诊断和治疗血管相关黄斑病及其症状的方法
阅读：835发布：2020-12-07
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1.一种治疗受试者的血管相关黄斑病的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的弹性蛋白酶抑制剂。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述弹性蛋白酶抑制剂是α-1抗胰蛋白酶、ZD0892、SPIPm2、ONO-5046、1,4-双苯基-1,4-二氢吡啶、2-羟基二氢吡啶和2-氨基二氢吡啶、多拉司他汀或多拉司他汀类似物，或鞘丝藻抑制素或鞘丝藻抑制素类似物。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述弹性蛋白酶抑制剂抑制HTRA1的弹性蛋白酶活性。
4.根据权利要求3所述的方法，其中所述弹性蛋白酶抑制剂是DPMFKLboroV。
5.一种在受试者中治疗(i)血管相关黄斑病；(ii)治疗与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(iii)治疗严重黄斑病或晚期黄斑病；或(iv)使异常脉络膜毛细血管小叶消退的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的弹性蛋白酶抑制剂。
6.根据权利要求1所述的方法，其中所述弹性蛋白酶抑制剂是α-1抗胰蛋白酶、ZD0892、SPIPm2、ONO-5046、1,4-双苯基-1,4-二氢吡啶、2-羟基二氢吡啶和2-氨基二氢吡啶、多拉司他汀或多拉司他汀类似物，或鞘丝藻抑制素或鞘丝藻抑制素类似物。
7.根据权利要求1所述的方法，其中所述弹性蛋白酶抑制剂抑制HTRA1的弹性蛋白酶活性。
8.根据权利要求3所述的方法，其中所述弹性蛋白酶抑制剂是DPMFKLboroV。
9.一种在受试者中治疗(i)血管相关黄斑病；(ii)治疗与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(iii)治疗严重黄斑病或晚期黄斑病；或(iv)使异常脉络膜毛细血管小叶消退的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的弹性蛋白酶调节剂。
10.根据权利要求5所述的方法，其中所述弹性蛋白酶调节剂是α-1抗胰蛋白酶、ZD0892、SPIPm2、ONO-5046、1,4-双苯基-1,4-二氢吡啶、2-羟基二氢吡啶和2-氨基二氢吡啶、多拉司他汀或多拉司他汀类似物，或鞘丝藻抑制素或鞘丝藻抑制素类似物。
11.根据权利要求5所述的方法，其中所述弹性蛋白酶调节剂抑制HTRA1的弹性蛋白酶活性。
12.根据权利要求7所述的方法，其中所述弹性蛋白酶调节剂是DPMFKLboroV。
13.根据权利要求7所述的方法，其中所述弹性蛋白酶调节剂与HTRA1的蛋白酶识别袋杂交或结合
14.根据权利要求1到9中任一项所述的方法，其中受试者是通过检测所述受试者的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶的存在来进行选择，其中异常脉络膜毛细血管小叶鉴定出患有(i)血管相关黄斑病；(ii)与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；或(iii)严重黄斑病或晚期黄斑病的受试者。
15.根据权利要求10所述的方法，其中通过以下方式来鉴定所述受试者的眼睛中存在的所述异常脉络膜毛细血管小叶：自发荧光成像技术、红外成像技术、光学相干断层摄影术（OCT）、Stratus光学相干断层摄影术（Stratus OCT）、傅里叶域光学相干断层摄影术（Fd-OCT）、双光子激发荧光（TPEF）成像、自适应光学扫描激光检眼镜检查法（AOSLO）、扫描激光检眼镜检查法、近红外成像联合谱域光学相干断层摄影术（SD-OCT）、彩色眼底摄影术、眼底自发荧光成像、无赤光成像、荧光素血管造影术、吲哚菁绿血管造影术、多焦视网膜电图（ERG）记录、微视野检查、彩色多普勒光学相干断层摄影术（CDOCT）、视野评估、Heidelberg Spectralis、Zeiss Cirrus、Topcon3D OCT2000、Optivue RTVue SD-OCT、Opko OCT SLO、NIDEK F-10或Optopol SOCT Copernicus HR。
16.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中通过以下步骤来选择受试者：确定所述受试者体内HTRA1、ARMS2或CFH基因中一个或多个SNP的身份，其中所述一个或多个SNP是(i)所述HTRA1基因中的rs11200638、所述HTRA1基因中的rs1049331、所述HTRA1基因中的rs2672587、所述ARMS2基因中的rs10490924、所述ARMS2基因中的rs3750848、所述CFH基因中的rs1061170，或所述CFH基因中的rs800292，或(ii)与(i)中的所述SNP存在连锁不平衡的SNP，其中所述SNP的一种或多种变体的存在鉴定出患有(i)血管相关黄斑病；(ii)与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(iii)严重黄斑病或晚期黄斑病；
或(iv)异常脉络膜毛细血管小叶的受试者。
17.一种筛选在受试者中可有效(i)治疗血管相关黄斑病；(ii)治疗与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(iii)治疗严重黄斑病或晚期黄斑病；或(iv)使异常脉络膜毛细血管小叶消退的药剂或药剂组合的方法，所述受试者被诊断据患有(i)、(ii)、(iii)或(iv)中的疾病或症状，所述方法包括：a)确定所述受试者的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶的数目或大小；b)向所述受试者施用药剂或药剂的组合并保持一定的时间间隔；c)在所述时间间隔之后，确定步骤a)中的所述眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶后续的数目或大小；以及d)将步骤c)中所述受试者的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶的所述数目或大小与步骤a)中所述受试者的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶的所述数目或大小相比较；
其中检测出步骤c)中所述受试者的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶的所述数目或大小没有增加则指示药剂或药剂的组合在所述受试者中可有效(i)治疗血管相关黄斑病；(ii)治疗与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(iii)治疗严重黄斑病或晚期黄斑病；或(iv)使异常脉络膜毛细血管小叶消退。
18.一种确定药剂在受试者中(i)治疗血管相关黄斑病；(ii)治疗与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(iii)治疗严重黄斑病或晚期黄斑病；(iv)使异常脉络膜毛细血管小叶消退的功效的方法，所述受试者被诊断据患有(i)、(ii)、(iii)或(iv)中的疾病或症状，所述方法包括：a)在开始治疗(1)血管相关黄斑病；(2)与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(3)严重黄斑病或晚期黄斑病；或(4)使异常脉络膜毛细血管小叶消退之前确定所述受试者的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶的数目；b)开始治疗(1)、(2)、(3)或(4)并保持一定的时间间隔；c)在所述时间间隔之后，确定步骤a)中的所述眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶后续的数目；以及d)将步骤c)中所述受试者的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶的所述数目与步骤a)中所述受试者的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶的所述数目相比较，其中检测出步骤c)中所述受试者的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶的所述数目有所增加则指示药剂在所述受试者中不能有效(i)治疗血管相关黄斑病；(ii)治疗与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(iii)治疗严重黄斑病或晚期黄斑病；或(iv)使异常脉络膜毛细血管小叶消退。
19.一种确定药剂在受试者中(i)治疗血管相关黄斑病；(ii)治疗与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(iii)治疗严重黄斑病或晚期黄斑病；(iv)使异常脉络膜毛细血管小叶消退的功效的方法，所述受试者被诊断据患有(i)、(ii)、(iii)或(iv)中的疾病或症状，所述方法包括：a)在开始治疗(1)血管相关黄斑病；(2)与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(3)严重黄斑病或晚期黄斑病；或(4)异常脉络膜毛细血管小叶之前确定所述受试者的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶的数目；b)开始治疗(1)、(2)、(3)或(4)并保持一定的时间间隔；c)在所述时间间隔之后，确定步骤a)中的所述眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶后续的数目；以及d)将步骤c)中所述受试者的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶的所述数目与步骤a)中所述受试者的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶的所述数目相比较，其中检测出步骤c)中所述受试者的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶的所述数目没有增加则指示药剂在所述受试者中可有效(i)治疗血管相关黄斑病；(ii)治疗与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(iii)治疗严重黄斑病或晚期黄斑病；或(iv)使异常脉络膜毛细血管小叶消退。
20.一种确定在受试者中进行的(i)治疗血管相关黄斑病；(ii)治疗与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(iii)治疗严重黄斑病或晚期黄斑病；或(iv)使异常脉络膜毛细血管小叶消退的治疗功效的方法，所述受试者被诊断据患有(i)、(ii)、(iii)或(iv)中的疾病或症状，所述方法包括：a)在开始治疗(1)血管相关黄斑病；(2)与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(3)严重黄斑病或晚期黄斑病；或(4)异常脉络膜毛细血管小叶之前确定所述受试者的眼睛中覆盖并且对应于所述脉络膜毛细血管小叶的RPE细胞的存在；b)开始治疗(1)、(2)、(3)或(4)并保持一定的时间间隔；c)在所述时间间隔之后，确定步骤a)中的所述眼睛中覆盖并且对应于所述脉络膜毛细血管小叶的RPE细胞的再生长或再生；以及d)将步骤c)中所述受试者的眼睛中覆盖并且对应于所述脉络膜毛细血管小叶的RPE细胞的所述再生长或再生与步骤a)中所述受试者的眼睛中覆盖并且对应于所述脉络膜毛细血管小叶的RPE细胞的所述再生长或再生相比较，其中检测出步骤c)中所述受试者的眼睛中覆盖并且对应于所述脉络膜毛细血管小叶的RPE细胞的所述再生长或再生没有发生变化或有所减少则指示药剂在所述受试者中可有效(i)治疗血管相关黄斑病；
(ii)治疗与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(iii)治疗严重黄斑病或晚期黄斑病；或(iv)使异常脉络膜毛细血管小叶消退。
21.一种确定在受试者中进行的(i)治疗血管相关黄斑病；(ii)治疗与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(iii)治疗严重黄斑病或晚期黄斑病；或(iv)使异常脉络膜毛细血管小叶消退的治疗功效的方法，所述受试者被诊断据患有(i)、(ii)、(iii)或(iv)中的疾病或症状，所述方法包括：a)在开始治疗(1)血管相关黄斑病；(2)与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(3)严重黄斑病或晚期黄斑病；或(4)异常脉络膜毛细血管小叶之前确定所述受试者的眼睛中覆盖并且对应于所述脉络膜毛细血管小叶的RPE细胞的存在；b)开始治疗(1)、(2)、(3)或(4)并保持一定的时间间隔；c)在所述时间间隔之后，确定步骤a)中的所述眼睛中覆盖并且对应于所述脉络膜毛细血管小叶的RPE细胞的再生长或再生；以及d)将步骤c)中所述受试者的眼睛中覆盖并且对应于所述脉络膜毛细血管小叶的RPE细胞的所述再生长或再生与步骤a)中所述受试者的眼睛中覆盖并且对应于所述脉络膜毛细血管小叶的RPE细胞的所述再生长或再生相比较，其中检测出步骤c)中所述受试者的眼睛中覆盖并且对应于所述脉络膜毛细血管小叶的RPE细胞的所述再生长或再生有所增加则指示药剂在所述受试者中不能有效(i)治疗血管相关黄斑病；(ii)治疗与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(iii)治疗严重黄斑病或晚期黄斑病；或(iv)使异常脉络膜毛细血管小叶消退。
22.根据权利要求20或21所述的方法，其中通过以下方式来确定RPE细胞的所述再生长或再生：自发荧光成像技术、红外成像技术、光学相干断层摄影术（OCT）、Stratus光学相干断层摄影术（Stratus OCT）、傅里叶域光学相干断层摄影术（Fd-OCT）、双光子激发荧光（TPEF）成像、自适应光学扫描激光检眼镜检查法（AOSLO）、扫描激光检眼镜检查法、近红外成像联合谱域光学相干断层摄影术（SD-OCT）、彩色眼底摄影术、眼底自发荧光成像、无赤光成像、荧光素血管造影术、吲哚菁绿血管造影术、多焦视网膜电图（ERG）记录、微视野检查、彩色多普勒光学相干断层摄影术（CDOCT）、视野评估、Heidelberg Spectralis、Zeiss Cirrus、Topcon3D OCT2000、Optivue RTVue SD-OCT、Opko OCT SLO、NIDEK F-10或Optopol SOCT Copernicus HR。
23.一种确定在受试者中进行的(i)治疗血管相关黄斑病；(ii)治疗与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(iii)治疗严重黄斑病或晚期黄斑病；或(iv)使异常脉络膜毛细血管小叶消退的治疗功效的方法，所述受试者被诊断据患有(i)、(ii)、(iii)或(iv)中的疾病或症状，所述方法包括：a)在开始治疗(1)血管相关黄斑病；(2)与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(3)严重黄斑病或晚期黄斑病；或(4)异常脉络膜毛细血管小叶之前测定所述受试者的眼睛中所述脉络膜毛细血管小叶的灌注；b)开始治疗(1)、(2)、(3)或(4)并保持一定的时间间隔；c)在所述时间间隔之后，测定步骤a)中的所述眼睛中所述脉络膜毛细血管小叶的灌注；以及d)将步骤c)中所述受试者的眼睛中所述脉络膜毛细血管小叶的灌注与步骤a)中所述受试者的眼睛中所述脉络膜毛细血管小叶的灌注相比较，其中检测出步骤c)中所述受试者的眼睛中所述脉络膜毛细血管小叶的灌注没有增加则指示药剂在所述受试者中不能有效(i)治疗血管相关黄斑病；(ii)治疗与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(iii)治疗严重黄斑病或晚期黄斑病；或(iv)使异常脉络膜毛细血管小叶消退。
24.一种确定在受试者中进行的(i)治疗血管相关黄斑病；(ii)治疗与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(iii)治疗严重黄斑病或晚期黄斑病；或(iv)使异常脉络膜毛细血管小叶消退的治疗功效的方法，所述受试者被诊断据患有(i)、(ii)、(iii)或(iv)中的疾病或症状，所述方法包括：a)在开始治疗(1)血管相关黄斑病；(2)与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(3)严重黄斑病或晚期黄斑病；或(4)异常脉络膜毛细血管小叶之前测定所述受试者的眼睛中所述脉络膜毛细血管小叶的灌注；b)开始治疗(1)、(2)、(3)或(4)并保持一定的时间间隔；c)在所述时间间隔之后，测定步骤a)中的所述眼睛中所述脉络膜毛细血管小叶的灌注；以及d)将步骤c)中所述受试者的眼睛中所述脉络膜毛细血管小叶的灌注与步骤a)中所述受试者的眼睛中所述脉络膜毛细血管小叶的灌注相比较，其中检测出步骤c)中所述受试者的眼睛中所述脉络膜毛细血管小叶的灌注有所增加则指示药剂在所述受试者中可有效(i)治疗血管相关黄斑病；(ii)治疗与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(iii)治疗严重黄斑病或晚期黄斑病；或(iv)使异常脉络膜毛细血管小叶消退。
25.根据权利要求23或24所述的方法，其中通过以下方式来测定所述眼睛中所述脉络膜毛细血管小叶的灌注：自发荧光成像技术、红外成像技术、光学相干断层摄影术（OCT）、Stratus光学相干断层摄影术（Stratus OCT）、傅里叶域光学相干断层摄影术（Fd-OCT）、双光子激发荧光（TPEF）成像、自适应光学扫描激光检眼镜检查法（AOSLO）、扫描激光检眼镜检查法、近红外成像联合谱域光学相干断层摄影术（SD-OCT）、彩色眼底摄影术、眼底自发荧光成像、无赤光成像、荧光素血管造影术、吲哚菁绿血管造影术、多焦视网膜电图（ERG）记录、微视野检查、彩色多普勒光学相干断层摄影术（CDOCT）、视野评估、Heidelberg Spectralis、Zeiss Cirrus、Topcon3D OCT2000、Optivue RTVue SD-OCT、Opko OCT SLO、NIDEK F-10或Optopol SOCT Copernicus HR。
诊断和治疗血管相关黄斑病及其症状的方法
[0001] 鸣谢
[0002] 本发明是在政府支持下根据由NIH授予的授权号EY017404完成的。政府拥有本发明的某些权利。
[0003] 相关申请的交叉引用
[0004] 本申请要求2011年3月15日提交的美国临时专利申请号61/452,944、2011年3月15日提交的美国临时专利申请号61/452,964以及2011年3月15日提交的美国临时专
利申请号61/452,950的权益。这些申请的全部内容以引用的方式并入本文。
发明领域
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发明领域
[0005] 本发明整体涉及对受试者的血管相关黄斑病及其症状的诊断和治疗。具体而言，本发明涉及a)诊断受试者的血管相关黄斑病及其症状的方法；b)鉴定受试者产生血管相关黄斑病及其症状的易感性的方法；c)治疗受试者的血管相关黄斑病及其症状的方法；以及d)筛选有效治疗受试者的血管相关黄斑病及其症状的药剂的方法。
[0006] 发明背景
[0007] 血管相关黄斑病（VAM）表示可能与多种血管症状相关联的一种先前未得到确诊的疾病。目前，患有血管相关黄斑病的患者经常被误诊。此外，由于人可能表现出多种多样的症状，所以可能难以对血管相关黄斑病以及其症状作出诊断。因此，需要的是更有效诊断受试者的血管相关黄斑病和它的相关症状的方法。此外，需要的是治疗受试者的血管相关黄斑病和它的相关症状的方法。
[0008] 概述
[0009] 本文描述了诊断受试者的血管相关黄斑病或其症状的方法，所述方法包括检测受试者的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶和/或重构脉络膜毛细血管的小叶状性质的眼部病变的存在，其中在所述受试者的眼睛中存在异常脉络膜毛细血管小叶和/或重构脉络膜毛细血管的小叶状性质的眼部病变指示所述受试者存在血管相关黄斑病或其症状。
[0010] 本文还描述了用于在人类受试者中预测受试者患有或产生血管相关黄斑病的风险的方法，所述方法包括：确定所述受试者体内HTRA1、ARMS2或CFH基因中一个或多个SNP的身份，其中所述一个或多个SNP是(i)HTRA1基因中的rs11200638、HTRA1基因中的rs1049331、HTRA1基因中的rs2672587、ARMS2基因中的rs10490924、ARMS2基因中的rs3750848、CFH基因中的rs1061170或CFH基因中的rs800292，或(ii)与(i)中的SNP存
在连锁不平衡的SNP，其中所述SNP中的一个或多个的存在预示所述受试者有患有或产生血管相关黄斑病的风险。
在连锁不平衡的SNP，其中所述SNP中的一个或多个的存在预示所述受试者有患有或产生血管相关黄斑病的风险。
[0011] 本文还描述了用于在人类受试者中预测受试者患有或产生血管相关黄斑病的风险的方法，所述方法包括：生成所述受试者眼睛的图像，使用所述图像检测所述受试者的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶的存在，其中所述受试者的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶的存在预示所述受试者有患有或产生血管相关黄斑病的风险。
[0012] 本文还描述了用于在人类受试者中预测受试者患有或产生血管相关黄斑病的风险的方法，所述方法包括：生成所述受试者眼睛的图像，使用所述图像检测所述受试者的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶的存在，其中所述受试者的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶的存在预示所述受试者有患有或产生血管相关黄斑病的风险。
[0013] 本文还描述了用于对患有血管相关黄斑病的受试者进行诊断的方法，所述方法包括：在从所述受试者获得的样品中，确定HTRA1、ARMS2或CFH基因中一个或多个SNP的身份，其中所述一个或多个SNP是(i)HTRA1基因中的rs11200638、HTRA1基因中的
rs1049331、HTRA1基因中的rs2672587、ARMS2基因中的rs10490924、ARMS2基因中的
rs3750848、CFH基因中的rs1061170或CFH基因中的rs800292，或(ii)与(i)中的SNP存
在连锁不平衡的SNP，从而基于(i)或(ii)中的SNP的一种或多种变体的存在对所述受试者进行诊断。
rs1049331、HTRA1基因中的rs2672587、ARMS2基因中的rs10490924、ARMS2基因中的
rs3750848、CFH基因中的rs1061170或CFH基因中的rs800292，或(ii)与(i)中的SNP存
在连锁不平衡的SNP，从而基于(i)或(ii)中的SNP的一种或多种变体的存在对所述受试者进行诊断。
[0014] 本文还描述了对患有血管相关黄斑病的受试者进行诊断的方法，所述方法包括：生成所述受试者眼睛的图像，在所述受试者眼睛的图像中检测异常脉络膜毛细血管小叶的存在，其中所述受试者的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶的存在使得可以诊断出血管相关黄斑病。
[0015] 本文还描述了用于在人类受试者中预测受试者患有或产生严重黄斑病或晚期黄斑病的风险的方法，所述方法包括：确定所述受试者体内HTRA1、ARMS2或CFH基因中一个或多个SNP的身份，其中所述一个或多个SNP是(i)HTRA1基因中的rs11200638、HTRA1基因中的rs1049331、HTRA1基因中的rs2672587、ARMS2基因中的rs10490924、ARMS2基因中的rs3750848、CFH基因中的rs1061170或CFH基因中的rs800292，或(ii)与(i)中的SNP存在连锁不平衡的SNP，其中所述SNP中的一个或多个的存在预示所述受试者有患有或产生严重黄斑病或晚期黄斑病的风险。
[0016] 本文还描述了用于在人类受试者中预测受试者患有或产生严重黄斑病或晚期黄斑病的风险的方法，所述方法包括：生成所述受试者眼睛的图像，使用所述图像检测所述受试者的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶的存在，其中所述受试者的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶的存在预示所述受试者有患有或产生严重黄斑病或晚期黄斑病的风险。
[0017] 本文还描述了用于对患有严重黄斑病或晚期黄斑病的受试者进行诊断的方法，所述方法包括：在从所述受试者获得的样品中，确定HTRA1、ARMS2或CFH基因中一个或多个SNP的身份，其中所述一个或多个SNP是(i)HTRA1基因中的rs11200638、HTRA1基因中的rs1049331、HTRA1基因中的rs2672587、ARMS2基因中的rs10490924、ARMS2基因中的rs3750848、CFH基因中的rs1061170或CFH基因中的rs800292，或(ii)与(i)中的SNP存在连锁不平衡的SNP，从而基于(i)或(ii)中的一个或多个SNP的存在对所述受试者进行诊断。
[0018] 本文还描述了用于对患有严重黄斑病或晚期黄斑病的受试者进行诊断的方法，所述方法包括：生成所述受试者眼睛的图像，使用所述图像检测所述受试者的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶的存在，从而基于所述受试者的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶的存在对所述受试者进行诊断。
[0019] 本文还描述了用于在人类受试者中预测受试者具有或产生异常脉络膜毛细血管小叶的风险的方法，所述方法包括：确定所述受试者体内HTRA1、ARMS2或CFH基因中一个或多个SNP的身份，其中所述一个或多个SNP是(i)HTRA1基因中的rs11200638、HTRA1基因中的rs1049331、HTRA1基因中的rs2672587、ARMS2基因中的rs10490924、ARMS2基因中的rs3750848、CFH基因中的rs1061170或CFH基因中的rs800292，或(ii)与(i)中的SNP存在连锁不平衡的SNP，其中所述SNP中的一个或多个的存在预示所述受试者有具有或产生异常脉络膜毛细血管小叶的风险。
[0020] 本文还描述了确定受试者产生血管相关黄斑病或其症状的风险的方法，所述方法包括确定受试者体内HTRA1、ARMS2或PLEKHA1基因中一个或多个单核苷酸多态现象（single nucleotide polymorphism，SNP）的身份，其中某些SNP指示产生血管相关黄斑病或其症状的风险增加或降低。
[0021] 本文还描述了在受试者中确定受试者产生血管相关黄斑病或其症状的风险的方法，所述方法包括确定受试者体内HTRA1、ARMS2或PLEKHA1基因中一个或多个单核苷酸多态现象（SNP）的身份，其中某些SNP指示产生血管相关黄斑病或其症状的风险降低。
[0022] 本文还描述了在受试者中确定受试者产生血管相关黄斑病或其症状的风险的方法，所述方法包括确定受试者体内CFH、C3、C2、CFB或APOE基因中一个或多个单核苷酸多态现象（SNP）的身份，其中某些SNP指示产生血管相关黄斑病或其症状的风险增加或降低。
[0023] 本文还描述了对受试者的血管相关黄斑病或其症状进行诊断的方法，所述方法包括确定受试者体内HTRA1、ARMS2、PLEKHA1中的一个或多个单核苷酸多态现象（SNP）、CFH、C3、C2、CFB或APOE基因中的单核苷酸多态现象（SNP）的身份，其中某些SNP指示血管相关黄斑病或其症状的存在。
[0024] 本文还描述了对受试者的血管相关黄斑病或其症状进行诊断的方法，所述方法包括确定受试者体内HTRA1、ARMS2、PLEKHA1、CFH、C3、C2、CFB或APOE基因中一个或多个单核苷酸多态现象（SNP）的身份，其中某些SNP指示缺少防止产生血管相关黄斑病或其症状的保护。
[0025] 本文还描述了鉴定受试者产生血管相关黄斑病或其症状的易感性的方法，所述方法包括在受试者的眼睛中检测异常脉络膜毛细血管小叶，其中在受试者的眼睛中检测出异常脉络膜毛细血管小叶指示在所述受试者的组织或器官中易产生血管相关黄斑病或其症状。
[0026] 本文还描述了鉴定受试者产生严重或晚期黄斑病的易感性的方法，所述方法包括在受试者的眼睛中检测异常脉络膜毛细血管小叶，其中在所述受试者的眼睛中检测出异常脉络膜毛细血管小叶指示所述受试者易产生严重或晚期黄斑病。
[0027] 本文还描述了鉴定受试者产生异常脉络膜毛细血管小叶的易感性的方法，所述方法包括检测受试者体内HTRA1或ARMS2基因中的特定SNP，其中检测出HTRA1或ARMS2基因中的特定SNP指示所述受试者易产生异常脉络膜毛细血管小叶。
[0028] 本文还描述了治疗受试者的血管相关黄斑病或其症状的方法，其中在受试者的眼睛中存在异常脉络膜毛细血管小叶，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的一种或多种抑制脉络膜毛细血管小叶和/或脉络膜毛细血管的血管结构上游更大的小动脉和动脉阻塞或封堵的活性剂或治疗剂。
[0029] 本文还描述了增强临床试验的方法，所述方法包括选择适当的患者群体进行那些临床试验。在一个方面，可以使用所述方法来确保基于患者是否有可能对正在研究的一种或多种实验治疗剂起反应而鉴定出参与临床试验的患者。
[0030] 本文还描述了如下的试剂盒，所述试剂盒包含用于在受试者的核酸样品中检测一个或多个SNP的测定，其中所述SNP是(i)HTRA1基因中的rs11200638、HTRA1基因中的rs1049331、HTRA1基因中的rs2672587、ARMS2基因中的rs10490924、ARMS2基因中的rs3750848、CFH基因中的rs1061170或CFH基因中的rs800292；(ii)(i)中的SNP的组合；
或(iii)与(i)中的SNP存在连锁不平衡的SNP。
或(iii)与(i)中的SNP存在连锁不平衡的SNP。
[0031] 本文还描述了血管相关黄斑病的非人类动物模型，其中所述动物的一种或多种细胞表达重组HTRA1多肽。
[0032] 本文还描述了用于鉴定异常脉络膜毛细血管小叶的系统，所述系统包括
[0033] 用于对眼睛进行成像的装置，所述装置被配置成提供异常脉络膜毛细血管小叶的可识别图像，以及
[0035] 本文还描述了治疗受试者的血管相关黄斑病、治疗与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状、治疗严重黄斑病、治疗晚期黄斑病或使异常脉络膜毛细血管小叶消退的方法。
[0036] 本文还描述了治疗受试者的血管相关黄斑病、治疗与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状、治疗严重黄斑病、治疗晚期黄斑病或使异常脉络膜毛细血管小叶消退的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的一种或多种所公开的组合物、治疗剂、活性剂或功能性核酸。
[0037] 本文还描述了治疗受试者的血管相关黄斑病或其症状的方法，其中在受试者的眼睛中存在异常脉络膜毛细血管小叶，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的一种或多种增加所述受试者的眼睛中脉络膜毛细血管小叶中的灌注的活性剂或治疗剂。
[0038] 本文还描述了治疗受试者的血管相关黄斑病或其症状的方法，其中在受试者的眼睛中存在异常脉络膜毛细血管小叶，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的一种或多种模拟HTRA1或ARMS2核酸或肽的活性、与HTRA1或ARMS2核酸或肽杂交或以其它方式调节HTRA1或ARMS2核酸或肽的活性的活性剂或治疗剂。
[0039] 本文还描述了治疗受试者的血管相关黄斑病、严重黄斑病或晚期黄斑病或者使异常脉络膜毛细血管小叶消退的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的弹性蛋白酶抑制剂。
[0040] 本文还描述了治疗受试者的与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的弹性蛋白酶抑制剂。
[0041] 本文还描述了选择用于所公开的方法的受试者的方法，所述所公开的方法用于(i)治疗血管相关黄斑病；(ii)治疗与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(iii)治疗严重黄斑病或晚期黄斑病；或(iv)使异常脉络膜毛细血管小叶消退。
[0042] 本文还描述了对如下的受试者进行诊断的方法，所述受试者患有(i)血管相关黄斑病；(ii)与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(iii)严重黄斑病或晚期黄斑病；或具有(iv)异常脉络膜毛细血管小叶。
[0043] 本文还描述了筛选如下的药剂或药剂的组合的方法，所述药剂或药剂的组合有效用于(i)治疗血管相关黄斑病；(ii)治疗与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(iii)治疗严重黄斑病或晚期黄斑病；或(iv)使异常脉络膜毛细血管小叶消退。
[0044] 本文还描述了确定对被诊断患有血管相关黄斑病或其症状的受试者的血管相关黄斑病或其症状进行治疗的功效的方法。
[0046] 并入本说明书中并且构成本说明书的一部分的附图图解了若干个方面并且连同说明书一起用来阐释本发明的原理。
[0048] 图2示出了经过红外成像（IR）的相对于具有适度高反射率的背景呈具有低反射率的独特单元（均具有以及不具有独特的高反射性中心‘斑点’）形式的异常脉络膜毛细血管小叶。
[0049] 图3示出了随时间推移的表型的发展。
[0050] 图4示出了随时间推移的表型的发展。
[0051] 图5示出了如由SD-OCT所观测到的视网膜下腔中的异常脉络膜毛细血管小叶。
[0053] 图7示出了在眼底中所观测到的总体图案重构了黄斑脉络膜毛细血管解剖结构的总体图案。
[0054] 图8示出了获自具有黄斑异常脉络膜毛细血管小叶的患者的高分辨率OCT‘C’扫描图。
[0055] 图9示出了以中央凹为中心的异常脉络膜毛细血管小叶的‘扇形’分布。
[0056] 图10示出了在2011年3月所拍摄并且描绘了异常脉络膜毛细血管小叶的存在的彩色图像、FA图像以及IR图像。
[0057] 图11示出了在死亡时间之后3小时又45分钟取自捐献者并且被打开以暴露内层的眼睛。
[0059] 图13示出了在更高的放大倍数下所观测到的脉络膜毛细血管的独特形态特征。
[0060] 图14示出了黄斑视网膜功能降低的实例（右侧画面中的暗区）。
[0061] 图15示出了HtrA1蛋白酶结构域结构的比对。
[0062] 图16示出了HTRA1的结构比对的三个视图。
[0063] 图17示出了在黄斑外和黄斑区域中HTRA1的表达数据。
[0064] 图18示出了在黄斑外和黄斑区域中HTRA1的表达数据。
[0065] 图19示出了HTRA1和ARMS2表达的蛋白质印迹。
[0066] 图20示出了对血清中的HTRA1和ARMS2进行的抗体检测。
[0067] 图21示出了通过蛋白质印迹法使用以下抗体对来自具有不同基因型的患者的血清样品进行分析：A-SC-15465（左侧）、SC-50335（右侧）；B-NEP-1688（左侧）、NEP-1693（右侧）；C-NEP-1694（左侧）、NEP-1695（右侧）；D-NEP-2414。
[0068] 图22示出了使用抗-HtrA1抗体进行探测的蛋白质印迹。
[0069] 图23示出了使用抗-HtrA1抗体进行探测的蛋白质印迹。
[0070] 图24示出了在视网膜/RPE蛋白质提取和蛋白质印迹中对HtrA1和ARMS2蛋白质进行检测。
[0071] 图25示出了弹性蛋白的HTRA1降解。
[0072] 图26示出了HTRA1的弹性蛋白酶活性。
[0073] 图27示出了HTRA1弹性蛋白酶活性的抑制。
[0074] 图28示出了被用于产生小鼠品系的HTRA1转基因构建体。
[0075] 图29示出了展现出PCV的重要特征的hHTRA1+小鼠。
[0076] 图30示出了展现出PCV的重要特征的hHTRA1+小鼠。
[0077] 图31示出了hHTRA1+小鼠体内布鲁赫膜（Bruch's membrane）的弹性膜的降解。
[0078] 图32示出了hHTRA1+小鼠体内脉络膜血管的弹性膜的降解。
[0079] 图33示出了注射了NP的眼睛具有正常的视网膜构造而与对照相比未出现毒性体征。
[0080] 图34示出了使用HTRA1抑制剂对hHTRA1+小鼠进行治疗逆转了PCV表型。
[0081] 图35示出了被亚克隆到AAV穿梭载体pAAV-CAG-Shuttle-WPRE中处于CAG启动2
子下的含有全长编码区和C-端myc-His6标签 的人类HTRA1 cDNA。
子下的含有全长编码区和C-端myc-His6标签 的人类HTRA1 cDNA。
[0082] 图36示出了在受到AAV2-HTRA1感染的小鼠体内观测到的PCV病变。
[0083] 图37示出了弹性蛋白原（弹性蛋白的可溶性前体）的水平在hHTRA1+小鼠与WT小鼠体内是相似的。
[0084] 图38示出了ACL的最大风险是染色体10上的具有纯合风险性的任何双倍型（diplotype）。
[0085] 图39示出了在DNA样品中针对于处于补体区（CFH-至-F13B）以及HTRA1、ARMS2、C3、CFB、C2以及APOE基因的控制之下的SNP进行筛选的结果。
[0086] 图40示出了各种SNP的等位基因频率，在异常脉络膜毛细血管小叶组群中加以表征并且与具有416名没有异常脉络膜毛细血管小叶的个体的组群相比较。
[0087] 图41示出了各种SNP的等位基因频率，在异常脉络膜毛细血管小叶组群中加以表征并且与具有416名没有异常脉络膜毛细血管小叶的个体的组群相比较。
[0088] 图42示出了各种SNP的等位基因频率，在异常脉络膜毛细血管小叶组群中加以表征并且与具有416名没有异常脉络膜毛细血管小叶的个体的组群相比较。
[0089] 本发明的其它优点将在某种程度上阐述于随后的描述中，并且根据描述将在某种程度上变得显而易见，或可以通过实践本发明而获悉。本发明的优点将借助于在所附权利要求书中所具体指出的要素和组合来了解和实现。应了解，以上概述和以下详述仅具示例性和说明性而不限制如所要求保护的本发明。
[0090] 描述
[0091] 通过参考以下发明详述以及其中所包括的实施例可使本发明更易理解。
[0092] 除非另外明确地说明，否则本文所阐述的任何方法或方面决不是意图被视为必需按照特定的次序进行它的步骤。因此，在权利要求书或发明详述中方法权项没有确切地说明所述步骤将限于特定次序的情况下，决不是意图在任何方面推断次序。这适用于任何可能的非明确的解释基础，包括关于步骤或操作流程的安排的逻辑事宜；从语法组织或标点符号得到的显明意义；或在本说明书中所述的方面的数目或类型。
[0093] 定义
[0094] 除非上下文另外明确地规定，否则如在本说明书以及所附的权利要求书中所用的单数形式“一个（种）”和“所述”包括多个指示物。因此，例如，提及“一种药物载体”包括了两种或更多种这类载体的混合物，诸如此类。
[0095] 范围在本文中可以被表示为从“约”一个具体值和/或至“约”另一个具体值。当表示这种范围时，另一个实施方案包括了从一个具体值和/或至另一个具体值。类似地，当通过在之前使用“约”将值表示为近似值时，应了解所述具体值形成了另一个实施方案。将进一步了解的是，每个范围的终点相对于另一个终点都是有意义的并且独立于另一个终点。还应了解，存在本文所述的多个值，并且每个值在本文中除了所述值本身之外还被公开为“约”所述具体值。例如，如果公开了值“10”，那么也就公开了“约10”。还应了解的是，如由熟练的技术人员所适当地理解，在值被公开时，也就公开了“小于或等于”所述值、“大于或等于所述值”以及值之间可能的范围。例如，如果公开了值“10”，那么也就公开了“小于或等于10”以及“大于或等于10”。还应了解的是，在整个申请中，以多种不同的形式提供数据，并且这些数据表示终点、起点以及所述数据点的任何组合的范围。例如，如果公开了具体的数据点“10”和具体的数据点15，那么应了解，认为公开了大于、大于或等于、小于、小于或等于以及等于10和15以及10与15之间。还应了解，还公开了两个具体单位之间
的每个单位。例如，如果公开了10和15，那么也就公开了11、12、13以及14。
的每个单位。例如，如果公开了10和15，那么也就公开了11、12、13以及14。
[0096] “任选的”或“任选地”意思是随后描述的事件或情形可能存在或可能不存在并且所述描述包括了所述事件或情形存在的情况以及所述事件或情形不存在的情况。
[0097] 本文所用的词语“或”意指具体清单中的任何一个成员并且还包括了所述清单中成员的任何组合。
[0098] 本文所用的“严重黄斑病”或“晚期黄斑病”意指任何地图状萎缩（4A级）、新生血管性AMD（RPE脱离、[周边]视网膜出血和/或在不存在其它视网膜[血管]病症的情况下的瘢痕；4B级；包括CNV的所有表型，包括隐匿性、典型性、息肉样脉络膜病[PPCV]，以及视网膜血管瘤增殖[RAP]），或两者（4C级；包括GA的所有表型）。
[0099] 本文所用的“HTRA1”意思是高温需求丝氨酸肽酶1（High TemperatureRequirement Serine Peptidase1，HTRA1）基因。HTRA1还可以意指由HTRA1基因编码的任何HTRA1蛋白。HTRA1的NCBI基因识别号是5654。
[0100] 本文所用的“ARMS2”意指年龄相关性黄斑病易感因子2（ARMS2）基因。ARMS2还可以意指由ARMS2基因编码的任何ARMS2蛋白。ARMS2的NCBI基因识别号是387715。
[0101] .诊断血管相关黄斑病及其症状的方法
[0102] 本公开内容揭示了如下意外的发现：异常脉络膜毛细血管小叶不是视网膜下类玻璃膜疣状沉积物，而是代表了一种新的疾病，即血管相关黄斑病以及黄斑变性的体征。异常脉络膜毛细血管小叶表示人眼中视网膜光感受器的外段、视网膜色素上皮以及布鲁赫膜中覆盖并且对应于脉络膜毛细血管小叶中的毛细血管以及脉络膜中的小动脉封堵或阻塞区域的缺血性损伤和损害区域，而并非像典型的玻璃膜疣一样由细胞碎片、补体蛋白或脂质构成。人眼中脉络膜毛细血管和/或脉络膜中的脉络膜小动脉封堵或阻塞与血管相关黄斑病的发病率增加有关，所述血管相关黄斑病可以表现为脉络膜新血管生成（CNV）、视网膜下出血以及中央视觉丧失。对异常脉络膜毛细血管小叶进行检测代表了对受试者的眼睛疾病以及侵害体内其它组织和器官的血管疾病进行诊断的一种先前未被认识到的方式。
[0103] 目前，患有血管相关黄斑病的患者经常被误诊。此外，由于人可能表现出多种多样的症状，所以可能难以对血管相关黄斑病以及其症状作出诊断。因此，需要的是更有效诊断受试者的血管相关黄斑病和它的相关症状的方法。此外，需要的是治疗受试者的血管相关黄斑病和它的相关症状的方法。
[0104] 1.异常脉络膜毛细血管小叶
[0105] 本文描述了对受试者的血管相关黄斑病或其症状进行诊断的方法，所述方法包括在受试者的眼睛中检测异常脉络膜毛细血管小叶的存在，其中在所述受试者的眼睛中存在异常脉络膜毛细血管小叶指示所述受试者存在血管相关黄斑病或其症状或后果。
[0106] 本文还描述了用于在人类受试者中预测受试者患有或产生血管相关黄斑病的风险的方法，所述方法包括：生成所述受试者眼睛的图像，使用所述图像检测所述受试者的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶的存在，其中在所述受试者的眼睛中存在异常脉络膜毛细血管小叶预测所述受试者有患有或产生血管相关黄斑病、严重或晚期黄斑病或异常脉络膜毛细血管小叶的风险。本文所用的血管相关黄斑病可以进一步包含与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状，其中血管相关黄斑病的一种或多种症状是黄斑变性、年龄相关性黄斑变性、心脏微血管疾病、斯特格氏病（Stargardt's）、弹性假黄瘤（PXE）、Alagille综合征、皮层下脑白质病、子痫前期、高血压、糖尿病、心肌缺血、动脉瘤、因自身免疫性疾病或感染因子所致的血管炎、深静脉血栓形成、淋巴水肿、静脉曲张、外周动脉疾病、肾动脉疾病、雷诺氏病（Raynaud's disease）、伯格氏病（Buerger's disease）、外周静脉疾病、静脉血凝块、动脉粥样硬化、动脉硬化症、小动脉硬化、冠状动脉疾病、心绞痛、充血性心力衰竭、动脉硬化、血栓性或栓塞性中风或心肌梗塞。
[0107] 在一个方面，本文所述的方法可以进一步包括确定所述受试者体内HTRA1、ARMS2或CFH基因中的一个或多个SNP的身份，其中所述一个或多个SNP是(i)HTRA1基因中的rs11200638、HTRA1基因中的rs1049331、HTRA1基因中的rs2672587、ARMS2基因中
的rs10490924、ARMS2基因中的rs3750848、CFH基因中的rs1061170或CFH基因中的
rs800292，或(ii)与(i)中的SNP存在连锁不平衡的SNP，其中所述SNP的一种或多种变
体的存在预示所述受试者有患有或产生血管相关黄斑病、严重或晚期黄斑病或异常脉络膜毛细血管小叶的风险。在一个方面，确定rs11200638SNP处的A、rs1049331SNP处的T、rs2672587SNP处的G、rs10490924SNP处的T、rs3750848SNP处的G、rs1061170SNP处的C，或rs800292SNP处的G的身份可预示所述受试者有患有或产生血管相关黄斑病、严重或晚期黄斑病或异常脉络膜毛细血管小叶的风险或者患有或产生血管相关黄斑病、严重或晚期黄斑病或异常脉络膜毛细血管小叶的风险增加。
的rs10490924、ARMS2基因中的rs3750848、CFH基因中的rs1061170或CFH基因中的
rs800292，或(ii)与(i)中的SNP存在连锁不平衡的SNP，其中所述SNP的一种或多种变
体的存在预示所述受试者有患有或产生血管相关黄斑病、严重或晚期黄斑病或异常脉络膜毛细血管小叶的风险。在一个方面，确定rs11200638SNP处的A、rs1049331SNP处的T、rs2672587SNP处的G、rs10490924SNP处的T、rs3750848SNP处的G、rs1061170SNP处的C，或rs800292SNP处的G的身份可预示所述受试者有患有或产生血管相关黄斑病、严重或晚期黄斑病或异常脉络膜毛细血管小叶的风险或者患有或产生血管相关黄斑病、严重或晚期黄斑病或异常脉络膜毛细血管小叶的风险增加。
[0108] 在一个方面，确定rs11200638SNP处的G、rs1049331SNP处的C、rs2672587SNP处的C、rs10490924SNP处的G、rs3750848SNP处的T、rs1061170SNP处的T，或rs800292SNP处的A的身份可预示所述受试者有患有或产生血管相关黄斑病、严重或晚期黄斑病或异常脉络膜毛细血管小叶的风险或者患有或产生血管相关黄斑病、严重或晚期黄斑病或异常脉络膜毛细血管小叶的风险降低。
[0109] 本文还描述了鉴定受试者的组织或器官中产生与血管相关黄斑病相关联的症状的易感性的方法，所述方法包括在受试者的眼睛中检测异常脉络膜毛细血管小叶的存在，其中在所述受试者的眼睛中检测出异常脉络膜毛细血管小叶的存在指示所述受试者的组织或器官中易产生与血管相关黄斑病相关联的症状。所述组织或器官可以包括但不限于心脏、血管、脑、脊髓、肌肉、骨骼、眼睛、耳朵、肾脏、子宫、胎盘、皮肤、粘膜、胃、肝脏、肺、胆囊、脾脏、阑尾、小肠、大肠、胰腺、前列腺或膀胱。
[0110] 术语“受试者”的意思是个体。在一个方面，受试者是哺乳动物，如灵长类动物，并且更优选地是人类。非人类灵长类动物包括狨猴、猴子、黑猩猩、大猩猩、猩猩以及长臂猿等等。术语“受试者”还包括驯养的动物，如猫、狗等；家畜（例如牛（母牛）、马、猪、绵羊、山羊等）；实验室动物（例如雪貂、南美栗鼠、小鼠、家兔、大鼠、沙鼠、豚鼠等）；以及鸟类物种（例如鸡、火鸡、鸭、野鸡、家鸽、野鸽、鹦鹉、美冠鹦鹉、鹅等）。受试者还可以包括但不限于鱼（例如斑马鱼、金鱼、罗非鱼、鲑鱼以及鳟鱼）、两栖动物以及爬行动物。本文所用的“受试者”与“患者”相同，并且所述术语可以可互换地使用。
[0111] 本文所用的“异常”意思是与正常或预期的类型不同。异常的可以与“不正常”或“反常”相同，并且所述术语可以可互换地使用。在一个方面，异常的还可以意指重构。
[0112] 本文所用的“脉络膜毛细血管小叶”是眼睛的黄斑中所独有的圆形毛细血管床，即脉络膜中的毛细血管。充氧的血液进入每个脉络膜毛细血管小叶的中心，而缺氧的血液经由围绕每个小叶的大部分外周的静脉回流区域离开。回流区域的直径可能与脉络膜毛细血管小叶的直径相同。
[0113] “异常脉络膜毛细血管小叶”可为看起来不正常和/或不正常起作用的脉络膜毛细血管小叶。异常脉络膜毛细血管小叶还可以是重构黄斑脉络膜毛细血管的小叶状性质的病变，包括但不限于视网膜色素上皮死亡（RPE）、布鲁赫膜或RPE下腔发生改变、光感受器间隔或视网膜下腔发生改变、与异常脉络膜毛细血管小叶产生（如脉络膜基质发生改变、上游血管结构发生改变、下游血管结构发生改变或缺血）有关的其它视网膜异常或病变、光感受器死亡或眼周的鹅卵石样萎缩。可以经由本领域中已知的多种仪器对异常脉络膜毛细血管小叶进行成像，所述仪器包括但不限于Heidelberg Spectralis、Zeiss Cirrus、Topcon3D OCT2000、Optivue RTVue SD-OCT、Opko OCT SLO、NIDEK F-10或Optopol SOCT Copernicus HR。可以使用例如（而不限于）血管造影术、ERG、血流量或彩色多普勒光学相干断层摄影术（CDOCT）来检测异常脉络膜毛细血管小叶的功能后果。在一个方面，不能正常地起作用可能由小叶阻塞所致。因而，“异常脉络膜毛细血管小叶”可能是被阻塞、部分阻塞或功能性阻塞的脉络膜毛细血管小叶。小叶“阻塞”的意思与小叶完全或部分“封堵”相同。例如，脉络膜毛细血管小叶可能被部分或完全封堵或阻塞。“阻塞”还可以意指功能性阻塞。本文所用的功能性阻塞可以意指上游血管结构的阻塞，所述上游血管结构例如（而不限于）向脉络膜毛细血管供血的小动脉。脉络膜毛细血管小叶阻塞可能是因为使一部分或全部管腔闭塞的血管壁不正常变厚；与脉络膜血管相关联的支撑基质降解，例如弹性蛋白和/或细胞外基质降解；脂质、钙、纤维组织、血小板、纤维蛋白或血栓在血管内表面上积聚；或部分或完全阻碍、抑制或减少血管腔中的血流的栓子。在正常情况下，例如，当受试者并未患有血管相关黄斑病或其症状时，在受试者眼睛的黄斑中不存在或可能不会看到异常脉络膜毛细血管小叶。在另一个方面，当受试者患有视力障碍，但并未患有血管相关黄斑病或其症状时，在受试者的眼睛中可能存在或可能看到异常脉络膜毛细血管小叶，从而充当血管相关黄斑病和它的相关症状的早期预测物。本文所用的“视力障碍”意思是引起视力发生改变而偏离正常的任何病状，例如（而不限于）视力模糊、虹视、盲点、飞蚊症以及其它症状。
[0114] 在受试者眼睛的黄斑中异常脉络膜毛细血管小叶的存在指示对血管相关黄斑病或其症状进行诊断的一种先前未被认识到的方法，在一个方面，所述血管相关黄斑病或其症状的特征在于受试者的眼睛中脉络膜中的脉络膜毛细血管小叶的灌注减少或不存在灌注。本文所用的“灌注减少”意思是在全部或一部分黄斑区中，脉络膜毛细血管小叶中的血流减少至正常水平以下或不存在血流。“灌注减少”还可以意指脉络膜毛细血管小叶中的血流不足以向目标组织提供必要的氧和营养物，所述目标组织包括但不限于例如脉络膜、巩膜、布鲁赫膜、视网膜色素上皮或视网膜光感受器的外段。
[0115] 脉络膜毛细血管小叶中灌注减少或不存在灌注可能与脉络膜毛细血管、脉络膜小动脉或甚至对脉络膜进行供给的更大动脉部分或完全封堵或阻塞有关，所述更大的动脉包括但不限于例如睫状动脉、眼动脉、颈内动脉以及颈总动脉。当通向眼睛或离开眼睛的血管在多个位置处发生部分或完全阻塞时，可以检测出脉络膜毛细血管小叶的灌注减少或不存在灌注，所述位置包括但不限于受试者的眼眶或视神经区域。我们还想说的是关于“沿着血管树向下”或在静脉侧上。
[0116] 在一个方面，本文所述的对受试者的血管相关黄斑病或其症状进行诊断，或鉴定产生血管相关黄斑病或其症状的易感性的方法可以进一步包括使用眼科程序对受试者进行检查。
[0117] 可以进行本领域技术人员已知的不同的眼科程序来检测异常脉络膜毛细血管小叶的存在，所述程序包括但不限于自发荧光成像技术、红外成像技术、光学相干断层摄影术（OCT）、Stratus光学相干断层摄影术（Stratus OCT）、傅里叶域光学相干断层摄影术（Fourier-domain optical coherence tomography，Fd-OCT）、双光子激发荧光（TPEF）成像、自适应光学扫描激光检眼镜检查法（AOSLO）、扫描激光检眼镜检查法、近红外成像联合谱域光学相干断层摄影术（SD-OCT）、彩色眼底摄影术、眼底自发荧光成像、无赤光成像、荧光素血管造影术、吲哚菁绿血管造影术、多焦视网膜电图（ERG）记录、微视野检查、彩色多普勒光学相干断层摄影术（CDOCT）以及视野评估。另外，可以通过使用Heidelberg Spectralis、Zeiss Cirrus、Topcon3D OCT2000、Optivue RTVue SD-OCT、Opko OCT SLO、NIDEK F-10或Optopol SOCT Copernicus HR来检测异常脉络膜毛细血管小叶的存在。
[0118] 在一个方面，可以通过观测覆盖并且对应于脉络膜毛细血管小叶的视网膜色素上皮（RPE）的改变来检测异常脉络膜毛细血管小叶的存在。可以使用例如（而不限于）本领域中已知的自发荧光成像技术来实现对RPE进行观测。当存在异常脉络膜毛细血管小叶时，覆盖并且对应于异常小叶的RPE细胞可能死亡。因此，可以通过观测覆盖并且对应于脉络膜毛细血管小叶的RPE细胞死亡来检测异常脉络膜毛细血管小叶的存在。可以利用本领域技术人员已知的不同程序来检测死亡的RPE细胞，所述程序包括但不限于自发荧光成像技术、红外成像技术、光学相干断层摄影术（OCT）、Stratus光学相干断层摄影术（Stratus OCT）、傅里叶域光学相干断层摄影术（Fd-OCT）、双光子激发荧光（TPEF）成像、自适应光学扫描激光检眼镜检查法（AOSLO）、扫描激光检眼镜检查法、近红外成像联合谱域光学相干断层摄影术（SD-OCT）、彩色眼底摄影术、眼底自发荧光成像、无赤光成像、荧光素血管造影术、吲哚菁绿血管造影术、多焦视网膜电图（ERG）记录、微视野检查、彩色多普勒光学相干断层摄影术（CDOCT）以及视野评估。另外，可以通过使用Heidelberg Spectralis、Zeiss Cirrus、Topcon3D OCT2000、Optivue RTVue SD-OCT、Opko OCT SLO、NIDEK F-10或Optopol SOCT Copernicus HR来观测RPE。
