血管内皮肽释放许多种血管活性物质，包括衍生自内皮的血管收缩 肽、内皮肽(ET)(参见例如：Vanhoutte等人(1986)，Annual Rev.Physiol.， 48：307-320；Furchgott和Zawadski(1980)，Nature，288：373-376)。 最早在猪主动脉内皮细胞的培养物上清液中发现的内皮肽(参见 Yanagisawa等人(1988)，Nature，332：411-415)为一种强效的21个氨 基酸肽血管收缩剂。其是已知的最强效血管加压剂，且可由许多种细胞 产生，包括：内皮、气管、肾及脑细胞。内皮肽是合成的203个氨基酸 前体前内皮肽原(preproendothelin)，其中含有一个信号序列，可被内源 性蛋白酶裂解成38个(人类)或39个(猪)氨基酸肽。此中间体称为 大内皮肽，于活体内经一种推想的内皮肽转化酶(ECE)转化成成熟的 生物活性型，该转化酶似乎为一种依赖金属的中性蛋白酶(参见例如： Kashiwabara等人(1989)EEBS Lttrs.247：337-340)。裂解作用对诱导 生理反应是必要的(参见例如：Von Geldern等人(1991)，Peptide Res.4： 32-35)。在猪主动脉内皮细胞中，该39个氨基酸中间物(大内皮肽) 于Trp21-Val22键水解，产生内皮肽-1及C-末端片段。在人类细胞中， 38个氨基酸中间物也发生类似裂解作用。已鉴别出三种具有强效血管收 缩剂活性的不同内皮肽同功肽，即内皮肽-1、内皮肽-2及内皮肽-3。
这三种同功肽族：内皮肽-1、内皮肽-2与内皮肽-3是由三种基 因族编码的(参见，Inoue等人(1989)，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，86： 2863-2867；亦参见Saida等人(1989)，J.Biol.Chem.264：14613- 14616)。三种人类基因的核苷酸序列在编码成熟的21个氨基酸肽的区域 内高度保守，且肽的C-末端部分均相同。内皮肽-2为(Trp6，Leu7) 内皮肽-1，且内皮肽-3为(Thr2，Phe4，Thr5，Tyr6，Lys7，Tyr14)内皮肽 -1。因此这些肽的C-末端高度保守。由经培养的内皮细胞中释放内皮 肽的作用受许多化学性与物理性刺激调节，且似乎在转录及/或翻译阶段 调节。化学刺激，包括肾上腺素、凝血酶及Ca2+离子载体，可提高编码 内皮肽-1之基因的表达。由内皮产生及释放内皮肽的作用则受血管收 缩素II、血管加压素、内毒素、环孢菌素及其他在因子刺激(参见Brooks 等人(1991)，Eur.J.Pharm，194：115-117)，且受氧化氮抑制。内皮 细胞在受血管活性剂如乙酰胆碱及缓激肽刺激时，似乎会分泌短寿命的 衍生自内皮的松弛因子(EDRF)，包括氧化氮或相关物质(Palmer等人 (1987)，Nature，327：524-526)。受内皮肽诱发的血管收缩作用亦由 于前房钠尿肽(ANP)而减弱。
内皮肽在体外及活体内均具有许多生物活性。内皮肽在老鼠活体内 以及已分离之血管平滑肌制剂中引发强烈且持续的血管收缩作用；其亦 引发由已灌洗之血管床中释放类二十烷醇(eicosanoids)及衍生自内皮 的松弛因子(EDRF)。经静脉内给药内皮肽-1及体外添加内皮肽-1至 血管及其他平滑肌组织中，分别会产生长效的加压和收缩作用(参见例 如：Bolger等人，Can.J.Physiol，Pharmacol，69：406-413)。例如在分 离的血管条中，内皮肽-1为强效(EC50＝4×10-10M)、作用缓慢但持 续的收缩剂。在活体内，单剂量在约20至30分钟即可升高血压。内皮 肽所诱发的血管收缩作用不受已知神经递质或激素因子的拮抗剂影响， 但受钙通道拮抗剂抑制。然而，钙通道拮抗剂的影响最有可能是抑制钙 流入作用的结果，这是因为钙流入作用对内皮肽的长效性收缩反应似乎 是必需的。
内皮肽亦在豚鼠前房中调节肾素释放、刺激ANP释放及诱发增强收 缩作用。在肺部中，内皮肽-1的作用为强效支气管收缩剂(Maggi等 人(1989)，Eur.J.Pharmacol.，160：179-182)。内皮肽提高肾血管抗 性，减低肾血流，并降低肾小球滤液速率。其是肾小球膜细胞的强效有 丝分裂因子，且在这些细胞中刺激磷酸肌苷阶式反应(Simonson等人 (1990)，J.Clin.Invest.，85：790-797)。  
血管系统及其他组织(包括肠、心脏、肺、肾、脾、肾上腺及脑) 中，均有内皮肽的专一性高亲和性结合点(解离常数在2-6×10-10M 的范围内)。结合作用不受儿茶酚胺、血管活性肽、神经毒素或钙通道拮 抗剂抑制。内皮肽会与不同于其他自主性受体及电压依赖性钙通道的受 体位置结合并相互作用。由竞争性结合试验发现，有几类受体对内皮肽 同功肽具有不同亲和性。沙洛弗毒性(sarafotoxin)是一种来自蛇 Atractaspis eingadensis毒液的肽毒素，其能够使被蛇咬伤者出现严重的 冠状血管痉挛，其结构和功能均与内皮肽-1为同种性，且会与相同的 心膜受体竞争结合(Kloog等人(1989)，Trends Pharmacol.Sci.，10：212 -214)。
已鉴别出有二种不同内皮肽受体，称为ETA和ETB，且分离出编码各 受体的DNA克隆(Arai等人(1990)，Nature，348：730-732；Sakurai 等人(1990)，Nature，348：732-735)。根据该克隆出的DNA所编码之 蛋白质的氨基酸序列，各受体似乎含有7个膜距区，且结构上类似于G 蛋白质偶合的膜蛋白质。已在许多不同组织上(包括心、肺、肾及脑) 检测到编码这二种受体的信使RNA。受体亚型的分布为组织专一性的 (Martin等人(1989)，Biochm.Biophys.Res.Commun.，162：130-137)。 ETA受体似乎对内皮肽-1具有选择性，且主要出现在心血管组织中。ETB 受体主要出现在非心血管组织中，包括中枢神经系统及肾，并与三种内 皮肽同功肽相互作用(Sakurai等人(1990)，Natrure 348：732-734)。 此外，出现在血管平滑肌上的ETA受体与血管收缩有关，且与心血管、 肾及中枢神经系统疾病有关；而位于血管内皮的ETB受体则与血管舒张 有关(Takayanagi等人(1991)，FEBS Lttrs.，282：103-106)，并与支 气管收缩性病变有关。
由于受体型态的分布及各受体亚型对各同功肽的亲和性不同，内皮 肽同功肽的活性亦随组织不同而变化。例如，内皮肽-1在心血管组织 中抑制125I标记的内皮肽-1结合作用比内皮肽-3强40至700倍。内 皮肽-1与内皮肽-3对非心血管组织如肾、肾上腺及小脑中125I标记的 内皮肽-1结合作用的抑制程度则相同，这表示ETA受体主要出现在心 血管组织中，而ETB受体主要出现在非心血管组织中。
某些疾病状态会提高内皮肽血浆浓度(参见例如：国际PCT申请WO 94/27979及美国专利第5,382,569号，这些文献已完全并入本文作为参考 文献)。由放射免疫分析法(RIA)测得健康人体内的内皮肽-1血浆浓 度为0.26-5pg/ml。在休克、心肌梗塞、血管痉弯性绞痛、肾衰竭及各 种不同结缔组织病变中，血液中内皮肽-1及其前体(大内皮肽)的浓 度会提高。进行血液透析或肾移植或患有心脏性休克、心肌梗塞或肺动 脉高血压的患者曾出现高达35pg/ml的浓度(参见Stewart等人(1991)， Annals Internal Med.，114：464-469)。由于内皮肽可能为局部性而非全 身性调节因子，因此内皮/平滑肌界面处的内皮肽浓度可能远高于循环浓 度。
患有缺血性心脏病的患者也可测得内皮肽浓度提高(Yasuda等人 (1990)，Amer.Heart J.，119：801-806；Ray等人(1992)，Br.Heart J.， 67：383-386)。晚期动脉硬化患者的循环与组织内皮肽免疫反应性增加 2倍以上(Lerman等人(1991)，New Engl.J.Med.，325：997-1001)。 内皮肽免疫反应性提高亦与血栓闭塞性脉管炎(Buerger′s disease)(Kanno 等人(1990)，J.Amer.Med.Assoc.，264：2868)及雷诺现象(Raynaud′s phenomenon)(Zamora等人(1990)，Lancet 336，1144-1147)有关。接 受经皮式穿透管腔的冠状血管成形术(PTCA)的患者(Tahara等人 (1991)，Metab.Clin.Exp.，40：1235-1237；Sanjay等人(1991)，Circulation 84(补充本4)：726)、及肺动脉高血压的患者(Miyauchi等人(1992)， Jpn.J.Pharmacol.58：279P；Stewart等人(1991)，Ann.Internal Medicine， 114：464-469)，也出现循环内皮肽浓度增高的现象。因此，有临床人 体试验数据支持内皮肽浓度提高与许多种疾病之间的相关性。 内皮肽激动剂与拮抗剂
由于内皮肽与某些疾病有关且涉及许多种生理作用，因此可干扰或 加强内皮肽相关活性(如内皮肽-受体相互作用和血管收缩剂活性)的 化合物即值得注意。现已鉴别出具有内皮肽拮抗活性的化合物。例如： 三崎链霉菌(Streptomyces misakiensis)的发酵产物(称为BE-18257B) 已被鉴定为ETA受体拮抗剂。BE-18257B为一种环五肽，环(D-Glu- L-Ala-allo-D-Ile-L-Leu-D-Trp)，其在心血管组织中浓度依赖性地抑 制125I标记的内皮肽-1结合作用(于主动脉平滑肌中的IC50为1.4μM， 室膜中为0.8μM，且于经培养的主动脉平滑肌细胞中为0.5μM)，但在 ETB受体浓度达100μM的组织中，则无法抑制与受体的结合作用。现 已合成与BE-18257B相关的环五肽，如环(D-Asp-Pro-D-Val-Leu -D-Trp)(BQ-123)，且已显示具有作为ETA受体拮抗剂的活性(参见 美国专利第5,114,918号(Ishikawa等人)；亦参见EPA 10 436 189(BANYU PHARMACUTICAL CO.，LTD.1991年10月7日)。测定此等环肽抑制 内皮肽-1与内皮肽专一性受体的结合作用的研究显示，此等环肽优先 与ETA受体结合。现已鉴定出其他肽及非肽的ETA拮抗剂(参见例如： 第5,352,800、5,334,598、5,352,659、5,248,807、5,240,910、5,198,548、 5,187,195、5,082,838号美国专利)。这些拮抗剂包括其他环五肽、酰基 三肽、六肽类似物、某些蒽醌衍生物、茚满羧酸(indanecarboxylic acids)、 某些N-嘧啶基苯磺酰胺、某些苯磺酰胺、以及某些萘磺酰胺(Nakajima 等人，(1991)，J.Antibiot.44：1348-1356；Miyata等人(1992)，J.Antibiot. 45：74-8；Ishikawa等人(1992)，J.Med.Chem.35：2139-2142；Ishikawa 等人的第5,114,918号美国专利；EP A 10569 193；EP A 10558 258；EP A 10436 189，颁与BANYU PHARMACEUTICAL CO.，LTD(1991年10月 7日)；加拿大专利申请2,067,288；加拿大专利申请2,071,193；美国专 利5,208,243；美国专利5,270,313；美国专利5,612,359；美国专利 5,514,696；美国专利5,378,715；Cody等人(1993)Med.Chem.Res.3：154 -162；Miyata等人(1992)J.Antibiot 45：1041-1046；Miyata等人(1992)， J.Antibiot 45：1029-1040；Fujimoto等人(1992)FEBS Lett.305：41- 44；Oshashi等人(1002)J.Antibiot 45：1684-1685；EP A10496 452；Clozel 等人(1993)Nature 365：759-761；国际专利申请WO 93/08799；Nishikibe 等人(1993)Life Sci.52：717-724；以及Benigni等人(1993)Kidney Int.44： 440-444)。在第5,464,853、5,594,021、5,591,761、5,571,821、5,514,691 号美国专利、国际PCT申请第96/31492号以及国际PCT申请第WO 97/27979号中也描述了许多为内皮肽拮抗剂的磺酰胺。
通常，已鉴定的化合物在体外测试中于约50-100μM或更低的浓度 下具有ETA拮抗剂活性。许多此等化合物亦在活体内动物模型中具有活 性。 以内皮肽拮抗剂及激动剂作为治疗剂
已知在测试内皮肽拮抗剂或激动剂活性的标准体外分析法中，于IC50 或EC50为10-4或更低浓度下具有活性的化合物具有药理应用(参见例 如美国专利5,352,800、5,334,598、5,352,659、5,248,807、5,240,910、 5,198,548、5,187,195和5,082,838)。由于此活性，认为这些化合物适用 于治疗高血压如周边循环不良、心脏病如心绞痛、心肌病、动脉硬化、 心肌梗塞、肺动脉高血压、血管痉挛、血管再狭窄、雷诺病、脑中风如 脑动脉痉弯、脑缺血、多蛛膜下出血后的后期脑痉挛、气喘、支气管收 缩、肾衰竭、特别是缺血后肾衰竭、环孢菌素肾毒性如急性肾衰竭、结 肠炎、及其他炎症、因内皮肽引起或与内皮肽有关的内毒素休克、以及 其他涉及内皮肽的疾病。
就内皮肽的许多生理作用及其与某些疾病的相关性而言，具信内皮 肽在这些病理生理病症中扮演重要角色(参见例如：Saito等人(1990) Hypertension 15：734-738；Tomita等人(1989)N.Engl.J.Med.321： 1127；Kurihara等人(1989)J.Cardiovasc.Pharmacol.13(Suppl.5)：S13 -S17；Doherty(1992)J.Med.Chem.35：1493-1508；Morel等人(1989) Eur.J.Pharmacol.167：427-428)。若能提供内皮肽族肽的功能及结构方 面的更详细知识，将可了解此等病症的发展和治疗法。
为了有助于进一步了解及研究受内皮肽调节或与内皮肽有关的病 变，需要鉴别可调整或改变内皮肽活性的化合物。鉴别可调整内皮肽活 性的化合物，如那些具有专一性拮抗剂或激动剂作用的化合物，可能不 仅有助于阐明内皮肽的功能，而且还可产生有治疗作用的化合物。具体 而言，可专一性干扰内皮肽与ETA或ETB受体相互作用的化合物应可用 于鉴别内皮肽的必要特性，应有助于设计治疗药物，且可用为疾病的专 一性治疗药物。如上所述，许多化合物，特别是磺酰胺化合物，是强效 内皮肽拮抗剂，并因此是理想的临床候选者。在临床使用时，需要体内 活性最佳的强效化合物以及稳定的组合物和适用于各种途径给药的组合 物。
因此，本发明的目的是提供具有体内调整一种或多种内皮肽同功肽 的生物活性能力的化合物。另一个目的是提供用作体内专一性内皮肽拮 抗剂的化合物。再一个目的是可与ETA受体专一性相互作用或抑制内皮 肽与ETA受体专一性相互作用的化合物的用途。又一个目的是提供用于 治疗受内皮肽调节之疾病的此等化合物的组合物。这些化合物应可用为 治疗受内皮肽调节的疾病与疾变的治疗药物。
发明概要
本发明提供调整内皮肽与ETA和/或ETB受体相互作用的磺酰胺、磺 酰胺的组合物和方法。具体而言，是提供抑制内皮肽与ETA或ETB受体 结合作用的磺酰胺、磺酰胺的组合物和方法。该磺酰胺是经取代或未经 取代的噻吩基、呋喃基、吡咯基和苯基磺酰胺。
特别优选的磺酰胺是N-异恶唑基噻吩磺酰胺、呋喃基、吡咯基和 苯基磺酰胺，其中噻吩、呋喃、吡咯或者苯环被芳基、优选苯基取代， 其只有一个或两个氢取代基。与其中芳基具有两个以上氢取代基的化合 物相比，所述化合物具有更好的效力、效用、生物利用度、体内半衰期 和/或稳定性，并同时避免了与疏水性有关的毒性作用。另外，这些化合 物似乎在标准体外毒性测试中具有良好的曲线。
发现在体内给药时，希望磺酰胺达到适当程度的亲水性，这可降低 化合物潜在的溶血性。如果例如取代噻吩、呋喃、吡咯或者苯环的芳基 是四、五或六取代的，优选四或五取代的，则可实现此目标。如果芳基 是四取代的，优选在1、2、4和6位取代。1位的取代基与噻吩、呋喃、 吡咯或者苯环连接。2、4或位处的取代基之一优选是极性基团，例如羟 基、乙酰氧基、羧基、磺酰基、酰基、杂芳基、肟、卤素、假卤素和羧 酰胺(carboxamide)。此等取代可增强化合物的内皮肽拮抗剂活性和亲 水性。
如果芳基是被3个非极性基团取代的，如烷基，更具体而言是甲基， 则芳基优选为五-或六取代的。在所述五取代的芳基中，第4个取代基 连接在噻吩、呋喃、吡咯或者苯环时，而第5个取代基优选是极性基团， 如羟基、乙酰氧基、羧基、磺酰基、酰基、杂芳基、肟、卤素、假卤素 和羧酰胺。为实现治疗应用中最高水平的活性，此等取代是优选的。
此等取代使化合物具有良好的生物利用度、长的体内半衰期、和/或 良好的体内效用。就在此所述而言，使用合适的动物模型也可经验性地 确定其它如此合适的取代模式和取代基。
本发明的组合物及方法中所用的化合物是具有以下通式I的磺酰胺化 合物：
Ar2-SO2-NH-Ar1                 (I) 及其药物学上可接受的衍生物，其中Ar1是未取代或被一个或者多个取 代基取代的芳基或杂芳基，所述取代基包括烷基、芳基、取代芳基、硝 基、氨基或卤素；或者是烷基。具体而言，Ar1是烷基或者是5或6元取 代或未取代芳香或杂芳香环，特别是3-或5-异恶唑基，哒嗪基，吡嗪 基，包括2-吡嗪基，噻唑基，包括2-噻唑基，苯并噻二唑基，包括2， 1，3-苯并噻二唑-5-基，苯并恶二唑基，包括2，1，3-苯并恶二唑 -5-基，嘧啶基，包括2-嘧啶基，或取代苯基，包括芳氧基取代苯基， 或者是二环或三环碳或者杂环。
对于Ar1更优选的基团是3-或5-异恶唑基。在这些实施方案中， 化合物具有以下式II： 其中R1和R2是如下的(i)、(ii)或(iii)：
(i)R1和R2分别独立地选自于H、NH2、NO2、卤素、假卤素、烷基、 链烯基、链炔基、芳基、芳烷基、杂芳基、烷氧基、烷基氨基、烷硫基、 烷基氧基、卤代烷基、烷基亚硫酰基、烷基磺酰基、芳氧基、芳基氨基、 芳硫基、芳基亚硫酰基、芳基磺酰基、卤代烷基、卤代芳基、烷氧羰基、 烷基羰基、氨基羰基、芳基羰基、甲酰基、取代或未取代酰胺基、以及 取代或未取代脲基，其中烷基、链烯基和链炔基部分包含1-14个碳原子， 而且可以是直链或支链或环状的，而芳基部分包含4-16个碳原子，但是 R2不是卤素或假卤素；或者
(ii)R1和R2一起形成-(CH2)n-，其中n是3-6；或者
(iii)R1和R2一起形成1，3-丁二烯基(-CH＝CH-CH＝CH-)。
在优选的实施方案中，R1和R2分别独立地选自于烷基、低级链烯基、 低级链炔基、低级卤代烷基、卤素、假卤素或H，但R2不是卤素。
在用于本发明的组合物及方法中的化合物中，Ar2是具有以下式的噻 吩基、呋喃基、吡咯基或苯基： 其中M是-C(Y)-W-、(CH2)mC(Y)(CH2)r、(CH2)mC(Y)NH(CH2)r、 (CH2)m(CH＝CH)(CH2)r、(CH2)mC(Y)(CH2)sNH(CH2)r、C＝N(OH)(CH2)r、 (CH2)mC(Y)(CH＝CH)sNH(CH2)r、CH(OH)(CH2)r、CH(CH3)C(Y)(CH2)r、 CH(CH3)C(Y)(CH2)m(CH＝CH)(CH2)r、(CH2)r、(CH2)rO、或(CH2)S(O)n； 其中n是0-2；m、s和r分别独立地是0-6，优选为0-3；W是O、NH或 (CH2)z，其中z是0-6，优选为0-3，更优选为1；而Y是O、S，或者与R8 以及它们所连接的原子一起形成3-16元未取代或取代环或杂环，优选为 5或6元未取代或取代环或杂环，更优选为6元未取代或取代杂环；M优选 是-C(Y)-W-或(CH2)z；
R3和R4独立地选自于氢、卤素、氰基、氰基烷基、C(O)R41、烷基、 链烯基、环烷基和芳基，或一起形成亚烷基或亚烯基，其中R41是烷基、 芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、环烷基、烷基氨基、二烷基氨基、 芳基氨基、二芳基氨基、烷基磺酰基氨基、芳基磺酰基氨基、烷基磺酰 基烷基氨基、烷基磺酰基芳基氨基、芳基磺酰基烷基氨基或芳基磺酰基 芳基氨基；
Y1和Y2分别独立地是碳或氮；a和b分别独立地是0或1；
R5、R6、R7、R8和R9分别独立地如下选自于(i)或(ii)：
(i)R5、R6、R7、R8和R9分别独立地选自于H、OH、NHR38、CONR38R39、 NO2、氰基、卤素、假卤素、烷基、链烯基、链炔基、芳基、芳烷基、 杂芳基、烷氧基、烷基氨基、烷硫基、卤代烷基、烷基亚硫酰基、烷基 磺酰基、烷氧羰基、烷基羰基、链烯基硫基、链烯基氨基、链烯基氧基、 链烯基亚硫酰基、链烯基磺酰基、烷氧羰基、芳基氨基羰基、烷基氨基- 羰基、氨基羰基、(烷基-氨基羰基)烷基、乙酰氧基、羟基、羧基、羧 基烷基、羧基烯基、烷基磺酰基氨基烷基、氰基烷基、乙酰基、乙酰氧 基烷基、羟基烷基、烷氧基烷氧基、羟基烷基、(乙酰氧基)烷氧基、(羟 基)烷氧基、甲酰基、磺酰氯、氨基酸、己糖、O-糖苷、核糖、低级烷 基、CN、-(CH2)xC(O)(CH2)yCH3、-(CH2)xCH3、(CH2)xNH-低级烷基、 -(CH2)xC(O)NH2、D-、L-或外消旋氨基酸、伯或仲酰胺、O-糖苷、 己糖或核糖、-S(O)2NH2、羟基、烷氧基、烷氧羰基、乙酰氧基烷基、 -(CH2)xCOOH、-(CH2)xCH(COOH)(CH2)yCH3、CO2-低级烷基、CN、 杂芳基、C(O)(CH2)xS(O)2(CH2)yCH3、C(＝N-OR38)(CH2)yCH3、 -C(O)C(O)(CH2)yCH3、-(CH2)xN(CH3)2、磺酰氯、S(O)2NHR50、 OS(O)2NR38R39、烷基芳基、烷基杂芳基、C(O)NHR50、-(CH2)xOH、 以及-C(O)N(H)N(H)R50；
其中R38和R39分别独立地选自于氢、烷基、链烯基、链炔基、芳基、 卤代烷基、烷基芳基、杂环基、芳烷基、芳基烷氧基、烷氧基、芳氧基、 环烷基、环烯基和环炔基，并优选分别选自于氢、低级烷基、低级烷氧 基和低级卤代烷基；x和y分别独立地是0-14；而R50是诸如氢、低级烷基、 低级烷氧基或杂芳基的取代基；或者
(ii)取代环上相邻碳原子的R5、R6、R7、R8和R9中的至少两个一起形 成亚烷基二氧基，亚烷基硫代氧基氧基或亚烷基二硫代氧基(如 -O-(CH2)n-O-、-S-(CH2)n-O-、-S-(CH2)n-S-，其中n是1-4， 优选为1或2)，这些基团是未取代或者一个或多个氢原子通过被卤素、低 级烷基、低级烷氧基或卤代低级烷基置换而被取代，而其他的R5、R6、 R7、R8和R9则如(i)进行选择；而且
