用于C3抑制的组合疗法
阅读：625发布：2021-08-24
专利汇可以提供用于C3抑制的组合疗法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且在一些方面，本 发明 提供包含坎普他汀类似物的某些组合疗法。，下面是用于C3抑制的组合疗法专利的具体信息内容。
1.一种抑制受试者中的补体活化的方法，其包括向所述受试者施用以下一种或两种：
(a)抑制C3表达的抑制性核酸试剂(INAA)；和
(b)包含清除率降低部分(CRM)和至少一个坎普他汀类似物部分的坎普他汀类似物，
使得所述受试者暴露于这二者，
其中所述INAA和所述坎普他汀类似物各自根据给药方案按至少2天的给药间隔施用。
2.一种抑制受试者中的补体活化的方法，其包括向所述受试者施用(a)抑制C3表达的
抑制性核酸试剂(INAA)；和(b)包含清除率降低部分(CRM)和至少一个坎普他汀类似物部分的坎普他汀类似物，其中如使用旁路途径分析、经典途径分析或二者所测定的，所述INAA按有效抑制血清补体活性平均不超过95％，任选地介于50％与95％之间的量施用。
3.一种抑制受试者中的补体活化的方法，其包括向所述受试者施用(a)抑制C3表达的
抑制性核酸试剂(INAA)；和(b)包含清除率降低部分(CRM)和至少一个坎普他汀类似物部分的坎普他汀类似物，其中如使用旁路途径分析、经典途径分析或二者所测定的，所述坎普他汀类似物按有效抑制血清补体活性平均不超过95％，任选地介于50％与95％之间的量施用。
4.一种抑制受试者中的补体活化的方法，其包括向所述受试者施用(a)抑制C3表达的
抑制性核酸试剂(INAA)；和(b)包含清除率降低部分(CRM)和至少一个坎普他汀类似物部分的坎普他汀类似物，其中所述坎普他汀类似物按平均小于约300mg/天的量施用。
5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述坎普他汀类似物包含具有至少两
个与其连接的坎普他汀类似物部分的清除率降低部分(CRM)。
6.一种抑制受试者中的补体活化的方法，其包括向所述受试者施用(a)抑制C3表达的
抑制性核酸试剂(INAA)；和(b)坎普他汀类似物，其包含具有至少两个与其连接的坎普他汀类似物部分的清除率降低部分(CRM)，任选地其中：(i)如使用旁路途径分析、经典途径分析或二者所测定的，所述坎普他汀类似物按有效抑制血清补体活性平均不超过90％的量施用；(ii)如使用旁路途径分析、经典途径分析或二者所测定的，所述INAA按有效抑制血清补体活性平均不超过90％的量施用；(iii)所述INAA和所述坎普他汀类似物均根据给药方案按至少2天的给药间隔施用；或(iv)(i)、(ii)和(iii)的任何组合。
7.一种治疗需要治疗补体介导的障碍的受试者的方法，其包括向所述受试者施用(a)
抑制C3表达的抑制性核酸试剂(INAA)；和(b)如前述权利要求中任一项中所述的坎普他汀类似物。
8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述坎普他汀类似物根据给药方案按
至少7天的给药间隔施用。
9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述INAA和所述坎普他汀类似物均根
据给药方案按至少7天的给药间隔施用。
10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述INAA和所述坎普他汀类似物均
根据给药方案按介于7天与31天之间的给药间隔施用。
11.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述坎普他汀类似物和所述INAA分
开施用，任选地根据不同的给药时间表施用。
12.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述坎普他汀类似物和所述INAA根
据相同的给药时间表分开施用。
13.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述坎普他汀类似物和所述INAA按
同一种组合物施用。
14.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述坎普他汀类似物在静脉内或皮
下施用于人类受试者时具有介于24小时与10天之间的半衰期。
15.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述INAA按有效降低C3的稳态血浆
水平50％与95％之间的量施用。
16.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中如使用经典途径溶血分析、旁路途径溶血分析或二者所测定的，所述INAA按有效抑制血浆或血浆补体活性50％与95％之间的量施用。
17.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中如使用旁路途径分析所测定的，所述INAA按有效抑制血浆补体活性50％与95％之间的量施用。
18.根据权利要求17所述的方法，其中所述旁路途径分析是基于溶血或酶联免疫吸附
分析(ELISA)。
19.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中如使用经典途径分析所测定的，所述INAA按有效抑制血浆补体活性50％与95％之间的量施用。
20.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中如使用经典途径溶血分析、旁路途径溶血分析或二者所测定的，所述INAA和所述坎普他汀类似物按有效抑制血浆补体活性大于
90％、大于95％或大于99％的量施用。
21.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中如使用经典途径分析所测定的，所述INAA和所述坎普他汀类似物按有效抑制血浆补体活性大于90％、大于95％或大于99％的量施用。
22.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中如使用旁路途径分析所测定的，所述INAA和所述坎普他汀类似物按有效抑制血浆补体活性大于90％、大于95％或大于99％的量施用。
23.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述INAA包含一条链，所述链包含与人类C3 RNA的至少6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、
27、28、29或30个连续核苷酸完全互补的区域。
24.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述INAA包含一条链，所述链包含与人类C3信使RNA(mRNA)的至少6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、
24、25、26、27、28、29或30个连续核苷酸完全互补的区域。
25.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述INAA包含双链核酸或其中所述
核酸包含单链核酸。
26.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述INAA包含RNAi试剂。
27.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述INAA包含双链短干扰RNA
(siRNA)。
28.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述INAA包含切丁酶底物siRNA。
29.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述INAA包含反义链，在所述反义链中，在2-7位处的核苷酸与人类C3 mRNA中的靶区域完全互补。
30.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述INAA包含与人类C3 mRNA的3'非
翻译区(UTR)中的靶区域互补的链。
31.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述INAA包含在与人类C3 mRNA杂交
时具有不超过5个错配的或不匹配的非突出端碱基的链。
32.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述INAA包含具有一个或两个3'突
出端的双链核酸，任选地其中每个突出端的长度独立地介于1个与4个碱基之间。
33.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述INAA包含双链核酸，所述双链核酸包含长度介于15个与30个碱基对之间，任选地长度为17-25、17-23、17-21、23-27、19-21、
21-23或23-25个碱基对的双链区域。
34.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述INAA在一个或多个位置包含修
饰，任选地其中所述修饰包括以下一种或多种：(a)一个或多个非磷酸二酯骨架键；和/或(b)一个或多个2'糖修饰，任选地选自下组：2'-甲氧基乙基、2'-O-烷基、2'-O-烯丙基、2'-C-烯丙基、2'-氟、2'-脱氧、2'-羟基以及其组合。
35.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述INAA在一个或多个位置包含修
饰，任选地其中所述修饰包括2'-O-甲基修饰、2'-氟修饰或二者。
36.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述INAA是双链并且在任一条链或
两条链上包括一个或多个修饰，任选地其中所述修饰呈交替模式。
37.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述INAA包含反义链，所述反义链包含至少一个无环或无碱基残基，任选地在7位。
38.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述INAA包含反义链，所述反义链包含至少一个解锁核酸，任选地在7位。
39.根据权利要求1至38中任一项所述的方法，其中所述INAA包含与人类C3 RNA中的靶
区域互补的单链反义寡核苷酸(ASO)。
40.根据权利要求39所述的方法，其中所述ASO促进核糖核酸酶H介导的C3 mRNA的降
解。
41.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述INAA与靶向部分物理缔合。
42.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述INAA与增强肝细胞对所述INAA
的摄取的靶向部分物理缔合，任选地其中所述靶向部分包含GalNac。
43.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述INAA与递送试剂物理缔合，任选地其中所述递送试剂包含脂质、颗粒或含脂质颗粒。
44.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述清除率降低部分(CRM)包含聚合
物。
45.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述CRM包含PEG。
46.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述CRM的平均分子量介于约10kD与
约50kD之间，例如介于约35kD与约45kD之间，例如约40kD。
47.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述坎普他汀类似物包含每个末端
连接有坎普他汀类似物部分的线性聚合物。
48.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中每个坎普他汀类似物部分包含环状
肽，所述环状肽包含如SEQ ID NO:3-36、37、37A、38A、39A、40A或41A中的任一个所示的氨基酸序列。
49.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中每个坎普他汀类似物部分包含环状
肽，所述环状肽包含如SEQ ID NO:28、32或34中的任一个所示的氨基酸序列。
50.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中每个坎普他汀类似物部分包含环状
肽，所述环状肽包含长度为11个氨基酸的环状部分，其中所述肽的序列与坎普他汀的序列(SEQ ID NO:8)或与具有比坎普他汀更高活性的坎普他汀类似物的序列至少50％相同。
51.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中每个坎普他汀类似物部分包含环状
肽，所述环状肽包含长度为11个氨基酸的环状部分，其中所述肽的序列与所述坎普他汀的序列(SEQ ID NO:8)或与具有比坎普他汀更高活性的坎普他汀类似物的序列至少50％相同，其中所述肽包含至少一个非标准氨基酸，任选地其中至少一个非标准氨基酸是单卤代或多卤代氨基酸、N-烷基氨基酸或芳族氨基酸。
52.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中每个坎普他汀类似物部分包含肽，所述肽包含相对于所述坎普他汀的序列具有1、2、3或4个取代的序列，其中所述肽通过在与坎普他汀的2位和12位对应的位置处的氨基酸之间的键环化，其中所述坎普他汀序列中的1、
2、3或4个氨基酸被非标准氨基酸替换，并且其中任选地至少一个非标准氨基酸是单卤代或多卤代氨基酸、N-烷基氨基酸或芳族氨基酸。
53.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述坎普他汀类似物包含一个或多
个坎普他汀类似物部分，所述坎普他汀类似物部分包含在与SEQ ID NO:8的4位对应的位置处具有1-甲基Trp的环状肽。
54.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述坎普他汀类似物包含一个或多
个坎普他汀类似物部分，所述坎普他汀类似物部分包含在与SEQ ID NO:8的8位对应的位置处具有N-甲基Gly的环状肽。
55.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述坎普他汀类似物包含连接至一
个或多个坎普他汀类似物部分的一个或多个清除率降低部分，其中：每个坎普他汀类似物部分包含具有如SEQ ID NO:3-36中的任一个所示的氨基酸序列的环状肽，所述环状肽在N末端、C末端或二者处通过一个或多个末端氨基酸延伸，其中一个或多个所述氨基酸具有包含伯胺或仲胺的侧链并且与所述环状肽被任选地包含寡(乙二醇)部分的刚性或柔性隔离物分开；并且每个清除率降低部分任选地包含聚乙二醇(PEG)，其中每个清除率降低部分通过连接部分共价连接至一个或多个坎普他汀类似物部分，并且其中所述连接部分包含不饱和烷基部分、包含非芳族环系的部分、芳族部分、醚部分、酰胺部分、酯部分、羰基部分、亚胺部分、硫醚部分和/或氨基酸残基。
56.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述坎普他汀类似物包含连接至两
个坎普他汀类似物部分的清除率降低部分并且其中：(a)每个坎普他汀类似物部分包含在N末端、C末端或二者处通过一个或多个氨基酸延伸的环状肽，其中所述一个或多个氨基酸与所述肽的所述环状部分被刚性或柔性隔离物分开，任选地其中所述隔离物包含寡(乙二醇)部分；并且(b)所述清除率降低部分包含线性聚合物，其中所述线性聚合物的每个末端通过包含羰基的接头部分连接至一个所述坎普他汀类似物部分。
57.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述坎普他汀类似物包含连接至两
个坎普他汀类似物部分的清除率降低部分并且其中：(a)每个坎普他汀类似物部分包含在N末端、C末端或二者处通过一个或多个氨基酸延伸的环状肽，其中所述一个或多个氨基酸与所述肽的所述环状部分被刚性或柔性隔离物分开，任选地其中所述隔离物包含寡(乙二醇)部分；并且(b)所述清除率降低部分包含线性聚合物，其中所述线性聚合物的每个末端通过氨基甲酸酯或酰胺连接至一个所述坎普他汀类似物部分。
58.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中每个坎普他汀类似物部分包含通过
氨基酸序列延伸的环状肽，所述氨基酸序列包含至少一个具有包含伯胺或仲胺的侧链的氨基酸，任选地其中所述至少一个具有包含伯胺或仲胺的侧链的氨基酸是在所述环状肽的C末端的赖氨酸。
59.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中每个坎普他汀类似物部分包含在N末
端、C末端或二者处通过一个或多个氨基酸延伸的环状肽，其中所述一个或多个氨基酸与所述肽的所述环状部分被包含寡(乙二醇)部分的刚性或柔性隔离物分开，其中所述寡(乙二醇)部分是(-(O-CH2-CH2-)n，其中n介于1与10之间。
60.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中每个坎普他汀类似物部分包含在N末
端、C末端或二者处通过一个或多个氨基酸延伸的环状肽，其中所述一个或多个氨基酸与所述肽的所述环状部分被包含共价连接的-(CH2)m-和-(O-CH2-CH2-)n的刚性或柔性隔离物分开，其中m介于1与10之间并且n介于1与10之间，寡(乙二醇)部分，任选地其中m是1并且n是2。
61.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中每个坎普他汀类似物部分包含在N末
端、C末端或二者处通过一个或多个氨基酸延伸的环状肽，其中所述一个或多个氨基酸与所述肽的所述环状部分被包含8-氨基-3,6-二氧杂辛酸(AEEAc)或11-氨基-3,6,9-三氧杂十一烷酸的刚性或柔性隔离物分开。
62.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述坎普他汀类似物包含CA28-2TS-
BF或CA28-2GS-BF。
63.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述坎普他汀类似物皮下或口服施
用。
64.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述坎普他汀类似物和所述INAA皮
下施用。
65.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述坎普他汀类似物、所述INAA或二者按不超过每天一次地施用。
66.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述坎普他汀类似物、所述INAA或二者各自按每剂量不超过1ml的体积皮下施用。
67.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述坎普他汀类似物、所述INAA或二者按每剂量不超过0.5ml的体积皮下施用。
68.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述坎普他汀类似物按每剂量介于
20mg与500mg之间的量施用。
69.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述坎普他汀类似物按每剂量介于
20mg与270mg之间的量施用。
70.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述坎普他汀类似物按每剂量介于
20mg与180mg之间的量施用。
71.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述坎普他汀类似物按每剂量介于
20mg与50mg之间或每剂量介于50mg与100mg之间或每剂量介于100mg与150mg之间或每剂量介于150mg与200mg之间或每剂量介于200mg与250mg之间的量施用。
72.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述受试者具有补体介导的障碍。
73.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述受试者具有补体调节缺陷，任选地其中所述缺陷包括至少一些所述受试者的细胞对一种或多种补体调节蛋白的异常低的表达。
74.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述补体介导的障碍是慢性障碍。
75.根据权利要求72至74中任一项所述的方法，其中所述补体介导的障碍涉及补体介
导的对红血细胞的损伤，任选地其中所述障碍是阵发性夜间血红蛋白尿或非典型溶血性尿毒症综合征。
76.根据权利要求72至74中任一项所述的方法，其中所述补体介导的障碍是自身免疫
疾病，任选地其中所述障碍是多发性硬化症。
77.根据权利要求72至74中任一项所述的方法，其中所述补体介导的障碍涉及肾，任选地其中所述障碍是膜性增生性肾小球炎、狼疮性肾炎或急性肾损伤。
78.根据权利要求72至74中任一项所述的方法，其中所述补体介导的障碍涉及中枢或
外周神经系统或神经肌肉接点，任选地其中所述障碍是视神经脊髓炎、吉兰-巴雷综合征、多灶性运动神经病变或重症肌无力。
79.根据权利要求72至74中任一项所述的方法，其中所述补体介导的障碍涉及呼吸系
统，任选地其中所述障碍的特征在于肺纤维化。
80.根据权利要求72至74中任一项所述的方法，其中所述补体介导的障碍涉及血管系
统，任选地其中所述障碍的特征在于血管炎。
81.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述坎普他汀类似物部分包含具有
X'aa-Gln-Asp-Xaa-Gly(SEQ ID NO:3)的核心序列的环状肽，其中X'aa和Xaa选自Trp和Trp类似物。
82.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述坎普他汀类似物部分包含具有
X'aa-Gln-Asp-Xaa-Gly-X"aa(SEQ ID NO:4)的核心序列的环状肽，其中X'aa和Xaa各自独立地选自Trp和Trp类似物，并且X"aa选自His、Ala、单甲基非支链氨基酸、Phe、Trp以及Trp类似物。
83.根据权利要求81或82所述的方法，其中X'aa2和X"aa4是Cys，并且其中X"aa1任选地是Ala或单甲基非支链氨基酸。
84.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述坎普他汀类似物部分包含具有
以下序列的环状肽：
Xaa1-Cys-Val-Xaa2-Gln-Asp-Xaa2*-Gly-Xaa3-His-Arg-Cys-Xaa4(SEQ ID NO:6)；其
中：
Xaa1是Ile、Val、Leu、B1-Ile、B1-Val、B1-Leu或包含Gly-Ile或B1-Gly-Ile的二肽，并且B1代表第一封端部分；
Xaa2和Xaa2*独立地选自Trp和Trp类似物；
Xaa3是His、Ala或Ala类似物、Phe、Trp或Trp类似物；
Xaa4是L-Thr、D-Thr、Ile、Val、Gly、选自Thr-Ala和Thr-Asn的二肽、或包含Thr-Ala-Asn的三肽，其中所述L-Thr、D-Thr、Ile、Val、Gly、Ala或Asn中任一个的羧基末端-OH任选地被第二封端部分B2替换；并且
所述两个Cys残基通过二硫键连接。
85.根据权利要求84所述的方法，其中
Xaa1是Ile、Val、Leu、Ac-Ile、Ac-Val、Ac-Leu或包含Gly-Ile或Ac-Gly-Ile的二肽；
Xaa2和Xaa2*独立地选自Trp和Trp类似物；
Xaa3是His、Ala或Ala类似物、Phe、Trp或Trp类似物；
Xaa4是L-Thr、D-Thr、Ile、Val、Gly、选自Thr-Ala和Thr-Asn的二肽、或包含Thr-Ala-Asn的三肽，其中所述L-Thr、D-Thr、Ile、Val、Gly、Ala或Asn中任一个的羧基末端-OH任选地被-NH2替换。
86.根据权利要求84或85所述的方法，其中Xaa2是Trp类似物，其包含在色氨酸的1或5
位处的低级烷氧基或低级烷基取代基或在色氨酸的5或6位处的卤素取代基。
87.根据权利要求84或85所述的方法，其中Xaa2是Trp类似物，其包含在色氨酸的1或5
位处的低级烷氧基或低级烷基取代基或在色氨酸的5或6位处的卤素取代基，并且Xaa2*是Trp。
88.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中施用步骤包括向正接受所述坎普他
汀类似物的受试者施用所述INAA。
89.根据权利要求1至87中任一项所述的方法，其中所述施用步骤包括向正接受所述
INAA的受试者施用所述坎普他汀类似物。
90.根据权利要求1至87中任一项所述的方法，其中所述施用步骤包括施用所述坎普他
汀类似物和所述INAA二者。
91.根据权利要求90所述的方法，其中所述施用步骤包括施用含有所述坎普他汀类似
物和所述INAA二者的组合物。
用于C3抑制的组合疗法
[0001] 相关申请的交叉引用
[0002] 本申请根据35U.S.C.119(e)要求2016年10月17日提交的美国临时申请号62/409,357的权益，其全部内容通过引用并入本申请。
背景技术
[0003] 补体是由超过30种血浆蛋白和细胞结合的蛋白组成的系统，该系统在先天性免疫和适应性免疫中起重要作用。补体系统的蛋白通过多种蛋白相互作用和裂解事件在一系列
酶促级联中起作用。补体激活通过3个主要途径而发生：抗体依赖性的经典途径，旁路途径，和结合甘露糖的凝集素(MBL)途径。不适当的或过度的补体激活是许多严重疾病和病症的
根本原因或促成因素，在过去的数十年中已经做出了大量努力来探究不同的补体抑制剂作
为治疗剂。
发明内容
酶促级联中起作用。补体激活通过3个主要途径而发生：抗体依赖性的经典途径，旁路途径，和结合甘露糖的凝集素(MBL)途径。不适当的或过度的补体激活是许多严重疾病和病症的
根本原因或促成因素，在过去的数十年中已经做出了大量努力来探究不同的补体抑制剂作
为治疗剂。
发明内容
[0004] 补体组分C3(“C3”)在三个主要补体活化途径中占据中心位置。有许多出于治疗目的而靶向C3的潜在方法。例如，坎普他汀(compstatin)类似物是这样一类化合物，其包含与C3结合并抑制其裂解的环状肽，从而阻止生物活性裂解产物C3a和C3b的产生以及防止C3转化酶和补体活化级联的下游部分的形成。另一种抑制C3的方法是通过使用抑制性核酸试剂
(INAA)如短干扰RNA(siRNA)和反义寡核苷酸(ASO)来抑制其表达。本公开提供了以下认识：
使用被设计成用于抑制C3表达的抑制性核酸试剂治疗补体介导的障碍有显著的局限性。即
使达到高水平的转录物降解或翻译抑制，仍会产生足够的C3以引起显著的有害的补体介导
的作用。此外，INAA的治疗应用主要集中在抑制由肝脏产生的蛋白质的表达，因为INAA向肝脏以外的器官的全身递送已证明具有挑战性。虽然肝脏是体内大多数C3的来源，但C3也可
以通过多种细胞类型在肝脏外部产生。C3的肝外产生可能有助于限制全身施用的INAA以多
种治疗目的所需的水平抑制C3的能力。
(INAA)如短干扰RNA(siRNA)和反义寡核苷酸(ASO)来抑制其表达。本公开提供了以下认识：
使用被设计成用于抑制C3表达的抑制性核酸试剂治疗补体介导的障碍有显著的局限性。即
使达到高水平的转录物降解或翻译抑制，仍会产生足够的C3以引起显著的有害的补体介导
的作用。此外，INAA的治疗应用主要集中在抑制由肝脏产生的蛋白质的表达，因为INAA向肝脏以外的器官的全身递送已证明具有挑战性。虽然肝脏是体内大多数C3的来源，但C3也可
以通过多种细胞类型在肝脏外部产生。C3的肝外产生可能有助于限制全身施用的INAA以多
种治疗目的所需的水平抑制C3的能力。
[0005] 在一些方面，本发明提供和/或涉及使用某些长效坎普他汀类似物与抑制C3表达的抑制性核酸试剂(INAA)的组合来抑制补体活化。例如，本发明提供和/或涉及包括向有需要的受试者施用这类长效坎普他汀类似物和抑制C3表达的抑制性核酸试剂(INAA)的方法、
包含它们的组合物、以及制造、鉴定、表征和/或使用这类组合物的方法。在一些方面，本发明提供和/或涉及生理上可接受的组合物，其包含和/或递送长效坎普他汀类似物和抑制C3
表达的INAA中的一种或两种。在一些方面，本发明提供和/或涉及药用级组合物，其包含和/或递送长效坎普他汀类似物和抑制C3表达的INAA中的一种或两种。在一些方面，本发明提
供和/或涉及药物包装件或试剂盒，其包含一个或多个剂量的长效坎普他汀类似物和一个
或多个剂量的抑制C3表达的INAA。此外，在一些方面，本公开描述了特别有用的长效坎普他汀类似物和抑制C3表达的INAA、其组合用途，并且还为人类受试者，例如特定的人类受试
者，例如患有和/或易患一种或多种某些疾病、障碍或病症的人类受试者，提供了特定的剂量、剂量形式、给药方案、单位剂量组合物以及其它涉及采用长效坎普他汀类似物和抑制C3表达的INAA的组合疗法的技术。
包含它们的组合物、以及制造、鉴定、表征和/或使用这类组合物的方法。在一些方面，本发明提供和/或涉及生理上可接受的组合物，其包含和/或递送长效坎普他汀类似物和抑制C3
表达的INAA中的一种或两种。在一些方面，本发明提供和/或涉及药用级组合物，其包含和/或递送长效坎普他汀类似物和抑制C3表达的INAA中的一种或两种。在一些方面，本发明提
供和/或涉及药物包装件或试剂盒，其包含一个或多个剂量的长效坎普他汀类似物和一个
或多个剂量的抑制C3表达的INAA。此外，在一些方面，本公开描述了特别有用的长效坎普他汀类似物和抑制C3表达的INAA、其组合用途，并且还为人类受试者，例如特定的人类受试
者，例如患有和/或易患一种或多种某些疾病、障碍或病症的人类受试者，提供了特定的剂量、剂量形式、给药方案、单位剂量组合物以及其它涉及采用长效坎普他汀类似物和抑制C3表达的INAA的组合疗法的技术。
[0006] 在一些方面，本发明提供了治疗需要治疗补体介导的障碍的受试者的方法，所述方法可以包括使用特定的剂量、剂量形式(例如，单位剂量组合物和/或特定的制剂)和/或
给药方案(例如，在某些实施方案中确定为对于治疗某些疾病、障碍或病症特别理想的施用途径、给药时机等)，向受试者施用长效坎普他汀类似物和抑制C3表达的INAA。
给药方案(例如，在某些实施方案中确定为对于治疗某些疾病、障碍或病症特别理想的施用途径、给药时机等)，向受试者施用长效坎普他汀类似物和抑制C3表达的INAA。
[0007] 在一些实施方案中，待根据本公开内容治疗的补体介导的障碍是阵发性夜间血红蛋白尿(paroxysmal nocturnal hemoglobinuria，PNH)、非典型溶血性尿毒症综合征
(atypical hemolytic uremic syndrome，aHUS)或与补体介导的溶血相关的另一种障碍。
在一些实施方案中，所述障碍是影响中枢神经系统(CNS)的炎性障碍。例如，在一些实施方案中，所述障碍是视神经脊髓炎(neuromyelitis optica，NMO)。在一些实施方案中，所述障碍是重症肌无力(myasthenia gravis，MG)，例如难治性MG(rMG)。在一些实施方案中，所述障碍影响肾。例如，在一些实施方案中，所述障碍是膜性增生性肾小球炎或狼疮性肾炎。在一些实施方案中，所述障碍是缺血/再灌注(I/R)损伤(例如，因为心肌梗塞、血栓栓塞性中风或外科手术)。在一些实施方案中，所述障碍是创伤。在一些实施方案中，所述障碍是移植排斥。在一些实施方案中，所述障碍是慢性呼吸障碍，例如哮喘或COPD或特发性肺纤维化。
(atypical hemolytic uremic syndrome，aHUS)或与补体介导的溶血相关的另一种障碍。
在一些实施方案中，所述障碍是影响中枢神经系统(CNS)的炎性障碍。例如，在一些实施方案中，所述障碍是视神经脊髓炎(neuromyelitis optica，NMO)。在一些实施方案中，所述障碍是重症肌无力(myasthenia gravis，MG)，例如难治性MG(rMG)。在一些实施方案中，所述障碍影响肾。例如，在一些实施方案中，所述障碍是膜性增生性肾小球炎或狼疮性肾炎。在一些实施方案中，所述障碍是缺血/再灌注(I/R)损伤(例如，因为心肌梗塞、血栓栓塞性中风或外科手术)。在一些实施方案中，所述障碍是创伤。在一些实施方案中，所述障碍是移植排斥。在一些实施方案中，所述障碍是慢性呼吸障碍，例如哮喘或COPD或特发性肺纤维化。
[0008] 在本申请中提及的所有文章、书籍、专利申请、专利、其它出版物、网站和数据库通过引用并入本文。在说明书和任意并入的参考文献之间冲突的情况下，以说明书(包括对其做出的任何修改)为准。除非另有说明，在本文中使用本领域接受的术语和缩写的含义。本文中描述的某些方面的实践可以采用本领域普通技术范围内的分子生物学、细胞培养、重组核酸(例如，DNA)技术、免疫学、和/或核酸和多肽的合成、检测、操作和量化等常规的技术。参见，例如，Ausubel,F.,et al.,(eds.),Current Protocols in Molecular Biology,Current Protocols in Immunology,Current Protocols in Protein Science和Current
Protocols in Cell Biology，所有均为John Wiley&Sons,N.Y.出版，例如，当前的2010年1月版或其后的版本；Sambrook,Russell和Sambrook,Molecular Cloning:A Laboratory
Manual,第3版，Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,2001或
2012年的第4版。
附图说明
Protocols in Cell Biology，所有均为John Wiley&Sons,N.Y.出版，例如，当前的2010年1月版或其后的版本；Sambrook,Russell和Sambrook,Molecular Cloning:A Laboratory
Manual,第3版，Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,2001或
2012年的第4版。
附图说明
[0009] 图1的图显示了随着肽浓度(μM)而变化的坎普他汀类似物CA28(SEQ ID NO:28)和3种长效坎普他汀类似物(CA28-1、CA28-2、CA28-3)的补体激活抑制活性百分比。使用经典的补体抑制测定，在体外试验了补体激活的抑制。该图显示了通过平均2组测量的结果所得到的值。CA28(圆圈；红色)，CA28-1(交叉(x)；蓝色)；CA28-2(三角形；绿色)，CA28-3(正方形；紫色)。
[0010] 图2的图显示了随着化合物浓度(μM)而变化的CA28和长效坎普他汀类似物CA28-2和CA28-3的补体激活抑制活性百分比。CA28(正方形，浅灰色)，CA28-2(菱形，黑色)，CA28-3(圆圈，深灰色)。CA28-3是含有多个肽部分的化合物。尽管每个肽部分的活性小于单个CA28分子的活性，在摩尔基础上，CA28-3的总活性超过CA28的活性。
[0011] 图3的图显示了在单次静脉内注射以后，食蟹猴中CA28和长效坎普他汀类似物CA28-2和CA28-3的血浆浓度相对于时间的关系。以200mg/kg施用CA28。分别以50mg/kg施用CA28-2和CA28-3。在为这些实验计算剂量时，假定施用的CA28-2和CA28-3物质由80％(w/w，基于干重)的活性化合物组成。但是，在样品分析过程中，标准曲线假定100％(w/w，基于干重)的活性化合物，超出30％的估测值。因而，Cmax的值会高估实际的Cmax。CA28(正方形，浅灰色)，CA28-2(三角形，黑色)，CA28-3(圆圈，深灰色)。
[0012] 图4的图显示了随着化合物浓度(μM)而变化的CA28和长效坎普他汀类似物CA28-4的补体激活抑制活性百分比。使用经典的补体抑制测定，在体外试验了补体激活的抑制。该图显示了通过平均CA28-4的4组测量的结果所得到的值。CA28(正方形，浅灰色)，CA28-4(交叉，黑色)。
[0013] 图5的图显示了在单次静脉内注射以后，食蟹猴中CA28和长效坎普他汀类似物CA28-2、CA28-3和CA28-4的浓度相对于时间的关系。以200mg/kg施用CA28。分别以50mg/kg施用CA28-2、CA28-3和CA28-4。在为这些实验计算剂量时，假定施用的CA28-2和CA28-3物质由80％(w/w，基于干重)的活性化合物组成。但是，在样品分析过程中，标准曲线假定100％(w/w，基于干重)的活性化合物。因而，Cmax的值会将在指定的剂量(基于干质量)施用这些化合物时所达到的Cmax高估30％的估测值。CA28(正方形，浅灰色)，CA28-2(三角形，黑色)，CA28-3(圆圈，深灰色)，CA28-4(倒三角形，黑色)。
[0014] 图6是代表性的色谱图，显示了使用反相HPLC对基于PEG的长效坎普他汀类似物的紫外线(UV)检测。具有33.68分钟的保留时间(RT)的峰代表PEG化的坎普他汀类似物并具有
96％的相对面积。
96％的相对面积。
[0015] 图7的图显示了随着化合物浓度(μM)而变化的CA28和长效坎普他汀类似物CA28-2CS、CA28-2GS、CA28-2HS和CA28-2TS的补体激活抑制活性百分比。CA28-2CS(菱形，红色)；
CA28-2GS(交叉，蓝色)；CA28-2HS(三角形，绿色)；CA28-2TS(正方形，黑色)。
CA28-2GS(交叉，蓝色)；CA28-2HS(三角形，绿色)；CA28-2TS(正方形，黑色)。
[0016] 图8的图显示了随着化合物浓度(微摩尔)而变化的CA28和双官能化长效坎普他汀类似物CA28-2GS-BF的补体激活抑制活性百分比。CA28(空心圆圈，蓝色)；CA28-2G-SBF(实心圆圈，红色)。
[0017] 图9的图显示了在单次静脉内注射(CA28(正方形，红色)和CA28-2GS-BF(圆圈，紫色))以后或当每天一次连续7天通过皮下注射(仅CA28-2GS-BF，星号，蓝色)施用以后，食蟹猴中CA28和长效坎普他汀类似物CA28-2GS-BF的血浆浓度相对于时间的关系。以25mg/ml施
用CA28-2GSBF。用于静脉内施用的给药体积是2ml/kg且用于皮下施用的给药体积是
0.28ml/kg/天。CA28的数据来自不同的实验，在所述实验中所述化合物也是在5％葡萄糖中的并被配制成20mg/ml并且给药体积为10ml/kg。在每种情况下，媒介物是5％葡萄糖水溶
液。
用CA28-2GSBF。用于静脉内施用的给药体积是2ml/kg且用于皮下施用的给药体积是
0.28ml/kg/天。CA28的数据来自不同的实验，在所述实验中所述化合物也是在5％葡萄糖中的并被配制成20mg/ml并且给药体积为10ml/kg。在每种情况下，媒介物是5％葡萄糖水溶
液。
[0018] 图10(A)和10(B)的图显示了随着化合物浓度(微摩尔)而变化的CA28和双官能化长效坎普他汀类似物CA28-2TS-BF的补体激活抑制活性百分比。(A)CA28(圆圈，红色)和
CA28-2TS-BF(交叉，蓝色)对经典途径的抑制。(B)旁路途径的抑制。CA28(圆圈，红色)和
CA28-2TS-BF(交叉，蓝色)。
CA28-2TS-BF(交叉，蓝色)对经典途径的抑制。(B)旁路途径的抑制。CA28(圆圈，红色)和
CA28-2TS-BF(交叉，蓝色)。
[0019] 图10(C)显示了CA28-2TS-BF的结构(假定PEG部分是40kD)。
[0020] 图11的图显示了在单次静脉内注射200mg/kg CA28(正方形，红色)、单次静脉内注射7mg/kg CA28-2TS-BF(星号，紫色)、皮下仅注射7mg/kg CA28-2TS-BF一次(圆圈，蓝色)或每天一次连续7天皮下注射7mg/kg CA28-2TS-BF(倒三角形，绿色)之后，食蟹猴中CA28和长效坎普他汀类似物CA28-2TS-BF的血浆浓度相对于时间的关系。在每种情况下，媒介物是
5％葡萄糖水溶液。
5％葡萄糖水溶液。
[0021] 图12(A)和12(B)显示了对来自PNH患者的红血细胞上C3沉积的流式细胞计数分析，所述细胞在修改版海姆氏试验(Ham's test)中暴露于激活的补体。图12(A)显示了证实CA28对C3沉积作用的稀释实验结果。图12(B)显示了证实CA28-2GS-BF对C3沉积影响的稀释
实验结果。使用的化合物浓度示于每个图的上面和上方。
实验结果。使用的化合物浓度示于每个图的上面和上方。
[0022] 图13显示了对来自PNH患者的红血细胞上C3沉积的流式细胞计数分析，所述细胞在修改版海姆氏试验中，在不存在补体抑制剂(左图)、存在抗C5单克隆抗体艾库组单抗
(eculizumab)(中间图)和存在CA28-2GS-BF(右图)的条件下暴露于激活的补体。
(eculizumab)(中间图)和存在CA28-2GS-BF(右图)的条件下暴露于激活的补体。
[0023] 图14显示了在健康受试者中用包含40kD PEG的长效坎普他汀类似物在多次递增剂量试验中观察到的离体的血清诱导的溶血图。
具体实施方式
[0024] I.定义
[0025] 除非另有说明或另外从上下文中显而易见，否则有关数字时的术语“大约”或“约”一般包括在所述数字的±10％内、在某些实施方案中±5％内、在某些实施方案中±1％内、在某些实施方案中±0.5％内的数字(所述数字不允许超过可能值的100％的情形除外)。
[0026] 如本文所用，术语“组合疗法”是指受试者同时暴露于两种或更多种治疗方案(例如，两种或更多种治疗剂)的那些情况。在一些实施方案中，可以同时施用两种或更多种方案；在一些实施方案中，这类方案可以依序施用(例如，在施用任何剂量的第二方案之前施用第一方案的所有“剂量”)；在一些实施方案中，这类药剂以重叠给药方案施用。在一些实施方案中，组合疗法的“施用”可以涉及向接受组合中的其它药剂或方式的受试者施用一种或多种药剂或方式。为清楚起见，虽然在一些实施方案中，两种或更多种药剂或其活性部分可以在组合组合物中，或甚至在组合化合物(例如，作为单一化学复合物或共价实体的一部分)中一起施用，但组合疗法不要求各个药剂在单一组合物中一起施用(或甚至必须同时施
用)。
用)。
[0027] “补体组分”或“补体蛋白”是补体系统激活所涉及的蛋白或参与一种或多种补体介导的活性的蛋白。经典补体途径的组分包括例C1q、C1r、C1s、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9和C5b-9复合物(也被称作膜攻击复合物(MAC))，和任何上述的活性片段或酶切割产物(例如，C3a、C3b、C4a、C4b、C5a等)。旁路途径的组分包括例如因子B、因子D和备解素。凝集素途径的组分包括例如MBL2、MASP-1和MASP-2。补体组分还包括可溶性补体组分的细胞结合受
体，其中这样的受体在可溶性补体组分结合以后介导这样的可溶性补体组分的一种或多种
生物活性。这样的受体包括例如C5a受体(C5aR)、C3a受体(C3aR)、补体受体1(CR1)、补体受体2(CR2)、补体受体3(CR3、也被称作CD45)等。应当理解，术语“补体组分”无意包括充当补体激活的“触发剂”的那些分子和分子结构，例如抗原-抗体复合物、存在于微生物或人工表面上的外来结构等。
体，其中这样的受体在可溶性补体组分结合以后介导这样的可溶性补体组分的一种或多种
生物活性。这样的受体包括例如C5a受体(C5aR)、C3a受体(C3aR)、补体受体1(CR1)、补体受体2(CR2)、补体受体3(CR3、也被称作CD45)等。应当理解，术语“补体组分”无意包括充当补体激活的“触发剂”的那些分子和分子结构，例如抗原-抗体复合物、存在于微生物或人工表面上的外来结构等。
[0028] “补体介导的障碍”是其中已知或怀疑补体激活在至少一些罹患该障碍的受试者中是促成因素和/或至少部分地是诱发因素的任意障碍，例如，其中补体激活导致组织损伤的障碍。补体介导的障碍的非限制性例子包括、但不限于：(i)以溶血或溶血性贫血为特征的各种障碍，诸如非典型溶血性尿毒症综合征、冷凝集素疾病、阵发性夜间血红蛋白尿、输血反应；(ii)移植排斥(例如，超急性或急性移植排斥)或移植物功能障碍；(iii)涉及缺血/再灌注损伤的障碍，诸如创伤、外科手术(例如，动脉瘤修复)、心肌梗塞、缺血性中风；(iv)呼吸系统障碍，诸如哮喘和慢性阻塞性肺疾病(COPD)；(v)关节炎，例如，类风湿性关节炎；
(vi)眼科障碍，诸如年龄相关的黄斑变性(AMD)、糖尿病视网膜病变、青光眼和葡萄膜炎。
“障碍”在本文中与“疾病”、“病症”和类似词语互换使用，表示生物体的健康的任何病损或异常功能状态，例如，其中指示医学和/或外科手术处置或受试者适当地寻求针对它的医学和/或外科手术注意的任何状态。还应当理解，在特定种类内列出的特定障碍是为了方便，且无意限制本发明。应该理解，某些障碍可以适当地列在多个种类中。
(vi)眼科障碍，诸如年龄相关的黄斑变性(AMD)、糖尿病视网膜病变、青光眼和葡萄膜炎。
“障碍”在本文中与“疾病”、“病症”和类似词语互换使用，表示生物体的健康的任何病损或异常功能状态，例如，其中指示医学和/或外科手术处置或受试者适当地寻求针对它的医学和/或外科手术注意的任何状态。还应当理解，在特定种类内列出的特定障碍是为了方便，且无意限制本发明。应该理解，某些障碍可以适当地列在多个种类中。
[0029] “补体调节蛋白”是参与调节补体活性的蛋白。补体调节蛋白可以减量调节补体活性，例如，通过抑制补体激活或通过灭活一种或多种被激活的补体蛋白或加速一种或多种被激活的补体蛋白的衰变。补体调节蛋白的例子包括C1抑制剂、C4结合蛋白、簇连蛋白、玻璃体结合蛋白、CFH、因子I、以及细胞结合蛋白CD46、CD55、CD59、CR1、CR2和CR3。
[0030] “互补的”在本文中根据其在本领域公认的含义使用，是指特定的碱基、核苷、核苷酸或核酸之间精确配对的能力。例如，腺嘌呤(A)和尿苷(U)是互补的；腺嘌呤(A)和胸苷(T)是互补的；并且鸟嘌呤(G)和胞嘧啶(C)是互补的，并且在本领域中被称为沃森-克里克碱基配对。如果当链以反向平行取向比对时，第一核酸序列的某个位置上的核苷酸与第二核酸序列中相对的核苷酸互补，那么核苷酸形成互补碱基对，并且核酸在那个位置是互补的。第一核酸与第二核酸的互补百分比可以通过以下评估：为了评估窗口内的最大互补性，将它
们以反向平行取向比对，确定在所述窗口内形成互补碱基对的两条链中的nt总数，除以窗
口内的nt总数，并乘以100。例如，AAAAAAAA和TTTGTTAT是75％互补的，因为在总共16nt中有
12nt呈互补碱基对。在计算实现特定互补％所需的互补nt的数量时，将分数四舍五入到最
接近的整数。非互补核苷酸占据的位置构成错配，即该位置被非互补碱基对占据。在某些实施方案中，评估窗口具有本文针对双链体部分或靶部分所述的长度。互补序列包括在两个
核苷酸序列的整个长度上(如果是相同长度)或在较短序列的整个长度上(如果是不同长
度)，包含第一核苷酸序列的多核苷酸与包含第二核苷酸序列的多核苷酸的碱基配对。这些序列在本文中可以相对于彼此称为“完全互补”(100％互补性)。在评估窗口内至少70％互补的核酸被认为在该窗口内“基本上互补”。在某些实施方案中，互补核酸在评估窗口内至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％互补。当第一序列相对于本文的第二序列被称为“基本上互补”时，两个序列可以是完全互补的，或者它们可以在杂交时包含一个或多个不匹配的碱基，例如在杂交时高达约5％、10％、15％、20％或25％的不匹配碱基，例如针对多达30个碱基对的双链体，在杂交时有1、2、3、4、5或6个错配的碱基对，同时保留在与其预期用途最相关的条件下的杂交能力。应当理解，在将两个寡核苷酸设计成在杂交时
形成一个或多个单链突出端时，就确定互补百分比而言，不认为这些突出端是错配的或不
配对的核苷酸。例如，dsRNA的两条链包含一个长度为21个核苷酸的寡核苷酸和另一个长度为23个核苷酸的寡核苷酸，其中较长的寡核苷酸包含与较短的寡核苷酸完全互补的21个核
苷酸序列和2个核苷酸突出端，本文中可以被称为“完全互补”。如本文所用的“互补”序列可以包括一个或多个非沃森-克里克碱基对和/或由非天然和其它修饰的核苷酸形成的碱基
对，只要满足其杂交能力的要求即可。这种非沃森-克里克碱基对包括但不限于G:U摆动
(Wobble)或胡斯坦(Hoogsteen)碱基配对。本领域普通技术人员知道，根据所谓的“摆动”规则，鸟嘌呤、胞嘧啶、腺嘌呤和尿嘧啶可以被其它碱基替换而基本上不改变包含带有这种碱基的核苷酸的多核苷酸的碱基配对性质(参见例如Murphy,FV IV&V Ramakrishnan,V.,
Nature Structural and Molecular Biology 11:1251-1252(2004))。例如，包含肌苷作为其碱基的核苷酸可以与含有腺嘌呤、胞嘧啶或尿嘧啶的核苷酸碱基配对。因此，含有尿嘧
啶、鸟嘌呤或腺嘌呤的核苷酸可以在本文所述的INAA的核苷酸序列中被含有例如肌苷的核
苷酸替换。应当理解，术语“互补的”、“完全互补的”和“基本上互补的”可以用于任何两个核酸之间的碱基匹配，例如，如从上下文中显而易见的，dsRNA的有义链与反义链之间、或ds INAA(例如，ds RNAi试剂)的反义链与靶序列之间、或反义寡核苷酸与靶序列之间的碱基匹配。如本领域普通技术人员所理解的，如本文所用的“杂交”是指包含互补部分或由互补部分组成的两个核酸序列之间能形成在特定感兴趣的条件下稳定的双链体结构的相互作用。
们以反向平行取向比对，确定在所述窗口内形成互补碱基对的两条链中的nt总数，除以窗
口内的nt总数，并乘以100。例如，AAAAAAAA和TTTGTTAT是75％互补的，因为在总共16nt中有
12nt呈互补碱基对。在计算实现特定互补％所需的互补nt的数量时，将分数四舍五入到最
接近的整数。非互补核苷酸占据的位置构成错配，即该位置被非互补碱基对占据。在某些实施方案中，评估窗口具有本文针对双链体部分或靶部分所述的长度。互补序列包括在两个
核苷酸序列的整个长度上(如果是相同长度)或在较短序列的整个长度上(如果是不同长
度)，包含第一核苷酸序列的多核苷酸与包含第二核苷酸序列的多核苷酸的碱基配对。这些序列在本文中可以相对于彼此称为“完全互补”(100％互补性)。在评估窗口内至少70％互补的核酸被认为在该窗口内“基本上互补”。在某些实施方案中，互补核酸在评估窗口内至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％互补。当第一序列相对于本文的第二序列被称为“基本上互补”时，两个序列可以是完全互补的，或者它们可以在杂交时包含一个或多个不匹配的碱基，例如在杂交时高达约5％、10％、15％、20％或25％的不匹配碱基，例如针对多达30个碱基对的双链体，在杂交时有1、2、3、4、5或6个错配的碱基对，同时保留在与其预期用途最相关的条件下的杂交能力。应当理解，在将两个寡核苷酸设计成在杂交时
形成一个或多个单链突出端时，就确定互补百分比而言，不认为这些突出端是错配的或不
配对的核苷酸。例如，dsRNA的两条链包含一个长度为21个核苷酸的寡核苷酸和另一个长度为23个核苷酸的寡核苷酸，其中较长的寡核苷酸包含与较短的寡核苷酸完全互补的21个核
苷酸序列和2个核苷酸突出端，本文中可以被称为“完全互补”。如本文所用的“互补”序列可以包括一个或多个非沃森-克里克碱基对和/或由非天然和其它修饰的核苷酸形成的碱基
对，只要满足其杂交能力的要求即可。这种非沃森-克里克碱基对包括但不限于G:U摆动
(Wobble)或胡斯坦(Hoogsteen)碱基配对。本领域普通技术人员知道，根据所谓的“摆动”规则，鸟嘌呤、胞嘧啶、腺嘌呤和尿嘧啶可以被其它碱基替换而基本上不改变包含带有这种碱基的核苷酸的多核苷酸的碱基配对性质(参见例如Murphy,FV IV&V Ramakrishnan,V.,
Nature Structural and Molecular Biology 11:1251-1252(2004))。例如，包含肌苷作为其碱基的核苷酸可以与含有腺嘌呤、胞嘧啶或尿嘧啶的核苷酸碱基配对。因此，含有尿嘧
啶、鸟嘌呤或腺嘌呤的核苷酸可以在本文所述的INAA的核苷酸序列中被含有例如肌苷的核
苷酸替换。应当理解，术语“互补的”、“完全互补的”和“基本上互补的”可以用于任何两个核酸之间的碱基匹配，例如，如从上下文中显而易见的，dsRNA的有义链与反义链之间、或ds INAA(例如，ds RNAi试剂)的反义链与靶序列之间、或反义寡核苷酸与靶序列之间的碱基匹配。如本领域普通技术人员所理解的，如本文所用的“杂交”是指包含互补部分或由互补部分组成的两个核酸序列之间能形成在特定感兴趣的条件下稳定的双链体结构的相互作用。
[0031] “抑制性核酸试剂”(INAA)是指包含抑制靶基因表达的核酸的试剂。“抑制靶基因的表达”意指降低使用来自基因的信息产生的功能性基因产物的水平。表达包括转录步骤，以及相关的RNA剪接、翻译和翻译后修饰。INAA可以抑制这些步骤中的任何一个或多个。在本文特别感兴趣的实施方案中，INAA通过促进从基因转录的RNA的降解或抑制从基因转录的RNA的翻译来抑制靶基因的表达。如本文所用，“从基因转录的RNA”是指初级RNA转录物(前mRNA)以及通过转录后加工产生的RNA，例如信使RNA(mRNA)。
[0032] 本文中使用的“分离的”是指，1)从至少一些在自然状态下通常与其结合的组分中分离；2)通过涉及人的过程制备或纯化；和/或3)在自然条件下不发生，例如，在人工环境中存在。一般的，除非另有说明或显而易见，否则任何实体、产物、试剂、组合物等，如果需要的话，可被视为“分离的”。
[0033] 本文中关于两个或更多个部分使用的“连接的”是指，所述部分彼此以物理方式结合或连接以形成足够稳定的分子结构，以致所述部分在形成连接的条件下(并且优选在使用新分子结构的条件下，例如在生理条件下)保持结合。在本发明的某些优选实施方案中，所述连接是共价连接。在其它实施方案中，所述连接是非共价的。各部分可直接或间接连
接。当两个部分直接连接时，它们彼此共价键合，或者足够紧邻以致两个部分之间的分子间力保持其结合。当两个部分间接连接时，它们各自共价地或非共价地连接至第三部分，所述第三部分保持所述两个部分之间的结合。一般而言，当将两个部分说成通过“连接基团”或“连接部分”连接时，所述两个被连接的部分之间的连接是间接的，并且通常所述被连接的部分各自共价地键合至连接部分。使用“接头”可以连接2个部分。接头可以是与要连接的实体在合理时间段内在符合所述实体(其部分可以根据条件经过适当保护)的稳定性的条件
下足量反应以产生合理产率的任何合适部分。通常，所述接头含有至少2个官能团，其中之一与第一实体反应，另一个官能团与第二实体反应。应当理解，在接头已经与要连接的实体反应以后，术语“接头”可以表示得到的结构的源自所述接头的部分，或者至少表示不包括反应过的官能团的部分。连接部分可以包含这样的部分：其不参与与要连接的实体的键，且其主要目的可以是使所述实体在空间上彼此分离。这样的部分可以被称作“隔离物”。
接。当两个部分直接连接时，它们彼此共价键合，或者足够紧邻以致两个部分之间的分子间力保持其结合。当两个部分间接连接时，它们各自共价地或非共价地连接至第三部分，所述第三部分保持所述两个部分之间的结合。一般而言，当将两个部分说成通过“连接基团”或“连接部分”连接时，所述两个被连接的部分之间的连接是间接的，并且通常所述被连接的部分各自共价地键合至连接部分。使用“接头”可以连接2个部分。接头可以是与要连接的实体在合理时间段内在符合所述实体(其部分可以根据条件经过适当保护)的稳定性的条件
下足量反应以产生合理产率的任何合适部分。通常，所述接头含有至少2个官能团，其中之一与第一实体反应，另一个官能团与第二实体反应。应当理解，在接头已经与要连接的实体反应以后，术语“接头”可以表示得到的结构的源自所述接头的部分，或者至少表示不包括反应过的官能团的部分。连接部分可以包含这样的部分：其不参与与要连接的实体的键，且其主要目的可以是使所述实体在空间上彼此分离。这样的部分可以被称作“隔离物”。
[0034] “核酸”可与“多核苷酸”互换使用，并包括核苷酸的聚合物。“寡核苷酸”是指相对较短的核酸，例如长度通常介于约4个与约100个核苷酸(nt)之间，例如长度介于8-60nt之间或介于10-40nt之间。核苷酸包括核糖核苷酸、脱氧核糖核苷酸和修饰的核苷酸。“修饰的核苷酸”是指独立地具有修饰的糖部分、修饰的核苷间键(或其部分)和/或修饰的核碱基的分子，其中“修饰的”在此情形下意指糖、键或核碱基不同于天然存在的哺乳动物mRNA中所发现的标准的糖、键或核碱基。如本文所用的修饰的核苷酸包括这样的分子，其中核苷酸的一种或多种组分，即糖、碱基和磷酸酯部分，不同于天然存在的。因此，术语修饰的核苷酸包括例如官能团或原子于核苷间键、糖部分或核碱基的取代、添加或去除。在一些实施方案
中，核酸包含DNA或RNA或由其组成。在一些实施方案中，核酸仅包含标准核碱基(通常简称为“碱基”)(与包括标准和非标准核碱基相反)。标准碱基是胞嘧啶、鸟嘌呤、腺嘌呤(在DNA和RNA中发现)、胸腺嘧啶(在DNA中发现)和尿嘧啶(在RNA中发现)，分别缩写为C、G、A、T和U(这些缩写也可用于指掺入了相应碱基的核苷或核苷酸)。在一些实施方案中，核酸可以包
含一种或多种非标准核碱基，其可以是天然存在的或非天然存在的(即，人工的；在自然界中未发现的)。在一些实施方案中，核酸可以包含修饰的碱基(例如，烷基化的(例如，甲基化的)碱基)、修饰的糖(例如，2'-O-烷基核糖(例如，2'-O-甲基核糖)、2'-氟核糖、阿拉伯糖或己糖)、修饰的磷酸酯基(例如硫代磷酸酯或5'-N-亚磷酰胺键)。修饰的核碱基包括其它合
成和天然核碱基，例如脱氧胸腺嘧啶(dT)、5-甲基胞嘧啶(5-me-C)、5-羟甲基胞嘧啶、黄嘌呤、次黄嘌呤、2-氨基腺嘌呤、腺嘌呤和鸟嘌呤的6-甲基和其它烷基衍生物、腺嘌呤和鸟嘌呤的2-丙基和其它烷基衍生物、2-硫尿嘧啶、2-硫胸腺嘧啶和2-硫胞嘧啶、5-卤基尿嘧啶和胞嘧啶、5-丙炔基尿嘧啶和胞嘧啶、6-偶氮尿嘧啶、胞嘧啶和胸腺嘧啶、5-尿嘧啶(假尿嘧啶)、4-硫尿嘧啶、8-卤基、8-氨基、8-硫醇、8-硫烷基、8-羟基以及其它8-取代的腺嘌呤和鸟嘌呤、5-卤基、特别是5-溴、5-三氟甲基以及其它5-取代的尿嘧啶和胞嘧啶、7-甲基鸟嘌呤和7-甲基腺嘌呤、8-氮杂鸟嘌呤和8-氮杂腺嘌呤、7-脱氮鸟嘌呤和7-脱氮腺嘌呤以及3-脱
氮鸟嘌呤和3-脱氮腺嘌呤、5-取代的嘧啶、6-氮杂嘧啶和N-2、N-6和O-6取代的嘌呤，包括2-氨丙基腺嘌呤、5-丙炔基尿嘧啶、5-丙炔基胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶。其它核碱基包括美国专利号3,687,808中公开的那些；Modified Nucleosides in Biochemistry,Biotechnology
and Medicine,Herdewijn,P.编Wiley-VCH,2008中公开的那些；The Concise
Encyclopedia Of Polymer Science And Engineering,第858-859页,Kroschwitz,J.L编
John Wiley&Sons,1990中公开的那些；由Englisch等人,Angewandte Chemie,
International Edition,1991,30,613公开的那些；以及由Sanghvi,Y S.,第15章,dsRNA
Research and Applications,第289-302页,Crooke,S.T.和Lebleu,B.编,CRC出版社,1993
公开的那些。在一些实施方案中，核酸包含通过磷酸二酯键连接的亚基(残基)。在一些实施方案中，至少一些核酸的亚基通过连续核苷之间(例如一个糖分子的3'碳原子与另一个糖
分子的5'碳原子之间)的非磷酸二酯键或其它非磷酸二酯骨架结构连接，例如硫代磷酸酯、
5'-N-亚磷酰胺、磷酸酯、烷基磷酸酯、二硫代磷酸酯、磷酸酯、烷基硫代磷酸酯、氨基磷酸酯、磷酸三酯、氨基烷基磷酸三酯、甲基和其它烷基磷酸酯，包括3'-亚烷基磷酸酯和手性磷酸酯、亚磷酸酯、硫羰基氨基磷酸酯、硫羰基烷基磷酸酯、硫羰基烷基磷酸三酯、硼烷磷酸酯、氨基甲酸酯、碳酸酯、磷酸三酯、乙酰胺、羧甲基酯以及肽键。在一些实施方案中，可以使用不含磷的键。这种骨架可以包含烷基或环烷基糖间键、混合的杂原子和烷基或环烷基糖
间键、或一个或多个杂原子或杂环糖间键、吗啉代键(部分地由核苷的糖部分形成)；聚(醚-硫醚)、聚(醚-亚砜)或聚(醚-砜)硅氧烷骨架；硫化物、亚砜和砜骨架；甲酰基和硫代甲酰基骨架；亚甲基甲酰基和硫代甲酰基骨架；含有烯烃的骨架；氨基磺酸酯骨架；亚甲基亚氨基和亚甲基肼基骨架；磺酸酯和磺酰胺骨架；酰胺骨架。示例性的含磷非磷酸二酯键和不含磷键以及其制备和使用方法描述于美国专利号6,348,583和8,163,477和美国专利申请公开
号20090318676以及前述任一项中的参考文献中。在一些实施方案中，修饰的核苷酸具有与其共价连接的部分(例如，靶向部分)。在一些实施方案中，将可以连接标记的部分或官能团掺入或连接至碱基。在一些实施方案中，所述连接位于不参与沃森-克里克碱基配对的位
置，使得在该位置的修饰不会显著干扰杂交。例如，UTP和dUTP的C-5位置不参与沃森-克里克碱基配对，并且是用于修饰或连接部分的有用位点。为了本公开的目的，包含修饰的糖、修饰的碱基或非磷酸二酯骨架键的核酸亚基可以被称为“修饰的核苷酸”，并且应当理解，核酸的任何核苷酸都可以是修饰的核苷酸。“修饰的核酸”是这样一种核酸，其特征在于：
(1)其核苷中的至少两个通过非标准核苷间键(即，一个核苷酸的5'末端与另一个核苷酸的
3'末端之间除磷酸二酯键以外的键)共价连接；(2)其掺入了一个或多个修饰的核苷酸(其
可以包含修饰的碱基、糖或磷酸酯)；和/或(3)通常与天然核酸无关的化学基团已被共价连接至核酸。在各种实施方案中，核酸可以是线性或环状的。在各种实施方案中，核酸可以是单链、双链或部分双链。至少部分是双链的核酸可以是平末端的或可以具有一个或多个突
出端，例如5'和/或3'突出端。一种或多种核酸修饰(例如，碱基、糖和/或骨架修饰)、非标准核苷酸或核苷等可以存在于核酸中。这类修饰可以例如增加稳定性(例如，通过降低对核酸酶裂解的敏感性)，降低体内清除，增加细胞摄取，或赋予改善效力、功效、特异性或以其它方式使核酸更适合于预期用途的其它性质。核酸修饰以及合成和修饰核酸或核苷酸(包括
修饰的核苷酸)的方法的各种非限制性实例描述于以下各者中：Crooke,S T(编)Antisense drug technology:principles,strategies,and applications,Boca Raton:CRC出版社,
2008；Kurreck,J.(编)Therapeutic oligonucleotides,RSC biomolecular
sciences.Cambridge:Royal Society of Chemistry,2008；Egli,M.等人(编),Current
protocols in nucleic acid chemistry,Wiley(1999-2016)(例如，Deleavey GF等人,
Chemical modification of siRNA.Current protocols in nucleic acid chemistry
39:16.3.1-16.3.22(2009))；美国专利号4,469,863；5,536,821；5,541,306；5,637,683；5,
637,684；5,700,922；5,717,083；5,719,262；5,739,308；5,773,601；5,886,165；5,929,
226；5,977,296；6,140,482；6,455,308,6,403,779；6,399,754；6,225,460；6,127,533；6,
031,086；6,005,087；5,977,089；美国专利申请公开号20090203135；和/或PCT申请公开WO
00/56746和WO 01/14398；以及本文中所引用的或本文中所引用的参考文献中所引用的其
它参考文献。核酸可以被均一地修饰或仅在其一部分上修饰和/或可以含有多种不同的修
饰。可以在双链核酸的两条链中使用不同的修饰。本领域普通技术人员将进一步理解，根据本公开使用的核酸试剂可以包含一个或多个不是核苷酸或核苷酸类似物的部分。应当理
解，如本文所用的术语“核酸序列”和“靶序列”可以指核酸材料本身而不仅仅是在生物化学上表征特定核酸分子的序列信息(例如，在代表分别含有碱基腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶和尿嘧啶的核苷酸的五个字母A、G、C、T或U中选出的一连串字母)。
中，核酸包含DNA或RNA或由其组成。在一些实施方案中，核酸仅包含标准核碱基(通常简称为“碱基”)(与包括标准和非标准核碱基相反)。标准碱基是胞嘧啶、鸟嘌呤、腺嘌呤(在DNA和RNA中发现)、胸腺嘧啶(在DNA中发现)和尿嘧啶(在RNA中发现)，分别缩写为C、G、A、T和U(这些缩写也可用于指掺入了相应碱基的核苷或核苷酸)。在一些实施方案中，核酸可以包
含一种或多种非标准核碱基，其可以是天然存在的或非天然存在的(即，人工的；在自然界中未发现的)。在一些实施方案中，核酸可以包含修饰的碱基(例如，烷基化的(例如，甲基化的)碱基)、修饰的糖(例如，2'-O-烷基核糖(例如，2'-O-甲基核糖)、2'-氟核糖、阿拉伯糖或己糖)、修饰的磷酸酯基(例如硫代磷酸酯或5'-N-亚磷酰胺键)。修饰的核碱基包括其它合
成和天然核碱基，例如脱氧胸腺嘧啶(dT)、5-甲基胞嘧啶(5-me-C)、5-羟甲基胞嘧啶、黄嘌呤、次黄嘌呤、2-氨基腺嘌呤、腺嘌呤和鸟嘌呤的6-甲基和其它烷基衍生物、腺嘌呤和鸟嘌呤的2-丙基和其它烷基衍生物、2-硫尿嘧啶、2-硫胸腺嘧啶和2-硫胞嘧啶、5-卤基尿嘧啶和胞嘧啶、5-丙炔基尿嘧啶和胞嘧啶、6-偶氮尿嘧啶、胞嘧啶和胸腺嘧啶、5-尿嘧啶(假尿嘧啶)、4-硫尿嘧啶、8-卤基、8-氨基、8-硫醇、8-硫烷基、8-羟基以及其它8-取代的腺嘌呤和鸟嘌呤、5-卤基、特别是5-溴、5-三氟甲基以及其它5-取代的尿嘧啶和胞嘧啶、7-甲基鸟嘌呤和7-甲基腺嘌呤、8-氮杂鸟嘌呤和8-氮杂腺嘌呤、7-脱氮鸟嘌呤和7-脱氮腺嘌呤以及3-脱
氮鸟嘌呤和3-脱氮腺嘌呤、5-取代的嘧啶、6-氮杂嘧啶和N-2、N-6和O-6取代的嘌呤，包括2-氨丙基腺嘌呤、5-丙炔基尿嘧啶、5-丙炔基胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶。其它核碱基包括美国专利号3,687,808中公开的那些；Modified Nucleosides in Biochemistry,Biotechnology
and Medicine,Herdewijn,P.编Wiley-VCH,2008中公开的那些；The Concise
Encyclopedia Of Polymer Science And Engineering,第858-859页,Kroschwitz,J.L编
John Wiley&Sons,1990中公开的那些；由Englisch等人,Angewandte Chemie,
International Edition,1991,30,613公开的那些；以及由Sanghvi,Y S.,第15章,dsRNA
Research and Applications,第289-302页,Crooke,S.T.和Lebleu,B.编,CRC出版社,1993
公开的那些。在一些实施方案中，核酸包含通过磷酸二酯键连接的亚基(残基)。在一些实施方案中，至少一些核酸的亚基通过连续核苷之间(例如一个糖分子的3'碳原子与另一个糖
分子的5'碳原子之间)的非磷酸二酯键或其它非磷酸二酯骨架结构连接，例如硫代磷酸酯、
5'-N-亚磷酰胺、磷酸酯、烷基磷酸酯、二硫代磷酸酯、磷酸酯、烷基硫代磷酸酯、氨基磷酸酯、磷酸三酯、氨基烷基磷酸三酯、甲基和其它烷基磷酸酯，包括3'-亚烷基磷酸酯和手性磷酸酯、亚磷酸酯、硫羰基氨基磷酸酯、硫羰基烷基磷酸酯、硫羰基烷基磷酸三酯、硼烷磷酸酯、氨基甲酸酯、碳酸酯、磷酸三酯、乙酰胺、羧甲基酯以及肽键。在一些实施方案中，可以使用不含磷的键。这种骨架可以包含烷基或环烷基糖间键、混合的杂原子和烷基或环烷基糖
间键、或一个或多个杂原子或杂环糖间键、吗啉代键(部分地由核苷的糖部分形成)；聚(醚-硫醚)、聚(醚-亚砜)或聚(醚-砜)硅氧烷骨架；硫化物、亚砜和砜骨架；甲酰基和硫代甲酰基骨架；亚甲基甲酰基和硫代甲酰基骨架；含有烯烃的骨架；氨基磺酸酯骨架；亚甲基亚氨基和亚甲基肼基骨架；磺酸酯和磺酰胺骨架；酰胺骨架。示例性的含磷非磷酸二酯键和不含磷键以及其制备和使用方法描述于美国专利号6,348,583和8,163,477和美国专利申请公开
号20090318676以及前述任一项中的参考文献中。在一些实施方案中，修饰的核苷酸具有与其共价连接的部分(例如，靶向部分)。在一些实施方案中，将可以连接标记的部分或官能团掺入或连接至碱基。在一些实施方案中，所述连接位于不参与沃森-克里克碱基配对的位
置，使得在该位置的修饰不会显著干扰杂交。例如，UTP和dUTP的C-5位置不参与沃森-克里克碱基配对，并且是用于修饰或连接部分的有用位点。为了本公开的目的，包含修饰的糖、修饰的碱基或非磷酸二酯骨架键的核酸亚基可以被称为“修饰的核苷酸”，并且应当理解，核酸的任何核苷酸都可以是修饰的核苷酸。“修饰的核酸”是这样一种核酸，其特征在于：
(1)其核苷中的至少两个通过非标准核苷间键(即，一个核苷酸的5'末端与另一个核苷酸的
3'末端之间除磷酸二酯键以外的键)共价连接；(2)其掺入了一个或多个修饰的核苷酸(其
可以包含修饰的碱基、糖或磷酸酯)；和/或(3)通常与天然核酸无关的化学基团已被共价连接至核酸。在各种实施方案中，核酸可以是线性或环状的。在各种实施方案中，核酸可以是单链、双链或部分双链。至少部分是双链的核酸可以是平末端的或可以具有一个或多个突
出端，例如5'和/或3'突出端。一种或多种核酸修饰(例如，碱基、糖和/或骨架修饰)、非标准核苷酸或核苷等可以存在于核酸中。这类修饰可以例如增加稳定性(例如，通过降低对核酸酶裂解的敏感性)，降低体内清除，增加细胞摄取，或赋予改善效力、功效、特异性或以其它方式使核酸更适合于预期用途的其它性质。核酸修饰以及合成和修饰核酸或核苷酸(包括
修饰的核苷酸)的方法的各种非限制性实例描述于以下各者中：Crooke,S T(编)Antisense drug technology:principles,strategies,and applications,Boca Raton:CRC出版社,
2008；Kurreck,J.(编)Therapeutic oligonucleotides,RSC biomolecular
sciences.Cambridge:Royal Society of Chemistry,2008；Egli,M.等人(编),Current
protocols in nucleic acid chemistry,Wiley(1999-2016)(例如，Deleavey GF等人,
Chemical modification of siRNA.Current protocols in nucleic acid chemistry
39:16.3.1-16.3.22(2009))；美国专利号4,469,863；5,536,821；5,541,306；5,637,683；5,
637,684；5,700,922；5,717,083；5,719,262；5,739,308；5,773,601；5,886,165；5,929,
226；5,977,296；6,140,482；6,455,308,6,403,779；6,399,754；6,225,460；6,127,533；6,
031,086；6,005,087；5,977,089；美国专利申请公开号20090203135；和/或PCT申请公开WO
00/56746和WO 01/14398；以及本文中所引用的或本文中所引用的参考文献中所引用的其
它参考文献。核酸可以被均一地修饰或仅在其一部分上修饰和/或可以含有多种不同的修
饰。可以在双链核酸的两条链中使用不同的修饰。本领域普通技术人员将进一步理解，根据本公开使用的核酸试剂可以包含一个或多个不是核苷酸或核苷酸类似物的部分。应当理
解，如本文所用的术语“核酸序列”和“靶序列”可以指核酸材料本身而不仅仅是在生物化学上表征特定核酸分子的序列信息(例如，在代表分别含有碱基腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶和尿嘧啶的核苷酸的五个字母A、G、C、T或U中选出的一连串字母)。
[0035] 本文中使用的“生理条件”是指能至少部分地模拟在活体的受试者(例如，哺乳动物受试者)中常见的那些条件的一组条件，例如温度、盐浓度、pH值。在某些方面，生理条件是指水性介质中的条件，例如，在体积/体积的基础上，包含至少90％、95％、96％、97％、
97％、99％、或约100％的水的介质。在某些实施方案中，如果存在其它液体，则该液体基本上不影响蛋白质的二级或三级结构。在一些实施方案中，生理条件至少部分地模拟发现于
体液(例如，哺乳动物受试者的例如血液或细胞外液，例如，间质液)中的那些条件。本领域已知多种对，例如，体外测试，有益的生理条件。一般的，生理条件下的介质含有生理浓度的盐，例如，氯化钠。在某些实施方案中，生理浓度的盐是指浓度范围从约250mOsm/L至约
350mOsm/L，例如，约275mOsm/L至约325mOsm/L，例如，约300mOsm/L。在某些实施方案中，生理条件与体液(例如血液或细胞外液(例如，间质液))近似等渗。在某些实施方案中，生理条件包括范围从约6.5至约7.8，例如，约7.0至约7.5的pH。在某些实施方案中，生理介质包含缓冲物质，所述缓冲物质帮助维持所述介质的pH在生理范围内。在某些实施方案中，生理条件包括使得典型的哺乳动物蛋白质，例如，通常在体液(例如血液或细胞外液)中存在的蛋
白质，基本上保留通常在体液中存在的蛋白质所具有的二级结构以及三级结构(如果适用
的话)的条件。在某些实施方案中，生理介质的组分以其在所述生理介质中的浓度存在时，对哺乳细胞通常基本上是无毒性的。在多个标准参考文献中列出了多种生理介质(有时称
为“缓冲液”)，例如以上引用的那些文献(例如，Sambrook,et al.,Protocols series)。在一些实施方案中，生理温度的范围从约25摄氏度至约38摄氏度，例如，从约30摄氏度至约37摄氏度，例如，35摄氏度到37摄氏度。
97％、99％、或约100％的水的介质。在某些实施方案中，如果存在其它液体，则该液体基本上不影响蛋白质的二级或三级结构。在一些实施方案中，生理条件至少部分地模拟发现于
体液(例如，哺乳动物受试者的例如血液或细胞外液，例如，间质液)中的那些条件。本领域已知多种对，例如，体外测试，有益的生理条件。一般的，生理条件下的介质含有生理浓度的盐，例如，氯化钠。在某些实施方案中，生理浓度的盐是指浓度范围从约250mOsm/L至约
350mOsm/L，例如，约275mOsm/L至约325mOsm/L，例如，约300mOsm/L。在某些实施方案中，生理条件与体液(例如血液或细胞外液(例如，间质液))近似等渗。在某些实施方案中，生理条件包括范围从约6.5至约7.8，例如，约7.0至约7.5的pH。在某些实施方案中，生理介质包含缓冲物质，所述缓冲物质帮助维持所述介质的pH在生理范围内。在某些实施方案中，生理条件包括使得典型的哺乳动物蛋白质，例如，通常在体液(例如血液或细胞外液)中存在的蛋
白质，基本上保留通常在体液中存在的蛋白质所具有的二级结构以及三级结构(如果适用
的话)的条件。在某些实施方案中，生理介质的组分以其在所述生理介质中的浓度存在时，对哺乳细胞通常基本上是无毒性的。在多个标准参考文献中列出了多种生理介质(有时称
为“缓冲液”)，例如以上引用的那些文献(例如，Sambrook,et al.,Protocols series)。在一些实施方案中，生理温度的范围从约25摄氏度至约38摄氏度，例如，从约30摄氏度至约37摄氏度，例如，35摄氏度到37摄氏度。
[0036] 本文中使用的“多肽”表示氨基酸的聚合物，任选包括一个或多个氨基酸类似物。蛋白是由一个或多个多肽组成的分子。肽是相对较短的多肽，长度通常介于约2个与60个氨基酸之间，例如长度介于8个与40个氨基酸之间。术语“蛋白”、“多肽”和“肽”可互换使用。本文中使用的多肽可以含有氨基酸，例如蛋白质中天然存在的氨基酸、蛋白质中非天然存在
的氨基酸和/或不为氨基酸的氨基酸类似物。本文中使用的氨基酸的“类似物”可以是在结构上类似于氨基酸的不同氨基酸，或在结构上类似于氨基酸的除氨基酸外的化合物。已知
大量本领域公知的在蛋白质中常见的20种氨基酸(“标准”氨基酸)的类似物。可以修饰多肽中的一个或多个氨基酸，例如，通过添加化学实体，如糖基、磷酸酯基、法呢基、异法呢基、脂肪酸基团、用于连接、官能化或其它修饰的接头等。某些非限制性的合适的类似物和修饰描述于WO2004026328和/或下面。多肽可以例如在N末端被乙酰化和/或例如在C末端被酰胺
化。
的氨基酸和/或不为氨基酸的氨基酸类似物。本文中使用的氨基酸的“类似物”可以是在结构上类似于氨基酸的不同氨基酸，或在结构上类似于氨基酸的除氨基酸外的化合物。已知
大量本领域公知的在蛋白质中常见的20种氨基酸(“标准”氨基酸)的类似物。可以修饰多肽中的一个或多个氨基酸，例如，通过添加化学实体，如糖基、磷酸酯基、法呢基、异法呢基、脂肪酸基团、用于连接、官能化或其它修饰的接头等。某些非限制性的合适的类似物和修饰描述于WO2004026328和/或下面。多肽可以例如在N末端被乙酰化和/或例如在C末端被酰胺
化。
[0037] 本文使用的术语“纯化的”，是指已经从至少某些或大部分组分中分离的物质，该物质在天然状态下或在最初生成时与所述组分结合或在纯化之前与所述组分结合。一般的，这样的纯化涉及人的活动。纯化的试剂可以是部分纯化的、基本上纯化的或是纯的。这样的试剂的纯度可以是，例如，纯度至少为50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、
96％、97％、98％、99％、或大于99％。在某些实施方案中，纯化核酸、多肽、或小分子以使其分别构成存在于制剂中的总核酸、多肽、或小分子材料的75％、80％、85％、90％、95％、
96％、97％、98％、99％、或更多。在某些实施方案中，纯化有机物质，例如核酸、多肽、或小分子以使其构成存在于制剂中的总有机材料的75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、
98％、99％、或更多。纯度可以基于，例如，干重、色谱跟踪(GC，HPLC等)峰的大小、分子丰度、电泳法、凝胶上的条带强度、光谱数据(例如，NMR)、要素分析、高通量测序、质谱法、或任何本领域公认的定量方法。在某些实施方案中，水、缓冲物质、离子和/或小分子(例如，合成的前体如核苷酸或氨基酸)，可任选地存在于纯化的制剂中。纯化的试剂可以通过将其从其它物质(例如，其他细胞材料)中分离、或通过以用于达到所需纯度的方式生产而制得。在某些实施方案中，当“部分纯化的”用于细胞产生的分子时，是指细胞产生的分子不再存在于所述细胞内，例如，所述细胞已被裂解，并且任选地，已去除至少一些细胞材料(例如，细胞壁、细胞膜、细胞器)和/或已将所述分子从存在于该裂解物中的至少一些同类分子(蛋白质、
RNA、DNA等)中分离或隔离。
96％、97％、98％、99％、或大于99％。在某些实施方案中，纯化核酸、多肽、或小分子以使其分别构成存在于制剂中的总核酸、多肽、或小分子材料的75％、80％、85％、90％、95％、
96％、97％、98％、99％、或更多。在某些实施方案中，纯化有机物质，例如核酸、多肽、或小分子以使其构成存在于制剂中的总有机材料的75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、
98％、99％、或更多。纯度可以基于，例如，干重、色谱跟踪(GC，HPLC等)峰的大小、分子丰度、电泳法、凝胶上的条带强度、光谱数据(例如，NMR)、要素分析、高通量测序、质谱法、或任何本领域公认的定量方法。在某些实施方案中，水、缓冲物质、离子和/或小分子(例如，合成的前体如核苷酸或氨基酸)，可任选地存在于纯化的制剂中。纯化的试剂可以通过将其从其它物质(例如，其他细胞材料)中分离、或通过以用于达到所需纯度的方式生产而制得。在某些实施方案中，当“部分纯化的”用于细胞产生的分子时，是指细胞产生的分子不再存在于所述细胞内，例如，所述细胞已被裂解，并且任选地，已去除至少一些细胞材料(例如，细胞壁、细胞膜、细胞器)和/或已将所述分子从存在于该裂解物中的至少一些同类分子(蛋白质、
RNA、DNA等)中分离或隔离。
[0038] “重组宿主细胞”、“宿主细胞”和其它此类术语，是指原核的或真核的细胞或细胞系，所述细胞或细胞系含有外源性核酸(通常为DNA)，例如包含编码目的多肽的核酸的表达载体。应当理解，此类术语包括已经引入了所述载体或其它核酸的原始细胞的后代。合适的宿主细胞包括本领域内常规用于表达多核苷酸(例如，为了生产由该多核苷酸编码的多肽)的那些细胞的任一种，包括，例如，原核生物，例如大肠杆菌或其它细菌如埃希氏菌种；乳杆菌属、芽孢杆菌属(例如，枯草芽孢杆菌)、沙门氏假单胞菌属、链霉菌属、葡萄球菌属等；和真核生物，包括例如，真菌，如酵母(例如，毕赤酵母属(例如，巴斯德毕赤酵母)、克鲁维酵母，如乳酸克鲁维酵母，汉逊酵母，例如多形汉逊酵母)。其它真菌细胞的例子有丝状真菌细胞，例如细胞曲霉属、脉孢菌属、镰刀菌属或木霉属，例如，米曲霉、构巢曲霉或黑曲霉株；昆虫细胞(例如，Sf9)、植物细胞和动物细胞，例如，哺乳动物细胞如CHO、R1.1、B-W、L-M，非洲绿猴肾细胞(例如，COS-1、COS-7、BSC-1、BSC-40和BMT-10)，以及培养的人细胞。也包括遗传修饰(例如，转基因)植物或动物中的遗传修饰细胞，其中至少一些这样的细胞产生重组多
肽。多肽可于乳汁中分泌、从植物材料中获得，等。可将所述外源核酸可作为附加体如质粒而稳定地维持，或者可以任选地在被复制或逆转录之后，至少部分地整合进宿主细胞的基
因组中。术语例如“宿主细胞”等，也用来指在引入核酸之前，可用作外源核酸的接收者的细胞或细胞系。“重组多核苷酸”一般是含有在自然状态下未被发现彼此直接连接的核酸序列的多核苷酸。例如，所述核酸序列可以存在于不同的基因或不同的物种中或者一个或多个
所述序列可以是天然发生的序列的变体，或者可以至少部分是不与天然发生的序列同源的
人工序列。“重组多肽”一般至少部分由重组宿主细胞或由无细胞的体外表达系统对外源核酸进行转录和翻译产生，和/或包含在自然状态下未被发现彼此直接连接的氨基酸序列。在后一种情况下，所述重组多肽可以指“嵌合多肽”。在嵌合多肽中的氨基酸序列可以，例如，存在于不同的基因或不同的物种中，或者一个或多个所述序列可以是天然存在序列的变
体，或者可以至少部分是在大部分长度上与天然存在的序列不相同的或在某些实施方案中
不同源的人工序列。应该理解，嵌合多肽可以包含两个或更多的多肽。例如，嵌合多肽的第一和第二多肽A和B可以直接连接(A-B或B-A)或者可以由第三多肽部分C隔开(A-C-B或B-C-
A)。在某些实施方案中，C部分代表多肽接头，该接头可以，例如，包含多个甘氨酸和/或丝氨酸残基或任意的多种其它氨基酸。在某些实施方案中，两个或多个多肽可由非多肽接头连
接。在某些实施方案中，本文所使用的“重组”包括由连接(例如，化学缀合、酶缀合)产生的多肽，可以在重组宿主细胞中产生的较短的重组多肽。在某些实施方案中，重组多肽可以包含涉及分泌所述多肽的信号序列或将表达的多肽引导入特定的隔室或细胞器的序列。合适
的序列是本领域已知的。可以针对目的宿主细胞的类型(例如，细菌、真菌、哺乳动物、植物等)选择适当的序列。在某些实施方案中，信号序列可以位于或邻近(例如，在其高达10-50个氨基酸内)N末端或C末端处。在某些实施方案中，多肽包含标记。标记对于方便检测和/或纯化含有该标记的蛋白质是有用的。标记的例子包括多组氨酸标记(例如，6X-His标签)、谷胱甘肽-S-转移酶、麦芽糖结合蛋白、NUS标记、SNUT标记、Strep标记、表位标记如V5、HA、Myc蛋白或FLAG。在某些实施方案中，蛋白酶裂解位点位于所述标记与所述多肽之间的区域中，从而允许通过暴露于蛋白酶而将所述多肽从所述标记分离。在某些实施方案中，编码重组
多肽的多核苷酸在目的宿主细胞(例如，细菌、真菌、哺乳动物、植物等)中至少部分进行了表达的密码子优化。在多个实施方案中，标记可以位于或邻近(例如，在其高达10-50个氨基酸内)多肽的N末端或C末端处。可以使用多种方法中的任一种来对重组多肽进行分离、纯化等。参见，例如，Sambrook,Protocols series或其他标准参考文献。使用的方法可包括，例如，透析(例如，使用具有确定孔径的膜)、层析、沉淀、凝胶纯化、或基于亲和力的方法，在某些实施方案中，所述基于亲和力的方法使用标记或特异性结合试剂例如抗体。
肽。多肽可于乳汁中分泌、从植物材料中获得，等。可将所述外源核酸可作为附加体如质粒而稳定地维持，或者可以任选地在被复制或逆转录之后，至少部分地整合进宿主细胞的基
因组中。术语例如“宿主细胞”等，也用来指在引入核酸之前，可用作外源核酸的接收者的细胞或细胞系。“重组多核苷酸”一般是含有在自然状态下未被发现彼此直接连接的核酸序列的多核苷酸。例如，所述核酸序列可以存在于不同的基因或不同的物种中或者一个或多个
所述序列可以是天然发生的序列的变体，或者可以至少部分是不与天然发生的序列同源的
人工序列。“重组多肽”一般至少部分由重组宿主细胞或由无细胞的体外表达系统对外源核酸进行转录和翻译产生，和/或包含在自然状态下未被发现彼此直接连接的氨基酸序列。在后一种情况下，所述重组多肽可以指“嵌合多肽”。在嵌合多肽中的氨基酸序列可以，例如，存在于不同的基因或不同的物种中，或者一个或多个所述序列可以是天然存在序列的变
体，或者可以至少部分是在大部分长度上与天然存在的序列不相同的或在某些实施方案中
不同源的人工序列。应该理解，嵌合多肽可以包含两个或更多的多肽。例如，嵌合多肽的第一和第二多肽A和B可以直接连接(A-B或B-A)或者可以由第三多肽部分C隔开(A-C-B或B-C-
A)。在某些实施方案中，C部分代表多肽接头，该接头可以，例如，包含多个甘氨酸和/或丝氨酸残基或任意的多种其它氨基酸。在某些实施方案中，两个或多个多肽可由非多肽接头连
接。在某些实施方案中，本文所使用的“重组”包括由连接(例如，化学缀合、酶缀合)产生的多肽，可以在重组宿主细胞中产生的较短的重组多肽。在某些实施方案中，重组多肽可以包含涉及分泌所述多肽的信号序列或将表达的多肽引导入特定的隔室或细胞器的序列。合适
的序列是本领域已知的。可以针对目的宿主细胞的类型(例如，细菌、真菌、哺乳动物、植物等)选择适当的序列。在某些实施方案中，信号序列可以位于或邻近(例如，在其高达10-50个氨基酸内)N末端或C末端处。在某些实施方案中，多肽包含标记。标记对于方便检测和/或纯化含有该标记的蛋白质是有用的。标记的例子包括多组氨酸标记(例如，6X-His标签)、谷胱甘肽-S-转移酶、麦芽糖结合蛋白、NUS标记、SNUT标记、Strep标记、表位标记如V5、HA、Myc蛋白或FLAG。在某些实施方案中，蛋白酶裂解位点位于所述标记与所述多肽之间的区域中，从而允许通过暴露于蛋白酶而将所述多肽从所述标记分离。在某些实施方案中，编码重组
多肽的多核苷酸在目的宿主细胞(例如，细菌、真菌、哺乳动物、植物等)中至少部分进行了表达的密码子优化。在多个实施方案中，标记可以位于或邻近(例如，在其高达10-50个氨基酸内)多肽的N末端或C末端处。可以使用多种方法中的任一种来对重组多肽进行分离、纯化等。参见，例如，Sambrook,Protocols series或其他标准参考文献。使用的方法可包括，例如，透析(例如，使用具有确定孔径的膜)、层析、沉淀、凝胶纯化、或基于亲和力的方法，在某些实施方案中，所述基于亲和力的方法使用标记或特异性结合试剂例如抗体。
[0039] 本文中使用的“反应性官能团”表示包括、但不限于以下的基团：烯烃、炔烃、醇、酚、醚、氧化物、卤化物、醛、酮、羧酸、酯、酰胺、氰酸酯、异氰酸酯、硫氰酸酯、异硫氰酸酯、胺、肼、腙、酰肼、重氮基、重氮鎓、硝基、腈、硫醇、硫化物、二硫化物、亚砜、砜、磺酸、亚磺酸、缩醛、缩酮、酸酐、硫酸酯、次磺酸异腈、脒、酰亚胺、亚氨酯(imidate)、硝酮(nitrone)、羟胺、肟、异羟肟酸硫代异羟肟酸、联烯(allene)、原酸酯、亚硫酸酯、烯胺、炔胺、脲、假脲、氨基脲、碳化二亚胺、氨基甲酸酯、亚胺、叠氮化物、偶氮化合物、氧化偶氮基化合物和亚硝基化合物、N-羟基琥珀酰亚胺酯、马来酰亚胺、巯基等。制备这些官能团中的每一种的方法是本领域众所周知的，并且它们对于特定目的的应用或修饰都在本领域技术人员的能力范围内(参见，例如，Sandler和Karo,编.ORGANIC FUNCTIONAL GROUP PREPARATIONS,Academic Press,San Diego,1989,和Hermanson,G.,Bioconjugate Techniques,第2版,Academic
Press,San Diego,2008)。
Press,San Diego,2008)。
[0040] “RNA干扰”(RNAi)是指被称为“RNA诱导沉默复合物”(RISC)的复合物在真核细胞(例如脊椎动物细胞，例如哺乳动物细胞)中或在适当的体外系统中以序列特异性方式抑制基因表达的过程。不希望受任何理论的束缚，可以认为，在自然界中，RNAi途径由被称为切丁酶(Dicer)的III型核酸内切酶起动，切丁酶将长双链RNA(dsRNA)切割成具有2个碱基的
3'突出端的21-23个碱基对的较短的双链片段，该双链片段被称为短干扰RNA(siRNA)。此类siRNA包含两个单链RNA(ssRNA)，通常称为“过客链(passenger strand)”或“有义链”和“引导链(guide strand)”或“反义链”。因此，术语“反义链”或“引导链”是指INAA，例如dsRNAi试剂的链，其包括与靶序列基本上互补的区域。如本文所用的术语“有义链”或“过客链”是指iRNA的包括与反义链的区域基本上互补的区域的链。将引导链整合到RISC中，在RISC中，其与mRNA分子中的互补序列配对，这导致Argonaute2(作为RISC复合物的催化组分的酶)切
割mRNA。过客链被降解。RISC可以替代地或另外地介导对与引导链互补的靶RNA的翻译抑
制。本领域普通技术人员将理解，引导链可以与靶RNA的靶区域完全互补，或者可以与靶RNA的靶区域具有不完全互补性。通过靶RNA和引导链的杂交形成的结构的互补性可以使得引
导链可以(i)引导RNA诱导沉默复合物(RISC)中靶RNA的切割和/或(ii)引起RISC介导的靶
RNA的翻译抑制。在不以任何方式限制本发明的情况下，认为与靶mRNA完全或近乎完全互补的链主要通过切割来诱导mRNA降解，而互补性没那么大的链(特别是在比引导链的7位更靠
近3'的区域中)一般促进翻译抑制。在一些实施方案中，链可以与靶mRNA的3'-非翻译区(3'UTR)不完全碱基配对，并通过脱腺苷化引起RISC依赖性翻译抑制或mRNA去稳定化，导致脱
帽和降解。
3'突出端的21-23个碱基对的较短的双链片段，该双链片段被称为短干扰RNA(siRNA)。此类siRNA包含两个单链RNA(ssRNA)，通常称为“过客链(passenger strand)”或“有义链”和“引导链(guide strand)”或“反义链”。因此，术语“反义链”或“引导链”是指INAA，例如dsRNAi试剂的链，其包括与靶序列基本上互补的区域。如本文所用的术语“有义链”或“过客链”是指iRNA的包括与反义链的区域基本上互补的区域的链。将引导链整合到RISC中，在RISC中，其与mRNA分子中的互补序列配对，这导致Argonaute2(作为RISC复合物的催化组分的酶)切
割mRNA。过客链被降解。RISC可以替代地或另外地介导对与引导链互补的靶RNA的翻译抑
制。本领域普通技术人员将理解，引导链可以与靶RNA的靶区域完全互补，或者可以与靶RNA的靶区域具有不完全互补性。通过靶RNA和引导链的杂交形成的结构的互补性可以使得引
导链可以(i)引导RNA诱导沉默复合物(RISC)中靶RNA的切割和/或(ii)引起RISC介导的靶
RNA的翻译抑制。在不以任何方式限制本发明的情况下，认为与靶mRNA完全或近乎完全互补的链主要通过切割来诱导mRNA降解，而互补性没那么大的链(特别是在比引导链的7位更靠
近3'的区域中)一般促进翻译抑制。在一些实施方案中，链可以与靶mRNA的3'-非翻译区(3'UTR)不完全碱基配对，并通过脱腺苷化引起RISC依赖性翻译抑制或mRNA去稳定化，导致脱
帽和降解。
[0041] 如本文所用的术语“RNAi试剂”是指包含通过RNA干扰(RNAi)指导细胞中RNA(例如mRNA)的序列特异性降解或翻译抑制的核酸的试剂。因此，RNAi试剂抑制靶基因在细胞中，例如在受试者(如哺乳动物受试者，例如人类受试者)内的细胞中的表达。RNAi试剂包括短
干扰RNA(siRNA)和短发夹RNA(shRNA)。siRNA可以是双链(ds siRNA)或单链(ss siRNA)。如本文所用的术语“siRNA”包括通过切丁酶切割较长的dsRNA产生的siRNA以及通过化学合成或本领域已知的其它方法产生的具有相似或相同结构的化合物，包括具有本文针对siRNA
所述的结构的化合物。
干扰RNA(siRNA)和短发夹RNA(shRNA)。siRNA可以是双链(ds siRNA)或单链(ss siRNA)。如本文所用的术语“siRNA”包括通过切丁酶切割较长的dsRNA产生的siRNA以及通过化学合成或本领域已知的其它方法产生的具有相似或相同结构的化合物，包括具有本文针对siRNA
所述的结构的化合物。
[0042] “特异性结合”通常表示靶多肽(或更一般而言，靶分子)与结合分子(例如抗体或配体)之间的物理结合。所述结合通常依赖于可被结合分子识别的靶标的特定结构特征(例
如抗原决定簇、表位、结合槽或裂隙)的存在。例如，如果抗体对表位A具特异性，则含有表位A的多肽的存在，或游离的未标记的A在含有游离的经标记的A和与其结合的结合分子的反
应物中的存在，将降低与结合分子结合的经标记的A的量。应当理解，特异性不需要是绝对的，而通常表示在其中发生结合的情形。例如，本领域众所周知，众多抗体除与靶分子中存在的表位反应外，还与其它表位交叉反应。取决于欲使用抗体的应用，所述交叉反应性可以是可接受的。本领域普通技术人员将能够选择特异性程度足以适合在任何给定应用(例如
用于检测靶分子、用于治疗目的等)中进行的抗体或配体。还应当理解，可以在额外因素的情形中评价特异性，例如结合分子对靶标的亲和力相对于结合分子对其它靶标(例如竞争
剂)的亲和力。如果结合分子对需要检测的靶分子表现出高亲和力并且对非靶分子表现出
低亲和力，则所述抗体可能成为可接受的试剂。在从一个或多个情形中确立结合分子的特
异性后，即可将其用于其它、优选类似的情形，而无需再评价其特异性。在某些实施方案中，在所测试的条件下，例如在生理条件下，表现出特异性结合的2个分子的亲和力(如通过平
衡解离常数Kd所测得)是10-3M或更小，例如，10-4M或更小，例如，10-5M或更小，例如，10-6M或更小，10-7M或更小，10-8M或更小，或10-9M或更小。
如抗原决定簇、表位、结合槽或裂隙)的存在。例如，如果抗体对表位A具特异性，则含有表位A的多肽的存在，或游离的未标记的A在含有游离的经标记的A和与其结合的结合分子的反
应物中的存在，将降低与结合分子结合的经标记的A的量。应当理解，特异性不需要是绝对的，而通常表示在其中发生结合的情形。例如，本领域众所周知，众多抗体除与靶分子中存在的表位反应外，还与其它表位交叉反应。取决于欲使用抗体的应用，所述交叉反应性可以是可接受的。本领域普通技术人员将能够选择特异性程度足以适合在任何给定应用(例如
用于检测靶分子、用于治疗目的等)中进行的抗体或配体。还应当理解，可以在额外因素的情形中评价特异性，例如结合分子对靶标的亲和力相对于结合分子对其它靶标(例如竞争
剂)的亲和力。如果结合分子对需要检测的靶分子表现出高亲和力并且对非靶分子表现出
低亲和力，则所述抗体可能成为可接受的试剂。在从一个或多个情形中确立结合分子的特
异性后，即可将其用于其它、优选类似的情形，而无需再评价其特异性。在某些实施方案中，在所测试的条件下，例如在生理条件下，表现出特异性结合的2个分子的亲和力(如通过平
衡解离常数Kd所测得)是10-3M或更小，例如，10-4M或更小，例如，10-5M或更小，例如，10-6M或更小，10-7M或更小，10-8M或更小，或10-9M或更小。
[0043] 根据本发明治疗的“受试者”通常是人、非人灵长类动物或低等动物(例如，小鼠或大鼠)，其表达或含有至少一些灵长类动物(例如，人)补体组分C3和任选的一种或多种其它灵长类动物补体组分。在某些实施方案中，所述受试者是雄性。在某些实施方案中，所述受试者是雌性。在某些实施方案中，所述受试者是成年人，例如，至少18岁，例如，18-100岁之间的人。在某些实施方案中，人受试者至少是12岁。在某些实施方案中，受试者是成人，例如，至少18岁，例如，18-100岁之间的人。在某些实施方案中，受试者至少是40、45、50、55、60、65、70、75、或80岁。在某些实施方案中，所述受试者是儿童，例如，0-4岁或5-11岁之间的人。
[0044] “靶基因”是指其表达将被调节，例如被抑制的基因。如本文所用，术语“靶RNA”是指使用INAA降解或翻译抑制或以其它方式抑制的RNA。靶RNA也可以被称为靶序列或靶转录物。RNA可以是从靶基因(例如前mRNA)转录的初级RNA转录物或加工的转录物，例如编码多
肽的mRNA。如本文所用，术语“靶部分”或“靶区域”是指靶RNA的核苷酸序列的连续部分。在一些实施方案中，mRNA的靶部分至少足够长以在合适的RNAi试剂存在下用作该部分内RNAi
介导的切割的底物。在一些实施方案中，RNA的靶部分至少足够长以在合适的反义寡核苷酸存在下用作该部分内核糖核酸酶H介导的切割的底物。靶部分的长度可以是约8-36个核苷
酸，例如长度为约10-20或约15-30个核苷酸。靶部分长度可以具有在上述范围内的特定值
或子范围。例如，在某些实施方案中，靶部分的长度可以是约15-29、15-28、15-27、15-26、
15-25、15-24、15-23、15-22、15-21、15-20、15-19、15-18、15-17、18-30、18-29、18-28、18-
27、18-26、18-25、18-24、18-23、18-22、18-21、18-20、19-30、19-29、19-28、19-27、19-26、
19-25、19-24、19-23、19-22、19-21、19-20、20-30、20-29、20-28、20-27、20-26、20-25、20-
24、20-23、20-22、20-21、21-30、21-29、21-28、21-27、21-26、21-25、21-24、21-23或21-22个核苷酸。
肽的mRNA。如本文所用，术语“靶部分”或“靶区域”是指靶RNA的核苷酸序列的连续部分。在一些实施方案中，mRNA的靶部分至少足够长以在合适的RNAi试剂存在下用作该部分内RNAi
介导的切割的底物。在一些实施方案中，RNA的靶部分至少足够长以在合适的反义寡核苷酸存在下用作该部分内核糖核酸酶H介导的切割的底物。靶部分的长度可以是约8-36个核苷
酸，例如长度为约10-20或约15-30个核苷酸。靶部分长度可以具有在上述范围内的特定值
或子范围。例如，在某些实施方案中，靶部分的长度可以是约15-29、15-28、15-27、15-26、
15-25、15-24、15-23、15-22、15-21、15-20、15-19、15-18、15-17、18-30、18-29、18-28、18-
27、18-26、18-25、18-24、18-23、18-22、18-21、18-20、19-30、19-29、19-28、19-27、19-26、
19-25、19-24、19-23、19-22、19-21、19-20、20-30、20-29、20-28、20-27、20-26、20-25、20-
24、20-23、20-22、20-21、21-30、21-29、21-28、21-27、21-26、21-25、21-24、21-23或21-22个核苷酸。
[0045] 本文中关于治疗受试者使用的“治疗”表示，提供治疗，即，提供受试者的任何类型的医学或外科手术处置。可以提供治疗以便逆转、缓解疾病，抑制所述疾病的进展，预防或降低所述疾病的可能性，或者以便逆转、缓解疾病的一种或多种征状或表现，抑制或防止所述征状或表现的进展，预防或降低止所述征状或表现的可能性。“预防”表示，使至少一些个体在至少一段时间内不会出现疾病或者疾病的征状或表现。治疗可以包括：在发展出指示疾病的一种或多种征状或表现后，给受试者施用化合物或组合物，例如以便逆转、缓解、降低所述疾病的严重程度，和/或抑制或防止所述疾病的进展，和/或逆转、缓解、降低所述疾病的一种或多种征状或表现的严重程度，和/或抑制或所述疾病的一种或多种征状或表现。
可以将化合物或组合物施用给已经发展疾病的受试者或相对于一般群体的成员而言具有
增加的发展所述疾病的风险的受试者。可以将化合物或组合物施用给这样的受试者：其已
经发展疾病，且与确诊该疾病的其它个体相比，或者与所述受试者的典型的平均的这种征
状或表现或恶化风险相比，具有增加的发展所述疾病的一种或多种特定征状或表现或者所
述疾病的恶化的风险。例如，所述受试者可能已经暴露于“触发剂”，所述“触发剂”使所述受试者处于增加的经历恶化的风险(例如，暂时增加的风险)。可以预防性地施用化合物或组
合物，即，在发展出所述疾病的任何征状或表现之前。通常，在该情况下，所述受试者将处于发展疾病的风险中，例如，相对于一般群体的成员，所述成员任选地以年龄、性别和/或其它人口统计变量的方式相匹配。
可以将化合物或组合物施用给已经发展疾病的受试者或相对于一般群体的成员而言具有
增加的发展所述疾病的风险的受试者。可以将化合物或组合物施用给这样的受试者：其已
经发展疾病，且与确诊该疾病的其它个体相比，或者与所述受试者的典型的平均的这种征
状或表现或恶化风险相比，具有增加的发展所述疾病的一种或多种特定征状或表现或者所
述疾病的恶化的风险。例如，所述受试者可能已经暴露于“触发剂”，所述“触发剂”使所述受试者处于增加的经历恶化的风险(例如，暂时增加的风险)。可以预防性地施用化合物或组
合物，即，在发展出所述疾病的任何征状或表现之前。通常，在该情况下，所述受试者将处于发展疾病的风险中，例如，相对于一般群体的成员，所述成员任选地以年龄、性别和/或其它人口统计变量的方式相匹配。
[0046] “载体”可以是能够通过，例如，转移、运输等，介导目的核酸在不同的遗传环境之间穿梭或进入细胞的多种核酸分子、病毒、或其部分的任一种。可以使用，例如，限制和连接，将所述目的核酸连接至(例如，插入)所述载体。载体包括，例如，DNA或RNA质粒、粘粒、天然存在的或修饰的病毒基因组或其部分、可被包装入病毒衣壳的核酸、小染色体、人工染色体等。质粒载体通常包括复制起点(例如，用于在原核细胞中复制)。质粒可以包括部分的或全部的病毒基因组(例如，病毒启动子、增强子、加工或包装信号、和/或足以产生可以整合进所述宿主细胞基因组的核酸和/或产生感染性病毒的序列)。可将用于将核酸引入细胞的病毒或其部分称为病毒载体。病毒载体包括，例如，腺病毒、腺相关病毒、逆转录病毒(例如，慢病毒、牛痘病毒和其它痘病毒、疱疹病毒(例如，单纯疱疹病毒)等。杆状病毒用于，例如，昆虫细胞中。已知多种植物病毒载体，包括，例如，那些基于或包括花椰菜花叶病毒、烟草花叶病毒、或其一种或多种遗传元件(例如，花椰菜花叶病毒35S启动子)的载体。病毒载体可含有或可不含有足够的病毒遗传信息用于在被引入宿主细胞时产生感染性病毒，即，病毒
载体可以是有复制能力的或是复制缺陷的。在某些实施方案中，例如，在缺乏足够的信息用于产生感染性病毒的实施方案中，如果想要产生病毒，可由宿主细胞或由另一被引入所述
细胞的载体提供该信息。在某些实施方案中，如果不想要产生病毒，则不提供这样的信息。
待转移的核酸可被掺入天然存在的或修饰的病毒基因组或其片段中，或在病毒衣壳内作为
单独的核酸分子存在。载体可含有一个或多个编码标记物的核酸，所述标记物适合用于鉴
定和/或选择已摄取了所述载体的细胞。标记物包括，例如，各种增强或减弱对抗生素或其它试剂(例如，赋予针对抗生素如嘌呤霉素、潮霉素或灭瘟素的抗性的蛋白质)的抗性或敏
感性的蛋白质、其活性可经本领域已知的测试法检测的酶(例如，β-半乳糖苷酶或碱性磷酸酶)、以及蛋白质或RNA，所述蛋白质或RNA可检测地影响其表达(例如，荧光蛋白)细胞的表型。载体通常包括一个或多个适当的限制性酶位点，该位点可用于促进将核酸，例如，待表达的核酸，插入进所述载体。表达载体是所需核酸已被插入或可被插入的载体，所述核酸与调控元件(也称作“调控序列”、“表达控制元件”、或“表达控制序列”)可操作地连接并可表达成RNA转录子(例如，可被翻译成蛋白质的mRNA或非编码RNA)。表达载体包括调控序列，例如，表达控制序列，所述调控序列在至少某些条件下足以引导与其可操作地连接的核酸的
转录；其它表达所需的或有助于表达的元件由，例如，所述宿主细胞或由体外表达系统提
供。这样的调控序列通常包括启动子并且可以包括增强子序列或上游激活子序列。在某些
实施方案中，载体可以包括编码5'非翻译区和/或3'非翻译区的序列，所述序列可以包含裂解和/或聚腺苷酸化信号。一般而言，调控元件可以在插入所需表达的核酸之前就包含在载体中或可以包含在插入的核酸中或可以在插入所需表达的核酸之后插入载体中。如本申请
所用，当核酸和调控元件共价地连接以使所述核酸的所述表达或转录受所述调控元件影响
或控制时，称其为“可操作地连接”。例如，如果启动子区能够影响核酸的转录，则会将所述启动子区可操作地连接到所述核酸。本领域的普通技术人员将认识到，有助于基因表达的
调控序列的确切的性质会因物种或细胞类型不同而变化，但是一般而言，会适当地包括，参与转录起始、RNA加工、或翻译起始的序列。本领域普通技术人员有能力和判断力来选择和设计适当的载体和调控元件。例如，本领域普通技术人员将选择适当的启动子(或其它表达控制序列)用于在所需的物种(例如，原核生物(细菌)或真核生物(例如，真菌、植物、哺乳动物类)或细胞类型中表达。载体可以含有能够在哺乳动物细胞中指导表达的启动子，例如合适的病毒启动子，来自，例如，巨细胞病毒(CMV)、逆转录病毒、猿猴病毒(例如，SV40)、乳头状瘤病毒、疱疹病毒或其它感染哺乳动物细胞的病毒，或来自，例如，基因如EF1alpha、泛素(例如，泛素B或C)、球蛋白、肌动蛋白、磷酸甘油酸激酶(PGK)等的哺乳动物启动子，或复合启动子例如CAG启动子(CMV早期增强子元件和鸡β-肌动蛋白启动子的组合)。在某些实施方案中，可以使用人启动子。在某些实施方案中，可以使用通常引导由真核RNA聚合酶I(“聚合酶I启动子”)介导的转录，例如，(U6、H1、7SK或tRNA的启动子或其功能性变体)。在某些实施方案中，使用通常引导由真核RNA聚合酶II(“聚合酶II启动子”)介导的转录的启动子或其功能性变体。在某些实施方案中，可以使用通常引导由真核RNA聚合酶III(“聚合酶III启动子”)介导的转录的启动子或其功能性变体，例如，用于转录核糖体RNA(除5S rRNA外)的启动子。本领域普通技术人员将选择适当的启动子用于引导目的序列的转录。可在哺乳动物
细胞中使用的表达载体的例子包括，例如，pcDNA载体系列、pSV2载体系列、pCMV载体系列、pRSV载体系列、pEF1载体系列、 载体等。在某些实施方案中，使用可调节的(例如，
可诱导的或可阻遏的)表达控制元件，例如，使用可调节的启动子调控表达，例如，开启或增强或关闭或减弱。在某些实施方案中，载体可包含编码多肽的多核苷酸序列，其中所述多核苷酸序列位于插入所述载体的核酸的框架内，由此发生N-或C-末端融合。在某些实施方案
中，所述多核苷酸序列编码的多肽可以包含信号序列(其引导蛋白质的分泌)或将所述表达
的蛋白质引导入特定的细胞器或细胞内位点例如细胞核或线粒体的序列。在某些实施方案
中，多肽包含标记。标记对于方便检测和/或纯化含有该标记的蛋白质是有用的。标记的例子包括多组氨酸标记(例如，6X-His标记)、谷胱甘肽-S-转移酶、麦芽糖结合蛋白、NUS标记、SNUT标记、Strep标记、表位标记如V5、HA、Myc蛋白或FLAG。在某些实施方案中，蛋白酶裂解位点位于由所述插入的核酸编码的所述蛋白质和所述多肽之间的区域中，从而允许通过暴
露于所述蛋白酶而去除所述多肽。可以使用本领域已知的方法将载体引入宿主细胞。本领
域普通技术人员将基于，例如，所述载体、细胞类型等，选择适当的方法。合适的方法的例子包括，例如，磷酸钙介导的转染、以多种市售试剂的任一种进行的转染，例如，基于脂质的或基于非脂质的试剂(例如FuGENE、Lipofectamine、TurboFect)；电穿孔；微粒轰击等。在标准参考文献如Sambrook、Protocols series和其它文献中详细解释了这些的方法。
载体可以是有复制能力的或是复制缺陷的。在某些实施方案中，例如，在缺乏足够的信息用于产生感染性病毒的实施方案中，如果想要产生病毒，可由宿主细胞或由另一被引入所述
细胞的载体提供该信息。在某些实施方案中，如果不想要产生病毒，则不提供这样的信息。
待转移的核酸可被掺入天然存在的或修饰的病毒基因组或其片段中，或在病毒衣壳内作为
单独的核酸分子存在。载体可含有一个或多个编码标记物的核酸，所述标记物适合用于鉴
定和/或选择已摄取了所述载体的细胞。标记物包括，例如，各种增强或减弱对抗生素或其它试剂(例如，赋予针对抗生素如嘌呤霉素、潮霉素或灭瘟素的抗性的蛋白质)的抗性或敏
感性的蛋白质、其活性可经本领域已知的测试法检测的酶(例如，β-半乳糖苷酶或碱性磷酸酶)、以及蛋白质或RNA，所述蛋白质或RNA可检测地影响其表达(例如，荧光蛋白)细胞的表型。载体通常包括一个或多个适当的限制性酶位点，该位点可用于促进将核酸，例如，待表达的核酸，插入进所述载体。表达载体是所需核酸已被插入或可被插入的载体，所述核酸与调控元件(也称作“调控序列”、“表达控制元件”、或“表达控制序列”)可操作地连接并可表达成RNA转录子(例如，可被翻译成蛋白质的mRNA或非编码RNA)。表达载体包括调控序列，例如，表达控制序列，所述调控序列在至少某些条件下足以引导与其可操作地连接的核酸的
转录；其它表达所需的或有助于表达的元件由，例如，所述宿主细胞或由体外表达系统提
供。这样的调控序列通常包括启动子并且可以包括增强子序列或上游激活子序列。在某些
实施方案中，载体可以包括编码5'非翻译区和/或3'非翻译区的序列，所述序列可以包含裂解和/或聚腺苷酸化信号。一般而言，调控元件可以在插入所需表达的核酸之前就包含在载体中或可以包含在插入的核酸中或可以在插入所需表达的核酸之后插入载体中。如本申请
所用，当核酸和调控元件共价地连接以使所述核酸的所述表达或转录受所述调控元件影响
或控制时，称其为“可操作地连接”。例如，如果启动子区能够影响核酸的转录，则会将所述启动子区可操作地连接到所述核酸。本领域的普通技术人员将认识到，有助于基因表达的
调控序列的确切的性质会因物种或细胞类型不同而变化，但是一般而言，会适当地包括，参与转录起始、RNA加工、或翻译起始的序列。本领域普通技术人员有能力和判断力来选择和设计适当的载体和调控元件。例如，本领域普通技术人员将选择适当的启动子(或其它表达控制序列)用于在所需的物种(例如，原核生物(细菌)或真核生物(例如，真菌、植物、哺乳动物类)或细胞类型中表达。载体可以含有能够在哺乳动物细胞中指导表达的启动子，例如合适的病毒启动子，来自，例如，巨细胞病毒(CMV)、逆转录病毒、猿猴病毒(例如，SV40)、乳头状瘤病毒、疱疹病毒或其它感染哺乳动物细胞的病毒，或来自，例如，基因如EF1alpha、泛素(例如，泛素B或C)、球蛋白、肌动蛋白、磷酸甘油酸激酶(PGK)等的哺乳动物启动子，或复合启动子例如CAG启动子(CMV早期增强子元件和鸡β-肌动蛋白启动子的组合)。在某些实施方案中，可以使用人启动子。在某些实施方案中，可以使用通常引导由真核RNA聚合酶I(“聚合酶I启动子”)介导的转录，例如，(U6、H1、7SK或tRNA的启动子或其功能性变体)。在某些实施方案中，使用通常引导由真核RNA聚合酶II(“聚合酶II启动子”)介导的转录的启动子或其功能性变体。在某些实施方案中，可以使用通常引导由真核RNA聚合酶III(“聚合酶III启动子”)介导的转录的启动子或其功能性变体，例如，用于转录核糖体RNA(除5S rRNA外)的启动子。本领域普通技术人员将选择适当的启动子用于引导目的序列的转录。可在哺乳动物
细胞中使用的表达载体的例子包括，例如，pcDNA载体系列、pSV2载体系列、pCMV载体系列、pRSV载体系列、pEF1载体系列、 载体等。在某些实施方案中，使用可调节的(例如，
可诱导的或可阻遏的)表达控制元件，例如，使用可调节的启动子调控表达，例如，开启或增强或关闭或减弱。在某些实施方案中，载体可包含编码多肽的多核苷酸序列，其中所述多核苷酸序列位于插入所述载体的核酸的框架内，由此发生N-或C-末端融合。在某些实施方案
中，所述多核苷酸序列编码的多肽可以包含信号序列(其引导蛋白质的分泌)或将所述表达
的蛋白质引导入特定的细胞器或细胞内位点例如细胞核或线粒体的序列。在某些实施方案
中，多肽包含标记。标记对于方便检测和/或纯化含有该标记的蛋白质是有用的。标记的例子包括多组氨酸标记(例如，6X-His标记)、谷胱甘肽-S-转移酶、麦芽糖结合蛋白、NUS标记、SNUT标记、Strep标记、表位标记如V5、HA、Myc蛋白或FLAG。在某些实施方案中，蛋白酶裂解位点位于由所述插入的核酸编码的所述蛋白质和所述多肽之间的区域中，从而允许通过暴
露于所述蛋白酶而去除所述多肽。可以使用本领域已知的方法将载体引入宿主细胞。本领
域普通技术人员将基于，例如，所述载体、细胞类型等，选择适当的方法。合适的方法的例子包括，例如，磷酸钙介导的转染、以多种市售试剂的任一种进行的转染，例如，基于脂质的或基于非脂质的试剂(例如FuGENE、Lipofectamine、TurboFect)；电穿孔；微粒轰击等。在标准参考文献如Sambrook、Protocols series和其它文献中详细解释了这些的方法。
[0047] 本文中使用的术语“脂族”表示这样的烃部分：其可以是直链(即，无分支)、支链或环状(包括稠合的、桥连和螺稠合的多环)，且可以是完全饱和的，或者可以含有一个或多个不饱和单元，但是其是非芳族的。除非另外指出，脂族基团含有1-30个碳原子。在某些实施方案中，脂族基团含有1-10个碳原子。在其它实施方案中，脂族基团含有1-8个碳原子。在其它实施方案中，脂族基团含有1-6个碳原子，且在其它实施方案中，脂族基团含有1-4个碳原子。合适的脂族基团包括、但不限于：直链或支链的烷基、烯基和炔基，以及它们的杂合物，诸如(环烷基)烷基、(环烯基)烷基或(环烷基)烯基。
[0048] 本文中使用的“烷基”表示，具有约1至约22个碳原子(以及其中碳原子范围和具体个数的所有组合和子组合)的饱和直链、支链或环状烃，其中在本发明的某些实施方案中，约1至约12个碳原子、或约1至约7个碳原子是优选的。烷基包括、但不限于：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、环戊基、异戊基、新戊基、正己基、异己基、环己基、环辛基、金刚烷基、3-甲基戊基、2,2-二甲基丁基和2,3-二甲基丁基。
[0049] 本文中使用的“卤素”表示F、Cl、Br或I。
[0050] 本文中使用的“烷酰基”表示其中具有约1-10个碳原子(以及碳原子范围和具体个数的所有组合和子组合)、例如约1-7个碳原子的任选地被取代的直链或支链脂族无环残
基，如将理解的，所述残基用单键连接至末端C＝O基团(且也可以被称作“酰基”)。烷酰基包括、但不限于：甲酰基、乙酰基、丙酰基、丁酰基、异丁酰基、戊酰基、异戊酰基、2-甲基-丁酰基、2,2-二甲氧基丙酰基、己酰基、庚酰基、辛酰基等，并且就本发明的目的而言，甲酰基被视作烷酰基。“低级烷酰基”表示具有约1至约5个碳原子(以及碳原子范围和具体个数的所有组合和子组合)的任选地被取代的直链或支链脂族无环残基。这样的基团包括、但不限
于：甲酰基、乙酰基、丙酰基、丁酰基、异丁酰基、戊酰基、异戊酰基等。
基，如将理解的，所述残基用单键连接至末端C＝O基团(且也可以被称作“酰基”)。烷酰基包括、但不限于：甲酰基、乙酰基、丙酰基、丁酰基、异丁酰基、戊酰基、异戊酰基、2-甲基-丁酰基、2,2-二甲氧基丙酰基、己酰基、庚酰基、辛酰基等，并且就本发明的目的而言，甲酰基被视作烷酰基。“低级烷酰基”表示具有约1至约5个碳原子(以及碳原子范围和具体个数的所有组合和子组合)的任选地被取代的直链或支链脂族无环残基。这样的基团包括、但不限
于：甲酰基、乙酰基、丙酰基、丁酰基、异丁酰基、戊酰基、异戊酰基等。
