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一种长春新ELISA检测试剂

阅读:574发布:2023-02-20

专利汇可以提供一种长春新ELISA检测试剂专利检索,专利查询,专利分析的服务。并且本实用新型公开一种长春新 碱 酶联免疫检测 试剂 盒 ,涉及长春新碱ELISA检测技术领域。该试剂盒包括:盒体,以及盒内的底部固定 支架 、96孔酶标板和12瓶试剂,其中,96孔酶标板的酶标孔预包被偶联长春新碱的包被 抗原 ;12瓶试剂,分别为6瓶标准品冻干粉,1瓶样品稀释液、1瓶长春新碱 抗体 工作液、1瓶酶标二抗工作液、1瓶底物显色液、1瓶终止液、1瓶洗涤浓缩液;底部固定支架有12个瓶位。采用间接竞争ELISA法,在酶标孔上预包被的长春新碱包被抗原和样本中的长春新碱竞争结合长春新碱抗体,利用样本吸光值与样品中长春新碱含量成反比关系,可检测长春新碱含量。本实用新型有益效果在于能快速、灵敏的检测人体 血浆 中长春新碱的含量。,下面是一种长春新ELISA检测试剂专利的具体信息内容。

1.一种长春新ELISA检测试剂盒,包括盒体,以及盒内有一个底部固定支架、一96孔酶标板和12瓶试剂,其特征在于:所述的96孔酶标板的酶标孔为固体载体,预包被偶联长春新碱的包被抗原;所述的12瓶试剂,分别为6瓶标准品冻干粉,1瓶样品稀释液、1瓶长春新碱抗体工作液、1瓶酶标二抗工作液、1瓶底物显色液、1瓶终止液、1瓶洗涤浓缩液;所述的底部固定支架,有12个瓶位,放置位置依次为:6个标准品冻干粉瓶位,1个样品稀释液瓶位、1个长春新碱抗体工作液瓶位、1个酶标二抗工作液瓶位、1个底物显色液瓶位、1个终止液瓶位、1个洗涤浓缩液瓶位。
2.根据权利要求书1所述的试剂盒,其特征在于:所述的盒体是硬纸盒;所述的底部固定支架可以为硬纸板、泡沫塑料和海绵;所述96孔酶标板放在真空箔袋内;1瓶样品稀释液、1瓶长春新碱抗体工作液、1瓶酶标二抗工作液、1瓶终止液、1瓶洗涤浓缩液用蓝盖PE半透明塑料瓶;1瓶底物显色液用黑盖PE黑色塑料瓶;6瓶标准品冻干粉用棕色盖PE棕色塑料瓶。
3.根据权利要求书1所述的试剂盒,其特征在于:酶标板是由外框支架和放置其上的可拆卸的12条酶标条组成,每个可拆卸的酶标条有8个酶标孔,标准品冻干粉6瓶,1ml/瓶,样品稀释液1瓶,10ml,长春新碱抗体工作液1瓶,10ml,酶标二抗工作液1瓶,10ml,底物显色液1瓶,12ml,终止液1瓶,10ml,洗涤浓缩液1瓶,20ml。

说明书全文

一种长春新ELISA检测试剂

技术领域:

