使用Serelaxin治疗炎症
阅读：163发布：2020-05-12
专利汇可以提供使用Serelaxin治疗炎症专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本公 开关 于在对象中 治疗 炎症 的方法。具体地，本公开提供通过施用具有药学活性的serelaxin以增加与炎症减轻相关的可溶性标志物用于治疗炎症的方法。本公开进一步包括治疗炎性 疾病 的方法和向患有该类疾病的患者施用具有药学活性的serelaxin的药盒。，下面是使用Serelaxin治疗炎症专利的具体信息内容。
1.一种治疗炎症的方法，包括向对象施用具有药学活性的serelaxin，其剂量有效引起受炎症影响的该对象组织中可溶性ST-2短暂上调，其中所述可溶性ST-2短暂上调可减少该组织中的促炎细胞因子。
2.根据权利要求1的方法，其特征在于，所述促炎细胞因子由IL-33诱导。
3.根据权利要求1的方法，其特征在于，所述组织选自肺组织、皮肤组织、关节组织、神经组织和血管组织。
4.根据权利要求1的方法，其特征在于，具有药学活性的serelaxin的剂量范围为每日约10μg/kg-约500μg/kg。
5.根据权利要求1的方法，其特征在于，所述炎症包括选自下组的炎性病症：嗜酸性气道高反应性、哮喘、类风湿性关节炎、多发性硬化、强直性脊柱炎、炎性肠病、痛风、肌炎、舍格伦综合征、系统性红斑狼疮、血管炎、胸膜恶性肿瘤、败血症、创伤、伤口愈合、特应性变态反应、过敏性反应、自身免疫性脑脊髓炎、CNS缺氧、CNS血管损伤、高伤害感受、湿疹、皮炎、硬皮病、毒漆疹、痤疮、荨麻疹和牛皮癣。
6.根据权利要求1的方法，其特征在于，所述可溶性ST-2短暂上调持续约1天-约5天。
7.根据权利要求1的方法，其特征在于，所述可溶性ST-2结合Il-33。
8.根据权利要求7的方法，其特征在于，所述可溶性ST-2充当缺乏跨膜和/或胞质结构域的诱饵受体。
9.根据权利要求12的方法，其特征在于，所述诱饵受体抑制所述IL-33结合其跨膜受体ST-2。
10.根据权利要求5的方法，其特征在于，所述炎症性疾病是IL-33介导免疫应答或IL-33介导自体免疫疾病。
11.一种治疗炎症的方法，包括：
(i)向对象施用具有药学活性的serelaxin，其剂量有效引起该受炎症影响对象组织中的可溶性ST-2短暂上调，和
(ii)确定所述可溶性ST-2短暂上调是否减少该对象所述组织中的促炎细胞因子。
12.根据权利要求11的方法，其特征在于，所述促炎细胞因子由IL-33诱导。
13.根据权利要求12的方法，其特征在于，所述促炎细胞因子通过用可溶性ST-2抑制IL-33来减少。
14.根据权利要求13的方法，其特征在于，所述减少的促炎细胞因子通过测量该对象外周血中所述促炎细胞因子血清水平的试验来评估。
15.根据权利要求11的方法，其特征在于，所述组织选自肺组织、皮肤组织、关节组织、神经组织和血管组织。
16.根据权利要求11的方法，其特征在于，所述具有药学活性的serelaxin的剂量范围为每日约10μg/kg-约500μg/kg。
17.根据权利要求11的方法，其中所述炎症包括选自下组的炎性病症：嗜酸性气道高反应性、哮喘、类风湿性关节炎、多发性硬化、强直性脊柱炎、炎性肠病、痛风、肌炎、舍格伦综合征、系统性红斑狼疮、血管炎、胸膜恶性肿瘤、败血症、创伤、伤口愈合、特应性变态反应、过敏性反应、自身免疫性脑脊髓炎、CNS缺氧、CNS血管损伤、高伤害感受、湿疹、皮炎、硬皮病、毒漆疹、痤疮、荨麻疹和牛皮癣。
18.根据权利要求11的方法，其特征在于，所述可溶性ST-2短暂上调持续约1天-约
5天。
19.根据权利要求1的方法，其特征在于，所述可溶性ST-2结合Il-33。
20.根据权利要求19的方法，其特征在于，所述可溶性ST-2充当缺乏跨膜和/或胞质结构域的诱饵受体。
21.根据权利要求20的方法，其特征在于，所述诱饵受体抑制所述IL-33结合其跨膜受体ST-2。
22.根据权利要求17的方法，其特征在于，所述炎症性疾病是IL-33介导免疫应答或IL-33介导自体免疫疾病。
使用Serelaxin治疗炎症
技术领域
[0001] 本公开关于在对象中治疗炎症的方法。具体地，本公开提供通过施用具有药学活性的serelaxin以增加与炎症减轻相关的可溶性标志物用以治疗炎症的方法。本公开进一步包括治疗炎性疾病的方法和向患有该类疾病的患者施用具有药学活性的serelaxin的药盒。
背景技术
[0002] 炎症
[0003] 炎症通常被理解为免疫系统保护机体免于侵入物和感染的应答。炎症发生时，白细胞离开血液并进入身体受影响区域，它在该处充当吞噬细胞，即破坏外来病原体。炎症包括在侵入或感染部位肿胀，进而压迫神经末端引起疼痛。炎症症状包括疲劳、能量损失、头痛、发烧和寒冷。在一些情况下，即使没有外来侵入物或病原体，也能引起炎症反应，例如在自体免疫疾病如类风湿性关节炎中。自体免疫疾病中，机体免疫系统攻击自己的组织和器官。另外，已知炎症是许多疾病的副产物，包括动脉粥样硬化、心脏病、老年痴呆症(ALZ)和癌症。严重发炎是疾病发展的主要作用因素。
[0004] 白介素-33
[0005] 白介素-1(IL-1)家族包括一组在炎症反应调节中发挥重要作用的细胞因子。白介素-33(IL-33)是该家族中新鉴定的成员且在促炎性刺激后在许多细胞类型中表达。IL-33充当受体ST-2的配体，ST-2在辅助T细胞2(TH2)和肥大细胞中广泛表达。IL-33似乎在疾病发展中起双重作用，包括通过促进TH2免疫应答来保护宿主抵御寄生虫感染和减少动脉粥样硬化。然而，IL-33还能加剧TH2和肥大细胞介导的炎性疾病的发病，包括哮喘、关节炎症、特应性皮炎和过敏反应。因此，IL-33是一个有希望的新治疗干预靶标(参见Liew等(2012)Nature Reviews 10:103-110)。
[0007] 本公开提供一种治疗炎症所导致病症的方法。一方面本公开提供治疗IL-33介导炎症所导致的疾病或相关疾病的方法。具体地，本公开提供治疗炎症的方法，包括向对象施用具有药学活性的serelaxin，其剂量有效引起受炎症影响对象组织中的可溶性ST-2(sST-2)短暂上调，其中sST-2短暂上调可减少组织中的促炎细胞因子。Serelaxin短暂上调sST-2，并因此通过降低促炎细胞因子水平来减轻炎症。IL-33结合膜结合型ST-2受体，因此有效诱导促炎细胞因子。可溶型ST-2受体是诱饵受体，它也结合IL-33，但不诱导促炎细胞因子。
[0008] 另一方面，本公开提供治疗IL-33介导炎症的方法，其中施用具有药学活性的serelaxin，从而sST-2在特定组织中短暂上调，包括但不限于肺组织、皮肤组织、关节组织、神经组织和/或血管组织。具有药学活性的serelaxin的剂量范围为每日约10μg/kg-约500μg/kg，更具体地为每日约30μg/kg-约250μg/kg。能使用serelaxin治疗的炎症包括IL-33介导的炎性疾病。这类疾病包括但不限于嗜酸性气道高反应性、哮喘、类风湿性关节炎、多发性硬化(MS)、强直性脊柱炎(AS)、炎性肠病、痛风、肌炎、舍格伦综合征、系统性红斑狼疮(SLE)、血管炎、胸膜恶性肿瘤、败血症、创伤、伤口愈合、特应性变态反应、过敏性反应、自身免疫性脑脊髓炎、CNS缺氧、CNS血管损伤和高伤害感受。另外，serelaxin能用于治疗IL-33介导的炎性皮肤疾病，包括但不限于湿疹、皮炎、硬皮病、毒漆疹、痤疮、荨麻疹和牛皮癣。能使用serelaxin治疗的炎症还包括IL-33介导自体免疫疾病或基于IL-33介导免疫应答的炎性疾病。
[0009] 另一方面，本公开提供治疗IL-33介导炎症的方法，其中施用具有药学活性的serelaxin，从而sST-2在特定组织中短暂上调，其中所述sST-2短暂上调持续约1天-约5天，更具体地为约2天-约4天。在一个实施方式中，sST-2充当诱饵受体并结合IL-33。
作为诱饵受体，sST-2缺乏跨膜和胞质结构域且仅用于捕捉或诱陷IL-33以防止与天然受体ST-2结合。因此，sST-2抑制IL-33结合其跨膜受体ST-2。
作为诱饵受体，sST-2缺乏跨膜和胞质结构域且仅用于捕捉或诱陷IL-33以防止与天然受体ST-2结合。因此，sST-2抑制IL-33结合其跨膜受体ST-2。
[0010] 本公开还包括含serelaxin的药盒，其剂量有效引起受炎症影响对象组织中的sST-2短暂上调；和描述药物治疗方案的说明书，所述治疗方案基于与已建立治疗模型相比的短暂上调。其中，serelaxin剂量范围为每日约10μg/kg-约500μg/kg，且所述药物治疗方案具有组织特异性。
