一种细胞溶酶体中次氯酸根的双光子激发荧光成像方法
阅读：350发布：2020-05-11
专利汇可以提供一种细胞溶酶体中次氯酸根的双光子激发荧光成像方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种细胞溶酶体中 次氯酸 根的双 光子 激发 荧光 成像方法，荧光探针1，5-MQDA的制备方法操作步骤如下所示：将单取代或未取代的1，5- 萘 二胺（56.5mg，0.357mmol）溶解在5mL无 水 乙醇 中，快速滴加6mL的6-（3-吗啉-1-丙炔）喹啉-2-甲 醛 （100mg，0.357mmol）的无水乙醇溶液，室温搅拌1小时后，快速加入 硼 氢化钠（140mg），反应过夜后，旋除乙醇，得到粗产物。本发明通过采用基于1，5-二 氨 基萘单元作为反应识别基团，该探针能利用 双光子激发 技术以荧光方法实现高选择性地检测细胞内溶酶体中次氯酸根阴离子含量，继而解决了现有检测分析方法不具有高选择性、高灵敏度、响应时间快、时间和空间 分辨率 高的问题。，下面是一种细胞溶酶体中次氯酸根的双光子激发荧光成像方法专利的具体信息内容。
1.一种细胞溶酶体中次氯酸根的双光子激发荧光成像方法，其特征在于：检测次氯酸
根阴离子的荧光探针1，5-MQDA具有如下结构：
R是氢原子，或C1-C8的烃基（烷基、含杂原子的烃基、含芳环的烃基、含杂芳环的烃基）；
荧光探针1，5-MQDA的制备路线如下所示：
荧光探针1，5-MQDA的制备方法操作步骤如下所示：
将单取代或未取代的1，5-萘二胺（56.5mg，0.357mmol）溶解在5mL无水乙醇中，快速滴加6mL的6-（3-吗啉-1-丙炔）喹啉-2-甲醛（100mg，0.357mmol）的无水乙醇溶液，室温搅拌1小时后，快速加入硼氢化钠（140mg），反应过夜后，旋除乙醇，得到粗产物，用正己烷和乙酸乙酯的混合物作为洗脱剂，柱层析得到目标产物（产率42%），即荧光探针1，5-MQDA；
熔点：241.9-242.6℃，IR（film，cm-1）：3902.0，2922.2，2852.7，2358.9，2339.7，
1622.1，1585.5，1527.6，1454.3，1431.2，1330.9，1288.5，1112.9，1004.9，860.3，873.1，
760.0，731.0，1HNMR（CDCl3，300MHz，ppm）δ=2.71（t，4H）；3.60（s，2H）；3.82（t，4H）；4.16（s，
2H）；4.78（s，2H）；6.10（s，1H）；6.64（d，J=8.0Hz，1H）；6.84（d，J=7.4Hz，1H）；7.23（d，J=
8.4Hz，1H）；7.32（t，1H）；7.36（t，1H）；7.48（d，J=8.5Hz，1H）；7.55（d，J=8.5Hz，1H）；7.77（dd，J1=1.6Hz，J2=8.7Hz，1H）；7.93（d，J=1.6Hz，1H）；8.06（d，J=8.6Hz，1H）；8.11（d，J=
8.7Hz，1H），13CNMR（CDCl3，75MHz，ppm）δ=158.99，146.91，143.46，142.73，136.25，132.49，
131.09，129.13，127.09，125.64，125.27，124.39，124.30，120.95，120.40，111.02，110.01，
104.80，85.35，85.27，66.93，52.51，49.63，48.15，元素分析：C27H26N4O，理论值C：76.75，H：
6.20，N：13.26；实测值：C：77.04，H：6.57，N：12.51；ESI-MS：C27H26N4O，m/z：423.21（M+1）。
2.根据权利要求1所述的一种细胞溶酶体中次氯酸根的双光子激发荧光成像方法，其
特征在于：所述在荧光探针1，5-MQDA的制备过程中探针1，5-MQDA与ClO-作用后，在334nm波长处激发，在430nm处产生特定的荧光发射峰，且激发和发射的狭缝宽度分别设定为3和
5nm，所有的光谱测试都是在25℃下进行的。
3.根据权利要求1所述的一种细胞溶酶体中次氯酸根的双光子激发荧光成像方法，其
特征在于：所述在探针1，5-MQDA对多种分析物种的选择性荧光应答过程中，当探针1，5-MQDA的浓度为10.0μM时，分析物包括：过氧化氢H2O2、单线态氧1O2、羟基自由基·OH、过氧化亚硝酰ONO2-、次氯酸钠NaOCl，它们的浓度均为100.0μM，每一种分析物加入测试体系后，经充分震荡混合后立即进行相应的荧光光谱测试，结果如图1所示，在所测试的ROS物种中，只有NaOCl能够使探针1，5-MQDA在430nm处产生强烈的荧光发射信号，而其它测试的ROS物种则不产生这个作用，且NaOCl与探针1，5-MQDA能发生专一性的作用，探针1，5-MQDA可以在水溶液体系中选择性识别NaOCl，并产生特定的荧光发射信号。
4.根据权利要求1所述的一种细胞溶酶体中次氯酸根的双光子激发荧光成像方法，其
特征在于：所述荧光探针1，5-MQDA在pH=7.0的水体系过程中，将2.0μM浓度的探针1，5-MQDA为加入浓度为100.0μM的NaOCl，快速充分振荡1分钟后，立即开始计时，每间隔1分钟即时测定体系在430nm处荧光发射强度，结果如图2所示，体系在430nm处的荧光发射强度在测试开始时就已远远大于探针自身的荧光强度，接近饱和，说明探针与次氯酸钠响应时间小于1分钟。
5.根据权利要求1所述的一种细胞溶酶体中次氯酸根的双光子激发荧光成像方法，其
特征在于：所述在ClO-浓度对探针1，5-MQDA（2.0μM）荧光发射强度的影响及检测限时，pH=
7.0条件下，固定探针1，5-MQDA的浓度为2.0μM，分别加入浓度为0-50.0μM的NaOCl水溶液（每组NaOCl浓度以5.0μM递增），经充分震荡混合后，测定不同组的荧光光谱，参见图3，在未加入NaClO时，体系几乎没有荧光发射信号，随着溶液中NaClO浓度的增加，体系在430nm处的荧光强度不断增加。
6.根据权利要求1所述的一种细胞溶酶体中次氯酸根的双光子激发荧光成像方法，其
特征在于：所述探针1，5-MQDA在细胞内溶酶体定位时过程中，Raw264.7细胞用脂多糖LPS（100μg/mL）预处理30h，更换培养基，加入市售LysoTracker（50nM）孵育10min，再加入探针
1，5-MQDA（2.0μM）共同孵育20min，成像，640nm与561nm激发，收集蓝、红通道荧光，如图4所示。
一种细胞溶酶体中次氯酸根的双光子激发荧光成像方法
技术领域
背景技术
[0002] 次氯酸（ClO-）根具有强氧化性，不仅广泛于水体的灭菌净化，在生物体内的细胞信号传导和免疫系统中也起着关键作用，例如抗炎症、免疫调节和病原体反应。过量的次氯酸根会通过氧化应激损害细胞中的蛋白质，导致一系列疾病的产生。因此，开放一种可靠有效的方法来监测环境和生物体内及细胞内的次氯酸根含量，在环境监测及细胞内的病理、生理过程具有重要意义。
