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腹足动物生物 流体、制备和精制方法以及用途

阅读：627发布：2021-07-28

专利汇可以提供腹足动物生物流体、制备和精制方法以及用途专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明技术一般地涉及皮肤护理组合物、药疗化妆品或制剂，及其制备或使用方法。更具体地，本发明所述技术一般地涉及制备和使用组合物、药疗化妆品或制剂的方法，所述组合物、药疗化妆品或制剂包含从腹足动物，即Helix Aspersa Müller等收集和精制的独特组合物。，下面是腹足动物生物流体、制备和精制方法以及用途专利的具体信息内容。

权利要求

1.一种收集腹足动物生物流体的方法，所述方法包括以下步骤：
1)刺激活的腹足动物以增加生物流体分泌；
2)收集所述分泌的生物流体；
3)离心所述分泌的流体以产生上清液；和
4)过滤所述上清液以回收含提高的量的糖胺聚糖的滤液。
2.如权利要求1所述的方法，其还包括使所述腹足动物断食约1天至约5天以减少所述分泌的生物流体中的毒素的步骤。
3.如权利要求1所述的方法，其中所述腹足动物是Helix Aspersa Müller。
4.如权利要求1所述的方法，其中所述腹足动物是Helix pomatia。
5.如权利要求1所述的方法，其中所述腹足动物生物流体包含(1→4)-2-乙酰基，
2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖(1→4)-2-磺基-α-L-吡喃艾杜糖基糖醛酸。
6.如权利要求1所述的方法，其中所述刺激所述活的腹足动物的步骤是选自以下的方法：使所述腹足动物暴露于声振动；使所述腹足动物暴露于低度高压；使所述腹足动物暴露于低氧条件；使所述腹足动物暴露于热刺；使所述腹足动物暴露于电离辐射；使所述腹足动物暴露于物理刺激；和倒转所述腹足动物。
6.如权利要求5所述的方法，其中所述使所述腹足动物暴露于声振动的步骤包括使所述腹足动物暴露于约20kHz的超声辐射至少约10秒。
7.如权利要求5所述的方法，其中所述使所述腹足动物暴露于低度高压的步骤包括使所述腹足动物暴露于压力为约4psi至约7.5psi的高压室至少约10秒。
8.如权利要求7所述的方法，其中所述腹足动物暴露于所述高压室至少约15秒。
9.如权利要求5所述的方法，其中所述使所述腹足动物暴露于物理刺激的步骤包括在约1G至约6G的力之间离心所述腹足动物约2分钟至约10分钟。
10.如权利要求9所述的方法，其中所述离心步骤在约10℃或更高的温度进行。
11.如权利要求9所述的方法，其中所述离心步骤在约15℃或更高的温度进行。
12.如权利要求9所述的方法，其中所述离心步骤在约20℃或更高的温度进行。
13.如权利要求9所述的方法，其中所述离心步骤在约20℃至约35℃之间的温度进行。
13.一种腹足动物生物流体，其通过如权利要求1所述的方法制备。
14.如权利要求13所述的腹足动物生物流体，其中所述腹足动物生物流体含有有效使人类或动物皮肤组织康复的量的所述糖胺聚糖。
15.一种促进皮肤再生和康复的药疗化妆品，其包含至少约15重量％的通过权利要求
1的方法制备的滤液。
16.如权利要求15所述的药疗化妆品，其还包含递送系统。
17.如权利要求16所述的药疗化妆品，其中所述递送媒介包含膏霜、凝胶、溶液、油、悬浮液、分散体、软膏、膜、贴片、罩、丸剂、栓剂、皂、皮肤粘合胶、粉末、其衍生物或它们的组合。
18.一种腹足动物生物流体，其包含：
约0.001％至约0.1％糖醛酸；
约0.003％至约0.3％氨基己糖；
约0.001至约0.1％乙酰基化物；
约0.001至约0.1％硫酸化物；
约0.02％至约5.0％的至少一种粘多糖；
约0.05％至约0.5％的至少一种成纤维细胞生长因子；
约0.01％至约0.1％的至少一种酶；
约0.01％至约1.0％的透明质酸；
约0.001％至约0.1％的至少一种氧载体；
约0.001％至约0.1％的至少一种高分子量蛋白质；
约0.0001至约0.01％的至少一种痕量元素；
约0.005％至约0.1％的至少一种高分子量抗氧化剂化合物；
约0.005％至约0.1％的至少一种低分子量化合物；和
约80％至约98％的水。
19.一种腹足动物生物流体，其包含：
约0.02％至约0.03％糖醛酸；
约0.03％至约0.05％氨基己糖；
约0.01至约0.02％乙酰基化物；
约0.01至约0.02％硫酸化物；
约0.28％至约0.30％的至少一种粘多糖；
约0.1％至约0.2％的至少一种成纤维细胞生长因子；
约0.05％至约0.06％至少一种酶；
约0.1％至约0.2％透明质酸；
约0.01％至约0.02％的至少一种氧载体；
约0.04％至约0.05％的至少一种高分子量蛋白质；
约0.001至约0.002％的至少一种痕量元素；
约0.05％至约0.06％的至少一种高分子量抗氧化剂化合物；
约0.05％至约0.06％的至少一种低分子量化合物；和
约96.0％至约96.5％水。
20.如权利要求19所述的腹足动物生物流体，其中所述至少一种粘多糖包含
(1→4)-2-乙酰基，2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖(1→4)-2-磺基-α-L-吡喃艾杜糖基糖醛酸。
21.如权利要求19所述的腹足动物生物流体，其中所述至少一种成纤维细胞生长因子是选自以下的成员：FGF1、FGF2、FGF3、FGF4、FGF5、FGF6、FGF7、FGF8、FGF9、FGF10、FGF11、FGF12、FGF13、FGF14、FGF15、FGF16、FGF17、FGF18、FGF19、FGF20、FGF21、FGF22、FGF23和它们的组合。
22.如权利要求19所述的腹足动物生物流体，其中所述至少一种成纤维细胞生长因子是FGF1、FGF4、FGF7、FGF10或它们的组合。
23.如权利要求19所述的腹足动物生物流体，其中所述至少一种酶包含胶原酶、明胶酶、蛋白聚糖酶、其衍生物、或它们的组合。
24.一种药疗化妆品，其包含以重量计至少约1％至约30％的含(1→4)-2-乙酰基，
2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖(1→4)-2-磺基-α-L-吡喃艾杜糖基糖醛酸的腹足动物生物流体。
25.如权利要求24所述的药疗化妆品，其包含以重量计至少约10％至约25％的所述腹足动物生物流体。
26.如权利要求24所述的药疗化妆品，其中所述腹足动物生物流体是上清液生物流体。
27.如权利要求24所述的药疗化妆品，其中所述腹足动物生物流体是含有效量的(1→4)-2-乙酰基，2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖(1→4)-2-磺基-α-L-吡喃艾杜糖基糖醛酸的滤液。
28.如权利要求24所述的药疗化妆品，其还包含有效量的角鲨烯。
29.如权利要求28所述的药疗化妆品，其中所述角鲨烯以重量计占所述药疗化妆品的约0.3％至约3.0％。
30.如权利要求29所述的药疗化妆品，其中所述角鲨烯以重量计占所述药疗化妆品的约0.8％至约1.0％。
31.如权利要求24所述的药疗化妆品，其还包含有效量的透明质酸。
32.如权利要求31所述的药疗化妆品，其中所述透明质酸以重量计占所述药疗化妆品的约0.3％至约3.0％。
33.如权利要求31所述的药疗化妆品，其中所述透明质酸以重量计占所述药疗化妆品的约0.5％至约1.2％。
34.一种皮肤护理组合物，其包含：
生物有效量的腹足动物分泌流体，和
能够施用于人类或动物皮肤的递送媒介。
35.如权利要求34所述的皮肤护理组合物，其中所述递送媒介包含膏霜、凝胶、溶液、油、悬浮液、分散体、软膏、膜、贴片、罩、丸剂、栓剂、皂、皮肤粘合胶、粉末、其衍生物或它们的组合。
36.如权利要求34所述的皮肤护理组合物，其还包含约0.3％至约3.0％角鲨烯和约
0.3％至约3.0％透明质酸。
37.如权利要求32所述的皮肤护理组合物，其还包含至少一种防腐剂、至少一种抗氧化剂、至少一种溶剂、至少一种增白剂和至少一种摩擦剂。
38.如权利要求37所述的皮肤护理组合物，其中所述至少一种防腐剂包含苯氧乙醇、乙基己基甘油或它们的组合。
39.如权利要求37所述的皮肤护理组合物，其中所述至少一种防腐剂以重量计占所述皮肤护理组合物的约0.1％至约4.0％。
40.如权利要求37所述的皮肤护理组合物，其中所述抗氧化剂是选自以下的成员：橄榄油衍生物、油酸、棕榈酸、尿酸、类胡萝卜素、维生素Q、硫辛酸、维生素C、维生素E、酚类化合物、白藜芦醇、β-胡萝卜素、硒、高分子量抗氧化剂化合物、低分子量抗氧化剂化合物、其衍生物和它们的组合。
41.如权利要求37所述的皮肤护理组合物，其中所述抗氧化剂以重量计占所述皮肤护理组合物总重量的约0.1％至约10％。
42.如权利要求37所述的皮肤护理组合物，其中所述抗氧化剂以重量计占所述皮肤护理组合物总重量的约2.0％至约3.0％。
43.如权利要求37所述的皮肤护理组合物，其中所述溶剂是选自以下的成员：甘油、水或它们的组合。
44.如权利要求43所述的皮肤护理组合物，其中所述溶剂包含约60.0％至约70.0％水和约10.0％至约20.0％甘油，基于所述皮肤护理组合物的总重量。
45.如权利要求37所述的皮肤护理组合物，其中所述溶剂占所述皮肤护理组合物总重量的约50.0％至约90.0％。
46.如权利要求37所述的皮肤护理组合物，其中所述摩擦剂是刚玉氧化物。
47.如权利要求37所述的皮肤护理组合物，其中所述摩擦剂占所述皮肤护理组合物总重量的约0.001％至约0.005％。
48.如权利要求34所述的皮肤护理组合物，其还包含橄榄油衍生物。
49.如权利要求48所述的皮肤护理组合物，其中所述橄榄油衍生物选自：失水山梨糖醇橄榄油酸酯、橄榄油酸聚乙二醇(4)酯、角鲨烯、其衍生物和它们的组合。
50.如权利要求48所述的皮肤护理组合物，其中所述橄榄油衍生物占所述皮肤护理组合物总重量的约0.5％至约5.0％。
51.如权利要求34所述的皮肤护理组合物，其还包含以重量计约2.0％至约3.0％的橄榄油衍生物、以重量计约10％至约20％的所述腹足动物生物流体、以重量计约0.5％至约2.0％的透明质酸、以重量计约10％至约15％的甘油、以重量计约0.5％至1.5％的含苯氧乙醇和乙基己基甘油的防腐剂和以重量计约0.1％至约1.0％的刚玉氧化物，基于所述皮肤护理组合物的总重量。
52.一种组合物，其包含：
约10.0％至约25.0％的腹足动物分泌流体；
约0.5％至约10.0％硬脂酸；
约0.1％至约1.0％单硬脂酸甘油酯；
约1.0％至约10.0％的至少一种油；
约0.1％至约1.0％十八烷醇；
约1.0％至约10.0％甘油；
约0.02％至约2.0％氢氧化钾；和
约0.2％至约2.0％防腐剂。
53.如权利要求52所述的组合物，其中所述至少一种油包含白油、硅油或它们的组合。
54.如权利要求53所述的组合物，其中所述至少一种油包含约1％至约6％白油和约
1％至约2％硅油。
55.如权利要求52所述的组合物，其还包含约0.1％至约1.0％的香精。
56.一种制剂，其包含：
约10％至约20％腹足动物分泌流体；
约0.2％至约2.0％玫瑰果种子油；
约0.2％至约2.0％橄榄油乳化剂；
约0.5％至约5.0％海藻提取物；
约0.1％至约1.0％透明质酸；
约0.4％至约4.0％春黄菊提取物；
约0.5％至约5.0％糖异构化物；
约0.3％至约3.0％甘草提取物；和
约0.3％至约3.0％防腐剂。
57.如权利要求56所述的制剂，其还包含约60％至约65％水。
58.如权利要求56所述的制剂，其中所述防腐剂包含一种或多种植物提取物。
59.如权利要求58所述的制剂，其中所述植物提取物是选自以下的成员：牛至叶提取物、百里香提取物、肉桂皮提取物、迷迭香叶提取物、薰衣草花提取物、柠檬皮提取物、薄荷叶提取物、白毛茛根提取物、橄榄叶提取物、其衍生物和它们的组合。

