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中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白半定量检测 试剂盒

阅读：545发布：2023-02-12

专利汇可以提供中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白半定量检测试剂盒专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本实用新型公开了一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白半定量快速检测试剂盒，属于临床医学检测领域。所述试剂盒包括卡盒、比色卡和试纸条三部分：卡盒包括盒盖（8）与盒底（15）两部分，卡盒内置比色卡（9）和试纸条。卡盒正面可见检视窗（1）、加样孔（4）和比色窗（7），盒盖正面印有结果标识（2）、加样孔标识（3）、品名标识（5）及信息记录栏（6）。本实用新型应用免疫层析技术，以高效中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白单克隆抗体或多克隆抗体作为捕获抗体和检测抗体，用比色卡进行靶物质浓度半定量，用滤血垫和渗滤垫过滤红血球和颗粒物质，制备一种半定量快速检测试剂盒，可快速简便的半定量检测血清、血浆、全血和尿液中的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白。，下面是中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白半定量检测试剂盒专利的具体信息内容。

权利要求

1.一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白半定量免疫层析检测试剂盒，其特征在于试剂盒由卡盒、试纸条和比色卡三部分组成；所述卡盒包括盒盖和盒底两部分，卡盒内设置试纸条和比色卡，盒盖设置有检视窗、加样孔和比色窗、结果标识、加样孔标识、品名标识及信息记录栏，盒底中间设置有试纸条槽和比色卡槽；所述试纸条由基板上用双面胶依次黏贴的样品垫、标记抗体垫、反应膜、吸水垫组成，放置在试纸条槽内；所述比色卡设置有比色卡标识、色带及对应浓度说明，比色卡由比色卡插口插入卡盒中间的比色卡槽。
2.根据权利要求1所述的一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白半定量免疫层析检测试剂盒，其特征在于：所述比色卡由300克以上白色光面铜板纸构成，铜板纸上设有比色卡标注和色带及对应浓度说明。
3.根据权利要求1所述的一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白半定量免疫层析检测试剂盒，其特征在于：针对不同的检测样品，样品垫采用不同组合，对血清或血浆样品，样品垫直接由玻璃纤维或无纺布组成；对全血样品，样品垫由玻璃纤维或无纺布和滤血样品垫组合构成，所述滤血样品垫由经抗人血红细胞单克隆抗体或多克隆抗体固化处理的玻璃纤维或无纺布构成；对尿液样品，样品垫由玻璃纤维或无纺布和过滤膜组合构成。
4.根据权利要求1所述的一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白半定量免疫层析检测试剂盒，其特征在于：所述标记抗体垫是将标记物标记的抗NGAL单克隆抗体或多克隆抗体固化在玻璃纤维或无纺布上构成。
5.根据权利要求1所述的一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白半定量免疫层析检测试剂盒，其特征在于：所述标记物为胶体金属颗粒或彩色乳胶颗粒。
6.根据权利要求1所述的一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白半定量免疫层析检测试剂盒，其特征在于：所述反应膜上设置有检测线和质控线，所述检测线由包被抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白单克隆抗体或多克隆抗体构成，所述质控线由包被羊或兔抗鼠IgG多克隆抗体或检测线所包被多克隆抗体的二抗构成。

说明书全文

中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白半定量检测试剂盒

技术领域

[0001] 本实用新型属于临床医学检测领域，涉及免疫层析检测技术，具体涉及一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白半定量快速检测试剂盒。

