细胞结合分子的特异性偶联
专利汇可以提供细胞结合分子的特异性偶联专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 描述了一类包含桥连接体的细胞结合剂-药物偶联物以及连接体和偶联物的应用。，下面是细胞结合分子的特异性偶联专利的具体信息内容。
1.结构式为(I)的桥连接体：
其中连接体上的乙炔乙二酸结构可以和细胞结合剂中的一对硫原子反应；
Z1和Z2是相同的或不同的能和细胞毒性药物反应的官能团，可通过生成二硫键、醚键、
酯键、硫醚键、硫酯键、肽键、腙键、氨基甲酸酯键、碳酸酯键、胺键(二级，三级或四级)、亚胺键、杂环烷基、杂芳基、烷氧肟键或酰胺键与毒性小分子药物结合；
R1和R2是相同的、不同的或缺省的含1～6个碳原子的直链烷基，3到6个碳原子的支链或
环烷基，直链、直链或环烯基或炔基，或1～6个碳原子的酯基、醚基、酰胺基或聚乙氧基
(OCH2CH2)p，其中p是0到约1000的整数，或这些基团的组合；
另外，R1和R2是包含C,N,O,S,Si,和P原子的链状结构，最优含0～500个原子，共价连接
于X1或X2和Z1或Z2；R1和R2中的各个原子以所有可能的化学方式结合，比如形成烷基、亚烷基、亚烯基、亚炔基、醚、聚氧烷基、酯、胺、亚胺、聚胺、肼、腙、酰胺、脲、氨基脲、卡巴肼、烷氧胺、聚氨酯、氨基酸、多肽、酰氧胺、异羟肟酸，或这些基团的组合；
X1和X2独立选自NH,N(R3),O,S或CH2；R3是H,1～6个碳原子的直链烷基，3到6个碳原子的
支链或环状烷基，直链、支链或环烯基或炔基，或1～6个碳原子的酯、醚、酰胺或聚乙氧单元(OCH2CH2)p，其中p是0到1000的整数，或这些基团的组合。
2.结构为公式(II)的细胞结合剂-药物偶联物：
其中：
Cb为细胞结合剂，最优为抗体；
括号内是通过一对硫原子与细胞结合分子偶联的连接体-药物组分；
Drug1和Drug2为相同的或不同的细胞毒性剂，它们以烷基、亚烷基、亚烯基、亚炔基、醚、聚烷氧基、酯、胺，亚胺，聚胺、肼、腙、酰胺、脲、氨基脲、卡巴肼、烷氧基胺、氨基甲酸酯、氨基酸、肽、酰氧胺、异羟肟酸、二硫键、硫醚、硫酯、氨基甲酸酯、碳酸酯、杂环、杂烷基、杂芳基或烷氧肟键及其组合与细胞结合剂链接；
n是1～20；R1,R2,X1和X2的定义同权利要求1。
3.结构式如(III)的化合物：
其中Cb,Z1,Z2,n,R1,R2,X1和X2的定义同权利要求1和2。
4.结构式如(IV)的化合物：：
其中Drug1,Drug2,Z1,Z2,n,R1,R2,X1,和X2的定义同权利要求1和2。
5.在权利要求1中，含有乙炔二羰基类桥连接体的合成是，乙炔二羰基或其衍生物，和
其他组分末端胺(一级或二级胺)、醇或硫醇的缩合，如下面(Ia)所示：
其中，X是在权利要求1中的X1或X2的描述，指N(R3),O,或S；R是R1和/或R2，R1、R2和R3定义同权利要求1。
Lv1和Lv2相同的或各自独立的OH、F、Cl、Br、I、硝基苯酚、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)、苯酚、二硝基苯酚、五氟苯酚、四氟苯酚、二氟苯酚、单氟苯酚、五氯酚、三氟甲基磺酸、咪唑、二氯苯酚、四氯苯酚、1-羟基苯并三氮唑、对甲苯磺酸、甲磺酸、2-乙基-5-苯基异恶唑-3'-磺酸、酸酐或与其他酸酐如乙酰酐、甲酸酐形成的酸酐；或多肽缩合反应中间体或Mitsunobu反应中间体；缩合试剂包括：1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)，二环己基碳二亚胺(DCC)，N,N'-二异丙基碳二酰亚胺(DIC)，1-环已基-2-吗啉乙基碳二亚胺对甲苯
磺酸盐(CMC,或CME-CDI)，羰基二咪唑(CDI)，TBTU(O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四
氟硼酸)，O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)，苯并三氮唑-1-基氧基三(二甲基氨
基)磷鎓六氟磷酸盐(BOP)，六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(PyBOP)，焦碳酸二乙酯(DEPC)，N,N,N',N'-四甲基氯甲脒六氟磷酸盐，2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)，1-[(二甲胺)(吗啉基)亚甲基]-1[1,2,3]三唑并[4,5-b]1-吡
啶-3-氧六氟磷酸盐(HDMA)，2-氯-1,3-二甲基咪唑鎓六氟磷酸盐(CIP)，氯代三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐(PyCloP)，双(四亚甲基)氟代甲酰胺(BTFFH)，N,N,N',N'-四甲基-硫-(1-氧代-
2-吡啶基)硫脲鎓六氟磷酸盐，2-(2-吡啶酮-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸盐(TPTU)，硫-(1-氧代-2-吡啶基)-N,N,N',N'-四甲基硫脲六氟磷酸盐，O-[(乙氧基羰基)氰基甲胺]-
N,N,N',N'-四甲基硫脲六氟磷酸盐(HOTU)，(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代亚乙基氨基氧基)二
甲基氨基-吗啉-碳鎓六氟磷酸盐(COMU)，(苯并三氮唑-1-基氧基)二吡咯烷碳六氟磷酸盐
(HBPyU)，N-苄基-N′-环己基碳二亚胺(或荷载在聚合物上)，二吡咯烷基(N-琥珀酰亚氨氧基)碳鎓六氟磷酸盐(HSPyU)，1-(氯-1-吡咯烷基亚甲基)吡咯烷六氟磷酸盐(PyClU)，2-氯-
1,3-二甲基咪唑四氟硼酸盐(CIB)，(苯并三氮唑-1-基氧基)二哌啶碳六氟磷酸盐
(HBPipU)，6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯(TCTU)，溴化三(二甲基氨基)膦六氟磷酸(BroP)，1-正丙基磷酸酐(PPACA， )，2-异氰基乙基吗啉(MEI)，N,N,N',N'-四
甲基脲-氧-(N-琥珀酸亚胺基)六氟磷酸盐(HSTU)，2-溴-1-乙基吡啶四氟硼酸盐(BEP)，氧-[(乙氧基羰基)氰基甲胺]-N,N,N',N'-四甲基硫尿四氟硼酸盐(TOTU)，4-(4,6-二甲氧基三
嗪-2-基)-4-甲基吗啉盐酸盐(MMTM,DMTMM)，2-琥珀酰亚胺基-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸
酯(TSTU)，N,N,N',N'-四甲基-O-(3,4-二氢-4-氧代-1,2,3-苯并三嗪-3-基)脲四氟硼酸盐
(TDBTU)，偶氮二甲酰二哌啶(ADD)，双(4-氯苄基)偶氮二甲酸酯(DCAD)，偶氮二甲酸二叔丁酯(DBAD)，偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD)，偶氮二甲酸二乙酯(DEAD)。
6.权利要求1中，桥连接体上乙炔二羰基与其他官能团缩合，延伸碳链，合成步骤为二
(三甲基硅基)乙炔、乙炔二溴化镁(格氏试剂)、乙炔二锂盐或其它乙炔二金属盐，和酰卤或酸酐的反应，图示如(Ib),(Ic),(Id),(Ie),(If),(Ig)和(Ih)：
这里M是Na,K,Li,Cu,CuLi,Sn,Ti,Ca,Mg或Zn。
7.在权利要求2和4中，公式(II)和(IV)里的Drug1和Drug2相同或各自独立选自：
1)化疗剂：a)烷基化剂，如氮芥：氯苯那普，氯普那嗪，环磷酰胺，达卡巴嗪，雌二醇氮
芥，异环磷酰胺，氮芥，盐酸二甲氧胺，氧化二氮芥，盐酸氨氯地平，麦考酚酸，卫矛醇，哌泊溴烷，新氮芥，苯芥胆甾醇，松龙苯芥，噻替哌，曲磷胺对，尿嘧啶；CC-1065(包括其阿多来新，卡折来新和比折来新合成同系物)；多卡霉素(包括合成同系物KW-2189和CBI-TMI)；苯并二氮卓二聚体(例如吡咯并苯二氮卓(PBD)或托美霉素，吲哚并苯并二氮卓，咪唑并苯并
噻二氮卓或恶唑烷并苯并二氮卓的二聚体)；亚硝基脲(卡莫司汀，洛莫司汀，氯化梭菌素，福莫司汀，尼莫司汀，拉莫司汀)；烷基磺酸盐(白消安，硫丹，硫丹和硫磺)；三氮烯(达卡巴嗪)；含铂化合物(卡铂，顺铂，奥沙利铂)；吖丙啶类，如苯并二氢吡喃酮，卡洛酮，美妥替派和乌雷多巴；乙烯亚胺和甲基三聚氰胺，包括六甲蜜胺，三亚乙基三胺，三乙基磷酰胺，三亚乙基硫代磷酰胺和三羟甲基甲基胺；b)植物生物碱，如长春花生物碱(长春新碱，长春碱，长春地辛，长春瑞滨，去甲长春碱)；类紫杉醇(紫杉醇，多西紫杉醇)及其同系物；美登素生物碱(DM1，DM2，DM3，DM4，DM5，DM6，DM7，美登素和安沙霉素)及其同系物；cryptophycin(特别是cryptophycin 1和cryptophycin8)；埃博霉素，软珊瑚醇，迪莫利德，草苔虫内酯，海兔毒素，奥瑞他汀，tubulysin，cephalostatin，pancratistatin，sarcodictyin，海绵抑制素；c)DNA拓扑异构酶抑制剂，例如依托泊苷替尼(9-氨基喜树碱，喜树碱，克立那托，道诺霉素，依托泊苷，磷酸依托泊苷，伊立替康，米托蒽醌，诺消灵，视黄酸(视黄醇)，替尼泊苷，拓扑替康，9-硝基喜树碱(RFS 2000))；丝裂霉素(丝裂霉素C)；d)抗代谢物，例如抗叶酸剂，DHFR抑制剂(甲氨蝶呤，曲麦克特，二甲叶酸，蝶罗呤，氨喋呤(4-氨基苯甲酸)或其他叶酸同系物)；
IMP脱氢酶抑制剂(麦考酚酸，噻唑呋林，利巴韦林，EICAR)；核糖核苷酸还原酶抑制剂(羟基脲，去铁胺)；嘧啶同系物，尿嘧啶同系物(安西他滨，阿扎胞苷，6-氮尿嘧啶，卡培他滨(希罗达)，卡莫氟，阿糖胞苷，双脱氧尿苷，去氧氟尿苷，依诺他滨，5-氟尿嘧啶，氟尿苷，
ratitrexed(Tomudex)；胞嘧啶同系物(阿糖胞苷，胞嘧啶阿拉伯糖苷，氟达拉滨)；嘌呤同系物(硫唑嘌呤，氟达拉滨，巯嘌呤，硫胺素，硫鸟嘌呤)；叶酸补充剂，如弗洛林酸；e)激素疗法剂，如受体拮抗剂，抗雌激素(甲地孕酮，雷洛昔芬，他莫昔芬)，LHRH兴奋剂(戈斯他林，醋酸亮丙瑞林)；抗雄激素药(比卡鲁胺，氟他胺，卡鲁司酮，丙酸倍他雄酮，表雄甾醇，戈舍瑞林，亮丙瑞林，美替利定，尼鲁米特，睾内酯，曲洛司坦及其他雄激素抑制剂)；维甲类化合物，维生素D3同系物(CB1093，EB1089KH1060，胆钙化醇，麦角钙化甾醇)；光动力疗法剂(维替泊芬，酞菁，光敏剂Pc4，去甲氧基-竹红菌素A)；细胞因子(干扰素-α，干扰素-γ，肿瘤坏死因子(TNF)，含TNF的人蛋白)；f)激酶抑制剂，如BIBW 2992(抗-EGFR/Erb2)，伊马替尼，吉非替尼，哌加他尼，索拉非尼，达沙替尼，舒尼替尼，厄洛替尼，尼洛替尼，拉帕替尼，阿西替尼，帕唑帕尼，凡德他尼，E7080(抗VEGFR2)，mubritinib，普纳替尼(AP24534)，bafetinib(INNO-
406)，bosutinib(SKI-606)，卡博替尼，维莫德吉，iniparib，鲁索利替尼，CYT387，阿西替尼，tivozanib，索拉非尼，贝伐单抗，西妥昔单抗，曲妥珠单抗，雷珠单抗，帕尼单抗，伊斯平斯；g)抗生素，如烯二炔类抗生素(加利车霉素，特别是加利车霉素γ1，δ1，α1和β1(参考J.Med.Chem.1996,39(11)，2103-2117；Angew Chem Intl.Ed.Engl.1994,33:183-186)，达因霉素，包括达因霉素A和脱氧米霉素，埃斯培拉霉素，卡达霉素，C-1027，maduropeptin以及新制癌菌素发色团和相关色蛋白烯二炔抗生素发色团)，aclacinomysins，放线菌素，安曲霉素，重氮丝氨酸，博来霉素，卡诺霉素，卡拉霉素，洋红霉素，嗜癌素，阿霉素，阿霉素，吗啉代阿霉素，2-吡咯啉阿霉素和脱氧柔红霉素，表柔比星，阿柔比星，伊达比星，马可霉素，霉素，霉酚酸，洛匹霉素，培洛霉素，培洛霉素，嘌呤霉素，三铁阿霉素，阿霉素，链脲霉素，链脲佐菌素，杀结核菌素，乌苯美司，净司他丁，佐柔比星；h)其他，如聚酮化合物(番荔素)，特别是bullatacin和bullatacinone；吉西他滨，环氧酶素(如卡菲偌米布)，硼替佐米，沙利度胺，来那度胺，pomalidomide，tosedostat，zybrestat，PLX4032，STA-9090，Stimuvax，allovectin-7，Xegeva，Provenge，Yervoy，异戊二烯化抑制剂(如洛伐他汀)，多巴胺能神经毒素(如星形孢菌素)，放线菌素(如放线菌素D，更生霉素)，博莱霉素(如博来霉素A2，博莱霉素B2，培洛霉素)，蒽环类抗生素(如柔红霉素)，阿霉素(亚德里亚霉素)，伊达比星，表柔比星，吡柔比星，佐柔比星，米托蒽醌，MDR抑制剂(如维拉帕米)，Ca2+ATP酶抑制剂(如毒胡萝卜素)，组蛋白去乙酰酶抑制剂(伏立诺他，罗米地辛，帕比司他，丙戊酸，Mocetinostat
(MGCD0103)，Belinostat，PCI-24781，恩替诺特，SB939，Resminostat，Givinostat，AR-42，CUDC-101，萝卜硫素，曲古抑菌素A)；塞来昔布，格列酮类，表没食子儿茶素没食子酸酯，双硫仑，Salinosporamide A；抗肾上腺药物，如氨鲁米特，米托坦，曲洛司坦，醋葡醛内酯，醛磷酰胺，氨基乙酰丙酸，安吖啶，阿拉伯糖苷，bestrabucil，比生群，edatraxate，defofamine，美可辛，地吖醌，依氟鸟氨酸(DFMO)，elfomithine，依利醋铵，乙基葡糖酸，硝酸镓，胞嘧啶，羟基脲，伊班膦酸盐，香菇多糖，氯尼达明，米托胍腙，米托蒽醌，莫哌达醇，二胺硝吖啶，喷司他丁，蛋氨氮芥，吡柔比星，鬼臼酸，2-乙肼，甲基苄肼； 哌嗪二酮丙烷；根霉素；西佐；螺环锗；细格孢氮杂酸；三亚胺醌；三氯三乙胺；单端孢霉烯(特别是T-2毒素，疣孢菌素A，杆孢菌素A和anguidine)，聚氨酯，siRNA，反义药物和核酸分解酶。
2)自身免疫疾病药物，包括但不限于环孢菌素，环孢菌素A，氨基己酸，硫唑嘌呤，溴隐
亭，苯丁酸氮芥，氯喹，环磷酰胺，皮质类固醇(例如安西奈德，地塞米松，曲安奈德，丙酸倍氯米松，DHEA，依那西普，羟基氯喹，英夫利昔单抗，美洛昔康，甲氨蝶呤，麦考酚酸酯，泼尼松，西罗莫司，他克莫司。
3)抗感染性疾病药物，包括但不限于a)氨基糖苷类：阿米卡星，阿司米星，庆大霉素(奈
替米星，西索米星，异帕米星)，潮霉素B，卡那霉素(阿米卡星，阿贝卡星，氨基去氧卡那霉素，地贝卡星，妥布霉素)，新霉素(framycetin，巴龙霉素，核糖霉素)，奈替米星，壮观霉素，链霉素，妥布霉素，甲基姿苏霉素；b)酰胺醇类：叠氮氯霉素，氯霉素，氟苯尼考，甲砜霉素；
c)安沙霉素：格尔德霉素，除莠霉素；d)碳青霉烯类：比阿培南，多利培南，厄他培南，亚胺培南/西司他丁，美罗培南，帕尼培南；e)头孢烯：碳头孢烯(洛拉卡比)，头孢乙腈，氯氨苄青霉素，头孢拉定，头孢羟氨，头孢洛宁，头孢噻啶，头孢噻吩或头孢金素，头孢氨苄，头孢来星，头孢孟多，头孢匹林，羟胺唑头孢菌素，氟唑头孢菌素，孢西酮，唑啉头孢菌素，头孢拉宗，头孢卡品，头孢达肟，头孢吡，头孢克肟，头孢西丁，头孢罗齐，头孢甲氧环烯胺，头孢替唑，头孢呋辛，头孢克肟，头孢地尼，头孢托仑，头孢吡，头孢他美，头孢甲肟，头孢地嗪，头孢尼西，头孢哌酮，头孢雷特，头孢噻肟，噻乙胺唑头孢菌素，头孢唑兰，头孢氨苄，头孢咪唑，头孢匹胺，头孢匹罗，头孢泊肟，头孢罗齐，头孢喹诺，头孢磺啶，头孢他啶，头孢特仑，头孢布腾，头孢噻林，头孢唑肟，头孢吡普，头孢曲松，头孢呋辛，头孢唑南，头霉素(头孢西丁，头孢替坦，头孢氰唑)，氧(碳)头孢烯(氟氧头孢，头孢)；f)糖肽：博来霉素，万古霉素(奥利万星，特拉万星)，替考拉宁(达巴万星)，雷莫拉宁，g)甘氨酰环素：如替加环素，h)β-内酰胺酶抑制剂：
