尽管治疗肥胖症的新药已经被开发出来，但是很多这些药物都有反 面作用，而且这些药物中的几个由于严重的副作用包括一些受治疗的受 试者的死亡，已经在美国食品药物监督局(FDA)批准后从市场上被取消。
Khandwala等在美国专利5,827,898中以及Reed.M.J.等(1999)描 述了去甲二氢愈创木酸(nordihydroguaiareticacid，“NDGA”)在啮齿 类动物中降低血清葡萄糖、血清甘油三酯，以及血清非酯化脂肪酸的作 用。Mowri，M.S.等(1999)公开了NDGA降低高血压的作用。NDGA在这 些疾病或状况中的作用机理不为人知。
邻苯二酚丁烷，包括去甲二氢愈创木酸(“NDGA”)及其衍生物，已 经在某些实验动物中用于抑制肿瘤的生长。例如，Jordan等在美国专利 5,008,294中描述了对在无胸腺裸NCr鼠(athymic nude NCr mice) 中的一个乳腺癌MX-1异种移植物使用单一剂量的NDGA。在一个实验中， 在一14mg的人乳腺肿瘤碎片被皮下植入小鼠的腋窝一天以后，NDGA被注 射进该肿瘤中。Jordan等还描述了将人乳腺癌植入到无胸腺裸鼠第23 天后，NDGA的局部应用。在这些实验中观察到了一些肿瘤抑制的证据， 但不清楚该抗肿瘤作用是否持久。
Huang等在美国专利6,417,234和美国专利6,214,874中描述了一种 叫做4-O-甲基-NDGA或M4N，以及另一种NDGA衍生物，叫做G4N的NDGA 衍生物分别或一起注射进植有HPV-16转化的无限生长分化的小鼠上皮细 胞(C3)的小鼠中的肿瘤内(intratumor)注射。黄等还发现一些这些 NDGA衍生物抑制肿瘤生长的证据。不知道诸如这些NDGA衍生物的化合物 能否安全地用于其他动物，诸如人。
人们希望可以发现用于治疗肥胖症以及治疗超重受试者的新的组合 物或方法。

因而，本发明的目的之一是提供用于预防或治疗超重受试者的方法 和成分，诸如用于治疗需要该治疗的受试者的肥胖症。
本发明的另一个目的是提供一种或多种如上所述的对预防或治疗肥 胖症有效的邻苯二酚丁烷，包括NDGA化合物的给药方法。
本发明的另一个目的是在适合于治疗肥胖症的配方中提供含有一种 或多种邻苯二酚丁烷，包括NDGA化合物的成分。
根据本发明的一个目的，提供了一种用于治疗在需要该治疗的受试 者的肥胖症的药物组合物，该受试者为一种动物，例如，人，其中该组 合物包含少一种邻苯二酚丁烷和一种制药学上可接受的载体(carrier) 或赋形剂(excipient)，其中该组合物被制备且其以不同于直接注射进 染病组织或局部应用到染病组织上的方法给药。
根据本发明的另一个目的，提供了一种如上成分，其中该组合物被 制备成用于鼻内给药，口服给药，包括通过缓释或快速释放胶囊，用于 吸入，用于皮下给药，用于透皮给药，用于动脉内给药，用于脂内 (intradipose)给药(例如，进入脂肪)，局部给药(topical administration)，静脉给药，口腔含化给药，腹膜内给药，眼内给药， 中央静脉给药，肌肉给药或用于植入。
根据本发明的另一个目的，提供了一种如上成分，其中该制药学可 接受的载体或赋形剂包括二甲基亚砜(DMSO)，磷酸缓冲液(PBS)，盐水， 一种油诸如，蓖麻油或玉米油，聚乙氧基蓖麻油(Cremaphor EL)，以及 乙醇。
根据本发明的另一个目的，提供了一种如上成分，其中该制药学可 接受的载体或赋形剂包括一种基于脂质的配方(lipid based formulation)，一种脂质体(liposomal)配方，一种纳米颗粒 (nanoparticle)配方，一种胶束配方，一种水溶性配方，一种聚乙氧 基蓖麻油/乙醇/盐水配方或在一可生物降解聚合物中的任何上述物质。
根据本发明的另一个目的，提供了一种如上成分，其中邻苯二酚丁 烷具有如下的结构式：

其中R1和R2是独立的-H，一种低级烷基，一种低级酰基，一种亚烃基或 一种氨基酸残基或其取代基或其盐；R3，R4，R5，R6，R10，R11，R12，R13是 独立的-H或一种低级烷基；R7，R8，R9是独立的-H，-OH，一种低级烷氧 基，一种低级酰氧基，或任何两个相邻的在一起(together)可以是一 个亚烃基二氧基(alkyene dioxy)的基团或一种氨基酸残基或其取代基 或其盐。
根据本发明的另一个目的，提供了一种如上邻苯二酚丁烷，其中R1 和R2是独立的-H，一种低级烷基，一种低级酰基，或一种氨基酸残基或 其取代基或其盐；R3，R4是独立的一种低级烷基；R5，R6，R10，R11，R12和 R13是独立的-H；而R7，R8，R9是独立的-H，-OH，一种低级烷氧基，一种 低级酰氧基，或一种氨基酸残基或其取代基或其盐。
根据本发明的另一个目的，提供了一种如上邻苯二酚丁烷，其中R1 和R2是独立的-H，一种低级烷基，一种低级酰基，或一种氨基酸残基或 其取代基或其盐；R3，R4是独立的一种低级烷基；R5，R6，R7，R10，R11， R12和R13是独立的-H；而R8，R9是独立的-OH，一种低级烷氧基，低级酰 氧基，或一种氨基酸残基或其取代基或其盐。
根据本发明的另一个目的，提供了一种如上邻苯二酚丁烷，其中R1 和R2是独立的-CH3或-(C＝O)CH2N(CH3)2或一种其盐。
根据本发明的另一个目的，提供了一种如上邻苯二酚丁烷，其中R8 和R9是独立的-OCH3或-O(C＝O)CH2N(CH3)2或一种其盐。
根据本发明的另一个目的，提供了一种如上邻苯二酚丁烷，其中R1 和R2是独立的-CH3或-(C＝O)CH2N(CH3)2或-(C＝O)CH2N+H(CH3)2Cl-而R8和 R9是独立的-OCH3或-O(C＝O)CH2N(CH3)2或-O(C＝O)CH2N+H(CH3)2Cl-。
根据本发明的另一个目的，提供了一种如上邻苯二酚丁烷，其中R1 和R2是独立的-H或-CH3而R8和R9是独立的-OH或-OCH3，条件是该邻苯二 酚丁烷不是NDGA。
根据本发明的另一个目的，提供了一种如上邻苯二酚丁烷，其中R1 和R2是独立的-CH3而R8和R9是独立的-OCH3。
根据本发明的另一个目的，提供了一种如上邻苯二酚丁烷，其中该 邻苯二酚丁烷是NDGA。
根据本发明的另一个目的，提供了一种如上邻苯二酚丁烷，其中该 邻苯二酚丁烷不同于NDGA。
根据本发明的另一个目的，提供了一种制备含有一种邻苯二酚丁烷 的药物组合物的方法，其中该方法包括提供一个如上的邻苯二酚丁烷以 及一种如上制药学上可接受的载体或赋形剂，以及该邻苯二酚丁烷和制 药学上可接受的载体或赋形剂的组合。
根据本发明的另一个目的，提供了一种在一个需要治疗的受试者上 治疗肥胖症的方法，包括给该受试者用任何一种上述的组合物。
根据本发明的另一个目的，提供了一种如上的治疗方法，其中该组 合物的配方用于鼻内给药，口服给药，包括通过缓释或快速释放胶囊， 用于吸入，用于皮下给药，用于透皮给药，用于脂内给药，局部给药， 静脉给药，口腔含化给药(buccal administration)，腹膜内给药，眼 内给药，中央静脉给药，肌肉给药或用于植入。
根据本发明的另一个目的，提供了一种如上治疗的方法，其中该制 药学可接受的载体或赋形剂包括二甲基亚砜(DMSO)，磷酸缓冲液(PBS)， 盐水，一种油诸如，蓖麻油或玉米油，聚乙氧基蓖麻油，以及乙醇。
根据本发明的另一个目的，提供了一种如上治疗的方法，其中该制 药学可接受的载体或赋形剂包括一种基于脂质的配方，一种脂质体配方， 一种非颗粒配方，一种胶束配方，一种水溶液配方，一种聚乙氧基蓖麻 油/乙醇/盐水配方或在一可生物降解聚合物中的任何上述物质。
根据本发明的另一个目的，提供了一种如上治疗的方法，其中邻苯 二酚丁烷具有如上给出的结构式。
根据本发明的另一个目的，提供了一种如上治疗的方法，其中邻苯 二酚丁烷是4-O-甲基-NDGA。
根据本发明的另一个目的，提供了一种如上治疗的方法，其中邻苯 二酚丁烷是4-二甲基甘氨酰NDGA(tetra-dimethylglycinyl NDGA)。
根据本发明的另一个目的，提供了一种如上治疗的方法，其中邻苯 二酚丁烷是3-O-甲基-NDGA。
根据本发明的另一个目的，提供了一种如上治疗的方法，其中邻苯 二酚丁烷是NDGA。
根据本发明的另一个目的，提供了一种如上治疗的方法，其中邻苯 二酚丁烷不同于NDGA。
根据本发明的另一个目的，提供了一种如上治疗的方法，其中该方 法包括以至少两种邻苯二酚丁烷给药。
根据本发明的另一个目的，提供了一种如上治疗的方法，其中该两 种邻苯二酚丁烷基本同时给药。
根据本发明的另一个目的，提供了一种如上治疗的方法，其中该两 种邻苯二酚丁烷在不同时间给药。
根据本发明的另一个目的，提供了一种如上治疗的方法，其中该两 种邻苯二酚丁烷选自由4-O-甲基-NDGA、3-O-甲基-NDGA和4-二甲基甘氨 酰NDGA组成的组。
根据本发明的另一个目的，提供了一种如上治疗的方法，其中该纳 米颗粒配方包含至少一种选自由聚(DL-丙交酯-共-乙交酯)(Poly (DL-lactide-co-glycolide))、聚乙烯醇、d-α-生育酚聚乙二醇1000琥 珀酸酯，以及聚(丙交酯-共-乙交酯)-单甲氧基-聚(聚乙二醇)组成 的组。
根据本发明的另一个目的，提供了一种如上治疗的方法，其中该脂 质体配方包括至少一种选自由磷脂酰胆碱/胆固醇/PEG-DPPE、二硬脂酰 卵磷脂(distearoylphosphatidylcholine)/胆固醇/PEG-DPPE，以及1-2- 二油酰-顺-甘油基-3-磷酸胆碱/1-2-棕榈酰-顺-甘油基-3-磷酸基-消旋 (rac)-(1-甘油)钠盐/胆固醇/三油精/三辛酸甘油酯组成的组。
根据本发明的另一个目的，提供了一种如上治疗的方法，其中该方 法包括对该组合物用药不止一次。
根据本发明的另一个目的，提供了一种如上治疗的方法，其中该制 药学上可接受的载体或赋形剂是一种水制剂。
根据本发明的另一个目的，提供了一种如上治疗的方法，其中该制 药学上可接受的载体或赋形剂包括一种疏水制剂。
根据本发明的另一个目的，提供了一种如上治疗的方法，其中该疏 水制剂包括一种基于脂质的赋形剂(vehicle)。
根据本发明的另一个目的，提供了一种如上治疗的方法，其中制药 学上可接受的载体或赋形剂包括至少一种选自由蓖麻油、花生油、二甲 基亚砜，以及其他食用脂肪或油组成的组。
根据本发明的另一个目的，提供了一种如上治疗的方法，其中该组 合物以一种选自由一种药片、一种粉末、一种凝胶胶囊，以及一种液体 组成的组的形式配制。
根据本发明的另一个目的，提供了一种如上治疗的方法，其中该制 药学上可接受的载体或赋形剂包括一种聚合物配方。
根据本发明的另一个目的，提供了一种如上治疗的方法，其中该聚 合物配方是一种可生物降解的聚合物配方。
根据本发明的另一个目的，提供了一种如上治疗的方法，其中该制 药学上可接受的载体或赋形剂允许高局部药物浓度和在一段时间内持续 释放。
根据本发明的另一个目的，提供了一种如上治疗的方法，其中该聚 合物配方包括至少一种选自由1，3-二(p-羧基苯氧基)丙烷 (1，3-bis(p-carboxyphenoxy)propane)、癸二酸、聚乙烯醋酸乙酯 (ploy(ethylene-co-vinyl acetate))，以及聚丙交酯-乙交酯组成的组。
根据本发明的另一个目的，提供了一种如上治疗的方法，其中该邻 苯二酚丁烷在用药之前被溶解盐水、DMSO或乙醇中。
根据本发明的另一个目的，提供了一种如上治疗的方法，其中该组 合物是至少一种选自由一种粉末、一种气溶胶、一种含水配方、一种脂 质体配方、一种纳米颗粒配方，以及一种疏水性配方组成的组。
根据本发明的另一个目的，提供了一种如上治疗的方法，其中该组 合物在一特定的时间段内每天给药。
根据本发明的另一个目的，提供了一种如上治疗的方法，其中该组 合物是间歇地给药。
根据本发明的另一个目的，提供了一种如上治疗的方法，其中该邻 苯二酚丁烷被注射进受试者。
根据本发明的另一个目的，提供了一种如上治疗的方法，其中该邻 苯二酚丁烷是一种水溶性的化合物。
根据本发明的另一个目的，提供了一种如上治疗的方法，其中该邻 苯二酚丁烷是一种疏水性化合物。
根据本发明的另一个目的，提供了一种如上治疗的方法，其中该邻 苯二酚丁烷配制为一种液体，一种气溶胶，一种悬浮液，一种药片，一 种粉末或一种凝胶胶囊。
根据本发明的另一个目的，提供了一种如上治疗的方法，其中该邻 苯二酚丁烷对人的用药量为每剂量在大约大于10mg/kg而小于375mg/kg 的范围内。
根据本发明的另一个目的，提供了一种如上治疗的方法，其中该范 围是大约大于10mg/kg而小于大约250mg/kg每剂量。
根据本发明的另一个目的，提供了一种如上治疗的方法，其中该范 围是大约大于10mg/kg而小于大约200mg/kg每剂量。
根据本发明的另一个目的，提供了一种如上治疗的方法，其中该范 围是大约大于10mg/kg而小于大约150mg/kg每剂量。
根据本发明的另一个目的，提供了一种如上治疗的方法，其中该范 围是大约大于10mg/kg而小于大约100mg/kg每剂量。
根据本发明的另一个目的，提供了一种如上治疗的方法，其中该范 围是大约大于10mg/kg而小于大约75mg/kg每剂量。
根据本发明的另一个目的，提供了一种如上治疗的方法，其中该范 围是大约大于10mg/kg而小于大约50mg/kg每剂量。
根据本发明的另一个目的，提供了一种如上治疗的方法，其中该组 合物是静脉给药。
根据本发明的另一个目的，提供了一种如上治疗的方法，其中该组 合物是口服给药。
根据本发明的另一个目的，提供了一种如上治疗的方法，其中邻苯 二酚丁烷是3-O-NDGA或4-O-甲基NDGA。
根据本发明的另一个目的，提供了一个治疗肥胖症的试剂盒，该试 剂盒包括一种上述的药物组合物和该组合物给药的用法说明。
根据本发明的另一个目的，提供了一个治疗如上肥胖症的方法，其 中该制药学上可接受的载体或赋形剂是一种油，诸如，例如，蓖麻油或 玉米油。
根据本发明的另一个目的，提供了一个治疗如上肥胖症的方法，其 中该组合物存在于一种可食用的混合物中。
根据本发明的另一个目的，提供了一个治疗如上肥胖症的方法，其 中该组合物在一段时间内每日给药，例如，1周内5天或更多天每天给药， 2周内5天或更多天每天给药，3周内5天或更多天每天给药。
