获得性免疫缺损综合症AIDS是一种特征在于细胞介导的免疫 丧失的疾病。其是由动物界非常普遍的属于脂质被膜逆转录病毒 (lipid envelope retroviruse)家族并被称为人类免疫缺陷病毒(HIV) 的病毒引起的。HIV是一种感染并控制免疫系统的某些细胞的病毒， 其中免疫系统是人体抵抗感染和疾病的防御体系。这些细胞对于抵 抗疾病是非常重要的。一旦被感染，病毒就会利用细胞来形成其自 身的副本(复制体)，然后继续感染其他细胞。这会导致被感染的 细胞不正常地发挥作用并过早地死亡，削弱免疫系统。
HIV感染引起整个免疫防御机制的混乱，因为特异性免疫防御 T系统的所有T4细胞或辅助细胞都不能起到调控免疫应答的作用。 HIV诱导的T4减少导致由致病生物(例如病毒、细菌、原生动物 或真菌)引起的感染频繁发生并最终发展成致命的机会性感染，如 果不同的T细胞族群(T cell populations)之间存在正常的平衡，这 些致病生物在正常情况下是无害的。人们认为感染HIV的个体在发 展成AIDS的过程中观察到的免疫失调是由于从T辅助细胞1(Th1) 到更低保护性Th2型细胞因子(细胞分裂素，cytokinin)分布的改 变导致的。正是Th1和Th2之间的不平衡使得通常被限制或消除的 疾病有时发展为致死性的。因为近年来感染HIV或AIDS病毒的患 者的数量显著增加，所以存在开发更有效和安全的治疗病毒和逆转 录病毒感染的紧迫理由。
自从20世纪80年代中期，人们就已经知道了抑制病毒复制的 抗病毒剂。抗HIV疗法的总体目标是减慢或终止该复制过程，并从 而减慢或终止HIV疾病和免疫系统破坏的发展。尽管已经提出并测 试了抗击HIV感染的其它途径，但是迄今为止只有抗病毒疗法被证 实可以减慢HIV疾病发展并延长寿命。现在可获得很多用于抑制 HIV病毒复制的药物，然而，它们的副作用通常非常严重以致必须 中止治疗而会使HIV抗性株迅速形成。目前的抗HIV/AIDS疗法可 以根据它们作用于病毒生命周期的哪一步或者它们如何实现该作 用分类成以下的组：核苷类似物逆转录酶抑制剂、非核苷类似物逆 转录酶抑制剂和蛋白酶抑制剂。前两组疗法是通过模拟DNA构建 体(building block)之一、干扰逆转录(一种HIV复制自身的基本 过程)来进行的。蛋白酶抑制剂作用于病毒生命周期的后期(在病 毒已经成功地感染细胞并试图制造其新的副本之后)。这些药物最 终减慢病毒的DNA复制。然而，这些药物并不消除病毒体，而仅 仅是起到降低感染严重程度和减慢感染发展的作用。最后，可以说 传统的抗HIV剂没有提供足够的疗效。此外，用作单一药物疗法的 所有药物都会随时间推移而降低它们的效力。
存在对新型的、毒性较小并且更有效地抵抗HIV的治疗的需 求。理想地，新疗法应该清除病毒体而不仅是起减慢的作用。为了 防止促进抗性株的作用，这些新疗法在其作用中优选是非特异性 的。

因此，本发明的一个目的在于提供一种用于将脂质被膜病毒载 量(viral load)降低至无法检出的水平的方法和组合物。
醛固酮(醛甾酮，aldosterone)是一种盐皮质激素(一种由肾 上腺产生的激素)。醛固酮通过刺激盐皮质类固醇受体 (Mineralocorticoid Steroid Receptor)起作用。可以认为醛固酮通过 肾脏的远端小管增加了钠的重吸收(并增加了钾的排泄)。钠的重 吸收导致水的重吸收增加，而水的重吸收增加会导致高血压。在阿 狄森(氏)病(Addison’s disease)和妊娠毒血症(toxemia of pregnancy) 中观察到低血醛固酮水平。在柯兴(氏)综合征(Cushing’s syndrome)、 原发性醛固酮过多症(primary hyperaldosteronism)、恶性高血压、 充血性心力衰竭的严重肿胀和肾病综合征中观察到较高的血醛固 酮水平。
已经验证了许多药物，其可以通过阻断盐皮质类固醇受体(包 括螺内酯)来抑制体内的醛固酮活性。术语“螺甾内酯(spirolactone)” 是指一种连接于螺旋构型中的另一环结构的一个内酯环(即环状 酯)(即该内酯环与其它环共用一个碳原子)。从制药的前景来看， 偶联于类固醇的螺甾内酯是最重要的一类螺甾内酯，因此它们广泛 地在制药领域被简单地称为螺甾内酯。如本文中所使用的，“螺甾 内酯”是指包含通过螺环构型偶联于类固醇结构或类固醇衍生物的 内酯结构分子。
一种特别的螺甾内酯称为螺内酯(spironolactone)(其是一种 具有醛固酮类似结构的合成的类固醇)，其典型地被描述为抗盐皮 质激素化合物或拮抗剂，功能性地充当盐皮质类固醇受体的竞争性 抑制剂。螺内酯属于一类称为保钾利尿剂(potassium-sparing diuretics)的降血压剂。它被用来治疗原发性高血压、低血钾水平 以及与充血性心力衰竭相关的液体滞留和肿胀、肝硬化以及其它需 要利尿剂而不伴有钾水平下降的病症。它通过从机体中除去过量的 液体来起作用。另一应用是用于原发性醛固酮过多症的诊断和治 疗。螺内酯由G.D.Searle(Skokie，H1.)以商标″Aldosteronectone″和 ″Aldactazide″作为抗高血压药和利尿药在市场上销售。螺内酯是药 房通常使用的名称；其化学全称是17-羟基-7-α-巯基-3-氧代-17-α- 孕甾-4-烯-21-羧酸γ-内酯乙酸酯。这种化合物、其活性及合成和纯 化方式在包括美国专利第4,529,811号(Hill和Ericksσn，1985)的大 量美国专利中都有描述。可有效作为抗盐皮质激素化合物的另一种 螺内酯是依普利酮(epoxymexrenone)。依普利酮具有高盐皮质激素 受体亲和性(与螺内酯相当)，但具有降低的对雄性激素和孕酮受 体的结合亲和力。对这种化合物的初期研究证实了其Na+/K+效应与 50mg剂量的螺内酯等效。抗盐皮质激素化合物包括螺内酯的类似 化合物，例如坎利酸钾(potassium canrenoate)[Clin.Pharm.Ther.21， 602(1977)]、坎利酸钾[J.Pharmacol.Exp.Ther.209，144(1979)]、丙 利酸钾(potassium prorenoate)[Clin.Pharm.Ther.18，391(1975)]、 螺利酮(spirorenone)[日本未审查专利公开第55-162799号]、二氢 螺利酮(dihydrospirorenone)、依普利酮(eplerenone)[美国专利第 5981744号和WO00033847]等。
本发明还提供了在专利第4,129,564(1978)号中描述的化学式1 的新型螺甾内酯作为抗病毒剂。
化学式1
其中
是其中
R是最多5个碳原子的低级烷基，并且
是