说明书全文

腹足动物生物 流体、制备和精制方法以及用途

[0001] 相关申请

[0002] 本申请涉及以下申请并要求以下申请的权益：2007年6月23日提交的标题为BIOMEMBRANE PRODUCTS FOR SKIN RENEWAL，WOUNDREPAIR AND SCAR REMOVAL的美国临时申请60/937,008和2008年4月6日提交的标题为BIOCREAM PRODUCTS FOR SKIN RENEWAL，WOUNDREPAIR，AND SCAR REMOVAL的美国临时申请(Express Mail Label No.EV332942220US，Attorney Docket No.40064PIIA)。将前述申请的全部内容通过引用的方式并入本文。

[0003] 发明背景

[0004] 本发明技术一般地涉及皮肤护理组合物、药疗化妆品组合物和制备或使用它们的方法。更具体地，本发明所述技术一般地涉及利用从腹足动物(gastropod)(即，Helix Aspersa Müller等)回收和精制的独特组合物的皮肤护理组合物、药疗化妆品组合物以及制备和使用它们的方法。

[0005] 皮肤是由防护下面的肌肉和器官的多层上皮组织组成的身体系统最大的器官。因为它与环境接界，皮肤在保护身体抵御病原体和其它环境危害中起着极其重要的作用。皮肤在其它功能如隔离、体温调节、感觉、维生素D的合成和维生素B叶酸酯的保护中也起着重要作用。因此，必须维持健康的皮肤和促进受损或受伤皮肤的康复。在当今市场上的许多常规皮肤护理产品含有例如不总是帮助皮肤康复，甚至可能导致有害的副作用的化学合成成分。

[0006] 与许多皮肤护理产品不同，本发明技术基于中药 (traditional Chinesemedicine)，其中促进皮肤修复和康复的活性成分是从天然来源获得和精制。糖结合物是对与其它化学物种共价连接的糖的一般分类，已经发现，它是生物学中非常重要的化合物，由许多不同的类型如糖蛋白、糖肽、肽聚糖、糖脂和脂多糖组成。在细胞-细胞相互作用(包括细胞-细胞识别)和细胞-基质相互作用中涉及糖结合物。有趣的是，人们对由腹足动物分泌的可以提供药用益处的独特糖结合物的益处又有了新的兴趣。

[0007] 腹足动物或螺类(snails)是属于软体动物门的多样化类别，具有60,000-75,000个已知的存活物种。人们已经知道螺类提供药用益处几个世纪了，但是直到最近才对螺类、螺类身体部分和/或螺类分泌物的组成有了更深的认识，证明其具有有益性质。根据本申请所述的本发明技术，意料不到地发现，收集和精制的由腹足动物在受力时分泌的提供皮肤康复和再生性质的生物流体具有独特的组成。该分泌的生物流体可以用于许多皮肤护理组合物和其它制剂中，用于处理大量皮肤疾病，例如创伤、灼伤、伤疤、角化病、银屑病、痤疮、皱纹和老化以及皮肤损伤。

发明内容

[0008] 在一方面，本发明技术提供了从活的腹足动物收集和精制腹足动物生物流体的独特方法。所述方法包括，例如，刺激腹足动物的步骤，以增加希望的生物流体的分泌。刺激腹足动物的方法包括，例如，使腹足动物暴露于声振动(sound vibration)；使腹足动物暴露于低度高压(low hyperbaricpressure)；使腹足动物暴露于热刺(thermal puncture)；使腹足动物暴露于物理刺激(physical stimulus)；使腹足动物暴露于电离辐射(ionizing radiation)；使腹足动物暴露于重力；或倒转腹足动物。所述方法还包括收集分泌的流体和离心分泌的流体的步骤，以形成上清液。所述方法还包括过滤上清液的步骤以回收滤液，所述滤液含有提高的量的糖胺聚糖，一种糖结合物。应理解的是，本发明技术包括用所述方法收集的腹足动物生物流体。

[0009] 在另一方面，本发明技术提供了一种或多种药疗化妆品(cosmeceuticals)，所述药疗化妆品包含有效量的收集和精制的腹足动物生物流体。回收和精制的腹足动物生物流体(例如，滤液或上清液)可以占本申请所述组合物的以重量计约1％至约30％。可选择地，腹足动物生物流体可以占本申请所述的一种或多种皮肤护理组合物、制剂或药疗化妆品的约10％至约20％。所述组合物可以用于皮肤修复和再生，处理创伤、痤疮和伤疤，和/或可以用作防晒剂、抗衰老护肤霜、抗皱霜、增湿霜或增白霜。本发明所述组合物还可以包含有效量的角鲨烷和有效量的透明质酸等其它添加剂。

[0010] 在又一方面，本发明技术提供了生物有效量的腹足动物分泌流体和能够施用至皮肤的递送系统。递送系统可以，例如，包括膏霜(creams)、凝胶、溶液、油、悬浮液、分散体、软膏(ointments)、膜、贴片(patches)、粉末、栓剂、胶囊、丸剂、皂和皮肤粘合胶(skin adhesive glues)。

[0011] 在本发明所述技术的又一方面，提供了促进皮肤再生和康复的含至少约15重量％腹足动物生物滤液的药疗化妆品、组合物或制剂。

[0012] 在另一方面，本发明技术提供了腹足动物生物流体，该腹足动物生物流体包含约0.002％至约0.1％糖醛酸；约0.003％至约0.5％氨基己糖(hexozamine)；约0.001至约
0.1％乙酰基化物(acetyl)；约0.001至约0.1％硫酸化物(sulfate)；约0.02％至约1.0％的至少一种粘多糖；约0.05％至约0.5％的至少一种成纤维细胞生长因子；约0.01％至约0.1％的至少一种酶；约0.01％至约1.0％透明质酸；约0.001％至约0.2％的至少一种氧载体；约0.005％至约0.1％的至少一种高分子量蛋白质；约0.0001至约0.01％的至少一种痕量元素；约0.005％至约0.1％的至少一种高分子量抗氧化剂化合物(antioxidant compound)；约0.005％至约0.1％的至少一种低分子量化合物；和/或约80％至约98％水。

[0013] 在可选择的方面，本发明技术提供了具有至少约1％至至少约30％腹足动物生物流体的组合物、药疗化妆品或制剂。所述腹足动物生物流体可以是含富集量的糖胺聚糖的上清液或滤液。

[0014] 在又一方面，本发明技术提供了具有约10.0％至约25.0％腹足动物分泌流体的组合物、药疗化妆品或制剂。所述组合物、药疗化妆品或制剂还包含约0.5％至约10.0％硬脂酸；约0.1％至约1.0％单硬脂酸甘油酯；约1.0％至约10.0％的至少一种油；约0.1％至约1.0％十八烷醇；约1.0％至约10.0％甘油；约0.02％至约2.0％氢氧化钾；和/或约0.2％至约2.0％防腐剂。

[0015] 在又一方面，本发明技术提供了组合物、药疗化妆品或制剂，所述组合物、药疗化妆品或制剂具有约10％至约20％腹足动物分泌流体；约0.2％至约2.0％玫瑰果种子油(rose hip seed oil)；约0.2％至约2.0％橄榄油乳化剂；约0.5％至约5.0％海藻提取物；约0.1％至约1.0％透明质酸；约0.4％至约4.0％春黄菊提取物；约0.5％至约5.0％糖异构化物(saccharide isomerate)；约0.3％至约3.0％甘草提取物；和/或约0.3％至约3.0％防腐剂。附图说明

[0016] 图1是SDS-PAGE凝胶的图像，显示出用肝素裂解酶I、肝素裂解酶II或肝素裂解酶III与对照物相比较对腹足动物生物流体GAG的消化。

[0017] Fig.2是图示Helix Aspersa Müller套膜的组织染色(histological staining)的一组图像。图2-1图示WPA染色；图2-2图示nNOS染色；图2-3图示具有羧基的蛋白聚糖的染色；图2-4图示羧酸蛋白聚糖染色；图2-5图示其它糖蛋白染色；图2-6图示δ-D-葡萄糖和δ-D-甘露糖染色；图2-7图示寡糖染色；图2-8图示δ-D-gal和(1-3)-D-Gal-Nac染色；图2-9图示δ-L-岩藻糖染色；以及图2-10图示N-乙酰基-D-半乳糖胺或D-半乳糖染色。

[0018] 图3是线图，图示在柠檬酸盐存在和不存在的情况下用腹足动物生物流体(螺类浆液(serum)，SJ)处理过的成纤维细胞的细胞增殖的增加。

[0019] 图4图解了在用本发明技术的腹足动物生物流体(SJ)处理过的CHO-K1细胞中纤连蛋白组装(fibronectin assembly)的组织染色。

[0020] 图5图解了在用本发明腹足动物生物流体处理后人类皮肤成纤维细胞形态(human dermal fibroblast morphology)的组织染色。

[0021] 图6是图示腹足动物生物流体(螺类浆液)的抗氧化品质的线图。

[0022] 图7是图示含腹足动物生物流体的增湿液体制剂的增湿品质的线图。

[0023] 图8是示出含腹足动物生物流体的制剂对健康受试者皮肤的长期(22天)增湿效果的图解。

[0024] 图9是立体图像，显示出对于用对照霜处理的组(A，B，C)和用含本发明技术腹足动物生物流体的抗皱霜处理的组(D，E，F)，抗皱霜对皱纹深度的效果。在处理0天(A，D)、处理15天(B，E)或处理30天(C，F)时进行测量。

[0025] 如本申请所述，本发明技术一般地涉及从活的腹足动物收集和精制腹足动物生物流体的独特方法和该腹足动物生物流体在提供例如有益的皮肤护理处理和治疗结果的组合物、药疗化妆品或制剂中的用途。该基于天然的组合物、药疗化妆品和/或制剂可以触发受损细胞的再生；防止或减少疤痕化、角化、银屑病鳞屑以及所有类型的皮肤瑕疵；防止或减少痤疮的出现；防止或减少皱纹的迹象；以及能够对皮肤类脂屏障进行补充和/或增湿。所述组合物、药疗化妆品和/或制剂是基于天然成分的，优选的是含有少量或不含化学品、洗涤剂或填料。在这种情况下，具有该天然成分的独特组合物被认为(尽管不希望被任何具体理论所束缚)向皮肤(包括模拟皮肤的细胞内结构和对正常皮肤功能必不可少的组分或组分系统)提供抗微生物、防护、增湿、修复和/或更新性质。

[0026] 在一种实施方式中，本发明技术提供了从活的腹足动物收集和精制腹足动物生物流体的方法。本发明技术的至少一个优点是能够重复使用腹足动物收集生物流体，因为该方法优选的是不损害腹足动物。腹足动物在受力时分泌待收集和精制的生物流体，以防护、增湿、修复和更新它自己的皮肤膜。所述方法包括以下步骤：刺激活的腹足动物以增加生物流体分泌；收集分泌的流体；离心分泌的流体以产生上清液；和过滤上清液以回收滤液。该滤液含有提高的量的一种或多种独特的腹足动物糖胺聚糖。

[0027] 本申请使用的腹足动物是软体动物门腹足纲的成员，包括蜗牛属(Helix)(带壳的)和非蜗牛属(non-Helix)(无壳的)成员，其腺分泌流体在本发明技术实践中用作活性成分。适合的腹足动物包括，例如，Helix pomatia、Helixhortensis、Helix nemoralis、Helix cardidula、Helix tchthyomma(也称作Helixcampylea)、Helix fructicicola(也称作Helix se uca)、Helix strigella、Helixfruticum、Helix bidens、Helix arbostorum、Helix rotundata、Helix aculeata、Helix pulchella、Helix personata、Helix holoserica、Helix aperta、Helixparnassia、Helix alonensis、Helix candidissima、Helix pisana和Helixgualteviana。有关腹足纲的更广泛的讨论可以参见Invertebrate Zoology(第五版)，864p.Robert D.Barnes，(Saunders College Publishing，Inc.，Troy，Mich.，1987)。特别适合的腹足动物是Helix Aspersa Müller。可选择地，另一种适合的腹足动物是Helix pomatia。

[0028] 本发明所述技术的至少一种方法包括刺激活的腹足动物以增加生物流体分泌。刺激活的腹足动物的方法可以包括不损害活的腹足动物，同时增加腹足动物生物流体排出量，从而使腹足动物再次用于生物流体收集的任何方法。刺激导致腹足动物增加由粘蛋白(mucinous)、蛋白和唾液腺天然产生的生物流体分泌。这些方法包括，但不限于，使腹足动物暴露于声振动，使腹足动物暴露于低度高压，使腹足动物暴露于热刺，使腹足动物暴露于低氧条件(hypoxic conditions)，使腹足动物暴露于重力，倒转腹足动物以改变它的朝向和使腹足动物暴露于物理刺激。

[0029] 使腹足动物暴露于声振动包括本领域已知的方法，使腹足动物暴露于约5kHz至约25kHz，可选择地约10KHz至约20kHz，可选择地约15kHz至约20kHz的频率，持续约1秒至约60秒，可选择地约5秒至约30秒，更适合地约10秒。可以使腹足动物暴露于约5kHz，约10kHz，约12kHz，约15kHz，约20kHz的声频，持续至少约5秒，至少约10秒，至少约15秒，至少约20秒，以增加生物流体分泌。

