一种评价免疫缺陷小鼠模型的免疫缺陷程度的方法
阅读：587发布：2020-05-12
专利汇可以提供一种评价免疫缺陷小鼠模型的免疫缺陷程度的方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及 生物 领域，公开了一种评价免疫 缺陷 小鼠模型的免疫缺陷程度的方法，通过移植不同数量级的血液 肿瘤 细胞和实体肿瘤细胞到免疫缺陷小鼠模型内，构建肿瘤小鼠模型后，检测肿瘤小鼠模型内外周血中肿瘤细胞GPB的比例、骨髓中肿瘤细胞GBM的比例、以及脾脏中肿瘤细胞GSP的比例，根据所述比例参数指标评价免疫缺陷小鼠模型的免疫缺陷程度，本发明的优点在于，可以定量评价免疫缺陷小鼠的缺陷程度，其中涉及简化和总结通过肿瘤移植效率与小鼠免疫缺陷程度之间的联系而获得的数学模型和计算方法，并且可通过免疫缺陷程度得分以比较免疫缺陷小鼠之间的缺陷差异程度。本发明所述方法简单易行，便于操作，具有良好的应用前景。，下面是一种评价免疫缺陷小鼠模型的免疫缺陷程度的方法专利的具体信息内容。
1.一种评价免疫缺陷小鼠模型的免疫缺陷程度的方法，包含以下步骤：
通过移植不同数量级的血液肿瘤细胞和实体肿瘤细胞到免疫缺陷小鼠模型内，构建肿瘤小鼠模型后，检测肿瘤小鼠模型内外周血中肿瘤细胞GPB的比例、骨髓中肿瘤细胞GBM的比例、以及脾脏中肿瘤细胞GSP的比例，根据所述比例参数指标评价免疫缺陷小鼠模型的免疫缺陷程度。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述肿瘤细胞为同种或异种。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，肿瘤细胞移植的不同数量级为L：1×104个，
5 6
M：1×10个，H：1×10个。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述异种肿瘤细胞为人源的肿瘤细胞，其中人血液肿瘤细胞为人慢性髓系白血病K562细胞系，人实体肿瘤细胞为人肺癌A549细胞系。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述同种肿瘤细胞为鼠源肿瘤细胞，血液肿瘤细胞小鼠淋巴瘤细胞系RMA，实体肿瘤细胞小鼠黑色素瘤细胞系B16-F10。
6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，根据检测得到的肿瘤小鼠模型内外周血中肿瘤细胞GPB的比例、骨髓中肿瘤细胞GBM的比例、以及脾脏中肿瘤细胞GSP的比例，评价免疫缺陷小鼠模型的免疫缺陷程度的方法包括如下步骤，(1)采用公式得到移植每个数量级血液肿瘤细胞对免疫缺陷小鼠的作用指数HTEI，
Gi为GPB、GBM、GSP之和，Di为将血液肿瘤细胞移植入免疫缺陷小鼠模型内到肿瘤细胞开始对免疫缺陷小鼠模型作用间隔的时间，分别得到每个数量级血液肿瘤细胞对免疫缺陷小鼠的作用指数HTEI(H)，HTEI(M)，HTEI(L)，最后再求得平均HTEI；
(2)采用公式得到移植每个数量级实体肿瘤细胞对免疫缺陷小鼠模型的作用指数STEI，
Wn为将实体肿瘤移植入免疫缺陷小鼠模型内形成的实体肿瘤的重量，Dn为将实体肿瘤移植入免疫缺陷内到肿瘤细胞开始对免疫缺陷小鼠模型作用的间隔时间，分别得到每个数量级实体肿瘤细胞对免疫缺陷小鼠的作用指数STEI(H)，STEI(M)，STEI(L)，最后再求得平均STEI；
(3)根据步骤(1)和步骤(2)得到的平均HTEI、平均STEI，采用如下公式得到总肿瘤作用指数TEI，
该总肿瘤作用指数与免疫缺陷程度呈负相关。
一种评价免疫缺陷小鼠模型的免疫缺陷程度的方法
技术领域
背景技术