[0051] 本文中使用的“芳基”表示具有约5至约14个碳原子(以及其中碳原子范围和具体个数的所有组合和子组合)的任选地被取代的、单环或二环芳族环系，其中约6至约10个碳
是优选的。非限制性例子包括，例如，苯基和萘基。
是优选的。非限制性例子包括，例如，苯基和萘基。
[0052] 本文中使用的“芳烷基”表示这样的烷基残基：其带有芳基取代基，并且具有约6至约22个碳原子(以及其中碳原子范围和具体个数的所有组合和子组合)，其中在某些实施方案中，约6至约12个碳原子是优选的。芳烷基可以任选地被取代。非限制性例子包括，例如，苄基、萘基甲基、二苯基甲基、三苯基甲基、苯基乙基和二苯基乙基。
[0053] 本文中使用的术语“烷氧基”表示任选地被取代的烷基-O-基团，其中烷基如先前所定义。示例性烷氧基包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基和庚氧基。
[0054] 本文中使用的“羧基”表示-C(＝O)OH基团。
[0055] 本文中使用的“烷氧基羰基”表示-C(＝O)O-烷基，其中烷基如先前所定义。
[0056] 本文中使用的“芳酰基”表示-C(＝O)-芳基，其中芳基如先前所定义。示例性芳酰基包括苯甲酰基和萘甲酰基。
[0057] 术语“环系”表示芳族或非芳族、部分不饱和的或完全饱和的、3-10元环系，其包括3-8个原子大小的单环和可包括与非芳族环稠合的芳族5或6元芳基或芳族杂环基团的二环
系和三环系。这些杂环包括具有1-3个杂原子的那些杂环，所述杂原子独立地选自氧、硫和氮。在某些实施方案中，术语杂环表示非芳族5-、6-、或7-元环或多环基团，其中至少一个环原子是选自O、S和N的杂原子，包括、但不限于，二环或三环基团，其包含具有1-3个独立地选自氧、硫和氮的杂原子的稠合6元环。在某些实施方案中，“环系”表示环烷基，其在本文中用于表示具有3-10个(例如，4-7个)碳原子的基团。环烷基包括、但不限于任选地被取代的环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基等。在某些实施方案中，“环系”表示任选地被取代的环烯基或环炔基部分。
系和三环系。这些杂环包括具有1-3个杂原子的那些杂环，所述杂原子独立地选自氧、硫和氮。在某些实施方案中，术语杂环表示非芳族5-、6-、或7-元环或多环基团，其中至少一个环原子是选自O、S和N的杂原子，包括、但不限于，二环或三环基团，其包含具有1-3个独立地选自氧、硫和氮的杂原子的稠合6元环。在某些实施方案中，“环系”表示环烷基，其在本文中用于表示具有3-10个(例如，4-7个)碳原子的基团。环烷基包括、但不限于任选地被取代的环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基等。在某些实施方案中，“环系”表示任选地被取代的环烯基或环炔基部分。
[0058] 通常，被取代的化学部分包括一个或多个替代氢的取代基。示例性取代基包括例如卤代、烷基、环烷基、芳烷基、芳基、巯基、羟基(-OH)、烷氧基、氰基(-CN)、羧基(-COOH)、-C(＝O)O-烷基、氨基羰基(-C(＝O)NH2)、-N-取代的氨基羰基(-C(＝O)NHR”)、CF3、CF2CF3等。
关于上文所述的取代基，每个部分R”可独立地为例如H、烷基、环烷基、芳基或芳烷基中任一个。
关于上文所述的取代基，每个部分R”可独立地为例如H、烷基、环烷基、芳基或芳烷基中任一个。
[0059] 本文中使用的“L-氨基酸”表示通常存在于蛋白质中的任何天然存在的左旋α-氨基酸，或那些α-氨基酸的烷基酯。术语“D-氨基酸”表示右旋α-氨基酸。除非另有说明，否则本文中提及的所有氨基酸都是L-氨基酸。
[0060] 本文中使用的“芳族氨基酸”是包含至少一个芳族环的氨基酸，例如其包含一个芳基。
[0061] 本文中使用的“芳族氨基酸类似物”是包含至少一个芳族环的氨基酸类似物，例如其包含一个芳基。
[0062] II.补体系统
[0063] 为了促进本发明的理解，且无意以任何方式限制本发明，本部分提供了补体和它的激活途径的概述。其它细节参见，例如，Kuby Immunology,2006年第6版；Paul,W.E.,
Fundamental Immunology,Lippincott Williams&Wilkins；2008年第6版；和Walport MJ.,Complement.2个部分的第一部分.N Engl J Med.,344(14):1058-66,2001。
Fundamental Immunology,Lippincott Williams&Wilkins；2008年第6版；和Walport MJ.,Complement.2个部分的第一部分.N Engl J Med.,344(14):1058-66,2001。
[0064] 补体是先天性免疫系统的一个分支，其在对抗传染性病原体的身体防御中起重要作用。补体系统包含30多种血清蛋白和细胞蛋白，所述蛋白涉入三个主要途径：称为经典途径、旁路途径和凝集素途径。经典途径通常通过抗原与IgM或IgG抗体的复合物与C1的结合
而触发(但某些其它激活剂也可以启动此途径)。激活的C1裂解C4和C2，除了产生C2a和C2b
之外，还产生C4a和C4b。C4b与C2a组合以形成C3转化酶，其裂解C3以形成C3a和C3b。C3b与C3转化酶的结合会产生C5转化酶，其将C5裂解成C5a和C5b。C3a、C4a和C5a是过敏毒素，并且介导急性炎症应答中的多种反应。C3a和C5a还是趋化因子，其吸引免疫系统细胞诸如嗜中性
粒细胞。
而触发(但某些其它激活剂也可以启动此途径)。激活的C1裂解C4和C2，除了产生C2a和C2b
之外，还产生C4a和C4b。C4b与C2a组合以形成C3转化酶，其裂解C3以形成C3a和C3b。C3b与C3转化酶的结合会产生C5转化酶，其将C5裂解成C5a和C5b。C3a、C4a和C5a是过敏毒素，并且介导急性炎症应答中的多种反应。C3a和C5a还是趋化因子，其吸引免疫系统细胞诸如嗜中性
粒细胞。
[0065] 旁路途径是由例如微生物表面和各种复合多糖启动和放大。在此途径中，C3向C3(H2O)的水解(其以低水平自发发生)会导致因子B(其被因子D裂解)的结合，从而产生流体
相C3转化酶，所述C3转化酶通过将C3裂解成C3a和C3b而激活补体。C3b结合靶标诸如细胞表面，并与因子B(其以后被因子D裂解)形成复合物，从而产生C3转化酶。表面结合的C3转化酶会裂解和激活其它C3分子，导致在激活部位紧密靠近处的快速C3b沉积，并导致其它C3转化酶的形成，这又会产生其它C3b。该过程会导致C3裂解和C3转化酶形成的循环，这会显著扩大应答。C3的裂解以及另一分子C3b与C3转化酶的结合会产生C5转化酶。此途径的C3和C5转化酶受宿主细胞分子CR1、DAF、MCP、CD59和fH调节。这些蛋白质的作用模式涉及衰变加速活性(即，解离转化酶的能力)、在因子I对C3b或C4b的降解中充当辅因子的能力，或二者。通常，补体调节蛋白在宿主细胞表面上的存在会阻止在其上面发生显著的补体激活。
相C3转化酶，所述C3转化酶通过将C3裂解成C3a和C3b而激活补体。C3b结合靶标诸如细胞表面，并与因子B(其以后被因子D裂解)形成复合物，从而产生C3转化酶。表面结合的C3转化酶会裂解和激活其它C3分子，导致在激活部位紧密靠近处的快速C3b沉积，并导致其它C3转化酶的形成，这又会产生其它C3b。该过程会导致C3裂解和C3转化酶形成的循环，这会显著扩大应答。C3的裂解以及另一分子C3b与C3转化酶的结合会产生C5转化酶。此途径的C3和C5转化酶受宿主细胞分子CR1、DAF、MCP、CD59和fH调节。这些蛋白质的作用模式涉及衰变加速活性(即，解离转化酶的能力)、在因子I对C3b或C4b的降解中充当辅因子的能力，或二者。通常，补体调节蛋白在宿主细胞表面上的存在会阻止在其上面发生显著的补体激活。
[0066] 两种途径中产生的C5转化酶裂解C5以产生C5a和C5b。C5b然后结合至C6、C7和C8以形成C5b-8，其催化C9的聚合以形成C5b-9膜攻击复合物(MAC)。MAC本身插入靶细胞膜中，并引起细胞裂解。细胞膜上的少量MAC可能具有除细胞死亡以外的多种后果。
[0067] 凝集素补体途径是由甘露糖结合凝集素(MBL)和MBL相关丝氨酸蛋白酶(MASP)与碳水化合物的结合而启动。MB1-1基因(在人类中，称为LMAN-1)编码位于内质网与高尔基体(Golgi)之间的中间区域中的I型嵌膜蛋白。MBL-2基因编码存在于血清中的可溶性甘露糖
结合蛋白。在人凝集素途径中，MASP-1和MASP-2涉入C4和C2的蛋白酶解，产生上文所述的C3转化酶。
结合蛋白。在人凝集素途径中，MASP-1和MASP-2涉入C4和C2的蛋白酶解，产生上文所述的C3转化酶。
[0068] 补体活性受称作补体调节蛋白(CCP)或补体激活(RCA)蛋白调节剂(RCA)的各种哺乳动物蛋白调节(美国专利号6,897,290)。这些蛋白质在配体特异性和补体抑制机制方面
存在差异。它们可加速转化酶的正常衰变和/或充当因子I的辅因子，以将C3b和/或C4b酶促裂解成更小的片段。CCP的特征是存在多个(通常4-56个)同源基序，所述同源基序被称为短共有重复序列(SCR)、补体调节蛋白(CCP)模块或SUSHI结构域，其长度为约50-70个氨基酸，含有包括四个二硫键键合的半胱氨酸(两个二硫键)、脯氨酸、色氨酸和许多疏水残基的保
守基序。CCP家族包括补体受体1型(CR1；C3b:C4b受体)、补体受体2型(CR2)、膜辅因子蛋白(MCP；CD46)、衰变加速因子(DAF)、补体因子H(fH)和C4b结合蛋白(C4bp)。CD59是一种在结构上与CCP无关的膜结合的补体调节蛋白。补体调节蛋白通常用于限制否则可能在哺乳动
物(例如，人宿主)的细胞和组织上发生的补体激活。因而，“自我”细胞通常会被保护免于有害作用，所述有害作用否则会在这些细胞上发生补体激活以后而产生。补体调节蛋白的缺
点或缺陷涉入多种补体介导的障碍(例如，如本文中讨论的)的发病机制。
存在差异。它们可加速转化酶的正常衰变和/或充当因子I的辅因子，以将C3b和/或C4b酶促裂解成更小的片段。CCP的特征是存在多个(通常4-56个)同源基序，所述同源基序被称为短共有重复序列(SCR)、补体调节蛋白(CCP)模块或SUSHI结构域，其长度为约50-70个氨基酸，含有包括四个二硫键键合的半胱氨酸(两个二硫键)、脯氨酸、色氨酸和许多疏水残基的保
守基序。CCP家族包括补体受体1型(CR1；C3b:C4b受体)、补体受体2型(CR2)、膜辅因子蛋白(MCP；CD46)、衰变加速因子(DAF)、补体因子H(fH)和C4b结合蛋白(C4bp)。CD59是一种在结构上与CCP无关的膜结合的补体调节蛋白。补体调节蛋白通常用于限制否则可能在哺乳动
物(例如，人宿主)的细胞和组织上发生的补体激活。因而，“自我”细胞通常会被保护免于有害作用，所述有害作用否则会在这些细胞上发生补体激活以后而产生。补体调节蛋白的缺
点或缺陷涉入多种补体介导的障碍(例如，如本文中讨论的)的发病机制。
[0069] III.坎普他汀类似物
[0070] 坎普他汀是一种环状肽，其结合至C3并抑制补体激活。美国专利号6,319,897描述了一种具有序列Ile-[Cys-Val-Val-Gln-Asp-Trp-Gly-His-His-Arg-Cys]-Thr(SEQ ID
NO:1)的肽，其中两个半胱氨酸之间的二硫键由括号表示。应当理解，在美国专利号6,319,
897中未使用名称“坎普他汀”，但随后在科技文献和专利文献(参见，例如，Morikis,等人,ProteinSci.,7(3):619-27,1998))中用它来表示具有与美国专利号6,319,897中所公开的
SEQ ID NO:2相同的序列、但是如表1中所示在C末端处被酰胺化的肽(SEQ ID NO:8)。术语
“坎普他汀”在本文中与所述用法一致地使用(即，表示SEQ ID NO:8)。已经开发出具有比坎普他汀更高的补体抑制活性的坎普他汀类似物。参见，例如，WO2004/026328(PCT/US2003/
029653),Morikis,D.,等人,Biochem Soc Trans.32(第1部分):28-32,2004,Mallik,B.,等
人,J.Med.Chem.,274-286,2005；Katragadda,M.,等人.J.Med.Chem.,49:4616-4622,2006；
WO2007062249(PCT/US2006/045539)；WO2007044668(PCT/US2006/039397),WO/2009/
046198(PCT/US2008/078593)；WO/2010/127336(PCT/US2010/033345)和下面的讨论。
NO:1)的肽，其中两个半胱氨酸之间的二硫键由括号表示。应当理解，在美国专利号6,319,
897中未使用名称“坎普他汀”，但随后在科技文献和专利文献(参见，例如，Morikis,等人,ProteinSci.,7(3):619-27,1998))中用它来表示具有与美国专利号6,319,897中所公开的
SEQ ID NO:2相同的序列、但是如表1中所示在C末端处被酰胺化的肽(SEQ ID NO:8)。术语
“坎普他汀”在本文中与所述用法一致地使用(即，表示SEQ ID NO:8)。已经开发出具有比坎普他汀更高的补体抑制活性的坎普他汀类似物。参见，例如，WO2004/026328(PCT/US2003/
029653),Morikis,D.,等人,Biochem Soc Trans.32(第1部分):28-32,2004,Mallik,B.,等
人,J.Med.Chem.,274-286,2005；Katragadda,M.,等人.J.Med.Chem.,49:4616-4622,2006；
WO2007062249(PCT/US2006/045539)；WO2007044668(PCT/US2006/039397),WO/2009/
046198(PCT/US2008/078593)；WO/2010/127336(PCT/US2010/033345)和下面的讨论。
[0071] 坎普他汀类似物可以在例如N末端和/或C末端被乙酰化或酰胺化。例如，坎普他汀类似物可以在N末端被乙酰化和在C末端被酰胺化。与本领域的用法一致，本文中使用的“坎普他汀”以及本文中相对于坎普他汀的活性描述的坎普他汀类似物的活性表示在C末端被
酰胺化的坎普他汀(Mallik,2005，出处同上)。
酰胺化的坎普他汀(Mallik,2005，出处同上)。
[0072] 坎普他汀或其补体抑制类似物的多联体或多聚体也可用于本发明中。
[0073] 本文中使用的术语“坎普他汀类似物”包括坎普他汀及其任何补体抑制类似物。术语“坎普他汀类似物”包括坎普他汀以及这样的其它化合物：所述化合物基于坎普他汀设计或鉴别，并且当使用例如本领域认可的任何补体激活测定或基本上类似或相当的测定测量时，其补体抑制活性是坎普他汀的补体抑制活性的至少50％。某些合适的测定描述于：美国专利号6,319,897,WO2004/026328,Morikis，出处同上，Mallik，出处同上，
Katragadda2006，出处同上，WO2007062249(PCT/US2006/045539)；WO2007044668(PCT/
US2006/039397),WO/2009/046198(PCT/US2008/078593)；和/或WO/2010/127336(PCT/
US2010/033345)。所述测定可例如测量旁路途径或经典途径介导的红细胞裂解，或者是
ELISA测定。在某些实施方案中，使用在WO/2010/135717(PCT/US2010/035871)中描述的测
定。
Katragadda2006，出处同上，WO2007062249(PCT/US2006/045539)；WO2007044668(PCT/
US2006/039397),WO/2009/046198(PCT/US2008/078593)；和/或WO/2010/127336(PCT/
US2010/033345)。所述测定可例如测量旁路途径或经典途径介导的红细胞裂解，或者是
ELISA测定。在某些实施方案中，使用在WO/2010/135717(PCT/US2010/035871)中描述的测
定。
[0074] 坎普他汀类似物的活性可以以其IC50(使补体激活抑制50％的化合物浓度)的方式来表示，如本领域所公认的，较低IC50值指示较高活性。用于本发明中的优选坎普他汀类似物的活性至少与坎普他汀的活性相同。应当指出，已知某些修饰会降低或消除补体抑制活
性，并且其可以明确地排除在本发明任何实施方案之外。使用旁路途径介导的红细胞裂解
测定(WO2004/026328)，已经将坎普他汀的IC50测量为12μM。应当理解，所测量的给定坎普他汀类似物的准确IC50值将随实验条件(例如，在测定中使用的血清浓度)而变化。例如从在基本上相同的条件下确定多种不同化合物的IC50值的实验所获得的比较值是有用的。在一个
实施方案中，坎普他汀类似物的IC50值不超过坎普他汀的IC50值。在本发明的某些实施方案中，坎普他汀类似物的活性是坎普他汀的2到99倍(即，所述类似物的IC50是坎普他汀IC50的
1/2至1/99)。例如，所述活性可以是坎普他汀10-50倍，或是坎普他汀的50-99倍。在本发明的某些实施方案中，坎普他汀类似物的活性是坎普他汀的活性的99-264倍。例如，所述活性可以是坎普他汀的活性的100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、
230、240、250、260或264倍。在某些实施方案中，所述活性是坎普他汀的活性的250-300、300和350、350和400、或400和500倍。本发明另外涵盖这样的坎普他汀类似物：其活性是坎普他汀的活性的500-1000倍或更多。在某些实施方案中，所述坎普他汀类似物的IC50是在约0.2μM至约0.5μM之间。在某些实施方案中，所述坎普他汀类似物的IC50是在约0.1μM至约0.2μM之间。在某些实施方案中，所述坎普他汀类似物的IC50是在约0.05μM至约0.1μM之间。在某些实施方案中，所述坎普他汀类似物的IC50是在约0.001μM至约0.05μM之间。
性，并且其可以明确地排除在本发明任何实施方案之外。使用旁路途径介导的红细胞裂解
测定(WO2004/026328)，已经将坎普他汀的IC50测量为12μM。应当理解，所测量的给定坎普他汀类似物的准确IC50值将随实验条件(例如，在测定中使用的血清浓度)而变化。例如从在基本上相同的条件下确定多种不同化合物的IC50值的实验所获得的比较值是有用的。在一个
实施方案中，坎普他汀类似物的IC50值不超过坎普他汀的IC50值。在本发明的某些实施方案中，坎普他汀类似物的活性是坎普他汀的2到99倍(即，所述类似物的IC50是坎普他汀IC50的
1/2至1/99)。例如，所述活性可以是坎普他汀10-50倍，或是坎普他汀的50-99倍。在本发明的某些实施方案中，坎普他汀类似物的活性是坎普他汀的活性的99-264倍。例如，所述活性可以是坎普他汀的活性的100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、
230、240、250、260或264倍。在某些实施方案中，所述活性是坎普他汀的活性的250-300、300和350、350和400、或400和500倍。本发明另外涵盖这样的坎普他汀类似物：其活性是坎普他汀的活性的500-1000倍或更多。在某些实施方案中，所述坎普他汀类似物的IC50是在约0.2μM至约0.5μM之间。在某些实施方案中，所述坎普他汀类似物的IC50是在约0.1μM至约0.2μM之间。在某些实施方案中，所述坎普他汀类似物的IC50是在约0.05μM至约0.1μM之间。在某些实施方案中，所述坎普他汀类似物的IC50是在约0.001μM至约0.05μM之间。
[0075] 使用等温滴定量热法，可以测量坎普他汀结合C3的Kd值(Katragadda,等人,J.Biol.Chem.,279(53),54987-54995,2004)。已经将多种坎普他汀类似物与C3的结合亲和
力与它们的活性相关联，如本领域所公认的，较低的Kd指示较高的结合亲和力。证实了某些试验的类似物的结合亲和力与活性之间的线性关系(Katragadda,2004，出处同上；
Katragadda2006，出处同上)。在本发明的某些实施方案中，坎普他汀类似物结合C3的Kd介于0.1μM与1.0μM之间、介于0.05μM与0.1μM之间、介于0.025μM与0.05μM之间、介于0.015μM与0.025μM之间、介于0.01μM与0.015μM之间、或介于0.001μM与0.01μM之间。
力与它们的活性相关联，如本领域所公认的，较低的Kd指示较高的结合亲和力。证实了某些试验的类似物的结合亲和力与活性之间的线性关系(Katragadda,2004，出处同上；
Katragadda2006，出处同上)。在本发明的某些实施方案中，坎普他汀类似物结合C3的Kd介于0.1μM与1.0μM之间、介于0.05μM与0.1μM之间、介于0.025μM与0.05μM之间、介于0.015μM与0.025μM之间、介于0.01μM与0.015μM之间、或介于0.001μM与0.01μM之间。
[0076] “基于坎普他汀设计或鉴别的”化合物包括、但不限于包含通过以下方式获得其序列的氨基酸链的化合物：(i)修饰坎普他汀的序列(例如，用不同的氨基酸或氨基酸类似物替换坎普他汀序列的一个或多个氨基酸，将一个或多个氨基酸或氨基酸类似物插入坎普他
汀的序列中，或从坎普他汀序列删除一个或多个氨基酸)；(ii)从其中将坎普他汀的一个或多个氨基酸随机化的噬菌体展示肽文库选择，并任选进一步根据方法(i)进行修饰；或
(iii)通过筛选与坎普他汀或利用方法(i)或(ii)获得的其任何类似物竞争结合C3或其片
段的化合物来鉴别。许多有用的坎普他汀类似物包含疏水簇、β转角和二硫键。
汀的序列中，或从坎普他汀序列删除一个或多个氨基酸)；(ii)从其中将坎普他汀的一个或多个氨基酸随机化的噬菌体展示肽文库选择，并任选进一步根据方法(i)进行修饰；或
(iii)通过筛选与坎普他汀或利用方法(i)或(ii)获得的其任何类似物竞争结合C3或其片
段的化合物来鉴别。许多有用的坎普他汀类似物包含疏水簇、β转角和二硫键。
[0077] 在本发明的某些实施方案中，坎普他汀类似物的序列包含通过在坎普他汀序列中进行1、2、3或4个置换(即，由不同标准氨基酸或非标准氨基酸替代坎普他汀序列中的1、2、3或4个氨基酸)而获得的序列，或基本上由所述序列组成。在本发明的某些实施方案中，4位的氨基酸被改变。在本发明的某些实施方案中，9位的氨基酸被改变。在本发明的某些实施方案中，4位和9位的氨基酸被改变。在本发明的某些实施方案中，仅4位和9位的氨基酸被改变。在本发明的某些实施方案中，4位或9位的氨基酸被改变，或在某些实施方案中，4位和9位的氨基酸都被改变，而且另外位于选自1、7、10、11和13位的多达两个氨基酸也被改变。在本发明的某些实施方案中，4位、7位和9位的氨基酸被改变。在本发明的某些实施方案中，2位、12位或两个位置的氨基酸都被改变，前提条件是，所述改变保留欲环化的化合物的能
力。在2位和/或12位的这种改变可以是除1、4、7、9、10、11和/或13位改变之外还有的改变。
其序列是通过替换坎普他汀序列的一个或多个氨基酸而获得的任何坎普他汀类似物的序
列任选地在C末端进一步包括多达1、2或3个额外氨基酸。在一个实施方案中，所述额外氨基酸是Gly。其序列是通过替换坎普他汀序列的一个或多个氨基酸而获得的任何坎普他汀类
似物的序列任选地在C末端进一步包括多达5个或多达10个额外氨基酸。应当理解，除非另
有说明或从上下文显而易见，否则坎普他汀类似物可以具有本文所述各种实施方案的任何
一个或多个特性或特征，并且任意实施方案的特性或特征可另外表征本文所述的任何其它
实施方案。在本发明的某些实施方案中，坎普他汀类似物的序列包含除对应于坎普他汀序
列4位和9位的位置以外都与坎普他汀一致的序列，或基本上由所述序列组成。
力。在2位和/或12位的这种改变可以是除1、4、7、9、10、11和/或13位改变之外还有的改变。
其序列是通过替换坎普他汀序列的一个或多个氨基酸而获得的任何坎普他汀类似物的序
列任选地在C末端进一步包括多达1、2或3个额外氨基酸。在一个实施方案中，所述额外氨基酸是Gly。其序列是通过替换坎普他汀序列的一个或多个氨基酸而获得的任何坎普他汀类
似物的序列任选地在C末端进一步包括多达5个或多达10个额外氨基酸。应当理解，除非另
有说明或从上下文显而易见，否则坎普他汀类似物可以具有本文所述各种实施方案的任何
一个或多个特性或特征，并且任意实施方案的特性或特征可另外表征本文所述的任何其它
实施方案。在本发明的某些实施方案中，坎普他汀类似物的序列包含除对应于坎普他汀序
列4位和9位的位置以外都与坎普他汀一致的序列，或基本上由所述序列组成。
[0078] 坎普他汀和活性略高于坎普他汀的某些坎普他汀类似物仅含有标准氨基酸(“标准氨基酸”为甘氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、半胱氨酸、蛋氨酸、精氨酸、赖氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸和组氨酸)。具有提高的活性的某些坎普他汀类似物包含一个或多个非标准氨基酸。有用的非标准氨基酸包括单卤代和多卤代(例如氟代)氨基酸、D-氨基酸、高氨基酸、N-烷基氨基酸、脱氢氨基酸、芳族氨基酸(除苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸外)、邻氨基苯甲酸、间氨基苯甲酸或对氨基苯甲酸、磷酸-氨基酸、甲氧基化氨基酸和α,α-二取代的氨基酸。在本发明的某些实施方案中，通过用相应的D-氨基酸替换本文别处所述的坎普他汀类似物中的一个或多
个L-氨基酸，设计坎普他汀类似物。这样的化合物及其使用方法是本发明的一个方面。适用的示例性非标准氨基酸包括：2-萘基丙氨酸(2-NaI)、1-萘基丙氨酸(1-NaI)、2-茚满基甘氨酸甲酸(2Ig1)、二氢色氨酸(Dht)、4-苯甲酰基-L-苯丙氨酸(Bpa)、2-α-氨基丁酸(2-Abu)、
3-α-氨基丁酸(3-Abu)、4-α-氨基丁酸(4-Abu)、环己基丙氨酸(Cha)、同素环己基丙氨酸(hCha)、4-氟-L-色氨酸(4fW)、5-氟-L-色氨酸(5fW)、6-氟-L-色氨酸(6fW)、4-羟基-L-色氨酸(4OH-W)、5-羟基-L-色氨酸(5OH-W)、6-羟基-L-色氨酸(6OH-W)、1-甲基-L-色氨酸
(1MeW)、4-甲基-L-色氨酸(4MeW)、5-甲基-L-色氨酸(5MeW)、7-氮杂-L-色氨酸(7aW)、α-甲基-L-色氨酸(αMeW)、β-甲基-L-色氨酸(βMeW)、Ν-甲基-L-色氨酸(ΝMeW)、鸟氨酸(orn)、瓜氨酸、正亮氨酸、γ-谷氨酸等。
个L-氨基酸，设计坎普他汀类似物。这样的化合物及其使用方法是本发明的一个方面。适用的示例性非标准氨基酸包括：2-萘基丙氨酸(2-NaI)、1-萘基丙氨酸(1-NaI)、2-茚满基甘氨酸甲酸(2Ig1)、二氢色氨酸(Dht)、4-苯甲酰基-L-苯丙氨酸(Bpa)、2-α-氨基丁酸(2-Abu)、
3-α-氨基丁酸(3-Abu)、4-α-氨基丁酸(4-Abu)、环己基丙氨酸(Cha)、同素环己基丙氨酸(hCha)、4-氟-L-色氨酸(4fW)、5-氟-L-色氨酸(5fW)、6-氟-L-色氨酸(6fW)、4-羟基-L-色氨酸(4OH-W)、5-羟基-L-色氨酸(5OH-W)、6-羟基-L-色氨酸(6OH-W)、1-甲基-L-色氨酸
(1MeW)、4-甲基-L-色氨酸(4MeW)、5-甲基-L-色氨酸(5MeW)、7-氮杂-L-色氨酸(7aW)、α-甲基-L-色氨酸(αMeW)、β-甲基-L-色氨酸(βMeW)、Ν-甲基-L-色氨酸(ΝMeW)、鸟氨酸(orn)、瓜氨酸、正亮氨酸、γ-谷氨酸等。
[0079] 在本发明的某些实施方案中，所述坎普他汀类似物包含一种或多种Trp类似物(例如相对于坎普他汀序列，在4位和/或7位)。示例性的Trp类似物如上所述。也参见Beene,等人.Biochemistry 41:10262-10269,2002(特别描述单卤代的和多卤代的Trp类似物)；
Babitzke和Yanofsky,J.Biol.Chem.270:12452-12456,1995(特别描述甲基化的和卤代的
Trp以及其它Trp和吲哚类似物)；以及美国专利6,214,790、6,169,057、5,776,970、4,870,
097、4,576,750和4,299,838。其它Trp类似物包括在α或β碳处以及任选在吲哚环的一个或多个位置被取代(例如被甲基取代)的变体。包含两个或更多个芳族环(包括其被取代、未被取代或可替换地被取代的变体)的氨基酸作为Trp类似物是值得关注的。在本发明的某些实
施方案中，在例如4位的Trp类似物是5-甲氧基、5-甲基-、1-甲基-或1-甲酰基-色氨酸。在本发明的某些实施方案中，使用包含1-烷基取代基(例如低级烷基(例如C1-C5)取代基)的Trp
类似物(例如在4位)。在某些实施方案中，使用N(α)甲基色氨酸或5-甲基色氨酸。在某些实施方案中，使用包含1-烷酰基取代基(例如低级烷酰基(例如C1-C5))的类似物。例子包括1-乙酰基-L-色氨酸和L-β-色氨酸。
Babitzke和Yanofsky,J.Biol.Chem.270:12452-12456,1995(特别描述甲基化的和卤代的
Trp以及其它Trp和吲哚类似物)；以及美国专利6,214,790、6,169,057、5,776,970、4,870,
097、4,576,750和4,299,838。其它Trp类似物包括在α或β碳处以及任选在吲哚环的一个或多个位置被取代(例如被甲基取代)的变体。包含两个或更多个芳族环(包括其被取代、未被取代或可替换地被取代的变体)的氨基酸作为Trp类似物是值得关注的。在本发明的某些实
施方案中，在例如4位的Trp类似物是5-甲氧基、5-甲基-、1-甲基-或1-甲酰基-色氨酸。在本发明的某些实施方案中，使用包含1-烷基取代基(例如低级烷基(例如C1-C5)取代基)的Trp
类似物(例如在4位)。在某些实施方案中，使用N(α)甲基色氨酸或5-甲基色氨酸。在某些实施方案中，使用包含1-烷酰基取代基(例如低级烷酰基(例如C1-C5))的类似物。例子包括1-乙酰基-L-色氨酸和L-β-色氨酸。
[0080] 在某些实施方案中，Trp类似物的疏水性相对于Trp有所增加。例如，吲哚环可以被一个或多个烷基(例如甲基)取代。在某些实施方案中，Trp类似物参加与C3的疏水相互作用。这样的Trp类似物可以位于例如相对于坎普他汀序列的4位。在某些实施方案中，Trp类似物包含被取代的或未被取代的二环芳族环组分，或者包含两个或更多个被取代的或未被
取代的单环芳族环组分。
取代的单环芳族环组分。
[0081] 在某些实施方案中，Trp类似物与C3形成氢键的倾向相对于Trp增加，但疏水性相对于Trp没有增加。Trp类似物的极性比Trp强，和/或参加与C3上氢键供体的静电相互作用
的能力有所增加。具有增加的氢键形成性质的某些示例性Trp类似物在吲哚环上包含带负
电荷的取代基。这样的Trp类似物可以位于例如相对于坎普他汀序列的7位。
的能力有所增加。具有增加的氢键形成性质的某些示例性Trp类似物在吲哚环上包含带负
电荷的取代基。这样的Trp类似物可以位于例如相对于坎普他汀序列的7位。
[0082] 在本发明的某些实施方案中，坎普他汀类似物包含一种或多种Ala类似物(例如在相对于坎普他汀序列的9位)，例如除在侧链包含一个或多个CH2基团外都与Ala一致的Ala
类似物。在某些实施方案中，Ala类似物是无支链的单甲基氨基酸，例如2-Abu。在本发明的某些实施方案中，坎普他汀类似物包含一种或多种Trp类似物(例如，在相对于坎普他汀序
列的4位和/或7位)和一种Ala类似物(例如，在相对于坎普他汀序列的9位)。
类似物。在某些实施方案中，Ala类似物是无支链的单甲基氨基酸，例如2-Abu。在本发明的某些实施方案中，坎普他汀类似物包含一种或多种Trp类似物(例如，在相对于坎普他汀序
列的4位和/或7位)和一种Ala类似物(例如，在相对于坎普他汀序列的9位)。
[0083] 在本发明的某些实施方案中，坎普他汀类似物是包含序列为(X'aa)n-Gln-Asp-Xaa-Gly-(X"aa)m(SEQ ID NO:2)的肽的化合物，其中各X'aa和各X"aa是独立选择的氨基酸
或氨基酸类似物，其中Xaa是Trp或Trp类似物，并且其中n>1和m>1，而且n+m是5-21。所述肽具有Gln-Asp-Xaa-Gly的核心序列，其中Xaa是Trp或Trp类似物，例如，与氢键供体形成氢键的倾向相对于Trp有所增加、但在某些实施方案中疏水性相对于Trp没有增加的Trp类似物。
例如，所述类似物可以是其中Trp的吲哚环被带负电部分(例如卤素诸如氟)取代的类似物。
在一个实施方案中，Xaa是5-氟色氨酸。在没有相反证据的情况下，本领域技术人员会认识到，其序列包含此核心序列并且抑制补体激活和/或结合C3的任何非天然存在的肽都能基
于坎普他汀序列而设计。在一个替代实施方案中，Xaa是除Trp类似物外允许Gln-Asp-Xaa-
Gly肽形成β转角的氨基酸或氨基酸类似物。
或氨基酸类似物，其中Xaa是Trp或Trp类似物，并且其中n>1和m>1，而且n+m是5-21。所述肽具有Gln-Asp-Xaa-Gly的核心序列，其中Xaa是Trp或Trp类似物，例如，与氢键供体形成氢键的倾向相对于Trp有所增加、但在某些实施方案中疏水性相对于Trp没有增加的Trp类似物。
例如，所述类似物可以是其中Trp的吲哚环被带负电部分(例如卤素诸如氟)取代的类似物。
在一个实施方案中，Xaa是5-氟色氨酸。在没有相反证据的情况下，本领域技术人员会认识到，其序列包含此核心序列并且抑制补体激活和/或结合C3的任何非天然存在的肽都能基
于坎普他汀序列而设计。在一个替代实施方案中，Xaa是除Trp类似物外允许Gln-Asp-Xaa-
Gly肽形成β转角的氨基酸或氨基酸类似物。
[0084] 在本发明的某些实施方案中，所述肽具有X'aa-Gln-Asp-Xaa-Gly(SEQ ID NO:3)的核心序列，其中X'aa和Xaa选自Trp和Trp类似物。在本发明的某些实施方案中，所述肽具有X'aa-Gln-Asp-Xaa-Gly(SEQ ID NO:3)的核心序列，其中X'aa和Xaa选自Trp、Trp类似物
以及包含至少一个芳族环的其它氨基酸或氨基酸类似物。在本发明的某些实施方案中，在
肽的情况下，所述核心序列形成β转角。β转角可以是柔性的，以致当例如使用核磁共振
(NMR)评估时，所述肽可呈现两种或更多种构象。在某些实施方案中，X'aa是包含被取代的或未被取代的二环芳族环组分、或者包含两个或更多个被取代的或未被取代的单环芳族环
组分的Trp类似物。在本发明的某些实施方案中，X'aa选自：2-萘基丙氨酸、1-萘基丙氨酸、
2-茚满基甘氨酸甲酸、二氢色氨酸和苯甲酰基苯丙氨酸。在本发明的某些实施方案中，X'aa是疏水性比Trp强的Trp类似物。例如，X'aa可以是1-甲基色氨酸。在本发明的某些实施方案中，Xaa是形成氢键的倾向相对于Trp有所增加、但是在某些实施方案中疏水性相对于Trp没有增加的Trp类似物。在本发明的某些实施方案中，形成氢键的倾向相对于Trp有所增加的
Trp类似物在Trp的吲哚环上(例如在5位)包含修饰，例如卤素原子对5位的氢原子的替代。
例如，Xaa可以是5-氟色氨酸。
以及包含至少一个芳族环的其它氨基酸或氨基酸类似物。在本发明的某些实施方案中，在
肽的情况下，所述核心序列形成β转角。β转角可以是柔性的，以致当例如使用核磁共振
(NMR)评估时，所述肽可呈现两种或更多种构象。在某些实施方案中，X'aa是包含被取代的或未被取代的二环芳族环组分、或者包含两个或更多个被取代的或未被取代的单环芳族环
组分的Trp类似物。在本发明的某些实施方案中，X'aa选自：2-萘基丙氨酸、1-萘基丙氨酸、
2-茚满基甘氨酸甲酸、二氢色氨酸和苯甲酰基苯丙氨酸。在本发明的某些实施方案中，X'aa是疏水性比Trp强的Trp类似物。例如，X'aa可以是1-甲基色氨酸。在本发明的某些实施方案中，Xaa是形成氢键的倾向相对于Trp有所增加、但是在某些实施方案中疏水性相对于Trp没有增加的Trp类似物。在本发明的某些实施方案中，形成氢键的倾向相对于Trp有所增加的
Trp类似物在Trp的吲哚环上(例如在5位)包含修饰，例如卤素原子对5位的氢原子的替代。
例如，Xaa可以是5-氟色氨酸。
[0085] 在本发明的某些实施方案中，所述肽具有X'aa-Gln-Asp-Xaa-Gly-X"aa(SEQ ID NO:4)的核心序列，其中X'aa和Xaa各独立地选自Trp和Trp类似物，并且X"aa选自His、Ala、Ala类似物、Phe和Trp。在本发明的某些实施方案中，X'aa是疏水性比Trp强的Trp类似物，例如1-甲基色氨酸，或在吲哚环上(例如1、4、5或6位)具有烷基取代基的其它Trp类似物。在某些实施方案中，X'aa是包含被取代的或未被取代的二环芳族环组分、或者包含两个或更多
个被取代的或未被取代的单环芳族环组分的Trp类似物。在本发明的某些实施方案中，X'aa选自：选自：2-萘基丙氨酸、1-萘基丙氨酸、2-茚满基甘氨酸甲酸、二氢色氨酸和苯甲酰基苯丙氨酸。在本发明的某些实施方案中，Xaa是与C3形成氢键的倾向相对于Trp有所增加、但是在某些实施方案中疏水性相对于Trp没有增加的Trp类似物。在本发明的某些实施方案中，
形成氢键的倾向相对于Trp有所增加的Trp类似物在Trp的吲哚环上(例如在5位)包含修饰，
例如卤素原子对5位的氢原子的替代。例如，Xaa可以是5-氟色氨酸。在某些实施方案中，X"aa是Ala或Ala类似物(例如Abu)或另一无支链单甲基氨基酸。在本发明的某些实施方案中，所述肽具有X'aa-Gln-Asp-Xaa-Gly-X"aa(SEQ ID NO:4)的核心序列，其中X'aa和Xaa各独
立地选自Trp、Trp类似物以及包含至少一个芳族侧链的氨基酸或氨基酸类似物，并且X"aa
选自His、Ala、Ala类似物、Phe和Trp。在某些实施方案中，X"aa选自Trp类似物、芳族氨基酸和芳族氨基酸类似物。
个被取代的或未被取代的单环芳族环组分的Trp类似物。在本发明的某些实施方案中，X'aa选自：选自：2-萘基丙氨酸、1-萘基丙氨酸、2-茚满基甘氨酸甲酸、二氢色氨酸和苯甲酰基苯丙氨酸。在本发明的某些实施方案中，Xaa是与C3形成氢键的倾向相对于Trp有所增加、但是在某些实施方案中疏水性相对于Trp没有增加的Trp类似物。在本发明的某些实施方案中，
形成氢键的倾向相对于Trp有所增加的Trp类似物在Trp的吲哚环上(例如在5位)包含修饰，
例如卤素原子对5位的氢原子的替代。例如，Xaa可以是5-氟色氨酸。在某些实施方案中，X"aa是Ala或Ala类似物(例如Abu)或另一无支链单甲基氨基酸。在本发明的某些实施方案中，所述肽具有X'aa-Gln-Asp-Xaa-Gly-X"aa(SEQ ID NO:4)的核心序列，其中X'aa和Xaa各独
立地选自Trp、Trp类似物以及包含至少一个芳族侧链的氨基酸或氨基酸类似物，并且X"aa
选自His、Ala、Ala类似物、Phe和Trp。在某些实施方案中，X"aa选自Trp类似物、芳族氨基酸和芳族氨基酸类似物。
[0086] 在本发明的某些优选实施方案中，所述肽是环状的。所述肽可通过任何两个氨基酸之间的键环化，其中一个氨基酸是(X'aa)n，而另一个位于(X"aa)m内。在某些实施方案中，肽的环状部分是9到15个氨基酸长，例如10到12个氨基酸长。在某些实施方案中，肽的环状部分是11个氨基酸长，并且在2位与12位氨基酸之间具有键(例如二硫键)。例如，肽可以是
13个氨基酸长，并且在2位与12位氨基酸之间具有键，由此产生11个氨基酸长的环状部分。
13个氨基酸长，并且在2位与12位氨基酸之间具有键，由此产生11个氨基酸长的环状部分。
[0087] 在某些实施方案中，所述肽包含序列X'aa1-X'aa2-X'aa3-X'aa4-Gln-Asp-Xaa-Gly-X"aa1-X"aa2-X"aa3-X"aa4-X"aa5(SEQ ID NO:5)或由所述序列组成。在某些实施方案
中，X'aa4和Xaa选自Trp和Trp类似物，并且X'aa1、X'aa2、X'aa3、X"aa1、X"aa2、X"aa3、X"aa4和X"aa5独立地选自氨基酸和氨基酸类似物。在某些实施方案中，X'aa4和Xaa选自芳族氨基酸和芳族氨基酸类似物。X'aa1、X'aa2、X'aa3、X"aa1、X"aa2、X"aa3、X"aa4和X"aa5中的任意一个或多个可以与坎普他汀中的相应位置的氨基酸相同。在一个实施方案中，X"aa1是Ala
或无支链单甲基氨基酸。肽可以通过(i)X'aa1、X'aa2或X'aa3与(ii)X"aa2、X"aa3、X"aa4或X"aa5之间的共价键环化。在一个实施方案中，肽通过X'aa2与X"aa4之间的共价键环化。在一个实施方案中，共价结合的氨基酸各自是Cys，而且共价键是二硫(S-S)键。在其它实施方案中，共价键是C-C、C-O、C-S或C-N键。在某些实施方案中，共价结合的残基之一是其侧链包含伯胺或仲胺的氨基酸或氨基酸类似物，另一共价结合的残基是其侧链包含羧酸基团的氨
基酸或氨基酸类似物，并且共价键是酰胺键。其侧链包含伯胺或仲胺的氨基酸或氨基酸类
似物包括赖氨酸，和通式结构NH2(CH2)nCH(NH2)COOH的二氨基甲酸，诸如2,3-二氨基丙酸
(dapa)、2,4-二氨基丁酸(daba)和鸟氨酸(orn)，其中n分别为1(dapa)、2(daba)和3(orn)。
其侧链包含羧酸基团的氨基酸的例子包括二羧基氨基酸，例如谷氨酸和天冬氨酸。还可以
使用类似物，例如β-羟基-L-谷氨酸。在某些实施方案中，肽用硫醚键环化，例如，如在PCT/US2011/052442(WO/2012/040259)中所述。例如，在某些实施方案中，任意肽中的二硫键被硫醚键替代。在某些实施方案中，形成胱硫醚。在某些实施方案中，所述胱硫醚是δ-胱硫醚或γ-胱硫醚。在某些实施方案中，修饰包括：用CH2的添加来替代SEQ ID NO:5中的X'aa2和X"aa4处的半胱氨酸之间的Cys-Cys二硫键(或其它序列中的对应位置)以形成在X'aa2或X"
aa4处的高半胱氨酸，和引入硫醚键以形成胱硫醚。在一个实施方案中，所述胱硫醚是γ-胱硫醚。在另一个实施方案中，所述胱硫醚是δ-胱硫醚。根据本发明的另一种修饰包括，在不添加CH2的情况下用硫醚键替代二硫键，由此形成羊毛硫氨酸。在某些实施方案中，至少在某些条件下，与含有二硫键的坎普他汀类似物相比，含有替代硫醚的二硫键的坎普他汀类
似物具有增加的稳定性。
中，X'aa4和Xaa选自Trp和Trp类似物，并且X'aa1、X'aa2、X'aa3、X"aa1、X"aa2、X"aa3、X"aa4和X"aa5独立地选自氨基酸和氨基酸类似物。在某些实施方案中，X'aa4和Xaa选自芳族氨基酸和芳族氨基酸类似物。X'aa1、X'aa2、X'aa3、X"aa1、X"aa2、X"aa3、X"aa4和X"aa5中的任意一个或多个可以与坎普他汀中的相应位置的氨基酸相同。在一个实施方案中，X"aa1是Ala
或无支链单甲基氨基酸。肽可以通过(i)X'aa1、X'aa2或X'aa3与(ii)X"aa2、X"aa3、X"aa4或X"aa5之间的共价键环化。在一个实施方案中，肽通过X'aa2与X"aa4之间的共价键环化。在一个实施方案中，共价结合的氨基酸各自是Cys，而且共价键是二硫(S-S)键。在其它实施方案中，共价键是C-C、C-O、C-S或C-N键。在某些实施方案中，共价结合的残基之一是其侧链包含伯胺或仲胺的氨基酸或氨基酸类似物，另一共价结合的残基是其侧链包含羧酸基团的氨
基酸或氨基酸类似物，并且共价键是酰胺键。其侧链包含伯胺或仲胺的氨基酸或氨基酸类
似物包括赖氨酸，和通式结构NH2(CH2)nCH(NH2)COOH的二氨基甲酸，诸如2,3-二氨基丙酸
(dapa)、2,4-二氨基丁酸(daba)和鸟氨酸(orn)，其中n分别为1(dapa)、2(daba)和3(orn)。
其侧链包含羧酸基团的氨基酸的例子包括二羧基氨基酸，例如谷氨酸和天冬氨酸。还可以
使用类似物，例如β-羟基-L-谷氨酸。在某些实施方案中，肽用硫醚键环化，例如，如在PCT/US2011/052442(WO/2012/040259)中所述。例如，在某些实施方案中，任意肽中的二硫键被硫醚键替代。在某些实施方案中，形成胱硫醚。在某些实施方案中，所述胱硫醚是δ-胱硫醚或γ-胱硫醚。在某些实施方案中，修饰包括：用CH2的添加来替代SEQ ID NO:5中的X'aa2和X"aa4处的半胱氨酸之间的Cys-Cys二硫键(或其它序列中的对应位置)以形成在X'aa2或X"
aa4处的高半胱氨酸，和引入硫醚键以形成胱硫醚。在一个实施方案中，所述胱硫醚是γ-胱硫醚。在另一个实施方案中，所述胱硫醚是δ-胱硫醚。根据本发明的另一种修饰包括，在不添加CH2的情况下用硫醚键替代二硫键，由此形成羊毛硫氨酸。在某些实施方案中，至少在某些条件下，与含有二硫键的坎普他汀类似物相比，含有替代硫醚的二硫键的坎普他汀类
似物具有增加的稳定性。
[0088] 在某些实施方案中，所述坎普他汀类似物是包含具有以下序列的肽的化合物：
[0089] Xaa1-Cys-Val-Xaa2-Gln-Asp-Xaa2*-Gly-Xaa3-His-Arg-Cys-Xaa4(SEQ IDNO:6)；其中：
[0090] Xaa1是Ile、Val、Leu、B1-Ile、B1-Val、B1-Leu或包含Gly-Ile或B1-Gly-Ile的二肽，且B1代表第一封端部分；
[0091] Xaa2和Xaa2*独立地选自Trp和Trp类似物；
[0092] Xaa3是His、Ala或Ala类似物、Phe、Trp或Trp类似物；
[0093] Xaa4是L-Thr、D-Thr、Ile、Val、Gly、选自Thr-Ala和Thr-Asn的二肽、或包含Thr-Ala-Asn的三肽，其中L-Thr、D-Thr、Ile、Val、Gly、Ala或Asn中任一个的羧基末端-OH任选地被第二封端部分B2替换；并且
[0094] 两个Cys残基通过二硫键连接。在某些实施方案中，Xaa4是Leu、Nle、His或Phe、或选自Xaa5-Ala和Xaa5-Asn的二肽、或三肽Xaa5-Ala-Asn，其中Xaa5选自Leu、Nle、His或Phe，且其中L-Thr、D-Thr、Ile、Val、Gly、Leu、Nle、His、Phe、Ala或Asn中的中任一个的羧基末端-OH任选地被第二封端部分B2替换；并且两个Cys残基通过二硫键连接。
[0095] 在其它实施方案中，Xaa1不存在，或为任何氨基酸或氨基酸类似物，并且Xaa2、Xaa2*、Xaa3和Xaa4如上面所定义。如果Xaa1不存在，则N末端Cys残基可以具有与其连接的封端部分B1。
[0096] 在另一个实施方案中，Xaa4为任何氨基酸或氨基酸类似物，并且Xaa1、Xaa2、Xaa2*和Xaa3如上面所定义。在另一个实施方案中，Xaa4是选自Thr-Ala和Thr-Asn的二肽，其中羧基末端-OH或者Ala或Asn任选地被第二封端部分B2替换。
[0097] 在SEQ ID NO:6的坎普他汀类似物的任意实施方案中，Xaa2可以是Trp。
[0098] 在SEQ ID NO:6的坎普他汀类似物的任意实施方案中，Xaa2可以是包含被取代的或未被取代的二环芳族环组分、或者包含两个或更多个被取代的或未被取代的单环芳族环
组分的Trp类似物。例如，Trp类似物可以选自2-萘基丙氨酸(2-NaI)、1-萘基丙氨酸(1-
NaI)、2-茚满基甘氨酸甲酸(Ig1)、二氢色氨酸(Dht)和4-苯甲酰基-L-苯丙氨酸。
组分的Trp类似物。例如，Trp类似物可以选自2-萘基丙氨酸(2-NaI)、1-萘基丙氨酸(1-
NaI)、2-茚满基甘氨酸甲酸(Ig1)、二氢色氨酸(Dht)和4-苯甲酰基-L-苯丙氨酸。
[0099] 在SEQ ID NO:6的坎普他汀类似物的任意实施方案中，Xaa2可以是疏水性比Trp强的Trp类似物。例如，所述Trp类似物可以选自1-甲基色氨酸、4-甲基色氨酸、5-甲基色氨酸和6-甲基色氨酸。在一个实施方案中，Trp类似物是1-甲基色氨酸。在一个实施方案中，Xaa2是1-甲基色氨酸，Xaa2*是Trp，Xaa3是Ala，并且其它氨基酸与坎普他汀的那些相同。
[0100] 在SEQ ID NO:6的坎普他汀类似物的任意实施方案中，Xaa2*可以是Trp类似物，例如与C3形成氢键的倾向相对于Trp有所增加并且在某些实施方案中疏水性相对于Trp没有
增加的Trp类似物。在某些实施方案中，Trp类似物在吲哚环上包含带负电取代基。例如，Trp类似物可以选自5-氟色氨酸和6-氟色氨酸。
增加的Trp类似物。在某些实施方案中，Trp类似物在吲哚环上包含带负电取代基。例如，Trp类似物可以选自5-氟色氨酸和6-氟色氨酸。
[0101] 在本发明的某些实施方案中，Xaa2是Trp，并且Xaa2*是与C3形成氢键的倾向相对于Trp有所增加并且在某些实施方案中疏水性相对于Trp没有增加的Trp类似物。在SEQ ID
NO:6的坎普他汀类似物的某些实施方案中，Xaa2是疏水性比Trp强的Trp类似物，例如选自
1-甲基色氨酸、4-甲基色氨酸、5-甲基色氨酸和6-甲基色氨酸的Trp类似物，并且Xaa2*是与C3形成氢键的倾向相对于Trp有所增加并且在某些实施方案中疏水性相对于Trp没有增加
的Trp类似物。例如，在一个实施方案中，Xaa2是甲基色氨酸，并且Xaa2*是5-氟色氨酸。
NO:6的坎普他汀类似物的某些实施方案中，Xaa2是疏水性比Trp强的Trp类似物，例如选自
1-甲基色氨酸、4-甲基色氨酸、5-甲基色氨酸和6-甲基色氨酸的Trp类似物，并且Xaa2*是与C3形成氢键的倾向相对于Trp有所增加并且在某些实施方案中疏水性相对于Trp没有增加
的Trp类似物。例如，在一个实施方案中，Xaa2是甲基色氨酸，并且Xaa2*是5-氟色氨酸。
[0102] 在某些上述实施方案中，Xaa3是Ala。在某些上述实施方案中，Xaa3是无支链的单甲基氨基酸，例如Abu。
[0103] 本发明另外提供了如上文所述的SEQ ID NO:6的坎普他汀类似物，其中Xaa2和Xaa2*独立地选自Trp、Trp类似物，以及包含至少一个芳族环的其它氨基酸或氨基酸类似
物，并且Xaa3是His、Ala或Ala类似物、Phe、Trp、Trp类似物、或另一芳族氨基酸或芳族氨基酸类似物。
物，并且Xaa3是His、Ala或Ala类似物、Phe、Trp、Trp类似物、或另一芳族氨基酸或芳族氨基酸类似物。
[0104] 在本发明的某些实施方案中，存在于本文所述的任意坎普他汀类似物的N末端或C末端处的封端部分是使肽稳定以防降解(否则其将在哺乳动物(例如人类或非人灵长类动
物)血液或间隙液中发生)的任何部分。例如，封端部分B1可以是改变肽的N末端结构从而抑制肽的N末端氨基酸与相邻氨基酸之间的肽键裂解的任何部分。封端部分B2可以是改变肽
的C末端结构从而抑制肽的C末端氨基酸与相邻氨基酸之间的肽键裂解的任何部分。可以使
用本领域已知的任何合适的封端部分。在本发明的某些实施方案中，封端部分B1包含酰基
(即，羧酸在去除-OH基团后剩余的部分)。酰基通常包含1-12个碳，例如1-6个碳。例如，在本发明的某些实施方案中，封端部分B1选自：甲酰基、乙酰基、丙酰基、丁酰基、异丁酰基、戊酰基、异戊酰基等。在一个实施方案中，封端部分B1是乙酰基，即，Xaa1是Ac-Ile、Ac-Val、Ac-Leu或Ac-Gly-Ile。
物)血液或间隙液中发生)的任何部分。例如，封端部分B1可以是改变肽的N末端结构从而抑制肽的N末端氨基酸与相邻氨基酸之间的肽键裂解的任何部分。封端部分B2可以是改变肽
的C末端结构从而抑制肽的C末端氨基酸与相邻氨基酸之间的肽键裂解的任何部分。可以使
用本领域已知的任何合适的封端部分。在本发明的某些实施方案中，封端部分B1包含酰基
(即，羧酸在去除-OH基团后剩余的部分)。酰基通常包含1-12个碳，例如1-6个碳。例如，在本发明的某些实施方案中，封端部分B1选自：甲酰基、乙酰基、丙酰基、丁酰基、异丁酰基、戊酰基、异戊酰基等。在一个实施方案中，封端部分B1是乙酰基，即，Xaa1是Ac-Ile、Ac-Val、Ac-Leu或Ac-Gly-Ile。
[0105] 在本发明的某些实施方案中，封端部分B2是伯胺或仲胺(-NH2或-NHR1，其中R是有机部分，例如烷基)。
[0106] 在本发明的某些实施方案中，封端部分B1是中和/或降低正电荷(否则其可以在生理pH存在于N末端)的任何部分。在本发明的某些实施方案中，封端部分B2是中和/或降低负电荷(否则其可以在生理pH存在于C末端)的任何部分。
[0107] 在本发明的某些实施方案中，坎普他汀类似物分别在N末端和/或C末端被乙酰化或酰胺化。坎普他汀类似物可以在N末端被乙酰化、在C末端被酰胺化，和/或在N末端被乙酰化和在C末端被酰胺化。在本发明的某些实施方案中，坎普他汀类似物在N末端包含烷基或
芳基，而非乙酰基。
芳基，而非乙酰基。
[0108] 在某些实施方案中，所述坎普他汀类似物是包含具有以下序列的肽的化合物：
[0109] Xaa1-Cys-Val-Xaa2-Gln-Asp-Xaa2*-Gly-Xaa3-His-Arg-Cys-Xaa4(SEQ ID NO:7)；其中:
[0110] Xaa1是Ile、Val、Leu、Ac-Ile、Ac-Val、Ac-Leu或包含Gly-Ile或Ac-Gly-Ile的二肽；
[0111] Xaa2和Xaa2*独立地选自Trp和Trp类似物；
[0112] Xaa3是His、Ala或Ala类似物、Phe、Trp或Trp类似物；
[0113] Xaa4是L-Thr、D-Thr、Ile、Val、Gly、选自Thr-Ala和Thr-Asn的二肽、或包含Thr-Ala-Asn的三肽，其中L-Thr、D-Thr、Ile、Val、Gly、Ala或Asn中任一个的羧基末端-OH任选地被-NH2替换；并且两个Cys残基通过二硫键连接。在某些实施方案中，Xaa4是Leu、Nle、His、或Phe、或选自Xaa5-Ala和Xaa5-Asn的二肽、或三肽Xaa5-Ala-Asn，其中Xaa5选自Leu、Nle、His或Phe，且其中L-Thr、D-Thr、Ile、Val、Gly、Leu、Nle、His、Phe、Ala或Asn中任一个的羧基末端-OH任选地被第二封端部分B2替换；并且两个Cys残基通过二硫键连接。
[0114] 在某些实施方案中，Xaa1、Xaa2、Xaa2*、Xaa3和Xaa4如上文关于SEQ ID NO:6的各个实施方案所述。例如，在某些实施方案中，Xaa2*是Trp。在某些实施方案中，Xaa2是疏水性比Trp强的Trp类似物，例如1-甲基色氨酸。在某些实施方案中，Xaa3是Ala。在某些实施方案中，Xaa3是无支链的单甲基氨基酸。
[0115] 在本发明的某些实施方案中，Xaa1是Ile，且Xaa4是L-Thr。
[0116] 在本发明的某些实施方案中，Xaa1是Ile，Xaa2*是Trp，且Xaa4是L-Thr。
[0117] 本发明另外提供了如上文所述的SEQ ID NO:7的坎普他汀类似物，其中Xaa2和Xaa2*独立地选自Trp、Trp类似物、其它氨基酸或芳族氨基酸类似物，并且Xaa3是His、Ala或Ala类似物、Phe、Trp、Trp类似物、或另一芳族氨基酸或芳族氨基酸类似物。
[0118] 在本文所述任意坎普他汀类似物的某些实施方案中，使用Phe类似物而不是Phe。
[0119] 表1提供了可用于本发明中的坎普他汀类似物的非限制性列表。所述类似物在左边一栏中以缩写形式提及，其中指示了在指定位置(1-13)与亲本肽坎普他汀相比较的特定
修饰。与本领域的用法一致，本文中使用的“坎普他汀”和本文中相对于坎普他汀的活性描述的坎普他汀类似物的活性，表示在C末端被酰胺化的坎普他汀肽。除非另有说明，否则表1中的肽在C末端被酰胺化。粗体字用于指示某些修饰。与坎普他汀有关的活性是基于公开的数据和其中所述的测定(WO2004/026328,WO2007044668,Mallik,2005；Katragadda,2006)。
当参考多个报导活性的出版物时，使用最新公开的值，并且应认识到，在各测定之间存在差异的情况下，可以对值进行调整。还应当理解，在本发明的某些实施方案中，在表1中列出的肽当用于本发明的治疗组合物和方法中时，通过两个Cys残基之间的二硫键环化。用于环化肽的替代方式也在本发明范围内。如上面所指出的，在本发明的不同实施方案中，坎普他汀类似物(例如，本文中公开的任意坎普他汀类似物)的一个或多个氨基酸可以是N-烷基氨基
酸(例如，N-甲基氨基酸)。例如，但不限于，在所述肽的环状部分内的至少一个氨基酸、在环状部分的N末端的至少一个氨基酸和/或在环状部分的C末端的至少一个氨基酸可以是N-烷
基氨基酸，例如，N-甲基氨基酸。在本发明的某些实施方案中，例如，坎普他汀类似物包含N-甲基甘氨酸，例如，在与坎普他汀的8位对应的位置处和/或在与坎普他汀的13位对应的位
置处。在某些实施方案中，表1中的一种或多种坎普他汀类似物含有至少一个N-甲基甘氨
酸，例如，在与坎普他汀的8位对应的位置处和/或在与坎普他汀的13位对应的位置处。在某些实施方案中，表1中的一种或多种坎普他汀类似物，例如，在与坎普他汀的第13位对应的位置处，含有至少一个N-甲基异亮氨酸。例如，在表1中列出序列的肽或任意其它坎普他汀类似物序列的C末端处或邻近的Thr，可被N-甲基Ile取代。如将理解的，在某些实施方案中，所述N-甲基化的氨基酸包含在第8位的N-甲基Gly和在第13位的N-甲基Ile。在某些实施方
案中，所述N-甲基化的氨基酸包括在核心序列如SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4中的N-甲基
Gly。在某些实施方案中，所述N-甲基化的氨基酸包括在核心序列如SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:7中的N-甲基Gly。
修饰。与本领域的用法一致，本文中使用的“坎普他汀”和本文中相对于坎普他汀的活性描述的坎普他汀类似物的活性，表示在C末端被酰胺化的坎普他汀肽。除非另有说明，否则表1中的肽在C末端被酰胺化。粗体字用于指示某些修饰。与坎普他汀有关的活性是基于公开的数据和其中所述的测定(WO2004/026328,WO2007044668,Mallik,2005；Katragadda,2006)。
当参考多个报导活性的出版物时，使用最新公开的值，并且应认识到，在各测定之间存在差异的情况下，可以对值进行调整。还应当理解，在本发明的某些实施方案中，在表1中列出的肽当用于本发明的治疗组合物和方法中时，通过两个Cys残基之间的二硫键环化。用于环化肽的替代方式也在本发明范围内。如上面所指出的，在本发明的不同实施方案中，坎普他汀类似物(例如，本文中公开的任意坎普他汀类似物)的一个或多个氨基酸可以是N-烷基氨基
酸(例如，N-甲基氨基酸)。例如，但不限于，在所述肽的环状部分内的至少一个氨基酸、在环状部分的N末端的至少一个氨基酸和/或在环状部分的C末端的至少一个氨基酸可以是N-烷
基氨基酸，例如，N-甲基氨基酸。在本发明的某些实施方案中，例如，坎普他汀类似物包含N-甲基甘氨酸，例如，在与坎普他汀的8位对应的位置处和/或在与坎普他汀的13位对应的位
置处。在某些实施方案中，表1中的一种或多种坎普他汀类似物含有至少一个N-甲基甘氨
酸，例如，在与坎普他汀的8位对应的位置处和/或在与坎普他汀的13位对应的位置处。在某些实施方案中，表1中的一种或多种坎普他汀类似物，例如，在与坎普他汀的第13位对应的位置处，含有至少一个N-甲基异亮氨酸。例如，在表1中列出序列的肽或任意其它坎普他汀类似物序列的C末端处或邻近的Thr，可被N-甲基Ile取代。如将理解的，在某些实施方案中，所述N-甲基化的氨基酸包含在第8位的N-甲基Gly和在第13位的N-甲基Ile。在某些实施方
案中，所述N-甲基化的氨基酸包括在核心序列如SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4中的N-甲基
Gly。在某些实施方案中，所述N-甲基化的氨基酸包括在核心序列如SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:7中的N-甲基Gly。
[0120] 表1
[0121]
[0122]
[0123] NA＝不可得到
[0124] 在本发明的组合物和方法的某些实施方案中，所述坎普他汀类似物具有选自序列9-36的序列。在本发明的组合物和方法的某些实施方案中，所述坎普他汀类似物具有选自
SEQ ID NO:14、21、28、29、32、33、34和36的序列。在本发明的组合物和/或方法的某些实施方案中，所述坎普他汀类似物具有选自SEQ ID NO:30和31的序列。在本发明的组合物和方
法的一个实施方案中，所述坎普他汀类似物具有SEQ ID NO:28的序列。在本发明的组合物
和方法的一个实施方案中，所述坎普他汀类似物具有SEQ ID NO:32的序列。在本发明的组
合物和方法的一个实施方案中，所述坎普他汀类似物具有SEQ ID NO:34的序列。在本发明
的组合物和方法的一个实施方案中，所述坎普他汀类似物具有SEQ ID NO:36的序列。
SEQ ID NO:14、21、28、29、32、33、34和36的序列。在本发明的组合物和/或方法的某些实施方案中，所述坎普他汀类似物具有选自SEQ ID NO:30和31的序列。在本发明的组合物和方
法的一个实施方案中，所述坎普他汀类似物具有SEQ ID NO:28的序列。在本发明的组合物
和方法的一个实施方案中，所述坎普他汀类似物具有SEQ ID NO:32的序列。在本发明的组
合物和方法的一个实施方案中，所述坎普他汀类似物具有SEQ ID NO:34的序列。在本发明
的组合物和方法的一个实施方案中，所述坎普他汀类似物具有SEQ ID NO:36的序列。
[0125] 在某些实施方案中，封端部分B1包含氨基酸，所述氨基酸可表示为Xaa0。在某些实施方案中，封端部分B2包含氨基酸，所述氨基酸可表示为XaaN。在某些实施方案中，封端部分B1和/或B2包含非标准氨基酸，例如D-氨基酸、N-烷基氨基酸(例如，N-甲基氨基酸)。在某些实施方案中，封端部分B1和/或B2包含非标准氨基酸，所述非标准氨基酸是标准氨基酸的类似物。在某些实施方案中，氨基酸类似物与其所类似的标准氨基酸相比，包含低级烷基、低级烷氧基、或卤素取代基。在某些实施方案中，取代基在侧链上。在某些实施方案中，取代基在α碳原子上。在某些实施方案中，封端部分B1包含氨基酸，例如，非标准氨基酸，进一步包含B1a部分。例如，封端部分B1可表示为B1a-Xaa0。在某些实施方案中，B1中和/或降低正电荷，否则所述正电荷在生理pH下可存在于N末端。在某些实施方案中，B1a包含，例如，酰基基团，或由其组成，所述酰基基团例如，包含，1-12个碳，例如，1-6个碳。在某些实施方案中，封端部分B1a选自下组：甲酰基、乙酰基、丙酰基、丁酰基、异丁酰基、戊酰基、异戊酰基等。在某些实施方案中，包含氨基酸(例如，非标准氨基酸)的封端部分B2，可以进一步包含B2a部分。例如，封端部分B2可表示为XaaN-B2a，其中N代表所述氨基酸的适当的编号(该编号将取决于所述肽的其余部分所使用的编号方式)。在某些实施方案中，B2a中和/或降低可能在生理pH
2a
下存在于N末端的负电荷。在某些实施方案中，B 包含伯胺或仲胺(例如，NH2)或由其组成。
应该理解，在多个实施方案中，B1a-Xaa0和/或XaaN-B2a部分的封闭活性可由任一或两个所述部分的组分提供。在某些实施方案中，封端部分或其一部分，例如，氨基酸残基，可能对所述化合物对C3或C3b的亲和力的增强和/或提高所述化合物的活性做出贡献。在某些实施方
案中，对氨基酸残基的亲和力或活性的贡献可以与对封闭活性的贡献至少同样重要。例如，在某些实施方案中，B1a-Xaa0和/或XaaN-B2a中的Xaa0和/或XaaN可以主要起到增强所述化
合物的亲和力或活性的作用，而B1a和/或B2a可以抑制对所述肽的消化和/或中和所述肽的
电荷。在某些实施方案中，坎普他汀类似物包含SEQ ID NO:5-36中任一个的氨基酸序列，其中SEQ ID NO:5-36在N末端和/或C末端进一步延伸。在某些实施方案中，所述序列可被表示为B1a-Xaa0-SEQUENCE-XaaN-B2a，其中SEQUENCE代表SEQ ID NO:5-36中的任一个，其中B1a和B2a可以独立地存在或缺失。例如，在某些实施方案中，坎普他汀类似物包含B1a-Xaa0-X'
aa1-X'aa2-X'aa3-X'aa4-Gln-Asp-Xaa-Gly-X"aa1-X"aa2-X"aa3-X"aa4-X"aa5-XaaN-B2a
(SEQ ID NO:69)，其中X'aa1-X'aa2-X'aa3-X'aa4、Xaa、X"aa1、X"aa2、X"aa3、X"aa4和X"aa5如以上对SEQ ID NO：5的描述。
2a
下存在于N末端的负电荷。在某些实施方案中，B 包含伯胺或仲胺(例如，NH2)或由其组成。
应该理解，在多个实施方案中，B1a-Xaa0和/或XaaN-B2a部分的封闭活性可由任一或两个所述部分的组分提供。在某些实施方案中，封端部分或其一部分，例如，氨基酸残基，可能对所述化合物对C3或C3b的亲和力的增强和/或提高所述化合物的活性做出贡献。在某些实施方
案中，对氨基酸残基的亲和力或活性的贡献可以与对封闭活性的贡献至少同样重要。例如，在某些实施方案中，B1a-Xaa0和/或XaaN-B2a中的Xaa0和/或XaaN可以主要起到增强所述化
合物的亲和力或活性的作用，而B1a和/或B2a可以抑制对所述肽的消化和/或中和所述肽的
电荷。在某些实施方案中，坎普他汀类似物包含SEQ ID NO:5-36中任一个的氨基酸序列，其中SEQ ID NO:5-36在N末端和/或C末端进一步延伸。在某些实施方案中，所述序列可被表示为B1a-Xaa0-SEQUENCE-XaaN-B2a，其中SEQUENCE代表SEQ ID NO:5-36中的任一个，其中B1a和B2a可以独立地存在或缺失。例如，在某些实施方案中，坎普他汀类似物包含B1a-Xaa0-X'
aa1-X'aa2-X'aa3-X'aa4-Gln-Asp-Xaa-Gly-X"aa1-X"aa2-X"aa3-X"aa4-X"aa5-XaaN-B2a
(SEQ ID NO:69)，其中X'aa1-X'aa2-X'aa3-X'aa4、Xaa、X"aa1、X"aa2、X"aa3、X"aa4和X"aa5如以上对SEQ ID NO：5的描述。
[0126] 在某些实施方案中，坎普他汀类似物包含B1a-Xaa0-Xaa1-Cys-Val-Xaa2-Gln-Asp-Xaa2*-Gly-Xaa3-His-Arg-Cys-Xaa4-XaaN-B2a(SEQ ID NO:70)，其中Xaa1、Xaa2、Xaa2*、Xaa3和Xaa4如以上对SEQ ID NO：6的描述，或者其中Xaa1、Xaa2、Xaa2*、Xaa3和Xaa4如以上对SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:7的描述。
[0127] 在某些实施方案中，坎普他汀类似物包含B1a-Xaa0-Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaa10-Xaa11-Xaa12-Xaa13-XaaN-B2a(SEQ ID NO:71)，其中Xaa1、
Xaa2、Xaa3、Xaa4、Xaa5、Xaa6、Xaa7、Xaa8、Xaa9、Xaa10、Xaa11、Xaa12和Xaa13与SEQ ID NO:
9-36任一个的第1-13位处的氨基酸相同。
Xaa2、Xaa3、Xaa4、Xaa5、Xaa6、Xaa7、Xaa8、Xaa9、Xaa10、Xaa11、Xaa12和Xaa13与SEQ ID NO:
9-36任一个的第1-13位处的氨基酸相同。
[0128] 在某些实施方案中，在任意坎普他汀类似物序列中的Xaa0和/或XaaN包含氨基酸，所述氨基酸包含在一个或多个位点处具有烷基取代基的芳族环。在某些实施方案中，烷基
取代基是低级烷基取代基。例如，在某些实施方案中，烷基取代基是甲基或乙基基团。在某些实施方案中，取代基位于不破坏所述化合物的所述芳族特性的任意位点。在某些实施方
案中，取代基位于不破坏该取代基所连接的环的所述芳族特性的任意位点。在某些实施方
案中，取代基位于第1、2、3、4或5位处。在某些实施方案中，Xaa0包含酪氨酸、2-羟基苯丙氨酸或3-羟基苯丙氨酸的O-甲基类似物。对于本申请的目的，可用小写的“m”后面跟着三个字母的氨基酸缩写来具体表示所述氨基酸是N-甲基氨基酸。例如，当本文中出现缩写“mGly”时，其指代N-甲基甘氨酸(有时也表示为肌氨酸或Sar)。在某些实施方案中，Xaa0是或包含mGly、Tyr、Phe、Arg、Trp、Thr、Tyr(Me)、Cha、mPhe、mVal、mIle、mAla、DTyr、DPhe、DArg、DTrp、DThr、DTyr(Me)、mPhe、mVal、mIle、DAla或Dcha。例如，在某些实施方案中，坎普他汀类似物包含具有序列B1-Ile-[Cys-Val-Trp(Me)-Gln-Asp-Trp-mGly-Ala-His-Arg-Cys]-mIle-B2
(SEQ ID NO:72)或B1-Ile-[Cys-Val-Trp(Me)-Gln-Asp-Trp-mGly-Ala-His-Arg-Cys]-
mIle-B2(SEQ ID NO:73)的肽。在所述活性化合物中，所述两个Cys残基由二硫键连接。在某些实施方案中，所述肽在所述N末端乙酰化和/或在所述C末端酰胺化。在某些实施方案中，如上所述，B1包含B1a-Xaa0和/或B2包含XaaN-B2a。例如，在某些实施方案中，B1包含Gly、mGly、Tyr、Phe、Arg、Trp、Thr、Tyr(Me)、mPhe、mVal、mIle、mAla、DTyr、DPhe、DTrp、DCha、DAla
2 1
或由其组成，以及B包含NH2，例如，mIle的羧基末端-OH被NH2取代。在某些实施方案中，B包含mGly、Tyr、Dtyr或Tyr(Me)或由其组成，以及B2包含NH2，例如，mIle的羧基末端-OH被NH2取代。在某些实施方案中，在Xaa1位处的Ile被Gly取代。所选的坎普他汀类似物的补体抑制效力和/或C3b结合参数在WO/2010/127336(PCT/US2010/033345)和/或Qu,et al.,
Immunobiology(2012),doi:10.1016/j.imbio.2012.06.003中进行描述。
取代基是低级烷基取代基。例如，在某些实施方案中，烷基取代基是甲基或乙基基团。在某些实施方案中，取代基位于不破坏所述化合物的所述芳族特性的任意位点。在某些实施方
案中，取代基位于不破坏该取代基所连接的环的所述芳族特性的任意位点。在某些实施方
案中，取代基位于第1、2、3、4或5位处。在某些实施方案中，Xaa0包含酪氨酸、2-羟基苯丙氨酸或3-羟基苯丙氨酸的O-甲基类似物。对于本申请的目的，可用小写的“m”后面跟着三个字母的氨基酸缩写来具体表示所述氨基酸是N-甲基氨基酸。例如，当本文中出现缩写“mGly”时，其指代N-甲基甘氨酸(有时也表示为肌氨酸或Sar)。在某些实施方案中，Xaa0是或包含mGly、Tyr、Phe、Arg、Trp、Thr、Tyr(Me)、Cha、mPhe、mVal、mIle、mAla、DTyr、DPhe、DArg、DTrp、DThr、DTyr(Me)、mPhe、mVal、mIle、DAla或Dcha。例如，在某些实施方案中，坎普他汀类似物包含具有序列B1-Ile-[Cys-Val-Trp(Me)-Gln-Asp-Trp-mGly-Ala-His-Arg-Cys]-mIle-B2
(SEQ ID NO:72)或B1-Ile-[Cys-Val-Trp(Me)-Gln-Asp-Trp-mGly-Ala-His-Arg-Cys]-
mIle-B2(SEQ ID NO:73)的肽。在所述活性化合物中，所述两个Cys残基由二硫键连接。在某些实施方案中，所述肽在所述N末端乙酰化和/或在所述C末端酰胺化。在某些实施方案中，如上所述，B1包含B1a-Xaa0和/或B2包含XaaN-B2a。例如，在某些实施方案中，B1包含Gly、mGly、Tyr、Phe、Arg、Trp、Thr、Tyr(Me)、mPhe、mVal、mIle、mAla、DTyr、DPhe、DTrp、DCha、DAla
2 1
或由其组成，以及B包含NH2，例如，mIle的羧基末端-OH被NH2取代。在某些实施方案中，B包含mGly、Tyr、Dtyr或Tyr(Me)或由其组成，以及B2包含NH2，例如，mIle的羧基末端-OH被NH2取代。在某些实施方案中，在Xaa1位处的Ile被Gly取代。所选的坎普他汀类似物的补体抑制效力和/或C3b结合参数在WO/2010/127336(PCT/US2010/033345)和/或Qu,et al.,
Immunobiology(2012),doi:10.1016/j.imbio.2012.06.003中进行描述。
[0129] 在某些实施方案中，封端部分或其一部分，例如，氨基酸残基，可能对所述化合物对C3或C3b的亲和力的增强和/或所述化合物的活性的提高做出贡献。在某些实施方案中，对氨基酸或氨基酸类似物的亲和力和活性的贡献可能比对封闭活性的贡献更显著。
[0130] 在本发明的组合物和方法的某些实施方案中，所述坎普他汀类似物具有表1中描绘的序列，但是其中Ac-基团被如本申请中所述的替代封端部分B1替换。在某些实施方案
中，所述-NH2基团被如本申请中所述的替代封端部分B2替换。
中，所述-NH2基团被如本申请中所述的替代封端部分B2替换。
[0131] 在一个实施方案中，所述坎普他汀类似物结合与坎普他汀基本上相同的人类C3的β链的区域。在一个实施方案中，坎普他汀类似物是这样的化合物：其结合至坎普他汀所结合的人类C3的β链的C末端部分的分子量为约40kDa的片段(Soulika,A.M.,等人,
Mol.Immunol.,35:160,1998；Soulika,A.M.,等人,Mol.Immunol.43(12):2023-9,2006)。在某些实施方案中，所述坎普他汀类似物是这样的化合物：其结合至如在坎普他汀-C3结构
(例如，晶体结构或NMR衍生的3D结构)中确定的坎普他汀结合位点。在某些实施方案中，所述坎普他汀类似物是这样的化合物：其可以置换坎普他汀-C3结构中的坎普他汀，并与C3形成与坎普他汀基本上相同的分子间接触。在某些实施方案中，所述坎普他汀类似物是这样
的化合物：其结合至肽-C3结构(例如晶体结构)中具有表1所述序列(例如SEQ ID NO:14、
21、28、29、32、33、34或36、37、37A、38A、39A、40A或41A或本申请公开的另一坎普他汀类似物序列)的肽的结合位点。在某些实施方案中，所述坎普他汀类似物是这样的化合物：其结合至肽-C3结构(例如晶体结构)中具有SEQ ID NO:30或31的肽的结合位点。在某些实施方案
中，所述坎普他汀类似物是这样的化合物：其可以置换肽-C3结构中具有SEQ ID NO:9-36
(例如SEQ ID NO:14、21、28、29、32、33、34或36、37、37A、38A、39A、40A或41A或本申请公开的另一坎普他汀类似物序列)的肽，并且能与C3形成与所述肽基本上相同的分子间接触。在某些实施方案中，所述坎普他汀类似物是这样的化合物：其可以置换肽-C3结构中SEQ ID NO:
30或31的肽，并且能与C3形成与所述肽基本上相同的分子间接触。
Mol.Immunol.,35:160,1998；Soulika,A.M.,等人,Mol.Immunol.43(12):2023-9,2006)。在某些实施方案中，所述坎普他汀类似物是这样的化合物：其结合至如在坎普他汀-C3结构
(例如，晶体结构或NMR衍生的3D结构)中确定的坎普他汀结合位点。在某些实施方案中，所述坎普他汀类似物是这样的化合物：其可以置换坎普他汀-C3结构中的坎普他汀，并与C3形成与坎普他汀基本上相同的分子间接触。在某些实施方案中，所述坎普他汀类似物是这样
的化合物：其结合至肽-C3结构(例如晶体结构)中具有表1所述序列(例如SEQ ID NO:14、
21、28、29、32、33、34或36、37、37A、38A、39A、40A或41A或本申请公开的另一坎普他汀类似物序列)的肽的结合位点。在某些实施方案中，所述坎普他汀类似物是这样的化合物：其结合至肽-C3结构(例如晶体结构)中具有SEQ ID NO:30或31的肽的结合位点。在某些实施方案
中，所述坎普他汀类似物是这样的化合物：其可以置换肽-C3结构中具有SEQ ID NO:9-36
(例如SEQ ID NO:14、21、28、29、32、33、34或36、37、37A、38A、39A、40A或41A或本申请公开的另一坎普他汀类似物序列)的肽，并且能与C3形成与所述肽基本上相同的分子间接触。在某些实施方案中，所述坎普他汀类似物是这样的化合物：其可以置换肽-C3结构中SEQ ID NO:
30或31的肽，并且能与C3形成与所述肽基本上相同的分子间接触。
[0132] 本领域普通技术人员使用常规实验方法能够容易地确定坎普他汀类似物是否结合C3的β链的C末端部分的片段。例如，本领域技术人员可以如下合成可光交联形式的坎普他汀类似物：在所述化合物中，例如在序列的C末端，包括光交联氨基酸，例如对苯甲酰基-L-苯丙氨酸(Bpa)(Soulika,A.M.,等人，出处同上)。可以任选地包括额外氨基酸，例如表位标签，如FLAG标签或HA标签，以便利化合物的检测，例如，通过蛋白质印迹法。将坎普他汀类似物与所述片段一起温育，并开始交联。坎普他汀类似物与C3片段的共定位指示结合。也可以使用表面等离子体共振来确定坎普他汀类似物是否结合C3或其片段上的坎普他汀结合
位点。本领域技术人员能够使用分子建模软件程序来预测一种化合物是否能与C3形成与坎
普他汀或具有表1中任意肽的序列(例如，SEQ ID NO:14、21、28、29、32、33、34或36，或在某些实施方案中，SEQ ID NO:30或31、37、37A、38A、39A、40A或41A或本申请公开的另一坎普他汀类似物序列)的肽基本上相同的分子间接触。
位点。本领域技术人员能够使用分子建模软件程序来预测一种化合物是否能与C3形成与坎
普他汀或具有表1中任意肽的序列(例如，SEQ ID NO:14、21、28、29、32、33、34或36，或在某些实施方案中，SEQ ID NO:30或31、37、37A、38A、39A、40A或41A或本申请公开的另一坎普他汀类似物序列)的肽基本上相同的分子间接触。
[0133] 坎普他汀类似物可以通过本领域已知的多种肽合成方法经由氨基酸残基的缩合来制备，例如，根据常规肽合成方法，可以使用本领域已知的方法，通过在体外或在活细胞中从编码它们的合适核酸序列表达来制备。例如，可以使用如下述文献中所述的标准固相
方法来合成肽：Malik，出处同上，Katragadda，出处同上，WO2004026328，和/或
WO2007062249。使用本领域已知的各种保护基和方法，可以对潜在反应性部分诸如氨基和
羧基、反应性官能团等进行保护和随后去保护。参见，例如，“Protective Groups in
Organic Synthesis”,第3版Greene,T.W.和Wuts,P.G.,编,John Wiley&Sons,New York:
1999。使用标准方案诸如反相HPLC，可以纯化肽。如果需要的话，使用已知方法诸如反相
HPLC，可以进行非对映异构肽的分离。如果需要的话，可以将制剂低压冻干，随后溶解于合适溶剂(例如，水)中。使用碱(例如NaOH)，可以调整所得溶液的pH，例如调到生理pH。如果需要的话，可以通过质谱法来表征肽制剂，例如以确认质量和/或二硫键形成。参见，例如，Mallik，2005，和Katragadda，2006。
方法来合成肽：Malik，出处同上，Katragadda，出处同上，WO2004026328，和/或
WO2007062249。使用本领域已知的各种保护基和方法，可以对潜在反应性部分诸如氨基和
羧基、反应性官能团等进行保护和随后去保护。参见，例如，“Protective Groups in
Organic Synthesis”,第3版Greene,T.W.和Wuts,P.G.,编,John Wiley&Sons,New York:
1999。使用标准方案诸如反相HPLC，可以纯化肽。如果需要的话，使用已知方法诸如反相
HPLC，可以进行非对映异构肽的分离。如果需要的话，可以将制剂低压冻干，随后溶解于合适溶剂(例如，水)中。使用碱(例如NaOH)，可以调整所得溶液的pH，例如调到生理pH。如果需要的话，可以通过质谱法来表征肽制剂，例如以确认质量和/或二硫键形成。参见，例如，Mallik，2005，和Katragadda，2006。
[0134] 在一些实施方案中，坎普他汀类似物可以是或者可以包含细胞反应性坎普他汀类似物。细胞反应性坎普他汀类似物是这样的化合物：其包含坎普他汀类似物部分和细胞反
应性官能团，所述官能团能够与在细胞表面上暴露的官能团反应(例如，在生理条件下)以
形成共价键。所述细胞反应性坎普他汀类似物因而变得与细胞共价连接。不希望受任何特
定理论约束，细胞连接的坎普他汀类似物会保护细胞免于补体介导的损伤，例如，通过结合在细胞表面处和/或在细胞附近的C3(其可以是C3(H2O)的形式)和抑制C3裂解和激活，和/
或通过结合C3b和抑制它在细胞上的沉积或在补体激活级联中的参与。在本发明的某些方
面，使分离的细胞与细胞反应性坎普他汀类似物离体(在体外)接触。在本发明的某些方面，所述细胞存在于分离的组织或器官(例如，要移植进受试者中的组织或器官)中。在本发明
的某些方面，通过将细胞反应性坎普他汀类似物施用给受试者，使细胞与细胞反应性坎普
他汀类似物在体内接触。所述细胞反应性坎普他汀类似物变得在体内与细胞共价连接。在
某些方面，本发明的方案会保护细胞、组织和/或器官免于补体激活的有害作用至少2周，在这期间无需再治疗。
应性官能团，所述官能团能够与在细胞表面上暴露的官能团反应(例如，在生理条件下)以
形成共价键。所述细胞反应性坎普他汀类似物因而变得与细胞共价连接。不希望受任何特
定理论约束，细胞连接的坎普他汀类似物会保护细胞免于补体介导的损伤，例如，通过结合在细胞表面处和/或在细胞附近的C3(其可以是C3(H2O)的形式)和抑制C3裂解和激活，和/
或通过结合C3b和抑制它在细胞上的沉积或在补体激活级联中的参与。在本发明的某些方
面，使分离的细胞与细胞反应性坎普他汀类似物离体(在体外)接触。在本发明的某些方面，所述细胞存在于分离的组织或器官(例如，要移植进受试者中的组织或器官)中。在本发明
的某些方面，通过将细胞反应性坎普他汀类似物施用给受试者，使细胞与细胞反应性坎普
他汀类似物在体内接触。所述细胞反应性坎普他汀类似物变得在体内与细胞共价连接。在
某些方面，本发明的方案会保护细胞、组织和/或器官免于补体激活的有害作用至少2周，在这期间无需再治疗。
[0135] 在某些实施方案中，本发明提供了和/或利用了包含靶向部分的坎普他汀类似物，所述靶向部分与存在于细胞或组织表面上的靶分子非共价地结合，或与未附着至细胞或组
织的细胞外物质非共价地结合。这样的坎普他汀类似物在本文中被称作“靶向坎普他汀类
似物”。通常所述靶分子是连接至细胞膜和暴露于细胞表面上的蛋白或碳水化合物。所述靶向部分将坎普他汀类似物靶向细胞、组织或易于补体激活的位置。在本发明的某些方面，将分离的细胞与靶向坎普他汀类似物进行离体(在体外)接触。在本发明的某些方面，所述细
胞存在于分离的组织或器官(例如，要移植进受试者中的组织或器官)中。在本发明的某些
方面，对受试者施用靶向坎普他汀类似物，且在体内与细胞、组织或细胞外物质非共价结
合。在某些方面，本发明的方案会保护细胞、组织和/或器官免于补体激活的有害作用至少2周，在这期间无需再治疗。在某些实施方案中，靶向坎普他汀类似物包含靶向部分和细胞反应性部分。所述靶向部分使所述坎普他汀类似物靶向，例如，特定的细胞类型(通过与这样的细胞上的分子非共价地结合)。然后所述细胞反应性部分共价地结合所述细胞或细胞外
物质。在其它实施方案中，靶向坎普他汀类似物不包含细胞反应性部分。
织的细胞外物质非共价地结合。这样的坎普他汀类似物在本文中被称作“靶向坎普他汀类
似物”。通常所述靶分子是连接至细胞膜和暴露于细胞表面上的蛋白或碳水化合物。所述靶向部分将坎普他汀类似物靶向细胞、组织或易于补体激活的位置。在本发明的某些方面，将分离的细胞与靶向坎普他汀类似物进行离体(在体外)接触。在本发明的某些方面，所述细
胞存在于分离的组织或器官(例如，要移植进受试者中的组织或器官)中。在本发明的某些
方面，对受试者施用靶向坎普他汀类似物，且在体内与细胞、组织或细胞外物质非共价结
合。在某些方面，本发明的方案会保护细胞、组织和/或器官免于补体激活的有害作用至少2周，在这期间无需再治疗。在某些实施方案中，靶向坎普他汀类似物包含靶向部分和细胞反应性部分。所述靶向部分使所述坎普他汀类似物靶向，例如，特定的细胞类型(通过与这样的细胞上的分子非共价地结合)。然后所述细胞反应性部分共价地结合所述细胞或细胞外
物质。在其它实施方案中，靶向坎普他汀类似物不包含细胞反应性部分。
[0136] 在某些方面，坎普他汀类似物可以是或者可以包含长效坎普他汀类似物，其中所述长效坎普他汀类似物包含延长所述化合物在体内的半衰期的部分诸如聚乙二醇(PEG)
(例如，通过降低它从血液的清除率)。在某些实施方案中，长效坎普他汀类似物不包含靶向部分或细胞反应性部分。在某些实施方案中，长效坎普他汀类似物包含靶向部分和/或细胞反应性部分。
(例如，通过降低它从血液的清除率)。在某些实施方案中，长效坎普他汀类似物不包含靶向部分或细胞反应性部分。在某些实施方案中，长效坎普他汀类似物包含靶向部分和/或细胞反应性部分。
[0137] 通过添加分子(诸如聚乙二醇(PEG)或类似分子)，可以修饰任选地连接至细胞反应性部分或靶向部分的坎普他汀类似物，以稳定化合物、降低其免疫原性、延长其在体内的寿命、增强或减弱其可溶性和/或增强其对降解的抗性。聚乙二醇化方法是本领域众所周知的(Veronese,F.M.和Harris,Adv.Drug Deliv.Rev.54,453-456,2002；Davis,F.F.,
Adv.Drug Deliv.Rev.54,457-458,2002)；Hinds,K.D.和Kim,S.W.Adv.Drug
Deliv.Rev.54,505-530(2002；Roberts,M.J.,Bentley,M.D.和Harris,J.M.Adv.Drug
Deliv.Rev.54,459-476；2002)；Wang,Y.S.等人.Adv.Drug Deliv.Rev.54,547-570,2002)。
多种聚合物诸如PEG和经修饰的PEG(包括可与多肽方便地连接的衍生化的PEG)描述于
Nektar Advanced Pegylation 2005-2006Product Catalog,Nektar Therapeutics,San
Carlos,CA中，其也提供了适当的缀合操作的细节。在另一个实施方案中，将坎普他汀类似物融合至免疫球蛋白或其部分的Fc结构域。在一些其它的实施方案中，将坎普他汀类似物
缀合至白蛋白部分或白蛋白结合肽。因而，在某些实施方案中，用一种或多种多肽或非多肽组分修饰坎普他汀类似物，例如，将坎普他汀类似物聚乙二醇化或缀合至另一个部分。在某些实施方案中，所述组分不是免疫球蛋白或其部分的Fc结构域。可以将坎普他汀类似物提
供为多聚体或超分子复合物的一部分，所述超分子复合物可以包括单一分子物质或多种不
同物质(例如，多种不同的类似物)。
Adv.Drug Deliv.Rev.54,457-458,2002)；Hinds,K.D.和Kim,S.W.Adv.Drug
Deliv.Rev.54,505-530(2002；Roberts,M.J.,Bentley,M.D.和Harris,J.M.Adv.Drug
Deliv.Rev.54,459-476；2002)；Wang,Y.S.等人.Adv.Drug Deliv.Rev.54,547-570,2002)。
多种聚合物诸如PEG和经修饰的PEG(包括可与多肽方便地连接的衍生化的PEG)描述于
Nektar Advanced Pegylation 2005-2006Product Catalog,Nektar Therapeutics,San
Carlos,CA中，其也提供了适当的缀合操作的细节。在另一个实施方案中，将坎普他汀类似物融合至免疫球蛋白或其部分的Fc结构域。在一些其它的实施方案中，将坎普他汀类似物
缀合至白蛋白部分或白蛋白结合肽。因而，在某些实施方案中，用一种或多种多肽或非多肽组分修饰坎普他汀类似物，例如，将坎普他汀类似物聚乙二醇化或缀合至另一个部分。在某些实施方案中，所述组分不是免疫球蛋白或其部分的Fc结构域。可以将坎普他汀类似物提
供为多聚体或超分子复合物的一部分，所述超分子复合物可以包括单一分子物质或多种不
同物质(例如，多种不同的类似物)。
[0138] 在某些实施方案中，坎普他汀类似物是多价化合物，其包含与聚合主链或支架共价地或非共价地连接的多个坎普他汀类似物部分。所述坎普他汀类似物部分可以是相同的
或不同的。在本发明的某些实施方案中，所述多价化合物包含单一坎普他汀类似物部分的
多个实例或拷贝。在本发明的其它实施方案中，所述多价化合物包含两种或更多种不同坎
普他汀类似物部分(例如3、4、5或更多种不同的坎普他汀类似物部分)中的每一种的一个或多个实例。在本发明的某些实施方案中，所述坎普他汀类似物部分的数目(“n”)是2-6。在本发明的其它实施方案中，n是7-20。在本发明的其它实施方案中，n是20-100。在其它实施方案中，n是100-1,000。在本发明的其它实施方案中，n是1,000至10,000。在其它实施方案中，n是10,000至50,000。在其它实施方案中，n是50,000至100,000。在其它实施方案中，n是
100,000至1,000,000。
或不同的。在本发明的某些实施方案中，所述多价化合物包含单一坎普他汀类似物部分的
多个实例或拷贝。在本发明的其它实施方案中，所述多价化合物包含两种或更多种不同坎
普他汀类似物部分(例如3、4、5或更多种不同的坎普他汀类似物部分)中的每一种的一个或多个实例。在本发明的某些实施方案中，所述坎普他汀类似物部分的数目(“n”)是2-6。在本发明的其它实施方案中，n是7-20。在本发明的其它实施方案中，n是20-100。在其它实施方案中，n是100-1,000。在本发明的其它实施方案中，n是1,000至10,000。在其它实施方案中，n是10,000至50,000。在其它实施方案中，n是50,000至100,000。在其它实施方案中，n是
100,000至1,000,000。
[0139] 坎普他汀类似物部分可以与聚合支架直接连接，或可以通过连接部分连接，所述连接部分将坎普他汀类似物部分连接至聚合支架。所述连接部分可以连接至单一坎普他汀
类似物部分和连接至聚合支架。可替代地，连接部分可以具有多个与其连接的坎普他汀类
似物部分，以使所述连接部分将多个坎普他汀类似物部分连接至聚合支架。
类似物部分和连接至聚合支架。可替代地，连接部分可以具有多个与其连接的坎普他汀类
似物部分，以使所述连接部分将多个坎普他汀类似物部分连接至聚合支架。
[0140] 在某些实施方案中，所述坎普他汀类似物包含具有含伯胺或仲胺的侧链的氨基酸，例如Lys残基。例如，使Lys残基或包含Lys残基的序列附加至坎普他汀类似物的N末端
和/或C末端。在某些实施方案中，所述Lys残基与坎普他汀类似物的环状部分被刚性或柔性隔离物分开。所述隔离物可以例如包含被取代的或未被取代的、饱和的或不饱和的烷基链、寡(乙二醇)链和/或其它部分，例如，如在第VI部分中关于接头所述。所述链的长度可以是例如2-20个碳原子。在其它实施方案中，所述隔离物是肽。所述肽隔离物的长度可以是例如
1-20个氨基酸，例如长度为4-20个氨基酸。例如，合适的隔离物可以包含多个Gly残基、Ser残基或二者，或由其组成。任选地，具有含伯胺或仲胺的侧链的氨基酸和/或隔离物中的至少一个氨基酸是D-氨基酸。可以使用多种聚合主链或支架中的任一种。例如，聚合主链或支架可以为聚酰胺、多糖、聚酸酐、聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酸酯、多肽、聚氧化乙烯或树枝状聚合物。合适的方法和聚合主链描述于例如WO98/46270(PCT/US98/07171)或WO98/47002
(PCT/US98/06963)中。在一个实施方案中，所述聚合主链或支架包含多种反应性官能团，诸如羧酸、酸酐或琥珀酰亚胺基团。所述聚合主链或支架与坎普他汀类似物反应。在一个实施方案中，所述坎普他汀类似物包含多种不同反应性官能团(诸如羧酸、酸酐或琥珀酰亚胺基团)中的任一种，其与聚合主链上的适当基团反应。可替代地，可以彼此结合形成聚合主链或支架的单体单元首先与坎普他汀类似物反应，并且得到的单体发生聚合。在另一个实施
方案中，将短链预聚合、官能化，然后使不同组成的短链的混合物装配成较长聚合物。
和/或C末端。在某些实施方案中，所述Lys残基与坎普他汀类似物的环状部分被刚性或柔性隔离物分开。所述隔离物可以例如包含被取代的或未被取代的、饱和的或不饱和的烷基链、寡(乙二醇)链和/或其它部分，例如，如在第VI部分中关于接头所述。所述链的长度可以是例如2-20个碳原子。在其它实施方案中，所述隔离物是肽。所述肽隔离物的长度可以是例如
1-20个氨基酸，例如长度为4-20个氨基酸。例如，合适的隔离物可以包含多个Gly残基、Ser残基或二者，或由其组成。任选地，具有含伯胺或仲胺的侧链的氨基酸和/或隔离物中的至少一个氨基酸是D-氨基酸。可以使用多种聚合主链或支架中的任一种。例如，聚合主链或支架可以为聚酰胺、多糖、聚酸酐、聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酸酯、多肽、聚氧化乙烯或树枝状聚合物。合适的方法和聚合主链描述于例如WO98/46270(PCT/US98/07171)或WO98/47002
(PCT/US98/06963)中。在一个实施方案中，所述聚合主链或支架包含多种反应性官能团，诸如羧酸、酸酐或琥珀酰亚胺基团。所述聚合主链或支架与坎普他汀类似物反应。在一个实施方案中，所述坎普他汀类似物包含多种不同反应性官能团(诸如羧酸、酸酐或琥珀酰亚胺基团)中的任一种，其与聚合主链上的适当基团反应。可替代地，可以彼此结合形成聚合主链或支架的单体单元首先与坎普他汀类似物反应，并且得到的单体发生聚合。在另一个实施
方案中，将短链预聚合、官能化，然后使不同组成的短链的混合物装配成较长聚合物。
[0141] IV.坎普他汀模拟物
[0142] 坎普他汀的结构是本领域已知的，并且许多具有比坎普他汀更高活性的坎普他汀类似物的NMR结构也是已知的(Malik，出处同上)。结构信息可以用于设计坎普他汀模拟物。
[0143] 在一个实施方案中，所述坎普他汀模拟物是这样的任意化合物：其与坎普他汀或任意坎普他汀类似物(例如其序列列于表1中的坎普他汀类似物)竞争结合C3或其片段(例
如坎普他汀所结合的β链的40kD片段)。在某些实施方案中，所述坎普他汀模拟物具有等于或大于坎普他汀活性的活性。在某些实施方案中，所述坎普他汀模拟物与坎普他汀相比更
稳定、更易于口服得到或具有更好的生物利用度。所述坎普他汀模拟物可以为肽、核酸、或小分子。在某些实施方案中，所述坎普他汀模拟物是与在坎普他汀-C3结构(例如晶体结构
或得自NMR实验的3-D结构)中所确定的坎普他汀的结合位点结合的化合物。在某些实施方
案中，所述坎普他汀模拟物是这样的化合物：其在坎普他汀-C3结构中可以置换坎普他汀，并且可以与C3形成与坎普他汀基本上相同的分子间接触。在某些实施方案中，所述坎普他
汀模拟物是这样的化合物：其与肽-C3结构中具有表1所列序列(例如，SEQ ID NO:14、21、
28、29、32、33、34或36，或在某些实施方案中，SEQ ID NO:30或31或其它坎普他汀类似物序列)的肽的结合位点结合。在某些实施方案中，所述坎普他汀模拟物是这样的化合物：其可以置换肽-C3结构中具有表1所列序列(例如，SEQ ID NO:14、21、28、29、32、33、34或36，或在某些实施方案中，SEQ ID NO:30或31其它坎普他汀类似物序列)的肽，并且可以与C3形成与所述肽基本上相同的分子间接触。在某些实施方案中，所述坎普他汀模拟物具有非肽主链，但具有以基于坎普他汀序列而设计的序列排列的侧链。
如坎普他汀所结合的β链的40kD片段)。在某些实施方案中，所述坎普他汀模拟物具有等于或大于坎普他汀活性的活性。在某些实施方案中，所述坎普他汀模拟物与坎普他汀相比更
稳定、更易于口服得到或具有更好的生物利用度。所述坎普他汀模拟物可以为肽、核酸、或小分子。在某些实施方案中，所述坎普他汀模拟物是与在坎普他汀-C3结构(例如晶体结构
或得自NMR实验的3-D结构)中所确定的坎普他汀的结合位点结合的化合物。在某些实施方
案中，所述坎普他汀模拟物是这样的化合物：其在坎普他汀-C3结构中可以置换坎普他汀，并且可以与C3形成与坎普他汀基本上相同的分子间接触。在某些实施方案中，所述坎普他
汀模拟物是这样的化合物：其与肽-C3结构中具有表1所列序列(例如，SEQ ID NO:14、21、
28、29、32、33、34或36，或在某些实施方案中，SEQ ID NO:30或31或其它坎普他汀类似物序列)的肽的结合位点结合。在某些实施方案中，所述坎普他汀模拟物是这样的化合物：其可以置换肽-C3结构中具有表1所列序列(例如，SEQ ID NO:14、21、28、29、32、33、34或36，或在某些实施方案中，SEQ ID NO:30或31其它坎普他汀类似物序列)的肽，并且可以与C3形成与所述肽基本上相同的分子间接触。在某些实施方案中，所述坎普他汀模拟物具有非肽主链，但具有以基于坎普他汀序列而设计的序列排列的侧链。
[0144] 本领域技术人员会明白，在确定短肽的特定所需构象后，设计肽或肽模拟物以配合所述构象的方法是众所周知的。参见，例如，G.R.Marshall(1993),Tetrahedron,49:
3547-3558；Hruby和Nikiforovich(1991),Molecular Conformation and Biological
Interactions,P.Balaram和S.Ramasehan,编,Indian Acad.of Sci.,Bangalore,PP.429-
455),Eguchi M,Kahn M.,Mini Rev Med Chem.,2(5):447-62,2002。与本发明特别相关的
是，通过考虑氨基酸残基的各种侧链的贡献(例如对于官能团的作用或空间考虑)，可以进
一步精化肽类似物的设计，如本领域关于坎普他汀及其类似物以及其它所述。
3547-3558；Hruby和Nikiforovich(1991),Molecular Conformation and Biological
Interactions,P.Balaram和S.Ramasehan,编,Indian Acad.of Sci.,Bangalore,PP.429-
455),Eguchi M,Kahn M.,Mini Rev Med Chem.,2(5):447-62,2002。与本发明特别相关的
是，通过考虑氨基酸残基的各种侧链的贡献(例如对于官能团的作用或空间考虑)，可以进
一步精化肽类似物的设计，如本领域关于坎普他汀及其类似物以及其它所述。
[0145] 本领域普通技术人员应当理解，就提供结合C3和抑制补体激活所需的特定主链构象和侧链官能团的目的而言，肽模拟物可以起与肽相同的作用。因此，本发明的范围涵盖，通过使用能连接形成合适主链构象的天然存在的氨基酸、氨基酸衍生物、类似物或非氨基
酸分子来制备结合C3的、抑制补体的化合物，并利用所述化合物。非肽类似物或包含肽和非肽组分的类似物在本文中有时称为“肽模拟物”或“电子等排模拟物”，用于指具有大致相同的主链构象特征和/或其它官能团的肽的置换或衍生化，以致其与示例性说明的肽足够类
似以抑制补体激活。更一般来说，坎普他汀模拟物是其中药效团的位置类似于它们在坎普
他汀中的定位(即使主链不同)的任何化合物。
酸分子来制备结合C3的、抑制补体的化合物，并利用所述化合物。非肽类似物或包含肽和非肽组分的类似物在本文中有时称为“肽模拟物”或“电子等排模拟物”，用于指具有大致相同的主链构象特征和/或其它官能团的肽的置换或衍生化，以致其与示例性说明的肽足够类
似以抑制补体激活。更一般来说，坎普他汀模拟物是其中药效团的位置类似于它们在坎普
他汀中的定位(即使主链不同)的任何化合物。
[0146] 肽模拟物用于开发高亲和力肽类似物的用途是本领域众所周知的。假定旋转约束与肽内的氨基酸残基的旋转约束类似，借助于拉马钱德兰图(Hruby和Nikiforovich 1991)
和其它已知技术，可以分析包含非氨基酸部分的类似物，并验证它们的构象基序。
和其它已知技术，可以分析包含非氨基酸部分的类似物，并验证它们的构象基序。
[0147] 本领域普通技术人员将能够容易地确立合适的筛选测定，以鉴别额外坎普他汀模拟物并选择具有所需抑制活性的那些模拟物。例如，可以标记(例如，用放射性标记或荧光标记)坎普他汀或其类似物，并在不同浓度试验化合物存在下与C3接触。评价试验化合物的减少坎普他汀类似物与C3结合的能力。使坎普他汀类似物与C3的结合明显减少的试验化合
物是候选坎普他汀模拟物。例如，使坎普他汀类似物-C3复合物的稳态浓度减少、或使坎普他汀类似物-C3复合物的形成速率降低至少25％或至少50％的试验化合物是候选坎普他汀
模拟物。本领域普通技术人员将认识到，可以使用所述筛选测定的多种变化形式。欲筛选的化合物包括天然产物、适体文库、噬菌体展示文库、使用组合化学合成的化合物文库等。本发明包括：基于上述核心序列来合成化合物的组合文库，和筛选所述文库以鉴别坎普他汀
模拟物。还可以使用这些方法中的任一种来鉴别新坎普他汀类似物，其具有比迄今所试验
的坎普他汀类似物更高的抑制活性。应当理解，坎普他汀模拟物可以用于本发明的细胞反
应性的化合物中，并且本发明提供了这样的细胞反应性坎普他汀模拟物。
物是候选坎普他汀模拟物。例如，使坎普他汀类似物-C3复合物的稳态浓度减少、或使坎普他汀类似物-C3复合物的形成速率降低至少25％或至少50％的试验化合物是候选坎普他汀
模拟物。本领域普通技术人员将认识到，可以使用所述筛选测定的多种变化形式。欲筛选的化合物包括天然产物、适体文库、噬菌体展示文库、使用组合化学合成的化合物文库等。本发明包括：基于上述核心序列来合成化合物的组合文库，和筛选所述文库以鉴别坎普他汀
模拟物。还可以使用这些方法中的任一种来鉴别新坎普他汀类似物，其具有比迄今所试验
的坎普他汀类似物更高的抑制活性。应当理解，坎普他汀模拟物可以用于本发明的细胞反
应性的化合物中，并且本发明提供了这样的细胞反应性坎普他汀模拟物。
[0148] V.细胞反应性的或长效的坎普他汀类似物
[0149] 如上所述，在某些实施方案中，本发明提供了和/或利用了多种细胞反应性坎普他汀类似物。在某些方面，细胞反应性坎普他汀类似物包含式A-L-M的化合物，其中A是包含细胞反应性官能团J的部分，L是任选地存在的连接部分，且M包含坎普他汀类似物部分。在不同的实施方案中，所述坎普他汀类似物部分可以包含任意坎普他汀类似物，例如，上述的任意坎普他汀类似物。式A-L-M包括：其中A-L存在于坎普他汀类似物部分的N末端的实施方
案，其中A-L存在于坎普他汀类似物部分的C末端的实施方案，其中A-L连接至坎普他汀类似物部分的氨基酸的侧链的实施方案，和其中相同的或不同的A-L存在于M的两端的实施方
案。应当理解，当某些坎普他汀类似物作为坎普他汀类似物部分存在于式A-L-M的化合物中时，坎普他汀类似物的官能团将与L的官能团反应以形成与A或L的共价键。例如，细胞反应性坎普他汀类似物(其中坎普他汀类似物部分包含含有氨基酸的坎普他汀类似物，所述氨
基酸具有含伯胺(NH2)基团的侧链(所述坎普他汀类似物可以由式R1—(NH2)表示))可以具
有式R1—NH—L-A，其中已经形成与L的新共价键(例如，N—C)，且丢失氢。因而，术语“坎普他汀类似物部分”包括这样的分子结构：其中坎普他汀类似物的至少一个原子参加与第二
部分的共价键，所述第二部分可以是例如侧链的修饰。类似的考虑适用于在上述多价化合
物中存在的坎普他汀类似物部分。在某些实施方案中，在坎普他汀类似物(例如，在上面第IV部分中描述的坎普他汀类似物)的N末端或C末端处的封端部分被细胞反应性坎普他汀类
似物的结构中的A-L替代。在某些实施方案中，A或L包含封端部分。在某些实施方案中，细胞反应性坎普他汀类似物的摩尔活性为具有相同氨基酸序列(和，如果适用的话，一个或多个封端部分)、但是不包含细胞反应性部分的对应坎普他汀类似物的活性的至少约10％、20％或30％，例如，30％至40％、30％至50％、30％至60％、30％至70％、30％至80％、30％至90％或更多。在某些其中细胞反应性坎普他汀类似物包含多个坎普他汀类似物部分的实施方案
中，细胞反应性坎普他汀类似物的摩尔活性是所述坎普他汀类似物部分的活性总和的至少
约10％、20％或30％，例如，30％至40％、30％至50％、30％至60％、30％至70％、30％至
80％、30％至90％或更多。
案，其中A-L存在于坎普他汀类似物部分的C末端的实施方案，其中A-L连接至坎普他汀类似物部分的氨基酸的侧链的实施方案，和其中相同的或不同的A-L存在于M的两端的实施方
案。应当理解，当某些坎普他汀类似物作为坎普他汀类似物部分存在于式A-L-M的化合物中时，坎普他汀类似物的官能团将与L的官能团反应以形成与A或L的共价键。例如，细胞反应性坎普他汀类似物(其中坎普他汀类似物部分包含含有氨基酸的坎普他汀类似物，所述氨
基酸具有含伯胺(NH2)基团的侧链(所述坎普他汀类似物可以由式R1—(NH2)表示))可以具
有式R1—NH—L-A，其中已经形成与L的新共价键(例如，N—C)，且丢失氢。因而，术语“坎普他汀类似物部分”包括这样的分子结构：其中坎普他汀类似物的至少一个原子参加与第二
部分的共价键，所述第二部分可以是例如侧链的修饰。类似的考虑适用于在上述多价化合
物中存在的坎普他汀类似物部分。在某些实施方案中，在坎普他汀类似物(例如，在上面第IV部分中描述的坎普他汀类似物)的N末端或C末端处的封端部分被细胞反应性坎普他汀类
似物的结构中的A-L替代。在某些实施方案中，A或L包含封端部分。在某些实施方案中，细胞反应性坎普他汀类似物的摩尔活性为具有相同氨基酸序列(和，如果适用的话，一个或多个封端部分)、但是不包含细胞反应性部分的对应坎普他汀类似物的活性的至少约10％、20％或30％，例如，30％至40％、30％至50％、30％至60％、30％至70％、30％至80％、30％至90％或更多。在某些其中细胞反应性坎普他汀类似物包含多个坎普他汀类似物部分的实施方案
中，细胞反应性坎普他汀类似物的摩尔活性是所述坎普他汀类似物部分的活性总和的至少
约10％、20％或30％，例如，30％至40％、30％至50％、30％至60％、30％至70％、30％至
80％、30％至90％或更多。
[0150] 在不同的实施方案中，细胞反应性部分A可以包含多种不同的细胞反应性官能团J中的任一种。一般而言，细胞反应性官能团可以至少部分地基于例如下述因素来选择：(a)要靶向的特定官能团；(b)在生理上可接受的离体条件(例如，生理上可接受的pH和渗量)下和/或在体内条件下(例如，在血液中)，反应性官能团与靶官能团反应的能力；(c)在生理上可接受的离体条件下和/或在体内，反应性官能团和靶官能团之间的反应的特异性；(d)由
反应性官能团与它的靶官能团的反应产生的共价键的稳定性(例如，在体内条件下)；(e)合成包含反应性官能团的细胞反应性坎普他汀类似物的容易性，等。在某些实施方案中，选择这样的反应性官能团：其在不释放离去基团的情况下与它的靶化学基团反应。在某些实施
方案中，选择这样的反应性官能团：其在与靶标反应以后导致离去基团的释放。含有这样的基团的化合物可以用于，例如，监测反应的进展和/或程度。在某些实施方案中，离去基团在产生的量(例如，基于浓度和/或产生的绝对量)方面是细胞、组织或器官在生理上可接受
的，和/或在体内产生的量(例如，基于在有关体液诸如血液中的浓度，和/或基于产生的绝对量)方面是受试者在医学上可接受的。在某些实施方案中，至少部分地除去离体产生的离去基团，例如，通过洗涤细胞，或通过洗涤或灌注组织或器官，例如用盐水。
反应性官能团与它的靶官能团的反应产生的共价键的稳定性(例如，在体内条件下)；(e)合成包含反应性官能团的细胞反应性坎普他汀类似物的容易性，等。在某些实施方案中，选择这样的反应性官能团：其在不释放离去基团的情况下与它的靶化学基团反应。在某些实施
方案中，选择这样的反应性官能团：其在与靶标反应以后导致离去基团的释放。含有这样的基团的化合物可以用于，例如，监测反应的进展和/或程度。在某些实施方案中，离去基团在产生的量(例如，基于浓度和/或产生的绝对量)方面是细胞、组织或器官在生理上可接受
的，和/或在体内产生的量(例如，基于在有关体液诸如血液中的浓度，和/或基于产生的绝对量)方面是受试者在医学上可接受的。在某些实施方案中，至少部分地除去离体产生的离去基团，例如，通过洗涤细胞，或通过洗涤或灌注组织或器官，例如用盐水。
[0151] 在许多实施方案中，在本发明中使用的细胞反应性官能团与氨基酸残基的侧链和/或与蛋白的N末端氨基或C末端羧基反应。在某些实施方案中，所述细胞反应性官能团可与存在于半胱氨酸残基侧链中的巯基(-SH)基团反应。在某些实施方案中，使用马来酰亚胺基团。马来酰亚胺基团会在生理pH与蛋白的半胱氨酸残基的巯基反应，并形成稳定的硫醚
键。在某些实施方案中，使用卤代乙酰基，诸如碘代乙酰基或溴代乙酰基。卤代乙酰基会在生理pH与巯基反应。碘代乙酰基的反应通过来自巯基的硫原子对碘的亲核取代而进行，从
而产生稳定的硫醚键。在其它实施方案中，使用碘乙酰胺基团。在某些实施方案中，所述细胞反应性官能团会与氨基(-NH2)基团反应，所述氨基存在于蛋白的N末端处和赖氨酸残基
的侧链中(ε-氨基)。在某些实施方案中，使用活化的酯，例如，琥珀酰亚胺基酯(即，NHS酯)。
例如，N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)或它的水溶性的类似物(磺基-NHS)可以用于合成中，由此得到的细胞反应性坎普他汀类似物包含NHS酯。在某些实施方案中，所述细胞反应性官能团会与羧基(-COOH)基团反应，所述羧基存在于蛋白的C末端处和氨基酸残基的侧链中。在某些
实施方案中，所述细胞反应性坎普他汀类似物可与羟基(-OH)基团反应，所述羟基存在于不同氨基酸的侧链中和糖基化蛋白的碳水化合物部分中。
键。在某些实施方案中，使用卤代乙酰基，诸如碘代乙酰基或溴代乙酰基。卤代乙酰基会在生理pH与巯基反应。碘代乙酰基的反应通过来自巯基的硫原子对碘的亲核取代而进行，从
而产生稳定的硫醚键。在其它实施方案中，使用碘乙酰胺基团。在某些实施方案中，所述细胞反应性官能团会与氨基(-NH2)基团反应，所述氨基存在于蛋白的N末端处和赖氨酸残基
的侧链中(ε-氨基)。在某些实施方案中，使用活化的酯，例如，琥珀酰亚胺基酯(即，NHS酯)。
例如，N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)或它的水溶性的类似物(磺基-NHS)可以用于合成中，由此得到的细胞反应性坎普他汀类似物包含NHS酯。在某些实施方案中，所述细胞反应性官能团会与羧基(-COOH)基团反应，所述羧基存在于蛋白的C末端处和氨基酸残基的侧链中。在某些
实施方案中，所述细胞反应性坎普他汀类似物可与羟基(-OH)基团反应，所述羟基存在于不同氨基酸的侧链中和糖基化蛋白的碳水化合物部分中。
[0152] 一般而言，连接部分L可以包含任意一种或多种脂族和/或芳族部分，所述部分适合形成结合所述连接的部分的稳定化合物。本文中使用的术语“稳定”优选地表示这样的化合物：其具有足以实现制备的稳定性，且其维持化合物的完整性足够的时间段，例如，以用于本文中描述的一个或多个目的。在某些实施方案中，L包含饱和的或不饱和的、被取代的或未被取代的、支链或无支链的、脂族链，其具有1-30个、1-20个、1-10个、1-6个或5个碳原子或更少碳原子的长度，其中长度表示主(最长)链中的C原子的数目。在某些实施方案中，所述脂族链包含一个或多个可以独立地选择的杂原子(O、N、S)。在某些实施方案中，L的主链中的原子的至少50％是碳原子。在某些实施方案中，L包含饱和的烷基部分(CH2)n，其中n是1-30。
[0153] 在某些实施方案中，L包含一个或多个杂原子，且具有1-1000个、1-800个、1-600个、1-400个、1-300个、1-200个、1-100个、1-50个、1-30个或1-10个碳原子的链长度。在某些实施方案中，L包含寡(乙二醇)部分(-(O-CH2-CH2-)n)其中n是1-500、1-400、1-300、1-200、
1-100、10-200、200-300、100-200、40-500、30-500、20-500、10-500、1-40、1-30、1-20或1-
10。
1-100、10-200、200-300、100-200、40-500、30-500、20-500、10-500、1-40、1-30、1-20或1-
10。
[0154] 在某些实施方案中，L包含：不饱和的部分诸如-CH＝CH-或-CH2-CH＝CH-；包含非芳族环系的部分(例如，环己基部分)、芳族部分(例如，芳族环系诸如苯基部分)；醚部分(-C-O-C-)；酰胺部分(-C(＝O)-N-)；酯部分(-CO-O-)；羰基部分(-C(＝O)-)；亚胺部分(-C＝N-)；硫醚部分(-C-S-C-)；氨基酸残基；和/或通过2个相容的反应性官能团的反应可以形成的任意部分。在某些实施方案中，连接部分或细胞反应性部分的一个或多个部分被包括、但不限于以下的一个或多个部分对其上的一个或多个氢(或其它)原子的独立替换所取代：脂
族；芳族、芳基；烷基、芳烷基、烷酰基、芳酰基、烷氧基；硫代；F；C1；Br；I；-NO2；-CN；-CF3；-CH2CF3；-CHC12；-CH2OH；-CH2CH2OH；-CH2NH2；-CH2SO2CH3；-或-GRG1，其中G是-O-、-S-、-NRG2-、-C(＝O)-、-S(＝O)-、-SO2-、-C(＝O)O-、-C(＝O)NRG2-、-OC(＝O)-、-NRG2C(＝O)-、-OC(＝O)O-、-OC(＝O)NRG2-、-NRG2C(＝O)O-、-NRG2C(＝O)NRG2-、-C(＝S)-、-C(＝S)S-、-SC(＝S)-、-SC(＝S)S-、-C(＝NRG2)-、-C(＝NRG2)O-、-C(＝NRG2)NRG3-、-OC(＝NRG2)-、-NRG2C(＝NRG3)-、-NRG2SO2-、-NRG2SO2NRG3-或-SO2NRG2-，其中RG1、RG2和RG3的每次出现独立地包括、但不限于：氢、卤素或任选地被取代的脂族、芳族或芳基部分。应当理解，环系当作为取代基存在时，可以任选地经由直链部分连接。本发明预见到的取代基和变量的组
合优选地是导致稳定化合物形成的那些，所述化合物可用于本文所述的方法的任意一种或
多种中，例如，可用于治疗一种或多种障碍和/或用于接触细胞、组织或器官(如本文中所
述)，和/或可在一种或多种这样的化合物的制备中用作中间体。
族；芳族、芳基；烷基、芳烷基、烷酰基、芳酰基、烷氧基；硫代；F；C1；Br；I；-NO2；-CN；-CF3；-CH2CF3；-CHC12；-CH2OH；-CH2CH2OH；-CH2NH2；-CH2SO2CH3；-或-GRG1，其中G是-O-、-S-、-NRG2-、-C(＝O)-、-S(＝O)-、-SO2-、-C(＝O)O-、-C(＝O)NRG2-、-OC(＝O)-、-NRG2C(＝O)-、-OC(＝O)O-、-OC(＝O)NRG2-、-NRG2C(＝O)O-、-NRG2C(＝O)NRG2-、-C(＝S)-、-C(＝S)S-、-SC(＝S)-、-SC(＝S)S-、-C(＝NRG2)-、-C(＝NRG2)O-、-C(＝NRG2)NRG3-、-OC(＝NRG2)-、-NRG2C(＝NRG3)-、-NRG2SO2-、-NRG2SO2NRG3-或-SO2NRG2-，其中RG1、RG2和RG3的每次出现独立地包括、但不限于：氢、卤素或任选地被取代的脂族、芳族或芳基部分。应当理解，环系当作为取代基存在时，可以任选地经由直链部分连接。本发明预见到的取代基和变量的组
合优选地是导致稳定化合物形成的那些，所述化合物可用于本文所述的方法的任意一种或
多种中，例如，可用于治疗一种或多种障碍和/或用于接触细胞、组织或器官(如本文中所
述)，和/或可在一种或多种这样的化合物的制备中用作中间体。
[0155] 在不同的实施方案中，L可以包含一个或多个在上述段落中描述的任意部分。在某些实施方案中，L包含2个或更多个不同的部分，所述部分彼此连接以形成通常具有1至约60个原子、1至约50个原子(例如，1-40个、1-30个、1-20个、1-10个或1-6个原子)的长度的结构，其中长度表示主(最长)链中的原子的数目。在某些实施方案中，L包含2个或更多个不同的部分，所述部分彼此连接以形成在主(最长)链中通常具有1至约40个(例如，1-30个，例
如，1-20个、1-10个或1-6个)碳原子的结构。一般而言，这样的细胞反应性坎普他汀类似物的结构可以由式A-(LPj)j-M表示，其中j通常是在1-10之间，且每个LPj独立地选自在上述段落中描述的部分。在许多实施方案中，L包含一个或多个含碳链诸如-(CH2)n-和/或-(O-CH2-CH2-)n，其彼此共价连接和/或与细胞反应性官能团或坎普他汀类似物连接，例如，通过由2个相容的反应性官能团的反应产生的部分(例如，酰胺、酯或醚部分)。在某些实施方案中，L包含寡(乙二醇)部分和/或饱和的烷基链。在某些实施方案中，L包含-(CH2)m-C(＝O)-NH-
(CH2CH2O)n(CH2)pC(＝O)-或-(CH2)m-C(＝O)-NH-(CH2)p(OCH2CH2)nC(＝O)-。在某些实施方案中，选择m、n和p，使得链中的碳的数目是1-500，例如，2-400、2-300、2-200、2-100、2-50、4-