低级烷基残基包括支链和非支链基团，优选甲基、乙基和正丙 基。
螺内酯是广泛代谢的[J.Clin.Pharmacol.29，342(1989)]。烯睾 丙内酯被认为是初级代谢产物，而其它代谢产物包括：7-α-硫代螺 内酯、7-α-硫代甲基螺内酯、6-β-羟基-7-α-硫代螺内酯和6-β-羟基 -7-α-硫代甲基螺内酯。
本发明涉及一种治疗暴露于脂质包膜病毒或感染脂质包膜病 毒的个体的方法，包括对该个体给予治疗有效量的一种或多种本发 明的化合物，所述化合物抑制或阻止所述脂质包膜病毒的复制，其 通过干扰该病毒的复制或其它基本功能、通过交互作用地阻断哺乳 动物细胞中的病毒结合靶标，从而干扰对于亲脂病毒(lipid viral) 复制和进入染色体来说是必需的病毒的基本生命周期行为。
本发明涉及抑制病毒复制并表现出免疫调节活性的特定抗盐 皮质激素化合物。令人惊奇地发现，抗盐皮质激素化合物具有有效 的抗病毒活性。此外，本发明涉及同样具有抗病毒活性的特定抗盐 皮质激素化合物的代谢衍生物(或代谢产物)。
本发明的目的包括提供适用于有效抗病毒疗法的抗盐皮质激 素化合物的药物制剂。其它目的是提供制造和使用该制剂的方法。
根据本发明，提供了一种治疗或预防病毒感染的方法，包括对 受治者给予有效量的一种或多种本发明的化合物。
本发明还提供了一种或多种本发明的化合物在制备用于病毒 感染的药物中的应用。
本发明还提供了在治疗病毒感染的方法中应用的本发明的化 合物，所述方法包括对受治者给予一种或多种抗盐皮质激素化合 物。
根据本发明的目的，提供了一种改良药物制剂在预防和治疗病 毒感染或其并发症或后遗症中的应用(或方法)。尤其是本发明涉 及抗盐皮质激素化合物及其代谢衍生物在预防和治疗病毒感染、病 毒复制以及发展以及在防止导致机会性感染和某些癌症的免疫系 统缺陷中的应用。更具体的是，本发明涉及抗盐皮质激素分子及其 代谢衍生物在预防和治疗病毒感染(其一个实例是逆转录病毒)中 的应用，病毒感染被认为对获得性免疫缺乏综合征(AIDS)和AIDS 相关综合征负有责任，其被认为是由人免疫缺陷病毒(HIV)感染 引起的，在几乎所有被诊断为AIDS的个体中都发现有该病毒(HIV) 的抗体。
其它实施方式提供了一种治疗病毒感染或减轻与病毒感染(例 如黄病毒或逆转录病毒感染)相关的一种或多种症状的药物制剂或 方法，所述方法包括对被感染的患者给予有效量的本文中披露的抗 盐皮质激素分子或化合物或制剂。
本发明的一个目的是提供一种组合物，其包括至少一种用于处 理(treatment)、治疗或预防、抵抗病毒感染的抗盐皮质激素化合物。 设计包含至少一种抗盐皮质激素化合物的组合物以便在给药后，它 具有最大的生物利用度。这满足了对于具有免疫调节特性的非特异 性、抗病毒治疗的需要。
本发明进一步涉及一种预防和治疗针对AIDS相关综合征(例 如恶病质和/或衰竭综合征)的药物制剂或方法。
因此，本文中披露的抗盐皮质激素分子和化合物提供了一种用 于治疗病毒感染的药物制剂或方法；用于治疗任何病毒感染、防止 将来病毒感染和/或使将来的病毒感染作用最小化；包括对需要其的 患者给予预防或治疗有效量的包含至少一种抗盐皮质激素化合物 的组合物。
优点在于，提供了具有对抗盐皮质激素产生病毒抗性的最小危 险的有效抗病毒效果。
在另一具体实施方式中，通过将抗盐皮质激素化合物与靶向于 被病毒感染的细胞的脂质体或碳水化合物赋形剂相结合而将该抗 盐皮质激素化合物递送至被病毒感染的细胞，其中将定向于病毒的 抗体置于这些脂质体或碳水化合物载体表面上。
在另一具体实施方式中，抗盐皮质激素化合物选自由螺内酯、 螺利酮、1，2-二氢-螺利酮、1，2α-亚甲基-螺利酮、7α-乙酰硫代-3-氧 代-4，15-雄甾二烯-[17(β-1’)-螺-5’]全氢呋喃-2’-酮、3-氧代-7α-丙酰硫 代-4，15-雄甾二烯-[17(β-1’)-螺-5’]全氢呋喃-2’-酮、6β，7β-亚甲基-3- 氧代-4，15-雄甾二烯-[17(β-1’)-螺-5’]全氢呋喃-2’-酮、15α，16α-亚甲基 -3-氧代-7α-丙酰硫代-4-雄烯-[17(β-1’)-螺-5’]全氢呋喃-2’-酮、 6β，7β，15α，16α-二亚甲基-3-氧代-4-雄烯-[17(β-1’)-螺-5’]全氢呋喃-2’- 酮、7α-乙酰硫代-15α，16α-亚甲基-3-氧代-4-雄烯-[17(β-1’)-螺-5’]全 氢呋喃-2’-酮、7α-乙酰硫代-15β，16β-亚甲基-3-氧-4-雄烯-[17(β-1’)- 螺-5’]全氢呋喃-2’-酮、15β，16β-亚甲基-3-氧代-7β-丙酰硫代-4-雄烯 -[17(β-1’)-螺-5’]全氢呋喃-2’-酮、6β，7β，15β，16β-二亚甲基-3-氧代-4- 雄烯-[17(β-1’)-螺-5’]全氢呋喃-2’-酮、依普利酮、坎利酸钾、坎利酸 盐、坎利酮及其药学上可接受的盐和它们的代谢物构成的组。
在另一具体实施方式中，抗盐皮质激素化合物选自由具有抗盐 皮质激素活性的孕激素构成的组，包括孕酮、孕二烯酮、屈螺酮 (drospirenone)、地美炔酮(dimethisterone)、炔雌醇 (ethinyloestradiol)、炔孕酮(ethisterone)、11β-羟孕酮、17α-羟孕 酮、16α-甲基孕酮、羟孕酮己酸酯、甲羟孕酮醋酸酯、普罗孕酮及 其药学上可接受的盐和它们的代谢物、类似物和模拟分子(mimic molecules)。
在另一具体实施方式中，抗盐皮质激素化合物可作为前药合 成。
在另一具体实施方式中，抗盐皮质激素化合物是由化学式B表 示的7α-乙酰硫代-4-孕烯-3，20-二酮。
其中R1是氢、氢氧根、羟基、诸如硫酸、磷酸根或硝酸基团 的无机酸酯、或酰氧基-OR2、酰基R2是衍生自可以具有最多12个 碳原子的化学式R4OOH的羧酸，其中R4可以被取代或未被取代的、 可以是饱和或不饱和的、直链或支链的、脂环族的、芳基、杂环或 混合基团，并且R3是甲基。
在一种具体实施方式中，R1是羟基或OR2，其中R2是衍生自 上述类型的羧酸，但具有一个或3至12个碳原子中的多个碳原子。
在另一具体实施方式中，R1是羟基(或氢氧根)、一元羧基、 具有12个碳原子的直链或支链烷酰氧基(alkanooyloxy group)。
在另一具体实施方式中，R1是氢、羟基、乙酰氧基、丙酰氧基、 正丁酰氧基、三甲基乙酰氧基、正戊酰氧基或正庚酰氧基。