[0002] 以免疫缺陷小鼠为宿主，构建的人源化小鼠模型和病人来源的异种移植模型是人体免疫系统和人体肿瘤病理机制研究的重要工具。1963年，科学家研发出裸鼠(Nude mice)，该小鼠Foxn1基因突变，胸腺恶化或缺失，阻断T细胞发育，导致T细胞大量剧减，免疫系统缺陷。但裸鼠拥有B细胞和自然杀伤(NK,natural killer)细胞,不利于维持人体细胞在小鼠体内的生长。1983年，严重复合免疫缺陷小鼠(scid，severe combined immunodeficiency)出现，该小鼠Prdkc基因缺陷，导致其缺失B细胞和T细胞。RAG2小鼠(recombination activating 2deficient)Rag2基因缺失，B细胞和T细胞缺失。与scid小鼠一样，RAG2小鼠仍然存在大量的NK细胞，一定程度上限制了人体细胞的移植。1995年，研究人员通过将Prdkcscid基因突变导入NOD(non-obese diabetic)近交系小鼠，建立NOD-scid(NOD.Cg-Prkdcscid)小鼠。该小鼠不仅缺失B细胞和T细胞，且仅有少量的NK细胞，固有免疫系统损伤，是免疫缺陷小鼠的一个里程碑。而人源化小鼠构建的一个重要的突破是Il2Rg-/-小鼠及基于该小鼠的其它免疫缺陷小鼠的研发，如NOG(NOD/Shi-Prkdcscid Il2rctm1Sug/Jic)、NSG(NOD/LtSz-PrkdcscidIl2rctm1Wjl/J).IL2Rc是IL-2、IL-4、IL-7、IL-15和IL-21细胞因子的共有受体，而这些细胞因子对T、B、NK等免疫细胞的发育具有重要的影响。所以，IL2Rc-/-免疫缺陷小鼠缺失T、B、NK细胞，同时该小鼠的巨噬细胞和树突状细胞功能被削弱。与其他免疫缺陷小鼠对比，NOG、NSG小鼠表现出高水平的移植供体特性：在这两种IL2Rγc缺陷小鼠品系中，人造血干细胞移植表现出极高的移植效率，并且这些造血干细胞可分化为多种造血系细胞，如CD4和CD8单阳T细胞；移植的癌细胞在该小鼠中能快速生长并在多次传代后保持低分化的特性。但尽管免疫缺陷小鼠及其相关研究越来越多，但是缺乏统一的标准对免疫缺陷小鼠进行评估，则导致进一步的免疫缺陷小鼠研究和应用缺乏参考和指导的标准。
[0003] 免疫系统是生物体体内一系列的生物学结构和进程所组成的疾病防御系统，无法用单一的或简单组合的免疫指标如T、B、NK细胞数量或者干扰素、趋化因子等表达情况来判定免疫强度。同理，小鼠免疫缺陷程度也无法通过这些单一或简单组合的免疫细胞或炎症因子的缺陷来评估。
[0004] 在肿瘤微环境中,肿瘤细胞和机体的免疫系统相互作用,相互影响。大量的临床数据表明免疫缺陷的个体更容易自发肿瘤。比如，跟没有免疫缺陷的病人对比，有免疫缺陷的病人更倾向于得白血病。跟免疫缺陷的病人相似，免疫缺陷小鼠患自发肿瘤的概率比免疫系统正常的小鼠高很多。因此，在免疫缺陷小鼠体内，免疫系统的极度缺陷会导致很大程度的肿瘤增殖。肿瘤免疫是广泛动员机体免疫系统对抗肿瘤生长和发育的过程，所以基于肿瘤移植的小鼠免疫缺陷程度评估是全面的。肿瘤免疫包括清除、平衡和逃逸三个主要阶段。而清除阶段又可细分为四个阶段，一：起始抗肿瘤免疫应答，内在免疫系统的免疫细胞识别正进行基质重塑，引起组织损伤的肿瘤细胞。接着，通过释放炎症信号征召和集合内在免疫系统的免疫细胞，如自然杀伤细胞(NK)、自然杀伤T细胞(NKT)巨噬细胞和树突状细胞。集结而来的NK细胞和NKT细胞释放α干扰素(IFN-α)。二：α干扰素效应，新合成的α干扰素可诱导肿瘤凋亡，并促进趋化因子CXCL10、CXCL9和CXCL11的产生。这些趋化因子可以通过阻断新血管的生成而抑制肿瘤生长。更多的免疫细胞将受趋化因子趋化、集结在肿瘤部位。这阶段，树突状细胞吞噬肿瘤细胞后，将迁移至淋巴结。三：扩大效应，NK细胞和巨噬细胞通过释放α干扰素和IL-12相互激活。这些细胞将进一步促进肿瘤凋亡和活性氧、氮中间体的产生。
在淋巴结中，吞噬肿瘤后的肿瘤特异性树突状细胞可启动辅助性T细胞的分化，接着促进肿瘤杀伤性T细胞即CD8+T细胞的发育。四：特异性清除，发育成熟的肿瘤特异性CD4+T细胞和CD8+T细胞迁移至肿瘤部位，并杀伤仍存留的抗原耐受的肿瘤细胞。平衡阶段和逃逸阶段，肿瘤细胞突变体在清除阶段中存活下来，并进入平衡阶段。在平衡阶段，淋巴细胞和α干扰素会给予选择性清除压力，肿瘤细胞会进行基因突变以适应，并进入逃逸阶段。肿瘤免疫广泛涉及固有免疫和适应性免疫的范围，基于肿瘤移植模型的免疫缺陷程度评估可全面反映小鼠免疫缺陷程度。异种移植的肿瘤细胞相对更难适应免疫压力的机体环境，同种结合异种的肿瘤移植模型评估可更真实的反映小鼠免疫缺陷程度。