[0011] 本公开还考虑治疗炎症的方法，包括向对象施用具有药学活性的serelaxin，其剂量有效引起受炎症影响对象组织中的sST-2短暂上调，并测定可溶性ST-2的短暂上调是否减少对象组织中的促炎细胞因子。通过测量对象外周血中促炎细胞因子血清水平的试验来评估所减少的促炎细胞因子。一个所述试验的实例是ELISA分析法。减少的促炎细胞因子示例包括但不限于IL-1、IL-3、IL-5、IL-6、IL-13、IL-33、TNF、CXCL2、CCL2、CCL3、CCL5、CCL17、CCL24、PGD2和LTB4。附图说明
[0012] 阅读结合描述本发明的附图，可最好地理解本公开。然而，应理解本公开不限于附图所公开的特定实施方式。
[0013] 图1显示对象用4剂serelaxin和安慰剂治疗48小时的时间内，sST-2中值浓度相比基线的变化。安慰剂组中sST-2在48小时下降，而serelaxin组与48小时的安慰剂sST-2水平相比显示短暂上升。48小时时，安慰剂组与各serelaxin剂量组的差异在统计上显著。
[0014] 图2描述安慰剂组和合并的serelaxin组对象中，一定时间内sST-2中值浓度相比基线的变化。
[0015] 图3描述通过访问的sST-2治疗间分析，比较3个时间点下serelaxin组相比安慰剂组，sST-2几何平均数相比基线的变化。在治疗48小时，所有serelaxin组以及合并的serelaxin组中相比基线的变化与安慰剂组中相比基线的变化具有显著不同。
具体实施方式
[0016] 总体概述
[0017] 本公开关于通过向患有所述炎症和相关疾病的对象施用serelaxin治疗炎症相关疾病的方法。具体地，这些方法包括施用具有药学活性的serelaxin，以引起受IL-33介导炎症影响的对象组织中的可溶性ST-2(sST-2)短暂上调。sST-2上调减少组织中的促炎细胞因子，从而以组织特异性方式减轻炎症。例如，IL-33介导炎症是许多疾病和紊乱的主要作用因素，与对象健康的持续衰退相关。促炎细胞因子包括但不限于白介素-1-β(IL-1)、白介素-3(IL-3)、白介素-5(IL-5),白介素-6(IL-6)、白介素-13(IL-13)、肿瘤坏死因子(TNF)、CXC趋化因子配体2(CXCL2)、CC趋化因子配体2(CCL2)、CC趋化因子配体3(CCL3)、CC趋化因子配体5(CCL5)、CC趋化因子配体17(CCL17)、CC趋化因子配体24(CCL24)、前列腺素D2(PGD2)和白三烯B4(LTB4)以及IL-33。许多炎性疾病与IL-33介导炎症相关，包括但不限于类风湿性关节炎、多发性硬化(MS)、强直性脊柱炎(AS)、炎性肠病、哮喘、痛风、败血症、过敏性反应、自身免疫性脑脊髓炎、CNS缺氧、CNS血管损伤、高伤害感受、湿疹、皮炎、硬皮病、毒漆疹、痤疮、荨麻疹和牛皮癣。此外，IL-33介导的慢性炎症是非传统已知的炎性疾病(例如癌症)的常见副作用。有炎症的治疗可用，然而许多现有抗炎药物具有如恶心、呕吐、腹泻、便秘、皮疹、头晕、头痛、困倦和水肿的副作用。更严重的副作用包括肾衰竭、肝衰竭、溃疡、损伤后持续出血、中风和心脏病，这可能使对象处于严重风险。另外，现有治疗并不总是有效。因此，受炎症折磨的患者需要新的治疗方法以改善病症并使患者稳定且不引起这些副作用。Serelaxin是天然产生的物质，将它向炎症对象施用时，能减少与IL-33介导炎症相关的组织中的促炎细胞因子，而不影响相邻组织且不引起显著副作用。由于serelaxin通过短暂增加一种生化物质(即可溶性标记物)来起作用，其进而下调促炎细胞因子，因此当需要时可减轻炎症，但炎症应答系统受影响程度不至于发生严重副作用。如此，serelaxin提供一种新型IL-33介导炎症的治疗，其特异性靶向具体组织且短暂到足以不干扰机体的天然防御系统。
[0018] 不想受理论约束地，预计serelaxin通过刺激诱饵受体或可溶型ST-2受体(sST-2)结合一个或多个促炎细胞因子诱导物来影响ST-2途径。在一个实施方式中，诱饵受体结合过量配体，从而减少或调节结合天然受体的配体的量。在另一个实施方式中，诱饵受体与大部分或所有配体结合，从而抑制所有或大部分与天然受体正常结合的配体。
[0019] 例如，IL-33是促炎细胞因子的主要诱导物，通过诱饵受体捕获该配体可减少和调节组织中的炎症。Serelaxin对诱饵的效果短暂，因此，其能通过抑制过量IL-33和打破进展周期而同时不负面影响被认为是潜在从IL-33效果受益的组织来改善炎症。通过直接施用sST-2尝试治疗IL-33介导炎性疾病的其中一个不需要的结果是声称的IL-33心血管保护作用可能受影响，从而增加心血管发病率风险加大的可能性。尽管已报道sST-2升高预示AHF患者中的结果不佳，serelaxin起血管调节剂的作用且产生有利的血流动力学效果，极大降低不良心脏事件的风险。如此，serelaxin被认为能够调节免疫应答，同时调节这些患者中的正系统性功能和肾脏血流动力学功能。此外，动物模型显示IL-33减少心脏肥大和纤维化，sST-2由于其IL-33抑制活性会使这些效果恶化。因此，直接施用sST-2可能促进这些不良心脏影响。然而，由于serelaxin是胞外基质降解的介质且显示抑制心肌纤维化，预测通过serelaxin的短暂sST-2诱导对心肌纤维化和肥大没有有害影响。
[0020] 定义
[0022] 术语“serelaxin”指氨基酸序列与松弛素相同的肽激素。Serelaxin涵盖人serelaxin，包括完整具有全长的人serelaxin或保留生物活性的部分serelaxin分子。术语“serelaxin”包括人H1前serelaxin原(preproserelaxin)、serelaxin原(proserelaxin)和serelaxin；H2前serelaxin原、serelaxin原和serelaxin；以及H3前serelaxin原、serelaxin原和serelaxin。术语“serelaxin”进一步包括来自重组、合成或天然来源的具有生物活性(本文也称为“具有药学活性”)的serelaxin以及例如氨基酸序列变体的serelaxin变体。如此，该术语考虑了合成的人serelaxin和重组的人serelaxin，包括合成的H1、H2和H3人serelaxin以及重组的H1、H2和H3人serelaxin。所述术语进一步涵盖具有serelaxin样活性的活性试剂，如serelaxin激动剂和/或serelaxin类似物以及其保留生物活性的部分，包括从serelaxin受体(如RXFP1受体、RXFP2受体、RXFP3受体、RXFP4受体，之前分别被称为LGR7、LGR8、GPCR135、GPCR142)竞争性地取代结合serelaxin的所有试剂。因此，药学上有效的serelaxin或serelaxin激动剂是具有serelaxin样活性的任何试剂，其能结合serelaxin受体以引发serelaxin样反应。此外，药学上有效的serelaxin或serelaxin激动剂是具有serelaxin样活性的任何试剂，其能上调和/或修饰sST-2诱饵受体活性，且进一步能下调和/或修饰IL-33活性，从而在炎症期间和/或发作时调节和/或改变和/或减少存在于组织和/或器官中的促炎细胞因子的量。另外，本文所用serelaxin的核酸序列不一定与人serelaxin(如H1、H2和/或H3)的核酸序列100％相同，但可与人serelaxin核酸序列至少约40％、50％、60％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、
82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、
97％、98％或99％相同。本文所用serelaxin可通过本领域技术人员已知的任何方法制备。该方法的示例描述于例如美国专利号5,759,807和Bullesbach等(1991)The Journal of Biological Chemistry266:10754-10761中。Serelaxin分子和类似物的示例描述于例如美国专利号5,166,191中。天然产生的具有生物活性的serelaxin可获自人、鼠(即大鼠或小鼠)、猪或其他哺乳动物来源。还包括经修饰以增加活体内半衰期的serelaxin，如聚乙二醇serelaxin(即serelaxin缀合聚乙二醇)，受到降解酶切的serelaxin中的氨基酸修饰等。所述术语还包括含A和B链的serelaxin，具有N-和/或C-端截断。一般地，H2serelaxin中，A链在A(1-24)到A(10-24)中变化，B链在B(1-33)到B(10-22)中变化；H1serelaxin中，A链在A(1-24)到A(10-24)中变化，B链在B(1-32)到B(10-22)中变化。术语“serelaxin”的范围还包括一个或多个氨基酸残基、糖基化变体、未糖基化的serelaxin、有机和无机盐、共价修饰的serelaxin衍生物、前serelaxin原、和serelaxin原的其它插入、取代或缺失。所述术语还包括serelaxin类似物，其氨基酸序列不同于野生型(如天然产生)序列，包括但不限于美国专利号5,811,395公开的serelaxin类似物。
