下面结合具体
实施例来详细说明本发明。
实施例1:
一种治疗更年期综合症的药物,由下述配比的原料制成:
郁金 220g 熟地黄 308g 制何首乌 154g
钩藤 220g 五味子 110g 首乌藤 110g
酸枣仁 308g 远志 110g 浮小麦 220g
栀子 110g 琥珀 60g 百合 154g
胆南星 110g
该配方的制备过程如下:
(1)以上十三味,取琥珀粉、20%的钩藤
粉碎成细粉,备用;
(2)剩余钩藤、五味子、酸枣仁、制何首乌粉碎成粗粉,照流浸膏剂与浸膏 剂项下的渗漉法,用60%
乙醇作
溶剂浸渍48小时后,缓缓进行渗漉,收集漉液, 回收乙醇,减压干燥成干膏,粉碎,备用;
(3)其余郁金等8味加
水煎煮两次,每次2小时,合并煎液,滤过(分子膜 过滤),截留液浓缩至一定程度,加乙醇使含醇量达70%,静置过夜,滤取上清液, 回收乙醇,滤液浓缩成稠膏,加入钩藤、琥珀细粉及干浸膏粉,混匀,减压干燥 成干膏,加适量辅料,用乙醇制粒,压片,制成1000片,包
薄膜衣,即得。
实施例2:
治疗更年期综合征药物配方2:
郁金 176g 熟地黄 286g 制何首乌 110g
钩藤 176g 五味子 88g 首乌藤 88g
酸枣仁 286g 远志 88g 浮小麦 176g
栀子 88g 琥珀 55g 百合 110g
胆南星 88g
制备工艺及过程同实施例1。
实施例3:
治疗更年期综合征药物配方:
郁金 264g 熟地黄 352g 制何首乌 176g
钩藤 264g 五味子 132g 首乌藤 132g
酸枣仁 352g 远志 132g 浮小麦 264g
栀子 132g 琥珀 70g 百合 176g
胆南星 132g
制备工艺及过程同实施例1。
实验实施例:
一、
稳定性试验
本实验对治疗更年期综合症药物进行了稳定性考察,实施例1、实施例2、实 施例3的样品批号分别为:991201、991202、991203,考察条件为常温下放置0、 1、2、3、6、12、18、24个月,密封放置。考察结果表明,该药物在常温放置24 个月,其外观及含量等均未发生明显变化。
表1、治疗更年期综合症药物的长期稳定性试验结果(一)
样品批号:991201 生产日期:1999年12月 0月 1月 2月 3月 6月 12月 18月 24月 性状 本品为薄 膜衣片, 除去包衣 后显棕褐 色;味微 酸、微涩 本品为薄 膜衣片, 除去包衣 后显棕褐 色;味微 酸、微涩 本品为薄 膜衣片, 除去包衣 后显棕褐 色;味微 酸、微涩 本品为薄 膜衣片, 除去包衣 后显棕褐 色;味微 酸、微涩 本品为薄 膜衣片, 除去包衣 后显棕褐 色;味微 酸、微涩 本品为薄 膜衣片, 除去包衣 后显棕褐 色;味微 酸、微涩 本品为薄 膜衣片, 除去包衣 后显棕褐 色;味微 酸、微涩 本品为薄 膜衣片, 除去包衣 后显棕褐 色;味微 酸、微涩 薄 层 鉴 别 何首乌首乌藤 薄层
鉴别 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 五味子薄层鉴别 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 酸枣仁薄层鉴别 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 栀子薄层鉴别 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 检 查 崩解时限(min) 38 42 41 38 40 40 37 39 卫 生 学 检 查 细菌(<10000个/g) 100 150 150 200 180 180 200 200 霉菌(<100个/g) <10 <10 <10 <10 <10 <10 <10 <10 大肠杆菌 未检出 未检出 未检出 未检出 未检出 未检出 未检出 未检出 活螨 未检出 未检出 未检出 未检出 未检出 未检出 未检出 未检出
表2、治疗更年期综合症药物长期稳定性试验结果(二)
