前列腺素D2(PGD2)长期以来被认为与炎症和特应性病症，尤其是变 态反应性疾病例如哮喘、鼻炎和特应性皮炎有关(路易斯(Lewis)等(1982) 免疫学杂志(J.Immunol.)129，1627)。PGD2属于衍生自花生四烯酸的 20-碳脂肪酸骨架的一类化合物。急性变态反应期间，为了对抗原激发作出 应答，PGD2大量释放到气道以及皮肤内。属于G-蛋白偶联受体(GPCR)亚 族成员的DP受体长期被认为是PGD2的唯一受体。DP在变应性哮喘中的作 用已由DP缺陷小鼠得到证明(Matsuoka等(2000)科学(Science)287， 2013-2017)。然而，尽管人们对PGD2在炎症应答作用方面表现出浓厚兴趣， DP受体活化和PGD2-刺激的嗜酸性粒细胞移行间的直接关系尚未建立起来 (温伍德(Woodward)等(1990)眼科学研究(Invest.Ophthalomol Vis. Sci.)31，138-146；温伍德(Woodward)等(1993)欧洲药学杂志(Eur.J. Pharmacol.)230，327-333)。
近期，另一种G蛋白偶联受体，称为“T辅助细胞2上表达的趋化受体 -同源分子”(CRTH2)(Nagata等(1999)免疫学杂志(J.Immunol.) 162，1278-1286，荷利(Hirai)等(2001)实验医学杂志(J Exp.Med.) 193，255-261)已被鉴定为PGD2的受体，这个发现已开始揭示PDG2的作用 机制。CRTH2，也称为DP2、GPR44或DLIR，与DP受体和其它前列腺素类受 体相比，几乎没有结构相似性。然而，CRTH2却有着类似的对PDG2的亲和 力。外周血液T淋巴细胞中，人CRTH2选择性表达于Th2细胞并且高表达于 和变态反应性炎症有关的细胞类型，例如嗜酸性粒细胞、嗜碱细胞和Th2细 胞。另外，CRTH2还介导PGD2依赖性血液嗜酸性粒细胞和嗜碱细胞的细胞 迁移。再进一步，表达CRTH2的循环T细胞的数目增加与特应性皮炎的严重 程度有关(考斯米(Cosmi)等(2000)欧洲免疫学杂志(Eur.J.Immunol.) 30，2972-2979)。CRTH2和PGD2的相互作用在变应原诱导的变态反应性炎 症靶组织里Th2细胞的募集反应中起着关键作用。因此，抑制CRTH2和PGD2 结合的化合物应当可用于治疗变态反应性疾病。
变态反应性疾病，如哮喘和炎症性皮肤病，代表一类复杂和通常是慢性 的炎症性疾病，这些炎症性疾病目前影响着约10％的人口，而且看来数目正 在增加(布什(Bush)，R.K.，乔治蒂斯(Georgitis)J.W.，哮喘和鼻炎 手册.第1版.(1997)，阿比顿(Abingdon)：布莱克威尔科学(Blackwell Science.)270)。特应性皮炎是一种慢性皮肤病，患者的皮肤变得奇痒无 比。皮肤科医生的病人中10-20％属于这种。全世界变态反应性疾病和炎症 性皮肤病不断升高的发病率使得对有效治疗或预防这种疾病的新方法的需 求加剧。目前，多种类型的药物广泛用于治疗这些疾病，例如，抗组胺药、 解充血药、抗胆碱药、甲基黄嘌呤类、色甘酸类、皮质类固醇和白三烯调节 剂。然而，这些药物的应用常常受限于其副作用和低疗效。
最近已报导3-硫-取代的吲哚衍生物(A)显示出CRTH2活性(WO 04/106302，阿斯特拉勤察(AstraZeneca)AB)，有潜力用于治疗各种呼吸 系统疾病。

WO 04/096777(拜尔健康保健公司(Bayer Healthcare AG))涉及嘧 啶衍生物，可用于治疗CRTH2介导的疾病。

WO 04/035543和WO 05/102338(华纳-兰伯特有限公司(Warner-Lambert Company LLC))公开了作为CRTH2拮抗剂的四氢喹啉衍生物(C)，据称其 也可有效治疗神经性疼痛。

WO 04/032848(千年药物有限公司(Millennium Pharmaceutical Inc.)) 和WO 05/007094(特拉基有限公司(Tularik Inc.))也提供了特定的作 为CRTH2调节剂的四氢喹啉衍生物。据说这些四氢喹啉衍生物可用于治疗与 变态反应性炎症进程相关的疾病。
发明概述
一方面，本发明提供式(I)所示螺衍生物。另一方面，本发明提供式(I) 代表的螺衍生物作为药物活性化合物的应用。所述化合物适合用于治疗和/ 或预防变态反应性疾病和炎症性皮肤病。所述化合物调节CRTH2。具体地说， 本发明涉及用作药物的式(I)所示螺衍生物：

其中R1、R2、R3、T、X、Y、Z和m按照下面详述中的描述定义。
本发明还提供含有式(I)化合物和药学上可接受的赋形剂或载体的药物 组合物。
本发明进一步涉及式I化合物在制备治疗和/或预防选自以下的疾病的 药物中的应用，所述疾病是变态反应性疾病，诸如变应性哮喘、变应性鼻炎、 变应性结膜炎，和炎症性皮肤病，诸如特应性皮炎、接触过敏、变应性接触 性皮炎、慢性荨麻疹/慢性特发性/自身免疫荨麻疹、药物性皮疹(例如中毒 性表皮坏死松解症或莱尔氏(Lyell’s)综合征/斯蒂文森-强生 (Stevens-Johnson)综合征/药物超敏综合征)、光照性皮肤病或多形日光 疹(例如光照刺激性接触性皮炎、光变应性接触性皮炎、慢性光化性皮炎) 和肌炎、神经退行性疾病(例如神经性疼痛)和其它具有炎症性成分的疾病 (例如类风湿性关节炎、多发性硬化症、骨关节炎和炎症性肠病(IBD))以 及其它与CTRH2活性有关的疾病。具体地说，本发明涉及式(I)化合物在 调节CRTH2活性中的应用。
本发明进一步涉及通过给予患者式(I)所示衍生物治疗和/或预防选 自以下的疾病的方法，所述疾病是变态反应性疾病(例如变应性哮喘、变应 性鼻炎、变应性结膜炎)和炎症性皮肤病(例如特应性皮炎、接触过敏、变 应性接触性皮炎、慢性荨麻疹/慢性特发性/自身免疫荨麻疹)、药物性皮疹 (例如中毒性表皮坏死松解症或Lyell综合征/Stevens-Johnson综合征/药 物超敏综合征)、光照性皮肤病或多形日光疹(例如光照刺激性接触性皮炎、 光变应性接触性皮炎、慢性光化性皮炎)和肌炎、神经退行性疾病(例如神 经性疼痛)和其它具有炎症性成分的疾病(例如类风湿性关节炎、多发性硬 化症、骨关节炎和炎症性肠病(IBD))以及其它与CTRH2活性有关的疾病。
本发明进一步涉及式(I)化合物在制备药物组合物中的应用。
本发明最后涉及新型的式(I)化合物以及合成式(I)化合物的方法。
发明描述
以下段落提供了构成本发明化合物各种化学基团的定义，其目的是在说 明书和权利要求中统一应用，除非另行表述的定义给出了范围更广的限定。
“C1-C6-烷基”指具有1-6个碳原子的单价烷基基团。该术语可用甲基、 乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正己基等来举例说明。
“芳基”指具有单环(如苯基)或多稠环(如萘基)的6-14个碳原子 的不饱和芳香族碳环基团。优选的芳基包括苯基、萘基、菲基等。芳环也可 与杂环烷基稠合。这种稠合芳基包括二氢苯并咪唑-2-酮、苯并[1，3]间二氧 杂环戊烯等。
“C1-C6-烷基芳基”指具有芳基取代基的C1-C6-烷基，例如苄基、苯乙 基等。
“杂芳基”指单环杂芳族或双环或三环稠环杂芳族基团。杂芳基的具体 例子包括任选地取代的吡啶基、吡咯基、嘧啶基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、 噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、吡唑基、1，2，3-三唑基、1，2，4- 三唑基、1，2，3-噁二唑基、1，2，4-噁二唑基、1，2，5-噁二唑基、1，3，4-噁二 唑基、1，3，4-三嗪基、1，2，3-三嗪基、1，3，4-噻二唑基、苯并呋喃基、[2，3- 二氢]苯并呋喃基、异苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并三唑基、异苯并噻吩 基、吲哚基、异吲哚基、3H-吲哚基、苯并咪唑基、咪唑并[1，2-a]吡啶基、 苯并噻唑基、苯并噁唑基、喹嗪基、喹唑啉基、2，3-二氮杂萘基、喹喔啉基、 噌啉基、1，5-二氮杂萘基、哒嗪基、吡啶并[3，4-b]吡啶基、吡啶并[3，2-b] 吡啶基、吡啶并[4，3-b]吡啶基、喹啉基、异喹啉基、四唑基、5，6，7，8- 四氢喹啉基、5，6，7，8-四氢异喹啉基、嘌呤基、喋啶基、咔唑基、呫吨基或 苯并喹啉基等。
“C1-C6-烷基杂芳基”指具有杂芳基取代基的C1-C6-烷基，例如2-呋喃 基甲基、2-噻吩基甲基、2-(1H-吲哚-3-基)乙基等。
“C3-C8-环烷基”指具有单环(如环己基)或多稠环(如降冰片基)的 3-8个碳原子的饱和碳环基团。优选的环烷基包括环戊基、环己基、降冰片 基等。
“C3-C8-杂环烷基”指上述定义的C3-C8-环烷基，其中最多3个碳原子 被选自O、S、NR的杂原子取代，R定义为氢或甲基。优选的杂环烷基包括 吡咯烷、哌啶、哌嗪、1-甲基哌嗪、吗啉、1，4-二噁烷等。
“C1-C6-烷基环烷基”指具有环烷基取代基的C1-C6-烷基，包括环己基 甲基、环戊基丙基等。
“C1-C6-烷基杂环烷基”指具有杂环烷基取代基的C1-C6-烷基，包括 2-(1-吡咯烷基)乙基、4-吗啉基甲基、(1-甲基-4-哌啶基)甲基等。
“C2-C6-烯基”指优选具有2-6个碳原子并具有至少1个或多个烯基不 饱和键的烯基基团。优选的烯基包括乙烯基(-CH＝CH2)、正-2-丙烯基(烯 丙基，-CH2CH＝CH2)等。
“C2-C6-炔基”指优选具有2-6个碳原子并具有至少1个或多个炔基不 饱和键的炔基基团。优选的炔基包括乙炔基(-CH≡CH)、丙炔基(-CH2C≡CH) 等。
“羧基”指基团-C(O)OR，其中R包括氢或“C1-C6-烷基”。
“酰基”，指基团-C(O)R，其中R包括“C1-C6-烷基”、“芳基”、“杂 芳基”、“C3-C8-环烷基”、“C3-C8-杂环烷基”、“C1-C6-烷基芳基”或 “C1-C6-烷基杂芳基”。
“酰氧基”指基团-OC(O)R，其中R包括“C1-C6-烷基”、“芳基”、 “杂芳基”、“C1-C6-烷基芳基”或“C1-C6-烷基杂芳基”。
“芳基酰基”指具有酰基取代基的芳基，包括2-乙酰基苯基等。
“杂芳基酰基”指具有酰基取代基的杂芳基，包括2-乙酰基吡啶基等。
“烷氧基”指基团-O-R，其中R包括“C1-C6-烷基”、“C2-C6-烯基”、 “C2-C6-炔基”、“C3-C8-环烷基”、“杂环烷基”、“芳基”、“杂芳基”、 “C1-C6-烷基芳基”或“C1-C6-烷基杂芳基”、“C2-C6-烯基芳基”、“C2-C6- 烯基杂芳基”、“C2-C6-炔基芳基”、“C2-C6-炔基杂芳基”、“C1-C6-烷基 环烷基”、“C1-C6-烷基杂环烷基”。优选的烷氧基包括例如甲氧基、乙氧 基、苯氧基等。
“C1-C6-烷基烷氧基”指具有烷氧基取代基的C1-C6-烷基，包括2-乙氧 基乙基等。
“烷氧基羰基”指基团-C(O)OR，其中R包括“C1-C6-烷基”或“芳基” 或“杂芳基”或“C1-C6-烷基芳基”或“C1-C6-烷基杂芳基”。
“氨基羰基”指基团-C(O)NRR’，其中R、R’独立地包括氢或C1-C6- 烷基或芳基或杂芳基或“C1-C6-烷基芳基”或“C1-C6-烷基杂芳基”。
“酰基氨基”指基团-NR(CO)R’，其中每个R、R’独立地是氢或“C1-C6- 烷基”或“芳基”或“杂芳基”或“C1-C6-烷基芳基”或“C1-C6-烷基杂芳 基”。
“卤素”指氟、氯、溴和碘原子。
“磺酰氧基”指基团-OSO2-R，其中R选自H、“C1-C6-烷基”、被卤素 取代的“C1-C6-烷基”如-OSO2-CF3、“C2-C6-烯基”、“C2-C6-炔基”、“C3-C8- 环烷基”、“杂环烷基”、“芳基”、“杂芳基”、“C1-C6-烷基芳基”或 “C1-C6-烷基杂芳基”、“C2-C6-烯基芳基”、“C2-C6-烯基杂芳基”、“C2-C6- 炔基芳基”、“C2-C6-炔基杂芳基”、“C1-C6-烷基环烷基”、“C1-C6-烷基 杂环烷基”。
“磺酰基”指基团“-SO2-R”，其中R选自H、“芳基”、“杂芳基”、 “C1-C6-烷基”、被卤素取代的“C1-C6-烷基”如-SO2-CF3、“C2-C6-烯基”、 “C2-C6-炔基”、“C3-C8-环烷基”、“杂环烷基”、“芳基”、“杂芳基”、 “C1-C6-烷基芳基”或“C1-C6-烷基杂芳基”、“C2-C6-烯基芳基”、“C2-C6- 烯基杂芳基”、“C2-C6-炔基芳基”、“C2-C6-炔基杂芳基”、“C1-C6-烷基 环烷基”、“C1-C6-烷基杂环烷基”。
“亚磺酰基”指基团“-S(O)R”，其中R选自H、“C1-C6-烷基”、被 卤素取代的“C1-C6-烷基”如-SO-CF3、“C2-C6-烯基”、“C2-C6-炔基”、 “C3-C8-环烷基”、“杂环烷基”、“芳基”、“杂芳基”、“C1-C6-烷基芳 基”或“C1-C6-烷基杂芳基”、“C2-C6-烯基芳基”、“C2-C6-烯基杂芳基”、 “C2-C6-炔基芳基”、“C2-C6-炔基杂芳基”、“C1-C6-烷基环烷基”、“C1-C6- 烷基杂环烷基”。
“硫烷基”指基团-S-R，其中R包括H、“C1-C6-烷基”、被卤素任选 取代的“C1-C6-烷基”如-S-CF3、“C2-C6-烯基”、“C2-C6-炔基”、“C3-C8- 环烷基”、“杂环烷基”、“芳基”、“杂芳基”、“C1-C6-烷基芳基”或 “C1-C6-烷基杂芳基”、“C2-C6-烯基芳基”、“C2-C6-烯基杂芳基”、“C2-C6- 炔基芳基”、“C2-C6-炔基杂芳基”、“C1-C6-烷基环烷基”、“C1-C6-烷基 杂环烷基”。优选的硫烷基包括甲基硫烷基、乙基硫烷基等。
“磺酰基氨基”指基团-NRSO2-R’，其中各个R、R’独立地包括氢、 “C1-C6-烷基”、“C2-C6-烯基”、“C2-C6-炔基”、“C3-C8-环烷基”、“杂 环烷基”、“芳基”、“杂芳基”、“C1-C6-烷基芳基”或“C1-C6-烷基杂芳 基”、“C2-C6-烯基芳基”、“C2-C6-烯基杂芳基”、“C2-C6-炔基芳基”、 “C2-C6-炔基杂芳基”、“C1-C6-烷基环烷基”、“C1-C6-烷基杂环烷基”。
“氨基磺酰基”指基团-SO2-NRR’，其中各个R、R’独立地包括氢、 “C1-C6-烷基”、“C2-C6-烯基”、“C2-C6-炔基”、“C3-C8-环烷基”、“杂 环烷基”、“芳基”、“杂芳基”、“C1-C6-烷基芳基”或“C1-C6-烷基杂芳 基”、“C2-C6-烯基芳基”、“C2-C6-烯基杂芳基”、“C2-C6-炔基芳基”、 “C2-C6-炔基杂芳基”、“C1-C6-烷基环烷基”、“C1-C6-烷基杂环烷基”。
“氨基”指基团-NRR’，其中各个R、R’独立地是氢、“C1-C6-烷基”、 “C2-C6-烯基”、“C2-C6-炔基”、“C3-C8-环烷基”、“杂环烷基”、“芳 基”、“杂芳基”、“C1-C6-烷基芳基”或“C1-C6-烷基杂芳基”、“C2-C6- 烯基芳基”、“C2-C6-烯基杂芳基”、“C2-C6-炔基芳基”、“C2-C6-炔基杂 芳基”、“C1-C6-烷基环烷基”、“C1-C6-烷基杂环烷基”，以及其中R和R” 与它们连接的氮原子一起可任选地形成3-8元杂环烷基环。
“取代的或未取代的”：除非用各个取代基的定义另行限定，上面所述 的基团，如“烷基”、“烯基”、“炔基”、“烷氧基”、“芳基”和“杂 芳基”等基团可任选地被1-5个选自以下基团的取代基取代：“C1-C6-烷 基”、“C1-C6-烷基芳基”、“C1-C6-烷基杂芳基”、“C2-C6-烯基”、“C2-C6- 炔基”、伯、仲、叔氨基或季铵基团、“酰基”、“酰氧基”、“酰基氨基”、 “氨基羰基”、“烷氧基羰基”、“芳基”、“芳氧基”、“杂芳基”、“杂 芳氧基”、羧基、氰基、卤素、羟基、硝基、硫烷基、硫氧基、磺酰基、磺 酰氨基、烷氧基、硫烷氧基、三卤甲基等。在本发明的框架下，所述“取代” 还包括相邻取代基进行环合的情形，尤其是涉及相邻的功能性取代基时，形 成例如内酰胺、内酯、环状酸酐，而且还包括例如为了获得保护基，通过环 合形成缩醛、硫代缩醛、缩醛胺的情形。
“药学上可接受的阳离子盐或复合物(complex)”指这些盐类，例如碱 金属盐(例如钠和钾)、碱土金属盐(例如钙或镁)、铝盐、铵盐以及和有机 胺成的盐，例如甲胺、2-N-吗啉乙醇、二甲胺、三甲胺、乙胺、三乙胺、吗 啉、N-Me-葡萄糖胺、N，N’-双(苯甲基)-1，2-乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、 乙二胺、N-甲基吗啉、哌啶、苄星青霉素(N，N’-二苄基乙二胺)、胆碱、乙 二胺、苯乙苄胺(N-苄基苯乙胺)、二乙胺、哌嗪、氨丁三醇(2-氨基-2-羟 甲基-1，3-丙二醇)、普鲁卡因以及式-NRR’R”所示胺，其中R、R’、R” 独立地是氢、烷基或苄基。
“药学上可接受的盐或复合物”指如下定义的式I化合物的盐或复合 物，它们保留了所需的生物学活性。这些盐的例子包括但不限于与无机酸 (如盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、硝酸等)形成的酸加成盐；与有机酸(如 乙酸、草酸、酒石酸、琥珀酸、苹果酸、富马酸、马来酸、抗坏血酸、苯甲 酸、单宁酸、4，4’-亚甲基双(3-羟基-2-萘甲酸)(pamoic acid)、海藻酸、 聚谷氨酸、萘磺酸、萘二磺酸、和聚半乳糖醛酸)形成的酸加成盐。所述的 化合物也可以本领域人员已知的药学上可接受的季盐给药，特别包括式 -NRR’R”+Z-所示季铵盐，其中R、R’、R”独立地是氢、烷基或苄基，Z是 抗衡离子，包括氯离子、溴离子、碘离子、-O-烷基、甲苯磺酸离子、甲基 磺酸离子、磺酸离子、磷酸离子或羧酸离子(如苯甲酸盐、琥珀酸盐、乙酸 盐、乙醇酸盐、马来酸盐、苹果酸盐、富马酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、抗 坏血酸盐、肉桂酸盐、扁桃酸盐和二苯基乙酸盐)。
“药学活性衍生物”指任何化合物，当它们被给予接受者时能够直接或 间接提供本说明书揭示的活性。
一方面，本发明提供可用于治疗和/或预防选自以下的疾病的式(I)所示 螺衍生物，所述疾病是变态反应性疾病，诸如变应性哮喘、变应性鼻炎、 变应性结膜炎，和炎症性皮肤病，诸如特应性皮炎、接触过敏、变应性接 触性皮炎、慢性荨麻疹/慢性特发性/自身免疫荨麻疹、药物性皮疹(例如中 毒性表皮坏死松解症或Lyell综合征/Stevens-Johnson综合征/药物超敏 综合征)、光照性皮肤病或多形日光疹(例如光照刺激性接触性皮炎、光变 应性接触性皮炎、慢性光化性皮炎)和肌炎、神经退行性疾病，诸如神经 性疼痛，和其它具有炎症性成分的疾病，诸如类风湿性关节炎、多发性硬 化症、骨关节炎和炎症性肠病(IBD)。

