N-酰基乙醇酰胺衍生物和其用途
阅读：116发布：2021-07-03
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1.一种式I-a化合物：
X1-X2
其中：
X1是N-酰基乙醇酰胺；并且
X2是与所述N-酰基乙醇酰胺缀合的部分。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物呈盐形式。
3.根据权利要求2所述的化合物，其中所述盐形式是药学上可接受的盐形式。
4.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物是：
5.一种式I化合物：
其中：
每个R1、R2或R3独立地是氢或-T-R4，其中R1、R2或R3中的至少一个是-T-R4；
-T-表示二价部分；并且
R4是选自由C1-40脂肪族基、-C(O)R以及X1组成的组的任选地被取代的基团，其中
R选自由氢和任选地被取代的C1-20脂肪族基组成的组；并且
X1是N-酰基乙醇酰胺。
6.根据权利要求2所述的化合物，其中所述化合物具有式I'或I"：
7.根据权利要求5或6所述的化合物，其中所述化合物呈盐形式。
8.根据权利要求7所述的化合物，其中所述盐形式是药学上可接受的盐形式。
9.一种式I-b化合物：
X1-X3
I-b
其中：
X1是N-酰基乙醇酰胺；
X3是选自由-(CH2)m-P(O)(OR)2、C1-40脂肪族基、-T-X4组成的组的任选地被取代的基团；
另外其中
m是选自由0到10组成的组的整数；
-T-表示二价部分；
X4是糖部分，在一些特定实施例中，X4是二糖，例如蔗糖。
10.根据权利要求9所述的化合物，其中所述化合物呈盐形式。
11.根据权利要求10所述的化合物，其中所述盐形式是药学上可接受的盐形式。
12.根据权利要求1至3或9至11中任一项所述的化合物，其中X1选自由N-棕榈酰基乙醇酰胺、N-油酰基乙醇酰胺以及N-花生四烯酰基乙醇酰胺组成的组。
13.根据权利要求12所述的化合物，其中X1是N-棕榈酰基乙醇酰胺。
14.根据权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中X2包含选自由以下组成的组的部分：磷酸酯、丁酸、甘油、琥珀酸酯、辛酸、葡萄糖酸、二十碳五烯酸、亚油酸、琥珀酸酯以及蔗糖部分，或其组合。
15.根据权利要求5至8中任一项所述的化合物，其中R1是-T-R4，并且R2和R3是氢。
16.根据权利要求5至8中任一项所述的化合物，其中R2是-T-R4，并且R1和R3是氢。
17.根据权利要求5至8或15至16中任一项所述的化合物，其中R1、R2或R3中的至少一个是：
其中Y是二价C1-10直链或支链烃链。
18.根据权利要求17所述的化合物，其具有式II：
其中Y是二价C1-10直链或支链烃链。
19.根据权利要求17所述的化合物，其具有式III：
其中Y是二价C1-10直链或支链烃链。
20.根据权利要求19所述的化合物，其具有式III'或III"：
21.根据权利要求17至20中任一项所述的化合物，其中Y是二价C1-6直链或支链烃链。
22.根据权利要求21所述的化合物，其中Y是亚丙基。
23.根据权利要求21所述的化合物，其中Y是亚乙基。
24.根据权利要求21所述的化合物，其中Y是亚甲基。
25.根据权利要求9至11中任一项所述的化合物，其中X3是-(CH2)m-PO(OR)2。
26.根据权利要求25所述的化合物，其中X3是-PO(OH)2。
27.根据权利要求9至11中任一项所述的化合物，其中X3是C1-40脂肪族基。
28.根据权利要求9至11中任一项所述的化合物，其中X3是-T-X4。
29.根据权利要求5至11或15至16中任一项所述的化合物，其中-T-是衍生自二羧酸的二价部分。
30.根据权利要求29所述的化合物，其中-T-是衍生自琥珀酸的二价部分。
31.根据权利要求9至11或28至30中任一项所述的化合物，其中X4是蔗糖。
32.根据权利要求5所述的化合物，其中所述化合物具有式IV：
其中：
R4a和R4b独立地是氢、-C(O)R'或-C(O)-Y-C(O)OR'；
其中
每个R'独立地选自由氢和任选地被取代的C1-20脂肪族基组成的组；并且
每个Y独立地是二价C1-20直链或支链烃链。
33.根据权利要求32所述的化合物，其中所述化合物具有式IV'或IV"：
34.根据权利要求32或33所述的化合物，其中所述化合物呈盐形式。
35.根据权利要求34所述的化合物，其中所述盐形式是药学上可接受的盐形式。
4a 4b
36.根据权利要求32至35中任一项所述的化合物，其中R 和R 是氢。
37.根据权利要求32至35中任一项所述的化合物，其中R4a和R4b独立地是-C(O)R'。
38.根据权利要求37所述的化合物，其中R4a和R4b独立地选自由以下组成的组：
以及
39.根据权利要求32至35中任一项所述的化合物，其中R4a和R4b独立地是-C(O)-Y-C(O)OR'。
40.根据权利要求39所述的化合物，其中R'是氢。
41.根据权利要求40所述的化合物，其中每个R'独立地选自由以下组成的组：
以及
42.根据权利要求39至41中任一项所述的化合物，其中每个Y独立地是二价C1-6直链或支链烃链。
43.根据权利要求39所述的化合物，其中R4a和R4b是
44.根据权利要求5所述的化合物，其中所述化合物具有式V：
其中：
R4a和R4c独立地是氢、-C(O)R'或-C(O)-Y-C(O)OR'；
其中
每个R'独立地选自由氢和任选地被取代的C1-20脂肪族基组成的组；并且
每个Y独立地是二价C1-20直链或支链烃链。
45.根据权利要求44所述的化合物，其中所述化合物具有式V'或V"：
46.根据权利要求44或45所述的化合物，其中所述化合物呈盐形式。
47.根据权利要求46所述的化合物，其中所述盐形式是药学上可接受的盐形式。
48.根据权利要求44至47中任一项所述的化合物，其中R4a和R4c是氢。
49.根据权利要求44至47中任一项所述的化合物，其中R4a和R4c独立地选自由以下组成的组：
以及
50.根据权利要求44至47中任一项所述的化合物，其中R4a和R4c独立地是-C(O)-Y-C(O)OR'。
51.根据权利要求50所述的化合物，其中R'是氢。
52.根据权利要求50所述的化合物，其中每个R'独立地选自由以下组成的组：
以及
53.根据权利要求50至52中任一项所述的化合物，其中每个Y独立地是二价C1-6直链或支链烃链。
4a 4c
54.根据权利要求53所述的化合物，其中R 和R 是
55.一种化合物，其选自：
56.一种化合物，其选自：
57.根据权利要求55或56所述的化合物，其中所述化合物呈盐形式。
58.根据权利要求57所述的化合物，其中所述盐形式是药学上可接受的盐形式。
59.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中一个或多个氢原子被氘原子置换。
60.根据权利要求5至8、14至24以及29至31中任一项所述的化合物，其中R1、R2或R3中的一个或多个是氘或含有氘。
61.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其特征在于，与参考化合物N-酰基乙醇酰胺相比，所述化合物能够在水性体系中展现改善的溶解性。
62.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其特征在于，与所述参考化合物相比，所述化合物能够展现改善的稳定性。
63.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其特征在于，相对于所述参考化合物，所述化合物以不同方式代谢。
64.根据权利要求63所述的化合物，其中，相对于所述参考化合物，所述化合物以不同速率代谢。
65.根据权利要求61至64中任一项所述的化合物，其中所述参考化合物是母体N-酰基乙醇酰胺化合物。
66.根据权利要求65所述的化合物，其中所述母体N-酰基乙醇酰胺化合物是N-棕榈酰基乙醇酰胺。
67.根据权利要求65所述的化合物，其中所述母体N-酰基乙醇酰胺化合物是N-油酰基乙醇酰胺。
68.根据权利要求65所述的化合物，其中所述母体N-酰基乙醇酰胺化合物是N-花生四烯酰基乙醇酰胺。
69.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其特征在于，在施用时，递送N-酰基乙醇酰胺化合物或其活性代谢物。
70.根据权利要求69所述的化合物，其中所述N-酰基乙醇酰胺化合物是母体N-酰基乙醇酰胺化合物。
71.根据权利要求69所述的化合物，其中所述母体N-酰基乙醇酰胺化合物是N-棕榈酰基乙醇酰胺。
72.根据权利要求69所述的化合物，其中所述母体N-酰基乙醇酰胺化合物是N-油酰基乙醇酰胺。
73.根据权利要求70所述的化合物，其中所述母体N-酰基乙醇酰胺化合物是N-花生四烯酰基乙醇酰胺。
74.一种药物组合物，其包含根据前述权利要求中任一项所述的结构的化合物和药学上可接受的赋形剂。
75.根据权利要求74所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物在室温下是液体。
76.根据权利要求74或75所述的药物组合物，其中所述药物组合物被配制成用于口服递送。
77.根据权利要求76所述的药物组合物，其中所述药物组合物被配制成固体制剂。
78.根据权利要求77所述的药物组合物，其中所述药物组合物被配制成液体制剂。
79.根据权利要求74至78中任一项所述的药物组合物，其中所述固体制剂是片剂。
80.根据权利要求74至78中任一项所述的药物组合物，其中所述固体制剂是胶囊。
81.根据权利要求80所述的药物组合物，其中所述胶囊包封液体。
82.根据权利要求80所述的药物制剂，其中所述胶囊包封凝胶。
83.根据权利要求80所述的药物制剂，其中所述胶囊包封固体。
84.根据权利要求74至78中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物是或包含液体。
85.根据权利要求74至78中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物是或包含凝胶。
86.根据权利要求74至78中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物是或包含糖浆。
87.根据权利要求74至78中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物是或包含悬浮液。
88.根据权利要求74至78中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物是或包含粉末。
89.根据权利要求74所述的药物组合物，其中所述药物组合物被配制成用于局部递送。
90.根据权利要求74至78或89中任一项所述的药物制剂，其中所述药物组合物被配制成乳膏。
91.根据权利要求74至78或89中任一项所述的药物制剂，其中所述药物组合物被配制成软膏。
92.根据权利要求74至78或89中任一项所述的药物制剂，其中所述药物组合物被配制成泡沫剂。
93.根据权利要求1至73中任一项所述的化合物或根据权利要求74-92中任一项所述的药物组合物，其特征在于，当向受试者口服施用时，其递送生物活性N-酰基乙醇酰胺化合物或其生物活性代谢物，并且口服生物利用度比由所述N-酰基乙醇酰胺化合物的类似参考药物组合物所实现的高。
94.一种治疗患有或易患疾病、病症或病状的受试者的方法，所述方法包含以下步骤：
向所述受试者施用根据权利要求1至73中任一项所述的结构的化合物或根据权利要求
74至92中任一项所述的药物组合物。
95.根据权利要求94所述的方法，其中所述化合物或药物组合物与一种或多种治疗所述受试者所患的所述疾病、病症或病状或其一种或多种症状的其它药剂组合施用。
96.根据权利要求94或95所述的方法，其中所述疾病、病症或病状是或包含疼痛。
97.根据权利要求94或95所述的方法，其中所述疾病、病症或病状是或包含慢性下背痛。
98.根据权利要求94或95所述的方法，其中所述疾病、病症或病状是或包含坐骨神经痛。
99.根据权利要求94或95所述的方法，其中所述疾病、病症或病状是或包含神经根病。
100.根据权利要求94或95所述的方法，其中所述疾病、病症或病状是或包含放射痛。
101.根据权利要求94或95所述的方法，其中所述疾病、病症或病状是或包含焦虑。
102.根据权利要求94或95所述的方法，其中所述疾病、病症或病状是或包含抑郁症。
103.根据权利要求94或95所述的方法，其中所述疾病、病症或病状的特征在于精神分裂症的一种或多种症状。
104.根据权利要求94或95所述的方法，其中所述疾病、病症或病状是或包含肌萎缩侧索硬化。
105.根据权利要求94或95所述的方法，其中所述疾病、病症或病状是或包含多发性硬化。
106.根据权利要求94或95所述的方法，其中所述疾病、病症或病状是或包含神经系统疾病、病症或病状。
107.根据权利要求94或95所述的方法，其中所述疾病、病症或病状是或包含帕金森病。
108.根据权利要求94或95所述的方法，其中所述疾病、病症或病状是或包含阿尔茨海默病。
109.根据权利要求94或95所述的方法，其中所述疾病、病症或病状是或包含亨廷顿病。
110.根据权利要求94或95所述的方法，其中所述疾病、病症或病状是或包含神经病理性疼痛。
111.根据权利要求94或95所述的方法，其中所述疾病、病症或病状是或包含脑缺血。
112.根据权利要求94或95所述的方法，其中所述疾病、病症或病状是或包含癫痫。
113.根据权利要求94或95所述的方法，其中所述疾病、病症或病状是或包含食欲不振。
114.根据权利要求94或95所述的方法，其中所述疾病、病症或病状是或包含牙痛。
115.根据权利要求94或95所述的方法，其中所述疾病、病症或病状是或包含骨关节炎。
116.根据权利要求94或95所述的方法，其中所述疾病、病症或病状是或包含胃肠动力降低。
117.根据权利要求94或95所述的方法，其中所述疾病、病症或病状是或包含癌症。
118.根据权利要求94或95所述的方法，其中所述疾病、病症或病状是或包含青光眼。
119.根据权利要求94或95所述的方法，其中所述疾病、病症或病状是或包含异位性皮炎。
120.根据权利要求94或95所述的方法，其中所述疾病、病症或病状是或包含呼吸道感染。
121.根据权利要求94或95所述的方法，其中所述疾病、病症或病状是创伤后应激障碍。
122.根据权利要求94或95所述的方法，其中所述疾病、病症或病状是或包含肥胖。
123.根据权利要求94或95所述的方法，其中所述疾病、病症或病状是或包含失眠。
124.根据权利要求94或95所述的方法，其中所述疾病、病症或病状是或包含嗜睡。
125.一种降低患者的胃肠动力的方法，所述方法包含向所述患者施用根据权利要求1至73中任一项所述的结构的化合物或根据权利要求74至92中任一项所述的药物组合物的步骤。
126.一种减少患者中或生物样品中的癌细胞增殖的方法，所述方法包含向所述患者施用或使所述生物样品接触根据权利要求1至73中任一项所述的结构的化合物或根据权利要求74至92中任一项所述的药物组合物的步骤。
127.一种诱导患者中或生物样品中的脂解的方法，所述方法包含向所述患者施用或使所述生物样品接触根据权利要求1至73中任一项所述的的结构的化合物或根据权利要求74至92中任一项所述的药物组合物的步骤。
128.一种制造药物组合物的方法，所述方法包含以下步骤：
与至少一种药学上可接受的载体一起配制根据权利要求1至73中任一项所述的化合物。
129.一种鉴别和/或表征N-酰基乙醇酰胺化合物的衍生物的方法，所述方法包含以下步骤：
提供包含修饰或以其它方式连接至N-酰基乙醇酰胺化合物的X2部分的衍生化合物；
确定所述衍生化合物具有一种或多种相对于所述N-酰基乙醇酰胺化合物改善的药理学性质。
130.一种制造根据权利要求1至73中任一项所述的化合物的方法，所述方法包含以下步骤：
使N-酰基乙醇酰胺化合物(例如，母体N-酰基乙醇酰胺化合物)与接头部分缀合或以其它方式连接；
使X2部分与接头-N-酰基乙醇酰胺部分缀合或以其它方式连接。
131.一种制造根据权利要求1至73中任一项所述的化合物的方法，所述方法包含以下步骤：
使X2部分与接头部分缀合或以其它方式连接；
使N-酰基乙醇酰胺化合物(例如，母体N-酰基乙醇酰胺化合物)与接头-X2部分缀合或以其它方式连接。
N-酰基乙醇酰胺衍生物和其用途
[0001] 相关申请的交叉引用
[0002] 本申请要求2017年6月9日提交的美国临时申请第62/517,344号和2016年10月13日提交的美国临时申请第62/407,796号的优先权，这两个美国临时申请各自的全部内容以引用的方式并入本文中。
背景技术
[0004] N-酰基乙醇酰胺被广泛认为是潜在有用的治疗化合物，并且已经被广泛研究，特别是它们的镇痛和/或消炎作用。
[0005] 然而，本公开认识到N-酰基乙醇酰胺化合物通常具有一种或多种不良药理学性质，例如当通过特定途径(例如，口服)施用和/或低暴露于特定感兴趣的靶部位(例如，肠道，或更具体来说，低位肠道)时导致有限的生物利用度。在许多情况下，这些不良性质会限制剂量，限制对特定感兴趣部位的暴露或递送，限制对特定途径的有效递送的易感性等，和/或可能因此或因为其它原因而需要替代施用模式。
[0006] 本公开进一步认识到，通过提供适当的前药可以减轻或消除许多N-酰基乙醇酰胺化合物遇到的不良药理学性质中的一些或所有。如本领域中已知的，前药在大多数情况下是母体药物分子的药理学上无活性的衍生物，其需要在体内自发转化或酶促转化以释放活性药物。本公开包括以下见解：某些N-酰基乙醇酰胺化合物的药理学问题的一个根源可能是化合物未能以足够实现其所期望的生物学效应的水平到达相关靶部位。或者或另外，N-酰基乙醇酰胺化合物可能与非靶部位相互作用，和/或可能展现出不希望有的副作用。本公开提供了N-酰基乙醇酰胺化合物的某些衍生物(例如，前药)形式，其可以减轻或消除这些问题和/或根源。
[0007] 在一些实施例中，本公开提供了N-酰基乙醇酰胺的衍生物，其表现出改善的药理学性质和/或展现出与其母体N-酰基乙醇酰胺(或另一种适当的参考N-酰基乙醇酰胺)的生物活性相当(或，在一些情况下，可能更佳)的生物活性。在一些实施例中，当与参考N-酰基乙醇酰胺，例如其母体N-酰基乙醇酰胺相比时，所提供的N-酰基乙醇酰胺衍生化合物可以表现出一种或多种性质，例如，增加的口服生物利用度、增加的细胞渗透性、增加的水溶性、降低的首过效应(first-pass effect)、增加的稳定性、肠道转运体的主动转运、避开外排性转运体和/或其组合。
[0008] 在一些实施例中，根据本公开使用的化合物是这样的化合物，其中N-酰基乙醇酰胺与选自由以下组成的组的部分缀合：磷酸酯、丁酸、甘油、琥珀酸酯、辛酸、葡萄糖酸、二十碳五烯酸、亚油酸、琥珀酸酯以及蔗糖部分，和其组合。在一些实施例中，N-酰基乙醇酰胺通过使用接头部分而与一个或多个这种部分缀合。在一些实施例中，N-酰基乙醇酰胺与两个或更多个这种部分缀合。在一些实施例中，N-酰基乙醇酰胺与一个、两个或三个这种部分缀合。
[0009] 在一些实施例中，所提供的化合物具有由式I-a表示的化学结构：
[0010] X1-X2
[0011] 或其药学上可接受的盐；其中
[0012] X1是N-酰基乙醇酰胺；并且
[0013] X2是与N-酰基乙醇酰胺缀合的部分。
[0014] 在一些实施例中，X1选自由N-棕榈酰基乙醇酰胺、N-油酰基乙醇酰胺以及N-花生四烯酰基乙醇酰胺组成的组；在一些特定实施例中，X1是N-棕榈酰基乙醇酰胺。在一些实施例中，X2包含选自由以下组成的组的部分：磷酸酯、丁酸、甘油、琥珀酸酯、辛酸、葡萄糖酸、二十碳五烯酸、亚油酸、琥珀酸酯以及蔗糖部分。
[0015] 在一些实施例中，所提供的化合物具有由式I表示的化学结构：
[0016]
[0017] 或其药学上可接受的盐，其中：
[0018] 每个R1、R2或R3独立地是氢或-T-R4，其中R1、R2或R3中的至少一个是-T-R4；
[0019] -T-表示二价部分；并且
[0020] R4是选自由C1-40脂肪族基、-C(O)R以及X1组成的组的任选地被取代的基团，其中[0021] R选自由氢和任选地被取代的C1-20脂肪族基组成的组；并且
[0022] X1如上文所定义。
[0023] 在一些实施例中，所提供的化合物具有由式I-b表示的化学结构：
[0024] X1-X3
[0025] I-b
[0026] 或其药学上可接受的盐，其中：
[0027] X1如上文所定义；
[0028] X3是选自由-(CH2)m-P(O)(OR)2、C1-40脂肪族基、-T-X4组成的组的任选地被取代的基团；另外其中
[0029] m是选自由0到10组成的组的整数；
[0030] -T-如上文所定义；
[0031] X4是糖部分，在一些特定实施例中，X4是二糖，例如蔗糖。
[0032] 在一些实施例中，本公开提供化合物，例如：
[0033]
[0034]
[0035]
[0036] 在一些实施例中，本公开提供N-酰基乙醇酰胺前药。在一些实施例中，所提供的前药的特征可以在于一种或多种所期望的物理性质，其可以例如相对于适当的参考N-酰基乙醇酰胺(例如，相对于所提供前药的母体N-酰基乙醇酰胺)进行评估；在一些实施例中，这些所期望的物理性质可以是或包括例如增强的水溶性(其可以促进例如配制成药物组合物，特别是用于口服或肠胃外施用)、增强的消化道吸收、在相关储存条件下增强的稳定性等。
[0037] 在一些实施例中，母体N-酰基乙醇酰胺化合物是特征在于有限的水溶性和/或有限的口服生物利用度的化合物。例如，在一些实施例中，母体N-酰基乙醇酰胺化合物的特征在于低于相关阈值的水溶性和/或低于相关阈值的口服生物利用度。
[0038] 在一些实施例中，母体N-酰基乙醇酰胺化合物的特征在于一种或多种药理学性质，这一种或多种药理学性质影响其对药物制剂的顺从性，例如，以致在制备含有所期望的单位剂量的量和/或所期望的浓度的化合物的药物组合物时遇到了挑战。在一些实施例中，本公开提供了这种母体N-酰基乙醇酰胺化合物的衍生物；在一些实施例中，本公开提供的衍生物充当相关母体化合物的前药，因为在施用于受试者时(例如，在药物组合物的背景下)，所提供的衍生物递送母体化合物和/或其活性代谢物。在一些实施例中，如本文中所描述，所提供的N-酰基乙醇酰胺衍生化合物包含一个或多个修饰或以其它方式连接至母体N-酰基乙醇酰胺化合物的部分。
[0039] 在一些实施例中，所提供的N-酰基乙醇酰胺衍生化合物适合于单位剂量和/或浓度高于在类似条件下用相关母体N-酰基乙醇酰胺化合物实现的单位剂量和/或浓度的药物制剂。
[0040] 本发明尤其提供了式I化合物和其药学上可接受的盐、上述化合物的制备、含有上述化合物的药物和其制造、以及鉴别和/或表征有用的这类化合物的技术、以及所提供的化合物的用途，例如用于治疗一种或多种例如如本文中所描述的疾病、病症或病状。附图说明
[0041] 图1是指示疼痛分类和代表性适应症的流程图。不同类型的疼痛之间的区分对于正确治疗至关重要。疼痛可以根据其持续时间分为急性和慢性疼痛。慢性疼痛进一步根据疼痛产生的来源分类：伤害性疼痛，其由伤害感受器从损伤部位或组织受伤部位(例如，在关节炎中是发炎的关节)传播；神经病理性疼痛，其由神经系统中的原发病灶或功能障碍引发或引起(进一步细分为中枢和外周，分别涉及中枢神经系统和外周神经系统)；内脏痛，其涉及内脏器官；混合性疼痛，其具有混合来源。指示了所选择的慢性疼痛病状在美国的流行率。资料来源：疾病控制和预防中心、美国国家卫生统计中心、关节炎基金会、美国国家糖尿病、消化病和肾病研究所、美国疼痛协会、美国疼痛基金会。
[0042] 图2A是展示视觉模拟10点量表的条形图，该量表衡量PEA管理疼痛的用途。
[0044] 图2C是测量用PEA治疗的患者和对照组在不同观测时间的疼痛强度变化的散点图。值表示为平均值±SEM。
[0045] 图2D是测量A组、B组和C组中的骨盆疼痛的视觉模拟的条形图。
[0046] 图2E是测量A组、B组和C组中的性交困难的视觉模拟的条形图。
[0047] 图2F是测量A组、B组和C组中的痛经的视觉模拟的条形图。
[0048] 图2G是展示在用丁酸和胰岛素治疗后状态的正常化百分比的条形图。具体来说，15名IBS-DP患者对比4名IBS-CP患者：在意向性治疗(intent to treat，ITT)组和符合方案(per-protocol，PP)组中分别为68％对比14％和71％对比16％(p<0.005)。*统计显著(p<
0.005)。
0.005)。
[0049] 图2H是展示远端UC患者在用丁酸钠(黑点)或氯化钠(白点；对照)灌肠剂治疗之前和之后的内镜评分(n＝10)的散点图。垂直条指示1 SEM；*显著性差异(内镜评分，P<0.01；组织学分级，P<0.02；上隐窝标记，P<0.03；威尔科克森检验(Wilcoxon test))。
[0050] 图2I是展示远端UC患者在用丁酸钠(黑点)或氯化钠(白点；对照)灌肠剂治疗之前和之后的组织学分级(n＝10)的散点图。垂直条指示1 SEM；*显著性差异(内镜评分，P<0.01；组织学分级，P<0.02；上隐窝标记，P<0.03；威尔科克森检验)。
[0051] 图2J是展示远端UC患者在用丁酸钠(黑点)或氯化钠(白点；对照)灌肠剂治疗之前和之后的上隐窝标记频率(n＝6)的散点图。垂直条指示1 SEM；*显著性差异(内镜评分，P<0.01；组织学分级，P<0.02；上隐窝标记，P<0.03；威尔科克森检验)。
[0052] 图2K是展示对照小鼠中PEA(1-10mg·kg-1，i.p.)对上胃肠道转运的抑制作用的条形图。在施用OM或媒剂(30％乙醇)后28天测量转运。结果(每个实验组9-10只小鼠的平均值±SEM)表示为上胃肠道转运的百分比。*P<0.05，**P<0.01，显著不同于媒剂。术语“媒剂”是指用于溶解PEA的媒剂。
[0053] 图2L是展示经过芥子油(oil ofmustard，OM)处理的小鼠中PEA(1-10mg·kg-1，i.p.)对上胃肠道转运的抑制作用的条形图。在施用OM或媒剂(30％乙醇)后28天测量转运。结果(每个实验组9-10只小鼠的平均值±SEM)表示为上胃肠道转运的百分比。*P<0.05，**P<0.01，显著不同于媒剂。应注意，在(B)中，术语“媒剂”是指用于溶解OM的媒剂。经过OM处理的小鼠中媒剂或PEA的转运％。
[0054] 图2M是展示小鼠中的2,4,6-二硝基苯磺酸诱发型(“DNBS诱发型”)结肠炎的条形图。对照和经过DNBS处理的小鼠在存在或不存在腹膜内(i.p.)PEA的情况下的体重变化。在施用DNBS(或媒剂)之前和即将杀死之前对小鼠进行称重。在施用媒剂或DNBS后3天分析组织。从炎性损伤后24小时开始，一天一次施用PEA(0.1-10mg·kg-1)，连续三天(治疗方案)。各长条是每个实验组的12-15只小鼠的平均值±SEM。#P<0.001对比对照(即，没有肠炎的小鼠)。*P<0.05、**P<0.01以及***P<0.001对比单独的DNBS。
[0055] 图2N是展示小鼠中的DNBS诱发型结肠炎的条形图。对照和经过DNBS处理的小鼠在存在或不存在口服(p.o.)PEA的情况下的体重变化。在施用DNBS(或媒剂)之前和即将杀死之前对小鼠进行称重。在施用媒剂或DNBS后3天分析组织。从炎性损伤后24小时开始，一天-1一次施用PEA(0.1-10mg·kg )，连续三天(治疗方案)。各长条是每个实验组的12-15只小鼠的平均值±SEM。#P<0.001对比对照(即，没有肠炎的小鼠)。*P<0.05、**P<0.01以及***P<
0.001对比单独的DNBS。
0.001对比单独的DNBS。
[0056] 图2O是展示小鼠中的DNBS诱发型结肠炎的条形图。对照和经过DNBS处理的小鼠在存在或不存在i.p.PEA的情况下的结肠重量/结肠长度比率的变化。在施用DNBS(或媒剂)之前和即将杀死之前对小鼠进行称重。在施用媒剂或DNBS后3天分析组织。从炎性损伤后24小时开始，一天一次施用PEA(0.1-10mg·kg-1)，连续三天(治疗方案)。各长条是每个实验组的12-15只小鼠的平均值±SEM。#P<0.001对比对照(即，没有肠炎的小鼠)。*P<0.05、**P<0.01以及***P<0.001对比单独的DNBS。
[0057] 图2P是展示小鼠中的DNBS诱发型结肠炎的条形图。对照和经过DNBS处理的小鼠在存在或不存在p.o.PEA的情况下的结肠重量/结肠长度比率的变化。在施用DNBS(或媒剂)之前和即将杀死之前对小鼠进行称重。在施用媒剂或DNBS后3天分析组织。从炎性损伤后24小时开始，一天一次施用PEA(0.1-10mg·kg-1)，连续三天(治疗方案)。各长条是每个实验组的12-15只小鼠的平均值±SEM。#P<0.001对比对照(即，没有肠炎的小鼠)。*P<0.05、**P<0.01以及***P<0.001对比单独的DNBS。
[0058] 图2Q是测量两个群体(一个口服，另一个腹膜内施用)的抑制％(如通过结肠重量:长度比率所测量)对比PEA的施用量的散点图。
[0059] 图3A是PEA的空白血浆色谱图。Y轴按0到365的量表测量强度(cp)；X轴按0到1.0的量表测量时间(分钟)。
[0060] 图3B是PEA的LLOQ2.5ng/mL的代表性色谱图。Y轴按0到870的量表测量强度(cp)；X轴按0到1.0的量表测量时间(分钟)。
[0061] 图3C是PEA的ULOQ 1000ng/mL的代表性色谱图。Y轴按0到1.8×105的量表测量强度(cp)；X轴按0到1.0的量表测量时间(分钟)。
[0062] 图3D是PEA的代表性校准曲线。
[0063] 图3E是PEA-前药I-9的空白血浆色谱图。Y轴按0到1000的量表测量强度(cp)；X轴按0到1.0的量表测量时间(分钟)。
[0064] 图3F是PEA-前药I-9的LLOQ0.5ng/mL的代表性色谱图。Y轴按0到1120的量表测量强度(cp)；X轴按0到1.0的量表测量时间(分钟)。
[0065] 图3G是PEA前药I-9的ULOQ 1000ng/mL的代表性色谱图。Y轴按0到9×106的量表测量强度(cp)；X轴按0到1.0的量表测量时间(分钟)。
[0066] 图3H是PEA-前药I-9的代表性校准曲线。
[0067] 图4A是在雄性史泊格-多利大鼠(Sprague-Dawley rat)中以1mg/kg静脉内施用PEA后PEA的各个血浆浓度的散点图(第1组)。
[0068] 图4B是在雄性史泊格-多利大鼠中以1mg/kg静脉内施用PEA后PEA的平均血浆浓度的散点图(第1组)。
[0069] 图5A是在雄性史泊格多利大鼠中以16mg/kg口服I-9后PEA的各个血浆浓度的散点图。
[0070] 图5B是在雄性史泊格-多利大鼠中以16mg/kg口服I-9后PEA的平均血浆浓度的散点图。
[0071] 图5C是在雄性史泊格-多利大鼠中以19mg/kg口服I-6后PEA的各个血浆浓度的散点图(第2组)。
[0072] 图5D是在口服I-6后PEA的平均血浆浓度的散点图。
[0073] 图5E是在雄性史泊格-多利大鼠中以19.7mg/kg口服I-5后PEA的各个血浆浓度的散点图(第3组)。
[0074] 图5F是在雄性史泊格-多利大鼠中以19.7mg/kg口服I-5后PEA的平均血浆浓度的散点图(第3组)。
[0075] 图5G是在雄性史泊格-多利大鼠中以24.5mg/kg口服I-3(PEA-琥珀酸酯-甘油-二辛酸)后PEA的各个血浆浓度的散点图(第4组)。
[0076] 图5H是在雄性史泊格-多利大鼠中以24.5mg/kg口服I-3(PEA-琥珀酸酯-甘油-二辛酸)后PEA的平均血浆浓度的散点图(第4组)。
[0077] 图5I是在雄性史泊格-多利大鼠中以12/5mg/kg口服I-2(PEA-BA)后PEA的各个血浆浓度的散点图(第5组)。
[0078] 图5J是在雄性史泊格-多利大鼠中以12.5mg/kg口服I-2(PEA-BA)后PEA的平均血浆浓度的散点图(第5组)。
[0079] 图5K是在雄性史泊格-多利大鼠中以20.7mg/kg口服I-11后PEA的各个血浆浓度的散点图(第6组)。
[0080] 图5L是在雄性史泊格-多利大鼠中以20.7mg/kg口服I-11后PEA的平均血浆浓度的散点图(第6组)。
[0081] 图5M是在雄性史泊格-多利大鼠中以24.5mg/kg口服I-7后PEA的各个血浆浓度的散点图(第7组)。
[0082] 图5N是在雄性史泊格-多利大鼠中以24.5mg/kg口服I-7后PEA的平均血浆浓度的散点图(第7组)。
[0083] 图6是在雄性史泊格-多利大鼠中以24.3mg/kg口服I-13(在20％(Solutol HS15:NMP1:1)、10％PEG400、70％H2O中)后PEA的各个血浆浓度的散点图。
[0084] 图7A是在雄性史泊格-多利大鼠中以35.2mg/kg口服I-12(在20％Solutol HS15:NMP(1:1)、10％PEG400、70％H2O中)后PEA的各个血浆浓度的散点图(第1组)。
[0085] 图7B是在雄性史泊格-多利大鼠中以35.2mg/kg口服I-12(在20％Solutol HS15:NMP(1:1)、10％PEG400、70％H2O中)后PEA的平均血浆浓度的散点图(第1组)。
[0086] 图7C是在雄性史泊格-多利大鼠中以35.2mg/kg口服I-12(在0.5％甲基纤维素中，在20％Solutol HS15:NMP(1:1)、10％PEG400、70％H2O中)后PEA的各个血浆浓度的散点图(第2组)。
[0087] 图7D是在雄性史泊格-多利大鼠中以35.2mg/kg口服I-12(在0.5％甲基纤维素中，在20％Solutol HS15:NMP(1:1)、10％PEG400、70％H2O中)后PEA的平均血浆浓度的散点图(第2组)。
[0088] 图8A是在雄性史泊格-多利大鼠中以20.7mg/kg口服I-15(在20％Solutol HS15:NMP(1:1)、10％PEG400、70％H2O中)后PEA的各个血浆浓度的散点图(第1组)。
[0089] 图8B是在雄性史泊格-多利大鼠中以20.7mg/kg口服I-15(在20％Solutol HS15:NMP(1:1)、10％PEG400、70％H2O中)后PEA的平均血浆浓度的散点图(第1组)。
[0090] 图8C是在雄性史泊格-多利大鼠中以20.7mg/kg口服I-14(在20％Solutol HS15:NMP(1:1)、10％PEG400、70％H2O中)后PEA的各个血浆浓度的散点图(第1组)。
[0091] 图8D是在雄性史泊格-多利大鼠中以20.7mg/kg口服I-14(在20％Solutol HS15:NMP(1:1)、10％PEG400、70％H2O中)后PEA的平均血浆浓度的散点图(第1组)。
[0092] 图9A是在口服I-8后PEA的各个血浆浓度的散点图。
[0093] 图9B是在口服I-8后PEA的平均血浆浓度的散点图。
[0094] 图9C是在口服I-16后PEA的各个血浆浓度的散点图。
[0095] 图9D是在口服I-16后PEA的平均血浆浓度的散点图。
[0096] 图10A是在雄性史泊格-多利大鼠中以4mg/kg口服I-8(在20％solutol HS15:NMP(1:1)、10％PEG400、70％H2O中)后PEA的各个血浆浓度(ng/mL)和药物动力学参数的散点图。
[0097] 图10B是在雄性史泊格-多利大鼠中以4mg/kg口服I-8(在20％Solutol HS15:NMP(1:1)、10％PEG400、70％H2O中)后PEA的平均血浆浓度(ng/mL)和药物动力学参数的散点图。
[0098] 图10C是在雄性史泊格-多利大鼠中以8mg/kg口服I-8(在20％Solutol HS15:NMP(1:1)、10％PEG400、70％H2O中)后PEA的各个血浆浓度(ng/mL)和药物动力学参数的散点图。
[0099] 图10D是在雄性史泊格-多利大鼠中以8mg/kg口服I-8(在20％Solutol HS15:NMP(1:1)、10％PEG400、70％H2O中)后PEA的平均血浆浓度(ng/mL)和药物动力学参数的散点图。