样品批号:991202 生产日期:1999年12月 0月 1月 2月 3月 6月 12月 18月 24月 性状 本品为薄膜 衣片,除去 包衣后显棕 褐色;味微 酸、微涩 本品为薄膜 衣片,除去 包衣后显棕 褐色;味微 酸、微涩 本品为薄膜 衣片,除去 包衣后显棕 褐色;味微 酸、微涩 本品为薄膜 衣片,除去 包衣后显棕 褐色;味微 酸、微涩 本品为薄膜 衣片,除去 包衣后显棕 褐色;味微 酸、微涩 本品为薄膜 衣片,除去 包衣后显棕 褐色;味微 酸、微涩 本品为薄膜 衣片,除去 包衣后显棕 褐色;味微 酸、微涩 本品为薄膜 衣片,除去 包衣后显棕 褐色;味微 酸、微涩 薄 层 鉴 别 何首乌首乌藤 薄层鉴别 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 五味子薄层鉴别 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 酸枣仁薄层鉴别 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 栀子薄层鉴别 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 检 查 崩解时限(min) 34 38 37 32 36 36 35 32 卫 生 学 检 查 细菌(<10000个/g) 80 90 100 150 140 160 200 220 霉菌(<100个/g) <10 <10 <10 <10 <10 <10 <10 <10 大肠杆菌 未检出 未检出 未检出 未检出 未检出 未检出 未检出 未检出 活螨 未检出 未检出 未检出 未检出 未检出 未检出 未检出 未检出
表3、治疗更年期综合症药物长期稳定性试验结果(三)
样品批号:991203 生产日期:1999年12月 0月 1月 2月 3月 6月 12月 18月 24月 性状 本品为薄 膜衣片, 除去包衣 后显棕褐 色;味微 酸、微涩 本品为薄 膜衣片, 除去包衣 后显棕褐 色;味微 酸、微涩 本品为薄 膜衣片, 除去包衣 后显棕褐 色;味微 酸、微涩 本品为薄 膜衣片, 除去包衣 后显棕褐 色;味微 酸、微涩 本品为薄 膜衣片, 除去包衣 后显棕褐 色;味微 酸、微涩 本品为薄 膜衣片, 除去包衣 后显棕褐 色;味微 酸、微涩 本品为薄 膜衣片, 除去包衣 后显棕褐 色;味微 酸、微涩 本品为薄 膜衣片, 除去包衣 后显棕褐 色;味微 酸、微涩 薄 层 鉴 别 何首乌首乌藤 薄层鉴别 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 五味子薄层鉴别 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 酸枣仁薄层鉴别 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 栀子薄层鉴别 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 符合规定 检 查 崩解时限(min) 40 43 39 37 42 41 44 40 卫 生 学 检 查 细菌(<10000个/g) 120 130 110 160 150 200 200 210 霉菌(<100个/g) <10 <10 <10 <10 <10 <10 <10 <10 大肠杆菌 未检出 未检出 未检出 未检出 未检出 未检出 未检出 未检出 活螨 未检出 未检出 未检出 未检出 未检出 未检出 未检出 未检出
二、主要药效学与毒理学研究
主要药效学研究
试验目的:验证本发明治疗更年期综合症药物的主要药效作用,为临床用药 提供依据。
本发明治疗更年期综合症药物是以郁金、熟地、酸枣仁等多味中药组成的复 方制剂,具有舒肝解郁、滋阴潜阳、安神定志功能,临床用于治疗情志不畅,阴 虚阳亢所致更年期综合症。为验证其主要药理作用,我们以更年安片为阳性对照 药,观察了本品对戊巴比妥钠所致睡眠的协同作用及小鼠自主活动的影响,对去 势大鼠激素水平的影响等项试验,结果如下:
1、
镇静试验
对小鼠自主活动次数的影响
取18-20g昆明种小鼠60只,按体重随机分成5组,每组12只,分别为本发 明治疗更年期综合症药物高中低剂量组,
给药量为:8.8g生药/Kg,4.4g生药/Kg 及2.2g生药/Kg,相当于人用剂量的20、10、5倍(以公斤体重计算),用更年 安片0.9g/Kg做阳性对照药,空白对照组给水0.5ml/只,每日给药一次,连续7 天,于末次给药1小时后将小鼠按拉丁方顺序排列,放入XZ-4型小鼠自主活动仪 内记录5分钟内小鼠自主活动次数,进行统计学计算。
