一种免疫纳米磁珠诊断试剂盒
专利汇可以提供一种免疫纳米磁珠诊断试剂盒专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及一种免疫纳米 磁珠 诊断 试剂 盒 ，包括基底、样品垫、结合垫、 硝酸 纤维 素膜和吸 水 垫，所述的样品垫、结合垫、硝酸 纤维素 膜和吸水垫按顺序依次排列于基底上，结合垫含有免疫纳米磁珠，为将目的蛋白特异的 抗体 或 抗原 偶联于纳米 磁性 粒子形成的，硝酸纤维素膜上有检测带和对照带，检测带上有固定于膜上的与目的蛋白相应的抗体或抗原，对照带上有固定于膜上的抗体或抗抗体。用本发明技术生产的试剂盒，具有简便、快速、成本低、 质量 稳定可靠及灵敏度高的特点。该试剂盒亦可对多项检测指标同时检测；该试剂盒能检测 全血 、血清、 血浆 、唾液等多种样本；可用于 疾病 预警、诊断、疗效评估及 预后 等。，下面是一种免疫纳米磁珠诊断试剂盒专利的具体信息内容。
1.一种免疫纳米磁珠诊断试剂盒，包括基底、样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和 吸水垫，所述的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫按顺序依次排列于基底上， 所述的样品垫用于添加样品；结合垫含有免疫纳米磁珠，所述的免疫纳米磁珠为将 目的蛋白特异的抗体或抗原偶联于纳米磁性粒子形成的，硝酸纤维素膜上有检测带 即T带和对照带即C带，所述的检测带上有固定于膜上的与目的蛋白相应的抗体或 抗原，所述的对照带上有固定于膜上的抗体即一抗或抗抗体即二抗。
2、根据权利要求1所述的免疫纳米磁珠诊断试剂盒，其特征在于，所述免疫纳米磁 珠的制备是选用颗粒直径为10-800nm的纳米磁性粒子，优选选用颗粒直径为 60-300nm的纳米磁性粒子，将目的蛋白特异的抗体或抗原共价偶联于纳米磁性粒子， 形成免疫纳米磁珠；所述免疫纳米磁珠的固相化是将免疫纳米磁珠喷到玻璃纤维素 膜或聚酯膜上，成为一固相垫，干燥待用。
3、根据权利要求1所述的免疫纳米磁珠诊断试剂盒，其特征在于，所述的检测带即 T带是将检测目的蛋白特异的抗体或抗原喷到硝酸纤维素膜上形成，对照带即C带 是将抗体即一抗或抗抗体即二抗喷到硝酸纤维素膜上形成，以蛋白液封闭，干燥。
4、根据权利要求1所述的免疫纳米磁珠诊断试剂盒，其特征在于，所述的检测带为 一条或多条，用于样品中一种或多种目的蛋白的检测。
5、根据权利要求1所述的免疫纳米磁珠诊断试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中 一组样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫构成一个检测通路，所述的试剂盒中 含有一个或多个并列的检测通路，用于一个或多个样品中一种或多种目的蛋白的同 时检测。
6、根据权利要求1-5任意一项所述的免疫纳米磁珠诊断试剂盒，其特征在于，所述 的试剂盒形式为检测板或检测条。