青霉烷(舒巴坦，他唑巴坦)，氧青霉烷(克拉维酸)；i)林可酰胺：克林霉素，林可霉素；j)脂肽：达托霉素，A54145，钙依赖性抗生素(CDA)；k)大环内酯类：阿奇霉素，克霉素，克拉霉素，地红霉素，红霉素，氟雷霉素，交沙霉素，酮内酯(泰利霉素，塞红霉素)，麦迪霉素，米卡霉素，竹桃霉素，利福霉素(异烟肼、利福平，利福布丁，利福喷汀)，罗匹霉素，罗红霉素，大观霉素，螺旋霉素，他克莫司(FK506)，醋竹桃霉素，泰利霉素；l)单环胺：氨曲南，替吉莫南；m)恶唑烷酮类：利奈唑胺；n)青霉素类：阿莫西林，氨苄青霉素(匹氨西林，海洛西林，巴氨西林，氨苄青霉素，阿霉素)，阿替代西林，阿洛西林，苄青霉素，苄星青霉素苄青霉素，苄星青霉素苯氧甲基青霉素，克洛西林，普鲁卡因青霉素(美替西林)，美洛西林，甲氧西林，萘夫西林，苯唑西林，醋甲西林，青霉素，非奈西林，苯氧基甲基青霉素，哌拉西林，氨苄西林，磺苯西林，替莫西林，替卡西林；o)多肽：杆菌肽，粘菌素，多粘菌素B，p)喹诺酮类：阿拉曲沙星，巴洛沙星，环丙沙星，克林沙，达氟沙星，二氟沙星，依诺沙星，恩诺沙星，加雷沙星，加替沙星，吉米沙星，格帕沙星，卡诺曲伐沙星，左氧氟沙星，洛美沙星，麻保沙星，莫西沙星，那氟沙星，诺氟沙星，奥比沙星，氧氟沙星，培氟沙星，曲伐沙星，格帕沙星，西他沙星，司帕沙星，替马沙星，托沙星，曲伐沙星；q)链阳性菌素：普那霉素，奎奴普丁/达福普汀，r)磺胺类药物：磺胺类药物：磺胺类药物，磺胺嘧啶，磺胺嘧啶，磺胺嘧啶，柳氮磺胺吡啶，磺胺异恶唑，三苯氧胺，甲氧苄氨嘧啶-磺胺甲恶唑(复方新诺明)；s)类固醇抗菌药物：如夫西地酸；t)四环素类：强力霉素，金霉素，氯米西环素，地美环素，雷莫昔林，美西环素，美他环素，米诺环素，土霉素，青霉素V钾哌四环素，吡咯烷甲基四环素，四环素，甘氨酰环素(如替加环素)：u)其他类型的抗生素：番荔枝素，胂凡纳明，细菌萜醇抑制剂(杆菌)，DANAL/AR抑制剂(环丝氨酸)，dictyostatin，圆皮海绵内酯，软珊瑚醇，埃博霉素，乙胺丁醇，依托泊苷，法罗培南，夫西地酸，呋喃唑酮，异烟肼，laulimalide，甲硝唑，莫匹罗星，NAM合成抑制剂(例如磷霉素)，呋喃妥因，紫杉醇，普兰西霉素，吡嗪酰胺，奎奴普丁/达福普汀，利福平(利福平)，他唑巴坦替硝唑，乌菊花素。
4)抗病毒药物：a)进入/融合抑制剂：阿帕韦洛，马拉韦罗，vicriviroc，gp41(恩夫韦
肽)，PRO 140，CD4(艾巴利珠单抗)；b)整合酶抑制剂：雷特格韦，elvite-gravir，
globoidnan A；c)成熟抑制剂：bevirimat，vivecon；d)神经氨酸酶抑制剂：奥司他韦，扎那米韦，帕拉米韦；E)核苷和核苷酸：阿巴卡韦，阿昔单韦，阿德福韦，阿莫西韦，阿昔单抗，溴夫定，西多福韦，克拉夫定，地塞米松，去羟肌苷(ddI)，elvucitabine，恩曲他滨(FTC)，恩替卡韦，泛昔洛韦，氟拉西林(5-FU),3’-氟取代的2’，3’-脱氧核苷同系物(如3，3’-氟-2′，3′-双脱氧胸苷(FLT)和3’-氟-2’，3’-双脱氧鸟苷(FLG)，福米韦生，9-鸟嘌呤，碘苷，拉米夫定(3TC)，1-核苷(例如β-1-胸苷和β-1-2'-脱氧胞苷)，喷昔洛韦，racivir，利巴韦林，迪替丁，司他夫定(d4T)，塔利巴韦林(viramidine)，替比夫定，替诺福韦，三氟尿苷伐昔洛韦，缬更昔洛韦，扎西他滨(ddC)，齐多夫定(AZT)；f)非核苷类：金刚烷胺，阿替吡啶，卡普韦林，二芳基嘧啶(依曲韦林，rilpivirine)，地拉夫定，二十二烷醇，乙米韦林，依法韦仑，膦甲酸(磷酰基甲酸)，咪喹莫特，聚乙二醇干扰素，洛韦胺，洛德腺苷，甲吲噻腙，奈韦拉平，NOV-205，长效干扰素α，鬼臼毒素，利福平，金刚乙胺，瑞喹莫德(R-848)，醋胺金刚烷；g)蛋白酶抑制剂：安普那韦阿扎那韦，boceprevir，darunavir，福沙那韦，印地那韦，洛匹那韦，奈非那韦，普来可那立，利托那韦，沙奎那韦，telaprevir(VX-950)，替拉那韦；h)其它类型的抗病毒药物：抗氧化酶，阿比朵尔，卡拉诺莱德，ceragenin，氰维林-n，二芳基嘧啶，表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)，膦甲酸，格里菲辛，taribavirin(viramidine)，羟基脲，KP-1461，米替福新，普来可那立，混成抑制剂，利巴韦林，seliciclib。
5)放射性同位素(放射性核素)，选自3H，11C，14C，18F，32P，35S，64Cu，68Ga，86Y，99Tc，111In，
123I，124I，125I，131I，133Xe，177Lu，211At或213Bi。
6)发色分子，可以吸收一种光，如紫外光，荧光，红外光，近红外光或可见光；黄色素，红细胞，虹彩色素，白细胞，黑色素和蓝绿色素的一类或一个亚类，荧光分子(吸收光后再发光的荧光化学物质)的一类或一个亚类，视觉光转导分子，光子分子，冷光分子和荧光素化合物；非蛋白质有机荧光团，例如氧杂蒽衍生物(荧光素，罗丹明，俄勒冈绿，伊红和德克萨斯红)；花青衍生物(花青，吲哚羰花青，氧杂花青，硫代花青和部花青)；方酸衍生物和环取代的方酸，包括Seta，SeTau和Square染料；萘衍生物(丹酰和氟硅酸钠衍生物)；香豆素衍生物；恶二唑衍生物(吡啶基恶唑，硝基苯并恶唑和苯并恶二唑)；蒽衍生物(蒽醌类，包括
DRAQ5，DRAQ7和CyTRAK橙)；芘衍生物(级联蓝等)；恶嗪衍生物(尼罗红，尼罗蓝，甲酚紫，恶嗪170等)；吖啶衍生物(黄醇黄素，吖啶橙，吖啶黄等)；芳基甲胺衍生物(金胺，结晶紫，孔雀石绿)和四吡咯衍生物(卟吩，酞菁，胆红素)；下列荧光化合物的同系物和衍生物：CF染料(Biotium)，DRAQ和CyTRAK探针(BioS-tatus)，BODIPY(Invitrogen)，Alexa Fluor
(Invitrogen)，DyLight Fluor(Thermo Scientific，Pierce)，Atto和Tracy(Sigma
Aldrich)，FluoProbes(Interchim)，Abberior染料(Abberior)，DY和MegaStokes染料
(Dyomics)，Sulfo Cy染料(Cyandye)，HiLyte Fluor(AnaSpec)，Seta，SeTau和Square染料(Biosearch Technologies)，SureLight染料(APC，RPEPerCP，Phycobilisomes)(Columbia Biosciences)，APC，APCXL，RPE，BPE(Phyco-Biotech)，别藻蓝蛋白(APC)，氨基胭脂蛋白，APC-Cy7偶联物，BODIPY-FL，Cascade Blue，Cy2，Cy3，Cy3.5，Cy3B，Cy5，Cy5.5，Cy7，荧光素，FluorX，羟基香豆素，丽丝胺罗丹明B，萤光黄，Me-甲氧基香豆素，NBD，Pacific Blue，Pacific Orange，PE-Cy5偶联物，PE-R-藻红蛋白(PE)，Red 613，Seta-555-Azide，Seta-
555-DBCO，Seta-555-NHS，Seta-580-NHS，Seta-680-NHS，Seta-APC-780，Seta-PerCP-680，Seta-R-PE-670，SeTau-380-NHS，SeTau-405-马来酰亚胺，SeTau-405-NHS，SeTau-425-NHS，SeTau-647-NHS，Texas Red,TRITC，TruRed，X-Rhodamine，7-AAD(7-氨基放线菌素D，CG-选择性的)，吖啶橙，色霉素A3，CyTRAK橙(Biostatus)，DAPI，DRAQ5，DRAQ7，溴化乙锭，
Hoechst33258，Hoechst33342，LDS 751，光辉霉素，碘化丙啶(PI)，SYTOX蓝，SYTOX绿，SYTOX橙，噻唑橙，TO-PRO，菁染料单体，TOTO-1，TO-PRO-1，TOTO-3，TO-PRO-3，YOSeta-1，YOYO-1。
可以与本发明的连接体相连，用于研究细胞的荧光化合物，选自下列化合物或其衍生物：
DCFH(2'，7'-二氯二氢荧光素，氧化形式)，DHR(二氢罗丹明123，氧化形式，光催化氧化)，Fluo-3(AM酯，pH>6)，Fluo-4(AM酯，pH7.2)，Indo-1(AM酯，低/高钙(Ca 2+))，SNARF(pH 6/
9)。优选的荧光化合物选自：别藻蓝蛋白(APC)，AmCyan1(四聚体，Clontech)，AsRed2(四聚体，Clontech)，蓟绿(单体，MBL)，Azurite，B-藻红蛋白(BPE)，Cerulean，CyPet，DsRed单体(Clontech)，DsRed2(“RFP”，Clontech)，EBFP，EBFP2，ECFP，EGFP(弱二聚体，Clontech)，Emerald(弱二聚体，Invitrogen)，EYFP(弱二聚体，Clontech)，GFP(S65A突变)，GFP(S65C突变)，GFP(S65L突变)GFP(Y66H突变)，GFP(Y66W突变)，GFPuv，HcRed1，J-Red，Katusha，Kusabira Orange(单聚体，MBL)，mCFP，mCherry(单体，MBL)，mKate(TagFP635，单体，
Evrogen)，mKeima-Red(单体，MBL)，mKO，mOrange，mPlum，mRaspberry，mRFP1(单体，Tsien实验室)，mStrawberry，mTFP1，mTurquoise2，P3(藻胆体复合物)，多甲藻黄素-叶绿素-蛋白质复合物(PerCP)，R-phycoerythrin(RPE)，T-Sapphire，TagCFP(二聚体，Evrogen)，TagGFP(二聚体，Evrogen)，TagRFP(二聚体，Evrogen)，TagYFP(二聚体，Evrogen)，tdTomato(串联二聚体)，Topaz，TurboFP602(二聚体，Evrogen)，TurboFPP635(二聚体，Evrogen)，TurboGFP(二聚体，Evrogen)，TurboRFP(二聚体，Evrogen)，TurboYFP(二聚体，Evrogen)，Venus，野生型GFP型，YPet，ZsGreen1(四聚体，Clontech)，ZsYellow1(四聚体，Clontech)。
7)上述药物的药学上可接受的盐、酸或衍生物。
8.在权利要求2和4中，公式(II)和(IV)里的Drug1和Drug2为发色分子，结构式为(II)和
(IV)的偶联物可用于检测，监测或研究细胞结合分子的功能，与靶细胞的相互作用，和/或偶联物与目标物，特别是靶细胞的相互作用。
9.在权利要求2和4中，Drug1和Drug2优选自tubulysin，卡奇霉素，澳瑞他汀，美登素生
物碱，CC-1065同系物，柔红霉素和阿霉素化合物，紫杉烷类(紫杉烷类)，cryptophycin，埃博霉素，苯并二氮卓二聚体(例如吡咯并苯二氮卓(PBD)，托美霉素，安曲霉素，吲哚并苯并二氮卓，咪唑并苯并噻二氮卓或恶唑烷并苯并二氮卓的二聚体)，卡立霉素类和烯二炔类抗生素，放线菌素，氮丝菌素，博来霉素，表柔比星，他莫昔芬，伊达比星，多拉司他汀/澳瑞他汀(例如MMAE，MMAF，澳瑞他汀PYE，澳瑞他汀TP，澳瑞他汀2-AQ，6-AQ，EB(AEB)和EFP
(AEFP))，多卡霉素，噻替派，长春新碱，半米塔林，nazumamide，microginin，radiosumin，alterobactin，microsclerominmin，theonellamide，esperamicin，siRNA，溶核酶和/或其药学上可接受的盐、酸和/或上述分子的同系物和衍生物。
10.权利要求2和3中的细胞结合剂/分子选自抗体、蛋白、维生素(如叶酸)、肽、聚合物
胶束、脂质体、脂蛋白为基础的药物载体、纳米颗粒药物载体、树状分子和涂覆了细胞结合配体的上述分子或其组合物。
11.权利要求2、3和10中的细胞结合剂/分子优选为，抗体，完整抗体(多克隆抗体，单克
隆抗体，二聚体，多聚体，多特异性抗体，例如双特异性抗体)；单链抗体；结合靶细胞的抗体片段、单克隆抗体，单链单克隆抗体或结合靶细胞的单克隆抗体片段，嵌合抗体、结合靶细胞的嵌合抗体片段，单域抗体，结合靶细胞的单域抗体片段，表面修饰抗体，单链表面修饰抗体，或结合靶细胞的表面修饰抗体片段，人源化抗体，单链人源化抗体，或结合靶细胞的人源化抗体片段，抗独特型抗体(抗-Id)，CDR，双价抗体，三价抗体，微抗体，免疫蛋白
(SIP)，淋巴因子，激素，维生素，生长因子，一个集落刺激因子，营养转运分子，大分子量的蛋白质。
12.权利要求2、3和10中的细胞结合剂/分子可以是任何能够靶向下列细胞的试剂：肿
瘤细胞、病毒感染的细胞、微生物感染的细胞，寄生虫感染的细胞，自身免疫性疾病的细胞，激活的肿瘤细胞，骨髓细胞，活化的T细胞，侵袭B细胞，或黑素细胞。
13.权利要求2、3和10中的细胞结合剂/分子可以是任何能够对抗下列抗原或受体之一
的药物/分子：CD3,CD4,CD5,CD6,CD7,CD8,CD9,CD10,CD11a,CD11b,CD11c,CD12w,CD14,
CD15,CD16,CDw17,CD18,CD19,CD20,CD21,CD22,CD23,CD24,CD25,CD26,CD27,CD28,CD29,
CD30,CD31,CD32,CD33,CD34,CD35,CD36,CD37,CD38,CD39,CD40,CD41,CD42,CD43,CD44,
CD45,CD46,CD47,CD48,CD49b,CD49c,CD51,CD52,CD53,CD54,CD55,CD56,CD58,CD59,CD61,
CD62E,CD62L,CD62P,CD63,CD66,CD68,CD69,CD70,CD72,CD74,CD79,CD79a,CD79b,CD80,
CD81,CD82,CD83,CD86,CD87,CD88,CD89,CD90,CD91,CD95,CD96,CD98,CD100,CD103,
CD105,CD106,CD109,CD117,CD120,CD125,CD126,CD127,CD133,CD134,CD135,CD138,
CD141,CD142,CD143,CD144,CD147,CD151,CD147,CD152,CD154,CD156,CD158,CD163,
CD166,.CD168,CD174,CD180,CD184,CDw186,CD194,CD195,CD200,CD200a,CD200b,CD209,
CD221,CD227,CD235a,CD240,CD262,CD271,CD274,CD276(B7-H3),CD303,CD304,CD309,
CD326,4-1BB,5AC,5T4(Trophoblast糖蛋白，TPBG，5T4，WNT-活化抑制因子1或WAIF1)，腺癌抗原，AGS-5,AGS-22M6，激活素受体激酶1，AFP，AKAP-4，ALK，α整合素，αvβ6，氨基肽酶N，淀粉样蛋白β，雄激素受体，促血管新生蛋白因子2，促血管新生蛋白因子3，膜联蛋白A1，炭疽毒素保护性抗原，抗转移蛋白受体，AOC3(VAP-1)，B7-H3，炭疽杆菌，BAFF(B细胞激活因子)，B淋巴瘤细胞，bcr-abl，蛙皮素，BORIS，C5，C242抗原，CA125(糖抗原125，MUC16)，CA-IX(或CAIX，碳酸酐酶9)，CALLA，CanAg，犬红斑狼疮IL31，碳酸酐酶IX，心肌肌凝蛋白，CCL11(C-C片段趋化因子11)，CCR4(C-C趋化因子受体4，CD194)，CCR5，CD3E(ε)，CEA(癌胚抗原)，CEACAM3，CEACAM5(癌胚抗原)，CFD(因子D)，Ch4D5，胆囊收缩素2(CCK2R)，CLDN18(Claudin-
18)，丛生因子A，CRIPTO，FCSF1R(集落刺激因子1受体，CD115)，CSF2(集落刺激因子2，粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF))，CTLA4(细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4)，CTAA16.88
肿瘤抗原，CXCR4(CD184)，C-X-C趋化因子受体4，环状ADP核糖核酸酶，细胞周期蛋白B1，CYP1B1，巨细胞病毒，巨细胞病毒糖蛋白B，Dabigatran，DLL4(类Δ配体4)，DPP4(双肽-肽酶
4)，DR5(死亡受体5)，大肠杆菌shiga毒素类型-1，大肠杆菌shiga毒素type-2，ED-B，EGFL7(类EGF结构域蛋白7)，EGFR，EGFRII，EGFRvIII，内皮因子(CD105)，内皮素B受体，内毒素，EpCAM(上皮细胞粘附分子)，EphA2，Episialin，ERBB2(表皮生长因子受体2)，ERBB3，ERG(TMPRSS2ETS融合基因)，大肠杆菌，ETV6-AML，FAP(成纤维细胞活化蛋白α)，FCGR1，甲胎蛋白，纤维蛋白IIβ链，纤连蛋白额外结构域-B，FOLR(叶酸受体)，叶酸受体α，叶酸水解酶，Fos相关抗原1，呼吸道合胞病毒的F蛋白，卷曲的受体，岩藻糖GM1，GD2神经节苷脂，G-28(细胞表面抗原糖脂)，GD3独特型，GloboH，Glypican 3，N-羟乙酰神经氨酸，GM3，GMCSF受体α链，生长分化因子8，GP100，GPNMB(跨膜糖蛋白NMB)，GUCY2C(鸟苷酸环化酶2C)，鸟苷酸环化酶C(GC-C)，肠鸟苷酸环化酶，鸟苷酸环化酶C受体，热稳定肠毒素受体(hSTAR)，热休克蛋白，血凝素，乙肝表面抗原，乙型肝炎病毒，HER1(人类表皮生长因子受体1)，HER2，HER2/neu，HER3(ERBB-3)，IgG4，HGF/SF(肝细胞生长因子/分散因子)，HHGFR，HIV-1，组蛋白复合物，HLA-DR(人类白细胞抗原)，HLA-DR10，HLA-DRB，HMWMAA，人类绒毛膜促性腺激素，HNGF,人类分散因子受体激酶，HPV E6/E7，Hsp90，hTERT，ICAM-1(细胞间粘附分子1)，独特型，IGF1R(IGF–1，类胰岛素生长因子1受体)，IGHE，IFN-γ，流感血凝素，IgE，IgE Fc区，IGHE，IL–1，IL-2R(白介素2受体)，IL–4，IL-5，IL–6，IL-6R(白介素6受体)，IL-9，IL–10，IL–12，IL-13，IL-17，IL-