[0003] 近年来，已经开发了比色法，电化学和分光光度法等多种方法用于检测ClO-的分析方法，然而这些检测分析方法不具有高选择性、高灵敏度、响应时间快、时间和空间分辨率高等优点，虽然越来越多的荧光探针被开发用于ClO-的特异性检测和细胞成像，但是，目-前仍旧缺少溶酶体定位的ClO荧光探针。
发明内容
[0004] 本发明的目的在于提供一种细胞溶酶体中次氯酸根的双光子激发荧光成像方法，具备高选择性、高灵敏度、响应时间快、时间和空间分辨率高的优点，解决了现有检测分析方法不具有高选择性、高灵敏度、响应时间快、时间和空间分辨率高的问题。
[0005] 为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种细胞溶酶体中次氯酸根的双光子激发荧光成像方法，检测次氯酸根阴离子的荧光探针1，5-MQDA具有如下结构：R是氢原子，或C1-C8的烃基（烷基、含杂原子的烃基、含芳环的烃基、含杂芳环的烃基）；
荧光探针1，5-MQDA的制备路线如下所示：
荧光探针1，5-MQDA的制备方法操作步骤如下所示：
将单取代或未取代的1，5-萘二胺（56.5mg，0.357mmol）溶解在5mL无水乙醇中，快速滴加6mL的6-（3-吗啉-1-丙炔）喹啉-2-甲醛（100mg，0.357mmol）的无水乙醇溶液，室温搅拌1小时后，快速加入硼氢化钠（140mg），反应过夜后，旋除乙醇，得到粗产物，用正己烷和乙酸乙酯的混合物作为洗脱剂，柱层析得到目标产物（产率42%），即荧光探针1，5-MQDA；
熔点：241.9-242.6℃，IR（film，cm-1）：3902.0，2922.2，2852.7，2358.9，2339.7，
1622.1，1585.5，1527.6，1454.3，1431.2，1330.9，1288.5，1112.9，1004.9，860.3，873.1，
760.0，731.0，1HNMR（CDCl3，300MHz，ppm）δ=2.71（t，4H）；3.60（s，2H）；3.82（t，4H）；4.16（s，
2H）；4.78（s，2H）；6.10（s，1H）；6.64（d，J=8.0Hz，1H）；6.84（d，J=7.4Hz，1H）；7.23（d，J=
8.4Hz，1H）；7.32（t，1H）；7.36（t，1H）；7.48（d，J=8.5Hz，1H）；7.55（d，J=8.5Hz，1H）；7.77（dd，J1=1.6Hz，J2=8.7Hz，1H）；7.93（d，J=1.6Hz，1H）；8.06（d，J=8.6Hz，1H）；8.11（d，J=
8.7Hz，1H），13CNMR（CDCl3，75MHz，ppm）δ=158.99，146.91，143.46，142.73，136.25，132.49，
131.09，129.13，127.09，125.64，125.27，124.39，124.30，120.95，120.40，111.02，110.01，
104.80，85.35，85.27，66.93，52.51，49.63，48.15，元素分析：C27H26N4O，理论值C：76.75，H：
6.20，N：13.26；实测值：C：77.04，H：6.57，N：12.51；ESI-MS：C27H26N4O，m/z：423.21（M+1）。
荧光探针1，5-MQDA的制备路线如下所示：
荧光探针1，5-MQDA的制备方法操作步骤如下所示：
将单取代或未取代的1，5-萘二胺（56.5mg，0.357mmol）溶解在5mL无水乙醇中，快速滴加6mL的6-（3-吗啉-1-丙炔）喹啉-2-甲醛（100mg，0.357mmol）的无水乙醇溶液，室温搅拌1小时后，快速加入硼氢化钠（140mg），反应过夜后，旋除乙醇，得到粗产物，用正己烷和乙酸乙酯的混合物作为洗脱剂，柱层析得到目标产物（产率42%），即荧光探针1，5-MQDA；
熔点：241.9-242.6℃，IR（film，cm-1）：3902.0，2922.2，2852.7，2358.9，2339.7，
1622.1，1585.5，1527.6，1454.3，1431.2，1330.9，1288.5，1112.9，1004.9，860.3，873.1，
760.0，731.0，1HNMR（CDCl3，300MHz，ppm）δ=2.71（t，4H）；3.60（s，2H）；3.82（t，4H）；4.16（s，
2H）；4.78（s，2H）；6.10（s，1H）；6.64（d，J=8.0Hz，1H）；6.84（d，J=7.4Hz，1H）；7.23（d，J=
8.4Hz，1H）；7.32（t，1H）；7.36（t，1H）；7.48（d，J=8.5Hz，1H）；7.55（d，J=8.5Hz，1H）；7.77（dd，J1=1.6Hz，J2=8.7Hz，1H）；7.93（d，J=1.6Hz，1H）；8.06（d，J=8.6Hz，1H）；8.11（d，J=
8.7Hz，1H），13CNMR（CDCl3，75MHz，ppm）δ=158.99，146.91，143.46，142.73，136.25，132.49，
131.09，129.13，127.09，125.64，125.27，124.39，124.30，120.95，120.40，111.02，110.01，
104.80，85.35，85.27，66.93，52.51，49.63，48.15，元素分析：C27H26N4O，理论值C：76.75，H：
6.20，N：13.26；实测值：C：77.04，H：6.57，N：12.51；ESI-MS：C27H26N4O，m/z：423.21（M+1）。
[0006] 优选的，所述在荧光探针1，5-MQDA的制备过程中探针1，5-MQDA与ClO-作用后，在334nm波长处激发，在430nm处产生特定的荧光发射峰，且激发和发射的狭缝宽度分别设定为3和5nm，所有的光谱测试都是在25℃下进行的。
[0007] 优选的，所述在探针1，5-MQDA对多种分析物种的选择性荧光应答过程中，当探针1，5-MQDA的浓度为10.0μM时，分析物包括：过氧化氢H2O2、单线态氧1O2、羟基自由基·OH、过氧化亚硝酰ONO2-、次氯酸钠NaOCl，它们的浓度均为100.0μM，每一种分析物加入测试体系后，经充分震荡混合后立即进行相应的荧光光谱测试，结果如图1所示，在所测试的ROS物种中，只有NaOCl能够使探针1，5-MQDA在430nm处产生强烈的荧光发射信号，而其它测试的ROS物种则不产生这个作用，且NaOCl与探针1，5-MQDA能发生专一性的作用，探针1，5-MQDA可以在水溶液体系中选择性识别NaOCl，并产生特定的荧光发射信号。
[0008] 优选的，所述荧光探针1，5-MQDA在pH=7.0的水体系过程中，将2.0μM浓度的探针1，5-MQDA为加入浓度为100.0μM的NaOCl，快速充分振荡1分钟后，立即开始计时，每间隔1分钟即时测定体系在430nm处荧光发射强度，结果如图2所示，体系在430nm处的荧光发射强度在测试开始时就已远远大于探针自身的荧光强度，接近饱和，说明探针与次氯酸钠响应时间小于1分钟。
