亲水性自消耗连接子及其缀合物
专利汇可以提供亲水性自消耗连接子及其缀合物专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 申请 提供具有亲 水 性自消耗连接子的化合物，该连接子在适宜条件下可被裂解及结合亲水性基团以提供化合物的较好的可溶性。本申请的化合物包含药物部分、能够靶向 选定 的细胞群落的靶向部分及连接子，该连接子含有酰基单元、用于在药物部分与靶向部分之间提供距离的任选间隔基单元、可在适宜条件下可裂解的肽连接子、亲水性自消耗连接子及任选第二自消耗间隔基或环化自消除连接子。，下面是亲水性自消耗连接子及其缀合物专利的具体信息内容。
1.一种式(II)的化合物或其盐：
其中：
D为药物部分；
T为靶向部分；
R1为氢、未取代或经取代的C1-3烷基或未取代或经取代的杂环基，其中所述经取代的烷基为具有一个或多个选自以下的取代基的烷基：-R60、卤素、＝O、-OR70、-SR70、-NR80R80、三卤代甲基、-CN、-OCN、-SCN、-NO、-NO2、＝N2、-N3、-S(O)R70、-SO2R70、-SO2O-M+、-SO2OR70、-OSO2R70、-OSO2O-M+、-OSO2OR70、-P(O)(O-)2(M+)2、-P(O)(OR70)O-M+、-P(O)(OR70)2、-C(O)R70、-C
70 70 70 - + 70 70 80 80 70 80 80
(S)R 、-C(NR )R 、-C(O)OM 、-C(O)OR 、-C(S)OR 、-C(O)NR R 、-C(NR )NR R 、-OC(O)R70、-OC(S)R70、-OC(O)O-M+、-OC(O)OR70、-OC(S)OR70、-NR70C(O)R70、-NR70C(S)R70、-NR70CO2-M+、-NR70CO2R70、-NR70C(S)OR70、-NR70C(O)NR80R80、-NR70C(NR70)R70及-NR70C(NR70)NR80R80，其中R60选自由以下基团组成的群组中：烷基、环烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、环烷基烷基、芳
70 60 80 70
基、芳基烷基、杂芳基及杂芳基烷基；每个R 独立为氢或R ；每个R 独立为R 或可选择地，两个R80’与它们所键合的氮原子一起形成3、4、5、6或7元杂环烷基，该杂环烷基可任选包括1至4个选自由O、N及S组成的群组中的相同或不同的额外杂原子，其中N可具有-H、C1-C4烷基、-C(O)C1-4烷基、-CO2C1-4烷基或-SO2C1-4烷基取代，且每个M+为具有净单个正电荷的抗衡离子；其中所述经取代的杂环基为用1至5个取代基或1至3个取代基取代的杂环基，所述取代基选自烷基、烷氧基、环烷基、环烯基、酰基、酰氨基、酰氧基、氨基、氨酰基、氨酰氧基、叠氮基、氰基、卤素、羟基、氧代、硫酮基、羧基、羧基酯、硫代芳氧基、硫代杂芳氧基、硫代杂环氧基、巯基、硫代烷氧基、芳基、芳氧基、杂芳基、杂芳氧基、杂环基、杂环氧基、羟氨基、烷氧氨基、硝基、磺酰氨基、-SO-烷基、-SO-芳基、-SO-杂芳基、-SO-杂环基、-SO2-烷基、-SO2-芳基、-SO2-杂芳基及-SO2-杂环基；
L1为键、第二自消耗连接子或环化自消除连接子；
L2为键或第二自消耗连接子；
其中若L1为第二自消耗连接子或环化自消除连接子，则L2为键；
其中若L2为第二自消耗连接子，则L1为键；
L3为肽连接子；
L4为键或间隔基；及
A为酰基单元。
2.一种式(IIa)的化合物或其盐：
其中：
p为1至20；
D为药物部分；
T为靶向部分；
R1为氢、未取代或经取代的C1-3烷基或未取代或经取代的杂环基，其中所述经取代的烷
60 70 70 80 80
基为具有一个或多个选自以下的取代基的烷基：-R 、卤素、＝O、-OR 、-SR 、-NR R 、三卤代甲基、-CN、-OCN、-SCN、-NO、-NO2、＝N2、-N3、-S(O)R70、-SO2R70、-SO2O-M+、-SO2OR70、-OSO2R70、-OSO2O-M+、-OSO2OR70、-P(O)(O-)2(M+)2、-P(O)(OR70)O-M+、-P(O)(OR70)2、-C(O)R70、-C(S)R70、-C(NR70)R70、-C(O)O-M+、-C(O)OR70、-C(S)OR70、-C(O)NR80R80、-C(NR70)NR80R80、-OC(O)
70 70 - + 70 70 70 70 70 70 70 -
R 、-OC(S)R 、-OC(O)O M、-OC(O)OR 、-OC(S)OR 、-NR C(O)R 、-NR C(S)R 、-NR CO2 M+、-NR70CO2R70、-NR70C(S)OR70、-NR70C(O)NR80R80、-NR70C(NR70)R70及-NR70C(NR70)NR80R80，其中R60选自由以下基团组成的群组中：烷基、环烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、环烷基烷基、芳基、芳基烷基、杂芳基及杂芳基烷基；每个R70独立为氢或R60；每个R80独立为R70或可选择地，两个R80’与它们所键合的氮原子一起形成3、4、5、6或7元杂环烷基，该杂环烷基可任选包括1至4个选自由O、N及S组成的群组中的相同或不同的额外杂原子，其中N可具有-H、C1-C4烷基、-C(O)C1-4烷基、-CO2C1-4烷基或-SO2C1-4烷基取代，且每个M+为具有净单个正电荷的抗衡离子；其中所述经取代的杂环基为用1至5个取代基或1至3个取代基取代的杂环基，所述取代基选自烷基、烷氧基、环烷基、环烯基、酰基、酰氨基、酰氧基、氨基、氨酰基、氨酰氧基、叠氮基、氰基、卤素、羟基、氧代、硫酮基、羧基、羧基酯、硫代芳氧基、硫代杂芳氧基、硫代杂环氧基、巯基、硫代烷氧基、芳基、芳氧基、杂芳基、杂芳氧基、杂环基、杂环氧基、羟氨基、烷氧氨基、硝基、磺酰氨基、-SO-烷基、-SO-芳基、-SO-杂芳基、-SO-杂环基、-SO2-烷基、-SO2-芳基、-SO2-杂芳基及-SO2-杂环基；
L1为键、第二自消耗连接子或环化自消除连接子；
L2为键或第二自消耗连接子；
其中若L1为第二自消耗连接子或环化自消除连接子，则L2为键；
其中若L2为第二自消耗连接子，则L1为键；
3
L为肽连接子；
L4为键或间隔基；及
A为酰基单元。
3.如权利要求2所述的化合物，其中p为1至4。
1
4.如权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中L为键。
5.如权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中L1为第二自消耗连接子或环化自消除连接子。
6.如权利要求5所述的化合物，其中L1为氨基苯甲氧羰基连接子。
7.如权利要求5所述的化合物，其中L1选自由以下基团组成的群组中：
8.如权利要求5所述的化合物，其中L1选自由以下基团组成的群组中：
9.如权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中L2为键。
10.如权利要求4所述的化合物，其中L2为第二自消耗连接子。
11.如权利要求10所述的化合物，其中L2为氨基苯甲氧羰基连接子。
2
12.如权利要求10所述的化合物，其中L选自
13.如权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中L3为1至10个氨基酸残基的肽连接子。
14.如权利要求13所述的化合物，其中L3为2至4个氨基酸残基的肽连接子。
15.如权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中L3为包含至少一个赖氨酸或精氨酸残基的肽连接子。
16.如权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中L3为包含选自以下的氨基酸残基的肽连接子：赖氨酸、D-赖氨酸、瓜氨酸、精氨酸、脯氨酸、组氨酸、鸟氨酸及谷氨酰胺。
17.如权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中L3为包含选自以下的氨基酸残基的肽连接子：缬氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、天冬酰胺、脯氨酸、丙氨酸、亮氨酸、色氨酸及酪氨酸。
18.如权利要求13所述的化合物，其中L3为选自以下的二肽单元：缬氨酸-瓜氨酸、脯氨酸-赖氨酸、甲硫氨酸-D-赖氨酸、天冬酰胺-D-赖氨酸、异亮氨酸-脯氨酸、苯丙氨酸-赖氨酸及缬氨酸-赖氨酸。
19.如权利要求18所述的化合物，其中L3为缬氨酸-瓜氨酸。
20.如权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中L4为键。
21.如权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中L4为间隔基。
22.如权利要求21所述的化合物，其中该间隔基为聚亚烷基二醇、亚烷基、亚烯基、亚炔基或聚胺。
23.如权利要求21所述的化合物，其中L4为L4a-C(O)、L4a-C(O)-NH、L4a-S(O)2或L4a-S(O)2-NH，其中每个L4a独立为聚亚烷基二醇、亚烷基、亚烯基、亚炔基或聚胺。