在另一具体实施方式中，抗盐皮质激素化合物选自包括以下的 组：7α-乙酰硫代-4-孕烯-3，20-二酮、7α-乙酰硫代-21-氢氧基-4-孕烯 -3，20-二酮、7α-乙酰硫代-21-乙酰氧基-4-孕烯-3，20-二酮、7α-乙酰硫 代-21-丙酰氧基-4-孕烯-3，20-二酮、7α-乙酰硫代-21-正丁酰氧基-4- 孕烯-3，20-二酮、7α-乙酰硫代-21-三甲基乙酰氧基-4-孕烯-3，20-二 酮、7α-乙酰硫代-21-正戊酰氧基-4-孕烯-3，20-二酮和7α-乙酰硫代 -21-庚酰氧基-4-孕烯-3，20-二酮。
在另一具体实施方式中，抗盐皮质激素化合物是9，11-环氧类固 醇化合物，尤其是20-螺氧烷(spiroxane)系列和它们的类似物的 那些化合物。
在另一具体实施方式中，抗盐皮质激素化合物是在任意位置被 卤代的。卤素可以选自由氯、溴、氟和碘构成的组。
在另一具体实施方式中，组合物进一步包括药学上可接受的载 体，其在一种具体实施方式中是环糊精，优选羟丙基-β-环糊精，而 在另一具体实施方式中是维生素E油。
给予含有具有适合载体的至少一种抗盐皮质激素化合物的药 物制剂的益处有以下两点：
1、抗盐皮质激素化合物通过阻断病毒细胞附着、细胞进入和 复制而消除病毒。
2、抗盐皮质激素化合物具有免疫上调特性，例如上调自然杀 伤细胞和/或树突状细胞并减少炎性细胞因子。
出于稳定、便于结晶、增加溶解等目的，本发明的化合物可以 作为游离碱或药学上可接受的盐的形式配制或给药。
在本发明的一种实施方式中，感染是病毒感染，在另一实施方 式中，病毒感染由逆转录病毒引起，在另一具体实施方式中，逆转 录病毒感染由HIV或AIDS病毒、疱疹病毒、巨细胞病毒或动物病 毒引起，并且在另一实施方式中，病毒感染由脂质包膜病毒引起。
在另一实施方式中，药物制剂用于治疗AIDS相关综合征，包 括恶病质和/或衰竭综合征或脂肪营养障碍。
抗盐皮质激素化合物和它们的代谢产物的一个有用的特性是 它们的抗病毒活性，根据本发明的一个方面，其已经显示出广谱抗 病毒活性。因此，本发明构思每天向受治者给予对治疗或预防病毒 感染临床有效量的至少一种抗盐皮质激素化合物，其中该受治者患 有感染或处于感染的危险。在其他病毒之中，本发明可用来针对的 示例性病毒是HIV、巨细胞病毒(CMV)和产KS的疱疹病毒 (KS-producing herpes virus)、卡波西肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi’s Sarcoma-associated herpes virus)、肝炎属病毒、微小RNA病毒属病 毒、软疣痘属病毒、汉坦属病毒(hantaviruses)。
另外，本发明还广泛地涉及组合物在治疗(即，在治疗已经存 在的感染、防止将来感染、使将来感染的作用最小化的意义上)不 是逆转录病毒感染的所有感染中的应用，其中不是逆转录病毒感染 的几个代表性实例包括一种或多种支原体，和/或一种或多种由支原 体引起的疾病，和/或一种或多种下列感染：毛状白斑病(hairy leukoplakia)、口腔念珠菌病、口腔溃疡一口疮/疱疹/细菌、真菌假 丝酵母(fungal candida)、鳞状口腔癌、卡波西肉瘤口腔损伤、牙 周炎、牙龈坏死、人乳头瘤病毒、鼻病毒和虫媒传染性软疣、口面 带状疱疹、EB病毒(Epstein barr virus)、轮状病毒、披膜病毒 (togaviruses)也称为虫媒病毒，A组)、黄病毒(或黄热病病毒， flaviviruse)(也称为虫媒病毒，B组，如黄热病、以及丙型肝炎和 庚型肝炎)、风疹病毒(也称为rubella viruses，例如人类风疹病毒)、 鼠疫病毒(也称为粘膜病病毒，如牛病毒性腹泻病毒BVDV、猪瘟 病毒和羊边界病病毒)以及任何其它非逆转录病毒的诱发感染。因 此，可以治疗的病毒感染包括但不限于HIV、SIV、FIV、FELV、 SHIV、卡波西肉瘤相关疱疹病毒和其它疱疹病毒(例如HSV-1、 HSV-2、人类疱疹病毒6(HHV-6)和HHV-8)、与肝炎相关的病毒 (HAV、HBV、丙型肝炎病毒[HCV])，以及人巨细胞病毒、披膜 病毒和黄病毒，例如加利福尼亚脑炎病毒、圣路易斯脑炎病毒、西 方马脑炎病毒、东方马脑炎病毒、科罗拉多蜱热病毒、克罗斯脑炎 病毒、日本脑炎病毒、黄热病病毒、委内瑞拉马脑炎病毒、墨累谷 热病毒、蜱传脑炎病毒(tick-borne encephalitis virus)、GB病毒A、 GB病毒B、GB病毒C、登革热病毒1、登革热病毒2、登革热病 毒3、登革热病毒4、塞姆利基森林病毒(Semliki Forest virus)、辛 德毕斯病毒(Sinbis virus)、微小RNA病毒、鼻病毒、冠状病毒、 呼吸道合胞病毒、脊髓灰质炎病毒、副流感病毒和流感病毒(包括 A型、B型和C型)。醛固酮受体拮抗剂也对减轻与病毒感染相关 的一种或多种症状很有用，例如发热、疼痛或疲劳。
根据本发明的一个优选实施方式，如此给药的抗盐皮质激素的 有效量是使得产生足以降低病毒载量的抗盐皮质激素化合物及其 代谢产物的循环浓度，其中病毒载量通过例如病毒滴定法或PCR 监测。
当受治者是新生儿时，可以实施根据本发明的治疗。可以在新 生儿的分娩前和/或分娩过程中进行给药。
可以较宽范围内的任何途径对患者进行本发明的抗盐皮质激 素化合物的给药。因此，对于可用以给药的本发明的活性化合物的 剂型(制剂类型)，以及与该活性化合物一起包含在制剂中的任何 添加剂，以及可能的给药途径，对于本领域技术人员来说是已知的， 这样的剂型可以通过各种各样的形式来提供，选择特定的制剂和给 药途径，然后测试应用的适用性属于普通技术人员的知识范围。通 过举例说明但并非用于限制，合适的途径包括肠内、非肠道、局部、 口服、直肠、鼻内或阴道途径。非肠道途径包括皮下、肌内、静脉 内、腹膜内、皮内以及舌下给药。而且，可以利用药物递送系统将 组合物植入患者体内或进行注射。
根据本发明的药物制剂可以进行局部给药或全身给药。通过全 身给药是指导致在血液中或远离活性成分给药途径的位点出现有 效量的该活性成分的任何给药方式或途径。
进一步地，根据本发明的药物制剂可以间歇地给药。其优点在 于可以使患者经受一段时间的中止治疗而不必担心由病毒抗性株 的形成引起的药物失活。
根据本发明的药物制剂可以被配制用于肠内、非肠道或局部给 药。事实上，可以同时使用所有三种剂型以实现活性成分的全身给 药。
在本发明的一种实施方式中，抗盐皮质激素化合物被微粉化。 根据本发明，表达“微粉化”是指该化合物已经根据用于微粉化的 任何方法(其中的许多都是本领域中已知的)而被微粉化。微粉化 的颗粒优选包括一定百分比的颗粒，其中该颗粒的直径为约10微 米或更小，优选为5微米或更小。例如，在本发明的一个优选方面， 在微粉化颗粒的制剂中，至少80％的颗粒具有小于5微米的直径。 微粉化化合物的一种可替换方法是溶解该化合物并置于合适尺寸 的脂质体中。脂质体的制备和将活性成分插入这样的脂质体中都是 本领域熟知的。