[0009] 优选的，所述在ClO-浓度对探针1，5-MQDA（2.0μM）荧光发射强度的影响及检测限时，pH=7.0条件下，固定探针1，5-MQDA的浓度为2.0μM，分别加入浓度为0-50.0μM的NaOCl水溶液（每组NaOCl浓度以5.0μM递增），经充分震荡混合后，测定不同组的荧光光谱，参见图3，在未加入NaClO时，体系几乎没有荧光发射信号，随着溶液中NaClO浓度的增加，体系在430nm处的荧光强度不断增加。
[0010] 优选的，所述探针1，5-MQDA在细胞内溶酶体定位时过程中，Raw264.7细胞用脂多糖LPS（100μg/mL）预处理30h，更换培养基，加入市售LysoTracker（50nM）孵育10min，再加入探针1，5-MQDA（2.0μM）共同孵育20min，成像，640nm与561nm激发，收集蓝、红通道荧光，如图4所示。
[0011] 与现有技术相比，本发明的有益效果如下：1、本发明通过采用基于1，5-二氨基萘单元作为反应识别基团，该探针能利用双光子激
发技术以荧光方法实现高选择性地检测细胞内溶酶体中次氯酸根阴离子含量，可对多种分析物种的选择性荧光应答，同时也能详细观察探针1，5-MQDA（2.0μM）的荧光发射强度与次氯酸钠的响应时间关系以及荧光发射强度，直观观察探针1，5-MQDA在细胞内溶酶体定位的双光子激发荧光成像情况，继而解决了现有检测分析方法不具有高选择性、高灵敏度、响应时间快、时间和空间分辨率高的问题。
附图说明
发技术以荧光方法实现高选择性地检测细胞内溶酶体中次氯酸根阴离子含量，可对多种分析物种的选择性荧光应答，同时也能详细观察探针1，5-MQDA（2.0μM）的荧光发射强度与次氯酸钠的响应时间关系以及荧光发射强度，直观观察探针1，5-MQDA在细胞内溶酶体定位的双光子激发荧光成像情况，继而解决了现有检测分析方法不具有高选择性、高灵敏度、响应时间快、时间和空间分辨率高的问题。
附图说明
[0012] 图1为本发明探针1，5-MQDA对多种分析物种的选择性荧光应答示意图；图2为本发明pH=7.0的水体系中，探针1，5-MQDA（2.0μM）的荧光发射强度与次氯酸钠的响应时间关系曲线图；
图3为本发明ClO-浓度对探针1，5-MQDA（2.0μM）荧光发射强度的影响及检测曲线图；
图4为本发明探针1，5-MQDA在细胞内溶酶体定位的双光子激发荧光成像图。
图3为本发明ClO-浓度对探针1，5-MQDA（2.0μM）荧光发射强度的影响及检测曲线图；
图4为本发明探针1，5-MQDA在细胞内溶酶体定位的双光子激发荧光成像图。
具体实施方式
[0013] 下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0014] 请参阅图1-4，一种细胞溶酶体中次氯酸根的双光子激发荧光成像方法，检测次氯酸根阴离子的荧光探针1，5-MQDA具有如下结构：R是氢原子，或C1-C8的烃基（烷基、含杂原子的烃基、含芳环的烃基、含杂芳环的烃基）；
荧光探针1，5-MQDA的制备路线如下所示：
荧光探针1，5-MQDA的制备方法操作步骤如下所示：
将单取代或未取代的1，5-萘二胺（56.5mg，0.357mmol）溶解在5mL无水乙醇中，快速滴加6mL的6-（3-吗啉-1-丙炔）喹啉-2-甲醛（100mg，0.357mmol）的无水乙醇溶液，室温搅拌1小时后，快速加入硼氢化钠（140mg），反应过夜后，旋除乙醇，得到粗产物，用正己烷和乙酸乙酯的混合物作为洗脱剂，柱层析得到目标产物（产率42%），即荧光探针1，5-MQDA；
熔点：241.9-242.6℃，IR（film，cm-1）：3902.0，2922.2，2852.7，2358.9，2339.7，
1622.1，1585.5，1527.6，1454.3，1431.2，1330.9，1288.5，1112.9，1004.9，860.3，873.1，
760.0，731.0，1HNMR（CDCl3，300MHz，ppmδ=2.71（t，4H）；3.60（s，2H）；3.82（t，4H）；4.16（s，
2H）；4.78（s，2H）；6.10（s，1H）；6.64（d，J=8.0Hz，1H）；6.84（d，J=7.4Hz，1H）；7.23（d，J=
8.4Hz，1H）；7.32（t，1H）；7.36（t，1H）；7.48（d，J=8.5Hz，1H）；7.55（d，J=8.5Hz，1H）；7.77（dd，J1=1.6Hz，J2=8.7Hz，1H）；7.93（d，J=1.6Hz，1H）；8.06（d，J=8.6Hz，1H）；8.11（d，J=
8.7Hz，1H），13CNMR（CDCl3，75MHz，ppm）δ=158.99，146.91，143.46，142.73，136.25，132.49，
131.09，129.13，127.09，125.64，125.27，124.39，124.30，120.95，120.40，111.02，110.01，
104.80，85.35，85.27，66.93，52.51，49.63，48.15，元素分析：C27H26N4O，理论值C：76.75，H：
6.20，N：13.26；实测值：C：77.04，H：6.57，N：12.51；ESI-MS：C27H26N4O，m/z：423.21（M+1）。
荧光探针1，5-MQDA的制备路线如下所示：
荧光探针1，5-MQDA的制备方法操作步骤如下所示：
将单取代或未取代的1，5-萘二胺（56.5mg，0.357mmol）溶解在5mL无水乙醇中，快速滴加6mL的6-（3-吗啉-1-丙炔）喹啉-2-甲醛（100mg，0.357mmol）的无水乙醇溶液，室温搅拌1小时后，快速加入硼氢化钠（140mg），反应过夜后，旋除乙醇，得到粗产物，用正己烷和乙酸乙酯的混合物作为洗脱剂，柱层析得到目标产物（产率42%），即荧光探针1，5-MQDA；
熔点：241.9-242.6℃，IR（film，cm-1）：3902.0，2922.2，2852.7，2358.9，2339.7，
1622.1，1585.5，1527.6，1454.3，1431.2，1330.9，1288.5，1112.9，1004.9，860.3，873.1，
760.0，731.0，1HNMR（CDCl3，300MHz，ppmδ=2.71（t，4H）；3.60（s，2H）；3.82（t，4H）；4.16（s，
2H）；4.78（s，2H）；6.10（s，1H）；6.64（d，J=8.0Hz，1H）；6.84（d，J=7.4Hz，1H）；7.23（d，J=
8.4Hz，1H）；7.32（t，1H）；7.36（t，1H）；7.48（d，J=8.5Hz，1H）；7.55（d，J=8.5Hz，1H）；7.77（dd，J1=1.6Hz，J2=8.7Hz，1H）；7.93（d，J=1.6Hz，1H）；8.06（d，J=8.6Hz，1H）；8.11（d，J=