40、6-30或8-20。在某些实施方案中，m是2-10，n是1-500，和/或p是2-10。在某些实施方案中，m是2-10，n是1-400，和/或p是2-10。在某些实施方案中，m是2-10，n是1-300，和/或p是2-
10。在某些实施方案中，m是2-10，n是1-200，和/或p是2-10。在某些实施方案中，m是2-10，n是1-100，和/或p是2-10。在某些实施方案中，m是2-10，n是1-50，和/或p是2-10。在某些实施方案中，m是2-10，n是1-25，和/或p是2-10。在某些实施方案中，m是2-10，n是1-8，和/或p是
2-10。任选地，至少一个-CH2-被CH-R替代，其中R可以是任意取代基。任选地，至少一个-CH2-被杂原子、环系、酰胺、酯或醚部分替代。在某些实施方案中，L不包含在最长链中具有超过3个碳原子的烷基。在某些实施方案中，L不包含在最长链中具有超过4、5、6、7、8、9、10或11个碳原子的烷基。
如，1-20个、1-10个或1-6个)碳原子的结构。一般而言，这样的细胞反应性坎普他汀类似物的结构可以由式A-(LPj)j-M表示，其中j通常是在1-10之间，且每个LPj独立地选自在上述段落中描述的部分。在许多实施方案中，L包含一个或多个含碳链诸如-(CH2)n-和/或-(O-CH2-CH2-)n，其彼此共价连接和/或与细胞反应性官能团或坎普他汀类似物连接，例如，通过由2个相容的反应性官能团的反应产生的部分(例如，酰胺、酯或醚部分)。在某些实施方案中，L包含寡(乙二醇)部分和/或饱和的烷基链。在某些实施方案中，L包含-(CH2)m-C(＝O)-NH-
(CH2CH2O)n(CH2)pC(＝O)-或-(CH2)m-C(＝O)-NH-(CH2)p(OCH2CH2)nC(＝O)-。在某些实施方案中，选择m、n和p，使得链中的碳的数目是1-500，例如，2-400、2-300、2-200、2-100、2-50、4-
40、6-30或8-20。在某些实施方案中，m是2-10，n是1-500，和/或p是2-10。在某些实施方案中，m是2-10，n是1-400，和/或p是2-10。在某些实施方案中，m是2-10，n是1-300，和/或p是2-
10。在某些实施方案中，m是2-10，n是1-200，和/或p是2-10。在某些实施方案中，m是2-10，n是1-100，和/或p是2-10。在某些实施方案中，m是2-10，n是1-50，和/或p是2-10。在某些实施方案中，m是2-10，n是1-25，和/或p是2-10。在某些实施方案中，m是2-10，n是1-8，和/或p是
2-10。任选地，至少一个-CH2-被CH-R替代，其中R可以是任意取代基。任选地，至少一个-CH2-被杂原子、环系、酰胺、酯或醚部分替代。在某些实施方案中，L不包含在最长链中具有超过3个碳原子的烷基。在某些实施方案中，L不包含在最长链中具有超过4、5、6、7、8、9、10或11个碳原子的烷基。
[0156] 在本发明的某些实施方案中，A包含细胞反应性官能团J和包含连接部分LP1和反应性官能团的接头L1，所述反应性官能团与坎普他汀类似物反应以产生A-M。在某些实施方案中，使用包含2个反应性官能团和连接部分LP2的双功能接头L2。L的反应性官能团与A和M的适当的反应性官能团反应，以产生细胞反应性坎普他汀类似物A-L-M。在某些实施方案中，所述坎普他汀类似物包含含有连接部分LP3的接头L3。例如，如下面讨论的，包含反应性官能团的接头可以存在于N或C末端处，或者包含反应性官能团的部分可以经由接头连接至N或C
末端。因而，L可以含有多个连接部分LP，所述连接部分LP例如由A贡献，由用于连接A和M的接头贡献，和/或由坎普他汀类似物贡献。应该理解，当存在于结构A-L-M中时，在反应之前存在于L1、L2、L3等中的某些反应性官能团将经历反应，使得所述反应性官能团的仅一部分将存在于最终的结构A-L-M中，且所述化合物将含有由所述官能团的反应形成的部分。一般而言，如果化合物含有2个或更多个连接部分，所述连接部分可以相同或不同，且可以在不同的实施方案中独立地选择。多个连接部分LP可以彼此连接以形成更大的连接部分L，且至少一些这样的连接部分可以具有与其连接的一个或多个坎普他汀类似物和/或细胞反应性官
能团。在包含多个坎普他汀类似物的分子中，所述坎普他汀类似物可以相同或不同，且如果不同的话，可以独立地进行选择。这同样适用于连接部分和反应性官能团。本发明包括包含一个或多个细胞反应性官能团的多价坎普他汀类似物的用途，包含一个或多个细胞反应性
官能团的坎普他汀类似物的多联体的用途。在某些实施方案中，至少一个连接是稳定的非
共价连接诸如生物素/抗生物素蛋白(抗生蛋白链菌素)连接或大约等同强度的其它非共价
连接。
末端。因而，L可以含有多个连接部分LP，所述连接部分LP例如由A贡献，由用于连接A和M的接头贡献，和/或由坎普他汀类似物贡献。应该理解，当存在于结构A-L-M中时，在反应之前存在于L1、L2、L3等中的某些反应性官能团将经历反应，使得所述反应性官能团的仅一部分将存在于最终的结构A-L-M中，且所述化合物将含有由所述官能团的反应形成的部分。一般而言，如果化合物含有2个或更多个连接部分，所述连接部分可以相同或不同，且可以在不同的实施方案中独立地选择。多个连接部分LP可以彼此连接以形成更大的连接部分L，且至少一些这样的连接部分可以具有与其连接的一个或多个坎普他汀类似物和/或细胞反应性官
能团。在包含多个坎普他汀类似物的分子中，所述坎普他汀类似物可以相同或不同，且如果不同的话，可以独立地进行选择。这同样适用于连接部分和反应性官能团。本发明包括包含一个或多个细胞反应性官能团的多价坎普他汀类似物的用途，包含一个或多个细胞反应性
官能团的坎普他汀类似物的多联体的用途。在某些实施方案中，至少一个连接是稳定的非
共价连接诸如生物素/抗生物素蛋白(抗生蛋白链菌素)连接或大约等同强度的其它非共价
连接。
[0157] 在某些实施方案中，细胞反应性坎普他汀类似物包含这样的坎普他汀类似物：其中SEQ ID NO:3-36、37A、38A、39A、40A或41A中的任一个在N末端、C末端或二者处延长一个或多个氨基酸，其中至少一个氨基酸具有包含反应性官能团的侧链，所述反应性官能团是
例如：伯胺或仲胺、巯基、羧基(其可以作为羧酸盐基团存在)、胍基、酚基团、吲哚环、硫醚或咪唑环。在某些实施方案中，所述氨基酸是L-氨基酸。在某些实施方案中，任意一个或多个氨基酸是D-氨基酸。如果添加多个氨基酸，所述氨基酸可以独立地进行选择。在某些实施方案中，使用所述反应性官能团(例如，伯胺或仲胺)作为用于添加包含细胞反应性官能团的
部分的靶标。具有包含伯胺或仲胺的侧链的氨基酸包括赖氨酸(Lys)和通式结构NH2(CH2)
nCH(NH2)COOH的二氨基甲酸，诸如2,3-二氨基丙酸(dapa)、2,4-二氨基丁酸(daba)和鸟氨酸(orn)，其中n分别为1(dapa)、2(daba)和3(orn)。在某些实施方案中，至少一个氨基酸是半胱氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、精氨酸、酪氨酸、色氨酸、蛋氨酸或组氨酸。半胱氨酸具有包含巯基的侧链。天冬氨酸和谷氨酸具有包含羧基(可离子化为羧酸盐基团)的侧链。精氨酸具有
包含胍基的侧链。酪氨酸具有包含酚基团(可离子化为酚盐基团)的侧链。色氨酸具有包含
吲哚环的侧链，包括例如色氨酸。蛋氨酸具有包含硫醚基的侧链，包括例如蛋氨酸。组氨酸具有包含咪唑环的侧链。可以得到多种包含侧链(其包含一个或多个这样的反应性官能团)
的非标准氨基酸，包括天然存在的氨基酸和在自然界中不存在的氨基酸。参见，例如，
Hughes,B.(编),Amino Acids,Peptides and Proteins in Organic Chemistry,第1-4卷,
Wiley-VCH(2009-2011)；Blaskovich,M.,Handbook on Syntheses of Amino Acids
General Routes to Amino Acids,Oxford University Press,2010。本发明包括这样的实
施方案，其中使用一个或多个非标准氨基酸来提供用于添加包含细胞反应性官能团的部分
的靶标。在化合物合成过程中，可以适当地保护任意一个或多个氨基酸。例如，在涉及靶氨基酸侧链的反应过程中，可以保护一个或多个氨基酸。在某些其中使用含巯基的氨基酸作
为用于添加包含细胞反应性官能团的部分的靶标的实施方案中，当通过在其它氨基酸(诸
如半胱氨酸)之间形成分子内二硫键而环化化合物时，保护巯基。
例如：伯胺或仲胺、巯基、羧基(其可以作为羧酸盐基团存在)、胍基、酚基团、吲哚环、硫醚或咪唑环。在某些实施方案中，所述氨基酸是L-氨基酸。在某些实施方案中，任意一个或多个氨基酸是D-氨基酸。如果添加多个氨基酸，所述氨基酸可以独立地进行选择。在某些实施方案中，使用所述反应性官能团(例如，伯胺或仲胺)作为用于添加包含细胞反应性官能团的
部分的靶标。具有包含伯胺或仲胺的侧链的氨基酸包括赖氨酸(Lys)和通式结构NH2(CH2)
nCH(NH2)COOH的二氨基甲酸，诸如2,3-二氨基丙酸(dapa)、2,4-二氨基丁酸(daba)和鸟氨酸(orn)，其中n分别为1(dapa)、2(daba)和3(orn)。在某些实施方案中，至少一个氨基酸是半胱氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、精氨酸、酪氨酸、色氨酸、蛋氨酸或组氨酸。半胱氨酸具有包含巯基的侧链。天冬氨酸和谷氨酸具有包含羧基(可离子化为羧酸盐基团)的侧链。精氨酸具有
包含胍基的侧链。酪氨酸具有包含酚基团(可离子化为酚盐基团)的侧链。色氨酸具有包含
吲哚环的侧链，包括例如色氨酸。蛋氨酸具有包含硫醚基的侧链，包括例如蛋氨酸。组氨酸具有包含咪唑环的侧链。可以得到多种包含侧链(其包含一个或多个这样的反应性官能团)
的非标准氨基酸，包括天然存在的氨基酸和在自然界中不存在的氨基酸。参见，例如，
Hughes,B.(编),Amino Acids,Peptides and Proteins in Organic Chemistry,第1-4卷,
Wiley-VCH(2009-2011)；Blaskovich,M.,Handbook on Syntheses of Amino Acids
General Routes to Amino Acids,Oxford University Press,2010。本发明包括这样的实
施方案，其中使用一个或多个非标准氨基酸来提供用于添加包含细胞反应性官能团的部分
的靶标。在化合物合成过程中，可以适当地保护任意一个或多个氨基酸。例如，在涉及靶氨基酸侧链的反应过程中，可以保护一个或多个氨基酸。在某些其中使用含巯基的氨基酸作
为用于添加包含细胞反应性官能团的部分的靶标的实施方案中，当通过在其它氨基酸(诸
如半胱氨酸)之间形成分子内二硫键而环化化合物时，保护巯基。
[0158] 在该段落的讨论中，使用具有含胺基团的侧链的氨基酸作为一个例子。本发明包括类似的实施方案，其中使用具有含不同反应性官能团的侧链的氨基酸。在某些实施方案
中，具有含伯胺或仲胺的侧链的氨基酸直接或经由肽键连接至SEQ ID NO:3-36、37、37A、
38A、39A、40A或41A中的任一个的N末端或C末端。在某些实施方案中，具有含伯胺或仲胺的侧链的氨基酸连接或经由连接部分连接至SEQ ID NO:3-36、37、37A、38A、39A、40A或41A中的任一个的N末端或C末端，所述连接部分可以含有任意一种或多种上述的连接部分。在某
些实施方案中，至少2个氨基酸连接至任一端或两端。所述2个或更多个连接的氨基酸可以
通过肽键彼此连接，或者至少一些连接的氨基酸可以通过连接部分彼此连接，所述连接部
分可以含有任意一种或多种本文中描述的连接部分。因而，在某些实施方案中，细胞反应性坎普他汀类似物包含式B1-R1-M1-R2-B2的坎普他汀类似物部分M，其中M1代表SEQ ID NO:3-
36、37、37A、38A、39A、40A或41A中的任一个，R1或R2可以缺少，R1和R2中的至少一个包含具有含伯胺或仲胺的侧链的氨基酸，且B1和B2是任选地存在的封端部分。R1和/或R2可以通过肽键或非肽键连接至M1。R1和/或R2可以包含连接部分LP3。例如，R1可以具有式M2-LP3，和/或R2可以具有式LP3-M2，其中LP3是连接部分，且M2包含至少一个具有含伯胺或仲胺的侧链的氨P3
基酸。例如，M2可以是Lys或包含Lys的氨基酸链。在某些实施方案中，L 包含一个或多个氨基酸，或由其组成。例如，LP3的长度可以是1至约20个氨基酸，例如，4-20个氨基酸的长度。在某些实施方案中，LP3包含多个Gly、Ser和/或Ala残基，或由其组成。在某些实施方案中，LP3不包含含反应性SH基团的氨基酸，诸如Cys。在某些实施方案中，LP3包含寡(乙二醇)部分和/或饱和的烷基链。在某些实施方案中，LP3经由酰胺键连接至M1的N末端氨基酸。在某些实施方案中，LP3经由酰胺键连接至M1的C末端氨基酸。所述化合物可以通过添加其它连接部分
和/或氨基酸而在任一端或两端进一步延伸。所述氨基酸可以相同或不同，且如果不同的
话，可以独立地进行选择。在某些实施方案中，使用2个或更多个具有含反应性官能团的侧链的氨基酸，其中所述反应性官能团可以相同或不同。可以使用2个或更多个反应性官能团作为用于添加2个或更多个部分的靶标。在某些实施方案中，添加2个或更多个细胞反应性
部分。在某些实施方案中，添加细胞反应性部分和靶向部分。在某些实施方案中，在缉拿该氨基酸掺入肽链中以后，将接头和/或细胞反应性部分连接至氨基酸侧链。在某些实施方案中，在将氨基酸用于合成细胞反应性坎普他汀类似物之前，接头和/或细胞反应性部分已经连接至氨基酸侧链。例如，可以使用具有与其侧链连接的接头的Lys衍生物。所述接头可以包含细胞反应性官能团，或者可以随后进行修饰以包含细胞反应性官能团。
中，具有含伯胺或仲胺的侧链的氨基酸直接或经由肽键连接至SEQ ID NO:3-36、37、37A、
38A、39A、40A或41A中的任一个的N末端或C末端。在某些实施方案中，具有含伯胺或仲胺的侧链的氨基酸连接或经由连接部分连接至SEQ ID NO:3-36、37、37A、38A、39A、40A或41A中的任一个的N末端或C末端，所述连接部分可以含有任意一种或多种上述的连接部分。在某
些实施方案中，至少2个氨基酸连接至任一端或两端。所述2个或更多个连接的氨基酸可以
通过肽键彼此连接，或者至少一些连接的氨基酸可以通过连接部分彼此连接，所述连接部
分可以含有任意一种或多种本文中描述的连接部分。因而，在某些实施方案中，细胞反应性坎普他汀类似物包含式B1-R1-M1-R2-B2的坎普他汀类似物部分M，其中M1代表SEQ ID NO:3-
36、37、37A、38A、39A、40A或41A中的任一个，R1或R2可以缺少，R1和R2中的至少一个包含具有含伯胺或仲胺的侧链的氨基酸，且B1和B2是任选地存在的封端部分。R1和/或R2可以通过肽键或非肽键连接至M1。R1和/或R2可以包含连接部分LP3。例如，R1可以具有式M2-LP3，和/或R2可以具有式LP3-M2，其中LP3是连接部分，且M2包含至少一个具有含伯胺或仲胺的侧链的氨P3
基酸。例如，M2可以是Lys或包含Lys的氨基酸链。在某些实施方案中，L 包含一个或多个氨基酸，或由其组成。例如，LP3的长度可以是1至约20个氨基酸，例如，4-20个氨基酸的长度。在某些实施方案中，LP3包含多个Gly、Ser和/或Ala残基，或由其组成。在某些实施方案中，LP3不包含含反应性SH基团的氨基酸，诸如Cys。在某些实施方案中，LP3包含寡(乙二醇)部分和/或饱和的烷基链。在某些实施方案中，LP3经由酰胺键连接至M1的N末端氨基酸。在某些实施方案中，LP3经由酰胺键连接至M1的C末端氨基酸。所述化合物可以通过添加其它连接部分
和/或氨基酸而在任一端或两端进一步延伸。所述氨基酸可以相同或不同，且如果不同的
话，可以独立地进行选择。在某些实施方案中，使用2个或更多个具有含反应性官能团的侧链的氨基酸，其中所述反应性官能团可以相同或不同。可以使用2个或更多个反应性官能团作为用于添加2个或更多个部分的靶标。在某些实施方案中，添加2个或更多个细胞反应性
部分。在某些实施方案中，添加细胞反应性部分和靶向部分。在某些实施方案中，在缉拿该氨基酸掺入肽链中以后，将接头和/或细胞反应性部分连接至氨基酸侧链。在某些实施方案中，在将氨基酸用于合成细胞反应性坎普他汀类似物之前，接头和/或细胞反应性部分已经连接至氨基酸侧链。例如，可以使用具有与其侧链连接的接头的Lys衍生物。所述接头可以包含细胞反应性官能团，或者可以随后进行修饰以包含细胞反应性官能团。
[0159] 在下面更详细地描述了某些细胞反应性坎普他汀类似物。在以下的讨论中，使用具有氨基酸序列Ile-Cys*-Val-(1Me)Trp-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys*-Thr(SEQ
ID NO:37)(对应于SEQ ID NO:28的坎普他汀类似物，其中在SEQ ID NO:37中的星号代表活
性化合物中通过二硫键连接的半胱氨酸，且(1Me)Trp代表1-甲基-色氨酸))的肽作为一个
示例性的坎普他汀类似物部分；使用马来酰亚胺(缩写为Mal)作为细胞反应性官能团的一
个例子；使用(CH2)n和(O-CH2-CH2)n作为连接部分的例子；使用赖氨酸作为包含反应性官能团的氨基酸的一个例子(在某些化合物中)，和分别使用N和C末端的乙酰化和酰胺化作为在
某些化合物中任选地存在的示例性封端部分，且分别用斜体字表示，即，作为Ac和NH2。应当理解，使用多种合成方案和使用多种前体，可以制备化合物。下面的不同合成方案和前体的讨论无意限制本发明。一般而言，下面或在本申请描述的任意化合物的任意特征可以与下
面或在本文别处描述的其它化合物的特征自由组合，且本发明包括这样的实施方案。
ID NO:37)(对应于SEQ ID NO:28的坎普他汀类似物，其中在SEQ ID NO:37中的星号代表活
性化合物中通过二硫键连接的半胱氨酸，且(1Me)Trp代表1-甲基-色氨酸))的肽作为一个
示例性的坎普他汀类似物部分；使用马来酰亚胺(缩写为Mal)作为细胞反应性官能团的一
个例子；使用(CH2)n和(O-CH2-CH2)n作为连接部分的例子；使用赖氨酸作为包含反应性官能团的氨基酸的一个例子(在某些化合物中)，和分别使用N和C末端的乙酰化和酰胺化作为在
某些化合物中任选地存在的示例性封端部分，且分别用斜体字表示，即，作为Ac和NH2。应当理解，使用多种合成方案和使用多种前体，可以制备化合物。下面的不同合成方案和前体的讨论无意限制本发明。一般而言，下面或在本申请描述的任意化合物的任意特征可以与下
面或在本文别处描述的其它化合物的特征自由组合，且本发明包括这样的实施方案。
[0160] 在某些实施方案中，所述细胞反应性部分由包含马来酰亚胺基团(作为细胞反应性官能团)和链烷酸(RCOOH)(其中R是烷基)的细胞反应性的化合物提供。例如，可以使用下面描述的6-马来酰亚胺基己酸(Mal-(CH2)5-COOH)。
[0161]
[0162] 在某些实施方案中，所述细胞反应性部分由链烷酸衍生物提供，在所述链烷酸衍生物中，羧酸部分已经被激活，例如，OH部分已经被转化成更好的离去基团。例如，化合物I的羧基可以与EDC反应，随后与NHS(其可以任选地提供为水溶性的磺基-NHS)反应，从而产
生6-马来酰亚胺基己酸的N-羟基琥珀酰亚胺酯衍生物，即，6-马来酰亚胺基己酸N-羟基琥
珀酰亚胺(NHS)酯(下面描述)。
生6-马来酰亚胺基己酸的N-羟基琥珀酰亚胺酯衍生物，即，6-马来酰亚胺基己酸N-羟基琥
珀酰亚胺(NHS)酯(下面描述)。
[0163]
[0164] SEQ ID NO:37的化合物可以在N末端和/或C末端处被修饰，以产生细胞反应性坎普他汀类似物。例如，通过与Ile的N末端氨基反应，可以使用化合物II来制备下述细胞反应性坎普他汀类似物。
[0165] 马来酰亚胺-(CH2)5-C(＝O)-Ile-Cys*-Val-(1Me)Trp-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys*-Thr-NH2(SEQ ID NO:38)。应当理解，在SEQ ID NO:38中，-C(＝O)部分经由C-N键连接至邻近的C末端氨基酸(Ile)，其中所述N是氨基酸的一部分，且未显示。
[0166] 在其它实施方案中，马来酰亚胺基团连接至Thr的C末端，从而产生下述细胞反应性坎普他汀类似物：
[0167] Ac-Ile-Cys*-Val-(1Me)Trp-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys*-Thr-(C＝O)-(CH2)5-马来酰亚胺(SEQ ID NO:39)。
[0168] 在某些实施方案中，细胞反应性坎普他汀类似物可以使用双功能接头(例如，异双功能接头)来合成。下面显示了一种示例性的异双功能接头，其包含(CH2-CH2-O)n和(CH2)m(其中m＝2)部分：
[0169]
[0170] 化合物III包含作为细胞反应性官能团的马来酰亚胺基团和可与氨基(例如，N末端氨基或氨基酸侧链的氨基)容易地反应的NHS酯部分。
[0171] 使用SEQ ID NO:37的坎普他汀类似物，可以使用化合物III的一个实施方案(其中n＝2)来制备下述细胞反应性坎普他汀类似物：
[0172] 马来酰亚胺-(CH2)2-C(＝O)-NH-CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2C(＝O)-Ile-Cys*-Val-(1Me)Trp-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys*-Thr-NH2(SEQ ID NO:40)
[0173] 应当理解，在SEQ ID NO:40的化合物中，-C(＝O)部分经由C-N键连接至N末端氨基酸(Ile残基)，其中所述N是氨基酸的一部分，且未显示。在某些实施方案中，接头具有化合物III的式，其中n≥1。本文提供了(CH2-CH2-O)n部分中的n的示例性值。
[0174] 在某些实施方案中，与SEQ ID NO:39或SEQ ID NO:40的化合物相比，将马来酰亚胺部分连接至分子的其余部分的烷基链含有更多或更少的亚甲基单元，寡(乙二醇)部分含
有更多或更少的乙二醇单元，和/或存在更多或更少的侧接寡(乙二醇)部分的任一侧或两
侧的亚甲基单元。下面显示了解释几个这样的变体的示例性细胞反应性坎普他汀类似物
(SEQID NO:41-46)：
有更多或更少的乙二醇单元，和/或存在更多或更少的侧接寡(乙二醇)部分的任一侧或两
侧的亚甲基单元。下面显示了解释几个这样的变体的示例性细胞反应性坎普他汀类似物
(SEQID NO:41-46)：
[0175] 马来酰亚胺-(CH2)2-C(＝O)-NH-CH2CH2OCH2CH2C(＝O)-Ile-Cys*-Val-(1Me)Trp-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys*-Thr-NH2(SEQ ID NO:41)
[0176] 马来酰亚胺-(CH2)3-C(＝O)-NH-CH2CH2OCH2CH2OCH2C(＝O)-Ile-Cys*-Val-(1Me)Trp-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys*-Thr-NH2(SEQ ID NO:42)
[0177] 马来酰亚胺-(CH2)5-C(＝O)-NH-CH2CH2OCH2CH2OCH2C(＝O)-Ile-Cys*-Val-(1Me)Trp-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys*-Thr-NH2(SEQ ID NO:43)
[0178] 马来酰亚胺-(CH2)4-C(＝O)-NH-CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2C(＝O)-Ile-Cys*-Val-(1Me)Trp-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys*-Thr-NH2(SEQ ID NO:44)
[0179] 马来酰亚胺-(CH2)2-C(＝O)-NH-CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2C(＝O)-Ile-Cys*-Val-(1Me)Trp-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys*-Thr-NH2(SEQ ID NO:45)
[0180] 马来酰亚胺-(CH2)5-C(＝O)-NH-CH2CH2OCH2CH2OCH2C(＝O)-Ile-Cys*-Val-(1Me)Trp-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys*-Thr-NH2(SEQ ID NO:46)
[0181] 在某些实施方案中，将SEQ ID NO:37延长以包含在肽的N或C末端处的Lys残基，例如，如下面关于C末端连接所解释的：
[0182] Ac-Ile-Cys*-Val-(1Me)Trp-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys*-Thr-Lys-NH2(SEQ ID NO:47)。
[0183] 在某些实施方案中，将Lys残基经由肽接头连接至SEQ ID NO:37的N或C末端，例如，如下面关于C末端连接所解释的：
[0184] Ac-Ile-Cys*-Val-(1Me)Trp-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys*-Thr-(Gly)5-Lys-NH2(SEQ ID NO:48)。
[0185] 在某些实施方案中，将包含伯胺或仲胺的接头添加至坎普他汀类似物的N或C末端。在某些实施方案中，所述接头包含烷基链和/或寡(乙二醇)部分。例如，可以使用NH2
(CH2CH2O)nCH2C(＝O)OH(例如，8-氨基-3,6-二氧杂辛酸(AEEAc)或11-氨基-3,6,9-三氧杂
十一烷酸)或其NHS酯(例如，8-氨基-3,6-二氧杂辛酸或11-氨基-3,6,9-三氧杂十一烷酸的
NHS酯)。在某些实施方案中，得到的化合物如下(其中由接头贡献的部分以粗体显示):
(CH2CH2O)nCH2C(＝O)OH(例如，8-氨基-3,6-二氧杂辛酸(AEEAc)或11-氨基-3,6,9-三氧杂
十一烷酸)或其NHS酯(例如，8-氨基-3,6-二氧杂辛酸或11-氨基-3,6,9-三氧杂十一烷酸的
NHS酯)。在某些实施方案中，得到的化合物如下(其中由接头贡献的部分以粗体显示):
[0186] NH2(CH2)5C(＝O)-Ile-Cys-Val-(1Me)Trp-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys-Thr-NH2(SEQ ID NO:49)
[0187] NH2(CH2CH2O)2CH2C(＝O)-Ile-Cys-Val-(1Me)Trp-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys-Thr-NH2(SEQ ID NO:50)
[0188] 在某些实施方案中，将Lys残基经由包含非肽部分的肽接头连接至SEQ ID NO:37的N或C末端。例如，所述接头可以包含烷基链、寡(乙二醇)链和/或环系。在某些实施方案中，使用8-AEEAc或其NHS酯，从而产生(在C末端处连接Lys的情况下)下述化合物(其中由8-AEEAc贡献的部分以粗体显示)：
[0189] Ac-Ile-Cys*-Val-(1Me)Trp-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys*-Thr-NH-CH2CH2OCH2CH2OCH2-C(＝O)-Lys-NH2(SEQ ID NO:51)
[0190] 应当理解，在SEQ ID NO:49和50中，将-C(＝O)部分经由C-N键连接至邻近的Ile残基，其中所述N是氨基酸的一部分，且未显示。类似地，在SEQ ID NO:51中，将-C(＝O)部分经由C-N键连接至邻近的Lys残基，其中所述N是氨基酸的一部分，且未显示。还应当理解，在SEQ ID NO:51中，将NH部分经由C-N键连接至邻近的N末端氨基酸(Thr)，其中所述C是氨基
酸的羰基碳，且未显示。
酸的羰基碳，且未显示。
[0191] 可以在伯胺基团处容易地修饰SEQ ID NO:47-51的化合物，以产生细胞反应性坎普他汀类似物。例如，SEQ ID NO:47-51的化合物(或包含伯胺或仲胺和坎普他汀类似物部
分的其它化合物)可以与6-马来酰亚胺基己酸N-琥珀酰亚胺基酯反应，以产生下述细胞反
应性坎普他汀类似物：
分的其它化合物)可以与6-马来酰亚胺基己酸N-琥珀酰亚胺基酯反应，以产生下述细胞反
应性坎普他汀类似物：
[0192] Ac-Ile-Cys*-Val-(1Me)Trp-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys*-Thr-Lys-(C(＝O)-(CH2)5-Mal)-NH2(SEQ ID NO:52)。
[0193] Ac-Ile-Cys*-Val-(1Me)Trp-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys*-Thr-(Gly)5-Lys--(C(＝O)-(CH2)5-Mal)-NH2(SEQ ID NO:53)。
[0194] Mal-(CH2)5-(C(＝O)-NH(CH2)5C(＝O)-Ile-Cys-Val-(1Me)Trp-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys-Thr-NH2(SEQ ID NO:54)
[0195] Mal-(CH2)5-(C(＝O)NH(CH2CH2O)2CH2C(＝O)-Ile-Cys-Val-(1Me)Trp-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys-Thr-NH2(SEQ ID NO:55)
[0196] Ac-Ile-Cys*-Val-(1Me)Trp-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys*-Thr-NH-CH2CH2OCH2CH2OCH2-C(＝O)-Lys-(C(＝O)-(CH2)5-Mal)-NH2(SEQ ID NO:56)
[0197] 在另一个实施方案中，将细胞反应性坎普他汀类似物表示为：Ac-Ile-Cys*-Val-(1Me)Trp-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys*-Thr-Lys-C(＝O)-CH2(OCH2CH2)2NH(C(＝
O)-(CH2)5-Mal)-NH2(SEQ ID NO:57)。
O)-(CH2)5-Mal)-NH2(SEQ ID NO:57)。
[0198] 本发明提供了SEQ ID NO:38-57的变体，其中-Ile-Cys*-Val-(1Me)Trp-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys*-Thr-被包含任意其它坎普他汀类似物(例如，SEQ ID NO 3-27
或29-36、37、37A,38A、39A、40A或41A中的任一个)的氨基酸序列的氨基酸序列替代，前提条件是，存在于坎普他汀类似物的N末端和/或C末端处的封端部分可以缺失，被接头(其可以
包含封端部分)替代，或连接至存在于对应变体中的不同N或C末端氨基酸。
或29-36、37、37A,38A、39A、40A或41A中的任一个)的氨基酸序列的氨基酸序列替代，前提条件是，存在于坎普他汀类似物的N末端和/或C末端处的封端部分可以缺失，被接头(其可以
包含封端部分)替代，或连接至存在于对应变体中的不同N或C末端氨基酸。
[0199] 在本发明的不同实施方案中使用的其它双功能交联剂(其包含作为细胞反应性部分的马来酰亚胺和作为胺反应性部分的NHS酯)包括，例如，4-(对马来酰亚胺基苯基)丁酸
琥珀酰亚胺基酯(SMPB)；4-(N-马来酰亚胺基甲基)-环己烷-1-甲酸琥珀酰亚胺基酯
(SMCC)；N-γ-马来酰亚胺基丁酰基-氧基琥珀酰亚胺酯(GMBS)。磺酸酯向NHS环的添加会产生水溶性的类似物，诸如(4-碘乙酰基)-氨基苯甲酸磺基-琥珀酰亚胺基酯(磺基-SIAB)、4-(N-马来酰亚胺基甲基)-环己烷-1-甲酸磺基-琥珀酰亚胺基酯(磺基-SMCC)、4-(对马来酰
亚胺基苯基)丁酸磺基-琥珀酰亚胺基酯(磺基-SMPB)、磺基-N-γ-马来酰亚胺基丁酰基-氧
基琥珀酰亚胺酯(磺基-GMBS)等，这可以避免对有机溶剂的需要。在某些实施方案中，使用长链形式的前述任一种，其包含在NHS酯部分和分子的其它部分之间的间隔臂。所述隔离物可以包含，例如，烷基链。一个例子是琥珀酰亚胺基-4-[N-马来酰亚胺基甲基]环己烷-1-羧基-[6-酰氨基己酸酯]。
琥珀酰亚胺基酯(SMPB)；4-(N-马来酰亚胺基甲基)-环己烷-1-甲酸琥珀酰亚胺基酯
(SMCC)；N-γ-马来酰亚胺基丁酰基-氧基琥珀酰亚胺酯(GMBS)。磺酸酯向NHS环的添加会产生水溶性的类似物，诸如(4-碘乙酰基)-氨基苯甲酸磺基-琥珀酰亚胺基酯(磺基-SIAB)、4-(N-马来酰亚胺基甲基)-环己烷-1-甲酸磺基-琥珀酰亚胺基酯(磺基-SMCC)、4-(对马来酰
亚胺基苯基)丁酸磺基-琥珀酰亚胺基酯(磺基-SMPB)、磺基-N-γ-马来酰亚胺基丁酰基-氧
基琥珀酰亚胺酯(磺基-GMBS)等，这可以避免对有机溶剂的需要。在某些实施方案中，使用长链形式的前述任一种，其包含在NHS酯部分和分子的其它部分之间的间隔臂。所述隔离物可以包含，例如，烷基链。一个例子是琥珀酰亚胺基-4-[N-马来酰亚胺基甲基]环己烷-1-羧基-[6-酰氨基己酸酯]。
[0200] 在某些实施方案中，使用包含NHS酯(作为胺反应性部分)和碘代乙酰基(可与巯基反应)的双功能接头。这样的接头包括，例如，(4-碘乙酰基)-氨基苯甲酸N-琥珀酰亚胺基酯(SIAB)；6-[(碘代乙酰基)-氨基]己酸琥珀酰亚胺基酯(SIAX)；6-[6-(((碘代乙酰基)氨
基)-己酰基)氨基]己酸琥珀酰亚胺基酯(SIAXX)；4-((碘代乙酰基)氨基)甲基)-环己烷-1-
甲酸琥珀酰亚胺基酯(SIAC)；6-((((4-(碘代乙酰基)氨基)甲基-环己烷-1-羰基)氨基)己
酸琥珀酰亚胺基酯(SIACX)。
基)-己酰基)氨基]己酸琥珀酰亚胺基酯(SIAXX)；4-((碘代乙酰基)氨基)甲基)-环己烷-1-
甲酸琥珀酰亚胺基酯(SIAC)；6-((((4-(碘代乙酰基)氨基)甲基-环己烷-1-羰基)氨基)己
酸琥珀酰亚胺基酯(SIACX)。
[0201] 在某些实施方案中，使用包含NHS酯(作为胺反应性部分)和吡啶基二硫化物基团(作为可与巯基反应的细胞反应性部分)的双功能接头。例子包括：3-(2-吡啶基二硫基)丙
酸N-琥珀酰亚胺基酯(SPDP)；琥珀酰亚胺基氧基羰基-α-甲基-α-(2-吡啶基二硫基)甲苯
(SMPT)和包含在NHS环上的磺酸酯和/或含有烷基链的隔离物的形式，所述隔离物在NHS酯
部分和分子的其余部分之间(例如，6-(3-[2-吡啶基二硫基]-丙酰氨基)己酸琥珀酰亚胺基
酯)(LC-SPDP)。可以使用包括额外的或不同的部分的这类接头的变体。例如，可以在隔离物中使用更长或更短的烷基链，或者使用寡(乙二醇)部分替代烷基链。
酸N-琥珀酰亚胺基酯(SPDP)；琥珀酰亚胺基氧基羰基-α-甲基-α-(2-吡啶基二硫基)甲苯
(SMPT)和包含在NHS环上的磺酸酯和/或含有烷基链的隔离物的形式，所述隔离物在NHS酯
部分和分子的其余部分之间(例如，6-(3-[2-吡啶基二硫基]-丙酰氨基)己酸琥珀酰亚胺基
酯)(LC-SPDP)。可以使用包括额外的或不同的部分的这类接头的变体。例如，可以在隔离物中使用更长或更短的烷基链，或者使用寡(乙二醇)部分替代烷基链。
[0202] 一般而言，可以使用多种方案来合成细胞反应性坎普他汀类似物。包含细胞反应性官能团和接头的细胞反应性的化合物经常可以作为预形成的结构单元来购买。例如，6-
马来酰亚胺基己酸和6-马来酰亚胺基己酸N-羟基琥珀酰亚胺酯可以从不同的供应商购买。
可替代地，这样的化合物可以使用本领域已知的方法来合成。关于用于合成缀合物的方法
和试剂的讨论，参见，例如，Keller O,Rudinger J.Helv Chim Acta.58(2):531-41,1975和Hashida S,等人,J Appl Biochem.,6(1-2):56-63,1984。也参见,Hermanson,G.出处同上，和其中的参考文献。一般而言，本发明包括生产包含坎普他汀类似物部分和细胞反应性官
能团的化合物的任意方法，和得到的化合物。
马来酰亚胺基己酸和6-马来酰亚胺基己酸N-羟基琥珀酰亚胺酯可以从不同的供应商购买。
可替代地，这样的化合物可以使用本领域已知的方法来合成。关于用于合成缀合物的方法
和试剂的讨论，参见，例如，Keller O,Rudinger J.Helv Chim Acta.58(2):531-41,1975和Hashida S,等人,J Appl Biochem.,6(1-2):56-63,1984。也参见,Hermanson,G.出处同上，和其中的参考文献。一般而言，本发明包括生产包含坎普他汀类似物部分和细胞反应性官
能团的化合物的任意方法，和得到的化合物。
[0203] 在某些实施方案中，在直链肽的合成中使用具有与侧链连接的接头的氨基酸。所述直链肽可以使用本领域已知的标准肽合成方法(例如，标准的固相肽合成)来合成。然后
将直链肽环化(例如，通过Cys残基的氧化以形成分子内二硫键)。然后可以使环状化合物与包含细胞反应性官能团的接头反应。在其它实施方案中，使包含细胞反应性官能团的部分
在其环化之前与直链化合物反应。一般而言，可以适当地保护反应性官能团，以避免在合成细胞反应性坎普他汀类似物的过程中不希望的彼此反应。可以在反应过程中保护细胞反应
性官能团、任意氨基酸侧链和/或肽的任一端或两端，并随后去保护。例如，可以保护Cys残基的SH基团和/或SH反应性部分诸如马来酰亚胺，直到环化以后，以避免它们之间的反应。
至少部分地基于特定反应性官能团在合理时间段内达到合理收率的要求，选择反应条件。
可以调节温度、pH和试剂的浓度，以实现期望的反应程度或速率。参见，例如，Hermanson，出处同上。可以纯化期望的产物，例如，以除去未反应的包含细胞反应性官能团的化合物、未反应的坎普他汀类似物、接头、在反应中已经产生的除了期望的细胞反应性坎普他汀类似
物以外的产物、存在于反应混合物中的其它物质等。用于制备细胞反应性坎普他汀类似物
的组合物和方法，以及在合成中使用的中间体，是本发明的方面。
将直链肽环化(例如，通过Cys残基的氧化以形成分子内二硫键)。然后可以使环状化合物与包含细胞反应性官能团的接头反应。在其它实施方案中，使包含细胞反应性官能团的部分
在其环化之前与直链化合物反应。一般而言，可以适当地保护反应性官能团，以避免在合成细胞反应性坎普他汀类似物的过程中不希望的彼此反应。可以在反应过程中保护细胞反应
性官能团、任意氨基酸侧链和/或肽的任一端或两端，并随后去保护。例如，可以保护Cys残基的SH基团和/或SH反应性部分诸如马来酰亚胺，直到环化以后，以避免它们之间的反应。
至少部分地基于特定反应性官能团在合理时间段内达到合理收率的要求，选择反应条件。
可以调节温度、pH和试剂的浓度，以实现期望的反应程度或速率。参见，例如，Hermanson，出处同上。可以纯化期望的产物，例如，以除去未反应的包含细胞反应性官能团的化合物、未反应的坎普他汀类似物、接头、在反应中已经产生的除了期望的细胞反应性坎普他汀类似
物以外的产物、存在于反应混合物中的其它物质等。用于制备细胞反应性坎普他汀类似物
的组合物和方法，以及在合成中使用的中间体，是本发明的方面。
[0204] 在本发明的某些方面，将上述的接头用于生产包含诸如聚乙二醇(PEG)链或其它聚合物等部分的坎普他汀类似物，所述部分会例如稳定化合物、延长其在体内的寿命、增强其可溶性、降低其免疫原性和/或增强其对降解的抗性。不以任何方式限制本发明，这样的部分在本文中可以被称作“清除率降低部分”(CRM)，且包含这样的部分的坎普他汀类似物可以被称作“长效坎普他汀类似物”(LACA)。在某些实施方案中，当以10mg/kg的剂量静脉内施用给人类或非人灵长类动物时，或以约1-3mg/kg、3-5mg/kg、5-10mg/kg，例如，7mg/kg的剂量施用时，长效坎普他汀类似物具有至少1天(例如，1-3天、3-7天、7-14天或14-28天)的平均血浆半衰期。在某些实施方案中，当以例如，约1-3mg/kg、3-5mg/kg、5-10mg/kg，例如，
7mg/kg的剂量皮下地施用给人类或非人灵长类动物时，长效坎普他汀类似物具有至少1天
(例如，1-3天、3-7天、7-14天或14-28天)的平均血浆半衰期。在某些实施方案中，当以例如，约1-3mg/kg、3-5mg/kg、或5-10mg/kg，例如，7mg/kg的剂量静脉内地施用给人类或非人灵长类动物时，长效坎普他汀类似物具有介于约4-10、5-9、5-8、6-9、7-9或8-9天(例如，约4、
4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5或10天)的平均血浆半衰期(例如，终末半衰期)。在某些实施方案中，当以例如，约1-3mg/kg、3-5mg/kg、5-10mg/kg，例如，7mg/kg的剂量皮下地施用给人类或非人灵长类动物时，长效坎普他汀类似物具有介于约4-10、5-9、5-8、6-9、7-9或8-9天(例如，约4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5或10天)的平均血浆半衰期(例如，终末半衰期)。在某些实施方案中，长效坎普他汀类似物的特征在于，其在皮下注射之后的期间被广泛地从施用的位点吸收，并且在例如施用约1-2天之时或之后，其在血液中的水平与静脉施用相同量的化合物所达到的水平相当。在某些实施方案中，在皮下施用一定剂
量约2、3、4、5、6、7、8或更多天之时或之后，所述血液中的水平是在静脉内施用相同量的化合物所达到的血液水平的约5％、10％、15％、20％或25％之内。参见，例如，图11，所述图显示了本文所述的示例性化合物剂量在经静脉内和皮下施用之后的约1-2天的药代动力学。
在某些实施方案中，在以10mg/kg的剂量静脉内施用给人类或非人灵长类动物以后，与具有相同氨基酸序列(和，如果适用的话，一个或多个封端部分)、但是不包含CRM的对应坎普他汀类似物的平均血浆半衰期相比，长效坎普他汀类似物的平均血浆半衰期增加了至少2倍，例如，增加了2-5、5-10、10-50或50-100倍或100-150倍或150-200倍。应该理解，在不同的实施方案中，可在经由其它途径例如皮下施用和/或使用其它剂量，例如本申请所述的其它剂量(例如，20mg/kg)进行施用之后，观察到半衰期的增强。如上面所指出的，在某些实施方案中，SEQ ID NO:3-36、37、37A、38A、39A、40A或41A中的任一个的坎普他汀类似物在N末端、C末端或二者延长了一个或多个氨基酸，其中至少一个氨基酸具有包含反应性官能团(诸如
伯胺或仲胺)、巯基、羧基(其可以作为羧酸盐基团存在)、胍基、酚基团、吲哚环、硫醚或咪唑环的侧链，所述侧链会促进与反应性官能团的缀合，以将CRM连接至坎普他汀类似物。应该理解，不包含CRM的对应坎普他汀类似物也可以缺少一个或多个这样的氨基酸，所述氨基酸存在于它所对应的长效坎普他汀类似物中。因而，包含SEQ ID NO:3-36、37、37A、38A、39A、
40A或41A中的任一个且缺少CRM的对应坎普他汀类似物将被理解为分别具有与SEQ ID NO:
3-36、37、37A、38A、39A、40A或41A“相同的氨基酸序列”。例如，包含SEQ ID NO:14、21、28、
29、32、33、34或36的氨基酸序列且缺少CRM的对应坎普他汀类似物将被理解为分别具有与SEQ ID NO:14、21、28、29、32、33、34或36“相同的氨基酸序列”。在某些实施方案中，血浆半衰期是单次静脉内施用以后的终末半衰期。在某些实施方案中，血浆半衰期是在多次静脉
内施用以后已经达到稳态后的终末半衰期。在某些实施方案中，在单次静脉内施用给灵长
类动物以后，或者在多次静脉内施用以后，长效坎普他汀类似物在血浆中达到的Cmax是不
包含CRM的对应坎普他汀类似物的Cmax的至少5倍，例如，5-50倍。在某些实施方案中，在单次静脉内施用给灵长类动物以后，或者在多次静脉内施用以后，长效坎普他汀类似物在血
浆中达到的Cmax是不包含CRM的对应坎普他汀类似物的Cmax的10-20倍。在某些实施方案
中，灵长类动物是人。在某些实施方案中，灵长类动物是非人灵长类动物，例如，猴，诸如食蟹猴或恒河猴。在某些实施方案中，在以10mg/kg或20mg/kg剂量静脉内施用给人类或非人
灵长类动物以后的前24小时中，与对应坎普他汀类似物的肾清除率相比，长效坎普他汀类
似物的肾清除率下降了至少2倍，例如，2-5、5-10、10-50或50-100倍或100-150倍or 150-
200倍。应该理解，在不同的实施方案中，可在经由其它途径例如皮下施用和/或使用其它剂量，例如本申请所述的其它剂量(例如，20mg/kg)进行施用之后，观察到肾清除率的下降。使用例如UV、HPLC、质谱法(MS)、或针对CRM的抗体、或这样的方法的组合(诸如LC/MS或LC/MS/MS)，可以测量血液和/或尿样品中的坎普他汀类似物的浓度。使用本领域普通技术人员已
知的方法，可以确定药代动力学参数诸如半衰期和清除率。用例如WinNonlin软件v 5.2
(Pharsight Corporation,St.Louis,MO)或其它合适的程序，可以执行药代动力学分析。
7mg/kg的剂量皮下地施用给人类或非人灵长类动物时，长效坎普他汀类似物具有至少1天
(例如，1-3天、3-7天、7-14天或14-28天)的平均血浆半衰期。在某些实施方案中，当以例如，约1-3mg/kg、3-5mg/kg、或5-10mg/kg，例如，7mg/kg的剂量静脉内地施用给人类或非人灵长类动物时，长效坎普他汀类似物具有介于约4-10、5-9、5-8、6-9、7-9或8-9天(例如，约4、
4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5或10天)的平均血浆半衰期(例如，终末半衰期)。在某些实施方案中，当以例如，约1-3mg/kg、3-5mg/kg、5-10mg/kg，例如，7mg/kg的剂量皮下地施用给人类或非人灵长类动物时，长效坎普他汀类似物具有介于约4-10、5-9、5-8、6-9、7-9或8-9天(例如，约4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5或10天)的平均血浆半衰期(例如，终末半衰期)。在某些实施方案中，长效坎普他汀类似物的特征在于，其在皮下注射之后的期间被广泛地从施用的位点吸收，并且在例如施用约1-2天之时或之后，其在血液中的水平与静脉施用相同量的化合物所达到的水平相当。在某些实施方案中，在皮下施用一定剂
量约2、3、4、5、6、7、8或更多天之时或之后，所述血液中的水平是在静脉内施用相同量的化合物所达到的血液水平的约5％、10％、15％、20％或25％之内。参见，例如，图11，所述图显示了本文所述的示例性化合物剂量在经静脉内和皮下施用之后的约1-2天的药代动力学。
在某些实施方案中，在以10mg/kg的剂量静脉内施用给人类或非人灵长类动物以后，与具有相同氨基酸序列(和，如果适用的话，一个或多个封端部分)、但是不包含CRM的对应坎普他汀类似物的平均血浆半衰期相比，长效坎普他汀类似物的平均血浆半衰期增加了至少2倍，例如，增加了2-5、5-10、10-50或50-100倍或100-150倍或150-200倍。应该理解，在不同的实施方案中，可在经由其它途径例如皮下施用和/或使用其它剂量，例如本申请所述的其它剂量(例如，20mg/kg)进行施用之后，观察到半衰期的增强。如上面所指出的，在某些实施方案中，SEQ ID NO:3-36、37、37A、38A、39A、40A或41A中的任一个的坎普他汀类似物在N末端、C末端或二者延长了一个或多个氨基酸，其中至少一个氨基酸具有包含反应性官能团(诸如
伯胺或仲胺)、巯基、羧基(其可以作为羧酸盐基团存在)、胍基、酚基团、吲哚环、硫醚或咪唑环的侧链，所述侧链会促进与反应性官能团的缀合，以将CRM连接至坎普他汀类似物。应该理解，不包含CRM的对应坎普他汀类似物也可以缺少一个或多个这样的氨基酸，所述氨基酸存在于它所对应的长效坎普他汀类似物中。因而，包含SEQ ID NO:3-36、37、37A、38A、39A、
40A或41A中的任一个且缺少CRM的对应坎普他汀类似物将被理解为分别具有与SEQ ID NO:
3-36、37、37A、38A、39A、40A或41A“相同的氨基酸序列”。例如，包含SEQ ID NO:14、21、28、
29、32、33、34或36的氨基酸序列且缺少CRM的对应坎普他汀类似物将被理解为分别具有与SEQ ID NO:14、21、28、29、32、33、34或36“相同的氨基酸序列”。在某些实施方案中，血浆半衰期是单次静脉内施用以后的终末半衰期。在某些实施方案中，血浆半衰期是在多次静脉
内施用以后已经达到稳态后的终末半衰期。在某些实施方案中，在单次静脉内施用给灵长
类动物以后，或者在多次静脉内施用以后，长效坎普他汀类似物在血浆中达到的Cmax是不
包含CRM的对应坎普他汀类似物的Cmax的至少5倍，例如，5-50倍。在某些实施方案中，在单次静脉内施用给灵长类动物以后，或者在多次静脉内施用以后，长效坎普他汀类似物在血
浆中达到的Cmax是不包含CRM的对应坎普他汀类似物的Cmax的10-20倍。在某些实施方案
中，灵长类动物是人。在某些实施方案中，灵长类动物是非人灵长类动物，例如，猴，诸如食蟹猴或恒河猴。在某些实施方案中，在以10mg/kg或20mg/kg剂量静脉内施用给人类或非人
灵长类动物以后的前24小时中，与对应坎普他汀类似物的肾清除率相比，长效坎普他汀类
似物的肾清除率下降了至少2倍，例如，2-5、5-10、10-50或50-100倍或100-150倍or 150-
200倍。应该理解，在不同的实施方案中，可在经由其它途径例如皮下施用和/或使用其它剂量，例如本申请所述的其它剂量(例如，20mg/kg)进行施用之后，观察到肾清除率的下降。使用例如UV、HPLC、质谱法(MS)、或针对CRM的抗体、或这样的方法的组合(诸如LC/MS或LC/MS/MS)，可以测量血液和/或尿样品中的坎普他汀类似物的浓度。使用本领域普通技术人员已
知的方法，可以确定药代动力学参数诸如半衰期和清除率。用例如WinNonlin软件v 5.2
(Pharsight Corporation,St.Louis,MO)或其它合适的程序，可以执行药代动力学分析。
[0205] 在某些实施方案中，CRM在生理条件下稳定至少24小时或更长时间。在某些实施方案中，CRM在哺乳动物，例如，灵长类动物，例如，人或非人灵长类动物(例如，猴)的血液、血浆或血清中稳定至少24小时。在不同的实施方案中，在生理条件下孵育24小时、48小时、72小时、96小时、120小时、144小时、168小时或更长时间后，所述CRM分子的至少50％、60％、
70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更多保持完整。在不同的实施方案中，在血液、血浆或血清中于37摄氏度孵育48小时、72小时、96小时、120小时、144小时、168小时或更长时间后，所述CRM分子的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更多保持完整。在不同的实施方案中，可以使用浓度为1μg/ml至约100mg/ml的CRM进行孵
育。可以在不同时间点分析样品。可以使用例如色谱法(例如，HPLC)、质谱法、Western印迹或任意其它合适的方法评估大小或完整性。缀合至所述CRM的部分可以具有这种稳定的特
性。在不同的实施方案中，包含CRM的长效坎普他汀类似物可以具有上文提及的任意稳定特性。在某些方面，关于长效坎普他汀类似物的完整性是指所述坎普他汀类似物部分仍与所
述CRM缀合并且所述CRM的大小仍与开始孵育或施用时的大小大致相同。
70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更多保持完整。在不同的实施方案中，在血液、血浆或血清中于37摄氏度孵育48小时、72小时、96小时、120小时、144小时、168小时或更长时间后，所述CRM分子的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更多保持完整。在不同的实施方案中，可以使用浓度为1μg/ml至约100mg/ml的CRM进行孵
育。可以在不同时间点分析样品。可以使用例如色谱法(例如，HPLC)、质谱法、Western印迹或任意其它合适的方法评估大小或完整性。缀合至所述CRM的部分可以具有这种稳定的特
性。在不同的实施方案中，包含CRM的长效坎普他汀类似物可以具有上文提及的任意稳定特性。在某些方面，关于长效坎普他汀类似物的完整性是指所述坎普他汀类似物部分仍与所
述CRM缀合并且所述CRM的大小仍与开始孵育或施用时的大小大致相同。
[0206] 在某些实施方案中，长效坎普他汀类似物的摩尔活性为具有相同氨基酸序列(和，如果适用的话，一个或多个封端部分)、但是不包含CRM的对应坎普他汀类似物的活性的至
少约10％、20％、30％，例如，30％至40％、30％至50％、30％至60％、30％至70％、30％至
80％、30％至90％或更多。在某些其中长效坎普他汀类似物包含多个坎普他汀类似物部分
的实施方案中，长效坎普他汀类似物的摩尔活性是所述坎普他汀类似物部分的活性总和的
至少约10％、20％或30％，例如，30％至40％、30％至50％、30％至60％、30％至70％、30％至
80％、30％至90％或更多。在某些实施方案中，聚乙二醇(PEG)包含具有至少500道尔顿的分子量的(CH2CH2O)n部分。在某些实施方案中，上述的接头包含具有约500、1,000、1,500、2,
000、5,000、10,000、20,000、30,000、40,000、50,000、60,000、70,000、80,000、90,000至
100,000道尔顿的平均分子量的(CH2CH2O)n部分。在某些实施方案中，所述PEG的平均分子量是至少20,000道尔顿，高达约100,000、120,000、140,000、160,000、180,000或200,000道尔顿。“平均分子量”表示数量平均分子量。在某些实施方案中，(CH2CH2O)n部分的多分散性D是
1.0005至1.50，例如，1.005至1.10、1.15、1.20、1.25、1.30、1.40或1.50，或1.0005和1.50之间的任意值。
少约10％、20％、30％，例如，30％至40％、30％至50％、30％至60％、30％至70％、30％至
80％、30％至90％或更多。在某些其中长效坎普他汀类似物包含多个坎普他汀类似物部分
的实施方案中，长效坎普他汀类似物的摩尔活性是所述坎普他汀类似物部分的活性总和的
至少约10％、20％或30％，例如，30％至40％、30％至50％、30％至60％、30％至70％、30％至
80％、30％至90％或更多。在某些实施方案中，聚乙二醇(PEG)包含具有至少500道尔顿的分子量的(CH2CH2O)n部分。在某些实施方案中，上述的接头包含具有约500、1,000、1,500、2,
000、5,000、10,000、20,000、30,000、40,000、50,000、60,000、70,000、80,000、90,000至
100,000道尔顿的平均分子量的(CH2CH2O)n部分。在某些实施方案中，所述PEG的平均分子量是至少20,000道尔顿，高达约100,000、120,000、140,000、160,000、180,000或200,000道尔顿。“平均分子量”表示数量平均分子量。在某些实施方案中，(CH2CH2O)n部分的多分散性D是
1.0005至1.50，例如，1.005至1.10、1.15、1.20、1.25、1.30、1.40或1.50，或1.0005和1.50之间的任意值。
[0207] 在某些实施方案中，(CH2CH2O)n部分是单分散的，且(CH2CH2O)n部分的多分散性是1.0。这样的单分散的(CH2CH2O)n部分是本领域已知的，且可商购得自Quanta BioDesign
(Powell,OH)，并且包括(通过非限制性例子)其中n为2、4、6、8、12、16、20或24的单分散部分。
(Powell,OH)，并且包括(通过非限制性例子)其中n为2、4、6、8、12、16、20或24的单分散部分。
[0208] 在某些实施方案中，化合物包含多个(CH2CH2O)n部分，其中所述(CH2CH2O)n部分的总分子量是约1,000、5,000、10,000、20,000、30,000、40,000、50,000、60,000、70,000、80,000、90,000至100,000道尔顿。在某些实施方案中，所述化合物或(CH2CH2O)n部分的平均总分子量是至少20,000道尔顿，高达约100,000、120,000、140,000、160,000、180,000或200,
000道尔顿。在某些实施方案中，所述化合物包含多个具有确定长度的(CH2CH2O)n部分，例如，n＝4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28或30或更大。在某些实施方案中，所述化合物包含足够数目的具有确定长度的(CH2CH2O)n部分，以产生在约1,000、5,000、10,000、20,
000、30,000、40,000、50,000、60,000、70,000、80,000、90,000至100,000道尔顿之间的所述(CH2CH2O)n部分的总分子量。在某些实施方案中，所述化合物或(CH2CH2O)n部分的平均总分子量是至少20,000道尔顿，高达约100,000、120,000、140,000、160,000、180,000或200,000道尔顿。在某些实施方案中，n是约30至约3000。在某些实施方案中，将坎普他汀类似物部分连接在直链PEG的每个末端。可以使用在链的每个末端处具有反应性官能团的双功能PEG，
例如，如上所述。在某些实施方案中，所述反应性官能团是相同的，而在某些实施方案中，不同反应性官能团存在于每个末端处。在某些实施方案中，提供多个(CH2CH2O)n部分作为支链结构。所述支链可以连接至线性聚合物主链(例如，作为梳状结构)，或者可以从一个或多个中心基团发散，例如，作为星形结构。在某些实施方案中，支链分子具有3-10个(CH2CH2O)n链。在某些实施方案中，支链分子具有4-8个(CH2CH2O)n链。在某些实施方案中，支链分子具有10、9、8、7、6、5、4或3个(CH2CH2O)n链。在某些实施方案中，星形分子具有10-100个、10-50个、10-30个或10-20个从中心基团发散的(CH2CH2O)n链。在某些实施方案中，长效坎普他汀类似物因而可以包含，例如，3-10个坎普他汀类似物部分，例如，4-8个坎普他汀类似物部分，每个部分经由在链末端处的官能团连接至(CH2CH2O)n链。在某些实施方案中，长效坎普他汀类似物可以包含，例如，10-100个坎普他汀类似物部分，每个部分经由在链末端处的官能团连接至(CH2CH2O)n链。在某些实施方案中，支链或星形PEG的分支(有时被称作“臂”)含有大约相同数目的(CH2CH2O)部分。在某些实施方案中，至少一些分支长度可以不同。应该理解，在某些实施方案中，一个或多个(CH2CH2O)n链不具有与其连接的坎普他汀类似物部分。
在某些实施方案中，所述链的至少约30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或100％具有与其连接的坎普他汀类似物部分。
000道尔顿。在某些实施方案中，所述化合物包含多个具有确定长度的(CH2CH2O)n部分，例如，n＝4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28或30或更大。在某些实施方案中，所述化合物包含足够数目的具有确定长度的(CH2CH2O)n部分，以产生在约1,000、5,000、10,000、20,
000、30,000、40,000、50,000、60,000、70,000、80,000、90,000至100,000道尔顿之间的所述(CH2CH2O)n部分的总分子量。在某些实施方案中，所述化合物或(CH2CH2O)n部分的平均总分子量是至少20,000道尔顿，高达约100,000、120,000、140,000、160,000、180,000或200,000道尔顿。在某些实施方案中，n是约30至约3000。在某些实施方案中，将坎普他汀类似物部分连接在直链PEG的每个末端。可以使用在链的每个末端处具有反应性官能团的双功能PEG，
例如，如上所述。在某些实施方案中，所述反应性官能团是相同的，而在某些实施方案中，不同反应性官能团存在于每个末端处。在某些实施方案中，提供多个(CH2CH2O)n部分作为支链结构。所述支链可以连接至线性聚合物主链(例如，作为梳状结构)，或者可以从一个或多个中心基团发散，例如，作为星形结构。在某些实施方案中，支链分子具有3-10个(CH2CH2O)n链。在某些实施方案中，支链分子具有4-8个(CH2CH2O)n链。在某些实施方案中，支链分子具有10、9、8、7、6、5、4或3个(CH2CH2O)n链。在某些实施方案中，星形分子具有10-100个、10-50个、10-30个或10-20个从中心基团发散的(CH2CH2O)n链。在某些实施方案中，长效坎普他汀类似物因而可以包含，例如，3-10个坎普他汀类似物部分，例如，4-8个坎普他汀类似物部分，每个部分经由在链末端处的官能团连接至(CH2CH2O)n链。在某些实施方案中，长效坎普他汀类似物可以包含，例如，10-100个坎普他汀类似物部分，每个部分经由在链末端处的官能团连接至(CH2CH2O)n链。在某些实施方案中，支链或星形PEG的分支(有时被称作“臂”)含有大约相同数目的(CH2CH2O)部分。在某些实施方案中，至少一些分支长度可以不同。应该理解，在某些实施方案中，一个或多个(CH2CH2O)n链不具有与其连接的坎普他汀类似物部分。
在某些实施方案中，所述链的至少约30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或100％具有与其连接的坎普他汀类似物部分。
[0209] 在本文描述的类和化合物中，如下描绘聚乙二醇部分：将氧原子置于重复单元的右侧或重复单元的左侧。在仅描绘一种取向的情况下，本发明包括给定化合物或类的聚乙
二醇部分的两种取向(即，(CH2CH2O)n和(OCH2CH2)n)，或者在化合物或类含有多个聚乙二醇部分的情况下，本公开内容包括所有取向组合。
二醇部分的两种取向(即，(CH2CH2O)n和(OCH2CH2)n)，或者在化合物或类含有多个聚乙二醇部分的情况下，本公开内容包括所有取向组合。
[0210] 下面解释了一些示例性的包含反应性官能团的单功能PEG的通式。为了解释目的，描绘了其中反应性官能团包含NHS酯的通式，但是可以使用其它反应性官能团，例如，如上所述。在某些实施方案中，将(CH2CH2O)n描述为在左末端处以甲氧基(OCH3)终止，但是应该理解，在下面和在本文别处描绘的链可以以不同的OR部分(例如，脂族基团、烷基、低级烷基或任意其它合适的PEG末端基团)或OH基团终止。还应当理解，在不同的实施方案中，除了描述的那些以外的部分可以连接(CH2CH2O)n部分和NHS基团。
[0211] 在某些实施方案中，单功能PEG具有式A：
[0212]
[0213] 其中“反应性官能团”和n如上面所定义，并描述在本文中的类和亚类中；
[0214] R1是氢、脂族或任意合适的末端基团；且
[0215] T是共价键或C1-12直链或支链烃链，其中T的一个或多个碳单元任选地和独立地被-O-、-S-、-N(Rx)-、-C(O)-、-C(O)O-、-OC(O)-、-N(Rx)C(O)-、-C(O)N(Rx)-、-S(O)-、-S(O)2-、-N(Rx)SO2-或-SO2N(Rx)-替代；且
[0216] 每个Rx独立地是氢或C1-6脂族。
[0217] 示例性的式A的单功能PEG包括：
[0218]
[0219] 在式I中，包含反应性官能团的部分具有通式结构-CO-(CH2)m-COO-NHS，其中m＝2。在某些实施方案中，单功能PEG具有式I的结构，其中m是1-10，例如，1-5。例如，在某些实施方案中，m是3，如下所示：
[0220]
[0221] 在式II中，包含反应性官能团的部分具有通式结构-(CH2)m-COO-NHS，其中m＝1。在某些实施方案中，单功能PEG具有式II的结构，其中m是1-10(例如，其中m是5，如下面式III所示)，或其中m是0(如下面式IIIa所示)。
[0222]
[0223]
[0224] 在某些实施方案中，双功能的直链PEG包含在它的每个末端处具有反应性官能团的部分。所述反应性官能团可以是相同的(同双功能的)或不同的(异双功能的)。在某些实
施方案中，双功能PEG的结构可以是对称的，其中使用相同部分将反应性官能团连接至在-
(CH2CH2O)n链的每个末端处的氧原子。在某些实施方案中，使用不同部分将2个反应性官能团连接至分子的PEG部分。下面描绘了示例性的双功能PEG的结构。为了解释目的，描绘了其中反应性官能团包含NHS酯的通式，但是可以使用其它反应性官能团。
施方案中，双功能PEG的结构可以是对称的，其中使用相同部分将反应性官能团连接至在-
(CH2CH2O)n链的每个末端处的氧原子。在某些实施方案中，使用不同部分将2个反应性官能团连接至分子的PEG部分。下面描绘了示例性的双功能PEG的结构。为了解释目的，描绘了其中反应性官能团包含NHS酯的通式，但是可以使用其它反应性官能团。
[0225] 在某些实施方案中，双功能的直链PEG具有式B：
[0226]
[0227] 其中每个T和“反应性官能团”独立地如上定义，并描述在本文中的类和亚类中，且n如上面所定义，并描述在本文中的类和亚类中。
[0228] 示例性的式B的双功能PEG包括：
[0229]
[0230] 在式IV中，包含反应性官能团的部分具有通式结构-(CH2)m-COO-NHS，其中m＝1。在某些实施方案中，双功能PEG具有式IV的结构，其中m是1-10，例如，1-5。在某些实施方案中，例如，在包含反应性官能团的部分具有通式结构-COO-NHS的实施方案中，m是0。例如，在某些实施方案中，双官能PEG具有式IVa的结构，显示如下：
[0231]
[0232] 在式V中，包含反应性官能团的部分具有通式结构-CO-(CH2)m-COO-NHS，其中m＝2。在某些实施方案中，双功能PEG具有式V的结构，其中m是1-10，例如，1-5。在某些实施方案中，例如，m是2，显示如下：
[0233]
[0234] 在某些实施方案中，本发明提供了缀合至聚合物的坎普他汀类似物。在某些实施方案中，使在坎普他汀类似物上的官能团(例如，胺、羟基或硫醇基团)与具有如本文中所述的“反应性官能团”的含有PEG的化合物反应，以产生这样的缀合物。作为例子，式III和IV分别可以形成具有以下结构的坎普他汀类似物缀合物：
[0235] 或者
[0236]
[0237] 其中， 代表胺基团在坎普他汀类似物上的连接点。在某些实施方案中，胺基团是赖氨酸侧链基团。
[0238] 应该理解，对应的缀合物可以用任意含有PEG的化合物和本文所述类形成，取决于反应性官能团和/或坎普他汀官能团的选择。例如，式IVa和Va可以分别形成具有以下结构
的坎普他汀类似物缀合物：
的坎普他汀类似物缀合物：
[0239]
[0240] 在某些实施方案中，此类缀合物的所述PEG成分具有介于约20kD-100kD、约20kD-90kD、约20kD-80kD、约20kD-70kD、约20kD-60kD、约20kD-50kD、约30kD-80kD、约30kD-70kD、约30kD-60kD、约30kD-50kD、约30kD-45kD、约35kD-50kD、约35kD-45kD、约36kD-44kD、约
37kD-43kD、约38kD-42kD或约39kD-41kD的平均分子量。在某些实施方案中，此类缀合物的所述PEG成分具有约40kD的平均分子量。
37kD-43kD、约38kD-42kD或约39kD-41kD的平均分子量。在某些实施方案中，此类缀合物的所述PEG成分具有约40kD的平均分子量。
[0241] 本文中有时使用术语“双官能的”或“双官能化的”来表示包含两个与CRM连接的坎普他汀类似物部分的化合物。可用字母“BF”代表该化合物。在某些实施方案中，双官能化的化合物是对称的。在某些实施方案中，所述CRM与双官能化化合物的每个坎普他汀类似物部分之间的连接是相同的。在某些实施方案中，CRM和双官能化化合物的坎普他汀类似物之间的每个连接包含氨基甲酸酯。在某些实施方案中，CRM和双官能化化合物的坎普他汀类似物之间的每个连接包含氨基甲酸酯并且不包含酯。在某些实施方案中，双官能化化合物的每个坎普他汀类似物经由氨基甲酸酯直接与CRM连接。在某些实施方案中，双官能化化合物的每个坎普他汀类似物经由氨基甲酸酯直接与CRM连接，并且所述双官能化化合物具有以下
结构：
结构：
[0242]
[0243] 在 某 些 关 于 式 的 实 施 方 案 和 本 申 请 所 述 的 实 施 方 案 中 ，代表坎普他汀类似物中赖氨酸侧链基团的连接点，所述坎普
他汀类似物具有以下结构：
他汀类似物具有以下结构：
[0244]
[0245] 其中符号 表示化学部分与分子或化学式剩余部分的连接点。
[0246] 在某些实施方案中，有分支的梳形或星形PEG包含这样的部分：其含有在多个-(CH2CH2O)n链的每一个的末端处的反应性官能团。所述反应性官能团可以是相同的，或者可以存在至少2种不同的基团。在某些实施方案中，有分支的梳形或星形PEG具有下式：
[0247]
[0248]
[0249] 其中每个R2独立地是“反应性官能团”或R1，且每个T、n和“反应性官能团”独立地如上定义，并描述在本文中的类和亚类中。下面描述了包含NHS部分作为反应性官能团的示例性支链PEG(具有8个臂或分支)的结构：
[0250]
[0251] 下面描述了包含NHS部分作为反应性官能团的示例性支链PEG(具有4个臂或分支)的结构：
[0252]
[0253]
[0254] 从主链发散的分支的数目可以变化。例如，在不同的实施方案中，在上面式VI和VII中的数目4可以变为0-10之间的任意其它整数。在某些实施方案中，一个或多个分支不
含有反应性官能团，且所述分支以-CH2CH2OH或-CH2CH2OR基团终止，如上所述。
含有反应性官能团，且所述分支以-CH2CH2OH或-CH2CH2OR基团终止，如上所述。
[0255] 在某些实施方案中，支链PEG具有式VII、VIII或IX(或其具有不同数目的分支的变体)的结构，前提条件是，x是
[0256]
[0257] 在某些实施方案中，支链PEG具有式VII、VIII或IX(或其具有不同数目的分支的变体)的结构，前提条件是，x是
[0258]
[0259] 当然，在上面的x部分中的亚甲基(CH2)基团可以替代性地包含较长的烷基链(CH2)m，其中m是至多2、3、4、5、6、8、10、20或30，或者可以包含一个或多个本文中描述的其它部分。
[0260] 在某些实施方案中，下面描述了具有NHS或马来酰亚胺反应基团的示例性支链PEG：
[0261]
[0262] 在某些实施方案中，使用式X或XI的变体，其中所述4个分支中的3个或每个包含反应性官能团。
[0263] 可以如下表示PEG的其它例子：
[0264]
[0265] 如上面所指出的，应当理解，如本文中所述的，在不同的实施方案中，可以将多种部分中的任一种掺入长效坎普他汀类似物的肽组分和(CH2CH2O)n-R部分之间，诸如直链烷基、酯、酰胺、芳族环(例如，被取代的或未被取代的苯基)、被取代的或未被取代的环烷基结构、或它们的组合。在某些实施方案中，这样的部分可以使得化合物对水解更敏感，所述水解可以从CRM释放出化合物的肽部分。在某些实施方案中，这样的释放可以增强化合物的体内组织穿透和/或活性。在某些实施方案中，水解是一般(例如，酸-碱)水解。在某些实施方案中，水解是酶催化的，例如，酯酶催化的。当然，可能发生两类水解。包含一个或多个这样的部分和作为反应性官能团的NHS酯的PEG的例子如下：
[0266]
[0267] 在某些实施方案中，支链(多臂)PEG或星形PEG包含季戊四醇核心、六甘油核心或三季戊四醇核心。应该理解，在某些实施方案中，所述分支可以不都从单个点发散。
[0268] 在某些实施方案中，包含一个或多个反应性官能团的单功能的、双功能的、支链和其它PEG可以得自，例如，NOF America Corp.White Plains,NY或BOC Sciences 45-16Ramsey Road Shirley,NY 11967,USA，以及其它，或者可以使用本领域已知的方法制备。
[0269] 在某些实施方案中，CRM和坎普他汀类似物之间的连接包含氨基甲酸酯(carbamate)。在某些实施方案中，坎普他汀类似物经由氨基甲酸酯直接与CRM连接。在某些实施方案中，CRM和坎普他汀类似物之间的连接不包含酯。在某些实施方案中，CRM和坎普他汀类似物之间的连接包含氨基甲酸酯并且不包含酯。在某些实施方案中，CRM和坎普他汀类似物之间的连接包含氨基甲酸酯并且不包含在水性介质中比氨基甲酸酯更易于水解的键。
在某些实施方案中，所述CRM包含PEG部分或由其组成。
在某些实施方案中，所述CRM包含PEG部分或由其组成。
[0270] 在某些实施方案中，CRM和坎普他汀类似物之间的连接包含酰胺。在某些实施方案中，坎普他汀类似物经由酰胺直接与CRM连接。在某些实施方案中，CRM和坎普他汀类似物之间的连接包含酰胺并且不包含酯。在某些实施方案中，CRM和坎普他汀类似物之间的连接包含酰胺并且不包含不包含在水性介质中比酰胺更易于水解的键。在某些实施方案中，所述
CRM包含PEG部分或由其组成。
CRM包含PEG部分或由其组成。
[0271] 在某些实施方案中，多官能化化合物(例如，双官能化、三官能化或更广泛地官能化的化合物)的一个或多个坎普他汀类似物通过包含氨基甲酸酯的连接与CRM连接。在某些
实施方案中，多官能化化合物(例如，双官能化、三官能化或更广泛地官能化的化合物)的一个或多个坎普他汀类似物通过不包含酯的连接与CRM连接。在某些实施方案中，多官能化化合物(例如，双官能化、三官能化或更广泛地官能化的化合物)的一个或多个坎普他汀类似
物通过包含氨基甲酸酯并且不包含酯的连接与CRM连接。在某些实施方案中，多官能化化合物(例如，双官能化、三官能化或更广泛地官能化的化合物)的一个或多个坎普他汀类似物
通过包含氨基甲酸酯并且不包含在水性介质中比氨基甲酸酯更易于水解的键的连接与CRM
连接。在某些实施方案中，多官能化化合物(例如，双官能化、三官能化或更广泛地官能化的化合物)的每个坎普他汀类似物经由氨基甲酸酯直接与CRM连接。
实施方案中，多官能化化合物(例如，双官能化、三官能化或更广泛地官能化的化合物)的一个或多个坎普他汀类似物通过不包含酯的连接与CRM连接。在某些实施方案中，多官能化化合物(例如，双官能化、三官能化或更广泛地官能化的化合物)的一个或多个坎普他汀类似
物通过包含氨基甲酸酯并且不包含酯的连接与CRM连接。在某些实施方案中，多官能化化合物(例如，双官能化、三官能化或更广泛地官能化的化合物)的一个或多个坎普他汀类似物
通过包含氨基甲酸酯并且不包含在水性介质中比氨基甲酸酯更易于水解的键的连接与CRM
连接。在某些实施方案中，多官能化化合物(例如，双官能化、三官能化或更广泛地官能化的化合物)的每个坎普他汀类似物经由氨基甲酸酯直接与CRM连接。
[0272] 在某些实施方案中，所述CRM包含PEG部分或由其组成。在某些实施方案中，多官能化化合物(例如，双官能化、三官能化或更广泛地官能化的化合物)的一个或多个坎普他汀类似物通过包含酰胺的连接与CRM连接。在某些实施方案中，多官能化化合物(例如，双官能化、三官能化或更广泛地官能化的化合物)的一个或多个坎普他汀类似物通过包含酰胺并
且不包含酯的连接与CRM连接。在某些实施方案中，多官能化化合物(例如，双官能化、三官能化或更广泛地官能化的化合物)的一个或多个坎普他汀类似物通过包含酰胺并且不包含
在水性介质中比酰胺更易于水解的键的连接与CRM连接。在某些实施方案中，多官能化化合物(例如，双官能化、三官能化或更广泛地官能化的化合物)的每个坎普他汀类似物经由酰
胺直接与CRM连接。在某些实施方案中，所述CRM包含PEG部分或由其组成。
且不包含酯的连接与CRM连接。在某些实施方案中，多官能化化合物(例如，双官能化、三官能化或更广泛地官能化的化合物)的一个或多个坎普他汀类似物通过包含酰胺并且不包含
在水性介质中比酰胺更易于水解的键的连接与CRM连接。在某些实施方案中，多官能化化合物(例如，双官能化、三官能化或更广泛地官能化的化合物)的每个坎普他汀类似物经由酰
胺直接与CRM连接。在某些实施方案中，所述CRM包含PEG部分或由其组成。
[0273] 在某些实施方案中，本发明提供了与聚合物缀合的坎普他汀类似物，其中所述聚合物是除PEG以外的聚合物。在某些实施方案中，聚合物是聚噁唑啉(POZ)。下面描述了用于直接缀合或经由接头缀合的示例性的单官能化和多官能化聚噁唑啉衍生物：
[0274] Z-T-[N(CORx)CH2CH2]n-T-R1；
[0275] R1-{[N(CO-T-Z)CH2CH2]m-[N(CORx)CH2CH2]n}a-T-R1；
[0276] R1-{[N(CO-T-Z1)CH2CH2]p-[N(CORx)CH2CH2]n-[N(CO-T-Z2)CH2CH2]m}a-T-R1；
[0277] R1-{[N(CO-T-Z1)CH2CH2]p-[N(CORx)CH2CH2]n-[N(CO-T-Z2)CH2CH2]m}a-T-Z；
[0278] R1-[N(CORx)CH2CH2]n-T-B(-R1)(-T-Z)-T-[N(CORx)CH2CH2]m-R1；
[0279] 其中：
[0280] 如上面所定义的，Z、Z1和Z2各自独立地是反应性官能团，并于本文中的类和亚类中进行了描述；
[0281] T、Rx和R1各自独立地如上面所定义，并于本文中的类和亚类中进行了描述；
[0282] m、n和p各自独立地是0-1000的整数，限制条件是对于每个式，m,n和p的总和不是0；
[0283] a是“ran,”，表示随机的共聚物，或是“block,”，表示嵌段共聚物；
[0284] B是由接头或不由接头连接至所述聚合物的其它部分的分支部分。
[0285] 用于缀合的官能化聚噁唑啉衍生物的其它示例被广泛描述于本领域，包括但不限于在PCT专利申请公开号WO/2010/006282、WO/2009/089542、WO/2009/043027和WO/2008/
106186中描述的那些，所述PCT专利申请的每个的全部内容通过引用并入本文。
106186中描述的那些，所述PCT专利申请的每个的全部内容通过引用并入本文。
[0286] 下面描述了坎普他汀类似物与聚噁唑啉聚合物形成的缀合物的实例：
[0287]
[0288]
[0289] 其中每个变量独立地如上面所定义并在本文中的类和亚类中进行了描述；
[0290] 在某些实施方案中，本发明提供了与聚合物缀合的坎普他汀类似物，其中所述坎普他汀类似物经由一个或多个接头与所述聚合物连接。在某些实施方案中，聚合物选自上
文描述的、并在本申请的类和亚类中的含PEG的化合物和类。在某些实施方案中，本发明提供了本文描述的含PEG的化合物和类的坎普他汀类似物缀合物，其中所述坎普他汀类似物
经由一个或多个接头与所述含PEG的部分连接。包含一个或多个用于缀合的反应性官能团
的单官能和多官能PEG已在上文中定义并在本文的类和亚类中进行了描述，包括但不限于
式A、I、Ia、II、III、IIIa、B、IV、IVa、V、Va、C、D、E、F、G、H、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV或XVI的那些。
文描述的、并在本申请的类和亚类中的含PEG的化合物和类。在某些实施方案中，本发明提供了本文描述的含PEG的化合物和类的坎普他汀类似物缀合物，其中所述坎普他汀类似物
经由一个或多个接头与所述含PEG的部分连接。包含一个或多个用于缀合的反应性官能团
的单官能和多官能PEG已在上文中定义并在本文的类和亚类中进行了描述，包括但不限于
式A、I、Ia、II、III、IIIa、B、IV、IVa、V、Va、C、D、E、F、G、H、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII、XIV、XV或XVI的那些。
[0291] 用于连接坎普他汀类似物和聚合物部分(例如PEG或聚噁唑啉)的合适的接头在上文和本文的类和亚类中进行了广泛的描述。在某些实施方案中，接头具有多个官能团，其中一个官能团与坎普他汀类似物连接以及另一个与聚合物部分连接。在某些实施方案中，接
头是双官能化合物。在某些实施方案中，接头具有NH2(CH2CH2O)nCH2C(＝O)OH的结构，其中n是1到1000。在某些实施方案中，接头是8-氨基-3,6-二氧杂辛酸(AEEAc)。在某些实施方案中，激活接头用于与聚合物部分或坎普他汀类似物的官能团缀合。例如，在某些实施方案
中，在与赖氨酸基团侧链的胺基团缀合之前，激活AEEAc的羧基。
头是双官能化合物。在某些实施方案中，接头具有NH2(CH2CH2O)nCH2C(＝O)OH的结构，其中n是1到1000。在某些实施方案中，接头是8-氨基-3,6-二氧杂辛酸(AEEAc)。在某些实施方案中，激活接头用于与聚合物部分或坎普他汀类似物的官能团缀合。例如，在某些实施方案
中，在与赖氨酸基团侧链的胺基团缀合之前，激活AEEAc的羧基。
[0292] 在某些实施方案中，坎普他汀类似物上合适的官能团(例如，胺、羟基、硫醇或羧酸基团)用于与聚合物部分直接地缀合或经由接头缀合。在某些实施方案中，坎普他汀类似物经由接头通过胺基团与PEG部分缀合。在某些实施方案中，胺基团是氨基酸残基的α-胺基团。在某些实施方案中，胺基团是所述赖氨酸侧链的胺基团。在某些实施方案中，坎普他汀类似物经由具有NH2(CH2CH2O)nCH2C(＝O)OH结构(其中n是1到1000)的接头通过赖氨酸侧链
的胺基团(ε-胺基团)与PEG部分缀合。在某些实施方案中，坎普他汀类似物经由AEEAc接头通过赖氨酸侧链的所述胺基团与所述PEG部分缀合。在某些实施方案中，在缀合之后，所述NH2(CH2CH2O)nCH2C(＝O)OH接头将-NH(CH2CH2O)nCH2C(＝O)-部分引入坎普他汀赖氨酸侧链上。在某些实施方案中，在缀合之后，所述AEEAc接头将-NH(CH2CH2O)2CH2C(＝O)-部分引入坎普他汀赖氨酸侧链上。
的胺基团(ε-胺基团)与PEG部分缀合。在某些实施方案中，坎普他汀类似物经由AEEAc接头通过赖氨酸侧链的所述胺基团与所述PEG部分缀合。在某些实施方案中，在缀合之后，所述NH2(CH2CH2O)nCH2C(＝O)OH接头将-NH(CH2CH2O)nCH2C(＝O)-部分引入坎普他汀赖氨酸侧链上。在某些实施方案中，在缀合之后，所述AEEAc接头将-NH(CH2CH2O)2CH2C(＝O)-部分引入坎普他汀赖氨酸侧链上。
[0293] 在某些实施方案中，坎普他汀类似物经由接头与聚合物部分缀合，其中所述接头包含AEEAc部分和氨基酸残基。在某些实施方案中，坎普他汀类似物经由接头与聚合物部分缀合，其中所述接头包含AEEAc部分和赖氨酸残基。在某些实施方案中，聚合物是PEG。在某些实施方案中，坎普他汀类似物的C末端与AEEAc的胺基团连接并且AEEAc的C末端与赖氨酸
残基连接。在某些实施方案中，坎普他汀类似物的C末端与AEEAc的胺基团连接，并且AEEAc的C末端与赖氨酸残基的α-胺基团连接。在某些实施方案中，坎普他汀类似物的C末端与
AEEAc的胺基团连接，AEEAc的C末端与所述赖氨酸残基的α-胺基团连接，并且聚合物部分
(例如PEG部分)通过所述赖氨酸残基的ε-胺基团进行缀合。在某些实施方案中，修饰了所述赖氨酸残基的C末端。在某些实施方案中，通过酰胺化修饰所述赖氨酸残基的C末端。在某些实施方案中，将坎普他汀类似物的N末端进行乙酰化。
残基连接。在某些实施方案中，坎普他汀类似物的C末端与AEEAc的胺基团连接，并且AEEAc的C末端与赖氨酸残基的α-胺基团连接。在某些实施方案中，坎普他汀类似物的C末端与
AEEAc的胺基团连接，AEEAc的C末端与所述赖氨酸残基的α-胺基团连接，并且聚合物部分
(例如PEG部分)通过所述赖氨酸残基的ε-胺基团进行缀合。在某些实施方案中，修饰了所述赖氨酸残基的C末端。在某些实施方案中，通过酰胺化修饰所述赖氨酸残基的C末端。在某些实施方案中，将坎普他汀类似物的N末端进行乙酰化。
[0294] 下面描述了包含AEEAc接头和聚合物的示例性缀合物，其中
[0295] 代表在坎普他汀类似物上胺基团的连接点。代表坎普他汀类似物通过其C末端进行连接，并且其中每个
其它的变量独立地如上文定义并在本文中的类和亚类中进行了描述。在某些实施方案中，
胺基团是赖氨酸侧链的胺基团。
其它的变量独立地如上文定义并在本文中的类和亚类中进行了描述。在某些实施方案中，
胺基团是赖氨酸侧链的胺基团。
[0296]
[0297]
[0298]
[0299]
[0300] 在某些实施方案中，坎普他汀类似物可以表示为M-AEEAc-Lys-B2，其中B2是封端部分，例如，NH2，M代表SEQ ID NO:3-36、37、37A、38A、39A、40A或41A中的任一个，前提条件是SEQ ID NO:3-36、37、37A、38A、39A、40A或41A中的任一个的C末端经由与AEEAc-Lys-B2结合的肽进行连接。单官能或多官能(例如，双官能)PEG的NHS部分与所述赖氨酸侧链的游离胺反应以生成单官能化的(一个坎普他汀类似物部分)或多官能化的(多个坎普他汀类似物部
分)长效坎普他汀类似物。在不同的实施方案中，任意包含含有反应性官能团的侧链的氨基酸可以用于代替Lys(或除Lys之外还使用)。包含合适的反应性官能团的单官能或多官能
PEG可以与此侧链以类似于NHS-酯激活的PEG与Lys反应的方式反应。
分)长效坎普他汀类似物。在不同的实施方案中，任意包含含有反应性官能团的侧链的氨基酸可以用于代替Lys(或除Lys之外还使用)。包含合适的反应性官能团的单官能或多官能
PEG可以与此侧链以类似于NHS-酯激活的PEG与Lys反应的方式反应。
[0301] 对于上面的式和结构的任一个，应当理解，明确公开了所述坎普他汀类似物的成分包含本文所述的任意坎普他汀类似物，例如，SEQ ID NO：3-36、37、37A、38A、39A、40A、41A的任意坎普他汀类似物的实施方案。例如，但不限于，坎普他汀类似物可以包含SEQID NO:
28的氨基酸序列。图10(C)描绘了示例性的长效坎普他汀类似物，其中所述坎普他汀类似物的成分包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列。应当理解，如本文所述，在不同的实施方案中，所述PEG部分可以具有多种不同的分子量或平均分子量。例如，如本文所述，制剂内的单个PEG链可以在分子量上变化和/或不同的制剂可以具有不同的平均分子量和/或多分散性。在某
些实施方案中，图10(C)的所述化合物的所述PEG部分具有介于约20kD-100kD、约20kD-
90kD、约20kD-80kD、约20kD-70kD、约20kD-60kD、约20kD-50kD、约30kD-80kD、约30kD-70kD、约30kD-60kD、约30kD-50kD、约30kD-45kD、约35kD-50kD、约35kD-45kD,约36kD-44kD、约
37kD-43kD、约38kD-42kD或约39kD-41kD的平均分子量。在某些实施方案中，图10(C)的所述化合物的所述PEG部分具有介于约30kD和约50kD之间的平均分子量，例如，介于约35kD和约
45kD、介于约37.5kD和约42.5kD。在某些实施方案中，所述PEG部分具有约40kD的平均分子量，例如，37.5kD-42.5kD、38kD、39kD、40kD、41kD、42kD，所述化合物在本文中有时被称为CA28-2TS-BF。在某些实施方案中，包含CRM(例如PEG部分)的化合物具有约40kD的平均分子量，例如，37.5kD-42.5kD、38kD、39kD、40kD、41kD、42kD，当其被以约1-3mg/kg、3-5mg/kg或
5-10mg/kg的剂量静脉内地或皮下地施用于非人灵长类动物或人类时，所述化合物具有至
少约5天(例如，约5-10天，例如，约5、6、7、8、9天)的终末半衰期。
28的氨基酸序列。图10(C)描绘了示例性的长效坎普他汀类似物，其中所述坎普他汀类似物的成分包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列。应当理解，如本文所述，在不同的实施方案中，所述PEG部分可以具有多种不同的分子量或平均分子量。例如，如本文所述，制剂内的单个PEG链可以在分子量上变化和/或不同的制剂可以具有不同的平均分子量和/或多分散性。在某
些实施方案中，图10(C)的所述化合物的所述PEG部分具有介于约20kD-100kD、约20kD-
90kD、约20kD-80kD、约20kD-70kD、约20kD-60kD、约20kD-50kD、约30kD-80kD、约30kD-70kD、约30kD-60kD、约30kD-50kD、约30kD-45kD、约35kD-50kD、约35kD-45kD,约36kD-44kD、约
37kD-43kD、约38kD-42kD或约39kD-41kD的平均分子量。在某些实施方案中，图10(C)的所述化合物的所述PEG部分具有介于约30kD和约50kD之间的平均分子量，例如，介于约35kD和约
45kD、介于约37.5kD和约42.5kD。在某些实施方案中，所述PEG部分具有约40kD的平均分子量，例如，37.5kD-42.5kD、38kD、39kD、40kD、41kD、42kD，所述化合物在本文中有时被称为CA28-2TS-BF。在某些实施方案中，包含CRM(例如PEG部分)的化合物具有约40kD的平均分子量，例如，37.5kD-42.5kD、38kD、39kD、40kD、41kD、42kD，当其被以约1-3mg/kg、3-5mg/kg或
5-10mg/kg的剂量静脉内地或皮下地施用于非人灵长类动物或人类时，所述化合物具有至
少约5天(例如，约5-10天，例如，约5、6、7、8、9天)的终末半衰期。
[0302] 在某些方面，本发明涉及与坎普他汀类似物相关的点击化学的使用。“点击化学”是本领域熟知的并在本发明的一些方面是有用的。在某些实施方案中，点击化学体现为叠氮化物和炔烃间通用的环加成反应，该反应使得众多有用的应用得以进行。开展点击化学
的方法在本领域是已知的，并在以下进行了描述：Kolb,H.C.；Sharpless,K.B.,Drug
Disc.Today,2003,1128-1137；Moses,J.E.；Moorhouse,A.D.；Chem.Soc.Rev.,2007,1249-
1262，其每个的全部内容通过引用并入本文。点击化学是流行的生物缀合方法，这归因于其即便是在生物介质中也具有的高反应性和选择性。参见Kolb,H.C.；Finn,M.G.；Sharpless,K.B.Angew.Chem.Int.Ed.2001,40,2004-2021；and Wang,Q.；Chan,T.R.；Hilgraf,R.；
Fokin,V.V.；Sharpless,K.B.；Finn,M.G.J.Am.Chem.Soc.2003,125,3192-3193。此外，目前已有的重组技术和合成方法允许将带有叠氮化物和炔烃的非经典氨基酸引入肽、蛋白质、
细胞、病毒、细菌和其它生物实体，所述生物实体由蛋白质组成或展示蛋白质。参见Link,A.J.；Vink,M.K.S.；Tirrell,D.A.J.Am.Chem.Soc.2004,126,10598-10602；Deiters,A.；
Cropp,T.A.；Mukherji,M.；Chin,J.W.；Anderson,C.；Schultz,P.G.J.Am.Chem.Soc.2003,
125,11782-11783。
的方法在本领域是已知的，并在以下进行了描述：Kolb,H.C.；Sharpless,K.B.,Drug
Disc.Today,2003,1128-1137；Moses,J.E.；Moorhouse,A.D.；Chem.Soc.Rev.,2007,1249-
1262，其每个的全部内容通过引用并入本文。点击化学是流行的生物缀合方法，这归因于其即便是在生物介质中也具有的高反应性和选择性。参见Kolb,H.C.；Finn,M.G.；Sharpless,K.B.Angew.Chem.Int.Ed.2001,40,2004-2021；and Wang,Q.；Chan,T.R.；Hilgraf,R.；
Fokin,V.V.；Sharpless,K.B.；Finn,M.G.J.Am.Chem.Soc.2003,125,3192-3193。此外，目前已有的重组技术和合成方法允许将带有叠氮化物和炔烃的非经典氨基酸引入肽、蛋白质、
细胞、病毒、细菌和其它生物实体，所述生物实体由蛋白质组成或展示蛋白质。参见Link,A.J.；Vink,M.K.S.；Tirrell,D.A.J.Am.Chem.Soc.2004,126,10598-10602；Deiters,A.；
Cropp,T.A.；Mukherji,M.；Chin,J.W.；Anderson,C.；Schultz,P.G.J.Am.Chem.Soc.2003,
125,11782-11783。
[0303] 本文使用的术语“点击化学基团”有时用来表示能够与适当的第二反应官能团一起参与点击化学反应的反应官能团，所述第二反应官能团也是点击化学基团。所述第一和
第二点击化学基团，或包含这样的基团的实体(例如，分子)，可以是互补的。包含互补的点击化学基团的第一和第二实体，例如，分子，可被表示为点击化学伴侣。包含点击化学基团的实体或分子可被表示为“点击官能化的”。由互补的点击化学伴侣反应形成的键可被表示为“点击化学键”。
第二点击化学基团，或包含这样的基团的实体(例如，分子)，可以是互补的。包含互补的点击化学基团的第一和第二实体，例如，分子，可被表示为点击化学伴侣。包含点击化学基团的实体或分子可被表示为“点击官能化的”。由互补的点击化学伴侣反应形成的键可被表示为“点击化学键”。
[0304] 在某些实施方案中，本发明提供了点击官能化的坎普他汀类似物，用于，例如，与伴侣分子或生物分子上的互补部分缀合。在某些实施方案中，互补的伴侣分子或生物分子是聚合物、肽、蛋白质或作为清除率降低部分的分子。在某些实施方案中，所述“点击官能化的”部分是能够与互补的带有叠氮化物的分子和生物分子进行[3+2]环加成反应的炔烃或
炔烃衍生物。在另一实施方案中，所述“点击官能化的”官能团是能够与互补的带有炔烃分子和生物分子(即，点击化学)进行[3+2]环加成反应的叠氮化物或叠氮化物衍生物。
炔烃衍生物。在另一实施方案中，所述“点击官能化的”官能团是能够与互补的带有炔烃分子和生物分子(即，点击化学)进行[3+2]环加成反应的叠氮化物或叠氮化物衍生物。
[0305] 在某些实施方案中，点击官能化的坎普他汀类似物在所述坎普他汀类似物的任意侧链基团上带有叠氮基团。在某些实施方案中，点击官能化的坎普他汀类似物在赖氨酸侧
链基团上带有叠氮基团。
链基团上带有叠氮基团。
[0306] 在某些实施方案中，点击官能化的坎普他汀类似物在所述坎普他汀类似物的任意侧链基团上带有炔烃基团。在某些实施方案中，点击官能化的坎普他汀类似物在赖氨酸侧
链基团上带有炔烃基团。
链基团上带有炔烃基团。
[0307] 在某些实施方案中，本发明提供了包含坎普他汀类似物、作为清除率降低部分的分子和三唑接头的坎普他汀缀合物。在某些实施方案中，三唑接头是坎普他汀缀合物和作
为清除率降低部分的分子间点击缀合化学的结果。在某些实施方案中，所述CRM可以是本文公开的任意CRM。例如，所述CRM可以是PEG、多肽或POZ。
为清除率降低部分的分子间点击缀合化学的结果。在某些实施方案中，所述CRM可以是本文公开的任意CRM。例如，所述CRM可以是PEG、多肽或POZ。
[0308] 在某些实施方案中，本发明提供了包含坎普他汀类似物、PEG部分和三唑接头的坎普他汀缀合物。在某些实施方案中，三唑接头是坎普他汀缀合物和PEG部分间点击缀合化学的结果。
[0309] 在某些实施方案中，本发明提供了包含坎普他汀类似物、聚噁唑啉部分和三唑接头的坎普他汀缀合物。在某些实施方案中，三唑接头是坎普他汀缀合物和聚噁唑啉部分间
点击缀合化学的结果。
点击缀合化学的结果。
[0310] 在某些实施方案中，坎普他汀类似物和另一部分之间的点击化学是由过渡金属催化的。催化“点击”反应的含铜分子包括，但不限于，铜线、溴化铜(CuBr)、氯化铜(CuCl)、硫酸铜(CuSO4)、五水硫酸铜(CuSO4·5H2O)、醋酸铜(Cu2(AcO4)、碘化铜(CuI)、[Cu(MeCN)4](OTf)、[Cu(MeCN)4](PF6)、胶体铜源和固态铜源。在某些实施方案中，还包括其它金属，例如钌。还原剂以及有机的和无机的金属结合配体可以用于结合金属催化剂，包括，但不限于，抗坏血酸钠、三(三唑基)胺配体、三(羧乙基)膦(TCEP)、磺化红菲咯啉配体和基于苯并咪唑的配体。
[0311] 在某些实施方案中，坎普他汀类似物使用无金属点击化学(也被称为无铜点击化学)缀合至其它部分，以获得无金属的组合物或缀合物。与标准的点击化学(也被称为铜辅
助点击化学(CuACC))相反，无金属点击化学发生于有张力的环状炔或炔前体(例如氧杂降
冰片烯(oxanorbornadiene))和叠氮基团之间。如其名所示，对于所述反应的发生是不需要金属催化剂的。这类化学物质的实施例包括涉及环辛炔衍生物(Codelli,
et.al.J.Am.Chem.Soc.,2008,130,11486-11493；Jewett,et.al.J.Am.Chem.Soc.,2010,
132,3688-3690；Ning,et.al.Angew.Chem.Int.Ed.,2008,47,2253-2255)、二氟氧杂降冰片烯(difluoro-oxanorbornene)衍生物(van Berkel,et.al.ChemBioChem,2007,8,1504-
1508)或氧化腈衍生物(Lutz,et.al.Macromolecules,2009,42,5411-5413)的反应。在某些
实施方案中，无金属点击化学反应是无金属[3+2]环加成反应、狄尔斯-阿尔德(Diels-
Alder)反应或硫醇-烯基的自由基加成反应。点击化学反应和点击化学基团的实例在，例
如，Joerg Lahann,Click Chemistry for Biotechnology and Materials Science,2009,
John Wiley&Sons Ltd,ISBN 978-0-470-69970-6；Becer,Hoogenboom,和Schubert,Click
Chemistry beyond Metal-Catalyzed Cycloaddition,Angewandte Chemie
International Edition(2009)48:4900-4908中进行描述。在某些实施方案中，点击化学基团包含二芳环辛炔(diarylcyclooctyne)。
助点击化学(CuACC))相反，无金属点击化学发生于有张力的环状炔或炔前体(例如氧杂降
冰片烯(oxanorbornadiene))和叠氮基团之间。如其名所示，对于所述反应的发生是不需要金属催化剂的。这类化学物质的实施例包括涉及环辛炔衍生物(Codelli,
et.al.J.Am.Chem.Soc.,2008,130,11486-11493；Jewett,et.al.J.Am.Chem.Soc.,2010,
132,3688-3690；Ning,et.al.Angew.Chem.Int.Ed.,2008,47,2253-2255)、二氟氧杂降冰片烯(difluoro-oxanorbornene)衍生物(van Berkel,et.al.ChemBioChem,2007,8,1504-
1508)或氧化腈衍生物(Lutz,et.al.Macromolecules,2009,42,5411-5413)的反应。在某些
实施方案中，无金属点击化学反应是无金属[3+2]环加成反应、狄尔斯-阿尔德(Diels-
Alder)反应或硫醇-烯基的自由基加成反应。点击化学反应和点击化学基团的实例在，例
如，Joerg Lahann,Click Chemistry for Biotechnology and Materials Science,2009,
John Wiley&Sons Ltd,ISBN 978-0-470-69970-6；Becer,Hoogenboom,和Schubert,Click
Chemistry beyond Metal-Catalyzed Cycloaddition,Angewandte Chemie
International Edition(2009)48:4900-4908中进行描述。在某些实施方案中，点击化学基团包含二芳环辛炔(diarylcyclooctyne)。
[0312] 下面的方案中显示了某些无金属点击化学的实例。
[0313]
[0314] 某些无金属点击部分是文献中已知的。例子包括4-二苯基环辛炔(DIBO)(来自Ning et.al；Angew Chem Int Ed,2008,47,2253)；二氟化环辛炔
(DIFO或DFO) (来自Codelli,et.al.；J.Am.Chem.Soc.2008,130,11486-11493.)；
二芳基氮杂环辛酮(biarylazacyclooctynone)(BARAC) (来自Jewett
et.al.；J.Am.Chem.Soc.2010,132,3688)；或双环壬炔(bicyclononyne)(BCN) (来
自Dommerholt,et.al.；Angew Chem Int Ed,2010,49,9422-9425)或二苄基环辛炔
(dibenzylcyclooctyne)(DBCO)
(DIFO或DFO) (来自Codelli,et.al.；J.Am.Chem.Soc.2008,130,11486-11493.)；
二芳基氮杂环辛酮(biarylazacyclooctynone)(BARAC) (来自Jewett
et.al.；J.Am.Chem.Soc.2010,132,3688)；或双环壬炔(bicyclononyne)(BCN) (来
自Dommerholt,et.al.；Angew Chem Int Ed,2010,49,9422-9425)或二苄基环辛炔
(dibenzylcyclooctyne)(DBCO)
[0315] 下面显示了涉及DBCO和叠氮化物的反应的反应方案：
[0316]
[0317] 在不同的实施方案中，上图中的A可以包含坎普他汀类似物部分或由其组成以及B可以包含CRM，例如，聚合物(例如PEG或POZ或多肽)，或由其组成；或者B可以包含坎普他汀类似物部分或由其组成以及A可以包含CRM，例如，聚合物(例如PEG或POZ或多肽)，或由其组成。
[0318] 在某些实施方案中，所述“无金属点击官能化的”部分是乙炔或乙炔衍生物，所述乙炔或乙炔衍生物能够在不使用金属催化剂的条件下，与互补的带有叠氮化物的分子和生物分子进行[3+2]环加成反应。
[0319] 在某些实施方案中，所述无金属点击化学试剂的所述R和R'基团是坎普他汀类似物或本文所述的与坎普他汀类似物缀合的任意分子。在某些实施方案中，这样的坎普他汀
类似物在赖氨酸侧链上带有点击官能化的部分。在某些实施方案中，这样的坎普他汀类似
物经由接头与点击官能化的部分连接。在某些实施方案中，这样的坎普他汀类似物经由
AEEAc与点击官能化的部分连接。
类似物在赖氨酸侧链上带有点击官能化的部分。在某些实施方案中，这样的坎普他汀类似
物经由接头与点击官能化的部分连接。在某些实施方案中，这样的坎普他汀类似物经由
AEEAc与点击官能化的部分连接。
[0320] 在某些实施方案中，点击化学试剂包含DBCO。以下描绘了示例性试剂及其示例性使用：
[0321]
[0322] DBCO酸。在某些实施方案中，DBCO酸可被用来与含胺的部分反应。
[0323]
[0324] DBCO-NHS酯(上面)或DBCO-磺基-NHS酯(下面)可被用来将DBCO官能团掺入到含有胺的分子中，例如坎普他汀类似物或包含赖氨酸残基的多肽。
[0325]
[0326] DBCO-PEG4-NHS酯。在某些实施方案中，这样的试剂对于通过与已有的胺官能团反应来引入DBCO部分是有用的。在某些方面，作为亲水性间隔物而存在的PEG链对于，例如，增强溶解度或提供灵活性，是有用的。
[0327]
[0328] DBCO胺。在某些实施方案中，点击化学试剂包括羰基/羧基反应性二苄基环辛炔(dibenzylcyclooctyne)，其可以与酸、活性酯和/或醛反应。
[0329] 在某些实施方案中，点击化学反应涉及以下描述的环辛炔：
[0330]
[0331] 在某些实施方案中，点击化学反应包括硝和环辛炔之间的反应(参见，例如，Ning,Xinghai；Temming,Rinske P.；Dommerholt,Jan；Guo,Jun；Ania,Daniel B.；Debets,Marjoke F.；Wolfert,Margreet A.；Boons,Geert-Jan et al.(2010)."Protein
Modification by Strain-Promoted Alkyne-Nitrone Cycloaddition".Angewandte
Chemie International Edition 49(17):3065)、从醛和酮形成肟/腙、四嗪连接(参见，例如，Blackman,Melissa L.；Royzen,Maksim；Fox,Joseph M.(2008)."The Tetrazine
Ligation:Fast Bioconjugation based on Inverse-electron-demand Diels-Alder
Reactivity".Journal of the American Chemical Society 130(41):13518-9)、四唑连
接、基于异腈的点击反应(参见，例如，Stackmann,Henning；Neves, A.；Stairs,
Shaun；Brindle,Kevin M.；Leeper,Finian J.(2011)."Exploring isonitrile-based
click chemistry for ligation with biomolecules".Organic&Biomolecular
Chemistry 9(21):7303)和四环庚烷连接(参见，例如，Sletten,Ellen M.；Bertozzi,
Carolyn R.(2011)."A Bioorthogonal Quadricyclane Ligation".Journal of the
American Chemical Society 133(44):17570-3)。在某些实施方案中，点击化学反应是施
陶丁格连接(膦-叠氮化物)。
Modification by Strain-Promoted Alkyne-Nitrone Cycloaddition".Angewandte
Chemie International Edition 49(17):3065)、从醛和酮形成肟/腙、四嗪连接(参见，例如，Blackman,Melissa L.；Royzen,Maksim；Fox,Joseph M.(2008)."The Tetrazine
Ligation:Fast Bioconjugation based on Inverse-electron-demand Diels-Alder
Reactivity".Journal of the American Chemical Society 130(41):13518-9)、四唑连
接、基于异腈的点击反应(参见，例如，Stackmann,Henning；Neves, A.；Stairs,
Shaun；Brindle,Kevin M.；Leeper,Finian J.(2011)."Exploring isonitrile-based
click chemistry for ligation with biomolecules".Organic&Biomolecular
Chemistry 9(21):7303)和四环庚烷连接(参见，例如，Sletten,Ellen M.；Bertozzi,
Carolyn R.(2011)."A Bioorthogonal Quadricyclane Ligation".Journal of the
American Chemical Society 133(44):17570-3)。在某些实施方案中，点击化学反应是施
陶丁格连接(膦-叠氮化物)。
[0332] 在不同的实施方案中，可以修饰任意坎普他汀类似物以掺入点击化学基团。例如，可以如此修饰包含SEQ ID NO:3-36、37、37A、38A、39A、40A或41A中的任一序列的坎普他汀类似物。在某些实施方案中，任意这样的序列(例如，在C末端)进一步包含赖氨酸残基或AEEAc-Lys部分。在某些实施方案中，在肽合成之后掺入点击化学基团。例如，赖氨酸侧链可与叠氮基乙酸反应以引入叠氮部分作为点击化学基团。在某些实施方案中，在环化之后掺
入点击化学基团，并且在某些实施方案中，在N末端和/或C末端加入封闭部分之后掺入点击化学基团。在某些实施方案中，在肽合成的过程中掺入点击化学基团。例如，可以在坎普他汀类似物的合成中使用包含含有点击化学基团的侧链的氨基酸。多种这样的氨基酸具有若
干市售来源，例如，AAPPTec(路易斯维尔，肯塔基州)、Jena Bioscience GmBH(Jena，德国)。
在某些方面，本文提供了制备点击化学官能化的坎普他汀类似物的方法。
入点击化学基团，并且在某些实施方案中，在N末端和/或C末端加入封闭部分之后掺入点击化学基团。在某些实施方案中，在肽合成的过程中掺入点击化学基团。例如，可以在坎普他汀类似物的合成中使用包含含有点击化学基团的侧链的氨基酸。多种这样的氨基酸具有若
干市售来源，例如，AAPPTec(路易斯维尔，肯塔基州)、Jena Bioscience GmBH(Jena，德国)。
在某些方面，本文提供了制备点击化学官能化的坎普他汀类似物的方法。
[0333] 在某些实施方案中，提供了包含坎普他汀类似物和点击化学试剂的组合物。所述点击化学试剂可以是能与氨基酸侧链或包含坎普他汀类似物的化合物的末端反应以安装
点击化学基团的任意分子，例如，本领域已知的任意点击化学基团。在某些方面，可将所述组合物在合适的条件下温育(其可以包括提供合适的催化剂、光(例如，UV))以用点击化学
官能来官能化所述坎普他汀类似物。在某些实施方案中，本发明提供了包含任意点击化学
基团的坎普他汀类似物，所述点击化学基团包括，但不限于，本文所述的那些。在某些实施方案中，提供了制备长效坎普他汀类似物的方法。在某些实施方案中，所述方法包括在适合发生点击化学反应的条件下，将包含第一点击化学基团的坎普他汀类似物和包含互补的点
击化学基团的CRM混合。附加的步骤可以包括纯化得到的缀合物。在某些实施方案中，纯化包括(例如，使用适当的清除剂)去除至少一些未反应的成分。
点击化学基团的任意分子，例如，本领域已知的任意点击化学基团。在某些方面，可将所述组合物在合适的条件下温育(其可以包括提供合适的催化剂、光(例如，UV))以用点击化学
官能来官能化所述坎普他汀类似物。在某些实施方案中，本发明提供了包含任意点击化学
基团的坎普他汀类似物，所述点击化学基团包括，但不限于，本文所述的那些。在某些实施方案中，提供了制备长效坎普他汀类似物的方法。在某些实施方案中，所述方法包括在适合发生点击化学反应的条件下，将包含第一点击化学基团的坎普他汀类似物和包含互补的点
击化学基团的CRM混合。附加的步骤可以包括纯化得到的缀合物。在某些实施方案中，纯化包括(例如，使用适当的清除剂)去除至少一些未反应的成分。
[0334] 在某些实施方案中，使用点击化学反应连接两个或多个CRM，且所述CRM中的至少两个与坎普他汀类似物部分连接。在不同的实施方案中，所述坎普他汀类似物部分可以是
相同的或不同的。所述坎普他汀类似物部分可以经由点击化学反应与所述CRM连接或可以
不与其连接。例如，在某些实施方案中，在第一末端包含第一点击化学基团以及在第二末端包含NHS酯的第一异源双官能PEG，经由所述NHS酯与坎普他汀类似物部分偶联。在单独的反应中，在第一末端包含第二点击化学基团以及在第二末端包含NHS酯的第二异源双官能
PEG，经由所述NHS酯与坎普他汀类似物部分偶联。所得到的两种化合物随后经由点击化学
反应进行反应，以形成较大的包含两个坎普他汀类似物部分的分子。将PEG作为CRM的例子
而提及，但应当理解，本方案可以与任意CRM一起使用。例如，在某些实施方案中，它可以与包含多肽(例如，HAS或其一部分)或白蛋白或白蛋白结合肽，或抗体或其一部分的CRM一起
使用。在某些实施方案中，本方案可以与POZ一起使用。
相同的或不同的。所述坎普他汀类似物部分可以经由点击化学反应与所述CRM连接或可以
不与其连接。例如，在某些实施方案中，在第一末端包含第一点击化学基团以及在第二末端包含NHS酯的第一异源双官能PEG，经由所述NHS酯与坎普他汀类似物部分偶联。在单独的反应中，在第一末端包含第二点击化学基团以及在第二末端包含NHS酯的第二异源双官能
PEG，经由所述NHS酯与坎普他汀类似物部分偶联。所得到的两种化合物随后经由点击化学
反应进行反应，以形成较大的包含两个坎普他汀类似物部分的分子。将PEG作为CRM的例子
而提及，但应当理解，本方案可以与任意CRM一起使用。例如，在某些实施方案中，它可以与包含多肽(例如，HAS或其一部分)或白蛋白或白蛋白结合肽，或抗体或其一部分的CRM一起
使用。在某些实施方案中，本方案可以与POZ一起使用。
[0335] 包含点击化学基团的坎普他汀类似物具有多种用途。在某些实施方案中，包含第一点击化学基团的坎普他汀类似物与包含互补的点击化学基团的任意实体反应。包含所述
互补的点击化学基团的所述实体可以包括，例如，标记(例如，荧光团、荧光蛋白、放射性同位素等)、亲和试剂、抗体、靶向部分、金属、颗粒等。在某些实施方案中，点击化学基团被用于将坎普他汀类似物部分与表面结合，其中所述表面包含或被官能化以包含互补的点击化
学基团。在某些实施方案中，表面是传感器，例如，用于捕捉/检测C3的表面或传感器。在某些实施方案中，所述表面作为可能与血液接触(例如，体外)或临时地或无限期地植入受试
者体内(例如，假体装置或药物递送装置)的医疗设备、管材、膜、储库、植入物或其它材料中的一部分。在某些实施方案中，表面经坎普他汀类似物官能化以降低在其上发生的补体激
活。在某些实施方案中，装置或管材用于在手术等过程中循环血液，例如，用于血液透析。在某些实施方案中，装置是血液透析器或体外循环支持部件。本文中提供了这样的坎普他汀
类似物官能化的装置及其制作方法。
互补的点击化学基团的所述实体可以包括，例如，标记(例如，荧光团、荧光蛋白、放射性同位素等)、亲和试剂、抗体、靶向部分、金属、颗粒等。在某些实施方案中，点击化学基团被用于将坎普他汀类似物部分与表面结合，其中所述表面包含或被官能化以包含互补的点击化
学基团。在某些实施方案中，表面是传感器，例如，用于捕捉/检测C3的表面或传感器。在某些实施方案中，所述表面作为可能与血液接触(例如，体外)或临时地或无限期地植入受试
者体内(例如，假体装置或药物递送装置)的医疗设备、管材、膜、储库、植入物或其它材料中的一部分。在某些实施方案中，表面经坎普他汀类似物官能化以降低在其上发生的补体激
活。在某些实施方案中，装置或管材用于在手术等过程中循环血液，例如，用于血液透析。在某些实施方案中，装置是血液透析器或体外循环支持部件。本文中提供了这样的坎普他汀
类似物官能化的装置及其制作方法。
[0336] 在本发明的某些实施方案中，坎普他汀类似物包含细胞反应性官能团和CRM。在某些方面，本发明提供了任意前述细胞反应性坎普他汀类似物的分子的变体，其中细胞反应
性官能团或部分被(CH2CH2O)n部分(例如，本文描述的任意PEG)或其他聚合物(例如，POZ、多肽)替代，所述(CH2CH2O)n部分或其他聚合物具有至少500道尔顿的分子量，例如，至少1,500道尔顿至约100,000道尔顿(例如，约20,000、30,000、40,000、50,000、60,000、70,000、80,
000、90,000或100,000道尔顿的平均分子量)。在某些实施方案中，所述化合物或(CH2CH2O)n部分(或其他聚合物，例如，POZ或多肽)的平均分子量为至少20,000道尔顿，高达约100,
000、120,000、140,000、160,000、180,000或200,000道尔顿。因而可以理解，本文关于细胞反应性坎普他汀类似物(例如，所使用的坎普他汀类似物部分以及使坎普他汀类似物部分
连接至细胞反应性部分的连接)的教导可适用于长效坎普他汀类似物，并且长效坎普他汀