24.如权利要求21所述的化合物，其中L4为L4a-C(O)，其中L4a为聚亚烷基二醇、亚烷基、亚烯基、亚炔基或聚胺。
25.如权利要求21所述的化合物，其中L4为L4a-C(O)，其中L4a为聚亚烷基二醇。
26.如权利要求21所述的化合物，其中L4为L4a-C(O)，其中L4a为聚乙二醇。
27.如权利要求21所述的化合物，其中该间隔基具有式-CH2-(CH2-O-CH2)m-CH2-C(O)-，其中m为0至30的整数。
28.如权利要求21所述的化合物，其中L4为L4a-C(O)，其中L4a为亚烷基。
29.如权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中A选自由以下基团组成的群组中：
其中每个Q2
为NH或O且每个q独立为1至10的整数。
30.如权利要求29所述的化合物，其中A选自由以下基团组成的群组中：
其中每个Q2独立为NH或O及每个q独立为1
至10的整数。
31.如权利要求30所述的化合物，其中q为2、3、4或5。
32.如权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中A选自由以下基团组成的群组中：
其中每个Q2独立为NH或O。
33.如权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中T为抗体靶向分子。
34.如权利要求33所述的化合物，其中T选自由以下组成的群组中：(a)抗体，其包含：包含来自SEQ ID NO:1的三个CDR的重链可变区及包含来自SEQ ID NO:2的三个CDR的轻链可变区；及(b)抗体，其包含：包含来自SEQ ID NO:3的三个CDR的重链可变区及包含来自SEQ ID NO:4的三个CDR的轻链可变区。
35.如权利要求33所述的化合物，其中T选自由以下组成的群组中：(a)抗体，其包含：包含SEQ ID NO:1的氨基酸1-118的重链可变区及/或包含SEQ ID NO:2的氨基酸1-113的轻链可变区；及(b)抗体，其包含：包含来自SEQ ID NO:3的氨基酸1-119的重链可变区及/或包含来自SEQ ID NO:4的氨基酸1-108的轻链可变区。
36.如权利要求33所述的化合物，其中T为包含SEQ ID NO:1的重链氨基酸序列及SEQ ID NO:2的轻链氨基酸序列的抗体。
37.如权利要求33所述的化合物，其中T为包含SEQ ID NO:3的重链氨基酸序列及SEQ ID NO:4的轻链氨基酸序列的抗体。
38.如权利要求33所述的化合物，其中用半胱氨酸残基替代重链及/或轻链的一或多个氨基酸残基。
39.如权利要求33所述的化合物，其中用半胱氨酸残基替代重链的一或多个氨基酸残基。
40.如权利要求33所述的化合物，其中用半胱氨酸残基替代该抗体的Fc区域的一或多个氨基酸残基。
41.如权利要求40所述的化合物，其中该抗体的Fc区域的该一或多个氨基酸残基处于使用EU编号的位置157、169及/或442处。
42.如权利要求33所述的化合物，其中经由半胱氨酸残基将D连接至T。
43.如权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中D为含有氨基的药物部分，其中将该药物经由该氨基连接至L1或X。
44.如权利要求43所述的化合物，其中D为倍癌霉素、多拉司他汀、微管结合素、多柔比星(DOX)、紫杉醇或丝裂霉素C(MMC)或其氨基衍生物。
45.如权利要求43所述的化合物，其中D为选自由以下基团组成的群组中：
46.如权利要求43所述的化合物，其中D为：
47.如权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中-A-L4-L3-L2-为
48.如权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中-A-L4-L3-L2-X-L1-D为：
49.如权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中-A-L4-L3-L2-X-L1-D为：
50.如权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中-A-L4-L3-L2-X-L1-D为：
51.一种式(III)、(IV)或(V)的化合物或其盐：
其中T为：
(a)包含SEQ ID NO:1的重链氨基酸序列及SEQ ID NO:2的轻链氨基酸序列的抗体，或(b)包含SEQ ID NO:3的重链氨基酸序列及SEQ ID NO:4的轻链氨基酸序列的抗体。
52.如权利要求51所述的化合物或其盐；其中该化合物具有式(III)且T为包含SEQ ID NO:1的重链氨基酸序列及SEQ ID NO:2的轻链氨基酸序列的抗体。
53.如权利要求51所述的化合物或其盐；其中该化合物具有式(IV)且T为包含SEQ ID NO:1的重链氨基酸序列及SEQ ID NO:2的轻链氨基酸序列的抗体。
54.如权利要求51所述的化合物或其盐；其中该化合物具有式(V)且T为包含SEQ ID NO:1的重链氨基酸序列及SEQ ID NO:2的轻链氨基酸序列的抗体。
55.如权利要求51所述的化合物或其盐；其中该化合物具有式(III)且T为包含SEQ ID NO:3的重链氨基酸序列及SEQ ID NO:4的轻链氨基酸序列的抗体。
56.如权利要求51所述的化合物或其盐；其中该化合物具有式(IV)且T为包含SEQ ID NO:3的重链氨基酸序列及SEQ ID NO:4的轻链氨基酸序列的抗体。
57.如权利要求51所述的化合物或其盐；其中该化合物具有式(V)且T为包含SEQ ID NO:3的重链氨基酸序列及SEQ ID NO:4的轻链氨基酸序列的抗体。
58.一种式(IIIa)、(IVa)或(Va)的化合物或其盐：
其中p为1至4且T为：
(a)包含SEQ ID NO:1的重链氨基酸序列及SEQ ID NO:2的轻链氨基酸序列的抗体，或(b)包含SEQ ID NO:3的重链氨基酸序列及SEQ ID NO:4的轻链氨基酸序列的抗体。
59.如权利要求58所述的化合物或其盐；其中该化合物具有式(IIIa)，p为1至4且T为包含SEQ ID NO:1的重链氨基酸序列及SEQ ID NO:2的轻链氨基酸序列的抗体。
60.如权利要求58所述的化合物或其盐；其中该化合物具有式(IVa)，p为1至4且T为包含SEQ ID NO:1的重链氨基酸序列及SEQ ID NO:2的轻链氨基酸序列的抗体。
61.如权利要求58所述的化合物或其盐；其中该化合物具有式(Va)，p为1至4且T为包含SEQ ID NO:1的重链氨基酸序列及SEQ ID NO:2的轻链氨基酸序列的抗体。
62.如权利要求58所述的化合物或其盐；其中该化合物具有式(IIIa)，p为1至4且T为包含SEQ ID NO:3的重链氨基酸序列及SEQ ID NO:4的轻链氨基酸序列的抗体。
63.如权利要求58所述的化合物或其盐；其中该化合物具有式(IVa)，p为1至4且T为包含SEQ ID NO:3的重链氨基酸序列及SEQ ID NO:4的轻链氨基酸序列的抗体。
64.如权利要求58所述的化合物或其盐；其中该化合物具有式(Va)，p为1至4且T为包含SEQ ID NO:3的重链氨基酸序列及SEQ ID NO:4的轻链氨基酸序列的抗体。
65.一种药物组合物，该药物组合物包含如权利要求1至3、51和58中任一项所述的化合物或其盐；及药用载体。
66.如权利要求1至3中任一项所述的化合物或其盐在制备用于杀死细胞的药物中的用途。
67.如权利要求66所述的用途，其中该细胞为癌细胞。
68.如权利要求67所述的用途，其中该癌细胞为胃癌细胞、胰腺癌细胞、结肠直肠癌细胞、肺癌细胞、食道癌细胞、膀胱癌细胞、头颈癌细胞、肝癌细胞、子宫内膜癌细胞、唾液腺癌细胞、淋巴瘤细胞、乳癌细胞、宫颈癌细胞或卵巢癌细胞。
69.如权利要求1至3中任一项所述的化合物或其盐在制备用于治疗癌症的药物中的用途。
70.如权利要求69所述的用途，其中该癌症为胃癌、胰腺癌、结肠直肠癌、肺癌、食道癌、膀胱癌、头颈癌、肝癌、子宫内膜癌、唾液腺癌、淋巴瘤、乳癌、宫颈癌或卵巢癌。
71.一种试剂盒，该试剂盒包含如权利要求1至3、51和58中任一项所述的化合物或其盐。
72.如权利要求71所述的试剂盒，其进一步包含在癌症的治疗中的使用说明。
73.一种用于制备式(II)的化合物或其盐的方法：
其中：
D为药物部分；
T为抗体；