[0100] 图10E是在雄性史泊格-多利大鼠中以16mg/kg口服I-8(在20％Solutol HS15:NMP(1:1)、10％PEG400、70％H2O中)后PEA的各个血浆浓度(ng/mL)和药物动力学参数的散点图。
[0101] 图10F是在雄性史泊格-多利大鼠中以16mg/kg口服I-8(在20％Solutol HS15:NMP(1:1)、10％PEG400、70％H2O中)后PEA的平均血浆浓度(ng/mL)和药物动力学参数的散点图。
[0102] 图10G是在雄性史泊格-多利大鼠中以5.2mg/kg口服I-16(在20％Solutol HS15:NMP(1:1)、10％PEG400、70％H2O中)后PEA的各个血浆浓度(ng/mL)和药物动力学参数的散点图。
[0103] 图10H是在雄性史泊格-多利大鼠中以5.2mg/kg口服I-16(在20％Solutol HS15:NMP(1:1)、10％PEG400、70％H2O中)后PEA的平均血浆浓度(ng/mL)和药物动力学参数的散点图。
[0104] 图10I是在雄性史泊格-多利大鼠中以10.35mg/kg口服I-16(在20％Solutol HS15:NMP(1:1)、10％PEG400、70％H2O中)后PEA的各个血浆浓度(ng/mL)和药物动力学参数的散点图。
[0105] 图10J是在雄性史泊格-多利大鼠中以10.35mg/kg口服I-16(在20％Solutol HS15:NMP(1:1)、10％PEG400、70％H2O中)后PEA的平均血浆浓度(ng/mL)和药物动力学参数的散点图。
[0106] 图10K是在雄性史泊格-多利大鼠中以20.7mg/kg口服I-16(在20％Solutol HS15:NMP(1:1)、10％PEG400、70％H2O中)后PEA的各个血浆浓度(ng/mL)和药物动力学参数的散点图。
[0107] 图10L是在雄性史泊格-多利大鼠中以20.7mg/kg口服I-16(在20％Solutol HS15:NMP(1:1)、10％PEG400、70％H2O中)后PEA的平均血浆浓度(ng/mL)和药物动力学参数的散点图。
[0108] 图11是展示随提供给动物受试者的I-16的量而变的缩爪潜伏期(以秒为单位)的条形图。动物不接受I-16(即，仅接受媒剂)；接受5mg/kg当量的PEA(等同于10.25mg/kg I-16)；或10mg/kg当量的PEA(等同于20.50mg/kg I-16)。
[0110] 图12B是展示大鼠中的机械性异常疼痛随所施用的镇痛剂(媒剂：加巴喷丁(gabapentin)；或I-16)而变的条形图。
[0111] 定义
[0112] A.化学定义
[0113] 如本文中所用，除非另有指示，否则以下定义应适用。出于本发明的目的，化学元素根据元素周期表，CAS版，《化学与物理手册》(Handbook of Chemistry and Physics)，第75版来鉴别。另外，有机化学的一般原理描述于《有机化学》(Organic Chemistry),Thomas Sorrell,大学科学书籍(University Science Books),Sausalito:1999以及《March高等有机化学》(March's Advanced Organic Chemistry),第5版,编辑：Smith,M.B.和March,J.,约翰·威利父子公司(John Wiley&Sons),纽约:2001中，这些文献的全部内容以引用的方式并入本文中。
[0114] 脂肪族基：如本文中所用的“脂肪族基”意指完全饱和的或含有一个或多个不饱和单元的直链(即，无支链)或支链被取代或未被取代的烃链，或完全饱和的或含有一个或多个不饱和单元的单环烃、双环烃或多环烃，其与分子其余部分具有单一连接点。除非另外说明，否则脂肪族基含有1-100个脂肪族碳原子。在一些实施例中，脂肪族基含有1-20个脂肪族碳原子。在其它实施例中，脂肪族基含有1-10个脂肪族碳原子。在其它实施例中，脂肪族基含有1-5个脂肪族碳原子，并且在其它实施例中，脂肪族基含有1、2、3或4个脂肪族碳原子。合适的脂肪族基包括但不限于直链或支链被取代或未被取代的烷基、烯基、炔基以及其杂化物。
[0115] 烷基：如本文中所用的术语“烷基”具有其在本领域中的普通含义并且可以包括饱和脂肪族基，包括直链烷基、支链烷基、环烷基(脂环族基)、被烷基取代的环烷基以及被环烷基取代的烷基。在一些实施例中，烷基具有1-100个碳原子。在某些实施例中，直链或支链烷基在其主链中具有约1-20个碳原子(例如，直链烷基是C1-C20，支链烷基是C2-C20)，并且或者，在其主链中具有约1-10个碳原子。在一些实施例中，环烷基环在其环结构中具有约3-10个碳原子，其中这些环是单环或双环，并且或者，在环结构中具有约5、6或7个碳。在一些实施例中，烷基可以是低碳烷基，其中低碳烷基包含1-4个碳原子(例如，直链低碳烷基是C1-C4)。
[0116] 烯基：如本文中所用的术语“烯基”是指如本文中所定义，具有一个或多个双键的烷基。
[0117] 炔基：如本文中所用的术语“炔基”是指如本文中所定义，具有一个或多个三键的烷基。
[0118] 保护基：如本文中所用的短语“保护基”是指避免潜在反应性官能团发生不希望的化学转化的临时取代基。这类保护基的实例包括羧酸酯、醇的硅醚以及醛和酮各自的缩醛和缩酮。“Si保护基”是包含Si原子的保护基，例如Si-三烷基(例如，三甲基硅基、三丁基硅基、叔丁基二甲基硅基)、Si-三芳基、Si-烷基-二苯基(例如，叔丁基二苯基硅基)或Si-芳基-二烷基(例如，Si-苯基二烷基)。一般来说，Si保护基与氧原子连接。保护基化学领域已有综述(Greene,T.W.；Wuts,P.G.M《. 有机合成中的保护基》(Protective Groups in Organic Synthesis),第2版；Wiley:纽约,1991)。下文详细描述了这类保护基(和相关的保护部分)。
[0119] 被保护的羟基是本领域中众所周知的并且包括《有机合成中的保护基》,T.W.Greene和P.G.M.Wuts,第3版,约翰·威利父子公司,1999中详细描述的那些，所述文献的全部内容以引用的方式并入本文中。适当保护的羟基的实例进一步包括(但不限于)酯、碳酸酯、磺酸盐烯丙基醚、醚、硅烷基醚、烷基醚、芳基烷基醚和烷氧基烷基醚。合适的酯的实例包括甲酸酯、乙酸酯、丙酸酯、戊酸酯、巴豆酸酯以及苯甲酸酯。合适的酯的具体实例包括甲酸酯、苯甲酰甲酸酯、氯乙酸酯、三氟乙酸酯、甲氧基乙酸酯、三苯基甲氧基乙酸酯、对氯苯氧基乙酸酯、3-苯基丙酸酯、4-氧代戊酸酯、4,4-(亚乙基二硫基)戊酸酯、新戊酸酯(三甲基乙酸酯)、巴豆酸酯、4-甲氧基-巴豆酸酯、苯甲酸酯、对苯甲基苯甲酸酯、2,4,6-三甲基苯甲酸酯。合适的碳酸酯的实例包括碳酸9-芴基甲酯、碳酸乙酯、碳酸2,2,2-三氯乙酯、碳酸2-(三甲基硅基)乙酯、碳酸2-(苯磺酰基)乙酯、碳酸乙烯酯、碳酸烯丙酯以及碳酸对硝基苯甲酯。合适的硅醚的实例包括三甲基硅醚、三乙基硅醚、叔丁基二甲基硅醚、叔丁基二苯基硅醚、三异丙基硅醚以及其它三烷基硅醚。合适的烷基醚的实例包括甲基醚、苯甲基醚、对甲氧基苯甲基醚、3,4-二甲氧基苯甲基醚、三苯甲基醚、叔丁基醚以及烯丙醚或其衍生物。烷氧基烷基醚包括缩醛，例如甲氧基甲基醚、甲硫基甲基醚、(2-甲氧基乙氧基)甲基醚、苯甲氧基甲基醚、β-(三甲基硅基)乙氧基甲基醚以及四氢吡喃-2-基醚。合适的芳烷基醚的实例包括苯甲基醚、对甲氧基苯甲基(MPM)醚、3,4-二甲氧基苯甲基醚、邻硝基苯甲基醚、对硝基苯甲基醚、对卤基苯甲基醚、2,6-二氯苯甲基醚、对氰基苯甲基醚、2-和4-吡啶甲基醚。
[0120] 被保护的胺是本领域中众所周知的并且包括Greene(1999)中详细描述的那些。合适的单保护胺进一步包括但不限于芳烷基胺、氨基甲酸酯、烯丙基胺、酰胺等。合适的单保护氨基部分的实例包括叔丁氧羰基氨基(-NHBOC)、乙氧羰基氨基、甲氧羰基氨基、三氯乙氧羰基氨基、烯丙氧羰基氨基(-NHAlloc)、苯甲氧羰基氨基(-NHCBZ)、烯丙基氨基、苯甲基氨基(-NHBn)、芴基甲基羰基(-NHFmoc)、甲酰胺基、乙酰胺基、氯乙酰胺基、二氯乙酰胺基、三氯乙酰胺基、苯基乙酰胺基、三氟乙酰胺基、苯甲酰胺基、叔丁基二苯基硅基等。合适的双保护胺包括被两个独立地选自上文描述为单保护胺的取代基的取代基取代的胺，并进一步包括环酰亚胺，例如邻苯二甲酰亚胺、马来酰亚胺、琥珀酰亚胺等。合适的双保护胺还包括吡咯等、2,2,5,5-四甲基-[1,2,5]氮杂二硅杂环戊烷等以及叠氮化物。
[0121] 被保护的醛是本领域中众所周知的并且包括Greene(1999)中详细描述的那些。合适的被保护的醛进一步包括但不限于非环缩醛、环缩醛、腙、亚胺等。这类基团的实例包括二甲基缩醛、二乙基缩醛、二异丙基缩醛、二苯甲基缩醛、双(2-硝基苯甲基)缩醛、1,3-二噁烷、1,3-二氧杂环戊烷、缩氨基脲以及其衍生物。
[0122] 被保护的羧酸是本领域中众所周知的并且包括Greene(1999)中详细描述的那些。合适的被保护的羧酸进一步包括但不限于任选地被取代的C1-6脂肪族酯、任选地被取代的芳基酯、硅烷基酯、活化酯、酰胺、酰肼等。这类酯基的实例包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、苯甲基以及苯基酯，其中每个基团任选地被取代。其它合适的被保护的羧酸包括噁唑啉和原酸酯。
[0123] 被保护的硫醇是本领域中众所周知的并且包括Greene(1999)中详细描述的那些。合适的被保护的硫醇进一步包括但不限于二硫化物、硫醚、硅烷基硫醚、硫酯、硫代碳酸酯以及硫代氨基甲酸酯等。这类基团的实例包括但不限于烷基硫醚、苯甲基和被取代的苯甲基硫醚、三苯甲基硫醚以及三氯乙氧羰基硫酯等等。
[0124] 取代：如本文所描述，本公开的化合物可以含有任选地被取代的和/或被取代的部分。一般来说，术语“被取代”，无论前面有没有术语“任选地”，都意指指定部分的一个或多个氢被合适的取代基置换。除非另有指示，否则“任选地被取代的”基团可以在该基团的每个可取代位置具有合适的取代基，并且当任何给定结构中超过一个位置可以被超过一个选自指定组的取代基取代时，每一个位置上的取代基可以相同或不同。本公开所设想的取代基组合优选是能引起稳定的或化学上可行的化合物形成的取代基组合。如本文中所用的术语“稳定”是指化合物在经历一些条件以便实现其制造、检测，并且在某些实施例中，实现其出于本文中所公开的一个或多个目的的回收、纯化以及用途时，基本上不发生改变。
[0125] 合适的一价取代基包括卤素；-(CH2)0-4R○；-(CH2)0-4OR○；-O(CH2)0-4R○、-O-(CH2)0-4C(O)OR○；-(CH2)0-4CH(OR○)2；-(CH2)0-4Ph，其可以被R○取代；-(CH2)0-4O(CH2)0-1Ph，其可以被R○取代；-CH＝CHPh，其可以被R○取代；-(CH2)0-4O(CH2)0-1-吡啶基，其可以被R○取代；-NO2；-○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
CN；-N3；-(CH2)0-4N(R )2；-(CH2)0-4N(R )C(O)R ；-N(R )C(S)R ；-(CH2)0-4N(R )C(O)NR 2；-N(R○)C(S)NR○2；-(CH2)0-4N(R○)C(O)OR○；-N(R○)N(R○)C(O)R○；-N(R○)N(R○)C(O)NR○2；-N(R○)N(R○)C(O)OR○；-(CH2)0-4C(O)R○；-C(S)R○；-(CH2)0-4C(O)OR○；-(CH2)0-4C(O)SR○；-(CH2)0-4C(O)OSiR○3；-(CH2)0-4OC(O)R○；-OC(O)(CH2)0-4SR○-；-SC(S)SR○；-(CH2)0-4SC(O)R○；-(CH2)0-4C(O)NR○2；-C(S)NR○2；-C(S)SR○；-SC(S)SR○、-(CH2)0-4OC(O)NR○2；-C(O)N(OR○)R○；-C(O)C(O)R○；-C(O)CH2C(O)R○；-C(NOR○)R○；-(CH2)0-4SSR○；-(CH2)0-4S(O)2R○；-(CH2)0-4S(O)2OR○；-(CH2)0-4OS(O)2R○；-S(O)2NR○2；-(CH2)0-4S(O)R○；-N(R○)S(O)2NR○2；-N(R○)S(O)2R○；-N(OR○)R○；-C(NH)NR○2；-P(O)2R○；-P(O)R○2；-OP(O)R○2；-OP(O)(OR○)2；-SiR○3；-OSiR○3；-(C1-4直链或支链亚烷基)O-N(R○)2；或-(C1-4直链或支链亚烷基)C(O)O-N(R○)2，其中每个R○都可以如下文所定义般被取代，并且独立地是氢、C1-6脂肪族基、-CH2Ph、-O(CH2)0-1Ph、-CH2-(5-6元杂芳环)或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元饱和、部分不饱和或芳基环，或不管以上定义，两个独立存在的R○与其插入原子一起形成具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3-12元饱和、部分不饱和或芳基单环或双环，其可以如下文所定义般被取代。
CN；-N3；-(CH2)0-4N(R )2；-(CH2)0-4N(R )C(O)R ；-N(R )C(S)R ；-(CH2)0-4N(R )C(O)NR 2；-N(R○)C(S)NR○2；-(CH2)0-4N(R○)C(O)OR○；-N(R○)N(R○)C(O)R○；-N(R○)N(R○)C(O)NR○2；-N(R○)N(R○)C(O)OR○；-(CH2)0-4C(O)R○；-C(S)R○；-(CH2)0-4C(O)OR○；-(CH2)0-4C(O)SR○；-(CH2)0-4C(O)OSiR○3；-(CH2)0-4OC(O)R○；-OC(O)(CH2)0-4SR○-；-SC(S)SR○；-(CH2)0-4SC(O)R○；-(CH2)0-4C(O)NR○2；-C(S)NR○2；-C(S)SR○；-SC(S)SR○、-(CH2)0-4OC(O)NR○2；-C(O)N(OR○)R○；-C(O)C(O)R○；-C(O)CH2C(O)R○；-C(NOR○)R○；-(CH2)0-4SSR○；-(CH2)0-4S(O)2R○；-(CH2)0-4S(O)2OR○；-(CH2)0-4OS(O)2R○；-S(O)2NR○2；-(CH2)0-4S(O)R○；-N(R○)S(O)2NR○2；-N(R○)S(O)2R○；-N(OR○)R○；-C(NH)NR○2；-P(O)2R○；-P(O)R○2；-OP(O)R○2；-OP(O)(OR○)2；-SiR○3；-OSiR○3；-(C1-4直链或支链亚烷基)O-N(R○)2；或-(C1-4直链或支链亚烷基)C(O)O-N(R○)2，其中每个R○都可以如下文所定义般被取代，并且独立地是氢、C1-6脂肪族基、-CH2Ph、-O(CH2)0-1Ph、-CH2-(5-6元杂芳环)或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元饱和、部分不饱和或芳基环，或不管以上定义，两个独立存在的R○与其插入原子一起形成具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3-12元饱和、部分不饱和或芳基单环或双环，其可以如下文所定义般被取代。
[0126] R○(或通过两个独立存在的R○与其插入原子一起所形成的环)上的合适的一价取● ● ● ●代基独立地是卤素、-(CH2)0-2R 、-(卤基R )、-(CH2)0-2OH、-(CH2)0-2OR 、-(CH2)0-2CH(OR )2；-O(卤基R●)、-CN、-N3、-(CH2)0-2C(O)R●、-(CH2)0-2C(O)OH、-(CH2)0-2C(O)OR●、-(CH2)0-2SR●、-(CH2)0-2SH、-(CH2)0-2NH2、-(CH2)0-2NHR●、-(CH2)0-2NR●2、-NO2、-SiR●3、-OSiR●3、-C(O)SR●、-(C1-4直链或支链亚烷基)C(O)OR●，或-SSR●，其中每个R●未被取代或在前面存在“卤基”的情况下，仅被一个或多个卤素取代，并且独立地选自C1-4脂肪族基、-CH2Ph、-O(CH2)0-1Ph，或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元饱和、部分不饱和或芳基环。R○的饱和碳原子上的合适的二价取代基包括＝O和＝S。
[0127] 合适的二价取代基包括以下：＝O、＝S、＝NNR*2、＝NNHC(O)R*、＝NNHC(O)OR*、＝NNHS(O)2R*、＝NR*、＝NOR*、-O(C(R*2))2-3O-或-S(C(R*2))2-3S-，其中每个独立存在的R*选自氢、可以如下文所定义般被取代的C1-6脂肪族基或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的未被取代的5-6元饱和、部分不饱和或芳基环。与“任选地被取代的”基团的邻位可取代碳结合的合适的二价取代基包括：-O(CR*2)2-3O-，其中每个独立存在的R*选自氢、可以如下文所定义般被取代的C1-6脂肪族基、或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的未被取代的5-6元饱和、部分不饱和或芳基环。
[0128] R*的脂肪族基上的合适的取代基包括卤素、-R●、-(卤基R●)、-OH、-OR●、-O(卤基R●)、-CN、-C(O)OH、-C(O)OR●、-NH2、-NHR●、-NR●2或-NO2，其中每个R●未被取代或在前面存在“卤基”的情况下，仅被一个或多个卤素取代，并且独立地是C1-4脂肪族基、-CH2Ph、-O(CH2)0-1Ph、或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元饱和、部分不饱和或芳基环。
[0129] 在一些实施例中，可取代氮上的合适的取代基包括或 其中每个 独立地是氢、可以如下文所定义般被取代的C1-6脂肪族基、未
被取代的-OPh、或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的未被取代的5-6元饱和、部分不饱和或芳基环、或不管以上定义，两个独立存在的 与其插入原子一起形成具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的未被取代的3-12元饱和、部分不饱和或芳基单环或双环。
被取代的-OPh、或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的未被取代的5-6元饱和、部分不饱和或芳基环、或不管以上定义，两个独立存在的 与其插入原子一起形成具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的未被取代的3-12元饱和、部分不饱和或芳基单环或双环。
[0130] 的脂肪族基上的合适的取代基独立地是卤素、-R●、-(卤基R●)、-OH、-OR●、-O(卤基R●)、-CN、-C(O)OH、-C(O)OR●、-NH2、-NHR●、-NR●2或-NO2，其中每个R●未被取代或在前面存在“卤基”的情况下，仅被一个或多个卤素取代，并且独立地是C1-4脂肪族基、-CH2Ph、-O(CH2)0-1Ph、或具有0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5-6元饱和、部分不饱和或芳基环。
[0131] 除非另有说明，否则本文中所描绘的结构也意指包括该结构的所有异构(例如，对映异构、非对映异构以及几何异构(或构象异构))形式；例如针对每个不对称中心的R和S构型、Z和E双键异构体以及Z和E构象异构体。因此，本发明化合物的单一立体化学异构体以及对映异构、非对映异构和几何异构(或构象异构)混合物都在本发明的范围内。除非另有说明，否则本发明化合物的所有互变异构形式都在本发明的范围内。另外，除非另有说明，否则本文中所描绘的结构也意指包括仅在一个或多个同位素增浓原子的存在方面不同的化合物。举例来说，具有本发明结构，包括氘或氚置换氢或13C或14C增浓的碳置换碳的结构的化合物，在本发明的范围内。这类化合物适用作例如分析工具，用作生物分析中的探针，或用作根据本发明的治疗剂。
[0132] B.其它定义
[0133] 施用：如本文中所用的术语“施用”通常是指向受试者或系统施用组合物。本领域普通技术人员将清楚可以在适当的情况下用于向受试者，例如人类施用的各种途径。例如，在一些实施例中，施用可以是经眼、口服、肠胃外、局部等。在一些特定实施例中，施用可以经支气管(例如，通过支气管滴注)、经颊、经皮(其可以是或包含例如局部至真皮、皮内、皮间、经皮等中的一种或多种)、经肠、动脉内、皮内、胃内、髓内、肌肉内、鼻内、腹膜内、鞘内、静脉内、室内、特定器官内(例如，肝内)、经粘膜、经鼻、口服、经直肠、皮下、舌下、局部、经气管(例如，通过气管内滴注)、经阴道、经玻璃体等。在一些实施例中，施用可能涉及间歇给药(例如，间隔一定时间的多个剂量)和/或定期给药(例如，各个剂量间隔共同的一段时间)。在一些实施例中，施用可能涉及至少选定的一段时间内的连续给药(例如，灌注)。
[0134] 药剂：一般来说，如本文中所用的术语“药剂”可以用于指化合物或任何化学类别的实体，包括例如多肽、核酸、糖、脂质、小分子、金属或其组合或复合物。在适当的情况下，如本领域的普通技术人员从上下文中可以清楚地看出，该术语可以用于指这样的实体，它是或包含细胞或生物体，或其级分、提取物或组分。或者或另外，如上下文将清楚表明，该术语可以用于指存在于自然界中和/或从自然界获得的天然产物。在一些情况下，同样从上下文中可以清楚地看出，该术语可以用于指一种或多种人造实体，人造实体是由人工设计、工程改造和/或产生的和/或在自然界中找不到的。在一些实施例中，药剂可以按分离形式或纯净形式使用；在一些实施例中，药剂可以按粗物质形式使用。在一些实施例中，潜在药剂可以作为集合或库提供，例如可以经过筛选以鉴别或表征其中的活性剂。在一些情况下，术语“药剂”可以指作为或包含聚合物的化合物或实体；在一些情况下，该术语可以指包含一个或多个聚合物部分的化合物或实体。在一些实施例中，术语“药剂”可以指不是聚合物和/或基本上不含任何聚合物和/或一个或多个特定聚合物部分的化合物或实体。在一些实施例中，该术语可以指缺少或基本上不含任何聚合物部分的化合物或实体。
[0135] 激动剂：本领域的普通技术人员将了解，术语“激动剂”可用于指一种药剂状况或事件，其存在、水平、程度、类型或形式与另一种药剂(即，激动后的药剂)的增加的水平或活性相关。一般来说，激动剂可以是或包括任何化学类别的药剂，包括例如小分子、多肽、核酸、碳水化合物、脂质、金属和/或任何其它展现出相关活化活性的实体。在一些实施例中，激动剂可以是直接的(在此情况下，它直接对其目标施加其影响)；在一些实施例中，激动剂可以是间接的(在此情况下，它通过与其目标结合以外的方式施加其影响；例如通过与目标的调节剂相互作用，使得目标的水平或活性被改变)。
[0136] 动物：如本文中所用，是指动物界的任何成员。在一些实施例中，“动物”是指任何性别和任何发育阶段的人。在一些实施例中，“动物”是指任何发育阶段的非人类动物。在某些实施例中，非人类动物是哺乳动物(例如，啮齿动物、小鼠、大鼠、兔、猴、狗、猫、羊、牛、灵长类动物和/或猪)。在一些实施例中，动物包括但不限于哺乳动物、鸟类、爬行动物、两栖动物、鱼类、昆虫和/或蠕虫。在一些实施例中，动物可以是转基因动物、基因工程动物和/或克隆。
[0137] 大约：如本文中所用的术语“大约”或“约”在应用于感兴趣的一个或多个值时是指与所述参考值近似的值。在某些实施例中，除非另有说明或另外从上下文显而易见，否则术语“大约”或“约”是指落入所述参考值的任一方向(大于或小于)25％、20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％或更低范围内的值范围(此类数字超过可能值的100％的情况除外)。
[0138] 与……相关：如果一个事件或实体的存在、水平和/或形式与另一个事件或实体的存在、水平和/或形式相关，那么这两个事件或实体是彼此“相关”的，如所述术语在本文中所使用。例如，如果特定实体(例如，多肽、遗传特征(genetic signature)、代谢物、微生物等)的存在、水平和/或形式与特定疾病、病症或病状的发病率和/或对特定疾病、病症或病状的易感性相关(例如，在相关群体内)，那么认为该特定实体与该疾病、病症或病状相关。在一些实施例中，如果两个或更多个实体直接或间接相互作用，使得其彼此物理接近和/或保持物理接近，那么其彼此是物理“缔合”的。在一些实施例中，彼此物理缔合的两个或更多个实体彼此共价连接；在一些实施例中，彼此物理缔合的两个或更多个实体彼此不共价连接，而是非共价缔合，例如通过氢键、范德华相互相用(van der Waals interaction)、疏水性相互作用、磁性以及其组合。
[0139] 载体：如本文中所用，是指随着组合物一起施用的稀释剂、佐剂、赋形剂或媒剂。在一些示例性实施例中，载体可以包括无菌液体，例如水和油，包括石油、动物油、植物油或合成来源的油，例如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。在一些实施例中，载体是或包括一种或多种固体组分。
[0140] 可比较的：如本文中所用的术语“可比较的”是指两个或更多个药剂、实体、情况、条件集合等，它们可能彼此不相同，但是足够相似以允许它们之间能够进行比较，因此本领域普通技术人员将了解，可以基于所观测到的差异或相似性，合理地得出结论。在一些实施例中，可比较的条件、情形、个体或群体的集合的特征在于多个基本上相同的特征和一个或少量不同的特征。本领域普通技术人员将理解，在上下文中，在任何给定情况下，两个或更多个这类药剂、实体、情况、条件集合等要被认为是可比较的将需要何种程度的同一性。举例来说，本领域普通技术人员将了解，情形、个体或群体的集合当特征在于足够数量和类型的基本上相同的特征以确保合理的结论时是彼此可比较的，其中在情形、个体或群体的不同集合下或使用情形、个体或群体的不同集合获得的结果或观测到的现象的差异是由变化的那些特征的变化引起的或指示变化的那些特征的变化。
[0141] 组合物：本领域的普通技术人员将了解，术语“组合物”可以用于指包含一种或多种指定组分的离散物理实体。一般来说，除非另外说明，否则组合物可以是任何形式，例如气体、凝胶、液体、固体等。
[0142] 包含：本文中被描述为“包含”一个或多个指定的要素或步骤的组合物或方法是开放式的，意指指定的要素或步骤是必需的，但是可以在组合物或方法的范围内加入其它要素或步骤。为了避免冗长，还应理解，任何被描述为“包含”(或其“包含”)一个或多个指定的要素或步骤的组合物或方法也描述了“基本上由”前述指定的要素或步骤“组成”(或其“基本上由”前述指定的要素或步骤“组成”)的相应更有限的组合物或方法，意指该组合物或方法包括指定的基本要素或步骤，并且还可以包括不会实质上影响组合物或方法的基本和新颖特征的额外要素或步骤。还应理解，任何在本文中被描述为“包含”一个或多个指定的要素或步骤或“基本上由”一个或多个指定的要素或步骤“组成”的组合物或方法也描述了“由”指定的要素或步骤“组成”(consisting of/consists of)，不包括任何其它未指定的要素或步骤的相应更有限的和封闭的组合物或方法。在本文中所公开的任何组合物或方法中，可以用任何指定的基本要素或步骤的已知或所公开的同等物取代该要素或步骤。
[0143] 剂型或单位剂型：本领域的普通技术人员将了解，术语“剂型”可以用于指对受试者施用的活性剂(例如，治疗剂或诊断剂)的物理离散单位。通常，每个这种单位含有预定数量的活性剂。在一些实施例中，这个数量是适合根据一种给药方案施用的单位剂量(或其整个部分)，当对相关群体施用时，这种给药方案已被确定为与所期望的或有利的结果相关(即，采用治疗性给药方案)。本领域普通技术人员将了解，对特定受试者施用的治疗性组合物或药剂的总量是由一位或多位主治医生决定的并且可能涉及多种剂型的施用。
[0144] 给药方案：本领域的普通技术人员将了解，术语“给药方案”可以用于指通常间隔一段时间单独施用给受试者的一组单位剂量(通常多于一个)。在一些实施例中，给定治疗剂具有推荐的给药方案，其可能涉及一个或多个剂量。在一些实施例中，给药方案包含多个剂量，每个剂量与其它剂量间隔一定时间。在一些实施例中，各个剂量彼此间隔相同长度的时间段；在一些实施例中，给药方案包含多个剂量和隔开各个剂量的至少两种不同的时间段。在一些实施例中，给药方案内的所有剂量都具有相同的单位剂量的量。在一些实施例中，给药方案内的不同剂量具有不同的量。在一些实施例中，给药方案包含呈第一剂量的量的第一剂量，接着是呈不同于第一剂量的量的第二剂量的量的一个或多个额外剂量。在一些实施例中，给药方案包含呈第一剂量的量的第一剂量，接着是呈与第一剂量的量相同的第二剂量的量的一个或多个额外剂量。在一些实施例中，当在相关群体内施用时，给药方案与所期望的或有益的结果相关(即，是治疗性给药方案)。
[0145] 封装：术语“封装”在本文中用以指物质完全被另一种材料包围。
[0146] 赋形剂：如本文中所用，是指可被包括在药物组合物中，例如以提供或促进所期望的稠度或稳定作用的非治疗剂。合适的药物赋形剂包括例如淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、稻谷、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、滑石、氯化钠、脱脂奶粉、甘油、丙烯、乙二醇、水、乙醇等。
[0147] 凝胶：如本文中所用的术语“凝胶”是指粘弹性材料，其流变性质将其与溶液、固体等区分开来。在一些实施例中，如果组合物的储能模量(G')大于其模量(G")，那么该组合物被视为凝胶。在一些实施例中，如果在溶液中存在化学或物理交联网络结构，其有别于粘稠溶液中的缠结分子，那么组合物被视为凝胶。
[0148] “改善的”、“增加的”或“减小的”：如本文中所用的这些术语或语法上类似的比较术语指示相对于类似的参考测量值而言的值。例如，在一些实施例中，用感兴趣的药剂实现的评估值可以相对于用类似的参考药剂获得的评估值“改善”。或者或另外，在一些实施例中，在感兴趣的受试者或系统中实现的评估值可以相对于在同一个受试者或系统中在不同条件下(例如，在某个事件之前或之后，该事件例如施用感兴趣的药剂)获得的或在不同的类似受试者中(例如，在不同于感兴趣的受试者或系统的类似受试者或系统中在感兴趣的特定疾病、病症或病状的一个或多个指示的存在下，或在暴露于条件或药剂之前等)获得的评估值“改善”。在一些实施例中，比较术语是指统计学上相关的差异(例如，其具有足以实现统计相关性的流行率和/或量值)。本领域的普通技术人员将清楚或将能够容易地在给定的上下文中确定实现这种统计显著性所需的或足以实现这种统计显著性的差异的程度和/或流行率。
[0149] 腹膜内：如本文中所用的短语“腹膜内施用”和“腹膜内地施用”具有其在本领域中所理解的含义，是指将化合物或组合物施用到受试者的腹膜中。
[0150] 部分：本领域的普通技术人员将了解，“部分”是具有如本文中所描述的特定结构和/或活性的已定义的化学基团或实体。
[0151] 口服：如本文中所用的短语“口服(oral administration)”和“口服(administered orally)”具有其在本领域中所理解的含义，是指通过口腔施用化合物或组合物。
[0152] 母体N-酰基乙醇酰胺化合物：出于本公开的目的，“母体”N-酰基乙醇酰胺化合物是这样一种化合物，本公开相对于该化合物提供衍生物(例如，提供本文中所述的化合物)。母体N-酰基乙醇酰胺化合物通常具有如下所示的结构：
[0153]
[0154] 其中Rx是C1-40脂肪族基。
[0155] 在一些实施例中，Rx是C1-40脂肪族基。在一些实施例中，Rx是C1-35脂肪族基。在一些实施例中，Rx是C1-30脂肪族基。在一些实施例中，Rx是C1-25脂肪族基。在一些实施例中，Rx是x xC1-20脂肪族基。在一些实施例中，R是C1-15脂肪族基。在一些实施例中，R是C1-10脂肪族基。在一些实施例中，Rx是C1-5脂肪族基。在一些实施例中，Rx是C5-30脂肪族基。在一些实施例中，Rx是C10-25脂肪族基。在一些实施例中，Rx是C10-20脂肪族基。在一些实施例中，Rx是C5-15脂肪族基。在一些实施例中，Rx是C15-25脂肪族基。在一些实施例中，母体N-酰基乙醇酰胺化合物衍生自选自由以下组成的组的脂肪酸：肉豆蔻脑酸、棕榈油酸、十六碳烯酸、油酸、反油酸、异油酸、亚油酸、反亚油酸、α-亚麻酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、芥酸、二十二碳六烯酸、辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、花生酸、山嵛酸、二十四烷酸以及蜡酸。在一些实施例中，母体N-酰基乙醇酰胺化合物选自由N-棕榈酰基乙醇酰胺、N-油酰基乙醇酰胺以及N-花生四烯酰基乙醇酰胺组成的组。在一些实施例中，母体N-酰基乙醇酰胺化合物是N-棕榈酰基乙醇酰胺。在一些实施例中，母体N-酰基乙醇酰胺化合物是N-油酰基乙醇酰胺。在一些实施例中，母体N-酰基乙醇酰胺化合物是N-花生四烯酰基乙醇酰胺。
[0156] 肠胃外：如本文中所用的短语“肠胃外施用”和“肠胃外地施用”具有其在本领域中所理解的含义，是指除经肠和局部施用以外的施用模式，通常是通过注射，并且包括但不限于静脉内、肌肉内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内以及胸骨内注射和输注。
[0157] 患者：如本文中所用的术语“患者”是指例如出于实验、诊断、预防、美容和/或治疗目的而施用或可以施用所提供的组合物的任何生物体。典型患者包括动物(例如哺乳动物，如小鼠、大鼠、兔、非人类灵长类动物和/或人类)。在一些实施例中，患者是人类。在一些实施例中，患者患有或易患一种或多种病症或病状。在一些实施例中，患者展现出病症或病状的一种或多种症状。在一些实施例中，患者已被诊断为患有一种或多种病症或病状。在一些实施例中，病症或病状是或包括癌症，或存在一种或多种肿瘤。在一些实施例中，为了诊断和/或治疗疾病、病症或病状，患者正在接受或已接受过某种疗法。
[0158] 药物组合物：如本文中所用的术语“药物组合物”是指与一种或多种药学上可接受的载体一起配制的活性剂。在一些实施例中，活性剂以适合施用的单位剂量的量存在于治疗方案中，当对相关群体施用时，其显示实现预定治疗作用的统计学显著概率。在一些实施例中，药物组合物可以专门配制成以固体或液体形式施用，包括适合于以下方式的药物组合物：口服，例如大剂量药液(水性或非水性溶液或悬浮液)、片剂，例如针对经颊、舌下和全身性吸收的片剂、大丸剂、粉末剂、颗粒剂、糊剂，施用到舌头上；肠胃外施用，例如通过皮下、肌肉内、静脉内或硬膜外注射，作为例如无菌溶液或悬浮液或缓释制剂；局部施用，例如施用于皮肤、肺或口腔的乳膏、软膏或控释贴片或喷雾；阴道内或直肠内，例如作为子宫托、乳膏或泡沫剂；舌下；经眼；经皮；或经鼻、经肺以及施用于其它粘膜表面。
[0159] 药学上可接受的：如本文中所用的短语“药学上可接受的”是指在合理的医学判断范围内，适用于与人类和动物的组织接触而无过度毒性、刺激、过敏反应或其它问题或并发症，与合理的益处/风险比相匹配的那些化合物、材料、组合物和/或剂型。