一个具体实施方式中，式(I)化合物适合作为CRTH2的调节剂。因此， 本发明化合物也尤其可用于治疗和/或预防由CRTH2活性介导的疾病。所述 治疗涉及哺乳动物(尤其是人)CRTH2的调节。CRTH2调节剂选自CRTH2的 反向激动剂、拮抗剂、部分激动剂和激动剂。
一个具体实施方式中，CRTH2调节剂是CRTH2的反向激动剂。
另一个具体实施方式中，CRTH2调节剂是CRTH2的拮抗剂。
另一个具体实施方式中，CRTH2调节剂是CRTH2的部分激动剂。
另一个具体实施方式中，CRTH2调节剂是CRTH2的激动剂。
式(I)所示衍生物适合用作药物。
式(I)化合物还包括其几何异构体、其光学活性形式如对映体、非对映 体、其外消旋形式，以及其药学上可接受的盐，其中：
R1选自氢、取代或未取代的C1-C6-烷基、取代或未取代的C1-C6-烷氧基、 取代或未取代的卤-C1-C6-烷基、取代或未取代的卤-C1-C6-烷氧基、卤素、取 代或未取代的芳基和取代或未取代的杂芳基，以及
m是选自0、1、2、3或4的整数。
根据一个具体实施方式，R1是卤素或卤-C1-C6-烷氧基。
一个优选的具体实施方式中，R1是氯或氟。
另一个优选的具体实施方式中，R1是三氟甲氧基。
R2是C1-C6-烷基或A。
A选自A1、A2、A3、A4、A5和A6：
←(CH2)n-R4 ←(CH2)n-O-R4
A1              A2             A3

其中每个n是整数，独立地选自0、1、2、3或4；
其中R4选自取代或未取代的C1-C6-烷基、取代或未取代的C2-C6-烯基、 取代或未取代的C2-C6-炔基、取代或未取代的C3-C8-环烷基、取代或未取代 的C3-C8-杂环烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或 未取代的磺酰基胺、取代或未取代的胺、取代或未取代的卤-C1-C6-烷基、取 代或未取代的羟胺和羟基。
R4的例子包括甲基、乙基、丙基、异丙基、乙炔基、丙炔基、环丙基、 环丁基、环戊基、环己基、吡咯烷基、吡唑烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、 二噁烯基、任选取代或稠合的二噁烯基衍生物(如2，3-二氢-苯并[1，4]二 噁烯)、苯基、萘基、吡啶基、咪唑烷基、吡咯基、嘧啶基、喹嗪基、呋喃 基、噻吩基、咪唑基、稠合咪唑基衍生物(如咪唑并吡啶)、噁唑基、异噁 唑基、噻唑基、异噻唑基、咔唑基、1，2，3-三唑基、1，2，4-三唑基、1，2，3- 噁二唑基、1，2，4-噁二唑基、1，3，5-噁二唑基、1，3，4-噁二唑基、四唑基、 1，3，4-三嗪基、1，2，3-三嗪基、苯并呋喃基、异苯并呋喃基、苯并噻吩基、 苯并三唑基、异苯并噻吩基、吲哚基、异吲哚基、任选取代的异吲哚基衍生 物(如异吲哚-1，3-二酮)、3H-吲哚基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并噁 唑基、氧杂环戊基、吡咯烷基、任选取代的吡咯烷基衍生物(如吡咯烷-2，5- 二酮)、吡唑烷基、哌啶基、哌嗪基、吡啶基、咪唑烷基、1，2，4-噁二唑烷 基、1，2，5-噁二唑烷基、1，3，4-噁二唑烷基、异噁唑烷基、喹唑啉基、2，3- 二氮杂萘基、喹喔啉基、噌啉基、1，5-二氮杂萘基、喹啉基、异喹啉基、四 唑基、5，6，7，8-四氢喹啉基、5，6，7，8-四氢异喹啉基、嘌呤基、喋啶基、呫 吨基或苯并喹啉基。
一个具体实施方式中，R2是A1，n是选自1、2、3或4的整数。
一个进一步的具体实施方式中，R2是A1，n＝1。
另一个具体实施方式中，R2是A5，每个n是选自1、2、3或4的整数。
另一个进一步的具体实施方式中，R2是A5，每个n＝2。
另一个进一步的具体实施方式中，R4是取代或未取代的芳基。
另一个进一步的具体实施方式中，R4是取代或未取代的苯基或取代或未 取代的萘基。
另一个具体实施方式中，R4是取代或未取代的杂芳基。
另一个进一步的具体实施方式中，R4是噻唑基、取代或未取代的吡啶或 取代或未取代的喹啉基。
每个R4可任选地被一个或多个基团R6独立地取代。
R3是C1-C6-烷基或B。
B是：
←(CH2)n-R5
其中n是整数，独立地选自0、1、2、3或4；其中：
R5是羧基。
根据一个具体实施方式，R3是B，n是选自1、2、3或4的整数。
一个进一步的具体实施方式中，R3是B、n＝1并且其中R5是羧基。
另一个进一步的具体实施方式中，R3是B、n＝3并且其中R5是羧基。
另一个具体实施方式中，R3是C1-C6-烷基。
另一个进一步的具体实施方式中，R3是甲基。
另一个进一步的具体实施方式中，R3是乙基。
每个R6独立地选自C1-C6-烷基、烷氧基、烷氧基羰基、取代或未取代的 芳基、取代或未取代的芳基C1-C6-烷基、取代或未取代的杂芳基、取代或未 取代的杂芳基C1-C6-烷基、取代或未取代的C3-C8-环烷基、取代或未取代的 C3-C8-杂环烷基、羧基、氰基、卤素、羟基、氨基、氨基羰基、酰胺基、硝 基、硫氧基、磺酰基、磺酰基胺、氨基磺酰基和三卤C1-C6-烷基；
一个具体实施方式中，R6独立地选自C1-C6-烷基、C3-C8-环烷基、酰胺基、 氨基羰基、芳基、杂芳基、氰基、卤素、磺酰基、烷氧基和三卤甲基。
R7是氢或C1-C6-烷基；
T是CH或N；
X是CH2或NH；
每个Y独立地是C(O)或CH2；以及
Z是C(O)或CHR7；
一个具体实施方式中，T是CH。另一个具体实施方式中，X是CH。另一 个具体实施方式中，至少1个Y是C(O)。另一个具体实施方式中，Z是CHR7。
一个优选的具体实施方式中，T和X是CH、Y是C(O)以及Z是CHR7，其 中R7氢。
另一个优选的具体实施方式中，T和X是CH，至少1个Y是C(O)以及 Z是C(O)。
一个具体实施方式中，本发明化合物具有式(I’)：

其中
R1选自氢、取代或未取代的C1-C6-烷基、取代或未取代的C1-C6-烷氧基、 取代或未取代的卤-C1-C6-烷基、取代或未取代的卤-C1-C6-烷氧基、卤素、取 代或未取代的芳基和取代或未取代的杂芳基；以及
m是选自0、1、2、3或4的整数。
一个优选的具体实施方式中，m是1或2。
根据一个具体实施方式，R1是卤素或卤-C1-C6-烷氧基。
一个优选的具体实施方式中，R1是氯或氟。
另一个优选的具体实施方式中，R1是三氟甲氧基。
R2是C3-C6-烷基或A。
A选自A1、A2、A3、A4、A5和A6：
←(CH2)n-R4 ←(CH2)n-O-R4
A1                 A2           A3

其中每个n是整数，独立地选自0、1、2、3或4；
其中R4选自取代或未取代的C2-C6-烷基、取代或未取代的C2-C6-炔基、 取代或未取代的C3-C8-环烷基、取代或未取代的C3-C8-杂环烷基、取代或未 取代的芳基和取代或未取代的杂芳基。
优选的芳基是取代的苯基或取代或未取代的萘基。芳环也可以和环烷基 或杂环烷基稠合。
优选的杂芳基是单环杂芳基，例如噁唑基、噁二唑基、噻唑基、噻二唑 基、呋喃基、吡啶基，或双环杂芳基，例如苯并噻唑基、萘基、喹啉基、吲 哚基、苯并咪唑基、咪唑并吡啶基或苯并三唑基。
一个具体实施方式中，R2是A1，n选自1、2、3或4。
一个进一步的具体实施方式中，R2是A1，n＝1。
另一个具体实施方式中，R2是A5，每个n是选自1、2、3或4的整数。
另一个进一步的具体实施方式中，R2是A5，每个n＝2。
另一个进一步的具体实施方式中，R4是取代的苯基。
另一个具体实施方式中，R4是取代或未取代的杂芳基。
一个具体实施方式中，A是A1，n选自1、2或3以及R4选自取代或未 取代的C2-C6炔基、取代或未取代的C3-C8-环烷基、取代或未取代的C3-C8-杂 环烷基、取代或未取代的芳基和取代或未取代的杂芳基。
另一个具体实施方式中，A选自A2、A3、A4、A5和A6，n选自1、2和 3以及R4选自取代或未取代的C2-C6烷基、取代或未取代的C2-C6炔基、取代 或未取代的C3-C8-环烷基、取代或未取代的C3-C8-杂环烷基、取代或未取代 的芳基和取代或未取代的杂芳基。
每个R4可任选地被一个或多个基团R6独立地取代。
每个R6独立地选自C1-C6-烷基、烷氧基、烷氧基羰基、取代或未取代的 芳基、取代或未取代的芳基C1-C6-烷基、取代或未取代的杂芳基、取代或未 取代的杂芳基C1-C6-烷基、取代或未取代的C3-C8-环烷基、取代或未取代的 C3-C8-杂环烷基、羧基、氰基、卤素、羟基、氨基、氨基羰基、酰氨基、硝 基、硫氧基、磺酰基、磺酰基胺、氨基磺酰基和三卤C1-C6-烷基；
一个具体实施方式中，R6独立地选自C1-C6-烷基、C3-C8-环烷基、酰氨基、 氨基羰基、芳基、杂芳基、氰基、卤素、磺酰基、烷氧基、三卤甲基。
R7是氢或C1-C6-烷基；
R3是B，其中
B是：
←(CH2)n-R5
其中n是独立地选自1、2、3或4的整数；其中
R5是羧基。
根据一个具体实施方式，R3是B，n是选自1、2、3或4的整数。
另一个进一步的具体实施方式中，R3是B、n＝1并且其中R5是羧基。
另一个进一步的具体实施方式中，R3是B、n＝3并且其中R5是羧基。
X是CH2或NH；
每个Y独立地是C(O)或CH2；以及
Z是C(O)或CHR7；
另一个具体实施方式中，X是CH。另一个具体实施方式中，至少1个Y 是C(O)。另一个具体实施方式中，Z是CHR7。
一个优选的具体实施方式中，X是CH、Y是C(O)以及Z是CHR7，其中 R7是氢。
另一个优选的具体实施方式中，X是CH，至少1个Y是C(O)以及Z 是C(O)。
式(I’)化合物还包括其几何异构体、其光学活性形式如对映体、非对 映体、其外消旋形式以及其药学上可接受的盐。
式(I)和式(I’)一个具体的亚组是具有式(Ia)的化合物，其中 R1、R2和R3的定义同上述式(I)和式(I’)。

另一个式(Ia)的亚组是具有式(Ia-1)和(Ia-2)的化合物，其中 R1、R2和R3的定义同上。

作为对映体的式(Ia-1)和(Ia-2)的化合物如下图所示。

对映体A                            对映体B
式(I)和式(I’)另一个具体的亚组是具有式(Ib)的化合物，其中 R1、R2和R3的定义同上述式(I)和式(I’)。

一个式(Ib)的亚组是具有式(Ib-1)和(Ib-2)的化合物，其中R1、 R2和R3的定义同上。

作为对映体的式(Ib-1)和(Ib-2)的化合物如下图所示。

对映体A                            对映体B
式(I)和式(I’)另一个具体的亚组是具有式(Ic)的化合物，其中 R1、R2和R3的定义同上述式(I)和式(I’)。

一个式(Ic)的亚组是具有式(Ic-1)和(Ic-2)的化合物，其中R1、 R2和R3的定义同上。

作为对映体的式(Ic-1)和(Ic-2)的化合物如下图所示。

对映体A                           对映体B
式(I)和式(I’)另一个具体的亚组是具有式(Id)的化合物，其中 R1、R2和R3的定义同上述式(I)和式(I’)。