8.7Hz，1H），13CNMR（CDCl3，75MHz，ppm）δ=158.99，146.91，143.46，142.73，136.25，132.49，
131.09，129.13，127.09，125.64，125.27，124.39，124.30，120.95，120.40，111.02，110.01，
104.80，85.35，85.27，66.93，52.51，49.63，48.15，元素分析：C27H26N4O，理论值C：76.75，H：
6.20，N：13.26；实测值：C：77.04，H：6.57，N：12.51；ESI-MS：C27H26N4O，m/z：423.21（M+1）。
[0015] 实施例一：一种细胞溶酶体中次氯酸根的双光子激发荧光成像方法，检测次氯酸根阴离子的荧光
探针1，5-MQDA具有如下结构：
R是氢原子，或C1-C8的烃基（烷基、含杂原子的烃基、含芳环的烃基、含杂芳环的烃基）；
荧光探针1，5-MQDA的制备路线如下所示：
荧光探针1，5-MQDA的制备方法操作步骤如下所示：
将单取代或未取代的1，5-萘二胺（56.5mg，0.357mmol）溶解在5mL无水乙醇中，快速滴加6mL的6-（3-吗啉-1-丙炔）喹啉-2-甲醛（100mg，0.357mmol）的无水乙醇溶液，室温搅拌1小时后，快速加入硼氢化钠（140mg），反应过夜后，旋除乙醇，得到粗产物，用正己烷和乙酸乙酯的混合物作为洗脱剂，柱层析得到目标产物（产率42%），即荧光探针1，5-MQDA；
熔点：241.9-242.6℃，IR（film，cm-1）：3902.0，2922.2，2852.7，2358.9，2339.7，
1622.1，1585.5，1527.6，1454.3，1431.2，1330.9，1288.5，1112.9，1004.9，860.3，873.1，
760.0，731.0，1HNMR（CDCl3，300MHz，ppm）δ=2.71（t，4H）；3.60（s，2H）；3.82（t，4H）；4.16（s，
2H）；4.78（s，2H）；6.10（s，1H）；6.64（d，J=8.0Hz，1H）；6.84（d，J=7.4Hz，1H）；7.23（d，J=
8.4Hz，1H）；7.32（t，1H）；7.36（t，1H）；7.48（d，J=8.5Hz，1H）；7.55（d，J=8.5Hz，1H）；7.77（dd，J1=1.6Hz，J2=8.7Hz，1H）；7.93（d，J=1.6Hz，1H）；8.06（d，J=8.6Hz，1H）；8.11（d，J=
8.7Hz，1H），13CNMR（CDCl3，75MHz，ppm）δ=158.99，146.91，143.46，142.73，136.25，132.49，
131.09，129.13，127.09，125.64，125.27，124.39，124.30，120.95，120.40，111.02，110.01，
104.80，85.35，85.27，66.93，52.51，49.63，48.15，元素分析：C27H26N4O，理论值C：76.75，H：
6.20，N：13.26；实测值：C：77.04，H：6.57，N：12.51；ESI-MS：C27H26N4O，m/z：423.21（M+1）。
探针1，5-MQDA具有如下结构：
R是氢原子，或C1-C8的烃基（烷基、含杂原子的烃基、含芳环的烃基、含杂芳环的烃基）；
荧光探针1，5-MQDA的制备路线如下所示：
荧光探针1，5-MQDA的制备方法操作步骤如下所示：
将单取代或未取代的1，5-萘二胺（56.5mg，0.357mmol）溶解在5mL无水乙醇中，快速滴加6mL的6-（3-吗啉-1-丙炔）喹啉-2-甲醛（100mg，0.357mmol）的无水乙醇溶液，室温搅拌1小时后，快速加入硼氢化钠（140mg），反应过夜后，旋除乙醇，得到粗产物，用正己烷和乙酸乙酯的混合物作为洗脱剂，柱层析得到目标产物（产率42%），即荧光探针1，5-MQDA；
熔点：241.9-242.6℃，IR（film，cm-1）：3902.0，2922.2，2852.7，2358.9，2339.7，
1622.1，1585.5，1527.6，1454.3，1431.2，1330.9，1288.5，1112.9，1004.9，860.3，873.1，
760.0，731.0，1HNMR（CDCl3，300MHz，ppm）δ=2.71（t，4H）；3.60（s，2H）；3.82（t，4H）；4.16（s，
2H）；4.78（s，2H）；6.10（s，1H）；6.64（d，J=8.0Hz，1H）；6.84（d，J=7.4Hz，1H）；7.23（d，J=
8.4Hz，1H）；7.32（t，1H）；7.36（t，1H）；7.48（d，J=8.5Hz，1H）；7.55（d，J=8.5Hz，1H）；7.77（dd，J1=1.6Hz，J2=8.7Hz，1H）；7.93（d，J=1.6Hz，1H）；8.06（d，J=8.6Hz，1H）；8.11（d，J=
8.7Hz，1H），13CNMR（CDCl3，75MHz，ppm）δ=158.99，146.91，143.46，142.73，136.25，132.49，
131.09，129.13，127.09，125.64，125.27，124.39，124.30，120.95，120.40，111.02，110.01，
104.80，85.35，85.27，66.93，52.51，49.63，48.15，元素分析：C27H26N4O，理论值C：76.75，H：
6.20，N：13.26；实测值：C：77.04，H：6.57，N：12.51；ESI-MS：C27H26N4O，m/z：423.21（M+1）。
[0016] 实施例二：在实施例一中再加入下述工序：
在荧光探针1，5-MQDA的制备过程中探针1，5-MQDA与ClO-作用后，在334nm波长处激发，在430nm处产生特定的荧光发射峰，且激发和发射的狭缝宽度分别设定为3和5nm，所有的光谱测试都是在25℃下进行的。
在荧光探针1，5-MQDA的制备过程中探针1，5-MQDA与ClO-作用后，在334nm波长处激发，在430nm处产生特定的荧光发射峰，且激发和发射的狭缝宽度分别设定为3和5nm，所有的光谱测试都是在25℃下进行的。
[0017] 一种细胞溶酶体中次氯酸根的双光子激发荧光成像方法，检测次氯酸根阴离子的荧光探针1，5-MQDA具有如下结构：R是氢原子，或C1-C8的烃基（烷基、含杂原子的烃基、含芳环的烃基、含杂芳环的烃基）；
荧光探针1，5-MQDA的制备路线如下所示：
荧光探针1，5-MQDA的制备方法操作步骤如下所示：
将单取代或未取代的1，5-萘二胺（56.5mg，0.357mmol）溶解在5mL无水乙醇中，快速滴加6mL的6-（3-吗啉-1-丙炔）喹啉-2-甲醛（100mg，0.357mmol）的无水乙醇溶液，室温搅拌1小时后，快速加入硼氢化钠（140mg），反应过夜后，旋除乙醇，得到粗产物，用正己烷和乙酸乙酯的混合物作为洗脱剂，柱层析得到目标产物（产率42%），即荧光探针1，5-MQDA；