7、一种应用免疫纳米磁珠进行检测目的蛋白的方法，其特征在于，将目的蛋白特异 的抗体或抗原偶联于纳米磁性粒子，形成免疫纳米磁珠，以此偶联了特异抗体或抗 原的免疫纳米磁珠去结合目的抗原或抗体，与目的抗原或抗体结合的免疫纳米磁珠 最终被固定在膜上的相应抗体或抗原捕获，形成一检测带即T带；然后目测检测结 果或以磁性测定仪对该检测带进行定量检测，未与目的抗原或抗体结合的免疫纳米 磁珠被固定在膜上的抗体即一抗或抗抗体即二抗捕获，形成一对照带即C带。
8、一种应用权利要求1-6任意一项所述的免疫纳米磁珠诊断试剂盒进行检测目的蛋 白的方法，包括：
(1)将被检测样品加于样品垫上，该样品在吸水垫作用下沿样品垫向吸水垫方 向前移；
(2)样品在结合垫中与免疫纳米磁珠反应并继续向吸水垫方向前移，结合目的 抗原或抗体的免疫纳米磁珠在通过检测带时被固定在膜上的抗体或抗原捕获而形成 阳性或弱阳性检测带；
(3)免疫纳米磁珠继续前移被固定在膜上的一抗或二抗捕获，形成对照带；
(4)目测检测结果或以磁性测定仪对该检测带进行定量检测。
9、根据权利要求7或8所述的方法，其特征在于，所述免疫纳米磁珠的制备是选用 颗粒直径为10-800nm的纳米磁性粒子，优选选用颗粒直径为60-300nm的纳米磁 性粒子，将目的蛋白特异的抗体或抗原共价偶联于纳米磁性粒子，形成免疫纳米磁 珠；所述免疫纳米磁珠的固相化是将免疫纳米磁珠喷到玻璃纤维素膜或聚酯膜上， 成为一固相垫，干燥待用，所述的检测带即T带是将检测目的蛋白特异的抗体或 抗原喷到硝酸纤维素膜上形成，对照带即C带是将抗体即一抗或抗抗体即二抗喷到 硝酸纤维素膜上形成，以蛋白液封闭，干燥。
10、权利要求1-6任意一项所述的免疫纳米磁珠诊断试剂盒用于检测全血、血清、 血浆、唾液、尿液、组织液及脑脊液多种样本目的蛋白的用途以及用于疾病预警、 诊断、疗效评估及预后方面的用途。
技术领域
本发明涉及一种免疫纳米磁珠诊断试剂盒，可应用在医学检测，属于生物医学 领域。
背景技术
由于免疫纳米磁珠的上述特性，应用纳米磁性粒子偶联特定抗原或抗体的试剂 盒是近年来研究的一个热点。申请号为01113129.2的中国专利，提供了一种免疫胶 体金和免疫纳米磁性粒子双标记快速诊断试剂盒，将目的蛋白的抗体或抗原标记一 纳米磁性粒子，形成一磁珠，再以此磁珠去标记胶体金，使该抗体或抗原同时带有 两个标示物。然后以此双标记了的抗体或抗原去结合目的抗原或抗体，最终被固定 在膜上的相应抗体或抗原捕获，形成一检测带。然后在肉眼对检侧带进行初步定性 或半定量检测的基础上，以磁性测定仪对该检测带进行定量检侧。
但上述发明需要首先用抗体或抗原标记磁性粒子，再用胶体金对抗体或抗原标 记过的磁性粒子再标记，制备过程复杂，不易质控，致使产品质量难以稳定，且额 外增加成本较大。
因此，有必要对上述试剂盒进一步改进。
发明内容
本发明的另一目的在于提供一种应用免疫纳米磁珠进行检测目的蛋白的方法。
本发明的又一目的在于提供上述的免疫纳米磁珠诊断试剂盒用于检测全血、血 清、血浆、唾液、尿液、组织液及脑脊液多种样本目的蛋白的用途以及用于疾病预 警、诊断、疗效评估及预后方面的用途。
本发明提供的一种应用免疫纳米磁珠进行检测目的蛋白的方法，将目的蛋白特 异的抗体或抗原偶联于纳米磁性粒子，形成免疫纳米磁珠，以此偶联了特异抗体或 抗原的免疫纳米磁珠去结合目的抗原或抗体，与目的抗原或抗体结合的免疫纳米磁 珠最终被固定在膜上的相应抗体或抗原捕获，形成一检测带即T带；然后目测检测 结果或以磁性测定仪对该检测带进行定量检测，未与目的抗原或抗体结合的免疫纳 米磁珠被固定在膜上的抗体即一抗或抗抗体即二抗捕获，形成一对照带即C带。