[0030] 使腹足动物暴露于声振动的特别适合的方法包括：使用配有径向超声焊极S3(radial Sonotrode S3)(3mm直径)的超声发生器UP 200H horntype(20kHz，最大波幅为210μm，最大额定功率输出为460W)，使腹足动物暴露于超声照射，持续约10秒。

[0031] 可选择地，可以通过使腹足动物暴露于低度高压而刺激腹足动物，以增加待收集和精制的生物流体的产量。可以使用本领域已知的任何适合的方式，包括高压氧疗(HBOT)室。适合的HBOT室可以使腹足动物暴露于约3磅/平方英寸(psi)至约8psi，更适合地约4psi(1.27ATA(绝对大气压)8.92FSW)至约7.35psi(1.5ATA 16.38FSW)的压力，氧气浓度为至少约90％，更适合地至少约95％，更适合地至少约100％。使腹足动物暴露于低度高压，持续至少约5秒，更适合地至少约10秒，更适合地至少约12秒，更适合地至少约15秒，以刺激腹足动物产生生物流体。

[0032] 刺激腹足动物以增加生物流体分泌也可以包括将腹足动物倒转指定量的时间。可以通过腹足动物尾部将腹足动物悬吊，从而倒转腹足动物，使它的头部朝向地面，持续至少约5秒，至少约7秒，至少约10秒，至少约30秒，至少约1分钟，至少约1.5分钟，至少约2分钟。例如，可以使用小型钳子夹住腹足动物的尾部并将其在空中倒转约10秒至约2分钟。可以使用吸管(straw)沿着腹足动物腹部表面收集生物流体。

[0033] 可选择地，刺激腹足动物以增加生物流体分泌可以包括使腹足动物暴露于重力。重力导致在腹足动物的弯区域(sinus region)如颊或心弯(buccal orcardiac sinus)生物流体分泌增加。可以使用注射器吸取生物流体以移除生物液体。

[0034] 为增加流体分泌，也可以使腹足动物暴露于电离辐射(x-射线或γ射线)，持续约0.5秒，约1.0秒，约2.0秒。也可以使腹足动物暴露于低氧条件以刺激流体分泌。使腹足动物暴露于氧耗尽或环境低氧，持续至少约10秒，至少约12秒，至少约15秒，以增加分泌物产量。可以使用熟悉本领域的人员已知的氧耗尽或环境低氧的任何方法。

[0035] 在另一种实施方式中，刺激腹足动物以增加生物流体分泌可以例如通过使腹足动物暴露于物理刺激而实现。物理刺激腹足动物的适合方式是离心腹足动物。离心在不破坏带壳腹足动物的壳的条件下进行，或者如果是无壳腹足动物，则在腹足动物维持存活且不被压伤的条件下进行。将腹足动物在足以导致腹足动物分泌流体的温度和重力(G)离心一段时间。刺激腹足动物产生流体所需要的力适合的是小于约7G，更适合地小于约6G，更适合地约1G至约6G，更适合地约2G至约5G，持续约2分钟至约10分钟。一种适合的实施方式包括，例如，在或约2G离心腹足动物约10分钟。在以下温度离心腹足动物：约10℃或更高，更适合地15℃或更高，更适合地20℃或更高，更适合地约10℃至约35℃，更适合地约20℃至约35℃。

[0036] 可选择的离心方法包括在离心期间波动腹足动物约3至约4次。波动包括加速离心至希望的G力，减速离心并再次加速离心。该方法的适合的实施方式包括在约2G离心腹足动物约10分钟，且在此期间实施约3或约4次波动。

[0037] 在刺激腹足动物后收集腹足动物生物流体的方法可以是熟悉本领域人员已知的任何方法。例如，可以使用吸管从腹足动物腹部表面吸取生物流体。

[0038] 可以将所收集的腹足动物分泌的生物流体在约200rpm至约5000rpm，更适合地在约2000rpm离心，持续至少约2分钟，可选择地至少约5分钟，可选择地至少约2分钟至约10分钟，以除去任何大粒子和产生上清液。将上清液滗析并通过孔径为约0.1至约1微米的微孔过滤器过滤，以产生滤液。过滤可以在压力下进行以加速过滤过程。然后回收含腹足动物生物流体中的活性成分的滤液。

[0039] 在一些实施方式中，从活的腹足动物收集生物流体的方法还包括在刺激腹足动物之前使腹足动物断食至少约1天至约5天，可选择地约1天至约2天。再次，不希望束缚于任何具体理论，使腹足动物断食被认为减少作为腹足动物所吃食物的副产物产生的可能在分泌的流体中存在的毒素的量。可选择地，如果未使腹足动物断食，则可以通过熟悉本领域人员已知的方法(例如，钝化毒素)从分泌的流体除去毒素。

[0040] 本发明技术还提供了含用上述方法制备的上清液和滤液的腹足动物生物流体。如下面实施例中所述，腹足动物生物流体含有向人类皮肤提供有益的康复和再生效果等性质的组分的混合物。当使用适合的递送媒介施用至皮肤时，腹足动物生物流体可以，例如，促进免疫系统清除死的和濒死细胞，触发产生新细胞，通过修复、增湿和防护皮肤构成部分而重建皮肤基质。所述腹足动物生物流体包含约0.001％至约0.1％糖醛酸；约0.003％至约0.3％氨基己糖；约0.001至约0.1％乙酰基化物；约0.001％至约0.1％硫酸化物；约0.02％至约5.0％的至少一种粘多糖；约0.05％至约0.5％的至少一种成纤维细胞生长因子；约0.01％至约0.1％的至少一种酶；约0.01％至约1.0％透明质酸；约0.001％至约
0.1％的至少一种氧载体；约0.001％至约0.1％的至少一种高分子量蛋白质；约0.0001至约0.01％的至少一种痕量元素；约0.005％至约0.1％的至少一种高分子量抗氧化剂化合物；约0.005％至约0.1％的至少一种低分子量抗氧化剂化合物；和/或约80％至约98％水。适合的是，所述腹足动物生物流体得自Helix Aspersa Müller。

[0041] 所述至少一种粘多糖可以包括含糖部分(carbohydrate moieties)的糖胺聚糖(GAG)和蛋白聚糖(PG)，包括硫酸软骨素(chondroitin sufate，CS)、硫酸皮肤素(dermatan sufate，DS)、肝素(heparin，HP)和硫酸乙酰肝素(heparan sulfate，HS)。适合的是，所述粘多糖是由Helix Aspersa Müller产生的新型糖胺聚糖，分子量为约29,000Da(基于粘度计法测量)，均匀重复二糖结构为 -2-乙酰基，2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖 -2-磺基-α-L-吡喃艾杜糖基糖醛酸( -2-acetyl，
2-deoxy-α-D-glucopyranose -2-sulfo-α-L-idopyranosyluronicacid)。该多糖代表独特的且被认为是新的糖胺聚糖。它与糖胺聚糖的肝素和硫酸乙酰肝素家族相关，但是显然不同于这些种类糖胺聚糖的所有已知成员。该多糖的结构具有相邻的N-乙酰基葡糖胺和2-磺基-艾杜糖醛酸残基。核心蛋白和特定糖胺聚糖的组合产生了具有精确发育型(precisedevelopmental patter)的独特蛋白聚糖。这种糖胺聚糖占蜗牛软体组织干重的大概约3％至约5％，暗示对这种有机体的生存具有重要生物作用。腹足动物糖胺聚糖牢固地结合二价阳离子，例如铜(II)。粘多糖占腹足动物生物流体组成的至少约0.02％，至少约0.2％，至少约0.3％，至少约0.5％，至少约0.8，至少约1％，至少约2％，至少约3％或至少约4％。

[0042] 成纤维细胞生长因子(FGF)是一类在结构上相关的多肽生长因子，目前由具有肝素结合区域的23个成员组成。已知FGF在血管形成、创伤愈合和胚胎发育中起作用。本发明技术的所述至少一种成纤维细胞生长因子(FGF)可以选自：例如，FGF1、FGF2、FGF3、FGF4、FGF5、FGF6、FGF7、FGF8、FGF9、FGF10、FGF11、FGF12、FGF13、FGF14、FGF15、FGF16、FGF17、FGF18、FGF19、FGF20、FGF21、FGF22、FGF23或它们的组合。适合的是，在本发明技术实践中利用的至少一种成纤维细胞生长因子是FGF1、FGF4、FGF7、FGF10或它们的组合。本发明技术的独特腹足动物生物流体含有以重量计至少约0.005％，至少约0.01％，至少约0.05％，至少约0.08％，至少约0.1％，至少约0.2％，至少约0.5％的至少一种成纤维细胞生长因子组成。

[0043] 本发明技术的独特腹足动物生物流体还包含一种或多种酶。所述酶可以包括，例如，明胶酶、蛋白聚糖酶(proteoglycanases)、胶原酶(collagenases)或它们的组合。明胶酶包括容许活的有机体水解明胶的任何蛋白水解酶，包括但不限于MMP2和MMP9。蛋白聚糖酶属于一类基质金属蛋白酶(MMPs)，所述基质金属蛋白酶(MMPs)是锌依赖性内肽酶(zinc dependentendopeptidases)。它们能够降解所有种类的细胞外基质蛋白质。适合的蛋白聚糖酶包括但不限于MMP-23a、MMP-2、MMP23B、MMP-7、MMP-26。胶原酶包括破坏胶原肽键的任何酶。胶原酶被认为参与破坏病原体如细菌中的细胞外结构，因此响应于组织损伤或免疫应答而生成。所述一种或多种酶以重量计占腹足动物生物流体组成的至少约0.005％，可选择地至少约0.01％，可选择地至少约0.02％，可选择地至少约0.05％，可选择地至少约0.08％或可选择地至少约0.1％。

[0044] 所述腹足动物生物流体还含有至少一种氧载体，例如血蓝蛋白如铜血蓝蛋白。血蓝蛋白是高分子量载氧蛋白质。所述载氧蛋白质被认为在逆转氧化性损伤以及促进皮肤细胞的细胞增殖和再生中起作用。腹足动物生物流体含有至少约0.001％，可选择地至少约0.01％，可选择地至少约0.02％，可选择地至少约0.05％，可选择地至少约0.08％，或可选择地至少约0.1％的至少一种氧载体。

[0045] 所述腹足动物生物流体还包含至少一种较高分子量蛋白质。在生物流体中发现的较高分子量蛋白质可以包括粘蛋白(mucin)或粘液糖蛋白(mucusglycoproteins)。粘蛋白或粘液糖蛋白是一类多分散性分子，设计成在全身的粘膜表面执行多重任务。粘蛋白是高分子量上皮糖蛋白，具有高含量的成簇寡糖(clustered oligosaccharides)，所述成簇寡糖以O-成苷的方式连接至富含苏氨酸、丝氨酸和脯氨酸的串联重复肽。它们富含半胱氨酸残基，所述半胱氨酸残基涉及形成大分子复合物的亚单位交联(sub unit crosslinking)。它们还促成粘液凝胶屏障(mucus gel barrier)并且是动态、交互、粘膜防御系统的一部分。多年来，对许多器官的粘液糖蛋白进行的多项研究表明，这些大分子由通过链间二硫键结合在一起并通过非共价相互作用进一步稳定化的亚单位组成。有趣的是，本发明技术的腹足动物生物流体大概包含以重量计至少约0.001％，可选择地至少约0.005％，可选择地至少约0.01％，可选择地至少约0.05％，或可选择地至少约0.08％的至少一种高分子量蛋白质。

[0046] 所述腹足动物生物流体还包含至少一种痕量元素。痕量元素包括，例如，铜(Cu)、2+
锌(Zn)、铁(Fe)、钙(Ca )或它们的组合。痕量元素以重量计占生物流体的约0.0001％，可选择地至少约0.0005％，可选择地至少约0.001％，可选择地至少约0.005％，或可选择地至少约0.01％。

[0047] 所述腹足动物生物流体还可以含有至少一种高分子量抗氧化剂化合物。抗氧化剂是能够减缓或防止其它分子氧化的分子。氧化是将电子从物质转移至氧化剂的化学反应。氧化反应能够产生自由基，自由基引发损害细胞的链式反应。抗氧化剂通过除去自由基中间体终止这些链式反应，并且通过氧化自身而抑制其它氧化反应。结果，抗氧化剂经常是还原剂，包括但不限于硫醇或多酚。所述腹足动物生物流体含有以重量计约0.005％，可选择地至少约0.008％，可选择地至少约0.01％，可选择地至少约0.05％，或可选择地至少约
0.1％的至少一种较高分子量抗氧化剂。此外，含腹足动物生物流体的药疗化妆品、组合物或制剂也可以进一步包含至少一种另外的抗氧化剂化合物。可以使用本领域已知的任何适合的天然生成的抗氧化剂化合物，包括但不限于，橄榄油衍生物、油酸、棕榈酸、尿酸、类胡萝卜素、维生素Q(ubichinones)、硫辛酸、维生素C、维生素E、酚类化合物、白藜芦醇、β胡萝卜素、硒、高分子量抗氧化剂、低分子量抗氧化剂化合物、其衍生物和它们的组合。所述药疗化妆品、组合物或制剂可以包含以重量计占总组成约0.01％至约10.0％，更适合地约
0.1％至约5％，更适合地约0.5％至约3％的所述抗氧化剂化合物。所述抗氧化剂可以以重量计占药疗化妆品、组合物或制剂的约0.01％，约0.05％，约0.1％，约0.2％，约0.5％，约0.8％，约1.0％，约1.2％，约1.5％，约1.8％，约2.0％，约2.2％，约2.5％，约2.8％，约
3.0％，约5.0％，约7.0％，约8.0％，约10.0％。