X是-C(R3)＝C(R4)-、S、O或NR11，其中R11是氢或包含最多约30 个碳原子、优选1-10个碳原子、更优选1-6个碳原子，而且选自于氢、 烷基、链烯基、链炔基、芳基、烷基芳基、杂环基、芳烷基、芳烷氧基、 环烷基、环烯基、环炔基、C(O)R15和S(O)nR15，其中n是0-2；R15是氢、 烷基、链烯基、链炔基、芳基、烷基芳基、杂环基、芳烷基、芳烷氧基、 环烷基、环烯基或环炔基；R11和R15是未取代或被一个或多个独立地选 自于Z中的取代基取代，所述Z包括氢、卤素、假卤素、烷基、烷氧基、 链烯基、链炔基、芳基、氨基酸、伯和仲酰胺、O-糖苷、己糖、核糖、 烷基芳基、烷基杂芳基、杂环基、芳烷基、芳烷氧基、环烷基、环烯基、 环炔基、OH、CN、C(O)R16、OC(O)R16、CO2R16、OCO2R16、SH、S(O)nR16 其中n是0-2、NHOH、NR12R16、NO2、N3、OR16、R12NCOR16以及CONR12R16； R16是氢、烷基、链烯基、链炔基、芳基、烷基芳基、杂环基、芳烷基、 芳烷氧基、环烷基、环烯基、环炔基、氯、NHR50、烷基芳基、烷基杂 芳基或-(CH2)xOH；R50是诸如氢、低级烷基、低级烷氧基或杂芳基的取 代基；x是0-14；R12独立地选自于R11和Z，选自于氢、烷基、链烯基、 链炔基、芳基、烷基芳基、杂环基、芳烷基、芳烷氧基、环烷基、环烯 基、环炔基、C(O)R17和S(O)nR17其中n is 0-2；R17是氢、烷基、链烯 基、链炔基、芳基、烷基芳基、杂环基、芳烷基、芳烷氧基、环烷基、 环烯基或环炔基；R12和R16可一起形成亚烷基；R11、R12、R15和R16可分 别进一步被Z中的合适基团取代。
在所有的实施方案中，X优选是S或者-CH＝CH-，更优选是S。
在某些实施方案中，化合物的选择具有以下前提条件：R5、R6、R7、 R8和R9中最多有两个是氢。在另一个实施方案中，化合物的选择具有以 下前提条件：R5、R6、R7、R8和R9中最多有一个是氢。
在另一个实施方案中，所述化合物具有式I或II，其前提条件是：化 合物没有具体地公开在国际专利申请公布WO 94/27979、WO 96/31492、 WO 98/13366和WO 98/49162中，这些文献的内容在此并入作为参考。
在另一个实施方案中，化合物的选择具有以下前提条件：R8不是 COOH、CONH2或者苯基。
本文所述的化合物中，优选那些在约10μ以下的浓度即可抑制或提 高内皮肽所调节活性约50％的化合物。更优选的是在1μM以下浓度时， 以约0.1μM以下更优选，甚至约0.01μM以下更优选，约0.001μM 以下最优选，可抑制或提高内皮肽所调节活性约50％的化合物。应注意 到，如下所述，于体外分析法测定的IC50浓度为培养温度的非线性函数。 在本文中，得到优选数值的分析法于4℃下进行。当分析法于24℃下进 行时，可观察到稍高(见表1)的IC50浓度。因此，优选IC50浓度高约10 倍。另外，在这些化合物中，以标准动物模型测定具有最大生物利用度 和稳定性的化合物是最优选的。
亦用于本文所提供方法的最优选化合物是那些具有ETA选择性者， 也就是说，在远低于与ETB受体相互作用的浓度下(IC50至少低约10倍， 优选低100倍)与ETA受体相互作用。具体而言，优选的是，与ETA相 互作用的IC50约10μM以下，优选低于1μM，更优选低于0.1μM，但 与ETB的IC50约10μM以上的化合物，或与ETB相互作用的IC50约10 μM以下，优选低于1μM，但与ETA的IC50为约10μM以上的化合物。
本发明还涉及磺酰胺的任何药物学上可接受的衍生物，包括盐、酯、 酸、和碱、溶剂化物、水合物和前体药物。优选的是药物学上可接受的 盐，包括但不限于胺盐，例如但不限于N，N′-二苄基乙二胺、氯普 鲁卡因、胆碱、氨、二乙醇胺以及其它羟烷基胺、乙二胺、N-甲基葡 糖胺、普鲁卡因、N-苄基苯乙胺、1-对氯苄基-2-吡咯烷-1′-基 -甲基苯并咪唑、二乙基胺和其它烷基胺、哌嗪、三(羟甲基)氨基甲 烷，碱金属盐，例如但不限于锂、钾和钠，碱土金属盐，例如但不限于 钡、钙和镁，过渡金属盐，例如但不限于锌，以及其它金属盐，例如但 不限于磷酸氢钠和磷酸钠，优选钠盐，更优选钠盐，而且还包括但不限 于矿物酸的盐，例如但不限于盐酸和硫酸盐，有机酸的盐，例如但不限 于乙酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、抗坏血酸盐、琥 珀酸盐、丁酸盐、戊酸盐和富马酸盐。在此优选碱金属盐，特别是钠盐， 最优选的盐是钠盐。
本发明还提供用于经适当途径和手段给药的药物组合物，其含有有 效浓度的本文所提供的一种或多种化合物或该磺酰胺的药物学上可接受 的盐、酯、酸和碱、溶剂化物、水合物以及前体药物，优选盐，更优选 钠盐，包括但不限于钠盐和磷酸氢钠盐，最优选钠盐，该组合物释放有 效剂量，用于治疗高血压、中风、心血管疾病、心脏病包括：心肌梗塞、 肺动脉高血压、新生性肺动脉高血压、红细胞生成素所调节的高血压、 呼吸性疾病及炎症，包括气喘、支气管收缩、眼部疾病包括青光眼和视 网膜灌流不充分、胃肠疾病、肾衰竭、内毒素休克、月经性疾病、产科 疾病、受伤、板炎、勃起功能障碍、绝经、骨质疏松症和骨代谢性疾病、 气候性疾病包括热潮红、异常凝块行为、尿道生殖道不适以及心血管疾 病的发病率增加、和其他与中年妇女卵巢功能下降有关的疾病、子痫前 期、怀孕期间的控制、过敏性休克、出血性休克、氧化氮减弱的疾病、 以及其他涉及由内皮肽调节之生理反应的疾病或者涉及血管收缩的疾病 或者给药内皮肽拮抗剂或激动剂可缓解其症状的疾病。
本发明制剂是适用于通过任何所希望的途径给药的组合物，其包括 溶液、混悬液、乳液、片剂、溶散片、丸剂、胶囊、粉末、吸入用的干 粉末、缓释制剂、鼻腔和呼吸道给药的气雾剂、透皮给药的药贴、以及 任何其它合适途径给药的剂型。本发明组合物应适用于经口服给药，非 经胃肠道通过注射给药，这包括以注射水溶液或油溶液或乳液经皮下、 肌肉内或静脉注射，透皮给药以及其它经选择的给药途径。
本发明还提供磺酰胺衍生物的冻干粉末、其制备方法、以及包含复 原形式之冻干粉末的制剂。亦提供包含粉末的管形瓶、安瓿、注射器以 及其它合适容器。
优选制剂包括含有磺酰胺之药物学上可接受的盐、优选钠盐、更优 选一个钠盐的无菌冻干粉末，还包括胶囊和片剂。特别优选的制剂是那 些释放有效剂量之药物治疗高血压或肾衰竭的制剂。有效剂量和浓度是 指有效缓解任何疾病之任何症状的量。
在一个实施方案中，制剂是包含一种或多种式I之磺酰胺化合物的一 种或多种盐、优选磷酸氢钠盐或钠盐、更优选钠盐的冻干固体，其还包 括以下一种或多种物质：缓冲剂，如磷酸钾或钠、柠檬酸盐；增溶剂， 如LABRASOL(Gattefosse SA，France出售的聚乙二醇-8-辛基癸基甘 油酯)、DMSO、二(三甲基甲硅烷基)乙酰胺、乙醇、丙二醇(PG)、 或者聚乙烯吡咯烷酮(PVP)，以及糖或者其它碳水化合物，如山梨醇或 葡萄糖。
在其它实施方案中，制剂为固体剂型，优选为胶囊或片剂。在优选 实施方案中，制剂是固体剂型，优选是胶囊或片剂，其包括10-100重 量％、优选50-95重量％、更优选75-85重量％、最优选80-85重量 ％的式I之一种或多种磺酰胺的一种或多种盐，优选磷酸氢钠盐或钠盐， 更优选为钠盐；约0-25％、优选8-15％的赋形剂或粘合剂，如乳糖或 微晶纤维素；约0-10％、优选约3-7％的崩解剂，如改性淀粉或纤维 素聚合物，特别是交联羧甲基纤维素钠，如交联羧甲基纤维素 (crosscarmellose)钠(交联羧甲基纤维素钠NF可从FMC Corporation， Philadelphia，PA以AC-DI-SOL商品名购得)或淀粉羟乙酸钠；以及0 -2润滑剂，如硬脂酸镁、滑石和硬脂酸钙。如交联纤维素钠或者淀粉 羟乙酸钠的崩解剂能够使得在包衣聚合物溶解后快速崩解纤维素基质以 立即释放活性物质。在所有实施方案中，活性成分和辅助成分的精确量 可经验性地确定，而且与给药途径和所治疗的疾病有关。
用于给药的固体剂型如片剂也在本发明的范围之内。应理解的是， 本领域技术人员可经验性地确定所述制剂的精确量和组成。
本发明还提供使用所述制剂来调整内皮肽与ETA和/或ETB受体之相 互作用的方法。该方法是如下实现的：在使受体与内皮肽接触之前、与 其同时或者随后，使受体与磺酰胺之一种或多种药物学上可接受的盐、 优选磺酰胺的钠盐的制剂接触。
本发明还提供抑制内皮肽与内皮肽受体结合的方法。该方法如下实 现：在使受体与内皮肽接触之前、与其同时或者随后，使受体与一种或 多种本发明化合物或者所述化合物之药物学上可接受的盐的制剂接触。
还提供治疗内皮肽所调节之疾病的方法，所述疾病包括但不限于： 高血压、气喘、休克、眼压过高、青光眼、视网膜灌流不充分以及其他 由内皮肽依某些方式调节的病症，或用于治疗涉及血管收缩或可通过给 药内皮肽拮抗剂或激动剂而改善的病变。
具体而言，是提供治疗内皮肽所调节之病变的方法，其是给药有效 量的磺酰胺、磺酰胺的前体药物或其他合适衍生物。特定言之，是提供 治疗内皮肽所调节之病变的方法，包括：高血压、心血管疾病、心脏病 包括：心肌梗塞、肺动脉高血压、新生性肺动脉高血压、红细胞生成素 所调节的高血压、呼吸性疾病及炎症，包括气喘、支气管收缩、眼部疾 病包括青光眼和视网膜灌流不充分、胃肠疾病、肾衰竭、内毒素休克、 月经性疾病、产科疾病、受伤、板炎、勃起功能障碍、绝经、骨质疏松 症和骨代谢性疾病、气候性疾病包括热潮红、异常凝块行为、尿道生殖 道不适以及心血管疾病的发病率增加、和其他与中年妇女卵巢功能下降 有关的疾病、子痫前期、怀孕期间的控制、氧化氮减弱的疾病、过敏性 休克、出血性休克、以及其他涉及由内皮肽调节之生理反应的疾病，该 方法是通过给药有效量之在药物学上可接受的载体中的一种或多种本发 明的化合物来实现的。优选的治疗方法是治疗高血压和肾衰竭。
更优选的治疗法为那些其中组合物含有至少一种化合物，该化合物 在IC50约10μM以下，优选约5μM以下，更优选约1μM以下，甚至 更优选约0.1μM以下，且最优选0.05μM以下，可抑制内皮肽-1与ETA 受体相互作用。其他优选方法为那些其中组合物含有一种或多种ETA选 择性化合物或一种或多种ETB选择性化合物的药物学上可接受的盐。使 用ETA选择性化合物的方法是用于治疗如高血压的疾病，而使用ETB选 择性化合物的方法是用于治疗需要扩张支气管的疾病如气喘。
操作该方法时，是将含有治疗有效浓度之化合物的有效量组合物给 药出现一种或多种以下疾病之症状的个体，该组合物调配成经口、静脉 内、定点及局部施药，所述疾病为高血压、心血管疾病、心脏病包括： 心肌梗塞、肺动脉高血压、新生性肺动脉高血压、红细胞生成素所调节 的高血压、呼吸性疾病及炎症，包括气喘、支气管收缩、眼部疾病包括 青光眼和视网膜灌流不充分、胃肠疾病、肾衰竭、免疫抑制剂介导的肾 血管收缩、内毒素休克、月经性疾病、产科疾病、受伤、板炎、勃起功 能障碍、绝经、骨质疏松症和骨代谢性疾病、气候性疾病包括热潮红、 异常凝块行为、尿道生殖道不适以及心血管疾病的发病率增加、和其他 与中年妇女卵巢功能下降有关的疾病、子痫前期、怀孕期间的控制、过 敏性休克、出血性休克、氧化氮减弱的疾病、及其他涉及内皮肽所调节 之生理反应的疾病。其用量为有效改善或消除该等疾病的一种或多种症 状。
本发明亦提供鉴别及分离内皮肽受体亚型的方法。具体而言，提供 使用所揭示的化合物以检测、分辨、及分离内皮肽受体的方法。特定言 之，提供使用本文所提供化合物以检测、分辨及分离内皮肽受体的方法。
此外，亦提供鉴定根据其对特定内皮肽受体亚型的优先亲和力而适 用于治疗特定疾病的化合物。
并提供含有以下物质的制成品：包装材料、包含在该包装材料中的 本文所提供可有效改善内皮肽所调节之病变且在约10μM以下的IC50可 拮抗内皮肽效果或抑制内皮肽与ET受体的结合作用的化合物、及说明 该化合物或其药物学上可接受的盐用于拮抗内皮肽效果、治疗内皮肽所 调节之病变或抑制皮肽与ET受体的结合作用的标签。
优选实施方案的描述 定义
除非另外定义，否则本文所采用的科技名词均与本发明所属领域的 普通技术人员普通理解的意义相同。本文提及的所有专利及文献均在此 并入作为参考。
本文所采用的内皮肽(ET)包括实质上具有内皮肽-1、内皮肽-2 或内皮肽-3的氨基酸序列且作为强效内源性血管收缩剂肽作用的肽。
本文所采用的“内皮肽所调节的病症”是指因内皮肽活性异常或可 采用抑制内皮肽活性的化合物治疗的病症。此等疾病包括但不限于：高 血压、心血管疾病、气喘、炎症、眼部疾病、月经性病变、产科病症、 胃肠疾病、肾衰竭、肺动脉高血压、内毒素休克、过敏性休克、或出血 性休克。内皮肽所调节的病症亦包括使用如红细胞生成素和免疫抑制剂 等会提高内皮肽浓度的药剂治疗所造成的病症。
本文所采用“用于治疗特定疾病的有效量化合物”为足以改善且依 某些方式降低与疾病有关的症状的用量。此等用量可以单剂量或可根据 疗程有效给药。该用量可治疗疾病，但典型地是给药以改善疾病的症状。 典型地，需重复给药，以达到所需的改善症状效果。
本文所采用“内皮肽激动剂”为一种加强或具有与内皮肽有关的或 为内皮肽所拥有的生物活性的化合物。
本文所采用“内皮肽拮抗剂”为一种如药物和抗体的化合物，可抑 制内皮肽所刺激的血管收缩和收缩作用以及其他内皮肽所调节的生理反 应。拮抗剂的作用可干扰内皮肽与内皮肽专一性受体的相互作用或干扰 内皮肽同功肽的生理反应或生物活性，如血管收缩。因此，依本领域技 术人员熟知的分析法，本文所采用“内皮肽拮抗剂”可干扰内皮肽所刺 激的血管收缩或其他反应或干扰内皮肽与内皮肽专一性受体如ETA受体 的相互作用。
有潜力的激动剂与拮抗剂的有效性可使用本领域技术人员已知的方 法测试。例如，内皮肽激动剂活性可利用其刺激经分离的老鼠胸部主动 脉或门静脉环节的血管收缩的能力来鉴定(Borges等人(1989)“内皮肽 的组织选择性”(Tissue selectivity of endothelin)Eur.J.Pharmacol. 165：223-230)。内皮肽拮抗剂活性可由其干扰内皮肽所诱发之血管收缩 作用来分析。分析实例示于实施例部分。如上所述，优选IC50浓度范围 是供分析法参考，其中试验化合物是与含ET受体的细胞于4℃下培养。 在较不适宜的24℃下进行的培养步骤所显示的分析数据已有注明。可以 理解的是，为了比较，此等浓度均比于4℃时测得的浓度稍高。
本文所采用“生物利用度”是指吸收速率和程度。确定生物利用度 的方法对于本领域技术人员是已知的。例如，本发明描述的任何化合物 的生物利用度都可如下经验性地确定：将所述化合物给药于动物，然后 随时间采取血样，并测定化合物的血液浓度。体内半衰期(t1/2)定义为 化合物血液浓度降低一半所需要的时间。估算静脉给药曲线下的面积可 用于估计口服给药曲线下的面积，并产生生物利用度数据。参见例如Milo Gibal(1991)，Biopharmaceutics and Pharmacology，第4版(Lea and Sediger)。
本文所采用的“效能”是指化合物可产生的最大作用。效能可用本 领域技术人员已知的方法来测定。例如，可根据化合物的性质及其受体 -效应器系统来确定，然后反映在浓度-作用曲线的平台中。体内效能 是指在动物模型中测定的效能。例如，本发明化合物的体内效能可通过 在鼠中缺氧诱导的肺动脉高血压来测定。参见例如DiCarlo等人(1995)， Am.J.Physiol.269：L690-L697。
本文所采用的“在标准的体外或者体内毒性实验中具有良好行为的 化合物”是指相对于已知的内皮肽拮抗剂该化合物表现出更高的耐受性。 具体而言，如本文所述，在抑制P450酶、特别是CP4502C9、2C19和3A4 酶时具有更高的IC50值的化合物在标准的体外毒性实验中具有良好的行 为。在标准的体内急性缺氧模型中实现平均肺动脉压(MPAP)增加50 ％抑制时需要较低的剂量的化合物具有良好的体内行为。
本文所采用“内皮肽的生物活性”包括任何于活体内由内皮肽诱发、 加强或影响的活性。亦包括与特定受体结合的能力及诱发功能反应如血 管收缩的能力。其可利用活体内分析法或体外分析法(如本文所例举者) 分析。相关活性包括但不限于：血管收缩、血管舒张及支气管扩张。例 如，ETB受体似乎表达在血管内皮细胞中，且可调节血管扩张及其他此 等反应；而内皮肽-1专一性的ETA受体则出现在平滑肌上，且与血管 收缩有关。本领域技术人员已知用来测定或检测此等活性的任何分析法 均可用来分析此等活性(参见例如：Spokes等人(1989)J.Cardiovasc. Pharmacol.13(补充本5)：S191-192；Spinella等人(1991)Proc.Natl.Acad. Sci.USA 88：7443-7446；Cardell等人(1991)Neurochem.Int.18：571-574； 及本文的实施例)。
本文所采用“IC50”是指在测定此等反应的分析法中，特定的试验化 合物抑制最大反应如内皮肽与组织受体的结合作用达50％时的用量、浓 度或剂量。
本文所采用“EC50”是指特定的试验化合物随剂量诱发的反应达该特 定的试验化合物所诱发、激发或加强特定反应的最大表现的50％时的剂 量、浓度或用量。
本文所采用“ETA选择性磺酰胺”是指该磺酰胺对ETA受体的IC50比 对ETB受体的IC50至少低约10倍。
本文所采用“ETB选择性磺酰胺”是指该磺酰胺对ETB受体的IC50比 对ETA受体的IC50至少低约10倍。
本文所采用“化合物的药物学上可接受的盐、酯、水合物、溶剂化 物或其他衍生物”包括本领域技术人员使用此等衍生化法的已知方法即 可制备且所产生的化合物可给药于动物或人类、而实质上无毒性且具药 物活性或为前体药物的任何盐、酯或其它衍生物。药物学上可接受的盐 包括但不限于碱金属盐和碱土金属盐，包括但不限于钠盐、钾盐、锂盐、 钙盐和镁盐；过渡金属盐，如锌盐、铜盐和铝盐；多阳离子平衡离子盐， 例如但不限于铵盐、和取代的铵盐，和有机胺盐，如羟烷基胺和烷基胺； 矿物酸的盐，例如但不限于盐酸盐和硫酸盐，有机酸的盐，例如但不限 于乙酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、抗坏血酸盐、琥 珀酸盐、丁酸盐、戊酸盐和富马酸盐。在此还包括相应的酯。
本文所采用“钠盐”是指任何钠化合物的盐，其中平衡离子包括Na+， 并可包括其它离子，如HPO4 2-；所述“钠盐”特别是指平衡离子为Na+ 的盐。
本文所采用“治疗法”是指改善或有利地改变病症、病变或疾病的 症状的任何方式。治疗法亦包括本文中组合物的任何药物用途，如成为 避孕药的用途。
本文所采用“通过给药特定药物组合物来改善特定病变的症状”是 指任何因给药或与给药本发明组合物有关而减轻病情，不论暂时或永久、 持续或过渡性的。
本文所采用“实质上纯”是指其均匀性足以令标准分析法无法测得 可检测到的杂质，该等分析法为如：本领域技术人员常用来检测此等杂 质的薄层层析法(TLC)、凝胶电泳及高效液相色谱法(HPLC)，或其纯 度达到足以使进一步纯化亦不会改变物质的物理和化学性质(如酶活性 和生物活性)的程度。可产生化学上实质上纯的化合物的纯化法是本领 域技术人员已知的。然而，化学上实质上纯的化合物可为立体异构体的 混合物。在此情况下，进一步纯化可能提高化合物的比活性。
本文所采用“生物活性”是指化合物的活体内活性或化合物、组合 物或其他混合物给药至活体内所产生的生理反应。因此，生物活性包括 此等化合物、组合物及混合物的治疗效果及药物活性。
本文所采用“制剂的稳定性增加”是指以本领域技术人员已知的分 析法测定，例如高效液相色谱法、气相色谱法等，制剂中的活性成分在 该制剂制备后的给定时间处的百分比明显高于其它组合物在制备后的相 同时间处的活性成分百分比。在此情况下，就称前一个组合物相对于后 一个组合物具有增加的稳定性。
本文所采用“前体药物”为一种给药至活体内时会代谢或转化成化 合物的生物、药物或治疗活性型的化合物。为了制成前体药物，需修饰 药物活性化合物，使得活性化合物可经由代谢过程产生。设计前体药物 时，可改变药物的代谢稳定性或转运特性，遮蔽副反应或毒性，改善药 物口味或改变药物的其他特性或性质。由于本领域技术人员已了解活体 内的药物动力学过程及药物代谢，因此一旦已知一种药物活性化合物， 即可设计该化合物的前体药物(参见例如：Nogrady(1985)“医学化学、 生物学的探讨”，纽约牛津大学出版社(Medicinal Chemistry A Biochemical Approach)，Oxford University Press，New York)，第388-392页)。例如， 琥珀酰基-磺噻唑为4-氨基-N-(2-噻唑基)苯磺酰胺(磺噻唑) 的前体药物，可改变转运特性。
本文所采用“酸等排物”是指一种在生理pH下显著离子化的基团。 合适的酸等排物实例包括磺基、磷酰基、烷磺酰基氨甲酰基、四唑基、 芳磺酰基氨甲酰基或杂芳磺酰基氨甲酰基。
本文所采用“卤素或卤化物”是指卤原子；F、Cl、Br与I。
本文所采用“假卤化物”为其表现实质上类似于卤化物的化合物。 此等化合物可依卤化物的相同方式使用及处理(“X-”，其中X为卤素， 如Cl或Br)。假卤化物包括但不限于氰化物、氰酸根、硫代氰酸根、硒 氰酸根及叠氮化物。
本文所采用“卤代烷基”是指低级烷基，基中一个或多个氢原子被 卤素取代，其包括但不限于氯甲基、三氟甲基、1-氯-2-氟乙基，等 等。
本文所采用“烷基”是指脂族烃基，其为链中优选含约1至12个碳 原子的直链或支链链。优选烷基为链中含1至约6个碳原子的直链或支 链链低级烷基。“支链”表示在线性烷基链上附接一个或多个低级烷基如 甲基、乙基或丙基。烷基可未经取代或分别经一个或多个基团取代，例 如但不限于卤素、羧基、甲酰基、磺基、亚磺基、氨甲酰基、氨基和亚 氨基。烷基实例包括甲基、乙基、丙基、羧基甲基、羧基乙基、羧基丙 基、亚磺酸基乙基及磺酸基乙基。
本文中“低级”是用于说明含约6个或更少碳原子的烷基、链烯基 与链炔基。亦用于说明环中含6个或更少碳原子的芳基或杂芳基。低级 烷基、低级烯基及低级炔基是指含约6个碳以下的碳链。本文所提供化 合物的优选实施方案包括含低级烷基、低级烯基与低级炔基部分的烷基、 烯基或炔基部分。
本文所采用“链烯基”是指含有一个碳-碳双键且可为链中含约2 至约10个碳原子的直链或支链链的脂族烃基。优选烯基是于链中含2至 4个碳原子。“支链”表示在线性烯基链上附接一个或多个低级烷基或低 级烯基。链烯基可未经取代或分别经一个或多个基团取代，如卤素、羧 基、甲酰基、磺基、亚磺基、氨甲酰基、氨基和亚氨基。链烯基实例包 括乙烯基、丙烯基、羧乙烯基、羧丙烯基、亚磺基乙烯基和磺基乙烯基。
本文所采用“链炔基”是指含有一个碳-碳参键且可为链中含约2 至10个碳原子的直链或支链链的脂族烃基。“支链”表示在线性炔基链 上附接一个或多个低级烷基、烯基或炔基。链炔基实例为乙炔基。