类似物可以具有如上所述的任何由A-L-M表示的结构，其中A包含清除率降低部分(例如，本文所述的任何清除率降低部分)，并且此外其中可以存在一个、两个或更多个(例如，3个、4个、5个、6个、7个、8个)坎普他汀类似物部分M，所述坎普他汀类似物部分M经由本文中用L(或LP1、LP2或LP3)表示的连接部分连接至A。坎普他汀类似物部分可以包含肽，所述肽的序列包含SEQ ID NO:3-36、37、37A、38A、39A、40A或41A中的任一个，或其变体(例如，本文所述的任何变体)，任选地在N末端、C末端或二者处延长一个或多个氨基酸，其中至少一个氨基酸具有包含反应性官能团(诸如伯胺或仲胺(例如赖氨酸)、巯基、羧基(其可以作为羧酸盐基
团存在)胍基、酚基团、吲哚环、硫醚或咪唑环)的侧链，所述侧链会促进包含CRM的部分与所述坎普他汀类似物缀合(应该理解，在缀合后，这样的反应性官能团将会反应以形成键)。还应当理解，当包含SEQ ID NO:3-36、37、37A、38A、39A、40A或41A中的任一个或其变体的坎普他汀类似物部分在N末端、C末端或二端处延长一个或多个氨基酸，其中至少一个氨基酸具
有包含反应性官能团的侧链时，这样的一个或多个氨基酸延伸可以通过刚性或柔性隔离物
部分，与所述坎普他汀类似物部分的环状部分分隔开，所述刚性或柔性隔离物部分包含，例如，被取代的或未被取代的，饱和的或不饱和的烷基链，寡(乙二醇)链和/或本文中用L(或LP1、LP2或LP3)表示的任何其他部分。
性官能团或部分被(CH2CH2O)n部分(例如，本文描述的任意PEG)或其他聚合物(例如，POZ、多肽)替代，所述(CH2CH2O)n部分或其他聚合物具有至少500道尔顿的分子量，例如，至少1,500道尔顿至约100,000道尔顿(例如，约20,000、30,000、40,000、50,000、60,000、70,000、80,
000、90,000或100,000道尔顿的平均分子量)。在某些实施方案中，所述化合物或(CH2CH2O)n部分(或其他聚合物，例如，POZ或多肽)的平均分子量为至少20,000道尔顿，高达约100,
000、120,000、140,000、160,000、180,000或200,000道尔顿。因而可以理解，本文关于细胞反应性坎普他汀类似物(例如，所使用的坎普他汀类似物部分以及使坎普他汀类似物部分
连接至细胞反应性部分的连接)的教导可适用于长效坎普他汀类似物，并且长效坎普他汀
类似物可以具有如上所述的任何由A-L-M表示的结构，其中A包含清除率降低部分(例如，本文所述的任何清除率降低部分)，并且此外其中可以存在一个、两个或更多个(例如，3个、4个、5个、6个、7个、8个)坎普他汀类似物部分M，所述坎普他汀类似物部分M经由本文中用L(或LP1、LP2或LP3)表示的连接部分连接至A。坎普他汀类似物部分可以包含肽，所述肽的序列包含SEQ ID NO:3-36、37、37A、38A、39A、40A或41A中的任一个，或其变体(例如，本文所述的任何变体)，任选地在N末端、C末端或二者处延长一个或多个氨基酸，其中至少一个氨基酸具有包含反应性官能团(诸如伯胺或仲胺(例如赖氨酸)、巯基、羧基(其可以作为羧酸盐基
团存在)胍基、酚基团、吲哚环、硫醚或咪唑环)的侧链，所述侧链会促进包含CRM的部分与所述坎普他汀类似物缀合(应该理解，在缀合后，这样的反应性官能团将会反应以形成键)。还应当理解，当包含SEQ ID NO:3-36、37、37A、38A、39A、40A或41A中的任一个或其变体的坎普他汀类似物部分在N末端、C末端或二端处延长一个或多个氨基酸，其中至少一个氨基酸具
有包含反应性官能团的侧链时，这样的一个或多个氨基酸延伸可以通过刚性或柔性隔离物
部分，与所述坎普他汀类似物部分的环状部分分隔开，所述刚性或柔性隔离物部分包含，例如，被取代的或未被取代的，饱和的或不饱和的烷基链，寡(乙二醇)链和/或本文中用L(或LP1、LP2或LP3)表示的任何其他部分。
[0337] 示例性的长效坎普他汀类似物如下所述，其中n足以提供约500、1,000、1,500、2,000、5,000、10,000、20,000、30,000、40,000、50,000、60,000、70,000、80,000、90,000至
100,000道尔顿的平均分子量。在某些实施方案中，n足以提供介于约20,000道尔顿，高达约
100,000、120,000、140,000、160,000、180,000或200,000道尔顿的平均分子量。
100,000道尔顿的平均分子量。在某些实施方案中，n足以提供介于约20,000道尔顿，高达约
100,000、120,000、140,000、160,000、180,000或200,000道尔顿的平均分子量。
[0338] (CH2CH2O)nC(＝O)-Ile-Cys-Val-(1Me)Trp-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys-Thr-NH2)(SEQ ID NO:58)
[0339] Ac-Ile-Cys*-Val-(1Me)Trp-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys*-Thr-NH-CH2CH2OCH2CH2OCH2-C(＝O)-Lys-C(＝O)-(CH2CH2O)n-NH2(SEQ ID NO:59)
[0340] Ac-Ile-Cys*-Val-(1Me)Trp-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys*-Thr-Lys-C(＝O)-(CH2CH2O)n-NH2(SEQ ID NO:60)。
[0341] Ac-Ile-Cys*-Val-(1Me)Trp-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys*-Thr-(Gly)5-Lys-C(＝O)-(CH2CH2O)n-NH2(SEQ ID NO:61)
[0342] Ac-(CH2CH2O)nC(＝O)Lys-(Gly)5-Ile-Cys*-Val-(1Me)Trp-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys*-Thr-NH2)(SEQ ID NO:62)
[0343] Ac-(CH2CH2O)nC(＝O)Lys-Ile-Cys*-Val-(1Me)Trp-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys*-Thr-NH2)(SEQ ID NO:63)
[0344] 在SEQ ID NO:58中，(CH2CH2O)n经由酰胺键偶联至N末端氨基酸。在SEQ ID NO:59-63中，(CH2CH2O)n部分经由酰胺键偶联至Lys侧链；因而，应该理解，在SEQ ID NO:59、60和61的C末端处的NH2代表肽的C末端的酰胺化，且应该理解，在SEQ ID NO:62和63中，在N末端处的Ac代表肽的N末端的乙酰化，如上所述。本领域普通技术人员还理解，(CH2CH2O)n部分的游离末端通常用(OR)终止，其中带有下划线的O代表末端(CH2CH2O)基团中的O原子。(OR)经常是诸如羟基(OH)或甲氧基(-OCH3)基团等部分，尽管可以使用其它基团(例如，其它烷氧
基)。因而，例如，在直链PEG的情况下，SEQ IDNO:59可以表示为Ac-Ile-Cys*-Val-(1Me)
Trp-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys*-Thr-NH-CH2CH2OCH2CH2OCH2-C(＝O)-Lys-(C(＝
O)-(CH2CH2O)n-R)-NH2(SEQ ID NO:64)，其中R是例如H或CH3。在双功能的、支链或星形PEG的情况下，R代表分子的其它部分。此外，应该理解，包含反应性官能团的部分可以变化，如本文中所述(例如，根据本文中所述的任意通式)。例如，可以如下表示包含与SEQ ID NO:64相同的肽序列的长效坎普他汀类似物，其中包含反应性官能团的部分含有酯和/或烷基链：
基)。因而，例如，在直链PEG的情况下，SEQ IDNO:59可以表示为Ac-Ile-Cys*-Val-(1Me)
Trp-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys*-Thr-NH-CH2CH2OCH2CH2OCH2-C(＝O)-Lys-(C(＝
O)-(CH2CH2O)n-R)-NH2(SEQ ID NO:64)，其中R是例如H或CH3。在双功能的、支链或星形PEG的情况下，R代表分子的其它部分。此外，应该理解，包含反应性官能团的部分可以变化，如本文中所述(例如，根据本文中所述的任意通式)。例如，可以如下表示包含与SEQ ID NO:64相同的肽序列的长效坎普他汀类似物，其中包含反应性官能团的部分含有酯和/或烷基链：
[0345] Ac-Ile-Cys*-Val-(1Me)Trp-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys*-Thr-NH-CH2CH2OCH2CH2OCH2-C(＝O)-Lys-(C(＝O)-(CH2)m-(CH2CH2O)n-R)-NH2(SEQ ID NO:65)；
[0346] Ac-Ile-Cys*-Val-(1Me)Trp-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys*-Thr-NH-CH2CH2OCH2CH2OCH2-C(＝O)-Lys-(C(＝O)-(CH2)m-C(＝O)-(CH2CH2O)n-R)-NH2(SEQ ID NO:
66)
66)
[0347] Ac-Ile-Cys*-Val-(1Me)Trp-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys*-Thr-NH-CH2CH2OCH2CH2OCH2-C(＝O)-Lys-(C(＝O)-(CH2)m-C(＝O)-(CH2)j(CH2CH2O)n-R)-NH2(SEQ ID NO:67)
[0348] 在不同的实施方案中，在SEQ ID NO:65-67中，m的范围可以是1至约2、3、4、5、6、7、8、10、15、20或30。在不同的实施方案中，在SEQ ID NO:67中，j的范围可以是1至约2、3、4、5、
6、7、8、10、15、20或30。
6、7、8、10、15、20或30。
[0349] 还应当理解，如本文中所述的，在不同的实施方案中，可以将其它部分掺入Lys-(C(＝O)-和(CH2CH2O)n-R之间，诸如酰胺、芳族环(例如，被取代的或未被取代的苯基)、或被取代的或未被取代的环烷基结构。
[0350] 本发明提供了SEQ ID NO:58-67的变体，其中-Ile-Cys*-Val-(1Me)Trp-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys*-Thr-被包含任意其它坎普他汀类似物的氨基酸序列(例如，
SEQ ID NO 3-27或29-36、37、37A、38A、39A、40A或41A中的任一个)的氨基酸序列替代，前提条件是，存在于坎普他汀类似物的N末端和/或C末端处的封端部分可以缺失，被接头(其可
以包含封端部分)替代，或连接至存在于对应变体中的不同的N或C末端氨基酸。
SEQ ID NO 3-27或29-36、37、37A、38A、39A、40A或41A中的任一个)的氨基酸序列替代，前提条件是，存在于坎普他汀类似物的N末端和/或C末端处的封端部分可以缺失，被接头(其可
以包含封端部分)替代，或连接至存在于对应变体中的不同的N或C末端氨基酸。
[0351] 在不同的实施方案中，任意坎普他汀类似物，例如，包含SEQ ID NO:3-37、37A、38A、39A、40A或41A中的任一个的任意化合物，可以经由它的N末端或C末端或在它的N末端或C末端附近(例如，经由在它的N末端或C末端氨基酸处或附近的氨基酸的侧链)直接地或
间接地连接至包含反应性官能团的任意部分，例如，式I-XVI或式A-H的任意化合物。
间接地连接至包含反应性官能团的任意部分，例如，式I-XVI或式A-H的任意化合物。
[0352] 在某些实施方案中，所述CRM包含存在于人血清中的多肽或其片段、或所述多肽或其片段的基本上类似的变体。在某些实施方案中，所述多肽、片段或变体具有5kD至150kD的分子量，例如，至少5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100kd或更多，例如，100-120kD、或
120kD和150kD。在某些实施方案中，生产长效坎普他汀类似物包括：使包含反应性官能团的坎普他汀类似物与多肽的一个或多个氨基酸侧链反应，其中所述侧链包含相容的官能团。
在某些实施方案中，生产长效坎普他汀类似物包括：使包含反应性官能团的坎普他汀类似
物与多肽的N末端胺和/或C末端羧基反应。在某些实施方案中，生产长效坎普他汀类似物包括：使包含胺-反应性官能团的坎普他汀类似物与具有含伯胺的侧链的氨基酸(例如，赖氨
酸)和/或与多肽的N末端胺反应。在某些实施方案中，生产长效坎普他汀类似物包括：使包含羧基-反应性官能团的坎普他汀类似物与多肽的C末端羧基反应。在某些实施方案中，将
坎普他汀类似物部分连接在多肽的每个末端处，且任选地，连接至一个或多个内部氨基酸
的侧链。在某些实施方案中，生产长效坎普他汀类似物包括：使包含巯基-反应性官能团的坎普他汀类似物与多肽的一个或多个巯基反应。
120kD和150kD。在某些实施方案中，生产长效坎普他汀类似物包括：使包含反应性官能团的坎普他汀类似物与多肽的一个或多个氨基酸侧链反应，其中所述侧链包含相容的官能团。
在某些实施方案中，生产长效坎普他汀类似物包括：使包含反应性官能团的坎普他汀类似
物与多肽的N末端胺和/或C末端羧基反应。在某些实施方案中，生产长效坎普他汀类似物包括：使包含胺-反应性官能团的坎普他汀类似物与具有含伯胺的侧链的氨基酸(例如，赖氨
酸)和/或与多肽的N末端胺反应。在某些实施方案中，生产长效坎普他汀类似物包括：使包含羧基-反应性官能团的坎普他汀类似物与多肽的C末端羧基反应。在某些实施方案中，将
坎普他汀类似物部分连接在多肽的每个末端处，且任选地，连接至一个或多个内部氨基酸
的侧链。在某些实施方案中，生产长效坎普他汀类似物包括：使包含巯基-反应性官能团的坎普他汀类似物与多肽的一个或多个巯基反应。
[0353] 在某些实施方案中，将至少一个反应性官能团引入多肽中。例如，在某些实施方案中，在与坎普他汀类似物反应之前，修饰多肽的至少一个侧链，以将第一种反应性官能团转化成不同的反应性官能团。在某些实施方案中，引入硫醇。几种方法可用于将硫醇引入生物分子中，包括还原固有的二硫键、以及将胺、醛或羧酸基团转化成硫醇基团。蛋白中的胱氨酸的二硫键交联可以被二硫苏糖醇(DTT)、三-(2-羧基乙基)膦(TCEP)或三-(2-氰基乙基)膦还原为半胱氨酸残基。通过与3-(2-吡啶基二硫基)丙酸琥珀酰亚胺基酯(SPDP)反应，随
后用DTT或TCEP还原3-(2-吡啶基二硫基)丙酰基缀合物，可以间接地使胺硫醇盐化。通过与乙酰基硫代乙酸琥珀酰亚胺基酯反应，随后用50mM羟胺或肼在接近中性pH除去乙酰基，可
以间接地使胺硫醇盐化。通过与2-亚氨基四氢噻吩(硫杂环戊烷)反应，可以直接地使胺硫
醇盐化，所述反应会保留分子的总电荷并引入游离的硫醇。可以将不含硫醇的蛋白中的色
氨酸残基氧化成巯基色氨酸残基，后者然后可以用碘乙酰胺或马来酰亚胺进行修饰。包含
一个或多个硫醇的多肽可以与包含马来酰亚胺基团的坎普他汀类似物诸如Ac-Ile-Cys*-
Val-Trp(1-Me)-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys*-Thr-AEEAc-Lys-(C(＝O)-(CH2)5-
Mal)-NH2(SEQ ID NO:68)反应，以产生长效坎普他汀类似物。
后用DTT或TCEP还原3-(2-吡啶基二硫基)丙酰基缀合物，可以间接地使胺硫醇盐化。通过与乙酰基硫代乙酸琥珀酰亚胺基酯反应，随后用50mM羟胺或肼在接近中性pH除去乙酰基，可
以间接地使胺硫醇盐化。通过与2-亚氨基四氢噻吩(硫杂环戊烷)反应，可以直接地使胺硫
醇盐化，所述反应会保留分子的总电荷并引入游离的硫醇。可以将不含硫醇的蛋白中的色
氨酸残基氧化成巯基色氨酸残基，后者然后可以用碘乙酰胺或马来酰亚胺进行修饰。包含
一个或多个硫醇的多肽可以与包含马来酰亚胺基团的坎普他汀类似物诸如Ac-Ile-Cys*-
Val-Trp(1-Me)-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys*-Thr-AEEAc-Lys-(C(＝O)-(CH2)5-
Mal)-NH2(SEQ ID NO:68)反应，以产生长效坎普他汀类似物。
[0354] 在某些实施方案中，重组地生产多肽。在某些实施方案中，至少部分地重组生产多肽(例如，在细菌中，或在真核宿主细胞诸如真菌、昆虫、植物或脊椎动物中)，和/或至少部分地使用化学合成来生产多肽。在某些实施方案中，所述多肽是纯化的。例如，在某些实施方案中，从宿主细胞裂解液或从培养液中纯化所述多肽，其中所述多肽已由宿主细胞分泌进入培养液。在某些实施方案中，所述多肽是糖基化的。在某些实施方案中，所述多肽是未糖基化的。在某些实施方案中，所述多肽是人血清白蛋白(HSA)。在某些实施方案中，多肽的基本上类似的变体与所述变体的母本多肽充分类似，从而不会被受试者(例如，人受试者)
的正常免疫系统识别为外来物。在某些实施方案中，选择基本上类似的变体的序列中相对
于所述变体的母本多肽的改变，从而避免产生MHC I类表位。多种本领域已知的方法可以用于预测序列是否包含MHC I类表位。
的正常免疫系统识别为外来物。在某些实施方案中，选择基本上类似的变体的序列中相对
于所述变体的母本多肽的改变，从而避免产生MHC I类表位。多种本领域已知的方法可以用于预测序列是否包含MHC I类表位。
[0355] 在某些实施方案中，多肽或接头或组合物中的一个或多个氨基酸可选择是疏水的或亲水的或选择以对含有其的化合物赋予增强的亲水性，或者在某些实施方案中，增强的
疏水性。如本领域已知的，使用术语“亲水的”和“疏水的”来表示物质具有的对水的亲和力。
在某些方面，亲水性物质对水具有很强的亲和力，倾向于在水中溶解、与水混合或者被水润湿，然而疏水性物质基本上缺乏对水的亲和力，趋向于排斥和不吸收水并倾向于不溶于水
或不与水混合或不被水润湿。如本领域所熟知的，可基于其疏水性对氨基酸进行分类。“亲水性氨基酸”的例子是精氨酸、赖氨酸、苏氨酸、丙氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸和甘氨酸。“疏水性氨基酸”的例子是色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸。在某些实施方案中，使用标准氨基酸的类似物，其中所述类似物相较于其所类似的氨基酸，具有增强的或降低的亲水性或疏水性特性。
疏水性。如本领域已知的，使用术语“亲水的”和“疏水的”来表示物质具有的对水的亲和力。
在某些方面，亲水性物质对水具有很强的亲和力，倾向于在水中溶解、与水混合或者被水润湿，然而疏水性物质基本上缺乏对水的亲和力，趋向于排斥和不吸收水并倾向于不溶于水
或不与水混合或不被水润湿。如本领域所熟知的，可基于其疏水性对氨基酸进行分类。“亲水性氨基酸”的例子是精氨酸、赖氨酸、苏氨酸、丙氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸和甘氨酸。“疏水性氨基酸”的例子是色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸。在某些实施方案中，使用标准氨基酸的类似物，其中所述类似物相较于其所类似的氨基酸，具有增强的或降低的亲水性或疏水性特性。
[0356] 本发明另外提供了包含2个或更多个(例如，2-10个)含有CRM的坎普他汀类似物的多聚体(例如，多联体)，其中得到的分子(或其CRM组分)的平均分子量是20,000、30,000、
40,000、50,000、60,000、70,000、80,000、90,000至100,000道尔顿。在某些实施方案中，得到的分子(或其CRM成分)的平均分子量是至少20,000道尔顿，高达约100,000、120,000、
140,000、160,000、180,000或200,000道尔顿。在某些实施方案中，使用上述的连接部分中的任一种，可以连接包含CRM的坎普他汀类似物。本发明的方面涉及用于制备长效坎普他汀类似物的组合物和方法，以及合成过程中的中间体。
40,000、50,000、60,000、70,000、80,000、90,000至100,000道尔顿。在某些实施方案中，得到的分子(或其CRM成分)的平均分子量是至少20,000道尔顿，高达约100,000、120,000、
140,000、160,000、180,000或200,000道尔顿。在某些实施方案中，使用上述的连接部分中的任一种，可以连接包含CRM的坎普他汀类似物。本发明的方面涉及用于制备长效坎普他汀类似物的组合物和方法，以及合成过程中的中间体。
[0357] 在某些实施方案中，长效坎普他汀类似物(包括坎普他汀类似物部分)的总分子量不大于50kD。例如，对于包含40kD PEG的LACA来说，在某些实施方案中，由所述化合物(包括坎普他汀类似物部分)的其它部分贡献的分子量可以不大于10kD，例如，1.5kD-5.0kD或
5.0kD-10kD。在某些实施方案中，LACA(包括坎普他汀类似物部分)的总分子量在45kD至
50kD之间。在某些实施方案中，LACA(包括坎普他汀类似物部分)的总分子量在40kD至45kD
之间，15kD至40kD之间，例如15kD至25kD之间，25kD至35kD之间，35kD至40kD之间。因此，当本公开提及的坎普他汀类似物包含具有特定分子量的或具有特定范围内分子量的聚合物
或CRM时，在某些实施方案中，所述坎普他汀类似物的总分子量可以比所述聚合物或CRM的
分子量大例如，1.5kD至5kD，或者在某些实施方案中，比所述聚合物的分子量大5kD至10kD。
应该理解，化合物(例如，包含聚合物的化合物)的分子量可以是指组合物中该化合物分子
的平均分子量。
5.0kD-10kD。在某些实施方案中，LACA(包括坎普他汀类似物部分)的总分子量在45kD至
50kD之间。在某些实施方案中，LACA(包括坎普他汀类似物部分)的总分子量在40kD至45kD
之间，15kD至40kD之间，例如15kD至25kD之间，25kD至35kD之间，35kD至40kD之间。因此，当本公开提及的坎普他汀类似物包含具有特定分子量的或具有特定范围内分子量的聚合物
或CRM时，在某些实施方案中，所述坎普他汀类似物的总分子量可以比所述聚合物或CRM的
分子量大例如，1.5kD至5kD，或者在某些实施方案中，比所述聚合物的分子量大5kD至10kD。
应该理解，化合物(例如，包含聚合物的化合物)的分子量可以是指组合物中该化合物分子
的平均分子量。
[0358] 多种有益于检测聚合物，例如，PEG、POZ和/或多肽，和/或有益于测量聚合物例如，PEG、POZ和/或多肽的物理和/或结构特性的方法和测定法是本领域已知的，并且如果需要的话，可用于检测坎普他汀类似物，例如，细胞反应性的、长效的、靶向的坎普他汀类似物或坎普他汀类似物部分。例如，有益于确定例如聚合、溶解度、大小、结构、熔融性、纯度、降解产物或污染物的存在、水含量、流体动力半径等属性的方法和测定法是已有的。这样的方法包括，例如，分析离心法、各种类型的色谱法例如液相色谱法(例如，离子交换HPLC法、尺寸排阻HPLC法、反相HPLC法)、光散射法、毛细管电泳法、圆二色性法、等温量热法、差示扫描量热法、荧光法、红外(IR)法、核磁共振法(NMR)、拉曼光谱法、折射法、UV/可见光谱法、质谱法、免疫学方法等。应该理解，所述方法可以组合。在某些方面，如由上述方法中的任一种评估的，细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物(或包含细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物的组合物)具有本文所述的一种或多种特性。在某些方面，本文描述了有益于检测和/或定量长效坎普他汀类似物的方法。
[0359] VI.靶向坎普他汀类似物
[0360] 本发明提供了和/或利用了包含靶向部分和坎普他汀类似物部分的靶向坎普他汀类似物，其中所述靶向部分非共价地结合至靶分子。在某些方面，本发明提供了与在第VI部分中描述的细胞反应性坎普他汀类似物类似的靶向坎普他汀类似物，其中所述化合物除了
包含细胞反应性部分以外，或者作为细胞反应性部分的替代，包含靶向部分。所述靶向部分可以包含，例如，特异性地结合靶分子的抗体、多肽、肽、核酸(例如，适体)、碳水化合物、小分子或超分子复合物。在某些实施方案中，在试验的条件下，例如，在生理条件下，靶向部分对靶分子的亲和力(通过平衡解离常数Kd来测量)为10-3M或更小，例如，10-4M或更小，例如，-5 -6 -7 -8 -9
10 M或更小，例如，10 M或更小、10 M或更小、10 M或更小或10 M或更小。
包含细胞反应性部分以外，或者作为细胞反应性部分的替代，包含靶向部分。所述靶向部分可以包含，例如，特异性地结合靶分子的抗体、多肽、肽、核酸(例如，适体)、碳水化合物、小分子或超分子复合物。在某些实施方案中，在试验的条件下，例如，在生理条件下，靶向部分对靶分子的亲和力(通过平衡解离常数Kd来测量)为10-3M或更小，例如，10-4M或更小，例如，-5 -6 -7 -8 -9
10 M或更小，例如，10 M或更小、10 M或更小、10 M或更小或10 M或更小。
[0361] 在本发明的其中靶向部分为抗体的那些实施方案中，所述抗体可以为维持结合能力的任意免疫球蛋白或其衍生物、或具有结合结构域的任意蛋白质，所述结合结构域与免
疫球蛋白结合结构域同源或在很大程度上同源。这样的蛋白质可以衍生自天然来源，或部
分或全部以合成方式产生(例如使用重组DNA技术、化学合成等)。所述抗体可以属于任意物种，例如，人类、啮齿动物、兔、山羊、鸡等。所述抗体可以为任意免疫球蛋白类别的成员，包括任意人类类别：IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。在本发明的不同实施方案中，所述抗体可以为抗体片段，诸如Fab'、F(ab')2、scFv(单链可变)或保留抗原结合位点的其它片段；或以重组方式产生的scFv片段，包括以重组方式产生的片段。参见，例如，Allen,T.,Nature Reviews Cancer,第2卷,750-765,2002,和其中的参考文献。可以使用单价、二价或多价抗体。所述抗体可以为嵌合抗体，其中，例如，将啮齿动物起源的可变结构域与人起源的恒定结构域融
合，从而保留啮齿动物抗体的特异性。在某些实施方案中，使用展示技术诸如噬菌体展示
等，例如在啮齿类动物中制备人抗体或其部分，所述啮齿类动物的基因组掺入人免疫球蛋
白基因。在某些实施方案中，通过将一个或多个得自非人物种(例如，小鼠)的互补性决定区移植进人抗体序列中，制备人源化抗体。所述抗体可以是部分地或完全地人源化的。关于得到人源化抗体的不同方法(其可以用于得到在本发明中使用的靶向部分)的综述，参见，例
如，Almagro JC,Fransson J.Humanization of antibodies.Front Biosci.13:1619-33
(2008)。抗体可以是多克隆的或单克隆的，尽管就本发明的目的而言，单克隆抗体通常是优选的。在本发明的某些实施方案中，使用F(ab')2或F(ab')片段，而在其它实施方案中，使用包含Fc结构域的抗体。生产与基本上任意目标分子特异性结合的抗体的方法是本领域已知
的。例如，单克隆或多克隆抗体可以从天然来源纯化，例如从生产抗体的动物(例如，在用分子或其抗原片段免疫接种以后)的血液或腹水液纯化，或者可以在细胞培养物中以重组方
式产生。制备抗体片段的方法(例如，通过消化、二硫键还原或合成)是本领域已知的。
疫球蛋白结合结构域同源或在很大程度上同源。这样的蛋白质可以衍生自天然来源，或部
分或全部以合成方式产生(例如使用重组DNA技术、化学合成等)。所述抗体可以属于任意物种，例如，人类、啮齿动物、兔、山羊、鸡等。所述抗体可以为任意免疫球蛋白类别的成员，包括任意人类类别：IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。在本发明的不同实施方案中，所述抗体可以为抗体片段，诸如Fab'、F(ab')2、scFv(单链可变)或保留抗原结合位点的其它片段；或以重组方式产生的scFv片段，包括以重组方式产生的片段。参见，例如，Allen,T.,Nature Reviews Cancer,第2卷,750-765,2002,和其中的参考文献。可以使用单价、二价或多价抗体。所述抗体可以为嵌合抗体，其中，例如，将啮齿动物起源的可变结构域与人起源的恒定结构域融
合，从而保留啮齿动物抗体的特异性。在某些实施方案中，使用展示技术诸如噬菌体展示
等，例如在啮齿类动物中制备人抗体或其部分，所述啮齿类动物的基因组掺入人免疫球蛋
白基因。在某些实施方案中，通过将一个或多个得自非人物种(例如，小鼠)的互补性决定区移植进人抗体序列中，制备人源化抗体。所述抗体可以是部分地或完全地人源化的。关于得到人源化抗体的不同方法(其可以用于得到在本发明中使用的靶向部分)的综述，参见，例
如，Almagro JC,Fransson J.Humanization of antibodies.Front Biosci.13:1619-33
(2008)。抗体可以是多克隆的或单克隆的，尽管就本发明的目的而言，单克隆抗体通常是优选的。在本发明的某些实施方案中，使用F(ab')2或F(ab')片段，而在其它实施方案中，使用包含Fc结构域的抗体。生产与基本上任意目标分子特异性结合的抗体的方法是本领域已知
的。例如，单克隆或多克隆抗体可以从天然来源纯化，例如从生产抗体的动物(例如，在用分子或其抗原片段免疫接种以后)的血液或腹水液纯化，或者可以在细胞培养物中以重组方
式产生。制备抗体片段的方法(例如，通过消化、二硫键还原或合成)是本领域已知的。
[0362] 在本发明的不同实施方案中，靶向部分可以是通过除抗原-抗体相互作用以外的机制与靶分子特异性结合的任意分子。这样的靶向部分被称作“配体”。例如，在本发明的不同实施方案中，配体可以为多肽、肽、核酸(例如，DNA或RNA)、碳水化合物、脂质或磷脂或小分子。在某些实施方案中，小分子是天然存在或人工制造的有机化合物，其具有相对较低的分子量，并且不是蛋白质、多肽、核酸或脂质，其通常具有小于约1500g/mol的分子量，并且通常具有多个碳-碳键。一般而言，适体是结合特定蛋白的寡核苷酸(例如，RNA或DNA，其任选地包含一个或多个经修饰的核苷(例如，除了在RNA和DNA中最常见的5种标准碱基(A、G、C、T、U)或糖(核糖和脱氧核糖)以外的碱基或糖)或经修饰的核苷间键(例如，非磷酸二酯
键)，所述核苷间键例如稳定化分子，例如，通过使它更耐受核酸酶的降解)。在某些实施方案中，寡核苷酸的长度是至多约100个核苷，例如，12-100个核苷的长度。使用被称作SELEX的体外进化方法，可以衍生出适体，并且用于得到对目标蛋白特异性的适体的方法是本领
域已知的。参见，例如，Brody E N,Gold L.J Biotechnol.2000March；74(1):5-13。在某些实施方案中，使用肽核酸或锁定核酸。
键)，所述核苷间键例如稳定化分子，例如，通过使它更耐受核酸酶的降解)。在某些实施方案中，寡核苷酸的长度是至多约100个核苷，例如，12-100个核苷的长度。使用被称作SELEX的体外进化方法，可以衍生出适体，并且用于得到对目标蛋白特异性的适体的方法是本领
域已知的。参见，例如，Brody E N,Gold L.J Biotechnol.2000March；74(1):5-13。在某些实施方案中，使用肽核酸或锁定核酸。
[0363] 在本发明的某些实施方案中，靶向部分包含肽。在某些实施方案中，使用展示技术诸如噬菌体展示、核糖体展示、酵母展示等，鉴别与目标靶分子结合的肽。
[0364] 可以使用小分子作为配体。鉴定这样的配体的方法是本领域已知的。例如，小分子文库(包括组合文库)的体外筛选和以计算机为基础的筛选，例如以鉴定与蛋白质的凹表面(袋)结合的小有机化合物，可以鉴定多种目标蛋白的小分子配体(Huang,Z.,Pharm.和
Ther.86:201-215,2000)。
Ther.86:201-215,2000)。
[0365] 在本发明的某些实施方案中，靶向部分不是蛋白质或通常用作载体的分子，并且与用于实现产生抗体的目的的抗原缀合。实例为载体蛋白或分子，诸如牛血清白蛋白、钥孔戚血蓝蛋白、牛血清丙种球蛋白和白喉毒素。在本发明的某些实施方案中，所述靶向部分不是免疫球蛋白分子的Fc部分。在某些实施方案中，靶向部分是包含它所共价地或非共价地
连接的一个或多个额外部分的复合物的一部分。
连接的一个或多个额外部分的复合物的一部分。
[0366] 在本发明的不同实施方案中，靶分子可以是由细胞产生的任意分子(包括在细胞表面上表达的任意形式，或至少部分地从细胞外修饰产生的其修饰形式)。在某些实施方案中，靶分子是存在于组织内部或表面上的细胞外物质。在某些实施方案中，靶分子是特定患病或生理状态的特征，或一个或多个细胞类型或组织类型的特征。靶分子经常是这样的分
子：其至少部分地存在于细胞表面处(例如，跨膜或以其它方式膜连接的蛋白)，使得所述分子的至少一部分可供细胞外结合剂(诸如抗体)结合。靶分子可以、但不一定是细胞类型特
异性的。例如，细胞类型特异性的靶分子经常是在特定一个或多个细胞类型表面上或内部
的存在水平高于在许多其它细胞类型表面上或内部的水平的蛋白、肽、mRNA、脂质或碳水化合物。在某些情况下，细胞类型特异性的靶分子仅以可检测的水平存在于特定目标细胞类
型表面上或内部。但是，应当理解，为了被视作细胞类型特异性的，有用的细胞类型特异性的靶分子不需要是对目标细胞类型绝对特异性的。在某些实施方案中，针对特定细胞类型
的细胞类型特异性的靶分子在所述细胞类型中的表达水平是在参照细胞群体中的至少3
倍，所述参照细胞群体可以由例如来自多种(例如5-10种或更多种)不同组织或器官的大致
等量的细胞的混合物组成。在某些实施方案中，所述细胞类型特异性的靶分子的存在水平
是它在参照群体中的平均表达的至少4-5倍、5-10倍或超过10倍。在某些实施方案中，细胞类型特异性的靶分子的检测或测量允许本领域普通技术人员将一个或多个目标细胞类型
与许多、大多数或全部其它类型的细胞区分开。一般而言，使用一种或多种标准技术，诸如RNA印迹法,原位杂交,RT-PCR,测序,免疫学方法诸如免疫印迹法、免疫检测(例如，通过免
疫组织化学)或在用荧光标记抗体染色后实施免疫检测(例如，使用FACS)、寡核苷酸或cDNA微阵列或膜阵列、蛋白微阵列分析、质谱法等，可以确定大多数靶分子的存在和/或丰度。
子：其至少部分地存在于细胞表面处(例如，跨膜或以其它方式膜连接的蛋白)，使得所述分子的至少一部分可供细胞外结合剂(诸如抗体)结合。靶分子可以、但不一定是细胞类型特
异性的。例如，细胞类型特异性的靶分子经常是在特定一个或多个细胞类型表面上或内部
的存在水平高于在许多其它细胞类型表面上或内部的水平的蛋白、肽、mRNA、脂质或碳水化合物。在某些情况下，细胞类型特异性的靶分子仅以可检测的水平存在于特定目标细胞类
型表面上或内部。但是，应当理解，为了被视作细胞类型特异性的，有用的细胞类型特异性的靶分子不需要是对目标细胞类型绝对特异性的。在某些实施方案中，针对特定细胞类型
的细胞类型特异性的靶分子在所述细胞类型中的表达水平是在参照细胞群体中的至少3
倍，所述参照细胞群体可以由例如来自多种(例如5-10种或更多种)不同组织或器官的大致
等量的细胞的混合物组成。在某些实施方案中，所述细胞类型特异性的靶分子的存在水平
是它在参照群体中的平均表达的至少4-5倍、5-10倍或超过10倍。在某些实施方案中，细胞类型特异性的靶分子的检测或测量允许本领域普通技术人员将一个或多个目标细胞类型
与许多、大多数或全部其它类型的细胞区分开。一般而言，使用一种或多种标准技术，诸如RNA印迹法,原位杂交,RT-PCR,测序,免疫学方法诸如免疫印迹法、免疫检测(例如，通过免
疫组织化学)或在用荧光标记抗体染色后实施免疫检测(例如，使用FACS)、寡核苷酸或cDNA微阵列或膜阵列、蛋白微阵列分析、质谱法等，可以确定大多数靶分子的存在和/或丰度。
[0367] 在某些实施方案中，靶分子是通道、转运蛋白、受体或至少部分地暴露于细胞表面的其它分子。在某些实施方案中，靶分子是阴离子转运蛋白或水通道(例如，水通道蛋白)。
[0368] 在某些实施方案中，所述靶分子是至少部分地暴露于红血细胞表面的蛋白，诸如血型糖蛋白(例如，血型糖蛋白A、B、C或D)或带3。
[0369] 在某些实施方案中，所述靶分子是至少部分地暴露于内皮细胞表面的蛋白。在某些实施方案中，所述靶分子存在于正常的健康血管系统的表面。在某些实施方案中，所述靶分子存在于激活的内皮细胞的表面。在某些实施方案中，所述靶分子存在于激活的内皮细
胞的表面，但是不存在于未激活的内皮细胞的表面。在某些实施方案中，靶分子是这样的分子：其表达或暴露被诸如损伤或炎症等刺激诱导。在某些实施方案中，靶分子被受体识别为“非自身的”，所述受体接受含有表达靶分子的细胞的移植物。在某些实施方案中，所述靶分子是碳水化合物异种抗原，针对所述异种抗原的抗体常见于人类中。在某些实施方案中，所述碳水化合物包含血型抗原。在某些实施方案中，所述碳水化合物包含异种抗原，例如，
alpha-gal表位(Galalpha1-3Galbeta1-(3)4GlcNAc-R)(参见，例如，Macher BA and
Galili U.The Galalpha1,3Galbeta1,4GlcNAc-R(alpha-Gal)epitope:a carbohydrate
of unique evolution and clinical relevance.Biochim Biophys Acta.1780(2):75-88
(2008)。
胞的表面，但是不存在于未激活的内皮细胞的表面。在某些实施方案中，靶分子是这样的分子：其表达或暴露被诸如损伤或炎症等刺激诱导。在某些实施方案中，靶分子被受体识别为“非自身的”，所述受体接受含有表达靶分子的细胞的移植物。在某些实施方案中，所述靶分子是碳水化合物异种抗原，针对所述异种抗原的抗体常见于人类中。在某些实施方案中，所述碳水化合物包含血型抗原。在某些实施方案中，所述碳水化合物包含异种抗原，例如，
alpha-gal表位(Galalpha1-3Galbeta1-(3)4GlcNAc-R)(参见，例如，Macher BA and
Galili U.The Galalpha1,3Galbeta1,4GlcNAc-R(alpha-Gal)epitope:a carbohydrate
of unique evolution and clinical relevance.Biochim Biophys Acta.1780(2):75-88
(2008)。
[0370] 在本发明的某些实施方案中，坎普他汀类似物包含靶向部分和CRM。
[0371] 在某些实施方案中，靶向坎普他汀类似物包含多个靶向部分，所述靶向部分可以相同或不同。不同的靶向部分可以结合相同的靶分子或不同的靶分子。本发明提供了一种
靶向坎普他汀类似物，其就靶向部分、坎普他汀类似物或二者而言是多价的。
靶向坎普他汀类似物，其就靶向部分、坎普他汀类似物或二者而言是多价的。
[0372] 一般而言，本发明包括生产包含坎普他汀类似物部分和靶向部分的化合物的任意方法，和得到的化合物。在某些实施方案中，使用与在第VI部分中描述的那些基本上类似的方法，可以生产靶向坎普他汀类似物，其中作为细胞反应性部分的替代，或者除了细胞反应性部分以外，使用靶向部分。在某些实施方案中，合成包含肽作为靶向部分的靶向坎普他汀类似物，作为包含坎普他汀类似物部分和肽靶向部分的多肽链。任选地，所述多肽链包含在坎普他汀类似物部分和靶向部分之间的一个或多个隔离肽。
[0373] 在某些实施方案中，靶向坎普他汀类似物的摩尔活性是具有相同氨基酸序列(和，如果适用的话，一个或多个封端部分)、但是不包含靶向部分的对应坎普他汀类似物的活性的至少约10％、20％或30％，例如，30％至40％、30％至50％、30％至60％、30％至70％、30％至80％、30％至90％或更多。在某些其中靶向坎普他汀类似物包含多个坎普他汀类似物部
分的实施方案中，靶向坎普他汀类似物的摩尔活性是所述坎普他汀类似物部分的活性总和
的至少约10％、20％或30％，例如，30％至40％、30％至50％、30％至60％、30％至70％、30％至80％、30％至90％或更多。本发明的方面涉及用于制备靶向的坎普他汀类似物的组合物
和方法，以及在合成过程中的中间体。
分的实施方案中，靶向坎普他汀类似物的摩尔活性是所述坎普他汀类似物部分的活性总和
的至少约10％、20％或30％，例如，30％至40％、30％至50％、30％至60％、30％至70％、30％至80％、30％至90％或更多。本发明的方面涉及用于制备靶向的坎普他汀类似物的组合物
和方法，以及在合成过程中的中间体。
[0374] VII.用途
[0375] 细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物具有多种用途。不以任何方式限制本发明，本文中描述了细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物的某些用途和本
发明的有关方面。在一些方面，任何此类用途可以包括：除了施用细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物外，还向受试者施用抑制C3表达的INAA。
发明的有关方面。在一些方面，任何此类用途可以包括：除了施用细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物外，还向受试者施用抑制C3表达的INAA。
[0376] 例如，在一些实施方案中，提供了抑制受试者中的补体活化的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下一种或两种：(a)抑制C3表达的抑制性核酸试剂(INAA)；和(b)包含清除率降低部分(CRM)和至少一个坎普他汀类似物部分的坎普他汀类似物，使得所述受试
者暴露于这二者，其中所述INAA和所述坎普他汀类似物各自根据给药方案按至少2天的给
药间隔施用。
者暴露于这二者，其中所述INAA和所述坎普他汀类似物各自根据给药方案按至少2天的给
药间隔施用。
[0377] 在一些实施方案中，提供了抑制受试者中的补体活化的方法，所述方法包括向所述受试者施用(a)抑制C3表达的抑制性核酸试剂(INAA)；和(b)包含清除率降低部分(CRM)
和至少一个坎普他汀类似物部分的坎普他汀类似物，其中如使用旁路途径分析、经典途径
分析或二者所测定的，所述INAA按有效抑制血清补体活性平均不超过95％，任选地介于
50％与95％之间的量施用。
和至少一个坎普他汀类似物部分的坎普他汀类似物，其中如使用旁路途径分析、经典途径
分析或二者所测定的，所述INAA按有效抑制血清补体活性平均不超过95％，任选地介于
50％与95％之间的量施用。
[0378] 在一些实施方案中，提供了抑制受试者中的补体活化的方法，所述方法包括向所述受试者施用(a)抑制C3表达的抑制性核酸试剂(INAA)；和(b)包含清除率降低部分(CRM)
和至少一个坎普他汀类似物部分的坎普他汀类似物，其中如使用旁路途径分析、经典途径
分析或二者所测定的，坎普他汀类似物按有效抑制血清补体活性平均不超过95％，任选地
介于50％与95％之间的量施用。
和至少一个坎普他汀类似物部分的坎普他汀类似物，其中如使用旁路途径分析、经典途径
分析或二者所测定的，坎普他汀类似物按有效抑制血清补体活性平均不超过95％，任选地
介于50％与95％之间的量施用。
[0379] 在一些实施方案中，提供了抑制受试者中的补体活化的方法，所述方法包括向所述受试者施用(a)抑制C3表达的抑制性核酸试剂(INAA)；和(b)包含清除率降低部分(CRM)
和至少一个坎普他汀类似物部分的坎普他汀类似物，其中所述坎普他汀类似物按平均小于
约300mg/天的量施用。
和至少一个坎普他汀类似物部分的坎普他汀类似物，其中所述坎普他汀类似物按平均小于
约300mg/天的量施用。
[0380] 在一些实施方案中，提供了抑制受试者中的补体活化的方法，所述方法包括向所述受试者施用(a)抑制C3表达的抑制性核酸试剂(INAA)；和(b)坎普他汀类似物，其包含具
有至少两个与其连接的坎普他汀类似物部分的清除率降低部分(CRM)，任选地其中：(i)如
使用旁路途径分析、经典途径分析或二者所测定的，所述坎普他汀类似物按有效抑制血清
补体活性平均不超过90％的量施用；(ii)如使用旁路途径分析、经典途径分析或二者所测
定的，所述INAA按有效抑制血清补体活性平均不超过90％的量施用；(iii)所述INAA和所述坎普他汀类似物均根据给药方案按至少2天的给药间隔施用；或(iv)(i)、(ii)和(iii)的任何组合。
有至少两个与其连接的坎普他汀类似物部分的清除率降低部分(CRM)，任选地其中：(i)如
使用旁路途径分析、经典途径分析或二者所测定的，所述坎普他汀类似物按有效抑制血清
补体活性平均不超过90％的量施用；(ii)如使用旁路途径分析、经典途径分析或二者所测
定的，所述INAA按有效抑制血清补体活性平均不超过90％的量施用；(iii)所述INAA和所述坎普他汀类似物均根据给药方案按至少2天的给药间隔施用；或(iv)(i)、(ii)和(iii)的任何组合。
[0381] 在一些实施方案中，所述旁路途径分析是基于溶血。
[0383] 在一些实施方案中，提供了治疗需要治疗补体介导的障碍的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用(a)抑制C3表达的抑制性核酸试剂(INAA)；和(b)坎普他汀类似
物。
物。
[0384] 在一些实施方案中，所述施用步骤包括向正接受所述坎普他汀类似物的受试者施用所述INAA。
[0385] 在一些实施方案中，所述施用步骤包括向正接受所述INAA的受试者施用所述坎普他汀类似物。
[0386] 在一些实施方案中，所述施用步骤包括施用所述坎普他汀类似物和所述INAA二者。
[0387] 在一些实施方案中，所述施用步骤包括施用含有所述坎普他汀类似物和所述INAA二者的组合物。
[0388] 在一些实施方案中，提供了抑制受试者中的补体活化的方法，所述方法包括向所述受试者施用：(a)抑制C3表达的抑制性核酸试剂(INAA)；和(b)包含清除率降低部分(CRM)和至少一个坎普他汀类似物部分的坎普他汀类似物，其中所述INAA和所述坎普他汀类似物
均根据给药方案按至少2天的给药间隔施用。
均根据给药方案按至少2天的给药间隔施用。
[0389] 在一些实施方案中，所述坎普他汀类似物根据给药方案按至少7天的给药间隔施用。
[0390] 在一些实施方案中，所述INAA和所述坎普他汀类似物均根据给药方案按至少7天的给药间隔施用。
[0391] 在一些实施方案中，所述INAA和所述坎普他汀类似物均根据给药方案按介于7天与31天之间的给药间隔施用。
[0392] 在一些实施方案中，所述坎普他汀类似物和所述INAA分开施用，任选地根据不同的给药时间表施用。
[0393] 在一些实施方案中，所述坎普他汀类似物和所述INAA根据相同的给药时间表分开施用。
[0394] 在一些实施方案中，所述坎普他汀类似物和所述INAA按同一种组合物施用。
[0395] 在一些实施方案中，所述坎普他汀类似物在静脉内或皮下施用于人类受试者时具有介于24小时与10天之间的半衰期。
[0396] 在一些实施方案中，将细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物施用给遭受补体介导的器官、组织或细胞损伤或处于该损伤风险中的受试者。在某些实施方案中，使细胞反应性坎普他汀类似物与离体器官、组织或细胞接触，并变得与其共价结合。将所述器官、组织或细胞引入受试者中并保护免于否则会由受体的补体系统造成的损伤。
[0397] 不共价地结合细胞的坎普他汀类似物可以用于本文中描述的目的。例如，可以使用被增加化合物在体内的寿命的部分修饰的坎普他汀类似物和/或包含特定部分的坎普他
汀类似物，所述特定部分将坎普他汀类似物靶向易于补体激活的细胞类型或位置，并且本
发明包括这样的用途。在某些实施方案中，使用长效坎普他汀类似物。在某些实施方案中，使用包含靶向部分的坎普他汀类似物。在某些实施方案中，使用这样的坎普他汀类似物：其包含延长化合物在体内的寿命的部分和靶向部分。在下面的讨论提及细胞反应性坎普他汀
类似物的情况下，本发明提供了与靶向坎普他汀类似物有关的类似组合物和方法以及(至
少在关于坎普他汀类似物向受试者施用的那些方面)实施方案，其中作为细胞反应性坎普
他汀类似物的替代，或者除了细胞反应性坎普他汀类似物以外，使用不包含靶向部分或细
胞反应性部分的坎普他汀类似物，任选地长效坎普他汀类似物。
汀类似物，所述特定部分将坎普他汀类似物靶向易于补体激活的细胞类型或位置，并且本
发明包括这样的用途。在某些实施方案中，使用长效坎普他汀类似物。在某些实施方案中，使用包含靶向部分的坎普他汀类似物。在某些实施方案中，使用这样的坎普他汀类似物：其包含延长化合物在体内的寿命的部分和靶向部分。在下面的讨论提及细胞反应性坎普他汀
类似物的情况下，本发明提供了与靶向坎普他汀类似物有关的类似组合物和方法以及(至
少在关于坎普他汀类似物向受试者施用的那些方面)实施方案，其中作为细胞反应性坎普
他汀类似物的替代，或者除了细胞反应性坎普他汀类似物以外，使用不包含靶向部分或细
胞反应性部分的坎普他汀类似物，任选地长效坎普他汀类似物。
[0398] 某些感兴趣的用途包括：(1)在具有障碍的个体中保护红血细胞(RBC)免于补体介导的损伤，所述障碍诸如阵发性夜间血红蛋白尿或非典型溶血性尿毒症综合征或以补体介
导的RBC裂解为特征的其它障碍；(2)保护移植器官、组织和细胞免于补体介导的损伤；(3)减轻缺血/再灌注(I/R)损伤(例如，在遭受创伤、血管阻塞、心肌梗塞或其中可能发生I/R损伤的其它情形的个体中)；和(4)在多种不同的补体介导的障碍中的任一种中，保护可能暴
露于补体组分的各种身体结构(例如，视网膜)或膜(例如，滑膜)免于补体介导的损伤。在细胞或其它身体结构的表面处抑制补体激活的有益效果不限于由保护细胞或结构本身免于
直接补体介导的损伤(例如，防止细胞裂解)直接产生的那些。例如，使用细胞反应性坎普他汀类似物抑制补体激活可以减少过敏毒素的产生和引起的嗜中性粒细胞和其它促炎症事
件的流入/激活，和/或减少细胞内的内容物的潜在损伤性释放，由此可能对远距离器官系
统或遍布体内具有有益效果。
导的RBC裂解为特征的其它障碍；(2)保护移植器官、组织和细胞免于补体介导的损伤；(3)减轻缺血/再灌注(I/R)损伤(例如，在遭受创伤、血管阻塞、心肌梗塞或其中可能发生I/R损伤的其它情形的个体中)；和(4)在多种不同的补体介导的障碍中的任一种中，保护可能暴
露于补体组分的各种身体结构(例如，视网膜)或膜(例如，滑膜)免于补体介导的损伤。在细胞或其它身体结构的表面处抑制补体激活的有益效果不限于由保护细胞或结构本身免于
直接补体介导的损伤(例如，防止细胞裂解)直接产生的那些。例如，使用细胞反应性坎普他汀类似物抑制补体激活可以减少过敏毒素的产生和引起的嗜中性粒细胞和其它促炎症事
件的流入/激活，和/或减少细胞内的内容物的潜在损伤性释放，由此可能对远距离器官系
统或遍布体内具有有益效果。
[0399] A.血细胞保护
[0400] 在本发明的某些实施方案中，使用细胞反应性坎普他汀类似物、细胞靶向的坎普他汀类似物、和/或非靶向的坎普他汀类似物(例如，长效非靶向的坎普他汀类似物)来保护血细胞免于补体介导的损伤。所述血细胞可以是血液的任意细胞组分，例如，红血细胞
(RBC)、白血细胞(WBC)和/或血小板。在某些实施方案中，细胞靶向的坎普他汀类似物被靶向暴露于RBC的细胞表面处的靶分子，诸如血型糖蛋白或带3。多种障碍与对血细胞的补体
介导的损伤有关。这样的障碍可以源自，例如，个体的细胞的或可溶性的CRP中的一种或多种的缺乏或缺陷，例如，由于：(a)编码这样的蛋白的基因中的突变；(b)一种或多种CRP的生产或适当功能所需要的基因的突变，和/或(c)针对一种或多种CRP的自身抗体的存在。补体介导的RBC裂解可以源自针对RBC抗原的自身抗体的存在，所述RBC抗原可以由于众多原因
(经常是特发性的)而产生。具有在编码CRP的基因中这样的突变和/或具有针对CRP或针对
它们自身的RBC的抗体的个体处于增加的涉及补体介导的RBC损伤的障碍的风险中。已经发
生障碍特有的一种或多种发作的个体处于增加的复发风险中。
(RBC)、白血细胞(WBC)和/或血小板。在某些实施方案中，细胞靶向的坎普他汀类似物被靶向暴露于RBC的细胞表面处的靶分子，诸如血型糖蛋白或带3。多种障碍与对血细胞的补体
介导的损伤有关。这样的障碍可以源自，例如，个体的细胞的或可溶性的CRP中的一种或多种的缺乏或缺陷，例如，由于：(a)编码这样的蛋白的基因中的突变；(b)一种或多种CRP的生产或适当功能所需要的基因的突变，和/或(c)针对一种或多种CRP的自身抗体的存在。补体介导的RBC裂解可以源自针对RBC抗原的自身抗体的存在，所述RBC抗原可以由于众多原因
(经常是特发性的)而产生。具有在编码CRP的基因中这样的突变和/或具有针对CRP或针对
它们自身的RBC的抗体的个体处于增加的涉及补体介导的RBC损伤的障碍的风险中。已经发
生障碍特有的一种或多种发作的个体处于增加的复发风险中。
[0401] 阵发性夜间血红蛋白尿(PNH)是一种相对罕见的障碍，其包含以补体介导的血管内溶血、血红蛋白尿、骨髓衰竭和血栓形成倾向(形成血块的倾向)为特征的后天性溶血性
贫血。据估计，它影响世界上每百万人中的16人，发生在两种性别中，并且可以发生在任何年龄，常见于年轻的成年人(Bessler,M.和Hiken,J.,Hematology Am Soc Hematol Educ
Program,104-110(2008)；Hillmen,P.Hematology Am Soc Hematol Educ Program,116-
123(2008))PNH是一种以急性溶血性发作为特征的慢性的且使人虚弱的疾病，并且导致显
著的病态和降低的预期寿命。除了贫血以外，许多患者会经历腹部疼痛、吞咽困难、勃起功能障碍和肺性高血压，并且处于增加的肾衰竭和血栓栓塞性事件的风险中。
贫血。据估计，它影响世界上每百万人中的16人，发生在两种性别中，并且可以发生在任何年龄，常见于年轻的成年人(Bessler,M.和Hiken,J.,Hematology Am Soc Hematol Educ
Program,104-110(2008)；Hillmen,P.Hematology Am Soc Hematol Educ Program,116-
123(2008))PNH是一种以急性溶血性发作为特征的慢性的且使人虚弱的疾病，并且导致显
著的病态和降低的预期寿命。除了贫血以外，许多患者会经历腹部疼痛、吞咽困难、勃起功能障碍和肺性高血压，并且处于增加的肾衰竭和血栓栓塞性事件的风险中。
[0402] PNH在十九世纪初最早被描述为独特的实体，但是仅在二十世纪五十年代，随着补体激活的旁路途径的发现，牢固地确立了PNH中的溶血的原因(Parker CJ.Paroxysmal
nocturnal hemoglobinuria:an historical overview.Hematology Am Soc Hematol
Educ Program.93-103(2008))。CD55和CD59通常经由糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚(将某些蛋白
锚定至质膜的糖脂结构)而连接至细胞膜。PNH作为造血干细胞的非恶性克隆繁殖的后果而
产生，所述造血干细胞已经获得PIGA基因中的体细胞突变，所述PIGA基因编码在GPI锚的合成中涉及的蛋白(Takeda J,等人.Deficiency of the GPI anchor caused by a somatic
mutation of the PIG-A gene in paroxysmal nocturnal hemoglobinuria.Cell.73:
703-711(1993))。这样的干细胞的后代具有有缺陷的GPI锚定蛋白(包括CD55和CD59)。该缺陷使得这些细胞易感补体介导的RBC裂解。使用针对GPI锚定蛋白的抗体的流式细胞计数分
析经常被用于诊断。它检测GPI锚定蛋白在细胞表面处的缺乏，并允许确定缺乏的程度和受影响的细胞的比例(Brodsky RA.Advances in the diagnosis and therapy of
paroxysmal nocturnal hemoglobinuria.Blood Rev.22(2):65-74(2008)。PNH III型RBC
完全缺乏GPI连接蛋白，且对补体非常敏感，而PNH II型RBC具有部分缺乏且具有更低的敏
感性。FLAER是气单胞菌溶素原(一种结合GPI锚的细菌毒素)的荧光地标记的无活性变体，
且越来越多地与流式细胞计量术一起用于诊断PNH。FLAER与粒细胞的结合的缺乏足以诊断
PNH。在某些实施方案中，细胞反应性坎普他汀类似物会保护PNH RBC免于C3b的沉积。
nocturnal hemoglobinuria:an historical overview.Hematology Am Soc Hematol
Educ Program.93-103(2008))。CD55和CD59通常经由糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚(将某些蛋白
锚定至质膜的糖脂结构)而连接至细胞膜。PNH作为造血干细胞的非恶性克隆繁殖的后果而
产生，所述造血干细胞已经获得PIGA基因中的体细胞突变，所述PIGA基因编码在GPI锚的合成中涉及的蛋白(Takeda J,等人.Deficiency of the GPI anchor caused by a somatic
mutation of the PIG-A gene in paroxysmal nocturnal hemoglobinuria.Cell.73:
703-711(1993))。这样的干细胞的后代具有有缺陷的GPI锚定蛋白(包括CD55和CD59)。该缺陷使得这些细胞易感补体介导的RBC裂解。使用针对GPI锚定蛋白的抗体的流式细胞计数分
析经常被用于诊断。它检测GPI锚定蛋白在细胞表面处的缺乏，并允许确定缺乏的程度和受影响的细胞的比例(Brodsky RA.Advances in the diagnosis and therapy of
paroxysmal nocturnal hemoglobinuria.Blood Rev.22(2):65-74(2008)。PNH III型RBC
完全缺乏GPI连接蛋白，且对补体非常敏感，而PNH II型RBC具有部分缺乏且具有更低的敏
感性。FLAER是气单胞菌溶素原(一种结合GPI锚的细菌毒素)的荧光地标记的无活性变体，
且越来越多地与流式细胞计量术一起用于诊断PNH。FLAER与粒细胞的结合的缺乏足以诊断
PNH。在某些实施方案中，细胞反应性坎普他汀类似物会保护PNH RBC免于C3b的沉积。
[0403] 在某些实施方案中，将细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物施用给遭受非典型溶血综合征(aHUS)的受试者。aHUS是一种以微血管病性溶血性贫血、血小板减少
症和急性肾衰竭为特征的慢性障碍，且由不适当的补体激活造成，经常归因于编码补体调
节蛋白的基因中的突变(Warwicker,P.,等人..Kidney Int 53,836-844(1998)；Kavanagh,
D.和Goodship,T.Pediatr Nephrol 25,2431-2442(2010)。补体因子H(CFH)基因中的突变
是具有aHUS的患者中最常见的遗传异常，并且这些患者中的60-70％死亡或在疾病发作以
后一年内达到晚期肾衰竭(Kavanagh和Goodship，出处同上)。还已经描述了因子I、因子B、C3、因子H相关蛋白1-5和血栓调节蛋白中的突变。aHUS的其它原因包括针对补体调节蛋白
(诸如CFH)的自身抗体。在某些实施方案中，将细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物施用给这样的受试者：其已经被鉴别为具有因子I、因子B、C3、因子H相关蛋白1-5或血栓调节蛋白中的突变，或已经被鉴别为具有针对补体调节蛋白(诸如CFH)的自身抗体。
症和急性肾衰竭为特征的慢性障碍，且由不适当的补体激活造成，经常归因于编码补体调
节蛋白的基因中的突变(Warwicker,P.,等人..Kidney Int 53,836-844(1998)；Kavanagh,
D.和Goodship,T.Pediatr Nephrol 25,2431-2442(2010)。补体因子H(CFH)基因中的突变
是具有aHUS的患者中最常见的遗传异常，并且这些患者中的60-70％死亡或在疾病发作以
后一年内达到晚期肾衰竭(Kavanagh和Goodship，出处同上)。还已经描述了因子I、因子B、C3、因子H相关蛋白1-5和血栓调节蛋白中的突变。aHUS的其它原因包括针对补体调节蛋白
(诸如CFH)的自身抗体。在某些实施方案中，将细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物施用给这样的受试者：其已经被鉴别为具有因子I、因子B、C3、因子H相关蛋白1-5或血栓调节蛋白中的突变，或已经被鉴别为具有针对补体调节蛋白(诸如CFH)的自身抗体。
[0404] 补体介导的溶血发生在包括自身免疫性溶血性贫血在内的其它病症的不同组中，所述自身免疫性溶血性贫血涉及结合RBC并导致补体介导的溶血的抗体。例如，这样的溶血可以发生在原发性慢性冷凝集素疾病和某些针对药物和其它外来物质的反应中
(Berentsen,S.,等人,Hematology 12,361-370(2007)；Rosse,W.F.,Hillmen,P.和
Schreiber,A.D.Hematology Am Soc Hematol Educ Program,48-62(2004))。在本发明的
某些实施方案中，将细胞反应性坎普他汀类似物施用给遭受慢性冷凝集素疾病或处于慢性
冷凝集素疾病的风险中的受试者。在另一个实施方案中，使用细胞反应性坎普他汀类似物
来治疗遭受HELLP综合征或处于HELLP综合征的风险中的受试者，所述HELLP综合征通过溶
血的存在、升高的肝酶和低血小板计数来定义，且与至少一些受试者中的补体调节蛋白的
突变有关(Fakhouri,F.,等人,112:4542-4545(2008))。
(Berentsen,S.,等人,Hematology 12,361-370(2007)；Rosse,W.F.,Hillmen,P.和
Schreiber,A.D.Hematology Am Soc Hematol Educ Program,48-62(2004))。在本发明的
某些实施方案中，将细胞反应性坎普他汀类似物施用给遭受慢性冷凝集素疾病或处于慢性
冷凝集素疾病的风险中的受试者。在另一个实施方案中，使用细胞反应性坎普他汀类似物
来治疗遭受HELLP综合征或处于HELLP综合征的风险中的受试者，所述HELLP综合征通过溶
血的存在、升高的肝酶和低血小板计数来定义，且与至少一些受试者中的补体调节蛋白的
突变有关(Fakhouri,F.,等人,112:4542-4545(2008))。
[0405] 在其它实施方案中，使用细胞反应性坎普他汀类似物来保护RBC或要输入受试者中的血液的其它细胞组分。在下面进一步讨论了这样的用途的某些实施例。如上面所指出
的，靶向的和/或长效的坎普他汀类似物可以用于上述的抑制补体介导的溶血和/或RBC损
伤的方法中。在某些实施方案中，使用包含(CH2CH2O)部分的长效坎普他汀类似物来治疗PNH或aHUS。
的，靶向的和/或长效的坎普他汀类似物可以用于上述的抑制补体介导的溶血和/或RBC损
伤的方法中。在某些实施方案中，使用包含(CH2CH2O)部分的长效坎普他汀类似物来治疗PNH或aHUS。
[0406] B.移植
[0407] 移植是一种具有日益增加的重要性的治疗方案，其提供替代由于创伤、疾病或其它状况而受损的器官和组织的方式。肾、肝、肺、胰腺和心脏是可以成功地移植的器官。经常移植的组织包括骨、软骨、肌腱、角膜、皮肤、心脏瓣膜和血管。胰岛或胰岛细胞移植是一种有前途的治疗糖尿病(例如，I型糖尿病)的方案。就本发明的目的而言，要移植的、正在移植的或已经移植的器官、组织或细胞(或细胞群体)可以被称作“移植物”。就本发明的目的而言，血液输注被视作“移植物”。
[0408] 移植会使移植物遭受多种损伤性事件和刺激，所述事件和刺激可以促成移植物功能障碍，并可能促成失效。例如，就许多移植物(特别是实体器官)而言，缺血-再灌注(I/R)损伤是发病率和死亡率的一种常见且主要的原因，且可以是移植物存活的可能性的一个重
要决定因素。移植排斥是与遗传上不同的个体之间的移植有关的重大风险之一，且可以导
致移植物失效和需要从受体取出移植物。
要决定因素。移植排斥是与遗传上不同的个体之间的移植有关的重大风险之一，且可以导
致移植物失效和需要从受体取出移植物。
[0409] 在本发明的某些实施方案中，使用细胞反应性坎普他汀类似物、细胞靶向的坎普他汀类似物和/或长效坎普他汀类似物来保护移植物免于补体介导的损伤。细胞反应性坎
普他汀类似物会与移植物的细胞反应，变成与其共价地连接，并抑制补体激活。细胞靶向的坎普他汀类似物会结合移植物中的靶分子(例如，由移植物中的内皮细胞或其它细胞表达)
和抑制补体激活。靶分子可以是例如，其表达由刺激因素(诸如损伤或炎症)诱导或刺激的
分子，被受体识别为“非自身”的分子，碳水化合物异种抗原(针对所述异种抗原的抗体常见于人类中)诸如血型抗原或异种抗原，例如，包含alpha-gal表位的分子。在某些实施方案
中，与尚未接触坎普他汀类似物的移植物(例如，就移植物和他们接收的其它治疗而言匹配的受试者)中的C4d沉积的平均水平相比，已经与坎普他汀类似物(例如，细胞反应性坎普他汀类似物)接触的移植物的血管中的平均C4d沉积的减少，可以证实补体激活的减少。
普他汀类似物会与移植物的细胞反应，变成与其共价地连接，并抑制补体激活。细胞靶向的坎普他汀类似物会结合移植物中的靶分子(例如，由移植物中的内皮细胞或其它细胞表达)
和抑制补体激活。靶分子可以是例如，其表达由刺激因素(诸如损伤或炎症)诱导或刺激的
分子，被受体识别为“非自身”的分子，碳水化合物异种抗原(针对所述异种抗原的抗体常见于人类中)诸如血型抗原或异种抗原，例如，包含alpha-gal表位的分子。在某些实施方案
中，与尚未接触坎普他汀类似物的移植物(例如，就移植物和他们接收的其它治疗而言匹配的受试者)中的C4d沉积的平均水平相比，已经与坎普他汀类似物(例如，细胞反应性坎普他汀类似物)接触的移植物的血管中的平均C4d沉积的减少，可以证实补体激活的减少。
[0410] 在本发明的不同实施方案中，可以在移植之前、过程中和/或之后，使移植物与细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物和/或抑制C3表达的INAA接触。例如，在移植之前，可以使取自供体的移植物与包含细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物的
液体接触。例如，可以用所述溶液浸泡和/或灌注移植物。在另一个实施方案中，在取出移植物之前，将细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物施用给供体。在某些实施方案
中，在引入移植物过程中和/或之后，将细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物施用给受体。在某些实施方案中，将细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物局部地递送至移植的移植物。在某些实施方案中，全身性地(例如，静脉内地)施用细胞反应性坎普他汀类似物。
液体接触。例如，可以用所述溶液浸泡和/或灌注移植物。在另一个实施方案中，在取出移植物之前，将细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物施用给供体。在某些实施方案
中，在引入移植物过程中和/或之后，将细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物施用给受体。在某些实施方案中，将细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物局部地递送至移植的移植物。在某些实施方案中，全身性地(例如，静脉内地)施用细胞反应性坎普他汀类似物。
[0411] 本发明提供了一种组合物，其包含：(a)分离的移植物；(b)细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物；和(c)抑制C3表达的INAA。在某些实施方案中，所述组合物进一步包含液体溶液，所述液体溶液适合用于接触(例如，适合用于冲洗、洗涤、浸泡、灌注、维持或储存)移植物(例如，器官)，诸如已经从供体取出并且正在等待移植给受体的分离的移植物。在某些实施方案中，本发明提供了一种组合物，其包含：(a)适合用于接触移植物(例如，器官)的液体溶液；和(b)细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物。所述液体溶液可以是移植物生理上可接受的(例如，非细胞毒性的适当渗透组合物)、且考虑到随后向受体中引入移植物而在医学上可接受的(例如，优选无菌的，或至少适当地不含有微生物或其它污染物)、且与细胞反应性坎普他汀类似物相容(即，不会破坏坎普他汀类似物的反应性)或与长效或靶向坎普他汀类似物相容的任意液体溶液。在某些实施方案中，溶液是本领域认
可的用于任意这样的目的的任意溶液。在某些实施方案中，液体溶液是Marshall氏溶液或
高渗性柠檬酸盐溶液( Baxter Healthcare)、威斯康辛州大学(University of
Wisconsin，UW)溶液(ViaSpanTM,Bristol Myers Squibb)、组氨酸色氨酸酮戊二酸盐(HTK)溶液( Kohler Medical Limited)、EuroCollins(Fresenius)和
(Sangstat Medical)、Polysol、IGL-1或 RS-1。当然，可以在生理上可接受的组合物
的范围内使用其它溶液，例如，含有相同或不同浓度的等效或类似成分。在某些实施方案
中，溶液不含有预期细胞反应性坎普他汀类似物会与其显著反应的成分，且可以将任何溶
液改进或设计成缺少这样的成分。在某些实施方案中，细胞反应性坎普他汀类似物以例如
0.01mg/ml至100mg/ml的浓度存在于移植物相容的溶液中，或者可以加入溶液中以达到这
样的浓度。
可的用于任意这样的目的的任意溶液。在某些实施方案中，液体溶液是Marshall氏溶液或
高渗性柠檬酸盐溶液( Baxter Healthcare)、威斯康辛州大学(University of
Wisconsin，UW)溶液(ViaSpanTM,Bristol Myers Squibb)、组氨酸色氨酸酮戊二酸盐(HTK)溶液( Kohler Medical Limited)、EuroCollins(Fresenius)和
(Sangstat Medical)、Polysol、IGL-1或 RS-1。当然，可以在生理上可接受的组合物
的范围内使用其它溶液，例如，含有相同或不同浓度的等效或类似成分。在某些实施方案
中，溶液不含有预期细胞反应性坎普他汀类似物会与其显著反应的成分，且可以将任何溶
液改进或设计成缺少这样的成分。在某些实施方案中，细胞反应性坎普他汀类似物以例如
0.01mg/ml至100mg/ml的浓度存在于移植物相容的溶液中，或者可以加入溶液中以达到这
样的浓度。
[0412] 在某些实施方案中，本发明提供了一种试剂盒，其包含：(a)细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物；和(b)移植物相容的溶液或其固体(例如，粉末)组分。所述细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物可以以固体形式(例如，粉末)提供或至少部分地溶解在溶液中。在某些实施方案中，所述细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物和/或移植物相容的溶液以预定量提供，以致于当混合时产生用于与使移植物与细胞反应
性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物接触的适当的浓度的溶液。在许多实施方案中，细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物和移植物相容的溶液或其固体(例如，粉末)组
分是在试剂盒内的单独容器中。在某些实施方案中，所述细胞反应性坎普他汀类似物和移
植物相容的溶液的组分都以固体(例如，粉末)形式提供，在单独的容器中或相混合。在某些实施方案中，所述试剂盒包含使用说明书，例如，关于将细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物加入移植物相容的溶液中的说明书和/或关于使移植物与细胞反应性坎普他
汀类似物接触的说明书。任选地，所述试剂盒含有负责管理在移植、细胞治疗和/或血液输注中使用的产品的政府机构批准的标签。
性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物接触的适当的浓度的溶液。在许多实施方案中，细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物和移植物相容的溶液或其固体(例如，粉末)组
分是在试剂盒内的单独容器中。在某些实施方案中，所述细胞反应性坎普他汀类似物和移
植物相容的溶液的组分都以固体(例如，粉末)形式提供，在单独的容器中或相混合。在某些实施方案中，所述试剂盒包含使用说明书，例如，关于将细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物加入移植物相容的溶液中的说明书和/或关于使移植物与细胞反应性坎普他
汀类似物接触的说明书。任选地，所述试剂盒含有负责管理在移植、细胞治疗和/或血液输注中使用的产品的政府机构批准的标签。
[0413] 本发明另外提供了一种使坎普他汀类似物与分离的移植物共价连接的方法，所述方法包括：使分离的移植物与细胞反应性坎普他汀类似物接触。本发明另外提供了一种分
离的移植物，其具有与其共价连接的坎普他汀类似物。通常，分离的移植物具有许多与其连接的坎普他汀类似物分子。在某些实施方案中，移植物是或包含实体器官，诸如肾、肝、肺、胰腺或心脏。在某些实施方案中，移植物是或包含骨、软骨、筋膜、肌腱、韧带、角膜、巩膜、心包、皮肤、心脏瓣膜、血管、羊膜或硬膜。在某些实施方案中，移植物包含多器官，诸如心-肺或胰腺-肾移植物。在某些实施方案中，移植物包含不完整的器官或组织。例如，移植物可以含有器官或组织的一部分，例如，肝叶、血管段、皮瓣或心脏瓣膜。在某些实施方案中，移植物包含含有分离的细胞或组织片段的制品，所述细胞或组织片段已经从它们的起源组织分
离出，但是保留至少一些组织体系结构，例如，胰岛。在某些实施方案中，制品包含没有经由结缔组织彼此连接的分离的细胞，例如，源自周围血和/或脐带血的造血干细胞或祖细胞，或全血或任何含有细胞的血液制品诸如红血细胞(RBC)或血小板。在某些实施方案中，移植物得自死亡的供体(例如，“脑死亡以后的捐赠”(DBD)供体或“心脏死亡以后的捐赠”供体)。
在某些实施方案中，取决于移植物的特定类型，移植物得自活供体。例如，肾、肝部分、血细胞是经常可以从活供体得到的移植物类型，对供体没有不适当的风险，且与可靠的医学实
践相一致。
离的移植物，其具有与其共价连接的坎普他汀类似物。通常，分离的移植物具有许多与其连接的坎普他汀类似物分子。在某些实施方案中，移植物是或包含实体器官，诸如肾、肝、肺、胰腺或心脏。在某些实施方案中，移植物是或包含骨、软骨、筋膜、肌腱、韧带、角膜、巩膜、心包、皮肤、心脏瓣膜、血管、羊膜或硬膜。在某些实施方案中，移植物包含多器官，诸如心-肺或胰腺-肾移植物。在某些实施方案中，移植物包含不完整的器官或组织。例如，移植物可以含有器官或组织的一部分，例如，肝叶、血管段、皮瓣或心脏瓣膜。在某些实施方案中，移植物包含含有分离的细胞或组织片段的制品，所述细胞或组织片段已经从它们的起源组织分
离出，但是保留至少一些组织体系结构，例如，胰岛。在某些实施方案中，制品包含没有经由结缔组织彼此连接的分离的细胞，例如，源自周围血和/或脐带血的造血干细胞或祖细胞，或全血或任何含有细胞的血液制品诸如红血细胞(RBC)或血小板。在某些实施方案中，移植物得自死亡的供体(例如，“脑死亡以后的捐赠”(DBD)供体或“心脏死亡以后的捐赠”供体)。
在某些实施方案中，取决于移植物的特定类型，移植物得自活供体。例如，肾、肝部分、血细胞是经常可以从活供体得到的移植物类型，对供体没有不适当的风险，且与可靠的医学实
践相一致。
[0414] 在某些实施方案中，移植物是异种移植物(即，供体和受体属于不同的物种)。在某些实施方案中，移植物是自体移植物(即，移植物从身体的一个部分移植至相同个体的身体的另一个部分)。在某些实施方案中，移植物是同基因移植物(即，供体和受体是遗传上相同的)。在大多数实施方案中，移植物是同种异体移植物(即，供体和受体是相同物种的遗传上不同的成员)。在同种异体移植物的情况下，供体和受体可以是或不是遗传上有关的(例如，家族成员)。通常，供体和受体具有相容的血型(至少ABO相容性和任选地Rh、Kell和/或其它血细胞抗原相容性)。可以已经针对移植物和/或受体和供体的同种抗体筛选受体的血液，因为这样的抗体的存在可以导致超急性排斥反应(即，在移植物与受体的血液接触以后几
乎立即(例如，在几分钟内)开始排斥)。可以使用补体依赖性的细胞毒性(CDC)测定来筛选
受试者的血清中的抗-HLA抗体。将血清与一组已知HLA表型的淋巴细胞一起温育。如果所述血清含有针对靶细胞上的HLA分子的抗体，会发生由补体介导的裂解引起的细胞死亡。使用选择的靶细胞集合，允许人们将特异性分配给检测出的抗体。可用于确定抗-HLA抗体的存
在与否和任选地确定它们的HLA特异性的其它技术包括：ELISA测定、流式细胞计量术测定、微米珠阵列技术(例如，Luminex技术)。用于执行这些测定的方法是众所周知的，且多种用于执行它们的试剂盒是商购可得的。
乎立即(例如，在几分钟内)开始排斥)。可以使用补体依赖性的细胞毒性(CDC)测定来筛选
受试者的血清中的抗-HLA抗体。将血清与一组已知HLA表型的淋巴细胞一起温育。如果所述血清含有针对靶细胞上的HLA分子的抗体，会发生由补体介导的裂解引起的细胞死亡。使用选择的靶细胞集合，允许人们将特异性分配给检测出的抗体。可用于确定抗-HLA抗体的存
在与否和任选地确定它们的HLA特异性的其它技术包括：ELISA测定、流式细胞计量术测定、微米珠阵列技术(例如，Luminex技术)。用于执行这些测定的方法是众所周知的，且多种用于执行它们的试剂盒是商购可得的。
[0415] 在某些实施方案中，细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物会抑制补体介导的排斥。例如，在某些实施方案中，细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物会抑制超急性排斥反应。超急性排斥反应至少部分地由抗体介导的受体的补体系统的激活
(经由经典途径)和形成的移植物上的MAC沉积造成。它通常源自预先存在的与移植物反应
的抗体的受体的存在。尽管需要尝试通过在移植之前的适当匹配来避免超急性排斥反应，
但是由于例如时间和/或资源限制，并非总是可能这样做。此外，一些受体(例如，多次输血的个体、以前已经接受移植物的个体、已经多次妊娠的女性)可能已经具有许多预形成的抗体(可能包括针对通常没有试验的抗原的抗体)，以致于难以或也许几乎不可能以及时方式
可靠地获得相容的移植物。这样的个体是处于增加的超急性排斥反应的风险中。
(经由经典途径)和形成的移植物上的MAC沉积造成。它通常源自预先存在的与移植物反应
的抗体的受体的存在。尽管需要尝试通过在移植之前的适当匹配来避免超急性排斥反应，
但是由于例如时间和/或资源限制，并非总是可能这样做。此外，一些受体(例如，多次输血的个体、以前已经接受移植物的个体、已经多次妊娠的女性)可能已经具有许多预形成的抗体(可能包括针对通常没有试验的抗原的抗体)，以致于难以或也许几乎不可能以及时方式
可靠地获得相容的移植物。这样的个体是处于增加的超急性排斥反应的风险中。
[0416] 在某些实施方案中，细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物会抑制急性排斥反应或移植物失效。本文中使用的“急性排斥反应”表示在移植后至少24小时(通常至少几天至1周)直到移植后6个月之间发生的排斥。急性抗体介导的排斥(AMR)经常涉及供体
特异性的同种抗体(DSA)在移植后的前几周中剧烈升高。不希望受任何理论约束，预先存在的浆细胞和/或记忆B细胞向新浆细胞的转变可能在增加的DSA生产中起作用。这样的抗体
可以导致对移植物的补体介导的损伤，所述损伤可以通过使移植物与细胞反应性坎普他汀
类似物接触来抑制。不希望受任何理论约束，抑制在移植物处的补体激活可以减少白细胞
(例如，嗜中性粒细胞)浸润，即急性移植物失效的另一个促成因素。
特异性的同种抗体(DSA)在移植后的前几周中剧烈升高。不希望受任何理论约束，预先存在的浆细胞和/或记忆B细胞向新浆细胞的转变可能在增加的DSA生产中起作用。这样的抗体
可以导致对移植物的补体介导的损伤，所述损伤可以通过使移植物与细胞反应性坎普他汀
类似物接触来抑制。不希望受任何理论约束，抑制在移植物处的补体激活可以减少白细胞
(例如，嗜中性粒细胞)浸润，即急性移植物失效的另一个促成因素。
[0417] 在某些实施方案中，细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物会抑制对移植物的补体介导的I/R损伤。如在下面进一步讨论的，I/R损伤可以发生在组织的再灌注以
后，所述组织的血液供给已经受到暂时破坏，如在移植器官中所发生的。减少I/R损伤会降低急性移植物功能障碍的可能性或降低它的严重程度，并降低急性移植物失效的可能性。
后，所述组织的血液供给已经受到暂时破坏，如在移植器官中所发生的。减少I/R损伤会降低急性移植物功能障碍的可能性或降低它的严重程度，并降低急性移植物失效的可能性。
[0418] 在某些实施方案中，细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物会抑制慢性排斥和/或慢性移植物失效。本文中使用的“慢性排斥或移植物失效”表示在移植后至少6个月(例如，在移植后6个月至1、2、3、4、5年之间或更久，经常在数个月至数年的良好移植物功能以后)发生的排斥或失效。它由针对移植物的慢性炎症性应答和免疫应答造成。就本文中的目的而言，慢性排斥可以包括慢性同种异体移植物血管病变，该术语用于表示移植的组
织的内部血管的纤维化。由于免疫抑制方案已经降低了急性排斥反应的发生率，慢性排斥
正在变为移植物功能障碍和失效的更突出的原因。越来越多的证据表明，同种抗体的B-细
胞生产在慢性排斥和移植物失效的发生中是一个重要因素(Kwun J.和Knechtle SJ,
Transplantation,88(8):955-61(2009)。移植物的早期损伤可能是导致慢性进展(诸如纤
维化)的促成因素，所述慢性进展最终可以导致慢性排斥。因而，使用细胞反应性坎普他汀类似物抑制这样的早期损伤可能延迟和/或降低慢性移植物排斥的可能性或严重程度。
织的内部血管的纤维化。由于免疫抑制方案已经降低了急性排斥反应的发生率，慢性排斥
正在变为移植物功能障碍和失效的更突出的原因。越来越多的证据表明，同种抗体的B-细
胞生产在慢性排斥和移植物失效的发生中是一个重要因素(Kwun J.和Knechtle SJ,
Transplantation,88(8):955-61(2009)。移植物的早期损伤可能是导致慢性进展(诸如纤
维化)的促成因素，所述慢性进展最终可以导致慢性排斥。因而，使用细胞反应性坎普他汀类似物抑制这样的早期损伤可能延迟和/或降低慢性移植物排斥的可能性或严重程度。
[0419] 在某些实施方案中，将长效坎普他汀类似物施用给移植物受体以抑制移植物排斥和/或移植物失效。
[0420] C.缺血/再灌注损伤
[0422] 在创伤的情况下，全身性低氧血、低血压以及由挫伤、筋膜间隔综合征和血管损伤引起的血液供给的局部中断会造成缺血，所述缺血会损伤有代谢活性的组织。血液供给的恢复会触发强烈的全身性炎症反应，所述全身性炎症反应经常比缺血本身更有害。缺血区
域被再灌注以后，局部地产生和释放的因子进入循环系统并到达远距离位置，有时造成没
有受原始缺血性损伤影响的器官(诸如肺和肠)的显著损伤，从而导致单器官和多器官功能
障碍。补体激活发生在再灌注以后不久，且是缺血后损伤的关键介质(直接地和通过它对嗜中性粒细胞的化学吸引效应和刺激效应)。所有3个主要补体途径被激活，并且通过协同地
或独立地起作用而参与影响众多器官系统的I/R相关的不利事件。在本发明的某些实施方
案中，将细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物施用给最近(例如，在上述的2、4、
8、12、24或48小时内)经历创伤(例如，使受试者处于I/R损伤风险中的创伤，例如，由于全身性低氧血、低血压和/或血液供给的局部中断)的受试者。在某些实施方案中，可以任选地将细胞反应性坎普他汀类似物血管内地施用进供给受损伤的身体部分的血管中，或直接施用
至所述身体部分。在某些实施方案中，所述受试者遭受脊髓损伤、外伤性脑损伤、烧伤和/或失血性休克。
域被再灌注以后，局部地产生和释放的因子进入循环系统并到达远距离位置，有时造成没
有受原始缺血性损伤影响的器官(诸如肺和肠)的显著损伤，从而导致单器官和多器官功能
障碍。补体激活发生在再灌注以后不久，且是缺血后损伤的关键介质(直接地和通过它对嗜中性粒细胞的化学吸引效应和刺激效应)。所有3个主要补体途径被激活，并且通过协同地
或独立地起作用而参与影响众多器官系统的I/R相关的不利事件。在本发明的某些实施方
案中，将细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物施用给最近(例如，在上述的2、4、
8、12、24或48小时内)经历创伤(例如，使受试者处于I/R损伤风险中的创伤，例如，由于全身性低氧血、低血压和/或血液供给的局部中断)的受试者。在某些实施方案中，可以任选地将细胞反应性坎普他汀类似物血管内地施用进供给受损伤的身体部分的血管中，或直接施用
至所述身体部分。在某些实施方案中，所述受试者遭受脊髓损伤、外伤性脑损伤、烧伤和/或失血性休克。
[0423] 在某些实施方案中，在外科手术(例如，预期会暂时破坏供给组织、器官或身体部分的血流的外科手术)之前、过程中或之后，将细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物施用给受试者。这样的手术的例子包括心肺转流术、血管成形术、心脏瓣膜修复/置换、动脉瘤修复或其它血管手术。可以在与外科手术重叠的时间段之前、之后和/或过程中施用细胞反应性坎普他汀类似物。
[0424] 在某些实施方案中，将细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物施用给已经遭受MI、血栓栓塞性中风、深静脉血栓形成或肺栓塞的受试者。可以与血栓溶解剂联合施用细胞反应性坎普他汀类似物，所述血栓溶解剂例如组织纤溶酶原激活剂(tPA)(例如，阿
替普酶(Activase)、瑞替普酶(Retavase)、替奈普酶(TNKase))、阿尼普酶(Eminase)、链激酶(Kabikinase，Streptase)或尿激酶(雅激酶)。可以在与血栓溶解剂重叠的时间段之前、之后和/或过程中施用细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物。
替普酶(Activase)、瑞替普酶(Retavase)、替奈普酶(TNKase))、阿尼普酶(Eminase)、链激酶(Kabikinase，Streptase)或尿激酶(雅激酶)。可以在与血栓溶解剂重叠的时间段之前、之后和/或过程中施用细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物。
[0425] 在某些实施方案中，将细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物施用给受试者以治疗I/R损伤。
[0426] D.其它补体介导的障碍
[0427] 在某些实施方案中，将细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物引入眼睛中用于治疗眼病症，诸如年龄相关的黄斑变性(AMD)、糖尿病视网膜病变、青光眼或葡萄膜炎。例如，可以将细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物引入玻璃体腔中(例如，通过玻璃体内注射)，用于治疗遭受AMD或处于AMD风险中的受试者。在某些实施方案中，所述AMD是新生血管性(湿性)AMD。在某些实施方案中，所述AMD是干性AMD。本领域普通技术人员将理解，干性AMD包括地图样萎缩(GA)、中晚期AMD和早期AMD。在某些实施方案中，治疗患有GA的受试者以减缓或停止疾病的进展。例如，在某些实施方案中，治疗对患有GA的受试者能降低视网膜细胞死亡率。与对照组(例如，被给予假注射的患者)相比，用LACA治疗的患者中GA病灶生长速率的降低能证明视网膜细胞死亡率的降低。在某些实施方案中，受试者患有
中晚期AMD。在某些实施方案中，受试者患有早期AMD。在某些实施方案中，治疗患有中晚期或早期AMD的受试者以减缓或停止疾病的进展。例如，在某些实施方案中，治疗患有中晚期AMD的受试者可以减缓或阻止发展成晚期形式的AMD(新生血管性AMD或GA)。在某些实施方
案中，治疗患有早期AMD的受试者可以减缓或阻止发展成中晚期AMD。在某些实施方案中，眼睛同时患有GA和新生血管性AMD。在某些实施方案中，眼睛患有GA但不患有湿性AMD。在某些实施方案中，通过玻璃体内注射施用细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物，以治疗青光眼、葡萄膜炎(例如，后葡萄膜炎)或糖尿病视网膜病变。在某些实施方案中，将细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物引入前房中，例如，治疗前葡萄膜炎。
中晚期AMD。在某些实施方案中，受试者患有早期AMD。在某些实施方案中，治疗患有中晚期或早期AMD的受试者以减缓或停止疾病的进展。例如，在某些实施方案中，治疗患有中晚期AMD的受试者可以减缓或阻止发展成晚期形式的AMD(新生血管性AMD或GA)。在某些实施方
案中，治疗患有早期AMD的受试者可以减缓或阻止发展成中晚期AMD。在某些实施方案中，眼睛同时患有GA和新生血管性AMD。在某些实施方案中，眼睛患有GA但不患有湿性AMD。在某些实施方案中，通过玻璃体内注射施用细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物，以治疗青光眼、葡萄膜炎(例如，后葡萄膜炎)或糖尿病视网膜病变。在某些实施方案中，将细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物引入前房中，例如，治疗前葡萄膜炎。
[0428] 在某些实施方案中，使用细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物来治疗遭受自身免疫病(例如，至少部分地由针对一种或多种自身抗原的抗体介导的自身免疫病)
或处于所述自身免疫病风险中的受试者。
或处于所述自身免疫病风险中的受试者。
[0429] 可以将细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物引入例如遭受关节炎(例如，类风湿性关节炎)的受试者的滑液腔中。当然，可以另外全身性地施用它们。
[0430] 在某些实施方案中，使用细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物来治疗遭受脑内出血或处于脑内出血风险中的受试者。
[0431] 在某些实施方案中，使用细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物来治疗遭受重症肌无力或处于重症肌无力风险中的受试者。
[0432] 在某些实施方案中，使用细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物来治疗遭受视神经脊髓炎(NMO)或处于视神经脊髓炎风险中的受试者。
[0433] 在某些实施方案中，使用细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物来治疗遭受膜性增生性肾小球炎(MPGN)(例如，I型MPGN、II型MPGN或III型MPGH)或处于膜性增生
性肾小球炎风险中的受试者。
性肾小球炎风险中的受试者。
[0434] 在某些实施方案中，使用细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物来治疗遭受神经变性疾病或处于神经变性疾病风险中的受试者。在某些实施方案中，使用细胞反
应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物来治疗遭受神经性疼痛或处于神经性疼痛风险中
的受试者。在某些实施方案中，使用细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物来治疗遭受鼻及鼻窦炎或鼻息肉病或处于鼻及鼻窦炎或鼻息肉病风险中的受试者。在某些实施方
案中，使用细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物来治疗遭受癌症或处于癌症风
险中的受试者。在某些实施方案中，使用细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物来治疗遭受脓毒症或处于脓毒症风险中的受试者。在某些实施方案中，使用细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物来治疗遭受成人呼吸窘迫综合征或处于成人呼吸窘迫综合
征风险中的受试者。
应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物来治疗遭受神经性疼痛或处于神经性疼痛风险中
的受试者。在某些实施方案中，使用细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物来治疗遭受鼻及鼻窦炎或鼻息肉病或处于鼻及鼻窦炎或鼻息肉病风险中的受试者。在某些实施方
案中，使用细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物来治疗遭受癌症或处于癌症风
险中的受试者。在某些实施方案中，使用细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物来治疗遭受脓毒症或处于脓毒症风险中的受试者。在某些实施方案中，使用细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物来治疗遭受成人呼吸窘迫综合征或处于成人呼吸窘迫综合
征风险中的受试者。
[0435] 在某些实施方案中，使用细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物来治疗遭受过敏反应或输液反应或处于过敏反应或输液反应风险中的受试者。例如，在某些实施
方案中，可以在受试者接受可能造成过敏反应或输液反应的药物或媒介物之前、过程中或
之后，预处理所述受试者。在某些实施方案中，用细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物处理处于来自食品(例如，花生、贝类或其它食品变应原)、昆虫螫伤(例如，蜜蜂、黄蜂)的过敏反应的风险中或者遭受所述过敏反应的受试者。
方案中，可以在受试者接受可能造成过敏反应或输液反应的药物或媒介物之前、过程中或
之后，预处理所述受试者。在某些实施方案中，用细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物处理处于来自食品(例如，花生、贝类或其它食品变应原)、昆虫螫伤(例如，蜜蜂、黄蜂)的过敏反应的风险中或者遭受所述过敏反应的受试者。
[0436] 在本发明的不同实施方案中，可以局部地或全身性地施用细胞反应性的长效或靶向坎普他汀类似物。
[0437] 在某些实施方案中，使用细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物来治疗呼吸性疾病，例如，哮喘或慢性阻塞性肺疾病(COPD)或特发性肺纤维化。在不同的实施方案中，可以，例如，通过吸入(例如，作为干粉或经由喷雾)将细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物施用至呼吸道，或者可以通过注射(例如，静脉内、肌内或皮下)来施用。在某些实施方案中，使用细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物来治疗严重哮喘，例
如，用支气管扩张剂和/或吸入的皮质类固醇不足以控制的哮喘。
如，用支气管扩张剂和/或吸入的皮质类固醇不足以控制的哮喘。
[0438] 在某些方面，提供了治疗补体介导的障碍(例如，补体介导的慢性障碍)的方法，所述方法包括将长效补体抑制剂施用给需要治疗所述障碍的受试者。在多种实施方案中，所述长效坎普他汀类似物可以是本文所述的任意长效坎普他汀类似物。在某些方面，提供了
治疗Th17相关障碍的方法，所述方法包括将长效补体抑制剂施用给需要治疗所述障碍的受
试者。
治疗Th17相关障碍的方法，所述方法包括将长效补体抑制剂施用给需要治疗所述障碍的受
试者。
[0439] 在某些方面，“慢性障碍”是持续至少3个月和/或在本领域视为慢性障碍的障碍。在许多实施方案中，慢性障碍持续至少6个月，例如，至少1年，或更长，例如，无限期。本领域普通技术人员将认识到，多种慢性障碍的至少某些表现可以是间歇性的和/或严重性可能
随时间逐渐减弱。慢性障碍可以是渐进的，例如，随时间推移具有变得更为严重或影响更大面积的趋势。本文中讨论了许多补体介导的慢性障碍。补体介导的慢性障碍可以是涉及补
体激活(例如，过度的或不适当的补体激活)的任意慢性障碍，例如，作为促成的因素和/或至少部分诱导的因素。为方便起见，有时参考患有所述障碍的受试者中经常特别受影响的
器官或系统对障碍进行分组。应当理解，许多障碍能影响多个器官或系统，并且这样的分类不以任何方式限制。此外，许多表现(例如，症状)会发生于患有许多不同的障碍中的任一个的受试者中。关于本文的目的障碍的非限制性信息可以在，例如，标准的内科医学教科书
(例如，Cecil Textbook of Medicine(例如，第23版)、Harrison's Principles of
Internal Medicine(例如，第17版)，和/或侧重于特定的医学领域、特定的身体系统或器官和/或特定的障碍的标准教科书中找到。
随时间逐渐减弱。慢性障碍可以是渐进的，例如，随时间推移具有变得更为严重或影响更大面积的趋势。本文中讨论了许多补体介导的慢性障碍。补体介导的慢性障碍可以是涉及补
体激活(例如，过度的或不适当的补体激活)的任意慢性障碍，例如，作为促成的因素和/或至少部分诱导的因素。为方便起见，有时参考患有所述障碍的受试者中经常特别受影响的
器官或系统对障碍进行分组。应当理解，许多障碍能影响多个器官或系统，并且这样的分类不以任何方式限制。此外，许多表现(例如，症状)会发生于患有许多不同的障碍中的任一个的受试者中。关于本文的目的障碍的非限制性信息可以在，例如，标准的内科医学教科书
(例如，Cecil Textbook of Medicine(例如，第23版)、Harrison's Principles of
Internal Medicine(例如，第17版)，和/或侧重于特定的医学领域、特定的身体系统或器官和/或特定的障碍的标准教科书中找到。
[0440] 在某些实施方案中，补体介导的慢性障碍是Th2相关障碍。本文中所使用的Th2相关障碍，其特征在于在体内或其一部分(例如，在至少一种组织、器官或结构中)中，Th2亚型的CD4+辅助性T细胞(“Th2细胞”)过量和/或过度的或不适当的活性。例如，在例如，受障碍影响的至少一种组织、器官或结构中，Th2细胞相对于Th1亚型的CD4+辅助性T细胞(“Th1细胞”)可能更具有优势。如本领域已知的，Th2细胞通常分泌特征性的细胞因子例如白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-5(IL-5)和白细胞介素-13(IL-13)，而Th1细胞通常分泌干扰素-
γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子(TNFβ)。在某些实施方案中，Th2相关障碍的特征在于，在至少一种组织、器官或结构中，例如，相对于IFN-γ和/或TNFβ，IL-4、IL-5和/或IL-13的过度的生产和/或量。
γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子(TNFβ)。在某些实施方案中，Th2相关障碍的特征在于，在至少一种组织、器官或结构中，例如，相对于IFN-γ和/或TNFβ，IL-4、IL-5和/或IL-13的过度的生产和/或量。
[0441] 在某些实施方案中，补体介导的慢性障碍是Th17相关障碍。在某些方面，如在2012年6月22日提交的命名为“Methods of Treating Chronic Disorders with Complement Inhibitors”的PCT/US2012/043845中的进一步详细描述的，补体激活和Th17细胞参与涉及树突状细胞和抗体和促成对引起一系列障碍的病理免疫微环境的维持的周期。不希望受任
何理论约束，所述病理免疫微环境一旦确立，便是自我维持的并且促成细胞和组织损伤。在某些方面，长效坎普他汀类似物用于治疗Th17相关障碍。
何理论约束，所述病理免疫微环境一旦确立，便是自我维持的并且促成细胞和组织损伤。在某些方面，长效坎普他汀类似物用于治疗Th17相关障碍。
[0442] 本文中所使用的Th17相关障碍的特征在于在体内或其一部分(例如，在至少一种组织、器官或结构中)中，Th17亚型的CD4+辅助性T细胞(“Th17细胞”)过量和/或有过度的或不适当的活性。例如，在例如，受障碍影响的至少一种组织、器官或结构中，Th17细胞相对于Th1和/或Th2细胞可能更具有优势。在某些实施方案中，Th17细胞的优势是相对的优势，例如，Th17细胞对Th1细胞的比和/或Th17细胞对Th2细胞的比，相对于正常值是升高的。在某些实施方案中，Th17对调节性T细胞(CD4+CD25+调节性T细胞，也称作“Treg细胞”)的比，相对于正常值是升高的。多种细胞因子，例如，白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素21(IL-21)、白细胞介素23(IL-23)和/或白细胞介素1β(IL-1β)，促进了Th17细胞的形成和/或Th17细胞的激活。Th17细胞的形成包括前体T细胞，例如，初始CD4+T细胞，向Th17表型的分化及其成熟为功能性Th17细胞。在某些实施方案中，Th17细胞的形成包括Th17细胞的发育、增殖(扩张)、存活和/或成熟的任意方面。在某些实施方案中，Th17相关障碍的特征在于IL-6、IL-21、IL-
23和/或IL-1β的过度的产生和/或量。Th17细胞通常分泌特征性的细胞因子例如白细胞介
素-17A(IL-17A)、白细胞介素-17F(IL-17F)、白细胞介素-21(IL-21)和白细胞介素-22(IL-
22)。在某些实施方案中，Th17相关障碍的特征在于Th17效应细胞因子，例如，IL-17A、IL-
17F、IL-21和/或IL-22的过度的产生和/或量。在某些实施方案中，在血液中可检测到细胞因子的过度的产生或量。在某些实施方案中，例如，在至少一种组织、器官或结构中，局部地检测到细胞因子的过度的产生或量。在某些实施方案中，Th17相关障碍与Treg降低的数量
和/或Treg相关细胞因子的降低的量有关。在某些实施方案中，Th17障碍是任意慢性炎症疾病，该术语包括，该一系列病症的特征在于对多种组织的自我持续的免疫损伤，并且其似乎与引起所述病症的初始损伤相分离(其可以是未知的)。在某些实施方案中，Th17相关障碍
是任意自身免疫疾病。就算不是大多数，也有很多“慢性炎症疾病”实际上可能是自身免疫疾病。Th17相关障碍的例子包括炎性皮肤病(例如银屑病和特应性皮炎)、系统性硬皮病和
硬化症、炎性肠病(IBD)(例如克罗恩病和溃疡性结肠炎)、白塞氏病、皮肌炎、多发性肌炎、多发性硬化症(MS)、皮炎、脑膜炎、脑炎、葡萄膜炎、骨关节炎、狼疮性肾炎、类风湿关节炎(RA)、Sjorgen综合征、多发性硬化症、血管炎、中枢神经系统(CNS)炎性障碍、慢性肝炎、慢性胰腺炎、肾小球肾炎、结节病、甲状腺炎、对组织/器官移植的病理性免疫应答(例如，移植排斥)、慢性阻塞性肺病(COPD)、哮喘、支气管炎、过敏性肺炎、特发性肺纤维化(IPF)、牙周炎和齿龈炎。在某些实施方案中，Th17疾病是已知的经典的自身免疫疾病例如I型糖尿病或牛皮癣。在某些实施方案中，Th17相关障碍是年龄相关的黄斑变性病。
23和/或IL-1β的过度的产生和/或量。Th17细胞通常分泌特征性的细胞因子例如白细胞介
素-17A(IL-17A)、白细胞介素-17F(IL-17F)、白细胞介素-21(IL-21)和白细胞介素-22(IL-
22)。在某些实施方案中，Th17相关障碍的特征在于Th17效应细胞因子，例如，IL-17A、IL-
17F、IL-21和/或IL-22的过度的产生和/或量。在某些实施方案中，在血液中可检测到细胞因子的过度的产生或量。在某些实施方案中，例如，在至少一种组织、器官或结构中，局部地检测到细胞因子的过度的产生或量。在某些实施方案中，Th17相关障碍与Treg降低的数量
和/或Treg相关细胞因子的降低的量有关。在某些实施方案中，Th17障碍是任意慢性炎症疾病，该术语包括，该一系列病症的特征在于对多种组织的自我持续的免疫损伤，并且其似乎与引起所述病症的初始损伤相分离(其可以是未知的)。在某些实施方案中，Th17相关障碍
是任意自身免疫疾病。就算不是大多数，也有很多“慢性炎症疾病”实际上可能是自身免疫疾病。Th17相关障碍的例子包括炎性皮肤病(例如银屑病和特应性皮炎)、系统性硬皮病和
硬化症、炎性肠病(IBD)(例如克罗恩病和溃疡性结肠炎)、白塞氏病、皮肌炎、多发性肌炎、多发性硬化症(MS)、皮炎、脑膜炎、脑炎、葡萄膜炎、骨关节炎、狼疮性肾炎、类风湿关节炎(RA)、Sjorgen综合征、多发性硬化症、血管炎、中枢神经系统(CNS)炎性障碍、慢性肝炎、慢性胰腺炎、肾小球肾炎、结节病、甲状腺炎、对组织/器官移植的病理性免疫应答(例如，移植排斥)、慢性阻塞性肺病(COPD)、哮喘、支气管炎、过敏性肺炎、特发性肺纤维化(IPF)、牙周炎和齿龈炎。在某些实施方案中，Th17疾病是已知的经典的自身免疫疾病例如I型糖尿病或牛皮癣。在某些实施方案中，Th17相关障碍是年龄相关的黄斑变性病。
[0443] 在某些实施方案中，补体介导的慢性障碍是IgE相关障碍。本文中使用的“IgE相关障碍”是这样的障碍的特征在于过量的IgE和/或不适当的IgE的产生和/或量、过量的IgE生成细胞和/或其不适当的活性(例如，生成IgE的B细胞或血浆细胞)和/或过量的IgE应答细胞如嗜酸性粒细胞或肥大细胞和/或其不适当的活性。在某些实施方案中，IgE相关障碍的
特征在于总IgE的升高和/或在某些实施方案中，变应原特异性IgE，在受试者血浆中和/或
在局部的水平的上升。
特征在于总IgE的升高和/或在某些实施方案中，变应原特异性IgE，在受试者血浆中和/或
在局部的水平的上升。
[0444] 在某些实施方案中，补体介导的慢性障碍的特征在于在体内存在自身抗体和/或免疫复合物，所述自身抗体和免疫复合物可以经由，例如，经典途径，激活补体。自身抗体可以，例如，结合自身抗原(例如，在体内的细胞或组织上的自身抗原)。在某些实施方案中，自身抗体在血管内、皮肤内、神经内、肌肉内、结缔组织内、心脏内、肾内、甲状腺内等结合抗原。在某些实施方案中，受试者患有视神经脊髓炎并产生针对水通道蛋白4的自身抗体(例
如，IgG自身抗体)。在某些实施方案中，受试者患有类天疱疮并产生针对半桥粒的结构组分(例如，跨膜胶原蛋白XVII(BP180或BPAG2)和/或珀金氏家族蛋白质BP230(BPAG1)的自身抗
体(例如，IgG或IgE自身抗体)。在某些实施方案中，补体介导的慢性病症不具有自身抗体
和/或免疫复合物特征。
如，IgG自身抗体)。在某些实施方案中，受试者患有类天疱疮并产生针对半桥粒的结构组分(例如，跨膜胶原蛋白XVII(BP180或BPAG2)和/或珀金氏家族蛋白质BP230(BPAG1)的自身抗
体(例如，IgG或IgE自身抗体)。在某些实施方案中，补体介导的慢性病症不具有自身抗体
和/或免疫复合物特征。
[0445] 在某些实施方案中，补体介导的慢性障碍是呼吸障碍。在某些实施方案中，慢性呼吸障碍是哮喘或慢性阻塞性肺疾病(COPD)。在某些实施方案中，慢性呼吸障碍是肺纤维化(例如，特发性肺纤维化)、辐射诱发的肺损伤、过敏性支气管肺曲霉病、过敏性肺炎(也称为过敏性肺泡炎)、嗜酸细胞性肺炎、间质性肺炎、结节病、韦格纳肉芽肿病或闭塞性细支气管炎。在某些实施方案中，本发明提供了一种治疗需要治疗慢性呼吸障碍(例如，哮喘、COPD、肺纤维化、辐射诱发的肺损伤、过敏性支气管肺曲霉病、过敏性肺炎(也称为过敏性肺泡
炎)、嗜酸细胞性肺炎、间质性肺炎、结节病、韦格纳肉芽肿病或闭塞性细支气管炎)的受试者的方法，所述方法包括施用长效补体抑制剂给需要治疗所述障碍的受试者。
炎)、嗜酸细胞性肺炎、间质性肺炎、结节病、韦格纳肉芽肿病或闭塞性细支气管炎)的受试者的方法，所述方法包括施用长效补体抑制剂给需要治疗所述障碍的受试者。
[0446] 在某些实施方案中，补体介导的慢性障碍是过敏性鼻炎、鼻窦炎或鼻息肉。在某些实施方案中，本发明提供了一种治疗需要治疗过敏性鼻炎、鼻窦炎或鼻息肉的受试者的方法，所述方法包括施用长效补体抑制剂给需要治疗所述障碍的受试者。
[0447] 在某些实施方案中，补体介导的慢性障碍是影响肌肉骨骼系统的障碍。这样的障碍的例子包括炎性关节疾病(例如，关节炎如类风湿性关节炎或银屑病关节炎、幼年型慢性关节炎、脊椎关节病赖特综合征、痛风)。在某些实施方案中，肌肉骨骼系统障碍导致例如疼痛、僵硬和/或所受影响的身体部位运动受限的症状：。炎性肌病包括皮肌炎、多发性肌炎以及其它各种病因不明的、能导致肌无力的慢性肌炎症性障碍。在某些实施方案中，补体介导的慢性病症是重症肌无力。在某些实施方案中，本发明提供了治疗影响肌肉骨骼系统的任
意前述障碍的方法，所述方法包括施用长效补体抑制剂给需要治疗所述障碍的受试者。
意前述障碍的方法，所述方法包括施用长效补体抑制剂给需要治疗所述障碍的受试者。
[0448] 在某些实施方案中，补体介导的慢性障碍是影响皮肤系统的障碍。这样的障碍的例子包括，例如，特应性皮炎、银屑病、类天疱疮、天疱疮、系统性红斑狼疮、皮肌炎、硬皮病、硬化性皮肌炎、干燥综合征和慢性荨麻疹。在某些方面，本发明提供了治疗影响皮肤系统的任意前述障碍的方法，所述方法包括施用长效补体抑制剂给需要治疗所述障碍的受试者。
[0449] 在某些实施方案中，补体介导的慢性障碍影响神经系统，例如，中枢神经系统(CNS)和/或外周神经系统(PNS)。这样的障碍的例子包括，例如，多发性硬化症、其它慢性脱髓鞘疾病(例如，视神经脊髓炎)、肌萎缩性侧索硬化、慢性痛、中风、过敏性神经炎、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病和帕金森氏病。在某些实施方案中，本发明提供了治疗影响神经系统的任意前述病症的方法，所述方法包括施用补体抑制剂(例如，长效的、靶向的或细胞反应性的坎普他汀类似物)给需要治疗所述病症的受试者。
[0450] 在某些实施方案中，补体介导的慢性障碍影响循环系统。例如，在某些实施方案中，所述障碍是血管炎或与其它与血管炎症(例如，血管炎和/或淋巴管炎)相关的障碍。在某些实施方案中，血管炎是结节性多动脉炎、韦格内肉芽肿、巨细胞动脉炎、Churg-Strauss综合征、显微镜下多血管炎、过敏性紫癜、大动脉炎、川崎病或白塞氏病。在某些实施方案中，受试者，例如，需要治疗血管炎的受试者，针对抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)是阳性的。
[0451] 在某些实施方案中，补体介导的慢性障碍影响肠胃系统。例如，所述障碍可以是炎性肠病，例如，克罗恩病或溃疡性结肠炎。在某些实施方案中，本发明提供了治疗影响肠胃系统的补体介导的慢性障碍的方法，所述方法包括施用长效补体抑制剂给需要治疗所述障碍的受试者。
[0452] 在某些实施方案中，补体介导的慢性障碍是甲状腺炎(例如，桥本甲状腺炎、格雷夫斯病、产后甲状腺炎)、心肌炎、肝炎(例如，丙肝)、胰腺炎、肾炎(例如，膜增生性肾炎或膜性肾小球肾炎)或脂膜炎。
[0453] 在某些实施方案中，本发明提供了治疗患有慢性疼痛的受试者的方法，所述方法包括施用长效补体抑制剂给需要其的受试者。在某些实施方案中，受试者患有神经性疼痛。
神经性疼痛已被定义为由神经系统中的原发性损伤或机能障碍引发或引起的疼痛，特别是
作为影响体感系统的损伤或疾病的直接后果而发生的疼痛。例如，神经性疼痛可能起因于
涉及在外周神经中破坏小纤维和/或在CNS中破坏脊髓-丘脑皮层系统的体感通路的损伤。
在某些实施方案中，神经性疼痛起因于自身免疫性疾病(例如，多发性硬化症)、代谢疾病
(例如，糖尿病)、感染(例如，病毒性疾病如带状疱疹或HIV)、血管疾病(例如，中风)、创伤(例如，损伤、外科手术)或癌症。例如，神经性疼痛可以是在损伤愈合之后或是停止刺激周围神经末梢的之后持续存在的疼痛，或是由于神经损害而发生的疼痛。神经性疼痛病症或
相关的病症的示例包括疼痛性糖尿病神经病变、疱疹后神经痛(例如，在急性发作后的3个
月或更多个月在急性带状疱疹部位持续的或反复发作的疼痛)、三叉神经痛、癌症相关的神经性疼痛、化疗相关的神经性疼痛、HIV相关的神经性疼痛(例如，源自HIV神经病)、中风中/中风后的神经性疼痛、背部疼痛相关的神经病变(例如，腰痛(例如，源自神经根病如脊神经根压迫，例如，腰椎根压迫，该压迫可能是由于椎间盘突出))、椎管狭窄、外周神经损伤疼痛、幻肢痛、多发性神经病、脊髓损伤相关的疼痛、脊髓病和多发性硬化症。在本发明的某些实施方案中，根据发明性的给药方案，在患有一种或多种前述病症的受试者中施用补体抑
制剂以治疗神经性疼痛。
神经性疼痛已被定义为由神经系统中的原发性损伤或机能障碍引发或引起的疼痛，特别是
作为影响体感系统的损伤或疾病的直接后果而发生的疼痛。例如，神经性疼痛可能起因于
涉及在外周神经中破坏小纤维和/或在CNS中破坏脊髓-丘脑皮层系统的体感通路的损伤。
在某些实施方案中，神经性疼痛起因于自身免疫性疾病(例如，多发性硬化症)、代谢疾病
(例如，糖尿病)、感染(例如，病毒性疾病如带状疱疹或HIV)、血管疾病(例如，中风)、创伤(例如，损伤、外科手术)或癌症。例如，神经性疼痛可以是在损伤愈合之后或是停止刺激周围神经末梢的之后持续存在的疼痛，或是由于神经损害而发生的疼痛。神经性疼痛病症或
相关的病症的示例包括疼痛性糖尿病神经病变、疱疹后神经痛(例如，在急性发作后的3个
月或更多个月在急性带状疱疹部位持续的或反复发作的疼痛)、三叉神经痛、癌症相关的神经性疼痛、化疗相关的神经性疼痛、HIV相关的神经性疼痛(例如，源自HIV神经病)、中风中/中风后的神经性疼痛、背部疼痛相关的神经病变(例如，腰痛(例如，源自神经根病如脊神经根压迫，例如，腰椎根压迫，该压迫可能是由于椎间盘突出))、椎管狭窄、外周神经损伤疼痛、幻肢痛、多发性神经病、脊髓损伤相关的疼痛、脊髓病和多发性硬化症。在本发明的某些实施方案中，根据发明性的给药方案，在患有一种或多种前述病症的受试者中施用补体抑
制剂以治疗神经性疼痛。
[0454] 在某些实施方案中，补体介导的慢性障碍是慢性眼障碍。在某些实施方案中，所述慢性眼障碍的特征为黄斑变性、脉络膜新生血管(CNV)、视网膜新生血管(RNV)、眼部炎症或上述的任意组合。黄斑变性、CNV、RNV和/或眼部炎症可能是所述障碍的定义性和/或诊断性特征。以这些特征的一个或多个为特征的示例性障碍包括，但不限于，黄斑变性相关的病症、糖尿病性视网膜病、早产儿视网膜病、增殖性玻璃体变、葡萄膜炎、角膜炎、结膜炎和巩膜炎。黄斑变性相关的病症包括，例如，年龄相关性黄斑变性(AMD)。在某些实施方案中，受试者需要治疗湿性AMD。在某些实施方案中，受试者需要治疗干性AMD。在某些实施方案中，受试者需要治疗地图状萎缩(GA)。在某些实施方案中，受试者需要治疗眼部炎症。眼部炎症可以影响大部分眼结构例如结膜(结膜炎)、角膜(角膜炎)、巩膜外层、巩膜(巩膜炎)、葡萄膜、视网膜、血管系统和/或视神经。眼部炎症的证据可以包括在眼内存在炎症相关的细胞如白血细胞(例如，嗜中性粒细胞、巨噬细胞)、存在内源性炎症介质、一种或多种以下症状：