R1为氢、未取代或经取代的C1-3烷基或未取代或经取代的杂环基，其中所述经取代的烷基为具有一个或多个选自以下的取代基的烷基：-R60、卤素、＝O、-OR70、-SR70、-NR80R80、三卤代甲基、-CN、-OCN、-SCN、-NO、-NO2、＝N2、-N3、-S(O)R70、-SO2R70、-SO2O-M+、-SO2OR70、-OSO2R70、-OSO2O-M+、-OSO2OR70、-P(O)(O-)2(M+)2、-P(O)(OR70)O-M+、-P(O)(OR70)2、-C(O)R70、-C(S)R70、-C(NR70)R70、-C(O)O-M+、-C(O)OR70、-C(S)OR70、-C(O)NR80R80、-C(NR70)NR80R80、-OC(O)R70、-OC(S)R70、-OC(O)O-M+、-OC(O)OR70、-OC(S)OR70、-NR70C(O)R70、-NR70C(S)R70、-NR70CO2-M+、-NR70CO2R70、-NR70C(S)OR70、-NR70C(O)NR80R80、-NR70C(NR70)R70及-NR70C(NR70)NR80R80，其中R60选自由以下基团组成的群组中：烷基、环烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、环烷基烷基、芳基、芳基烷基、杂芳基及杂芳基烷基；每个R70独立为氢或R60；每个R80独立为R70或可选择地，两个R80’与它们所键合的氮原子一起形成3、4、5、6或7元杂环烷基，该杂环烷基可任选包括1至4个选自由O、N及S组成的群组中的相同或不同的额外杂原子，其中N可具有-H、C1-C4烷基、-C(O)C1-4烷基、-CO2C1-4烷基或-SO2C1-4烷基取代，且每个M+为具有净单个正电荷的抗衡离子；其中所述经取代的杂环基为用1至5个取代基或1至3个取代基取代的杂环基，所述取代基选自烷基、烷氧基、环烷基、环烯基、酰基、酰氨基、酰氧基、氨基、氨酰基、氨酰氧基、叠氮基、氰基、卤素、羟基、氧代、硫酮基、羧基、羧基酯、硫代芳氧基、硫代杂芳氧基、硫代杂环氧基、巯基、硫代烷氧基、芳基、芳氧基、杂芳基、杂芳氧基、杂环基、杂环氧基、羟氨基、烷氧氨基、硝基、磺酰氨基、-SO-烷基、-SO-芳基、-SO-杂芳基、-SO-杂环基、-SO2-烷基、-SO2-芳基、-SO2-杂芳基及-SO2-杂环基；
L1为键、第二自消耗连接子或环化自消除连接子；
L2为键或第二自消耗连接子；
其中若L1为第二自消耗连接子或环化自消除连接子，则L2为键；
2 1
其中若L为第二自消耗连接子，则L为键；
L3为肽连接子；
L4为键或间隔基；及
A为酰基单元；
该方法包括使抗体与化合物Z或其盐反应：
74.一种用于制备式(IIa)的化合物或其盐的方法：
其中：
p为1至20；
D为药物部分；
T为抗体；
R1为氢、未取代或经取代的C1-3烷基或未取代或经取代的杂环基，其中所述经取代的烷基为具有一个或多个选自以下的取代基的烷基：-R60、卤素、＝O、-OR70、-SR70、-NR80R80、三卤代甲基、-CN、-OCN、-SCN、-NO、-NO2、＝N2、-N3、-S(O)R70、-SO2R70、-SO2O-M+、-SO2OR70、-OSO2R70、-OSO2O-M+、-OSO2OR70、-P(O)(O-)2(M+)2、-P(O)(OR70)O-M+、-P(O)(OR70)2、-C(O)R70、-C(S)R70、-C(NR70)R70、-C(O)O-M+、-C(O)OR70、-C(S)OR70、-C(O)NR80R80、-C(NR70)NR80R80、-OC(O)R70、-OC(S)R70、-OC(O)O-M+、-OC(O)OR70、-OC(S)OR70、-NR70C(O)R70、-NR70C(S)R70、-NR70CO2-M+、-NR70CO2R70、-NR70C(S)OR70、-NR70C(O)NR80R80、-NR70C(NR70)R70及-NR70C(NR70)NR80R80，其中R60选自由以下基团组成的群组中：烷基、环烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、环烷基烷基、芳
70 60 80 70
基、芳基烷基、杂芳基及杂芳基烷基；每个R 独立为氢或R ；每个R 独立为R 或可选择地，两个R80’与它们所键合的氮原子一起形成3、4、5、6或7元杂环烷基，该杂环烷基可任选包括1至4个选自由O、N及S组成的群组中的相同或不同的额外杂原子，其中N可具有-H、C1-C4烷基、-C(O)C1-4烷基、-CO2C1-4烷基或-SO2C1-4烷基取代，且每个M+为具有净单个正电荷的抗衡离子；其中所述经取代的杂环基为用1至5个取代基或1至3个取代基取代的杂环基，所述取代基选自烷基、烷氧基、环烷基、环烯基、酰基、酰氨基、酰氧基、氨基、氨酰基、氨酰氧基、叠氮基、氰基、卤素、羟基、氧代、硫酮基、羧基、羧基酯、硫代芳氧基、硫代杂芳氧基、硫代杂环氧基、巯基、硫代烷氧基、芳基、芳氧基、杂芳基、杂芳氧基、杂环基、杂环氧基、羟氨基、烷氧氨基、硝基、磺酰氨基、-SO-烷基、-SO-芳基、-SO-杂芳基、-SO-杂环基、-SO2-烷基、-SO2-芳基、-SO2-杂芳基及-SO2-杂环基；
L1为键、第二自消耗连接子或环化自消除连接子；
L2为键或第二自消耗连接子；
其中若L1为第二自消耗连接子或环化自消除连接子，则L2为键；
其中若L2为第二自消耗连接子，则L1为键；
L3为肽连接子；
L4为键或间隔基；及
A为酰基单元；
该方法包括使抗体与化合物Z或其盐反应：
75.如权利要求74所述的方法，其中该抗体包含一或多个巯基。
76.一种化合物或其盐，其中通过根据权利要求73至75中任一项所述的方法制备该化合物，其中该抗体包含一或多个巯基。
77.一种药物组合物，该药物组合物包含如权利要求76所述的化合物或其盐及药用载体。
78.一种式(XII)的化合物或其盐：
其中R为NO2或NH2。
79.一种用于制备化合物X或其盐的方法：
其中：
2
L为键或第二自消耗连接子；
L3为肽连接子；
L4为键或间隔基；
A为酰基单元；及
1
R为氢、未取代或经取代的C1-3烷基或未取代或经取代的杂环基，其中所述经取代的烷基为具有一个或多个选自以下的取代基的烷基：-R60、卤素、＝O、-OR70、-SR70、-NR80R80、三卤代甲基、-CN、-OCN、-SCN、-NO、-NO2、＝N2、-N3、-S(O)R70、-SO2R70、-SO2O-M+、-SO2OR70、-OSO2R70、-OSO2O-M+、-OSO2OR70、-P(O)(O-)2(M+)2、-P(O)(OR70)O-M+、-P(O)(OR70)2、-C(O)R70、-C
70 70 70 - + 70 70 80 80 70 80 80
(S)R 、-C(NR )R 、-C(O)OM 、-C(O)OR 、-C(S)OR 、-C(O)NR R 、-C(NR )NR R 、-OC(O)R70、-OC(S)R70、-OC(O)O-M+、-OC(O)OR70、-OC(S)OR70、-NR70C(O)R70、-NR70C(S)R70、-NR70CO2-M+、-NR70CO2R70、-NR70C(S)OR70、-NR70C(O)NR80R80、-NR70C(NR70)R70及-NR70C(NR70)NR80R80，其中R60选自由以下基团组成的群组中：烷基、环烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、环烷基烷基、芳基、芳基烷基、杂芳基及杂芳基烷基；每个R70独立为氢或R60；每个R80独立为R70或可选择地，两个R80’与它们所键合的氮原子一起形成3、4、5、6或7元杂环烷基，该杂环烷基可任选包括1至4个选自由O、N及S组成的群组中的相同或不同的额外杂原子，其中N可具有-H、C1-C4烷基、-C(O)C1-4烷基、-CO2C1-4烷基或-SO2C1-4烷基取代，且每个M+为具有净单个正电荷的抗衡离子；其中所述经取代的杂环基为用1至5个取代基或1至3个取代基取代的杂环基，所述取代基选自烷基、烷氧基、环烷基、环烯基、酰基、酰氨基、酰氧基、氨基、氨酰基、氨酰氧基、叠氮基、氰基、卤素、羟基、氧代、硫酮基、羧基、羧基酯、硫代芳氧基、硫代杂芳氧基、硫代杂环氧基、巯基、硫代烷氧基、芳基、芳氧基、杂芳基、杂芳氧基、杂环基、杂环氧基、羟氨基、烷氧氨基、硝基、磺酰氨基、-SO-烷基、-SO-芳基、-SO-杂芳基、-SO-杂环基、-SO2-烷基、-SO2-芳基、-SO2-杂芳基及-SO2-杂环基；
该方法包括使化合物W：A-L4-L3-L2与化合物I： 反应。
80.一种用于制备化合物Z或其盐的方法：
其中：
D为药物部分；
L1为键、第二自消耗连接子或环化自消除连接子；
2
L为键或第二自消耗连接子；
其中若L1为第二自消耗连接子或环化自消除连接子，则L2为键；
其中若L2为第二自消耗连接子，则L1为键；
L3为肽连接子；
L4为键或间隔基；
A为酰基单元；及
R1为氢、未取代或经取代的C1-3烷基或未取代或经取代的杂环基，其中所述经取代的烷基为具有一个或多个选自以下的取代基的烷基：-R60、卤素、＝O、-OR70、-SR70、-NR80R80、三卤代甲基、-CN、-OCN、-SCN、-NO、-NO2、＝N2、-N3、-S(O)R70、-SO2R70、-SO2O-M+、-SO2OR70、-OSO2R70、-OSO2O-M+、-OSO2OR70、-P(O)(O-)2(M+)2、-P(O)(OR70)O-M+、-P(O)(OR70)2、-C(O)R70、-C(S)R70、-C(NR70)R70、-C(O)O-M+、-C(O)OR70、-C(S)OR70、-C(O)NR80R80、-C(NR70)NR80R80、-OC(O)R70、-OC(S)R70、-OC(O)O-M+、-OC(O)OR70、-OC(S)OR70、-NR70C(O)R70、-NR70C(S)R70、-NR70CO2-M+、-NR70CO2R70、-NR70C(S)OR70、-NR70C(O)NR80R80、-NR70C(NR70)R70及-NR70C(NR70)NR80R80，其中R60选自由以下基团组成的群组中：烷基、环烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、环烷基烷基、芳基、芳基烷基、杂芳基及杂芳基烷基；每个R70独立为氢或R60；每个R80独立为R70或可选择地，两个R80’与它们所键合的氮原子一起形成3、4、5、6或7元杂环烷基，该杂环烷基可任选包括1至4个选自由O、N及S组成的群组中的相同或不同的额外杂原子，其中N可具有-H、C1-C4烷+