本文所采用“芳基”是指含3至15或16个、优选5至10个碳原子 的芳香性单环或多环烃环系。芳基包括但不限于苯基、经取代的苯基、 萘基、经取代的萘基，其中取代基为低级烷基、卤素、或低级烷氧基。 优选芳基为环结构中含7个碳以下的低级芳基。
本文所采用烷基、烷氧基、羰基等的命名法是本领域技术人员都了 解的用法。例如，本文所采用“烷基”是指含有一个或多个碳的饱和碳 链；该链可为直链或支链，或包括环状部分或可为环状。本文所采用“脂 环”是指环状的芳基。
本文所采用“环烷基”是指饱和环状碳链；“环烯基”与“环炔基” 是指分别包含至少一个未饱和双键或参键的环状碳链。碳链的环状部分 可包含一个环或二个或多个稠合环。
本文所采用“环烯基”是指含有一个碳-碳双键以及约3至10个碳 原子的非芳香性单环或多环系。单环的环烯基实例包括环戊烯基或环己 烯基；优选为环己烯基。多环系环烯基的实例为降冰片烯基。环烯基可 分别经一个或多个卤素或烷基取代。
本文所采用“卤代烷基”是指低级烷基，其中一个或多个氢原子被 卤素取代，其包括但不限于氯甲基、三氟甲基、1-氯-2-氟乙基，等 等。
本文所采用“卤代烷氧基”是指其中R为卤烷基的RO-。
本文所采用“羧酰胺”是指如式RpCONH2的基团，其中R是选自烷 基或芳基，优选为低级烷基或低级芳基，且p为0或1。
本文所采用“烷氨基羰基”是指-C(O)NHR，其中R为氢、烷基， 优选为低级烷基，或芳基，优选为低级芳基。
本文所采用“二烷基氨基羰基”是指-C(O)NR′R，其中R′与R分别 选自烷基或芳基，优选为低级烷基或低级芳基；本文所采用“羧酰胺” 是指如式NR′COR的基团。
本文所采用“烷氧羰基”是指-C(O)OR，其中R为烷基，优选为低 级烷基，或芳基，优选为低级芳基。
本文所采用“烷氧基”与“硫烷氧基”是指RO-和RS-，其中R 为烷基，优选为低级烷基，或芳基，优选为低级芳基。
本文所采用“卤代烷氧基”是指其中R为卤烷基的RO-。
本文所采用“氨基羰基”是指-C(O)NH2。
本文所采用“烷胺基羰基”是指-C(O)NHR，其中R为烷基，优选 为低级烷基，或芳基，优选为低级芳基。
本文所采用“烷氧羰基”是指-C(O)OR，其中R为烷基，优选为低 级烷基。
本文所采用“环烷基”是指饱和环状碳链；环烯基和环炔基是指包 含至少一个不饱和参键的环状碳链。该碳链的环状部分可包含一个环或 二个或多个稠合环。
本文所采用“亚烷基二氧基”是指-O-烷基-O-基团，其中烷基 部分如上所述。亚烷基二氧基的置换类似物是指亚烷基二氧基中一个或 二个氧原子被表现类似的原子或原子的基团如S、N、NH、Se置换。置 换的亚烷基二氧基实例为亚乙基双(硫烷二基)。亚烷硫基氧为-S-烷 基-O-、-O-烷基-S-，而亚烷基二硫基为-S-烷基-S-。
本文所采用“杂芳基”是指芳香性单环或稠合环系中一个或多个碳原 子被碳以外的元素例如氮、氧或硫置换。优选环状基含有一个或二个稠 合环，且各环为3至约7元环。杂芳基类似于“芳基”，可未经取代或经 一个或多个取代基取代。杂芳基实例包括吡嗪基、吡唑基、四唑基、呋 喃基、(2-或3-)噻吩基、(2-、3-、或4-)吡啶基、咪唑基、嘧 啶基、异恶唑基、噻唑基、异噻唑基、喹啉基、吲哚基、异喹啉基、恶 唑基和2，1，3-恶二唑基。优选的杂芳基包括5至6元含氮环，如嘧 啶基。
本文所采用“烷氧羰基”是指烷基-O-CO-基团。烷氧羰基实例包 括甲氧羰基和乙氧基羰基。
本文所采用“氨甲酰基”是指-CONH2。如同本文所述的所有基团， 此等基团可未经取代或经取代。经取代的氨甲酰基包括如CONY2Y3基 团，其中Y2与Y3分别为氢、烷基、氰基(低级烷基)、芳烷基、杂芳烷 基、羧基(低级烷基)、羧基(芳基取代的低级烷基)、羧基(羧基取代 的低级烷基)、羧基(羟基取代的低级烷基)、羧基(杂芳基取代的低级 烷基)、氨甲酰基(低级烷基)、烷氧羰基(低级烷基)、或烷氧羰基(芳 基取代的低级烷基)，但其限制条件为：Y2与Y3中仅有一个为氢，而且 当Y2和Y3之一为羧基(低级烷基)、羧基(芳基取代的低级烷基)、氨 甲酰基(低级烷基)、烷氧羰基(低级烷基)或烷氧羰基(芳基取代的低 级烷基)时，则Y2与Y3中另一个为氢或烷基。Y2与Y3优选分别为氢、 烷基、氰基(低级烷基)、芳烷基、杂芳烷基、羧基(低级烷基)、羧基 (芳基取代的低级烷基)及氨甲酰基(低级烷基)。
本文所采用“其任何相应的N-(4-卤-3-甲基-5-异恶唑基)、 N-(4-卤-5-甲基-3-异恶唑基)、N-(3，4-二甲基-5-异恶 唑基)、N-(4-卤-5-甲基-3-异恶唑基)、N-(4-卤-3-甲基 -5-异恶唑基)、N-(4，5-二甲基-3-异恶唑基)衍生物”是指其 中Ar2与明确说明的化合物相同的化合物，但Ar1为N-(4-卤-3-甲 基-5-异恶唑基)、N-(4-卤-5-甲基-3-异恶唑基)、N-(3，4 -二甲基-5-异恶唑基)、N-(4-卤-5-甲基-3-异恶唑基)、N- (4-卤-3-甲基-5-异恶唑基)或N-(4，5-二甲基-3-异恶唑 基)，其中卤素为任何卤化物，以Cl或Br较佳。
本文所采用的任何保护基团、氨基酸或其他化合物的缩写，除非另有 说明，否则为根据其一般用法、公认的缩写、或IUPAC-IUB生化命名 委员会(IUPAC-IUB Commission on Biochemical Nomenclature)(参见 (1972) Biochem.11：942-944)。 A、用于治疗内皮肽所调节之疾病的化合物
本发明提供治疗内皮肽所调节之疾病的化合物及使用式I化合物治疗 内皮肽所调节之疾病的方法。具体而言，本发明所提供的化合物为芳基 取代的噻吩基、呋喃基、吡咯基或苯基磺酰胺，其中所述芳基是四、五 或六取代的，优选是四或五取代的。特别优选的磺酰胺是N-异恶唑基 噻吩磺酰胺，其中噻吩是经芳基取代的，该芳基仅有一个或两个氢取代 基。如果芳基是四取代的，则优选在1、2、4和6位被取代，且这些取 代基之一是极性基团，如羟基、乙酰氧基、羧基、磺酰基、酰基、杂芳 基、肟、卤素、假卤素和羧酰胺。如果芳基在2、4和6位是被非极性基 团取代的，如烷基，更具体为甲基，则芳基优选是五或六取代的。在五 取代芳基中，第4个取代基连接噻吩、呋喃、吡咯或苯环，而第5个取 代基优选是极性基团，如羟基、乙酰氧基、羧基、磺酰基、酰基、杂芳 基、肟、卤素、假卤素和羧酰胺。
在此描述的化合物在体内动物模型和其它合适模型中具有良好的生物 利用度，相对长的体内半衰期，以及良好的效能。
在此具体描述的实施方案中，Ar1是3-或5-异恶唑基，而该磺酰胺 化合物具有式III： 或其药物学上可接受的衍生物，其中R1和R2是如下的(i)、(ii)或(iii)：
(i)R1和R2分别独立地选自于H、NH2、NO2、卤素、假卤素、烷基、 链烯基、链炔基、芳基、芳烷基、杂芳基、烷氧基、烷基氨基、烷硫基、 烷基氧基、卤代烷基、烷基亚硫酰基、烷基磺酰基、芳氧基、芳基氨基、 芳硫基、芳基亚硫酰基、芳基磺酰基、卤代烷基、卤代芳基、烷氧羰基、 烷基羰基、氨基羰基、芳基羰基、甲酰基、取代或未取代酰胺基、以及 取代或未取代的脲基，其中烷基、链烯基和链炔基部分苯环1-14个碳原 子，而且可以是直链或支链或环状的，而芳基部分苯环4-16个碳原子， 但R2不是卤素或假卤素；或者
(ii)R1和R2一起形成-(CH2)n-，其中n是3-6；或者
(iii)R1和R2一起形成1，3-丁二烯基(-CH＝CH-CH＝CH-)；
M是-C(Y)-W-，(CH2)mC(Y)(CH2)r，(CH2)mC(Y)NH(CH2)r， (CH2)m(CH＝CH)(CH2)r，(CH2)mC(Y)(CH2)sNH(CH2)r，C＝N(OH)(CH2)r， (CH2)mC(Y)(CH＝CH)sNH(CH2)r，CH(OH)(CH2)r，CH(CH3)C(Y)(CH2)r， CH(CH3)C(Y)(CH2)m(CH＝CH)(CH2)r，(CH2)r，(CH2)rO，(CH2)S(O)n其中 n是0-2，其中m、s和r分别独立地是0-6，优选为0-3，其中W是O、NH或(CH2)z其中z是0-6，优选为0-3，更优选为1；而Y是O、S，或者与R8 以及它们所连接的原子一起形成3-16元未取代或取代环或杂环，优选为 5或6元未取代或取代环或杂环，更优选为6元未取代或取代杂环；M优选 是-C(Y)-W-或(CH2)z；
R3和R4独立地选自于氢、卤素、氰基、氰基烷基、C(O)R41、烷基、 链烯基、环烷基和芳基，或一起形成亚烷基或亚烯基，其中R41是烷基、 芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、环烷基、烷基氨基、二烷基氨基、 芳基氨基、二芳基氨基、烷基磺酰基氨基、芳基磺酰基氨基、烷基磺酰 基烷基氨基、烷基磺酰基芳基氨基、芳基磺酰基烷基氨基或芳基磺酰基 芳基氨基；
Y1和Y2分别独立地是碳或氮；a和b分别独立地是0或1；
R5、R6、R7、R8和R9分别独立地选自于如下的(i)或(ii)：
(i)R5、R6、R7、R8和R9分别独立地选自于H，OH，NHR38，CONR38R39， NO2，氰基，卤素，假卤素，烷基，链烯基，链炔基，芳基，芳烷基， 杂芳基，烷氧基，烷基氨基，烷硫基，卤代烷基，烷基亚硫酰基，烷基 磺酰基，烷氧羰基，烷基羰基，链烯基硫基，链烯基氨基，链烯基氧基， 链烯基亚硫酰基，链烯基磺酰基，烷氧羰基，芳基氨基羰基，烷基氨基- 羰基，氨基羰基，(烷基-氨基羰基)烷基，乙酰氧基，羟基，羧基，羧 基烷基，羧基烯基，烷基磺酰基氨基烷基，氰基烷基，乙酰基，乙酰氧 基烷基，羟基烷基，烷氧基烷氧基，羟基烷基，(乙酰氧基)烷氧基，(羟 基)烷氧基，甲酰基，磺酰氯，氨基酸，己糖，O-糖苷，核糖，低级烷 基，CN，-(CH2)xC(O)(CH2)yCH3，-(CH2)xCH3，(CH2)xNH-低级烷基， -(CH2)xC(O)NH2，D-、L-或外消旋氨基酸，伯或仲酰胺，O-糖苷， 己糖或核糖，-S(O)2NH2，羟基，烷氧基，烷氧羰基，乙酰氧基烷基， -(CH2)xCOOH，-(CH2)xCH(COOH)(CH2)yCH3，CO2-低级烷基，CN， 杂芳基，C(O)(CH2)xS(O)2(CH2)yCH3，C(＝N-OR38)(CH2)yCH3， -C(O)C(O)(CH2)yCH3，-(CH2)xN(CH3)2，S(O)2NHR50，OS(O)2NR38R39， 烷基芳基，烷基杂芳基，C(O)NHR30，-(CH2)xOH，以及 -C(O)N(H)N(H)R50；
其中R38和R39分别独立地选自于氢、烷基、链烯基、链炔基、芳基、 卤代烷基、烷基芳基、杂环基、芳烷基、芳基烷氧基、烷氧基、芳氧基、 环烷基、环烯基和环炔基，而且优选分别选自于氢、低级烷基、低级烷 氧基和低级卤代烷基；x和y分别独立地是0-14；和R50是诸如氢、低级烷 基、低级烷氧基或杂芳基的取代基；或者
(ii)取代环上的相邻碳原子的R5、R6、R7、R8和R9中的至少两个一起 形成亚烷基二氧基、亚烷基硫代氧基氧基或亚烷基二硫代氧基(如-O -(CH2)n-O-，-S-(CH2)n-O-，-S-(CH2)n-S-，其中n是1-4， 优选为1或2)，其是未取代或通过用卤素、低级烷基、低级烷氧基或卤代 低级烷基置换一个或者多个氢而被取代，而且其他的R5、R6、R7、R8和R9 如(i)进行选择；以及
X是-C(R3)＝C(R4)-，S，O或NR11，其中R11是氢或包含最多30个碳 原子、优选1-10个碳原子、更优选1-6个碳原子，并选自于氢、烷基、 链烯基、链炔基、芳基、烷基芳基、杂环基、芳烷基、芳烷氧基、环烷 基、环烯基、环炔基、C(O)R15和S(O)nR15其中n是0-2；R15是氢、烷基、 链烯基、链炔基、芳基、烷基芳基、杂环基、芳烷基、芳烷氧基、环烷 基、环烯基或环炔基；R11和R15是未取代或被一个或者多个分别选自于z 中的取代基取代，所述Z包括氢、卤素、假卤素、烷基、烷氧基、链烯 基、链炔基、芳基、氨基酸、伯和仲酰胺、O-糖苷、己糖、核糖、烷 基芳基、烷基杂芳基、杂环基、芳烷基、芳烷氧基、环烷基、环烯基、 环炔基、OH、CN、C(O)R16、OC(O)R16、CO2R16、OCO2R16、SH、S(O)nR16 其中n是0-2、NHOH、NR12R16、NO2、N3、OR16、R12NCOR16和CONR12R16； R16是氢、烷基、链烯基、链炔基、芳基、烷基芳基、杂环基、芳烷基、 芳烷氧基、环烷基、环烯基、环炔基、氯、NH50、烷基芳基、烷基杂 芳基或-(CH2)xOH；R50是诸如氢、低级烷基、低级烷氧基或杂芳基的取 代基；x是0-14；R12选自于R11和Z，并选自于氢、烷基、链烯基、链炔基、 芳基、烷基芳基、杂环基、芳烷基、芳烷氧基、环烷基、环烯基、环炔 基、C(O)R17和S(O)nR17其中n是0-2；R17是氢、烷基、链烯基、链炔基、 芳基、烷基芳基、杂环基、芳烷基、芳烷氧基、环烷基、环烯基或环炔 基；R12和R16可一起形成亚烷基；R11、R12、R15和R16可分别进一步被Z中的 合适基团取代。
在所有的实施方案中，X优选是S或-C(R3)＝C(R4)-，更优选是S或 -CH＝CH-，并最优选是S。
在一个实施方案中，M优选是-C(Y)-W-，而在该组合物及方法中 所用的化合物具有以下式IV： 或其药物学上可接受的衍生物，其中R1-R9、X、Y、W、Y1、Y2、a和b 分别如上所定义。
在这些实施方案中，化合物优选为式IV的化合物，其中X是S或 -CH＝CH-，优选为S；R1是卤素或低级烷基；R2是低级烷基；R3和R4分别是 氢；R5是低级烷基或-(CH2)xC(O)(CH2)yCH3；R6是低级烷基、 -(CH2)xC(O)(CH2)yCH3、或杂芳基；R7是氢，羟基，烷氧基，低级烷基， S(O)2NHR50和OS(O)2NR38R39；
其中R38和R39分别独立地选自于氢、烷基、链烯基、链炔基、芳基、 卤代烷基、烷基芳基、杂环基、芳烷基、芳基烷氧基、烷氧基、芳氧基、 环烷基、环烯基和环炔基，而且优选分别选自于氢、低级烷基、低级烷 氧基和低级卤代烷基；x和y分别独立地是0-14；和R50是氢、低级烷基、低 级烷氧基或杂芳基；
Y和R8选自于如下的(i)或(ii)：
(i)Y是O；而R8是CONR38R39，CN，杂芳基，烷基磺酰基， (CH2)xC(O)(CH2)yCH3，烷基，卤素，假卤素，羟基烷基， C(O)(CH2)xS(O)2(CH2)yCH3或C(＝N-OR38)(CH2)yCH3；或者
(ii)Y和R8与它们所连接的原子一起形成3-16元未取代或取代环或杂 环，优选5或6元未取代或取代环或杂环，更优选6元未取代或取代杂环， Y和R8优选一起形成-CO-N＝或-CO-C(CN)＝；
R9是H；Y1和Y2分别独立地是碳或氮；如果Y2是碳，则a是1；如果Y2是 氮，则a是0；如果Y1是碳，则b是1；如果Y1是氮，则b是0；而W是NH。
在特别优选的实施方案中，式IV的化合物是以下式V的2-取代-3- 磺酰胺： 及其药物学上可接受的衍生物，其中X是S或-CH＝CH-，优选为S；R1 是卤素或低级烷基；R2是低级烷基；R3和R4分别是氢；R5是低级烷基或 -(CH2)xC(O)(CH2)yCH3；R6是低级烷基，-(CH2)xC(O)(CH2)yCH3，或杂芳 基；R7是氢，羟基，烷氧基，低级烷基，S(O)2NHR50和OS(O)2NR38R39；
其中R38和R39分别独立地选自于氢、烷基、链烯基、链炔基、芳基、 卤代烷基、烷基芳基、杂环基、芳烷基、芳基烷氧基、烷氧基、芳氧基、 环烷基、环烯基和环炔基，而且优选分别选自于氢、低级烷基、低级烷 氧基和低级卤代烷基；x和y分别独立地是0-14；而R50是氢、低级烷基、 低级烷氧基或杂芳基；
Y和R8选自于如下的(i)或(ii)：
(i)Y是O；而R8是CONR38R39，CN，杂芳基，烷基磺酰基， (CH2)xC(O)(CH2)yCH3，烷基，卤素，假卤素，羟基烷基， C(O)(CH2)xS(O)2(CH2)yCH3或C(＝N-OR38)(CH2)yCH3；或
(ii)Y和R8与它们所连接的原子一起形成3-16元未取代或取代环或杂 环，preferably a 5或6元未取代或取代环或杂环，更优选6元未取代或取代 杂环，Y和R8优选一起形成-CO-N＝或-CO-C(CN)＝；
R9是H；Y1和Y2分别独立地是碳或氮；如果Y2是碳，则a是1；如果Y2是 氮，则a是0；如果Y1是碳，则b是1；如果Y1是氮，则b是0；而W是NH。
在更优选的实施方案中，所述化合物是式V的化合物，其中R1是卤素 或低级烷基；优选是Cl或Me；更优选是Me。在这些实施方案中，R2是低 级烷基，优选是Me；而R3和R4分别是H。
在具体描述的实施方案中，所述化合物是以下的式V化合物，其中R5 是Me或乙酰基，优选为Me；R6是Me、乙酰基或2-恶唑基，优选为Me；R7 是H、Me、OSO2NMe2、OCH2-环丙基，羟基或SO2NH-(4-氯-3-甲 基-5-异恶唑基)，优选是H；
Y和R8选自于(i)或(ii)，优选如下选自于(i)：
(i)Y是O；而R8是C(O)CH2SO2CH3，C(O)Me，CN，C(O)N(Me)(CH2- t-Bu)，SO2Me，2-恶唑基，SO2-异丙基，SO2-n-丙基，CH(OH)Me， C(O)NMe2，C(＝N-OMe)Me，Me，C(O)Et，Cl，n-丙基或乙基；或
(ii)Y和R8一起形成-CO-N＝或-CO-C(CN)＝；
R9是H；Y1和Y2分别独立地是碳或氮，优选是碳；如果Y2是碳，则a是1； 如果Y2是氮，则a是0；如果Y1是碳，则b是1；如果Y1是氮，则b是0；而W 是NH。
因此，在优选的实施方案中，化合物是以下的式V化合物，其中X是S； R1是Cl或Me，优选为Me；R2是Me；R3、R4和R9是H；Y是O；W是NH；和Y1 和Y2分别是碳。在这些实施方案中，化合物是以下式VI的噻吩磺酰胺化 合物： 或其药物学上可接受的衍生物，其中R1是Cl或Me，preferably Me；R5是Me 或乙酰基，preferably Me；R6是Me，乙酰基或2-恶唑基，preferably Me；R7 是H，Me，OSO2NMe2，OCH2-环丙基，羟基或SO2NH-(4-氯-3-甲 基-5-异恶唑基)，preferably H；和R8是C(O)CH2SO2CH3，C(O)Me，CN， C(O)N(Me)(CH2-t-Bu)，SO2Me，2-恶唑基，SO2-异丙基，SO2-n -丙基，CH(OH)Me，C(O)NMe2，C(＝N-OMe)Me，Me，C(O)Et，Cl， n-丙基或乙基。
在最优选的实施方案中，R1、R5和R6是Me；R7是氢；而R8是C(O)Me。
在另一个实施方案中，化合物是其中Y1和Y2分别为氮的式I化合物。 在该实施方案中，a和b优选为0；而其他的变量如上所定义。在优选的实 施方案中，R5、R6和R8是烷基，优选是低级烷基，更优选是Me；Y是O； 而W是NH。在更优选的实施方案中，R3和R4分别是H；而X是S。因此， 该实施方案的化合物是N-(5-异恶唑基)2-或3-(5-嘧啶基氨基羰基) 噻吩磺酰胺。
上述实施方案的优选化合物包括N-(2-乙酰基-4，6-二甲基苯基) -3-{[(3，4-二甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-2-噻吩羧酰胺、N -(2-氰基-3，4，6-三甲基苯基)-3-{[(3，4-二甲基-5-异恶唑 基)氨基]磺酰基}-2-噻吩羧酰胺、3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑 基)氨基]磺酰基}-N-(3，4，6-三甲基-2-丙酰基苯基)-2-噻吩羧 酰胺、3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-N-[2-(1 -羟基乙基)-4，6-二甲基苯基]-2-噻吩羧酰胺、3-{[(4-氯-3- 甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-N-{2-[(二甲基氨基)羰基]-4，6 -二甲基苯基)-2-噻吩羧酰胺、3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基) 氨基]磺酰基}-N-{2，4-二甲基-6-[(甲氧基)ethanimidoyl]苯基}-2 -噻吩羧酰胺、3-{[(3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰 基}-2-硫苯基)羰基]氨基}-2，4，6-三甲基苯基-N，N-二甲基氨 基磺酸酯、3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-N-{3 -[(环丙基甲基)氧基]-2，4，6-三甲基苯基}-2-噻吩羧酰胺、3-{[(4 -氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-N-(2，4，6-三甲基-5 -嘧啶基)-2-噻吩羧酰胺、N-(2-乙酰基-3，4，6-三甲基苯基)- 3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-2-噻吩羧酰胺、3 -{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-N-(2-氰基-3， 4，6-三甲基苯基)-2-噻吩羧酰胺、N-(2-氯-4，6-二甲基苯基) -3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-2-噻吩羧酰 胺、3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-N-(4，6-二 乙酰基-3-羟基-2-丙基苯基-2-噻吩羧酰胺、3-{[(4-氯-3-甲 基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-N-(2，4-二甲基-6-[2-(甲基磺酰 基)乙酰基]苯基}-2-噻吩羧酰胺、3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑 基)氨基]磺酰基}-N-(2，4-二甲基-6-{[甲基(2，2-二甲基丙基)氨 基]羰基}苯基)-2-噻吩羧酰胺、3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基) 氨基]磺酰基)-N-[2，4-二甲基-6-(甲基磺酰基)苯基]-2-噻吩羧 酰胺、3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-N-[2，4- 二甲基-6-(1，3-恶唑-2-基)苯基]-2-噻吩羧酰胺、3-{[(4-氯 -5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-N-[2-(2-丙基磺酰基)-4，6-二甲基 苯基]-2-噻吩羧酰胺、3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺 酰基)-N-[2，4-二甲基-6-(丙基磺酰基)苯基]-2-噻吩羧酰胺、3 -{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-N-(2-乙基-4，6 -二甲基苯基)-2-噻吩羧酰胺、3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基) 氨基]磺酰基}-N-[2，6-二甲基-4-(1，3-恶唑-2-基)苯基]-2- 噻吩羧酰胺、N-(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)-2-(6，8-二甲基 -4-羟基-2-苯并嘧啶基)噻吩-3-磺酰胺和N-(4-氯-3-甲基-5 -异恶唑基)-2-(3-氰基-4-羟基-6，8-二甲基苯并[b]吡啶-2- 基)噻吩-3-磺酰胺。
