使用增强p53活性的取代哌啶的方法
阅读：689发布：2021-07-18
专利汇可以提供使用增强p53活性的取代哌啶的方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 揭示使用具有HDM2蛋白拮抗剂活性的化合物的方法，用以 治疗 或 预防 癌症、由异常 细胞增殖 引起的 疾病 、与HDM2相关的疾病或由不当p53活性引起的疾病。，下面是使用增强p53活性的取代哌啶的方法专利的具体信息内容。
1.一种抑制HDM2蛋白的方法，其包括向需要此抑制的哺乳动 物给予治疗上可接受量的至少一种具有以下化学结构的化合物：
和
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、酯或前药。
2.一种治疗或预防一种或多种与HDM2相关的疾病的方法，其 包括向需要此治疗的哺乳动物给予治疗有效量的至少一种具有以下 化学结构的化合物：
和
或其药学上可接受的盐、溶剂、酯或前药。
3.一种治疗或预防一种或多种与p53相关的疾病，其包含向需 要此治疗的哺乳动物给予治疗有效量的至少一种具有以下化学结构 的化合物：
和
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、酯或前药。
4.一种治疗或预防一种或多种可与HDM2与p53的相互作用相 关的疾病的方法，其包括向需要该治疗的哺乳动物给予治疗有效量 的至少一种具有以下化学结构的化合物：
和
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、酯或前药。
5.权利要求2的方法，其包括向需要该治疗的哺乳动物给予下 列各物：
一定量的权利要求2所揭示的第一化合物；
和
一定量的至少一种第二化合物，其中该第二化合物为与权利要 求2所揭示的化合物不同的抗癌药；
其中该量的该第一化合物和该第二化合物产生治疗作用。
6.权利要求3的方法，其包括向需要该治疗的哺乳动物给予下 列各物：
一定量的权利要求3所揭示的第一化合物；
和
一定量的至少一种第二化合物，其中该第二化合物为与权利要 求3所揭示的化合物不同的抗癌药；
其中该量的该第一化合物和该第二化合物产生治疗作用。
7.权利要求4的方法，其包括向需要该治疗的哺乳动物给予下 列各物：
一定量的权利要求4所揭示的第一化合物；
和
一定量的至少一种第二化合物，其中该第二化合物为与权利要 求4所揭示的化合物不同的抗癌药；
其中该量的该第一化合物和该第二化合物产生治疗作用。
8.权利要求2-7中任一项的方法，其中该疾病选自：
癌，包括但不限于膀胱癌、乳癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜 癌、肾癌、肝癌、肺癌、头颈癌、食道癌、胆囊癌、宫颈癌、胰腺 癌、前列腺癌、喉癌、卵巢癌、胃癌、子宫癌、肉瘤和甲状腺癌；
淋巴系造血系统肿瘤，包括白血病、急性淋巴细胞性白血病、 慢性淋巴细胞性白血病、急性淋巴母细胞白血病、B细胞淋巴瘤、T 细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、毛细胞淋巴瘤、套 细胞淋巴瘤、骨髓瘤和伯基特氏淋巴瘤；
骨髓系造血系统肿瘤，包括急性和慢性髓细胞性白血病、骨髓 发育不良综合征和前髓细胞性白血病；
间质细胞起源的肿瘤，包括纤维肉瘤和横纹肌肉瘤；
中枢神经系统和周围神经系统的肿瘤，包括星形细胞瘤、神经 母细胞瘤、神经胶质瘤和神经鞘瘤；和
其他肿瘤，包括黑素瘤、皮肤(非黑素瘤)癌、间皮瘤(细胞)、精 原细胞瘤、畸胎瘤、骨肉瘤、着色性干皮病、角化棘皮瘤、甲状腺 滤泡状癌和卡波西氏肉瘤。
9.权利要求2-7中任一项的方法，其另外包括放射疗法、手 术、化学疗法、生物疗法、激素疗法、光动力学疗法或骨髓移植。
10.权利要求5、6或7的方法，其中该抗癌药选自：细胞毒性 剂、对抗癌症和赘生性疾病的靶向治疗剂(小分子、生物制剂、 siRNA和微小RNA)，
抗代谢物，诸如甲氨喋呤、5-氟尿嘧啶、吉西他滨、氟达拉滨、 卡培他滨；
烷基化剂，诸如替莫唑胺、环磷酰胺；
与DNA相互作用和破坏DNA的药剂，诸如顺铂、奥沙利铂、 多柔比星；
电离辐射，诸如放射疗法；
拓扑异构酶II抑制剂，诸如依托泊苷、多柔比星；
拓扑异构酶I抑制剂，诸如伊立替康、托泊替康；
微管蛋白相互作用剂，诸如紫杉醇、多西他赛、Abraxane、埃坡 霉素；
驱动蛋白纺锤体蛋白抑制剂；
纺锤体检查点抑制剂；
聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)抑制剂；
基质金属蛋白酶(MMP)抑制剂；
蛋白酶抑制剂，诸如组织蛋白酶D和组织蛋白酶K的抑制剂；
蛋白体或遍在蛋白化抑制剂，诸如硼替佐米；
用于恢复野生型p53活性的突变型p53的活化剂；
腺病毒-p53；
Bcl-2抑制剂，诸如ABT-263；
热休克蛋白(HSP)调节剂，诸如格尔德霉素和17-AAG；
组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂，诸如伏林司他(SAHA)；
性激素调节剂；
抗雌激素，诸如他莫昔芬、氟维司群，
选择性雌激素受体调节剂(SERM)，诸如雷洛昔芬，
抗雄激素，诸如比卡鲁胺、氟他胺，
LHRH激动剂，诸如亮丙立德，
5α-还原酶抑制剂，诸如非那雄胺，
细胞色素P450 C17裂合酶(CYP450c17)抑制剂，诸如阿比 特龙，
芳化酶抑制剂，诸如雷曲唑、阿那曲唑、依西美坦， EGFR激酶抑制剂，诸如吉非替尼、厄洛替尼、拉普替尼； 双重erbB1和erbB2抑制剂，诸如拉帕替尼；
多目标激酶(丝氨酸/苏氨酸和/或酪氨酸激酶)抑制剂：
ABL激酶抑制剂，伊马替尼和尼洛替尼，达沙替尼，
VEGFR-1、VEGFR-2、PDGFR、KDR、FLT、c-Kit、 Tie2、Raf、MEK和ERK抑制剂，诸如舒尼替尼、索拉非尼、 凡德他尼、帕唑帕尼、阿昔替尼、PTK787，
Polo样激酶抑制剂，
Aurora激酶抑制剂，
JAK抑制剂，
c-MET激酶抑制剂，
细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂，诸如CDK1和CDK2抑 制剂SCH 727965，
PI3K抑制剂，
mTOR抑制剂，诸如雷帕霉素、坦罗莫司和RAD001；
和其他抗癌药(也称抗肿瘤药)，其包括但不限于ara-C、阿霉 素、环磷酰胺、卡铂、尿嘧啶氮芥、氮芥、异环磷酰胺、美法仑、 苯丁酸氮芥、哌泊溴烷、三亚乙基蜜胺、三亚乙基硫代磷酰铵、白 消安、卡莫司汀、洛莫司汀、链佐星、达卡巴嗪、氟尿苷、阿糖胞 苷、6-巯嘌呤、6-硫鸟嘌呤、磷酸氟达拉滨、喷司他丁、长春碱、长 春新碱、长春地辛、长春瑞滨、诺维本、博来霉素、放线菌素D、 道诺霉素、多柔比星、表柔比星、替尼泊苷、阿糖胞苷、培美曲 塞、伊达比星、光神霉素、脱氧考福霉素、丝裂霉素C、L-天冬酰胺 酶、替尼泊苷17α-炔雌醇、己烯雌酚、睾酮、泼尼松、氟甲睾酮、 丙酸屈他雄酮、睾内酯、醋酸甲地孕酮、甲泼尼龙、甲基睾酮、泼 尼松龙、曲安西龙、氯烯雌醚、羟孕酮、氨鲁米特、雌莫司汀、氟 他胺、醋酸甲羟孕酮、托瑞米芬、戈舍瑞林、卡铂、羟基脲、安吖 啶、丙卡巴肼、米托坦、米托蒽醌、左旋咪唑、屈洛昔芬、六甲蜜 胺、贝克萨、Zevalin、Trisenox、Profimer、塞替派、六甲蜜胺 (Altretamine)、Doxil、昂他克、Depocyt、Aranesp、Neupogen、 Neulasta、Kepivance；
法呢基蛋白转移酶抑制剂，诸如SARASARTM(4-[2-[4-[(11R)- 3，10-二溴-8-氯-6，11-二氢-5H-苯并[5，6]环庚烷并[1，2-b]吡啶-11-基-]-1- 哌啶基]-2-氧代乙基]-哌啶甲酰胺、替吡法呢；
干扰素，诸如Intron A、Peg-Intron；
抗erbB1抗体，诸如西妥昔单抗、帕尼单抗；
抗erbB2抗体，诸如曲妥珠单抗；
抗CD52抗体，诸如阿仑珠单抗；
抗CD20抗体，诸如利妥昔单抗；
抗CD33抗体，诸如吉妥昔单抗奥佐米星；
抗VEGF抗体，诸如阿瓦斯丁；
TRIAL配体，诸如来沙木单抗、马帕木单抗和AMG-655；
抗CTLA-4、CTA1、CEA、CD5、CD19、CD22、CD30、 CD44、CD44V6、CD55、CD56、EpCAM、FAP、MHCII、HGF、 IL-6、MUC1、PSMA、TAL6、TAG-72、TRAILR、VEGFR、IGF- 2、FGF的抗体；
抗IGF-1R抗体，诸如SCH717454。
11.权利要求1的方法，其另外包括将药学上可接受的载体加入 至权利要求1所揭示的化合物中。
12.一种靶向HDM2-p53相互作用以藉由激活p53活性来治疗哺 乳动物疾病的方法，其包括向需要该治疗的哺乳动物给予治疗有效 量的至少一种权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化 物、酯或前药。
13.权利要求1-7和12中任一项的方法，其中哺乳动物为人 类。
14.一种保护哺乳动物的正常健康细胞免受细胞毒性诱导的副作 用的影响的方法，其包括向具有突变型P53的哺乳动物给予至少一 种权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、酯或前 药，随后给予不同于权利要求1的化合物的抗癌药。
15.权利要求14的方法，其中该另一抗癌药为紫杉醇。
16.权利要求12的方法，其中一定量的该第一化合物可与一定 量的至少一种第二化合物同时、连续或相继给予，该第一化合物为 权利要求1的化合物或其药学上可接受之盐、溶剂化物或酯，该第 二化合物为与权利要求1的化合物不同的抗癌药。
发明领域
本发明涉及作为人类双微体2(“HDM2”)蛋白抑制剂、调控剂或 调节剂的化合物的用途；含有该化合物的药用组合物的用途；和使 用该化合物和组合物治疗诸如癌症、涉及异常细胞增殖的疾病、与 HDM2相关的疾病或与不当P53活性相关的疾病的治疗方法。
发明背景
肿瘤抑制蛋白p53通过调控负责DNA修复、细胞周期和生长停 滞与细胞凋亡的一系列不同基因的表达而对维持细胞中基因组的完 整性起到重要作用[May等人，Oncogene 18 (53)(1999)第7621-7636 页；Oren，Cell Death Differ. 10(4)(2003)第431-442页；Hall和Peters， Adv.Cancer Res.， 68：(1996)第67-108页；Hainaut等人，Nucleic Acid Res.， 25：(1997)第151-157页；Sherr，Cancer Res.，60：(2000)第3689- 95页]。细胞对致癌应激信号(oncogenic stress signals)应答而触发p53 转录因子，从而活化细胞周期调控中所涉及的基因，由此起始细胞 凋亡或细胞周期停滞。细胞凋亡有助于受损细胞自有机体中除去， 而细胞周期停滞使得受损细胞能够修复基因损伤[Ko等人.，Genes & Devel.10：(1996)第1054-1072页；Levine，Cell 88：(1997)第323-331 页中评论]。p53安全保障功能的丧失易于使受损细胞发展成癌状 态。使小鼠体内的p53失活始终会导致异常高的肿瘤发生率 [Donehower等人，Nature，356：(1992)第215-221页]。
p53转录因子促进多种细胞周期调控基因的表达，所述基因包括 其自身的负调控剂，即编码小鼠双微体2(Mdm2)蛋白的基因[Chene， Nature Reviews Cancer 3：(2003)第102-109页；Momand，Gene 242(1- 2)：(2000)第15-29页；Zheleva等人Mini.Rev.Med.Chem. 3(3)： (2003)第257-270页]。Mdm2蛋白(对于人类称为HDM2)以自体调控 的方式起到下调P53活性的作用[Wu等人，Genes Dev.，7：(1993)第 1126-1132页，Bairak等人，EMBO J，12：(1993)第461-468页]。在无 致癌应激信号的情况下(也即，在正常细胞条件下)，Mdm2蛋白起到 将p53活性维持在低水平的作用[Wu等人，Genes Dev.，7：(1993)第 1126-1132页；Barak等人，EMBO J，12：(1993)第461-468页]。然 而，回应于细胞DNA损伤或在细胞应激下，p53活性会增强，从而 通过诱导细胞周期和生长停滞或细胞凋亡而有助于防止永久受损细 胞克隆的繁殖。
对p53功能的调控依赖于该p53-Mdm2自体调控系统中两组分 之间的适当平衡。事实上，该平衡似乎对于细胞存活至关重要。 Mdm2起到下调p53活性的作用存在至少三种途径。第一，Mdm2可 以与p53的N末端转录活化域结合以阻断p53效应基因的表达 [Kussie等人，Science，274：(1996)第948-953页；Oliner等人，Nature， 362：(1993)第857-860页；Momand等人，Cell，69：(1992)第1237- 1245页]。第二，Mdm2使p53由细胞核穿梭至细胞质，从而有助于 p53的蛋白水解降解[Roth等人，EMBO J，17：(1998)第554-564页； Freedman等人，Mol Cell Biol，18：(1998)第7288-7293页；Tao和 Levine，Proc.Natl.Acad.Sci.96：(1999)第3077-3080页]。最终，在 依赖遍在蛋白的26S蛋白体途径中，Mdm2具有使遍在蛋白与p53 缀合以使其降解的内在E3连接酶活性[Honda等人，FEBS Lett，420： (1997)第25-27页；Yasuda，Oncogene 19：(2000)第1473-1476页]。 因此，Mdm2通过与细胞核内的p53结合而妨碍p53转录因子促进 其靶基因表达的能力。弱化p53-Mdm2自体调控系统可对细胞稳态 具有关键作用。一直以来，已报道Mdm2的过量表达与肿瘤形成之 间的相关性[Chene，Nature 3：(2003)第102-109页]。在许多类型的人 类肿瘤中发现野生型p53的功能失活。通过抗MDM2疗法恢复肿瘤 细胞中p53的功能将导致肿瘤增殖减缓且刺激细胞凋亡。故当前对 鉴别阻滞HDM2与p53相互作用的能力的新型抗癌药做出的实质努 力也在意料之中[Chene，Nature 3：(2003)第102-109页]。已证实抗 体、肽和反义寡核苷酸破坏p53-Mdm2的相互作用，此会将p53自 Mdm2的负控制下释放，导致p53途径活化，从而允许生长停滞和/ 或细胞凋亡的正常信号发挥作用，此将提供一种治疗癌症和以异常 细胞增殖为特征的其他疾病的潜在治疗方法[例如参见Blaydes等 人，Oncogene 14：(1997)第1859-1868页；Bottger等人，Oncogene 13(10)：(1996)第2141-2147]。
美国公开说明书第2005/0037383 A1号中描述经修饰的可溶性 HDM2蛋白；编码该HDM2蛋白的核酸；适于X射线结晶分析的该 蛋白质晶体；该蛋白质和晶体用于鉴别、选择或设计可用作抗癌药 的化合物的用途；及与经修饰的HDM2结合的部分化合物本身 (Schering-Plough Corp.)。
对于拮抗p53-Mdm2相互作用的小分子已有描述。WO 00/15657 (Zeneca Limited)描述了作为Mdm2与p53相互作用的抑制剂的哌嗪- 4-苯基衍生物。Grasberger等人(J.Med.Chem.，48(2005)p.909-912) (Johnson & Johnson Pharmaceutical Research & Development L.L.C.)描 述有关作为活化细胞中p53的HDM2拮抗剂的苯并二氮杂二酮的 发现和共晶体结构。Galatin等人(J.Med.Chem.47(2004)第4163- 4165页)描述p53-Mdm2相互作用的非肽磺酰胺抑制剂和mdm2过度 表达的细胞中p53依赖性转录的活化剂。
Vassilev(J.Med.Chem.(Perspective)第48卷，第14期，(2005) 第1-8页)(Hoffmann-LaRoche Inc.)描述肿瘤学中应用的若干小分子 p53活化剂，包括下式：
和
上文所列的前四种化合物也于Totouhi等人(Current Topics in Medicinal Chemistry第三卷3，第2期(2005)第159-166页，第 161处)(Hoffmann La Roche Inc.)中进行描述。上文所列的后三种化 合物也已于Vassilev等人(Science第303卷(2004)：第844-848页) (Hoffmann La Roche Inc.)中进行描述且其白血病活性的关联已于 Koiima等人(Blood，，第108卷，第9期(2005年11月)第3150- 3159页)中进行研究。
