本发明涉及新的草本制剂组合物，特别是其活性成分为难溶的活性 剂的新草本制剂组合物，如大环内酯，或尤其是环聚-N-甲基化十一 肽或环孢菌素类的肽脂-见例如英国专利公开号nos.2222770和 2257359A以及世界各国的同族专利文献。

如上面英国专利文献所述，环孢菌素具有通常与给药有关的特定难 题，且尤其是草本制剂组合物，特别是包括稳定性、药物生物利用率以 及患者间和患者体内剂量反应的可变性的问题。

为了克服这些相关问题，在英国专利文献no.2222770和2257359A 中公开了草本制剂组合物，它包括作为活性成分的环孢菌素，且其特别 以微乳状液或微乳状液预浓缩物的形式使用。这些组合物一般包括1) 亲水相，2)亲油相，和3)表面活性剂。

根据本发明，现已惊奇地发现使用含二甲基异山梨醇的亲水相可以 得到含有难溶性活性剂的特别稳定的微乳状液或微乳状液预浓缩物，它 具有特别好的生物利用率特性以及降低的病人间和病人体内生物利用率 参数的可变性。

在WO 94/05312中已建议将二甲基异山梨醇用于含环孢菌素的组合 物产品中，但仅以复合组合物的形式存在。这些组合物组分的保护限定 是非常具体的，因此显然WO 94/05312申请人认为仅有很少基于二甲基 异山梨醇的组合物可以使用。因而WO 94/05312的实施例1、2和6描 述了一种含有二甲基异山梨醇的组合物，且包括乳化剂脱水甘露糖醇油 醚，(Montanide 103)，另一种乳化剂、柠檬酸甘油酯(Axol C62) 和脂凝胶羟基硬脂酸铝镁(Gilugel MIG)，以及短链脂肪酸甘油酯 (Miglyol 812)或乳蓟子油。二甲基异山梨醇仅被公开用作一种溶剂， 而没有提示它可以用作微乳状液亲水相组分。WO 94/05312申请在这点 上没有认识到其效用。

根据本发明，对比本领域技术人员的指导，惊奇地发现实践中实际 上可以制备包括用作亲水相组分的二甲基异山梨醇的这些微乳状液系 统。

本发明一方面提供了一种药物组合物，它是一种包含难溶性的活性 剂和载体介质的微乳状液预浓缩物，包括

1)含二甲基异山梨醇和/或低级烷基链烷酯的亲水相，

2)亲油相，和

3)表面活性剂。

本组合物优选提供油/水(水包油)型微乳状液的“微乳状液预浓缩 物”形式。但是本组合物也可以是还包含水相(优选水)的微乳状液形 式。

在本说明书中将“微乳状液预浓缩物”解释为一种在水介质中，如 水中，以1∶1或1∶10的稀释度，或口服后在胃液中自发地形成微乳状 液的组合物。

“微乳状液”是一种透明的或基本上透明的胶态分散体，当其组分 相互接触时它便自发地或实际上自发地形成。微乳状液具有热力学稳定 性，且含有大小小于约2000A的分散颗粒。通常微乳状液包括直径小于 约1500的液滴或颗粒；特别是小于100nm，通常大于10nm，且超过 24小时保持稳定。在上述英国专利文献2222770中可以发现它的其它特 性，其说明书在此作为参考。

亲油相可以包括5-85％重量份的载体介质，如10-85％；优选 15-70％重量份，更好的优选20-60％重量份，最佳优选约25％重 量份。

表面活性剂可以包括5-80％重量份载体介质；优选10-70％重 量份，更好的优选20-60％重量份，最佳优选约40％重量份。

亲水相可以包括5-50％重量份载体介质，如10-50％；优选15 -40％重量份，较好优选20-35％重量份。

组合物中可以含有的活性剂的重量最高可达约20％重量份。组合物 中可含的活性剂的量优选1-15％重量份，例如约2-10％。

难溶性的活性剂优选亲油药物，如环孢菌素或大环内酯。这里所用 术语“难溶”一词是指20℃时在水中的溶解度小于0.01％重量/体积。

本发明所使用的环孢菌素是指本领域中已知并记载的任何具有药物 效用的这类物质，如作为免疫抑制剂，抗寄生虫剂和多种药物耐受性的 恢复剂，特别是环孢菌素A(也是已知且以下称为环孢素)，环孢菌素 G，[O-(2-羟乙基)-(D)丝氨酸]8-环孢菌素A，和[3′-脱羟 -3′-酮-MeBmt]1-[缬氨酸]2-环孢菌素A。优选环孢菌素A。

本文所用术语“大环内酯”一词是指大环的内酯，例如含有12个或 更大内酯环的化合物。其中尤其有意义的是“内酰胺大环内酯”，即， 除内酯(酯)键外在大环中还有内酰胺(酰胺)键的大环化合物，例如 由链霉菌属的微生物如雷帕霉素、子囊霉素、和FK-506而得到的内酰 胺大环内酯，以及它们的许多衍生物和类似物。已知这些内酰胺大环内 酯具有有意义的药物特性，特别是免疫抑制特性和抗炎性。