基、-C(O)C1-4烷基、-CO2C1-4烷基或-SO2C1-4烷基取代，且每个M 为具有净单个正电荷的抗衡离子；其中所述经取代的杂环基为用1至5个取代基或1至3个取代基取代的杂环基，所述取代基选自烷基、烷氧基、环烷基、环烯基、酰基、酰氨基、酰氧基、氨基、氨酰基、氨酰氧基、叠氮基、氰基、卤素、羟基、氧代、硫酮基、羧基、羧基酯、硫代芳氧基、硫代杂芳氧基、硫代杂环氧基、巯基、硫代烷氧基、芳基、芳氧基、杂芳基、杂芳氧基、杂环基、杂环氧基、羟氨基、烷氧氨基、硝基、磺酰氨基、-SO-烷基、-SO-芳基、-SO-杂芳基、-SO-杂环基、-SO2-烷基、-SO2-芳基、-SO2-杂芳基及-SO2-杂环基；
该方法包括使化合物X： 与氯甲酸对硝基苯基酯反应以形
成化合物Y： 和
使化合物Y与包含L1-D的化合物反应。
81.一种用于制备化合物X1或其盐的方法：
其中：
L2为键或第二自消耗连接子；
L3为肽连接子；及
1
R为氢、未取代或经取代的C1-3烷基或未取代或经取代的杂环基，其中所述经取代的烷基为具有一个或多个选自以下的取代基的烷基：-R60、卤素、＝O、-OR70、-SR70、-NR80R80、三卤代甲基、-CN、-OCN、-SCN、-NO、-NO2、＝N2、-N3、-S(O)R70、-SO2R70、-SO2O-M+、-SO2OR70、-OSO2R70、-OSO2O-M+、-OSO2OR70、-P(O)(O-)2(M+)2、-P(O)(OR70)O-M+、-P(O)(OR70)2、-C(O)R70、-C
70 70 70 - + 70 70 80 80 70 80 80
(S)R 、-C(NR )R 、-C(O)OM 、-C(O)OR 、-C(S)OR 、-C(O)NR R 、-C(NR )NR R 、-OC(O)R70、-OC(S)R70、-OC(O)O-M+、-OC(O)OR70、-OC(S)OR70、-NR70C(O)R70、-NR70C(S)R70、-NR70CO2-M+、-NR70CO2R70、-NR70C(S)OR70、-NR70C(O)NR80R80、-NR70C(NR70)R70及-NR70C(NR70)NR80R80，其中R60选自由以下基团组成的群组中：烷基、环烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、环烷基烷基、芳基、芳基烷基、杂芳基及杂芳基烷基；每个R70独立为氢或R60；每个R80独立为R70或可选择地，两个R80’与它们所键合的氮原子一起形成3、4、5、6或7元杂环烷基，该杂环烷基可任选包括1至4个选自由O、N及S组成的群组中的相同或不同的额外杂原子，其中N可具有-H、C1-C4烷基、-C(O)C1-4烷基、-CO2C1-4烷基或-SO2C1-4烷基取代，且每个M+为具有净单个正电荷的抗衡离子；其中所述经取代的杂环基为用1至5个取代基或1至3个取代基取代的杂环基，所述取代基选自烷基、烷氧基、环烷基、环烯基、酰基、酰氨基、酰氧基、氨基、氨酰基、氨酰氧基、叠氮基、氰基、卤素、羟基、氧代、硫酮基、羧基、羧基酯、硫代芳氧基、硫代杂芳氧基、硫代杂环氧基、巯基、硫代烷氧基、芳基、芳氧基、杂芳基、杂芳氧基、杂环基、杂环氧基、羟氨基、烷氧氨基、硝基、磺酰氨基、-SO-烷基、-SO-芳基、-SO-杂芳基、-SO-杂环基、-SO2-烷基、-SO2-芳基、-SO2-杂芳基及-SO2-杂环基；
1 3 2
该方法包括使化合物W：L-L与化合物I： 反应。
82.一种用于制备化合物Y1或其盐的方法：
其中：
D为药物部分；
L1为键、第二自消耗连接子或环化自消除连接子；
L2为键或第二自消耗连接子；
其中若L1为第二自消耗连接子或环化自消除连接子，则L2为键；
其中若L2为第二自消耗连接子，则L1为键；
L3为肽连接子；及
R1为氢、未取代或经取代的C1-3烷基或未取代或经取代的杂环基，其中所述经取代的烷基为具有一个或多个选自以下的取代基的烷基：-R60、卤素、＝O、-OR70、-SR70、-NR80R80、三卤代甲基、-CN、-OCN、-SCN、-NO、-NO2、＝N2、-N3、-S(O)R70、-SO2R70、-SO2O-M+、-SO2OR70、-OSO2R70、-OSO2O-M+、-OSO2OR70、-P(O)(O-)2(M+)2、-P(O)(OR70)O-M+、-P(O)(OR70)2、-C(O)R70、-C(S)R70、-C(NR70)R70、-C(O)O-M+、-C(O)OR70、-C(S)OR70、-C(O)NR80R80、-C(NR70)NR80R80、-OC(O)R70、-OC(S)R70、-OC(O)O-M+、-OC(O)OR70、-OC(S)OR70、-NR70C(O)R70、-NR70C(S)R70、-NR70CO2-M+、-NR70CO2R70、-NR70C(S)OR70、-NR70C(O)NR80R80、-NR70C(NR70)R70及-NR70C(NR70)NR80R80，其中R60选自由以下基团组成的群组中：烷基、环烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、环烷基烷基、芳基、芳基烷基、杂芳基及杂芳基烷基；每个R70独立为氢或R60；每个R80独立为R70或可选择地，两个R80’与它们所键合的氮原子一起形成3、4、5、6或7元杂环烷基，该杂环烷基可任选包括1至4个选自由O、N及S组成的群组中的相同或不同的额外杂原子，其中N可具有-H、C1-C4烷基、-C(O)C1-4烷基、-CO2C1-4烷基或-SO2C1-4烷基取代，且每个M+为具有净单个正电荷的抗衡离子；其中所述经取代的杂环基为用1至5个取代基或1至3个取代基取代的杂环基，所述取代基选自烷基、烷氧基、环烷基、环烯基、酰基、酰氨基、酰氧基、氨基、氨酰基、氨酰氧基、叠氮基、氰基、卤素、羟基、氧代、硫酮基、羧基、羧基酯、硫代芳氧基、硫代杂芳氧基、硫代杂环氧基、巯基、硫代烷氧基、芳基、芳氧基、杂芳基、杂芳氧基、杂环基、杂环氧基、羟氨基、烷氧氨基、硝基、磺酰氨基、-SO-烷基、-SO-芳基、-SO-杂芳基、-SO-杂环基、-SO2-烷基、-SO2-芳基、-SO2-杂芳基及-SO2-杂环基；
该方法包括使化合物X1： 与包含L1-D的化合物反应。
83.一种用于制备化合物Z或其盐的方法：
其中：
D为药物部分；
1
L为键、第二自消耗连接子或环化自消除连接子；
L2为键或第二自消耗连接子；
其中若L1为第二自消耗连接子或环化自消除连接子，则L2为键；
其中若L2为第二自消耗连接子，则L1为键；
3
L为肽连接子；
L4为键或间隔基；
A为酰基单元；及
R1为氢、未取代或经取代的C1-3烷基或未取代或经取代的杂环基，其中所述经取代的烷
60 70 70 80 80
基为具有一个或多个选自以下的取代基的烷基：-R 、卤素、＝O、-OR 、-SR 、-NR R 、三卤代甲基、-CN、-OCN、-SCN、-NO、-NO2、＝N2、-N3、-S(O)R70、-SO2R70、-SO2O-M+、-SO2OR70、-OSO2R70、-OSO2O-M+、-OSO2OR70、-P(O)(O-)2(M+)2、-P(O)(OR70)O-M+、-P(O)(OR70)2、-C(O)R70、-C(S)R70、-C(NR70)R70、-C(O)O-M+、-C(O)OR70、-C(S)OR70、-C(O)NR80R80、-C(NR70)NR80R80、-OC(O)R70、-OC(S)R70、-OC(O)O-M+、-OC(O)OR70、-OC(S)OR70、-NR70C(O)R70、-NR70C(S)R70、-NR70CO2-M+、-NR70CO2R70、-NR70C(S)OR70、-NR70C(O)NR80R80、-NR70C(NR70)R70及-NR70C(NR70)NR80R80，其中R60选自由以下基团组成的群组中：烷基、环烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、环烷基烷基、芳基、芳基烷基、杂芳基及杂芳基烷基；每个R70独立为氢或R60；每个R80独立为R70或可选择地，两个R80’与它们所键合的氮原子一起形成3、4、5、6或7元杂环烷基，该杂环烷基可任选包括1至4个选自由O、N及S组成的群组中的相同或不同的额外杂原子，其中N可具有-H、C1-C4烷基、-C(O)C1-4烷基、-CO2C1-4烷基或-SO2C1-4烷基取代，且每个M+为具有净单个正电荷的抗衡离子；其中所述经取代的杂环基为用1至5个取代基或1至3个取代基取代的杂环基，所述取代基选自烷基、烷氧基、环烷基、环烯基、酰基、酰氨基、酰氧基、氨基、氨酰基、氨酰氧基、叠氮基、氰基、卤素、羟基、氧代、硫酮基、羧基、羧基酯、硫代芳氧基、硫代杂芳氧基、硫代杂环氧基、巯基、硫代烷氧基、芳基、芳氧基、杂芳基、杂芳氧基、杂环基、杂环氧基、羟氨基、烷氧氨基、硝基、磺酰氨基、-SO-烷基、-SO-芳基、-SO-杂芳基、-SO-杂环基、-SO2-烷基、-SO2-芳基、-SO2-杂芳基及-SO2-杂环基；