试验结果表明:小鼠灌胃本发明治疗更年期综合症药物8.8g生药/Kg,4.4g 生药/Kg及2.2g生药/Kg,对小鼠自主活动次数有一定的抑制作用,与空白对照组 比较差异有显著性意义(p<0.01)。
对戊巴比妥钠阈下剂量
催眠作用的影响
用昆明种小鼠,按体重随机分为5组,每组10只,每天灌胃给药,连续7天, 于末次给药1小时后,
腹腔注射0.5%戊巴比妥钠50mg/Kg(阈下催眠剂量)以给 药后15分钟内小鼠翻正反射消失达1分钟以上的小鼠作为入睡的指标,记录睡眠 动物个数,用卡方检验,进行统计学计算。
试验结果表明:小鼠灌胃本发明治疗更年期综合症药物,在8.8g生药/Kg剂 量下,对戊巴比妥钠阈下催眠剂量有一定的协同作用,睡眠百分率为80%,与空白 对照组比较差异有显著性意义。
对戊巴比妥钠催眠作用的影响
用昆明种小鼠,按体重随机分为5组,每组10只,每日灌胃给药,连续7天, 于末次给药后1小时,腹腔注射0.5%戊巴比妥钠75mg/Kg(动物产生翻正反射消 失的催眠剂量),观察小鼠睡眠潜伏期(从给药开始至翻正反射消失的时间)和 维持时间,与空白对照组比较,进行统计学计算。
试验结果表明:小鼠灌胃本发明治疗更年期综合症药物7天后,对戊巴比妥 钠催眠剂量有一定的协同作用,可缩短小鼠睡眠时间,与空白对照组比较差异有 显著性意义。
2、抗焦虑试验:
(1)、吗啡引起举尾反应的影响
用昆明种小鼠,按体重随机分为6组,每组10只,每日灌胃给药,连续7天, 于末次给药1小时后,肌肉注射
盐酸吗啡20mg/Kg,观察小鼠由兴奋、紧张引起的 竖尾反应潜伏期(以注射吗啡后出现竖尾反应症状的时间为竖尾反应潜伏期), 与空白对照组比较,进行统计学计算。
试验结果表明:小鼠灌胃本发明治疗更年期综合症药物7天后,能延长吗啡 引起的小鼠竖尾反应潜伏期,与模型组比较差异有显著性意义。
(2)、失望和不动行为的影响——尾悬挂法
取昆明种小鼠,按体重随机分为6组,每组10只,每日灌胃给药,连续7天, 于末次给药1小时后,将小鼠尾尖部用胶布固定于台架边缘,使小鼠头向下悬挂, 小鼠出现不动时记录时间,累计记录6分钟内小鼠不动的时间,比较各组间的差 异。
试验结果表明:小鼠灌胃本发明治疗更年期综合症药物7日后,小鼠悬挂不 动的时间影响不明显(P>0.05)。
3、对动物激素水平的影响
(1)对小鼠性器官发育的影响
取体重10-12g离乳小鼠75只,按体重随机分为5组,每组15只,每天灌胃 给药,连续给药15天,于末次给药1小时后,将小鼠处死,解刨取子宫,称重, 计算子宫的脏器系数,比较各组间的差异。
试验结果表明:雌性幼鼠灌胃本发明治疗更年期综合症药物,对幼鼠子宫有 明显增重作用,与空白对照组比较有显著性意义(P<0.01)。
(2)对去势雌性大鼠激素水平的影响
取180-190g雌性大鼠,用40mg/Kg戊巴比妥钠麻醉,
切除双侧卵巢,按体 重随机分为5组,分别为模型组,本发明治疗更年期综合症药物大、中、小剂量 组,给药量为:8.8g生药/Kg,4.4g生药/Kg及2.2g生药/Kg,用更年安片0.9g 生药/Kg作阳性对照药,另设假手术组为空白对照组,空白对照组与模型组给同体 积水,每日给药一次,连续给药30天,于末次给药1小时后,每组眼眶静脉丛取 血,测血清中雌二醇含量及睾
酮含量,进行统计学计算。
试验结果表明:雌性大鼠经切除双侧卵巢有血清雌二醇含量明显下降,经服 用本发明治疗更年期综合症药物血清雌二醇含量明显升高。
4、结论
本发明治疗更年期综合症药物是以郁金、熟地、酸枣仁等多味中药组成的复 方制剂,具有舒肝解郁、滋阴潜阳、安神定志作用,临床上用于治疗更年期综合 症。动物实验表明:
(1)本发明治疗更年期综合症药物有一定的镇静、催眠作用,在8.8g生药 /Kg剂量下,对戊巴比妥钠阈下及催眠剂量有一定的协同作用,可缩短小鼠的睡眠 潜伏期。延长小鼠睡眠时间,对小鼠自主活动次数有一定的抑制作用,与空白对 照组比较差异有显著性意义(P<0.01),提示本品有一定的镇静催眠作用。
(2)本发明治疗更年期综合症药物有一定的抗焦虑作用,能延长吗啡引起的 小鼠竖尾反应潜伏期,与模型组比较有显著性意义(P<0.05)。
(3)本发明治疗更年期综合症药物有提高动物雌激素水平的作用,雌性幼鼠 灌胃本发明治疗更年期综合症药物,对幼鼠子宫有明显增重作用,与空白对照组 比较差异有显著性意义(P<0.01),雌性大鼠经切除双侧卵巢有血清雌二醇含量 明显降低,服用本发明治疗更年期综合症药物,可使血清雌二醇含量明显升高, 提示本品有提高动物激素水平的作用。