雷帕霉素是一种由链霉菌属吸水菌素制成的免疫抑制性内酰胺大环 内酯。雷帕霉素的结构在Kesseler，H.，等人；1993；Helv.Chim.Acta； 76：117中有记载。此结构由式A表示：

参见如McAlpine，J.B.，et al.，J.Antibiotics(1991)44：688； Schreiber，S.L.，et al.，J.Am.Chem.Soc.(1991)113：7433；美国专 利号No.3929992。(雷帕霉素有各种号码表。为了避免混淆，当此处对 特殊的雷帕霉素衍生物命名时，根据使用式A的号码表的雷帕霉素给予 命名。)雷帕霉素是一种极有潜力的免疫抑制剂，并已知具有抗肿瘤和 抗真菌活性。但是，它作为药物的效用因其很低且可变的生物利用率以 及毒性大而受到限制。而且，雷帕霉素极不易溶解，这就使得它难以形 成稳定的草本制剂组合物。已知雷帕霉素的许多衍生物。在WO 94/02136 中公开了某种16-氧-取代的雷帕霉素，其内容在此引作参考。在US 5258389和WO 94/09010(氧-芳基和氧-烷基雷帕霉素)中记载了40 -氧-取代的雷帕霉素；WO 92/05179(羧酸酯)，US 5118677(酰胺 酯)，US 5118678(氨基甲酸酯)，US 5100883(氟化酯)，US 5151413 (乙缩醛)，US 5120842(甲硅烷基醚)，WO 93/11130(亚甲基雷帕 霉素及衍生物)，WO 94/02136(甲氧基衍生物)，WO 94/02385和 WO 95/14023(链烯基衍生物)所有这些在此均引作参考。US 5256790 中记载了32-氧-二氢或取代的雷帕霉素，在此作为参考。

将雷帕霉素及其结构上相似的类似物和衍生物一起称为“雷帕霉素 类”。

子囊霉素类，其中最为熟知的FK-506和子囊霉素，包括另一类内 酰胺大环内酯，其中许多具有有力的免疫抑制和抗菌活性。FK506是一 种由链霉菌属(Streptomyces tsukubaensis)No 9993制成的内酰胺大环 内酯免疫抑制剂。FK 506的结构在Merck索引，11th ed.(1898)的附 录的A5条目中有记载。美国专利3,244,592中记载了子囊霉素。已经合 成了许多子囊霉素和FK-506的衍生物，包括卤代衍生物如欧洲专利 427680所述的33-表氯-33-脱氧-子囊霉素。将子囊霉素、FK- 506及其结构上相似的类似物和衍生物一同称作“子囊霉素类”。

因此，大环内酯可以是雷帕霉素或氧-取代的衍生物，其中雷帕霉 素的环己基环上的羟基基团被-OR1取代，其中R1为羟烷基、氢化烷氧 基烷基、酰氨基烷基和氨基烷基；例如40-氧-(2-羟)乙基-雷帕 霉素，40-氧-(3-羟)丙基-雷帕霉素、40-氧-〔2-(2- 羟)乙氧〕乙基-雷帕霉素和40-氧-(2-乙酰氨基乙基)-雷帕霉 素。

优选的化合物是WO 94/09010中公开的40-氧-(2-羟)乙基雷 帕霉素。

FK 506类化合物的实例为上述的那些。它们包括如FK 506、子囊霉 素和其它天然存在的化合物。它们还包括合成的类似物。

欧洲专利427680公开了FK-506类的优选化合物，如实施例66a 也称为33-表氯-33-脱氧-子囊霉素。欧洲专利465426和欧洲专利 569337中公开了其它优选的化合物，例如，欧洲专利569337中实施例 71的化合物。

亲水相组分包括二甲基异山梨醇和/或低级烷基链烷酯。该术语低级 烷基包括C1-C4，例如乙基。该术语链烷酯包括乙酸酯和丙酸酯。优 选乙酸乙基酯。室温下乙酸乙基酯在水中的溶解度为8.5g/100ml。优选 在室温下在水中的溶解度约为1-约30/100ml的低级烷基链烷酯。

亲水相也可包括共同组分，它可以选自于Transcutol(其分子式为 C2H5-[O-(CH2)2]2-OH)、Glycofurol(也叫做四氢糠醇聚乙二醇 醚)和1，2-丙二醇。亲水相也可进一步包括亲水共同组分，例如低级 链烷醇如乙醇。这些共同组分通常以部分取代亲水相的其它组分的形式 出现。由于组合物中乙醇的使用并不是必不可少的，现已发现当将组合 物制成软胶囊的形式时具有特别的优势。这是因为改进了贮存性能。尤 其是减少了包胶过程后活性剂沉淀的弊端。因此通过将乙醇或某些其它 这种共同组分用作亲水相的附加成分可以延长贮存期限稳定性。亲水相 中可包括0-60％重量份的乙醇；优选20-约55％重量份，更好的优 选约40-50％重量份。亲水相中也可包含少量的液体聚乙二醇。