[0160] 药学上可接受的载体：如本文中所用的术语“药学上可接受的载体”意指药学上可接受的材料、组合物或媒剂，例如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂或溶剂包封材料，其参与将主题化合物从身体的一个器官或部分携带或运输到身体的另一个器官或部分。每种载体在与制剂的其它成分相容且对患者无害的意义上必须是“可接受的”。可以充当药学上可接受的载体的材料的一些实例包括：糖，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素和其衍生物，如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素；粉末状黄芪胶；麦芽；明胶；滑石；赋形剂，如可可脂和栓剂蜡；油，如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；二醇，如丙二醇；多元醇，如甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇；酯，如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，如氢氧化镁和氢氧化铝；褐藻酸；无热原质水；等渗盐水；林格氏溶液(Ringer's solution)；乙醇；pH缓冲溶液；聚酯、聚碳酸酯和/或聚酸酐；以及在药物制剂中采用的其它无毒相容物质。
[0161] 药学上可接受的盐：如本文中所用的术语“药学上可接受的盐”是指适合用于药物语境下的这类化合物的盐，即，在合理的医学判断范围内，适用于与人类和低等动物的组织接触而无过度毒性、刺激、过敏反应等，并且与合理的益处/风险比相匹配的盐。药学上可接受的盐在本领域中众所周知。例如，S.M.Berge等人在《药物科学杂志》(J.Pharmaceutical Sciences),66:1-19(1977)中详细描述了药学上可接受的盐。在一些实施例中，药学上可接受的盐包括但不限于无毒的酸加成盐，它们是氨基与无机酸或与有机酸形成的盐，无机酸如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸以及高氯酸，有机酸如乙酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸或丙二酸，或通过使用本领域中所用的其它方法，如离子交换法形成的盐。在一些实施例中，药学上可接受的盐包括但不限于己二酸盐、褐藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、葡萄糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘化物、2-羟基-乙磺酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一烷酸盐、戊酸盐等。代表性碱金属盐或碱土金属盐包括钠盐、锂盐、钾盐、钙盐、镁盐等。在一些实施例中，适当时，药学上可接受的盐包括使用抗衡离子形成的无毒的铵、季铵以及胺阳离子，抗衡离子例如卤离子、氢氧根、羧酸根、硫酸根、磷酸根、硝酸根、具有1到6个碳原子的烷基、磺酸根以及芳基磺酸根。
[0162] 预定：预定意指有意地选择的，例如与随机发生或实现相反。
[0163] 预防(Prevent)或预防(prevention)：如本文中所使用的，当结合疾病、病症和/或病状的存在使用时，是指降低患上疾病、病症和/或病状的风险和/或延迟疾病、病症或病状的一个或多个特征或症状的发作。当疾病、病症或病状的发作已经被延迟预定的一段时间时，可以认为预防完成。
[0164] 如本文中所用的术语“前药”是指作为药物前体的化合物，其在施用后通过化学或生理过程在体内释放出药物(例如，前药在达到生理pH时释放药物或通过酶的作用被转化为所期望的药物形式)。
[0165] 参考：如本文中所用，描述了一种标准或对照，以此为基础进行比较。例如，在一些实施例中，将感兴趣的药剂、动物、个体、群体、样品、序列或值与参考或对照药剂、动物、个体、群体、样品、序列或值进行比较。在一些实施例中，参考或对照与感兴趣的测试或测定基本上同时测试和/或测定。在一些实施例中，参考或对照是历史参考或对照，任选地体现在有形介质中。通常，如本领域的普通技术人员所理解的，参考或对照是在与处于评估中的条件或情况类似的条件或情况下测定或表征的。本领域的普通技术人员将了解何时存在足够的相似性以证明对特定可能参考或对照的依赖和/或与特定可能参考或对照的比较。
[0166] 受试者：如本文中所用的术语“受试者”或“测试对象”是指例如出于实验、诊断、预防和/或治疗目的而根据本公开施用所提供的化合物或组合物的任何生物体。典型的受试者包括动物(例如，哺乳动物，如小鼠、大鼠、兔、非人类灵长类动物以及人类；昆虫；蠕虫等)和植物。在一些实施例中，受试者可能患有和/或易患疾病、病症和/或病状。
[0167] 患有：“患有”疾病、病症和/或病状的个体已被诊断为患有疾病、病症和/或病状和/或展现出疾病、病症和/或病状的一种或多种症状。
[0168] 易患：“易患”疾病、病症和/或病状的个体是患上该疾病、病症和/或病状的风险高于一般公众成员的个体。在一些实施例中，易患疾病、病症和/或病状的个体尚未被诊断为患有该疾病、病症和/或病状。在一些实施例中，易患疾病、病症和/或病状的个体可能表现出该疾病、病症和/或病状的症状。在一些实施例中，易患疾病、病症和/或病状的个体尚未表现出该疾病、病症和/或病状的症状。在一些实施例中，易患疾病、病症和/或病状的个体将患上该疾病、病症和/或病状。在一些实施例中，易患疾病、病症和/或病状的个体将不患上该疾病、病症和/或病状。
[0169] 全身性：如本文中所用的短语“全身性施用”、“全身性地施用”、“外周施用”以及“外周地施用”具有其在本领域中所理解的含义，是指施用化合物或组合物，使其进入接受者的系统。
[0170] 互变异构形式：如本文中所用的短语“互变异构形式”用于描述有机化合物的能够容易地相互转化的不同异构形式。互变异构体的特征可以在于氢原子或质子的形式迁移，伴随着单键和相邻双键的转换。在一些实施例中，互变异构体可以由质子互变异构(即，质子的重新定位)产生。在一些实施例中，互变异构体可以由价互变异构(即，成键电子的快速重组)产生。所有这类互变异构形式都打算包括在本发明的范围内。在一些实施例中，化合物的互变异构形式彼此以动态平衡存在，因此尝试制备单独物质时会形成混合物。在一些实施例中，化合物的互变异构形式是可分开的和可分离的化合物。在本公开的一些实施例中，可以提供这样的化学组合物，它们是或包括化合物的单一互变异构形式的纯制剂。在一些实施例中，化学组合物可以按化合物的两种或更多种互变异构形式的混合物形式提供。在某些实施例中，这类混合物含有等量的不同互变异构形式；在某些实施例中，这类混合物含有化合物的不同量的至少两种不同的互变异构形式。在本公开的一些实施例中，化学组合物可以含有化合物的所有互变异构形式。在本公开的一些实施例中，化学组合物可以含有化合物的不到全部的互变异构形式。在本公开的一些实施例中，化学组合物可以含有化合物的一种或多种互变异构形式，其量因为相互转化而随时间推移改变。在本公开的一些实施例中，互变异构是酮-烯醇互变异构。化学领域的技术人员将想到，酮-烯醇互变异构体可以使用化学领域中已知的任何合适的试剂“捕获”(即，化学改性以使其保持“末端”形式)以提供随后可以使用本领域中已知的一种或多种合适的技术分离的末端衍生物。除非另有指示，否则本公开涵盖相关化合物的所有互变异构形式，无论是纯形式还是彼此混合。
[0171] 治疗剂：如本文中所用的短语“治疗剂”是指当施用于受试者时具有治疗作用和/或引发所期望的生物学和/或药理学作用的药剂。在一些实施例中，治疗剂是任何可用于使疾病、病症和/或病状的一个或多个症状或特征减轻、改善、缓解、抑制、预防、延迟发作、降低严重程度和/或降低发病率的物质。
[0172] 治疗有效量：如本文中所用的术语“治疗有效量”意指物质(例如，治疗剂、组合物和/或制剂)的在作为治疗方案的一部分施用时能引发所期望的生物反应的量。在一些实施例中，物质的治疗有效量是当向患有或易患疾病、病症和/或病状的受试者施用时足以治疗、诊断、预防该疾病、病症和/或病状和/或延迟其发作的量。如本领域的普通技术人员应了解，物质的有效量可以根据如所期望的生物终点、待递送物质、靶细胞或组织等因素而变化。例如，用以治疗疾病、病症和/或病状的制剂中的化合物的有效量是使该疾病、病症和/或病状的一个或多个症状或特征减轻、改善、缓解、抑制、预防、延缓发作、降低严重程度和/或降低发病率的量。在一些实施例中，治疗有效量以单剂量施用；在一些实施例中，需要多个单位剂量来递送治疗有效量。
[0173] 治疗方案：“治疗方案”，如该术语在本文中所用，是指这样的给药方案，其在相关群体内的施用将与所期望的或有益的治疗结果相关。
[0174] 治疗：如本文中所用的术语“治疗(treat)”、“治疗(treatment)”或“治疗(treating)”是指任何用以使疾病、病症和/或病状的一个或多个症状或特征部分地或完全地减轻、改善、缓解、抑制、预防、延迟发作、降低严重程度和/或降低发病率的方法。可以向没有表现出疾病、病症和/或病状的迹象的受试者施用治疗。在一些实施例中，可以向仅表现出疾病、病症和/或病状的早期迹象的受试者施用治疗，例如出于降低发展出与该疾病、病症和/或病状相关的病理的风险的目的。
[0175] 单位剂量：如本文中所用的表述“单位剂量”是指以药物组合物的单剂量和/或物理离散单位施用的量。在许多实施例中，单位剂量含有预定数量的活性剂。在一些实施例中，单位剂量含有整个单剂量的药剂。在一些实施例中，施用多于一个单位剂量以实现总的单剂量。在一些实施例中，为了实现预定作用，需要或预期将需要施用多个单位剂量。单位剂量可以是例如含有预定数量的一种或多种治疗剂的一定体积的液体(例如，可接受的载体)、呈固体形式的预定量的一种或多种治疗剂、含有预定量的一种或多种治疗剂的缓释制剂或药物递送装置等。应了解，单位剂量可以存在于除了治疗剂还包括各种组分中的任一种的制剂中。例如，可以包括可接受的载体(例如，药学上可接受的载体)、稀释剂、稳定剂、缓冲剂、防腐剂等，如下文所述。本领域的普通技术人员应了解，在许多实施例中，特定治疗剂的总的适当日剂量可以包含单位剂量的一部分或多个单位剂量，并且可以例如由主治医师在合理的医学判断范围内决定。在一些实施例中，任何特定受试者或生物体的特定有效剂量水平可以取决于各种因素，包括正被治疗的病症和该病症的严重程度；所采用的特定活性化合物的活性；所采用的特定组合物；受试者的年龄、体重、一般健康状况、性别以及饮食；所采用的特定活性化合物的施用时间和排泄速率；治疗持续时间；与所采用的特定化合物组合或同时使用的药物和/或额外疗法；以及医学领域中众所周知的类似因素。
具体实施方式
[0176] N-酰基乙醇酰胺已展现出在各种疾病、病症和病状的治疗方面的前景。在一些实施例中，本文中所提供的一种或多种化合物可以适用于治疗这类疾病、病症和病状。在一些实施例中，一种或多种所提供的化合物可以适用于例如治疗一种或多种神经系统疾病、病症或病状。在一些实施例中，本文中所提供的一种或多种化合物可以适用于例如治疗疼痛、焦虑、抑郁症、精神分裂症、肌萎缩侧索硬化、多发性硬化、帕金森病(Parkinson's disease)、阿尔茨海默病(Alzheimer's disease)、亨廷顿病(Huntington's disease)、神经病理性疼痛、脑缺血、癫痫、食欲不振、牙痛、骨关节炎、胃肠动力降低、癌症、青光眼、异位性皮炎、呼吸道感染、创伤后应激障碍、肥胖、失眠、嗜睡和/或腹泻型肠易激综合征(Irritable Bowel Syndrome with Diarrhea，IBS-D)。
[0177] 在一些实施例中，本文中所提供的一种或多种化合物可以适用于降低受试者中的胃肠动力。在一些实施例中，本文中所提供的一种或多种化合物可以适用于降低受试者中或生物样品中的癌细胞增殖。在一些实施例中，本文中所提供的一种或多种化合物可以适用于诱导患者中或生物样品中的脂解。
[0178] N-酰基乙醇酰胺的成功以及其次优的药理学性质引起了衍生物、组合物以及前药的开发。某些N-酰基乙醇酰胺衍生物展现出改善的药理学性质。例如，N-酰基乙醇酰胺的聚乙二醇衍生物得到改善的物理化学性质，可用于治疗发炎和瘙痒或疼痛相关的病症。参见例如US 2015/0157733 A1。
[0179] 然而，这类衍生物、组合物和前药无法产生具有适合高剂量口服的改善的口服生物利用度的N-酰基乙醇酰胺。因此，目前N-酰基乙醇酰胺的施用必须是肠胃外的，常常是静脉内。参见例如Vacondio,F.等人《作为棕榈酰基乙醇酰胺前药的胺基酸衍生物：合成、体外代谢以及在大鼠中的体内血浆分布》(Amino Acid Derivatives as Palmitoylethanolamide Prodrugs:Synthesis,In Vitro Metabolism,and In Vivo
Plasma Profile in Rats)《公共科学图书馆·综合》(PLoS One)2015,10(6),e0128699。
Plasma Profile in Rats)《公共科学图书馆·综合》(PLoS One)2015,10(6),e0128699。
[0180] 在一些实施例中，本发明提供具有所期望的药理学性质的N-酰基乙醇酰胺衍生物，所期望的药理学性质可以是或包括例如一种或多种相对于适当的N-酰基乙醇酰胺参考化合物(例如，特定衍生物的母体化合物)改善的性质。在某些实施例中，本公开提供母体N-酰基乙醇酰胺化合物的衍生物，衍生物的特征在于一种或多种次优药理学性质。
[0181] 在某些实施例中，所提供的N-酰基乙醇酰胺衍生化合物的特征可以在于以下性质中的一种或多种：当与N-酰基乙醇酰胺参考化合物(例如，特定衍生物的母体N-酰基乙醇酰胺化合物)相比时，增加的口服生物利用度、增加的细胞渗透性、增加的水溶性、降低的首过效应、增加的稳定性、肠道转运体的主动转运或避开外排性转运体。在一些实施例中，所提供的N-酰基乙醇酰胺衍生化合物的特征可以在于当与N-酰基乙醇酰胺参考化合物(例如，特定衍生物的母体N-酰基乙醇酰胺化合物)相比时增加的口服生物利用度。在一些实施例中，本发明提供口服N-酰基乙醇酰胺衍生化合物。在一些实施例中，本发明提供可以高剂量口服的N-酰基乙醇酰胺衍生化合物。
[0182] 此外，施用所提供的N-酰基乙醇酰胺衍生化合物可以使其在疾病、病症或病状的治疗中起作用。
[0183] 所提供的N-酰基乙醇酰胺衍生物
[0184] 在一些实施例中，根据本公开使用的化合物是这样的化合物，其中N-酰基乙醇酰胺与选自由以下组成的组的部分缀合：磷酸酯、丁酸、甘油、琥珀酸酯、辛酸、葡萄糖酸、二十碳五烯酸、亚油酸、琥珀酸酯以及蔗糖部分，和其组合。在一些实施例中，N-酰基乙醇酰胺通过使用接头部分而与一个或多个这种部分缀合。在一些实施例中，N-酰基乙醇酰胺与两个或更多个这种部分缀合。在一些实施例中，N-酰基乙醇酰胺与一个、两个或三个这种部分缀合。
[0185] 在一些实施例中，所提供的化合物具有由式I-a表示的化学结构：
[0186] X1-X2
[0187] 或其药学上可接受的盐；其中
[0188] X1是N-酰基乙醇酰胺；并且
[0189] X2是与N-酰基乙醇酰胺缀合的部分。
[0190] 在一些实施例中，X1选自由N-棕榈酰基乙醇酰胺、N-油酰基乙醇酰胺以及N-花生四烯酰基乙醇酰胺组成的组；在一些特定实施例中，X1是N-棕榈酰基乙醇酰胺。在一些实施例中，X2包含选自由以下组成的组的部分：磷酸酯、丁酸、甘油、琥珀酸酯、辛酸、葡萄糖酸、二十碳五烯酸、亚油酸、琥珀酸酯以及蔗糖部分。
[0191] 在一些实施例中，所提供的化合物具有由式I表示的化学结构：
[0192]
[0193] 或其药学上可接受的盐，其中：
[0194] 每个R1、R2或R3独立地是氢或-T-R4，其中R1、R2或R3中的至少一个是-T-R4；
[0195] -T-表示二价部分；并且
[0196] R4是选自由C1-40脂肪族基、-C(O)R以及X1组成的组的任选地被取代的基团，其中[0197] R选自由氢和任选地被取代的C1-20脂肪族基组成的组；并且
[0198] X1如上文所定义。
[0199] 在一些实施例中，所提供的化合物具有由式I-b表示的化学结构：
[0200] X1-X3
[0201] I-b
[0202] 或其药学上可接受的盐，其中：
[0203] X1如上文所定义；
[0204] X3是选自由-(CH2)m-P(O)(OR)2、C1-40脂肪族基、-T-X4组成的组的任选地被取代的基团；另外其中
[0205] m是选自由0到10组成的组的整数；
[0206] -T-如上文所定义；
[0207] X4是糖部分，在一些特定实施例中，X4是二糖，例如蔗糖。
[0208] 在一些实施例中，R1、R2或R3中的至少一个是-T-R4。在一些实施例中，R1、R2或R3中的至少两个是-T-R4。
[0209] 在一些实施例中，R1、R2或R3中的一个是-T-R4。在一些实施例中，R1、R2或R3中的两个各自独立地是-T-R4。在一些实施例中，R1、R2和R3各自独立地是-T-R4。
[0210] 在一些实施例中，R1是氢。在一些实施例中，R1是-T-R4。在一些实施例中，R2是氢。在一些实施例中，R2是-T-R4。在一些实施例中，R3是氢。在一些实施例中，R3是-T-R4。
[0211] 在一些实施例中，R1和R2是氢，并且R3是-T-R4。在一些实施例中，R2和R3是氢，并且R1是-T-R4。在一些实施例中，R1和R3是氢，并且R2是-T-R4。在一些实施例中，R1是氢，并且R2和R3各自独立地是-T-R4。在一些实施例中，R2是氢，并且R1和R3各自独立地是-T-R4。在一些实3 1 2 4 1 2 3
施例中，R是氢，并且R 和R各自独立地是-T-R 。在一些实施例中，R、R 和R中的每一个独立地是-T-R4。
施例中，R是氢，并且R 和R各自独立地是-T-R 。在一些实施例中，R、R 和R中的每一个独立地是-T-R4。
[0212] 在一些实施例中，-T-表示二价部分。
[0213] 在一些实施例中，-T-是衍生自二羧酸的二价部分。在一些实施例中，-T-是衍生自选自由以下组成的组的任选地被取代的二羧酸的二价部分：草酸、丙二酸、琥珀酸、戊二酸、己二酸、庚二酸、辛二酸、壬二酸、癸二酸、马来酸、富马酸、戊烯二酸、愈伤酸、粘康酸、戊炔二酸、柠康酸、中康酸、苹果酸、天冬氨酸、谷氨酸、丙醇二酸、酒石酸、二氨基庚二酸、葡萄糖二酸、中草酸、草酰乙酸、丙酮二甲酸、阿拉伯糖二酸、邻苯二甲酸、间苯二甲酸、对苯二甲酸、联苯酸以及2,6-萘二甲酸。
[0214] 在一些实施例中，-T-是衍生自任选地被取代的草酸的二价部分。在一些实施例中，-T-是衍生自任选地被取代的丙二酸的二价部分。在一些实施例中，-T-是衍生自任选地被取代的琥珀酸的二价部分。在一些实施例中，-T-是衍生自任选地被取代的戊二酸的二价部分。在一些实施例中，-T-是衍生自任选地被取代的己二酸的二价部分。在一些实施例中，-T-是衍生自任选地被取代的庚二酸的二价部分。在一些实施例中，-T-是衍生自任选地被取代的辛二酸的二价部分。在一些实施例中，-T-是衍生自任选地被取代的壬二酸的二价部分。在一些实施例中，-T-是衍生自任选地被取代的癸二酸的二价部分。在一些实施例中，-T-是衍生自任选地被取代的马来酸的二价部分。在一些实施例中，-T-是衍生自任选地被取代的富马酸的二价部分。在一些实施例中，-T-是衍生自任选地被取代的戊烯二酸的二价部分。在一些实施例中，-T-是衍生自任选地被取代的愈伤酸的二价部分。在一些实施例中，-T-是衍生自任选地被取代的粘康酸的二价部分。在一些实施例中，-T-是衍生自任选地被取代的戊炔二酸的二价部分。在一些实施例中，-T-是衍生自任选地被取代的柠康酸的二价部分。在一些实施例中，-T-是衍生自任选地被取代的中康酸的二价部分。在一些实施例中，-T-是衍生自任选地被取代的苹果酸的二价部分。在一些实施例中，-T-是衍生自任选地被取代的天冬氨酸的二价部分。在一些实施例中，-T-是衍生自任选地被取代的谷氨酸的二价部分。在一些实施例中，-T-是衍生自任选地被取代的丙醇二酸的二价部分。在一些实施例中，-T-是衍生自任选地被取代的酒石酸的二价部分。在一些实施例中，-T-是衍生自任选地被取代的二氨基庚二酸的二价部分。在一些实施例中，-T-是衍生自任选地被取代的葡萄糖二酸的二价部分。在一些实施例中，-T-是衍生自任选地被取代的中草酸的二价部分。在一些实施例中，-T-是衍生自任选地被取代的草酰乙酸的二价部分。在一些实施例中，-T-是衍生自任选地被取代的丙酮二甲酸的二价部分。在一些实施例中，-T-是衍生自任选地被取代的阿拉伯糖二酸的二价部分。在一些实施例中，-T-是衍生自任选地被取代的邻苯二甲酸的二价部分。在一些实施例中，-T-是衍生自任选地被取代的间苯二甲酸的二价部分。在一些实施例中，-T-是衍生自任选地被取代的对苯二甲酸的二价部分。在一些实施例中，-T-是衍生自任选地被取代的联苯酸的二价部分。在一些实施例中，-T-是衍生自任选地被取代的2,6-萘二甲酸的二价部分。
[0215] 在一些实施例中，-T-R4是：
[0216]
[0217] 其中R4如上文所定义；并且
[0218] Y是二价C1-20直链或支链烃链。
[0219] 在一些实施例中，Y是二价C1-20直链或支链烃链。在一些实施例中，Y是二价C1-15直链或支链烃链。在一些实施例中，Y是二价C1-12直链或支链烃链。在一些实施例中，Y是二价C1-10直链或支链烃链。在一些实施例中，Y是二价C1-8直链或支链烃链。在一些实施例中，Y是二价C1-6直链或支链烃链。在一些实施例中，Y是二价C1-5直链或支链烃链。在一些实施例中，Y是二价C1-4直链或支链烃链。在一些实施例中，Y是二价C1-3直链或支链烃链。在一些实施例中，Y是二价C1-2直链或支链烃链。
[0220] 在一些实施例中，Y是二价C1-20直链烃链。在一些实施例中，Y是二价C1-15直链烃链。在一些实施例中，Y是二价C1-12直链烃链。在一些实施例中，Y是二价C1-10直链烃链。在一些实施例中，Y是二价C1-8直链烃链。在一些实施例中，Y是二价C1-6直链烃链。在一些实施例中，Y是二价C1-5直链烃链。在一些实施例中，Y是二价C1-4直链烃链。在一些实施例中，Y是二价C1-3直链烃链。在一些实施例中，Y是二价C1-2直链烃链。
[0221] 在一些实施例中，Y是二价C1烃链。在一些实施例中，Y是二价C2直链或支链烃链。在一些实施例中，Y是二价C3直链或支链烃链。在一些实施例中，Y是二价C4直链或支链烃链。在一些实施例中，Y是二价C5直链或支链烃链。在一些实施例中，Y是二价C6直链或支链烃链。在一些实施例中，Y是二价C10直链或支链烃链。
[0222] 在一些实施例中，Y是亚丙基。在一些实施例中，Y是亚乙基。在一些实施例中，Y是亚甲基。
[0223] 在一些实施例中，R1、R2或R3中的至少一个是 在一些实施例中，R1、R2或R3中的至少两个各自独立地是
[0224] 在一些实施例中，R1、R2或R3中的一个是 在一些实施例中，R1是在一些实施例中，R2是 在一些实施例中，R1、R2或R3中的两个各自独立
地是 在一些实施例中，R1、R2和R3各自独立地是
地是 在一些实施例中，R1、R2和R3各自独立地是
[0225] 在一些实施例中，R4是选自由C1-40脂肪族基、-C(O)R以及X1组成的组的任选地被取代的基团。在一些实施例中，R4是任选地被取代的C1-40脂肪族基。在一些实施例中，R4是任选地被取代的C1-35脂肪族基。在一些实施例中，R4是任选地被取代的C1-30脂肪族基。在一些实4 4
施例中，R是任选地被取代的C1-25脂肪族基。在一些实施例中，R 是任选地被取代的C1-20脂肪族基。在一些实施例中，R4是任选地被取代的C1-10脂肪族基。在一些实施例中，R4是任选地被取代的C1-6脂肪族基。在一些实施例中，R4是任选地被取代的-C(O)R。在一些实施例中，R4是X1。
施例中，R是任选地被取代的C1-25脂肪族基。在一些实施例中，R 是任选地被取代的C1-20脂肪族基。在一些实施例中，R4是任选地被取代的C1-10脂肪族基。在一些实施例中，R4是任选地被取代的C1-6脂肪族基。在一些实施例中，R4是任选地被取代的-C(O)R。在一些实施例中，R4是X1。
[0226] 在一些实施例中，X1选自N-棕榈酰基乙醇酰胺、N-油酰基乙醇酰胺或N-花生四烯酰基乙醇酰胺。在一些实施例中，X1是N-棕榈酰基乙醇酰胺。在一些实施例中，X1是N-油酰基乙醇酰胺。在一些实施例中，X1是N-花生四烯酰基乙醇酰胺。
[0227] 在一些实施例中，R选自由氢和任选地被取代的C1-20脂肪族基组成的组。在一些实施例中，R是氢。在一些实施例中，R是任选地被取代的C1-20脂肪族基。在一些实施例中，R是任选地被取代的C1-10脂肪族基。在一些实施例中，R是任选地被取代的C1-6脂肪族基。在一些实施例中，R是任选地被取代的C1-3脂肪族基。
[0228] 在一些实施例中，X3是选自由-(CH2)m-P(O)(OR)2、C1-40脂肪族基以及-T-X4组成的组的任选地被取代的基团。在一些实施例中，X3是任选地被取代的-(CH2)m-P(O)(OR)2。在一些实施例中，X3是任选地被取代的C1-40脂肪族基。在一些实施例中，X3是任选地被取代的C1-30脂肪族基。在一些实施例中，X3是任选地被取代的C1-20脂肪族基。在一些实施例中，X3是任选地被取代的C1-10脂肪族基。在一些实施例中，X3是任选地被取代的C1-6脂肪族基。在一些实施例中，X3是任选地被取代的-T-X4。
[0229] 在一些实施例中，m是选自由0到10组成的组的整数。在一些实施例中，m是选自由0到5组成的组的整数。在一些实施例中，m是0。在一些实施例中，m是1。在一些实施例中，m是2。在一些实施例中，m是3。在一些实施例中，m是4。在一些实施例中，m是5。
[0230] 在一些实施例中，X4是糖部分。在一些实施例中，X4是二糖。在一些实施例中，X4是蔗糖。
[0231] 在一些实施例中，式I化合物在甘油主链内不包含立构中心(例如，当R1和R3相同1 3
时)。在一些实施例中，式I化合物在甘油主链内包含立构中心(例如，其中R 和R不同)。在一些实施例中，式I化合物以外消旋混合物形式提供和/或采用。在一些实施例中，式I化合物以可以是或可以不是外消旋混合物的立构形式的混合物形式提供和/或采用。在一些实施例中，式I化合物以单一对映异构体形式提供和/或采用。在一些实施例中，本公开提供式I'或I"的化合物：
时)。在一些实施例中，式I化合物在甘油主链内包含立构中心(例如，其中R 和R不同)。在一些实施例中，式I化合物以外消旋混合物形式提供和/或采用。在一些实施例中，式I化合物以可以是或可以不是外消旋混合物的立构形式的混合物形式提供和/或采用。在一些实施例中，式I化合物以单一对映异构体形式提供和/或采用。在一些实施例中，本公开提供式I'或I"的化合物：
[0232]
[0233] 或其药学上可接受的盐；
[0234] 其中R1、R2和R3如上文所定义。
[0235] 本公开还提供了这样的见解：在一些实施例中，N-酰基乙醇酰胺，例如PEA，在甘油部分上的位置可能对其药理学性质有影响。例如，N-酰基乙醇酰胺部分与2位(例如，对应于式I、I'或I"的*-OR2的位置)缀合的甘油部分可能表现出相对于N-酰基乙醇酰胺部分与1位或3位(例如，对应于式I、I'或I"的*-OR1或*-OR3的位置)缀合的甘油部分改善的药理学性质。不希望受特定理论的束缚，本公开提出，在一些实施例中，甘油主链的1位和3位可能比2位更易受细胞脂肪酶的影响。
[0236] 本公开还提供了这样的见解：在一些实施例中，本文中所提供的化合物可以异构化，例如，发生位置异构化。例如，本公开提出，在一些实施例中，当甘油部分包含游离醇(例1 3
如，在对应于式I、I'或I"的*-OR 或*-OR的位置的游离醇)时，与甘油缀合的部分(例如，在对应于式I、I'或I"的*-OR2的位置包含N-酰基乙醇酰胺的部分)会迁移到游离醇(例如，从对应于式I、I'或I"的*-OR2的位置迁移到对应于式I、I'或I"的*-OR1或*-OR3的位置)。例如，化合物I-8和I-9可以在位置异构体之间相互转化。
如，在对应于式I、I'或I"的*-OR 或*-OR的位置的游离醇)时，与甘油缀合的部分(例如，在对应于式I、I'或I"的*-OR2的位置包含N-酰基乙醇酰胺的部分)会迁移到游离醇(例如，从对应于式I、I'或I"的*-OR2的位置迁移到对应于式I、I'或I"的*-OR1或*-OR3的位置)。例如，化合物I-8和I-9可以在位置异构体之间相互转化。
[0237]
[0238] 在一些实施例中，异构化发生在施用之前。在一些实施例中，异构化发生在施用之后。
[0239] 此外，本公开还提供了这样的见解：在一些实施例中，不包含游离醇的甘油部分将不异构化。例如，在一些实施例中，化合物I-16不发生位置异构化。
[0240]
[0241] 在一些实施例中，本公开提供式II化合物：
[0242]
[0243] 或其药学上可接受的盐；
[0244] 其中Y和R4如上文所定义。
[0245] 在一些实施例中，本公开提供式III化合物：
[0246]
[0247] 或其药学上可接受的盐；
[0248] 其中Y和R4如上文所定义。
[0249] 在一些实施例中，本公开提供式III'或III"的化合物：
[0250]
[0251] 或其药学上可接受的盐；
[0252] 其中Y和R4如上文所定义。
[0253] 在一些实施例中，本公开提供式IV化合物：
[0254]
[0255] 或其药学上可接受的盐；
[0256] 其中：
[0257] R4a和R4b独立地是氢、-C(O)R'或-C(O)-Y-C(O)OR'；
[0258] 其中
[0259] 每个R'独立地选自由氢和任选地被取代的C1-20脂肪族基组成的组；并且
[0260] 每个Y独立地如上文所定义且如本文中所描述。
[0261] 在一些实施例中，本公开提供式IV'或IV"的化合物：
[0262]
[0263] 或其药学上可接受的盐；
[0264] 其中R4a和R4b如上文和本文中所定义。
[0265] 在一些实施例中，本公开提供式V化合物：
[0266]
[0267] 其中：
[0268] R4a和R4c独立地是氢、-C(O)R'或-C(O)-Y-C(O)OR'；
[0269] 其中
[0270] 每个R'独立地选自由氢和任选地被取代的C1-20脂肪族基组成的组；并且
[0271] 每个Y独立地如上文所定义且如本文中所描述。
[0272] 在一些实施例中，本公开提供式V'或V"的化合物：
[0273]
[0274] 或其药学上可接受的盐；
[0275] 其中R4a和R4c如上文和本文中所定义。
[0276] 在一些实施例中，R4a是氢。在一些实施例中，R4a是-C(O)R'。在一些实施例中，R4a是-C(O)-Y-C(O)OR'。在一些实施例中，R4b是氢。在一些实施例中，R4b是-C(O)R'。在一些实施例中，R4b是-C(O)-Y-C(O)OR'。在一些实施例中，R4c是氢。在一些实施例中，R4c是-C(O)R'。在一些实施例中，R4C是-C(O)-Y-C(O)OR'。
[0277] 在一些实施例中，R'是氢。在一些实施例中，R'是任选地被取代的C1-20脂肪族基。在一些实施例中，R'选自由以下组成的组：
[0278] 氢、以及
[0279] 在一些实施例中，R'选自由以下组成的组：
[0280]以及
[0281] 在一些实施例中，R'是 在一些实施例中，R'是 在一些实施例中，R'是 在一些实施例中，R'是
在一些实施例中，R'是
在一些实施例中，R'是
[0282] 在一些实施例中，R4a是-C(O)R'。在一些实施例中，R4a是-C(O)R'，其中R'是任选地被取代的C1-20脂肪族基。在一些实施例中，R4a选自由以下组成的组：
[0283]以及
[0284] 在一些实施例中，R4a选自由以下组成的组：
[0285]以及
[0286] 在 一些实施 例中 ，R 4a是 在 一些实施 例中 ，R 4a是在一些实施例中，R4a是 在一些实施例中，
R4a是 在一些实施例中，R4a是
R4a是 在一些实施例中，R4a是
[0287] 在一些实施例中，R4a是-C(O)-Y-C(O)OR"。在一些实施例中，R4a是-C(O)-Y-C(O)OR"，其中R'是任选地被取代的C1-20脂肪族基。
[0288] 在一些实施例中，R4a是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中R'选自由以下组成的组：氢、以及
[0289] 在一些实施例中，R4a是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中R'是氢。在一些实施例中，R4a是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中R'选自由以下组成的组：
[0290]以及
[0291] 在一些实施例中，R4a是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-20直链或支链烃链。在一些实施例中，R4a是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-15直链或支链烃链。在一些实施例中，R4a是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-12直链或支链烃链。在一些实施例中，R4a是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-10直链或支链烃链。在一些实施例中，R4a是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-8直链或支链烃链。在一些实施例中，R4a是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-6直链或支链烃链。在一些实施例中，R4a是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-5直链或支链烃链。在一些实施例中，R4a是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-4直链或支链烃链。在一些实施例中，R4a是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-3直链或支链烃链。在一些实施例中，R4a是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-2直链或支链烃链。
[0292] 在一些实施例中，R4a是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-20直链烃链。在一些实施4a 4a
例中，R 是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-15直链烃链。在一些实施例中，R 是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-12直链烃链。在一些实施例中，R4a是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-10直链烃链。在一些实施例中，R4a是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-8直链烃链。在一些实施例中，R4a是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-6直链烃链。在一些实施例中，R4a是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-5直链烃链。在一些实施例中，R4a是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-4直链烃链。在一些实施例中，R4a是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-3直链烃链。
在一些实施例中，R4a是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-2直链烃链。