在淋巴结中，吞噬肿瘤后的肿瘤特异性树突状细胞可启动辅助性T细胞的分化，接着促进肿瘤杀伤性T细胞即CD8+T细胞的发育。四：特异性清除，发育成熟的肿瘤特异性CD4+T细胞和CD8+T细胞迁移至肿瘤部位，并杀伤仍存留的抗原耐受的肿瘤细胞。平衡阶段和逃逸阶段，肿瘤细胞突变体在清除阶段中存活下来，并进入平衡阶段。在平衡阶段，淋巴细胞和α干扰素会给予选择性清除压力，肿瘤细胞会进行基因突变以适应，并进入逃逸阶段。肿瘤免疫广泛涉及固有免疫和适应性免疫的范围，基于肿瘤移植模型的免疫缺陷程度评估可全面反映小鼠免疫缺陷程度。异种移植的肿瘤细胞相对更难适应免疫压力的机体环境，同种结合异种的肿瘤移植模型评估可更真实的反映小鼠免疫缺陷程度。
[0005] 现今，伴随着各种新型大规模基因敲除技术和基因组修饰工具的出现，如TALEN(Transcription Activator-Like Effector Nuclease)和Cas(Type II Clustered,Regularly Interspaced,Short Palindromic Repeat(CRISPR)associated system)技术等，构建各种免疫缺陷小鼠品系的效率不断地提高。本发明人也利用TALEN技术，成功在NOD-scid小鼠品系背景下，敲除IL2Rc基因，获得NOD-scid IL2Rg-/-(NSI)小鼠品系(专利申请号：CN201310229629)。然而，随着免疫缺陷小鼠的不断出现，目前仍没有一个评估小鼠免疫缺陷程度的标准方法，很难客观地评估基因修饰小鼠品系的免疫缺陷程度，将导致免疫缺陷小鼠的盲目构建和使用，也不利于免疫缺陷小鼠应用的标准统一和推广。
发明内容
[0006] 本发明要解决的技术问题是提供一种评价免疫缺陷小鼠模型的免疫缺陷程度的方法，其实现的目的是根据本发明方法可量化免疫缺陷小鼠的免疫缺陷程度，从而通过该方法可以简单、准确地得到肿瘤细胞对免疫缺陷小鼠模型的作用，进而能够较好的应用在构建免疫缺陷小鼠模型中。
[0007] 为实现上述目的，本发明采用的技术方案为，本发明公开的一种评价免疫缺陷小鼠模型的免疫缺陷程度的方法，包含以下步骤：
[0008] 通过移植不同数量级的血液肿瘤细胞和实体肿瘤细胞到免疫缺陷小鼠模型内，构建肿瘤小鼠模型后，检测肿瘤小鼠模型内外周血中肿瘤细胞GPB的比例、骨髓中肿瘤细胞GBM的比例、以及脾脏中肿瘤细胞GSP的比例，根据所述比例参数指标评价免疫缺陷小鼠模型的免疫缺陷程度。
[0009] 进一步的，所述肿瘤细胞为同种或异种种，采用本发明方法不仅可以评价动物源肿瘤细胞对免疫缺陷小鼠的作用，还可以用于评价人源化的肿瘤细胞对免疫缺陷小鼠的作用。
[0010] 进一步的，肿瘤细胞移植的不同数量级为L：1×104个，M：1×105个，H：1×106个，该数量级的选择基于低于该数量级，则无法得到肿瘤细胞对免疫缺陷小鼠模型的作用指标，高于该数量级，肿瘤细胞对免疫缺陷小鼠模型小鼠作用难以区分开。
[0011] 本发明专利提供了一种量化免疫缺陷小鼠品系免疫缺陷程度的方法，为免疫缺陷小鼠的评估提供标准,以及帮助科研人员挑选合适的小鼠提供依据,并且为免疫缺陷小鼠研究和应用提供参考和指导的标准。
[0012] 具体应用如，协助科研人员定义和评估新研发的免疫缺陷小鼠；为科研人员选择免疫缺陷小鼠开展动物实验提供依据；为科研人员利用免疫缺陷小鼠的动物实验结果分析提供合理参考；为评估不同免疫缺陷小鼠的相关免疫能力提供一种可参考的数学模型和实验设定。
[0013] 本发明人根据肿瘤免疫对免疫系统的广泛涉及程度，提出通过在小鼠中移植同种或异种的肿瘤细胞，观察小鼠机体对同种或异种肿瘤细胞的排斥程度，以此反映小鼠的免疫缺陷程度。所述肿瘤细胞优选为人源的肿瘤细胞，其中人血液肿瘤细胞优选为人慢性髓系白血病K562细胞系，人实体肿瘤细胞优选为人肺癌A549细胞系；更优选地，所述肿瘤细胞为鼠源肿瘤细胞，血液肿瘤细胞优选小鼠淋巴瘤细胞系RMA，实体肿瘤细胞优选小鼠黑色素瘤细胞系B16-F10。