[0048] 所述腹足动物生物流体还含有以重量计约0.005％，至少约0.008％，至少约0.01％，至少约0.05％，至少约0.1％的至少一种低分子量抗氧化剂化合物。低分子量抗氧化剂化合物是细胞和有机体的抗氧化防卫机制的重要部分。主要的低分子量抗氧化剂包括但不限于尿酸、维生素Q、硫辛酸、维生素C和E、类胡萝卜素和酚类化合物。

[0049] 在使用和最终的制剂/组合物/药疗化妆品加工之前可以将所述腹足动物生物流体贮存起来。可以在约-10℃至约-30℃，优选的是在约-15℃至约-20℃将该流体快速冷冻。通过冻干可以将大量的生物流体贮存一年以上。所述生物流体是热敏的，可以在约60℃至80℃变性，如果加热到约90℃以上，则失去再生和抗菌性质。优选的是，当在约-20℃至约70℃的温度贮存时，该生物流体在组合物中是稳定的。

[0050] 在一些实施方式中，所述腹足动物生物流体可以在药疗化妆品中以有效量使用。“药疗化妆品”是含化妆品和生物制品和/或药品的组合的组合物，例如抗皱霜和防晒剂。
优选的是，本发明技术的药疗化妆品向皮肤提供有益性质。有益性质包括但不限于维持健康皮肤；增湿；康复和防止疤痕化；治疗由日光损害的皮肤；防止过早老化和起皱；诱导皮肤再生和创伤愈合；诱导皮肤修复；诱导氧化应激；增白皮肤色素沉着或使肤色变浅；回复组织柔软性；打开阻塞的毛孔；治疗向内生毛、须部假性毛囊炎(razor bumps)、干燥和光老化；抗炎作用；减轻痤疮疤痕化；对抗痤疮皮炎(acne breakouts)；或者对抗头皮和皮肤感染。可以包含本发明技术的腹足动物生物流体的适合的药疗化妆品优选地包括抗衰老、抗皱、痤疮治疗剂、创伤贴片、创伤膏、增白组合物和抗微生物组合物。

[0051] 腹足动物生物流体的“有效量”是提供希望的有益结果的量。在本发明技术的药疗化妆品中使用的腹足动物生物流体的有效量取决于所使用的递送系统和施用类型。腹足动物生物流体的有效量以重量计占药疗化妆品的至少约1％，至少约5％，至少约10％，至少约15％，至少约20％，至少约25％，至少约30％，至少约35％。腹足动物生物流体可以以重量计占药疗化妆品的约1％，约2％，约4％，约6％，约8％，约10％，约12％，约14％，约16％，约18％，约20％，约22％，约24％，约25％，约26％，约28％，约30％，约32％，约33％，约34％，约35％。

[0052] 药疗化妆品可以包含有效量的腹足动物生物流体和能够施用至皮肤的递送媒介。适合的递送媒介包括但不限于膏霜、溶液、凝胶、油、悬浮液、分散体、软膏、膜、贴片、粉末、胶囊、皂、栓剂、其衍生物或它们的组合。

[0053] 腹足动物生物流体的量可以取决于所使用的递送媒介。在一种实施方式中，例如，用于处理面部、手部或身体的膏霜可以包含约15％至约20％腹足动物生物流体。在另一种实施方式中(浸泡手和脚或在沐浴中洗涤身体的液体)，组合物、药疗化妆品或制剂可以含有约1％至约5％腹足动物生物流体。在又一种实施方式中(用于对特定皮肤区域进行局部处理的油)，组合物、药疗化妆品或制剂可以包含约30％至约35％腹足动物生物流体。在又一种实施方式中，组合物、药疗化妆品或制剂可以是施用至创伤区域或特定皮肤区域的粉末，该粉末含有约15％至约20％的腹足动物生物流体。在另一种实施方式中，组合物、药疗化妆品或制剂可以是覆盖大创伤的罩(mask)或面罩(face mask)，所述罩或面罩包含约20％至约25％腹足动物生物流体。在又一种实施方式中，药疗化妆品可以是覆盖部分的面部或身体区域或创伤区域的膜，该膜包含约20％至约25％腹足动物生物流体。作为可以控制活性成分释放的贴片或条带(strip)，药疗化妆品可以包含约15％至约25％腹足动物生物流体。在又一种实施方式中，药疗化妆品可以包括用于口服给药活性成分的丸剂或胶囊，所述丸剂或胶囊包含以药疗化妆品总重量计约25％至约30％的腹足动物生物流体。在又一种实施方式中，药疗化妆品可以是洗涤手部、面部或身体的皂，该皂包含以组合物总重量计约1％至约10％，更适合地约1％至约3％的腹足动物生物流体。

[0054] 此外，所述药疗化妆品还可以包含至少一种橄榄油或橄榄油衍生物。橄榄油衍生物包括但不限于油酸、棕榈酸和其它脂肪酸、角鲨烯、甾醇(包括植物甾醇和生育甾醇(tocosterols))、酪醇、羟基酪醇(hydroxytryrosol)(包括oleocanthal和橄榄苦苷)、橄榄油酸聚乙二醇(4)酯(Peg-4olivate)、表面活性剂失水山梨糖醇橄榄油酸酯(sorbitan olivate)、其衍生物或它们的组合。橄榄油衍生物含有有效的抗氧化剂性质，以及增湿和免疫刺激性质(immunestimulating properties)。所述组合物包含以重量计约0.01％至约10％，更适合地约0.5％至约5％的至少一种橄榄油衍生物。所述至少一种橄榄油衍生物可以占本发明药疗化妆品、组合物或制剂总重量的约0.08％，约0.1％，约0.2％，约0.3％，约0.5％，约0.8％，约1.0％，约1.2％，约1.5％，约1.8％，约2.0％，约2.2％，约2.3％，约2.4％，约2.5％，约2.6％，约2.8％，约3.0％，约3.2％，约3.4％，约3.6％，约4.0％，约
4.2％，约4.5％，约4.8％，约5.0％，约7.0％，约10.0％。所述橄榄油衍生物可以适合地是橄榄油酸聚乙二醇(4)酯、角鲨烷和失水山梨糖醇橄榄油酸酯的组合。在一种适合的实施方式中，所述至少一种橄榄油衍生物包含约0.2％至约2.0％，更适合地0.8％至约1.0％的橄榄油酸聚乙二醇(4)酯；约0.2％至约2.0％，更适合地约0.8％至约1.0％的角鲨烷；和约0.2％至约2.0％，更适合地约0.8％至约1.0％的失水山梨糖醇橄榄油酸酯。

[0055] 在一些实施方式中，所述药疗化妆品还包含约0.01％至约10％，更适合地约0.1％至约2％，更适合地约0.8％至约1.2％的角鲨烷，基于药疗化妆品、组合物或制剂的总重量。角鲨烷是天然有机化合物，主要得自鲨鱼肝油或橄榄油，但是也存在于植物源如苋菜种子、米糠、麦芽和橄榄。角鲨烯在药疗化妆品中用作天然增湿剂和抗氧化剂，其渗透皮肤迅速且不留下油腻残留物。

[0056] 在一些实施方式中，所述药疗化妆品还包含透明质酸。透明质酸可以占组合物总重量的约0.01％至约10％，更适合地约0.1％至约5％，更适合地约0.5至约2％，更适合地约0.8％至约1.0％。透明质酸是未硫酸化的糖胺聚糖，广泛地分布于结缔组织、上皮组织和神经组织。它是细胞外基质的主要组分之一，促成细胞增殖和迁移，参与许多细胞表面受体相互作用且涉及组织修复。透明质酸已证明是有效的自由基清除剂，并且当清除由紫外线辐射导致的氧化剂时也可以是有效的。它在诱导组织康复(特别是在手术如白内障手术后)中起作用。在组合物中，透明质酸可以在组织康复和诱导皮肤上的氧化应激中起作用。在一些实施方式中，使透明质酸和角鲨烯与腹足动物生物流体组合，以形成需要的药疗化妆品。

[0057] 在其它实施方式中，所述药疗化妆品、组合物或制剂可以包含防腐剂。防腐剂是添加至药疗化妆品、组合物或制剂以防止微生物(包括细菌、病毒、酵母和真菌)生长和保护药疗化妆品免受由空气和光导致的损害的成分。所述药疗化妆品可以包含约0.01至约10％，更适合地约0.1至约5％，更适合地约0.5％至约5％，更适合地约0.8％至约1.2％的防腐剂，基于组合物的总重量。特别适合的防腐剂包括苯氧乙醇、乙基己基甘油、其衍生物或它们的组合。苯氧乙醇是有机化学化合物，二醇醚杀菌剂。乙基己基甘油(1-(2-乙基己基)-甘油醚)是防腐剂作用增强剂，抑制细菌生长并且是温和的保湿剂和皮肤柔润剂。
可以使用本领域已知的用于化妆品中的任何适合的防腐剂。其它可选择的防腐剂包括对羟基苯甲酸酯。此外，防腐剂可以是植物提取物的组合。适合的植物提取物包括，例如，牛至叶提取物(organumvulgare leaf extract)、百里香提取物(thymus vulgaris extract)、肉桂皮提取物(cinnamomum zeylanicum bark extract)、迷迭香叶提取物(rosmarinus officinalisleaf extract)、薰衣草花提取物 (lavandula augustifolia flower extract)、柠檬皮提取物(citrus medica limonum peel extract)、薄荷叶提取物(menthe piperitaleaf extract)、白毛茛根提取物(hydrastis Canadensis root extract)、橄榄叶提取物(olea europaea leaf extract)、其衍生物或它们的组合。

[0058] 所述药疗化妆品、组合物或制剂还可以包含至少一种溶剂。溶剂是使固体、液体或气体溶解到所得溶液中的液体。适合的溶剂包括但不限于水、甘油、醇、其衍生物和它们的组合。甘油是无色的粘稠的糖醇，其也可以容易地溶解在醇或水中。甘油也是高度“吸湿性的”，这意味着它从空气吸收水。甘油向组合物提供以下作用：改善光滑度、提供润滑和作为保湿剂。甘油的量取决于药疗化妆品、组合物或制剂的递送系统。适合的是，所述药疗化妆品、组合物或制剂包含占总重量约0.1％至约99％，可选择地约10％至约90％的溶剂。药疗化妆品可以包含以重量计占组合物、药疗化妆品或制剂的至少约0.1％，约1.0％，约
5％，约8％，约10.0％，约12.0％，约15.0％，约18.0％，约20.0％，约22.0％，约24.0％，约25.0％，约28.0％，约30.0％，约32.0％，约35.0％，约36.0％，约38.0％，约40.0％，约42.0％，约44.0％，约48.0％，约50.0％，约55.0％，约58.0％，约60.0％，约62.0％，约64.0％，约66.0％，约68.0％，约70.0％，约72.0％，约74.0％，约76.0％，约78.0％，约80.0％，约82.0％，约84.0％，约86.0％，约88.0％，约90.0％，约92.0％，约94.0％，约
96.0％，约98.0％的溶剂。

[0059] 在一些实施方式中，所述药疗化妆品、组合物或制剂可以包含摩擦剂。适合的摩擦剂提供死亡细胞或组织和其它碎屑的脱落结果，且不损害皮肤。适合的摩擦剂是本领域已知的，包括但不限于corudrum oxide。所述药疗化妆品、组合物或制剂可以包含以重量计约0.0005％至约0.05％，更适合地约0.001％至约0.01％的摩擦剂。

[0060] 在一些实施方式中，所述药疗化妆品、组合物或制剂可以包含香精(aromatic essence)。香精可以向制剂提供香味，其包括但不限于，例如，香草香精、茉莉香精、紫罗兰香精、玫瑰香精、薰衣草香精、春黄菊香精、桃子香精、草莓香精、椰子香精、绿茶香精、薄荷香精、柑橘香精等。所述药疗化妆品、组合物或制剂可以包含约0.005％，可选择地约0.01％，可选择地约0.05％，可选择地约0.1％，可选择地约0.5％，可选择地约0.8％，可选择地约1.0％，或可选择地约2.0％的香精。