二甲基异山梨醇也叫做3，6-二脱水-2，5-二-氧-甲基-D- 葡糖醇。它可以从ICI Americas Inc.公司以Arlasolve DMI商标名得 到。它具有下列理化特性：

沸点            约234℃

25℃时的密度      1.164

折光率            1.467

25℃时的粘度    约5mPa.s

介电常数        约7

英国专利2222770A公开了各种适用于本发明的亲油相组分。优选的 亲油相组分为中链脂肪酸甘油三酯，混合的单酸甘油酯、甘油二酯、甘 油三酯和酯基转移乙氧基植物油。

适合的中链脂肪酸甘油三酯是那些已知并能以商品名Captex、 Myritol、Capmul、Captex Neobee和Mazol可买到的；最优选的为 Miglyol 812。Miglyol 812为分馏的椰子油，它是由辛癸酸甘油三酯组 成。分子量约为520道尔顿。脂肪酸组成为C6最大量约3％、C8约50-65 ％、C10约30-45％；C12最大为5％；酸价约0.1；皂化值约330- 345；碘价最大为1。Miglyol 812从Hüls公司可得到。

这些甘油三酯在Fiedler，H.P.“Lexikon der Hilfsstoffe  für Pharmazie，Kosmetik and angrenzende  Gebiete”，Editio Cantor，D -7960 Aulendorf、第三次修订版(1989)中有记载，其内容在此引作 参考。

混合的单酸甘油酯、甘油二酯、甘油三酯优选由C12-20脂肪酸单酸 甘油酯、甘油二酯和甘油三酯组成的混合物，特别是混合的C16-18脂肪 酸单酸甘油酯、甘油二酯和甘油三酯。混合单酸甘油酯、甘油二酯、甘 油三酯的脂肪酸组分可以包括饱和的和不饱和的两种脂肪酸残基。但是 优选地它们主要是由不饱和脂肪酸残基组成；尤其是C18不饱和脂肪酸残 基。合适的是混合的单酸甘油酯、甘油二酯、甘油三酯，包括至少60％ 重量份，优选至少75％重量份，更好优选85％重量份的C18不饱和脂肪 酸(例如亚麻酸、亚油酸和油酸)单酸甘油酯、甘油二酯和甘油三酯。 混合单酸甘油酯、甘油二酯、甘油三酯包含少于20％重量份，例如约15 ％重量份或10％或更少的饱和脂肪酸(如棕榈酸和硬脂酸)单酸甘油酯、 甘油二酯和甘油三酯较合适。

混合的单酸甘油酯、甘油二酯、甘油三酯优选主要由单酸甘油酯和 甘油二酯组成；例如亲油相的总重量中包含至少50％，优选至少70％ 的单酸甘油酯和甘油二酯。更为优选地，亲油相中至少包含75％(如约 80％或85％)重量份的单酸甘油酯和甘油二酯。

优选地，在亲油相混合单酸甘油酯、甘油二酯、甘油三酯的总重量 中包含约25-约50％单酸甘油酯，更优选为含有约30-约40％(如 35-40％)单酸甘油酯。

在亲油相混合单酸甘油酯、甘油二酯、甘油三酯的总重量中，优选 含约30-约60％甘油二酯。更好的优选为含有约40-约55％(如48 -50％)甘油二酯。

在亲油相混合单酸甘油酯、甘油二酯、甘油三酯的总重量中，优选 至少含有5％但少于约25％的甘油三酯。更好的优选是含有约7.5-约 15％(如约9-12％)甘油三酯。

将单个的单酸甘油酯、甘油二酯或甘油三酯以适当的相对比例混合 可以制备混合单酸甘油酯、甘油二酯、甘油三酯。但是它们通常含有植 物油的酯基转移产物，例如杏仁油、花生油、橄榄油、桃子油、棕榈油， 或者优选玉米油、葵花油或红花油，最佳优选玉米油、甘油。

这些酯基转移产物通常可按GB 2257359和/或WO 94/09211所述得 到，其内容在此引作参考。

当制成软胶囊时，首先优选去除部分甘油以得到“实际上不含甘油 的一批产品”。

精制的玉米油和甘油的酯基转移产物提供了尤为适合的混合单酸甘 油酯、甘油二酯和甘油三酯，以下称为“精制油”并根据GB 2257359和 /或WO 94/09211的说明书制备。

亲油相也可包括例如药学上可接受的油，优选含有不饱和组分如植 物油或鱼油。

亲油相也可包括适合的酯基转移乙氧基植物油，例如通过将各种天 然植物油(如，玉米油、核油、杏仁油、花生油、橄榄渍、豆油、葵花 油、红花油和棕榈油，或其混合物)与聚乙二醇在有催化剂存在时反应 可得到那些亲油相，它们的平均分子量为200-800。这些过程是已知 的，且在美国专利3288824中记载了一个实施例。特别优选酯基转移乙 氧基玉米油。