17A，IL-20，IL-22，IL-23，IL31RA，ILGF2(类胰岛素生长因子2)，整合蛋白(α4、αIIbβ3、αvβ
3、α4β7、α5β1、α6β4、α7β7、αllβ3、α5β5、αvβ5)，干扰素γ诱导蛋白质，ITGA2，ITGB2，KIR2D，LCK，Le，Legumain，Lewis-Y抗原，LFA-1(淋巴细胞功能相关抗原1，CD11a)，LHRH，LINGO-1，脂磷壁酸，LIV1A，LMP2，LTA，MAD-CT-1，MAD-CT-2，MAGE-1，MAGE-2，MAGE-3，MAGE A1，MAGE A3，MAGE 4，MART1，MCP-1，MIF(巨噬细胞迁移抑制因子，或糖基抑制因子(GIF))，MS4A1(跨膜4结构域亚家族A成员1)，MSLN(间皮素)，MUC1(粘蛋白1，细胞表面相关(MUC1)或多态性上皮粘蛋白(PEM))，MUC1-KLH，MUC16(CA125)，MCP1(单核细胞趋化蛋白1)，MelanA/MART1，ML-IAP，MPG，MS4A1，MYCN，髓磷脂相关糖蛋白，Myostatin,NA17，NARP-1,NCA-90(粒细胞抗原)，Nectin-4(ASG-22ME)，NGF，神经细胞凋亡调控蛋白酶1,NOGO-A，Notch受体，核仁素，Neu致癌基因产物，NY-BR-1，NY-ESO-1，OX-40,OxLDL(氧化低密度脂蛋白)，OY-TES1，P21，p53非突变体，P97，PAP，抗(N-羟乙酰神经氨酸)抗体结合部位，PAX3，PAX5，PCSK9，PDCD1(PD-1、程序性细胞死亡蛋白1，CD279)，PDGF-Rα(α血小板源生长因子受体)，PDGFR-β，PDL-1，PLAC1，类PLAP睾丸碱性磷酸酶，血小板衍生生长因子受体β，磷酸钠联合转运体，PMEL 17，聚唾液酸，蛋白酶3(PR1)，前列腺癌，PS(磷脂酰丝氨酸)，前列腺癌细胞，铜绿假单胞菌，PSMA，PSA，PSCA，狂犬病病毒糖蛋白，RHD(Rh多肽1(RhPI)，CD240)，Rhesus因子，RANKL，RhoC，Ras突变，RGS5，ROBO4，呼吸道合胞病毒，RON，肉瘤易位断点，SART3，Sclerostin，SLAMF7(SLAM成员
7)，Selectin P，SDC1(多配体蛋白聚糖1)，系统性红斑狼疮(a)，生长调节素C，SIP(1-磷酸鞘氨醇)，生长激素抑制素，精子蛋白17，SSX2，STEAP1(6-跨膜上皮前列腺抗原1)，STEAP2，STn，TAG-72(肿瘤相关糖蛋白)，存活素，T细胞受体，T细胞跨膜蛋白，TEM1(肿瘤血管内皮标记1)，TENB2，Tenascin C(TN-C)，TGF-α，TGF-β(转化生长因子β)，TGF-β1，TGF-β2(转化生长因子2)，Tie(CD202b)，Tie2，TIM-1(CDX-014)，Tn，TNF，TNF-α，TNFRSF8，TNFRSF10B(肿瘤坏死因子受体超家族成员10B)，TNFRSF13B(肿瘤坏死因子受体超家族成员13B)，TPBG(滋养细胞糖蛋白)，TRAIL-R1(TNF相关坏死诱导配体受体1)，TRAILR2(死亡受体5(DR5))，肿瘤相关的钙信号传感器2，肿瘤特异糖基化的MUC1，TWEAK受体，TYRP1(糖蛋白75)，TRP-2，酪氨酸酶，VCAM-1(CD106)，VEGF,VEGF-A,VEGF-2(CD309)，VEGFR-1，VEGFR2，vimentin,WT1,XAGE
1，表达任何胰岛素生长因子受体的细胞，或任何表皮生长因子受体。
14.权利要求12中的肿瘤细胞选自淋巴瘤细胞、骨髓瘤细胞、肾细胞癌细胞、乳腺癌细
胞、前列腺癌细胞、卵巢癌细胞、结肠癌细胞、胃癌细胞、鳞状细胞癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌细胞、睾丸癌细胞，或任何不受控、加速生长、分化而致癌的细胞。
15.权利要求1，2，3和4中的连接体组分R1和R2，可以由一个或者多个的连接体组分构
成：6-马来酰亚胺己酸(MC)，3-马来酰亚胺基丙酸(MP)，缬氨酸-瓜氨酸(val-cit)，丙氨酸-苯丙氨酸(ala-phe)，对氨基苄氧羰基(PAB)，4-硫代戊酸(SPP)，4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸(MCC)，4-硫代丁酸(SPDB)，乙基马来酰亚胺(ME)，4-硫代-2-羟基磺基丁酸(2-Sulfo-SPDB)，吡啶二硫醇(PySS)，烷氧基氨基(AOA)，乙烯氧基(EO)，4-甲基-4-二硫-戊酸(MPDP)，叠氮(N3)，炔，二硫代，肽，和/或(4-乙酰基)氨基苯甲酸酯(SIAB)。
16.权利要求2中，Drug1和Drug2为Tubulysin同系物，具有结构通式(II)的优选的偶联
物T01，T02，T03，T04，T05和T06：
其中mAb是抗体；Z3和Z3’是H，OP(O)(OM1)(OM2)，OCH2OP(O)(OM1)(OM2)，OSO3M1，R1或O-糖苷(糖苷，半乳糖苷，甘露糖苷，葡萄糖苷，果糖苷等)，NH-糖苷，S-糖苷或CH2-糖苷；M1和M2独立地为H，Na，K，Ca，Mg，NR1R2R3；n是1～20；X1，X2，R1，R2和R3与权利要求1中定义相同。
17.权利要求2中，Drug1和Drug2为加利车霉素同系物，具有结构通式(II)的优选的偶联
物C01：
其中mAb是抗体；n是1～20；X1，X2，R1和R2与权利要求1中定义相同。
18.权利要求2中，Drug1和Drug2为美登素生物碱同系物，具有结构通式(II)的优选的偶
联物M01：
其中mAb是抗体；n是1～20；X1，X2，R1和R2与权利要求1中定义相同。
19.权利要求2中，Drug1和Drug2为紫杉烷同系物，具有结构通式(II)的优选的偶联物
Tx01，Tx02和Tx03：
其中mAb是抗体；n是1～20；X1，X2，R1和R2与权利要求1中定义相同。
20.权利要求2中，Drug1和Drug2为CC-1065同系物，具有结构通式(II)的优选下面的偶
联物CC01，CC02，CC03：
其中mAb是抗体；n是1～20；Z4和Z4’是HH，PO(OM1)(OM2)，SO3M1，CH2PO(OM1)(OM2)，CH3N(CH2CH2)2NC(O)-，O(CH2CH2)2NC(O)-，R1或糖苷；X3和X3’是O，NH，NHC(O)，OC(O)，C(O)O，R1或缺省；X1、X2、R1、R2、M1和M2与权利要求1中定义相同。
21.权利要求2中，Drug1和Drug2为柔红霉素/阿霉素同系物，具有结构通式(II)的优选
的偶联物Da01，Da02，Da03和Da04：
其中mAb是抗体；n是1～20；X3和X3’是独立的H，O，NH，NHC(O)，NHC(O)NH，C(O)，OC(O)或R1；X1、X2、R1和R2与权利要求1中定义相同。
22.权利要求2中，Drug1和Drug2为澳瑞他汀同系物，具有结构通式(II)的优选的偶联物
Au01，Au02，Au03，Au04和Au05：
其中mAb是抗体；n为1～20；X3和X3’为独立的CH2，O，NH，NHC(O)，NHC(O)NH，C(O)，OC(O)R1或缺省；X4和X4’是独立的CH2，C(O)，C(O)NH，C(O)N(R1)，R1，NHR1，NR1，C(O)R1或C(O)O；Z3和Z3’是独立的H，R1，OP(O)(OM1)(OM2)，NHR1，OCH2OP(O)(OM1)(OM2)，OSO3M1或O-糖苷(糖苷，半乳糖苷，甘露糖苷，葡萄糖苷，果糖苷等)，NH-糖苷，S-糖苷或CH2-糖苷；M1和M2独立地为H，Na，K，Ca，Mg，NR1R2R3；X1，X2，R1，R2和R3与权利要求1中定义相同。
23.权利要求2中，Drug1和Drug2为苯并二氮卓二聚体同系物，具有结构通式(II)的优选
的偶联物PB01，PB02，PB03，PB04，PB05，PB06，PB07，和PB08：
其中mAb是抗体；n为1～20；X3和X3’为独立的CH2，O，NH，NHC(O)，NHC(O)NH，C(O)，OC(O)，OC(O)(NR3)，R1，NHR1，NR1，C(O)R1或缺省；X4和X4’是独立的CH2，C(O)，C(O)NH，C(O)N(R1)，R1，NHR1，NR1，C(O)R1或C(O)O；X1，X2，R1，R2和R3与权利要求1中定义相同。另外，R1和/或R2可以缺省。
24.一种用于癌症、自身免疫性疾病或传染病的治疗或预防的药物组合物，包含治疗有
效剂量的权利要求2，16，17，18，19，20，21，22，和/或23中的偶联物，和其药学可接受的盐、载体、稀释剂或赋形剂或其组合。
25.权利要求2，16，17，18，19，20，21，22，23或24中的偶联物，具有体外，体内或离体活性。
26.权利要求2，16，17，18，19，20，21，22，或23中的偶联物，其中连接体组分R1和/或R2包含一个1～20天然或非天然氨基酸单元的肽，氨基苄单元，6-马来酰亚胺己酰基单元，二硫化物，硫醚单元，腙单元、三唑单元，或烷氧肟单元。
27.权利要求2，16，17，18，19，20，21，22，或23中的连接体可以被蛋白酶所切断。
28.一种药物组合物，包含治疗有效量的权利要求2，16，17，18，19，20，21，22，23或/和
24中的偶联物，与其它治疗剂如化疗药物、放射治疗、免疫治疗剂，自身免疫性疾病药物、抗感染药物或其他偶联物同时使用，协同有效治疗或预防癌症、自身免疫性疾病或传染病。
29.权利要求28中的协同剂优选自下列药物中的一种或几种：阿巴西普，醋酸阿比特
龙，对乙酰氨基酚/氢可酮，阿达木单抗，阿法替尼马来酸盐，阿仑单抗，阿利维A酸，曲妥珠单抗，苯丙胺混合盐(苯丙胺/右苯丙胺)阿那曲唑，阿立哌唑，阿扎那韦，Atezolizumab，阿托伐他汀，阿昔替尼，贝林，贝伐单抗，卡巴他赛，卡博替，贝沙罗汀，blinatumomab，硼替佐米，波舒替尼，brentuximab vedotin，布地奈德，布地奈德/福莫特罗，丁丙诺啡，卡培他滨，卡非佐米，塞来考昔，ceritinib，西妥昔单抗，环孢素，西那卡塞，克里唑替尼，达比加群，达拉菲尼，阿法达贝汀，地瑞那韦，甲磺酸伊马替尼，达沙替尼，地尼白介素，狄诺塞麦，双丙戊酸钠，右兰索拉唑，右哌甲酯，Dinutuximab，多西环素，度洛西汀，恩曲他滨/利匹韦林/替诺福韦地索普西富马酸盐，恩曲他滨/替诺福韦/依法韦仑，依诺肝素，恩杂鲁胺，阿法依泊汀，厄洛替尼，埃索美拉唑，依折麦布，依折麦布/辛伐他汀，非诺贝特，非格司亭，芬戈莫德，丙酸氟替卡松，氟替卡松/沙美特罗，氟维司群，吉非替尼，格拉替雷，醋酸戈舍瑞林，伊马替尼，替伊莫单抗，依鲁替尼，胰岛素门冬胰岛素，地特胰岛素，甘精胰岛素，赖脯胰岛素，干扰素β1a，干扰素β1b，拉帕替尼，Ipilimumab，异丙托溴铵/沙丁胺醇，醋酸兰乐肽，来那度胺，联合二甲苯磺酸盐，来曲唑，左甲状腺素，左旋甲状腺素，利多卡因，利奈唑胺，利拉鲁肽，MEDI4736，美金刚，哌醋甲酯，美托洛尔，莫达非尼，莫米松，尼罗替尼，Nivolumab，奥法木单抗，奥立他珠单抗，帕唑帕尼，派姆单抗，培美曲塞，帕妥珠单抗，肺炎球菌结合疫苗，泊马度胺，普瑞巴林，喹硫平，雷贝拉唑氯化镭223，雷洛昔芬，拉替拉韦，雷莫瑞单抗，雷珠单抗，瑞格菲尼，利妥昔单抗，利伐沙班，罗米地辛，罗苏伐他汀，鲁索替尼磷酸盐，沙丁胺醇，司维拉明，西地那非，siltuximab，西他列汀，西他列汀/二甲双胍，索非那新，索拉非尼，舒尼替尼，他达拉非，他莫昔芬，替拉普韦，替西罗莫司，替诺福韦/恩曲他滨，睾酮凝胶，沙利度胺(Talidex)，噻托溴铵，托瑞米芬，曲美替尼，曲妥珠单抗，Tretinoin，尤特克单抗，缬沙坦，凡德他尼，维罗非尼，伏立诺他，阿柏西普，Zostavax及其同系物、衍生物、药学上可接受的盐、载体、稀释剂或赋形剂，或其组合。
细胞结合分子的特异性偶联
技术领域
的方法：或者先用这类连接体修饰药物，再与细胞结合剂反应，或者先用这类连接体修饰细胞结合剂，再与药物分子反应。
技术背景
Interscience,2005)。在蛋白许多的应用中，该蛋白常要用意思的基团修饰，比如细胞毒性分子，放射性元素标签或具有色谱特性的分子，以满足治疗或诊断检测的需要(Teicher,
B.A.et al.Clin.Cancer Res.2011,17,6389-97；Elsadek,B.et al.,J.Control Release,
2012,157,4～28)。这些应用之一，抗体-药物共轭偶联物(ADCs)，在近20年内作为热点得到了深入的开发，它结合了抗体精确的靶向性和抗肿瘤试剂的细胞毒性，使得药物被定靶传
送进入癌细胞，而并不对正常细胞产生影响。尤其是，自从美国FDA在2011年批准了
Adcetris(brentuximab vedotin)，2013年批准了Kadcyla(ado-trastuzumab emtansine)
以来，应用抗体-药物共轭偶联物作为靶向治疗癌症的手段，已经被国际几乎所有的制药公司和生物科技公司所应用(Chari,R.et al,Angew.Chem.,Int.Ed.2014,53,3796-3827；
Sievers,E.L.et al.Annu Rev Med.2013,64,15-29；Mehrling,T.Future Oncol,2015,11,
549)。根据网站www.clinictrails.gov.的统计目前在临床试验阶段的ADC药物有50多个。
50个暴露在表面的赖氨酸和8个半胱氨酸，这种非选择性偶联方式会导致细胞毒性分子和
抗体表面所有区域发生随机交叉链接，产生多种多样，DAR值(药物抗体比)分布宽泛的ADC
群(Wang,L.,et al.2005Protein Sci.14,2436；Hamblett,K.J.,et al.2004Clin.Cancer
Res.10,7063)。部分不希望产生的ADC亚群具有循环半衰期缩短、低效、潜在脱靶毒性高以及体内药代动力学(PK)性质不确定等缺陷(Hamblett,K.J.et al,Clin.Cancer Res.2004,
10,7063-7070；Adem,Y.T.et al,Bioconjugate Chem.2014,25,656-664；Boylan,
N.J.Bioconjugate Chem.,2013,24,1008–1016；Strop,P.,et al Chem.Biol.2013,20,
161-167)。此外，这种传统的偶联方式生产的ADC，保持批间一致性非常具有挑战性，需要更高的生产能力(Wakankar,A.mAbs,2011,3,161–172)。
方法包括：在抗体上引入非配对的半胱氨酸，例如Genentech的THIOMAB抗体(Junutula,
J.R.,et al Clin.Cancer Res.2010，16,4769；Junutula,J.R.,et al Nat
Biotechnol.2008 26,925-32；US专利8,309,300；7,855,275；7,521,541；7,723,485；
WO2008/141044)；或引入谷氨酰胺标签，可以被用茂原轮链丝菌扩增的谷氨酰胺转胺酶
(mTG)(Strop,P.,Bioconjugate Chem.,2014,25,855–862；Strop,P.,et al.,
Chem.Biol.2013,20,161–167；辉瑞Rinat公司的美国专利8,871,908)或由细菌来源的谷氨酰胺转胺酶(MTGase)(Dennler,P.,et al,Bioconjug.Chem.2014,25,569–578；Innate药物公司美国专利申请20130189287；意大利Bio-Ker S.r.l.公司的美国专利7,893,019)所识
别；引入巯基-L-岩藻糖(Dennler,P.,et al,Bioconjugate Chemistry 2014,25,569；
Okeley,N.M.,et alBioconjugate Chem.2013,24,1650)；通过诱变引入非天然氨基酸
(Axup,J.Y.,et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.2012,109,16101–16106；Zimmerman,E.S.,et
al.,Bioconjug.Chem.2014,25,351–361；Wu,P.,et al,Proc.Natl.Acad.Sci.2009,106,
3000-3005；Rabuka,D.,et al,Nat.Protoc.2012,7,1052-67；Sutro生物药物公司美国专利