其中，所述磁珠的制备是选用颗粒直径为10-800nm的纳米磁性粒子，优选选 用颗粒直径为50-300nm的纳米磁性粒子，将目的蛋白特异的抗体或抗原共价偶联 于纳米磁性粒子，形成免疫纳米磁珠。
所述免疫纳米磁珠的固相化是将免疫纳米磁珠喷到玻璃纤维素膜或聚酯膜上， 成为一固相垫，干燥待用。干燥优选低温冷冻干燥或37℃干燥。
该免疫纳米磁珠诊断试剂盒还包括将检测目的物相应的抗体或抗原喷到硝酸纤 维素膜上形成检测带即T带，同时将抗体即一抗或抗抗体即二抗喷到硝酸纤维素膜 上的另一位置，形成对照带即C带，以蛋白液封闭，干燥。此处C带之所以可以固 定有一抗或二抗，是因目的物而异的，当目的物为抗原时，免疫纳米磁珠上偶联的 是目的抗原的特异抗体，免疫纳米磁珠经过T带时，被固定在膜上的目的抗原相应 抗体捕获，形成双抗体夹心，未与目的抗原结合的免疫纳米磁珠继续迁移，经过C 带时，被固定在膜上的免疫纳米磁珠上的特异抗体的抗体即抗抗体或二抗捕获。同 理，当目的物为抗体时，免疫纳米磁珠上偶联的是目的抗体的特异抗原，免疫纳米 磁珠经过T带时，被固定在膜上的目的抗体相应抗原捕获，形成双抗原夹心，未与 目的抗体结合的免疫纳米磁珠继续迁移，经过C带时，被固定在膜上的免疫纳米磁 珠上的特异抗原的抗体即一抗捕获。
同时，根据上述方法，本发明还提供了一种免疫纳米磁珠诊断试剂盒，包括基 底、样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述的样品垫、结合垫、硝酸纤维 素膜和吸水垫按顺序依次排列于基底上，所述的样品垫用于添加样品；结合垫含有 免疫纳米磁珠，所述的免疫纳米磁珠为将目的蛋白特异的抗体或抗原偶联于纳米磁 性粒子形成的，硝酸纤维素膜上有检测带即T带和对照带即C带，所述的检测带上 有固定于膜上的与目的蛋白相应的抗体或抗原，所述的对照带上有固定于膜上的抗 体即一抗或抗抗体即二抗。
由于磁力检测仪对纳米磁性粒子的磁力强度检测很灵敏，所以该试剂盒具有灵 敏度高的优点，尤其能检测出浓度较低的目的物。
其中，所述磁珠的制备是选用颗粒直径为10-800nm的纳米磁性粒子，优选选 用颗粒直径为50-300nm的纳米磁性粒子，将目的蛋白特异的抗体或抗原共价偶联 于纳米磁性粒子，形成免疫纳米磁珠。
所述免疫纳米磁珠的固相化是将免疫纳米磁珠喷到玻璃纤维素膜或聚酯膜上， 成为一固相垫，干燥待用。干燥优选低温冷冻干燥或37℃干燥。
该免疫纳米磁珠诊断试剂盒中T带的形成是将检测目的物相应的抗体或抗原喷 到硝酸纤维素膜上而得，C带的形成是将将抗体即一抗或抗抗体即二抗喷到硝酸纤维 素膜上的另一位置，以蛋白液封闭，干燥。
上述所形成的检测带是一可见或不可见的T带，可见T带为样本中有目的蛋白 并且浓度很高使检测带上积聚的棕色磁珠能为肉眼所见，不可见T带为样本中无目 的蛋白或者浓度很低使检测带上积聚的棕色磁珠不能被肉眼看见。
其中，上述的检测带即T带可为一条或多条，可用于样品中一种或多种目的蛋 白的检测。
试剂盒中每一组样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫构成一个检测通路， 试剂盒中可含有一个或多个并列的检测通路，置于同一个基底上，用于一个或多个 样品中一种或多种目的蛋白的同时检测。