该方法包括使化合物Y1： 与包含A-L4的化合物反应。
84.一种具有以下式的化合物或其盐：
其中：
L2为键或第二自消耗连接子；
L3为肽连接子；
L4为键或间隔基；
A为酰基单元；及
R1为氢、未取代或经取代的C1-3烷基或未取代或经取代的杂环基，其中所述经取代的烷基为具有一个或多个选自以下的取代基的烷基：-R60、卤素、＝O、-OR70、-SR70、-NR80R80、三卤代甲基、-CN、-OCN、-SCN、-NO、-NO2、＝N2、-N3、-S(O)R70、-SO2R70、-SO2O-M+、-SO2OR70、-OSO2R70、-OSO2O-M+、-OSO2OR70、-P(O)(O-)2(M+)2、-P(O)(OR70)O-M+、-P(O)(OR70)2、-C(O)R70、-C(S)R70、-C(NR70)R70、-C(O)O-M+、-C(O)OR70、-C(S)OR70、-C(O)NR80R80、-C(NR70)NR80R80、-OC(O)R70、-OC(S)R70、-OC(O)O-M+、-OC(O)OR70、-OC(S)OR70、-NR70C(O)R70、-NR70C(S)R70、-NR70CO2-M+、-NR70CO2R70、-NR70C(S)OR70、-NR70C(O)NR80R80、-NR70C(NR70)R70及-NR70C(NR70)NR80R80，其中R60选自由以下基团组成的群组中：烷基、环烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、环烷基烷基、芳基、芳基烷基、杂芳基及杂芳基烷基；每个R70独立为氢或R60；每个R80独立为R70或可选择地，两个R80’与它们所键合的氮原子一起形成3、4、5、6或7元杂环烷基，该杂环烷基可任选包括1至4个选自由O、N及S组成的群组中的相同或不同的额外杂原子，其中N可具有-H、C1-C4烷基、-C(O)C1-4烷基、-CO2C1-4烷基或-SO2C1-4烷基取代，且每个M+为具有净单个正电荷的抗衡离子；其中所述经取代的杂环基为用1至5个取代基或1至3个取代基取代的杂环基，所述取代基选自烷基、烷氧基、环烷基、环烯基、酰基、酰氨基、酰氧基、氨基、氨酰基、氨酰氧基、叠氮基、氰基、卤素、羟基、氧代、硫酮基、羧基、羧基酯、硫代芳氧基、硫代杂芳氧基、硫代杂环氧基、巯基、硫代烷氧基、芳基、芳氧基、杂芳基、杂芳氧基、杂环基、杂环氧基、羟氨基、烷氧氨基、硝基、磺酰氨基、-SO-烷基、-SO-芳基、-SO-杂芳基、-SO-杂环基、-SO2-烷基、-SO2-芳基、-SO2-杂芳基及-SO2-杂环基。
85.一种具有以下式的化合物或其盐：
其中：
D为药物部分；
L1为键、第二自消耗连接子或环化自消除连接子；
L2为键或第二自消耗连接子；
其中若L1为第二自消耗连接子或环化自消除连接子，则L2为键；
其中若L2为第二自消耗连接子，则L1为键；
L3为肽连接子；
L4为键或间隔基；
A为酰基单元；及
R1为氢、未取代或经取代的C1-3烷基或未取代或经取代的杂环基，其中所述经取代的烷基为具有一个或多个选自以下的取代基的烷基：-R60、卤素、＝O、-OR70、-SR70、-NR80R80、三卤代甲基、-CN、-OCN、-SCN、-NO、-NO2、＝N2、-N3、-S(O)R70、-SO2R70、-SO2O-M+、-SO2OR70、-
70 - + 70 - + 70 - + 70 70
OSO2R 、-OSO2O M、-OSO2OR 、-P(O)(O)2(M)2、-P(O)(OR )OM、-P(O)(OR )2、-C(O)R 、-C(S)R70、-C(NR70)R70、-C(O)O-M+、-C(O)OR70、-C(S)OR70、-C(O)NR80R80、-C(NR70)NR80R80、-OC(O)R70、-OC(S)R70、-OC(O)O-M+、-OC(O)OR70、-OC(S)OR70、-NR70C(O)R70、-NR70C(S)R70、-NR70CO2-M+、-NR70CO2R70、-NR70C(S)OR70、-NR70C(O)NR80R80、-NR70C(NR70)R70及-NR70C(NR70)NR80R80，其中
60
R 选自由以下基团组成的群组中：烷基、环烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、环烷基烷基、芳基、芳基烷基、杂芳基及杂芳基烷基；每个R70独立为氢或R60；每个R80独立为R70或可选择地，两个R80’与它们所键合的氮原子一起形成3、4、5、6或7元杂环烷基，该杂环烷基可任选包括1至4个选自由O、N及S组成的群组中的相同或不同的额外杂原子，其中N可具有-H、C1-C4烷基、-C(O)C1-4烷基、-CO2C1-4烷基或-SO2C1-4烷基取代，且每个M+为具有净单个正电荷的抗衡离子；其中所述经取代的杂环基为用1至5个取代基或1至3个取代基取代的杂环基，所述取代基选自烷基、烷氧基、环烷基、环烯基、酰基、酰氨基、酰氧基、氨基、氨酰基、氨酰氧基、叠氮基、氰基、卤素、羟基、氧代、硫酮基、羧基、羧基酯、硫代芳氧基、硫代杂芳氧基、硫代杂环氧基、巯基、硫代烷氧基、芳基、芳氧基、杂芳基、杂芳氧基、杂环基、杂环氧基、羟氨基、烷氧氨基、硝基、磺酰氨基、-SO-烷基、-SO-芳基、-SO-杂芳基、-SO-杂环基、-SO2-烷基、-SO2-芳基、-SO2-杂芳基及-SO2-杂环基。
86.一种具有以下式的化合物或其盐：
其中：
L2为键或第二自消耗连接子；
L3为肽连接子；及
R1为氢、未取代或经取代的C1-3烷基或未取代或经取代的杂环基，其中所述经取代的烷基为具有一个或多个选自以下的取代基的烷基：-R60、卤素、＝O、-OR70、-SR70、-NR80R80、三卤代甲基、-CN、-OCN、-SCN、-NO、-NO2、＝N2、-N3、-S(O)R70、-SO2R70、-SO2O-M+、-SO2OR70、-OSO2R70、-OSO2O-M+、-OSO2OR70、-P(O)(O-)2(M+)2、-P(O)(OR70)O-M+、-P(O)(OR70)2、-C(O)R70、-C
70 70 70 - + 70 70 80 80 70 80 80
(S)R 、-C(NR )R 、-C(O)OM 、-C(O)OR 、-C(S)OR 、-C(O)NR R 、-C(NR )NR R 、-OC(O)R70、-OC(S)R70、-OC(O)O-M+、-OC(O)OR70、-OC(S)OR70、-NR70C(O)R70、-NR70C(S)R70、-NR70CO2-M+、-NR70CO2R70、-NR70C(S)OR70、-NR70C(O)NR80R80、-NR70C(NR70)R70及-NR70C(NR70)NR80R80，其中R60选自由以下基团组成的群组中：烷基、环烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、环烷基烷基、芳
70 60 80 70
基、芳基烷基、杂芳基及杂芳基烷基；每个R 独立为氢或R ；每个R 独立为R 或可选择地，两个R80’与它们所键合的氮原子一起形成3、4、5、6或7元杂环烷基，该杂环烷基可任选包括1至4个选自由O、N及S组成的群组中的相同或不同的额外杂原子，其中N可具有-H、C1-C4烷基、-C(O)C1-4烷基、-CO2C1-4烷基或-SO2C1-4烷基取代，且每个M+为具有净单个正电荷的抗衡离子；其中所述经取代的杂环基为用1至5个取代基或1至3个取代基取代的杂环基，所述取代基选自烷基、烷氧基、环烷基、环烯基、酰基、酰氨基、酰氧基、氨基、氨酰基、氨酰氧基、叠氮基、氰基、卤素、羟基、氧代、硫酮基、羧基、羧基酯、硫代芳氧基、硫代杂芳氧基、硫代杂环氧基、巯基、硫代烷氧基、芳基、芳氧基、杂芳基、杂芳氧基、杂环基、杂环氧基、羟氨基、烷氧氨基、硝基、磺酰氨基、-SO-烷基、-SO-芳基、-SO-杂芳基、-SO-杂环基、-SO2-烷基、-SO2-芳基、-SO2-杂芳基及-SO2-杂环基。
87.一种具有以下式的化合物或其盐：
其中：
D为药物部分；
L1为键、第二自消耗连接子或环化自消除连接子；
L2为键或第二自消耗连接子；
其中若L1为第二自消耗连接子或环化自消除连接子，则L2为键；
其中若L2为第二自消耗连接子，则L1为键；
L3为肽连接子；及