Ding等人(J.Am.Chem.Soc.第127卷(2005)：10130-10131)和(J. Med.Chem.第49卷(2006)：3432-3435)中描述了作为Mdm2-p53抑制 剂的若干螺-羟基吲哚化合物。
Lu等人(J.Med.Chem.第49卷(2006)：3759-3762)中描述作为 MDM2-p53相互作用的小分子抑制剂的7-[苯氨基(苯基)甲基]-2-甲基- 8-羟基喹啉。
Chène(Molecular Cancer Research第2卷：(2006年1月)第20- 28页)中描述通过靶向蛋白质-蛋白质界面而对p53-Mdm2相互作用 进行抑制。美国公开说明书第2004/0259867 A1号和第2004/0259884 A1号中描述顺式-咪唑(Hoffmann La Roche Inc.)， WO2005/110996A1号和WO 03/051359号中描述顺式-咪唑啉 (Hoffmann La Roche Inc.)，其作为抑制Mdm2与p53样肽相互作用从 而导致抗增殖作用的化合物。WO 2004/080460 A1描述作为Mdm2- p53抑制剂用于治疗癌症的经取代哌啶化合物(Hoffmann La Roche Inc.)。EP 0947494 A1描述苯氧基乙酸衍生物和苯氧基甲基四唑，其 充当Mdm2的拮抗剂且干扰Mdm2与p53之间的蛋白质-蛋白质相互 作用，从而导致抗肿瘤特性(Hoffmann La Roche Inc.)。Duncan等 人，J.Am.Chem.Soc.123(4)：(2001)第554-560页中描述来自镰孢 (Fusarium Sp.)的p-53-Mdm2拮抗剂绿褐素(chlorofusin)。Stoll等人， Biochemistry 40(2)(2001)第336-344页中描述拮抗人类癌蛋白Mdm2 与p53之间相互作用的查耳酮(chalcone)衍生物。
需要HDM2或MDM2蛋白的有效抑制剂，以便治疗或预防癌 症、与细胞增殖相关的其他疾病病况、与HDM2相关的疾病或由不 当p53活性引起的疾病。本申请揭示具有抑制或拮抗HDM2-p53和 Mdm2-p53相互作用和/或活化细胞中的p53蛋白的效能的化合物。 先前尚未揭示该化合物的HDM2-p53和Mdm2-p53抑制活性。
发明概述
本发明提供一种抑制HDM2蛋白的方法，其包括向需要该抑制 的患者给予治疗有效量的至少一种具有以下化学结构的化合物：
或
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、酯或前药。
发明详述
在一实施方案中，本发明提供抑制HDM2蛋白的方法，其包括 向需要该抑制的患者给予治疗上可接受量的至少一种具有上述化学 结构的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、酯或前药。
在另一实施方案中，本发明揭示治疗一种或多种与HDM2相关 的疾病的方法，其包括向需要该治疗的患者给予治疗有效量的至少 一种上述化合物。
在再一实施方案中，本发明提供治疗一种或多种与p53相关的 疾病的方法，其包括向需要该治疗的患者给予治疗有效量的至少一 种上述化合物。
在又一实施方案中，本发明揭示治疗一种或多种与HDM2蛋白 与p53蛋白相互作用相关的疾病的方法，其包括向需要该治疗的患 者给予治疗有效量的至少一种上述化合物。
在另一实施方案中，本发明提供治疗一种或多种与HDM2相关 的疾病的方法，其包括向需要该治疗的哺乳动物给予下列药物：
一定量的第一化合物，其中该第一化合物选自上述化合物；
和
一定量的至少一种第二化合物，其中该第二化合物为与第一化 合物不同的抗癌药；
其中该量的该第一化合物与该第二化合物产生治疗作用。
在再一实施方案中，本发明揭示治疗一种或多种与p53蛋白相 关的疾病的方法，其包括向需要该治疗的哺乳动物给予下列各物：
一定量的第一化合物，其中该第一化合物选自上述化合物；
和
一定量的至少一种第二化合物，其中该第二化合物为与该第一 化合物不同的抗癌药；
其中该量的该第一化合物与该第二化合物产生治疗作用。
在又一实施方案中，本发明提供治疗一种或多种与HDM2蛋白 与p53蛋白相互作用相关的疾病的方法，其包括向需要该治疗的哺 乳动物给予下列各物：
一定量的第一化合物，其中该第一化合物选自上述化合物；
和
一定量的至少一种第二化合物，其中该第二化合物为与第一化 合物不同的抗癌药；
其中该量的该第一化合物与该第二化合物产生治疗作用。
在另一实施方案中，本发明揭示治疗选自以下的疾病的方法：
癌，包括(但不限于)膀胱癌、乳癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜 癌、肾癌、肝癌、肺癌、头颈癌、食道癌、胆囊癌、宫颈癌、胰腺 癌、前列腺癌、喉癌、卵巢癌、胃癌、子宫癌、肉瘤和甲状腺癌；
淋巴系造血系统肿瘤，包括白血病、急性淋巴细胞性白血病、 慢性淋巴细胞性白血病、急性淋巴母细胞白血病、B细胞淋巴瘤、T 细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤(Hodgkins lymphoma)、非霍奇金淋巴 瘤、毛细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、骨髓瘤和伯基特氏淋巴瘤 (Burkett’s lymphoma)；
骨髓系造血系统肿瘤，包括急性和慢性髓细胞性白血病、骨髓 发育不良综合征和前髓细胞性白血病；
间质起源的肿瘤，包括纤维肉瘤和横纹肌肉瘤；
中枢神经系统和周围神经系统的肿瘤，包括星形细胞瘤、神经 母细胞瘤、神经胶质瘤和神经鞘瘤；和
其他肿瘤，包括黑素瘤、皮肤(非黑素瘤)癌、间皮瘤(细胞)、精 原细胞瘤、畸胎瘤、骨肉瘤、着色性干皮病、角化棘皮瘤、甲状腺 滤泡状癌和卡波西氏肉瘤(Kaposi’s sarcoma)。
在再一实施方案中，本发明的方法还包括放射疗法、手术、化 学疗法、生物疗法、激素疗法、光动力学疗法或骨髓移植。
在又一实施方案中，本发明提供一种治疗方法，
其中上文所述的抗癌药选自：细胞生长抑制剂、细胞毒性剂、 对抗癌症和赘生性疾病的靶向治疗剂(小分子、生物制剂、siRNA和 微小RNA(microRNA))：
抗代谢物，诸如甲氨喋呤(methoxtrexate)、5-氟尿嘧啶(5- fluorouracil)、吉西他滨(gemcitabine)、氟达拉滨(fludarabine)、卡培他 滨(capecitabine)；
烷化剂，诸如替莫唑胺(temozolomide)、环磷酰胺 (cyclophosphamide)；
与DNA相互作用和破坏DNA的药物，诸如顺铂(cisplatin)、奥 沙利铂(oxaliplatin)、多柔比星(doxorubicin)；
电离辐射，诸如放射疗法；
拓扑异构酶II抑制剂，诸如依托泊苷(etoposide)、多柔比星 (doxorubicin)；
拓扑异构酶I抑制剂，诸如伊立替康(irinotecan)、托泊替康 (topotecan)；
微管蛋白相互作用剂，诸如紫杉醇(paclitaxel)、多西他赛 (docetaxel)、Abraxane、埃坡霉素(epothilones)；
驱动蛋白纺锤体蛋白抑制剂；
纺锤体检查点抑制剂；
聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)抑制剂；
基质金属蛋白酶(MMP)抑制剂；
蛋白酶抑制剂，诸如组织蛋白酶D和组织蛋白酶K抑制剂；
蛋白体或遍在蛋白化抑制剂，诸如硼替佐米(bortezomib)；
用于恢复野生型p53活性的突变型p53的活化剂；
腺病毒-p53；
Bcl-2抑制剂，诸如ABT-263；
热休克蛋白(HSP)调节剂，诸如格尔德霉素(geldanamycin)和17- AAG；
组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂，诸如伏林司他(vorinostat， SAHA)；
性激素调节剂；
抗雌激素，诸如他莫昔芬(tamoxifen)、氟维司群 (fulvestrant)，
选择性雌激素受体调节剂(SERM)，诸如雷洛昔芬 (raloxifene)，
抗雄激素，诸如比卡鲁胺(bicalutamide)、氟他胺 (flutamide)，
LHRH激动剂，诸如亮丙立德(leuprolide)，
5α-还原酶抑制剂，诸如非那雄胺(finasteride)，
细胞色素P450C17裂合酶(CYP450c17)抑制剂，诸如阿比 特龙(Abiraterone)，
芳化酶抑制剂，诸如雷他曲唑(letrozole)、阿那曲唑 (anastrozole)、依西美坦(exemestane)；
EGFR激酶抑制剂，诸如吉非替尼(geftinib)、厄洛替尼 (erlotinib)、拉普替尼(laptinib)；
双重erbB1和erbB2抑制剂，诸如拉帕替尼(Lapatinib)；
多目标激酶(丝氨酸/苏氨酸和/或酪氨酸激酶)抑制剂；
ABL激酶抑制剂，伊马替尼(imatinib)和尼洛替尼 (nilotinib)、达沙替尼(dasatinib)，
VEGFR-1、VEGFR-2、PDGFR、KDR、FLT、c-Kit、 Tie2、Raf、MEK和ERK抑制剂，诸如舒尼替尼(sunitinib)、 索拉非尼(sorafenib)、凡德他尼(Vandetanib)、帕唑帕尼 (pazopanib)、阿昔替尼(Axitinib)、PTK787，
Polo样激酶抑制剂，
Aurora激酶抑制剂，
JAK抑制剂，
c-MET激酶抑制剂，
细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂，诸如CDK1和CDK2抑 制剂SCH727965，
PI3K抑制剂，
mTOR抑制剂，诸如雷帕霉素(Rapamycin)、坦罗莫司 (Temsirolimus)和RAD001；
和其他抗癌药(也称抗肿瘤药)，其包括(但不限于)ara-C、阿霉素 (adriamycin)、环磷酰胺(cytoxan)、卡铂(Carboplatin)、尿嘧啶氮芥 (Uracil mustard)、氮芥(Clormethine)、异环磷酰胺(Ifosfsmide)、美法 仑(Melphalan)、苯丁酸氮芥(Chlorambucil)、哌泊溴烷(Pipobroman)、 三亚乙基蜜胺(Triethylenemelamine)、三亚乙基硫代磷酰铵 (Triethylenethiophosphoramine)、白消安(Busulfan)、卡莫司汀 (Carmustine)、洛莫司汀(Lomustine)、链佐星(Streptozocin)、达卡巴嗪 (Dacarbazine)、氟尿苷(Floxuridine)、阿糖胞苷(Cytarabine)、6-巯嘌呤 (6-Mercaptopurine)、6-硫鸟嘌呤(6-Thioguanine)、磷酸氟达拉滨 (Fludarabinephosphate)、喷司他丁(Pentostatine)、长春碱 (Vinblastine)、长春新碱(Vincristine)、长春地辛(Vindesine)、长春瑞 滨(Vinorelbine)、诺维本(Navelbine)、博来霉素(Bleomycin)、放线菌 素D(Dactinomycin)、道诺霉素(Daunorubicin)、多柔比星 (Doxorubicin)、表柔比星(Epirubicin)、替尼泊苷(teniposide)、阿糖胞 苷(cytarabine)、培美曲塞(pemetrexed)、伊达比星(Idarubicin)、光神霉 素(Mithramycin)、脱氧考福霉素(Deoxycoformycin)、丝裂霉素C (Mitomycin-C)、L-天冬酰胺酶(L-Asparaginase)、替尼泊苷(Teniposide) 17α-炔雌醇(Ethinylestradiol)、己烯雌酚(Diethylstilbestrol)、睾酮 (Testosterone)、泼尼松(Prednisone)、氟甲睾酮(Fluoxymesterone)、丙 酸屈他雄酮(Dromostanolone propionate)、睾内酯(Testolactone)、醋酸 甲地孕酮(Megestrolacetate)、甲泼尼龙(Methylpredni solone)、甲基睾 酮(Methyltestosterone)、泼尼松龙(Prednisolone)、曲安西龙 (Triamcinolone)、氯烯雌醚(Chlorotrianisene)、羟孕酮 (Hydroxyprogesterone)、氨鲁米特(Aminoglutethimide)、雌莫司汀 (Estramustine)、氟他胺(Flutamide)、醋酸甲羟孕酮 (Medroxyprogesteroneacetate)、托瑞米芬(Toremifene)、戈舍瑞林 (goserelin)、卡铂(Carboplatin)、羟基脲(Hydroxyurea)、安吖啶 (Amsacrine)、丙卡巴肼(Procarbazine)、米托坦(Mitotane)、米托蒽醌 (Mitoxantrone)、左旋咪唑(Levamisole)、屈洛昔芬(Drol loxafine)、六 甲蜜胺(Hexamethylmelamine)、Bexxar、Zevalin、Trisenox、 Profimer、塞替派(Thiotepa)、六甲蜜胺(Altretamine)、Doxil、昂他克 (Ontak)、Depocyt、Aranesp、Neupogen、Neulasta、Kepivance；
法呢基蛋白转移酶抑制剂，诸如SARASARTM(4-[2-[4-[(11R)- 3，10-二溴-8-氯-6，11-二氢-5H-苯并[5，6]环庚烷并[1，2-b]吡啶-11-基-]-1- 哌啶基]-2-氧代乙基]-哌啶甲酰胺、替吡法呢(tipifarnib)；
干扰素，诸如Intron A、Peg-Intron；
抗erbB1抗体，诸如西妥昔单抗(cetuximab)、帕尼单抗 (panitumumab)；
抗erbB2抗体，诸如曲妥珠单抗(trastuzumab)；
抗CD52抗体，诸如阿仑珠单抗(Alemtuzumab)；
抗CD20抗体，诸如利妥昔单抗(Rituximab)；
抗CD33抗体，诸如吉妥昔单抗奥佐米星(Gemtuzumab ozogami cin)；
抗VEGF抗体，诸如阿瓦斯丁(Avastin)；
TRIAL配体，诸如来沙木单抗(Lexatumumab)、马帕木单抗 (mapatumumab)和AMG-655；
抗CTLA-4、CTA1、CEA、CD5、CD19、CD22、CD30、 CD44、CD44V6、CD55、CD56、EpCAM、FAP、MHCII、HGF、 IL-6、MUC1、PSMA、TAL6、TAG-72、TRAILR、VEGFR、IGF- 2、FGF的抗体；
抗IGF-1R抗体，诸如SCH717454。
上文所述的所有表示人类双微体2蛋白的等效名称包括(但不限 于)HDM2、hDM2、hdm2、Hdm2、人类双微体2、HDM-2、hDM- 2、hdm-2、Hdm-2、人类双微体-2、hDM2、hdm2、Hdm2、人类双 微体2(Human Double Minute two、human double minute two)、HDM- 2、hDM-2、hdm-2、Hdm-2、人类双微体-2(Human Double Minute- two、human double minute-two)、hDM2、hdm2、Hdm2、人类双微 体2(Human Double Minute Two、human double minute Two)、HDM- 2、hDM-2、hdm-2、Hdm-2、人类双微体-2(Human Double Minute- Two或human double minute Two)。
同样，小鼠双微体2蛋白可以与上文所述的人类双微体2蛋白以 相同的方式表示，但分别以“M”或“小鼠”替换“H”或“人类”。
上文所述的所有表示p53蛋白的等效名称包括(但不限于)P-53、 p53、p-53、P53、p53或p53。
除非另作说明，否则如上文和本申请公开内容通篇所使用的以 下术语应理解为具有以下含义：
“患者”包括人类与动物。
“哺乳动物”意味人类及其他哺乳动物。
关于化合物的术语“经纯化”、“纯化形式”或“经分离和纯化的形 式”是指自合成方法(例如，自反应混合物中)或天然来源或其组合中 分离之后该化合物的物理状态。因此，关于化合物的术语“经纯化”、 “纯化形式”或“经分离和纯化的形式”是指自本文所述的或技术人员熟 知的一种或多种纯化方法(例如层析、再结晶及其类似方法)获得之后 该化合物的物理状态，其具有足够纯度从而可以用本文所述或技术 人员熟知的标准分析技术加以表征。
也应注意，在本文正文、流程、实施例和表格中具有不饱和价 态的任何碳以及杂原子均假定具有足够数量的氢原子以使价态饱 和。
如本文所使用的术语“组合物”意欲涵盖包含指定量的指定成分的 产物，以及由指定量的指定成分的组合直接或间接产生的任何产 物。