对于口服给药，本专利的抗盐皮质激素抗病毒化合物可以制成 固体或液体制品。用于口服给药的合适剂型包括硬或软明胶胶囊、 糖锭剂(dragees)、丸剂、片剂、包括软包衣片剂、含片剂、锭剂、 熔剂(melt)、粉剂、微粉化颗粒剂、未微粉化颗粒剂、溶液、乳剂、 酏剂、混悬剂、糖浆剂或吸入剂及它们的控释形式。
本发明优选制剂之一是使得化合物包覆有肠溶衣并且口服给 药的制剂。在另一实施方式中，该化合物是舌下给药的。
在本发明的一种具体实施方式中，肠溶衣由聚合物制成，该聚 合物优选选自由聚(乳酸-乙醇酸)聚酯、邻苯二甲酸醋酸纤维素、 邻苯二甲酸羟丙基-甲基纤维素、聚(甲基丙烯酸丁酯)、甲基丙烯 酸(2-二甲基氨乙基)酯和甲基丙烯酸甲酯构成的组。
除了配制用于口服给药的那些，固体剂型包括直肠栓剂。
根据本发明的进一步方面，该化合物配制在脂质体中。
在本发明的另一实施方式中，提供靶向于HIV感染细胞的携带 该抗盐皮质激素化合物的脂质体或环糊精的分子笼，其中通过将抗 HIV外壳蛋白gp160或gp41的抗体置于其表面上来进行靶向。优 点在于，该脂质体选择性地靶向于被HIV感染的细胞。
在本发明的另一具体实施方式中，向被感染的细胞提供含有高 浓度的至少一种盐皮质类固醇受体阻断剂的脂质体，这将优先结合 醛固酮受体的醛固酮结合结构域并阻止HIV病毒附着以及运送进 入细胞或感染后离开细胞。在另一实施方式中，抗盐皮质激素化合 物是螺内酯，或屈螺酮或这些分子的组合。
适合注射的溶液包括静脉内、皮下和肌内注射溶液。注射形式 的实例包括溶液、混悬液和乳液。通常该化合物连通药物载体一起 注射，药物载体例如是生理盐水、林格液(ringer solution)、葡萄糖 溶液和本领域已知的其它含水载体(aqueous carrier)。也可以使用 适合的非水载体，其实例包括环糊精，优选羟丙基-β-环糊精、混合 油(维生素E油)、聚乙二醇和油酸乙酯。一种优选的载体是水中 的环糊精。通常期望在载体中包括添加剂，例如缓冲剂和防腐剂或 其它物质以增强等渗性和化学稳定性。
抗盐皮质激素化合物也可以局部给药。适合用于局部给药的剂 型包括霜剂(creams)、胶化体(gel)、凝胶剂(jellies)、粘液剂 (mucliages)、糊剂和软膏剂。该化合物可以配制用于经皮给药， 例如是透皮贴剂的形式，以实施全身给药。
组合物也可以植入物的形式给药。
组合物也可以输液剂形式或作为鼻内吸入剂或喷雾剂的形式 给药。
在另一具体实施方式中，还可以优选与至少一种其它抗病毒剂 共同给药。抗病毒剂的实例包括但不限于核苷类似物(AZT、ddC、 ddl、d4T、3TC、BW 1592、PMEA/bis-POM PMEA、dOTC、DAPD)、 非核苷逆转录酶抑制剂(地拉韦啶(delavirdine)、DMP 266； HBY097、洛韦胺(loviride)、奈韦拉平(nevirapine)、乙米韦林 (emivirine)、AG1549、PNU142721、红厚壳属植物提取物 (Calanolide A)、DPC961)、蛋白酶抑制剂(ABT-378、利托那韦 (ritonavir)、那非那韦(nelfinavir)、BW 141、KNI-272、印地那韦 (indinavir)、沙奎那韦(saquinavir)、L-756,423、DMP-450、 BMS-232630)、ALX40-4C、羟基脲、洛布卡韦(lobucavir)、喷他 夫西(pentafuside)、T-1249、PRO 542、FP-21399、AMD 3100、 HE-2000和多肽T(peptide T)。
抗病毒剂的其它实例包括但不限于阿巴卡韦(Abacavir)、醋孟 南(Acemannan)、阿昔洛韦(Acyclovir)、阿昔洛韦钠、阿德福韦 (Adefovir)、阿洛夫定(Alovudine)、阿韦舒托(Alvircept Sudotox)、 盐酸金刚烷胺、阿拉诺丁(Aranotin)、阿立酮(Arildone)、阿替韦 啶甲磺酸酯(Atevirdine Mesylate)、阿夫立定(Avridine)、西多福 韦(Cidofovir)、西潘茶碱(Cipamfylline)、恩曲他滨(Coviracil)、 盐酸阿糖胞苷、甲磺酸地拉韦啶、地昔洛韦(Desciclovir)、去羟肌 苷(Didanosine)、二噁沙利(Disoxaril)、依度尿苷(Edoxudine)、 乙米韦林(Emivirine)、依曲西他平(Emtricitabine)、恩韦拉登 (Enviradene)、恩韦肟(Enviroxime)、贺普丁(Epivir)、泛昔洛韦 (Famciclovir)、盐酸氯苯氢异喹、非西他滨(Fiacitabine)、非阿尿 苷(Fialuridine)、磷利酯(Fosarilate)、膦甲酸钠(Foscarnet Sodium)、 膦乙酸钠(Fosfonet Sodium)、更昔洛韦(Ganciclovir)、更昔洛韦 钠、碘苷(Idoxuridine)、茚地那韦(Indinavir)、乙氧丁酮醛 (Kethoxal)、拉米夫定(Lamivudine)、洛布卡韦、洛德腺苷 (Lodenosine)、洛匹那韦(Lopinavir)，盐酸美莫汀、甲红硫脲、 那非那韦(Nelfinavir)、奈韦拉平(Nevirapine)、喷昔洛韦 (Penciclovir)、吡罗达韦(Pirodavir)、利巴韦林(Ribavirin)、盐 酸金刚乙胺、沙奎那韦(Saquinavir Mesylate)、利托那韦(Ritonavir)、 盐酸索金刚胺、索立夫定(Sorivudine)、匍枝青霉菌素(Statolon)、 司他夫定(Stavudine)、替诺福韦(Tenofovir)、盐酸梯络龙、曲氟 尿苷(Trifluridine)、盐酸万乃洛韦、阿糖腺苷(Vidarabine)、磷酸 阿糖腺苷、阿糖腺苷磷酸钠、替拉那韦(Tipranavir)、韦罗肟 (Viroxime)、扎西他滨(Zalcitabine)、齐多夫定(Zidovudine)、净 韦肟(Zinviroxime)。
最近的研究(Am J Physiol Endocrinol Metab 2000，279(2)E386 -E394，The MINERALOCORTICOID STEROID RECEPTOR mediates aldosterone-induced differentiation of T371 cells into brown adipocytes，Penfornis P.，Viengchareun S.，Le Menuet D.，Cluzeud F.， Zennaro MC和Lombes M)表明，当将醛固酮施用于T371细胞时， 它们分化为集聚胞浆内的脂质滴(一种伴随胞内甘油三酸酯含量剂 量依赖性增加的效应)的棕色脂肪细胞。在对HIV患者给予蛋白酶 抑制剂之后，体重增加是很常见的副作用。这是由躯干、颈部和面 部的脂肪组织聚集引起的，产生躯干性肥胖、满月脸和水牛背的经 典特征描述。更加通俗地说法为克滤满肚(crix belly)。
