一种快速检测猪流行性腹泻病毒的荧光试纸及制备和应用
专利汇可以提供一种快速检测猪流行性腹泻病毒的荧光试纸及制备和应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开一种快速检测猪流行性腹泻病毒的 荧光 试纸 ，包括硬质聚氯乙烯 底板 、 硝酸 纤维 素膜、样品垫、荧 光标 记物垫、吸 水 纸，荧光标记物垫上 喷涂 有抗PEDV的单克隆 抗体 Ⅰ－ 量子点 荧光标记物，硝酸 纤维素 膜上喷涂有抗PEDV的单克隆抗体Ⅱ检测线和山羊抗鼠IgG的质控线；抗PEDV的单克隆抗体Ⅰ由杂交瘤细胞10F10分泌产生，抗PEDV的单克隆抗体Ⅱ由杂交瘤细胞4A11分泌产生。本发明还提供了上述试纸的制备方法和应用方法，制备的试纸操作简单、检测快速、灵敏、特异性强、结果清晰易于判断，仅需要一个简易的激发设备，无需专业人员操作，适用于现场诊断。，下面是一种快速检测猪流行性腹泻病毒的荧光试纸及制备和应用专利的具体信息内容。
1.一种快速检测猪流行性腹泻病毒的荧光试纸，包括硬质聚氯乙烯底板、硝酸纤维素膜、样品垫、荧光标记物垫、吸水纸，所述硝酸纤维素膜粘贴在硬质聚氯乙烯底板上，在硝酸纤维膜的一端粘贴有荧光标记物垫，在荧光标记物垫上粘贴有样品垫，吸水纸置于硝酸纤维素膜的另一端，其特征在于，所述荧光标记物垫上喷涂有抗PEDV的单克隆抗体Ⅰ－量子点荧光标记物，所述硝酸纤维素膜上喷涂有抗PEDV的单克隆抗体Ⅱ的检测线和山羊抗鼠IgG的质控线。
2.根据权利要求1所述的快速检测猪流行性腹泻病毒的荧光试纸，其特征在于，所述抗PEDV的单克隆抗体Ⅰ由杂交瘤细胞10F10分泌产生，所述的杂交瘤细胞10F10保藏在中国典型培养物保藏中心CCTCC，其菌种保藏编号为CCTCC NO:C201905。
3.根据权利要求1所述的快速检测猪流行性腹泻病毒的荧光试纸，其特征在于，所述抗PEDV的单克隆抗体Ⅱ由杂交瘤细胞4A11分泌产生，所述的杂交瘤细胞4A11保藏在中国典型培养物保藏中心CCTCC，其菌种保藏编号为CCTCC NO:C201904。
4.权利要求1～3任一项所述的快速检测猪流行性腹泻病毒的荧光试纸的制备，其特征在于，包括以下步骤：
S1、标记抗PEDV单克隆抗体Ⅰ胶体金的步骤为：
S11、配置试剂：分别取1g EDC和NHS各自溶于100ML纯水，配置成10mg/mL的EDC和NHS的工作母液，4℃下保存；
S12、活化量子点荧光：取500μL量子点荧光用纯水稀释至1㎎/ml，将EDC和NHS的工作母液稀释为1mg/mL的EDC和NHS的工作液，分别加入87.5μL的EDC工作液和53.3μL的NHS工作也，避光常温混匀30min，得活化量子点荧光；
S13、取pH值为8.7且浓度为0.02mol/L的PBS缓冲液，以及体积百分浓度分别为20％的海藻糖、20％的蔗糖、0.5％的吐温-20、0.5％的BSA，搅匀过滤后取得复溶液；
S14、取1mL活化的量子点荧光加入66μL浓度为1㎎/mL的抗PEDV的单克隆抗体Ⅰ，避光常温混匀1h；再加入100μL体积百分比浓度为10％的BSA，避光常温混匀2h，13000rpm/min下离心30min，去上清后加入1mL复溶液溶解，4℃保存，得标记的抗PEDV单克隆抗体Ⅰ胶体金；
S2、制备抗PEDV的单克隆抗体Ⅰ－量子点荧光标记物垫的步骤为：
S21、配制包被液Ⅰ：取浓度为0.015mol/L的PBS缓冲液，以及体积百分浓度为0.5％的BSA、2.0％的海藻糖、2％的吐温-20，搅匀过滤得包被液Ⅰ；
S22、制备荧光标记物垫：将玻璃纤维素膜浸泡在上述包被液Ⅰ中30min，37℃下烘干；将标记的抗PEDV单克隆抗体Ⅰ胶体金稀释8倍后喷涂于处理过的玻璃纤维素膜上，喷量为10μL/cm，37℃下烘干2h，裁切成宽0.5cm条状的荧光标记物垫；
S3、喷涂检测线和质控线的步骤为：
