一种清热、抗炎镇痛中药提取物
阅读：512发布：2023-01-22
专利汇可以提供一种清热、抗炎镇痛中药提取物专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及一种清热、抗炎 镇痛 中药提取物，具体是一种萝芙木根提取物及其制备方法。它是由下列步骤制得：选择萝芙木根，自然阴干， 粉碎 ；取适量干燥根粉末，加5～10倍量的蒸馏 水 ，置于合适的容器中，煎煮；过滤，滤液浓缩；加95％ 乙醇 ，将浓缩液的乙醇浓度调为70％，低温静置过夜；过滤，除去滤渣；滤液 真空 冷冻干燥 ，得冻干粉术，即为产物。本发明所述的萝芙木根提取物具有显著的清热、抗炎和镇痛作用，可以制备清热、抗炎 镇痛药 物。，下面是一种清热、抗炎镇痛中药提取物专利的具体信息内容。
1.一种具有清热、抗炎镇痛萝芙木根提取物，其特征在于它是由下列制备步骤制得，a、选择萝芙木根，自然阴干，粉碎；
b、取适量干燥根粉末，加5～10倍量的蒸馏水，置于合适的容器中，煎煮；
c、过滤，滤液浓缩；
d、加95％乙醇，将浓缩液的乙醇浓度调为70％，低温静置过夜；
e、过滤，除去滤渣；
f、滤液真空冷冻干燥，得冻干粉末。
2.根据权利要求1所述的萝芙木根提取物，其特征在于所述步骤a中自然阴干温度应该在20～40℃，并且避免阳光直射，粉碎粒度为10～100目，步骤a中所用的萝芙木根可以是海南萝芙木、催吐萝芙木、吊罗山萝芙木、萝芙木。
3.根据权利要求1所述的萝芙木根提取物，其特征在于所述步骤b的操作重复1～4次，每次煎煮的时间控制在0.5～1小时，最后合并煎煮液。
4.根据权利要求1所述的萝芙木根提取物，其特征在于所述步骤c为加热减压浓缩，加热温度控制在50～80℃，真空度控制在20～90kPa。
5.根据权利要求1所述的萝芙木根提取物，其特征在于所述步骤d添加95％乙醇时应慢加快搅，逐步提高浓缩液乙醇浓度至70％，浓缩液慢慢降至室温时，移至冷库于5～10℃静置冷藏过夜。
6.根据权利要求1所述的萝芙木根提取物，其特征在于所述步骤f将滤液冷冻至-45℃后采用逐步升温的方式进行冻干。
7.根据权利要求1所述的萝芙木根提取物，其特征在于它具有清热、抗炎和镇痛作用。
一种清热、抗炎镇痛中药提取物
技术领域
[0001] 本发明涉及一种清热、抗炎镇痛中药提取物，具体是一种萝芙木根提取物及其制备方法。
背景技术
[0002] 萝芙木(Rauvolfia)为夹竹桃科(Apocynaceae)萝芙木属(Rauvolfia)植物的总称。《中国植物志》记载萝芙木属在全世界有135种，大多数种分布于热带和亚热带，少数种分布于温带，中国有9种、4变种和3个栽培种，民间用其根或鲜叶治感冒高热、失眠眩晕等病、治跌打扭伤、毒蛇咬伤，具有清风热、降肝火、消肿解毒的作用，是我国重要的南药。
[0004] 国外科学家对印度萝芙木Rauvolfia serpentina的研究最多。而以往对萝芙木的研究大多都只是研究萝芙木生物碱的降压、镇静作用。萝芙木在我国民间用于治疗感冒发热、咽喉肿痛、头痛眩晕、痧症、腹痛吐泻、风痒疮疥等很多疾病，而没有人对萝芙木的清热、抗炎和镇痛作用进行过实验研究。
发明内容
[0005] 本发明的目的是为了发掘一种民间药材萝芙木提取物的药用价值。
[0006] 本发明的目的旨在提供上述萝芙木提取物制备方法。
[0007] 本发明的目的旨在对上述提取物的解热、抗炎和镇痛作用进行评价。
[0008] 本发明是由以下技术方案实现的，一种萝芙木根提取物，它是由下列制备步骤制得：
[0009] a、选择萝芙木根，自然阴干，粉碎；
[0010] b、取适量干燥根粉末，加5～10倍量的蒸馏水，置于合适的容器中，煎煮；
[0011] c、过滤，滤液浓缩；
[0012] d、加95％乙醇，将浓缩液的乙醇浓度调为70％，低温静置过夜；