在另一个实施方案中，X是-C(R3)＝C(R4)-，而化合物是式VII的苯 磺酰胺： 及其药物学上可接受的衍生物，其中R1和R2分别是如下的(i)、(ii)或(iii)：
(i)R1和R2分别独立地选自于H、NH2、NO2、卤素、假卤素、烷基、 链烯基、链炔基、芳基、芳烷基、杂芳基、烷氧基、烷基氨基、烷硫基、 烷基氧基、卤代烷基、烷基亚硫酰基、烷基磺酰基、芳氧基、芳基氨基、 芳硫基、芳基亚硫酰基、芳基磺酰基、卤代烷基、卤代芳基、烷氧羰基、 烷基羰基、氨基羰基、芳基羰基、甲酰基、取代或未取代酰胺基、以及 取代或未取代脲基，其中烷基、链烯基和链炔基部分包含1-14个碳原子， 而且可以是直链或支链或环状的，而芳基部分包含4-16个碳原子，但R2 不是卤素或假卤素；或
(ii)R1和R2一起形成-(CH2)n-，其中n是3-6；或
(iii)R1和R2一起形成1，3-丁二烯基(-CH＝CH-CH＝CH-)；
W是O、NH或(CH2)z其中z是0-6、优选为0-3、更优选为1；而Y是 O、S，或者与R8以及它们所连接的原子一起形成3-16元未取代或取代 环或杂环，优选5或6元未取代或取代环或杂环，更优选6元未取代或取代 杂环；M优选是-C(Y)-W-或(CH2)z；
R3和R4独立地选自于氢，卤素，氰基，氰基烷基，C(O)R41，烷基， 链烯基，环烷基和芳基，或一起形成亚烷基或亚烯基，其中R41是烷基， 芳基，杂芳基，芳烷基，杂芳烷基，环烷基，烷基氨基，二烷基氨基， 芳基氨基，二芳基氨基，烷基磺酰基氨基，芳基磺酰基氨基，烷基磺酰 基烷基氨基，烷基磺酰基芳基氨基，芳基磺酰基烷基氨基或芳基磺酰基 芳基氨基；
Y1和Y2分别独立地是碳或氮；a和b分别独立地是0或1；
R5、R6、R7、R8和R9分别独立地如下选自于(i)或(ii)：
(i)R5、R6、R7、R8和R9分别独立地选自于H，OH，NHR38，CONR38R39， NO2，氰基，卤素，假卤素，烷基，链烯基，链炔基，芳基，芳烷基， 杂芳基，烷氧基，烷基氨基，烷硫基，卤代烷基，烷基亚硫酰基，烷基 磺酰基，烷氧羰基，烷基羰基，链烯基硫基，链烯基氨基，链烯基氧基， 链烯基亚硫酰基，链烯基磺酰基，烷氧羰基，芳基氨基羰基，烷基氨基- 羰基，氨基羰基，(烷基-氨基羰基)烷基，乙酰氧基，羟基，羧基，羧 基烷基，羧基烯基，烷基磺酰基氨基烷基，氰基烷基，乙酰基，乙酰氧 基烷基，羟基烷基，烷氧基烷氧基，羟基烷基，(乙酰氧基)烷氧基，(羟 基)烷氧基，甲酰基，磺酰氯，氨基酸，己糖，O-糖苷，核糖，低级烷 基，CN，-(CH2)xC(O)(CH2)yCH3，-(CH2)xCH3，(CH2)xNH-低级烷基， -(CH2)xC(O)NH2，D-、L-或外消旋氨基酸，伯或仲酰胺，O-糖苷， 己糖或核糖，-S(O)2NH2，羟基，烷氧基，烷氧羰基，乙酰氧基烷基， -(CH2)xCOOH，-(CH2)xCH(COOH)(CH2)yCH3，CO2-低级烷基，CN， 杂芳基，C(O)(CH2)xS(O)2(CH2)yCH3，C(＝N-OR38)(CH2)yCH3， -C(O)C(O)(CH2)yCH3，-(CH2)xN(CH3)2，S(O)2NHR50，OS(O)2NR38R39， 烷基芳基，烷基杂芳基，C(O)NHR50，-(CH2)xOH，以及 -C(O)N(H)N(H)R50；
其中R38和R39分别独立地选自于氢、烷基、链烯基、链炔基、芳基、 卤代烷基、烷基芳基、杂环基、芳烷基、芳基烷氧基、烷氧基、芳氧基、 环烷基、环烯基和环炔基，而且优选分别选自于氢、低级烷基、低级烷 氧基和低级卤代烷基；x和y分别独立地是0-14；而R50是诸如氢、低级烷 基、低级烷氧基或杂芳基的取代基；或
(ii)取代环上相邻原子的R5、R6、R7、R8和R9中至少有两个一起形成 亚烷基二氧基、亚烷基硫代氧基氧基或亚烷基二硫代氧基(如 -O-(CH2)n-O-，-S-(CH2)n-O-，-S-(CH2)n-S-，其中n是1-4， 优选为1或2)其是未取代或通过用卤素、低级烷基、低级烷氧基或卤代 低级烷基取代一个或者多个氢而被取代，而其他的R5、R6、R7、R8和R9 如(i)中所述进行选择。
在某些实施方案中，化合物式如下的式VII化合物，其中R3、R4和R9 是H；Y是O；而W是NH。在优选的实施方案中，R1和R2分别选自于烷基、 低级链烯基、低级链炔基、低级卤代烷基、卤素、假卤素或H，但R2不 是卤素。R1优选是低级烷基或卤素，更优选是Me或Cl。R2优选是低级烷 基，更优选是Me。
 在更优选的实施方案中，化合物具有以下式VIII： 或其药物学上可接受的衍生物，其中R1是低级烷基或卤素，优选是Me或 Cl；R5是低级烷基或-(CH2)xC(O)(CH2)yCH3；R6是低级烷基， -(CH2)xC(O)(CH2)yCH3，或杂芳基；R7是氢，羟基，烷氧基，低级烷基， S(O)2NHR50或OS(O)2NR38R39；而R8是CONR38R39，CN，杂芳基，烷基磺 酰基，(CH2)xC(O)(CH2)yCH3，烷基，卤素，假卤素，羟基烷基， C(O)(CH2)xS(O)2(CH2)yCH3或C(＝N-OR38)(CH2)yCH3。
在更优选的实施方案中，所述化合物是如下的式VIII化合物，其中R5 是Me或乙酰基，优选为Me；R6是Me、乙酰基或2-恶唑基，优选为Me；R7 是H、Me、OSO2NMe2、OCH2-环丙基、羟基或SO2NH-(4-氯-3-甲 基-5-异恶唑基)，优选为H；而R8是C(O)CH2SO2CH3，C(O)Me，CN， C(O)N(Me)(CH2-t-Bu)，SO2Me，2-恶唑基，SO2-异丙基，SO2-n -丙基，CH(OH)Me，C(O)NMe2，C(＝N-OMe)Me，Me，C(O)Et，Cl， n-丙基或乙基。因此，在优选的实施方案中，所述化合物是如下的式VIII 化合物，其中R5和R6是Me；而R7是H。在这些实施方案中，R8最优选是 C(O)Me。
优选的式VIII化合物包括N-(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)-2-(2 -乙酰基-4，6-二甲基苯基氨基羰基)苯磺酰胺。
在其他的实施方案中，所述化合物是如下的式I化合物，其中M是 (CH2)z，其中z是0-6、优选0-3、更优选1。因此，在更优选的实施方案 中，式I的化合物具有式IX： 或其药物学上可接受的衍生物，其中R1和R2是如下的(i)、(ii)或(iii)：
(i)R1和R2分别独立地选自于H、NH2、NO2、卤素、假卤素、烷基、 链烯基、链炔基、芳基、芳烷基、杂芳基、烷氧基、烷基氨基、烷硫基、 烷基氧基、卤代烷基、烷基亚硫酰基、烷基磺酰基、芳氧基、芳基氨基、 芳硫基、芳基亚硫酰基、芳基磺酰基、卤代烷基、卤代芳基、烷氧羰基、 烷基羰基、氨基羰基、芳基羰基、甲酰基、取代或未取代酰胺基、以及 取代或未取代脲基，其中烷基、链烯基和链炔基部分包含1-14个碳原子， 而且可以是直链或支链或环状的，而芳基部分包含4-16个碳原子，但R2 不是卤素或假卤素；或
(ii)R1和R2一起形成-(CH2)n-，其中n是3-6；或，
(iii)R1和R2一起形成1，3-丁二烯基(-CH＝CH-CH＝CH-)；
R3和R4独立地选自于氢、卤素、氰基、氰基烷基、C(O)R41、烷基、 链烯基、环烷基和芳基，或一起形成亚烷基或亚烯基，其中R41是烷基、 芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、环烷基、烷基氨基、二烷基氨基、 芳基氨基、二芳基氨基、烷基磺酰基氨基、芳基磺酰基氨基、烷基磺酰 基烷基氨基、烷基磺酰基芳基氨基、芳基磺酰基烷基氨基或芳基磺酰基 芳基氨基；
Y1和Y2分别独立地是碳或氮；a和b分别独立地是0或1；
R5，R6，R7，R8和R9分别独立地如下选自于(i)或(ii)：
(i)R5、R6、R7、R8和R9分别独立地选自于H，OH，NHR38，CONR38R39， NO2，氰基，卤素，假卤素，烷基，链烯基，链炔基，芳基，芳烷基， 杂芳基，烷氧基，烷基氨基，烷硫基，卤代烷基，烷基亚硫酰基，烷基 磺酰基，烷氧羰基，烷基羰基，链烯基硫基，链烯基氨基，链烯基氧基， 链烯基亚硫酰基，链烯基磺酰基，烷氧羰基，芳基氨基羰基，烷基氨基- 羰基，氨基羰基，(烷基-氨基羰基)烷基，乙酰氧基，羟基，羧基，羧 基烷基，羧基烯基，烷基磺酰基氨基烷基，氰基烷基，乙酰基，乙酰氧 基烷基，羟基烷基，烷氧基烷氧基，羟基烷基，(乙酰氧基)烷氧基，(羟 基)烷氧基，甲酰基，磺酰氯，氨基酸，己糖，O-糖苷，核糖，低级烷 基，CN，-(CH2)xC(O)(CH2)yCH3，-(CH2)xCH3，(CH2)xNH-低级烷基， -(CH2)xC(O)NH2，D-、L-或外消旋氨基酸，伯或仲酰胺，O-糖苷， 己糖或核糖，-S(O)2NH2，羟基，烷氧基，烷氧羰基，乙酰氧基烷基， -(CH2)xCOOH，-(CH2)xCH(COOH)(CH2)yCH3，CO2-低级烷基，CN， 杂芳基，C(O)(CH2)xS(O)2(CH2)yCH3，C(＝N-OR38)(CH2)yCH3， -C(O)C(O)(CH2)yCH3，-(CH2)xN(CH3)2，S(O)2NHR50，OS(O)2NR38R39， 烷基芳基，烷基杂芳基，C(O)NHR50，-(CH2)xOH，以及 -C(O)N(H)N(H)R50；
其中R38和R39分别独立地选自于氢、烷基、链烯基、链炔基、芳基、 卤代烷基、烷基芳基、杂环基、芳烷基、芳基烷氧基、烷氧基、芳氧基、 环烷基、环烯基和环炔基，而且优选分别选自于氢、低级烷基、低级烷 氧基和低级卤代烷基；x和y分别独立地是0-14；而R50是诸如氢、低级烷 基、低级烷氧基或杂芳基的取代基；或
(ii)取代环上相邻原子的R5、R6、R7、R8和R9中至少有两个一起形成 亚烷基二氧基、亚烷基硫代氧基氧基或亚烷基二硫代氧基(如 -O-(CH2)n-O-，-S-(CH2)n-O-，-S-(CH2)n-S-，其中n是1-4， 优选为1或2)，其是未取代或通过用卤素、低级烷基、低级烷氧基或卤代 低级烷基取代一个或者多个氢而被取代，而其他的R5、R6、R7、R8和R9 如(i)中所述进行选择；以及
X是-C(R3)＝C(R4)-，S，O或NR11，其中R11是氢或包含最多30个、 优选1-10个、更优选1-6个碳原子，并选自于氢、烷基、链烯基、链炔 基、芳基、烷基芳基、杂环基、芳烷基、芳烷氧基、环烷基、环烯基、 环炔基、C(O)R15和S(O)nR15其中n是0-2；R15是氢、烷基、链烯基、链 炔基、芳基、烷基芳基、杂环基、芳烷基、芳烷氧基、环烷基、环烯基 或环炔基；R11和R15是未取代或被一个或者多个分别独立地选自于Z中的 取代基取代，所述Z包括氢、卤素、假卤素、烷基、烷氧基、链烯基、 链炔基、芳基、氨基酸、伯和仲酰胺、O-糖苷、己糖、核糖、烷基芳 基、烷基杂芳基、杂环基、芳烷基、芳烷氧基、环烷基、环烯基、环炔 基、OH、CN、C(O)R16、OC(O)R16、CO2R16、OCO2R16、SH、S(O)nR16其 中n是0-2、NHOH、NR12R16、NO2、N3、OR16、R12NCOR16和CONR12R16： R16是氢、烷基、链烯基、链炔基、芳基、烷基芳基、杂环基、芳烷基、 芳烷氧基、环烷基、环烯基、环炔基、氯、NHR50、烷基芳基、烷基杂 芳基或-(CH2)xOH；R50是诸如氢、低级烷基、低级烷氧基或杂芳基的取 代基；x是0-14；R12独立地选自于R11和Z，选自于氢、烷基、链烯基、链 炔基、芳基、烷基芳基、杂环基、芳烷基、芳烷氧基、环烷基、环烯基、 环炔基、C(O)R17和S(O)nR17其中n是0-2；R17是氢、烷基、链烯基、链 炔基、芳基、烷基芳基、杂环基、芳烷基、芳烷氧基、环烷基、环烯基 或环炔基；R12和R16可一起形成亚烷基；R11、R12、R15和R16可分别进一步 被Z中所定义的合适基团取代。
在这些实施方案中，R3和R4优选形成-CH＝CH-CH＝CH-，而X优 选是S。在更优选的实施方案中，式LX的化合物是在2位被苄基取代的苯 并噻吩-3-磺酰胺取代。因此，在更优选的实施方案中，式IX的化合物 具有式X： 或其药物学上可接受的衍生物，其中R1和R2分别如下是(i)、(ii)或(iii)：
(i)R1和R2分别独立地选自于H、NH2、NO2、卤素、假卤素、烷基、 链烯基、链炔基、芳基、芳烷基、杂芳基、烷氧基、烷基氨基、烷硫基、 烷基氧基、卤代烷基、烷基亚硫酰基、烷基磺酰基、芳氧基、芳基氨基、 芳硫基、芳基亚硫酰基、芳基磺酰基、卤代烷基、卤代芳基、烷氧羰基、 烷基羰基、氨基羰基、芳基羰基、甲酰基、取代或未取代酰胺基，以及 取代或未取代脲基，其中烷基、链烯基和链炔基部分包含1-14个碳原子， 而且可以是直链或支链或环状的，而芳基部分包含4-16个碳原子，但R2 不是卤素或假卤素；或，
(ii)R1和R2一起形成-(CH2)n-，其中n是3-6；或，
(iii)R1和R2一起形成1，3-丁二烯基(-CH＝CH-CH＝CH-)；
Y1和Y2分别独立地是碳或氮；a和b分别独立地是0或1；
R5，R6，R7，R8和R9分别独立地如下选自于(i)或(ii)：
(i)R5、R6、R7、R8和R9分别独立地选自于H，OH，NHR38，CONR38R39， NO2，氰基，卤素，假卤素，烷基，链烯基，链炔基，芳基，芳烷基， 杂芳基，烷氧基，烷基氨基，烷硫基，卤代烷基，烷基亚硫酰基，烷基 磺酰基，烷氧羰基，烷基羰基，链烯基硫基，链烯基氨基，链烯基氧基， 链烯基亚硫酰基，链烯基磺酰基，烷氧羰基，芳基氨基羰基，烷基氨基- 羰基，氨基羰基，(烷基-氨基羰基)烷基，乙酰氧基，羟基，羧基，羧 基烷基，羧基烯基，烷基磺酰基氨基烷基，氰基烷基，乙酰基，乙酰氧 基烷基，羟基烷基，烷氧基烷氧基，羟基烷基，(乙酰氧基)烷氧基，(羟 基)烷氧基，甲酰基，磺酰氯，氨基酸，己糖，O-糖苷，核糖，低级烷 基，CN，-(CH2)xC(O)(CH2)yCH3，-(CH2)xCH3，(CH2)xNH-低级烷基， -(CH2)xC(O)NH2，D-、L-或外消旋氨基酸，伯或仲酰胺，O-糖苷， 己糖或核糖，-S(O)2NH2，羟基，烷氧基，烷氧羰基，乙酰氧基烷基， -(CH2)xCOOH，-(CH2)xCH(COOH)(CH2)yCH3，CO2-低级烷基，CN， 杂芳基，C(O)(CH2)xS(O)2(CH2)yCH3，C(＝N-OR38)(CH2)yCH3， -C(O)C(O)(CH2)yCH3，-(CH2)xN(CH3)2，S(O)2NHR50，OS(O)2NR38R39， 烷基芳基，烷基杂芳基，C(O)NHR50，-(CH2)xOH，以及 -C(O)N(H)N(H)R50；
其中R38和R39分别独立地选自于氢、烷基、链烯基、链炔基、芳基、 卤代烷基、烷基芳基、杂环基、芳烷基、芳基烷氧基、烷氧基、芳氧基、 环烷基、环烯基和环炔基，而且优选分别选自于氢、低级烷基、低级烷 氧基和低级卤代烷基；x和y分别独立地是0-14；而R50是诸如氢、低级 烷基、低级烷氧基或杂芳基的取代基；或
(ii)取代环上相邻原子的R5、R6、R7、R8和R9中至少有两个一起形成 亚烷基二氧基、亚烷基硫代氧基氧基或亚烷基二硫代氧基(如 -O-(CH2)n-O-，-S-(CH2)n-O-，-S-(CH2)n-S-，其中n是1-4， 优选为1或2)其是未取代或通过用卤素、低级烷基、低级烷氧基或卤代 低级烷基取代一个或者多个氢而被取代，而其他的R5、R6、R7、R8和R9 如(i)中所述进行选择。
在更优选的实施方案中，所述化合物是如下的式X化合物，其中R1是 卤素或低级烷基；R2是低级烷基；R5是低级烷基或-(CH2)xC(O)(CH2)yCH3； R6是低级烷基，-(CH2)xC(O)(CH2)yCH3，或杂芳基；R7是氢，羟基，烷氧 基，低级烷基，S(O)2NHR50和OS(O)2NR38R39；
其中R38和R39分别独立地选自于氢、烷基、链烯基、链炔基、芳基、 卤代烷基、烷基芳基、杂环基、芳烷基、芳基烷氧基、烷氧基、芳氧基、 环烷基、环烯基和环炔基，而且优选分别选自于氢、低级烷基、低级烷 氧基和低级卤代烷基；x和y分别独立地是0-14；而R50是氢、低级烷基、 低级烷氧基或杂芳基；
R8是CONR38R39，CN，杂芳基，烷基磺酰基，(CH2)xC(O)(CH2)yCH3， 烷基，卤素，假卤素，羟基烷基，C(O)(CH2)xS(O)2(CH2)yCH3或 C(＝N-OR38)(CH2)yCH3；
R9是H；Y1和Y2分别独立地是碳或氮；如果Y2是碳，则a是1；如果Y2是 氮，则a是0；如果Y1是碳，则b是1；而如果Y1是氮，则b是0。
在这些实施方案中，Y1和Y2优选是碳；a和b分别为1；R5、R6和R8优选 是低级烷基，更优选为Me；而R7优选是H或SO2NHR50，其中R50是杂芳 基，更优选为异恶唑基，最优选为4-氯-3-甲基-5-异恶唑基。
该实施方案的优选化合物包括N-(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)- 2-(2，4，6-三甲基苄基)苯并[b]噻吩-3-磺酰胺和N-(4-氯-3-甲 基-5-异恶唑基)-2-(3-(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基磺酰基 -2，4，6-三甲基苄基)苯并[b]噻吩-3-磺酰胺。
还令人感兴趣的是药物学上可接受的衍生物，包括磺酰胺化合物的 盐、酯、酸和碱、溶剂化物、水合物和前体药物。优选的是药物学上可 接受的盐，特别是碱金属盐，最优选是钠盐。
特别优选的衍生物是如下化合物的盐，其中W是亚烷基，更特别是 CH2。在这些衍生物中，优选的盐是钠盐。
在所有的实施方案中，优选的取代基也可参考表1来确定，该表显示 了-些示例性的化合物。优选的合物是表1中具有最高活性的那些，而优 选的取代基则是在具有最高活性(最低浓度下的活性)的化合物上的取 代基。
                          表1                      化合物   ETA活性* N-(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)-2-{[3，4-(亚甲二 氧基)-6-甲基苯基)乙酰基]-噻吩-3-磺酰胺     1.0 N-(2-乙酰基-4，6-二甲基苯基)-3-{[(3，4二甲基 -5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-2-噻吩羧酰胺     18.1 N-(2-乙酰基-4，6-二甲基苯基)-3-{[(4-氯-3-甲 基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-2-噻吩磺酰胺     38.0 N-(2-氰基-3，4，6-三甲基苯基)-3-{[(3，4-二甲 基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-2-噻吩羧酰胺     18.6 3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-N- (3，4，6-三甲基-2-丙酰基苯基)-2-噻吩羧酰胺     23.9 3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-N- [2-(1-羟基乙基)-4，6-二甲基苯基]-2-噻吩羧酰胺     26.4 3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-N- {2-[(二甲基氨基)羰基]-4，6-二甲基苯基)-2-噻吩羧 酰胺     14.4 3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-N- {2，4-二甲基-6-[(甲氧基)ethanimidoyl]苯基}-2-噻吩 羧酰胺     23.6 3-{[(3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基} -2-噻吩基)羰基]氨基}-2，4，6-三甲基苯基-N，N- 二甲基氨基磺酸酯     0.3 3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-N- {3-[(环丙基甲基)氧基]-2，4，6-三甲基苯基}-2-噻 吩羧酰胺     9.4 3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-N- (2，4，6-三甲基-5-嘧啶基)-2-噻吩羧酰胺     2.0 N-(2-乙酰基-3，4，6-三甲基苯基)-3-{[(4-氯-3 -甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-2-噻吩羧酰胺     103.8                化合物 3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-N- (2-氰基-3，4，6-三甲基苯基)-2-噻吩羧酰胺   ETA活性*     55.7 N-(2-氯-4，6-二甲基苯基)-3-{[(4-氯-3-甲基- 5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-2-噻吩羧酰胺     20.7 3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-N- (4，6-二乙酰基-3-羟基-2-丙基苯基-2-噻吩羧酰 胺     0.1 3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-N- (2，4-二甲基-6-[2-(甲基磺酰基)乙酰基]苯基}-2-噻 吩羧酰胺     13.7 