本发明化合物的前药和溶剂化物也涵盖于本文中。有关前药的 讨论提供于A.C.S.Symposium Series的T.Higuchi和V.Stella，Pro- drugs as Novel Delivery Systems(1987)14中和Bioreversible Carriers in Drug Design，(1987)Edward B.Roche编，American Pharmaceutical Association and Pergamon Press中。术语“前药”意味在活体内转化 产生上文所述的化合物或该化合物的药学上可接受的盐、水合物或 溶剂化物的化合物(例如药物前体)。转化可经多种机制(例如，经代 谢或化学过程)发生，诸如经血液中的水解发生。在A.C.S. Symposium Series的T.Higuchi和W.Stella，“Pro-drugs as Novel Delivery Systems，”第14卷中和Bioreversible Carriers in Drug Design， Edward B.Roche编，American Pharmaceutical Association and Pergamon Press，1987中已提供有关前药使用的论述。
举例而言，若上文所述的化合物或该化合物的药学上可接受的 盐、水合物或溶剂化物含有羧酸官能团，则前药可包含由诸如以下 基团的基团置换酸基的氢原子所形成的酯：(C1-C8)烷基、(C2-C12)烷 酰氧基甲基、具有4-9个碳原子的1-(烷酰氧基)乙基、具有5-10 个碳原子的1-甲基-1-(烷酰氧基)-乙基、具有3-6个碳原子的烷氧基 羰氧基甲基、具有4-7个碳原子的1-(烷氧基羰氧基)乙基、具有5 -8个碳原子的1-甲基-1-(烷氧基羰氧基)乙基、具有3-9个碳原子 的N-(烷氧羰基)氨基甲基、具有4-10个碳原子的1-(N-(烷氧羰基) 氨基)乙基、3-苯并[c]呋喃酮基、4-巴豆酸内酯基、γ-丁内酯-4-基、 二-N，N-(C1-C2)烷基氨基(C2-C3)烷基(诸如β-二甲氨基乙基)、氨甲酰 基-(C1-C2)烷基、N，N-二(C1-C2)烷基氨甲酰基-(C1-C2)烷基和哌啶子 基(C2-C3)烷基、吡咯烷基(C2-C3)烷基或吗啉代(C2-C3)烷基及其类似基 团。
类似地，若上文所述的化合物含有醇官能团，则前药可由诸如 下列的基团置换醇基的氢原子而形成：(C1-C6)烷酰氧基甲基、1-((C1- C6)烷酰氧基)乙基、1-甲基-1-((C1-C6)烷酰氧基)乙基、(C1-C6)烷氧基 羰氧基甲基、N-(C1-C6)烷氧羰基氨基甲基、琥珀酰基、(C1-C6)烷酰 基、α-氨基(C1-C4)链烷基、芳基酰基和α-氨基酰基或α-氨基酰基-α- 氨基酰基，其中各α-氨基酰基独立地选自天然存在的L-氨基酸、 P(O)(OH)2、-P(O)(O(C1-C6)烷基)2或糖基(由移除半缩醛形式的碳水化 合物的羟基而产生的基团)及其类似基团。
若上文所述的化合物中掺入胺官能团，则前药可由以诸如下列 的基团置换氨基中的氢原子而形成：R-羰基、RO-羰基、NRR’-羰 基，其中R和R’各自独立地为(C1-C10)烷基、(C3-C7)环烷基、苯甲 基，或R-羰基为天然α-氨基酰基或天然α-氨基酰基- C(OH)C(O)OY1，其中Y1为H、(C1-C6)烷基或苯甲基；- C(OY2)Y3，其中Y2为(C1-C4)烷基且Y3为(C1-C6)烷基、羧基(C1-C6) 烷基、氨基(C1-C4)烷基或单-N-(C1-C6)烷基氨基烷基或二-N，N-(C1-C6) 烷基氨基烷基；-C(Y4)Y5，其中Y4为H或甲基且Y5为单-N-或二- N，N-(C1-C6)烷基氨基-吗啉代、哌啶-1-基或吡咯烷-1-基；及其类似 基团。
一种或多种本发明的化合物可以非溶剂化物形式以及与药学上 可接受的溶剂(诸如水、乙醇及其类似物)形成的溶剂化物的形式存 在，且预期本发明包括溶剂化物与非溶剂化物形式。“溶剂化物”意味 本发明的化合物与一个或多个溶剂分子的物理性缔合。该物理性缔 合涉及不同程度的离子键合和共价键合，包括氢键合。在某些情况 中，例如当一个或多个溶剂分子掺入结晶固体的晶格时，溶剂化物 将能够分离。＂溶剂化物＂涵盖溶液相与可分离的溶剂化物。适当溶剂 化物的非限制性实例包括乙醇化物、甲醇化物及其类似物。“水合物” 为溶剂分子为H2O的溶剂化物。
一种或多种本发明的化合物可任选转化为溶剂化物。一般已知 溶剂化物的制备。因此，例如M.Caira等人，J.Pharmaceutical Sci.， 93(3)，601-611(2004)中描述抗真菌氟康唑(fluconazole)于乙酸乙酯以 及水中的溶剂化物的制备。溶剂化物、半溶剂化物、水合物及其类 似物的类似制备已描述于E.C.van Tonder等人，AAPS PharmSciTech.，5(1)，article12(2004)；和A.L.Bingham等人，Chem. Commun.，603-604(2001)中。典型的非限制性方法涉及在高于环境温 度的温度下将本发明的化合物溶解于所需量的所需溶剂(有机物或水 或其混合物)中，且以足够形成晶体的速率冷却该溶液，随后用标准 方法分离。诸如I.R.光谱学的分析技术展示溶剂化物(或水合物)形式 的晶体中是否存在溶剂(或水)。
“有效量”或“治疗有效量”意欲描述可有效抑制上述疾病且因此产 生所需治疗、改善、抑制、调节、拮抗或预防作用的本发明的化合 物或组合物的量。
上文所述的化合物可形成盐，该盐也在本发明的范畴内。应了 解，除非另有说明，否则本文中对上述化合物的提及包括其盐的提 及。本文使用的术语“盐”表示与无机酸和/或有机酸形成的酸盐， 以及与无机碱和/或有机碱形成的碱盐。另外，当上文所述的化合物 含有诸如(但不限于)吡啶或咪唑的碱性部分与诸如(但不限于)羧酸的 酸性部分时，可形成两性离子(“内盐”)，且该两性离子也包括于本文 所用的术语“盐”内。尽管其他盐也适用，但药学上可接受(也即无 毒、生理上可接受)的盐较佳。可(例如)通过上文所述的化合物与一 定量(诸如等量)的酸或碱在介质(诸如所述盐在其中沉淀的介质)中或 在水性介质中反应随后冷冻干燥，形成上文所述的化合物的盐。
例示性酸加成盐包括乙酸盐、抗坏血酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸 盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸 盐、反丁烯二酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、乳酸盐、顺丁 烯二酸盐、甲磺酸盐、萘磺酸盐、硝酸盐、草酸盐、磷酸盐、丙酸 盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺 酸盐(也称为tosylates)等等。另外，一般认为适合由碱性药用化合物 形成药学上适用的盐的酸例如讨论于P.Stahl等人Camille G.编) Handbook of Pharmaceutical Salts.Properties，Selection and Use.(2002) Zurich：Wiley-VCH；S.Berge等人Journal of Pharmaceutical Sciences (1977)66(1)1-19；P.Gould，International J.of Pharmaceutics(1986)33 201-217；Anderson等人The Practice of Medicinal Chemistry(1996)， Academic Press，New York；和The Orange Book(Food & Drug Administration，Washington，D.C.的网页)中。这些揭示内容是以引用 的方式并入本文中。
例示性的碱盐包括：铵盐；碱金属盐，诸如钠盐、锂盐和钾 盐；碱土金属盐，诸如钙盐和镁盐；与有机碱(例如有机胺，诸如二 环己胺、叔丁胺)形成的盐；及与诸如精氨酸、赖氨酸等的氨基酸形 成的盐。可以用诸如低级烷基卤(例如甲基、乙基和丁基的氯化物、 溴化物和碘化物)、硫酸二烷基酯(例如硫酸二甲酯、硫酸二乙酯和硫 酸二丁酯)、长链卤化物(例如癸基、月桂基和硬脂酰基的氯化物、溴 化物和碘化物)、芳烷基卤(例如苯甲基溴和苯乙基溴)等试剂使含氮 基团季铵化。
预期所有该等酸盐和碱盐均为处于本发明范畴内的药学上可接 受的盐，且认为对于本发明而言，所有酸盐和碱盐等同于游离形式 的相应化合物。
本发明化合物的药学上可接受的酯包括以下基团：(1)通过羟基 酯化获得的羧酸酯，其中酯基的羧酸部分的非羰基部分选自直链或 支链烷基(例如乙酰基、正丙基、叔丁基或正丁基)、烷氧基烷基(例 如甲氧基甲基)、芳烷基(例如苯甲基)、芳氧基烷基(例如苯氧基甲 基)、芳基(例如任选经例如卤素、C1-4烷基或C1-4烷氧基或氨基取代 的苯基；(2)磺酸酯，诸如烷基磺酰基或芳烷基磺酰基(例如甲磺酰 基)；(3)氨基酸酯(例如L-缬氨酰基或L-异亮氨酰基)；(4)磷酸酯；和 (5)单磷酸酯、二磷酸酯或三磷酸酯。磷酸酯可进一步经例如C1-20醇 或其反应性衍生物酯化或经2，3-二(C6-24)酰基甘油酯化。
上文所述的化合物及其盐、溶剂化物、酯和前药可以其互变异 构形式(例如以酰胺或亚氨基醚形式)存在。所有该互变异构形式均作 为本发明的部分涵盖于本文中。
上文所述的化合物可含有不对称中心或手性中心，因此可以不 同的立体异构形式存在。预期所有上文所述的化合物的立体异构形 式以及其混合物(包括外消旋混合物)形成本发明的部分。另外，本发 明包括所有几何异构体和位置异构体。举例而言，若上文所述的化 合物中带入双键或稠环，则顺式与反式以及混合物均包括于本发明 的范畴内。
可基于物理化学差异用本领域技术人员熟知的方法(诸如层析法 和/或分步结晶法)将非对映异构体混合物分离成其个别非对映异构 体。可藉由如下步骤来分离对映异构体：使对映异构体混合物与适 当旋光化合物(例如手性助剂诸如手性醇或摩歇尔氏酰氯(Mosher’s acid chloride)反应将其转化为非对映异构体混合物，分离非对映异构 体且将个别非对映异构体转化(例如水解)为相应的纯对映异构体。 又，某些上文所述的化合物可为阻转异构体(例如经取代的联芳基)且 也被视为本发明的部分。对映异构体也可使用手性HPLC色谱柱加 以分离。
也可能上文所述的化合物可以不同的互变异构体形式存在，且 所有该形式均包括在本发明的范畴内。又例如该化合物的所有酮-烯 醇和亚胺-烯胺形式均包括于本发明中。
本发明的范畴内涵盖本发明化合物的所有立体异构体(例如几何 异构体、光学异构体等等)(包括该等化合物的盐、溶剂化物、酯和前 药以及该前药的盐、溶剂化物和酯的立体异构体)，诸如可因各种取 代基上的不对称碳而存在的立体异构体，包括对映异构形式(其甚至 可在不存在对称碳的情况下存在)、旋转异构形式、阻转异构体和非 对映异构形式，也包括位置异构体(诸如4-吡啶基和3-吡啶基)。(举 例而言，若上文所述化合物中带入双键或稠环，则顺式与反式以及 混合物均包括于本发明的范畴内。又，例如该化合物的所有酮-烯醇 和亚胺-烯胺形式均包括在本发明中。)本发明化合物的个别立体异构 体可(例如)基本上无其他异构体，或可(例如)混合为消旋体，或与其 他立体异构体或其他所选择的立体异构体混合。本发明的手性中心 可具有如由IUPAC1974规则所定义的S或R构型。预期术语 “盐”、“溶剂化物”、“酯”、“前药”等术语的使用同样适用 于本发明化合物的对映异构体、立体异构体、旋转异构体、互变异 构体、位置异构体、外消旋体或前药的盐、溶剂化物、酯和前药。
本发明也包括经同位素标记的本发明化合物，该经同位素标记 的化合物与本文所述的化合物相同，但事实上一个或多个原子经原 子质量或质量数与通常发现于自然界的原子质量或质量数不同的原 子置换。可掺入本发明化合物的同位素的实例包括氢、碳、氮、 氧、磷、氟和氯的同位素，分别诸如2H、3H、13C、14C、15N、18O、 17O、31P、32P、35S、18F和36Cl。
某些经同位素标记的上文所述的化合物(例如经3H和14C标记的彼 等化合物)可用于化合物和/或基质组织分布测定中。氚化(也即3H)和 碳-14(也即14C)同位素因其易于制备和可检测性而尤其较佳。此 外，以诸如氘(也即2H)的较重同位素进行的取代可因为代谢稳定性 较强而提供某些治疗优势(例如活体内半衰期增加或剂量需求减少)， 因此可在某些情况下较佳。经同位素标记的上文所述的化合物一般 可按照与下文流程和/或实施例中所揭示的程序类似的程序，藉由用 适当的经同位素标记的试剂取代未经同位素标记的试剂来进行制 备。
本发明中意欲包括上文所述的化合物和上文所述化合物的盐、 溶剂化物、酯和前药的多晶型形式。
上文所述的化合物可为人类双微体2蛋白或小鼠双微体2蛋白 与P-53蛋白相互作用的抑制剂或拮抗剂，且其可为细胞中P-53蛋白 的活化剂。另外，上文所述的化合物的药理学特性可用于治疗或预 防癌症；治疗或预防与异常细胞增殖相关的其他疾病病况；以及治 疗或预防由细胞中的不当p53蛋白含量引起的疾病。
本领域技术人员将认识到，术语“癌症”为机体细胞可能变得异常 且不受控制地分裂的疾病的名称。
上文所述的化合物可用于治疗多种癌症，包括(但不限于)：癌， 包括(但不限于)膀胱癌、乳癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾 癌、肝癌、肺癌、头颈癌、食道癌、胆囊癌、宫颈癌、胰腺癌、前 列腺癌、喉癌、卵巢癌、胃癌、子宫癌、肉瘤和甲状腺癌；
淋巴系造血系统肿瘤，包括白血病、急性淋巴细胞性白血病、 慢性淋巴细胞性白血病、急性淋巴母细胞白血病、B细胞淋巴瘤、T 细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、毛细胞淋巴瘤、套 细胞淋巴瘤、骨髓瘤和伯基特氏淋巴瘤；
骨髓系造血系统肿瘤，包括急性和慢性髓细胞性白血病、骨髓 发育不良综合征和前髓细胞性白血病；
间质细胞起源的肿瘤，包括纤维肉瘤和横纹肌肉瘤；
中枢神经系统和周围神经系统的肿瘤，包括星形细胞瘤、神经 母细胞瘤、神经胶质瘤和神经鞘瘤；和
其他肿瘤，包括黑素瘤、皮肤(非黑素瘤)癌、间皮瘤(细胞)、精 原细胞瘤、畸胎瘤、骨肉瘤、着色性干皮病、角化棘皮瘤、甲状腺 滤泡状癌和卡波西氏肉瘤。
归因于p53于调控细胞凋亡(细胞死亡)方面的关键作用，式(I) 的化合物可充当诱导细胞死亡的药物，其可用于治疗特征为异常细 胞增殖的任何疾病过程，例如各种起源和组织类型的癌症、炎症、 免疫病症。
归因于HDM2和p53于调控细胞增殖方面的关键作用，上文所 述的化合物可充当可逆性细胞生长抑制剂，其可用于治疗特征为异 常细胞增殖的任何疾病过程，例如良性前列腺增生、家族性腺瘤性 息肉病、神经纤维瘤、动脉粥样硬化、肺纤维化、关节炎、牛皮 癣、肾小球性肾炎、血管成形术或血管手术后再狭窄、变形性瘢痕 形成、炎症性肠病、移植排斥、内毒素休克和真菌感染。
上文所述的化合物也可用于化学预防癌症。化学预防定义为藉 由阻断诱变事件的起始或藉由阻断已受损害的癌前细胞的进展来抑 制侵入性癌症的发展，或抑制肿瘤复发。
上文所述的化合物也可用于抑制肿瘤血管生成和癌转移。
较佳剂量为每天每公斤体重大约0.001mg-500mg上文所述的 化合物。尤其较佳的剂量为每天每公斤体重大约0.01mg-25mg上 文所述的化合物或该化合物的药学上可接受的盐、溶剂化物、酯或 前药。
若调配为固定剂量，则该组合产物使用在本文所述的剂量范围 内的本发明化合物和在其剂量范围内的其他药用活性剂或治疗。
当组合调配不适当时，上文所述的化合物也可与已知抗癌药或 细胞毒性剂依次给予。本发明不受给药次序的限制；上文所述的化 合物可在给予已知抗癌药或细胞毒性剂之前给予或在其之后给予。 该技术在本领域技术人员以及主治医师的技术范围内。
较佳化合物可展现出小于大约15μm、较佳为大约0.001μm-大 约15.0μm、更佳为大约0.001μm-大约9μm、更佳为大约0.001μm -大约3μm的IC50或EC50值。
在再一实施方案中，本发明揭示用于制备包含上文所述的化合 物作为活性成分的药用组合物的方法。在本发明的药用组合物和方 法中，活性成分通常将以与关于预定给药形式适当选择且与常规医 药实践相符的适当载体材料的混合物形式给予，该预定给药形式也 即口服片剂、胶囊剂(固体填充、半固体填充或液体填充)、重建用散 剂、口服凝胶剂、酏剂、可分散颗粒剂、糖浆剂、混悬剂等形式。 举例而言，就经口给药的片剂或胶囊剂形式而言，可将活性药物组 分与任何经口无毒的药学上可接受的惰性载体组合，所述载体诸如 乳糖、淀粉、蔗糖、纤维素、硬脂酸镁、磷酸二钙、硫酸钙、滑 石、甘露醇、乙醇(液体形式)等等。此外，当需要时或视需要，也可 将适当的粘合剂、润滑剂、崩解剂和着色剂掺入混合物中。散剂和 片剂可包含大约5％至大约95％的本发明组合物。适当粘合剂包括淀 粉、明胶、天然糖、玉米甜味剂、天然和合成树胶(诸如阿拉伯胶)、 海藻酸钠、羧甲基纤维素、聚乙二醇和蜡。这些剂型中的润滑剂包 括硼酸、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠等等。崩解剂包括淀粉、甲基 纤维素、瓜尔胶等等。适当时也可包括甜味剂和调味剂和防腐剂。 上文所述的一些术语，即崩解剂、稀释剂、润滑剂、粘合剂等将于 下文中进行更详细地讨论。