本发明的试剂盒形式优选为检测板或检测条。
使用本发明技术制作的试剂盒可以使用双抗体夹心法、双抗原夹心法或间接法。
下面结合图2对本发明试剂盒的使用原理进行说明，
(1)将被检测样品加于样品垫上，该样品在吸水垫作用下沿样品垫向吸水垫方 向前移；
(2)样品在结合垫中与免疫纳米磁珠反应并继续向吸水垫方向前移，结合目的 抗原或抗体的免疫纳米磁珠在通过检测带时被固定在膜上的抗体或抗原捕获而形成 阳性或弱阳性检测带；
(3)继续前移被固定在膜上的一抗或二抗捕获，形成对照带；
(4)目测检测结果或以磁性测定仪对该检测带进行定量检测。
本发明使用免疫纳米磁珠技术建立诊断试剂盒，既能进行定性检测同时又能做 定量测定。运用本发明技术建立的试剂盒与同类定量试剂盒相比，制备过程简便， 成本低廉，易于质控，产品质量稳定可靠。
使用本发明技术生产的试剂盒，在对灵敏度要求不高且只需定性检测时，可根 据T带的显色与否，肉眼判断结果的阴阳性。在检测需高灵敏度时，需要以磁性测 定仪作定量分析。
使用本发明技术生产的试剂盒，具有制备过程简便，成本低廉，易于质控，产 品质量稳定，灵敏度高的特点。，亦可制备成可对多项检测指标、多种样品同时检测 的试剂盒。本发明的免疫纳米磁珠诊断试剂盒可用于测全血、血清、血浆、唾液、 尿液、组织液及脑脊液等多种样本目的蛋白，以及用于疾病预警、诊断、疗效评估 及预后等方面。
附图说明
图1为本发明以hCG(人绒毛膜促性腺激素)为例的一种反应原理示意图。
Y1为抗β-hCG单克隆抗体
Y2为抗α-hCG多克隆抗体
Y3为羊抗鼠多克隆抗体
图2本发明试剂盒结构示意图
1、样品垫 2、结合垫 3、硝酸纤维素膜
4、吸水垫 5、基底 6、T带
7、C带
图3应用本发明试剂盒检测结果为阳性时示意图
图4应用本发明试剂盒检测结果为阴性时示意图
具体实施方式
本发明的检测试剂盒的制作方法包括以下步骤：
1、磁珠的制备。
2、磁珠的固相化。
3、抗体或抗原或二抗包被到硝酸纤维素膜上及其封闭。
4、试剂盒的组装。
磁珠的制备是选用颗粒直径为10-800nm的纳米磁性粒子，优选使用颗粒直径 为10-800nm的纳米磁性粒子；通过碳二亚胺法共价到目的抗体或抗原相应的抗原 或抗体上，成为免疫纳米磁珠。操作程序为：
1、使用磁性分离器用1mLMES冲洗纳米磁性粒子；
2、第二次冲洗时，将纳米磁性粒子重新悬置在含有10mgEDC或CMC的0.25mLMES 中，室温下在混合器中混匀10min；
3、将目的抗体或抗原相应的抗原或抗体加入到纳米磁性粒子；室温混匀2小时；
4、用1mLPBS冲洗磁珠3次；
5、用封闭液中重新悬浮磁珠
上述操作过程中EDC、CMC均为可溶性碳二亚胺，MES为2-(N-吗啡代)乙烷磺酸， 均购自Sigma公司，封闭液成分为：PBS，0.1％BSA，0.05％叠氮钠，BSA和叠氮钠也 购自Sigma公司。
磁珠的固相化是以百德(Bio-Dot)仪或Metrix仪等的气压喷头喷到玻璃纤维 素膜上，成为一固相垫，低温冷冻干燥或于37℃干燥待用。
抗体或抗原或二抗包被到硝酸纤维素膜上及其封闭，是将检测目的物相应的另 一个抗体或抗原以百德(Bio-Dot)仪或Metrix仪等的喷头，喷到硝酸纤维素膜上 形成检测带即T带，同时将抗体即一抗或抗抗体即二抗喷到硝酸纤维素膜上的另一 位置，形成对照带即C带，以中性蛋白液封闭，低温冷冻干燥或于37℃干燥。