R1为氢、未取代或经取代的C1-3烷基或未取代或经取代的杂环基，其中所述经取代的烷基为具有一个或多个选自以下的取代基的烷基：-R60、卤素、＝O、-OR70、-SR70、-NR80R80、三卤代甲基、-CN、-OCN、-SCN、-NO、-NO2、＝N2、-N3、-S(O)R70、-SO2R70、-SO2O-M+、-SO2OR70、-OSO2R70、-OSO2O-M+、-OSO2OR70、-P(O)(O-)2(M+)2、-P(O)(OR70)O-M+、-P(O)(OR70)2、-C(O)R70、-C(S)R70、-C(NR70)R70、-C(O)O-M+、-C(O)OR70、-C(S)OR70、-C(O)NR80R80、-C(NR70)NR80R80、-OC(O)R70、-OC(S)R70、-OC(O)O-M+、-OC(O)OR70、-OC(S)OR70、-NR70C(O)R70、-NR70C(S)R70、-NR70CO2-M+、-NR70CO2R70、-NR70C(S)OR70、-NR70C(O)NR80R80、-NR70C(NR70)R70及-NR70C(NR70)NR80R80，其中R60选自由以下基团组成的群组中：烷基、环烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、环烷基烷基、芳基、芳基烷基、杂芳基及杂芳基烷基；每个R70独立为氢或R60；每个R80独立为R70或可选择地，两个R80’与它们所键合的氮原子一起形成3、4、5、6或7元杂环烷基，该杂环烷基可任选包括1至4个选自由O、N及S组成的群组中的相同或不同的额外杂原子，其中N可具有-H、C1-C4烷基、-C(O)C1-4烷基、-CO2C1-4烷基或-SO2C1-4烷基取代，且每个M+为具有净单个正电荷的抗衡离子；其中所述经取代的杂环基为用1至5个取代基或1至3个取代基取代的杂环基，所述取代基选自烷基、烷氧基、环烷基、环烯基、酰基、酰氨基、酰氧基、氨基、氨酰基、氨酰氧基、叠氮基、氰基、卤素、羟基、氧代、硫酮基、羧基、羧基酯、硫代芳氧基、硫代杂芳氧基、硫代杂环氧基、巯基、硫代烷氧基、芳基、芳氧基、杂芳基、杂芳氧基、杂环基、杂环氧基、羟氨基、烷氧氨基、硝基、磺酰氨基、-SO-烷基、-SO-芳基、-SO-杂芳基、-SO-杂环基、-SO2-烷基、-SO2-芳基、-SO2-杂芳基及-SO2-杂环基。
88.如权利要求1-2和84-87中任一项所述的化合物，其中R1为氢、未取代的C1-3烷基或未取代的杂环基。
1
89.如权利要求1-2和84-87中任一项所述的化合物，其中R为甲基。
90.如权利要求73-74和79-83中任一项所述的方法，其中R1为氢、未取代的C1-3烷基或未取代的杂环基。
91.如权利要求73-74和79-83中任一项所述的方法，其中R1为甲基。
亲水性自消耗连接子及其缀合物
技术领域
背景技术
数，从而增加治疗效果。Brentuximab Vedotin(SGN-35)，即一种与细胞毒性剂MMAE缀合的抗CD30抗体，已被批准用于治疗CD30阳性复发性淋巴瘤。
发明内容
在一些实施方案中，p为1、2、3或4。
SCN、-NO、-NO2、＝N2、-N3、-S(O)R 、-SO2R 、-SO2O M 、-SO2OR 、-OSO2R 、-OSO2O M 、-OSO2OR70、-P(O)(O-)2(M+)2、-P(O)(OR70)O-M+、-P(O)(OR70)2、-C(O)R70、-C(S)R70、-C(NR70)R70、-C(O)O-M+、-C(O)OR70、-C(S)OR70、-C(O)NR80R80、-C(NR70)NR80R80、-OC(O)R70、-OC(S)R70、-OC(O)O-M+、-OC(O)OR70、-OC(S)OR70、-NR70C(O)R70、-NR70C(S)R70、-NR70CO2-M+、-NR70CO2R70、-
70 70 70 80 80 70 70 70 70 70 80 80 60
NR C(S)OR 、-NR C(O)NR R 、-NR C(NR )R 及-NR C(NR )NR R ，其中R 选自由以下基
团组成的群组中：任选取代的烷基、环烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、环烷基烷基、芳基、芳基烷基、杂芳基及杂芳基烷基；每个R70独立为氢或R60；每个R80独立为R70或可选择地，两个R80’与它们所键合的氮原子一起形成3、4、5、6或7元杂环烷基，该杂环烷基可任选包括1至4个选自由O、N及S组成的群组中的相同或不同的额外杂原子，其中N可具有-H、C1-C4烷基、-C(O)C1-4烷基、-CO2C1-4烷基或-SO2C1-4烷基取代；且每个M+为具有净单个正电荷的抗衡离子。
例如，每个M+可独立为碱离子，诸如K+、Na+、Li+；铵根离子，诸如+N(R60)4；或碱土离子，诸如[Ca2+]0.5、[Mg2+]0.5或[Ba2+]0.5(下标0.5意指对于此类二价碱土离子的抗衡离子中的一个可为实施方案的化合物的离子化形式及诸如氯离子那样的其它典型抗衡离子，或本文所公开的两个离子化化合物可充当对于此类二价碱土离子的抗衡离子，或实施方案的一个双重离子化化合物可充当对于此类二价碱土离子的抗衡离子)。
NR CO2R 、-NR C(S)OR 、-NR C(O)NR R 、-NR C(NR )R 及-NR C(NR )NR R ，其中R 、R70、R80及M+如先前所定义，前提条件是在经取代的烯基或炔基的情况下，取代基不为-O-M+、-OR70、-SR70或-S-M+。
环烷基及环烷基中的氮原子上的氢的取代基为-R 、-OM、-OR 、-SR 、-SM 、-NR R 、三卤代甲基、-CF3、-CN、-NO、-NO2、-S(O)R70、-S(O)2R70、-S(O)2O-M+、-S(O)2OR70、-OS(O)2R70、-OS(O)2O-M+、-OS(O)2OR70、-P(O)(O-)2(M+)2、-P(O)(OR70)O-M+、-P(O)(OR70)(OR70)、-C(O)R70、-C(S)R70、-C(NR70)R70、-C(O)OR70、-C(S)OR70、-C(O)NR80R80、-C(NR70)NR80R80、-OC(O)R70、-OC(S)R70、-OC(O)OR70、-OC(S)OR70、-NR70C(O)R70、-NR70C(S)R70、-NR70C(O)OR70、-NR70C(S)OR70、-NR70C(O)NR80R80、-NR70C(NR70)R70及-NR70C(NR70)NR80R80，其中R60、R70、R80及M+如先前所定义。
二靶标。因此，“特异性结合”或“优先结合”不一定需要(尽管可包括)独占结合。特异性结合至靶标的抗体可具有至少约103M-1或104M-1的缔合常数，该缔合常数有时约105M-1或106M-1，在其它情况下约106M-1或107M-1、约108M-1至109M-1或约1010M-1至1011M-1或更高。各种免疫测定方式可用于通过特定蛋白质来选择具有特异性免疫活性的抗体。例如，固相ELISA免疫测定常用于通过蛋白质来选择具有特异性免疫活性的单克隆抗体。请参见例如Harlow and
Lane(1988)Antibodies,A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Publications,New York，用于描述可用于确定特异性免疫反应性的免疫测定方式及条件。
361页,第1084-1085页；Smith and March,March’s Advanced Organic Chemistry:
Reactions,Mechanisms,and Structure,第5版,Wiley-Interscience,2001。
的每个及每一此类亚组合。
具体实施方式
在一些实施方案中，p为1、2、3或4。在一些实施方案中，p为2。在一些实施方案中，p为3。在一些实施方案中，p为4。
或O且每个q独立为1至10的整数。
其中Q2为NH或O。
依托泊苷、长春碱、长春新碱、长春地辛、紫杉醇、多西紫杉醇维甲酸、丁酸、N-乙酰基亚精胺、喜树碱及其类似物。其它药物包括多拉司他汀(dolastatin)及倍癌霉素
(duocarmycin)。
蝶呤、放线菌素、博来霉素、9-氨基喜树碱、N-乙酰基亚精胺、1-(2-氯乙基)-1,2-二甲磺酰基肼、他利霉素、阿糖胞苷、多拉司他汀及其衍生物。含有氨基的药物也包括非天然含有氨基的药物的氨基衍生物。在某些实施方案中，D为倍癌霉素、多拉司他汀、微管结合素
(tubulysin)、多柔比星(DOX)、紫杉醇或丝裂霉素C(MMC)或其氨基衍生物。
在一些实施方案中，靶向部分具有1个接附的位点。在一些实施方案中，靶向部分具有4个接附的位点。在一些实施方案中，接附的某些潜在位点不可易于键合至药物部分。因此，靶向部分T中的接附位点的数目可导致其中接附的药物部分的数目比接附的潜在位点的数目更少的药物缀合物。在一些实施方案中，接附的位点中的一或多个可易于键合药物部分。例如，抗体靶向部分可在抗体的每个链上具有一或两个可易于经由连接子键合至药物部分的巯基。
改构型。抗体可为鼠类、大鼠、骆驼、人类或任何其它来源(包括人源化抗体)。在一些实施方案中，本文所描述的靶向部分中所使用的抗体(或抗体靶向部分)为以下抗体中的任一个：
双特异性抗体、多特异性抗体、单链、双官能及嵌合和人源化分子，其对由抗体的至少一个高变区(HVR)或互补决定区(CDR)授予的多肽具有亲合力。本申请中所使用的抗体也包括单域抗体，该等抗体为抗体重链的可变域或者抗体轻链的可变域。Holt等人,Trends
Biotechnol.21:484-490,2003。在本领域中也已知制备包含抗体重链的可变域或者抗体轻链的可变域的域抗体的方法，该等域抗体含有抗体中六个天然存在的HVR或CDR中的三个。
请参见例如Muyldermans,Rev.Mol.Biotechnol.74:277-302,2001。
1975,Nature,256:495首次描述的杂交瘤方法制备或可通过诸如美国专利第4,816,567号