8,778,631和美国专利申请20100184135，世界知识产权专利申请WO2010/081110；Ambrx公
司专利WO2006/069246,2007/059312,美国专利7,332,571,7,696,312；和7,638,299；
Allozyne公司专利WO2007/130453及美国专利7,632,492；7,829,659)；引入硒代半胱氨酸
(Hofer,T.,et al Biochemistry 2009,48,12047–12057；美国国家癌症研究院的美国专利
8,916,159)；用甲酰甘氨酸生成酶(FGE)将CXPXR共有序列上的半胱氨酸转化为甲酰甘氨酸
(FGly)(Drake,P.M.,et al.,Bioconjug.Chem.2014,25,1331–1341.美国专利7,985,783；
Redwood生命科学公司的美国专利8,097,701；8,349,910和美国专利申请20140141025,
20100210543)；或用半乳糖或唾液酸转移酶通过糖工程引入唾液酸(Zhou,Q.,et al
Bioconjug.Chem.,2014,25,510-520,赛诺菲-健赞公司的美国专利20140294867)。用上述
的方法可以生产出均一的产品，但是它们都需要抗体工程改造和重新优化细胞培养条件。
此外,非天然氨基酸基因编码的表达通常没有希望的那么高(Tian,F.,et al,2014,
Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.111,1766-71)，这一点对ADC产品的成本有重要的影响。另外，通过半胱氨酸侧链偶联获得的ADC药物通常在循环系统中的稳定性有限，导致了在抵达肿
瘤细胞前，毒性小分子荷载过早的断裂(Junutula,J.R.,et al Nat.Biotechnol.2008,26,
925-32)。
Frangione B,Milstein C.Nature 1967,216:939-941；Pink JR,Milstein C.Nature
1967,216:941-942；Frangione B,et al.Biochem J 1968,106,15–21；Frangione B,
Milstein C.J Mol Biol1968；33:893–906；Edelman GM,et al.Proc Natl Acad Sci USA
1969；63:78-85；Frangione B,et al.Nature 196,221:145-148,Spiegelberg,H.L.et al Biochemistry,1975,10,2157-63)。二硫键对于IgG分子的结构、稳定性和生物功能都有很
重要的作用。在IgG抗体的四种亚型IgG1,IgG2,IgG3和IgG4中，每个IgG分子含有总共12个链内二硫键；每个二硫键与一个独立的IgG域相关联。两条重链在铰链区通过不同数目的二硫键相连：IgG1和IgG4是2个，IgG2 4个，IgG311个。在IgG1上，轻链上最后一个半胱氨酸与重链上第5个半胱氨酸形成二硫键而相连。在IgG2,IgG3和IgG4上，轻链上最后一个半胱氨酸与重链上第3个半胱氨酸形成二硫键(Liu,H.and May,K.,2012,mAbs 4,17-23)。通过还原实验、烷基化和LC-MS分析，可以知道人源IgG1抗体上二硫键断裂难易的特性(Liu,H,et al
Anal.Chem.,2010,82,5219–5226)。链间二硫键比链内二硫键更易被还原断裂，并且轻重链之间的二硫键比两条重链间的二硫键更易被还原断裂。两条重链上部的链间二硫键比下部
的那一条更易断裂。此外,CH2域上的二硫键是最容易被还原的。VL,CL,VH,和CH1域的二硫
键具有相似的中等程度的可断裂性，而CH3域的二硫键是最不易被还原的(Liu,H,et al
Anal.Chem.,2010,82,5219–5226)。
为下一代的马来酰亚胺化合物(NGMs)，即溴代物或二溴马来酰亚胺类化合物(Schumacher,
F.F.,et al Org.Biomol.Chem.2014,12,7261–7269)，使用双烷基化试剂形成一个三碳桥
键(Badescu,G.,et al.,Bioconjug.Chem.2014,25,1124–1136,PolyTherics有限公司的专
利WO2013/190272,WO2014/064424)，使用双取代的杂芳基桥键(Concortis生物系统公司的
美国专利申请2015/0105539)，或通过双马来酰亚胺作为桥键(WO2014/114207)。我们同样
使用溴代马来酰亚胺和二溴马来酰亚胺作为连接体来偶联药物和抗体(WO2014/009774,
PCT/IB2012/053554)已很长时间了。但是，上述的桥连接体的设计是将一个细胞毒性分子
和一对二硫键偶联，由于受抗体上可用于共轭偶联的双硫键数目所限(约为2对)，大多数情况下生产出的ADCs药物DAR值低于2。
3191；Chari,R.V.Acc.Chem.Res.,2008,41,98-107,Zhao,R.Y.2011J.Med.Chem.54,3606-
3623)。本发明中的新型二硫键桥连接体不仅能够在每个连接体上连上2个或更多的小分子
药物，实现更高的DAR(≥4)，并且为了能够选择性地桥连抗体表面的链间二硫键。这是由于乙炔二羰基中三键伸展的自然特性决定的，当两个毒性小分子连接于伸展的桥连接体两端
的时候，能形成大分子( 间距)，其它二硫基团，如重链内部下端二硫基团难以接近。因
此本发明的二硫键桥连接体，可以选择性地桥连被TCEP或DTT断裂的抗体链间自由巯基对，从而产生DAR大于4的ADC。其它被还原过头的二硫键由于难以被桥连接体，特别是为含有2
个毒性小分子的伸展的桥连接体所接近，可以在偶联完成后用氧化物如脱氢抗坏血酸
(DHAA)或Cu(II)重新连接。总之，本发明中的这些桥连接体可以以一种简便的方式产生同
质均一的ADC药物。
发明摘要
其中Cb是细胞结合剂，L是连接体，Drug1和Drug2是药物小分子，n是
一个1到20的整数，且2个硫元素桥连Cb于L，每个桥连接体L共价连接2个或更多的药物分
子。在细胞小分子-药物偶联物中应用这类连接体的优点有：a).共价交联(重新搭桥)细胞
结合剂(如抗体)上还原打开的二硫键巯基的方式，有利于保持偶联物的稳定性；b).可以使毒性小分子/药物连接在细胞结合剂的特定位置，比如IgG抗体的链间位点，从而产生均一
的ADC药物。
乙炔乙二酸结构：
2-二甲基丁基，2,3-二甲基丁基，2,2-二甲基戊基，2,3-二甲基戊基，3,3-二甲基戊基，2,3,
4–三甲基戊基，3-甲基己基，2,2-二甲基己基，2,4-二甲基己基，2,5-二甲基己基，3,5-二甲基己基，2,4-二甲基戊基，2-甲基庚基，3-甲基庚基，正庚基，异庚基，正辛基，异辛基。一个C1-C8烷基可以是未被取代的或被一个或多个下列基团取代的，包括但不限于-C1-C8烷基，-O-(C1-C8烷基)，芳基，-C(O)R',-OC(O)R',-C(O)OR',-C(O)NH2,-C(O)NHR',-C(O)N(R')2,-NHC(O)R',-SR',-S(O)2R',-S(O)R',-OH,卤素，-N3,-NH2,-NH(R'),-N(R')2和–CN；其中每个R'独立选自-C1-C8烷基和芳基。“卤素”指氟、氯、溴、碘原子，优选为氟和氯原子。
2OR’,-OS(O)2OR’,-PR’R”,-P(O)R’R”,-P(OR’)(OR”),-P(O)(OR’)(OR”)或-OP(O)(OR’)(OR”)所取代，其中R’,R”是独立的氢,烷基,烯基,炔基,杂烷基,芳基,芳烷基,羰基或药用盐。
Physics,78th Edition,CRC Press,Inc.,1997-1998,p.225to 226。优选的非芳香类杂环
包括，但不限于环氧、乙烯亚氨基、吡咯烷、吡唑烷基，烷基咪唑、环氧乙烷基、四氢呋喃、二氧戊环、吡喃阿霉素，二恶烷基，二氧戊环、呱，哌嗪，吗啉、吡喃、咪唑啉、吡咯啉基、吡唑啉基、噻唑烷基，四氢噻喃，二噻烷，硫吗啉，二氢吡喃、吡喃阿霉素，四氢吡啶、二氢吡啶、四氢嘧啶、二氢噻喃、六亚甲基亚胺以及它们与苯基缩合而产生的结构。
HPLC，高效液相色谱；NHS，N-羟基琥珀酰亚胺；MMP，4-甲基吗啉；PAB，对氨基苯基；PBS，磷酸缓冲液(pH 7.0～7.5)；PEG，聚乙二醇；SEC，分子排阻色谱；TCEP，磷酸三氯乙酯；TFA，三氟乙酸；THF，四氢呋喃；Val，缬氨酸。
季铵盐。例如，常规的无毒盐包括无机酸的衍生物，如盐酸、氢溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等；和用有机酸制备的盐，如乙酸、丙酸、丁二酸、酒石酸、柠檬酸、磺酸、苯磺酸、葡萄糖、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、对甲苯磺酸、草酸、琥珀酸，马来有机酸、乳酸等。其它盐包括铵盐，如三甲胺，甲葡胺、吡咯乙醇盐等，和金属盐，如钠、钾、钙、锌和镁盐。
见于图2和10。
(EDC)，二环己基碳二亚胺(DCC)，N,N'-二异丙基碳二酰亚胺(DIC)，1-环已基-2-吗啉乙基碳二亚胺对甲苯磺酸盐(CMC,或CME-CDI)，羰基二咪唑(CDI)，TBTU(O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸)，O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)，苯并三氮唑-1-基氧
基三(二甲基氨基)磷鎓六氟磷酸盐(BOP)，六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷
(PyBOP)，焦碳酸二乙酯(DEPC)，N,N,N',N'-四甲基氯甲脒六氟磷酸盐,2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)，1-[(二甲胺)(吗啉基)亚甲基]-1[1,2,3]三
唑并[4,5-b]1-吡啶-3-氧六氟磷酸盐(HDMA)，2-氯-1,3-二甲基咪唑鎓六氟磷酸盐(CIP)，
氯代三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐(PyCloP)，双(四亚甲基)氟代甲酰胺(BTFFH)，N,N,N',N'-四甲基-硫-(1-氧代-2-吡啶基)硫脲鎓六氟磷酸盐,2-(2-吡啶酮-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲
四氟硼酸盐(TPTU)，硫-(1-氧代-2-吡啶基)-N,N,N',N'-四甲基硫脲六氟磷酸盐,O-[(乙氧
基羰基)氰基甲胺]-N,N,N',N'-四甲基硫脲六氟磷酸盐(HOTU)，(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代
亚乙基氨基氧基)二甲基氨基-吗啉-碳鎓六氟磷酸盐(COMU)，(苯并三氮唑-1-基氧基)二吡
咯烷碳六氟磷酸盐(HBPyU)，N-苄基-N′-环己基碳二亚胺(或荷载在聚合物上)，二吡咯烷基(N-琥珀酰亚氨氧基)碳鎓六氟磷酸盐(HSPyU)，1-(氯-1-吡咯烷基亚甲基)吡咯烷六氟磷酸
盐(PyClU)，2-氯-1,3-二甲基咪唑四氟硼酸盐(CIB)，(苯并三氮唑-1-基氧基)二哌啶碳六
氟磷酸盐(HBPipU)，6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯(TCTU)，溴化三(二甲
基氨基)膦六氟磷酸(BroP)，1-正丙基磷酸酐(PPACA， )，2-异氰基乙基吗啉(MEI)，N,
N,N',N'-四甲基脲-氧-(N-琥珀酸亚胺基)六氟磷酸盐(HSTU)，2-溴-1-乙基吡啶四氟硼酸
盐(BEP)，氧-[(乙氧基羰基)氰基甲胺]-N,N,N',N'-四甲基硫尿四氟硼酸盐(TOTU)，4-(4,
6-二甲氧基三嗪-2-基)-4-甲基吗啉盐酸盐(MMTM,DMTMM)，2-琥珀酰亚胺基-1,1,3,3-四甲
基脲四氟硼酸酯(TSTU)，N,N,N',N'-四甲基-O-(3,4-二氢-4-氧代-1,2,3-苯并三嗪-3-基)
脲四氟硼酸盐(TDBTU)，偶氮二甲酰二哌啶(ADD)，双(4-氯苄基)偶氮二甲酸酯(DCAD)，偶氮二甲酸二叔丁酯(DBAD)，偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD)，偶氮二甲酸二乙酯(DEAD)。
4-硫代丁酸(SPDB)，4-硫代-2-羟基磺基丁酸(2-Sulfo-SPDB)，一个或者多个乙氧基-
CH2CH2O-单元(″EO″or″PEO")，还包括其他在本领域中众所周知的连接体，部分在这里列出。
结合剂-药物偶联物的合成，是通过修饰的细胞结合剂中的二硫键和含有游离巯基的药物
之间的二硫键交换来实现的；通过硫醚键结合的细胞结合子-药物偶联物的合成，是通过经马来酰亚胺基或卤乙酰基或乙基砜修饰的细胞结合剂和含游离巯基的药物反应来实现；合
成分子内含酸不稳定的腙的偶联物，可由一个连接体中的酰肼基团和羰基反应来实现，具
体方法也为本领域内公知(参考P.Hamann et al.,Hinman,L.M.,et al,Cancer Res.1993,
53,3336-334；B.Laguzza et al.,J.Med.Chem.,1959,32；548-555；P.Trail et al.,
Cancer Res.,1997,57；100-105)；合成含三唑基团的偶联物可以通过一个连接体上的1-炔与含叠氮基团的药物以点击化学反应(偶极环加成)来实现(Lutz,J-F.et al,Adv.Drug
Del.Rev.2008,60,958–970；Sletten,E.M.et al Acc.Chem.Research2011,44,666–676)。
(III)中连接体上的马来酰亚胺、卤乙酰基或乙磺酰基，在pH 5.5-9的缓冲液中反应，生成硫醚键链接的共轭偶联物。含巯基的药物可以与公式(III)中连接体上的吡啶二硫片段进
行二硫键交换，生成二硫键链接的共轭偶联物。含有羟基或巯基的药物可与公式(III)中连接体上的卤素，尤其是α卤代羧酸上的卤素，在弱碱条件下，如pH值8.0-9.5，反应得到醚或硫醚键链接的共轭偶联物。含羟基的药物，也可以在EDC或DCC的缩合剂的作用下，和公式
(I)中连接体上的羧基缩合成酯。经药物修饰的桥连接体再与细胞结合分子进行偶联。含有氨基的药物可以和公式(III)中连接体上的NHS、咪唑、硝基苯酚、N-羟基丁二酰亚胺、苯酚、二硝基苯酚、五氟苯酚、2,3,5,6-四氟苯酚、二氟苯酚、单氟苯酚、五氯苯酚、三氟甲烷磺酸、二氯苯酚、四氯苯酚、1-羟基苯并三唑、甲苯磺酸、甲磺酸、2-乙基-5-苯基异恶唑-3'-磺酸的羧酸酯反应，得到酰胺键链接的共轭偶联物。
500mM。同时将细胞结合剂，如抗体以1～35mg/ml的浓度溶解在pH 5～9.5,最好6～8.5的缓冲液中，与1～20当量的TCEP或者DTT反应20分钟到12小时。还原后，用SEC色谱柱纯化除去DTT。TCEP可以用SEC色谱柱纯化或者不纯化直接进入下一步。此外，用TCEP还原的抗体或其他细胞结合剂可以在公式(I)桥连接体存在下进行，此时细胞结合剂的交联共轭偶联就和
TCEP还原同步进行。
HEPES，和MOPS缓冲液，可以包含其它成分，如环糊精，蔗糖和盐，如氯化钠和氯化钾。将公式(I)中的桥连接体溶液加入到还原的细胞结合剂溶液中，并在4至45℃，最好是室温孵育，并通过测量溶液在254nm或者其他合适的波长吸光度，来监测反应的进程。在反应完成后，可以按照常规方法纯化修饰的细胞结合剂，例如使用凝胶过滤层析或吸附色谱法。
(CEMS)来分析确定。本发明中的桥连接体上可以含有不同种类的官能团，可与各种药物反
应，尤其是具有合适的官能团的细胞毒性药物。例如，修饰后含氨基或羟基取代基的细胞结合剂能与含N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)酯的药物反应，修饰后含巯基的细胞结合剂能与含马
来酰亚胺基或卤素乙酰基的药物反应。此外，修改后含羰基(醛或酮基)的细胞结合剂能与
含酰肼或烷氧基胺的药物反应。本领域的技术人员可以很容易地根据其中官能团的反应活
性来确定使用怎样的连接体。
方法在反应式(Ia),(Ib),(Ic),(Id),(Ie),(If),(Ig)和(Ih)中已有描述。
物。
复合或反应。