一个式(Id)的亚组是具有式(Id-1)和(Id-2)的化合物，其中R1、 R2和R3的定义同上。

作为对映体的式(Id-1)和(Id-2)的化合物如下图所示。

对映体A                       对映体B
式(Ia-1)和(Ia-2)、(Ib-1)和(Ib-2)、(Ic-1)和(Ic-2)及 (Id-1)和(Id-2)的纯对映体以及外消旋混合物，都在本发明的范围之内。 其非对映体也在本发明的范围之内。
优选的式(I’)化合物选自：
[5-氯-1’-[(2-甲基-1，3-噻唑-4-基)甲基]-2，2’，5’-三氧螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-1’-(2，4-二氯苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-2，2’，5’-三氧-1’-(喹啉-2-基甲基)螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-1’-(4-氰基苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-1’-(3-氯苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-1’-(3，4-二氯苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-1’-(2-氟苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-1’-(4-氟苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-1’-(1-萘基甲基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-2，2’，5’-三氧-1’-(3-苯氧基苄基)螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-1’-(3-氟苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸
(1’-苄基-5-氯-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基) 乙酸
[5-氯-1’-(4-氯苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-1’-(4-甲氧基苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-1’-(3-甲氧基苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-1’-(2，3-二氢-1，4-苯并二噁烯-2-基甲基)-2，2’，5’-三氧螺 [吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-2，2’，5’-三氧-1’-(吡啶-2-基甲基)螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-2，2’，5’-三氧-1’-{[5-(三氟甲基)-2-呋喃基]甲基}螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-1’-(4-甲基苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-2，2’，5’-三氧-1’-[3-(三氟甲基)苄基]螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-1’-(2-萘基甲基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-2，2’，5’-三氧-1’-(1-苯乙基)螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-2，2’，5’-三氧-1’-(2-苯乙基)螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-1’-(咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基甲基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-2，2’，5’-三氧-1’-[(2E)-3-苯基丙-2-炔-1-基]螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-2，2’，5’-三氧-1’-[4-(三氟甲基)苄基]螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸
4-(1’-苄基-6-氯-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基) 丁酸
[5-氯-1’-(2-乙氧基乙基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸
[1’-[2-(苄氧基)乙基]-5-氯-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-2，2’，5’-三氧-1’-(2-苯氧基乙基)螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-2，2’，5’-三氧-1’-(3-苯基丙-2-炔-1-基)螺[吲哚-3，3’-吡 咯烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-1’-[(1-甲基-1H-咪唑-2-基)甲基]-2，2’，5’-三氧螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸
4-[5-氯-1’-(4-氟苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]丁酸
4-[5-氯-1’-(4-氯苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]丁酸
4-[5-氯-2，2’，5’-三氧-1’-[4-(三氟甲基)苄基]螺[吲哚-3，3’-吡 咯烷]-1(2H)-基]丁酸
[1’-苄基-2，2’，5’-三氧-5-(三氟甲氧基)螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸
[1’-(4-甲氧基苄基)-2，2’，5’-三氧-5-(三氟甲氧基)螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸
[1’-(3-氟苄基)-2，2’，5’-三氧-5-(三氟甲氧基)螺[吲哚-3，3’-吡 咯烷]-1(2H)-基]乙酸
[1’-(2-氟苄基)-2，2’，5’-三氧-5-(三氟甲氧基)螺[吲哚-3，3’-吡 咯烷]-1(2H)-基]乙酸
[2，2’，5’-三氧-5-(三氟甲氧基)-1’-[3-(三氟甲基)苄基]螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸
[1’-(1-萘基甲基)-2，2’，5’-三氧-5-(三氟甲氧基)螺[吲哚-3，3’- 吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸
[1’-(4-氯苄基)-2，2’，5’-三氧-5-(三氟甲氧基)螺[吲哚-3，3’-吡 咯烷]-1(2H)-基]乙酸
[1’-(4-氟苄基)-2，2’，5’-三氧-5-(三氟甲氧基)螺[吲哚-3，3’-吡 咯烷]-1(2H)-基]乙酸
4-[5-氯-1’-(4-甲氧基苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]丁酸
4-[5-氯-1’-(2-氟苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]丁酸
[(3S)-1’-苄基-5-氯-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸
[(3R)-1’-苄基-5-氯-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸
[6-氯-1’-(2-氟苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸
[6-氯-1’-(3-氟苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸
[6-氯-1’-(4-氟苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸
4-[5-氯-2，2’，5’-三氧-1’-(2-苯乙基)螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]丁酸
[5-氯-1’-(3，5-二氯苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-2，2’，5’-三氧-1’-(4-苯氧基苄基)螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-1’-(2-甲氧基苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-1’-[4-(甲基磺酰基)苄基]-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡 咯烷]-1(2H)-基]乙酸
[1’-[4-(氨基羰基)苄基]-5-氯-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-1’-(3-氰基苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-1’-[(5-甲基异噁唑-3-基)甲基]-2，2’，5’-三氧螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸
[1’-(1，3-苯并噻唑-2-基甲基)-5-氯-2，2’，5’-三氧螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-1’-[(5-氯-2-噻吩)甲基]-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡 咯烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-1’-[(5-氯-1，2，4-噻二唑-3-基)甲基]-2，2’，5’-三氧螺[吲 哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-2，2’，5’-三氧-1’-[(2-苯基-1，3-噻唑-4-基)甲基]螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-1’-(2-氯-4-氟苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-1’-(2，5-二氯苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸
[1’-[4-(乙酰氨基)苄基]-5-氯-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡 咯烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-1’-[(6-氯吡啶-3-基)甲基]-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’- 吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-1’-(1H-吲哚-3-基甲基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-1’-(5-氯-2-氟苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-2，2’，5’-三氧-1’-(1，3-噻唑-4-基甲基)螺[吲哚-3，3’-吡 咯烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-1’-[(4-氯吡啶-3-基)甲基]-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’- 吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-2，2’，5’-三氧-1’-(吡啶-3-基甲基)螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-1’-[(3，5-二甲基异噁唑-4-基)甲基]-2，2’，5’-三氧螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸
[1’-[(5-叔丁基-1，2，4-噁二唑-3-基)甲基]-5-氯-2，2’，5’-三氧螺 [吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-1’-[(5-环丙基-1，3，4-噻二唑-2-基)甲基]-2，2’，5’-三氧螺 [吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-1’-[(4-甲氧基-3，5-二甲基吡啶-2-基)甲基]-2，2’，5’-三氧 螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-1’-[(4，6-二氯吡啶-3-基)甲基]-2，2’，5’-三氧螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-2，2’，5’-三氧-1’-(2-噻吩基甲基)螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-1’-[(3，4-二甲氧基吡啶-2-基)甲基]-2，2’，5’-三氧螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-1’-(异喹啉-1-基甲基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-2，2’，5’-三氧-1’-[(5-苯基-1，2，4-噁二唑-3-基)甲基]螺 [吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸
1’-苄基-5-氯-1-(1H-四唑-5-基甲基)-2’H，5’H-螺[吲哚-3，3’-吡 咯烷]-2，2’，5’(1H)-三酮
(3R)-[5-氯-1’-(3-氯苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸
(3S)-[5-氯-1’-(3-氯苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸
(3R)-[5-氯-1’-(3-甲氧基苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡 咯烷]-1(2H)-基]乙酸
(3S)-[5-氯-1’-(3-甲氧基苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡 咯烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-1’-(2，4-二氟苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-1’-(1，3-噁唑-2-基甲基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡 咯烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-1’-[(4-甲氧基-3-甲基吡啶-2-基)甲基]-2，2’，5’-三氧螺 [吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-1’-{[2-(4-氯苯基)-1，3-噻唑-4-基]甲基}-2，2’，5’-三氧螺 [吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-1’-{[5-(4-甲氧基苯基)-1，2，4-噁二唑-3-基]甲 基}-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-1’-[(1-甲基-1H-1，2，3-苯并三唑-5-基)甲基]-2，2’，5’-三 氧螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-1’-(3-呋喃基甲基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-1’-(2-氯-5-氟苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-1’-(2，5-二氟苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-1’-(2，3-二氟苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-1’-(3，5-二氟苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]- 1(2H)-基]乙酸
[5-氯-1’-(3，4-二氟苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]- 1(2H)-基]乙酸
[5-氯-1’-[(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)甲基]-2，2’，5’-三氧螺[吲 哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-1’-(3-氟-甲氧基苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-1’-(3-氯-5-氟苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-1’-[(5-甲基-3-苯基异噁唑-4-基)甲基]-2，2’，5’-三氧螺 [吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-1’-[(3-甲基-5-苯基异噁唑-4-基)甲基]-2，2’，5’-三氧螺 [吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-1’-{[2-(3-氯苯基)-1，3-噻唑-基]甲基}-2，2’，5’-三氧螺 [吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-1’-(2-氟苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸
[5’-氯-1-(5-氯-2-氟苄基)-2，2’，5-三氧螺[咪唑烷-4，3’-吲 哚]-1’(2’H)-基]乙酸
[5’-氯-1-[(5-甲基-3-苯基异噁唑-4-基)甲基]-2，2’，5-三氧螺[咪 唑烷-4，3’-吲哚]-1’(2’H)-基]乙酸
(1-苄基-5’-氯-2，2’，5-三氧螺[咪唑烷-4，3’-吲哚]-1’(2’H)-基) 乙酸
[5’-氯-1-(2-氟苄基)-2，2’，5-三氧螺[咪唑烷-4，3’-吲 哚]-1’(2’H)-基]乙酸
(3R)-[5-氯-1’-(2-氟苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸
(3S)-[5-氯-1’-(2-氟苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸
(3S)-[5-氯-1’-(2-氟-5-氯苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡 咯烷]-1(2H)-基]乙酸
(3R)-[5-氯-1’-(2-氟-5-氯苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡 咯烷]-1(2H)-基]乙酸
(1’-苄基-5-氯-2，5’-二氧螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基)乙酸
[5-氯-1’-[(3-甲基-5-苯基异噁唑-4-基)甲基]-2，5’-二氧螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-1’-(2-氟苄基)-2，5’-二氧螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基] 乙酸
[5-氯-1’-(5-氯-2-氟苄基)-2，5’-二氧螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸
[5-氯-1’-[(5-甲基-3-苯基异噁唑-4-基)甲基]-2，2’-二氧螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸
优选的含有例如羧基残基的式(I)和(I’)和式(Ia、Ib、Ic和Id) 亚组化合物的药学上可接受的阳离子盐或复合物是药学上可接受的碱金属 盐、碱土金属盐、铝盐、铵盐以及和有机胺形成的盐。
第二方面，本发明提供用作药物的式(I)或(I’)的螺衍生物。一个 优选的具体实施方式中，这些螺衍生物是式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)亚组 的化合物。另一个优选的具体实施方式中，化合物具有式(Ia-1)、(Ia-2)、 (Ib-1)、(Ib-2)、(Ic-1)、(Ic-2)、(Id-1)或(Id-2)。
另一个具体实施方式中，用作药物的螺衍生物选自上面列出的化合物和 以下化合物：
(1’-苄基-5-氟-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基) 乙酸
4-(1’-烯丙基-5-氯-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)- 基)丁酸
[5-氯-1’-(2-甲氧基乙基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸
4-(1’-苄基-5-氯-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基) 丁酸
(1’-苄基-5-甲氧基-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)- 基)乙酸
[5-氟-1’-[(2-甲氧基乙氧基)甲基]-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’- 吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸
4-(1’-烯丙基-5-氟-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)- 基)丁酸
4-(1’-苄基-5-氟-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基) 丁酸，和
[5-氯-1’-[2-(二甲基氨基)-2-氧乙基]-2，2’，5’-三氧螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸。
第三方面，本发明提供式(I)、(I’)或其亚组式(Ia、Ib、Ic、Id)所 示螺衍生物在制备治疗和/或预防选自以下的疾病的药物中的应用，所述疾 病是变态反应性疾病，诸如变应性哮喘、变应性鼻炎、变应性结膜炎，和 炎症性皮肤病，诸如特应性皮炎、接触过敏、变应性接触性皮炎、慢性荨 麻疹/慢性特发性/自身免疫荨麻疹)、药物性皮疹(例如中毒性表皮坏死松 解症或Lyell综合征/Stevens-Johnson综合征/药物超敏综合征)、光照性 皮肤病或多形日光疹(例如光照刺激性接触性皮炎、光变应性接触性皮炎、 慢性光化性皮炎)和肌炎、神经退行性疾病(例如神经性疼痛)和其它具有 炎症性成分的疾病，诸如类风湿性关节炎、多发性硬化症、骨关节炎和炎症 性肠病(IBD)，以及其它与CTRH2活性有关的疾病。一个优选的具体实施方 式中，螺衍生物选自式(Ia-1)、(Ia-2)、(Ib-1)、(Ib-2)、(Ic-1)、(Ic-2)、 (Id-1)或(Id-2)。
第四方面，本发明提供通过给予患者式(I)、(I’)或其亚组式(Ia、 Ib、Ic、Id)所示螺衍生物治疗和/或预防选自以下的疾病的方法，所述疾 病是变态反应性疾病，诸如变应性哮喘、变应性鼻炎、变应性结膜炎，和炎 症性皮肤病，诸如特应性皮炎、接触过敏、变应性接触性皮炎、慢性荨麻疹 /慢性特发性/自身免疫荨麻疹)、药物性皮疹(例如中毒性表皮坏死松解症 或Lyell综合征/Stevens-Johnson综合征/药物超敏综合征)、光照性皮肤 病或多形日光疹(例如光照刺激性接触性皮炎、光变应性接触性皮炎、慢性 光化性皮炎)和肌炎、神经退行性疾病(例如神经性疼痛)和其它具有炎症 性成分的疾病，诸如类风湿性关节炎、多发性硬化症、骨关节炎和炎症性 肠病(IBD)，以及其它与CTRH2活性有关的疾病。一个优选的具体实施方 式中，螺衍生物选自式(Ia-1)、(Ia-2)、(Ib-1)、(Ib-2)、(Ic-1)、(Ic-2)、 (Id-1)或(Id-2)。
这里所用的术语“预防”应当理解为部分或完全预防、抑制、缓解或逆 转变态反应性疾病或炎症性皮炎的一种或多种症状或原因。
本发明化合物可与常规使用的助剂、载体、稀释剂或赋形剂一起放入药 物组合物的剂型及其单位剂量中，其剂型可为固体(如药片或充填的胶囊) 或液体(如溶液、悬浮液、乳液、酏剂、或充填了这些的胶囊)，用于口服 应用；或者是灭菌的可注射溶液，用于肠胃外给药(包括皮下给药)。这样 的药物组合物和其单位剂型可以常规的比例包含各成分，含有或不含有其它 活性成分，而且这样的单位剂型可含有与所要使用的日剂量范围相当的适当 有效量的任何活性成分。
第五方面，本发明提供含有式(I)、(I’)或其亚组式(Ia、Ib、Ic 和Id)所示螺衍生物的药物组合物。一个优选的具体实施方式中，药物组 合物含有式(Ia-1)、(Ia-2)、(Ib-1)、(Ib-2)、(Ic-1)、(Ic-2)、(Id-1)或 (Id-2)所示螺衍生物和药学上可接受的赋形剂或载体。
通常以药物组合物形式给予本发明的化合物。所述药物组合物可用制药 行业熟知的方法制备，包含至少一种活性化合物。通常，本发明化合物以药 学有效量给药。实际给予的化合物的量一般由医生根据相关的情况决定，包 括要治疗的疾病、选择的给药途径、实际给予的化合物、每个病人的年龄、 体重和反应、病人症状的严重程度等。
本发明药物组合物可通过多种途径给予，包括口服、直肠、透皮、皮下、 静脉内、肌肉内和鼻内。口服给药的组合物可采用大液体溶液或悬浮液的形 式，或大粉剂的形式。但是更为通常地，组合物以单位剂量的形式呈现，以 利于精确给药。术语“单位剂型”指物理上分离的单位，适合为人或其它哺 乳动物作为单一剂量使用，每单位含有计算好的能产生所需治疗效果的预定 量的活性物质，以及合适的药物赋形剂。典型的单位剂型包括液体组合物的 预充填的、预计量的安瓿或注射器，或固体组合物的丸剂、片剂、胶囊等。 在这样的组合物中，根据本发明的取代的亚甲基酰胺衍生物通常是小量组分 (约0.1-50％重量或优选约1-40％重量)，其余的是各种赋形剂或载体以及有 助于形成所需剂型的加工助剂。
适合于口服的液体形式可包括合适的水性或非水性赋形剂，含有缓冲 剂、悬浮和分散剂、色料、调味剂等。固体形式可包括例如任何以下的成分 或类似性质的化合物：粘合剂(如微晶纤维素、黄芪胶或明胶)、赋形剂(如 淀粉或乳糖)、崩解剂(如海藻酸、Primogel，或玉米淀粉)、润滑剂(如硬 脂酸镁)、助流剂(如胶体二氧化硅)、甜味剂(如蔗糖或糖精)、或调味剂 (如薄荷、水杨酸甲酯或橙味剂)。
可注射组合物通常基于灭菌的可注射盐水或磷酸盐缓冲的盐水或本领 域已知的其它可注射的载体。如上所述，式(I)所示螺衍生物在这样的组合 物中通常是小量成分，常常是在0.05-10％重量的范围，其余的是可注射的 载体等。
上述用于口服或可注射组合物的成分只是代表性的。进一步的材料和加 工技术等可参见雷明顿药物科学(Remington’s Pharmaceutical Sciences) (第20版，2000，马克(Marck)出版公司，美国宾夕法尼亚)的第五部分， 其结合在此引为参考。
本发明化合物也可以持续释放的形式给药或从持续释放药物输送系统 给药。代表性的持续释放材料的叙述也可见上述雷明顿药物科学 (Remington’s Pharmaceutical Sciences)。
第六方面，本发明提供式(I)或(I’)或其亚组式(Ia、Ib、Ic、Id) 所示化合物的合成方法。一个优选的具体实施方式中，螺衍生物选自式 (Ia-1)、(Ia-2)、(Ib-1)、(Ib-2)、(Ic-1)、(Ic-2)、(Id-1)或(Id-2)。
本发明中示例的螺衍生物可以采用下面的一般方法和步骤从容易获得 的起始原料制备。应该认识到，虽然其中给出了典型的或优选的实验条件 (即反应温度、时间、试剂的摩尔数、溶剂等)，但其它的实验条件也是可以 使用的，除非另有说明。最佳反应条件因所用具体试剂或溶剂而异，但这样 的条件可被本领域技术人员用常规的优化程序确定。
流程1a-1c描绘了获得式(Ia)化合物的一般合成方法。其中，通式 Ia所示螺-二氢吲哚酮衍生物(其中取代基R1、R2和R3的定义同上)，可以 从定制或可商购的靛红VIII开始，在一个例子中按照两种不同的合成方案 (标记为路线A和B)，通过6步化学反应制得；或者从定制或可商购的氧化 吲哚XIX制得，如下面的流程1a-1c以及流程2-6所示：
流程1a

第一种方法，在合适的碱(如哌啶)存在下，将靛红衍生物VIII(其 中R1的定义同上)和氰基乙酸甲酯在回流条件下进行肯诺范捷 (Knoevenagel0反应，获得相应的二氢吲哚酮衍生物VII。以甲醇作为溶剂， 用合适的氰化物(例如氰化钾、氰化钠或丙酮氰醇)室温下过夜或者回流条 件下更短时间处理二氢吲哚酮衍生物VII后获得中间体化合物VI。两步可 顺序进行或者合并成一锅法进行。酸性条件下，优选在氯化氢和甲醇混合物 中，将中间体化合物VI环合后分离到螺二氢吲哚酮衍生物V。该反应可在 室温下于溶剂(如甲醇、乙醇或异丙醇)中进行，反应时间取决于化合物 VI自身的反应性，也可以使用本领域技术人员熟知的标准条件，采用传统 的加热方法进行，如下面流程2所示：
流程2

按照两种不同的方法获得螺二氢吲哚酮衍生物II。第一种方法是如流 程3所示的路线A，从螺二氢吲哚酮衍生物V开始，连续烷基化后分离到螺 二氢吲哚酮衍生物II。在合适的烷基化试剂(如烷基氯、烷基溴、烷基碘 或甲磺酸烷基酯，其中R3的定义同上)存在下，采用合适的碱(如氢化钠) 于DMF中，在二氢吲哚酮环的氮原子上先发生烷基化，获得中间体螺二氢吲 哚酮衍生物IV。然后，在合适的碱(如碳酸钾)存在下及合适的溶剂(如 N，N-二甲基甲酰胺)中，室温下或通过传统的加热方法或使用微波技术，用 烷基化试剂(如烷基氯、烷基溴、烷基碘或甲磺酸烷基酯，其中R2的定义同 上)处理螺二氢吲哚酮中间体IV。这2步过后，使用本领域技术人员熟知 的标准条件分离到螺二氢吲哚酮衍生物II，如下面流程3所示：
流程3
路线A

第二种方法是流程4所示的路线B，从螺二氢吲哚酮衍生物V开始，连 续烷基化后分离到螺二氢吲哚酮衍生物II。在合适的烷基化试剂(如烷基 氯、烷基溴、烷基碘或甲磺酸烷基酯，其中R2的定义同上)存在下，采用合 适的碱(优选碳酸钾)于DMF中，先在琥珀酰亚胺环的氮原子上专属地发生 烷基化，获得中间体螺二氢吲哚酮衍生物III。然后，在合适的碱(如碳酸 钾、叔丁醇钾或氢化钠)存在下于溶剂(如无水N，N-二甲基甲酰胺或四氢 呋喃)中，优选在室温下，可用各种亲核试剂(如烷基氯、烷基溴、烷基碘 或甲磺酸烷基酯)处理螺二氢吲哚酮衍生物中间体III。这2步过后，使用 本领域技术人员熟知的标准条件，分离到螺二氢吲哚酮衍生物II，如下面 流程3所示，两步也可以采用一锅法进行。
流程4
路线B

关于路线B的另一方面，是使用丙烯酸叔丁酯作为烷基化试剂获得螺二 氢吲哚酮衍生物II。此时，可在合适的碱(如氢化钠、叔丁醇钾或碳酸钾) 存在下于无水溶剂(如四氢呋喃或DMF)中，室温条件下，用丙烯酸叔丁酯 处理螺二氢吲哚酮中间体III，使用本领域技术人员熟知的标准条件，快速 层析技术纯化后获得螺二氢吲哚酮衍生物II，如下面流程5所示：
流程5
路线B

最后，如流程6所示，可用各种酸(如三氟乙酸或氯化氢)处理式Ia 的螺二氢吲哚酮衍生物，进行叔丁酯衍生物II脱保护，获得预期的螺二氢 吲哚酮衍生物Ia。使用本领域技术人员熟知的标准条件，该反应可于各种 温度下在各种溶剂(如二氯甲烷、二噁烷或四氢呋喃)中进行。
流程6

流程1b描绘了获得式(Ia)化合物的第二种一般方法。其中，通式Ia 所示螺二氢吲哚酮衍生物(其中取代基R1、R2和R3的定义同上)，也可以从 定制或可商购的靛红VIII开始，通过6步化学反应制得，如下面流程1b所 示：
流程1b

一个更具体的方法中，在合适的烷基化试剂(如烷基氯、烷基溴、烷基 碘或甲磺酸烷基酯，其中R3的定义同上)存在下，采用合适的碱(优选碳酸 钾)于DMF中，对靛红衍生物VIII(其中R1的定义同上)进行烷基化，获 得相应的靛红衍生物VIIIb。在合适的碱(如哌啶)存在下，在回流条件下， 与氰基乙酸甲酯进行Knoevenagel缩合后获得二氢吲哚酮衍生物VIIb。在 合适的碱(如碳酸钾)存在下于溶剂(如四氢呋喃或甲醇)中，采用传统的 加热方法，优选用丙酮氰醇处理二氢吲哚酮衍生物VIIb后分离到中间体衍 生物VIb。甲醇作为溶剂，回流条件下也可使用无机氰化物(如氰化钾或氰 化钠)。使用本领域技术人员熟知的传统加热方法，在酸性条件下(优选氯 化氢和甲醇混合物)，中间体衍生物VIb环合后获得螺二氢吲哚酮衍生物IV。 在合适的烷基化试剂(如烷基氯、烷基溴、烷基碘或甲磺酸烷基酯，其中 R2的定义同上)存在下，采用合适的碱(如碳酸钾或叔丁醇钾)于DMF中， 对螺二氢吲哚酮衍生物IV进行烷基化，分离到中间体螺二氢吲哚酮化合物 II。
最后，如流程1b所示，用本领域技术人员熟知的路易斯(Lewis)酸(如 三甲基碘硅烷)、碱(如四丁基氢氧化铵)处理烷基酯衍生物II，或者在该 技术领域公知的酶促条件下处理烷基酯衍生物II，获得式(Ia)所示螺二 氢吲哚酮衍生物。
流程1c描绘了获得式(Ia)化合物的第三种一般方法。其中，通式Ia 所示螺-二氢吲哚酮衍生物(其中取代基R1、R2和R3的定义同上)，也可以从 定制或可商购的氧化吲哚XIX开始，通过6-7步化学反应制得，如下面流程 1c所示：
流程1c

一个更具体的方法中，在合适的碱(如三乙胺)存在下，氧化吲哚衍生 物XIX(其中R1的定义同上)和氯甲酸乙酯反应，获得相应的衍生物XX。用 DMAP于DMF中进一步处理，碳酸酯进行重排，获得相应的衍生物XXVI。在 合适的烷基化试剂(如烷基氯、烷基溴、烷基碘或甲磺酸烷基酯，其中R3 的定义同上)存在下，用合适的碱(优选DBU)于N，N-二甲基甲酰胺或四氢 呋喃中，室温或回流条件下，对衍生物XXVI的3-位进行烷基化，获得双烷 基化二氢吲哚酮衍生物XXVII。用各种酸(如三氟乙酸或氯化氢)处理，进 行叔丁酯衍生物XXVII脱保护，分离到相应的中间体羧酸XXVIII。使用本 领域技术人员熟知的标准条件，该反应可于各种温度下在各种溶剂(如二氯 甲烷、二噁烷或四氢呋喃)中进行。或者，也可以采用本领域技术人员熟知 的脂肪酶完成脱保护。室温或回流条件下，在合适的伯烷基胺(其中R2的定 义同上)存在下，羧酸XXVIII和1，1’-羰基二咪唑于四氢呋喃中反应，形 成螺二氢吲哚酮系统III。然后，在合适的碱(如碳酸钾、叔丁醇钾或氢化 钠)存在下于溶剂(如无水N，N-二甲基甲酰胺或四氢呋喃)中，优选在室 温下或通过传统的加热方法或使用微波技术，可用各种亲核试剂(如烷基 氯、烷基溴、烷基碘或甲磺酸烷基酯，其中R3的定义同上)处理螺二氢吲哚 酮衍生物中间体III，获得螺二氢吲哚酮衍生物Ia或II。最后，如流程1c 所示，可用各种酸(如三氟乙酸或氯化氢)处理叔丁酯衍生物II，进行脱 保护，获得预期的螺二氢吲哚酮衍生物Ia。使用本领域技术人员熟知的标 准条件，该反应可于各种温度下在各种溶剂(如二氯甲烷、二噁烷或四氢呋 喃)中进行。
流程7a和7b描绘了获得式(Ib)化合物的其它几种一般合成方法。其 中，根据Ib所示螺-二氢吲哚酮衍生物(其中取代基R1、R2和R3的定义同上)， 可以从定制或可商购的靛红VIII开始，按照下面流程7a和7b所示的合成 方案，通过4步化学反应制得。
一个更具体的方法中，在乙醇/水作为溶剂存在下，将靛红衍生物VIII (其中R1的定义同上)与碳酸铵和氰化钾进行反应，生成乙内酰脲衍生物IX。 连续烷基化后分离到螺二氢吲哚酮化合物XI。由于酰亚胺NH的酸性比任何 一个酰胺的酸性大，选择性烷基化能够进行，在烷基化试剂(如烷基氯、烷 基溴、烷基碘或甲磺酸烷基酯，其中R2的定义同上)存在下，用合适的碱(如 叔丁醇钾或碳酸钾)于DMF中，获得中间体螺二氢吲哚酮化合物X。然后， 在合适的碱(如碳酸钾或氢化钠)存在下于溶剂(如无水N，N-二甲基甲酰 胺或四氢呋喃)中，室温下或通过传统的加热方法或使用微波技术，可用各 种亲电试剂(如烷基氯、烷基溴、烷基碘或甲磺酸烷基酯)处理螺二氢吲哚 酮中间体X。使用本领域技术人员熟知的标准条件，这2步过后分离到螺二 氢吲哚酮衍生物XI，如下面流程7a所示。
最后，如流程7a所示，可用各种酸(如三氟乙酸或氯化氢)处理式Ib 的螺二氢吲哚酮衍生物，进行叔丁酯衍生物XI脱保护，获得预期的螺二氢 吲哚酮衍生物Ib。使用本领域技术人员熟知的标准条件，该反应可于各种 温度下在各种溶剂(如二氯甲烷、二噁烷或四氢呋喃)中进行。
流程7a