Serelaxin氨基酸残基可能的修饰包含游离氨基(包括N端)的乙酰化、甲酰化或类似保护，C端基团的酰胺化，或者羟基或羧基的酯形成，如通过引入甲酰基在B2处修饰色氨酸(Trp)残基。甲酰基是一个典型的容易移除的保护基团示例。其它可能的修饰包括用不同氨基酸(包括D型天然氨基酸)取代B和/或A链中的一个或多个天然氨基酸，包括但不限于用正亮氨酸(Nle)、缬氨酸(Val)、丙氨酸(Ala)、甘氨酸(Gly)、丝氨酸(Ser)或高丝氨酸(HomoSer)在B24取代Met部分。其它可能的修饰包括从链中删除天然氨基酸或向链添加一个或多个额外氨基酸。其它修饰包括serelaxin原的B/C和C/A接点的氨基酸取代，其有助于从serelaxin原切割C链；以及含有非天然产生的C肽的变体serelaxin，如美国专利号5,759,807中所描述。术语“serelaxin”还包括含serelaxin和异源多肽的融合多肽。异源多肽(如非serelaxin多肽)融合搭配物可以是融合蛋白serelaxin部分的C端或N端。异源多肽包括免疫学能检测的多肽(如“表位标记”)；能产生可检测信号的多肽(如绿色荧光蛋白，酶如碱性磷酸酶，和本领域已知的其他多肽)；治疗多肽，包括但不限于细胞因子、趋化因子和生长因子。所有serelaxin分子结构的这些变化或改变所产生的变体都包括在本公开范围内，只要其维持serelaxin的功能(生物)活性。优选地，serelaxin氨基酸序列或结构的任何修饰在用serelaxin变体治疗的对象中不增加其免疫原性。具有所述功能活性的这些serelaxin变体可以用本领域已知的体外和体内分析法便捷地鉴定。
82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、
97％、98％或99％相同。本文所用serelaxin可通过本领域技术人员已知的任何方法制备。该方法的示例描述于例如美国专利号5,759,807和Bullesbach等(1991)The Journal of Biological Chemistry266:10754-10761中。Serelaxin分子和类似物的示例描述于例如美国专利号5,166,191中。天然产生的具有生物活性的serelaxin可获自人、鼠(即大鼠或小鼠)、猪或其他哺乳动物来源。还包括经修饰以增加活体内半衰期的serelaxin，如聚乙二醇serelaxin(即serelaxin缀合聚乙二醇)，受到降解酶切的serelaxin中的氨基酸修饰等。所述术语还包括含A和B链的serelaxin，具有N-和/或C-端截断。一般地，H2serelaxin中，A链在A(1-24)到A(10-24)中变化，B链在B(1-33)到B(10-22)中变化；H1serelaxin中，A链在A(1-24)到A(10-24)中变化，B链在B(1-32)到B(10-22)中变化。术语“serelaxin”的范围还包括一个或多个氨基酸残基、糖基化变体、未糖基化的serelaxin、有机和无机盐、共价修饰的serelaxin衍生物、前serelaxin原、和serelaxin原的其它插入、取代或缺失。所述术语还包括serelaxin类似物，其氨基酸序列不同于野生型(如天然产生)序列，包括但不限于美国专利号5,811,395公开的serelaxin类似物。
Serelaxin氨基酸残基可能的修饰包含游离氨基(包括N端)的乙酰化、甲酰化或类似保护，C端基团的酰胺化，或者羟基或羧基的酯形成，如通过引入甲酰基在B2处修饰色氨酸(Trp)残基。甲酰基是一个典型的容易移除的保护基团示例。其它可能的修饰包括用不同氨基酸(包括D型天然氨基酸)取代B和/或A链中的一个或多个天然氨基酸，包括但不限于用正亮氨酸(Nle)、缬氨酸(Val)、丙氨酸(Ala)、甘氨酸(Gly)、丝氨酸(Ser)或高丝氨酸(HomoSer)在B24取代Met部分。其它可能的修饰包括从链中删除天然氨基酸或向链添加一个或多个额外氨基酸。其它修饰包括serelaxin原的B/C和C/A接点的氨基酸取代，其有助于从serelaxin原切割C链；以及含有非天然产生的C肽的变体serelaxin，如美国专利号5,759,807中所描述。术语“serelaxin”还包括含serelaxin和异源多肽的融合多肽。异源多肽(如非serelaxin多肽)融合搭配物可以是融合蛋白serelaxin部分的C端或N端。异源多肽包括免疫学能检测的多肽(如“表位标记”)；能产生可检测信号的多肽(如绿色荧光蛋白，酶如碱性磷酸酶，和本领域已知的其他多肽)；治疗多肽，包括但不限于细胞因子、趋化因子和生长因子。所有serelaxin分子结构的这些变化或改变所产生的变体都包括在本公开范围内，只要其维持serelaxin的功能(生物)活性。优选地，serelaxin氨基酸序列或结构的任何修饰在用serelaxin变体治疗的对象中不增加其免疫原性。具有所述功能活性的这些serelaxin变体可以用本领域已知的体外和体内分析法便捷地鉴定。
[0023] 术语“对象”指哺乳动物，包括但不限于人、灵长类动物、啮齿动物、兔、海洋哺乳动物、有蹄哺乳动物和食肉动物。术语“对象”进一步涵盖实验室和研究用哺乳动物，包括实验动物。
[0024] 术语“施用”指将药物治疗法或制剂经特定途径施用或应用于对象，包括但不限于经静脉内、皮下、肌肉、舌下、鼻内、脑内、脑室内、局部、玻璃体内以及经吸入。
[0025] “有效引起受炎症影响对象的组织中的可溶性ST-2短暂上调”中的术语“有效”指具有药学活性的serelaxin的量，与未治疗或安慰剂治疗的对象(即未用serelaxin治疗的炎症患者)相比，会在炎症患者中产生可测量的所需医学或临床益处。
[0026] 术语“上调”指在分子、细胞或全身水平对生理过程的正调控作用。例如，在一个实施方式中，它指细胞通过上调基因表达来增加细胞组分(例如RNA和/或蛋白)含量的过程。
[0027] 本文所用的术语“诱饵受体”一般指结合特异性配体的受体，从而防止该配体结合其天然受体(如跨膜ST-2受体)。
[0028] Serelaxin
[0029] Serelaxin是大小和形状与胰岛素类似的多肽激素。它属于胰岛素基因超家族的内分泌和自分泌/旁分泌激素。所编码蛋白的活性形式由一条A链和一条B链组成，它们通过2条链间和1条链内的二硫键连接在一起。因此，二硫键排列与胰岛素非常类似。在人类中，有3种已知的serelaxin非等位基因serelaxin-1(RLN-1或H1)、serelaxin-2(RLN-2或H2)和serelaxin-3(RLN-3或H3)。H1和H2共有高序列同源性。存在2种选择性剪接转录变体编码该基因所述的不同亚型。H1和H2在生殖器官中差异性表达(美国专利号5,023,321和Garibay-Tupas等.(2004)Molecular and Cellular Endocrinology 219:115-125)，而H3主要存在于脑中。Serelaxin肽家族在其受体方面的进化通常为本领域熟知(Wilkinson等.(2005)BMC Evolutionary Biology 5:1-17；和Wilkinson&Bathgate(2007),第1章,《Serelaxin和相关肽》(Serelaxin and Related Peptides),兰德斯生物科学和施普林格科学+商业媒体公司(Landes Bioscience and Springer Science+Business Media))。
[0030] Serelaxin和ST-2胞内信号传导途径
[0031] ST-2是白介素-1(IL-1)家族成员，其属于Toll样受体(TLR/IL-1R(TIR))超家族。ST-2基因在种间保守。它在人染色体2q12上跨约40kb且是较大的人白介素-1(IL-1)基因簇的一部分(参见Genbank登录号AC007248)。ST-2基因在采用跨膜形式时起促炎调节剂的作用，在采用可溶形式时起辅助性T细胞2(TH2)功能的抗炎抑制剂作用。因此，有2类ST-2受体，即膜结合性ST-2亚型和可溶性ST-2亚型(sST-2)。ST-2配体是白介素-33(IL-33)。然而，sST-2虽不发送信号，但充当IL-33的诱饵受体，从而防止其结合跨膜受体ST-2。