[0013] e、过滤，除去滤渣；
[0015] 本发明的最佳实施范围为：
[0017] 所述步骤b的操作重复1～4次，每次煎煮的时间控制在0.5～1小时，最后合并煎煮液；
[0018] 所述步骤c为加热减压浓缩，加热温度控制在50～80℃，真空度控制在20～90kPa；
[0019] 所述步骤d添加95％乙醇时应慢加快搅，逐步提高浓缩液醇浓度至70％，浓缩液慢慢降至室温时，移至冷库于5～10℃静置冷藏过夜；
[0020] 所述步骤f将滤液冷冻至-45℃后，再采用逐步升温的方式进行冻干。
[0021] 一种萝芙木根提取物的制备方法，它包括下列制备步骤：
[0022] a、选择萝芙木根，20～40℃避强光，自然阴干，粉碎至10～100目，优选海南萝芙木根；
[0023] b、取适量干燥根粉末，加5～10倍量的蒸馏水，置于合适的容器中，煎煮0.5～1小时，
[0024] 操作重复1～4次；优选加根粉木8倍量的水，重复1～3次，每次0.5～1小时；
[0025] c、粗提液过滤，粗提液滤液加热减压浓缩，加热温度控制在50～80℃，真空度控制在20～90kPa；
[0026] d、浓缩液缓慢添加95％乙醇，并快速搅拌，直至浓缩液乙醇浓度为70％，待浓缩液慢慢降至室温时，移至冷库于5～10℃静置冷藏过夜；
[0027] e、过滤，除去滤渣；
[0028] f、将滤液冷冻至-45℃后采用逐步升温的方式进行冻干，得到冻干粉末；
[0029] 此即得到本发明所述的萝芙木根提取物。
[0030] 本发明采用煎煮法提取萝芙木根中活性物质，能够充分将水溶性成分提取出来，符合民间用药特点。粗提液滤液浓缩温度控制在50～80℃，真空度控制在20～90kPa，提取物溶液采用真空冷冻干燥技术干燥，都可以避免高温对提取物结构的破坏，保持提取物的药理活性。
[0031] 本发明所述的萝芙木根提取物具有显著的解热、抗炎和镇痛作用，与其民间药理作用一致。动物实验结果如下：
[0032] 1实验材料、试剂与仪器
[0033] 1.1实验动物及饲料
[0034] 18.0～22.0gSPF级KM小鼠，长沙市开福区东创实验动物科技服务部，合格证号：004289
[0035] 160～190gSPF级SD大鼠，广东省医学实验动物中心，合格证号：0056907[0036] 2.0～2.5kg健康青紫兰家兔，海南医学院实验动物中心提供
[0037] SPF级小鼠、大鼠配合饲料，广东省医学实验动物中心，检验报告单：D2009010[0038] 1.2实验药品与试剂
[0039] 阿司匹林肠溶片，江苏平光制药有限责任公司，批号：0906181
[0040] 注射用生理盐水，江西长江药业有限公司，批号：20070907108
[0041] 本工艺制备的提取物，用注射用生理盐水配制成药物溶液
[0042] 1.3实验器材
[0043] 一次性注射器，南昌翔翊医疗器械有限公司
[0044] PV-200足趾容积测量仪，成都泰盟科技有限公司
[0045] WRY-B型微机热原测温仪，上海勇规分析仪器有限公司
[0046] 2实验方法
[0047] 2.1小鼠急性毒性实验
[0048] 2.1.1尾静脉注射给药急性毒性实验
[0049] 根据国家食品药品监督管理局发布的《中药、天然药物急性毒性研究技术指导原则》，选择18.0～22.0g小鼠，雌雄各半，给药前12h内禁食不禁水。预试验采用固定剂量法(Fixed-doseprocedure)，选择5000、500、50和5mg/kg四个固定剂量尾静脉单次注射给药，给药后观察记录动物的反应症状，记录死亡动物数，根据结果逐步改变剂量，得出近似的0和100％死亡率时的剂量分别为220mg/kg和340mg/kg。正式实验将实验组A、B、C、D和E作为5个剂量组(340mg/kg、304.9mg/kg、273.5mg/kg、245.3mg/kg和220mg/kg)，并设置F组为对照组(0.9％氯化钠注射液)，尾静脉单次注射给药，给药后观察记录动物的反应症状，记录死亡动物数。结果如表1，根据正式实验动物死亡数，用Bliss法计算LD50及95％可信限，LD50＝294.2mg/kg，LD50(Feiller校正)95％的可信限＝274.6～322.5mg/kg，对死亡动物进行大体剖检，主要脏器(心、肝、脾、肺、肾等)未见异常。