3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-N- (2，4-二甲基-6-{[甲基(2，2-二甲基丙基)氨基]羰基} 苯基)-2-噻吩羧酰胺     2.7 3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基)-N- [2，4-二甲基-6-(甲基磺酰基)苯基]-2-噻吩羧酰胺     64.1 3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-N- [2，4-二甲基-6-(1，3-恶唑-2-基)苯基]-2-噻吩 羧酰胺     17.9 3-{[(4-氯-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-N-[2-(2-丙 基磺酰基)-4，6-二甲基苯基]-2-噻吩羧酰胺     -- 3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基)-N- [2，4-二甲基-6-(丙基磺酰基)苯基]-2-噻吩羧酰胺     -- 3-{[(3，4-二甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-N-(2 -乙酰基-4，5-亚甲二氧基苯基)-2-噻吩羧酰胺     0.05 3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-N- (2，4，6-三甲基苯基)-2-噻吩羧酰胺     2.4 3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-2- (2，4，6-三甲基苯基乙酰基)噻吩     6.4 3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-N- (3-甲氧基羰基-2，4，6-三甲基苯基)-2-噻吩羧酰胺     4.7 3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-N- (2-乙酰基-4，5-亚甲二氧基苯基)-2-噻吩羧酰胺     0.15 3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-N- (2-氨甲酰基-4，6-二甲基苯基)-2-噻吩羧酰胺     1.04                化合物 3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-N- (2-羧基-4，6-二甲基苯基)-2-噻吩羧酰胺    ETA活性*     0.05 3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-N- (2-乙基-4，6-二甲基苯基)-2-噻吩羧酰胺     3.8 3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-N- [2，6-二甲基-4-(1，3-恶唑-2-基)苯基]-2-噻吩 羧酰胺     1.1 *相对于N-(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)-2-{[3，4-(亚甲二氧基)-6-  甲基苯基)乙酰基]-噻吩-3-磺酰胺的ETA拮抗活性 --数据没有得到或者是在100μM以％抑制测定的
本发明的化合物与已知的内皮肽拮抗剂相比还具有更高的药代动力学 性质(见下表2)。如表2中所示，本发明的化合物与已知的内皮肽拮抗 剂相比具有更高的口服生物利用度和选择性。例如，N-(2-乙酰基-4， 6-二甲基苯基)-3-{[(3，4二甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-2- 噻吩羧酰胺的口服利用度为148.1％，而N-(4-氯-3-甲基-5-异恶 唑基)-2-{[3，4-(亚甲二氧基)-6-甲基苯基)乙酰基]-噻吩-3-磺 酰胺的口服利用度为43.6％。另外，N-(2-乙酰基-4，6-二甲基苯基) -3-{[(3，4二甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-2-噻吩羧酰胺对ETA 受体的拮抗选择性比对ETB受体的拮抗选择性高441000，而N-(4-氯- 3-甲基-5-异恶唑基)-2-{[3，4-(亚甲二氧基)-6-甲基苯基)乙酰 基]-噻吩-3-磺酰胺在相同的测试中的选择性仅为20950。
表2还提供了证实与已知的内皮肽受体拮抗剂相比本发明的化合物在 体外和体内的耐受性都提高的数据。参见实施例24。例如，N-(2-乙酰 基-4，6-二甲基苯基)-3-{[(3，4二甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰 基}-2-噻吩羧酰胺在测量对CP4502C9、2C19和3A4酶抑制作用的体外 测试中的IC50值分别为7.6、126.3和28.0，而N-(4-氯-3-甲基-5-异 恶唑基)-2-{[3，4-(亚甲二氧基)-6-甲基苯基)乙酰基]-噻吩-3- 磺酰胺在相同测试中的IC50值分别为0.03、0.2和0.09。另外，N-(2-乙 酰基-4，6-二甲基苯基)-3-{[(3，4二甲基-5-异恶唑基)氨基]磺 酰基}-2-噻吩羧酰胺在急性缺氧模型中以约1mg/kg的剂量使平均肺动 脉压(MPAP)增加被抑制了50％，而N-(4-氯-3-甲基-5-异恶唑 基)-2-{[3，4-(亚甲二氧基)-6-甲基苯基)乙酰基]-噻吩-3-磺酰 胺在相同的测试中50％抑制MPAP增加时的剂量为2.5mg/kg。在表2中还 提供了其他的数据
因此，如体内和体外测试中所表明的，与已知的内皮肽受体拮抗剂 相比，本发明的化合物具有更高的药代动力学性质和耐受性。
                                     表2     化合物 口服利用度s  选择性+   t消除     (h) N-(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)-2- {[3，4-(亚甲二氧基)-6-甲基苯基)乙酰 基]-噻吩-3-磺酰胺     43.6   20950     4.5 N-(2-乙酰基-4，6-二甲基苯基)-3- {[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺 酰基}-2-噻吩磺酰胺     25.1   442000     4.0 N-(2-m甲磺酰基乙酰基-4，6-二甲基 苯基)-3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑 基)氨基]磺酰基}-2-噻吩磺酰胺     16.7   66500     12.2 N-(2-乙酰基-4，6-二甲基苯基)-3- {[(3，4二甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰 基}-2-噻吩羧酰胺     148.1   441000     6.0 N-(2-甲磺酰基-4，6-二甲基苯基)-3 -{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基] 磺酰基}-2-噻吩磺酰胺     --   456000     1.5 N-(2-(2-恶唑基)-4，6-二甲基苯基) -3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨 基]磺酰基}-2-噻吩磺酰胺     --   119000     5.3 N-(2-氰基-3，4，6-三甲基苯基)-3 -{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基] 磺酰基}-2-噻吩磺酰胺     --   549800     5.1 N-(2-氯-4，6-二甲基苯基)-3-{[(4 -氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰 基}-2-噻吩磺酰胺     --   166000     2.6 N-(2-氰基-3，4，6-三甲基苯基)-3 -{[(3，4-二甲基-5-异恶唑基)氨基]磺 酰基}-2-噻吩磺酰胺     --   330000     5.3 s  ％ +  对于ETB的IC50/对于ETA的IC50
                                 表2(续)               化合物    CP450     2C9*    CP450    2C19*    CP450     3A4* N-(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)-2 -{[3，4-(亚甲二氧基)-6-甲基苯基) 乙酰基]-噻吩-3-磺酰胺     0.03     0.2     0.09 N-(2-乙酰基-4，6-二甲基苯基)-3 -{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨 基]磺酰基}-2-噻吩磺酰胺     1.67     48.8     3.3 N-(2-甲磺酰基乙酰基-4，6-二甲基 苯基)-3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶 唑基)氨基]磺酰基}-2-噻吩磺酰胺     5.1     50.6     4.0 N-(2-乙酰基-4，6-二甲基苯基)-3 -{[(3，4二甲基-5-异恶唑基)氨基]磺 酰基}-2-噻吩羧酰胺     7.6     126.3     28.0 N-(2-甲磺酰基-4，6-二甲基苯基) -3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基) 氨基]磺酰基}-2-噻吩磺酰胺     5.3     6.2     13.7 N-(2-(2-恶唑基)-4，6-二甲基苯基) -3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基) 氨基]磺酰基}-2-噻吩磺酰胺     --     --      -- N-(2-氰基-3，4，6-三甲基苯基)- 3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨 基]磺酰基}-2-噻吩磺酰胺     0.77     13.53     1.44 N-(2-氯-4，6-二甲基苯基)-3-{[(4 -氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰 基}-2-噻吩磺酰胺     0.56     4.60     3.86 N-(2-氰基-3，4，6-三甲基苯基)- 3-{[(3，4-二甲基-5-异恶唑基)氨基] 磺酰基}-2-噻吩磺酰胺     2.38     14.36     3.30 * IC50值(μM)。
                                      表2(续)                  化合物   Cmax(μg)   急性缺氧# N-(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)-2- {[3，4-(亚甲二氧基)-6-甲基苯基)乙酰基] -噻吩-3-磺酰胺     133.2     2.5 N-(2-乙酰基-4，6-二甲基苯基)-3-{[(4 -氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}- 2-噻吩磺酰胺     58.8     1 N-(2-甲磺酰基乙酰基-4，6-二甲基苯基) -3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基] 磺酰基}-2-噻吩磺酰胺     37.3     ＞5 N-(2-乙酰基-4，6-二甲基苯基)-3- {[(3，4二甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}- 2-噻吩羧酰胺     157.2     1 N-(2-甲磺酰基-4，6-二甲基苯基)-3- {[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰 基}-2-噻吩磺酰胺     10.3     -- N-(2-(2-恶唑基)-4，6-二甲基苯基)-3 -{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰 基}-2-噻吩磺酰胺     66     -- N-(2-氰基-3，4，6-三甲基苯基)-3-{[(4 -氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}- 2-噻吩磺酰胺     45.7     1-5 N-(2-氯-4，6-二甲基苯基)-3-{[(4-氯 -3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-2- 噻吩磺酰胺     49.5     -- N-(2-氰基-3，4，6-三甲基苯基)-3- {[(3，4-二甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基} -2-噻吩磺酰胺     85.8     1-5 #在体内模型中，对平均肺动脉压增加产生50％抑制作用时的剂量(mg/kg) B、化合物的制备
一些具有所需活性的上述及其他化合物的制备方法示于实施例中。其 中未明确其合成法的化合物可利用实施例中详述的一种或多种方法经过 常规修饰，以容易取得的试剂适当替代即可合成。
许多本文中描述的化合物是3-氨磺酰基-2-芳基氨基羰基噻吩衍 生物。通常情况下，这些化合物可通过偶联适当的3-氨磺酰基噻吩基 羧酸和经取代或未经取代的苯胺来制备。
3-氨磺酰基噻吩基羧酸可通过本领域技术人员已知的各种方法来制 备。通常情况下，大多数合成法涉及羰烷氧基噻吩基磺酰氯与氨基异恶 唑于无水吡啶或四氢呋喃(THF)及氢化钠中的缩合反应。随后水解羰 烷氧基形成所需要的酸。磺酰氯与氨基异恶唑可市售得到或根据实施例 中所述方法或采用本领域技术人员已知的其他方法合成(参见例如第 4,659,369、4,861,366和4,753,672号美国专利)。
例如，噻吩基磺酰氯可通过以下方法制备。例如与溴或N-溴代琥珀 酰亚胺反应，在2位溴化3-氨磺酰基噻吩前体。随后金属-卤与烷基 锂如正丁基锂交换，再与二氧化碳反应，由此形成所需要的酸。另外的 方法是，与例如硫酸中的三氧化硫反应，使2-噻吩基羧酸衍生物在3 位磺化。将所得的磺酸转化为磺酰氯(与五氯化磷、三氯化磷、磷酰氯、 亚硫酰氯或草酰氯反应)，然后与适当的胺反应，形成所需要的氨磺酰基 噻吩基羧酸衍生物。中间体磺酰氯也可直接通过噻吩基羧酸衍生物与氯 磺酸的反应来制备。
N-(烷基异恶唑基)磺酰胺的制备方法可由氨基异恶唑与磺酰氯于 无水吡淀中，使用或不使用催化剂4-(二甲基氨基吡啶)缩合。N-(3， 4-二甲基-5-异恶唑基)磺酰胺和N-(4，5-二甲基-3-异恶唑基) 磺酰胺则可由相应的氨基二甲基异恶唑制备，如5-氨基-3，4-二甲 基异恶唑。例如，N-(3，4-二甲基-5-异恶唑基)-2-(羧甲氧 基)噻吩-3-磺酰胺是由2-甲氧羰基噻吩-3-磺酰氯与5-氨基-3， 4-二甲基异恶唑于无水吡啶中制备。
N-(4-卤异恶唑基)磺酰胺的制备方法可由氨基-4-卤异恶唑与 磺酰氯于THE中，使用氢化钠作为碱，进行缩合。例如，N-(4-溴 -3-甲基-5-异恶唑基)噻吩-2-磺酰胺是由5-氨基-4-溴-3- 甲基异恶唑与噻吩-2-磺酰氯于THF和氢化钠中制备。
这些磺酰胺亦可由相应的磺酰氯与氨基异恶唑，于吡啶中，使用或不 使用催化剂量的4-二甲基氨基吡啶(DMAP)制备。在某些情况下， 可得到二磺酰基化合物为主要或唯一产物。该二磺酰化产物容易使用氢 氧化钠水溶液及合适共溶剂，如甲醇或四氢呋喃，通常于室温上，水解 成磺酰胺。
取代苯胺通过用例如硝酸和硫酸的混合物或者四氟硼酸硝硝化合适的 前体取代苯来合成。用例如锌粉末、催化氢化、氯化亚锡、或任何其它 本领域技术人员已知的方法还原所得的芳香硝基化合物，得到所需要的 苯胺。
噻吩基羧酸与苯胺的偶联可如下进行：将酸转化为相应的酰基咪唑(例 如与羰基二咪唑反应)或者酰基氯(例如与草酰氯或亚硫酰氯反应)，然 后与苯胺反应，形成所希望的芳氨基羰基噻吩化合物。
在此所描述的一些化合物是3-氨磺酰基-2-苄基氨基羰基噻吩衍 生物。在制备这些化合物时，上述制备方法中的苯胺可用苄胺来替换。 合适的苄胺可如下合成：相应的苄基卤与叠氮化物反应，然后通过例如 催化氢化或者用三烷基或三芳基膦处理来还原所得的苄基叠氮化物。
在此所描述的其它化合物是3-氨磺酰基-2-芳基乙酰基噻吩衍生 物。这些化合物可通过在3-氨磺酰基-2-噻吩羧酸衍生物如N-甲基 -N-甲氧基酰胺中加入合适的苄基氯化镁来形成。所述酰胺可如下制 备：使酸与羰基二咪唑反应，然后与N-甲基-N-甲氧基胺反应。
在此描述的某些化合物可用以下合成路线1中描述的方法来制备： 其中R1是卤素或者低级烷基，其中优选是氯和甲基。
对于式A的化合物，R60与CO一起形成羧酸或其衍生物。在此情况 下，R60优选为OR40，其中R40为低级烷基或者烷氧基烷基，优选甲基或 甲氧基甲基，或者与所希望的化学相一致的其他基团。
对于式C或D的化合物，R60是OR40、卤素或与所希望的化学转化相 一致的其他羧酸活化基团，其中特别优选是氯。
对于式E的化合物，Ar可以是任何芳香或者杂芳基环，其中优选是 苯和嘧啶。
适合给药人体的化合物的前体药物与其他衍生物也可依本领域技术已 知的方法设计和制备(参见例如：Nogrady(1985)医学化学，生化学探 论，纽约牛津大学出版社 (Medicinal Chemistry A Biochemical Approach， Oxford University Press，New York，第388-392页)。
本文所说明的化合物已合成，并于体外测试中试验其活性，且有些在 活体动物模型中进行。由核磁共振光谱(NMR)、质谱、红外光谱及高 效液相色谱法进行的分析显示，所合成化合物的结构与此等化合物应有 的结构一致，而且通常纯度至少约98％。本文所例举或说明的所有化合 物均具有内皮肽拮抗剂活性。 C、化合物生物活性的评估
可采用标准生理、药学及生化方法来测试化合物，以鉴定那些具有任 何内皮肽生物活性或具有干扰或抑制内皮肽之能力的化合物。具有体外 活性的化合物，如有能力结合内皮肽受体或与一种或多种内皮肽竞争结 合内皮肽受体的化合物，可用于分离内皮肽受体的方法及分辩内皮肽受 体专一性的方法中，且可为用于治疗由内皮肽所调节之病变的方法中的 候选药物。
因此，除了本发明明确说明的化合物外，其他亦为内皮肽拮抗剂或 激动剂的优选式I与II化合物可使用此类筛选法进行鉴别。 1、调整内皮肽活性的化合物的鉴别
测试化合物调整内皮肽-1之活性的能力。本领域技术人员已知有许 多分析法可评估化合物调整内皮肽活性的能力(参见，例如Ishikawa等 人的第5,114,918号美国专利；EP A10436189，BANYU PHARMA- CEUTICAL CO.，LTD.(1991年10月7日)；Borges等人(1989) Eur.J. Pharm.165：223-230；Filep等人(1991) Biochem.Biophys.Res.Commum. 177：171-176)。体外试验可由活体内试验进行校正(参见例如：Ishikawa 等人的第5,114,918号美国专利；EP A10436189，BANYU PHARMACEUTICAL CO.，LTD.(1991年10月7日))，并由此分析药物 活性。此等分析法已说明于本文实施例中，并包括从其对自已经接受遗 传工程处理而在细胞表面上表达ETA或ETB受体的细胞株中分离的膜上 的ETA及ETB受体进行竞争结合的能力。
有潜力的拮抗剂的性质可采用特定组织，如鼠门静脉及主动脉、鼠子 宫、气管及输精管，分析其随活体内抑制内皮肽所诱发之活性的能力的 变化(参见例如：R.Borges，H.Von Grafenstein，及D.E.Knight，“内皮 肽的组织选择性”(Tissue selectivity of endothelin)， Eur.J.Pharmacol. 165：223-230(1989))。采用高血压鼠、ddy小白鼠或其他认可的动物 模型，测试其于活体内作为内皮肽拮抗剂的能力(参见Kaltenbronn等人， (1990) J.Mde.Chem.33：838-845，亦参见Ishikawa等人的第5,114, 918号美国专利；及EP A10436189，BANYU PHARMACEUTICAL CO.， LTD.(1991年10月7日)；亦参见Bolger等人(1983) J.Pharmacol.Exp. Ther.225：291-309)。采用此类动物试验的结果可评估药物有效性并测 定药物有效剂量。有潜力的激动剂亦可使用本领域人员已知的体外及活 体内分析法评估。
内皮肽活性可由试验化合物刺激分离之鼠胸主动脉收缩的能力来鉴定 (Borges等人(1989)，“内皮肽的组织选择性”(Tissue selectivity of endothelin)， Eur.J.Pharmacol.165：223-230。进行分析时，除掉内皮， 切成环节，于组织浴中放在张力下，于试验化合物的存在下以内皮肽处 理。记录内皮肽所诱发的张力变化。产生剂量反应曲线，提供试验化合 物的相对抑制效力的资料。其他组织，包括心脏、骨骼肌、肾、子宫、 气管和输精管，均可用来评估特定试验化合物对组织收缩的效果。
内皮肽同功型专一性拮抗剂可由试验化合物干扰内皮肽与表达不同内 皮肽-受体亚型的组织或细胞的结合，或干扰内皮肽或内皮肽同功型的 生物效果的能力来鉴定(Takayanagi等人(1991) Reg.Pep.32：23-37； Panek等人(1992) Biochem.Biophys.Res.Commun.183：556-571)。例 如，ETB受体表达在血管内皮细胞中，可能调节前列环素及衍生自内皮 肽的松弛因子的释放(De Nucci等人(1988) Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85：9797)。ETA受体则未见于经培养的、表达ETB受体的内皮细胞中。