[0061] 在一种具体实施方式中，所述药疗化妆品、组合物或制剂可以包含约5.0％至约10.0％硬脂酸、约0.1％至约1％单硬脂酸甘油酯、约1％至约10％的至少一种油、约0.1％至约1％十八烷醇、约5％至约15％甘油、约10％至约20％腹足动物生物流体、约0.1％至约1.0％氢氧化钾、约0.1％至约2.0％香精和约0.1％至约2.0％的防腐剂(包含苯氧乙醇和乙基己基甘油的组合)。所述一种或多种油可以包括白油、硅油、其衍生物或它们的组合。
适合的是，所述组合物、药疗化妆品或制剂包含至少一种油，所述至少一种油含有约4.0％至约5.0％白油和约1.0％至约2.0％硅油，基于组合物的总重量。该药疗化妆品还可以包含足量的水，以使组合物达到约1000克。

[0062] 在另一种具体实施方式中，所述药疗化妆品、组合物或制剂可以包含约0.1％至约1.2％橄榄油酸聚乙二醇(4)酯、约0.1％至约1.2％失水山梨糖醇橄榄油酸酯、约0.1％至约1.2％角鲨烷、约10.0％至约20.0％腹足动物生物浆液、约0.1％至约2.0％透明质酸、约
10％至约20％甘油、约0.1％至约2％防腐剂(例如，苯氧乙醇和乙基己基甘油)和约0.1％至约1％corundrum oxide，基于组合物的总重量。

[0063] 在又一种实施方式中，所述药疗化妆品、组合物或制剂包含约2.4％至约3.0％的至少一种橄榄油衍生物、约10％至约15％腹足动物生物流体、约0.8％至约1.2％透明质酸、约10.0％至约15.0％甘油和约0.8％至1.2％防腐剂(例如，苯氧乙醇和乙基己基甘油)，基于组合物的总重量。适合的是，这些实施方式包含水，以使制剂重量达到约1000g。

[0064] 在又一种具体实施方式中，所述药疗化妆品、组合物或制剂可以包含约0.01％至约5.0％，更适合地约0.1％至约2.0％的玫瑰果种子油，基于组合物的总重量。玫瑰果种子油富含维生素A前体和滋养和增湿皮肤的必需脂肪酸。所述药疗化妆品、组合物或制剂还可以包含约5％至约20.0％，更适合地约10％至约15％的腹足动物生物流体滤液、约0.1％至约10.0％橄榄油衍生物，基于组合物的总重量。橄榄油衍生物包含补充皮肤的脂质含量的乳化剂、表面活性剂和角鲨烷以及它们的衍生物，其包括但不限于本申请所述的那些。所述药疗化妆品、组合物或制剂还可以包含约0.5％至约5.0％，更适合地约1.5％至约2.5％的海藻提取物，基于组合物的总重量。海藻提取物提供促进细胞生长的微量元素。所述药疗化妆品还包含约0.01％至约10.0％，更适合地约0.1％至约2.0％的透明质酸、约0.1％至约10％，更适合地约1.0％至约4％的春黄菊。春黄菊提供抗炎性质，对于敏感性皮肤是有用的。此外，所述药疗化妆品、组合物或制剂还可以包含约0.1％至约10％，更适合地约2.0％至约5.0％的糖异构化物，基于组合物的总重量。糖异构化物包含促进皮肤保水的与在皮肤中发现的复合物相似的糖类复合物(carbohydrate complex)。此外，所述制剂可以包含甘草提取物(Glycyrrhizainflata extract)，其具有抗氧化、抗炎、抗刺激、抗微生物和皮脂调节活性。甘草提取物可以占组合物总重量的约0.5％至约10％，更适合地约1.0％至约5.0％。此外，所述组合物可以包含约0.1％至约10％，更适合地约1％至约5％的衍生自天然植物提取物的防腐剂，基于组合物的总重量。这些植物提取物提供抗微生物、抗菌、抗真菌、抗酵母和/或抗病毒性质。适合的植物提取物包括但不限于牛至(牛至)叶提取物、百里香(百里香)提取物、肉桂(肉桂)皮提取物、迷迭香(迷迭香)叶提取物、薰衣草(薰衣草)花提取物、柠檬(柠檬)皮提取物、薄荷(薄荷)叶提取物、白毛茛(白毛茛)根提取物和橄榄(橄榄)叶提取物。

[0065] 本发明技术的药疗化妆品、组合物或制剂还可以包含有效量的腹足动物生物体系和衍生自中药的成分，以产生新的制剂。衍生自中药的适合的成分包括但不限于油(例如，玫瑰油、emulsion aburagi fruit oil、玉米胚芽油、小麦胚芽油、fibert oil、芝麻油)、糖和糖衍生物(例如，右旋糖、AHA(α-羟基酸)、乙醇酸、甘油)、植物和果实精华(例如，银杏精华、郁金香精华、芦荟、金缕梅精华、百里香精华、水杨酸、柳皮精华、尿素和甘草精华(essenceofcarbamide and liquorice)、柑橘精华、黑莓精华)；药草(例如，灵芝、人参)；果实、坚果、蔬菜和它们的衍生物(例如，红番石榴、绿豆、栗子、覆盆子、鞣花酸、海藻、橙花水、亚麻籽酸(flaxseed acid)、向日葵籽)、维生素(例如，维生素C、维生素E、抗坏血酸、辅酶q)；洗涤剂(例如，月桂酸钠(sodium lauryl)或月桂基聚氧乙烯醚硫酸酯(laureth sulfate)、月桂基硫酸三乙醇胺(TEA-laurylsulfate))；乳化剂(例如，椰油酰基二乙醇胺)；真菌和真菌衍生物(例如，曲酸)；和其它物质(例如，C14-16烯基硫酸钠(Sodium C14-16 olefinsulfate C14-16)、三乙醇胺、蜂蜜精华(honey essence)、左旋-C(levorotation-C)、酰胺、jobs of tears、精氨酸、乳酸、尿素等)。这些制剂可以用于多种皮肤护理处理品，包括但不限于，创伤贴片、手术后康复膜、再生精华(rejuvenationessence)、消炎药(精制调理霜(purification conditioning cream))、抗-痤疮霜、抗皱霜、增湿面部清洁皂、淋浴凝胶、护手霜(hand cream)、增白霜、产后化妆品、痔疮溶栓剂、抗紫外线皮肤护理霜、防干燥皮肤护理霜、抗灼伤康复霜(anti-burn healing cream))。

[0066] 一种增白霜的具体实施方式包含腹足动物生物流体、维生素C、黄龙胆草(yellow gentian grass)、曲酸、至少一种抗氧化剂(例如，绿茶)和至少一种植物提取物。适合的植物提取物包括山梨(sorbic)、occident pear、橄榄果实、银杏、熊果(ursolic)、外来山毛榉(foreign beech)、海藻、白桦、桑树、人参提取物等。

[0067] 防晒药疗化妆膏霜的一种具体实施方式包含腹足动物生物流体和选自以下的至少一种紫外线阻滞剂(UV-blocking agent)：PABA(例如，对氨基苯甲酸、二甲氨基苯甲酸辛酯(Padimate O)、二甲氨基苯甲酸戊酯(PadimateA)、甘油基PAA(Glyceryl PAA))、水杨酸酯(例如，水杨酸三甲环己酯、水杨酸辛酯、水杨酸三乙醇胺(trolamine salicylate))、肉桂酸酯(例如，甲氧基肉桂酸辛酯、甲氧桂乙酯)；二苯甲酮(例如，羟甲氧苯酮(oxybenzone)、二羟苯宗(dioxybenzone)、磺异苯酮)、邻氨基苯甲酸(anthranilate)、邻氨基苯甲酸甲酯(methylanthranilate)、物理试剂(例如，xinc oxide 4、红凡士林(redpetroleum))和它们的组合。

[0068] 本发明技术的治疗性抗皱(防皱)霜药疗化妆品的一种具体实施方式包含腹足动物生物流体与例如以下物质的组合：银杏、绿茶因子(green teafactors)、芦荟、生物肽-C1(biopeptide-C1)、维生素E、placenta prime、ARL抗衰老因子(ARL against aging factor)和杏仁。

[0069] 本发明技术的治疗性除痤疮药疗化妆膏霜的一种具体实施方式包括，例如，腹足动物生物流体、龙胆大蒜提取物(gentian garlic extract)、酒花油、春黄菊提取物、向日葵提取物、茶树油和金盏花。

[0070] 任何上面的实施方式还可以包含使皮肤感觉柔滑的润湿剂。这些润湿剂可以包括PEG(聚乙二醇)、聚山梨醇酯(polysorbates)、丙二醇、聚丙二醇、丁二醇、己二醇、肉豆蔻酸异丙酯、其衍生物或它们的组合。任何上面的实施方式还可以包含另外的防腐剂以防止细菌、霉菌(mold fungal)、寄生物、酵母或其它微生物生长。适合的防腐剂可以包含，例如，季铵15(quaternium15)、咪唑烷基脲、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丁酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸甲酯。

[0071] 本发明技术的保水膏霜药疗化妆品的一种具体实施方式包含腹足动物生物流体、甘油、HA(透明质酸)、PCA-NA(L-吡咯烷酮羧酸钠或L-焦谷氨酸钠)、NMF(天然保湿因子)、神经硫胺素(nerve thiamine)和胶原蛋白、尿素、乳酸、壳聚糖、芦荟和海藻提取物。其它适合的额外组分包括，例如，丙二醇、聚丙二醇、丁二醇、己二醇、三(辛酸、癸酸、月桂酸)甘油酯、环状聚二甲基硅氧烷、聚二甲基硅氧烷、脂肪酸、透明质酸、吡咯烷酮羧酸钠、胶原、神经酰胺、弹性蛋白、卵磷脂、其衍生物或它们的组合。

[0072] 所述药疗化妆品也可以如下列实施例中所述以治疗性膏霜的形式制备。该治疗性膏霜可以用于(i)处理多种类型的灼伤，包括热和化学灼伤，(ii)预防或处理放射性皮炎和(iii)预防或处理晒伤。

[0073] 在另一种实施方式中，本发明技术的药疗化妆品可以是在正常(normal)、干性或油性皮肤上使用的滋养性面部或手部膏霜。所述腹足动物生物流体被认为修复上皮组织和更生皮肤。该膏霜还被认为作为剥脱剂，除去外面的死亡皮肤层(上皮角膜层)和促进新皮肤生长。泛酸和肝素在该膏霜中的使用是任选的，但是优选的是使用，因为它们提高康复和渗透作用。该膏霜使皮肤紧张并恢复活力，可以用于处理红斑斓疮、湿疹、皮炎和非常干燥的皮肤症状。

[0074] 在又一种实施方式中，本发明技术药疗化妆品可以是用于干性、正常或油性皮肤的净化和润湿液体。所得的液体清洁皮肤和使皮肤光滑，提高肤色的透明度。它也用作化妆品(例如，粉末)的粉底(base)，保护皮肤免受化妆品粉末(该化妆品粉末由在Mohr标度上硬度值为1的矿物组成)的有害作用。适合的制剂在约200g总产品中包含约2ml腹足动物生物流体。适合的是，所述净化和润湿液体优选地包含约0.5％，可选择地约1.0％，可选择地约2％，可选择地约5％，可选择地约10％，可选择地约15％的本发明腹足动物生物流体。

[0075] 在另一种实施方式中，本发明技术药疗化妆品可以是调和和清洁液体。推荐将该液体用在娇嫩的皮肤上和存在痤疮的皮肤上。它产生非常爽快的感觉和缓和的恬静的感觉。

[0076] 在又一种实施方式中，本发明技术药疗化妆品可以是用于每天或每周使用的抗皱霜。该膏霜易于施用，以及如果仅在存在皱纹的区域上使用，是最佳的。所述腹足动物生物流体活性成分被认为对于减少皱纹是有效的，同时其它组分产生收敛作用。在每次施用后，所述膏霜的效果持续至少一周。

[0077] 此外，本发明技术药疗化妆品可以用作防晒剂或晒伤处理剂。适合的是，所述防晒剂必须在暴露于日光之前施用。对于晒伤处理剂，所述膏霜可以每六个小时施用一次，直到症状消失。此外，所述膏霜可以用作日光&老化斑和黑斑病的色素校正剂(pigment corrector)(该色素校正剂包含腹足动物生物流体和Rumex botanical extract)，和在无任何副作用的情况下解除色素沉着过度的仿生肽(biomimetic peptide)。

[0078] 根据本发明技术设想的其它药疗化妆品包括家庭微型皮肤摩擦术膏霜(home microdermabrasion cream)，所述家庭微型皮肤摩擦术膏霜含有皮肤再生活化剂和微晶，以擦除粗糙部分、黯淡皮肤(dull skin)、受损组织和伤疤并容许浆液中的酶分解受损蛋白和深入地渗透到皮肤内；无油凝胶，以预防和处理痤疮、红斑斓疮和伤疤；和用于粗糙、旧的身体伤疤、怀孕牵拉痕迹(pregnancy stretch marks)的膏霜，以分解深的疤痕组织，和释放它们的氨基酸用于重建负责皮肤的机械性质(包括紧密度、韧度、柔软度和弹性)的所有结构成分。