[0032] 向AHF对象施用Serelaxin与呼吸困难改善和中长期结果改善相关。由于sST-2可预测AHF结果不佳，预期serelaxin的施用会与sST-2水平下降相关。然而，与此预期相反，本发明者意外发现serelaxin诱导sST-2表达。目前已知sST-2捕捉IL-33，防止IL-33传递信号。因此，在明确的组织-和IL-33-介导特异性的方式中，这导致促炎细胞因子征集减少。这是一个前所未有的发现，因为serelaxin与以下相关：促炎反应(Figueiredo等.(2006)The Journal of Biological Chemistry 281:3030–3039；Bryant-Greenwood等 .(2009)Placenta30:599-606；Horton 等 .(2012)Placenta 33:399-407)；抗 炎 反应 (Masini 等 .(2006)Free Radic.Biol.Med.39:520-531；Cosen-Binker 等 .(2006)World J.Gastroenterol.12:1558-1568；Santora 等 .(2007)J.Pharmacol.Exp.Ther.322:887-893；Brecht 等 .(2011)Regul.Pept.166:76-82)；促 TH1 炎 性 反 应(Piccinni等.(1999)Eur.J.Immunology 29:2241-2247)；抗中性粒细胞反应(Masini et al.(2004)Endocrinology 145:1106-1112)；对炎症无影响(Mookerjee等.(2006)Endocrinology 147:754-761；Hewitson 等 .(2007)Endocrinology148:660-669；Samuel等.(2007)Endocrinology 148:4259-4266；Royce等.(2009)Endocrinology 150:2692–
2699)；以及混合炎症效果(Horton等.(2011)Biol.Reprod.85:788-797)。在现有文献的启示下无法预期到serelaxin诱导sST-2的发现。明显地，该发现提供一种新的治疗方法，其通过使用serelaxin来治疗与ST-2配体异常上调相关的疾病。
2699)；以及混合炎症效果(Horton等.(2011)Biol.Reprod.85:788-797)。在现有文献的启示下无法预期到serelaxin诱导sST-2的发现。明显地，该发现提供一种新的治疗方法，其通过使用serelaxin来治疗与ST-2配体异常上调相关的疾病。
[0033] IL-33/ST-2胞内信号传导途径中，IL-33结合包括ST-2和IL-1R辅助蛋白(即IL-1RAP)的异二聚体受体复合物。Il-33被认为通过IL-1RAP的TIR结构域诱导信号传导。由于IL-33的结合，髓样分化初次应答蛋白88(MYD88)、IL-1R-相关激酶-1(IRAK-1)和IL-1R-相关激酶-4(IRAK-4)聚集到受体复合物并诱导大量信号蛋白活化，包括核因子-κB(NF-κB)、NF-κB-α抑制剂(IκBα)、胞外信号调节激酶-1(ERK-1，也称为MAPK-3)、胞外信号调节激酶-2(ERK-2，也称为MAPK-1)、p38(也称为MAPK-13)和JUN N末端激酶-1(JNK1，也称为MAPK-8)。在肥大细胞中，所述途径进一步涉及磷脂酶D和鞘氨醇激酶，其能引起白介素-1-β(IL-1)、白介素-3(IL-3)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF)、CXC趋化因子配体2(CXCL2)、CC趋化因子配体2(CCL2)、CC趋化因子配体3(CCL3)、前列腺素D2(PGD2)和白三烯B4(LTB4)的生成。然而，IL-33还诱导肥大细胞和T细胞生成白介素-5(IL-5)、白介素-13(IL-13)、CC趋化因子配体5(CCL5)、CC趋化因子配体17(CCL17)和CC趋化因子配体24(CCL24)，其由NF-κB-非依赖性促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)依赖性途径调节(参见Liew等.，同上)。通过增加sST-2表达，serelaxin干扰以上的IL-33信号级联。在一个实施方式中，这会减少或调节由肥大细胞生成IL-1β、IL-3、IL-6、TNF、CXCL2、CCL2、CCL3、前列腺素D2和白三烯B4以及由肥大细胞和T细胞生成IL-5、IL-13、CCL5、CCL17及CCL24。因此，组织中的炎症减少。在另一个实施方式中，这实质上阻抑或抑制大部分肥大细胞的IL-1β、IL-3、IL-6、TNF、CXCL2、CCL2、CCL3、PGD2和LTB4生成以及肥大细胞和T细胞生成IL-5、IL-13、CCL5、CCL17及CCL24。因此，组织中的炎症减少或实质上下调。
[0034] ST-2基因已在小鼠、大鼠、人和鸡中克隆。负责TH2细胞中ST-2基因转录调节的分子机制包括近端和远端启动子。关于启动子使用，远端启动子相较近端启动子处于主导地位。在远端启动子区域的小鼠和人ST-2基因中都发现GATA共有位点。转录起始位点上游的约100碱基对(bp)区域对ST-2基因表达至关重要，所述区域含有2个GATA共有位点。GATA-3转录因子(即对T细胞谱系发展以及转录调节TH2细胞特异性细胞因子基因如IL-4、IL-5和IL-13重要的因子)结合sST-2远端启动子关键区域的单一GATA位点，其激活已用cAMP刺激的TH2型细胞中的sST-2基因表达。而且，sST-2mRNA表达在cAMP刺激后3小时暂时增加(Hayakawa等.(2005)Biochimica et Biophysica Acta.1728:53-64)。这与cAMP强诱导物serelaxin相关。Serelaxin以高亲和性结合其serelaxin家族肽受体1(RXFP1)，这引起cAMP诱导(Du等.(2009)Nature Reviews 198:1-11)。不受理论约束地，认为serelaxin可通过cAMP诱导sST-2表达。
[0035] 用Serelaxin治疗炎症
[0036] 膜结合型ST-2在TH2细胞和肥大细胞中选择性表达，其中配体结合可促进TH2细胞活性。已知配体(如IL-33)在疾病中有双重作用，既提供保护抵御动脉粥样硬化和寄生虫感染，但也加重TH2细胞和肥大细胞介导的炎性疾病。可溶性ST-2(sST-2)受体被认定为治疗炎性疾病的潜在治疗靶向。然而，在本公开之前，这种疗法由于以下风险被认为不可行：抑制ST-2胞内信号传导途径会通过消除心脏保护作用而增加心脏病发病率(Kakkar和Lee(2008)Nature Reviews 7:827-840)。值得注意的是，本发明者发现serelaxin靶向ST-2胞内信号传导途径并提供炎性疾病的疗法而没有之前公认的与抗炎治疗相关的心脏病风险。Serelaxin充当血管调节剂且具有有利的血流动力学效果，极大降低不良心脏影响的风险(Teerlink等.(2009)Lancet 373:1429)。在一个实施方式中，serelaxin经ST-2/IL-33胞内信号传导途径减少和/或调节促炎细胞因子。在另一个实施方式中，serelaxin通过ST-2/IL-33胞内信号传导途径实质上阻抑或抑制促炎细胞因子。
[0037] ST-2胞内信号传导途径存在于肺(平滑肌和支气管及小气道被覆上皮)、外周血白细胞(TH2淋巴细胞和巨噬细胞)、皮肤、胃、脑、脊髓、关节、心和血管内皮。IL-33诱导T细胞中的TH2细胞因子且调节广泛范围的生理反应，包括但不限于抗原/过敏原反应、自身免疫、器官纤维化和心脏损伤。IL-33在涉及免疫应答的许多细胞类型中结合并激活ST-2信号传导，在广泛的免疫相关疾病中起致病作用。事实上，IL-33涉及各种病理状态，包括哮喘、败血症、类风湿性关节炎、皮肤病、动脉粥样硬化、胶原血管病和心力衰竭。ST-2信号传导途径是肥大细胞、嗜碱粒细胞和嗜酸粒细胞中促炎细胞因子的强效诱导物，也是过敏、哮喘和感染性休克的所有细胞介质。配体结合ST-2也能放大巨噬细胞和树突细胞的激活。
[0038] 本申请人研究了serelaxin对IL-33/ST-2胞内信号传导途径的影响并意外发现serelaxin上调可溶性ST-2(sST-2)受体，也称为IL-33的诱饵受体。已知sST-2在TH2免疫应答驱动和/或IL33介导的疾病中有抗炎效果。这些疾病包括但不限于胸膜恶性肿瘤、败血症、创伤、伤口愈合、特应性变态反应、过敏性反应、自身免疫性脑脊髓炎、嗜酸性气道高反应性、CNS缺氧/血管损伤、高伤害感受、类风湿性关节炎、多发性硬化(MS)、强直性脊柱炎(AS)、炎性肠病、哮喘、痛风、肌炎、舍格伦综合征、全身性红斑狼疮(SLE)、血管炎、湿疹、皮炎、硬皮病、毒漆疹、痤疮、荨麻疹和牛皮癣。由于serelaxin通过IL-33/ST-2胞内信号传导系统减少和/或调节和/或抑制炎症，它能被用于治疗这些疾病。通过测试低水平的sST-2、升高水平的IL-33或两者的组合，可鉴定serelaxin疗法有效的对象。在一个实施方式中，通过测试低循环水平的sST-2来鉴定serelaxin疗法有效的对象。在另一个实施方式中，通过测试高循环水平的IL-33鉴定serelaxin疗法有效的对象。在另一个实施方式中，通过测试低循环水平的sST-2以及高循环水平的IL-33来鉴定serelaxin疗法有效的对象。