此外，本发明的组合物可调配为持续释放形式以使该组分或活 性成分中任一种或一种以上以受控速率释放，从而使治疗作用(也即 抗细胞增殖活性等)最佳化。用于持续释放的适当剂型包括含有浸透 活性组分且成形为片剂形式的、崩解速率不同或控释的多层聚合基 质的多层片剂；或含有这种浸透或封装多孔聚合基质的胶囊。
液体形式的制剂包括溶液剂、混悬剂和乳剂。举例而言，非经 肠注射剂中可包括水或水-丙二醇溶液，或可加入甜味剂和安慰剂 (pacifiers)用于口服溶液剂、混悬剂和乳剂。液体形式的制剂也可包 括鼻内给药的溶液。
适于吸入的气雾剂可包括溶液剂和粉末形式的固体，其可与药 学上可接受的载体(诸如惰性压缩气体，例如氮气)组合。
对于制备栓剂而言，首先将诸如脂肪酸甘油脂混合物(诸如可可 油)的低熔点蜡熔融，且通过搅拌或类似混合将活性成分均匀分散于 其中。接着将熔融的均匀混合物倾入便利尺寸的模具中，使其冷却 固化。
也包括意欲在临用前转化为经口或非经肠给药的液体形式制剂 的固体形式的制剂。这些液体形式包括溶液剂、混悬剂和乳剂。
本发明的化合物也可经皮传递。经皮组合物可采取乳膏、洗 剂、气雾剂和/或乳剂的形式，并可包括在用于该目的的本领域常规 的基质或储库型透皮贴剂中。
较佳经口给予化合物。
药用制剂较佳采用单位剂型。在该形式中，将制剂再分为含有 适量(例如达成所需目的的治疗量)活性组分的适宜大小的单位剂量。
根据特定应用，单位剂量制剂中本发明活性组合物的量一般可 在大约大约1.0毫克-大约1,000毫克、较佳大约1.0毫克-大约 500毫克且通常大约1毫克-大约250毫克内变化或在该范围内进行 调整。所使用的实际剂量可视患者的年龄、性别、体重和所治疗病 况的严重程度而变化。该技术已为本领域技术人员所熟知。
所使用的实际剂量可视患者的需求和所治疗病况的严重程度而 变化。特定情况下适当剂量方案的确定在本领域的技术范围内。为 方便起见，视需要可将总日剂量分成数份并在一天内逐份给予。
一般而言，含有活性成分的人类口服剂型可每天给予1或2 次。给药量和频率将根据主治临床医师的判断加以调控。经口给药 的一般推荐每日剂量方案可以单次或分次剂量在每天大约1.0毫克- 大约1,000毫克的范围内。
在另一实施方案中，本发明提供包含上文所述化合物作为活性 成分的药用组合物用于治疗癌症、异常细胞增殖和其他与HDM2或 p53相关的疾病的用途。
该药用组合物一般另外包含药学上可接受的载体稀释剂、赋形 剂或载剂(在本文中统称为载体材料)。
本发明的再一方面为一种制备药盒的方法，该药盒包含一定量 的至少一种上文所述的化合物或该化合物的药学上可接受的盐、溶 剂化物、酯或前药和一定量的至少一种上文所列的抗癌疗法和/或抗 癌药，其中该量的该两种或两种以上成分产生所需治疗作用。
本发明的又一方面为药盒的用途，该药盒包含一定量的至少一 种上文所述的化合物或该化合物的药学上可接受的盐、溶剂化物、 酯或前药和一定量的至少一种上文所列的抗癌疗法和/或抗癌药，其 中该量的该两种或两种以上成分产生治疗有此需要的哺乳动物的所 需治疗作用。
胶囊是指由甲基纤维素、聚乙烯醇或变性明胶或淀粉所制成的 用于保持或容纳包含活性成分的组合物的特殊容器或外壳。硬壳胶 囊通常由具有相对高凝胶强度的骨骼和猪皮明胶的混合物制成。胶 囊本身可含有少量染料、遮光剂、增塑剂和防腐剂。
片剂是指含有活性成分和适当稀释剂的压缩或模制固体剂型。 可通过压缩经湿法制粒、干法制粒或由压实所获得的混合物或颗粒 来制备片剂。
口服凝胶是指分散或溶解于亲水性半固体基质中的活性成分。
重建用散剂是指含有活性成分与适当稀释剂的粉末掺和物，其 可悬浮于水或汁液中。
稀释剂是指通常组成组合物或剂型的主要部分的物质。适当稀 释剂包括糖，诸如乳糖、蔗糖、甘露醇和山梨糖醇；得自小麦、玉 米、稻和马铃薯的淀粉；和纤维素，诸如微晶纤维素。组合物中稀 释剂的量可在占总组合物大约10重量％-大约90重量％、较佳大 约25重量％-大约75重量％、更佳大约30重量％-大约60重量 ％、甚至更佳大约12重量％-大约60重量％的范围内。
崩解剂是指加入至组合物中以帮助其破裂(崩解)并释放药物的物 质。适当崩解剂包括淀粉；＂冷水可溶＂的改性淀粉，诸如羧甲基淀 粉钠；天然和合成树胶，诸如槐豆胶、刺梧桐树胶、瓜尔胶、西黄 蓍胶和琼脂；纤维素衍生物，诸如甲基纤维素和羧甲基纤维素钠； 微晶纤维素和交联微晶纤维素，诸如交联羧甲基纤维素钠；海藻酸 盐，诸如海藻酸和海藻酸钠；黏土，诸如膨润土；和起泡混合物。 组合物中崩解剂的量可在占组合物大约2重量％-大约15％、更佳大 约4重量％-大约10重量％的范围内。
粘合剂是指将粉末粘合或＂胶粘＂在一起且藉由形成颗粒使其粘合 从而用作制剂中的＂粘着剂＂的物质。粘合剂使稀释剂或膨胀剂中已获 得的粘合强度增加。适当粘合剂包括糖，诸如蔗糖；得自小麦、玉 米、稻和马铃薯的淀粉；天然树胶，诸如阿拉伯胶、明胶和西黄蓍 胶；海藻衍生物，诸如海藻酸、海藻酸钠和海藻酸钙铵；纤维素材 料，诸如甲基纤维素、羰甲基纤维素钠和羟丙基甲基纤维素；聚乙 烯吡咯烷酮；和无机物，诸如硅酸镁铝。组合物中粘合剂的量可在 占组合物大约2重量％-大约20重量％、更佳大约3重量％-大约 10重量％、甚至更佳大约3重量％-大约6重量％的范围内。
润滑剂是指加入至剂型中以使片剂、颗粒剂等在压缩后能够藉 由减小摩擦或磨损而自模具或冲模中释放的物质。适当润滑剂包括 金属硬脂酸盐，诸如硬脂酸镁、硬脂酸钙或硬脂酸钾；硬脂酸；高 熔点蜡；和水溶性润滑剂，诸如氯化钠、苯甲酸钠、乙酸钠、油酸 钠、聚乙二醇和d，l-亮氨酸。由于润滑剂必须存在于颗粒表面和颗粒 与压片部件之间，故一般在压缩前的最后一个步骤加入润滑剂。组 合物中润滑剂的量可在占组合物大约0.2重量％-大约5重量％、较 佳大约0.5重量％-大约2重量％、更佳大约0.3重量％-大约1.5重 量％的范围内。
助流剂为防止结块且改良颗粒的流动性从而使流动平滑和均匀 的材料。适当助流剂包括二氧化硅和滑石。组合物中助流剂的量可 在占总组合物大约0.1重量％-大约5重量％、较佳大约0.5重量％ -大约2重量％的范围内。
着色剂为对组合物或剂型提供着色的赋形剂。该赋形剂可包括 食品级染料和吸附于适当吸附剂(诸如粘土或氧化铝)上的食品级染 料。着色剂的量可在占组合物大约0.1重量％-大约5重量％、较佳 大约0.1重量％-大约1重量％的范围内变化。
在再一实施方案中，本发明揭示用于制备包含上文所述化合物 作为活性成分的药用组合物的方法。在本发明的药用组合物和方法 中，活性成分通常将以与关于预定给药形式适当选择且与常规医药 实践相符的适当载体材料的混合物形式给予，该预定给药形式也即 口服片剂、胶囊剂(固体填充、半固体填充或液体填充)、重建用散 剂、口服凝胶剂、酏剂、可分散颗粒剂、糖浆剂、悬浮剂等等。举 例而言，就经口给予片剂或胶囊剂形式而言，可将活性药物组分与 任何经口无毒的药学上可接受的惰性载体组合，所述载体诸如乳 糖、淀粉、蔗糖、纤维素、硬脂酸镁、磷酸二钙、硫酸钙、滑石、 甘露醇、乙醇(液体形式)等等。此外，当需要时或视需要，也可将适 当的粘合剂、润滑剂、崩解剂和着色剂掺入混合物中。散剂和片剂 可包含大约5％至大约95％的本发明组合物。适当粘合剂包括淀粉、 明胶、天然糖、玉米甜味剂、天然和合成树胶(诸如阿拉伯胶、海藻 酸钠、羰甲基纤维素、聚乙二醇和蜡。这些剂型中的润滑剂包括硼 酸、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠等等。崩解剂包括淀粉、甲基纤维 素、瓜尔胶等等。适当时也可包括甜味剂和调味剂和防腐剂。上文 所述的一些术语，即崩解剂、稀释剂、润滑剂、粘合剂将于下文中 进行更详细地讨论。
此外，本发明的组合物可调配为持续释放形式以使该组分或活 性成分中任一种或一种以上以受控速率释放，从而使治疗作用(也即 抗细胞增殖活性等)最佳化。用于持续释放的适当剂型包括含有浸透 活性组分且成形为片剂形式的、多层崩解速率不同或受控释放的聚 合基质的多层片剂；或含有这种浸透或封装多孔聚合基质的胶囊 剂。
液体形式的制剂包括溶液剂、混悬剂和乳剂。举例而言，非经 肠注射剂中可包括水或水-丙二醇溶液，或可加入甜味剂和安慰剂 (pacifiers)用于口服溶液剂、混悬剂和乳剂。液体形式的制剂也可包 括鼻内给药用的溶液剂。
适于吸入的气雾剂可包括溶液和粉末形式的固体，其可与药学 上可接受的载体(诸如惰性压缩气体，例如氮气)组合。
对于制备栓剂而言，首先将诸如脂肪酸甘油脂混合物(诸如可可 油)的低熔点蜡熔融，且通过搅拌或类似的混合将活性成分均匀分散 于其中。接着将熔融的均匀混合物倾入便利尺寸的模具中，使其冷 却固化。
也包括意欲在临用前转化为经口或非经肠给药的液体形式制剂 的固体形式的制剂。该液体形式包括溶液剂、混悬剂和乳剂。
本发明的化合物也可经皮传递。经皮组合物可采取乳膏、洗 剂、气雾剂和/或乳剂的形式，并可包括在用于该目的的在本领域中 常规的基质或储库型透皮贴剂中。
较佳经口给予化合物。
药用制剂较佳采用单位剂型。在该形式中，将制剂再分为含有 适量(例如达成所需目的的治疗量)活性组分的适宜大小的单位剂量。
根据特定应用，单位剂量制剂中本发明活性组合物的量一般可 在大约大约1.0毫克-大约1,000毫克、较佳大约1.0毫克-大约 500毫克且通常大约1毫克-大约250毫克内变化或在该范围内进行 调整。所使用的实际剂量可视患者的年龄、性别、体重和所治疗的 病况的严重程度而变化。该技术已为本领域技术人员所熟知。
所使用的实际剂量可视患者的需求和所治疗病况的严重程度而 变化。特定情况下适当剂量方案的确定在本领域的技术范围内。为 方便起见，视需要可将总日剂量分成数份并在一天内逐份给予。
一般而言，含有活性成分的人类口服剂型可每天给予1或2 次。给药量和给药频率将根据主治临床医师的判断加以调控。经口 给药的一般推荐每日剂量方案可以单次或分次剂量在每天大约1.0毫 克-大约1,000毫克的范围内。
生物利用度是指当与标准或对照相比时将活性药物成分或治疗 部分自所给予的剂型吸收至全身循环中的速率和程度。
已知用于制备片剂的常规方法。这些方法包括干法，诸如直接 压缩和压缩由压实产生的颗粒；或湿法或其他特殊程序。制备其他 给药剂型(诸如胶囊剂、栓剂等等)的常规方法也为人所熟知。
由以下制备和实施例例示说明本文所揭示的本发明，不应将该 制备和实施例解释为限制本发明的范畴。替代性机制途径和类似结 构将为本领域技术人员显而易见。
实施例
除非另作说明，否则以下实施例中的以下缩写将具有指定含 义：
N，N-二异丙基乙胺：iPr2Net
高分辨质谱：HRMS
高效液相色谱：HPLC
低分辨质谱：LRMS
纳摩尔浓度：nM
底物/受体复合物的抑制常数：Ki
结合聚苯乙烯的碳二亚胺树脂：PS-CDI
四氟硼酸O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓：TBTU
质子核磁共振：1H NMR
提供液相层析质谱资料，使用Applied Biosystems API-100质谱 仪和Shimadzu SCL-10A LC管柱进行分析(提供母体离子的观察值 (M+))：LCMS：
达成50％最大活性的有效浓度：EC50
达成50％最大活性的抑制浓度：IC50
毫升：mL
毫摩尔：mmol
微升：μl
克：g
毫克：mg
室温：rt(环境)：大约25℃
本发明所使用的上文所述的化合物用本领域中已知的方法(例如 根据流程1及其后的制备实施例所示的通用反应次序)制备：
流程1
A:R＝4-Ph
B:R＝4-OMe
C:R＝4-CH3
D:R＝4-CI
E:R＝4-CF3
F:R＝3-Ph
G:R＝2-CH3
步骤1：
苯甲基-1，2，5，6-四氢-3-吡啶基·苯甲基醚(1)
向由600mL甲醇制备的甲醇钠(62.4g，1.16mol)溶液中加入3-羟 基吡啶(100g，1.05mol)。加入苯甲基溴(375mL，3.15mol)后，使溶液 回流过夜。冷却至室温后，分数份加入硼氢化钠(79.4g，2.1mol)。在 真空中除去溶剂且将残余物与650mL水、64g碳酸钾和800mL乙 醚一起搅拌1小时，得到两个均匀液相。分离乙醚相，用碳酸钾干 燥且在真空中蒸发得到褐色油状物。在用力搅拌下，向此油状物于 20mL乙醚中的溶液缓慢加入2.1L乙醚和35g C盐521(Ceite 521)，并再持续搅拌30分钟。在真空中蒸发滤液，得到所需物质苯 甲基-1，2，5，6-四氢-3-吡啶基·苯甲基醚(294g，100％)。
步骤2：
1-苯甲基-3，3-二羟基哌啶氢溴酸盐(2)
使苯甲基-1，2，5，6-四氢-3-吡啶基·苯甲基醚(1，294g，1.05mol)于 48％HBr(385mL，7.77mol)中的溶液回流3小时。冷却至室温后，用 乙醚(4 X 300mL)萃取反应混合物。在真空中蒸发水层得到油状物， 使其结晶(丁酮)得到所需物质1-苯甲基-3，3-二羟基哌啶氢溴酸盐(129 g.43％)。
步骤3：
1-苯甲基-3-哌啶酮(3)
向悬浮于3.5L CH2Cl2中的1-苯甲基-3-哌啶酮氢溴酸盐(2，464g， 1.61mol)中加入三乙胺(247mL，1.77mol)，随后搅拌3小时。用H2O (3.5L X 2)和4L盐水洗涤所得混合物，随后用MgSO4干燥，过滤且 除去CH2Cl2，得到所需物质1-苯甲基-3-哌啶酮(305g，100％)。
步骤4：
使用7种酚制备7种衍生物(4)：
A.1-苯甲基-3-(联苯-4-基氧基)-哌啶-3-甲酸
将氢氧化钠(212g，5.28mol)加入至搅拌的4-苯基酚(100g，0.588 mol)于3L无水四氢呋喃中的溶液中。3小时后，加入1-苯甲基-3-哌 啶酮(3,444g，2.35mol)，将混合物冷却至0℃且逐滴加入无水氯仿 (282mL，2.52mol)。使反应混合物在0℃保持1小时且随后将其加 热至40℃历时2～3小时，在室温下搅拌过夜。减压除去四氢呋喃。 将残余物悬浮于水(3L)中且用乙醚(3L)加以洗涤。用6N HCl将水层 酸化至pH5，过滤且用CH2Cl2洗涤，得到所需物质1-苯甲基-3-(联 苯-4-基氧基)-哌啶-3-甲酸(156g，68.5％)。
B.1-苯甲基-3-(4-甲氧基-苯氧基)-哌啶-3-甲酸
将氢氧化钠(290g，7.26mol)加入至经搅拌的4-甲氧基酚(100g， 0.8mol)于无水四氢呋喃(3L)中的溶液中。3小时后，加入1-苯甲基- 3-哌啶酮(3,610g，3.22mol)，将混合物冷却至0℃且逐滴加入无水 氯仿(386mL，4.84mol)。使反应混合物在0℃保持1小时且随后将 其加热至40℃历时2～3小时，在室温下搅拌过夜。减压除去四氢 呋喃。将残余物悬浮于水(3L)中且用乙醚(3L)加以洗涤。用6N HCl 将水层酸化至pH5，过滤且用CH2Cl2洗涤，得到所需物质1-苯甲 基-3-(4-甲氧基-苯氧基)-哌啶-3-甲酸(135g，49.0％)。
C.1-苯甲基-3-对甲苯氧基-哌啶-3-甲酸
将氢氧化钠(260g，6.5mol)加入至经搅拌的对甲酚(78g，0.72mol) 于3L无水四氢呋喃中的溶液中。3小时后，加入1-苯甲基-3-哌啶酮 (3,547g，2.89mol)，将混合物冷却至0℃且逐滴加入无水氯仿(347 mL，4.33mol)。使反应混合物在0℃保持1小时且随后使其加热至 40℃历时2～3小时，在室温下搅拌过夜。减压除去四氢呋喃。将残 余物悬浮于水(2.5L)中且用乙醚(2.5L)加以洗涤。用6N HCl将水层 酸化至pH5，过滤且用CH2Cl2洗涤，得到所需物质1-苯甲基-3-对甲 苯氧基-哌啶-3-甲酸(120g，52.0％)。
D.1-苯甲基-3-(4-氯-苯氧基)-哌啶-3-甲酸
将氢氧化钠(381g，9.53mol)加入至搅拌的4-氯酚(136g，1.06mol) 于无水四氢呋喃(3L)中的溶液中。3小时后，加入1-苯甲基-3-哌啶 酮(3,801g，4.23mol)，将混合物冷却至0℃且逐滴加入无水氯仿 (508mL，6.35mol)。使反应混合物在0℃保持1小时且随后将其加 热至40℃历时2～3小时，在室温下搅拌过夜。减压除去四氢呋喃。 将残余物悬浮于水(3L)中且用乙醚(3L)加以洗涤。用6N HCl将水层 酸化至pH5，过滤且用CH2Cl2洗涤，得到所需物质1-苯甲基-3-(4- 氯-苯氧基)-哌啶-3-甲酸(210g，57.4％)。
E.1-苯甲基-3-(4-三氟甲基-苯氧基)-哌啶-3-甲酸