例中，R 是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-15直链烃链。在一些实施例中，R 是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-12直链烃链。在一些实施例中，R4a是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-10直链烃链。在一些实施例中，R4a是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-8直链烃链。在一些实施例中，R4a是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-6直链烃链。在一些实施例中，R4a是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-5直链烃链。在一些实施例中，R4a是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-4直链烃链。在一些实施例中，R4a是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-3直链烃链。
在一些实施例中，R4a是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-2直链烃链。
[0293] 在一些实施例中，R4a是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1烃链。在一些实施例中，R4a是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C2直链或支链烃链。在一些实施例中，R4a是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C3直链或支链烃链。在一些实施例中，R4a是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是4a
二价C4直链或支链烃链。在一些实施例中，R 是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C5直链或支链烃链。在一些实施例中，R4a是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C6直链或支链烃链。在一些实施例中，R4a是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C10直链或支链烃链。
二价C4直链或支链烃链。在一些实施例中，R 是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C5直链或支链烃链。在一些实施例中，R4a是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C6直链或支链烃链。在一些实施例中，R4a是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C10直链或支链烃链。
[0294] 在一些实施例中，R4a是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中，Y是亚丙基。在一些实施例中，R4a4a
是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是亚乙基。在一些实施例中，R 是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是亚甲基。
是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是亚乙基。在一些实施例中，R 是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是亚甲基。
[0295] 在一些实施例中，R4a是
[0296] 在一些实施例中，R4b是-C(O)R'。在一些实施例中，R4b是-C(O)R'，其中R'是任选地4b
被取代的C1-20脂肪族基。在一些实施例中，R 选自由以下组成的组：
被取代的C1-20脂肪族基。在一些实施例中，R 选自由以下组成的组：
[0297]以及
[0298] 在一些实施例中，R4b选自由以下组成的组：
[0299]以及
[0300] 在一些实施例中，R4b是 在一些实施例中，R4b是在一些实施例中 ，R4b是 在一些实施例中，R4b是
在一些实施例中，R4b是
在一些实施例中，R4b是
[0301] 在一些实施例中，R4b是-C(O)-Y-C(O)OR'。在一些实施例中，R4b是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中R'是任选地被取代的C1-20脂肪族基。
[0302] 在一些实施例中，R4b是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中R'选自由以下组成的组：氢、以及
[0303] 在一些实施例中，R4b是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中R'是氢。在一些实施例中，R4b是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中R'选自由以下组成的组：
[0304]以及
[0305] 在一些实施例中，R4b是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-20直链或支链烃链。在一些实施例中，R4b是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-15直链或支链烃链。在一些实施例中，R4b是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-12直链或支链烃链。在一些实施例中，R4b是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-10直链或支链烃链。在一些实施例中，R4b是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-8直链或支链烃链。在一些实施例中，R4b是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-6直链或支链烃链。在一些实施例中，R4b是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-5直链或支链烃链。在一些实施例中，R4b是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-4直链或支链烃链。在一些实施例中，R4b是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-3直链或支链烃链。在一些实施例中，R4b是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-2直链或支链烃链。
[0306] 在一些实施例中，R4b是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-20直链烃链。在一些实施例中，R4b是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-15直链烃链。在一些实施例中，R4b是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-12直链烃链。在一些实施例中，R4b是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-10直链烃链。在一些实施例中，R4b是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-8直链烃链。在一些实施例中，R4b是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-6直链烃链。在一些实施例中，R4b是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-5直链烃链。在一些实施例中，R4b是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-4直链烃链。在一些实施例中，R4b是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-3直链烃链。在一些实施例中，R4b是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-2直链烃链。
[0307] 在一些实施例中，R4b是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1烃链。在一些实施例中，R4b是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C2直链或支链烃链。在一些实施例中，R4b是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C3直链或支链烃链。在一些实施例中，R4b是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C4直链或支链烃链。在一些实施例中，R4b是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C5直链或支4b
链烃链。在一些实施例中，R 是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C6直链或支链烃链。在一些实施例中，R4b是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C10直链或支链烃链。
链烃链。在一些实施例中，R 是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C6直链或支链烃链。在一些实施例中，R4b是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C10直链或支链烃链。
[0308] 在一些实施例中，R4b是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是亚丙基。在一些实施例中，R4b是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是亚乙基。在一些实施例中，R4b是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是亚甲基。
[0309] 在一些实施例中，R4b是
[0310] 在一些实施例中，R4c是-C(O)R'。在一些实施例中，R4c是-C(O)R'，其中R'是任选地被取代的C1-20脂肪族基。在一些实施例中，R4c选自由以下组成的组：
[0311]以及
[0312] 在一些实施例中，R4c选自由以下组成的组：
[0313]以及
[0314] 在一些实施例中，R4c是 在一些实施例中，R4c是在一些实施例中 ，R4c是 在一些实施 例中 ，R 4c是
在一些实施例中，R4c是
在一些实施例中，R4c是
[0315] 在一些实施例中，R4c是-C(O)-Y-C(O)OR'。在一些实施例中，R4c是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中R'是任选地被取代的C1-20脂肪族基。
[0316] 在一些实施例中，R4c是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中R'选自由以下组成的组：氢、以及
[0317] 在一些实施例中，R4c是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中R'是氢。在一些实施例中，R4c是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中R '选自由以下组成的组：以及
[0318] 在一些实施例中，R4c是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-20直链或支链烃链。在一些实施例中，R4c是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-15直链或支链烃链。在一些实施例中，R4c是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-12直链或支链烃链。在一些实施例中，R4c是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-10直链或支链烃链。在一些实施例中，R4c是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-8直链或支链烃链。在一些实施例中，R4c是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-6直链或支链烃链。在一些实施例中，R4c是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-5直链或支链烃链。4c
在一些实施例中，R 是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-4直链或支链烃链。在一些实施例中，R4c是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-3直链或支链烃链。在一些实施例中，R4c是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-2直链或支链烃链。
在一些实施例中，R 是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-4直链或支链烃链。在一些实施例中，R4c是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-3直链或支链烃链。在一些实施例中，R4c是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-2直链或支链烃链。
[0319] 在一些实施例中，R4c是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-20直链烃链。在一些实施例中，R4c是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-15直链烃链。在一些实施例中，R4c是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-12直链烃链。在一些实施例中，R4c是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-10直链烃链。在一些实施例中，R4c是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-8直链烃链。在一些实施例中，R4c是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-6直链烃链。在一些实施例中，R4c是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-5直链烃链。在一些实施例中，R4c是-C(O)-Y-C(O)O-R'，其中4c
Y是二价C1-4直链烃链。在一些实施例中，R 是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-3直链烃链。
在一些实施例中，R4c是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-2直链烃链。
Y是二价C1-4直链烃链。在一些实施例中，R 是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-3直链烃链。
在一些实施例中，R4c是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1-2直链烃链。
[0320] 在一些实施例中，R4c是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C1烃链。在一些实施例中，R4c是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C2直链或支链烃链。在一些实施例中，R4c是-C(O)-Y-C4c
(O)OR'，其中Y是二价C3直链或支链烃链。在一些实施例中，R 是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C4直链或支链烃链。在一些实施例中，R4c是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C5直链或支链烃链。在一些实施例中，R4c是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C6直链或支链烃链。在一些实施例中，R4c是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C10直链或支链烃链。
(O)OR'，其中Y是二价C3直链或支链烃链。在一些实施例中，R 是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C4直链或支链烃链。在一些实施例中，R4c是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C5直链或支链烃链。在一些实施例中，R4c是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C6直链或支链烃链。在一些实施例中，R4c是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是二价C10直链或支链烃链。
[0321] 在一些实施例中，R4c是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是亚丙基。在一些实施例中，R4c是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是亚乙基。在一些实施例中，R4c是-C(O)-Y-C(O)OR'，其中Y是亚甲基。
[0322] 在一些实施例中，R4c是
[0323] 在一些实施例中，R4a、R4b和R4c中的每一个是氢。在一些实施例中，R4a、R4b和R4c中的每一个独立地选自由以下组成的组：
[0324]以及
[0325] 在一些实施例中，R4a、R4b和R4c中的每一个独立地选自由以下组成的组：
[0326]以及
[0327] 在一些实施例中，R4a、R4b和R4c中的每一个独立地选自由以下组成的组：
[0328]以及
[0329] 在一些实施例中，R4a和R4b或R4a和R4c相同。在一些实施例中，R4a和R4b相同。在一些实施例中，R4a和R4b是 在一些实施例中，R4a和R4b是 在一些实施例中，R4a4b 4a 4b
和R 是 在一些实施例中，R 和R 是 在一
些实施例中，R4a和R4b是 在一些实施
例中，R4a和R4b是 在一些实施例中，
R4a和R4b是
和R 是 在一些实施例中，R 和R 是 在一
些实施例中，R4a和R4b是 在一些实施
例中，R4a和R4b是 在一些实施例中，
R4a和R4b是
[0330] 在一些实施例中，R4a和R4c相同。在一些实施例中，R4a和R4c是 在一些实施例中，R4a和R4c是 在一些实施例中，R4a和R4C是 在一些实施例中 ，R4 a 和R 4c 是 在 一些 实 施例中 ，R4 a 和R4 c 是
在一些实施例中，R4a和R4C是
在一些实施例中，R4a和R4c是
在一些实施例中，R4a和R4C是
在一些实施例中，R4a和R4c是
[0331] 在一些实施例中，本公开提供选自表1中的物质的N-酰基乙醇酰胺衍生物。
[0332] 表1.
[0333]
[0334]
[0335]
[0336] 在一些实施例中，本公开提供选自表1-a中的物质的化合物。
[0337] 表1-a.
[0338]
[0339]
[0340]
[0341] 在一些实施例中，一个或多个氢原子被氘原子置换。在一些实施例中，R1、R2或R3中的一个或多个是或含有氘。
[0342] 在一些实施例中，所提供的N-酰基乙醇酰胺衍生化合物展现出一种或多种与参考化合物(例如，母体N-酰基乙醇酰胺化合物)的活性相当的活性。在一些实施例中，所提供的N-酰基乙醇酰胺衍生化合物展现出一种或多种与参考化合物(例如，母体N-酰基乙醇酰胺化合物)相比改善的活性。
[0343] 在一些实施例中，所提供的N-酰基乙醇酰胺衍生化合物的特征在于该化合物在水性体系中可以显示出与参考化合物(例如，母体N-酰基乙醇酰胺化合物)相比改善的溶解性。在一些特定实施例中，水溶性可以根据适当的分析评估。在一些实施例中，适当的分析是本领域中已知和/或本文中所描述的。
[0344] 在一些实施例中，所提供的N-酰基乙醇酰胺衍生化合物的特征在于该化合物可以显示出与参考化合物(例如，母体N-酰基乙醇酰胺化合物)相比改善的稳定性。在一些特定实施例中，稳定性可以例如使用适当的分析评估。在一些实施例中，适当的分析是本领域中已知和/或本文中所描述的。
[0345] 在一些实施例中，所提供的N-酰基乙醇酰胺衍生化合物的特征在于该化合物以不同于参考化合物(例如，母体N-酰基乙醇酰胺化合物)的方式代谢。在一些实施例中，所提供的N-酰基乙醇酰胺衍生化合物的特征在于该化合物以与参考化合物(例如，母体N-酰基乙醇酰胺化合物)相比不同的速率代谢。在一些实施例中，所提供的N-酰基乙醇酰胺衍生化合物的特征在于该化合物以比参考化合物(例如，母体N-酰基乙醇酰胺化合物)快的速率代谢。在一些实施例中，所提供的N-酰基乙醇酰胺衍生化合物的特征在于该化合物以比参考化合物(例如，母体N-酰基乙醇酰胺化合物)慢的速率代谢。在一些特定实施例中，代谢速率可以例如使用适当的分析评估。在一些实施例中，适当的分析是本领域中已知和/或本文中所描述的。
[0346] 在一些实施例中，所提供的N-酰基乙醇酰胺衍生化合物的特征在于：在施用时，该化合物递送母体N-酰基乙醇酰胺化合物或其活性代谢物。
[0347] 在一些实施例中，所提供的N-酰基乙醇酰胺衍生化合物的特征在于：在施用时，该化合物表现出与参考化合物(例如，母体N-酰基乙醇酰胺化合物)相比改善的口服生物利用度。在一些特定实施例中，口服生物利用度可以例如使用适当的分析评估。在一些实施例中，适当的分析是本领域中已知和/或本文中所描述的。
[0348] 在一些实施例中，参考化合物是或包含母体N-酰基乙醇酰胺化合物。在一些实施例中，参考化合物是或包含棕榈酰基乙醇酰胺。
[0349] 在一些实施例中，所提供的N-酰基乙醇酰胺衍生化合物展现出一种或多种与棕榈酰基乙醇酰胺的活性相当的活性。在一些实施例中，所提供的N-酰基乙醇酰胺衍生化合物展现出一种或多种与棕榈酰基乙醇酰胺相比改善的活性。
[0350] 在一些实施例中，所提供的N-酰基乙醇酰胺衍生化合物展现出与棕榈酰基乙醇酰胺的溶解性相比增加的溶解性。在一些特定实施例中，水溶性可以例如使用适当的分析评估。在一些实施例中，适当的分析是本领域中已知和/或本文中所描述的。
[0351] 在一些实施例中，所提供的N-酰基乙醇酰胺衍生化合物展现出与棕榈酰基乙醇酰胺的稳定性相当的增加的稳定性。
[0352] 在一些实施例中，所提供的N-酰基乙醇酰胺衍生化合物以与棕榈酰基乙醇酰胺的代谢方式相比不同的方式代谢。在一些实施例中，所提供的N-酰基乙醇酰胺衍生化合物与比棕榈酰基乙醇酰胺的代谢速率快的速率代谢。在一些实施例中，所提供的N-酰基乙醇酰胺衍生化合物以比棕榈酰基乙醇酰胺的代谢速率慢的速率代谢。
[0353] 在一些实施例中，所提供的N-酰基乙醇酰胺衍生化合物在施用时递送棕榈酰基乙醇酰胺或其活性代谢物。在一些实施例中，所提供的N-酰基乙醇酰胺衍生化合物在施用时展现出与施用棕榈酰基乙醇酰胺相比改善的口服生物利用度。
[0354] 在一些实施例中，参考化合物是或包含油酰基乙醇酰胺。
[0355] 在一些实施例中，所提供的N-酰基乙醇酰胺衍生化合物展现出一种或多种与油酰基乙醇酰胺的活性相当的活性。在一些实施例中，所提供的N-酰基乙醇酰胺衍生化合物展现出一种或多种与油酰基乙醇酰胺相比改善的活性。
[0356] 在一些实施例中，所提供的N-酰基乙醇酰胺衍生化合物展现出与油酰基乙醇酰胺的溶解性相当的增加的溶解性。在一些特定实施例中，水溶性可以例如使用适当的分析评估。在一些实施例中，适当的分析是本领域中已知和/或本文中所描述的。
[0357] 在一些实施例中，所提供的N-酰基乙醇酰胺衍生化合物展现出与油酰基乙醇酰胺的稳定性相当的增加的稳定性。
[0358] 在一些实施例中，所提供的N-酰基乙醇酰胺衍生化合物以与油酰基乙醇酰胺的代谢方式相比不同的方式代谢。在一些实施例中，所提供的N-酰基乙醇酰胺衍生化合物与比油酰基乙醇酰胺的代谢速率快的速率代谢。在一些实施例中，所提供的N-酰基乙醇酰胺衍生化合物以比油酰基乙醇酰胺的代谢速率慢的速率代谢。
[0359] 在一些实施例中，所提供的N-酰基乙醇酰胺衍生化合物在施用时递送油酰基乙醇酰胺或其活性代谢物。在一些实施例中，所提供的N-酰基乙醇酰胺衍生化合物在施用时展现出与施用油酰基乙醇酰胺相比改善的口服生物利用度。
[0360] 在一些实施例中，参考化合物是或包含花生四烯酰基乙醇酰胺。
[0361] 在一些实施例中，所提供的N-酰基乙醇酰胺衍生化合物展现出一种或多种与花生四烯酰基乙醇酰胺的活性相当的活性。在一些实施例中，所提供的N-酰基乙醇酰胺衍生化合物展现出一种或多种与花生四烯酰基乙醇酰胺相比改善的活性。
[0362] 在一些实施例中，所提供的N-酰基乙醇酰胺衍生化合物展现出与花生四烯酰基乙醇酰胺的溶解性相当的增加的溶解性。在一些特定实施例中，水溶性可以例如使用适当的分析评估。在一些实施例中，适当的分析是本领域中已知和/或本文中所描述的。
[0363] 在一些实施例中，所提供的N-酰基乙醇酰胺衍生化合物展现出与花生四烯酰基乙醇酰胺的稳定性相当的增加的稳定性。
[0364] 在一些实施例中，所提供的N-酰基乙醇酰胺衍生化合物以与花生四烯酰基乙醇酰胺的代谢方式相比不同的方式代谢。在一些实施例中，所提供的N-酰基乙醇酰胺衍生化合物与比花生四烯酰基乙醇酰胺的代谢速率快的速率代谢。在一些实施例中，所提供的N-酰基乙醇酰胺衍生化合物以比花生四烯酰基乙醇酰胺的代谢速率慢的速率代谢。
[0365] 在一些实施例中，所提供的N-酰基乙醇酰胺衍生化合物在施用时递送花生四烯酰基乙醇酰胺或其活性代谢物。在一些实施例中，所提供的N-酰基乙醇酰胺衍生化合物在施用时展现出与施用花生四烯酰基乙醇酰胺相比改善的口服生物利用度。
[0366] 用途
[0367] 在一些实施例中，本公开提供鉴别和/或表征N-酰基乙醇酰胺化合物(例如，母体N-酰基乙醇酰胺化合物)的衍生物的方法，该方法包含以下步骤：
[0368] 提供包含修饰或以其它方式连接至N-酰基乙醇酰胺的部分的衍生化合物；和
[0369] 确定衍生化合物具有一种或多种相对于N-酰基乙醇酰胺化合物改善的药理学性质。
[0370] 在一些实施例中，本公开提供用于鉴别、评估和/或表征一种或多种所提供的N-酰基乙醇酰胺衍生化合物的一种或多种活性或属性的技术。
[0371] 在一些实施例中，本公开提供治疗患有或易患疾病、病症或病状的受试者的方法，该方法包含以下步骤：
[0372] 向有需要的受试者施用本文中所公开的N-酰基乙醇酰胺衍生物或组合物。
[0373] 在一些实施例中，本文中所公开的N-酰基乙醇酰胺衍生物或组合物与一种或多种其它治疗相关受试者所患的相关疾病、病症或病状(或其一种或多种症状)的药剂组合施用。
[0374] 各种疾病、病症和/或病状可能受N-酰基乙醇酰胺的影响。在一些实施例中，本公开提供一些方法，这些方法包含向患有或易患疾病、病症或病状的受试者施用药学上有效量的所提供的化合物或组合物。
[0375] 在一些实施例中，疾病、病症或病状是或包含疼痛。在一些实施例中，疼痛可以是慢性疼痛。在一些实施例中，疼痛可以是或包括下背痛。在一些实施例中，疾病、病症或病状是或包含慢性下背痛。在一些实施例中，疾病、病症或病状是或包含坐骨神经痛。在一些实施例中，疾病、病症或病状是或包含神经根病。在一些实施例中，疾病、病症或病状是或包含放射痛。某些疼痛分类和代表性适应症描绘于图1中。
[0376] 在一些实施例中，疾病、病症或病状是或包含焦虑。在一些实施例中，疾病、病症或病状是或包含抑郁症。在一些实施例中，疾病、病症或病状的特征在于精神分裂症的一种或多种症状。
[0377] 在一些实施例中，疾病、病症或病状是或包含神经系统疾病、病症或病状。在一些实施例中，疾病、病症或病状是或包含亨廷顿病。在一些实施例中，疾病、病症或病状是或包含帕金森病。在一些实施例中，疾病、病症或病状是或包含阿尔茨海默病。在一些实施例中，疾病、病症或病状是或包含肌萎缩侧索硬化(Amyotrophic Lateral Sclerosis，ALS，也被称为卢·格里格病(Lou Gehrig's disease))。在一些实施例中，疾病、病症或病状是或包含多发性硬化。在一些实施例中，疾病、病症或病状是或包含神经病理性疼痛。在一些实施例中，疾病、病症或病状是或包含脑缺血。在一些实施例中，疾病、病症或病状是或包含癫痫。
[0378] 在一些实施例中，疾病、病症或病状是或包含食欲不振。在一些实施例中，疾病、病症或病状是或包含牙痛。在一些实施例中，疾病、病症或病状是或包含骨关节炎。在一些实施例中，疾病、病症或病状是或包含胃肠动力降低。
[0379] 在一些实施例中，疾病、病症或病状是或包含癌症。
[0380] 在一些实施例中，疾病、病症或病状是或包含眼科病状。在一些实施例中，疾病、病症或病状是或包含青光眼。
[0381] 在一些实施例中，疾病、病症或病状是或包含异位性皮炎。在一些实施例中，疾病、病症或病状是或包含呼吸道感染。在一些实施例中，疾病、病症或病状是或包含创伤后应激障碍。在一些实施例中，疾病、病症或病状是或包含肥胖。在一些实施例中，疾病、病症或病状是或包含失眠。在一些实施例中，疾病、病症或病状是或包含嗜睡。
[0382] 在一些实施例中，本公开提供降低患者中的胃肠动力的方法，该方法包含向有需要的受试者施用本文中所公开的化合物或组合物的步骤。
[0383] 在一些实施例中，本公开提供降低患者中或生物样品中的癌细胞增殖的方法，该方法包含向该患者施用或使该生物样品接触本文中所公开的化合物或组合物的步骤。
[0384] 在一些实施例中，本公开提供诱导患者中或生物样品中的脂解的方法，该方法包含向该患者施用或使该生物样品接触本文中所公开的化合物或组合物的步骤。
[0385] 在一些特定实施例中，所提供的包括丁酸部分的化合物适用于治疗IBS-D和/或治疗疼痛。丁酸(Butyric acid，BA)是肠道健康的重要组成部分并且已被证明可以减轻IBS-D患者的疼痛，降低排便频率以及增加稠度。
[0386] 在一些实施例中，所提供的利用如本文中所描述的一种或多种化合物的治疗(例如，疼痛治疗)可以按对应于大于或等于1200毫克/天PEA的剂量的水平递送PEA。在一些实施例中，所提供的治疗可以涉及每天施用一次或两次。
[0387] 在一些实施例中，所提供的利用一种或多种如本文中所描述的化合物的治疗(例如，IBS-D治疗)可以按对应于约3克/天PEA的剂量的水平递送PEA。
[0388] 在一些实施例中，所提供的采用如本文中所描述的含有丁酸部分的化合物的治疗(例如，疼痛和/或IBS-D治疗)可以按对应于约3克/天PEA的剂量的水平递送PEA和/或可以按对应于约1克/天BA的剂量的水平递送BA。
[0389] 在一些实施例中，本文中所提供的一种或多种特定化合物可以适用于治疗多种不同的疾病、病症或病状；在一些这类实施例中，该化合物在用于不同疾病、病症或病状时可以按不同的方式配制。
[0390] 组合物
[0391] 在一些实施例中，如本文中所提供的化合物以组合物，例如药物组合物形式制备和/或采用。在一些实施例中，所提供的药物组合物包含治疗有效量的所提供的化合物，和至少一种选自药学上可接受的稀释剂、药学上可接受的赋形剂以及药学上可接受的载体的药学上可接受的无活性成分。在一些实施例中，药物组合物被配制成用于静脉内注射、口服、经颊施用、吸入、经鼻施用、局部施用、眼科施用或经眼施用。在一些实施例中，药物组合物是片剂、丸剂、胶囊、液体、吸入剂、鼻喷雾溶液、栓剂、悬浮液、凝胶、胶体、分散液、悬浮液、溶液、乳液、软膏、洗剂、滴眼剂或滴耳剂。
[0392] 在一些实施例中，本公开提供一种药物组合物，其包含与药学上可接受的赋形剂混合的所提供的化合物或组合物。
[0393] 在治疗和/或诊断应用中，所提供的化合物可以被配制成用于各种施用模式，包括全身性和局部(topical)或局部(localized)施用。技术和制剂通常可以在《雷明顿：药学科学与实践》(Remington,The Science and Practice of Pharmacy)(第20版，2000)中找到。
[0394] 所提供的化合物和其组合物在宽剂量范围内有效。例如，在治疗成年人时，约0.01至约10000mg、约0.01至约1000mg、约0.5至约100mg、约1至约50mg每天以及约5至约100mg每天的剂量是可以使用的剂量的实例。确切的剂量将取决于施用途径、化合物的施用形式、待治疗的受试者、待治疗的受试者的体重以及主治医师的偏好和经验。
[0395] 药学上可接受的盐对本领域普通技术人员来说通常是众所周知的，并且举例来说但非限制，可以包括乙酸盐、苯磺酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、碳酸氢盐、酒石酸氢盐、溴化物、乙二胺四乙酸钙、樟脑磺酸盐、碳酸盐、柠檬酸盐、乙二胺四乙酸盐、乙二磺酸盐、依托酸盐(estolate)、乙磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡萄糖酸盐、谷氨酸盐、对羟乙酰氨基苯胂酸盐(glycollylarsanilate)、己基间苯二酚盐(hexylresorcinate)、海巴明(hydrabamine)、氢溴酸盐、盐酸盐、羟基萘甲酸盐、碘化物、羟乙磺酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、粘液酸盐、萘磺酸盐、硝酸盐、双羟萘酸盐(恩波酸盐(embonate))、泛酸盐、磷酸盐/二磷酸盐、聚半乳糖醛酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、碱式乙酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、丹宁酸盐、酒石酸盐或茶氯酸盐。其它药学上可接受的盐可以在例如《雷明顿：药学科学与实践》(第20版，2000)中找到。优选的药学上可接受的盐包括例如乙酸盐、苯甲酸盐、溴化物、碳酸盐、柠檬酸盐、葡萄糖酸盐、氢溴酸盐、盐酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、萘磺酸盐、双羟萘酸盐(恩波酸盐)、磷酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐或酒石酸盐。
[0396] 取决于所治疗的特定病状，这类药剂可以被配制成液体或固体剂型并全身或局部施用。药剂可以例如按本领域的普通技术人员所知的定时或持续低释放形式递送。配制和施用技术可以在《雷明顿：药学科学与实践》(第20版，2000)中找到。合适的途径可以包括口服、经颊、通过吸入喷雾、舌下、经直肠、经皮、经阴道、经粘膜、经鼻或肠内施用；肠胃外递送，包括肌肉内、皮下、髓内注射、以及鞘内、直接室内、静脉内、关节内、胸骨内、滑膜内、肝内、病灶内、颅内、腹膜内、鼻内或眼内注射或其它递送模式。