例如眼痛、发红、光敏感、视力模糊和飞蚊症等。葡萄膜炎是通用术语，表示在眼葡萄膜中，例如，在葡萄膜的任意结构(包括虹膜、睫状体和脉络膜)中，存在炎症。葡萄膜炎的具体类型包括虹膜炎、虹膜睫状体炎、睫状体炎、睫状体平坦部炎和脉络膜炎。在某些实施方案中，受试者需要治疗地图状萎缩(GA)。在某些实施方案中，所述慢性眼障碍是以视神经损伤(例如，视神经病变)为特征的眼障碍，例如青光眼。
例如眼痛、发红、光敏感、视力模糊和飞蚊症等。葡萄膜炎是通用术语，表示在眼葡萄膜中，例如，在葡萄膜的任意结构(包括虹膜、睫状体和脉络膜)中，存在炎症。葡萄膜炎的具体类型包括虹膜炎、虹膜睫状体炎、睫状体炎、睫状体平坦部炎和脉络膜炎。在某些实施方案中，受试者需要治疗地图状萎缩(GA)。在某些实施方案中，所述慢性眼障碍是以视神经损伤(例如，视神经病变)为特征的眼障碍，例如青光眼。
[0455] 如上面所指出的，在某些实施方案中，所述慢性呼吸疾病是哮喘。关于风险因素、流行病学、发病机制、诊断、目前对哮喘的管理等的信息可在，例如，"Expert Panel Report 3:Guidelines for the Diagnosis and Management of Asthma".National Heart Lung
and Blood Institute.2007.http://www.nhlbi.nih.gov/guidelines/asthma/
asthgdln.pdf.(“NHLBI Guidelines”；www.nhlbi.nih.gov/guidelines/asthma/
asthgdln.htm),Global Initiative for Asthma,Global Strategy for Asthma
Management and Prevention 2010“GINA Report”)和/或内科医学的标准教材例如Cecil Textbook of Medicine(第20版),Harrison's Principles of Internal Medicine17版)
和/或侧重于肺医学的标准教材中找到。哮喘是慢性的气道炎性障碍，在所述哮喘中许多细胞和细胞元件发挥作用，例如，肥大细胞、嗜酸性粒细胞、T淋巴细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和上皮细胞。哮喘的个体经历与症状相关的反复发作，例如气喘、气绝(也称为呼吸困难或呼吸急促)、胸闷和咳嗽。这些发作通常与分布广泛但可变的气流阻塞相关，所述气流阻塞往往是自发可逆的或经治疗可逆的。所述炎症还导致现有的针对多种刺激的支气管高反应
性的相关增强。气道高反应性(针对刺激的过大的支气管收缩反应)是哮喘的典型特征。一
般而言，气流受限源于支气管收缩和气道水肿。在某些患有哮喘的患者中，气流受限的可逆性可以是不完全的。例如，气道重塑会导致固定化的气道变窄。结构变化可以包括亚基底膜增稠、皮下纤维化、气道平滑肌肥大增生、血管增生和扩张以及粘膜腺体增生和分泌过多。
and Blood Institute.2007.http://www.nhlbi.nih.gov/guidelines/asthma/
asthgdln.pdf.(“NHLBI Guidelines”；www.nhlbi.nih.gov/guidelines/asthma/
asthgdln.htm),Global Initiative for Asthma,Global Strategy for Asthma
Management and Prevention 2010“GINA Report”)和/或内科医学的标准教材例如Cecil Textbook of Medicine(第20版),Harrison's Principles of Internal Medicine17版)
和/或侧重于肺医学的标准教材中找到。哮喘是慢性的气道炎性障碍，在所述哮喘中许多细胞和细胞元件发挥作用，例如，肥大细胞、嗜酸性粒细胞、T淋巴细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和上皮细胞。哮喘的个体经历与症状相关的反复发作，例如气喘、气绝(也称为呼吸困难或呼吸急促)、胸闷和咳嗽。这些发作通常与分布广泛但可变的气流阻塞相关，所述气流阻塞往往是自发可逆的或经治疗可逆的。所述炎症还导致现有的针对多种刺激的支气管高反应
性的相关增强。气道高反应性(针对刺激的过大的支气管收缩反应)是哮喘的典型特征。一
般而言，气流受限源于支气管收缩和气道水肿。在某些患有哮喘的患者中，气流受限的可逆性可以是不完全的。例如，气道重塑会导致固定化的气道变窄。结构变化可以包括亚基底膜增稠、皮下纤维化、气道平滑肌肥大增生、血管增生和扩张以及粘膜腺体增生和分泌过多。
[0456] 患有哮喘的个体可能经历恶化，所述恶化以特征为与所述个体先前的状态发生改变的事件而被鉴定出。严重的哮喘恶化可以被定义成需要在所述个体的所述部位上采取紧
急措施并需要他/她的医生以预防严重的结果，例如住院或因哮喘死亡的事件。例如，严重的哮喘恶化可能需要在受试者上使用系统性皮质类固醇(例如，口服皮质类固醇)，所述受
试者的哮喘通常在没有OCS的情况下得到很好地控制；或者可能需要增加稳定的维持剂量。
中度哮喘恶化可被定义为对于所述受试者是棘手的，并且需要改变治疗，但其并不严重的
事件。这些事件在临床上被鉴定为在所述受试者通常的日常哮喘变化范围之外。
急措施并需要他/她的医生以预防严重的结果，例如住院或因哮喘死亡的事件。例如，严重的哮喘恶化可能需要在受试者上使用系统性皮质类固醇(例如，口服皮质类固醇)，所述受
试者的哮喘通常在没有OCS的情况下得到很好地控制；或者可能需要增加稳定的维持剂量。
中度哮喘恶化可被定义为对于所述受试者是棘手的，并且需要改变治疗，但其并不严重的
事件。这些事件在临床上被鉴定为在所述受试者通常的日常哮喘变化范围之外。
[0457] 目前用于哮喘的药物通常分为两大类：用于达到和维持对持久哮喘的控制的长期控制药物(“控制药”)例如吸入性糖皮质激素(ICS)、口服皮质类固醇(OCS)、长效支气管扩张剂(LABA)、白三烯改性剂(例如，白三烯受体拮抗剂或白三烯合成抑制剂、抗IgE抗体(奥马珠单抗 )、色甘酸钠和奈多罗米，和用于治疗急性症状和恶化的快速缓解药物
如短效支气管扩张剂(SABA)。对于本发明的目的，这些治疗可被示为“常规疗法”。对恶化的治疗也可以包括增加控制药物治疗的剂量和/或强度。例如，可以使用OCS疗程重获对哮喘
的控制。对于患有持久哮喘的受试者，目前的指南强制每天施用控制药物，或者在许多情况下，每天施用多次剂量的控制药物(除Xolair之外，其为每2周或每4周施用)。
如短效支气管扩张剂(SABA)。对于本发明的目的，这些治疗可被示为“常规疗法”。对恶化的治疗也可以包括增加控制药物治疗的剂量和/或强度。例如，可以使用OCS疗程重获对哮喘
的控制。对于患有持久哮喘的受试者，目前的指南强制每天施用控制药物，或者在许多情况下，每天施用多次剂量的控制药物(除Xolair之外，其为每2周或每4周施用)。
[0458] 如果受试者每周平均遭受多于两次的症状和/或通常每周使用多于两次的快速缓解药物(例如，SABA)用于控制症状，则一般考虑所述受试者患有持久哮喘。一旦已治疗相关的合并症并且已优化吸入器技术和粘附，可基于控制所述受试者的哮喘所需要的治疗强度
分类“哮喘严重程度”(参见，例如，GINA Report；Taylor,DR,Eur Respir J 2008；32:545-
554)。治疗强度的描述可基于分步治疗算法中建议的药物和剂量，所述分步治疗算法可在
例如NHLBI Guidelines 2007、GINA Report和其前身等指南中和/或在标准医学教科中找
到。例如，如表X中所示，可将哮喘分为间歇性哮喘、轻度哮喘、中度哮喘或重度哮喘，其中“治疗”表示足以在受试者上达到最好的哮喘控制水平的治疗。(应当理解，一般而言，哮喘的轻度、中度和重度的类别暗示持久的、而非间歇性的哮喘)。本领域普通技术人员将认识到，表X是示例性的，并且并非在所有的医疗保健系统中都能获得所有的这些药物，这在某些环境中可能会影响对哮喘严重程度的评估。还将认识到，其它新兴的或新的方案可能会
影响对轻度/中度哮喘的分类。然而，仍然可以应用相同的原理，将轻度哮喘定义为能使用非常低强度的治疗达到较好的控制以及将重度哮喘定义为需要高强度的治疗。也可以或者
可替代地，在基于所述疾病在没有治疗的情况下的固有强度对哮喘严重程度进行分类(参
见，例如，NHBLI Guidelines 2007)。可在当前的肺功能检查和在前2-4周内该患者对症状的回忆的基础上进行评估。可评估当前损害和未来风险的参数，并包括进对哮喘严重程度
的确定过程。在某些实施方案中，对于0-4岁、5-11岁或>12岁年龄的个体，分别如NHBLI
Guidelines中的图3.4(a)、3.4(b)、3.4(c)中所示，定义哮喘的严重度。
分类“哮喘严重程度”(参见，例如，GINA Report；Taylor,DR,Eur Respir J 2008；32:545-
554)。治疗强度的描述可基于分步治疗算法中建议的药物和剂量，所述分步治疗算法可在
例如NHLBI Guidelines 2007、GINA Report和其前身等指南中和/或在标准医学教科中找
到。例如，如表X中所示，可将哮喘分为间歇性哮喘、轻度哮喘、中度哮喘或重度哮喘，其中“治疗”表示足以在受试者上达到最好的哮喘控制水平的治疗。(应当理解，一般而言，哮喘的轻度、中度和重度的类别暗示持久的、而非间歇性的哮喘)。本领域普通技术人员将认识到，表X是示例性的，并且并非在所有的医疗保健系统中都能获得所有的这些药物，这在某些环境中可能会影响对哮喘严重程度的评估。还将认识到，其它新兴的或新的方案可能会
影响对轻度/中度哮喘的分类。然而，仍然可以应用相同的原理，将轻度哮喘定义为能使用非常低强度的治疗达到较好的控制以及将重度哮喘定义为需要高强度的治疗。也可以或者
可替代地，在基于所述疾病在没有治疗的情况下的固有强度对哮喘严重程度进行分类(参
见，例如，NHBLI Guidelines 2007)。可在当前的肺功能检查和在前2-4周内该患者对症状的回忆的基础上进行评估。可评估当前损害和未来风险的参数，并包括进对哮喘严重程度
的确定过程。在某些实施方案中，对于0-4岁、5-11岁或>12岁年龄的个体，分别如NHBLI
Guidelines中的图3.4(a)、3.4(b)、3.4(c)中所示，定义哮喘的严重度。
[0459] 表X：基于治疗的哮喘分类
[0460]
[0461]
[0462] “'哮喘控制”表示通过治疗(不论是药物的或非药物的)已经减少或去除了哮喘的表现的程度。可以基于以下因素评估哮喘控制：例如症状频率、夜间症状、肺功能的客观量度如肺量计参数(例如，预测的FEV 1％、FEV 1变化性、用于症状控制而需要使用SABA。可评估当前损害和未来风险的参数，并包括进对哮喘控制水平的确定过程。在某些实施方案中，对于0-4岁、5-11岁或>12岁年龄的个体，分别如NHBLI Guidelines中的图4.3(a)、4.3(b)、
4.3(c)中所示，定义哮喘控制。
4.3(c)中所示，定义哮喘控制。
[0463] 一般而言，本领域普通技术人员可以选择适当的方式确定哮喘的严重程度和/或控制水平，并且可使用本领域的那些普通技术人员认为合理的任意分类方案。
[0464] 在本发明的某些实施方案中，使用本发明的给药方案，用补体抑制剂治疗患有持久性哮喘的受试者。在某些实施方案中，所述受试者患有轻度或中度哮喘。在某些实施方案中，所述受试者患有重度哮喘。在某些实施方案中，受试者患有的哮喘不能用常规治疗很好的控制。在某些实施方案中，当用常规治疗进行治疗时，需要使用ICS以较好的控制受试者患有的哮喘。在某些实施方案中，尽管使用了ICS，还是不能较好地控制受试者患有的哮喘。
在某些实施方案中，若使用常规疗法进行治疗，将需要使用OCS以较好地控制受试者患有的哮喘。在某些实施方案中，尽管使用了高强度的包括OCS的常规治疗，还是不能较好地控制受试者患有的哮喘。在本发明的某些实施方案中，将长效补体抑制剂作为控制药物进行施
用或允许所述受试者避免使用常规控制药物或减少常规控制药物的剂量。
在某些实施方案中，若使用常规疗法进行治疗，将需要使用OCS以较好地控制受试者患有的哮喘。在某些实施方案中，尽管使用了高强度的包括OCS的常规治疗，还是不能较好地控制受试者患有的哮喘。在本发明的某些实施方案中，将长效补体抑制剂作为控制药物进行施
用或允许所述受试者避免使用常规控制药物或减少常规控制药物的剂量。
[0465] 在某些实施方案中，所述受试者患有过敏性哮喘，其是大多数哮喘个体的情况。在某些实施方案中，如果针对哮喘的非过敏触发源(例如，冷、锻炼)是未知的和/或没有在标准诊断评估中鉴别，则考虑哮喘的受试者患有过敏性哮喘。在某些实施方案中，如果受试者(i)在暴露于过敏原或该受试者所敏感的过敏原之后，重复地发展出哮喘症状(或哮喘症状恶化)；(ii)表现出特异性针对过敏原或该受试者所敏感的过敏原的IgE；(iii)针对过敏原或所述受试者所敏感的过敏原，表现出阳性的皮肤点刺试验；和/或(iv)表现出其它与特应性疾病一致的特征性症状，例如过敏性鼻炎、湿疹或血清总IgE的升高，则考虑所述哮喘的受试者患有过敏性哮喘。应该认识到，如果，例如，所述受试者在特定的环境中经历症状恶化，可能鉴别不出特异性的过敏触发源，但可以对其进行怀疑或推断。
[0466] 吸入性的过敏原刺激是广泛用于评估过敏性气道疾病的技术。过敏原的吸入导致与IgE受体结合的过敏原特异性的IgE在例如，肥大细胞和嗜碱性粒细胞上交联。分泌途径
的激活随之而来，导致释放支气管收缩和血管通透性介质的释放。患有过敏性哮喘的个体
可能在过敏原刺激之后发展出多种表现，例如，早期哮喘反应(EAR)、迟发型哮喘反应
(LAR)、气道高反应性(AHR)和气道嗜酸性粒细胞增多，其每个可如本领域已知的那样被检
测和定量。例如，气道嗜酸性粒细胞增多可能通过痰和/或BAL液中嗜酸性粒细胞增多而检
测出。EAR，有时也被称为速发型哮喘反应(IAR)，是对吸入性过敏原的应答，其在吸入后不久(通常在吸入的10分钟之内)可通过例如，FEV1的减弱而检测出。所述EAR通常在30min内
达到最大值，并在刺激后2-3小时内消失。例如，在这个时间窗口期内，如果他/她的FEV1相对于基线FEV1(其中此处的“基线”表示在所述刺激之前的情况，例如，与所述受试者未经历哮喘恶化和未暴露于所述受试者所敏感的过敏性刺激时的惯常情况相当的情况)减少了至
少15％，例如，至少20％，可考虑所述受试者表现出“阳性的”EAR。晚期哮喘反应(LAR)通常始于刺激之后的3h至8h，并且其特征在于气道的细胞炎症、支气管血管渗透性的增强和粘
液分泌。其通常通过FEV1的减弱而检测出，该减弱可能在幅度上大于与所述EAR相关的减弱并且潜在地，可能在临床上更重要。例如，在所述相关时间窗口期内，如果他/她的FEV1相对于基线FEV1减少了至少15％，例如，至少20％，可考虑所述受试者表现出“阳性的”LAR。迟发气道反应(DAR)可能始发于刺激之后的约26至32h，在约32至48h间达到最大值，并在约56h
内消失(Pelikan,Z.Ann Allergy Asthma Immunol.2010,104(5):394-404)。
的激活随之而来，导致释放支气管收缩和血管通透性介质的释放。患有过敏性哮喘的个体
可能在过敏原刺激之后发展出多种表现，例如，早期哮喘反应(EAR)、迟发型哮喘反应
(LAR)、气道高反应性(AHR)和气道嗜酸性粒细胞增多，其每个可如本领域已知的那样被检
测和定量。例如，气道嗜酸性粒细胞增多可能通过痰和/或BAL液中嗜酸性粒细胞增多而检
测出。EAR，有时也被称为速发型哮喘反应(IAR)，是对吸入性过敏原的应答，其在吸入后不久(通常在吸入的10分钟之内)可通过例如，FEV1的减弱而检测出。所述EAR通常在30min内
达到最大值，并在刺激后2-3小时内消失。例如，在这个时间窗口期内，如果他/她的FEV1相对于基线FEV1(其中此处的“基线”表示在所述刺激之前的情况，例如，与所述受试者未经历哮喘恶化和未暴露于所述受试者所敏感的过敏性刺激时的惯常情况相当的情况)减少了至
少15％，例如，至少20％，可考虑所述受试者表现出“阳性的”EAR。晚期哮喘反应(LAR)通常始于刺激之后的3h至8h，并且其特征在于气道的细胞炎症、支气管血管渗透性的增强和粘
液分泌。其通常通过FEV1的减弱而检测出，该减弱可能在幅度上大于与所述EAR相关的减弱并且潜在地，可能在临床上更重要。例如，在所述相关时间窗口期内，如果他/她的FEV1相对于基线FEV1减少了至少15％，例如，至少20％，可考虑所述受试者表现出“阳性的”LAR。迟发气道反应(DAR)可能始发于刺激之后的约26至32h，在约32至48h间达到最大值，并在约56h
内消失(Pelikan,Z.Ann Allergy Asthma Immunol.2010,104(5):394-404)。
[0467] 在某些实施方案中，所述慢性呼吸障碍是慢性阻塞性肺疾病(COPD)。COPD包括众多具有特征为气流受限即使在治疗下也是不完全可逆的并且通常是渐进性的病症。COPD的
症状包括呼吸困难(气绝)、运动耐受力降低、咳嗽、咳痰、喘息和胸闷。患有COPD的人会经历症状的急性阶段(例如，在不到一周的期间内以及经常在24小时或更短的期间内发展)，恶
化(称作COPD恶化)，所述恶化可在频率和持续时间上变化并与显著发病率相关。它们可由
例如呼吸道感染、暴露于有害颗粒等事件触发，或者可能具有未知的病因。吸烟是COPD最常遇到的风险因素，并且其它吸入性接触也会促成该疾病的发展和进展。遗传因素在COPD中
的作用是一个活跃的研究领域。小部分的COPD患者具有α-1抗胰蛋白酶(丝氨酸蛋白酶主要的循环性抑制剂)的遗传性缺陷，并且这种缺陷可导致产生该疾病的快速进展的形式。
症状包括呼吸困难(气绝)、运动耐受力降低、咳嗽、咳痰、喘息和胸闷。患有COPD的人会经历症状的急性阶段(例如，在不到一周的期间内以及经常在24小时或更短的期间内发展)，恶
化(称作COPD恶化)，所述恶化可在频率和持续时间上变化并与显著发病率相关。它们可由
例如呼吸道感染、暴露于有害颗粒等事件触发，或者可能具有未知的病因。吸烟是COPD最常遇到的风险因素，并且其它吸入性接触也会促成该疾病的发展和进展。遗传因素在COPD中
的作用是一个活跃的研究领域。小部分的COPD患者具有α-1抗胰蛋白酶(丝氨酸蛋白酶主要的循环性抑制剂)的遗传性缺陷，并且这种缺陷可导致产生该疾病的快速进展的形式。
[0468] COPD特征性的病理生理特征包括小气道变窄和结构变化以及肺实质的破坏(特别是肺泡周围)，其最常见的原因是慢性炎症。在COPD中观察到的慢性气流受限通常涉及这些因素的混合，并其在促成气流受限和症状中的相对重要性因人而异。术语“肺气肿”表示终末细支气管远端的空气空间(肺泡)的扩大，并伴有对其壁的损坏。应当指出，所述术语“肺气肿”临床上经常用于表示与这样的病理变化相关的医学病症。某些患有COPD的个体具有
慢性支气管炎，其在临床上被定义为连续2年、每年的3个月中大多数日子里有咳痰。关于
COPD的风险因素、流行病学、发病机制、诊断和目前的管理的进一步信息可在例如，慢性阻塞性肺疾病全球倡议公司(GOLD)网站(www.goldcopd.org)上的“Global Strategy for
the Diagnosis,Management,and Prevention of Chronic Obstructive Pulmonary
Disease”(2009年更新)(本文中也被称为“GOLD报告”)、ATS网站www.thoracic.org/
clinical/copd-guidelines/resources/copddoc.pdf上的美国胸科学会/欧洲呼吸学会指
南(2004年)(本文中也被称为“ATC/ERS COPD”指南)和内科医学的标准教材例如Cecil
Textbook of Medicine(第20版)、Harrison's Principles of Internal Medicine(第17
版)，和/或侧重于肺医学的标准教材中找到。
慢性支气管炎，其在临床上被定义为连续2年、每年的3个月中大多数日子里有咳痰。关于
COPD的风险因素、流行病学、发病机制、诊断和目前的管理的进一步信息可在例如，慢性阻塞性肺疾病全球倡议公司(GOLD)网站(www.goldcopd.org)上的“Global Strategy for
the Diagnosis,Management,and Prevention of Chronic Obstructive Pulmonary
Disease”(2009年更新)(本文中也被称为“GOLD报告”)、ATS网站www.thoracic.org/
clinical/copd-guidelines/resources/copddoc.pdf上的美国胸科学会/欧洲呼吸学会指
南(2004年)(本文中也被称为“ATC/ERS COPD”指南)和内科医学的标准教材例如Cecil
Textbook of Medicine(第20版)、Harrison's Principles of Internal Medicine(第17
版)，和/或侧重于肺医学的标准教材中找到。
[0469] 在某些实施方案中，本文公开的方法抑制(干扰、破坏)上面所讨论的DC-Th17-B-Ab-C-DC循环。例如，施用补体抑制剂可以打破该循环，通过该循环，补体刺激DC细胞以促进Th17细胞表型的循环。其结果是，Th17细胞的数目和/或活性减弱，从而减少Th17介导的对B细胞的刺激和多克隆抗体的产生。在某些实施方案中，这些效应导致将免疫微环境“复位”到更正常的、病理性更低的状态。如PCT/US2012/043845(WO/2012/178083)的实施例1和
USSN 20140371133中的描述(简要概述于下面的实施例27中)中所述，已经在动物哮喘模型
中得到了证据，所述证据支持补体抑制能够对Th17相关的细胞因子的产生发挥延长的抑制
效应。
USSN 20140371133中的描述(简要概述于下面的实施例27中)中所述，已经在动物哮喘模型
中得到了证据，所述证据支持补体抑制能够对Th17相关的细胞因子的产生发挥延长的抑制
效应。
[0470] 在某些实施方案中，抑制所述DC-Th17-B-Ab-C-DC循环具有疾病修饰效应。不希望受任何理论约束，抑制所述DC-Th17-B-Ab-C-DC循环会干扰这样的基本病理机制而不是仅
仅治疗障碍的症状，所述机制即使在症状得到较好的控制时，也可能会促成持续的组织损
伤，和/或其可能会促成所述疾病的恶化。在某些实施方案中，抑制所述DC-Th17-B-Ab-C-DC循环引起了慢性障碍进入缓解阶段。在某些实施方案中，缓解表示在患有慢性障碍的受试
者中，不存在或基本上不存在疾病活性，但疾病有复发的可能。在某些实施方案中，在不存在继续治疗或在减少剂量或提升给药间隔的条件下，可在延长的时间段内(例如，至少6个
月，例如，6-12个月、12-24个月或更长)持续缓解。在某些方面，抑制补体可能会改变富含Th17细胞的组织的免疫微环境，并将其修饰成富含调节性T细胞(Treg)的微环境。这样做会允许免疫系统对自身进行“重设”并进入缓解状态。在某些实施方案中，例如，缓解可以持续至触发事件的发生。触发事件可以是，例如，感染(其可能导致产生与传染剂和自身蛋白质都发生反应的多克隆抗体)、暴露于特定的环境条件(例如，高水平的空气污染物如臭氧或
烟雾的特定的物质或组分如香烟烟雾、过敏原)等。遗传因素可能起一定作用。例如，具有编码补体成分的特定等位基因的个体可能具有更高的补体活性的基线水平，更有反应性的补
体系统和/或更低内源性补体调节蛋白活性的基线水平。在某些实施方案中，个体具有与
AMD的增强的风险相关的基因型。例如，所述受试者可以具有编码补体蛋白或补体调节蛋白(例如，CFH、C3、B因子)的基因的多态性，其中所述多态性与AMD增强的风险相关。
仅治疗障碍的症状，所述机制即使在症状得到较好的控制时，也可能会促成持续的组织损
伤，和/或其可能会促成所述疾病的恶化。在某些实施方案中，抑制所述DC-Th17-B-Ab-C-DC循环引起了慢性障碍进入缓解阶段。在某些实施方案中，缓解表示在患有慢性障碍的受试
者中，不存在或基本上不存在疾病活性，但疾病有复发的可能。在某些实施方案中，在不存在继续治疗或在减少剂量或提升给药间隔的条件下，可在延长的时间段内(例如，至少6个
月，例如，6-12个月、12-24个月或更长)持续缓解。在某些方面，抑制补体可能会改变富含Th17细胞的组织的免疫微环境，并将其修饰成富含调节性T细胞(Treg)的微环境。这样做会允许免疫系统对自身进行“重设”并进入缓解状态。在某些实施方案中，例如，缓解可以持续至触发事件的发生。触发事件可以是，例如，感染(其可能导致产生与传染剂和自身蛋白质都发生反应的多克隆抗体)、暴露于特定的环境条件(例如，高水平的空气污染物如臭氧或
烟雾的特定的物质或组分如香烟烟雾、过敏原)等。遗传因素可能起一定作用。例如，具有编码补体成分的特定等位基因的个体可能具有更高的补体活性的基线水平，更有反应性的补
体系统和/或更低内源性补体调节蛋白活性的基线水平。在某些实施方案中，个体具有与
AMD的增强的风险相关的基因型。例如，所述受试者可以具有编码补体蛋白或补体调节蛋白(例如，CFH、C3、B因子)的基因的多态性，其中所述多态性与AMD增强的风险相关。
[0471] 在某些实施方案中，例如，在尚未发展出慢性障碍的症状的受试者中或在已经发展出所述障碍并已经过本文所述的治疗的受试者中，免疫微环境可能随时间的推移，朝着
病理状态逐步变得更为极化。这样的转化可能随机发生(例如，至少部分是由于抗体水平
和/或亲和性的明显的随机波动)和/或由累积的、强度不足以触发障碍症状爆发的“亚阈
值”触发事件而导致。
病理状态逐步变得更为极化。这样的转化可能随机发生(例如，至少部分是由于抗体水平
和/或亲和性的明显的随机波动)和/或由累积的、强度不足以触发障碍症状爆发的“亚阈
值”触发事件而导致。
[0472] 在某些实施方案中，可以预期，相对短程的长效坎普他汀类似物，例如，介于1周至6周，例如，约2-4周，会提供长效的益处。在某些实施方案中，在延长的时间段内达到缓解，例如，1-3个月、3-6个月、6-12个月、12-24个月或更长时间。在某些实施方案中，可在症状复发之前，检测和/或预防性治疗受试者。例如，可在暴露于触发性事件之前或之时治疗受试者。在某些实施方案中，可在受试者上监测，例如，生物标记物(例如，包含Th17细胞或Th17细胞活性的指示分子的生物标记物)的升高，或补体活化，并在这样的生物标记物水平升高时进行治疗。进一步的讨论参见，例如，PCT/US2012/043845。
[0473] VIII.组合物和施用
[0474] 本发明提供了和/或利用了多种包含细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物的组合物。在不同的实施方案中，组合物可以具有本文中讨论的任意特征或特征组合，只要它们不是相互排斥。本发明提供了这样的组合物及其使用方法的实施方案，其中所述
坎普他汀类似物是任意坎普他汀类似物。在一些方面，如本文中进一步描述的，任何这类坎普他汀类似物或组合物都可以与抑制C3的INAA一起使用。INAA可以具有本文关于INAA所论
述的任何特征或特征组合，只要它们不相互排斥即可。
坎普他汀类似物是任意坎普他汀类似物。在一些方面，如本文中进一步描述的，任何这类坎普他汀类似物或组合物都可以与抑制C3的INAA一起使用。INAA可以具有本文关于INAA所论
述的任何特征或特征组合，只要它们不相互排斥即可。
[0475] 在某些实施方案中，组合物包含纯化的细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物。可以使用多种方案来实现纯化，所述方案可以由本领域普通技术人员基于实现纯
化之前存在于组合物中的不同组分的期望纯度而进行选择。例如，可以使用过滤、高效液相色谱法、亲和色谱法和/或其它方案和它们的组合。在某些实施方案中，所述组合物包含至少80％、85％、90％、95％、98％、99％或更多的细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物，作为总坎普他汀类似物的重量百分比。在某些实施方案中，所述组合物包含至少
80％、85％、90％、95％、98％、99％或更多的细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物，作为总坎普他汀类似物的摩尔百分比。在某些实施方案中，组合物由细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物组成或基本上由其组成。
化之前存在于组合物中的不同组分的期望纯度而进行选择。例如，可以使用过滤、高效液相色谱法、亲和色谱法和/或其它方案和它们的组合。在某些实施方案中，所述组合物包含至少80％、85％、90％、95％、98％、99％或更多的细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物，作为总坎普他汀类似物的重量百分比。在某些实施方案中，所述组合物包含至少
80％、85％、90％、95％、98％、99％或更多的细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物，作为总坎普他汀类似物的摩尔百分比。在某些实施方案中，组合物由细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物组成或基本上由其组成。
[0476] 在某些实施方案中，包含细胞反应性坎普他汀类似物和含有细胞反应性官能团的化合物的组合物的特征在于，细胞反应性坎普他汀类似物与含有细胞反应性官能团的化合
物的摩尔比为至少10:1、20:1、50:1、100:1、500:1、1、000:1或更多。在某些实施方案中，所述组合物包含至少80％、85％、90％、95％、98％、99％或更多的细胞反应性坎普他汀类似物，作为总坎普他汀类似物的重量百分比。在某些实施方案中，所述组合物包含至少80％、
85％、90％、95％、98％、99％或更多的细胞反应性坎普他汀类似物，作为总坎普他汀类似物的摩尔百分比。在某些实施方案中，按重量计，组合物包含至少80％、85％、90％、95％、
98％、99％或更多的细胞反应性坎普他汀类似物。在某些实施方案中，按重量计，组合物包含至少80％、85％、90％、95％、98％、99％或更多的长效坎普他汀类似物。在某些实施方案中，按重量计，组合物包含至少80％、85％、90％、95％、98％、99％或更多的靶向坎普他汀类似物。在某些实施方案中，按重量计，组合物包含至少80％、85％、90％、95％、98％、99％或更多的靶向坎普他汀类似物。在某些实施方案中，重量是干重。
物的摩尔比为至少10:1、20:1、50:1、100:1、500:1、1、000:1或更多。在某些实施方案中，所述组合物包含至少80％、85％、90％、95％、98％、99％或更多的细胞反应性坎普他汀类似物，作为总坎普他汀类似物的重量百分比。在某些实施方案中，所述组合物包含至少80％、
85％、90％、95％、98％、99％或更多的细胞反应性坎普他汀类似物，作为总坎普他汀类似物的摩尔百分比。在某些实施方案中，按重量计，组合物包含至少80％、85％、90％、95％、
98％、99％或更多的细胞反应性坎普他汀类似物。在某些实施方案中，按重量计，组合物包含至少80％、85％、90％、95％、98％、99％或更多的长效坎普他汀类似物。在某些实施方案中，按重量计，组合物包含至少80％、85％、90％、95％、98％、99％或更多的靶向坎普他汀类似物。在某些实施方案中，按重量计，组合物包含至少80％、85％、90％、95％、98％、99％或更多的靶向坎普他汀类似物。在某些实施方案中，重量是干重。
[0477] 在某些方面，本发明提供了一种药用级组合物，其包含细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物。在不同的实施方案中，所述药用级组合物可以在纯度方面具有上述特征中的任一种。所述药用级组合物基本上不含有内毒素、重金属和未识别的和/或未表征的物质，所以不经进一步纯化即可接受为药物组合物，所述药物组合物适合用于施用给人
受试者或用于制备要施用给人受试者的药物组合物。在某些实施方案中，所述药用级组合
物是无菌的。
受试者或用于制备要施用给人受试者的药物组合物。在某些实施方案中，所述药用级组合
物是无菌的。
[0478] 可以将合适的制品(例如，细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物或其它活性剂的基本上纯的制品)与药学上可接受的载体或媒介物等相组合，以生产适当的药物
组合物。术语“药学上可接受的载体或媒介物”表示不会破坏与其一起配制的化合物的药理学活性的无毒载体或媒介物。本领域技术人员会理解，如果载体或媒介物与以适合递送化
合物的量施用给受试者相容，而不造成不适当的毒性，那么它是“无毒的”。在本发明的组合物中可以使用的药学上可接受的载体或媒介物包括、但不限于：水、生理盐水、林格氏溶液、醋酸钠或乙酸钾溶液、5％葡萄糖等。所述组合物可以包括适合用于期望的制剂(例如，本文中讨论的)的其它组分。还可以将补充活性化合物(例如，可独立地用于治疗遭受补体介导
的障碍的受试者的化合物)掺入组合物中。本发明提供了这样的药物组合物，其包含细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物和任选的第二活性剂，所述第二活性剂可用于治
疗遭受补体介导的障碍的受试者。
组合物。术语“药学上可接受的载体或媒介物”表示不会破坏与其一起配制的化合物的药理学活性的无毒载体或媒介物。本领域技术人员会理解，如果载体或媒介物与以适合递送化
合物的量施用给受试者相容，而不造成不适当的毒性，那么它是“无毒的”。在本发明的组合物中可以使用的药学上可接受的载体或媒介物包括、但不限于：水、生理盐水、林格氏溶液、醋酸钠或乙酸钾溶液、5％葡萄糖等。所述组合物可以包括适合用于期望的制剂(例如，本文中讨论的)的其它组分。还可以将补充活性化合物(例如，可独立地用于治疗遭受补体介导
的障碍的受试者的化合物)掺入组合物中。本发明提供了这样的药物组合物，其包含细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物和任选的第二活性剂，所述第二活性剂可用于治
疗遭受补体介导的障碍的受试者。
[0479] 在某些实施方案中，本发明提供了一种适合施用给人类的药学上可接受的组合物，其与被负责管理药学试剂的政府机构(例如，美国食品和药品管理局)批准的标签一起
包装。在某些实施方案中，本发明提供了一种药物试剂盒或包装件，其包含：(a)固体形式的药学上可接受的细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物；(b)药学上可接受的载体或媒介物。在某些实施方案中，所述固体形式是冻干形式。在某些实施方案中，所述固体形式是粉末形式，例如，冻干的粉末。任选地，所述试剂盒或包装件含有关于将细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物溶解在载体中的说明书。在某些实施方案中，提供了药物
试剂盒或包装件。在某些实施方案中，所述包装件或试剂盒包含足够至少1次给药(例如，1-
200次给药，或任何插入的数字或子范围)的量的药物组合物。在某些实施方案中，试剂盒或包装件包含(i)第一容器，所述第一容器含有足够一次或多次给药的细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物；(ii)第二容器，所述第二容器包含药学上可接受的运载体，所述药学上可接受的运载体将与所述第一容器的内容物组合以产生适合通过例如，皮下(缩写
为SQ或SC)或玻璃体内(IVT)注射施用给受试者的组合物。在某些实施方案中，药物包装件
或试剂盒包含一个或多个针和任选的一个或多个注射器。在某些实施方案中，提供了至少
一个预装注射器(例如，1-200个或子范围的任何插入的数字)。在某些实施方案中，提供了一个或多个单位剂型或预测量的等分试样。在某些实施方案中，提供了一个或多个笔或笔
筒(pen cartridge)。在某些实施方案中，提供了施用说明书，在某些实施方案中，所述施用说明书包含自身施用，例如，经由皮下注射的说明书。
包装。在某些实施方案中，本发明提供了一种药物试剂盒或包装件，其包含：(a)固体形式的药学上可接受的细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物；(b)药学上可接受的载体或媒介物。在某些实施方案中，所述固体形式是冻干形式。在某些实施方案中，所述固体形式是粉末形式，例如，冻干的粉末。任选地，所述试剂盒或包装件含有关于将细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物溶解在载体中的说明书。在某些实施方案中，提供了药物
试剂盒或包装件。在某些实施方案中，所述包装件或试剂盒包含足够至少1次给药(例如，1-
200次给药，或任何插入的数字或子范围)的量的药物组合物。在某些实施方案中，试剂盒或包装件包含(i)第一容器，所述第一容器含有足够一次或多次给药的细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物；(ii)第二容器，所述第二容器包含药学上可接受的运载体，所述药学上可接受的运载体将与所述第一容器的内容物组合以产生适合通过例如，皮下(缩写
为SQ或SC)或玻璃体内(IVT)注射施用给受试者的组合物。在某些实施方案中，药物包装件
或试剂盒包含一个或多个针和任选的一个或多个注射器。在某些实施方案中，提供了至少
一个预装注射器(例如，1-200个或子范围的任何插入的数字)。在某些实施方案中，提供了一个或多个单位剂型或预测量的等分试样。在某些实施方案中，提供了一个或多个笔或笔
筒(pen cartridge)。在某些实施方案中，提供了施用说明书，在某些实施方案中，所述施用说明书包含自身施用，例如，经由皮下注射的说明书。
[0480] 通过任意合适的给药途径，包括、但不限于，静脉内、肌肉内、皮下、通过吸入、通过鼻递送、鞘内、颅内、动脉内、口服、直肠、透皮、真皮内、真皮下等，可以将药物组合物施用给受试者。在某些实施方案中，静脉内地施用包含细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物的组合物。在某些实施方案中，动脉内地施用包含细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物的组合物。可以将所述组合物局部地施用进供给器官或组织的血管系统中，或者血管外地施用到器官或组织的附近。应该理解，“施用”包括：给受试者直接施用化合物或组合物，指示第三方给受试者施用化合物或组合物，给受试者开处方或建议化合物或组合
物(例如，用于自身施用)，自身施用，和适当的使受试者可得到化合物或组合物的其它方
式。
物(例如，用于自身施用)，自身施用，和适当的使受试者可得到化合物或组合物的其它方
式。
[0481] 适合用于注射使用(例如，静脉内施用)或通过泵或导管使用的药物组合物通常包括无菌水溶液(其中水溶性的)或分散体以及用于即时制备无菌可注射溶液或分散体的无
菌粉剂。可以如下制备无菌溶液：任选地与一种成分或成分组合一起，将需要量的化合物掺入适当的溶剂中，所述成分是例如，缓冲剂诸如乙酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐或磷酸盐；用于调节张度的试剂诸如氯化钠或葡萄糖；抗细菌剂诸如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂
诸如抗坏血酸、谷胱甘肽或亚硫酸氢钠；螯合剂诸如乙二胺四乙酸；和其它合适的成分等，在需要时，随后进行基于过滤的灭菌。本领域技术人员知晓众多可以被包括在药物组合物
中的生理上可接受的化合物。其它有用的化合物包括，例如，碳水化合物，诸如葡萄糖、蔗糖、乳糖；葡聚糖；氨基酸诸如甘氨酸；多元醇诸如甘露醇。这些化合物可以例如充当填充剂和/或稳定剂，例如，以粉末形式，和/或当制备或贮存过程的一部分包含低压冻干法时。可以在组合物中包括表面活性剂诸如吐温-80、普流尼克-F108/F68、脱氧胆酸、磷脂酰胆碱
等，例如，为了增加可溶性或为了提供微乳剂以递送疏水药物。如果需要的话，可以用酸或碱(诸如盐酸或氢氧化钠)调节pH。可以将胃肠外制剂包封在由玻璃或塑料制成的安瓿、一
次用弃的注射器或输注袋或单剂量或多次剂量管形瓶中。优选地，注射用溶液是无菌的，且可接受地不含内毒素。
菌粉剂。可以如下制备无菌溶液：任选地与一种成分或成分组合一起，将需要量的化合物掺入适当的溶剂中，所述成分是例如，缓冲剂诸如乙酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐或磷酸盐；用于调节张度的试剂诸如氯化钠或葡萄糖；抗细菌剂诸如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂
诸如抗坏血酸、谷胱甘肽或亚硫酸氢钠；螯合剂诸如乙二胺四乙酸；和其它合适的成分等，在需要时，随后进行基于过滤的灭菌。本领域技术人员知晓众多可以被包括在药物组合物
中的生理上可接受的化合物。其它有用的化合物包括，例如，碳水化合物，诸如葡萄糖、蔗糖、乳糖；葡聚糖；氨基酸诸如甘氨酸；多元醇诸如甘露醇。这些化合物可以例如充当填充剂和/或稳定剂，例如，以粉末形式，和/或当制备或贮存过程的一部分包含低压冻干法时。可以在组合物中包括表面活性剂诸如吐温-80、普流尼克-F108/F68、脱氧胆酸、磷脂酰胆碱
等，例如，为了增加可溶性或为了提供微乳剂以递送疏水药物。如果需要的话，可以用酸或碱(诸如盐酸或氢氧化钠)调节pH。可以将胃肠外制剂包封在由玻璃或塑料制成的安瓿、一
次用弃的注射器或输注袋或单剂量或多次剂量管形瓶中。优选地，注射用溶液是无菌的，且可接受地不含内毒素。
[0482] 另外，本公开内容提供了以下的特别见解：在某些情况下，对于施用如本文所述的坎普他汀类似物(例如，LACA)，皮下和/或肌肉内注射可能是特别理想的。例如，在某些实施方案中，特别对于治疗慢性病症来说，皮下和/或肌内注射可以是优选的(相对于例如静脉内递送来说)。另选地或另外地，当例如期望和/或预期患者自己施用坎普他汀类似物的组
合物时(例如，不需要或不依赖于由医护人员进行施用，特别是当这种由护理提供者进行的施用可能需要前往输液中心时)，皮下和/或肌肉内注射可能会特别有用。
合物时(例如，不需要或不依赖于由医护人员进行施用，特别是当这种由护理提供者进行的施用可能需要前往输液中心时)，皮下和/或肌肉内注射可能会特别有用。
[0483] 在一些具体的方面，本公开涵盖以下认识：在每天施用药物的实施方案中，每天施用可能比以更长的给药间隔(如每周一次或每2周一次)施用更能维持更恒定的血液水平。更恒定的血液水平可能是合乎需要的，特别是在一些实施方案中(例如，如本文所述的对慢性疾病的治疗)。本公开认识到，长期的每日静脉内输注可能会很不方便，特别是对于非住院患者。
[0484] 本公开特别认识到，在一些实施方案中，皮下施用可能甚至比肌肉内注射更有效和/或更理想，特别是在预期或期望自己施用的情况下。
[0485] 在某些实施方案中，可以使用装置施用本文所述的组合物，特别是包含LACA的组合物，所述装置在某些实施方案中在激活时以至少部分自动化的形式，通过注射来递送一
定剂量的药物组合物。这种装置在本领域中被称为“笔”或“自动注射器”，并且这些术语在本文中可互换使用。通常，笔或自动注射器允许通过自动或手动插入的皮下注射针，或通过高速射流，注射容纳于筒、贮存器或注射器中的一定剂量的药物组合物。它可以被设计成用于施用单剂量或多剂量。
定剂量的药物组合物。这种装置在本领域中被称为“笔”或“自动注射器”，并且这些术语在本文中可互换使用。通常，笔或自动注射器允许通过自动或手动插入的皮下注射针，或通过高速射流，注射容纳于筒、贮存器或注射器中的一定剂量的药物组合物。它可以被设计成用于施用单剂量或多剂量。
[0486] 在某些特定的实施方案中，这种笔或自动注射器被用于肌肉内和/或皮下注射。根据本公开，笔或其他自动注射器对于利用皮下注射的实施方案可能特别有用。笔通常是这
样的装置：其在自带的筒或贮存器中含有(或可以装载有)药物，并且所述自带的筒或储存
器可以连接至针。
样的装置：其在自带的筒或贮存器中含有(或可以装载有)药物，并且所述自带的筒或储存
器可以连接至针。
[0487] 在某些实施方案中，本公开提供了如本文所述的以下认识：对于本文所述的一种或多种LACA，皮下和/或肌内注射可能是特别理想的递送模式。例如，本公开记载了某些特别理想的和/或有效的给药方案，其涉及通过注射(例如，通过皮下注射)施用LACA；在某些实施方案中，通过使用笔(例如，可能已经预先装载有适当剂量或体积的笔)来实现这样的
注射。笔可以是耐久的(以及可重复使用的)或一次性使用的。耐久的笔通常使用可更换的
筒，将空了的筒丢弃，并且将新筒插入笔中。一次性使用的笔通常在筒或贮存器中预先装有药物。当所述筒或贮存器空了的时候，将笔丢弃。筒或贮存器可以含有单剂量或多剂量。在使用笔的时候，将针与笔连接并插入皮肤。通常，推动按钮以施用剂量，但是在某些实施方案中也可以使用其他激活方法。在某些实施方案中，自动注射器可以包括加载有弹簧的注
射器，但是本领域普通技术人员将理解，可以使用多种技术来提供自动化施用。在某些实施方案中，通过按下按钮或以其他方式激活装置，自动插入针并且递送药物。在某些实施方案中，自动注射器可被设计成自动地和/或准确地将针插至皮下组织中的期望深度。笔或自动注射器可以包括诸如允许使用者选择或调整剂量或注射深度的标度盘等装置。
注射。笔可以是耐久的(以及可重复使用的)或一次性使用的。耐久的笔通常使用可更换的
筒，将空了的筒丢弃，并且将新筒插入笔中。一次性使用的笔通常在筒或贮存器中预先装有药物。当所述筒或贮存器空了的时候，将笔丢弃。筒或贮存器可以含有单剂量或多剂量。在使用笔的时候，将针与笔连接并插入皮肤。通常，推动按钮以施用剂量，但是在某些实施方案中也可以使用其他激活方法。在某些实施方案中，自动注射器可以包括加载有弹簧的注
射器，但是本领域普通技术人员将理解，可以使用多种技术来提供自动化施用。在某些实施方案中，通过按下按钮或以其他方式激活装置，自动插入针并且递送药物。在某些实施方案中，自动注射器可被设计成自动地和/或准确地将针插至皮下组织中的期望深度。笔或自动注射器可以包括诸如允许使用者选择或调整剂量或注射深度的标度盘等装置。
[0488] 在某些实施方案中，使用包含双腔室注射器的装置施用本文所述的组合物，特别是包含LACA的组合物。一个腔室中含有干燥的药物(例如，冻干的药物)。第二腔室含有合适的药学上可接受的运载体。在使用该装置时，首先通过将腔室中的内容物混合来重构药物。
这可以通过多种方式来完成。在某些实施方案中，推动柱塞会例如，通过将运载体转移到含有冻干药物的腔室中，使腔室的内容物混合。
这可以通过多种方式来完成。在某些实施方案中，推动柱塞会例如，通过将运载体转移到含有冻干药物的腔室中，使腔室的内容物混合。
[0489] 因此，可以提供包含本文所述组合物(例如，包含LACA)的多种药物递送装置，例如，预填充注射器、双腔室注射器、耐久的和/或一次性使用的笔、以及适用于笔的筒。这样的装置可以含有一个或多个剂量(例如，本文所述的任何剂量中的一个或多个)。
[0490] 在某些实施方案中，本公开涵盖向受试者提供(例如，通过邮寄或预约取件或其他常规递送方式)本文所述的一组装置，其共同提供足以持续预定的一段时间(例如，一周，两周，三周，四周等)的活性剂(例如，LACA)供应。在某些实施方案中，将上述的装置组定期地(例如，每周、每两周、三周、四周等)送到患者的住所，选择好时机以使得患者不会断供。在某些实施方案中，组合物(例如，LACA)可以容纳于容器(例如，小瓶)中或任意一种上文面提到的药物递送装置或包装件中。
[0491] 在某些实施方案中，所述组合物一直到施用前不久都是冻干的或保持冷藏的或冷冻的，在施用时将其复原(如果是冻干的)或解冻(如果是冷冻的)。在施用前可让组合物达
到室温。
到室温。
[0492] 在一些实施方案中，可以使用贴剂系统(例如，用于皮下或透皮施用)施用组合物。在某些实施方案中，所述贴剂可以包含或连接至贮存器，所述贮存器可含有，例如，高达约
10ml的溶液，从而允许在单次施用中向患者施用10ml的溶液。
10ml的溶液，从而允许在单次施用中向患者施用10ml的溶液。
[0493] 在某些实施方案中，包含本文所述坎普他汀类似物(例如，细胞反应性坎普他汀类似物，LACA或靶向坎普他汀类似物)和药学上可接受的运载体的组合物的pH在6.5至7.5之
间，例如在6.8至7.2之间(例如7.0)。在执行稳定性测试的过程中，观察到相对于中性的pH，较低的pH导致了某些LACA的稳定性升高。因此，在某些实施方案中，包含LACA和药学上可接受的运载体的组合物的pH在6.0至6.5之间，5.5至6.0之间，或5.0至5.5之间。在一些实施方案中，可以使用更低的pH值，例如4.5-5.0。在某些实施方案中，所述组合物还包含一种或多种药学上可接受的缓冲物质，其适于将pH维持在选定范围(例如，任何上述范围)内。本文描述了合适的缓冲物质(例如，乙酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐或磷酸盐)。在某些实施方案中，所述组合物另外地或另选地包含盐，例如，本文所述的任何药学上可接受的盐。在一些特定的实施方案中，所述组合物包含磷酸盐。
间，例如在6.8至7.2之间(例如7.0)。在执行稳定性测试的过程中，观察到相对于中性的pH，较低的pH导致了某些LACA的稳定性升高。因此，在某些实施方案中，包含LACA和药学上可接受的运载体的组合物的pH在6.0至6.5之间，5.5至6.0之间，或5.0至5.5之间。在一些实施方案中，可以使用更低的pH值，例如4.5-5.0。在某些实施方案中，所述组合物还包含一种或多种药学上可接受的缓冲物质，其适于将pH维持在选定范围(例如，任何上述范围)内。本文描述了合适的缓冲物质(例如，乙酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐或磷酸盐)。在某些实施方案中，所述组合物另外地或另选地包含盐，例如，本文所述的任何药学上可接受的盐。在一些特定的实施方案中，所述组合物包含磷酸盐。
[0494] 应当注意，为简明起见，本公开中描述的某些方面和实施方案(例如，涉及给药方案，剂量，施用方法，用于施用的装置和/或治疗方法)是就长效坎普他汀类似物而言的。然而，应该理解，提供了类似的实施方案，其中坎普他汀类似物不是LACA。所述坎普他汀类似物可以是，例如，不包含清除率降低部分的细胞反应性的或靶向的坎普他汀类似物。
[0495] 通常，通过将活性化合物掺入无菌媒介物中来制备分散体，所述媒介物含有基本分散介质和来自上文所述的那些的适当其它成分。就用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末
而言，制备方法可以包括真空干燥和冷冻干燥，其产生活性成分和任何额外所需成分的粉
末，例如，得自其先前无菌过滤的溶液。
而言，制备方法可以包括真空干燥和冷冻干燥，其产生活性成分和任何额外所需成分的粉
末，例如，得自其先前无菌过滤的溶液。
[0496] 在某些实施方案中，可以使用口服施用。口服组合物一般包括惰性稀释剂或可食用的载体。为了口服治疗性施用的目的，可以将活性化合物与赋形剂一起掺入并以片剂、糖锭或胶囊剂(例如，明胶胶囊剂)的形式使用。可以包括药学上适合的结合剂和/或辅料，作为组合物的一部分。片剂、丸剂、胶囊剂、锭剂等可以含有任意下述成分或相似性质的化合物：结合剂诸如微晶纤维素、黄蓍树胶或明胶；赋形剂诸如淀粉或乳糖；崩解剂诸如海藻酸、Primogel或玉米淀粉；润滑剂诸如硬脂酸镁或或Sterotes；助流剂诸如胶体二氧化硅；甜味剂诸如蔗糖或糖精；或矫味剂诸如薄荷、水杨酸甲酯或橙味矫味剂。也可以口服施用液体组合物。用于口服递送的制剂可以掺入改善在胃肠道内的稳定性和/或增强吸收的试剂。
[0497] 对于吸入给药，可以从含有适当推进剂(例如，气体诸如二氧化碳)的加压容器或分配器以气溶胶喷雾形式递送坎普他汀类似物。可以使用计量剂量吸入器或喷雾器。所述
气雾剂可以包含液体颗粒或干燥的气雾剂(例如，干粉、大多孔颗粒等)。在某些实施方案
中，用于多个实施方案的合适的水性媒介物包括水或盐水，任选地包括醇。在一些实施方案中，所述组合物包含甘油水溶液，例如约2％的甘油水溶液。在某些实施方案中，所述组合物包含适合用于引入肺中的表面活性剂。除此之外或可选地，可以使用适合用于肺部施用的
其它赋形剂。
气雾剂可以包含液体颗粒或干燥的气雾剂(例如，干粉、大多孔颗粒等)。在某些实施方案
中，用于多个实施方案的合适的水性媒介物包括水或盐水，任选地包括醇。在一些实施方案中，所述组合物包含甘油水溶液，例如约2％的甘油水溶液。在某些实施方案中，所述组合物包含适合用于引入肺中的表面活性剂。除此之外或可选地，可以使用适合用于肺部施用的
其它赋形剂。
[0498] 多种不同装置可用于通过吸入施用(其可互换地称为“吸入施用”，“呼吸施用”或“肺部施用”)。喷雾器是将药物溶液或悬液转化成适合用于在下呼吸道沉积的气雾剂的装置。喷雾器的类型包括喷射式喷雾器、超声波喷雾器和振动筛网喷雾器。已有的振动筛网喷雾器的部分列表包括eFlow(Pari)，i-Neb(Respironics)，MicroAir(欧姆龙)，IHSO喷雾器(Beurer)和 (Aerogen)。可以使用Respimat. Mist.TM吸入器(Boeringer Ingelheim)。定量吸入器(MDI)是使用推进剂递送治疗剂的手持式气雾剂装置。MDI包括加
压金属罐，所述加压金属罐含有药剂悬液或溶液、推进剂、表面活性剂(通常含有)和计量
阀。氯氟烃(CFC)已被广泛用作推进剂，但大部分已被氢氟烃(HFC，也被称为氢氟烷烃
(HFA))取代，例如HFC-134a和HFC-227ea。其他的选择是二氧化碳和氮气。干粉吸入器(DPI)是呼吸致动装置，其递送容纳在胶囊或泡罩中的颗粒形式的药物并且通常不使用推进剂，
所述胶囊或泡罩在使用前被刺穿。目前用于递送治疗哮喘和/或COPD的药物的DPI的例子包
括，例如，Diskus、Aerolizer、HandiHaler、Twisthaler、Flexhaler。这样的装置可用于递送多种实施方案中的坎普他汀类似物。可在多种实施方案中使用的其它示例性DPI装置包括
3M ConixTM、 (AKELA Pharma)、Acu-BreatheTM(Respirics)以及合并了锥形干粉吸
入技术的装置，例如API-5000(其中活性药物成分(API)存于微结构运载带上)。
压金属罐，所述加压金属罐含有药剂悬液或溶液、推进剂、表面活性剂(通常含有)和计量
阀。氯氟烃(CFC)已被广泛用作推进剂，但大部分已被氢氟烃(HFC，也被称为氢氟烷烃
(HFA))取代，例如HFC-134a和HFC-227ea。其他的选择是二氧化碳和氮气。干粉吸入器(DPI)是呼吸致动装置，其递送容纳在胶囊或泡罩中的颗粒形式的药物并且通常不使用推进剂，
所述胶囊或泡罩在使用前被刺穿。目前用于递送治疗哮喘和/或COPD的药物的DPI的例子包
括，例如，Diskus、Aerolizer、HandiHaler、Twisthaler、Flexhaler。这样的装置可用于递送多种实施方案中的坎普他汀类似物。可在多种实施方案中使用的其它示例性DPI装置包括
3M ConixTM、 (AKELA Pharma)、Acu-BreatheTM(Respirics)以及合并了锥形干粉吸
入技术的装置，例如API-5000(其中活性药物成分(API)存于微结构运载带上)。
[0499] 吸入辅助装置(IAD)通常分为两类：腔体储雾罐和握持储雾罐。腔体储雾罐和握持储雾罐延长吸入器的吸口并将药雾引向口腔，减少药物在空气中的流失。将腔体储雾罐与
MDI一起使用，有助于减少药物粘在喉咙背面的量，改善通过MDI递送的药物的方向和沉积。
单向阀握持储雾罐(VHC)使细密的药物云状物留在腔体储雾罐中，直到患者通过单向阀将
其吸入，将药物剂量吸入肺中。实例包括Aerochamber和Optichamber。
MDI一起使用，有助于减少药物粘在喉咙背面的量，改善通过MDI递送的药物的方向和沉积。
单向阀握持储雾罐(VHC)使细密的药物云状物留在腔体储雾罐中，直到患者通过单向阀将
其吸入，将药物剂量吸入肺中。实例包括Aerochamber和Optichamber。
[0500] 可基于多种参数，例如细颗粒部分(FPF)、排放剂量、平均颗粒密度和质量中值空气动力学直径(MMAD)对颗粒组合物进行表征。合适的方法在本领域中已知，其中一些记述
于美国专利号6,942,868和7,048,908，以及美国公开号20020146373、20030012742和
20040092470中。在某些实施方案中，对于呼吸递送，气雾剂颗粒在约0.5μm-10μm(MMAD)之间，例如约5μm，然而也可以使用更小或更大的颗粒。在某些实施方案中，使用质量平均空气动力学直径在1μm和25μm之间(例如，在1μm和10μm之间)的颗粒。
于美国专利号6,942,868和7,048,908，以及美国公开号20020146373、20030012742和
20040092470中。在某些实施方案中，对于呼吸递送，气雾剂颗粒在约0.5μm-10μm(MMAD)之间，例如约5μm，然而也可以使用更小或更大的颗粒。在某些实施方案中，使用质量平均空气动力学直径在1μm和25μm之间(例如，在1μm和10μm之间)的颗粒。
[0501] 在本文中，含有直径小于约1mm的颗粒的干颗粒组合物也被称为干粉。“干”组合物具有相对较低的液体含量，使得颗粒易于分散，例如在干粉吸入装置中分散形成气雾剂或喷雾剂。“粉”主要由或基本上全部由细小分散的固体颗粒组成，所述固体颗粒相对地自由流动并且能够易于在吸入装置中分散并随后被受试者吸入，优选地使得大部分颗粒可以到
达所期望的呼吸道部分。在某些实施方案中，使用平均几何直径在3至15μm范围内并且振实
3
密度在0.04和0.6g/cm之间的大多孔颗粒。参见，例如，美国专利号7,048,908；Edwards,D.等，Science 276:1868-1871,1997；和Vanbever,R.等，Pharmaceutical Res.16:1735-
1742,1999。
达所期望的呼吸道部分。在某些实施方案中，使用平均几何直径在3至15μm范围内并且振实
3
密度在0.04和0.6g/cm之间的大多孔颗粒。参见，例如，美国专利号7,048,908；Edwards,D.等，Science 276:1868-1871,1997；和Vanbever,R.等，Pharmaceutical Res.16:1735-
1742,1999。
[0502] 在某些方面，本文描述了用于通过坎普他汀类似物的吸入施用治疗患者的多种剂量，给药方案，组合物和方法。所述坎普他汀类似物可以是本文所述坎普他汀类似物中的任一种。所述坎普他汀类似物可以包含本文第III部分中描述的任何肽。例如，所述坎普他汀类似物可以包含本文所述的SEQ ID No：3-36的任一种或由其组成，和/或可以包含与本文
所述的坎普他汀有关的任何修饰。在特定的实施方案中，所述坎普他汀类似物包含肽或由
肽组成，所述肽的序列列于表1中，例如SEQ ID NO:14、21、28、29、32、33、34或36。在特定的实施方案中，所述坎普他汀类似物不包含清除率降低部分、细胞反应性部分或靶向部分。在某些实施方案中，所述坎普他汀类似物的分子量在1.5kD至2.0kD之间，或2.0kD至2.5kD之
间。在某些实施方案中，所述坎普他汀类似物具有11至25个氨基酸，例如，确切地，13、14、
15、16、17或18个氨基酸。
所述的坎普他汀有关的任何修饰。在特定的实施方案中，所述坎普他汀类似物包含肽或由
肽组成，所述肽的序列列于表1中，例如SEQ ID NO:14、21、28、29、32、33、34或36。在特定的实施方案中，所述坎普他汀类似物不包含清除率降低部分、细胞反应性部分或靶向部分。在某些实施方案中，所述坎普他汀类似物的分子量在1.5kD至2.0kD之间，或2.0kD至2.5kD之
间。在某些实施方案中，所述坎普他汀类似物具有11至25个氨基酸，例如，确切地，13、14、
15、16、17或18个氨基酸。
[0503] 在某些实施方案中，通过吸入施用(在本文中可互换地称为“肺施用”或“呼吸施用”)坎普他汀类似物的总每日剂量为至少5mg/天，例如，至少10mg/天，至少15mg/天，至少
20mg/天，至少25mg/天，或至少30mg/天。在某些实施方案中，所述每日剂量在5mg/天-20mg/天之间，例如，10mg/天或15mg/天。在某些实施方案中，所述每日剂量在20mg/天-60mg/天之间。在一些特别的实施方案中，所述剂量为10mg/天、15mg/天、20mg/天、25mg/天、30mg/天、
35mg/天、40mg/天、45mg/天、50mg/天、55mg/天或60mg/天。如实施例中所述，在健康受试者中进行的吸入施用的坎普他汀类似物的1期临床试验中，在30mg/天或60mg/天的剂量下观
察到了药理学活性的可能证据。
20mg/天，至少25mg/天，或至少30mg/天。在某些实施方案中，所述每日剂量在5mg/天-20mg/天之间，例如，10mg/天或15mg/天。在某些实施方案中，所述每日剂量在20mg/天-60mg/天之间。在一些特别的实施方案中，所述剂量为10mg/天、15mg/天、20mg/天、25mg/天、30mg/天、
35mg/天、40mg/天、45mg/天、50mg/天、55mg/天或60mg/天。如实施例中所述，在健康受试者中进行的吸入施用的坎普他汀类似物的1期临床试验中，在30mg/天或60mg/天的剂量下观
察到了药理学活性的可能证据。
[0504] 在一些实施方案中，所述每日剂量在60mg/天-150mg/天之间，例如，60、70、80、90、100、110、120、130、140或150mg/天。在一些实施方案中，所述每日剂量在150mg/天-350mg/天之间，例如，150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、
310、320、330、340或350mg/天。在一些实施方案中，所述每日剂量可以在单次施用期间施用。在某些实施方案中，所述每日剂量可以在一天之内以两剂或更多剂施用(例如在早上和晚上施用)。
310、320、330、340或350mg/天。在一些实施方案中，所述每日剂量可以在单次施用期间施用。在某些实施方案中，所述每日剂量可以在一天之内以两剂或更多剂施用(例如在早上和晚上施用)。
[0505] 对于局部施用，可以将坎普他汀类似物配制在含有悬浮或溶解于一种或多种载体中的活性组分的适当软膏中。用于局部施用的载体包括、但不限于：矿物油、液体矿脂、白矿脂、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯化合物、乳化蜡和水。可替换地，可以将药学上可接受的组合物配制为合适的洗剂或乳膏剂，其含有悬浮或溶解于一种或多种药学上可接受的载体中
的坎普他汀类似物。合适的载体包括、但不限于：矿物油、脱水山梨糖醇单硬脂酸酯、聚山梨酯60、十六烷基酯蜡、鲸腊硬脂醇、2-辛基十二烷醇、苯甲醇和水。
的坎普他汀类似物。合适的载体包括、但不限于：矿物油、脱水山梨糖醇单硬脂酸酯、聚山梨酯60、十六烷基酯蜡、鲸腊硬脂醇、2-辛基十二烷醇、苯甲醇和水。
[0506] 也可以通过透粘膜或透皮方式全身施用。对于透粘膜或透皮施用，在制剂中可以使用适于要透过的屏障的穿透剂。该穿透剂是本领域中普遍已知的，并且对于透粘膜给药
而言，包括例如去污剂、胆汁盐和夫西地酸衍生物。可以例如通过使用鼻腔喷雾剂或栓剂来完成透粘膜施用。对于透皮施用，通常将活性化合物配制成本领域通常已知的软膏剂、油膏剂、凝胶或乳膏剂。
而言，包括例如去污剂、胆汁盐和夫西地酸衍生物。可以例如通过使用鼻腔喷雾剂或栓剂来完成透粘膜施用。对于透皮施用，通常将活性化合物配制成本领域通常已知的软膏剂、油膏剂、凝胶或乳膏剂。
[0507] 也可以以用于直肠递送的栓剂(例如具有常规栓剂基质，如可可脂和其它甘油酯)或保留灌肠剂的形式，配制所述化合物。
[0508] 在本发明的某些实施方案中，用载体制备坎普他汀类似物或其它活性化合物，所述载体会保护化合物免于从身体中快速消除，诸如控释制剂，包括植入剂和微囊化的递送
系统。例如，可以将坎普他汀类似物掺入或包囊在微粒或纳米颗粒制剂中。可以使用可生物降解的、生物相容的聚合物，诸如乙烯醋酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯、聚醚、聚乳酸、PLGA等。可以使用脂质体或其它基于脂质的颗粒作为药学上可接受的载体。根据本领域技术人员已知的方法，例如，如在美国专利号4,522,811和/或本文中列出的其它
参考文献中所述，可以制备这些物质。可以使用含有坎普他汀类似物的贮库制剂。坎普他汀类似物随着时间从贮库释放，例如，从而与静脉内施用所述化合物相比，更久地提供治疗浓度。在某些方面，CRM赋予坎普他汀类似物贮库的属性。本领域普通技术人员会明白，为控释制剂、植入物等的制备而选择的材料和方法应当会例如保留化合物的活性。
系统。例如，可以将坎普他汀类似物掺入或包囊在微粒或纳米颗粒制剂中。可以使用可生物降解的、生物相容的聚合物，诸如乙烯醋酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯、聚醚、聚乳酸、PLGA等。可以使用脂质体或其它基于脂质的颗粒作为药学上可接受的载体。根据本领域技术人员已知的方法，例如，如在美国专利号4,522,811和/或本文中列出的其它
参考文献中所述，可以制备这些物质。可以使用含有坎普他汀类似物的贮库制剂。坎普他汀类似物随着时间从贮库释放，例如，从而与静脉内施用所述化合物相比，更久地提供治疗浓度。在某些方面，CRM赋予坎普他汀类似物贮库的属性。本领域普通技术人员会明白，为控释制剂、植入物等的制备而选择的材料和方法应当会例如保留化合物的活性。
[0509] 应当理解，可以将坎普他汀类似物和/或其它活性剂提供为药学上可接受的盐。药学上可接受的盐包括源自药学上可接受的无机和有机酸和碱的那些。合适的酸盐的例子包
括乙酸盐、己二酸盐、海藻酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡萄糖庚酸盐、甘油磷酸盐、乙醇酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、棕榈酸盐(palmoate)、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐和十一烷酸盐。并且，如果合适的话，根据活性剂的特性，可以将药学上可接受的盐制备为碱金属或碱土金属盐，诸如钠盐、钾盐或钙盐。
括乙酸盐、己二酸盐、海藻酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡萄糖庚酸盐、甘油磷酸盐、乙醇酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、棕榈酸盐(palmoate)、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐和十一烷酸盐。并且，如果合适的话，根据活性剂的特性，可以将药学上可接受的盐制备为碱金属或碱土金属盐，诸如钠盐、钾盐或钙盐。
[0510] 应该理解，本文中提及的药学上可接受的载体、化合物和制备方法是示例性的和非限制性的。关于药学上可接受的化合物和制备不同类型的药物组合物的方法的其它讨
论，参见，例如，Remington:The Science and Practice of Pharmacy.第21版
.Philadelphia,PA.Lippincott Williams&Wilkins,2005。
论，参见，例如，Remington:The Science and Practice of Pharmacy.第21版
.Philadelphia,PA.Lippincott Williams&Wilkins,2005。
[0511] 可以以有效地实现期望的有益效果的量施用药物组合物。在某些实施方案中，有效量足以提供一项或多项下述益处：(i)减少补体介导的障碍的至少一项症状或体征；(ii)提高生活质量；(iii)减少住院；(iv)降低死亡率。本领域的普通技术人员将理解，特定的有益效果将至少部分取决于多种因素，例如，所治疗的特定的障碍。本领域的普通技术人员将意识到在患有补体介导的障碍的受试者中可能发生的症状和体征。本文中提供了多种补体
介导的障碍的症状和体征的实例。例如，在某些实施方案中，例如，其中受试者患有PNH或aHUS，有益效果是补体介导的红血细胞溶解的减少。在某些方面，在本领域普通技术人员的判断范围内，有益效果是统计学显著的和/或有治疗意义的。
介导的障碍的症状和体征的实例。例如，在某些实施方案中，例如，其中受试者患有PNH或aHUS，有益效果是补体介导的红血细胞溶解的减少。在某些方面，在本领域普通技术人员的判断范围内，有益效果是统计学显著的和/或有治疗意义的。
[0512] 在本发明的某些实施方案中，胃肠外地施用包含细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物的药物组合物。在某些实施方案中，静脉内地施用所述组合物。在某些实施方案中，通过静脉内注射施用所述组合物。在某些实施方案中，作为静脉内推注或静脉内输注来施用所述组合物。在某些实施方案中，作为静脉内滴注来施用所述组合物。在某些实施方案中，作为静脉内推注、随后作为静脉内输注或静脉内滴注来施用所述组合物。在某些实施方案中，历时约1、2、3、4、5、15、20、30、60或120分钟，施用静脉内输注。在某些实施方案中，历时超过约60分钟，例如，历时约1、2、3或更多小时，施用静脉内滴注。
[0513] 在某些实施方案中，施用总量为约0.1mg/kg/天至约2,000mg/kg/天的坎普他汀类似物，例如，约1mg/kg/天至约1,000mg/kg/天，例如，约5mg/kg/天至约500mg/kg/天。在某些实施方案中，施用总量为约10mg/kg/天至约100mg/kg/天的坎普他汀类似物，例如，约10mg/kg/天至约50mg/kg/天，例如，约10mg/kg/天至约20mg/kg/天。在某些实施方案中，施用约
0.5mg/kg/天至约10mg/kg/天的坎普他汀类似物。在某些实施方案中，施用约1mg/kg/天至
约5mg/kg/天的坎普他汀类似物。在某些实施方案中，施用约1mg/kg/天至约3mg/kg/天的坎普他汀类似物。在某些实施方案中，施用约3mg/kg/天至约5mg/kg/天的坎普他汀类似物。在某些实施方案中，施用约5mg/kg/天至约7.5mg/kg/天的坎普他汀类似物。在某些实施方案
中，施用约7.5mg/kg/天至约10mg/kg/天的坎普他汀类似物。应当理解，可以使用多种不同的定量施用方案来施用期望的总日量。例如，可以在单次施用或多次施用中(例如，在24小时时段内)施用期望量的坎普他汀类似物。例如，受试者可以在24小时时段内接受2次或更
多次给药，所述给药可以经历相同的时间长度或经历不同的时间长度来施用。
0.5mg/kg/天至约10mg/kg/天的坎普他汀类似物。在某些实施方案中，施用约1mg/kg/天至
约5mg/kg/天的坎普他汀类似物。在某些实施方案中，施用约1mg/kg/天至约3mg/kg/天的坎普他汀类似物。在某些实施方案中，施用约3mg/kg/天至约5mg/kg/天的坎普他汀类似物。在某些实施方案中，施用约5mg/kg/天至约7.5mg/kg/天的坎普他汀类似物。在某些实施方案
中，施用约7.5mg/kg/天至约10mg/kg/天的坎普他汀类似物。应当理解，可以使用多种不同的定量施用方案来施用期望的总日量。例如，可以在单次施用或多次施用中(例如，在24小时时段内)施用期望量的坎普他汀类似物。例如，受试者可以在24小时时段内接受2次或更
多次给药，所述给药可以经历相同的时间长度或经历不同的时间长度来施用。
[0514] 在某些实施方案中，以大于24小时的时间间隔，施用细胞反应性的、长效的或靶向的坎普他汀类似物。例如，在不同的实施方案中，可以平均每隔日、每3-4天、每周、每隔周等进行施用。例如，在某些实施方案中，坎普他汀类似物根据给药方案按至少7天的给药间隔施用。在某些实施方案中，共价连接的、长效的或靶向的坎普他汀类似物会保护细胞、组织、器官持续数周或数月的时段，无需再治疗。例如，可以以间隔1-2周、2-4周、4-6周、6-8周或甚至更长的再治疗维持受试者。在某些实施方案中，使用皮下施用来施用至少一些剂量。例如，在某些实施方案中，涵盖大约0.1-5mg/kg/天(例如，约0.5-2mg/kg/天)的施用，例如，以约0.25ml-2mL的体积，例如，约1ml的体积。在某些实施方案中，所述浓度是约50mg/ml至约300mg/ml，例如，约50mg/ml至约100mg/ml，或约100mg/ml至约200mg/ml。
[0515] 在某些实施方案中，施用是每天施用。在某些实施方案中，每天进行1次或2次施用。如在所述实施例中的进一步描述，每天皮下地施用示例性的长效坎普他汀类似物容易
达到远高于5微摩尔的血液水平。在某些实施方案中，使用肌肉内施用来递送类似量的化合物。
达到远高于5微摩尔的血液水平。在某些实施方案中，使用肌肉内施用来递送类似量的化合物。
[0516] 在某些实施方案中，使用治疗有效量将长效坎普他汀类似物施用给受试者，其中这样的施用导致所述化合物的血液浓度达到这样的水平：其高于至少1μΜ、至少2μΜ、至少
2.5μΜ、至少3μΜ、至少4μΜ、至少5μΜ、至少6μΜ、至少7μΜ、至少8μΜ、至少9μΜ、至少10μΜ、至少11μΜ、至少12μΜ或至少13μΜ、至少14μΜ、至少15μΜ、至少16μΜ、至少18μΜ或至少约20μΜ，或至少约25μΜ或介于4μΜ和约15μΜ或约20μΜ或约25μΜ的任意范围内。在某些实施方案中，在单次静脉内注射之后或在每天皮下注射约5-7天之后，这样的水平能维持至少约24小时，或至少约48小时，或至少约72小时，或至少约96小时，或至少约120小时，或至少约144小时。可实现更长的持续水平，例如，长达约10天、12天、14天或更长。
2.5μΜ、至少3μΜ、至少4μΜ、至少5μΜ、至少6μΜ、至少7μΜ、至少8μΜ、至少9μΜ、至少10μΜ、至少11μΜ、至少12μΜ或至少13μΜ、至少14μΜ、至少15μΜ、至少16μΜ、至少18μΜ或至少约20μΜ，或至少约25μΜ或介于4μΜ和约15μΜ或约20μΜ或约25μΜ的任意范围内。在某些实施方案中，在单次静脉内注射之后或在每天皮下注射约5-7天之后，这样的水平能维持至少约24小时，或至少约48小时，或至少约72小时，或至少约96小时，或至少约120小时，或至少约144小时。可实现更长的持续水平，例如，长达约10天、12天、14天或更长。
[0517] 在某些实施方案中，治疗受试者以保持以下的稳态水平：约1.0μΜ、约2.0μΜ、约2.5μΜ、约3.0μΜ、约3.5μΜ、约4.0μΜ、约4.5μΜ、约5.0μΜ、约5.5μΜ、约6.0μΜ、约6.5μΜ、约7.0μΜ、约7.5μΜ、约8.0μΜ、约8.5μΜ、约9.0μΜ、约9.5μΜ或约10μΜ。在某些实施方案中，稳态水平具有以下值：介于约1.0μΜ和约10.0μΜ之间，例如，介于约2.0μΜ和约
5.0μΜ之间，介于约2.5μΜ约5.0μΜ之间，介于约5.0μΜ和约7.5μΜ之间，或介于约7.5μΜ和约10μΜ之间，或任意前述范围内的任何中间值。在某些实施方案中，例如，使用利用人血清的修改版海姆氏试验，浓度足以基本上抑制体外暴露于人血清的PNH患者的红血细胞的
裂解(参见，例如，实施例8)。在某些实施方案中，例如，使用利用人血清的修改版海姆氏试验，浓度足以使体外暴露于人血清的PNH患者的红血细胞的裂解减少至少50％、60％、70％、
80％、90％、或更多(参见，例如，实施例8)。在某些实施方案中，可以使用被调节至镁水平为约0.005mol/L和pH低至约6.2以激活补体的人血清进行海姆氏试验。实施例18和19显示的
数据确认本文所述的坎普他汀类似物对来自PNH患者的RBC裂解的抑制能力。
5.0μΜ之间，介于约2.5μΜ约5.0μΜ之间，介于约5.0μΜ和约7.5μΜ之间，或介于约7.5μΜ和约10μΜ之间，或任意前述范围内的任何中间值。在某些实施方案中，例如，使用利用人血清的修改版海姆氏试验，浓度足以基本上抑制体外暴露于人血清的PNH患者的红血细胞的
裂解(参见，例如，实施例8)。在某些实施方案中，例如，使用利用人血清的修改版海姆氏试验，浓度足以使体外暴露于人血清的PNH患者的红血细胞的裂解减少至少50％、60％、70％、
80％、90％、或更多(参见，例如，实施例8)。在某些实施方案中，可以使用被调节至镁水平为约0.005mol/L和pH低至约6.2以激活补体的人血清进行海姆氏试验。实施例18和19显示的
数据确认本文所述的坎普他汀类似物对来自PNH患者的RBC裂解的抑制能力。
[0518] 在某些实施方案中，坎普他汀类似物，例如，长效坎普他汀类似物，可以保护PNH患者的红细胞免于表面累积显著量的C3和/或C3激活的产物。例如，由坎普他汀类似物，例如，长效坎普他汀类似物，保护PNH红血细胞不受补体介导的裂解，也可保护其不在表面累积显著量的C3和/或C3激活的产物。如本领域已知的，艾库组单抗( Alexion制药公司)是在许多国家被批准用于治疗PNH和aHUS的人源化抗C5单克隆抗体(参见，例如，Dmytrijuk
A,FDA report:eculizumab(Soliris)for the treatment of patients with paroxysmal
nocturnal hemoglobinuria.Oncologist.2008Sep；13(9):993-1000.doi:10.1634/
theoncologist.2008-0086.Epub 2008Sep 10；Westra D.,A new era in the diagnosis
and treatment of atypical haemolytic uraemic syndrome.Neth J Med.2012Apr；70
(3):121-9)。据报道，当PNH RBC暴露于艾库组单抗时，其可能在其表面表现出显著量的C3和/或C3激活产物的累积，所述累积可能促成对这些细胞的清除和/或血管外溶血(例如，在脾中)以及可能由此至少部分地导致在某些PNH患者中观察到持久的血液异常，例如，持久
性贫血，尽管所述患者已接受了艾库组单抗的治疗。不希望受任何理论束缚，这可能是由艾库组单抗对所述MAC形成的抑制而导致发生的，所述艾库组单抗保护细胞免于MAC介导的裂
解，但不抑制C3的激活或C3和/或C3激活产物的沉积，并且由于所述细胞缺乏GPI-锚定补体抑制蛋白，使得PNH细胞容易发生表面上的C3的激活以及C3和/或C3激活产物的沉积。不希
望受任何理论束缚，本文中所述的坎普他汀类似物抑制C3的激活并从而抑制C3激活产物的
产生的能力可能提供显著优势。在某些实施方案中，用本文所述的坎普他汀类似物治疗已
经或正在接受艾库组单抗治疗并继续表现出溶血的证据的受试者，例如，临床显著溶血，如引起贫血和/或需要输血处理。在某些实施方案中，以足以导致以下的浓度使用坎普他汀类似物：暴露于所述坎普他汀类似物的PNH RBC上的C3和/或C3激活产物的水平在来自健康受
试者的正常RBC表现出的范围内。在某些实施方案中，暴露于坎普他汀类似物的PNH RBC上
的C3和/或C3激活产物的水平(体外(例如，在海姆氏试验中)或体内)在平均水平或正常上
限的约1.2、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5或5.0之内。在某些实施方案中，暴露于坎普他汀类似物的PNH RBC上的C3和/或C3激活产物的水平(体外(例如，在海姆氏试验中)或体内)
低于暴露于Soliris的PNH RBC上的C3和/或C3激活产物的水平，所述Soliris的浓度能提供
相当的保护不受补体介导的裂解。在某些实施方案中，暴露于坎普他汀类似物(体外或体
内)的PNH RBC上的C3和/或C3激活产物的水平不超过暴露于艾库组单抗的PNH RBC上的C3
和/或C3激活产物水平的约5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％或50％，所述艾库组单抗的浓度能提供相当的保护不受补体介导的裂解。在某些实施方案中，暴露于坎普他汀类似
物的PNH RBC上的C3和/或C3激活产物的水平(体外或体内)在正常范围的平均水平或上限
的约1.2、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5或5.0之内。在某些实施方案中，所述PNH细胞包含II型PNH细胞、III型PNH细胞，或其混合物，或由其组成。在某些实施方案中，所述RBC是至少
50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、或更多的III型和/或II型RBC。在某些实施方案中，所述细胞可包含一些I型细胞。在某些实施方案中，可基于RBC表面上的GPI锚定蛋白如CD59的水平，将RBC分为I、II或III型，所述水平可用流式细胞术、免疫荧光或ELISA，例如，使用抗体(例如，单克隆抗体)或其它与所述GPI锚定蛋白结合的结合剂测量得到。在某些方面，对C3和/或C3激活产物在细胞或表面上的沉积的抑制作用可被用作坎普他汀类似
物在其它补体介导的疾病如aHUS、其它补体介导的溶血性疾病或其它补体介导的疾病中的
功效的指标。例如，在某些实施方案中，坎普他汀类似物在患有aHUS的受试者上抑制内皮细胞上的这种沉积。在某些实施方案中，可使用流式细胞术、免疫荧光或ELISA，例如，使用抗体(例如，单克隆抗体)或其它与C3和/或一种或多种C3激活产物结合的结合剂测量C3和/或
C3激活产物的水平。在某些实施方案中，C3激活产物是C3b、C3c或C3d。在某些实施方案中，结合剂结合C3d。在某些实施方案中，结合剂结合C3d和至少一种其它的C3激活产物。在某些实施方案中，与坎普他汀类似物体外接触(例如，在海姆氏试验中)的PNH患者的RBC被保护
免受激活的补体的作用，使得I型、II型和III型细胞的相对比例(百分比)或III型和I型、II型和I型、或III型和II型的相对比例或百分比，与使用失活的补体(例如，热灭活的补体)的对照测定法中的相对比例或百分比大致相同。在某些实施方案中，与坎普他汀类似物体外
接触(例如，在海姆氏试验中)的PNH患者的RBC被保护免受激活的补体的作用，使得I型、II型和III型细胞的相对比例或百分比或III型和I型、II型和I型、或III型和II型的比例或百分比，是在使用失活的补体(例如，热灭活的补体)的对照测定法中的相对比例或百分比的
5％之内。在某些实施方案中，补体可以通过热灭活而被灭活，所述热灭活可通过将补体成分或含有补体成分的血清或血浆加热至56摄氏度或更高而得以进行。
A,FDA report:eculizumab(Soliris)for the treatment of patients with paroxysmal
nocturnal hemoglobinuria.Oncologist.2008Sep；13(9):993-1000.doi:10.1634/
theoncologist.2008-0086.Epub 2008Sep 10；Westra D.,A new era in the diagnosis
and treatment of atypical haemolytic uraemic syndrome.Neth J Med.2012Apr；70
(3):121-9)。据报道，当PNH RBC暴露于艾库组单抗时，其可能在其表面表现出显著量的C3和/或C3激活产物的累积，所述累积可能促成对这些细胞的清除和/或血管外溶血(例如，在脾中)以及可能由此至少部分地导致在某些PNH患者中观察到持久的血液异常，例如，持久
性贫血，尽管所述患者已接受了艾库组单抗的治疗。不希望受任何理论束缚，这可能是由艾库组单抗对所述MAC形成的抑制而导致发生的，所述艾库组单抗保护细胞免于MAC介导的裂
解，但不抑制C3的激活或C3和/或C3激活产物的沉积，并且由于所述细胞缺乏GPI-锚定补体抑制蛋白，使得PNH细胞容易发生表面上的C3的激活以及C3和/或C3激活产物的沉积。不希
望受任何理论束缚，本文中所述的坎普他汀类似物抑制C3的激活并从而抑制C3激活产物的
产生的能力可能提供显著优势。在某些实施方案中，用本文所述的坎普他汀类似物治疗已
经或正在接受艾库组单抗治疗并继续表现出溶血的证据的受试者，例如，临床显著溶血，如引起贫血和/或需要输血处理。在某些实施方案中，以足以导致以下的浓度使用坎普他汀类似物：暴露于所述坎普他汀类似物的PNH RBC上的C3和/或C3激活产物的水平在来自健康受
试者的正常RBC表现出的范围内。在某些实施方案中，暴露于坎普他汀类似物的PNH RBC上
的C3和/或C3激活产物的水平(体外(例如，在海姆氏试验中)或体内)在平均水平或正常上
限的约1.2、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5或5.0之内。在某些实施方案中，暴露于坎普他汀类似物的PNH RBC上的C3和/或C3激活产物的水平(体外(例如，在海姆氏试验中)或体内)
低于暴露于Soliris的PNH RBC上的C3和/或C3激活产物的水平，所述Soliris的浓度能提供
相当的保护不受补体介导的裂解。在某些实施方案中，暴露于坎普他汀类似物(体外或体
内)的PNH RBC上的C3和/或C3激活产物的水平不超过暴露于艾库组单抗的PNH RBC上的C3
和/或C3激活产物水平的约5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％或50％，所述艾库组单抗的浓度能提供相当的保护不受补体介导的裂解。在某些实施方案中，暴露于坎普他汀类似
物的PNH RBC上的C3和/或C3激活产物的水平(体外或体内)在正常范围的平均水平或上限
的约1.2、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5或5.0之内。在某些实施方案中，所述PNH细胞包含II型PNH细胞、III型PNH细胞，或其混合物，或由其组成。在某些实施方案中，所述RBC是至少
50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、或更多的III型和/或II型RBC。在某些实施方案中，所述细胞可包含一些I型细胞。在某些实施方案中，可基于RBC表面上的GPI锚定蛋白如CD59的水平，将RBC分为I、II或III型，所述水平可用流式细胞术、免疫荧光或ELISA，例如，使用抗体(例如，单克隆抗体)或其它与所述GPI锚定蛋白结合的结合剂测量得到。在某些方面，对C3和/或C3激活产物在细胞或表面上的沉积的抑制作用可被用作坎普他汀类似
物在其它补体介导的疾病如aHUS、其它补体介导的溶血性疾病或其它补体介导的疾病中的
功效的指标。例如，在某些实施方案中，坎普他汀类似物在患有aHUS的受试者上抑制内皮细胞上的这种沉积。在某些实施方案中，可使用流式细胞术、免疫荧光或ELISA，例如，使用抗体(例如，单克隆抗体)或其它与C3和/或一种或多种C3激活产物结合的结合剂测量C3和/或
C3激活产物的水平。在某些实施方案中，C3激活产物是C3b、C3c或C3d。在某些实施方案中，结合剂结合C3d。在某些实施方案中，结合剂结合C3d和至少一种其它的C3激活产物。在某些实施方案中，与坎普他汀类似物体外接触(例如，在海姆氏试验中)的PNH患者的RBC被保护
免受激活的补体的作用，使得I型、II型和III型细胞的相对比例(百分比)或III型和I型、II型和I型、或III型和II型的相对比例或百分比，与使用失活的补体(例如，热灭活的补体)的对照测定法中的相对比例或百分比大致相同。在某些实施方案中，与坎普他汀类似物体外
接触(例如，在海姆氏试验中)的PNH患者的RBC被保护免受激活的补体的作用，使得I型、II型和III型细胞的相对比例或百分比或III型和I型、II型和I型、或III型和II型的比例或百分比，是在使用失活的补体(例如，热灭活的补体)的对照测定法中的相对比例或百分比的
5％之内。在某些实施方案中，补体可以通过热灭活而被灭活，所述热灭活可通过将补体成分或含有补体成分的血清或血浆加热至56摄氏度或更高而得以进行。
[0519] 在某些实施方案中，在确定裂解量的过程中，可以额外地或替代地使用LDH(一种在红血细胞中大量存在的并且充当溶血功能标记物的酶)的测量、一种或多种血液学参数
如血细胞比容、血红蛋白，和/或网织红细胞的测量。在某些实施方案中，可以使用一种或多种方法来确定RBC的裂解量，例如，易受补体介导的裂解的RBC，例如PNH患者细胞、aHUS患者细胞、来自患有其它补体介导的血液疾病的受试者的细胞、暴露于异常高水平的补体激活
的细胞。在某些方面，本公开提供了一种方法，所述方法包括将一种或多种细胞体外或体内接触本文所述的坎普他汀类似物以及测量所述坎普他汀类似物对一个或多个补体介导的
细胞损伤的指示物和/或细胞表面的补体激活或沉积的效应。在某些实施方案中，以足够的浓度与所述一种或多种细胞接触足够长的时间，导致以异常高的值减少或异常低的值升高
至正常范围内或至正常范的下限或上限的5％、10％、15％、20％、25％以内。
如血细胞比容、血红蛋白，和/或网织红细胞的测量。在某些实施方案中，可以使用一种或多种方法来确定RBC的裂解量，例如，易受补体介导的裂解的RBC，例如PNH患者细胞、aHUS患者细胞、来自患有其它补体介导的血液疾病的受试者的细胞、暴露于异常高水平的补体激活
的细胞。在某些方面，本公开提供了一种方法，所述方法包括将一种或多种细胞体外或体内接触本文所述的坎普他汀类似物以及测量所述坎普他汀类似物对一个或多个补体介导的
细胞损伤的指示物和/或细胞表面的补体激活或沉积的效应。在某些实施方案中，以足够的浓度与所述一种或多种细胞接触足够长的时间，导致以异常高的值减少或异常低的值升高
至正常范围内或至正常范的下限或上限的5％、10％、15％、20％、25％以内。
[0520] 在某些方面，本公开提供了一种选择或改进用于患有补体介导的溶血病如PNH的患者的给药方案或给药方案的一个或多个成分的方法。所述给药方案的一个或多个成分可
以包括剂量、施用间隔、施用途径(例如，静脉内的或皮下的)，或其组合。剂量可以是负荷剂量、维持剂量，或两者兼而有之。在某些实施方案中，可从患者得到一份或多份血液样品，并且可以选择或改进针对坎普他汀类似物(例如，长效坎普他汀类似物)的剂量方案或其成
分，以达到体外所需的使所述患者的RBC免于裂解和/或免于累积C3和/或C3激活产物的保
护水平。在某些实施方案中，可将一种或多种剂量的坎普他汀类似物，例如，长效坎普他汀类似物，施用给患者，并且随后可从患者获得一份或多份血液样品并评估其表面上的C3和/或C3激活产物的水平。在某些实施方案中，可选择或改进给药方案或其成分，例如，剂量、施用间隔或施用途径，以达到体外或体内所需的使所述患者的RBC免于裂解和/或免于累积C3
和/或C3激活的产物的保护水平。在某些实施方案中，可选择或改进给药方案或其成分，例如，剂量、施用间隔或施用途径，以达到体内所需的使所述患者的RBC免于血管外清除和/或血管外裂解的保护水平。所需的水平可以是，例如，本领域接受的能提供具有临床意义的益处的水平，给特定病人提供具有临床意义的益处的水平，在正常范围内的水平，由医生选择的水平，或任意其它选择的水平。参数的正常范围可以是本领域中已知的和/或可以是由实验室(例如，临床实验室)建立的参考范围，其中，在至少95％、96％、97％、98％或99％的一般人群中或至少95％、96％、97％、98％或99％的健康个体(其可以任选地匹配一个或多个人口统计变量，如性别、年龄等)或获自其的生物样品(如血液样品)中测量的所述相关参数的值将落入参考范围内。可使用代表一般人群或代表健康个体的样本人群建立参考范围。
以包括剂量、施用间隔、施用途径(例如，静脉内的或皮下的)，或其组合。剂量可以是负荷剂量、维持剂量，或两者兼而有之。在某些实施方案中，可从患者得到一份或多份血液样品，并且可以选择或改进针对坎普他汀类似物(例如，长效坎普他汀类似物)的剂量方案或其成
分，以达到体外所需的使所述患者的RBC免于裂解和/或免于累积C3和/或C3激活产物的保
护水平。在某些实施方案中，可将一种或多种剂量的坎普他汀类似物，例如，长效坎普他汀类似物，施用给患者，并且随后可从患者获得一份或多份血液样品并评估其表面上的C3和/或C3激活产物的水平。在某些实施方案中，可选择或改进给药方案或其成分，例如，剂量、施用间隔或施用途径，以达到体外或体内所需的使所述患者的RBC免于裂解和/或免于累积C3
和/或C3激活的产物的保护水平。在某些实施方案中，可选择或改进给药方案或其成分，例如，剂量、施用间隔或施用途径，以达到体内所需的使所述患者的RBC免于血管外清除和/或血管外裂解的保护水平。所需的水平可以是，例如，本领域接受的能提供具有临床意义的益处的水平，给特定病人提供具有临床意义的益处的水平，在正常范围内的水平，由医生选择的水平，或任意其它选择的水平。参数的正常范围可以是本领域中已知的和/或可以是由实验室(例如，临床实验室)建立的参考范围，其中，在至少95％、96％、97％、98％或99％的一般人群中或至少95％、96％、97％、98％或99％的健康个体(其可以任选地匹配一个或多个人口统计变量，如性别、年龄等)或获自其的生物样品(如血液样品)中测量的所述相关参数的值将落入参考范围内。可使用代表一般人群或代表健康个体的样本人群建立参考范围。
[0521] 在某些实施方案中，包含CRM的长效坎普他汀类似物被设计成在皮下或肌肉内施用给患者之后，相对于不包含CRM的长效坎普他汀类似物，具有较慢的全身性吸收速率。在某些实施方案中，选择特定的CRM属性，例如，长度，以在皮下或肌肉内施用之后，相对于至少一些其它的CRM，具有所需的全身性吸收速率。在某些实施方案中，相对于剂量相当的不与CRM连接的坎普他汀类似物，降低了所述Cmax，其可能因此将所述化合物的血浆浓度保持在所需的窗口之内，例如，治疗窗口。在某些实施方案中，长效坎普他汀类似物的组合物的特征在于，当皮下施用时，基于在所述注射位点的目测，在施用后的约1、2、3、4、6、8、12、15、
30、45、60、90或120小时内，剂量呈现为完全吸收。
30、45、60、90或120小时内，剂量呈现为完全吸收。
[0522] 应该理解，可以存在初次治疗阶段，其中治疗更频繁，和/或其中施用更高的剂量。例如，在具有PNH或aHUS的受试者中，可能需要几次施用才能达到受试者的大部分RBC的保
护。此后，可以使用更低的剂量和/或更低的给药频率，例如，以保护新形成的RBC和/或以补充现有RBC的保护。当然，在适当时，可以遵循用于治疗任何疾病的类似方案。在某些实施方案中，使用静脉内施用开始治疗，然后转换至替代的途径，例如皮下、肌肉内、透皮或真皮内进行维持疗法。取决于疾病，治疗可以间隔地(例如隔数月、数年)或不确定地继续。适当的剂量和定量施用方案至少部分地取决于坎普他汀类似物(或其它活性剂)的效能和半衰期，
且可以任选地为特定受体定制，例如，通过施用递增的剂量，直到达到预选择的期望应答，诸如期望的补体抑制和/或细胞保护的程度。如果需要的话，可以至少部分地基于多种因素来选择任何特定受试者的具体剂量水平，所述因素包括采用的具体化合物的活性、要治疗
的特定病症、年龄、体重、一般健康、给药途径、排泄速率、任何药物组合和/或在得自受试者的一个或多个样品中测得的补体蛋白表达或活性程度。
护。此后，可以使用更低的剂量和/或更低的给药频率，例如，以保护新形成的RBC和/或以补充现有RBC的保护。当然，在适当时，可以遵循用于治疗任何疾病的类似方案。在某些实施方案中，使用静脉内施用开始治疗，然后转换至替代的途径，例如皮下、肌肉内、透皮或真皮内进行维持疗法。取决于疾病，治疗可以间隔地(例如隔数月、数年)或不确定地继续。适当的剂量和定量施用方案至少部分地取决于坎普他汀类似物(或其它活性剂)的效能和半衰期，
且可以任选地为特定受体定制，例如，通过施用递增的剂量，直到达到预选择的期望应答，诸如期望的补体抑制和/或细胞保护的程度。如果需要的话，可以至少部分地基于多种因素来选择任何特定受试者的具体剂量水平，所述因素包括采用的具体化合物的活性、要治疗
的特定病症、年龄、体重、一般健康、给药途径、排泄速率、任何药物组合和/或在得自受试者的一个或多个样品中测得的补体蛋白表达或活性程度。
[0523] 在某些方面，本文描述了这样的方法，其中将患者从用不包含坎普他汀类似物的补体抑制剂治疗，转换到用坎普他汀类似物(例如，长效坎普他汀类似物(LACA)，细胞反应性的或靶向的坎普他汀类似物)治疗。为简明起见，针对LACA描述这样的方法，但该方法也可以应用于将患者转换到用细胞反应性的或靶向的坎普他汀类似物治疗。在某些实施方案
中，被施用坎普他汀类似物(例如，LACA)的患者在开始用坎普他汀类似物(例如LACA)治疗
时，正在用另外一种不包含坎普他汀类似物的补体抑制剂治疗。在一些实施方案中，被施用坎普他汀类似物的患者在开始用坎普他汀类似物治疗时正在进行用另外的不包含坎普他
汀类似物的补体抑制剂治疗，在这样的实施方案中所述患者的补体系统可能在开始用LACA
治疗时已经被抑制(例如，通过合适的测定法(例如使用患者血清进行的离体血清诱导溶血
测定法)测得)。在某些实施方案中，另外的补体抑制剂是C5的抑制剂(即，通常通过结合C5来抑制C5的活化和/或活性的试剂)。在某些实施方案中，所述C5的抑制剂是抗-C5抗体，例如依库珠单抗、抗-C5siRNA(如ALN-CC5(Alnylam Pharmaceuticals))、抗-C5多肽(如
Coversin(Volution Immuno Pharmaceuticals，Ltd.))或者抗-C5小分子。在某些实施方案中，另外的补体抑制剂可以是C3的抑制剂。在某些实施方案中，停止用另外的补体抑制剂
(例如C5的抑制剂)治疗并且将所述患者转换到用LACA治疗。应当理解，理想地以这样的方
式转换到用LACA治疗：使患者在向用LACA作为唯一补体抑制剂疗法过渡的过程中不会经历
临床上显著的补体系统抑制降低。
中，被施用坎普他汀类似物(例如，LACA)的患者在开始用坎普他汀类似物(例如LACA)治疗
时，正在用另外一种不包含坎普他汀类似物的补体抑制剂治疗。在一些实施方案中，被施用坎普他汀类似物的患者在开始用坎普他汀类似物治疗时正在进行用另外的不包含坎普他
汀类似物的补体抑制剂治疗，在这样的实施方案中所述患者的补体系统可能在开始用LACA
治疗时已经被抑制(例如，通过合适的测定法(例如使用患者血清进行的离体血清诱导溶血
测定法)测得)。在某些实施方案中，另外的补体抑制剂是C5的抑制剂(即，通常通过结合C5来抑制C5的活化和/或活性的试剂)。在某些实施方案中，所述C5的抑制剂是抗-C5抗体，例如依库珠单抗、抗-C5siRNA(如ALN-CC5(Alnylam Pharmaceuticals))、抗-C5多肽(如
Coversin(Volution Immuno Pharmaceuticals，Ltd.))或者抗-C5小分子。在某些实施方案中，另外的补体抑制剂可以是C3的抑制剂。在某些实施方案中，停止用另外的补体抑制剂
(例如C5的抑制剂)治疗并且将所述患者转换到用LACA治疗。应当理解，理想地以这样的方
式转换到用LACA治疗：使患者在向用LACA作为唯一补体抑制剂疗法过渡的过程中不会经历
临床上显著的补体系统抑制降低。
[0524] 例如，对于患有补体介导的溶血性贫血(例如PNH)的患者，所述患者在停止用另外的补体抑制剂治疗时，不会经历临床上显著的溶血升高(例如，通过LDH水平和/或离体血清溶血活性所测得)。在某些实施方案中，监测所述患者并且妥善处理所述过渡，使得所述患者不会经历测得的LDH水平上升超过10％或者测得的溶血活性上升超过10％。在某些实施
方案中，用使得在过渡期间维持对离体血清溶血活性至少80％的抑制的方式，过渡到用
LACA作为唯一补体抑制剂疗法的治疗。“过渡期”是指从首剂LACA当天开始，并且到另外的补体抑制剂末剂过后的4乘以X天为止的时间段，其中“X”表示在首剂LACA施用给患者之前，另外的补体抑制剂施用给患者的给药间隔，例如以推荐剂量使用时，另外的补体抑制剂的
推荐给药间隔。药物的“推荐剂量”是指在美国FDA批准的标签上的处方信息中针对所述药物指定的剂量，或者如果所述药物未经FDA批准，则为在所述药物使用的管辖地负责药物审批的政府机构所批准的标签上的处方信息中针对所述药物指定的剂量。药物的“推荐给药
间隔”是指在处方信息中和/或在美国FDA批准的标签上针对所述药物所指定的给药间隔，
或者如果所述药物未经FDA批准，则为处方信息中和/或在所述药物使用的管辖地负责药物
审批的政府机构所批准的标签上指定的给药间隔。应该理解，药物可以具有两个或更多个
不同的推荐给药方案。这样的给药方案可能适合用于不同的适应症，适合用于具有不同特
征的患者，或者只是替代性的剂量、给药间隔和施用途径的治疗有效的组合。在药物具有两个或更多个推荐给药方案的情况下，应当理解，术语“推荐给药间隔”是指通过特定施用途径施用的特定剂量所使用的推荐给药间隔。
方案中，用使得在过渡期间维持对离体血清溶血活性至少80％的抑制的方式，过渡到用
LACA作为唯一补体抑制剂疗法的治疗。“过渡期”是指从首剂LACA当天开始，并且到另外的补体抑制剂末剂过后的4乘以X天为止的时间段，其中“X”表示在首剂LACA施用给患者之前，另外的补体抑制剂施用给患者的给药间隔，例如以推荐剂量使用时，另外的补体抑制剂的
推荐给药间隔。药物的“推荐剂量”是指在美国FDA批准的标签上的处方信息中针对所述药物指定的剂量，或者如果所述药物未经FDA批准，则为在所述药物使用的管辖地负责药物审批的政府机构所批准的标签上的处方信息中针对所述药物指定的剂量。药物的“推荐给药
间隔”是指在处方信息中和/或在美国FDA批准的标签上针对所述药物所指定的给药间隔，
或者如果所述药物未经FDA批准，则为处方信息中和/或在所述药物使用的管辖地负责药物
审批的政府机构所批准的标签上指定的给药间隔。应该理解，药物可以具有两个或更多个
不同的推荐给药方案。这样的给药方案可能适合用于不同的适应症，适合用于具有不同特
征的患者，或者只是替代性的剂量、给药间隔和施用途径的治疗有效的组合。在药物具有两个或更多个推荐给药方案的情况下，应当理解，术语“推荐给药间隔”是指通过特定施用途径施用的特定剂量所使用的推荐给药间隔。
[0525] 在某些实施方案中，首先将LACA施用给已经在一段时间内接受了至少一剂另外的补体抑制剂的患者，所述一段时间不超过另外的补体抑制剂的推荐给药间隔的1.5倍，例
如，在不超过另外的补体抑制剂的推荐给药间隔的一段时间内，例如，在不超过另外的补体抑制剂的推荐给药间隔的一半的一段时间内。在某些实施方案中，在所述患者的首剂LACA
之前的2周内，所述患者接受了至少一剂另外的补体抑制剂。在某些实施方案中，在所述患者的首剂LACA之前的1周内，所述患者接受了至少一剂另外的补体抑制剂。在某些实施方案中，在所述患者的首剂LACA之前不到一周的时间内，所述患者已经接受了一剂另外的补体
抑制剂。在某些实施方案中，在所述患者的首剂LACA当天，所述患者接受了一剂另外的补体抑制剂。在某些实施方案中，用有效量的另外的补体抑制剂和有效量的LACA治疗患者，从而使得另外的补体抑制剂和LACA的治疗有效的血液水平都维持一段时间。这样的联合治疗的
时间段可以持续例如，1周至2周、2周至4周、4周至6周、6周至8周、8周至12周、12周至26周。
在某些实施方案中，联合治疗的时间段可以是1、2、3、4、5或6个月。在某些实施方案中，联合治疗的时间段是从首剂LACA至末剂另外的补体抑制剂之间的一段时间。可以以患者在开始
用LACA治疗之前就已经接受的常规维持剂量来施用另外的补体抑制剂。在某些实施方案
中，可以以随时间(逐渐)减少的剂量施用另外的补体抑制剂，直到最终停止用另外的补体
抑制剂治疗。例如，在某些实施方案中，可以将另外的补体抑制剂的剂量减少至维持剂量的约67％，然后末剂为维持剂量的约33％。在某些实施方案中，可以将不同补体抑制剂的剂量减少至维持剂量的约75％，然后为维持剂量的约50％，然后末剂为维持剂量的约25％。在某些实施方案中，其中用LACA和另外的补体抑制剂治疗所述患者的总时间段(即，从首剂LACA至末剂第一补体抑制剂之间的时间)为2周至26周。在某些实施方案中，另外的补体抑制剂
不是逐渐减少的。相反，在某些实施方案中，例如，在LACA达到了治疗有效的血液水平之后，允许另外的补体抑制剂的血液水平随着其被代谢或以其他方式从身体移除而降低。在某些
实施方案中，在过渡期间和/或在其之后监测患者血清的离体血清诱导的溶血。在某些实施方案中，在从用另外的补体抑制剂治疗向用LACA作为唯一补体抑制剂的治疗转变的过渡期
中，如果检测发现患者血清的离体血清诱导的溶血未减少至少80％，例如至少90％，那么可以提升LACA的剂量。在某些实施方案中，C3片段(例如C3d)对PNH患者的红细胞的调理作用
的降低，可以指示患者正在接受治疗有效量的LACA。在某些实施方案中，继续用另外的补体抑制剂(例如C5的抑制剂)和LACA治疗至少6个月，例如6至12个月，12至24个月或更长时间
(例如，无限期地)。在某些实施方案中，以低于其作为患者的唯一补体抑制剂疗法使用时所用的剂量，施用另外的补体抑制剂和/或LACA。应该注意到，如果有需要，可以使用类似的方法将患者从用LACA治疗转换到用另外的补体抑制剂治疗，或者将患者从用第一LACA治疗转
换到用另外一种LACA治疗。
如，在不超过另外的补体抑制剂的推荐给药间隔的一段时间内，例如，在不超过另外的补体抑制剂的推荐给药间隔的一半的一段时间内。在某些实施方案中，在所述患者的首剂LACA
之前的2周内，所述患者接受了至少一剂另外的补体抑制剂。在某些实施方案中，在所述患者的首剂LACA之前的1周内，所述患者接受了至少一剂另外的补体抑制剂。在某些实施方案中，在所述患者的首剂LACA之前不到一周的时间内，所述患者已经接受了一剂另外的补体
抑制剂。在某些实施方案中，在所述患者的首剂LACA当天，所述患者接受了一剂另外的补体抑制剂。在某些实施方案中，用有效量的另外的补体抑制剂和有效量的LACA治疗患者，从而使得另外的补体抑制剂和LACA的治疗有效的血液水平都维持一段时间。这样的联合治疗的
时间段可以持续例如，1周至2周、2周至4周、4周至6周、6周至8周、8周至12周、12周至26周。
在某些实施方案中，联合治疗的时间段可以是1、2、3、4、5或6个月。在某些实施方案中，联合治疗的时间段是从首剂LACA至末剂另外的补体抑制剂之间的一段时间。可以以患者在开始
用LACA治疗之前就已经接受的常规维持剂量来施用另外的补体抑制剂。在某些实施方案
中，可以以随时间(逐渐)减少的剂量施用另外的补体抑制剂，直到最终停止用另外的补体
抑制剂治疗。例如，在某些实施方案中，可以将另外的补体抑制剂的剂量减少至维持剂量的约67％，然后末剂为维持剂量的约33％。在某些实施方案中，可以将不同补体抑制剂的剂量减少至维持剂量的约75％，然后为维持剂量的约50％，然后末剂为维持剂量的约25％。在某些实施方案中，其中用LACA和另外的补体抑制剂治疗所述患者的总时间段(即，从首剂LACA至末剂第一补体抑制剂之间的时间)为2周至26周。在某些实施方案中，另外的补体抑制剂
不是逐渐减少的。相反，在某些实施方案中，例如，在LACA达到了治疗有效的血液水平之后，允许另外的补体抑制剂的血液水平随着其被代谢或以其他方式从身体移除而降低。在某些
实施方案中，在过渡期间和/或在其之后监测患者血清的离体血清诱导的溶血。在某些实施方案中，在从用另外的补体抑制剂治疗向用LACA作为唯一补体抑制剂的治疗转变的过渡期
中，如果检测发现患者血清的离体血清诱导的溶血未减少至少80％，例如至少90％，那么可以提升LACA的剂量。在某些实施方案中，C3片段(例如C3d)对PNH患者的红细胞的调理作用
的降低，可以指示患者正在接受治疗有效量的LACA。在某些实施方案中，继续用另外的补体抑制剂(例如C5的抑制剂)和LACA治疗至少6个月，例如6至12个月，12至24个月或更长时间
(例如，无限期地)。在某些实施方案中，以低于其作为患者的唯一补体抑制剂疗法使用时所用的剂量，施用另外的补体抑制剂和/或LACA。应该注意到，如果有需要，可以使用类似的方法将患者从用LACA治疗转换到用另外的补体抑制剂治疗，或者将患者从用第一LACA治疗转
换到用另外一种LACA治疗。
[0526] 在某些方面，本文描述了用于向受试者施用长效坎普他汀类似物(LACA)的某些剂量、给药方案、组合物和方法。在某些方面，本文描述的某些剂量、给药方案、组合物和方法已经用于临床试验中，所述临床试验涉及向健康的人受试者或PNH患者通过皮下或玻璃体
内施用LACA，所述LACA包含分子量为40kD的直链PEG和两个坎普他汀类似物部分(所述直链
PEG的每个末端各连接一个)，或者涉及向AMD患者玻璃体内施用所述LACA(参见实施例)。因此，在某些方面，本文描述的剂量、给药方案、组合物和/或方法可用于向受试者(例如，患有补体介导的病症的患者)施用LACA，所述LACA包含分子量为40kD的直链PEG和两个坎普他汀
类似物部分。在某些实施方案中，所述两个坎普他汀类似物部分与直链PEG的末端连接(即，所述PEG的每个末端各连接一个坎普他汀类似物部分)。在某些实施方案中，各坎普他汀类
似物部分经由其C-末端与直链PEG连接。在某些实施方案中，所述LACA可以是CA28-2GS-BF
或CA28-2TS-BF。
内施用LACA，所述LACA包含分子量为40kD的直链PEG和两个坎普他汀类似物部分(所述直链
PEG的每个末端各连接一个)，或者涉及向AMD患者玻璃体内施用所述LACA(参见实施例)。因此，在某些方面，本文描述的剂量、给药方案、组合物和/或方法可用于向受试者(例如，患有补体介导的病症的患者)施用LACA，所述LACA包含分子量为40kD的直链PEG和两个坎普他汀
类似物部分。在某些实施方案中，所述两个坎普他汀类似物部分与直链PEG的末端连接(即，所述PEG的每个末端各连接一个坎普他汀类似物部分)。在某些实施方案中，各坎普他汀类
似物部分经由其C-末端与直链PEG连接。在某些实施方案中，所述LACA可以是CA28-2GS-BF
或CA28-2TS-BF。
[0527] 如本文所述，坎普他汀类似物部分可以包含隔离物，所述隔离物将具有侧链(所述侧链包含反应性官能团，例如，伯胺或仲胺、巯基或巯基反应性基团)的氨基酸(或者包含此类氨基酸的氨基酸序列)与包含环状部分的坎普他汀类似物部分的分隔开，或者这样的连
接部分可以不存在。存在时，这样的隔离物部分可以包含被取代的或未被取代的、饱和的或P1 P2 P3
不饱和的烷基链，低聚(乙二醇)链，和/或本文中用L(或L 、L 或L )表示的任何其它部分。
当化合物中存在两个或更多个包含隔离物部分的坎普他汀类似物部分时，所述隔离物部分
在各种实施方案中可以相同或不同。剂量、给药方案、组合物和/或方法可被用于施用包含坎普他汀类似物部分的长效坎普他汀类似物，所述坎普他汀类似物部分包含任何上述隔离
物部分。
接部分可以不存在。存在时，这样的隔离物部分可以包含被取代的或未被取代的、饱和的或P1 P2 P3
不饱和的烷基链，低聚(乙二醇)链，和/或本文中用L(或L 、L 或L )表示的任何其它部分。
当化合物中存在两个或更多个包含隔离物部分的坎普他汀类似物部分时，所述隔离物部分
在各种实施方案中可以相同或不同。剂量、给药方案、组合物和/或方法可被用于施用包含坎普他汀类似物部分的长效坎普他汀类似物，所述坎普他汀类似物部分包含任何上述隔离
物部分。
[0528] 本文还描述到，在各种实施方案中，坎普他汀类似物部分可以经由很多种不同连接中的任一种与PEG(或其他聚合物)连接。在一些实施方案中，(一个或多个)坎普他汀类似物部分可以经由以下部分与CRM连接：包含不饱和烷基部分的部分、包含非芳族环系的部
分、芳族部分、醚部分、酰胺部分、酯部分、羰基部分、亚胺部分、硫醚部分、氨基酸残基、和/或上文中任何用L(或LP1，LP2或LP3)表示的部分。例如，如本文所述，在特定的实施方案中，(一种或多种)坎普他汀类似物可以经由氨基甲酸酯连接，酯连接，酰胺连接或两种或更多
种这样的连接的组合，与CRM连接。当化合物中存在两个或更多个坎普他汀类似物部分时，各种实施方案中的与所述聚合物的连接可以相同或不同。剂量、给药方案、组合物和/或方法可被用于施用长效坎普他汀类似物，所述长效坎普他汀类似物包含经由任何上述部分与
CRM连接的坎普他汀类似物部分。
分、芳族部分、醚部分、酰胺部分、酯部分、羰基部分、亚胺部分、硫醚部分、氨基酸残基、和/或上文中任何用L(或LP1，LP2或LP3)表示的部分。例如，如本文所述，在特定的实施方案中，(一种或多种)坎普他汀类似物可以经由氨基甲酸酯连接，酯连接，酰胺连接或两种或更多
种这样的连接的组合，与CRM连接。当化合物中存在两个或更多个坎普他汀类似物部分时，各种实施方案中的与所述聚合物的连接可以相同或不同。剂量、给药方案、组合物和/或方法可被用于施用长效坎普他汀类似物，所述长效坎普他汀类似物包含经由任何上述部分与
CRM连接的坎普他汀类似物部分。
[0529] 在某些实施方案中，本申请所描述的剂量、给药方案、组合物和/或方法可被用于施用LACA，所述LACA在一个或多个方面区别于本文所述的临床试验中所使用的LACA。例如，这样的LACA可以包含：(i)作为CRM的另外的聚合物(例如，POZ、多肽、支链PEG)，(ii)作为CRM的分子量低于或高于40kD的聚合物；(iii)不同数目的坎普他汀类似物部分(例如，1个、
3个、4个或更多个坎普他汀类似物部分，而不是2个坎普他汀类似物部分)，(iv)一个或多个坎普他汀类似物部分，其包含替代了SEQ ID NO：28的不同于SEQ ID NO：28的序列(例如，本文所述的任何其他坎普他汀类似物部分)；(v)(一种或多种)延伸了一个不同的氨基酸残基
(或包含该氨基酸残基的氨基酸序列)的坎普他汀类似物，其具有侧链，所述侧链包含伯胺
或仲胺但不包含赖氨酸，或者包含不同的反应性官能团(如巯基或巯基反应性基团)；(vi)
经由坎普他汀类似物部分的N末端而不是经由C末端与CRM连接的(一种或多种)坎普他汀类
似物部分；(vii)一个或多个坎普他汀类似物部分的游离末端处的不同阻断部分；(viii)
(i)、(ii)、(iii)、(iv)、(v)、(vi)、(vii)和(vii)中的两个或更多个的任意组合。
3个、4个或更多个坎普他汀类似物部分，而不是2个坎普他汀类似物部分)，(iv)一个或多个坎普他汀类似物部分，其包含替代了SEQ ID NO：28的不同于SEQ ID NO：28的序列(例如，本文所述的任何其他坎普他汀类似物部分)；(v)(一种或多种)延伸了一个不同的氨基酸残基
(或包含该氨基酸残基的氨基酸序列)的坎普他汀类似物，其具有侧链，所述侧链包含伯胺
或仲胺但不包含赖氨酸，或者包含不同的反应性官能团(如巯基或巯基反应性基团)；(vi)
经由坎普他汀类似物部分的N末端而不是经由C末端与CRM连接的(一种或多种)坎普他汀类
似物部分；(vii)一个或多个坎普他汀类似物部分的游离末端处的不同阻断部分；(viii)
(i)、(ii)、(iii)、(iv)、(v)、(vi)、(vii)和(vii)中的两个或更多个的任意组合。
[0530] 如上所述，在某些方面，本文描述的剂量、给药方案、组合物和/或方法可被用于施用LACA，其包含作为CRM的分子量约为40kD的聚合物(例如，PEG)，例如，分子量为36kD-44kD、37kD-43kD、38kD-42kD或39kD-41kD的聚合物。然而，在某些实施方案中，剂量、给药方案、组合物和/或方法可被用于施用包含分子量在更宽范围内的聚合物的LACA。在值得特别关注的某些实施方案中，所述聚合物的分子量不大于45kD。在某些实施方案中，所述聚合物具有10kD-45kD的分子量。在某些实施方案中，所述聚合物具有20kD-45kD的分子量。在某些实施方案中，所述聚合物具有30kD-40kD的分子量。在某些实施方案中，所述聚合物具有
30kD至45kD的分子量。在某些实施方案中，所述聚合物具有35kD-45kD的分子量。在某些实施方案中，所述聚合物的分子量大于45kD，例如高达50kD。应当理解，聚合物的分子量可以是指本文讨论的组合物中聚合物分子的平均分子量。
30kD至45kD的分子量。在某些实施方案中，所述聚合物具有35kD-45kD的分子量。在某些实施方案中，所述聚合物的分子量大于45kD，例如高达50kD。应当理解，聚合物的分子量可以是指本文讨论的组合物中聚合物分子的平均分子量。
[0531] 在某些实施方案中，所述组合物包含5％的右旋糖作为药学上可接受的运载体。然而，可以使用任何药学上可接受的运载体。
[0532] 在各种实施方案中，本文描述的剂量、给药方案、组合物和/或方法可被用于治疗本文提到的任何补体介导的病症。不受限制地，这样的病症包括，例如，PNH、NMO、重症肌无力、aHUS、COPD、特发性肺纤维化、移植后的器官排斥(例如急性或慢性排斥)、类天疱疮和AMD。在某些实施方案中，所述补体介导的病症是补体介导的慢性病症，例如，本文提及的任何补体介导的慢性病症。在某些实施方案中，所述补体介导的病症是Th17相关病症，例如本文提及的任何Th17相关病症。