背景技术

[0002] 中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(Neutrophil gelatinasesociated lipocalin,NGAL)，又称人脂质运载蛋白2(lipocalin2,Ln2)或噬铁蛋白(siderocalin)，是人脂质运载蛋白家族的一个新成员。NGAL是1993年Kjedsen等在研究中性粒细胞时发现的一种特殊颗粒组分，与明胶酶B，即基质金属酶9(matrixmetalloproteinase-9,MMP-9)密切相关。NGAL是一种小分子蛋白，正常生理状态下，中性粒细胞、肾小管上皮细胞、肺泡巨噬细胞、支气管上皮粘液细胞等可分泌少量NGAL。NGAL的生理功能尚不完全清楚，可能参与不同生理、病理过程，涉及胚胎发育、细胞分化、肿瘤的发生发展、细胞凋亡、炎症免疫应答、脂质代谢等。研究表明，在各种原因引起的肾损伤中，血液和尿液中NGAL显著升高，尤其在损伤2小时内即可迅速升高，早于其他肾功能检测指标，因此，NGAL作为一种高灵敏度的急性肾损伤早期诊断指标备受业界关注。

[0003] 丹麦Bioproto公司的一项研究结果表明，健康志愿者EDTA血浆中NGAL浓度范围为37-106ng/ml，平均值63ng/ml，尿液中NGAL的浓度范围为0.7-9.8ng/ml，平均值5.3ng/ml。
而ICU病房中急性肾损伤(Acute kidney injury,AKI)患者NGAL浓度在血清中为66-922ng/ml，尿液中为110-40000ng/ml。各种临床试验研究证明：(1)NGAL可作为急性肾损伤的标志物，急性肾损伤时患者血、尿NGAL浓度通常会迅速升高，2小时最明显(比临界值升高几十到几百倍)，血清肌酐(sCr)、尿酶等传统指标往往要在24-72小时后才显著升高，因此NGAL可用于AKI的早期诊断，同时也可作为AKI的预后指标之一；(2)NGAL可以预测慢性肾病(Chronic kidney disease,CKD)的进展，CKD患者血清、尿NGAL水平显著高于正常人群，并与肾小球滤过率(GFR)呈密切负相关，但是sCr与GFR的相关程度不及NGAL。因此，CKD患者NGAL水平不仅是优于sCr反映GFR下降的指标，更是评价CKD患者肾损伤程度的标志。I、Ⅱ型糖尿病患者血清、尿NGAL水平在尿微清蛋白(mAIb)升高前就已显著增加，因此，NGAL是诊断糖尿病并发肾损伤的敏感性指标。NGAL也是优于抗dsDNA抗体滴度的狼疮肾病诊断指标，及IgA肾病小管间隙损伤的早期诊断指标；(3)NGAL可以作为肾脏疾病的疗效评价指标。

[0004] 自2005年丹麦Bioproto公司推出NGAL ELISA商品试剂盒以来，美国R&D Systems公司随即推出了NGAL ELISA试剂盒，美国博适公司推出了用于血浆或全血NGAL检测的Triage分析仪(双抗体夹心免疫荧光层析法)，美国雅培公司推出了用于尿液NGAL检测的全自动免疫分析仪(化学发光法)。相比较这些依靠仪器检测和结果分析的检测方法，床旁检验(Point care of testing，POCT)对NGAL的检测能更快速的提供检测结果，有利于临床诊断和治疗。POCT中侧向流免疫层析检测技术具有快速、简便、结果读取简单等特点，适合NGAL的临床检测，但其唯一的缺点就是定量困难。发明内容

[0005] 本实用新型旨在提供一种基于免疫层析技术的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白半定量快速检测试剂盒，可适用于血清、血浆、全血及尿液样本中NGAL的半定量检测。该实用新型操作简便，样本无需任何处理即可直接检测，检测结果可提供半定量的浓度范围，便于临床参考，可广泛用于各级医疗机构的临床检测。

[0006] 本实用新型通过以下技术方案实现：一种基于中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白半定量快速检测试剂盒，由卡盒、试纸条和比色卡三部分组成。

[0007] 所述卡盒包括盒盖和盒底两部分，卡盒内设置试纸条和比色卡，盒盖设置有检视窗、加样孔和比色窗、结果标识、加样孔标识、品名标识及信息记录栏，盒底中间设置有试纸条槽和比色卡槽；所述试纸条由基板上用双面胶依次黏贴的样品垫、标记抗体垫、反应膜、吸水垫组成，放置在试纸条槽内；所述比色卡设置有比色卡标识、色带及对应浓度说明，比色卡由比色卡插口插入卡盒中间的比色卡槽。