或者，在合适的烷基化试剂(如烷基氯、烷基溴、烷基碘或甲磺酸烷基 酯，其中R3的定义同上)存在下，采用合适的碱(优选碳酸钾)于DMF中， 将靛红衍生物VIII(其中R1的定义同上)进行烷基化，获得相应的靛红衍 生物VIIIb。在乙醇/水作为溶剂存在下，靛红衍生物VIIIb进一步与碳酸 铵和氰化钾进行反应，生成乙内酰脲衍生物IXb。合适的烷基化试剂(如烷 基氯、烷基溴、烷基碘或甲磺酸烷基酯，其中R2的定义同上)存在下，采用 合适的碱(优选碳酸钾)于DMF中，进行烷基化后分离到螺二氢吲哚酮化合 物XI。
最后，如流程7b所示，可用各种酸(如三氟乙酸或氯化氢)处理式Ib 的螺二氢吲哚酮衍生物，进行叔丁酯衍生物XI脱保护，获得预期的螺二氢 吲哚酮衍生物Ib。使用本领域技术人员熟知的标准条件，该反应可于各种 温度下在各种溶剂(如二氯甲烷、二噁烷或四氢呋喃)中进行。
流程7b

流程8描绘了获得式(Ic)化合物的另一种一般合成方法。其中，根据 通式Ic的螺-二氢吲哚酮衍生物(其中取代基R1、R2和R3的定义同上)，也 可以从定制制造的衍生物VII(流程1、2)开始，按照下面流程8所示的合 成方案，通过8步化学反应制得。
一个更具体的方法中，在哌啶作为碱存在下，衍生物VII(其中R1的定 义同上)和硝基甲烷反应，获得相应的衍生物XII。再经过2步后分离到螺 二氢吲哚酮化合物XIV。用氢氧化钠或钾于甲醇中水解酯衍生物XII，获得 合成中间体XIII，进一步于高沸点溶剂(如二甲基甲酰胺)中加热至160 度脱羧。如同实验部分的描述，析出和水洗过程后分离到衍生物XIV。用氯 化钯、极大过量的乙酰胺在四氢呋喃-水混合物中进一步处理衍生物XIV， 获得相应的伯酰胺衍生物XV。伯酰胺衍生物XV和锌在乙酸中进行反应，硝 基还原成伯胺，随后自身环合获得三环衍生物XVI，形成吡咯烷酮环。连续 烷基化后分离到螺二氢吲哚酮化合物XVIII。在合适的烷基化试剂(如烷基 氯、烷基溴、烷基碘或甲磺酸烷基酯，其中R3的定义同上)存在下，采用合 适的碱(如叔丁醇钾)于DMF中，使二氢吲哚酮环的氮原子先发生烷基化， 获得中间体螺二氢吲哚酮衍生物XVII。然后，在合适的碱(如碳酸钾)存 在下，在合适的溶剂(如N，N-二甲基甲酰胺或四氢呋喃)中，室温下或通 过传统的加热方法或使用微波技术，用烷基化试剂(如烷基氯、烷基溴、烷 基碘或甲磺酸烷基酯，其中R2的定义同上)处理螺二氢吲哚酮中间体XVII。 使用本领域技术人员熟知的标准条件，这2步过后分离到螺二氢吲哚酮衍生 物XVIII，如下面流程8所示。
最后，如流程8所示，可用各种酸(如三氟乙酸或氯化氢)处理式Ic 所示螺二氢吲哚酮衍生物，进行叔丁酯衍生物XVIII脱保护，获得预期的螺 二氢吲哚酮衍生物Ic。使用本领域技术人员熟知的标准条件，该反应可于 各种温度下在各种溶剂(如二氯甲烷、二噁烷或四氢呋喃)中进行。
流程8

流程9描绘了获得式(Id)化合物的另一种方法。其中，通式Id所示 螺-二氢吲哚酮衍生物(其中取代基R1、R2和R3的定义同上)，也可从市售 2-羟基吲哚衍生物XIX开始，按照下面流程9所示的合成方案，通过7步化 学反应制得。
一个更具体的方法中，在三乙胺作为碱存在下，衍生物XIX(其中R1的 定义同上)和氯甲酸乙酯或苄酯反应，获得相应的衍生物XX。甲醇中用氨进 一步处理，碳酸酯脱保护获得相应的衍生物XXI。氢化钠存在下于二甲基甲 酰胺中，将衍生物XXI和异氰酸2-溴乙基酯反应，获得相应的三环衍生物 XXII，形成吡咯烷酮环。当氨基甲酸苄酯或氨基甲酸乙酯作为保护基时，分 别用氧化铂于二甲基甲酰胺中，氢气压下或氢氧化钾于乙醇-水中完成氨基 甲酸酯保护基的裂解。这些步骤过后分离到衍生物XIII。连续烷基化后分 离到螺二氢吲哚酮化合物XXV。在合适的烷基化试剂(如烷基氯、烷基溴、 烷基碘或甲磺酸烷基酯，其中R3的定义同上)存在下，采用合适的碱(如叔 丁醇钾)于DMF中，使二氢吲哚酮环的氮原子先发生烷基化，获得中间体螺 二氢吲哚酮化合物XXIV。然后，在合适的碱(如氢化钠或叔丁醇钾)存在 下，合适的溶剂(如N，N-二甲基甲酰胺或四氢呋喃)中，优选在室温下， 用烷基化试剂(如烷基氯、烷基溴、烷基碘或甲磺酸烷基酯，其中R2的定义 同上)处理螺二氢吲哚酮中间体XVIV。使用本领域技术人员熟知的标准条 件，这2步过后分离到螺二氢吲哚酮衍生物XXV，如下面流程9所示。
最后，如流程9所示，可用各种酸(如三氟乙酸或氯化氢)处理式Id 所示螺二氢吲哚酮衍生物，进行叔丁酯衍生物XXV脱保护，获得预期的螺二 氢吲哚酮衍生物Id。使用本领域技术人员熟知的标准条件，该反应可于各 种温度下在各种溶剂(如二氯甲烷、二噁烷或四氢呋喃)中进行。
流程9

下列缩写所指的定义如下：
min(分钟)、hr(小时)、g(克)、MHz(兆赫兹)、ml(毫升)、mmol(毫 摩尔)、mM(毫摩尔浓度)、RT(室温)、AcNH2(乙酰胺)、AcOH(乙酸)、ATP (三磷酸腺苷)、BSA(牛血清白蛋白)、Bu4NOH(四丁基氢氧化铵)、CDI(1，1’- 羰基二咪唑)、DBU(1，8-二氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯)、DCM(二氯甲烷)、 DIPEA(二异丙基乙胺)、DMAP(4-二甲氨基吡啶)、DMSO(二甲基亚砜)、DMF (N，N’-二甲基甲酰胺)、CH3NO2(硝基甲烷)、CsCO3(碳酸铯)、cHex(环己 烷类)、Et3N(三乙胺)、EtOAc(乙酸乙酯)、EtOH(乙醇)、HCl(氯化氢)、 K2CO3(碳酸钾)、NaI(碘化钠)、KCN(氰化钾)、MeOH(甲醇)、MgSO4(硫 酸镁)、NH3(氨)、NaH(氢化钠)、NaHCO3(碳酸氢钠)、NH4Cl(氯化铵)、 NH4(CO3)2(碳酸铵)、TEA(三乙胺)、TFA(三氟乙酸)、THF(四氢呋喃)、 tBuOK(叔丁醇钾)、PdCl2(二氯化钯)、PetEther(石油醚)、PtO2(氧化铂)、 TBME(叔丁基甲基醚)、TMSI(三甲基碘硅烷)、Zn(锌粉)、rt(室温)、HPLC (高效液相色谱)、FC(硅胶快速层析)、MS(质谱)、NMR(核磁共振)、PBS(磷 酸盐缓冲液)、SPA(亲近闪烁分析)、TLC(薄层色谱)、UV(紫外)。
如果上述的一般合成方法还不能用来得到式(I)化合物和/或合成式 (I)化合物所需要的中间体，应使用本领域技术人员已知的合适的制备方 法。一般，各个具体的式(I)化合物的合成路线取决于每个分子的具体取 代基以及所需的中间体是否容易得到；这些因素是本领域技术人员所熟知 的。所有保护和脱保护的方法，参见J.考新斯基(Kocienski)的“保护 基团(Protecting Groups)”(乔治西门弗来斯托佳，纽约(Georg Thieme Verlag Stuttgart，New York)，1994)和格林(Greene)和彼得(Peter) G.M.伍兹(Wuts)的“有机合成中的保护基团(Protective Groups in Organic Synthesis)”(威雷交叉科学(Wiley Interscience)，第3版 1999)。
通过从合适溶剂的蒸发结晶可分离得到与溶剂分子缔合的本发明化合 物。含有碱中心的式(I)化合物的药学上可接受的酸加成盐可用常规的方 法加以制备。例如，可用合适的酸(纯净的酸或溶解在合适溶剂中的酸)处 理游离碱的溶液，通过过滤或真空蒸发反应溶剂来分离生成的盐。同样地可 通过用合适的碱处理式(I)化合物的溶液而得到药学上可接受的碱加成 盐。两种类型的盐可用离子交换树脂形成或互相转化。
下面本发明将要通过一些实施例加以说明，但这些实施例不应该被看成 是限制本发明的范围。
实验部分
下述实施例中的HPLC、NMR和MS数据是这样得到的：HPLC：柱Waters Symmetry C850×4.6mm，条件：MeCN/H2O，5-100％(8min)，最大图标 230-400nm；质谱：PE-SCIEX API 150 EX(APCI和ESI)；LC/MS谱：Waters ZMD(ES)；1H-NMR：Bruker DPX-300MHz；手性分析型HPLC：Chiralpak AD-H 250×4.6mm柱，流动相乙醇/甲酸100∶1。
制备性HPLC纯化在装备柱Prep Nova-HR C186μm 60、40×30mm (最高上柱量100mg)或Prep MS C8、10μm、50×300mm(最高上 柱量1g)的制备性HPLC Waters Prep LC 4000系统上进行。所有纯化都用 梯度MeCN/H2O 0.09％TFA完成。半制备反相HPLC在装备柱SupelcosilTM ABZ+Plus(25cm×21.2mm，12μm)的Biotage Parallex Flex系统上进 行；紫外检测波长254nm和220nm；流速20mL/min(最高上柱量50mg)。 TLC分析在Merck预制60 F254板上进行。快速层析纯化在SiO2载体上进行， 以环己烷/EtOAc或DCM/MeOH混合液作为洗脱剂。
中间体1：(2Z)-(5-氯-2-氧-1，2-二氢-3H-吲哚-3-亚基)(氰基)乙酸 甲酯(参见流程1、2，化合物VII)

搅拌下，将哌啶(2ml)加入5-氯-1H-吲哚-2，3-二酮(起始原料VIII) (90.8g，0.5mol)和氰基乙酸甲酯(44.1ml，0.5mol)于甲醇(1000ml) 的混合物中，加热回流5小时后室温静置过夜。过滤，得(5-氯-2-氧-1，2- 二氢-吲哚-3-亚基)-氰基乙酸甲基酯粗品，用冷甲醇(2×150ml)洗涤， 真空干燥后获得深紫色固体117.6g(90％)。这是6.5∶1的几何异构体混合 物，纯度经1H NMR检测，可用于随后的反应。
1H NMR(400MHz，DMSO)；4.12和4.18(2s，3H)，7.14和7.17(2d，1H)， 7.65和7.75(2m，1H)，8.00和8.48(2s，1H)，11.35和11.45(2br s，1H)。 MS(ESI-)：261。
中间体2：(2Z)-氰基(5-甲氧基-2-氧-1，2-二氢-3H-吲哚-3-亚基)乙酸 甲酯(参见流程1、2，化合物VII)

按照关于制备中间体1所概括的一般方法，从5-甲氧基-1H-吲哚-2，3- 二酮和氰基乙酸甲酯开始，蒸发后分离到标题化合物，呈深紫色固体，88％ 收率。这是4.5∶1的几何异构体混合物(99％HPLC纯度)。
1H NMR(400MHz，DMSO)；3.76和3.80(2s，3H)，3.92和4.00(2s，3H)， 6.82和6.88(2d，1H)，7.12(m，1H)，7.40和7.78(2s，1H)，10.90(br s，1H)。MS(ESI+)：259；MS(ESI-)：257。
中间体3：(2Z)-氰基(2-氧-5-(三氟甲氧基)-1，2-二氢-3H-吲哚-3-亚 基)乙酸甲酯(参见流程1、2，化合物VII)

按照关于制备中间体1所概括的一般方法，从5-(三氟甲氧基)-靛红和 氰基乙酸甲酯开始，浓缩后分离到标题化合物，呈深紫色固体，77％收率。 这是7.5∶1的几何异构体混合物。
1H NMR(400MHz，DMSO)；3.75和3.80(2s，3H)，6.82和6.88(2d，1H)， 7.28和7.38(2d，1H)，7.58和8.12(2s，1H)，11.04和11.15(2br s，1H)。
中间体4：(2Z)-(6-氯-2-氧-1，2-二氢-3H-吲哚-3-亚基)(氰基)-乙酸 甲酯(参见流程1、2，化合物VII)

按照关于制备中间体1所概括的一般方法，从6-氯靛红和氰基乙酸甲 酯开始，蒸发后分离到标题化合物，呈深棕色固体，84％收率。这是5.5∶1 的几何异构体混合物(98％HPLC纯度)。
1H NMR(400MHz，DMSO)；3.76和3.82(2s，3H)，6.78和6.85(2s，1H)， 7.00和7.10(2d，1H)，7.72和8.08(2d，1H)，11.00和11.14(2br s，1H)。 MS(ESI+)：263；MS(ESI-)：261。
中间体5：(5-氯-3-氰基-2-氧-2，3-二氢-1H-吲哚-3-基)-氰基乙酸甲 酯(参见流程1、2，化合物VI)

搅拌下，将氰化钾(13.8g，0.21mol)分批加入到(5-氯-2-氧-1，2- 二氢-吲哚-3-亚基)-氰基乙酸甲酯粗品(中间体1)(56.0g，0.21mol)于 甲醇(750ml)的悬浮液中，然后加入水(45ml)。混合物室温下搅拌7小 时，将所得黑色溶液静置过夜。真空除去溶剂，加水(500ml)，然后用2M 盐酸酸化[注意：可能仍存在少量氰化物]。混合物用二氯甲烷(3×300ml) 提取，提取液合并后水洗(2×300ml)并干燥(MgSO4)。真空除去溶剂后 获得(5-氯-3-氰基-2-氧-2，3-二氢-1H-吲哚-3-基)-氰基乙酸甲酯粗品，呈 浅棕色固体(53.3g，86％)。这是非对映体混合物，纯度经1H NMR检测， 可用于随后的反应。
1H NMR(400MHz，DMSO)；3.62(s，3H)，5.72和5.82(2s，1H)，6.92 (m，1H)，7.40(m，1H)，7.56和7.62(2s，1H)，11.60和11.64(2s，1H)。
中间体6：氰基(3-氰基-5-甲氧基-2-氧-2，3-二氢-1H-吲哚-3-基)乙酸 甲酯(参见流程1、2，化合物VI)

按照关于制备中间体5所概括的一般方法，从(2Z)-氰基(5-甲氧基-2- 氧-1，2-二氢-3H-吲哚-3-亚基)乙酸甲酯(中间体2)和氰化钾开始，浓缩 后分离到标题化合物，呈浅棕色固体，90％收率。这是非对映体混合物。
1H NMR(400MHz，DMSO)；3.75，3.77，3.80和3.82(4s，6H)，5.80 和5.88(2s，1H)，6.98(m，1H)，7.06(m，1H)，7.20和7.28(2s，1H)， 11.42(s，1H)。
中间体7：氰基[3-氰基-2-氧-5-(三氟甲氧基)-2，3-二氢-1H-吲哚-3- 基]乙酸甲酯(参见流程1、2，化合物VI)

按照关于制备中间体5所概括的一般方法，从(2Z)-氰基(2-氧-5-(三氟 甲氧基)-1，2-二氢-3H-吲哚-3-亚基)乙酸甲酯(中间体3)和氰化钾开始， 浓缩后分离到标题化合物，呈浅棕色固体，90％收率。这是非对映体混合物。
1H NMR(400MHz，DMSO)；3.76(s，3H)，5.88和5.98(2s，1H)，7.16 (m，1H)，7.48-7.58(m，1H)，7.68和7.76(2s，1H)，11.78和11.82(2s， 1H)。
中间体8：(6-氯-3-氰基-2-氧-2，3-二氢-1H-吲哚-3-基)(氰基)乙酸甲 酯(参见流程1、2，化合物VI)

按照关于制备中间体5概括的一般方法，从(2Z)-(6-氯-2-氧-1，2-二 氢-3H-吲哚-3-亚基)(氰基)乙酸甲酯(中间体4)和氰化钾开始，浓缩后分 离到标题化合物，呈浅棕色固体，61％收率。这是非对映体混合物。
1H NMR(400MHz，DMSO)；3.90和3.95(2s，3H)，6.00和6.05(2s，1H)， 7.22(s，1H)，7.38-7.48(m，1H)，7.70和7.80(2d，1H)，11.90(s，1H)。
中间体9：5-氯-1H-螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-2，2’，5’-三酮(参见流 程1、2、3、4，化合物V)

搅拌下，将(5-氯-3-氰基-2-氧-2，3-二氢-1H-吲哚-3-基)-氰基乙酸甲 酯粗品(中间体5)(53.3g，0.18mol)于甲醇(450ml)中的溶液用冰 -水浴冷却，通氯化氢气体至饱和，维持温度20℃以下。所得溶液室温下静 置过夜，然后小心加热回流5小时，得黄色悬浮液。真空除去溶剂，得半固 体残留物，与冰乙酸(375ml)混合后加热回流16小时。冰-水浴冷却后，过 滤得5-氯-1H-螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-2，2’，5’-三酮粗品，用冷的冰乙 酸(100ml)、水(100ml)和乙醚(100ml)洗涤后真空干燥，得灰白色 固体。合并后的乙酸滤液真空除去溶剂，重复纯化步骤后获得另一部分粗品， 总计得30.5g(66％)，纯度经1H NMR检测，可用于随后的反应。
1H NMR(400MHz，DMSO)；3.00(d，1H)，3.20(d，1H)，6.92(d，1H)， 6.35(m，1H)，7.75(s，1H)，11.00(br s，1H)，11.84(br s，1H)。MS (ESI-)：249。
中间体10：5-甲氧基-2’H，5’H-螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-2，2’，5’-三酮(参见流程1、2、3、4，化合物V)

按照关于制备中间体9概括的一般方法，在氯化氢存在下于甲醇中，从 氰基(3-氰基-5-甲氧基-2-氧-2，3-二氢-1H-吲哚-3-基)乙酸甲酯(中间体 6)开始，浓缩后分离到标题化合物，呈浅棕色固体，46％收率(100％HPLC 纯度)。
1H NMR(400MHz，DMSO)；2.86(d，1H)，3.05(d，1H)，3.62(s，3H)， 6.74(m，2H)，7.15(s，1H)，10.52(s，1H)，11.67(br s，1H)。MS(ESI-)： 245。
中间体11：5-(三氟甲氧基)-2’H，5’H-螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-2，2’，5’-三酮(参见流程1、2、3、4，化合物V)

按照关于制备中间体9概括的一般方法，在氯化氢存在下于甲醇中，从 氰基(3-氰基-2-氧-5-(三氟甲氧基)-2，3-二氢-1H-吲哚-3-基)乙酸甲酯 (中间体7)开始，浓缩后分离到标题化合物，呈灰白色固体，30％收率(99 ％HPLC纯度)。
1H NMR(400MHz，DMSO)；3.00(d，1H)，3.20(d，1H)，7.02(d，1H)， 7.32(m，1H)，7.75(d，1H)，11.05(br s，1H)，11.60(br s，1H)。MS (EST)：299。
中间体12：2-氯-N-(3-氯吡嗪-2-基)苯磺酰胺(参见流程1、2、3、4， 化合物V)

按照关于制备中间体9概括的一般方法，在氯化氢存在下于甲醇中，从 (6-氯-3-氰基-2-氧-2，3-二氢-1H-吲哚-3-基)(氰基)乙酸甲酯(中间体8) 开始，浓缩后分离到标题化合物，呈灰白色固体，22％收率(80％HPLC纯度)。
1H NMR(400MHz，DMSO)；3.18(d，1H)，3.35(d，1H)，7.13(s，1H)， 7.26(d，1H)，7.72(d，1H)，11.16(br s，1H)，12.00(br s，1H)。MS (ESI-)：249。
中间体13：(5-氯-2，2’5’-三氧-螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-1-基)乙酸 叔丁酯(参见流程1，3，化合物IV)

搅拌下，将5-氯-1H-螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-2，2’，5’-三酮粗品(中 间体9)(5.0g，19.96mmol)加入到氢化钠(60％矿物油分散液，1.68g， 42mmol)于无水N，N-二甲基甲酰胺(140ml)的悬浮液中。室温下搅拌40 分钟后，将深橙色溶液于冰-水浴中冷却，然后用溴乙酸叔丁酯溶液(3.24g， 2.26ml，18.96mmol)在无水N，N-二甲基甲酰胺(46ml)中处理30分钟。 所得深黄色混合物升温至室温并搅拌4小时。所得混合物用饱和氯化铵水溶 液(500ml)稀释，用乙酸乙酯(3×200ml)提取。合并提取液后干燥 (MgSO4)，除去溶剂后获得(5-氯-2，2’5’-三氧-螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1-基)乙酸叔丁酯粗品，经硅胶快速层析(用含有增加量(0-80％)乙酸 乙酯的石油醚(40-60)洗脱)纯化后获得黄色固体4.76g(95％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3，TMS)；1.50(s，9H)，3.03(d，1H)，3.38(d， 1H)，4.22(d，1H)，4.54(d，1H)，6.73(d，1H)，7.22(d，1H)，7.35(m， 1H)，8.32(br s，1H)。MS(ESI-)：363。
中间体14：1’-苄基-5-氯-1H-螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-2，2’，5’-三 酮(参见流程1、4、5，化合物III)