分析化合物的结合或抑制内皮肽与ETB受体的结合时，是通过测定 对内皮肽-1所调节的前列环素释放的抑制作用来进行的，亦即测定由 经培养的牛主动脉内皮细胞中释放出的主要稳定代谢物，6-酮基PGF1α (见例如：Filep等人(1991) Biochem.And Biophys Res.Commun.177： 171-176)。因此，评估化合物对不同内皮肽受体的相对亲和力时，可采 用与受体亚型相异的组织来测定抑制性剂量-反应曲线。
采用此等分析法时，可分析化合物对ETA受体及ETB受体的相对亲 和力。选出具有所需性质，如对内皮肽-1结合作用的专一抑制性的化 合物。经选出具有所需活性的化合物可用于治疗，并采用上述可评估其 活体内有效性的分析法测试此种用途(参见例如第5,248,807号美国专 利；第5,240,910号美国专利；第5,198,548号美国专利；第5,187,195号 美国专利；第5,082,838号美国专利；第5,230,999号美国专利；已公开 的第2,067,888和2071193号加拿大专利申请；已公开的第2,259,450号 英国申请；已公开的国际PCT申请WO 93/08799；Benigi等人(1993) Kidney Internatioal 44：440-444；以及Nirei等人(1993) Life Sciences 52：1869-1874)。具有体外活性并与体内有效性相关的化合物即可调配 成合适的药物组合物，并用为治疗剂。
该等化合物亦可用于鉴定及分离内皮肽专一性受体，而且有助于设计 更强效的内皮肽拮抗剂或激动剂或者对特定内皮肽受体更专一性的化合 物。 2、内皮肽受体的分离
本文提供一种鉴定内皮肽受体的方法。在操作本方法时，将一种或多 种化合物连接在载体上，并用于受体的亲和性纯化法。选择具有特定专 一性的化合物时，可鉴定出不同ET受体的亚型。
一种或多种化合物可连接至适当树脂，如Affi-凝胶，其是依本领域 技术人员已知的连接内皮肽与此等树脂的方法进行共价连接或其他方式 连接(参见Schvartz等人(1990) Endocrinology 126：3218-3222)。连 接的化合物则可为那些对ETA或ETB受体或其他受体亚型呈专一性的化 合物。
树脂已先以通常在生理pH(7至8)下的合适缓冲剂平衡。取含有来 自特定组织的已溶解受体的组合物与化合物待连接的树脂混合，并选择 性洗脱受体。测试受体结合内皮肽同功肽或类似物的情形或利用其他鉴 定蛋白质及鉴别特性的方法来鉴定受体。受体、树脂的制备及洗脱法可 通过修改本领域技术人员已知的标准程序来进行(参见例如：Schvartz 等人(1990) Endocrinology 126：3218-3222)。
本文根据受体与任何本化合物的差示性亲和力提供分辩受体类型的其 他方法。本文所说明用于测定特定化合物对内皮肽受体的亲和力的任何 分析法可用于根据受体对本文所提供特定化合物的亲和力来分辩受体亚 型。具体而言，测定未知受体对本文所提供已知其对一种受体的亲和力 高于另一种受体的化合物的结合亲和性时，即可鉴定其为ETA或ETB受 体。此等优先性相互作用适用于测定可采用本文所述制得的化合物治疗 的特定疾病。例如，对ETA受体亲和性高和对ETB受体亲和力低或无的 化合物可作为高血压剂的候选药物；而优先与ETB受体相互作用的化合 物则适用于为抗气喘剂的候选药物。 D、组合物的调配与给药
本发明还提供磺酰胺的制剂。所述制剂是用于给药本文所述磺酰胺 化合物之药物学上可接受的衍生物、特别是其盐的组合物。由于与中性 形式相比，盐、特别是钠盐的稳定性高，所以特别适合于口服或非经胃 肠道给药。此等组合物包括溶液、混悬液、片剂、溶散片、丸剂、胶囊、 粉末、缓释制剂或任何其它合适剂型。该组合物优选为丸剂或片剂。制 造片剂、胶囊剂以及其它此等制剂的方法对于本领域技术人员是已知的 (参见例如：Ansel，H.C(1985)Introduction to Pharma-ceutical Dosage Forms，第4版，第126-163页)。
在所述制剂中，有效浓度的一种或多种药物学上可接受的衍生物与合 适的药物载体或载剂混合。优选的是，在配制之前，磺酰胺化合物如上 所述衍生为相应的盐，优选为钠盐。制剂中化合物盐的浓度应使得在给 药时释放的量可有效改善内皮肽所调节之疾病的症状。通常情况下，将 组合物配制成单剂量给药的形式。在配制组合物时，将化合物溶解、悬 浮、分散在所选载体中或与所述载体混合，该化合物的重量份应使其浓 度足以缓解或改善所治疗的病症。适合于给药本发明化合物的药物载体 或载剂包括任何本领域技术人员已知的适用于具体给药形式的载体。另 外，本发明化合物可单独作为药物活性成分配制在组合物中，或者与其 它活性成分混合。脂质体悬浮体，包括组织靶向的脂质体，也适于作为 药物学上可接受的载体。它们可根据本领域技术人员已知的方法来制备。 例如，脂质体剂可如第4,522,811号美国专利来制备。
盐、优选为钠盐形式的活性化合物在药物学上可接受的载体中的量应 足以对所治疗的病人产生有用的治疗作用，但没有副反应。治疗有效浓 度可通过在体外和体内系统中测试化合物来经验性地确定(参见例如： Ishikawa等人的第5,114,918号美国专利；EP A1 0436189，Banyu Pharmaceutical Co.，Ltd.(1991年10月7日)；Borges等人(1989) Eur.J. Pharm.165：223-230；Filep等人(1991) Biochem.Biophys.Res.Commun. 177：171-176)，然后由此外推得到用于人的剂量。
药物组合物中活性化合物钠盐的浓度取决于该活性化合物的吸收、失 活和排泄速率、该化合物的物化特性、给药方案、给药量以及本领域技 术人员已知的其它因素。例如，所给药的量应足以治疗高血压的症状。 希望治疗内皮肽所调节之病变的有效量高于给药治疗细菌感染的磺酰胺 化合物的量。
通常情况下，治疗有效剂量应产生约0.1ng/ml至约50-100μg/ml的 活性成分血清浓度。药物组合物通常提供约0.001-2000mg化合物/kg 体重/天的剂量。所制备的药物单元剂量剂型可提供约1-1000mg、优选 约10-500mg基本活性组分或基本组分的组合/单元剂量剂型。
活性组分可一次性地给药，或者以一定的时间间隔分成多个小剂量给 药。应理解的是，精确的治疗剂量和持续时间随待治疗的疾病而变化， 并可使用已知的测试方案或从体内或体外测试数据外推来经验性地确 定。应注意的是，浓度和剂量值还可根据待缓解之病症的严重程度来变 化。进一步应理解的是，对于任何特别的病人，具体的给药方案应根据 个体所需以及给药人或监视给药组合物之人的专业判断随时间来调节， 而且上述浓度范围仅为示例性的，并不用来限制本发明组合物的范围或 实际使用。
优选的药物学上可接受的衍生物包括酸、盐、酯、水合物、溶剂化物 和前体药物形式。所选的衍生物应比相应的中性化合物更稳定。更优选 的盐包括碱金属盐，特别是钠盐，例如但不限于磷酸氢钠和钠盐，最优 选为钠盐。
因此，有效浓度或量的一种或多种本发明之化合物或其药物学上可接 受的衍生物与适于全身、定点或局部给药的药物载体相混合，由此形成 药物组合物。组合物中包括的化合物量应有效缓解或治疗所欲治疗之由 内皮肽调节的疾病。组合物中活性化合物的浓度取决于该活性化合物的 吸收、失活、排泄速率、给药方案、给药量、具体的制剂以及本领域技 术人员已知的其它因素。
本发明组合物可根据所治疗的疾病通过合适的途径给药，这包括口 服、非经胃肠道、直肠、定点和局部给药。例如，在治疗眼科疾病如青 光眼时，可制成眼内和玻璃体内注射给药的剂型。在口服给药时，优选 胶囊和片剂。在非经胃肠道给药时，优选如上所述的经复原的冻干粉末。 化合物可以是液体、半液体或固体剂型，并以适合于各给药途径的方式 来配制。优选的给药方式包括非经胃肠道和口服给药。
用于非经胃肠道、经皮内、皮下或局部给药的溶液或混悬液可包括以 下任何物质：无菌稀释剂，如注射用水、盐水溶液、混合油、聚乙二醇、 甘油、丙二醇或其它合成溶剂；抗菌剂，如苄醇和对羟基苯甲酸甲酯； 抗氧剂，如抗坏血酸和亚硫酸氢钠；螯合剂，如乙二胺四乙酸(EDTA)； 缓冲剂，如乙酸盐、柠檬酸盐和磷酸盐；以及用于调节离子强度的试剂， 如氯化钠或葡萄糖。非经胃肠道给药的制剂可封闭在由玻璃、塑料或其 它合适材料制成的安瓿、一次性注射器或者单或多剂量管形瓶中。
当化合物的溶解度不足时，可采用增溶化合物的方法。此等方法是本 领域技术人员已知的，且包括但不限于：使用共溶剂，如二甲基亚砜 (DMSO)，使用表面活性剂，如tween，或溶于碳酸氢纳水溶液中。化 合物的衍生物，如化合物的盐类或化合物的前体药物，亦可用于调配有 效的药物组合物。
当混合或添加磺酰胺化合物的钠盐时，所形成的混合物可为溶液、悬 浮液、乳液，等等。所形成的混合物的形式依许多因素而定，包括：计 划的给药模式以及化合物在特定载体或载剂中的浓解度。有效浓度足以 改善待治疗疾病、病变或病症的症状，且可由实验决定。
用于给药于人和动物的制剂可为单元剂量剂型，例如片剂、胶囊剂、 丸剂、粉末剂、颗粒剂、无菌注射溶液剂或混悬剂、以及口服溶液或混 悬剂、油-水乳剂，它们都包含合适量的化合物、特别是其药物学上可 接受的盐、优选为钠盐。药物学上治疗活性的化合物及其衍生物通常配 制成单元剂量剂型或多份剂量剂型并给药。在此所述的单元剂量剂型是 指本领域技术人员已知的适用于人和动物患者并单独包装的物理上独立 的单元。各单元剂量包括预定量的治疗活性化合物以及所需要的药物载 体、载剂或稀释剂，所述活性化合物的量足以产生所希望的治疗效果。 单元剂量剂型的例子包括安瓿和注射器、单独包装的片剂或胶囊。单元 剂量剂型可以其一部分或多份给药。多份剂量剂型是指包装在单个容器 中的多个相同单元剂量剂型，并以独立的单元剂量剂型给药。多份剂量 剂型包括管形瓶、片剂瓶或胶囊或品脱或加仑瓶。因此，多份剂量剂型 是没有单独包装的多个单元剂量。
本发明的组合物可包括活性成分：稀释剂，如乳糖、蔗糖、磷酸氢二 钙、或羧甲基纤维素；润滑剂，如硬脂酸镁、硬脂酸钙和滑石；以及粘 合剂，如淀粉、天然胶如金合欢胶、葡萄糖、糖蜜、聚乙烯吡咯烷酮、 纤维素和其衍生物、povidone、crospovidone、以及本领域技术人员已知 的其它粘合剂。可以液体给药的药物组合物可例如通过以下方法来制备： 在载体中溶解、分散或混合如上所述的活性化合物以及任选的药物辅剂， 所述载体例如是水、盐水、葡萄糖水溶液、甘油、乙二醇、乙醇等，由 此形成溶液或混悬液。如果需要，待给药的药物组合物还可包括少量的 非毒性辅助物质，如湿润剂、乳化剂、或增溶剂、pH缓冲剂等，如乙酸 盐、柠檬酸钠、环糊精衍生物、山梨糖醇酐单月桂酸酯、三乙醇胺乙酸 钠、油酸三乙醇胺、以及其它此等试剂。制备此等剂型的实际方法对于 本领域技术人员是已知的或者是显而易见的；例如，参见Remington′s Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Company，Easton，Pa.，第15版， 1975。待给药的组合物或制剂在任何时候都包含一定量的活性化合物， 该量应足以缓解所治疗患者的症状。
可制备包含0.005％-100％活性成分、其余为非毒性载体的剂型或组 合物。对于口服给药，混入任何常规使用的赋形剂，如药物级的甘露糖、 乳糖、淀粉、硬脂酸镁、滑石、纤维素衍生物、交联羧甲基纤维素钠、 葡萄糖、蔗糖、碳酸镁或糖精钠，由此形成药物学上可接受的非毒性组 合物。此等组合物包括溶液剂、混悬剂、片剂、胶囊剂、粉末剂和缓释 制剂，例如但不限于植入剂和微胶囊化的给药系统、以及可生物降解且 生物相适的聚合物，如胶原、乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、聚原 酸酯、聚乳酸等。制备这些制剂的方法对于本领域技术人员是已知的。 本发明的组合物可包含0.001-100％活性成分，优选0.1-85％，通常为 75-95％。
活性化合物的盐、优选钠盐可与载体混合，该载体保护化合物避免快 速从体内消除，例如定时释放制剂或包衣。
所述制剂可包含其它活性化合物，以得到所希望的性能组合。本发明 之式I化合物或其药物学上可接受的盐和衍生物可有利地与其它本领域 已知用于治疗一种或多种上述疾病或病症的药剂共同给药用于治疗或预 防目的，例如β-肾上腺能阻断剂(例如阿替洛尔)、钙通道阻断剂(如 硝苯地平)、血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂(如赖诺普利)、利尿剂 (如呋塞米或氢氯噻嗪)、内皮肽转化酶(ECE)抑制剂(例如 phosphoramidon)、中性肽链内切酶(NEP)抑制剂、HMGCoA还原酶抑 制剂、氧化氮供体、抗氧剂、血管舒张药、多巴胺激动剂、神经保护剂、 甾体、β-激动剂、抗凝血剂、或血栓溶解剂。应理解的是，此等组合 治疗构成了本发明组合物及治疗方法的另一个方面。 1、口服给药制剂
口服给药剂型可为固体、凝胶或液体制剂。固体剂型有片剂、胶囊 剂、颗粒剂、块状粉末剂。口服片剂的类型包括压缩的口嚼锭剂和片剂， 它们可为肠衣、糖衣或薄膜包衣的。胶囊可为硬或软明胶胶囊，而颗粒 和粉末剂可与本领域技术人员已知的其它成分一起组合以非泡腾或泡腾 剂型提供。
在某些实施方案中，制剂为固体剂型，优选为胶囊剂或片剂。片剂、 丸剂、胶囊剂、含片等可包含以下任何成分或者性质类似的化合物：粘 合剂、稀释剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、甜味剂、和调味剂。
粘合剂的例子包括微晶纤维素、黄蓍胶、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、 明胶溶液、蔗糖和淀粉糊。润滑剂包括滑石、淀粉、硬脂酸镁或硬脂酸 钙、石松子和硬脂酸。稀释剂包括乳糖、蔗糖、淀粉、高岭土、盐、甘 露糖和磷酸二钙。助流剂包括但不限于胶体二氧化硅。崩解剂包括交联 羧甲基纤维素钠、淀粉羟乙酸钠、藻酸、玉米淀粉、马铃薯淀粉、膨润 土、甲基纤维素、琼脂和羧甲基纤维素。着色剂包括任何经批准的水溶 性FD和C染料、它们的混合物；以及悬浮于水合矾土中的非水溶性FD 和C染料。甜味剂包括蔗糖、乳糖、甘露糖和人造甜味剂，如甜精钠和 糖精；以及任何喷雾干燥的芳味剂。调味剂包括从植物如果实中提取的 天然调味剂以及可产生令人愉快之感觉的化合物的合成混合物，例如但 不限于洋薄荷和水杨酸甲酯。湿润剂包括丙二醇单硬脂酸酯、脱水山梨 糖醇单油酸酯、二乙二醇单月桂酸酯和聚氧乙烯月桂基醚。催吐包衣包 括脂肪酸、脂肪、蜡、虫胶、氨基虫胶和乙酸邻苯二甲酸纤维素。薄膜 包衣包括羟乙基纤维素、羧甲基纤维素钠、聚乙二醇4000和乙酸邻苯二 甲酸纤维素。
如果需要口服给药，化合物的盐可配制在组合物中，以防止胃液的 酸性环境。例如，组合物可配制在肠溶包衣中，该包衣能够保持其在胃 中的完整性，并在肠中释放活性化合物。组合物还可配制成与抗酸剂或 其它类似成分组合。 
如果单元剂量剂型是胶囊，除以上类型的物质外，其还可包含液体 载体如脂肪油。另外，单元剂量剂型可包括各种改善该单元剂量剂型之 物理形状的物质，例如糖衣和其它肠溶剂。化合物还可以作为甘香酒剂、 混悬剂、糖浆剂、糯米纸囊剂、喷洒剂(sprinkle)、口香糖剂等中的成 分来给药。除活性化合物外，糖浆剂还可包含作为甜味剂的蔗糖以及某 些防腐剂、染料、着色剂和调味剂。
活性物质也可与其它不损坏所希望之作用的活性物质相混合，或者 与增强所希望之作用的物质如抗酸剂、H2阻断剂和利尿剂混合。例如， 如果本发明化合物用于治疗哮喘或高血压，其可分别与其它支气管舒张 剂和抗高血压药物一起使用。活性成分是本文中所述的化合物或其盐。 也可包括更高浓度的活性成分，最多至约98重量％。
片剂中包括的药物学上可接受的载体是粘合剂、润滑剂、稀释剂、 崩解剂、着色剂、调味剂和甜味剂。由于其肠衣，肠衣片可对抗胃酸的 作用，并在中性或碱性的肠道中溶解或崩解。糖衣片为压制片剂，其中 有不同层的药物学上可接受的物质。薄膜包衣片是用聚合物或其它合适 包衣来包衣的压制片剂。多次压制片剂是使用上述药物学上可接受的物 质通过一次以上压制循环而制成的压制片剂。着色剂也可用于上述剂型 中。调味剂和甜味剂用于压制片剂、糖衣片剂、多次压制片剂和口嚼片 剂中。调味剂和甜味剂特别用于口嚼片剂和锭剂中。
液体口服剂型包括水溶液、乳剂、混悬剂、由非泡腾颗粒复原形成 的溶液和/或混悬剂、以及由泡腾颗粒复原形成的泡腾制剂。水溶液例如 包括甘香酒剂和糖浆剂。乳剂可为水包油或者油包水型的。
甘香酒剂为澄清的、甜的水醇制剂。甘香酒剂中所用的药物学上可 接受的载体包括溶剂。糖浆剂为浓的糖水溶液，例如蔗糖，并可包含防 腐剂。乳剂为两个相的系统，其中一种液体以小球状分散在另一种液体 中。乳剂中所用的药物学上可接受的载体是非含水的液体、乳化剂和防 腐剂。混悬剂使用药物学上可技术的悬浮剂和防腐剂。待复原成液体口 服剂型之非泡腾颗粒中所用的药物学上可接受的载体包括稀释剂、甜味 剂和湿润剂。待复原成液体口服剂型之泡腾颗粒中所用的药物学上可接 受的载体包括有机添加剂和二氧化碳源。在以上所有剂型中都使用着色 剂和调味剂。
溶剂包括甘油、山梨醇、乙醇和糖浆。防腐剂的例子包括甘油、尼 泊金甲酯和尼泊金丙酯、苯甲酸类添加剂、苯甲酸钠和醇。乳剂中所用 的非含水的液体包括矿物油和棉籽油。乳化剂的例子包括明胶、金合欢 胶、黄蓍胶、膨润土、以及表面活性剂，如聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸 酯。悬浮剂包括羧甲基纤维素钠、果胶、黄蓍胶、V字胶和金合欢胶。 稀释剂包括乳糖和蔗糖。甜味剂包括蔗糖、糖浆、甘油和人造甜味剂， 如甜精钠和糖精。湿润剂包括丙二醇单硬脂酸酯、脱水山梨醇单油酸酯、 二乙二醇单月桂酸酯和聚氧乙烯月桂基醚。有机添加剂包括柠檬酸和酒 石酸。二氧化碳源包括碳酸氢钠和碳酸钠。着色剂包括任何经批准的水 溶性FD和C染料、以及它们的混合物。调味剂包括从植物如果实中提 取的天然调味剂、以及可产生令人愉快之感觉的化合物的合成混合物。
对于固体剂型，在例如碳酸丙烯酯、植物油或甘油三酯中的溶液和 悬浮液优选包胶在明胶胶囊中。此等溶液、其制备方法和包胶方法见第 4,328,245、4,409,239和4,410,545号美国专利。对于液体剂型，例如在 聚乙二醇中的溶液，可用足够量的药物学上可接受的液体载体如水来稀 释，以容易计量给药。
另外，液体或半固体口服制剂通过以下方法来制备：将活性化合物 或盐溶解或分散在植物油、多元醇、甘油三酯、丙二醇酯(例如碳酸丙 烯酯)以及其它此等载体中，然后将这些溶液包胶在硬或软明胶胶囊壳 中。其它有用的制剂包括第Re 28,819和4,358,603号美国专利中所述的。
在一个实施方案中，制剂为固体剂型，优选为胶囊或片剂。在优选 实施方案中，制剂为固体剂型，优选为胶囊或片剂，其包含10-100重 量％、优选50-95重量％、更优选75-85重量％、最优选80-85重量 ％的一种或多种磺酰胺或磺酰胺盐，优选为式I之一种或多种磺酰胺化 合物的磷酸氢钠盐或钠盐，更优选为钠盐；约0-25％、优选8-15％的 稀释剂或粘合剂，例如乳糖或微晶纤维素；约0-10％、优选0-7％的 崩解剂，例如经改性的淀粉或纤维素聚合物，特别是交联羧甲基纤维素 钠，如交联羧甲基纤维素钠(交联羧甲基纤维素钠NF可从FMC Croporation，Philadelphia，PA以AC-DI-SOL商品名购得)或淀粉羟乙 酸钠；以及0-2％的润滑剂，例如硬脂酸镁、滑石和硬脂酸钙。崩解剂， 例如交联羧甲基纤维素钠或淀粉羟乙酸钠，可使纤维素基质快速崩解， 在包衣聚合物溶解后立即释放活性物质。在所有实施方案中，活性成分 和辅助成分的精确量可经验性地测定，并随给药途径和所治疗之疾病变 化。
在示例性实施方案中，制剂为胶囊，其包含约50-100％、优选70 -90％、更优选80-90％、最优选83％的一种或多种式I之磺酰胺化合 物的一种或多种钠盐；约0-15％、优选11％的稀释剂或粘合剂，例如 乳糖或微晶纤维素；约0-10％、优选5％的崩解剂，例如交联羧甲基纤 维素钠或淀粉羟乙酸钠；以及约0-5、优选约1％的润滑剂，例如硬脂 酸镁。以片剂给药的固体剂型也在此范围之内。
在示例性的优选实施方案中，制剂为胶囊剂，其包含83％的一种或 多种磺酰胺化合物的一种或多种钠盐；11％微晶纤维素；5％崩解剂，例 如交联羧甲基纤维素钠或淀粉羟乙酸钠；以及1％硬脂酸镁。
上述实施方案也可配制成片剂，并任选地进行包衣。片剂包含上述 组成。
在所有实施方案中，片剂和胶囊剂可如本领域技术人员已知地进行 包衣，以改进或维持活性组分的溶解。例如，片剂可用常规的肠溶包衣 如水杨酸苯酯、蜡和乙酸邻苯二甲酸纤维素来包衣。 2、注射剂、溶液剂和乳剂
非胃肠道给药，通常包括注射、皮下、肌肉内或静脉内给药，也在 本发明的范围内。注射剂可制成常规形式，如液体溶液或混悬剂，注射 前适合于在液体中形成溶液或混悬剂的固体剂型，或者乳剂。合适的赋 形剂是例如水、盐水、葡萄糖、甘油或乙醇。另外，如果需要，所给药 的药物组合物还可包括少量的非毒性辅助物质，例如湿润剂或乳化剂、pH 缓冲剂、稳定剂、增溶剂、以及其它此等试剂，如乙酸钠、脱水山梨醇 单月桂酸酯、油酸三乙醇胺和环糊精。本发明还包括植入缓释或持续释 放系统，以维持恒定的剂量水平(例如参见第3,710,795号美国专利)。 包含在此等非胃肠道给药之组合物中的活性化合物的百分比绝大程度上 取决于其具体的性质、以及化合物的活性和患者的需要。
非胃肠道给药制剂包括静脉、皮下和肌肉内给药。非胃肠道给药的 制剂包括用于注射的无菌溶液，在使用前待与溶剂混合的无菌可溶性干 物质，如冻干粉末，其包括皮下片剂，用于注射的无菌混悬剂，在使用 前待与载体混合的无菌干燥非可溶性物质和无菌乳剂。溶液剂可为含水 的或者是不含水的。
如果静脉给药，合适的载体包括生理盐水或磷酸盐缓冲盐水(PBS)、 以及包含增粘或增溶之试剂的溶液，上述试剂例如是葡萄糖、聚乙二醇 和聚丙二醇以及它们的混合物。
非胃肠道给药之制剂中所用的药物学上可接受的载体包括含水载 体、非含水载体、抗菌剂、等渗剂、缓冲剂、抗氧剂、局部麻醉剂、悬 浮和分散剂、乳化剂、螯合剂、以及其它药物学上可接受的物质。
含水载体的例子包括氯化钠注射液、Ringers注射液、等渗葡萄糖注 射液、无菌水注射液、葡萄糖和乳酸Ringers注射液。非含水的非胃肠 道给药载体包括植物来源的固定油、棉籽油、玉米油、芝麻油和花生油。 必须在包装于多份剂量容器中的非胃肠道给药制剂中加入抑菌或抑真菌 浓度的抗菌剂，所述抗菌剂包括苯酚或甲酚、汞制剂、苄醇、氯丁醇、 对羟基苯甲酸甲酯和丙酯、乙基汞硫代水杨酸钠、苄扎氯铵和苄索氯铵。 等渗剂包括氯化钠和葡萄糖。缓冲剂包括磷酸盐和柠檬酸盐。抗氧剂包 括硫酸氢钠。局部麻醉剂包括盐酸普鲁卡因。悬浮和分散剂包括羧甲基 纤维素钠、羟丙基甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮。乳化剂包括Polysorbate 80(Tween 80)。金属离子螯合剂包括EDTA。药物载体还包括乙醇、聚 乙二醇和丙二醇用于可与水混溶的载剂，以及氢氧化钠、盐酸、柠檬酸 或乳酸用于pH调节。