[0008] 所述比色卡由300克以上白色光面铜板纸构成，铜板纸上印有比色卡标注和色带及对应浓度说明。

[0009] 所述卡盒材料可由ABS树脂(丙烯腈-丁二烯-苯乙烯共聚物)或塑料(聚苯乙烯、聚乙烯、聚氯乙烯等)构成。

[0010] 所述基板材质可由PVC塑料(聚氯乙烯)或PS板构成。

[0011] 所述样品垫，其特征在于：针对不同的检测样品，样品垫采用不同组合，对血清或血浆样品，样品垫直接由玻璃纤维或无纺布组成；对全血样品，样品垫由玻璃纤维或无纺布和滤血样品垫组合构成，所述滤血样品垫由经抗人血红细胞单克隆抗体或多克隆抗体固化处理的玻璃纤维或无纺布构成；对尿液样品，样品垫由玻璃纤维或无纺布和过滤膜组合构成。

[0012] 所述标记抗体垫是将标记物标记的抗NGAL单克隆抗体或多克隆抗体固化在玻璃纤维或无纺布上构成，所述标记物为胶体金属颗粒或彩色乳胶颗粒。

[0013] 所述反应膜由硝酸纤维素膜构成，其上设有检测线(T线)和质控线(C线)，所述检测线由包被抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白单克隆抗体或多克隆抗体构成，所述质控线由包被羊或兔抗鼠IgG多克隆抗体或检测线所包被多克隆抗体的二抗构成。

[0014] 所述吸水垫由吸水滤纸或滤油纸构成。

[0015] 本实用新型的创新效果主要体现在：(1)采用比色法对NGAL免疫层析检测结果进行半定量分析，估计出样本中NGAL的浓度范围，便于临床参考。此方案可以通过如下过程来实现：首先在试剂盒的敏感度范围(可检出最低浓度和最高浓度)内将NGAL质控品进行梯度稀释，用NGAL免疫层析检测试纸条检测，对不同浓度质控品，试纸条检测线(T线)会呈现不同的显色度，依据试纸条检测线(T线)对不同浓度质控品显色度，制备比色卡，比色卡上每条色带对应一个NGAL浓度。比色估计NGAL浓度范围，检测结束后将比色卡沿卡槽缓慢上下移动，将比色卡上的色带与检测线进行色度比较，与检测线色度接近的色带对应的浓度范围即为样品中NGAL浓度范围。(2)本实用新型实现的NGAL免疫层析半定量快速检测试剂盒对抗凝全血样本可直接检测，无需血浆或血清分离，其实现的原理在于，在样品垫增加一层滤血膜，滤血膜中固化有抗人血红细胞抗体(单抗或多克隆抗体)，检测时，当抗凝血全血进入滤血膜后血液中红细胞被抗体结合到滤血膜上，血浆渗入样品垫，完成检测。(3)本实用新型实现的NGAL免疫层析半定量快速检测试剂盒对浑浊的尿液样本可直接检测，无需离心分离处理，其实现的原理在于，在样品垫增加一层渗滤膜，渗滤膜可以过滤尿液中的细胞和大颗粒物质，避免其对检测结果的影响，检测时，当尿液进入渗滤膜后尿液细胞和大颗粒物质被过滤下来，过滤后的尿液进入样品垫，完成检测。

[0016] 本实用新型采用固相免疫检测技术，抗体蛋白被固化在NC膜或玻璃纤维或无纺布上，在这种固化干燥的状态下抗体蛋白较稳定，对环境温度要求不高，试剂盒可在常温下(4-30℃)保存，运输过程简单，不需要冷链，同时，本实用新型还具有操作简单，无需特殊设备，结果目视直接读取，可半定量等优点。适用于血清、血浆或全血及尿液样本检测。附图说明