抗盐皮质激素化合物阻止细胞脂肪蓄积。糖皮质激素受体表现 出不涉及细胞脂肪蓄积，因为它阻止存在于蛋白酶抑制剂中的病毒 蛋白作为醛固酮的模拟分子作用于脂肪细胞。诸如螺甾内酯和/或屈 螺酮的抗盐皮质激素化合物与蛋白酶抑制剂的共同给药将增强这 两类化合物的抗病毒效果，并使蛋白酶抑制剂(目前选择用于治疗 HIV的药物)的副作用最小化。
本文中披露的任何药物制剂的组分都可以同时给药(在组合制 剂中)、基本同时给药(例如每一种化合物间隔几分钟或几小时给 药)、或可以连续给药例如间隔几天或间隔多于一周给药。例如本 发明的化合物，至少一种抗盐皮质激素化合物可以一起给药，或基 本上同时给药，例如每一种化合物隔几分钟或几小时给药，或可以 连续给药，例如间隔几天或间隔多于一周。联合疗法给药中的所有 这样的变化都包括在本发明的范围内。
在另一具体实施方式中，组合物掺入到药学上可接受的载体、 稀释剂、赋形剂等中用于通过服用进行全身给药。这样的载体的一 个实例是环糊精。
关于根据本发明任一方面的治疗的剂量和持续时间，对于药物 领域的技术人员而言根据许多相关因素确定合适的药量的能力是 公知的，并且技术人员能够容易地监控患者以确定在任何给定时间 治疗是否应该开始、继续、中断或重新开始。例如，根据受治者的 病状、年龄和性别等个体情况来适当地确定这些化合物的给药剂 量。掺入本发明的药物组合物中的化合物的量随配制途径(dosage route)、化合物的溶解性、给药途径、给药方案等而不同。对特定 患者的有效量可以根据诸如治疗的病症、患者的整体健康状况以及 给药的方法、途径和剂量等因素而有所不同。临床医生利用本领域 中已知参数来确定适当的剂量。通常，该剂量开始稍微小于最佳剂 量，此后通过小的增量逐渐增加直至达到所需效果或最佳效果。可 以通过进一步考虑已知领域中的相关披露来确定合适的给药剂量。
通常，递送至患者的化合物的量是足以达到血浆的约3～10 μg/ml到约5000μg/ml的血药浓度，代表性地是约3～约50μg/ml 或约5～约25μg/ml。然而，当靶向于被病毒感染的细胞的脂质体 被用于给予抗盐皮质激素化合物时，使用25mg/ml的大剂量。给药 有效量可选地是在10μg/kg与约20,000μg/kg患者体重之间的剂量 范围内。用于本披露内容中描述的任何病症的单位剂量代表性地包 括约1-1000mg/天的抗盐皮质激素化合物，通常为大约5-500mg/ 天，理想地为400mg/天，伴随着全天血液中的最佳血药浓度为60 μM。优选的儿科剂量范围是0.001～100mg/kg/天，其中在该范围 中的最佳剂量是3mg/kg/天。
正如本文所报道的，抗盐皮质激素化合物的给药具有直接的抗 病毒效果。正如所附表格和附图所表明的，通过抗盐皮质激素化合 物和它们的活性代谢产物阻断病毒细胞进入和细胞感染的能力来 构建这种抗病毒效果。
与大多数类固醇激素受体一样，盐皮质类固醇受体通过跨过细 胞的质膜的醛固酮并作用于胞质溶胶或细胞核中的醛固酮受体蛋 白以形成复合物而介导其生物学反应。已经证实盐皮质类固醇受体 是含有90kDa热休克蛋白(HSP90)的杂寡聚体(hetero oligomeric) 复合物。
然后醛固酮/盐皮质类固醇受体复合物通过热休克蛋白伴随而 进入细胞核，然后它们在结合于特定调控DNA序列处的细胞核中 蓄积。病毒的遗传因子易位并形成多个副本，然后被翻译以形成酶 和病毒蛋白外壳。病毒的增殖通常使在其中发生病毒增殖的细胞致 死，而且在许多情况下被感染的细胞破裂，从而使子代病毒进入附 近的细胞中。病毒感染的很多临床表现都反映出了这种病毒的溶胞 作用。由例如单纯疱疹病毒引起的唇疱疹和由天花引起的损伤都反 映了在皮肤的局部区域中杀灭上皮细胞。
在最近的出版物中，已经证实盐皮质类固醇受体功能性地存在 于淋巴细胞上(Leukemia(2000)14，1097-1104，Demonstration of the mineralocorticoid receptor hormone and action in human leukemic cell lines N Mirshahi，S Mirshahi，N Golestaneh，Z Mishal，C Nicolas，C Hecquet和MK Agrwal)。
已经证实了本专利中的HIV病毒外壳蛋白起到模拟醛固酮分 子的作用。提出通过结合于白细胞上的盐皮质类固醇受体，病毒易 于进入细胞的DNA。抗盐皮质激素化合物通过阻断靶向于盐皮质 类固醇受体的醛固酮结合区域的HIV病毒蛋白附着(需要醛固酮拮 抗剂或抗个体基因型受体抗体的存在)而起作用。通过阻断盐皮质 类固醇受体，就可能抑制或阻止病毒复制以及阻止病毒并入宿主细 胞的细胞染色体组中。
本文中鉴定作为病毒疫苗备选物抗原的特定氨基酸序列是在 盐皮质类固醇受体上的序列，其允许用于类固醇结合，例如如果出 现在脱壳入侵病毒(uncoated entering virus)或者如果添加到新生病 毒肽的组装体的醛固酮被识别，则使得能够通过醛固酮结合到疏水 序列的病毒蛋白受体无效，这将抑制病毒基因转移到宿主细胞核。
其它抗盐皮质激素化合物(醛固酮拮抗剂和/或模拟醛固酮结构 的分子)，尤其是与涉及盐皮质类固醇受体附着的病毒外壳蛋白竞 争并降低感染率。
在另一实施方式中，编码相应于醛固酮附着位点的疏水性氨基 酸序列的DNA核苷酸序列选自下列15聚体的共用序列：
GRE(+)    GGTACAnnnTGTTCT；
GRE(-)    ATYACNnnnTGATCW。
上述机制被大量的病毒家族利用并且可利用这个信息(结合至 位于醛固酮附着位点的盐皮质类固醇受体的必然性)用于在新药物 和疫苗设计中干扰产生的感染。
结合HSP CD91的受体是一种低密度脂蛋白类受体。已证实， 在获准CD4+ T-淋巴细胞培养物暴露于HIV-1之后的早期，注意到 HSP70的核易位，随后是特定盐皮质类固醇受体NA合成的显著增 加。这些结果表明，HIV-1与细胞膜之间的相互作用能够引发诱导 70kDa热休克蛋白进入核(nuclear inflx)的信号。其它研究(J Virological Methods，26(1989)313-318，Rapid detection of HIV-1 in clinical samples by co-culture with heat-shocked cells.M.C.Re1 G. Furlini和M.La Placa)表明，相比于对照，温和的热激(热休克) 在短期内可以检测出胞内病毒标记物(核心抗原p24和逆转录酶)， 表明增强的感染性。