将氢氧化钠(222g，5.55mol)加入至经搅拌的4-三氟甲基苯酚(100 g，0.62mol)于无水四氢呋喃(3L)中的溶液。3小时后，加入1-苯甲 基-3-哌啶酮(3,467g，2.47mol)，将混合物冷却至0℃且逐滴加入无 水氯仿(296mL，3.7mol)。使反应混合物在0℃保持1小时且随后使 其达到40℃历时2～3小时，在室温下搅拌过夜。减压除去四氢呋 喃。将残余物悬浮于水(3L)中且用乙醚(3L)加以洗涤。用6N HCl将 水层酸化至pH7，过滤且用CH2Cl2洗涤，得到所需物质1-苯甲基-3- (4-三氟甲基-苯氧基)-哌啶-3-甲酸(146g，62.4％)。
F.1-苯甲基-3-(联苯-3-基氧基)-哌啶-3-甲酸
将氢氧化钠(212g，5.28mol)加入至经搅拌的3-苯基酚(100g， 0.588mol)于无水四氢呋喃(3L)中的溶液中。3小时后，加入1-苯甲 基-3-哌啶酮(3,444g，2.35mol)，将混合物冷却至0℃且逐滴加入无 水氯仿(282mL，2.52mol)。使反应混合物在0℃保持1小时且随后 使其达到40℃历时2～3小时，在室温下搅拌过夜。减压除去四氢呋 喃。将残余物悬浮于水(3L)中且用乙醚(3L)加以洗涤。用6N HCl将 水层酸化至pH5，过滤且用CH2Cl2洗涤，得到所需物质1-苯甲基-3- (联苯-3-基氧基)-哌啶-3-甲酸(80g，35.2％)。
G.1-苯甲基-3-邻甲苯氧基-哌啶-3-甲酸
将氢氧化钠(332g，8.3mol)加入至经搅拌的邻甲酚(100g，0.925 mol)于无水四氢呋喃(2L)中的溶液中。3小时后，加入1-苯甲基-3-哌 啶酮(3,700g，3.67mol)，将混合物冷却至0℃且逐滴加入无水氯仿 (440mL，5.55mol)。使反应混合物在0℃保持1小时且随后将其加 热至60℃历时2～3小时，在室温下搅拌过夜。减压除去四氢呋喃。 将残余物悬浮于水(2.5L)中且用乙醚(2.5L)加以洗涤。用6N HCl将 水层酸化至pH7，用二氯甲烷萃取且以MgSO4进行干燥。将粗混合 物(380g)悬浮于乙酸乙酯(4L)中并加入环己胺(170mL)。搅拌混合物 1小时且将其在冰箱中储存2天。过滤沉淀且用CH2Cl2加以洗涤。 将盐(100g)悬浮于二氯甲烷(1L)中，加入6N HCl(43mL，0.26mol)， 随后过滤固体并用二氯甲烷和乙醚洗涤，得到所需物质1-苯甲基-3- 邻甲苯氧基-哌啶-3-甲酸(40g，13.3％)。
流程2
R1和R2为藉由偶联相应胺而形成的衍生物。
R3为藉由加入相应羧酸而形成的衍生物。
步骤5：
在室温下，向完全溶解于25％乙醇/75％乙酸乙酯(400mL)中的4 (1当量，18mmol，6.9g)和N，N-二异丙基乙胺(5当量，91mmol，15.8 mL)中加入二碳酸二叔丁酯(1当量，18mmol，4.0g)于乙酸乙酯(50mL) 中的溶液，随后加入5％披钯碳(30重量％，2.0g)。用隔片密封反应容 器，用氩气进行净化且使氢气通过溶剂历时2分钟。室温下，在氢 气氛下搅拌反应混合物15小时，随后使其经硅藻土过滤且在真空中 浓缩，得到呈灰白色固体状的相应二异丙基乙胺盐形式的5，不经进 一步纯化即加以使用。
步骤6：
向N，N-二甲基甲酰胺(0.67mL)和N，N-二异丙基乙胺(3.0当量， 0.3mmol，52uL)中的5(即步骤1的产物)(0.1mmol)中加入1-羟基苯 并三唑(1.0当量，0.1mmol，14mg)、6(1.5当量，0.15mmol，29mg)和 以1.3mmol/g装载的结合聚苯乙烯的碳二亚胺树脂(3.0当量，0.3 mmol，231mg)。在室温下震荡混合物过夜且用四氢呋喃(3mL)中的 MP-三胺和MP-异氰酸酯树脂(过量)净化2小时。过滤除去树脂且在 真空中除去溶剂。将粗反应混合物溶解于1，4-二噁烷(3mL)中的4N 盐酸且在室温下震荡2小时，随后在真空中进行蒸发。不经进一步 纯化即使用粗残余物(7)。
步骤7：
向7(即步骤2的产物)(1.0当量，0.2mmol，100mg)中加入N，N-二 甲基甲酰胺(6.7mL)和N，N-二异丙基乙胺(4.0当量，0.8mmol，140uL) 中的8(1.5当量，0.3mmol，58mg)和1-羟基苯并三唑(1.0当量，0.2 mmol，27mg)。加入以1.3mmol/g装载的结合聚苯乙烯的碳二亚胺树 脂(3.0当量，0.6mmol，462mg)且在室温下震荡过夜。过滤除去树 脂，在真空中除去溶剂且藉由HPLC-MS纯化粗残余物，得到TFA 盐形式的制备1的目标化合物。将固体溶解于乙腈/H2O溶液(1:1，共 1.0mL)和1.0N盐酸(200uL)中且冷冻干燥，得到相应盐酸盐形式的 制备1(9)的目标化合物(M+：636.2)。
可藉由已知方法容易地评估本发明的化合物以测定对HDM2蛋 白的活性，诸如测量达成50％最大活性的抑制浓度(FP IC50)和抑制剂 结合的解离常数(FP Ki)的荧光偏振筛选测定法。[Zhang等人，J. Analytical Biochemistry 331：138-146(2004)]。
此外，使用细胞活力测定法测试化合物对HDM2蛋白的活性，该 细胞活力测定法在经本发明的化合物处理一段时间(例如72小时)后基 于量化所存在的ATP量(细胞活力IC50)来测定培养物中存活细胞的数 量Luminescent Cell Viability Assay，来自Promega]。
本申请的化合物展现出低于50.0μM的FP IC50、FP Ki和细胞活力 IC50值。
本发明中所使用的化合物藉由与上述制备实施例中所示程序基 本相同的程序制备。
代表性化合物的HDM2抑制活性展示于下表1中。
表1：
根据上述测试结果，本领域技术人员将了解，本发明的化合物 于治疗与HDM2蛋白和不当p53蛋白含量相关的疾病(包括(但不限 于)导致诸如癌症的过度细胞增殖的疾病)中具有效用。
p53转录因子促进多种细胞周期调控基因的表达，所述基因包括 其自身的负调控剂，即编码小鼠双微体2(Mdm2)蛋白的基因[Chene， Nature Reviews Cancer 3：(2003)第102-109页；Momand，Gene 242(1- 2)：(2000)第15-29页；Zheleva等人Mini.Rev.Med.Chem. 3(3)： (2003)第257-270页]。Mdm2蛋白(对于人类称为HDM2)以自体调控 的方式起到下调P53活性的作用[Wu等人，Genes Dev.，7：(1993)第 1126-1132页，Bairak等人，EMBO J，12：(1993)第461-468页]。在无 致癌应激信号的情况下(也即，在正常细胞条件下)，Mdm2蛋白起到 将p53活性维持在低水平的作用[Wu等人，Genes Dev.，7：(1993)第 1126-1132页；Barak等人，EMBO J，12：(1993)第461-468页]。然 而，回应于细胞DNA损伤或在细胞应激下，p53活性会增强，从而 通过诱导细胞周期和生长停滞或细胞凋亡而有助于防止永久受损细 胞克隆的繁殖。
对p53功能的调控依赖于该p53-Mdm2自体调控系统中两组分 之间的适当平衡。事实上，该平衡似乎对于细胞存活至关重要。 Mdm2起到下调p53活性的作用存在至少三种途径。第一，Mdm2可 以与p53的N末端转录活化域结合以阻断p53效应基因的表达 [Kussie等人，Science，274：(1996)第948-953页；Oliner等人，Nature， 362：(1993)第857-860页；Momand等人，Cell，69：(1992)第1237- 1245页]。第二，Mdm2使p53由细胞核穿梭至细胞质，从而有助于 p53的蛋白水解降解[Roth等人，EMBO J，17：(1998)第554-564页； Freedman等人，Mol Cell Biol，18：(1998)第7288-7293页；Tao和 Levine，Proc.Natl.Acad.Sci.96：(1999)第3077-3080页]。最终，在 依赖遍在蛋白的26S蛋白体途径中，Mdm2具有使遍在蛋白与p53 缀合以使其降解的内在E3连接酶活性[Honda等人，FEBS Lett，420： (1997)第25-27页；Yasuda，Oncogene 19：(2000)第1473-1476页]。 因此，Mdm2通过与细胞核内的p53结合而妨碍p53转录因子促进 其靶基因表达的能力。弱化p53-Mdm2自体调控系统可对细胞稳态 具有关键作用。一直以来，已报道Mdm2的过量表达与肿瘤形成之 间的相关性[Chene，Nature 3：(2003)第102-109页]。在许多类型的人 类肿瘤中发现野生型p53的功能失活。通过抗MDM2疗法恢复肿瘤 细胞中p53的功能将导致肿瘤增殖减缓且刺激细胞凋亡。故当前对 鉴别阻滞HDM2与p53相互作用的能力的新型抗癌药做出的实质努 力也在意料之中[Chene，Nature 3：(2003)第102-109页]。已证实抗 体、肽和反义寡核苷酸破坏p53-Mdm2的相互作用，此会将p53自 Mdm2的负控制下释放，导致p53途径活化，从而允许生长停滞和/ 或细胞凋亡的正常信号发挥作用，此将提供一种治疗癌症和以异常 细胞增殖为特征的其他疾病的潜在治疗方法[例如参见Blaydes等 人，Oncogene 14：(1997)第1859-1868页；Bottger等人，Oncogene 13(10)：(1996)第2141-2147]。
美国公开说明书第2005/0037383 A1号中描述经修饰的可溶性 HDM2蛋白；编码该HDM2蛋白的核酸；适于X射线结晶分析的该 蛋白质晶体；该蛋白质和晶体用于鉴别、选择或设计可用作抗癌药 的化合物的用途；及与经修饰的HDM2结合的部分化合物本身 (Schering-Plough Corp.)。
对于拮抗p53-Mdm2相互作用的小分子已有描述。WO 00/15657 (Zeneca Limited)描述了作为Mdm2与p53相互作用的抑制剂的哌嗪- 4-苯基衍生物。Grasberger等人(J.Med.Chem.，48(2005)p.909-912) (Johnson & Johnson Pharmaceutical Research & Development L.L.C.)描 述有关作为活化细胞中p53的HDM2拮抗剂的苯并二氮杂二酮的 发现和共晶体结构。Galatin等人(J.Med.Chem.47(2004)第4163- 4165页)描述p53-Mdm2相互作用的非肽磺酰胺抑制剂和mdm2过度 表达的细胞中p53依赖性转录的活化剂。
Vassilev(J.Med.Chem.(Perspective)第48卷，第14期，(2005) 第1-8页)(Hoffmann-LaRoche Inc.)描述肿瘤学中应用的若干小分子 p53活化剂，包括下式：
和
上文所列的前四种化合物也于Totouhi等人(Current Topics in Medicinal Chemistry第三卷3，第2期(2005)第159-166页，第 161处)(Hoffmann La Roche Inc.)中进行描述。上文所列的后三种化 合物也已于Vassilev等人(Science第303卷(2004)：第844-848页) (Hoffmann La Roche Inc.)中进行描述且其白血病活性的关联已于 Koiima等人(Blood，，第108卷，第9期(2005年11月)第3150- 3159页)中进行研究。
Ding等人(J.Am.Chem.Soc.第127卷(2005)：10130-10131)和(J. Med.Chem.第49卷(2006)：3432-3435)中描述了作为Mdm2-p53抑制 剂的若干螺-羟基吲哚化合物。
Lu等人(J.Med.Chem.第49卷(2006)：3759-3762)中描述作为 MDM2-p53相互作用的小分子抑制剂的7-[苯氨基(苯基)甲基]-2-甲基- 8-羟基喹啉。
Chène(Molecular Cancer Research第2卷：(2006年1月)第20- 28页)中描述通过靶向蛋白质-蛋白质界面而对p53-Mdm2相互作用 进行抑制。美国公开说明书第2004/0259867 A1号和第2004/0259884 A1号中描述顺式-咪唑(Hoffmann La Roche Inc.)， WO2005/110996A1号和WO 03/051359号中描述顺式-咪唑啉 (Hoffmann La Roche Inc.)，其作为抑制Mdm2与p53样肽相互作用从 而导致抗增殖作用的化合物。WO 2004/080460 A1描述作为Mdm2- p53抑制剂用于治疗癌症的经取代哌啶化合物(Hoffmann La Roche Inc.)。EP 0947494 A1描述苯氧基乙酸衍生物和苯氧基甲基四唑，其 充当Mdm2的拮抗剂且干扰Mdm2与p53之间的蛋白质-蛋白质相互 作用，从而导致抗肿瘤特性(Hoffmann La Roche Inc.)。Duncan等 人，J.Am.Chem.Soc.123(4)：(2001)第554-560页中描述来自镰孢 (Fusarium Sp.)的p-53-Mdm2拮抗剂绿褐素(chlorofusin)。Stoll等人， Biochemistry 40(2)(2001)第336-344页中描述拮抗人类癌蛋白Mdm2 与p53之间相互作用的查耳酮(chalcone)衍生物。
需要HDM2或MDM2蛋白的有效抑制剂，以便治疗或预防癌 症、与细胞增殖相关的其他疾病病况、与HDM2相关的疾病或由不 当p53活性引起的疾病。本申请揭示具有抑制或拮抗HDM2-p53和 Mdm2-p53相互作用和/或活化细胞中的p53蛋白的效能的化合物。 先前尚未揭示该化合物的HDM2-p53和Mdm2-p53抑制活性。
发明概述
本发明提供一种抑制HDM2蛋白的方法，其包括向需要该抑制 的患者给予治疗有效量的至少一种具有以下化学结构的化合物：
或
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、酯或前药。
发明详述
在一实施方案中，本发明提供抑制HDM2蛋白的方法，其包括 向需要该抑制的患者给予治疗上可接受量的至少一种具有上述化学 结构的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、酯或前药。
在另一实施方案中，本发明揭示治疗一种或多种与HDM2相关 的疾病的方法，其包括向需要该治疗的患者给予治疗有效量的至少 一种上述化合物。
在再一实施方案中，本发明提供治疗一种或多种与p53相关的 疾病的方法，其包括向需要该治疗的患者给予治疗有效量的至少一 种上述化合物。
在又一实施方案中，本发明揭示治疗一种或多种与HDM2蛋白 与p53蛋白相互作用相关的疾病的方法，其包括向需要该治疗的患 者给予治疗有效量的至少一种上述化合物。
在另一实施方案中，本发明提供治疗一种或多种与HDM2相关 的疾病的方法，其包括向需要该治疗的哺乳动物给予下列药物：
一定量的第一化合物，其中该第一化合物选自上述化合物；
和
一定量的至少一种第二化合物，其中该第二化合物为与第一化 合物不同的抗癌药；
其中该量的该第一化合物与该第二化合物产生治疗作用。
在再一实施方案中，本发明揭示治疗一种或多种与p53蛋白相 关的疾病的方法，其包括向需要该治疗的哺乳动物给予下列各物：
一定量的第一化合物，其中该第一化合物选自上述化合物；
和
一定量的至少一种第二化合物，其中该第二化合物为与该第一 化合物不同的抗癌药；
其中该量的该第一化合物与该第二化合物产生治疗作用。
在又一实施方案中，本发明提供治疗一种或多种与HDM2蛋白 与p53蛋白相互作用相关的疾病的方法，其包括向需要该治疗的哺 乳动物给予下列各物：
一定量的第一化合物，其中该第一化合物选自上述化合物；
和
一定量的至少一种第二化合物，其中该第二化合物为与第一化 合物不同的抗癌药；
其中该量的该第一化合物与该第二化合物产生治疗作用。
在另一实施方案中，本发明揭示治疗选自以下的疾病的方法：
癌，包括(但不限于)膀胱癌、乳癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜 癌、肾癌、肝癌、肺癌、头颈癌、食道癌、胆囊癌、宫颈癌、胰腺 癌、前列腺癌、喉癌、卵巢癌、胃癌、子宫癌、肉瘤和甲状腺癌；
淋巴系造血系统肿瘤，包括白血病、急性淋巴细胞性白血病、 慢性淋巴细胞性白血病、急性淋巴母细胞白血病、B细胞淋巴瘤、T 细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤(Hodgkins lymphoma)、非霍奇金淋巴 瘤、毛细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、骨髓瘤和伯基特氏淋巴瘤 (Burkett’s lymphoma)；
骨髓系造血系统肿瘤，包括急性和慢性髓细胞性白血病、骨髓 发育不良综合征和前髓细胞性白血病；
间质起源的肿瘤，包括纤维肉瘤和横纹肌肉瘤；
中枢神经系统和周围神经系统的肿瘤，包括星形细胞瘤、神经 母细胞瘤、神经胶质瘤和神经鞘瘤；和
其他肿瘤，包括黑素瘤、皮肤(非黑素瘤)癌、间皮瘤(细胞)、精 原细胞瘤、畸胎瘤、骨肉瘤、着色性干皮病、角化棘皮瘤、甲状腺 滤泡状癌和卡波西氏肉瘤(Kaposi’s sarcoma)。