[0119] 在另一个方面，可以通过观测重构黄斑脉络膜毛细血管的小叶状性质的其它病变来检测异常脉络膜毛细血管小叶的存在，所述其它病变包括但不限于布鲁赫膜或RPE下腔发生改变、光感受器间隔或视网膜下腔发生改变、与异常脉络膜毛细血管小叶产生（如脉络膜基质发生改变、上游血管结构发生改变、下游血管结构发生改变或缺血）有关的其它视网膜异常或病变、光感受器死亡或眼周的鹅卵石样萎缩。可以利用本领域技术人员已知并且在本文中描述的不同程序来检测重构黄斑脉络膜毛细血管的小叶状性质的病变。
[0120] 在一个方面，本文所述的方法可以包括对受试者的血管相关黄斑病或其症状进行诊断，包括在受试者的眼睛中检测异常脉络膜毛细血管小叶的存在，其中在所述受试者的眼睛中存在异常脉络膜毛细血管小叶则指示可以诊断出所述受试者存在血管相关黄斑病或其症状，并且其中血管相关黄斑病的症状是黄斑变性、年龄相关性黄斑变性、心脏微血管疾病、斯特格氏病、弹性假黄瘤（PXE）、Alagille综合征、皮层下脑白质病、子痫前期、高血压、糖尿病、心肌缺血、动脉瘤、因自身免疫性疾病或感染因子所致的血管炎、深静脉血栓形成、淋巴水肿、静脉曲张、外周动脉疾病、肾动脉疾病、雷诺氏病、伯格氏病、外周静脉疾病、静脉血凝块、动脉粥样硬化、动脉硬化症、小动脉硬化、冠状动脉疾病、心绞痛、充血性心力衰竭、动脉硬化、血栓性或栓塞性中风或心肌梗塞。在另一个方面，血管相关黄斑病的症状可以是重构黄斑脉络膜毛细血管的小叶状性质的病变，包括但不限于视网膜色素上皮死亡（RPE）、布鲁赫膜或RPE下腔发生改变、光感受器间隔或视网膜下腔发生改变、与异常脉络膜毛细血管小叶产生（如脉络膜基质发生改变、上游血管结构发生改变、下游血管结构发生改变或缺血）有关的其它视网膜异常或病变、光感受器死亡或眼周的鹅卵石样萎缩。
[0121] 在另一个方面，本文所述的方法可以包括鉴定受试者的组织或器官中产生血管相关黄斑病的症状的易感性，包括在受试者的眼睛中检测异常脉络膜毛细血管小叶的存在，其中在所述受试者眼睛的黄斑中检测出异常脉络膜毛细血管小叶指示所述受试者的组织或器官中易产生血管相关黄斑病的症状，并且其中所述症状是年龄相关性黄斑变性（AMD）、心脏微血管疾病、皮层下脑白质病或子痫前期。
[0122] 本文所用的“血管相关黄斑病的症状”意思是侵害受试者的循环系统的任何病状。例如（而不限于），血管相关黄斑病的症状可以是黄斑变性、年龄相关性黄斑变性、心脏微血管疾病、斯特格氏病、弹性假黄瘤（PXE）、Alagille综合征、皮层下脑白质病、子痫前期、高血压、糖尿病、心肌缺血、动脉瘤、因自身免疫性疾病或感染因子所致的血管炎、深静脉血栓形成、淋巴水肿、静脉曲张、外周动脉疾病、肾动脉疾病、雷诺氏病、伯格氏病、外周静脉疾病、静脉血凝块、动脉粥样硬化、动脉硬化症、小动脉硬化、冠状动脉疾病、心绞痛、充血性心力衰竭、动脉硬化、血栓性或栓塞性中风或心肌梗塞。“血管相关黄斑病的症状”还可以是重构黄斑脉络膜毛细血管的小叶状性质的病变，包括但不限于视网膜色素上皮死亡（RPE）、布鲁赫膜或RPE下腔发生改变、光感受器间隔或视网膜下腔发生改变、与异常脉络膜毛细血管小叶产生（如脉络膜基质发生改变、上游血管结构发生改变、下游血管结构发生改变或缺血）有关的其它视网膜异常或病变、光感受器死亡或眼周的鹅卵石样萎缩。“血管相关黄斑病的症状”还可以是引起视力发生改变而偏离正常的任何视力病状，例如（而不限于）视力模糊、虹视、盲点、飞蚊症以及其它症状。
[0123] 血管相关黄斑病的症状通常与心脏相关联；然而，所述病状还可以侵害多种其它组织或器官，如脑、脊髓、肌肉、骨骼、眼睛、耳朵、肾脏、子宫、胎盘、皮肤、粘膜、胃、肝脏、肺、胆囊、脾脏、阑尾、小肠、大肠、胰腺、前列腺或膀胱。
[0124] 在心脏中出现的血管相关黄斑病的症状（如冠状动脉微血管疾病）即使在人类受试者的冠状动脉中不存在显著疾病的情况下也可能会导致所述受试者发生心肌梗塞。此外，患有血管相关黄斑病的人类受试者可能会产生例如皮层下脑白质病，所述皮层下脑白质病可能以痴呆的形式存在。另外，在脑中出现的血管相关黄斑病的症状可能是癫痫发作、记忆力丧失、步态不稳、神经肌肉萎缩、瘫痪、中风以及失明。在人类受试者的胎盘中出现的血管相关黄斑病的症状可能表现为子痫前期，伴有高血压和蛋白尿的体征和症状。
[0125] 可能受到血管相关黄斑病的症状侵害的组织或器官的实例包括但不限于心脏、血管、脑、脊髓、肌肉、骨骼、眼睛、耳朵、肾脏、子宫、胎盘、皮肤、粘膜、胃、肝脏、肺、胆囊、脾脏、阑尾、小肠、大肠、胰腺、前列腺或膀胱。
[0126] 在一个方面，血管相关黄斑病的症状可能是小血管疾病。本文所用的“小血管疾病”或“SVD”是指造成向器官或组织提供血流或从器官或组织提供血流的较小血管变得狭窄的病状。SVD的实例包括但不限于伴有皮层下梗死和脑白质病的常染色体隐性脑动脉病（CARASIL）、伴有脑白质营养不良的视网膜血管病变（RVCL）以及IV型胶原蛋白α1（COL4A1）相关病症。伴有皮层下梗死和脑白质病的常染色体显性脑动脉病（CADASIL）仍然是由编码细胞信号转导受体的NOTCH3基因中发生>190处不同的突变所引起的最常见的遗传性小血管疾病（SVD）。
[0127] 因此，在受试者的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶的存在可以为医师鉴定出侵害所述受试者体内其它组织或器官的小血管疾病的可能性，所述其它组织或器官包括但不限于心脏、血管、脑、脊髓、肌肉、骨骼、眼睛、耳朵、肾脏、子宫、胎盘、皮肤、粘膜、胃、肝脏、肺、胆囊、脾脏、阑尾、小肠、大肠、胰腺、前列腺或膀胱。
[0128] 例如，在心脏中出现的血管相关黄斑病的症状可以包括冠状动脉微血管疾病，所述冠状动脉微血管疾病即使在人类受试者的冠状动脉中不存在显著疾病的情况下也可能会导致所述受试者发生心肌梗塞。冠状动脉微血管疾病是心脏中的小动脉变得狭窄并且会引起心脏病的体征和症状（如胸痛（心绞痛））的一种病状。通常在医师对心脏中引起冠状动脉疾病的大动脉堵塞进行检查并且发现几乎没有或没有变狭窄之后对小血管疾病作出诊断。因此，在眼睛的黄斑中存在异常脉络膜毛细血管小叶可以提醒医师受试者可能患有血管相关黄斑病的症状，如引起受试者的体征和症状的心脏小血管疾病。
[0129] 此外，患有血管相关黄斑病的受试者可能会产生例如皮层下脑白质病，所述皮层下脑白质病可能以痴呆的形式存在。在脑中出现的血管相关黄斑病的其它神经症状的非限制性实例包括但不限于失语症、癫痫发作、记忆力丧失、步态不稳、神经肌肉萎缩、瘫痪、丧失平衡、听力损失、中风以及失明。
[0130] 在受试者的胎盘中出现的血管相关黄斑病的症状可能表现为子痫前期，伴有高血压和蛋白尿的体征和症状。
[0131] 在一个方面，血管相关黄斑病的症状可能以黄斑变性形式存在。例如（而不限于），黄斑变性可能是年龄相关性黄斑病症（AMD）、北卡罗来纳黄斑营养不良、索斯比氏眼底营养不良（Sorsby's fundus dystrophy）、斯特格氏病、图形样营养不良、贝斯特氏病（Best's disease）、显性玻璃膜疣、遗传性黄斑变性疾病（malattia leventinese）、浆液性视网膜脱离、脉络膜视网膜变性、视网膜变性、光感受器变性、视网膜色素上皮（RPE）变性、粘多糖贮积症、视杆-视锥细胞营养不良、视锥-视杆细胞营养不良或视锥细胞变性。
[0132] 在一个方面，血管相关黄斑病可能会引起眼睛黄斑中的脉络膜毛细血管小叶中的灌注减少。在另一个方面，血管相关黄斑病可能会引起眼睛黄斑中的脉络膜毛细血管小叶部分或完全封堵。可能会引起脉络膜毛细血管小叶、脉络膜小动脉、睫状动脉、眼动脉、颈内动脉以及颈总动脉部分或完全封堵或阻塞的血管相关黄斑病的症状的实例包括但不限于动脉粥样硬化、动脉硬化症、小动脉硬化、血管炎、真性红细胞增多症、白血病、高粘稠度综合征、血栓栓塞性疾病、糖尿病、感染性疾病、脓毒性栓子、霉菌性栓子、过敏性疾病、赘生物、自身免疫性疾病等。
[0133] 另外，脉络膜毛细血管小叶、脉络膜小动脉、睫状动脉、眼动脉、颈内动脉或颈总动脉部分或完全阻塞可能会引起与血管相关黄斑病相关联的多种症状，包括但不限于动脉粥样硬化、动脉硬化症、小动脉硬化、血管炎、真性红细胞增多症、白血病、高粘稠度综合征、血栓栓塞性疾病、糖尿病、感染性疾病、脓毒性栓子、霉菌性栓子、过敏性疾病、赘生物、自身免疫性疾病等。脉络膜毛细血管小叶、脉络膜小动脉、睫状动脉、眼动脉、颈内动脉以及颈总动脉部分或完全封堵或阻塞的其它成因包括但不限于创伤、物理因素、辐射、毒素以及药物。
[0134] 在一个方面，血管相关黄斑病的症状可能出现在除眼睛以外的组织或器官中。因此，本文还描述了对受试者的血管相关黄斑病的症状进行诊断的方法，所述方法包括在所述受试者的眼睛中检测异常脉络膜毛细血管小叶的存在，其中在所述受试者的眼睛中存在异常脉络膜毛细血管小叶则指示可以诊断出所述受试者存在血管相关黄斑病的症状，并且其中血管相关黄斑病的症状并不表现为眼睛的疾病或血管疾病。
[0135] 另外，本文描述了鉴定受试者的组织或器官中产生血管相关黄斑病的症状的易感性的方法，所述方法包括在受试者的眼睛中检测异常脉络膜毛细血管小叶，其中在所述受试者的眼睛中检测出异常脉络膜毛细血管小叶指示所述受试者的组织或器官中易产生血管相关黄斑病的症状，并且其中血管相关黄斑病的症状并不表现为眼睛的疾病或血管疾病。
[0136] 在一个方面，本文所述的方法可以进一步包括确定视网膜动脉（A）或静脉（V）直径的比率，其中直径比率（A:V）是约0.60至约1.48则进一步指示可以诊断出血管相关黄斑病或其症状。在另一个方面，直径的比率（A:V）是约0.60至约1.48还可以指示受试者有可能具有异常脉络膜毛细血管小叶。在另一个方面，直径的比率（A:V）是约0.8可以进一步指示可以诊断出血管相关黄斑病或其症状，或可以指示受试者有可能具有异常脉络膜毛细血管小叶。在又另一个方面，确定动脉和静脉的单独的测量结果不正常可以指示可以诊断出血管相关黄斑病或其症状，或可以指示受试者有可能具有异常脉络膜毛细血管小叶。在再另一个方面，可以通过测量例如眼眶血管、颈动脉、眼动脉或睫状后动脉的血流量来对血管相关黄斑病或其症状作出诊断，或对异常脉络膜毛细血管小叶作出诊断。可以使用多普勒或本领域中已知的其它技术来测量血流量。在又另一个方面，可以通过使用例如3T MRI或本领域中已知的其它技术评估眼眶中的血管构造来对血管相关黄斑病或其症状作出诊断或对异常脉络膜毛细血管小叶作出诊断。
[0137] 本文还描述了鉴定受试者的严重或晚期黄斑病的方法，所述方法包括在受试者的眼睛中检测异常脉络膜毛细血管小叶，其中在所述受试者的眼睛中检测出异常脉络膜毛细血管小叶则指示所述受试者易产生严重或晚期黄斑病。这种方法可以进一步包括在受试者的眼睛中检测地图状萎缩的面积。地图状萎缩可能由大面积脉络膜毛细血管丧失导致。因此，在一个方面，可以使用本文所述的方法来预测受试者的黄斑疾病发展的速率。这种方法可以更进一步包括在受试者的眼睛中检测脉络膜新血管生成（CNV）。CNV可能由视网膜或脉络膜中由异常脉络膜毛细血管小叶所驱动的缺血所引起。
[0138] 本文还描述了鉴定受试者的血管相关黄斑病的症状的方法，所述方法包括在受试者的眼睛中检测异常脉络膜毛细血管小叶，其中在所述受试者的眼睛中检测出异常脉络膜毛细血管小叶则指示所述受试者易产生血管相关黄斑病的症状。这种方法可以进一步包括在受试者的眼睛中检测地图状萎缩的面积。地图状萎缩可能由大面积脉络膜毛细血管丧失导致。因此，在一个方面，可以使用本文所述的方法来预测受试者的血管相关黄斑病或黄斑疾病的症状发展的速率。
[0139] 本文还描述了用于对患有血管相关黄斑病、严重或晚期黄斑病或异常脉络膜毛细血管小叶的受试者进行诊断的方法，所述方法包括：生成所述受试者眼睛的图像，在所述受试者眼睛的图像中检测异常脉络膜毛细血管小叶的存在，其中在所述受试者的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶的存在使得可以诊断出血管相关黄斑病、严重或晚期黄斑病或异常脉络膜毛细血管小叶。在一个方面，在所述受试者的眼睛中不存在异常脉络膜毛细血管小叶则可以使得作出以下诊断：所述受试者未患有血管相关黄斑病、严重或晚期黄斑病或异常脉络膜毛细血管小叶。
[0140] 在一个方面，所述方法可以进一步包括在从受试者获得的样品中，确定HTRA1、ARMS2或CFH基因中一个或多个SNP的身份，其中所述一个或多个SNP是(i)HTRA1基因中的rs11200638、HTRA1基因中的rs1049331、HTRA1基因中的rs2672587、ARMS2基因
中的rs10490924、ARMS2基因中的rs3750848、CFH基因中的rs1061170或CFH基因中的
rs800292，或(ii)与(i)中的SNP存在连锁不平衡的SNP，从而基于(i)或(ii)中的一个
或多个SNP的存在对所述受试者进行诊断。
中的rs10490924、ARMS2基因中的rs3750848、CFH基因中的rs1061170或CFH基因中的
rs800292，或(ii)与(i)中的SNP存在连锁不平衡的SNP，从而基于(i)或(ii)中的一个
或多个SNP的存在对所述受试者进行诊断。
[0141] 本文还描述了用于鉴定异常脉络膜毛细血管小叶的系统，所述系统包括用于对眼睛进行成像的装置，所述装置被配置成提供异常脉络膜毛细血管小叶的可识别图像；以及用于鉴定异常脉络膜毛细血管小叶的说明书。本文所述或本领域中已知的用于对眼睛进行成像的任何装置可以与所述系统一起使用。例如（而不限于），所述装置可以是近红外反射和SD-OCT装置或多普勒成像装置。
[0142] 2.HTRA1和ARMS2单核苷酸多态现象
[0143] 本文描述了包含HTRA1和ARMS2基因中的多种变异的一组多态现象和单倍型。这些多态现象和单倍型中的一个或多个与血管相关黄斑病或其症状相关联。对这些和其它多态现象以及多态现象的集合（例如单倍型）进行检测可用于设计和进行针对血管相关黄斑病或其症状的诊断测定。可以通过分析核酸、通过分析由HTRA1或ARMS2编码序列编码的多肽（包括由剪接变体编码的多肽）、通过分析HTRA1或ARMS2非编码序列，或通过本领域中已知的其它方式来检测多态现象以及多态现象的集合。对这类多态现象和单倍型进行分析还可以用于设计针对血管相关黄斑病或其症状的防治方案和治疗方案。
[0144] 术语“多态现象”是指群体中存在一个或多个由遗传决定的替代性序列或等位基因。“多态位点”是存在序列趋异的基因座。多态位点具有至少一个等位基因。双等位基因多态现象具有两个等位基因。三等位基因多态现象具有三个等位基因。二倍体有机体的等位基因形式可能是纯合的或杂合的。多态位点可以小到一个碱基对。多态位点的实例包括：限制性片段长度多态现象（RFLP）、数目可变的串联重复序列（VNTR）、高变区、小卫星（minisatellite）、二核苷酸重复序列、三核苷酸重复序列、四核苷酸重复序列以及简单重复序列。如本文所用，对“多态现象”的提及可以涵盖一组多态现象（即单倍型）。
[0145] “单核苷酸多态现象（SNP）”可以存在于由单个核苷酸所占据的多态位点处，所述多态位点是等位基因序列之间的变异位点。在所述位点之前以及之后可以是等位基因的高度保守序列。SNP通常因多态位点上一个核苷酸取代另一个核苷酸而引起。一个嘌呤被另一个嘌呤所置换或一个嘧啶被另一个嘧啶所置换被称作转换。嘌呤被嘧啶所置换或反之被称作颠换。同义SNP是指在编码区中不会改变所编码的多肽的氨基酸序列的核苷酸之间的取代。非同义SNP是指编码区中使得所编码多肽的氨基酸序列发生改变的核苷酸之间的取代。SNP还可能由相对于参考等位基因一个或多个核苷酸缺失或插入而引起。
[0146] 一“组”多态现象的意思是一个或多个多态现象，例如至少1个、至少2个、至少3个、至少4个、至少5个、至少6个或多于6个例如在HTRA1或ARMS2基因中已知的多态现象。
[0147] 本文所用的“单倍型”的意思是包含在个体的单个染色体的亚区上所含有的一个或多个相关的多态现象的DNA序列。单倍型可以指的是单个基因、基因间序列或包括基因和基因间序列两者的更大的序列（例如一组基因或一组基因和基因间序列）中的一组多态现象。例如，单倍型可以指的是染色体10q26基因座中的一组多态现象，所述染色体10q26基因座包括了ARMS2、HTRA1的基因序列以及基因间序列（即与基因区中的多态现象存在连锁不平衡的间插基因间序列、上游序列以及下游序列）。术语“单倍型”可以指的是单个染色体上被认为彼此具有统计学关联性的一组单核苷酸多态现象（SNP）。单倍型还可以指的是单个染色体上被认为彼此具有统计学关联性的多态现象（例如SNP）和其它遗传标记（例如插入或缺失）的组合。“双倍型”是一对单倍型。例如，双倍型可以包含一个保护性单倍型和一个风险性单倍型、两个保护性单倍型、两个风险性单倍型、一个中性单倍型和一个风险性单倍型、一个中性单倍型和一个保护性单倍型或两个中性单倍型。在一些情况下，一个单倍型可能是显性的或一个单倍型可能是隐性的。
[0148] HTRA1也被称为HtrA丝氨酸肽酶1、L56、HtrA、ARMD7、ORF480或PRSS11，是编码HTRA1蛋白的基因，所述蛋白质是丝氨酸蛋白酶的胰蛋白酶家族的成员。HTRA1的NCBI基因识别号是5654，并且本领域技术人员可以通过访问http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/并且针对HTRA1进行搜索而容易地获得关于HTRA1的另外的信息。例如（而不限于），通过访问关于HTRA1的NCBI基因网页，本领域技术人员可以容易地获得如下的信息，如HTRA1的基因组位置、HTRA1蛋白特性的概述、关于HTRA1的细胞定位的信息、关于HTRA1的同源物和变体（例如剪接变体）的信息，以及多个HTRA1参考序列，如HTRA1的基因组序列、HTRA1的mRNA序列以及HTRA1的蛋白质序列。本文所阐述的可以容易地从HTRA1NCBI基因条目和NCBI基因编号获得的所有信息在此以引用的方式整体并入本文。
[0149] ARMS2也被称为年龄相关性黄斑病易感因子2或ARMD8，是编码ARMS2蛋白的基因。ARMS2的NCBI基因识别号是387715，并且本领域技术人员可以通过访问http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/并且针对ARMS2进行搜索而容易地获得关于ARMS2的另外的信
息。通过访问关于ARMS2的NCBI基因网页，本领域技术人员可以容易地获得如下的信息，如ARMS2的基因组位置、ARMS2蛋白特性的概述、关于ARMS2的细胞定位的信息、关于ARMS2的同源物和变体（例如剪接变体）的信息，以及多个ARMS2参考序列，如ARMS2的基因组序列、ARMS2的mRNA序列以及ARMS2的蛋白质序列。本文所阐述的可以容易地从ARMS2NCBI基因条目和NCBI基因编号获得的所有信息在此以引用的方式整体并入本文。
息。通过访问关于ARMS2的NCBI基因网页，本领域技术人员可以容易地获得如下的信息，如ARMS2的基因组位置、ARMS2蛋白特性的概述、关于ARMS2的细胞定位的信息、关于ARMS2的同源物和变体（例如剪接变体）的信息，以及多个ARMS2参考序列，如ARMS2的基因组序列、ARMS2的mRNA序列以及ARMS2的蛋白质序列。本文所阐述的可以容易地从ARMS2NCBI基因条目和NCBI基因编号获得的所有信息在此以引用的方式整体并入本文。
[0150] 除非另外指出，否则本文所用的“HTRA1”或“ARMS2”包括了来自保留了HTRA1或ARMS2的至少一种活性的任何有机体的任何HTRA1或ARMS2基因、核酸（DNA或RNA）或蛋白质。另外，本文所用的“HTRA1”或“ARMS2”包括了HTRA1或ARMS2基因的基因组DNA或RNA中存在的任何非编码序列或之间存在的基因间序列。当提及HTRA1或ARMS2时，这还包括了来自任何有机体并且可能充当与血管相关黄斑病或其症状相关联的HTRA1或ARMS2核酸或蛋白质的任何HTRA1或ARMS2基因、核酸（DNA或RNA）或蛋白质。例如，核酸或蛋白质序列可以来自于或处于受试者的细胞中。
[0151] 本文所用的“核酸”、“多核苷酸”或“寡核苷酸”是具有任何长度的核苷酸聚合形式，可能是DNA或RNA，并且可能是单链或双链的。核酸可能包括启动子或其它调控序列。寡核苷酸通常是通过合成方式来制备的。核酸包括了跨越或侧接HTRA1或ARMS2基因中已知的多态位点中的任何一个的DNA片段或它们的互补序列。所述片段通常在5个与100个连续碱基之间并且经常在5个、10个、15个、20个或25个核苷酸的下限至10个、15个、20个、25个、30个、50个或100个核苷酸的上限范围内（其中上限大于下限）。具有5个与10个、5个与20个、10个与20个、12个与30个、15个与30个、10个与50个、20个与50个或
20个与100个之间的碱基的核酸是常见的。多态位点可以存在于片段的任何位置内。对双链核酸的一条链的序列的提及定义了互补序列，并且除非在根据上下文另外清晰明了的情况下，否则对核酸的一条链的提及还指它的互补序列。
20个与100个之间的碱基的核酸是常见的。多态位点可以存在于片段的任何位置内。对双链核酸的一条链的序列的提及定义了互补序列，并且除非在根据上下文另外清晰明了的情况下，否则对核酸的一条链的提及还指它的互补序列。
[0152] 对于某些应用，可以对核酸（例如RNA）分子进行修饰以增加细胞内稳定性并且延长半衰期。可能的修饰包括但不限于在分子的骨架内使用硫代磷酸酯或2'-O-甲基而非磷酸二酯键。经过修饰的核酸包括如下的肽核酸（PNA）和核酸，所述肽核酸和核酸具有不容易被内源性核酸内切酶所识别的非传统的碱基，如次黄嘌呤核苷、Q核苷（queosine）以及怀丁苷，以及腺嘌呤、胞嘧啶核苷、鸟嘌呤、胸腺嘧啶以及尿嘧啶核苷的乙酰基-、甲基-、硫代-以及以类似方式修饰的形式。
[0153] 本文所用的“杂交探针”是能够以碱基特异性方式与核酸的互补链结合的核酸。这类探针包括核酸和肽核酸（Nielsen等,1991）。可以在本领域中已知的严格条件下进行杂交。例如，参见Berger和Kimmel(1987)Methods In Enzymology,第152卷:Guide
To Molecular Cloning Techniques,San Diego:Academic Press,Inc.；Sambrook 等
(1989)Molecular Cloning:A Laboratory Manual, 第 2 版 , 第 1-3 卷 ,Cold Spring Harbor Laboratory；Sambook(2001) 第 3 版 ;Rychlik,W. 和 Rhoads,R.E.,1989,Nucl.Acids Res.17,8543；Mueller,P.R. 等 (1993)Current Protocols in Molecular
Biology15.5,Greene Publishing Associates,Inc. 和 John Wiley and Sons,New
York；以及Anderson和Young,Quantitative Filter Hybridization in Nucleic Acid Hybridization(1985))。本文所用的术语“探针”包括引物。探针和引物有时被称为“寡核苷酸”。
To Molecular Cloning Techniques,San Diego:Academic Press,Inc.；Sambrook 等
(1989)Molecular Cloning:A Laboratory Manual, 第 2 版 , 第 1-3 卷 ,Cold Spring Harbor Laboratory；Sambook(2001) 第 3 版 ;Rychlik,W. 和 Rhoads,R.E.,1989,Nucl.Acids Res.17,8543；Mueller,P.R. 等 (1993)Current Protocols in Molecular
Biology15.5,Greene Publishing Associates,Inc. 和 John Wiley and Sons,New
York；以及Anderson和Young,Quantitative Filter Hybridization in Nucleic Acid Hybridization(1985))。本文所用的术语“探针”包括引物。探针和引物有时被称为“寡核苷酸”。
[0154] 术语“引物”是指能够在适当的条件下，在适当的缓冲液中并且在适合的温度下充当模板引导的DNA合成的起始点的单链寡核苷酸。引物的适当长度取决于引物的预期用途，但典型地在15个至30个核苷酸的范围内。引物序列不需要与模板完全互补，但是必须具有足够的互补性以与模板杂交。术语“引物位点”是指目标DNA中与引物杂交的区域。术语“引物对”的意思是一组引物，包括5'端上游引物，所述5'端上游引物与待扩增的DNA序列的5'端杂交；和3'端下游引物，所述3'端下游引物与待扩增的序列的3'端的互补序列杂交。
[0155] 用于短探针和引物的示例性杂交条件是比所计算的Tm低约5℃至12℃。用于计算Tm的公式是已知的并且对于具有<14个碱基的寡核苷酸来说并且假定在50mM单价阳离子存在下进行反应的情况下，包括：Tm=4℃×(引物中G'和C'的数目）+2℃×(引物中A'和T'的数目)。对于更长的寡核苷酸，可以使用以下公式：Tm=64.9℃+41℃×(引物中G'和C'的数目-16.4)/N，其中N是引物的长度。另一个常用的公式考虑到了反应物的盐浓度（Rychlik（同上）；Sambrook（同上）；Mueller（同上））：Tm=81.5℃+16.6℃×(log10[Na+]+[K+])+0.41℃×(%GC)-675/N，其中N是寡核苷酸中核苷酸的数目。上述公式为某些应用提供了起始点；然而，具体的探针和引物的设计可能考虑到另外或不同的因素。用于设计用于本发明方法中的探针和引物的方法在本领域中是熟知的。
[0156] 本文所用的术语“风险性”、“保护性”以及“中性”被用于描述群体中的变异、SNP、单倍型、双倍型以及由特征在于这类变异模式的基因所编码的蛋白质。风险性SNP是包含至少一个变体多态现象的基因（例如HTRA1或ARMS2基因）的与产生血管相关黄斑病或其症状的风险增加相关联的等位基因形式。术语“变体”在被用于提及HTRA1或ARMS2基因时是指序列不同于群体中最普遍的序列的核苷酸序列。变体多态现象可以在基因的编码部分或非编码部分中。风险性HTRA1SNP的实例是HTRA1基因中的rs11200638SNP的A等位基因。风险性SNP可以是天然存在的或者可以通过重组技术加以合成。保护性SNP是包含至少一个变体多态现象的基因（在本文是HTRA1或ARMS2基因）的与产生血管相关黄斑病或其症状的风险降低相关联的等位基因形式。例如，一个保护性HTRA1SNP是HTRA1基因中的rs11200638SNP的G等位基因。保护性SNP可以是天然存在的或者可以通过重组技术加以合成。因此，HTRA1或ARMS2的“保护性”形式在向例如患有血管相关黄斑病或有产生血管相关黄斑病的风险的受试者施用时可以提供治疗益处，并且因此可以“保护”所述受试者免患疾病。
[0157] 术语“变体”在本文所述的SNP的情况下还可以指的是序列与群体中最普遍的序列例如有一个核苷酸不同的核苷酸序列。例如，HTRA1或ARMS2基因的核苷酸序列中发生一些变异或取代会改变密码子，因此编码出不同的氨基酸，从而产生变体多肽。术语“变体”还可以指的是序列在不会改变所编码多肽的氨基酸序列（即保守改变）的位置上不同于群体中最普遍的序列的多肽。变体多肽可以由风险性单倍型编码、由保护性单倍型编码，或可以由中性单倍型编码。变体HTRA1或ARMS2多肽可能与风险相关联、与保护作用相关联，或可能是中性的。
[0158] “分离的核酸”或“经过纯化的核酸”的意思是如下的DNA，所述DNA不含在产生本发明DNA的有机体的天然存在的基因组中侧接所述基因的基因。所述术语因此包括例如如下的重组DNA，所述重组DNA被并入到如自主复制的质粒或病毒的载体中；或被并入到原核生物或真核生物的基因组DNA中（例如转基因）；或以单独的分子形式存在（例如由PCR、限制性核酸内切酶消化或者化学合成或体外合成所产生的cDNA或基因组或cDNA片段）。它还包括作为编码另外的多肽序列的杂合基因的一部分的重组DNA。术语“分离的核酸”还指的是由分离的DNA分子编码，或者以化学方式合成，或者与至少一些细胞组分（例如其它类型的RNA分子或多肽分子）分离或大致上不含至少一些细胞组分的RNA，例如mRNA分子。
[0159] “分离的多肽”或“经过纯化的多肽”的意思是如下的多肽（或其片段），所述多肽大致上不含在自然界中通常与所述多肽相缔合的物质。本发明的多肽或其片段可以例如通过从天然来源（例如哺乳动物细胞）中提取、通过使编码所述多肽的重组核酸表达（例如在细胞或无细胞翻译系统中），或通过对所述多肽进行化学合成而获得。另外，可以通过这些方法中的任一种或通过使全长多肽裂解来获得多肽片段。
[0160] 两个氨基酸序列在它们至少约80%同一、至少约90%同一、至少约95%同一、至少约98%同一，或至少约99%同一时被认为具有“相当大的同一性”。序列同一性百分比典型地通过确定两个序列之间的最优比对并且对这两个序列进行比较来计算。可以通过目测；或使用Smith和Waterman,1981,Adv.Appl.Math.2:482的局部同源性算法；使
用Needleman和Wunsch,1970,J.Mol.Biol.48:443的同源性比对算法；使用Pearson和
Lipman,1988,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.85:2444的相似性搜索方法；通过使用用于氨基酸比较的缺省参数（例如用于空隙评分等）计算机化实现这些算法（例如在威斯康星遗传学软件包（Wisconsin Genetics Software Package）,遗传学计算机小组（Genetics Computer Group）,575Science Dr.,Madison,Wis.中）来对序列进行最优比对。有时希望描述两个序列之间与特定的长度或区域有关的序列同一性（例如两个序列可能被描述为在至少500个碱基对的长度上具有至少95%同一性）。通常，所述长度将是至少约50个、100个、200个、300个、400个、500个、600个、700个、800个、900个或1000个氨基酸，或参考蛋白的全长。两个氨基酸序列在它们有1个、2个或3个残基不同，或有2个至20个残基、2个至10个残基、3个至20个残基或3个至10个残基不同的情况下也可以被认为具有相当
大的同一性。
用Needleman和Wunsch,1970,J.Mol.Biol.48:443的同源性比对算法；使用Pearson和
Lipman,1988,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.85:2444的相似性搜索方法；通过使用用于氨基酸比较的缺省参数（例如用于空隙评分等）计算机化实现这些算法（例如在威斯康星遗传学软件包（Wisconsin Genetics Software Package）,遗传学计算机小组（Genetics Computer Group）,575Science Dr.,Madison,Wis.中）来对序列进行最优比对。有时希望描述两个序列之间与特定的长度或区域有关的序列同一性（例如两个序列可能被描述为在至少500个碱基对的长度上具有至少95%同一性）。通常，所述长度将是至少约50个、100个、200个、300个、400个、500个、600个、700个、800个、900个或1000个氨基酸，或参考蛋白的全长。两个氨基酸序列在它们有1个、2个或3个残基不同，或有2个至20个残基、2个至10个残基、3个至20个残基或3个至10个残基不同的情况下也可以被认为具有相当
大的同一性。
[0161] 应了解，HTRA1或ARMS2基因中的多态位点可能与血管相关黄斑病或其症状相关联，其中血管相关黄斑病的症状可以是黄斑变性、年龄相关性黄斑变性、心脏微血管疾病、斯特格氏病、弹性假黄瘤（PXE）、Alagille综合征、皮层下脑白质病、子痫前期、高血压、糖尿病、心肌缺血、动脉瘤、因自身免疫性疾病或感染因子所致的血管炎、深静脉血栓形成、淋巴水肿、静脉曲张、外周动脉疾病、肾动脉疾病、雷诺氏病、伯格氏病、外周静脉疾病、静脉血凝块、动脉粥样硬化、动脉硬化症、小动脉硬化、冠状动脉疾病、心绞痛、充血性心力衰竭、动脉硬化、血栓性或栓塞性中风、心肌梗塞、伴有皮层下梗死和脑白质病的常染色体隐性脑动脉病（CARASIL）、伴有脑白质营养不良的视网膜血管病变（RVCL）以及IV型胶原蛋白α1（COL4A1）相关病症或伴有皮层下梗死或脑白质病的常染色体显性脑动脉病（CADASIL）。
[0162] HTRA1或ARMS2基因中的示例性多态位点作为实例描述于本文中并且不意图具限制性。还可以使用这些多态位点或SNP来进行本发明的方法。此外，应了解的是，这些HTRA1或ARMS2多态现象可用于连锁和关联性研究、对临床群体进行基因分型、基因型信息与表型信息的相关性、杂合性丢失分析、鉴定细胞样品的来源并且还可以用于使潜在的治疗剂靶向细胞。
[0163] 应了解的是，在本文的表中没有明确描述的HTRA1或ARMS2基因中另外的多态位点可以进一步改进这一分析。使用HTRA1或ARMS2基因中的非同义多态现象进行的SNP分析可以用于鉴定变体HTRA1或ARMS2多肽。与风险相关联的其它SNP可以编码序列与
由中性或保护性SNP所编码的蛋白质相同的蛋白质，但是在启动子或内含子中含有例如使HTRA1或ARMS2表达的水平或部位发生改变的等位基因。还应了解的是，HTRA1或ARMS2基因中的多态现象可能与相邻基因中的变异具有连锁性。相邻基因中的变异可能会使得所编码的蛋白质的表达或形式发生改变并且在携带者体内具有有害作用或保护作用。
由中性或保护性SNP所编码的蛋白质相同的蛋白质，但是在启动子或内含子中含有例如使HTRA1或ARMS2表达的水平或部位发生改变的等位基因。还应了解的是，HTRA1或ARMS2基因中的多态现象可能与相邻基因中的变异具有连锁性。相邻基因中的变异可能会使得所编码的蛋白质的表达或形式发生改变并且在携带者体内具有有害作用或保护作用。
[0164] 本文所提供的方法和物质可以被用于确定受试者（例如人类）的HTRA1或ARMS2核酸是否含有多态现象，如单核苷酸多态现象（SNP）。例如，本文所提供的方法和物质可以被用于确定受试者是否具有变体SNP。可以使用任何方法来检测HTRA1或ARMS2核酸中的多态现象。例如，可以通过对外显子、内含子或非翻译序列进行测序、变性高效液相色谱法（DHPLC）、等位基因特异性杂交、等位基因特异性限制性消化、突变特异性聚合酶链反应、单链构象多态现象检测以及这些方法的组合来检测多态现象。
[0165] 本文描述了用于在人类受试者中预测受试者患有或产生血管相关黄斑病的风险的方法，所述方法包括：确定所述受试者体内HTRA1、ARMS2或CFH基因中一个或多个SNP的身份，其中所述一个或多个SNP是(i)HTRA1基因中的rs11200638、HTRA1基因中
的rs1049331、HTRA1基因中的rs2672587、ARMS2基因中的rs10490924、ARMS2基因中的rs3750848、CFH基因中的rs1061170或CFH基因中的rs800292，或(ii)与(i)中的SNP存
在连锁不平衡的SNP，其中所述SNP中的一个或多个的存在预示所述受试者有患有或产生血管相关黄斑病的风险。在一个方面，所述方法可以预测受试者患有或产生严重黄斑病或晚期黄斑病的风险。在另一个方面，所述方法可以预测受试者具有或产生异常脉络膜毛细血管小叶的风险。
的rs1049331、HTRA1基因中的rs2672587、ARMS2基因中的rs10490924、ARMS2基因中的rs3750848、CFH基因中的rs1061170或CFH基因中的rs800292，或(ii)与(i)中的SNP存
在连锁不平衡的SNP，其中所述SNP中的一个或多个的存在预示所述受试者有患有或产生血管相关黄斑病的风险。在一个方面，所述方法可以预测受试者患有或产生严重黄斑病或晚期黄斑病的风险。在另一个方面，所述方法可以预测受试者具有或产生异常脉络膜毛细血管小叶的风险。
[0166] 在一个方面，确定rs11200638SNP处的A、rs1049331SNP处的T、rs2672587SNP处的G、rs10490924SNP处的T、rs3750848SNP处的G、rs1061170SNP处的C，或rs800292SNP处的G的身份可预示所述受试者有患有或产生血管相关黄斑病、严重或晚期黄斑病或异常脉络膜毛细血管小叶的风险。
[0167] 在另一个方面，确定rs11200638SNP处的A、rs1049331SNP处的T、rs2672587SNP处的G、rs10490924SNP处的T、rs3750848SNP处的G、rs1061170SNP处的C，或rs800292SNP处的G的身份可预示所述受试者患有或产生血管相关黄斑病、严重或晚期黄斑病或异常脉络膜毛细血管小叶的风险增加。
[0168] 在另一个方面，确定rs11200638SNP处的G、rs1049331SNP处的C、rs2672587SNP处的C、rs10490924SNP处的G、rs3750848SNP处的T、rs1061170SNP处的T，或rs800292SNP处的A的身份可预示所述受试者有患有或产生血管相关黄斑病、严重或晚期黄斑病或异常脉络膜毛细血管小叶的风险。
[0169] 在再另一个方面，确定rs11200638SNP处的G、rs1049331SNP处的C、rs2672587SNP处的C、rs10490924SNP处的G、rs3750848SNP处的T、rs1061170SNP处的T，或rs800292SNP处的A的身份可预示所述受试者患有或产生血管相关黄斑病、严重或晚期黄斑病或异常脉络膜毛细血管小叶的风险降低。
[0170] 在一个方面，本文所述的方法可以进一步包括：生成所述受试者眼睛的图像，使用所述图像检测所述受试者的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶的存在，其中在所述受试者的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶的存在预示所述受试者有患有或产生血管相关黄斑病的风险。本文所用的血管相关黄斑病可以进一步包含与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状，其中血管相关黄斑病的一种或多种症状是黄斑变性、年龄相关性黄斑变性、心脏微血管疾病、斯特格氏病、弹性假黄瘤（PXE）、Alagille综合征、皮层下脑白质病、子痫前期、高血压、糖尿病、心肌缺血、动脉瘤、因自身免疫性疾病或感染因子所致的血管炎、深静脉血栓形成、淋巴水肿、静脉曲张、外周动脉疾病、肾动脉疾病、雷诺氏病、伯格氏病、外周静脉疾病、静脉血凝块、动脉粥样硬化、动脉硬化症、小动脉硬化、冠状动脉疾病、心绞痛、充血性心力衰竭、动脉硬化、血栓性或栓塞性中风或心肌梗塞。
[0171] 在另一个方面，本文所述的方法可以进一步包括确定视网膜动脉或静脉的直径的比率，其中视网膜动脉（A）或静脉（V）的直径的比率是约0.60至约1.48则可以预测所述受试者有患有或产生血管相关黄斑病、严重或晚期黄斑病或异常脉络膜毛细血管小叶的风险。
[0172] 本文还描述了用于对患有血管相关黄斑病的受试者进行诊断的方法，所述方法包括：在从所述受试者获得的样品中，确定HTRA1、ARMS2或CFH基因中一个或多个SNP的身份，其中所述一个或多个SNP是(i)HTRA1基因中的rs11200638、HTRA1基因中的
rs1049331、HTRA1基因中的rs2672587、ARMS2基因中的rs10490924、ARMS2基因中的
rs3750848、CFH基因中的rs1061170或CFH基因中的rs800292，或(ii)与(i)中的SNP
存在连锁不平衡的SNP，从而基于(i)或(ii)中的SNP的一种或多种变体的存在对所述受试者进行诊断，其中rs11200638SNP处的A、rs1049331SNP处的T、rs2672587SNP处的G、rs10490924SNP处的T、rs3750848SNP处的G、rs1061170SNP处的C或rs800292SNP处的
G可诊断出所述受试者患有血管相关黄斑病、严重或晚期黄斑病或异常脉络膜毛细血管小叶。在一个方面，确定rs11200638SNP处的G、rs1049331SNP处的C、rs2672587SNP处的C、rs10490924SNP处的G、rs3750848SNP处的T、rs1061170SNP处的T，或rs800292SNP处的A的身份可诊断出所述受试者未患有血管相关黄斑病、严重或晚期黄斑病或异常脉络膜毛细血管小叶。
rs1049331、HTRA1基因中的rs2672587、ARMS2基因中的rs10490924、ARMS2基因中的
rs3750848、CFH基因中的rs1061170或CFH基因中的rs800292，或(ii)与(i)中的SNP
存在连锁不平衡的SNP，从而基于(i)或(ii)中的SNP的一种或多种变体的存在对所述受试者进行诊断，其中rs11200638SNP处的A、rs1049331SNP处的T、rs2672587SNP处的G、rs10490924SNP处的T、rs3750848SNP处的G、rs1061170SNP处的C或rs800292SNP处的
G可诊断出所述受试者患有血管相关黄斑病、严重或晚期黄斑病或异常脉络膜毛细血管小叶。在一个方面，确定rs11200638SNP处的G、rs1049331SNP处的C、rs2672587SNP处的C、rs10490924SNP处的G、rs3750848SNP处的T、rs1061170SNP处的T，或rs800292SNP处的A的身份可诊断出所述受试者未患有血管相关黄斑病、严重或晚期黄斑病或异常脉络膜毛细血管小叶。
[0173] 本文描述了对受试者的血管相关黄斑病或其症状进行诊断的方法，所述方法包括确定所述受试者体内表1中所鉴定的一个或多个SNP的身份。
[0174] 本文还描述了对受试者的血管相关黄斑病或其症状进行诊断的方法，所述方法包括确定所述受试者体内HTRA1或AMRS2基因中一个或多个SNP的身份。例如，所述SNP可以包括但不限于HTRA1基因中的rs11200638和ARMS2基因中的rs10490924，其中HTRA1SNP处的A等位基因以及ARMS2SNP处的T等位基因指示存在血管相关黄斑病。
[0175] 本文还描述了对受试者的血管相关黄斑病或其症状进行诊断的方法，所述方法包括确定所述受试者体内HTRA1基因中的rs11200638和ARMS2基因中的rs10490924的身份，其中HTRA1基因中rs11200638处的A等位基因以及ARMS2基因中rs10490924处的T等位基因指示存在血管相关黄斑病或其症状。
[0176] 另外，本文描述了对受试者的血管相关黄斑病或其症状进行诊断的方法，所述方法包括确定所述受试者体内HTRA1或ARMS2基因中一个或多个SNP的身份。例如，所述SNP可以包括但不限于rs1049331、rs3750848或rs2672587，其中rs1049331、rs3750848或rs2672587中的一个或多个的存在指示存在血管相关黄斑病或其症状。
[0177] 在一个方面，对受试者的血管相关黄斑病或其症状进行诊断可以包括检测与本文所述的HTRA1或ARMS2多态现象存在连锁不平衡的一个SNP或多个SNP。
[0178] 此外，本文描述了对受试者的血管相关黄斑病或其症状进行诊断的方法，所述方法包括确定所述受试者体内一个或多个异常脉络膜毛细血管小叶相关SNP的身份。本文所用的异常脉络膜毛细血管小叶相关SNP的意思是指示异常脉络膜毛细血管小叶的存在或产生异常脉络膜毛细血管小叶的可能性的SNP。例如，所述SNP可以包括但不限于HTRA1基因中rs11200638SNP的A等位基因、ARMS2基因中rs10490924SNP的T等位基因、CFH基因中rs1061170的C等位基因或C3基因中rs2230199SNP的G等位基因，其中所述异常脉络
膜毛细血管小叶相关SNP中的一个或多个的存在指示存在血管相关黄斑病或其症状。
膜毛细血管小叶相关SNP中的一个或多个的存在指示存在血管相关黄斑病或其症状。
[0179] 在一个方面，“异常脉络膜毛细血管小叶相关SNP”还可以意指与本文所述的HTRA1、ARMS2、CFH或C3多态现象存在连锁不平衡的一个SNP或多个SNP。异常脉络膜毛细血管小叶相关SNP的实例包括但不限于表1和图39-42中所列的SNP。
[0180] 本文还描述了如下的试剂盒，所述试剂盒包含用于在受试者的核酸样品中检测一个或多个SNP的测定，其中所述SNP是(i)HTRA1基因中的rs11200638、HTRA1基因中的rs1049331、HTRA1基因中的rs2672587、ARMS2基因中的rs10490924、ARMS2基因中的rs3750848、CFH基因中的rs1061170或CFH基因中的rs800292；(ii)(i)中的SNP的组合；
或(iii)与(i)中的SNP存在连锁不平衡的SNP。在一个方面，所述试剂盒可以进一步包含用于使测定结果与受试者患有或产生血管相关黄斑病、严重或晚期黄斑病或异常脉络膜毛细血管小叶的风险相关联的说明书。
或(iii)与(i)中的SNP存在连锁不平衡的SNP。在一个方面，所述试剂盒可以进一步包含用于使测定结果与受试者患有或产生血管相关黄斑病、严重或晚期黄斑病或异常脉络膜毛细血管小叶的风险相关联的说明书。
[0181]
[0182]
[0183] 本文所用的“连锁”描述了基因、等位基因、基因座或遗传标记因它们在同一条染色体上的位置而倾向于共同遗传。可以通过两个基因、等位基因、基因座或遗传标记之间的重组百分比来测量连锁。典型地，存在于彼此相距50厘摩（cM）以内的基因座具有连锁性。连锁的标记可能存在于同一个基因或基因簇内。本文所用的“连锁不平衡”是处于两个或更多个基因座上的等位基因的非随机关联性，所述两个或更多个基因座未必处于同一条染色体上。它不等同于连锁，所述连锁描述了染色体上的两个或更多个基因座的关联性，其中在它们之间进行有限的重组。连锁不平衡描述了如下的情形：等位基因或遗传标记的一些组合在群体中出现的频率高于或低于基于等位基因的频率根据由所述等位基因随机形成单倍型所预期的频率。通过连锁不平衡（LD）度来测量不同基因座上的多态现象之间的非随机关联性。连锁不平衡的水平可能受多种因素的影响，所述因素包括遗传连锁、重组率、突变率、随机漂变、非随机交配以及群体结构。“连锁不平衡”或“等位基因关联性”因此意指特定的等位基因或遗传标记与另一个特定的等位基因或遗传标记的非随机关联性，它们在群体中同时出现的频率高于针对任何特定的等位基因频率所随机预期的频率。与信息标记（如本文所述的HTRA1或ARMS2SNP中的一个）存在连锁不平衡的标记可以用于检测对血管相关黄斑病或其症状的易感性。与本文所述的风险性、保护性或其它信息SNP或遗传标记存在连锁不平衡的SNP可以被称为“代理性”或“代替性”SNP。代理性SNP可能与本文所述的风险性、保护性或其它信息SNP或遗传标记存在至少50%、60%或70%连锁不平衡，并且在一个方面，与本文所述的风险性、保护性或其它信息SNP或遗传标记存在至少约80%、
90%，并且在另一个方面，存在91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或约100%的LD。
90%，并且在另一个方面，存在91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或约100%的LD。
[0184] 可以使用公众可获得的数据库，如HapMap数据库（http://ftp.hapmap.org/ld_data/latest/）和Haploview（Barrett,J.C.等,Bioinformatics21,263(2005)）来计算两个SNP之间的连锁不平衡。可以使用本文所述的方法来确定所鉴定的等位基因在疾病中的频率对在对照群体中的频率。可以利用统计分析来确定两个SNP之间的非随机关联性的显著性（例如哈代-温伯格平衡定律（Hardy-Weinberg Equilibrium）、基因型似然比（基因型p值）、卡方分析（Chi Square analysis）、费雪精确检验（Fishers Exact test））。两个SNP之间的非随机关联性具有统计显著性指示它们存在连锁不平衡并且一个SNP可以充当另一个SNP的代理性SNP。
[0185] 另外，本文描述了确定受试者将产生血管相关黄斑病或其症状的风险的方法，所述方法包括确定所述受试者体内一个或多个异常脉络膜毛细血管小叶相关SNP的身份，所述SNP包括但不限于CFH基因中rs800292SNP的A等位基因、CFB基因中rs641153SNP的A等位基因或CFB基因中rs4151667SNP的A等位基因，其中所述SNP中一个或多个的存在
指示产生血管相关黄斑病或其症状的风险降低。
指示产生血管相关黄斑病或其症状的风险降低。
[0186] 此外，本文描述了确定受试者将产生血管相关黄斑病或其症状的风险的方法，所述方法包括确定所述受试者体内HTRA1基因中rs11200638SNP处的G等位基因，或ARMS2基因中rs10490924SNP处的T等位基因的身份，其中HTRA1基因中的rs11200638SNP处的
G等位基因以及ARMS2基因中的rs10490924SNP处的T等位基因指示产生血管相关黄斑病
或其症状的风险降低。
G等位基因以及ARMS2基因中的rs10490924SNP处的T等位基因指示产生血管相关黄斑病
或其症状的风险降低。
[0187] 在一个方面，本文所述的方法可以进一步包括确定视网膜动脉（A）或静脉（V）直径的比率，其中直径比率（A:V）是约0.60至约1.48则进一步指示可以诊断出血管相关黄斑病或其症状。在另一个方面，直径的比率（A:V）是约0.60至约1.48还可以指示受试者有可能具有异常脉络膜毛细血管小叶。在另一个方面，直径的比率（A:V）是约0.8可以进一步指示可以诊断出血管相关黄斑病或其症状，或可以指示受试者有可能具有异常脉络膜毛细血管小叶。在又另一个方面，确定动脉和静脉的单独的测量结果不正常可以指示可以诊断出血管相关黄斑病或其症状，或可以指示受试者有可能具有异常脉络膜毛细血管小叶。在再另一个方面，可以通过测量例如眼眶血管、颈动脉、眼动脉或睫状后动脉的血流量来对血管相关黄斑病或其症状作出诊断，或对异常脉络膜毛细血管小叶作出诊断。可以使用多普勒或本领域中已知的其它技术来测量血流量。在又另一个方面，可以通过使用例如3T MRI或本领域中已知的其它技术评估眼眶中的血管构造来对血管相关黄斑病或其症状作出诊断或对异常脉络膜毛细血管小叶作出诊断。
[0188] 关于HTRA1或ARMS2基因中的多态位点与血管相关黄斑病或其症状相关联的发现具有许多特定的应用，包括但不限于对个体进行筛选以确定产生血管相关黄斑病或其症状的风险，以及对用于患有血管相关黄斑病或其症状或产生血管相关黄斑病或其症状的风险增加的个体的新型并且最优的治疗途径进行鉴定。在不意图受特定机制限制的情况下，HTRA1或ARMS2基因中的多态现象可能以不同的方式促成个体的表型。HTRA1或ARMS2的
蛋白质编码区内存在的多态现象可能通过影响蛋白质结构和/或功能来促成表型。HTRA1或ARMS2的非编码区中存在的多态现象可能经由它们对复制、转录和/或翻译的影响来间接地发挥表型效应。HTRA1或ARMS2基因中的某些多态现象可能使个体易于出现与血管相关黄斑病或其症状有因果关系的独特突变。或者，如上文所指出，HTRA1或ARMS2基因中的多态现象可能与相邻基因（包括但不限于PLEKHA1）中的变异具有连锁性。相邻基因中的变异可能会使得所编码的蛋白质的表达或形式发生改变并且在携带者体内具有有害作用或保护作用。
蛋白质编码区内存在的多态现象可能通过影响蛋白质结构和/或功能来促成表型。HTRA1或ARMS2的非编码区中存在的多态现象可能经由它们对复制、转录和/或翻译的影响来间接地发挥表型效应。HTRA1或ARMS2基因中的某些多态现象可能使个体易于出现与血管相关黄斑病或其症状有因果关系的独特突变。或者，如上文所指出，HTRA1或ARMS2基因中的多态现象可能与相邻基因（包括但不限于PLEKHA1）中的变异具有连锁性。相邻基因中的变异可能会使得所编码的蛋白质的表达或形式发生改变并且在携带者体内具有有害作用或保护作用。
[0189] 可以在从受试者分离的目标核酸中检测多态现象。典型地分析基因组DNA。对于基因组DNA的测定，几乎任何含有基因组DNA或RNA的生物样品（例如有核细胞）都是适合的。例如，在本文实施例部分中所述的实验中，从自病例和对照受试者采集的外周血白细胞中获得基因组DNA（QIAamp DNA血液大量提取试剂盒（QIAamp DNA Blood Maxi kit）,Qiagen,Valencia,Calif.）。其它适合的样品包括但不限于唾液、颊面刮下的碎屑、视网膜、肾脏或肝脏或者其它器官或组织的活组织检查样品；皮肤活组织检查样品；羊水或CNS样品；等。在一个方面，可以对RNA或cDNA进行测定。在一个方面，所述测定可以检测变体HTRA1或ARMS2蛋白。用于从患者样品中对核酸或蛋白质进行纯化或部分纯化以用于诊断或其它测定中的方法在本领域中是已知的。
[0190] 可以使用本领域中已知的多种方法中的任一种来确定个体（例如所分析的患者）体内占据HTRA1和ARMS2基因中的多态位点的碱基的身份。例如（而不限于）使用等位基因特异性探针、使用等位基因特异性引物、直接序列分析、变性梯度凝胶电泳（DGGE）分析、单链构象多态现象（SSCP）分析以及变性高效液相色谱（DHPLC）分析。用于检测DNA中的多态现象的其它熟知的方法包括使用：分子信标（Molecular Beacons）技术
（参 见 例 如 Piatek等,1998;Nat.Biotechnol.16:359-63；Tyagi和 Kramer,1996,Nat.Biotechnology14:303-308；以及Tyagi等,1998,Nat.Biotechnol.16:49-53）、侵染技术（Invader technology）（参见例如Neri等,2000,Advances in Nucleic Acid and Protein Analysis3826:117-125；和美国专利号6,706,471）、基于核酸序列的扩增（Nasba）
（Compton,1991）、蝎形探针技术（Scorpion technology）（Thelwell等,2000,Nuc.Acids Res,28:3752-3761；和Solinas等,2001,“Duplex Scorpion primers in SNP analysis and FRET applications”Nuc.Acids Res,29:20.）、限制性片段长度多态现象（RFLP）分析等。另外的方法对于本领域技术人员来说是清楚的。
（参 见 例 如 Piatek等,1998;Nat.Biotechnol.16:359-63；Tyagi和 Kramer,1996,Nat.Biotechnology14:303-308；以及Tyagi等,1998,Nat.Biotechnol.16:49-53）、侵染技术（Invader technology）（参见例如Neri等,2000,Advances in Nucleic Acid and Protein Analysis3826:117-125；和美国专利号6,706,471）、基于核酸序列的扩增（Nasba）