根据本发明的另一个目的，提供了一个治疗如上肥胖症的方法，其 中该4-O-甲基NDGA以至少30mg每剂量给药，或可选地，至少90mg每剂 量。
根据本发明的另一个目的，提供了一个治疗如上肥胖症的方法，其 中该4-O-甲基NDGA的在组合物中的浓度是20mg/ml。
根据本发明的另一个目的，提供了一个治疗如上肥胖症的方法，其 中该制药学可接受的载体或赋形剂包括聚乙氧基蓖麻油、乙醇和盐水， 其中该组合物中聚乙氧基蓖麻油存在的浓度可以是大约6％，乙醇存在的 浓度可以是大约6％，盐水存在的浓度可以是大约88％，举例来说。
根据本发明的另一个目的，提供了一个治疗如上肥胖症的方法，其 中给药到受试者的该组合物每剂量包括至少2mg 4-O-甲基NDGA。
根据本发明的另一个目的，提供了一个治疗如上肥胖症的方法，其 中该组合物以静脉或腹膜内给药。
根据本发明的另一个目的，提供了一个治疗如上肥胖症的方法，其 中该组合物以比在一段时间内每6天一次更频繁地给药，或可选地，比 在一段时间内每2天一次更频繁地给药。
本领域技术人员在阅读本说明书后将明显得知本发明的进一步的目 的、特点和优势。该其他的目的、特点和优势也被认为被本发明所包含。
附图说明
图1是NDGA衍生物释放至组织以治疗肥胖症的不同模式的实施例的 图示。M4N代表一种亲水性的NDGA而G4N代表一种亲脂性的NDGA。SC代 表皮下给药。IP代表腹膜内给药。IM代表肌肉给药。
实施方案
本发明在此公开了具有如下结构式的邻苯二酚丁烷：

其中R1和R2是独立的-H，一种低级烷基，一种低级酰基，一种亚烃基或 一种氨基酸残基或其取代基或其盐；R3，R4，R5，R6，R10，R11，R12，R13是 独立的-H或一种低级烷基；R7，R8，R9是独立的-H，-OH，一种低级烷氧 基，一种低级酰氧基，或任何两个相邻的在一起可以是一个亚烃基二氧 基的基团或一种氨基酸残基或其取代基或其盐，对于治疗肥胖症有用。 该邻苯二酚丁烷可以和制药学可接受的载体或赋形剂组合，以生产可以 配制成用于非常多种类的释放途径的药物组合物。
在本发明的另一个实施方案中，该邻苯二酚丁烷具有如上的结构式， 其中R1和R2是独立的-H，一种低级烷基，一种低级酰基，或一种氨基酸 残基或其取代基或其盐；R3，R4是独立的一种低级烷基；R5，R6，R10，R11， R12和R13是独立的-H；而R7，R8，R9是独立的-H，-OH，一种低级烷氧基， 一种低级酰氧基，或一种氨基酸残基或其取代基或其盐。
在本发明的另一个实施方案中，该药物组合物具有如上结构式，其 中R1和R2是独立的-H，一种低级烷基，一种低级酰基，或一种氨基酸残 基或其取代基或其盐；R3，R4是独立的一种低级烷基；R5，R6，R7，R10， R11，R12和R13是独立的-H；而R8，R9是独立的-OH，一种低级烷氧基，低 级酰氧基，或一种氨基酸残基或其取代基或其盐。
在本发明的另一个实施方案中，该药物组合物具有如上结构式，其 中R1和R2是独立的-CH3或-(C＝O)CH2N(CH3)2或一种其盐。
在本发明的另一个实施方案中，该药物组合物具有如上结构式，其 中R8和R9是独立的-OCH3或-O(C＝O)CH2N(CH3)2或一种其盐。
在本发明的另一个实施方案中，该药物组合物具有如上结构式，其 中R1和R2是独立的-CH3或-(C＝O)CH2N(CH3)2或-(C＝O)CH2N+H(CH3)2Cl-而 R8和R9是独立的-OCH3或-O(C＝O)CH2N(CH3)2或-O(C＝O)CH2N+H(CH3)2Cl-。
在本发明的另一个实施方案中，该药物组合物具有如上结构式，其 中R1和R2是独立的-H或-CH3而R8和R9是独立的-OH或-OCH3，条件是该邻 苯二酚丁烷不是NDGA。
在本发明的另一个实施方案中，该药物组合物具有如上结构式，其 中R1和R2是独立的-CH3而R8和R9是独立的-OCH3。
在本发明的另一个实施方案中，该邻苯二酚丁烷是NDGA，在一个可 选实施方案中，该邻苯二酚丁烷不同于NDGA。

本发明人惊奇地发现一种含有一种基本上纯的至少一种NDGA衍生物 制剂(preperation)的成分对于肥胖症的治疗有效。这个发现是偶然的 而且确实很令人惊讶，因为NDGA化合物起初被用作其他用途，而体重减 轻是一个意料不到的副作用。
该NDGA化合物在此具有如上提出的结构式，其中R1，R2，R3和R4独 立地代表-OH，一种低级烷氧基，例如，-OCH3，一种低级酰氧基，例如 -O(C＝O)CH3，或一种氨基酸残基，或一种取代基或其盐但不同时为-OH；而 R5，R6独立地代表-H或一种烷基，诸如一种低级烷基，例如，-CH3或-CH2CH3。 在一个实施方案中，R5和R6可以同时是-H，-CH3或-CH2CH3。
本邻苯二酚丁烷，包括NDGA化合物，在一种适合的配方中可以安全 地给一个或多个需要该治疗的受试者通过鼻内释放给药。任选地，这些 邻苯二酚丁烷或NDGA化合物可以通过吸入给药。进一步任选地，这些邻 苯二酚丁烷或NDGA化合物可以通过口服给药，诸如通过和食物混合，例 如，或者通过口腔含化给药，或者通过眼内给药。
而且，该邻苯二酚丁烷或NDGA化合物可以被配制为脂质体配方，纳 米颗粒配方，或胶束配方，还可以安全地全身给药，诸如通过静脉，诸 如通过注射进入中央静脉，或通过腹膜内的给药，通过间质 (interstitial)给药，皮下给药，透皮给药，肌肉给药，脂内给药， 或局部给药。
此外，该邻苯二酚丁烷或NDGA化合物在脂质体配方，纳米颗粒配方， 或胶束配方中的时候，可以被包埋进一种可生物降解聚合物配方中而安 全地给药，诸如通过皮下植入。
在本发明的一个实施方案中，为此处目的的给药途径非肠胃外给药 (parenteral administration)，其中此处的肠胃外给药意思是静脉内、 肌肉、皮下、透皮和腹膜内给药。
本发明的进一步的特点在于，一种含有用于治疗肥胖症的邻苯二酚 丁烷或NDGA化合物的药物组合物，其中配制该组合物以用于上述药物释 放或给药，例如以一种药片，一种不是亲水就是疏水的液体，一种诸如 一种由冻干法制备的粉末，一种气溶胶的形式，或形式为一种含水的水 溶性组合物，一种疏水组合物，一种脂质体组合物，一种胶束组合物， 诸如基于吐温(Tween)80或双嵌段共聚物(diblock copolymer)，一种 纳米颗粒组合物，一种聚合物组合物，一种环式糊精错合物(complex)组 合物，乳化液，叫做“脂核(lipocores)”的基于脂质的纳米颗粒。
本发明的进一步的特点在于，一种生产本发明药物组合物的方法， 该方法包括制备或提供以基本上纯的形式的该邻苯二酚丁烷或NDGA化合 物，将该成分与一种制药学可接受的载体或赋形剂组合，且以和适用的 给药模式相适合的方式配置该组合物。
本发明还额外提供了用于治疗肥胖症的包含如上成分或配方的试剂 盒，其中该成分被配制成用如上释放方式给药，包括但不限于鼻内给药， 吸入，口服，脂内给药，局部给药，静脉给药，腹膜内给药，和其他肠 胃外给药，并提供了这些给药的用法说明。
除非另外限定，在此使用的所有的技术和科学术语和本领域技术人 员的通常理解具有相同的含义。还可根据如下的特定含义更好地理解本 发明。
                         定义
术语“活性剂”、“化合物”、和“药物”在此指的是一种或多种邻苯 二酚丁烷，包括NDGA和NDGA衍生物。
此处使用的术语“亚烃基二氧基(alkylene dioxy)”指的是亚甲基 (或取代的亚甲基)二氧基(methylene dioxy)，或乙烯基(或取代的 乙烯基)二氧基(ethylene dioxy)。术语“氨基酸残基或其取代基或其 盐”指的是邻苯二酚丁烷的结构式中的其中一个R基团是氨基酸残基或 一种取代的氨基酸残基或一种氨基酸残基或取代的氨基酸残基的盐，包 括但不限于：丙氨酸，精氨酸，天冬酰胺，天冬氨酸，半胱氨酸，谷氨 酰胺，谷氨酸，甘氨酸，组氨酸，异亮氨酸，亮氨酸，赖氨酸，甲硫氨 酸，苯丙氨酸，脯氨酸，丝氨酸，苏氨酸，色氨酸，酪氨酸，缬氨酸， 5-羟赖氨酸，4-羟脯氨酸，甲状腺氨酸，3-甲基组氨酸，ε-N-甲基赖氨 酸，ε-N，N，N-三甲基赖氨酸，氨基己二酸，γ-羧基谷氨酸，磷酸丝氨酸， 磷酸苏氨酸，磷酸酪氨酸，N-甲基精氨酸，N-乙酰赖氨酸，和一种N，N- 二甲基-取代的氨基酸残基或一种其盐。
术语“低级烷基”指的是C1-C6烷基。
术语“低级酰基”指的是C1-C6酰基。
术语“NDGA化合物”指的是NDGA和/或NDGA衍生物，分开的或一起 的。
术语“NDGA衍生物”指的是一种或多种化合物，其每一种都具有如 下结构式：

其中R1，R2，R3和R4是独立的-OH，低级烷氧基，低级酰氧基，或一种氨 基酸残基，或取代基或其盐但每一种不同时为-OH；而R5，R6是独立的-H或一种烷基，诸如一种低级烷基。该术语包括，例如，一种化合物，其 中R1，R2，R3和R4各自是-OCH3，或各自是-O(C＝O)CH3；而R5，R6各自 是-H或各自是一种低级烷基。在本发明的一个实施方案中，R5和R6可各 自是-CH3或-CH2CH3。
关于邻苯二酚丁烷或NDGA化合物的一种“基本上纯化的”化合物在 此指的是一种基本上不含除了本发明的邻苯二酚丁烷或NDGA化合物的化 合物(此后，称之为“非NDGA物质”)。但是基本上不含指的是至少50 ％，优选地至少70％，更优选地至少80％，还更优选地至少90％地不含 非NDGA物质。
在此适用的“缓冲液”包括任何本领域的常规缓冲液，诸如，例如， Tris，磷酸缓冲液，咪唑缓冲液，以及碳酸氢盐缓冲液。
在此适用的术语“治疗(treatment)”，“治(treating)”，以及类 似的术语指的是获得一种需要的药学和/或生理作用。该作用可以是根据 完全或部分阻止一种其状况或疾病或症状的预防，和/或可以是根据一种 部分或完全的治愈一种状况或疾病和/或该状况或疾病引起的不良影响 的治疗性作用。因而，“治疗(treatment)”，例如，涵盖了任何对一种 哺乳动物，尤其是人类的状况或疾病的治疗，且包括：(a)如果该受试 者有该状况或疾病的倾向，但还未被确诊患病，则预防该状况或疾病的 发生；(b)抑制该状况或疾病，诸如，阻止其发展；以及(c)减轻、缓 和或改善该状况或疾病，诸如，例如，导致该状况或疾病的消退。
一种“制药学上可接受的载体(carrier)”指的是任何常规类型的 一种无毒固体，半固体或流体填料，稀释液，胶囊物质或配方辅剂。“制 药学上可接受的载体”在使用的剂量和浓度下对受者无毒性，且和其他 配方成分相容。例如，一种含有本邻苯二酚丁烷或NDGA化合物的配方的 载体，优选地不包括氧化剂和其他已知对此有害的化合物。适用的载体 包括，但不限于，水，葡萄糖，甘油，盐水，乙醇，缓冲液，二甲基亚 砜，聚乙氧基蓖麻油，及其组合物。该载体可以含有额外的物质诸如润 湿剂或乳化剂，或pH缓冲剂。其他材料诸如抗氧化剂，保湿剂，粘度稳 定剂，以及类似的物质可以在需要的时候添加。
此处制药学可接受的盐包括加酸盐(acid addition salt)(由多肽 的自由氨基基团形成)和由无机酸形成的盐，诸如，例如，盐酸或磷酸， 或诸如乙酸，苦杏仁酸，草酸，和酒石酸的有机酸。由自由羧基形成的 盐也可得自无机碱诸如，例如，钠，钾，铵，钙，或氢氧化铁，以及诸 如异丙基胺，三甲基胺，2-乙胺醇，和组氨酸的有机碱。
术语“制药学上可接受的赋形剂(excipient)”包括赋形剂 (vehicles)，佐剂，或稀释液或其他辅助物质，诸如本领域常规物质， 这些物质公众可轻易得到。例如，制药学上可接受的辅助物质包括pH调 节和缓冲剂，浸透压调节剂，稳定剂，润湿剂以及类似的物质。
术语“受试者”，“宿主”和“患者”在此可以互换地使用，指的是 一个被用本组合物治疗的动物，包括，但不限于，猿，人，猫，犬，马， 啮齿动物，牛，猪，绵羊，山羊，哺乳类农畜，哺乳类运动动物，以及 哺乳类宠物。
此处使用的术语“肥胖症”或“超重”意思是超过骨骼和身体需要 限制的体重的增加，由体内过量的脂肪积累引起。因而，该术语意在涵 盖超过理想体重大约5％，诸如大约10％，例如，大约15％的，诸如大 于20％等等的体重。
在本发明进一步描述之前，应该知道，本发明不限于所描述的特定 的实施方案，因为这些实施方案理所当然地可以变化。也应该懂得，此 处使用的术语仅用于描述特定的实施方案，而不是意在限制，因为本发 明的范围将仅被附加的权利要求所限定。
提供任何一个范围的值的时候，应该知道，每一中间值，除了本文 另外明确规定，至下限单位的十分之一，在该范围的上下限之间以及任 何其他叙述的或在该叙述的范围内的任何中间值，都包含在本发明的范 围内。这些较小范围的上下限可以独立地被包括在较小的范围内，也被 包含在本发明的内，除非是在所述的范围内的任何特定排除的界限。当 所述的范围包括一个或同时两个界限的时候，排除那些包括的界限其一 或两者的范围也包括在本发明的范围内。
在此提及的所有出版物，包括专利，专利申请，和杂志论文其内容 的全部均作为参考文件列入此处，包括其引用的参考文献，这些参考文 献也均作为参考文件列入此处。
必须注意，当在此使用的时候单数形式的“一(a)”、“一(an)”， 以及“该(the)”包括多个指示物，除非其上下文明显地显示是其他含 义。因而，例如，涉及“一化合物”包括多个这类化合物，而涉及“该 NDGA化合物”包括指一种或多种NDGA化合物及其为本领域人员知晓的同 等物(equivalents)。
在此讨论的出版物仅提供了在本申请申请日以前公开的部分。没有 任何在此的叙述可以被解释为承认本发明无权由于在先申请而居先于这 种出版物。此外，提供的出版日期可能不同于实际出版日期，可能需要 单独确认。
下文描述的本发明仅通过实施例给出，但不能以任何方式解释为限 制本发明。
邻苯二酚丁烷的制备
本发明的邻苯二酚丁烷可以任何常规的方法制备。例如，这些化合 物可以如美国专利5,008,294所述的方法制备。
NDGA化合物的制备