[0533] 在某些方面，本文描述了用于通过皮下施用LACA来治疗患者的多种剂量、给药方案、组合物和方法。在用包含40kD的PEG部分的LACA进行的实验中，发现粘度而非溶解度是限制包含LACA的组合物的浓度的主要因素，在通过给定内径或规格号的针递送给定体积的
组合物所需的时间和压力方面，所述组合物可以以医师和患者可接受的方式，通过皮下或
IVT注射施用。规格号描述空心针的外径，较大的规格号表示较小的外径。通常，患者和医师优选具有较大规格号的针，因为与具有较小规格号的针相比，其可能与较少的疼痛和/或组织损伤相关(或可以被认为相关)。内径取决于外径和壁厚。对于标准的针，规格号越大，则内径越小(例如，27号针的内径大于29号针的内径，后者的内径又大于30号针的内径)。
组合物所需的时间和压力方面，所述组合物可以以医师和患者可接受的方式，通过皮下或
IVT注射施用。规格号描述空心针的外径，较大的规格号表示较小的外径。通常，患者和医师优选具有较大规格号的针，因为与具有较小规格号的针相比，其可能与较少的疼痛和/或组织损伤相关(或可以被认为相关)。内径取决于外径和壁厚。对于标准的针，规格号越大，则内径越小(例如，27号针的内径大于29号针的内径，后者的内径又大于30号针的内径)。
[0534] 在一些实施方案中，包含LACA的组合物，例如药物组合物，具有150mg/ml的浓度。发现可以使用27号针容易地递送150mg/ml包含40kD PEG的LACA溶液。因此，在一些实施方
案中，使用27号针以高达150mg/ml，例如75mg/ml-90mg/ml、85mg/ml-95mg/ml、90mg/ml-
100mg/ml、95mg/ml-105mg/ml、100mg/ml-110mg/ml、105mg/ml-115mg/ml、110mg/ml-120mg/ml、115mg/ml-125mg/ml、120mg/ml-130mg/ml、125mg/ml-135mg/ml、130mg/ml-140mg/ml、
135mg/ml-145mg/ml、140mg/ml-150mg/ml，例如100mg/ml、125mg/ml或150mg/ml的浓度施用包含分子量为约40kD的PEG的LACA的剂量。在一些实施方案中，包含含有分子量为约40kD的PEG的LACA的组合物具有高达150mg/ml的浓度，例如75mg/ml-90mg/ml、85mg/ml-95mg/ml、
90mg/ml-100mg/ml、95mg/ml-105mg/ml、100mg/ml-110mg/ml、105mg/ml-115mg/ml、110mg/ml-120mg/ml、115mg/ml-125mg/ml、120mg/ml-130mg/ml、125mg/ml-135mg/ml、130mg/ml-
140mg/ml、135mg/ml-145mg/ml、140mg/ml-150mg/ml，例如100mg/ml、125mg/ml或150mg/ml。
在一些实施方案中，包含含有40kD PEG的LACA的组合物具有150mg/ml-180mg/ml的浓度。在一些实施方案中，包含含有分子量为约40kD的PEG的LACA的组合物具有180mg/ml-200mg/ml
的浓度。在一些实施方案中，使用27号针按以下浓度施用包含含有分子量为约40kD的PEG的LACA的组合物：150mg/ml-160mg/ml、160mg/ml-170mg/ml、170mg/ml-180mg/ml、180mg/ml-
190mg/ml或190mg/ml-200mg/ml。当然，也可以替代地使用较小规格号(例如，25、26号)的针来代替27号(或更大)规格号的针。
案中，使用27号针以高达150mg/ml，例如75mg/ml-90mg/ml、85mg/ml-95mg/ml、90mg/ml-
100mg/ml、95mg/ml-105mg/ml、100mg/ml-110mg/ml、105mg/ml-115mg/ml、110mg/ml-120mg/ml、115mg/ml-125mg/ml、120mg/ml-130mg/ml、125mg/ml-135mg/ml、130mg/ml-140mg/ml、
135mg/ml-145mg/ml、140mg/ml-150mg/ml，例如100mg/ml、125mg/ml或150mg/ml的浓度施用包含分子量为约40kD的PEG的LACA的剂量。在一些实施方案中，包含含有分子量为约40kD的PEG的LACA的组合物具有高达150mg/ml的浓度，例如75mg/ml-90mg/ml、85mg/ml-95mg/ml、
90mg/ml-100mg/ml、95mg/ml-105mg/ml、100mg/ml-110mg/ml、105mg/ml-115mg/ml、110mg/ml-120mg/ml、115mg/ml-125mg/ml、120mg/ml-130mg/ml、125mg/ml-135mg/ml、130mg/ml-
140mg/ml、135mg/ml-145mg/ml、140mg/ml-150mg/ml，例如100mg/ml、125mg/ml或150mg/ml。
在一些实施方案中，包含含有40kD PEG的LACA的组合物具有150mg/ml-180mg/ml的浓度。在一些实施方案中，包含含有分子量为约40kD的PEG的LACA的组合物具有180mg/ml-200mg/ml
的浓度。在一些实施方案中，使用27号针按以下浓度施用包含含有分子量为约40kD的PEG的LACA的组合物：150mg/ml-160mg/ml、160mg/ml-170mg/ml、170mg/ml-180mg/ml、180mg/ml-
190mg/ml或190mg/ml-200mg/ml。当然，也可以替代地使用较小规格号(例如，25、26号)的针来代替27号(或更大)规格号的针。
[0535] 本公开包括以下发现：使用25号针可以容易地递送包含40kD的PEG的200mg/mlLACA溶液。在某些实施方案中，使用25号针或26号针施用浓度为200mg/ml或更高浓度的
包含LACA的组合物，所述LACA包含40kD PEG。在某些实施方案中，使用25号针或26号针施用浓度为200mg/ml-225mg/ml或225mg/ml-250mg/ml的包含LACA的组合物。
包含LACA的组合物，所述LACA包含40kD PEG。在某些实施方案中，使用25号针或26号针施用浓度为200mg/ml-225mg/ml或225mg/ml-250mg/ml的包含LACA的组合物。
[0536] 在某些方面，本公开教导某些薄壁针用于施用根据本发明所述的LACA的特定用途。例如，在某些实施方案中，薄壁针用于皮下、肌肉内或眼内(例如玻璃体内)注射LACA。对于给定的规格，薄壁针具有与标准针相等的外径，但具有更大的内径。例如，薄壁针的内径尺寸可以与规格小1至2个号的标准针相同(例如，29号薄壁针的内径可以与27号或28号标
准针的内径相同，但其外径与29号标准针的外径相同)。内径的增加会导致给定压力下的流体流量显著增加和/或维持给定流量所需的压力显著减小。较低的压力意味着需要较少的
注射力来施用具有给定粘度的组合物。通常，低注射力有助于施用，因此通常是理想的特
征。在某些实施方案中，薄壁针具有沿针长均匀分布的给定内径。在某些实施方案中，薄壁针具有沿针长变化的内径。例如，所述针在一端的内径可以与29号标准针的内径相同，而在另一端增大到27号标准针的内径。在某些实施方案中，可以使用微型针。在某些实施方案
中，可以使用具有类似手术刀的尖端的针。针的长度可以是不同的。在某些实施方案中，可以使用短针，例如5mm或6mm的针。在某些实施方案中，可以使用长度介于6mm和8mm之间，或者介于8mm和12mm之间的针。合适的针和注射器可商购得自，例如，Becton Dickinson and Company(BD)、Terumo Corp.等。
准针的内径相同，但其外径与29号标准针的外径相同)。内径的增加会导致给定压力下的流体流量显著增加和/或维持给定流量所需的压力显著减小。较低的压力意味着需要较少的
注射力来施用具有给定粘度的组合物。通常，低注射力有助于施用，因此通常是理想的特
征。在某些实施方案中，薄壁针具有沿针长均匀分布的给定内径。在某些实施方案中，薄壁针具有沿针长变化的内径。例如，所述针在一端的内径可以与29号标准针的内径相同，而在另一端增大到27号标准针的内径。在某些实施方案中，可以使用微型针。在某些实施方案
中，可以使用具有类似手术刀的尖端的针。针的长度可以是不同的。在某些实施方案中，可以使用短针，例如5mm或6mm的针。在某些实施方案中，可以使用长度介于6mm和8mm之间，或者介于8mm和12mm之间的针。合适的针和注射器可商购得自，例如，Becton Dickinson and Company(BD)、Terumo Corp.等。
[0537] 在某些实施方案中，可以使用薄壁针来施用具有给定粘度和/或浓度的组合物，所述薄壁针的规格比用来在选定的流速和/或用选定的注射力条件下施用具有同样的粘度
和/或浓度的组合物时所优选使用的标准针的规格尺寸大1或2号。例如，在某些实施方案
中，对于优选使用25号标准针施用以获得所需的流速和/或注射力的组合物，可以使用26或
27号薄壁针以同样的流速和/或注射力施用。在某些实施方案中，对于优选使用27号标准针施用以获得所需的流速和/或注射力的组合物，可以使用28或29号薄壁针以同样的流速和/
或注射力施用。在某些实施方案中，对于优选使用29号标准针施用以获得所需的流速和/或注射力的组合物，可以使用30或31号薄壁针以同样的流速和/或注射力施用。在某些实施方案中，使用29号薄壁针来施用浓度为150mg/ml-160mg/ml、160mg/ml-170mg/ml、170mg/ml-
180mg/ml、180mg/ml-190mg/ml或190mg/ml-200mg/ml的包含LACA的组合物，所述LACA包含
分子量为约40kD的聚合物(例如PEG)。当然也可以替代地使用具有较小规格号(例如27、28
号)的薄壁针来代替规格号为29号(或更大)的薄壁针头。
和/或浓度的组合物时所优选使用的标准针的规格尺寸大1或2号。例如，在某些实施方案
中，对于优选使用25号标准针施用以获得所需的流速和/或注射力的组合物，可以使用26或
27号薄壁针以同样的流速和/或注射力施用。在某些实施方案中，对于优选使用27号标准针施用以获得所需的流速和/或注射力的组合物，可以使用28或29号薄壁针以同样的流速和/
或注射力施用。在某些实施方案中，对于优选使用29号标准针施用以获得所需的流速和/或注射力的组合物，可以使用30或31号薄壁针以同样的流速和/或注射力施用。在某些实施方案中，使用29号薄壁针来施用浓度为150mg/ml-160mg/ml、160mg/ml-170mg/ml、170mg/ml-
180mg/ml、180mg/ml-190mg/ml或190mg/ml-200mg/ml的包含LACA的组合物，所述LACA包含
分子量为约40kD的聚合物(例如PEG)。当然也可以替代地使用具有较小规格号(例如27、28
号)的薄壁针来代替规格号为29号(或更大)的薄壁针头。
[0538] 在一些方面，各个SC注射的合适的体积可以是高达2毫升(ml)-3ml。因此，例如，在一些实施方案中，可以通过SC注射施用大于1.0ml的体积，例如1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9或2.0ml。在一些实施方案中，可以通过SC注射施用大于2.0ml的体积，例如
2.1、2.2、2.3、2.4或2.5ml。在一些实施方案中，可以通过SC注射施用大于2.5ml的体积，例如2.6、2.7、2.8、2.9或3.0ml。在一些实施方案中，每次注射使用1ml或更小的体积，例如
0.5、0.6、0.7、0.8、0.9或1.0ml。在一些实施方案中，施用给患者的每日总体积介于1.0与
2.5ml之间，例如1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4或
2.5ml。在一些实施方案中，施用给患者的每日总体积介于2.5与3.0ml之间，例如2.5、2.6、
2.7、2.8、2.9或3.0ml。在施用两个SC注射的一些实施方案中，可以施用高达5ml的体积。在一些实施方案中，按每日单次注射施用1.0-2.5ml的体积。在一些实施方案中，按两次单独注射施用1.0-2.5ml的体积。在一些实施方案中，按两次单独注射施用2.5-3.0ml的体积。按两次单独注射施用的体积可以相同或不同，只要它们一起提供的总体积足以施用所需量的
LACA即可。在一些实施方案中，两次单独注射可以相隔长达12小时施用。然而，在一些实施方案中，两次单独注射彼此相隔长达5、10、15、20、30或60分钟施用。
2.1、2.2、2.3、2.4或2.5ml。在一些实施方案中，可以通过SC注射施用大于2.5ml的体积，例如2.6、2.7、2.8、2.9或3.0ml。在一些实施方案中，每次注射使用1ml或更小的体积，例如
0.5、0.6、0.7、0.8、0.9或1.0ml。在一些实施方案中，施用给患者的每日总体积介于1.0与
2.5ml之间，例如1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4或
2.5ml。在一些实施方案中，施用给患者的每日总体积介于2.5与3.0ml之间，例如2.5、2.6、
2.7、2.8、2.9或3.0ml。在施用两个SC注射的一些实施方案中，可以施用高达5ml的体积。在一些实施方案中，按每日单次注射施用1.0-2.5ml的体积。在一些实施方案中，按两次单独注射施用1.0-2.5ml的体积。在一些实施方案中，按两次单独注射施用2.5-3.0ml的体积。按两次单独注射施用的体积可以相同或不同，只要它们一起提供的总体积足以施用所需量的
LACA即可。在一些实施方案中，两次单独注射可以相隔长达12小时施用。然而，在一些实施方案中，两次单独注射彼此相隔长达5、10、15、20、30或60分钟施用。
[0539] 在某些方面，一种或多种固定剂量可用于不同患者，所述不同患者的重量和/或体表面积可能有较大范围的差异。在某些实施方案中，可以提供2、3或更多种不同的固定剂
量，其中不同的剂量可以例如更适合用于体重和/或体表面积处于不同范围内的个体。
量，其中不同的剂量可以例如更适合用于体重和/或体表面积处于不同范围内的个体。
[0540] 在某些实施方案中，固定剂量可以用于施用一定量的坎普他汀类似物(例如LACA)，其将在至少25％、至少50％、至少75％、至少90％或至少95％或更多的健康受试者和/或至少25％、至少50％、至少75％、至少90％或至少95％或更多的需要治疗本文提及的特定病症的患者中，达到期望的补体抑制水平(例如，在血浆样品中所测得)。在某些实施方案中，固定剂量可以用于施用这样的量：其将在至少25％、至少50％、至少75％或至少90％的需要治疗本文提及的特定病症的患者中，达到期望的效力水平(例如，通过使用合适的终点所测得)。在某些方面，本文所述的剂量可能对皮下(SC)施用特别有用。然而，在一些实施方案中，作为皮下途径的替代，或者除了皮下途径以外，可以使用其他肠胃外施用途径(例如静脉内、透皮或肌肉内)，将本文所述的剂量施用给受试者。因此，当描述涉及特定剂量的皮下施用时，本公开内容提供了通过不同的施用途径(例如静脉内，透皮或肌肉内)施用该
剂量的实施方案。
剂量的实施方案。
[0541] 在某些实施方案中，包含两个坎普他汀类似物部分和分子量为约40kD的PEG的LACA的肠胃外施用(例如皮下施用)总日剂量为至少30mg/天，例如至少45mg/天，例如至少
90mg/天，例如至少150mg/天，例如至少180mg/天。在一些实施方案中，所述日剂量在90mg/天-180mg/天之间。在一些实施方案中，所述日剂量在180mg/天-270mg/天之间。在某些实施方案中，所述剂量为，例如，180mg/天-230mg/天。在某些实施方案中，所述剂量为至少
190mg/天，例如，190mg/天-240mg/天。在某些实施方案中，所述剂量为至少200mg/天，例如，
200mg/天-250mg/天。在某些实施方案中，所述剂量为至少210mg/天，例如，210mg/天-
260mg/天。在某些实施方案中，所述剂量为至少220mg/天，例如，220mg/天-270mg/天。在某些实施方案中，所述剂量为至少230mg/天，例如，230mg/天-280mg/天。在某些特定的实施方案中，所述剂量为180mg/天、190mg/天、200mg/天、205mg/天、210mg/天、215mg/天、220mg/天、225mg/天、230mg/天、235mg/天、240mg/天、245mg/天、250mg/天、255mg/天、260mg/天、
265mg/天或者270mg/天。在某些实施方案中，以每日单次注射1.5ml-2.0ml的体积施用
180mg/天-270mg/天的剂量。在某些实施方案中，以每日单次注射多达2.0-2.5ml的体积施
用180mg/天-270mg/天的剂量。在某些实施方案中，以每日两次注射施用180mg/天-270mg/
天的剂量，每次体积小于2.0ml(例如，1.0ml至1.9ml)。例如，在特定的实施方案中，以单次注射1.5ml的体积施用270mg/天的日剂量。在另一特定的实施方案中，以单次注射1.8ml的
体积施用270mg/天的日剂量。在另一特定的实施方案中，以每日两次注射施用270mg/天的
日剂量，每次体积为0.9ml。在某些特定的实施方案中，以每日两次注射施用270mg/天的日剂量，每次体积为0.9ml-1.2ml(例如，1.0ml、1.05ml、1.1ml、1.15ml或1.2ml)。在某些特定的实施方案中，以每日两次注射施用270mg/天的日剂量，每次体积为1.2ml-1.5ml(例如，
1.2ml、1.25ml、1.35ml、1.40ml、1.45ml或1.5ml)。在某些具体的实施方案中，以每日两次注射施用270mg/天的日剂量，每次体积为1.5ml-1.9ml(例如，1.55ml、1.6ml、1.65ml、1.7ml、
1.75ml、1.8ml、1.85ml或1.90ml)。
90mg/天，例如至少150mg/天，例如至少180mg/天。在一些实施方案中，所述日剂量在90mg/天-180mg/天之间。在一些实施方案中，所述日剂量在180mg/天-270mg/天之间。在某些实施方案中，所述剂量为，例如，180mg/天-230mg/天。在某些实施方案中，所述剂量为至少
190mg/天，例如，190mg/天-240mg/天。在某些实施方案中，所述剂量为至少200mg/天，例如，
200mg/天-250mg/天。在某些实施方案中，所述剂量为至少210mg/天，例如，210mg/天-
260mg/天。在某些实施方案中，所述剂量为至少220mg/天，例如，220mg/天-270mg/天。在某些实施方案中，所述剂量为至少230mg/天，例如，230mg/天-280mg/天。在某些特定的实施方案中，所述剂量为180mg/天、190mg/天、200mg/天、205mg/天、210mg/天、215mg/天、220mg/天、225mg/天、230mg/天、235mg/天、240mg/天、245mg/天、250mg/天、255mg/天、260mg/天、
265mg/天或者270mg/天。在某些实施方案中，以每日单次注射1.5ml-2.0ml的体积施用
180mg/天-270mg/天的剂量。在某些实施方案中，以每日单次注射多达2.0-2.5ml的体积施
用180mg/天-270mg/天的剂量。在某些实施方案中，以每日两次注射施用180mg/天-270mg/
天的剂量，每次体积小于2.0ml(例如，1.0ml至1.9ml)。例如，在特定的实施方案中，以单次注射1.5ml的体积施用270mg/天的日剂量。在另一特定的实施方案中，以单次注射1.8ml的
体积施用270mg/天的日剂量。在另一特定的实施方案中，以每日两次注射施用270mg/天的
日剂量，每次体积为0.9ml。在某些特定的实施方案中，以每日两次注射施用270mg/天的日剂量，每次体积为0.9ml-1.2ml(例如，1.0ml、1.05ml、1.1ml、1.15ml或1.2ml)。在某些特定的实施方案中，以每日两次注射施用270mg/天的日剂量，每次体积为1.2ml-1.5ml(例如，
1.2ml、1.25ml、1.35ml、1.40ml、1.45ml或1.5ml)。在某些具体的实施方案中，以每日两次注射施用270mg/天的日剂量，每次体积为1.5ml-1.9ml(例如，1.55ml、1.6ml、1.65ml、1.7ml、
1.75ml、1.8ml、1.85ml或1.90ml)。
[0542] 在某些实施方案中，包含两个坎普他汀类似物部分和分子量为约40kD的PEG的LACA的肠胃外施用(例如皮下施用)总日剂量为270mg/天-360mg/天。在某些实施方案中，所述剂量为270mg/天-300mg/天。在某些实施方案中，所述剂量为300mg/天-330mg/天。在某些实施方案中，所述剂量为330mg/天-360mg/天。在某些特定的实施方案中，所述剂量为
295mg/天、300mg/天、305mg/天、310mg/天、315mg/天、320mg/天、325mg/天、330mg/天、
335mg/天、340mg/天、345mg/天、350mg/天、355mg/天或360mg/天。在某些实施方案中，以每日单次注射1.5ml-2.0ml的体积，或以每日单次注射多达2.0-2.5ml的体积施用270mg/天-
360mg/天的剂量。在某些实施方案中，以每日两次注射施用270mg/天-360mg/天的剂量(例
如，任何前述剂量)，每次体积小于2.0ml(例如，在1.0ml至1.9ml之间，如1.0ml、1.05ml、
1.10ml、1.15ml、1.20ml、1.25ml、1.30ml、1.35ml、1.40ml、1.45ml、1.50ml、1.55ml、1.60ml、
1.65ml、1.70ml、1.75ml、1.80ml、1.85ml、1.90ml)。
295mg/天、300mg/天、305mg/天、310mg/天、315mg/天、320mg/天、325mg/天、330mg/天、
335mg/天、340mg/天、345mg/天、350mg/天、355mg/天或360mg/天。在某些实施方案中，以每日单次注射1.5ml-2.0ml的体积，或以每日单次注射多达2.0-2.5ml的体积施用270mg/天-
360mg/天的剂量。在某些实施方案中，以每日两次注射施用270mg/天-360mg/天的剂量(例
如，任何前述剂量)，每次体积小于2.0ml(例如，在1.0ml至1.9ml之间，如1.0ml、1.05ml、
1.10ml、1.15ml、1.20ml、1.25ml、1.30ml、1.35ml、1.40ml、1.45ml、1.50ml、1.55ml、1.60ml、
1.65ml、1.70ml、1.75ml、1.80ml、1.85ml、1.90ml)。
[0543] 在某些实施方案中，包含两个坎普他汀类似物部分和分子量为约40kD的PEG的LACA的皮下施用总日剂量为至少360mg/天，例如，360mg/天-540mg/天。在某些实施方案中，所述总日剂量大于360mg/天，例如，高达约540mg/天。例如，所述总日剂量可以是370mg/天、
380mg/天、390mg/天、400mg/天、410mg/天、420mg/天、430mg/天、440mg/天、450mg/天、
460mg/天、470mg/天、480mg/天、490mg/天、500mg/天、510mg/天、520mg/天、530mg/天或
540mg/天。在某些实施方案中，以每日单次注射例如约2.0-2.5ml或2.5ml-3.0ml的体积，施用360mg/天-540mg/天的剂量。在某些实施方案中，以每日两次注射，施用360mg/天至高达约540mg/天的剂量，每次体积小于2.0ml(例如，在1.0ml至1.9ml之间)。
380mg/天、390mg/天、400mg/天、410mg/天、420mg/天、430mg/天、440mg/天、450mg/天、
460mg/天、470mg/天、480mg/天、490mg/天、500mg/天、510mg/天、520mg/天、530mg/天或
540mg/天。在某些实施方案中，以每日单次注射例如约2.0-2.5ml或2.5ml-3.0ml的体积，施用360mg/天-540mg/天的剂量。在某些实施方案中，以每日两次注射，施用360mg/天至高达约540mg/天的剂量，每次体积小于2.0ml(例如，在1.0ml至1.9ml之间)。
[0544] 应当理解，本文所述用于皮下施用(或其他肠胃外施用途径)的剂量和体积可以通过使用独立式(free-standing)针和注射器，笔装置，自动注射器或本领域技术人员已知的其他手段来施用。
[0545] 在某些实施方案中，可以继续通过皮下施用或其他胃肠外施用途径(例如，根据本文所述的任何给药方案和/或使用本文所述的任何剂量或施用装置)用坎普他汀类似物(例
如LACA)治疗任意一段时间，例如无限期地。在某些实施方案中，可以用短疗程治疗患者(例如，治疗长达1周、2周或长达1、2、3、4、5、6个月)。在某些实施方案中，这样的短疗程可足以改变病症(例如，PNH、NMO、重症肌无力、COPD)的病程，使得持续的缓解(例如，通过不再出现突然爆发或恶化所证实)可以用间歇性治疗维持，即，在疗程之间允许将LACA冲洗出体外。
在某些实施方案中，受试者可以每年用短疗程治疗一次或两次、每两年用短疗程治疗一次
等。在某些实施方案中，短疗程可以改变病症(例如，PNH、NMO、重症肌无力、COPD、哮喘、特发性肺纤维化、血管炎、类天疱疮)的病程，从而实现持续的缓解或治愈而无需进一步治疗。不希望受任何理论约束，用坎普他汀类似物(例如，LACA)进行的短疗程可足以打破使得针对
细胞或组织(例如，其组分，如蛋白质或脂质)的免疫应答持续存在的循环，所述细胞或组织是补体介导的病症中免疫系统攻击的靶点。在某些实施方案中，例如，用LACA进行的短疗程可足以打破使得针对以下细胞或组织的免疫应答持续存在的循环：骨髓(例如，造血干细
胞)(例如，在PNH患者中)、神经系统(例如，神经细胞，胶质细胞)(例如，在NMO或重症肌无力患者中)、循环系统(例如，内皮细胞)(例如，在血管炎患者中)、呼吸系统(例如，在COPD、哮喘或特发性肺纤维化患者中)、外皮系统(例如，在类天疱疮患者中)中的细胞或组织。
如LACA)治疗任意一段时间，例如无限期地。在某些实施方案中，可以用短疗程治疗患者(例如，治疗长达1周、2周或长达1、2、3、4、5、6个月)。在某些实施方案中，这样的短疗程可足以改变病症(例如，PNH、NMO、重症肌无力、COPD)的病程，使得持续的缓解(例如，通过不再出现突然爆发或恶化所证实)可以用间歇性治疗维持，即，在疗程之间允许将LACA冲洗出体外。
在某些实施方案中，受试者可以每年用短疗程治疗一次或两次、每两年用短疗程治疗一次
等。在某些实施方案中，短疗程可以改变病症(例如，PNH、NMO、重症肌无力、COPD、哮喘、特发性肺纤维化、血管炎、类天疱疮)的病程，从而实现持续的缓解或治愈而无需进一步治疗。不希望受任何理论约束，用坎普他汀类似物(例如，LACA)进行的短疗程可足以打破使得针对
细胞或组织(例如，其组分，如蛋白质或脂质)的免疫应答持续存在的循环，所述细胞或组织是补体介导的病症中免疫系统攻击的靶点。在某些实施方案中，例如，用LACA进行的短疗程可足以打破使得针对以下细胞或组织的免疫应答持续存在的循环：骨髓(例如，造血干细
胞)(例如，在PNH患者中)、神经系统(例如，神经细胞，胶质细胞)(例如，在NMO或重症肌无力患者中)、循环系统(例如，内皮细胞)(例如，在血管炎患者中)、呼吸系统(例如，在COPD、哮喘或特发性肺纤维化患者中)、外皮系统(例如，在类天疱疮患者中)中的细胞或组织。
[0546] 在某些方面，本文描述了用于通过玻璃体内(IVT)施用LACA，治疗需要治疗补体介导的眼病的患者的多种剂量、给药方案、组合物和使用方法，所述眼病影响眼后段，例如视网膜。在某些实施方案中，所述眼病是AMD，例如晚期AMD(地图样萎缩(GA)或新生血管性
AMD)、糖尿病性视网膜病、青光眼或葡萄膜炎。
AMD)、糖尿病性视网膜病、青光眼或葡萄膜炎。
[0547] 在某些实施方案中，用于玻璃体内注射包含两个坎普他汀类似物部分和分子量为约40kD的PEG的LACA的剂量为5mg-20mg。在某些实施方案中，所述剂量为10mg。在某些实施方案中，所述剂量为10mg、11mg、12mg、13mg、14mg、15mg、16mg、17mg、18mg、19mg或20mg。在某些特定的实施方案中，所述剂量为15mg。在某些实施方案中，通过玻璃体内注射介于90至
110微升之间的体积(例如100微升体积)施用任意上述剂量。在某些实施方案中，使用27、
28、29或30号针通过玻璃体内注射施用任意上述剂量。在1b期临床试验中，发现AMD患者对使用29号针通过玻璃体内注射施用体积为100微升的多达20mg(即，5mg、10mg和20mg)的剂
量耐受良好。在一些实施方案中，选择剂量和针规格的组合，所述组合允许在10秒或更短的时间内通过IVT注射的施用。在一些实施方案中，使用剂量和针规格的组合，所述组合允许在5-6秒或更短的时间内通过IVT注射施用所述剂量。发现体积为100微升的15mg的剂量
(150mg/ml)导致产生了这样的组合物：其粘度有利于经由薄壁27号针在5-6秒或更短的时
间内通过玻璃体内注射进行施用。
110微升之间的体积(例如100微升体积)施用任意上述剂量。在某些实施方案中，使用27、
28、29或30号针通过玻璃体内注射施用任意上述剂量。在1b期临床试验中，发现AMD患者对使用29号针通过玻璃体内注射施用体积为100微升的多达20mg(即，5mg、10mg和20mg)的剂
量耐受良好。在一些实施方案中，选择剂量和针规格的组合，所述组合允许在10秒或更短的时间内通过IVT注射的施用。在一些实施方案中，使用剂量和针规格的组合，所述组合允许在5-6秒或更短的时间内通过IVT注射施用所述剂量。发现体积为100微升的15mg的剂量
(150mg/ml)导致产生了这样的组合物：其粘度有利于经由薄壁27号针在5-6秒或更短的时
间内通过玻璃体内注射进行施用。
[0548] 在一些实施方案中，通过IVT注射以大于100微升的体积来施用一定剂量的包含LACA的组合物。例如，可以使用100-110微升，110-125微升或125-150微升的体积。与100微升注射体积相比，这种更大的体积可以允许施用更高的剂量，而不会增加递送所述剂量所
需的时间和/或不需要使用规格更小(直径更宽)的针。这样的总剂量的增加可能与增加的
体积成正比。例如，剂量体积增加50％将允许所施用的LACA的量增加50％，而不会增加递送所述剂量所需的时间和/或不需要使用规格更小的针。
需的时间和/或不需要使用规格更小(直径更宽)的针。这样的总剂量的增加可能与增加的
体积成正比。例如，剂量体积增加50％将允许所施用的LACA的量增加50％，而不会增加递送所述剂量所需的时间和/或不需要使用规格更小的针。
[0549] 在某些实施方案中，通过眼部施用(例如玻璃体内注射)，每月一次，每6周一次或每2个月(即，每隔一个月)施用一定剂量的包含LACA的组合物。在某些实施方案中，通过玻璃体内注射，每3个月一次，每4个月一次，每5个月一次，或每6个月一次，或以更低的频率(例如，每9个月一次，每年一次)施用一定剂量的包含LACA的组合物。因此，在某些实施方案中，患者每年可以接受1至6次注射，注射的间隔大致相等。在某些实施方案中，首先用每月一次的注射治疗患者(例如，对于前3-6个月或前6-12个月)，随后施用的频率降低(例如每
2、3、4、5或6个月一次，或更不频繁地，例如每9个月一次、每年一次)。
2、3、4、5或6个月一次，或更不频繁地，例如每9个月一次、每年一次)。
[0550] 在某些实施方案中，根据任意前述给药方案通过玻璃体内注射用LACA进行的治疗可以无限期地继续。在某些实施方案中，可以用短疗程(例如，1、2、3、4、5或6次玻璃体内注射)治疗患者。在某些实施方案中，短疗程可足以停止或基本停止病症(例如，AMD，如GA或早期或中晚期AMD)的进展，从而不需要进一步的治疗。例如，用LACA进行的短疗程可足以破坏使针对视网膜或视网膜色素上皮细胞的免疫应答持续存在的循环。
[0551] 在某些实施方案中，使用具有一个或多个减少摩擦和/或所需注射力的设计特征(例如，相对短的筒和/或相对大的柱塞尺寸)的注射器来施用LACA。
[0552] 在使用包含不同分子量PEG的LACA所执行的实验中，确定了与相同浓度(以mg/ml为单位)的包含40kD的PEG的LACA相比，包含较低分子量(例如，10kD-30kD)的PEG的LACA溶
液粘度降低。较低的粘度能有利于使用较高规格号的针(例如，29号而非27号)。在某些实施方案中，相较于包含分子量为40kD或更高的聚合物(例如，PEG)的LACA，包含分子量低于
40kD的聚合物(例如，PEG)的LACA可以使用具有更小的内径和/或更高的规格号的针来施
用。在某些实施方案中，包含分子量低于40kD的聚合物(例如，PEG)的LACA可以以80mg/ml至
150mg/ml，例如约100mg/ml或约125mg/ml的浓度施用。在某些实施方案中，包含分子量低于
40kD的聚合物(例如，PEG)的LACA可以以150mg/ml至250mg/ml之间的浓度施用。在某些实施方案中，包含分子量低于40kD(例如，10kD-35kD)的聚合物(例如，PEG)的LACA可以以高于
250mg/ml的浓度(例如，高达300mg/ml、300mg/ml-400mg/ml、400mg/ml-500mg/ml或更高)施用。
液粘度降低。较低的粘度能有利于使用较高规格号的针(例如，29号而非27号)。在某些实施方案中，相较于包含分子量为40kD或更高的聚合物(例如，PEG)的LACA，包含分子量低于
40kD的聚合物(例如，PEG)的LACA可以使用具有更小的内径和/或更高的规格号的针来施
用。在某些实施方案中，包含分子量低于40kD的聚合物(例如，PEG)的LACA可以以80mg/ml至
150mg/ml，例如约100mg/ml或约125mg/ml的浓度施用。在某些实施方案中，包含分子量低于
40kD的聚合物(例如，PEG)的LACA可以以150mg/ml至250mg/ml之间的浓度施用。在某些实施方案中，包含分子量低于40kD(例如，10kD-35kD)的聚合物(例如，PEG)的LACA可以以高于
250mg/ml的浓度(例如，高达300mg/ml、300mg/ml-400mg/ml、400mg/ml-500mg/ml或更高)施用。
[0553] 在某些实施方案中，包含分子量低于约40kD(例如，10kD-35kD)的CRM(例如，PEG、POZ、多肽或其他聚合物)和特定数量的坎普他汀类似物部分(例如1个、2个、3个、4个)的LACA可以以与上文关于包含分子量为约40kD的CRM的LACA所述的任何量相同的剂量(就摩
尔数而言)施用，使得剂量的重量更低，但仍含有大致相同数量的坎普他汀类似物部分。每剂施用总量较低的化合物(按重量计)可以允许给药体积减少。减少给药体积可以允许减少
注射次数(例如，在某些实施方案中，每日单次注射代替每日两次注射)和/或可以减少注射时间(施用单个剂量的时间长度)。较低的总剂量(以重量计)能允许在给定体积中使用较低
浓度(按重量计)的化合物，使得粘度降低，从而允许使用具有较小内径的针和/或较短的注射时间。在某些实施方案中，包含分子量低于约40kD(例如，10kD-30kD)的CRM(例如，PEG、POZ、多肽或其他聚合物)和特定数量的坎普他汀类似物部分(例如1个、2个、3个、4个)的
LACA可以以相较于包含分子量为约40kD的CRM的LACA更高的摩尔剂量施用，使得每剂施用
更大数量的坎普他汀类似物部分。在某些实施方案中，所述摩尔剂量可以高达1.2倍、1.5
倍、2.0倍、2.5倍、3.0倍、3.5倍、4.0倍、4.5倍或5倍，取决于例如CRM的分子量。
尔数而言)施用，使得剂量的重量更低，但仍含有大致相同数量的坎普他汀类似物部分。每剂施用总量较低的化合物(按重量计)可以允许给药体积减少。减少给药体积可以允许减少
注射次数(例如，在某些实施方案中，每日单次注射代替每日两次注射)和/或可以减少注射时间(施用单个剂量的时间长度)。较低的总剂量(以重量计)能允许在给定体积中使用较低
浓度(按重量计)的化合物，使得粘度降低，从而允许使用具有较小内径的针和/或较短的注射时间。在某些实施方案中，包含分子量低于约40kD(例如，10kD-30kD)的CRM(例如，PEG、POZ、多肽或其他聚合物)和特定数量的坎普他汀类似物部分(例如1个、2个、3个、4个)的
LACA可以以相较于包含分子量为约40kD的CRM的LACA更高的摩尔剂量施用，使得每剂施用
更大数量的坎普他汀类似物部分。在某些实施方案中，所述摩尔剂量可以高达1.2倍、1.5
倍、2.0倍、2.5倍、3.0倍、3.5倍、4.0倍、4.5倍或5倍，取决于例如CRM的分子量。
[0554] 在某些实施方案中，包含分子量低于约40kD(例如，10kD-35kD)的CRM(例如，PEG、POZ、多肽或其他聚合物)和特定数量的坎普他汀类似物部分(例如1个、2个、3个、4个)的LACA可以以相较于上文关于包含分子量为约40kD的CRM的LACA所述的剂量更低的每单位时
间剂量(按重量计)(例如，更低的日剂量，更低的周剂量，更低的月剂量等)、大约相同的每单位时间剂量或更高的每单位时间剂量施用。在某些实施方案中，涵盖这样的认识：包含分子量低于约40kD(例如，10kD-30kD)的CRM的LACA的剂量(按重量计)可以低于或高于包含
40kD的CRM的LACA的每日剂量最多达约3倍(例如，约1.1、1.2、1.5、2.0、2.5、3.0)。
间剂量(按重量计)(例如，更低的日剂量，更低的周剂量，更低的月剂量等)、大约相同的每单位时间剂量或更高的每单位时间剂量施用。在某些实施方案中，涵盖这样的认识：包含分子量低于约40kD(例如，10kD-30kD)的CRM的LACA的剂量(按重量计)可以低于或高于包含
40kD的CRM的LACA的每日剂量最多达约3倍(例如，约1.1、1.2、1.5、2.0、2.5、3.0)。
[0555] 本发明包括采用坎普他汀类似物和其它治疗的组合疗法。这样的其它治疗可以包括，在本领域中使用的，或潜在可用于治疗患有疾病的受试者的任何试剂的施用。例如，在某些实施方案中，将LACA，细胞反应性的或靶向的坎普他汀类似物与C5的抑制剂(例如，依库珠单抗或本文提及的或本领域已知的任何其它C5的抑制剂)联合施用给患者，例如患有
PNH或本申请提及的任何其他补体介导的病症的患者。在某些实施方案中，将LACA，细胞反应性的或靶向的坎普他汀类似物与抗血管内皮生长因子(VEGF)剂联合施用给患有湿性AMD
的受试者。抗VEGF剂包括结合VEGF的抗体，如雷珠单抗(Lucentis)和贝伐单抗(阿瓦斯汀)，包含VEGF受体的可溶部分的多肽，如阿柏西普(Eylea，也称为VEGF-Trap)。
PNH或本申请提及的任何其他补体介导的病症的患者。在某些实施方案中，将LACA，细胞反应性的或靶向的坎普他汀类似物与抗血管内皮生长因子(VEGF)剂联合施用给患有湿性AMD
的受试者。抗VEGF剂包括结合VEGF的抗体，如雷珠单抗(Lucentis)和贝伐单抗(阿瓦斯汀)，包含VEGF受体的可溶部分的多肽，如阿柏西普(Eylea，也称为VEGF-Trap)。
[0556] 在本发明的不同实施方案中，当彼此“联合”使用或施用2种或更多种疗法(例如，化合物或组合物)时，它们可以同时地、在重叠的时间段内或顺序地(例如，在时间上隔开至多2周，或者更多，例如，在时间上隔开至多约4周、6周、8周或12周)施用。它们可以经由相同途径或不同途径来施用。在某些实施方案中，在彼此相距48小时内施用所述化合物或组合物。在某些实施方案中，坎普他汀类似物的施用可以在其它化合物的施用之前或之后，例
如，在时间上足够接近，使得坎普他汀类似物和其它化合物以有用的水平在体内存在至少
一次。在某些实施方案中，在时间上足够接近地一起施用所述化合物或组合物，使得在施用第二种化合物或组合物时，不超过90％的先施用的组合物已经代谢为无活性的代谢物或从
身体消除(例如，排泄)。
如，在时间上足够接近，使得坎普他汀类似物和其它化合物以有用的水平在体内存在至少
一次。在某些实施方案中，在时间上足够接近地一起施用所述化合物或组合物，使得在施用第二种化合物或组合物时，不超过90％的先施用的组合物已经代谢为无活性的代谢物或从
身体消除(例如，排泄)。
[0557] 在某些实施方案中，施用包括细胞反应性坎普他汀类似物，或长效的或靶向的坎普他汀类似物和其它化合物二者的组合物。
[0558] 在某些实施方案中，通过使用例如吸入施用或肠胃外施用的(经由例如，皮下、肌内或静脉内注射)坎普他汀类似物治疗或将用坎普他汀类似物治疗的受试者，被针对一种
或多种病原体的疫苗接种。例如，所述受试者可以接受针对脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌
和/或肺炎链球菌的疫苗。在某些实施方案中，受试者被针对所有这三种微生物的疫苗接
种。在某些实施方案中，受试者可在首剂坎普他汀类似物前至少1周、2周、3周、4周、5周或6周接受疫苗。如果合适的话，所述受试者可以接受一次或多次额外的疫苗剂量。
或多种病原体的疫苗接种。例如，所述受试者可以接受针对脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌
和/或肺炎链球菌的疫苗。在某些实施方案中，受试者被针对所有这三种微生物的疫苗接
种。在某些实施方案中，受试者可在首剂坎普他汀类似物前至少1周、2周、3周、4周、5周或6周接受疫苗。如果合适的话，所述受试者可以接受一次或多次额外的疫苗剂量。
[0559] 在某些实施方案中，通过使用例如吸入施用或肠胃外施用的(经由例如，皮下、肌内或静脉内注射)坎普他汀类似物治疗或将用坎普他汀类似物治疗的受试者可接受抗生
素，所述抗生素预期能有效预防或限制一种或多种病原体(例如，脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌和/或肺炎链球菌)的感染。在某些实施方案中，所述受试者可以预防性地接受抗生素。
预防性施用可以在所述受试者接受首剂坎普他汀类似物之前，或者之后的任何时间开始。
本领域普通技术人员知晓合适的抗生素。
素，所述抗生素预期能有效预防或限制一种或多种病原体(例如，脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌和/或肺炎链球菌)的感染。在某些实施方案中，所述受试者可以预防性地接受抗生素。
预防性施用可以在所述受试者接受首剂坎普他汀类似物之前，或者之后的任何时间开始。
本领域普通技术人员知晓合适的抗生素。
[0560] IX.抑制C3的抑制性核酸试剂和其用途
[0561] 在一些方面，本公开涉及以下认识：与抑制C3表达的抑制性核酸试剂(INAA)组合施用长效坎普他汀类似物(LACA)可以具有许多重要优点。在一些方面，单独施用抑制C3表
达的INAA(例如靶向C3的siRNA)可能不足以将补体活性降低至所期望的或治疗最佳水平。
例如，在患有以补体介导的溶血为特征的障碍(例如PNH)的个体中，仍可能存在足够的残留C3以导致不希望的溶血。通过与LACA疗法一起施用INAA疗法，可以抑制残留的C3，从而实现所期望的水平的补体抑制和/或获得所期望的治疗益处。在一些实施方案中，向正接受LACA疗法的受试者施用INAA疗法；在一些实施方案中，向正接受INAA疗法的受试者施用LACA疗
法。在一些实施方案中，向受试者施用INAA疗法和LACA疗法。
达的INAA(例如靶向C3的siRNA)可能不足以将补体活性降低至所期望的或治疗最佳水平。
例如，在患有以补体介导的溶血为特征的障碍(例如PNH)的个体中，仍可能存在足够的残留C3以导致不希望的溶血。通过与LACA疗法一起施用INAA疗法，可以抑制残留的C3，从而实现所期望的水平的补体抑制和/或获得所期望的治疗益处。在一些实施方案中，向正接受LACA疗法的受试者施用INAA疗法；在一些实施方案中，向正接受INAA疗法的受试者施用LACA疗
法。在一些实施方案中，向受试者施用INAA疗法和LACA疗法。
[0562] 在一些实施方案中，与作为单一补体抑制疗法施用INAA相比，施用LACA疗法可以允许施用减少的INAA给药方案(例如，涉及较小量的个体剂量、降低的给药频率、减少的剂量数量和/或减少的总体暴露)。不希望受任何理论的束缚，在一些实施方案中，减少的INAA给药方案可以避免一种或多种否则可能由例如INAA的脱靶效应而引起的不希望的不良反
应。
应。
[0563] 在一些方面，INAA疗法与LACA疗法组合施用(例如，INAA与LACA组合施用)可以充分减少受试者血液中C3的量，因此，需要减少的LACA疗法给药方案来实现所期望的补体抑
制程度。
制程度。
[0564] 在一些实施方案中，与作为单一补体抑制疗法施用LACA相比，这种减小的剂量可以按更小的体积，或使用更低的浓度，或使用更长的给药间隔，或前述任何组合来施用。
[0565] 本公开特别认识到，长效坎普他汀类似物和INAA均非常适合皮下施用，并且由采用LACA和抑制C3表达的INAA的组合疗法提供的施用减小剂量的LACA(允许给药量和/或增
加给药间隔)的机会可以提供许多优点，例如增加患者的便利性和/或舒适度。本文所述的
组合施用方法可用于治疗需要治疗任何补体介导的障碍，例如本文中提到的任何补体介导
的障碍的受试者。
加给药间隔)的机会可以提供许多优点，例如增加患者的便利性和/或舒适度。本文所述的
组合施用方法可用于治疗需要治疗任何补体介导的障碍，例如本文中提到的任何补体介导
的障碍的受试者。
[0566] 在一些方面，本公开教导了施用抑制C3表达的INAA与施用某些长效坎普他汀类似物(LACA)的组合的特定效用。在一些方面，本公开教导了根据某些给药方案和/或使用某些给药方式以组合方式施用这类INAA和长效坎普他汀类似物的特定效用。在一些实施方案
中，如使用旁路途径分析、经典途径分析或二者所测定的，按抑制血浆补体活性平均不超过
95％，任选地介于50％与95％之间的量施用的INAA，可以与LACA组合施用。在一些实施方案中，如使用旁路途径分析、经典途径分析或二者所测定的，坎普他汀类似物按抑制血浆补体活性平均不超过95％，任选地介于50％与95％之间的量施用，可以与INAA组合施用。在一些实施方案中，所述分析是溶血分析。在一些实施方案中，按有效降低C3的稳态血浆水平平均介于30％与95％之间，例如平均介于50％与95％之间，例如介于50％与60％之间、介于60％与70％之间、介于70％与80％之间或介于80％与90％之间的量施用的INAA，可以与LACA组
合施用。在一些实施方案中，按有效降低C3的稳态血浆水平平均介于30％与95％之间，例如平均介于50％与95％之间，例如介于50％与60％之间、介于60％与70％之间、介于70％与
80％之间、介于80％与90％之间的量施用的INAA，可以与LACA组合施用。在一些实施方案
中，INAA可以按有效降低C3的稳态血浆水平大于95％的量施用但仍未实现所期望的功效。
与LACA组合施用可以实现这种功效。在一些实施方案中，INAA可以按其最大耐受剂量的
80％到100％施用。在一些实施方案中，与LACA的组合施用允许使用比实现所期望功效水平所需的剂量更小剂量的INAA。不希望受任何理论的束缚，较低剂量的INAA具有降低的不希
望的副作用倾向，副作用例如脱靶抑制、受体饱和和/或RNAi机制饱和，或其它否则可能由INAA或INAA递送试剂引起的特异性或非特异性作用。在一些实施方案中，INAA可以按低于
其最大耐受剂量的50％、60％、70％或80％施用。
中，如使用旁路途径分析、经典途径分析或二者所测定的，按抑制血浆补体活性平均不超过
95％，任选地介于50％与95％之间的量施用的INAA，可以与LACA组合施用。在一些实施方案中，如使用旁路途径分析、经典途径分析或二者所测定的，坎普他汀类似物按抑制血浆补体活性平均不超过95％，任选地介于50％与95％之间的量施用，可以与INAA组合施用。在一些实施方案中，所述分析是溶血分析。在一些实施方案中，按有效降低C3的稳态血浆水平平均介于30％与95％之间，例如平均介于50％与95％之间，例如介于50％与60％之间、介于60％与70％之间、介于70％与80％之间或介于80％与90％之间的量施用的INAA，可以与LACA组
合施用。在一些实施方案中，按有效降低C3的稳态血浆水平平均介于30％与95％之间，例如平均介于50％与95％之间，例如介于50％与60％之间、介于60％与70％之间、介于70％与
80％之间、介于80％与90％之间的量施用的INAA，可以与LACA组合施用。在一些实施方案
中，INAA可以按有效降低C3的稳态血浆水平大于95％的量施用但仍未实现所期望的功效。
与LACA组合施用可以实现这种功效。在一些实施方案中，INAA可以按其最大耐受剂量的
80％到100％施用。在一些实施方案中，与LACA的组合施用允许使用比实现所期望功效水平所需的剂量更小剂量的INAA。不希望受任何理论的束缚，较低剂量的INAA具有降低的不希
望的副作用倾向，副作用例如脱靶抑制、受体饱和和/或RNAi机制饱和，或其它否则可能由INAA或INAA递送试剂引起的特异性或非特异性作用。在一些实施方案中，INAA可以按低于
其最大耐受剂量的50％、60％、70％或80％施用。
[0567] 在一些实施方案中，INAA可以按每天、每周、每2、3或4周或甚至按更长的时间间隔施用。在一些实施方案中，可能需要根据相同的给药时间表(例如，每天一次、每隔一天一次或每周一次)施用INAA和LACA，而在其它实施方案中，可以使用不同的给药时间表(例如，LACA是每天或每周，并且INAA是大约每4周，例如每月)。在许多实施方案中，INAA和LACA均皮下施用。在一些实施方案中，INAA可以静脉内施用。
[0568] 在一些实施方案中，可以提供含有INAA和LACA的药物包装件或试剂盒。INAA和LACA可以在单独的容器中。包装件或试剂盒可以包括施用说明书。说明书可以包括用于以
适合一个或多个个体剂量的体积重构干燥形式的任一种或两种药剂的说明书。
适合一个或多个个体剂量的体积重构干燥形式的任一种或两种药剂的说明书。
[0569] 在一些实施方案中，LACA包含两个坎普他汀类似物部分。在一些实施方案中，两个坎普他汀类似物部分位于线性聚合物的末端，线性聚合物例如PEG。在一些实施方案中，PEG的平均分子量介于10与50kD之间。在一些实施方案中，PEG的平均分子量介于35与45kD之间，例如约40kD。在一些特定实施方案中，坎普他汀类似物部分包含含有SEQID NO:28、32或
34的肽。
34的肽。
[0570] 在一些实施方案中，LACA是当作为唯一补体抑制疗法每天一次或两次，例如皮下施用时实现治疗上有用的补体抑制水平的LACA。在一些实施方案中，LACA是当作为唯一C3
抑制疗法每天一次或两次，例如皮下施用时实现治疗上有用的C3抑制水平的LACA。在一些
实施方案中，当与抑制C3表达的INAA组合施用时，这类LACA可以按较低的总量(如在相关的一段时间，例如一个月内所测定的)施用。在一些实施方案中，在相关的一段时间，例如一个月内，所施用的总量可以降低至少1.5倍，例如降低1.5至5倍、5至10倍或10至20倍。在一些实施方案中，与如果LACA作为唯一的补体抑制剂疗法或作为唯一的C3抑制疗法施用时将使
用的剂量相比，LACA可以按更小的日剂量施用。在一些实施方案中，与如果LACA作为唯一的补体抑制剂疗法或作为唯一的C3抑制疗法施用时将使用的给药间隔相比，LACA可以使用更
长的给药间隔来施用。例如，在一些实施方案中，通常每天施用以实现所期望的效果的LACA可以改为每隔一天、每3天或每周施用，以实现基本上相同的效果。在一些实施方案中，LACA在与LACA组合施用时可以使用比当作为唯一的补体抑制剂疗法或作为唯一的C3抑制疗法
施用时更低的个体剂量和更长的给药间隔施用。
抑制疗法每天一次或两次，例如皮下施用时实现治疗上有用的C3抑制水平的LACA。在一些
实施方案中，当与抑制C3表达的INAA组合施用时，这类LACA可以按较低的总量(如在相关的一段时间，例如一个月内所测定的)施用。在一些实施方案中，在相关的一段时间，例如一个月内，所施用的总量可以降低至少1.5倍，例如降低1.5至5倍、5至10倍或10至20倍。在一些实施方案中，与如果LACA作为唯一的补体抑制剂疗法或作为唯一的C3抑制疗法施用时将使
用的剂量相比，LACA可以按更小的日剂量施用。在一些实施方案中，与如果LACA作为唯一的补体抑制剂疗法或作为唯一的C3抑制疗法施用时将使用的给药间隔相比，LACA可以使用更
长的给药间隔来施用。例如，在一些实施方案中，通常每天施用以实现所期望的效果的LACA可以改为每隔一天、每3天或每周施用，以实现基本上相同的效果。在一些实施方案中，LACA在与LACA组合施用时可以使用比当作为唯一的补体抑制剂疗法或作为唯一的C3抑制疗法
施用时更低的个体剂量和更长的给药间隔施用。
[0571] 如本文所述，当以180mg和270mg的日剂量皮下施用时，包含40kD PEG的某些LACA显示出药理学活性，其中270mg/天特别有效。在一些实施方案中，当与LACA组合施用时，这样的LACA可以按降低的剂量施用，例如，剂量降低至少1.5倍，例如降低1.5至5倍、5至10倍或10至20倍。在一些实施方案中，例如，剂量可以是介于约9mg/天与约150mg/天之间，例如介于约9mg/天与约20mg/天之间、介于约20mg/天与约50mg/天之间、介于约50mg/天与
100mg/天之间、介于约100mg/天与约150mg/天之间，并且在至少一些实施方案中实现至少
与180mg/天剂量或在一些实施方案中与270mg/天剂量等同的功效。在一些实施方案中，剂
量可以介于约150mg/天与约200mg/天之间，并且在至少一些实施方案中，实现至少与
270mg/天剂量等同的功效。在一些实施方案中，剂量是10mg/天-20mg/天、20mg/天-30mg/
天、30mg/天-40mg/天、40mg/天-50mg/天、50mg/天-60mg/天、60mg/天-70mg/天、70mg/天-
80mg/天、80mg/天-90mg/天、90mg/天-100mg/天、100mg/天-110mg/天、110mg/天-120mg/天、
120mg/天-130mg/天、130mg/天-140mg/天、140mg/天-150mg/天、150mg/天-160mg/天、
160mg/天-170mg/天、170mg/天-180mg/天、180mg/天-190mg/天或190mg/天-200mg/天。在一些实施方案中，剂量是200mg/天-210mg/天、210mg/天-220mg/天、220mg/天-230mg/天、
230mg/天-240mg/天或240mg/天-250mg/天。在一些实施方案中，作为单次日剂量，例如皮下施用LACA的剂量。在一些实施方案中，作为单次周剂量，例如皮下施用LACA的剂量。
100mg/天之间、介于约100mg/天与约150mg/天之间，并且在至少一些实施方案中实现至少
与180mg/天剂量或在一些实施方案中与270mg/天剂量等同的功效。在一些实施方案中，剂
量可以介于约150mg/天与约200mg/天之间，并且在至少一些实施方案中，实现至少与
270mg/天剂量等同的功效。在一些实施方案中，剂量是10mg/天-20mg/天、20mg/天-30mg/
天、30mg/天-40mg/天、40mg/天-50mg/天、50mg/天-60mg/天、60mg/天-70mg/天、70mg/天-
80mg/天、80mg/天-90mg/天、90mg/天-100mg/天、100mg/天-110mg/天、110mg/天-120mg/天、
120mg/天-130mg/天、130mg/天-140mg/天、140mg/天-150mg/天、150mg/天-160mg/天、
160mg/天-170mg/天、170mg/天-180mg/天、180mg/天-190mg/天或190mg/天-200mg/天。在一些实施方案中，剂量是200mg/天-210mg/天、210mg/天-220mg/天、220mg/天-230mg/天、
230mg/天-240mg/天或240mg/天-250mg/天。在一些实施方案中，作为单次日剂量，例如皮下施用LACA的剂量。在一些实施方案中，作为单次周剂量，例如皮下施用LACA的剂量。
[0572] 在一些方面，减小剂量的LACA可以按较小的体积和/或按降低的浓度施用。例如，如果剂量减小10倍，那么体积也可以减小10倍，同时保持浓度相同。或者，浓度可以降低10倍，同时保持体积相同。或者，可以减小浓度和体积。在某些实施方案中，个体剂量的体积是约0.8ml或更低，例如0.5ml或更低，例如介于0.02ml与0.5ml之间，例如0.1ml、0.2ml、
0.3ml、0.4ml或0.5ml。在某些实施方案中，浓度低于约100mg/ml。例如，浓度可以是10mg/ml-20mg/ml、20mg/ml-30mg/ml、30mg/ml-40mg/ml、40mg/ml-50mg/ml、50mg/ml-60mg/ml、
60mg/ml-70mg/ml、70mg/ml-80mg/ml、80mg/ml-90mg/ml或90mg/ml-100mg/ml。可以对体积和浓度加以选择以递送所期望的量。例如，在一个示例性实施方案中，40mg的剂量以0.5ml的体积以80mg/ml的浓度施用。在另一个示例性实施方案中，60mg的剂量以0.6ml的体积以
100mg/ml的浓度施用。在一些实施方案中，可以使用28、29、30或31号针施用LACA、INAA或二者。
0.3ml、0.4ml或0.5ml。在某些实施方案中，浓度低于约100mg/ml。例如，浓度可以是10mg/ml-20mg/ml、20mg/ml-30mg/ml、30mg/ml-40mg/ml、40mg/ml-50mg/ml、50mg/ml-60mg/ml、
60mg/ml-70mg/ml、70mg/ml-80mg/ml、80mg/ml-90mg/ml或90mg/ml-100mg/ml。可以对体积和浓度加以选择以递送所期望的量。例如，在一个示例性实施方案中，40mg的剂量以0.5ml的体积以80mg/ml的浓度施用。在另一个示例性实施方案中，60mg的剂量以0.6ml的体积以
100mg/ml的浓度施用。在一些实施方案中，可以使用28、29、30或31号针施用LACA、INAA或二者。
[0573] 尽管对于与抑制C3表达的INAA组合施用，例如SC施用LACA，250mg/天或更低的剂量特别感兴趣，但本公开还考虑与抑制C3表达的INAA组合施用超过250mg/天的剂量，例如
250mg/天-300mg/天、300mg/天-400mg/天或400mg/天-500mg/天的剂量。在某些实施方案
中，这种剂量可以每周施用。
250mg/天-300mg/天、300mg/天-400mg/天或400mg/天-500mg/天的剂量。在某些实施方案
中，这种剂量可以每周施用。
[0574] 虽然本公开特别考虑了这样的实施方案，其中在向灵长类动物IV或SC施用时具有至少2、3、4或更多天的终末半衰期的LACA，例如包含如本文所述的清除率降低部分的LACA，与抑制C3表达的INAA组合施用，但是在某些实施方案中，预期与这种INAA的组合施用也可
用于具有较短半衰期和/或缺少清除率降低部分的坎普他汀类似物。这类坎普他汀类似物
可以按每天1或2个剂量施用。
用于具有较短半衰期和/或缺少清除率降低部分的坎普他汀类似物。这类坎普他汀类似物
可以按每天1或2个剂量施用。
[0575] 在一些实施方案中，特定药剂或药剂组合的功效可以通过患有补体介导的溶血障碍例如PNH的患者中的LDH水平来测定。在一些实施方案中，功效可以通过经典或旁路途径
补体分析来测定，所述分析可以是溶血分析。
补体分析来测定，所述分析可以是溶血分析。
[0576] 本公开考虑使用抑制C3表达的多种INAA中的任何一种。抑制C3表达的INAA包含与C3转录物，例如C3 mRNA的靶部分互补的链。靶部分可以是15-30个核苷酸长，例如15、16、
17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个核苷酸长，尽管也考虑了更短或更长的靶部分。本文对人类C3特别感兴趣。人类C3的氨基酸和核苷酸序列是本领域中已知的并且
可以在公众可获得的数据库中找到，例如美国国家生物技术信息中心(National Center
for Biotechnology Information，NCBI)参考序列(RefSeq)数据库，在所述数据库中，所述序列分别列在RefSeq登录号NP_000055(当前登录版本号NP_000055.2)和NM_000064(当前
登录版本号NM_000064.3)下(其中“氨基酸序列”是指C3多肽的序列并且“核苷酸序列”在此上下文中是指如在基因组DNA中所呈现的C3 mRNA序列，应理解，实际mRNA核苷酸序列含有U而不含T)。本领域普通技术人员将理解，前述序列用于补体C3前原蛋白，其包括信号序列，所述信号序列被切除并且因此不存在于成熟蛋白中。已经给人类C3基因分配NCBI基因ID：
718，并且基因组C3序列具有RefSeq登录号NG_009557(当前登录版本号NG_009557.1)。人类C3 mRNA的核苷酸序列如下所示(来自RefSeq登录号NM_000064.3，其中T替换为U)。
17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个核苷酸长，尽管也考虑了更短或更长的靶部分。本文对人类C3特别感兴趣。人类C3的氨基酸和核苷酸序列是本领域中已知的并且
可以在公众可获得的数据库中找到，例如美国国家生物技术信息中心(National Center
for Biotechnology Information，NCBI)参考序列(RefSeq)数据库，在所述数据库中，所述序列分别列在RefSeq登录号NP_000055(当前登录版本号NP_000055.2)和NM_000064(当前
登录版本号NM_000064.3)下(其中“氨基酸序列”是指C3多肽的序列并且“核苷酸序列”在此上下文中是指如在基因组DNA中所呈现的C3 mRNA序列，应理解，实际mRNA核苷酸序列含有U而不含T)。本领域普通技术人员将理解，前述序列用于补体C3前原蛋白，其包括信号序列，所述信号序列被切除并且因此不存在于成熟蛋白中。已经给人类C3基因分配NCBI基因ID：
718，并且基因组C3序列具有RefSeq登录号NG_009557(当前登录版本号NG_009557.1)。人类C3 mRNA的核苷酸序列如下所示(来自RefSeq登录号NM_000064.3，其中T替换为U)。
[0577] AGAUAAAAAGCCAGCUCCAGCAGGCGCUGCUCACUCCUCCCCAUCCUCUCCCUCUGUCCCUCUGUCCCUCUGACCCUGCACUGUCCCAGCACCAUGGGACCCACCUCAGGUCCCAGCCUGCUGCUCCUGCUACUAACCCACCUC
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UGCUGGAGGCCCACGACGCGCAAGGGGAUGUUCCAGUCACUGUUACUGUCCACGACUUCCCAGGCAAAAAACUAGU
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74)
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74)
[0578] 在一些实施方案中，除了人类C3外，INAA还能够抑制一种或多种非人类物种的C3的表达，例如非人类灵长类动物C3，例如食蟹猴(Macaca fascicularis)C3。已经为食蟹猴C3基因分配NCBI基因ID：102131458，并且所预测的食蟹猴C3的氨基酸和核苷酸序列分别列在NCBI RefSeq登录号XP_005587776.1和XM_005587719.2下。在一些实施方案中，INAA与在人类和食蟹猴C3转录物中相同的靶部分互补。在一些实施方案中，INAA与人类C3转录物的
靶部分互补，所述人类C3转录物与食蟹猴C3转录物中的序列相差1、2或3个核苷酸。应当理解，抑制人类C3表达的INAA也可以抑制非灵长类动物C3，例如大鼠或小鼠C3的表达，特别是如果靶向C3转录物的保守区域。
靶部分互补，所述人类C3转录物与食蟹猴C3转录物中的序列相差1、2或3个核苷酸。应当理解，抑制人类C3表达的INAA也可以抑制非灵长类动物C3，例如大鼠或小鼠C3的表达，特别是如果靶向C3转录物的保守区域。
[0579] 如本文所用，术语“互补区”是指INAA的反义链上与靶RNA的序列，例如靶部分基本上互补的区域。在一些实施方案中，用于抑制细胞(例如受试者内的细胞，受试者例如哺乳动物，如人类或非人类灵长类动物)中的靶基因，例如C3基因的表达的INAA包含反义链，所述反义链具有与通过靶基因的转录形成的RNA，例如mRNA的至少一部分互补的区域，其中互补区的长度是7至约30个核苷酸(例如，15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个核苷酸长)。在一些实施方案中，如本文所述的INAA的反义链可以含有与靶序列的一个或多个错配。在互补区与靶部分不完全互补的情况下，错配可以在链的内部或末端区域中。在一些实施方案中，错配在INAA反义链的末端区域中，例如，5'和/或3'末端核苷酸，或在5'和/或3'末端的2、3、4或5个核苷酸内。在一些实施方案中，当反义链与靶RNA杂交时，在反义链的10位和11位的核苷酸与靶序列互补。在一些实施方案中，就C3 RNA的靶部分而言，如本文所述的INAA的反义链含有不超过3个错配。在一些实施方案中，如果INAA的反义链含有与靶序列的错配，那么错配区域不位于互补区的中心。在一些实施方案中，如果反义链含有与靶部分的错配，那么错配区域位于互补区的5'或3'末端的最后5个核苷酸内。在一些实施方案中，由反义链和靶部分形成的双链体不含相对于反义链的5'末端在10或11位的核苷
酸的错配。在一些实施方案中，由反义链和靶部分形成的双链体不含相对于反义链的5'末
端在8位与13位之间的核苷酸的任何错配。在一些方面，本文所述的或本领域中已知的方法可用于确定任何特定的INAA，例如包含含有与靶部分错配的反义链的INAA，是否能够有效
抑制靶基因，例如C3基因的表达。
酸的错配。在一些实施方案中，由反义链和靶部分形成的双链体不含相对于反义链的5'末
端在8位与13位之间的核苷酸的任何错配。在一些方面，本文所述的或本领域中已知的方法可用于确定任何特定的INAA，例如包含含有与靶部分错配的反义链的INAA，是否能够有效
抑制靶基因，例如C3基因的表达。
[0580] INAA的靶部分，例如siRNA，可以位于靶RNA，例如C3转录物的5'UTR、编码序列、3'UTR内，或部分位于UTR中并且部分位于编码序列中(即，它不包括内含子序列)。C3 mRNA的编码区在上述核苷酸序列中从94位延伸至5085位。C3 mRNA含有41个外显子。本领域普通技术人员将能够从上面提供的RefSeq数据库条目或从UCSC基因组浏览器中可获得的人类基因组序列获得外显子边界和内含子序列的位置。在某些实施方案中，RNAi试剂的反义链仅
与外显子序列杂交。在一些实施方案中，RNAi试剂的反义链与仅包括单个外显子内的序列
的靶区域杂交；在其它实施方案中，通过初级转录物的剪接或其它修饰来产生靶部分。在一些实施方案中，ASO的靶部分可以在5'UTR、编码序列或3'UTR内，或者可以与UTR和编码序列之间的边界重叠。在一些实施方案中，ASO的靶部分可以在内含子内，在外显子内，或可以与内含子和外显子之间的边界重叠。通常，可用于与核酸链杂交，导致转录物的切割和降解或导致翻译抑制的任何位点都可被用作靶部分。尽管如此，本领域普通技术人员将理解，可能需要选择或避免靶RNA的特定区域作为靶部分。例如，在一些实施方案中，可能需要避免靶RNA的与其它不希望降解或翻译抑制的转录物具有广泛同一性的区段。本领域普通技术人
员将理解，已经鉴定了C3基因中的各种天然存在的DNA序列变异，并且这些变异可以在例如NCBI dbSNP(ncbi.nlm.nih.gov/snp)和UniProt数据库中找到。术语“C3”旨在涵盖这些变异。在一些方面，本文提供的人类C3的参考核苷酸序列(例如，NM_000064.3或更早版本NM_
000064.2)可用于设计靶向C3的INAA，确定特定序列是否与C3 RNA互补，描述靶部分的位
置，或用于本文所述的其它目的。在一些实施方案中，C3 RNA序列的靶部分不含多态性位
点，其中最常见的等位基因具有小于99％的频率。在一些实施方案中，C3 RNA序列的靶部分不含靶部分的8位与13位之间的多态性位点，其中主要等位基因具有小于99％的频率。本领域普通技术人员将能够从dbSNP获得多态性的等位基因频率。
与外显子序列杂交。在一些实施方案中，RNAi试剂的反义链与仅包括单个外显子内的序列
的靶区域杂交；在其它实施方案中，通过初级转录物的剪接或其它修饰来产生靶部分。在一些实施方案中，ASO的靶部分可以在5'UTR、编码序列或3'UTR内，或者可以与UTR和编码序列之间的边界重叠。在一些实施方案中，ASO的靶部分可以在内含子内，在外显子内，或可以与内含子和外显子之间的边界重叠。通常，可用于与核酸链杂交，导致转录物的切割和降解或导致翻译抑制的任何位点都可被用作靶部分。尽管如此，本领域普通技术人员将理解，可能需要选择或避免靶RNA的特定区域作为靶部分。例如，在一些实施方案中，可能需要避免靶RNA的与其它不希望降解或翻译抑制的转录物具有广泛同一性的区段。本领域普通技术人
员将理解，已经鉴定了C3基因中的各种天然存在的DNA序列变异，并且这些变异可以在例如NCBI dbSNP(ncbi.nlm.nih.gov/snp)和UniProt数据库中找到。术语“C3”旨在涵盖这些变异。在一些方面，本文提供的人类C3的参考核苷酸序列(例如，NM_000064.3或更早版本NM_
000064.2)可用于设计靶向C3的INAA，确定特定序列是否与C3 RNA互补，描述靶部分的位
置，或用于本文所述的其它目的。在一些实施方案中，C3 RNA序列的靶部分不含多态性位
点，其中最常见的等位基因具有小于99％的频率。在一些实施方案中，C3 RNA序列的靶部分不含靶部分的8位与13位之间的多态性位点，其中主要等位基因具有小于99％的频率。本领域普通技术人员将能够从dbSNP获得多态性的等位基因频率。
[0581] INAA可以包含一个或多个修饰的核苷酸。适用于INAA的修饰包括本文公开的或本领域中已知的所有类型的修饰。任何此类修饰都可以存在于本文所述的各种类型的INAA中
的任一个中，例如RNAi试剂、siRNA、dsRNA或ASO。与缺乏特定修饰但在其它方面相同的核酸相比，这类修饰可以例如增加稳定性(例如，通过降低对核酸酶裂解的敏感性)，降低体内清除，增加细胞摄取，或赋予改善效力、功效、特异性或以其它方式使核酸更适合于预期用途的其它性质。修饰包括例如末端修饰，例如5'末端修饰、3'末端修饰、碱基修饰，例如用稳定碱基、去稳定碱基或与扩展的伴侣谱库碱基配对的碱基替换，去除碱基(无碱基核苷酸)或
缀合碱基；糖修饰(例如，在2'位或4'位)或糖替换；和/或骨架修饰，包括磷酸二酯键的修饰或替换。可以在双链核酸的两条链中使用不同的修饰。核酸可以被均一地修饰或仅在其一
部分上修饰和/或可以含有多种不同的修饰。本领域普通技术人员理解，某些修饰可能更适合用于所期望的特定类型的INAA和/或特定抑制机制，并且能够基于本文的教导和本文引
用的参考文献选择适当的修饰。本公开涵盖靶向C3的INAA，其设计基于并体现本文引用的
参考文献中描述的任何特定构象，并引入适当的修饰，以产生这样的INAA。
的任一个中，例如RNAi试剂、siRNA、dsRNA或ASO。与缺乏特定修饰但在其它方面相同的核酸相比，这类修饰可以例如增加稳定性(例如，通过降低对核酸酶裂解的敏感性)，降低体内清除，增加细胞摄取，或赋予改善效力、功效、特异性或以其它方式使核酸更适合于预期用途的其它性质。修饰包括例如末端修饰，例如5'末端修饰、3'末端修饰、碱基修饰，例如用稳定碱基、去稳定碱基或与扩展的伴侣谱库碱基配对的碱基替换，去除碱基(无碱基核苷酸)或
缀合碱基；糖修饰(例如，在2'位或4'位)或糖替换；和/或骨架修饰，包括磷酸二酯键的修饰或替换。可以在双链核酸的两条链中使用不同的修饰。核酸可以被均一地修饰或仅在其一
部分上修饰和/或可以含有多种不同的修饰。本领域普通技术人员理解，某些修饰可能更适合用于所期望的特定类型的INAA和/或特定抑制机制，并且能够基于本文的教导和本文引
用的参考文献选择适当的修饰。本公开涵盖靶向C3的INAA，其设计基于并体现本文引用的
参考文献中描述的任何特定构象，并引入适当的修饰，以产生这样的INAA。
[0582] 在一些实施方案中，INAA包含在一个或多个位置的修饰。例如，在一些实施方案中，有义链和/或反义链包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15个或更多个修饰的核苷酸。修饰的核苷酸的数量可以表示为INAA中存在的核苷酸总数的百分比。例如，INAA可以包含在核苷酸位置的约5％至约100％(例如，核苷酸位置的5％、10％、15％、20％、25％、
30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％)的修饰的核苷酸。在某些实施方案中，INAA的核苷酸中至少80％、85％、90％、95％或更多被修饰。在某些实施方案中，基本上所有核苷酸都被修饰。基本上所有核苷酸都被修饰的INAA或其链可以包括1、2、3、4或5个未修饰的核苷酸，条件是至少80％的核苷酸被修饰。
30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％)的修饰的核苷酸。在某些实施方案中，INAA的核苷酸中至少80％、85％、90％、95％或更多被修饰。在某些实施方案中，基本上所有核苷酸都被修饰。基本上所有核苷酸都被修饰的INAA或其链可以包括1、2、3、4或5个未修饰的核苷酸，条件是至少80％的核苷酸被修饰。
[0583] 在一些实施方案中，INAA包含两种或更多种不同修饰。在一些实施方案中，INAA包含两种或更多种不同的2'糖修饰。在一些实施方案中，INAA可以含有一个或多个被取代的糖部分。例如，INAA可以包括在2'位包含以下一种的糖部分：OH；F；O-、S-或N-烷基；O-、S-或N-烯基；O-、S-或N-炔基；或O-烷基-O-烷基，其中烷基、烯基和炔基可以是被取代或未被取代的C1到C10烷基或C2到C10烯基和炔基。示例性合适的修饰包括O[(CH2)nO]mCH3、O(CH2)
nOCH3、O(CH2)nNH2、O(CH2)nCH3、O(CH2)nONH2和O(CH2)nON[(CH2)nCH3)]2，其中n和m在每次出现时独立地是1到约10。在一些实施方案中，INAA在2'位包含以下一种：C1到C10烷基、被取代的烷基、烷芳基、芳烷基、O-烷芳基或O-芳烷基、SH、SCH3、OCN、Cl、Br、CN、CF3、OCF3、SOCH3、SO2CH3、ONO2、NO2、N3、NH2、杂环烷基、杂环烷芳基、氨基烷氨基、聚烷基氨基、被取代的甲硅烷基。在一些实施方案中，修饰包括2'-甲氧基乙氧基(2'-O-CH2CH2OCH，也被称为
2'-O-(2-甲氧基乙基)或2'-MOE)，即，烷氧基-烷氧基。另一个示例性修饰是2'-二甲基氨基氧乙氧基，即，O(CH2)2ON(CH)2基团，也被称为2'-DMAOE，和2'-二甲基氨基乙氧基乙氧基(本领域中也被称为2'-O-二甲基氨基乙氧基乙基或2'-DMAEOE)，即，2'-O-CH2-O-CH2-N
(CH2)2。其它修饰包括2'-甲氧基(2'-OCH3)、2'-氨基丙氧基(2'-OCH2CH2CH2NH2)和2'-氟
(2'-F)。也可以在INAA的其它位置进行类似的修饰，例如3'末端核苷酸上或2'-5'连接的
dsRNA中糖的3'位和5'末端核苷酸的5'位。INAA可以包含糖模拟物，例如环丁基部分，代替戊呋喃糖。在一些实施方案中，INAA可以替代地或另外地含有一个或多个修饰的碱基，例如本文所述的那些。
nOCH3、O(CH2)nNH2、O(CH2)nCH3、O(CH2)nONH2和O(CH2)nON[(CH2)nCH3)]2，其中n和m在每次出现时独立地是1到约10。在一些实施方案中，INAA在2'位包含以下一种：C1到C10烷基、被取代的烷基、烷芳基、芳烷基、O-烷芳基或O-芳烷基、SH、SCH3、OCN、Cl、Br、CN、CF3、OCF3、SOCH3、SO2CH3、ONO2、NO2、N3、NH2、杂环烷基、杂环烷芳基、氨基烷氨基、聚烷基氨基、被取代的甲硅烷基。在一些实施方案中，修饰包括2'-甲氧基乙氧基(2'-O-CH2CH2OCH，也被称为
2'-O-(2-甲氧基乙基)或2'-MOE)，即，烷氧基-烷氧基。另一个示例性修饰是2'-二甲基氨基氧乙氧基，即，O(CH2)2ON(CH)2基团，也被称为2'-DMAOE，和2'-二甲基氨基乙氧基乙氧基(本领域中也被称为2'-O-二甲基氨基乙氧基乙基或2'-DMAEOE)，即，2'-O-CH2-O-CH2-N
(CH2)2。其它修饰包括2'-甲氧基(2'-OCH3)、2'-氨基丙氧基(2'-OCH2CH2CH2NH2)和2'-氟
(2'-F)。也可以在INAA的其它位置进行类似的修饰，例如3'末端核苷酸上或2'-5'连接的
dsRNA中糖的3'位和5'末端核苷酸的5'位。INAA可以包含糖模拟物，例如环丁基部分，代替戊呋喃糖。在一些实施方案中，INAA可以替代地或另外地含有一个或多个修饰的碱基，例如本文所述的那些。
[0584] 在一些实施方案中，INAA可以包括一个或多个构象限制的核苷酸(CRN)。构象限制的核苷酸是核苷酸类似物，其经过修饰以减少化合物可以呈现的潜在构象的数量。构象限
制的核苷酸通常包含双环糖部分(例如双环核糖)，其中糖部分的C2'和C4'桥连或C3'和C5'
桥连。不希望受任何理论束缚，在核酸，例如RNAi试剂中包含构象限制的核苷酸可以增加试剂在血清中的稳定性和/或降低脱靶效应。使用的双环核苷的实例包括例如包含4'和2'核
糖基环原子之间的桥连的核苷。在某些实施方案中，INAA包括一个或多个包含4'至2'桥连
的双环核苷。这种4'至2'桥连双环核苷的实例包括但不限于4'-(CH2)-O-2'(本领域中被称
为“锁定核酸”或LNA)；4'-(CH2)-S-2'；4'-(CH2)2-O-2'(ENA)；4'-CH(CH3)-O-2'(也被称为"约束乙基"或"cEt")和4'-CH(CH2OCH3)-O-2'(和其类似物；参见例如美国专利号7,399,
845)；4'-C(CH3)(CH3)-O-2'(和其类似物；参见例如美国专利号8,278,283)；4'-CH2-N
(OCH3)-2'(和其类似物；参见例如美国专利号8,278,425)；4'-CH2-O-N(CH3)-2'(参见例如美国专利公开号20040171570)；4'-CH2-N(R)-O-2'，其中R是H、C1-C12烷基或保护基(参见例如美国专利号7,427,672)；4'-CH2-C(H)(CH3)-2'和4'-CH2-C(＝CH2)-2'(和其类似物；
参见例如美国专利号8,278,426)。INAA的一个或多个核苷酸可以包含羟甲基取代的核苷
酸。“羟甲基取代的核苷酸”是无环的2'-3'-seco-核苷酸，也被称为“解锁核酸”(UNA)修饰。
教导UNA的制备的代表性出版物包括但不限于美国专利号8,314,227；和美国专利申请公开
号20130096289；20130011922；和20110313020。可以存在于核酸分子的一个或多个末端的潜在稳定修饰可以包括N-(乙酰氨基己酰基)-4-羟基脯氨醇(Hyp-C6-NHAc)、N-(己酰基-4-
羟基脯氨醇(Hyp-C6)、N-(乙酰基-4-羟基脯氨醇(Hyp-NHAc)、胸苷-2'-O-脱氧胸苷(醚)、N-(氨基己酰基)-4-羟基脯氨醇(Hyp-C6-氨基)、2-二十二烷酰基-尿苷-3'-磷酸盐、反向核苷酸(3'-3'、5'-5'或2'-2'连接的核苷酸)、dT(idT)等。可以存在于核酸链的末端的某些有用修饰的公开可以在PCT公开号WO 2011/005861和/或美国专利申请公开号20050096290中找
到。
制的核苷酸通常包含双环糖部分(例如双环核糖)，其中糖部分的C2'和C4'桥连或C3'和C5'
桥连。不希望受任何理论束缚，在核酸，例如RNAi试剂中包含构象限制的核苷酸可以增加试剂在血清中的稳定性和/或降低脱靶效应。使用的双环核苷的实例包括例如包含4'和2'核
糖基环原子之间的桥连的核苷。在某些实施方案中，INAA包括一个或多个包含4'至2'桥连
的双环核苷。这种4'至2'桥连双环核苷的实例包括但不限于4'-(CH2)-O-2'(本领域中被称
为“锁定核酸”或LNA)；4'-(CH2)-S-2'；4'-(CH2)2-O-2'(ENA)；4'-CH(CH3)-O-2'(也被称为"约束乙基"或"cEt")和4'-CH(CH2OCH3)-O-2'(和其类似物；参见例如美国专利号7,399,
845)；4'-C(CH3)(CH3)-O-2'(和其类似物；参见例如美国专利号8,278,283)；4'-CH2-N
(OCH3)-2'(和其类似物；参见例如美国专利号8,278,425)；4'-CH2-O-N(CH3)-2'(参见例如美国专利公开号20040171570)；4'-CH2-N(R)-O-2'，其中R是H、C1-C12烷基或保护基(参见例如美国专利号7,427,672)；4'-CH2-C(H)(CH3)-2'和4'-CH2-C(＝CH2)-2'(和其类似物；
参见例如美国专利号8,278,426)。INAA的一个或多个核苷酸可以包含羟甲基取代的核苷
酸。“羟甲基取代的核苷酸”是无环的2'-3'-seco-核苷酸，也被称为“解锁核酸”(UNA)修饰。
教导UNA的制备的代表性出版物包括但不限于美国专利号8,314,227；和美国专利申请公开
号20130096289；20130011922；和20110313020。可以存在于核酸分子的一个或多个末端的潜在稳定修饰可以包括N-(乙酰氨基己酰基)-4-羟基脯氨醇(Hyp-C6-NHAc)、N-(己酰基-4-
羟基脯氨醇(Hyp-C6)、N-(乙酰基-4-羟基脯氨醇(Hyp-NHAc)、胸苷-2'-O-脱氧胸苷(醚)、N-(氨基己酰基)-4-羟基脯氨醇(Hyp-C6-氨基)、2-二十二烷酰基-尿苷-3'-磷酸盐、反向核苷酸(3'-3'、5'-5'或2'-2'连接的核苷酸)、dT(idT)等。可以存在于核酸链的末端的某些有用修饰的公开可以在PCT公开号WO 2011/005861和/或美国专利申请公开号20050096290中找
到。
[0585] 在一些实施方案中，INAA包含选自2'-脱氧、2'-O-甲基、2'-氟、2'-脱氧-2'-氟、2'-O-苄基和2'-O-甲基-4-吡啶的一种或多种2'糖修饰。在一些实施方案中，INAA包含至多两种不同的2'糖修饰，例如2'-O-甲基和2'-氟。在一些实施方案中，2'-F修饰的核苷酸，如果存在的话，是嘧啶，并且2'-O-甲基修饰的核苷酸，如果存在的话，是嘌呤。在一些实施方案中，INAA包含骨架，所述骨架包含至少一种单体，其中核糖部分已经被除核糖之外的部分替换，例如非碳水化合物部分，其可以是环状的。非核糖单体可以包含连接点，其在一些实施方案中是指环状部分的组成环原子，例如碳原子或杂原子，其连接选定的部分，例如配
体，例如靶向或递送部分，或改变物理性质的部分。可以在INAA中使用的示例性非核糖单体以及其它类型的修饰描述于美国专利申请公开号20050107325中。
体，例如靶向或递送部分，或改变物理性质的部分。可以在INAA中使用的示例性非核糖单体以及其它类型的修饰描述于美国专利申请公开号20050107325中。
[0586] 本领域普通技术人员认识到有效的RNAi试剂可以具有多种构象。RNAi试剂的“构象”是指试剂相对于对特定序列没有特异性的各种结构特征的形式，例如链的数量(单链或双链)；突出端(如果存在)的位置和长度；每条链中的修饰模式；双链体部分的长度；与靶标互补的区域的长度；相对于反义链末端的互补区的位置；存在或不存在环；与核酸连接的任何部分的属性和位置；双链体部分的互补百分比；双链体部分中任何错配或不配对核苷酸
的位置；互补区和靶标的互补百分比；以及由互补区和靶标形成的双链体中任何错配或不
配对核苷酸的位置。“修饰的模式”或“修饰模式”是指核酸中修饰的属性和位置。本公开包括靶向C3并具有本文、本文引用的参考文献中所述或本领域中其它已知的任何构象和修饰
模式的RNAi试剂。
的位置；互补区和靶标的互补百分比；以及由互补区和靶标形成的双链体中任何错配或不
配对核苷酸的位置。“修饰的模式”或“修饰模式”是指核酸中修饰的属性和位置。本公开包括靶向C3并具有本文、本文引用的参考文献中所述或本领域中其它已知的任何构象和修饰
模式的RNAi试剂。
[0587] 在一些实施方案中，抑制C3表达的INAA包含双链siRNA。双链siRNA包含两条分开的核酸链，它们彼此杂交，形成包含至少9个碱基对(bp)长并且至多约36bp长的双链部分
(“双链体部分”)的结构。双链体部分包含两条反向平行且基本上互补的核酸链，其可被称为相对于靶RNA具有“有义”和“反义”取向，其中“有义”链的序列包含与靶RNA的靶部分的序列相同或同源的区域，并且“反义”链的序列包含与靶RNA的靶部分互补的区域。在某些实施方案中，双链体部分可以是介于10-15bp、12-30bp、14-30bp、17-30bp、27-30bp、17-23bp、
17-21bp、17-19bp、17-27bp、18-25bp、19-25bp、19-23bp、19-21bp、21-25bp或21-23bp长。在某些实施方案中，双链体部分的长度是10-36、11-36、12-36、13-36、14-36、15-36、9-35、10-
35、11-35、12-35、13-35、14-35、15-35、9-34、10-34、11-34、12-34、13-34、14-34、15-34、9-
33、10-33、11-33、12-33、13-33、14-33、15-33、9-32、10-32、11-32、12-32、13-32、14-32、15-
32、9-31、10-31、11-31、12-31、13-32、14-31、15-31、15-30、15-29、15-28、15-27、15-26、15-
25、15-24、15-23、15-22、15-21、15-20、15-19、15-18、15-17、18-30、18-29、18-28、18-27、
18-26、18-25、18-24、18-23、18-22、18-21、18-20、19-30、19-29、19-28、19-27、19-26、19-
25、19-24、19-23、19-22、19-21、19-20、20-30、20-29、20-28、20-27、20-26、20-25、20-24、
20-23、20-22、20-21、21-30、21-29、21-28、21-27、21-26、21-25、21-24、21-23或21-22个碱基对。在某些实施方案中，双链体部分是15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、
29或30bp长。
(“双链体部分”)的结构。双链体部分包含两条反向平行且基本上互补的核酸链，其可被称为相对于靶RNA具有“有义”和“反义”取向，其中“有义”链的序列包含与靶RNA的靶部分的序列相同或同源的区域，并且“反义”链的序列包含与靶RNA的靶部分互补的区域。在某些实施方案中，双链体部分可以是介于10-15bp、12-30bp、14-30bp、17-30bp、27-30bp、17-23bp、
17-21bp、17-19bp、17-27bp、18-25bp、19-25bp、19-23bp、19-21bp、21-25bp或21-23bp长。在某些实施方案中，双链体部分的长度是10-36、11-36、12-36、13-36、14-36、15-36、9-35、10-
35、11-35、12-35、13-35、14-35、15-35、9-34、10-34、11-34、12-34、13-34、14-34、15-34、9-
33、10-33、11-33、12-33、13-33、14-33、15-33、9-32、10-32、11-32、12-32、13-32、14-32、15-
32、9-31、10-31、11-31、12-31、13-32、14-31、15-31、15-30、15-29、15-28、15-27、15-26、15-
25、15-24、15-23、15-22、15-21、15-20、15-19、15-18、15-17、18-30、18-29、18-28、18-27、
18-26、18-25、18-24、18-23、18-22、18-21、18-20、19-30、19-29、19-28、19-27、19-26、19-
25、19-24、19-23、19-22、19-21、19-20、20-30、20-29、20-28、20-27、20-26、20-25、20-24、
20-23、20-22、20-21、21-30、21-29、21-28、21-27、21-26、21-25、21-24、21-23或21-22个碱基对。在某些实施方案中，双链体部分是15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、
29或30bp长。
[0588] 在一些实施方案中，ds siRNA的每条链的长度可以在12-36nt的范围内。例如，每条链的长度可以是14-30nt、长度是17-30nt、长度是25-30nt、长度是27-30nt、长度是17-
23nt、长度是17-21nt、长度是17-19nt、长度是19-25nt、长度是19-23nt、长度是19-21nt、长度是21-25nt或长度是21-23nt。在某些实施方案中，任一条或两条链是12、13、14、15、16、
17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30nt长。在各种实施方案中，链可以长度相等或可以具有不同长度。在一些实施方案中，链的长度可以相差1-10nt。在一些实施方案
中，任一条或两条链可以含有5'磷酸酯基和/或3'羟基(--OH)。在一些实施方案中，任一条或两条链可以含有5'羟基(OH)。siRNA的有义链和反义链可以在其全长或部分长度上彼此
配对。例如，20nt链可以与互补链碱基配对以形成20nt双链体部分，或者可以与这种链上
15、16、17、18或19个碱基的互补区碱基配对以形成由15、16、17、18或19个碱基对组成的双链体部分。在后一种情况下，剩余的不配对碱基可以作为5'和/或3'突出端存在。通常，ds siRNA的链在双链体部分内彼此基本上互补。在一些实施方案中，ds siRNA的链在双链体部分内彼此完全互补。然而，应当理解，不需要双链体部分内的100％互补性。因此，在一些实施方案中，双链体部分可以含有一个或多个不匹配的核苷酸。不匹配的核苷酸可以是在错
配(非互补)核苷酸对中，或者可以形成包含一个或多个不与另一条链中的核苷酸相对的核
苷酸的凸起或成为其一部分。在一些实施方案中，任一条或两条链可以在双链体部分内含
有多达约1、2、3、4或5个不匹配的核苷酸。两条链可以含有不同数量的不匹配核苷酸。为了计算双链体部分的长度，在每侧具有至少一个匹配的核苷酸对的错配核苷酸对被认为是核
苷酸对。在一些实施方案中，双链体部分含有1或2个错配的核苷酸对。在一些实施方案中，双链体部分含有1或2个不匹配的核苷酸，形成单核苷酸凸起或2个核苷酸的凸起。
23nt、长度是17-21nt、长度是17-19nt、长度是19-25nt、长度是19-23nt、长度是19-21nt、长度是21-25nt或长度是21-23nt。在某些实施方案中，任一条或两条链是12、13、14、15、16、
17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30nt长。在各种实施方案中，链可以长度相等或可以具有不同长度。在一些实施方案中，链的长度可以相差1-10nt。在一些实施方案
中，任一条或两条链可以含有5'磷酸酯基和/或3'羟基(--OH)。在一些实施方案中，任一条或两条链可以含有5'羟基(OH)。siRNA的有义链和反义链可以在其全长或部分长度上彼此
配对。例如，20nt链可以与互补链碱基配对以形成20nt双链体部分，或者可以与这种链上
15、16、17、18或19个碱基的互补区碱基配对以形成由15、16、17、18或19个碱基对组成的双链体部分。在后一种情况下，剩余的不配对碱基可以作为5'和/或3'突出端存在。通常，ds siRNA的链在双链体部分内彼此基本上互补。在一些实施方案中，ds siRNA的链在双链体部分内彼此完全互补。然而，应当理解，不需要双链体部分内的100％互补性。因此，在一些实施方案中，双链体部分可以含有一个或多个不匹配的核苷酸。不匹配的核苷酸可以是在错
配(非互补)核苷酸对中，或者可以形成包含一个或多个不与另一条链中的核苷酸相对的核
苷酸的凸起或成为其一部分。在一些实施方案中，任一条或两条链可以在双链体部分内含
有多达约1、2、3、4或5个不匹配的核苷酸。两条链可以含有不同数量的不匹配核苷酸。为了计算双链体部分的长度，在每侧具有至少一个匹配的核苷酸对的错配核苷酸对被认为是核
苷酸对。在一些实施方案中，双链体部分含有1或2个错配的核苷酸对。在一些实施方案中，双链体部分含有1或2个不匹配的核苷酸，形成单核苷酸凸起或2个核苷酸的凸起。
[0589] 形成RNAi试剂的双链体结构的两条链可以是一个较大核酸分子的不同部分，或者它们可以是分开的核酸分子。当两条链是较大分子的一部分时，形成双链体结构的一条链
的3'末端和另一条链的5'末端可以直接连接或可以通过形成双链体结构的一条链的3'末
端和另一条链的5'末端之间的不间断核苷酸链连接。所得结构可以被称为“发夹”，并且连接RNA链可以被称为“环”。该分子可以被称为“短发夹RNA”(shRNA)。环可以包含至少一个不配对的核苷酸。在一些实施方案中，环包含至少2个、至少3个、至少4个、至少5个、至少6个、至少7个、至少8个、至少9个、至少10个、至少20个或更多个不配对的核苷酸。在各种实施方案中，引导链序列可以位于茎的任一臂中，即相对于环是5'或相对于环是3'。如本领域中所知，茎结构不需要精确的碱基配对(完全互补)。因此，茎可以包括一个或多个不匹配的残
基，或碱基配对可以是精确的，即它可以不包括任何错配或凸起。茎可以具有上文针对双链体部分所述的任何长度。例如，在一些实施方案中，茎介于15-30bp之间，例如介于17-29bp之间，例如15-19bp或19-25bp。环内的一级序列和核苷酸数可以变化。环序列的实例包括例如UGGU；ACUCGAGA；UUCAAGAGA。在一些实施方案中，可以不存在环序列(在这种情况下，双链体部分的末端可以直接连接)。在一些实施方案中，环序列可以是至少部分自身互补的。在一些实施方案中，环的长度介于1与20nt之间，例如1-15nt，例如4-9nt。shRNA可以包含5'或
3'突出端。如本领域已知的，shRNA可以经历细胞内加工，例如通过切丁酶，以去除环并产生siRNA。在一些实施方案中，ds RNAi试剂的两条互补链可以通过除了形成双链体结构的一
条链的3'末端和另一条链的5'末端之间的不间断核苷酸链以外的方式共价连接。各种连接
部分中的任何一个，例如本文关于坎普他汀类似物所述的那些，都可以用于连接链，例如通过其末端连接。在一些实施方案中，INAA可以由载体编码，例如重组质粒或病毒载体，其在被引入细胞中时，引起细胞表达INAA。例如，INAA可以是shRNA或可以包含两条分开的RNA
链，这两条链在细胞内杂交以产生ds siRNA。向受试者施用质粒或病毒载体。在一些实施方案中，载体能够感染或转导肝细胞。在一些实施方案中，病毒载体是基于腺相关病毒(AAV)的载体或逆转录病毒载体(例如，慢病毒载体)。在一些实施方案中，INAA可以从RNA聚合酶III启动子表达。
的3'末端和另一条链的5'末端可以直接连接或可以通过形成双链体结构的一条链的3'末
端和另一条链的5'末端之间的不间断核苷酸链连接。所得结构可以被称为“发夹”，并且连接RNA链可以被称为“环”。该分子可以被称为“短发夹RNA”(shRNA)。环可以包含至少一个不配对的核苷酸。在一些实施方案中，环包含至少2个、至少3个、至少4个、至少5个、至少6个、至少7个、至少8个、至少9个、至少10个、至少20个或更多个不配对的核苷酸。在各种实施方案中，引导链序列可以位于茎的任一臂中，即相对于环是5'或相对于环是3'。如本领域中所知，茎结构不需要精确的碱基配对(完全互补)。因此，茎可以包括一个或多个不匹配的残
基，或碱基配对可以是精确的，即它可以不包括任何错配或凸起。茎可以具有上文针对双链体部分所述的任何长度。例如，在一些实施方案中，茎介于15-30bp之间，例如介于17-29bp之间，例如15-19bp或19-25bp。环内的一级序列和核苷酸数可以变化。环序列的实例包括例如UGGU；ACUCGAGA；UUCAAGAGA。在一些实施方案中，可以不存在环序列(在这种情况下，双链体部分的末端可以直接连接)。在一些实施方案中，环序列可以是至少部分自身互补的。在一些实施方案中，环的长度介于1与20nt之间，例如1-15nt，例如4-9nt。shRNA可以包含5'或
3'突出端。如本领域已知的，shRNA可以经历细胞内加工，例如通过切丁酶，以去除环并产生siRNA。在一些实施方案中，ds RNAi试剂的两条互补链可以通过除了形成双链体结构的一
条链的3'末端和另一条链的5'末端之间的不间断核苷酸链以外的方式共价连接。各种连接
部分中的任何一个，例如本文关于坎普他汀类似物所述的那些，都可以用于连接链，例如通过其末端连接。在一些实施方案中，INAA可以由载体编码，例如重组质粒或病毒载体，其在被引入细胞中时，引起细胞表达INAA。例如，INAA可以是shRNA或可以包含两条分开的RNA
链，这两条链在细胞内杂交以产生ds siRNA。向受试者施用质粒或病毒载体。在一些实施方案中，载体能够感染或转导肝细胞。在一些实施方案中，病毒载体是基于腺相关病毒(AAV)的载体或逆转录病毒载体(例如，慢病毒载体)。在一些实施方案中，INAA可以从RNA聚合酶III启动子表达。
[0590] 除双链体结构外，双链核酸，例如双链INAA，例如双链RNAi试剂，还可以包含一个或多个核苷酸突出端。术语“核苷酸突出端”或“突出端”可互换使用，是指从双链核酸的双链体结构突出的至少一个不配对的核苷酸。例如，当ds核酸的一条链的3'末端延伸超过另一条链的5'末端时，存在3'核苷酸突出端。关于双链核酸的“平端”或“平末端”意指在双链核酸的该末端没有不配对的核苷酸，即没有核苷酸突出端。因此，“平末端的”RNAi试剂在其整个长度上是双链的，即在任一端都没有核苷酸突出端(尽管在双链体内可能存在一个或
多个不配对的核苷酸)。本文所述的RNAi试剂包括在一端具有核苷酸突出端的RNAi试剂，即具有一个突出端和一个平末端的试剂、在两端具有核苷酸突出端的试剂以及平末端的试
剂。
多个不配对的核苷酸)。本文所述的RNAi试剂包括在一端具有核苷酸突出端的RNAi试剂，即具有一个突出端和一个平末端的试剂、在两端具有核苷酸突出端的试剂以及平末端的试
剂。
[0591] 在一些实施方案中，突出端包含至少1、2、3、4、5nt或更多。突出端可以包含核苷酸或非核苷酸部分或其组合或由其组成。RNAi试剂可以在一条或两条链的3'末端、5'末端或两端含有一个或多个突出端区域。突出端可以是在有义链、反义链或其任何组合上，应当理解，双链核酸可以具有至多两个突出端。在一些实施方案中，突出端的核苷酸可以存在于反义链或有义链的5'-末端、3'-末端或两端。在一些实施方案中，ds siRNA的反义链在3'末端和/或5'末端具有1-5nt或5-10nt突出端，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10nt突出端。在一些实施方案中，ds siRNA的有义链在3'末端和/或5'末端具有1-5nt或5-10nt突出端，例如，1、
2、3、4、5、6、7、8、9或10nt突出端。在一些实施方案中，突出端的长度可以是1-6nt，例如长度是2-6nt、长度是1-5nt、长度是2-5nt、长度是1-4nt、长度是2-4nt、长度是1-3nt、长度是2-
3nt或长度是1-2nt，例如2nt。突出端可以是一条链比另一条链长的结果或是两条相同长度的链交错的结果。在各种实施方案中，突出端可以与由引导链和靶RNA形成的杂交体中的靶RNA完全互补、部分互补或不互补。例如，2nt突出端可以由相对于mRNA中的靶位点与1位和2位互补的核苷酸组成。在某些实施方案中，RNAi试剂的突出端区域中的核苷酸可以各自独
立地是经过修饰或未经过修饰的核苷酸，包括但不限于2'-糖修饰的核苷酸，例如2'-F、2'-O-甲基、2'-O-甲氧基乙基-5-甲基尿苷(Teo)、2'-O-甲氧基乙基腺苷(Aeo)、2'-O-甲氧基乙基-5-甲基胞苷(m5Ceo)；或非2'-糖修饰的核苷酸，例如尿嘧啶(U)、胸苷(T)或脱氧胸苷
(dT)，以及其任何组合。例如，UU、TT或dTdT可以是任一条链上任一个末端的突出端序列。在一些实施方案中，突出端含有核糖核苷酸或2'-O-甲基修饰的核苷酸或其组合。在一些实施方案中，RNAi试剂的有义链、反义链或两条链的5'或3'突出端可被磷酸化。在一些实施方案中，突出端区域含有两个核苷酸，其在两个核苷酸之间具有硫代磷酸酯或其它非磷酸二酯
键，其中两个核苷酸可以相同或不同。在一些实施方案中，突出端存在于有义链的3'末端、反义链的3'末端或两条链的3'末端。在一些实施方案中，反义链中存在3'突出端。在一些实施方案中，有义链中存在3'突出端。在一些实施方案中，RNAi试剂可以含有单个突出端。例如，突出端可以位于有义链的3'末端，而有义链的5'末端(与反义链的3'末端一起)形成平
末端。或者，突出端可以位于反义链的3'末端，而反义链的5'末端(与有义链的3'末端一起)形成平末端。在一些实施方案中，3'突出端可以替代地或另外地具有与其连接的部分，例如靶向部分或亲脂性部分。
2、3、4、5、6、7、8、9或10nt突出端。在一些实施方案中，突出端的长度可以是1-6nt，例如长度是2-6nt、长度是1-5nt、长度是2-5nt、长度是1-4nt、长度是2-4nt、长度是1-3nt、长度是2-
3nt或长度是1-2nt，例如2nt。突出端可以是一条链比另一条链长的结果或是两条相同长度的链交错的结果。在各种实施方案中，突出端可以与由引导链和靶RNA形成的杂交体中的靶RNA完全互补、部分互补或不互补。例如，2nt突出端可以由相对于mRNA中的靶位点与1位和2位互补的核苷酸组成。在某些实施方案中，RNAi试剂的突出端区域中的核苷酸可以各自独
立地是经过修饰或未经过修饰的核苷酸，包括但不限于2'-糖修饰的核苷酸，例如2'-F、2'-O-甲基、2'-O-甲氧基乙基-5-甲基尿苷(Teo)、2'-O-甲氧基乙基腺苷(Aeo)、2'-O-甲氧基乙基-5-甲基胞苷(m5Ceo)；或非2'-糖修饰的核苷酸，例如尿嘧啶(U)、胸苷(T)或脱氧胸苷
(dT)，以及其任何组合。例如，UU、TT或dTdT可以是任一条链上任一个末端的突出端序列。在一些实施方案中，突出端含有核糖核苷酸或2'-O-甲基修饰的核苷酸或其组合。在一些实施方案中，RNAi试剂的有义链、反义链或两条链的5'或3'突出端可被磷酸化。在一些实施方案中，突出端区域含有两个核苷酸，其在两个核苷酸之间具有硫代磷酸酯或其它非磷酸二酯
键，其中两个核苷酸可以相同或不同。在一些实施方案中，突出端存在于有义链的3'末端、反义链的3'末端或两条链的3'末端。在一些实施方案中，反义链中存在3'突出端。在一些实施方案中，有义链中存在3'突出端。在一些实施方案中，RNAi试剂可以含有单个突出端。例如，突出端可以位于有义链的3'末端，而有义链的5'末端(与反义链的3'末端一起)形成平
末端。或者，突出端可以位于反义链的3'末端，而反义链的5'末端(与有义链的3'末端一起)形成平末端。在一些实施方案中，3'突出端可以替代地或另外地具有与其连接的部分，例如靶向部分或亲脂性部分。
[0592] 在某些实施方案中，INAA的至少一条链包含非核苷酸部分，所述非核苷酸部分在其存在的链的3'末端核苷酸处的糖残基的3'或2'位共价连接。这种3'末端核苷酸可以是突
出端的一部分或可以是平末端的一部分。在一些实施方案中，非核苷酸部分选自下组：丙
醇、与磷酸二酯连接的烷基部分、与硫代磷酸酯连接的烷基部分、无碱基部分(例如，脱氧核糖无碱基部分或核糖无碱基部分)或其组合。烷基部分可以是3-碳烷基链。这些修饰和其用途描述于美国专利申请公开号20130035368中。在各种实施方案中，本公开包括美国专利公开号20130035368中描述的任何核酸结构和/或修饰的用途。
出端的一部分或可以是平末端的一部分。在一些实施方案中，非核苷酸部分选自下组：丙
醇、与磷酸二酯连接的烷基部分、与硫代磷酸酯连接的烷基部分、无碱基部分(例如，脱氧核糖无碱基部分或核糖无碱基部分)或其组合。烷基部分可以是3-碳烷基链。这些修饰和其用途描述于美国专利申请公开号20130035368中。在各种实施方案中，本公开包括美国专利公开号20130035368中描述的任何核酸结构和/或修饰的用途。
[0593] 在一些实施方案中，ds RNAi试剂足够长并且具有适当的结构特征以用作切丁酶的底物。在这种情况下，在通过细胞摄取dsRNAi试剂后，内源性切丁酶可以将ds RNAi试剂切割成具有链和3'突出端的较短RNAi试剂，其长度为天然存在的siRNA特有的长度。然后这些切丁酶产生的siRNA介导RNAi以抑制靶基因的表达。能够用作切丁酶底物的RNAi试剂有
时在本领域中称为“切丁酶底物短干扰RNA”或DsiRNA。不希望受任何理论的束缚，由于切丁酶加工与RISC加载之间的联系，与较短的siRNA(例如，含有21bp长并具有中心19bp双链体
和2碱基3'突出端的链的siRNA)相比，DsiRNA可以具有增加的RNAi效力。切丁酶可以促进将衍生自切割的dsRNA的单链切割产物并入RISC中。示例性DsiRNA描述于例如美国专利申请
公开号20070265220和美国专利号8,084,599和8,796,444中。在一些实施方案中，这种RNAi试剂包含至少24nt长，例如至少25nt长，例如25-30nt长，例如27-30nt长的双链体部分。根据此实施方案，dsRNA中最长的链包含24-30个核苷酸。在一个实施方案中，dsRNA是不对称的，使得有义链包含22-28个核苷酸并且反义链包含24-30个核苷酸。因此，所得dsRNA在反义链的3'末端具有突出端。突出端是1-3个核苷酸，例如2个核苷酸。在一些实施方案中，ds siRNA包含双链RNA，其具有25至30个核苷酸的有义链、在有义链的3'末端的平末端以及在
反义链的3'末端的一个至四个核苷酸的突出端。在一些实施方案中，ds RNAi试剂的两条链是至少25个核苷酸长。在一些实施方案中，其中一条至少15、16、17、18或19个核苷酸长的链的区域与由靶基因(例如C3基因)产生的RNA的核苷酸序列充分互补，以触发RNAi机制对靶
RNA的破坏。在一些实施方案中，ds RNAi试剂具有相同长度的链，例如25、26、27、28、29或
30nt。在一些实施方案中，ds RNAi试剂的两端是平末端。在一些实施方案中，ds RNAi试剂具有不对称设计，不对称设计意指两条链的长度不相同。在一些实施方案中，ds RNAi试剂包含含有RNA并具有5'末端和3'末端的第一寡核苷酸链和含有RNA并具有5'末端和3'末端
的第二寡核苷酸链，其中所述第一链具有25-30个核苷酸的长度，并且其中所述第二链在其
3'末端比所述第一链长1-4个核苷酸并在其5'末端与所述第一链的所述3'末端形成碱基配
对的平末端，其中所述双链核酸包含长度为至少25个核苷酸的双链体部分，其中所述第二
寡核苷酸链沿着所述第二寡核苷酸链长度的至少19个核苷酸与靶mRNA(例如，C3 mRNA)充
分互补，以在将所述双链核酸引入哺乳动物细胞中时，降低靶基因表达。在引入哺乳动物细胞，例如人细胞后，双链核酸会被人切丁酶切割，以便促进切割后的第二寡核苷酸链并入
RISC中。在一些实施方案中，dsRNAi试剂在第一寡核苷酸链的3'末端含有1-3个修饰的核苷酸。在一些实施方案中，第二链包含未修饰的和修饰的核苷酸的组合。例如，在一些实施方案中，第二链在与突出端相邻的链的一部分上包含交替的核糖核苷酸和2'-O-甲基修饰的
核苷酸。在一些实施方案中，第一和第二寡核苷酸链中的一个或两个含有5'磷酸酯。在一些实施方案中，第一和第二寡核苷酸链中的一个或两个含有5'羟基(OH)。在一些实施方案中，修饰的核苷酸是2'-O-甲基、2'-甲氧基乙氧基、2'-氟、2'-烯丙基、2'-O-[2-(甲氨基)-2-氧代乙基]、4'-硫代、4'-CH2-O-2'桥连、4'-(CH2)2-O-2'桥连、2'-LNA或2'-O-(N-甲基氨基甲酸酯)。在一些实施方案中，突出端的长度是1-4个碱基，例如1-2个碱基长。在一些实施方案中，突出端的长度是1、2、3或4个碱基，并且修饰的核苷酸是2'-O-甲基修饰的核苷酸、脱氧核糖核苷酸或其组合。在一些实施方案中，第一寡核苷酸链的长度是25个核苷酸并且第二
寡核苷酸链的长度是27个核苷酸。在一些实施方案中，第一寡核苷酸链的长度是26个核苷
酸并且第二寡核苷酸链的长度是28个核苷酸。在一些实施方案中，第一寡核苷酸链的长度
是26个核苷酸并且第二寡核苷酸链的长度是27个核苷酸。在一些实施方案中，ds siRNA包
含具有25-nt过客链和27-nt引导链的不对称双链体，其在引导链上具有单个2-nt 3'-突出
端，并且在过客链的3'-末端具有一个或多个修饰的核苷酸。在一些实施方案中，链在双链体部分内完全互补。在一些实施方案中，有义链的3'部分含有一个或多个错配，例如，有义链的3'部分中存在两个错配。必要时，可以使用本领域已知的方法在体外或体内测定任何
给定ds RNAi试剂作为切丁酶底物的能力。
时在本领域中称为“切丁酶底物短干扰RNA”或DsiRNA。不希望受任何理论的束缚，由于切丁酶加工与RISC加载之间的联系，与较短的siRNA(例如，含有21bp长并具有中心19bp双链体
和2碱基3'突出端的链的siRNA)相比，DsiRNA可以具有增加的RNAi效力。切丁酶可以促进将衍生自切割的dsRNA的单链切割产物并入RISC中。示例性DsiRNA描述于例如美国专利申请
公开号20070265220和美国专利号8,084,599和8,796,444中。在一些实施方案中，这种RNAi试剂包含至少24nt长，例如至少25nt长，例如25-30nt长，例如27-30nt长的双链体部分。根据此实施方案，dsRNA中最长的链包含24-30个核苷酸。在一个实施方案中，dsRNA是不对称的，使得有义链包含22-28个核苷酸并且反义链包含24-30个核苷酸。因此，所得dsRNA在反义链的3'末端具有突出端。突出端是1-3个核苷酸，例如2个核苷酸。在一些实施方案中，ds siRNA包含双链RNA，其具有25至30个核苷酸的有义链、在有义链的3'末端的平末端以及在
反义链的3'末端的一个至四个核苷酸的突出端。在一些实施方案中，ds RNAi试剂的两条链是至少25个核苷酸长。在一些实施方案中，其中一条至少15、16、17、18或19个核苷酸长的链的区域与由靶基因(例如C3基因)产生的RNA的核苷酸序列充分互补，以触发RNAi机制对靶
RNA的破坏。在一些实施方案中，ds RNAi试剂具有相同长度的链，例如25、26、27、28、29或
30nt。在一些实施方案中，ds RNAi试剂的两端是平末端。在一些实施方案中，ds RNAi试剂具有不对称设计，不对称设计意指两条链的长度不相同。在一些实施方案中，ds RNAi试剂包含含有RNA并具有5'末端和3'末端的第一寡核苷酸链和含有RNA并具有5'末端和3'末端
的第二寡核苷酸链，其中所述第一链具有25-30个核苷酸的长度，并且其中所述第二链在其
3'末端比所述第一链长1-4个核苷酸并在其5'末端与所述第一链的所述3'末端形成碱基配
对的平末端，其中所述双链核酸包含长度为至少25个核苷酸的双链体部分，其中所述第二
寡核苷酸链沿着所述第二寡核苷酸链长度的至少19个核苷酸与靶mRNA(例如，C3 mRNA)充
分互补，以在将所述双链核酸引入哺乳动物细胞中时，降低靶基因表达。在引入哺乳动物细胞，例如人细胞后，双链核酸会被人切丁酶切割，以便促进切割后的第二寡核苷酸链并入
RISC中。在一些实施方案中，dsRNAi试剂在第一寡核苷酸链的3'末端含有1-3个修饰的核苷酸。在一些实施方案中，第二链包含未修饰的和修饰的核苷酸的组合。例如，在一些实施方案中，第二链在与突出端相邻的链的一部分上包含交替的核糖核苷酸和2'-O-甲基修饰的
核苷酸。在一些实施方案中，第一和第二寡核苷酸链中的一个或两个含有5'磷酸酯。在一些实施方案中，第一和第二寡核苷酸链中的一个或两个含有5'羟基(OH)。在一些实施方案中，修饰的核苷酸是2'-O-甲基、2'-甲氧基乙氧基、2'-氟、2'-烯丙基、2'-O-[2-(甲氨基)-2-氧代乙基]、4'-硫代、4'-CH2-O-2'桥连、4'-(CH2)2-O-2'桥连、2'-LNA或2'-O-(N-甲基氨基甲酸酯)。在一些实施方案中，突出端的长度是1-4个碱基，例如1-2个碱基长。在一些实施方案中，突出端的长度是1、2、3或4个碱基，并且修饰的核苷酸是2'-O-甲基修饰的核苷酸、脱氧核糖核苷酸或其组合。在一些实施方案中，第一寡核苷酸链的长度是25个核苷酸并且第二
寡核苷酸链的长度是27个核苷酸。在一些实施方案中，第一寡核苷酸链的长度是26个核苷
酸并且第二寡核苷酸链的长度是28个核苷酸。在一些实施方案中，第一寡核苷酸链的长度
是26个核苷酸并且第二寡核苷酸链的长度是27个核苷酸。在一些实施方案中，ds siRNA包
含具有25-nt过客链和27-nt引导链的不对称双链体，其在引导链上具有单个2-nt 3'-突出
端，并且在过客链的3'-末端具有一个或多个修饰的核苷酸。在一些实施方案中，链在双链体部分内完全互补。在一些实施方案中，有义链的3'部分含有一个或多个错配，例如，有义链的3'部分中存在两个错配。必要时，可以使用本领域已知的方法在体外或体内测定任何
给定ds RNAi试剂作为切丁酶底物的能力。
[0594] DsiRNA可以包含两个分开的核酸分子，其杂交在一起形成双链体结构。含有两个分开的寡核苷酸的合适的dsRNA组合物可以通过化学连接基团在其退火区域外化学连接。
许多合适的化学连接基团是本领域已知的并且可以使用。合适的基团不会阻断对dsRNA的
切丁酶活性，并且不会干扰从靶基因转录的RNA的定向破坏。或者，如上所述(参见shRNA的讨论)，两个分开的寡核苷酸可以通过第三寡核苷酸连接，使得在构成dsRNA组合物的两个
寡核苷酸退火时产生发夹结构。发夹结构不会阻断对dsRNA的切丁酶活性，并且不会干扰从靶基因转录的RNA的定向破坏。在一些实施方案中，各种连接部分中的任一个，例如本文关于坎普他汀类似物所述的那些，都可以用于连接链，例如通过其末端连接。例如，在一些实施方案中，两条链可以通过包含烷基链的连接部分连接。
许多合适的化学连接基团是本领域已知的并且可以使用。合适的基团不会阻断对dsRNA的
切丁酶活性，并且不会干扰从靶基因转录的RNA的定向破坏。或者，如上所述(参见shRNA的讨论)，两个分开的寡核苷酸可以通过第三寡核苷酸连接，使得在构成dsRNA组合物的两个
寡核苷酸退火时产生发夹结构。发夹结构不会阻断对dsRNA的切丁酶活性，并且不会干扰从靶基因转录的RNA的定向破坏。在一些实施方案中，各种连接部分中的任一个，例如本文关于坎普他汀类似物所述的那些，都可以用于连接链，例如通过其末端连接。例如，在一些实施方案中，两条链可以通过包含烷基链的连接部分连接。
[0595] 在一些实施方案中，通过位于有义链3'末端的合适修饰剂修饰ds RNAi试剂的有义链，例如以促进切丁酶加工，即，dsRNA被设计成用于指导切丁酶结合和加工的方向。合适的修饰剂包括核苷酸，例如脱氧核糖核苷酸、双脱氧核糖核苷酸、无环核苷酸等，以及空间位阻分子，例如荧光分子等。无环核苷酸用2-羟基乙氧基甲基取代通常存在于dNMP中的2'-脱氧核糖呋喃糖。其它核苷酸修饰剂可以包括3'-脱氧腺苷(虫草素)、3'-叠氮基-3'-脱氧
胸苷(AZT)、2',3'-双脱氧肌苷(ddI)、2',3'-双脱氧-3'-硫代胞苷(3TC)、2',3'-双脱氢-
2',3'-双脱氧胸苷(d4T)，以及3'-叠氮基-3'-脱氧胸苷(AZT)、2',3'-双脱氧-3'-硫代胞苷(3TC)和2',3'-双脱氢-2',3'-双脱氧胸苷(d4T)的单磷酸核苷酸。在一个实施方案中，使用脱氧核苷酸作为修饰剂。当采用核苷酸修饰剂时，1-3个核苷酸的修饰剂或2个核苷酸的修
饰剂取代有义链3'末端上的核糖核苷酸。当采用空间位阻分子时，它们与反义链的3'末端
的核糖核苷酸连接。因此，链的长度不随修饰剂的并入而改变。在另一个实施方案中，取代dsRNA中的两个DNA碱基可以指导反义链的切丁酶加工方向。在又一个实施方案中，两个末
端DNA碱基取代有义链3'末端的两个核糖核苷酸，在有义链的3'末端和反义链的5'末端形
成双链体的平末端，并且两个核苷酸的RNA突出端位于反义链的3'末端。这是一种不对称组合物，在平末端具有DNA并且在突出末端具有RNA碱基。应当理解，可以优化DsiRNA的dsRNA结构以确保由切丁酶切割产生的寡核苷酸区段是最有效抑制基因表达的寡核苷酸部分。例
如，可以合成27-bp寡核苷酸，其中抑制基因表达的预期21至22-bp区段位于反义链的3'末
端。位于反义链5'末端的剩余碱基将被切丁酶切除并丢弃。这个已切割部分可以是同源的