药物活性化合物的浓度可进行调节，以使注射剂可提供有效量的化 合物，产生所希望的药物效果。如本领域技术人员已知的，精确的剂量 取决于患者或动物的年龄、体重和病况。
单元剂量的非胃肠道给药制剂可包装在安瓿、管形瓶或带针头的注 射器中。如本领域技术人员已知的，所有用于非胃肠道给药的制剂必须 是无菌的。
例如，静脉或动脉内输注包含活性化合物的无菌水溶液是一种有效 的给药方式。其它实施方案是无菌水或油溶液或悬浮液，其中包括产生 希望之药物效果所必须的活性注射物质。
注射剂用于定点或全身给药。通常情况下，配入治疗有效剂量，其 包含至少约0.1％w/w-90％w/w或更多、优选超过1％w/w的活性化合 物。活性成分可一次性给药，也可分成多个小剂量以一定间隔给药。应 理解的是，治疗的精确剂量和时间随治疗组织而变化，并可使用已知的 测试方案或者通过从体内或体外测试数据外推来经验性地确定。还应注 意的是，浓度和剂量值也可随治疗个体的年龄而变化。进一步应理解的 是，对于任何患者，具体的给药方案应根据个体需要以及给药人或监视 给药制剂的人的专业判断而随时间来调整，而且在此所述浓度仅是示例 性的，并不是用于限制本发明组合物的范围或实际操作。
化合物可悬浮成微粒化或其它合适的形式，或者进行衍生化以形成 更稳定的活性产物或产生前体药物。所得混合物的形式取决于许多因素， 包括给药方式以及化合物在所选载体或载剂中的溶解度。有效浓度应足 以缓解病症之症状，并可经验性地确定。
在许多情况下，与中性化合物相比，钠盐的溶液，包括钠盐和磷酸 氢钠具有。在含水媒质中，与中性化合物相比，这些盐还具有更高的溶 解度。在某些含水制剂中发现，钠盐与磷酸氢钠盐一样稳定。 3、冻干粉末
特别令人感兴趣的是冻干粉末，该粉末可复原以溶液、乳剂或其它 混合物给药。它们还可复原并配制成固体或凝胶制剂。
在具体实施方案中，提供了相对于中性磺酰胺制剂具有更高稳定性的 磺酰胺化合物盐、磷酸氢钠或钠盐、特别是钠盐的制剂。具体而言，提 供了作为无菌冻干粉末的磺酰胺钠盐的制剂。发现这些粉末相对于中性 磺酰胺制剂具有更高的稳定性。
无菌冻干粉末是如下制备的：将钠盐溶解在包含葡萄糖或其他合适赋 形剂的磷酸钠缓冲溶液中，无菌过滤该溶液，然后在本领域技术人员已 知的标准条件下冻干，产生所希望的制剂。简而言之，冻干粉末是如下 制备的：将右旋糖、山梨醇、果糖、玉米糖浆、木糖醇、甘油、葡萄糖、 蔗糖或其他合适的试剂溶解在合适缓冲液中，上述物质的量约为1-20 ％，优选约为5-15％，所述缓冲液为例如柠檬酸盐、磷酸钠或钾或者 本领域技术人员已知的其他缓冲液，该缓冲液通常约为中性pH值。然 后在优选在高于室温、更优选在约30-35℃下将所选的磺酰胺盐、优选 钠盐加入至上述混合物中(约1g盐/10-100g缓冲液，通常为约1g/30 g)，并搅拌直至溶解。添加更多的缓冲液，由此稀释所得的混合物(使 所得盐的浓度下降约10-50％，通常约为15-25％)。所得混合物无菌 过滤，或者无菌处理以除去颗粒，并确保无菌，然后等分放入管形瓶中 冻干。每个管形瓶包含单个剂量(100-500mg，优选250mg)或者多 份剂量的磺酰胺。冻干粉末可储存在适当的条件下，如约4℃-室温。 示例性步骤的细节见实施例。
该冻干粉末用注射水复原则可提供用于非胃肠道给药磺酰胺钠盐的制 剂。对于复原，每ml无菌水或其他合适载体中加入约1-50mg、优选5 -35mg、更优选约9-30mg。精确的量取决于所治疗的病症和所选的 化合物。此量可经验性地确定。
在一个实施方案中，制剂包含冻干固体，其包含一种或多种式I之磺 酰胺化合物的一种或多种盐，优选磷酸氢钠或钠盐，更优选钠盐，其还 包含一种或多种以下物质：
缓冲剂，如磷酸钠或钾、柠檬酸盐；
增溶剂，如LABRASOL、DMSO、二(三甲基甲硅烷基)乙酰胺、 乙醇、丙二醇(PG)、或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)；以及
糖，如山梨醇或葡萄糖。
在更优选的实施方案中，制剂包含一种或多种式I之磺酰胺化合物的 一种或多种盐，优选磷酸氢钠或钠盐，更优选钠盐；缓冲剂，如磷酸钠 或钾、或柠檬酸盐；以及糖，如山梨醇或葡萄糖。
在最优选的实施方案中，制剂包含一种或多种式I之磺酰胺化合物的 一种或多种钠盐；磷酸钠缓冲剂；和葡萄糖。 4、局部给药
局部给药可如以上定点和全身给药来制备。所得混合物可为溶液、混 悬液、乳液等，并可配制成乳膏剂、凝胶剂、软膏剂、乳胶、溶液剂、 甘香酒剂、洗液剂、混悬剂、酊剂、糊剂、泡沫剂、气雾剂、灌注剂、 喷雾剂、栓剂、绷带、药贴或者任何适合于局部给药的其他剂型。
本发明化合物的钠盐及其他衍生物可成型为局部给药的气雾剂，如吸 入剂(参见例如：第4,044,126、4,414,209和4,364,923号美国专利，它 们描述了用于给药治疗炎性疾病、特别是哮喘之甾体药物的气雾剂)。这 些向呼吸道给药的制剂可为用于喷雾器的气雾剂或溶液，或者为用于吸 入的微细粉末，活性物质可单独使用或者与惰性载体如乳糖组合使用。 在此情况下，制剂中颗粒的粒径小于50微米，优选小于10微米。
化合物的钠盐可配制成用于定点或局部给药，例如局部用于皮肤和粘 膜，如眼中，为凝胶剂、乳膏剂和洗液剂，并可用于眼或者脑池内或脊 柱内。局部给药还包括透皮给药，以及向眼或粘膜给药，或用于吸入治 疗。也可鼻腔给药单独的活性化合物溶液或者与其他药物学上可接受的 赋形剂组合给药。
这些溶液、特别是那些用于眼科的溶液，可用适当的盐配制成0.01- 10％的等渗溶液，pH值约为5-7。 5、制成品
最后，本化合物的衍生物，特别是盐、酸、酯和前体药物，优选钠 盐，可包装成制成品，其中含包装材料，含在包装材料中的本文所提供 可有效拮抗内皮肽效果、改善内皮肽所调节的病变的症状、或抑制内皮 肽与ET受体结合、IC50低于10μM的化合物的盐、酸、酯和前体药物、 优选钠盐，以及说明该化合物或其盐可用于拮抗内皮肽效果、治疗内皮 肽所调节的病变或抑制内皮肽与ET受体结合的标签。 6、用于其他给药途径的制剂
根据所治疗的病症，其他给药途径，如局部给药、透皮药贴、直肠给 药，也在本发明范围之内。
例如，直肠给药的药物剂型是具有全身作用的直肠栓剂、胶囊和片剂。 在此所用的直肠栓剂是指插入在直肠中的固体物体，该物体可在体温下 熔化或软化，释放一种或多种药理或治疗活性成分。直肠栓剂中所用的 药物学上可接受的物质是基质或载体以及提高熔点的试剂。基质的例子 包括可可脂(可可油)、甘油-明胶、碳酯聚乙二醇、(聚氧乙二醇)以 及甘油的单、二和三脂肪酸酯的混合物。提高栓剂熔点的栓剂包括鲸蜡 和蜂蜡。直肠栓剂可通过压缩或模塑法制备。直肠栓剂的通常重量为约 2-3g。
直肠给药的片剂和胶囊可使用与口服给药之制剂相同的药物学上可接 受的物质和方法来制造。
下列实施例仅说明本发明，并未限制本发明的范围。
                        实施例1 N-(2-乙酰基-4，6-二甲基苯基)-3-{[(3，4-二甲基-5-异恶 唑基)氨基]磺酰基}-2-噻吩羧酰胺 步骤1：制备化合物1
在配有磁搅拌棒的250ml圆底烧瓶中加入20.0g的5-氨基-3，4- 二甲基异恶唑、50ml的吡啶、以及2.0g(催化量)的二甲基氨基吡啶。 在冰浴中冷却该混合物，同时分批添加21.5g的2-羧甲基-3-噻吩磺 酰氯。密封该烧瓶，撤掉冰浴，然后在室温下搅拌反应物过夜。通过旋 转蒸发除去绝大部分的吡啶，残留物在乙酸乙酯和2 N盐酸之间分配。 分离各层，并用乙酸乙酯(2×)萃取含水层。合并的萃取液用稀盐酸(2 ×)、盐水(2×)洗涤，然后在硫酸镁上干燥。过滤并旋转蒸发浓缩， 得到23.2g油状的化合物1。 步骤2：制备化合物2
在1L配有磁搅拌棒和滴液漏斗的圆底烧瓶中加入23.1g的化合物1、 500ml的二氯甲烷、和28.4g的二异丙基胺。在冰浴中冷却反应物，然 后滴加6.0ml的溴甲基甲基醚。撤掉冰浴，然后在室温下搅拌反应物过 夜。此时，添加200ml的水，并搅拌反应物30分钟。分离各层，并用 二氯甲烷萃取含水层(2×)。合并的有机层用0.5N盐酸、水、饱和碳 酸氢钠水溶液、盐水洗涤，然后在硫酸镁上干燥。过滤并旋转蒸发，得 到一油状物，其进一步通过硅胶色谱法用25-30％乙酸乙酯/己烷作为洗 脱剂进行纯制，得到21.5g油状的化合物2。 步骤2B：制备化合物3
在500ml配有磁搅拌棒的圆底烧瓶中加入21.4g的化合物2、120ml 的四氢呋喃、以及120ml的1N氢氧化钠。快速搅拌反应物，直至反应 完全(约3-4个小时)。通过旋转蒸发除去绝大多数的四氢呋喃，然后 将残留物与50ml的水混合。该混合物用130ml的1N盐酸进行酸化， 然后用200ml的乙酸乙酯萃取(×2)。合并的萃取液用水(50ml)、盐 水(50ml)洗涤，最后用硫酸镁干燥。过滤并旋转蒸发浓缩后，得到20.1 g黄色油状的化合物3，其在放置时固化。 步骤2C：制备化合物4
在1L配有磁搅拌棒和滴液漏斗的圆底烧瓶中加入19.7g的化合物3、 200ml的二氯甲烷、以及5滴吡啶。滴加128ml草酰氯在100ml二氯 甲烷中的溶液。将滴液漏斗换成回流冷凝器，并将反应物加热至回流3 小时，之后通过旋转蒸发进行浓缩，得到20.9g棕色固体状的化合物4。 该物质未经纯制直接用于步骤3中。 步骤3：制备化合物6
在1L配有磁搅拌棒和滴液漏斗的圆底烧瓶中加入18.5g的2-乙酰 基-4，6-二甲基苯胺(5)和150ml的二氯甲烷。向其中滴加20.7g 的化合物4在350ml二氯甲烷中的溶液。在室温下搅拌反应物3小时， 然后蒸发浓缩。向残留物中添加20ml的乙醚，并过滤该混合物。滤饼 用3×100ml的乙醚洗涤。合并的滤液用3×100ml的1N盐酸洗涤，然 后分别用100ml的水、饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤。溶液用硫酸镁 干燥，过滤，然后旋转蒸发浓缩，产生半晶体材料。该材料用200ml的 乙醚研磨，得到23.7g的化合物6，其为白色固体。 步骤4A：制备化合物7
在500ml配有磁搅拌棒和回流冷凝器的圆底烧瓶中加入23.7g的化 合物6、180ml的甲醇、以及90ml的浓盐酸。将混合物加热回流4小 时。停止加热，然后搅拌混合物，并用冰浴冷却。约30分钟后，过滤混 合物，滤饼用水和甲醇的混合物洗涤，得到18.3g的化合物7。该物质 用乙酸乙酯/己烷重结晶，得到16.8g白色固体状的物质：mp 158-160 ℃。 步骤4B：制备化合物7钠盐
将16.8g的化合物7溶解在800ml的乙酸乙酯和200ml的四氢呋喃 中，并向其中添加100ml的饱和碳酸氢钠水溶液。分离各层，并用额外 的2×100ml饱和碳酸氢钠水溶液洗涤有机层。合并的碳酸氢钠洗涤液 重新用乙酸乙酯萃取，合并的有机溶液在硫酸镁上干燥，过滤，然后旋 转蒸发浓缩，得到一泡沫状物质。该物质溶解在300ml的水中，然后过 滤所得的溶液并冻干，得到15.5g的化合物7钠盐，其为白色固体。
                    实施例2 N-(2-氰基-3，4，6-三甲基苯基)-3-{[(3，4-二甲基-5-异恶 唑基)氨基]磺酰基}-2-噻吩羧酰胺
按照实施例1的方法制备N-(2-氰基-3，4，6-三甲基苯基)- 3-{[(3，4-二甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-2-噻吩羧酰胺，但 在步骤3中用2-氰基-3，4，6-三甲基苯胺(8)替换2-乙酰基-4， 6-二甲基苯胺。
                    实施例3 制备化合物16：3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-N -(3，4，6-三甲基-2-丙酰基苯基)-2-噻吩羧酰胺 步骤1：制备化合物10：3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰 基}-2-噻吩甲酸
在500ml圆底烧瓶中加入46.5g的3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶 唑基)氨基]磺酰基}-2-噻吩甲酸甲酯，然后添加250ml的1N氢氧化 钠溶液。搅拌混合物，直至不存在任何起始物。用2N盐酸酸化反应溶 液，然后用乙酸乙酯(3×100ml)萃取。合并的萃取物干燥(硫酸镁)， 过滤并旋转蒸发浓缩，得到42.5g的化合物10固体。 步骤2A：制备3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-N- 甲氧基甲基-2-噻吩甲酸甲氧基甲基酯
在2L配有磁搅拌棒和滴液漏斗的圆底烧瓶中加入42.5g的化合物 10、500ml的二氯甲烷和40.1g的二异丙基乙基胺。用冰浴冷却反应混 合物，然后滴加21.5ml的溴甲基甲基醚。车掉冰浴，然后在室温下搅拌 反应物过夜。添加200ml的水，并搅拌反应混合物30分钟。分离各层， 并用100ml二氯甲烷萃取含水层。合并有机层并分别用50ml的0.5N 盐酸、水、饱和碳酸氢钠水溶液、盐水洗涤，最后用硫酸镁干燥。混合 物过滤，并旋转蒸发滤液，得到一油状物，其进一步通过硅胶色谱法用 25-30％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂进行纯制，得到38.1g油状的化合物 11。
步骤2B：制备化合物12
在1L配有磁搅拌棒的圆底烧瓶中加入38g的化合物11、250ml的 四氢呋喃、以及250ml的1N氢氧化钠。快速搅拌反应物，直至范围完 全(约4小时)。通过旋转蒸发除去绝大部分的四氢呋喃，然后使残留物 与50ml的水混合。该溶液通过添加260ml的1N盐酸进行酸化。用200 ml的乙酸乙酯萃取该混合物两次。合并的萃取液分别用50ml的水和盐 水洗涤，然后用硫酸镁干燥。过滤并旋转蒸发浓缩，得到30.8g黄色油 状的化合物12，其在放置时固化。 步骤2C：制备化合物13
在1L配有磁搅拌棒和滴液漏斗的圆底烧瓶中加入30g的化合物12、 20ml的二氯甲烷、以及5滴吡啶。添加29.2g的亚硫酰氯在200ml二 氯甲烷中的溶液。将滴液漏斗换成回流冷凝器，然后将反应物加热回流 4小时。通过旋转蒸发来浓缩反应物，得到31.4g的化合物13，其为棕 色固体。该物质未经进一步的纯制即直接用于步骤3中。 步骤3：制备化合物15
在1L配有磁搅拌棒和滴液漏斗的圆底烧瓶中加入19.8g的化合物 (14)和150ml的二氯甲烷。向其中滴加20.0g的化合物13在350ml 二氯甲烷中的溶液。反应物在室温下搅拌3小时，然后旋转蒸发浓缩。 向残留物中添加200ml的乙醚，然后过滤该混合物。滤饼用100ml的 乙醚、2×200ml的热乙酸乙酯洗涤。合并的洗涤液用3×100ml的1N 盐酸、分别为100ml的水、饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤。溶液用硫 酸镁干燥，过滤，然后旋转蒸发浓缩，得到半晶体物质。该物质用100ml 的乙醚研磨，得到20.1g的化合物15，其为白色固体。 步骤4：制备化合物16
按照实施例1的方法，将步骤4A的化合物15转化为化合物16，其 为固体，mp 166-170℃。
                     实施例4 制备化合物18：3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-N -[2-(1-羟基乙基)-4，6-二甲基苯基]-2-噻吩羧酰胺
在100mg的化合物17(钠盐)于水中的溶液内添加100mg的硼氢 化钠。3小时后，添加另外的100mg硼氢化钠，然后在室温下搅拌溶液 过夜。反应物与过量的饱和氯化钠溶液混合，用乙酸乙酯(3×50ml) 萃取。萃取液用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，然后蒸发，得到化合物18(钠 盐)，其为固体，mp 147-154℃。
                    实施例5 制备化合物20：3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-N -{2-[(二甲基氨基)羰基]-4，6-二甲基苯基}-2-噻吩羧酰胺
根据实施例3的方法制备化合物20，但在步骤3中用2-[(二甲基 氨基)羰基]-4，6-二甲基苯胺(19)替换化合物12。所得的化合物20 为白色固体。
                      实施例6 制备化合物22：3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-N -{2，4-二甲基-6-[(甲氧基)ethanimidoyl]苯基}-2-噻吩羧酰胺
使化合物17与甲氧基胺(21)在乙醇溶液中反应，得到白色固体的 化合物22，mp 140-145℃。
                        实施例7 制备化合物24：3-{[(3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰 基}-2-噻吩基)羰基]氨基}-2，4，6-三甲基苯基-N，N-二甲基氨 基磺酸酯
在700mg的3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}- N-{3-羟基-2，4，6-三甲基苯基}-2-噻吩羧酰胺(23)于15ml 二甲基甲酰胺中的冰冷溶液内加入247mg的叔丁醇钾。短时间后，添加 317mg的二甲基氨基磺酰氯。判断反应完全时，用水稀释，用1N盐酸 酸化。该混合物用乙酸乙酯(3×30ml)萃取，合并的萃取液干燥(硫 酸镁)、过滤，然后蒸发，得到白色固体状的化合物24；mp 169-174℃。
                   实施例8 制备化合物26：3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-N -{3-[(环丙基甲基)氧基]-2，4，6-三甲基苯基}-2-噻吩羧酰胺
在700mg的3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}- N-{3-羟基-2，4，6-三甲基苯基}-2-噻吩羧酰胺(23)于15ml 二甲基甲酰胺中的冰冷溶液内加入247mg的叔丁醇钾。短时间后，添加 135mg的环丙基甲基溴(25)。判断反应完全时，用水稀释，用1N盐 酸酸化。该混合物用乙酸乙酯(3×30ml)萃取，合并的萃取液干燥(硫 酸镁)、过滤，然后蒸发，得到白色固体状的化合物26；mp 155-158℃。
                  实施例9 制备化合物28：3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-N -(2，4，6-三甲基-5-嘧啶基)-2-噻吩羧酰胺
根据实施例3的方法制备化合物28，但在步骤3中用5-氨基-2， 4，6-三甲基嘧啶(27)替换化合物12。所得的化合物28为白色固体； mp 170-175℃。
                     实施例10 制备化合物30：N-(2-乙酰基-3，4，6-三甲基苯基)-3-{[(4-氯 -3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-2-噻吩羧酰胺
根据实施例3的方法制备化合物30，但在步骤3中用2-乙酰基-3， 4，6-三甲基苯胺(29)替换化合物12。所得的化合物30为白色固体； mp 223-225℃。 
                  实施例11 制备化合物32：3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-N -(2-氰基-3，4，6-三甲基苯基)-2-噻吩羧酰胺
根据实施例3的方法制备化合物32，但在步骤3中用2-氰基-3， 4，6-三甲基苯胺(31)替换化合物12。所得的化合物32为白色固体； mp 218-220℃。
                   实施例12 制备化合物34：N-(2-氯-4，6-二甲基苯基)-3-{[(4-氯-3-甲 基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-2-噻吩羧酰胺
根据实施例3的方法制备化合物34，但在步骤3中用2-氯-4，6 -二甲基苯胺(33)替换化合物12。所得的化合物34为白色固体；mp 174 -176℃。
                 实施例13 制备化合物36：3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-N -(4，6-二乙酰基-3-羟基-2-丙基苯基)-2-噻吩羧酰胺
根据实施例3的方法制备化合物36，但在步骤3中用4，6-二乙酰 基-3-羟基-2-丙基苯胺(35)替换化合物12。所得的化合物36为 白色固体；mp 163-167℃。
                   实施例14 制备化合物38：3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-N -(2，4-二甲基-6-[2-(甲基磺酰基)乙酰基]苯基)-2-噻吩羧 酰胺
根据实施例3的方法制备中间化合物53，但在步骤3中用2，4-二 甲基-6-(2-氯乙酰基)苯胺(37)替换化合物12。
在室温下搅拌400mg的化合物53和1.2g的甲磺酸钠在10ml二甲 基甲酰胺中的溶液。当判断反应完全时，反应物用水稀释，用2N盐酸 酸化，并用乙酸乙酯(3×30ml)萃取。合并萃取液，干燥，然后旋转 蒸发浓缩，得到化合物38，其为白色固体；mp172-175℃。
                     实施例15 制备化合物40：3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-N -(2，4-二甲基-6-{[甲基(2，2-二甲基丙基)氨基]羰基}苯基)- 2-噻吩羧酰胺
根据实施例3的方法制备化合物40，但在步骤3中用2-{[甲基- (2，2-二甲基丙基)氨基]羰基}-4，6-二甲基苯胺(39)替换化合 物12。所得的化合物40为白色固体；mp 174-176℃。
                     实施例16 制备化合物42：3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-N -[2，4-二甲基-6-(甲基磺酰基)苯基]-2-噻吩羧酰胺
根据实施例3的方法制备化合物42，但在步骤3中用2，4-二甲基 -6-(甲基磺酰基)苯胺(41)替换化合物12。所得的化合物40为白 色固体；mp 208-210℃。
                    实施例17 制备化合物44：3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-N -[2，4-二甲基-6-(1，3-恶唑-2-基)苯基]-2-噻吩羧酰胺