[0039] 更特定地，本发明者展示serelaxin短暂上调sST-2(见图1、2和3)。如图1所示，serelaxin治疗48小时时，所有治疗组显著不同于安慰剂组(即安慰剂组相比基线减少30％)。在基线时，治疗组的几何平均数范围为47ng/ml-60ng/ml，即55％治疗对象的sST-2浓度超过了女性33.5ng/ml和男性49.3ng/ml的正常范围。48小时时，安慰剂组显示sST-2浓度减少30％，而所有serelaxin组显示相比基线增加(就所有serelaxin组相比安慰剂而言，p<0.05)。在第5和第14天，安慰剂组和所有serelaxin组显示sST-2较基线减少35-50％，这与所有组中的炎症状态降低一致。因此，serelaxin短暂上调sST-2，进而减少和/或调节炎症。在一个实施方式中，短暂上调的sST-2结合并抑制IL-33。在另一个实施方式中，短暂上调的sST-2降低和/或调节IL-33介导炎症。在另一个实施方式中，sST-2结合并抑制或下调IL-33，其中IL-33在炎症环境下天然地以较高水平存在。由于IL-33是肥大细胞的促炎细胞因子和趋化因子的强力诱导物，特别是IL-1、IL-6、IL-13、TNF、CCL2和CCL3，它的抑制或下调可防止诱导IgE致敏肥大细胞脱粒并减少肥大细胞成熟和存活。IL-33通常还活化刺激其它细胞因子和趋化因子的嗜碱粒细胞，强力诱导嗜酸粒细胞并上调粘附分子表达。因此，IL-33的抑制或下调可防止或显著降低嗜酸粒细胞的诱导并进一步下调粘附分子的表达。由于肥大细胞、嗜酸粒细胞和粘附分子在过敏反应中起重要作用，可通过抑制IL-33来有效使用serelaxin以治疗过敏、哮喘、感染性休克和其它疾病。
[0040] 例如，IL-33/ST-2胞内信号传导系统是众多自体免疫疾病的起因，包括类风湿性关节炎和关节疾病。人类对象在风湿病患者的滑液中表达高水平的IL-33且在患有全身性红斑狼疮、进行性系统性硬化症和韦格纳肉芽肿的对象血清中sST-2水平升高，这表明sST-2介导的IL-33抑制在一系列自体免疫疾病中起重要作用(Kakkar和Lee，同上)。值得注意的是，在小鼠模型中阻断IL-33功能(即通过施用sST-2或sST-2基因缺失或施用特异性ST-2抗体)使得胶原诱导性关节炎小鼠模型中的疾病严重度降低(Liew等.,同上)。此外，其它试验显示与另一个小鼠胶原诱导性关节炎模型中sST2-Fc融合蛋白相似的结果，在该模型中，与对照相比短期施用sST2-Fc融合蛋白显著降低了疾病严重度(Leung等.(2004)The Journal of Immunology 173:145–150)。Serelaxin能用于诱导sST-2，从而自体免疫疾病(如表征为T细胞主导炎症的关节炎)中的IL-33可减少或被抑制。在一个实施方式中，serelaxin用于诱导sST-2，从而自体免疫疾病中的ST-2配体(如IL-33)减少。在另一个实施方式中，serelaxin用于诱导sST-2，从而自体免疫疾病中的ST-2配体(如IL-33)受到实质的阻抑或抑制。
[0041] 在肺中，ST-2信号传导参与免疫应答。接触配体导致上皮细胞肥大和粘液积累，预示支气管中的炎性过程。例如，IL-33在哮喘对象中以较高水平表达。与sST-2的诱饵功能一致，sST-2向小鼠基因转移显著地减弱响应免疫攻击的气道炎症，预接触sST-2可降低小鼠模型中过敏原诱发肺部炎症的TH2细胞因子生成。人类对象中，sST-2血清水平升高与哮喘急性恶化和患有急性嗜酸细胞性肺炎的对象有关。有趣的是，sST-2基因和蛋白表达能在肺泡巨噬细胞(MA)细胞系中响应促炎刺激(如LPS、IL-Iβ、Il-6、TNF-α)以及在LPS-诱导小鼠肺损伤模型中受到诱导，而ST-2基因表达似乎是组成型的且在刺激前后不改变。另外，sST-2蛋白预处理在LPS刺激的MA细胞中引起包括IL-1α、IL-6和TNF-α的促炎细胞因子的基因和蛋白表达下调。这表明sST-2能阻抑另外会导致急性肺损伤的促炎细胞因子生成(Oshikawa等.(2002)Biochemical and Biophysical Research Communications299:18-24)。由于serelaxin上调sST-2，它提供一种新的用于肺部炎症(如哮喘)的治疗。
尽管serelaxin涉及潜在减少肺纤维化，但被认为在肺炎症中不起作用(Royce等.(2009)Endocrinology 150:2692–2699)。因此，关于serelaxin在肺中可通过sST-2减少或抑制促炎细胞因子生成的发现是令人惊讶且意外的。因而，在一个实施方式中，serelaxin用于诱导sST-2，从而肺部炎症中的ST-2配体下降。在另一个实施方式中，serelaxin用于诱导sST-2，从而肺部炎症中的ST-2配体受到实质阻抑或抑制。
尽管serelaxin涉及潜在减少肺纤维化，但被认为在肺炎症中不起作用(Royce等.(2009)Endocrinology 150:2692–2699)。因此，关于serelaxin在肺中可通过sST-2减少或抑制促炎细胞因子生成的发现是令人惊讶且意外的。因而，在一个实施方式中，serelaxin用于诱导sST-2，从而肺部炎症中的ST-2配体下降。在另一个实施方式中，serelaxin用于诱导sST-2，从而肺部炎症中的ST-2配体受到实质阻抑或抑制。
[0042] IL-33主要由屏障组织的细胞表达并在特定皮肤病中发挥重要作用。例如，在特应性皮炎(AD)中，TH2细胞因子鉴定炎性反应。此外，小鼠暴露于过敏原或金黄色葡萄球菌B型肠毒素(SEB)后，AD皮肤中的IL-33和sST-2表达增加。另外，皮肤成纤维细胞、培养的角化细胞、原代巨噬细胞和HUVEC内皮细胞响应肿瘤坏死因子-α与IFN-γ的组合刺激而生成IL-33。刺激物、过敏原或SEB攻击引起的IL-33和sST-2表达增加能通过局部他克莫司治疗来抑制。通过某些触发因素如过敏原暴露、刺激物、擦伤、细菌和病毒感染，AD皮损中的IL-33和sST-2上调(Savinko等.(2012年1月26日)Journal of Investigative Dermatology；on-line；《特应性皮炎中的IL-33和ST-2：表达概况和触发因素调节》(IL-33and ST-2in Atopic Dermatitis:Expression Profiles and Modulation by Triggering Factors))。这显示IL-33–sST2相互作用在AD发病机理和疾病严重度中有明显作用。这进而支持了本发明者的发现，即ST-2配体表达增加能用serelaxin通过上调sST-2来调节和实质减少。因此，在一个实施方式中，serelaxin用于诱导sST-2，从而炎性皮肤病中的ST-2配体减少。在另一个实施方式中，serelaxin用于诱导sST-2，从而炎性皮肤病中的ST-2配体受到实质阻抑或抑制。
[0043] 在败血症和创伤中，对象的IL-4和IL-10血清水平升高，而TH1细胞因子水平下降，这通常是疾病可能预后不佳的征兆。送入急诊室或加护病房的被诊断有败血症或经历严重创伤的对象还显示高血清水平的sST-2，这可能是发病的进一步征兆。在小鼠败血症模型中，施用sST-2引起IL-6、IL-12和TNFα血清水平下降以及存活增加(Kakkar和Lee，同上)。这表明sST-2能调节和减少败血症和创伤中的促炎刺激。因此，serelaxin治疗可提供针对这些疾病过程的新治疗方法。此外，sST-2可能与患有败血症和/或创伤的对象的预后和/或存活相关。因而，因患有败血症或严重创伤而入院的同时也伴有sST-2水平升高的对象可能是serelaxin治疗的良好候选者。因此，在一个实施方式中，serelaxin用于诱导sST-2，从而诸如败血症和创伤等疾病中的ST-2配体减少。在另一个实施方式中，serelaxin用于诱导sST-2，从而诸如败血症和创伤等疾病中的ST-2配体受到实质阻抑或抑制。