酯基转移乙氧基植物油是已知的，且能以商品名LABRAFIL(H. Fielder，loc cit，vol 2，page 707)得到。例如LABRAFIL M 2125 CS(从 玉米油中获得，酸价约少于2，皂化值为155-175，亲水-亲油平衡 值为3-4，碘价为90-110)，和LABRAFIL M1944 CS(从核油中 获得，酸价约为2，皂化值为145-175，碘价为60-90)。也可以 使用LABRAFIL M 2130 CS(它是C12-18甘油和聚乙二醇的酯基转移产 品，其熔点约为35-40℃，酸价约少于2，皂化值为185-200，碘 价约少于3)。优选的酯基转移乙氧基植物油为可以从Gattefossé，Saint- Priest Cedex，France得到的LABRAFIL M 2125 CS。

用于本发明的表面活性剂的合适的实例为：

i)天然的或氢化的蓖麻油与环氧乙烷的反应产物。天然的或氢化的 蓖麻油可以按约1∶35-约1∶60的摩尔比与环氧乙烷反应，并从产物中 选择性地去除聚乙二醇组分。可以买到各种这些表面活性剂。特别适合 的是以商品名CREMOPHOR得到的聚乙二醇-氢化蓖麻油。尤为适合的 是CREMOPHOR RH40，其中皂化值约为50-60，酸价约少于1，水 含量(Fischer)约少于2％，nD60约为1.453-1.457，亲水-亲油平 衡值约14-16；和CREMOPHOR RH60，其中皂化值约为40-50， 酸价约少于1，碘价约少于1，水含量(Fischer)约4.5-5.5％， nD25约1.453-1.457，亲水-亲油平衡值约15-17。此类产物特别优 选CREMOPHOR RH40。又如以商品名称CREMOPHOR  EL得到的 聚乙二醇蓖麻油也是适合的，它的分子量(用蒸汽渗透压力计)约1630， 皂化值约65-70，酸价约2，碘价约28-32，nD25约1.471。

能够使用的类似或相同产品以商标名NIKKOL(如NIKKOL HCO -40和HCO-60)、MAPEG(如MAPEG CO-40h)、INCROCAS (如INCROCAS 40)和TAGAT(例如聚氧乙烯甘油脂肪酸酯如， TAGAT RH 40；和TAGAT TO，亲水-亲油平衡值为11.3的聚氧乙 烯甘油三油酸酯；优选TAGAT TO)得到。这些表面活性剂在Fielder loc cit.中有进一步描述。

ii)聚氧乙烯-脱水山梨糖醇-脂肪酸酯，例如类型已知并以商品 名TWEEN(Fielder loc cit.p.1300-1304)可得到的单和三月桂基、 棕榈基、硬脂酰基和油烯基酯，包括产品TWEEN

20[聚氧乙烯(20)脱水山梨糖醇单月桂酸酯]，

21[聚氧乙烯(4)脱水山梨糖醇单月桂酸酯]，

40[聚氧乙烯(20)脱水山梨糖醇单棕榈酸酯]，

60[聚氧乙烯(20)脱水山梨糖醇一硬脂酸酯]，

65[聚氧乙烯(20)脱水山梨糖醇三硬脂酸酯]，

80[聚氧乙烯(20)脱水山梨糖醇一油酸酯]，

81[聚氧乙烯(5)脱水山梨糖醇一油酸酯]，

85[聚氧乙烯(20)脱水山梨糖醇三油酸酯]。

此类产品特别优选TWEEN 40和TWEEN 80。

iii)聚氧乙烯脂肪酸酯，例如类型已知并以商品名MYRJ(Fielder loc.cit.，2，p.834-835)中可以买到的聚氧乙烯硬脂酸酯。这类产品特 别优选MYRJ 52，它的D25约1.1，熔点约40-44℃，亲水-亲油平 衡值约16.9，酸值约0-1以及皂化值约25-35。

iv)聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物和嵌段共聚物，其类型已知且以商 品名PLURONIC、EMKALYX和POLOXAMER(Fielder loc.cit.，2，p. 959)可以买到。此类产品特别优选PLURONIC F68，其熔点约52℃， 分子量约6800-8975。此类产品的进一步优选是POLOXAMER 188。

v)二辛基磺基琥珀酸酯或二-〔2-乙基庚基〕-琥珀酸酯 (Fielder 10c.cit.，1，p.107-108)。

vi)磷脂，特别是卵磷脂(Fielder loc.cit.，2，p.943-944)。合 适的卵磷脂包括大豆卵磷脂。

vii)丙二醇单或二脂肪酸酯，如丙二醇二辛酸酯(也是已知的并以 商品名MIGLYOL 840可买到)，丙二醇二月桂酸酯，丙二醇羟基硬脂酸 酯，丙二醇异硬脂酸酯，丙二醇月桂酸酯，丙二醇蓖麻醇酸酯，丙二醇 硬脂酸酯等等(Fielder loc.cit.，2，p.808-809)。

所选择的表面活性剂优选亲水-亲油平衡值至少为10者，例如 Cremophor。

亲水相组分、亲油相和表面活性剂的相对比例优选在标准三维图中 的“微乳状液”范围内。如此得到的组合物为稳定性强的微乳状液预浓 缩物，当加入水时能得到平均颗粒大小小于1,500A(150nm)的微乳状 液。