[0397] 对于注射，所提供的药剂可以在水溶液中，例如在生理学相容的缓冲液中，例如在汉克氏溶液(Hanks's olution)、林格氏溶液或生理盐水缓冲液中配制和稀释。对于这类经粘膜施用，在制剂中使用适于待渗透屏障的渗透剂。这类渗透剂一般是本领域中已知的。
[0398] 使用药学上可接受的惰性载体将所提供的化合物或组合物配制成适合于全身性施用的剂量在本公开的范围内。通过恰当选择载体和合适的制造实践，本公开的组合物，尤其是被配制成溶液的组合物，可以在肠胃外，例如通过静脉内注射而施用。
[0399] 可以容易地使用本领域中众所周知的药学上可接受的载体将化合物配制成适合口服的剂量。这类载体使得所提供的化合物和组合物能够被配制成片剂、丸剂、胶囊、液体、凝胶、糖浆、浆液、悬浮液等，以便让待治疗的受试者(例如，患者)口服摄取。
[0400] 对于经鼻或吸入递送，所提供的化合物或组合物也可以通过本领域技术人员已知的方法配制，并且可以包括例如但不限于增溶、稀释或分配物质的实例，例如盐水、防腐剂(例如苯甲醇)、吸收促进剂以及碳氟化合物。
[0401] 在某些实施例中，所提供的化合物和组合物被递送到CNS。在某些实施例中，所提供的化合物和组合物被递送到脑脊髓液。在某些实施例中，所提供的化合物和组合物被施用到脑实质。在某些实施例中，所提供的化合物和组合物通过鞘内施用或脑室内施用而被递送到动物/受试者。本文中所描述的所提供的化合物和组合物在中枢神经系统内的广泛分布可以通过实质内施用、鞘内施用或脑室内施用实现。
[0402] 在某些实施例中，肠胃外施用是通过注射，通过例如注射器、泵等。在某些实施例中，注射是团注(bolus injection)。在某些实施例中，将注射液直接施用到组织，例如纹状体、尾状核、皮质、海马体以及小脑。
[0403] 适用于本公开中的药物组合物包括活性成分以可有效实现其预期目的的量包含在内的组合物。有效量的确定完全在本领域的普通技术人员的能力范围内，尤其是根据本文中所提供的详细公开内容。
[0404] 除了活性成分之外，这些药物组合物还可以含有有助于将活性化合物加工成可以在药学上使用的制剂的合适的药学上可接受的载体，包含赋形剂和助剂。被配制成口服的制剂可以呈片剂、糖衣药丸、胶囊、凝胶、糖浆、悬浮液、粉末或溶液形式。
[0405] 用于口服使用的药物制剂可以通过以下方式获得：将活性化合物与固体赋形剂组合，任选地研磨所得混合物，并在必要时加入合适的助剂之后，加工颗粒混合物，获得片剂或糖衣药丸芯。具体来说，合适的赋形剂是填充剂，例如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露糖醇或山梨糖醇；纤维素制剂，例如玉米淀粉、小麦淀粉、大米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、黄芪胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠(CMC)和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP：聚维酮(povidone))。必要时，可以加入崩解剂，例如交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂或褐藻酸或其盐，例如褐藻酸钠。
[0406] 在一些实施例中，芯具有合适的包衣。出于这一目的，可以使用浓缩糖溶液，其可以任选地含有阿拉伯胶、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、卡波姆凝胶(carbopol gel)、聚乙二醇(PEG)和/或二氧化钛、漆溶液以及合适的有机溶剂或溶剂混合物。可以将染料或颜料加入到片剂或糖衣药丸包衣中以鉴别或表征活性化合物剂量的不同组合。
[0407] 可以口服使用的药物制剂包括由明胶制成的配合插入胶囊(push-fit capsule)以及由明胶和增塑剂如甘油或山梨糖醇制成的软密封胶囊。配合插入胶囊可以含有活性成分与例如乳糖的填充剂、例如淀粉的粘合剂和/或例如滑石或硬脂酸镁的润滑剂以及任选地稳定剂的混合物。在软胶囊中，活性化合物可以溶解或悬浮于合适的液体，例如脂肪油、液体石蜡或液体聚乙二醇(PEG)中。另外，可以加入稳定剂。
[0408] 取决于待治疗或预防的特定病状或疾病状态，可以与所提供的化合物或组合物一起施用额外的治疗剂，这些额外的治疗剂通常是用于治疗或预防该病状而施用的。例如，可以将化疗剂或其它抗增殖剂与所提供的化合物或组合物组合来治疗增殖性疾病和癌症。已知化疗剂的实例包括但不限于阿霉素(adriamycin)、地塞米松(dexamethasone)、长春新碱(vincristine)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、氟尿嘧啶(fluorouracil)、拓扑替康(topotecan)、紫杉醇(taxol)、干扰素以及铂衍生物。
[0409] 制造方法
[0410] 在一些实施例中，本公开提供制造所提供的N-酰基乙醇酰胺衍生化合物的方法，该方法包含以下步骤：
[0411] 使N-酰基乙醇酰胺化合物(例如，母体N-酰基乙醇酰胺化合物)与接头部分缀合或以其它方式连接；
[0412] 使一个部分与接头-N-酰基乙醇酰胺部分缀合或以其它方式连接。
[0413] 在一些实施例中，本公开提供制造所提供的N-酰基乙醇酰胺衍生化合物的方法，该方法包含以下步骤：
[0414] 使一个部分与接头部分缀合或以其它方式连接；
[0415] 使N-酰基乙醇酰胺化合物(例如，母体N-酰基乙醇酰胺化合物)与接头部分缀合或以其它方式连接。
[0416] 在一些实施例中，部分选自由以下组成的组：磷酸酯、丁酸、甘油、琥珀酸酯、辛酸、葡萄糖酸、二十碳五烯酸、亚油酸、琥珀酸酯以及蔗糖部分，和其组合。
[0417] 在一些实施例中，本公开提供制造所提供的药物组合物的方法，该方法包含以下步骤：
[0418] 与至少一种药学上可接受的载体一起配制所提供的N-酰基乙醇酰胺衍生化合物。
[0419] 范例
[0420] 实例1：(N-棕榈酰基乙醇酰胺)PEA在疼痛方面
[0421] 本实例提供12个PEA疼痛研究的元分析(meta-analysis)，并且尤其表明，67％的已治疗患者对比21％的安慰剂实现了≤3的VAS评分。参见图2A-2F和下表，下表引自Guida等人，Dolor 2010；Paladini等人，《疼痛医生杂志》(Pain Physician Jounrla)，2016年2月；以及Cobellis等人，《欧洲妇产科杂志》(Eur.J.Ob.and Gyn)，2010年7月。
[0422]
[0423] 实例2：治疗IBS-D
[0424] 本实例展示了根据本公开的一些实施例治疗IBS-D。
[0425] 本公开提供了将丁酸(BA)和PEA组合成单一双活性前药的强有力理论，该单一双活性前药将在肠道中代谢为两种活性成分，这将减轻疼痛并改善大便稠度。
[0426] 在一些实施例中，IBS-D治疗成功包含同时获得以下改善：(i)与基线每周平均值相比，每日最严重腹痛评分改善≥30％；和(ii)在12周的时间间隔内，至少50％的天数将布里斯托大便分类(Bristol Stool Scale，BSS)减少至<5。或者或另外，治疗成功可以是或包含在不存在并行排便的情况下改善每日最严重腹痛。参见图2G-2Q和下表，下表引自Scarpellini等人，《消化性肝病》(Digestive Liver Disease)，2007；Banasiewicz等人，《结肠直肠病》(Colorectal Disease)，2012；Scheppach等人，《胃肠病学》
(Gastroenterology)，1992；Capasso等人，《英国药理学杂志》(Br.J.of Pharm)，2014；以及Borrelli等人，《英国药理学杂志》，2015。例如，短链脂肪酸灌注已被证明可改善转向性结肠炎(diversion colitis)的炎症。在Scheppach等人的研究中，在10名患有远端溃疡性结肠炎的患者中测试了丁酸盐灌肠剂的作用，这些患者持续8周对标准疗法没有反应或不耐受。他们按随机顺序用丁酸钠(100mmol/L)治疗2周并用安慰剂治疗2周(单盲试验)。在治疗之前和之后，注意临床症状并且在内镜和组织学上对炎症程度进行分级。通过放射自显影评估直肠增殖。在丁酸盐灌注后，大便频率(n次/天)从4.7±0.5降至2.1±0.4(P<0.01)，并且10名患者中有9名停止出血。内镜评分从6.5±0.4降至3.8±0.8(P<0.01)。组织学炎症程度从2.4±0.3降至1.5±0.3(P<0.02)。整体隐窝增殖没有变化，但上部隐窝标记指数从
0.086±0.019降至0.032±0.003(P<0.03)。施用安慰剂时，所有这些参数都没有改变。这些数据支持这样的观点，即丁酸盐缺乏可能在远端溃疡性结肠炎的发病机制中发挥作用并且丁酸盐灌注改善了这种状况。Scheppach等人《, 丁酸盐灌肠剂对远端溃疡性结肠炎中的结肠粘膜的影响》(Effect of Butyrate Enemas on the Colonic Mucosa in Distal
Ulcerative Colitis)《, 胃肠病学》(Gastroenterology),103:51-56(1992)。
(Gastroenterology)，1992；Capasso等人，《英国药理学杂志》(Br.J.of Pharm)，2014；以及Borrelli等人，《英国药理学杂志》，2015。例如，短链脂肪酸灌注已被证明可改善转向性结肠炎(diversion colitis)的炎症。在Scheppach等人的研究中，在10名患有远端溃疡性结肠炎的患者中测试了丁酸盐灌肠剂的作用，这些患者持续8周对标准疗法没有反应或不耐受。他们按随机顺序用丁酸钠(100mmol/L)治疗2周并用安慰剂治疗2周(单盲试验)。在治疗之前和之后，注意临床症状并且在内镜和组织学上对炎症程度进行分级。通过放射自显影评估直肠增殖。在丁酸盐灌注后，大便频率(n次/天)从4.7±0.5降至2.1±0.4(P<0.01)，并且10名患者中有9名停止出血。内镜评分从6.5±0.4降至3.8±0.8(P<0.01)。组织学炎症程度从2.4±0.3降至1.5±0.3(P<0.02)。整体隐窝增殖没有变化，但上部隐窝标记指数从
0.086±0.019降至0.032±0.003(P<0.03)。施用安慰剂时，所有这些参数都没有改变。这些数据支持这样的观点，即丁酸盐缺乏可能在远端溃疡性结肠炎的发病机制中发挥作用并且丁酸盐灌注改善了这种状况。Scheppach等人《, 丁酸盐灌肠剂对远端溃疡性结肠炎中的结肠粘膜的影响》(Effect of Butyrate Enemas on the Colonic Mucosa in Distal
Ulcerative Colitis)《, 胃肠病学》(Gastroenterology),103:51-56(1992)。
[0427] 患者的人口统计学特征包括
[0428]
[0429] 治疗对症状严重程度的影响
[0430]
[0431] a括号中的数字＝SD
[0432] *统计显著(p<0.005)。
[0433]
[0434]
[0435]
[0436] 研究中任何一组均无不良作用。值以比例显示。
[0437] 实例3：PEA和前药的方法开发、血浆稳定性以及方法鉴定
[0438] 本实例描述了用以测定史泊格-多利大鼠血浆中的PEA水平和用以测定本文所提供的化合物的稳定性的LC-MS/MS方法。
[0439] 开发了一种用于测定史泊格-多利大鼠血浆中的PEA和PEA-前药I-9的LC-MS/MS方法。将每个测试物注入ABSciex API4000质谱仪以确定优化后的参数。接着，开发液相色谱条件以获得合适的特异性并解析PEA和PEA-前药峰。
[0440] 评估PEA-前药I-9在含有肝素钠作为抗凝血剂的史泊格-多利大鼠血浆和含有柠檬酸和甲酸的酸化大鼠血浆中的稳定性。通过用肝素钠收集史泊格-多利大鼠血浆并每毫升血液加入100μL 0.5M柠檬酸来制备酸化血浆。将血液离心以产生血浆，并且然后每毫升血浆加入100μL 10％甲酸。
[0441] 向每个基质中加入PEA-前药至最终浓度为1μg/mL。立即收集三份等分试样(50μL)并将其加入到150μL含有内标的乙腈中。将剩余的血浆等分试样平分。使一份等分试样在室温下静置，而将另一份放置在冰上。九十分钟后，收集每份样品的三份等分试样并将其加入乙腈中。将样品以13000rpm离心十分钟，并使用所开发的LC-MS/MS方法分析所得上清液。然后将来自孵育样品的分析物和内标的峰面积响应比(peak area response ratio，PARR)与初始样品进行比较，以确定剩余的PEA前药百分比。
[0442] 在其初始分析之后，将来自酸化血浆实验的上清液样品在自动进样器(约8℃)上储存两小时后再注射，以评估PEA-前药在提取后基质中的稳定性。
[0443] 稳定性实验的结果显示于表3a、3b和3c中。
[0444] 表3a：PEA-前药I-9在史泊格多利大鼠血浆中的血浆稳定性
[0445]
[0446] ND：未确定
[0447] 表3b：PEA-前药I-9在酸化的史泊格-多利大鼠血浆中的血浆稳定性
[0448]
[0449] ND：未确定
[0450] 表3c：从酸化的史泊格-多利大鼠血浆提取的PEA-前药I-9的提取后稳定性
[0451]
[0452] ND：未确定
[0453] 在每个基质中的稳定性的结果呈现在表3a和3b中。当在室温下(剩余0.203％)和冰上(剩余73.4％)储存90分钟时，发现前药不稳定。当将PEA-前药I-9强化到用柠檬酸和甲酸酸化的大鼠血浆中时，发现其在室温下(剩余107％)和冰上(剩余96.0％)能稳定90分钟。此外，证明PEA-前药I-9在自动进样器(约8℃)上储存两小时后在提取后基质中是稳定的(表3c)。
[0454] 通过单日研究前鉴定评估PEA和PEA-前药I-9在酸化的史泊格-多利大鼠血浆中的方法的特异性、准确性和精确度。提取三个水平的单一八点标准曲线和质量控制样品，每个样品重复六次，并分析PEA或PEA-前药I-9。另外，制备高浓度样品的稀释QC以证明该方法的平行性。标准品和质量控制样品由每种测试化合物的独立制备的储备溶液制备。血浆鉴定结果呈现在表3d和3e中。
[0455] 表3d：酸化的大鼠血浆中的PEA的方法鉴定结果
[0456]
[0457] 表3e：酸化的大鼠血浆中的PEA-前药I-9的方法鉴定结果
[0458]
[0459] 血浆样品使用下述方法提取。
[0460] 在DMSO中制备分析储备溶液(1.00mg/mL的游离药物)。
[0461] 用肝素钠收集史泊格-多利大鼠血液，并以每毫升血液100μL的比率加入0.5M柠檬酸。将血液离心以收集血浆。向每毫升血浆中加入100μL 10％甲酸等分试样。
[0462] 在酸化的大鼠血浆中制备标准品。标准品和质量控制样品由每种分析物的独立制备的储备溶液制备。在50:50乙腈:水中制备工作溶液，并且然后将其加入血浆中，使得对于PEA-前药I-9，校准标准品的最终浓度为1000、500、100、50、10、5、1以及0.5ng/mL，并且质量控制样品的最终浓度为2.50、50.0以及500ng/mL。对于PEA，校准标准品被制备成最终浓度为1000、500、100、50、25、10、5以及2.5ng/mL，并且质量控制样品的最终浓度为12.50、100以及500ng/mL。对于每种分析物，以10,000ng/mL制备高浓度稀释QC。在提取之前将该样品稀释20倍至分析范围内。
[0463] 通过乙腈沉淀提取血浆样品。标准品和QC：在96孔板中加入10μL适当的工作溶液至50μL空白基质。空白：在96孔板中加入10μL 50:50乙腈:水至50μL空白基质。样品：在96孔板中加入10μL 50:50乙腈:水至50μL研究样品。盖上盖子并混合。向每个孔中加入150μL乙腈(含100ng/mL利托那韦(ritonavir)作为内标)。盖上盖子并以1000rpm混合五分钟。将板以3000rpm离心十分钟。将150μL所得上清液的等分试样转移到干净的96孔板中。盖上盖子进行分析。HPLC和质谱条件描述于表3f中。色谱图在图3A、3B、3C、3D、3E、3F、3G以及3H中举例说明。
[0464] 表3f：HPLC和质谱条件
[0465] HPLC条件
[0466]
[0467]
[0468] 质谱条件
[0469]
[0471]
[0472] IS：离子喷雾电压；DP：去簇电位；EP：入口电位；CE：碰撞能：CXP：碰撞室出口电位；*所有设置都以伏特为单位。
[0473] 实例4：人类和大鼠肝脏微粒体、人类和大鼠肠道S9级分以及模拟胃液中的PEA稳定性
[0474] 本实例描述了在人类和大鼠肝脏微粒体、人类和大鼠肠道S9级分以及模拟胃液中观测到的PEA稳定性。
[0475] 肝脏微粒体稳定性
[0476] 提供混合性别人类肝脏微粒体(批号1210347)和雄性史泊格-多利大鼠肝脏微粒体(批号1310030)。如下所述制备没有辅因子的反应混合物。将测试物以1μM的最终浓度加入反应混合物中。对照化合物睾酮与测试物同时在单独的反应中进行。将反应混合物的等分试样(没有辅因子)在37℃的振荡水浴中平衡3分钟。通过加入辅因子引发反应，并在37℃的振荡水浴中孵育混合物。在0、10、20、30和60分钟取出等分试样(100μL)。立即将所有样品与400μL含有0.1％甲酸和内标的冰冷50/50乙腈/H2O组合以终止反应。然后将样品混合并离心以沉淀蛋白质。在匹配的基质中制备校准标准品。对于所给予的前药I-9和所期望的药物(PEA)，使用电喷雾电离通过LC-MS/MS分析所有样品和标准品。分析条件概述于附录4-1中。将每个时间点的测试物浓度与时间0时的测试物浓度进行比较，以确定每个时间点的剩余百分比。使用GraphPad软件，拟合单相指数衰减方程来计算半衰期。结果显示于表4a和4b中。
[0477] 反应组成
[0478] 肝脏微粒体0.5mg/mL
[0479] NADPH(辅因子)1mM
[0480] UDPGA(辅因子)1mM
[0481] 磷酸钾，pH 7.4 100mM
[0482] 氯化镁5mM
[0483] 测试物1μM
[0484] 表4a：在人类和大鼠肝脏微粒体中观测到的PEA稳定性
[0485]
[0486] a当计算的半衰期比实验持续时间长时，半衰期表示为>最长孵育时间。类似地，如果计算的半衰期比最短时间点小，那么半衰期表示为<该时间点，并且计算的半衰期也列在圆括号中。
[0487] b内在清除率(CLint)根据CLint＝k/P计算，其中k是消除速率常数并且P是孵育中的蛋白质浓度。
[0488]
[0489] 表4b：前药和药物的测量到的浓度
[0490]
[0491] 肠道S9级分稳定性
[0492] 提供混合性别人类肠道S9级分(批号0710351)和雄性史泊格-多利大鼠肠道S9级分(批号0510116)。如下所述制备没有辅因子的反应混合物。将测试物以1μM的最终浓度加入反应混合物中。对照化合物睾酮和7-羟基香豆素与测试物同时在单独的反应中进行。将反应混合物的等分试样(没有辅因子混合物)在37℃的振荡水浴中平衡3分钟。通过加入辅因子混合物引发反应，并在37℃的振荡水浴中孵育混合物。在0、10、20、30和60分钟取出等分试样(100μL)。立即将所有样品与400μL含有0.1％甲酸和内标的冰冷50/50乙腈/H2O组合以终止反应。然后将样品混合并离心以沉淀蛋白质。在匹配的基质中制备校准标准品。对于所给予的前药I-9和所期望的药物(PEA)，使用电喷雾电离通过LC-MS/MS分析所有样品和标准品。分析条件概述于附录4-1中。将每个时间点的测试物浓度与时间0时的测试物浓度进行比较，以确定每个时间点的剩余百分比。使用GraphPad软件，拟合单相指数衰减方程来计算半衰期。结果显示于表4c和4d中。
[0493] 反应组成
[0494] 肠道S9级分1.0mg/mL
[0495] NADPH(辅因子)1mM
[0496] UDPGA(辅因子)1mM
[0497] PAPS(辅因子)1mM
[0498] GSH(辅因子)1mM
[0499] 磷酸钾，pH 7.4 100mM
[0500] 氯化镁5mM
[0501] 测试物1μM
[0502] 表4c：在人类和大鼠肠道S9级分中观测到的PEA稳定性
[0503]
[0504] a当计算的半衰期比实验持续时间长时，半衰期表示为>最长孵育时间。类似地，如果计算的半衰期比最短时间点小，那么半衰期表示为<该时间点，并且计算的半衰期也列在圆括号中。
[0505] b内在清除率(CLint)根据CLint＝k/P计算，其中k是消除速率常数并且P是孵育中的蛋白质浓度。
[0506]
[0507] 表4d：前药和药物的测量到的浓度
[0508]
[0509] 模拟胃液稳定性
[0510] 在模拟胃液(simulated gastric fluid，SGF)中进行研究。通过将2.0g NaCl和3.2g纯化后的胃蛋白酶(源自猪胃粘膜)溶解在7mL的10N HCl和足够的水中以达到1000mL来制备SGF。将pH调整到pH 1.2。还在不向基质中加入胃蛋白酶的情况下进行了对照实验。
将测试物在37℃下以2μM的最终浓度加入SGF中，并在37℃的振荡水浴中孵育。在每个时间点(0、15、30、60和120分钟)在各个管中加料。在适当的时间，将500μL含有0.1％甲酸和内标的冰冷乙腈加入单个管中。使每个管的开始时间错开，以便所有时间点同时完成。然后将样品混合并离心。在匹配的基质中制备校准标准品。对于所给予的前药I-9和所期望的药物(PEA)，使用电喷雾电离通过LCMS/MS分析所有样品和标准品。分析条件概述于附录4-1中。
将每个时间点的测试物浓度与时间0时的测试物浓度进行比较，以确定每个时间点的剩余百分比。使用GraphPad软件，拟合单相指数衰减方程来计算半衰期。结果显示于表4e和4f中。
将测试物在37℃下以2μM的最终浓度加入SGF中，并在37℃的振荡水浴中孵育。在每个时间点(0、15、30、60和120分钟)在各个管中加料。在适当的时间，将500μL含有0.1％甲酸和内标的冰冷乙腈加入单个管中。使每个管的开始时间错开，以便所有时间点同时完成。然后将样品混合并离心。在匹配的基质中制备校准标准品。对于所给予的前药I-9和所期望的药物(PEA)，使用电喷雾电离通过LCMS/MS分析所有样品和标准品。分析条件概述于附录4-1中。
将每个时间点的测试物浓度与时间0时的测试物浓度进行比较，以确定每个时间点的剩余百分比。使用GraphPad软件，拟合单相指数衰减方程来计算半衰期。结果显示于表4e和4f中。
[0511] 表4e：在模拟胃液中观测到的PEA稳定性
[0512]
[0513] a当计算的半衰期比实验持续时间长时，半衰期表示为>最长孵育时间。
[0514] 表4f：前药和药物的测量到的浓度
[0515]
[0516] 微粒体/S9级分对照
[0517] 作为肝脏微粒体和肠道S9级分研究的对照，在反应混合物中，排除微粒体蛋白进行额外的实验。如下所述制备反应混合物。将测试物以2μM的最终浓度加入反应混合物中，并且然后在37℃的振荡水浴中孵育。在每个时间点(0、10、20、30和60分钟)在各个管中加料。在适当的时间，将500μL含有0.1％甲酸和内标的冰冷乙腈加入单个管中。使每个管的开始时间错开，以便所有时间点同时完成。然后将样品混合并离心以沉淀蛋白质。在匹配的基质中制备校准标准品。对于所给予的前药I-9和所期望的药物(PEA)，使用电喷雾电离通过LC-MS/MS分析所有样品和标准品。分析条件概述于附录4-1中。将每个时间点的测试物浓度与时间0时的测试物浓度进行比较，以确定每个时间点的剩余百分比。使用GraphPad软件，拟合单相指数衰减方程来计算半衰期。结果显示于表4g和4h中。
[0518] 反应组成
[0519] NADPH(辅因子)1mM
[0520] UDPGA(辅因子)1mM
[0521] PAPS(辅因子)1mM
[0522] GSH(辅因子)1mM
[0523] 磷酸钾，pH 7.4 100mM
[0524] 氯化镁5mM
[0525] 测试物2μM
[0526] 表4g：微粒体/S9级分对照
[0527]
[0528] a当计算的半衰期比实验持续时间长时，半衰期表示为>最长孵育时间。
[0529] 表4h：前药和药物的测量到的浓度
[0530]
[0531] 附录4-1
[0532] 液相色谱
[0533]
[0534] 质谱
[0535]
[0536]
[0537] 实例5：在雄性史泊格-多利大鼠中施用PEA和PEA-前药后，测定PEA的口服生物利用度
[0538] 本实例描述了在口服本文中所提供的化合物之后在史泊格-多利大鼠样品中观测到的PEA水平。
[0539] 在口服给予PEA、市售PEA产品Normast或PEA-前药I-9之后，评估棕榈酰基乙醇酰胺(PEA)的口服生物利用度。还以1mg/kg静脉内给予PEA。在给药后长达8小时，收集血液样品，并用合格的LC-MS/MS方法测定PEA和PEA-前药血浆浓度。使用Phoenix WinNonlin v.6.4软件通过非房室模型进行药物动力学分析。
[0540] 给药制剂的制备
[0541] 用于IV和PO给药的PEA(密苏里州圣路易斯(St.Louis,MO))。提供PEA-前药(批号261-SB-85)和Normast(Epitech Group，批号D106C6)。在给药当天以0.5mg/mL在包含10％solutol HS15、10％n-甲基吡咯烷酮(NMP)、10％聚乙二醇400(PEG400)以及70％水的媒剂中新鲜制备IV给药溶液。对于PO给药，在torpac胶囊里装载适量的PEA、PEA-前药或normast粉末。制备第2组、第3组和第4组中的剂量以对每只大鼠递送相似量的活性药物。PEA-前药具有63.2％(w/w)活性并且Normast含有72.7％活性(w/w)。第5组中的前药剂量是适合单个胶囊的最大粉末量。
[0542] 在禁食的雄性史泊格-多利大鼠中评估PEA和PEA-前药的药物动力学。每笼饲养一只大鼠。每只大鼠配有颈静脉插管(jugular vein cannula，JVC)用于血液收集。打算进行IV给药的大鼠配有额外的JVC用于给药。每个研究组一式三份给药。在给药前将大鼠禁食最少十二小时。在给药后四小时恢复食物。在整个研究过程中，动物可以自由饮水。
[0543] 动物给药
[0544] 通过JVC从大鼠收集血液样品(约300μL)并将其放置到含有肝素钠作为抗凝血剂和30μL 0.5M柠檬酸的冷冻聚丙烯管中。在整个处理过程中保持样品是冷冻的。将血液样品在4℃和3,000g下离心5分钟。然后将血浆(约150μL)转移到含有15μL 10％甲酸的冷冻的带标记的聚丙烯管中，放置在干冰上，并在保持在-60℃至-80℃的冷冻箱中储存。血液采样时间显示于表5a中。
[0545] 表5a：研究设计
[0546]
[0547]
[0548] NMP：n-甲基吡咯烷酮；*实际前药或药物产品的毫克数，未针对活性含量进行校正。
[0549] 以上描述了用于测定PEA和PEA-前药的LC-MS/MS方法(参见例如实例3)。
[0550] 药物动力学参数从血浆浓度的时间过程计算并呈现在表3至9中。药物动力学参数使用Phoenix WinNonlin(v6.4)软件，使用非房室模型测定。IV给药后的最大血浆浓度(C0)通过将前两个时间点外推回t＝0来估计。从数据中观测口服给药后的最大血浆浓度(Cmax)和达到最大血浆药物浓度的时间(Tmax)。使用线性梯形法则计算时间浓度曲线下面积(AUC)，计算到最后一个可定量的数据点，并且如果适用，外推至无穷大。需要至少三个可定量的数据点来确定AUC。从0.693/末端消除相的斜率计算血浆半衰期(t1/2)。平均停留时间MRT通过将矩曲线下面积(area under the moment curve，AUMC)除以AUC来计算。从剂量/AUC计算清除率(CL)。从CL*MRT(平均停留时间)计算稳态分布容积(Vss)。通过将各个PO剂量标准化的AUClast值除以平均IV AUClast值来确定生物利用度。对于药物动力学数据分析，任何低于定量限的样品都被处理为零。
[0551] 通过LC-MS/MS分析IV给药溶液。测量到的给药溶液浓度显示于表5b中。将给药溶液稀释到大鼠血浆中并一式三份进行分析。所有浓度都表示为mg/mL游离碱。不分析胶囊。在这些组的所有计算中使用标称给药浓度。
[0552] 表5b：测量到的给药溶液浓度(mg/mL).
[0553]
[0554] NMP：n-甲基吡咯烷酮
[0555] 在所有大鼠中都发现了内源性水平的PEA。通过减去在给药前样品中测量到的PEA浓度来校正血浆样品中测量到的PEA浓度。这些校正值在下表中报告，并用于确定药物动力学参数。任何为负的校正值都被报告为未确定(ND)。
[0556] 在以1mg/kg IV给药后，PEA的平均半衰期为0.596±0.165小时，平均清除率为15.1±3.15升/小时/千克，并且平均分布容积为9.12±0.832升/千克。结果显示于表5c和图4A和4B中。
[0557] 表5c：在雄性史泊格-多利大鼠中以1mg/kg静脉内施用PEA后PEA的各个和平均血浆浓度(ng/mL)和药物动力学参数(第1组).
[0558]
[0559] C0：外推至t＝0的最大血浆浓度；tmax：最大血浆浓度的时间；t1/2：半衰期，用于半衰期测定的数据点以粗体显示；MRTlast：平均停留时间，计算到最后一个可观测的时间点；CL：清除率；Vss：稳态分布容积；AUClast：曲线下面积，计算到最后一个可观测的时间点；
1
AUC∞：曲线下面积，外推至无穷大；ND：未确定；外推至t＝0。
1
AUC∞：曲线下面积，外推至无穷大；ND：未确定；外推至t＝0。
[0560] 在第2组中口服给予PEA(平均剂量为11.7mg/kg)后，几乎所有血浆样品都低于在给药前样品中测量到的内源性水平。在给药后2小时在一只动物中测量到的最高浓度是5.30ng/mL。无法确定该组的AUC或生物利用度值。结果显示于表5d中。
[0561] 表5d：在雄性史泊格-多利大鼠中以约10mg/kg口服PEA后PEA的各个和平均血浆浓度(ng/mL)和药物动力学参数(第2组).
[0562]
[0563] C0：最大血浆浓度；tmax：最大血浆浓度的时间；t1/2：半衰期，用于半衰期测定的数据点以粗体显示；MRTlast：平均停留时间，计算到最后一个可观测的时间点；AUClast：曲线下面积，计算到最后一个可观测的时间点；AUC∞：曲线下面积，外推至无穷大；ND：未确定。
[0564] 在第3组中在口服给予PEA-前药(平均剂量为11.7mg/kg活性当量)后，几乎所有血浆样品都低于在给药前样品中测量到的内源性水平。在给药后0.25小时在一只动物(大鼠914)中测量到的最高浓度是0.630ng/ml。这只动物中的生物利用度是0.108％。结果显示于表5e和5f中。
[0565] 表5e：在雄性史泊格-多利大鼠中以约16mg/kg口服PEA-前药后PEA-前药的各个和平均血浆浓度(ng/mL)和药物动力学参数(第3组).
[0566]
[0567] Cmax：最大血浆浓度；tmax：最大血浆浓度的时间；t1/2：半衰期，用于半衰期测定的数据点以粗体显示；MRTlast：平均停留时间，计算到最后一个可观测的时间点；AUClast：曲线下面积，计算到最后一个可观测的时间点；AUC∞：曲线下面积，外推至无穷大；ND：未确定；BLOQ：低于定量限(0.5ng/mL)。
[0568] 表5f：在雄性史泊格-多利大鼠中以约16mg/kg口服PEA前药后PEA的各个和平均血浆浓度(ng/mL)和药物动力学参数(第3组).
[0569]
[0570]
[0571] Cmax：最大血浆浓度；tmax：最大血浆浓度的时间；t1/2：半衰期，用于半衰期测定的数据点以粗体显示；MRTlast：平均停留时间，计算到最后一个可观测的时间点；AUClast：曲线下面积，计算到最后一个可观测的时间点；AUC∞：曲线下面积，外推至无穷大；ND：未确定；1通过该参数除以以mg/kg为单位的剂量确定的剂量标准化值；2通过各个剂量标准化的AUClast值除以平均IV AUClast值确定的生物利用度；3因为缺乏拖尾Cmax的可定量的数据点而未确定。
[0572] 在第4组中口服给予Normast(平均剂量为18.5mg/kg)后，许多血浆样品低于在给药前样品中测量到的内源性水平。平均最大血浆浓度(n＝3)是3.38±2.17ng/mL。平均生物利用度(n＝2)是0.561％。结果显示于表5g中。
[0573] 表5g：在雄性史泊格-多利大鼠中以约16mg/kg口服Normast后PEA的各个和平均血浆浓度(ng/mL)和药物动力学参数(第4组).
[0574]
[0575]
[0576] Cmax：最大血浆浓度；tmax：最大血浆浓度的时间；t1/2：半衰期，用于半衰期测定的数据点以粗体显示；MRTlast：平均停留时间，计算到最后一个可观测的时间点；AUClast：曲线下面积，计算到最后一个可观测的时间点；AUC∞：曲线下面积，外推至无穷大；ND：未确定；1通过该参数除以以mg/kg为单位的剂量确定的剂量标准化值；2通过各个剂量标准化的AUClast值除以平均IV AUClast值确定的生物利用度；3因为缺乏可定量的数据点拖尾Cmax而未确定。
[0577] 在第5组中在口服给予PEA-前药(平均剂量为90.6mg/kg活性当量)后，许多血浆样品低于在给药前样品中测量到的内源性水平。平均最大血浆浓度(n＝3)是2.52±0.829ng/mL。在一只动物中测定的生物利用度是0.124％。结果显示于表5h和5j中。
[0578] 表5h：在雄性史泊格-多利大鼠中以约126mg/kg口服PEA-前药后PEA-前药的各个和平均血浆浓度(ng/mL)和药物动力学参数(第5组).
[0579]
[0580]
[0581] Cmax：最大血浆浓度；tmax：最大血浆浓度的时间；t1/2：半衰期，用于半衰期测定的数据点以粗体显示；MRTlast：平均停留时间，计算到最后一个可观测的时间点；AUClast：曲线下面积，计算到最后一个可观测的时间点；AUC∞：曲线下面积，外推至无穷大；ND：未确定；BLOQ：低于定量限(0.5ng/mL)。
[0582] 表5j：以在雄性史泊格-多利大鼠中约126mg/kg口服PEA前药后PEA的各个和平均血浆浓度(ng/mL)和药物动力学参数(第5组).
[0583]
[0584] Cmax：最大血浆浓度；tmax：最大血浆浓度的时间；t1/2：半衰期，用于半衰期测定的数据点以粗体显示；MRTlast：平均停留时间，计算到最后一个可观测的时间点；AUClast：曲线下面积，计算到最后一个可观测的时间点；AUC∞：曲线下面积，外推至无穷大；ND：未确定；1通过该参数除以以mg/kg为单位的剂量确定的剂量标准化值；2通过各个剂量标准化的AUClast值除以平均IV AUClast值确定的生物利用度；3因为缺乏可定量的数据点拖尾Cmax而未确定。
[0585] 在任何血浆样品中都检测不到PEA-前药。没有测定PEA-前药的药物动力学参数。
[0586] 实例6：兔血浆样品中的PEA水平
[0587] 本实例描述了在口服本文中所提供的化合物之后在兔血浆样品中观测到的PEA水平。在早晨给药后约五小时采集血液样品。
[0588] 先前已经证实PEA-前药I-9在未处理的血浆样品中的不稳定性(参见例如实例3-5)。来自当前研究的血浆样品未经处理以延长前药的收集后稳定性。相反，在提取和分析之前，使所有样品在室温下静置，解冻并且不加处理，持续四小时。此策略允许样品中任何剩余的前药转化为PEA。所有报告的浓度均为样品中的总PEA。
[0589] 用先前开发的用于检测棕榈酰基乙醇酰胺(PEA)的LC-MS/MS方法分析了七十九个新西兰白兔血浆样品。共收到79份血浆样品进行分析。所有样品收到时均以良好状态冷冻。将样品储存在-80℃直至分析。
[0590] 使用用于测定血浆中的PEA的LC-MS/MS方法来定量本研究中的样品。参见例如实例3。使用实例3-5中描述的方法提取研究样品。
[0591] 结果显示于表6a至6d中。
[0592] 表6a.：第1组(经过媒剂处理的)血浆样品中的各个和平均PEA浓度(ng/ML).