[0079] 将专门设计的用于保存生物物质和用于皮肤病和化妆品处理剂的赋形剂用于可TM以从Pharmacom(位于Iowa City，Iowa)商购的Younger Biocream。这种赋形剂的一个优点是，它接受几乎所有其它的活性成分并给予组合物最佳的稳定性。这种优选的赋形剂由分子量范围为约900至约1300的聚乙二醇混合物、鲸蜡醇、单硬脂酸甘油酯、选择的矿物油、呈超细粉形式的碳酸钙、呈超细粉形式的氧化锌和水相制成。该赋形剂基本上由以下物质组成：约10％至约17％，优选地约12.0％至约15.5％的鲸蜡醇和/或它的副产物如月桂酸酯、肉豆蔻酸酯和己二酸酯；约20％至约50％，优选地约30％至约50％的聚乙二醇混合物(例如，聚乙二醇400、1500和4000的混合物)；约3.5％至约5.8％，优选地约4％至约6％的单硬脂酸甘油酯；约7％至约12％，优选地约8％至约10％的矿物油(优选地石蜡油)；约5％至约8％，优选地约5.5％至约7％的呈超细粉形式的碳酸钙；约0.3-0.6％，优选地0.32-0.40％的呈超细粉形式的氧化锌；和有效量的水相，通常最多至约35％，优选地约16％至约30％。水基(aqueous base)的量应使得足以得到所需稠度的组合物。如果水基的量高于35％，则应使用防腐剂。所述水基包含水、盐溶液[例如，不含生热物质(pyrogenous matter)的0.9％的氯化钠溶液]或生理浆液。所述百分数是以重量计的且总和为100％。百分数可以用最少实验(minimalexperimentation)容易地调节，以提供需要的奶油状稠度。所述赋形剂是无味和白色的，且不受紫外线辐射、x-射线和γ射线所影响。它可以在制备膏霜、乳液和膏剂等中使用。它被认为不具有有害效应(甚至当历经长时间段使用时)或不产生不利反应如变态反应或致癌效应。该赋形剂还被认为促进活性成分通过皮肤的吸收，在约-20℃至约+70℃之间不损坏，以及不受湿度影响，因此可以在许多气候极限中使用。此外，该赋形剂是稳定的，不受分米波、紫外线辐射、1.3MeV的γ辐射和光子影响。优选的是，也不受贮存容器所影响。这种赋形剂的重要性不是基于外来组分，而是基于它们的性质，该性质是大量实验制剂的结果。

[0080] 对于所述水基大于35％的情况，可以在药疗化妆品中使用的任选成分包括防腐剂如对羟基苯甲酸甲酯、氧化抑制剂如亚硫酸氢钠，和在治疗性组合物中通常包含的其它成分。

[0081] 可以在本发明技术的组合物、药疗化妆品或制剂中使用的任选成分包括矿物油如石蜡油、龟油或其它油，用量为约1％至约10％，优选为约2％；硼酸，用量为约0.1％至约0.6％，优选为约0.3％；叶绿素，用量为约0.25％至约1.5％，优选为约1.0％；甲醛溶液(例如，约30％浓度)，用量为约0.3％至约3％，优选为约0.4％；甘油，用量为约0.1％至约4.0％，优选为约0.5％；肝素，用量为约0.01％至约0.4％，优选为约0.1％；羊毛脂，用量为约0.1％至约6％，优选为约0.5％；薄荷醇，用量为约0.25至约2.5％，优选为约1％；
泛酸，用量为约0.01％至约0.5％，优选为约0.1％；硫酸铝钾，用量为约0.1％至约1.5％，优选为约0.4％；硫酸铜，用量为约0.01％至约0.3％，优选为约0.03％；维生素C，用量为约0.01％至约0.5％，优选为约0.2％；或金属碘化物(metallic iodine)，用量为约0.1％至约1.1％，优选为约0.6％。上面的百分数是以重量计的，且化妆品组合物的总重量为以重量计100％。

[0082] 通过参考以下实施例，将更好地理解本发明所述技术和它的优点。提供这些实施例以描述本发明技术的具体实施方式。发明人未通过提供这些实施例来限制本发明技术的范围和主旨。本领域技术人员将了解的是，本发明所述技术的全部范围包括随附该说明书的权利要求和这些权利要求的任何变更(alterations)、修饰(modifications)、可选方案(alternatives)或等同物(equivalents)所限定的主旨。

[0083] 实施例

[0084] 实施例1：收集和精制腹足动物生物流体

[0085] Helix Aspersa Müller原产于法国，吃高蛋白食物生长。将Helix AspersaMüller蜗牛以2G离心10分钟，且进行3次波动。波动通过以下方法实施：使离心机加速至2G，使离心机减速并再次使离心机加速至2G。在每一波动期间，使离心机加速至2G，减速并再次加速至2G。在离心之后，使用用于移除流体的吸管从蜗牛收集蜗牛的流体分泌物，并收集到适于离心的管中。将流体分泌物以2000rpm离心10分钟以除去任何大粒子。将上清液滗析到含0.1μm微孔过滤器的圆筒中。用封闭物密封所述圆筒，所述封闭物连接至压缩空气系统以促进过滤。然后将滤液用作本发明所述技术的腹足动物生物流体。

[0086] 实施例2：腹足动物生物流体的组分分解

[0087] 为了评价腹足动物生物流体的化学组成，对Helix Aspersa Müller蜗牛进行处理以测定它们的GAG(糖胺聚糖)浓度。除去蜗牛壳，并使用三个24-小时的丙酮萃取将整个软体脱脂。使用剃刀刀片将无脂肪的干蜗牛切割成细粉。使约4g干的、脱脂的、粉碎粉末悬浮在40ml的0.05M碳酸钠缓冲溶液(sodium carbonated buffer)(pH 9.2)中。添加2ml的蛋白酶(Alcalase，2.4安森单位(Anson units)/g)，然后将悬浮液以200rpm在60℃摇振48小时。将消化混合物冷却至4℃，并添加三氯乙酸至5％的最终浓度。将样品混合，静置10分钟，然后以8000×g离心20分钟。通过滗析回收上清液。将三体积的在乙醇中的5％乙酸钾添加至一体积的上清液。在混合后，将悬浮在4℃贮存过夜，然后以8,000×g离心30分钟。丢弃上清液，并用无水乙醇(absolute alcohol)洗涤沉淀物。将沉淀物(1g)溶解在40ml的0.2MNaCl中并以8,000×g离心30分钟，并丢弃不可溶物质。向所得的物质添加0.5ml的鲸蜡基氯化吡啶鎓(5％)，并通过离心收集所得的沉淀物。然后将该沉淀物溶解在10ml的2.5M NaCl中，添加5体积的乙醇，并将沉淀物以10,000×g离心30分钟。
将沉淀物再次溶解在水中并对100体积的水透析，并将经透析的部分冻干，以获得0.18g的作为白色粉末滤液(white powder filtrate)的GAG腹足动物流体。

[0088] 完整多糖的物理性质的分析

[0089] 将来自腹足动物生物流体(200μg)的多糖GAG在P2O5存在下在真空中彻底干燥并使用具有Teflon作为内衬的盖子的螺旋盖试管(screw-cappedtube)溶解在0.5ml的1M HCl甲醇溶液中。使氮气通过溶液鼓泡15秒，然后将试管密封。在80℃甲醇分解24小时之后，通过添加0.15ml吡啶中和酸溶液。通过添加0.1ml乙酸酐进行再次N-乙酰化(Re-N-acetylation)。将该混合物在室温保持约1小时。然后，用氮气流在35℃蒸发样品溶液。将残留物经P2O5真空干燥16小时。最后，用50μl硅烷化试剂(吡啶/N，O-双-(三甲基甲硅烷基)三氟乙酰胺，1∶2(v/v))将样品在室温三甲基甲硅烷化30分钟。使用Alltech Associates(位于DeerfileIL)的毛细管柱AT-1，0.53mm×30-m(1.5-μm厚度)，在配有Shimadzu Chromatopac CR501积分记录器的Shimadzu(Kyoto，Japan)气相色谱仪(型号GC-14A，具有火焰离子化检测器)上进行气相色谱法(GC)组成分析。注射口温度和检测器温度分别为270℃和280℃。对于单糖混合物的分析，将炉温设定为120-260℃(10℃/min)。

[0090] GAG的裂解酶处理所形成的寡糖的分析

[0091] 通过毛细管电泳(CE)，使用配有能够进行恒定或梯度电压控制的高压电源的Dionex Capillary Electrophoresis系统(可从Sunnyvalle的DionexCorporation商购，具有先进的计算机接口，型号I)，使用DionexCorporation(Sunnyvale，CA)的熔融二氧化硅毛细管分析由完整多糖通过各自的肝素裂解酶产生的二糖和寡糖的组合物。通过在阴极处施用样品以反极性模式操作CE系统，并用20mM磷酸(如上所述，用1M磷酸氢二钠调节至pH 3.5)运行。在使用前用0.5ml的0.5M氢氧化钠，接着用0.5m1的蒸馏水，然后用0.5ml的电泳缓冲液(running buffer)对毛细管(75-μm内径，375-μm外径，68cm长)进行手动洗涤。通过流体静压(45mm)，使用重力注入(gravity injection)(20秒)施用样品，产生9.2ml的样品体积。每一实验在恒定的18,000V进行。在232nm收集数据。通过与在我们的实验室制备并表征的二糖和寡糖标准物共同注射来鉴定峰。用肝素裂解酶II处理腹足动物GAG所形成的产物的大小通过凝胶渗透色谱法在Sephadex G-50(特级(superfine))柱(1.5×25cm)上测定，用0.2M氯化钠洗脱并用咔唑测定(carbazole assay)监测。制备肝素裂解酶II处理的二糖产物用于通过半制备型强阴离子交换HPLC分析并通过色谱法在
5-cm×0.5-m Bio-Gel P-2柱上脱盐。这些结果显示出本发明技术的腹足动物生物流体中的多糖的复杂和独特的组成。

[0092] 梯度PAGE分析

[0093] 用肝素裂解酶I、肝素裂解酶II或肝素裂解酶III消化腹足动物GAG。在聚丙烯酰胺线性梯度分离胶(14×16cm，12-22％总的丙烯酰胺)上实施梯度PAGE。运行作为未处理的蜗牛GAG(泳道a)、肝素裂解酶I处理的蜗牛GAG(泳道b)、肝素裂解酶II处理的蜗牛GAG(泳道c)、肝素裂解酶III处理的蜗牛GAG(泳道d)和从牛肺肝素制备的肝素寡糖标准物梯(泳道e)的样品。通过阿辛蓝染色使寡糖可见。结果可以参见图1，该图显示本发明技术的腹足动物生物流体具有蛋白聚糖的复杂组成。

[0094] 对Helix Aspersa Müller进行组织化学染色以测定糖蛋白浓度

[0095] 为了测定Helix Aspersa Müller的蛋白质组成，将Helix Aspersa Müller薄切片在卡诺依(氏)固定液(60％乙醇，30％氯仿，10％乙酸)和4％多聚甲醛中固定并包埋于paraplast中。通过Ignesti改进的Mallory法(Carazzi hemalum，1％酸性品红，1％磷钼酸，Mallory’s溶液)染色切片。使用以下的说明蛋白质、糖蛋白和酸性蛋白聚糖的组织化学法。对于蛋白质，使用溴酚蓝法、茚三酮-希夫反应(ninhydrin-Schiff)、氯胺T-希夫反应(chloramines T-Schiff)、过氧甲酸-希夫反应(performic acid-Schiff)、Morel和Sisley、Millon和Adams反应、重氮化反应和坂口反应。对于糖蛋白，使用根据McManus的阿辛蓝-高碘酸希夫(alcian blue-Periodic acid Schiff，AB-PAS)反应和双甲酮-PAS反应。为了测试酸性蛋白聚糖，使用AB(阿辛蓝)(pH 1)和AB(pH 2.5)。使用AB-PAS(pH 1和2.5)区分糖蛋白和酸性蛋白聚糖。为了区分具有不同酸度的酸性蛋白聚糖，使用AB-C.E.C.(临界电解质浓度)染色、0.05％AB、以在乙酸缓冲液(pH 5.8)中0.5-1M MgCl2的分级摩尔浓度抑制亲阿利辛性(alcianophilia)；弱甲基化-AB(pH 2.5)；强甲基化-AB(pH2.5)；弱甲基化-皂化-AB(pH 2.5)；和强甲基化-皂化-AB(pH 2.5)。在0.1M乙酸盐缓冲液(pH 2.5)中于60℃酸水解4小时，接着又用AB(阿辛蓝)(pH 2.5)处理，而未皂化。酶消化的方法：PAS-淀粉酶；AB-神经氨酸酶(pH 2.5，来自Clostridiumperfrigens)，皂化和未皂化；睾丸透明质酸酶。为了测量特定的糖残留物，使用生物素化的凝集素和抗生物素蛋白-生物素过氧化酶法(avidin-biotinperoxidase method)(ABC)。研究了所使用的生物素化的凝集素、它们的起源、特异性和抑制糖(inhibiting sugars)。为了揭示nNOS，在
4℃，在潮湿的室中用1∶200稀释的多克隆兔抗人脑nNOS抗体(nNOS类型I抗体；代码
606-259-1550)将组织切片温育过夜。然后，将该切片在PBS(磷酸盐缓冲盐水(phosphate buffer saline))中洗涤并用羊抗兔IgG-过氧化物酶结合物(1∶100)温育2小时。通过将该切片在0.015％3，3’-二氨基联苯胺在含0.005％H2O2的0.01M三羟甲基氨基甲烷(Tris)缓冲液(pH 7.6)中的溶液中于室温温育5-12分钟，使过氧化物酶活性可见。阴性对照包括省略一抗(the primaryantibody)或用非免疫性兔血清代替它。