微乳状液预浓缩组合物，例如以下实施例中的组合物，通过标准的 稳定性试验表现出好的稳定性，如贮存期限稳定性达到一、二或三年， 甚至更长。本发明的微乳状液预浓缩组合物能制成稳定的微乳状液，例 如达1天或更长。

本药物组合物还进一步包括添加剂或配合剂，例如抗氧化剂(如抗 坏血酸棕榈酸酯、丁基羟基苯甲醚(BHA)，丁基羟基甲苯(BHT) 和维生素E)和/或防腐剂。这些添加剂或配合剂可约占组合物总重量的 约0.05-1％重量份。本药物组合物也可包括甜味剂或调味剂，其数量 约占组合物总重量的2.5-5％重量分。抗氧化剂优选α-生育酚(维生 素E)。

当口服给药时本药物组合物显示出特别的优越性，例如在浓度和用 标准的生物利用率试验测得的高水平生物利用率方面，如高于乳状液 2-4倍。这些试验是在动物如大鼠或狗或者健康的志愿者中进行的，使 用高压液相层析或者特异性或非特异性的单克隆试剂盒测定药物的含 量，例如血液中的大环内酯。比如，给狗口服实施例1的组合物，使用 特异性单克隆抗体经酶联免疫吸附测定可以得到特别高的Cmax值。

而且极容易预计药物动力学参数例如吸收和血中的含量，也可以减 少或消除用药时不规则吸收中出现的问题。此外本药物组合物与表面活 性剂物质并存时也有效，例如与存在于胃肠道中的胆盐并存。也即是说： 本药物组合物在包含这些天然表面活性剂的含水系统中可完全分散，因 而在此部位能形成稳定的微乳状液系统，但不会出现活性剂沉淀或细颗 粒结构的其它破坏。经口服的本药物组合物的作用实际上是保持独立 的，而且/或者在任何特殊情况下或对于任何使用的个体都不会因胆盐的 相对存在或缺少而被破坏。

本发明的组合物可减少病人间和病人体内剂量反应的可变性。

本发明另一方面还提供了上述药物组合物的制备过程，此过程包括 将(1)亲水相；(2)亲油相；和(3)表面活性剂制成紧密混合物， 并加入活性剂，如环孢菌素或大环内酯类化合物。当需要时，此组合物 也可制成单位剂量型化合物，例如将此组合物充填成胶囊。

可以将另外任选的组分或添加剂，特别是亲水相共同组分如乙醇， 与组分(1)、(2)和(3)混合或者在活性剂加入时或加入后与组 分(1)、(2)和(3)混合。

本组合物可以与水或含水溶剂介质结合从而得到微乳状液。

本申请也包含微乳状液预浓缩组合物，它不含精制鱼油和/或乙醇和 /或酯基转移乙氧基植物油。

本申请人发现大环内酯贮存时不稳定，例如40-氧-(2-羟)乙 基雷帕霉素，并且会产生各种不同的降解反应。例如，贮存几天后，使 用高压液相层析，可以测出一种或更多降解产物。虽然还不清楚降解途 径，但本申请人认为可能会出现大环内酯的内酯环断裂。

本申请人认为40-氧-(2-羟)乙基雷帕霉素-2，34-断酸是 40-氧-(2-羟)乙基雷帕霉素的主要降解产物。40-氧-(2- 羟)乙基雷帕霉素-2，34-断酸，以下叫做断酸，具有下列结构：

现已发现通过在酸环境中配制大环内酯可以得到含大环内酯的稳定 组合物。室温下(25℃)几天或几星期后如果药用物质大环内酯实际上 仍保持完整，则本文中认为组合物是稳定的。

另一方面，本发明提供了包含大环内酯和一种酸的药物组合物。

大环内酯一词的含义如上所述。

优选的大环内酯至少含有下述的一个基团。

例子为上面所述的那些，优选雷帕霉素或40-氧-(2-羟)乙基 雷帕霉素。

酸可以是脂溶性的和/或溶于乙醇的。例如酸可为脂肪酸，如油酸。 此酸可以是羧酸，如一元羧酸、二羧酸或三羧酸，优选一元羧酸或二羧 酸。这种酸可包括一个或更多亲水基，如羟基，优选一个或两个亲水基。 用于本发明的较合适的酸包括丙二酸、富马酸、马来酸、D-苹果酸、 L-苹果酸、柠檬酸、抗坏血酸、琥珀酸、草酸、苯甲酸或乳酸或者含 相似pKa的酸，如2-7。优选的酸包括丙二酸、草酸、柠檬酸和乳酸。 更好的优选为丙二酸。

酸的优选量可以由常规实验术决定。本发明中组合物的大环丙酯与 酸的重量比可约为20∶1，例如1∶5-5∶1，如1∶1。可以包含的酸的 数量为组合物的0.05％-5％重量份。