中所描述的重组DNA方法制备。单克隆抗体也可使用例如McCafferty等人,1990,Nature,
348:552-554中所描述的技术与所产生的噬菌体抗体库分离。
81:3273-3277；Harlow及Lane(1988),Antibodies:a Laboratory Manual,Cold Spring
Harbor Laboratory)。通常，在该等嵌合抗体中，轻链及重链两者的可变区模拟自哺乳动物的一个物种衍生的抗体的可变区，而恒定部分与自另一物种衍生的抗体中的序列同源。此类嵌合形式的一种明显优势在于例如可使用可易于取得的杂交瘤或来自非人类宿主有机
体的B细胞与自例如人类细胞制品衍生的恒定区的结合便于自目前已知的来源衍生可变
区。尽管可变区具有易于制备的优势且特异性不受其来源影响，但是当注射抗体时人类恒定区在人类受试者中引起免疫反应的可能性比非人类来源的恒定区更小。然而，该定义并不被限于此特定实例。
人源化抗体最佳也将包含免疫球蛋白恒定区或恒定域(Fc)中的至少一部分，通常为人类免疫球蛋白的恒定区或恒定域。抗体可具有如WO 99/58572中所描述的修改的Fc区。人源化抗体的其它形式具有一或多个HVR或CDR(一个、两个、三个、四个、五个、六个)，关于原始抗体改变该等HVR或CDR，此也称为“衍生自”原始抗体中的一或多个HVR或CDR的一或多个HVR或CDR。
(USA)95:6157-6162；Hoogenboom及Winter,1991,J.Mol.Biol.,227:381；Marks等人,1991,J.Mol.Biol.,222:581)。也可通过将人类免疫球蛋白基因座引入转基因动物(例如小鼠)中来制备人类抗体，在该等转基因动物体内已部分或完全灭活内源性免疫球蛋白基因。在美国专利第5,545,807号、第5,545,806号、第5,569,825号、第5,625,126号、第5,633,425号及第5,661,016号中描述此方法。可选择地，可通过永生化针对靶抗原产生抗体的人类B淋巴细胞制备人类抗体(此类B淋巴细胞可自个体回收或可在体外已被免疫)。参见例如Cole等人,Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy,Alan R.Liss,第77页(1985)；Boerner等人,1991,J.Immunol.,147(1):86-95；及美国专利第5,750,373号。
013587(专利公开第WO 2007/146172号)或PCT/US2008/087515(专利公开第WO 2009/
079649号)中所描述的抗体，该等专利中的每篇的内容以引用的方式引入本文。在一些实施方案中，抗体为h5F1Ca.1抗体。
2013/103800)中所描述的抗体，该等申请中的内容以全文引用的方式引入本文。在一些实施方案中，抗体为嵌合5D7-54.17抗体(c5D7)、5D7-54.17或衍生自5D7-54.17抗体的抗体(例如美国临时专利申请第61/584,125中所描述的抗体)。在一些实施方案中，抗体为c5D7抗体。
119；及/或轻链可变区，其包含SEQ ID NO:4的氨基酸1-108。在一些实施方案中，所述抗体为嵌合抗体。在一些实施方案中，所述抗体为人源化抗体。
Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD.(1991))。恒定域不可直接涉及结合抗体至抗原，但是可展示各种效应功能，诸如抗体在抗体依赖性细胞毒性
(ADCC)中的参与。抗体的恒定区指单独或组合的抗体轻链的恒定区或抗体重链的恒定区。
抗体的恒定区大体上提供结构稳定性及其它生物功能，诸如抗体链关联、分泌、经胎盘移动及补充结合，但是不涉及结合至抗原。恒定区的基因中的氨基酸序列及对应的外显子序列将取决于其所衍生来自的物种；然而，在物种内部针对特定恒定区将相对限制氨基酸序列中导致异型的变异。每个链的可变区通过连接多肽序列接合至恒定区。通过轻链基因中的“J”序列及重链基因中的“D”序列及“J”序列的组合编码连接序列。
Immunological Interest,第5版,Public Health Service,National Institutes of
Health,Bethesda,MD.(1991))及/或来自“高变环”的彼等残基(例如VL中的残基26-32
(L1)、50-52(L2)及91-96(L3)及VH中的26-32(H1)、53-55(H2)及96-101(H3)；Chothia及Lesk J.Mol.Biol.196:901-917(1987))。存在多种方式用于确定CDR，例如基于交叉物种序列变化性的途径(即Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest,
(第5版,1991,National Institutes of Health,Bethesda MD))；及基于抗原-抗体复合物的结晶研究的途径(Al-lazikani等人(1997)J.Mol.Biol.273:927-948))。作为Kabat互补决定区(CDR)的HVR基于序列变化性且最常使用(前述Kabat等人)。Chothia反而指结构环的位置(Chothia及Lesk J.Mol.Biol.196:901-917(1987))。AbM HVR表示Kabat CDR与
Chothia结构环之间的折中且由Oxford Molecular的AbM抗体建模软件使用。“接触”HVR基于可得复晶体结构的分析。如本文所使用，CDR可为由上述措施中的任一个或上述措施中的任两者或三者的组合定义的CDR。CDR可为Kabat CDR、Chothia CDR或接触CDR。下文注释来自该等HVR中的各者的残基。
932；Lyons,A等人,(1990)Prot.Engineering 3(8):703-708；及Stimmel,JB等人,(2000)J.Biol.Chem.275(39):30445-30450。在一些实施方案中，对抗体进行工程化以用一或多个半胱氨酸残基代替重链或轻链上的氨基酸残基(例如天然存在的氨基酸)，前提条件是半胱氨酸残基的反应性硫醇基团对抗体折叠或组装几乎没有影响且不明显改变抗原结合。在一些实施方案中，针对新引进的工程化的半胱氨酸硫醇基团的反应性评估半胱氨酸残基。硫醇反应性值为0至1.0范围内的相对数值项且可针对任何用半胱氨酸工程化的抗体测量该
值。在一些实施方案中，本发明的用半胱氨酸工程化的抗体的硫醇反应性值为约0.6至1.0、
0.7至1.0或0.8至1.0中的任一个。WO 2006/034488、WO 2010/141902、WO 2013/093809、WO
2008/038024、WO 2008/070593、WO 2009/092011、WO 2011/005481及WO 2011/156328提供针对位点特异性缀合的用半胱氨酸工程化的抗体。
在本发明的一些实施方案中，对h5F1Ca.1、c5D7抗体或衍生自h5F1Ca.1或c5D7抗体的抗体进行工程化以包含一或多个游离半胱氨酸残基。
137、138、139、161、168、172、234、235、237、239、246、249、265、267、269、270、276、278、282、
283、284、287、289、292、293、297、298、299、300、302、303、312、314、315、318、320、324、326、
327、330、332、333、334、335、336、337、339、345、347、354、355、356、358、359、360、361、362、
370、373、376、378、380、382、383、384、386、388、398、390、392、393、400、401、404、411、413、
414、416、418、419、421、422、428、431、432、437、438、439、440、442、443及444；根据Kabat等人(1991,NIH Publication91-3242,National Technical Information Service,
Springfield,VA,以下称为“Kabat”)的EU索引编号。
84、88、103、112、113、114、115、131、132、133、134、135、136、137、138、139、161、168、172、
234、235、237、239、246、249、265、267、269、270、276、278、282、283、284、287、289、292、293、
297、298、299、300、302、303、312、314、315、318、320、324、326、327、330、332、333、334、335、
336、337、339、345、347、354、355、356、358、359、360、361、362、370、373、376、378、380、382、
383、384、386、388、398、390、392、393、400、401、404、411、413、414、416、418、419、421、422、
428、431、432、437、438、439、440、442、443及444；根据Kabat的EU索引编号。
208及210，根据Kabat的EU索引编号。