在另一具体实施方式中，所述制剂进一步包括将反义盐皮质类 固醇受体(anti-sense mineralocorticoid steroid receptor)NA指向热 休克蛋白的cDNA克隆(体)。在一个实施方式中，该cDNA克隆 指向反义盐皮质类固醇受体NA的70kDa热休克蛋白(hsp70)。在 一种具体实施方式中，该反义盐皮质类固醇受体NA指向反义盐皮 质类固醇受体NA的90kDa热休克蛋白(hsp90)。
在另一出版物(Biochem J.(1995)311，797-804，Distant functions of the 90kDa heat-shock protein(hsp90)in oestrogen and mineralocorticoid receptor activity，effects of hsp90 deletion and mutants，N Binart，M lombes和E-E Baukiieu)中，证实了当hsp90 的特定区域发生突变时，其不再与盐皮质类固醇受体发生相互作 用。
在另一实施方式中，通过将反义盐皮质类固醇受体NA和DNA 掺入脂质体或碳水化合物赋形剂中，将该反义盐皮质类固醇受体 NA和DNA递送至被病毒感染的细胞中，其中所述脂质体或碳水化 合物赋形剂通过将定向于病毒的抗体置于这些脂质体或赋形剂表 面上而靶向于被感染的细胞。
在本发明的另一实施方式中，提供的脂质体带有反义盐皮质类 固醇受体NA和DNA，其中通过将抗HIV外壳蛋白gp160或gp41 的抗体置于其表面上而使反义盐皮质类固醇受体NA和DNA靶向 于HIV感染的细胞。这样的益处在于该脂质体可以选择性地靶向 HIV感染的细胞。
脂质体包膜病毒的外壳由通常排列为若干层的多种类型的多 肽链构成。此外，在许多病毒中，蛋白质壳体还被含有蛋白质的脂 双层膜所包裹。这些包膜蛋白中的很多在从质膜的出芽过程中需要 这种包膜。这种出芽过程使病毒粒子可以离开细胞而没有破坏质 膜，因此不会杀死细胞。然而，脂质体包膜病毒的外壳蛋白在磷脂 分布(phospholipid profile)上与宿主细胞的质膜显著不同。认为这 是由于出芽过程发生的脂质体的选择性截存(sequestration)，其中 该病毒蛋白选择在其成熟过程中出现的宿主细胞膜中的特定区域。 醛固酮是一种在出芽过程中所选择并截存的激素。病毒包膜中的高 胆固醇/磷脂比率对于许多包膜病毒的感染性来说似乎是必需的。
病毒的实例包括但不限于加勒比人和以色列人天生具有的人T 细胞白血病病毒(HTLV-I)，和引起毛细胞白血病的人T细胞白血 病病毒III(HTLV-III)。
进一步地，本发明提供了组合物在制备用于预防或治疗病毒感 染或其并发症或后果的药物中的应用。
另外，本发明提供了组合物在免疫缺陷动物和人类中针对病毒 感染提供保护的应用。这些组合物可以预防性地或治疗性地用来保 护动物或患者免受由致病病毒感染引起的后果。
进一步地，本发明提供了组合物在遭受使得免疫反应发生缺陷 并引起感染的病毒感染的动物种群中的预防性和治疗性兽药中的 应用。
另外，本发明提供了组合物在治疗免疫缺陷AIDS患者或表现 出AIDS相关综合征(ARC)的被诸如HIV病毒的逆转录病毒感染 的那些患者中的应用。
此外，本发明提供了一种使病毒为非感染性，但对于免疫清除 和免疫记忆细胞的发育是有活性的方法，包括从它的基因组中删除 针对疏水氨基酸序列的编码，其中所述疏水氨基酸序列将病毒结合 至盐皮质类固醇受体上的醛固酮结合位点。
本文中定义的术语“抗体”不仅包括全抗体，还包括抗体的生 物学活性片段，具体地是包含抗原结合区的片段。这样的抗体可以 通过传统方法和/或基因工程来制备。抗体片段可以被遗传改造，优 选来自轻链和/或重链(VH和VL)的可变区，包括高变区并且更 加优选来自VH区和VL区二者。例如，如本文中使用的，术语“抗 体”涵盖多克隆和单克隆抗体及其生物学活性片段，其中包括其他 可能性(possibilities)“单价”抗体[Glennie et al.Nature，295：712 (1982)]；Fab蛋白，其包括不论是共价还是非共价结合的Fab’和 F(ab)2片段；单独的轻链或重链，优选可变重链和轻链区(VH和 VL区)，并且更优选包括高变区[另外称为VH和VL区的互补区]； Fc蛋白；能够与多于一个抗原结合的“杂交”抗体；恒定-可变区 嵌合体；不同来源的轻链和重链的“复合”免疫球蛋白；通过标准 化重组技术以及寡核苷酸定向的诱变技术制备的具有改善的特异 性和其他特性的“改变的”抗体[Dalbadie-McFarland et al.，PNAS USA，79：6409(1982)]。
术语(个体)基因型抗体是一种针对另一抗体的抗原结合位点 形成的抗体。该抗体是利用抗个体基因型方法产生的。例如单克隆 个体基因型抗体是抗醛固酮抗体，其是针对抗醛固酮抗体的醛固酮 结合位点形成的。
通常，术语类固醇(甾族化合物，steroid)被认为是含有氢化 的环戊烷多氢菲环体系的脂肪族名称。本发明尤其感兴趣的物质是 肾上腺皮质激素，尤其是醛固酮。
术语类固醇激素(甾类激素)受体在本文中被定义为是磷蛋白 的核受体，包括用于盐皮质激素的能够结合至其DNA应答元件 (responsive element)的受体。
无需进一步赘述，相信本领域技术人员利用之前的描述能够充 分实施和呈现本发明。以下详述的实施例描述了如何测试本发明的 各种化合物和/或实施本发明的各种方法，并且这些都仅是举例说明 本发明的，而不以任何形式限制前述的披露内容。本领域的技术人 员可从所述过程中迅速认识到适合的变形。

参考本发明一些实施方式的以下描述以及参考附图，可以更加 清楚地理解本发明的这些和其他特征以及优点，附图中：
图10是曲线图，示出了螺内酯对巨噬细胞中的HIV-1 IIIB病 毒的作用(影响)(％VC)及其对细胞存活性的作用(％CC)，而表 1和表1a描述了图10中示出的单个数据。
图11及表2和表2a是本发明的另一实施方式，示出了螺内酯 对PBMC细胞中的HIV-1 IIB病毒的作用；
图13是本发明的另一具体实施方式，示出了坎利酸钾盐(坎利 酸钾)对PBMC细胞中的HIV-1 IIIB病毒(％VC)的作用和细胞存 活性的作用(％CC)；和
图14及表4和表4a示出了坎利酸钾盐(坎利酸钾)对巨噬细胞 中的HIV IIIB病毒的作用。