[0044] ST-2信号传导还涉及组织损伤和纤维增生疾病的纤维增生反应。例如，肺纤维化急性恶化的对象显示sST-2血清水平升高。小鼠暴露于肝毒素(即肝毒素四氯化碳)时，其在用sST-2-Fc融合蛋白治疗时表现出损伤后纤维化反应加速，该效果似乎由该融合蛋白阻断TLR-4介导信号传导的能力来调节。这与LPS诱导败血症模型中sST-2参与TLR-4信号传导一致(Kakkar和Lee，同上)。由于对损伤的纤维化响应是大部分组织的特征，serelaxin治疗在纤维增生疾病中具有广泛应用。在一个实施方式中，serelaxin用于诱导sST-2，从而纤维增生疾病中的ST-2配体减少。在另一个实施方式中，serelaxin用于诱导sST-2，从而纤维增生疾病中的ST-2配体受到实质阻抑或抑制。
[0045] 特应性变态反应和过敏反应产生较高水平的IgE抗体。IgE抗体通过其活化促炎细胞因子的受体是高亲和性Fcε受体(FcεRI)。IL-33活化肥大细胞并在IgE致敏发生后诱导脱粒。然而，单独IL-33表达不总是引发过敏性休克或急性过敏反应。相反，IL-33以累加方式起作用从而进一步使这些病症恶化。ST-2信号传导系统仍是潜在的治疗靶标(Liew等.,同上)。在一个实施方式中，serelaxin用于诱导sST-2，从而变态反应和/或过敏反应相关疾病中的ST-2配体(如IL-33)减少。在另一个实施方式中，serelaxin用于诱导sST-2，从而变态反应和/或过敏反应相关疾病中的ST-2配体(如IL-33)受到本质阻抑或抑制。例如，IL-33减少时，过敏性休克病症改善，因为IL-33不再能恶化病症。类似地，这同样适用于急性过敏反应，其能通过使用serelaxin来稳定。
[0046] IL-33/ST-2系统还涉及中枢神经系统(CNS)和伤害感受(疼痛传导)。例如，IL-33在CNS中生成，在该处活化小胶质细胞，且IL-33被认为在CNS病理生理学中起促炎介质作用。IL-33受体主要在小胶质细胞和星形胶质细胞中表达。然而，IL-33配体由内皮细胞和星形胶质细胞生成，而不是小胶质细胞或神经元。在CNS中，IL-33诱导小胶质细胞和促炎细胞因子增殖，包括IL-1β、TNFα和IL-10。IL-33还诱导趋化因子和一氧化氮生成(Yasuoka等.(2011)Brain Research 1385:8-17)。用IL-33治疗小鼠会加重实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)。小鼠CNS中的病毒感染诱导IL-33mRNA表达，表明IL-33在CNS的宿主防御中发挥作用。还有证据显示IL-33涉及CNS缺氧和血管损伤，因为蛛网膜下出血对象显示脑脊液中细胞的ST-2表达增加。IL-33也涉及周围神经系统，在该处能诱导炎性疼痛。高伤害感受是负责疼痛传导的伤害感受器(即痛觉感受器)敏化。例如，可通过局部施用IL-33在小鼠中诱导皮肤和关节高伤害感受。在抗原诱导的皮肤高伤害感受模型中，能通过sST-2治疗减弱疼痛(Liew等.,同上)。因此，serelaxin治疗能用于减少全身的疼痛传导。在一个实施方式中，serelaxin用于诱导sST-2，从而高伤害感受和/或CNS相关的其它疾病中的ST-2配体(如IL-33)减少。在另一个实施方式中，serelaxin用于诱导sST-2，从而高伤害感受和/或CNS相关其它疾病中的ST-2配体(如IL-33)受到本质阻抑或抑制。
[0047] 已知IL-33在慢性发炎组织如克罗恩病(CD)患者的肠或类风湿性关节炎患者的滑膜中上调。IL-33与胃肠道病理变化相关，所述胃肠道包括食管、小肠和大肠、脾(Schmitz等.(2005)Immunity 23:479-490)。人们已广泛接受以下观点：包括CD和溃疡性结肠炎(UC)的炎性肠病(IBD)是很大程度上由致炎因子不平衡引起的炎症性疾病。例如，IL-1和IL-18的不平衡与UC和CD的发病机理有关，且表明sST-2具有一定抗炎特性，因为其充当IL-33的诱饵受体。还已确定通过TNF疗法阻断促炎细胞因子是下调IBD粘膜炎症的有效方法。ST-2信号传导被认为在IBD中激活，且有强有力的理由支持采用抗ST-2配体策略治疗IBD(Pastorelli等.(2010)PNAS 107:8017-8022)。因此，serelaxin能用于治疗胃肠道炎性疾病。在一个实施方式中，serelaxin用于诱导sST-2，从而胃肠道炎症中的ST-2配体减少。在另一个实施方式中，serelaxin用于诱导sST-2，从而胃肠道炎症中的ST-2配体(如IL-33)受到本质阻抑或抑制。
[0048] ST-2基因在心血管疾病中上调，其通过机械刺激心肌细胞来诱导且是已知的心脏机械过载的生物标志物。通过IL-33活化跨膜型ST-2具有心脏保护效果，相反，sST-2在心肌梗塞和心力衰竭对象中升高(Kakkar和Lee，同上)。这类sST-2与急性呼吸困难对象的死亡率相关且有时被称为独立于BNP的死亡率的预后生物标志物(Januzzi等.(2007)J.Am.Coll.Cardiol.50:607-613)。然而，IL-33也生成血管并经一氧化氮(NO)产生血管通透性。IL-33能直接活化内皮细胞(EC)，促进血管再生和通透性增强。因此，尽管有时也产生需要的心脏保护效果，但是IL-33对血管生成依赖性炎性血管病的发病机理也起作用(Choi等.(2009)Blood 114:3117-3126)。尽管少量IL-33可能对一些对象产生心脏保护效果，但过多IL-33(如在血管炎症中)对脉管系统有破坏性。因此，能减少获取IL-33的试剂另外会对可能患血管炎症增加的对象有益，超过IL-33的任何心脏保护效果。Serelaxin显示对AHF对象有益，因为其具有血管调控作用。在此，serelaxin充当产生有利血流动力学效应的血管调节剂，可大幅降低不良心脏事件的风险(Teerlink等.,同上)。Serelaxin可以进一步通过减少ST-2配体介导的血管炎症来改善心脏病对象的结果。这出乎意料，因为总认为ST-2配体IL-33在心脏病对象中大多起心脏保护作用。然而，serelaxin诱导sST-2，从而调节和减少IL-33介导的血管生成和血管通透性。但是，血管生成的正效应未丧失，因为serelaxin通过诱导VEGF来持续诱导血管生成。Serelaxin可以是通过sST-2有效降低血管炎症的初步治疗，而不会影响心脏保护效果。这可能是由于以下原因：过多IL-33会破坏脉管系统且serelaxin能用于调节其下降到更低且更理想的水平，并因此是保护水平。在一个实施方式中，serelaxin用于诱导sST-2，从而血管炎症中的IL-33减少。
[0049] 总之，serelaxin通过短暂上调sST-2能影响ST-2信号传导途径。因此，serelaxin对治疗炎症性疾病有效，因为其诱导sST-2表达并从而在特定组织或器官中促进ST-2配体的减少或下调，引起促炎细胞因子和炎症减少。如此，本申请者设计了通过施用serelaxin治疗ST-2配体介导炎症的方法。更特定地，用具有药学活性的serelaxin治疗对象，日剂量范围为每天约1-1000μg/kg/对象体重。根据炎性病症，药剂还可每周或每月施用。在一个实施方式中，serelaxin剂量是每日10、30、100或250μg/kg。这些剂量产生约1、3、10、30、75或100ng/ml的serelaxin血清浓度。在一个实施方式中，药学上有效的serelaxin或其激动剂以每日约30μg/kg施用。在另一个实施方式中，药学上有效的serelaxin或其激动剂以每日约10-约250μg/kg施用。在另一个实施方式中，持续施用serelaxin以维持约0.5-约500ng/ml、约0.5-约300ng/ml、和约1-约50ng/ml的serelaxin血清浓度。
在一个实施方式中，持续施用serelaxin以维持约10ng/ml的serelaxin血清浓度。这些serelaxin浓度预计能改善或减轻炎症性疾病相关的炎症，包括但不限于胸膜恶性肿瘤、败血症、创伤、伤口愈合、特应性变态反应、过敏性反应、自身免疫性脑脊髓炎、嗜酸性气道高反应性、CNS缺氧/血管损伤、高伤害感受、风湿性关节炎、多发性硬化(MS)、强直性脊柱炎(AS)、炎性肠病、哮喘、痛风、肌炎、舍格伦综合征、全身性红斑狼疮(SLE)、血管炎、湿疹、皮炎、硬皮病、毒漆疹、痤疮、荨麻疹和牛皮癣。
在一个实施方式中，持续施用serelaxin以维持约10ng/ml的serelaxin血清浓度。这些serelaxin浓度预计能改善或减轻炎症性疾病相关的炎症，包括但不限于胸膜恶性肿瘤、败血症、创伤、伤口愈合、特应性变态反应、过敏性反应、自身免疫性脑脊髓炎、嗜酸性气道高反应性、CNS缺氧/血管损伤、高伤害感受、风湿性关节炎、多发性硬化(MS)、强直性脊柱炎(AS)、炎性肠病、哮喘、痛风、肌炎、舍格伦综合征、全身性红斑狼疮(SLE)、血管炎、湿疹、皮炎、硬皮病、毒漆疹、痤疮、荨麻疹和牛皮癣。
[0050] Serelaxin组合物和制剂