[0096] 在Helix Apsera Müller蜗牛套膜中，皮肤由肌纤维横穿的相当松弛的结缔组织组成。在套膜的边缘，存在四个深褶，在该处外部单层上皮仅由非纤毛的立方细胞组成，而在褶的深处还有杯状细胞。粘液细胞被认为含有具有酸性基团的糖蛋白和蛋白聚糖，参见例如，图2-2。

[0097] 组织化学法揭示了在套膜和足部中的上皮细胞之中的“蛋白质”细胞。在碱性介质中用坚牢蓝进行的重氮化反应显示，“酚”细胞仅存在于套膜中。PAS阳性细胞显示，糖蛋白仅存在于套膜中。染色未存在于用β-淀粉酶处理过的切片中，表明在下面的结缔组织中存在与粘液细胞共存的“糖原”上皮细胞。

[0098] 而且，显示酸性糖胺聚糖的反应揭示了套膜中的五种类型的粘液细胞：仅具有糖蛋白、具有硫酸化的酸性蛋白聚糖、具有含羧基的蛋白聚糖和具有糖蛋白和具有含羧基的蛋白聚糖的细胞(参见例如，图2-3)。足部上皮的一些粘液细胞含有羧基酸性蛋白聚糖(参见例如，图2-4)和其它糖蛋白(参见例如，图2-5)。在套膜和足部的外皮中未发现唾液酸和透明质酸。使用ConA、PHA-L、PNA、WPA和SBA凝集素(其均结合不同的糖部分)显示，套膜和足部的上皮内和真皮内粘液细胞的分泌物对于δ-D-葡萄糖和δ-D-甘露糖(参见例如，图2-6)、寡糖(参见例如，图2-7)、δ-D-gal和(1-3)-D-Gal-Nac(参见例如，图2-8)、δ-L-岩藻糖(参见例如，图2-9)和N-乙酰基-D-半乳糖胺或D-半乳糖(参见例如，图2-10)是阳性的。在套膜的表面上皮中，很少神经内分泌细胞对于WGA(参见例如，图2-1)是阳性的。在套膜上皮中，发现了nNOS-阳性的非粘液细胞(参见例如，图2-2)。

[0099] 实施例3：腹足动物生物流体诱导成纤维细胞体外增殖和调节成纤维细胞细胞骨架重组。

[0100] 为了研究腹足动物生物流体(标记为SJ，“蜗牛分泌液(snail juice)”)的再生性质是否与增强的细胞增殖有关，测定了生物流体对成纤维细胞体外增殖的影响。

[0101] 为了测定成纤维细胞增殖，将每孔两万五千人皮成纤维细胞涂布到12-孔板中并用标明的50μl或100μl的Helix Müller生物流体(SJ)与0.1mM柠檬酸盐(pH 5.0)，100U/ml LMW肝素或1μM六硫酸肌醇酯(inositolhexasulfate)一起处理一周。将单层用PBS洗涤，在10％福尔马林中固定，并用蒸馏水漂洗。然后将细胞用0.1％结晶紫(Sigma)染色30分钟，充分漂洗并干燥。用2.0ml 10％乙酸提取细胞-缔合染料。将等分试样用H2O进行1∶4稀释，转移至96-孔微孔滴定板，并在590nm测定光密度。将值标准化至未处理的细胞在第0天的光密度。在实验中，将每一点一式三份测定；将每一生长曲线实施至少两次。用蜗牛浆液在柠檬酸盐存在和不存在的情况下的生长曲线示于图3。有趣的是，来自Helix Aspersa Müller的生物流体提高了细胞增殖，通过添加柠檬酸盐将细胞增殖进一步增强，所述柠檬酸盐已证明诱导成纤维细胞增殖。该结果得到了进一步强化，因为本发明技术的生物流体提高了用UVA光辐射时的细胞存活，这暗示，所观察到的生物流体的有益效果是由于抗氧化和增殖的组合作用。

[0102] 由于细胞外基质(ECM)组装是组织再生中的关键事件，所以测定了Helix Aspersa Müller的腹足动物生物流体的效果。将CHO-K1细胞在玻璃盖玻片上使用具有盘尼西林/链霉素和10％胎牛血清的Ham’s F-12培养基补充剂(medium supplements)培养24小时。然后，在5μg/ml人纤连蛋白存在或不存在的情况下，用50或100μg/ml Helix Aspersa Müller生物流体(SJ)处理细胞，并在24小时之后通过间接免疫荧光监测纤连蛋白组装。
然后将细胞在冷甲醇中固定10分钟。将纤连蛋白用抗-80kDa多克隆抗体染色，接着与Alexa488-结合的抗兔抗体一起温育。将样品装到Mowiol中，并用具有63x和100x浸没物镜的Leica DMR照相显微镜检查。使用Leica Qfish 软件处理图像，结果示于图4。与对照细胞相比，Helix Aspersa Müller的腹足动物生物流体诱导纤连蛋白组装。有趣的是，生物流体似乎增加了纤连蛋白分泌，因为它在不存在外源纤连蛋白的情况下增加了细胞的纤连蛋白沉积。为了说明纤连蛋白的增加不是由于分泌物中存在的纤连蛋白，通过ELISA和蛋白质印迹使用一组抗-纤连蛋白抗体分析了生物流体。发现生物流体不含纤连蛋白反应性，如通过蛋白质印迹或ELISA中与任何抗体均无反应性所显示的。这些实验证明，所观察到的腹足动物生物流体在纤连蛋白组装和分泌中的效果是由于它对细胞的作用，而不是由于提取物中所含的ECM的直接沉积。这样的结果说明了本发明技术的腹足动物生物流体的独特的组分组成和性质。

[0103] 为了测定在用Helix Aspersa Müller腹足动物生物流体处理后成纤维细胞形态的改变，将健康志愿者供体的人皮成纤维细胞在100μg/ml生物流体存在或不存在的情况下培养24小时。将细胞用PBS中的4％甲醛固定并使用0.1％Triton X-100透化。对于F-肌动蛋白染色，在室温将盖玻片与PBS中的1μg/ml Alexa488-结合的毒伞素(Invitrogen)一起温育1小时。将样品如上所述安装并检查。检查了三个单独的实验的至少200个细胞/条件。结果示于图8。通过使用阿辛蓝技术(通过图5中(A)中的箭头和(B)中的棒示出)使横向蛋白聚糖(transverse proteoglycans)可见。也标记了分泌型成纤维细胞(f)和microenv(me)(标度棒0.2mm)。所述生物流体影响人皮成纤维细胞的形态，从而诱导肌动蛋白重组、成束(bundling)和微丝排列，并导致细胞伸长。该结果说明了本发明技术的腹足动物生物流体的一些独特性质。

[0104] 实施例5：腹足动物生物流体的抗氧化效果

[0105] 为了测试得自Helix Aspersa Müller的腹足动物生物流体提供抗氧化性质的能力，使用可以从Sigma Chemical Co，St.Louis MO商购的谷胱甘肽-S-转移酶(GST)比色测定试剂盒测定谷胱甘肽S-转移酶(GST，在细胞解毒中起关键作用的分子)活性的增加，并使用可以从Calbiochem Co(San Diego CA)商购的超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒。根据试剂盒制造商的规程在1mg/mlSCA悬浮液中测定GST和SOD(抗氧化酶)活性。在试剂盒中提供了阳性和阴性对照物并按照所标明的使用。使用可以从Vector Labs(Burlingame CA)商购的ABTS(2，2′-连氮基-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸，2，2′-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonic acid)))抗氧化剂试剂盒以300s测试腹足动物生物流体(“SJ”)(100μg/ml)、槲皮素(2.5μM)和Trolox C(10μM)或单独的载体。在添加所述试剂之前和之后，.在不同的时间点测量在743nm的吸收，将该实验进行一式三份。图6示出了该实验的代表性结果。该数据证明，本发明技术腹足动物生物流体兼具抗氧化和自由基清除能力。

[0106] 实施例6：膏霜药疗化妆品制剂的实施方式的制备

[0107] 通过添加所列的成分制备总共1000g的产品，制备以下制剂。将产品在制药混合器中充分混合。

[0108] 制剂I：

[0109] 橄榄油酸聚乙二醇(4)酯(约8g至约10g)

[0110] 失水山梨糖醇橄榄油酸酯(来自橄榄油)(约8g至约10g)

[0111] 角鲨烷(来自橄榄油)(约8g至约10g)

[0112] 腹足动物生物流体滤液(约100ml至约150ml)

[0113] 透明质酸(约8g至约12g)

[0114] 甘油(约110g至约130g)

[0115] 苯氧乙醇&乙基己基甘油(约9g至约10g)

[0116] 刚玉氧化物(corundum oxide)(约4g至约6g)

[0117] 蒸馏水(约500ml)，加上足够的水以使产品重量达到约1000g。

[0118] 制剂2：

[0119] 橄榄油酸聚乙二醇(4)酯(约10g)

[0120] 失水山梨糖醇橄榄油酸酯(来自橄榄油)(约10g)

[0121] 角鲨烷(来自橄榄油)(约10g)

[0122] 腹足动物生物流体(约150ml)

[0123] 透明质酸(约10g)

[0124] 甘油(约120g)

[0125] 苯氧乙醇&乙基己基甘油(约10g)

[0126] 刚玉氧化物(约5g)和

[0127] 蒸馏水(约500ml)，加上足够的水以使产品重量达到约1000g。

[0128] 制剂3：

[0129] 橄榄油酸聚乙二醇(4)酯(约10g)

[0130] 失水山梨糖醇橄榄油酸酯(来自橄榄油)(约10g)

[0131] 角鲨烷(来自橄榄油)(约10g)

[0132] 腹足动物生物流体(约100ml)

[0133] 透明质酸(约10g)

[0134] 甘油(约120g)

[0135] 苯氧乙醇&乙基己基甘油(约10g)

[0136] 刚玉氧化物(约5g)和

[0137] 蒸馏水(约500ml)，加上足够的水以使产品重量达到约1000g。

[0138] 制剂4：

[0139] 硬脂酸(约65至约70g)

[0140] 单硬脂酸甘油酯(约4至约5g)

[0141] 白油(约45至约50ml)

[0142] 硅油(约12ml至约15ml)

[0143] 十八烷醇(约4g至约5g)

[0144] 甘油(约55ml至约60ml)

[0145] 腹足动物生物流体(约100ml至150ml)

[0146] 氢氧化钾(约2.2g至约2.5g)

[0147] 香精(约4.5ml至约5ml)

[0148] 苯氧乙醇&乙基己基甘油(约9g至约11g)

[0149] 蒸馏水(约600ml)，加上足够的水以使产品重量达到约1000g。

[0150] 制剂5：

[0151] 硬脂酸(约70g)

[0152] 单硬脂酸甘油酯(约5g)

[0153] 白油(约50ml)

[0154] 硅油(约15ml)

[0155] 十八烷醇(约5g)

[0156] 甘油(约60ml)

[0157] 腹足动物生物流体(约100ml)

[0158] 氢氧化钾(约2.5g)

[0159] 香精(5ml)

[0160] 苯氧乙醇&乙基己基甘油(约10g)

[0161] 蒸馏水(约625ml)，加上足够的水以使产品重量达到约1000g。

[0162] 制剂6：

[0163] 硬脂酸(约70g)

[0164] 单硬脂酸甘油酯(约5g)

[0165] 白油(约50ml)

[0166] 硅油(约15ml)

[0167] 十八烷醇(约5g)

[0168] 甘油(约60ml)

[0169] 蜗牛浆液(约150ml)

[0170] 氢氧化钾(约2.5g)

[0171] 香精(约5ml)

[0172] 苯氧乙醇&乙基己基甘油(约10g)

[0173] 蒸馏水(约600ml)，加上足够的水以使产品重量达到约1000g。

[0174] 制剂7：

[0175] 玫瑰果种子油(约8至约10ml)

[0176] 腹足动物生物流体滤液(约100至约150ml)

[0177] 橄榄油乳化剂(约8至约10g)

[0178] 海藻提取物(约18g至约22g)

[0179] 透明质酸(约8g至约10g)