NDGA化合物及其配方可以由任何本领域常规的方法制备。例如， NDGA化合物可以由美国专利5,008,294(Jordan等，1991年4月16日 领证(issue))；美国专利6,291,524(Huang等，2001年9月18日领证)； Hwu，J.R等(1998)；或McDonald，R.W.等(2001)所述的方法制备。
在本发明的一个实施方案中，一种NDGA化合物，4-O-甲基NDGA，也 被称之为内消旋-1，4-二(3，4-二甲氧苯基)-2，3-二甲基丁烷 (meso-1，4-bis(3，4-dimethoxyphenyl)-2，3-dimethylbutane)，或M4N 由如下方法制备：在一个反应瓶中制备一种在甲醇中的含有NDGA和氢氧 化钾的溶液。然后在反应瓶中加入硫酸二甲酯，以允许反应继续进行。 最后用水骤冷反应，是产物沉淀下来。该沉淀通过过滤分离，并在一个 真空电炉中干燥。所得化合物然后溶解在一种二氯甲烷和甲苯的溶液中， 随后通过一个氧化铝柱纯化。溶剂通过旋转蒸发除去，而固体在异丙醇 中重悬并过滤分离。在一个真空电炉中干燥滤饼(filter cake)。所得 的4-O-甲基NDGA(M4N)通过在异丙醇中回流滤饼，以及通过过滤重新分 离结晶而结晶。
在本发明的一些实施方案中，本发明的某些NDGA化合物，诸如G4N， 也被称之为内消旋-1，4-二[3，4-(二甲氧氨基乙酸基)苯基]-(2R，3S)- 二甲基丁烷(meso-1，4-bis[3，4-dimethylaminoacetoxy]phenyl) -(2R，3S)-dimethylbutane)或4-二甲基甘氨酰NDGA (tetra-dimethyglycinyl NDGA)，或有时被称为四甘氨酰NDGA (tetraglycinal NDGA)，或一种其盐酸盐和具有氨基酸取代基的类似化 合物，也可根据常规方法制备，例如，在美国专利6,417,234中所述的 方法。
组合物
本发明还提供了组合物，包括药物组合物，其包含包括该NDGA化合 物的该邻苯二酚丁烷和制药学上可接受的载体或赋形剂。这些组合物包 括一种缓冲液，该缓冲液根据该邻苯二酚丁烷或NDGA化合物的合适的使 用选择，也可包括其他适合于预期用途的其他物质。本领域技术人员可 以容易地选择一种合适的缓冲液，这些缓冲液中的许多都在本领域已知， 且适用于一个预期用途。在某些情况下，该成分可包括一种制药学上可 接受的赋形剂，这些赋形剂许多都在本领域已知。许多出版物描述了此 处使用的制药学上可接受的赋形剂，包括，例如A.Gennaro，(1995)； Ansel，H.C.等(1999)；以及Kibbe，A.H(2000)。
此处的组合物根据潜在的用药方式配制。因而，如果该组合物打算 以鼻内或吸入方式给药，例如，该组合物可以被转化成一种粉末或气溶 胶的形式，和用作这种目的的常规方法一样。其他配方，诸如口服或者 肠胃外用药物释放，也按本领域常规方法使用。
此处给药的组合物可以形成溶液，悬浮液，药片，药丸，胶囊，持 续释放配方或粉末。
治疗方法
在某人希望对一个患肥胖症的受试者提供一种治疗的情况下，该邻 苯二酚丁烷包括本主题发明的该NDGA化合物成分可用于治疗的药剂。
根据该主题方法，可以治疗大量的动物宿主，包括人和非人动物。 通常这些宿主是“哺乳动物”或“哺乳类”，其中这些术语被广泛用于描 述在哺乳动物纲的生物体，包括食肉动物目(例如，狗和猫)，啮齿目(例 如，豚鼠，以及大鼠)，以及其他哺乳动物，包括牛，山羊，马，绵羊， 兔，猪和灵长类(例如，人，黑猩猩，以及猴子)。在许多实施方案中， 该宿主是人。实验研究所关心的是动物模型，诸如提供一种治疗人类疾 病的模型。此外，本发明也可用于兽医护理。
配方，剂量，以及给药途径
如上提及的，给宿主施加有效量的活性剂，其中“有效量”意思是 一种足以产生所需结果的剂量。在一些实施方案中，该所需结果是至少 减少体重或减少体重的增加。
通常，本发明的组合物包含从小于大约1％至大约99％的活性成分， 即，此处的邻苯二酚丁烷包括该NDGA化合物；可选地，本发明包含大约 5％至大约90％的活性成分。给药的合适剂量依赖于所治疗的受试者，诸 如受试者的总体健康状况，受试者的年龄，疾病或状况的情形，受试者 的体重。通常，对小孩可给药大约0.1mg至大约500mg或更少，对成人 可给药大约0.1mg至大约5g或更少。该活性剂可以在一个剂量，或更通 常的情况下，多个剂量给药。本领域技术人员通过不同的方法可轻易确 定对某一给定的药剂的优选剂量。本领域技术人员通过常规的试验建立 剂量反应曲线可轻易地确定其他有效剂量。当然，药剂量将根据使用的 特定药剂而变化。
活性剂的给药频率，和剂量一样，可以被护理者通过年龄，体重， 疾病状况，健康状况以及病人的反应确定。这样，该药剂可以每天、每 周、每月、或常规方法确定的适合的时间给药一次或多次。该药剂可以 间歇性给药，诸如给药几天，几周或几月，然后直到过了一段时间，诸 如3个或6个月不再给药，然后再次给药几天、几周或几月。
本发明的邻苯二酚丁烷或活性剂可以并到各种不同的配方中，以用 于治疗性给药。尤其是，本发明的邻苯二酚丁烷可以通过和适合的、制 药学可接受的载体或稀释剂组合配制进药物组合物中，还可配制进如固 体，半固体，液体或气体形式，诸如药片，胶囊，粉末，气溶胶，脂质 体，纳米颗粒，细粒，药膏，溶液，栓剂，注射剂，吸入剂和烟雾剂的 制剂中。
同样地，这些活性剂的给药可以以不同的方式实现，诸如，口服给 药，口腔含化给药，直肠给药，鼻内给药，静脉给药，脂内给药，气管 内管(intra-tracheal)给药，局部给药，间质给药，皮下给药，等等， 或通过吸入或植入给药。
特别地，纳米颗粒、胶束、脂质体制剂，还可以全身地给药，包括 肠胃外用药或鼻内用药，以及间质给药，口服用药，局部用药，透皮用 药，通过吸入或植入给药，诸如靶向药物给药，提高药物的生物利用度 以及保护药物的生物活性和稳定性。此处的纳米颗粒束缚药物可望能达 到更长的体内药物存留时间。
在药物剂型下，该活性剂可以以制药学可接受的盐的形式给药，或 者它们可以单独使用或和其他制药学活性化合物适当联合以及组合使 用。以下的方法和赋形剂仅仅是举例说明，而决无限制之意。
对于口腔制剂，该活性剂可以单独使用或和其他适合的添加剂组合 使用，以制备药片，粉末，细粒或胶囊，例如，和常规的添加剂，诸如 乳糖，甘露醇，玉米淀粉或马铃薯淀粉；和粘结剂，诸如结晶纤维素， 纤维素衍生物，阿拉伯树胶，玉米淀粉或白明胶；和分解剂 (disintegrator)，诸如玉米淀粉、马铃薯淀粉或羧甲基纤维素钠；和 润滑剂，诸如滑石，硬脂酸镁；以及如果需要的话，和稀释剂，缓冲剂， 润湿剂，防腐剂和调味剂。
该制药学可接受的赋形剂，诸如赋形剂，辅佐剂，载体或稀释剂， 在本领域是常规物质。适用的赋形剂媒介物是，例如，水，盐水，葡萄 糖，甘油，乙醇，或类似物，及其组合。此外，如果需要的话，该赋形 剂可以包括少量的辅助物质诸如pH调节剂和缓冲剂，浸透压调节剂，稳 定剂，润湿剂或乳化剂。制备这些药剂形式的实际方法是公知的，或将 对本领域技术人员显而易见。参见，例如，1985年的雷明顿的 (Remington’s)《制药学》第17版，麦克(Mack)出版公司，宜思顿 (Easton)，宾夕法尼亚州。该将给药的成分或配方在任何情况下，都包 含足以在被治疗的受试者中达到所需状态的一定量的药剂
该活性剂可以通过在水或非水溶剂中溶解，悬浮或乳化它们而配制 进注射制剂中，这些溶剂有，诸如，植物或其他类似的油，包括玉米油， 蓖麻油，合成脂肪族酸甘油酯，更高级脂肪酸或丙二醇的酯；以及如果 需要，和常规的添加剂诸如增溶剂，等渗剂，悬浮剂，乳化剂，稳定剂 和防腐剂一起使用。
该活性剂可以在通过吸入给药的气溶胶配方中使用。本发明的化合 物可以配制进压力可接受的推进剂诸如二氯二氟甲烷，丙烷，氮气以及 类似的物质。
此外，该活性剂可以通过和不同的基底(base)诸如乳化基底或水 溶基底混合而制备进栓剂中。本发明化合物可以通过栓剂直肠给药。该 栓剂包括赋形剂诸如可可油，聚乙二醇(carbowax)和聚氧乙烯，这些 物质能在体温下融化，而在室温下凝固。
可提供口服或直肠给药的单位剂型，诸如糖浆，酏剂，以及悬浮液， 其中每一剂量单元，例如一茶匙的量、一大汤匙的量、药片或栓剂，含 有一预定量的含有一种或多种抑制剂的该组合物。类似地，注射或静脉 给药的单位剂型可以包括在一种组合物中的抑制剂，如一种在无菌水， 普通盐水或另一种制药学可接受的载体中的溶液。
此处使用的术语“单位剂型”，指的是适合于人和动物受试者单次剂 量的物理不连续的单位，每一单位含有一预定量的的本发明化合物，该 化合物已被计算成在一个在和一种制药学接受的稀释剂、载体或媒介物 一起使用时足以产生需要的作用的量。本发明的新单位剂型的规格依赖 于使用的特定化合物和需要达到的效果，以及宿主中每一化合物相关的 药物动力学。
本发明包括具有多次或单位剂量的活性剂的试剂盒。在这种试剂盒 中，除了包含多次或单位剂量的含NDGA衍生物的组合物的容器外，还有 一指示的包装插页，该插页上具有描述治疗相关的病理情况的药物的使 用和附带益处的说明。
纳米颗粒(“NP”)的制备
本发明包括邻苯二酚丁烷的配方，包括在一种NP制剂中的NDGA化 合物。依据不同的释放方法，在此可以使用一些不同的NP配方。该NP 配方可以根据需要的药物释放分布(drugrelease profile)而不同， 通过控制分子量，共聚物比例，药物填充量，微颗粒大小和孔隙率和制 造条件。该NP配方也可根据制造工艺中使用的聚合物、稳定剂和表面活 性剂而不同。不同的赋形剂也可对药物吸收、药物在身体中的分布以及 药物在血浆中的持续性具有不同的影响。本领域技术人员可以确定所需 的属性和特点，以及相应地确定要使用的合适的NP配方。
NP的聚合物基质必须满足生物相容性、生物利用度、机械强度以及 易于加工性的标准。对该用途的最为人熟悉的聚合物是可生物降解的聚 丙交酯-共-乙交酯(“PLGAs”)。
此处的NP可以本领域常规的方法制备。在一个实施方案中，该NP 可以由所述的物质制备，例如，Lockman，P.R.等(2002)。制造方法类 型包括，例如，乳化液聚合，界面聚合，反溶剂化蒸发和溶剂沉积。
此处制备NP的乳化液聚合方法中，该聚合方法包括从一单个单体单 元上构建一聚合物链，如，例如Kreuter，J.(1994)的描述。通过自由基 或离子形成的方法，诸如通过使用高能辐射，紫外光，或羟基离子启动 后，聚合化在室温下同时发生。一旦聚合化反应完成，过滤并中和该溶 液。聚合物形成胶束且其微滴由从大约100至107个聚合物分子组成。本 方法通常不需要表面活性剂和稳定剂。同样，本方法可以在一有机相而 不是一水相中完成。
此处NP也可以由一种界面聚合方法制备，例如Khouri，A.I.(1986) 的描述。在这个方法中，使用单体制备聚合物，且聚合反应发生在当一 种水相和有机相通过在高力矩机械搅拌下均质，乳化，或微流态化 (microfluidization)而混合的时候。例如，聚氰基丙烯酸烷酯 (alkylcyanoacrylate)纳米胶囊含有该邻苯二酚丁烷，诸如该NDGA化合 物，可以由将该亲脂性NDGA化合物和该单体组合在一有机相中，在油中 溶解该组合物，以及在不断搅拌下通过一个小管缓慢地将该混合物加入 到一水相中而制备。然后该单体通过阴离子聚合化自发形成200-300nm 的胶囊。本方法的一个变体包括将苯甲酸苄酯，丙酮和磷脂的溶剂混合 物加入到含有该单体和药物的该有机相中，例如Fessi，H.等(1989)的描 述。这创造了一种配方，其中该药物被封装且抗降解直至该药物达到靶 组织。
在NP制备的油变性和反溶剂化过程中可以使用诸如清蛋白和明胶的 大分子。在油乳化液变性过程中，大分子通过均质化被包埋在一有机相 中。一旦被包埋，该大分子就被在不断搅拌下缓慢地导入一水相中。然 后该通过导入两不混溶相形成的该纳米颗粒可通过诸如与一种醛交联或 通过热变性而硬化。
或者，大分子可以通过“反溶剂化”形成NP。在该反溶剂化过程中， 大分子被溶解在一种溶剂中，其中该大分子以一种溶涨的、卷曲的形状 存在。然后通过改变环境，诸如pH，电荷，或者通过使用一种反溶剂物质 诸如乙醇的方法，诱导该溶涨的大分子成卷曲状态。然后该大分子通过 与一种醛交联而固定并硬化。在交联之前，该NDGA化合物可以被该大分 子吸收或束缚，以便于该衍生物被包埋在新形成的颗粒中。
固体脂NP可以通过高压均质制备。固体脂NP具有可以被灭菌和高 压蒸汽处理且具有一提供一种受控释放的固体基质的优点。
本发明还包括具有不同药物填充方法的NP。该NP可以是具有该药物 均匀分散在其中的固体胶质NP。该NP可以是具有该药物连接在表面的固 体胶质NP，诸如通过吸附。该NP可以是具有药物包埋在其中的纳米胶囊。 该NP还可以是具有该药物均匀分散在其中并且同时具有一种用于定向输 送至合适的组织的细胞表面配体的固体胶质NP。
对于一种特定的释放方式，该NP的大小可以和其效果相关。该NP 通常为大约10nm至大约1000nm；任选地，NP可以为大约30至大约800nm； 更典型地，从大约60至大约270nm；更进一步典型地，从大约80至大约 260nm；或从大约90至大约230nm，或从大约100至大约195nm。几个因 素可以影响NP的大小，所有的这些因素都可以由本领域技术人员调整， 诸如，例如，在聚合过程中使用的溶液的pH值，启始触发器(诸如热或 辐射等)的量以及单体单元的浓度。NP的大小可以用光散射通过光子相 关光谱测量。
此处的NP，诸如聚糖NP或清蛋白NP，可选地可以涂敷一层脂质层。 例如，聚糖NP可以和磷酸盐(阴离子)和四元铵(阳离子)配体相交联， 带或不带一脂双层，诸如含有二棕榈酰磷脂酰胆碱和胆固醇的涂层。其 他聚合物/稳定剂包括，但不限于：大豆油；麦芽糖糊精；聚氰基丙烯酸 正丁酯；氰基丙烯酸正丁酯/葡聚糖70kDa，聚山梨醇酯-85；聚氰基丙烯 酸正丁酯/葡聚糖70kDa，聚山梨醇酯-85；硬脂酸；聚甲基甲基丙烯酸脂。
该包含邻苯二酚丁烷的NP制剂，诸如NDGA化合物，诸如通过吸附 到NP上，可以静脉给药用于治疗肥胖症。为了避免网状内皮细胞对这些 NP制剂的有害的吸收，该NP可以用表面活性剂涂敷，或制有一种磁响应 材料。