搅拌下，将叔丁醇钾(377mg，3.19mmol)加入到5-氯-1H-螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-2，2’，5’-三酮粗品(中间体9)(800mg，3.19mmol)的 无水N，N-二甲基甲酰胺(6ml)溶液中。室温下搅拌40分钟后，加入溴化 苄(0.38ml，3.19mmol)。混合物搅拌2小时后静置过夜。所得混合物用 水(50ml)稀释，乙酸乙酯(3×50ml)提取。合并提取液后干燥(MgSO4)， 真空除去溶剂后获得1’-苄基-5-氯-1H-螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-2，2’，5’-三酮粗品，经硅胶快速层析(用含有增加量(0-75％)乙酸 乙酯的石油醚(40-60)洗脱)纯化后获得黄色固体789mg(73％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3，TMS)；2.97(d，1H)，3.35(d，1H)，4.78(s， 2H)，6.85(d，1H)，6.98(s，1H)，7.25-7.48(m，6H)，8.06(br s，1H)。 MS(ESI-)：339。
中间体15：3-(1’-苄基5-氯-2，2’5’-三氧-螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1-基)丙酸叔丁酯(参见流程5，化合物II)

搅拌下，将1’-苄基-5-氯-1H-螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-2，2’，5’-三 酮(中间体14)(50mg，0.15mmol)加入到氢化钠(60％矿物油分散液，7 mg，0.16mmol)的无水四氢呋喃(2ml)悬浮液中。室温下搅拌30分钟后， 加入丙烯酸叔丁酯(0.03ml，0.19mmol)，所得混合物搅拌2小时后室温 下静置18小时。加水(15ml)并用乙酸乙酯(3×15ml)提取。合并提取 液后用盐水(15ml)洗涤，干燥(MgSO4)及真空除去溶剂后获得3-(1’- 苄基5-氯-2，2’5’-三氧-螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-1-基)丙酸叔丁酯粗品， 经硅胶快速层析(用含有增加量(0-50％)乙酸乙酯的石油醚(40-60)洗 脱)纯化后获得白色固体(37mg 54％)，纯度经1H NMR检测，可用于最后 一步的水解。
1H NMR(400MHz，CDCl3，TMS)；1.41(s，9H)，2.63(t，2H)，2.93(d， 1H)，3.31(d，1H)，3.98(t，2H)，4.75(s，2H)，6.96(m，2H)，7.29-7.37 (m，6H)。
中间体16：(1’-苄基-5-氯-2，2’5’-三氧-螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1-基)乙酸叔丁酯(参见流程1、3、4，化合物II)

路线A：
搅拌下，将碳酸钾(114mg，0.82mmol)，接着是溴化苄(56mg，0.04 ml，0.33mmol)依次加入到(5-氯-2，2’5’-三氧-螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1-基)乙酸叔丁酯(中间体13)(100mg，0.27mmol)的无水N，N-二甲 基甲酰胺(2.5ml)溶液中，50℃加热18小时。加水(25ml)并用乙酸乙 酯(3×25ml)提取。合并提取液后用盐水(25ml)洗涤，干燥(MgSO4)及 真空除去溶剂后获得(1’-苄基-5-氯-2，2’5’-三氧-螺[吲哚-3，3’-吡 咯烷]-1-基)乙酸叔丁酯粗品，经硅胶快速层析(用含有增加量(0-50％)乙 酸乙酯的石油醚(40-60)洗脱)纯化后获得白色固体(104mg，83％)，纯 度经1H NMR检测，可用于最后一步的水解。
路线B：
搅拌下，将1’-苄基-5-氯-1H-螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-2，2’，5’-三 酮(中间体14)(900mg，2.64mmol)加入到氢化钠(60％分散于油中[116 mg，2.9mmol])的无水四氢呋喃(30ml)悬浮液中。室温下搅拌30分钟 后，将溴乙酸叔丁酯(0.51ml，3.44mmol)加入该澄清溶液中。所得悬浮 液搅拌3小时后静置过夜。加水(100ml)并用乙酸乙酯(3×100ml)提 取。合并提取液后用盐水(100ml)洗涤，干燥(MgSO4)及真空除去溶剂 后获得(1’-苄基-5-氯-2，2’5’-三氧-螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-1-基)乙 酸叔丁酯粗品，经硅胶快速层析(用含有增加量(0-50％)乙酸乙酯的石油 醚(40-60)洗脱)纯化后，获得白色固体(1.088g，91％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3，TMS)；1.44(s，9H)，2.97(d，1H)，3.35(d， 1H)，4.21(d，1H)，4.53(d，1H)，4.76(s，2H)，6.72(d，1H)，7.00(s， 1H)，7.30-7.37(m，6H)。MS(ESI+)：399(失去t-Bu)。
中间体17：(1’-苄基-5-氯-2，2’5’-三氧-螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1-基)乙酸乙酯(参见流程1、3、4，化合物II)

搅拌下，将1’-苄基-5-氯-1H-螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-2，2’，5’-三 酮(中间体14)(300mg，0.88mmol)加入到氢化钠(60％分散于油中[39 mg，0.969mmol])的无水四氢呋喃(10ml)悬浮液中。室温下搅拌30分钟 后，将溴乙酸乙酯(0.13ml，1.16mmol)处理该澄清溶液中。所得悬浮液 搅拌3小时后静置过夜。加水(50ml)并用乙酸乙酯(3×50ml)提取。 合并提取液后用盐水(50ml)洗涤，干燥(MgSO4)及真空除去溶剂后获得 (1’-苄基-5-氯-2，2’5’-三氧-螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-1-基)乙酸乙酯 粗品，经硅胶快速层析(用含有增加量(0-50％)乙酸乙酯的石油醚(40-60) 洗脱)纯化，再于二异丙醚中研磨后获得白色固体(264mg，70％)，熔点 (m.pt.)143-144℃。
1H NMR(400MHz；CDCl3；Me4Si)：1.27(t，3H)，2.99(d，1H)，3.36 (d，1H)，4.22(q，2H)，4.31(d，1H)，4.63(d，1H)，4.76(s，2H)，6.74 (d，1H)，7.00(d，1H)，7.32(m，6H)。
中间体18：5’-氯-2H，5H-螺[咪唑烷-4，3’-吲哚]-2，2’，5’(1’H)- 三酮(参见流程7a，化合物IX)

将5-氯靛红(5.00g；27.54mmol)、碳酸铵(21.14g；0.22mol)和 氰化钾(2.37g；36.35mmol)于EtOH(130ml)和水(70ml)中的混合 物温和回流加热3小时。混合物倾入水(400ml)中并用AcOH酸化至pH值 为5。真空除去有机溶剂后，过滤析出的固体，干燥后获得标题化合物，58％ 收率(HPLC纯度94％)，MS(ESI-)：250.0。
中间体19：5’-氯-1-(5-氯-2-氟苄基)-2H，5H-螺[咪唑烷-4，3’-吲 哚]-2，2’，5’(1’H)-三酮(参见流程7a，化合物X)

用碳酸钾(274.62mg；1.99mmol)处理冰冷却的5’-氯-2H，5H-螺[咪 唑烷-4，3’-吲哚]-2，2’，5’(1’H)-三酮(中间体18)(500.00mg；1.99 mmol)的DMF(10ml)溶液中。移去冰浴，加入5-氯-2-氟苄基溴(444.05 mg；1.99mmol)。1.5h后，加入乙酸乙酯，有机相用水和盐水洗涤，干燥 (MgSO4)及真空除去溶剂后获得粗产物，呈红色固体。经硅胶快速层析(用 含有增加量(20-50％)乙酸乙酯的环己烷洗脱)纯化后获得标题化合物， 26％收率(HPLC纯度94％)，MS(ESI+)：394.1；MS(ESI-)：392.0。
中间体20：[5’-氯-1-(5-氯-2-氟苄基)-2，2’，5’-三氧-螺[咪唑烷 -4，3’-吲哚]-1’(2’H)-基]乙酸叔丁酯(参见流程7a和7b，化合物XI)

方法A：
用氢化钠(123.89mg；3.10mmol)处理冰冷却的5’-氯-1-(5-氯-2- 氟苄基)-2H，5H-螺[咪唑烷-4，3’-吲哚]-2，2’，5’(1’H)-三酮(中间体 19)(1.100g；2.79mmol)的DMF(10ml)溶液中，搅拌30分钟。加入 溴乙酸叔丁酯(2.11ml；2.79mmol)，室温下搅拌。加入乙酸乙酯，有机 相用水和盐水洗涤，干燥(MgSO4)及真空除去溶剂后获得粗产物，呈红色 固体。经硅胶层析(用含有增加量(20-50％)乙酸乙酯的环己烷洗脱)纯化 后获得标题化合物，12％收率(HPLC纯度98.8％)，MS(ESI+)：510.2。
方法B：
0-5℃下，将碳酸钾(3.58g，25.91mmol)分批加入到(5-氯 -2，2’5’-三氧-螺[咪唑烷-4，3’-吲哚]-1’(2’H)-基)乙酸叔丁酯(中 间体54)(7.90g，21.59mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(80ml)溶液中。 0-5℃下持续搅拌45分钟然后于室温下再搅拌90分钟。用5-氯-2-氟苄基 溴加入到该悬浮液中，室温下搅拌1小时。滤去固体，滤液分配于水(400ml) 和叔丁基甲基醚(200ml)中，产品用叔丁基甲基醚(3×150ml)提取。 合并提取液后水洗(400ml)、干燥(MgSO4)后获得粉红色残留物。甲苯重 结晶后得标题化合物(6.47g，59％)，呈淡粉红色固体(HPLC纯度：96％)。
中间体21：5’-氯-1-[(5-甲基-3-苯基异噁唑-4-基)甲基]-2H，5H-螺 [咪唑烷-4，3’-吲哚]-2，2’，5’(1’H)-三酮(参见流程7a，化合物X)

按照关于制备中间体19概括的一般方法，从5’-氯-2H，5H-螺[咪唑烷 -4，3’-吲哚]-2，2’，5’(1’H)-三酮(中间体18)和4-(溴甲基)-5-甲基 -3-苯基异噁唑开始，经硅胶层析(用含有增加量(20-50％)乙酸乙酯的环 己烷洗脱)纯化后分离到标题化合物，呈白色固体，27％收率，MS(ESI+)： 423.2；MS(ESI-)：423.1。
中间体22：[5’-氯-1-[(5-甲基-3-苯基异噁唑-4-基)甲 基]-2，2’，5’-三氧螺[咪唑烷-4，3’-吲哚]-1’(2’H)-基]乙酸叔丁酯 (参见流程7a和7b，化合物XI)

按照关于制备中间体20(方法A)概括的一般方法，从5’-氯-1-[(5- 甲基-3-苯基异噁唑-4-基)甲基]-2H，5H-螺[咪唑烷-4，3’-吲 哚]-2，2’，5’(1’H)-三酮(中间体21)和溴乙酸叔丁酯开始，经硅胶层 析(用含有增加量(10-30％)乙酸乙酯的环己烷洗脱)纯化后分离到标题 化合物，呈白色固体，37％收率(HPLC纯度91％)。
MS(ESI+)：537.3；MS(ESI-)：535.6
中间体23：(1-苄基-5’-氯)-2H，5H-螺[咪唑烷-4，3’-吲 哚]-2，2’，5’(1’H)-三酮(参见流程7a，化合物X)

按照关于制备中间体19概括的一般方法，从5’-氯-2H，5H-螺[咪唑烷 -4，3’-吲哚]-2，2’，5’(1’H)-三酮(中间体18)和溴化苄开始，用乙醚 研磨后分离到标题化合物，呈浅褐色固体，45％收率，MS(ESI-)：340。
中间体24：[1-苄基-5’-氯)-2，2’，5’-三氧螺[咪唑烷-4，3’-吲 哚]-1’(2’H)-基]乙酸叔丁酯(参见流程7a和7b，化合物XI)

按照关于制备中间体20(方法A)概括的一般方法，从(1-苄基-5’- 氯)-2H，5H-螺[咪唑烷-4，3’-吲哚]-2，2’，5’(1’H)-三酮(中间体23) 和溴乙酸叔丁酯开始，经硅胶层析(用石油醚和乙酸乙酯1∶1的混合液洗脱) 纯化后分离到标题化合物，呈无色油状物，38％收率，MS(ESI-)：454。
中间体25：5’-氯-(2-氟苄基)-2H，5H-螺[咪唑烷-4，3’-吲 哚]-2，2’，5’(1’H)-三酮(参见流程7a，化合物X)

按照关于制备中间体19概括的一般方法，从5’-氯-2H，5H-螺[咪唑烷 -4，3’-吲哚]-2，2’，5’(1’H)-三酮(中间体18)和2-氟苄基溴开始，经 硅胶层析(用含有增加量(50-65％)乙酸乙酯的石油醚洗脱)纯化后分离 到标题化合物，呈白固体，41％收率，MS(ESI-)：358。
中间体26：[5’-氯-1-(2-氟苄基)-2，2’，5’-三氧螺[咪唑烷-4，3’- 吲哚]-1’(2’H)-基]乙酸叔丁酯(参见流程7a和7b，化合物XI)

按照关于制备中间体20(方法A)概括的一般方法，从(1-苄基-5’- 氯)-2H，5H-螺[咪唑烷-4，3’-吲哚]-2，2’，5’(1’H)-三酮(中间体25) 和溴乙酸叔丁酯开始，经硅胶层析(用含有增加量(20-50％)乙酸乙酯的石 油醚洗脱)纯化后分离到标题化合物，呈白固体，52％收率，MS(ESI-)：454。
中间体27：[5-氯-3-(硝基甲基)-2-氧-2，3-二氢-1H-吲哚-3-基](氰基) 乙酸甲酯(参见流程8，化合物XII)

用哌啶(189μl；1.90mmol)处理(2Z)-(5-氯-2-氧-1，2-二氢-3H- 吲哚-3-亚基)(氰基)乙酸甲酯(中间体1)(10.000g；38.1mmol)的干 燥硝基甲烷(61ml；1.14mol)悬浮液。搅拌3小时后，混合物用乙酸乙 酯稀释，硅胶过滤。蒸发溶剂获得[5-氯-3-(硝基甲基)-2-氧-2，3-二氢-1H- 吲哚-3-基](氰基)乙酸甲酯，呈油状物(9.1g，73.8％)。这是非对映体混 合物，纯度经1H NMR检测，可用于随后的反应(HPLC纯度97％)。MS(ESI+)： 324.2；MS(ESI-)：322.2。
中间体28：[5-氯-3-(硝基甲基)-2-氧-2，3-二氢-1H-吲哚-3-基](氰基) 乙酸(参见流程8，化合物XIII)

将氢氧化钾水溶液(9.27ml；5.00M；46.34mmol)加入到[5-氯 -3-(硝基甲基)-2-氧-2，3-二氢-1H-吲哚-3-基](氰基)乙酸甲酯(中间体27) (5.00g；15.45mmol)的MeOH(150ml)溶液中。搅拌2.51后蒸发溶剂。 将残留物加入乙酸乙酯中，有机相用1N HCl提取，干燥(MgSO4)，真空除 去溶剂后获得[5-氯-3-(硝基甲基)-2-氧-2，3-二氢-1H-吲哚-3-基](氰基) 乙酸粗品(4.89g，定量)。这是非对映体混合物，纯度经检测，可用于随 后的反应(HPLC纯度93％)。
中间体29：[5-氯-3-(硝基甲基)-2-氧-2，3-二氢-1H-吲哚-3-基]乙腈 (参见流程8，化合物XIV)

将[5-氯-3-(硝基甲基)-2-氧-2，3-二氢-1H-吲哚-3-基](氰基)乙酸(中 间体28)(2.00g；6.46mmol)的无水DMF(15ml)溶液160℃下加热1 小时。蒸发溶剂后，残留物加入乙酸乙酯，盐水提取，干燥(MgSO4)，真空 除去溶剂后获得[5-氯-3-(硝基甲基)-2-氧-2，3-二氢-1H-吲哚-3-基]乙腈 粗品(1.74g，定量，HPLC纯度93％)，MS(ESI-)：264.1。
中间体30：2-[5-氯-3-(硝基甲基)-2-氧-2，3-二氢-1H-吲哚-3-基]乙 酰胺(参见流程8，化合物XV)

用乙酰胺(775mg；13.13mmol)和氯化钯(II)(51.7mg；0.29mmol) 处理[5-氯-3-(硝基甲基)-2-氧-2，3-二氢-1H-吲哚-3-基]乙腈(中间体29) (775mg；2.92mmol)于THF(6ml)和水(2ml)的溶液，并搅拌过夜。 加入乙酸乙酯，有机相用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，真空浓缩后获得标题化 合物(740mg)，直接用于下一步(HPLC纯度93％)。MS(ESI+)：284.1； MS(ESI-)：282.1。
中间体31：5-氯-5’H-螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-2，5’(1H)-二酮(参 见流程8，化合物XVI)

冰浴条件下，经5分钟时间，将锌(2.5g；39mmol)分批加入到2-[5- 氯-3-(硝基甲基)-2-氧-2，3-二氢-1H-吲哚-3-基]乙酰胺(中间体30)(1.10 g；3.88mmol)的AcOH(25ml)悬浮液中[小心：放热反应]。搅拌5分钟 后移去冰浴，反应混合物室温下搅拌1小时。然后加热回流2h。真空除去 溶剂，残留物经硅胶快速层析(用含有增加量(3-20％)MeOH的DCM洗脱) 纯化后获得标题化合物(420mg，45.8％)，直接用于下一步(HPLC纯度 77％)。MS(ESI+)：237.1；MS(ESI-)：235.1。
中间体32：(5-氯-2，5’-二氧螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸 叔丁酯(参见流程8，化合物XVII)

将叔丁醇钾(109mg；0.97mmol)加入到5-氯-5’H-螺[吲哚-3，3’- 吡咯烷]-2，5’(1H)-二酮(中间体31)(230mg；0.97mmol)的无水DMF(10 ml)溶液中。反应混合物RT搅拌30分钟，然后冷却至0℃，加入溴乙酸叔 丁酯(190mg；0.97mmol)溶解于3mL无水DMF的溶液。反应混合物室温 搅拌1小时。真空蒸发溶剂，残留物再溶解于乙酸乙酯(20mL)，水洗，干 燥(MgSO4)，真空除去溶剂。残留物经硅胶快速层析(用含有增加量 (50-100％)乙酸乙酯的环己烷洗脱)纯化后获得标题化合物(341mg，52.4％， HPLC纯度100％)，MS(ESI+)：351.1；MS(ESI-)：349.2。
中间体33：[1’-苄基-5-氯-2，5’-二氧螺[吲哚-3.3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸叔丁酯(参见流程8，化合物XVIII)

将氢化钠(24mg；0.60mmol)加入到(5-氯-2，5’-二氧螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸叔丁酯(中间体32)(175.00mg；0.50mmol) 的干燥THF(5mL)溶液中。反应混合物搅拌15分钟后加入溴化苄(71.10 μl；0.60mmol)。搅拌10分钟后，蒸发溶剂，残留物再溶解于乙酸乙酯中， 用水和盐水洗涤，干燥(MgSO4)，真空除去溶剂后得残留物，经硅胶快速层 析(用含有增加量(20-50％)乙酸乙酯的环己烷洗脱)纯化后获得标题化 合物(220g，52.1％，HPLC纯度96.7％)。MS(ESI+)：441.4；MS(ESI-)：439.2。
中间体34：[5-氯-1’-(5-氯-2-氟苄基)-2，5’-二氧螺[吲哚-3，3’- 吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸叔丁酯(参见流程8，化合物XVIII)

按照关于制备中间体33概括的一般方法，从[5-氯-1’-(2-氟苄 基)-2，5’-二氧螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸叔丁酯(中间体32) 和5-氯-2-氟苄基溴开始，经硅胶层析(用含有增加量(5-40％)乙酸乙酯 的环己烷洗脱)纯化后分离到标题化合物，呈白色固体，72.7％收率(HPLC 纯度94％)。MS(ESI+)：493.4；MS(ESI-)：491.0。
中间体35：[5-氯-1’-[(3-甲基-5-苯基异噁唑-4-基)甲基]-2，5’-二 氧螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸叔丁酯(参见流程8，化合物 XVIII)

按照关于制备中间体33概括的一般方法，从(5-氯-2，5’-二氧螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基)乙酸叔丁酯(中间体32)和4-(溴甲基)-3-甲 基-5-苯基异噁唑开始，经硅胶层析(用含有增加量(10-50％)乙酸乙酯的 环己烷洗脱)纯化后分离到标题化合物，呈白色固体，53％收率(HPLC纯度 89％)。MS(ESI+)：522.4；MS(ESI-)：520.1。
中间体36：[5-氯-1’-(2-氟苄基)-2，5’-二氧螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸叔丁酯(参见流程8，化合物XVIII)