（Compton,1991）、蝎形探针技术（Scorpion technology）（Thelwell等,2000,Nuc.Acids Res,28:3752-3761；和Solinas等,2001,“Duplex Scorpion primers in SNP analysis and FRET applications”Nuc.Acids Res,29:20.）、限制性片段长度多态现象（RFLP）分析等。另外的方法对于本领域技术人员来说是清楚的。
[0191] 用于分析多态现象的等位基因特异性探针的设计和使用由例如Saiki等,1986；Dattagupta的EP235,726；Saiki的WO89/11548所描述。简单地说，等位基因特异性探针经过设计以与来自一个个体的目标DNA的片段杂交，但不与来自另一个体的相应片段杂交，条件是这两个片段代表不同的多态形式。选择足够严格的杂交条件以使得给定的探针仅仅主要与两个等位基因中的一个杂交。典型地，等位基因特异性探针可以经过设计以与目标DNA的片段杂交，从而使得多态位点与探针的中心位置对准。
[0192] 可以成对地使用等位基因特异性探针，一对探针中的一个成员经过设计以与目标序列的参考等位基因杂交而另一个成员经过设计以与变体等位基因杂交。可以将几对探针固定在相同的支撑物上以对同一目标基因序列内的多个多态现象同时进行分析。
[0193] 用于分析多态现象的等位基因特异性引物的设计和使用由例如WO93/22456和Gibbs,1989所描述。简单地说，等位基因特异性引物经过设计以与目标DNA上与多态现象重叠的位点杂交并且只有当引物与特定的等位基因形式展现出完全互补性时才能够根据标准PCR方案引发DNA扩增。单碱基错配会阻止DNA扩增并且不形成可检测到的PCR产物。
当多态位点处于引物的3'最末端时，所述方法的表现最好，这是因为这个位置最容易变得不稳定以由引物延长。
当多态位点处于引物的3'最末端时，所述方法的表现最好，这是因为这个位置最容易变得不稳定以由引物延长。
[0194] 在一些实施方案中，可以使用基因组DNA来检测HTRA1或ARMS2多态现象。典型地从如外周血液样品或组织样品的样品中提取基因组DNA。可以使用标准方
法从样品中提取基因组DNA，如苯酚提取。在一些情况下，可以使用可商购获得的试
剂盒（例如可商购自Qiagen,Chatsworth,Calif.；Promega,Madison,Wis.；或Gentra Systems,Minneapolis,Minn.）来提取基因组DNA。
法从样品中提取基因组DNA，如苯酚提取。在一些情况下，可以使用可商购获得的试
剂盒（例如可商购自Qiagen,Chatsworth,Calif.；Promega,Madison,Wis.；或Gentra Systems,Minneapolis,Minn.）来提取基因组DNA。
[0195] 用于检测多态现象的其它方法可以包括对从受试者获得的样品中的核酸进行扩增（例如，使用HTRA1-特异性引物对个体的HTRA1基因的片段进行扩增）以及对所扩增的基因进行分析。这可以通过标准聚合酶链反应（PCR和RT-PCR）方案或本领域中已知的其它方法来实现。扩增可以使得HTRA1或ARMS2等位基因特异性寡核苷酸产生，所述寡核苷酸跨越了HTRA1或ARMS2基因中的单核苷酸多态位点。HTRA1或ARMS2特异性引物序列以及HTRA1和ARMS2等位基因特异性寡核苷酸可以源自于HTRA1或ARMS2基因的编码（外显子）或非编码（启动子、5'端非翻译、内含子或3'端非翻译）区。在一个方面，可以使用QIAamp DNA血液大量提取试剂盒（Qiagen,Valencia,CA）从外周血白细胞中分离所有受试者的基因组DNA。可以针对CFH（I62V，rs800292；Y402H，rs1061170）、HTRA1（启动子，rs11200638）、ARMS2（A69S，rs10490924）、C3（R80G，rs2230199）、CFB（L9H，rs4151667；R32Q，rs641153）、C2（IVS10，rs547154；E318D，rs9332739）或APOE中的SNP对DNA样品进行筛选。可以通过TaqMan测定（Applied Biosystems,Foster City,California）使用10ng模板DNA在5μL反应物中进行基因分型。在384-孔热循环仪（PTC-225,MJ Research）中的热循环条件可以由以下各项组成：最初在95℃下保持10分钟，继而是15秒95℃变性步骤和1分钟60℃退火和延伸步骤，历经40个循环。可以在7900HT快速实时PCR系统（Applied Biosystems）中对培养板进行读数。
[0196] 可以通过使用变性梯度凝胶电泳（DGGE）对使用PCR产生的扩增产物进行分析。可以基于在溶液中的序列依赖性解链特性和电泳迁移作用来鉴定不同的等位基因。参见Erlich编著,PCR Technology,Principles and Applications for DNA Amplification,第7章(W.H.Freeman and Co,New York,1992)。
[0197] 可以使用单链构象多态现象（SSCP）分析来辨别目标序列的等位基因。可以基于单链PCR产物的序列依赖性和结构依赖性电泳迁移作用来鉴定不同的等位基因（Orita等,1989）。可以根据标准方案产生扩增的PCR产物并且对其进行加热或以其它方式使其变性以形成单链产物，所述单链产物可能重新折叠或形成二级结构，所述二级结构部分地取决于碱基序列。
[0198] 可以使用变性高效液相色谱（DHPLC）分析来辨别目标序列的等位基因。可以基于碱基差异，通过单链PCR产物的色谱迁移的变化来鉴定不同的等位基因（Frueh和Noyer-Weidner,2003）。可以根据标准方案产生扩增的PCR产物并且对其进行加热或以其它方式使其变性以形成单链产物，所述单链产物可能重新折叠或形成二级结构，所述二级结构部分地取决于碱基序列。
[0199] 可以使用本领域中熟知的DNA测序程序来对多态现象进行直接序列分析。参见Sambrook等,Molecular Cloning,A Laboratory Manual (第2版,CSHP,New York1989)；和Zyskind等,Recombinant DNA Laboratory Manual(Acad.Press,1988)。
[0200] 用于在生物样品中检测多态现象的多种多样的其它方法在本领域中是已知的。参见例如Ullman等,“Methods for single nucleotide polymorphism detection”,美国专利号6,632,606；Shi,2002,“Technologies for individual genotyping:detection of genetic polymorphisms in drug targets and disease genes”,Am JPharmacogenomics2:197-205；Kwok 等 ,2003,“Detection of single nucleotide
polymorphisms”,Curr Issues Biol.5:43-60。)
polymorphisms”,Curr Issues Biol.5:43-60。)
[0201] 本文描述了靠近于或跨越HTRA1或ARMS2多态位点的核酸、疾病多态位点。可以使用所述核酸作为探针或引物（包括侵染、分子信标以及其它荧光共振能量转移（FRET）型探针）来检测HTRA1或ARMS2多态现象。
[0202] 本文还描述了包含编码全长HTRA1或ARMS2多肽的核苷酸序列的载体。所述载体还可以包含编码HTRA1多肽的亚结构域的核苷酸序列。因此，HTRA1或ARMS2多肽可以包含在NCBI蛋白质登录号NP_002766或NP_001093137处所见的氨基酸序列或其变体（例如风险性变体或保护性变体）并且可能是全长形式或截短形式。核酸可能是DNA或RNA并且可能是单链或双链的。
[0203] 一些核酸可以编码HTRA1或ARMS2多肽的全长、变体形式。变体HTRA1或ARMS2多肽与NP_002766.1或NP_001093137.1的不同之处可能在于由包括HTRA1或ARMS2基因
中已知的任何非同义多态位置中的一个在内的密码子所编码的氨基酸。在一个方面，变体HTRA1或ARMS2多肽与NP_002766.1或NP_001093137.1的不同之处在于由包括本文所述的非同义多态位置中的一个在内的密码子所编码的氨基酸。应了解的是，可以产生如下的变体HTRA1或ARMS2基因，所述变体HTRA1或ARMS2基因编码在HTRA1或ARMS2基因中的多
个多态位点上具有替代性氨基酸的变体HTRA1或ARMS2多肽。
中已知的任何非同义多态位置中的一个在内的密码子所编码的氨基酸。在一个方面，变体HTRA1或ARMS2多肽与NP_002766.1或NP_001093137.1的不同之处在于由包括本文所述的非同义多态位置中的一个在内的密码子所编码的氨基酸。应了解的是，可以产生如下的变体HTRA1或ARMS2基因，所述变体HTRA1或ARMS2基因编码在HTRA1或ARMS2基因中的多
个多态位点上具有替代性氨基酸的变体HTRA1或ARMS2多肽。
[0204] 用于产生重组蛋白和肽的表达载体在本领域中是熟知的（参见Ausubel等 ,2004,Current Protocols In Molecular Biology,Greene Publishing and
Wiley-Interscience,New York）。这类表达载体可以包括与如启动子的调控元件相连接的编码HTRA1或ARMS2多肽的核酸序列，所述启动子驱使DNA转录并且适用于在原核（例如大肠杆菌（E.coli））和真核（例如酵母、昆虫或哺乳动物细胞）宿主中表达。变体HTRA1或ARMS2多肽可以在变体HTRA1或ARMS2基因与启动子可操作地连接的表达载体中表达。启动子可以是用于在哺乳动物细胞中表达的真核生物启动子。转录调控序列可以包含异源性启动子并且任选地包含由宿主细胞识别的增强子。可以使用可商购获得的表达载体。表达载体可以包括宿主识别的复制系统、可扩增基因、选择标记、可用于插入到宿主基因组中的宿主序列等。例如（而不限于），可以通过PCR，使用寡核苷酸作为模板来合成HTRA1-S328A质粒以使用针对表达加以优化的密码子在大肠杆菌细菌细胞中产生人类HtrA1氨基酸序列。所述序列可能含有S328A突变。PCR产物在末端上可能含有NdeI和XhoI限制性位点，所述限制性位点可以被用于使所述PCR产物连接到pET-21a(+)质粒中。
Wiley-Interscience,New York）。这类表达载体可以包括与如启动子的调控元件相连接的编码HTRA1或ARMS2多肽的核酸序列，所述启动子驱使DNA转录并且适用于在原核（例如大肠杆菌（E.coli））和真核（例如酵母、昆虫或哺乳动物细胞）宿主中表达。变体HTRA1或ARMS2多肽可以在变体HTRA1或ARMS2基因与启动子可操作地连接的表达载体中表达。启动子可以是用于在哺乳动物细胞中表达的真核生物启动子。转录调控序列可以包含异源性启动子并且任选地包含由宿主细胞识别的增强子。可以使用可商购获得的表达载体。表达载体可以包括宿主识别的复制系统、可扩增基因、选择标记、可用于插入到宿主基因组中的宿主序列等。例如（而不限于），可以通过PCR，使用寡核苷酸作为模板来合成HTRA1-S328A质粒以使用针对表达加以优化的密码子在大肠杆菌细菌细胞中产生人类HtrA1氨基酸序列。所述序列可能含有S328A突变。PCR产物在末端上可能含有NdeI和XhoI限制性位点，所述限制性位点可以被用于使所述PCR产物连接到pET-21a(+)质粒中。
[0205] 本文还描述了分离的宿主细胞，所述宿主细胞包含编码全长HTRA1或ARMS2多肽的载体。宿主细胞还可以包含编码HTRA1多肽的亚结构域的载体。适合的宿主细胞可以包括如大肠杆菌的细菌、酵母、丝状真菌、昆虫细胞，以及典型地永生化的哺乳动物细胞，包括小鼠、仓鼠、人类以及猴子细胞系，以及其衍生物。宿主细胞可能能够加工HTRA1或ARMS2基因产物以产生经过适当加工的成熟多肽。这种加工可能包括糖基化、泛素化、形成二硫键等。
[0206] 可以将含有HTRA1或ARMS2基因的表达构建体引入到宿主细胞中，这取决于特定的构造和目标宿主。适当的方法以及原核和真核宿主细胞在本领域中是熟知的。例如，使全长人类HTRA1和HTRA1的亚结构域表达于NEB T7表达lysY细胞中，并且也使全长人类TM
ARMS2表达于NEB T7表达lysY细胞中。可以使用BL21-AI One 化学感受态大肠杆
菌（Invitrogen，编号C607003）使表达Arms2蛋白的构建体转化并且表达。可以使用用于经由T7启动子驱动蛋白质表达的构建体的NEB SHuffle表达感受态大肠杆菌（New England BioLab，编号C3028H）或NEB SHuffle T7表达感受态大肠杆菌（New England BioLabs，编号C3026H）表达会产生天然折叠含有二硫键的蛋白质的构建体，包括核苷酸序列编码IGFBP和/或Kazal亚结构域的所有HtrA1构建体。
ARMS2表达于NEB T7表达lysY细胞中。可以使用BL21-AI One 化学感受态大肠杆
菌（Invitrogen，编号C607003）使表达Arms2蛋白的构建体转化并且表达。可以使用用于经由T7启动子驱动蛋白质表达的构建体的NEB SHuffle表达感受态大肠杆菌（New England BioLab，编号C3028H）或NEB SHuffle T7表达感受态大肠杆菌（New England BioLabs，编号C3026H）表达会产生天然折叠含有二硫键的蛋白质的构建体，包括核苷酸序列编码IGFBP和/或Kazal亚结构域的所有HtrA1构建体。
[0207] 本文还描述了腺病毒载体，所述腺病毒载体包含编码全长HTRA1或ARMS2多肽（包括变体在内）的核苷酸序列。在一个方面，本文描述了编码全长或变体HTRA1或ARMS2多肽的感染性腺病毒颗粒。本发明更进一步包含一种分离的宿主细胞，所述分离的宿主细胞当中含有编码全长或变体HTRA1或ARMS2多肽的腺病毒颗粒。适合的宿主细胞可以包括哺乳动物细胞，如小鼠、仓鼠、人类以及猴子细胞系，以及其衍生物。宿主细胞可能能够加工HTRA1或ARMS2基因产物以产生经过适当加工的成熟多肽。这种加工可能包括糖基化、泛素化、形成二硫键等。腺病毒构建体可以使得HTRA1或ARMS2多肽能够在哺乳动物系统中表达。在一个方面，可以使小鼠感染腺病毒颗粒并且可以使HTRA1或ARMS2多肽或其变体表达以驱动与血管相关黄斑病或其症状相关联的表型。
[0208] 本文还描述了包含全长HTRA1或ARMS2多肽的氨基酸序列的经过纯化的或分离的蛋白质。在一个方面，经过纯化的或分离的蛋白质可以包含HTRA1多肽亚结构域的氨基酸序列。可以进行蛋白质测定来鉴定蛋白质并且对受试者HTRA1或ARMS2基因中的多态现象进行表征。可以适用于检测HTRA1或ARMS2蛋白的方法是熟知的。这些方法包括分析型生物化学方法，如电泳（包括毛细管电泳和双向电泳）；色谱法，如高效液相色谱法（HPLC）、薄层色谱法（TLC）、超扩散色谱法；质谱测定法；以及不同的免疫学方法，如流体或凝胶沉淀素反应、免疫扩散法（单向或双向）、免疫电泳法、放射性免疫测定（RIA）、酶联免疫吸附测定（ELISA）、免疫荧光测定、蛋白质印迹法以及其它方法。例如（而不限于），多种适用于实施本发明的公认的免疫结合测定形式是已知的（参见例如Harlow,E.;Lane,D.Antibodies:a laboratory manual.Cold Spring Harbor,N.Y.:Cold Spring Harbor Laboratory;1988；
和Ausubel等,(2004)Current Protocols in Molecular Biology,John Wiley&Sons,New York N.Y.）。所述测定可以是竞争性的或非竞争性的。典型地，免疫结合测定（或免疫测定）利用了与分析物特异性结合并且经常固定所述分析物的“捕获剂”。在一个方面，捕获剂可以是与变体HTRA1或ARMS2多肽或子序列特异性结合的部分。可以使用例如可检测标记的抗-HTRA1或ARMS2抗体来检测所结合的蛋白质。在一个方面，所述抗体中的至少一种对HTRA1或ARMS2多肽的变体形式具有特异性。在一个方面，可以使用免疫印迹（蛋白质印迹）形式检测变体多肽。
和Ausubel等,(2004)Current Protocols in Molecular Biology,John Wiley&Sons,New York N.Y.）。所述测定可以是竞争性的或非竞争性的。典型地，免疫结合测定（或免疫测定）利用了与分析物特异性结合并且经常固定所述分析物的“捕获剂”。在一个方面，捕获剂可以是与变体HTRA1或ARMS2多肽或子序列特异性结合的部分。可以使用例如可检测标记的抗-HTRA1或ARMS2抗体来检测所结合的蛋白质。在一个方面，所述抗体中的至少一种对HTRA1或ARMS2多肽的变体形式具有特异性。在一个方面，可以使用免疫印迹（蛋白质印迹）形式检测变体多肽。
[0209] 本文还描述了结合HTRA1或ARMS2多肽的经过纯化的多克隆抗体或其片段。本文还描述了结合HTRA1或ARMS2多肽的分离的抗体或其片段。
[0210] 本文描述了与HTRA1的不同表位结合的抗体，包括但不限于与HTRA1的IGFBP（胰岛素样生长因子结合蛋白结构域）、Kazal、连接子-蛋白酶、蛋白酶-连接子或PDZ（突触后密度蛋白（PSD95）、果蝇盘大肿瘤抑制因子（Dlg1）以及闭锁小带-1蛋白（Zo-1））结构域结合的抗体。
[0211] 例如，本文描述了与HTRA1的不同氨基酸36-49、96-106、119-129、136-148、155-168、367-379、419-431结合的抗体（参见NCBI基因登录号5654）。
[0212] 本文还描述了与ARMS2杂交的抗体，包括但不限于与ARMS2的氨基酸42-58结合的抗体（参见NCBI基因登录号387715）。
[0213] 本文还描述了与SEQ.ID.No.1、2、3、4、5、6、7或8中的一个或多个杂交的抗体。
[0214] 本文所述的抗体可以识别参考HTRA1或ARMS2多肽或变体HTRA1或ARMS2多肽并且与其杂交，在所述变体HTRA1或ARMS2多肽中一个或多个非同义单核苷酸多态现象（SNP）存在于HTRA1或ARMS2编码区中。在一个方面，抗体可以与变体HTRA1或ARMS2多肽或其
片段特异性杂交，但不与在多态位点上不存在变异的HTRA1或ARMS2多肽特异性杂交。抗体可以是多克隆抗体，并且可以根据标准方案加以制备。可以通过用野生型或变体HTRA1或ARMS2多肽或其片段或其合成肽片段对适合的动物进行注射来制备抗体。
片段特异性杂交，但不与在多态位点上不存在变异的HTRA1或ARMS2多肽特异性杂交。抗体可以是多克隆抗体，并且可以根据标准方案加以制备。可以通过用野生型或变体HTRA1或ARMS2多肽或其片段或其合成肽片段对适合的动物进行注射来制备抗体。
[0215] 本文还描述了检测受试者的HTRA1或ARMS2的方法，所述方法包括使用与HTRA1或ARMS2特异性杂交的抗体检测HTRA1或ARMS2的水平。用于鉴定与多肽特异性杂交的抗体的方法在本领域中是熟知的。关于包括抗体筛选和消减法在内的方法；参见Harlow和Lane,Antibodies,A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Press,New York(1988)；Current Protocols in Immunology(J.E.Coligan等编著,1999，包括直到2005年的增
订本)；Goding,Monoclonal Antibodies,Principles and Practice(第2版)Academic Press,New York(1986)；Burioni 等 ,1998,“A new subtraction technique for
molecular cloning of rare antiviral antibody specificities from phage display libraries”,Res Virol.149(5):327-30；Ames 等 ,1994,Isolation of neutralizing anti-C5a monoclonal antibodies from a filamentous phage monovalent Fab display library.J Immunol.152(9):4572-81；Shinohara 等 ,2002,Isolation of monoclonal antibodies recognizing rare and dominant epitopes in plant vascular cell walls by phage display subtraction.J Immunol Methods 264(1-2):187-94。免疫法或筛选可以针对全长蛋白质或可替代地（并且经常更适宜）针对包含已知在变体与野生型形式之间不同的表位的肽或多肽片段。对HTRA1或ARMS2多肽具有特异性的多克隆抗体可以用于对HTRA1或ARMS2的变体形式进行检测的诊断测定中或可以用作药物组合物中的活性成分。
订本)；Goding,Monoclonal Antibodies,Principles and Practice(第2版)Academic Press,New York(1986)；Burioni 等 ,1998,“A new subtraction technique for
molecular cloning of rare antiviral antibody specificities from phage display libraries”,Res Virol.149(5):327-30；Ames 等 ,1994,Isolation of neutralizing anti-C5a monoclonal antibodies from a filamentous phage monovalent Fab display library.J Immunol.152(9):4572-81；Shinohara 等 ,2002,Isolation of monoclonal antibodies recognizing rare and dominant epitopes in plant vascular cell walls by phage display subtraction.J Immunol Methods 264(1-2):187-94。免疫法或筛选可以针对全长蛋白质或可替代地（并且经常更适宜）针对包含已知在变体与野生型形式之间不同的表位的肽或多肽片段。对HTRA1或ARMS2多肽具有特异性的多克隆抗体可以用于对HTRA1或ARMS2的变体形式进行检测的诊断测定中或可以用作药物组合物中的活性成分。
[0216] 本文还描述了动物模型，所述动物模型包括过表达人类HTRA1的转基因非人类动物。在一个方面，本文描述了在小鼠RPE中过表达人类HTRA1的转基因小鼠。本文还描述了包含HTRA1或ARMS2敲除的动物模型，其中所述动物是小鼠。转基因非人类动物的内源性HTRA1或ARMS2基因的等位基因中的一个或两个可能失活。在另一个方面，动物的一种或多种细胞可以包含与RPE-特异性人类卵黄状黄斑营养不良2启动子可操作地连接的编码重组HTRA1多肽的核酸。可以通过遵循标准方案，使基因与启动子并且任选地与增强子可操作地连接，然后将构建体显微注射到受精卵中来使外源性变体HTRA1或ARMS2基因表达。参见Hogan等,“Manipulating the Mouse Embryo,A Laboratory Manual,”Cold Spring Harbor Laboratory。可以通过本领域中已知的方法使内源性HTRA1或ARMS2基因失活（Capecchi,1989）。HTRA1或ARMS2缺陷型小鼠可供用于引入外源性人类变体HTRA1或ARMS2。表达人类或非人类变体HTRA1或ARMS2多肽的转基因动物可以提供有用的药物筛选系统并且可以充当血管相关黄斑病或其症状以及其它相关疾病的模型。转基因动物还可能被用于产生本文所述的重组HTRA1或ARMS2蛋白（参见例如美国专利号6,066,725；6,013,857；5,994,616；以及5,959,171；Lillico等,2005;Houdebine,2000）。
[0217] 本文还描述了筛选其它基因中与本文所述的风险性、保护性或其它信息SNP或遗传标记（包括但不限于HTRA1或ARMS2基因中的多态位点）存在连锁不平衡的多态位点的方法。这些方法可以包括鉴定基因中与HTRA1或ARMS2基因中的多态位点存在连锁不平衡的多态位点，其中HTRA1或ARMS2基因中多态位点的多态形式与血管相关黄斑病或其症状相关联（例如风险增加或降低），以及确定个体群体中的单倍型以指示连锁的多态位点的多态形式是否与HTRA1或ARMS2基因与血管相关黄斑病表型有关的多态形式存在连锁不平衡。
[0218] HTRA1或ARMS2基因中的多态现象（如本文所述的那些多态现象）可以被用于确定与所关注的性状相关联的基因座与不与所述性状相关联，但与负责所述性状的基因座在物理上邻近并且与其共分离的多态标记之间的物理连锁。对与所关注的性状相关联的基因座进行定位有助于遵循本领域中熟知的程序对负责所述性状的一个或多个基因进行克隆。
[0219] 在一个方面，本文描述了如下的生物化合物，特别是蛋白质、肽或核酸，来自患有血管相关黄斑病或其症状的受试者的样品中所存在的所述生物学化合物与年龄匹配的对照受试者（未患所述疾病的个体相比有所不同。在另一个方面，本文描述了如下的生物学病状，包括但不限于子痫前期、高血压、中风或心肌梗塞，患有血管相关黄斑病或其症状的受试者所存在的所述生物学病状与年龄匹配的对照受试者（未患所述疾病的个体）相比可能有所不同。这些蛋白质或病状因此可能与血管相关黄斑病或其症状相关联，并且被称作血管相关黄斑病相关性生物标记或者被称作生物标记。在另一个方面，这些蛋白质或病状可能与血管相关黄斑病的症状（如小血管疾病）相关联并且被称作小血管疾病相关生物标记。在又另一个方面，这些蛋白质或病状可能与异常脉络膜毛细血管小叶的存在或产生异常脉络膜毛细血管小叶的风险相关联并且被称作异常脉络膜毛细血管小叶相关生物标记。这些生物标记可能以与未患血管相关黄斑病或其症状的个体相比不同的水平存在于患有所述疾病的个体体内。这些生物标记可能以与健康个体相比升高或降低的水平存在于患有血管相关黄斑病或其症状的个体体内。据展示以与年龄匹配的对照个体相比不同的水平存在于患有血管相关黄斑病或其症状的个体体内的示例性生物标记是HTRA1和/或ARMS2。因此，本文描述了确定受试者的HTRA1和/或ARMS2表达水平的方法。在实施本文所述的方法时，可以在个体的样品，优选地体液样品中获得生物标记。优选地在以下的个体样品中获得生物标记：唾液样品、颊面刮下的碎屑样品、视网膜、肾脏或肝脏或者其它器官或组织的活组织检查样品；皮肤活组织检查样品；羊水或CNS样品；等。
[0220] 本文所用的术语“生物标记”可以指的是与年龄匹配的对照受试者相比，在患有血管相关黄斑病或其症状的受试者的样品中以不同的水平存在的蛋白质。术语“生物标记”还可以指核酸序列，例如DNA或RNA序列，如本文所述的HTRA1或ARMS2核酸序列。
[0221] 本文所述的生物标记可以呈提供了关于本发明的变体或SNP存在或不存在的信息的任何形式。例如，所公开的生物标记可以是（但不限于）核酸分子，例如DNA或RNA分子；多肽或抗体
[0222] 术语“水平”指的是在从个体获得的样品中生物标记的量。生物标记的量可以通过本领域中已知的任何方法来测定并且将在某种程度上取决于生物标记的性质（例如电泳，包括毛细管电泳、单向和双向电泳、双向差异凝胶电泳DIGE，继而进行MALDI-ToF质谱分析；色谱法，如高效液相色谱法（HPLC）、薄层色谱法（TLC）、超扩散色谱法；质谱测定法（MS）；不同的免疫学方法，如流体或凝胶沉淀素反应、单向或双向免疫扩散、免疫电泳法、放射性免疫测定（RIA）、酶联免疫吸附测定（ELISA）、免疫荧光测定、蛋白质印迹法及其它方法，以及基于酶或功能的活性测定）。应了解，生物标记的量无需以绝对项的形式来测定，但可以以相对项的形式来测定。例如，生物标记的量可以通过它在样品中的浓度、通过与所述生物标记结合的抗体的浓度，或通过所述生物标记的功能活性（即结合或酶活性）来表示。
[0223] 可以如上文所述测定单个生物标记或一“组”生物标记的生物标记水平。一组生物标记指的是已经例如（而不限于）因以下原因而被归集在一起的一群多于一个的生物标记：共有的特性，如它们以与对照相比升高的水平存在于血管相关黄斑病患者体内；它们以与对照相比降低的水平存在于血管相关黄斑病患者体内；它们的水平在血管相关黄斑病患者与对照之间的比率或差异（例如，在1.25倍与2倍之间的差异、在2倍与3倍之间的差异、在3倍与5倍之间的差异，以及至少5倍的差异）；或功能。
[0224] 术语“差异”在它涉及本发明生物标记的水平时指的是具有统计学差异性的差异。例如（而不限于）如果期望值<0.05，使用斯氏t-检验（Student's t-test）确定的p值<0.05，或如果使用斯氏t-检验确定的p值<0.1，那么差异具有统计学差异性。患有血管相关黄斑病或其症状的个体与对照个体或群体之间生物标记水平的差异可以是例如（而不限于）至少10%差异（1.10倍）、至少25%差异（1.25倍）、至少50%差异（1.5倍）、至少100%差异（2倍）、至少200%差异（3倍）、至少400%差异（5倍）、至少10倍差异、至少20倍差异、至少50倍差异、至少100倍差异、至少150倍或至少200倍差异。
[0225] 可以使用多种方法中的任一种来检测血管相关黄斑病生物标记，所述方法包括免疫学测定（例如ELISA）、基于分离的方法（例如凝胶电泳）、基于蛋白质的方法（例如质谱分析）、基于功能的方法（例如酶活性或结合活性）等。在一个方面，测定HTRA1或ARMS2表达水平包括使用与HTRA1或ARMS2特异性结合的抗体。其它方法对于受到本说明书指导的本领域技术人员来说是已知的。用于测定水平的具体方法在某种程度上取决于生物标记蛋白的身份和性质。在一个方面，可以确立生物标记表达水平的正常或基线值（或范围）。可以根据为本领域技术人员所熟知的标准方法确定有机体的任何特定的群体、亚群或群组的正常水平。一般来说，可以通过对从正常（健康）受试者获得的生物样品（例如体液、细胞或组织）中生物标记的量进行定量来确定生物标记的基线（正常）水平。应用被用于医学的标准统计方法使得能够对基线表达水平以及与所述基线水平相比的显著性偏差进行确定。应了解的是，除非要求，否则所述测定方法未必需要测量生物标记的绝对值，这是因为相对值可能足以满足本文所述的方法的许多应用。在希望定量的情况下，本文描述了如下的试剂，所述试剂使得几乎任何已知的用于对基因产物进行定量的方法都可以被使用。
[0226] 在一个方面，用于分离本文所述的一种或多种生物标记（包括但不限于HTRA1和ARMS2）并且测定其水平的方法可以包括从个体获得生物样品，通过双向差异凝胶电泳（DIGE）分离生物标记并且测定其水平，以及通过MALDI-ToF质谱分析对所述生物标记进行鉴定。在另一个方面，可以通过与使用DIGE得到的生物标记的已知分离图谱相比较来鉴定通过DIGE所分离的生物标记。
[0227] 在另一个方面，用于分离、检测本文所述的生物标记（包括但不限于HTRA1和ARMS2）并且测定其水平的方法包括从个体获得生物样品，通过色谱法分离蛋白质，在适当时，将蛋白质捕获于生物芯片（即SELDI探针的吸附剂）上，以及通过质谱测定法（即ToF-MS）检测所捕获的生物标记并且测定其水平。
[0228] 生物芯片可以包括固体基质并且可以具有可以与捕获试剂（也被称为吸附剂或亲和试剂）相连接的总体上呈平面的表面。时常，生物芯片的表面包含多个可寻址的位置，每个位置可以具有与其相结合的捕获试剂。
[0229] 本文所用的“蛋白质生物芯片”指的是适用于捕获蛋白质的生物芯片。蛋白质生物芯片对于本领域技术人员来说是已知的，包括但不限于由以下公司生产的蛋白质生物芯片：Ciphergen Biosystems公司（Fremont,Calif.）、Packard BioScience公司（Meriden,Conn.）、Zyomyx（Hayward,Calif.）、Phylos（Lexington,Mass.）以及Biacore（Uppsala,Sweden）。这类蛋白质生物芯片的实例描述于例如美国专利号6,225,047、
6,329,209以及5,242,828，以及PCT公布号WO99/51773和WO00/56934中。
6,329,209以及5,242,828，以及PCT公布号WO99/51773和WO00/56934中。
[0230] 在一个方面，可以通过质谱测定法（MS）来检测本发明的生物标记。质谱仪的实例包括但不限于飞行时间（ToF）质谱仪、扇形磁场质谱仪、四极滤质器、离子阱质谱仪、离子回旋共振质谱仪、扇形静电型分析器以及这些质谱仪的复合物。
[0231] 在一个方面，质谱仪可以是激光解吸/电离质谱仪。在激光解吸/电离质谱测定法中，将分析物（即蛋白质）放在MS探针的表面上，所述探针与质谱仪的探针接口相接合并且使分析物暴露于电离能以进行电离并且将其引入到质谱仪中。激光解吸质谱仪利用了激光能量，所述激光能量典型地来自紫外线激光器以及红外线激光器，使分析物从表面解吸附，并且使分析物挥发并且电离，从而使它们可供质谱仪的离子光学器件使用。
[0232] 用于本文所述的方法中的质谱测定法可以是如例如美国专利号5,719,060和6,225,047中所述的“表面增强激光解吸和电离”或“SELDI”。SELDI指的是解吸/电离气相离子光谱测定法，其中将分析物（即至少两种生物标记）捕获于SELDI MS探针的表面上。
SELDI存在多种型式，包括“亲和捕获质谱测定法”、“表面增强亲和捕获”或“SEAC”、“表面增强净解吸”或“SEND”以及“表面增强光不稳定性连接和释放”或“SEPAR”。
SELDI存在多种型式，包括“亲和捕获质谱测定法”、“表面增强亲和捕获”或“SEAC”、“表面增强净解吸”或“SEND”以及“表面增强光不稳定性连接和释放”或“SEPAR”。
[0233] SEAC包括使用如下的探针，所述探针在探针表面上具有如下的物质，所述物质可以经由所述物质与分析物之间的非共价亲和相互作用（即吸附）而捕获分析物（即蛋白质）。所述物质有着不同的名称，即“吸附剂”、“捕获试剂”、“亲和试剂”或“结合部分”。这类探针被称作具有“吸附表面”的“亲和捕获探针”。所述捕获试剂可以是能够结合分析物的任何物质。捕获试剂可以与选择性表面的基质直接相连接，或所述基质可以具有带有能够例如经由形成共价或配位共价键的反应结合捕获试剂的反应性部分的反应性表面。环氧化物和羰基二咪唑可以是被用于与蛋白质捕获试剂（如抗体或细胞受体）共价结合的反应性部分。
次氮基乙酸和亚氨基二乙酸可以是充当螯合剂以结合与含组氨酸肽发生非共价相互作用的金属离子的反应性部分。吸附剂总体上可以被分为色谱吸附剂或生物特异性吸附剂。
次氮基乙酸和亚氨基二乙酸可以是充当螯合剂以结合与含组氨酸肽发生非共价相互作用的金属离子的反应性部分。吸附剂总体上可以被分为色谱吸附剂或生物特异性吸附剂。
[0234] “色谱吸附剂”指的是典型地被用于色谱法中的吸附物质。色谱吸附剂包括例如阴离子交换和阳离子交换物质、金属螯合剂（例如次氮基乙酸或亚氨基二乙酸）、固定的金属螯合物、疏水性相互作用吸附剂、亲水性相互作用吸附剂、染料、简单的生物分子（例如核苷酸、氨基酸、单糖以及脂肪酸）以及混合型吸附剂（例如疏水性引力/静电排斥吸附剂）。
[0235] “生物特异性吸附剂”指的是包含以下各项的吸附剂：生物分子，例如核酸分子（例如适体）、多肽、多糖、脂质、类固醇或这些物质的缀合物（例如糖蛋白、脂蛋白、糖脂或核酸（例如DNA）-蛋白质缀合物）。在一些方面，生物特异性吸附剂可以是大分子结构，如多蛋白复合物、生物膜或病毒。生物特异性吸附剂的实例包括但不限于抗体、受体蛋白以及核酸。生物特异性吸附剂对目标分析物的特异性可能高于色谱吸附剂。用于SELDI的吸附剂的另外的实例可以见于美国专利号6,225,047中。“生物选择性吸附剂”指的是与分析物结合的-8
亲和力典型地是至少10 M的吸附剂。
亲和力典型地是至少10 M的吸附剂。
[0236] 由Ciphergen Biosystems公司生产的蛋白质生物芯片包含在可寻址的位置上连接有色谱或生物特异性吸附剂的表面。Ciphergen蛋白质芯片阵列包括NP20（亲水性）；H4和HSO（疏水性）；SAX2、Q10以及LSAX30（阴离子交换）；WCX2、CM10以及LWCX30（阳离子交换）；IMAC3、IMAC30以及IMAC40（金属螯合物）；以及PS10、PS20（具有羰基二咪唑、环氧化物的反应性表面）以及PG20（经由羰基二咪唑偶联的蛋白质G）。疏水性蛋白质芯片阵列具有异丙基或壬基苯氧基-聚(乙二醇)甲基丙烯酸酯官能团。阴离子交换蛋白质芯片阵列具有季铵官能团。阳离子交换蛋白质芯片阵列具有羧酸酯官能团。固定的金属螯合物蛋白质芯片阵列具有通过螯合作用吸附过渡金属离子（如铜、镍、锌以及镓）的次氮基乙酸官能团。预活化的蛋白质芯片阵列具有可以与蛋白质上的基团反应以进行共价结合的羰基二咪唑或环氧化物官能团。
[0237] 蛋白质生物芯片进一步描述于美国专利号6,579,719和6,555,813、PCT公布号WO00/66265和WO03/040700、美国专利申请号US20030032043A1、US20030218130A1以及US20050059086A1中。
[0238] 在一个方面，可以使具有吸附表面的探针与样品接触足够长的一段时间以允许样品中存在的蛋白质与吸附剂结合。在孵育时段之后，可以洗涤基质以去除未结合的物质。可以使用任何适合的洗涤溶液；例如，可以使用水溶液。可以通过调节洗涤的严格度来操控蛋白质保持与吸附剂结合的程度。洗涤溶液的洗脱特征可能取决于例如pH值、离子强度、疏水性、离液度、清洁剂强度、温度等。除非探针兼具SEAC和SEND特性（如本文所述），否则然后可以将能量吸收分子涂覆于结合有蛋白质的基质上。
[0239] 可以在气相离子分光仪（如ToF质谱仪）中对与基质结合的生物标记进行检测。可以通过如激光的电离源使生物标记电离，可以通过离子光学组件收集所产生的离子，然后质量分析器可以使通过的离子分散并且对其进行分析。检测器然后可以将所检测的离子的信息转换成质荷比。对生物标记进行检测可以包括检测信号强度。因此，可以测定生物标记的数量和质量。
[0240] SEND包括使用如下的探针，所述探针包含与探针表面以化学方式结合的能量吸收分子（“SEND探针”）。短语“能量吸收分子”（EAM）表示能够从激光解吸/电离源吸收能量并且之后促成与其接触的分析物分子解吸附和电离的分子。EAM类别包括被用于MALDI中的时常被称为“矩阵”的分子，并且由以下各项所示例：肉桂酸衍生物、芥子酸（SPA）、氰基-羟基肉桂酸（CHCA）以及二羟基苯甲酸、阿魏酸以及羟基苯乙酮衍生物。在一个方面，可以将EAM并入线性或交联聚合物（例如聚甲基丙烯酸酯）中。例如，组成可以是α-氰基-4-甲基丙烯酰基氧基肉桂酸与丙烯酸酯的共聚物。在另一个方面，组成是α-氰基-4-甲基丙烯酰基氧基肉桂酸、丙烯酸酯与甲基丙烯酸3-(三乙氧基)甲硅烷基丙酯的共聚物。在另一个方面，组成可以是α-氰基-4-甲基丙烯酰基氧基肉桂酸与甲基丙烯酸十八烷酯的共聚物（“C18SEND”）。SEND进一步描述于美国专利号6,124,137和PCT公布号WO03/64594中。
[0241] SEAC/SEND是SELDI的一种型式，其中可以使捕获试剂和EAM都与样品呈现表面连接。SEAC/SEND探针因此可以使得能够经由亲和捕获作用来捕获分析物并且进行电离/解吸而无需涂覆外部矩阵。C18SEND生物芯片是SEAC/SEND的一种型式，包含充当捕获试剂的C18部分和充当EAM的CHCA部分。
[0242] SEPAR包括使用表面连接有如下部分的探针，所述部分可以与分析物共价结合，然后在曝露于光，例如曝露于激光后经由使所述部分中的光不稳定性键断裂来释放分析物（参见美国专利号5,719,060）。SEPAR和SELDI的其它形式可以依据本文所述的方法容易地被适配成检测生物标记或生物标记型态。
[0243] 在另一种MS方法中，可以首先将生物标记捕获于具有结合生物标记的色谱特性的树脂上。这可以包括多种方法。例如，可以将生物标记捕获于阳离子交换树脂（如CM CERAMIC HYPERD F树脂）上，可以对树脂进行洗涤，可以将生物标记洗脱并且可以通过MALDI对所洗脱的生物标记进行检测。作为替代方案，在进行这一方法之前，可以在阴离子交换树脂（如Q CERAMIC HYPERD F树脂）上对样品进行分级分离，之后将其施加到阳离子交换树脂上。在另一个方面，可以直接在阴离子交换树脂上对样品进行分级分离并且通过MALDI检测。在又另一个方面，可以将生物标记捕获于包含与特定生物标记结合的抗体的免疫色谱树脂上，可以对树脂进行洗涤以去除未结合的物质，可以从树脂将生物标记洗脱并且可以通过MALDI或通过SELDI对所洗脱的生物标记进行检测。
[0244] 通过ToF-MS对分析物进行分析会产生飞行时间谱。最终分析的飞行时间谱典型地不表示来自针对样品的电离能的单脉冲的信号，而是表示来自多个脉冲的信号总和。这会减少噪声并且增加动态范围。然后可以使用Ciphergen的蛋白质芯片软件或任何等效的数据处理软件对这种飞行时间数据进行数据处理。数据处理可以包括TOF-向-M/Z的转换以产生质谱；基线扣除以消除仪器偏移；以及高频噪声过滤以减少高频噪声。
[0245] 可以借助于可编程的数字计算机对通过使生物标记解吸附并且对其进行检测所产生的数据进行分析。计算机程序可以分析所述数据以指示所检测的生物标记的数目、信号强度或针对所检测的每种生物标记所确定的分子质量。数据分析可以包括如下步骤：测定生物标记的信号强度以及去除偏离预定的统计分布的数据。例如，可以通过计算每个峰相对于某种参照的高度来对所观测到的峰进行标准化。所述参照可以是由仪器和化学物质（如能量吸收分子）所产生的背景噪声，可以将其在标度上设定为零。
[0246] 计算机可以将所得数据转换成用于显示的不同形式。可以显示标准谱图，但在一个方面，可以在谱图中仅保留峰高和质荷比信息，从而使得图像更加清晰并且使得能够更容易地看到分子量几乎相同的生物标记。在另一个方面，可以比较两个或更多个谱图，宜突出显示独特的生物标记和样品之间上调或下调的生物标记。使用这些形式中的任一种，可以容易地确定特定的生物标记是否存在于样品中。
[0247] 分析可以包括鉴定谱图中代表来自分析物的信号的峰。可以目视进行峰选择，但可以获得可以对峰进行自动检测的软件，例如作为Ciphergen的蛋白质芯片软件包的一部分。一般来说，这种软件通过鉴定信噪比高于所选阈值的信号并且标记处于峰值信号矩心处的峰质量来运行。在一个方面，可以比较多个谱图以鉴定在质谱的某种所选百分比中存在的相同峰。这种软件的一个版本聚集了所界定的质量范围内出现在不同的谱图中的所有峰，并且将质量（M/Z）分配给靠近质量（M/Z）簇中点的所有峰。
[0248] 被用于分析数据的软件可以包括如下的代码，所述代码运用算法对信号进行分析以确定所述信号是否代表对应于本文所述的生物标记的信号的峰。所述软件还可以对关于所观测到的生物标记峰的数据进行分类树或ANN分析，以确定生物标记峰或生物标记峰的组合是否存在，这指示在检查时特定的临床参数的状态。对数据进行分析可以为通过对样品进行质谱分析而直接或间接获得的多种参数“提供解答”。这些参数包括但不限于存在或不存在至少两个峰、一个峰或一组峰的形状、至少两个峰的高度、至少两个峰的高度的对数以及峰高数据的其它算术运算。
[0249] 用于检测本文所述的生物标记的示例性方案如下。可以从受试者获得有待测试的生物样品，在适当时，去除白蛋白和IgG或在阴离子交换色谱树脂或其它色谱树脂上预先分级分离，然后使其与亲和捕获SELDI探针接触，所述探针包含阳离子交换吸附剂（例如CM10或WCX2蛋白质芯片阵列，来自Ciphergen Systems公司）、阴离子交换吸附剂（例如Q10蛋白质芯片阵列，来自Ciphergen Systems公司）、疏水性交换吸附剂（例如HSO蛋白质芯片阵列，来自Ciphergen Systems公司）或IMAC吸附剂（例如IMAC3或IMAC30蛋白质芯片阵列，来自Ciphergen Systems公司）。可以用适合的缓冲液洗涤SELDI探针，所述缓冲液保留了本发明的生物标记，而洗掉未结合的生物分子。然后可以通过激光解吸/电离质谱测定法检测特异性保留在SELDI探针上的生物标记。
[0250] 在与SELDI探针结合之前，可以将例如血清、血浆或尿的生物样品中的白蛋白和IgG去除，或对所述生物样品进行预先分级分离。在一个方面，预先分级分离可以包括使生物样品与阴离子交换色谱树脂接触。然后可以使用具有不同pH值的缓冲液对结合的生物分子进行逐步pH值洗脱。可以收集含有生物分子的不同的馏分并且使其与SELDI探针结合。
[0251] 在另一个方面，如果希望对特定的蛋白质和其不同形式进行分析，那么可以使识别特定蛋白质的抗体与SELDI探针（例如预活化的PS10或PS20蛋白质芯片阵列，来自Ciphergen Systems公司）的表面连接。所述抗体将生物样品中的靶蛋白捕获于SELDI探针上。然后可以通过例如激光解吸/电离质谱测定法检测所捕获的蛋白质。所述抗体还可以将靶蛋白捕获于固定的支撑物上，并且可以如本文所述将靶蛋白洗脱并且捕获于SELDI探针上，并且对所述靶蛋白进行检测。
[0252] 针对靶蛋白的抗体是可商购获得的或可以通过本领域中已知的方法，例如通过用通过标准纯化技术分离的靶蛋白或用靶蛋白的合成肽使动物免疫而产生。
[0253] 在一些方面，将希望确立生物标记表达水平的正常或基线值（或范围）。可以根据为本领域技术人员所熟知的标准方法确定有机体的任何特定的群体、亚群或群组的正常水平。一般来说，通过对从正常（健康）受试者获得的生物样品（例如体液、细胞或组织）中生物标记的量进行定量来确定生物标记的基线（正常）水平。应用被用于医学的标准统计方法使得能够对基线表达水平以及与所述基线水平相比的显著性偏差进行确定。
[0254] 在进行本文所述的诊断和预测方法中，参考“诊断”值和“预测”值有时是有用的。本文所用的“诊断值”指的是针对在样品中所检测到的生物标记基因产物所测定的值，所述值在与所述生物标记基因产物的正常（或“基线”）范围相比时指示疾病的存在。“预测值”指的是符合疾病的特定诊断和预后的生物标记的量。将在样品中检测到的生物标记基因产物的量与生物标记的预测值相比较，以使得对值进行的相对比较的结果指示疾病的存在或疾病发展的可能结果。在一个方面，例如，为了评估血管相关黄斑病预后，收集数据以使得生物标记水平与血管相关黄斑病的不同症状存在统计显著性相关性。根据具有已知的临床结果的受试者确立生物标记水平的预定范围。获得足够数目的测量结果以产生将与之进行比较的统计显著性值（或值的范围）。
[0255] 应了解的是，除非要求，否则本文所述的测定方法未必需要测量生物标记的绝对值，这是因为相对值足以满足本文所述的方法的许多应用。在希望定量的情况下，目前所述的方法提供了如下的试剂，所述试剂使得几乎任何已知的用于对基因产物进行定量的方法都可以被使用。
[0256] 在一个方面，本文描述了用于诊断或确定受试者可能产生血管相关黄斑病或其症状的风险的方法，所述方法通过以下步骤来实现：测定来自个体的样品中至少一种血管相关黄斑病相关生物标记的水平，并且将样品中生物标记的水平与未患血管相关黄斑病的个体的对照群体的特征性生物标记参考水平相比较，其中来自所述个体的样品与对照群体之间生物标记水平存在差异指示所述个体患有血管相关黄斑病或其症状或者患有血管相关黄斑病或其症状的风险增加。生物标记可以是（但不限于）HTRA1或ARMS2蛋白。例如，生物标记可以是在患有血管相关黄斑病或其症状的个体体内以升高的水平表达的HTRA1或ARMS2蛋白。在另一个方面，生物标记可以是HTRA1或ARMS2核酸，如DNA或RNA。
[0257] 本文还描述了用于评估针对个体的血管相关黄斑病或其症状进行治疗的功效的方法，所述方法通过以下步骤来实现：(a)在使用药剂治疗之前或在治疗后第一个时间点，测定来自个体的样品中至少一种生物标记的水平，以及(b)在使用药剂治疗期间随后的时间点或在治疗后，测定来自个体的样品中生物标记的水平，其中(b)中所测量的生物标记水平与(a)中所测量的生物标记水平相比存在如下差异指示所述治疗有效：生物标记的水平变得更接近未患血管相关黄斑病或其症状的个体的对照群体的特征性生物标记参考水平。所述生物标记中的至少一种可以是HTRA1或ARMS2蛋白。
[0258] 此外，本文描述了确定药剂针对被诊断患有以下(i)、(ii)、(iii)或(iv)中疾病或症状的受试者的功效的方法：(i)治疗血管相关黄斑病；(ii)治疗与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(iii)治疗严重黄斑病或晚期黄斑病；(iv)使异常脉络膜毛细血管小叶消退，所述方法包括：a)在开始治疗(1)血管相关黄斑病；(2)与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(3)严重的黄斑病或晚期黄斑病；或(4)使异常脉络膜毛细血管小叶消退之前确定受试者的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶的数目；b)开始治疗(1)、(2)、(3)或(4)并保持一定的时间间隔；c)在所述时间间隔之后确定步骤a)中的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶后续的数目；以及d)将步骤c)中所述受试者的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶的数目与步骤a)中所述受试者的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶的数目相比较，其中检测到步骤c)中所述受试者的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶的数目有所增加则指示药剂在所述受试者中不能有效(i)治疗血管相关黄斑病；(ii)治疗与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(iii)治疗严重的黄斑病或晚期黄斑病；或(iv)使异常脉络膜毛细血管小叶消退。
[0259] 本文还描述了确定药剂针对被诊断患有以下(i)、(ii)、(iii)或(iv)中疾病或症状的受试者的功效的方法：(i)治疗血管相关黄斑病；(ii)治疗与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(iii)治疗严重黄斑病或晚期黄斑病；(iv)使异常脉络膜毛细血管小叶消退，所述方法包括：a)在开始治疗(1)血管相关黄斑病；(2)与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(3)严重的黄斑病或晚期黄斑病；或(4)异常脉络膜毛细血管小叶之前确定受试者的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶的数目；b)开始治疗(1)、(2)、(3)或(4)并保持一定的时间间隔；c)在所述时间间隔之后确定步骤a)中的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶后续的数目；以及d)将步骤c)中所述受试者的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶的数目与步骤a)中所述受试者的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶的数目相比较，其中检测出步骤c)中所述受试者的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶的数目没有增加则指示药剂对于所述受试者可有效(i)治疗血管相关黄斑病；(ii)治疗与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(iii)治疗严重的黄斑病或晚期黄斑病；或(iv)使异常脉络膜毛细血管小叶消退。
[0260] 另外，本文描述了确定针对被诊断患有以下(i)、(ii)、(iii)或(iv)中疾病或症状的受试者进行治疗的功效的方法：(i)治疗血管相关黄斑病；(ii)治疗与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(iii)治疗严重黄斑病或晚期黄斑病；或(iv)使异常脉络膜毛细血管小叶消退，所述方法包括：a)在开始治疗(1)血管相关黄斑病；(2)与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(3)严重的黄斑病或晚期黄斑病；或(4)异常脉络膜毛细血管小叶之前确定受试者的眼睛中覆盖并且对应于所述脉络膜毛细血管小叶的RPE细胞的存在；b)开始治疗(1)、(2)、(3)或(4)并保持一定的时间间隔；c)在所述时间间隔之后确定步骤a)中的眼睛中覆盖并且对应于所述脉络膜毛细血管小叶的RPE细胞的再生长或再生；以及d)将步骤c)中所述受试者的眼睛中覆盖并且对应于所述脉络膜毛细血管小叶的RPE细胞的再生长或再生与步骤a)中所述受试者的眼睛中覆盖并且对应于所述脉络膜毛细血管小叶的RPE细胞的再生长或再生相比较，其中检测出步骤c)中所述受试者的眼睛中覆盖并且对应于所述脉络膜毛细血管小叶的RPE细胞的再生长或再生没有发生变化或减少则指示药剂对于所述受试者可有效(i)治疗血管相关黄斑病；(ii)治疗与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(iii)治疗严重黄斑病或晚期黄斑病；或(iv)使异常脉络膜毛细血管小叶消退。
[0261] 本文还描述了确定针对被诊断患有以下(i)、(ii)、(iii)或(iv)中疾病或症状的受试者进行治疗的功效的方法：(i)治疗血管相关黄斑病；(ii)治疗与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(iii)治疗严重黄斑病或晚期黄斑病；或(iv)使异常脉络膜毛细血管小叶消退，所述方法包括：a)在开始治疗(1)血管相关黄斑病；(2)与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(3)严重的黄斑病或晚期黄斑病；或(4)异常脉络膜毛细血管小叶之前确定受试者的眼睛中覆盖并且对应于所述脉络膜毛细血管小叶的RPE细胞的存在；b)开始治疗(1)、(2)、(3)或(4)并保持一定的时间间隔；c)在所述时间间隔之后确定步骤a)中的眼睛中覆盖并且对应于所述脉络膜毛细血管小叶的RPE细胞的再生长或再生；以及d)将步骤c)中所述受试者的眼睛中覆盖并且对应于所述脉络膜毛细血管小叶的RPE细胞的再生长或再生与步骤a)中所述受试者的眼睛中覆盖并且对应于所述脉络膜毛细血管小叶的RPE细胞的再生长或再生相比较，其中检测出步骤c)中所述受试者的眼睛中覆盖并且对应于所述脉络膜毛细血管小叶的RPE细胞的再生长或再生有所增加则指示药剂在所述受试者中不能有效(i)治疗血管相关黄斑病；(ii)治疗与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(iii)治疗严重黄斑病或晚期黄斑病；或(iv)使异常脉络膜毛细血管小叶消退。通过以下方式来确定RPE细胞的再生长或再生：自发荧光成像技术、红外成像技术、光学相干断层摄影术（OCT）、Stratus光学相干断层摄影术（Stratus OCT）、傅里叶域光学相干断层摄影术（Fd-OCT）、双光子激发荧光（TPEF）成像、自适应光学扫描激光检眼镜检查法（AOSLO）、扫描激光检眼镜检查法、近红外成像联合谱域光学相干断层摄影术（SD-OCT）、彩色眼底摄影术、眼底自发荧光成像、无赤光成像、荧光素血管造影术、吲哚菁绿血管造影术、多焦视网膜电图（ERG）记录、微视野检查、彩色多普勒光学相干断层摄影术（CDOCT）、视野评估、Heidelberg Spectralis、Zeiss Cirrus、Topcon3D OCT2000、Optivue RTVue SD-OCT、Opko OCT SLO、NIDEK F-10或Optopol SOCT Copernicus HR。