图15是曲线图，示出了抗个体基因型抗醛固酮单克隆抗体对 外周血单核细胞(PBMC)中的HIV-1 IIB病毒的作用(％VC)及 其对细胞存活性的作用(CC％)，而表5和表5a描述了图15中示 出的单个数据；
图16及表6和表6a是本发明的另一实施方式，示出了抗个体 基因型抗醛固酮单克隆抗体对PBMC细胞中的HIV-1 IIB病毒5的 作用；
图17及表7和表7a以及图18及表8和表8a是本发明进一步 的实施方式，示出了抗个体基因型抗醛固酮单克隆抗体对PBMC细 胞中的HIV-1 IIIB的作用。

实施例
实施例1和2表明了实施用来确定螺内酯和坎利酸的钾盐(坎利 酸)、螺内酯的主要代谢产物、抗个体基因型抗醛固酮单克隆抗体以 及醛固酮在减少HIV-1(不考虑劳损型或分化体)感染T-淋巴细胞 和巨噬细胞的能力的有效性(效力)的试验方法和结果。还进行试 验以确定螺内酯对未感染的T-淋巴细胞和巨噬细胞的毒理学作用。 实施例3至8描述了如何配制抗盐皮质激素化合物的方法，以便在 给药(通过若干种给药途径)后具有最大的生物利用度。
实施例1
新鲜人细胞中的抗HIV活性：在新鲜人T-淋巴细胞中测定
从红十字会自愿供体中分离新鲜的人外周血淋巴细胞(PBL)， 对HIV和HBV血清反应呈阴性。用杜伯科(氏)磷酸盐缓冲盐水 (PBS)对白血球血(Leukophorese blood)进行1∶1的稀释并在50 ml离心管中在14ml的聚蔗糖-泛影葡胺(Ficoll-Hypaque)密度梯 度上进行分层。然后将离心管以600Xg离心30分钟。从得到的界 面轻轻地抽吸成带状的PBL并接着通过低速离心用PBS清洗2X。 最后清洗之后，通过苔盼蓝(trypan blue)排除法计数细胞，将其 以1×107/ml重新悬浮于含有15％的胎牛血清、2mM的L-谷氨酰 胺、4μg/ml的PHA-P的RPMI 1640中，并允许在37℃下孵育48-72 小时。在孵育之后，将PBL进行离心重置于具有15％的FBS、2mM 的L-谷氨酰胺、100U/ml的青霉素、100μg/ml的链霉素、10μg/ml 的庆大霉素和20U/ml的重组人IL-2的RPMI 1640中。PBL在这种 介质中保持1-2×106/ml的浓度，每两周更换介质，直至在测定方 案中使用。
对于PBL测定，将来自至少两个正常供体的PHA-P刺激的细 胞混合，以2×106/ml置于新鲜介质中，并以50μL/孔铺在96孔圆 底微板的内孔中。在微量滴定管中，以2X的浓度制备试验药物稀 释液，并将每一种浓度的100μL以标准方式置于恰当孔中。将预测 定的病毒原液(virus stock)的稀释液的50微升置于每一个测试孔 中。只具有细胞和病毒的孔被用作病毒对照。单独的板同样在没有 病毒下被设置用作利用XTT测定系统的药物细胞毒性研究。
在标准PBL测定(MOI：0.2)中，该测定第7天结束然后收 集用于逆转录酶活性测定的不含细胞的上清液。将氚化三磷酸胸苷 (NEN)(TTP)以5Ci/ml重新悬浮于蒸馏H2O中。制备聚rA和 寡dT作为母液(stock solution)，其保持在-20℃。每天制备新鲜的 RT反应缓冲液，并且包括125μl的1M EGTA、125μl的dH2O、 110μl的10％SDS、50μl的1M Tris(pH 7.4)、50μl的1M DTT和 40μl的1M MgCl2。将这三种溶液以2份TTP、1份聚rA∶寡dT和 1份反应缓冲液的比例混合。将10微升的这种反应混合物置于圆底 微滴定板中并添加15μl含有病毒的上清液并混合。将该板在具有 防止该板浸没的固体支架的水浴中、在37℃下孵育60分钟。反应 后，将反应物放置在DE 81过滤垫上，用5％的磷酸钠缓冲液清洗 6次，每次5分钟；用蒸馏水清洗两次，每次1分钟；用70％的乙 醇清洗2次，每次1分钟，然后进行干燥。在每个过滤垫上添加 Opti-Fluor O(Opti-Fluor O闪烁液)，利用Wallac 1450 Microbetaplus 液体闪烁计数器来定量化掺入的放射性。如上所述，用XTT对毒 性板进行染色。
结果示于图10和图11以及表1A和表1B中。参见附图的图 10，可以观察到T-淋巴细胞培养物在使用螺内酯的所有浓度下保持 健康，而％HIV-1水平以剂量依赖性方式下降。
参见附图的图13和图14以及表3和表3a，可以观察到T-淋巴 细胞培养物在使用坎利酸钾的所有浓度下类似地保持健康，而 ％HIV-1水平以剂量依赖性方式下降。
参见附图的图15、16、17和18以及表5和表5a。抗个体基因 型抗醛固酮单克隆抗体是一种指向抗醛固酮单克隆抗体上的醛固 酮结合位点的单克隆抗体。其以剂量依赖性方式竞争性地抑制醛固 酮与盐皮质激素类固醇受体的结合。抗个体基因型抗体被限定为醛 固酮的限制性内影像(internal image)。此外，其与特异性用于醛固 酮的受体相互作用并且是一种非常特异性的抗盐皮质激素化合物。 可以观察到，在T淋巴细胞培养物中，抗个体基因型抗醛固酮单克 隆抗体剂量依赖性地抑制％HIV-1病毒复制。也观察到了在细胞生 长中的剂量依赖性下降。假定缺乏醛固酮，也许在体外细胞的含盐 量(对生命来说是必需)会受到影响。
实施例2
在新鲜人细胞中的抗HIV活性：在新鲜人单核巨噬细胞中测定
对于粘附性细胞(贴壁细胞)的分离，将3×106个非PHA刺 激的外周血细胞重新悬浮在补充了10％的人AB血清的Hanks缓冲 盐水(含有钙和镁)中。在37℃下将细胞置于96孔微滴定板中达 2小时。通过剧烈洗涤6次除去非粘附性细胞。将贴壁细胞在含有 15％胎牛血清的RPMI 1640组织培养基中培养7天。仔细监控培养 物以在该培养期内铺满。利用单亲细胞(monocytotropic)HIV-1分 离物来实施细胞侵染。从受感染的外周血粘附性细胞收集这些病毒 的每一个的高效价群，并在-80℃下以1.0ml等份冷冻。单核巨噬 细胞单层以0.1的MOI进行感染。将待在单核巨噬细胞测定中进行 评价的化合物在感染前立即添加到该单层中，以在最大程度上鉴定 活性化合物。
在感染后2天，倾析介质并用完全培养基洗涤培养物两次以去 除过多的病毒。加入单独的新鲜介质或含有适当浓度的药物的介 质，并孵育持续另外的5天。用于细胞毒性的XTT染色和用于产 生p24核心抗原的HIV p24 ELISA测定在感染后的第7天进行。 ELISA试剂盒购自Coulter。该测定根据制造商的推荐进行。在每一 个测定中产生对照曲线以精确地定量每一试样中壳蛋白的量。使用 Molecular Devices Vmax板式读数器(plate reader)在450nm处通 过分光光度分析获得数据。通过利用Molecular Device软件包Soft Max从光密度值计算p24的浓度。