熔点：241.9-242.6℃，IR（film，cm-1）：3902.0，2922.2，2852.7，2358.9，2339.7，
1622.1，1585.5，1527.6，1454.3，1431.2，1330.9，1288.5，1112.9，1004.9，860.3，873.1，
760.0，731.0，1HNMR（CDCl3，300MHz，ppm）δ=2.71（t，4H）；3.60（s，2H）；3.82（t，4H）；4.16（s，
2H）；4.78（s，2H）；6.10（s，1H）；6.64（d，J=8.0Hz，1H）；6.84（d，J=7.4Hz，1H）；7.23（d，J=
8.4Hz，1H）；7.32（t，1H）；7.36（t，1H）；7.48（d，J=8.5Hz，1H）；7.55（d，J=8.5Hz，1H）；7.77（dd，J1=1.6Hz，J2=8.7Hz，1H）；7.93（d，J=1.6Hz，1H）；8.06（d，J=8.6Hz，1H）；8.11（d，J=
8.7Hz，1H），13CNMR（CDCl3，75MHz，ppm）δ=158.99，146.91，143.46，142.73，136.25，132.49，
131.09，129.13，127.09，125.64，125.27，124.39，124.30，120.95，120.40，111.02，110.01，
104.80，85.35，85.27，66.93，52.51，49.63，48.15，元素分析：C27H26N4O，理论值C：76.75，H：
6.20，N：13.26；实测值：C：77.04，H：6.57，N：12.51；ESI-MS：C27H26N4O，m/z：423.21（M+1）。
荧光探针1，5-MQDA的制备路线如下所示：
荧光探针1，5-MQDA的制备方法操作步骤如下所示：
将单取代或未取代的1，5-萘二胺（56.5mg，0.357mmol）溶解在5mL无水乙醇中，快速滴加6mL的6-（3-吗啉-1-丙炔）喹啉-2-甲醛（100mg，0.357mmol）的无水乙醇溶液，室温搅拌1小时后，快速加入硼氢化钠（140mg），反应过夜后，旋除乙醇，得到粗产物，用正己烷和乙酸乙酯的混合物作为洗脱剂，柱层析得到目标产物（产率42%），即荧光探针1，5-MQDA；
熔点：241.9-242.6℃，IR（film，cm-1）：3902.0，2922.2，2852.7，2358.9，2339.7，
1622.1，1585.5，1527.6，1454.3，1431.2，1330.9，1288.5，1112.9，1004.9，860.3，873.1，
760.0，731.0，1HNMR（CDCl3，300MHz，ppm）δ=2.71（t，4H）；3.60（s，2H）；3.82（t，4H）；4.16（s，
2H）；4.78（s，2H）；6.10（s，1H）；6.64（d，J=8.0Hz，1H）；6.84（d，J=7.4Hz，1H）；7.23（d，J=
8.4Hz，1H）；7.32（t，1H）；7.36（t，1H）；7.48（d，J=8.5Hz，1H）；7.55（d，J=8.5Hz，1H）；7.77（dd，J1=1.6Hz，J2=8.7Hz，1H）；7.93（d，J=1.6Hz，1H）；8.06（d，J=8.6Hz，1H）；8.11（d，J=
8.7Hz，1H），13CNMR（CDCl3，75MHz，ppm）δ=158.99，146.91，143.46，142.73，136.25，132.49，
131.09，129.13，127.09，125.64，125.27，124.39，124.30，120.95，120.40，111.02，110.01，
104.80，85.35，85.27，66.93，52.51，49.63，48.15，元素分析：C27H26N4O，理论值C：76.75，H：
6.20，N：13.26；实测值：C：77.04，H：6.57，N：12.51；ESI-MS：C27H26N4O，m/z：423.21（M+1）。
[0018] 实施例三：在实施例二中再加入下述工序：
在探针1，5-MQDA对多种分析物种的选择性荧光应答过程中，当探针1，5-MQDA的浓度为
10.0μM时，分析物包括：过氧化氢H2O2、单线态氧1O2、羟基自由基·OH、过氧化亚硝酰ONO2-、次氯酸钠NaOCl，它们的浓度均为100.0μM，每一种分析物加入测试体系后，经充分震荡混合后立即进行相应的荧光光谱测试，结果如图1所示，在所测试的ROS物种中，只有NaOCl能够使探针1，5-MQDA在430nm处产生强烈的荧光发射信号，而其它测试的ROS物种则不产生这个作用，且NaOCl与探针1，5-MQDA能发生专一性的作用，探针1，5-MQDA可以在水溶液体系中选择性识别NaOCl，并产生特定的荧光发射信号。
在探针1，5-MQDA对多种分析物种的选择性荧光应答过程中，当探针1，5-MQDA的浓度为
10.0μM时，分析物包括：过氧化氢H2O2、单线态氧1O2、羟基自由基·OH、过氧化亚硝酰ONO2-、次氯酸钠NaOCl，它们的浓度均为100.0μM，每一种分析物加入测试体系后，经充分震荡混合后立即进行相应的荧光光谱测试，结果如图1所示，在所测试的ROS物种中，只有NaOCl能够使探针1，5-MQDA在430nm处产生强烈的荧光发射信号，而其它测试的ROS物种则不产生这个作用，且NaOCl与探针1，5-MQDA能发生专一性的作用，探针1，5-MQDA可以在水溶液体系中选择性识别NaOCl，并产生特定的荧光发射信号。
[0019] 一种细胞溶酶体中次氯酸根的双光子激发荧光成像方法，检测次氯酸根阴离子的荧光探针1，5-MQDA具有如下结构：R是氢原子，或C1-C8的烃基（烷基、含杂原子的烃基、含芳环的烃基、含杂芳环的烃基）；
荧光探针1，5-MQDA的制备路线如下所示：
荧光探针1，5-MQDA的制备方法操作步骤如下所示：
将单取代或未取代的1，5-萘二胺（56.5mg，0.357mmol）溶解在5mL无水乙醇中，快速滴加6mL的6-（3-吗啉-1-丙炔）喹啉-2-甲醛（100mg，0.357mmol）的无水乙醇溶液，室温搅拌1小时后，快速加入硼氢化钠（140mg），反应过夜后，旋除乙醇，得到粗产物，用正己烷和乙酸乙酯的混合物作为洗脱剂，柱层析得到目标产物（产率42%），即荧光探针1，5-MQDA；
熔点：241.9-242.6℃，IR（film，cm-1）：3902.0，2922.2，2852.7，2358.9，2339.7，
1622.1，1585.5，1527.6，1454.3，1431.2，1330.9，1288.5，1112.9，1004.9，860.3，873.1，
760.0，731.0，1HNMR（CDCl3，300MHz，ppm）δ=2.71（t，4H）；3.60（s，2H）；3.82（t，4H）；4.16（s，