[0051] Serelaxin、serelaxin激动剂和/或serelaxin类似物被配制成待用于本公开方法的药物。能刺激与具有生物或药学活性的serelaxin(如合成serelaxin、重组serelaxin)或serelaxin激动剂(如serelaxin类似物或serelaxin样调节物)结合相关的生物反应以短暂上调sST-2的任何组合物或化合物能用做本公开的药物。关于配方和施药的一般细节详述于科学文献(参见《雷明顿药物科学》(Remington's Pharmaceutical Sciences),宾夕法尼亚州伊斯顿的马克出版公司(Maack Publishing Co))。含有具有药学活性的serelaxin的药物制剂能够根据制药领域已知的任何方法制备。本公开方法中含有具有药学活性的serelaxin或serelaxin激动剂的药学制剂可配制用于任何传统上可接受的施药途径，包括但不仅限于经静脉内、皮下、肌内、舌下、鼻内、脑内、脑室内、局部、口服、玻璃体内和吸入。以下列出说明性示例。在一个实施方式中，serelaxin以静脉内或皮下方式施用。
[0052] 当serelaxin经静脉内或皮下注射(如输注、推注、药泵)给药时，含有具有药学活性的serelaxin或serelaxin激动剂的制剂可采用无菌注射剂形式，如水性或油性的无菌注射悬液。这种悬液可根据已知技术并运用上文提及的合适分散剂或润湿剂和助悬剂来配制。无菌注射剂还可以是溶于无毒的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌注射溶液或悬液。能采用的可接受载剂和溶剂包括水和林格氏液(一种等渗氯化钠溶液)。另外，无菌的不挥发油可常规充当溶剂或悬浮媒剂。出于此目的，可以使用任何温和的不挥发油，包括合成的甘油单酯或甘油二酯。另外，脂肪酸如油酸，也可用于制备注射剂。
[0053] 本公开的水性悬浮剂包含与适合制备水性悬液的赋形剂相混合的serelaxin。这些赋形剂包括助悬剂，如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙甲纤维素、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶和阿拉伯胶，以及分散剂或润湿剂，如天然产生的磷脂(例如卵磷脂)、环氧烷烃与脂肪酸的缩合产物(如聚氧乙烯硬脂酸酯)、环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物(如十七碳乙烯氧基十六醇)、环氧乙烷与脂肪酸己糖醇偏酯的缩合产物(如聚氧乙烯山梨醇单油酸酯)、或环氧乙烯与脂肪酸己糖醇酐偏酯的缩合产物(如聚氧乙烯去水山梨醇单油酸酯)。水性悬浮剂也可含有一种或多种防腐剂如对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸酯丙酯，一种或多种着色剂，一种或多种香味剂，以及一种或多种甜味剂如蔗糖、阿斯巴甜或糖精。配方可根据渗透压作调整。
[0054] 可通过将serelaxin悬浮在植物油如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油或者是矿物油如液体石蜡中来配制油性悬浮剂。油性悬浮剂能含有增稠剂(如蜂蜡、固体石蜡或鲸蜡醇)。可加入甜味剂制成可口的口服液。这些制剂可加入抗氧化剂如抗坏血酸来防腐。
[0055] 可通过将serelaxin与分散剂、助悬剂和/或润湿剂以及一种或多种防腐剂混合来配制本公开中的分散性粉末和颗粒，它适合通过加水制备水性悬浮剂。合适的分散剂或润湿剂和助悬剂通过上述公开举例说明。还可含有其他赋形剂，如甜味剂、香味剂和着色剂。
[0056] 本公开的药物剂型也可以是水包油乳剂的形式。油相可以是植物油如花生油或橄榄油，矿物油如液体石蜡，或者是这些的混合物。合适的乳化剂包括天然产生的胶类如阿拉伯胶和黄蓍胶，天然产生的磷脂如大豆卵磷脂，脂肪酸和己醇糖酐形成的酯或偏酯如山梨糖醇单油酸酯，以及这些偏酯与环氧乙烷的缩合产物如聚氧乙烯山梨醇单油酸酯。
[0057] Serelaxin制剂的施用和剂量方案
[0058] 本公开方法所用的含有具有药学活性的serelaxin或药学上有效的serelaxin激动剂的制剂，可通过任何传统上可接受的途径来施用，包括但不仅限于经静脉内、皮下、肌内、舌下、鼻内、脑内、脑室、局部、口服、玻璃体内和吸入。施用方式根据药代动力学和药物其他性质以及对象健康状况而变化。通用的指导方针如下所示。
[0059] 本公开的方法减少与IL-33介导炎症性疾病或其它病症相关的炎症。有效实现上述效果的serelaxin单用或与另一药剂或药物联用时的量被认为是治疗有效剂量。对此用途有效的剂量安排和量(即“给药方案”)取决于许多因素，包括炎症性疾病或病症的所处阶段、炎症性疾病或病症的严重度、不良副作用的严重程度、对象的总体健康状况、对象的体质、年龄等。在计算某一对象的给药方案时，也需考虑给药模式。给药方案必须考虑到药代动力学，即吸收速率、生物利用度、代谢、清除等。基于这些原则，serelaxin可用于治疗患有ST-2配体介导(如IL-33介导)炎症性疾病的对象中的炎症。
[0060] 本公开还提供了serelaxin在制造治疗ST-2配体介导炎症的药物中的应用，其中所述药物特别制备用于治疗受影响对象。进一步考虑的是serelaxin在制造治疗ST-2配体介导炎症的药物中的应用，其中所述对象在之前(如数小时前，一日或多日前，等等)接受过不同药物的治疗。在一个实施方式中，另一药物在对象体内仍有活性。在另一个实施方式中，另一药物在对象体内已经不再有活性。
[0061] 目前领域内的技术水平使临床医师能够针对每个对象对象确定serelaxin给药方案。作为一个示例，下面提供的serelaxin指导方针可充当确定给药方案的指南，即在实施本公开方法时，针对所施用的含具有药学活性的serelaxin制剂，确定剂量安排和剂量水平。作为总体指导原则，预期具有药学活性的serelaxin(如合成的、重组的、类似物、激动剂等)的日剂量通常在每日约1-1000μg/kg对象体重的用量范围内。在一个实施方式中，serelaxin剂量是每日10、30、100或250μg/kg。在另一实施方式中，这些剂量产生约1、3、10、30、75或100ng/ml的serelaxin血清浓度。在一个实施方式中，药学上有效的serelaxin或其激动剂以每日约30μg/kg施用。在另一个实施方式中，药学上有效的serelaxin或其激动剂以每日约10-约250μg/kg施用。在另一个实施方式中，持续施用serelaxin以维持约0.5-约500ng/ml的serelaxin血清浓度，更优选约0.5-约300ng/ml，最优选约1-约10ng/ml。在一个实施方式中，持续施用serelaxin以维持约10ng/ml或更高的serelaxin血清浓度。因此，本公开方法包括产生这些serelaxin血清浓度的施用。这些serelaxin血清浓度可改善或减轻炎症性疾病相关的炎症，包括但不限于胸膜恶性肿瘤、败血症、创伤、伤口愈合、特应性变态反应、过敏性反应、自身免疫性脑脊髓炎、嗜酸性气道高反应性、CNS缺氧/血管损伤、高伤害感受、类风湿性关节炎、多发性硬化(MS)、强直性脊柱炎(AS)、炎性肠病、哮喘、痛风、肌炎、舍格伦综合征、全身性红斑狼疮(SLE)、血管炎、湿疹、皮炎、硬皮病、毒漆疹、痤疮、荨麻疹和牛皮癣。此外，这些serelaxin浓度可改善或减轻并非传统已知的炎症性疾病(如癌症)中的炎症。根据对象情况，serelaxin的施用维持特定的一段时间或者按照需要一直持续下去，以达到对象状态的稳定。例如根据对象情况，serelaxin治疗期优选为约4小时-约96小时，更优选8小时-约72小时，还可按需进行任选的一次或多次重复治疗。
[0062] 根据ST-2配体介导炎症患者需要和可耐受的剂量和频率，可施用一次或多次serelaxin制剂。制剂应该提供足够量的serelaxin以有效改善病症。用于静脉内、皮下施用serelaxin的典型制剂取决于特定疗法。例如，serelaxin可经单一疗法(即没有其他伴随用药)或与另一药物组合治疗而向对象施用。在一个实施方式中，每日向对象施用serelaxin作为单一治疗。在另一个实施方式中，每日向对象施用serelaxin与另一药物的组合治疗。值得注意地，施用于对象的serelaxin剂量和频率可根据年龄、疾病程度、药物耐受和伴随用药及病症而异。
[0063] 在—些实施方式中，以1.0mg/ml溶液(5ml玻璃小瓶里装3.5ml)提供serelaxin。与serelaxin的稀释剂相同的安慰剂装在相同小瓶中。serelaxin或安慰剂配以生理盐水可以用便携装置中的注射泵进行静脉内或皮下小体积施用。使用经测试符合serelaxin使用要求的兼容管和三通活栓来施用serelaxin制剂。基于体重施用剂量，并通过调整serelaxin药物递送速率(如采用输注泵递送)针对每个对象进行调整。