[0050] 表1静脉注射正式实验及结果
[0051]
[0052] 结果表明，萝芙木根提取物采用尾静脉单次注射给药对小鼠的半数致死剂量为294.2mg/kg。
[0053] 2.1.2经口灌胃给药急性毒性实验
[0054] 根据国家食品药品监督管理局发布的《中药、天然药物急性毒性研究技术指导原则》，选择18.0～22.0g小鼠，雌雄各半，给药前12h内禁食不禁水。采用最大给药量，给药容积40ml/kg，经口灌胃给药，给药后观察记录动物的反应症状，记录死亡动物数，计算小鼠对药物溶液的最大耐受量。结果表明，小鼠对本发明的药物溶液的最大耐受量为3445～4140mg/kg，对死亡动物进行大体剖检，主要脏器(心、肝、脾、肺、肾等)未见异常。
[0055] 2.22，4-二硝基氯代苯诱导小鼠耳肿胀实验
[0056] 选择18.0～22.0g小鼠50只，雌雄各半，随机分为5组。按剂量经口灌胃给药，连续给药5天，末次给药30min后，于每只小鼠右耳片均匀涂抹2，4-二硝基氯代苯，左耳不涂2，4-二硝基氯代苯作为对照；立即尾静脉注射0.5％伊文思蓝(0.1ml/10g)。30min后将小鼠颈椎脱臼处死，用直径6mm的打孔器在左、右耳同一部位打下圆耳片、称重，右耳与左耳重量之差即为肿胀度。采用SAS 8.0软件统计分析，比较药物的抗炎作用，计算肿胀抑制率。萝芙木根提取物对2，4-二硝基氯代苯所致小鼠耳片肿胀度的影响见表2。
[0057] 表2萝芙木根提取物对2，4-二硝基氯代苯致小鼠耳片肿胀度的影响[0058]# * **
[0059] 与生理盐水组比较，P＞0.05，P＜0.05，P＜0.01；n＝10
[0060] 结果表明，本发明制备的萝芙木根提取物能抑制2，4-二硝基氯代苯所致的小鼠耳肿胀。与空白组相比，萝芙木根提取物对耳廓的肿胀呈现了剂量依赖性的抑制作用，三个剂量组均有显著的差异，其抑制率分别达到13.70％、21.92％和69.64％，其中，高剂量组的抑制率高于阳性对照阿司匹林组，显示出了显著的抑制作用。
[0061] 2.3小鼠皮肤毛细血管通透性实验
[0062] 上述实验将耳片称重之后，将左、右耳片剪碎，浸入1.5ml丙酮-生理盐水(7∶3)的溶液中，在38℃水浴条件下提取48h浸出染料；离心，上清液于590nm处比色，测吸光度(OD值)。采用SAS 8.0软件统计分析，比较药物的抗炎作用。萝芙木根提取物对2，4-二硝基氯代苯所致小鼠皮肤毛细血管通透性的影响见表3。
[0063] 表3萝芙木根提取物对2，4-二硝基氯代苯所致小鼠皮肤毛细血管通透性的影响[0064]
[0065] 与生理盐水组比较，#P＞0.05，*P＜0.05，**P＜0.01；n＝10
[0066] 结果表明，萝芙木根提取物高剂量组能降低小鼠毛细血管通透性，具有明显的抗炎作用。
[0067] 2.4大鼠足趾肿胀实验
[0068] 取体重160～190g大鼠50只，随机分为5组，每组10只。按剂量经口灌胃给药，连续给药7天，末次给药30min后，每鼠左后脚爪正面上端用圆珠笔作一清晰横线，用足趾容积测量仪测鼠爪体积，然后在各鼠爪皮下注射原蛋清(0.05ml/爪)，于0.5、1、2、及6小时各测鼠爪体积1次，按下式计算鼠爪肿胀百分率：
[0069]