[0017] 图1是本实用新型的正面示意图。

[0018] 图2是本实用新型的比色卡(9)示意图。

[0019] 图3是本实用新型的盒盖背面示意图。

[0020] 图4是本实用新型的盒底(14)正面示意图。

[0021] 图5是本实用新型的试纸条正面示意图。

[0022] 图6是本实用新型的试纸条侧面示意图。

[0023] 图中各数字表示内容如下：1.检视窗；2.结果标识；3.加样孔标识；4.加样孔；5.品名标识；6.信息记录栏；7.比色窗；8.盒盖；9.比色卡；10.比色卡标注；11.色带及对应浓度说明；12.柱；13.比色卡插口；14.试纸条槽；15.盒底；16.柱槽；17.比色卡槽；18.样品垫；19.胶带；20.反应膜；21.检测线T；22.质控线C；23.吸水垫；24.基板；25.双面胶；26.标记抗体垫。

具体实施方式

[0024] 提供下述实施例是为了进一步理解本实用新型，并不局限于所述最佳实施方式，不对本实用新型的内容和保护范围构成限制，任何人在本实用新型的启示下或是将本实用新型与其他现有技术特征相组合而得出的任何与本实用新型相同或相似的产品，均落在本实用新型的保护范围之内。

[0025] 实施例1一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白半定量金标检测试剂盒[0026] 中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白半定量金标检测试剂盒由盒盖(8)、盒底(15)、置于卡底部试纸槽内试纸条及比色卡(9)四部分组成。盒盖(8)上设置有检视窗(1)、结果标识(2)、加样孔标识(3)、加样孔(4)、品名标识(5)、信息记录栏(6)、比色窗(7)、比色卡插口(13)。加样孔(4)对应试纸条的样品垫(18)，检视窗(1)对应试纸条的反应膜(20)，结果标识C对应反应膜上质控线(22)，T对反应膜上检测线(21)。

[0027] 盒底设有试纸条槽(14)、比色卡槽(17)和比色卡插口(13)，试纸条槽的规格与试纸条相契合，比色卡槽的规格与比色卡相契合，比色卡插口(13)与盒盖上的比色卡插口(13)相吻合。

[0028] 试纸条由在基板(24)上用双面胶(25)依次粘结的样品垫(18)、标记抗体垫(26)、反应膜(20)及吸水垫(23)组成，样品垫、标记抗体垫与反应膜之间交错约15mm，并以胶带(19)粘结，反应膜与吸水垫之间交错约15mm。其中基板由PVC板构成，样品垫由无纺布构成，反应膜由硝酸纤维素膜(NC)膜构成，吸水垫由滤油纸构成(图5、图6)。所述的胶体金垫是将胶体金标记的抗NGAL单克隆抗体a侵入无纺布，再经25℃干燥固化制成，所述反应膜上的检测线T(21)是由抗NGAL单克隆抗体b划线包被，45℃干燥1小时制成。所述反应膜上的质控线C(22)是由羊或兔抗鼠IgG多克隆抗体划线包被，45℃干燥1小时制成。试纸条放置在盒底(15)的试纸条槽(14)内；将盒盖(8)上的柱(12)与盒底上的柱槽(16)对齐，以插接方式闭合。

[0029] 比色卡(9)上设有比色卡标注(10)、色带及对应浓度说明(11)，在300克的铜板纸上印刷而成，共设置0.05μg/ml，0.50μg/ml，1.00μg/ml，5.00μg/ml和20.00μg/ml五个浓度梯度的色带，色带的色度参照试纸条检测0.05μg/ml，0.50μg/ml，1.00μg/ml，5.00μg/ml和20.00μg/ml NGAL质控品制成，使用时将比色卡沿比色卡槽上下移动，将比色卡上的色带与检测线进行色度比较，与检测线色度接近的色带对应的浓度范围既为样品中NGAL浓度范围。