S31、配制包被液Ⅱ：取pH值为7.2且浓度为0.02mol/L的PBS缓冲液，以及体积百分数浓度为1.0％的海藻糖、1.0％的山梨醇、0.3％的吐温-20、搅匀后用0.22μm的滤膜过滤，得包被液Ⅱ；
S32、将硝酸纤维素膜非点样面粘贴于聚氯乙烯底板上，将抗PEDV的单克隆抗体Ⅱ用包被液Ⅱ稀释至浓度为0.5mg/mL，然后喷涂于硝酸纤维素膜上作为检测线，喷量为0.8μL/cm；
将浓度为1.5mg/mL的羊抗鼠IgG喷涂在硝酸纤维素膜上作为质控线，喷量为0.8μL/cm；
37℃下烘干2h备用；
S4、处理样品垫，将吸水纸浸泡在由浓度为0.015mol/L的PBS以及体积百分浓度为
2.5％蔗糖和2％BSA组成的PBS缓冲液中30min，37℃下烘干，裁切成宽为1.8cm条状备用，得样品垫；
S5、试纸的组装、切割和包装，在硬质聚氯乙烯底板上依次粘贴有样品垫、荧光标记物垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，样品垫部分覆盖在荧光标记物垫上，荧光标记物垫部分覆盖在硝酸纤维素膜上，吸水纸部分覆盖在硝酸纤维素膜上；荧光标记物垫与硝酸纤维素膜上的检测线相邻，吸水纸与硝酸纤维素膜上的质控线相邻；切成3.6mm宽得试纸成品。
5.权利要求1～3任一项所述的快速检测猪流行性腹泻病毒的荧光试纸的制备，其特征在于，步骤S32中，检测线和质控线的距离是5mm。
6.权利要求1～3任一项所述的快速检测猪流行性腹泻病毒的荧光试纸的应用，其特征在于，包括以下步骤：
P1、样品的预处理：取少量待测样本加至pH值为7.4，浓度为1mL的0.01mol/LPBS缓冲液中，搅匀后静置或离心，取上清液；
P2、检测：取75μL上清液滴在荧光试纸上，15min后放入便携检测仪中观察结果；
P3、结果判定：质控线、检测线上均出现橙色荧光时为阳性，即待测样本中含有猪流行性腹泻病毒；质控线出现橙色荧光、检测线不出现橙色荧光为阴性结果，即样本中不含有猪流行性腹泻病毒；质控线未出现橙色荧光，则试纸无效。
一种快速检测猪流行性腹泻病毒的荧光试纸及制备和应用
技术领域
背景技术
发明内容
具体实施方式
| 标题 | 发布/更新时间 | 阅读量 |
|---|---|---|
| 来自木质纤维网的荧光液体的光学检测 | 2020-05-12 | 400 |
| 在自体荧光存在下生物材料中目标荧光团的成像 | 2020-05-11 | 348 |
| 自镇流一体化荧光灯 | 2020-05-11 | 830 |
| 自体免疫抗体的免疫荧光影像型态识别方法 | 2020-05-11 | 729 |
| 用于确定皮肤组织的自体荧光值的方法和设备 | 2020-05-12 | 863 |
| 自荧光体材料回收稀土及相关方法 | 2020-05-11 | 706 |
| 自身抗体荧光显微图文采集报告系统 | 2020-05-11 | 878 |
| 一种基于自体荧光寿命的癌症诊断系统 | 2020-05-12 | 816 |
| 人体自发荧光照明激发及图像处理系统及方法 | 2020-05-12 | 360 |
| 一种人体自发荧光探测装置用光源系统 | 2020-05-13 | 776 |
高效检索全球专利专利汇是专利免费检索,专利查询,专利分析-国家发明专利查询检索分析平台，是提供专利分析，专利查询，专利检索等数据服务功能的知识产权数据服务商。
我们的产品包含105个国家的1.26亿组数据，免费查、免费专利分析。
专利汇分析报告产品可以对行业情报数据进行梳理分析，涉及维度包括行业专利基本状况分析、地域分析、技术分析、发明人分析、申请人分析、专利权人分析、失效分析、核心专利分析、法律分析、研发重点分析、企业专利处境分析、技术处境分析、专利寿命分析、企业定位分析、引证分析等超过60个分析角度，系统通过AI智能系统对图表进行解读，只需1分钟，一键生成行业专利分析报告。