因而，可选地，一种表面活性剂可用于连接到该NP上。例如，聚氰 基丙烯酸正丁酯NP可以和一种葡聚糖-70,000稳定剂和作为一种表面活 性剂的聚山梨醇酯-80一起使用。其他表面活性剂包括，但不限于：聚山 梨醇酯-20、40或60；泊洛沙姆(Poloxamer)188；脂包衣(coating) ---二棕榈酰磷脂酰胆碱；大豆磷脂(Epikuron 200)；泊洛沙姆338；保 丽视明(Poloxamine)908；泊洛沙姆407。例如，保丽视明908可用于一 种表面活性剂以降低肝、脾、肺以及骨髓的网状内皮系统(RES)对于NP 的摄入。
该磁响应材料可以是可并入制备NP成分中的磁铁矿(Fe3O4)。这些 磁响应NP可以通过一磁体外部引导。
在另一个实施方案中，此处的NP可以由入Mu，L和Feng，S.S.(2003) 所述的方法制备，使用一种聚丙交酯-共-乙交酯(“PLGAs”)以及d-α- 生育酚聚乙二醇(d-α-tocopheryl polyethylene glycol)1000琥珀 酸酯(维生素E TPGS或TPGS)的混合物。后者除了可作为一种基质材料 外，也可用作乳化剂。
胶束形成载体的制备
本发明包括邻苯二酚丁烷，包括配制到胶束形成载体中的该NDGA化 合物，其中该胶束由常规的方法制备。这些实施例在，例如，Liggins， R.T.和Burt，H.M.(2002)；Zhang，X.等(1996)；以及Churchill，J.R. 和Hutchinson，F.G.(1998)。在这种方法中的一种中，聚醚-聚酯嵌段 共聚物被用作胶束形成载体，其中该嵌段共聚物是具有亲水(聚醚)和 亲脂(聚酯)部分的亲水脂聚合物。
另一类型的胶束是，例如，由同时具有亲水和亲脂部分的AB型嵌段 共聚物形成的，这由于其两亲特征而在含水媒介中能形成胶束结构是公 知的，就如在，例如，Tuzar，Z和Kratochvil，P.(1976)；和Wilhelm， M等(1991)所描述的。尽管在这些胶束内核中并入了高含量的疏水性药 物，这些聚合胶束还能保持令人满意的水稳定性。这些胶束在大约＜200nm 大小的范围内的时候，能有效地降低非选择性RES清除并提高渗透性和 保持力。
另外，例如，聚(D，L-丙交酯)-b-甲氧基聚乙二醇(MePEG：PDLLA) 二嵌段共聚物可以用MePEG1900和5000制备。使用辛酸亚锡(0.25％) 作为催化剂，该反应可以允许在160℃进行3hr。然而，如果反应被允许 进行大约6hr，可以用低达130℃的一个温度，或者如果反应仅进行大约 2hr，可用高达190℃的温度。
在一个实施方案中，使用Kohori，F.等(1998)的方法，N-异丙基 丙烯酰胺(“IPAAm”)(可井(Kohjin)，东京，日本)和二甲基丙稀酰胺 (“DMAAm”)(瓦可(Wako)纯化学，东京，日本)可在一种自由基聚合 过程中用于制备羟基端聚(IPAAm-co-DMAAm)。获得的共聚物可溶于冷水 中，并通过10,000和20,000截留分子量(molecular weight cut-off) 的两种超滤膜过滤。该聚合物溶液首先通过20,000截留分子量膜过滤。 然后滤出液再次通过10,000截留分子量膜过滤。最后可得三种分子量部 分，一种低分子量，一种中间分子量，以及一种高分子量部分。然后一 种嵌段共聚物可以通过从中间分子量部分的聚(IPAAm-co-DMAAm)的终 端羟基基团的D，L-丙交酯的开环共聚反应合成。所得的聚 (IPAAm-co-DMAAm)-b-聚(D，L-丙交酯)共聚物可以由如Kohori，F. 等(1999)描述的方法纯化。
该邻苯二酚丁烷，诸如NDGA化合物，可以被填充进胶束的内核以及 通过一个透析方法同时制备的胶束中。例如，可以在N，N-二甲基乙酰胺 (“DMAC”)中溶解一种NDGA化合物的氯盐，并加入三乙胺(“TEA”)。该 聚(IPAAm-co-DMAAm)-b-聚(D，L-丙交酯)嵌段共聚物可溶于DMAC中， 且可加入蒸馏水。该NDGA化合物溶液和该嵌段共聚物溶液可以在室温下 混合，随后在25℃下，用12,000-14,000截留分子量的透析膜(范围/ 泊(Spectra/Por)2，光谱医学工业(spectrum Medical Indus.)，加 州，美国)对蒸馏水透析。如Kohori，F.等(1999)所描述的，结合有 NDGA化合物的聚(IPAAm-co-DMAAm)-b-聚(D，L-丙交酯)胶束可以用一 种20nm孔径的微滤膜(安东迪斯科(ANODISC)TM，怀特曼国际(Whatman International))过滤纯化。
含有NDGA化合物的多囊脂质体(Multivesicular Liposome)的制备
多囊脂质体(“MVL”)可以由任何本领域常规方法制备，诸如，例如， 如Mantripragada，S(2002)描述的双重乳化方法。简要地，在该双重 乳化方法中，首先制备一种“油包水”乳化液，其步骤是，通过在一种 或多种挥发性有机溶剂中溶解两亲脂质，该两亲脂质可以是诸如一种含 有至少一中性脂质，诸如一种甘油三酯的磷脂，然后在此脂质组合物中 加入一种不混溶的第一水成分和一种亲水邻苯二酚丁烷，诸如一种疏水 NDGA化合物。然后乳化该混合物以形成一种油包水乳化液，然后和一种 第二不混溶水成分混合，随后加以机械混合，以形成悬浮在第二水成分 中的溶剂颗粒，形成一种水包油包水乳化液。该溶剂颗粒将含有带有溶 解在其中的邻苯二酚丁烷，诸如该NDGA化合物的多个水微滴。然后该有 机溶剂被从该颗粒中除去，通常用蒸发、降压或在悬浮液上方或在悬浮 液中通过一种气体蒸汽的方法。当溶剂被完全除去的时候，该颗粒成为 MVL，诸如储库泡沫(DepoForm)颗粒。当该过程的中性脂质被省略的时 候，将形成常规的多层微脂粒(multilamellar vesicle)或单层微脂粒 而不是MVL。
用于口服的邻苯二酚丁烷，诸如NDGA化合物的配方
一些邻苯二酚丁烷，诸如NDGA化合物是水溶性的、亲水性的化合物， 诸如G4N。本发明包括在制药学上可接受的载体或赋形剂中的亲水化合物 的配方，以及诸如口服配方的释放，诸如采用该化合物的含水液体溶液 形式，或该化合物可被冻干并作为一种粉末、或制进药片、或可以胶囊 化(encapsulate)该化合物而释放。
此处的该药片可以是肠溶片(enteric coated tablets)。此处的配 方可以是持续释放，或者缓慢释放或者快速释放配方。
该需要包括在口服配方中邻苯二酚丁烷，诸如NDGA化合物的量可以 依据将要给受试者的需要的用药剂量而调整。这种调整对于本领域技术 人员是常规方法。
一些邻苯二酚丁烷，包括一些NDGA化合物，是疏水性或亲脂性化合 物，诸如M4N。亲脂性化合物在内脏中的吸收可以通过使用可以增加化合 物在含水的肠液中溶解程度或速率的制药学可接受载体而提高。脂质载 体在本领域是公知的，如Stuchlik，M.和Zak，S.(2001)描述的。此 处的配方可以作为口服脂质释放，或者可以胶囊化进不同类型的胶囊中。
本发明包括，在一个实施方案中，一种含亲脂性NDGA化合物的配方， 通过将这些化合物溶解在甘油三酯中，该配方被配制成用作口服释放， 然后该配方被胶囊化以用于口服释放。甘油三酯是长链和/或中链脂肪酸 和一个甘油分子相连形成的分子。该长链脂肪酸从C14至C24，可以在普 通的脂肪中找到。中链脂肪酸从大约C6至C12，可以在椰子油或棕榈仁 油中找到。此处适于使用的甘油三酯包括结构脂质，该结构脂质包括以 下物质的混合物：在相同的甘油分子上的酯化的短链或中链脂肪酸或两 者。
本发明的另一个实施方案中，可在邻苯二酚丁烷，包括NDGA化合物 以及脂质载体的混合物中加入一种或多种表面活性剂，以使药物以微小 的油/表面活性剂混合物微滴存在。该表面活性剂可以起在胃肠道流体中 分散该稀释的油性配方的作用。
本发明还包括一种用于口腔释放的以一种由亲水表面活性剂和油组 成的微乳化液(micro-emulsion)的形式存在的邻苯二酚丁烷，包括NDGA 化合物的配方。该微乳化液颗粒可以是含有溶化的油和药物的表面活性 剂胶束。
邻苯二酚丁烷，包括NDGA化合物在固体脂质纳米颗粒制剂中的配方 也可适用于口服给药。固体脂质纳米颗粒可以由任何本领域的常规方法 制备，例如由Stuchlik，M.和Zak，S.(2001)描述的。
在一个实施方案中，该固体脂质纳米颗粒可以在一个通过在高温下 均质融化的脂质的热均质过程中制备。在这个过程中，融化固体脂质， 然后在融化的脂质中溶解邻苯二酚丁烷，诸如NDGA化合物。然后将一种 预热的分散介质与填充药物的脂质融化物混合，该组合物用一个均质器 混合形成一种粗预乳化液(coarse pre-emulsion)。然后在高于脂质融 化点的温度下进行高压均质，以制备一种油/水-纳米乳化液。冷却该纳 米乳化液至室温，形成固体纳米颗粒。
在本发明的另一个实施方案中，该固体脂质纳米颗粒可以在一个冷 均质过程中制备。在这个过程中，融化脂质，然后在融化的脂质中溶解 邻苯二酚丁烷，诸如NDGA化合物。然后将该填充药物的脂质在液氮或干 冰中凝固。在一个粉末碾磨器中将该固体药物-脂质碾磨成50-100μm颗 粒。然后该脂质颗粒被分散进冷的含水分散介质中，并在室温或更低温 度下均质形成固体脂质纳米颗粒。
本发明还包括在用于口服释放的脂质体或微束中的亲脂性邻苯二酚 丁烷，诸如NDGA化合物的配方。这些配方可以由任何本领域常规的方法 制备。微束通常是脂质单层微脂粒(monolayer vesicle)，其中该疏水药 物和该单层上的疏水区相连。脂质体通常是磷脂双层微脂粒。该亲脂性 邻苯二酚丁烷，诸如亲脂性NDGA化合物，通常位于这些微脂粒的中心。
鼻内释放的NDGA化合物的配方
本发明包括用于鼻内释放的以NDGA化合物为例的邻苯二酚丁烷的配 方以及其鼻内释放方法。鼻内释放能有利地比静脉给药建立一种更高的 在脑中的活性剂浓度。同样，这种药物释放方法避免了接受该药物的受 试者的内脏和肝脏中的首渡代谢(first-pass metabolism)问题。
可吸收的活性剂的量部分依赖于药物在粘液—一种由血清蛋白、糖 蛋白、脂质以及电解质的95％水溶液组成的组合物中的溶解度。通常， 当此活性剂的亲脂性增加时，药物在CSF中的浓度也增加。参见，例如， Minn，A.等(2002)。
该亲脂性NDGA化合物可以溶解在一种制药学上可接受的载体诸如盐 水、磷酸缓冲液、或磷酸缓冲盐水中。在一个实施方案中，一种pH7.4 的0.05M磷酸缓冲液可用作该载体，如Kao，H.D.等(2000)所描述的。
本药剂的鼻内释放可通过调整给药时受试者的位置而最优化。例如， 患者的头部可以不同地位于垂直-90°，仰卧-90°，仰卧-45°，或仰卧 -70°以达到最好的效果。
NDGA化合物组合物的载体可以是制药学上可接受的以及和组合物的 活性剂相容的任何物质。当载体是液体时，它可以对于鼻流体是低渗或 等渗，且在大约4.5至7.5的pH范围内。当载体时粉末形式的时候，它 也在一个可接受的pH范围内。
用于鼻内药物释放的载体组合物可以任选地含有能提高活性剂跨鼻 膜，并通过嗅觉神经通道进入脑的吸收的亲脂性物质。这些亲脂性物质 的实施例包括，但不限于，神经节苷脂和磷脂酰丝氨酸。该组合物中可 包括一种或多种亲脂性佐剂，诸如，以胶束的形式。
为给受试者治疗肥胖症的鼻内药物释放的活性剂的药物组合物可以 用本领域常规的方法配制，例如美国专利6,180,603所描述。例如，此 处的组合物可以配制为一种粉末、细粒、溶液、气溶胶、滴剂、纳米颗 粒，或脂质体的形式。除了活性剂，该组合物可以包括合适的佐剂、缓 冲剂、防腐剂、盐。诸如鼻滴剂的溶液可含有抗氧化剂、缓冲液，以及 类似物。
通过植入的药物释放
此处的以NDGA化合物为例的邻苯二酚丁烷，可以通过手术植入对治 疗的受试者释放药物，诸如皮下植入一种含有NDGA化合物的可生物降解 聚合物。该治疗可以和除去手术或除了手术外的其他常规疗法组合使用。
因而，此处的可生物降解聚合物可以为溶于肠道流体、对宿主组织 无任何毒性或反作用的任何聚合物或共聚物。优选地，该聚合物或合成 该聚合物的单体由食品药物监督局批准用于投药给人。一种具有不同的 溶解特性的单体的共聚物也优选以用于控制降解的动力学，如增加一种 单体对于另一种单体的比例以控制分解的速率。
在一个实施方案中，该聚合物是一种1，3-二-(p-羧基苯氧基)丙烷 和癸二酸[p(CPP∶SA)]的共聚物，如FlemingA.B.和Saltzman，W.M.，于 2002年在临床药物代谢动力学(Clin.Pharmacokine t)41：403-419的 论文，“卡氯芥植入的药物(代谢)动力学”；以及Brem，H.和Gabikian， P.(2001)所描述的。在另一个实施方案中，该聚合物是一种聚乙二醇 (“PEG”)和癸二酸的共聚物，如Fu，J.等(2002)所描述。
聚合物释放系统可用于释放此处的疏水和亲水NDGA化合物两者。该 NDGA化合物和可生物降解聚合物组合并用手术植入。一些聚合物成分也 可用于此处的静脉或吸入疗法。
通过吸入释放
此处的以NDGA化合物为例的邻苯二酚丁烷，可以通过吸入肺的给药 而全身地和/或局部地释放。药物的吸入释放作为一种在肺组织中达到高 药物浓度而不导致实质性的全身毒性的方法，以及实现药物的全身循环 的方法而被很好的接受。该用于制备这类配方的方法在本领域是常规的。 用该方法释放疏水或亲水NDGA化合物的任一种都可以看到对肺部疾病的 功效。
对通过吸入的肺部释放，此处的NDGA化合物可以配制成干粉末、水 溶液、脂质体、纳米颗粒，或聚合物的形式，而用例如，气溶胶的形式 给药。亲水性配方也可以通过肺泡表面摄入并进入血液循环以用于全身 性应用。
在一个实施方案中，包含活性剂的此处的聚合物由如Fu，J.等(2002) 所述的方法制备和使用。例如，此处的聚合物可以是癸二酸和聚乙二醇 (“PEG”)的聚合物，或者可以是聚丙交酯-共-乙交酯(“PLGA”)，或聚 乙烯亚胺(“PEI”)和聚-L-赖氨酸(“PLL”)的聚合物。
在一个实施方案中，该用于吸入释放的NDGA化合物在雾化和给药之 前可以溶解在盐水或乙醇中，如Choi，W.S.等(2001)所述。
在另一个实施方案中，此处的药剂当用常规方法制备成干燥粉末释 放的时候也有效，例如，Patton，J.S等在1999年“高级药物释放评论” (Adv.Drug Deliv.Rev.)35：235-247的论文“吸入的胰岛素”所述。