[0180] 春黄菊(约28g至约32g)

[0181] 糖异构化物(约38g至约42g)，

[0182] 甘草(Glycyrrhiza inflata)提取物(约22g至约25g)

[0183] 防腐剂(约18g至约22g)：用微量的下列植物提取物制备：牛至叶提取物、百里香提取物、肉桂皮提取物、迷迭香叶提取物、薰衣草花提取物、柠檬皮提取物、薄荷叶提取物、白毛茛根提取物和橄榄叶提取物

[0184] 蒸馏水(约600ml)，加上足够的水以使产品重量达到约1000g。

[0185] 制剂8：

[0186] 玫瑰果种子油(约10ml)

[0187] 腹足动物生物流体滤液(约100ml)

[0188] 橄榄油乳化剂(约10g)

[0189] 海藻提取物(约20g)

[0190] 透明质酸(约10g)

[0191] 春黄菊(约30g)

[0192] 糖异构化物(约40g)，

[0193] 甘草(Glycyrrhiza inflata)提取物(约25g)

[0194] 防腐剂(约20g)：用微量的下列植物提取物制备：牛至(牛至)叶提取物、百里香(百里香)提取物、肉桂(肉桂)皮提取物、迷迭香(迷迭香)叶提取物、薰衣草(薰衣草)花提取物、柠檬(柠檬)皮提取物、薄荷(薄荷)叶提取物、白毛茛(白毛茛)根提取物和橄榄(橄榄)叶提取物

[0195] 蒸馏水(600ml)，加上足够的水以使产品重量达到约1000g。

[0196] 用标准混合器将组合物混合至均匀。

[0197] 实施例7：能够添加至腹足动物生物流体以制备药疗化妆品的赋形剂的制备[0198] 优选用于含本发明技术腹足动物生物流体的本发明技术治疗性组合物的赋形剂的制备通过以下方法进行：用标准方法熔融鲸蜡醇(15g)，然后添加50g的聚乙二醇混合物[聚乙二醇400(49.％)、1500(1.0％)和4000(49.5％)]以形成第一混合物。当达到熔点时，将该混合物转移至商业制药实验室(commercial pharmaceutical laboratory)。第二混合物通过以下方法制备：熔融5g单硬脂酸甘油酯并添加预先加热至80℃的
12.6g(12.6ml)的蒸馏水或优选的生理血清(physiological serum)。当第二混合物的温度与第一混合物的温度相同时，将第二混合物添加至第一混合物。一边持续搅拌，一边将7g碳酸钙和0.4g氧化锌(二者均呈微粉形式)和10ml石蜡油添加至混合物。

[0199] 实施例8：治疗性膏霜的制备

[0200] 使总共约25至约30ml的腹足动物生物流体(或约25至约30g的冻干流体)与约500至约600g的上述赋形剂在混合器中于约30℃至约40℃混合。获得总共约500至约700g的膏霜。

[0201] 实施例9：营养面霜的制备

[0202] 通过以下方法制备膏霜：在上述赋形剂中混合10ml腹足动物生物流体、0.2g泛酸和0.2g肝素，总共200克。该膏霜使皮肤调和并恢复活力。

[0203] 实施例10：营养手霜的制备

[0204] 通过以下方法制备膏霜：混合5g腹足动物生物流体、4cc.甘油和0.5g羊毛脂，总共约100克。所得的膏霜非常光滑且铺展良好。它可以在白天或在夜间施用，以再生、更生和光滑皮肤。

[0205] 实施例11：净化和润湿液体的制备

[0206] 该实施例描述了用于干性、正常或油性皮肤的净化和润湿液体的制备。对于在正常和油性皮肤上的用途，通过混合200g赋形剂、20cc.腹足动物生物流体、0.3g硫酸铝钾和10cc.玫瑰水制备所述液体。对于在干性皮肤上的用途，如上所述制备液体，不同的是添加
2cc.矿物油，例如，石蜡油。可以任选地添加着色剂。所得的液体清洁和光滑皮肤，并且提高肤色的透明度。它也用作化妆品(例如，粉末)的粉底。最后，它保护皮肤免受化妆品粉末(该化妆品粉末由在Mohr标度上硬度值为1的矿物组成)的有害作用。

[0207] 即时润湿

[0208] 为了确定膏霜中的腹足动物生物流体的润湿效果，使用Corneometry测量了含2％、5％或10％本发明技术腹足动物生物流体的膏霜的润湿动力学。在单独施用用2％、
5％和10％腹足动物生物流体以含水凝胶的形式配制的产品之后0分钟(T0)、30分钟、2小时和4小时的时间测量湿度水平。结果示于图7。具有最高剂量腹足动物生物流体(10％)的制剂的施用量足够高，以临时性地保持部分所含的水在化妆品制剂中。在30分钟之后记录了最高30.8％的润湿增加。后来的读数(2h，4h)揭示，经皮的水积聚起来，未大量耗散。
至于中等和低浓度(5％和2％)，在30分钟时的瞬时效应不是那么显著，但是随时间推移仍保持了更多的水分，从而强化了经皮的水保持的重要性，所述经皮的水保持被认为是由于腹足动物生物流体的成膜效应积聚经皮的水，使其不耗散(动力学因素)。

[0209] 含腹足动物生物流体的膏霜的长效润湿效果

[0210] 为了评价含本发明腹足动物生物流体的膏霜的长效润湿效果，将润湿动力学研究延长至21天。研究参与者向他们的皮肤施用制剂(10％腹足动物生物流体或安慰剂(Placebo))，每天两次。在第22天测量每一研究参与者的湿度水平，并将结果平均，如图8中所示。与每一志愿者在开始研究(D0/T0)之前的初始值相比，腹足动物生物流体(蜗牛浆液)在处理区域上在第22天的润湿水平明显较高(+12.5％)。这些结果表明，与安慰剂相比，重复施用该产品具有累积的润湿效果。

[0211] 实施例12：调和和清洁液体的制备

[0212] 通过以下方法制备液体：混合10cc.腹足动物生物流体、100cc.生理血清、0.3g硫酸铝钾、0.5g硼酸和0.1g硫酸铜，总共100g。推荐将该液体用在娇嫩的皮肤上或存在痤疮的皮肤上。它产生非常爽快的感觉和缓和的恬静的感觉。

[0213] 实施例13：抗皱霜的制备

[0214] 每天使用的抗皱霜通过以下方法制备：混合5cc.腹足动物生物流体、7g羊毛脂和1.56g硫酸铝钾，并添加至基础赋形剂或生理血清，总共250g。一周最多使用一次的浓缩膏霜如上所述制备，不同的是使用15g活性成分、15g羊毛脂和2g硫酸铝钾。该膏霜易于施用且仅用在存在皱纹的区域上。活性成分在减少皱纹方面有效，而其它组分产生收敛作用。

[0215] 实施了用于测量抗皱霜效果的皮肤表面形态分析(Skin topographyanalysis)，在所选择的健康妇女志愿者的用抗皱霜或安慰剂处理过的一定面部区域上获得硅印记(silicon imprints)。在处理了0、15和30天(每天两次)之后，获得硅印记。为了实现皮肤表面的数字表示，使用了电容设备(capacitive device)。通过在皮肤的ROI(感兴趣部位)上轻轻按压该设备，实时取得图像。该设备(最初设计用于生物测定应用中的指纹获取和识别)依赖于有效电容像素感应技术(active capacitive pixel sensing technology)，能够以50μm/像素的分辨率获得皮肤的详细图像。感应器的阵列由256×360个像素组成，并且为12.8×18.0mm。每一像素的表面由两个相邻的金属板组成。当使活的皮肤(live skin)靠近传感器板时，皮肤干扰两块板之间的场力线，并使反馈电容降至最低。相反地，当将皮肤从传感器表面移开时，反馈电容增至最大。因此，根据所测电容，进而根据传感器板和皮肤表面三维曲线之间的距离，调节各个象素的灰度值，代表三维皮肤传感器的输出图像的灰度值得到了皮肤表面的图示。

[0216] 从电容设备提供的高分辨率图像获得详细信息是容易的。然而，许多因素可以影响传感器设备提供的灰度值：(1)在获取期间施加于传感器表面的压强；(2)皮肤的吸水状况局部地影响所得电容图像的灰度值；(3)电容设备的输出响应根据像素位移(pixel displacements)改变，因为传感器在单元阵列的上部显示出不同的行为；(4)电容背景图像(在设备传感器区域上无任何物质的情况下获得的图像，下文简称为背景)倾向于偏至较高灰度值；和(5)噪音改变电容图像的最终灰度值。面对这些问题，关键的是从电容图像中检测的皮肤表面形态结构推断出真正真实的公制测量值(real absolute metricmeasures)。

[0217] 实验的第一部分是测量在良好识别的表面形态结构之间的平面距离。我们将注意力集中于皱纹(通过相对于周围皮肤的高灰度值识别)，其相比之下在电容图像中显得较黑。首先，实施预处理步骤，以降低上述的误导因素。然后，我们提取出皱纹的轮廓，以解析形式通过使用正常的三次样条(natural cubic spline)将皱纹的轮廓转化。然后，我们测量皱纹间的距离(下文中，简称为IWD)，即，在经过两个顺序的局部最小值的轴之间以微米计的距离，所述局部最小值从2D轮廓提取并属于相邻的皱纹。实验的第二部分致力于通过使这些测量值与通过轮廓测定分析(profilometric analysis)获得的相同身体位置区域的测量值进行对比来验证这些测量值。用配有20×放大物镜(20×magnification objective)和.5×比例因子缩减透镜(.5×scale factorreducer lens)的光学轮廓测定仪分析了有机硅皮肤复制品，因此得到10×的总放大系数。该系统(基于白光干涉测量法)提供复制品的有限区域的精确表面数据深度(accurate surface data depths)，视场2
为0.62×0.47mm，图像分辨率为640×480像素。

[0218] 在超过200个健康妇女志愿者上测试浓缩膏霜。将该团体分类，并用上述抗皱霜或安慰剂测试30天。在每一应用后，抗皱效果持续约一周。皱纹越多和越大，通过后续的观测分析所得的该处理的可见效果就越明显。如图9中图解的代表性结果所示，与用安慰剂处理过的皮肤(图9B和C)相比，用抗皱霜处理过的皮肤(图9E和F)的皱纹的深度在15和30天之后减小了。在处理30天之后皱纹深度明显降低的观察结果证实了含本发明技术腹足动物生物流体的膏霜的抗皱益处。

[0219] 实施例14：防晒霜的制备

[0220] 通过混合总共250g物质(具有5ml腹足动物生物流体滤液)制备防晒霜。防晒晒黑霜如上所述制备，不同的是添加1g金属碘化物和0.3g维生素C。作为预防剂，在暴露于日光之前施用一薄层防晒剂就足够了。如果已被晒伤，可以每六小时施用一薄层防晒霜。

[0221] 为了测试防晒剂，使用防晒霜处理306位白肤色的(fair-complexioned)受试者。将产品预防性地用于6％的受试者，治疗性地用于94％的受试者。将防晒剂用于处理在具有高度氯化水的游泳池被晒伤的受试者(该受试者显示出起泡(blistering)(水泡(phlytena)))，和在海滩被晒伤的人。在每一案例中，所述膏霜在施用后的几秒钟内消除了疼痛和灼感，水泡在5至6小时内消失；晒伤在24小时内消失。

[0222] 紫外线辐射导致诸如晒伤、光敏反应或免疫抑制的不利影响。该研究的目的是通过测定红斑指标和评定人类真皮内的高分子量抗氧化剂和它的代谢产物来评价Pharmacom TMYounger Sunscreen Cream的光保护结果。使用这些物质作为氧化效果的标识。在该研究中招募了八位健康的女性受试者。将两块腹部区域暴露于日光模拟辐射，使用三种最小红斑剂量，一块施用防晒霜，另一块不施用防晒霜。使用两块其它区域作为对照，一块不施用SPF8，另一块施用SPF8。从人类真皮通过微量渗析收集抗坏血酸和它的代谢产物(脱氢抗坏血酸、苏糖酸、草酸和木糖)，并通过气相色谱质谱分析法进行测定。与另三块位置相比，未施用防晒剂的辐射位置明显显示出较低的真皮抗坏血酸浓度和较高的红斑指标(P＜0.05)。与在对照位置I相比，苏糖酸、草酸和木糖的真皮浓度在位置III显著较高(P＜0.05)。受保护的辐射位置未显示红斑形成，并且抗坏血酸真皮浓度具有稳定性，代谢产物无变化。这些结果暗示，本发明技术的防晒组合物可以用作防晒剂和防止对皮肤造成氧化和UV损害。

[0223] 现在以如此充分、清楚和简明的术语描述了本发明技术，使得本领域技术人员能够实践本发明。应了解的是，上文描述了本发明技术的优选实施方式，以及可以对其进行改变，而未脱离随附权利要求所阐述的本发明技术的主旨和范围。

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腹足动物生物流体、制备和精制方法以及用途

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