[0070] 采用SAS 8.0软件统计分析，比较药物的抗炎作用。萝芙木根提取物对原蛋清所致大鼠足趾肿胀的影响见表4。
[0071] 表4萝芙木根提取物对原蛋清所致大鼠足趾肿胀的影响
[0072]# * **
[0073] 与生理盐水组比较，P＞0.05，P＜0.05，P＜0.01；n＝10
[0074] 结果表明，高剂量的萝芙木根提取物具有显著的抗炎作用，1194mg/kg剂量的作用与阿司匹林12.6mg/kg剂量的作用相近。
[0075] 2.5大鼠肉芽肿实验
[0076] 取体重160～190g大鼠50只，随机分为5组，每组10只。腹腔注射戊巴比妥钠30mg/kg麻醉，在每只大鼠的腹部用碘酒消毒，75％酒精棉球脱碘后，切开1cm长小口，用眼科镊子将50mg的经高压灭菌棉球从切口处植入皮下，随即缝合皮肤。从手术当日起，经口灌胃给药。连续给药7天，第八天，将大鼠颈椎脱臼处死，打开原切口，将棉球连同周围结缔组织一起取出，剔除脂肪组织，放入70℃烘箱中烘干，称重，将称得的重量剪去棉球原重量即为肉芽肿重量。采用SAS 8.0软件统计分析，比较药物对肉芽增生相形成的抑制作用。萝芙木根提取物对棉球肉芽形成的影响见表5。
[0077] 表5萝芙木根提取物对棉球肉芽形成的影响
[0078]# * **
[0079] 与生理盐水组比较，P＞0.05，P＜0.05，P＜0.01；n＝10
[0080] 结果表明，萝芙木根提取物对大鼠的棉球肉芽肿有抑制作用。高剂量组1194mg/kg的抑制效果要高于阿司匹林12.6mg/kg剂量组的作用效果。
[0081] 2.6小鼠醋酸扭体实验
[0082] 选择18.0～22.0g小鼠50只，雌雄各半，随机分为5组。按剂量经口灌胃给药，连续给药5天，木次给药30min后，腹腔注射0.9％醋酸生理盐水(0.1ml/10g)。记录注射醋酸溶液后15min内小鼠出现扭体的次数。采用SAS 8.0软件统计分析，比较组间差异，计算药物对小鼠痛觉的抑制率。萝芙木根提取物对醋酸引起小鼠扭体反应的影响见表6。
[0083] 表6萝芙木根提取物对醋酸引起小鼠扭体反应的影响
[0084]
[0085] 与生理盐水组比较，#P＞0.05，*P＜0.05，**P＜0.01；n＝10
[0086] 结果表明，萝芙木根提取物高、中、低剂量组对醋酸致痛小鼠能减少小鼠的扭体次数，具有一定的镇痛作用，其中高剂量组的镇痛百分率可达42.48％，镇痛作用显著。
[0087] 2.7家兔解热实验
[0088] 取家兔30只，雌雄各半，随机分为5组，每组6只。分别设注射用生理盐水组、阿司匹林阳性对照组、萝芙木根根提取物高、中、低剂量组。试验时将家兔置于笼内安静后测3次体温(间隔30min)，以3次体温的平均值作为正常体温、由耳缘静脉注射伤寒-副伤寒四联菌苗1.0ml/kg，立即经口灌胃以上剂量的受试药液或对照液，给药体积均为5.0ml/kg，给药前12h内禁食不禁水。然后每隔1h测1次肛温，共测5次，比较6组动物给药后体温的变化。
[0089] 表7萝芙木根提取物对伤寒-副伤寒四联菌所致家兔发热的影响
[0090]
[0091] 与生理盐水组比较，#P＞0.05，*P＜0.05，**P＜0.01；n＝6
[0092] 结果表明，家兔在静脉注射伤寒-副伤寒四联菌后，1h体温明显升高，2h到达峰值，以后体温缓慢下降，5h后基本接近正常。从真个过程来看，阳性对照组阿司匹林解热作用发挥较快。本发明制备的提取物对致热家兔亦有明显的解热作用，并表现出一定的剂量依赖关系，高剂量组的解热作用尤为突出，尽管显效速度较阿司匹林组慢，但是解热的作用时间较长。因此可以认为，萝芙木根提取物具有明显的解热作用。
具体实施方式
[0093] 以下实施例旨在说明本发明而不是对本发明的进一步限定。
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