具体实施方式
[0064]
[0065] 下列特定实施例旨在说明本公开而不应解释为对权利要求范围构成限制。
[0066] 实施例1
[0067] 心力衰竭对象的样品采集
[0068] 从多中心、随机、双盲、安慰剂对照的临床试验入组对象中采集样品，实施所述试验以确定serelaxin(重组的人serelaxin)在心力衰竭对象中的安全性和功效，如Teerlink等.(同上)所述。
[0069] 实施例2
[0070] 临床样品分析
[0071] 从218个对象(同上)中收集血清，确定其基线sST-2水平以及serelaxin治疗后的sST-2水平。发现sST-2的定量下限是3.1ng/ml且定量上限是200ng/ml。sST-2通过EIA试剂盒测量(更多细节参见实施例7)且准确的临床测量概括于表1(见附表1)。
[0072] 实施例3
[0073] Serelaxin诱导sST-2短暂增加
[0074] 图1显示对象用serelaxin和安慰剂治疗的一定时间内，sST-2中值浓度相比基线的变化。安慰剂组中sST-2在48小时下降，而serelaxin组显示在48小时时sST-2水平短暂上升。48小时时，安慰剂组与各serelaxin剂量组的差异在统计上显著。然而，此差异不持续，所有组到第5和第14天相比基线的变化都减少。
[0075] 更特定地，serelaxin治疗48小时时，所有治疗组都显著不同于安慰剂组(即安慰剂组相比基线减少30％)。在基线时，治疗组的几何平均数范围为47ng/ml-60ng/ml，即55％的治疗对象的sST-2浓度超过女性33.5ng/ml和男性49.3ng/ml的正常范围。48小时时，安慰剂组显示sST-2浓度减少30％，而所有serelaxin组显示相较基线增加(就所有serelaxin组相比安慰剂而言，p<0.05)。在第5和第14天，安慰剂组和所有serelaxin组显示sST-2相较基线减少35-50％。这确定serelaxin短暂上调sST-2。
[0076] 图2描述相较安慰剂组的合并的serelaxin组，即显示安慰剂组和合并的serelaxin组对象中，一定时间内sST-2中值浓度相比基线的变化。
[0077] 图3描述通过访问得到的sST-2治疗间分析，比较3个时间点下serelaxin组相较安慰剂组的sST-2几何平均数相比基线的变化。在治疗48小时，所有serelaxin组以及合并serelaxin组中相比基线的变化与安慰剂组中相比基线的变化显著不同。所述差异减弱，从而到第5天时4个serelaxin组中有3个以及合并的serelaxin组中，相比基线的变化与安慰剂组中相比基线的变化没有不同。到第14天，所有serelaxin组中相比基线的变化与安慰剂组中的变化没有不同。如上所述，这确定serelaxin短暂上调sST-2。
[0078] 实施例4
[0079] 用Serelaxin治疗炎症
[0080] 经历炎症、具有高IL-33水平和/或低sST-2水平的对象能用serelaxin治疗以减轻其组织炎症。在一个实施方式中，serelaxin防止或改善炎症后果。符合serelaxin治疗要求的对象可加入随机研究，以双盲方式接受IV安慰剂或每日10、30、100或250mg/kg的serelaxin并持续48小时。或者，除了标准炎症治疗外，可以根据医生的意见用serelaxin以相同方式治疗对象。还可在研究中评估其它施用途径或剂量。用于研究的安慰剂应与制备每日100mg/kg剂量的serelaxin所用的稀释剂是相同溶液。在serelaxin治疗中根据征兆和症状定期评估对象以监控其炎症状态，例如serelaxin治疗开始后6h、12h、24h、48h和第3、4、5和14天或另外情况下指导医师认为有必要时。研究结束时，通过EIA试验测试对象的ST-2配体(如IL-33)和sST-2水平，参见实施例7，以重新评估对象的炎症状况。另外，可从对象取血液样品以测试致炎因子的存在以及ST-2配体(如IL-33)的循环水平和/或能定量、标准化并与原始测量作比较的sST-2。受益于serelaxin治疗的对象最终会显示一种或多种致炎因子减少，包括但不限于IL-1β、IL-3、IL-5、IL-6、IL-13、IL-33、TNF、CXCL2、CCL2、CCL3、CCL5、CCL17、CCL24、PGD2和LTB4。因此，受益于serelaxin治疗的对象会经历ST-2配体介导炎症减少。许多非临床毒理学研究显示serelaxin在以广泛剂量范围施用且持续多至6个月连续治疗时是安全的。因此，可推断serelaxin不干预涉及免疫细胞内ST2表达的正常体内平衡机制(Kakkar.,同上)，这可能在直接施用sST-2时比较受关注。
[0081] 实施例5
[0082] 鉴定受益于Serelaxin治疗的对象
[0083] 本发明者提出serelaxin通过上调sST-2起作用，其充当诱饵受体并减少炎性环境下可用的ST-2配体(如IL-33)的量。例如，IL-33是促炎剂的强效激活剂，因而这类介质会下调、减轻炎症。在一个实施方式中，炎症对象(如患有哮喘、关节炎、关节病等的对象)会具有如所测IL-33的ST-2配体的循环水平。如果存在ST-2配体介导炎症，则预期配体水平高于基线水平。因此，ST-2配体循环水平高的对象会被鉴定为serelaxin治疗候选者。这类对象会从通过serelaxin减少ST-2配体以改善炎症中受益。在一个实施方式中，ST-2配体是IL-33。显然，在严重受损对象中，由于天然免疫系统功能，sST-2水平也可显著上调。例如，在心力衰竭对象中，sST-2水平能高达50ng/ml-130ng/ml或甚至更高。这些对象中，应测量2种ST-2配体如IL-33和sST-2。心力衰竭对象会受益于ST-2配体(如IL-33)减少到起保护作用但不再是炎症性的水平。
[0084] ST-2水平正常或仅轻微下降的炎症对象也是serelaxin治疗候选者。正常sST-2水平表明诱饵受体尚未上调，使IL-33在提高促炎细胞因子方面更有力。该诱饵可能尝试减少IL-33介导炎症但缺乏效力。低sST-2循环水平的对象也是serelaxin治疗的良好候选者，因为诱饵受体不上调或未起作用，使IL-33能继续诱导致炎因子。
[0085] 实施例6
[0086] 健康供体sST-2参照
[0087] 为了建立标准健康对象中sST-2水平的基线参照，一个自我报告健康组在先前已确定且可用于EIA测试试剂盒的参照比较(参见EIA测试试剂盒/PRESAGE sST-2测定，来自纽约的危急诊断公司(Critical Diagnostics))。该组包括490个在不同性别间均匀分布的健康供体。年龄范围为18-84岁。该组显示就sST-2值而言没有基于年龄的偏好(Kruskal-Wallis检验；男性＝0.501，女性＝0.056)，但sST-2值作为性别函数差异显著(Kruskal-Wallis检验p<0.0001)。490个供体中，一半是男性且一半是女性。整个组的sST-2中值浓度测定为约18.8ng/ml，其中男性中值为23.6ng/ml且女性中值为16.2ng/ml。然而，基于总体分析，正常健康男性的sST-2范围测定为8.5-49.3ng/ml，正常健康女性的sST-2范围测定为7.1-33.5ng/ml。因此，能与这些健康标准比较对象的sST-2水平，如表1所示。表1包括治疗组和访问组的sST-2概要统计，其被本发明者延伸到关于对象群体的全分析(见附表1)。
[0088] 实施例7
[0089] 测量Serelaxin对sST-2水平影响的试验
[0090] sST-2水平用EIA测试试剂盒&PRESAGE sST-2测试法(来自纽约的危急诊断公司)根据厂商说明书测量。或者，可使用其它试验，如QUANTIKINE ST2/IL-1R4免疫测定(来自明尼苏达州的安迪生物(R&D Systems,Inc.))。
[0091] EIA测试试剂盒是96孔板格式的定量夹心单克隆ELISA，用于测量血清或血浆中的sST-2。将来自218个对象的稀释血清加入抗ST-2抗体包被板的合适孔内并培育规定时间。在从板中洗出试剂并加入额外试剂且随后洗出的一系列步骤后，通过加入比色试剂来检测分析物sST-2。用分光设备在450nm测量所得信号。根据EIA测试试剂盒的试验说明中描述的参数，使用所有规定试剂和材料实施所述试验。
[0092] 本领域技术人员应清楚了解本公开的多种修改和变化，而不脱离本公开的范围和精神。尽管本发明结合一些特定实施方式作出阐述，应理解权利要求不应过度局限于这些特定的实施方式。事实上，本领域技术人员应理解，对所述实施本公开方式的各种修饰都包含在权利要求范围内。
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