[0262] 此外，本文描述了确定针对被诊断患有以下(i)、(ii)、(iii)或(iv)中疾病或症状的受试者进行治疗的功效的方法：(i)治疗血管相关黄斑病；(ii)治疗与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(iii)治疗严重黄斑病或晚期黄斑病；(iv)使异常脉络膜毛细血管小叶消退，所述方法包括：a)在开始治疗(1)血管相关黄斑病；(2)与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(3)严重的黄斑病或晚期黄斑病；或(4)异常脉络膜毛细血管小叶之前测定受试者的眼睛中所述脉络膜毛细血管小叶的灌注；b)开始治疗(1)、(2)、(3)或(4)并保持一定的时间间隔；c)在所述时间间隔之后测定步骤a)中的眼睛中所述脉络膜毛细血管小叶的灌注；以及d)将步骤c)中所述受试者的眼睛中所述脉络膜毛细血管小叶的灌注与步骤a)中所述受试者的眼睛中所述脉络膜毛细血管小叶的灌注相比较，其中检测出步骤c)中所述受试者的眼睛中所述脉络膜毛细血管小叶的灌注没有增加则指示药剂在所述受试者中不能有效(i)治疗血管相关黄斑病；(ii)治疗与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(iii)治疗严重黄斑病或晚期黄斑病；或(iv)使异常脉络膜毛细血管小叶消退。
[0263] 本文还描述了确定针对被诊断患有以下(i)、(ii)、(iii)或(iv)中疾病或症状的受试者进行治疗的功效的方法：(i)治疗血管相关黄斑病；(ii)治疗与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(iii)治疗严重黄斑病或晚期黄斑病；(iv)使异常脉络膜毛细血管小叶消退，所述方法包括：a)在开始治疗(1)血管相关黄斑病；(2)与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(3)严重的黄斑病或晚期黄斑病；或(4)异常脉络膜毛细血管小叶之前测定受试者的眼睛中所述脉络膜毛细血管小叶的灌注；b)开始治疗(1)、(2)、(3)或(4)并保持一定的时间间隔；c)在所述时间间隔之后测定步骤a)中的眼睛中所述脉络膜毛细血管小叶的灌注；以及d)将步骤c)中所述受试者的眼睛中所述脉络膜毛细血管小叶的灌注与步骤a)中所述受试者的眼睛中所述脉络膜毛细血管小叶的灌注相比较，其中检测出步骤c)中所述受试者的眼睛中所述脉络膜毛细血管小叶的灌注有所增加则指示药剂对于所述受试者可有效(i)治疗血管相关黄斑病；(ii)治疗与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(iii)治疗严重黄斑病或晚期黄斑病；或(iv)使异常脉络膜毛细血管小叶消退。通过以下方式来测定眼睛中脉络膜毛细血管小叶的灌注：自发荧光成像技术、红外成像技术、光学相干断层摄影术（OCT）、Stratus光学相干断层摄影术（Stratus OCT）、傅里叶域光学相干断层摄影术（Fd-OCT）、双光子激发荧光（TPEF）成像、自适应光学扫描激光检眼镜检查法（AOSLO）、扫描激光检眼镜检查法、近红外成像联合谱域光学相干断层摄影术（SD-OCT）、彩色眼底摄影术、眼底自发荧光成像、无赤光成像、荧光素血管造影术、吲哚菁绿血管造影术、多焦视网膜电图（ERG）记录、微视野检查、彩色多普勒光学相干断层摄影术（CDOCT）、视野评估、Heidelberg Spectralis、Zeiss Cirrus、Topcon3D OCT2000、Optivue RTVue SD-OCT、Opko OCT SLO、NIDEK F-10或Optopol SOCT Copernicus HR。
[0264] 还公开了如下的显像剂，其中所述显像剂与HTRA1或ARMS2或者变体HTRA1或ARMS2编码核酸特异性结合。例如，公开了包含能够与本文所述的一个或多个风险性、保护性或中性HTRA1或ARMS2SNP特异性杂交的多核苷酸的阵列。还公开了如下的显像剂，其中所述显像剂能够与一个或多个风险性或保护性HTRA1或ARMS2SNP中的一个或多个特异性杂交，所述SNP包括但不限于HTRA1基因中的rs11200638、rs1049331或rs2672587；ARMS2基因中的rs10490924或rs3750848；CFH基因中的rs1061170；C3基因中的rs2230199；CFH基因中的rs800292SNP；CFB基因中的rs641153SNP；或CFB基因中的rs4151667SNP。
[0265] 本文还描述了鉴定受试者产生异常脉络膜毛细血管小叶的易感性的方法，所述方法包括在所述受试者体内检测一个或多个HTRA1或ARMS2SNP，其中在所述受试者体内检测出一个或多个HTRA1或ARMS2SNP则指示所述受试者易产生异常脉络膜毛细血管小叶。例如（而不限于），检测HTRA1基因中的rs11200638或ARMS2基因中的rs10490924中的一个或多个，其中HTRA1SNP存在A等位基因或ARMS2SNP存在T等位基因可以指示存在异常脉络膜毛细血管小叶或产生异常脉络膜毛细血管小叶的风险增加。在另一个方面，所述方法可以包括确定受试者体内HTRA1或ARMS2基因中一个或多个SNP的身份，所述SNP包括但
不限于rs1049331、rs3750848或rs2672587，其中所述SNP中的一个或多个的存在指示存在异常脉络膜毛细血管小叶或产生异常脉络膜毛细血管小叶的风险增加。在又另一个方面，所述方法可以包括检测与本文所述的风险性、保护性或其它信息SNP或遗传标记（例如（而不限于）HTRA1或ARMS2SNP）存在连锁不平衡的SNP，其中检测出与HTRA1或ARMS2SNP存在连锁不平衡的SNP可以指示存在异常脉络膜毛细血管小叶或产生异常脉络膜毛细血管小叶的风险增加。
不限于rs1049331、rs3750848或rs2672587，其中所述SNP中的一个或多个的存在指示存在异常脉络膜毛细血管小叶或产生异常脉络膜毛细血管小叶的风险增加。在又另一个方面，所述方法可以包括检测与本文所述的风险性、保护性或其它信息SNP或遗传标记（例如（而不限于）HTRA1或ARMS2SNP）存在连锁不平衡的SNP，其中检测出与HTRA1或ARMS2SNP存在连锁不平衡的SNP可以指示存在异常脉络膜毛细血管小叶或产生异常脉络膜毛细血管小叶的风险增加。
[0266] 应了解，本文所述的诊断和/或确定受试者产生血管相关黄斑病或其症状的易感性的方法包括确定所述受试者体内一个或多个本文所述的SNP的身份，所述方法可以与本文所述的其它方法中的任一种组合进行。因此，本文描述了诊断和/或确定受试者产生血管相关黄斑病或其症状的易感性的方法，所述方法包括在所述受试者的眼睛中检测异常脉络膜毛细血管小叶的存在，其中在所述受试者的眼睛中存在异常脉络膜毛细血管小叶则指示可以诊断出所述受试者产生血管相关黄斑病或其症状或所述受试者产生血管相关黄斑病或其症状的风险增加，所述方法进一步包括确定所述受试者体内HTRA1或ARMS2基因中的一个或多个SNP的身份，所述SNP包括但不限于HTRA1基因中的rs11200638或ARMS2基因中的rs10490924，其中HTRA1SNP处的A等位基因或ARMS2SNP处的T等位基因则指示存
在血管相关黄斑病或其症状或产生血管相关黄斑病或其症状的风险增加。
在血管相关黄斑病或其症状或产生血管相关黄斑病或其症状的风险增加。
[0267] 本文还描述了诊断和/或确定受试者产生血管相关黄斑病或其症状的易感性的方法，所述方法包括在所述受试者的眼睛中检测异常脉络膜毛细血管小叶的存在，其中在所述受试者的眼睛中存在异常脉络膜毛细血管小叶则指示可以诊断出所述受试者
产生血管相关黄斑病或其症状或所述受试者产生血管相关黄斑病或其症状的风险增加，所述方法进一步包括确定所述受试者体内HTRA1基因中的rs11200638或ARMS2基因中
的rs10490924的身份，其中HTRA1基因中rs11200638处的A等位基因或ARMS2基因中
rs10490924处的T等位基因则指示存在血管相关黄斑病或其症状或产生血管相关黄斑病或其症状的风险增加。
产生血管相关黄斑病或其症状或所述受试者产生血管相关黄斑病或其症状的风险增加，所述方法进一步包括确定所述受试者体内HTRA1基因中的rs11200638或ARMS2基因中
的rs10490924的身份，其中HTRA1基因中rs11200638处的A等位基因或ARMS2基因中
rs10490924处的T等位基因则指示存在血管相关黄斑病或其症状或产生血管相关黄斑病或其症状的风险增加。
[0268] 另外，本文描述了对受试者的血管相关黄斑病或其症状进行诊断的方法，所述方法包括在所述受试者的眼睛中检测异常脉络膜毛细血管小叶的存在，其中在所述受试者的眼睛中存在异常脉络膜毛细血管小叶则指示可以诊断出所述受试者存在血管相关黄斑病或其症状，所述方法进一步包括确定所述受试者体内HTRA1或ARMS2基因中一个或多个SNP的身份，所述SNP包括但不限于rs1049331、rs3750848或rs2672587，其中所述SNP中的一个或多个的存在指示血管相关黄斑病或其症状的存在。
[0269] 此外，本文描述了对受试者的血管相关黄斑病或其症状进行诊断的方法，所述方法包括在所述受试者的眼睛中检测异常脉络膜毛细血管小叶的存在，其中在所述受试者的眼睛中存在异常脉络膜毛细血管小叶则指示可以诊断出所述受试者存在血管相关黄斑病或其症状，所述方法进一步包括确定所述受试者体内一个或多个异常脉络膜毛细血管小叶相关SNP的身份，所述异常脉络膜毛细血管小叶相关SNP包括但不限于HTRA1基因中rs11200638SNP的A等位基因、ARMS2基因中rs10490924SNP的T等位基因、CFH基因中
rs1061170的C等位基因，或C3基因中rs2230199SNP的G等位基因，其中所述异常脉络膜毛细血管小叶相关SNP中的一个或多个的存在指示血管相关黄斑病或其症状的存在。
rs1061170的C等位基因，或C3基因中rs2230199SNP的G等位基因，其中所述异常脉络膜毛细血管小叶相关SNP中的一个或多个的存在指示血管相关黄斑病或其症状的存在。
[0270] 本文还描述了对受试者的血管相关黄斑病或其症状进行诊断的方法，所述方法包括在所述受试者的眼睛中检测异常脉络膜毛细血管小叶的存在，其中在所述受试者的眼睛中存在异常脉络膜毛细血管小叶则指示所述受试者存在血管相关黄斑病或其症状，所述方法进一步包括确定所述受试者体内与本文所述的风险性、保护性或其它信息SNP或遗传标记（例如（而不限于）HTRA1或ARMS2SNP）存在连锁不平衡的SNP的身份，其中检测出与HTRA1或ARMS2SNP存在连锁不平衡的SNP指示血管相关黄斑病或其症状的风险增加。
[0271] 本文还描述了对受试者的血管相关黄斑病或其症状进行诊断的方法，所述方法包括在所述受试者的眼睛中检测异常脉络膜毛细血管小叶的存在，其中在所述受试者的眼睛中存在异常脉络膜毛细血管小叶则指示所述受试者存在血管相关黄斑病或其症状，所述方法进一步包括确定所述受试者体内与本文所述的风险性、保护性或其它信息SNP或遗传标记（例如（而不限于）HTRA1或ARMS2SNP）存在连锁不平衡的SNP的身份，其中检测出与HTRA1或ARMS2SNP存在连锁不平衡的SNP指示存在血管相关黄斑病或其症状。
[0272] 此外，本文描述了对受试者的血管相关黄斑病或其症状进行诊断的方法，所述方法包括在所述受试者的眼睛中检测异常脉络膜毛细血管小叶的存在，其中在所述受试者的眼睛中存在异常脉络膜毛细血管小叶则指示所述受试者存在血管相关黄斑病或其症状，所述方法进一步包括确定所述受试者体内一个或多个异常脉络膜毛细血管小叶相关SNP的身份，所述异常脉络膜毛细血管小叶相关SNP包括但不限于CFH基因中rs800292SNP的A等位基因、CFB基因中rs641153SNP的A等位基因或CFB基因中rs4151667SNP的A等位基
因，其中所述SNP中的一个或多个的存在指示产生血管相关黄斑病或其症状的风险降低。
因，其中所述SNP中的一个或多个的存在指示产生血管相关黄斑病或其症状的风险降低。
[0273] 本文还描述了对受试者的血管相关黄斑病或其症状进行诊断的方法，所述方法包括在所述受试者的眼睛中检测异常脉络膜毛细血管小叶的存在，其中在所述受试者的眼睛中存在异常脉络膜毛细血管小叶则指示所述受试者存在血管相关黄斑病或其症状，所述方法进一步包括确定所述受试者体内HTRA1基因中rs11200638SNP处的G等位基因的身份，其中HTRA1基因中的rs11200638SNP处的G等位基因指示产生血管相关黄斑病或其症状的风险降低。
[0274] .治疗血管相关黄斑病或其症状的方法
[0275] 本文描述了治疗受试者的血管相关黄斑病或其症状的方法，其中在所述受试者眼睛的黄斑中存在异常脉络膜毛细血管小叶，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的一种或多种抑制所述受试者眼睛的黄斑中脉络膜毛细血管小叶的灌注减少和/或封堵的药剂。在一个方面，血管相关黄斑病的症状可能出现在所述受试者的眼睛中。因此，本文还描述了治疗受试者的眼睛中血管相关黄斑病的症状的方法，其中在所述受试者的眼睛中存在异常脉络膜毛细血管小叶，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的一种或多种抑制所述受试者的眼睛中脉络膜毛细血管小叶封堵的药剂。
[0276] 本文还描述了治疗受试者的血管相关黄斑病、治疗与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状、治疗严重黄斑病、治疗晚期黄斑病或使异常脉络膜毛细血管小叶消退的方法。
[0277] 本文进一步描述了治疗受试者的血管相关黄斑病、治疗与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状、治疗严重的黄斑病、治疗晚期黄斑病或使异常脉络膜毛细血管小叶消退的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的一种或多种所公开的组合物、治疗剂、活性剂或功能性核酸。
[0278] 本文所用的“治疗”指的是对患者进行医学处理以旨在治愈、改善、稳定或预防疾病、病理学病状或病症。这个术语包括积极治疗，即特定地旨在改善疾病、病理学病状或病症的治疗；并且还包括病因治疗，即旨在去除相关疾病、病理学病状或病症的病因的治疗。另外，这个术语包括姑息治疗，即经过设计以用于减轻症状而非治愈疾病、病理学病状或病症的治疗；预防性治疗，即旨在使相关疾病、病理学病状或病症的产生减至最低限度或者部分或完全抑制相关疾病、病理学病状或病症产生的治疗；以及支持治疗，即被用于补充旨在改善相关疾病、病理学病状或病症的另一特定疗法的治疗。在不同的方面，所述术语涵盖了对包括哺乳动物（例如人类）在内的受试者进行的任何治疗，并且包括：(i)预防可能易患疾病但尚未被诊断患有所述疾病的受试者出现所述疾病；(ii)抑制疾病，即阻止其产生；或(iii)减轻疾病，即使得疾病消退。
[0279] 术语“正施用（administering）”和“施用（administration）”指的是向受试者提供药物制剂的任何方法。这类方法为本领域技术人员所熟知并且包括但不限于口服施用、舌下施用、经颊粘膜施用、经皮施用、通过吸入施用、经鼻施用、局部施用、阴道内施用、眼科施用、耳内施用、脑内施用、鞘内施用、直肠施用、腹膜内施用以及肠胃外施用，包括注射，如静脉内施用、动脉内施用、肌肉内施用、皮内施用以及皮下施用。眼科施用可以包括局部施用、结膜下施用、眼球筋膜囊下（sub-Tenon's）施用、眼球上施用、眼球后施用、眼眶内施用以及眼内施用（包括玻璃体内施用）。施用可以是连续的或间歇的。在不同的方面，可以治疗性施用制剂；即，施用所述制剂以治疗存在的疾病或病状。在另外的不同方面，可以防治性施用制剂；即施用所述制剂以预防疾病或病状。
[0280] 本文所用的术语“治疗有效量”指的是足以实现所希望的结果或对不希望有的病状起作用的量。例如，“治疗有效量”可以指的是足以实现所希望的结果，如抑制脉络膜毛细血管小叶封堵或增加脉络膜毛细血管小叶的灌注的量。
[0281] 本文还描述了调节HTRA1或ARMS2的表达或活性的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的一种或多种反义分子、siRNA、肽或小分子。例如，调节可以意指使HTRA1或ARMS2的表达或活性增加或降低。在本文所述的方法中，抑制HTRA1或ARMS2转录，或抑制HTRA1或ARMS2基因产物翻译可以调节HTRA1或ARMS2的表达或活性。类似地，可以直接或间接地抑制HTRA1或ARMS2基因产物（例如mRNA、多肽或蛋白质）的活性。对表达或活性的调节作用未必是完全的。例如，与HTRA1或ARMS2的表达或活性没有受到调节的对照细胞相比，可以将表达或活性调节约10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、99%、100%或之间的任何百分比。
[0282] “调节（modulate）”、“调节着（modulating）”或“受到调节（modulated）”意指通过增加或降低而发生改变。
[0283] 本文所用的“调节剂”可以意指可以使基因或基因产物（如肽）的表达或活性增加或降低的组合物。对表达或活性的调节作用未必是完全的。例如，与基因或基因产物的表达或活性没有受到组合物调节的对照细胞相比，可以将表达或活性调节约10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、99%、100%或之间的任何百分比。例如，“候选调节剂”可以是活性剂或治疗剂。
[0284] 术语“活性剂”或“治疗剂”被定义为如药物、化学治疗剂、化合物等的药剂。例如（而不限于），活性剂或治疗剂可以是天然存在的分子或可以是合成化合物，包括例如而不限于小分子（例如分子量<1000的分子）、肽、蛋白质、抗体或核酸（如siRNA或反义分子）。活性剂或治疗剂可以单独地使用或与任何其它活性剂或治疗剂组合使用。
[0285] 本文描述了治疗受试者的血管相关黄斑病、治疗与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状、治疗严重黄斑病、治疗晚期黄斑病或使异常脉络膜毛细血管小叶消退的方法，所述方法包括施用有效量的一种或多种药剂，所述药剂抑制脉络膜毛细血管小叶的灌注减少和/或脉络膜毛细血管小叶封堵；抑制脉络膜小动脉或脉络膜毛细血管封堵（解剖学或功能性）或阻塞；增加脉络膜小动脉和脉络膜毛细血管灌注；调节HTRA1的表达；调节ARMS2的表达；调节HTRA1的活性；调节ARMS2的活性；调节HTRA1或ARMS2转录；调节HTRA1或ARMS2基因产物的翻译；调节HTRA1或ARMS2的表达或活性；调节弹性蛋白酶活性；或调节HTRA1的弹性蛋白酶活性，从而治疗所述受试者的血管相关黄斑病、治疗与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；治疗严重黄斑病、治疗晚期黄斑病或使异常脉络膜毛细血管小叶消退。
[0286] 抑制脉络膜毛细血管小叶的灌注减少和/或脉络膜毛细血管小叶封堵、抑制脉络膜小动脉或脉络膜毛细血管封堵（解剖学或功能性）或阻塞、增加脉络膜小动脉和脉络膜毛细血管的灌注、调节HTRA1的表达、调节ARMS2的表达、调节HTRA1的活性、调节ARMS2的活性、调节HTRA1或ARMS2转录、调节HTRA1或ARMS2基因产物的翻译、调节HTRA1或ARMS2的表达或活性、调节弹性蛋白酶活性或调节HTRA1的弹性蛋白酶活性的一种或多
种药剂包括但不限于阿斯匹林（aspirin）、抗炎药物、胆固醇降低药物、抗高血糖药物、血管扩张剂、血管加压药、利尿剂、抗凝剂、血栓溶解药物、抗血管内皮生长因子药物、抗缺血后损伤药物、抗高血压药物、异常凝血治疗剂、其它血管治疗剂、阿图尼德（Amturnide）（阿利克伦（aliskiren）+氨氯地平（amlodipine）+氢氯噻嗪（hydrochlorothiazide））、普拉达萨（Pradaxa）（达比加群酯甲磺酸盐（dabigatran etexilate mesylate））、塔卡莫罗（Tekamlo）（阿利克伦+氨氯地平）、曲本扎（Tribenzor）（奥美沙坦酯（olmesartan medoxomil）+氨氯地平+氢氯噻嗪）、萨艾丽丝（Cialis）（他达拉非（tadalafil））、艾曲恩（Atryn）（供复原用的抗凝血酶重组冻干粉末）、埃菲恩特（Efient）（普拉格雷（prasugrel））、丽芙罗（Livalo）（匹伐他汀（pitavastatin））、马尔塔克（Multaq）（决奈达隆（dronedarone））、泰瓦索（Tyvaso）（曲前列尼尔（treprostinil））、克莱维派（Cleviprex）（氯维地平（clevidipine））、屈里匹克（Trilipix）（非诺贝特酸（fenofibric acid））、阿扎（Azor）（苯磺酸氨氯地平；奥美沙坦酯）、非诺贝特（Fenofibrate）、莱它瑞斯（Letairis）（安贝生坦（ambrisentan））、索里瑞斯（Soliris）（艾库组单抗（eculizumab））、特库瑞娜（Tekturna）（阿利克伦）、雷尼科萨（Ranexa）（雷诺嗪（ranolazine））、比迪尔（BiDil）（二硝酸异山梨醇酯/盐酸肼苯哒嗪（hydralazine hydrochloride））、卡度埃特（Caduet）（氨氯地平/阿托伐他汀（atorvastatin））、克莱斯特（Crestor）（瑞舒伐他汀钙（rosuvastatin calcium））、莱维它（Levitra）（伐地那非（vardenafil））、艾尔特克（Altocor）（洛伐他汀（lovastatin））、本尼卡（Benicar）、伊麦君特（Imagent）（全氯已烷脂质微球体（perflexane lipid microsphere））、伊斯普拉（Inspra）（依普利酮（eplerenone）片剂）、普拉维克（Plavix）（硫酸氢氯吡格雷（clopidogrel bisulfate））、瑞莫杜林（Remodulin）（曲前列尼尔）、艾德威可（Advicor）（延释烟酸/洛伐他汀）、代文（Diovan）（缬沙坦（valsartan））、纳曲可（Natrecor）（奈西立肽（nesiritide））、特维妥（Teveten）（甲磺酸依普罗沙坦（eprosartan mesylate）+氢氯噻嗪）、曲可（Tricor）（非诺贝特）、安吉玛（Angiomax）（比伐卢定（bivalirudin））、阿加曲班注射剂（Argatroban Injection）、爱达康（Atacand）（坎地沙坦西酯（candesartan cilexetil））、倍培AF片剂（Betapace AF Tablet）、盐酸地尔硫卓（Diltiazem HCL）、伊诺西普（Innohep）（亭扎肝素钠（tinzaparin sodium））、来适可XL（Lescol XL）（氟伐他汀钠（fluvastatin sodium））、美卡素HCT（Micardis HCT）（替米沙坦（telmisartan）和氢氯噻嗪）、耐绞宁（Nitrostat）（硝化甘油）、来适可（Lescol）（氟伐他汀钠）、美降脂（Mevacor）（洛伐他汀）、诺之平（Niaspan）、安归宁（Agrylin）（盐酸阿那格雷（anagrelide HCL））、爱达康（坎地沙坦西酯）、爱达康（坎地沙坦西酯）、骁悉（CellCept）、代文HCT（缬沙坦）、替格雷林（Integrilin）、美卡素（Micardis）（替米沙坦）、来特莫尔（Rythmol）、添安达（Tiazac）（盐酸地尔硫卓）、添安达（盐酸地尔硫卓）、曲可（非诺贝特）、万艾可（Viagra）、拜可（Baycol）（西立伐他汀钠（cerivastatin sodium））、卡托普利（Captopril）和氢氯噻嗪、凯迪心（Cardizem）、可罗泮（Corlopam）、代文（缬沙坦）、导脉顺CR（DynaCirc CR）、EDEX、来适可（氟伐他汀钠）、利血压（Lexxel）（顺丁烯二酸依拉普利（enalapril maleate）-非洛地平ER（felodipine ER））、立克压（Microzide）（氢氯噻嗪）、诺美弗（Normiflo）、己酮可可碱（Pentoxifylline）、品多洛尔（Pindolol）、波立维（Plavix）（硫酸氢氯吡格雷）、博斯可（Posicor）、瑞博（ReoPro）、贺美奇（REPRONEX）（注射用促生育素，USP）、特维妥（Teveten）（甲磺酸依普罗沙坦）、维拉帕米（Verapamil）、华法令钠（Warfarin Sodium）、舒降之（Zocor）、可福乐（Covera-HS）（维拉帕米）、玛威（Mavik）（群多普利（trandolapril））、缪斯（Muse）、普拉固（Pravachol）（普伐他汀钠（pravastatin sodium））、普拉固（普伐他汀钠）、普罗玛汀（ProAmatine）（米多君（midodrine））、普鲁卡比（Procanbid）（盐酸普鲁卡因胺延释片剂（procainamide hydrochloride extended-release tablets））、瑞他维（Retavase）（瑞替普酶（reteplase））、泰卓（Teczem）（顺丁烯二酸依拉普利/苹果酸地尔硫卓）、添安达（Tiazac）（盐酸地尔硫卓）、威视派克（Visipaque）（碘克沙醇（iodixanol））、安得罗达（Androderm）（睪固酮经皮系统）、康弗注射剂（Corvert Injection）（反丁烯二酸伊布利特注射剂（ibutilide fumarate injection））、心宁卫（Prinivil）或捷赐瑞（Zestril）（赖诺普利（Lisinopril））或托普洛-XL（Toprol-XL）（丁二酸美托洛尔（metoprolol succinate））、β-肾上腺素能阻断剂，如倍他索洛尔（betaxolol）、普萘洛尔（propranolol）、纳多洛尔（nadolol）、美托洛尔、阿替洛尔（atenolol）、卡维地洛（carvedilol）、美托洛尔、奈必洛尔（nebivolol）、拉贝洛尔（labetalol）、索他洛尔（sotalol）、噻吗洛尔（timolol）、艾司洛尔（esmolol）、卡替洛尔（carteolol）、喷布洛尔（penbutolol）、醋丁洛尔（acebutolol）、品多洛尔以及比索洛尔（bisoprolol）；异常凝血药物，如肝素、依诺肝素（enoxaparin）、达肝素（dalteparin）、可密定（coumadin）、TPA、链激酶、尿激酶、双嘧达莫（diypyramidole）、噻氯匹定（Ticlopidine）（抵克力得（Ticlid））、氯吡格雷（clopidrogel）（波立维（Plavix））、阿昔单抗（abciximab）（雷普罗（Reopro））、依非巴肽（eptifabitide）（替格雷林）以及替罗非班（tirofiban）（欣维宁（Aggrastat））；利尿剂，如乙酰唑胺（acetazolamide）、双氯非那胺（dichlorphenamide）、甲醋唑胺（methazolamide）、托西迈（torsemide）、呋喃苯胺酸（furosemide）、布美他尼（bumetanide）、利尿酸（ethacrynic acid）、巴马溴（pamabrom）、螺内酯（spironolactone）、螺内酯、阿米洛利（amiloride）、氨苯蝶啶（triamterene）、吲达帕胺（indapamide）、甲氯噻嗪（methyclothiazide）、氢氯噻嗪、氯噻嗪（chlorothiazide）、美托拉宗（metolazone）、苄氟噻嗪（bendroflumethiazide）、泊利噻嗪（polythiazide）、氢
2+
氟噻嗪（hydroflumethiazide）以及氯噻酮（chlorthalidone）；Ca 通道阻断剂，如地尔硫卓、尼莫地平（nimodipine）、维拉帕米、硝苯地平（nifedipine）、氨氯地平（amlodipine）、非洛地平、伊拉地平（isradipine）、氯维地平（clevidipine）、苄普地尔（bepridil）以及尼索地平（nisoldipine）；硝化扩张剂（nitrodilator），如硝化甘油、前列地尔（alprostadil）、肼屈嗪（hydralazine）、敏乐定（minoxidil）、奈西立肽、单硝酸异山梨醇酯以及硝普盐（nitroprusside）；α-肾上腺素能受体拮抗剂或α-阻断剂，如多沙唑嗪（doxazosin）、哌唑嗪（prazosin）、特拉唑嗪（terazosin）、阿夫唑嗪（alfuzosin）、坦索罗辛（tamsulosin）以及西洛多辛（silodosin）；血管紧张素转化酶抑制剂，如群多普利、福辛普利（fosinopril）、依拉普利、雷米普利（ramipril）、卡托普利、莫西普利（moexipril）、赖诺普利、喹那普利（quinapril）、贝那普利（benazepril）以及培哚普利（perindopril）；
血管紧张素受体阻断剂或ARB，如依普罗沙坦、奥美沙坦（olmesartan）、替米沙坦、洛沙坦（losartan）、缬沙坦、厄贝沙坦（irbesartan）以及坎地沙坦（candesartan）；肾素抑制剂，如阿利克伦；外周加压素，如环扁桃酯（cyclandelate）、罂粟碱（papaverine）以及异克舒令（isoxsuprine）；β-激动剂，如肾上腺素、去甲肾上腺素、多巴胺、多巴酚丁胺以及异丙肾上腺素；强心苷，如乌本箭毒苷、洋地黄、地高辛（digoxin）以及洋地黄毒苷（digitoxin）；磷酸二酯酶抑制剂，如米力农（milrinone）、氨力农（inamrinone）、西洛他唑（cilostazol）、西地那非（sildenafil）以及他达拉非（tadalafil）；血管加压素类似物，如精氨酸血管加压素和特利加压素（terlipressin）；抗凝剂；香豆素和茚满二酮，如华法令和茴茚二酮（anisindione）；因子Xa抑制剂，如磺达肝癸（fondaparinux）；肝素，如达肝素、亭扎肝素、依诺肝素、阿地肝素（ardeparin）以及达那肝素（danaparoid）；血小板聚集抑制剂，如阿斯匹林、普拉格雷（prasugrel）、西洛他唑（cilostazol）、氯吡格雷、潘生丁（dipyridamole）以及噻氯匹定（ticlopidine）；凝血酶抑制剂，如阿加曲班、比伐卢定、地西卢定（desirudin）以及来匹卢定（lepirudin）；抗炎药物；类固醇，如强的松（prednisone）、强的松龙（prednisolone）以及氢化可的松（hydrocortisone）；眼科抗炎剂，如奈帕芬胺（nepafenac）、酮咯酸（ketorolac）、氟比洛芬（flurbiprofen）、舒洛芬（suprofen）、环孢素（cyclosporine）、曲安西龙（triamcinolone）、双氯芬酸（diclofenac）以及溴芬那酸（bromfena）；非类固醇抗炎药（NSAIDS），如布洛芬（ibuprofen）、酮洛芬（ketoprofen）、依托度酸（etodolac）、非诺洛芬（fenoprofen）、萘普生（naproxen）、舒林酸（sulindac）、吲哚美辛（indomethacin）、吡罗昔康（piroxicam）、甲灭酸（mefenamic acid）、奥沙普秦（oxaprozin）以及托美丁（tolmetin）；胆固醇降低药物；他汀类（statin），如阿托伐他汀（atorvastatin）、辛伐他汀（simvastatin）、普伐他汀、洛伐他汀、氟伐他汀、西立伐他汀、匹伐他汀（pitavastatin）以及瑞舒伐他汀（rosuvastatin）；
烟酸、阿斯匹林、依泽替米贝（ezetimibe）以及右旋甲状腺素；纤维酸（fibric acid），如吉非罗齐（Gemfibrozil）、非诺贝特以及氯贝特（clofibrate）；抗高血糖剂；促分泌剂，如格列吡嗪（glipizide）、格列美脲（glimepiride）、优降糖（glyburide）、氯磺丙脲（chlorpropamide）、乙酰苯磺酰环已脲（acetohexamide）、甲苯磺丁脲（tolbutamide）、妥拉磺脲（tolazamide）、瑞格列奈（repaglinide）以及那格列奈（nateglinide）；胰岛素增敏剂，如罗格列酮（rosiglitazone）、吡格列酮（pioglitazone）、曲列格酮（troglitazone）、二甲双胍（metformin）、丁双胍（buformin）以及苯乙双胍（phenformin）；α-葡糖苷酶抑制剂，如米格列醇（miglitol）、阿卡波糖（acarbose）；肽类似物，如艾塞那肽（exenatide）、沙格列汀（saxagliptin）、西他列汀（sitagliptin）、利拉鲁肽（liraglutide）、他司鲁泰（taspoglutide）以及普兰林肽（pramlinitide）；以及抑制缺血后损伤的药物，如番茄红素、谷氨酸盐、抗-T-淋巴细胞球蛋白、EPO、丙酮酸乙酯、戴安新（diannexin）、A-002（Athera Pharmaceuticals，抑制PLA2）、 DP-b99（D-Pharm，金属螯合剂）、
TM
单独或与噻吩并吡啶组合的利伐沙班（Rivaroxaban）、Viprinex （安克洛酶（Ancrod））、心肌细胞肌球蛋白激动剂（Omecamtiv mecarbil）（CK-1827452）、人参皂甙-Rd、替奈普酶（Tenecteplase）、罗替格普肽（Rotigaptide）、去氨普酶（desmoteplase）、奥米沙班（Otamixaban）（XRP0673）、依普利酮（eplerenone）、SCH530348、雷珠单抗（ranibizumab）、阿替普酶（Alteplase）、阿加曲班、人类重组成纤维细胞生长因子-1（FGF1-141）、埃替非巴肽（Eptifibatide）、FX06（纤维蛋白衍生肽）、阿哌沙班（apixaban）、功能性核酸、适体、核糖酶、三链体形成分子，以及外部引导序列、肽核酸、反义分子、siRNA、shRNA、吗啉代寡核苷酸、抗体、肽、小分子、α-1抗胰蛋白酶、ZD0892、SPIPm2、ONO-5046、1,4-双苯基-1,4-二氢吡啶、2-羟基二氢吡啶和2-氨基二氢吡啶、多拉司他汀或多拉司他汀类似物，或鞘丝藻抑制素（lyngbyastatin）或鞘丝藻抑制素类似物或DPMFKLboroV。
种药剂包括但不限于阿斯匹林（aspirin）、抗炎药物、胆固醇降低药物、抗高血糖药物、血管扩张剂、血管加压药、利尿剂、抗凝剂、血栓溶解药物、抗血管内皮生长因子药物、抗缺血后损伤药物、抗高血压药物、异常凝血治疗剂、其它血管治疗剂、阿图尼德（Amturnide）（阿利克伦（aliskiren）+氨氯地平（amlodipine）+氢氯噻嗪（hydrochlorothiazide））、普拉达萨（Pradaxa）（达比加群酯甲磺酸盐（dabigatran etexilate mesylate））、塔卡莫罗（Tekamlo）（阿利克伦+氨氯地平）、曲本扎（Tribenzor）（奥美沙坦酯（olmesartan medoxomil）+氨氯地平+氢氯噻嗪）、萨艾丽丝（Cialis）（他达拉非（tadalafil））、艾曲恩（Atryn）（供复原用的抗凝血酶重组冻干粉末）、埃菲恩特（Efient）（普拉格雷（prasugrel））、丽芙罗（Livalo）（匹伐他汀（pitavastatin））、马尔塔克（Multaq）（决奈达隆（dronedarone））、泰瓦索（Tyvaso）（曲前列尼尔（treprostinil））、克莱维派（Cleviprex）（氯维地平（clevidipine））、屈里匹克（Trilipix）（非诺贝特酸（fenofibric acid））、阿扎（Azor）（苯磺酸氨氯地平；奥美沙坦酯）、非诺贝特（Fenofibrate）、莱它瑞斯（Letairis）（安贝生坦（ambrisentan））、索里瑞斯（Soliris）（艾库组单抗（eculizumab））、特库瑞娜（Tekturna）（阿利克伦）、雷尼科萨（Ranexa）（雷诺嗪（ranolazine））、比迪尔（BiDil）（二硝酸异山梨醇酯/盐酸肼苯哒嗪（hydralazine hydrochloride））、卡度埃特（Caduet）（氨氯地平/阿托伐他汀（atorvastatin））、克莱斯特（Crestor）（瑞舒伐他汀钙（rosuvastatin calcium））、莱维它（Levitra）（伐地那非（vardenafil））、艾尔特克（Altocor）（洛伐他汀（lovastatin））、本尼卡（Benicar）、伊麦君特（Imagent）（全氯已烷脂质微球体（perflexane lipid microsphere））、伊斯普拉（Inspra）（依普利酮（eplerenone）片剂）、普拉维克（Plavix）（硫酸氢氯吡格雷（clopidogrel bisulfate））、瑞莫杜林（Remodulin）（曲前列尼尔）、艾德威可（Advicor）（延释烟酸/洛伐他汀）、代文（Diovan）（缬沙坦（valsartan））、纳曲可（Natrecor）（奈西立肽（nesiritide））、特维妥（Teveten）（甲磺酸依普罗沙坦（eprosartan mesylate）+氢氯噻嗪）、曲可（Tricor）（非诺贝特）、安吉玛（Angiomax）（比伐卢定（bivalirudin））、阿加曲班注射剂（Argatroban Injection）、爱达康（Atacand）（坎地沙坦西酯（candesartan cilexetil））、倍培AF片剂（Betapace AF Tablet）、盐酸地尔硫卓（Diltiazem HCL）、伊诺西普（Innohep）（亭扎肝素钠（tinzaparin sodium））、来适可XL（Lescol XL）（氟伐他汀钠（fluvastatin sodium））、美卡素HCT（Micardis HCT）（替米沙坦（telmisartan）和氢氯噻嗪）、耐绞宁（Nitrostat）（硝化甘油）、来适可（Lescol）（氟伐他汀钠）、美降脂（Mevacor）（洛伐他汀）、诺之平（Niaspan）、安归宁（Agrylin）（盐酸阿那格雷（anagrelide HCL））、爱达康（坎地沙坦西酯）、爱达康（坎地沙坦西酯）、骁悉（CellCept）、代文HCT（缬沙坦）、替格雷林（Integrilin）、美卡素（Micardis）（替米沙坦）、来特莫尔（Rythmol）、添安达（Tiazac）（盐酸地尔硫卓）、添安达（盐酸地尔硫卓）、曲可（非诺贝特）、万艾可（Viagra）、拜可（Baycol）（西立伐他汀钠（cerivastatin sodium））、卡托普利（Captopril）和氢氯噻嗪、凯迪心（Cardizem）、可罗泮（Corlopam）、代文（缬沙坦）、导脉顺CR（DynaCirc CR）、EDEX、来适可（氟伐他汀钠）、利血压（Lexxel）（顺丁烯二酸依拉普利（enalapril maleate）-非洛地平ER（felodipine ER））、立克压（Microzide）（氢氯噻嗪）、诺美弗（Normiflo）、己酮可可碱（Pentoxifylline）、品多洛尔（Pindolol）、波立维（Plavix）（硫酸氢氯吡格雷）、博斯可（Posicor）、瑞博（ReoPro）、贺美奇（REPRONEX）（注射用促生育素，USP）、特维妥（Teveten）（甲磺酸依普罗沙坦）、维拉帕米（Verapamil）、华法令钠（Warfarin Sodium）、舒降之（Zocor）、可福乐（Covera-HS）（维拉帕米）、玛威（Mavik）（群多普利（trandolapril））、缪斯（Muse）、普拉固（Pravachol）（普伐他汀钠（pravastatin sodium））、普拉固（普伐他汀钠）、普罗玛汀（ProAmatine）（米多君（midodrine））、普鲁卡比（Procanbid）（盐酸普鲁卡因胺延释片剂（procainamide hydrochloride extended-release tablets））、瑞他维（Retavase）（瑞替普酶（reteplase））、泰卓（Teczem）（顺丁烯二酸依拉普利/苹果酸地尔硫卓）、添安达（Tiazac）（盐酸地尔硫卓）、威视派克（Visipaque）（碘克沙醇（iodixanol））、安得罗达（Androderm）（睪固酮经皮系统）、康弗注射剂（Corvert Injection）（反丁烯二酸伊布利特注射剂（ibutilide fumarate injection））、心宁卫（Prinivil）或捷赐瑞（Zestril）（赖诺普利（Lisinopril））或托普洛-XL（Toprol-XL）（丁二酸美托洛尔（metoprolol succinate））、β-肾上腺素能阻断剂，如倍他索洛尔（betaxolol）、普萘洛尔（propranolol）、纳多洛尔（nadolol）、美托洛尔、阿替洛尔（atenolol）、卡维地洛（carvedilol）、美托洛尔、奈必洛尔（nebivolol）、拉贝洛尔（labetalol）、索他洛尔（sotalol）、噻吗洛尔（timolol）、艾司洛尔（esmolol）、卡替洛尔（carteolol）、喷布洛尔（penbutolol）、醋丁洛尔（acebutolol）、品多洛尔以及比索洛尔（bisoprolol）；异常凝血药物，如肝素、依诺肝素（enoxaparin）、达肝素（dalteparin）、可密定（coumadin）、TPA、链激酶、尿激酶、双嘧达莫（diypyramidole）、噻氯匹定（Ticlopidine）（抵克力得（Ticlid））、氯吡格雷（clopidrogel）（波立维（Plavix））、阿昔单抗（abciximab）（雷普罗（Reopro））、依非巴肽（eptifabitide）（替格雷林）以及替罗非班（tirofiban）（欣维宁（Aggrastat））；利尿剂，如乙酰唑胺（acetazolamide）、双氯非那胺（dichlorphenamide）、甲醋唑胺（methazolamide）、托西迈（torsemide）、呋喃苯胺酸（furosemide）、布美他尼（bumetanide）、利尿酸（ethacrynic acid）、巴马溴（pamabrom）、螺内酯（spironolactone）、螺内酯、阿米洛利（amiloride）、氨苯蝶啶（triamterene）、吲达帕胺（indapamide）、甲氯噻嗪（methyclothiazide）、氢氯噻嗪、氯噻嗪（chlorothiazide）、美托拉宗（metolazone）、苄氟噻嗪（bendroflumethiazide）、泊利噻嗪（polythiazide）、氢
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氟噻嗪（hydroflumethiazide）以及氯噻酮（chlorthalidone）；Ca 通道阻断剂，如地尔硫卓、尼莫地平（nimodipine）、维拉帕米、硝苯地平（nifedipine）、氨氯地平（amlodipine）、非洛地平、伊拉地平（isradipine）、氯维地平（clevidipine）、苄普地尔（bepridil）以及尼索地平（nisoldipine）；硝化扩张剂（nitrodilator），如硝化甘油、前列地尔（alprostadil）、肼屈嗪（hydralazine）、敏乐定（minoxidil）、奈西立肽、单硝酸异山梨醇酯以及硝普盐（nitroprusside）；α-肾上腺素能受体拮抗剂或α-阻断剂，如多沙唑嗪（doxazosin）、哌唑嗪（prazosin）、特拉唑嗪（terazosin）、阿夫唑嗪（alfuzosin）、坦索罗辛（tamsulosin）以及西洛多辛（silodosin）；血管紧张素转化酶抑制剂，如群多普利、福辛普利（fosinopril）、依拉普利、雷米普利（ramipril）、卡托普利、莫西普利（moexipril）、赖诺普利、喹那普利（quinapril）、贝那普利（benazepril）以及培哚普利（perindopril）；
血管紧张素受体阻断剂或ARB，如依普罗沙坦、奥美沙坦（olmesartan）、替米沙坦、洛沙坦（losartan）、缬沙坦、厄贝沙坦（irbesartan）以及坎地沙坦（candesartan）；肾素抑制剂，如阿利克伦；外周加压素，如环扁桃酯（cyclandelate）、罂粟碱（papaverine）以及异克舒令（isoxsuprine）；β-激动剂，如肾上腺素、去甲肾上腺素、多巴胺、多巴酚丁胺以及异丙肾上腺素；强心苷，如乌本箭毒苷、洋地黄、地高辛（digoxin）以及洋地黄毒苷（digitoxin）；磷酸二酯酶抑制剂，如米力农（milrinone）、氨力农（inamrinone）、西洛他唑（cilostazol）、西地那非（sildenafil）以及他达拉非（tadalafil）；血管加压素类似物，如精氨酸血管加压素和特利加压素（terlipressin）；抗凝剂；香豆素和茚满二酮，如华法令和茴茚二酮（anisindione）；因子Xa抑制剂，如磺达肝癸（fondaparinux）；肝素，如达肝素、亭扎肝素、依诺肝素、阿地肝素（ardeparin）以及达那肝素（danaparoid）；血小板聚集抑制剂，如阿斯匹林、普拉格雷（prasugrel）、西洛他唑（cilostazol）、氯吡格雷、潘生丁（dipyridamole）以及噻氯匹定（ticlopidine）；凝血酶抑制剂，如阿加曲班、比伐卢定、地西卢定（desirudin）以及来匹卢定（lepirudin）；抗炎药物；类固醇，如强的松（prednisone）、强的松龙（prednisolone）以及氢化可的松（hydrocortisone）；眼科抗炎剂，如奈帕芬胺（nepafenac）、酮咯酸（ketorolac）、氟比洛芬（flurbiprofen）、舒洛芬（suprofen）、环孢素（cyclosporine）、曲安西龙（triamcinolone）、双氯芬酸（diclofenac）以及溴芬那酸（bromfena）；非类固醇抗炎药（NSAIDS），如布洛芬（ibuprofen）、酮洛芬（ketoprofen）、依托度酸（etodolac）、非诺洛芬（fenoprofen）、萘普生（naproxen）、舒林酸（sulindac）、吲哚美辛（indomethacin）、吡罗昔康（piroxicam）、甲灭酸（mefenamic acid）、奥沙普秦（oxaprozin）以及托美丁（tolmetin）；胆固醇降低药物；他汀类（statin），如阿托伐他汀（atorvastatin）、辛伐他汀（simvastatin）、普伐他汀、洛伐他汀、氟伐他汀、西立伐他汀、匹伐他汀（pitavastatin）以及瑞舒伐他汀（rosuvastatin）；
烟酸、阿斯匹林、依泽替米贝（ezetimibe）以及右旋甲状腺素；纤维酸（fibric acid），如吉非罗齐（Gemfibrozil）、非诺贝特以及氯贝特（clofibrate）；抗高血糖剂；促分泌剂，如格列吡嗪（glipizide）、格列美脲（glimepiride）、优降糖（glyburide）、氯磺丙脲（chlorpropamide）、乙酰苯磺酰环已脲（acetohexamide）、甲苯磺丁脲（tolbutamide）、妥拉磺脲（tolazamide）、瑞格列奈（repaglinide）以及那格列奈（nateglinide）；胰岛素增敏剂，如罗格列酮（rosiglitazone）、吡格列酮（pioglitazone）、曲列格酮（troglitazone）、二甲双胍（metformin）、丁双胍（buformin）以及苯乙双胍（phenformin）；α-葡糖苷酶抑制剂，如米格列醇（miglitol）、阿卡波糖（acarbose）；肽类似物，如艾塞那肽（exenatide）、沙格列汀（saxagliptin）、西他列汀（sitagliptin）、利拉鲁肽（liraglutide）、他司鲁泰（taspoglutide）以及普兰林肽（pramlinitide）；以及抑制缺血后损伤的药物，如番茄红素、谷氨酸盐、抗-T-淋巴细胞球蛋白、EPO、丙酮酸乙酯、戴安新（diannexin）、A-002（Athera Pharmaceuticals，抑制PLA2）、 DP-b99（D-Pharm，金属螯合剂）、
TM
单独或与噻吩并吡啶组合的利伐沙班（Rivaroxaban）、Viprinex （安克洛酶（Ancrod））、心肌细胞肌球蛋白激动剂（Omecamtiv mecarbil）（CK-1827452）、人参皂甙-Rd、替奈普酶（Tenecteplase）、罗替格普肽（Rotigaptide）、去氨普酶（desmoteplase）、奥米沙班（Otamixaban）（XRP0673）、依普利酮（eplerenone）、SCH530348、雷珠单抗（ranibizumab）、阿替普酶（Alteplase）、阿加曲班、人类重组成纤维细胞生长因子-1（FGF1-141）、埃替非巴肽（Eptifibatide）、FX06（纤维蛋白衍生肽）、阿哌沙班（apixaban）、功能性核酸、适体、核糖酶、三链体形成分子，以及外部引导序列、肽核酸、反义分子、siRNA、shRNA、吗啉代寡核苷酸、抗体、肽、小分子、α-1抗胰蛋白酶、ZD0892、SPIPm2、ONO-5046、1,4-双苯基-1,4-二氢吡啶、2-羟基二氢吡啶和2-氨基二氢吡啶、多拉司他汀或多拉司他汀类似物，或鞘丝藻抑制素（lyngbyastatin）或鞘丝藻抑制素类似物或DPMFKLboroV。
[0287] 本文还描述了治疗或减轻血管相关黄斑病或其症状的症状的方法，所述方法包括通过向受试者施用治疗有效量的活性剂或治疗剂（例如一种或多种反义分子、siRNA、肽或小分子）来调节HTRA1或ARMS2的表达或活性。例如（而不限于），所述治疗剂可以是DPMFKLboroV。
[0288] 在一个方面，治疗或减轻血管相关黄斑病或其症状的方法包括通过向受试者施用治疗有效量的一种或多种能够与HTRA1或ARMS2杂交的反义分子、siRNA、肽或小分子来调节HTRA1或ARMS2的表达或活性，可以进一步包括向受试者施用治疗有效量的在受试者体内抑制脉络膜小动脉或脉络膜毛细血管封堵或阻塞的一种或多种药剂以及增加脉络膜小动脉和脉络膜毛细血管的灌注的一种或多种药剂。
[0289] 本文还描述了预测活性剂或治疗剂对针对渗出性AMD进行治疗的患者的功效的方法，所述方法包括确定HTRA1或ARMS2基因中一个或多个SNP的身份，其中SNP的存在指示所述患者对所述活性剂或治疗剂起反应的可能性较低。例如（而不限于）检测HTRA1基因中的rs11200638或ARMS2基因中的rs10490924中的一个或多个，其中HTRA1SNP处的A等位基因或ARMS2SNP处的T等位基因可指示所述患者对活性剂或治疗剂起反应的可能性较低。在另一个方面，所述方法可以包括确定受试者体内HTRA1或ARMS2基因中一个或多个SNP的身份，所述SNP包括但不限于rs1049331、rs3750848或rs2672587，其中所述SNP中的一个或多个的存在指示患者对活性剂或治疗剂起反应的可能性较低。在又另一个方面，所述方法可以包括检测与本文所述的风险性或其它信息SNP或遗传标记（例如（而不限于）HTRA1或ARMS2SNP）存在连锁不平衡的SNP，其中检测出与HTRA1或ARMS2SNP存在连锁不平衡的SNP可以指示患者对活性剂或治疗剂起反应的可能性较低。
[0290] 本文还描述了预测抗-VEGF（血管内皮生长因子）疗法对针对渗出性AMD进行治疗的患者的功效的方法，所述方法包括确定ARMS2基因中一个或多个SNP的身份，其中ARMS2基因中一个或多个SNP的存在指示所述患者对抗-VEGF疗法起反应的可能性较低。例如（而不限于）检测ARMS2基因中的rs10490924，其中这个ARMS2SNP处的T等位基因可指示所述患者对抗-VEGF疗法起反应的可能性较低。在另一个方面，所述方法可以包括确定受试者体内ARMS2基因中一个或多个SNP的身份，所述SNP包括但不限于rs3750848，其中这个ARMS2SNP处的G等位基因则指示患者对抗-VEGF疗法起反应的可能性较低。在又另一
个方面，所述方法可以包括检测与本文所述的风险性或其它信息SNP或遗传标记（例如（而不限于）ARMS2SNP）存在连锁不平衡的SNP，其中检测出与ARMS2SNP存在连锁不平衡的SNP可以指示患者对抗-VEGF疗法起反应的可能性较低。
个方面，所述方法可以包括检测与本文所述的风险性或其它信息SNP或遗传标记（例如（而不限于）ARMS2SNP）存在连锁不平衡的SNP，其中检测出与ARMS2SNP存在连锁不平衡的SNP可以指示患者对抗-VEGF疗法起反应的可能性较低。
[0291] 本文还描述了调节HTRA1和ARMS2的表达或活性的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的一种或多种反义分子、siRNA、肽或小分子。
[0292] 本文还描述了治疗或减轻血管相关黄斑病或其症状的方法，所述方法包括通过向受试者施用治疗有效量的一种或多种反义分子、siRNA、肽或小分子来调节HTRA1和ARMS2的表达或活性。
[0293] 在一个方面，治疗或减轻血管相关黄斑病或其症状的方法可以包括通过向受试者施用治疗有效量的一种或多种反义分子、siRNA、肽或小分子来调节HTRA1和ARMS2的表达或活性，可以进一步包括向受试者施用治疗有效量的在受试者体内抑制脉络膜小动脉或脉络膜毛细血管封堵的一种或多种药剂以及增加脉络膜小动脉和脉络膜毛细血管的灌注的一种或多种药剂。
[0294] 1.HTRA1-弹性蛋白酶
[0295] 本文还描述了调节HTRA1的弹性蛋白酶活性的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的一种或多种反义分子、siRNA、肽或小分子。在一个方面，所述方法包括通过向受试者施用治疗有效量的一种或多种活性剂或治疗剂来防止布鲁赫膜降解。例如（而不限于），所述药剂可以是DPMFKLboroV。
[0296] 布鲁赫膜是包含结构蛋白弹性蛋白和胶原蛋白的细胞外层，充当细胞和血管从脉络膜流出进入RPE下腔和视网膜下腔中的物理屏障。对这一屏障的破坏或损害在AMD中与视力减退相关，这经常由新血管从脉络膜生长到RPE下腔和/或视网膜下腔中所致（这个过程被称为脉络膜新血管生成或CNV）。此外，对患有AMD和未患AMD的人类捐献者眼睛的黄斑和黄斑外区域进行形态测定评估揭示了黄斑区域与黄斑外区域之间布鲁赫膜的含弹性蛋白层（EL）的完整性和厚度存在统计显著性差异。重要的是，在底物识别中起关键作用的HTRA1蛋白酶识别袋类似于弹性蛋白酶的蛋白酶识别袋，并且Kazal结构域（所述蛋白质的调控区的不可缺少的部分）与来自海葵（Anemonia）的已知弹性蛋白酶抑制剂共有结构同源性。因此，本文所述的方法可以包括通过向受试者施用治疗有效量的弹性蛋白酶抑制剂来防止布鲁赫膜降解。例如（而不限于），弹性蛋白酶抑制剂可以是α-1抗胰蛋白酶、ZD0892、SPIPm2、ONO-5046、1,4-双苯基-1,4-二氢吡啶、2-羟基二氢吡啶和2-氨基二氢吡啶、多拉司他汀或多拉司他汀类似物，或鞘丝藻抑制素或鞘丝藻抑制素类似物。
[0297] 本文还描述了治疗受试者的血管相关黄斑病的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的弹性蛋白酶抑制剂。