在再一实施方案中，本发明的方法还包括放射疗法、手术、化 学疗法、生物疗法、激素疗法、光动力学疗法或骨髓移植。
在又一实施方案中，本发明提供一种治疗方法，
其中上文所述的抗癌药选自：细胞生长抑制剂、细胞毒性剂、 对抗癌症和赘生性疾病的靶向治疗剂(小分子、生物制剂、siRNA和 微小RNA(microRNA))：
抗代谢物，诸如甲氨喋呤(methoxtrexate)、5-氟尿嘧啶(5- fluorouracil)、吉西他滨(gemcitabine)、氟达拉滨(fludarabine)、卡培他 滨(capecitabine)；
烷化剂，诸如替莫唑胺(temozolomide)、环磷酰胺 (cyclophosphamide)；
与DNA相互作用和破坏DNA的药物，诸如顺铂(cisplatin)、奥 沙利铂(oxaliplatin)、多柔比星(doxorubicin)；
电离辐射，诸如放射疗法；
拓扑异构酶II抑制剂，诸如依托泊苷(etoposide)、多柔比星 (doxorubicin)；
拓扑异构酶I抑制剂，诸如伊立替康(irinotecan)、托泊替康 (topotecan)；
微管蛋白相互作用剂，诸如紫杉醇(paclitaxel)、多西他赛 (docetaxel)、Abraxane、埃坡霉素(epothilones)；
驱动蛋白纺锤体蛋白抑制剂；
纺锤体检查点抑制剂；
聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)抑制剂；
基质金属蛋白酶(MMP)抑制剂；
蛋白酶抑制剂，诸如组织蛋白酶D和组织蛋白酶K抑制剂；
蛋白体或遍在蛋白化抑制剂，诸如硼替佐米(bortezomib)；
用于恢复野生型p53活性的突变型p53的活化剂；
腺病毒-p53；
Bcl-2抑制剂，诸如ABT-263；
热休克蛋白(HSP)调节剂，诸如格尔德霉素(geldanamycin)和17- AAG；
组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂，诸如伏林司他(vorinostat， SAHA)；
性激素调节剂；
抗雌激素，诸如他莫昔芬(tamoxifen)、氟维司群 (fulvestrant)，
选择性雌激素受体调节剂(SERM)，诸如雷洛昔芬 (raloxifene)，
抗雄激素，诸如比卡鲁胺(bicalutamide)、氟他胺 (flutamide)，
LHRH激动剂，诸如亮丙立德(leuprolide)，
5α-还原酶抑制剂，诸如非那雄胺(finasteride)，
细胞色素P450C17裂合酶(CYP450c17)抑制剂，诸如阿比 特龙(Abiraterone)，
芳化酶抑制剂，诸如雷他曲唑(letrozole)、阿那曲唑 (anastrozole)、依西美坦(exemestane)；
EGFR激酶抑制剂，诸如吉非替尼(geftinib)、厄洛替尼 (erlotinib)、拉普替尼(laptinib)；
双重erbB1和erbB2抑制剂，诸如拉帕替尼(Lapatinib)；
多目标激酶(丝氨酸/苏氨酸和/或酪氨酸激酶)抑制剂；
ABL激酶抑制剂，伊马替尼(imatinib)和尼洛替尼 (nilotinib)、达沙替尼(dasatinib)，
VEGFR-1、VEGFR-2、PDGFR、KDR、FLT、c-Kit、 Tie2、Raf、MEK和ERK抑制剂，诸如舒尼替尼(sunitinib)、 索拉非尼(sorafenib)、凡德他尼(Vandetanib)、帕唑帕尼 (pazopanib)、阿昔替尼(Axitinib)、PTK787，
Polo样激酶抑制剂，
Aurora激酶抑制剂，
JAK抑制剂，
c-MET激酶抑制剂，
细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂，诸如CDK1和CDK2抑 制剂SCH727965，
PI3K抑制剂，
mTOR抑制剂，诸如雷帕霉素(Rapamycin)、坦罗莫司 (Temsirolimus)和RAD001；
和其他抗癌药(也称抗肿瘤药)，其包括(但不限于)ara-C、阿霉素 (adriamycin)、环磷酰胺(cytoxan)、卡铂(Carboplatin)、尿嘧啶氮芥 (Uracil mustard)、氮芥(Clormethine)、异环磷酰胺(Ifosfsmide)、美法 仑(Melphalan)、苯丁酸氮芥(Chlorambucil)、哌泊溴烷(Pipobroman)、 三亚乙基蜜胺(Triethylenemelamine)、三亚乙基硫代磷酰铵 (Triethylenethiophosphoramine)、白消安(Busulfan)、卡莫司汀 (Carmustine)、洛莫司汀(Lomustine)、链佐星(Streptozocin)、达卡巴嗪 (Dacarbazine)、氟尿苷(Floxuridine)、阿糖胞苷(Cytarabine)、6-巯嘌呤 (6-Mercaptopurine)、6-硫鸟嘌呤(6-Thioguanine)、磷酸氟达拉滨 (Fludarabinephosphate)、喷司他丁(Pentostatine)、长春碱 (Vinblastine)、长春新碱(Vincristine)、长春地辛(Vindesine)、长春瑞 滨(Vinorelbine)、诺维本(Navelbine)、博来霉素(Bleomycin)、放线菌 素D(Dactinomycin)、道诺霉素(Daunorubicin)、多柔比星 (Doxorubicin)、表柔比星(Epirubicin)、替尼泊苷(teniposide)、阿糖胞 苷(cytarabine)、培美曲塞(pemetrexed)、伊达比星(Idarubicin)、光神霉 素(Mithramycin)、脱氧考福霉素(Deoxycoformycin)、丝裂霉素C (Mitomycin-C)、L-天冬酰胺酶(L-Asparaginase)、替尼泊苷(Teniposide) 17α-炔雌醇(Ethinylestradiol)、己烯雌酚(Diethylstilbestrol)、睾酮 (Testosterone)、泼尼松(Prednisone)、氟甲睾酮(Fluoxymesterone)、丙 酸屈他雄酮(Dromostanolone propionate)、睾内酯(Testolactone)、醋酸 甲地孕酮(Megestrolacetate)、甲泼尼龙(Methylpredni solone)、甲基睾 酮(Methyltestosterone)、泼尼松龙(Prednisolone)、曲安西龙 (Triamcinolone)、氯烯雌醚(Chlorotrianisene)、羟孕酮 (Hydroxyprogesterone)、氨鲁米特(Aminoglutethimide)、雌莫司汀 (Estramustine)、氟他胺(Flutamide)、醋酸甲羟孕酮 (Medroxyprogesteroneacetate)、托瑞米芬(Toremifene)、戈舍瑞林 (goserelin)、卡铂(Carboplatin)、羟基脲(Hydroxyurea)、安吖啶 (Amsacrine)、丙卡巴肼(Procarbazine)、米托坦(Mitotane)、米托蒽醌 (Mitoxantrone)、左旋咪唑(Levamisole)、屈洛昔芬(Drol loxafine)、六 甲蜜胺(Hexamethylmelamine)、Bexxar、Zevalin、Trisenox、 Profimer、塞替派(Thiotepa)、六甲蜜胺(Altretamine)、Doxil、昂他克 (Ontak)、Depocyt、Aranesp、Neupogen、Neulasta、Kepivance；
法呢基蛋白转移酶抑制剂，诸如SARASARTM(4-[2-[4-[(11R)- 3，10-二溴-8-氯-6，11-二氢-5H-苯并[5，6]环庚烷并[1，2-b]吡啶-11-基-]-1- 哌啶基]-2-氧代乙基]-哌啶甲酰胺、替吡法呢(tipifarnib)；
干扰素，诸如Intron A、Peg-Intron；
抗erbB1抗体，诸如西妥昔单抗(cetuximab)、帕尼单抗 (panitumumab)；
抗erbB2抗体，诸如曲妥珠单抗(trastuzumab)；
抗CD52抗体，诸如阿仑珠单抗(Alemtuzumab)；
抗CD20抗体，诸如利妥昔单抗(Rituximab)；
抗CD33抗体，诸如吉妥昔单抗奥佐米星(Gemtuzumab ozogami cin)；
抗VEGF抗体，诸如阿瓦斯丁(Avastin)；
TRIAL配体，诸如来沙木单抗(Lexatumumab)、马帕木单抗 (mapatumumab)和AMG-655；
抗CTLA-4、CTA1、CEA、CD5、CD19、CD22、CD30、 CD44、CD44V6、CD55、CD56、EpCAM、FAP、MHCII、HGF、 IL-6、MUC1、PSMA、TAL6、TAG-72、TRAILR、VEGFR、IGF- 2、FGF的抗体；
抗IGF-1R抗体，诸如SCH717454。
上文所述的所有表示人类双微体2蛋白的等效名称包括(但不限 于)HDM2、hDM2、hdm2、Hdm2、人类双微体2、HDM-2、hDM- 2、hdm-2、Hdm-2、人类双微体-2、hDM2、hdm2、Hdm2、人类双 微体2(Human Double Minute two、human double minute two)、HDM- 2、hDM-2、hdm-2、Hdm-2、人类双微体-2(Human Double Minute- two、human double minute-two)、hDM2、hdm2、Hdm2、人类双微 体2(Human Double Minute Two、human double minute Two)、HDM- 2、hDM-2、hdm-2、Hdm-2、人类双微体-2(Human Double Minute- Two或human double minute Two)。
同样，小鼠双微体2蛋白可以与上文所述的人类双微体2蛋白以 相同的方式表示，但分别以“M”或“小鼠”替换“H”或“人类”。
上文所述的所有表示p53蛋白的等效名称包括(但不限于)P-53、 p53、p-53、P53、p53或p53。
除非另作说明，否则如上文和本申请公开内容通篇所使用的以 下术语应理解为具有以下含义：
“患者”包括人类与动物。
“哺乳动物”意味人类及其他哺乳动物。
关于化合物的术语“经纯化”、“纯化形式”或“经分离和纯化的形 式”是指自合成方法(例如，自反应混合物中)或天然来源或其组合中 分离之后该化合物的物理状态。因此，关于化合物的术语“经纯化”、 “纯化形式”或“经分离和纯化的形式”是指自本文所述的或技术人员熟 知的一种或多种纯化方法(例如层析、再结晶及其类似方法)获得之后 该化合物的物理状态，其具有足够纯度从而可以用本文所述或技术 人员熟知的标准分析技术加以表征。
也应注意，在本文正文、流程、实施例和表格中具有不饱和价 态的任何碳以及杂原子均假定具有足够数量的氢原子以使价态饱 和。
如本文所使用的术语“组合物”意欲涵盖包含指定量的指定成分的 产物，以及由指定量的指定成分的组合直接或间接产生的任何产 物。
本发明化合物的前药和溶剂化物也涵盖于本文中。有关前药的 讨论提供于A.C.S.Symposium Series的T.Higuchi和V.Stella，Pro- drugs as Novel Delivery Systems(1987)14中和Bioreversible Carriers in Drug Design，(1987)Edward B.Roche编，American Pharmaceutical Association and Pergamon Press中。术语“前药”意味在活体内转化 产生上文所述的化合物或该化合物的药学上可接受的盐、水合物或 溶剂化物的化合物(例如药物前体)。转化可经多种机制(例如，经代 谢或化学过程)发生，诸如经血液中的水解发生。在A.C.S. Symposium Series的T.Higuchi和W.Stella，“Pro-drugs as Novel Delivery Systems，”第14卷中和Bioreversible Carriers in Drug Design， Edward B.Roche编，American Pharmaceutical Association and Pergamon Press，1987中已提供有关前药使用的论述。
举例而言，若上文所述的化合物或该化合物的药学上可接受的 盐、水合物或溶剂化物含有羧酸官能团，则前药可包含由诸如以下 基团的基团置换酸基的氢原子所形成的酯：(C1-C8)烷基、(C2-C12)烷 酰氧基甲基、具有4-9个碳原子的1-(烷酰氧基)乙基、具有5-10 个碳原子的1-甲基-1-(烷酰氧基)-乙基、具有3-6个碳原子的烷氧基 羰氧基甲基、具有4-7个碳原子的1-(烷氧基羰氧基)乙基、具有5 -8个碳原子的1-甲基-1-(烷氧基羰氧基)乙基、具有3-9个碳原子 的N-(烷氧羰基)氨基甲基、具有4-10个碳原子的1-(N-(烷氧羰基) 氨基)乙基、3-苯并[c]呋喃酮基、4-巴豆酸内酯基、γ-丁内酯-4-基、 二-N，N-(C1-C2)烷基氨基(C2-C3)烷基(诸如β-二甲氨基乙基)、氨甲酰 基-(C1-C2)烷基、N，N-二(C1-C2)烷基氨甲酰基-(C1-C2)烷基和哌啶子 基(C2-C3)烷基、吡咯烷基(C2-C3)烷基或吗啉代(C2-C3)烷基及其类似基 团。
类似地，若上文所述的化合物含有醇官能团，则前药可由诸如 下列的基团置换醇基的氢原子而形成：(C1-C6)烷酰氧基甲基、1-((C1- C6)烷酰氧基)乙基、1-甲基-1-((C1-C6)烷酰氧基)乙基、(C1-C6)烷氧基 羰氧基甲基、N-(C1-C6)烷氧羰基氨基甲基、琥珀酰基、(C1-C6)烷酰 基、α-氨基(C1-C4)链烷基、芳基酰基和α-氨基酰基或α-氨基酰基-α- 氨基酰基，其中各α-氨基酰基独立地选自天然存在的L-氨基酸、 P(O)(OH)2、-P(O)(O(C1-C6)烷基)2或糖基(由移除半缩醛形式的碳水化 合物的羟基而产生的基团)及其类似基团。
若上文所述的化合物中掺入胺官能团，则前药可由以诸如下列 的基团置换氨基中的氢原子而形成：R-羰基、RO-羰基、NRR’-羰 基，其中R和R’各自独立地为(C1-C10)烷基、(C3-C7)环烷基、苯甲 基，或R-羰基为天然α-氨基酰基或天然α-氨基酰基- C(OH)C(O)OY1，其中Y1为H、(C1-C6)烷基或苯甲基；- C(OY2)Y3，其中Y2为(C1-C4)烷基且Y3为(C1-C6)烷基、羧基(C1-C6) 烷基、氨基(C1-C4)烷基或单-N-(C1-C6)烷基氨基烷基或二-N，N-(C1-C6) 烷基氨基烷基；-C(Y4)Y5，其中Y4为H或甲基且Y5为单-N-或二- N，N-(C1-C6)烷基氨基-吗啉代、哌啶-1-基或吡咯烷-1-基；及其类似 基团。
一种或多种本发明的化合物可以非溶剂化物形式以及与药学上 可接受的溶剂(诸如水、乙醇及其类似物)形成的溶剂化物的形式存 在，且预期本发明包括溶剂化物与非溶剂化物形式。“溶剂化物”意味 本发明的化合物与一个或多个溶剂分子的物理性缔合。该物理性缔 合涉及不同程度的离子键合和共价键合，包括氢键合。在某些情况 中，例如当一个或多个溶剂分子掺入结晶固体的晶格时，溶剂化物 将能够分离。＂溶剂化物＂涵盖溶液相与可分离的溶剂化物。适当溶剂 化物的非限制性实例包括乙醇化物、甲醇化物及其类似物。“水合物” 为溶剂分子为H2O的溶剂化物。
一种或多种本发明的化合物可任选转化为溶剂化物。一般已知 溶剂化物的制备。因此，例如M.Caira等人，J.Pharmaceutical Sci.， 93(3)，601-611(2004)中描述抗真菌氟康唑(fluconazole)于乙酸乙酯以 及水中的溶剂化物的制备。溶剂化物、半溶剂化物、水合物及其类 似物的类似制备已描述于E.C.van Tonder等人，AAPS PharmSciTech.，5(1)，article12(2004)；和A.L.Bingham等人，Chem. Commun.，603-604(2001)中。典型的非限制性方法涉及在高于环境温 度的温度下将本发明的化合物溶解于所需量的所需溶剂(有机物或水 或其混合物)中，且以足够形成晶体的速率冷却该溶液，随后用标准 方法分离。诸如I.R.光谱学的分析技术展示溶剂化物(或水合物)形式 的晶体中是否存在溶剂(或水)。
“有效量”或“治疗有效量”意欲描述可有效抑制上述疾病且因此产 生所需治疗、改善、抑制、调节、拮抗或预防作用的本发明的化合 物或组合物的量。