(即，基于靶序列的序列)或非同源的，并且可以加入以延伸核酸链。可以包括其它修饰，只要该修饰不阻止dsRNA充当切丁酶或其它的底物。在一些实施方案中，一种或多种修饰增强dsRNA的切丁酶加工，导致更有效的RNAi产生，支持更大的RNAi作用，导致递送至细胞的每个dsRNA分子的效力更大。修饰可以并入3'-末端区域、5'-末端区域、3'-末端和5'-末端区域，或者在一些情况下，并入序列内的不同位置。在存在多种修饰的情况下，它们可以相同或不同。考虑了对碱基、糖部分、磷酸骨架以及其组合的修饰。任一5'-末端可以被磷酸化。
通常，可以使用本文描述的任何修饰。例如，考虑用于磷酸骨架的修饰包括磷酸酯和硫代磷酸酯。考虑用于糖部分的修饰的实例包括2'-烷基，例如2'-O-甲基；2'-氟；脱氧修饰。可以并入构象限制的核苷酸，例如LNA。在某些实施方案中，配体(例如，靶向部分或转导结构域)可以连接在例如有义链的3'末端。在一些实施方案中，一条或两条链的至少5'和/或3'末端
1或2个核苷间键是硫代磷酸酯键。在一些实施方案中，一条或两条链的仅5'和/或3'末端1
或2个核苷间键是硫代磷酸酯键。在一些实施方案中，一个或两个3'突出端的1、2或所有核苷间键是硫代磷酸酯键。在一些实施方案中，3'突出端可以替代地或另外地具有与其连接
的部分，例如靶向部分或亲脂性部分。
胸苷(AZT)、2',3'-双脱氧肌苷(ddI)、2',3'-双脱氧-3'-硫代胞苷(3TC)、2',3'-双脱氢-
2',3'-双脱氧胸苷(d4T)，以及3'-叠氮基-3'-脱氧胸苷(AZT)、2',3'-双脱氧-3'-硫代胞苷(3TC)和2',3'-双脱氢-2',3'-双脱氧胸苷(d4T)的单磷酸核苷酸。在一个实施方案中，使用脱氧核苷酸作为修饰剂。当采用核苷酸修饰剂时，1-3个核苷酸的修饰剂或2个核苷酸的修
饰剂取代有义链3'末端上的核糖核苷酸。当采用空间位阻分子时，它们与反义链的3'末端
的核糖核苷酸连接。因此，链的长度不随修饰剂的并入而改变。在另一个实施方案中，取代dsRNA中的两个DNA碱基可以指导反义链的切丁酶加工方向。在又一个实施方案中，两个末
端DNA碱基取代有义链3'末端的两个核糖核苷酸，在有义链的3'末端和反义链的5'末端形
成双链体的平末端，并且两个核苷酸的RNA突出端位于反义链的3'末端。这是一种不对称组合物，在平末端具有DNA并且在突出末端具有RNA碱基。应当理解，可以优化DsiRNA的dsRNA结构以确保由切丁酶切割产生的寡核苷酸区段是最有效抑制基因表达的寡核苷酸部分。例
如，可以合成27-bp寡核苷酸，其中抑制基因表达的预期21至22-bp区段位于反义链的3'末
端。位于反义链5'末端的剩余碱基将被切丁酶切除并丢弃。这个已切割部分可以是同源的
(即，基于靶序列的序列)或非同源的，并且可以加入以延伸核酸链。可以包括其它修饰，只要该修饰不阻止dsRNA充当切丁酶或其它的底物。在一些实施方案中，一种或多种修饰增强dsRNA的切丁酶加工，导致更有效的RNAi产生，支持更大的RNAi作用，导致递送至细胞的每个dsRNA分子的效力更大。修饰可以并入3'-末端区域、5'-末端区域、3'-末端和5'-末端区域，或者在一些情况下，并入序列内的不同位置。在存在多种修饰的情况下，它们可以相同或不同。考虑了对碱基、糖部分、磷酸骨架以及其组合的修饰。任一5'-末端可以被磷酸化。
通常，可以使用本文描述的任何修饰。例如，考虑用于磷酸骨架的修饰包括磷酸酯和硫代磷酸酯。考虑用于糖部分的修饰的实例包括2'-烷基，例如2'-O-甲基；2'-氟；脱氧修饰。可以并入构象限制的核苷酸，例如LNA。在某些实施方案中，配体(例如，靶向部分或转导结构域)可以连接在例如有义链的3'末端。在一些实施方案中，一条或两条链的至少5'和/或3'末端
1或2个核苷间键是硫代磷酸酯键。在一些实施方案中，一条或两条链的仅5'和/或3'末端1
或2个核苷间键是硫代磷酸酯键。在一些实施方案中，一个或两个3'突出端的1、2或所有核苷间键是硫代磷酸酯键。在一些实施方案中，3'突出端可以替代地或另外地具有与其连接
的部分，例如靶向部分或亲脂性部分。
[0596] 在一些实施方案中，RNAi试剂包含短双链区。“短双链区”是指8-15个核苷酸长的双链区。在一些实施方案中，RNAi试剂包含短双链区、在引导链3'末端的长度为2-13个核苷酸的单链区以及多个修饰。包含短双链区的示例性RNAi试剂描述于美国专利申请公开号20110263680中。
[0597] 在一些实施方案中，RNAi试剂包含单链RNA，其可被并入RISC中并与靶RNA，例如C3靶mRNA序列相互作用，以指导RISC核酸内切酶对靶RNA的裂解。这种单链RNAi试剂可被称为单链siRNA(ss siRNA)。ss siRNA通常是15-30个核苷酸，并且相对于天然存在的RNA经过化学修饰。用于ss siRNA的示例性修饰和ss siRNA的设计方法是本领域已知的，并且描述于以下各者中：例如美国专利号8,101,348；Lima等人,Cell 150:883-894(2012)；Yu等人,
Cell 150:895(2012)；Haringsma等人,Nucleic Acids Res 40:4125,2012；Chorn等人,RNA
18:1796(2012)；美国专利申请公开号2009002365；WO 2011/046983；WO 2011/139699；WO
2011/139702；WO 2012/145729；WO 2012/027206。在某些实施方案中，靶向C3的ss siRNA根据美国专利申请公开号20150291957中所述的原理设计和/或利用其中所述的修饰的核苷
酸和/或核酸结构。在一些实施方案中，ss siRNA包含以下修饰中的至少一种：至少两个核苷酸之间的硫代磷酸酯核苷酸间键、2'O-甲基核糖核苷酸、2'-甲氧基乙氧基核糖核苷酸、
2'-氟-脱氧核糖核苷酸、锁定核酸以及3'末端腺苷核苷酸。在某些实施方案中，ss siRNA在
3'末端包含由两个连续的2'-O-甲氧基乙基核糖核苷酸、两个连续的2'-O-甲基核糖核苷酸
或LNA二核苷酸组成的二核苷酸。在某些实施方案中，核酸，例如ss siRNA，在其5'末端包含磷酸盐或磷酸盐类似物(也被称为磷酸盐电子等排体、磷酸盐生物电子等排体或磷酸盐模
拟物)。例如，磷酸盐类似物可以是磷酸酯，例如5'-亚甲基磷酸酯(5'-MP)或5'-(E)-乙烯基磷酸酯。在某些实施方案中，ss siRNA具有与其连接的亲脂性部分。在一些实施方案中，亲脂性部分连接在ss siRNA的5'末端的第八个核苷酸处。ss siRNA可以包含前述修饰中的任
何一种或多种。在某些方面，本文中被描述为抑制C3表达的ds siRNA的反义链的任何核苷
酸序列都可以用作单链siRNA以抑制C3表达。在一些实施方案中，本文中被描述为ds siRNA的反义链的任何核苷酸序列都可以根据本文在任何一个或多个前述参考文献中对ss
siRNA所述的方法进行修饰。
Cell 150:895(2012)；Haringsma等人,Nucleic Acids Res 40:4125,2012；Chorn等人,RNA
18:1796(2012)；美国专利申请公开号2009002365；WO 2011/046983；WO 2011/139699；WO
2011/139702；WO 2012/145729；WO 2012/027206。在某些实施方案中，靶向C3的ss siRNA根据美国专利申请公开号20150291957中所述的原理设计和/或利用其中所述的修饰的核苷
酸和/或核酸结构。在一些实施方案中，ss siRNA包含以下修饰中的至少一种：至少两个核苷酸之间的硫代磷酸酯核苷酸间键、2'O-甲基核糖核苷酸、2'-甲氧基乙氧基核糖核苷酸、
2'-氟-脱氧核糖核苷酸、锁定核酸以及3'末端腺苷核苷酸。在某些实施方案中，ss siRNA在
3'末端包含由两个连续的2'-O-甲氧基乙基核糖核苷酸、两个连续的2'-O-甲基核糖核苷酸
或LNA二核苷酸组成的二核苷酸。在某些实施方案中，核酸，例如ss siRNA，在其5'末端包含磷酸盐或磷酸盐类似物(也被称为磷酸盐电子等排体、磷酸盐生物电子等排体或磷酸盐模
拟物)。例如，磷酸盐类似物可以是磷酸酯，例如5'-亚甲基磷酸酯(5'-MP)或5'-(E)-乙烯基磷酸酯。在某些实施方案中，ss siRNA具有与其连接的亲脂性部分。在一些实施方案中，亲脂性部分连接在ss siRNA的5'末端的第八个核苷酸处。ss siRNA可以包含前述修饰中的任
何一种或多种。在某些方面，本文中被描述为抑制C3表达的ds siRNA的反义链的任何核苷
酸序列都可以用作单链siRNA以抑制C3表达。在一些实施方案中，本文中被描述为ds siRNA的反义链的任何核苷酸序列都可以根据本文在任何一个或多个前述参考文献中对ss
siRNA所述的方法进行修饰。
[0598] 在一些实施方案中，本文所述的方法和组合物中使用的INAA是单链核酸分子，其通过反义抑制机制而不是RNAi机制抑制靶RNA。这种试剂在本文中可被称为“反义寡核苷
酸”(ASO)。如本文所用，“反义抑制机制”是指由与靶RNA的靶部分互补并且不依赖于RISC(例如，不会在RISC中发生，并且也不会由作为RISC的一部分或与RISC物理缔合的蛋白质催化或进行)的单链核酸分子介导的任何表达抑制机制。在一些实施方案中，ASO通过与mRNA
碱基配对和物理阻碍翻译机制以化学计量方式抑制翻译。在一些实施方案中，单链反义寡
核苷酸与RNA(例如，C3 mRNA或C3前mRNA)杂交，导致核糖核酸酶，例如核糖核酸酶H降解
RNA。在一些实施方案中，ASO可以是长度约15至约30个核苷酸，并具有与靶序列互补的序
列。例如，ASO可以包含与C3 mRNA或前mRNA的靶部分互补的至少约15、16、17、18、19、20个或更多个连续核苷酸的序列。在一些实施方案中，ASO的长度可以短于15个核苷酸，例如长度介于8个与14个核苷酸之间。出于此目的，7至14个核苷酸长的核酸可被称为“短聚物
(shortmer)”。在某些实施方案中，单链ASO含有DNA中心区域(核心)，其活化核糖核酸酶H以切割靶RNA，该核心通常侧翼为具有修饰的5'和3'核苷酸序列，所述修饰例如核糖修饰，例如2'-甲氧基乙基(MOE)或LNA或约束乙基(cET)，其不支持核糖核酸酶H介导的切割，而是赋予增加的杂交亲和力。这种侧翼区域可以被称为“翼”。含有活化核糖核酸酶H的中心区域(例如DNA区域)和不活化核糖核酸酶H的侧翼区域的ASO可以被称为本领域已知的“间隔体
(gapmer)”。在一些实施方案中，支持核糖核酸酶H介导的切割的ASO含有至少5个连续DNA核苷酸的核心，例如5-7或7-10个连续DNA核苷酸。在一些实施方案中，每个翼独立地是3至10个核苷酸长，例如3至5或5至8nt长。在一些实施方案中，间隔体是10至14个核苷酸长或15至
22个核苷酸长。在一些实施方案中，单链ASO至少部分地通过空间阻断起作用。此类ASO可以含有以ASO不活化核糖核酸酶H的方式分布的核糖修饰。在一些实施方案中，通过空间阻断
起作用的ASO为8-14个核苷酸长。
酸”(ASO)。如本文所用，“反义抑制机制”是指由与靶RNA的靶部分互补并且不依赖于RISC(例如，不会在RISC中发生，并且也不会由作为RISC的一部分或与RISC物理缔合的蛋白质催化或进行)的单链核酸分子介导的任何表达抑制机制。在一些实施方案中，ASO通过与mRNA
碱基配对和物理阻碍翻译机制以化学计量方式抑制翻译。在一些实施方案中，单链反义寡
核苷酸与RNA(例如，C3 mRNA或C3前mRNA)杂交，导致核糖核酸酶，例如核糖核酸酶H降解
RNA。在一些实施方案中，ASO可以是长度约15至约30个核苷酸，并具有与靶序列互补的序
列。例如，ASO可以包含与C3 mRNA或前mRNA的靶部分互补的至少约15、16、17、18、19、20个或更多个连续核苷酸的序列。在一些实施方案中，ASO的长度可以短于15个核苷酸，例如长度介于8个与14个核苷酸之间。出于此目的，7至14个核苷酸长的核酸可被称为“短聚物
(shortmer)”。在某些实施方案中，单链ASO含有DNA中心区域(核心)，其活化核糖核酸酶H以切割靶RNA，该核心通常侧翼为具有修饰的5'和3'核苷酸序列，所述修饰例如核糖修饰，例如2'-甲氧基乙基(MOE)或LNA或约束乙基(cET)，其不支持核糖核酸酶H介导的切割，而是赋予增加的杂交亲和力。这种侧翼区域可以被称为“翼”。含有活化核糖核酸酶H的中心区域(例如DNA区域)和不活化核糖核酸酶H的侧翼区域的ASO可以被称为本领域已知的“间隔体
(gapmer)”。在一些实施方案中，支持核糖核酸酶H介导的切割的ASO含有至少5个连续DNA核苷酸的核心，例如5-7或7-10个连续DNA核苷酸。在一些实施方案中，每个翼独立地是3至10个核苷酸长，例如3至5或5至8nt长。在一些实施方案中，间隔体是10至14个核苷酸长或15至
22个核苷酸长。在一些实施方案中，单链ASO至少部分地通过空间阻断起作用。此类ASO可以含有以ASO不活化核糖核酸酶H的方式分布的核糖修饰。在一些实施方案中，通过空间阻断
起作用的ASO为8-14个核苷酸长。
[0599] 在某些实施方案中，可以采用美国专利申请公开号20010044145、20080207541和20100093836中的任何一个或多个中所述的方法或核苷酸修饰来设计靶向C3并诱导核糖核
酸酶H介导的C3转录物降解的ASO。在某些实施方案中，针对一个或多个靶标(例如，C3 RNA)的ASO单体通过在血浆中稳定但在细胞内被切割(释放出活性ASO单体)的连接区域共合成
为同源二聚体或异二聚体或多聚体(参见例如，Subramanian RR等人,Nucleic Acids
Res.；43(19):9123-32(2015))。
酸酶H介导的C3转录物降解的ASO。在某些实施方案中，针对一个或多个靶标(例如，C3 RNA)的ASO单体通过在血浆中稳定但在细胞内被切割(释放出活性ASO单体)的连接区域共合成
为同源二聚体或异二聚体或多聚体(参见例如，Subramanian RR等人,Nucleic Acids
Res.；43(19):9123-32(2015))。
[0600] 在一些实施方案中，靶向C3的反义寡核苷酸可以如美国专利申请公开号20150247141中所述进行设计。ASO可以包含两个、三个或更多个不同的部分，每个部分与C3 RNA中的不同靶部分互补，其中两个或更多个不同的部分通过连接部分连接在一起，所述连接部分可以包含可切割的键。在一些实施方案中，靶向C3并包含基于非核苷酸的可切割的
连接部分的反义寡核苷酸如美国专利申请公开号20150315585和/或20150315586中所述进
行设计。
连接部分的反义寡核苷酸如美国专利申请公开号20150315585和/或20150315586中所述进
行设计。
[0601] 根据某些实施方案，可以在ds INAA的有义或反义链中选择性地使用各种核苷酸修饰或核苷酸修饰模式。例如，在一些实施方案中，可以在反义链中(至少在其双链体部分内)利用未修饰的核糖核苷酸，而在有义链中的一些或所有位置采用修饰的核苷酸和/或修
饰的或未修饰的脱氧核糖核苷酸。在一些实施方案中，在ds RNAi试剂的任一条链或两条链的部分或全部中或在ss-RNAi试剂或ASO的单链内采用特定的修饰模式。本领域普通技术人
员认识到，某些修饰和/或设计特征可以增加ds RNAi试剂中的所需链(即，与C3 mRNA的靶
部分互补的链)将被用作引导链的可能性。核苷酸修饰可以按多种模式中的任何一种发生。
例如，可以使用交替模式。交替模式包括例如每隔一个核苷酸在链的至少一部分(例如，参与具有INAA的互补链的双链体的部分)内具有特定修饰的交替模式和两个、三个或更多个
核苷酸的嵌段在链的至少一部分内具有特定修饰的交替模式，其中所述嵌段被不具有这种
修饰的相同大小或不同大小的嵌段分开。例如，反义链、有义链或二者可以在每隔一个核苷酸上具有2'-O-甲基或2'-氟修饰。
饰的或未修饰的脱氧核糖核苷酸。在一些实施方案中，在ds RNAi试剂的任一条链或两条链的部分或全部中或在ss-RNAi试剂或ASO的单链内采用特定的修饰模式。本领域普通技术人
员认识到，某些修饰和/或设计特征可以增加ds RNAi试剂中的所需链(即，与C3 mRNA的靶
部分互补的链)将被用作引导链的可能性。核苷酸修饰可以按多种模式中的任何一种发生。
例如，可以使用交替模式。交替模式包括例如每隔一个核苷酸在链的至少一部分(例如，参与具有INAA的互补链的双链体的部分)内具有特定修饰的交替模式和两个、三个或更多个
核苷酸的嵌段在链的至少一部分内具有特定修饰的交替模式，其中所述嵌段被不具有这种
修饰的相同大小或不同大小的嵌段分开。例如，反义链、有义链或二者可以在每隔一个核苷酸上具有2'-O-甲基或2'-氟修饰。
[0602] 在一些实施方案中，INAA包含在三个连续核苷酸上含有一个或多个具有三个相同修饰的基序的链。例如，在一些实施方案中，双链RNAi试剂包含在有义链、反义链或二者中的三个连续核苷酸上的一个或多个具有三个相同修饰的基序。在一些实施方案中，这种基
序可以出现在任一条链或两条链中的切割位点处或附近。这种基序和包含这种基序的RNAi
试剂构象和RNAi试剂的实例描述于美国专利申请公开20150197746、20150247143和
20160298124中。
序可以出现在任一条链或两条链中的切割位点处或附近。这种基序和包含这种基序的RNAi
试剂构象和RNAi试剂的实例描述于美国专利申请公开20150197746、20150247143和
20160298124中。
[0603] 在一些实施方案中，RNAi试剂是长度为19个核苷酸的双末端平端聚合物(bluntmer)，其中有义链在5'末端的7、8、9位的三个连续核苷酸上含有至少一个具有三个
2'-F修饰的基序。反义链在5'末端的11、12、13位的三个连续核苷酸上含有至少一个具有三个2'-O-甲基修饰的基序。在一些实施方案中，RNAi试剂是长度为20个核苷酸的双末端平端聚合物，其中有义链在5'末端的8、9、10位的三个连续核苷酸上含有至少一个具有三个2'-F修饰的基序。反义链在5'末端的11、12、13位的三个连续核苷酸上含有至少一个具有三个
2'-O-甲基修饰的基序。在一些实施方案中，RNAi试剂是长度为21个核苷酸的双末端平端聚合物，其中有义链在5'末端的9、10、11位的三个连续核苷酸上含有至少一个具有三个2'-F修饰的基序。反义链在5'末端的11、12、13位的三个连续核苷酸上含有至少一个具有三个
2'-0-甲基修饰的基序。
2'-F修饰的基序。反义链在5'末端的11、12、13位的三个连续核苷酸上含有至少一个具有三个2'-O-甲基修饰的基序。在一些实施方案中，RNAi试剂是长度为20个核苷酸的双末端平端聚合物，其中有义链在5'末端的8、9、10位的三个连续核苷酸上含有至少一个具有三个2'-F修饰的基序。反义链在5'末端的11、12、13位的三个连续核苷酸上含有至少一个具有三个
2'-O-甲基修饰的基序。在一些实施方案中，RNAi试剂是长度为21个核苷酸的双末端平端聚合物，其中有义链在5'末端的9、10、11位的三个连续核苷酸上含有至少一个具有三个2'-F修饰的基序。反义链在5'末端的11、12、13位的三个连续核苷酸上含有至少一个具有三个
2'-0-甲基修饰的基序。
[0604] 在一些实施方案中，RNAi试剂包含21个核苷酸的有义链和23个核苷酸的反义链，其中有义链在5'末端的9、10、11位的三个连续核苷酸上含有至少一个具有三个2'-F修饰的基序；反义链在5'末端的11、12、13位的三个连续核苷酸上含有至少一个具有三个2'-O-甲基修饰的基序，其中RNAi试剂的一个末端是平端，而另一个末端包含2个核苷酸的突出端。
优选地，2个核苷酸的突出端位于反义链的3'末端。当2个核苷酸的突出端位于反义链的3'
末端时，末端三个核苷酸之间可能存在两个硫代磷酸酯核苷酸间键，其中三个核苷酸中的
两个是突出端核苷酸，并且第三个核苷酸是紧挨着突出端核苷酸的配对核苷酸。在一些实
施方案中，RNAi试剂另外在有义链的5'末端和反义链的5'末端的末端三个核苷酸之间具有
两个硫代磷酸酯核苷酸间键。在一些实施方案中，RNAi试剂的有义链和反义链中的每一个
核苷酸，包括作为基序的一部分的核苷酸，都是修饰的核苷酸。在一些实施方案中，每个残基独立地用2'-O-甲基或3'-氟修饰，例如在交替基序中修饰。
优选地，2个核苷酸的突出端位于反义链的3'末端。当2个核苷酸的突出端位于反义链的3'
末端时，末端三个核苷酸之间可能存在两个硫代磷酸酯核苷酸间键，其中三个核苷酸中的
两个是突出端核苷酸，并且第三个核苷酸是紧挨着突出端核苷酸的配对核苷酸。在一些实
施方案中，RNAi试剂另外在有义链的5'末端和反义链的5'末端的末端三个核苷酸之间具有
两个硫代磷酸酯核苷酸间键。在一些实施方案中，RNAi试剂的有义链和反义链中的每一个
核苷酸，包括作为基序的一部分的核苷酸，都是修饰的核苷酸。在一些实施方案中，每个残基独立地用2'-O-甲基或3'-氟修饰，例如在交替基序中修饰。
[0605] 在一些实施方案中，RNAi试剂包含有义链和反义链，其中有义链的长度为25-30个核苷酸残基，其中从5'末端核苷酸(1位)开始，第一链的1到23位包含至少8个核糖核苷酸；
反义链的长度为36-66个核苷酸残基，并且从3'末端核苷酸开始，在与有义链的1-23位配对以形成双链体的位置包含至少8个核糖核苷酸；其中至少反义链的3'末端核苷酸与有义链
不配对，并且多达6个连续的3'末端核苷酸与有义链不配对，从而形成1-6个核苷酸的3'单
链突出端；其中反义链的5'末端包含10-30个与有义链不配对的连续核苷酸，从而形成10-
30个核苷酸的单链5'突出端；其中当比对有义链和反义链的最大互补性时，至少有义链5'
末端和3'末端核苷酸与反义链的核苷酸碱基配对，从而在有义链和反义链之间形成基本上
双链的区域；并且当双链核酸被引入哺乳动物细胞中时，反义链沿着反义链长度的至少19
个核糖核苷酸与靶RNA充分互补，以降低靶基因表达；并且其中有义链在三个连续核苷酸上含有至少一个具有三个2'-F修饰的基序，其中至少一个基序出现在切割位点处或附近。反
义链在切割位点处或附近的三个连续核苷酸上含有至少一个具有三个2'-O-甲基修饰的基
序。
反义链的长度为36-66个核苷酸残基，并且从3'末端核苷酸开始，在与有义链的1-23位配对以形成双链体的位置包含至少8个核糖核苷酸；其中至少反义链的3'末端核苷酸与有义链
不配对，并且多达6个连续的3'末端核苷酸与有义链不配对，从而形成1-6个核苷酸的3'单
链突出端；其中反义链的5'末端包含10-30个与有义链不配对的连续核苷酸，从而形成10-
30个核苷酸的单链5'突出端；其中当比对有义链和反义链的最大互补性时，至少有义链5'
末端和3'末端核苷酸与反义链的核苷酸碱基配对，从而在有义链和反义链之间形成基本上
双链的区域；并且当双链核酸被引入哺乳动物细胞中时，反义链沿着反义链长度的至少19
个核糖核苷酸与靶RNA充分互补，以降低靶基因表达；并且其中有义链在三个连续核苷酸上含有至少一个具有三个2'-F修饰的基序，其中至少一个基序出现在切割位点处或附近。反
义链在切割位点处或附近的三个连续核苷酸上含有至少一个具有三个2'-O-甲基修饰的基
序。
[0606] 在一些实施方案中，RNAi试剂的有义链在三个连续核苷酸上含有至少一个具有三个相同修饰的基序，其中一个基序出现在有义链的切割位点。在一些实施方案中，RNAi试剂的反义链还可以在三个连续核苷酸上含有至少一个具有三个相同修饰的基序，其中一个基
序出现在反义链中的切割位点处或附近。
序出现在反义链中的切割位点处或附近。
[0607] 对于具有长度为17-23个核苷酸的双链体部分的RNAi试剂，反义链的切割位点通常在5'-末端的10、11和12位附近。因此，三个相同修饰的基序可能出现在反义链的9、10、11位；10、11、12位；11、12、13位；12、13、14位；或13、14、15位，计数是从反义链的5'末端的第1个核苷酸开始的，或者计数是从反义链的5'-末端的双链体部分内的第1个配对的核苷酸开
始的。反义链中的切割位点也可以根据RNAi的双链体部分距离5'末端的长度而变化。
始的。反义链中的切割位点也可以根据RNAi的双链体部分距离5'末端的长度而变化。
[0608] RNAi试剂的有义链可以在链的切割位点处的三个连续核苷酸上含有至少一个具有三个相同修饰的基序；并且反义链可以在链的切割位点处或附近的三个连续核苷酸上具
有至少一个具有三个相同修饰的基序。当有义链和反义链形成dsRNA双链体时，有义链和反义链可以这样比对，使有义链上的一个具有三个核苷酸的基序和反义链上的一个具有三个
核苷酸的基序具有至少一个核苷酸重叠，即有义链中的基序的三个核苷酸中的至少一个与
反义链中的基序的三个核苷酸中的至少一个形成碱基对。或者，至少两个核苷酸可以重叠，或者所有三个核苷酸都可以重叠。
有至少一个具有三个相同修饰的基序。当有义链和反义链形成dsRNA双链体时，有义链和反义链可以这样比对，使有义链上的一个具有三个核苷酸的基序和反义链上的一个具有三个
核苷酸的基序具有至少一个核苷酸重叠，即有义链中的基序的三个核苷酸中的至少一个与
反义链中的基序的三个核苷酸中的至少一个形成碱基对。或者，至少两个核苷酸可以重叠，或者所有三个核苷酸都可以重叠。
[0609] 在一些实施方案中，RNAi试剂的有义链可以在三个连续核苷酸上含有超过一个具有三个相同修饰的基序。第一基序可以出现在链的切割位点处或附近，并且其它基序可以
是“翼修饰”，该术语在RNAi试剂的情况下是指出现在链的另一部分处的基序，其与在同一条链的切割位点处或附近的基序分开。翼修饰与第一基序相邻或被至少一个或多个核苷酸
分开。当基序彼此紧邻时，基序的化学性质彼此不同，并且当基序被一个或多个核苷酸分开时，化学性质可以相同或不同。可以存在两种或更多种翼修饰。例如，当存在两种翼修饰时，每种翼修饰可以出现在相对于第一基序的一个末端处，该第一基序位于切割位点处或附
近，或者位于引导基序的任一侧。
是“翼修饰”，该术语在RNAi试剂的情况下是指出现在链的另一部分处的基序，其与在同一条链的切割位点处或附近的基序分开。翼修饰与第一基序相邻或被至少一个或多个核苷酸
分开。当基序彼此紧邻时，基序的化学性质彼此不同，并且当基序被一个或多个核苷酸分开时，化学性质可以相同或不同。可以存在两种或更多种翼修饰。例如，当存在两种翼修饰时，每种翼修饰可以出现在相对于第一基序的一个末端处，该第一基序位于切割位点处或附
近，或者位于引导基序的任一侧。
[0610] RNAi试剂的反义链可以在三个连续核苷酸上含有超过一个具有三个相同修饰的基序，其中至少一个基序出现在链的切割位点处或附近。反义链还可以在比对中含有一个
或多个翼修饰，其类似于可能存在于有义链上的翼修饰。在一些实施方案中，RNAi试剂的有义链或反义链上的翼修饰通常不包括在链的3'末端、5'末端或两个末端的前一个或两个末
端核苷酸。在另一个实施方案中，RNAi试剂的有义链或反义链上的翼修饰通常不包括在链
的3'末端、5'末端或两个末端的双链体部分内的前一个或两个配对核苷酸。当RNAi试剂的
有义链和反义链各自含有至少一个翼修饰时，翼修饰可以落在双链体部分的同一个末端，
并且具有一个、两个或三个核苷酸的重叠。当RNAi试剂的有义链和反义链各自含有至少两
个翼修饰时，有义链和反义链可以这样比对，使得各自来自一条链的两个修饰落在双链体
部分的一个末端上，具有一个、两个或三个核苷酸的重叠；各自来自一条链的两个修饰落在双链体部分的另一个末端，具有一个、两个或三个核苷酸的重叠；一条链的两个修饰落在前导基序的每一侧，在双链体部分中具有一个、两个或三个核苷酸的重叠。
或多个翼修饰，其类似于可能存在于有义链上的翼修饰。在一些实施方案中，RNAi试剂的有义链或反义链上的翼修饰通常不包括在链的3'末端、5'末端或两个末端的前一个或两个末
端核苷酸。在另一个实施方案中，RNAi试剂的有义链或反义链上的翼修饰通常不包括在链
的3'末端、5'末端或两个末端的双链体部分内的前一个或两个配对核苷酸。当RNAi试剂的
有义链和反义链各自含有至少一个翼修饰时，翼修饰可以落在双链体部分的同一个末端，
并且具有一个、两个或三个核苷酸的重叠。当RNAi试剂的有义链和反义链各自含有至少两
个翼修饰时，有义链和反义链可以这样比对，使得各自来自一条链的两个修饰落在双链体
部分的一个末端上，具有一个、两个或三个核苷酸的重叠；各自来自一条链的两个修饰落在双链体部分的另一个末端，具有一个、两个或三个核苷酸的重叠；一条链的两个修饰落在前导基序的每一侧，在双链体部分中具有一个、两个或三个核苷酸的重叠。
[0611] 在一些实施方案中，可以修饰RNAi试剂的有义链和反义链中的每一个核苷酸，包括作为基序的一部分的核苷酸。每个核苷酸可以用相同或不同的修饰进行修饰，所述修饰
可以包括一个或两个非连接磷酸氧和/或一个或多个连接磷酸氧的一种或多种改变；核糖
组分的改变，例如核糖上的2'羟基的改变；用“脱磷”接头整体替换磷酸酯部分；天然存在的碱基的修饰或替换；以及核糖-磷酸骨架的替换或修饰。
可以包括一个或两个非连接磷酸氧和/或一个或多个连接磷酸氧的一种或多种改变；核糖
组分的改变，例如核糖上的2'羟基的改变；用“脱磷”接头整体替换磷酸酯部分；天然存在的碱基的修饰或替换；以及核糖-磷酸骨架的替换或修饰。
[0612] 在一些实施方案中，有义链和反义链的至少50％、60％、70％、80％、90％或更多，例如100％的残基，独立地用以下各者进行修饰：LNA、CRN、cET、UNA、HNA(1,5-脱水己糖醇核酸)、CeNA(环己烯基核酸，一种DNA模拟物，其中脱氧核糖被六元环己烯环取代)、2'-甲氧基乙基、2'-O-甲基、2'-O-烯丙基、2'-C-烯丙基、2'-脱氧、2'-羟基或2'-氟。链可以含有超过一种修饰。在一些实施方案中，有义链和反义链的至少50％、60％、70％、80％、90％或更多，例如100％的残基，独立地用2'-O-甲基或2'-氟进行修饰。在一些实施方案中，在有义链和反义链上存在至少两种不同的修饰。那两种修饰可以是2'-O-甲基或2'-氟修饰或其它。
[0613] 在一些实施方案中，Na和/或Nb包含交替模式的修饰。如本文所用的术语“交替基序”是指具有一个或多个修饰的基序，每个修饰出现在一条链的一个或多个核苷酸的交替
基团上。例如，交替核苷酸可以指每隔一个核苷酸一个或每三个核苷酸一个，或类似的模
式。例如，如果A、B和C各自代表一种类型的核苷酸修饰，那么交替基序可以是"
ABABABABABAB..."、"AABBAABBAABB..."、"AABAABAABAAB..."、"AAABAAABAAAB…"、
“AAABBBAAABBB..."或"ABCABCABCABC..."等。
基团上。例如，交替核苷酸可以指每隔一个核苷酸一个或每三个核苷酸一个，或类似的模
式。例如，如果A、B和C各自代表一种类型的核苷酸修饰，那么交替基序可以是"
ABABABABABAB..."、"AABBAABBAABB..."、"AABAABAABAAB..."、"AAABAAABAAAB…"、
“AAABBBAAABBB..."或"ABCABCABCABC..."等。
[0614] 包含在交替基序中的修饰类型可以相同或不同。例如，如果A、B、C、D各自代表一种类型的核苷酸修饰，那么交替模式，即每隔一个核苷酸的修饰，可以是相同的，但是有义链或反义链各自可以选自交替基序内的几种可能的修饰，例如"ABABAB..."、"ACACAC..."、"BDBDBD..."或"CDCDCD..."等。
[0615] 在一些实施方案中，RNAi试剂包含有义链上的针对交替基序的修饰模式，其相对于反义链上的针对交替基序的修饰模式移位。该移位可以使得有义链核苷酸的修饰基团对
应于反义链核苷酸的不同修饰基团，反之亦然。例如，有义链在与dsRNA双链体中的反义链配对时，有义链中的交替基序可以从链的5'-3'的“ABABAB”开始，并且反义链中的交替基序可以从双链体部分内的链的5'-3的“BAB ABA”开始。作为另一个例子，有义链中的交替基序可以从链的5'-3'的“AABBAABB”开始，并且反义链中的交替基序可以从双链体部分内的链的5'-3'的“BBAABBAA”开始，因此有义链和反义链之间的修饰模式存在完全或部分移位。
应于反义链核苷酸的不同修饰基团，反之亦然。例如，有义链在与dsRNA双链体中的反义链配对时，有义链中的交替基序可以从链的5'-3'的“ABABAB”开始，并且反义链中的交替基序可以从双链体部分内的链的5'-3的“BAB ABA”开始。作为另一个例子，有义链中的交替基序可以从链的5'-3'的“AABBAABB”开始，并且反义链中的交替基序可以从双链体部分内的链的5'-3'的“BBAABBAA”开始，因此有义链和反义链之间的修饰模式存在完全或部分移位。
[0616] 在一些实施方案中，最初包含有义链上的2'-O-甲基修饰和2'-F修饰的交替基序模式的RNAi试剂最初具有相对于反义链上的2'-O-甲基修饰和2'-F修饰的交替基序模式的
移位，即有义链上的2'-O-甲基修饰的核苷酸与反义链上的2'-F修饰的核苷酸碱基配对，反之亦然。有义链的1位可以从2'-F修饰开始，并且反义链的1位可以从2'-O-甲基修饰开始。
移位，即有义链上的2'-O-甲基修饰的核苷酸与反义链上的2'-F修饰的核苷酸碱基配对，反之亦然。有义链的1位可以从2'-F修饰开始，并且反义链的1位可以从2'-O-甲基修饰开始。
[0617] 将三个连续核苷酸上的一个或多个具有三个相同修饰的基序引入有义链和/或反义链可中断有义链和/或反义链中存在的初始修饰模式。在一些实施方案中，当将三个连续核苷酸上具有三个相同修饰的基序引入任何链中时，基序旁边的核苷酸修饰是与基序修饰
不同的修饰。例如，含有基序的序列部分是"...NaYYYNb..."，其中“Y”代表三个连续核苷酸上具有三个相同修饰的基序的修饰，并且“Na”和“Nb”代表不同于Y的修饰的针对基序“YYY”旁边的核苷酸的修饰，并且其中Na和Nb可以是相同或不同的修饰。或者，当存在翼修饰时，Na和/或Nb可以存在或不存在。
不同的修饰。例如，含有基序的序列部分是"...NaYYYNb..."，其中“Y”代表三个连续核苷酸上具有三个相同修饰的基序的修饰，并且“Na”和“Nb”代表不同于Y的修饰的针对基序“YYY”旁边的核苷酸的修饰，并且其中Na和Nb可以是相同或不同的修饰。或者，当存在翼修饰时，Na和/或Nb可以存在或不存在。
[0618] RNAi试剂可以进一步包含至少一个硫代磷酸酯或甲基磷酸酯核苷酸间键。硫代磷酸酯或甲基磷酸酯核苷酸间键修饰可以出现在有义链或反义链或两条链的任何链位置上
的任何核苷酸上。例如，核苷酸间键修饰可以出现在有义链和/或反义链上的每个核苷酸
上；每个核苷酸间键修饰可以按交替模式出现在有义链和/或反义链上；或者有义链或反义链可以按交替模式含有两种核苷酸间键修饰。有义链上的核苷酸间键修饰的交替模式可以
与反义链相同或不同，并且有义链上的核苷酸间键修饰的交替模式可以相对于反义链上的
核苷酸间键修饰的交替模式具有移位。在一些实施方案中，双链RNAi试剂包含6-8个硫代磷酸酯核苷酸间键。在一些实施方案中，反义链包含5'末端的两个硫代磷酸酯核苷酸间键和
3'末端的两个硫代磷酸酯核苷酸间键，并且有义链在5'末端或3'末端包含至少两个硫代磷
酸酯核苷酸间键。
的任何核苷酸上。例如，核苷酸间键修饰可以出现在有义链和/或反义链上的每个核苷酸
上；每个核苷酸间键修饰可以按交替模式出现在有义链和/或反义链上；或者有义链或反义链可以按交替模式含有两种核苷酸间键修饰。有义链上的核苷酸间键修饰的交替模式可以
与反义链相同或不同，并且有义链上的核苷酸间键修饰的交替模式可以相对于反义链上的
核苷酸间键修饰的交替模式具有移位。在一些实施方案中，双链RNAi试剂包含6-8个硫代磷酸酯核苷酸间键。在一些实施方案中，反义链包含5'末端的两个硫代磷酸酯核苷酸间键和
3'末端的两个硫代磷酸酯核苷酸间键，并且有义链在5'末端或3'末端包含至少两个硫代磷
酸酯核苷酸间键。
[0619] 在一些实施方案中，RNAi试剂在突出端区域中包含硫代磷酸酯或甲基磷酸酯核苷酸间键修饰。例如，突出端区域可以含有两个核苷酸，在两个核苷酸之间具有硫代磷酸酯或甲基磷酸酯核苷酸间键。还可以进行核苷酸间键修饰以连接突出端核苷酸与双链体部分内
的末端配对的核苷酸。例如，至少2、3、4个或所有突出端核苷酸可以通过硫代磷酸酯或甲基磷酸酯核苷酸间键连接，并且任选地，可以存在其它的硫代磷酸酯或甲基磷酸酯核苷酸间
键，其连接突出端核苷酸与突出端核苷酸旁边的配对的核苷酸。例如，在末端三个核苷酸之间可以存在至少两个硫代磷酸酯核苷酸间键，其中三个核苷酸中的两个是突出端核苷酸，
并且第三个是突出端核苷酸旁边的配对核苷酸。这末端三个核苷酸可位于反义链的3'末
端、有义链的3'-末端、反义链的5'-末端和/或反义链的5'末端。
的末端配对的核苷酸。例如，至少2、3、4个或所有突出端核苷酸可以通过硫代磷酸酯或甲基磷酸酯核苷酸间键连接，并且任选地，可以存在其它的硫代磷酸酯或甲基磷酸酯核苷酸间
键，其连接突出端核苷酸与突出端核苷酸旁边的配对的核苷酸。例如，在末端三个核苷酸之间可以存在至少两个硫代磷酸酯核苷酸间键，其中三个核苷酸中的两个是突出端核苷酸，
并且第三个是突出端核苷酸旁边的配对核苷酸。这末端三个核苷酸可位于反义链的3'末
端、有义链的3'-末端、反义链的5'-末端和/或反义链的5'末端。
[0620] 在一些实施方案中，2个核苷酸的突出端位于反义链的3'末端，并且在末端三个核苷酸之间存在两个硫代磷酸酯核苷酸间键，其中三个核苷酸中的两个是突出端核苷酸，并
且第三个核苷酸是突出端核苷酸旁边的配对核苷酸。任选地，RNAi试剂可以另外在有义链
的5'末端和反义链的5'末端的末端三个核苷酸之间具有两个硫代磷酸酯核苷酸间键。
且第三个核苷酸是突出端核苷酸旁边的配对核苷酸。任选地，RNAi试剂可以另外在有义链
的5'末端和反义链的5'末端的末端三个核苷酸之间具有两个硫代磷酸酯核苷酸间键。
[0621] 在一些实施方案中，RNAi试剂包含与靶标的错配、双链体内的错配或其组合。错配可以出现在突出端区域或双链体部分中。碱基对可以基于其促进解离或解链的倾向性进行排序(例如，关于特定配对的结合或解离的自由能，尽管也可以使用近邻分析或类似分析，但最简单的方法是在单个对的基础上检查各对)。在促进解离方面：A:U优于G:C；G:U优于G:
C；并且I:C优于G:C(I＝肌苷)。错配，例如非经典的或不经典的配对(如本文其它地方所述)优于经典(A:T、A:U、G:C)配对；并且包括通用碱基的配对优于经典配对。
C；并且I:C优于G:C(I＝肌苷)。错配，例如非经典的或不经典的配对(如本文其它地方所述)优于经典(A:T、A:U、G:C)配对；并且包括通用碱基的配对优于经典配对。
[0622] 在一些实施方案中，ds RNAi试剂包含反义链5'-末端双链体部分内的前1、2、3、4或5个碱基对中的至少一个，所述碱基对独立地选自下组：A:U、G:U、I:C以及错配对，例如，非经典的或不经典的配对或包括通用碱基的配对，以促进反义链在双链体的5'-末端的解离。在一些实施方案中，反义链中5'末端双链体部分内的1位核苷酸选自下组：A、dA、dU、U和dT。或者，反义链5'-末端双链体部分内前1、2或3个碱基对中的至少一个是AU碱基对。例如，反义链5'-末端双链体部分内的第一个碱基对是AU碱基对。
[0623] 在某些实施方案中，RNAi试剂可以具有WO/2015/089368的第59页(第20行)到第65页(第15行)或美国专利申请公开号20160298124的相应段落[0469]-[0537]或所述公开的
任一个或两个的权利要求书中所描述的任何构象和/或修饰模式。例如，在一些实施方案
中，INAA包含双链RNAi试剂，其包含有义链和反义链，其中所述有义链与所述反义链互补，其中所述反义链包含与编码C3的mRNA部分互补的区域，其中每条链的长度为约14至约30个
核苷酸，其中所述试剂由式(III)表示：
任一个或两个的权利要求书中所描述的任何构象和/或修饰模式。例如，在一些实施方案
中，INAA包含双链RNAi试剂，其包含有义链和反义链，其中所述有义链与所述反义链互补，其中所述反义链包含与编码C3的mRNA部分互补的区域，其中每条链的长度为约14至约30个
核苷酸，其中所述试剂由式(III)表示：
[0624] 有义：5'np-Na-(X X X)i-Nb-Y Y Y-Nb-(Z Z Z)j-Na-nq3'
[0625] 反义：3'np'-Na'-(X'X'X')k-Nb'-Y'Y'Y'-Nb'-(Z'Z'Z')l-Na'-nq'5'
[0626] 其中：i、j、k和1各自独立地是0或1；p、p'、q和q'各自独立地是0-6；每个Na和Na'独立地代表包含0-25个核苷酸的寡核苷酸序列，所述核苷酸是修饰的或未修饰的或其组合，每个序列包含至少两个不同修饰的核苷酸；每个Nb和Nb'独立地代表包含0-10个核苷酸的寡核苷酸序列，所述核苷酸是修饰的或未修饰的或其组合；每个np、np'、nq和nq'，各自可以存在或不存在，独立地代表突出端核苷酸；XXX、YYY、ZZZ、X'X'X'、Y'Y'Y'和Z'Z'Z'各自独立地代表三个连续核苷酸上的一个具有三个相同修饰的基序；对Nb的修饰不同于对Y的修饰，并且对Nb'的修饰不同于对Y'的修饰：并且其中有义链与至少一个配体缀合。在一些实施方案中，i是0；j是0；i是1；j是1；i和j均是0；或i和j均是1。在一些实施方案中，XXX与X'X'X'互补，YYY与Y'Y'Y'互补，并且ZZZ与Z'Z'Z'互补。应当理解，每个X可以包含不同碱基，只要每个X包含相同修饰即可。例如，XXX可以代表AGC，其中每个核苷酸包含2-F修饰。类似地，每个X'、每个Y、每个Y'、每个Z以及每个Z可以不同。
[0627] 在一些实施方案中，式(III)由式(IIIa)表示：
[0628] 有义：5'np-Na-Y Y Y-Na-nq3'
[0629] 反义：3'np'-Na'-Y'Y'Y'-Na'-nq'5'
[0630] 或其中式(III)由式(IIIb)表示：
[0631] 有义：5'np-Na-Y Y Y-Nb-Z Z Z-Na-nq3'
[0632] 反义：3'np'-Na'-Y'Y'Y'-Nb'-Z'Z'Z'-Na'-nq'5'
[0633] 其中每个Nb和Nb'独立地代表包含1-5个修饰的核苷酸的寡核苷酸序列；或其中式(III)由式(IIIc)表示：
[0634] 有义：5'np-Na-X X X-Nb-Y Y Y-Na-nq3'
[0635] 反义：3'np'-Na'-X'X'X'-Nb'-Y'Y'Y'-Na'-nq'5'
[0636] 其中每个Nb和Nb'独立地表示包含1-5个修饰的核苷酸的寡核苷酸序列；或其中式(III)由式(IIId)表示：
[0637] 有义：5'np-Na-X X X-Nb-Y Y Y-Nb-Z Z Z-Na-nq3'
[0638] 反义：3'np'-Na'-X'X'X'-Nb'-Y'Y'Y'-Nb'-Z'Z'Z'-Na'-nq'5
[0639] 其中每个Nb和Nb'独立地代表包含1-5个修饰的核苷酸的寡核苷酸序列，并且每个Na和Na'独立地代表包含2-10个修饰的核苷酸的寡核苷酸序列。
[0640] 在一些实施方案中，核苷酸上的修饰选自下组：LNA、CRN、cET、UNA、HNA、CeNA、2'-甲氧基乙基、2'-O-甲基、2'-O-烷基、2'-O-烯丙基、2'-C-烯丙基、2'-氟、2'-脱氧、2'-羟基以及其组合。
[0641] 在一些实施方案中，核苷酸上的修饰是2'-O-甲基或2'-氟修饰。
[0642] 在一些实施方案中，配体是通过二价或三价支链接头连接的一个或多个GalNAc衍生物。在一些实施方案中，下文式XA、XB或XC中描述了配体。
[0643] 在一些实施方案中，配体连接到有义链的3'末端。在一些实施方案中，连接如下文式XD中所描述。
[0644] 在一些实施方案中，试剂进一步包含至少一个硫代磷酸酯或甲基磷酸酯核苷酸间键。
[0645] 在一些实施方案中，p'>0；或p'＝2。
[0646] 在一些实施方案中，q'＝0，p＝0，q＝0，并且p'突出端核苷酸与C3 mRNA互补。在一些实施方案中，q'＝0，p＝0，q＝0，并且p'突出端核苷酸与C3 mRNA不互补。
[0647] 在一些实施方案中，至少一个np'通过硫代磷酸酯键连接至相邻核苷酸。
[0648] 在一些实施方案中，INAA是双链核酸分子，其包含有义链或反义链的5'延伸，并且还包含与配体或抗体缀合的多个核苷酸。在一些实施方案中，双链核酸包含：包含21至83个核苷酸的有义链；包含15至39个核苷酸的反义链；由所述有义链和反义链形成的双链体，长度为15至35个碱基对；其中ds核酸在有义链的5'末端和反义链的3'末端之间或在有义链的3'末端和反义链的5'末端之间包含不连续性；其中有义链包含四环，并且四环包含至少一
个配体缀合的核苷酸；并且其中所述反义链沿着所述第二链长度的至少15个核苷酸与C3
mRNA充分互补，以在将所述双链核酸引入哺乳动物或哺乳动物细胞时降低靶基因表达。在
WO/2016/100401中描述了这种INAA和其制造方法的实例。在一些实施方案中，四环包含1、
2、3、4或更多个配体缀合的核苷酸。在一些实施方案中，至少一个配体，例如所有配体，通过核苷酸核糖上的2'羟基与四环的核苷酸缀合。在一些实施方案中，反义链具有15-30个核苷酸、18-25个核苷酸或19-24个核苷酸的长度范围。在一些实施方案中，有义链具有19-30个核苷酸或19-36个核苷酸的长度范围。在一些实施方案中，双链体具有15-22个核苷酸或15-
30个核苷酸的长度范围。
个配体缀合的核苷酸；并且其中所述反义链沿着所述第二链长度的至少15个核苷酸与C3
mRNA充分互补，以在将所述双链核酸引入哺乳动物或哺乳动物细胞时降低靶基因表达。在
WO/2016/100401中描述了这种INAA和其制造方法的实例。在一些实施方案中，四环包含1、
2、3、4或更多个配体缀合的核苷酸。在一些实施方案中，至少一个配体，例如所有配体，通过核苷酸核糖上的2'羟基与四环的核苷酸缀合。在一些实施方案中，反义链具有15-30个核苷酸、18-25个核苷酸或19-24个核苷酸的长度范围。在一些实施方案中，有义链具有19-30个核苷酸或19-36个核苷酸的长度范围。在一些实施方案中，双链体具有15-22个核苷酸或15-
30个核苷酸的长度范围。
[0649] 在一些实施方案中，配体将核酸分子靶向肝细胞。例如，在一些实施方案中，配体结合至肝细胞特异性去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)，例如，配体包含半乳糖衍生物，例如GalNac。其它示例性配体如下所述。
[0650] 本领域普通技术人员认识到，INAA可以通过本领域已知的标准方法合成，例如通过使用自动化核酸合成仪。在一些实施方案中，可以通过首先合成单独的链，然后使它们退火来制备双链INAA。可以使用溶液相或固相有机合成或二者来制备双链核酸的单独的链或
单链核酸的单链。
单链核酸的单链。
[0651] 靶向C3的某些INAA是本领域已知的，并且可以用于本文所述的方法和组合物中。在一些实施方案中，INAA，例如ds RNAi试剂的反义链的互补区，由PCT/US2014/069951(WO/
2015/089368)和相应的美国专利申请公开号20160298124，下文称“美国公开'124”的表5和
6中任一个的反义序列之一的核苷酸序列组成，其中表5代表未修饰的序列并且表6代表所
述序列的修饰形式。所述表在本文中再现为表13(C3未修饰序列)和表14(C3修饰序列)，其
中表14中使用的缩写如表15中所列。所述表中还列出了NM_000064.2的人类C3转录物序列
中的位置。在一些实施方案中，靶向C3的INAA包括选自美国公开'124的表5和6中任一个中
提供的序列组的有义链，和有义链的相应反义链，其选自美国公开'124的表5和6中任一个
的序列组。在这方面，两个序列中的一个与两个序列中的另一个互补，其中一个序列与C3基因表达中产生的mRNA序列基本上互补。因此，在这方面，ds RNAi试剂将包括两个寡核苷酸，其中将一个寡核苷酸描述为美国公开'124的表5和6中任一个中的有义链，并且将第二寡核
苷酸描述为美国公开'124的表5和6中任一个中的有义链的相应反义链。在各种实施方案
中，基本上互补的序列可以包含在分开的寡核苷酸上或包含在单个寡核苷酸中(任选地通
过如本文所述的环结构连接)。
2015/089368)和相应的美国专利申请公开号20160298124，下文称“美国公开'124”的表5和
6中任一个的反义序列之一的核苷酸序列组成，其中表5代表未修饰的序列并且表6代表所
述序列的修饰形式。所述表在本文中再现为表13(C3未修饰序列)和表14(C3修饰序列)，其
中表14中使用的缩写如表15中所列。所述表中还列出了NM_000064.2的人类C3转录物序列
中的位置。在一些实施方案中，靶向C3的INAA包括选自美国公开'124的表5和6中任一个中
提供的序列组的有义链，和有义链的相应反义链，其选自美国公开'124的表5和6中任一个
的序列组。在这方面，两个序列中的一个与两个序列中的另一个互补，其中一个序列与C3基因表达中产生的mRNA序列基本上互补。因此，在这方面，ds RNAi试剂将包括两个寡核苷酸，其中将一个寡核苷酸描述为美国公开'124的表5和6中任一个中的有义链，并且将第二寡核
苷酸描述为美国公开'124的表5和6中任一个中的有义链的相应反义链。在各种实施方案
中，基本上互补的序列可以包含在分开的寡核苷酸上或包含在单个寡核苷酸中(任选地通
过如本文所述的环结构连接)。
[0652] 在一些实施方案中，INAA包含反义链，其包含在美国公开'124的表5或6中被命名为AD-60149.1、AD-60152.1、AD-60156.1、AD-60165.1、AD-60169.1、AD-60171.1、AD-
60174.1、AD-60175.1、AD-60176.1、AD-60179.1、AD-60183.1或AD-60187.1的双链体的反义链的至少15个连续核苷酸。INAA可以进一步包含有义链，其包含在美国公开'124的表5或6
中被命名为AD-60149.1、AD-60152.1、AD-60156.1、AD-60165.1、AD-60169.1、AD-60171.1、AD-60174.1、AD-60175.1、AD-60176.1、AD-60179.1、AD-60183.1或AD-60187.1的双链体的有义链的至少15个连续核苷酸。在一些实施方案中，INAA包含美国公开'124的表5或6中被
命名为AD-60149.1、AD-60152.1、AD-60156.1、AD-60165.1、AD-60169.1、AD-60171.1、AD-
60174.1、AD-60175.1、AD-60176.1、AD-60179.1、AD-60183.1或AD-60187.1的双链体。在一些实施方案中，INAA包含相对于前述反义链和有义链中任一个相差最多3个核苷酸的反义
链和有义链。
60174.1、AD-60175.1、AD-60176.1、AD-60179.1、AD-60183.1或AD-60187.1的双链体的反义链的至少15个连续核苷酸。INAA可以进一步包含有义链，其包含在美国公开'124的表5或6
中被命名为AD-60149.1、AD-60152.1、AD-60156.1、AD-60165.1、AD-60169.1、AD-60171.1、AD-60174.1、AD-60175.1、AD-60176.1、AD-60179.1、AD-60183.1或AD-60187.1的双链体的有义链的至少15个连续核苷酸。在一些实施方案中，INAA包含美国公开'124的表5或6中被
命名为AD-60149.1、AD-60152.1、AD-60156.1、AD-60165.1、AD-60169.1、AD-60171.1、AD-
60174.1、AD-60175.1、AD-60176.1、AD-60179.1、AD-60183.1或AD-60187.1的双链体。在一些实施方案中，INAA包含相对于前述反义链和有义链中任一个相差最多3个核苷酸的反义
链和有义链。
[0653] 尽管美国公开'124的表5和6中的一些序列在其中被描述为修饰的和/或缀合的序列，但是用于本公开的方法和组合物中的INAA可以包含美国公开'124的表5和6中所示的任
何一个或多个序列，所述序列未修饰、未缀合和/或以与其中所述不同的方式修饰和/或缀
合。此外，可以使用变体序列，其在序列中至多1、2或3个核苷酸位置与美国公开'124的表5和6中所示的序列不同。此类变体序列在其核碱基序列方面可以不同，以便在dsINAA的双链体内产生一个或多个错配和/或当与C3 RNA杂交时产生一个或多个错配。
何一个或多个序列，所述序列未修饰、未缀合和/或以与其中所述不同的方式修饰和/或缀
合。此外，可以使用变体序列，其在序列中至多1、2或3个核苷酸位置与美国公开'124的表5和6中所示的序列不同。此类变体序列在其核碱基序列方面可以不同，以便在dsINAA的双链体内产生一个或多个错配和/或当与C3 RNA杂交时产生一个或多个错配。
[0654] 在一些方面，INAA包含约20至23个碱基对，例如21个碱基对的双链体部分。在一些方面，可以使用包含更短或更长RNA双链体部分的INAA。在一些实施方案中，采用美国公开'124的表5或6中提供的寡核苷酸序列，INAA可以包括至少一条长度为最少21个核苷酸的链。
在一些实施方案中，可以使用较短的双链体，其包含美国公开'124的表5或6的一个或多个
序列的部分，但在一个或两个末端缺少多达几个核苷酸。例如，可以使用这样的ds siRNA，其具有衍生自美国公开'124的表5和6的序列之一的至少15、16、17、18、19、20或更多个连续核苷酸的序列。在一些实施方案中，可以使用较长的双链体，其包含美国公开'124的表5或6的一个或多个序列，但在一个或两个末端并入多达15个额外的核苷酸。这类额外的核苷酸
当存在于反义链末端时，可以选择为与C3 mRNA中与构成反义链所靶向的靶部分的序列相
邻的序列互补。在一些实施方案中，可以在美国公开'124的表5或6中所示的链的3'末端添
加一个或多个(例如，多达15个)额外的核苷酸。
在一些实施方案中，可以使用较短的双链体，其包含美国公开'124的表5或6的一个或多个
序列的部分，但在一个或两个末端缺少多达几个核苷酸。例如，可以使用这样的ds siRNA，其具有衍生自美国公开'124的表5和6的序列之一的至少15、16、17、18、19、20或更多个连续核苷酸的序列。在一些实施方案中，可以使用较长的双链体，其包含美国公开'124的表5或6的一个或多个序列，但在一个或两个末端并入多达15个额外的核苷酸。这类额外的核苷酸
当存在于反义链末端时，可以选择为与C3 mRNA中与构成反义链所靶向的靶部分的序列相
邻的序列互补。在一些实施方案中，可以在美国公开'124的表5或6中所示的链的3'末端添
加一个或多个(例如，多达15个)额外的核苷酸。
[0655] 在一些实施方案中，靶向C3的INAA包括有义链和反义链，其不包含美国公开'124的表5或6中所包括的有义链或反义链的至少10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多个连续核苷酸。在一些实施方案中，靶向C3的INAA包括有义链和反义链，其不包含与美国公开'124的表5或6中所列的链相差1、2或3个核苷酸的有义链或反义链。在一些实施方案中，靶向C3的INAA靶向不同于美国公开'124的表5和6中所述的RNAi试剂所靶向部分的C3部分。
在一些实施方案中，靶向C3的INAA不包含美国公开'124的表5和6中所示的序列或不由其组
成。在本公开的某些实施方案中，INAA靶向与美国公开'124的表5和6中所示的反义序列基
本上不互补的C3 RNA区域。在本公开的某些实施方案中，INAA切割C3 RNA的区域，其不与将与美国公开'124的表5和6中所示的反义序列形成双链体的C3部分一起定位。在一些实施方
案中，靶向C3的INAA靶向不与美国公开'124的表5和6中所述的RNAi试剂所靶向的部分重叠
的靶部分。在一些实施方案中，靶向C3的INAA靶向与美国公开'124的表5和6中所述的RNAi
试剂所靶向的部分重叠的靶部分，但这种重叠的长度不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个核苷酸。
在一些实施方案中，靶向C3的INAA不包含美国公开'124的表5和6中所示的序列或不由其组
成。在本公开的某些实施方案中，INAA靶向与美国公开'124的表5和6中所示的反义序列基
本上不互补的C3 RNA区域。在本公开的某些实施方案中，INAA切割C3 RNA的区域，其不与将与美国公开'124的表5和6中所示的反义序列形成双链体的C3部分一起定位。在一些实施方
案中，靶向C3的INAA靶向不与美国公开'124的表5和6中所述的RNAi试剂所靶向的部分重叠
的靶部分。在一些实施方案中，靶向C3的INAA靶向与美国公开'124的表5和6中所述的RNAi
试剂所靶向的部分重叠的靶部分，但这种重叠的长度不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个核苷酸。
[0656] 在一些实施方案中，靶向C3的INAA包括反义链和有义链，其不包含美国公开'124的表5或6中所包括的美国公开'124的表5或6中被命名为以下的双链体的反义链或有义链
的至少10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多个连续核苷酸：AD-60149.1、AD-
60152.1、AD-60156.1、AD-60165.1、AD-60169.1、AD-60171.1、AD-60174.1、AD-60175.1、AD-
60176.1、AD-60179.1、AD-60183.1或AD-60187.1。在一些实施方案中，靶向C3的INAA包括与美国公开'124的表5或6中被命名为以下的双链体的反义链和有义链相差超过3个核苷酸的
反义链和有义链：AD-60149.1、AD-60152.1、AD-60156.1、AD-60165.1、AD-60169.1、AD-
60171.1、AD-60174.1、AD-60175.1、AD-60176.1、AD-60179.1、AD-60183.1或AD-60187.1。
的至少10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多个连续核苷酸：AD-60149.1、AD-
60152.1、AD-60156.1、AD-60165.1、AD-60169.1、AD-60171.1、AD-60174.1、AD-60175.1、AD-
60176.1、AD-60179.1、AD-60183.1或AD-60187.1。在一些实施方案中，靶向C3的INAA包括与美国公开'124的表5或6中被命名为以下的双链体的反义链和有义链相差超过3个核苷酸的
反义链和有义链：AD-60149.1、AD-60152.1、AD-60156.1、AD-60165.1、AD-60169.1、AD-
60171.1、AD-60174.1、AD-60175.1、AD-60176.1、AD-60179.1、AD-60183.1或AD-60187.1。
[0657] 在一些方面，考虑使用在美国专利申请公开号20080090997中被公开为适合于靶向C3或包含所述公开中被公开为适合于靶向C3的siRNA的有义链的INAA。
[0658] 在一些实施方案中，抑制C3表达的INAA包含与任何以下序列的至少10、11、12、13、14、15、16、17、18或19个连续核苷酸完全或基本上互补的反义链：
[0659] AAACUGACGCAGAGUAAGA(SEQ ID NO:75)
[0660] AAAGAUCAACUCACCUGUA(SEQ ID NO:76)
[0661] AACAAGCUCUGCCGUGAUG(SEQ ID NO:77)
[0662] AAGAAACACUACCUCAUGU(SEQ ID NO:78)
[0663] AAGAAAUGAUUGGUGGAUU(SEQ ID NO:79)
[0664] AAGAUCAACUCACCUGUAA(SEQ ID NO:80)
[0665] ACAAAGCCUUCUCCGAUAG(SEQ ID NO:81)
[0666] ACACCUACCUGAUCAUGAA(SEQ ID NO:82)
[0667] ACAGGGAGUUCAAGUCAGA(SEQ ID NO:83)
[0668] ACAUGAACCUACAGAGAUC(SEQ ID NO:84)
[0669] ACGAAGAGAACCAGAAACA(SEQ ID NO:85)
[0670] ACGAAUGCCAAGACGAAGA(SEQ ID NO:86)
[0671] ACGGAACAACAACGAGAAA(SEQ ID NO:87)
[0672] ACGGAGAAGCGAAUGGACA(SEQ ID NO:88)
[0673] ACGUUGAGGACUUGAAAGA(SEQ ID NO:89)
[0674] AGAAAUGAUUGGUGGAUUA(SEQ ID NO:90)
[0675] AGAACACUAUGAUCCUUGA(SEQ ID NO:91)
[0676] AGACACAGAUGACCUGAAG(SEQ ID NO:92)
[0677] AGACAGACAAGACCAUCUA(SEQ ID NO:93)
[0678] AGACGAAGAGAACCAGAAA(SEQ ID NO:94)
[0679] AGAUGACCCUGAAGAUAGA(SEQ ID NO:95)
[0680] AGGAUGGAAAGCUGAACAA(SEQ ID NO:96)
[0681] AGGGAGUUCAAGUCAGAAA(SEQ ID NO:97)
[0682] AGGUUCAGCUGUCCAAUGA(SEQ ID NO:98)
[0683] AGUCACAGCUGAAGGAAAA(SEQ ID NO:99)
[0684] AGUGGAGCCUACAGAGAAA(SEQ ID NO:100)
[0685] AGUUUGAGGUGAAGGAGUA(SEQ ID NO:101)
[0686] AUUACAACCUGGAGGAAAG(SEQ ID NO:102)
[0687] CAACAACGAGAAAGACAUG(SEQ ID NO:103)
[0688] CAACAGGGAGUUCAAGUCA(SEQ ID NO:104)
[0689] CAACCCAGCUCUGCCUUUG(SEQ ID NO:105)
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[0691] CAAGAACACUAUGAUCCUU(SEQ ID NO:107)
[0692] CAAGAUCACCCACCGUAUC(SEQ ID NO:108)
[0693] CAAGGUCACCCUGGAAGAA(SEQ ID NO:109)
[0694] CACCAAUACUUUAAUGUAG(SEQ ID NO:110)
[0695] CAGAAGACCUGGUGGGGAA(SEQ ID NO:111)
[0696] CAGAAGAGAACAUCGUUUC(SEQ ID NO:112)
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[0699] CAGAUCCACUUCACCAAGA(SEQ ID NO:115)
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[0701] CAGCAGCGCACGUUCAUCA(SEQ ID NO:117)
[0702] CAGCAUCACUAAAGCAGGA(SEQ ID NO:118)
[0703] CAGUCAAGGUCUACGCCUA(SEQ ID NO:119)
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[0705] CAUCAUUGCAGAAGAGAAC(SEQ ID NO:121)
[0706] CCAACUACAUGAACCUACA(SEQ ID NO:122)
[0707] CCAAGACACCCAAGUACUU(SEQ ID NO:123)
[0708] CCAAGGAAAAUGAGGGUUU(SEQ ID NO:124)
[0709] CCAAGGAGCUGCGCAAGUG(SEQ ID NO:125)
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[0712] CCAAUGGUGUUGACAGAUA(SEQ ID NO:128)
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[0714] CCACUGAGUUUGAGGUGAA(SEQ ID NO:130)
[0715] CCCUGAAGCUGGAGGAGAA(SEQ ID NO:131)
[0716] CCGGAAGGAAUCAGAAUGA(SEQ ID NO:132)
[0717] CCGUGAAGGAGUGCAGAAA(SEQ ID NO:133)
[0718] CCGUGAUACACCAAGAAAU(SEQ ID NO:134)
[0719] CCGUGUGGGUGGACGUCAA(SEQ ID NO:135)
[0720] CCUACAGCACCGUGGGCAA(SEQ ID NO:136)
[0721] CCUACCUGAUCAUGAACAA(SEQ ID NO:137)
[0722] CCUCAAGCGCAUUCCGAUU(SEQ ID NO:138)
[0723] CGAAACGAGCAGGUGGAAA(SEQ ID NO:139)
[0724] CGAAGCUCAUGAAUAUAUU(SEQ ID NO:140)
[0725] CGAAGUGAGUUCCCAGAGA(SEQ ID NO:141)
[0726] CGGAAAAGGAGGAUGGAAA(SEQ ID NO:142)
[0727] CGGAAGGCAUCCCGGUCAA(SEQ ID NO:143)
[0728] CGGAGAAGCGAAUGGACAA(SEQ ID NO:144)
[0729] CGGCUACCCUACUCUGUUG(SEQ ID NO:145)
[0730] CGGGCAGUGGGAAGGAUUA(SEQ ID NO:146)
[0731] CGGUCAUCGCUGUGCAUUA(SEQ ID NO:147)
[0732] CUACAUCUAUAACGAGAAG(SEQ ID NO:148)
[0733] CUACAUGAACCUACAGAGA(SEQ ID NO:149)
[0734] CUACGAAGCUCAUGAAUAU(SEQ ID NO:150)
[0735] CUGAAUAAGAAGAACAAAC(SEQ ID NO:151)
[0736] CUGCAGGAGGCUAAAGAUA(SEQ ID NO:152)
[0737] CUGGAGCAGUCAAGGUCUA(SEQ ID NO:153)
[0738] CUUGAAAGAGCCACCGAAA(SEQ ID NO:154)
[0739] GAAACGAGCAGGUGGAAAU(SEQ ID NO:155)
[0740] GAAACGGAGCAGUGGGAGA(SEQ ID NO:156)
[0741] GAACAACAACGAGAAAGAC(SEQ ID NO:157)
[0742] GAACAAGCUCUGCCGUGAU(SEQ ID NO:158)
[0743] GAACAGAACAUGAUCGGCA(SEQ ID NO:159)
[0744] GAACAUCGUUUCCCGAAGU(SEQ ID NO:160)
[0745] GAACCAGCUUGGCGUCUUG(SEQ ID NO:161)
[0746] GAACGUUGAGGACUUGAAA(SEQ ID NO:162)
[0747] GAACUGAACCUUGAUGUGU(SEQ ID NO:163)
[0748] GAACUGCCUUUGUCAUCUU(SEQ ID NO:164)
[0749] GAAGAAACACUACCUCAUG(SEQ ID NO:165)
[0750] GAAGAGAACCAGAAACAAU(SEQ ID NO:166)
[0751] GAAGAUCCGAGCCUACUAU(SEQ ID NO:167)
[0752] GAAGGAAUCAGAAUGAACA(SEQ ID NO:168)
[0753] GAAGUUCGGCCUAGAGAAG(SEQ ID NO:169)
[0754] GAAUGGACAAAGUCGGCAA(SEQ ID NO:170)
[0755] GACAAAGCCUUCUCCGAUA(SEQ ID NO:171)
[0756] GACCACAGCCAAAGAUAAG(SEQ ID NO:172)
[0757] GACCAGAAUUCUCCUGCAA(SEQ ID NO:173)
[0758] GAGAAGUUCGGCCUAGAGA(SEQ ID NO:174)
[0759] GAGAAUUGCUUCAUACAAA(SEQ ID NO:175)
[0760] GAGCCGUUCUCUACAAUUA(SEQ ID NO:176)
[0761] GAGGAGAAUUGCUUCAUAC(SEQ ID NO:177)
[0762] GAGGAUGACUGUCUAGCUU(SEQ ID NO:178)
[0763] GAGUGCAGAAAGAGGACAU(SEQ ID NO:179)
[0764] GAGUGGACUAUGUGUACAA(SEQ ID NO:180)
[0765] GAUAGGAACACCCUCAUCA(SEQ ID NO:181)
[0766] GAUCAACUCACCUGUAAUA(SEQ ID NO:182)
[0767] GAUCAGAAGAGACCAAGGA(SEQ ID NO:183)
[0768] GAUCCGAGCCUACUAUGAA(SEQ ID NO:184)
[0769] GCAACAAGUUCGUGACCGU(SEQ ID NO:185)
[0770] GCAGAAGAGAACAUCGUUU(SEQ ID NO:186)
[0771] GCAGAUGACCCUGAAGAUA(SEQ ID NO:187)
[0772] GCAGCUGGCCUUCAGACAA(SEQ ID NO:188)
[0773] GCAGGAGGCUAAAGAUAUU(SEQ ID NO:189)
[0774] GCCAAGACGAAGAGAACCA(SEQ ID NO:190)
[0775] GCCAGAAGCCCUUGAGCAU(SEQ ID NO:191)
[0776] GCGCAUUCCGAUUGAGGAU(SEQ ID NO:192)
[0777] GCGCCUUCACCGAGAGCAU(SEQ ID NO:193)
[0778] GCGUGUUCGUGCUGAAUAA(SEQ ID NO:194)
[0779] GCUCUGCCGUGAUGAACUG(SEQ ID NO:195)
[0780] GGAACAACAACGAGAAAGA(SEQ ID NO:196)
[0781] GGAACACCCUCAUCAUCUA(SEQ ID NO:197)
[0782] GGAACUGCCUUUGUCAUCU(SEQ ID NO:198)
[0783] GGAAGAAAGUGGAGGGAAC(SEQ ID NO:199)
[0784] GGAAGAUCCGAGCCUACUA(SEQ ID NO:200)
[0785] GGAAGGAAUCAGAAUGAAC(SEQ ID NO:201)
[0786] GGAAUCAGAAUGAACAAAA(SEQ ID NO:202)
[0787] GGACAAAGUCGGCAAGUAC(SEQ ID NO:203)
[0788] GGACAAGGCCUGUGAGCCA(SEQ ID NO:204)
[0789] GGACAAGGUCUCACACUCU(SEQ ID NO:205)
[0790] GGACAGCAGCGCACGUUCA(SEQ ID NO:206)
[0791] GGACAUAUCCAUGAUGACU(SEQ ID NO:207)
[0792] GGACAUCAUUGCAGAAGAG(SEQ ID NO:208)
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[0795] GGACGGUCAUGGUCAACAU(SEQ ID NO:211)
[0796] GGAGAAGCGAAUGGACAAA(SEQ ID NO:212)
[0797] GGAGAAUUGCUUCAUACAA(SEQ ID NO:213)
[0798] GGAGAGAAGCCCAACCUCA(SEQ ID NO:214)
[0799] GGAGGGAACUGCCUUUGUC(SEQ ID NO:215)
[0800] GGAGUAACCUGGAUGAGGA(SEQ ID NO:216)
[0801] GGAUGACUGUCUAGCUUUC(SEQ ID NO:217)
[0802] GGAUGCCACUAUGUCUAUA(SEQ ID NO:218)
[0803] GGAUUACGCCGGUGUCUUC(SEQ ID NO:219)
[0804] GGCAGAACCAAGAGCUCAA(SEQ ID NO:220)
[0805] GGCAGCAGAUGACCCUGAA(SEQ ID NO:221)
[0806] GGCCAAUGGUGUUGACAGA(SEQ ID NO:222)
[0807] GGCCUCUUCUUAACAAAUU(SEQ ID NO:223)
[0808] GGCUCAAUGAACAGAGAUA(SEQ ID NO:224)
[0809] GGGAAGAAAGUGGAGGGAA(SEQ ID NO:225)
[0810] GGGAGACCCUCAACGUCAA(SEQ ID NO:226)
[0811] GGUCAUCGCUGUGCAUUAC(SEQ ID NO:227)
[0812] GGUCUUCUCCACUGAGUUU(SEQ ID NO:228)
[0813] GUAAGCAGCUCUACAACGU(SEQ ID NO:229)
[0814] GUAAUAAAUUCGACCUCAA(SEQ ID NO:230)
[0815] GUGAAGGAGUGCAGAAAGA(SEQ ID NO:231)
[0816] GUGACAAUGUACCAUGCUA(SEQ ID NO:232)
[0817] GUGACAUGGUGCAGGCAGA(SEQ ID NO:233)
[0818] GUGCAUUACCUGGAUGAAA(SEQ ID NO:234)
[0819] GUGCUGAAUAAGAAGAACA(SEQ ID NO:235)
[0820] GUGGGCAACUCCAACAAUU(SEQ ID NO:236)
[0821] GUUCACCAAUACUUUAAUG(SEQ ID NO:237)
[0822] UCAACUCACCUGUAAUAAA(SEQ ID NO:238)
[0823] UCAAUGAACAGAGAUACUA(SEQ ID NO:239)
[0824] UCACAGUAAUGCAGGACUU(SEQ ID NO:240)
[0825] UCACCAAGACACCCAAGUA(SEQ ID NO:241)
[0826] UCAGAAGAGACCAAGGAAA(SEQ ID NO:242)
[0827] UCUACGAAGCUCAUGAAUA(SEQ ID NO:243)
[0828] UCUGGGACGUGGUGGAGAA(SEQ ID NO:244)
[0829] UGAAGCAGCUGGCCAAUGG(SEQ ID NO:245)
[0830] UGAAGCUGGAGGAGAAGAA(SEQ ID NO:246)
[0831] UGACAAUGUACCAUGCUAA(SEQ ID NO:247)
[0832] UGACCACAGCCAAAGAUAA(SEQ ID NO:248)
[0833] UGAGGAGAAUUGCUUCAUA(SEQ ID NO:249)
[0834] UGCAGGAAGUGGAAGUCAA(SEQ ID NO:250)
[0835] UGCUAAGGCCAAAGAUCAA(SEQ ID NO:251)
[0836] UGGAAGAACGGCUGGACAA(SEQ ID NO:252)
[0837] UGGCUUUGCUCCAGACACA(SEQ ID NO:253)
[0838] UGUGGAACGUUGAGGACUU(SEQ ID NO:254)
[0839] UUUCAAAGUUCACCAAUAC(SEQ ID NO:255)
[0840] AAUCCGAGCCGUUCUCUACAA(SEQ ID NO:256)
[0841] AACAAGCUCUGCCGUGAUGAA(SEQ ID NO:257)
[0842] AAUGGACAAAGUCGGCAAGUA(SEQ ID NO:258)
[0843] AACUACAUGAACCUACAGAGA(SEQ ID NO:259)
[0844] AAAAAGCGGCCAGUCAGAAGA(SEQ ID NO:260)
[0845] AAUGAUUGGUGGAUUACGGAA(SEQ ID NO:261)
[0846] AAGUCCUCGUUGUCCGUUCCA(SEQ ID NO:262)
[0847] AAAUGAUUGGUGGAUUACGGA(SEQ ID NO:263)
[0848] AAUUACCGGCAGAACCAAGAG(SEQ ID NO:264)
[0849] AAAUGGAAUCUCUACGAAGCU(SEQ ID NO:265)
[0850] AAUGAACAGAGAUACUACGGU(SEQ ID NO:266)
[0851] AAGCCUUGGCUCAAUACCAAA(SEQ ID NO:267)
[0852] AAGCGCAUUCCGAUUGAGGAU(SEQ ID NO:268)
[0853] AAUGGAAUCUCUACGAAGCUC(SEQ ID NO:269)
[0854] AACCUCAUCGCCAUCGACUCC(SEQ ID NO:270)
[0855] INAA可以进一步包含与反义链完全或基本上互补的有义链。所述有义链可以包含任何以上序列的至少10、11、12、13、14、15、16、17、18或19个连续核苷酸。
[0856] 在一些实施方案中，抑制C3表达的INAA包含与任何前述序列相差1、2或3个核苷酸的反义链。INAA可以进一步包含与反义链互补的有义链。所述有义链可以包含任何以上序
列的至少10、11、12、13、14、15、16、17、18或19个连续核苷酸。包含所述反义链和有义链的INAA可以包含本文所述的任何构象、修饰和/或修饰模式。例如，INAA可以包含一个或多个突出端，可以包含一个或多个非磷酸二酯键，可以包含交替修饰基序，可以包含在三个连续核苷酸上包含一个或多个具有三个相同修饰的基序的链，等等。在某些实施方案中，此类反义链和有义链在例如其3'末端延伸至大于21个核苷酸的长度，例如足够长以用作切丁酶底
物短干扰RNA。反义链中的额外核苷酸可以与靶C3 mRNA互补。在一些实施方案中，进一步考虑使用所述反义序列作为ss siRNA。
列的至少10、11、12、13、14、15、16、17、18或19个连续核苷酸。包含所述反义链和有义链的INAA可以包含本文所述的任何构象、修饰和/或修饰模式。例如，INAA可以包含一个或多个突出端，可以包含一个或多个非磷酸二酯键，可以包含交替修饰基序，可以包含在三个连续核苷酸上包含一个或多个具有三个相同修饰的基序的链，等等。在某些实施方案中，此类反义链和有义链在例如其3'末端延伸至大于21个核苷酸的长度，例如足够长以用作切丁酶底
物短干扰RNA。反义链中的额外核苷酸可以与靶C3 mRNA互补。在一些实施方案中，进一步考虑使用所述反义序列作为ss siRNA。
[0857] 必要时，可以利用本领域已知的软件包和指南来鉴定C3 RNA的其它可以适合作为任何特定类型的INAA的靶区域的部分和/或设计靶向这些靶部分的INAA。用于选择siRNA靶
区域和siRNA反义链和有义链序列的合适软件包的实例是siDirect 2.0(可从http://
siDirect2.RNAi.jp/获得)，其鉴定满足Ui-Tei等人,Nucleic Acids Res.32,936-948
(2004)；Reynolds等人,Nat.Biotechnol.22,326-330(2004)；Amarzguioui等人,BBRC 316,
1050-1058(2004)或其组合中所述的siRNA设计规则的靶部分和siRNA链。可以使用的其它
计算机程序和算法描述于美国专利申请公开号20080090997中。在一些实施方案中，可以选择特定的期望尺寸(例如，8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、
27、28或29个核苷酸)并扫描靶RNA序列以鉴定满足所选指南以用作靶部分的那种大小的序
列。通过这种方式，可以鉴定符合特定指南集的特定尺寸的完整潜在靶部分集。可以合成并测试靶向所鉴定序列的INAA(使用如本文所述或本领域已知的分析)以鉴定当用INAA靶向
时，产生所期望的靶基因表达抑制程度和/或如所期望般没有脱靶效应的那些靶部分。
区域和siRNA反义链和有义链序列的合适软件包的实例是siDirect 2.0(可从http://
siDirect2.RNAi.jp/获得)，其鉴定满足Ui-Tei等人,Nucleic Acids Res.32,936-948
(2004)；Reynolds等人,Nat.Biotechnol.22,326-330(2004)；Amarzguioui等人,BBRC 316,
1050-1058(2004)或其组合中所述的siRNA设计规则的靶部分和siRNA链。可以使用的其它
计算机程序和算法描述于美国专利申请公开号20080090997中。在一些实施方案中，可以选择特定的期望尺寸(例如，8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、
27、28或29个核苷酸)并扫描靶RNA序列以鉴定满足所选指南以用作靶部分的那种大小的序
列。通过这种方式，可以鉴定符合特定指南集的特定尺寸的完整潜在靶部分集。可以合成并测试靶向所鉴定序列的INAA(使用如本文所述或本领域已知的分析)以鉴定当用INAA靶向
时，产生所期望的靶基因表达抑制程度和/或如所期望般没有脱靶效应的那些靶部分。
[0858] 在一些实施方案中，本文所述的任何反义序列，例如，美国公开‘124的表5和6中所示的反义序列或其序列变体中的任一个，可以经过修饰以符合适合于通过翻译抑制或核糖核酸酶H介导的降解进行ASO操作的设计原则。在一些实施方案中，美国公开'124的表5和6
中所示的任何反义序列都可以经过修饰以符合适合于ss siRNA的设计原则。
中所示的任何反义序列都可以经过修饰以符合适合于ss siRNA的设计原则。
[0859] 在一些实施方案中，INAA与一个或多个部分缀合或以其它方式物理缔合，所述一个或多个部分调节，例如，增强INAA的活性、稳定性、细胞分布或细胞摄取，和/或改变INAA的一种或多种物理性质，例如电荷或溶解性。在某些实施方案中，一个部分改变其所掺入的INAA的分布、靶向或寿命。在一些实施方案中，相比于例如没有这样的部分的物种而言，一个部分提供增强的针对所选靶标的亲和力，所述靶标例如分子、细胞类型、区室，例如，身体的细胞或器官区室、组织、器官或区域。所述部分通常既不参与也不破坏双链核酸中的双链配对。部分可以包含抗体或配体。配体可以是碳水化合物、凝集素、蛋白质、糖蛋白、脂质、胆固醇、类固醇、胆汁酸、核酸激素、生长因子或受体。在一些实施方案中，可以使用天然存在的激素、生长因子或其它配体的生物学上无活性的变体。在一些实施方案中，所述部分包含靶向部分，所述靶向部分将INAA靶向特定细胞类型，例如肝细胞。在一些实施方案中，靶向部分与肝细胞特异性去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)结合。
[0860] 在一些实施方案中，部分通过可逆连接与INAA连接。“可逆连接”是包含可逆键的连接。“可逆键”(也被称为不稳定键或可裂解键)是除了与氢原子的共价键之外的共价键，其在选定条件下能够比分子中的其它键更快地选择性地断裂或裂解，所述键能够在基本上不会断裂或裂解同一分子中的其它共价键的条件下被选择性地断裂或裂解。键的裂解或不
稳定性可以用键裂解的半衰期(t1/2)(一半键裂解所需的时间)来描述。除非另有说明，否
则本文中感兴趣的可逆键是“生理上可逆的键”，这意味着所述键在通常哺乳动物体内遇到的或类似于遇到的条件下是可裂解的。生理上可逆的连接是包含至少一个生理上可逆的键
的连接。在一些实施方案中，生理上可逆的键在哺乳动物细胞内条件下是可逆的，所述条件包括在哺乳动物细胞中发现的或与所发现的类似的化学条件，例如pH、温度、氧化或还原条件或试剂以及盐浓度。哺乳动物细胞内条件还包括通常存在于哺乳动物细胞中的酶活性的
存在，例如来自蛋白水解酶或水解酶。酶不稳定键在体内被酶，例如细胞内酶裂解。pH不稳定键在小于或等于7.0的pH下裂解。在一些实施方案中，生理学键在靶细胞中或在选择用于模拟或代表细胞内条件的第一参考条件下比在哺乳动物受试者的血液、血浆或血清中或在
选择用于模拟或代表在哺乳动物受试者的血液、血浆或血清中发现的条件的第二参考条件
下裂解快至少10、50、100或更多倍，即键在靶细胞中或在第一参考条件下的t1/2比键在哺乳动物受试者的血液、血浆或血清中或在第二参考条件下的t1/2低至少10、50、100或更多倍。在一些实施方案中，生理上可逆的键在靶细胞或感兴趣的细胞区室中具有≤2小时的
t1/2。在一些实施方案中，生理上可逆的键在靶细胞或感兴趣的细胞区室中具有≤1小时或在一些实施方案中≤30分钟的t1/2。生理上可逆的键通常在细胞外足够稳定以使含有所述
键的试剂保持完整，但在进入靶细胞时裂解以释放出通过所述键保持在一起的试剂的两个
部分。在一些实施方案中，可逆连接在细胞外(例如，在血液中)足够稳定，使得其允许通过与靶细胞的可逆连接靶向治疗有益量的与靶向部分偶联的INAA，但是在进入靶细胞后被裂
解以从靶向部分中释放出INAA。可逆键和可逆连接以及其将部分与INAA缀合的用途的实例
描述于美国专利申请公开号20130281685和20150273081中。
稳定性可以用键裂解的半衰期(t1/2)(一半键裂解所需的时间)来描述。除非另有说明，否
则本文中感兴趣的可逆键是“生理上可逆的键”，这意味着所述键在通常哺乳动物体内遇到的或类似于遇到的条件下是可裂解的。生理上可逆的连接是包含至少一个生理上可逆的键
的连接。在一些实施方案中，生理上可逆的键在哺乳动物细胞内条件下是可逆的，所述条件包括在哺乳动物细胞中发现的或与所发现的类似的化学条件，例如pH、温度、氧化或还原条件或试剂以及盐浓度。哺乳动物细胞内条件还包括通常存在于哺乳动物细胞中的酶活性的
存在，例如来自蛋白水解酶或水解酶。酶不稳定键在体内被酶，例如细胞内酶裂解。pH不稳定键在小于或等于7.0的pH下裂解。在一些实施方案中，生理学键在靶细胞中或在选择用于模拟或代表细胞内条件的第一参考条件下比在哺乳动物受试者的血液、血浆或血清中或在
选择用于模拟或代表在哺乳动物受试者的血液、血浆或血清中发现的条件的第二参考条件
下裂解快至少10、50、100或更多倍，即键在靶细胞中或在第一参考条件下的t1/2比键在哺乳动物受试者的血液、血浆或血清中或在第二参考条件下的t1/2低至少10、50、100或更多倍。在一些实施方案中，生理上可逆的键在靶细胞或感兴趣的细胞区室中具有≤2小时的
t1/2。在一些实施方案中，生理上可逆的键在靶细胞或感兴趣的细胞区室中具有≤1小时或在一些实施方案中≤30分钟的t1/2。生理上可逆的键通常在细胞外足够稳定以使含有所述
键的试剂保持完整，但在进入靶细胞时裂解以释放出通过所述键保持在一起的试剂的两个
部分。在一些实施方案中，可逆连接在细胞外(例如，在血液中)足够稳定，使得其允许通过与靶细胞的可逆连接靶向治疗有益量的与靶向部分偶联的INAA，但是在进入靶细胞后被裂
解以从靶向部分中释放出INAA。可逆键和可逆连接以及其将部分与INAA缀合的用途的实例
描述于美国专利申请公开号20130281685和20150273081中。
[0861] 在一些实施方案中，部分包含蛋白质转导结构域(PTD)。蛋白质转导结构域是多肽或其部分，其促进连接至结构域的异源分子的摄取(这种异源分子可被称为“货物”)。作为肽的蛋白质转导结构域可以被称为细胞穿透肽(CPP)。许多蛋白质转导结构域/肽是本领域
已知的。PTD包括多种天然存在的或合成的富含精氨酸的肽。富含精氨酸的肽是含有至少
30％精氨酸残基的肽，例如至少40％、50％、60％或更多。PTD的实例包括TAT(至少氨基酸
49-56)、触角同源结构域(Antennopedia homeodomain)、HSV VP22以及聚精氨酸。此类肽可以是阳离子肽、疏水肽或两亲性肽，并且可以包括非标准氨基酸和/或各种修饰或变化，例如使用环状变换、反转、逆转、逆反转或肽模拟形式。PTD和货物的连接可以是共价的或非共价的。
已知的。PTD包括多种天然存在的或合成的富含精氨酸的肽。富含精氨酸的肽是含有至少
30％精氨酸残基的肽，例如至少40％、50％、60％或更多。PTD的实例包括TAT(至少氨基酸
49-56)、触角同源结构域(Antennopedia homeodomain)、HSV VP22以及聚精氨酸。此类肽可以是阳离子肽、疏水肽或两亲性肽，并且可以包括非标准氨基酸和/或各种修饰或变化，例如使用环状变换、反转、逆转、逆反转或肽模拟形式。PTD和货物的连接可以是共价的或非共价的。
[0862] 可以使用的示例性PTD描述于美国专利申请公开号20090093026、20090093425、20120142763、20150238516和20160215022中。PTD可以包含两个或更多个PTD(例如，2到10个PTD)，其可以相同或不同。PTD可以彼此直接连接或可以被连接部分分开，所述连接部分可以包含一个或多个氨基酸和/或一个或多个非氨基酸部分，例如烷基链或低聚乙二醇部
分。
分。
[0863] 在一些实施方案中，INAA包含阴离子电荷中和部分或与阴离子电荷中和部分物理缔合。阴离子电荷中和部分是指可以降低与其物理缔合的核酸的总净阴离子电荷的分子或
化学基团。一个或多个阴离子电荷中和分子或基团可以与核酸缔合，其中各自独立地有助
于阴离子电荷的减少和/或阳离子电荷的增加。电荷中和是指核酸的阴离子电荷相比于同
一个核酸在不存在阴离子电荷中和分子或基团的情况下减少、被中和或更具阳离子性。磷
酸二酯和/或硫代磷酸酯保护基是阴离子电荷中和基团的实例。因此，在一些实施方案中，INAA在一个或多个位置包含保护基，其降低含有带负电基团的骨架(例如，磷酸二酯或硫代磷酸酯骨架)的净阴离子电荷。INAA可以是如本文所述的RNAi试剂或ASO，条件是阴离子电
荷减少。在一些实施方案中，通过用生物可逆的磷酸三酯保护基合成来中和带负电荷的磷
酸二酯骨架，所述保护基通过细胞质硫酯酶的作用在细胞内转化为带电荷的磷酸二酯键，
产生具有生物活性以抑制表达的试剂，例如可以介导RNAi的siRNA。因此，这些有时被称为中性短干扰核糖核酸(siRNN)的试剂可以用作siRNA前药。应该理解，骨架不需要完全中和
(即不带电)。换句话说，并非所有磷酸酯基都需要被保护，尽管它们可以被保护。在一些实施方案中，5％至100％的磷酸酯基被保护，例如25％-50％或50％至75％或75％至100％。在某些实施方案中，保护一条或两条链上的至少5、6、7、8、9或10个磷酸酯基。有用的磷酸二酯和/或硫代磷酸酯保护基、其制造方法以及其在核酸中的用途(例如，用于产生RNAi试剂前
药)的实例描述于美国专利申请公开号20110294869、20090093425、20120142763和
20150238516中。例如，有用的生物可逆的磷酸三酯保护基是tBu-SATE(SATE＝S-酰基-2-硫代乙基)、羟基O-SATE、醛A-SATE和BMEG(S-异丁酰基2-(2-巯基乙氧基)乙氧基)。在某些实施方案中，保护基包含可用于连接例如PTD或靶向部分的部分的反应性官能团。在某些实施方案中，化学反应性醛A-SATE磷酸三酯保护基允许与含肼部分的有效缀合。在一些实施方
案中，siRNN或其它抑制性电荷中和的核酸具有蛋白质转导结构域，例如阳离子PTD，与其缀合或以其它方式与其物理缔合。不希望受任何理论束缚，负骨架电荷可以中和阳离子PTD，其可促进聚集和/或减少细胞递送。因此，中和负骨架电荷可以降低聚集倾向并改善细胞递送。因此，某些INAA组合使用PTD，例如TAT和poly-Arg，以及能够充当RNAi试剂前药的电荷中和的核酸。在一些实施方案中，可以合成靶向部分或包含PTD的部分以含有肼部分，肼部分可以在siRNN或电荷中和的ASO上的限定位置与醛A-SATE反应。在某些实施方案中，包含
PTD的部分包含HyNic-GG-(TAT)-PEG18-(TAT)-PEG18-(TAT)，其中TAT＝RKKRRQRRR并且
HyNic＝6-肼基烟酰胺(Hamil,A.S.等人Conjugation of Duplexed siRNN
Oligonucleotides with DD-HyNic Peptides for Cellular Delivery of RNAi
Triggers.Bio-protocol 6(7):e1782(2016))。在各种实施方案中，siRNN可以包含本文所
述的任何修饰。例如，在一些实施方案中，其可以含有2'糖修饰(例如，2'-F、2'-O-Me)。此外，siRNN可以具有本文所述的任何构象或修饰模式。
化学基团。一个或多个阴离子电荷中和分子或基团可以与核酸缔合，其中各自独立地有助
于阴离子电荷的减少和/或阳离子电荷的增加。电荷中和是指核酸的阴离子电荷相比于同
一个核酸在不存在阴离子电荷中和分子或基团的情况下减少、被中和或更具阳离子性。磷
酸二酯和/或硫代磷酸酯保护基是阴离子电荷中和基团的实例。因此，在一些实施方案中，INAA在一个或多个位置包含保护基，其降低含有带负电基团的骨架(例如，磷酸二酯或硫代磷酸酯骨架)的净阴离子电荷。INAA可以是如本文所述的RNAi试剂或ASO，条件是阴离子电
荷减少。在一些实施方案中，通过用生物可逆的磷酸三酯保护基合成来中和带负电荷的磷
酸二酯骨架，所述保护基通过细胞质硫酯酶的作用在细胞内转化为带电荷的磷酸二酯键，
产生具有生物活性以抑制表达的试剂，例如可以介导RNAi的siRNA。因此，这些有时被称为中性短干扰核糖核酸(siRNN)的试剂可以用作siRNA前药。应该理解，骨架不需要完全中和
(即不带电)。换句话说，并非所有磷酸酯基都需要被保护，尽管它们可以被保护。在一些实施方案中，5％至100％的磷酸酯基被保护，例如25％-50％或50％至75％或75％至100％。在某些实施方案中，保护一条或两条链上的至少5、6、7、8、9或10个磷酸酯基。有用的磷酸二酯和/或硫代磷酸酯保护基、其制造方法以及其在核酸中的用途(例如，用于产生RNAi试剂前
药)的实例描述于美国专利申请公开号20110294869、20090093425、20120142763和
20150238516中。例如，有用的生物可逆的磷酸三酯保护基是tBu-SATE(SATE＝S-酰基-2-硫代乙基)、羟基O-SATE、醛A-SATE和BMEG(S-异丁酰基2-(2-巯基乙氧基)乙氧基)。在某些实施方案中，保护基包含可用于连接例如PTD或靶向部分的部分的反应性官能团。在某些实施方案中，化学反应性醛A-SATE磷酸三酯保护基允许与含肼部分的有效缀合。在一些实施方
案中，siRNN或其它抑制性电荷中和的核酸具有蛋白质转导结构域，例如阳离子PTD，与其缀合或以其它方式与其物理缔合。不希望受任何理论束缚，负骨架电荷可以中和阳离子PTD，其可促进聚集和/或减少细胞递送。因此，中和负骨架电荷可以降低聚集倾向并改善细胞递送。因此，某些INAA组合使用PTD，例如TAT和poly-Arg，以及能够充当RNAi试剂前药的电荷中和的核酸。在一些实施方案中，可以合成靶向部分或包含PTD的部分以含有肼部分，肼部分可以在siRNN或电荷中和的ASO上的限定位置与醛A-SATE反应。在某些实施方案中，包含
PTD的部分包含HyNic-GG-(TAT)-PEG18-(TAT)-PEG18-(TAT)，其中TAT＝RKKRRQRRR并且
HyNic＝6-肼基烟酰胺(Hamil,A.S.等人Conjugation of Duplexed siRNN
Oligonucleotides with DD-HyNic Peptides for Cellular Delivery of RNAi
Triggers.Bio-protocol 6(7):e1782(2016))。在各种实施方案中，siRNN可以包含本文所
述的任何修饰。例如，在一些实施方案中，其可以含有2'糖修饰(例如，2'-F、2'-O-Me)。此外，siRNN可以具有本文所述的任何构象或修饰模式。
[0864] 在一些实施方案中，与INAA连接的部分包含碳水化合物。代表性碳水化合物包括单糖、二糖、三糖以及含有约4、5、6、7、8或9个单糖单元的寡糖。在某些实施方案中，碳水化合物包括半乳糖或半乳糖衍生物，例如半乳糖胺、N-甲酰基-半乳糖胺、N-乙酰半乳糖胺、N-丙酰基-半乳糖胺、N-正丁酰基-半乳糖胺以及N-异丁酰基半乳糖胺。在特别感兴趣的某些
实施方案中，半乳糖衍生物包含N-乙酰半乳糖胺(GalNAc)。在某些实施方案中，所述部分包含多个半乳糖或半乳糖衍生物，例如多个N-乙酰半乳糖胺部分，例如3个GalNAc部分。如本文所用，术语“半乳糖衍生物”包括半乳糖和半乳糖衍生物二者，半乳糖衍生物对去唾液酸糖蛋白受体的亲和力等于或大于半乳糖的亲和力。术语“半乳糖簇”是指包含至少2个彼此物理缔合，通常通过共价连接至另一个部分的半乳糖衍生物的结构。在一些实施方案中，半乳糖簇具有2-10个，例如6个；2-4个，例如3个末端半乳糖衍生物。末端半乳糖衍生物可以通过半乳糖衍生物的C-1碳连接至另一个部分。在一些实施方案中，两个或更多个，例如三个半乳糖衍生物连接至用作分支点并且可以连接至INAA的部分。在一些实施方案中，半乳糖
衍生物通过接头或隔离物连接至用作分支点的部分。在一些实施方案中，用作分支点的部
分可以通过接头或隔离物连接至INAA。接头或隔离物可以包含本文所述的任何接头或隔离
物。例如，在一些实施方案中，半乳糖衍生物通过包含酰胺、羰基、烷基、低聚乙二醇部分或其组合的接头或隔离物连接至分支点。在一些实施方案中，连接至每个半乳糖衍生物的接
头或隔离物是相同的。在一些实施方案中，半乳糖簇具有三个末端半乳糖胺或半乳糖胺衍
生物(例如，GalNAc)，其各自对去唾液酸糖蛋白受体具有亲和力。包含两个或更多个半乳糖衍生物的分子可被称为多价。包含三个半乳糖衍生物的分子可被称为三价。其中3个末端
GalNAc部分(例如，通过糖的C-1碳)连接至用作分支点的部分的结构可被称为三触角N-乙
酰半乳糖胺(GalNAc3)。在一些实施方案中，一个或多个包含半乳糖衍生物的单体单元可以位点特异性地并入INAA中。这种含有半乳糖衍生物的单体单元可以包含连接至核苷或非核
苷部分的半乳糖衍生物，例如GalNac。在一些实施方案中，至少3个核苷-GalNAc单体或至少
3个非核苷-GalNAc单体位点特异性地并入INAA中。在一些实施方案中，这种并入可以在固
相合成期间使用亚磷酰胺化学或通过合成后缀合发生。在一些实施方案中，含有半乳糖衍
生物的单体单元通过磷酸二酯键彼此连接和/或连接至未连接有半乳糖衍生物的INAA的核
苷。在一些实施方案中，2、3或更多个含有半乳糖衍生物的单体单元连续排列，即，不插入任何不含半乳糖衍生物的单元。在一些实施方案中，碳水化合物，例如半乳糖簇，例如三触角N-乙酰半乳糖胺或两个或更多个含GalNac的单体单元，存在于链的末端，例如，ds RNAi试剂的有义链的3'末端或ASO的5'末端。示例性碳水化合物(例如，半乳糖簇)、含有半乳糖衍生物的单体单元、碳水化合物修饰的INAA以及其制造和使用方法描述于以下各者中：美国
专利申请公开号20090203135、20090239814、20110207799、20120157509、20150247143、美国公开'124；Nair,JK等人,J.Am.Chem.Soc.136,16958-16961(2014)；Matsuda,S.等人,ACS Chem.Biol.10,1181-1187(2015)；Rajeev,K.等人,ChemBioChem 16,903-908(2015)；
Migawa,MT.等人,Bioorg Med Chem Lett.26(9):2194-7(2016)；Prakash,TP等人,JMed
Chem.59(6):2718-33(2016)。示例性半乳糖簇如下所描绘。
实施方案中，半乳糖衍生物包含N-乙酰半乳糖胺(GalNAc)。在某些实施方案中，所述部分包含多个半乳糖或半乳糖衍生物，例如多个N-乙酰半乳糖胺部分，例如3个GalNAc部分。如本文所用，术语“半乳糖衍生物”包括半乳糖和半乳糖衍生物二者，半乳糖衍生物对去唾液酸糖蛋白受体的亲和力等于或大于半乳糖的亲和力。术语“半乳糖簇”是指包含至少2个彼此物理缔合，通常通过共价连接至另一个部分的半乳糖衍生物的结构。在一些实施方案中，半乳糖簇具有2-10个，例如6个；2-4个，例如3个末端半乳糖衍生物。末端半乳糖衍生物可以通过半乳糖衍生物的C-1碳连接至另一个部分。在一些实施方案中，两个或更多个，例如三个半乳糖衍生物连接至用作分支点并且可以连接至INAA的部分。在一些实施方案中，半乳糖
衍生物通过接头或隔离物连接至用作分支点的部分。在一些实施方案中，用作分支点的部
分可以通过接头或隔离物连接至INAA。接头或隔离物可以包含本文所述的任何接头或隔离
物。例如，在一些实施方案中，半乳糖衍生物通过包含酰胺、羰基、烷基、低聚乙二醇部分或其组合的接头或隔离物连接至分支点。在一些实施方案中，连接至每个半乳糖衍生物的接
头或隔离物是相同的。在一些实施方案中，半乳糖簇具有三个末端半乳糖胺或半乳糖胺衍
生物(例如，GalNAc)，其各自对去唾液酸糖蛋白受体具有亲和力。包含两个或更多个半乳糖衍生物的分子可被称为多价。包含三个半乳糖衍生物的分子可被称为三价。其中3个末端
GalNAc部分(例如，通过糖的C-1碳)连接至用作分支点的部分的结构可被称为三触角N-乙
酰半乳糖胺(GalNAc3)。在一些实施方案中，一个或多个包含半乳糖衍生物的单体单元可以位点特异性地并入INAA中。这种含有半乳糖衍生物的单体单元可以包含连接至核苷或非核
苷部分的半乳糖衍生物，例如GalNac。在一些实施方案中，至少3个核苷-GalNAc单体或至少
3个非核苷-GalNAc单体位点特异性地并入INAA中。在一些实施方案中，这种并入可以在固
相合成期间使用亚磷酰胺化学或通过合成后缀合发生。在一些实施方案中，含有半乳糖衍
生物的单体单元通过磷酸二酯键彼此连接和/或连接至未连接有半乳糖衍生物的INAA的核
苷。在一些实施方案中，2、3或更多个含有半乳糖衍生物的单体单元连续排列，即，不插入任何不含半乳糖衍生物的单元。在一些实施方案中，碳水化合物，例如半乳糖簇，例如三触角N-乙酰半乳糖胺或两个或更多个含GalNac的单体单元，存在于链的末端，例如，ds RNAi试剂的有义链的3'末端或ASO的5'末端。示例性碳水化合物(例如，半乳糖簇)、含有半乳糖衍生物的单体单元、碳水化合物修饰的INAA以及其制造和使用方法描述于以下各者中：美国
专利申请公开号20090203135、20090239814、20110207799、20120157509、20150247143、美国公开'124；Nair,JK等人,J.Am.Chem.Soc.136,16958-16961(2014)；Matsuda,S.等人,ACS Chem.Biol.10,1181-1187(2015)；Rajeev,K.等人,ChemBioChem 16,903-908(2015)；
Migawa,MT.等人,Bioorg Med Chem Lett.26(9):2194-7(2016)；Prakash,TP等人,JMed
Chem.59(6):2718-33(2016)。示例性半乳糖簇如下所描绘。
[0865]
[0866]
[0867] Dfdf
[0868]
[0869] 本领域普通技术人员理解，将每个GalNac连接至分支点的连接部分的结构可以变化。
[0870] 在一些实施方案中，INAA与配体缀合，如下所描绘。
[0871]
[0872] 并且，其中X是O或S。在大多数实施方案中，X是O。本领域普通技术人员将理解，将半乳糖簇连接至磷酸酯基的连接部分的结构可以变化。
[0873] 在某些实施方案中，所述部分包含亲脂性部分。在一些实施方案中，亲脂性部分包含生育酚，例如α-生育酚。在一些实施方案中，亲脂性部分包含胆固醇。在一些实施方案中，亲脂性化合物包含烷基或杂烷基。在一些实施方案中，亲脂性化合物包含棕榈酰基、十六碳-8-烯酰基、油烯基、(9E,12E)-十八碳-9,12-二烯酰基、二辛酰基或C16-C20酰基。在一些实施方案中，亲脂性部分包含至少16个碳原子。在一些实施方案中，亲脂性部分包含-
(CH)n-NH-(C＝O)-(CH)m-CH3。在一些实施方案中，n和m各自独立地在1和20之间。在一些实施方案中，n+m至少是10、12、14或16。在一些实施方案中，亲脂性部分如下所示和/或连接至如下所示的糖部分。
(CH)n-NH-(C＝O)-(CH)m-CH3。在一些实施方案中，n和m各自独立地在1和20之间。在一些实施方案中，n+m至少是10、12、14或16。在一些实施方案中，亲脂性部分如下所示和/或连接至如下所示的糖部分。
[0874]
[0875] 通常，部分可以连接在INAA的末端或内部亚基上。在一些实施方案中，部分连接至INAA的修饰的亚基。本领域普通技术人员知道制备具有与其缀合的部分的核酸的合适方法。包含含有反应性官能团的修饰的核苷酸的核酸链可以与包含第二反应性官能团的部分
反应，其中第一和第二反应性官能团能够在与维持核酸链的结构相容的条件下彼此反应。
在一些实施方案中，在链分别与互补反义链或有义链杂交之前，可以将部分连接至有义链
或反义链。在一些实施方案中，可以在并入部分之前使链杂交以形成双链体。通常，可以使用本文描述的各种缀合方法。参见例如，Hermanson，出处同上。
反应，其中第一和第二反应性官能团能够在与维持核酸链的结构相容的条件下彼此反应。
在一些实施方案中，在链分别与互补反义链或有义链杂交之前，可以将部分连接至有义链
或反义链。在一些实施方案中，可以在并入部分之前使链杂交以形成双链体。通常，可以使用本文描述的各种缀合方法。参见例如，Hermanson，出处同上。
[0876] 在一些实施方案中，INAA是嵌合的INAA。如本文所用的“嵌合的”INAA是含有两个或更多个化学上不同区域的INAA，每个区域由至少一个单体单元构成，其中所述区域赋予化合物不同的性质。在一些实施方案中，修饰至少一个区域以赋予INAA增加的对核酸酶降
解的抗性、增加的细胞摄取和/或增加的对靶核酸的结合亲和力，并且INAA的至少一个另外的区域可以用作能够切割RNA:DNA或RNA:RNA杂交体的酶(例如核糖核酸酶H)的底物。在一
些实施方案中，INAA的至少一个区域可以用作能够切割RNA:DNA或RNA:RNA杂交体的酶(例
如核糖核酸酶H)的底物并且至少一个区域可以通过空间阻断抑制翻译。
解的抗性、增加的细胞摄取和/或增加的对靶核酸的结合亲和力，并且INAA的至少一个另外的区域可以用作能够切割RNA:DNA或RNA:RNA杂交体的酶(例如核糖核酸酶H)的底物。在一
些实施方案中，INAA的至少一个区域可以用作能够切割RNA:DNA或RNA:RNA杂交体的酶(例
如核糖核酸酶H)的底物并且至少一个区域可以通过空间阻断抑制翻译。
[0877] 可以按多种不同方式实现INAA向细胞的递送。体内递送可以通过向受试者施用包含INAA的组合物来进行，例如通过肠胃外施用途径，例如皮下或静脉内或肌肉内施用。
[0878] 在一些实施方案中，INAA与递送试剂缔合。“递送试剂”是指与生物活性剂(例如，INAA)非共价或共价缔合或与INAA共同施用并具有一种或多种功能的物质或实体，所述功能为增加生物活性剂的稳定性和/或功效，使稳定性和/或功效超过了在不存在递送试剂的
情况下递送生物活性剂(例如，施用于受试者)时所产生的稳定性和/或功效。例如，递送试剂可以保护INAA免于降解(例如，在血液中)，可以促进INAA进入细胞或进入感兴趣的细胞
区室(例如，细胞质)，和/或可以增强与含有待调节的分子靶标的特定细胞的结合。本领域普通技术人员知道许多可用于递送INAA，例如siRNA的递送试剂。有关这些技术中的一些的综述，参见Kanasty,R.等人Nat Mater.12(11):967-77(2013)。在一些实施方案中，例如，为了全身施用INAA，INAA可以与递送试剂缔合，递送试剂例如纳米颗粒、树枝状聚合物、聚合物、脂质体或阳离子递送系统。不希望受任何理论的束缚，认为带正电荷的阳离子递送系统促进带负电荷的INAA的结合，并且还增强带负电荷的细胞膜上的相互作用，以允许细胞有
效摄取INAA。阳离子脂质、树枝状聚合物或聚合物可以与INAA结合或可以形成包封INAA的
囊泡或胶束。制造和施用包含阳离子试剂和INAA的复合物的方法是本领域已知的。在一些
实施方案中，特别考虑使用美国公开'124中所述的任何递送试剂。在一些实施方案中，INAA与环糊精形成复合物用于全身施用。在一些实施方案中，INAA与脂质或含脂质颗粒联合施
用。在一些实施方案中，INAA与阳离子聚合物(其可以是多肽或非多肽聚合物)、脂质、肽、PEG、环糊精或其组合联合施用，其可以呈纳米颗粒或微粒形式。脂质或肽可以是阳离子的。
“纳米颗粒”是指二维或三维长度大于1纳米(nm)且小于约150nm，例如20nm-50nm或50nm-
100nm的颗粒。“微粒”是指二维或三维长度大于150nm且小于约1000nm的颗粒。纳米颗粒可以具有与其共价或非共价连接的靶向部分和/或细胞穿透部分或膜活性部分。示例性递送
试剂、制造方法以及在INAA递送中的用途描述于美国专利号7,427,605；8,158,601；9,012,
498；9,415,109；9,062,021；9,402,816中。在一些实施方案中，考虑使用本领域已知为“智能颗粒(Smarticles)”的递送技术。在一些实施方案中，考虑使用本领域已知为“稳定核酸脂质颗粒”(SNALP)的递送技术，其中待递送的核酸被包封在脂质双层中，所述脂质双层含有阳离子脂质和融合脂质的混合物，所述融合脂质还包被有可扩散的聚乙二醇-脂质(PEG-
脂质)缀合物，其提供中性亲水外部。
情况下递送生物活性剂(例如，施用于受试者)时所产生的稳定性和/或功效。例如，递送试剂可以保护INAA免于降解(例如，在血液中)，可以促进INAA进入细胞或进入感兴趣的细胞
区室(例如，细胞质)，和/或可以增强与含有待调节的分子靶标的特定细胞的结合。本领域普通技术人员知道许多可用于递送INAA，例如siRNA的递送试剂。有关这些技术中的一些的综述，参见Kanasty,R.等人Nat Mater.12(11):967-77(2013)。在一些实施方案中，例如，为了全身施用INAA，INAA可以与递送试剂缔合，递送试剂例如纳米颗粒、树枝状聚合物、聚合物、脂质体或阳离子递送系统。不希望受任何理论的束缚，认为带正电荷的阳离子递送系统促进带负电荷的INAA的结合，并且还增强带负电荷的细胞膜上的相互作用，以允许细胞有
效摄取INAA。阳离子脂质、树枝状聚合物或聚合物可以与INAA结合或可以形成包封INAA的
囊泡或胶束。制造和施用包含阳离子试剂和INAA的复合物的方法是本领域已知的。在一些
实施方案中，特别考虑使用美国公开'124中所述的任何递送试剂。在一些实施方案中，INAA与环糊精形成复合物用于全身施用。在一些实施方案中，INAA与脂质或含脂质颗粒联合施
用。在一些实施方案中，INAA与阳离子聚合物(其可以是多肽或非多肽聚合物)、脂质、肽、PEG、环糊精或其组合联合施用，其可以呈纳米颗粒或微粒形式。脂质或肽可以是阳离子的。
“纳米颗粒”是指二维或三维长度大于1纳米(nm)且小于约150nm，例如20nm-50nm或50nm-
100nm的颗粒。“微粒”是指二维或三维长度大于150nm且小于约1000nm的颗粒。纳米颗粒可以具有与其共价或非共价连接的靶向部分和/或细胞穿透部分或膜活性部分。示例性递送
试剂、制造方法以及在INAA递送中的用途描述于美国专利号7,427,605；8,158,601；9,012,
498；9,415,109；9,062,021；9,402,816中。在一些实施方案中，考虑使用本领域已知为“智能颗粒(Smarticles)”的递送技术。在一些实施方案中，考虑使用本领域已知为“稳定核酸脂质颗粒”(SNALP)的递送技术，其中待递送的核酸被包封在脂质双层中，所述脂质双层含有阳离子脂质和融合脂质的混合物，所述融合脂质还包被有可扩散的聚乙二醇-脂质(PEG-
脂质)缀合物，其提供中性亲水外部。
[0879] 在一些实施方案中，递送试剂包含一种或多种氨基醇阳离子脂质，例如美国专利号9,044,512中所述的那些。
[0880] 在一些实施方案中，递送试剂包含一种或多种氨基酸脂质。氨基酸脂质是含有氨基酸残基(例如，精氨酸、高精氨酸、去甲精氨酸、去甲-去甲精氨酸、鸟氨酸、赖氨酸、高赖氨酸、组氨酸、1-甲基组氨酸、吡啶丙氨酸、天冬酰胺、N-乙基天冬酰胺、谷氨酰胺、4-氨基苯丙氨酸、其N-甲基化形式以及其侧链修饰的衍生物)和一个或多个亲脂性尾部的分子。示例性氨基酸脂质及其用于递送核酸的用途描述于美国专利申请公开号20110117125和美国专利
号8,877,729、9,139,554和9,339,461中。在一些实施方案中，可以使用膜裂解聚(氨基胺)聚合物和聚缀合物，例如美国专利申请公开号20130289207中所述的那些。在一些实施方案中，递送试剂包含脂肽化合物，所述脂肽化合物包含中心肽并且在每个末端连接有亲脂基
团。在一些实施方案中，亲脂基团可以衍生自天然存在的脂质。在一些实施方案中，亲脂基团可以包含C(1-22)烷基、C(6-12)环烷基、C(6-12)环烷基-烷基、C(3-18)烯基、C(3-18)炔基、C(1-5)烷氧基-C(1-5)烷基、或二氢鞘氨醇或(2R,3R)-2-氨基-1,3-十八烷二醇、二十碳鞘氨醇烷(icosasphinganine)、鞘氨醇、植物鞘氨醇或顺式-4-鞘氨醇。中心肽可以包含阳离子或两亲性氨基酸序列。此类脂肽和其用于递送核酸的用途的实例描述于美国专利号9,
220,785中。
号8,877,729、9,139,554和9,339,461中。在一些实施方案中，可以使用膜裂解聚(氨基胺)聚合物和聚缀合物，例如美国专利申请公开号20130289207中所述的那些。在一些实施方案中，递送试剂包含脂肽化合物，所述脂肽化合物包含中心肽并且在每个末端连接有亲脂基
团。在一些实施方案中，亲脂基团可以衍生自天然存在的脂质。在一些实施方案中，亲脂基团可以包含C(1-22)烷基、C(6-12)环烷基、C(6-12)环烷基-烷基、C(3-18)烯基、C(3-18)炔基、C(1-5)烷氧基-C(1-5)烷基、或二氢鞘氨醇或(2R,3R)-2-氨基-1,3-十八烷二醇、二十碳鞘氨醇烷(icosasphinganine)、鞘氨醇、植物鞘氨醇或顺式-4-鞘氨醇。中心肽可以包含阳离子或两亲性氨基酸序列。此类脂肽和其用于递送核酸的用途的实例描述于美国专利号9,
220,785中。
[0881] “掩蔽部分”意指当与另一种试剂(例如聚合物)物理缔合时，屏蔽、抑制或灭活所述试剂的一种或多种性质(生物物理或生物化学特征)或活性的分子或基团。掩蔽部分可以共价或非共价连接到试剂上。掩蔽部分可以是可逆的，这意味着它通过可逆连接与其所掩
蔽的试剂连接。如本领域普通技术人员所理解的，足够数量的掩蔽部分与待掩蔽的试剂连
接以达到所期望的灭活水平。
蔽的试剂连接。如本领域普通技术人员所理解的，足够数量的掩蔽部分与待掩蔽的试剂连
接以达到所期望的灭活水平。
[0882] 在一些实施方案中，INAA与作为聚合物的递送试剂缀合。有用的递送聚合物包括例如聚(丙烯酸酯)聚合物(参见例如美国专利公开号20150104408)、聚(乙烯基酯)聚合物
(参见例如美国专利公开号20150110732)和某些多肽。在一些实施方案中，递送聚合物是可逆掩蔽的膜活性聚合物。在一些实施方案中，INAA或聚合物或二者具有与其缀合的靶向部
分。在一些实施方案中，INAA或INAA靶向部分缀合物与递送聚合物共同施用，但不与聚合物缀合。在此上下文中“共同施用”意指将INAA和递送聚合物施用于受试者，使得它们在重叠时间段内存在于受试者中。INAA靶向部分缀合物和递送聚合物可以同时施用或者它们可以
依序递送。对于同时施用，可以在施用前将其混合。对于依序施用，可以首先施用INAA或递送聚合物。INAA和递送聚合物可以在同一个组合物中施用，或者可以在时间上足够靠近地
分开施用，使得相对于在不施用聚合物的情况下发生的细胞质递送，INAA向细胞的细胞质
递送增强。在一些实施方案中，INAA和递送聚合物的施用间隔不超过15分钟、30分钟、60分钟或120分钟。在一些实施方案中，递送聚合物是靶向的、可逆掩蔽的膜活性聚合物。聚合物具有与其连接的靶向部分，其将聚合物靶向需要增强INAA的细胞质递送的细胞。INAA可以
靶向相同的细胞，任选地使用相同的靶向部分，即INAA可以作为INAA靶向部分缀合物施用。
如本文所用，膜活性聚合物是表面活性的两亲性聚合物，其能够在生物膜上诱导一种或多
种以下作用：膜的改变或破坏，其允许非膜可渗透分子进入细胞或跨过膜；在膜中形成孔；
膜的分裂；或膜的破坏或溶解。如本文所用，膜或细胞膜包含脂质双层。膜的改变或破坏可以通过聚合物在至少一种以下分析中的活性从功能上定义：红血细胞裂解(溶血)、脂质体
渗漏、脂质体融合、细胞融合、细胞裂解以及内吞体释放。膜活性聚合物可以通过以下增强多核苷酸向细胞的递送：通过破坏或去稳定化质膜或内囊泡膜(例如内吞体或溶酶体)，例
如通过在膜中形成孔，或破坏内吞体或溶酶体囊泡，从而允许将囊泡内容物释放到细胞质