[0593]
[0594] BLOQ：低于定量限(2.5ng/mL)；ND：未确定。
[0595] 表6b：第2组(经过Normast以32毫克/千克/天处理)血浆样品中的各个和平均PEA浓度(ng/mL)
[0596]
[0597] BLOQ：低于定量限(2.5ng/mL)；ND：未确定。
[0598] 表6c：第3组(经过PEA-前药以32毫克/千克/天处理)血浆样品中的各个和平均PEA浓度(ng/mL)
[0599]
[0600]
[0601] BLOQ：低于定量限(2.5ng/mL)；ND：未确定。
[0602] 表6d：第4组(经过PEA-前药以160毫克/千克/天处理)血浆样品中的各个和平均PEA浓度(ng/mL)
[0603]
[0604] BLOQ：低于定量限(2.5ng/mL)；ND：未确定。
[0605] 报告来自媒剂组(第1组)的一个样品的可测量的PEA浓度(2.77ng/mL，第3天，动物R2769)。这个阳性结果可能是因为PEA是内源性脂肪酸这个事实。来自媒剂组和给药前时间点的几个样品接近该方法的LLOQ(2.5ng/mL)，而这是唯一超过LLOQ的样品。
[0606] 实例7：在雄性史泊格-多利大鼠中口服(PO)PEA-前药后，测定PEA的生物利用度[0607] 本实例描述在雄性史泊格-多利大鼠中施用PEA前药I-2、I-3、I-5、I-6、I-7、I-9和I-11后PEA的口服生物利用度。
[0608] 在口服七种不同的PEA-前药后，评估棕榈酰基乙醇酰胺(PEA)的口服生物利用度。口服前药以递送10mg/kg的总PEA剂量。在口服PEA-前药之后，用合格的LC-MS/MS方法测定PEA血浆浓度。
[0609] 给药制剂的制备
[0610] 给予前药以便施用总剂量为10mg/kg的PEA。在包含10％Solutol、10％n-甲基吡咯烷酮(NMP)、10％聚乙二醇400(PEG400)以及70％水的媒剂中配制每种前药。在给药当天新鲜制备制剂。
[0611] 动物给药
[0612] 评估PEA在禁食的雄性史泊格-多利大鼠中的药物动力学。每笼饲养一只大鼠。每只大鼠配有颈静脉插管(JVC)用于血液收集。每个研究组一式三份给药。在给药前将大鼠禁食最少十二小时。在给药后四小时恢复食物。在整个研究过程中，动物可以自由饮水。
[0613] 通过JVC从大鼠收集血液样品(约300μL)并将其放置到含有肝素钠作为抗凝血剂和30μL 0.5M柠檬酸的冷冻聚丙烯管中。在整个处理过程中保持样品是冷冻的。将血液样品在4℃和3,000g下离心5分钟。然后将血浆(约150μL)转移到含有15μL 10％甲酸的冷冻的带标记的聚丙烯管中，放置在干冰上，并在保持在-60℃至-80℃的冷冻箱中储存。血液采样时间显示于表7a中。
[0614] 表7a：研究设计
[0615]
[0616] NMP：n-甲基吡咯烷酮；*实际前药剂量，全部递送10mg/kg的PEA。
[0617] 以上描述了用于测定PEA和PEA-前药的LC-MS/MS方法(参见例如实例3)。
[0618] 药物动力学参数从血浆浓度的时间过程计算并呈现在表7b-7h和图7A-7N中。从数据中观测口服给药后的最大血浆浓度(Cmax)和达到最大血浆药物浓度的时间(Tmax)。使用线性梯形法则计算时间浓度曲线下面积(AUC)，计算到最后一个可定量的数据点，并且如果适用，外推至无穷大。需要至少三个可定量的数据点来确定AUC。从0.693/末端消除相的斜率计算血浆半衰期(t1/2)。平均停留时间MRT通过将矩曲线下面积(area under the moment curve，AUMC)除以AUC来计算。生物利用度通过将各个剂量标准化的PO AUClast值除以平均IV AUClast值(IV数据，实例5)来确定。对于药物动力学数据分析，低于定量限的样品被处理为零。
[0619] 结果
[0620] 在本研究中，在雄性史泊格-多利大鼠中口服PEA前药后未观测到不良反应。
[0621] 没有通过LC-MS/MS分析给药溶液。浓度表示为mg/ml游离碱。在所有计算中使用标称给药水平。
[0622] PEA的各个和平均血浆浓度和药物动力学参数显示于表7b-7h中。数据表示为ng/mL游离药物。在计算平均值时不使用低于定量限的样品。在图7A-7N中绘制血浆浓度对时间数据的图。在所有大鼠中都发现了内源性水平的PEA。通过减去在给药前样品中测量到的PEA浓度来校正血浆样品中测量到的PEA浓度。这些校正值在下表中报告，并用于确定药物动力学参数。任何为负的校正值都被报告为未确定(ND)。
[0623] 在PO给予I-9(第1组)之后，在给药后1小时观测到最大血浆浓度(平均值为10.4±2.29ng/mL)。因为缺乏拖尾Cmax的可定量的数据点，所以未确定平均半衰期。基于剂量标准化的AUClast的平均暴露量是1.61±0.692h*kg*ng/mL/mg。基于来自研究实例5的IV数据，I-
9的平均口服生物利用度是2.60±1.11％。结果显示于表7b和图5A和5B中。
9的平均口服生物利用度是2.60±1.11％。结果显示于表7b和图5A和5B中。
[0624] 表7b：在雄性史泊格-多利大鼠中以16/mg/kg口服I-9后PEA的各个和平均血浆浓度(ng/ml)和药物动力学参数.
[0625] 口服(16mg/kg I-9相当于10mg/kg PEA)
[0626]
[0627]
[0628] Cmax：最大血浆浓度；tmax：最大血浆浓度的时间；t1/2：半衰期，用于半衰期测定的数据点以粗体显示；MRTlast：平均停留时间，计算到最后一个可观测的时间点；AUClast：曲线下面积，计算到最后一个可观测的时间点；AUC∞：曲线下面积，外推至无穷大；ND：未确定；1
BLOQ：低于定量限(0.5ng/mL)；通过该参数除以以mg/kg为单位的标称剂量进行剂量标准化；2通过各个剂量标准化的口服AUClast值除以来自实例5的平均IV AUClast值62.1h*ng/mL确定的生物利用度；3因为缺乏拖尾Cmax的可定量的数据点而未确定。
BLOQ：低于定量限(0.5ng/mL)；通过该参数除以以mg/kg为单位的标称剂量进行剂量标准化；2通过各个剂量标准化的口服AUClast值除以来自实例5的平均IV AUClast值62.1h*ng/mL确定的生物利用度；3因为缺乏拖尾Cmax的可定量的数据点而未确定。
[0629] 在PO给予I-6(第2组)之后，在给药后十五分钟观测到最大血浆浓度(平均值为11.7±5.39ng/mL)。PO给药后的平均半衰期是1.96±2.04小时。基于剂量标准化的AUClast的平均暴露量是1.40±0.737h*kg*ng/mL/mg。基于来自实例5的IV数据，I-6的平均口服生物利用度是2.25±1.19％。结果显示于表7c和图5C和5D中。
[0630] 表7c：在雄性史泊格-多利大鼠中以19mg/kg口服I-6后PEA的各个和平均血浆浓度(ng/mL)和药物动力学参数(第2组).
[0631] 口服(19mg/kg I-6相当于10mg/kg PEA)
[0632]
[0633]
[0634] Cmax：最大血浆浓度；tmax：最大血浆浓度的时间；t1/2：半衰期，用于半衰期测定的数据点以粗体显示；MRTlast：平均停留时间，计算到最后一个可观测的时间点；AUClast：曲线下面积，计算到最后一个可观测的时间点；AUC∞：曲线下面积，外推至无穷大；ND：未确定；BLOQ：低于定量限(2.5ng/mL)；1通过该参数除以以mg/kg为单位的标称剂量进行剂量标准化；2通过各个剂量标准化的口服AUClast值除以来自实例5的平均IV AUClast值62.1h*ng/mL确定的生物利用度；3因为AUC∞超过AUClast大于25％外推而未确定。
[0635] 在PO给予I-5(第3组)之后，在给药后十五分钟到三十分钟之间观测到最大血浆浓度(平均值为12.2±5.52ng/mL)。PO给药后的平均半衰期是3.15小时。基于剂量标准化的AUClast的平均暴露量是2.38±1.47h*kg*ng/mL/mg。基于来自实例5的IV数据，I-5的平均口服生物利用度是3.84±2.37％。结果显示于表7d和图5E和5F中。
[0636] 表7d：在雄性史泊格-多利大鼠中以19.7mg/kg口服I-5后PEA的各个和平均血浆浓度(ng/mL)和药物动力学参数(第3组).
[0637] 口服(19.7mg/kg I-5相当于10mg/kg PEA)
[0638]
[0639]
[0640] Cmax：最大血浆浓度；tmax：最大血浆浓度的时间；t1/2：半衰期，用于半衰期测定的数据点以粗体显示；MRTlast：平均停留时间，计算到最后一个可观测的时间点；AUClast：曲线下面积，计算到最后一个可观测的时间点；AUC∞：曲线下面积，外推至无穷大；ND：未确定；BLOQ：低于定量限(2.5ng/mL)；1通过该参数除以以mg/kg为单位的标称剂量进行剂量标准化；2通过各个剂量标准化的口服AUClast值除以来自实例5的平均IV AUClast值62.1h*ng/mL确定的生物利用度；3因为缺乏拖尾Cmax的可定量的数据点而未确定。
[0641] 在PO给予I-3(第4组)之后，在给药后三十分钟到2小时之间观测到最大血浆浓度(平均值为9.83±3.69ng/mL)。平均半衰期未确定；然而，一只大鼠的半衰期是0.779小时。基于剂量标准化的AUClast的平均暴露量是1.99±0.338h*kg*ng/mL/mg。基于来自实例5的IV数据，I-3的平均口服生物利用度是3.20±0.544％。结果显示于表7e和图5G和5H中。
[0642] 表7e：在雄性史泊格-多利大鼠中以24.5mg/kg口服I-3后PEA的各个和平均血浆浓度(ng/mL)和药物动力学参数(第4组).
[0643] 口服(24.5mg/kg I-3相当于10mg/kg PEA)
[0644]
[0645]
[0646] Cmax：最大血浆浓度；tmax：最大血浆浓度的时间；t1/2：半衰期，用于半衰期测定的数据点以粗体显示；MRTlast：平均停留时间，计算到最后一个可观测的时间点；AUClast：曲线下面积，计算到最后一个可观测的时间点；AUC∞：曲线下面积，外推至无穷大；ND：未确定；1
BLOQ：低于定量限(2.5ng/mL)；通过该参数除以以mg/kg为单位的标称剂量进行剂量标准化；2通过各个剂量标准化的口服AUClast值除以来自实例5的平均IV AUClast值62.1h*ng/mL确定的生物利用度；3因为缺乏拖尾Cmax的可定量的数据点而未确定。
BLOQ：低于定量限(2.5ng/mL)；通过该参数除以以mg/kg为单位的标称剂量进行剂量标准化；2通过各个剂量标准化的口服AUClast值除以来自实例5的平均IV AUClast值62.1h*ng/mL确定的生物利用度；3因为缺乏拖尾Cmax的可定量的数据点而未确定。
[0647] 在PO给予I-2(第5组)之后，在给药后十五分钟到三十分钟之间观测到最大血浆浓度(平均值为8.83±1.23ng/mL)。平均半衰期未确定；然而，一只大鼠的半衰期是0.797小时。基于剂量标准化的AUClast的平均暴露量是0.854±0.164h*kg*ng/mL/mg。基于来自实例5的IV数据，I-2的平均口服生物利用度是1.38±0.264％。结果显示于表7f和图5I和5J中。
[0648] 表7f：在雄性史泊格-多利大鼠中以12.5mg/kg口服I-2后PEA的各个和平均血浆浓度(ng/mL)和药物动力学参数(第5组).
[0649] 口服(12.5mg/kg I-2相当于10mg/kg PEA)
[0650]
[0651]
[0652] Cmax：最大血浆浓度；tmax：最大血浆浓度的时间；t1/2：半衰期，用于半衰期测定的数据点以粗体显示；MRTlast：平均停留时间，计算到最后一个可观测的时间点；AUClast：曲线下面积，计算到最后一个可观测的时间点；AUC∞：曲线下面积，外推至无穷大；ND：未确定；BLOQ：低于定量限(2.5ng/mL)；1通过该参数除以以mg/kg为单位的标称剂量进行剂量标准化；2通过各个剂量标准化的口服AUClast值除以来自实例5的平均IV AUClast值62.1h*ng/mL确定的生物利用度；3因为缺乏拖尾Cmax的可定量的数据点而未确定；4因为AUC∞超过AUClast大于25％外推而未确定；5因为定义末端消除相的线具有r2<0.85而未确定。
[0653] 在PO给予I-11(第6组)之后，在给药后十五分钟到三十分钟之间观测到最大血浆浓度(平均值为15.5±3.01ng/mL)。平均半衰期未确定；然而，一只大鼠的半衰期是0.685小时。基于剂量标准化的AUClast的平均暴露量是2.79±0.808h*kg*ng/mL/mg。基于来自实例5的IV数据，I-11的平均口服生物利用度是4.49±1.30％。结果显示于表7g和图5K和5L中。
[0654] 表7g：在雄性史泊格-多利大鼠中以20.7mg/kg口服I-11后PEA的各个平均血浆浓度(ng/mL)和药物动力学参数(第6组).
[0655] 口服(20.7mg/kg I-11相当于10mg/kg PEA)
[0656]
[0657]
[0658] Cmax：最大血浆浓度；tmax：最大血浆浓度的时间；t1/2：半衰期，用于半衰期测定的数据点以粗体显示；MRTlast：平均停留时间，计算到最后一个可观测的时间点；AUClast：曲线下面积，计算到最后一个可观测的时间点；AUC∞：曲线下面积，外推至无穷大；ND：未确定；BLOQ：低于定量限(2.5ng/mL)；1通过该参数除以以mg/kg为单位的标称剂量进行剂量标准化；2通过各个剂量标准化的口服AUClast值除以来自实例5的平均IV AUClast值62.1h*ng/mL
3 2
确定的生物利用度；因为定义末端消除相的线具有r<0.85而未确定。
3 2
确定的生物利用度；因为定义末端消除相的线具有r<0.85而未确定。
[0659] 在PO给予I-7(第7组)之后，在给药后零分钟到十五分钟小时之间观测到最大血浆浓度(平均值为3.52ng/mL)。平均半衰期未确定；然而，一只大鼠的半衰期是0.736小时。基于剂量标准化的AUClast的平均暴露量1.23h*kg*ng/mL/mg。基于来自实例5的IV数据，I-7的平均口服生物利用度是1.98％。结果显示于表7h和图5M和5N中。
[0660] 表7h：在雄性史泊格-多利大鼠中以24.5mg/kg口服I-7后PEA的各个和平均血浆浓度(mg/mL)和药物动力学参数(第7组).
[0661] 口服(24.5mg/kg I-7相当于10mg/kg PEA)
[0662]
[0663]
[0664] Cmax：最大血浆浓度；tmax：最大血浆浓度的时间；t1/2：半衰期，用于半衰期测定的数据点以粗体显示；MRTlast：平均停留时间，计算到最后一个可观测的时间点；AUClast：曲线下面积，计算到最后一个可观测的时间点；AUC∞：曲线下面积，外推至无穷大；ND：未确定；BLOQ：低于定量限(2.5ng/mL)；1通过该参数除以以mg/kg为单位的标称剂量进行剂量标准化；2通过各个剂量标准化的口服AUClast值除以来自实例5的平均IV AUClast值62.1h*ng/mL确定的生物利用度；3因为定义末端消除相的线具有r2<0.85而未确定。
[0665] 实例8：在人类、大鼠、小鼠以及狗肝脏微粒体；人类、大鼠、小鼠以及狗肝脏S9级分；人类、大鼠、小鼠以及狗肠道S9级分；人类、大鼠、小鼠以及狗血浆；以及模拟肠液中的PEA稳定性.
[0666] 本实例描述了在以下各者中观测到的PEA稳定性：1)人类、大鼠、小鼠以及狗肝脏微粒体；2)人类、大鼠、小鼠、狗肝脏S9级分；人类、大鼠、小鼠以及狗肠道S9级分；4)人类、大鼠、小鼠以及狗血浆；以及5)含有各种酶的模拟肠液。
[0667] 肝脏微粒体稳定性
[0668] 提供混合性别人类(批号1210347)、雄性史泊格-多利大鼠(批号1310030)、雄性CD-1小鼠(批号1510043)以及雄性比格犬(Beagle dog)(批号0810143)肝脏微粒体。如下所述制备没有辅因子的反应混合物。将测试物以1μM的最终浓度加入反应混合物中。对照化合物睾酮与测试物同时在单独的反应中进行。将反应混合物的等分试样(没有辅因子)在37℃的振荡水浴中平衡3分钟。通过加入辅因子引发反应，并在37℃的振荡水浴中孵育混合物。在0、10、20、30和60分钟取出等分试样(100μL)。立即将测试物样品与300μL含有1％甲酸的冰冷乙腈组合。立即将对照样品与400μL含有0.1％甲酸和内标的冰冷50/50乙腈(ACN)/dH2O组合以终止反应。然后将样品混合并离心以沉淀蛋白质。在匹配的基质中制备校准标准品。对于所给予的前药和所期望的药物(PEA)，使用电喷雾电离通过LC-MS/MS分析样品和标准品。分析条件概述于附录8-1中。将每个时间点的测试物浓度与时间0时的测试物浓度进行比较，以确定每个时间点的剩余百分比。使用GraphPad软件，拟合单相指数衰减方程来计算半衰期。结果显示于表8a和8b中。
[0669] 反应组成
[0670]
[0671] 表8a.在人类、大鼠、小鼠以及狗肝脏微粒体中观测到的PEA稳定性.
[0672]
[0673]
[0674] a当计算的半衰期比实验持续时间长时，半衰期表示为>最长孵育时间。类似地，如果计算的半衰期比最短时间点小，那么半衰期表示为<该时间点，并且计算的半衰期也列在圆括号中。
[0675] b内在清除率(CLint)根据CLint＝k/P计算，其中k是消除速率常数并且P是孵育中的蛋白质浓度。
[0676]
[0677] 表8b.测量到的药物浓度.
[0678]
[0679]
[0680] 肝脏S9稳定性
[0681] 提供混合性别人类(批号1210091)、雄性史泊格-多利大鼠(批号1410265)、雄性CD-1小鼠(批号1510255)以及雄性比格犬(批号1210278)肝脏S9级分。如下所述制备没有辅因子的反应混合物。将测试物以1μM的最终浓度加入反应混合物中。对照化合物睾酮和7-羟基香豆素(7-HC)与测试物同时在单独的反应中进行。将反应混合物的等分试样(没有辅因子混合物)在37℃的振荡水浴中平衡3分钟。通过加入辅因子混合物(参见下文)引发反应，并且然后在37℃的振荡水浴中孵育混合物。在0、10、20、30和60分钟取出等分试样(100μL)。立即将测试物样品与300μL含有1％甲酸的冰冷乙腈组合。立即将对照样品与400μL含有
0.1％甲酸和内标的冰冷50/50乙腈(ACN)/dH2O组合以终止反应。然后将样品混合并离心以沉淀蛋白质。在匹配的基质中制备校准标准品。对于所给予的前药和所期望的药物(PEA)，使用电喷雾电离通过LC-MS/MS分析样品和标准品。分析条件概述于附录8-1中。将每个时间点的测试物浓度与时间0时的测试物浓度进行比较，以确定每个时间点的剩余百分比。使用GraphPad软件，拟合单相指数衰减方程来计算半衰期。结果显示于表8c和8d中。
0.1％甲酸和内标的冰冷50/50乙腈(ACN)/dH2O组合以终止反应。然后将样品混合并离心以沉淀蛋白质。在匹配的基质中制备校准标准品。对于所给予的前药和所期望的药物(PEA)，使用电喷雾电离通过LC-MS/MS分析样品和标准品。分析条件概述于附录8-1中。将每个时间点的测试物浓度与时间0时的测试物浓度进行比较，以确定每个时间点的剩余百分比。使用GraphPad软件，拟合单相指数衰减方程来计算半衰期。结果显示于表8c和8d中。
[0682] 反应组成
[0683]
[0684]
[0685] 表8c.在人类、大鼠、小鼠以及狗肝脏S9中观测到的PEA稳定性.
[0686]
[0687]
[0688] a当计算的半衰期比实验持续时间长时，半衰期表示为>最长孵育时间。类似地，如果计算的半衰期比最短时间点小，那么半衰期表示为<该时间点，并且计算的半衰期也列在圆括号中。
[0689] b内在清除率(CLint)根据CLint＝k/P计算，其中k是消除速率常数并且P是孵育中的蛋白质浓度。
[0690]
[0691] 表8d.测量到的药物浓度.
[0692]
[0693]
[0694] 肠道S9级分稳定性
[0695] 提供混合性别人类(批号1410073)、雄性史泊格-多利大鼠(批号1510303)、雄性CD-1小鼠(批号1510194)以及雄性比格犬(批号1510226)肠道S9级分。如下所述制备没有辅因子的反应混合物。将测试物以1μM的最终浓度加入反应混合物中。对照化合物睾酮和7-羟基香豆素与测试物同时在单独的反应中进行。将反应混合物的等分试样(没有辅因子混合物)在37℃的振荡水浴中平衡3分钟。通过加入辅因子混合物引发反应，并在37℃的振荡水浴中孵育混合物。在0、10、20、30和60分钟取出等分试样(100μL)。立即将测试物样品与300μL含有1％甲酸的冰冷乙腈组合。立即将对照样品与400μL含有0.1％甲酸和内标的冰冷50/50乙腈(ACN)/dH2O组合以终止反应。然后将样品混合并离心以沉淀蛋白质。在匹配的基质中制备校准标准品。对于所给予的前药和所期望的药物(PEA)，使用电喷雾电离通过LC-MS/MS分析样品和标准品。分析条件概述于附录8-1中。将每个时间点的测试物浓度与时间0时的测试物浓度进行比较，以确定每个时间点的剩余百分比。使用GraphPad软件，拟合单相指数衰减方程来计算半衰期。结果显示于表8e和8f中。
[0696] 反应组成
[0697]
[0698]
[0699] 表8e.在人类、大鼠、小鼠以及狗肠道S9级分中观测到的PEA稳定性.
[0700]
[0701] a当计算的半衰期比实验持续时间长时，半衰期表示为>最长孵育时间。类似地，如果计算的半衰期比最短时间点小，那么半衰期表示为<该时间点，并且计算的半衰期也列在圆括号中。
[0702] b内在清除率(CLint)根据CLint＝k/P计算，其中k是消除速率常数并且P是孵育中的蛋白质浓度。
[0703]
[0704] 表8f.测量到的药物浓度.
[0705]
[0706]
[0707] 血浆稳定性
[0708] 在用肝素钠收集的混合性别人类血浆(批号GLP530-5)、雄性史泊格-多利大鼠(批号RAT297944、RAT313140)、雄性CD-1小鼠(批号MSE237700)以及雄性比格犬(批号BGL87670、BGL82614)中进行研究。在开始实验之前，将血浆调整到pH 7.4。首先为测试物制备DMSO储备液。将DMSO溶液的等分试样加入700μL血浆中，该血浆已经预热至37℃，最终测试物浓度为1μM。在每个时间点(0、15、30、60和120分钟)取得等分试样(100μL)并将其立即与300μL含有1％甲酸的冰冷乙腈混合。将样品储存在4℃下直至实验结束。在对最终时间点采样后，将培养板混合，并且然后以3,000rpm离心10分钟。在匹配的基质中制备校准标准品。对于所给予的前药和所期望的药物(PEA)，使用电喷雾电离通过LC-MS/MS分析样品和标准品。分析条件概述于附录8-1中。将每个时间点的测试物浓度与时间0时的测试物浓度进行比较，以确定每个时间点的剩余百分比。使用GraphPad软件，拟合单相指数衰减方程来计算半衰期。结果显示于表8g和8h中。
[0709] 表8g.在人类、大鼠、小鼠以及狗血浆中观测到的PEA稳定性.
[0710]
[0711]
[0712] 表8h.测量到的药物浓度.
[0713]
[0714]
[0715] 模拟肠液稳定性
[0716] 在模拟肠液中在各种酶的存在下进行研究。模拟肠液通过将6.8g磷酸二氢钾溶解在1.0L水中而制备。取得此溶液的等分试样并将pH调整到6.8。然后将各种酶掺入等分试样中以进行每个实验。首先为测试物制备DMSO储备液。将DMSO溶液的等分试样加入700μL基质中，该基质已经预热至37℃，最终测试物浓度为1μM。在每个时间点(0、15、30、60和120分钟)取得等分试样(100μL)并将其立即与300μL含有1％甲酸的冰冷乙腈混合。将样品储存在4℃下直至实验结束。在对最终时间点采样后，将培养板混合，并且然后以3,000rpm离心10分钟。在匹配的基质中制备校准标准品。对于所给予的前药和所期望的药物(PEA)，使用电喷雾电离通过LC-MS/MS分析样品和标准品。分析条件概述于附录8-1中。将每个时间点的测试物浓度与时间0时的测试物浓度进行比较，以确定每个时间点的剩余百分比。使用GraphPad软件，拟合单相指数衰减方程来计算半衰期。结果显示于表8i和8j中。
[0717] 表8i：在模拟肠液(SIF)中观测到的PEA稳定性.
[0718]
[0719]
[0720] 表8j.测量到的药物浓度.
[0721]
[0722]
[0723] 发现PEA在胰酶中是内源性的，并且因此在分析样品中未定量。
[0724] 附录8-1
[0725] 液相色谱
[0726]
[0727] 质谱
[0728]
[0729]测试物 Q1/Q3 DP EP CE CXP IS TEM CAD CUR GS1 GS2
I-6 +562.6/282.4 133 10 29 19 5500 500 7 30 50 50
I-2 +370.3/282.4 107 10 21 18 5500 500 7 30 50 50
I-3 +726.6/282.4 129 10 38 18 5500 500 7 30 50 50
I-5 +584.5/282.4 135 10 24 20 5500 500 7 30 50 50
I-11 +614.6/282.4 123 10 35 20 5500 500 7 30 50 50
I-7 +724.5/282.4 120 10 40 19 5500 500 7 30 50 50
PEA +300.3/62.1 123 10 29 10 5500 500 7 30 50 50
I-6 +562.6/282.4 133 10 29 19 5500 500 7 30 50 50
I-2 +370.3/282.4 107 10 21 18 5500 500 7 30 50 50
I-3 +726.6/282.4 129 10 38 18 5500 500 7 30 50 50
I-5 +584.5/282.4 135 10 24 20 5500 500 7 30 50 50
I-11 +614.6/282.4 123 10 35 20 5500 500 7 30 50 50
I-7 +724.5/282.4 120 10 40 19 5500 500 7 30 50 50
PEA +300.3/62.1 123 10 29 10 5500 500 7 30 50 50
[0730] 液相色谱
[0731]
[0732]
[0733] 质谱
[0734]
[0735]测试物 Q1/Q3 DP EP CE CXP IS TEM CAD CUR GS1 GS2
I-9 +562.6/282.4 107 10 29 19 5500 500 7 20 20 30
PEA +370.3/282.4 123 10 29 10 5500 500 7 20 20 30
I-9 +562.6/282.4 107 10 29 19 5500 500 7 20 20 30
PEA +370.3/282.4 123 10 29 10 5500 500 7 20 20 30
[0736] 实例9：在雄性史泊格-多利大鼠中口服PEA-前药后，测定棕榈酰基乙醇酰胺(PEA)的生物利用度.
[0737] 本实例描述了在雄性史泊格-多利大鼠中施用PEA前药后PEA的口服生物利用度。
[0738] 在口服PEA前药I-13之后，评估雄性史泊格-多利大鼠中棕榈酰基乙醇酰胺(PEA)的口服生物利用度。I-13以24.3mg/kg口服(PO)给予，这等同于10mg/kg剂量的PEA。在给药后长达8小时收集血液样品，并通过LC-MS/MS测定PEA的血浆浓度。因为缺乏可定量的数据点，所以未确定药物动力学参数，但Cmax和tmax例外。在PO给予I-13(在20％(Solutol HS15:NMP1:1)、10％PEG400、70％H2O中)之后，几乎所有大鼠血浆样品都低于定量限。在给药后2小时到8小时之间观测到最大血浆浓度(平均值为2.70±0.0681ng/mL)。没有测定AUC或生物利用度值。
[0739] 给药制剂的制备
[0740] 给予前药以便施用总剂量为10mg/kg的PEA。在包含10％Solutol HS15、10％n-甲基吡咯烷酮(NMP)、10％聚乙二醇400(PEG400)以及70％水的媒剂中配制前药。在给药当天新鲜制备制剂。
[0741] 动物给药
[0742] 评估PEA在禁食的雄性史泊格-多利大鼠中的药物动力学。每笼饲养一只大鼠。每只大鼠配有颈静脉插管(JVC)用于血液收集。每个研究组一式三份给药。在给药前将大鼠禁食最少十二小时。在给药后四小时恢复食物。在整个研究过程中，动物可以自由饮水。
[0743] 通过JVC从大鼠收集血液样品(约300μL)并将其放置到含有肝素钠作为抗凝血剂和30μL 0.5M柠檬酸的冷冻聚丙烯管中。在整个处理过程中保持样品是冷冻的。将血液样品在4℃和3,000g下离心5分钟。然后将血浆(约150μL)转移到含有15μL 10％甲酸的冷冻的带标记的聚丙烯管中，放置在干冰上，并在保持在-60℃至-80℃的冷冻箱中储存。血液采样时间显示于表9a中。
[0744] 表9a：研究设计.
[0745]
[0746] *所有剂量都是基于mg/kg的前药，并且递送10mg/kg的活性药物PEA。
[0747] 以上描述了用于测定PEA和PEA-前药的LC-MS/MS方法(参见例如实例3)。
[0748] 因为缺乏可定量的数据点，所以未确定药物动力学参数，但Cmax和tmax例外。从数据中观测口服给药后的最大血浆浓度(Cmax)和达到最大血浆药物浓度的时间(Tmax)。对于药物动力学数据分析，低于定量限的样品被处理为零。
[0749] 结果
[0750] 在本研究中，在雄性史泊格-多利大鼠中口服PEA前药后未观测到不良反应。
[0751] 没有通过LC-MS/MS分析给药溶液。在所有计算中使用标称给药水平。PEA的各个和平均血浆浓度显示于表9b中。数据表示为ng/mL游离药物。在计算平均值时不使用低于定量限的样品。在图6中绘制血浆浓度对时间数据的图。在所有大鼠中发现的PEA的内源性水平均低于定量限；并且因此，未校正在血浆样品中测量到的PEA浓度。
[0752] 表9b.在雄性史泊格-多利大鼠中以24.3mg/kg口服I-13(在20％(Solutol HS15:NMP 1:1)、10％PEG400、70％H2O中)后PEA的各个和平均血浆浓度(ng/mL)和药物动力学参数.
[0753] 口服(24.3mg/kg I-13相当于10mg/kg PEA)
[0754]
[0755] Cmax：最大血浆浓度；tmax：最大血浆浓度的时间；t1/2：半衰期，用于半衰期测定的数据点以粗体显示；MRTlast：平均停留时间，计算到最后一个可观测的时间点；AUClast：曲线下面积，计算到最后一个可观测的时间点；AUC∞：曲线下面积，外推至无穷大；ND：未确定；BLOQ：低于定量限(2.5ng/mL)；1因为缺乏可定量的数据点而未确定。
[0756] 实例10：在人类、大鼠、小鼠以及狗肝脏微粒体；人类、大鼠、小鼠以及狗肝脏S9级分；人类、大鼠、小鼠以及狗肠道S9级分；人类、大鼠、小鼠以及狗血浆；以及模拟肠液中的PEA稳定性.
[0757] 本实例描述了在以下各者中观测到的PEA稳定性：1)人类、大鼠、小鼠以及狗肝脏微粒体；2)人类、大鼠、小鼠、狗肝脏S9级分；人类、大鼠、小鼠以及狗肠道S9级分；4)人类、大鼠、小鼠以及狗血浆；以及5)含有各种酶的模拟肠液。
[0758] 肝脏微粒体稳定性
[0759] 提供混合性别人类(批号1010420)、雄性史泊格-多利大鼠(批号1510115)、雄性CD-1小鼠(批号1510043)以及雄性比格犬(批号0810143)肝脏微粒体。如下所述制备没有辅因子的反应混合物。将测试物以1μM的最终浓度加入反应混合物中。对照化合物睾酮与测试物同时在单独的反应中进行。将反应混合物的等分试样(没有辅因子)在37℃的振荡水浴中平衡5分钟。通过加入辅因子引发反应，并在37℃的振荡水浴中孵育混合物。在0、10、20、30和60分钟取出等分试样(100μL)。立即将测试物样品与300μL含有1％甲酸的冰冷乙腈组合。立即将对照样品与400μL含有0.1％甲酸和内标的冰冷50/50乙腈(ACN)/dH2O组合以终止反应。然后将样品混合并离心以沉淀蛋白质。在匹配的基质中制备校准标准品。对于所给予的前药和所期望的药物(PEA)，使用电喷雾电离通过LC-MS/MS分析样品和标准品。分析条件概述于附录10-1中。将每个时间点的测试物浓度与时间0时的测试物浓度进行比较，以确定每个时间点的剩余百分比。使用GraphPad软件，拟合单相指数衰减方程来计算半衰期。结果显示于表10a和10b中。
[0760] 反应组成
[0761]
[0762] 表10a.在人类、大鼠、小鼠以及狗肝脏微粒体中观测到的PEA稳定性.
[0763]
[0764] a当计算的半衰期比实验持续时间长时，半衰期表示为>最长孵育时间。类似地，如果计算的半衰期比最短时间点小，那么半衰期表示为<该时间点，并且计算的半衰期也列在圆括号中。
[0765] b内在清除率(CLint)根据CLint＝k/P计算，其中k是消除速率常数并且P是孵育中的蛋白质浓度。
[0766]
[0767] 表10b.测量到的药物浓度.