按照关于制备中间体33概括的一般方法，从(5-氯-1’-(2-氟苄 基)-2，5’-二氧螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸叔丁酯(中间体32) 和2-氟苄基溴开始，经硅胶层析(用含有增加量(20-50％)乙酸乙酯的环 己烷洗脱)纯化后分离到标题化合物，呈白色固体，54％收率(HPLC纯度 90％)。MS(ESI+)：459.3；MS(ESI-)：457.2。
中间体37：2-{[(苄氧基)羰基]氧基}-5-氯-1H-吲哚-1-羧酸苄酯(参 见流程9，化合物XX)

冰浴下，将氯甲酸苄酯(37.9ml；240mmol)滴加到5-氯-2-羟基吲 哚(16.75g；100mmol)和三乙胺(30.50ml；220mmol)的THF(360ml) 溶液中。室温搅拌6h后，加水，分出有机相，再用盐水洗涤，干燥(MgSO4)， 真空除去溶剂后得固体残留物，重结晶(乙酸乙酯)纯化后获得标题化合 物，61％收率(HPLC纯度89％)。
中间体38：5-氯-2-氧二氢吲哚-1-羧酸苄酯(参见流程9，化合物XXI)

将2-{[(苄氧基)羰基]氧基}-5-氯-1H-吲哚-1-羧酸苄酯(中间体37) (5.00g；11.47mmol)用氨的二噁烷(25.2ml；0.50M；12.6mmol)溶 液处理，搅拌过夜。加入盐水，用乙酸乙酯提取。有机相经干燥(MgSO4)， 真空除去溶剂后获得固体残留物，重结晶(乙酸乙酯)纯化后获得标题化合 物，59％收率(HPLC纯度88％)。MS(ESI+)：302.1；MS(ESI-)：300.1。
中间体39：5-氯-2，2’-二氧螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-羧酸苄酯 (参见流程9，化合物XXII)

用实用的(pract.)氢化钠(265.12mg；6.63mmol)处理5-氯-2-氧 二氢吲哚-1-羧酸苄酯(中间体38)(2.00g；6.63mmol)的无水DMF(30.00 ml)溶液。10分钟后，加入异氰酸2-溴乙酯(559μl；6.63mmol)。再过 10分钟后，加入乙酸乙酯，水洗。有机相经干燥(MgSO4)，真空除去溶剂后 获得固体残留物，重结晶(乙酸乙酯)纯化后获得标题化合物，57％收率 (HPLC纯度92％)。MS(ESI+)：371.1；MS(ESI-)：369.1。
中间体40：5-氯-2’H-螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-2，2’(1H)-二酮(参 见流程9，化合物XXIII)

用氧化铂(200mg；0.88mmol)处理5-氯-2，2’-二氧螺[吲哚-3，3’- 吡咯烷]-1(2H)-羧酸苄酯(中间体39)(1.000g；2.70mmol)的DMF(50ml) 溶液。混合物置于氢化容器中，通氢气至20大气压(atm)。搅拌过夜后， 再加入一定量的二氧化铂(2.50g)，于20atm H2下持续氢化过夜。反应混 合物经滤纸过滤，然后真空除去溶剂，得标题化合物，96％收率(HPLC纯度 85％)。MS(ESI+)：237.0；MS(ESI-)：235.0。
中间体41：(5-氯-2，2’-二氧螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基)乙酸 叔丁酯(参见流程9，化合物XXIV)

用叔丁醇钾(241.82mg；2.16mmol；1.00eq.)处理5-氯-5’H-螺[吲 哚-3，3’-吡咯烷]-2，5’(1H)-二酮(中间体40)(600.00mg；2.16mmol) 于30mL无水DMF的溶液。10分钟后，加入溴乙酸叔丁酯(420.35mg；2.16 mmol)在6mL无水DMF中的溶液。4h后，蒸去溶剂，残留物溶解于乙酸乙 酯。加水后析出固体，过滤得标题化合物，呈灰色固体，30％收率(HPLC纯 度89％)。MS(ESI+)：351.2；MS(ESI-)：348.9。
中间体42：[5-氯-1’-[(5-甲基-3-苯基异噁唑-4-基)甲基]-2，2’-二 氧螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基)乙酸叔丁酯(参见流程9，化合物 XXV)

用实用的氢化钠(sodium hydride pract.)(14.8mg；0.37mmol)处理 (5-氯-2，5’-二氧螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基)乙酸叔丁酯(中间体 41)(100mg；0.29mmol)的无水DMF(5ml)悬浮液。搅拌20分钟后加 入4-(溴甲基)-5-甲基-3-苯基异噁唑(86.24mg；0.34mmol)。搅拌1h后 蒸去溶剂得残留物，将残留物溶解于乙酸乙酯中。有机相用盐水洗涤，干燥 (MgSO4)，真空除去溶剂后得固体残留物，经硅胶快速层析(用含有增加量 (30-50％)乙酸乙酯的环己烷洗脱)纯化后获得标题化合物，58％收率(HPLC 纯度99％)。MS(ESI+)：522.4；MS(ESI-)：520.2。
中间体43：(5-氯-2，3-二氧-2，3-二氢-1H-吲哚-1-基)乙酸甲酯(参见 流程Ib，化合物VIIIb)

0-5℃下，将碳酸钾(9.87g，71.59mmol)分批加入到5-氯靛红(化 合物VIII)(10.0g，55.07mmol)的无水N，N-二甲基甲酰胺(100ml)溶 液中。0-5℃搅拌10分钟，室温下再搅拌1小时后，滴加溴乙酸甲酯(8.25 ml，60.58mmol)，滴加速度控制在使内温不超过35℃。所得橙色悬浮液室 温搅拌过夜。加水(350ml)，产物用乙酸乙酯(5×100ml)提取。合并有 机提取液后用盐水(100ml)洗涤，干燥(MgSO4)，减压浓缩后获得标题化 合物(10.83g，76％)，呈橙色固体，(HPLC纯度98％)。MS(ESI+)：254.1； MS(ESI-)：252.1。
中间体44：(5-氯-2，3-二氧-2，3-二氢-1H-吲哚-1-基)乙酸叔丁酯(参 见流程7b，化合物VIIIb)

按照上述关于合成中间体43概括的一般方法，将5-氯靛红(化合物 VIII)(10.0g，55.07mmol)与碳酸钾(9.89g，5.03mmol)和溴乙酸叔 丁酯(8.95ml，60.58mmol)于N，N-二甲基甲酰胺(100ml)中反应， 水析后获得标题化合物(12.14g，75％)，呈橙色固体(H PLC纯度：99％)。 MS(ESI)：294.2。
中间体45：(2Z)-[5-氯-1-(2-甲氧基-2-氧乙基)-2-氧-1，2-二氢-3H- 吲哚-3-亚基](氰基)乙酸甲酯(参见流程Ib，化合物VIIb)

室温下，将氰基乙酸甲酯(3.55ml，40.10mmol)和哌啶(0.40ml， 4.01mmol)加入到(5-氯-2，3-二氧-2，3-二氢-1H-吲哚-1-基)乙酸甲酯 (中间体43)(10.17g，40.10mmol)的甲醇(200ml)悬浮液中。所得细 悬浮液室温下持续搅拌过夜。滤出沉淀，甲醇(3×20ml)洗涤，真空干燥 后的标题化合物(11.62g，80％)，呈紫色固体(H PLC纯度：92％)。 MS(ESI+)：335.2；MS(ESI-)：333.2。
中间体46：[5-氯-3-氰基-1-(2-甲氧基-2-氧乙基)-2-氧-2，3-二氢 -1H-吲哚-3-基](氰基)乙酸甲酯(参见流程Ib，化合物VIb)

室温下，用丙酮氰醇(acetone cyanohydrine)(4.0ml，43.5mmol)加 入到碳酸钾(1.39g，10.03mmol)的水(8.2ml)溶液中，持续搅拌15分 钟。滴加(2Z)-[5-氯-1-(2-甲氧基-2-氧乙基)-2-氧-1，2-二氢-3H-吲哚-3- 亚基](氰基)乙酸甲酯(中间体45)(11.19g，33.43mmol)于四氢呋喃 (500ml)中的细悬浮液。所得悬浮液回流加热3小时。滤出固体，残留物 用四氢呋喃(3×40ml)洗涤。滤液合并后浓缩至干。固体溶解于二氯甲烷 (250ml)中，用饱和NaHCO3(2×100ml)、水(100ml)洗涤，干燥(MgSO4) 后得标题化合物(10.82g，89％)，呈红棕色固体(HPLC纯度：91％)。 MS(ESI+)：362.2；MS(ESI-)：360.2。
中间体47：(5-氯-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基) 乙酸甲酯(参见流程1a、1b、3，通式IV化合物)

-78℃下，[5-氯-3-氰基-1-(2-甲氧基-2-氧乙基)-2-氧-2，3-二氢-1H- 吲哚-3-基](氰基)乙酸甲酯(中间体46)(10.56g，29.19mmol)于无水 甲醇(190ml)中的悬浮液用氯化氢气体吹洗45分钟。悬浮液暖至室温后 加热回流4小时。真空除去溶剂，残留固体悬浮于冰乙酸(300ml)中，加 热回流5小时。减压浓缩后得红棕色油，溶解于乙酸乙酯(300ml)中，用 水(2×200ml)洗涤，水洗液用乙酸乙酯(200ml)回提一次，有机提取 液干燥(MgSO4)后得标题化合物(10.87g，定量)，呈固体化泡沫，(HPLC 纯度：91％)。MS(ESI+)：323.2；MS(ESI-)：321.1。
中间体48：[5-氯-1’-(3-氯苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡 咯烷]-1(2H)-基]]乙酸甲酯(参见流程1a、1b、1c、3、4，通式II化合物)

按照上述关于合成中间体16概括的一般方法(路线A)，室温下，将(5- 氯-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基)乙酸甲酯(中间体 47)(2.94g，9.11mmol与叔丁醇钾(1.07g，9.57mmol)和3-氯苄基 溴(1.25ml，9.57mmol)于无水N，N-二甲基甲酰胺(90ml)中反应2小 时，四氢呋喃/乙醚研磨后得标题化合物(2.10g，52％)，呈淡粉色粉末。 将该化合物分成几部分(HPLC纯度：96-99％)。MS(ESI+)：447.3；MS(ESI-)： 445.3。
中间体49：5-氯-2-[(乙氧基羰基)氧基]-1H-吲哚-1-羧酸乙酯(参见 流程1c、9，化合物XX)

按照上述关于合成中间体37概括的一般方法，用三乙胺(36.4ml， 262.54mmol)和氯甲酸乙酯(25.2ml，262，54mmol)处理5-氯羟基吲 哚(化合物VIII)(20.0g，119.34)90分钟，加水处理后获得标题化合 物(36.87g，99％)，呈淡粉色结晶性固体(HPLC纯度：97％)。MS(ESI-)： 310.1。
中间体50：5-氯-2-氧二氢吲哚-1，3-二羧酸二乙酯(参见流程1c，化 合物XXVI)

0-5℃下，将4-二甲氨基吡啶(14.45g，118.28mmol)分批加入到5- 氯-2-[(乙氧基羰基)氧基]-1H-吲哚-1-羧酸乙酯(中间体49)(36.87g， 118.28mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(100ml)溶液中，控制内温不超过 5℃。生成稠的悬浮液，用N，N-二甲基甲酰胺多次稀释(总容积：350ml)以 便搅拌。0-5℃维持2小时后，加入氯化氢(发烟，37％；9.8ml)的水(480 ml)溶液，速率控制在使内温维持于15℃以下。滤出沉淀，0-5℃下水洗 (2×100ml)，干燥后获得标题化合物(7.45g，70％)，呈灰白色粉末 (HPLC纯度：94％)。MS(ESI+)：312.2；MS(ESI-)：310.2。
中间体51：3-(2-叔丁氧基-2-氧乙基)5-氯-2-氧二氢吲哚-1，3-二羧酸 二乙酯(参见流程1c，化合物XXVII)

室温下，将1，8-二氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯(2.63ml，17.64mmol) 滴加到5-氯-2-氧二氢吲哚-1，3-二羧酸二乙酯(中间体50)(5.0g，16.04 mmol)的无水N，N-二甲基甲酰胺(80ml)溶液中，滴加速率控制在维持内 温低于30℃。室温下持续搅拌1小时后，加入溴乙酸叔丁酯(2.73ml，18.45 mmol)，继续搅拌72h。加水(100ml)，产品用叔丁基甲基醚(2×50ml)提 取，合并提取液后用盐水(50ml)洗涤，干燥(MgSO4)。获得红色固体(7.11 g)，快速层析(正庚烷/乙酸乙酯＝15％；增加至20％)纯化后获得标题化 合物(4.00g，59％)，呈无色固体(H PLC纯度：99％)。MS(ESI+)：426.3。
中间体52：[5-氯-1，3-双(乙氧基羰基)-2-氧-2，3-二氢-1H-吲哚-3-基] 乙酸(参见流程1c，化合物XXVIII)

0-5℃下，将三氟乙酸(3.18ml，42.97mmol)加入到3-(2-叔丁氧基 -2-氧乙基)5-氯-2-氧二氢吲哚-1，3-二羧酸二乙酯(中间体51)(1.83g， 4.30mmol)的二氯甲烷(30ml)溶液中。0-5℃搅拌30分钟后室温下搅拌 过夜。浓缩，真空干燥，得标题化合物(1.57g，99％)，呈无色油(HPLC 纯度：85％)。MS(ESI+)：370.2。
中间体53：5-氯-1’(2-氟苄基)-2’H，5’H-螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-2，2’，5’(1H)-三酮(参见流程1a、1c、4、5，化合物III)

0-5℃下，将1，1’-羰基-二咪唑(820mg，5.03mmol)加入到[5-氯 -1，3-双(乙氧基羰基)-2-氧-2，3-二氢-1H-吲哚-3-基]乙酸(中间体52) (1.55g，4.1.9mmol)的四氢呋喃(20ml)溶液中。0-5℃搅拌10分钟后 室温下搅拌3小时。加入2-氟-苄胺(0.57ml，5.03mmol)，室温下继续 搅拌24小时。溶液再加热至回流24小时，然后加水(25ml)。用叔丁基甲 基醚(3×15ml)提取产品，合并提取液后干燥(MgSO4)，获得红棕色固体 (1.92g)。用甲苯(25ml)重结晶后获得标题化合物(810mg，54％)，呈 灰白色固体(HPLC纯度96％)。MS(ESI+)：359.0；MS(ESI-)：357.0。
中间体54：(5’-氯-2，2’5’-三氧螺[咪唑烷-4，3’-吲 哚]-1’(2’H)-基)乙酸叔丁酯(参见流程7b，化合物IXb)

按照上述关于合成中间体18概括的一般方法，将(5-氯-2，3-二氧-2，3- 二氢-1H-吲哚-1-基)乙酸叔丁酯(中间体44)(8.17g，27.64mmol)与 氰化钾(2.39g，36.76mmol)和碳酸铵(21.24g，221.0mmol)于乙醇/ 水＝2∶1(300ml)中反应90分钟，获得标题化合物(7.38g，73％)，呈 深紫色固体(HPLC纯度：63％)。MS(ESI-)：364.3。
实施例1：[5-氯-1’-[(2-甲基-1，3-噻唑-4-基)甲基]-2，2’，5’-三 氧螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸

按照关于实施例12概括的一般方法(方法D)，从5-氯-1H-螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-2，2’，5’-三酮(中间体9)开始，分离到标题化合物， 呈白色固体，60％收率(96％HPLC纯度)。MS(ESI+)：420.8；MS(ESI-)：418.7。
实施例2：[5-氯-1’-(2，4-二氯苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸

按照关于实施例12概括的一般方法(方法D)，从5-氯-1H-螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-2，2’，5’-三酮(中间体9)开始，分离到标题化合物， 呈白色固体，65％收率(90％HPLC纯度)。MS(ESI+)：468.8；MS(ESI-)：466.7。
实施例3：[5-氯-2，2’，5’-三氧-1’-(喹啉-2-基甲基)螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸

按照关于实施例12概括的一般方法(方法D)，从5-氯-1H-螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-2，2’，5’-三酮(中间体9)开始，分离到标题化合物， 呈白-棕色固体，55％收率(79.5％HPLC纯度)。MS(ESI+)：450.9；MS(ESI-)： 448.8。
实施例4：[5-氯-1’-(4-氰基苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’- 吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸

按照关于实施例12概括的一般方法(方法D)，从5-氯-1H-螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-2，2’，5’-三酮(中间体9)开始，分离到标题化合物， 呈浅褐色固体，66％收率(82％HPLC纯度)。MS(ESI+)：424.9；MS(ESI-)： 422.8。
实施例5：[5-氯-1’-(3-氯苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡 咯烷]-1(2H)-基]乙酸

按照关于实施例12概括的一般方法(方法D)，从5-氯-1H-螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-2，2’，5’-三酮(中间体9)开始，分离到标题化合物， 呈浅褐色固体，61％收率(91％HPLC纯度)。
或者，用三甲基碘硅烷(0.31ml，2.24mmol)处理[5-氯-1’-(3-氯 苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基)乙酸甲酯(中 间体48)(250mg，0.56mmol)的氯仿或乙腈(10ml)溶液，加热回流 至反应完全。加入1.0N HCl(10ml)，产品用乙酸乙酯或氯仿(3×5ml) 提取，合并提取液后用饱和硫代硫酸钠溶液(10ml)洗涤，干燥(MgSO4)， 获得标题化合物，呈浅黄色固体，收率定量(使用氯仿，75％HPLC纯度；使 用乙腈，68％HPLC纯度)。MS(ESI+)：434.3；MS(ESI-)：431.4。
实施例6：[5-氯-1’-(3，4-二氯苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸

按照关于实施例12概括的一般方法(方法D)，从5-氯-1H-螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-2，2’，5’-三酮(中间体9)开始，分离到标题化合物， 呈浅褐色固体，70％收率(94％HPLC纯度)。MS(ESI+)：468.7；MS(ESI-)：465.6。
实施例7：[5-氯-1’-(2-氟苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡 咯烷]-1(2H)-基]乙酸

按照关于实施例12概括的一般方法(方法D)，从5-氯-1H-螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-2，2’，5’-三酮(中间体9)开始，分离到标题化合物， 呈浅褐色固体，72％收率(85％HPLC纯度)。MS(ESI+)：417.7；MS(ESI-)： 415.6。
实施例8：[5-氯-1’-(4-氟苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡 咯烷]-1(2H)-基]乙酸

按照关于实施例12概括的一般方法(方法D)，从5-氯-1H-螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-2，2’，5’-三酮(中间体9)开始，分离到标题化合物， 呈浅褐色固体，73％收率(92％HPLC纯度)。MS(ESI+)：417.8；MS(ESI-)：415.6。
实施例9：[5-氯-1’-(1-萘基甲基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’- 吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸

按照关于实施例12概括的一般方法(方法D)，从5-氯-1H-螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-2，2’，5’-三酮(中间体9)开始，分离到标题化合物， 为棕色发泡物，76％收率(93.4％HPLC纯度)。MS(ESI+)：449.8；MS(ESI-)： 447.6。
实施例10：[5-氯-2，2’，5’-三氧-1’-(3-苯氧基苄基)螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸

按照关于实施例12概括的一般方法(方法D)，从5-氯-1H-螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-2，2’，5’-三酮(中间体9)开始，分离到标题化合物， 呈黑色固体，72％收率(92％HPLC纯度)。MS(ESI+)：491.9；MS(ESI-)：489.8。
实施例11：[5-氯-1’-(3-氟苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’- 吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸

按照关于实施例12概括的一般方法(方法D)，从5-氯-1H-螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-2，2’，5’-三酮(中间体9)开始，分离到标题化合物， 呈浅褐色固体，69％收率(91％HPLC纯度)。MS(ESI+)：417.8；MS(ESI-)： 415.6。
实施例12：合成通式Ia(R 1 、R 2 和R 3 定义同上)的螺二氢吲哚酮衍生物 (流程1、6)的一般方法：(1’-苄基-5-氯-2，2’，5’-三氧-螺[吲哚-3，3’- 吡咯烷]-1-基)乙酸