[0014] 进一步的，根据检测得到的肿瘤小鼠模型内外周血中肿瘤细胞GPB的比例、骨髓中肿瘤细胞GBM的比例、以及脾脏中肿瘤细胞GSP的比例，评价免疫缺陷小鼠模型的免疫缺陷程度的方法包括如下步骤，(1)采用公式得到移植每个数量级血液肿瘤细胞对免疫缺陷小鼠的作用指数HTEI， Gi为GPB、GBM、GSP之和，Di为将血液肿瘤细胞移植入免疫缺陷小鼠模型内到肿瘤细胞开始对免疫缺陷小鼠模型作用间隔的时间，分别得到每个数量级血液肿瘤细胞对免疫缺陷小鼠的作用指数HTEI(H)，HTEI(M)，HTEI(L)，最后再求得平均HTEI；
[0015] (2)采用公式得到移植每个数量级实体肿瘤细胞对免疫缺陷小鼠模型的作用指数STEI， Wn为将实体肿瘤移植入免疫缺陷小鼠模型内形成的实体肿瘤的重量，Dn为将实体肿瘤移植入免疫缺陷内到肿瘤细胞开始对免疫缺陷小鼠模型作用的间隔时间，分别得到每个数量级实体肿瘤细胞对免疫缺陷小鼠的作用指数STEI(H)，STEI(M)，STEI(L)，最后再求得平均STEI；
[0016] (3)根据步骤(1)和步骤(2)得到的平均HTEI、平均STEI，采用如下公式得到总肿瘤作用指数 该总肿瘤作用指数与免疫缺陷程度呈负相关。
[0017] 本发明首次提出一个量化小鼠的免疫缺陷程度的数学模型和计算方法,通过这个数学模型，可以定量地获得免疫缺陷小鼠的缺陷程度程度。并且，通过对比免疫缺陷程度得分可以评估免疫缺陷小鼠之间的缺陷差异程度。研究人员可以利用这个数学模型，挑选出合适的免疫缺陷小鼠来进行特定的实验。附图说明
[0018] 图1为7种小鼠免疫缺陷程度柱状图；
[0019] 图2显示7种小鼠同种肿瘤免疫缺陷程度柱状图。
具体实施方式
[0020] 本发明公开了一种量化小鼠免疫缺陷程度的方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
[0021] 实施例一：具体实施步骤：
[0022] 带标记基因的人血液瘤细胞系的构建
[0023] 为了便于本发明创造的推广和应用，以人慢性髓系白血病细胞系K562作为免疫缺陷数学模型的标准(异种)人血液肿瘤细胞，以人肺腺癌细胞系A549作为免疫缺陷数学模型的标准(异种)人实体肿瘤细胞，并在K562细胞系中导入标记基因(如GFP绿色荧光基因、Tdtomato红色荧光基因、Luciferase荧光酶等)。以下介绍GFP绿色荧光基因转染方法，包装Lenti-GFP病毒感染肿瘤细胞系，扩大培养被感染细胞后，分选感染成功的GFP阳性肿瘤细胞，获得GFP阳性细胞纯度大于98％。
[0024] 血液瘤小鼠模型的构建和HTEI的计算
[0025] 将不同数量级(106(H),105(M),104(L))带标记基因的血液瘤细胞系(K562-GFP)移植入待评估的特定免疫缺陷品系实验小鼠(每一数量级移植用5只实验小鼠)，移植肿瘤细胞后，每天观察小鼠状态。小鼠病发时，记录小鼠的存活时间(Di)以及小鼠血液、脾脏、骨髓中的肿瘤细胞(GFP阳性细胞)比例(GPB、GSP、GBM)，采用如下公式分别计算出每个数量级的HTEI(H)，HTEI(M)，HTEI(L)，
[0026] Gi为GPB、GBM、GSP之和，要注意的是，Gi、Di均是平行重复试验多次得到的平均值，本次实施例采用了5只小鼠平行重复试验5次，最后得到,再根据HTEI(H)，HTEI(M)，HTEI(L)求得平均HTEI；
[0027] 实体瘤小鼠模型的构建和STEI的计算
[0028] 移植不同数量级(106(H),105(M),104(L))实体瘤细胞系(A549移植入待评估的特定免疫缺陷品系实验小鼠(每一数量级移植用5只实验小鼠)，移植肿瘤细胞后，每天观察小鼠状态。移植人实体肿瘤细胞系一定时间后(不同肿瘤细胞系的观察时间不同，A549细胞系则于移植三十天后进行观察记录)，称量并记录形成的实体肿瘤的质量(Wn，单位：g)，并将Dn＝30和Wn代入公式， 分别求出STEI(H)，STEI(M)，STEI(L)，最后求得平均STEI。
[0029] 评估该品系小鼠的免疫缺陷程度