2H）；4.78（s，2H）；6.10（s，1H）；6.64（d，J=8.0Hz，1H）；6.84（d，J=7.4Hz，1H）；7.23（d，J=
8.4Hz，1H）；7.32（t，1H）；7.36（t，1H）；7.48（d，J=8.5Hz，1H）；7.55（d，J=8.5Hz，1H）；7.77（dd，J1=1.6Hz，J2=8.7Hz，1H）；7.93（d，J=1.6Hz，1H）；8.06（d，J=8.6Hz，1H）；8.11（d，J=
8.7Hz，1H），13CNMR（CDCl3，75MHz，ppm）δ=158.99，146.91，143.46，142.73，136.25，132.49，
131.09，129.13，127.09，125.64，125.27，124.39，124.30，120.95，120.40，111.02，110.01，
104.80，85.35，85.27，66.93，52.51，49.63，48.15，元素分析：C27H26N4O，理论值C：76.75，H：
6.20，N：13.26；实测值：C：77.04，H：6.57，N：12.51；ESI-MS：C27H26N4O，m/z：423.21（M+1）。
荧光探针1，5-MQDA的制备路线如下所示：
荧光探针1，5-MQDA的制备方法操作步骤如下所示：
将单取代或未取代的1，5-萘二胺（56.5mg，0.357mmol）溶解在5mL无水乙醇中，快速滴加6mL的6-（3-吗啉-1-丙炔）喹啉-2-甲醛（100mg，0.357mmol）的无水乙醇溶液，室温搅拌1小时后，快速加入硼氢化钠（140mg），反应过夜后，旋除乙醇，得到粗产物，用正己烷和乙酸乙酯的混合物作为洗脱剂，柱层析得到目标产物（产率42%），即荧光探针1，5-MQDA；
熔点：241.9-242.6℃，IR（film，cm-1）：3902.0，2922.2，2852.7，2358.9，2339.7，
1622.1，1585.5，1527.6，1454.3，1431.2，1330.9，1288.5，1112.9，1004.9，860.3，873.1，
760.0，731.0，1HNMR（CDCl3，300MHz，ppm）δ=2.71（t，4H）；3.60（s，2H）；3.82（t，4H）；4.16（s，
2H）；4.78（s，2H）；6.10（s，1H）；6.64（d，J=8.0Hz，1H）；6.84（d，J=7.4Hz，1H）；7.23（d，J=
8.4Hz，1H）；7.32（t，1H）；7.36（t，1H）；7.48（d，J=8.5Hz，1H）；7.55（d，J=8.5Hz，1H）；7.77（dd，J1=1.6Hz，J2=8.7Hz，1H）；7.93（d，J=1.6Hz，1H）；8.06（d，J=8.6Hz，1H）；8.11（d，J=
8.7Hz，1H），13CNMR（CDCl3，75MHz，ppm）δ=158.99，146.91，143.46，142.73，136.25，132.49，
131.09，129.13，127.09，125.64，125.27，124.39，124.30，120.95，120.40，111.02，110.01，
104.80，85.35，85.27，66.93，52.51，49.63，48.15，元素分析：C27H26N4O，理论值C：76.75，H：
6.20，N：13.26；实测值：C：77.04，H：6.57，N：12.51；ESI-MS：C27H26N4O，m/z：423.21（M+1）。
[0020] 实施例四：在实施例三中再加入下述工序：
荧光探针1，5-MQDA在pH=7.0的水体系过程中，将2.0μM浓度的探针1，5-MQDA为加入浓
度为100.0μM的NaOCl，快速充分振荡1分钟后，立即开始计时，每间隔1分钟即时测定体系在
430nm处荧光发射强度，结果如图2所示，体系在430nm处的荧光发射强度在测试开始时就已远远大于探针自身的荧光强度，接近饱和，说明探针与次氯酸钠响应时间小于1分钟。
荧光探针1，5-MQDA在pH=7.0的水体系过程中，将2.0μM浓度的探针1，5-MQDA为加入浓
度为100.0μM的NaOCl，快速充分振荡1分钟后，立即开始计时，每间隔1分钟即时测定体系在
430nm处荧光发射强度，结果如图2所示，体系在430nm处的荧光发射强度在测试开始时就已远远大于探针自身的荧光强度，接近饱和，说明探针与次氯酸钠响应时间小于1分钟。
[0021] 细胞溶酶体中次氯酸根的双光子激发荧光成像方法，检测次氯酸根阴离子的荧光探针1，5-MQDA具有如下结构：R是氢原子，或C1-C8的烃基（烷基、含杂原子的烃基、含芳环的烃基、含杂芳环的烃基）；
荧光探针1，5-MQDA的制备路线如下所示：
荧光探针1，5-MQDA的制备方法操作步骤如下所示：
将单取代或未取代的1，5-萘二胺（56.5mg，0.357mmol）溶解在5mL无水乙醇中，快速滴加6mL的6-（3-吗啉-1-丙炔）喹啉-2-甲醛（100mg，0.357mmol）的无水乙醇溶液，室温搅拌1小时后，快速加入硼氢化钠（140mg），反应过夜后，旋除乙醇，得到粗产物，用正己烷和乙酸乙酯的混合物作为洗脱剂，柱层析得到目标产物（产率42%），即荧光探针1，5-MQDA；
熔点：241.9-242.6℃，IR（film，cm-1）：3902.0，2922.2，2852.7，2358.9，2339.7，
1622.1，1585.5，1527.6，1454.3，1431.2，1330.9，1288.5，1112.9，1004.9，860.3，873.1，
760.0，731.0，1HNMR（CDCl3，300MHz，ppm）δ=2.71（t，4H）；3.60（s，2H）；3.82（t，4H）；4.16（s，
2H）；4.78（s，2H）；6.10（s，1H）；6.64（d，J=8.0Hz，1H）；6.84（d，J=7.4Hz，1H）；7.23（d，J=
8.4Hz，1H）；7.32（t，1H）；7.36（t，1H）；7.48（d，J=8.5Hz，1H）；7.55（d，J=8.5Hz，1H）；7.77（dd，J1=1.6Hz，J2=8.7Hz，1H）；7.93（d，J=1.6Hz，1H）；8.06（d，J=8.6Hz，1H）；8.11（d，J=
8.7Hz，1H），13CNMR（CDCl3，75MHz，ppm）δ=158.99，146.91，143.46，142.73，136.25，132.49，
131.09，129.13，127.09，125.64，125.27，124.39，124.30，120.95，120.40，111.02，110.01，
104.80，85.35，85.27，66.93，52.51，49.63，48.15，元素分析：C27H26N4O，理论值C：76.75，H：
6.20，N：13.26；实测值：C：77.04，H：6.57，N：12.51；ESI-MS：C27H26N4O，m/z：423.21（M+1）。