上文所述的化合物可形成盐，该盐也在本发明的范畴内。应了 解，除非另有说明，否则本文中对上述化合物的提及包括其盐的提 及。本文使用的术语“盐”表示与无机酸和/或有机酸形成的酸盐， 以及与无机碱和/或有机碱形成的碱盐。另外，当上文所述的化合物 含有诸如(但不限于)吡啶或咪唑的碱性部分与诸如(但不限于)羧酸的 酸性部分时，可形成两性离子(“内盐”)，且该两性离子也包括于本文 所用的术语“盐”内。尽管其他盐也适用，但药学上可接受(也即无 毒、生理上可接受)的盐较佳。可(例如)通过上文所述的化合物与一 定量(诸如等量)的酸或碱在介质(诸如所述盐在其中沉淀的介质)中或 在水性介质中反应随后冷冻干燥，形成上文所述的化合物的盐。
例示性酸加成盐包括乙酸盐、抗坏血酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸 盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸 盐、反丁烯二酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、乳酸盐、顺丁 烯二酸盐、甲磺酸盐、萘磺酸盐、硝酸盐、草酸盐、磷酸盐、丙酸 盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺 酸盐(也称为tosylates)等等。另外，一般认为适合由碱性药用化合物 形成药学上适用的盐的酸例如讨论于P.Stahl等人Camille G.编) Handbook of Pharmaceutical Salts.Properties，Selection and Use.(2002) Zurich：Wiley-VCH；S.Berge等人Journal of Pharmaceutical Sciences (1977)66(1)1-19；P.Gould，International J.of Pharmaceutics(1986)33 201-217；Anderson等人The Practice of Medicinal Chemistry(1996)， Academic Press，New York；和The Orange Book(Food & Drug Administration，Washington，D.C.的网页)中。这些揭示内容是以引用 的方式并入本文中。
例示性的碱盐包括：铵盐；碱金属盐，诸如钠盐、锂盐和钾 盐；碱土金属盐，诸如钙盐和镁盐；与有机碱(例如有机胺，诸如二 环己胺、叔丁胺)形成的盐；及与诸如精氨酸、赖氨酸等的氨基酸形 成的盐。可以用诸如低级烷基卤(例如甲基、乙基和丁基的氯化物、 溴化物和碘化物)、硫酸二烷基酯(例如硫酸二甲酯、硫酸二乙酯和硫 酸二丁酯)、长链卤化物(例如癸基、月桂基和硬脂酰基的氯化物、溴 化物和碘化物)、芳烷基卤(例如苯甲基溴和苯乙基溴)等试剂使含氮 基团季铵化。
预期所有该等酸盐和碱盐均为处于本发明范畴内的药学上可接 受的盐，且认为对于本发明而言，所有酸盐和碱盐等同于游离形式 的相应化合物。
本发明化合物的药学上可接受的酯包括以下基团：(1)通过羟基 酯化获得的羧酸酯，其中酯基的羧酸部分的非羰基部分选自直链或 支链烷基(例如乙酰基、正丙基、叔丁基或正丁基)、烷氧基烷基(例 如甲氧基甲基)、芳烷基(例如苯甲基)、芳氧基烷基(例如苯氧基甲 基)、芳基(例如任选经例如卤素、C1-4烷基或C1-4烷氧基或氨基取代 的苯基；(2)磺酸酯，诸如烷基磺酰基或芳烷基磺酰基(例如甲磺酰 基)；(3)氨基酸酯(例如L-缬氨酰基或L-异亮氨酰基)；(4)磷酸酯；和 (5)单磷酸酯、二磷酸酯或三磷酸酯。磷酸酯可进一步经例如C1-20醇 或其反应性衍生物酯化或经2，3-二(C6-24)酰基甘油酯化。
上文所述的化合物及其盐、溶剂化物、酯和前药可以其互变异 构形式(例如以酰胺或亚氨基醚形式)存在。所有该互变异构形式均作 为本发明的部分涵盖于本文中。
上文所述的化合物可含有不对称中心或手性中心，因此可以不 同的立体异构形式存在。预期所有上文所述的化合物的立体异构形 式以及其混合物(包括外消旋混合物)形成本发明的部分。另外，本发 明包括所有几何异构体和位置异构体。举例而言，若上文所述的化 合物中带入双键或稠环，则顺式与反式以及混合物均包括于本发明 的范畴内。
可基于物理化学差异用本领域技术人员熟知的方法(诸如层析法 和/或分步结晶法)将非对映异构体混合物分离成其个别非对映异构 体。可藉由如下步骤来分离对映异构体：使对映异构体混合物与适 当旋光化合物(例如手性助剂诸如手性醇或摩歇尔氏酰氯(Mosher’s acid chloride)反应将其转化为非对映异构体混合物，分离非对映异构 体且将个别非对映异构体转化(例如水解)为相应的纯对映异构体。 又，某些上文所述的化合物可为阻转异构体(例如经取代的联芳基)且 也被视为本发明的部分。对映异构体也可使用手性HPLC色谱柱加 以分离。
也可能上文所述的化合物可以不同的互变异构体形式存在，且 所有该形式均包括在本发明的范畴内。又例如该化合物的所有酮-烯 醇和亚胺-烯胺形式均包括于本发明中。
本发明的范畴内涵盖本发明化合物的所有立体异构体(例如几何 异构体、光学异构体等等)(包括该等化合物的盐、溶剂化物、酯和前 药以及该前药的盐、溶剂化物和酯的立体异构体)，诸如可因各种取 代基上的不对称碳而存在的立体异构体，包括对映异构形式(其甚至 可在不存在对称碳的情况下存在)、旋转异构形式、阻转异构体和非 对映异构形式，也包括位置异构体(诸如4-吡啶基和3-吡啶基)。(举 例而言，若上文所述化合物中带入双键或稠环，则顺式与反式以及 混合物均包括于本发明的范畴内。又，例如该化合物的所有酮-烯醇 和亚胺-烯胺形式均包括在本发明中。)本发明化合物的个别立体异构 体可(例如)基本上无其他异构体，或可(例如)混合为消旋体，或与其 他立体异构体或其他所选择的立体异构体混合。本发明的手性中心 可具有如由IUPAC1974规则所定义的S或R构型。预期术语 “盐”、“溶剂化物”、“酯”、“前药”等术语的使用同样适用 于本发明化合物的对映异构体、立体异构体、旋转异构体、互变异 构体、位置异构体、外消旋体或前药的盐、溶剂化物、酯和前药。
本发明也包括经同位素标记的本发明化合物，该经同位素标记 的化合物与本文所述的化合物相同，但事实上一个或多个原子经原 子质量或质量数与通常发现于自然界的原子质量或质量数不同的原 子置换。可掺入本发明化合物的同位素的实例包括氢、碳、氮、 氧、磷、氟和氯的同位素，分别诸如2H、3H、13C、14C、15N、18O、 17O、31P、32P、35S、18F和36Cl。
某些经同位素标记的上文所述的化合物(例如经3H和14C标记的彼 等化合物)可用于化合物和/或基质组织分布测定中。氚化(也即3H)和 碳-14(也即14C)同位素因其易于制备和可检测性而尤其较佳。此 外，以诸如氘(也即2H)的较重同位素进行的取代可因为代谢稳定性 较强而提供某些治疗优势(例如活体内半衰期增加或剂量需求减少)， 因此可在某些情况下较佳。经同位素标记的上文所述的化合物一般 可按照与下文流程和/或实施例中所揭示的程序类似的程序，藉由用 适当的经同位素标记的试剂取代未经同位素标记的试剂来进行制 备。
本发明中意欲包括上文所述的化合物和上文所述化合物的盐、 溶剂化物、酯和前药的多晶型形式。
上文所述的化合物可为人类双微体2蛋白或小鼠双微体2蛋白 与P-53蛋白相互作用的抑制剂或拮抗剂，且其可为细胞中P-53蛋白 的活化剂。另外，上文所述的化合物的药理学特性可用于治疗或预 防癌症；治疗或预防与异常细胞增殖相关的其他疾病病况；以及治 疗或预防由细胞中的不当p53蛋白含量引起的疾病。
本领域技术人员将认识到，术语“癌症”为机体细胞可能变得异常 且不受控制地分裂的疾病的名称。
上文所述的化合物可用于治疗多种癌症，包括(但不限于)：癌， 包括(但不限于)膀胱癌、乳癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾 癌、肝癌、肺癌、头颈癌、食道癌、胆囊癌、宫颈癌、胰腺癌、前 列腺癌、喉癌、卵巢癌、胃癌、子宫癌、肉瘤和甲状腺癌；
淋巴系造血系统肿瘤，包括白血病、急性淋巴细胞性白血病、 慢性淋巴细胞性白血病、急性淋巴母细胞白血病、B细胞淋巴瘤、T 细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、毛细胞淋巴瘤、套 细胞淋巴瘤、骨髓瘤和伯基特氏淋巴瘤；
骨髓系造血系统肿瘤，包括急性和慢性髓细胞性白血病、骨髓 发育不良综合征和前髓细胞性白血病；
间质细胞起源的肿瘤，包括纤维肉瘤和横纹肌肉瘤；
中枢神经系统和周围神经系统的肿瘤，包括星形细胞瘤、神经 母细胞瘤、神经胶质瘤和神经鞘瘤；和
其他肿瘤，包括黑素瘤、皮肤(非黑素瘤)癌、间皮瘤(细胞)、精 原细胞瘤、畸胎瘤、骨肉瘤、着色性干皮病、角化棘皮瘤、甲状腺 滤泡状癌和卡波西氏肉瘤。
归因于p53于调控细胞凋亡(细胞死亡)方面的关键作用，式(I) 的化合物可充当诱导细胞死亡的药物，其可用于治疗特征为异常细 胞增殖的任何疾病过程，例如各种起源和组织类型的癌症、炎症、 免疫病症。
归因于HDM2和p53于调控细胞增殖方面的关键作用，上文所 述的化合物可充当可逆性细胞生长抑制剂，其可用于治疗特征为异 常细胞增殖的任何疾病过程，例如良性前列腺增生、家族性腺瘤性 息肉病、神经纤维瘤、动脉粥样硬化、肺纤维化、关节炎、牛皮 癣、肾小球性肾炎、血管成形术或血管手术后再狭窄、变形性瘢痕 形成、炎症性肠病、移植排斥、内毒素休克和真菌感染。
上文所述的化合物也可用于化学预防癌症。化学预防定义为藉 由阻断诱变事件的起始或藉由阻断已受损害的癌前细胞的进展来抑 制侵入性癌症的发展，或抑制肿瘤复发。
上文所述的化合物也可用于抑制肿瘤血管生成和癌转移。
较佳剂量为每天每公斤体重大约0.001mg-500mg上文所述的 化合物。尤其较佳的剂量为每天每公斤体重大约0.01mg-25mg上 文所述的化合物或该化合物的药学上可接受的盐、溶剂化物、酯或 前药。
若调配为固定剂量，则该组合产物使用在本文所述的剂量范围 内的本发明化合物和在其剂量范围内的其他药用活性剂或治疗。
当组合调配不适当时，上文所述的化合物也可与已知抗癌药或 细胞毒性剂依次给予。本发明不受给药次序的限制；上文所述的化 合物可在给予已知抗癌药或细胞毒性剂之前给予或在其之后给予。 该技术在本领域技术人员以及主治医师的技术范围内。
较佳化合物可展现出小于大约15μm、较佳为大约0.001μm-大 约15.0μm、更佳为大约0.001μm-大约9μm、更佳为大约0.001μm -大约3μm的IC50或EC50值。
在再一实施方案中，本发明揭示用于制备包含上文所述的化合 物作为活性成分的药用组合物的方法。在本发明的药用组合物和方 法中，活性成分通常将以与关于预定给药形式适当选择且与常规医 药实践相符的适当载体材料的混合物形式给予，该预定给药形式也 即口服片剂、胶囊剂(固体填充、半固体填充或液体填充)、重建用散 剂、口服凝胶剂、酏剂、可分散颗粒剂、糖浆剂、混悬剂等形式。 举例而言，就经口给药的片剂或胶囊剂形式而言，可将活性药物组 分与任何经口无毒的药学上可接受的惰性载体组合，所述载体诸如 乳糖、淀粉、蔗糖、纤维素、硬脂酸镁、磷酸二钙、硫酸钙、滑 石、甘露醇、乙醇(液体形式)等等。此外，当需要时或视需要，也可 将适当的粘合剂、润滑剂、崩解剂和着色剂掺入混合物中。散剂和 片剂可包含大约5％至大约95％的本发明组合物。适当粘合剂包括淀 粉、明胶、天然糖、玉米甜味剂、天然和合成树胶(诸如阿拉伯胶)、 海藻酸钠、羧甲基纤维素、聚乙二醇和蜡。这些剂型中的润滑剂包 括硼酸、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠等等。崩解剂包括淀粉、甲基 纤维素、瓜尔胶等等。适当时也可包括甜味剂和调味剂和防腐剂。 上文所述的一些术语，即崩解剂、稀释剂、润滑剂、粘合剂等将于 下文中进行更详细地讨论。
此外，本发明的组合物可调配为持续释放形式以使该组分或活 性成分中任一种或一种以上以受控速率释放，从而使治疗作用(也即 抗细胞增殖活性等)最佳化。用于持续释放的适当剂型包括含有浸透 活性组分且成形为片剂形式的、崩解速率不同或控释的多层聚合基 质的多层片剂；或含有这种浸透或封装多孔聚合基质的胶囊。
液体形式的制剂包括溶液剂、混悬剂和乳剂。举例而言，非经 肠注射剂中可包括水或水-丙二醇溶液，或可加入甜味剂和安慰剂 (pacifiers)用于口服溶液剂、混悬剂和乳剂。液体形式的制剂也可包 括鼻内给药的溶液。
适于吸入的气雾剂可包括溶液剂和粉末形式的固体，其可与药 学上可接受的载体(诸如惰性压缩气体，例如氮气)组合。
对于制备栓剂而言，首先将诸如脂肪酸甘油脂混合物(诸如可可 油)的低熔点蜡熔融，且通过搅拌或类似混合将活性成分均匀分散于 其中。接着将熔融的均匀混合物倾入便利尺寸的模具中，使其冷却 固化。
也包括意欲在临用前转化为经口或非经肠给药的液体形式制剂 的固体形式的制剂。这些液体形式包括溶液剂、混悬剂和乳剂。
本发明的化合物也可经皮传递。经皮组合物可采取乳膏、洗 剂、气雾剂和/或乳剂的形式，并可包括在用于该目的的本领域常规 的基质或储库型透皮贴剂中。
较佳经口给予化合物。
药用制剂较佳采用单位剂型。在该形式中，将制剂再分为含有 适量(例如达成所需目的的治疗量)活性组分的适宜大小的单位剂量。
根据特定应用，单位剂量制剂中本发明活性组合物的量一般可 在大约大约1.0毫克-大约1,000毫克、较佳大约1.0毫克-大约 500毫克且通常大约1毫克-大约250毫克内变化或在该范围内进行 调整。所使用的实际剂量可视患者的年龄、性别、体重和所治疗病 况的严重程度而变化。该技术已为本领域技术人员所熟知。
所使用的实际剂量可视患者的需求和所治疗病况的严重程度而 变化。特定情况下适当剂量方案的确定在本领域的技术范围内。为 方便起见，视需要可将总日剂量分成数份并在一天内逐份给予。
一般而言，含有活性成分的人类口服剂型可每天给予1或2 次。给药量和频率将根据主治临床医师的判断加以调控。经口给药 的一般推荐每日剂量方案可以单次或分次剂量在每天大约1.0毫克- 大约1,000毫克的范围内。
在另一实施方案中，本发明提供包含上文所述化合物作为活性 成分的药用组合物用于治疗癌症、异常细胞增殖和其他与HDM2或 p53相关的疾病的用途。
该药用组合物一般另外包含药学上可接受的载体稀释剂、赋形 剂或载剂(在本文中统称为载体材料)。
本发明的再一方面为一种制备药盒的方法，该药盒包含一定量 的至少一种上文所述的化合物或该化合物的药学上可接受的盐、溶 剂化物、酯或前药和一定量的至少一种上文所列的抗癌疗法和/或抗 癌药，其中该量的该两种或两种以上成分产生所需治疗作用。
本发明的又一方面为药盒的用途，该药盒包含一定量的至少一 种上文所述的化合物或该化合物的药学上可接受的盐、溶剂化物、 酯或前药和一定量的至少一种上文所列的抗癌疗法和/或抗癌药，其 中该量的该两种或两种以上成分产生治疗有此需要的哺乳动物的所 需治疗作用。
胶囊是指由甲基纤维素、聚乙烯醇或变性明胶或淀粉所制成的 用于保持或容纳包含活性成分的组合物的特殊容器或外壳。硬壳胶 囊通常由具有相对高凝胶强度的骨骼和猪皮明胶的混合物制成。胶 囊本身可含有少量染料、遮光剂、增塑剂和防腐剂。
片剂是指含有活性成分和适当稀释剂的压缩或模制固体剂型。 可通过压缩经湿法制粒、干法制粒或由压实所获得的混合物或颗粒 来制备片剂。
口服凝胶是指分散或溶解于亲水性半固体基质中的活性成分。
重建用散剂是指含有活性成分与适当稀释剂的粉末掺和物，其 可悬浮于水或汁液中。
稀释剂是指通常组成组合物或剂型的主要部分的物质。适当稀 释剂包括糖，诸如乳糖、蔗糖、甘露醇和山梨糖醇；得自小麦、玉 米、稻和马铃薯的淀粉；和纤维素，诸如微晶纤维素。组合物中稀 释剂的量可在占总组合物大约10重量％-大约90重量％、较佳大 约25重量％-大约75重量％、更佳大约30重量％-大约60重量 ％、甚至更佳大约12重量％-大约60重量％的范围内。
崩解剂是指加入至组合物中以帮助其破裂(崩解)并释放药物的物 质。适当崩解剂包括淀粉；＂冷水可溶＂的改性淀粉，诸如羧甲基淀 粉钠；天然和合成树胶，诸如槐豆胶、刺梧桐树胶、瓜尔胶、西黄 蓍胶和琼脂；纤维素衍生物，诸如甲基纤维素和羧甲基纤维素钠； 微晶纤维素和交联微晶纤维素，诸如交联羧甲基纤维素钠；海藻酸 盐，诸如海藻酸和海藻酸钠；黏土，诸如膨润土；和起泡混合物。 组合物中崩解剂的量可在占组合物大约2重量％-大约15％、更佳大 约4重量％-大约10重量％的范围内。
粘合剂是指将粉末粘合或＂胶粘＂在一起且藉由形成颗粒使其粘合 从而用作制剂中的＂粘着剂＂的物质。粘合剂使稀释剂或膨胀剂中已获 得的粘合强度增加。适当粘合剂包括糖，诸如蔗糖；得自小麦、玉 米、稻和马铃薯的淀粉；天然树胶，诸如阿拉伯胶、明胶和西黄蓍 胶；海藻衍生物，诸如海藻酸、海藻酸钠和海藻酸钙铵；纤维素材 料，诸如甲基纤维素、羰甲基纤维素钠和羟丙基甲基纤维素；聚乙 烯吡咯烷酮；和无机物，诸如硅酸镁铝。组合物中粘合剂的量可在 占组合物大约2重量％-大约20重量％、更佳大约3重量％-大约 10重量％、甚至更佳大约3重量％-大约6重量％的范围内。