4861)；干扰素(如I，II，III型)；多肽；淋巴因子如IL-2，IL-3，IL-4，IL-5，IL-6，IL-10，GM-CSF，干扰素-γ(IFN-γ)；激素例如胰岛素，TRH(促甲状腺激素释放激素)，MSH(促黑素细胞激素)，类固醇激素如雄激素和雌激素；生长因子和集落刺激因子，如表皮生长因子(EGF)，粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)，转化生长因子(TGF)如TGFα，TGFβ，胰岛素和胰岛素样生长因子(IGF-I,IGF-II)，G-CSF，M-CSF和GM-CSF(Burgess,Immunology Today 1984,
5,155-158)；牛痘生长因子(VGF)；成纤维细胞生长因子(FGF)；小分子量的蛋白质；多肽；肽和肽激素，如铃蟾肽，胃泌素，胃泌素释放肽；血小板衍生的生长因子；白细胞介素和细胞因子，例如，白细胞介素-2(IL-2)，白细胞介素-6(IL-6)，白血病抑制因子，粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)；维生素，如叶酸；脱辅基蛋白和糖蛋白，如转铁蛋白(O'Keefe et al,J.Biol.Chem.1985 260932-937)；糖结合蛋白或脂蛋白，如凝集素；细胞营养传递分子；小分子抑制剂，如前列腺特异性膜抗原(PSMA)抑制剂和小分子酪氨酸激酶抑制剂(TKI)，非肽或任何其它细胞结合分子或物质，如生物活性聚合物(Dhar ,et al ,
Proc.Natl.Acad.Sci.2008,105,17356-61)，生物活性树枝状大分子(Lee,et al,
Nat.Biotechnol.2005,23,1517-26；Almutairi,et al；Proc.Natl.Acad.Sci.2009,106,
685-90)，纳米粒子(Liong,et al,ACS Nano,2008,19,1309-12；Medarova,et al,
Nat.Med.2007,13,372-7；Javier,et al,Bioconjugate Chem.2008,19,1309-12)，脂质体
(Medinai,et al,Curr.Phar.Des.2004,10,2981-9)和病毒外壳(Flenniken,et al,
Viruses Nanotechnol.2009,327,71-93)。
胞，与已经用所需抗原免疫的小鼠的脾细胞融合，来制备单克隆抗体( G.；Milstein,
C.Nature 1975,256:495-497)。详细的过程在“Antibodies--A Laboratory Manual,
Harlow and Lane,eds.,Cold Spring Harbor Laboratory Press,New York(1988)”中有
描述，此处引作参考。具体地，可以用目标抗原，如完整的靶细胞，从靶细胞分离的抗原，完整的病毒，灭活的全病毒和病毒蛋白质，免疫小鼠，大鼠，仓鼠或任何其它哺乳动物。通常使用聚乙二醇(PEG)6000将脾细胞与骨髓瘤细胞融合。通过对HAT(次黄嘌呤-氨基蝶呤-胸腺
嘧啶)的敏感性来筛选融合细胞。通过它们免疫反应特异性受体的能力或抑制靶细胞上的
受体活性的能力，可以确定实施本发明的单克隆抗体的杂交瘤。
足的一段时间，以使杂交瘤将抗体分子分泌到培养基。然后收集含有抗体的培养基。使用通过公知的技术进一步分离抗体分子，如蛋白质A亲和层析，阴离子、阳离子、疏水或体积排阻色谱法(特别是通过蛋白质A亲和层析和体积排阻色谱法)，离心，差异溶解度或任何其他纯化蛋白质的标准技术。
ppm的Cu，Mn，Fe或Zn等重金属或/和重金属盐，以及消泡剂如聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物。
4))或卡波西肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)，见于美国专利4,341,761；4,399,121；4,427,783；
4,444,887；4,451,570；4,466,917；4,472,500；4,491,632；4,493,890。单克隆抗体也可以通过含末端羧基的抗受体肽或肽制备，这些都为如本领域所公知，可参考文献Niman et
al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,1983,80:4949-4953；Geysen et al.,
Proc.Natl.Acad.Sci.USA,1985,82:178-182；Lei et al.Biochemistry 1995,34(20):
6675-6688。通常，抗受体肽或肽类似物作为产生抗受体肽单克隆抗体免疫原，可以单独使用或与免疫原性载体连接。
式，可用于选择能与抗原特异性结合的人源抗体。噬菌体展示技术在文献中也有详细描
述，，噬菌体展示库的构建和筛选在本领域也是众所周知的，可参考文献Dente et al,
Gene.1994,148(1):7-13；Little et al,Biotechnol Adv.1994,12(3):539-55；Clackson et al.,Nature 1991,352:264-628；Huse et al.,Science 1989,246:1275-1281。
描述，如美国专利5,859,205和6,797,492；Liu et al,Immunol Rev.2008,222:9-27；
Almagro et al,Front Biosci.2008,13:1619-33；Lazar et al,MolImmunol.2007,44(8):
1986-98；Li et al,Proc.Natl.Acad.Sci.U S A.2006,103(10):3557-62，此处引为参考。
完整人抗体也可以通过用免疫原免疫携带大部分的人类球蛋白重轻链的转基因小鼠、兔
子、猴子或其他哺乳动物来制备。这些老鼠的例子有：Xenomouse(Abgenix/Amgen)，HuMAb-Mouse(Medarex/BMS)和VelociMouse(Regeneron)，参考美国专利6,596,541,6,207,418,6,
150,584,6,111,166,6,075,181,5,922,545,5,661,016,5,545,806,5,436,149和5,569,
825。用于人类治疗时，小鼠的可变区域和人的恒定区域也可以被融合，成为“嵌合抗体”，它在人类身上的免疫原性显著低于小鼠单抗(Kipriyanov et al,MolBiotechnol.2004,26:
39-60；Houdebine,CurrOpinBiotechnol.2002,13:625-9)。另外，在抗体可变区域的定点诱变能导致抗体具有较高的亲和性和特异性(Brannigan et al,Nat Rev Mol Cell
Biol.2002,3:964-70；Adams et al,J Immunol Methods.1999,231:249-60)，抗体恒定区
域的改变可以提高其介导结合和细胞毒性的效应功能。
编码可以商业获得，例如从GenBank数据库或类似数据库，文献出版物获得，或通过常规克隆和测序得到。
肽或蛋白质，它们对表位或相应的受体有亲和力，不一定非得是免疫球蛋白家族成员。这些肽可以通过类似噬菌体显示抗体的技术分离出来(Szardenings,J Recept Signal
Transduct Res.2003；23(4):307-49)。从随机肽库中获得的肽可以与抗体和抗体片段类似被使用。肽或蛋白质结合分子可以偶联或链接至大分子或其他物质，包括但不限于白蛋白、聚合物、脂质体、纳米粒子、树形分子，只要这样的链接能保留肽或蛋白质的抗原结合特异性。
6)，Alemtuzumab(Campath，MabCampath，抗CD52)，Altumomab(抗CEA)，Anatumomab(抗TAG-
72)，Anrukinzumab(IMA-638,抗-IL-13)，Apolizumab(抗-HLA-DR)，阿奇单抗(抗-CEA)，阿塞珠单抗(抗-L-选择蛋白CD62L)，Atlizumab(tocilizumab,Actemra,RoActemra,抗-IL-6
受体),Atorolimumab(抗-Rhesus因子),Bapineuzumab(抗-β淀粉样蛋白)，Basiliximab
(Simulect，抗CD25(IL-2受体的α链))，Bavituximab(抗磷脂酰丝氨酸)，Bectumomab
(LymphoScan，抗-CD22)，贝利单抗(Benlysta，LymphoStat-B，抗BAFF)，Benralizumab(抗CD125)，Bertilimumab(抗CCL11(eotaxin-1))，Besilesomab(Scintimun，抗CEA相关抗原)，贝伐单抗(Avastin，抗VEGF-A)，Biciromab(FibriScint，抗纤维蛋白IIβ链)，Bivatuzumab(抗-CD44v6)，Blinatumomab(BiTE，抗CD19)，Brentuximab(cAC10，抗-CD30TNRSF8)，
Briakinumab(抗IL-12，IL-23)，Canakinumab(Ilaris，抗IL-1)，Cantuzumab(C242，抗
CanAg)，Capromab，Catumaxomab(Removab，抗EpCAM，抗CD3)，CC49(抗TAG-72)，Cedelizumab(抗CD4)，Certolizumab单抗(Cimzia抗TNF-α)，西妥昔单抗(爱必妥，IMC-C225，抗EGFR)，Citatuzumab bogatox(抗EpCAM)，Cixutumumab(抗IGF-1)，Clenoliximab(抗CD4)，
Clivatuzu-mab(抗MUC1)，Conatumumab(抗TRAIL-R2)，CR6261(抗流感A血凝素)，
Dacetuzumab(抗CD40)，Daclizumab(Zenapax，抗CD25(IL-2受体α链))，Daratumumab(抗
CD38(环ADP核糖水解酶)，Denosumab(Prolia，抗RANKL)，Detumomab(抗B淋巴瘤细胞)，
Dorlimomab，Dorlixizumab，Ecromeximab(抗GD3神经节苷脂)，Eculizumab(Soliris，抗-C5)，Edobacomab(抗内毒素)，Edrecolomab(Panorex，MAb17-1A，抗-EpCAM)，Efalizumab(Raptiva，抗LFA-1(CD11a))，Efungumab(Mycograb，抗Hsp90)，Elotuzumab(抗SLAMF7)，Elsilimomab(抗IL-6)，Enlimomab单抗(抗ICAM-1(CD54))，Epitumomab(抗episialin)，依他珠单抗(抗-CD22)，Erlizumab(抗-ITGB2(CD18))，Ertumaxomab(Rexomun，抗HER2/neu，CD3)，依他拉单抗(Abegrin，抗整联蛋白αvβ3)，Exbivirumab(抗乙肝表面抗原)，
Fanolesomab(NeutroSpec，抗CD15)，Faralimomab(抗干扰素受体)，Farletuzumab(抗叶酸受体1)，Felvizumab(抗呼吸道合胞病毒)，Fezakinumab(抗-IL-22)，Figitumumab(抗-IGF-
1受体)，Fontolizumab(抗-IFN-γ)，Foravirumab(抗狂犬病病毒糖蛋白)，Fresolimumab
(抗TGF-β)，Galiximab(抗CD80)，Gantenerumab(抗β淀粉样蛋白)，Gavilimomab(抗CD147(basigin))，Gemtuzumab(抗CD33)，Girentuximab(抗碳酸酐酶9)，Glembatumumab(CR011，抗GPNMB)，Golimumab(Simponi，抗-TNF-α)，Gomiliximab(抗-CD23(IgE受体))，Ibalizumab(抗-CD4)，Ibritumomab(抗CD20)，Igovomab(Indimacis-125，抗CA-125)，Imciromab
(Myoscint，抗心肌肌凝蛋白)，Infliximab(Remicade，抗TNF-α)，Intetumumab(抗CD51)，Inolimomab(抗CD25(IL-2受体α链)，伊珠单抗(抗-CD22)，Ipilimumab(抗CD152)，
Iratumumab(抗CD30(TNFRSF8))，Keliximab(抗-CD4)，Labetuzumab(CEA-Cide，抗CEA)，
Lebrikizumab(抗IL-13)，Lemalesomab(抗NCA-90(粒细胞抗原))，Lerdelimumab(抗TGFβ
2)，Lexatumumab(抗TRAIL-R2)，Libivirumab(抗乙肝表面抗原)，Lintuzumab(抗CD33)，鲁米木单抗(抗CD40)，鲁米单抗(抗CD23(IgE受体)，Mapatumumab(抗TRAIL-R1)，马西莫单抗(抗T-细胞受体)，马妥珠单抗(抗EGFR)，Mepolizumab(Bosatria，抗IL-5)，Metelimumab(抗TGFβ1)，Milatuzumab(抗CD74)，Minretumomab(抗TAG-72)，Mitumomab(BEC-2，抗GD3神经节苷脂)，Morolimumab(抗恒河猴因子)，Motavizumab(Numax，抗呼吸道合胞病毒)，
Muromonab-CD3(Orthoclone OKT3，抗CD3)，Nacolomab(抗-C242)，Naptumomab(抗5T4)，那他珠单抗(Tysabri，抗整联蛋白α4)，奈巴单抗(抗-内毒素)，Necitumumab(抗EGFR)，
Nerelimomab(抗-TNF-α)，Nimotuzumab(Theracim，Theraloc，抗-EGFR)，Nofetumomab，Ocrelizumab(抗-CD20)，奥利木单抗(Afolimomab，抗LFA-1(CD11a))，Ofatumumab
(Arzerra，抗CD20)，Olaratumab(抗PDGF-Rα)，Omalizumab(Xolair，抗IgE Fc区)
Oportuzumab(抗EpCAM)，Oregovomab(OvaRex，抗CA-125)，Otelixizumab(抗CD3)，
Pagibaximab(抗脂磷壁酸)，Palivizumab(Synagis，Abbosynagis，抗呼吸道合胞病毒)，帕尼单抗(Vectibix，ABX-EGF，抗EGFR)，Panobacumab(抗铜绿假单胞菌(Pseudomonas
aeruginosa))，帕考珠单抗(抗IL-4)，Pemtumomab(Theragyn，抗MUC1)，Pertuzumab
(Omnitarg，2C4，抗HER2/neu)，Pexelizumab(抗-c5)，Pintumomab(抗腺癌抗原)，
Priliximab(抗-CD4)，Pritumumab(抗波形蛋白)，PRO140(抗-CCR5)Racotumomab(1E10，抗-N-羟乙酰神经氨酸(NeuGc，NGNA)-神经节苷脂GM3))，Rafivirumab(抗狂犬病病毒糖蛋白)，Ramucirumab(抗VEGFR2)，Ranibizumab(Lucentis，抗VEGF-A)，Raxibacumab(抗炭疽毒素，保护性抗原)，Regavirumab(抗巨细胞病毒糖蛋白B)，Reslizumab(抗-IL-5)，Rilotumumab(抗-HGF)，Rituximab(MabThera，Rituxanmab，抗-CD20)，Robatumumab(抗-IGF-1受体)，Rontalizumab(抗IFN-α)，Rovelizumab(LeukAr-rest，抗CD11，CD18)，Ruplizumab(Antova，抗CD154(CD40L))，Satumomab(抗TAG-72)，Sevirumab(抗巨细胞病毒)，Sibrotuzumab(抗
FAP)，西法木单抗(抗IFN-α)，Siltuximab(抗IL-6)，Siplizumab(抗CD2)，Smart MI95(抗CD33)，Solanezumab(抗β淀粉状蛋白)，Sonepcizumab(抗鞘氨醇-1-磷酸)，Sontuzumab(抗-episialin)，Stamulumab(抗-myostatin)，Sulesomab(LeukoScan，抗NCA-90(粒细胞抗
原))，Tacatuzumab(抗α甲胎蛋白)，Tadocizumab(抗整联蛋白αIIbβ3)，Talizumab(抗IgE)，Tanezumab(anti-NGF)，Taplitumomab(抗-CD19)，Tefibazumab(Aurexis，(抗凝聚因子A))，Telimomab，Tenatumomab(抗腱生蛋白C)，Teneliximab(抗CD40)，Teplizumab(抗CD3)，