[0030] 将前述步骤计算出来的平均HTEI和平均STEI待入公式最后计算出该品系免疫缺陷小鼠模型总肿瘤作用指数TEI，该指数和免疫缺陷程度呈负相关。
[0031] TEI数值越高,则表示该品系小鼠的免疫缺陷程度越严重；TEI数值越低，表示该品系小鼠的免疫系统越完整。以上阐述的方法是综合评估小鼠免疫缺陷程度的，对于具体的免疫系统情况，如T细胞或B细胞或NK细胞的数量和功能、针对HIV病毒感染的免疫系统缺陷程度等，TEI仅能提供参考作用；
[0033] 实施例二：
[0034] 利用本发明小鼠免疫程度评估的方法，综合评估NSI(NOD-scid IL2rg-/-)小鼠的免疫缺陷程度(TEINSI)，具体步骤如下：
[0035] 1.1.HTEINSI数值计算：分别移植H、M、L数量级的K562-GFP细胞入NSI小鼠体内，每天观察小鼠，于小鼠病发时获取并记录实验参数如下表：
[0036] 表1.NSI小鼠-人血液肿瘤移植模型参数表
[0037]
[0038] 将以上参数代入公式得：
[0039]
[0040]
[0041]
[0042] HTEINSI＝average(HTEI(NSI，H)，HTEI(NSI，M)，TEI(NSLL))＝0.014[0043] 1.2.STEINSI数值计算：分别移植H、M、L数量级的A549-GFP细胞入NSI小鼠体内，每天观察小鼠，于小鼠病发时获取并记录实验参数如下表：
[0044] 表2.NSI小鼠-人实体肿瘤移植模型参数表
[0045]
[0046] 将以上参数代入公式得：
[0047]
[0048]
[0049]
[0050] STEINSI＝average(STEI(NSI，H)，STEI(NSLM)，STEI(NSI，L))＝0.040[0051] 1.3.NSI小鼠免疫缺陷程度的评估，TEINSI数值计算：
[0052] 将以上获得的HTEINSI和STEINSI的数值代入公式得
[0053]
[0054] 由上可得，NSI小鼠的免疫缺陷程度得分为0.027。
[0055] 实施例三
[0056] 利用本发明小鼠免疫程度评估的方法，综合评估NOD-scid(简写：NS)小鼠的免疫缺陷程度(TEINS)，具体步骤如下：
[0057] 1.4.HTEINS数值计算：分别移植H、M、L数量级的K562-GFP细胞入NOD-scid小鼠体内，每天观察小鼠，于小鼠病发时获取并记录实验参数如下表：
[0058] 表3.NOD-scid小鼠-人血液肿瘤移植模型参数表
[0059]
[0060] 将以上参数代入公式得：
[0061]
[0062]
[0063]
[0064] HTEINS＝average(HTEI(NS，H)，HTEI(NS，M)，TEI(NS，L))＝0.009[0065] 1.5.STEINS数值计算：分别移植H、M、L数量级的A549-GFP细胞入NOD-scid小鼠体内，每天观察小鼠，于小鼠病发时获取并记录实验参数如下表：
[0066] 表4.NOD-scid小鼠-人实体肿瘤移植模型参数表
[0067]
[0068] 将以上参数代入公式得：
[0069]
[0070]
[0071]
[0072] STEINS＝average(STEI(NS，H)，STEI(NS，M)，STEI(NS，L))＝0.023[0073] 1.6.NOD-scid小鼠免疫缺陷程度的评估，TEINS数值计算：
[0074] 将以上获得的HTEINS和STEINS的数值代入公式，得
[0075]
[0076] 由上可得，NOD-scid小鼠的免疫缺陷程度得分为0.016。
[0077] 2.实施例四：
[0078] 利用本发明小鼠免疫程度评估的方法，综合评估CB-17scid(简写：scid)小鼠的免疫缺陷程度(TEIscid)，具体步骤如下：
[0079] 2.1.HTEIscid数值计算：分别移植H、M、L数量级的K562-GFP细胞入CB-17scid小鼠体内，每天观察小鼠，于小鼠病发时获取并记录实验参数如下表：
[0080] 表5.CB-17scid小鼠-人血液肿瘤移植模型参数表
[0081]