图13和图14以及表2示出了结果。巨噬细胞中的结果与在T 淋巴细胞中观察到的结果非常相似。对于两种药物HIV-1水平以剂 量依赖性方式下降，其中对细胞存活性几乎没有影响。
对于坎利酸钾，巨噬细胞中的结果与在T淋巴细胞中观察到的 结果非常相似。对于两种药物HIV-1水平以剂量依赖性方式下降， 其对细胞存活性几乎没有影响。
参见图15、16、17和18以及表6和表6a。对于抗个体基因型 抗醛固酮单克隆抗体，HIV-1水平以剂量依赖性方式下降，其对细 胞存活性几乎没有影响。
实施例3
本实施例描述了根据本发明如何用环糊精来制备抗盐皮质激 素化合物。
在羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)溶液中制备螺内酯
1.在分析天平上称取45克HP-β-CD，并置于干净的烧杯中。
2.向其中加入1升的无菌生理盐水。
3.将所得混合物盖住并在搅拌器下混合4小时或过夜，直至 获得澄清的溶液。
4.向其中以20mg/ml的浓度加入未微粉化的螺内酯，并再次 搅拌，直至溶液澄清。
5.然后使其通过0.2微米的过滤器以对其进行灭菌，然后将其 等分装入无菌容器中。
实施例4
本实施例描述了一种通过用具有邻苯二甲酸醋酸纤维素膜的 肠溶衣包裹抗盐皮质激素化合物的方法。利用肠溶衣的目的在于在 下消化道中释放该组合物。肠溶衣胶囊、扁胶囊、粉剂、片剂等的 制备在本领域中是公知的。以下通过实例进行说明：
邻苯二甲酸醋酸纤维素膜

组合物可以包括至少一种抗盐皮质激素化合物。这是本发明的 一个优选实施方式。
实施例5
配制组合物的一种可替换方法是将它们装入适当尺寸的脂质 体中。脂质体的制备和活性成分插入这样的脂质体都是本领域中公 知的。下文以举例的方式进行描述。
制备脂质体中的螺内酯
1.将400mg磷脂酰胆碱、100mg胆固醇和80mg螺内酯溶解 于氯仿∶甲醇(2∶1)的溶液中。
2.然后将混合物在圆底烧瓶的侧壁上通过旋转蒸发进行干燥。
3.通过添加8ml的0.9％w/v氯化钠溶液将得到的膜进行再水 化。
4.利用Malvern Zetasizer 3000通过光子相关光谱测量得到的 脂质体的尺寸。
5.如果需要，可以利用声处理来制造小于400nm的脂质体。
包含脂质体的制剂可以任何标准的途径例如口服、气雾剂或肠 胃外给药(例如i.v.或i.m.)递送至受治者。
实施例6
通过将抗盐皮质激素化合物配制成栓剂制剂，它们可以直肠给 药。用于直肠给药的制剂可以表现为具有适合的基质(包含例如可 可油或水杨酸酯)的栓剂。以下通过举例的方式说明：
以栓剂形式的制备螺内酯
1.精确称取螺内酯，其量取决于将要制造多少栓剂。每个栓剂 将使用500mg螺内酯。
2.将螺内酯与栓剂基质混合，形成二者的均质混合物。
3.将该混合物倒入灭菌密封的单个塑料外壳中，并留置以固 化。
栓剂基质可以是衍生自在性能上与可可油相似的食用植物油 的一系列甘油三酸酯。它们是非常稳定、保存条件下均一的，这导 致了精确的熔解性质，并且不需要特别的贮存条件。典型的性质可 以是：
FFA％：                 0.1
皂化值：                242
碘值：                  3
水分％：                0.1
熔点(封闭毛细管)：      35℃。
实施例7
通过连接聚乙二醇制备用于IV(静脉内)给药的螺内酯
给予抗盐皮质激素化合物的另一种方法是肠胃外给药。实现这 一目的的一种方法是通过将它们连接至载体分子上，例如生物相容 性聚合物。最好的生物相容性聚合物之一是聚乙二醇(PEG)，因为 它具有许多有用的特性，包括：缺少毒性和免疫原性、生物不可降 解性和易于从活体中排出、提高的血液循环半衰期、潜在增加的生 物利用度和效能(potency)。
术语PEG是指含有约20至约2000000个键连单体，典型地大 约50-1000个键连单体，通常大约100-300个键连单体的乙二醇聚 合物。聚乙二醇包括含有不同数目的键连单体的PEG，例如PEG20、 PEG30、PEG40、PEG60、PEG80、PEG100、PEG115、PEG200、 PEG300、PEG400、PEG500、PEG600、PEG1000、PEG1500、PEG2000、 PEG3350、PEG4000、PEG4600、PEG5000、PEG6000、PEG8000、 PEG11000、PEG12000、PEG2000000以及它们的任意混合物。
可替换地，化合物可以与赋形剂混合。术语赋形剂是指与本发 明组合物或制剂的其它成分相容意义下的可接受的组分或成分，并 且对给予该制剂的患者或动物不是过度有害。如本文使用的，赋形 剂通常是液体，包括苯甲酸苄酯、棉子油、N，N-二甲基乙酰胺、醇 如C2-12醇(例如乙醇)、丙三醇、花生油、PEG、维生素E、罂粟 油、丙二醇、红花油、芝麻油、大豆油和植物油。如本文中使用的， 赋形剂通常不包括氯仿、二噁烷和DMSO。赋形剂包括一种或多种 通常用于药物制剂领域的组分，例如填充剂、粘结剂、崩解剂和润 滑剂。
适合用于对人类或动物进行肠胃外递送抗盐皮质激素化合物 的本发明的组合物通常包含两种或三种或更多种赋形剂。示例性实 施方式包括(1)丙二醇、PEG200、PEG300、乙醇和苯甲酸苄酯中 的任意两种、三种或四种，以及(2)丙二醇、PEG100、PEG200、 PEG300、PEG400和苯甲酸苄酯中的任意两种、三种或四种。
实施例8
其它的螺内酯制剂
1.向玻璃容器中加入400mg的螺内酯和2.5ml的聚乙二醇 300，并涡旋1分钟以形成平滑、奶油状液体。
2.加入2.5ml的丙二醇并涡旋1分钟以形成均匀的混悬液。
3.加入0.5ml的苯甲酸苄酯并涡旋1分钟以形成半透明液体。
4.加入1.25ml的无水乙醇(99.5％)并涡旋至清澈和无色溶 液。
5.用丙二醇补足10ml。
6.在10-25℃下贮存，避免任何形式的加热。
这种制剂给予到皮肤的皮下层中。
术语“下消化道”在此是指小肠(回肠)和结肠的下部。术语 “肠溶衣”在此是指核芯周围的包衣，包衣的溶解性依赖于pH， 采用的方式是使其阻止药物在胃中释放但允许药物在该制剂已经 从胃中排空后的某一阶段释放。
药学可接受的是指那些从药学/毒理学观点来看可以被患者所 接受的特性和/或物质(包括生物利用度和患者接受性)，或从关于 构成、制剂、稳定性和可分离性的物理-化学的观点来看可以被药剂 师所接受的特性和/或物质。
在本说明书中，术语“包含、包括和构成”和术语“含有、含 有的、包含有”可以互换使用并应该作最宽的解释。
本发明不局限于上述实施方式，但在权利要求的范围内可以进 行构成和细节的变化。