根据实施例3的方法制备化合物44，但在步骤3中用2，4-二甲基 -6-(1，3-恶唑-2-基)苯胺(43)替换化合物12。所得的化合物 44为白色固体；mp 176-178℃。
                  实施例18 制备化合物46：3-{[(4-氯-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-N-[2-(2- 丙基磺酰基)-4，6-二甲基苯基]-2-噻吩羧酰胺
根据实施例3的方法制备化合物46，但在步骤3中用2-(2-丙基 磺酰基)-4，6-二甲基苯胺(45)替换化合物12。所得的化合物46 为白色固体；mp 190-192℃。
                  实施例19 制备化合物48：3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-N -[2，4-二甲基-6-(丙基磺酰基)苯基]-2-噻吩羧酰胺
根据实施例3的方法制备化合物48，但在步骤3中用2，4-二甲基 -6-(丙基磺酰基)苯胺(47)替换化合物12。所得的化合物40为白 色固体；mp 152-155℃。
                   实施例20 制备化合物50：3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-N -[2-乙基-4，6-二甲基苯基]-2-噻吩羧酰胺
根据实施例3的方法制备化合物50，但在步骤3中用2-乙基-4， 6-二甲基苯胺(49)替换化合物12。所得的化合物50为白色固体；mp 152 -154℃。
                    实施例21 制备化合物52：3-{[(4-氯-3-甲基-5-异恶唑基)氨基]磺酰基}-N -[2，6-二甲基-4-(1，3-恶唑-2-基)苯基]-2-噻吩羧酰胺
根据实施例3的方法制备化合物52，但在步骤3中用2，6-二甲基 -4-(1，3-恶唑-2-基)苯胺(51)替换化合物12。所得的化合物 52为白色固体；mp 205-207℃。
                     实施例22 磺酰胺钠盐的制剂 A、静脉给药的磺酰胺钠盐制剂
在4升有标度的量筒中加入3200ml无菌注射用水(USP)，在该无 菌水中加入七水磷酸氢二钠(USP，21.44g)，搅拌该混合物5分钟，或 者直至固体完全溶解，加入磷酸二氢钠(USP，11.04g)，搅拌混合物直 至固体完全溶解，将溶液稀释至4.0升并搅拌，由此制得缓冲液。将3000 g制得的磷酸盐缓冲液加入至8升烧杯中。加入葡萄糖(USP，200.0g)， 并将混合物在水浴中加热至30-35℃，同时搅拌直至形成溶液。加入混 有赋形剂的磺酰胺钠盐(100.0g)。搅拌该混合物至少10分钟或者直至 形成溶液。待钠盐溶解后从水浴中取出溶液。用磷酸盐缓冲液将该溶液 稀释至4000g，并搅拌5分钟。使用无菌0.22微米之预制孔径的Durapore Millipak 200过滤器无菌过滤该溶液。经过滤的溶液装入无菌管形瓶中， 并在标准条件下冻干。密封该管形瓶。冻干产物然后用9.4ml或19.4ml 的注射用水复原，形成的最终浓度分别为25mg/ml或12.5mg/ml。 B、用于口服给药的磺酰胺钠盐制剂
使用本领域技术人员已知的方法制备这些制剂(例如参见：Ansel， Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms(第4版)1985(Lea& Febiger))。通常情况下，用湿法或干法使各成分成粒，然后压缩，由此 来制备片剂。另外，组合的成分可通过直接压缩来形成片剂。在制备胶 囊时，将磺酰胺钠盐、赋形剂(稀释剂)、粘合剂、崩解剂和润滑剂直接 填入胶囊壳中。在这些制剂中活性成分和惰性成分的合适量可通过本领 域技术人员已知的方法来经验性地确定。通常情况下，活性成分的量(即 磺酰胺钠盐)应足以产生治疗有效剂量的活性成分。治疗有效剂量可通 过在已知的体内和体外系统中测试化合物(例如参见：Ishikawa等人的 第5,114,918号美国专利；EP A10436189，BANYUPHARMACEUTICAL CO.，LTD.(1991年10月7日)；Borges等人(1989) Eur.J.Pharm.165：223 -230；Filep等人(1991) Biochem.Biophys.Res.Commun.177：171- 176)、然后再由此外推用于人的剂量来经验性地确定。
                  实施例23 具有内皮肽拮抗剂和/或激动剂活性之化合物的鉴别法
具有内皮肽拮抗剂潜力的化合物通过其与125I标记之ET-1在经分离 之细胞膜上竞争结合人ETA受体或ETB受体的能力来鉴别。试验化合物 作为内皮肽之生物组织反应的拮抗剂或激动剂之有效性亦可通过测定其 对分离之老鼠胸主动脉环节受内皮肽所诱发之收缩的影响来评估。化合 物作为ETB受体之拮抗剂或激动剂的能力可由试验化合物抑制内皮肽-1 诱发所培养的牛主动脉内皮细胞释放前列环素的能力来决定。 A、抑制内皮肽结合作用-结合试验#1：抑制与ETA受体结合的作用
TE671细胞(ATCC No.HTB 139)表达ETA受体。此等细胞于T-175 烧瓶中生长至融合为止。自多数重复的烧瓶中刮下细胞汇集在一起，于 190×g下离心10分钟。使用Tenbroeck均化器，将细胞悬浮于含10mM EDTA之磷酸盐缓冲生理盐水(PBS)中。悬浮液于4℃、57800×g下 离心15分钟，沉淀物再悬浮于5ml缓冲液A(5mM HEPES缓冲液，pH 7.4，包含抑蛋白酶肽(100KIU/ml))，然后冷冻及解冻一次。添加5ml 缓冲液B(5mM HEPES缓冲液，pH7.4，含10mM MnCl2和0.001％脱 氧核糖核酸酶I)，反转悬浮液混合，然后于37℃下培养30分钟。如上 所述，混合物于57800×g下离心，沉淀物以缓冲液A洗涤2次后，再 悬浮于缓冲液C(30mM HEPES缓冲液，pH7.4，含抑蛋白酶肽(100 KIU/ml))，蛋白质终浓度为2mg/ml，保存在-70℃下，直到使用时为 止。
以结合作用缓冲液(30mM HEPES缓冲液，pH7.4，含150mM NaCl、 5mM MgCl2、0.5％杆菌肽)稀释膜悬浮液至8μg/50μl的浓度。添加125I -内皮肽-1(3000cpm，50ml)至50μl之(A)内皮肽-1(用于非 专一性结合作用)，终浓度为80nM；(B)结合作用缓冲液(用于总结合 作用)；或(C)试验化合物(终浓度1nM至100μM)中。取包含8μ g膜蛋白质的膜悬浮液(50μl)加至各(A)、(B)或(C)中。振荡混 合物，于4℃下培养16-18小时，再于4℃及2500×g下离心25分钟。 或者，于24℃下培养。当于24℃下培养时，IC50浓度比在4℃下培养时 高2至10倍。因此，当比较本文所提供化合物之间的IC50浓度时，必须 注意此点。
倾析包含未结合之放射活性的上清液，取沉淀物于Genesys多孔式γ 计数器上计数。根据下列公式计算抑制结合作用的程度(D)： $\%D=100-\frac{\left(C\right)-\left(A\right)}{\left(B\right)-\left(A\right)}\times 100$
每项试验通常进行三次。 B、抑制内皮肽结合作用-结合试验#2：抑制与ETB受体结合的作用
以编码ETB受体的DNA转染COS7细胞。所产生的可表达人ETB 受体之细胞于T-150烧瓶中生长至融合。依上述方法制备膜。使用膜 制剂，以结合作用缓冲液稀释至1μg/50μl的浓度，依上述进行结合作 用分析。
简言之，由上述已接受编码ETB受体之DNA转染并于其表面上表 达人ETB受体的COS7细胞于T-175烧瓶中生长至融合。自多数重覆的 烧瓶中刮下细胞汇集在一起，于190×g离心10分钟。使用Tenbroeck 均化器，使细胞悬浮于含10mM EDTA的磷酸盐缓冲生理盐(PBS)。悬 浮液于4℃、57800×g下离心15分钟，沉淀物再浮于5ml缓冲液A(5mM HEPES缓冲液，pH7.4，含抑蛋白酶(100KIU/ml))，然后冷冻及解冻 一次。添加5ml缓冲液B(5mM HEPES缓冲液，pH7.4，含10mM MnCl2 和0.001％脱氧核糖核酸酶I)，反转悬浮液混合，然后于37℃下培养30 分钟。混合物依上述，于57800×g下离心，沉淀物以缓冲液A洗涤2次 后，再悬浮于缓冲液C(30mM HEPES缓冲液，pH7.4，含抑蛋白酶肽 (100KIU/ml))，蛋白质终浓度为2mg/ml。
依上述，使用稀释至1μg/50μl结合作用缓冲液的膜制剂，进行结合 作用分析法。 C、对抗内皮肽诱发分离之老鼠胸主动脉环和缩之活性的试验
试验化合物作为内皮肽之生物组织反应的拮抗剂或激动剂的有效性分 析法是通过测定其对内皮肽诱发分离之老鼠胸主动脉环之收缩作用的影 响(见例如：Borges等人(1981)，Eur.J.Pharmacol.165：223-230)或 测定其单独添加时使组织收缩的能力来估测的。
将试验化合物制成100μM保存液。若必须溶解，先使化合物溶于最 DMSO中，以150mM NaCl稀释。由于DMSO可使主动脉环放松，因 此测试含有不同浓度DMSO的对照组溶液。
自成鼠主动脉上切下胸主动脉部分，小心剥下内皮，切成3毫米环节。 环节在2g预负载量下悬浮于10ml器官浴中。器官浴中填充以95％O2 和5％CO2气体混合物饱和的Krebs′-Henseleit溶液(118mM NaCl、4.7 mM KCl、1.2mM MgSO4、1.2mM KH2PO4、25mM NaHCO3、2.5mM CaCl2、10mM D-葡萄糖)。
作为内皮肽所诱发胸主动脉环收缩之拮抗剂的活性与作为内皮肽与内 皮肽受体结合作用之抑制剂的活性之间有相关性。pA2为IC50对数值的 线性函数。 D、对ETB受体具有激动剂和/或拮抗剂活性之化合物的鉴别法 1、刺激前列环素释放
由于内皮肽-1刺激经培养之牛主动脉内皮细胞释放前列环素，因此 大致上依Filep等人(1991) Biochem.Biophys.Res.Commun.177 171 -176所述测定6-酮基PGF1α，由化合物抑制内皮肽-1诱发此等内皮 肽细胞释放前列环素的能力，鉴定具有激动剂或拮抗剂活性的化合物。 牛主动脉细胞来自经胶原处理的牛主动脉，接种至培养皿中，于补充已 热失活的15％胎牛血清和L-谷酰胺(2mM)、青霉素、链霉素和fungizone 的199培养基中生长，并进行培养至少4次。细胞再接种于相同培养基 的六孔板中。待细胞达融合后，于分析前8小时更换培养基。细胞再a) 与培养基单独培养，b)与含内皮肽-1(10nM)的培养基培养，c)与 试验化合物单独培养，及d)与试验化合物+内皮肽-1(10nM)培养。
培养15分钟后，取出各孔中的培养基，由直接免疫分析法测定6- 酮基PGF1α浓度，由接受内皮肽-1处理之细胞释放的6-酮基PGF1α量 减去接受相同处理但未受内皮肽-1处理之细胞释放的量，由其差值计 算前列环素产量。会刺激6-酮基PGF1α释放的化合物具有激动剂活性， 而那些抑制内皮肽-1、6-酮基PGF1α释放的化合物则具有拮抗剂活性。 2、抑制沙洛弗毒素6c所诱发的收缩作用
沙洛弗毒素6c为专一性ETB拮抗剂，使老鼠胃底剥条收缩。采用试 验化合物抑制此沙洛弗毒素6c所诱发之老鼠胃底剥条收缩的有效性，作 为ETB拮抗剂活性的测定值。取2条经分离之老鼠胃底剥条，在1g负 载量下悬浮于器官浴中，器官浴填充包含10μM环(D-Asp-Pro-D-Val -Leu-D-Trp)、5μM吲哚美辛并以95％O2/5％CO2气体混合物饱和 的Kreb’s-Henseleit溶液(BQ-123；参见Ishikawa等人的第5,114,918 号美国专利)。在等量下测定张力的变化，并采用连接于转换器的Grass Polygraph记录。以累进式添加沙洛弗毒素6c至其中一个剥条上，同时 取第二个剥条先与试验化合物预培养15分钟，然后再添加累进剂量的沙 洛弗毒素6c。检查试验化合物对沙洛弗毒素6c的浓度一反应曲线的影 响。 E、以去氧皮质甾酮乙酸盐(DOCA)高血压鼠模型于活体内分析特定化 合物的活性
于去氧皮质甾酮乙酸盐(DOCA)高血压鼠模型中测试本文所揭示 的几种特定化合物。进行此等试验时，根据Ommsbee等人(1973)， the J. Pharm.Sci.62：255-257的方法，制备含47mg DOCA的硅橡胶MDX4 -4210弹性体植入物。简言之，将DOCA加入硅橡胶植入物中，使之持 续释放。制备植入物时，使DOCA加入未聚合的硅橡胶中，添加催化剂， 然后将混合物塑成半圆柱形。
取Sprague Dawley鼠(7至8周大)，在氯胺酮麻醉下进行单侧肾切 除术，将DOCA-植入物在动物左腹背面上。使老鼠恢复3周。恢复期 间，可自由取用正常老鼠饲料，及改用0.9％NaCl饮用溶液替代饮 水。老鼠在3周内发展出高血压。
所有动物均在手术后21天至30天之间用于试验。此等动物的平均动 脉血压在165-200毫米汞柱之范围内。
实验当天，在甲己炔巴比妥(brevital)麻醉下，将导管插入右股动脉 中用于测量血压，及插入右股静脉中用于给药特定化合物。动物置入栅 栏内，使之恢复至少60分钟，或直到记录到平稳的平均动脉血压为止。 此时，经静脉内以60分钟输液，或经口导管给予特定化合物或对照组载 剂。再连续测量血压10小时。 F、在清醒之自主性阻断的大鼠之活体内活性分析模式中测定特定化合物 经静脉内给药对ET-1所诱发之加压素反应的影响
麻醉(甲己炔巴比妥50mg/kg，IP)雄Sprague Dawley鼠(250-450g)， 将导管插入股动脉中测定平均动脉压(MAP)，插入股静脉的导管则供 经静脉内给药。动物置入栅栏内，使之恢复意识。30分钟后，给药自主 性阻断剂(阿托品甲基硝酸盐，3mg/kg，IV，随后给药心得安 (propranalol)，2mg/kg，IV)。1小时后，动物接受大丸剂载剂注射(0.5 ml)，30分钟后，经静脉内大丸剂给药ET-1(对照组，1μg/kg)。由接 受此等处理中恢复后，经静脉内大丸剂给药试验化合物(0.5ml)，30分 钟后再给予ET-1。结果以给药试验化合物后对ET-1诱发之加压素反 应与接受对照组ET-1处理所诱发之加压素反应比较得到的抑制作用百 分比表示。有时候在给药试验化合物90分钟后才进行第三次ET-1处 理。 G、结果 1、体外
前述实施例化合物对ETA和ETB受体的各IC50均已测定。几乎所有 化合物对ETA及ETB受体之一或二者之IC50均低于10μM。许多化合物 的IC50低于10μM，其他化合物的IC50低于约1μM，有些化合物的IC50 低于约0.1μM。许多化合物对ETA受体的IC50远低于(10至100倍或 更多)对ETB受体，因此对ETA受体具选择性。其他化合物则对ETB受 体具选择性。 2、活体内
均已在高血压鼠模型中测试几种特定化合物，如N-(4-氯-3-甲 基-5-异恶唑基)-2-(3-羟基-2，4，6-三甲基苯基氨基羰基) 噻吩-3-磺酰胺，且可有效降低血压。
                     实施例24
           评估化合物的毒理学性质的实验 A、细胞色素P450酶实验
使用由Gentest Corporation研制的人重组细胞色素P450酶实验来测 定不同的人细胞色素P450酶(2C9、2C19、3A4)50％抑制底物代谢时 所需要的本发明化合物浓度(IC50)的体外实验。这些实验包括Gentest SupersomesTM(特异性人细胞色素P450酶，与P450还原酶和细胞色素 b5共同表达)、NADPH再生体系、底物以及本发明化合物的浓度范围。 荧光产物是这些实验的测量终点。IC50是使用4个参数的对数等式计算 的，其中底部为0％抑制，而顶部为100％抑制(当n大于1时，数值是 平均IC50±SD)。 i：总的实验条件
实验是在96孔微量滴定板中进行的，其中使用Gentest Corporation研 制的荧光计。每排的12个孔用于一个抑制曲线。第1-8孔包含测试化 合物一系列1∶3的稀释液。第9-12孔不包含抑制剂，而第11和12孔 是用于背景荧光的空白(在酶之前添加的停止溶液)。所有的浓度曲线都 进行双份。在与温热的反应混合物中添加酶和底物，由此开始进行温育。 在特定的温育时间后，通过添加停止溶液使反应停止。使用荧光板读数 器测量荧光，由此测定每个孔的代谢产物。每个酶的详细实验程序如下 所示。通常参见用于测量细胞色素P450抑制作用的高输出法(Gentest Corporation，Technical Bulletin)；Crespi，C.L.，Miller，V.P.，和Penman，B. W.(1997)Adv.Pharm.43：7-35。 ii、CYP2C9实验
在37℃下温育0.2ml/孔的反应混合物45分钟，该混合物在25mM 磷酸钾(pH7.4)中包含3pmol的CYP2C9(P258)、1.3mM NADP+、3.3 mM的葡萄糖-6-磷酸、3.3mM的氯化镁、0.4U/ml的葡萄糖-6-磷 酸脱氢酶、以及75μM的甲氧基-4-三氟甲基香豆素。将标准的CYP2C9 抑制剂--磺胺苯吡唑由最高浓度10μM进行系列稀释，并用作阳性对 照。测试化合物由最高浓度100μM进行系列稀释。温育后，通过添加 75μl的停止溶液(80％乙腈/20％0.5M Tris碱)使反应停止，然后使用 Spectra Fluor(Tecan)或者Cytoflour 2350(Millipore)荧光板读数器测 量每个孔的荧光。分别使用409nm的激发波长(30nm带宽)和535nm 的放射波长(25nm带宽)，或者400nm的激发波长(30nm带宽)和460 nm的放射波长(40nm带宽)。 iii、CYP2C19实验
在37℃下温育0.2ml/孔的反应混合物45分钟，该混合物在50mM 磷酸钾(pH7.4)中包含1pmol的CYP2C19(P258)、1.3mM NADP+、 3.3mM的葡萄糖-6-磷酸、3.3mM的氯化镁、0.4U/ml的葡萄糖-6 -磷酸脱氢酶、以及25μM的3-氰基-7-乙氧基香豆素。将标准的 CYP2C19抑制剂--反苯环苯丙胺由最高浓度500μM进行系列稀释， 并用作阳性对照。测试化合物由最高浓度100μM进行系列稀释。温育 后，通过添加75μl的停止溶液(80％乙腈/20％0.5M Tris碱)使反应停 止，然后使用Spectra Fluor(Tecan)荧光板读数器在1小时内测量每个 孔的荧光。使用409nm的激发波长(30nm带宽)和465nm的放射波 长(25nm带宽)。 iv、CYP3A4实验
在37℃下温育0.2ml/孔的反应混合物45分钟，该混合物在200mM 磷酸钾(pH7.4)中包含4pmol的CYP3A4(P258)、1.3mM NADP+、3.3 mM的葡萄糖-6-磷酸、3.3mM的氯化镁、0.4U/ml的葡萄糖-6-磷 酸脱氢酶、0.01％的pluronic F68以及50μM的试卤灵乙基醚。将标准 的3A4抑制剂--酮康唑由最高浓度5μM进行系列稀释，并用作阳性 对照。测试化合物由最高浓度100μM进行系列稀释。温育后，通过添 加75μl的停止溶液(80％乙腈/20％0.5M Tris碱)使反应停止，然后使 用Spectra Fluor(Tecan)荧光板读数器在1小时内测量每个孔的荧光。 使用530nm的激发波长(30nm带宽)和580nm的放射波长(4nm带 宽)。 v、分析
每个浓度的两个孔的荧光值、没有添加测试化合物的4个孔的荧光 值(这是0％抑制)、以及“停止-空白”的4个孔(这些孔代表“背景”， 因为在添加酶之前反应被停止)的荧光值针对每个化合物进行平均。
“％抑制”如下进行计算：
100-(每个荧光值的平均值-背景)×100/(0％抑制-背景)
在Prism(GraphPad，Inc.)中建立浓度-％抑制曲线。使用“Top& Bottom Fixed”途径分析数据。所用等式是：
         Y-0+100/(1+10_((Log IC50-X)*HillSlope)) 其中： X是浓度的对数， Y是应答(％抑制)，在0％开始，并向100％前进，具有S形状。
该等式对于“四参数对数等式”。 vi、结果
测试化合物对不同CYP酶介导的代谢物形成的平均IC50值见表2 所示。使用对于各分析的CYP已知的抑制剂(阳性对照)，实验值是有 效的。如果阳性对照的IC50值在CYP阳性对照的历史平均值的1个标准 偏差之内，则认为实验对于表2中的内容是有效的。如果阳性对照的IC50 值在1个标准偏差之外，则将该实验排除。 B、缺氧方案
缺氧接触(10.0±0.5％O2)是通过将大鼠放置在3301 Plexiglas手 套箱(Manostat，Brooklyn，New York，USA)中实现的。间断地由液氮储 存器中向该手套箱中添加氮气。Baralyme(Allied Health Care Products，St. Louis，Missouri，USA)CO2洗涤器将CO2浓度保持低于0.2％。手套箱内 的相对湿度用无水硫酸钙保持低于70％。使用硼酸，将手套箱内的NH3 浓度保持最低。参见：Tilton等人(2000)Pulm.Pharm.Ther.13：87-97。 i、急性缺氧方案
在初始实验中，评估测试化合物对随后暴露于急性缺氧环境90分 钟的大鼠的平均肺动脉压(MPAP)的作用。在戊巴比妥钠麻醉(50mg/kg ip)下，对股动脉和静脉进行插管，并用胸腔封闭技术通过右颈静脉对 肺动脉进行插管。所有插管都连接至聚乙烯(PE 20)管上，而且通过皮 下埋入的不锈钢丝(直径为0.018in)在颈的后侧引到外面。2天后，通 过股和肺动脉插管由连接在多种波描记器上的换能器记录MPAP。一旦 达到稳定的记录曲线，就使清醒而且未受限制的大鼠接触缺氧环境(10 ％O2，1atm)，并在90分钟的时间内记录缺氧对该参数的影响。在实 验设计中插入测试化合物防止方案(在10分钟的时间内iv输注5mg/kg， 在开始缺氧前10分钟停止)和测试化合物干扰方案(在10分钟的时间 内iv输注5mg/kg，在开始缺氧后50分钟启动)。 ii、结果
急性normobaric缺氧与MPAP的双相(biphasic)增加有关：在5 分钟内由19mm Hg的基线水平增加至24.5mm Hg，然后在接下来的10 分钟内下降至21mm Hg，接着在余下来的缺氧时间内返回至约25mm Hg的峰值水平。当该组在实验结束时重新回到室内空气时，肺压快速返回 到基线值。如表2中所示，在低于已知内皮肽所需的剂量时，本发明的 化合物对于抑制缺氧诱发的血管收缩是有效的。
由于一些修饰对本领域技术人员是显而易见的，因此对本发明仅受 所附的权利要求限制。
相关申请
本申请要求Wu等人于1999年12月31日申请的第60/174,104号美 国临时专利申请的优先权，其名称为“调整内皮肽活性的磺酰胺及其衍 生物”。为了美国国内申请以及其他的需要，该临时专利申请的内容在此 并入作为参考。