大环内酯可以占组合物重量的1-15％重量份。

药物组合物的类型并不是关键。它可以为固体，但优选液体。例如， 大环内酯可以配制成如上所述的微乳状液预浓缩物或乳状液浓缩物，并 与一定数量的酸结合。此酸稳定的组合物可以肠内给药，如口服，比如 作为胶囊或口服液，或胃肠外给药，如作为输注浓缩物。优选口服给药。

另一方面，本发明提供了用一种酸来稳定药物组合物中的大环内酯 的用途。

另一方面，本发明提供了一种稳定药物组合物中大环内酯的方法， 此方法包括将酸与大环内酯混合。

因此本发明得到了稳定的大环内酯组合物制剂。可以得到在病人之 间和病人体内的剂量反应方面的好的药物生物利用率和可变性减小。

在标准的临床实验中用产生相同的活性剂血含量的已知的活性剂指 示剂量，以及在标准的动物模型中可以观察到本发明的所有药物组合物 的效用；例如对于一个75kg的哺乳动物如成人每天使用2.5mg-1000mg 剂量的活性剂。在上述的标准动物实验和临床试验中可以观察到由组合 物带来的活性剂的生物利用率增加。

由于个体对活性剂的反应和大环内酯化合物如雷帕霉素的代谢可以 不同，因此对于特殊病人必须认真考虑活性剂给予的最适宜用量。用放 免测定、单克隆抗体测定或其它合适方便的方式检验活性剂的血清含量 是可取的。大环内酯的用量通常为1-1000mg/天，如对于75kg的成人 每天2.5mg-1000mg，优选25mg-500mg，最佳剂量约为50-100mg/ 天。每天给药约75mg可得到满意的效果，例如以两个胶囊的形式，一个 含50mg，另一个含25mg；或者三个胶囊每个含25mg。环孢菌素的用 量可为25-1000mg/天(优选50mg-500mg)，FK 506的用量可为 2.5mg-1000mg/天(优选10mg-250mg)。服用40-氧-(2-羟) 乙基雷帕霉素的指示量为日用量0.5-5mg/kg体重/天。

本药物组合物优选单位剂型的化合物，例如将组合物充填在口服胶 囊壳中。这种胶囊壳可以是软的或硬的胶囊壳。如果药物组合物是以单 位剂型的形式。则每单位剂量以包含10-100mg活性剂为宜，较好优选 10-50mg；如15、20、25或50mg。根据治疗的特殊目的、治疗的 时期等，这种单位剂型以每天服药1-5次为宜。

但是，若需要，本药物组合物可以以口服液的形式且可包括水或任 何其它的含水系统，以便提供适合于饮用的微乳状液系统。

本药物组合物特别适用于预防和治疗EP 427680中第40和41页， 以及PCT/EO93/02604中第5和6页所公开的，这些申请的内容在此引作 参考。

本药物组合物尤其用于：

a)预防和治疗器官或组织移植排斥，例如治疗心、肺、心-肺合并、 肝、肾、胰、皮肤或角膜移植的受体。本药物组合物也适用于预防移植 物抗宿主疾病、如骨髓移植后有时出现的疾病；

b)预防和治疗自身免疫病或炎性疾病，特别是其病原学包含自身免疫 成分的炎性疾病比如关节炎(如类风湿关节炎、慢性进育蚜性关节炎和 变形性关节炎)以及类风湿性疾病；和

c)多药耐药性的治疗。

大环内酯活性剂也具有抗肿瘤和抗真菌的活性，因此本药物组合物 可用作抗肿瘤和抗真菌剂。

以上所有参考资料所提及的内容特别是举例说明的化合物在此引作 参考，且每个举例说明的化合物可以用作下列实施例中的大环内酯。 实施例：

以下是以实施例的方式仅对本发明组合物的说明。除非另有指示， 组分是以占每个组合物的重量百分比表示。 实施例1-20

下面是以实施例的方式仅对本发明的微乳状液预浓缩组合物的说 明，其中亲水相包括二甲基异山梨醇或乙酸乙基酯。

实施例1和2举例说明单位剂型的组合物适用于例如预防移植排斥 或治疗自身免疫病，按1-5单位剂量/天给药。这些实施例特别对环孢菌 素A作了说明，但使用任何大环内酯或其它活性剂可以得到相同的组合 物。 实施例1

口服单位剂型的制备

组分                              含量(mg/胶囊)

环孢菌素，如环孢菌素A             100

1)二甲基异山梨醇                  100-200，如150

2)精制玉米油或Labrafil M2125 CS   100-500，如320

3) Cremphor RH 40                 100-500，如380

4)乙醇                            10-100，如50

                                  总量1,000(从各范围中选择

                                  合适的数量)

一次共制成1000个胶囊。

将环孢菌素溶解在(1)中于室温下搅拌，再将(2)和(3)加 入所得的溶液中并搅拌。将0.5ml的所得混合物装入大小为1的硬胶囊 中并密封，例如使用Quali-密封技术或者装在软胶囊中。