[0030] 检测方法及结果判定：取待测血清、血浆、清亮的尿液样本100μl加入加样孔，同时将样本编号填写在盒盖正面信息记录栏，开始观察结果，观察检视窗处质控线C和检测线T的显色状况，20分钟内有效。若质控线C和检测线T均显紫红色，则结果为阳性；若只有质控线C显紫红色，检测线T不显色，则结果为阴性；若质控线C和检测线T均不显色，则结果无效。对阳性结果，用比色卡进行半定量，对比检测线T与比色窗内色带及对应浓度说明的颜色，以确定样本中NGAL的含量范围。所述试剂盒检测结果解释如下：

[0031] (1)检测结果阴性，说明样本中的NGAL含量小于0.05μg/ml；

[0032] (2)检测结果阳性，且检测线T的颜色与比色窗内标记为0.05μg/ml的色带相比较深，而与标记为0.50μg/ml的色带相比较浅时，说明样本中NGAL含量大于0.05μg/ml而小于0.50μg/ml；

[0033] (3)检测结果阳性，且检测线T的颜色与比色窗内标记为0.50μg/ml的色带相比较深，而与标记为1.00μg/ml的色带相比较浅时，说明样本中NGAL含量大于0.50μg/ml而小于1.00μg/ml；

[0034] (4)检测结果阳性，且检测线T的颜色与比色窗内标记为1.00μg/ml的色带相比较深，而与标记为5.00μg/ml的色带相比较浅时，说明样本中NGAL含量大于1.00μg/ml而小于5.00μg/ml；

[0035] (5)检测结果阳性，且检测线T的颜色与比色窗内标记为5.00μg/ml的色带相比较深，而与标记为20.00μg/ml的色带相比较浅时，说明样本中NGAL含量大于5.00μg/ml而小于20.00μg/ml；

[0036] (6)检测结果阳性，且检测线T的颜色与比色窗内标记为20.00μg/ml的色带相比较深，说明样本中NGAL含量大于20.00μg/ml。

[0037] 本实施例所述试剂盒适用于血清、血浆和清亮的尿液样本检测。

[0038] 实施例2一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白全血半定量金标快速检测试剂盒

[0039] 该试剂盒的组成结构除样品垫(18)由滤血膜和无纺布组合构成，滤血膜置于无纺布上层，所述滤血膜由抗人红细胞抗体(单抗或多抗)固化于无纺布构成外，其他条件与实施例1相同。检测时取120μl抗凝血样本直接加入加样孔，血液进入滤血膜，红细胞被抗体结合在膜内，血浆继续向下渗透进入样品垫完成检测。结果判定同实施例1.

[0040] 实施例3一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白金标半定量尿液检测试剂盒[0041] 该试剂盒的组成结构除样品垫(18)由渗滤膜和无纺布组合构成，其他条件与实施例1相同，渗滤膜置于无纺布上层。检测时取100μl尿液样本直接加入加样孔，尿液中的大颗粒物质被渗滤膜过滤，尿液继续向下渗透进入样品垫完成检测。结果判定同实施例1.[0042] 实施例4一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白乳胶免疫层析半定量检测试剂盒

[0043] 该试剂盒的组成结构抗体标记垫(26)由彩色乳胶垫代替外，其他条件与实施例1相同，所述彩色乳胶垫除了所用标记物为彩色乳胶外，其制备方法同胶体金垫。

[0044] 实施例5一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白乳胶免疫层析半定量全血检测试剂盒

[0045] 该试剂盒的组成结构抗体标记垫(26)由彩色乳胶垫代替外，其他条件与实施例2相同，所述彩色乳胶垫除了所用标记物为彩色乳胶外，其制备方法同胶体金垫。

[0046] 实施例6一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白乳胶免疫层析半定量全尿液测试剂盒

[0047] 该试剂盒的组成结构抗体标记垫(26)由彩色乳胶垫代替外，其他条件与实施例3相同，所述彩色乳胶垫除了所用标记物为彩色乳胶外，其制备方法同胶体金垫。

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