本发明包括NDGA化合物在微处理器植入的药物释放装置的帮助下的 释放，诸如，Gonda，I.等(1998)所描述的例如，聪明雾(SmartMist)TM 和艾尔克斯(AERx)TM。
在阅读本公开的发明后，本领域技术人员可以认识到可以用本发明 的配方给药而治疗和/或缓和的其他疾病状况和/或症状。
                         实施例
下述实施例是为了给本领域技术人员提供一个有关如何进行和使用 本发明的完全的公开和描述而提出，而不是意在限制发明人认为是其发 明的范围，也不是意在表现下述实验是完成的所有或仅有的实验。对于 使用的数据(例如，数量，温度等)已经做过努力使其保持精确，但是 应该说明的是会有一些实验的误差和偏差。除非另外说明，份是重量份， 分子量是重量平均分子量，温度是摄氏度，而压力是或接近大气压。
         实施例1.  4-O-甲基-NDGA的预备批次的制备
4-O-甲基-NDGA，在此称之为M4N，通过在碱，诸如氢氧化钾的存在 下，NDGA和过量的硫酸二甲酯反应而合成。产物通过添加水使产物沉淀 而分离。该反应产物通过一个碱性矾土塞子，以除去痕量的酚杂质，主 要是不同种类的2-O-甲基和3-O-甲基取代的NDGA。在该反应混合物的溶 液通过该矾土塞子时，在一个旋转蒸发器上除去溶剂，形成固体产物。 该产物和2-丙醇一起粉碎，过滤并在一个真空炉中干燥，形成粗4-O-甲 基NDGA。从2-丙醇中结晶将得到纯度大于或等于99.66％的4-O-甲基 NDGA。
步骤1：4-O-甲基-NDGA的粗制剂的合成
在一个用作冷却浴的水浴盆中设立一个装有一个机械搅拌器、冷凝 器和用于惰性气圈的入口的22L长颈瓶。该长颈瓶被放在一个氩气气圈 中，且装有484.3克NDGA(西部工程和研究公司，德克萨斯州厄尔巴索 市(E1 Paso))，以及4850mL甲醇，并搅拌。在搅拌后的浆液中加入在 1210mL去离子水中的387.5克氢氧化钾溶液。用冰浴冷却含有该反应混 合物的长颈瓶，并缓慢(逐滴地)加入硫酸二甲酯(1210mL)。控制该添 加以避免放热(exotherm)。在添加结束的时候，温度大约为13℃。监控 反应的pH值，且整天逐份添加50％KOH溶液，以维持碱性pH；共添加 1400mL 50％KOH溶液。PH指示条显示，该具有过量碱的反应混合物的 pH值大约为12。该溶液在碱性pH下呈黑色，但在中性或酸性pH下变浅 色。
在该天结束的时候，添加额外的600mL硫酸二甲酯，且该反应混合 物被允许过夜搅拌。次日上午，反应仍为碱性，并已经进行至大约90％。
该反应混合物通过加入4850mL去离子水抑制(quench)，并使产物 沉淀下来。该产物通过过滤分离，该滤饼用水彻底清洗，产物在50℃真 空炉中干燥大约65hr，产生539.5g粗产物。该产物在750mL二氯甲烷中 溶解，并在该溶液中加入375mL甲苯。该溶液通过以含有2215g碱性矾 土的短柱。该矾土用12,000mL二氯甲烷/甲苯溶液(2∶1)洗脱。在一个 旋转蒸发器上在真空中去除溶剂后，得到一种固体剩余物。该物质在1L 2-丙醇中被粉碎。过滤所得浆液以分离该固体产物。该物质在一个真空 炉中、在高真空、于50℃干燥大约21hr，产生426.7g(74％产量)粗 4-O-甲基-NDGA。
步骤2：4-O-甲基-NDGA的结晶
在一个加热罩(heating mantle)中设置一带有机械搅拌器、冷凝 器以及入口的3L长颈瓶，并装入415.4g产物。该长颈瓶装有1245mL的 2-丙醇，且加热该搅拌的混合物，产生一种温和的逆流；获得一种溶液。 停止加热，允许该混合物过夜冷却。该晶体产物通过过滤分离，并用200mL 冷2-丙醇洗涤该滤饼。该产物在真空炉中、于50℃下、在高度真空中干 燥至为404.7g(从NDGA的70.5％总产量)的恒重。
         实施例2 含有NDGA化合物的PLGA纳米颗粒的制备
该NDGA化合物可以用本领域常规的方法制备为一种纳米颗粒制剂。 例如，该纳米颗粒可以如Lamprecht，A.等(2001a)、Lamprecht，A.等 (2001b)及如下所述的方法制备。
可生物降解的聚合物聚(DL-丙交酯-共-乙交酯)50/50(PLGA) (mol.wt.5,000或20,000)可以从瓦可(Wako)(日本大阪)购买。大约 40mg的一种NDGA化合物可以溶于含有250mg聚合物聚(DL-丙交酯-共- 乙交酯)50/50(分子量5,000或20,000)的4ml二氯丙烷中。然后该溶 液可以被倒入8ml含水的聚乙烯醇溶液(1％)并用超声波降解器 (ultrasonifier)(超声破裂器UR-200P；托米精工(Tomy Seiko)株式 会社，日本东京)在冰浴中均质3min。二氯乙烯可以在减压下蒸发，并 沉淀聚合物。该纳米颗粒可以通过离心(14,000g离心5min)从非胶囊 化的药物和自由表面活性剂中分离出来。在冻干前，纳米颗粒可以在蒸 馏水中再分散和离心3次。在口服前，该纳米颗粒可以在pH6.8的磷酸 缓冲液中再分散。
可以分别用丰达(Photal)激光粒度分析仪LPA3100(大琢电子 (Otsuka Electronics)，日本大阪)和泽塔粒度仪(Zetasizer)II(马 尔文仪器(Malvern Instruments)，英国伍斯特郡)分析纳米颗粒的大小 分布和其表面电势。纳米颗粒的外表形状可以用日本电子株式会社 (JEOL)的JSM-T330A扫描显微镜(日本东京)分析。
  实施例3.含NDGA化合物的PLGA/维生素E TPGS纳米颗粒的制备
含PLGA和另一种基质材料，d-α-生育酚聚乙二醇1000琥珀酸酯(维 生素E TPGS或TPGS)的NP，可以由如Mu，L.和Feng，S.S.(2003)所 述的，一种修饰的水包油的单乳化液溶剂蒸发/萃取的方法制备。在该方 法中，在二氯甲烷中加入已知质量的聚合物和NDGA化合物。该聚合物， 例如，聚(DL-丙交酯-共-乙交酯)(PLGA；L/G＝50/50，MW 40,000-75,000； L/G＝75/25，MW 90,000-120,000；L/G＝85/15，MW 90,000-120,000；)， 可以从西格玛(Sigma)(美国)购买。维生素E TPGS可以从美国伊斯曼 化学(Eastman Chemical)获得。搅拌该混合物，以使所有的物质都溶 解。然后将该有机相溶液缓慢倒入该搅拌后的水溶液中，用或不用乳化 剂和同时的在50W脉冲模式的超声处理(美沙尼克(Misonix)，美国)。 形成的o/w乳化液可以在室温下(22℃)用一个磁力搅拌器轻柔搅拌过 夜，以蒸发该有机溶剂。所得的样品可以通过离心收集，诸如在10,000rpm 下，16℃，10min(爱本德(eppendorf)5810R型，爱本德，德国汉堡)， 并对某些样品用去离子水洗涤一次或二次。所得的悬浮液可以冷冻干燥 (阿尔法-2，马丁·克里斯特冷冻干燥机有限公司，德国)以获得一种 纳米颗粒的精细粉末，该粉末可以放置和保存在一个真空干燥器中。
         实施例4.含有NDGA化合物的脂质体的制备
该NDGA化合物，诸如该亲脂性药物，可以用本领域常规方法被胶囊 化进长久作用的脂质体中。一种这类方法如Sharma，U.S.等(1997)所 述。
长久作用的脂质体具有延长的血液循环时间。它们通常包括高相转 变Tm脂质、高胆固醇含量，以及一种诸如磷脂酰肌醇、单唾液酸神经节 苷脂(GM1)，或具有一个聚乙二醇(PEG)首基(headgroup)的合成的磷 脂的成分，该首基提供了一防止血浆(plasma)蛋白进入脂质体表面的 空间位阻。
在一个实施例中，可以制备包括摩尔比为9∶5∶1的磷脂酰胆碱 (“PC”)：胆固醇(“Chol”)：连接到二棕榈酰磷脂酰乙醇胺 (dipalmitoylphosphatidylethanolamine)上的聚乙二醇(“PEG-DPPE”) 的脂质体。该脂质首先在氯仿中混合，然后通过蒸发溶剂可以产生一薄 层脂质膜。然后在由NaCl(145mM)、Tris[羟甲基]-2-氨基乙烷-磺酸(TES： 10mM)以及乙二胺四乙酸(EDTA：0.1mM)缓冲液、pH7.2组成的缓冲液 中水合该脂质。然后该脂质体可以通过0.08μm聚碳酸酯滤膜被挤出数 次。
在另一个实施例中，由二硬脂酰磷脂酰胆碱(“DSPC”)∶Chol∶ PEG-DSPE以摩尔比9∶5∶1组成的脂质体可用一种“远距离填充(remote loading)”方法制备，如在Madden，T.D.等(1990)中所述。该远距离 填充法允许在脂质体含水核心内胶囊化高浓度的NDGA化合物。简要地说， 一薄的脂质膜可以在硫酸铵(250mM，pH5.5)中水合。该液体悬浮液可 以在60℃通过0.08μm聚碳酸酯滤膜挤出，并用等渗蔗糖透析，以除去 游离的硫酸铵。亲水NDGA化合物可以在10％(w/v)蔗糖中水合，并和 预先形成的脂质体一起在65℃孵育1hr。该制剂可以用等渗蔗糖透析， 以除去少量残留的未胶囊化的药物的部分。该方法产生的胶囊化效率可 大于或等于90％的起始NDGA化合物。
不同摩尔比的聚(丙交酯--共-乙交酯)-单甲氧基-聚(聚乙二醇) (PLGA-mPEG)共聚物可以通过一个融化聚合过程在真空下用辛酸亚锡作 催化剂制备，如Beletsi，A等(1999)以及Avgoustakis，K.等(2002) 所述。
         实施例5.NDGA化合物的鼻内配方的制备
该NDGA化合物可以作为用于鼻内释放的一种干粉末或一种气溶胶用 本领域任何常规的方法，如Marttin，E.等(1997)所述的方法来制备。
在一个实施方案中，可将该NDGA化合物配制为一种溶液，该溶液具 有在MQ水中任意的甲基化的β-环式糊精(“RAMEB”)(取代程度1.8)(德 国布格豪森(Wacker，Burghausen))，甘露醇或葡萄糖，MQ水是由一种米 里泊(Millipore)(荷兰安特罗(Etten-Leur))公司生产的Mili-Q UF 加超纯水系统过滤的水。该配方可以作为喷雾或滴剂给药。该在脂质配 方中的NDGA化合物的剂量可以从大约1mg/ml至大约1500mg/ml，或可选 地从大约10mg/ml至大约1200mg/ml，或更可选地从大约100mg/ml至大 约1000mg/ml，或更可选地从大约200mg/ml至大约800mg/ml，或任何落 在这些范围内的值。这些脂质配方可以喷进鼻孔或用作滴剂。
在另一个实施方案中，本发明包括NDGA化合物的冻干粉配方，由在 MQ水中溶解该NDGA化合物和不同量的RAMEB、乳糖、或甘露醇，以及冻 干该混合物，诸如，例如，过夜的方法制备。
          实施例6.可生物降解聚合物植入物的生产
此处的该NDGA化合物可以并入一种可生物降解的用于植入的聚合物 中。这些可生物降解的聚合物可以由任何本领域常规的方法制备，诸如 Fleming，A.B.和Saltzman，W.M.(2002)所述。一种或多种此可生物降 解的聚合物薄片(wafers)可以依据所需的化合物剂量一次植入。该可 生物降解的聚合物基质可由聚苯丙生(Polifeprosan)20制成，聚苯丙 生是一种由1，3-二-(p-羧基苯氧基)丙烷和癸二酸[p(CCP∶SA)]以20∶ 80摩尔比的共聚物。为制备用于植入的聚合物，p(CCP∶SA)和此处的一种 化合物可以在二氯甲烷中一起溶解，并喷雾干燥形成大小在大约1至大 约20μm范围内的球形颗粒。所得的“微球”被压缩铸造成人任何所需 大小的薄片，例如大约14mm的直径和大约1mm的厚度。该薄片可具有一 种由小间隙包围的致密包装的微球组成的一种均质结构。该NDGA化合物 的浓度可以是适于要治疗的病人的任何量，例如3.8％活性化合物。
         实施例7.PLGA-MPEG纳米颗粒的制备
含有该NDGA化合物的PLGA-mPEG纳米颗粒可以用稍微修改的如Song C.X.等(1997)描述的双重乳化液方法制备。这里，该NDGA化合物的水 溶液可以在二氯甲烷中被乳化，其中该共聚物用探针超声处理(probe sonication)(生物块(Bioblock)科学，75038型)被溶解。该水/油乳 化液可以转移至一胆酸钠的水溶液中，并该混合物可以用探针超声处理。 所得的水/油/水乳化液可以在室温下轻柔搅拌直至有机相挥发完毕。本 方法制备的纳米颗粒可以通过离心纯化，并用去离子蒸馏水再造 (reconstituted)。然后该纳米颗粒可被过滤，诸如通过一1.2-μm过 滤器(米里克斯(Millex)AP，米里泊)。
  实施例8.含NDGA化合物的普流尼克(Pluronic)胶束的制备
普流尼克是一种三嵌段PEO-PPO-PEO共聚物，其中PEO代表聚氧乙 烯，而PPO代表聚氧丙烯。疏水中心PPO嵌段形成胶束核心，而侧翼PEO 嵌段形成保护胶束免被网状内皮系统(“RES”)识别的外壳(shell)或 冠(corona)。普流尼克共聚物可以从巴斯夫(BASF)公司和ICI公司商 业获得。该NDGA化合物可以用任何本领域常规的方法导入该普流尼克胶 束，如Rapoport，N.Y.等(1999)所述。
简要地，该NDGA化合物，诸如G4N，例如，可以在PBS或RPMI培养 基中溶解，然后在一个在67kHz下操作的超声浴中超声处理一小段时间， 诸如15sec。该溶液可以在37℃下保存大约2hr，其中不溶的药物可以通 过一1000D截留分子量的膜在37℃下透析大约12hr，而从PBS或RPMI 培养基中去除(仅为10和20wt％普流尼克溶液透析)。
      实施例9.通过吸入释放在乙醇中的NDGA化合物
此处的NDGA化合物可以用任何本领域常规的配方通过吸入而释放， 包括作为干燥粉末或作为水溶液。前者有稳定性、对微生物生长的低感 药性以及每喷的高质量的优势。水溶液提供了更好的可重复性并避开了 团块组织。