TGN1412(抗CD28)，Ticilimumab(Tremelimumab，抗-CTLA-4)，Tigatuzumab(抗TRAIL-R2)，TNX-650(抗IL-13)，Tocilizumab(Atlizumab，Actemra，RoActemra，IL-6受体)，
Toralizumab(抗CD154(CD40L))，Tositumomab(抗CD20)，曲妥珠单抗(赫赛汀，抗HER2/
neu)，Tremelimumab(抗CTLA-4)，Tucotuzumab celmoleukin(抗EpCAM)，Tuvirumab(抗乙型肝炎病毒)，Urtoxazumab(抗大肠杆菌)，Ustekinumab(Stelara,抗-IL-12,IL-23)，
Vapaliximab(抗-AOC3(VAP-1))，维多珠单抗(抗整联蛋白α4β7)，维妥珠单抗(抗CD20)，Vepalimomab(抗AOC3(VAP-1))，Visilizumab(Nuvion，抗CD3)，Vitaxin(抗血管整合素
avb3)，Volociximab(抗整联蛋白α5β1)，Votumumab(HumaSPECT，抗肿瘤抗原CTAA16.88)，Zalutumumab(HuMax-EGFR，Zanolimumab(HuMax-CD4，抗-CD4)，Ziralimumab(抗-CD147
(basigin))，Zolimomab(抗-CD5)，依那西普 Alefacept
Abatacept Rilonacept(Arcalyst)，14F7(抗IRP-2(铁调节蛋白2))，14G2a(抗
GD2神经节苷脂，源于Nat.Cancer Inst.，治疗黑素瘤和实体瘤)，J591(抗-PSMA，源于Weill Cornell医学院，治疗前列腺癌)，225.28S(抗HMW-MAA(高分子量黑素瘤相关抗原)，Sorin Radiofarmaci SRL(源于意大利米兰，治疗黑色素瘤)，COL-1(抗CEACAM3，CGM1，源于Nat Cancer Inst.治疗结肠直肠癌和胃癌)，CYT-356( 治疗前列腺癌)，HNK20(OraVax
Inc.治疗呼吸道合胞病毒感染)，ImmuRAIT(源于Immunomedics，治疗NHL)，Lym-1(抗HLA-
DR10，Peregrine Pharm)，MAK-195F(抗TNF(肿瘤坏死因子，TNFA，TNF-α，TNFSF2，源于Abbott/Knoll，治疗脓毒症中毒性休克)，MEDI-500(T10B9，抗CD3，TRαβ(T细胞受体α/β)，源于MedImmune Inc，用于移植物抗宿主疾病病)，RING SCAN(抗TAG 72(肿瘤相关糖蛋白72)，源于Neoprobe Corp.，用于乳腺癌，结肠癌和直肠癌)，Avicidin(抗EPCAM(上皮细胞粘附分子))，抗-TACSTD1(肿瘤相关钙信号转导1)，抗GA733-2(胃肠肿瘤相关蛋白2)，抗EGP-2(上皮糖蛋白2)，抗KSA，KS1/4抗原，M4S，肿瘤抗原17-1A，CD326(源于NeoRx公司，治疗结肠癌，卵巢癌，前列腺癌和NHL)，LymphoCide(源于Immunomedics)，Smart ID10(源于Protein
Design Labs)，Oncolym(源于Techniclone Inc)，Allomune(源于BioTransplant)，抗VEGF(源于Genentech)；CEAcide(源于Immunomedics)，IMC-1C11(源于ImClone Systems)和
Cetuximab(源于ImClone)。
Nucleolin，Neu癌基因产物(各自癌症)，P21(各种癌)，抗(N-羟乙酰神经氨酸)抗体结合部位(乳腺癌，黑色素瘤)，类PLAP睾丸碱性磷酸酶(卵巢癌、睾丸癌)，PSMA(前列腺瘤)，PSA(前列腺癌)，ROBO4，TAG 72(肿瘤相关糖蛋白72，AML，胃癌、结肠直肠癌、卵巢癌)，T细胞跨膜蛋白(各种癌症)，Tie(CD202b)，TNFRSF10B(肿瘤坏死因子受体超家族成员10B，各种癌症)，TNFRSF13B(肿瘤坏死因子受体超家族成员13B，多发性骨髓瘤，NHL，其他癌症，RA和SLE)，TPBG(滋养细胞糖蛋白，肾细胞癌)，TRAIL-R1(TNF相关坏死诱导配体受体1，淋巴瘤，NHL，结直肠癌，肺癌)，VCAM-1(CD106，黑色素瘤)，VEGF，VEGF-a，VEGF-2(CD309)(各种癌症)。其它肿瘤相关，可被抗体识别的抗原已被总结和评述(Gerber,et al,mAbs 2009，1:3,247-253；
Novellino et al,Cancer ImmunolImmunother.2005，54(3),187-207；Franke,et al,
Cancer BiotherRadiopharm.2000,15,459-76)。
CDw17,CD18,CD19,CD20,CD21,CD22,CD23,CD24,CD25,CD26,CD27,CD28,CD29,CD30,CD31,
CD32,CD33,CD34,CD35,CD36,CD37,CD38,CD39,CD40,CD41,CD42,CD43,CD44,CD45,CD46,
CD47,CD48,CD49b,CD49c,CD51,CD52,CD53,CD54,CD55,CD56,CD58,CD59,CD61,CD62E,
CD62L,CD62P,CD63,CD66,CD68,CD69,CD70,CD72,CD74,CD79,CD79a,CD79b,CD80,CD81,
CD82,CD83,CD86,CD87,CD88,CD89,CD90,CD91,CD95,CD96,CD98,CD100,CD103,CD105,
CD106,CD109,CD117,CD120,CD125,CD126,CD127,CD133,CD134,CD135,CD138,CD141,
CD142,CD143,CD144,CD147,CD151,CD147,CD152,CD154,CD156,CD158,CD163,CD166,
.CD168,CD174,CD180,CD184,CDw186,CD194,CD195,CD200,CD200a,CD200b,CD209,CD221,
CD227,CD235a,CD240,CD262,CD271,CD274,CD276(B7-H3),CD303,CD304,CD309,CD326,4-
1BB,5AC,5T4(Trophoblast糖蛋白，TPBG，5T4，WNT-活化抑制因子1或WAIF1)，腺癌抗原，AGS-5,AGS-22M6，激活素受体激酶1，AFP，AKAP-4，ALK，α整合素，αvβ6，氨基肽酶N，淀粉样蛋白β，雄激素受体，促血管新生蛋白因子2，促血管新生蛋白因子3，膜联蛋白A1，炭疽毒素保护性抗原，抗转移蛋白受体，AOC3(VAP-1)，B7-H3，炭疽杆菌，BAFF(B细胞激活因子)，B淋巴瘤细胞，bcr-abl，蛙皮素，BORIS，C5，C242抗原，CA125(糖抗原125，MUC16)，CA-IX(或CAIX，碳酸酐酶9)，CALLA，CanAg，犬红斑狼疮IL31，碳酸酐酶IX，心肌肌凝蛋白，CCL11(C-C片段趋化因子11)，CCR4(C-C趋化因子受体4，CD194)，CCR5，CD3E(ε)，CEA(癌胚抗原)，CEACAM3，CEACAM5(癌胚抗原)，CFD(因子D)，Ch4D5，胆囊收缩素2(CCK2R)，CLDN18(Claudin-18)，丛生因子A，CRIPTO，FCSF1R(集落刺激因子1受体，CD115)，CSF2(集落刺激因子2，粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF))，CTLA4(细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4)，CTAA16.88肿瘤抗原，CXCR4(CD184)，C-X-C趋化因子受体4，环状ADP核糖核酸酶，细胞周期蛋白B1，CYP1B1，巨细胞病毒，巨细胞病毒糖蛋白B，Dabigatran，DLL4(类Δ配体4)，DPP4(双肽-肽酶4)，DR5(死亡受体5)，大肠杆菌shiga毒素类型-1，大肠杆菌shiga毒素类型-2，ED-B，EGFL7(类EGF结构域蛋白7)，EGFR，EGFRII，EGFRvIII，内皮因子(CD105)，内皮素B受体，内毒素，EpCAM(上皮细胞粘附分子)，EphA2，Episialin，ERBB2(表皮生长因子受体2)，ERBB3，ERG(TMPRSS2ETS融合基因)，大肠杆菌，ETV6-AML，FAP(成纤维细胞活化蛋白α)，FCGR1，甲胎蛋白，纤维蛋白IIβ链，纤连蛋白额外结构域-B，FOLR(叶酸受体)，叶酸受体α，叶酸水解酶，Fos相关抗原1，呼吸道合胞病毒的F蛋白，卷曲的受体，岩藻糖GM1，GD2神经节苷脂，G-28(细胞表面抗原糖脂)，GD3独特型，GloboH，Glypican 3，N-羟乙酰神经氨酸，GM3，GMCSF受体α链，生长分化因子8，GP100，GPNMB(跨膜糖蛋白NMB)，GUCY2C(鸟苷酸环化酶2C)，鸟苷酸环化酶C(GC-C)，肠鸟苷酸环化酶，鸟苷酸环化酶C受体，热稳定肠毒素受体(hSTAR)，热休克蛋白，血凝素，乙肝表面抗原，乙型肝炎病毒，HER1(人类表皮生长因子受体1)，HER2，HER2/neu，HER3(ERBB-3)，IgG4，HGF/SF(肝细胞生长因子/分散因子)，HHGFR，HIV-1，组蛋白复合物，HLA-DR(人类白细胞抗原)，HLA-DR10，HLA-DRB，HMWMAA，人类绒毛膜促性腺激素，HNGF,人类分散因子受体激酶，HPV E6/E7，Hsp90，hTERT，ICAM-1(细胞间粘附分子1)，独特型，IGF1R(IGF–1，类胰岛素生长因子1受体)，IGHE，IFN-γ，流感血凝素，IgE，IgE Fc区，IGHE，IL–1，IL-2R(白介素2受体)，IL–4，IL-5，IL–6，IL-6R(白介素6受体)，IL-9，IL–10，IL–12，IL-13，IL-17，IL-17A，IL-
20，IL-22，IL-23，IL31RA，ILGF2(类胰岛素生长因子2)，整合蛋白(α4、αIIbβ3、αvβ3、α4β7、α
5β1、α6β4、α7β7、αllβ3、α5β5、αvβ5)，干扰素γ诱导蛋白质，ITGA2，ITGB2，KIR2D，LCK，Le，Legumain，Lewis-Y抗原，LFA-1(淋巴细胞功能相关抗原1，CD11a)，LHRH，LINGO-1，脂磷壁酸，LIV1A，LMP2，LTA，MAD-CT-1，MAD-CT-2，MAGE-1，MAGE-2，MAGE-3，MAGE A1，MAGE A3，MAGE
4，MART1，MCP-1，MIF(巨噬细胞迁移抑制因子，或糖基抑制因子(GIF))，MS4A1(跨膜4结构域亚家族A成员1)，MSLN(间皮素)，MUC1(粘蛋白1，细胞表面相关(MUC1)或多态性上皮粘蛋白(PEM))，MUC1-KLH，MUC16(CA125)，MCP1(单核细胞趋化蛋白1)，MelanA/MART1，ML-IAP，MPG，MS4A1，MYCN，髓磷脂相关糖蛋白，Myostatin,NA17，NARP-1,NCA-90(粒细胞抗原)，Nectin-4(ASG-22ME)，NGF，神经细胞凋亡调控蛋白酶1,NOGO-A，Notch受体，核仁素，Neu致癌基因产物，NY-BR-1，NY-ESO-1，OX-40,OxLDL(氧化低密度脂蛋白)，OY-TES1，P21，p53非突变体，P97，PAP，抗(N-羟乙酰神经氨酸)抗体结合部位，PAX3，PAX5，PCSK9，PDCD1(PD-1、程序性细胞死亡蛋白1，CD279)，PDGF-Rα(α血小板源生长因子受体)，PDGFR-β，PDL-1，PLAC1，类PLAP睾丸碱性磷酸酶，血小板衍生生长因子受体β，磷酸钠联合转运体，PMEL 17，聚唾液酸，蛋白酶3(PR1)，前列腺癌，PS(磷脂酰丝氨酸)，前列腺癌细胞，铜绿假单胞菌，PSMA，PSA，PSCA，狂犬病病毒糖蛋白，RHD(Rh多肽1(RhPI)，CD240)，Rhesus因子，RANKL，RhoC，Ras突变，RGS5，ROBO4，呼吸道合胞病毒，RON，肉瘤易位断点，SART3，Sclerostin，SLAMF7(SLAM成员7)，Selectin P，SDC1(多配体蛋白聚糖1)，系统性红斑狼疮(a)，生长调节素C，SIP(1-磷酸鞘氨醇)，生长激素抑制素，精子蛋白17，SSX2，STEAP1(6-跨膜上皮前列腺抗原1)，STEAP2，STn，TAG-72(肿瘤相关糖蛋白)，存活素，T细胞受体，T细胞跨膜蛋白，TEM1(肿瘤血管内皮标记
1)，TENB2，Tenascin C(TN-C)，TGF-α，TGF-β(转化生长因子β)，TGF-β1，TGF-β2(转化生长因子2)，Tie(CD202b)，Tie2，TIM-1(CDX-014)，Tn，TNF，TNF-α，TNFRSF8，TNFRSF10B(肿瘤坏死因子受体超家族成员10B)，TNFRSF13B(肿瘤坏死因子受体超家族成员13B)，TPBG(滋养细胞糖蛋白)，TRAIL-R1(TNF相关坏死诱导配体受体1)，TRAILR2(死亡受体5(DR5))，肿瘤相关的钙信号传感器2，肿瘤特异糖基化的MUC1，TWEAK受体，TYRP1(糖蛋白75)，TRP-2，酪氨酸酶，VCAM-1(CD106)，VEGF,VEGF-A,VEGF-2(CD309)，VEGFR-1，VEGFR2，vimentin,WT1,XAGE 1，表达任何胰岛素生长因子受体的细胞，或任何表皮生长因子受体。
Achlorhydra自身免疫性活动性慢性肝炎，急性播散性脑脊髓炎，急性出血性脑白质炎，艾迪生病，无精症，斑秃，肌萎缩侧索硬化症，强直性脊柱炎，抗GBM/TBM肾炎，抗磷脂综合征，抗异常酶综合征，关节炎，特应性过敏，特应性皮炎，自身免疫性再生障碍性贫血，自身免疫性心肌病，自身免疫性溶血性贫血，自身免疫性肝炎，自身免疫性内耳疾病，自身免疫性淋巴组织增生综合征，自身免疫性周围神经病，自身免疫性胰腺炎，自身免疫性多内分泌综合征I，II和III型，自身免疫性黄体酮皮炎，自身免疫性血小板减少性紫癜，自身免疫性葡萄膜炎，Balo病/Balo同心硬化症，Bechets综合征，Berger氏病，Bickerstaff脑炎，Blau综合征，大疱性类天疱疮，Castleman病，Chagas病，慢性疲劳免疫功能障碍综合征，慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病，慢性复发性多灶性骨髓炎，慢性莱姆病，慢性阻塞性肺病，Churg-
Strauss综合征，瘢痕性类天疱疮，乳糜泄，Cogan综合征，冷凝集素病，补体成分2缺乏症，颅骨动脉炎，CREST综合征，Crohns病(特发性炎症性肠病)，库欣综合征，皮肤白细胞增多性血管炎，德戈氏病，Dercum氏病，疱疹样皮炎，皮肌炎，1型糖尿病，弥漫性皮肤系统性硬化症，Dressler综合征，盘状红斑狼疮，湿疹，子宫内膜异位症，附着点炎相关的关节炎，
Eosinophilic筋膜炎，大疱性表皮松解症，结节性红斑，特发性混合性冷球蛋白血症，伊文氏综合征，纤维发育不良性骨化症，纤维肌痛，纤维化性肌炎，纤维性肺泡炎，胃炎，胃肠类天疱疮，巨细胞动脉炎，肾小球肾炎，古德帕斯丘尔综合征，格雷夫斯病，格林-巴利综合征，桥本氏脑炎，桥本氏甲状腺炎，溶血性贫血，过敏性紫癜，妊娠性肝炎，化脓性汗腺炎，休斯综合征(抗磷脂综合征)，低丙球蛋白血症，特发性炎性脱髓鞘疾病，特发性肺纤维化，特发性血小板减少性紫癜(自身免疫性血小板减少性紫癜)，IgA肾病(伯杰氏病)，包涵体肌炎，炎性脱髓鞘性多神经炎，间质性膀胱炎，过敏性肠综合征，少年特发性关节炎，青少年类风湿性关节炎，川崎氏病，朗伯-伊顿重症肌无力综合征，白细胞碎屑性血管炎，扁平苔癣，硬化性硬化症，线状IgA疾病(LAD)，Lou Gehrig病(也称肌萎缩侧索硬化症)，狼疮性肝炎，红斑狼疮，Majeed综合征，美尼尔氏病，显微镜下多动脉炎，米勒-费希尔综合征，混合性结缔组织病，硬斑病，穆罕默德-哈贝曼病，麦考利综合征，多发性骨髓瘤，多发性硬化症，重症肌无力，肌炎，嗜睡症，视神经脊髓炎(Devic病)，神经性肌强直，眼睑瘢痕性类天疱疮，
Opsoclonus myoclonus综合征，Ord甲状腺炎，回文风湿病，PANDAS(与链球菌相关的小儿自身免疫性神经精神病)，Paraneoplastic小脑变性，阵发性睡眠性血红蛋白尿症，Parry
Romberg综合征，Parsonnage-Turner综合征，睫状体平部炎，天疱疮，寻常型天疱疮，贫血，周围脑脊髓炎，POEMS综合征，结节性多动脉炎，风湿性多肌痛，多发性肌炎，原发性胆汁性肝硬化，原发性硬化性胆管炎，进行性炎症性神经病变，牛皮癣，牛皮癣性关节炎，坏疽性皮肤炎，纯红细胞再生障碍，Rasmussen脑炎，雷诺现象，复发性多软骨炎，赖特综合征，不宁腿综合症，后神经纤维化，类风湿性关节炎，类风湿热，结节病，精神分裂症，施密特综合征，Schnitzler综合征，施尼茨勒综合征，巩膜炎，硬皮病，干燥综合征，脊椎关节病，粘稠血症，Still病，僵人综合征，亚急性细菌性心内膜炎，苏萨克综合征，Sweet综合征，小舞蹈病，交感神经性贫血，Takayasu动脉炎，颞动脉炎(巨细胞动脉炎)，Tolosa-Hunt综合征，横贯性脊髓炎，溃疡性结肠炎(特发性炎性肠病)，未分化结缔组织病，未分化脊柱关节病，血管炎，白癜风，韦格纳肉芽肿病，威尔逊氏综合征，威斯科特-奥尔德里奇综合征。