[0082] 将以上参数代入公式得：
[0083]
[0084]
[0085]
[0086] HTEIscid＝average(HTEI(scid，H)，HTEI(scid，M)，TEI(scid，L))＝0.001[0087] 2.2.STEIscid数值计算：分别移植H、M、L数量级的A549-GFP细胞入CB-17scid小鼠体内，每天观察小鼠，于小鼠病发时获取并记录实验参数如下表：
[0088] 表6.CB-17scid小鼠-人实体肿瘤移植模型参数表
[0089]
[0090]
[0091] 将以上参数代入公式得：
[0092]
[0093]
[0094]
[0095] STEIscid＝average(STEI(scid，H)，STEI(scid，M)，STEI(scid，L))＝0.011[0096] 2.3.CB-17scid小鼠免疫缺陷程度的评估，TEIscid数值计算：
[0097] 将以上获得的HTEIscid和STEIscid的数值代入公式，得
[0098]
[0099] 由上可得，CB-17scid小鼠的免疫缺陷程度得分为0.006。
[0100] 3.实施例五：
[0101] 利用本发明小鼠免疫程度评估的方法，综合评估IL2rg-/-(简写：IL2)小鼠的免疫缺陷程度(TEIIL2)，具体步骤如下：
[0102] 3.1.HTEIIL2数值计算：分别移植H、M、L数量级的K562-GFP细胞入IL2rg-/-小鼠体内，每天观察小鼠，于小鼠病发时获取并记录实验参数如下表：
[0103] 表7.IL2rg-/-小鼠-人血液肿瘤移植模型参数表
[0104]
[0105] 将以上参数代入公式得：
[0106]
[0107]
[0108]
[0109] HTEIIL2＝average(HTEI(IL2，H)，HTEI(IL2，M)，TEI(IL2，L))＝0.0003[0110] 3.2.STEIIL2数值计算：分别移植H、M、L数量级的A549-GFP细胞入IL2Rg-/-小鼠体内，每天观察小鼠，于小鼠病发时获取并记录实验参数如下表：
[0111] 表8.IL2Rg-/-小鼠-人实体肿瘤移植模型参数表
[0112]
[0113]
[0114] 将以上参数代入公式得：
[0115]
[0116]
[0117]
[0118] STEIIL2＝average(STEI(IL2，H)，STEI(IL2，M)，STEI(IL2，L))＝0.002[0119] 3.3.IL2Rg-/-小鼠免疫缺陷程度的评估，TEIIL2数值计算：
[0120] 将以上获得的HTEIIL2和STEIIL2的数值代入公式得
[0121]
[0122] 由上可得，IL2Rg-/-小鼠的免疫缺陷程度得分为0.001。
[0123] 4.实施例六：
[0124] 利用本发明小鼠免疫程度评估的方法，综合评估Rag2-/-(简写：Rag2)小鼠的免疫缺陷程度(TEIRag2)，具体步骤如下：
[0125] 4.1.HTEIRag2数值计算：分别移植H、M、L数量级的K562-GFP细胞入Rag2-/-小鼠体内，每天观察小鼠，于小鼠病发时获取并记录实验参数如下表：
[0126] 表9.Rag2-/-小鼠-人血液肿瘤移植模型参数表
[0127]
[0128] 将以上参数代入公式得：
[0129]
[0130]
[0131]
[0132] HTEIRag2＝average(HTEI(Rag2，H)，HTEI(Rag2，M)，TEI(Rag2，L))＝0.000[0133] 4.2.STEIRag2数值计算：分别移植H、M、L数量级的A549-GFP细胞入Rag2-/-小鼠体内，每天观察小鼠，于小鼠病发时获取并记录实验参数如下表：
[0134] 表10.Rag2-/-小鼠-人实体肿瘤移植模型参数表
[0135]
[0136] 将以上参数代人公式得：
[0137]
[0138]
[0139]
[0140] STEIRag2＝average(STEI(Rag2，H)，STEI(Rag2，M)，STEI(Rag2，L))＝0.005[0141] 4.3.Rag2-/-小鼠免疫缺陷程度的评估，TEIRag2数值计算：