方法A：
搅拌下，将(1’-苄基-5-氯-2，2’，5’-三氧-螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1-基)-乙酸叔丁酯(中间体16)(800mg，1.76mmol)的无水二氯甲 烷(20ml)溶液于冰-水浴中冷却，用三氟乙酸(1.0ml)处理。冷却下搅 拌30min后，升温至室温。2小时后，薄层色谱(硅胶；乙酸乙酯/石油醚 (40-60)[1∶1])显示几乎未反应，再加入三氟乙酸(1.0ml)，室温下搅拌 48小时。真空除去溶剂，加入甲苯(50ml)。过滤获得(1’-苄基-5-氯 -2，2’，5’-三氧-螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-1-基]乙酸粗品，再用甲苯(25 ml)和石油醚(40-60)(25ml)洗涤。硅胶快速层析(乙酸乙酯洗脱)纯 化后获得白色固体(401mg，57％)，m.pt.205-207℃。
1H NMR(400MHz，CDCl3+DMSO(d6)；Me4Si)：3.06(d，1H)，3.32(d， 1H)，4.30(d，1H)，4.60(d，1H)，4.75(s，2H)，6.83(d，1H)，7.11(d， 1H)，7.33(m，5H)，7.43(s，1H)。MS(ESI+)399.9，(ESI-)397.8。
方法B：(路线A，平行方法1)
步骤1：每个管子都装有(5-氯-2，2’，5’-三氧-螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1-基)乙酸叔丁酯(中间体13)(73mg，0.2mmol)、碳酸钾(83mg， 0.6mmol)和无水N，N-二甲基甲酰胺(2ml)。加入合适的烷化剂(0.24 mmol)，反应混合物50℃搅拌过夜(考虑到烷化剂不稳定而在室温下进行反 应的例子除外)。当烷化剂是α-甲基苄基溴或类似物时，反应在CEM Discover微波反应器中于150℃进行30分钟。有些例子由于所使用的烷化 剂是其盐酸盐形式，则使用2倍量的碳酸钾。每个反应都加水(约5ml)并 用乙酸乙酯(3×5ml(大约))提取。提取液使用Genevac HT4在管子中于 60℃浓缩2小时，然后用于下一步。
步骤2：每一个步骤1中的粗产品都用三氟乙酸的无水二氯甲烷 10％(v/v)溶液(3ml)处理，室温搅拌72小时。每个反应混合物都加入甲苯 (1ml)，移出磁力搅拌子，用Genevac HT4除去溶剂，先在不完全真空(vac ramp)条件下于45℃下达1h50，然后在完全真空条件下于50℃下达45分 钟。每个管子中都加入N，N-二甲基甲酰胺(1ml)溶解残留物，然后转移到 微孔板上进行自动反相制备色谱。
方法C：(路线B，平行方法2)
步骤1：反应器中加入6-氯-1H-螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-2，2’，5’- 三酮(中间体12)(300mg，1.198mmol)、无水N，N-二甲基甲酰胺(2.5ml) 和叔丁醇钾(141mg，1.198mmol)，或5-三氟甲氧基-1H-螺[吲哚-3，3’- 吡咯烷]-2，2’，5’-三酮(中间体11)(400mg，1.6mmol)、无水N，N-二 甲基甲酰胺(2.5ml)和叔丁醇钾(188mg，1.6mmol)。室温搅拌40分钟后， 加入合适的烷化剂(1eq)，室温下搅拌18小时。如果所用烷化剂是其盐酸 盐形式，则在加入反应混合物之前先与另外1当量叔丁醇钾于无水N，N-二 甲基甲酰胺(1ml)中混合。加水(25ml)，反应混合物用乙酸乙酯(3×25ml) 提取。合并提取液后干燥(MgSO4)，真空除去溶剂后得粗产品，硅胶快速层 析(用含有增加量乙酸乙酯的石油醚(40-60)洗脱)纯化。产品经1H NMR检验， 纯度符合要求的用于下一步。
步骤2：每个管子中都装有合适的步骤2的产品(0.2mmol)，溶解于无 水N，N-二甲基甲酰胺(2ml)中。依次加入叔丁醇钾(25mg，0.22mmol)和 溴乙酸叔丁酯(0.04ml，0.22mmol)。室温下搅拌3小时后，将混合物静置 18小时。每个反应混合物都加水(约5ml)并用乙酸乙酯(3×5ml(大约))提 取。提取液使用Genevac HT4在管子中于60℃浓缩2小时，然后用于下一 步。
步骤3：最后一步按照方法B的最后一步(步骤2)进行。
方法D：(路线B，平行方法3)
步骤1：反应器中加入5-氯-1H-螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-2，2’，5’- 三酮(中间体9)(500mg，1.9mmol)、无水N，N-二甲基甲酰胺(3ml)和 叔丁醇钾(235mg，1.9mmol)，或6-氯-1H-螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-2，2’，5’-三酮(中间体12)(300mg，1.2mmol)、无水N，N-二甲基 甲酰胺(2.5ml)和叔丁醇钾(141mg，1.2mmol)，或5-三氟甲氧基-1H-螺[吲 哚-3，3’-吡咯烷]-2，2’，5’-三酮(中间体11)(400mg，1.6mmol)、无 水N，N-二甲基甲酰胺(2.5ml)和叔丁醇钾(188mg，1.6mmol)。室温搅拌 40分钟后，加入合适的烷化剂(1eq)，室温下搅拌18小时。如果所用烷化 剂是其盐酸盐形式，则在加入反应混合物之前先与另外1当量叔丁醇钾于无 水N，N-二甲基甲酰胺(1ml)中混合。加水(25ml)，反应混合物用乙酸乙 酯(3×25ml)提取。合并提取液后干燥(MgSO4)，真空除去溶剂后得粗产品， 硅胶快速层析(用含有增加量乙酸乙酯的石油醚(40-60)洗脱)纯化。产品经 1H NMR检验，纯度符合要求的用于下一步。
步骤2：采用了2种不同的方法，均在下面叙述：
每个管子中都装有合适的步骤1的产品(0.2mmol)，溶解于无水N，N- 二甲基甲酰胺(2ml)中。依次加入叔丁醇钾(25mg，0.22mmol)和4-溴丁 酸叔丁酯(0.04ml，0.22mmol)。反应混合物50℃加热18小时。加水(约 5ml)并用乙酸乙酯(3×5ml(大约))提取。提取液使用Genevac HT4在管子 中于60℃浓缩2小时，然后用于下一步。
每个管子中都装有合适的步骤1的产品(0.2mmol)，溶解于无水四氢呋 喃(2ml)中。加入氢化钠(60％油分散物，9mg，0.22mmol)，室温搅拌40 分钟后，加入丙烯酸叔丁酯(0.04ml，0.26mmol)。反应混合物30℃加热 18小时。加水(约5ml)并用乙酸乙酯(3×5ml(大约))提取。提取液使用 Genevac HT4在管子中于60℃浓缩2小时，然后用于下一步。
步骤3：最后一步按照方法B的最后一步(步骤2)进行。
实施例13：[5-氯-1’-(4-氯苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’- 吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸

按照关于实施例12概括的一般方法(方法D)，从5-氯-1H-螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-2，2’，5’-三酮(中间体9)开始，分离到标题化合物，呈 白色固体，58％收率(97％HPLC纯度)。MS(ESI+)：434.3；MS(ESI-)：432.4。
实施例14：[5-氯-1’-(4-甲氧基苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸

按照关于实施例12概括的一般方法(方法D)，从5-氯-1H-螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-2，2’，5’-三酮(中间体9)开始，分离到标题化合物，呈 白色固体，80％收率(97％HPLC纯度)。MS(ESI+)：429.8；MS(ESI-)：427.8。
实施例15：[5-氯-1’-(3-甲氧基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡 咯烷]-1(2H)-基]乙酸

按照关于实施例12概括的一般方法(方法D)，从5-氯-1H-螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-2，2’，5’-三酮(中间体9)开始，分离到标题化合物，呈 浅褐色固体，75％收率(91％HPLC纯度)。MS(ESI+)：429.8；MS(ESI-)：427.8。
实施例16：[5-氯-1’-(2，3-二氢-1，4-苯并二噁烯-2-基甲基)- 2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸

按照关于实施例12概括的一般方法(方法D)，从5-氯-1H-螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-2，2’，5’-三酮(中间体9)开始，分离到标题化合物，呈 白色固体，70％收率(86％HPLC纯度)。MS(ESI+)：434.3；MS(ESI-)：432.4。
实施例17：[5-氯-2，2’，5’-三氧-1’-(吡啶-2-基甲基)螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸

按照关于实施例12概括的一般方法(方法D)，从5-氯-1H-螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-2，2’，5’-三酮(中间体9)开始，分离到标题化合物，呈 白色固体，69％收率(91.2％HPLC纯度)。MS(ESI+)：400.8；MS(ESI-)：398.9。
实施例18：[5-氯-2，2’，5’-三氧-1’-{[5-(三氟甲基)-2-呋喃基]甲 基}螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸

按照关于实施例12概括的一般方法(方法D)，从5-氯-1H-螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-2，2’，5’-三酮(中间体9)开始，分离到标题化合物，呈 棕色固体，72％收率(96.7％HPLC纯度)。MS(ESI+)：457.8；MS(ESI-)：455.8。
实施例19：[5-氯-1’-(4-甲基苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’- 吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸

按照关于实施例12概括的一般方法(方法D)，从5-氯-1H-螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-2，2’，5’-三酮(中间体9)开始，分离到标题化合物，呈 棕色固体，65％收率(88％HPLC纯度)。MS(ESI+)：413.8；MS(ESI-)：411.8。
实施例20：[5-氯-2，2’，5’-三氧-1’-[3-(三氟甲基)苄基]螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸

按照关于实施例12概括的一般方法(方法D)，从5-氯-1H-螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-2，2’，5’-三酮(中间体9)开始，分离到标题化合物，呈 浅褐色油状物，58％收率(92％HPLC纯度)。MS(ESI+)：467.8；MS(ESI-)：465.6。
实施例21：[5-氯-1’-(2-萘基甲基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’- 吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸

按照关于实施例12概括的一般方法(方法D)，从5-氯-1H-螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-2，2’，5’-三酮(中间体9)开始，分离到标题化合物，呈 浅褐色固体，74％收率(93％HPLC纯度)。MS(ESI+)：449.9；MS(ESI-)：447.9。
实施例22：[5-氯-2，2’，5’-三氧-1’-(1-苯基乙基)螺[吲哚-3，3’- 吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸

按照关于实施例12概括的一般方法(方法D)，从5-氯-1H-螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-2，2’，5’-三酮(中间体9)开始，分离到标题化合物，呈 橙色固体，26％收率(94.5％HPLC纯度)。MS(ESI+)：413.8；MS(ESI-)：411.7。
实施例23：[5-氯-2，2’，5’-三氧-1’-(2-苯基乙基)螺[吲哚-3，3’- 吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸

按照关于实施例12概括的一般方法(方法D)，从5-氯-1H-螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-2，2’，5’-三酮(中间体9)开始，分离到标题化合物，呈 棕色固体，67％收率(96％HPLC纯度)。MS(ESI+)：413.8；MS(ESI-)：411.6。
实施例24：[5-氯-1’-(咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基甲基)-2，2’，5’-三 氧螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸

按照关于实施例12概括的一般方法(方法D)，从5-氯-1H-螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-2，2’，5’-三酮(中间体9)开始，分离到标题化合物，呈 棕色固体，65％收率(95.9％HPLC纯度)。MS(ESI+)：439.8；MS(ESI-)：437.8。
实施例25：[5-氯-2，2’，5’-三氧-1’-[(2E)-3-苯基丙-2-烯-1-基] 螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸

按照关于实施例12概括的一般方法(方法D)，从5-氯-1H-螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-2，2’，5’-三酮(中间体9)开始，分离到标题化合物，呈 浅褐色固体，60％收率(98％HPLC纯度)。MS(ESI+)：425.8；MS(ESI-)：423.6。
实施例26：[5-氯-2，2’，5’-三氧-1’-[4-(三氟甲基)苄基]螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸

按照关于实施例12概括的一般方法(方法D)，从5-氯-1H-螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-2，2’，5’-三酮(中间体9)开始，分离到标题化合物，呈 浅褐色固体，63％收率(92％HPLC纯度)。MS(ESI+)：467.7；MS(ESI-)：465.6。
实施例27：4-(1’-苄基-6-氯-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]丁酸

按照关于实施例12概括的一般方法(方法C)，从6-氯-1H-螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-2，2’，5’-三酮(中间体12)开始，分离到标题化合物，呈 浅褐色固体，17％收率(90.4％HPLC纯度)。MS(ESI+)：427.9；MS(ESI-)：425.8。
实施例28：[5-氯-1’-(2-乙氧基乙基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸

按照关于实施例12概括的一般方法(方法D)，从5-氯-1H-螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-2，2’，5’-三酮(中间体9)开始，分离到标题化合物，呈 浅褐色固体，69％收率(89％HPLC纯度)。MS(ESI+)：381.8；MS(ESI-)：379.8。
实施例29：[1’-[2-(苄基氧基)乙基]-5-氯-2，2’，5’-三氧螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸

按照关于实施例12概括的一般方法(方法D)，从5-氯-1H-螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-2，2’，5’-三酮(中间体9)开始，分离到标题化合物，呈 浅褐色固体，65％收率(93％HPLC纯度)。MS(ESI+)：443.9；MS(ESI-)：441.8。
实施例30：[5-氯-2，2’，5’-三氧-1’-(2-苯氧基乙基)螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸

按照关于实施例12概括的一般方法(方法D)，从5-氯-1H-螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-2，2’，5’-三酮(中间体9)开始，分离到标题化合物，呈 浅褐色固体，71％收率(91％HPLC纯度)。MS(ESI+)：429.8；MS(ESI-)：427.8。
实施例31：[5-氯-2，2’，5’-三氧-1’-(3-苯基丙-2-炔-1-基)螺[吲 哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸

按照关于实施例12概括的一般方法(方法D)，从5-氯-1H-螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-2，2’，5’-三酮(中间体9)开始，分离到标题化合物，呈 黑色固体，56％收率(84.5％HPLC纯度)。MS(ESI+)：423.8；MS(ESI-)：421.7。
实施例32：(1’-丁-2-炔-1-基-5-氯-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’- 吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸

按照关于实施例12概括的一般方法(方法D)，从5-氯-1H-螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-2，2’，5’-三酮(中间体9)开始，分离到标题化合物，呈 白色固体，69％收率(94％HPLC纯度)。MS(ESI+)：361.7；MS(ESI-)：359.8。
实施例33：[5-氯-1’-[(1-甲基-1H-咪唑-2-基)甲基]-2，2’，5’-三 氧螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸

按照关于实施例12概括的一般方法(方法D)，从5-氯-1H-螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-2，2’，5’-三酮(中间体9)开始，分离到标题化合物，呈 白色固体，51％收率(87％HPLC纯度)。MS(ESI+)：403.7；MS(ESI-)：401.8。
实施例34：4-[5-氯-1’-(4-氟苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’- 吡咯烷]-1(2H)-基]丁酸

按照关于实施例12概括的一般方法(方法D)，从5-氯-1H-螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-2，2’，5’-三酮(中间体9)开始，分离到标题化合物，呈 黄色固体，64％收率(82.2％HPLC纯度)。MS(ESI+)：445.7；MS(ESI-)：443.8。
实施例35：4-[5-氯-1’-(4-氯苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’- 吡咯烷]-1(2H)-基]丁酸

按照关于实施例12概括的一般方法(方法D)，从5-氯-1H-螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-2，2’，5’-三酮(中间体9)开始，分离到标题化合物，呈 白色固体，62％收率(90％HPLC纯度)。MS(ESI+)：462.3；MS(ESI-)：460.2。
实施例36：4-[5-氯-2，2’，5’-三氧-1’-[4-(三氟甲基)苄基]螺[吲 哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]丁酸

按照关于实施例12概括的一般方法(方法D)，从5-氯-1H-螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-2，2’，5’-三酮(中间体9)开始，分离到标题化合物，呈 浅黄色固体，60％收率(74.3％HPLC纯度)。MS(ESI+)：495.9；MS(ESI-)：493.8。
实施例37：[1’-苄基-2，2’，5’-三氧-5-(三氟甲氧基)螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸

按照关于实施例12概括的一般方法(方法C)，从5-三氟甲氧基-1H-螺 [吲哚-3，3’-吡咯烷]-2，2’，5’-三酮(中间体11)开始，分离到标题化合 物，呈白色固体，67％收率(96％HPLC纯度)。MS(ESI+)：449.5；MS(ESI-)： 447.3。
实施例38：[1’-(4-甲氧基苄基)-2，2’，5’-三氧-5-(三氟甲氧基)螺 [吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸

按照关于实施例12概括的一般方法(方法C)，从5-三氟甲氧基-1H-螺 [吲哚-3，3’-吡咯烷]-2，2’，5’-三酮(中间体11)开始，分离到标题化合 物，呈浅棕色固体，74％收率(79％HPLC纯度)。MS(ESI+)：479.4；MS(ESI-)： 477.3。
实施例39：[1’-(3-氟苄基)-2，2’，5’-三氧-5-(三氟甲氧基)螺[吲 哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸

按照关于实施例12概括的一般方法(方法C)，从5-三氟甲氧基-1H-螺 [吲哚-3，3’-吡咯烷]-2，2’，5’-三酮(中间体11)开始，分离到标题化合 物，呈白色固体，73％收率(96.9％HPLC纯度)。MS(ESI+)：467.4；MS(ESI-)： 465.3。
实施例40：[1’-(2-氟苄基)-2，2’，5’-三氧-5-(三氟甲氧基)螺[吲 哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸

按照关于实施例12概括的一般方法(方法C)，从5-三氟甲氧基-1H-螺 [吲哚-3，3’-吡咯烷]-2，2’，5’-三酮(中间体11)开始，分离到标题化合 物，呈白色固体，58％收率(97.3％HPLC纯度)。MS(ESI+)：467.4；MS(ESI-)： 465.3。
实施例41：[2，2’，5’-三氧-5-(三氟甲氧基)-1’-[3-(三氟甲基)苄 基]-螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸

按照关于实施例12概括的一般方法(方法C)，从5-三氟甲氧基-1H-螺 [吲哚-3，3’-吡咯烷]-2，2’，5’-三酮(中间体11)开始，分离到标题化合 物，呈浅棕色固体，68％收率(98.9％HPLC纯度)。MS(ESI+)：517.3；MS(ESI-)： 515.3。
实施例42：[1’-(1-萘基甲基)-2，2’，5’-三氧-5-(三氟甲氧基)螺 [吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸

按照关于实施例12概括的一般方法(方法C)，从5-三氟甲氧基-1H-螺 [吲哚-3，3’-吡咯烷]-2，2’，5’-三酮(中间体11)开始，分离到标题化合 物，呈白色固体，65％收率(98.9％HPLC纯度)。MS(ESI+)：499.5；MS(ESI-)： 497.3。
实施例43：[1’-(4-氯苄基)-2，2’，5’-三氧-5-(三氟甲氧基)螺[吲 哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸

按照关于实施例12概括的一般方法(方法C)，从5-三氟甲氧基-1H-螺 [吲哚-3，3’-吡咯烷]-2，2’，5’-三酮(中间体11)开始，分离到标题化合 物，呈浅棕色固体，56％收率(71.8％HPLC纯度)。MS(ESI+)：483.8；MS(ESI-)： 481.7。
实施例44：[1’-(4-氟苄基)-2，2’，5’-三氧-5-(三氟甲氧基)螺[吲 哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸

按照关于实施例12概括的一般方法(方法C)，从5-三氟甲氧基-1H-螺 [吲哚-3，3’-吡咯烷]-2，2’，5’-三酮(中间体11)开始，分离到标题化合 物，呈白色固体，66％收率(82.7％HPLC纯度)。MS(ESI+)：467.5；MS(ESI-)： 465.2。
实施例45：4-[5-氯-1’-(4-甲氧基苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]丁酸

按照关于实施例12概括的一般方法(方法C)，从5-氯-1H-螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-2，2’，5’-三酮(中间体9)开始，分离到标题化合物，呈 浅黄色固体，61％收率(100％HPLC纯度)。MS(ESI+)：457.9；MS(ESI-)：455.8。
实施例46：4-[5-氯-1’-(2-氟苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’- 吡咯烷]-1(2H)-基]丁酸

按照关于实施例12概括的一般方法(方法C)，从5-氯-1H-螺[吲哚 -3，3’-吡咯烷]-2，2’，5’-三酮(中间体9)开始，分离到标题化合物，呈 浅黄色固体，54％收率(96.5％HPLC纯度)。MS(ESI+)：445.9；MS(ESI-)：443.6。
实施例47：[(3S)-1’-苄基-5-氯-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡 咯烷]-1(2H)-基]乙酸

实施例12经手性柱ChiralPak-AD-H纯化(乙醇：0.5％甲酸为洗脱剂) 后，分离到标题化合物，呈白色固体(100％HPLC纯度)。MS(ESI+)：399.8； MS(ESI-)：397.7；保留时间(手性HPLC)：8.30min。
实施例48：[(3R)-1’-苄基-5-氯-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡 咯烷]-1(2H)-基]乙酸

实施例12经手性柱ChiralPak-AD-H纯化(乙醇：0.5％甲酸为洗脱剂) 后，分离到标题化合物，呈白色固体(100％HPLC纯度)。MS(ESI+)：399.8； MS(ESI-)：397.7；保留时间(手性HPLC)：5.62min。
实施例49-108：
按照关于实施例12概括的一般方法(方法C)，还制备了下列化合物。 有些化合物是单一的对映体，通过手性柱ChiralPak-AD-H纯化(乙醇和0.5％ 甲酸为洗脱剂)后获得。