Abys抗上皮细胞抗体，抗地下室膜IV型胶原蛋白抗体，抗核抗体，抗ds DNA，抗ss DNA，抗心磷脂抗体IgM，IgG，抗乳糜泻抗体，抗磷脂抗体IgK，IgG，抗SM抗体，抗线粒体抗体，甲状腺抗体，微粒体抗体，T细胞抗体，甲状腺球蛋白抗体，抗SCL-70，抗Jo，抗U.sub.1RNP，抗La/SSB，抗SSA，抗SSB，抗壁细胞抗体，抗组蛋白，抗RNP，C-ANCA，P-ANCA，抗着丝粒，抗纤维蛋白原，抗GBM抗体，抗神经节苷脂抗体，抗Desmogein 3抗体，抗p62抗体，抗sp100抗体，抗线粒体(M2)抗体，类风湿因子抗体，抗MCV抗体，抗拓扑异构酶抗体，抗中性粒细胞胞质(cANCA)抗体。
蛋白基因超家族成员(例如CD2，CD3，CD4，CD8，CD19，CD20，CD22，CD28，CD30，CD33，CD37，CD38，CD56，CD70，CD79，CD79b，CD90，CD125，CD147，CD152/CTLA-4，PD-1或ICOS)，TNF受体超家族成员(例如CD27，CD40，CD95/Fas，CD134/OX40，CD137/4-1BB，INF-R1，TNFR-2，RANK，TACI，BCMA，骨保护素，Apo2/TRAIL-R1，TRAIL-R2，TRAIL-R3，TRAIL-R4和APO-3)，整合蛋白，细胞因子受体，趋化因子受体，主要组织相容性蛋白，凝集素(C型，S型或I型)或补体控制蛋白。
脑膜炎)，亚博病毒脑炎，正粘病毒(脑炎性脑炎)，RV(狂犬病)，长鼻病毒，疱疹病毒脑膜炎，拉姆齐亨特综合征II型，脊髓灰质炎病毒(脊髓灰质炎病毒，后脊髓灰质炎综合征)，HTLV-1(热带麻痹性麻痹))；巨细胞病毒(巨细胞病毒视网膜炎，HSV(疱疹性角膜炎)；心血管病毒，如CBV(心包炎，心肌炎)；呼吸系统/急性病毒性鼻内炎/病毒性肺炎，如爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV感染/传染性单核病)，巨细胞病毒，非典冠状病毒(严重急性呼吸综合征)或正黏液病
毒，流感病毒a/b/c(流感/禽流感)，副粘病毒，人类副流感病毒，RSV(人类呼吸道合胞病
毒)，hMPV；消化系统病毒(腮腺炎病毒，巨细胞病毒(巨细胞病毒食管炎)，腺病毒(腺病毒感染)，轮状病毒，诺瓦克病毒，星状病毒，冠状病毒，乙型肝炎病毒，CBV，甲型肝炎病毒，丙型肝炎病毒，丁型肝炎病毒，戊型肝炎病毒，HGV)；泌尿生殖病毒，如BK病毒，MuV(腮腺炎)。
的例子包括在进行移植(HSCT)之前对造血干细胞(HSC)进行处理，以杀死患病或恶性细胞。
例如，在癌症治疗中的自体移植之前或在自身免疫性疾病的治疗中从骨髓中去除肿瘤细胞
或淋巴细胞，或在移植之前为了防止移植物抗宿主疾病从同种异体骨髓或组织中除去T细
胞和其他淋巴细胞。这样的临床离体治疗可以按如下步骤进行：从患者或其他个体收获骨
髓，然后在含有血清的培养基中约37℃下孵育约30分钟至约48小时，在该培养基中加入本
发明的偶联物，浓度范围从约1pM至0.1mM。具体的药物浓度和孵育时间应当由专业临床医
师决定。孵育后，用含血清的培养基洗涤骨髓细胞，并按照已知的方法通过静脉注射给患
者。若患者在骨髓采集和再输注治疗细胞之间，还接受其它治疗(例如消融化疗或全身辐射疗程)的情况下，应使用标准医疗设备将处理后的骨髓细胞在液氮中冷冻储存。
50μg至20mg/kg(体重)每天，或者每周，两周，三周或者每个月(每次注射10μg至200mg/kg剂量)。治疗后 周，患者可以接受第二疗程治疗。有关施用途径，赋形剂，稀释剂，剂量，次数等的具体临床方案可以由专业临床医生确定。
物的相对生物功效，药物的配方，给药途径(静脉内，肌肉内或其他)，药物指定运送途径的药代动力学性质，以及给药速度(推注或连续输注)和给药方案(给定时间内的重复次数)。
0.01至100mg/kg体重。作为一般指导原则，人类的单位剂量其范围为1mg到3000mg每天或者每周，或者2周，3周或者每个月。单位剂量范围优选1至500mg，一周一次至四次，更优选为
10mg至500mg，一周一次。本文提供的偶联物可以通过与一种或多种药学上可接受的赋形剂混合而配制成药物组合物。这样的单位剂量组合物可以通过口服给药，如片剂，简单胶囊或软凝胶胶囊的形式的药物；或鼻内给药，如粉剂，滴鼻剂或气雾剂的药物；或皮肤给药，如使用局部用软膏，乳膏，乳液，凝胶或喷雾剂或通过透皮贴剂给药。
嘧啶类似物，尿嘧啶类似物(安西他滨，阿扎胞苷，6-氮尿嘧啶，卡培他滨(希罗达)，卡莫氟，阿糖胞苷，双脱氧尿苷，去氧氟尿苷，依诺他滨，5-氟尿嘧啶，氟尿苷，ratitrexed
(Tomudex)；胞嘧啶类似物(阿糖胞苷，胞嘧啶阿拉伯糖苷，氟达拉滨)；嘌呤类似物(硫唑嘌呤，氟达拉滨，巯嘌呤，硫胺素，硫鸟嘌呤)；叶酸补充剂，如弗洛林酸；e)激素疗法剂，如受体拮抗剂，抗雌激素(甲地孕酮，雷洛昔芬，他莫昔芬)，LHRH兴奋剂(戈斯他林，醋酸亮丙瑞林)；抗雄激素药(比卡鲁胺，氟他胺，卡鲁司酮，丙酸倍他雄酮，表雄甾醇，戈舍瑞林，亮丙瑞林，美替利定，尼鲁米特，睾内酯，曲洛司坦及其他雄激素抑制剂)；维甲类化合物，维生素D3类似物(CB1093，EB1089KH1060，胆钙化醇，麦角钙化甾醇)；光动力疗法剂(维替泊芬，酞菁，光敏剂Pc4，去甲氧基-竹红菌素A)；细胞因子(干扰素-α，干扰素-γ，肿瘤坏死因子(TNF)，含TNF的人蛋白)；f)激酶抑制剂，如BIBW 2992(抗-EGFR/Erb2)，伊马替尼，吉非替尼，哌加他尼，索拉非尼，达沙替尼，舒尼替尼，厄洛替尼，尼洛替尼，拉帕替尼，阿西替尼，帕唑帕尼，凡德他尼，E7080(抗VEGFR2)，mubritinib，普纳替尼(AP24534)，bafetinib(INNO-406)，bosutinib(SKI-606)，卡博替尼，维莫德吉，iniparib，鲁索利替尼，CYT387，阿西替尼，tivozanib，索拉非尼，贝伐单抗，西妥昔单抗，曲妥珠单抗，雷珠单抗，帕尼单抗，伊斯平斯；
g)抗生素，如烯二炔类抗生素(加利车霉素，特别是加利车霉素γ1，δ1，α1和β1(参考
J.Med.Chem.1996,39(11)，2103-2117；Angew Chem Intl.Ed.Engl.1994,33:183-186)，达因霉素，包括达因霉素A和脱氧米霉素，埃斯培拉霉素，卡达霉素，C-1027，maduropeptin以及新制癌菌素发色团和相关色蛋白烯二炔抗生素发色团)，aclacinomysins，放线菌素，安曲霉素，重氮丝氨酸，博来霉素，卡诺霉素，卡拉霉素，洋红霉素，嗜癌素，阿霉素，阿霉素，吗啉代阿霉素，2-吡咯啉阿霉素和脱氧柔红霉素，表柔比星，阿柔比星，伊达比星，马可霉素，霉素，霉酚酸，洛匹霉素，培洛霉素，培洛霉素，嘌呤霉素，三铁阿霉素，阿霉素，链脲霉素，链脲佐菌素，杀结核菌素，乌苯美司，净司他丁，佐柔比星；h)其他，如聚酮化合物(番荔素)，特别是bullatacin和bullatacinone；吉西他滨，环氧酶素(如卡菲偌米布)，硼替佐米，沙利度胺，来那度胺，pomalidomide，tosedostat，zybrestat，PLX4032，STA-9090，Stimuvax，allovectin-7，Xegeva，Provenge，Yervoy，异戊二烯化抑制剂(如洛伐他汀)，多巴胺能神经毒素(如星形孢菌素)，放线菌素(如放线菌素D，更生霉素)，博莱霉素(如博来霉素A2，博莱霉素B2，培洛霉素)，蒽环类抗生素(如柔红霉素)，阿霉素(亚德里亚霉素)，伊达比星，表柔比星，吡柔比星，佐柔比星，米托蒽醌，MDR抑制剂(如维拉帕米)，Ca2+ATP酶抑制剂(如毒胡萝卜素)，组蛋白去乙酰酶抑制剂(伏立诺他，罗米地辛，帕比司他，丙戊酸，Mocetinostat
(MGCD0103)，Belinostat，PCI-24781，恩替诺特，SB939，Resminostat，Givinostat，AR-42，CUDC-101，萝卜硫素，曲古抑菌素A)；塞来昔布，格列酮类，表没食子儿茶素没食子酸酯，双硫仑，Salinosporamide A；抗肾上腺药物，如氨鲁米特，米托坦，曲洛司坦，醋葡醛内酯，醛磷酰胺，氨基乙酰丙酸，安吖啶，阿拉伯糖苷，bestrabucil，比生群，edatraxate，defofamine，美可辛，地吖醌，依氟鸟氨酸(DFMO)，elfomithine，依利醋铵，乙基葡糖酸，硝酸镓，胞嘧啶，羟基脲，伊班膦酸盐，香菇多糖，氯尼达明，米托胍腙，米托蒽醌，莫哌达醇，二胺硝吖啶，喷司他丁，蛋氨氮芥，吡柔比星，鬼臼酸，2-乙肼，甲基苄肼； 哌嗪二酮丙烷；根霉素；西佐；螺环锗；细格孢氮杂酸；三亚胺醌；三氯三乙胺；单端孢霉烯(特别是T-2毒素，疣孢菌素A，杆孢菌素A和anguidine)，聚氨酯，siRNA，反义药物和核酸分解酶。
1137-1146)。细胞结合分子，例如抗体可以通过本专利的连接体链接配体试剂，进行标记。
配体可以用文献(Current Protocols in Immunology,Volumes 1and 2,Coligen et al,
Ed.Wiley-Interscience,New York,N.Y.,Pubs.(1991))所述的方法与放射性金属结合、螯
合或生成复合物。可以络合金属离子的螯合配体包括DOTA，DOTP，DOTMA，DTPA和TETA
(Macrocyclics，Dallas，TX)等。
光，荧光，红外光，近红外光或可见光；发色分子包括黄色素，红细胞，虹彩色素，白细胞，黑色素和蓝绿色素的一类或一个亚类，荧光分子(吸收光后再发光的荧光化学物质)的一类或
一个亚类，视觉光转导分子的一类或一个亚类，光子分子的一类或一个亚类，冷光分子的一类或一个亚类和荧光素化合物的一类或一个亚类。
唑)；蒽衍生物(蒽醌类，包括DRAQ5，DRAQ7和CyTRAK橙)；芘衍生物(级联蓝等)；恶嗪衍生物(尼罗红，尼罗蓝，甲酚紫，恶嗪170等)；吖啶衍生物(黄醇黄素，吖啶橙，吖啶黄等)；芳基甲胺衍生物(金胺，结晶紫，孔雀石绿)和四吡咯衍生物(卟吩，酞菁，胆红素)。
Fluor(Thermo Scientific，Pierce)，Atto和Tracy(Sigma Aldrich)，FluoProbes
(Interchim)，Abberior染料(Abberior)，DY和MegaStokes染料(Dyomics)，Sulfo Cy染料
(Cyandye)，HiLyte Fluor(AnaSpec)，Seta，SeTau和Square染料(Biosearch
Technologies)，SureLight染料(APC，RPEPerCP，Phycobilisomes)(Columbia
Biosciences)，APC，APCXL，RPE，BPE(Phyco-Biotech)。
555-Azide，Seta-555-DBCO，Seta-555-NHS，Seta-580-NHS，Seta-680-NHS，Seta-APC-780，Seta-PerCP-680，Seta-R-PE-670，SeTau-380-NHS，SeTau-405-马来酰亚胺，SeTau-405-
NHS，SeTau-425-NHS，SeTau-647-NHS，Texas Red,TRITC，TruRed，X-Rhodamine。
(APC)，AmCyan1(四聚体，Clontech)，AsRed2(四聚体，Clontech)，蓟绿(单体，MBL)，
Azurite，B-藻红蛋白(BPE)，Cerulean，CyPet，DsRed单体(Clontech)，DsRed2(“RFP”，Clontech)，EBFP，EBFP2，ECFP，EGFP(弱二聚体，Clontech)，Emerald(弱二聚体，
Invitrogen)，EYFP(弱二聚体，Clontech)，GFP(S65A突变)，GFP(S65C突变)，GFP(S65L突变)GFP(Y66H突变)，GFP(Y66W突变)，GFPuv，HcRed1，J-Red，Katusha，Kusabira Orange(单聚体，MBL)，mCFP，mCherry(单体，MBL)，mKate(TagFP635，单体，Evrogen)，mKeima-Red(单体，MBL)，mKO，mOrange，mPlum，mRaspberry，mRFP1(单体，Tsien实验室)，mStrawberry，mTFP1，mTurquoise2，P3(藻胆体复合物)，多甲藻黄素-叶绿素-蛋白质复合物(PerCP)，R-
phycoerythrin(RPE)，T-Sapphire，TagCFP(二聚体，Evrogen)，TagGFP(二聚体，Evrogen)，TagRFP(二聚体，Evrogen)，TagYFP(二聚体，Evrogen)，tdTomato(串联二聚体)，Topaz，TurboFP602(二聚体，Evrogen)，TurboFPP635(二聚体，Evrogen)，TurboGFP(二聚体，
Evrogen)，TurboRFP(二聚体，Evrogen)，TurboYFP(二聚体，Evrogen)，Venus，野生型GFP型，YPet，ZsGreen1(四聚体，Clontech)，ZsYellow1(四聚体，Clontech)。
或恶唑烷并苯并二氮卓的二聚体)，卡立霉素类和烯二炔类抗生素，放线菌素，氮丝菌素，博来霉素，表柔比星，他莫昔芬，伊达比星，多拉司他汀，澳瑞他汀(例如MMAE，MMAF，澳瑞他汀PYE，澳瑞他汀TP，澳瑞他汀2-AQ，6-AQ，EB(AEB)和EFP(AEFP))，多卡霉素，噻替派，长春新碱，半米塔林，nazumamide，microginin，radiosumin，alterobactin，microsclerominmin，theonellamide，esperamicin，PNU-159682及其类似物和衍生物。
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Can.Pat.Appl.CA2710693(2011).Chai,Y.；et al.Eur.Pat.Appl.2174947(2010),PCT WO
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PCT WO 2009134279；PCT WO 2009012958,US appl.20110263650,20110021568,
Matschiner,G.；et al,PCT WO 2009095447.Vlahov,I.；et al,PCT WO 2009055562,WO
2008112873.Low,P.；et al,PCT WO 2009026177.Richter,W.,PCT WO 2008138561.Kjems,
J.；et al,PCT WO 2008125116.Davis,M.；et al,PCT WO 2008076333.Diener,J.；et al,U.S.Pat.Appl.20070041901,WO 2006096754.Matschiner,G.；et al,PCT WO
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10241152；DE 10008089.Leung,D.；et al,WO 2002077036.Reichenbach,H.；et al,
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在专利PCT/IB2012/053554中描述了与细胞结合分子连接的tubulysin的优选结构。
5888，和美国专利4,970,198；5,053,394；5,108,912；5,264,586；5,384,412；5,606,040；5,
712,374；5,714,586；5,739,116；5,770,701；5,770,710；5,773,001；5,877,296；6,015,
562；6,124,310；8,153,768。通过桥连接体连接的抗体-加利车霉素类似物的结构的例子如C01：
331,598；4,450,254；4,364,866；4,313,946；4,315,929；4,362,663；4,322,348；4,371,
533；4,424,219；5,208,020；5,416,064；5,208,020；5,416,064；6,333.410；6,441,163；6,
716,821,7,276,497；7,301,019；7,303,749；7,368,565；7,411,063；7,851,432和8,163,