98％纯的，更优选地至少99％纯的。在一些实施方案中，抗体为单克隆抗体。在一些实施方案中，抗体为人源化抗体。在一些实施方案中，抗体为嵌合抗体。在一些实施方案中，抗体为人类抗体。在一些实施方案中，抗体为IgG(诸如IgG1、IgG2或IgG4)。在一些实施方案中，抗体为人类IgG，诸如人类IgG1。
式(IV)的化合物或其盐或溶剂合物或立体异构体意欲涵盖式(IVa)的化合物或其盐或溶剂合物或立体异构体；及式(V)的化合物或其盐或溶剂合物或立体异构体意欲涵盖式(Va)的化合物或其盐或溶剂合物或立体异构体。
(Trastuzumab；Genentech,CA))；抗CD20抗体，诸如嵌合抗CD20单克隆抗体(例如RITUXAN(rituximab；Genentech))；OvaRex(AltaRex Corporation,MA)；Panorex(Glaxo Wellcome,NC)；BEC2(ImClone Systems Inc.,NY)；IMC-C225(ImClone Systems Inc.,NY)；Vitaxin(MedImmune,Inc.,MD)；Campath I/H(Leukosite,MA)；SmartMI95(Protein Design Labs,Inc.,CA)；LymphoCide(Immunomedics,Inc.,NJ)；Smart ID10(Protein Design Labs,
Inc.,CA)；Oncolym(Techniclone,Inc.,CA)；抗CD2抗体，诸如人源化抗CD2mAb(例如
Allomune(BioTransplant,CA))；抗VEGF抗体，诸如人源化抗VEGF抗体(例如贝伐单抗
(Genentech,Inc.,CA))；CEAcide(Immunomedics,NJ)；抗KDR抗体，诸如抗KDR嵌合抗体(例如IMC-1C11(ImClone Systems,NJ))；抗EGFR抗体，诸如抗EGFR嵌合抗体(例如Cetuximab(ImClone,NJ))；BR96mAb(Trail,P.A.等人,Science 1993,261,212-215)；BR64(Trail,P A等人,Cancer Research 1997,57,100-105)；抗CD30抗体；及抗CD 40抗原的mAbs，诸如
S2C6mAb。抗体可进一步包括对抗以下抗原中的任一个的抗体：CA125、CA15-3、CA19-9、L6、Lewis Y、Lewis X、甲胎蛋白、CA242、碳酸酐酶IX(CAIX/CA9)、CA6、畸胎瘤衍化生长因子(cripto)、间皮素、αv-整合素、LIV-1(也称为SLC39A6或ZIP6)、SLC44A4(AGS-5)、鸟苷酸环化酶C(GCC)、ENPP3、FOLR1、EGFRvIII、MUC16、内皮受体ETB(ETBR)、NaPi2b(钠依赖性磷酸盐转运蛋白2b)(也称为SLC34A2)、前列腺特异性膜抗原(PSMA)、5T4、STEAP1、结合素-4、GPNMB、上皮细胞粘附分子(EpCAM)、EphA2、叶酸受体α(FRA)、CanAg、人类非肌肉肌球蛋白重链A型(nmMHCA)、SLITRK6、T细胞免疫球蛋白及粘蛋白域1(TIM-1)(也称为HAVCR1)、组织因子(TF)、胎盘碱性磷酸酶、前列腺特异性抗原、前列腺酸性磷酸酶、表皮生长因子、MAGE-1、MAGE-2、MAGE-3、MAGE-4、抗转铁蛋白受体、p97、MUC1-KLH、CEA、gp100、MART1、PSA、IL-2受体、CD20、CD52、CD33、CD22、CD138(Syndecan-1)、CD79b、CD74、CD70、CD56、CD37、CD19、癌胚抗原相关细胞粘附分子5(CEACAM5)(也称为CD66e)、上皮糖蛋白-1(EGP-1)(也称为TROP2、TACSTD2、GA733-1、M1S1)、人类绒膜促性腺激素、CD38、CD40、粘蛋白、P21、MPG及Neu原癌基因产物。
8)，上述各者能够引起免疫反应。
Pharmaceutical Sciences,第17版,Mack Publishing Company,Easton,Pa.,1985。
所欲取代基以得到所欲产物。可选择地，不使用最终所欲取代基，而是使用可经由反应流程实施及酌情使用所欲取代基替代的适宜基团可为必需或理想的。此外，本领域技术人员将认识到的是，可按与特定侧基的官能性兼容的任何次序执行下文流程中所示的转化。优选地在自约0℃至所使用的有机溶剂的回流温度的温度执行大体流程中所描述的反应中的各者。除另有规定外，变量如上文关于式(I)所定义。
4397.Carpino,L.A.；El-Faham,A.J.Am.Chem.Soc.1995,117,5401.Li,P.；Xu,
J.C.J.Pept.Res.2001,58,129.)。
及/或制备化合物的方法所产生的化合物中的一或多个的组合物(例如药物组合物)。
80.4％相同的人类抗体ABI74084(Genebank第ABI74084号)的VL用作受体抗体。受体抗体的一些残基被突变为鼠类对应残基以避免可变区的构形变化。表1展示h5F1Ca.1重链及轻链的最终氨基酸序列。
h5F1Ca.1/pcDNA5-FRT-hIgG1用于表达h5F1Ca.1抗体。
30-40分钟后形成白色混悬液并将CH2Cl2(10ml)中的4-硝基苯基乙醇酸添加至此混合物中，引起透明溶液的形成。在搅拌混合物1小时后，在室温添加N-甲基哌嗪(5mmol)。在反应完成(TLC,10分钟)后，使用10％NaHCO3水溶液(2×10ml)继之以H2O(3×10ml)洗涤混合物。用无水硫酸钠干燥有机层及在减小压力下除去溶剂，得到粗产物，通过重结晶或柱色谱法(石油醚:乙酸乙酯＝8:2)进一步纯化该粗产物。
DTNB。从J.T.Baker(Center Valley,PA)处获得磷酸钠、硼酸钠及氯化钠。从Alfa Aesar(Ward Hill,MA)处获得半胱氨酸。
(BCRC,Cat.No.60212)、结肠直肠癌细胞COLO205(ATCC,Cat.No.CCL-222)、DLD-1(ATCC,
Cat.No.CCL-221)及SW480(ATCC,Cat.No.CCL-228)。
流动速率为0.8mL/分钟及柱温为80℃。溶剂A为水中的0.05％三氟乙酸及溶剂B为乙腈中的
0.04％三氟乙酸。方法如下：等度25％B历时3分钟；25分钟线性梯度至50％B；2分钟线性梯度至95％B；1分钟线性梯度至25％B；及等度25％B历时2分钟。利用非缀合h5F1Ca.1(L0及H0)进行峰归属。通过其洗脱时间、UV光谱(A248/280比例随药物载入增加)及SDS-PAGE分布(轻链及重链)归属L1、H1、H2及H3。
细胞SNU-16、Panc 02.03B、COLO 205及SW480。在96孔微量滴定板上以1×10 个细胞/孔接种癌细胞DLD-1及PANC-1。以3μg/mL及1μg/mL的最终浓度或最终指示浓度及最终体积200μL/孔一式三份添加h5F1Ca.1/Tap18H ADC、h5F1Ca.1/Tap18Hr1或裸抗体h5F1Ca.1。随后在
37℃及5％CO2中温育细胞及通过细胞增殖试剂WST-1(Roche(Nutley,NJ),
Cat.No.11644807001)遵循制造商说明在72小时或96小时检测细胞生存力。简言之，温育结束时，撤出100μL培养基及将10μL/孔的WST-1添加至测试细胞系中。在最佳彩色显影(当未经处理的对照的OD450≥1.00时)后，通过分光光度计(Molecular Devices(Sunnyvale,CA),VERSAmax微板读取器)测量450nm处的吸光率(OD450值)。获得一式三份的平均值及减去背景(培养基对照)。所得到的OD450值随后用于根据以下公式计算抑制百分比(％)：[OD450溶剂-OD450样本]/[OD450溶剂]*100。溶剂表明未经处理的对照。
3
天时平均肿瘤大小被进一步抑制至<20mm (图2)。在治疗组及载体组中，该等小鼠的体重皆保持不变。因此，数据表明h5F1Ca.1/Tap18H可有效抑制SCID小鼠中抗原阳性肿瘤的生长。
小达到100mm (标记为第1天)时，用2周剂量的载体或ADC以1mg/kg治疗小鼠。如图3所示，h5F1Ca.1/Tap18Hr1的给药引发肿瘤消退，其中平均肿瘤大小被抑制至<10mm3。在治疗组及载体组中，该等小鼠的体重皆保持不变。因此，数据表明h5F1Ca.1/Tap18Hr1可有效抑制SCID小鼠中抗原阳性肿瘤的生长。
c5D7。使用对于1.0mg/mL溶液在280nm的吸收率值1.346量化蛋白质浓度及使用145,194g/mol的分子量确定摩尔浓度。通过使用DTNB(或5,5’-二硫基二(2-硝基苯甲酸))的滴定法确定所产生的mAb-半胱氨酸硫醇的浓度。当使用3.0摩尔当量的TCEP时通常产生约4.0至4.5硫醇/mAb。使用2.4M马来酰亚氨基己酰基-单甲基多拉司他汀10/mAb-半胱氨酸硫醇对部分还原的c5D7进行烷基化。在10℃进行烷基化反应30分钟。半胱氨酸(最终1mM)用于淬灭任何未反应的过量马来酰亚氨基己酰基-单甲基多拉司他汀10药物。通过在4℃透析过夜将所得到的ADC转变为磷酸盐缓冲盐水。
宽度×宽度)计算肿瘤体积。
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