综上所述,本发明治疗更年期综合症药物具有一定的镇静、抗焦虑、提高低 下的激素水平等作用,用于治疗更年期综合症与临床药理作用取得一致的结果。
毒理学研究
1、急性毒性试验
本试验用选体重18-20g昆明种小鼠20只,每只小鼠以0.88g/ml浓度, 0.8ml/20g体积灌胃给药,一日1次。累积剂量为35.2g/kg(277.02g生药/kg, 临床日用最大剂量为0.3g生药/kg),相当于临床用量的629倍。给药后即刻观 察动物反应,并连续观察7天,结果小鼠全部存活,体重增加,肉眼观察未见明 显毒性反应。
2、长期毒性试验
观察连续灌胃本发明治疗更年期综合症药物90天,对大鼠所产生的毒性反应, 首先出现的症状和严重程度,毒副反应的靶器官及其恢复和发展情况。确定无毒 反应剂量,为拟订临床人用安全剂量提供参考。
试验结果:
(1)一般状况
给药90天及停药14天期间,无一例死亡,各组大鼠的自主活动、饮水、摄 食、排泄等均未见异常反应。各组动物体重增加,与空白对照组比较,差异无显 著性意义(P>0.05)。
(2)血液学指标
给药90天后及停药14天后,各给药组大鼠血液学指标(RBC、HB、PLT、WBC 及分类)均在正常值范围内,与空白对照组比较,差异无显著性意义(P>0.05)
(3)血液生化学指标
给药90天后及停药14天后,各给药组血液生化学指标(AST、ALT、ALP、BUN、 TP、ALB、GLU、T-BiL、C rea、T-CHO)均在正常值范围内,与空白对照组比较, 差异无显著性意义(P>0.05)。
脏器系数
给药90天及停药14天后,各给药组大鼠的脏器系数与空白对照组比较,差 异无显著性意义(P>0.05)
病理
组织学检查
给药90天及停药14天后,肉眼观察各给药组主要脏器未见明显改变,病理 组织学检查也未见明显异常。
试验结论
本发明治疗更年期综合症药物的药粉按35.2、17.6、8.8g生药/kg剂量给予 大鼠灌胃,连续90天,大鼠一般状况、血液学指标、血液生化学指标、脏器系数 及病理组织学检查均未见异常。提示该药在上述剂量下,未表现明显的毒性反应。
临床研究
本发明治疗更年期综合症药物是纯中药制剂,由郁金、熟地、制何首乌、钩 藤、五味子,夜交藤酸枣仁、远志、浮小麦、栀子、琥珀粉、百合、胆南星等中 药组成,具有舒肝解郁、滋阴潜阳、安神定惊之功效,临床适用于情志不畅、阴 虚肝旺所致的更年期综合症的治疗。
根据《中药新药临床研究指导原则》,采用单盲随机试验方法,对所选病例 进行平行
配对,随机分组。设计观察总例数400例,其中治疗组300例,对照组 100例,对照药物选择天津乐仁堂制药厂生产的更年安片。临床验证医院按验证计 划要求,统一表格,作出详细记录,认真写好病历。
门诊观察注意控制可变因素, 注意观察不良反应和未预料到的毒副作用,追踪随访。临床资料处理:等级资料 采用RIDIT分析,计量资料采用T检验,计数资料采用卡方检验,在总疗效、症 状、体症、舌象、脉象及病情、病程、理化检验与疗效关系等方面作出组内和组 间比较,进行统计学处理和评价。对每个病例进行为期一个月的随访。
临床验证结果表明,本发明治疗更年期综合症药物治疗更年期综合症具有和 更年安片相似的疗效,且疗效满意,结论如下:
1、本发明治疗更年期综合症药物治疗更年期综合症疗效确切。其显愈率为 62.33%,有效率为90.33%。与更年安片比较,疗效相似。
2、本发明治疗更年期综合症药物对不同病情程度更年期综合症患者的疗效相 似。
3、本发明治疗更年期综合症药物对不同病程更年期综合症患者的疗效相似。
4、本发明治疗更年期综合症药物可有效缓解更年期综合症引起的烦躁不安、 面红潮热、易汗、眩晕、失眠、耳鸣、腰膝酸痛等主要症状,对月经失调有一定 的调节作用。
5、本发明治疗更年期综合症药物对更年期限综合症患者的舌脉象有较好的改 善作用。
6、本发明治疗更年期综合症药物治疗更年期综合症近期疗效满意。
7、本发明治疗更年期综合症药物治疗更年期综合症无明显毒副作用。
8、本发明治疗更年期综合症药物剂型合理,携带使用方便。
综上所述,本发明治疗更年期综合症药物治疗更年期综合症适应证明确,组 方科学,疗效确切,无副作用,可在临床推广使用。