使用下面所示的成分按所示用量类似地制备含50和100mg环孢菌 素A的组合物。

在此实施例中，精制油是指“精制甘油-酯基转移玉米油”，正如 GB 2257359和WO 94/09211所述，实际上不含甘油。 实施例2

口服液的制备

以实施例1中相似的方法制得5升量的组合物，如果需要可另外用 等量的二甲基异山梨醇代替乙醇。 实施例3-19

制备环孢菌素A组合物用作亲油相；

实施例3-9中的Miglyol 812(来自Hüls公司)；

实施例10-17中的玉米油甘油酯(精制的玉米油单酸甘油酯、甘 油二酯和甘油三酯)；和

实施例18和19中的Labrafil 2125 CS(来自Gattefossé公司)。

下面实施例中二甲基异山梨醇缩写为DMI。

通过将组分相互混合制成载体介质。然后经搅拌将环孢菌素A溶解 在载体介质中。

图l-5代表每种亲水组分、亲油组分和表面活性剂组分的相应浓 度的三维图。DMI的相应浓度从图的右边缘的0％增至如箭头所指的较 低的左边角的100％。图1-5中的表面活性剂缩写为S的相应浓度从 图的基线增至箭头所指的顶点处的100％。亲油相的相应浓度从图的左 边缘的0％增至箭头所指的右边较低角处的100％。图内部的线代表10 ％的增量，从每一边缘0％一直到各自相对顶点的100％。

因此仅包括50％亲油相和50％DMI的假设组合物标在图的基线的 中点处。

对于本发明的优选组合物，主要的载体介质组分的相应比例，在图1 中为分别被线A和B划定的区域a和b；在图2中为分别被线C、D′ 和D″划定的区域c、d′和d″；在图3中为被线E划定的区域e；在图4 中为被线F划定的区域f；在图5中为被线G划定的区域g。

在图1和2中，Miglyol 812缩写为M。在图3和4中玉米油甘油 酯缩写为CG。在图5中，Labrafil 2125 CS缩写为L。

通过光子相关光谱学比如使用Malvern仪器中的Malvern Zetasizer No.3，在1ml水与60μl组合物并存的稀释液中于20℃进行颗粒大小测 量。 实施例3-9

下面的环孢菌素A组合物是用Miglyol 812制成的。乙醇占实施例3 和4的组合物重量的10％。     实施例     3     4  Cremophor RH 40     48     40  Miglyol 812     24     32  DMI     8     8  无水乙醇     10     10  环孢菌素A     10     10

组合物3和4均为透明，没有出现液相分离。当用水以1∶1和1∶10 体积稀释时，实施例3的组合物仍保持透明。当用水以1∶1和1∶10(1 份组合物，10份体积的水)稀释时实施例4的组合物呈乳色。图1表示 组合物3(a区)和4(b区)的三向标绘图。  实施例     5     6     7     8     9  Cremophor RH 40     36     36     45     54     54  Miglyol 812     27     18     18     18     9  DMI     27     36     27     18     27  环孢菌素A     10     10     10     10     10

实施例5-9的组合物为透明，均没出现液相分离。当用水以1∶1 和1∶10稀释时，实施例5-9的组合物仍保持透明。图2代表每个组合 物5-9的三向标绘图(区域c、d′和d″)。 实施例10-17

实施例10-17的环孢菌素A组合物是用玉米油甘油酯制备的。乙 醇占实施例10和11的组合物重量的10％重量份。 实施例     10     11 Cremophor RH 40     40     32 玉米油甘油酯     32     40 DMI     8     8 无水乙醇     10     10 环孢菌素A     10     10

组合物10和11为透明的，没有出现液相分离。当用水以1∶1和1∶ 10体积稀释时(1份组合物，10份水)，实施例10和11的组合物保持 透明。图3代表组合物10和11的三向标绘图(e区)。  实施例     12     13     14     15     16     17  Cremophor RH 40     27     45     36     45     45     36  玉米油甘油酯     18     18     27     27     36     36  DMI     45     27     27     18     9     18  环孢菌素A     10     10     10     10     10     10

组合物12-17均为透明，没有出现液相分离。当用水以1∶10体积 稀释(1份组合物，10份水)时，实施例12-17的组合物保持透明。 当用水以1∶1比例稀释时，实施例12、13、14、15和17的组合物仍 为透明，实施例16的组合物呈现乳色。

图4代表组合物12-17的三向标绘图(f区)。 实施例18和19

实施例18和19的环孢菌素A组合物是使用Labrafil 2125 CS作为 亲油相制备的。  实施例     18     19  Cremophor RH 40     27     45  Labrafil 2125 CS     18     18  DMI     45     27  环孢菌素A     10     10

组合物18或19为透明的，没有出现液相分离。当用水以1∶1和1∶ 10稀释时(1份组合物，10份体积的水)，实施例19的组合物保持透 明。当用水以1∶1和1∶10比例稀释时，组合物18呈现乳色。图5代表 组合物19的三向标绘图(g区)。

对组合物3-19进行了粒子大小分布测定。所有组合物中最大的粒 子大小为70nm以下。Z均平均粒子大小为22.0-32.6nm。多分散指数 为0.076-1.164。 实施例20-24