试剂盒的组装是将各成份(基底、上端吸水纸、喷有抗原或抗体的膜、下端吸 水纸)裁剪、组装、包装。
最终形成的试剂盒可参见图2，包括基底5、样品垫1、结合垫2、硝酸纤维素 膜3和吸水垫4，所述的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫按顺序依次排列于 基底上，所述的样品垫用于添加样品；结合垫含有免疫纳米磁珠，所述的免疫纳米 磁珠为将目的蛋白特异的抗体或抗原偶联于纳米磁性粒子形成的，硝酸纤维素膜上 有检测带即T带6和对照带即C带7，所述的检测带上有固定于膜上的与目的蛋白相 应的抗体或抗原，所述的对照带上有固定于膜上的抗体即一抗或抗抗体即二抗。
实施例2
本实施例为用本发明试剂盒及应用其进行检测的结果。下面结合图1-图4进行 具体说明。
图1为本发明以hCG(人绒毛膜促性腺激素)为例的一种反应原理示意图。
在该实施例中，试剂盒为将Y1(抗β-hCG单克隆抗体)偶联磁性粒子，形成免 疫纳米磁珠，再以此偶联了Y1的免疫纳米磁珠去结合hCG(图中为三角形)，最终被 固定在硝酸纤维素膜上的Y2(抗α-hCG多克隆抗体)捕获，形成检测带即T带； 然后以磁性测定仪对该检测带进行定量检测，未与Y2结合的免疫纳米磁珠被固定在 硝酸纤维素膜上的Y3(即羊抗鼠多克隆抗体)捕获，形成对照带即C带。
上述所形成的检测带是一可见或不可见的T带，应用本发明试剂盒对样品进行 检测，所得结果参见图3或图4，图3为阳性结果，由图可见T带有肉眼可见的棕色 磁珠，图4为阴性结果，样品中无目的蛋白或者浓度很低使检测带上积聚的棕色磁 珠不能被肉眼看见。
| 标题 | 发布/更新时间 | 阅读量 |
|---|---|---|
| 分段式石墨烯纳米带 | 2020-05-13 | 779 |
| 纳米砂带 | 2020-05-11 | 204 |
| 纳米远红外线健康带 | 2020-05-12 | 362 |
| 一种纳米抗菌止血绷带 | 2020-05-13 | 91 |
| 纳米腰带发电机 | 2020-05-11 | 965 |
| 纳米远红外线健康绷带 | 2020-05-12 | 733 |
| 1940纳米带通红外滤光片 | 2020-05-12 | 875 |
| 3900纳米带通红外滤光片 | 2020-05-12 | 232 |
| 3400纳米带通红外滤光片 | 2020-05-12 | 488 |
| 4640纳米带通红外滤光片 | 2020-05-13 | 845 |
高效检索全球专利专利汇是专利免费检索,专利查询,专利分析-国家发明专利查询检索分析平台，是提供专利分析，专利查询，专利检索等数据服务功能的知识产权数据服务商。
我们的产品包含105个国家的1.26亿组数据，免费查、免费专利分析。
专利汇分析报告产品可以对行业情报数据进行梳理分析，涉及维度包括行业专利基本状况分析、地域分析、技术分析、发明人分析、申请人分析、专利权人分析、失效分析、核心专利分析、法律分析、研发重点分析、企业专利处境分析、技术处境分析、专利寿命分析、企业定位分析、引证分析等超过60个分析角度，系统通过AI智能系统对图表进行解读，只需1分钟，一键生成行业专利分析报告。