[0768]
[0769] 肝脏S9稳定性
[0770] 提供混合性别人类(批号1210091)、雄性史泊格-多利大鼠(批号1410265)、雄性CD-1小鼠(批号1510255)以及雄性比格犬(批号1310285)肝脏S9级分。如下所述制备没有辅因子的反应混合物。将测试物以1μM的最终浓度加入反应混合物中。对照化合物睾酮和7-羟基香豆素(7-HC)与测试物同时在单独的反应中进行。将反应混合物的等分试样(没有辅因子混合物)在37℃的振荡水浴中平衡5分钟。通过加入辅因子混合物(参见下文)引发反应，并且然后在37℃的振荡水浴中孵育混合物。在0、10、20、30和60分钟取出等分试样(100μL)。立即将测试物样品与300μL含有1％甲酸的冰冷乙腈组合。立即将对照样品与400μL含有
0.1％甲酸和内标的冰冷50/50乙腈(ACN)/dH2O组合以终止反应。然后将样品混合并离心以沉淀蛋白质。在匹配的基质中制备校准标准品。对于所给予的前药和所期望的药物(PEA)，使用电喷雾电离通过LC-MS/MS分析样品和标准品。分析条件概述于附录10-1中。将每个时间点的测试物浓度与时间0时的测试物浓度进行比较，以确定每个时间点的剩余百分比。使用GraphPad软件，拟合单相指数衰减方程来计算半衰期。结果显示于表10c和10d中。
0.1％甲酸和内标的冰冷50/50乙腈(ACN)/dH2O组合以终止反应。然后将样品混合并离心以沉淀蛋白质。在匹配的基质中制备校准标准品。对于所给予的前药和所期望的药物(PEA)，使用电喷雾电离通过LC-MS/MS分析样品和标准品。分析条件概述于附录10-1中。将每个时间点的测试物浓度与时间0时的测试物浓度进行比较，以确定每个时间点的剩余百分比。使用GraphPad软件，拟合单相指数衰减方程来计算半衰期。结果显示于表10c和10d中。
[0771] 反应组成
[0772]
[0773]
[0774] 表10c.在人类、大鼠、小鼠以及狗肝脏S9中观测到的PEA稳定性.
[0775]
[0776] a当计算的半衰期比实验持续时间长时，半衰期表示为>最长孵育时间。类似地，如果计算的半衰期比最短时间点小，那么半衰期表示为<该时间点，并且计算的半衰期也列在圆括号中。
[0777] b内在清除率(CLint)根据CLint＝k/P计算，其中k是消除速率常数并且P是孵育中的蛋白质浓度。
[0778]
[0779] 表10d.测量到的药物浓度.
[0780]
[0781] 肠道S9级分稳定性
[0782] 提供混合性别人类(批号1410073)、雄性史泊格-多利大鼠(批号1010042)、雄性CD-1小鼠(批号1510194)以及雄性比格犬(批号1510226)肠道S9级分。如下所述制备没有辅因子的反应混合物。将测试物以1μM的最终浓度加入反应混合物中。对照化合物睾酮和7-羟基香豆素与测试物同时在单独的反应中进行。将反应混合物的等分试样(没有辅因子混合物)在37℃的振荡水浴中平衡5分钟。通过加入辅因子混合物引发反应，并在37℃的振荡水浴中孵育混合物。在0、10、20、30和60分钟取出等分试样(100μL)。立即将测试物样品与300μL含有1％甲酸的冰冷乙腈组合。立即将对照样品与400μL含有0.1％甲酸和内标的冰冷50/50乙腈(ACN)/dH2O组合以终止反应。然后将样品混合并离心以沉淀蛋白质。在匹配的基质中制备校准标准品。对于所给予的前药和所期望的药物(PEA)，使用电喷雾电离通过LC-MS/MS分析样品和标准品。分析条件概述于附录10-1中。将每个时间点的测试物浓度与时间0时的测试物浓度进行比较，以确定每个时间点的剩余百分比。使用GraphPad软件，拟合单相指数衰减方程来计算半衰期。结果显示于表10e和10f中。
[0783] 反应组成
[0784]
[0785] 表10e.在人类、大鼠、小鼠以及狗肠道S9级分中观测到的PEA稳定性.
[0786]
[0787]
[0788] a当计算的半衰期比实验持续时间长时，半衰期表示为>最长孵育时间。类似地，如果计算的半衰期比最短时间点小，那么半衰期表示为<该时间点，并且计算的半衰期也列在圆括号中。
[0789] b内在清除率(CLint)根据CLint＝k/P计算，其中k是消除速率常数并且P是孵育中的蛋白质浓度。
[0790]
[0791] 表10f.测量到的药物浓度.
[0792]
[0793] 血浆稳定性
[0794] 在用肝素钠收集的混合性别人类血浆(批号AS1650-2)、雄性史泊格-多利大鼠(批号RAT297944)、雄性CD-1小鼠(批号MSE237700)以及雄性比格犬(批号BGL91384)中进行研究。在开始实验之前，将血浆调整到pH 7.4。首先为测试物制备DMSO储备液。将DMSO溶液的等分试样加入700μL血浆中，该血浆已经预热至37℃，最终测试物浓度为1μM。在每个时间点(0、15、30、60和120分钟)取得等分试样(100μL)并将其立即与300μL含有1％甲酸的冰冷乙腈混合。将样品储存在4℃下直至实验结束。在对最终时间点采样后，将培养板混合，并且然后以3,000rpm离心10分钟。在匹配的基质中制备校准标准品。对于所给予的前药和所期望的药物(PEA)，使用电喷雾电离通过LC-MS/MS分析样品和标准品。分析条件概述于附录10-1中。将每个时间点的测试物浓度与时间0时的测试物浓度进行比较，以确定每个时间点的剩余百分比。使用GraphPad软件，拟合单相指数衰减方程来计算半衰期。结果显示于表10g和10h中。
[0795] 表10g.在人类、大鼠、小鼠以及狗血浆中观测到的PEA稳定性.
[0796]
[0797] 表10h.测量到的药物浓度.
[0798]
[0799] 模拟肠液稳定性
[0800] 在模拟肠液中在各种酶的存在下进行研究。模拟肠液通过将6.8g磷酸二氢钾溶解在1.0L水中而制备。取得此溶液的等分试样并将pH调整到6.8。然后将各种酶掺入等分试样中以进行每个实验。首先为测试物制备DMSO储备液。将DMSO溶液的等分试样加入700μL基质中，该基质已经预热至37℃，最终测试物浓度为1μM。在每个时间点(0、15、30、60和120分钟)取得等分试样(100μL)并将其立即与300μL含有1％甲酸的冰冷乙腈混合。将样品储存在4℃下直至实验结束。在对最终时间点采样后，将培养板混合，并且然后以3,000rpm离心10分钟。在匹配的基质中制备校准标准品。对于所给予的前药和所期望的药物(PEA)，使用电喷雾电离通过LC-MS/MS分析样品和标准品。分析条件概述于附录10-1中。将每个时间点的测试物浓度与时间0时的测试物浓度进行比较，以确定每个时间点的剩余百分比。使用GraphPad软件，拟合单相指数衰减方程来计算半衰期。结果显示于表10i和10j中。
[0801] 表10i：在模拟肠液(SIF)中观测到的PEA稳定性.
[0802]
[0803]
[0804] 表10j.测量到的药物浓度.
[0805]
[0806] 发现PEA在胰酶中是内源性的，并且因此在分析样品中未定量。
[0807] 附录10-1
[0808] 液相色谱
[0809]
[0810] 质谱
[0811]
[0812]
[0813] 实例11：在模拟肠液中的PEA稳定性.
[0814] 模拟肠液稳定性
[0815] 在含有胰酶的模拟肠液中进行研究。模拟肠液通过将6.8g磷酸二氢钾溶解在1.0 L水中而制备。然后将胰酶加入溶液中并将pH调整到6.8。首先为测试物制备DMSO储备液。将DMSO溶液的等分试样加入300μL基质中，该基质已经预热至37℃，最终测试物浓度为1μM。在每个时间点，在各个管中加料。在每个时间点(0、15、30、60和120分钟)，将900μL含有1.0％甲酸的冰冷乙腈加入各个管中。使每个管的开始时间错开，以便所有时间点将同时完成。在实验结束后，将管混合并且然后以3,000rpm离心10分钟。在匹配的基质中制备校准标准品。使用电喷雾电离通过LC-MS/MS分析样品和标准品。分析条件概述于附录11-1中。将每个时间点的测试物浓度与时间0时的测试物浓度进行比较，以确定每个时间点的剩余百分比。使用GraphPad软件，拟合单相指数衰减方程来计算半衰期。结果显示于表11a和11b中。
[0816] 表11a：在模拟肠液(SIF)中观测到的PEA稳定性.
[0817]
[0818] 表11b.测量到的药物浓度.
[0819]
[0820] 附录11-1
[0821] 液相色谱
[0822]
[0823] 质谱
[0824]
[0825]测试物 Q1/Q3 DP EP CE CXP IS TEM CAD CUR GS1 GS2
I-15 +614.5/282.6 112 10 40 7 5500 500 7 30 50 50
I-14 +614.5/282.8 124 10 30 8 5500 500 7 30 50 50
I-15 +614.5/282.6 112 10 40 7 5500 500 7 30 50 50
I-14 +614.5/282.8 124 10 30 8 5500 500 7 30 50 50
[0826] 实例12：在雄性史泊格-多利大鼠中口服PEA-前药后，测定棕榈酰基乙醇酰胺(PEA)的生物利用度.
[0827] 本实例描述了在雄性史泊格-多利大鼠中施用PEA前药后PEA的口服生物利用度。
[0828] 在口服PEA前药I-12之后，评估棕榈酰基乙醇酰胺(PEA)在雄性史泊格-多利大鼠中的口服生物利用度。I-12以35.2mg/kg分两个不同制剂口服(PO)给予，这等同于10mg/kg剂量的PEA。在给药后长达8小时收集血液样品，并通过LC-MS/MS测定PEA的血浆浓度。在PO给予第1组I-12(在20％(Solutol HS15:NMP1:1)、10％PEG400、70％H2O中)之后，通过分析PEA，在给药后1小时观测到最大血浆浓度(平均值为12.8±1.68ng/mL)。因为缺乏拖尾Cmax的可定量的数据点，所以未确定平均半衰期。基于剂量标准化的AUClast的PEA平均暴露量是2.23±1.08h*kg*ng/mL/mg。基于来自实例5的IV数据，PEA(第1组)的平均口服生物利用度是3.60±1.73％。在PO给予第2组I-12(在0.5％甲基纤维素/20％(Solutol HS15:NMP1:1)、
10％PEG400、70％H2O中)之后，通过分析PEA，在给药后1小时观测到最大血浆浓度(平均值为16.1±3.62ng/mL)。PO给药后的平均半衰期无法确定；然而，一只大鼠的半衰期是4.34小时。基于剂量标准化的AUClast的PEA平均暴露量是3.43±1.03h*kg*ng/mL/mg。基于来自实例5的IV数据，PEA(第2组)的平均口服生物利用度是5.52±1.66％。
10％PEG400、70％H2O中)之后，通过分析PEA，在给药后1小时观测到最大血浆浓度(平均值为16.1±3.62ng/mL)。PO给药后的平均半衰期无法确定；然而，一只大鼠的半衰期是4.34小时。基于剂量标准化的AUClast的PEA平均暴露量是3.43±1.03h*kg*ng/mL/mg。基于来自实例5的IV数据，PEA(第2组)的平均口服生物利用度是5.52±1.66％。
[0829] 给药制剂的制备
[0830] 给予前药以便施用总剂量为10mg/kg的PEA。前药在包含10％Solutol HS15、10％n-甲基吡咯烷酮(NMP)、10％聚乙二醇400(PEG400)以及70％水的媒剂中(第1组)或在包含0.5％甲基纤维素/10％Solutol HS15、10％NMP、10％PEG400以及70％水的媒剂中(第2组)配制。在给药当天新鲜制备制剂。
[0831] 动物给药
[0832] 评估PEA在禁食的雄性史泊格-多利大鼠中的药物动力学。每笼饲养一只大鼠。每只大鼠配有颈静脉插管(JVC)用于血液收集。每个研究组一式三份给药。在给药前将大鼠禁食最少十二小时。在给药后四小时恢复食物。在整个研究过程中，动物可以自由饮水。通过JVC从大鼠收集血液样品(约300μL)并将其放置到含有肝素钠作为抗凝血剂和30μL 0.5M柠檬酸的冷冻聚丙烯管中。在整个处理过程中保持样品是冷冻的。将血液样品在4℃和3,000g下离心5分钟。然后将血浆(约150μL)转移到含有15μL 10％甲酸的冷冻的带标记的聚丙烯管中，放置在干冰上，并在保持在-60℃至-80℃的冷冻箱中储存。血液采样时间显示于表12a中。
[0833] 表12a：研究设计.
[0834]
[0835]
[0836] *所有剂量都是基于mg/kg的前药，并且递送10mg/kg的活性药物PEA。
[0837] 以上描述了用于测定PEA和PEA-前药的LC-MS/MS方法(参见例如实例3)。
[0838] 从血浆浓度的时间过程计算药物动力学参数。从数据中观测口服给药后的最大血浆浓度(Cmax)和达到最大血浆药物浓度的时间(Tmax)。使用线性梯形法则计算时间浓度曲线下面积(AUC)，计算到最后一个可定量的数据点，并且如果适用，外推至无穷大。需要至少三个可定量的数据点来确定AUC。从0.693/末端消除相的斜率计算血浆半衰期(t1/2)。平均停留时间MRT通过将矩曲线下面积(AUMC)除以AUC来计算。生物利用度通过将各个剂量标准化的PO AUClast值除以平均IVAUClast值(来自实例5的IV数据)来确定。对于药物动力学数据分析，低于定量限的样品被处理为零。
[0839] 结果
[0840] 在本研究中，在雄性史泊格-多利大鼠中口服PEA前药后未观测到不良反应。
[0841] 没有通过LC-MS/MS分析给药溶液。在所有计算中使用标称给药水平。PEA的各个和平均血浆浓度显示于表12b和12c中。数据表示为ng/mL游离药物。在计算平均值时不使用低于定量限的样品。在图7A至7D中绘制血浆浓度对时间数据的图。在所有大鼠中发现的PEA的内源性水平均低于定量限；并且因此，未校正在血浆样品中测量到的PEA浓度。
[0842] 表12b.在雄性史泊格-多利大鼠中以35.2mg/kg口服I-12(在20％Solutol HS15:NMP(1:1)、10％PEG400、70％H2O中)后PEA的各个和平均血浆浓度(ng/mL)和药物动力学参数(第1组).
[0843] 口服(35.2mg/kg I-12相当于10mg/kg PEA)
[0844]
[0845]
[0846] Cmax：最大血浆浓度；tmax：最大血浆浓度的时间；t1/2：半衰期，用于半衰期测定的数据点以粗体显示；MRTlast：平均停留时间，计算到最后一个可观测的时间点；AUClast：曲线下面积，计算到最后一个可观测的时间点；AUC∞：曲线下面积，外推至无穷大；ND：未确定；BLOQ：低于定量限(2.5ng/mL)；1通过该参数除以以mg/kg为单位的标称剂量进行剂量标准
2
化；通过各个剂量标准化的口服AUClast值除以来自实例5的平均IV AUClast值62.1h*ng/mL确定的生物利用度；3因为缺乏拖尾Cmax的可定量的数据点而未确定。
2
化；通过各个剂量标准化的口服AUClast值除以来自实例5的平均IV AUClast值62.1h*ng/mL确定的生物利用度；3因为缺乏拖尾Cmax的可定量的数据点而未确定。
[0847] 表12c.在雄性史泊格-多利大鼠中以35.2mg/kg口服I-12(在0.5％甲基纤维素/20％Solutol HS15:NMP(1:1)、10％PEG400、70％H2O中)后PEA的各个和平均血浆浓度(ng/mL)和药物动力学参数(第2组).
[0848] 口服(35.2mg/kg I-12相当于10mg/kg PEA)
[0849]
[0850]
[0851] Cmax：最大血浆浓度；tmax：最大血浆浓度的时间；t1/2：半衰期，用于半衰期测定的数据点以粗体显示；MRTlast：平均停留时间，计算到最后一个可观测的时间点；AUClast：曲线下面积，计算到最后一个可观测的时间点；AUC∞：曲线下面积，外推至无穷大；ND：未确定；BLOQ：低于定量限(2.5ng/mL)；1通过该参数除以以mg/kg为单位的标称剂量进行剂量标准化；2通过各个剂量标准化的口服AUClast值除以来自实例5的平均IV AUClast值62.1h*ng/mL确定的生物利用度；3因为缺乏拖尾Cmax的可定量的数据点而未确定；4因为AUC∞超过AUClast大于25％外推而未确定。
[0852] 实例13：在人类、大鼠、小鼠以及狗肝脏微粒体；人类、大鼠、小鼠以及狗肝脏S9级分；人类、大鼠、小鼠以及狗肠道S9级分；人类、大鼠、小鼠以及狗血浆；以及模拟肠液中的PEA稳定性.
[0853] 本实例描述了在以下各者中观测到的PEA稳定性：1)人类、大鼠、小鼠以及狗肝脏微粒体；2)人类、大鼠、小鼠、狗肝脏S9级分；人类、大鼠、小鼠以及狗肠道S9级分；4)人类、大鼠、小鼠以及狗血浆；以及5)含有各种酶的模拟肠液。
[0854] 肝脏微粒体稳定性
[0855] 提供混合性别人类(批号1010420)、雄性史泊格-多利大鼠(批号1510115)、雄性CD-1小鼠(批号1610148)以及雄性比格犬(批号0810143)肝脏微粒体。如下所述制备没有辅因子的反应混合物。将测试物以1μM的最终浓度加入反应混合物中。对照化合物睾酮与测试物同时在单独的反应中进行。将反应混合物的等分试样(没有辅因子)在37℃的振荡水浴中平衡3分钟。通过加入辅因子引发反应，并在37℃的振荡水浴中孵育混合物。在0、10、20、30和60分钟取出等分试样(100μL)。立即将测试物样品与300μL含有1％甲酸的冰冷乙腈组合。立即将对照样品与400μL含有0.1％甲酸和内标的冰冷50/50乙腈(ACN)/dH2O组合以终止反应。然后将样品混合并离心以沉淀蛋白质。在匹配的基质中制备校准标准品。对于所给予的前药和所期望的药物(PEA)，使用电喷雾电离通过LC-MS/MS分析样品和标准品。分析条件概述于附录13-1中。将每个时间点的测试物浓度与时间0时的测试物浓度进行比较，以确定每个时间点的剩余百分比。使用GraphPad软件，拟合单相指数衰减方程来计算半衰期。结果显示于表13a和13b中。
[0856] 反应组成
[0857]
[0858] 表13a.在人类、大鼠、小鼠以及狗肝脏微粒体中观测到的PEA稳定性.
[0859]
[0860] a当计算的半衰期比实验持续时间长时，半衰期表示为>最长孵育时间。类似地，如果计算的半衰期比最短时间点小，那么半衰期表示为<该时间点，并且计算的半衰期也列在圆括号中。
[0861] b内在清除率(CLint)根据CLint＝k/P计算，其中k是消除速率常数并且P是孵育中的蛋白质浓度。
[0862]
[0863] 表13b.测量到的药物浓度.
[0864]
[0865] 肝脏S9稳定性
[0866] 提供混合性别人类(批号1210091)、雄性史泊格-多利大鼠(批号1410265)、雄性CD-1小鼠(批号1510255)以及雄性比格犬(批号1310285)肝脏S9级分。如下所述制备没有辅因子的反应混合物。将测试物以1μM的最终浓度加入反应混合物中。对照化合物睾酮和7-羟基香豆素(7-HC)与测试物同时在单独的反应中进行。将反应混合物的等分试样(没有辅因子混合物)在37℃的振荡水浴中平衡3分钟。通过加入辅因子混合物(参见下文)引发反应，并且然后在37℃的振荡水浴中孵育混合物。在0、10、20、30和60分钟取出等分试样(100μL)。立即将测试物样品与300μL含有1％甲酸的冰冷乙腈组合。立即将对照样品与400μL含有
0.1％甲酸和内标的冰冷50/50乙腈(ACN)/dH2O组合以终止反应。然后将样品混合并离心以沉淀蛋白质。在匹配的基质中制备校准标准品。对于所给予的前药和所期望的药物(PEA)，使用电喷雾电离通过LC-MS/MS分析样品和标准品。分析条件概述于附录13-1中。将每个时间点的测试物浓度与时间0时的测试物浓度进行比较，以确定每个时间点的剩余百分比。使用GraphPad软件，拟合单相指数衰减方程来计算半衰期。结果显示于表13c和13d中。
0.1％甲酸和内标的冰冷50/50乙腈(ACN)/dH2O组合以终止反应。然后将样品混合并离心以沉淀蛋白质。在匹配的基质中制备校准标准品。对于所给予的前药和所期望的药物(PEA)，使用电喷雾电离通过LC-MS/MS分析样品和标准品。分析条件概述于附录13-1中。将每个时间点的测试物浓度与时间0时的测试物浓度进行比较，以确定每个时间点的剩余百分比。使用GraphPad软件，拟合单相指数衰减方程来计算半衰期。结果显示于表13c和13d中。
[0867] 反应组成
[0868]
[0869]
[0870] 表13c.在人类、大鼠、小鼠以及狗肝脏S9中观测到的PEA稳定性.
[0871]
[0872] a当计算的半衰期比实验持续时间长时，半衰期表示为>最长孵育时间。类似地，如果计算的半衰期比最短时间点小，那么半衰期表示为<该时间点，并且计算的半衰期也列在圆括号中。
[0873] b内在清除率(CLint)根据CLint＝k/P计算，其中k是消除速率常数并且P是孵育中的蛋白质浓度。
[0874]
[0875] 表13d.测量到的药物浓度.
[0876]
[0877] 肠道S9级分稳定性
[0878] 提供混合性别人类(批号1410073)、雄性史泊格-多利大鼠(批号1010042)、雄性CD-1小鼠(批号1510194)以及雄性比格犬(批号1510226)肠道S9级分。如下所述制备没有辅因子的反应混合物。将测试物以1μM的最终浓度加入反应混合物中。对照化合物睾酮和7-羟基香豆素与测试物同时在单独的反应中进行。将反应混合物的等分试样(没有辅因子混合物)在37℃的振荡水浴中平衡3分钟。通过加入辅因子混合物引发反应，并在37℃的振荡水浴中孵育混合物。在0、10、20、30和60分钟取出等分试样(100μL)。立即将测试物样品与300μL含有1％甲酸的冰冷乙腈组合。立即将对照样品与400μL含有0.1％甲酸和内标的冰冷50/50乙腈(ACN)/dH2O组合以终止反应。然后将样品混合并离心以沉淀蛋白质。在匹配的基质中制备校准标准品。对于所给予的前药和所期望的药物(PEA)，使用电喷雾电离通过LC-MS/MS分析样品和标准品。分析条件概述于附录13-1中。将每个时间点的测试物浓度与时间0时的测试物浓度进行比较，以确定每个时间点的剩余百分比。使用GraphPad软件，拟合单相指数衰减方程来计算半衰期。结果显示于表13e和13f中。
[0879] 反应组成
[0880]
[0881] 表13e.在人类、大鼠、小鼠以及狗肠道S9级分中观测到的PEA稳定性.
[0882]
[0883]
[0884] a当计算的半衰期比实验持续时间长时，半衰期表示为>最长孵育时间。类似地，如果计算的半衰期比最短时间点小，那么半衰期表示为<该时间点，并且计算的半衰期也列在圆括号中。
[0885] b内在清除率(CLint)根据CLint＝k/P计算，其中k是消除速率常数并且P是孵育中的蛋白质浓度。
[0886]
[0887] 表13f.测量到的药物浓度.
[0888]
[0889] 血浆稳定性
[0890] 在用肝素钠收集的混合性别人类血浆(批号AS1650-2)、雄性史泊格-多利大鼠(批号RAT297944)、雄性CD-1小鼠(批号MSE237700)以及雄性比格犬(批号BGL91384)中进行研究。在开始实验之前，将血浆调整到pH 7.4。首先为测试物制备DMSO储备液。将DMSO溶液的等分试样加入700μL血浆中，该血浆已经预热至37℃，最终测试物浓度为1μM。在每个时间点(0、15、30、60和120分钟)取得等分试样(100μL)并将其立即与300μL含有1％甲酸的冰冷乙腈混合。将样品储存在4℃下直至实验结束。在对最终时间点采样后，将培养板混合，并且然后以3,000rpm离心10分钟。在匹配的基质中制备校准标准品。对于所给予的前药和所期望的药物(PEA)，使用电喷雾电离通过LC-MS/MS分析样品和标准品。分析条件概述于附录13-1中。将每个时间点的测试物浓度与时间0时的测试物浓度进行比较，以确定每个时间点的剩余百分比。使用GraphPad软件，拟合单相指数衰减方程来计算半衰期。结果显示于表13g和13h中。
[0891] 表13g.在人类、大鼠、小鼠以及狗血浆中观测到的PEA稳定性.
[0892]
[0893] 表13h.测量到的药物浓度.
[0894]
[0895] 模拟肠液稳定性
[0896] 在模拟肠液中在各种酶的存在下进行研究。模拟肠液通过将6.8g磷酸二氢钾溶解在1.0L水中而制备。取得此溶液的等分试样并将pH调整到6.8。然后将各种酶掺入等分试样中以进行每个实验。首先为测试物制备DMSO储备液。将DMSO溶液的等分试样加入700μL基质中，该基质已经预热至37℃，最终测试物浓度为1μM。在每个时间点(0、15、30、60和120分钟)取得等分试样(100μL)并将其立即与300μL含有1％甲酸的冰冷乙腈混合。将样品储存在4℃下直至实验结束。在对最终时间点采样后，将培养板混合，并且然后以3,000rpm离心10分钟。在匹配的基质中制备校准标准品。对于所给予的前药和所期望的药物(PEA)，使用电喷雾电离通过LC-MS/MS分析样品和标准品。分析条件概述于附录13-1中。将每个时间点的测试物浓度与时间0时的测试物浓度进行比较，以确定每个时间点的剩余百分比。使用GraphPad软件，拟合单相指数衰减方程来计算半衰期。结果显示于表13i和13j中。
[0897] 表13i：在模拟肠液(SIF)中观测到的PEA稳定性.
[0898]
[0899] 表13j.测量到的药物浓度.
[0900]
[0901] 发现PEA在胰酶中是内源性的，并且因此在分析样品中未定量。
[0902] 附录13-1
[0903] 液相色谱
[0904]
[0905]
[0906] 质谱
[0907]
[0908]
[0909] 实例14：在模拟肠液中的PEA稳定性.
[0910] 模拟肠液稳定性
[0911] 在含有胰酶的模拟肠液中进行研究。模拟肠液通过将6.8g磷酸二氢钾溶解在1.0 L水中而制备。然后将胰酶加入溶液中并将pH调整到6.8。首先为测试物制备DMSO储备液。将DMSO溶液的等分试样加入300μL基质中，该基质已经预热至37℃，最终测试物浓度为1μM。在每个时间点，在各个管中加料。在每个时间点(0、15、30、60和120分钟)，将900μL含有1.0％甲酸的冰冷乙腈加入各个管中。使每个管的开始时间错开，以便所有时间点将同时完成。在实验结束后，将管混合并且然后以3,000rpm离心10分钟。在匹配的基质中制备校准标准品。使用电喷雾电离通过LC-MS/MS分析样品和标准品。分析条件概述于附录14-1中。将每个时间点的测试物浓度与时间0时的测试物浓度进行比较，以确定每个时间点的剩余百分比。使用GraphPad软件，拟合单相指数衰减方程来计算半衰期。结果显示于表14a和14b中。
[0912] 表14a：在模拟肠液(SIF)中观测到的PEA稳定性.
[0913]
[0914] 表14b.测量到的药物浓度.
[0915]
[0916] 附录14-1
[0917]
[0918] 质谱
[0919]
[0920]测试物 Q1/Q3 DP EP CE CXP IS TEM CAD CUR GS1 GS2
I-8 +474.3/282.2 112 10 28 18 5500 500 7 30 50 50
I-16 +614.5/282.6 123 10 37 18 5500 500 7 30 50 50
I-8 +474.3/282.2 112 10 28 18 5500 500 7 30 50 50
I-16 +614.5/282.6 123 10 37 18 5500 500 7 30 50 50
[0921] 实例15：在雄性史泊格-多利大鼠中口服PEA-前药后，测定棕榈酰基乙醇酰胺(PEA)的生物利用度.
[0922] 本实例描述了在雄性史泊格-多利大鼠中施用PEA前药后PEA的口服生物利用度。
[0923] 在口服PEA前药I-15和I-14之后，评估棕榈酰基乙醇酰胺(PEA)在雄性史泊格-多利大鼠中的口服生物利用度。每种测试物以20.7mg/kg口服(PO)给予，这等同于10mg/kg剂量的PEA。在给药后长达8小时收集血液样品，并通过LC-MS/MS测定PEA的血浆浓度。在PO给予I-15(在20％(Solutol HS15:NMP1:1)、10％PEG400、70％H2O中)之后，在给药后15分钟到1小时之间观测到11.7±2.34ng/mL的平均Cmax。基于剂量标准化的AUClast的I-15(第1组)平均暴露量是2.13±1.05h*kg*ng/mL/mg。基于来自实例5的IV数据，I-15(第1组)的平均口服生物利用度是3.42±1.69％。在PO给予I-14(在20％(Solutol HS15:NMP1:1)、10％PEG400、
70％H2O中)之后，在所有大鼠中在给药后30分钟观测到16.9±1.47ng/mL的平均Cmax。基于剂量标准化的AUClast的I-14(第2组)平均暴露量是2.72±0.854h*kg*ng/mL/mg。基于来自实例5的IV数据，I-14(第2组)的平均口服生物利用度是4.39±1.37％。
70％H2O中)之后，在所有大鼠中在给药后30分钟观测到16.9±1.47ng/mL的平均Cmax。基于剂量标准化的AUClast的I-14(第2组)平均暴露量是2.72±0.854h*kg*ng/mL/mg。基于来自实例5的IV数据，I-14(第2组)的平均口服生物利用度是4.39±1.37％。
[0924] 给药制剂的制备
[0925] 给予前药以便施用总剂量为10mg/kg的PEA。在包含10％Solutol HS15、10％n-甲基吡咯烷酮(NMP)、10％聚乙二醇400(PEG400)以及70％水的媒剂中配制前药。
[0926] 动物给药
[0927] 评估PEA在禁食的雄性史泊格-多利大鼠中的药物动力学。每笼饲养一只大鼠。每只大鼠配有颈静脉插管(JVC)用于血液收集。每个研究组一式三份给药。在给药前将大鼠禁食最少十二小时。在给药后四小时恢复食物。在整个研究过程中，动物可以自由饮水。通过JVC从大鼠收集血液样品(约300μL)并将其放置到含有肝素钠作为抗凝血剂和30μL 0.5M柠檬酸的冷冻聚丙烯管中。在整个处理过程中保持样品是冷冻的。将血液样品在4℃和3,000g下离心5分钟。然后将血浆(约150μL)转移到含有15μL 10％甲酸的冷冻的带标记的聚丙烯管中，放置在干冰上，并在保持在-60℃至-80℃的冷冻箱中储存。血液采样时间显示于表15a中。
[0928] 表15a：研究设计.
[0929]
[0930]
[0931] *所有剂量都是基于mg/kg的前药，并且递送10mg/kg的活性药物PEA。
[0932] 以上描述了用于测定PEA和PEA-前药的LC-MS/MS方法(参见例如实例3)。
[0933] 从血浆浓度的时间过程计算药物动力学参数。从数据中观测口服给药后的最大血浆浓度(Cmax)和达到最大血浆药物浓度的时间(Tmax)。使用线性梯形法则计算时间浓度曲线下面积(AUC)，计算到最后一个可定量的数据点，并且如果适用，外推至无穷大。需要至少三个可定量的数据点来确定AUC。从0.693/末端消除相的斜率计算血浆半衰期(t1/2)。平均停留时间MRT通过将矩曲线下面积(AUMC)除以AUC来计算。生物利用度通过将各个剂量标准化的PO AUClast值除以平均IVAUClast值(来自实例5的IV数据)来确定。对于药物动力学数据分析，低于定量限的样品被处理为零。
[0934] 结果
[0935] 在本研究中，在雄性史泊格-多利大鼠中口服PEA前药后未观测到不良反应。没有通过LC-MS/MS分析给药溶液。在所有计算中使用标称给药水平。PEA的各个和平均血浆浓度显示于表15b和表15c中。数据表示为ng/mL游离药物。在计算平均值时不使用低于定量限的样品。在图15A至15D中绘制血浆浓度对时间数据的图。在所有大鼠中发现的PEA的内源性水平均低于定量限；并且因此，未校正在血浆样品中测量到的PEA浓度。
[0936] 表15b.在雄性史泊格-多利大鼠中以20.7mg/kg口服I-15(在20％Solutol HS15:NMP(1:1)、10％PEG400、70％H2O中)后PEA的各个和平均血浆浓度(ng/mL)和药物动力学参数(第1组).
[0937] 口服(20.7mg/kg I-15相当于10mg/kg PEA)
[0938]
[0939]
[0940] Cmax：最大血浆浓度；tmax：最大血浆浓度的时间；t1/2：半衰期，用于半衰期测定的数据点以粗体显示；MRTlast：平均停留时间，计算到最后一个可观测的时间点；AUClast：曲线下面积，计算到最后一个可观测的时间点；AUC∞：曲线下面积，外推至无穷大；ND：未确定；BLOQ：低于定量限(2.5ng/mL)；1通过该参数除以以mg/kg为单位的标称剂量进行剂量标准化；2通过各个剂量标准化的口服AUClast值除以来自实例5的平均IV AUClast值62.1h*ng/mL确定的生物利用度；3因为缺乏拖尾Cmax的可定量的数据点而未确定。4因为定义末端消除相的线具有r2>0.85而未确定。
[0941] 表15b.在雄性史泊格-多利大鼠中以20.7mg/kg口服I-14(在20％Solutol HS15:NMP(1:1)、10％PEG400、70％H2O中)后PEA的各个和平均血浆浓度(ng/mL)和药物动力学参数(第1组).