在一个实施方案中，某些NDGA化合物可以依据如Choi，W.S.等 (2001)所述的方法释放。根据特定的化合物及其溶解度，该化合物可 以配制成乙醇中的一个合适的浓度，例如在大约1mg/ml至大约 1000mg/ml的范围内，或在其间的任何中间值，例如在大约2mg/ml和大 约800mg/ml之间，或在大约4mg/ml和大约100mg/ml之间，或在大约 5mg/ml至大约50mg/ml之间。为获得最大深度肺释放，可产生1-3μm 大小的气溶胶颗粒。为获得在乙醇中的更好的溶解性，此处的化合物可 以首先被冻干，然后如果必要或想要的话，用诸如H3PO4酸化。所得产物 的pH值可以用NaOH调节，如果想要的化，诸如调至pH7.4。然后所得组 合物可以被冻干，在乙醇中悬浮，超声处理并搅拌以产生合适的亚微米 大小的颗粒。然后该气溶胶化合物可以用标准的商业喷雾器给药，诸如 一个压缩器(空气喷射)或一超声类型的，或一个计量的剂量吸入器。 一个实施例是一种和一个帕里·帕罗内博(PARI PRONEB)压缩器相连的 帕里(PARI)LC Jet+喷雾器(帕里呼吸设备公司(PARI Rispiratory Equipment)，加州蒙特里)喷雾器的贮器可以装入最多大约9ml，且能喷 雾最大大约10min。
在另一个实施方案中，用于吸入的配方可以如Wang，D.L.等(2000) 所述的方法制备。例如粉末状的NDGA化合物可以溶于10∶90(v/v)的 聚乙二醇300∶100％含有0.5％(w/v)的抗坏血酸和0.5％(w/v)磷脂 酰胆碱的乙醇中。然后在药物配方可以用一个帕里(Pari)LC-加喷雾 器(帕里，弗吉尼亚州里士满(Richmond))气溶胶化，并待治疗的受试 者可以依据配方的剂量和想要达到的浓度，在产生的气溶胶中暴露不同 长度的时间。这种时间段可以是大约5分钟、10分钟、15分钟或更长。
    实施例10.用特殊设计的吸入器对NDGA化合物的释放
该用于吸入用途的NDGA化合物也可以在几个其他制药学上可接受的 载体中配制。在这个实施例中，此处的某些化合物可以根据Enk，A.H. 等(2000)的方法释放。这些化合物可以在含有大约5％葡萄糖和2％人 清蛋白的溶液中溶解。然后可以用一种特殊设计的吸入器进行吸入。 (Jatair，Fa.Hoyer，德国)。
           实施例11.用NDGA衍生物治疗肥胖症
NDGA衍生物可以用于治疗肥胖症。在一个实施例中，该NDGA衍生物， G4N，可以配制为一种无菌溶液，例如，1mg/ml在150mM氯化钠和40mM 磷酸钠(pH7.4)中。对于静脉给药，该药物还可进一步稀释于10ml/kg (最大大约100ml)生理盐水(normal saline)。每次治疗由一段时间的 一连续的输注组成，该时间决定于特定NDGA衍生物的半衰期，例如，在 用标准剂量的苯海拉明(diphenhydramine)[苯那君(Benadryl)]和对乙 酰氨基酚(acetaminophen)[泰诺(Tylenol)]预治疗15-20分钟后，给 予1-hr输注。患者被治疗一或两个疗程，每一疗程包括10天连续治疗 或三周每周连续3天共9剂药剂。这些药剂根据患者的特点和疾病的状 态决定，可以是例如，0.1mg/kg/天，或0.18mg/kg/天，或0.32mg/kg/ 天或更高的一种。
      实施例12.在全身或口服给药M4N后小鼠的体重减轻
下述实验本来是为了确定M4N对肿瘤的影响而进行的。然而，结果令 人惊奇地显示，不仅M4N对肿瘤的治疗有效，M4N还能引起小鼠的体重减 轻。这些结果纯属偶然，它表明此处的化合物对于治疗肥胖症有用。
小鼠
雌性ICR小鼠，年龄6-8周，从哈兰·斯帕拉格道利(Harlan Sprague Dawley)公司购买(印第安纳州，印第安纳玻利斯)。C57b1/6小鼠从查 尔斯河实验室(Charles River Laboratories)(麻萨诸塞州，威名顿 (wilmington))购买。无胸腺(thy-/thy-)裸鼠，5-6周年龄的雄性和 雌性，购自查尔斯河实验室，并根据动物关怀与应用指南(institutional animal care and use guidelines)在受控的温度和湿度下在一个无病 菌房间中饲养。
具有C3细胞诱导肿瘤的C57b1/6小鼠如Kim，E.H.等(2004)所述 制备。
配方
将M4N溶解于6％聚乙氧基蓖麻油，6％乙醇，88％盐水中，如Loganzo 等(2003)所述。小鼠接受为期3周的含有2mg M4N的一单独地每日100 μL i.p.注射。对照小鼠接受一等体积量的赋形剂。每7天测量一次肿 瘤两个垂直尺寸(L和W)，肿瘤体积根据下述公式计算：V＝(L×W/2)3× π/6。从各个小鼠得到的结构作成平均肿瘤体积比时间的图。肿瘤体积 的均差的统计显著性由学生t-检验(Student′s t-test)确定。在实验 的终点，收集肿瘤活组织切片用作cdc2免疫组织学分析和生存素 (Survivin)表达。
使用3H-M4N进行M4N组织分布研究
通过尾静脉或腹膜内给哈兰(Harlan)ICR小鼠或具有C3细胞诱导 肿瘤的C57b1/6小鼠注射含100μCi(微居里)氚示踪M4N和60mM冷M4N 的Cremaphor-乙醇基溶剂100μL。在注射后的特定时间，杀死小鼠，收 集其器官和血液，称重，并在4M异硫氰酸胍盐(Guanidine isothiocyanae，GITC)中过夜溶解。然后将不溶颗粒进一步用EtOH提取。 GITC抽提物和EtOH抽提物的氚含量用派卡德(Packard)闪烁计数器测 量，而每一器官的M4N量根据接种物的比活度(specific activity)计算。
短期和长期口喂食后的组织分布和毒性分析
在短期喂食实验中，对6只小鼠每只口服喂食30mg溶解在300μL 蓖麻油中的M4N。在给药后的2h，4h和8h时间点，杀死2只小鼠，收集 其器官和血液，M4N由如下方法提取和定量。在长期喂食实验中，给小鼠 喂食由溶解在玉米油中的M4N以及基本混合物(Basal Mix)(哈兰·泰克 拉(Harlan Teklad)；威斯康星州麦迪逊；产品目录号(Cat.)#TD 02273) 组成的食物小球14周。食物小球重9g每个含有242mg M4N。两个小鼠， 一只雄性一只雌性，被用作长期药物存留研究而保留；14只小鼠，有雄 性和雌性，用作长期药物毒性研究。在喂食结束时，杀死小鼠，收集器 官和血液，M4N由如下所述的方法提取和定量。
口喂食后M4N的提取和HPLC分析
从M4N喂食的小鼠上获取器官和血液，然后在-80℃过夜冷冻。在冷 冻之前，将肠胃器官(胃、小肠、结肠)纵向切开，并用PBS彻底清洗， 除去任何内含物。次日，将器官用剃刀刀片在干冰上切成小碎片，在一 个真空离心蒸发浓缩器(Speed-vac)中干燥，然后用研钵和杵压碾成粗 粉末。样品在100％乙醇中摇晃过夜抽提。离心样品，收集上清液。沉淀 在100％乙醇中再过夜摇晃抽提两次。汇集的乙醇抽提物在工作台上蒸发 数天，然后用乙酸乙酯重提，并在真空离心蒸发浓缩器中彻底干燥。然 后干燥样品用HPLC定量分析，M4N用纯M4N作标准品通过质谱鉴定。
对于来自短期喂养的小鼠的样品，进行透析以进一步从组织提取物 中纯化M4N。在1.5mL100％EtOH中溶解干燥的乙醇抽提物，并离心5min。 收集上清液，沉淀在0.4mL乙醇中重悬，并再次离心。上清液和以前的 上清液汇集在一起，然后用150mL100％EtOH过夜透析。该透析液在工作 台上以及在一个真空离心蒸发浓缩器中干燥，然后用HPLC分析。
HPLC定量M4N
将在每个时间点从一单个小鼠获得的样品送至KP制药(印地安那州 伯明顿(Bloomington))进行HPLC分析。HPLC条件如下所述：35％∶0.1 ％水中的TFA，65％＝“CAN.”该M4N标准品通过在100mL CAN中稀释 10.01mg M4N，然后超声处理5min制备。(2002ng/注射)。样品由加入 400uL EtOH并超声处理2min或直至达到完全溶解而制备。样品的注射 体积是100uL。
实验结果
腹膜内、静脉以及口服给药后，M4N被全身地分布到不同组织且检测 不到毒性
a.在一单一腹膜内或静脉给药后M4N的全身分布
将氚示踪冷M4N混合物溶解在6％聚乙氧基蓖麻油、6％乙醇、88％ 盐水溶剂中，然后腹膜内(i.p.)注射或通过尾静脉静脉(i.v.)注射 进小鼠中。注射后3小时，获取其器官和血液并称重，提取M4N。来自每 一器官的提取物的氚含量用一个派卡德闪烁计数器测量，而每一器官的 M4N量根据接种物的比活度计算。在通过i.p.和i.v.两种给药途径注射 3小时后，M4N被成功地分布至不同的的器官。有趣的是，尽管是不同的 给药途径，但获得的组织分布曲线图非常相似，因而表明一种非随机、 可能是受调节的药物分散机制。与此确证的是，用如下所述的口服给药 途径观察到了非常相似的分布曲线图。大部分回收的放射性位于肠胃道 器官：胃、小肠、盲肠和大肠，在3μg至20μg M4N每克组织的范围内。 大量的M4N也存在于肝和脂肪中，而在脑、肾和脾中检测到了在150至 400ng每克组织范围内的更低浓度。然而，极少或没有M4N，在注射后3 小时的心脏或血液中检测到。
总之，M4N可以通过i.p.或i.v.注射全身地用药到不同的特定组织 中。
前述实验表明M4N可以在一单个时间点上全身地和相对快速地被释 放至不同的组织。为了确定在一单次运用后M4N在不同时间在组织中的分 布，同时也为了评估将M4N释放至一个远处的肿瘤的能力，将6只具有 C 3细胞诱导肿瘤的小鼠(A-F)用如上的方法用3H-M4N通过i.p.处理。 在注射后的4小时、6小时、18小时和6天，测量不同组织和肿瘤中的 3H-M4N量。其结果确认了全身分布M4N的能力，大部分的M4N再次位于GI (肠胃)道器官、脂肪和肝，更少量在脑和肾中检测到。有趣的是，尽 管在以前的3小时注射中不明显，在4小时至6小时之间，脂肪和脾显 示了M4N量的快速增加。注射后6小时，在肿瘤中测量到了显著的、尽管 相对低含量的M4N，为294ng M4N每克湿肿瘤。最初用药后M4N的组织分 布变化显示了从0至6小时这些组织中M4N水平的增加，并在大约6小时 有一个峰。在18小时，M4N水平大大降低，在注射后6天，尽管在大部 分组织中还能检测到显著的M4N水平，M4N水平已经降至在6小时时看到 的水平的5-10％。
(b)在短期和长期口喂食后的全身组织分布和体内毒性评估。
预期的全身化学治疗药剂的毒性非常重要，因为它通常是在治疗许 多癌症中的主要限制性因素。为了评估用M4N进行长期腹膜内全身治疗的 毒性，也为了确定下述异种移植实验的安全剂量，进行了下述的毒性试 验。将12只小鼠分成3组，每组4只，进行为期2周的如下治疗：组1 接受一单一每日i.p.注射溶于100毫升6％聚乙氧基蓖麻油、6％乙醇、 和88％盐水(20mg/mL是可溶于该溶剂中的最大M4N量)中的2mg M4N； 组2接受一每天i.p.仅注射赋形剂；组3没有接受治疗。通过在治疗过 程之间的活动和总体重的每日评估而确定，在任何小鼠中均没有观察到 毒性。
前面的实验表明M4N可以通过IP和IV注射被全身地在体内分散，而 没有明显的毒性。然而，口服给药的便利和轻松，尤其是在长期的手术 后辅助治疗中，将大大便利于患者的给药并提高患者的生活质量。因而， 除了IP和IV给药，也研究了M4N口服给药的全身分散能力。在短期(＜8 小时)喂食实验和长期(14周)喂食实验两者中，评估了不同组织中的 M4N水平以及它们的在体内的毒性。在短期实验中，给小鼠喂食溶解在蓖 麻油(100mg M4N/mL蓖麻油)中的30mg M4N，在喂食后的2、4和8小 时，用HPLC确定不同组织中存在的M4N含量。在喂食后2小时，在每一 组织中发现一相对非常低含量的M4N(＜2ng每克组织)。在喂食后2小时 和4小时之间，包括肝、胰腺、肾、精囊、小肠、胃、大肠、盲肠以及 血液在内的大部分器官都显示了M4N水平的大量增加。在4小时时，如同 在IP和IV给药中看到的那样，大部分M4N位于胃肠道器官，在4ng至 45ngM4N每克组织的范围内。大量的M4N也存在于胰腺中，在0.1ng至2ng 每克组织范围内的更低的浓度也在心脏、肝、精囊、血液以及膀胱中检 测到。在喂食后8小时，M4N水平在几乎大部分的器官中降低，且在大部 分器官中已不存在M4N。总之，M4N在一单次口服30mg M4N后被短暂地分 散到不同的器官。M4N水平在大约喂食后4小时达到峰值，且M4N浓度大 大低于IP和IV给药中观察到的浓度。
长期喂食实验的目的是测量在连续口服14周后M4N在不同小鼠器官 中的稳定态水平。给野生型小鼠连续14周喂食含有大约280mg M4N、重 约9g的食物小球。一单个9g食物小球被一单个小鼠在大约3天内吃完， 转化为每天吃或给药93.9mg。HPLC定量显示口服给药已经全身地将M4N 分散至分析的所有器官；且令人惊奇地在所有器官中积累至大大超过那 些以前IP、IV以及口服一次给药观察到的浓度。在GI道器官和脾中测 量到了在350μg和900μg M4N每克组织之间的浓度；在肺、胰腺、精囊、 血液和脂肪中测量到15μg/g至30μg/g M4N；在心脏、肝、肾和膀胱中 测量到5μg/g至13μg/g M4N。
令人惊奇的是，尽管小鼠在试验过程中保持健康，在治疗中观察到 的体重表明M4N对治疗肥胖症有效。尤其是，体重的测量是在每两周或每 月基础上的。表1显示所有25只小鼠的体重变化，以及当应用的时候， 在整个治疗期间内M4N的消耗量。然而，为评价长期药物毒性，仅比较那 些治疗时间大于20周的小鼠。共有14只小鼠治疗时间超过20周，6只 是M4N治疗的而8只是对照小鼠。由于雌性通常吃的比雄性要少，且体重 更轻，对比是根据同性的小鼠之间进行的。对于雌性的对照和药物治疗 小鼠的平均体重百分比变化是相似的，甚至在对照雌鼠的平均食物消耗 量显著更高的时候(表2)。这个观察结果暗示M4N对雌性小鼠没有毒性 作用。对于雄性组，对照小鼠的平均体重变化是72％，而药物治疗的小 鼠的平均体重变化仅为21％。这个巨大的平均体重百分比变化归因于这 样一个事实，即对照雄性小鼠消耗了显著更高量的食物(药物治疗的 225g，而对照357g)。雄性和雌性的对照小鼠消耗了比M4N治疗的小鼠大 的多的食物表明在对照受试者中的更大的食物偏好。因此，看来M4N既减 少了雄性小鼠的食欲又减少了雌性小鼠的食欲。