[0142] 将以上获得的HTEIRag2和STEIRag2的数值代入公式得
[0143]
[0144] 由上可得，Rag2-/-小鼠的免疫缺陷程度得分为0.0025。
[0145] 5.实施例七
[0146] 利用本发明小鼠免疫程度评估的方法，综合评估nude(简写：Nu)小鼠的免疫缺陷程度(TEINu)，具体步骤如下：
[0147] 5.1.HTEINu数值计算：分别移植H、M、L数量级的K562-GFP细胞入nude小鼠体内，每天观察小鼠，于小鼠病发时获取并记录实验参数如下表：
[0148] 表11.nude小鼠-人血液肿瘤移植模型参数表
[0149]
[0150] 将以上参数代入公式得：
[0151]
[0152]
[0153]
[0154] HTEINu＝average(HTEI(Nu，H)，HTEI(Nu，M)，TEI(Nu，L))＝0.000[0155] 5.2.STEINu数值计算：分别移植H、M、L数量级的A549-GFP细胞入nude小鼠体内，每天观察小鼠，于小鼠病发时获取并记录实验参数如下表：
[0156] 表12.nude小鼠-人实体肿瘤移植模型参数表
[0157]
[0158]
[0159] 将以上参数代入公式得：
[0160]
[0161]
[0162]
[0163] STEINu＝average(STEI(Nu，H)，STEI(Nu，M)，STEI(Nu，L))＝0.008[0164] 5.3.nude小鼠免疫缺陷程度的评估，TEINu数值计算：
[0165] 将以上获得的HTEINu和STEINu的数值代入公式1，得
[0166]
[0167] 由上可得，nude小鼠的免疫缺陷程度得分为0.004。
[0168] 6.实施例八：
[0169] 利用本发明小鼠免疫程度评估的方法，综合评估C57BL/6(简写：B6)小鼠的免疫缺陷程度(TEIB6)，具体步骤如下：
[0170] 6.1.HTEIB6数值计算：分别移植H、M、L数量级的K562-GFP细胞入nude小鼠体内，每天观察小鼠，于小鼠病发时获取并记录实验参数如下表：
[0171] 表13.C57BL/6小鼠-人血液肿瘤移植模型参数表
[0172]
[0173] 将以上参数代入公式得：
[0174]
[0175]
[0176]
[0177] HTEIB6＝average(HTEI(Nu，H)，HTEI(Nu，M)，TEI(Nu，L))＝0.000[0178] 6.2.STEIB6数值计算：分别移植H、M、L数量级的A549-GFP细胞入nude小鼠体内，每天观察小鼠，于小鼠病发时获取并记录实验参数如下表：
[0179] 表14.B6小鼠-人实体肿瘤移植模型参数表
[0180]
[0181]
[0182] 将以上参数代入公式得：
[0183]
[0184]
[0185]
[0186] STEIB6＝average(STEI(B6，H)，STEI(B6，M)，STEI(B6，L))＝0.000[0187] 6.3.B6小鼠免疫缺陷程度的评估，TEIB6数值计算：
[0188] 将以上获得的HTEIB6和STEIB6的数值代入公式得
[0189]
[0190] 由上可得，B6小鼠的免疫缺陷程度得分为0.000。
[0191] 由实施例二到八可知，七种品系小鼠的免疫缺陷程度对比(如下图)为：NSI＞NOD-scid＞scid＞nude＞Rag2-/-＞IL2rg-/-＞C57BL/6(WT)，这为研究人员动物模型构建实验选择合适的免疫缺陷小鼠提供了重要的参考依据；同时，由图1可知，NSI小鼠拥有最强的免疫缺陷程度，因此在研究人员研发新型免疫缺陷小鼠时，应以NSI小鼠作为对照标准评估新研发小鼠品系的免疫缺陷程度。
[0192] 7.实施例九
[0193] 因抵抗、杀伤异种移植的肿瘤细胞将更大程度的动用免疫系统，所以可通过肿瘤异种移植结合数学模型的方法(如以上阐述)，综合评估小鼠的免疫缺陷程度。而需要对某一特定功能、某一特定免疫细胞等免疫缺陷程度的评估，则需对肿瘤移植模型试验和相对应的数学模型进行一定的修改，以评估某特定免疫系统缺陷程度，如本实施例——利用肿瘤同种移植模型结合数学模型的方法，评估肿瘤同种移植的免疫缺陷程度。详细如下：