微乳状液预浓缩物是使用乙酸乙基酯作为亲水相制备的。用水以1∶ 1和以1份组合物∶10份水稀释这些组合物得到微乳状液。  实施例     20     21     22     23     24  Cremophor RH 40     40     45     45     54     48  玉米油甘油酯     24     27  Labrfil M2125 CS     27  Miglyol 812     18     24  乙基乙酯     16     18     18     18     8  乙醇     10     10  环孢菌素A     10     10     10     10     10  用水稀释剂  1∶1    透明    透明    透明    透明    透明  1∶10    透明    透明    透明    透明    透明  液滴大小  Z均平均粒子大小  多分散指数   26.9nm    0.08   23.7nm    0.089    29.3nm    0.110     27.1     0.152     33.2     0.111

稀释后用目测检查，可见组合物20-24每个均形成透明且稳定的 微乳状液。 贮存

未稀释的实施例1-24的组合物保持稳定即室温下至少一个月不出 现沉淀或结晶。未稀释组合物在室温下贮存两个月后，实施例5、6、7、 12和18的组合物保持透明。 实施例25-27

制备微乳状液预浓缩物并在室温贮存12个月。 实施例25            重量百分数 Cremophor RH 40       24 玉米油甘油酯          48 DMI                   8 无水乙醇              10 环孢菌素A             10

贮存12个月后未出现沉淀或结晶。 实施例26           重量百分数 Cremophor RH 40       27 玉米油甘油酯          54 DMI                   9 环孢菌素A             10

贮存12个月后没发现沉淀或结晶。 实施例27           重量百分数 Cremophor RH 40       27 玉米油甘油酯          45 DMI                   18 环孢菌素A             10

贮存12个月后未出现沉淀或结晶。

实施例1-27所述的任何组合物中的环孢菌素A可以用另一种环孢 菌素，或用大环内酯代替，例如雷帕霉素、42-氧-(2-羟)乙基雷 帕霉素、33-表氯-33-脱氧-子囊霉素或者EP 569337中实施例71 的化合物。 实施例28-32

下面仅对被酸稳定的大环内酯组合物以实施例的方式加以说明。 实施例28

将FK 506类或雷帕霉素类的一种活性剂如40-氧-(2-羟)乙 基雷帕霉素配制成微乳状液预浓缩物，它具有下列成分：2％重量比的 活性化合物，2％重量比的丙二酸、乳酸或富马酸，44％重量比的 Cremophor RH 44，26.4％重量比的玉米油单酸甘油酯、甘油二酯、甘 油三酯，17.6％重量比的1，2丙二醇和10％重量比的乙醇。

3个月后的稳定性实验表明丙二酸组分含98％的活性剂，而不含丙 二酸的组合物仅含73％的活性成份。 实施例29和30

在实施例29a和29b中用40-氧-(2-羟)乙基雷帕霉素作为活 性剂，在实施例30a和30b中用雷帕霉素作为活性剂制备微乳状液预浓 缩物。在实施例29中，活性剂40-氧-(2-羟)乙基雷帕霉素缩写 为“活性剂R”。

用高压液相层析测定完整的药物含量和主要的降解产物，分析误差 为+/-2％。 组合物   实施例29a    活性剂R   实施例29b    活性剂R    丙二酸    实施例30a    雷帕霉素   实施例30b   雷帕霉素    丙二酸 Cremophor RH 40     44.0％     43.0％     41.5％     40.5％ 玉米油甘油酯     26.3％     25.7％     24.8％     24.2％ 丙二醇     17.6％     17.2％     16.6％     16.2％ 无水乙醇     10.0％     100％     15.0％     15.0％ DL-α-生育酚     0.1％     0.1％     0.1％     0.1％ 活性剂R     2.0％     2.0％      -      - 雷帕霉素      -      -     2.0％     2.0％ 丙二酸      -     2.0％      -     2.0％ 表示为百分数的完整的药物含量和主要降解产物(断酸)(外标准化的 高压液相层析测定) 25℃4周     86.0％     (16.1％)     99.5％     (0.5％)     83.5％     (15.4％)     98.4％     (0.7％)

主要降解产物的量如括弧内所示。雷帕霉素的主要降解产物为断雷 帕霉素。

上面的实施例证明当40-氧-(2-羟)乙基雷帕霉素或雷帕霉素 降解时，丙二酸具有显著的稳定作用。 实施例31

将丙二酸以0.05％-5％重量份的浓度与实施例29a的组合物相混 合。当丙二酸的浓度范围为占组合物0.25-0.75％重量份时出现很好的 稳定效果。 实施例32

用下列成分制备输注浓缩物：

40-氧-(2-羟)乙基雷帕霉素     20mg/m1

Cremophor EL                600mg/ml

柠檬酸                       10mg/ml

乙醇                           至1ml

在25℃贮存4周后，测得99.6％活性成分。这表明柠檬酸对40- 氧-(2-羟)乙基雷帕霉素具有稳定作用。

在上面实施例28-32中，活性剂可以用33-表氯-33-脱氧- 子囊霉素或EP 569 337中实施例71的化合物代替。