[0298] 在一个方面，治疗受试者的血管相关黄斑病的方法可以包括向所述受试者施用有效量的α-1抗胰蛋白酶、ZD0892、SPIPm2、ONO-5046、1,4-双苯基-1,4-二氢吡啶、2-羟基二氢吡啶和2-氨基二氢吡啶、多拉司他汀或多拉司他汀类似物，或鞘丝藻抑制素或鞘丝藻抑制素类似物或DPMFKLboroV。
[0299] 本文还描述了治疗受试者的与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的弹性蛋白酶抑制剂。
[0300] 在一个方面，治疗受试者的与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状的方法可以包括向所述受试者施用有效量的α-1抗胰蛋白酶、ZD0892、SPIPm2、ONO-5046、1,4-双苯基-1,4-二氢吡啶、2-羟基二氢吡啶和2-氨基二氢吡啶、多拉司他汀或多拉司他汀类似物，或鞘丝藻抑制素或鞘丝藻抑制素类似物或DPMFKLboroV。
[0301] 本文还描述了治疗受试者的严重黄斑病或晚期黄斑病的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的弹性蛋白酶抑制剂。
[0302] 在一个方面，治疗受试者的严重黄斑病或晚期黄斑病的方法可以包括向所述受试者施用有效量的α-1抗胰蛋白酶、ZD0892、SPIPm2、ONO-5046、1,4-双苯基-1,4-二氢吡啶、2-羟基二氢吡啶和2-氨基二氢吡啶、多拉司他汀或多拉司他汀类似物，或鞘丝藻抑制素或鞘丝藻抑制素类似物或DPMFKLboroV。
[0303] 本文还描述了使受试者的异常脉络膜毛细血管小叶消退的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的弹性蛋白酶抑制剂。
[0304] 在一个方面，使受试者的异常脉络膜毛细血管小叶消退的方法可以包括向所述受试者施用有效量的α-1抗胰蛋白酶、ZD0892、SPIPm2、ONO-5046、1,4-双苯基-1,4-二氢吡啶、2-羟基二氢吡啶和2-氨基二氢吡啶、多拉司他汀或多拉司他汀类似物，或鞘丝藻抑制素或鞘丝藻抑制素类似物或DPMFKLboroV。
[0305] 本文还描述了针对受试者(i)治疗血管相关黄斑病；(ii)治疗与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(iii)治疗严重黄斑病或晚期黄斑病；或(iv)使异常脉络膜毛细血管小叶消退的方法，所述方法包括：(a)选择用于(i)治疗血管相关黄斑病；(ii)治疗与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(iii)治疗严重黄斑病或晚期黄斑病；或(iv)使异常脉络膜毛细血管小叶消退的受试者；(b)向所述受试者施用有效量的一种或多种所公开的组合物、治疗剂、活性剂或功能性核酸，从而针对所述受试者(i)治疗血管相关黄斑病；(ii)治疗与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(iii)治疗严重黄斑病或晚期黄斑病；或(iv)使异常脉络膜毛细血管小叶消退。
[0306] 本文进一步描述了针对受试者(i)治疗血管相关黄斑病；(ii)治疗与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(iii)治疗严重黄斑病或晚期黄斑病；或(iv)使异常脉络膜毛细血管小叶消退的方法，所述方法包括：(a)选择用于(i)治疗血管相关黄斑病；(ii)治疗与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(iii)治疗严重黄斑病或晚期黄斑病；或(iv)使异常脉络膜毛细血管小叶消退的受试者；以及(b)向所述受试者施用有效量的药物组合物，所述药物组合物包含一种或多种所公开的组合物、治疗剂、活性剂或功能性核酸以及药学上可接受的载体，从而针对所述受试者(i)治疗血管相关黄斑病；(ii)治疗与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(iii)治疗严重黄斑病或晚期黄斑病；或(iv)使异常脉络膜毛细血管小叶消退。
[0307] 本文还描述了治疗或逆转受试者的血管相关黄斑病或其症状的方法，其中在所述受试者的眼睛中存在异常脉络膜毛细血管小叶，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的一种或多种增加所述受试者的眼睛中脉络膜毛细血管小叶的灌注的药剂。在一个方面，血管相关黄斑病的症状可能出现在所述受试者的眼睛中。因此，本文还描述了治疗或逆转受试者的眼睛中血管相关黄斑病的症状的方法，其中在所述受试者的眼睛中存在异常脉络膜毛细血管小叶，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的一种或多种增加所述受试者的眼睛中脉络膜毛细血管小叶的灌注的药剂。
[0308] 另外，本文描述了治疗或逆转受试者的血管相关黄斑病或其症状的方法，其中在所述受试者的眼睛中存在异常脉络膜毛细血管小叶，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的一种或多种抑制所述受试者的眼睛中脉络膜毛细血管小叶封堵的药剂以及一种或多种增加所述受试者的眼睛中脉络膜毛细血管小叶的灌注的药剂。在一个方面，血管相关黄斑病的症状可能出现在所述受试者的眼睛中。因此，本文还描述了治疗或逆转受试者的眼睛中血管相关黄斑病的症状的方法，其中在所述受试者的眼睛中存在异常脉络膜毛细血管小叶，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的一种或多种抑制所述受试者的眼睛中脉络膜毛细血管小叶封堵的药剂以及一种或多种增加所述受试者的眼睛中脉络膜毛细血管小叶的灌注的药剂。
[0309] 此外，本文描述了治疗或逆转受试者的血管相关黄斑病或其症状的方法，其中在所述受试者的眼睛中存在异常脉络膜毛细血管小叶，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的抗血管内皮生长因子（抗-VEGF）剂以及一种或多种抑制所述受试者的眼睛中脉络膜毛细血管小叶封堵或灌注减少的药剂或一种或多种增加所述受试者的眼睛中脉络膜毛细血管小叶的灌注的药剂。在一个方面，血管相关黄斑病的症状可能出现在所述受试者的眼睛中。因此，本文还描述了治疗或逆转受试者的眼睛中血管相关黄斑病的症状的方法，其中在所述受试者的眼睛中存在异常脉络膜毛细血管小叶，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的抗血管内皮生长因子（抗-VEGF）剂，以及一种或多种抑制所述受试者的眼睛中的脉络膜毛细血管小叶封堵的药剂或一种或多种增加所述受试者的眼睛中脉络膜毛细血管小叶的灌注的药剂。抗-VEGF剂可以是（但不限于）贝伐单抗（bevacizumab）、雷珠单抗、雷莫芦单抗（ramucirumab）、阿柏西普（aflibercept）、舒尼替尼（sunitinib）、索拉非尼（sorafenib）、凡德他尼（vandetanib）、瓦他拉尼（vatalanib）、泰瓦扎尼（tivozanib）、阿西替尼（axitinib）、伊马替尼（imatinib）或帕唑帕尼（pazopanib）。
[0310] 在一个方面，本文所述的治疗或逆转血管相关黄斑病或其症状的方法可以进一步包括监测所述受试者的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶的步骤。
[0311] 本文还描述了降低受试者的血管相关黄斑病或其症状的风险的方法，其中在所述受试者的眼睛中存在异常脉络膜毛细血管小叶，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的一种或多种抑制所述受试者的眼睛中的脉络膜毛细血管小叶封堵的药剂。在一个方面，血管相关黄斑病的症状可能出现在所述受试者的眼睛中。因此，本文还描述了降低受试者的眼睛中血管相关黄斑病的症状的风险的方法，其中在所述受试者的眼睛中存在异常脉络膜毛细血管小叶，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的一种或多种抑制所述受试者的眼睛中的脉络膜毛细血管小叶封堵（解剖学或功能性封堵）的药剂。
[0312] 本文所用的短语“降低风险”的意思可能与“预防（prevent）”或“预防着（preventing）”相同，并且指的是阻止、避免、规避、阻碍、停止、延迟或妨碍某些事情发生，尤其是通过预先作用来实现。应了解，在本文使用降低、抑制或预防的情况下，除非另外确切地指明，否则还明确地公开了其它两个词语的使用。
[0313] 在一个方面，可以向眼睛直接施用一种或多种抑制脉络膜毛细血管小叶封堵的药剂。这种施用途径被称为眼科施用，可以通过为本领域技术人员所知的多种方式来实现。例如（而不限于），可以经由将乳膏剂、软膏剂或液体滴剂制剂放到受试者的内眼睑上、经由使用喷到受试者的眼睛上的喷雾剂，或经由玻璃体内注射来向有需要的受试者的眼睛中提供一种或多种药剂。眼科施用可以进一步包括局部施用、结膜下施用、眼球筋膜囊下施用、眼球上施用、眼球后施用、眼眶内施用、眼周注射以及眼内施用（包括玻璃体内施用）。
[0314] 在一个方面，可以经由使用全身递送（如静脉内递送）、单向巩膜上植入物、中空微针、实心经涂布微针、自由漂浮的玻璃体内植入物或巩膜固定的玻璃体内植入物来实现一种或多种药剂的眼科施用。还可以经由使用局部离子导入法来实现一种或多种药剂的眼科施用。离子导入法是将化合物递送到眼睛中的一种无创性方法。它可以通过施加所带电荷与化合物相同的小电流以产生排斥电动势从而能够将化合物递送到眼睛的前段或后段中来进行。Edelhauser等,Ophthalmic Drug Delivery Systems for the Treatment of Retinal Diseases:Basic Research to Clinical Applications,IOVS2010:51(11)5403-5419描述了这些不同的眼科施用方法，所述文献以引用的方式整体并入本文。
[0315] 短语“有需要的受试者”指的是基于治疗病症的需要对受试者进行选择。例如，受试者可以基于技术人员的诊断被鉴定为有治疗血管相关黄斑病或其症状、严重黄斑病、晚期黄斑病或异常脉络膜毛细血管小叶的需要，并且之后针对所述病症接受治疗。在一个方面，考虑了可以由与作出诊断的人员不同的人员进行鉴定。在另一个方面，还考虑了可以由随后进行施用的人员来进行施用。
[0316] 本文还描述了选择受试者的方法，所述受试者用于(i)治疗血管相关黄斑病；(ii)治疗与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(iii)治疗严重黄斑病或晚期黄斑病；或(iv)使异常脉络膜毛细血管小叶消退的所公开的方法。
[0317] 本文还描述了对受试者进行诊断的方法，所述受试者患有(i)血管相关黄斑病；(ii)与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(iii)严重黄斑病或晚期黄斑病；或(iv)异常脉络膜毛细血管小叶。
[0318] 在一个方面，本文描述了通过在受试者的眼睛中检测异常脉络膜毛细血管小叶的存在来对受试者进行选择或诊断的方法，其中异常脉络膜毛细血管小叶可以鉴定出患有(i)血管相关黄斑病；(ii)与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；或(iii)严重黄斑病或晚期黄斑病的受试者。可以使用本文所公开的方法中的任一种来鉴定受试者的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶，例如，可以通过以下方式鉴定受试者的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶：自发荧光成像技术、红外成像技术、光学相干断层摄影术（OCT）、Stratus光学相干断层摄影术（Stratus OCT）、傅里叶域光学相干断层摄影术（Fd-OCT）、双光子激发荧光（TPEF）成像、自适应光学扫描激光检眼镜检查法（AOSLO）、扫描激光检眼镜检查法、近红外成像联合谱域光学相干断层摄影术（SD-OCT）、彩色眼底摄影术、眼底自发荧光成像、无赤光成像、荧光素血管造影术、吲哚菁绿血管造影术、多焦视网膜电图（ERG）记录、微视野检查、彩色多普勒光学相干断层摄影术（CDOCT）、视野评估、Heidelberg Spectralis、Zeiss Cirrus、Topcon3D OCT2000、Optivue RTVue SD-OCT、Opko OCT SLO、NIDEK F-10或Optopol SOCT Copernicus HR。
[0319] 本文进一步描述了通过确定受试者体内HTRA1、ARMS2或CFH基因中一个或多个SNP的身份来对受试者进行选择或诊断的方法，其中所述一个或多个SNP是(i)HTRA1基因中的rs11200638、HTRA1基因中的rs1049331、HTRA1基因中的rs2672587、ARMS2基因中的rs10490924、ARMS2基因中的rs3750848、CFH基因中的rs1061170或CFH基因中的
rs800292，或(ii)与(i)中的SNP存在连锁不平衡的SNP，其中所述SNP的一种或多种变
体的存在鉴定出患有(a)血管相关黄斑病；(b)与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(c)严重黄斑病或晚期黄斑病；或(d)异常脉络膜毛细血管小叶的受试者。例如，本文公开了通过确定受试者体内HTRA1、ARMS2或CFH基因中一个或多个SNP的身份来对受试者进行选择的方法，其中rs11200638SNP处的A、rs1049331SNP处的T、rs2672587SNP处的G、rs10490924SNP处的T、rs3750848SNP处的G、rs1061170SNP处的C或rs800292SNP处的G
可鉴定出患有(a)血管相关黄斑病；(b)与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(c)严重黄斑病或晚期黄斑病；或(d)异常脉络膜毛细血管小叶的受试者。
rs800292，或(ii)与(i)中的SNP存在连锁不平衡的SNP，其中所述SNP的一种或多种变
体的存在鉴定出患有(a)血管相关黄斑病；(b)与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(c)严重黄斑病或晚期黄斑病；或(d)异常脉络膜毛细血管小叶的受试者。例如，本文公开了通过确定受试者体内HTRA1、ARMS2或CFH基因中一个或多个SNP的身份来对受试者进行选择的方法，其中rs11200638SNP处的A、rs1049331SNP处的T、rs2672587SNP处的G、rs10490924SNP处的T、rs3750848SNP处的G、rs1061170SNP处的C或rs800292SNP处的G
可鉴定出患有(a)血管相关黄斑病；(b)与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(c)严重黄斑病或晚期黄斑病；或(d)异常脉络膜毛细血管小叶的受试者。
[0320] 可以抑制脉络膜毛细血管小叶封堵（解剖学或功能性封堵）的药剂的实例包括但不限于阿斯匹林、抗炎药物、胆固醇降低药物、抗高血糖药物、血管扩张剂、血管加压药、利尿剂、抗凝剂、血栓溶解药物、抗血管内皮生长因子药物、抗缺血后损伤药物、抗高血压药物、异常凝血治疗剂或其它血管治疗剂。
[0321] 血管治疗剂的实例可以包括但不限于阿图尼德（阿利克伦+氨氯地平+氢氯噻嗪）、普拉达萨（达比加群酯甲磺酸盐）、塔卡莫罗（阿利克伦+氨氯地平）、曲本扎（奥美沙坦酯+氨氯地平+氢氯噻嗪）、萨艾丽丝（他达拉非）、艾曲恩（供复原用的抗凝血酶重组冻干粉末）、埃菲恩特（普拉格雷）、丽芙罗（匹伐他汀）、马尔塔克（决奈达隆）、泰瓦索（曲前列尼尔）、克莱维派（氯维地平）、屈里匹克（非诺贝特酸）、阿扎（苯磺酸氨氯地平；奥美沙坦酯）、非诺贝特、莱它瑞斯（安贝生坦）、索里瑞斯（艾库组单抗）、特库瑞娜（阿利克伦）、雷尼科萨（雷诺嗪）、比迪尔（二硝酸异山梨醇酯/盐酸肼苯哒嗪）、卡度埃特（氨氯地平/阿托伐他汀）、克莱斯特（瑞舒伐他汀钙）、莱维它（伐地那非）、艾尔特克（洛伐他汀）、本尼卡、伊麦君特（全氯已烷脂质微球体）、伊斯普拉（依普利酮片剂）、普拉维克（硫酸氢氯吡格雷）、瑞莫杜林（曲前列尼尔）、艾德威可（延释烟酸/洛伐他汀）、代文（缬沙坦）、纳曲可（奈西立肽）、特维妥（甲磺酸依普罗沙坦+氢氯噻嗪）、曲可（非诺贝特）、安吉玛（比伐卢定）、阿加曲班注射剂、爱达康（坎地沙坦西酯）、倍培AF片剂、盐酸地尔硫卓、伊诺西普（亭扎肝素钠）、来适可XL（氟伐他汀钠）、美卡素HCT（替米沙坦和氢氯噻嗪）、耐绞宁（硝化甘油）、来适可（氟伐他汀钠）、美降脂（洛伐他汀）、诺之平、安归宁（盐酸阿那格雷）、爱达康（坎地沙坦西酯）、爱达康（坎地沙坦西酯）、骁悉、代文HCT（缬沙坦）、替格雷林、美卡素（替米沙坦）、来特莫尔、添安达（盐酸地尔硫卓）、添安达（盐酸地尔硫卓）、曲可（非诺贝特）、万艾可、拜可（西立伐他汀钠）、卡托普利和氢氯噻嗪、凯迪心、可罗泮、代文（缬沙坦）、导脉顺CR、EDEX、来适可（氟伐他汀钠）、利血压（顺丁烯二酸依拉普利-非洛地平ER）、立克压（氢氯噻嗪）、诺美弗、己酮可可碱、品多洛尔、波立维（硫酸氢氯吡格雷）、博斯可、瑞博、贺美奇（注射用促生育素，USP）、特维妥（甲磺酸依普罗沙坦）、维拉帕米、华法令钠、舒降之、可福乐（维拉帕米）、玛威（群多普利）、缪斯、普拉固（普伐他汀钠）、普拉固（普伐他汀钠）、普罗玛汀（米多君）、普鲁卡比（盐酸普鲁卡因胺延释片剂）、瑞他维（瑞替普酶）、泰卓（顺丁烯二酸依拉普利/苹果酸地尔硫卓）、添安达（盐酸地尔硫卓）、威视派克（碘克沙醇）、安得罗达（睪固酮经皮系统）、康弗注射剂（反丁烯二酸伊布利特注射剂）、心宁卫或捷赐瑞（赖诺普利）或托普洛-XL（丁二酸美托洛尔）。
[0322] 可以被用于本文所述的方法中的另外的治疗剂包括但不限于β-肾上腺素能阻断剂，如倍他索洛尔、普萘洛尔、纳多洛尔、美托洛尔、阿替洛尔、卡维地洛、美托洛尔、奈必洛尔、拉贝洛尔、索他洛尔、噻吗洛尔、艾司洛尔、卡替洛尔、喷布洛尔、醋丁洛尔、品多洛尔以及比索洛尔；异常凝血药物，如肝素、依诺肝素、达肝素、可密定、TPA、链激酶、尿激酶、双嘧达莫、噻氯匹定（抵克力得）、氯吡格雷（波立维）、阿昔单抗（雷普罗）、依非巴肽（替格雷林）以及替罗非班（欣维宁）；利尿剂，如乙酰唑胺、双氯非那胺、甲醋唑胺、托西迈、呋喃苯胺酸、布美他尼、利尿酸、巴马溴、螺内酯、螺内酯、阿米洛利、氨苯蝶啶、吲达帕胺、甲氯噻嗪、氢氯2+
噻嗪、氯噻嗪、美托拉宗、苄氟噻嗪、泊利噻嗪、氢氟噻嗪以及氯噻酮；Ca 通道阻断剂，如地尔硫卓、尼莫地平、维拉帕米、硝苯地平、氨氯地平、非洛地平、伊拉地平、氯维地平、苄普地尔以及尼索地平；硝化扩张剂，如硝化甘油、前列地尔、肼屈嗪、敏乐定、奈西立肽、单硝酸异山梨醇酯以及硝普盐；α-肾上腺素能受体拮抗剂或α-阻断剂，如多沙唑嗪、哌唑嗪、特拉唑嗪、阿夫唑嗪、坦索罗辛以及西洛多辛；血管紧张素转化酶抑制剂，如群多普利、福辛普利、依拉普利、雷米普利、卡托普利、莫西普利、赖诺普利、喹那普利、贝那普利以及培哚普利；血管紧张素受体阻断剂或ARB，如依普罗沙坦、奥美沙坦、替米沙坦、洛沙坦、缬沙坦、厄贝沙坦以及坎地沙坦；肾素抑制剂，如阿利克伦；外周加压素，如环扁桃酯、罂粟碱以及异克舒令；β-激动剂，如肾上腺素、去甲肾上腺素、多巴胺、多巴酚丁胺以及异丙肾上腺素；
强心苷，如乌本箭毒苷、洋地黄、地高辛以及洋地黄毒苷；磷酸二酯酶抑制剂，如米力农、氨力农、西洛他唑、西地那非以及他达拉非；血管加压素类似物，如精氨酸血管加压素和特利加压素；抗凝剂；香豆素和茚满二酮，如华法令和茴茚二酮；因子Xa抑制剂，如磺达肝癸；
肝素，如达肝素、亭扎肝素、依诺肝素、阿地肝素以及达那肝素；血小板聚集抑制剂，如阿斯匹林、普拉格雷、西洛他唑、氯吡格雷、潘生丁以及噻氯匹定；凝血酶抑制剂，如阿加曲班、比伐卢定、地西卢定以及来匹卢定；抗炎药物；类固醇，如强的松、强的松龙以及氢化可的松；
眼科抗炎剂，如奈帕芬胺、酮咯酸、氟比洛芬、舒洛芬、环孢素、曲安西龙、双氯芬酸以及溴芬那酸；非类固醇抗炎药（NSAIDS），如布洛芬、酮洛芬、依托度酸、非诺洛芬、萘普生、舒林酸、吲哚美辛、吡罗昔康、甲灭酸、奥沙普秦以及托美丁；胆固醇降低药物；他汀类，如阿托伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、洛伐他汀、氟伐他汀、西立伐他汀、匹伐他汀以及瑞舒伐他汀；烟酸、阿斯匹林、依泽替米贝以及右旋甲状腺素；纤维酸，如吉非罗齐、非诺贝特以及氯贝特；
抗高血糖剂；促分泌剂，如格列吡嗪、格列美脲、优降糖、氯磺丙脲、乙酰苯磺酰环已脲、甲苯磺丁脲、妥拉磺脲、瑞格列奈以及那格列奈；胰岛素增敏剂，如罗格列酮、吡格列酮、曲列格酮、二甲双胍、丁双胍以及苯乙双胍；α-葡糖苷酶抑制剂，如米格列醇、阿卡波糖；肽类似物，如艾塞那肽、沙格列汀、西他列汀、利拉鲁肽、他司鲁泰以及普兰林肽；以及抑制缺血后损伤的药物，如番茄红素、谷氨酸盐、抗-T-淋巴细胞球蛋白、EPO、丙酮酸乙酯、戴安新、A-002（Athera Pharmaceuticals，抑制PLA2）、 DP-b99（D-Pharm，金属螯
TM
合剂）、单独或与噻吩并吡啶组合的利伐沙班、Viprinex (安克洛酶）、心肌细胞肌球蛋白激动剂（CK-1827452）、人参皂甙-Rd、替奈普酶、罗替格普肽、去氨普酶、奥米沙班（XRP0673）、依普利酮、SCH530348、雷珠单抗、阿替普酶、阿加曲班、人类重组成纤维细胞生长因子-1（FGF1-141）、埃替非巴肽、FX06（纤维蛋白衍生肽）以及阿哌沙班。
噻嗪、氯噻嗪、美托拉宗、苄氟噻嗪、泊利噻嗪、氢氟噻嗪以及氯噻酮；Ca 通道阻断剂，如地尔硫卓、尼莫地平、维拉帕米、硝苯地平、氨氯地平、非洛地平、伊拉地平、氯维地平、苄普地尔以及尼索地平；硝化扩张剂，如硝化甘油、前列地尔、肼屈嗪、敏乐定、奈西立肽、单硝酸异山梨醇酯以及硝普盐；α-肾上腺素能受体拮抗剂或α-阻断剂，如多沙唑嗪、哌唑嗪、特拉唑嗪、阿夫唑嗪、坦索罗辛以及西洛多辛；血管紧张素转化酶抑制剂，如群多普利、福辛普利、依拉普利、雷米普利、卡托普利、莫西普利、赖诺普利、喹那普利、贝那普利以及培哚普利；血管紧张素受体阻断剂或ARB，如依普罗沙坦、奥美沙坦、替米沙坦、洛沙坦、缬沙坦、厄贝沙坦以及坎地沙坦；肾素抑制剂，如阿利克伦；外周加压素，如环扁桃酯、罂粟碱以及异克舒令；β-激动剂，如肾上腺素、去甲肾上腺素、多巴胺、多巴酚丁胺以及异丙肾上腺素；
强心苷，如乌本箭毒苷、洋地黄、地高辛以及洋地黄毒苷；磷酸二酯酶抑制剂，如米力农、氨力农、西洛他唑、西地那非以及他达拉非；血管加压素类似物，如精氨酸血管加压素和特利加压素；抗凝剂；香豆素和茚满二酮，如华法令和茴茚二酮；因子Xa抑制剂，如磺达肝癸；
肝素，如达肝素、亭扎肝素、依诺肝素、阿地肝素以及达那肝素；血小板聚集抑制剂，如阿斯匹林、普拉格雷、西洛他唑、氯吡格雷、潘生丁以及噻氯匹定；凝血酶抑制剂，如阿加曲班、比伐卢定、地西卢定以及来匹卢定；抗炎药物；类固醇，如强的松、强的松龙以及氢化可的松；
眼科抗炎剂，如奈帕芬胺、酮咯酸、氟比洛芬、舒洛芬、环孢素、曲安西龙、双氯芬酸以及溴芬那酸；非类固醇抗炎药（NSAIDS），如布洛芬、酮洛芬、依托度酸、非诺洛芬、萘普生、舒林酸、吲哚美辛、吡罗昔康、甲灭酸、奥沙普秦以及托美丁；胆固醇降低药物；他汀类，如阿托伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、洛伐他汀、氟伐他汀、西立伐他汀、匹伐他汀以及瑞舒伐他汀；烟酸、阿斯匹林、依泽替米贝以及右旋甲状腺素；纤维酸，如吉非罗齐、非诺贝特以及氯贝特；
抗高血糖剂；促分泌剂，如格列吡嗪、格列美脲、优降糖、氯磺丙脲、乙酰苯磺酰环已脲、甲苯磺丁脲、妥拉磺脲、瑞格列奈以及那格列奈；胰岛素增敏剂，如罗格列酮、吡格列酮、曲列格酮、二甲双胍、丁双胍以及苯乙双胍；α-葡糖苷酶抑制剂，如米格列醇、阿卡波糖；肽类似物，如艾塞那肽、沙格列汀、西他列汀、利拉鲁肽、他司鲁泰以及普兰林肽；以及抑制缺血后损伤的药物，如番茄红素、谷氨酸盐、抗-T-淋巴细胞球蛋白、EPO、丙酮酸乙酯、戴安新、A-002（Athera Pharmaceuticals，抑制PLA2）、 DP-b99（D-Pharm，金属螯
TM
合剂）、单独或与噻吩并吡啶组合的利伐沙班、Viprinex (安克洛酶）、心肌细胞肌球蛋白激动剂（CK-1827452）、人参皂甙-Rd、替奈普酶、罗替格普肽、去氨普酶、奥米沙班（XRP0673）、依普利酮、SCH530348、雷珠单抗、阿替普酶、阿加曲班、人类重组成纤维细胞生长因子-1（FGF1-141）、埃替非巴肽、FX06（纤维蛋白衍生肽）以及阿哌沙班。
[0323] 在本领域中熟知的是，本文所述的许多药剂可以具有多于一种的作用和功能。具体而言，所描述的许多药剂可以防止或抑制脉络膜毛细血管小叶封堵或阻塞并且增加脉络膜毛细血管小叶的血流量以增加目标组织和器官的灌注，所述目标组织和器官例如是人眼的脉络膜、心脏、脑、脊髓、肌肉、骨骼、眼睛、耳朵、肾脏、子宫、胎盘、皮肤、粘膜、胃、肝脏、肺、胆囊、脾脏、阑尾、小肠、大肠、胰腺、前列腺或膀胱等。
[0324] 还考虑了可以将旨在干扰导致缺血后损伤的不同通路的药剂用于所公开的方法中。这类通路的实例包括但不限于与NF-κΒ、碱性成纤维细胞生长因子相关的通路、激酶通路（PI3、Akt、Ras、MAPK）以及其它通路（胱天蛋白酶、SOD、过氧化氢酶、前列腺素E1、前列腺素E2、凝血栓蛋白以及Fas受体）等。
[0325] 在一个方面，可以将一种或多种抑制脉络膜毛细血管小叶封堵的药剂与和HTRA1或ARMS2核酸或肽杂交的一种或多种药剂联合。HTRA1或ARMS2靶向剂可以是（但不限于）核酸、功能性核酸、适体、核糖酶、三链体形成分子以及外部引导序列、肽核酸、反义分子、siRNA、shRNA、吗啉代寡核苷酸、抗体、肽或小分子。此外，HTRA1或ARMS2靶向剂可以是抑制HTRA1或ARMS2表达或活性的药剂。例如（而不限于），可以将HTRA1或ARMS2表达或活性抑制约5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、
43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、
62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、
81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或
100%。因此，可以将HTRA1或ARMS2表达或活性抑制约5%至约100%，包括在5%与100%之
间的所有抑制百分比值在内。
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100%。因此，可以将HTRA1或ARMS2表达或活性抑制约5%至约100%，包括在5%与100%之
间的所有抑制百分比值在内。
[0326] 2.功能性核酸
[0327] 公开了可以与所公开的多核苷酸相互作用的功能性核酸。功能性核酸是具有特定功能，如与目标分子结合或催化特定反应的核酸分子。功能性核酸分子可以被分成下列类别，所述类别不意指具有限制性。例如，功能性核酸包括反义分子、适体、核糖酶、三链体形成分子以及外部引导序列。功能性核酸分子可以充当目标分子所具有的特定活性的效应物、抑制剂、调节剂以及刺激物，或功能性核酸分子可以具有与任何其它分子无关的新生活性。
[0328] 功能性核酸分子可以与如DNA、RNA、多肽或碳水化合物链的任何大分子相互作用。因此，功能性核酸可以与具有本文所述的多核苷酸序列的mRNA或具有本文所述的多核苷酸序列的基因组DNA相互作用或它们可以与由本文所述的多核苷酸序列所编码的多肽相互作用。经常，功能性核酸经过设计以基于目标分子与功能性核酸分子之间的序列同源性而与其它核酸相互作用。在其它情形下，功能性核酸分子与目标分子之间的特异性识别并非基于功能性核酸分子与目标分子之间的序列同源性，而是基于形成使得能够进行特异性识别的三级结构。
[0329] 3.反义分子
[0330] 本文描述了与所公开的多核苷酸相互作用的反义分子。反义分子经过设计以经由规范或非规范碱基配对与目标核酸分子相互作用。反义分子与目标分子的相互作用经过设计以经由例如RNAseH介导的RNA-DNA杂交体降解来促进对目标分子的破坏。可替代地，反义分子经过设计以干扰通常将对目标分子进行的加工功能（如转录或复制）。可以基于目标分子的序列来设计反义分子。存在多种用于对反义效率进行优化的方法，所述方法是通过寻找目标分子的最可及的区域来实现的。示例性方法将是体外选择实验和使用DMS和DEPC-6进行的DNA修饰研究。优选的是，反义分子结合目标分子的解离常数（kd）小于或等于10 、-8 -10 -12
10 、10 或10 。有助于设计和使用反义分子的方法和技术的代表性范例可以见于下列非限制性清单中的美国专利中：5,135,917、5,294,533、5,627,158、5,641,754、5,691,317、
5,780,607、5,786,138、5,849,903、5,856,103、5,919,772、5,955,590、5,990,088、
5,994,320、5,998,602、6,005,095、6,007,995、6,013,522、6,017,898、6,018,042、
6,025,198、6,033,910、6,040,296、6,046,004、6,046,319以及6,057,437，所述美国专利中的每一个中关于修饰和与其相关的方法的教导内容以引用的方式整体并入本文。
10 、10 或10 。有助于设计和使用反义分子的方法和技术的代表性范例可以见于下列非限制性清单中的美国专利中：5,135,917、5,294,533、5,627,158、5,641,754、5,691,317、
5,780,607、5,786,138、5,849,903、5,856,103、5,919,772、5,955,590、5,990,088、
5,994,320、5,998,602、6,005,095、6,007,995、6,013,522、6,017,898、6,018,042、
6,025,198、6,033,910、6,040,296、6,046,004、6,046,319以及6,057,437，所述美国专利中的每一个中关于修饰和与其相关的方法的教导内容以引用的方式整体并入本文。
[0331] 一般来说，术语“反义”指的是因某种序列互补性而能够与一部分RNA序列（如mRNA）杂交的核酸分子。本文所述的反义核酸可以是如下的寡核苷酸，所述寡核苷酸是双链或单链RNA或DNA或其修饰或衍生物，可以向细胞直接施用（例如通过向受试者施用反义分子），或可以通过使所引入的外源性序列转录而在细胞内产生（例如通过向受试者施用包括处于启动子控制之下的反义分子在内的载体）。
[0332] 反义核酸是多核苷酸，例如长度是至少6个核苷酸、至少10个核苷酸、至少15个核苷酸、至少20个核苷酸、至少100个核苷酸、至少200个核苷酸，如6至100个核苷酸的核酸分子。然而，反义分子可以长得多。在具体的实例中，核苷酸在一个或多个碱基部分、糖部分或磷酸骨架（或其组合）处经过修饰，并且可以包括其它附加的基团（如肽），或有助于跨细胞膜（Letsinger等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA1989,86:6553-6；Lemaitre等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA1987,84:648-52；WO88/09810）或血脑屏障（WO89/10134）转运的药剂、杂交触发裂解剂（Krol等,BioTechniques1988,6:958-76）或插入剂（Zon,Pharm.Res.5:539-49,1988）。另外的修饰包括美国专利号6,608,035、7,176,296、7,329,648、7,262,489、7,115,579以及7,105,495中所述的修饰。
[0333] 修饰的碱基部分的实例包括但不限于：5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-氯尿嘧啶、5-碘尿嘧啶、次黄嘌呤、黄嘌呤、乙酰胞嘧啶、5-(羧基羟基甲基)尿嘧啶、5-羧基甲基氨基甲基-2-硫尿嘧啶核苷、5-羧基甲基氨基甲基尿嘧啶、二氢尿嘧啶、β-D-半乳糖苷Q核苷、次黄嘌呤核苷、N～6-异戊烯基腺嘌呤、1-甲基鸟嘌呤、1-甲基次黄嘌呤核苷、2,2-二甲基鸟嘌呤、2-甲基腺嘌呤、2-甲基鸟嘌呤、3-甲基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、N6-腺嘌呤、7-甲基鸟嘌呤、5-甲基氨基甲基尿嘧啶、甲氧基氨基甲基-2-硫尿嘧啶、β-D-甘露糖Q核苷、
5'-甲氧基羧甲基尿嘧啶、5-甲氧基尿嘧啶、2-甲硫基-N6-异戊烯基腺嘌呤、尿嘧啶-5-氧乙酸、假尿嘧啶、Q核苷、2-硫胞嘧啶、5-甲基-2-硫尿嘧啶、2-硫尿嘧啶、4-硫尿嘧啶、
5-甲基尿嘧啶、尿嘧啶-5-氧乙酸甲酯、尿嘧啶-S-氧乙酸、5-甲基-2-硫尿嘧啶、3-(3-氨基-3-N-2-羧基丙基)尿嘧啶以及2,6-二氨基嘌呤。
5'-甲氧基羧甲基尿嘧啶、5-甲氧基尿嘧啶、2-甲硫基-N6-异戊烯基腺嘌呤、尿嘧啶-5-氧乙酸、假尿嘧啶、Q核苷、2-硫胞嘧啶、5-甲基-2-硫尿嘧啶、2-硫尿嘧啶、4-硫尿嘧啶、
5-甲基尿嘧啶、尿嘧啶-5-氧乙酸甲酯、尿嘧啶-S-氧乙酸、5-甲基-2-硫尿嘧啶、3-(3-氨基-3-N-2-羧基丙基)尿嘧啶以及2,6-二氨基嘌呤。
[0334] 修饰的糖部分的实例包括但不限于：阿拉伯糖、2-氟阿拉伯糖、木糖以及己糖；或磷酸骨架的修饰组分，如硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、硫代氨基磷酸酯、氨基磷酸酯、二氨基磷酸酯、甲基膦酸酯、烷基磷酸三酯；或甲缩醛或其类似物。
[0335] 在一个具体的实例中，反义分子是α-端基异构寡核苷酸。α-端基异构寡核苷酸与互补RNA形成特异性双链杂交体，其中与常见的β-单位相反，所述链彼此平行（Gautier等,Nucl.Acids Res.15:6625-41,1987）。寡核苷酸可以与另一分子缀合，所述另一分子如肽、杂交触发交联剂、转运剂或杂交触发裂解剂。寡核苷酸可以包括增强宿主细胞对分子的吸收的靶向部分。靶向部分可以是特异性结合分子，如识别宿主细胞的表面上存在的分子的抗体或其片段。
[0336] 在一个特定的实例中，识别本文所述的核酸的反义分子包括催化性RNA或核糖酶（例如参见WO90/11364；WO95/06764；以及Sarver 等,Science247:1222-5,1990）。反义序列与金属络合物（如三联吡啶铜(II)）的能够调节mRNA水解的缀合物描述于Bashkin等（Appl.Biochem Biotechnol.54:43-56,1995）。在一个实例中，反义核苷酸是2'-0-甲基核糖核苷酸（Inoue等,Nucl.Acids Res.15:6131-48,1987）或嵌合RNA-DNA类似物（Inoue等,FEBS Lett.215:327-30,1987）。
[0337] 反义分子可以通过利用Integrated DNA Technologies公司的反义序列设计算法（1710Commercial Park,Coralville,IA52241USA；http://www.idtdna.com/Scitools/Applications/AntiSense/Antisense.aspx/）而产生。
[0338] 4.SIRNA
[0339] 短干扰RNA（siRNA）也被称为小干扰RNA，是可以诱导序列特异性转录后基因沉默，从而减少基因表达的双链RNA（参见例如美国专利号6,506,559、7,056,704、7,078,196、6,107,094、5,898,221、6,573,099以及欧洲专利号1.144,623，所述的所有专利以引用的方式整体并入本文）。siRNa可以具有不同的长度，只要它们维持它们的功能即可。在一些实例中，siRNA分子的长度是约19-23个核苷酸，如至少21个核苷酸，例如至少23个
核苷酸。在一个实例中，siRNA触发如mRNA的同源性RNA分子在siRNA与目标RNA之间
具有序列同一性的区域内发生特异性降解。例如，WO02/44321公开了能够在与3'悬垂
端进行碱基配对时使目标mRNA发生序列特异性降解的siRNA。dsRNA加工的方向决定了
是有义目标RNA还是反义目标RNA可以被所产生的siRNA核酸内切酶复合物所裂解。因
此，siRNA可以被用于例如通过减少表1中所述的基因表达来调节转录或翻译。siRNA的作用已经在来自多种有机体的细胞中得到证实，所述有机体包括果蝇（Drosophila）、秀丽隐杆线虫（C.elegans）、昆虫、蛙、植物、真菌、小鼠以及人类（例如WO02/44321；Gitlin等,Nature418:430-4,2002；Caplen等,Proc.Natl.Acad.Sci.98:9742-9747,2001；以及Elbashir等,Nature411:494-8,2001）。
核苷酸。在一个实例中，siRNA触发如mRNA的同源性RNA分子在siRNA与目标RNA之间
具有序列同一性的区域内发生特异性降解。例如，WO02/44321公开了能够在与3'悬垂
端进行碱基配对时使目标mRNA发生序列特异性降解的siRNA。dsRNA加工的方向决定了
是有义目标RNA还是反义目标RNA可以被所产生的siRNA核酸内切酶复合物所裂解。因
此，siRNA可以被用于例如通过减少表1中所述的基因表达来调节转录或翻译。siRNA的作用已经在来自多种有机体的细胞中得到证实，所述有机体包括果蝇（Drosophila）、秀丽隐杆线虫（C.elegans）、昆虫、蛙、植物、真菌、小鼠以及人类（例如WO02/44321；Gitlin等,Nature418:430-4,2002；Caplen等,Proc.Natl.Acad.Sci.98:9742-9747,2001；以及Elbashir等,Nature411:494-8,2001）。
[0340] 利用序列分析工具，本领域技术人员可以设计siRNA以特异性靶向表1中所述的任何基因以使基因表达减少。抑制基因表达或使基因表达沉默的siRNA可以从合成siRNA的许多商业实体获得，例如Ambion公司（2130Woodward Austin,TX78744-1832,USA）、Qiagen公司（27220Turnberry Lane,Valencia,CA USA）以及Dharmacon公司（650Crescent Drive,#100Lafayette,CO80026,USA）。由Ambion公司、Qiagen公司或Dharmacon公司合成的siRNA可以通过提供表1中所述的任何基因的mRNA的基因库登录号而容易地从这些以TM
及其它实体获得。另外，可以通过利用Invitrogen的BLOCK-IT RNAi Designer（https://rnaidesigner.invitrogen.com/rnaiexpress）产生siRNA。
及其它实体获得。另外，可以通过利用Invitrogen的BLOCK-IT RNAi Designer（https://rnaidesigner.invitrogen.com/rnaiexpress）产生siRNA。
[0341] 5.SHRNA
[0342] shRNA（短发夹RNA）是可以被克隆到表达载体中以表达siRNA（典型地是19-29nt RNA双链体）以进行RNAi干扰研究的DNA分子。shRNA具有下列结构特征：源自于目标基因的具有约19-29个范围内的核苷酸的短核苷酸序列，继而是具有约4-15个核苷酸的短间隔区（即环）以及具有约19-29个核苷酸的序列，所述具有约19-29个核苷酸的序列是初始目标序列的反向互补序列。
[0343] 6.吗啉代寡核苷酸
[0344] 吗啉代寡核苷酸是可以阻断其它分子接近核糖核酸（RNA）的小（约25个碱基）区域的合成反义寡核苷酸。吗啉代寡核苷酸经常被用于使用反向遗传学方法通过阻断接近mRNA的通道来确定基因的功能。长度通常是约25个碱基的吗啉代寡核苷酸通过标准核酸碱基配对而与RNA的互补序列结合。吗啉代寡核苷酸不使它们的目标RNA分子降解。实际上，吗啉代寡核苷酸通过“位阻”，与RNA内的目标序列结合并且仅干扰可能另外与RNA相互作用的分子而起作用。吗啉代寡核苷酸已经被用于小鼠至人类范围内的哺乳动物。
[0345] 吗啉代寡核苷酸与信使RNA（mRNA）的5'端非翻译区结合，可以干扰核糖体起始复合物从5'端帽向起始密码子前进。这会阻止所靶向的转录产物的编码区的翻译（被称作“敲低”基因表达）。吗啉代寡核苷酸还可以干扰mRNA前体加工步骤，这通常是通过阻止剪接引导的snRNP复合物与它们在RNA前体的链上内含子的边界处的目标结合来实现的。阻止U1（处于供体位点上）或U2/U5（处于多聚嘧啶部分和接受位点上）结合可以引起剪接发生改变，从而通常使得外显子被排除在成熟mRNA外。靶向一些剪接目标会引起内含子纳入，而使隐蔽剪接位点活化可以引起部分纳入或排除。还可以阻断U11/U12snRNP的目标。剪接修饰可以方便地通过反转录酶聚合酶链反应（RT-PCR）来测定并且在对RT-PCR产物进行凝胶电泳之后被观测为条带移位。设计、制备以及利用吗啉代寡核苷酸的方法公开于美国专利号6,867,349中，所述美国专利以引用的方式整体并入本文。
[0346] 7.适体
[0347] 还公开了与所公开的多核苷酸相互作用的适体。适体是优选地以特异性方式与目标分子相互作用的分子。典型地，适体是长度在15个-50个碱基范围内的小核酸，所述小核酸折叠成明确的二级和三级结构，如茎环或G-四联体。适体可以结合小分子，如ATP（美国专利5,631,146）和茶碱（美国专利5,580,737）；以及大分子，如反转录酶（美国专利5,786,462）和凝血酶（美国专利5,543,293）。适体可以与目标分子非常紧密地结合，其中kd-12 -6 -8 -10 -12
小于10 M。优选的是，适体结合目标分子的kd小于10 、10 、10 或10 。适体可以与目标分子以极高的特异度结合。例如，已经分离出如下的适体，所述适体针对目标分子的结合亲和力与针对不同之处仅在于分子上的单个位置的另一个分子的结合亲和力之间的差异大于10000倍（美国专利5,543,293）。优选的是，适体针对目标分子的kd是针对背景结合分子的kd的至多1/10、1/100、1/1000、1/10,000或1/100,000。优选的是，当例如针对多肽进行比较时，所述背景分子是不同的多肽。例如，在确定适体的特异性时，背景蛋白质可以是ef-1α。制备和使用与多种不同的目标分子结合的适体的方式的代表性实例可以见于下列非限制性清单中的美国专利中：5,476,766、5,503,978、5,631,146、5,731,424、5,780,228、
5,792,613、5,795,721、5,846,713、5,858,660、5,861,254、5,864,026、5,869,641、
5,958,691、6,001,988、6,011,020、6,013,443、6,020,130、6,028,186、6,030,776 以 及
6,051,698。
小于10 M。优选的是，适体结合目标分子的kd小于10 、10 、10 或10 。适体可以与目标分子以极高的特异度结合。例如，已经分离出如下的适体，所述适体针对目标分子的结合亲和力与针对不同之处仅在于分子上的单个位置的另一个分子的结合亲和力之间的差异大于10000倍（美国专利5,543,293）。优选的是，适体针对目标分子的kd是针对背景结合分子的kd的至多1/10、1/100、1/1000、1/10,000或1/100,000。优选的是，当例如针对多肽进行比较时，所述背景分子是不同的多肽。例如，在确定适体的特异性时，背景蛋白质可以是ef-1α。制备和使用与多种不同的目标分子结合的适体的方式的代表性实例可以见于下列非限制性清单中的美国专利中：5,476,766、5,503,978、5,631,146、5,731,424、5,780,228、
5,792,613、5,795,721、5,846,713、5,858,660、5,861,254、5,864,026、5,869,641、
5,958,691、6,001,988、6,011,020、6,013,443、6,020,130、6,028,186、6,030,776 以 及
6,051,698。
[0348] 8.核糖酶
[0349] 还公开了与所公开的多核苷酸相互作用的核糖酶。核糖酶是能够在分子内或分子间催化化学反应的核酸分子。核糖酶因此是催化性核酸。优选的是，核糖酶催化分子间反应。存在多种不同类型的核糖酶，所述核糖酶催化核酸酶或核酸聚合酶型反应，所述反应基于在自然系统中存在的核糖酶，如锤头状核糖酶（例如（但不限于）下列美国专 利：5,334,711、5,436,330、5,616,466、5,633,133、5,646,020、5,652,094、5,712,384、
5,770,715、5,856,463、5,861,288、5,891,683、5,891,684、5,985,621、5,989,908、
5,998,193、5,998,203、Ludwig和Sproat的WO9858058、Ludwig和Sproat的WO9858057以及Ludwig和Sproat的WO9718312）、发夹核糖酶（例如（但不限于）下列美国专利：5,631,115、
5,646,031、5,683,902、5,712,384、5,856,188、5,866,701、5,869,339以及6,022,962）以及四膜虫核糖酶（例如（但不限于）下列美国专利：5,595,873和5,652,107）。还存在许多在自然系统中不存在，但已经过工程改造以能够重新催化特定反应的核糖酶（例如（但不限于）下列美国专利：5,580,967、5,688,670、5,807,718以及5,910,408）。优选的核糖酶裂解RNA或DNA底物，并且更优选地裂解RNA底物。核糖酶典型地经由识别并且结合目标底物，随后进行裂解来裂解核酸底物。这种识别经常主要基于规范或非规范碱基对相互作用。
这种特性因对目标底物的识别是基于目标底物的序列而使得核糖酶成为用于使核酸发生目标特异性裂解的尤其优良的候选者。制备和使用催化多种不同反应的核糖酶的方式的代表性实例可以见于下列非限制性清单中的美国专利中：5,646,042、5,693,535、5,731,295、
5,811,300、5,837,855、5,869,253、5,877,021、5,877,022、5,972,699、5,972,704、
5,989,906以及6,017,756。
5,770,715、5,856,463、5,861,288、5,891,683、5,891,684、5,985,621、5,989,908、
5,998,193、5,998,203、Ludwig和Sproat的WO9858058、Ludwig和Sproat的WO9858057以及Ludwig和Sproat的WO9718312）、发夹核糖酶（例如（但不限于）下列美国专利：5,631,115、
5,646,031、5,683,902、5,712,384、5,856,188、5,866,701、5,869,339以及6,022,962）以及四膜虫核糖酶（例如（但不限于）下列美国专利：5,595,873和5,652,107）。还存在许多在自然系统中不存在，但已经过工程改造以能够重新催化特定反应的核糖酶（例如（但不限于）下列美国专利：5,580,967、5,688,670、5,807,718以及5,910,408）。优选的核糖酶裂解RNA或DNA底物，并且更优选地裂解RNA底物。核糖酶典型地经由识别并且结合目标底物，随后进行裂解来裂解核酸底物。这种识别经常主要基于规范或非规范碱基对相互作用。
这种特性因对目标底物的识别是基于目标底物的序列而使得核糖酶成为用于使核酸发生目标特异性裂解的尤其优良的候选者。制备和使用催化多种不同反应的核糖酶的方式的代表性实例可以见于下列非限制性清单中的美国专利中：5,646,042、5,693,535、5,731,295、
5,811,300、5,837,855、5,869,253、5,877,021、5,877,022、5,972,699、5,972,704、
5,989,906以及6,017,756。
[0350] 9.三链体形成功能性核酸分子
[0351] 还公开了与所公开的多核苷酸相互作用的三链体形成功能性核酸分子。三链体形成功能性核酸分子是可以与双链或单链核酸相互作用的分子。当三链体分子与目标区相互作用时，形成被称作三链体的结构，其中三条DNA链依赖于沃森-克立克（Watson-Crick）和霍氏（Hoogsteen）碱基配对形成复合物。三链体分子是优选的，这是因为它们可以与目-6标区以高亲和力和特异性结合。优选的是，三链体形成分子结合目标分子的kd小于10 、-8 -10 -12
10 、10 或10 。制备和使用与多种不同的目标分子结合的三链体形成分子的方式的代表性实例可以见于下列非限制性清单中的美国专利中：5,176,996、5,645,985、5,650,316、
5,683,874、5,693,773、5,834,185、5,869,246、5,874,566以及5,962,426。
10 、10 或10 。制备和使用与多种不同的目标分子结合的三链体形成分子的方式的代表性实例可以见于下列非限制性清单中的美国专利中：5,176,996、5,645,985、5,650,316、
5,683,874、5,693,773、5,834,185、5,869,246、5,874,566以及5,962,426。
[0352] 10.外部引导序列
[0353] 还公开了与所公开的多核苷酸形成复合物的外部引导序列。外部引导序列（EGS）是与目标核酸分子结合，从而形成复合物的分子，并且这种复合物由核糖核酸酶P所识别，从而使目标分子裂解。EGS可以经过设计以特异性靶向所选的RNA分子。核糖核酸酶P有助于对细胞内的转运RNA（tRNA）进行加工。细菌核糖核酸酶P可以被募集以通过使用EGS来裂解几乎任何RNA序列，所述EGS使得目标RNA:EGS复合物模拟天然的tRNA底物。（Yale的WO92/03566以及Forster和Altman,Science238:407-409(1990)）。
[0354] 类似地，可以利用真核生物EGS/核糖核酸酶P引导的对RNA的裂解来裂解真核细胞内的所需目标。（Yuan等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA89:8006-8010(1992)；Yale的WO93/22434；Yale的WO95/24489；Yuan和Altman,EMBO J14:159-168(1995)；以及Carrara等,Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)92:2627-2631(1995)）。制备和使用促成对多种不同的目标分子的裂解的EGS分子的方式的代表性实例可以见于下列非限制性清单中的美国专利中：
5,168,053、5,624,824、5,683,873、5,728,521、5,869,248以及5,877,162。
5,168,053、5,624,824、5,683,873、5,728,521、5,869,248以及5,877,162。
[0355] 11.肽核酸
[0356] 还公开了含有肽核酸（PNA）组合物的多核苷酸。PNA是核苷碱基与假肽骨架相连接的DNA模拟物（Good和Nielsen,Antisense Nucleic Acid Drug Dev.1997;7(4)431-37）。PNA能够被用于传统上已经使用RNA或DNA的多种方法中。经常，PNA序列在技术方面的
表现优于相应的RNA或DNA序列并且具有并非为RNA或DNA所固有的效用。关于PNA的综
述，包括制备方法、使用特征以及使用方法在内由Corey提供（Trends Biotechnol,1997年
6月;15(6):224-9）。因而，在某些实施方案中，可能基于所公开的多核苷酸制备与mRNA序列的一个或多个部分互补的PNA序列，并且这类PNA组合物可能被用于调控、改变、减少或降低由所公开的多核苷酸转录的mRNA的翻译，并且从而改变已经接受这类PNA组合物施用的宿主细胞中所公开的多核苷酸的活性水平。
表现优于相应的RNA或DNA序列并且具有并非为RNA或DNA所固有的效用。关于PNA的综
述，包括制备方法、使用特征以及使用方法在内由Corey提供（Trends Biotechnol,1997年
6月;15(6):224-9）。因而，在某些实施方案中，可能基于所公开的多核苷酸制备与mRNA序列的一个或多个部分互补的PNA序列，并且这类PNA组合物可能被用于调控、改变、减少或降低由所公开的多核苷酸转录的mRNA的翻译，并且从而改变已经接受这类PNA组合物施用的宿主细胞中所公开的多核苷酸的活性水平。
[0357] PNA具有置换DNA的正常磷酸二酯骨架的2-氨乙基-甘氨酸键（Nielsen等,Science,1991年12月6日;254(5037):1497-500；Hanvey等,Science,1992年11月
27日;258(5087):1481-5；Hyrup和Nielsen,Bioorg Med Chem.1996年1月;4(1):5-23）。
这种化学结构具有三个重要的影响：首先，与DNA或硫代磷酸寡核苷酸对比，PNA是中性分子；其次，PNA是非手性的，从而避免了对研发立体选择性合成的需要；再次，PNA合成使用用于固相肽合成的标准Boc或Fmoc方案，但是也已经使用了其它方法，包括经过修改的梅里菲尔德法（Merrifield method）。
27日;258(5087):1481-5；Hyrup和Nielsen,Bioorg Med Chem.1996年1月;4(1):5-23）。
这种化学结构具有三个重要的影响：首先，与DNA或硫代磷酸寡核苷酸对比，PNA是中性分子；其次，PNA是非手性的，从而避免了对研发立体选择性合成的需要；再次，PNA合成使用用于固相肽合成的标准Boc或Fmoc方案，但是也已经使用了其它方法，包括经过修改的梅里菲尔德法（Merrifield method）。
[0358] PNA单体或现成的寡聚物可商购自PerSeptive Biosystems（Framingham,Mass.）。使用手动或自动方案，通过Boc或Fmoc方案进行的PNA合成是简单的（Norton等,Bioorg Med Chem.1995年4月;3(4):437-45）。手动方案适用于产生经过化学修饰的PNA或同时合成密切相关的PNA的家族。
[0359] 如同肽合成的情况一样，特定的PNA合成的成功将取决于所选序列的特性。例如，虽然在理论上，PNA可以并入有核苷酸碱基的任何组合，但相邻嘌呤的存在可能会导致产物中一个或多个残基的缺失。在预期到这种困难时，建议在产生具有相邻嘌呤的PNA时，应该重复地偶合可能会被无效地添加的残基。这之后应该通过反相高压液相色谱法对PNA进行纯化，从而提供产率和纯度与在合成肽期间所观测到的产率和纯度相似的产物。
[0360] 可以通过在固相合成期间偶合氨基酸或通过将含有羧酸基的化合物连接到暴露的N-端胺上来针对给定的应用对PNA进行修饰。可替代地，可以在合成之后通过与所引入的赖氨酸或半胱氨酸偶合来对PNA进行修饰。对PNA进行修饰的简易性将有助于针对更佳的溶解性或针对特定的功能需要来进行优化。在合成后，可以通过质谱测定法确定PNA和它们的衍生物的身份。多项研究已经对PNA进行修饰并且对其加以利用（例如Norton等,Bioorg Med Chem.1995年4月;3(4):437-45；Petersen等,J Pept Sci.1995年5
