专利汇可以提供一种采用高效液相色谱测定苯并芘在吸烟后大鼠肺部沉积量的方法专利检索,专利查询,专利分析的服务。并且本 发明 涉及一种采用高效液相色谱测定苯并芘在吸烟后大鼠 肺 部沉积量的方法,包括以下五个步骤:1)大鼠吸烟、2)待测样品溶液的制备、3)标准工作溶液的制备、4)色谱条件和5)标准曲线绘制及结果计算。本发明建立了一种采用高效液相色谱测定苯并芘在吸烟后大鼠肺部沉积量的检测方法,具有以下优点:1.由吸烟机吸烟产生 卷烟 烟气,能检测不同卷烟不同抽吸模式下对苯并芘在大鼠肺部沉积,运用灵活。2.本实验相对传统的采用索氏提取法,采用环己烷萃取-二甲基亚砜反萃取-环己烷萃取的方式使样品处理时间大大缩短,且操作方便。3.本发明的方法灵敏度高,重复性及回收率好。,下面是一种采用高效液相色谱测定苯并芘在吸烟后大鼠肺部沉积量的方法专利的具体信息内容。
1.一种采用高效液相色谱测定苯并芘在吸烟后大鼠肺部沉积量的方法,其特征在于该方法包括以下步骤:
1)大鼠吸烟:SD大鼠置于慧荣和大鼠口鼻暴露系统中,维持载气流量8L/min,抽气流量9.5L/min,氧气浓度20±0.5%,温度24±2 ºC,相对湿度60-80%;卷烟采用国际标准模式进行抽吸,连续吸烟20支,吸烟结束后1小时内处死大鼠,取肺组织冻存于-70 ºC;
2)待测样品溶液的制备:取1g肺组织于4mL EP管中,同时加入1g无水硫酸钠;加入
2mL环己烷,匀浆;将匀浆转移至10mL离心管中,并用环己烷洗涤EP管,合并环己烷至离心管中;,超声10min;离心,3500rpm,2min;收集上清液于50mL鸡心瓶中,残渣用10mL环己烷重提2次,合并环己烷提取液;旋蒸浓缩至1mL,备用;将上述浓缩液转移至分液漏斗中,用环己烷清洗鸡心瓶,合并环己烷,保持总体积5mL;分别用5、3、2mL DMSO萃取3次,取分液漏斗下层DMSO层,收集合并于另一个分液漏斗中,待进一步纯化处理;向上述DMSO萃取液中加入15mL 2.0g/L无水硫酸钠溶液,然后每次用5mL环己烷反萃取3次,保留上层的环己烷层,合并于20mL刻度试管中;氮气吹干,用甲醇溶解残渣,定容至1mL,过0.45µm滤膜,待测;
3)标准工作溶液的制备:准确称取2mg苯并芘溶于1ml甲醇中,配制成2000ng/ml标准品母液,待测前24小时内直接用甲醇稀释成浓度为10,5,2,1,0.8,0.4ng/ml的标准工作溶液,避光保存待用;
4)色谱条件:色谱柱:BP-C18柱,250mm*4.6mm;流动相:乙腈:水=88:12;流速:1.2mL/min;荧光检测激发波长:384nm,发射波长:406nm,柱温:30℃,进样量:50µL;
5)标准曲线绘制及结果计算:将配制好的不同浓度的苯并芘标准工作溶液引入高效液相色谱仪,以外标法进行定量分析,标准品的苯并芘的色谱峰面积与其相应的浓度进行线性回归分析,得到标准曲线线性回归方程,相关系数需大于等于0.999;对制备的样品进行测定,测得样品中苯并芘的峰面积,代入一元线性回归方程,计算得到待测样品中苯并芘的含量。
量的方法
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