润滑剂是指加入至剂型中以使片剂、颗粒剂等在压缩后能够藉 由减小摩擦或磨损而自模具或冲模中释放的物质。适当润滑剂包括 金属硬脂酸盐，诸如硬脂酸镁、硬脂酸钙或硬脂酸钾；硬脂酸；高 熔点蜡；和水溶性润滑剂，诸如氯化钠、苯甲酸钠、乙酸钠、油酸 钠、聚乙二醇和d，l-亮氨酸。由于润滑剂必须存在于颗粒表面和颗粒 与压片部件之间，故一般在压缩前的最后一个步骤加入润滑剂。组 合物中润滑剂的量可在占组合物大约0.2重量％-大约5重量％、较 佳大约0.5重量％-大约2重量％、更佳大约0.3重量％-大约1.5重 量％的范围内。
助流剂为防止结块且改良颗粒的流动性从而使流动平滑和均匀 的材料。适当助流剂包括二氧化硅和滑石。组合物中助流剂的量可 在占总组合物大约0.1重量％-大约5重量％、较佳大约0.5重量％ -大约2重量％的范围内。
着色剂为对组合物或剂型提供着色的赋形剂。该赋形剂可包括 食品级染料和吸附于适当吸附剂(诸如粘土或氧化铝)上的食品级染 料。着色剂的量可在占组合物大约0.1重量％-大约5重量％、较佳 大约0.1重量％-大约1重量％的范围内变化。
在再一实施方案中，本发明揭示用于制备包含上文所述化合物 作为活性成分的药用组合物的方法。在本发明的药用组合物和方法 中，活性成分通常将以与关于预定给药形式适当选择且与常规医药 实践相符的适当载体材料的混合物形式给予，该预定给药形式也即 口服片剂、胶囊剂(固体填充、半固体填充或液体填充)、重建用散 剂、口服凝胶剂、酏剂、可分散颗粒剂、糖浆剂、悬浮剂等等。举 例而言，就经口给予片剂或胶囊剂形式而言，可将活性药物组分与 任何经口无毒的药学上可接受的惰性载体组合，所述载体诸如乳 糖、淀粉、蔗糖、纤维素、硬脂酸镁、磷酸二钙、硫酸钙、滑石、 甘露醇、乙醇(液体形式)等等。此外，当需要时或视需要，也可将适 当的粘合剂、润滑剂、崩解剂和着色剂掺入混合物中。散剂和片剂 可包含大约5％至大约95％的本发明组合物。适当粘合剂包括淀粉、 明胶、天然糖、玉米甜味剂、天然和合成树胶(诸如阿拉伯胶、海藻 酸钠、羰甲基纤维素、聚乙二醇和蜡。这些剂型中的润滑剂包括硼 酸、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠等等。崩解剂包括淀粉、甲基纤维 素、瓜尔胶等等。适当时也可包括甜味剂和调味剂和防腐剂。上文 所述的一些术语，即崩解剂、稀释剂、润滑剂、粘合剂将于下文中 进行更详细地讨论。
此外，本发明的组合物可调配为持续释放形式以使该组分或活 性成分中任一种或一种以上以受控速率释放，从而使治疗作用(也即 抗细胞增殖活性等)最佳化。用于持续释放的适当剂型包括含有浸透 活性组分且成形为片剂形式的、多层崩解速率不同或受控释放的聚 合基质的多层片剂；或含有这种浸透或封装多孔聚合基质的胶囊 剂。
液体形式的制剂包括溶液剂、混悬剂和乳剂。举例而言，非经 肠注射剂中可包括水或水-丙二醇溶液，或可加入甜味剂和安慰剂 (pacifiers)用于口服溶液剂、混悬剂和乳剂。液体形式的制剂也可包 括鼻内给药用的溶液剂。
适于吸入的气雾剂可包括溶液和粉末形式的固体，其可与药学 上可接受的载体(诸如惰性压缩气体，例如氮气)组合。
对于制备栓剂而言，首先将诸如脂肪酸甘油脂混合物(诸如可可 油)的低熔点蜡熔融，且通过搅拌或类似的混合将活性成分均匀分散 于其中。接着将熔融的均匀混合物倾入便利尺寸的模具中，使其冷 却固化。
也包括意欲在临用前转化为经口或非经肠给药的液体形式制剂 的固体形式的制剂。该液体形式包括溶液剂、混悬剂和乳剂。
本发明的化合物也可经皮传递。经皮组合物可采取乳膏、洗 剂、气雾剂和/或乳剂的形式，并可包括在用于该目的的在本领域中 常规的基质或储库型透皮贴剂中。
较佳经口给予化合物。
药用制剂较佳采用单位剂型。在该形式中，将制剂再分为含有 适量(例如达成所需目的的治疗量)活性组分的适宜大小的单位剂量。
根据特定应用，单位剂量制剂中本发明活性组合物的量一般可 在大约大约1.0毫克-大约1,000毫克、较佳大约1.0毫克-大约 500毫克且通常大约1毫克-大约250毫克内变化或在该范围内进行 调整。所使用的实际剂量可视患者的年龄、性别、体重和所治疗的 病况的严重程度而变化。该技术已为本领域技术人员所熟知。
所使用的实际剂量可视患者的需求和所治疗病况的严重程度而 变化。特定情况下适当剂量方案的确定在本领域的技术范围内。为 方便起见，视需要可将总日剂量分成数份并在一天内逐份给予。
一般而言，含有活性成分的人类口服剂型可每天给予1或2 次。给药量和给药频率将根据主治临床医师的判断加以调控。经口 给药的一般推荐每日剂量方案可以单次或分次剂量在每天大约1.0毫 克-大约1,000毫克的范围内。
生物利用度是指当与标准或对照相比时将活性药物成分或治疗 部分自所给予的剂型吸收至全身循环中的速率和程度。
已知用于制备片剂的常规方法。这些方法包括干法，诸如直接 压缩和压缩由压实产生的颗粒；或湿法或其他特殊程序。制备其他 给药剂型(诸如胶囊剂、栓剂等等)的常规方法也为人所熟知。
由以下制备和实施例例示说明本文所揭示的本发明，不应将该 制备和实施例解释为限制本发明的范畴。替代性机制途径和类似结 构将为本领域技术人员显而易见。
实施例
除非另作说明，否则以下实施例中的以下缩写将具有指定含 义：
N，N-二异丙基乙胺：iPr2Net
高分辨质谱：HRMS
高效液相色谱：HPLC
低分辨质谱：LRMS
纳摩尔浓度：nM
底物/受体复合物的抑制常数：Ki
结合聚苯乙烯的碳二亚胺树脂：PS-CDI
四氟硼酸O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓：TBTU
质子核磁共振：1H NMR
提供液相层析质谱资料，使用Applied Biosystems API-100质谱 仪和Shimadzu SCL-10A LC管柱进行分析(提供母体离子的观察值 (M+))：LCMS：
达成50％最大活性的有效浓度：EC50
达成50％最大活性的抑制浓度：IC50
毫升：mL
毫摩尔：mmol
微升：μl
克：g
毫克：mg
室温：rt(环境)：大约25℃
本发明所使用的上文所述的化合物用本领域中已知的方法(例如 根据流程1及其后的制备实施例所示的通用反应次序)制备：
流程1
A:R＝4-Ph
B:R＝4-OMe
C:R＝4-CH3
D:R＝4-CI
E:R＝4-CF3
F:R＝3-Ph
G:R＝2-CH3
步骤1：
苯甲基-1，2，5，6-四氢-3-吡啶基·苯甲基醚(1)
向由600mL甲醇制备的甲醇钠(62.4g，1.16mol)溶液中加入3-羟 基吡啶(100g，1.05mol)。加入苯甲基溴(375mL，3.15mol)后，使溶液 回流过夜。冷却至室温后，分数份加入硼氢化钠(79.4g，2.1mol)。在 真空中除去溶剂且将残余物与650mL水、64g碳酸钾和800mL乙 醚一起搅拌1小时，得到两个均匀液相。分离乙醚相，用碳酸钾干 燥且在真空中蒸发得到褐色油状物。在用力搅拌下，向此油状物于 20mL乙醚中的溶液缓慢加入2.1L乙醚和35g C盐521(Ceite 521)，并再持续搅拌30分钟。在真空中蒸发滤液，得到所需物质苯 甲基-1，2，5，6-四氢-3-吡啶基·苯甲基醚(294g，100％)。
步骤2：
1-苯甲基-3，3-二羟基哌啶氢溴酸盐(2)
使苯甲基-1，2，5，6-四氢-3-吡啶基·苯甲基醚(1，294g，1.05mol)于 48％HBr(385mL，7.77mol)中的溶液回流3小时。冷却至室温后，用 乙醚(4 X 300mL)萃取反应混合物。在真空中蒸发水层得到油状物， 使其结晶(丁酮)得到所需物质1-苯甲基-3，3-二羟基哌啶氢溴酸盐(129 g.43％)。
步骤3：
1-苯甲基-3-哌啶酮(3)
向悬浮于3.5L CH2Cl2中的1-苯甲基-3-哌啶酮氢溴酸盐(2，464g， 1.61mol)中加入三乙胺(247mL，1.77mol)，随后搅拌3小时。用H2O (3.5L X 2)和4L盐水洗涤所得混合物，随后用MgSO4干燥，过滤且 除去CH2Cl2，得到所需物质1-苯甲基-3-哌啶酮(305g，100％)。
步骤4：
使用7种酚制备7种衍生物(4)：
A.1-苯甲基-3-(联苯-4-基氧基)-哌啶-3-甲酸
将氢氧化钠(212g，5.28mol)加入至搅拌的4-苯基酚(100g，0.588 mol)于3L无水四氢呋喃中的溶液中。3小时后，加入1-苯甲基-3-哌 啶酮(3,444g，2.35mol)，将混合物冷却至0℃且逐滴加入无水氯仿 (282mL，2.52mol)。使反应混合物在0℃保持1小时且随后将其加 热至40℃历时2～3小时，在室温下搅拌过夜。减压除去四氢呋喃。 将残余物悬浮于水(3L)中且用乙醚(3L)加以洗涤。用6N HCl将水层 酸化至pH5，过滤且用CH2Cl2洗涤，得到所需物质1-苯甲基-3-(联 苯-4-基氧基)-哌啶-3-甲酸(156g，68.5％)。
B.1-苯甲基-3-(4-甲氧基-苯氧基)-哌啶-3-甲酸
将氢氧化钠(290g，7.26mol)加入至经搅拌的4-甲氧基酚(100g， 0.8mol)于无水四氢呋喃(3L)中的溶液中。3小时后，加入1-苯甲基- 3-哌啶酮(3,610g，3.22mol)，将混合物冷却至0℃且逐滴加入无水 氯仿(386mL，4.84mol)。使反应混合物在0℃保持1小时且随后将 其加热至40℃历时2～3小时，在室温下搅拌过夜。减压除去四氢 呋喃。将残余物悬浮于水(3L)中且用乙醚(3L)加以洗涤。用6N HCl 将水层酸化至pH5，过滤且用CH2Cl2洗涤，得到所需物质1-苯甲 基-3-(4-甲氧基-苯氧基)-哌啶-3-甲酸(135g，49.0％)。
C.1-苯甲基-3-对甲苯氧基-哌啶-3-甲酸
将氢氧化钠(260g，6.5mol)加入至经搅拌的对甲酚(78g，0.72mol) 于3L无水四氢呋喃中的溶液中。3小时后，加入1-苯甲基-3-哌啶酮 (3,547g，2.89mol)，将混合物冷却至0℃且逐滴加入无水氯仿(347 mL，4.33mol)。使反应混合物在0℃保持1小时且随后使其加热至 40℃历时2～3小时，在室温下搅拌过夜。减压除去四氢呋喃。将残 余物悬浮于水(2.5L)中且用乙醚(2.5L)加以洗涤。用6N HCl将水层 酸化至pH5，过滤且用CH2Cl2洗涤，得到所需物质1-苯甲基-3-对甲 苯氧基-哌啶-3-甲酸(120g，52.0％)。
D.1-苯甲基-3-(4-氯-苯氧基)-哌啶-3-甲酸
将氢氧化钠(381g，9.53mol)加入至搅拌的4-氯酚(136g，1.06mol) 于无水四氢呋喃(3L)中的溶液中。3小时后，加入1-苯甲基-3-哌啶 酮(3,801g，4.23mol)，将混合物冷却至0℃且逐滴加入无水氯仿 (508mL，6.35mol)。使反应混合物在0℃保持1小时且随后将其加 热至40℃历时2～3小时，在室温下搅拌过夜。减压除去四氢呋喃。 将残余物悬浮于水(3L)中且用乙醚(3L)加以洗涤。用6N HCl将水层 酸化至pH5，过滤且用CH2Cl2洗涤，得到所需物质1-苯甲基-3-(4- 氯-苯氧基)-哌啶-3-甲酸(210g，57.4％)。
E.1-苯甲基-3-(4-三氟甲基-苯氧基)-哌啶-3-甲酸
将氢氧化钠(222g，5.55mol)加入至经搅拌的4-三氟甲基苯酚(100 g，0.62mol)于无水四氢呋喃(3L)中的溶液。3小时后，加入1-苯甲 基-3-哌啶酮(3,467g，2.47mol)，将混合物冷却至0℃且逐滴加入无 水氯仿(296mL，3.7mol)。使反应混合物在0℃保持1小时且随后使 其达到40℃历时2～3小时，在室温下搅拌过夜。减压除去四氢呋 喃。将残余物悬浮于水(3L)中且用乙醚(3L)加以洗涤。用6N HCl将 水层酸化至pH7，过滤且用CH2Cl2洗涤，得到所需物质1-苯甲基-3- (4-三氟甲基-苯氧基)-哌啶-3-甲酸(146g，62.4％)。
F.1-苯甲基-3-(联苯-3-基氧基)-哌啶-3-甲酸
将氢氧化钠(212g，5.28mol)加入至经搅拌的3-苯基酚(100g， 0.588mol)于无水四氢呋喃(3L)中的溶液中。3小时后，加入1-苯甲 基-3-哌啶酮(3,444g，2.35mol)，将混合物冷却至0℃且逐滴加入无 水氯仿(282mL，2.52mol)。使反应混合物在0℃保持1小时且随后 使其达到40℃历时2～3小时，在室温下搅拌过夜。减压除去四氢呋 喃。将残余物悬浮于水(3L)中且用乙醚(3L)加以洗涤。用6N HCl将 水层酸化至pH5，过滤且用CH2Cl2洗涤，得到所需物质1-苯甲基-3- (联苯-3-基氧基)-哌啶-3-甲酸(80g，35.2％)。
G.1-苯甲基-3-邻甲苯氧基-哌啶-3-甲酸
将氢氧化钠(332g，8.3mol)加入至经搅拌的邻甲酚(100g，0.925 mol)于无水四氢呋喃(2L)中的溶液中。3小时后，加入1-苯甲基-3-哌 啶酮(3,700g，3.67mol)，将混合物冷却至0℃且逐滴加入无水氯仿 (440mL，5.55mol)。使反应混合物在0℃保持1小时且随后将其加 热至60℃历时2～3小时，在室温下搅拌过夜。减压除去四氢呋喃。 将残余物悬浮于水(2.5L)中且用乙醚(2.5L)加以洗涤。用6N HCl将 水层酸化至pH7，用二氯甲烷萃取且以MgSO4进行干燥。将粗混合 物(380g)悬浮于乙酸乙酯(4L)中并加入环己胺(170mL)。搅拌混合物 1小时且将其在冰箱中储存2天。过滤沉淀且用CH2Cl2加以洗涤。 将盐(100g)悬浮于二氯甲烷(1L)中，加入6N HCl(43mL，0.26mol)， 随后过滤固体并用二氯甲烷和乙醚洗涤，得到所需物质1-苯甲基-3- 邻甲苯氧基-哌啶-3-甲酸(40g，13.3％)。
流程2
R1和R2为藉由偶联相应胺而形成的衍生物。
R3为藉由加入相应羧酸而形成的衍生物。
步骤5：
在室温下，向完全溶解于25％乙醇/75％乙酸乙酯(400mL)中的4 (1当量，18mmol，6.9g)和N，N-二异丙基乙胺(5当量，91mmol，15.8 mL)中加入二碳酸二叔丁酯(1当量，18mmol，4.0g)于乙酸乙酯(50mL) 中的溶液，随后加入5％披钯碳(30重量％，2.0g)。用隔片密封反应容 器，用氩气进行净化且使氢气通过溶剂历时2分钟。室温下，在氢 气氛下搅拌反应混合物15小时，随后使其经硅藻土过滤且在真空中 浓缩，得到呈灰白色固体状的相应二异丙基乙胺盐形式的5，不经进 一步纯化即加以使用。
步骤6：
向N，N-二甲基甲酰胺(0.67mL)和N，N-二异丙基乙胺(3.0当量， 0.3mmol，52uL)中的5(即步骤1的产物)(0.1mmol)中加入1-羟基苯 并三唑(1.0当量，0.1mmol，14mg)、6(1.5当量，0.15mmol，29mg)和 以1.3mmol/g装载的结合聚苯乙烯的碳二亚胺树脂(3.0当量，0.3 mmol，231mg)。在室温下震荡混合物过夜且用四氢呋喃(3mL)中的 MP-三胺和MP-异氰酸酯树脂(过量)净化2小时。过滤除去树脂且在 真空中除去溶剂。将粗反应混合物溶解于1，4-二噁烷(3mL)中的4N 盐酸且在室温下震荡2小时，随后在真空中进行蒸发。不经进一步 纯化即使用粗残余物(7)。
步骤7：
向7(即步骤2的产物)(1.0当量，0.2mmol，100mg)中加入N，N-二 甲基甲酰胺(6.7mL)和N，N-二异丙基乙胺(4.0当量，0.8mmol，140uL) 中的8(1.5当量，0.3mmol，58mg)和1-羟基苯并三唑(1.0当量，0.2 mmol，27mg)。加入以1.3mmol/g装载的结合聚苯乙烯的碳二亚胺树 脂(3.0当量，0.6mmol，462mg)且在室温下震荡过夜。过滤除去树 脂，在真空中除去溶剂且藉由HPLC-MS纯化粗残余物，得到TFA 盐形式的制备1的目标化合物。将固体溶解于乙腈/H2O溶液(1:1，共 1.0mL)和1.0N盐酸(200uL)中且冷冻干燥，得到相应盐酸盐形式的 制备1(9)的目标化合物(M+：636.2)。
可藉由已知方法容易地评估本发明的化合物以测定对HDM2蛋 白的活性，诸如测量达成50％最大活性的抑制浓度(FP IC50)和抑制剂 结合的解离常数(FP Ki)的荧光偏振筛选测定法。[Zhang等人，J. Analytical Biochemistry 331：138-146(2004)]。
此外，使用细胞活力测定法测试化合物对HDM2蛋白的活性，该 细胞活力测定法在经本发明的化合物处理一段时间(例如72小时)后基 于量化所存在的ATP量(细胞活力IC50)来测定培养物中存活细胞的数 量Luminescent Cell Viability Assay，来自Promega]。
本申请的化合物展现出低于50.0μM的FP IC50、FP Ki和细胞活力 IC50值。
本发明中所使用的化合物藉由与上述制备实施例中所示程序基 本相同的程序制备。
代表性化合物的HDM2抑制活性展示于下表1中。
表1：
根据上述测试结果，本领域技术人员将了解，本发明的化合物 于治疗与HDM2蛋白和不当p53蛋白含量相关的疾病(包括(但不限 于)导致诸如癌症的过度细胞增殖的疾病)中具有效用。
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