月 -6 月 ;1(3):175-83；Orum 等 ,Biotechniques.1995 年 9 月 ;19(3):472-80；Footer等 ,Biochemistry.1996 年 8 月 20 日 ;35(33):10673-9；Griffith 等 ,Nucleic Acids Res.1995年8月11日;23(15):3003-8；Pardridge等,Proc Natl Acad Sci USA.1995
年 6 月 6 日 ;92(12):5592-6；Boffa 等 ,Proc Natl Acad Sci USA.1995 年 3 月 14日;92(6):1901-5；Gambacorti-Passerini等,Blood.1996年8月15日;88(4):1411-7；
Armitage等 ,Proc Natl Acad Sci USA.1997年11 月11 日;94(23):12320-5；Seeger
等,Biotechniques.1997年 9月 ;23(3):512-7）。 美 国 专 利 号5,700,922 论 述 了PNA-DNA-PNA嵌合分子以及它们在诊断学、调节有机体的蛋白质以及治疗对治疗剂敏感的病状方面的用途。
月 -6 月 ;1(3):175-83；Orum 等 ,Biotechniques.1995 年 9 月 ;19(3):472-80；Footer等 ,Biochemistry.1996 年 8 月 20 日 ;35(33):10673-9；Griffith 等 ,Nucleic Acids Res.1995年8月11日;23(15):3003-8；Pardridge等,Proc Natl Acad Sci USA.1995
年 6 月 6 日 ;92(12):5592-6；Boffa 等 ,Proc Natl Acad Sci USA.1995 年 3 月 14日;92(6):1901-5；Gambacorti-Passerini等,Blood.1996年8月15日;88(4):1411-7；
Armitage等 ,Proc Natl Acad Sci USA.1997年11 月11 日;94(23):12320-5；Seeger
等,Biotechniques.1997年 9月 ;23(3):512-7）。 美 国 专 利 号5,700,922 论 述 了PNA-DNA-PNA嵌合分子以及它们在诊断学、调节有机体的蛋白质以及治疗对治疗剂敏感的病状方面的用途。
[0361] 对PNA的反义结合特性进行表征的方法论述于Rose（Anal Chem.1993年12月15日;65(24):3545-9）和Jensen等（Biochemistry.1997年4月22日;36(16):5072-7）中。Rose使用毛细管凝胶电泳来测定PNA与它们的互补寡核苷酸的结合，从而测量相对结合动TM
力学和化学计量。Jensen等使用BIAcore 技术进行了相似类型的测量。
力学和化学计量。Jensen等使用BIAcore 技术进行了相似类型的测量。
[0362] 已加以描述并且对于熟练技术人员来说将是清楚的PNA的其它应用包括用于DNA链侵染、反义抑制、突变分析、转录的增强剂、核酸纯化、分离具有转录活性的基因、阻断转录因子结合、基因组裂解、生物感测器、原位杂交等。
[0363] 12.抗体
[0364] 本文所用的术语“抗体”涵盖了具有双重或多重抗原或表位特异性的嵌合抗体和杂交抗体以及片段，所述片段如F(ab')2、Fab'、Fab等，包括杂交片段。因此，提供了抗体的保留与它们的特异性抗原结合的能力的片段。所述抗体和片段可以根据实施例中所述的方法以及在用于产生抗体并且针对特异性和活性对抗体进行筛选的一般方法
中通过本领域中已知的技术来制备并且可以针对特异性和活性进行筛选（参见Harlow
和 Lane.Antibodies,A Laboratory Manual.Cold Spring Harbor Publications,New York,(1988)）。
中通过本领域中已知的技术来制备并且可以针对特异性和活性进行筛选（参见Harlow
和 Lane.Antibodies,A Laboratory Manual.Cold Spring Harbor Publications,New York,(1988)）。
[0365] 在“抗体”的含义内还包括了如例如美国专利号4,704,692中所述的抗体片段和抗原结合蛋白（单链抗体）的缀合物，所述美国专利的内容以引用的方式并入本文。
[0366] 任选地，在其它物种中产生抗体并且将其“人源化”以向人类施用。在一个方面，“人源化”抗体是由种系突变型动物产生的抗体的人类型式。非人类（例如鼠类）抗体的人源化形式是含有源自于非人类免疫球蛋白的最小序列的嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白链或其片段（如Fv、Fab、Fab'、F(ab')2，或抗体的其它抗原结合子序列）。人源化抗体包括了人类免疫球蛋白（接受体抗体），其中接受体的CDR中的残基被具有所需的特异性、亲和力以及能力的非人类物种（供体抗体）的CDR中的残基置换，所述非人类物种如小鼠、大鼠或家兔。在一个实施方案中，本文描述了抗体的人源化型式，所述人源化型式包含与由本文所述的基因编码的蛋白质或其片段特异性结合的单克隆抗体的至少一个、两个、三个、四个或最多所有的CDR。在有些情况下，人类免疫球蛋白的Fv框架残基被相应的非人类残基所置换。
人源化抗体还可能包含既不存在于接受体抗体也不存在于所引入的CDR或框架序列中的残基。一般来说，人源化抗体可以包含大致上所有或至少一个，并且典型地两个可变域，其中所有或大致上所有CDR区对应于非人类免疫球蛋白的CDR区并且所有或大致上所有FR
区是人类免疫球蛋白共有序列的FR区。人源化抗体最佳地还可以包含免疫球蛋白恒定区（Fc）的至少一部分，所述免疫球蛋白恒定区典型地是人类免疫球蛋白的免疫球蛋白恒定区（Jones等,Nature,321:522-525(1986)；Riechmann等,Nature,332:323-327(1988)；以及Presta,Curr.Op.Struct.Biol.,2:593-596(1992)）。
人源化抗体还可能包含既不存在于接受体抗体也不存在于所引入的CDR或框架序列中的残基。一般来说，人源化抗体可以包含大致上所有或至少一个，并且典型地两个可变域，其中所有或大致上所有CDR区对应于非人类免疫球蛋白的CDR区并且所有或大致上所有FR
区是人类免疫球蛋白共有序列的FR区。人源化抗体最佳地还可以包含免疫球蛋白恒定区（Fc）的至少一部分，所述免疫球蛋白恒定区典型地是人类免疫球蛋白的免疫球蛋白恒定区（Jones等,Nature,321:522-525(1986)；Riechmann等,Nature,332:323-327(1988)；以及Presta,Curr.Op.Struct.Biol.,2:593-596(1992)）。
[0367] 用于对非人类抗体进行人源化的方法在本领域中是熟知的。一般来说，人源化抗体具有一个或多个从非人类来源引入它当中的氨基酸残基。这些非人类氨基酸残基经常被称为“输入”残基，所述残基典型地取自“输入”可变域。可以主要遵循Winter和合作者的方法（Jones等,Nature,321:522-525(1986)；Riechmann等,Nature,332:323-327(1988)；Verhoeyen等,Science,239:1534-1536(1988)），通过用一个或多个啮齿动物CDR序列取代人类抗体的相应序列来进行人源化。因此，这类“人源化”抗体是嵌合抗体（美国专利号
4,816,567），其中大致上小于完整的人类可变域已经被来自非人类物种的相应序列所取代。实际上，人源化抗体典型地是一些CDR残基以及可能的一些FR残基被啮齿动物抗体中类似位点上的残基所取代的人类抗体。
4,816,567），其中大致上小于完整的人类可变域已经被来自非人类物种的相应序列所取代。实际上，人源化抗体典型地是一些CDR残基以及可能的一些FR残基被啮齿动物抗体中类似位点上的残基所取代的人类抗体。
[0368] 13.肽
[0369] HTRA1或ARMS2肽可以是重组HTRA1或ARMS2肽、合成HTRA1或ARMS2肽、HTRA1或ARMS2肽、经过纯化的HTRA1或ARMS2肽，或可商购获得的HTRA1或ARMS2肽。HTRA1或
ARMS2肽可以具有非天然存在的序列或可以具有任何物种（例如人类、大鼠或小鼠）中存在的序列。在一些情况下，HTRA1或ARMS2肽可以含有一个或多个氨基酸类似物或其它肽模拟物。本文所用的术语“肽模拟物”意指模拟多肽的生物活性，但在化学性质上不是肽的分子。虽然在某些方面，肽模拟物可以是不含肽键（即氨基酸之间的酰胺键）的分子，但是术语肽模拟物可以包括在特征上不完全是肽的分子，如假肽、半肽以及类肽。无论在特征上完全或部分非肽，本文所述的肽模拟物可以使得反应性化学部分呈现出与多肽中的活性基团的三维排列非常相似的空间排列。由于这种相似的活性位点几何结构，肽模拟物可以展现出与多肽的生物活性相似的生物效应。HTRA1或ARMS2肽的亚单位可以通过肽键或其它键（例如像酯或醚键）连接。HTRA1或ARMS2肽可以是全长HTRA1或ARMS2肽、前体HTRA1或ARMS2肽，或HTRA1或ARMS2肽的片段。在一些情况下，HTRA1或ARMS2肽可以含有一处或多处修饰。例如，HTRA1或ARMS2肽可以经过修饰以被聚乙二醇化或含有如白蛋白序列（例如人类白蛋白序列）的另外的氨基酸序列。在一些情况下，HTRA1或ARMS2肽可以是融合多肽，如含有白蛋白序列的片段的融合多肽。在一些情况下，HTRA1或ARMS2肽可以与寡聚物共价连接，所述寡聚物如使得口服施用成为可能或改良所缀合的HTRA1或ARMS2肽的药物动力学或药效学特征曲线的短两亲性寡聚物。寡聚物可以包含水溶性聚乙二醇（PEG）和脂溶性烷基（短链脂肪酸聚合物）。参见例如国际专利申请公布号WO2004/047871，描述了可以被用于治疗多种病状的变体和修饰肽和肽类似物。在一些情况下，HTRA1或ARMS2肽可以与免疫球蛋白分子（例如IgG1分子）的Fc结构域融合，这样使得融合多肽能够经由Fc受体进行跨上皮细胞屏障的主动转运。
ARMS2肽可以具有非天然存在的序列或可以具有任何物种（例如人类、大鼠或小鼠）中存在的序列。在一些情况下，HTRA1或ARMS2肽可以含有一个或多个氨基酸类似物或其它肽模拟物。本文所用的术语“肽模拟物”意指模拟多肽的生物活性，但在化学性质上不是肽的分子。虽然在某些方面，肽模拟物可以是不含肽键（即氨基酸之间的酰胺键）的分子，但是术语肽模拟物可以包括在特征上不完全是肽的分子，如假肽、半肽以及类肽。无论在特征上完全或部分非肽，本文所述的肽模拟物可以使得反应性化学部分呈现出与多肽中的活性基团的三维排列非常相似的空间排列。由于这种相似的活性位点几何结构，肽模拟物可以展现出与多肽的生物活性相似的生物效应。HTRA1或ARMS2肽的亚单位可以通过肽键或其它键（例如像酯或醚键）连接。HTRA1或ARMS2肽可以是全长HTRA1或ARMS2肽、前体HTRA1或ARMS2肽，或HTRA1或ARMS2肽的片段。在一些情况下，HTRA1或ARMS2肽可以含有一处或多处修饰。例如，HTRA1或ARMS2肽可以经过修饰以被聚乙二醇化或含有如白蛋白序列（例如人类白蛋白序列）的另外的氨基酸序列。在一些情况下，HTRA1或ARMS2肽可以是融合多肽，如含有白蛋白序列的片段的融合多肽。在一些情况下，HTRA1或ARMS2肽可以与寡聚物共价连接，所述寡聚物如使得口服施用成为可能或改良所缀合的HTRA1或ARMS2肽的药物动力学或药效学特征曲线的短两亲性寡聚物。寡聚物可以包含水溶性聚乙二醇（PEG）和脂溶性烷基（短链脂肪酸聚合物）。参见例如国际专利申请公布号WO2004/047871，描述了可以被用于治疗多种病状的变体和修饰肽和肽类似物。在一些情况下，HTRA1或ARMS2肽可以与免疫球蛋白分子（例如IgG1分子）的Fc结构域融合，这样使得融合多肽能够经由Fc受体进行跨上皮细胞屏障的主动转运。
[0370] 在一个方面，向受试者施用HTRA1或AMRS2肽可以被设计成在所述受试者体内产生HTRA1或ARMS2抗体。例如，可以向受试者施用对于受试者的免疫系统来
说是外来物的HTRA1或ARMS2多肽，这样使得所述受试者产生可以抑制所述受试者
体内HTRA1或ARMS2多肽的活性的HTRA1或ARMS2抗体。可以向受试者施用的多肽
包括但不限于：Ac-EPARSPPQPEHCEG-酰胺（SEQ ID No.1），对应于HTRA136-49IGFBP
结 构 域；Ac-PASATVRRRAQC- 酰 胺（SEQ ID NO.2），对 应 于 HTRA196-106IGFBP 结 构域；Ac-CGSDANTYANL- 酰 胺（SEQ ID NO.4），对 应 于 HTRA1119-129Kazal 结 构 域；
Ac-SRRSERLHRPPVIC- 酰 胺（SEQ ID No.3），对 应 于 HTRA1136-148Kazal 结 构 域；
Ac-CGQGQEDPNSLRHK-OH（SEQ ID NO.5），对应于HTRA1155-168连接子-蛋白酶结构
域；Ac-SHDRQAKGKAITKC-酰胺（SEQ ID NO.6），对应于HTRA1367-379蛋白酶-连接子结构域；Ac-CPDTPAEAGGLKEN-酰胺（SEQ ID NO.7），对应于HTRA1419-431PDZ结构域；或Ac-LDPGVGGEGASDKQRSKC-酰胺（SEQ ID NO.8），对应于ARMS242-58结构域。在另一个方面，本身的HTRA1或AMRS2多肽可以经过设计而含有外来的T细胞表位，以使得施用所述多肽会产生可以抑制受试者体内HTRA1或ARMS2多肽的活性的HTRA1或AMRS2抗体。如明矾
的佐剂可以与HTRA1或ARMS2多肽组合使用。可以将HTRA1或ARMS2肽活性抑制任何量。
例如（而不限于），可以将肽活性抑制约5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、
17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、
36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、
55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、
74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、
93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%以及在约5%与100%之间的任何百分比。
说是外来物的HTRA1或ARMS2多肽，这样使得所述受试者产生可以抑制所述受试者
体内HTRA1或ARMS2多肽的活性的HTRA1或ARMS2抗体。可以向受试者施用的多肽
包括但不限于：Ac-EPARSPPQPEHCEG-酰胺（SEQ ID No.1），对应于HTRA136-49IGFBP
结 构 域；Ac-PASATVRRRAQC- 酰 胺（SEQ ID NO.2），对 应 于 HTRA196-106IGFBP 结 构域；Ac-CGSDANTYANL- 酰 胺（SEQ ID NO.4），对 应 于 HTRA1119-129Kazal 结 构 域；
Ac-SRRSERLHRPPVIC- 酰 胺（SEQ ID No.3），对 应 于 HTRA1136-148Kazal 结 构 域；
Ac-CGQGQEDPNSLRHK-OH（SEQ ID NO.5），对应于HTRA1155-168连接子-蛋白酶结构
域；Ac-SHDRQAKGKAITKC-酰胺（SEQ ID NO.6），对应于HTRA1367-379蛋白酶-连接子结构域；Ac-CPDTPAEAGGLKEN-酰胺（SEQ ID NO.7），对应于HTRA1419-431PDZ结构域；或Ac-LDPGVGGEGASDKQRSKC-酰胺（SEQ ID NO.8），对应于ARMS242-58结构域。在另一个方面，本身的HTRA1或AMRS2多肽可以经过设计而含有外来的T细胞表位，以使得施用所述多肽会产生可以抑制受试者体内HTRA1或ARMS2多肽的活性的HTRA1或AMRS2抗体。如明矾
的佐剂可以与HTRA1或ARMS2多肽组合使用。可以将HTRA1或ARMS2肽活性抑制任何量。
例如（而不限于），可以将肽活性抑制约5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、
17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、
36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、
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74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、
93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%以及在约5%与100%之间的任何百分比。
[0371] 本文还描述了治疗受试者的血管相关黄斑病的方法，所述方法包括向所述受试者施用诱骗可溶性弹性蛋白（decoy-soluble elastin）（弹性蛋白陷阱）。施用诱骗弹性蛋白可以防止例如HTRA1的弹性蛋白酶与它们的正常底物结合，从而阻断它们的弹性蛋白酶活性。
[0372] 本文还描述了治疗受试者的血管相关黄斑病或其症状的方法，其中在所述受试者的眼睛中存在异常脉络膜毛细血管小叶，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的由HTRA1、ARMS2、CFH或C3保护性单倍型所编码的一种或多种多肽。在一个方面，血管相关黄斑病的症状可以出现在所述受试者的眼睛中。因此，本文还描述了治疗受试者的眼睛中血管相关黄斑病的症状的方法，其中在所述受试者的眼睛中存在异常脉络膜毛细血管小叶，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的由HTRA1、ARMS2、CFH或C3保护性单倍型所编码的一种或多种多肽。
[0373] 另外，本文描述了治疗受试者的血管相关黄斑病或其症状的方法，其中在所述受试者的眼睛中存在异常脉络膜毛细血管小叶，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的由HTRA1、ARMS2、CFH或C3突变型单倍型所编码的一种或多种多肽。在一个方面，血管相关黄斑病的症状可以出现在所述受试者的眼睛中。因此，本文还描述了治疗受试者的眼睛中血管相关黄斑病的症状的方法，其中在所述受试者的眼睛中存在异常脉络膜毛细血管小叶，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的由HTRA1、ARMS2、CFH或C3突变型单倍型所编码的一种或多种多肽。
[0374] 突变型HTRA1、ARMS2、CFH或C3单倍型可以由具有单核苷酸多态现象（SNP）的HTRA1、ARMS2、CFH或C3核苷酸序列所编码。更具体而言，HTRA1、ARMS2、CFH或C3核苷酸序列可以具有HTRA1基因中rs11200638SNP的A等位基因、ARMS2基因中rs10490924SNP的T等位基因、CFH基因中rs1061170SNP的C等位基因或C3基因中rs2230199SNP的G等位基因。
[0375] 14.小分子
[0376] 在本文所述的方法中可以利用直接或间接靶向HTRA1或ARMS2核酸或肽的任何小分子。这些分子可以在科学文献、可从欧洲生物信息学研究所（European Bioinformatics Institute）获得的StarLite数据库、药物库（DrugBank）（Wishart等,Nucleic Acids Res.2006年1月1日;34(数据库问题):D668-72）、包装说明书、小册子、化学供应商（例如Sigma、Tocris、Aurora Fine Chemicals等等），或通过任何其它方式来鉴定，以使得本领域技术人员在HTRA1或ARMS2与分子对HTRA1和ARMS2的直接或间接的抑制作用之间建立联系。优选的小分子是IC50值小于约1mM、小于约100微摩尔浓度、小于约75微摩尔浓度、小于约50微摩尔浓度、小于约25微摩尔浓度、小于约10微摩尔浓度、小于约5微摩尔浓度或小于约1微摩尔浓度的那些小分子。半数最大抑制浓度（IC50）是化合物抑制生物或生物化学功能的有效性的量度。这种定量量度指示了将给定生物过程（或过程的组分，即酶、细胞、细胞受体或微生物）抑制一半所需的特定化合物或其它物质（抑制剂）的量。换句话说，它是物质的半数最大（50%）抑制浓度（IC）（50%IC或IC50）。
[0377] .确定治疗剂的功效的方法
[0378] 本文描述了确定对被诊断患有血管相关黄斑病或其症状的受试者的血管相关黄斑病或其症状进行治疗的功效的方法，所述方法包括：a)在开始治疗疾病或其症状之前确定所述受试者的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶的数目；b)开始治疗疾病并保持一定的时间间隔；c)在所述时间间隔之后确定步骤a)中的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶后续的数目；以及d)将步骤c)中所述受试者的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶的数目与步骤a)中所述受试者的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶的数目相比较，其中检测出步骤c)中所述受试者的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶的数目没有增加或有所减少则指示对所述受试者的血管相关黄斑病或其症状进行的治疗有功效。
[0379] 在一个方面，确定对受试者的血管相关黄斑病或其症状进行治疗的功效的方法可以包括在对血管相关黄斑病或其症状进行治疗之后，检测覆盖并且对应于脉络膜毛细血管小叶的RPE细胞的再生长或再生，其中检测出RPE细胞再生长或再生则指示所述治疗有功效。可以利用本领域技术人员已知的不同程序来检测RPE细胞的再生长或再生，所述程序包括但不限于自发荧光成像技术、红外成像技术、光学相干断层摄影术（OCT）、Stratus光学相干断层摄影术（Stratus OCT）、傅里叶域光学相干断层摄影术（Fd-OCT）、双光子激发荧光（TPEF）成像、自适应光学扫描激光检眼镜检查法（AOSLO）、扫描激光检眼镜检查法、近红外成像联合谱域光学相干断层摄影术（SD-OCT）、彩色眼底摄影术、眼底自发荧光成像、无赤光成像、荧光素血管造影术、吲哚菁绿血管造影术、多焦视网膜电图（ERG）记录、微视野检查、彩色多普勒光学相干断层摄影术（CDOCT）、视野评估、Heidelberg Spectralis、Zeiss Cirrus、Topcon3D OCT2000、Optivue RTVue SD-OCT、Opko OCT SLO、NIDEK F-10或Optopol SOCT Copernicus HR。
[0380] 在另一个方面，确定对受试者的血管相关黄斑病或其症状进行治疗的功效的方法可以包括在对血管相关黄斑病或其症状进行治疗之后，检测脉络膜毛细血管小叶的灌注增加，其中检测出脉络膜毛细血管小叶的灌注有所增加则指示所述治疗有功效。可以利用本领域技术人员已知的不同程序来检测脉络膜毛细血管小叶的灌注增加，所述程序包括但不限于自发荧光成像技术、红外成像技术、光学相干断层摄影术（OCT）、Stratus光学相干断层摄影术（Stratus OCT）、傅里叶域光学相干断层摄影术（Fd-OCT）、双光子激发荧光（TPEF）成像、自适应光学扫描激光检眼镜检查法（AOSLO）、扫描激光检眼镜检查法、近红外成像联合谱域光学相干断层摄影术（SD-OCT）、彩色眼底摄影术、眼底自发荧光成像、无赤光成像、荧光素血管造影术、吲哚菁绿血管造影术、多焦视网膜电图（ERG）记录、微视野检查、彩色多普勒光学相干断层摄影术（CDOCT）、视野评估、Heidelberg Spectralis、Zeiss Cirrus、Topcon3D OCT2000、Optivue RTVue SD-OCT、Opko OCT SLO、NIDEK F-10或Optopol SOCT Copernicus HR。
[0381] 在又另一个方面，确定对受试者的血管相关黄斑病或其症状进行治疗的功效的方法可以包括在对血管相关黄斑病或其症状进行治疗之后，检测补体通路、HTRA1或ARMS2相关活性（如表达水平、生物化学活性（例如补体组分的酶活性）或针对补体通路、HTRA1或ARMS2相关分子的血清自身抗体）从异常水平回到或趋向正常水平，其中检测出补体通路、HTRA1或ARMS2相关活性回到或趋向正常水平则指示所述治疗有功效。
[0382] 本文所用的术语“被诊断”的意思是已经接受由技术人员（例如医师）进行的身体检查，包括但不限于遗传学检查，并且发现患有可以由本文所述的化合物、组合物或方法进行诊断或治疗的病状。例如，“被诊断患有血管相关黄斑病或其症状”的意思是已经接受由技术人员（例如医师）利用本文所述的方法进行的身体检查，并且发现患有可以被诊断为血管相关黄斑病或其症状的病状。
[0383] 本文所用的术语“被诊断”还可以意指已经对受试者的DNA、RNA或在一些情况下，对受试者的蛋白质进行检查，以便评估本文所述的各种SNP（并且在一个方面，是其它SNP和遗传或行为特征）存在或不存在，以确定所述受试者是否患有血管相关黄斑病或其症状。
[0384] 本文所用的“没有增加”或“减少”的意思是在由普通技术人员使用本领域中熟知的眼科程序（如本文所述的程序）对眼睛进行检查时异常脉络膜毛细血管小叶的数目或大小没有显著或明显的增加。治疗可以呈以下形式：向受试者单独施用或与其它治疗形式组合施用一种或多种治疗剂，所述其它治疗形式包括但不限于运动、减少吸烟或戒烟、减少饮酒或戒酒、减压、减轻体重、控制血压或改善膳食和营养摄入。
[0385] 因此，本领域技术人员可以通过以不同的时间间隔对受试者进行随访并且检查受试者的眼睛以将每次检查时异常脉络膜毛细血管小叶的数目或大小与在最初对受试者的血管相关黄斑病或其症状进行诊断时在初次检查时所确定的异常脉络膜毛细血管小叶的数目或大小相比较来确定对受试者的血管相关黄斑病或其症状进行治疗的过程是否有效。本领域技术人员可以使用本领域中熟知的眼科程序（如本文所述的程序）对受试者一只眼睛或两只眼睛中的黄斑的外观进行拍照并且记录，然后测量异常脉络膜毛细血管小叶的大小或对黄斑中异常脉络膜毛细血管小叶的数目进行计数。在异常脉络膜毛细血管小叶的数目或大小没有增加时，本领域技术人员可以确定组合物和治疗方法是有效的。
[0386] 本文还描述了确定对被诊断患有血管相关黄斑病的受试者的血管相关黄斑病或其症状进行治疗的功效的方法，所述方法包括：a)在开始治疗血管相关黄斑病或其症状之前确定所述受试者的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶的数目；b)开始治疗血管相关黄斑病或其症状并保持一定的时间间隔；c)在所述时间间隔之后确定步骤a)中的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶后续的数目；以及d)将步骤c)中所述受试者的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶的数目与步骤a)中所述受试者的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶的数目相比较，其中检测出步骤c)中所述受试者的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶的数目有所增加则指示药剂不能有效治疗所述受试者的血管相关黄斑病或其症状。
[0387] 在一个方面，确定对受试者的血管相关黄斑病或其症状进行治疗的功效的方法可以包括在对血管相关黄斑病或其症状进行治疗之后，检测覆盖并且对应于脉络膜毛细血管小叶的RPE细胞的再生长或再生，其中检测出RPE细胞没有再生长或再生则指示药剂不能有效治疗血管相关黄斑病或其症状。可以利用本领域技术人员已知的不同程序来检测RPE细胞的再生长或再生，所述程序包括但不限于自发荧光成像技术、红外成像技术、光学相干断层摄影术（OCT）、Stratus光学相干断层摄影术（Stratus OCT）、傅里叶域光学相干断层摄影术（Fd-OCT）、双光子激发荧光（TPEF）成像、自适应光学扫描激光检眼镜检查法（AOSLO）、扫描激光检眼镜检查法、近红外成像联合谱域光学相干断层摄影术（SD-OCT）、彩色眼底摄影术、眼底自发荧光成像、无赤光成像、荧光素血管造影术、吲哚菁绿血管造影术、多焦视网膜电图（ERG）记录、微视野检查、彩色多普勒光学相干断层摄影术（CDOCT）、视野评估、Heidelberg Spectralis、Zeiss Cirrus、Topcon3D OCT2000、Optivue RTVue SD-OCT、Opko OCT SLO、NIDEK F-10或Optopol SOCT Copernicus HR。
[0388] 在另一个方面，确定对受试者的血管相关黄斑病或其症状进行治疗的功效的方法可以包括在对血管相关黄斑病或其症状进行治疗之后检测脉络膜毛细血管小叶的灌注没有增加，其中检测出脉络膜毛细血管小叶的灌注没有增加则指示药剂不能有效治疗血管相关黄斑病或其症状。可以利用本领域技术人员已知的不同程序来检测脉络膜毛细血管小叶的灌注增加，所述程序包括但不限于自发荧光成像技术、红外成像技术、光学相干断层摄影术（OCT）、Stratus光学相干断层摄影术（Stratus OCT）、傅里叶域光学相干断层摄影术（Fd-OCT）、双光子激发荧光（TPEF）成像、自适应光学扫描激光检眼镜检查法（AOSLO）、扫描激光检眼镜检查法、近红外成像联合谱域光学相干断层摄影术（SD-OCT）、彩色眼底摄影术、眼底自发荧光成像、无赤光成像、荧光素血管造影术、吲哚菁绿血管造影术、多焦视网膜电图（ERG）记录、微视野检查、彩色多普勒光学相干断层摄影术（CDOCT）、视野评估、Heidelberg Spectralis、Zeiss Cirrus、Topcon3D OCT2000、Optivue RTVue SD-OCT、Opko OCT SLO、NIDEK F-10或Optopol SOCT Copernicus HR。
[0389] 在又另一个方面，确定对受试者的血管相关黄斑病或其症状进行治疗的功效的方法可以包括在对血管相关黄斑病或其症状进行治疗之后，检测补体通路、HTRA1或ARMS2相关活性（如表达水平、生物化学活性（例如补体组分的酶活性）或针对补体通路、HTRA1或ARMS2相关分子的血清自身抗体）没有从异常水平回到或趋向正常水平，其中检测出补体通路、HTRA1或ARMS2相关活性没有回到或趋向正常水平则指示药剂不能有效治疗血管相关黄斑病或其症状。
[0390] 本领域技术人员可以通过以不同的时间间隔对受试者进行随访并且检查所述受试者眼睛的黄斑以将每次检查时异常脉络膜毛细血管小叶的数目或大小与在最初对血管相关黄斑病或其症状进行诊断时在初次检查时所确定的异常脉络膜毛细血管小叶的数目或大小相比较来确定对受试者的血管相关黄斑病或其症状进行治疗的过程是否无效。本领域技术人员可以使用本领域中熟知的眼科程序（如本文所述的程序）对受试者一只眼睛或两只眼睛中的黄斑的外观进行拍照并且记录，然后测量异常脉络膜毛细血管小叶的大小或对黄斑中异常脉络膜毛细血管小叶的数目进行计数。在异常脉络膜毛细血管小叶的数目或大小有所增加时，本领域技术人员可以确定组合物和治疗方法无效。
[0391] 此外，本文描述了对有效治疗被诊断患有血管相关黄斑病或其症状的受试者的血管相关黄斑病或其症状的药剂或药剂组合进行筛选的方法，所述方法包括：a)确定所述受试者的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶的数目或大小；b)向所述受试者施用药剂或药剂的组合并保持一定的时间间隔；c)在所述时间间隔之后，确定步骤a)中的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶后续的数目或大小；以及d)将步骤c)中所述受试者的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶的数目或大小与步骤a)中所述受试者的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶的数目或大小相比较，其中检测出步骤c)中所述受试者的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶的数目或大小没有增加则指示药剂或药剂的组合有效治疗所述受试者的血管相关黄斑病或其症状。本文所述的筛选方法还可以被用于对治疗剂联合其它治疗的组合进行筛选，所述其它治疗包括但不限于运动、减少吸烟或戒烟、减少饮酒或戒酒、减压、减轻体重、控制血压或改善膳食和营养摄入。
[0392] 本文还描述了对有效用于以下方面的药剂或药剂的组合进行筛选的方法：(i)治疗血管相关黄斑病；(ii)治疗与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(iii)治疗严重黄斑病或晚期黄斑病；或(iv)使异常脉络膜毛细血管小叶消退。
[0393] 此外，本文描述了对有效用于以下方面的药剂或药剂的组合进行筛选的方法，所述药剂或药剂的组合针对被诊断患有以下(i)、(ii)、(iii)或(iv)中疾病或症状的受试者可有效(i)治疗血管相关黄斑病；(ii)治疗与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(iii)治疗严重黄斑病或晚期黄斑病；或(iv)使异常脉络膜毛细血管小叶消退，所述方法包括：a)确定所述受试者的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶的数目或大小；b)向所述受试者施用药剂或药剂的组合并保持一定的时间间隔；c)在所述时间间隔之后，确定步骤a)中的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶后续的数目或大小；以及d)将步骤c)中所述受试者的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶的数目或大小与步骤a)中所述受试者的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶的数目或大小相比较，其中检测出步骤c)中所述受试者的眼睛中异常脉络膜毛细血管小叶的数目或大小没有增加则指示药剂或药剂的组合在受试者中可有效(i)治疗血管相关黄斑病；(ii)治疗与血管相关黄斑病相关联的一种或多种症状；(iii)治疗严重黄斑病或晚期黄斑病；或(iv)使异常脉络膜毛细血管小叶消退。
[0394] 本文还描述了增强临床试验的方法，所述方法包括选择适用于那些临床试验的患者群体。在一个方面，所述方法可以被用于确保基于患者是否对正在研究的一种或多种实验治疗剂起反应而鉴定出参与临床试验的患者。所述方法可以包括监测接受用于血管相关黄斑病或其症状的治疗的受试者的病状。成功的治疗结果可以通过补体通路、HTRA1或ARMS2相关活性（如表达水平、生物化学活性（例如补体组分的酶活性）或针对补体通路、HTRA1或ARMS2相关分子的血清自身抗体）从异常水平回到或趋向正常水平来指示。在一个方面，所述方法可以包括在受试者接受治疗之前测量异常活性水平（例如自身抗体异常存在或补体通路、HTRA1或ARMS2分子的异常水平）的初始值。然后可以在一段时间内进行反复测量。例如（而不限于），这段时间可以是约1天、2天、5天、1周、2周、3周、1个月、2个月、3个月、4个月、6个月、9个月、1年或超过1年。如果最初水平相对于对照群体的平均水平有所升高，那么在后续测量时水平显著降低则可以指示阳性治疗结果。同样，如果测量标记的最初水平相对于对照群体的平均值有所降低，那么所测量的水平相对于最初水平显著增加则可以表示阳性治疗结果。如果后续所测量的水平与最初水平的重复测量结果的平均值相差大于一个标准差，那么随后测量的水平被认为相对于最初水平有显著性改变。如果监测揭示出阳性治疗结果，则指示患者可以被选择参与针对所述一种或多种特定的治疗剂的临床试验中。如果监测揭示出阴性治疗结果，则指示患者不应被选择参与针对所述一种或多种特定的治疗剂的临床试验中。
[0395] .治疗性组合物
[0396] 本文描述了用于制备本发明组合物的组分以及本文所述的方法内所使用的组合物本身。这些以及其它物质描述于本文中，并且应了解，当公开了这些物质的组合、子集、相互作用、群组等时，虽然可能没有明确地公开关于这些化合物的每一种不同的单独和集体组合以及排列的具体涉及内容，但在本文中确切地涵盖并且描述了每一种。例如，如果公开并且论述了特定的指示试剂，并且还论述了对所述指示试剂的改变，那么除非确切地指明是相反情况，否则确切地涵盖了所述指示试剂的每一种组合和排列以及可能的改变。因此，如果公开了一类指示试剂A、B以及C，并且公开了一类指示试剂D、E以及F，和组合指示试剂的一个实例A-D，那么即使没有单独地叙述每一种，也单独并且共同地涵盖了每一种，意思是认为公开了组合A-E、A-F、B-D、B-E、B-F、C-D、C-E以及C-F。同样，也公开了这些组合的任何子集或组合。因此，例如，将认为公开了A-E、B-F以及C-E的子群。这一概念适用于本申请的所有方面，包括但不限于制备和使用本发明组合物的方法中的步骤。因此，如果存在可以进行的多个另外的步骤，那么应了解这些另外的步骤中的每一个可以与本发明方法的任何具体的实施方案或实施方案的组合一起进行。
[0397] 本文所述的组合物具有某些功能，如治疗血管相关黄斑病或改善与血管相关黄斑病相关联的症状。本文描述了发挥所公开的功能的某些结构要求，并且应了解，存在多种可以发挥相同功能并且与所公开的结构有关的结构，并且这些结构将典型地实现相同的结果，例如治疗血管相关黄斑病或其症状。
[0398] 在一个方面，治疗血管相关黄斑病或其症状的治疗剂包括生物疗法，如基因疗法。例如，可以将含有HTRA1或ARMS2多肽的编码序列的全部或一部分的DNA并入载体中以使所编码的多肽在适合的宿主细胞中表达。包括细菌、酵母以及哺乳动物载体在内的大量载体在本领域中已知用于在不同的宿主细胞或无细胞系统中复制和/或表达，并且可以被用于基因疗法。表达载体可以是用于将基因递送到细胞中（例如质粒）或用作递送基因的一般策略的一部分，例如重组反转录病毒或腺病毒的一部分的任何核苷酸构造（Ram等,Cancer Res.53:83-88,(1993)）。例如，本文公开了表达载体，所述表达载体包含与控制元件可操作地连接的分离的多核苷酸，所述多核苷酸包含本文所述的一种或多种基因的序列。
[0399] 本文所用的质粒或病毒载体是将所公开的核酸，如能够编码本文所公开的一种或多种多肽的分离的多核苷酸转运到细胞中而不会发生降解的试剂，并且包括使得基因在当中递送有所述基因的细胞中表达的启动子。在一些实施方案中，本文所公开的分离的多核苷酸源自于病毒或反转录病毒。
[0400] 1.药物载体/药物产品的递送
[0401] 本文所述的组合物（或者被称为组合物）还可以在药学上可接受的载体中进行体内施用。“药学上可接受的”意指在生物学上或其它方面没有不合乎需要的物质，即所述物质可以连同本文所述的例如肽的药剂一起向受试者施用，而不会引起任何不希望有的生物效应或与当中含有所述物质的药物组合物的其它组分中的任一种以有害方式相互作用。如本领域技术人员所熟知，必然将选择使活性成分的任何降解减到最少并且使受试者的任何不良副作用减到最少的载体。
[0402] 所述组合物可以通过以下方式来施用：口服施用、经皮施用、通过吸入施用、经鼻施用、局部施用、阴道内施用、眼科施用、耳内施用、脑内施用、直肠施用以及肠胃外施用，包括注射，如静脉内施用、动脉内施用、肌肉内施用以及皮下施用。本文所用的“局部鼻内施用”意指经由鼻和鼻部通道这两个部位中的一个或两个将组合物递送到鼻和鼻部通道中并且可以包括通过喷雾机构或小滴机构，或经由气溶胶化进行递送。可以经由鼻或口腔，借助于通过喷雾或小滴机构进行递送来通过吸入剂施用组合物。还可以经由插管法直接递送至呼吸系统的任何部位（例如肺）。可以眼科施用组合物。可以通过本领域技术人员已知的多种方式实现眼科施用。例如（而不限于），可以经由将乳膏剂、软膏剂或液体滴剂制剂放到受试者的内眼睑上、经由使用喷到受试者的眼睛上的喷雾剂，或经由玻璃体内注射来向有需要的受试者的眼睛中提供一种或多种药剂。眼科施用可以进一步包括但不限于局部施用、结膜下施用、眼球筋膜囊下施用、眼球上施用、眼球后施用、眼眶内施用以及眼内施用（包括玻璃体内施用）。
[0403] 在一个方面，可以经由使用全身递送（如静脉内递送）、单向巩膜上植入物、中空微针、实心经涂布微针、自由漂浮的玻璃体内植入物或巩膜固定的玻璃体内植入物来实现一种或多种药剂的眼科施用。还可以经由使用局部离子导入法来实现一种或多种药剂的眼科施用。离子导入法是将化合物递送到眼睛中的一种无创性方法。它可以通过施加所带电荷与化合物相同的小电流以产生排斥电动势从而能够将化合物递送到眼睛的前段或后段中来进行。Edelhauser等,Ophthalmic Drug Delivery Systems for the Treatment of Retinal Diseases:Basic Research to Clinical Applications,IOVS2010:51(11)5403-5419描述了这些不同的眼科施用方法，所述文献以引用的方式整体并入本文。
[0404] 所需要的组合物的精确量将在受试者之间有所不同，这取决于所述受试者的物种、年龄、体重以及一般情况、疾病的严重度、它的施用方式等。因此，不可能规定每种组合物的精确量。然而，可以由本领域技术人员，仅使用本文教导内容中所给出的常规实验来确定适当量。
[0405] 组合物的肠胃外施用在使用时一般来说特征在于注射。注射剂可以被制备成常规形式，制备成液体溶液或悬浮液、适用于在注射前于液体中形成溶液或悬浮液的固体形式或乳液。新近修改的肠胃外施用途径包括使用缓释或持续释放系统以维持恒定剂量。参见例如美国专利3,610,795，所述美国专利以引用的方式并入本文。在另一个方面，通过静脉内注射和/或静脉内滴注来施用所公开的组合物。
[0406] a.药学上可接受的载体
[0407] 本文所述的组合物可以与药学上可接受的载体在治疗上组合使用。
[0408] 适合的载体和它们的制剂描述于Remington:The Science and Practice ofPharmacy(第19版)A.R.Gennaro编著,Mack Publishing Company,Easton,PA1995中。典型地，将适量的药学上可接受的盐用于制剂中以使所述制剂等渗。药学上可接受的载体的实例包括但不限于生理盐水、林格氏溶液（Ringer's solution）以及右旋糖溶液。溶液的pH值可以是约5至约8，并且更优选地是约7至约7.5。另外的载体包括持续释放制剂，如含有肽的固体疏水性聚合物的半透性基质，所述基质呈成型物品形式，所述成型物品例如是膜、脂质体、纳米粒子或微粒。对于本领域技术人员来说清楚的是，某些载体可能是更优选的，这取决于例如施用途径和所施用的组合物的浓度。
[0409] 药物载体为本领域技术人员所知。这些药物载体最典型地是用于向人类施用药物的标准载体，包括溶液，如无菌水、生理盐水、林格氏溶液、右旋糖水溶液、平衡盐溶液以及具有生理pH值的缓冲溶液。所使用的药物载体还可以是例如固体、液体或气体。固体载体的实例包括乳糖、白土、蔗糖、滑石、明胶、琼脂、果胶、阿拉伯胶、硬脂酸镁以及硬脂酸。液体载体的实例是糖浆、花生油、橄榄油以及水。气体载体的实例包括二氧化碳和氮气。
[0411] 用于肠胃外施用的制剂包括无菌水性或非水性溶液、悬浮液以及乳液。非水性溶剂的实例是丙二醇、聚乙二醇、植物油如橄榄油，以及可注射有机酯如油酸乙酯。水性载体包括水、醇性/水性溶液、乳液或悬浮液，包括生理盐水和缓冲介质。肠胃外媒介物包括氯化钠溶液、林格氏右旋糖、右旋糖以及氯化钠、乳酸林格氏液（lactated Ringer's）或非挥发性油。静脉内媒介物包括体液和营养补充剂、电解质补充剂（如基于林格氏右旋糖的电解质补充剂）等。还可能存在防腐剂和其它添加剂，例如像抗微生物剂、抗氧化剂、螯合剂以及惰性气体等。
[0412] 用于局部施用的制剂可能包括软膏剂、洗剂、乳膏剂、凝胶剂、滴剂、栓剂、喷雾剂、液体以及粉剂。常规的药物载体、水性、粉末或油性基质、增稠剂等可能是必需的或合乎需要的。
[0413] 在制备用于口服剂型的组合物时，可以使用任何适宜的药物介质。例如，可以使用水、二醇、油、醇、调味剂、防腐剂、着色剂等形成口服液体制剂，如悬浮液、酏剂以及溶液；但是可以使用如淀粉、糖、微晶纤维素、稀释剂、成粒剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂等的载体形成如散剂、胶囊以及片剂的口服固体制剂。片剂和胶囊因它们易于施用而是使用固体药物载体的优选口服剂量单位。任选地，片剂可以通过标准水性或非水性技术来包衣。
[0414] 一些组合物有可能以药学上可接受的酸加成盐或碱加成盐形式施用，所述盐是通过与无机酸，如盐酸、氢溴酸、高氯酸、硝酸、硫氰酸、硫酸以及磷酸；和有机酸，如甲酸、乙酸、丙酸、乙醇酸、乳酸、丙酮酸、乙二酸、丙二酸、丁二酸、顺丁烯二酸以及反丁烯二酸反应，或通过与无机碱，如氢氧化钠、氢氧化铵、氢氧化钾；和有机碱，如单烷基胺、二烷基胺、三烷基胺和芳基胺以及取代的乙醇胺反应而形成的。
[0415] 本文所述的某些物质、化合物、组合物以及组分可以商购获得或可以容易地使用本领域技术人员一般已知的技术加以合成。
[0416] b.剂量
[0417] 用于施用本文所述的组合物的有效剂量和时程可以凭经验来确定，并且进行所述确定在本领域的技术范围内。施用组合物的剂量范围是足够大以产生能够影响病症的症状的所需作用的剂量范围。所述剂量不应如此大以致引起不良副作用，如不希望有的交叉反应、过敏反应等。一般来说，剂量将随患者的年龄、情况、性别以及血管相关黄斑病或其症状的程度、施用途径，或在方案中是否包括其它药物而变，并且可以由本领域技术人员确定。在存在任何禁忌症的情况下，剂量可以由单独的医师加以调整。剂量可以发生变化并且可以以每天一次或多次剂量施用形式来施用，持续一天或数天。关于给定类别的药物产品（尤其是肽）的适当剂量的指导可以见于文献中。这种指导的实例可以见于整个文献中。
[0418] 在一个方面，剂量水平可以是每天约0.1至约250mg/kg；更优选地是每天0.5至100mg/kg。适合的剂量水平可以是每天约0.01至250mg/kg、每天约0.05至100mg/kg或
每天约0.1至50mg/kg。在这个范围内，剂量可以是每天0.05至0.5、0.5至5.0或5.0至
50mg/kg。对于口服施用，组合物优选地以片剂形式提供，所述片剂含有1.0至1000毫克活性成分，具体地含有1.0、5.0、10、15、20、25、50、75、100、150、200、250、300、400、500、600、
750、800、900以及1000毫克的活性成分以根据症状对所治疗的患者的剂量进行调整。可以根据每天1至4次，优选地每天一次或两次的方案施用化合物。可以对这种给药方案进行调整以提供最优的治疗反应。
每天约0.1至50mg/kg。在这个范围内，剂量可以是每天0.05至0.5、0.5至5.0或5.0至
50mg/kg。对于口服施用，组合物优选地以片剂形式提供，所述片剂含有1.0至1000毫克活性成分，具体地含有1.0、5.0、10、15、20、25、50、75、100、150、200、250、300、400、500、600、
750、800、900以及1000毫克的活性成分以根据症状对所治疗的患者的剂量进行调整。可以根据每天1至4次，优选地每天一次或两次的方案施用化合物。可以对这种给药方案进行调整以提供最优的治疗反应。
[0419] 然而，应了解，用于任何具体患者的特定剂量水平将取决于多种因素。所述因素包括患者的年龄、体重、一般健康情况、性别以及膳食。其它因素包括施用时间和途径、排泄率、药物组合以及接受疗法的具体疾病的类型和严重度。
[0420] .阵列
[0421] 本文还描述了如下的阵列，所述阵列包含能够与HTRA1或ARMS2或者变体HTRA1或ARMS2编码核酸特异性杂交的多核苷酸。例如，描述了如下的阵列，所述阵列包含能够与本文表1和图39-42中所述的一个或多个风险性或保护性SNP特异性杂交的多核苷酸。还公开了如下的阵列，所述阵列包含能够与本文表1和图39-42中所述的一个或多个风险性或保护性SNP中的一个或多个特异性杂交的多核苷酸。
[0422] 本文还描述了固体支撑物，所述固体支撑物包含能够与HTRA2或ARMS2或者变体HTRA1或ARMS2肽特异性杂交的一种或多种多肽。
[0423] 固体支撑物是可以与如分析物和分析物结合分子的分子缔合的固态基质或支撑物。如钙化纳米粒子和蛋白质的分析物可以与固体支撑物直接或间接缔合。例如，分析物可以直接固定于固体支撑物上。分析物捕获剂（如捕获化合物）也可以固定于固体支撑物上。例如，本文描述了抗原结合剂，所述抗原结合剂能够与HTRA1或ARMS2或者变体HTRA1或ARMS2肽特异性结合。
[0424] 固体支撑物的优选形式是阵列。固体支撑物的另一形式是阵列检测器。阵列检测器是与多种不同的捕获化合物或检测化合物以阵列、网格或其它有组织的图案形式偶合的固体支撑物。
[0425] 用于固体支撑物中的固态基质可以包括可以与分子偶合的任何固体材料。这包括如以下各项的材料：丙烯酰胺、琼脂糖、纤维素、硝化纤维素、玻璃、聚苯乙烯、聚乙烯乙酸乙烯酯、聚丙烯、聚甲基丙烯酸酯、聚乙烯、聚氧化乙烯、聚硅酸盐、聚碳酸酯、特氟隆（teflon）、氟碳化合物、尼龙、硅橡胶、聚酐、聚乙醇酸、聚乳酸、聚原酸酯、聚反丁烯二酸丙酯、胶原蛋白、粘多糖以及聚氨基酸。固态基质可以具有任何有用的形式，包括薄膜、膜、瓶、皿盘、纤维、编织纤维、成型聚合物、粒子、珠粒、纳米粒子、微粒或组合。固态基质和固体支撑物可以是多孔的或无孔的。固态基质的优选形式是微量滴定盘，如标准96孔型。在优选实施方案中，可以使用多孔载玻片，所述多孔载玻片每孔通常含有一个阵列。这种特征允许更大程度地控制测定可重复性、增加通量和样品处理以及易于自动化。
[0426] 不同的化合物可以作为集合共同使用。该集合可以作为在单独的反应中分开使用或固定于阵列中的所有化合物或化合物子集的混合物使用。分开使用或以混合物形式使用的化合物可以经由例如与固体支撑物缔合或固定于固体支撑物上而以物理方式分离。阵列可以包括固定于阵列上所鉴定或预先确定的位置上的多种化合物。阵列上每个预先确定的位置一般可以具有一种类型的组分（即，处于所述位置的所有组分都相同）。每个位置将具有所述组分的多个拷贝。将阵列中不同的组分在空间上进行分离允许对本文所述的多核苷酸或多肽进行单独的检测和鉴定。
[0427] 虽然是优选的，但是给定的阵列不需要是单个单元或结构。化合物的集合可能分布于多个固体支撑物上。例如，在一种极端情况下，可能将每种化合物固定于单独的反应管或容器中，或固定于单独的珠粒或微粒或纳米粒子上。可以使用固定于固体支撑物上的不同组分（例如，对不同的蛋白质具有特异性的不同化合物）进行所公开方法的不同模式。
[0428] 一些固体支撑物可以具有与固态基质连接的捕获化合物，如抗体。这类捕获化合物可以对钙化纳米粒子或钙化纳米粒子上的蛋白质具有特异性。然后可以通过第二检测化合物（如抗体）的结合来检测所捕获的钙化纳米粒子或蛋白质。检测化合物可以对钙化纳米粒子上相同或不同的蛋白质具有特异性。
[0429] 用于将抗体（和其它蛋白质）固定到固态基质上的方法是已确立的。可以通过使用标准固定化学方法例如与胺化表面、羧化表面或羟基化表面连接来实现固定。连接剂的实例是溴化氰、丁二酰亚胺、醛、甲苯磺酰氯、抗生物素蛋白-生物素、光致交联剂、环氧化物以及顺丁烯二酰亚胺。优选的连接剂是异双官能交联剂N-[γ-顺丁烯二酰亚氨基丁酰氧基]丁二酰亚胺酯（GMBS）。这些和其它连接剂以及将它们用于连接的方法描述于Protein immobilization:fundamentals and applications,Richard F.Taylor编著,(M.Dekker,New York,1991)；Johnstone和Thorpe,Immunochemistry In Practice(Blackwell Scientific Publications,Oxford,England,1987) 第209-216页 和 第241-242页；以及Immobilized Affinity Ligands;Craig T.Hermanson等编著,(Academic Press,New York,1992)中，关于将抗体与固态基质连接的方法，所述文献以引用的方式整体并入本文。
可以通过使抗体上的游离氨基与固态基质内存在的反应性侧基发生化学交联来使抗体与基质连接。例如，可能分别使用戊二醛、碳化二亚胺或GMBS作为交联剂使抗体与含有游离氨基、羧基或硫基的基质发生化学交联。在这种方法中，在戊二醛或碳化二亚胺存在下将含有游离抗体的水溶液与固态基质一起孵育。
可以通过使抗体上的游离氨基与固态基质内存在的反应性侧基发生化学交联来使抗体与基质连接。例如，可能分别使用戊二醛、碳化二亚胺或GMBS作为交联剂使抗体与含有游离氨基、羧基或硫基的基质发生化学交联。在这种方法中，在戊二醛或碳化二亚胺存在下将含有游离抗体的水溶液与固态基质一起孵育。
[0430] 用于使抗体或其它蛋白质与固态基质连接的优选方法是用氨基硅烷或硫醇硅烷3
对基质进行官能化，然后使用同双官能交联剂如双-磺基-丁二酰亚氨基辛二酸酯（BS）或异双官能交联剂如GMBS使官能化的基质活化。对于使用GMBS进行交联，将玻璃基质通过在巯基丙基三甲氧基硅烷溶液（1%体积/体积的95%乙醇溶液，pH5.5）中浸渍1小时，在95%乙醇中冲洗并且在120℃下加热4小时来以化学方式官能化。将硫醇衍生化的载片通过在室温下在0.5mg/ml GMBS于1%二甲基甲酰胺、99%乙醇的溶液中浸渍1小时来活化。将抗体或蛋白质直接加入活化的基质中，然后将其用含有如2%牛血清白蛋白的试剂的溶液封闭，并且空气干燥。其它标准的固定化学方法由本领域技术人员所知。
对基质进行官能化，然后使用同双官能交联剂如双-磺基-丁二酰亚氨基辛二酸酯（BS）或异双官能交联剂如GMBS使官能化的基质活化。对于使用GMBS进行交联，将玻璃基质通过在巯基丙基三甲氧基硅烷溶液（1%体积/体积的95%乙醇溶液，pH5.5）中浸渍1小时，在95%乙醇中冲洗并且在120℃下加热4小时来以化学方式官能化。将硫醇衍生化的载片通过在室温下在0.5mg/ml GMBS于1%二甲基甲酰胺、99%乙醇的溶液中浸渍1小时来活化。将抗体或蛋白质直接加入活化的基质中，然后将其用含有如2%牛血清白蛋白的试剂的溶液封闭，并且空气干燥。其它标准的固定化学方法由本领域技术人员所知。
[0431] 固定于固体支撑物上的组分（例如化合物）各自优选地位于固体支撑物上不同的预先确定的区域中。不同的预先确定的区域中的每一个可以与其它不同区域中的每一个以物理方式分离。固体支撑物上不同预先确定的区域之间的距离可以是固定或可变的。例如，在阵列中，组分各自可能以彼此固定的距离排列，而与珠粒缔合的组分将不会呈现固定的空间关系。具体来说，使用多个固体支撑物单元（例如，多个珠粒）将会使距离可变。
[0432] 组分可能以任何密度缔合或固定于固体支撑物上。优选地以每立方厘米超过400种不同组分的密度将组分固定到固体支撑物上。组分的阵列可以具有多种组分。例如，阵列可以具有固定于固体支撑物上的至少1,000种不同的组分、固定于固体支撑物上的至少10,000种不同的组分、固定于固体支撑物上的至少100,000种不同的组分，或固定于固体支撑物上的至少1,000,000种不同的组分。