888。一个抗体-美登素偶联物的例子如M01：
3896；1997,40,267-278；2002,45,5620-5623；Ojima et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.,1999,
96:4256-4261；Kim et al.,Bull.Korean Chem.Soc.,1999,20,1389-1390；Miller,et
al.J.Med.Chem.,2004,47,4802-4805；美国专利5,475,011 5,728,849,5,811,452；6,340,
701；6,372,738；6,391,913,6.436,931；6,589,979；6,596,757；6,706,708；7,008,942；7,
186,851；7,217,819；7,276,499；7,598,290和7,667,054。
J.Med.Chem.31:590-603(1988),D.Boger et al.,J.Org.Chem；66；6654-6661,2001；美国专利4169888,4391904,4671958,4816567,4912227,4923990,4952394,4975278,4978757,
4994578,5037993,5070092,5084468,5101038,5117006,5137877,5138059,5147786,
5187186,5223409,5225539,5288514,5324483,5332740,5332837,5334528,5403484,
5427908,5475092,5495009,5530101,5545806,5547667,5569825,5571698,5573922,
5580717,5585089,5585499,5587161,5595499,5606017,5622929,5625126,5629430,
5633425,5641780,5660829,5661016,5686237,5693762,5703080,5712374,5714586,
5739116,5739350,5770429,5773001,5773435,5786377 5786486,5789650,5814318,
5846545,5874299,5877296,5877397,5885793,5939598,5962216,5969108,5985908,
6060608,6066742,6075181,6103236,6114598,6130237,6132722,6143901,6150584,
6162963,6172197,6180370,6194612,6214345,6262271,6281354,6310209,6329497,
6342480,6486326,6512101,6521404,6534660,6544731,6548530,6555313,6555693,
6566336,6,586,618,6593081,6630579,6,756,397,6759509,6762179,6884869,6897034,
6946455,7,049,316,7087600,7091186,7115573,7129261,7214663,7223837,7304032,
7329507,7,329,760,7,388,026,7,655,660,7,655,661,7,906,545,和8,012,978。经桥连
接体连接的抗体-CC-1065类似物结构的实例如下：
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et al.,E.,et al.,Cancer Res.1988,48,926-9311；Trouet,et al.,1982,79,626-629；
Z.Brich et al.,J.Controlled Release,1992,19,245-258；Chen et al.,Syn.Comm.,
2003,33,2377-2390；King et al.,Bioconj.Chem.,1999,10,279-288；King et al.,
J.Med.Chem.,2002,45,4336-4343；Kratz et al.,J Med Chem.2002,45,5523-33；Kratz
et al.,Biol Pharm Bull.Jan.1998,21,56-61；Lau et al.,Bioorg.Med.Chem.1995,3,
1305-1312；Scott et al.,Bioorg.Med.l Chem.Lett.1996 6,1491-1496；Watanabe et
al.,Tokai J.Experimental Clin.Med.1990,15,327-334；Zhou et al.,
J.Am.Chem.Soc.2004,126,15656-7；WO 01/38318；美国专利5,106,951；5,122,368；5,146,
064；5,177,016；5,208,323；5,824,805；6,146,658；6,214,345；7569358；7,803,903；8,
084,586；8,053,205。通过桥连接体连接的抗体-阿霉素类似物结构的实例如下所示：
物，在如下文献中有描述：Int.J.Oncol.1999,15,367-72；Molecular Cancer
Therapeutics,2004,3(8),921-932；美国专利申请11134826,20060074008,2006022925,美
国专利4414205,4753894,4764368,4816444,4879278,4943628,4978744,5122368,
5165923,5169774,5286637,5410024,5521284,5530097,5554725,5585089,5599902,
5629197,5635483,5654399,5663149,5665860,5708146,5714586,5741892,5767236,
5767237,5780588,5821337,5840699,5965537,6004934,6033876,6034065,6048720,
6054297,6054561,6124431,6143721,6162930,6214345,6239104,6323315,6342219,
6342221,6407213,6569834,6620911,6639055,6884869,6913748,7090843,7091186,
7097840,7098305,7098308,7498298,7375078,7462352,7553816,7659241,7662387,
7745394,7754681,7829531,7837980,7837995,7902338,7964566,7964567,7851437,
7994135。抗体-澳瑞他汀通过桥连接体连接的偶联物结构的实例如AuO 1，AuO 2，AuO 3，AuO 4和AuO 5：
319；7,704,924；7,691,848；7,678,787；7,612,062；7,608,615；7,557,099；7,528,128；7,
528,126；7,511,032；7,429,658；7,407,951；7,326,700；7,312,210；7,265,105；7,202,
239；7,189,710；7,173,026；7,109,193；7,067,511；7,064,120；7,056,913；7,049,311；7,
022,699；7,015,215；6,979,684；6,951,853；6,884,799；6,800,622；6,747,144；6,660,
856；6,608,192；6,562,806；6,977,254；6,951,853；6,909,006；6,344,451；5,880,122；4,
935,362；4,764,616；4,761,412；4,723,007；4,723,003；4,683,230；4,663,453；4,508,
647；4,464,467；4,427,587；4,000,304；美国专利申请20100203007,20100316656,
20030195196。抗体-苯并二氮卓二聚体偶联物结构的实例如PB01，PB02，PB03，PB04，PB05，PB06，PB07和PB08：
物和衍生物。
外，细胞培养试剂来自于Invitrogen公司。所有的无水试剂均由商业途径获得，并储存于
Sure-Seal密封瓶中。其他的试剂和溶剂均按照最高规格购买，使用时未经进一步的处理。
Varian Prostar HPLC进行制备HPLC纯化。NMR数据在Varian Mercury 400MHz上获得，化学位移以ppm为单位，四甲基硅烷为参考(0.00ppm)，耦合常数(J)的单位是Hz。质谱数据在
Waters XevoQTof质谱仪(连接Waters Acquity UPLC高效液相色谱仪和TUV检测器)上获
得。
2H,J＝6.4Hz),3.59-3.72(m,14H).ESI MS m/z-C13H25O6(M-H),计算值.277.17,实测值
277.20.
(d,2H,J＝8.0Hz),7.75(d,2H,J＝8.0Hz)；ESI MS m/z+C20H33O8S(M+H),计算值433.18,实测值433.30.
35mL)萃取，合并的有机层用无水硫酸镁干燥，过滤，真空除去溶剂。粗品(约90％TLC纯)不经进一步纯化而使用。1H NMR(CDCl3):1.40(s,9H),2.45(t,2H,J＝6.4Hz),3.33(t,2H,J＝
5.2Hz),3.53-3.66(m,12H).ESI MS m/z+C13H26N3O8(M+H),计算值.304.18,实测值304.20.
三氧杂十二烷酸叔丁酯丁酯37(1.83g，收率44％ESI MSm/z+C13H27NO5(M+H),计算值278.19,实测值278.30)和13-氨基-双(4,7,10-三氧杂十二烷酸叔丁酯)38(2.58g，32％产率，ESI
MS m/z+C26H52NO10(M+H),计算值538.35,实测值538.40).
86％收率)，无需进一步纯化。ESI MS m/z+C9H20NO5(M+H),计算值222.12，实测值222.20.[0230] 例6. 13-氨基-双(4,7,10-三氧杂十二烷酸盐酸盐)(40)
0.71g，91％收率)，未经进一步纯化。ESI MS m/z+C18H36NO10(M+H),计算值426.22，实测值
426.20。
干燥，真空浓缩。所得产物经硅胶柱层析(100-200目，5％至10％H2O/乙腈)纯化，得到标题产物(5.50g，产率85％)。ESI MS m/z-C10H9O6(M-H),计算值226.05,实测值226.10.
4-甲酰氨基)-5-(3-氨基-4-羟基苯基)-2-甲基戊酸，51(Huang Y.et al,Med Chem.#44,
th
249 ACS National Meeting,Denver,CO,Mar.22～26,2015；WO2014009774)(151mg，
0.199mmol)的THF(4.0ml)溶液和磷酸盐缓冲液(4mL，100mM Na 2HPO 4，pH 7.0)。在室温下搅拌4小时后，浓缩反应液并用C-18制备HPLC(250mm×20mm)纯化，用水/乙醇(90％至50％
水，55分钟，流速15ml/分钟)。合并含有产物的组分，浓缩并用EtOH/正己烷结晶，得到标题化合物(73mg，53％收率)。ESI MS m/z+C86H122N12NaO20S2(M+Na),计算值1729.83,实测值
1730.10.
(345mg，59％收率)。ESI MS m/z-C22H36N2O12(M-H),计算值519.22,实测值519.30.
基)丁-2-炔二酸盐9(190mg，0.61mmol)。在室温下暗处搅拌4h后，浓缩反应混合物并用C-18制备HPLC(250mm×内径30mm)，用水/乙醇(在55分钟内90％至50％水，流速35ml/分钟)洗
脱，合并含有产物的组分并浓缩，得到标题化合物(287毫克，产率51％)。ESI MS m/z-
C40H67N2O22(M-H),计算值927.42,实测值928.30.
(401mg，2.08mmol)。将混合物在暗处搅拌过夜，浓缩后在SiO 2柱上纯化，用EtOAc/DCM(5:
1)洗脱，得到标题化合物88(330mg，71％收率)。ESI MS m/z+C30H43N4O16(M+H),计算值
715.26,实测值715.20.
1,30-二酸盐(89)
(249mg，63％收率)。ESI MS m/z+C56H81N6O30(M+H),计算值1317.49,实测值1317.80.
(2-((1R，3R)-1-乙酰氧基-3-((2S，3S)-N，3-二甲基-2-((R)-1-甲基哌啶-2-甲酰氨基)戊基)-4-甲基戊基)噻唑-4-甲酰氨基)-2-甲基-酸)(90)
戊基)噻唑-4-甲酰氨基)-5-(3-氨基-4-羟基苯基)-2-甲基戊酸，51(Huang Y.et al,Med
Chem.#44,249th ACS National Meeting,Denver,CO,Mar.22～26,2015；WO2014009774)
(80mg，0.107mmol)的THF(4.0ml)溶液和磷酸盐缓冲液(4ml,100mM Na2HPO4,pH 7.0)。在室温下搅拌4小时后，将混合物浓缩并用C-18制备HPLC(250mm×内径20mm)纯化，用水/乙醇
(95％至50％水，流速15ml/分钟)。合并含有产物的组分，浓缩并用EtOH/正己烷结晶，得到标题化合物(48mg，56％收率)。ESI MS m/z-C98H147N14O26S2(M-H),计算值2000.01,实测值
2000.40.
91(约87％收率)( 缓冲液中)。药物/抗体比率(DAR)通过UPLC-Qtof质谱测定
为4.0。SEC HPLC(Tosoh Biosciences，Tskgel G3000SW，7.8mm ID×30cm，0.5毫升/分钟，
100分钟)分析显示单体含量96-99％，SDS-PAGE凝胶测量显示单一条带。
4-甲酰氨基)-5-(3-氨基-4-羟基苯基)-2-甲基戊酸，51(Huang Y.et al,Med Chem.#44,
249th ACS National Meeting,Denver,CO,Mar.22～26,2015；WO2014009774)(100.6mg，
0.132mmol)的THF(4.0ml)溶液和磷酸盐缓冲液(4ml，100mM Na2HPO4，pH7.0)。在室温下搅拌
4小时后，浓缩反应混合物并用C-18制备HPLC(250mm×内径20mm)纯化，用水/乙醇(95％至
50％水，50分钟内，流速15ml/分钟)洗脱。合并含有产物的组分，浓缩并用EtOH/正己烷结晶，得到标题化合物92(47.6mg，47％收率)。ESI MS m/z-C192H291N26O50S4(M-H),计算值.3890.00,实测值3890.30.
25柱上纯化，用100mM NaH2PO4，50mM NaCl pH 的缓冲液洗脱，得到 的
偶联物92( 缓冲液中， 产率)。药物/抗体比率(DAR)通过UPLC-Qtof质谱
测定为8.0。SEC HPLC(Tosoh Biosciences，Tskgel G3000SW，7.8mm ID×30cm，0.5毫升/分钟，100分钟)分析显示单体含量96-99％，SDS-PAGE凝胶测量显示单一条带。
1640培养基。对于SKOV3细胞，细胞生长在含10％FBS的McCoy 5A培养基。运行试验时，细胞(180μl，6000细胞)被添加到96孔板并且在37℃和5％二氧化碳的环境中孵育24小时，之后用不同浓度的化合物(20μL)来处理这些细胞(总体积0.2mL)。对照孔包含细胞和培养基，无测试化合物。孔板在37℃和5％的二氧化碳的环境中孵育120小时后，向其中加入MTT(5mg/
mL)，在37℃孵化1.5小时。小心的去除培养基后加入DMSO(180μL)，震荡15分钟，在490nm和
570nm测量吸光度，620nm为参考。依照以下公式计算抑制率：抑制率％＝[1-(分析值-空白对照值)/(控制值-空白对照值)]×100％
偶连物91 0.108nM 0.089nM >20nM
偶联物93 0.037nM 0.029nM >10nM
T-DM1 0.270nM 0.191nM >15nM
344；偶联物T-DM1对N87细胞的特异性超过55(IC50>15/IC50＝0.27)，对SK-OV-3细胞超过
78。
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