[0001] 本实用新型涉及一种药物检测的ELISA检测技术领域,具体涉及人体血浆中长春新碱ELISA检测技术领域。技术背景:
[0002] 长春新碱(Vincristine)是一种双吲哚型生物碱。分子式C46H56N4010,结构式为:
[0003]
[0004] 是以长春碱(长春花中生物碱含量最高的一种化合物)为原料合成的医疗用药,分子量为824.96。长春新碱作为一种常见抗肿瘤药,其疗效比长春碱约高10倍,可用于治疗急性淋巴细胞性白血病,疗效较好,对其他急性白血病、何杰金氏病、淋巴肉瘤、网状细胞肉瘤和乳腺癌也有疗效。在临床,特别是对造血器官的肿瘤比较有效。其药理机制是能与微管蛋白结合,使细胞分裂(有丝分裂)在中期停止的作用。另外,它对微管蛋白以外的蛋白质如肌动蛋白及10nm细丝蛋白等也起作用。
[0005] 然而,由于长春新碱具有较大的神经系统毒性和局部刺激性,限制了其在临床上的应用。研究发现,其临床的毒副作用表现为剂量依赖性的神经毒性,且剂量毒性曲线陡峭,因此,长春新碱具有治疗窗狭窄的特点。而且,在临床应用中,多种药物能与长春新碱产生相互作用,影响长春新碱的作用和毒性,如:诱导P糖蛋白MDR3药物可产生药物耐受,降低长春新碱作用;三唑仑通过抑制肝药酶2YP2D6,抑制长春新碱代谢,增加毒性。为了能将药物剂量浓度控制在有效的治疗窗内,减少毒副作用,需要建立一种快速、灵敏检测长春新碱血药浓度的方法,对服用长春新碱的病人监测血浆中长春新碱的浓度,为临床医生调整给药方案提供参考依据,对提高长春新碱临床治疗的有效性、减少毒副作用有着及其重要的意义。
[0006] 据文献报道,利用毛细管区带电泳和电化学方法结合测定了人体红血球细胞中硫酸长春新碱的动吸收情况。迄今为止,测定长春新碱的方法有液相色谱法、电分析法、伏安法、毛细管电泳、紫外分光光度法。中国药典规定长春新碱注射液用高效液相色谱法。但是长春新碱在血液中得浓度较低,因此,要达到分析的要求,往往具有样品前处理复杂繁琐、仪器昂贵,以及分析速度慢等特点,不宜进行临床推广和大批样品的检测。
[0007] ELISA法(酶联免疫吸附法)是以免疫学反应为基础,将抗原抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。该方法具有分析速度快、灵敏度高、样品处理简单等特点。
[0008] ELISA定量测定人血浆中长春新碱浓度的方法目前国内外尚无文献报道,并且没有检测试剂盒上市。发明内容:
[0009] 本实用新型的目的是设计一种长春新碱ELISA检测试剂盒,可以快速、灵敏的检测人体血浆中长春新碱药物的含量。
[0010] 本实用新型是一种长春新碱ELISA检测试剂盒,包括盒体,以及盒内有一个底部固定支架、一96孔酶标板和12瓶试剂,其特征在于:所述的96孔酶标板的酶标孔为固体载体,预包被偶联长春新碱的包被抗原;所述的12瓶试剂,分别为6瓶标准品冻干粉,1瓶样品稀释液、1瓶长春新碱抗体工作液、1瓶酶标二抗工作液、1瓶底物显色液、1瓶终止液、1瓶洗涤浓缩液;所述的底部固定支架,有12个瓶位,放置位置依次为:6个标准品冻干粉瓶位,1个样品稀释液瓶位、1个长春新碱抗体工作液瓶位、1个酶标二抗工作液瓶位、1个底物显色液瓶位、1个终止液瓶位、1个洗涤浓缩液瓶位。其中,所述的盒体是硬纸盒;所述的底部固定支架可以为硬纸板、泡沫塑料和海绵;所述96孔酶标板放在真空箔袋内;1瓶样品稀释液、1瓶长春新碱抗体工作液、1瓶酶标二抗工作液、1瓶终止液、1瓶洗涤浓缩液用蓝盖PE半透明塑料瓶;1瓶底物显色液用黑盖PE黑色塑料瓶;6瓶标准品冻干粉用棕色盖PE棕色塑料瓶。酶标板是由外框支架和放置其上的可拆卸的12条酶标条组成,每个可拆卸的酶标条有8个酶标孔,标准品冻干粉6瓶,1ml/瓶,样品稀释液1瓶,10ml,长春新碱抗体工作液1瓶,10ml,酶标二抗工作液1瓶,10ml,底物显色液1瓶,12ml,终止液1瓶,10ml,洗涤浓缩液1瓶,20ml。
[0011] 本实用新型原理是采用间接竞争ELISA方法,在酶标板酶标孔上预包被偶联长春新碱的包被抗原,血浆中的长春新碱和酶标孔上预包被的包被抗原同时竞争结合长春新碱抗体,与长春新碱抗体结合的长春新碱固定在微孔板上,未结合的长春新碱,则被洗涤液洗去,然后,加入酶标二抗,用底物显色液显色,样本吸光值与其所含长春新碱的含量成负相关,与标准曲线比较,再乘以其对应的稀释倍数,即可得出样品血浆中长春新碱药物的含量。