[0942] 口服(20.7mg/kg I-14相当于10mg/kg PEA)
[0943]
[0944]
[0945] Cmax：最大血浆浓度；tmax：最大血浆浓度的时间；t1/2：半衰期，用于半衰期测定的数据点以粗体显示；MRTlast：平均停留时间，计算到最后一个可观测的时间点；AUClast：曲线下面积，计算到最后一个可观测的时间点；AUC∞：曲线下面积，外推至无穷大；ND：未确定；BLOQ：低于定量限(2.5ng/mL)；1通过该参数除以以mg/kg为单位的标称剂量进行剂量标准化；2通过各个剂量标准化的口服AUClast值除以来自实例5的平均IV AUClast值62.1h*ng/mL确定的生物利用度；3因为缺乏拖尾Cmax的可定量的数据点而未确定。
[0946] 实例16：在雄性史泊格-多利大鼠中口服PEA-前药后，测定棕榈酰基乙醇酰胺(PEA)的生物利用度.
[0947] 本实例描述了根据例如实例15中所述的方法在雄性史泊格-多利大鼠中施用PEA前药I-8和I-16后PEA的口服生物利用度。PEA的各个和平均血浆浓度显示于表16a和表16b中。在图9A至9D中绘制血浆浓度对时间数据的图。
[0948] 表16a.在雄性史泊格-多利大鼠中以16mg/kg口服I-8(在20％Solutol HS15:NMP(1:1)、10％PEG400、70％H2O中)后PEA的各个和平均血浆浓度(ng/mL)和药物动力学参数(第1组).
[0949] 口服(16mg/kg I-8相当于10mg/kg PEA)
[0950]
[0951] Cmax：最大血浆浓度；tmax：最大血浆浓度的时间；t1/2：半衰期，用于半衰期测定的数据点以粗体显示；MRTlast：平均停留时间，计算到最后一个可观测的时间点；AUClast：曲线下面积，计算到最后一个可观测的时间点；AUC∞：曲线下面积，外推至无穷大；ND：未确定；BLOQ：低于定量限(2.5ng/mL)；1通过该参数除以以mg/kg为单位的标称剂量进行剂量标准化；2通过各个剂量标准化的口服AUClast值除以来自实例5的平均IV AUClast值62.1h*ng/mL确定的生物利用度；3因为缺乏拖尾Cmax的可定量的数据点而未确定。
[0952] 表16b.在雄性史泊格-多利大鼠中以16mg/kg口服I-16(在20％Solutol HS15:NMP(1:1)、10％PEG400、70％H2O中)后PEA的各个和平均血浆浓度(ng/mL)和药物动力学参数(第1组).
[0953] 口服(16mg/kg I-16相当于10mg/kg PEA)
[0954]
[0955] Cmax：最大血浆浓度；tmax：最大血浆浓度的时间；t1/2：半衰期，用于半衰期测定的数据点以粗体显示；MRTlast：平均停留时间，计算到最后一个可观测的时间点；AUClast：曲线下面积，计算到最后一个可观测的时间点；AUC∞：曲线下面积，外推至无穷大；ND：未确定；BLOQ：低于定量限(2.5ng/mL)；1通过该参数除以以mg/kg为单位的标称剂量进行剂量标准化；2通过各个剂量标准化的口服AUClast值除以来自实例5的平均IV AUClast值62.1h*ng/mL
3
确定的生物利用度；因为缺乏拖尾Cmax的可定量的数据点而未确定。
3
确定的生物利用度；因为缺乏拖尾Cmax的可定量的数据点而未确定。
[0956] 实例17：在人类、大鼠、小鼠以及狗肝脏微粒体；人类、大鼠、小鼠以及狗肝脏S9级分；人类、大鼠、小鼠以及狗肠道S9级分；人类、大鼠、小鼠以及狗血浆；以及模拟肠液中的PEA稳定性.
[0957] 本实例描述了在以下各者中观测到的PEA稳定性：1)人类、大鼠、小鼠以及狗肝脏微粒体；2)人类、大鼠、小鼠、狗肝脏S9级分；人类、大鼠、小鼠以及狗肠道S9级分；4)人类、大鼠、小鼠以及狗血浆；以及5)含有各种酶的模拟肠液。
[0958] 肝脏微粒体稳定性
[0959] 提供混合性别人类(批号1010420)、雄性史泊格-多利大鼠(批号1510115)、雄性CD-1小鼠(批号1610148)以及雄性比格犬(批号1110044)肝脏微粒体。如下所述制备没有辅因子的反应混合物。将测试物以1μM的最终浓度加入反应混合物中。对照化合物睾酮与测试物同时在单独的反应中进行。将反应混合物的等分试样(没有辅因子)在37℃的振荡水浴中平衡3分钟。通过加入辅因子引发反应，并在37℃的振荡水浴中孵育混合物。在0、10、20、30和60分钟取出等分试样(100μL)。立即将测试物样品与300μL含有1％甲酸的冰冷乙腈组合。立即将对照样品与400μL含有0.1％甲酸和内标的冰冷50/50乙腈(ACN)/dH2O组合以终止反应。然后将样品混合并离心以沉淀蛋白质。在匹配的基质中制备校准标准品。对于所给予的前药和所期望的药物(PEA)，使用电喷雾电离通过LC-MS/MS分析样品和标准品。分析条件概述于附录17-1中。将每个时间点的测试物浓度与时间0时的测试物浓度进行比较，以确定每个时间点的剩余百分比。使用GraphPad软件，拟合单相指数衰减方程来计算半衰期。结果显示于表17a和17b中。
[0960] 反应组成
[0961]
[0962] 表17a.在人类、大鼠、小鼠以及狗肝脏微粒体中观测到的PEA稳定性.
[0963]
[0964]
[0965] a当计算的半衰期比实验持续时间长时，半衰期表示为>最长孵育时间。类似地，如果计算的半衰期比最短时间点小，那么半衰期表示为<该时间点，并且计算的半衰期也列在圆括号中。
[0966] b内在清除率(CLint)根据CLint＝k/P计算，其中k是消除速率常数并且P是孵育中的蛋白质浓度。
[0967]
[0968] 表17b.测量到的药物浓度.
[0969]
[0970] 肝脏S9稳定性
[0971] 提供混合性别人类(批号0910396)、雄性史泊格-多利大鼠(批号1410265)、雄性CD-1小鼠(批号1310026)以及雄性比格犬(批号1310285)肝脏S9级分。如下所述制备没有辅因子的反应混合物。将测试物以1μM的最终浓度加入反应混合物中。对照化合物睾酮和7-羟基香豆素(7-HC)与测试物同时在单独的反应中进行。将反应混合物的等分试样(没有辅因子混合物)在37℃的振荡水浴中平衡3分钟。通过加入辅因子混合物(参见下文)引发反应，并且然后在37℃的振荡水浴中孵育混合物。在0、10、20、30和60分钟取出等分试样(100μL)。立即将测试物样品与300μL含有1％甲酸的冰冷乙腈组合。立即将对照样品与400μL含有
0.1％甲酸和内标的冰冷50/50乙腈(ACN)/dH2O组合以终止反应。然后将样品混合并离心以沉淀蛋白质。在匹配的基质中制备校准标准品。对于所给予的前药和所期望的药物(PEA)，使用电喷雾电离通过LC-MS/MS分析样品和标准品。分析条件概述于附录17-1中。将每个时间点的测试物浓度与时间0时的测试物浓度进行比较，以确定每个时间点的剩余百分比。使用GraphPad软件，拟合单相指数衰减方程来计算半衰期。结果显示于表17c和17d中。
0.1％甲酸和内标的冰冷50/50乙腈(ACN)/dH2O组合以终止反应。然后将样品混合并离心以沉淀蛋白质。在匹配的基质中制备校准标准品。对于所给予的前药和所期望的药物(PEA)，使用电喷雾电离通过LC-MS/MS分析样品和标准品。分析条件概述于附录17-1中。将每个时间点的测试物浓度与时间0时的测试物浓度进行比较，以确定每个时间点的剩余百分比。使用GraphPad软件，拟合单相指数衰减方程来计算半衰期。结果显示于表17c和17d中。
[0972] 反应组成
[0973]
[0974] 表17c.在人类、大鼠、小鼠以及狗肝脏S9中观测到的PEA稳定性.
[0975]
[0976] a当计算的半衰期比实验持续时间长时，半衰期表示为>最长孵育时间。类似地，如果计算的半衰期比最短时间点小，那么半衰期表示为<该时间点，并且计算的半衰期也列在圆括号中。
[0977] b内在清除率(CLint)根据CLint＝k/P计算，其中k是消除速率常数并且P是孵育中的蛋白质浓度。
[0978]
[0979] 表17d.测量到的药物浓度.
[0980]
[0981] 肠道S9级分稳定性
[0982] 提供混合性别人类(批号1410073)、雄性史泊格-多利大鼠(批号1510303)、雄性CD-1小鼠(批号1510194)以及雄性比格犬(批号1510226)肠道S9级分。如下所述制备没有辅因子的反应混合物。将测试物以1μM的最终浓度加入反应混合物中。对照化合物睾酮和7-羟基香豆素与测试物同时在单独的反应中进行。将反应混合物的等分试样(没有辅因子混合物)在37℃的振荡水浴中平衡3分钟。通过加入辅因子混合物引发反应，并在37℃的振荡水浴中孵育混合物。在0、10、20、30和60分钟取出等分试样(100μL)。立即将测试物样品与300μL含有1％甲酸的冰冷乙腈组合。立即将对照样品与400μL含有0.1％甲酸和内标的冰冷50/50乙腈(ACN)/dH2O组合以终止反应。然后将样品混合并离心以沉淀蛋白质。在匹配的基质中制备校准标准品。对于所给予的前药和所期望的药物(PEA)，使用电喷雾电离通过LC-MS/MS分析样品和标准品。分析条件概述于附录17-1中。将每个时间点的测试物浓度与时间0时的测试物浓度进行比较，以确定每个时间点的剩余百分比。使用GraphPad软件，拟合单相指数衰减方程来计算半衰期。结果显示于表17e和17f中。
[0983] 反应组成
[0984]
[0985] 表17e.在人类、大鼠、小鼠以及狗肠道S9级分中观测到的PEA稳定性..
[0986]
[0987] a当计算的半衰期比实验持续时间长时，半衰期表示为>最长孵育时间。类似地，如果计算的半衰期比最短时间点小，那么半衰期表示为<该时间点，并且计算的半衰期也列在圆括号中。
[0988] b内在清除率(CLint)根据CLint＝k/P计算，其中k是消除速率常数并且P是孵育中的蛋白质浓度。
[0989]
[0990] 表17f.测量到的药物浓度.
[0991]
[0992] 血浆稳定性
[0993] 在用肝素钠收集的混合性别人类血浆(批号AS1650-2)、雄性史泊格-多利大鼠(批号RAT320835)、雄性CD-1小鼠(批号MSE260693)以及雄性比格犬(批号BGL91384)中进行研究。在开始实验之前，将血浆调整到pH 7.4。首先为测试物制备DMSO储备液。将DMSO溶液的等分试样加入700μL血浆中，该血浆已经预热至37℃，最终测试物浓度为1μM。在每个时间点(0、15、30、60和120分钟)取得等分试样(100μL)并将其立即与300μL含有1％甲酸的冰冷乙腈混合。将样品储存在4℃下直至实验结束。在对最终时间点采样后，将培养板混合，并且然后以3,000rpm离心10分钟。在匹配的基质中制备校准标准品。对于所给予的前药和所期望的药物(PEA)，使用电喷雾电离通过LC-MS/MS分析样品和标准品。分析条件概述于附录17-1中。将每个时间点的测试物浓度与时间0时的测试物浓度进行比较，以确定每个时间点的剩余百分比。使用GraphPad软件，拟合单相指数衰减方程来计算半衰期。结果显示于表17g和17h中。
[0994] 表17g.在人类、大鼠、小鼠以及狗血浆中观测到的PEA稳定性.
[0995]
[0996] 表17h.测量到的药物浓度.
[0997]
[0998] 模拟肠液稳定性
[0999] 在模拟肠液中在各种酶的存在下进行研究。模拟肠液通过将6.8g磷酸二氢钾溶解在1.0L水中而制备。取得此溶液的等分试样并将pH调整到6.8。然后将各种酶掺入等分试样中以进行每个实验。首先为测试物制备DMSO储备液。将DMSO溶液的等分试样加入700μL基质中，该基质已经预热至37℃，最终测试物浓度为1μM。在每个时间点(0、15、30、60和120分钟)取得等分试样(100μL)并将其立即与300μL含有1％甲酸的冰冷乙腈混合。将样品储存在4℃下直至实验结束。在对最终时间点采样后，将培养板混合，并且然后以3,000rpm离心10分钟。在匹配的基质中制备校准标准品。对于所给予的前药和所期望的药物(PEA)，使用电喷雾电离通过LC-MS/MS分析样品和标准品。分析条件概述于附录17-1中。将每个时间点的测试物浓度与时间0时的测试物浓度进行比较，以确定每个时间点的剩余百分比。使用GraphPad软件，拟合单相指数衰减方程来计算半衰期。结果显示于表17i和17j中。
[1000] 表17i：在模拟肠液(SIF)中观测到的PEA稳定性.
[1001]
[1002] a当计算的半衰期比实验持续时间长时，半衰期表示为>最长孵育时间。类似地，如果计算的半衰期比最短时间点小，那么半衰期表示为<该时间点，并且计算的半衰期也列在圆括号中。
[1003] 表17j.测量到的药物浓度.
[1004]
[1005] 附录17-1
[1006] 液相色谱
[1007]
[1008] 质谱
[1009]
[1010]测试物 +/- Q1 Q3 DP EP CE CXP IS
I-8 + 474.3 282.2 112 10 28 18 5500
I-16 + 614.5 282.6 123 10 37 18 5500
PEA + 300.3 62.0 100 10 32 10 5500
I-8 + 474.3 282.2 112 10 28 18 5500
I-16 + 614.5 282.6 123 10 37 18 5500
PEA + 300.3 62.0 100 10 32 10 5500
[1011] 表A.半衰期和口服生物利用度数据的汇总.
[1012]化合物 半衰期(分钟) 生物利用度
PEA n/a 0.56％
I-11 <1 4.5％
I-15 <1 3.42％
I-14 7.5 4.39％
I-16 <1 12.1％
I-8 6.2 17.3％
PEA n/a 0.56％
I-11 <1 4.5％
I-15 <1 3.42％
I-14 7.5 4.39％
I-16 <1 12.1％
I-8 6.2 17.3％
[1013] 实例18：在雄性史泊格-多利大鼠中口服PEA-前药后，测定棕榈酰基乙醇酰胺(PEA)的生物利用度.
[1014] 本实例描述了在雄性史泊格-多利大鼠中施用PEA前药后PEA的口服生物利用度。
[1015] 在口服PEA前药I-8和I-16之后，评估棕榈酰基乙醇酰胺(PEA)在雄性史泊格-多利大鼠中的口服生物利用度。I-8以4、8和16mg/kg口服(PO)给予，并且I-16以5.2、10.35和20.7mg/kg口服(PO)给予，采用由20％(Solutol HS15:NMP1:1)、10％PEG400以及70％水组成的制剂。所给予的每种前药等同于2.5、5或10mg/kg剂量的PEA。在给药后长达8小时收集血液样品，并通过LC-MS/MS测定PEA的血浆浓度。使用来自实例5的IV数据计算生物利用度。
[1016] 在PO给予4mg/kg I-8(2.5mg/kg PEA当量)之后，在给药后1小时观测到最大血浆浓度(平均值为25.3±6.67ng/mL)。因为缺乏拖尾Cmax的可定量的数据点，所以未确定半衰期。基于剂量标准化的AUClast的I-8平均暴露量是13.5±4.65h*kg*ng/mL/mg。这组的PEA平均口服生物利用度是21.7±7.48％。
[1017] 在PO给予8mg/kg I-8(5mg/kg PEA当量)之后，在给药后1小时观测到最大血浆浓度(平均值为46.9±13.6ng/mL)。因为缺乏拖尾Cmax的可定量的数据点，所以未确定半衰期。基于剂量标准化的AUClast的I-8平均暴露量是14.8±1.19h*kg*ng/mL/mg。这组的PEA平均口服生物利用度是23.9±1.92％。
[1018] 在PO给予16mg/kg I-8(10mg/kg PEA当量)之后，在给药后1小时观测到最大血浆浓度(平均值为102±31.8ng/mL)。因为缺乏拖尾Cmax的可定量的数据点，所以未确定半衰期。基于剂量标准化的AUClast的I-8平均暴露量是16.8±3.80h*kg*ng/mL/mg。这组的PEA平均口服生物利用度是27.1±6.13％。
[1019] 在PO给予5.2mg/kg I-16(2.5mg/kg PEA当量)之后，在给药后30分钟到1小时之间观测到最大血浆浓度(平均值为25.3±23.6ng/mL)。因为缺乏拖尾Cmax的可定量的数据点，所以未确定半衰期。基于剂量标准化的AUClast的I-16平均暴露量是9.08±6.08h*kg*ng/mL/mg。这组的PEA平均口服生物利用度是14.6±11.1％。
[1020] 在PO给予10.35mg/kg I-16(5mg/kg PEA当量)之后，在给药后1小时观测到最大血浆浓度(平均值为43.9±7.33ng/mL)。因为缺乏拖尾Cmax的可定量的数据点，所以未确定半衰期。基于剂量标准化的AUClast的I-16平均暴露量是10.6±0.544h*kg*ng/mL/mg。这组的PEA平均口服生物利用度是17.0±0.876％。
[1021] 在PO给予20.7mg/kg I-16(10mg/kg PEA当量)之后，在给药后1小时观测到最大血浆浓度(平均值为68.3±11.4ng/mL)。因为缺乏拖尾Cmax的可定量的数据点，所以未确定半衰期。基于剂量标准化的AUClast的I-16平均暴露量是11.2±1.01h*kg*ng/mL/mg。这组的PEA平均口服生物利用度是18.0±1.63％。
[1022] 在每个剂量的I-8之后，PEA的Cmax存在与剂量成比例的增加。在4、8和16mg/kg剂量后，在I-8给药后的平均PEA Cmax值分别是25.3、46.9和102ng/mL。还类似地得到分别在4、8和16mg/kg I-8剂量后的平均剂量标准化的AUClast值(13.5、14.8和16.8hr*kg*ng/mL/mg)和生物利用度(21.7、23.9和27.1％)。
[1023] 在每个剂量的I-16之后，PEA的Cmax存在与剂量成比例的增加。在5.2、10.35和20.7mg/kg剂量之后，在I-16给药后的平均PEA Cmax值分别是25.3、43.9、68.3ng/mL。还类似地得到分别在5.2、10.35和20.7mg/kg I-16剂量后的平均剂量标准化的AUClast值(9.08、
10.6、11.2hr*kg*ng/mL/mg)和生物利用度(14.6、17.0、18.0％)。
10.6、11.2hr*kg*ng/mL/mg)和生物利用度(14.6、17.0、18.0％)。
[1024] 给药制剂的制备
[1025] 给予前药以便施用总剂量为2.5、5、10mg/kg的PEA。在包含10％Solutol HS15、10％n-甲基吡咯烷酮(NMP)、10％聚乙二醇400(PEG400)以及70％水的媒剂中配制每种前药。在给药当天新鲜制备制剂。
[1026] 动物给药
[1027] 评估PEA在禁食的雄性史泊格-多利大鼠中的药物动力学。每笼饲养一只大鼠。每只大鼠配有颈静脉插管(JVC)用于血液收集。每个研究组一式三份给药。在给药前将大鼠禁食最少十二小时。在给药后四小时恢复食物。在整个研究过程中，动物可以自由饮水。通过JVC从大鼠收集血液样品(约300μL)并将其放置到含有肝素钠作为抗凝血剂和30μL 0.5M柠檬酸的冷冻聚丙烯管中。在整个处理过程中保持样品是冷冻的。将血液样品在4℃和3,000g下离心5分钟。然后将血浆(约150μL)转移到含有15μL 10％甲酸的冷冻的带标记的聚丙烯管中，放置在干冰上，并在保持在-60℃至-80℃的冷冻箱中储存。血液采样时间显示于表18a中。
[1028] 表18a：研究设计.
[1029]
[1030] *所有剂量都是基于mg/kg的前药，并且递送10mg/kg的活性药物PEA。
[1031] 以上描述了用于测定PEA和PEA-前药的LC-MS/MS方法(参见例如实例3)。
[1032] 从血浆浓度的时间过程计算药物动力学参数。从数据中观测口服给药后的最大血浆浓度(Cmax)和达到最大血浆药物浓度的时间(Tmax)。使用线性梯形法则计算时间浓度曲线下面积(AUC)，计算到最后一个可定量的数据点，并且如果适用，外推至无穷大。需要至少三个可定量的数据点来确定AUC。平均停留时间(MRT)通过将矩曲线下面积(AUMC)除以AUC来计算。生物利用度通过将各个剂量标准化的PO AUClast值除以平均IVAUClast值(来自实例5的IV数据)来确定。对于药物动力学数据分析，低于定量限的样品被处理为零。
[1033] 结果
[1034] 在雄性史泊格-多利大鼠中口服PEA前药后未观测到不良反应。没有通过LC-MS/MS分析给药溶液。在计算中使用标称给药水平。浓度表示为mg/mL游离碱。
[1035] PEA的各个和平均血浆浓度显示于表18b至表18g中。数据表示为ng/mL游离药物。在计算平均值时不使用低于定量限的样品。在图10A至10L中绘制血浆浓度对时间数据的图。在所有大鼠中，在大多数大鼠中发现了内源性水平的PEA。通过减去在给药前样品中测量到的PEA浓度来校正血浆样品中测量到的PEA浓度。校正值在下表中报告，并用于确定药物动力学参数。为负的校正值被报告为未确定(ND)。
[1036] 表18b.在雄性史泊格-多利大鼠中以4mg/kg口服I-8(在20％Solutol HS15:NMP(1:1)、10％PEG400、70％H2O中)后PEA的各个和平均血浆浓度(ng/mL)和药物动力学参数.[1037] 口服(4mg/kg I-8相当于2.5mg/kg PEA)
[1038]
[1039] Cmax：最大血浆浓度；tmax：最大血浆浓度的时间；t1/2：半衰期，用于半衰期测定的数据点以粗体显示；MRTlast：平均停留时间，计算到最后一个可观测的时间点；AUClast：曲线下面积，计算到最后一个可观测的时间点；AUC∞：曲线下面积，外推至无穷大；ND：未确定；BLOQ：低于定量限(2.5ng/mL)；1通过该参数除以以mg/kg为单位的标称剂量进行剂量标准化；2通过各个剂量标准化的口服AUClast值除以来自实例5的平均IV AUClast值62.1h*ng/mL确定的生物利用度；3因为缺乏拖尾Cmax的可定量的数据点而未确定。
[1040] 表18c.在雄性史泊格-多利大鼠中以8mg/kg口服I-8(在20％Solutol HS15:NMP(1:1)、10％PEG400、70％H2O中)后PEA的各个和平均血浆浓度(ng/mL)和药物动力学参数.[1041] 口服(8mg/kg I-8相当于5mg/kg PEA)
[1042]
[1043] Cmax：最大血浆浓度；tmax：最大血浆浓度的时间；t1/2：半衰期，用于半衰期测定的数据点以粗体显示；MRTlast：平均停留时间，计算到最后一个可观测的时间点；AUClast：曲线下面积，计算到最后一个可观测的时间点；AUC∞：曲线下面积，外推至无穷大；ND：未确定；BLOQ：低于定量限(2.5ng/mL)；1通过该参数除以以mg/kg为单位的标称剂量进行剂量标准化；2通过各个剂量标准化的口服AUClast值除以来自实例5的平均IV AUClast值62.1h*ng/mL确定的生物利用度；3因为缺乏拖尾Cmax的可定量的数据点而未确定。
[1044] 表18d.在雄性史泊格-多利大鼠中以16mg/kg口服I-8(在20％Solutol HS15:NMP(1:1)、10％PEG400、70％H2O中)后PEA的各个和平均血浆浓度(ng/mL)和药物动力学参数.[1045] 口服(16mg/kg I-8相当于5mg/kg PEA)
[1046]
[1047] Cmax：最大血浆浓度；tmax：最大血浆浓度的时间；t1/2：半衰期，用于半衰期测定的数据点以粗体显示；MRTlast：平均停留时间，计算到最后一个可观测的时间点；AUClast：曲线下面积，计算到最后一个可观测的时间点；AUC∞：曲线下面积，外推至无穷大；ND：未确定；BLOQ：低于定量限(2.5ng/mL)；1通过该参数除以以mg/kg为单位的标称剂量进行剂量标准化；2通过各个剂量标准化的口服AUClast值除以来自实例5的平均IV AUClast值62.1h*ng/mL确定的生物利用度；3因为缺乏拖尾Cmax的可定量的数据点而未确定。
[1048] 表18e.在雄性史泊格-多利大鼠中以5.2mg/kg口服I-16(在20％Solutol HS15:NMP(1:1)、10％PEG400、70％H2O中)后PEA的各个和平均血浆浓度(ng/mL)和药物动力学参数.
[1049] 口服(5.2mg/kg I-16相当于2.5mg/kg PEA)
[1050]
[1051] Cmax：最大血浆浓度；tmax：最大血浆浓度的时间；t1/2：半衰期，用于半衰期测定的数据点以粗体显示；MRTlast：平均停留时间，计算到最后一个可观测的时间点；AUClast：曲线下面积，计算到最后一个可观测的时间点；AUC∞：曲线下面积，外推至无穷大；ND：未确定；BLOQ：低于定量限(2.5ng/mL)；1通过该参数除以以mg/kg为单位的标称剂量进行剂量标准化；2通过各个剂量标准化的口服AUClast值除以来自实例5的平均IV AUClast值62.1h*ng/mL确定的生物利用度；3因为缺乏拖尾Cmax的可定量的数据点而未确定。
[1052] 表18f.在雄性史泊格-多利大鼠中以10.35mg/kg口服I-16(在20％Solutol HS15:NMP(1:1)、10％PEG400、70％H2O中)后PEA的各个和平均血浆浓度(ng/mL)和药物动力学参数.
[1053] 口服(10.35mg/kg I-16相当于2.5mg/kg PEA)
[1054]
[1055] Cmax：最大血浆浓度；tmax：最大血浆浓度的时间；t1/2：半衰期，用于半衰期测定的数据点以粗体显示；MRTlast：平均停留时间，计算到最后一个可观测的时间点；AUClast：曲线下面积，计算到最后一个可观测的时间点；AUC∞：曲线下面积，外推至无穷大；ND：未确定；BLOQ：低于定量限(2.5ng/mL)；1通过该参数除以以mg/kg为单位的标称剂量进行剂量标准化；2通过各个剂量标准化的口服AUClast值除以来自实例5的平均IV AUClast值62.1h*ng/mL确定的生物利用度；3因为缺乏拖尾Cmax的可定量的数据点而未确定。
[1056] 表18g.在雄性史泊格-多利大鼠中以20.7mg/kg口服I-16(在20％Solutol HS15:NMP(1:1)、10％PEG400、70％H2O中)后PEA的各个和平均血浆浓度(ng/mL)和药物动力学参数.
[1057] 口服(20.7mg/kg I-16相当于2.5mg/kg PEA)
[1058]
[1059]
[1060] Cmax：最大血浆浓度；tmax：最大血浆浓度的时间；t1/2：半衰期，用于半衰期测定的数据点以粗体显示；MRTlast：平均停留时间，计算到最后一个可观测的时间点；AUClast：曲线下面积，计算到最后一个可观测的时间点；AUC∞：曲线下面积，外推至无穷大；ND：未确定；BLOQ：低于定量限(2.5ng/mL)；1通过该参数除以以mg/kg为单位的标称剂量进行剂量标准
2
化；通过各个剂量标准化的口服AUClast值除以来自实例5的平均IV AUClast值62.1h*ng/mL确定的生物利用度；3因为缺乏拖尾Cmax的可定量的数据点而未确定。
2
化；通过各个剂量标准化的口服AUClast值除以来自实例5的平均IV AUClast值62.1h*ng/mL确定的生物利用度；3因为缺乏拖尾Cmax的可定量的数据点而未确定。
[1061] 实例19：合成化合物I-9
[1062]
[1063] 将丙酮缩甘油(21g，0.16mol)、琥珀酸酐(15.9g，0.16mol)和吡啶(500mL)的混合物加热到回流，持续16小时。通过NMR监测转化率。在高真空下去除吡啶。仍然剩余大约15-20％吡啶。混合物不经进一步纯化即进入到下一步骤。
[1064]
[1065] 将INT-19a(62.13mg，0.27mol)和PEA(61.46mg，0.27mol)于DCM(1升)中的溶液冷却到0℃。向此溶液中逐份加入1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺(EDCI)(152.5mg，0.8mol)，接着逐份加入4-二甲氨基吡啶(DMAP)(9.8mg，0.08mol)。将反应混合物升温到室温并搅拌24小时。将反应混合物用水和盐水洗涤并用DCM萃取。分离有机层并将其用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过柱色谱以己烷和乙酸乙酯纯化粗物质，获得88mg呈白色固体状的纯INT-19b。
[1066]
[1067] 将INT-19b(88mg)溶解于甲醇(4升)中并冷却到5℃。向此溶液中加入Dowex H+树脂(45mg)并在5℃下搅拌8小时。然后用硅藻土垫过滤出树脂。浓缩滤液，获得灰白色固体。用乙酸乙酯重结晶固体，得到73.6mg纯I-9。
[1068] 实例20：二酯PEA前药的一般合成.
[1069] 本发明化合物可以根据流程20合成。
[1070] 流程20.
[1071]
[1072] 将PEA前药(1当量)、RCOOH(2.2-3.0当量)于DCM(10体积)中的溶液冷却到0℃。向此溶液中逐份加入1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺(EDCI)(3当量)，接着逐份加入4-二甲氨基吡啶(DMAP)(0.3当量)。通过TLC/NMR监测反应进展。转化后，将反应混合物用DCM稀释，用水、饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤，并用DCM萃取。将有机层用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过柱色谱以递增梯度的乙酸乙酯/己烷纯化粗残余物。
[1073] 实例21：合成化合物I-8和I-16
[1074] 化合物I-8和I-16可以根据流程21a和21b合成。
[1075] 流程21a.
[1076]
[1077] 流程21b.
[1078]
[1079] 实例22：使用热痛觉过敏试验评估I-16在角叉菜胶诱导的炎症模型中的镇痛作用。
[1080] 在本研究中使用六十只雄性史泊格多利大鼠。基线热痛觉过敏阈值在第-1天测定；根据基线热痛觉过敏阈值将动物分成6组。在第0天，动物接受口服剂量的媒剂或I-16。在给药后大约30分钟，动物接受足底注射2％角叉菜胶溶液。在角叉菜胶注射后大约4小时和大约24小时评估动物的热痛觉过敏。
[1081] 在基线时(在给予媒剂或I-16之前)、在角叉菜胶注射后4小时和24小时，评估热痛觉过敏。口服10.25mg/kg(等同于5mg/kg当量的PEA)I-16不会显著降低任何时间点通过角叉菜胶注射到后爪中诱导的热痛觉过敏。口服20.50mg/kg(等同于15mg/kg PEA)I-16显著降低4小时时间点的热痛觉过敏，但是不显著降低24小时时间点的热痛觉过敏(图11)。
[1082] 在药理学评估期(第0天)期间，在经过媒剂和I-16处理的动物中注射角叉菜胶后的平均值±SEM同侧缩爪潜伏期。所有动物通过口服管饲法接受10％solutol、10％n-甲基吡咯烷酮、10％PEG 400以及70％水(10mL/kg)或I-16(10.25或20.50mg/kg)的混合物(n＝10)。
[1083] 这些结果指示，I-16的施用显著降低了与发炎性疼痛相关的热痛觉过敏的程度。施用I-16产生了剂量和时间依赖性的热痛觉过敏降低，其中施用10.25mg/kg I-16没有产生显著效果，而施用20.50mg/kg I-16显著降低了4小时时间点的热痛觉过敏。
[1084] 实例23：评估大鼠慢性压迫性损伤(CCI)模型中的镇痛作用.
[1085] 在15％ HS15/15％聚乙二醇(PEG)400/70％注射用水(water for injection，WFI)中配制两种测试化合物(I-16和加巴喷丁)，用于口服(PO)，连续17天(qdx17)。施用10mL/kg的给药体积。
[1086] 方法：
[1087] 使用重量为180±20g的雄性史泊格多利大鼠。在戊巴比妥(pentobarbital)(50mg/kg，5ml/kg，IP)麻醉下，在大腿中部水平暴露左侧坐骨神经。相距约1mm的四根铬肠结扎线松散地系在神经周围。然后在测试机械性异常疼痛和热痛觉过敏之前，将动物社交饲养在具有软垫层的笼子中至少10天。
[1088] 机械性异常疼痛
[1089] 将大鼠放置在金属丝网架上倒置的Plexiglas笼下，并使其适应20到30分钟。通过Chaplin上/下法使用von Frey细丝评估左后爪的足底表面的异常疼痛。在第-3天(手术前基线)评估所有大鼠的机械性异常性疼痛以获得手术前异常疼痛阈值。对于加巴喷丁组，只有当神经结扎(预处理)后第13天的疼痛阈值相对于神经结扎前(结扎前)各个爪的反应减小10克力时，即明确存在异常疼痛，才预先选择大鼠进行实验。在第14天，在施用I-16、媒剂或加巴喷丁后1小时进行机械性异常疼痛测试。
[1090] 热痛觉过敏
[1091] 通过IITC型号336G(美国IITC公司)设备测量热痛觉过敏。将每只大鼠放置在玻璃地板顶上的塑料箱中20到30分钟。地板下的光束瞄准左后爪的足底表面。自动测量缩爪以远离热刺激时的时间。施加23秒的截止潜伏期。获得每只大鼠的回缩潜伏期并将其定义为热痛阈值。在第-3天(手术前基线)评估所有大鼠的热痛觉过敏以获得手术前阈值。对于加巴喷丁组，只有当神经结扎(预处理)后第13天的疼痛阈值降低15秒时才预先选择大鼠进行实验。在第14天，在施用I-16、媒剂或加巴喷丁后1.5小时进行热痛觉过敏测试。
[1092] 将组差异与媒剂对照组进行比较。在P<0.05下，差异被认为是显著的。
[1093] 制剂和给药方案提供在表23中并在图12A中可视化：
[1094] 表23
[1095]
[1096] 在治疗后(1小时)和(1.5小时)测量机械性异常疼痛的分析的结果报告于图12B中。
[1097] 同等物
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