中。在一些实施方案中，靶向的可逆掩蔽的膜活性聚合物是内吞体溶解聚合物。内吞体溶解聚合物是这样的聚合物，其响应于pH的变化，能够引起内吞体的破坏或溶解，或者以其它方式提供从细胞内膜封入的囊泡，例如内吞体或溶酶体，释放正常细胞膜不可渗透的化合物，例如多核苷酸或蛋白质。在一些实施方案中，聚合物是可逆修饰的两亲性膜活性多胺，其中可逆修饰抑制膜活性，中和多胺以减少正电荷并形成近中性电荷聚合物。可逆修饰还可以
提供细胞类型特异性靶向和/或抑制聚合物的非特异性相互作用。通过对多胺上的胺的可
逆修饰，可以可逆地修饰多胺。可逆掩蔽的膜活性聚合物在被掩蔽时基本上不具有膜活性，但在暴露时变得具有膜活性。掩蔽部分通常通过生理上可逆的连接与膜活性聚合物共价结
合。通过使用生理上可逆的连接，掩蔽部分可以在体内从聚合物上裂解下来，从而暴露聚合物并恢复未掩蔽的聚合物的活性。通过选择合适的可逆连接，在缀合物已经递送或靶向至
所需细胞类型或细胞位置后，恢复膜活性聚合物的活性。连接的可逆性提供了膜活性聚合
物的选择性活化。生理上可逆的键在哺乳动物细胞内条件下是可逆的，所述条件包括在哺
乳动物细胞中发现的或与所发现的类似的化学条件，例如pH、温度、氧化或还原条件或试剂以及盐浓度。在一些实施方案中，靶向部分，例如ASGPR靶向部分，可以用作掩蔽部分。在一些实施方案中，ASGPR靶向部分具有与其缀合的亲脂性部分。示例性靶向部分(例如，ASGPR靶向部分)；生理上不稳定的键(例如，酶不稳定键、pH不稳定键)；掩蔽部分；膜活性聚合物(例如，内吞体溶解活性聚合物)；亲脂性部分；RNAi试剂-靶向部分缀合物；递送试剂-靶向部分缀合物；包含RNAi试剂、靶向部分和递送试剂的缀合物；以及将核酸递送至细胞(例如，肝细胞)的方法描述于以下美国专利申请公开号中：20130245091、20130317079、
20120157509、20120165393、20120172412、20120230938、20140135380、20140135381、
20150104408和20150110732。在一些实施方案中，INAA与蜂毒素(mellitin)肽共同施用，例如，如美国专利申请公开号20120165393中所述。INAA、蜂毒素肽或二者可以具有与其缀合的靶向部分，任选地通过可逆连接缀合。在一些实施方案中，掩蔽部分包含二肽-氨基苄基-碳酸酯或二取代的马来酸酐掩蔽部分，例如，如美国专利申请公开号20150110732中所述。
(参见例如美国专利公开号20150110732)和某些多肽。在一些实施方案中，递送聚合物是可逆掩蔽的膜活性聚合物。在一些实施方案中，INAA或聚合物或二者具有与其缀合的靶向部
分。在一些实施方案中，INAA或INAA靶向部分缀合物与递送聚合物共同施用，但不与聚合物缀合。在此上下文中“共同施用”意指将INAA和递送聚合物施用于受试者，使得它们在重叠时间段内存在于受试者中。INAA靶向部分缀合物和递送聚合物可以同时施用或者它们可以
依序递送。对于同时施用，可以在施用前将其混合。对于依序施用，可以首先施用INAA或递送聚合物。INAA和递送聚合物可以在同一个组合物中施用，或者可以在时间上足够靠近地
分开施用，使得相对于在不施用聚合物的情况下发生的细胞质递送，INAA向细胞的细胞质
递送增强。在一些实施方案中，INAA和递送聚合物的施用间隔不超过15分钟、30分钟、60分钟或120分钟。在一些实施方案中，递送聚合物是靶向的、可逆掩蔽的膜活性聚合物。聚合物具有与其连接的靶向部分，其将聚合物靶向需要增强INAA的细胞质递送的细胞。INAA可以
靶向相同的细胞，任选地使用相同的靶向部分，即INAA可以作为INAA靶向部分缀合物施用。
如本文所用，膜活性聚合物是表面活性的两亲性聚合物，其能够在生物膜上诱导一种或多
种以下作用：膜的改变或破坏，其允许非膜可渗透分子进入细胞或跨过膜；在膜中形成孔；
膜的分裂；或膜的破坏或溶解。如本文所用，膜或细胞膜包含脂质双层。膜的改变或破坏可以通过聚合物在至少一种以下分析中的活性从功能上定义：红血细胞裂解(溶血)、脂质体
渗漏、脂质体融合、细胞融合、细胞裂解以及内吞体释放。膜活性聚合物可以通过以下增强多核苷酸向细胞的递送：通过破坏或去稳定化质膜或内囊泡膜(例如内吞体或溶酶体)，例
如通过在膜中形成孔，或破坏内吞体或溶酶体囊泡，从而允许将囊泡内容物释放到细胞质
中。在一些实施方案中，靶向的可逆掩蔽的膜活性聚合物是内吞体溶解聚合物。内吞体溶解聚合物是这样的聚合物，其响应于pH的变化，能够引起内吞体的破坏或溶解，或者以其它方式提供从细胞内膜封入的囊泡，例如内吞体或溶酶体，释放正常细胞膜不可渗透的化合物，例如多核苷酸或蛋白质。在一些实施方案中，聚合物是可逆修饰的两亲性膜活性多胺，其中可逆修饰抑制膜活性，中和多胺以减少正电荷并形成近中性电荷聚合物。可逆修饰还可以
提供细胞类型特异性靶向和/或抑制聚合物的非特异性相互作用。通过对多胺上的胺的可
逆修饰，可以可逆地修饰多胺。可逆掩蔽的膜活性聚合物在被掩蔽时基本上不具有膜活性，但在暴露时变得具有膜活性。掩蔽部分通常通过生理上可逆的连接与膜活性聚合物共价结
合。通过使用生理上可逆的连接，掩蔽部分可以在体内从聚合物上裂解下来，从而暴露聚合物并恢复未掩蔽的聚合物的活性。通过选择合适的可逆连接，在缀合物已经递送或靶向至
所需细胞类型或细胞位置后，恢复膜活性聚合物的活性。连接的可逆性提供了膜活性聚合
物的选择性活化。生理上可逆的键在哺乳动物细胞内条件下是可逆的，所述条件包括在哺
乳动物细胞中发现的或与所发现的类似的化学条件，例如pH、温度、氧化或还原条件或试剂以及盐浓度。在一些实施方案中，靶向部分，例如ASGPR靶向部分，可以用作掩蔽部分。在一些实施方案中，ASGPR靶向部分具有与其缀合的亲脂性部分。示例性靶向部分(例如，ASGPR靶向部分)；生理上不稳定的键(例如，酶不稳定键、pH不稳定键)；掩蔽部分；膜活性聚合物(例如，内吞体溶解活性聚合物)；亲脂性部分；RNAi试剂-靶向部分缀合物；递送试剂-靶向部分缀合物；包含RNAi试剂、靶向部分和递送试剂的缀合物；以及将核酸递送至细胞(例如，肝细胞)的方法描述于以下美国专利申请公开号中：20130245091、20130317079、
20120157509、20120165393、20120172412、20120230938、20140135380、20140135381、
20150104408和20150110732。在一些实施方案中，INAA与蜂毒素(mellitin)肽共同施用，例如，如美国专利申请公开号20120165393中所述。INAA、蜂毒素肽或二者可以具有与其缀合的靶向部分，任选地通过可逆连接缀合。在一些实施方案中，掩蔽部分包含二肽-氨基苄基-碳酸酯或二取代的马来酸酐掩蔽部分，例如，如美国专利申请公开号20150110732中所述。
[0883] 在一些实施方案中，INAA可以“裸”形式施用，即在不存在递送试剂的情况下施用。裸INAA可以在合适的缓冲溶液中。缓冲溶液可以例如包含乙酸盐、柠檬酸盐、谷醇溶蛋白、碳酸盐或磷酸盐或其任何组合。在一些实施方案中，缓冲溶液是磷酸盐缓冲盐水(PBS)。可以调整缓冲溶液的pH和渗透压(osmolarity)，使其适合于对受试者施用。在一些实施方案
中，INAA不与脂质或含脂质颗粒物理缔合地施用。在一些实施方案中，INAA不与纳米颗粒或微粒物理缔合地施用。在一些实施方案中，INAA不与阳离子聚合物物理缔合地施用。在一些实施方案中，INAA不与环糊精物理缔合地施用。在一些实施方案中，以“裸”形式施用的INAA包含靶向部分。
中，INAA不与脂质或含脂质颗粒物理缔合地施用。在一些实施方案中，INAA不与纳米颗粒或微粒物理缔合地施用。在一些实施方案中，INAA不与阳离子聚合物物理缔合地施用。在一些实施方案中，INAA不与环糊精物理缔合地施用。在一些实施方案中，以“裸”形式施用的INAA包含靶向部分。
[0884] 在一些实施方案中，向受试者施用选定量的INAA。例如，所述量可以介于0.01mg/kg与50mg/kg之间。在一些实施方案中，INAA按约0.01mg/kg至约10mg/kg或约0.5mg/kg至约
15mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中，INAA按约10mg/kg至约30mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中，INAA按选自下组的剂量施用：0.5mg/kg、1mg/kg、1.5mg/kg、3mg/kg、5mg/kg、
10mg/kg以及30mg/kg。在一些实施方案中，所述量介于0.01mg/kg与0.1mg/kg之间、介于
0.01mg/kg与0.1mg/kg之间、介于0.1mg/kg与1.0mg/kg之间、介于1.0mg/kg与2.5mg/kg之
间、介于2.5mg/kg与5.0mg/kg之间、介于5.0mg/kg与10mg/kg之间、介于10mg/kg与20mg/kg之间、介于20mg/kg与30mg/kg之间、介于30mg/kg与40mg/kg之间或介于40mg/kg与50mg/kg
之间。在一些实施方案中，施用固定剂量。在一些实施方案中，剂量介于5mg与1.0g之间，例如介于5mg与10mg之间、介于10mg与20mg之间、介于20mg与40mg之间、介于40mg与80mg之间、介于80mg与160mg之间、介于160mg与320mg之间、介于320mg与640mg之间、介于640mg与1g之间。在一些实施方案中，剂量是约1mg、5mg、10mg、25mg、50mg、100mg、150mg、200mg、250mg、
300mg、350mg、400mg、450mg、500mg、600mg、700mg、800mg、900mg或1000mg。在一些实施方案中，剂量是日剂量。在一些实施方案中，剂量根据给药方案按至少2天，例如至少7天，例如约
2、3、4、6或8周的给药间隔施用。例如，在一些实施方案中，INAA根据给药方案按至少7天的给药间隔施用。
15mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中，INAA按约10mg/kg至约30mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中，INAA按选自下组的剂量施用：0.5mg/kg、1mg/kg、1.5mg/kg、3mg/kg、5mg/kg、
10mg/kg以及30mg/kg。在一些实施方案中，所述量介于0.01mg/kg与0.1mg/kg之间、介于
0.01mg/kg与0.1mg/kg之间、介于0.1mg/kg与1.0mg/kg之间、介于1.0mg/kg与2.5mg/kg之
间、介于2.5mg/kg与5.0mg/kg之间、介于5.0mg/kg与10mg/kg之间、介于10mg/kg与20mg/kg之间、介于20mg/kg与30mg/kg之间、介于30mg/kg与40mg/kg之间或介于40mg/kg与50mg/kg
之间。在一些实施方案中，施用固定剂量。在一些实施方案中，剂量介于5mg与1.0g之间，例如介于5mg与10mg之间、介于10mg与20mg之间、介于20mg与40mg之间、介于40mg与80mg之间、介于80mg与160mg之间、介于160mg与320mg之间、介于320mg与640mg之间、介于640mg与1g之间。在一些实施方案中，剂量是约1mg、5mg、10mg、25mg、50mg、100mg、150mg、200mg、250mg、
300mg、350mg、400mg、450mg、500mg、600mg、700mg、800mg、900mg或1000mg。在一些实施方案中，剂量是日剂量。在一些实施方案中，剂量根据给药方案按至少2天，例如至少7天，例如约
2、3、4、6或8周的给药间隔施用。例如，在一些实施方案中，INAA根据给药方案按至少7天的给药间隔施用。
[0885] 在一些实施方案中，INAA通过皮下注射施用。在一些实施方案中，INAA通过静脉内输注一段时间施用，例如约5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30分钟的一段时间或更长时间。可以定期重复施用，例如每周、两周一次(即每两周)、每四周、每月、每6周、每2个月、每3个月、每6个月等。可继续施用例如1、2、
3、4、5、6、8、12、18、24个月或更长时间。在一些实施方案中，在初始治疗期后，可以较不频繁地施用药剂。例如，在一些实施方案中，在每周或每两周一次地施用三个月后，可以每月一次重复施用，持续六个月或一年或更长时间。如果合适，剂量可以随时间改变。
3、4、5、6、8、12、18、24个月或更长时间。在一些实施方案中，在初始治疗期后，可以较不频繁地施用药剂。例如，在一些实施方案中，在每周或每两周一次地施用三个月后，可以每月一次重复施用，持续六个月或一年或更长时间。如果合适，剂量可以随时间改变。
[0886] 在某些实施方案中，在与表达C3的细胞，例如肝细胞接触后，如通过合适的分析法分析的，INAA抑制C3的表达至少约10％。合适的分析可以通过例如RNA印迹、PCR(例如，逆转录PCR，其可以是实时逆转录PCR，也被称为定量PCR)、基于分支DNA(bDNA)的方法或RNA-Seq来测定C3 RNA(例如，C3 mRNA)水平，或可以通过免疫学方法测定C3蛋白，例如蛋白质印迹法、免疫沉淀、用荧光标记的抗体染色后的荧光检测(例如，流式细胞术、光谱法、荧光显微术)、ELISA分析、蛋白质微阵列分析、珠阵列分析(例如Luminex xMAP技术或来自BD Biosciences的细胞珠阵列(CBA)系统)或使用特异性结合C3的非抗体配体的类似方法。替
代地或另外地，INAA抑制表达的能力可以使用合适的报告基因分析测定，例如美国专利申
请公开号20050042641中所述的那些，其中将报告基因编码序列与靶核酸序列融合并测定
报告基因的表达。可以替代地或另外地进行测定C3生物活性的分析。这类分析包括例如溶
血分析和末端补体复合物(TCC)形成的分析(例如，免疫分析)。TCC分析可以对TCC的第一组分(例如，TCC的C9环)使用第一抗体(例如，单克隆抗体)以捕获复合物。随后用第二抗体(例如，单克隆抗体)检测所捕获的TCC，第二抗体可以包含可检测的标记，其中第二抗体与
SC5b9复合物的不同抗原结合。在一些实施方案中，INAA的施用使受试者的例如细胞(例如
肝细胞)、组织、血液、尿液或其它区室中的C3水平降低了至少约10％、15％、20％、25％、
30％、35％、40％、45％、50％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、
65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、
80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、
95％、96％、97％、98％或至少约99％或更多。在一些实施方案中，INAA的施用使受试者的例如细胞(例如肝细胞)、组织、血液、尿液或其它区室中的C3水平降低了10％至95％，例如
10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％至95％。在一些实施方案中，INAA的施用使受试者的例如细胞(例如肝细胞)、组织、血液、尿液或其它区室中的C3水平降低了10％至95％，例如10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％至95％。在一些实施方案中，INAA的施用使受试者的例如细胞(例如肝细胞)、组织、血液、尿液或其它区室中的C3水平降低了10％至50％。在一些实施方案中，INAA的施用使受试者的例如细胞(例如肝细胞)、组织、血液、尿液或其它区室中的C3水平降低了50％至95％。在一些实施方案中，降低是一段时间内的平均降低，例如，药剂连续给药之间的时间段。在一些实施方案中，选择剂量以在剂量之间的整个期间实现至少所期望的降低水平。在一些实施方案中，人类肝细胞癌细
胞，例如Hep3B细胞(ATCC，Manassas，Va.)的培养物可用于评估例如INAA的药剂所赋予的C3表达的抑制量或抑制补体活性。在一些实施方案中，INAA可以一次或多次地施用于非人类
动物。可以随后测定动物肝脏中C3 mRNA的量和/或动物血液中C3的量，并且必要时，可以确定抑制程度。
代地或另外地，INAA抑制表达的能力可以使用合适的报告基因分析测定，例如美国专利申
请公开号20050042641中所述的那些，其中将报告基因编码序列与靶核酸序列融合并测定
报告基因的表达。可以替代地或另外地进行测定C3生物活性的分析。这类分析包括例如溶
血分析和末端补体复合物(TCC)形成的分析(例如，免疫分析)。TCC分析可以对TCC的第一组分(例如，TCC的C9环)使用第一抗体(例如，单克隆抗体)以捕获复合物。随后用第二抗体(例如，单克隆抗体)检测所捕获的TCC，第二抗体可以包含可检测的标记，其中第二抗体与
SC5b9复合物的不同抗原结合。在一些实施方案中，INAA的施用使受试者的例如细胞(例如
肝细胞)、组织、血液、尿液或其它区室中的C3水平降低了至少约10％、15％、20％、25％、
30％、35％、40％、45％、50％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、
65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、
80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、
95％、96％、97％、98％或至少约99％或更多。在一些实施方案中，INAA的施用使受试者的例如细胞(例如肝细胞)、组织、血液、尿液或其它区室中的C3水平降低了10％至95％，例如
10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％至95％。在一些实施方案中，INAA的施用使受试者的例如细胞(例如肝细胞)、组织、血液、尿液或其它区室中的C3水平降低了10％至95％，例如10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％至95％。在一些实施方案中，INAA的施用使受试者的例如细胞(例如肝细胞)、组织、血液、尿液或其它区室中的C3水平降低了10％至50％。在一些实施方案中，INAA的施用使受试者的例如细胞(例如肝细胞)、组织、血液、尿液或其它区室中的C3水平降低了50％至95％。在一些实施方案中，降低是一段时间内的平均降低，例如，药剂连续给药之间的时间段。在一些实施方案中，选择剂量以在剂量之间的整个期间实现至少所期望的降低水平。在一些实施方案中，人类肝细胞癌细
胞，例如Hep3B细胞(ATCC，Manassas，Va.)的培养物可用于评估例如INAA的药剂所赋予的C3表达的抑制量或抑制补体活性。在一些实施方案中，INAA可以一次或多次地施用于非人类
动物。可以随后测定动物肝脏中C3 mRNA的量和/或动物血液中C3的量，并且必要时，可以确定抑制程度。
[0887] 实施例
[0888] 实施例1：保留大部分补体抑制活性的聚乙二醇化的坎普他汀类似物的开发
[0889] 合成了坎普他汀类似物，其具有SEQ ID NO:28的坎普他汀类似物的氨基酸序列，但是掺入了位于SEQ ID NO:28的Thr残基的C末端的AEEAc-Lys部分，该部分用于随后将NHS
酯激活的PEG缀合至Lys侧链的氨基。使用标准方法合成化合物。简而言之，得到氨基酸(包括AEEAc)作为Fmoc-保护的氨基酸，其中每个氨基酸的α-氨基用Fmoc保护。侧链官能团也用不同的适当保护基封端。按照Merrifield(J.Amer.Chem.Soc.85,2149(1963))描述的固相
方法完成合成。在固相上进行链装配，在其结束时，将N末端乙酰化；然后从固相切离肽，并同时使用TFA经由酸解而去保护，并酰胺化。然后将直链肽氧化和纯化。得到的坎普他汀类似物被表示为Ac-Ile-Cys*-Val-(1Me)Trp-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys*-Thr-
AEEAc-Lys-NH2(SEQ IDNO:51),缩写为CA28-AEEAc-Lys。应当指出，为了简洁目的，在该缩写中省略了N末端乙酰基和C末端氨基。分别将具有30kD和40kD的分子量的单功能的直链
NHS-酯激活的PEG(NOF America Corp.White Plains,NY,目录号 ME-300GS
和 ME-400GS)偶联至CA28-AEEAc-Lys的赖氨酸侧链，产生如下表示的长效坎
普他汀类似物：CA28-AEEAc-Lys-(PEG30k)和CA28-AEEAc-Lys-(PEG40k)，并纯化。应当指
出，在术语“PEG”后面且在字母“k”前面的数字代表以千道尔顿计的PEG部分的分子量，且“k”是kD的缩写)。CA28-AEEAc-Lys-(PEG30k)也被称作CA28-1。CA28-AEEAc-Lys-(PEG40k)也被称作CA28-2。
酯激活的PEG缀合至Lys侧链的氨基。使用标准方法合成化合物。简而言之，得到氨基酸(包括AEEAc)作为Fmoc-保护的氨基酸，其中每个氨基酸的α-氨基用Fmoc保护。侧链官能团也用不同的适当保护基封端。按照Merrifield(J.Amer.Chem.Soc.85,2149(1963))描述的固相
方法完成合成。在固相上进行链装配，在其结束时，将N末端乙酰化；然后从固相切离肽，并同时使用TFA经由酸解而去保护，并酰胺化。然后将直链肽氧化和纯化。得到的坎普他汀类似物被表示为Ac-Ile-Cys*-Val-(1Me)Trp-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys*-Thr-
AEEAc-Lys-NH2(SEQ IDNO:51),缩写为CA28-AEEAc-Lys。应当指出，为了简洁目的，在该缩写中省略了N末端乙酰基和C末端氨基。分别将具有30kD和40kD的分子量的单功能的直链
NHS-酯激活的PEG(NOF America Corp.White Plains,NY,目录号 ME-300GS
和 ME-400GS)偶联至CA28-AEEAc-Lys的赖氨酸侧链，产生如下表示的长效坎
普他汀类似物：CA28-AEEAc-Lys-(PEG30k)和CA28-AEEAc-Lys-(PEG40k)，并纯化。应当指
出，在术语“PEG”后面且在字母“k”前面的数字代表以千道尔顿计的PEG部分的分子量，且“k”是kD的缩写)。CA28-AEEAc-Lys-(PEG30k)也被称作CA28-1。CA28-AEEAc-Lys-(PEG40k)也被称作CA28-2。
[0890] 如下评估合成的化合物的抑制活性：使用标准的补体抑制测定，测量所述化合物对经由经典途径的补体激活的影响。所述方案以ELISA形式测量C3b沉积。使用该方法监测
的C3b沉积通过被经典途径激活的补体产生。简而言之，用BSA包被96-孔平板。加入人血浆、鸡卵白蛋白(OVA)、多克隆抗-OVA抗体和要试验的化合物(被称作“药物”)并温育，随后加入抗-人类C3HRP-缀合抗体。另外温育以后，加入底物，并检测信号。该方案的细节如下：
的C3b沉积通过被经典途径激活的补体产生。简而言之，用BSA包被96-孔平板。加入人血浆、鸡卵白蛋白(OVA)、多克隆抗-OVA抗体和要试验的化合物(被称作“药物”)并温育，随后加入抗-人类C3HRP-缀合抗体。另外温育以后，加入底物，并检测信号。该方案的细节如下：
[0891] 经典补体抑制测定的方案
[0892] 材料：
[0893] ·96孔板(聚苯乙烯板,Thermo Scientific,9205)
[0894] ·鸡OVA(Sigma A5503-5G)
[0895] ·兔抗-鸡OVA(Abcam ab1221)
[0896] ·封闭缓冲液(开始封闭缓冲液,Thermo Scientific 37538)
[0897] ·维罗那缓冲液(5X浓度,Lonza 12-624E)
[0898] ·人血浆(以50ug/ml终浓度，与来匹卢定一起收集)
[0899] ·山羊抗-人类C3HRP-缀合的Ab(MP Biomedicals,55237)
[0900] ·吐温-20洗涤缓冲液(0.05％吐温20-PBS缓冲液)
[0901] ·TMB(过氧化物酶底物,BD 555214)-BD 51-2607KC和51-2606KC的1:1混合物。
[0902] ·1M H2SO4
[0903] 方案：
[0904] 1.添加100ul/孔的1％鸡OVA(在PBS中)
[0905] 2.在4℃或室温温育1-2小时
[0906] 3.通过振荡和轻叩板移出
[0907] 4.通过添加200μl封闭缓冲液来封闭
[0908] 5.在室温温育1h
[0909] 6.通过振荡和轻叩板移出
[0910] 7.添加100ul多克隆抗-鸡OVA在封闭缓冲液中的1:1000稀释液
[0911] 8.在室温温育1h
[0912] 9.用洗涤缓冲液洗涤两次
[0913] 10.向第2至12号孔中添加50ul VB++
[0914] 11.向第1号孔中添加100μl起始化合物稀释液(2x存在于VB++中)。
[0915] 12.如下所述自第1至10号孔连续稀释(1:2)药物
[0916] a.自起始孔取50μl溶液
[0917] b.将此溶液加入下一孔中
[0918] c.通过抽吸若干次进行混合
[0919] d.重复至第10号孔
[0920] 注：自第10号孔移出50μl并抛弃。
[0921] 13.向第1至11号孔添加50μl 2x血浆稀释液(原始血浆的1:37.5稀释液)
[0922] 14.温育1h
[0923] 15.用洗涤缓冲液洗涤
[0924] 16.添加100μl抗-C3-HRP Ab在封闭缓冲液中的1/1000稀释液
[0925] 17.温育1h
[0926] 18.用洗涤缓冲液洗涤
[0927] 19.向所有孔添加100μl TMB
[0928] 20.在黑暗中温育5-10min
[0929] 21.添加50ul 1M H2SO4
[0930] 22.在450nm读出板
[0931] VB++
[0932] 配方：
[0933]
[0934] 储备溶液：
[0935] 维罗那缓冲液(5X)
[0936] 产品编号 分子量 每500ml
9mM巴比妥钠 Sigma B0500 206.17 927mg
15.5mM二乙基巴比妥酸 Sigma B0375 184.19 1.42克
9mM巴比妥钠 Sigma B0500 206.17 927mg
15.5mM二乙基巴比妥酸 Sigma B0375 184.19 1.42克
[0937] Mg-Cl2(200X)
[0938] 产品编号 分子量 每50ml
100mM MgCl2-6H2O Sigma M0250 203.30 1.00克
100mM MgCl2-6H2O Sigma M0250 203.30 1.00克
[0939] CaCl2(500x)
[0940] 产品编号 分子量 每50ml
75mM CaCl2 Sigma C7902 147.01 551.28mg
75mM CaCl2 Sigma C7902 147.01 551.28mg
[0941] 为了制备50ml工作缓冲液：
[0942] ·称量210mg NaCl
[0943] ·添加10ml 5X VB
[0944] ·添加100μl CaCl2(500X)
[0945] ·添加250μl MgCl(200X)
[0946] ·用H2O调节体积至50ml
[0947] ·调节pH至7.4
[0948] 使用GraphPad Prism5软件分析数据。相对于与没有添加化合物的孔对应的100％激活对照，将得自每个实验的数据集标准化为激活百分比。将药物浓度值(X值)转换成它们的对数，并使用下式Pi＝100-Pa(Yi＝100-Ya)，将激活百分比(Pa)(Y值)转换成抑制百分比(Pi)。将抑制百分比相对于药物浓度绘图，并将得到的数据集拟合至S形-剂量响应函数[Y
＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10((Log EC-X)))]。从拟合参数得到IC50值。
＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10((Log EC-X)))]。从拟合参数得到IC50值。
[0949] 结果呈现在图1中，且IC50值显示在表2(在实施例2中)中。如指示的，在摩尔基础上，CA28-1和CA28-2表现出CA28的活性的约30％。
[0950] 实施例2：表现出增加的摩尔活性的长效坎普他汀类似物的开发
[0951] 将分子量为40kD的8臂NHS-酯激活的PEG(NOF America Corp.White Plains,NY,目录号 HGEO-400GS；化学式:六甘油八(琥珀酰亚胺基氧基戊二酰基)聚氧乙
烯)偶连至CA28-AEEAc-Lys的赖氨酸侧链，产生如下表示的长效坎普他汀类似物：(CA28-
AEEAc)8-PEG40k，也被称作CA28-3。
烯)偶连至CA28-AEEAc-Lys的赖氨酸侧链，产生如下表示的长效坎普他汀类似物：(CA28-
AEEAc)8-PEG40k，也被称作CA28-3。
[0952] 使用在实施例1中描述的测定，试验CA28-3的补体抑制活性。将结果绘图在图1中，将IC50值列出在表2中，二者都是CA28浓度的函数。使用CA28在283nm的消光系数-1 -1
(10208.14L·mol ·cm )，计算CA28的浓度。基于其它分析(紫外吸收相对于物质的质量，
和元素CHN％分析)，得出结论：每个CA28-3分子存在7.5个CA28部分。因而，在摩尔基础上，CA28-3的活性是图1和表2所示的7.5倍。因而，在摩尔基础上，表2中的IC50值是CA28-3的实际IC50的7.5倍。在摩尔基础上，将CA28-3的IC50计算为约0.26(低于母体化合物CA28的
IC50)。图2显示了随着CA28-3浓度(μM)而变化的CA28和长效坎普他汀类似物CA28-2和
CA28-3的补体激活抑制活性百分比，即，已经校正CA28-3的活性，以解释该化合物含有7.5个CA28部分的事实。在摩尔基础上，CA28-3的补体抑制活性超过CA28的补体抑制活性。
(10208.14L·mol ·cm )，计算CA28的浓度。基于其它分析(紫外吸收相对于物质的质量，
和元素CHN％分析)，得出结论：每个CA28-3分子存在7.5个CA28部分。因而，在摩尔基础上，CA28-3的活性是图1和表2所示的7.5倍。因而，在摩尔基础上，表2中的IC50值是CA28-3的实际IC50的7.5倍。在摩尔基础上，将CA28-3的IC50计算为约0.26(低于母体化合物CA28的
IC50)。图2显示了随着CA28-3浓度(μM)而变化的CA28和长效坎普他汀类似物CA28-2和
CA28-3的补体激活抑制活性百分比，即，已经校正CA28-3的活性，以解释该化合物含有7.5个CA28部分的事实。在摩尔基础上，CA28-3的补体抑制活性超过CA28的补体抑制活性。
[0953] 表2
[0954] CA28 CA28-1 CA28-2 CA28-3
IC50 0.3909 1.264 1.288 1.927
IC50 0.3909 1.264 1.288 1.927
[0955] 在有或没有多种缓冲物质和/或赋形剂的情况下，观察到CA28-1、CD28-2和CA28-3在水中的溶解度超过母体化合物CA28的溶解度。
[0956] 实施例3：表现出急剧增加的血浆半衰期和Cmax的长效坎普他汀类似物
[0957] 本实施例描述了长效坎普他汀类似物CA28-2和CA28-3在施用给食蟹猴以后的药代动力学参数的确定。
[0958] 定量施用和样品收集
[0959] 在时间0经由静脉内注射将CA28-2和CA28-3施用进雌性食蟹猴(每组3只，2-5岁，2.9-3.5kg)。以25mg/ml的浓度，以50mg/kg在5％葡萄糖水溶液中施用化合物。在以下时间点，从股静脉收集血液样本(各约1mL)：施用前，施用后5min、15min、30min、1小时(h)、4h、
8h、24h、48h、96h(4天)和192h(8天)。通过直接静脉穿刺来收集样本，并放入不含有抗凝血剂的红顶血清试管中，并在室温保持至少30分钟。将血液样品在3000x g在4℃温度离心5分钟。在处理过程中，维持样品冷冻。在离心以后，收集血清样品，并放入样品试管中。将样品储存在冰柜中，所述冰柜设定成维持在-60℃至-80℃。在整个研究中，所有动物表现出正常的活动。在整个研究中，没有观察到动物的化合物相关的异常。
8h、24h、48h、96h(4天)和192h(8天)。通过直接静脉穿刺来收集样本，并放入不含有抗凝血剂的红顶血清试管中，并在室温保持至少30分钟。将血液样品在3000x g在4℃温度离心5分钟。在处理过程中，维持样品冷冻。在离心以后，收集血清样品，并放入样品试管中。将样品储存在冰柜中，所述冰柜设定成维持在-60℃至-80℃。在整个研究中，所有动物表现出正常的活动。在整个研究中，没有观察到动物的化合物相关的异常。
[0960] 样品分析.使用下述方法，通过LC/MS/MS分析如上所述得到的血浆样品，以确定化合物的浓度：将50μL样品与内部标准品(CA28-AEEAc-Arg)混合，然后加入100μL含有HOAc的
1M NH4OAc(pH 3.5)，并混合。然后，加入250μL乙腈，并混合。将样品离心，并将上清液倒入另一个试管中，并干燥。将样品重构，并注射到LC/MS/MS系统上。流动相A是含有0.1％FA的
5mM NH4OAc，流动相B是含有0.1％FA的90:10(ACN:50mM NH4OAc)。LC柱是Intrada WP-RP
2x150mm,3μ。在以阳离子模式运行的Applied BiosystemsAPI-4000三重四极质谱仪上进行定量。使用源内(In-source)碰撞诱导的解离(CID)将质谱仪源中的化合物片段化，在Q1中
选择m/z 144离子质量，片段化，并在Q3中选择m/z 77离子质量，并检测。使用Analyst
1.4.2软件处理数据。
1M NH4OAc(pH 3.5)，并混合。然后，加入250μL乙腈，并混合。将样品离心，并将上清液倒入另一个试管中，并干燥。将样品重构，并注射到LC/MS/MS系统上。流动相A是含有0.1％FA的
5mM NH4OAc，流动相B是含有0.1％FA的90:10(ACN:50mM NH4OAc)。LC柱是Intrada WP-RP
2x150mm,3μ。在以阳离子模式运行的Applied BiosystemsAPI-4000三重四极质谱仪上进行定量。使用源内(In-source)碰撞诱导的解离(CID)将质谱仪源中的化合物片段化，在Q1中
选择m/z 144离子质量，片段化，并在Q3中选择m/z 77离子质量，并检测。使用Analyst
1.4.2软件处理数据。
[0961] 结果.在下面的表3中显示了在每个时间点的CA28-2和CA28-3的血清浓度(以微克/ml计)。显示了3只接受指定的化合物的猴子各自的数据。容易地计算平均值和标准差。
在动物之间存在显著的一致性。CA28是在以前研究中得到的历史数据，在所述以前研究中，将CA28静脉内地施用给食蟹猴。在该研究中，使用HPLC检测样品中的CA28。
在动物之间存在显著的一致性。CA28是在以前研究中得到的历史数据，在所述以前研究中，将CA28静脉内地施用给食蟹猴。在该研究中，使用HPLC检测样品中的CA28。
[0962] 表3
[0963] 血清浓度，以ug/mL计
[0964]
[0965] 取每种化合物的结果的平均值，并绘制在图3中。观察到与CA28相比，CA28-2和CA28-3的半衰期和Cmax的显著增加。CA28-2和CA28-3的终末半衰期为约4-4.5天。基于这些数据，预期在大约1-2周给药间隔的静脉内施用会提供持久的化合物水平，并有效地抑制人受试者中的补体激活，尽管可以使用更短或更长的给药间隔。
[0966] 实施例4：包含HSA作为清除率降低部分的长效坎普他汀类似物
[0967] 使用2-亚氨基四氢噻吩(硫杂环戊烷)，将人血清白蛋白(HSA)的侧链赖氨酸转化成硫醇，并与包含马来酰亚胺作为反应性官能团的坎普他汀类似物Ac-Ile-Cys*-Val-Trp
(1-Me)-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys*-Thr-
(1-Me)-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys*-Thr-
[0968] AEEAc-Lys-(C(＝O)-(CH2)5-Mal)-NH2(SEQ ID NO:68)反应。对于得到的长效坎普他汀类似物(CA28-4)，如实施例1所述在体外试验其补体抑制活性(图4)，并如实施例3所述在体内试验其药代动力学性质。如在前述实施例中所述，确定CA28-4在施用给食蟹猴以后
的药代动力学参数。结果显示在图5中(与CA28、CA28-1、CA28-2和CA28-3的结果一起)。
CA28-4的PK数据显示在表4中。
的药代动力学参数。结果显示在图5中(与CA28、CA28-1、CA28-2和CA28-3的结果一起)。
CA28-4的PK数据显示在表4中。
[0969] 表4
[0970] 血清浓度，以ug/mL计
[0971]
[0972] 实施例5：在使用不同的NHS激活的PEG的条件下，基于PEG的坎普他汀类似物的合成和活性
[0973] 如实施例1中所述，合成了这样的坎普他汀类似物：其具有SEQ ID NO：28的坎普他汀类似物的氨基酸序列，但掺入了位于SEQ ID NO:28的Thr残基C末端的AEEAc-Lys部分，其目的在于随后将NHS酯活化的PEG与所述Lys侧链的所述氨基缀合。得到的坎普他汀类似物表示为以下：Ac-Ile-Cys*-Val-(1Me)Trp-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys*-Thr-
AEEAc-Lys-NH2(SEQ ID NO:51)，缩写成CA28-AEEAc-Lys。将具有40kD的分子量并且在NHS
羧酸连接化学方面不同的、经单甲氧基-NHS激活的单官能线性酯/碳酸盐PEG(NOF美国公
司，怀特普莱恩斯，纽约州，目录号 ME-400CS、 ME-400GS、
ME-400HS、 ME-400TS)，经由酰胺键与所述CA28-AEEAc-Lys的
赖氨酸侧链偶联。(由于所述AEEAc接头含有氨基酸残基，所述Lys残基是Lys15。)所有化合物在N末端乙酰化，C-末端酰胺化，并且经由Cys2和Cys12之间的二硫键环化。(所述乙酰化、酰胺化和环化在与所述PEG偶联之前进行。)将所述化合物制备成三氟乙酸盐并纯化。所述
化合物如下表(表5)所示。如表5中进一步的详细说明，字母CS、GS、HS和TS代表所述PEG部分和所述NHS部分之间不同的接头部分。应该理解，对于每个化合物，所述多种名称和缩写可以互换使用。注意，CA28-2(参见实施例1)是与CA28-2GS一样的。
AEEAc-Lys-NH2(SEQ ID NO:51)，缩写成CA28-AEEAc-Lys。将具有40kD的分子量并且在NHS
羧酸连接化学方面不同的、经单甲氧基-NHS激活的单官能线性酯/碳酸盐PEG(NOF美国公
司，怀特普莱恩斯，纽约州，目录号 ME-400CS、 ME-400GS、
ME-400HS、 ME-400TS)，经由酰胺键与所述CA28-AEEAc-Lys的
赖氨酸侧链偶联。(由于所述AEEAc接头含有氨基酸残基，所述Lys残基是Lys15。)所有化合物在N末端乙酰化，C-末端酰胺化，并且经由Cys2和Cys12之间的二硫键环化。(所述乙酰化、酰胺化和环化在与所述PEG偶联之前进行。)将所述化合物制备成三氟乙酸盐并纯化。所述
化合物如下表(表5)所示。如表5中进一步的详细说明，字母CS、GS、HS和TS代表所述PEG部分和所述NHS部分之间不同的接头部分。应该理解，对于每个化合物，所述多种名称和缩写可以互换使用。注意，CA28-2(参见实施例1)是与CA28-2GS一样的。
[0974] 表5：含有一个坎普他汀类似物部分的基于PEG的坎普他汀类似物
[0975]
[0976] *AEEAc＝8＝氨基-3,6-二氧杂辛酸
[0977] 化合物被制备成三氟乙酸盐，但可以使用其它抗衡离子
[0978] 通过反相HPLC分析化合物。图6显示了所述化合物中的一种的代表性色谱图。使用了VariTide RPC柱。洗脱液A是含有0.1％TFA的水溶液；洗脱剂B是含有0.1％TFA的50％
CAN/40％水溶液。流速是1.000ml/min，在40分钟内具有0％B至100％B的梯度。具有33.68分钟的保留时间的峰值代表所述PEG化的化合物并具有96.50％的相对面积。
CAN/40％水溶液。流速是1.000ml/min，在40分钟内具有0％B至100％B的梯度。具有33.68分钟的保留时间的峰值代表所述PEG化的化合物并具有96.50％的相对面积。
[0979] 如实施例1中所述，使用标准的补体抑制测定法，通过测量所述化合物对经由经典途径的补体激活的效应，评估所述化合物的抑制活性。结果绘于图7中。这些结果表示两次独立实验的组合。所述化合物显示出显著相似的补体抑制活性。
[0980] 实施例6：双官能化的基于PEG的坎普他汀类似物的合成和活性
[0981] 具有40kD的分子量并且在NHS羧酸连接化学方面不同的、经单甲氧基-NHS激活的单官能线性酯/碳酸盐PEG获自NOF美国公司(怀特普莱恩斯，纽约州)。所述被激活的PEG经
由酰胺键与CA28-AEEAc-Lys的赖氨酸侧链偶联，使得两个CA28-AEEAc-Lys部分与每个PEG
链偶联。所有化合物在N末端乙酰化和在所述CA28-AEEAc-Lys部分的C末端酰胺化，并且经
由Cys2和Cys12之间的二硫键环化。(所述乙酰化、酰胺化和环化在与所述PEG偶联之前进
行。)将所述化合物制备成乙酸盐并纯化。所述化合物如下表(表6)所示。
由酰胺键与CA28-AEEAc-Lys的赖氨酸侧链偶联，使得两个CA28-AEEAc-Lys部分与每个PEG
链偶联。所有化合物在N末端乙酰化和在所述CA28-AEEAc-Lys部分的C末端酰胺化，并且经
由Cys2和Cys12之间的二硫键环化。(所述乙酰化、酰胺化和环化在与所述PEG偶联之前进
行。)将所述化合物制备成乙酸盐并纯化。所述化合物如下表(表6)所示。
[0982] 表6：基于PEG的双官能化坎普他汀类似物
[0983]
[0984] *AEEAc＝8＝氨基-3,6-二氧杂辛酸
[0985] 化合物被制备成乙酸盐，但可以使用其它抗衡离子
[0986] 如实施例1中所述，使用标准的补体抑制测定法，通过测量所述化合物对经由经典途径的补体激活的效应，评估CA28-2GS-BF的抑制活性，并如实施例1中所述进行了分析。结果绘于图8中。如上所述，CA28-2GS-BF每分子含有两个坎普他汀类似物部分。虽然CA28-
2GS-BF的每个坎普他汀类似物部分的活性小于单个CA28分子的活性，但所述两种化合物在
摩尔基础上的活性在较宽浓度范围内几乎是相同的。
2GS-BF的每个坎普他汀类似物部分的活性小于单个CA28分子的活性，但所述两种化合物在
摩尔基础上的活性在较宽浓度范围内几乎是相同的。
[0987] 实施例7：基于PEG的双官能化坎普他汀类似物的皮下施用
[0988] 本实施例描述了长效坎普他汀类似物CA28-2GS-BF在施用给食蟹猴之后的药代动力学参数的确定，所述施用是经由单次静脉内(IV)注射的或是通过反复的(每日一次)皮下
施用七天给予的。
施用七天给予的。
[0989] 定量施用和样品收集 在时间0经由静脉内注射或经由反复的皮下注射(每天一次，共七天)将CA28-2GS施用进雄性食蟹猴。本研究中使用了六只非幼龄雄性食蟹猴，年龄
1-5岁，重量范围从4.6至5.3千克(每组3只)。所述动物在所述7天试验开始时是健康的。所述研究是非盲性的。在所述研究开始之前，供应动物自由采食的水和每日两餐的购买的食
物。在所述研究之前，以设施SOP向所述动物供应食物。动物没有被禁食。在适当的某天，在时间0经由静脉内和皮下施用向动物定量施用。使用22gauge大小的针用于皮下施用。所述
化合物以25mg/ml的浓度溶于5％的葡萄糖水溶液中，并以50mg/kg进行施用。在以下时间
点，从股静脉收集血液样本(各约1mL)：第1天：给药前、5分钟、15分钟、30分钟、1小时(h)、
4h、8h。第2-9天：0分钟。第16天：基于第1天剂量的最终取样。经由直接静脉穿刺，从所述猴的股骨或隐静脉收集每份血液样品(约1.0mL)并置于不含抗凝剂的红盖血清管中，并在室
温下保持至少30分钟。将血液样品在4℃以3000x g离心5分钟。在处理过程中，维持样品低温。在离心以后，收集血清样品，并放入样品试管中。将样品储存在冰柜中，所述冰柜设定成维持在-60℃至-80℃。将血清样品和剩下的剂量溶液在干冰中冷冻运输用于分析。
1-5岁，重量范围从4.6至5.3千克(每组3只)。所述动物在所述7天试验开始时是健康的。所述研究是非盲性的。在所述研究开始之前，供应动物自由采食的水和每日两餐的购买的食
物。在所述研究之前，以设施SOP向所述动物供应食物。动物没有被禁食。在适当的某天，在时间0经由静脉内和皮下施用向动物定量施用。使用22gauge大小的针用于皮下施用。所述
化合物以25mg/ml的浓度溶于5％的葡萄糖水溶液中，并以50mg/kg进行施用。在以下时间
点，从股静脉收集血液样本(各约1mL)：第1天：给药前、5分钟、15分钟、30分钟、1小时(h)、
4h、8h。第2-9天：0分钟。第16天：基于第1天剂量的最终取样。经由直接静脉穿刺，从所述猴的股骨或隐静脉收集每份血液样品(约1.0mL)并置于不含抗凝剂的红盖血清管中，并在室
温下保持至少30分钟。将血液样品在4℃以3000x g离心5分钟。在处理过程中，维持样品低温。在离心以后，收集血清样品，并放入样品试管中。将样品储存在冰柜中，所述冰柜设定成维持在-60℃至-80℃。将血清样品和剩下的剂量溶液在干冰中冷冻运输用于分析。
[0990] 观察每个皮下施用的部位，检查所述注射量的吸收有多快及所述制剂是否留下肿块或完全消失。在每个收集的时间点和在第2-7天的下午观察所述给药位点。在所述研究的持续期间，所有剂量都被吸收。基于所述观察，估计剂量在施用之后的15分钟内被吸收。在整个研究中，所有动物表现出正常的活动。在整个研究中，没有在动物中观察到的化合物相关的异常。
[0991] 样品分析。通过利用CID(碰撞诱导的解离)的LC/MS/MS分析如上所述得到的血浆样品，所述利用CID的LC/MS/MS类似于实施例3中所述的方法。
[0992] 结果。当如上所述静脉内地或皮下地施用CA28-2GS-BF时，其血清浓度随时间变化的关系绘于图9中。数据点代表所有检测到的PEG化的CA28化合物。图9中的CA28的数据是在以前研究中得到的历史数据，在所述以前的研究中，CA28被静脉内地施用给食蟹猴。在该研究中，使用HPLC检测样品中的CA28。图9中显示的CA28数据是在以前研究中获得的历史数
据，在所述以前研究中，将CA28静脉内地施用给食蟹猴。在该以前的研究中，使用HPLC检测样品中的CA28。
据，在所述以前研究中，将CA28静脉内地施用给食蟹猴。在该以前的研究中，使用HPLC检测样品中的CA28。
[0993] 通过皮下施用CA28-2GS-BF达到了500μg/ml(11μM)的血清峰浓度。当被静脉内地或皮下地施用时，CA28-2GS-BF的终端半衰期约为5天。结果总结在下面的表中：
[0994] 表7
[0995] CA28-2GS-BF在猴血清中的研究样品浓度的汇总(在第0天以50mg/kg静脉内施用的)
[0996]
[0997] 表8
[0998] 猴血清中CA28-2GS-BF的研究样品浓度的总结(SQ@7mg/kg/天x 7天)
[0999]
[1000] 实施例8：对来自具有PNH患者的红细胞的补体介导的裂解的抑制
[1001] 进行修改版海姆氏试验以测量坎普他汀类似物体外抑制补体介导的红血细胞裂解的能力，所述红血细胞来自具有PNH的患者。通过加入镁的酸化血清激活补体，以裂解所述PNH红细胞。进行90分钟的所述温育。使用标准标记物对流式细胞仪测量的PNH红细胞的
进行读数。使用热灭活的血清用作对照(不溶血)。在不存在添加的补体抑制剂的条件下，酸化血清产生最大化的裂解。用两倍系列稀释的坎普他汀类似物CA28、CA28-2、CA28-2CS、
CA28-2CS-BD、CA28-2GS、CA28-2GS-BF、CA28-2HS、CA28-2HS-BF、CA28-2TS、CA28-2GS-BF和CA28-3进行所述实验。确定了体外完全阻止溶血所需要的每个化合物的浓度。还使用了不
含有任何导致凝集的桥连的抗C3多克隆抗体(例如，Ab4214或Ab14396，二者都是可购得的
且FITC缀合的，Abcam，剑桥，英国)测定红血细胞的C3片段的沉积，以测量所述化合物抑制C3片段在PNH红细胞上的沉积的能力。将结果与使用相同的测定法用艾库组单抗得到的结
果对比。
进行读数。使用热灭活的血清用作对照(不溶血)。在不存在添加的补体抑制剂的条件下，酸化血清产生最大化的裂解。用两倍系列稀释的坎普他汀类似物CA28、CA28-2、CA28-2CS、
CA28-2CS-BD、CA28-2GS、CA28-2GS-BF、CA28-2HS、CA28-2HS-BF、CA28-2TS、CA28-2GS-BF和CA28-3进行所述实验。确定了体外完全阻止溶血所需要的每个化合物的浓度。还使用了不
含有任何导致凝集的桥连的抗C3多克隆抗体(例如，Ab4214或Ab14396，二者都是可购得的
且FITC缀合的，Abcam，剑桥，英国)测定红血细胞的C3片段的沉积，以测量所述化合物抑制C3片段在PNH红细胞上的沉积的能力。将结果与使用相同的测定法用艾库组单抗得到的结
果对比。
[1002] 实施例9：具有PNH的患者中的长效坎普他汀类似物
[1003] 将一群被诊断出PNH的受试者分成4组。以1-2周的时间间隔，以5mg/kg至20mg/kg之间的剂量，分别用CA28-2或CA28-3的静脉内施用来治疗组1和2中的受试者。任选地，在更频繁的时间间隔开始治疗，然后降低频率进行维持疗法。根据推荐的定量施用方案，用依库珠单抗治疗组3中的受试者。组4用作对照(无补体抑制剂治疗)。随时间监测血管内溶血(基于LDH测量和/或RBC的(51)Cr标记)、网状细胞增多(贫血的指征)、血细胞比容、血液中的血红蛋白浓度、红血细胞的调理素作用(C3激活的产物(诸如C3b)在红血细胞上的沉积，其可
以使用流式细胞计量术来检测)、PNH征状、输血要求、血栓栓塞性事件、溶血相关的一氧化氮耗竭、肺动脉高压的量度、生活质量和存活。在各组之间对比结果，并与得自对照PNH患者的历史数据(在依库珠单抗的临床试验中得到)进行对比。与组4的受试者相比，在接受
CA28-2(组1)或CA28-3(组2)的受试者中持久贫血的改善(例如，通过减轻的网状细胞增多、减少的溶血证据、增加的血细胞比容、增加的血红蛋白来证实)、提高的生活质量、减少的PNH征状、降低的输血要求、减少的血栓栓塞性事件、减少的溶血相关的一氧化氮耗竭、减少的肺动脉高压的量度、增加的生活质量和/或增加的存活会指示效力。
以使用流式细胞计量术来检测)、PNH征状、输血要求、血栓栓塞性事件、溶血相关的一氧化氮耗竭、肺动脉高压的量度、生活质量和存活。在各组之间对比结果，并与得自对照PNH患者的历史数据(在依库珠单抗的临床试验中得到)进行对比。与组4的受试者相比，在接受
CA28-2(组1)或CA28-3(组2)的受试者中持久贫血的改善(例如，通过减轻的网状细胞增多、减少的溶血证据、增加的血细胞比容、增加的血红蛋白来证实)、提高的生活质量、减少的PNH征状、降低的输血要求、减少的血栓栓塞性事件、减少的溶血相关的一氧化氮耗竭、减少的肺动脉高压的量度、增加的生活质量和/或增加的存活会指示效力。
[1004] 实施例10：在具有PNH的患者中的长效坎普他汀类似物
[1005] 经过下述改进，重复实施例9：受试者是在依库珠单抗治疗下仍然输血依赖性的和/或继续具有低于截止值(诸如9.0g/dL)的血红蛋白的具有PNH的个体。在各组之间对比
结果。
结果。
[1006] 实施例11：在具有aHUS的患者中的长效坎普他汀类似物
[1007] 将一群被诊断出aHUS的受试者分成4组。以1-2周的时间间隔，以5mg/kg至20mg/kg之间的剂量，分别用CA28-2或CA28-3的静脉内施用来治疗组1和2中的受试者。任选地，在更频繁的时间间隔开始治疗，然后降低频率进行维持疗法。根据推荐的定量施用方案，用依库珠单抗治疗组3中的受试者。随时间监测血管内溶血(基于LDH测量)、红血细胞的调理素作
用(C3激活的产物(诸如C3b)在红血细胞上的沉积)、aHUS征状、肾功能、对血浆交换或透析的需要、生活质量和存活。在各组之间对比结果，并与得自对照aHUS患者的历史数据(在依库珠单抗的临床试验中得到)进行对比。与组4的受试者相比，在接受CA28-2或CA28-3的受
试者中减少的溶血证据、提高的生活质量、减少的aHUS征状、减少的对血浆交换或透析的需要、增加的生活质量和/或增加的存活会指示效力。
用(C3激活的产物(诸如C3b)在红血细胞上的沉积)、aHUS征状、肾功能、对血浆交换或透析的需要、生活质量和存活。在各组之间对比结果，并与得自对照aHUS患者的历史数据(在依库珠单抗的临床试验中得到)进行对比。与组4的受试者相比，在接受CA28-2或CA28-3的受
试者中减少的溶血证据、提高的生活质量、减少的aHUS征状、减少的对血浆交换或透析的需要、增加的生活质量和/或增加的存活会指示效力。
[1008] 实施例12：使用CA28-2GS-BF、CA28-2HS、CA28-2HS-BF、CA28-2TS和CA28-2GS-TS-BF，重复实施例8-11。
[1009] 实施例14：通过皮下注射，每天施用CA28-2GS-BF、CA28-2HS、CA28-2HS-BF、CA28-2TS和CA28-2GS-TS-BF，重复实施例9-12。
[1010] 实施例14：使用额外的长效坎普他汀类似物，重复实施例8-11。
[1011] 实施例15：使用细胞反应性的长效坎普他汀类似物，重复实施例8-11。
[1012] 实施例16：长效坎普他汀类似物的补体激活抑制活性
[1013] 如上所述，合成了CA28和CA28-AEEAc-Lys。使用在NHS羧酸连接化学方面是TS类型的反应性双官能PEG合成了CA28-2TS-BF，其经由所述赖氨酸侧链的所述伯胺，与两个CA28-AEEAc-Lys分子连接。使用标准的补体抑制测试法，通过测量所述化合物对经由经典途径和经由旁路途径的补体激活的效应，评估CA28和CA28-2TS-BF的补体激活抑制活性。用于所述经典途径激活的测试法的方案描述于实施例1中。用于旁路途径激活的方案也以ELISA的形
式测量C3b的沉积，并描述于下文。使用此方法检测的C3b的沉积是通过由旁路途径被脂多
糖(LPS)激活的补体产生的。简单来说，用LPS包被96孔平板。加入测试化合物(称为“药
物”)，随后加入血浆或血清作为补体来源，并温育。在这之后加入抗-人类C3HRP-缀合的抗体。再次温育后，加入底物并检测信号。所述方案的详情如下：
式测量C3b的沉积，并描述于下文。使用此方法检测的C3b的沉积是通过由旁路途径被脂多
糖(LPS)激活的补体产生的。简单来说，用LPS包被96孔平板。加入测试化合物(称为“药
物”)，随后加入血浆或血清作为补体来源，并温育。在这之后加入抗-人类C3HRP-缀合的抗体。再次温育后，加入底物并检测信号。所述方案的详情如下：
[1014] 基于ELISA的旁路补体途径激活的测定
[1015] 材料：
[1016] ·96孔ELISA板(Corning 3590)
[1017] ·来自伤寒沙门氏菌的LPS-Sigma L7136(40ug/ml的PBS溶液)
[1018] ·1％BSA的PBS溶液-Calbiochem#1266261/30稀释
[1019] ·佛罗那缓冲液+10mM MgCl2+10mM EGTA(VB-Mg EGTA)
[1020] ·人血浆(用5ug/ml终浓度的来匹卢定收集)
[1021] ·抗人C3HRP-缀合的Ab(Poli to C3-HRP Ab,Cappel 55237)
[1022] ·吐温-20洗涤缓冲液(PBS中0.05％)
[1023] ·TMB(过氧化物酶底物)-BD 51-2607KC和51-2606KC的1:1混合物
[1024] ·3M H2SO4
[1025] ·酶标仪
[1026] 方案：
[1027] 1.添加50ul/孔的40ug/ml LPS(在PBS中)
[1028] 2.在室温温育2小时
[1029] 3.通过振荡和轻叩板移出
[1030] 4.通过添加200μl的1％BSA/PBS来封闭
[1031] 5.在室温温育1h
[1032] 6.通过振荡和轻叩板移出
[1033] 7.向第2至12号孔中添加50ul的VB-Mg EGTA
[1034] 8.向第1号孔中添加100μl起始药物稀释液(2x存在于VB-Mg EGTA中)。
[1035] 9.如下所述自第1至10号孔连续稀释(1:2)所述药物
[1036] a.自起始孔取50ul溶液
[1037] b.将此溶液加入下一孔中
[1038] c.通过抽吸若干次进行混合
[1039] d.重复至第10号孔
[1040] 注：自第10号孔移出50ul并抛弃。
[1041] 10.向第1至11号孔添加50ul 2x血浆稀释液
[1042] 11.温育1h
[1043] 12.用洗涤缓冲液洗涤两次
[1044] 13.添加50ul C3-HRP Ab在1％BSA/PBS中的1/1000稀释液
[1045] 14.温育1h
[1046] 15.向所有孔添加100ul TMB
[1047] 16.温育30min
[1048] 17.添加50ul 3M H2SO4
[1049] 18.在450nm读出板
[1050] VB Mg EGTA配方：
[1051] 巴比妥 5mM
[1052] NaCl 72.5mM
[1053] MgCl2 10mM
[1054] EGTA 10mM
[1055] pH 7.3-7.4
[1056] 储备溶液：
[1057] 维罗那缓冲液(5X)
[1058] 产品编号 分子量 每500ml
9mM巴比妥钠 Sigma B0500 206.17 927mg
15.5mM二乙基巴比妥酸 Sigma B0375 184.19 1.42克
9mM巴比妥钠 Sigma B0500 206.17 927mg
15.5mM二乙基巴比妥酸 Sigma B0375 184.19 1.42克
[1059] Mg-Cl2(10X)
[1060] 产品编号 分子量 每50ml
100mM MgCl2-6H2O Sigma M0250 203.30 1.00克
100mM MgCl2-6H2O Sigma M0250 203.30 1.00克
[1061] EGTA(10x)
[1062] 产品编号 分子量 每25ml
100mM EGTA Sigma E8145 468.3 1.17克
100mM EGTA Sigma E8145 468.3 1.17克
[1063] 为了制备20ml工作缓冲液：
[1064] ·称量84mg NaCl
[1065] ·添加4ml 5X VB
[1066] ·添加2ml EDTA 10X
[1067] ·添加2ml MgCl 10X
[1068] ·用H2O调节体积至20ml
[1069] ·调节pH至7.4
[1070] 结果
[1071] 图10(A)显示了随着所述化合物摩尔浓度而变化的CA28和CA28-2TS-BF的经典补体激活抑制活性百分比。图10(B)显示了随着所述化合物摩尔浓度而变化的CA28和CA28-
2TS-BF的旁路补体激活抑制活性百分比。原始数据列于以下的表9(每种条件重复4次)中。
根据所述图中显示的抑制曲线和背后数据，在所述测定法的实验误差范围内，所述CA28-
2TS-BF的摩尔基础上的补体抑制活性至少与CA28的一样大。这些结果进一步证实本文所述
的长效坎普他汀类似物在，例如，治疗目的上的适用性。
2TS-BF的旁路补体激活抑制活性百分比。原始数据列于以下的表9(每种条件重复4次)中。
根据所述图中显示的抑制曲线和背后数据，在所述测定法的实验误差范围内，所述CA28-
2TS-BF的摩尔基础上的补体抑制活性至少与CA28的一样大。这些结果进一步证实本文所述
的长效坎普他汀类似物在，例如，治疗目的上的适用性。
[1072] 表9
[1073]
[1074] 实施例17：通过静脉内或皮下途径施用的长效坎普他汀类似物的药代动力学性质
[1075] 本实施例描述了长效坎普他汀类似物CA28-2TS-BF在施用给食蟹猴之后的药代动力学参数的确定，所述施用是经由单次静脉内(IV)注射的、单次皮下注射的或是通过每日
皮下施用一次共七天给予的。使用在NHS羧酸连接化学方面是TS类型的反应性双官能PEG合
成了CA28-2TS-BF，其经由所述赖氨酸侧链的所述伯胺，与两个CA28-AEEAc-Lys分子连接。
皮下施用一次共七天给予的。使用在NHS羧酸连接化学方面是TS类型的反应性双官能PEG合
成了CA28-2TS-BF，其经由所述赖氨酸侧链的所述伯胺，与两个CA28-AEEAc-Lys分子连接。
[1076] 定量施用和样品收集
[1077] 在时间0经由静脉内注射进隐静脉或经由单次皮下注射或反复的皮下注射(每天一次，共七天)将CA28-2TS-BF施用进食蟹猴。本研究中使用了六只幼龄雌性食蟹猴，年龄2-
5岁，重量范围从2.6至3.9千克(每组3只)。所述动物在所述试验开始之时是健康的。所述研究不是盲性的。在所述研究开始之前，供应动物自由采食的水和每日两餐购买的食物。在所述研究之前，以设施SOP向所述动物供应食物。动物没有被禁食。在适当的某天，在时间0经由静脉内和皮下施用向动物定量施用7mg/kg。用于静脉内施用的给药溶液浓度是3.5mg/
mL，用于皮下施用的给药溶液浓度是25mg/mL。用于静脉内施用的施用体积是2mL/kg，用于皮下施用的施用体积是0.28mL/kg，。用23G3/4大小的注射针皮下施用。所述化合物溶于5％的葡萄糖水溶液中进行施用。
5岁，重量范围从2.6至3.9千克(每组3只)。所述动物在所述试验开始之时是健康的。所述研究不是盲性的。在所述研究开始之前，供应动物自由采食的水和每日两餐购买的食物。在所述研究之前，以设施SOP向所述动物供应食物。动物没有被禁食。在适当的某天，在时间0经由静脉内和皮下施用向动物定量施用7mg/kg。用于静脉内施用的给药溶液浓度是3.5mg/
mL，用于皮下施用的给药溶液浓度是25mg/mL。用于静脉内施用的施用体积是2mL/kg，用于皮下施用的施用体积是0.28mL/kg，。用23G3/4大小的注射针皮下施用。所述化合物溶于5％的葡萄糖水溶液中进行施用。
[1078] 在以下时间点，从股静脉收集血液样本(约0.5-1mL)：第1天：给药前、5分钟、15分钟、30分钟、1小时(h)、4h、8h。第2-9天：0分钟。第15天：基于第1天剂量的最终取样。经由直接静脉穿刺，从所述猴的隐静脉收集每份血液样品并置于不含抗凝剂的红盖血清管中，并在室温下保持至少30分钟。将血液样品在4℃以3000x g离心5分钟。在处理过程中，维持样品低温。在离心以后，收集血清样品，并放入样品试管中。将样品储存在冰柜中，所述冰柜设定成维持在-60℃至-80℃。将血清样品和剩下的剂量溶液在干冰中冷冻运输用于分析。
[1079] 观察每个皮下施用的部位，检查所述注射量的吸收有多快及所述制剂是否留下肿块或完全消失。对于接受皮下注射的所述动物，在每个施用日的晚上观察所述给药位点。基于目测观察，所述给药部位没有显示具有肿块并到该时间为止被完全吸收。在整个研究中，每天观察所有动物两次且其表现出正常的活动。在整个研究中，没有观察到在动物中的化
合物相关的异常。
合物相关的异常。
[1080] 样品分析。通过利用CID(碰撞诱导的解离)的LC/MS/MS分析如上所述得到的血浆样品，所述利用CID的LC/MS/MS类似于实施例3中所述的方法。
[1081] 结果。
[1082] 当如上所述静脉内地或皮下地施用CA28-2GS-BF时，其血清浓度随时间变化的关系绘于图11中。数据点代表所有检测到的PEG化的CA28化合物。图11中显示的CA28的数据是在以前研究中得到的历史数据，在所述以前的研究中，CA28被静脉内地施用给食蟹猴。在该以前的研究中，使用HPLC/MS检测样品中的CA28。
[1083] 通过每天一次地皮下施用CA28-2TS-BF，共7天，达到了约500微克/mL的血清峰浓度。当被静脉内地施用或通过单次皮下注射时，CA28-2TS-BF的终端半衰期约为8天。以下表
10(A)(静脉内施用)和10(B)(皮下施用)中提供了原始数据。(在图11和表10(A)和10(B)中，给药当天被认为是第0天)。
10(A)(静脉内施用)和10(B)(皮下施用)中提供了原始数据。(在图11和表10(A)和10(B)中，给药当天被认为是第0天)。
[1084] 表10(A)
[1085]
[1086] 表10(B)
[1087]
[1088] BQL＝低于定量限值
[1089] 如上面所指出的，使用TS类型的反应性双官能PEG合成了CA28-2TS-BF，导致在与赖氨酸的伯胺反应之后形成氨基甲酸酯。使用在NHS羧酸连接化学方面是GS型的反应性双
官能PEG合成了CA28-2GS-BF，导致在与赖氨酸的伯胺反应之后形成酰胺。所述化合物还含
有在CA28-2TS-BF中不存在的酯键。值得注意的是，本实验中CA28-2TS-BF达到的约8天的终末半衰期比CA28-2GS-BF的大得多，所述CA28-2GS-BF在类似的实验中被发现具有约5天的
半衰期(参见实施例8)。
官能PEG合成了CA28-2GS-BF，导致在与赖氨酸的伯胺反应之后形成酰胺。所述化合物还含
有在CA28-2TS-BF中不存在的酯键。值得注意的是，本实验中CA28-2TS-BF达到的约8天的终末半衰期比CA28-2GS-BF的大得多，所述CA28-2GS-BF在类似的实验中被发现具有约5天的
半衰期(参见实施例8)。
[1090] 实施例18：坎普他汀类似物抑制C3在PNH患者的红血细胞上的沉积并防止补体介导的裂解
[1091] 进行修改版海姆氏试验以评估坎普他汀类似物保护PNH RBC免于补体介导的裂解的能力。在不存在补体抑制剂或存在不同量的坎普他汀类似物CA28或CA28-2GS-BF的条件
下，将来自具有PNH的患者的RBC暴露于酸化的人血清(作为补体成分的来源)和镁(Mg2+，为旁路途径激活所需)。将暴露于热灭活人血清用作对照，代表没有显著的补体介导的裂解，这是由于热灭活了补体。在不存在补体抑制剂的条件下(标记为Mg2+的图)，将暴露于酸化的
2+
人血清和镁(Mg )用作对照，代表最大化裂解。
下，将来自具有PNH的患者的RBC暴露于酸化的人血清(作为补体成分的来源)和镁(Mg2+，为旁路途径激活所需)。将暴露于热灭活人血清用作对照，代表没有显著的补体介导的裂解，这是由于热灭活了补体。在不存在补体抑制剂的条件下(标记为Mg2+的图)，将暴露于酸化的
2+
人血清和镁(Mg )用作对照，代表最大化裂解。
[1092] 温育以后，用抗CD59和C3d的抗体染色细胞。CD59水平允许将PNH RBC分类为I型、II型或III型。对C3d的染色用作C3和C3激活产物沉积(堆积)的标记物，所述C3d是C3激活和裂解的产物。进行流式细胞分析以评估RBC表面的CD59和C3d并定量存在于多种样品中的I
型、II型和III型细胞的百分比。
型、II型和III型细胞的百分比。
[1093] 证实不同浓度的CA28对C3沉积的效应的和细胞百分比的稀释实验结果示于图12(A)。证实不同浓度的CA28-2GS-BF对C3沉积的效应和细胞百分比的稀释实验结果示于图12
(B)。所述结果定量地呈现于以下的表11中。I型细胞(以橘色示于图12中)具有正常的CD59
水平。III型细胞(以蓝色示于图12中)基本上没有可检测到的CD59。这些细胞是很容易受补体介导的裂解的。II型细胞(以紫色示于图12中)具有与正常细胞或I型细胞相比降低的
CD59水平并对补体介导的裂解具有中等敏感性。在存在补体激活的条件下，III型细胞迅速裂解。裂解的减少或缺失可由III型细胞的升高来证明，这在图12(A)和12(B)中是明显的，因为与存在Mg2+(最大化裂解)的图相比，在无裂解的图中具有更高的III型细胞的百分比。
换句话说，在所述阳性对照中具有比所述阴性对照中相对更少的III型细胞。II型细胞可能在存在激活的补体的条件下最终裂解，但这之前可以积累大量的C3激活产物例如C3d。裂解的减少或缺失可由II型细胞上升高的C3或C3激活产物的水平来证明，这在图12(A)和12(B)
中是明显的，所述图12(A)和12(B)将所述无裂解的图中的II型细胞上的C3d水平与所述最
大化裂解的图中的II型细胞上的C3d水平做比较。换句话说，在所述最大化裂解图中具有比所述无裂解图中更多的C3d。I型细胞具有功能性的CD59，因此它们灭活转化酶并因而不积
累与II型细胞一样多的C3d。然而，其累积的C3d的量可被用作更脆弱的细胞(II和III型)的裂解量的替代指标。因此，I型细胞上降低的C3d能指示针对裂解的保护作用。I、II和III型
2+
细胞的相对百分比从所述最大化裂解对照图(Mg )中的百分比向所述无裂解对照图(热灭
活血清)中的百分比的转移，能指示针对补体介导的裂解的保护作用。这些百分比示于下表中。表11中标记％C'3的栏表示对于C3和C3激活产物(“C3堆积”)的存在被认为是“阳性”的细胞的百分比。从图12(A)和(B)和表11中可以看出，CA28和CA28-2GS-BF在被测试的浓度
中，表现出相似对的PNH红细胞裂解的保护作用，在100微克/ml化合物或更高浓度时，PNH细胞上基本上没有C3的堆积。值得注意的是，在存在100ug/ml或更多坎普他汀类似物的条件
下，III、II和I型细胞的百分比基本上与所述无裂解对照中的相同，表明本测试法确定了针对补体介导的裂解的完全保护作用。本实验中没有测试低于100ug/ml但高于60ug/ml的浓
度,例如，至少70ug/ml、至少80mg/ml、或至少90ug/ml,但低于100ug/ml，但所述浓度仍可能提供显著的保护作用。100微克/ml CA28-2GS-BF代表约2.5微摩尔的浓度，如本文所述，其在体内是很容易达到的。
(B)。所述结果定量地呈现于以下的表11中。I型细胞(以橘色示于图12中)具有正常的CD59
水平。III型细胞(以蓝色示于图12中)基本上没有可检测到的CD59。这些细胞是很容易受补体介导的裂解的。II型细胞(以紫色示于图12中)具有与正常细胞或I型细胞相比降低的
CD59水平并对补体介导的裂解具有中等敏感性。在存在补体激活的条件下，III型细胞迅速裂解。裂解的减少或缺失可由III型细胞的升高来证明，这在图12(A)和12(B)中是明显的，因为与存在Mg2+(最大化裂解)的图相比，在无裂解的图中具有更高的III型细胞的百分比。
换句话说，在所述阳性对照中具有比所述阴性对照中相对更少的III型细胞。II型细胞可能在存在激活的补体的条件下最终裂解，但这之前可以积累大量的C3激活产物例如C3d。裂解的减少或缺失可由II型细胞上升高的C3或C3激活产物的水平来证明，这在图12(A)和12(B)
中是明显的，所述图12(A)和12(B)将所述无裂解的图中的II型细胞上的C3d水平与所述最
大化裂解的图中的II型细胞上的C3d水平做比较。换句话说，在所述最大化裂解图中具有比所述无裂解图中更多的C3d。I型细胞具有功能性的CD59，因此它们灭活转化酶并因而不积
累与II型细胞一样多的C3d。然而，其累积的C3d的量可被用作更脆弱的细胞(II和III型)的裂解量的替代指标。因此，I型细胞上降低的C3d能指示针对裂解的保护作用。I、II和III型
2+
细胞的相对百分比从所述最大化裂解对照图(Mg )中的百分比向所述无裂解对照图(热灭
活血清)中的百分比的转移，能指示针对补体介导的裂解的保护作用。这些百分比示于下表中。表11中标记％C'3的栏表示对于C3和C3激活产物(“C3堆积”)的存在被认为是“阳性”的细胞的百分比。从图12(A)和(B)和表11中可以看出，CA28和CA28-2GS-BF在被测试的浓度
中，表现出相似对的PNH红细胞裂解的保护作用，在100微克/ml化合物或更高浓度时，PNH细胞上基本上没有C3的堆积。值得注意的是，在存在100ug/ml或更多坎普他汀类似物的条件
下，III、II和I型细胞的百分比基本上与所述无裂解对照中的相同，表明本测试法确定了针对补体介导的裂解的完全保护作用。本实验中没有测试低于100ug/ml但高于60ug/ml的浓
度,例如，至少70ug/ml、至少80mg/ml、或至少90ug/ml,但低于100ug/ml，但所述浓度仍可能提供显著的保护作用。100微克/ml CA28-2GS-BF代表约2.5微摩尔的浓度，如本文所述，其在体内是很容易达到的。
[1094] 表11：在不存在或存在坎普他汀类似物的条件下的I、II和III型PNH RBC的百分比和C3的堆积(显示了以微克/ml表示的浓度)
[1095]
[1096] 实施例19：坎普他汀类似物和Soliris对来自PNH患者的红血细胞上C3沉积的效应
[1097] 进行了与实施例18中所述的相似的实验，以进一步证实坎普他汀类似物CA28-2GS-BF的保护效应，并将其与抗C5的抗体Soliris作比较。使用PNH RBC进行了如实施例18
中所述的修改版海姆氏试验，将所述PNH RBC在不存在补体抑制剂(左图)或存在Soliris
(中图)或CA28-2GS-BF(50ug/ml)(右图)的条件下温育。在使用抗CD59和C3d的抗体进行抗
体染色之后，进行流式细胞术。结果示于图13中。在该图中，象限1(Q1)和象限3(Q3)代表III型细胞。象限2(Q2)和象限4(Q4)代表I型和II型细胞。Q1和Q2代表具有显著的和异常高量的C3激活产物(例如，C3d)沉积的细胞。Q3和Q4代表没有显著的C3d沉积或稍高的(Q4的右半部分)、但比Q2细胞低的水平的细胞。在所述不同象限里的细胞百分比呈现在图13中的每个图的下面和以下表12中。
中所述的修改版海姆氏试验，将所述PNH RBC在不存在补体抑制剂(左图)或存在Soliris
(中图)或CA28-2GS-BF(50ug/ml)(右图)的条件下温育。在使用抗CD59和C3d的抗体进行抗
体染色之后，进行流式细胞术。结果示于图13中。在该图中，象限1(Q1)和象限3(Q3)代表III型细胞。象限2(Q2)和象限4(Q4)代表I型和II型细胞。Q1和Q2代表具有显著的和异常高量的C3激活产物(例如，C3d)沉积的细胞。Q3和Q4代表没有显著的C3d沉积或稍高的(Q4的右半部分)、但比Q2细胞低的水平的细胞。在所述不同象限里的细胞百分比呈现在图13中的每个图的下面和以下表12中。
[1098] 表12
[1099]
[1100] 可以看到，在不存在抑制剂的条件下，绝大多数细胞位于Q4(具有低水平的C3激活产物沉积的I型或II型)。III型细胞将大部分裂解，因此其百分比(Q1和Q3)较低。积累C3沉积产物的Q2细胞最终裂解，所以其数量保持相对较低。在存在艾库组单抗的条件下，III型细胞至少在初期被保护免于裂解，但是仍积累C3激活产物(例如，C3d)，表现为与无抑制剂的图相比具有较高的Q1细胞的百分比(36.79％对0.09％)。由于III型细胞的存活增加，Q2+Q4细胞(I型和II型)的相对比例是较低的。然而，显而易见的是，III型细胞上发生了显著的C3激活产物(例如，C3d)沉积，这可能最终导致裂解或清除(体内)。与艾库组单抗的结果相反，经CA28-2GS-BF处理的PNH RBC(右图)显示C3d基本上没有沉积，不管其是I、II或III型。
在Q1和Q2中的细胞百分比是可以忽略不计的。相对于没有抑制剂或有艾库组单抗条件下的
结果，III型细胞的百分比显著升高(61.55％)，表明(连同C3d沉积的缺失)CA28-2GS-BF对
于免于裂解的保护作用的增强。
在Q1和Q2中的细胞百分比是可以忽略不计的。相对于没有抑制剂或有艾库组单抗条件下的
结果，III型细胞的百分比显著升高(61.55％)，表明(连同C3d沉积的缺失)CA28-2GS-BF对
于免于裂解的保护作用的增强。
[1101] 实施例20：长效坎普他汀类似物在健康受试者中的1期临床试验
[1102] 启动了两个关于长效坎普他汀类似物的1期随机双盲安慰剂对照临床试验：单次递增剂量(SAD)试验和多次递增剂量(MAD)试验，来评估安全性、耐受性、药代动力学和药效学，所述长效坎普他汀类似物包含40kD的直链PEG和两个坎普他汀类似物部分(线性PEG的
每个末端各连接一个)，每个坎普他汀类似物部分包含具有SEQ ID NO:28所示的氨基酸序
列的肽，所述肽在其C末端延伸一个部分，所述部分包含用于附接至所述PEG部分的AEEAc-
Lys。为方便起见，这种化合物在实施例20-26中简称为LACA-40。在单次递增剂量试验中，将健康受试者随机分到六个组之一，剂量范围为45mg至1440mg(45、90、180、360、720或
1440mg)，溶于5％右旋糖溶液中。在试验的第一天通过皮下注射施用LACA-40，然后根据剂量水平监测29或43天。每组包括4名接受药物的受试者和1或2名接受安慰剂的受试者。在多次递增剂量试验中，连续28天每天通过皮下注射向健康受试者施用LACA-40，然后在末次给药后监测56天。受试者参与到剂量为30mg至270mg/天的(30、90、180或270mg/天)的四个组之一中。每组包括4名接受药物的受试者和1名接受安慰剂的受试者。通过密集的临床监测
来评估安全性。为了测定血清中的LACA-40浓度，进行连续血液采样。还获得了血液样品以测定补体活性相关标记物(C3、CH50和AP50)。在后几组中测量了其他相关的PD标记物(完整的C3、iC3b、C3a、C4a和C5a)。在多次给药之前，受试者接受了脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌和B型流感嗜血杆菌(Hib)的疫苗接种。
每个末端各连接一个)，每个坎普他汀类似物部分包含具有SEQ ID NO:28所示的氨基酸序
列的肽，所述肽在其C末端延伸一个部分，所述部分包含用于附接至所述PEG部分的AEEAc-
Lys。为方便起见，这种化合物在实施例20-26中简称为LACA-40。在单次递增剂量试验中，将健康受试者随机分到六个组之一，剂量范围为45mg至1440mg(45、90、180、360、720或
1440mg)，溶于5％右旋糖溶液中。在试验的第一天通过皮下注射施用LACA-40，然后根据剂量水平监测29或43天。每组包括4名接受药物的受试者和1或2名接受安慰剂的受试者。在多次递增剂量试验中，连续28天每天通过皮下注射向健康受试者施用LACA-40，然后在末次给药后监测56天。受试者参与到剂量为30mg至270mg/天的(30、90、180或270mg/天)的四个组之一中。每组包括4名接受药物的受试者和1名接受安慰剂的受试者。通过密集的临床监测
来评估安全性。为了测定血清中的LACA-40浓度，进行连续血液采样。还获得了血液样品以测定补体活性相关标记物(C3、CH50和AP50)。在后几组中测量了其他相关的PD标记物(完整的C3、iC3b、C3a、C4a和C5a)。在多次给药之前，受试者接受了脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌和B型流感嗜血杆菌(Hib)的疫苗接种。
[1103] 结果
[1104] 当在1期单次递增剂量试验中总共有24名健康受试者以高达1440mg的剂量接受单剂量的LACA-40，以及在多次递增剂量试验中总共有16名健康受试者以高达270mg/天的剂
量连续28天接受了多个剂量的LACA-40时，有11名健康受试者在试验中接受了单次或多次
安慰剂施用，并且分析显示LACA-40在两次试验中耐受性良好，未报告严重不良事件或导致研究药物停用的治疗紧急不良事件或严重不良事件。此外，在对每次试验的实验室数据、生命体征、身体检查或心电图结果的审阅中，均未观察到临床相关的安全性信号。
量连续28天接受了多个剂量的LACA-40时，有11名健康受试者在试验中接受了单次或多次
安慰剂施用，并且分析显示LACA-40在两次试验中耐受性良好，未报告严重不良事件或导致研究药物停用的治疗紧急不良事件或严重不良事件。此外，在对每次试验的实验室数据、生命体征、身体检查或心电图结果的审阅中，均未观察到临床相关的安全性信号。
[1105] LACA-40的药代动力学符合来源于临床前数据的预期，几乎观察不到受试者间的多变性。
[1106] 在多次递增剂量试验中，观察到LACA-40的血浆浓度随剂量线性升高，在第14天至第28天之间达到最大浓度。在每日给药28天后，血清浓度接近稳定状态。
[1107] 在两个试验中均观察到C3的剂量依赖性的升高，这表明LACA-40与C3结合。
[1108] 在单次递增剂量研究中，在单次剂量的1440mg LACA-40后，观察到了旁路途径介导的溶血活性(AP50)降低。
[1109] 在LACA-40的多次递增剂量试验的第三组中，在180mg/天的剂量水平下，体外血清诱导的溶血的减少早在治疗开始后7天就被观察到，并在治疗期间持续存在，而且在四名受试者中的两名中达到最大超过80％，在其他两名受试者中最大达到超过60％(图14)。在
LACA-40的多次递增剂量试验的第四组中，在270mg/天的剂量水平下，体外血清诱导的溶血的减少早在治疗开始后7天就被观察到，并在治疗期间持续存在，而且在四名受试者中的三名中达到最大超过80％。第四名受试者是异常值，相对于基线减少了大约40％。
LACA-40的多次递增剂量试验的第四组中，在270mg/天的剂量水平下，体外血清诱导的溶血的减少早在治疗开始后7天就被观察到，并在治疗期间持续存在，而且在四名受试者中的三名中达到最大超过80％。第四名受试者是异常值，相对于基线减少了大约40％。
[1110] 基于兔红细胞在补体被旁路途径(AP)激活时的溶血的标准测定法，测定了抑制离体血清诱导的溶血的百分比。兔红细胞是人AP的自发激活剂。该测定法利用了以下事实：当兔红细胞在加入EGTA以螯合Ca2+(以抑制经典和凝集素途径对补体的活化)的血清中孵育
时，AP转化酶形成，导致C3的活化以及随后红细胞的溶解，其可以通过用分光光度法检测游离血红蛋白来检测到。值得注意的是，该测定法可能会低估抑制溶血的实际百分比，因为阴性对照样品缺乏血清，而血清存在于来自受试者的样品中，并且贡献这些样品中的基线吸
光度。
时，AP转化酶形成，导致C3的活化以及随后红细胞的溶解，其可以通过用分光光度法检测游离血红蛋白来检测到。值得注意的是，该测定法可能会低估抑制溶血的实际百分比，因为阴性对照样品缺乏血清，而血清存在于来自受试者的样品中，并且贡献这些样品中的基线吸
光度。
[1111] 值得注意的是，在PNH患者的依库珠单抗(一种结合C5的补体抑制剂)临床试验中，显示对离体血清诱导的溶血(使用来自PNH患者的血清)的80％抑制率对于治疗PNH有相当
大的益处(Hillmen,P.等，N Engl J Med 2004；350:552-9)。因此，本实施例证实，至少在
180mg/天的LACA-40剂量下，达到了药理学相关水平的补体抑制。本实施例进一步证实，
LACA-40的药理学剂量安全且耐受性良好，LACA-40的药代动力学/药效学(PK/PD)谱支持每
日皮下施用，并且每日180mg和270mg的LACA-40剂量早在给药开始后七天就显著降低了溶
血活性，并且这种抑制在给药期间持续。
大的益处(Hillmen,P.等，N Engl J Med 2004；350:552-9)。因此，本实施例证实，至少在
180mg/天的LACA-40剂量下，达到了药理学相关水平的补体抑制。本实施例进一步证实，
LACA-40的药理学剂量安全且耐受性良好，LACA-40的药代动力学/药效学(PK/PD)谱支持每
日皮下施用，并且每日180mg和270mg的LACA-40剂量早在给药开始后七天就显著降低了溶
血活性，并且这种抑制在给药期间持续。
[1112] 在一个方面，来自这些研究的PK数据已被用于开发PK/PD模型，其可用于辅助PNH患者或其他被施用LACA-40的患者中的剂量选择。
[1113] 本公开涵盖这样的认识：较低剂量的LACA-40也可能对PNH有效。例如，离体血清诱导的溶血测定法仅测量MAC导致的裂解，反映血管内溶血。LACA-40(以及本文所述的某些其它化合物)保护细胞免于MAC，并且还免于C3片段(例如C3b)的调理作用，其导致血管外溶血和依库珠单抗所无法改善的潜在的功能病症。因此，不希望受任何特定理论约束，本公开教导了，在某些实施方案中，即使用的剂量低于抑制80％离体血清诱导的溶血的所需剂量，也能达到治疗PNH的功效，这至少部分地归因于对血管外溶血的抑制。
[1114] 因此，另外本实施例还证实，包含40kD的直链PEG和两个坎普他汀类似物部分的长效坎普他汀类似物的皮下给药(例如，在相关的一段时间(例如至少一天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、4周或更多)内每日皮下给药)可以实现有效的作用。本实施例具体证实了180mg/天的日剂量实现的有效作用，并且具体涵盖这样的认识：在适当情况下较高的
和较低的剂量都是可取的。本实施例还具体证实了270mg/天的日剂量达到的有效作用，并
且具体涵盖这样的认识：在适当情况下较高的和较低的剂量都是可取的。
和较低的剂量都是可取的。本实施例还具体证实了270mg/天的日剂量达到的有效作用，并
且具体涵盖这样的认识：在适当情况下较高的和较低的剂量都是可取的。
[1115] 此外，鉴于特别表明的所提供的用于LACA-40的给药方案得到的有效结果，本实施例证实了长效坎普他汀类似物，特别是包含至少两个坎普他汀类似物部分的类似物和/或
包含分子量为大约40kD(例如，在约10kD至约50kD的范围内，包括具体地，分子量为约20kD，
30kD，40kD等)的PEG部分的类似物在此类方案中的特别用途。
包含分子量为大约40kD(例如，在约10kD至约50kD的范围内，包括具体地，分子量为约20kD，
30kD，40kD等)的PEG部分的类似物在此类方案中的特别用途。
[1116] 另选地或另外地，本实施例表明总分子量为不大于约50kD的长效坎普他汀类似物在本文描述的给药方案(参见上文)中的特定用途。
[1117] 实施例21：LACA-40在PNH患者中的Ib期临床试验
[1118] 启动了LACA-40的Ib期单次和多次递增剂量临床试验，以评估LACA-40联合依库珠单抗(Soliris)在成人PNH患者中的安全性、耐受性、PK和PD。在该临床试验中，向PNH患者施用LACA-40的5％右旋糖溶液的皮下剂量，所有患者当前均正在接受依库珠单抗治疗。参加
试验的患者必须年满18岁，体重超过55公斤，已用依库珠单抗治疗至少3个月，筛查时血红蛋白<10g/dL或者在筛查前12个月内至少接受过1次输血，血小板计数>30,000/mm3，并且绝对嗜中性粒细胞计数>500个细胞/μL。在给药之前，所有受试者开始预防性的抗生素口服并接受针对脑膜炎奈瑟菌的疫苗接种。第3组和第4组的受试者还被接种针对肺炎链球菌和B
型流感嗜血杆菌(Hib)的疫苗。
试验的患者必须年满18岁，体重超过55公斤，已用依库珠单抗治疗至少3个月，筛查时血红蛋白<10g/dL或者在筛查前12个月内至少接受过1次输血，血小板计数>30,000/mm3，并且绝对嗜中性粒细胞计数>500个细胞/μL。在给药之前，所有受试者开始预防性的抗生素口服并接受针对脑膜炎奈瑟菌的疫苗接种。第3组和第4组的受试者还被接种针对肺炎链球菌和B
型流感嗜血杆菌(Hib)的疫苗。
[1119] 前两组各由两名患者组成，所述患者接受单剂量的LACA-40，随后接受至少28天的监测。如果在这一监测期后认为单剂量耐受性良好，那么患者随后接受另外连续28天每天
给予皮下剂量的LACA-40的方案。第三组和第四组分别由两名和六名患者组成，他们连续28天每天接受皮下剂量的LACA-40。研究的剂量如下：
给予皮下剂量的LACA-40的方案。第三组和第四组分别由两名和六名患者组成，他们连续28天每天接受皮下剂量的LACA-40。研究的剂量如下：
[1120] 第1组：25mg LACA-40的单次皮下剂量和5mg/天的重复皮下剂量
[1121] 第2组：50mg LACA-40的单次皮下剂量和30mg/天的重复皮下剂量
[1122] 第3组：180mg/天LACA-40的重复皮下剂量
[1123] 第4组：270mg/天LACA-40的重复皮下剂量
[1124] 通过临床监测来评估安全性，并且所有药物都由合格的护士在受试者家中或在诊所中施用。收集一系列血清血样用于测定LACA-40的浓度。评估药效学(PD)活性和效力信
号，包括乳酸脱氢酶(LDH)、血红蛋白水平、RBC的PNH克隆分布、输血要求、补体水平、RBC和网织红细胞上的C3片段沉积。
号，包括乳酸脱氢酶(LDH)、血红蛋白水平、RBC的PNH克隆分布、输血要求、补体水平、RBC和网织红细胞上的C3片段沉积。
[1125] 结果
[1126] 前三组已经完成其给药时，分析显示LACA-40的耐受性良好，报告了一起严重不良事件，其被认为不太可能与LACA-40的施用有关。
[1127] 当两名受试者完成了180mg药理学活性剂量的给药时，两者都显示出临床改善和血液生物标志物的相关变化。两名受试者的血红蛋白水平均在治疗前两周的期间升高，并
在第28天治疗结束前保持稳定。一名受试者的LDH稳定在正常上限的约1.5倍，而另一名受
试者的LDH从正常上限约1.5倍降至正常范围内。两名受试者中PNH III型(CD59阴性)RBC的
比例均大致增至两倍，从第1天到第29天分别从22.3％上升到52.5％以及从32.5％上升到
62.5％。与最近的历史数据相比，给药期间的RBC输血要求也有所降低。未报告治疗相关的严重不良事件，并且没有发生导致停药的治疗相关的不良事件。继续对第4组给药(每天
270mg)。
在第28天治疗结束前保持稳定。一名受试者的LDH稳定在正常上限的约1.5倍，而另一名受
试者的LDH从正常上限约1.5倍降至正常范围内。两名受试者中PNH III型(CD59阴性)RBC的
比例均大致增至两倍，从第1天到第29天分别从22.3％上升到52.5％以及从32.5％上升到
62.5％。与最近的历史数据相比，给药期间的RBC输血要求也有所降低。未报告治疗相关的严重不良事件，并且没有发生导致停药的治疗相关的不良事件。继续对第4组给药(每天
270mg)。
[1128] 三名受试者已经完成28天的270mg/天的皮下LACA-40给药时，全部三名受试者都显示出了相似的与血液生物标志物的相关变化相关联的临床改善。Hb水平升高，LDH水平下降，网织红细胞减少，并且PNH III型RBC百分比升高。基于对风险/收益配制的评估，批准了步骤修正，以允许在270mg/天的组中，在正在进行的依库珠单抗治疗之外再进行56天，总共
84天的不间断的继续给药。自从开始用LACA-40治疗以来，三名受试者都没有要求RBC输血。
84天的不间断的继续给药。自从开始用LACA-40治疗以来，三名受试者都没有要求RBC输血。
[1129] 这些数据证实，LACA-40的药理学剂量在患有PNH的受试者中是安全且耐受性良好的，并且LACA-40的每日皮下给药将对PNH患者的溶血活性提供持续的抑制作用。这些数据
进一步证实，对C3的抑制为对抗C5的治疗(例如，依库珠单抗治疗)具有次优应答的PNH受试者提供临床益处。
进一步证实，对C3的抑制为对抗C5的治疗(例如，依库珠单抗治疗)具有次优应答的PNH受试者提供临床益处。
[1130] 因此，本公开涵盖这样的认识：皮下给予(例如，在相关时间段(例如至少1天，2天，3天，4天，5天，6天，1周，2周，3周，4周或更长)内每天皮下给药，例如持续数月或数年)包含
40kD的直链PEG和两个坎普他汀类似物部分的长效坎普他汀类似物，无论是作为单独治疗
或者与其他疗法(例如，依库珠单抗疗法)联合。
40kD的直链PEG和两个坎普他汀类似物部分的长效坎普他汀类似物，无论是作为单独治疗
或者与其他疗法(例如，依库珠单抗疗法)联合。
[1131] 实施例22：LACA-40在PNH患者中的1b期临床试验
[1132] 在未接受过治疗的PNH患者中进行LACA-40的1b期开放标签临床试验，以评估重复剂量的LACA-40的安全性、PK、PD和初步效力。诊断为溶血性PNH的男性和女性患者均符合条件。受试者需要在试验前12个月内输过血，并且乳酸脱氢酶(LDH)水平是正常上限(ULN)的2倍以上。在给药之前，受试者被针对脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌和B型流感嗜血杆菌(Hib)的疫苗接种并开始预防性的抗生素口服。LACA-40的5％右旋糖溶液的剂量通过皮下注射连续
施用至少28天，最多连续施用84天。(在这种情况下，未接受过治疗的患者是指先前未用补体抑制剂治疗过的患者)。招募了2个组，每组3名患者。测试了用于第一组的180mg/天和用于第二个组的270mg/天的剂量。每日单次注射施用1.8ml体积的剂量，或者每日两次、每次注射施用0.9ml体积的剂量。该试验的主要效力终点是作为血管内溶血指示物的LDH水平测
量值。测量的其他相关效力标记包括血红蛋白、RBC的PNH克隆分布、总溶血补体活性
(CH50)、旁路途径介导的溶血活性(AP50)、输血要求、网织红细胞计数和C3片段在血细胞上的沉积(作为潜在的血管外溶血的指示物)。通过流式细胞术(例如，如上所述的)进行对C3
片段沉积的测量。使用与C3b、C3c和C3d交叉反应的抗体。
施用至少28天，最多连续施用84天。(在这种情况下，未接受过治疗的患者是指先前未用补体抑制剂治疗过的患者)。招募了2个组，每组3名患者。测试了用于第一组的180mg/天和用于第二个组的270mg/天的剂量。每日单次注射施用1.8ml体积的剂量，或者每日两次、每次注射施用0.9ml体积的剂量。该试验的主要效力终点是作为血管内溶血指示物的LDH水平测
量值。测量的其他相关效力标记包括血红蛋白、RBC的PNH克隆分布、总溶血补体活性
(CH50)、旁路途径介导的溶血活性(AP50)、输血要求、网织红细胞计数和C3片段在血细胞上的沉积(作为潜在的血管外溶血的指示物)。通过流式细胞术(例如，如上所述的)进行对C3
片段沉积的测量。使用与C3b、C3c和C3d交叉反应的抗体。
[1133] 结果
[1134] 组1
[1135] 在组1结束后，两名受试者已接受了28天180mg剂量的LACA-40，并且有一名受试者由于首剂后的反应而撤回了同意书。在接受了28天治疗的两名受试者中，均观察到了从第1天至第29天LDH水平的显著下降，分别从2078U/L降至1082U/L以及从1325U/L降至709U/L
(正常为100-250U/L)。这两名受试者都没有达到继续进入第2部分的标准。
(正常为100-250U/L)。这两名受试者都没有达到继续进入第2部分的标准。
[1136] 筛选血红蛋白(Hb)水平低于80g/L并且两位受试者均在给予LACA-40之前的3周中接受了输血。两名受试者的血红蛋白水平均维持在80g/L以上，且在给药期间均不需要输
血。两名受试者在停止LACA-40治疗的约4周内接受了输血。
血。两名受试者在停止LACA-40治疗的约4周内接受了输血。
[1137] 在两位受试者中III型(CD59阴性)RBC的部分均大致增至三倍，分别从第1天的5.1％和13.4％上升到第29天的17.4％和37.6％。
[1138] 在完成了28天给药的两位受试者中，LACA-40显示为安全且耐受性良好的。第三位受试者在接受了第一剂LACA-40后的5-6小时出现恶心、呕吐和皮疹。该事件被报告为可能
是与LACA-40相关的严重不良事件。为了支持在本研究中的继续参与，用体外的细胞反应性测试以及LACA-40和40kD的PEG的皮肤点刺测试进一步研究了该反应。测试得出没有T细胞
活化的证据，并且皮肤测试呈阴性结论。因此，认为所述受试者重新进入研究在医学上是安全的。但是，该受试者因个人原因撤回了同意书。
是与LACA-40相关的严重不良事件。为了支持在本研究中的继续参与，用体外的细胞反应性测试以及LACA-40和40kD的PEG的皮肤点刺测试进一步研究了该反应。测试得出没有T细胞
活化的证据，并且皮肤测试呈阴性结论。因此，认为所述受试者重新进入研究在医学上是安全的。但是，该受试者因个人原因撤回了同意书。
[1139] 组2
[1140] 在通过皮下注射施用270mg/天的LACA-40治疗的两名受试者完成了28天的治疗期后，两名受试者均表现出LDH水平显著降低至正常上限的2倍以内，以及PNH的III型红细胞
百分比的升高。如果观察到了临床益处并且如果研究人员要求的话，则该组中的受试者能
够在检验所有数据之后继续接受每日的LACA-40。两名被治疗的受试者均符合继续给药至
84天的预定标准。一位受试者因个人原因而离开研究。另一位受试者继续给药，并且在第57天测试时继续显示LDH的持续降低。第2组中的下一位受试者的给药待定。
百分比的升高。如果观察到了临床益处并且如果研究人员要求的话，则该组中的受试者能
够在检验所有数据之后继续接受每日的LACA-40。两名被治疗的受试者均符合继续给药至
84天的预定标准。一位受试者因个人原因而离开研究。另一位受试者继续给药，并且在第57天测试时继续显示LDH的持续降低。第2组中的下一位受试者的给药待定。
[1141] 综上，每天施用LACA-40是安全并且耐受性良好的，并导致在没有正在接受依库珠单抗的PNH患者中溶血的持续抑制。
[1142] 另外，本公开具体提供了某些见解，所述见解特别涉及特别适用于递送某些LACA组合物的装置的某些期望特征(例如，针的规格、针孔直径和/或壁厚等)，所述LACA组合物具体包括本文描述的某些LACA-40组合物(见上文)。
[1143] 实施例23：玻璃体内LACA-40的临床前研究
[1144] 进行了猴子中的临床前研究，以评估玻璃体内注射LACA-40时的安全性和药理学。在食蟹猴中，玻璃体内施用的LACA-40分布进入血流，然后进一步分布于身体和/或缓慢地
从身体中被排除。以剂量高达24.8mg/眼的50或100μL/眼体积的5％右旋糖溶液，在9个月的过程中的重复玻璃体内注射后，LACA-40的玻璃体和血清浓度的毒代动力学分析结果表明，在多次注射过程中，药物几乎没有眼内或血清积聚。此外，在任何测试的剂量下，全面的毒理学检验均未发现LACA-40介导的变化的证据，所述全面的毒理学检验包括通过间接照射
和裂隙灯进行眼科评估，谱域光学相干层析成像，视网膜电图，以及对每只猴子的双眼和大约50个另外的组织进行的眼压测量和组织病理学检查。
从身体中被排除。以剂量高达24.8mg/眼的50或100μL/眼体积的5％右旋糖溶液，在9个月的过程中的重复玻璃体内注射后，LACA-40的玻璃体和血清浓度的毒代动力学分析结果表明，在多次注射过程中，药物几乎没有眼内或血清积聚。此外，在任何测试的剂量下，全面的毒理学检验均未发现LACA-40介导的变化的证据，所述全面的毒理学检验包括通过间接照射
和裂隙灯进行眼科评估，谱域光学相干层析成像，视网膜电图，以及对每只猴子的双眼和大约50个另外的组织进行的眼压测量和组织病理学检查。
[1145] 对猴子中LACA-40的单次玻璃体内剂量(双眼均为10mg/眼)的药代动力学特征的评估显示玻璃体半衰期为大约3.2天。在玻璃体内注射后，LACA-40的血清浓度持续上升，直至给药后第7天，然后以10.4天的表观半衰期下降。
[1146] 另外，本公开涵盖针对包含40kD的直链PEG和两个坎普他汀类似物部分的长效坎普他汀类似物的给药方案，在所述给药方案中，根据本文所述的LACA-40的半衰期，特别地选择单个剂量的时机以确保得到预期的PK模式。
[1147] 实施例24：LACA-40在患有AMD的受试者中的1b期单次递增剂量临床试验
[1148] 在患有湿性AMD并正在接受抗VEGF疗法(特别是 或 )的患者中，启动了LACA-40的1期开放标签单次递增剂量临床试验，以评估LACA-40的安全性、耐受性和PK。在该试验中，患者通过玻璃体内注射接受单剂量的LACA-40，然后进行113天的监测。最初计划在试验中招募9名患者，以剂量为5mg、10mg和20mg的100微升体积的LACA-40的5％右旋糖溶液，分成三组，每组三名患者。所有三个组招募完成后，第三组从三名患者扩展到总共12名患者。在最初的9名患者中，LACA-40的耐受性良好，未报告严重不良事件。
[1149] 本公开内容提供了给药方案，根据所述给药方案通过玻璃体内注射施用包含40kD的直链PEG和两个坎普他汀类似物部分的长效坎普他汀类似物。在某些实施方案中，将包含
40kD的直链PEG和两个坎普他汀类似物部分的长效坎普他汀类似物作为单一疗法施用；在
某些实施方案中，将其与另一种疗法(例如抗VEGF治疗)联合施用，使得所述患者同时暴露
于两者。
40kD的直链PEG和两个坎普他汀类似物部分的长效坎普他汀类似物作为单一疗法施用；在
某些实施方案中，将其与另一种疗法(例如抗VEGF治疗)联合施用，使得所述患者同时暴露
于两者。
[1150] 本实施例具体描述并支持给药方案，在所述给药方案下，通过玻璃体内注射，向正在接受VEGF疗法的受试者施用包含40kD的直链PEG和两个坎普他汀类似物部分的长效坎普他汀类似物。在某些实施方案中，用抗VEGF疗法和LACA-40疗法两者治疗的受试者接受抗-
VEGF剂的剂量的间隔长于在其它方面相当但没有接受LACA-40疗法的受试者所用的间隔。
已经开发出了多种抗VEGF试剂(例如，在Lanzetta Br J Opthamol 97:1497,2013中的综
述)。例如，报道的用于某些抗VEGF试剂的给药方案包括玻璃体内注射0.5mg兰尼单抗或
1.25mg贝伐单抗，每4周(q4)施用一次，或者必要时施用；在某些实施方案中，将这样的方案用作适当的参照方案，相对于其来评估本文所述的抗VEGF组合治疗方案。
VEGF剂的剂量的间隔长于在其它方面相当但没有接受LACA-40疗法的受试者所用的间隔。
已经开发出了多种抗VEGF试剂(例如，在Lanzetta Br J Opthamol 97:1497,2013中的综
述)。例如，报道的用于某些抗VEGF试剂的给药方案包括玻璃体内注射0.5mg兰尼单抗或
1.25mg贝伐单抗，每4周(q4)施用一次，或者必要时施用；在某些实施方案中，将这样的方案用作适当的参照方案，相对于其来评估本文所述的抗VEGF组合治疗方案。
[1151] 根据本文提供的(包括本实施例中的)公开内容，本领域技术人员将理解，提供了某些组合治疗方案，例如，根据所述方案，LACA-40和抗VEGF试剂各以玻璃体内的方式施用；
在某些实施方案中，针对某些(但不一定是全部)剂量，LACA-40和抗-VEGF可以在单次注射
中一起施用。在某些实施方案中，相较于在不施用LACA-40的条件下施用的剂量，在选定的一段时间内施用更少的抗VEGF剂量。
在某些实施方案中，针对某些(但不一定是全部)剂量，LACA-40和抗-VEGF可以在单次注射
中一起施用。在某些实施方案中，相较于在不施用LACA-40的条件下施用的剂量，在选定的一段时间内施用更少的抗VEGF剂量。
[1152] 实施例25：LACA-40在患有地图样萎缩的受试者中2期单次递增剂量临床试验
[1153] 在GA患者中进行了LACA-40的随机单盲假性对照临床试验。试验招募了大约240名患者。试验中的患者被诊断为继发与年龄相关性黄斑变性的黄斑地图样萎缩，在进行随机
分配之前的14天内，通过使用眼底自发荧光图像的中央阅读中心以及以下标准进行确认：
总GA面积必须≥2.5mm2并且≤17.5mm2(分别为1个和7个视盘面积[DA])，通过筛选FAF的图
像确定。
分配之前的14天内，通过使用眼底自发荧光图像的中央阅读中心以及以下标准进行确认：
总GA面积必须≥2.5mm2并且≤17.5mm2(分别为1个和7个视盘面积[DA])，通过筛选FAF的图
像确定。
[1154] 患者以2:2:1:1的方式随机分配为每月接受一次LACA-40、每隔一个月接受一次LACA-40、每月接受一次假性注射或每隔一个月接受一次假性注射。LACA-40臂(arm)中的患者接受12个月15mg剂量的LACA-40，以0.1cc的体积注射到玻璃体液中，每月一次或每隔一
个月一次，然后在治疗结束后进行6个月的监测。在假性注射组中，患者接受模拟注射。评估了多次玻璃体内注射LACA-40在GA患者至少一只眼中的安全性、耐受性、PK和活性证据。主要效力终点为GA病灶大小从基线至第12个月的变化。所述试验被设计用来检测在LACA-40
臂和假性对照臂之间从基线至第12个月期间病灶大小生长减少至少30％。主要的安全性终
点为局部和全身性治疗的紧急不良事件的次数和严重程度。
个月一次，然后在治疗结束后进行6个月的监测。在假性注射组中，患者接受模拟注射。评估了多次玻璃体内注射LACA-40在GA患者至少一只眼中的安全性、耐受性、PK和活性证据。主要效力终点为GA病灶大小从基线至第12个月的变化。所述试验被设计用来检测在LACA-40
臂和假性对照臂之间从基线至第12个月期间病灶大小生长减少至少30％。主要的安全性终
点为局部和全身性治疗的紧急不良事件的次数和严重程度。
[1155] 实施例26：LACA-40在患有中晚期AMD的受试者中的的2期单次递增剂量临床试验
[1156] 在患有中晚期AMD患者中进行了LACA-40的随机单盲假性对照临床试验。试验中的患者被诊断为中晚期年龄相关性黄斑变性。试验的目的是评估LACA-40是否能预先阻止中
晚期AMD发展成GA或湿性AMD。
晚期AMD发展成GA或湿性AMD。
[1157] 患者以2:2:1:1的方式随机分配为每月接受一次LACA-40、每隔一个月接受一次LACA-40、每月接受一次假性注射或每隔一个月接受一次假性注射。LACA-40臂中的患者接
受至少12个月15mg剂量LACA-40，以0.1cc的体积注射到玻璃体液中，每月一次或每隔一个
月一次，然后在治疗结束后进行6个月的监测。在假性注射组中，患者接受模拟注射。评估了多次玻璃体内注射LACA-40在中晚期AMD患者的至少一只眼中的安全性、耐受性和活性证
据。效力终点包括从中晚期AMD发展成GA和/或湿性AMD的发生率(与接受假性注射的患者相
比，用LACA-40治疗的患者中发生率降低，其代表了效力证据)，以及高风险玻璃膜疣的数量和/或体积和总玻璃膜疣的数量和/或体积的变化。与接受假性注射的患者相比，用LACA-40治疗的患者中玻璃膜疣数量、体积和/或生长速率的更大幅度的减少代表了效力证据。主要的安全性终点为局部和全身性治疗的紧急不良事件的次数和严重程度。
受至少12个月15mg剂量LACA-40，以0.1cc的体积注射到玻璃体液中，每月一次或每隔一个
月一次，然后在治疗结束后进行6个月的监测。在假性注射组中，患者接受模拟注射。评估了多次玻璃体内注射LACA-40在中晚期AMD患者的至少一只眼中的安全性、耐受性和活性证
据。效力终点包括从中晚期AMD发展成GA和/或湿性AMD的发生率(与接受假性注射的患者相
比，用LACA-40治疗的患者中发生率降低，其代表了效力证据)，以及高风险玻璃膜疣的数量和/或体积和总玻璃膜疣的数量和/或体积的变化。与接受假性注射的患者相比，用LACA-40治疗的患者中玻璃膜疣数量、体积和/或生长速率的更大幅度的减少代表了效力证据。主要的安全性终点为局部和全身性治疗的紧急不良事件的次数和严重程度。
[1158] 实施例27：吸入性CA28的临床前研究
[1159] 在狗和食蟹猴中进行了单剂量或重复给药的吸入性研究。在测试的最高吸入剂量下，在任何动物中都没有与药物有关的发现。在狗的7天重复剂量研究中，剂量为25mg/kg/天，在猴子的单剂量研究中，剂量为80mg/kg，以及在猴子的14天重复剂量中，剂量为30mg/kg/天。
[1160] 利用猪蛔虫刺激模型来研究CA28与皮质类固醇相比在食蟹猴中的在体内药理学效应。在14天的治疗期内和治疗停止后的28天内，将药物洗脱后，20mg/天或15mg/kg/天(连续14天)剂量的雾化CA28在过敏原刺激后控制肺中的炎性细胞因子水平(如在支气管肺泡
灌洗液中所测得)方面均具有的药理学效应。
灌洗液中所测得)方面均具有的药理学效应。
[1161] 实施例28：吸入性CA28在健康受试者中的1期单次和多次递增剂量临床试验
[1162] 进行了坎普他汀类似物(CA28)的每日雾化制剂的1期开放标签的、随机化的、安慰剂对照的单次和多次递增剂量临床试验，以评估所述药物的单次和多次吸入剂量在健康志
愿者中的安全性、耐受性和PK。将(2％甘油的)CA28溶液或安慰剂(2％甘油)经由带有灭弧
室的PARI LC 喷射式喷雾器施用，所述灭弧室由PARI S压缩机驱动。在
试验的单次递增剂量部分中，16名受试者招募至4个组中，每组4名受试者。向这些受试者施用剂量范围为20mg至350mg(20、60、150或350mg)的单剂量CA28，并在治疗后监测14天。在这部分试验中，CA-28的耐受性良好，并且未报告严重不良事件。
愿者中的安全性、耐受性和PK。将(2％甘油的)CA28溶液或安慰剂(2％甘油)经由带有灭弧
室的PARI LC 喷射式喷雾器施用，所述灭弧室由PARI S压缩机驱动。在
试验的单次递增剂量部分中，16名受试者招募至4个组中，每组4名受试者。向这些受试者施用剂量范围为20mg至350mg(20、60、150或350mg)的单剂量CA28，并在治疗后监测14天。在这部分试验中，CA-28的耐受性良好，并且未报告严重不良事件。
[1163] 试验的多次递增剂量部分的第一组中招募了四名受试者。这些受试者将连续14天接受60mg/天剂量的药物的治疗。然而，在用60mg/天的剂量治疗9天后，有一名受试者发展出与潜在的细菌感染相一致的体征和症状，其被认为可能与所述药物的药理学有关。试验
暂停，随后在受试者接受30mg/天恢复。另一名受试者发展出与潜在的细菌感染相一致的体征和症状，其被认为可能与所述药物以30mg/天剂量治疗10天后的药理学有关。于是试验终止。
暂停，随后在受试者接受30mg/天恢复。另一名受试者发展出与潜在的细菌感染相一致的体征和症状，其被认为可能与所述药物以30mg/天剂量治疗10天后的药理学有关。于是试验终止。
[1164] 两名受试者均在几小时内对一线抗生素治疗产生应答，其提示了细菌性的发病机理。在这项试验中，受试者被针对脑膜炎奈瑟菌的疫苗接种，并密切监测感染迹象。尽管细菌培养物都呈阴性，但是相信流感嗜血杆菌或肺炎链球菌可能与所观察到的发热的现象有
关，因为已知C3缺陷型个体感染脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌和肺炎链球菌的风险更高。针对这三种病原体的疫苗是已有的，并且相信感染的风险可以通过疫苗接种来解决，潜在性
地可以添加预防性抗生素(例如，青霉素V)。
关，因为已知C3缺陷型个体感染脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌和肺炎链球菌的风险更高。针对这三种病原体的疫苗是已有的，并且相信感染的风险可以通过疫苗接种来解决，潜在性
地可以添加预防性抗生素(例如，青霉素V)。
[1165] 实施例29：采用LACA和ds siRNA的组合疗法
[1166] 对另外的治疗组重复实施例20、21和22：(i)使用一定剂量和给药体积的LACA-40，每次减少5倍；(ii)使用一定剂量和给药体积的LACA-40，每次减少10倍；(iii)使用每周施用LACA-40代替每天施用。还用抑制C3表达的双链siRNA治疗受试者，所述双链siRNA每周或每月皮下施用。
[1167] 实施例30：采用LACA和ss siRNA或ASO的组合疗法
[1168] 重复实施例29，不同之处在于用抑制C3表达的单链siRNA或抑制C3表达的ASO代替双链siRNA来治疗受试者。
[1169] *****
[1170] 本领域技术人员会认识到或仅仅使用例行实验就能够确定许多与本文所述的本发明的具体实施方案等效的方案。本发明的范围无意限于上面的描述，而是如所附权利要
求所述。应当理解，本发明绝不依赖于任何具体实施例中或利用任何具体实施方案实现的
特定结果。除非指示相反情形或以其它方式从上下文显而易见，否则诸如”一个”、“一种”和”所述”等词可以指一个/种或超过一个/种。如果群体成员中的一个、超过一个或所有成员存在于指定的产品或过程中、在指定的产品或过程中使用、或以其它方式与指定的产品
或过程相关，那么认为满足在一组的一个或多个成员之间包括“或”的权利要求或描述，除非指示相反情形或以其它方式从上下文显而易见。本发明包括这样的实施方案，其中所述
组的刚好一个成员存在于给定产品或方法中、用于给定产品或方法中或者以其它方式与给
定产品或方法相关。例如，但不限于，应当理解，在权利要求或描述指示特定位置的残基可以选自特定氨基酸或氨基酸类似物组的情况下，本发明包括其中所述位置的残基是任何所
列氨基酸或氨基酸类似物的个别实施方案。本发明还包括这样的实施方案，其中所述组成
员中的超过一个或全部都存在于给定产品或方法中、用于给定产品或方法中或者以其它方
式与给定产品或方法相关。此外，应当理解，本发明包括其中将一个或多个限定、要素、条款、说明性术语等从一个或多个所列权利要求或从上述描述引入另一权利要求中的所有变
体、组合和排列。例如，可以对从属于另一权利要求的任何权利要求进行修改，以包括从属于相同基本权利要求的任何其它权利要求中所见的一个或多个要素、限定、条款或说明性
术语等。此外，当权利要求叙述一种组合物时，应当理解，根据本文中公开的任意方法施用所述组合物的方法，和为了本文中公开的任何目的而使用所述组合物的方法，都被包括在
本发明的范围内，并且根据本文中公开的任意制备方法来制备所述组合物的方法也被包括
在本发明的范围内，除非另外指出或者除非本领域普通技术人员显而易见会引起抵触或矛
盾。治疗受试者的方法可以包括：提供需要这种治疗的受试者(例如，已经具有疾病或者处于增加的具有疾病的风险中的受试者)的步骤，将受试者诊断为具有疾病的步骤，和/或选
择受试者进行细胞反应性坎普他汀类似物治疗的步骤。在将要素呈现为列表的情况下，应
当理解，也公开了所述要素的每个亚组，并且可以从所述组中除去任何要素。为了简洁的目的，本文中仅明确地叙述这些实施方案中的一些，但本发明包括所有这样的实施方案。还应当理解，一般而言，在本发明或本发明的方面被称作包含特定要素、特征等的情况下，本发明的某些实施方案或本发明的方面由这样的要素、特征等组成，或基本上由其组成。在本文中的不同标题下对不同疾病、障碍和病症的讨论是为了方便，且无意限制本发明。
求所述。应当理解，本发明绝不依赖于任何具体实施例中或利用任何具体实施方案实现的
特定结果。除非指示相反情形或以其它方式从上下文显而易见，否则诸如”一个”、“一种”和”所述”等词可以指一个/种或超过一个/种。如果群体成员中的一个、超过一个或所有成员存在于指定的产品或过程中、在指定的产品或过程中使用、或以其它方式与指定的产品
或过程相关，那么认为满足在一组的一个或多个成员之间包括“或”的权利要求或描述，除非指示相反情形或以其它方式从上下文显而易见。本发明包括这样的实施方案，其中所述
组的刚好一个成员存在于给定产品或方法中、用于给定产品或方法中或者以其它方式与给
定产品或方法相关。例如，但不限于，应当理解，在权利要求或描述指示特定位置的残基可以选自特定氨基酸或氨基酸类似物组的情况下，本发明包括其中所述位置的残基是任何所
列氨基酸或氨基酸类似物的个别实施方案。本发明还包括这样的实施方案，其中所述组成
员中的超过一个或全部都存在于给定产品或方法中、用于给定产品或方法中或者以其它方
式与给定产品或方法相关。此外，应当理解，本发明包括其中将一个或多个限定、要素、条款、说明性术语等从一个或多个所列权利要求或从上述描述引入另一权利要求中的所有变
体、组合和排列。例如，可以对从属于另一权利要求的任何权利要求进行修改，以包括从属于相同基本权利要求的任何其它权利要求中所见的一个或多个要素、限定、条款或说明性
术语等。此外，当权利要求叙述一种组合物时，应当理解，根据本文中公开的任意方法施用所述组合物的方法，和为了本文中公开的任何目的而使用所述组合物的方法，都被包括在
本发明的范围内，并且根据本文中公开的任意制备方法来制备所述组合物的方法也被包括
在本发明的范围内，除非另外指出或者除非本领域普通技术人员显而易见会引起抵触或矛
盾。治疗受试者的方法可以包括：提供需要这种治疗的受试者(例如，已经具有疾病或者处于增加的具有疾病的风险中的受试者)的步骤，将受试者诊断为具有疾病的步骤，和/或选
择受试者进行细胞反应性坎普他汀类似物治疗的步骤。在将要素呈现为列表的情况下，应
当理解，也公开了所述要素的每个亚组，并且可以从所述组中除去任何要素。为了简洁的目的，本文中仅明确地叙述这些实施方案中的一些，但本发明包括所有这样的实施方案。还应当理解，一般而言，在本发明或本发明的方面被称作包含特定要素、特征等的情况下，本发明的某些实施方案或本发明的方面由这样的要素、特征等组成，或基本上由其组成。在本文中的不同标题下对不同疾病、障碍和病症的讨论是为了方便，且无意限制本发明。
[1171] 在给出范围的情况下，包括端点。此外，应当理解，除非另外指示或以其它方式从上下文和本领域普通技术人员的理解显而易见，否则以范围表述的数值在本发明的不同实施方案中可呈现处于所述范围内的任何具体数值或子范围，其精确至该范围的下限单位的
十分之一，除非上下文另外清楚地指明。可以从权利要求中明确地排除本发明的任何特定
实施方案、方面、要素、特征等，即使这样的排除没有在本文中明确地阐述。例如，可以明确地排除任意坎普他汀类似物、官能团、连接部分、清除率降低部分、疾病或适应症。
十分之一，除非上下文另外清楚地指明。可以从权利要求中明确地排除本发明的任何特定
实施方案、方面、要素、特征等，即使这样的排除没有在本文中明确地阐述。例如，可以明确地排除任意坎普他汀类似物、官能团、连接部分、清除率降低部分、疾病或适应症。
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