表1   小鼠   治疗时长   (星期)   M4N的消毛   量(g)  开始日期  的体重(g)  结束日期  的体重(g)   ％体重   变化   M1   8   3.385  20.4  24.1   18.1   M2   9   3.321  19.0  19.7   3.7   M3   20   6.089  15.0  19.4   29.3   M4   20   5.364  17.2  19.4   12.8   M5   9   3.545  18.0  18.9   5.0   M6   20   6.032  18.1  23.0   27.1   M7   20   6.298  17.9  23.3   30.2   C8   11  16.9  19.6   16.0   C9   11  17.4  17.7   1.7   C10   20  17.7  23.9   35.0   C11   11  15.8  21.3   34.8   C12   20  17.2  19.4   12.8   C13   11  16.4  19.4   18.3   M14   8   3.131  21.9  26.4   20.5   M15   9   3.443  21.1  24.2   14.7   M16   20   6.101  22.2  24.1   8.6   M17   20   6.784  15.6  20.9   34.0   M18   11   3.882  18.6  20.8   11.8   M19   N/A   N/A  N/A  N/A   N/A   C20   20  17.7  28.6   61.6   C21   20  15.1  27.4   81.5   C22   20  15.8  27.2   72.2   C23   20  16.4  27.0   64.6   C24   20  16.2  28.7   77.2   C25   20  16.0  28.3   76.9
表2   性别   治疗   平均％体重   变化   平均食物消耗   量(g)  平均M4N消耗  量(g)   雌性   M4N   24.9   258.8  4.9   雌性   对照   23.9   342.0  N/A   雄性   M4N   21.0   225.0  4.7   雄性   对照   72.3   375.0  N/A
分离的器官的净重在表3中给出。由于受试的数量小，尽管不能对 大部分器官作出确定的结论，然而在喂食含有M4N的富含脂肪的食物为期 20周后，脂肪细胞的重量的降低却是显著(0.84g对0.196g)的。尤其 是，从两只用无M4N的富含脂肪的食物喂食的对照小鼠(C24和C25)上 分离脂肪组织，并用CREM溶液或用加M4N的CREM溶液孵育共6天时间(72 小时第一次提取，又一72小时后第二次提取)。测量在CREM溶液和不含 M4N的CREM溶液中孵育0时间、第三天和第六天的时候的脂肪细胞的重 量。结果在表4中显示。
表3   雌性   雌性   雄性   雄性   器官   对照   M4N   对照   M4N   胰腺   0.143   0.18   0.176   0.121   肾   0.254   0.3   0.323   0.35   盲肠   0.055   0.162   0.07   0.133   心脏   0.096   0.107   0.115   0.319   脾   0.06   0.08   0.059   0.065   肺   0.134   0.205   0.134   0.156   膀胱   0.0142   0.034   0.043   0.026   胃   0.162   0.243   0.185   0.177   结肠   0.124   0.195   0.149   0.186   肝   0.74   1.153   1.092   1.44   小肠   0.719   1.193   1.115   1.44   脂肪   0.353   0.509   0.84   0.196   睾丸   --   --   0.183   0.189   小囊   --   --   0.242   0.154
表4   溶剂**/小鼠   开始脂肪重量   第一次提取后的   脂肪重量   第二次提取后的   脂肪重量   -M4N/C24   0.842g   0.837g   0.818g   +M4N/C25   0.97g   0.481g   0.059g
**溶剂：0.6ml CREM 0.6ml乙醇±21.4mg M4N，70℃，2min然后 用8.8ml 0.15M NaCl稀释
  实施例13.在14天静脉注射M4N后的小猎兔犬(Beagle Dog)的
                     安全性研究
在这个实施例中，确定了两种不同的M4N配方[Cremaphor-乙醇(CET) 或二甲基亚砜(DMSO)]对雄性和雌性小猎兔犬的最大耐受剂量(MTD)。 这个实施例显示了M4N在4小时在CET赋形剂(vehicle)中以剂量达 10mg/kg，在DMSO赋形剂中以剂量达100mg/kg通过静脉注射进小猎兔犬 被安全地给药。这些配方达到了达14,000ng/ml M4N的血液水平而只有极 小毒性。
M4N-CET组的血管通路端口(Vascular Access Port(VAP))植入手术
将VAP植入小猎兔犬，并使输入导管(catheter)的末端位于上腔 静脉(superior vena cava)的水平上。狗在手术当天用止痛剂和抗生 素以及在手术后用抗生素和/或止痛剂预防性治疗(根据适当的基因逻辑 (Gene Logic)公司SOP号324.0.2，325.0.1和326.0.2)。根据主管兽 医(staff veterinarian)的推荐提供其他治疗。在术后恢复期，用盐 水以研究主管认为合适的频率冲洗导管管线。
尽管VAP被植入被指定要接受M4N-DMSO注入的小猎兔犬，然而，发 现DMSO和动物体内的VAP相连的注入导管不相容。因而，该M4N-DMSO 组动物的M4N-DMSO给药是通过在非VAP颈静脉内、在4小时期间内每30 分钟一次进行8次静脉注射进行的。该释放频率模拟了使用注射泵的测 试物质(test article)的药物释放方式。
表5.组指定和剂量水平   治疗     狗数目     剂量水平   (mg/kg)   注射速率   (mL/kg/hr)   注射体积   (mL)  持续  时间   M4N-CET         1雄，1雌         0   1   5   10   雄(1.7)，雌(1.3)   雄(1.7)，雌(1.4)   雄(0.7)，雌(0.6)   雄(1.8)，雌(1.3)  2小时  2小时  4小时  4小时   M4N-DMSOa                 1雄，1雌                 0     10     50     100     雄(0.17)，   雌(0.12)   雄(0.16)，   雌(0.13)   雄(0.83)，   雌(0.66)   雄(1.78)，   雌(1.35)  4小时    4小时    4小时    4小时     M4N-DMSOb     1雄，1雌     200     雄(4.1)，   雌(2.8)  ～1小  时
a每30分钟一次、为期4小时进行8次静脉注射
b用于确定潜在毒性的额外动物，雄性动物接受3次注射，雌性动物接受 2次注射
在整个注射期间以及在注射结束后至少一小时观察了来自该CET组 的动物。在整个颈静脉注射期间和在最后(第8次)注射后至少一小时 观察了DMSO组的狗。
用于毒物动力学(TK)分析的血液样品收集
在研究日(SD)1、SD3、SD6和SD8的下述时间点：给药前(predose)、 大约4小时注射完成后的0.25、0.5、1、2、4、8以及16小时通过颈静 脉收集来自CET组的动物的血液样品。
在SD1、SD3、SD6和SD8的下述时间点：给药前(predose)、M4N-DMSO 的最后注射剂量后的0.25、0.5、1、2、4、8以及16小时通过头静脉收 集从DMSO组动物的血液样品。
从两组动物收集的血液样品经过处理取得其用于TK分析的血浆和血 清。
TK分析
将该血浆和血清样品送至药拓(MedTox)实验室—主办人指定的用 于TK分析的实验室。用一种药拓实验室的已验证的方法(validated method)(M200406)进行M4N血浆和血清药时数据(concentration-time data)的TK分析，并通过非室(noncompartmental)方法分析以获得毒 物动力学参数的估计值，但不一定限于，Cmax，Tmax和AUC。
研究日1(SD1)：
a)M4N-CET组
雄狗：在第一个半小时内对CET注入的反应是：红斑，麻疹，痒， 呕吐，腹泻以及通常的懒散。在次之后开始恢复，开始到处走动，喝水。 在注入结束后不久行动正常。雌狗：除了没有呕吐和腹泻外和雄狗反应 相似。其过敏反应液比雄性更不严重。在注入结束后不久行动正常。
b)M4N-DMSO组
雄狗：对DMSO的反应是轻微的红斑，微痒，其它正常。在最后一次 注射结束后不久行动正常。雌狗：和雄狗反应相似。在最后一次注射结 束后不久行动正常。
研究日3(SD3)：
a)M4N-CET组
雄狗：对注射M4N-CET(1mg/kg)的反应是轻微的红斑，麻疹，痒。 这天的反应比SD1要轻微。尤其是，动物们没有呕吐，腹泻，或懒散， 它比SD1更警觉。在注射结束后不久行动正常。雌狗：它在注射日对 M4N-CET(1mg/kg)的反应比在SD1观察到的还要轻微。其过敏反应包括 轻微红斑和痒，但它在整个4小时的注射期间内通常相当警觉。在最后 一次注射结束后不久行动正常。
b)M4N-DMSO组
雄狗：这只狗没有显示出不良临床反应。如预料的那样，在沿颈静 脉的注射点上有一些发炎。
雌狗：这只狗没有显示出不良临床反应。如预料的那样，在沿颈静 脉的注射点上有一些发炎。
研究日6(SD6)：
a)M4N-CET组
雄狗：和前两个用药日相似，该动物对注射的反应是轻微的红斑、 麻疹和痒。反应强度当然只是SD 3的反应。它不呕吐或腹泻，通常在整 个注入期间保持警觉。在注射结束后不久行动正常。
雌狗：和它对以前给药的反应一致，它和雄狗相比，更好地忍受了 今天的注射，它还是有轻微的红斑和痒，但它相当警觉。在注射结束后 不久行动正常。
b)M4N-DMSO组
雄狗：该狗在第一3用药间隔(在给药之间1/2hr)通过非VAP颈静 脉成功地静脉注射了M4N-DMSO。和以前的用药日一样，该狗对每一次注 射后均没有显示出任何不良的临床迹象或症状。在第4次注射前，技术 人员注意到在注射点周围有一个“鸡蛋大小的”肿胀。皮下的误给药可 以被排除，因为在第3次注射期间可以轻易的检测到它。最有可能的是 一个血肿，是由于血液通过注射点缓慢外渗的结果。该动物在第三次注 射后没有接受更多的给药，然而，收集了血样，在第三次注射后的血液 收集的准确时间点被清楚的记载了下来。该血肿在两小时内消退且在注 射点区的轻柔按摩没有使动物发炎(irritate)。
雌狗：该狗在4小时内成功地8次重复注射了M4N-DMSO。和以前的 给药日相似，该狗没有显示任何不良的临床迹象或症状。
研究日8(SD8)：
a)M4N-CET组
雄性和雌性狗都接受完全剂量。它们对该高剂量的反应和它们在以 前的给药天中相似，包括红斑、麻疹以及痒。没有观察到有呕吐和腹泻。 动物们在注射结束后不久行动正常。
b)M4N-DMSO组
雄性和雌性狗都接受完全剂量。它们对该高剂量的反应和它们在以 前的给药天中相似。看起来有更大胃肠刺激(G.I.irritation)，如两 类狗都表现出一些不呕吐的恶心的反应，它们比平常更懒散。然而，两 类狗都在全剂量给药治疗下存活了下来，且看来在给药结束后得到恢复。
M4N-DMSO组的额外剂量(200mg/kg)
由于服用了100mg/kg的M4N-DMSO的动物没有显示不良的临床迹象或 症状，给两只剩下的狗(1雄1雌)服用200mg/kg M4N-DMSO。在200mg/kg 时，雌狗在8剂量的第一剂后就经历了呼吸困难(鼻子起泡)，不久昏倒 但还是能恢复进行第二次给药。在第二次给药后，其反应相似但更为严 重。因而主管兽医建议给该雌狗施以安乐死。雄狗稍微更能忍受但是显 示了相似的呼吸困难迹象和昏倒症状。它接受了共3剂，然后主管兽医 建议停止进一步给药。
对于这个额外给药，没有进行给药后TK分析，在该天收集的所有给 药前的血样都被丢弃。
TK分析
a)M4N-CET组
                                    表6：M4N-CET-血清结果(ng/mL)   动物号   /性别   剂量   预剂量   15min   30min   1hr   2hr   4hr   8hr   16hr   10828   雌   1mg/k   g   ＜2   ＞100   ＞100   78.59   48.32   39.75   9.88   4.33   10827   雄   1mg/k   g   ＜2   ＞100   ＞100   53.78   32.72   26.65   7.19   4.63   10828   雌   5mg/k   g   ＜1   ＞100   ＞50   ＞50   ＞50   34.40   19.45   11.57   10827   雄   5mg/k   g   ＜1   ＞50.0   ＞50   ＞50   45.35   19.99   12.98   6.71   10828   雌   10mg/   kg   ＜20.0   ＞1000   ＞1000   705.47   285.10   187.82   133.5   0   52.94   10827   雄   10mg/   kg   63.76   ＞1000   ＞1000   783.86   431.21   158.20   117.0   0   60.36
