专利汇可以提供一种基于生物3D打印构建三维胶质瘤组织的方法专利检索,专利查询,专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种基于 生物 3D打印构建三维胶质瘤组织的方法,步骤为:1)制备海绵 支架 材料,并检测其 力 学特性,利用生物3D打印技术将海绵加入到多孔板内,通过24h的冻干过程,再进行紫外灭菌2h以得到用于构建胶质瘤的三维组织支架;2)将人胶质瘤细胞用培养基混匀后3D打印到海绵支架材料上,然后在含有10%FBS培养液中培养7天,制备成三维胶质瘤组织工程化单元;3)检测三维胶质瘤组织的细胞活性和糖胺聚糖分泌量;4)采用生物等效性组化方法检测2D及3D第7天时的生长状态。其优点在于:本发明有效促进胶质瘤组织功能的形成,为脑组织工程的科学研究以及脑癌的临床 治疗 提供有益的参考,并且为生物打印技术的临床化提供有效的方法及技术 支撑 。,下面是一种基于生物3D打印构建三维胶质瘤组织的方法专利的具体信息内容。
1.一种基于生物3D打印构建三维胶质瘤组织的方法,其特征在于:包括以下步骤:
(1)制备海绵支架材料,并检测其力学特性,然后利用生物3D打印技术将海绵加入到多孔板内,通过24h的冻干过程,再进行紫外灭菌2h以得到用于构建胶质瘤的三维组织支架;
(2)将人胶质瘤细胞用培养基混匀后3D打印到步骤(1)中制备的海绵支架材料上,然后在含有10% FBS培养液中培养7天,即制备成三维胶质瘤组织工程化单元,保存备用;
(3)检测步骤(2)中制备的三维胶质瘤组织的细胞活性和糖胺聚糖GAG分泌量;
(4)采用生物等效性组化方法检测2D及3D第7天时的生长状态。
2.根据权利要求1所述的一种基于生物3D打印构建三维胶质瘤组织的方法,其特征在于:所述步骤(1)中的海绵支架材料的制备具体方法为:首先称取20g鸡、鸭、牛、羊、猪、马等动物皮肤组织,尽量将组织剪成小块,以2%至8%的碳酸钠溶液超声脱脂,控制温度在30℃以下,用纯水洗涤去除残留的碳酸钠;将脱脂后的皮肤用破壁机打碎后再浸泡于500 mL 1M醋酸中,加入1-5g胃蛋白酶消化2-3天,过滤,向粗提液中加入10%氯化钠盐析,充分搅拌后将得到白色胶原沉淀,将白色胶原沉淀复溶于0.5M醋酸溶液中,使用3500KDa的透析袋以纯水为外液透析2-3天,得到胶原液,将胶原液置于玻璃器皿中预冻过夜,然后冻干48h后即可得到海绵支架材料。
3.根据权利要求1一种基于生物3D打印构建三维胶质瘤组织的方法,其特征在于:所述步骤(1)中的胶质瘤的三维支架构建的具体方法为:称取2g海绵复溶于360 mL pH=3的稀盐酸中以得到均匀分散液,加入40 mL 0.5%的纳米纤维素与分散液充分混匀后再利用3D打印技术精确打入孔板内,每孔容量100至600µL,预冻后冻干24 h即可得到2-4mm左右厚度的海绵支架材料,紫外灭菌2h后即可得到构建胶质瘤的三维组织支架。
4.根据权利要求1所述的一种基于生物3D打印构建三维胶质瘤组织的方法,其特征在于:所述步骤(1)中的力学特性检测的具体方法为:取70mL海绵支架材料溶液于长方形模具中预冻后冻干,沿同一方向裁取得到长宽10cm×1.6cm,厚度为3mm的长条形海绵;用力学测试仪器夹住长条形海绵的两端,标准距离为1cm,以5 mm/min的速率进行薄膜和薄片拉伸性能的测定试验。
5.根据权利要求1所述的一种基于生物3D打印构建三维胶质瘤组织的方法,其特征在于:所述步骤(2)的具体方法为:将人胶质瘤细胞浓度调整为1x107/mL,制成生物打印墨水,逐滴打印到海绵支架材料上,将海绵支架材料转移到培养箱中待细胞粘附1h后再补加适当的培养液以浸没支架,每2天更换新鲜培养液,观察支架内细胞生长状态。
6.根据权利要求1所述的一种基于生物3D打印构建三维胶质瘤组织的方法,其特征在于:所述步骤(3)的具体方法为:待三维胶质瘤组织材料培养24h后进行live/dead荧光检测;将培养1天的三维胶质瘤组织材料和浸泡在培养液内1天的无细胞海绵支架材料收集冷冻,并于第7天一起检测第1天和第7天三维胶质瘤组织材料以及无细胞的海绵支架材料的GAG含量,最后通过三维胶质瘤组织材料的GAG含量减去对应的无细胞海绵支架材料的GAG含量,即可得到三维胶质瘤组织在培养第1天和第7天时GAG的分泌量。
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