[0194] 8.1数学模型参数含义修改：
[0195] HTEI(strain，allograft)，同种血液瘤移植能力得分，表示待评估的某品系(Strain)小鼠移植小鼠血液瘤细胞重建血液肿瘤(Hematologic Tumor)的能力得分，在此以小鼠淋巴瘤细胞系RMA移植为标准。
[0196] 同种实体瘤移植能力得分，表示待评估的某品系(Strain)小鼠移植小鼠实体瘤细胞重建实体肿瘤(Solid Tumor)的能力得分，在此以小鼠黑色素瘤细胞系B16-F10为标准。
[0197] 表示某品系(Strain)小鼠同种肿瘤移植能力得分，以此评估该品系小鼠对同种肿瘤的免疫缺陷程度。
[0198] 8.2具体实施步骤：
[0199] 8.2.1带标记基因的小鼠血液瘤细胞系的构建
[0200] 在RMA细胞系中导入标记基因(如GFP绿色荧光基因、Tdtomato红色荧光基因、Luciferase荧光酶等)。以下以GFP绿色荧光基因为例介绍标记基因导入方法，包装Lenti-GFP病毒感染肿瘤细胞系，扩大培养被感染细胞后，分选感染成功的GFP阳性肿瘤细胞，获得GFP阳性细胞纯度大于98％。
[0201] 8.2.2血液瘤小鼠模型的构建和HTEIstrain的计算
[0202] 将不同数量级(106(H)，105(M)，104(L))带标记基因的血液瘤细胞系(RMA-GFP)移植入待评估的特定免疫缺陷品系实验小鼠(每一数量级移植用5只实验小鼠)，移植肿瘤细胞后，每天观察小鼠状态。小鼠病发时，记录小鼠的存活时间(Dn)以及小鼠血液、脾脏、骨髓中的肿瘤细胞(GFP阳性细胞)比例(GPB、GSP、GBM)，并代入公式 计算出
[0203] 8.2.3实体瘤小鼠模型的构建和STEIstrain的计算
[0204] 移植不同数量级(106(H)，105(M)，104(L))实体瘤细胞系(B16F10-GFP)移植入待评估的特定免疫缺陷品系实验小鼠(每一数量级移植用5只实验小鼠)，移植肿瘤细胞后，每天观察小鼠状态。移植人实体肿瘤细胞系一定时间后(不同肿瘤细胞系的观察时间不同，B16F10细胞系则于移植二十天后进行观察记录)，称量并记录形成的实体肿瘤的质量(Wn，单位：g)，并将Dn＝20和Wn代入公式 计算出
[0205] 8.2.4评估该品系小鼠的免疫缺陷程度TEIstrain
[0206] 将上述计算出来的和待入公式 最后计算出该品系小鼠同种肿瘤移植能力得分，并将该数值定义为该品系小鼠对同种肿瘤的免疫缺陷程度。
[0207] 8.2.5评估7种品系小鼠的同种肿瘤移植能力得分
[0208] 通过本发明方法，分别获取NSI、IL2rg-/-、NOD-scid、scid、Rag2-/-、nude、C57BL/6七种小鼠的H、M、L移植数量级的HTEI和STEI数值，并最后求出不同品系的TEIallograft得分(如表15和图2)。
[0209] 表15.同种肿瘤免疫缺陷程度TEI
[0210]
[0211] 由实施例九结果可得，对同种肿瘤的免疫缺陷程度对比为：NSI>IL2rg-/->NOD-scid>scid>Rag2-/->nude>C57BL/6(WT)，NSI小鼠对同种肿瘤移植的免疫缺陷程度最高。
[0212] 同种，肿瘤免疫缺陷程度的高低排序与综合免疫缺陷程度大致相同，可见，综合免疫缺陷程度的评估对小鼠特定免疫系统缺陷程度评估具有一定的参考价值。
[0213] 识别和杀伤同种肿瘤更多需要动用固有免疫系统特别是NK自然杀伤细胞，而IL2rg-/-和Rag2-/-小鼠的NK细胞缺陷程度更高，所以IL2rg-/-和Rag2-/-小鼠的同种肿瘤免疫缺陷程度排序相对向前移动。由此可知，动物实验结合数学模型的方法不仅可用于综合免疫缺陷程度的评估，而且可准确评估小鼠的特定免疫系统缺陷程度。
[0214] 以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
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