通常，为期4小时的不同剂量水平下的M4N-CET静脉注射导致在早期 时间点上非常高的血清浓度且在注射结束30分钟后达到峰值(表7)。测 试物质的血清浓度在下一15小时中降低。
b)M4N-DMSO组
                                         表7：M4N-DMSO-血清结果(ng/mL)   动物   号/性   别   剂量   预剂   量   15min   30min   1hr   2hr   4hr   8hr   16hr   10831   雌   10mg   /kg   ＜2   594.98   398.95   436.9   2   238.20   97.92   43.80   38.39   10832   雄   10mg   /kg   ＜2   516.8   533.07   348.7   252.68   317.13   78.87   56.27   10831   雌   50mg   /kg   3.49   1136.5   1   474.95   673.4   241   144   101   58.8   10832   雄   50mg   /kg   19.91   NR   NR   NR   234.15   79.11   65.79   45.8   10831   雌   100m   g/kg   21.47   8688.1   0   8163.6   8   7696.   48   2624.2   1021.05   459.82   222.2   10832   雄   100m   g/kg   38.22   10477   14088   7498.   88   3878.86   3468.19   814.24   593.8
通常，为期4小时的不同剂量水平下的M4N-DMSO的重复静脉注射导 致极高的血清浓度。表9报告的血清浓度数据是对血清全身稀释以满足 检测范围要求后的结果。结果显示，大体上，M4N-DMSO的血清浓度在早 期时间点上高且在最后的注射结束30分钟后达到峰值。测试物质的血清 浓度在下一15小时中降低。基于这组的血清浓度，当用重复的静脉注射 给药时，M4N-DMSO的半衰期大约为1.5至2小时。值得注意的是，从该 MTD期的过程中的M4N-DMSO的预剂量血清浓度来看，在血液中测试物质 有少量的积累，但是该滞留通常小于最高血清浓度的0.3％。
本研究的MTD期(phase)的目的是为了确定M4N的两种配方 (Cremaphor-乙醇和二甲基亚砜)对于雄性和雌性小猎兔犬的最大耐受 剂量。接受M4N-CET的动物组的反应是痒、红斑、麻疹以及想睡；临床迹 象和症状和Crsmaphor-乙醇的作用一致。在100mg/kg下接受重复的 M4N-DMSO注射的动物显示了在注射点的一些发炎和轻微的恶心。不过， 两种动物在2或3次200mg/kg的M4N-DMSO注射后都昏倒。该组的TK分 析暗示M4N-DMSO的半衰期在1.5至2小时的范围内。从该MTD期的过程 中测试物质有少量的积累，但是该滞留仅为小于最高血清浓度的0.3％。 总之，本研究的MTD期是成功的，因为确定了导致显著的不良临床迹象 和症状的剂量水平，这样本阶段的目的达到了。
这样，治疗肥胖症的方法已被描述。尽管本主题的发明的优选实施 方案已经被一定程度地详细的描述，应该知道，可以作出明显的变化而 没有偏离所附的权利要求中限定的本发明的精神和范围。
相关申请的交叉引用
本申请根据35 U.S.C.§119(e)对2003年5月20日申请的题为“用 于治疗癌症的NDGA衍生物的释放的方法和组合物”的美国临时申请 60/472,188要求优先权；对2003年5月20日申请的题为“用于治疗癌 症的NDGA的释放的方法和组合物”的美国临时申请60/472,299要求优 先权；对2003年5月20日申请的题为“用于治疗神经变性疾病、紊乱 和状况的组合物和方法”的美国临时申请60/472,008要求优先权；对 2003年5月20日申请的题为“用于治疗神经变性疾病、紊乱和状况的 NDGA组合物和方法”的美国临时申请60/472,144要求优先权；对2003 年5月20日申请的题为“用于治疗高血压、糖尿病以及肥胖症的NDGA 衍生物”的美国临时申请60/472,282要求优先权，所有上述申请的内容 全部作为参考文件列入此处。
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权利要求书
(按照条约第19条的修改)
42.如权利要求36所述的方法，其特征在于该方法包括对该组合物 脂内给药。
43.如权利要求36所述的方法，其特征在于该方法包括对该组合物 局部给药。
44.如权利要求36所述的方法，其特征在于该方法包括对该组合物 静脉给药。
45.如权利要求36所述的方法，其特征在于该方法包括对该组合物 口腔含化给药。
46.如权利要求36所述的方法，其特征在于该方法包括对该组合物 腹膜内给药。
47.如权利要求36所述的方法，其特征在于该方法包括对该组合物 肌肉给药。
48.如权利要求36所述的方法，其特征在于该方法包括对该组合物 通过植入给药。
49.如权利要求36所述的方法，其特征在于该方法包括对该组合物 通过中央静脉给药。
50.如权利要求36-49之任一权利要求所述的方法，其特征在于该 该制药学可接受的载体或赋形剂包括二甲基亚砜(DMSO)。
51.如权利要求36-49之任一权利要求所述的方法，其特征在于该 该制药学可接受的载体或赋形剂包括磷酸缓冲液。
52.如权利要求36-49之任一权利要求所述的方法，其特征在于该 该制药学可接受的载体或赋形剂包括盐水。
53.如权利要求36-49之任一权利要求所述的方法，其特征在于该 该制药学可接受的载体或赋形剂包括一种基于脂质的配方。
54.如权利要求36-49之任一权利要求所述的方法，其特征在于该 该制药学可接受的载体或赋形剂包括一种脂质体配方。
55.如权利要求36-49之任一权利要求所述的方法，其特征在于该 该制药学可接受的载体或赋形剂包括一种纳米颗粒配方。
56.如权利要求36-49之任一权利要求所述的方法，其特征在于该 该制药学可接受的载体或赋形剂包括一种胶束配方。
57.如权利要求36-49之任一权利要求所述的方法，其特征在于该 该制药学可接受的载体或赋形剂包括一种水溶性配方。
58.如权利要求36-49之任一权利要求所述的方法，其特征在于该 该制药学可接受的载体或赋形剂包括一种可生物降解聚合物。
59.如权利要求36所述的方法，其特征在于该邻苯二酚丁烷具有权 利要求25-34之任一权利要求给出的结构式。
60.如权利要求36所述的方法，其特征在于该邻苯二酚丁烷是4-O- 甲基NDGA。
61.如权利要求36所述的方法，其特征在于该邻苯二酚丁烷是四甘 氨酰NDGA或4-二甲基甘氨酰NDGA。
62.如权利要求36所述的方法，其特征在于该邻苯二酚丁烷是3-O- 甲基NDGA
63.如权利要求36所述的方法，其特征在于该邻苯二酚丁烷是 NDGA。
64.如权利要求36所述的方法，其特征在于该邻苯二酚丁烷不同于 NDGA。
65.如权利要求36所述的方法，其特征在于该方法包括给药至少两 种邻苯二酚丁烷。
66.如权利要求65所述的方法，其特征在于该两种邻苯二酚丁烷基 本上同时给药。
67.如权利要求65所述的方法，其特征在于该两种邻苯二酚丁烷在 不同时间给药。
68.如权利要求65所述的方法，其特征在于该两种邻苯二酚丁烷选 自由3-O-甲基NDGA、4-O-甲基NDGA和四甘氨酰NDGA、4-二甲基甘氨酰 NDGA组成的组。
69.如权利要求55所述的方法，其特征在于该纳米颗粒配方包含至 少一种选自由聚(DL-丙交酯-共-乙交酯)、聚乙烯醇、d-α-生育酚聚乙 二醇1000琥珀酸酯，以及聚(丙交酯-共-乙交酯)-单甲氧基-聚(聚乙 二醇)组成的组。
70.如权利要求54所述的方法，其特征在于该脂质体配方包含至少 一种选自由磷脂酰胆碱/胆固醇/PEG-DPPE、二硬脂酰卵磷脂/胆固醇 /PEG-DPPE，以及1-2-二油酰-顺-甘油基-3-磷酸胆碱/1-2-棕榈酰-顺- 甘油基-3-磷酸基-消旋-(1-甘油)钠盐/胆固醇/三油精/三辛酸甘油酯 组成的组。
71.如权利要求36所述的方法，其特征在于该方法包括对该组合物 用药不止一次。
72.如权利要求36所述的方法，其特征在于该制药学上可接受的载 体或赋形剂是一种水制剂。
73.如权利要求36所述的方法，其特征在于该制药学上可接受的载 体或赋形剂包括一种疏水制剂。
74.如权利要求73所述的方法，其特征在于该疏水制剂包括一种基 于脂质的赋形剂。
75.如权利要求36所述的方法，其特征在于该制药学上可接受的载 体或赋形剂包括至少一种选自由蓖麻油、花生油、二甲基亚砜，以及其 他食用脂肪或油组成的组。
76.如权利要求36所述的方法，其特征在于该组合物以一种选自由 一种药片、一种粉末、一种凝胶胶囊，以及一种液体组成的组的形式配 制。
77.如权利要求36所述的方法，其特征在于该制药学上可接受的载 体或赋形剂包括一种聚合物配方。
78.如权利要求77所述的方法，其特征在于该聚合物配方是一种可 生物降解的聚合物配方。
79.如权利要求36所述的方法，其特征在于该制药学上可接受的载 体或赋形剂允许高局部药物浓度和在一段时间内持续释放。
80.如权利要求77所述的方法，其特征在于该聚合物配方包括至少 一种选自由1，3-二(p-羧基苯氧基)丙烷、癸二酸、聚(乙烯-共-醋酸 乙酯)、以及聚(丙交酯-共-乙交酯)组成的组。
81.如权利要求36所述的方法，其特征在于该邻苯二酚丁烷在给药 之前被溶解盐水、DMSO或乙醇中。
82.如权利要求36所述的方法，其特征在于该组合物是至少一种选 自由一种粉末、一种气溶胶、一种含水配方、一种脂质体配方、一种纳 米颗粒配方，以及一种疏水性配方组成的组。
83.如权利要求36所述的方法，其特征在于该组合物在一特定的时 间段内每天给药。
84.如权利要求36所述的方法，其特征在于该组合物是间歇地给 药。
85.如权利要求36所述的方法，其特征在于该邻苯二酚丁烷被注射 进受试者。
86.如权利要求36所述的方法，其特征在于该邻苯二酚丁烷是一种 水溶性的化合物。
87.如权利要求36所述的方法，其特征在于该邻苯二酚丁烷是一种 疏水性化合物。
88.如权利要求36所述的方法，其特征在于该邻苯二酚丁烷配制为 一种液体，一种气溶胶，一种悬浮液，一种药片，一种粉末或一种凝胶 胶囊。
89.如权利要求36所述的方法，其特征在于该邻苯二酚丁烷对人的 用药量在每剂量大约大于10mg/kg而小于375mg/kg的范围内。
90.如权利要求89所述的方法，其特征在于该范围是大约大于10 mg/kg而小于大约250mg/kg每剂量。
91.如权利要求90所述的方法，其特征在于该范围是大约大于10 mg/kg而小于大约200mg/kg每剂量。
92.如权利要求91所述的方法，其特征在于该范围是大约大于10 mg/kg而小于大约150mg/kg每剂量。
93.如权利要求92所述的方法，其特征在于该范围是大约大于10 mg/kg而小于大约100mg/kg每剂量。
94.如权利要求93所述的方法，其特征在于该范围是大约大于10 mg/kg而小于大约75mg/kg每剂量。
95.如权利要求94所述的方法，其特征在于该范围是大约大于10 mg/kg而小于大约50mg/kg每剂量。
96.如权利要求89-95之任何权利要求所述的方法，其特征在于该 组合物是静脉给药。
97.如权利要求89-95之任何权利要求所述的方法，其特征在于该 邻苯二酚丁烷是3-O-NDGA或4-O-甲基NDGA。
98.一种用于治疗肥胖症的试剂盒，该试剂盒包括权利要求1所述 的药物组合物和该组合物给药的用法说明。
99.一种用于在需要治疗的受试者上治疗肥胖症的方法，包括如下 步骤：
(a)提供一种包括4-O-甲基NDGA和一种制药学可接受的载体 或赋形剂的组合物；以及
(b)将给组合物给受试者给药。
100.如权利要求99所述的方法，其特征在于该组合物是口服给药。
101.如权利要求100所述的方法，其特征在于该制药学上可接受的 载体或赋形剂是一种油。
102.如权利要求101所述的方法，其特征在于该油是蓖麻油或玉米 油。
103.如权利要求100所述的方法，其特征在于该组合物存在于一种 可食用的混合物中。
104.如权利要求100所述的方法，其特征在于该组合物在一段时间 内每日给药。
105.如权利要求104所述的方法，其特征在于该组合物以1周内5 天或更多天每天给药。
106.如权利要求104所述的方法，其特征在于该组合物以2周内5 天或更多天每天给药。
107.如权利要求104所述的方法，其特征在于该组合物以3周内5 天或更多天每天给药。
108.如权利要求100所述的方法，其特征在于4-O-甲基NDGA以至 少每剂量30mg给药。
109.如权利要求100所述的方法，其特征在于4-O-甲基NDGA以至 少每剂量90mg给药。
110.如权利要求100所述的方法，其特征在于该4-O-甲基NDGA的 在组合物中的浓度是20mg/ml。
111.如权利要求99所述的方法，其特征在于该制药学可接受的载体 或赋形剂包括聚乙氧基蓖麻油、乙醇和盐水。
112.如权利要求111所述的方法，其特征在于该聚乙氧基蓖麻油的 浓度是6％。
113.如权利要求111所述的方法，其特征在于该乙醇的浓度是6％。
114.如权利要求111所述的方法，其特征在于该盐水的浓度是88％。
115.如权利要求111所述的方法，其特征在于该给受试者服用的组 合物包括每剂量至少2mg4-O-甲基NDGA。
116.如权利要求111所述的方法，其特征在于该组合物是静脉给药。
117.如权利要求111所述的方法，其特征在于该组合物是腹膜内给 药。
118.如权利要求116或117所述的方法，其特征在于该组合物以比 在一段时间内每6天一次更频繁地给药。
119.如权利要求118所述的方法，其特征在于该组合物以比在一段 时间内每2天一次更频繁地给药。