实施例109：[5’-氯-1-(5-氯-2-氟苄基)-2，2’，5-三氧螺[咪唑烷 -4，3’-吲哚]-1’(2’H)-基]乙酸

冰浴下，用三氟乙酸(1.00ml)处理[5’-氯-1-(5-氯-2-氟苄 基)-2，2’，5-三氧螺[咪唑烷-4，3’-吲哚]-1’(2’H)-基]乙酸叔丁酯 (168.00mg；0.33mmol)的DCM(4.00ml)溶液。搅拌4小时后蒸发溶剂。 加入甲苯2次并蒸发，获得标题化合物，呈浅褐色固体，67.5％收率 (96.1％HPLC纯度)。MS(ESI+)：452.1；MS(ESI-)：454.4。
实施例110-112：
按照关于实施例109概括的一般方法，从合适的中间体开始，还制备了 以下化合物：

实施例113：[5-氯-1’-氟苄基-2，5’-二氧螺[吲哚-3，3’-吡咯 烷]-1(2H)-基]乙酸

冰浴下，用三氟乙酸(2.00ml)处理[5-氯-1’-(5-氯-2-氟苄 基)-2，5’-二氧螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸叔丁酯(中间体33) (110mg；0.25mmol)的DCM(8.00ml)溶液。室温搅拌4小时后真空除去 溶剂。加入甲苯2次并真空除去，获得标题化合物，呈白色固体，95％收率 (99.8％HPLC纯度)。MS(ESI+)：358.3；MS(ESI-)：356.3。
实施例114-116：
按照关于实施例113概括的一般方法，从合适的中间体开始，还制备了 以下化合物：

实施例117：[5-氯-1’-[(5-甲基-3-苯基异噁唑-4-基)甲基]-2，2’- 二氧螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸

冰浴下，将三氟乙酸(2.00ml)加入到[5-氯-1’-[(5-甲基-3-苯基异 噁唑-4-基)甲基]-2，2’-二氧螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸叔丁 酯(中间体42)(80.00mg；0.15mmol)的DCM(8.00ml)溶液中。室温搅 拌5小时后真空除去溶剂。加入甲苯2次并真空除去，获得标题化合物，呈 白色固体，91％收率(96.3％HPLC纯度)。MS(ESI+)：466.3；MS(ESI-)：464.4。
实施例118：药物制剂的制备
下面的制剂实施例阐述代表性的本发明药物组合物，本发明并不受其限制。
制剂1-片剂
将式I所示螺-α-吲哚满酮干粉以约1∶2的重量比与干燥的明胶粘合 剂混合。加入少量硬脂酸镁作为润滑剂。用压片机将混合物制成240-270mg 片剂(每片含80-90mg活性螺-α-吲哚满酮化合物)。
制剂2-胶囊剂
将式I所示螺-α-吲哚满酮干粉以约1∶1的重量比与淀粉稀释剂混合。 将混合物填充到250mg胶囊中(每个胶囊包含1254mg活性螺-α-吲哚满酮 化合物)。
制剂3-液体剂
将式I所示螺-α-吲哚满酮(1250mg)、蔗糖(1.75g)和黄原酸胶(4mg) 混合，通过10号筛孔美国筛，然后与先前准备的微晶纤维素和羧甲基纤维 素钠(11：89，50mg)的水溶液混合。将苯甲酸钠(10mg)、香料和色素用 水稀释，搅拌下加入溶液中。然后加入足量水使总体积达到5ml。
制剂4-片剂
将式I所示螺-α-吲哚满酮干粉以约1∶2的重量比与干燥的明胶粘合 剂混合。加入少量硬脂酸镁作为润滑剂。用压片机将混合物制成450-900mg 片剂(每片含150-300mg活性螺-α-吲哚满酮化合物)。
制剂5-注射剂
将式I所示螺-α-吲哚满酮溶解于缓冲的灭菌盐水可注射介质中，浓度 为约5mg/ml。
生物分析
实施例119：pCEP4-hCRTH2哺乳动物表达载体的构建
以人膀胱cDNA文库为模板用PCR扩增CRTH2 cDNA，用含HindIII和 BamHI限制性酶切位点的特定引物克隆到pCEP4载体(Invitrogen)中。该 载体的构建在索耶(Sawyer)等，英国药学杂志(Br.J.Pharmocol)2002，137， 1163-72中有详细描述。所克隆的cDNA的核苷酸序列与先前报告的hCRTH2 序列相同(Nagata等，1999，免疫学杂志(J.Immunol.)162，1278-1286)。
实施例120：pCEP4-hCRTH2-HEK293(EBNA)细胞系的建立
采用磷酸钙技术，用pCEP4-hCRTH2构建物转染HEK293(EBNA)细胞。 细胞于37℃、5％CO2氛围下，在德尔倍库氏(Dulbecco’s)改良的衣格尔的 (Eagle’s)F12培养基(Invitrogen)中培养，该培养基含10％热灭活胎牛 血清(TerraCell International，加拿大)、2mM谷氨酰胺、100U/ml青霉 素和100μg/ml链霉素(Invitrogen)。转染48小时后，细胞在300μg/ml潮 霉素B(Invitrogen)存在下生长4周，让抗生素抗性细胞增长以用于细胞 膜制备。
实施例121：hCRTH2表达膜的制备
在225cm2细胞培养瓶(康宁(Corning)，美国)的30ml培养基中培养表 达hCRTH2的贴壁HEK293(EBNA)细胞。用磷酸盐缓冲的盐水(PBS)淋洗 两次后，用含1mM EDTA的10ml PBS收集细胞，4℃、500xg离心5min， 于-80℃冷冻。将沉淀物再悬浮于50mM Tris-HCl(pH7.4)、2mM EDTA、 250mM蔗糖，含蛋白酶抑制剂混合物的片剂(完全无EDTA，罗氏(Roche)， 德国)，4℃培养30min。通过4℃氮空腔化(Parr Instruments，美国) (800p.s.i.，30min)破坏细胞，于4℃、500xg离心10min。弃去含 细胞核和细胞碎片的沉淀，上清液于4℃、45000xg离心60min。用Dounce 匀浆器将膜沉淀再悬浮于储备缓冲液(10mM HEPES/KOH(pH7.4)，1mM EDTA， 250mM蔗糖，蛋白酶抑制剂混合物片)，用液氮冷冻，-80℃储存。
实施例122：放射配体结合试验
本发明的化合物抑制PGD2与其受体CRTH2结合。抑制活性可用放射配 体结合试验(索耶等，英国药学杂志(Br.J.Pharmocol)2002，137， 1163-72)进行研究。放射配体结合试验在96孔板(康宁(Corning)，美国) 上终体积100μl的含1.5nM[3H]PGD2(Amersham，156Cie/mmol)和10μg hCRTH2 HEK293(EBNA)细胞膜蛋白的结合缓冲液(10mM HEPES/KOH pH7.4， 10mM MnCl2，蛋白酶抑制剂混合物片)中于室温下进行。在1μM PGD2(Cayman， 美国)的存在下测定非特异性结合.竞争的螺-α-吲哚满酮用二甲亚砜稀释， 使二甲亚砜的总体积保持恒定于1％二甲亚砜(Me2SO)。制备100μM和100pm 的系列稀释液。加入这些螺-α-吲哚满酮10μl。培养(室温60min)采用 通过GF/C Unifilter板(Whatman，美国)快速过滤加以终止。滤器用250μl Tris-HCl(pH7.4)、10mM MnCl2洗涤两次，结合于滤器上的残余放射配 体混合于100μl闪烁混合液(Optiphase，Supermix，Perkin Elmer，美国)，用 1450Micro-beta闪烁计数器(Wallac，英国)计数残余放射配体来确定 结合活性。对下面的代表性化合物进行了测试。所有化合物对PGD2结合的 抑制均比对CRTH2结合的抑制大70％以上。
(1’-苄基-5-氯-2，2’，5’-三氧螺〔吲哚-3，3’-吡咯烷〕-1(2H)- 基)乙酸；
(1’-苄基-5-氟-2，2’，5’-三氧螺〔吲哚-3，3’-吡咯烷〕-1(2H)- 基)乙酸；
4-(1’-烯丙基-5-氯-2，2’，5’-三氧螺〔吲哚-3，3’-吡咯烷〕-1(2H)- 基)丁酸；
(5-氯-1’-(2-甲氧基乙基)-2，2’，5’-三氧螺〔吲哚-3，3’-吡咯 烷〕-1(2H)-基)乙酸；
4-(1’-苄基-5-氯-2，2’，5’-三氧螺〔吲哚-3，3’-吡咯烷〕-1(2H)- 基)丁酸；
(1’-苄基-5-甲氧基-2，2’，5’-三氧螺〔吲哚-3，3’-吡咯烷〕 -1(2H)-基)乙酸；
〔5-氟-1’-〔(2-甲氧基乙氧基)甲基〕-2，2’，5’-三氧螺〔吲哚 -3，3’-吡咯烷〕-1(2H)-基)乙酸；
4-(1’-烯丙基-5-氟-2，2’，5’-三氧螺〔吲哚-3，3’-吡咯烷〕-1(2H)- 基)丁酸；
4-(1’-苄基-5-氟-2，2’，5’-三氧螺〔吲哚-3，3’-吡咯烷〕-1(2H)- 基)丁酸。
实施例123：Ki的测定(放射配体结合试验)
用对[3H]PGD2的平衡竞争结合试验测定Ki值。Ki值用下面的公式计算， 代表至少三个独立的剂量反应试验的平均值。Ki值给出了抑制[3H]PGD2与 CRTH2结合的50％所必需的配体的浓度。
Ki＝IC50/(1+[配体的浓度]/Kd)]
所有试验在96孔板上进行，按照以上所述的过滤试验，终体积为100μl。 膜和3[H]PGD2的浓度、以及阳性和阴性对照均与上面描述的相同。
在一个实施方案中，本发明的螺衍生物在浓度＜10μM时抑制CRTH2。在 另一个实施方案中，本发明的螺衍生物在浓度＜1μM时抑制CRTH2。在一个优 选的实施方案中，本发明的螺衍生物在浓度＜0.1μM时即抑制CRTH2。
本发明的代表性化合物的Ki值见表1。从中可以得知，所述式(I)化 合物对PGD2的结合显示比CRTH2显着的抑制作用。
表1
  化合物序   号   名称   Ki(nM)   1   [5-氯-1’-[(2-甲基-1，3-噻唑-4-基)甲基]-2，2’，5’-三   氧螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸   39   3   [5-氯-2，2’，5’-三氧-1’-(喹啉-2-基甲基)螺[吲哚   -3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸   93   4   [5-氯-1’-(4-氰基苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-   吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸   89   5   [5-氯-1’-(3-氯苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡   咯烷]-1(2H)-基]乙酸   73   6   [5-氯-1’-(3，4-二氯苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚   -3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸   100
  化合物序   号   名称   Ki(nM)   10   [5-氯-2，2’，5’-三氧-1’-(3-苯氧基苄基)螺[吲哚   -3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸   148   16   [5-氯-1’-(2，3-二氢-1，4-苯并二噁烯-2-基甲基)-   2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸   213   17   [5-氯-2，2’，5’-三氧-1’-(吡啶-2-基甲基)螺[吲哚   -3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸   170   18   [5-氯-2，2’，5’-三氧-1’-{[5-(三氟甲基)-2-呋喃基]甲   基}螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸   270   23   [5-氯-2，2’，5’-三氧-1’-(2-苯基乙基)螺[吲哚-3，3’-   吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸   267   24   [5-氯-1’-(咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基甲基)-2，2’，5’-三   氧螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸   705   25   [5-氯-2，2’，5’-三氧-1’-[(2E)-3-苯基丙-2-烯-1-基]螺   [吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸   768   28   [5-氯-1’-(2-乙氧基乙基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚   -3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸   1031   29   [1’-[2-(苄基氧基)乙基]-5-氯-2，2’，5’-三氧螺[吲哚   -3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸   1129   32   [5-氯-1’-[(1-甲基-1H-咪唑-2-基)甲基]-2，2’，5’-三氧   螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸   1817   35   4-[5-氯-2，2’，5’-三氧-1’-[4-(三氟甲基)苄基]螺[吲哚   -3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]丁酸   681   54   [5-氯-1’-(2-甲氧基苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚   -3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸   153   75   [5-氯-1’[(4-甲氧基-3，5-二甲基吡啶-2-基)甲基]-   2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸   510   76   [[5-氯-1’-[(4，6-二氯吡啶-3-基)甲基]-2，2’，5’-三氧   螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸   12
  化合物序   号   名称   Ki(nM)   77   [5-氯-2，2’，5’-三氧-1’-(2-噻吩基甲基)螺[吲哚   -3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸   75   78   [5-氯-1’-[(3，4-二甲氧基吡啶-2-基)甲基]-2，2’，5’-三   氧螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸   101   103   [5-氯-1’-{[2-(3-氯苯基)-1，3-噻唑-4-基]甲   基}-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙   酸   6   104   ][5-氯-1’-(2-氟苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡   咯烷]-1(2H)-基]乙酸   24   105   [5’-氯-1-(2-氟苄基)-2，2’，5-三氧螺[咪唑烷-4，3’-吲   哚]-1’(2’H)-基]乙酸   16   106   [5’-氯-1-[(5-甲基-3-苯基异噁唑-4-基)甲基]-2，2’，5-   三氧螺[咪唑烷-4，3’-吲哚]-1’(2’H)-基]乙酸   1120   107   (1-苄基-5’-氯-2，2’，5-三氧螺[咪唑烷-4，3’-吲   哚]-1’(2’H)-基)乙酸   300   108   [5’-氯-1-(2-氟苄基)-2，2’，5-三氧螺[咪唑烷-4，3’-吲   哚]-1’(2’H)-基]乙酸   4.8   109   (3R)-[5-氯-1’-(2-氟苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚   -3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸   28   110   (3S)-[5-氯-1’-(2-氟苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚   -3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸   8.4   111   (3S)-[5-氯-1’-(2-氟-5-氯苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚   -3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸   470   112   (3R)-[5-氯-1’-(2-氟苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚   -3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸   150   113   (1’-苄基-5’-氯-2，5’-二氧螺[吲哚-3，3’-吡咯   烷]-1(2H)-基]乙酸   630
  化合物序   号   名称   Ki(nM)   114   [5-氯-1’-[(3-甲基-5-苯基异噁唑-4-基)甲基]-2，5’-二   氧螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸   3.4   115   [5-氯-1’-(2-氟苄基)-2，5’-二氧螺[吲哚-3，3’-吡咯   烷]-1(2H)-基]乙酸   140   116   [5-氯-1’-(5-氯-2-氟苄基)-2，5’-二氧螺[吲哚-3，3’-吡   咯烷]-1(2H)-基]乙酸   22
实施例124：[35S]GTPγS结合试验
[35S]GTPγS试验测得由激动剂(PGD2)与CRTH2结合而产生的细胞膜 G-蛋白上鸟苷酸交换的增加。此过程可通过含G-蛋白和CRTH2的细胞膜与 GDP和[35S]GTPγS(放射标记的GTP耐水解类似物)体外培养而加以监测(见 哈里森(Harrison)等，生命科学(Life Sciences)74，489-508，2003)。添 加螺衍生物导致与CRTH2的结合，从而抑制激动剂的结合，作为刺激GTP/GDP 交换的抑制可被监测出来。
试验条件与实施例21中描述的放射配体结合试验相同。[35S]GTPγS结合 试验于30℃在96孔白色聚苯乙烯闪烁板(Perkin Elmer，美国)上进行， 终体积200μl，含2％二甲亚砜(Me2SO)。螺衍生物在20mM HEPES/KOH(pH7.4)， 10mM MgCl2、10μg/ml Saponin、3μM GDP、150mM NaCl(含10μg表达hCRTH2 受体的膜(Euroscreen，比利时))中培养10min。在10μM GTPγS存在下测 定非特异性结合。样品在PGD2浓度增加的情况下或在80nM PGD2的情况下培 养30min，分别测定激动剂活性和拮抗剂活性。接着，在样品中加入0.15nM [35S]GTPγS，培养30min后，于1000xg、4℃下离心10min以终止反应。 取出上清液，用1450微-β(Micro-beta)闪烁计数器测定[35S]GTPγS结合， 采用“Prism”(GraphPad Software，Inc.美国圣地亚哥)分析数据。在 96孔板上进行IC50值(即结合达到50％抑制所需的量(μM))的测定，按照上 面描述的过滤试验，终浓度为100μl。膜和放射配体的浓度、以及阳性和阴 性对照均与上面实施例122和123中所用的和描述的条件相同。
代表性化合物的IC50值见表2。从中可得出如下结论：式(1)所示化 合物对PGD2的结合显示比CRTH2显着的抑制作用。
表2
  化合物序号   名称   Ki(nM)   1   [5-氯-1’-[(2-甲基-1，3-噻唑-4-基)甲基]-2，2’，5’-三氧螺   [吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸   198   2   [5-氯-1’-(2，4-二氯苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡   咯烷]-1(2H)-基]乙酸   80   3   [5-氯-2，2’，5’-三氧-1’-(喹啉-2-基甲基)螺[吲哚-3，3’-吡   咯烷]-1(2H)-基]乙酸   200   4   [5-氯-1’-(4-氰基苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯   烷]-1(2H)-基]乙酸   305   5   [5-氯-1’-(3-氯苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯   烷]-1(2H)-基]乙酸   90   10   [5-氯-2，2’，5’-三氧-1’-(3-苯氧基苄基)螺[吲哚-3，3’-吡   咯烷]-1(2H)-基]乙酸   95   16   [5-氯-1’-(2，3-二氢-1，4-苯并二噁烯-2-基甲基)-2，2’，5’-   三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸   370   17   [5-氯-2，2’，5’-三氧-1’-(吡啶-2-基甲基)螺[吲哚-3，3’-吡   咯烷]-1(2H)-基]乙酸   980   18   [5-氯-2，2’，5’-三氧-1’-{[5-(三氟甲基)-2-呋喃基]甲基}螺   [吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸   420   76   [5-氯-1’-[(4，6-二氯吡啶-3-基)甲基]-2，2’，5’-三氧螺[吲   哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸   1300   103   [5-氯-1’-{2-(3-氯苯基)1，3-噻二唑-4-基]甲基}-2，2’，5’-   三氧螺[吲哚-3，3’-吡咯烷]-1(2H)-基]乙酸   46   104   [5-氯-1’-(2-氟苄基)-2，2’，5’-三氧螺[吲哚-3，3’-吡   咯烷]-1(2H)-基]乙酸]   190   107   (1-苄基-5’-氯-2，2’，5-三氧螺[咪唑烷-4，3’-吲   哚]-1’(2’H)-基)乙酸   72
实施例125：CHS模型
接触过敏反应模型可被用来评估螺衍生物对T细胞介导的皮肤炎症的 治疗效应。本模型是为了鉴定用于皮肤病学适应症如牛皮癣和过敏性接触性 皮炎而适宜地建立的(徐(Xu)等，实验医学杂志(J Exp Med.)183，1001-12， 1996)。它涉及致敏状态和随后的抗原(DNFB，2，4-二硝基氟苯)攻击。这 导致皮肤炎症，形成皮肤水肿和细胞浸润。可用测径器在攻击部位(小鼠耳 朵)测量水肿程度。在用DNFB攻击前30分钟静脉或口服(以10％Labrasol 为载体)给予本发明的化合物，与抗原攻击前仅用赋形剂处理的阳性对照组 相比，导致肿胀的减少从而减轻了皮肤炎症。阴性对照组小鼠不致敏，但用 DNFB攻击，因此不出现T相比依赖性炎症反应，也不形成水肿。Balb/c小 鼠得自CharlesRiver(Calcco，意大利)。动物置于常规动物设备中。处理 开始于平均周龄8-12周。
DNFB(2，4-二硝基氟苯)购自Sigma-Aldrich(美国St.Louis，MO)。
通过DNFB进行致敏和CHS攻击
对小鼠致敏和攻击，引起对DNFB的CHS。过敏相之后是攻击相。使用 前用丙酮/橄榄油(4/1)稀释DNFB。小鼠背部剃毛，在皮肤上施用25μl 0.5％DNFB溶液，使小鼠对DNFB过敏。5天后，在右耳双侧均施用10μl0.2％ DNFB(攻击)。第6天(攻击后1天)用测径器(Mitutoyo，意大利米兰)测 量耳朵厚度。耳朵肿胀的计算：((Tn-T5)右耳-(Tn-T5)左耳)，其中 Tn和T5分别代表研究n天和攻击前第5天的耳朵厚度。
两个代表性化合物的结果如下：
化合物83(60mg/kg，口服(po))引起耳肿胀减少40％。化合物105 (60mg/kg，po)引起耳肿胀减少50％。
实施例126：DK-PGD2引起小鼠血管渗出模型
Takeshita(2004)等描述了本试验。Balb/c小鼠(Elevage Janvier) (8周龄)在给予受试化合物(螺衍生物)后30分钟，在剃了毛的背部皮 内注射DK-PGD2(10μg，30μl)，并静脉注射伊文思蓝溶液(25mg/kg)。 攻击90分钟后，将动物处死。取下背部皮肤并取血样。渗出的染料(冲头 直径：5mm)用0.2ml甲酰胺提取，荧光定量(EI：585nm，E2：660nm)。 伊文思蓝渗出比表示如下：皮肤/血清X 1000。
代表性化合物(剂量30mg/kg)的血管渗出百分比见表3。
表3
  化合物序号   抑制(％)   83   77   105   60   109   38   111   65   112   61   113   55   114   44   115   45   116   51
参考文献列表
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WO 04/032848
WO 05/007094
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