[0433] 任选地，固体支撑物上的至少一个地址是本文所述的任何核酸序列中所阐述的序列或序列的一部分。还公开了如下的固体支撑物，其中至少一个地址是本文所述的任何肽序列中所阐述的序列或序列的一部分。固体支撑物还可以含有如下的至少一个地址，所述至少一个地址是本文所述的任何核酸序列中所阐述的序列或序列的一部分的变体。固体支撑物还可以含有如下的至少一个地址，所述至少一个地址是本文所述的任何肽序列中所阐述的序列或序列的一部分的变体。
[0434] 还公开了用于对抗体反应进行多重表征的抗原微阵列。例如，公开了抗原阵列和小型化的抗原阵列，所述阵列如以下文献中所述使用亚微升（submicroliter）量的生物样品，对针对本文所述的多肽、多核苷酸以及抗体的抗体反应进行大规模多重表征：Robinson等 ,Autoantigen microarrays for multiplex characterization of autoantibody responses,Nat Med.,8(3):295-301(2002)，所述文献中关于建构并且使用抗原阵列以使用亚微升量的生物样品对针对结构上不同的抗原的抗体反应进行大规模多重表征的教导内容以引用的方式整体并入本文。
[0435] 蛋白质变体和衍生物由本领域技术人员充分了解，并且可以包括氨基酸序列修饰。例如，氨基酸序列修饰典型地分为以下三个类别中的一个或多个：取代型、插入型或缺失型变体。本文所述的多肽变体沿着它们的长度与本文所述的多肽序列典型地展现至少约70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%或更大的同一性（如下文所述来测定）。
[0436] .实施例
[0437] 提出以下实施例以向本领域技术人员提供关于如何产生并且评价本文要求保护的化合物、组合物、物品、装置和/或方法的完整公开内容和描述，并且所述实施例仅仅旨在对本发明进行示例，而非旨在限制诸位发明人所谓的其发明范围。已经努力确保数字（例如量、温度等）的准确度，但应考虑到一些误差和偏差。除非另外指明，否则份数是重量份数，温度以℃为单位或在环境温度下，并且压力是大气压或接近大气压。
[0438] 1.异常脉络膜毛细血管小叶的性质
[0439] 异常脉络膜毛细血管小叶在近红外（IR）、眼底自发荧光（AF）以及无赤光（RF）图像上的特征性呈现形式以及相应的荧光素血管造影照片（FA）和吲哚菁绿血管造影照片（ICG）描绘于图1中。可以在彩色和无赤光眼底照片/图像中观测异常脉络膜毛细血管小叶，但是通过这些技术进行观测会大体上低估了它们的广泛性。异常脉络膜毛细血管小叶在彩色和无赤光眼底照片/图像中被界定为对比度相对低的白色至黄色规则的交错网状结构。
[0440] 异常脉络膜毛细血管小叶是尤其独特的，并且与其它成像方式相比，可以通过近红外成像联合谱域光学相干断层摄影术（SD-OCT）（参见Zweifel等,2010）最清楚地显现。经过红外成像（IR）的异常脉络膜毛细血管小叶被界定为相对于具有适度高反射率的背景具有低反射率的独特的150-400um直径（或有时更小或更大）的单元（具有以及不具有独特的高反射性中心‘斑点’）（图2）。这些现在被视作病变表型随时间推移的进展过程中的独特阶段（图3和4）。
[0441] 描绘了如通过SD-OCT（Heidelberg Spectralis和其它仪器）所观测到的在视网膜下腔中异常脉络膜毛细血管小叶的一种发展性表型的特征性“位置”，所述表型由红外图像表现为环形结构（图5）。在此的一个重要发现在于在OCT图像中所观测到的‘视网膜下尖峰状物’对应于由近红外所观测到的环形小叶的中心（图5）。因此，当以三维方式投影时，应了解，异常脉络膜毛细血管小叶的分布并非如同单独在SD-OCT图像中所预测的那样是随机的，而是展现出重构了脉络膜毛细血管的大小和分布的150-400微米直径（直径有时更大或更小）的球形结构的规则图案（图5）。
[0442] 使用图像配准对通过不同的成像方式所检测到的异常脉络膜毛细血管小叶进行评估。通过不同的成像技术所观测到的单独小叶具有高度的空间相应性（图1）。使用Heidelberg HRA+OCT/Spectralis仪器对近红外反射图像中的异常脉络膜毛细血管小叶进行测量。
[0443] 荧光素和ICG血管造影照片的早期充盈时间（0.39秒和0.53秒）和晚期时间（9.38分钟和10.20分钟）展示出异常脉络膜毛细血管小叶的特征在于晚期低荧光，指示了这些脉络膜毛细血管小叶的灌注不良和/或掩蔽了荧光信号（图1和6）。重要的是，在眼底中所观测到的总体图案重构了黄斑脉络膜毛细血管解剖结构的总体图案，这与脉络膜的其它区域相比是独特的（图7）。
[0444] 不同的证据支持了以下的观测结果，异常脉络膜毛细血管小叶表示灌注不良、无灌注、死亡和/或功能障碍的黄斑毛细血管小叶。首先，单独病变的一般球形形态和大小支持了这一观点。其次，从具有黄斑异常脉络膜毛细血管小叶的患者拍摄的高分辨率OCT‘C’扫描图更精确地定义了异常脉络膜毛细血管小叶的小叶状性质和解剖结构，所述异常脉络膜毛细血管小叶的小叶状性质和解剖结构再次重构了黄斑脉络膜毛细血管的形态（图8）。
[0445] 第三，多于25名研究患者经过检查展现出异常脉络膜毛细血管小叶以中央凹为中心的‘扇形’分布（图9）。这些研究患者经常展现出正常黄斑中由以存在异常脉络膜毛细血管小叶为特征的黄斑围绕的颞侧楔状缺损（temporal wedge）。根据IGG血管造影术，脉络膜在正常黄斑区域中的充盈是正常的，而与异常脉络膜毛细血管小叶相关的黄斑的充盈是延迟的或不存在的（图9；右侧画面），另外支持了它是在异常脉络膜毛细血管小叶病变中受影响的脉络膜血管床。此外，这些扇形图案模拟了如由Hayreh（Brit J Ophthalmol59:631,1975）所表征的颞侧/黄斑脉络膜睫状后短动脉和它们相关的分水带区分布的图案（图9；插图）。
[0446] 另外的证明黄斑脉络膜毛细血管小叶变性的证据还已经从在死亡时捐献眼睛的六名犹他州（Utah）研究患者获得。所有六名患者已经在John A.Moran眼科中心（John A.Moran Eye Center，JMEC）就诊并且在死亡时间之前基于彩色、IR、AF以及无赤光图像连同相应的FA和/或ICG血管造影照片成像被确定具有异常脉络膜毛细血管小叶。这些患者当中的三名患者展现出以异常脉络膜毛细血管小叶为特征的早期AMD，而三名患者展现出与存在异常脉络膜毛细血管小叶相关联的疾病晚期阶段。这些眼睛捐献者中的一名捐献者的实例描述于本文中。这名患者在2009年2月首次就诊于JMEC，在2011年3月最后一次就诊于JMEC，并且在2011年5月死于肠梗阻。记录了先前有高血压和心肌梗塞的病史。在
2011年3月所拍摄并且描绘了异常脉络膜毛细血管小叶的存在的彩色、FA以及IR图像示出于图10中（在左面的画面中异常脉络膜毛细血管小叶是可见的；虚线表示被制成下方组织切片的区域）。除异常脉络膜毛细血管小叶之外，所述患者被诊断存在软玻璃膜疣和RPE改变。
2011年3月所拍摄并且描绘了异常脉络膜毛细血管小叶的存在的彩色、FA以及IR图像示出于图10中（在左面的画面中异常脉络膜毛细血管小叶是可见的；虚线表示被制成下方组织切片的区域）。除异常脉络膜毛细血管小叶之外，所述患者被诊断存在软玻璃膜疣和RPE改变。
[0447] 在死亡时间之后3小时又45分钟取自这名捐献者并且被打开以暴露内层的眼睛描绘于图11中。所述眼睛的特征在于在最周边存在鹅卵石样（铺路石样）变性，这是对具有异常脉络膜毛细血管小叶的患者进行表征的另一个特征。周边鹅卵石样（铺路石样）也可以由视网膜周边中的脉络膜血管床的异常变性/功能异常所引起。
[0448] 标准的组织切片（用马氏三色法染色）取自上文所述的区域，描绘于图12左侧画面中。取自于没有异常脉络膜毛细血管小叶或AMD病史的年龄匹配捐献者的切片在相同的放大倍数下描绘于图12右侧画面中。示出了300um的比例尺，代表了单个脉络膜毛细血管小叶的平均直径。意外的是，与对照捐献者相比，具有异常脉络膜毛细血管小叶的捐献者的脉络膜变得极薄。还在50名具有异常脉络膜毛细血管小叶的患者（平均厚度是115.3um）中，与50名没有异常脉络膜毛细血管小叶的患者（平均厚度是158.2um）相比较来评估黄斑脉络膜的变薄，从而为具有异常脉络膜毛细血管小叶的患者的脉络膜变薄的这种观测结果提供了另外的支持。此外，有异常脉络膜毛细血管小叶病史的捐献者的脉络膜血管，尤其是中等大小血管的丧失在这些图像中是明显的，脉络膜基质的纤维化性质也是明显的（左侧画面中暗粉红色的基质，与右侧画面中的半透明基质相比）。另外，具有异常脉络膜毛细血管小叶的捐献者的光感受器丧失是明显的。
[0449] 在更高的放大倍数下观测到多种独特的形态特征（图13）。重要的是，在临床上存在异常脉络膜毛细血管小叶的后极中的脉络膜毛细血管严重地变性（它的大部分毛细血管完全变性），支持了以下血管造影研究结果：黄斑RPD病变代表异常脉络膜毛细血管小叶（图13，左侧画面）。此外，脉络膜基质纤维化，回流小静脉扩张并且充满红血球，大部分正常的脉络膜血管构造不存在，并且视网膜展现出严重的光感受器变性（图13，左侧画面）。不存在视网膜下碎片的沉积物或视网膜下类玻璃膜疣状沉积物（图13，左侧画面）。占据中央血管层并且向脉络膜毛细血管小叶供血的小动脉经常发生透明样变并且展现出管腔减少或不存在（图13，右侧画面）。相似的毛细血管病变是脑动脉粥样硬化的特点，其中经常观测到与母血管成直角产生的小动脉壁变厚并且发生透明样变。所引起的管腔狭窄经常由高血压和/或动脉粥样硬化所引起，会影响收缩、扩张以及流速。
[0450] 2.在人类捐献者眼睛贮库中对‘异常脉络膜毛细血管小叶’进行评估
[0451] 使用包含来自于多于4,000名人类捐献者的眼睛、DNA、血液、医学以及眼科记录的贮库来确定‘异常脉络膜毛细血管小叶’（ACL）的性质并且尤其确定ACL是否表现为视网膜下碎片（也被称为视网膜下类玻璃膜疣状沉积物）。在死亡四小时内对贮库中所有眼睛中超过85%的眼睛进行处理。由视网膜专家对这个贮库中所有眼睛大体的病理学特征以及可获得的相应眼底照片和血管造影照片进行研究并且分类。根据国际AMD分级系统的修改版本（Chong等,2005）对眼底进行分类。如果捐献者在死亡时超过65岁，无黄斑病变的宏观或眼底镜下体征或任何所记录的眼科AMD病史，那么将所述捐献者分类为未患AMD。
[0452] 对于光学显微镜评估，如先前所述（Hageman等,1999），将整个后极或后极的楔状缺损固定于含4%(多聚)甲醛的100mmol/L二甲胂酸钠（pH7.4）中。在固定剂中两小时至四小时之后，将眼睛转移至100mmol/L二甲胂酸钠中并且包埋于丙烯酰胺和/或石蜡中。将跨越锯齿缘与黄斑之间的组织（在大多数情况下，在颞上象限和颞下象限中）在切片机或低温恒温器上切至6μm到8μm的厚度。
[0453] 在颞上象限中距离中央凹中心1mm至2mm和12mm至13mm的两个确定的位置上，使用环钻钻孔器获得所检查的所有眼睛的巩膜-脉络膜-RPE-视网膜的定向的4mm直径的全厚度钻孔样品。将被用于透射电子显微镜观测的钻孔样品通过在一半强度的卡氏固定剂（Karnovsky's fixative）中进行浸渍式固定至少24小时来固定。如先前所述（Chong等,2005；Hageman等,1999），将环钻钻取的样本固定，转移至100mmol/L二甲胂酸钠缓冲液（pH7.4）中，并且随后脱水，包埋于环氧树脂中，切片并且进行拍摄。在对这些显微照片进行检查后所鉴定出的任何类型的视网膜下碎片被包括为‘视网膜下类玻璃膜疣状沉积物’而与量无关。
[0454] 针对视网膜下类玻璃膜疣状沉积物的存在，对人类捐献者贮库中存在有光学显微照片和电子显微照片的所有眼睛进行研究。贮库中可获得光学显微照片和电子显微照片的捐献者共有2,379名。在这些捐献者当中，402名（16.9%）记录有AMD临床病史，并且1,977名（83.1%）无AMD临床病史或组织学证据。在所检查的2,379名捐献者当中，22名（0.92%）有证据显示有视网膜下碎片位于靠近RPE顶面的视网膜下腔内。在14名（3.4%）AMD捐献者以及在1,977名非AMD捐献者当中的9名（0.5%）中鉴定出视网膜下碎片。有视网膜下碎片的六名AMD捐献者是晚期病例（3名有地图状萎缩并且3名有CNV），而八名是早期疾病。数据总结于本文表2中。
[0455] 当在亚结构分辨率水平下观测时，视网膜下碎片在存在时较薄，具有相对均匀的厚度（根据Zweifel和合作者的命名，是‘平坦聚集物’），零星的并且局限于RPE的顶面。视网膜下碎片在任何病例中都没有延伸到光感受器内段或内界膜水平，也不是在任何捐献者中通过光学或电子显微镜检查所观测到的任何视锥细胞隆起。除一例（是血红素）之外，在所有病例中，所述物质包含膜碎片和光感受器外段的可鉴定部分。重要的是，视网膜下沉积物确实存在，但是它们不具有适当的大小、数目或构形分布以重构经过IR成像的异常脉络膜毛细血管病变的大小、数目或构形分布。
[0456] 表2.具有形态学上可检测的视网膜下碎片的捐献者中视网膜下类玻璃膜疣状沉积物的分布。
[0457]
[0458] 在第二种途径中，对贮库中特定地展现出临床‘网状假性玻璃膜疣’的捐献者进行评估，所述网状假性玻璃膜疣如由Klein和合作者（Klein等,2008）所定义是一种由广泛交错的带状物所构成的黄色网状结构。在死亡之前拍摄的彩色眼底照片中以及在死后的眼底后部照片中鉴定异常脉络膜毛细血管小叶，其中在一些病例中鉴定出符合所定义的标准的异常脉络膜毛细血管小叶。
[0459] 可获得大体和/或死前眼底照片的捐献者共有3,565名。在42名捐献者或所检查的全部捐献者中的1.2%中鉴定出有令人信服的证据显示存在如由Klein和合作者（2008）所定义的异常脉络膜毛细血管小叶；在这些捐献者当中，根据死前眼底照片鉴定出10名，而通过总体照片鉴定出32名。19名具有异常脉络膜毛细血管小叶的捐献者（83.3%）确定有AMD临床病史，4名（9.5%）怀疑有AMD病史，而3名（7.2%）没有AMD存在证据或病史。42名有照片证据显示存在异常脉络膜毛细血管小叶的捐献者中有30名的光学和电子显微照片可供使用；针对视网膜下碎片或‘视网膜下类玻璃膜疣状沉积物’的存在对这些捐献者进行评价。这30名异常脉络膜毛细血管小叶捐献者中仅有2名有任何证据显示存在视网膜下碎片或‘视网膜下类玻璃膜疣状沉积物’。数据总结于本文表3中。
[0460] 表3.有照片证据显示存在异常脉络膜毛细血管小叶的捐献者中视网膜下类玻璃膜疣状沉积物的分布。
[0461]
[0462] 3.仅基于彩色摄影术在爱荷华州（Iowa）和墨尔本（Melbourne）病例对照组群中对异常脉络膜毛细血管小叶进行评估
[0463] 确定包含超过2,600名AMD病例和未患AMD的年龄匹配对照的组群。
[0464] 对这个组群进行评估以确定可仅通过彩色眼底照片所检测的异常脉络膜毛细血管小叶的人口分布。在先前多项研究中已经使用这同一个组群来评估与AMD的遗传关联性（参见Hageman等,2005）。这个组群中的个体具有欧美血统，年龄超过60岁，并且没有亲缘关系。AMD病例与对照在年龄方面是相匹配的。由受过专门训练的眼科医师对患者进行检查并且拍照。如先前所述（Hageman等,2005），根据标准化的分类系统（Bird等,1995；Klaver等,2001）对彩色眼底照片进行分级；在这项分析中使用针对最差眼睛作出的分类。
基于对于彩色照片所确立的标准，针对异常脉络膜毛细血管小叶存在或不存在来评估来自
2,600名受试者的眼底照片（Klein等,2008；Smith等,2009）。在2,600名研究参与者中的82名（3.2%）中鉴定出异常脉络膜毛细血管小叶。在82名具有确定的异常脉络膜毛细血管小叶的受试者当中，68名（83%）是女性而14名（17%）是男性。所有具有异常脉络膜毛细血管小叶的患者中有6.1%没有记录被诊断患有AMD，并且有2.4%出于多种原因没有进行分级。其余受试者有临床记录显示被诊断患有AMD；8.5%患有AMD（1a级），22.0%患有早期AMD（1b级、2a级、2b级以及3级），7.3%有地图状萎缩（4a级），41.5%有CNV（4b级），并且
12.2%有GA和CNV（4c级）。
基于对于彩色照片所确立的标准，针对异常脉络膜毛细血管小叶存在或不存在来评估来自
2,600名受试者的眼底照片（Klein等,2008；Smith等,2009）。在2,600名研究参与者中的82名（3.2%）中鉴定出异常脉络膜毛细血管小叶。在82名具有确定的异常脉络膜毛细血管小叶的受试者当中，68名（83%）是女性而14名（17%）是男性。所有具有异常脉络膜毛细血管小叶的患者中有6.1%没有记录被诊断患有AMD，并且有2.4%出于多种原因没有进行分级。其余受试者有临床记录显示被诊断患有AMD；8.5%患有AMD（1a级），22.0%患有早期AMD（1b级、2a级、2b级以及3级），7.3%有地图状萎缩（4a级），41.5%有CNV（4b级），并且
12.2%有GA和CNV（4c级）。
[0465] 根据彩色摄影术，约60%具有异常脉络膜毛细血管小叶的患者展现出‘虎斑状’图案，而其余40%展现出‘点状’图案。在约50%展现出‘点状’表型的个体中，小叶存在于眼底中心区域中（其余40%存在于上部区域中而10%存在于颞侧区域中）。在约70%展现出‘虎斑状’表型的个体中，它们存在于眼底的上部区域中（其余约12%存在于颞侧区域中，12%存在于中心区域中，并且其余处于鼻侧区域中）。大于70%具有在彩色眼底照片上所检测到的异常脉络膜毛细血管小叶的患者展现出晚期AMD，包括地图状萎缩和/或脉络膜新血管生成。近视与28%具有异常脉络膜毛细血管小叶的患者有关；远视和正常眼是相等分布的。然而，我们现在基于更先进的成像方式（参见关于犹他州组群的部分）已知的是，使用彩色和无赤光眼底照片/图像来检测异常脉络膜毛细血管小叶会将这种表型在患者组群中的广泛性大体上低估10倍至20倍。使用来自墨尔本大学（University of Melbourne）的病例对照组群产生相似的观测结果。这个具有超过2,000名受试者的组群中仅有105名患者在彩色照片上展现出异常脉络膜毛细血管小叶表型。再邀请这个组群中的多名患者并且使用SD-OCT成像。在最初评估时通过彩色摄影术没有展现出异常脉络膜毛细血管小叶表型的许多另外的患者通过SD-OCT展示出存在异常脉络膜毛细血管小叶表型。总起来说，这些研究提供了有关与异常脉络膜毛细血管小叶表型的临床关联性的一些信息，但是在单独使用彩色摄影术时大体上低估了这种表型在群体中的广泛性。
[0466] 4.在加纳（Ghanan）组群中对异常脉络膜毛细血管小叶进行评估
[0467] 在加纳的阿克拉（Accra），根据伦理审查委员会（Institutional Review Board）批准的方案，确定包含323名个体的病例/对照组群（77名病例、191名对照、55名不确定个体）。对这个组群进行评估以确定可仅通过彩色眼底照片所检测的异常脉络膜毛细血管小叶的人口分布。这个组群中的个体具有非洲血统，年龄超过60岁，并且没有亲缘关系。AMD病例与对照在年龄方面是相匹配的。由受过专门训练的眼科医师和工作人员对患者进行检查并且拍照。如先前所述（Hageman等,2005），根据标准化的分类系统（Bird等,1995；
Klaver等,2001）对彩色眼底照片进行分级；在这项分析中使用针对最差眼睛作出的分类。
基于对于彩色照片所确立的标准，针对异常脉络膜毛细血管小叶存在或不存在来评估来自
323名受试者（平均年龄=67岁）的眼底照片（Klein等,2008；Smith等,2009）。仅记录一名假定性异常脉络膜毛细血管小叶病例。
Klaver等,2001）对彩色眼底照片进行分级；在这项分析中使用针对最差眼睛作出的分类。
基于对于彩色照片所确立的标准，针对异常脉络膜毛细血管小叶存在或不存在来评估来自
323名受试者（平均年龄=67岁）的眼底照片（Klein等,2008；Smith等,2009）。仅记录一名假定性异常脉络膜毛细血管小叶病例。
[0468] 在整个组群中，对表1中所列的SNP基因型进行评估。分析所述组群中由42名病例和107名对照组成的一部分组群的AMD疾病关联性。使用标准卡方检验、2×2表以及双侧费雪精确检验来评估单个标记关联性。使用Haploview（http://www.broadinstitute.org/haploview）软件建构单倍型。
[0469] 5.在犹他州临床组群中对异常脉络膜毛细血管小叶广泛性/出现率进行回顾性评估
[0470] 对进入Willow数据库的所有患者进行回顾性图表审查，包括关于从2007年4月以来就诊的患者的多模态图像和临床信息。在评估中仅包括这个数据库中在2007年4月与2010年6月之间使用彩色、近红外反射以及SD-OCT成像的患者。在所述数据库中特定地筛选两组受试者：1)被诊断患有任何形式的AMD的患者；和2)被诊断有黄斑裂孔的年龄匹配患者充当对照组。
[0471] 为了纳入到分析当中，必须确定（‘异常脉络膜毛细血管小叶’）或明确地排除（‘无异常脉络膜毛细血管小叶’）联合的近红外反射和SD-OCT图像上异常脉络膜毛细血管小叶的存在。基于以下方面严格地对异常脉络膜毛细血管小叶作出诊断：1)在SD-OCT图像中存在如由Spaide（参考文献）所述的‘视网膜下尖峰状物’；和2)在IR图像中具有适当大小的实体清楚可见。记录异常脉络膜毛细血管小叶在彩色、无赤光以及AF照片中的存在，但并非用作分类标准。排除标准包括因图像品质不良而无法证实或排除异常脉络膜毛细血管小叶存在的情形、有糖尿病性视网膜病的体征、有视网膜血管阻塞的病史以及有遗传性视网膜营养不良的任何体征或病史。对于两组评估异常脉络膜毛细血管小叶的存在以及相关特征（例如位置、黄斑受累程度、疾病关联性）并且进行记录。
[0472] 对被诊断患有AMD并且通过近红外反射和SD-OCT成像的248名受试者进行鉴定。在这248名受试者中，204名（82.3%）有证据显示存在异常脉络膜毛细血管小叶，而44名（17.7%）无证据显示存在异常脉络膜毛细血管小叶。数据展示于本文表4中。所有记录有CNV的患者中有92.5%并且那些记录有地图状萎缩的患者中有97%表现出异常脉络膜毛细血管小叶。绝大多数没有异常脉络膜毛细血管小叶的患者有早期而非晚期AMD的病史。
[0473] 对被诊断有黄斑裂孔并且通过近红外反射和SD-OCT成像的97名受试者（平均年龄=72.2岁）进行鉴定。六名患者（6.2%）有证据显示存在异常脉络膜毛细血管小叶，而91名（93.8%）无证据显示存在异常脉络膜毛细血管小叶。
[0474] 对犹他州组群进行的评估揭示了异常脉络膜毛细血管小叶表型的下列特征。异常脉络膜毛细血管小叶表型严重地倾向于在女性身上出现（犹他州组群中约70%的女性以及在墨尔本确定的组群中90%的女性）。另外，约77%具有异常脉络膜毛细血管小叶的患者患有严重或晚期黄斑病，相较于没有异常脉络膜毛细血管小叶的仅37%的患者。
[0475] 表4.具有异常脉络膜毛细血管小叶的眼病的分布。
[0476]
[0477] 6.在前瞻性犹他州病例对照组群中对由SD-OCT-确定的异常脉络膜毛细血管小叶进行评估
[0478] 从门诊部招募被诊断患有所有分期的AMD的患者以及包含有黄斑裂孔和没有黄斑裂孔的受试者的年龄匹配对照组。所有研究遵循赫尔辛基宣言（Declaration of Helsinki）的宗旨。在说明研究的性质和可能的后果之后，从每名患者获得知情同意书。使用标准问卷记录眼科和医学病史并且对记录进行审查。采集血液样品或唾液以进行遗传分析并且采集血清以用于将来的生物标记分析。
[0479] 使用1.0%的托吡卡胺（tropicamide）和2.5%的苯肾上腺素（phenylephrine）使瞳孔放大，并且使用联合的cSLO、近红外以及SD-OCT对研究受试者进行成像。从大部分患者采集彩色眼底照片、眼底自发荧光图像以及无赤光图像。对所选择的病例进行荧光素血管造影术、吲哚菁绿血管造影术、多焦ERG记录、微视野检查以及视野评估。
[0480] 为了纳入所提供的研究数据中，必须确定（有异常脉络膜毛细血管小叶型AMD；有异常脉络膜毛细血管小叶而无AMD）或者明确地排除（无异常脉络膜毛细血管小叶型AMD；无异常脉络膜毛细血管小叶对照）在联合的近红外反射和SD-OCT图像上网状图案的存在。
排除标准包括有糖尿病性视网膜病体征、有视网膜血管阻塞病史，以及有遗传性视网膜营养不良的任何体征或病史。
排除标准包括有糖尿病性视网膜病体征、有视网膜血管阻塞病史，以及有遗传性视网膜营养不良的任何体征或病史。
[0481] a.彩色眼底摄影术
[0483] b.SLO和SD-OCT成像
[0484] 使用允许同时记录cSLO和SD-OCT图像的Heidelberg HRA+OCT/Spectralis扫描激光检眼镜（Heidelberg Engineering,Heidelberg,Germany）进行高分辨率成像（Helb等,2009）。对于联合成像，对所有患者进行最低标准化成像方案，包括使用第二对独立的扫描镜（870nm；采集速度：每秒40,000次A-型扫描；扫描深度：1.8mm；数字深度分辨率：每像素约3.5μm）采集近红外反射（830nm；视野：30°×30°；图像分辨率：768×768像素）并且同时进行SD-OCT扫描。使用所含的Heidelberg软件（Spectralis Viewing Module4.0.0.0；Heidelberg Engineering）对SD-OCT扫描进行观测。使用截面对后极中的异常脉络膜毛细血管小叶病变部位进行成像，每个截面包含平均最多100次扫描。记录眼球运动并且自动校正；这使得cSLO图像与OCT图像具有像素对像素相关性。使用这种仪器的点对点相关性特征来记录近红外图像与SD-OCT图像之间的相应病变。取决于不同的模式（分别是高分辨率模式和高速模式），OCT扫描的垂直显示被放大最多四倍。因而，SD-OCT图像在垂直尺寸或Z轴上看起来高度不成比例。
[0485] c.自发荧光成像
[0486] 在相同的Heidelberg HRA+OCT/Spectralis仪器上，使用照明用的488nm蓝色激光和500nm的屏障滤光片捕捉AF图像。每个图像表示由SLO软件合成的平均6至9次扫描。
[0487] d.无赤光成像
[0488] 在相同的Heidelberg HRA+OCT/Spectralis仪器上，使用照明用的488nm蓝色激光捕捉RF图像。还使用Zeiss数字眼底照相机，使用标准化的方案获得RF图像。
[0489] e.荧光素血管造影术
[0490] 在静脉内注 射5ml的10%钠荧光素溶 液（Akorn Pharmaceuticals；LakeForest,Illinois）之后，在Zeiss眼底照相机上使用蓝色滤光片或在Heidelberg
HRA+OCT/Spectralis仪器上使用照明用的488nm蓝色激光和530nm的屏障滤光片，在最初
20秒至30秒时间内捕捉高速数字图像，继而在第1分钟、第5分钟、第10分钟并且有时在第20分钟捕捉静态照片。
HRA+OCT/Spectralis仪器上使用照明用的488nm蓝色激光和530nm的屏障滤光片，在最初
20秒至30秒时间内捕捉高速数字图像，继而在第1分钟、第5分钟、第10分钟并且有时在第20分钟捕捉静态照片。
[0491] f.吲哚菁绿血管造影术
[0492] 在 静 脉 内 注 射 2ml 至4ml 含 有 12.5mg 至25.0mg ICG 的 溶 液（Akorn Pharmaceuticals；Lake Forest,Illinois）之后，在Zeiss眼底照相机上使用蓝色滤光片或在Heidelberg HRA+OCT/Spectralis仪器上使用照明用的488nm蓝色激光和530nm的屏障滤光片，在最初20秒至30秒时间内捕捉高速数字图像，继而在第1分钟、第5分钟、第10分钟并且有时在第20分钟捕捉静态照片。
[0493] g.多焦视网膜电图
[0494] 通过多焦视网膜电图（mERG）分析眼睛的视网膜反应/敏感度。使用Veris6.3版的多焦系统（Electro-Diagnostic Imaging公司；Redwood City,CA），使用103个40°水平和35°垂直的六边形视野获得mERG反应。使用RETIscan系统（Roland
Consult,Elektrophysiologische Diagnostik Systeme,Brandenburg,Germany）对一些患者进行分析。在两个亮度级之间，遵循经过校正的短二进制m序列独立地修改要素，并且从总反应中提取所有受刺激的视网膜区域的局部反应。
Consult,Elektrophysiologische Diagnostik Systeme,Brandenburg,Germany）对一些患者进行分析。在两个亮度级之间，遵循经过校正的短二进制m序列独立地修改要素，并且从总反应中提取所有受刺激的视网膜区域的局部反应。
[0495] h.眼底受控微视野检查
[0496] 使用眼底受控微视野检查来分析眼睛的视网膜功能，使用MAIA Macuar完整性评估仪器（MAIA Macuar Integrity Assessment instrument）（Ellex；CenterVue SpA；Padova,Italy）、共焦红外检眼镜联合用于可见光投影的系统来进行所述眼底受控微视野检查以利用眼底视野检查来获得视野测量结果。使用如由制造商所提供的‘专业检查（Expert Test）’方案，利用标准37个刺激视野。使用微视野仪1（Microperimeter1，MP1；
Nidek Technologies,Padova,Italy）对一些患者进行评估，所述微视野仪允许测定适光功能的眼底受控光增加敏感度（light increment sensitivity，LIS）。整合的红外眼底照相机允许在监测器上进行实时眼底成像。除预先确定的检查网格之外，还由检查者选择眼底图像上单独的检查点；在视野检查之前捕捉眼底图像。整合的眼睛追踪系统连续地监测患者的眼球运动，从而确保解剖学标志与视野敏感度定位图之间存在精确的空间相关性。
Nidek Technologies,Padova,Italy）对一些患者进行评估，所述微视野仪允许测定适光功能的眼底受控光增加敏感度（light increment sensitivity，LIS）。整合的红外眼底照相机允许在监测器上进行实时眼底成像。除预先确定的检查网格之外，还由检查者选择眼底图像上单独的检查点；在视野检查之前捕捉眼底图像。整合的眼睛追踪系统连续地监测患者的眼球运动，从而确保解剖学标志与视野敏感度定位图之间存在精确的空间相关性。
[0497] 7.图像解释和分析
[0498] 为了对网状图案进行空间评估，同时并行研究cSLO和SD-OCT扫描图。所述分析包括在正面cSLO图像上在后极上方网状图案的构形分布和信号特征，所述网状图案是一种独特图案，可见为具有100μm与400μm之间的大致大小的圆形或椭圆形不规则结构的交错网状结构。对SD-OCT扫描图上在RPE/光感受器水平上以及在更内部的视网膜层中相应的结构变化进行评价。对于前者，根据Pircher等(2006)分析外核层的低反射性条带以下的单独条带：(1)薄高反射性条带估计可能对应于外界膜，(2)略微更厚的高反射性条带估计可能对应于光感受器层（IPRL）的内段与外段的界面，(3)薄而仅偶尔可见的高反射性条带估计可能对应于外段-RPE齿合（interdigitation），以及(4)宽高反射性条带被认为对应于RPE-布鲁赫膜复合物。
[0499] 异常脉络膜毛细血管小叶（ACL）与前瞻性病例对照组群的关联性总结于表10中。ACL与染色体10（rs10490924）风险性等位基因的关联性较高（MAF=0.434）。与染色体1风险性等位基因（rs1061170）的关联性的稳固性较低。ACL与rs10490924和rs1061170的不同纯合子组合的关联性也描绘于表10中。最显著的关联性在纯合风险性基因型（TT；69.9%至75.0%）下分离。在这个组群中，ACL偏向于在女性身上出现（66.2%），我们在迄今为止所研究的所有组群中都检测出这种关联性。最后，ACL与晚期黄斑变性表型，即地图状萎缩（4A）、CNV（4B）或两者（4C）强烈相关联。例如，所有CNV病例中有58.2%与ACL相关联。
[0500] 表10
[0501]
[0502]
[0503]
[0504]
[0505] 8.异常脉络膜毛细血管小叶的功能后果：多焦视网膜电图
[0506] 在一项研究中，进行配对样品t检验以相较于没有任何异常脉络膜毛细血管小叶的对照受试者，对在上黄斑表现有异常脉络膜毛细血管小叶的患者的上视网膜与下视网膜的多焦视网膜电图（MERG）反应（N1-P1振幅和P1潜伏期）进行比较。将每个上半环与用于分析的具有相同偏心度的下半环配对，从而形成5对。根据莱文检验（Levene's test），上视网膜组与下视网膜组之间的差异没有展示出具显著性差异并且没有违背正态性。在上半环1和2（1°-8°）中，与它们在对照眼睛中以及单独在异常脉络膜毛细血管小叶眼睛的2
上半环1中的下对应部分相比较，振幅存在显著下降（-10.26，-2.35nV/deg）。尽管在对照眼睛和异常脉络膜毛细血管小叶眼睛的上视网膜与下视网膜之间在中心（1°-8°）存在振幅差异，但是在周边几乎不存在至不存在振幅差异。对照眼睛和假性玻璃膜疣眼睛在半环3（8°至12°的偏心度）处在上视网膜与下视网膜之间展示出平均潜伏期存在显著性差异。最令人感兴趣的是，与下半环4（31.1±1.9）相比较，在异常脉络膜毛细血管小叶眼睛中上半环4（32.3±1.9）的潜伏期存在显著延迟；t(22)=3.13，p=0.005。仅在RPD眼睛中，与下半环5（31.0±2.0）相比较，上半环5（31.7±2.0）存在类似的显著延迟；t(22)=2.30，p=0.032。仅在异常脉络膜毛细血管小叶眼睛中但未在对照眼睛中发现上周边视网膜与下周边（12°至22°）视网膜相比较的这些P1-绝对时间延迟。继续进行后续的研究以证实在具有异常脉络膜毛细血管小叶的黄斑区域上存在如由MERG所评估的显著视网膜功能失调。在中心黄斑中具有广泛的异常脉络膜毛细血管小叶的患者的黄斑视网膜功能降低的一个实例（在图14的右侧画面中的暗区）示出于图14中。
上半环1中的下对应部分相比较，振幅存在显著下降（-10.26，-2.35nV/deg）。尽管在对照眼睛和异常脉络膜毛细血管小叶眼睛的上视网膜与下视网膜之间在中心（1°-8°）存在振幅差异，但是在周边几乎不存在至不存在振幅差异。对照眼睛和假性玻璃膜疣眼睛在半环3（8°至12°的偏心度）处在上视网膜与下视网膜之间展示出平均潜伏期存在显著性差异。最令人感兴趣的是，与下半环4（31.1±1.9）相比较，在异常脉络膜毛细血管小叶眼睛中上半环4（32.3±1.9）的潜伏期存在显著延迟；t(22)=3.13，p=0.005。仅在RPD眼睛中，与下半环5（31.0±2.0）相比较，上半环5（31.7±2.0）存在类似的显著延迟；t(22)=2.30，p=0.032。仅在异常脉络膜毛细血管小叶眼睛中但未在对照眼睛中发现上周边视网膜与下周边（12°至22°）视网膜相比较的这些P1-绝对时间延迟。继续进行后续的研究以证实在具有异常脉络膜毛细血管小叶的黄斑区域上存在如由MERG所评估的显著视网膜功能失调。在中心黄斑中具有广泛的异常脉络膜毛细血管小叶的患者的黄斑视网膜功能降低的一个实例（在图14的右侧画面中的暗区）示出于图14中。
[0507] 9.异常脉络膜毛细血管小叶的功能后果：眼底受控微视野检查
[0508] 在25名患者中，将异常脉络膜毛细血管小叶区域上的光感受器功能与无异常脉络膜毛细血管小叶的区域相比较。与无异常脉络膜毛细血管小叶的区域相比，异常脉络膜毛细血管小叶区域中的光感受器功能一致受损。
[0509] 10.异常脉络膜毛细血管小叶与RAP
[0510] 对犹他大学（University of Utah）的John Moran眼科中心的Willow数据库中所有被诊断有视网膜血管瘤增殖（RAP）的患者进行检查。在所观测的所有病例中，RAP与异常脉络膜毛细血管小叶的存在有关，表明这种新血管生成的特定表型可能是因形成异常脉络膜毛细血管小叶而产生。在患有AMD的患者中所观测到的脉络膜新血管生成的典型形式侵蚀穿过视网膜色素上皮并且渗入视网膜神经感觉层。相反，RAP的起源在视网膜的深层并且增殖发展到视网膜下腔中，之后与脉络膜血管网状结构相通并且形成视网膜-脉络膜吻合（Yannuzzi L.A.等,Retinal Angiomatous Proliferation in Age-related Macular Degeneration,Retina2001,21(5):416-34）。
[0511] 11.在单独使用彩色摄影术所检测的小型组群中AMD相关基因的多态现象与异常脉络膜毛细血管小叶的关联性
[0512] 最初在具有49名基于彩色照片具有异常脉络膜毛细血管小叶表型的患者的小型组群中，与先前对于AMD和对照组群所确定的基线数据相比，确定CFH（V62I，rs800292；Y402H，rs1061170）、HTRA1（启动子，rs11200638）、ARMS2（A69S，rs10490924）、C3（R102G，rs2230199）、CFB（L9H，rs4151667；R32Q，rs641153）、C2（IVS10，rs547154；E318D，rs9332739）以及APOE基因内的不同SNP的关联性。在这个组群中，10.2%的受试者是男性并且89.8%是女性，平均年龄是74.2岁并且82%患有晚期AMD。
[0513] 使用QIAamp DNA血液大量提取试剂盒（Qiagen,Valencia,CA）从外周血白细胞中分离所有受试者的基因组DNA。针对CFH（V62I，rs800292；Y402H，rs1061170）、HTRA1（启动子，rs11200638）、ARMS2（A69S，rs10490924）、C3（R102G，rs2230199）、CFB（L9H，rs4151667；R32Q，rs641153）、C2（IVS10，rs547154；E318D，rs9332739）以及APOE中的单倍型标签SNP（ht-SNP）对DNA样品进行筛选。通过TaqMan测定（Applied Biosystems,Foster City,California）使用10ng模板DNA在5μL反应物中进行基因分型。在384孔热循环仪（PTC-225,MJ Research）中的热循环条件由以下各项组成：最初在95℃下保持10分钟，继而是15秒95℃变性步骤和1分钟60℃退火和延伸步骤，历经40个循环。在7900HT快速实时PCR系统（Applied Biosystems）中对培养板进行读数。
[0514] 在异常脉络膜毛细血管小叶组群中对SNP的等位基因和基因型频率进行表征并且与先前针对具有约900名AMD病例以及400名年龄和种族匹配对照的组群所获得的关于相同SNP的数据（Hageman等,2005）相比较。通过标准卡方检验、2×2表以及双侧费雪精确检验进行统计分析。
[0515] HTRA1启动子等位基因（rs11200638）的频率在网状组群中是52%而在一般AMD组群中是40%（p<0.01）。ARMS2的风险性等位基因的相应频率是54%和41%（p<0.01）。相比之下，CFH Y402H风险性等位基因的频率在异常脉络膜毛细血管小叶组群中是56%而在一般AMD组群中是54%，并且保护性I62V等位基因的频率在异常脉络膜毛细血管小叶患者中是16%而在一般AMD组群中是15%；这些数据不具显著性。类似地，所筛选的C3和CFB SNP的等位基因频率在异常脉络膜毛细血管小叶患者与先前公布的AMD组群之间不存在显著性差异。还应指出的是，在异常脉络膜毛细血管小叶受试者的这个小型组群中女性:男性比率有所增加（10.2%男性和89.8%女性），这与在先前研究中所发现的情况相符。
[0516] 这些数据提供证据显示含有两个基因HTRA1和ARMS2的染色体10基因座与异常脉络膜毛细血管小叶的关联性强于与AMD的关联性。
[0517] 12.在经过完全成像的前瞻性犹他州病例对照组群中AMD相关基因的多态现象与异常脉络膜毛细血管小叶的关联性
[0518] 如本文在别处所述，从门诊部招募被诊断患有所有分期的AMD的患者以及包含有黄斑裂孔和没有黄斑裂孔的受试者的年龄匹配对照组并且进行成像。在犹他州组群中确定染色体1补体基因座（CFH至F13B）以及HTRA1、ARMS2、C3、CFB、C2以及APOE基因内各种SNP（图39A至39C）的关联性，所述犹他州组群包含如使用SD-OCT和IR所成像具有异常脉络膜毛细血管小叶表型的388名患者以及没有异常脉络膜毛细血管小叶的416名个体。在异常小叶组群中，39.8%的受试者是男性而60.2%是女性，平均年龄是79.7岁并且77.4%患有晚期AMD。
[0519] 使用QIAamp DNA血液大量提取试剂盒（Qiagen,Valencia,CA）从外周血白细胞中分离所有受试者的基因组DNA。针对于处于补体区（CFH至F13B）以及HTRA1、ARMS2、C3、CFB、C2以及APOE基因控制之下的SNP（图39A至39C）对DNA样品进行筛选。通过TaqMan测定（Applied Biosystems,Foster City,California）使用10ng模板DNA在5μL反应物中进行基因分型。在384孔热循环仪（PTC-225,MJ Research）中的热循环条件由以下各项组成：最初在95℃下保持10分钟，继而是15秒95℃变性步骤和1分钟60℃退火和延伸步骤，历经40个循环。在7900HT快速实时PCR系统（Applied Biosystems）中对培养板进行读数。
[0520] 在异常脉络膜毛细血管小叶组群中对SNP的等位基因频率进行表征并且与具有416名没有异常脉络膜毛细血管小叶的个体的组群相比较。通过标准卡方检验、2×2表以及双侧费雪精确检验进行统计分析（图39A至39C）。在SNP展示出显著性的情况下，建构单倍型并且计算频率。通过标准卡方检验、2×2表以及双侧费雪精确检验进行统计分析（图
40至42）。
40至42）。
[0521] HTRA1启动子风险性等位基因（rs11200638）的频率在网状组群中是44%而在无网状组群中是32%（p<0.000001）。ARMS2的风险性等位基因的相应频率是44%和30%
（p<0.0000001）。相比之下，CFH Y402H风险性等位基因的频率在异常脉络膜毛细血管小叶组群中是56%而在无网状组群中是50%（p=0.026），并且保护性CFH I62V等位基因的频率在异常脉络膜毛细血管小叶患者中是14%而在没有异常小叶的组群中是18%（p=0.020）。
所筛选的C2、C3以及CFB SNP的等位基因频率在异常脉络膜毛细血管小叶患者与没有异常小叶的组群之间不存在显著性差异。还应指出的是，在异常脉络膜毛细血管小叶受试者的这个组群中女性:男性比率偏移（39.8%的男性和60.2%的女性）与我们在其它组群中所发现的情况相符。
（p<0.0000001）。相比之下，CFH Y402H风险性等位基因的频率在异常脉络膜毛细血管小叶组群中是56%而在无网状组群中是50%（p=0.026），并且保护性CFH I62V等位基因的频率在异常脉络膜毛细血管小叶患者中是14%而在没有异常小叶的组群中是18%（p=0.020）。
所筛选的C2、C3以及CFB SNP的等位基因频率在异常脉络膜毛细血管小叶患者与没有异常小叶的组群之间不存在显著性差异。还应指出的是，在异常脉络膜毛细血管小叶受试者的这个组群中女性:男性比率偏移（39.8%的男性和60.2%的女性）与我们在其它组群中所发现的情况相符。
[0522] 这些数据提供证据表明虽然AMD相关染色体1SNP与异常脉络膜毛细血管小叶展示出显著的关联性，但染色体10基因座，尤其是两个基因HTRA1和ARMS2与异常脉络膜毛细血管小叶的关联性最强。然而，这些基因座不能解释所有异常脉络膜毛细血管小叶病例。
[0523] 13.区分异常脉络膜毛细血管小叶、GA以及CNV的A69S/Y402H基因型
[0524] 虽然染色体1和10带有与所有AMD亚型具有最强并且稳定的关联性的SNP，但尚不清楚这些基因座上的等位基因的组合如何促成AMD亚表型风险，如异常脉络膜毛细血管小叶。所述数据表明这两个主要基因座上基因型或双倍型的组合是区分AMD亚表型的因素。明确的是，具有A69S与Y402H的特定基因型组合可能会展示出存在如异常脉络膜毛细血管小叶的表型的风险更大。通过对基于这两个基因座中的每一个上等位基因的组合的风险进行标准化和排序，变得清楚的是，染色体10A69S变体（rs10490924）的风险性等位基因驱动ACL风险的程度大于染色体1上的风险性等位基因（rs1061170）。ACL的最大风险是染色体10上具有纯合风险性的任何双倍型，这是个明显的事实。参见图38。
[0525] 14.HTRA1眼部基因表达
[0526] 在有眼部AMD病史和没有眼部AMD病史的人类捐献者眼睛的RPE-脉络膜复合物中评估HTRA1基因表达。从获自爱荷华大学（University of Iowa）的狮子会眼库（Lion's Eye Bank）或俄勒冈州（Oregon）狮子会眼库的人眼分离RPE-脉络膜和视网膜样品。通过视网膜专家使用大体病理学特征以及可获得时相应的眼科病史（包括眼底照片和血管造影照片）对获自爱荷华的眼睛进行分类。使用柱上消化以及Qiagen RNeasy制备法（Qiagen公司,Valencia,CA）纯化无DNA的RNA。使用Agilent人类全基因组4×44K原位寡核苷酸
阵列（G4112F，Agilent Technologies公司,Santa Clara,CA），根据制造商的方法进行整体转录组谱分析。数据处理方法以及另外的技术信息提供于Newman AM等（Systems-level analysis of age-related macular degeneration reveals global biomarkers and phenotype-specific functional networks,Genome Med2012,24;4(2):16）中。 样 品信息、详细的微阵列方法以及微阵列数据可通过基因表达综合数据库（Gene Expression Omnibus）（登录号：GSE29801）获得。
阵列（G4112F，Agilent Technologies公司,Santa Clara,CA），根据制造商的方法进行整体转录组谱分析。数据处理方法以及另外的技术信息提供于Newman AM等（Systems-level analysis of age-related macular degeneration reveals global biomarkers and phenotype-specific functional networks,Genome Med2012,24;4(2):16）中。 样 品信息、详细的微阵列方法以及微阵列数据可通过基因表达综合数据库（Gene Expression Omnibus）（登录号：GSE29801）获得。
[0527] 黄斑外区域和黄斑区域中的HTRA1表达数据呈现于图17和18中所示的图表中。基于疾病状态（在上部图表中，是AMD分级[GA、CNV、MD1MD2]和对照[未标记]，而在中间图表中，是AMD和对照）以及染色体10rs11200638SNP的基因型（‘A’是风险性等位基因而‘G’是非风险性等位基因）描绘表达数据。AMD*指示没有分级的CSMD俄勒冈州眼睛。在下部柱状图中描绘了基因型与表达水平的关联性。误差线是平均标准误差并且使用斯氏t检验确定p值。具有杂合子‘GA’的捐献者与具有纯合子非风险性‘GG’基因型的捐献者之间在黄斑外区域中的表达水平存在细微的显著性差异（p=0.015），但在黄斑区域中的表达水平不存在显著性差异。与早期AMD相比，有CNV或GA的捐献者的表达水平看似不存在任何差异。参见图17和18。
[0528] 15.产生HTRA1和ARMS2构建体/质粒
[0529] 产生经过设计以表达HTRA1-4以及ARMS2的部分的构建体。对这些构建体进行密码子优化以在细菌中高效地表达。关于所产生的所有构建体的概述，参见本文表5。在表5中对于HTRA1的每个结构域所给出的氨基酸坐标与经过密码子优化的核苷酸序列SEQ ID NO.9有关。通过对蛋白质表达进行蛋白质印迹分析来对这些构建体进行测试。简单地说，将未经过诱导和经过诱导（用IPTG诱导3小时）的细胞沉淀物重悬于1×样品缓冲液中并且将其煮沸，持续20分钟，继而进行离心。对于SDS-PAGE，每个泳道上样5μl样品。然后将凝胶转移至硝化纤维素膜上并且使用含5%脱脂乳的PBS-Tween20（PBST）封闭。随后使用与HRP缀合的抗His抗体（1:2000）对膜进行探测并且使用ECL试剂（SuperSignalWest Dura Chemiluminescent Substrate,Thermo，编号34076）间接地检测蛋白质。关于那些结果的概述，参见本文图4。使构建体在NEB T7表达lysY细胞中表达并且使用ITPG诱导3小时。使用抗HIS标签抗体（使HIS标签与所有融合蛋白缀合）对表达进行检测。除HTRA3（仅诱导少量蛋白）和HTRA2（未观测到条带）之外，对所有构建体的预期条带进行鉴定。将经过密码子优化的HTRA2和HTRA3克隆到另外的载体中。
[0530] 表5：HTRA1和ARMS2构建体/质粒
[0531]
[0532]
[0533]
[0534] 16.生HTRA1和ARMS2腺病毒构建体
[0535] 使用ViraQuest设计并且建构下列腺病毒构建体：具有Myc-HIS标签和没有Myc-HIS标签的HTRA1；具有Myc-HIS标签和没有Myc-HIS标签的HTRA1-S328A（无蛋白水解活性）；以及具有Myc-HIS标签和没有Myc-HIS标签的ARMS2。关于所产生的腺病毒构建体的概述，参见本文表6。产生的所有构建体具有全长人类HTRA1和ARMS2序列（分别是SEQ ID NO.10和11）并且将其克隆到pVQAd CMV载体中。所有六种腺病毒构建体的病毒颗粒均被接纳。
[0536] 表6：HTRA1和ARMS2腺病毒构建体
[0537]
[0538]
[0539] 17.用Arctic Express DE3细胞对HTRA1进行表达和纯化
[0540] 使用Arctic Express DE3细胞来表达GeneArt HTRA1质粒。在先前试图使用多种不同色谱策略对HTRA1进行纯化中已经观测到污染蛋白的聚集和共洗脱。研究用于防止聚集物/使聚集物溶解的方法。将HTRA1IMAC洗脱部分浓缩约十倍并且在SEC柱上运行。在色谱图上拆分多个峰。在使用SDS-PAGE和蛋白质印迹进行分析时在所有峰中观测到HTRA1，但共洗脱的蛋白质在不同峰中是有所不同的。HTRA1在任何峰中并未洗脱成单个条带。对多种试剂进行评价以观测它们是否将破坏聚集物：0.05%Brij-35（非离子型洗涤剂）、200mM MgSO4（Kosmotrope）、100mM CaCl2以及1M脲（离液剂）。将所有试剂加入IMAC洗脱物中，然后使其穿过30,000mw截留过滤器。在每种情况下，所有蛋白质都被保留，包括预期会穿过膜的低分子量蛋白质。
[0541] 先前针对HTRA1纯化已经尝试过苯甲脒柱。观测到多种污染物，并且HTRA1蛋白从溶液中沉淀出。沉淀可能因pH值发生改变以洗脱蛋白质（pH3），然后中和酸性pH值（pH9三羟甲基氨基甲烷）所引起。HTRA1的理论pI是8.09。在洗脱份管中使用更低pH8.2三羟甲基氨基甲烷缓冲液重复苯甲脒柱实验。所添加的体积使得最终pH值是7.4并且避免经过HTRA1的pI。在这次操作中没有观测到沉淀物。
[0542] 遵循由Strategene提供的方案，使Arctic Express细胞生长并且对其进行诱导。将细胞沉淀物储存于-80℃下。将融化的沉淀物重悬于含有Benzonase核酸酶的蛋白质样品缓冲液中并且使用Avestin均质器溶解。在离心之前添加CHAPS（最终10mM）并且将澄清的溶解产物在固定的金属离子亲和柱（IMAC）上运行，继而使用咪唑进行蛋白质洗脱。通过SDS-PAGE使用Sypro染色剂（BioRad），或通过免疫印迹使用HTRA1抗体#1693（1:1000稀释并且曝光3分钟）对洗脱部分进行分析。将IMAC洗脱物与苯甲脒琼脂糖凝胶在4℃下一起孵育1小时。将浆料放入BioRad柱中并且用结合缓冲液洗涤。使用含20mM对氨基苯甲脒的结合缓冲液洗脱蛋白质。关于HTRA1表达和纯化结果，参见本文图5。
[0543] 产生经过设计以表达单独结构域以及结构域的特定组合的HTRA1表达构建体。使用这些构建体来测试抗体的特异性并且产生蛋白质以进行晶体结构测定。关于这些HTRA1表达构建体的概述，参见本文表7。在表7中对于HTRA1的每个结构域所给出的氨基酸坐标与经过密码子优化的核苷酸序列SEQ ID NO.9有关。
[0544] 表7：HTRA1表达
[0545]
[0546] 18.ARMS2的表达和纯化
[0547] 使用针对ARMS2的42-58抗体进行的蛋白质印迹分析展示ARMS2表达构建体在Invitrogen DE3细胞中未表达。BL21AI细胞展示大部分ARMS2处于细胞溶解产物的不溶性部分中，而仅有少量可见于可溶性部分中。使用NiNTA磁珠提取可溶性ARMS2并且使用
150mM咪唑洗脱。由于ARMS2的不可溶性，所以将ARMS2克隆到具有硫氧还蛋白标签和肠激酶裂解位点的载体（Invitrogen）中。使培养物在DE3细胞中生长，使用1mM IPTG诱导并且在诱导后4小时收集。在经过考马斯（coomassie）染色的SDS-PAGE凝胶上，全细胞溶解产物展示出具有23KDa的预期分子量的强条带，而在预先诱导的对照中没有观测到条带。使用抗ARMS2抗体，蛋白质印迹也得到强23KDa信号。关于ARMS2表达和纯化结果的概述，参见本文图6。
150mM咪唑洗脱。由于ARMS2的不可溶性，所以将ARMS2克隆到具有硫氧还蛋白标签和肠激酶裂解位点的载体（Invitrogen）中。使培养物在DE3细胞中生长，使用1mM IPTG诱导并且在诱导后4小时收集。在经过考马斯（coomassie）染色的SDS-PAGE凝胶上，全细胞溶解产物展示出具有23KDa的预期分子量的强条带，而在预先诱导的对照中没有观测到条带。使用抗ARMS2抗体，蛋白质印迹也得到强23KDa信号。关于ARMS2表达和纯化结果的概述，参见本文图6。
[0548] 进行另外的HTRA1和ARMS2表达实验。将HEK293细胞培养于具有5%胎牛血清和1mM Glutamax的Advanced MEM中。在转染当天，在PBS中洗涤细胞，用0.25%
7
胰蛋白酶处理并且以4×10 个细胞/毫升重悬于电穿孔缓冲液‘R’中。将10μg的
编 码 pCMV6-Entry-MycDDK、pCMV6-HTRA1-MycDDK（Origene，目 录 号 RC222362） 或pCMV6-ARMS2-MycDDK（Origene，目录号RC223747）的质粒DNA以10μl的体积加入100μl细胞中。使用Neon（Invitrogen）以两个脉冲在900伏或1000伏下对细胞进行电穿孔
（20ms）。作为替代方案，使用单个脉冲在1100伏下对细胞进行脉冲（20ms）。作为阴性对照，还使细胞未经过脉冲。将细胞重悬于10ml培养基中并且在37℃下孵育。在第24小
时（1000v和1100v样品）或第48小时（900v样品），在PBS中洗涤细胞并且在含有蛋白酶抑制剂混合液的0.5ml M-PER溶解缓冲液（Pierce PI-78501）中使其溶解。在离心后，通过Bradford测定对上清液中的蛋白质产率进行定量。将每个样品总共10μg蛋白质
在4%至12%NuPage凝胶（Invitrogen）上进行电泳，通过蛋白质印迹转移至硝化纤维素膜上并且在Starting Block封闭缓冲液（Pierce，编号PI-37539）中孵育1小时。使用在PBS+0.1%Tween-20中1:1000稀释的抗DDK抗体（目录号TA50011）对膜进行探测，持续1小时。在PBS+0.1%Tween-20中洗涤之后，然后使用在PBS+0.1%Tween-20中1:10,000稀释的与HRP缀合的山羊抗小鼠抗体对膜进行探测。再次，对膜进行洗涤，然后用Super Signal West Dura化学发光底物（Thermo，编号34076）进行处理。在LAS4000上将膜曝光5分钟并且成像。参见图19。