[0012] 有益效果:
[0013] 本实用新型的有益效果在于可以快速、灵敏的检测人体血浆中长春新碱药物的含量,对服用长春新碱的病人监测血浆中长春新碱的浓度,为临床医生调整给药方案提供参考依据,对提高长春新碱临床治疗的有效性、减少毒副作用有着及其重要的意义。附图说明:
[0014] 图1为本实用新型盒体示意图,其中,1盒体;
[0015] 图2为本实用新型底部固定支架的俯视图,其中,2底部固定支架、3样品稀释液瓶位、4长春新碱抗体工作液瓶位、5酶标二抗工作液瓶位、6终止液瓶位、7洗涤浓缩液瓶位;8底物显色液瓶位;9标准品冻干粉瓶位。
[0016] 图3为本实用新型96孔酶标板的示意图,其中,10酶标板,11预包被长春新碱抗包被原酶标孔,12固定酶标条的外框支架;
[0017] 图4为本实用新型试剂瓶示意图,其中13蓝盖PE半透明塑料瓶封装10ml样品稀释液试剂瓶、长春新碱抗体工作液试剂瓶、酶标二抗工作液试剂瓶和终止液试剂瓶,14蓝盖PE半透明塑料瓶封装20ml洗涤浓缩液;15黑盖PE黑色塑料瓶封装12ml底物显色液;16棕色盖PE棕色塑料瓶封装1ml标准品冻干粉。具体实施方式:
[0018] 实施例1:
[0019] 长春新碱ELISA检测试剂盒组装
[0020] 长春新碱ELISA检测试剂盒包括盒体1,以及盒内有一个底部固定支架2、一块96孔酶标板10和12瓶试剂,96孔酶标板10的酶标孔11上预包被偶联长春新碱的包被抗原,96孔酶标板10放在真空锡箔袋内。12瓶试剂,分别为6瓶标准品冻干粉,1瓶样品稀释液、
1瓶长春新碱抗体工作液、1瓶酶标二抗工作液、1瓶底物显色液、1瓶终止液、1瓶洗涤浓缩液。底部固定支架2上有对应的12个瓶位,放置位置依次为:6个标准品冻干粉瓶位9,1个样品稀释液瓶位3、1个长春新碱抗体工作液瓶位4、1个酶标二抗工作液瓶位5、1个终止液瓶位6、1个洗涤浓缩液瓶位7、1个底物显色液瓶位8。用棕色盖PE棕色塑料瓶16封装
1ml标准品,用蓝盖PE半透明塑料瓶13分别封装10ml样品稀释液、长春新碱抗体工作液、酶标二抗工作液和终止液;用黑盖PE黑色塑料瓶15封装12ml底物显色液;用蓝盖PE半透明塑料瓶14封装20ml洗涤浓缩液。盒体1是硬纸盒,底部固定支架2为硬纸板。
[0021] 实施例2:
[0022] 长春新碱ELISA检测试剂盒样品检测
[0023] 将人血浆和样品稀释液溶解的标准品分别按50μl/孔加入预包被偶联长春新碱抗原的酶标板内,同时加入抗体工作液50μl/孔,37℃,孵育90分钟,用洗涤液洗涤3次,拍干后,向孔中加入酶标二抗工作液50μl/孔,37℃,孵育60分钟,用洗涤液洗涤3次,拍干后,再向孔中加入底物显色液50μl/孔,室温10min,加终止液50μl/孔终止,酶标仪检测。以长春新碱含量的对数(lnC)为横坐标,相应的A450值(OD)为纵坐标,得标准曲线回归方程,计算出长春新碱含量浓度。
[0024] 实施例3
[0025] ELISA法检测血浆中长春新碱浓度的标准曲线
[0026] 采用实施例2的方法建立血浆中长春新碱浓度的标准曲线。将长春新碱标准品溶液0.1、0.4、1.6、6.4、12.8、51.2ng/mL分别加入包被有偶联长春新碱包被抗原的酶标板中,每一稀释度设3个平行孔,加长春新碱抗体工作液后,加酶标二抗工作液,底物显色液显色,检测A450值,以长春新碱含量的对数(lnC)为横坐标,相应的A450值(OD)为纵坐标,得标准曲线回归方程OD=0.27860×lnC+2.0971,r=0.9987。可见,采用该方法在0.1-51.2ng/mL浓度范围内具有较好的线性。
[0027] 实施例4
[0028] ELISA法检测血浆中长春新碱浓度的日内和日间精密度
[0029] 配制高(51.2ng/mL)、中(12.8ng/mL)、低(0.1ng/mL)3个浓度的长春新碱标准溶液,采用实施例2的测定方法,在一次实验中每个浓度点测5孔,计算批内变异系数。连续测5批次,计算批间变异系数。精密度试验结果显示,该检测方法的批内变异系数为4.75%,批间变异系数为8.33%,满足批内精密度小于10%,批间精密度小于15%的要求。
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