荧光探针1，5-MQDA的制备路线如下所示：
荧光探针1，5-MQDA的制备方法操作步骤如下所示：
将单取代或未取代的1，5-萘二胺（56.5mg，0.357mmol）溶解在5mL无水乙醇中，快速滴加6mL的6-（3-吗啉-1-丙炔）喹啉-2-甲醛（100mg，0.357mmol）的无水乙醇溶液，室温搅拌1小时后，快速加入硼氢化钠（140mg），反应过夜后，旋除乙醇，得到粗产物，用正己烷和乙酸乙酯的混合物作为洗脱剂，柱层析得到目标产物（产率42%），即荧光探针1，5-MQDA；
熔点：241.9-242.6℃，IR（film，cm-1）：3902.0，2922.2，2852.7，2358.9，2339.7，
1622.1，1585.5，1527.6，1454.3，1431.2，1330.9，1288.5，1112.9，1004.9，860.3，873.1，
760.0，731.0，1HNMR（CDCl3，300MHz，ppm）δ=2.71（t，4H）；3.60（s，2H）；3.82（t，4H）；4.16（s，
2H）；4.78（s，2H）；6.10（s，1H）；6.64（d，J=8.0Hz，1H）；6.84（d，J=7.4Hz，1H）；7.23（d，J=
8.4Hz，1H）；7.32（t，1H）；7.36（t，1H）；7.48（d，J=8.5Hz，1H）；7.55（d，J=8.5Hz，1H）；7.77（dd，J1=1.6Hz，J2=8.7Hz，1H）；7.93（d，J=1.6Hz，1H）；8.06（d，J=8.6Hz，1H）；8.11（d，J=
8.7Hz，1H），13CNMR（CDCl3，75MHz，ppm）δ=158.99，146.91，143.46，142.73，136.25，132.49，
131.09，129.13，127.09，125.64，125.27，124.39，124.30，120.95，120.40，111.02，110.01，
104.80，85.35，85.27，66.93，52.51，49.63，48.15，元素分析：C27H26N4O，理论值C：76.75，H：
6.20，N：13.26；实测值：C：77.04，H：6.57，N：12.51；ESI-MS：C27H26N4O，m/z：423.21（M+1）。
[0022] 实施例五：在实施例四中再加入下述工序：
在ClO-浓度对探针1，5-MQDA（2.0μM）荧光发射强度的影响及检测限时，pH=7.0条件下，固定探针1，5-MQDA的浓度为2.0μM，分别加入浓度为0-50.0μM的NaOCl水溶液（每组NaOCl浓度以5.0μM递增），经充分震荡混合后，测定不同组的荧光光谱，参见图3，在未加入NaClO时，体系几乎没有荧光发射信号，随着溶液中NaClO浓度的增加，体系在430nm处的荧光强度不断增加。
在ClO-浓度对探针1，5-MQDA（2.0μM）荧光发射强度的影响及检测限时，pH=7.0条件下，固定探针1，5-MQDA的浓度为2.0μM，分别加入浓度为0-50.0μM的NaOCl水溶液（每组NaOCl浓度以5.0μM递增），经充分震荡混合后，测定不同组的荧光光谱，参见图3，在未加入NaClO时，体系几乎没有荧光发射信号，随着溶液中NaClO浓度的增加，体系在430nm处的荧光强度不断增加。
[0023] 一种细胞溶酶体中次氯酸根的双光子激发荧光成像方法，检测次氯酸根阴离子的荧光探针1，5-MQDA具有如下结构：R是氢原子，或C1-C8的烃基（烷基、含杂原子的烃基、含芳环的烃基、含杂芳环的烃基）；
荧光探针1，5-MQDA的制备路线如下所示：
荧光探针1，5-MQDA的制备方法操作步骤如下所示：
将单取代或未取代的1，5-萘二胺（56.5mg，0.357mmol）溶解在5mL无水乙醇中，快速滴加6mL的6-（3-吗啉-1-丙炔）喹啉-2-甲醛（100mg，0.357mmol）的无水乙醇溶液，室温搅拌1小时后，快速加入硼氢化钠（140mg），反应过夜后，旋除乙醇，得到粗产物，用正己烷和乙酸乙酯的混合物作为洗脱剂，柱层析得到目标产物（产率42%），即荧光探针1，5-MQDA；
熔点：241.9-242.6℃，IR（film，cm-1）：3902.0，2922.2，2852.7，2358.9，2339.7，
1622.1，1585.5，1527.6，1454.3，1431.2，1330.9，1288.5，1112.9，1004.9，860.3，873.1，
760.0，731.0，1HNMR（CDCl3，300MHz，ppm）δ=2.71（t，4H）；3.60（s，2H）；3.82（t，4H）；4.16（s，
2H）；4.78（s，2H）；6.10（s，1H）；6.64（d，J=8.0Hz，1H）；6.84（d，J=7.4Hz，1H）；7.23（d，J=
8.4Hz，1H）；7.32（t，1H）；7.36（t，1H）；7.48（d，J=8.5Hz，1H）；7.55（d，J=8.5Hz，1H）；7.77（dd，J1=1.6Hz，J2=8.7Hz，1H）；7.93（d，J=1.6Hz，1H）；8.06（d，J=8.6Hz，1H）；8.11（d，J=
8.7Hz，1H），13CNMR（CDCl3，75MHz，ppm）δ=158.99，146.91，143.46，142.73，136.25，132.49，
131.09，129.13，127.09，125.64，125.27，124.39，124.30，120.95，120.40，111.02，110.01，
104.80，85.35，85.27，66.93，52.51，49.63，48.15，元素分析：C27H26N4O，理论值C：76.75，H：
6.20，N：13.26；实测值：C：77.04，H：6.57，N：12.51；ESI-MS：C27H26N4O，m/z：423.21（M+1）。
荧光探针1，5-MQDA的制备路线如下所示：
荧光探针1，5-MQDA的制备方法操作步骤如下所示：
将单取代或未取代的1，5-萘二胺（56.5mg，0.357mmol）溶解在5mL无水乙醇中，快速滴加6mL的6-（3-吗啉-1-丙炔）喹啉-2-甲醛（100mg，0.357mmol）的无水乙醇溶液，室温搅拌1小时后，快速加入硼氢化钠（140mg），反应过夜后，旋除乙醇，得到粗产物，用正己烷和乙酸乙酯的混合物作为洗脱剂，柱层析得到目标产物（产率42%），即荧光探针1，5-MQDA；
熔点：241.9-242.6℃，IR（film，cm-1）：3902.0，2922.2，2852.7，2358.9，2339.7，
1622.1，1585.5，1527.6，1454.3，1431.2，1330.9，1288.5，1112.9，1004.9，860.3，873.1，
760.0，731.0，1HNMR（CDCl3，300MHz，ppm）δ=2.71（t，4H）；3.60（s，2H）；3.82（t，4H）；4.16（s，