7
胰蛋白酶处理并且以4×10 个细胞/毫升重悬于电穿孔缓冲液‘R’中。将10μg的
编 码 pCMV6-Entry-MycDDK、pCMV6-HTRA1-MycDDK（Origene，目 录 号 RC222362） 或pCMV6-ARMS2-MycDDK（Origene，目录号RC223747）的质粒DNA以10μl的体积加入100μl细胞中。使用Neon（Invitrogen）以两个脉冲在900伏或1000伏下对细胞进行电穿孔
（20ms）。作为替代方案，使用单个脉冲在1100伏下对细胞进行脉冲（20ms）。作为阴性对照，还使细胞未经过脉冲。将细胞重悬于10ml培养基中并且在37℃下孵育。在第24小
时（1000v和1100v样品）或第48小时（900v样品），在PBS中洗涤细胞并且在含有蛋白酶抑制剂混合液的0.5ml M-PER溶解缓冲液（Pierce PI-78501）中使其溶解。在离心后，通过Bradford测定对上清液中的蛋白质产率进行定量。将每个样品总共10μg蛋白质
在4%至12%NuPage凝胶（Invitrogen）上进行电泳，通过蛋白质印迹转移至硝化纤维素膜上并且在Starting Block封闭缓冲液（Pierce，编号PI-37539）中孵育1小时。使用在PBS+0.1%Tween-20中1:1000稀释的抗DDK抗体（目录号TA50011）对膜进行探测，持续1小时。在PBS+0.1%Tween-20中洗涤之后，然后使用在PBS+0.1%Tween-20中1:10,000稀释的与HRP缀合的山羊抗小鼠抗体对膜进行探测。再次，对膜进行洗涤，然后用Super Signal West Dura化学发光底物（Thermo，编号34076）进行处理。在LAS4000上将膜曝光5分钟并且成像。参见图19。
[0549] 19.生HTRA1和ARMS2抗体
[0550] 产生多克隆抗体以区分不同的HTRA1和ARMS2蛋白质。基于结构设计HTRA1和ARMS2的表位。使用HTRA1和ARMS2蛋白质中的六个表位在家兔中产生抗血清。在28天时间内，通过三次注射使家兔免疫。在第35天和第40天进行取血并且使用ELISA来测定滴度。在第68天第四次使动物免疫，在第78天放血，采集血液并且通过亲和纯化，使用由被用作免疫原的相同肽制成的柱来制备抗体。关于这些抗体产生数据的概述，参见本文表8。
[0551] 表8：HTRA1和ARMS2抗体产生
[0552]
[0553]
[0554] 在经过设计以识别特定结构域的五种HTRA1-定向抗体当中，所有五种都检测到血清中的HTRA1。ARMS2抗体检测到由细菌表达的ARMS2蛋白。将血清样品从-80℃的储存处移出并且在冰上融化。使用PBS以及等体积的含有50mMDTT的2×样品缓冲液（还原
条件）或不含DTT的样品缓冲液（非还原条件）将每个样品1/40稀释。在95℃下使样品变性7分钟，继而在4℃下使样品变性5分钟。制备重组HtrA1蛋白的样品作为阳性对照。将样品连同MagicMark分子量标记（Invitrogen）一起上样于4%-12%Bis-TrisNuPage凝胶（Invitrogen）上。使凝胶在含有抗氧化剂的MES电泳缓冲液中在200V下进行跑胶，持续
35分钟。在含有15%甲醇的转移缓冲液中，通过蛋白质印迹在30V下将蛋白质转移至硝化纤维素膜上，持续1小时。在Starting Block封闭缓冲液（Pierce，编号PI-37539）中将膜封闭1小时。在室温下，使用在PBS+0.1%Tween-20中1:1000稀释的一抗对膜进行探测，持续1小时。在PBS+0.1%Tween-20中洗涤之后，然后使用在PBS+0.1%Tween-20中1:10,000稀释的与HRP缀合的二抗对膜进行探测。最后，对膜进行洗涤，并且用Super Signal West Dura化学发光底物（Thermo，编号34076）进行处理。在FujiFilmLAS-4000分析器上将膜曝光不同的时间并且进行成像。关于HTRA1和ARMS2检测数据的概述，参见本文表9和图
20。
条件）或不含DTT的样品缓冲液（非还原条件）将每个样品1/40稀释。在95℃下使样品变性7分钟，继而在4℃下使样品变性5分钟。制备重组HtrA1蛋白的样品作为阳性对照。将样品连同MagicMark分子量标记（Invitrogen）一起上样于4%-12%Bis-TrisNuPage凝胶（Invitrogen）上。使凝胶在含有抗氧化剂的MES电泳缓冲液中在200V下进行跑胶，持续
35分钟。在含有15%甲醇的转移缓冲液中，通过蛋白质印迹在30V下将蛋白质转移至硝化纤维素膜上，持续1小时。在Starting Block封闭缓冲液（Pierce，编号PI-37539）中将膜封闭1小时。在室温下，使用在PBS+0.1%Tween-20中1:1000稀释的一抗对膜进行探测，持续1小时。在PBS+0.1%Tween-20中洗涤之后，然后使用在PBS+0.1%Tween-20中1:10,000稀释的与HRP缀合的二抗对膜进行探测。最后，对膜进行洗涤，并且用Super Signal West Dura化学发光底物（Thermo，编号34076）进行处理。在FujiFilmLAS-4000分析器上将膜曝光不同的时间并且进行成像。关于HTRA1和ARMS2检测数据的概述，参见本文表9和图
20。
[0555] 表9：通过定向抗体检测HTRA1和ARMS2蛋白
[0556]抗体编号 靶蛋白 蛋白质结构域 氨基酸 重组蛋白 人类血清
#2414 HTRA1 IGFBP 36-49 是 弱
#1684 HTRA1 IGFBP 96-106 是
#1688 HTRA1 Kazal 119-129 是 弱
#2413 HTRA1 Kazal 136-148 是
#1693 HTRA1 连接子-蛋白酶 155-168 是 弱
#1695 HTRA1 蛋白酶-连接子 367-379 是 是
#1694 HTRA1 PDZ 419-431 是 是
SC-15465 HTRA1 C端 是 是
SC-50335 HTRA1 C端 389-480 是 是
1685 ARMS2 NA 42-58 是 否
#2414 HTRA1 IGFBP 36-49 是 弱
#1684 HTRA1 IGFBP 96-106 是
#1688 HTRA1 Kazal 119-129 是 弱
#2413 HTRA1 Kazal 136-148 是
#1693 HTRA1 连接子-蛋白酶 155-168 是 弱
#1695 HTRA1 蛋白酶-连接子 367-379 是 是
#1694 HTRA1 PDZ 419-431 是 是
SC-15465 HTRA1 C端 是 是
SC-50335 HTRA1 C端 389-480 是 是
1685 ARMS2 NA 42-58 是 否
[0557] 20.H TRA1的血清水平与AMD
[0558] 对源自于患有AMD和未患AMD的受试者的血清和血浆样品中HTRA1和任何潜在HTRA1肽的分布进行研究。使用六种可商购获得的结构域特异性HTRA1-定向抗体对每个基因型组中的10名AMD受试者以及10名对照受试者的样品进行评价。
[0559] 将血清样品从-80℃的储存处移出并且在冰上融化。在PBS中将2μL的每个样品稀释100倍以使用微板Coomassie Plus蛋白质测定（Coomassie Plus Protein Assay，Pierce）进行蛋白质浓度测定。然后用PBS稀释每个样品以在150μL中达到2μg/μL的最终蛋白质浓度。将等体积的含有DTT（最终50mM）的2×样品缓冲液以及内标蛋白FUS1（最终每个泳道1ng）加入每个样品中。将样品在PCR培养板中分成2×150μL等分部分并且加载于MJ Research PCR仪器中，并且在95℃下使其变性7分钟，继而在4℃下变性5分钟。然后将每个样品分成12.5μl的等分部分，储存于-80℃下。通过收集表达人类重组HtrA1蛋白的HEK293细胞的细胞培养上清液来制备HtrA1蛋白的样品作为阳性对照。将
总共208μl的48小时上清液与25μl的500mM二硫苏糖醇和75ml的4X样品缓冲液混
合。在95℃下使混合物变性7分钟，之后上样于凝胶上。为了通过SDS-PAGE分离蛋白质混合物，在95℃下使血清样品变性7分钟。将总共10μl的血清样品连同10μl的HtrA1阳
性对照和分子量标记一起上样于4%-12%Bis-TrisNuPage凝胶（Invitrogen）上。使凝胶在含有抗氧化剂的MES电泳缓冲液中在200V下进行跑胶，持续35分钟。在含有15%甲醇的
转移缓冲液中，通过蛋白质印迹在30V下将蛋白质转移至硝化纤维素膜上，持续1小时。在Starting Block封闭缓冲液（Pierce，编号PI-37539）中将膜封闭1小时。在室温下，使用在PBS+0.1%Tween-20中1:1000稀释的一抗对膜进行探测，持续1小时。在PBS+0.1%Tween-20中洗涤之后，然后使用在PBS+0.1%Tween-20中1:10,000稀释的与HRP缀合的二抗对膜进行探测。再次，对膜进行洗涤，然后用Super Signal West Dura化学发光底物（Thermo，编号34076）进行处理。在LAS4000上将膜曝光不同的时间并且成像。参见图21。通过蛋白质印迹使用以下抗体对来自具有不同基因型的患者的血清样品进行分析：A-SC-15465（左侧）、SC-50335（右侧）；B-NEP-1688（左侧）、NEP-1693（右侧）；C-NEP-1694（左侧）、NEP-1695（右侧）；D-NEP-2414。
总共208μl的48小时上清液与25μl的500mM二硫苏糖醇和75ml的4X样品缓冲液混
合。在95℃下使混合物变性7分钟，之后上样于凝胶上。为了通过SDS-PAGE分离蛋白质混合物，在95℃下使血清样品变性7分钟。将总共10μl的血清样品连同10μl的HtrA1阳
性对照和分子量标记一起上样于4%-12%Bis-TrisNuPage凝胶（Invitrogen）上。使凝胶在含有抗氧化剂的MES电泳缓冲液中在200V下进行跑胶，持续35分钟。在含有15%甲醇的
转移缓冲液中，通过蛋白质印迹在30V下将蛋白质转移至硝化纤维素膜上，持续1小时。在Starting Block封闭缓冲液（Pierce，编号PI-37539）中将膜封闭1小时。在室温下，使用在PBS+0.1%Tween-20中1:1000稀释的一抗对膜进行探测，持续1小时。在PBS+0.1%Tween-20中洗涤之后，然后使用在PBS+0.1%Tween-20中1:10,000稀释的与HRP缀合的二抗对膜进行探测。再次，对膜进行洗涤，然后用Super Signal West Dura化学发光底物（Thermo，编号34076）进行处理。在LAS4000上将膜曝光不同的时间并且成像。参见图21。通过蛋白质印迹使用以下抗体对来自具有不同基因型的患者的血清样品进行分析：A-SC-15465（左侧）、SC-50335（右侧）；B-NEP-1688（左侧）、NEP-1693（右侧）；C-NEP-1694（左侧）、NEP-1695（右侧）；D-NEP-2414。
[0560] 在图21中，HtrA1条带的强度在不同的印迹上有所不同。为了确定这是否归因于具有不同基因型的HtrA1的水平的差异，或这是否归因于将蛋白质转移至硝化纤维素的效率的差异，在每个基因型组中选择2个样品并且在相同的蛋白质印迹中进行操作。使用抗-HtrA1抗体进行探测未能证明不同基因型组之间在HtrA1水平方面存在差异。因此，图21中所示的差异可能归因于转移效率。参见图22。
[0561] 另外，在图21中，存在很多没有准确大小的条带。为了确定这是否归因于一抗或二抗的非特异性反应性，使样品在凝胶上跑胶，转移至硝化纤维素膜，使用Starting Block封闭缓冲液将膜封闭，并且单独使用二抗（在PBS+0.1%tween-20中1:10,000稀释）进行探测。作为替代方案，首先将经过封闭的膜与家兔免疫前血清一起孵育过夜，然后与在PBS+0.1%tween-20中1:10,000稀释的二抗一起孵育。结果显示在图21中所看到的大部分背景条带归因于二抗的非特异性反应性。参见图23。
[0562] 21.视网膜/RPE蛋白质提取和蛋白质印迹中检测HtrA1和ARMS2蛋白
[0563] 在死后4小时采集视网膜和RPE（钻孔样品9）并且冷冻于液氮中，并且在蛋白质提取之前储存于-80C下。在冰上使组织融化。用PBS洗涤视网膜以去除多余的玻璃体。比较三种提取缓冲液：RIPA、TPer以及SDS-PAGE样品缓冲液。将含有完全蛋白酶抑制剂的冰冷蛋白质提取缓冲液加入样品（每40mg组织1ml）中。在微量离心管中使用聚丙烯研杵将样品研磨并且离心。将上清液上样于用于蛋白质印迹的凝胶上。使用抗HTRA1抗体#1693与#1695的组合或单独使用#1695对蛋白质印迹进行探测，所有抗体都1:1000稀释。参见图24A。
[0564] 如上文所述使用RIPA缓冲液制备胎盘组织、RPE以及视网膜的提取物并且使用BCA测定试剂盒进行定量。使总共50μg至300μg蛋白质在4%-12%Bis-Tris SDS凝
胶上跑胶，通过蛋白质印迹转移至硝化纤维素膜上，并且使用不同的抗ARMS2抗体在所指示的稀释度下进行免疫印迹。作为阳性对照，也使重组ARMS2蛋白在凝胶上跑胶。使用所测试的所有抗体对重组ARMS2蛋白进行检测。由E.Kortvely等（Investigative
Ophthalmology&Visual Science51:79-88,2010）提供的ARMS2抗体检测到重组ARMS2，并且可能在RPE和胎盘中检测到具有相似大小的条带，但是所述条带极弱。参见图24B。通过免疫印迹，使用抗ARMS2抗体对来自胎盘、RPE以及视网膜组织的不同量的提取物（在括号中被指示为蛋白质的总微克数）进行分析。包括重组ARMS2蛋白（rARMS2）作为阳性对照。
如表8中所述制备NEP-1685抗体。Abcam#80266抗体是购自Abcam。
胶上跑胶，通过蛋白质印迹转移至硝化纤维素膜上，并且使用不同的抗ARMS2抗体在所指示的稀释度下进行免疫印迹。作为阳性对照，也使重组ARMS2蛋白在凝胶上跑胶。使用所测试的所有抗体对重组ARMS2蛋白进行检测。由E.Kortvely等（Investigative
Ophthalmology&Visual Science51:79-88,2010）提供的ARMS2抗体检测到重组ARMS2，并且可能在RPE和胎盘中检测到具有相似大小的条带，但是所述条带极弱。参见图24B。通过免疫印迹，使用抗ARMS2抗体对来自胎盘、RPE以及视网膜组织的不同量的提取物（在括号中被指示为蛋白质的总微克数）进行分析。包括重组ARMS2蛋白（rARMS2）作为阳性对照。
如表8中所述制备NEP-1685抗体。Abcam#80266抗体是购自Abcam。
[0565] 22.测HtrA1和ARMS2蛋白在成人和胎儿的人类组织中的表达
[0566] 对成人和胎儿组织中的HtrA1和ARMS2蛋白的性质进行研究以提供关于染色体10高优先级候选目标的表达模式和水平的基本认识。对因翻译后修饰和/或ARMS2与HtrA1之间的mRNA剪接变体所致的具有替代性大小的HtrA1（‘HtrA1片段’）进行鉴定可以提供ACL风险增加与染色体10单倍型之间的因果联系。通过对HtrA1和/或ARMS2的新型蛋白质/mRNA进行鉴定来检验这一假设。
[0567] 这些研究中所用的抗体列于本文表9中。靶向HtrA1和ARMS2的多克隆抗体的产生描述于先前报道中。简单地说，合成对应于HtrA1和ARMS2的抗原区的肽并且将其用于使家兔免疫。经由亲和柱纯化，通过使用原始肽抗原，从家兔血清中使多克隆抗体富集。组织组印迹购自BioChain公司（目录号W1234404和W1244425）。使用含2%脱脂乳（NFM）的PBS-T进行膜封闭。使用对应的抗体（1:100或1:1000）在室温下（RT）对印迹进行探测，持续1小时，或在4℃下对印迹进行探测过夜。随后在PBS-T中将印迹洗涤3×5分钟，并且添加与HRP缀合的二抗（Santa Cruz，山羊抗家兔；对于成人组织，1:10,000；而对于胎儿组织，1:5000），在室温下持续1小时或在4℃下过夜。然后在PBS-T中将印迹洗涤3×5分钟，并且使用Super Signal West Dura ECL试剂（Pierce，目录号34075）使所述印迹显影最多
10分钟。使用FujiFilm LAS4000数字成像器使印迹曝光10分钟到2小时，这取决于信号强度。使用Restore Plus蛋白质印迹剥离缓冲液（Pierce，目录号46430）对印迹进行剥离
15分钟并且使用另外的抗体重新探测最多4次而没有明显的信号损失。一些曝光更长时间的实验确实展示出因一抗不完全剥离所产生的残留信号，并且使用星号来描绘条带。为了追踪先前实验中的任何“渗透（leak-through）”，我们将印迹标记为A、B或C，并且按照探测印迹的顺序将它们依序编号为1、2、3或4。使用GAPDH作为针对印迹所测试的最终抗体以确定组织溶解产物的上样量相等并且在剥离程序期间没有无意中去除蛋白质。
10分钟。使用FujiFilm LAS4000数字成像器使印迹曝光10分钟到2小时，这取决于信号强度。使用Restore Plus蛋白质印迹剥离缓冲液（Pierce，目录号46430）对印迹进行剥离
15分钟并且使用另外的抗体重新探测最多4次而没有明显的信号损失。一些曝光更长时间的实验确实展示出因一抗不完全剥离所产生的残留信号，并且使用星号来描绘条带。为了追踪先前实验中的任何“渗透（leak-through）”，我们将印迹标记为A、B或C，并且按照探测印迹的顺序将它们依序编号为1、2、3或4。使用GAPDH作为针对印迹所测试的最终抗体以确定组织溶解产物的上样量相等并且在剥离程序期间没有无意中去除蛋白质。
[0568] 在所测试的七种HtrA1抗体当中，有四条主要的条带在约25kDa、约30kDa、约52kDa以及约70kDa处迁移。全长HtrA1的预期大小是约52kDa。其它免疫反应性条带可
能表示由翻译后修饰或HtrA1 mRNA、与ARMS2的mRNA杂交体的选择性剪接或上述任何组合所产生的不同形式的HtrA1。或者，这些抗体可能因与表位发生交叉反应以及因抗体滴度低而使得曝光时间极长而识别不同大小的条带。
能表示由翻译后修饰或HtrA1 mRNA、与ARMS2的mRNA杂交体的选择性剪接或上述任何组合所产生的不同形式的HtrA1。或者，这些抗体可能因与表位发生交叉反应以及因抗体滴度低而使得曝光时间极长而识别不同大小的条带。
[0569] 从HtrA1的N端开始，在所有胎儿的人类组织中，靶向IGFBP结构域的抗体#2414在约52kDa处检测到一条主要的条带并且在约70kDa处检测到第二条强度较低的条带。预测约52kDa是全长HtrA1蛋白。成人组织印迹仅在约25kDa至30kDa处展示出条带，在其它组织中同一地观测到所述条带。
[0570] 识别Kazal结构域的抗体#1688在胎儿组织中检测到许多条带，其中主要抗原处于约25kDa处，并且在一些组织中检测到约40kDa至50kDa的条带。在成人组织印迹中，仅骨骼肌在约52kDa处展示出阳性信号，其它所有组织的HtrA1表达都呈阴性。已经成功地使用这种抗体检测到约52kDa的重组HtrA1蛋白（1:100稀释）以及来自患者样品的还原血清样品中具有适当大小的条带。
[0571] 新产生的Kazal结构域特异性抗体#2413在多种不同的胎儿组织中与约30kDa处的主要条带和较小的条带反应。在约25kDa、约52kDa以及约70kDa处所检测到的微弱条带可能表示来自先前印迹的残留信号。成人组织印迹未展示任何阳性条带。
[0572] 靶向连接子-蛋白酶区的#1693抗体在所测试的所有胎儿组织中都检测到约70kDa的主要条带。约70kDa的稳固条带大量地表达于除脑之外所有的成人组织中。在多种成人组织中还检测到分布量较少的多个较小的条带。约70kDa的条带与HtrA1不符，但是先前使用RPE和视网膜蛋白质溶解产物进行的蛋白质印迹使用这种抗体确实检测到约
70kDa的条带。
70kDa的条带。
[0573] 抗体#1695在胎儿组织中检测到若干条带，但所识别的条带图不同一。相反，成人组织展示出极清楚的条带图，其中大部分组织展示出约30kDa的单一条带而少数组织展示出约15kDa与35kDa之间的额外条带。在先前研究中使用RPE、视网膜、脑以及血清来源的蛋白质溶解产物也检测到约30kDa的条带。在最优条件下，在还原血清样品的条件下，检测到具有适当大小的条带。
[0574] 由NEP产生的#1694抗体识别PDZ结构域（图6）。在一些胎儿组织中，所述抗体在约70kDa和约52kDa处展示出极弱的条带。在所有组织中，成人组织表达主要的约70kDa的条带，在大部分组织类型中，在约52kDa处有强度较低的条带。使用这种抗体检测到若干另外的条带。在还原条件下使用starting block封闭缓冲液作为封闭剂在患者血清样品中检测到对应于约52kDa的微弱条带。
[0575] 作为由NEP产生的多克隆抗体的比较，还测试了可商购获得的HtrA1多克隆抗体（Santa Cruz，SC-50335）。不同于由肽产生的NEP抗体，这种抗体是使用整个PDZ结构域作为抗原而产生的。在成人组织中，所述抗体在约70kDa和约52kDa处检测到两条主要的条带。大部分组织表达这两个条带，但包括脑在内的一些组织不表达。肝脏主要表达更大的约70kDa的条带，而据报道表达高水平HtrA1的胎盘主要表达约52kDa的蛋白质条带。
[0576] 通过蛋白质印迹法检测内源性ARMS2蛋白。使用人类胎儿组织组用抗体#1685进行的蛋白质印迹在肝脏组织中展示出约10kDa与25kDa之间的若干条带。所述组中的其它胎儿组织都未展示出阳性信号。成人组织组在肝脏组织中确实展示出约17kDa的阳性信号。还在骨骼肌中检测到约28kDa的条带。所有其它组织的ARMS2表达都呈阴性，包括已经展示出ARMS2mRNA的胎盘在内。
[0577] 在这个初步评估中，多种HtrA1-定向抗体不识别全长的HtrA1蛋白（例如#1688、#2413以及#1695），而其它抗体可以检测全长蛋白（#2414、#1693、#1694以及SC-50335）。ARMS2-定向抗体确实在肝脏中检测到若干比预期条带略大的条带。
[0578] 23.H TRA1蛋白的弹性蛋白酶活性
[0579] HTRA1蛋白包含四个不同的模块：IGFBP、Kazal、丝氨酸蛋白酶以及PDZ（但是它们精确的结构域分界线尚未得到明确地界定），HTRA1蛋白具有多种独特的特征以将其与其它丝氨酸蛋白酶区分开来，从而使其成为实际的治疗‘靶标’。这些特征包括下列各项：1)它具有这一类别当中最小的蛋白酶结构域，含有约200个残基；2)它不具有蛋白酶结构域或识别袋的由二硫键介导的稳定化作用，这不同于所有其它丝氨酸蛋白酶；3)它并非以酶原形式合成；4)酶原活化因构象变化而发生；5)活化是可逆的；6)它含有PDZ结构域，所述PDZ结构域可能牵涉到活化过程以及底物识别；以及7)蛋白酶结构域仅与其它HtrA，而不与任何其它丝氨酸蛋白酶的相应结构域展现出高序列同源性。
[0580] HTRA1表达数据表明在源自于记录有AMD临床病史并且具有风险性HTRA1单倍型的捐献者的眼部组织中，风险性单倍型使得mRNA和蛋白质的水平增加。不同的证据表明布鲁赫膜是包含结构蛋白弹性蛋白和胶原蛋白的细胞外层，充当细胞和血管从脉络膜流出进入RPE下腔和视网膜下腔中的物理屏障。对这一屏障的破坏或损害在AMD中与视力减退相关，这经常由新血管从脉络膜生长到RPE下腔和/或视网膜下腔中所致（这个过程被称为脉络膜新血管生成或CNV）。此外，可以通过在激光凝固术之后或在进行用于人类CNVM的激光处理之后对正常猴子眼睛中的布鲁赫膜造成热损害而以实验方式诱导脉络膜新生血管膜（CNVM）形成。黄斑外激光处理在诱导CNV方面相对无效，这表明黄斑布鲁赫膜独特地对损害敏感。新近研究已经对于这种敏感性提供了假设。对患有AMD和未患AMD的人类捐献者眼睛的黄斑和黄斑外区域进行形态测定评估揭示了黄斑区域与黄斑外区域之间布鲁赫膜的含弹性蛋白层（EL）的完整性和厚度存在统计显著性差异。在所有年龄的个体中，EL在黄斑中的厚度是在周边中厚度的1/6至1/3并且在黄斑中的分布量是在周边中的分布量的1/5至1/2。重要的是，与年龄匹配对照相比，患有早期AMD的捐献者的黄斑EL的完整性和厚度显著更低（Chong等,2005）。黄斑EL的这些结构特性（薄并且多孔）在空间上对应于与AMD相关联的黄斑病变的分布并且提供强有力证据表明弹性蛋白的降解可能1)在AMD
的病理学中起关键作用并且2)是CNVM生成和生长的重要‘诱导因素’。另外的研究展示在AMD患者，尤其是处于所述疾病晚期的患者的血浆和尿中存在更高水平的弹性蛋白降解肽或EDP，这为这一概念提供了另外的支持。另外，HTRA1中在底物识别方面起关键作用的蛋白酶识别袋与弹性蛋白酶的识别袋相似。还已经展示，Kazal结构域作为蛋白质的调控区的不可缺少的部分与来自海葵的已知弹性蛋白酶抑制剂共有结构同源性。
的病理学中起关键作用并且2)是CNVM生成和生长的重要‘诱导因素’。另外的研究展示在AMD患者，尤其是处于所述疾病晚期的患者的血浆和尿中存在更高水平的弹性蛋白降解肽或EDP，这为这一概念提供了另外的支持。另外，HTRA1中在底物识别方面起关键作用的蛋白酶识别袋与弹性蛋白酶的识别袋相似。还已经展示，Kazal结构域作为蛋白质的调控区的不可缺少的部分与来自海葵的已知弹性蛋白酶抑制剂共有结构同源性。
[0581] 因此，进行研究以确定HTRA1是否使作为布鲁赫膜的主要组分的弹性蛋白降解。将重组HTRA1与经过染料标记的弹性蛋白在37℃下一起孵育2小时并且在513nm下监测
所释放的弹性蛋白肽的荧光。发现HTRA1会使经过染料标记的弹性蛋白降解。在另外的阳性对照测定中，使用不同浓度的弹性蛋白酶（从0.04纳克/孔的猪胰腺弹性蛋白酶开始）和
100纳克/孔的ProteaImmun HtrA1，通过荧光来测量HTRA1的弹性蛋白酶活性。DQ弹性蛋白底物是25ug/ml。关于结果，参见图25。
所释放的弹性蛋白肽的荧光。发现HTRA1会使经过染料标记的弹性蛋白降解。在另外的阳性对照测定中，使用不同浓度的弹性蛋白酶（从0.04纳克/孔的猪胰腺弹性蛋白酶开始）和
100纳克/孔的ProteaImmun HtrA1，通过荧光来测量HTRA1的弹性蛋白酶活性。DQ弹性蛋白底物是25ug/ml。关于结果，参见图25。
[0582] 从Sf9细胞表达并且纯化的重组HtrA1蛋白是购自ProteaImmun（目录号30600103）。除底物浓度是12.5μg/mL之外，使用荧光EnzChek弹性蛋白酶测定试剂盒（Invitrogen，目录号E12056），使用所提供的方案来测量HtrA1的弹性蛋白酶活性。以两倍稀释度，从200纳克/孔至12.5纳克/孔来滴定HtrA1浓度。以30分钟增量来测量活性，
总共持续2小时。关于结果，参见图26。
总共持续2小时。关于结果，参见图26。
[0583] 为了测试对HTRA1的弹性蛋白酶活性的抑制作用，还使HtrA1与多种蛋白酶抑制剂接触。从Sf9细胞表达并且纯化的重组HtrA1蛋白是购自ProteaImmun（目录号
30600103）。除底物浓度是12.5μg/mL之外，使用荧光EnzChek弹性蛋白酶测定试剂盒（Invitrogen，目录号E12056），使用所提供的方案来测量HtrA1的弹性蛋白酶活性。对于蛋白酶抑制剂研究，使用100纳克/孔的重组HtrA1。测试下列抑制剂的HtrA1抑制作用：抑肽酶、抑胃肽A以及大豆胰蛋白酶抑制剂（STI），所有都购自Sigma。以两倍稀释度从10μM至0.01μM滴定抑制剂浓度并且在2小时之后测量抑制百分比并且针对未处理的样品进行标准化。关于结果，参见图27。
30600103）。除底物浓度是12.5μg/mL之外，使用荧光EnzChek弹性蛋白酶测定试剂盒（Invitrogen，目录号E12056），使用所提供的方案来测量HtrA1的弹性蛋白酶活性。对于蛋白酶抑制剂研究，使用100纳克/孔的重组HtrA1。测试下列抑制剂的HtrA1抑制作用：抑肽酶、抑胃肽A以及大豆胰蛋白酶抑制剂（STI），所有都购自Sigma。以两倍稀释度从10μM至0.01μM滴定抑制剂浓度并且在2小时之后测量抑制百分比并且针对未处理的样品进行标准化。关于结果，参见图27。
[0584] 24.HTRA1建模
[0585] 将HtrA1蛋白酶结构域（蛋白质数据库ID：3NZI）与HtrA1Kazal结构域（基于海葵弹性蛋白酶抑制剂的同源模型，蛋白质数据库ID：1Y1C）建模成复合物。大带状物（中间）表示DPMFKLboroV肽，所述DPMFKLboroV肽与活性位点丝氨酸连接。
[0586] 将HtrA1蛋白酶结构域（淡蓝色，蛋白质数据库ID：3NZI）与HtrA1Kazal结构域（深蓝色，基于海葵弹性蛋白酶抑制剂的同源模型，蛋白质数据库ID：1Y1C）建模成复合物。红色带状物表示DPMFKLboroV肽（SEQ ID NO.13），所述DPMFKLboroV肽与活性位点丝氨酸连接。具体而言，使用3NZI链B残基326至340以及1TGS链Z残基193至210将HtrA1蛋白酶结构域与欧洲牛（Bos taurus）胰蛋白酶原和野猪（Sus scrofa）胰腺分泌性胰蛋白酶抑制剂的共同结构比对。然后将HtrA1Kazal同源模型重叠于1TGS链I上。使用DeepView4.0进行结构比对。使用Swiss-Model（2-4）进行同源建模。使用史密斯-沃特曼算法（Smith-Waterman algorithm）来鉴定胰蛋白酶原与HtrA1蛋白酶结构域之间的基于序列的同源性。参见图15和16。
[0587] a.HtrA1蛋白酶结构域与弹性蛋白酶同源物的结构比较
[0588] 使用结构7EST（肽Cf3-Leu-Ala-Nh-C6h4-Cf3（Tfla）与猪胰腺弹性蛋白酶的相互作用）查询NCBI结构比较工具VAST（载体比对搜索工具）。选择来自中等冗余数据集的七个结构并且与HtrA1蛋白酶结构域结构3NZI以及1TGS进行比对，所述1TGS是用于对HtrA1蛋白酶与Kazal结构域之间的复合物进行建模的与胰腺分泌性抑制剂（Kazal型）形成复合物的胰蛋白酶原的共同结构。结构比对的三个视图示出于图15和16中；结构包括
7EST、1ELT、1GI3、1AZZ、3GOV、2BZ6、1TGS、3NZI以及2HAL。
7EST、1ELT、1GI3、1AZZ、3GOV、2BZ6、1TGS、3NZI以及2HAL。
[0589] 使用结构7EST（肽Cf3-Leu-Ala-Nh-C6h4-Cf3（Tfla）与猪胰腺弹性蛋白酶的相互作用）查询NCBI结构比较工具VAST（载体比对搜索工具）。选择来自中等冗余数据集的七个结构并且与HtrA1蛋白酶结构域结构3NZI以及1TGS进行比对，所述1TGS是用于对HtrA1蛋白酶与Kazal结构域之间的复合物进行建模的与胰腺分泌性抑制剂（Kazal型）形成复合物的胰蛋白酶原的共同结构。结构比对的三个视图示出于图16中；结构包括7EST、
1ELT、1GI3、1AZZ、3GOV、2BZ6、1TGS、3NZI以及2HAL。
1ELT、1GI3、1AZZ、3GOV、2BZ6、1TGS、3NZI以及2HAL。
[0590] b.与弹性蛋白酶抑制剂同源物进行HtrA1Kazal结构域结构比较以及重新界定边界
[0591] 使用HtrA1残基114至155作为查询序列经由针对蛋白质数据库中所寄存的结构进行蛋白质BLAST来鉴定用于对HtrA1Kazal结构域进行结构建模的模板，所述查询序列是目前经由NCBI鉴定为HtrA1Kazal结构域的区域。在所有所寄存的结构当中，海葵弹性蛋白酶抑制剂结构1Y1B和1Y1C的序列与查询序列最佳匹配。1Y1B和1Y1C的氨基酸序列在所比对的区域中是同一的，所述区域跨越HtrA1残基116-155。比对统计结果是：同一性=18/40（45%）；阳性=24/40（60%）；空隙=4/40（10%）。这些分析表明HtrA1Kazal结构域充当弹性蛋白酶抑制剂，能够抑制充当弹性蛋白酶的‘蛋白酶’结构域。
[0592] 选择1Y1C结构以使用程序Swiss-Model（2-4）进行基于序列的结构比对。结构建模指示在1Y1C中存在不能使用HtrA1残基114-155形成的二硫键。将Kazal序列延伸至残基111-155（包括近侧的半胱氨酸残基在内）允许对缺失的二硫键进行建模。因此，残基111-155可能更准确地反映了HtrA1Kazal结构域的边界。
[0593] 25.HTRA1转基因小鼠
[0594] 产生在小鼠RPE中过表达人类HTRA1（hHTRA1）的转基因小鼠（hHTRA1+）。由RPE特异性人类卵黄状黄斑营养不良2（VMD2）启动子驱动转基因。为了产生HTRA1转基因，使用具有BamHI和XhoI悬垂物的引物从pcDNA3.1-CMV-VMD-hHtra1-myc-His6
扩 增1.5-kb的 人 类HTRA1cDNA（去 除TAG 终 止 密 码 子）（SEQ ID NO.12），所 述pcDNA3.1-CMV-VMD-hHtra1-myc-His6 描 述 于Jones,A. 等 ,Proc Natl Acad Sci U S A108,14578-14583(2011)中。使用具有XhoI和EcoRI悬垂物的引物从相同的模板来扩增myc-his6片段。使用BamHI和EcoRI对目的质粒pAAV-CAG-Shuttle-WPRE进行消化并且在三件连接反应（three-piece ligation reaction）中，将其与经过扩增的人类HTRA1cDNA和myc-his片段连接。随后，将人类VMD2启动子（-585bp至+38bp）作为KpnI-BamHI片段插入于HTRA1cDNA之前。对含有VMD2启动子、hHTRA1-myc-His6、旱獭转录后调控元件（WPRE）以及人类生长激素多聚腺苷酸的转基因区进行序列验证。参见图28。在犹他大学转基因/基因靶向核心设施中，通过KpnI-RsrII消化来切除转基因构建体，进行凝胶纯化，并且注射到C57BL/6×CBA胚胎中。
扩 增1.5-kb的 人 类HTRA1cDNA（去 除TAG 终 止 密 码 子）（SEQ ID NO.12），所 述pcDNA3.1-CMV-VMD-hHtra1-myc-His6 描 述 于Jones,A. 等 ,Proc Natl Acad Sci U S A108,14578-14583(2011)中。使用具有XhoI和EcoRI悬垂物的引物从相同的模板来扩增myc-his6片段。使用BamHI和EcoRI对目的质粒pAAV-CAG-Shuttle-WPRE进行消化并且在三件连接反应（three-piece ligation reaction）中，将其与经过扩增的人类HTRA1cDNA和myc-his片段连接。随后，将人类VMD2启动子（-585bp至+38bp）作为KpnI-BamHI片段插入于HTRA1cDNA之前。对含有VMD2启动子、hHTRA1-myc-His6、旱獭转录后调控元件（WPRE）以及人类生长激素多聚腺苷酸的转基因区进行序列验证。参见图28。在犹他大学转基因/基因靶向核心设施中，通过KpnI-RsrII消化来切除转基因构建体，进行凝胶纯化，并且注射到C57BL/6×CBA胚胎中。
[0595] 新的转基因hHTRA1+小鼠的表型与以下文献中所述的表型相似：Jones,A.等,Increased expression of multifunctional serine protease,HTRA1,in retinal pigment epithelium induces polypoidal choroidal vasculopathy in mice.Proc Natl Acad Sci U S A108,14578-14583(2011)，所述文献以引用的方式整体并入本文。
[0596] a.PCV表型
[0597] 根据吲哚菁绿血管造影术（ICGA），hHTRA1+小鼠（1至4个月大）在两侧展现出PCV的主要特征：1)多个小高荧光点（直径小于0.25mm），这符合微动脉瘤性扩张；2)类似于葡萄串的大息肉样病变（直径大于0.45mm）。在野生型（WT）同窝出生小鼠中没有观测到上述特征。参见图29。荧光素血管造影术（FA）是正常的，这表明那些小鼠的视网膜血管结构没有受到影响。参见图30。
[0598] b.布鲁赫膜的弹性膜降解
[0599] 根据超微结构分析，hHTRA1+小鼠的弹性膜（EL）是支离破碎的，并且穿插有大小不同的间隙。EL的降解与和AMD病变相关联的黄斑EL破坏共有密切相似性（参见Chong等,2005）。参见图31。
[0600] c.hHTRA1+小鼠的脉络膜血管的弹性膜的降解
[0601] hHTRA1+小鼠的PCV病变由受损的脉络膜血管的渗出液所引起。对hHTRA1+小鼠进行超微结构分析显示脉络膜血管显著变薄。萎缩区域中脉络膜动脉的内弹性膜和外弹性膜中的弹性蛋白含量均减少。中膜严重变性或缺失。参见图32。
[0602] 对HTRA1小鼠的布鲁赫膜和脉络膜血管的弹性蛋白降解的解释是由RPE分泌的过表达的HTRA1的蛋白酶活性引起变性。由于不知道HTRA1具有弹性蛋白酶活性，所以使用DQ弹性蛋白作为底物进行体外弹性蛋白降解测定，所述DQ弹性蛋白是一种经过猝灭式BODIPY FL染料标记的可溶性弹性蛋白。纯化的重组人类HTRA1以4.4±0.8u/mg（n=3）的比活性降解弹性蛋白。这一活性是猪胰腺弹性蛋白酶（135±5.5u/mg，n=4）的约1/30，表明HTRA1的基础弹性蛋白酶活性低。为了消除脉络膜血管和布鲁赫膜的弹性层缺乏是因弹+
性蛋白表达下调所致的可能性，我们通过蛋白质印迹分析了hHTRA1 小鼠和野生型小鼠的RPE/脉络膜中可溶性弹性蛋白的蛋白水平。弹性蛋白原（弹性蛋白的可溶性前体）的水平+
在hHTRA1 小鼠与野生型小鼠中是相似的（图37），表明弹性蛋白的生物合成没有因HTRA1+
过表达而发生改变。然而，与野生型和PCV-小鼠相比，hHTRA1-PCV+小鼠的降解的弹性蛋白产物有所增加（图31，括弧），表明弹性蛋白降解而非弹性蛋白下调有可能是在PCV+小鼠的布鲁赫膜和脉络膜血管中所观测到的病变的成因。这与在患有AMD和具有异常脉络膜毛细血管小叶的人类捐献者中所观测到的情况相似。
性蛋白表达下调所致的可能性，我们通过蛋白质印迹分析了hHTRA1 小鼠和野生型小鼠的RPE/脉络膜中可溶性弹性蛋白的蛋白水平。弹性蛋白原（弹性蛋白的可溶性前体）的水平+
在hHTRA1 小鼠与野生型小鼠中是相似的（图37），表明弹性蛋白的生物合成没有因HTRA1+
过表达而发生改变。然而，与野生型和PCV-小鼠相比，hHTRA1-PCV+小鼠的降解的弹性蛋白产物有所增加（图31，括弧），表明弹性蛋白降解而非弹性蛋白下调有可能是在PCV+小鼠的布鲁赫膜和脉络膜血管中所观测到的病变的成因。这与在患有AMD和具有异常脉络膜毛细血管小叶的人类捐献者中所观测到的情况相似。
[0603] d.HTRA1在小鼠RPE中的表达
[0604] 对人类HTRA1在小鼠RPE中的表达水平进行评价，所述表达水平是所公布的小鼠品系中HTRA1表达的50%至80%（Jones,A.等），后者是HTRA1蛋白质在人类RPE中的表达水平的5.3倍。换句话说，人类HTRA1在转基因品系的小鼠RPE中的表达水平是HTRA1蛋白在人类RPE中的表达水平的2.7倍至4.2倍。
[0605] e.阴性对照hHTRA1-S328A+小鼠
[0606] 为了对HTRA1的蛋白酶活性是它在PCV中的作用的原因的这一假设进行检验，我+ +们产生阴性对照小鼠hHTRA1-S328A。产生突变型hHTRA1-S328A 小鼠的方法与用于产生+
hHTRA1 小鼠的方法相同，不同之处在于通过基于PCR的突变诱发方法使转基因中的S328残基突变成丙氨酸。
hHTRA1 小鼠的方法相同，不同之处在于通过基于PCR的突变诱发方法使转基因中的S328残基突变成丙氨酸。
[0607] 根据ICGA，在hHTRA1-S328A+小鼠中没有证据显示存在PCV。FA也是正常的。另+外，HTRA1-S328A（品系26）在小鼠RPE中的表达水平是HTRA1在新转基因hHTRA1 小鼠中的表达水平的约3倍。
[0608] f.使用HTRA1抑制剂对hHTRA1+小鼠进行处理会逆转PCV表型
[0609] Truebestein等（Nat Struct Mol Biol18,386-388,2011）鉴 定 出 一 种 肽DPMFKLboroV（SEQ ID NO.13），所述肽经由它的C端硼酸基与HTRA1的活性位点丝氨酸共价结合（IC50=2.6μM）。由于PCV存在于脉络膜中，所以使用基于生物可降解聚合物的纳米粒子（NP）
[0610] 将DPMFKLboroV递送到hHTRA1+小鼠眼睛的后段中以实现长期持续释放。先前研究证实玻璃体内施用NP能够短暂地跨越过视网膜并且优先地定位于RPE中。在单次注射之后，NP在RPE中保留几周至几个月。使用聚乳酸/聚乳酸-聚氧化乙烯（PLA/PLA-PEO），遵循所公布的程序来制备以下两种类型的NP：1)封装有亲脂性荧光标记6-香豆素的NP；2)封装有香豆素和HTRA1抑制剂的NP。基于电子显微镜检术，NP的大小是约100nm。参见图34。
[0611] 使用1.5μL含有香豆素的NP对成年野生型小鼠进行玻璃体内注射。参见图33。在注射后第四天，NP集中于RPE和外段中。NP之后主要定位于RPE中并且在注射之后至少第36天可被检测到。与先前研究相符，与对照眼睛相比，注射NP的眼睛具有正常的视网膜构造而没有出现毒性体征。向hHTRA1+小鼠（2个月大）注射含有抑制剂和香豆素的NP或仅含有香豆素的NP。在注射抑制剂之后第十五天，病变数目显著减少。在注射对照NP的眼睛中，PCV病变仍存在。这一观测结果支持了以下假设：HTRA1的弹性蛋白酶/蛋白酶活性是PCV产生的原因。
[0612] g.感染AAV2-HTRA1的小鼠
[0613] 将含有全长编码区和C端myc-His6标签2的人类HTRA1 cDNA亚克隆到AAV穿梭载体pAAV-CAG-Shuttle-WPRE中处于CAG启动子下。参见图35。AAV2-HTRA1病毒可在商
12
业上制备。病毒滴度是7.6×10 GC/mL。如先前所述，在约2个月大时，通过视网膜下注射向CD1小鼠注射2μL的AAV2-HTRA1或对照AAV2-GFP。在注射后一个月，通过ICGA对小鼠+
进行成像。所观测到的PCV病变与hHTRA1 小鼠的病变相似。参见图36。
12
业上制备。病毒滴度是7.6×10 GC/mL。如先前所述，在约2个月大时，通过视网膜下注射向CD1小鼠注射2μL的AAV2-HTRA1或对照AAV2-GFP。在注射后一个月，通过ICGA对小鼠+
进行成像。所观测到的PCV病变与hHTRA1 小鼠的病变相似。参见图36。
[0614] 26.患有渗出性AMD的患者的基因型以及对抗VEGF疗法的反应
[0615] 从连续的针对渗出性AMD进行初始抗VEGF疗法或维持抗VEGF疗法（哌加他尼（Pegaptanib）、雷珠单抗和/或贝伐单抗）的患者中招募339名研究参与者。通过四名与研究相关的玻璃体视网膜外科医生中的一名根据2005年与2008年之间针对渗出性AMD的现行实践模式对受试者进行治疗。由参与的医师所使用的治疗策略与PRONTO研究（Fung等,2007）中所用的‘按需’治疗策略最为相似。对于在一只眼睛中进行初始抗VEGF疗法的时候所招收的受试者，前瞻性地收集所有数据。对于在维持疗法期间所招收的受试者，回顾性地收集直到对初始抗VEGF治疗进行评价之时的数据并且前瞻性地收集从招收之时以来的数据。根据下列一个或多个排除标准，排除用于本文所提供的分析的眼睛：之前使用维速达尔（Visudyne）进行光动力疗法、之前接受玻璃体内曲安西龙疗法、之前在眼周注射醋酸阿奈可他（anecortave acetate）、在开始玻璃体内抗VEGF疗法时有晚期盘状瘢痕，或随访不足以达到一个研究终点。数据收集包括视敏度、对CNV渗漏的评估（OCT上的视网膜下液或通过荧光素血管造影术来确定）、视网膜色素上皮脱离（RPED）状态（持续或消退）、彩色照片以及在使用抗VEGF治疗剂进行初始治疗后治疗一年或更长时间期间的治疗方案分析。
在Snellen或ETDRS表上测量视敏度并且将值转换成LogMar值。视力出现0.2LogMar的
变化（对应于2行改变）被认为是视力发生显著变化。主要通过光学相干断层摄影术（OCT）并且在可供使用时通过荧光素血管造影术来对CNV渗漏进行评估。使用Stratus OCT3仪器对几乎所有眼睛进行OCT。对于每次扫描，利用下列变量中的一个或多个对CNV渗漏进行评估：中心黄斑厚度、视网膜下液、视网膜内液以及RPED状态。对于一些有大量视网膜下液、大RPED或固定不良的眼睛，中心黄斑厚度测量结果是不可获得的（脱离标度尺）或因固定不良而是不可靠的。因而，需要基于定性特征（即，液体或囊肿减少或消退）而非绝对中心黄斑厚度测量结果来进行评估。
在Snellen或ETDRS表上测量视敏度并且将值转换成LogMar值。视力出现0.2LogMar的
变化（对应于2行改变）被认为是视力发生显著变化。主要通过光学相干断层摄影术（OCT）并且在可供使用时通过荧光素血管造影术来对CNV渗漏进行评估。使用Stratus OCT3仪器对几乎所有眼睛进行OCT。对于每次扫描，利用下列变量中的一个或多个对CNV渗漏进行评估：中心黄斑厚度、视网膜下液、视网膜内液以及RPED状态。对于一些有大量视网膜下液、大RPED或固定不良的眼睛，中心黄斑厚度测量结果是不可获得的（脱离标度尺）或因固定不良而是不可靠的。因而，需要基于定性特征（即，液体或囊肿减少或消退）而非绝对中心黄斑厚度测量结果来进行评估。
[0616] 根据下列四种抗VEGF反应模式中的一种来对受试者进行分类，所述反应模式是基于由PI和临床合作者所建立的严格标准：1)不需要维持疗法的早期反应者：在≤3次注射后，视敏度（VA）改善≥0.2LogMar，而不考虑视网膜/视网膜下/RPED液状态，或视网膜内/视网膜下/RPED液完全消退而VA与治疗前VA相差0.2LogMar以内。另外，这些受试者在第三次注射后未产生复发性视网膜下液，因此被指定为不需要维持疗法（即使一些研究者出于其它原因（如患者要求或单眼状态）而继续进行注射）；2)需要维持疗法的早期反应者：在≤3次注射后，视敏度（VA）改善≥0.2LogMar，而不考虑视网膜/视网膜下/RPED液状态，或视网膜内/视网膜下/RPED液完全消退而VA与治疗前VA相差0.2LogMar以内。
另外，这些受试者在每次试图停止或延长治疗时都产生复发性视网膜下液，因此被指定为在第三次注射后需要维持疗法；3)延迟的反应者：在一年时间内经过四次或更多次治疗视敏度改善≥0.2LogMar，或VA改善0.2LogMar以内（视力无变化）而视网膜内/视网膜下液消退（RPED可能持续但没有增加）；或4)无反应者：在一年时间内三次或更多次注射后，视敏度恶化≥2LogMar，或在一年时间内三次或更多次注射后，VA变化在0.2LogMar以内（视力无变化）而视网膜下液或RPED没有改变或恶化。
另外，这些受试者在每次试图停止或延长治疗时都产生复发性视网膜下液，因此被指定为在第三次注射后需要维持疗法；3)延迟的反应者：在一年时间内经过四次或更多次治疗视敏度改善≥0.2LogMar，或VA改善0.2LogMar以内（视力无变化）而视网膜内/视网膜下液消退（RPED可能持续但没有增加）；或4)无反应者：在一年时间内三次或更多次注射后，视敏度恶化≥2LogMar，或在一年时间内三次或更多次注射后，VA变化在0.2LogMar以内（视力无变化）而视网膜下液或RPED没有改变或恶化。
[0617] 通过Applied Biosystems（Foster City,CA） 5'端核苷酸酶测定、SSCP、直接测序以及分子倒置探针基因分型（Molecular Inversion Probe Genotyping，ParAllele Biosciences/Affymetrix）的组合对CFH（rs800292、rs12029785、rs551397以及rs106117）、ARMS2（rs10490923、rs2736911以及rs10490924）、C3（rs2230199）、CFB（rs415667）以及APOE基因中的SNP进行基因分型。将基因型和抗VEGF反应类别在微软电子表格系统（Microsoft Excel）中制成表格并且输入到SAS9.1.3中。使用每只有资格作为观测单位的眼睛进行分析。使用SAS程序FREQ将基因型频率制成交叉分析表。使用皮尔森卡方检验（Pearson chi-square test）来对所评估的每个SNP的分类变量和基因型频率中的每一个进行比较。使用皮尔森卡方检验和费雪精确检验来对等位基因频率进行检验。使用双侧检验计算所有P值，并且对于多重检验不进行校正。将三种反应类别（‘需要维持疗法的早期反应者’、‘不需要维持疗法的早期反应者’以及‘延迟的反应者’）单独地比较并且与‘无反应者’组合比较。使用逻辑回归分析来评价优点比以及显著基因型优点的
95%置信区间。相对于参考类别来评价分类变量的优点比。借助于SAS统计软件包9.1.3版分析数据。
95%置信区间。相对于参考类别来评价分类变量的优点比。借助于SAS统计软件包9.1.3版分析数据。
[0618] 在这项分析中包括针对渗出性AMD进行抗VEGF疗法（爱荷华大学组群）并且不具有排除标准的总共242只眼睛。意外的是，所述分析揭示了C3基因型与之前存在的渗出性AMD对使用玻璃体内抗VEGF治疗剂进行治疗的反应之间存在非常显著的（P=0.0034）关联性。具体而言，分别编码C3S（慢）和C3F（快）蛋白质亚型的常见功能性多态现象rs2230199（Arg80Gly）与在将所有三种类别的‘反应者’与‘无反应者’相比较时对治疗的反应不同相关联。个体在他们的rs2230199C3变体是GC[P=0.0016；优点比（OR）=5.48，95%置信区间（1.90-15.75）]或CC[P=0.01；OR=3.65，95%CI（1.35-9.86]的情况下更有可能对抗VEGF疗法起反应。换句话说，患者在他们携带GG基因型的情况下更有可能对使用抗VGF剂进行的疗法没有反应。在区分反应者的子类时，C3关联性在‘需要维持疗法的早期反应者’组（P=0.0004）中最为显著。
[0619] 对于所评估的CFH、CFB、ARMS2或APOE基因型中的任一个，没有观测到反应者组与无反应者组之间对治疗的反应存在关联性。然而，对于ARMS2rs10490923变体，反应者与无反应者之间有存在显著性的倾向（P=0.035）。
[0620] 27.视网膜动脉或静脉直径的比率进一步指示对异常脉络膜毛细血管小叶疾病的诊断
[0621] 使用IVAN（血管测量系统；威斯康星大学（University of Wisconsin）的眼科系（Madison,WI））在具有异常脉络膜毛细血管小叶的19名患者的眼底照片中测量视网膜动脉和静脉的直径以及这些参数的比率（A:V），所述IVAN是一种用于在数字（或数字化）视网膜图像中测量视网膜血管宽度的半自动化系统（Knudtson,MD等;Variation associated with measurement of retinal vessel diameters at different points in the pulse cycle2004;Br J Ophthalmol88:57）。进行这项研究以确定对照片中视网膜血管口径进行客观评估是否将提供特定表型所特有的心血管风险信息。计算机辅助测量结果例如显示视网膜小动脉变窄与女性的突发性冠状动脉性心脏病有关（Wong TY等,Retinal arteriolar narrowing and incident coronary heart disease in men and women:The Atherosclerosis Risk in Communities Study,JAMA2002;287:1153-59）并且与男性和女性的突发性中风和糖尿病有关（Wong TY等,Retinal microvascularabnormalities and incident stroke:The Atherosclerosis Risk in the Communities Study,Lancet2001;358:1134-40；Wong TY等,Retinal arteriolar narrowing and risk of diabetes mellitus in middle-aged persons,JAMA2002;287:2528-33；De Silva DA等,Neurology2011年8月30日;77:896-903）。
[0622] 自动化的部件包括以视神经盘为中心放置重叠的网格、血管类型鉴定以及对血管进行宽度测量。在屏幕显示器中，使用蓝色来表示静脉/小静脉（V）并且使用红色表示动脉/小动脉（A）。控制窗口上的数据表显示了所测量的每个血管的平均宽度和标准差并且通过每个血管的顺时针角度定位每个血管。血管被自动地分型为A或V；在不确定的情况下，将血管分型为A。
[0623] 手动部件包括允许撤消任何初始的自动化判定或测量的选择权。这包括调整网格的位置、改变血管类型、删除血管、重新测量血管以及添加在初始自动化时漏掉的显著血管。改进的ARIC网格由三个同心圆构成，它以平均视神经盘为中心进行划界，划分出区域A和区域B，所述区域A被界定为从视神经盘边缘至距视神经盘1/2直径处的区域，所述区域B被界定为从距视神经盘1/2视神经盘直径处至距视神经盘1个视神经盘直径处的区域。对区域B中所有的视网膜血管进行测量。IVAN经过编码以提供1800微米的具有中心圆（视神经盘直径）的网格，它的大小是根据比例因子来设定的。使用比例因子以调整由照相机光学器件、扫描器分辨率或患者位置所引入的放大倍数差异。使用配置程序来设定每个数据集（即，来自相同研究的使用相同的摄影方法所获得的图像）用于血管跟踪的参数。仅需要六个最大V和六个最大A的宽度数据以使用纳特森公式（Knudtson formula）计算A:V比率。不需要分支血管（子血管）的宽度数据。
[0624] 具有异常脉络膜毛细血管小叶的患者展现出0.88（0.60-1.48）的平均A:V比率（Scott和Jason-参见文件‘RPD_ArteryVeinRatios_2.22.10.xlsx’）。这个比率显著不同于先前对于未患AMD的患者（平均A:V=0.64）、患有早期AMD的患者（平均A:V=0.63）以及患有晚期AMD的患者（平均A:V=0.64）所公布的比率（Jeganthan V.S.E.等,Retinal Vascular Caliber and Age-related Macular Degeneration:The Singapore Malay Eye Study,Am J Ophthalmol2008,146:954-959）。
[0625] 对在彩色照片上经过检测具有异常脉络膜毛细血管小叶（仅可见于上黄斑中）的20名患者、患有AMD但不具有异常脉络膜毛细血管小叶的20名患者以及未患AMD或不具有异常脉络膜毛细血管小叶的20名患者进行初步评估。对从视神经盘出来的平均六个血管进行测量。仅在具有上异常脉络膜毛细血管小叶的患者中，上动脉（而非上静脉）相较于下动脉显著扩张。这些数据支持了以下的概念：在异常脉络膜毛细血管小叶仅存在于上黄斑中时，视网膜/脉络膜缺血，从而引起动脉扩张。
[0626] 对于本领域技术人员来说清楚的是，可以对本发明进行不同的改进和改变而不背离本发明的范围或精神。通过考虑本说明书以及实施本文所述的本发明，本发明的其它方面对于本领域技术人员来说将是清楚的。本说明书和实施例仅意在被认为是示例性的，而本发明的真实范围和精神由下列权利要求书所指示。
[0627] 在整个本申请中，参考了不同的出版物。这些出版物的公开内容以引用的方式整体并入本申请中以更充分地描述本申请所属领域的技术发展水平。所公开的参考文献当中所含的在依附于所述参考文献的语句中所论述的材料也单独并且确切地以引用的方式并入本文。本文的任何信息并不被理解为承认本发明无权凭借在先发明而早于所述出版物。另外，本文提供的出版日期可能不同于实际的出版日期，所述实际的出版日期可能需要单独确定。
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