2H）；4.78（s，2H）；6.10（s，1H）；6.64（d，J=8.0Hz，1H）；6.84（d，J=7.4Hz，1H）；7.23（d，J=
8.4Hz，1H）；7.32（t，1H）；7.36（t，1H）；7.48（d，J=8.5Hz，1H）；7.55（d，J=8.5Hz，1H）；7.77（dd，J1=1.6Hz，J2=8.7Hz，1H）；7.93（d，J=1.6Hz，1H）；8.06（d，J=8.6Hz，1H）；8.11（d，J=
8.7Hz，1H），13CNMR（CDCl3，75MHz，ppm）δ=158.99，146.91，143.46，142.73，136.25，132.49，
131.09，129.13，127.09，125.64，125.27，124.39，124.30，120.95，120.40，111.02，110.01，
104.80，85.35，85.27，66.93，52.51，49.63，48.15，元素分析：C27H26N4O，理论值C：76.75，H：
6.20，N：13.26；实测值：C：77.04，H：6.57，N：12.51；ESI-MS：C27H26N4O，m/z：423.21（M+1）。
[0024] 实施例六：在实施例五中再加入下述工序：
探针1，5-MQDA在细胞内溶酶体定位时过程中，Raw264.7细胞用脂多糖LPS（100μg/mL）预处理30h，更换培养基，加入市售LysoTracker（50nM）孵育10min，再加入探针1，5-MQDA（2.0μM）共同孵育20min，成像，640nm与561nm激发，收集蓝、红通道荧光，如图4所示。
探针1，5-MQDA在细胞内溶酶体定位时过程中，Raw264.7细胞用脂多糖LPS（100μg/mL）预处理30h，更换培养基，加入市售LysoTracker（50nM）孵育10min，再加入探针1，5-MQDA（2.0μM）共同孵育20min，成像，640nm与561nm激发，收集蓝、红通道荧光，如图4所示。
[0025] 一种细胞溶酶体中次氯酸根的双光子激发荧光成像方法，检测次氯酸根阴离子的荧光探针1，5-MQDA具有如下结构：R是氢原子，或C1-C8的烃基（烷基、含杂原子的烃基、含芳环的烃基、含杂芳环的烃基）；
荧光探针1，5-MQDA的制备路线如下所示：
荧光探针1，5-MQDA的制备方法操作步骤如下所示：
将单取代或未取代的1，5-萘二胺（56.5mg，0.357mmol）溶解在5mL无水乙醇中，快速滴加6mL的6-（3-吗啉-1-丙炔）喹啉-2-甲醛（100mg，0.357mmol）的无水乙醇溶液，室温搅拌1小时后，快速加入硼氢化钠（140mg），反应过夜后，旋除乙醇，得到粗产物，用正己烷和乙酸乙酯的混合物作为洗脱剂，柱层析得到目标产物（产率42%），即荧光探针1，5-MQDA；
熔点：241.9-242.6℃，IR（film，cm-1）：3902.0，2922.2，2852.7，2358.9，2339.7，
1622.1，1585.5，1527.6，1454.3，1431.2，1330.9，1288.5，1112.9，1004.9，860.3，873.1，
760.0，731.0，1HNMR（CDCl3，300MHz，ppm）δ=2.71（t，4H）；3.60（s，2H）；3.82（t，4H）；4.16（s，
2H）；4.78（s，2H）；6.10（s，1H）；6.64（d，J=8.0Hz，1H）；6.84（d，J=7.4Hz，1H）；7.23（d，J=
8.4Hz，1H）；7.32（t，1H）；7.36（t，1H）；7.48（d，J=8.5Hz，1H）；7.55（d，J=8.5Hz，1H）；7.77（dd，J1=1.6Hz，J2=8.7Hz，1H）；7.93（d，J=1.6Hz，1H）；8.06（d，J=8.6Hz，1H）；8.11（d，J=
8.7Hz，1H），13CNMR（CDCl3，75MHz，ppm）δ=158.99，146.91，143.46，142.73，136.25，132.49，
131.09，129.13，127.09，125.64，125.27，124.39，124.30，120.95，120.40，111.02，110.01，
104.80，85.35，85.27，66.93，52.51，49.63，48.15，元素分析：C27H26N4O，理论值C：76.75，H：
6.20，N：13.26；实测值：C：77.04，H：6.57，N：12.51；ESI-MS：C27H26N4O，m/z：423.21（M+1）。
荧光探针1，5-MQDA的制备路线如下所示：
荧光探针1，5-MQDA的制备方法操作步骤如下所示：
将单取代或未取代的1，5-萘二胺（56.5mg，0.357mmol）溶解在5mL无水乙醇中，快速滴加6mL的6-（3-吗啉-1-丙炔）喹啉-2-甲醛（100mg，0.357mmol）的无水乙醇溶液，室温搅拌1小时后，快速加入硼氢化钠（140mg），反应过夜后，旋除乙醇，得到粗产物，用正己烷和乙酸乙酯的混合物作为洗脱剂，柱层析得到目标产物（产率42%），即荧光探针1，5-MQDA；
熔点：241.9-242.6℃，IR（film，cm-1）：3902.0，2922.2，2852.7，2358.9，2339.7，
1622.1，1585.5，1527.6，1454.3，1431.2，1330.9，1288.5，1112.9，1004.9，860.3，873.1，
760.0，731.0，1HNMR（CDCl3，300MHz，ppm）δ=2.71（t，4H）；3.60（s，2H）；3.82（t，4H）；4.16（s，
2H）；4.78（s，2H）；6.10（s，1H）；6.64（d，J=8.0Hz，1H）；6.84（d，J=7.4Hz，1H）；7.23（d，J=
8.4Hz，1H）；7.32（t，1H）；7.36（t，1H）；7.48（d，J=8.5Hz，1H）；7.55（d，J=8.5Hz，1H）；7.77（dd，J1=1.6Hz，J2=8.7Hz，1H）；7.93（d，J=1.6Hz，1H）；8.06（d，J=8.6Hz，1H）；8.11（d，J=
8.7Hz，1H），13CNMR（CDCl3，75MHz，ppm）δ=158.99，146.91，143.46，142.73，136.25，132.49，
131.09，129.13，127.09，125.64，125.27，124.39，124.30，120.95，120.40，111.02，110.01，
104.80，85.35，85.27，66.93，52.51，49.63，48.15，元素分析：C27H26N4O，理论值C：76.75，H：
6.20，N：13.26；实测值：C：77.04，H：6.57，N：12.51；ESI-MS：C27H26N4O，m/z：423.21（M+1）。
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