富含益生菌和多肽的液态或半固态发酵全价
饲料的制备方法技术领域富含益生菌和多肽的液态或半固态发酵全价饲料的制备方法，属于
生物发 酵技术领域，具体涉及了一种采用
植物乳杆菌和酶发酵剂生产液态或半固态全 价饲料或
能量蛋白饲料的方法。 背景技术近年来营养生理学的研究证明，
蛋白质在胃和小肠中基本上
水解成小肽，进 而被
机体吸收。小肽的吸收具有转运速度快、耗能低及载体不易饱和等优点， 可避免与
氨基酸吸收之间的竞争。研究表明，小肽载体吸收能
力高于各种氨基 酸载体吸收能力的总和，因此，小肽混合物的吸收率明显高于氨基酸混合物。小肽也可以促进其他营养素的吸收。首先，除了吸收机制能促进氨基酸吸 收外，小肽本身也对氨基酸及残基的吸收有促进作用，作为肠腔的吸收底物，小 肽不仅能增加肠刷状缘氨基肽酶和二肽酶的活性，而且能提高小肽载体的数量。 第二，小肽的氨基酸残基可与
金属离子螯合，避免肠腔中拮抗因子及其他影响因 子对矿物元素的沉淀或
吸附作用，直接到达小肠刷状缘，并在吸收位点处发生水 解，从而增加矿物质元素的吸收。第三，小肽能给机体消化酶的快速合成提供完 整的氮架，在饲料中添加小肽类物质能显著提高胃蛋白酶、脂肪酶和
淀粉酶的 活性。此外，小肽可优先作为肠黏膜上皮细胞结构和功能发育的
能源底物有效 促进肠黏膜组织的发育。小肽可被完整有效吸收，从而降低进入大肠的末消化的 蛋白
质量，减少大肠后段氨气和有毒胺类的产生，对消化道起积极的保护作用， 维持消化道正常的免疫功能。另外， 一些生理活性小肽，可直接作为神经递质、 间接刺激肠道
激素受体或促进酶的分泌而发挥生理调节作用，从而促进小肠发 育。对于
反刍动物而言，具有以上所述特点外，小肽还可以促进
瘤胃内产特定 消化酶
微生物的生长，从而提高瘤胃微生物对粗饲料的利用程度。以微生物发酵法生产多肽的同时，还能将硒、
铁、
铜等无机微量元素经菌 体转化为有机微量元素，提高微量元素的利用率，减少无机元素对胃肠道的刺 激等
副作用，增加发酵产物中异黄
酮等生理活性物质的含量。而乳酸菌是人体 肠道中的正常菌群，代谢可以产生
有机酸、细菌素等多种生理活性物质，具有 维持肠道内菌群平衡，促进营养物质吸收，增强机体的免疫力等多种功能。乳 酸菌及其发酵产物作为饲料添加剂可使畜禽增重增加、成活率和生产效率提高、 免疫力增强，并具有防病治病的效果。利用乳酸菌发酵全价饲料并结合使用蛋白酶释放饲料中蛋白蕴含的小肽， 同时，乳酸菌发酵能修饰肽中的苦味因子，产生多种
风味物质，产品密封保贮 后，越贮越香，大大提高了饲料的适口性，有助于增加采食量。此产品可以使 多肽营养价值和乳酸菌益生作用相结合，会产生巨大的经济和社会效益。用本法液态、固态发酵操作简单，产品可直接饲喂动物或进行简单的后处理以长期保存，由于乳酸菌发酵后饲料pH值大大降低，同时产生了乳酸菌、苯 乳酸等有机酸和细菌素等抑菌物质，有利于抑制细菌、霉菌污染，大大提高了 饲料的安全性，有利于饲料贮存。
发明内容本发明的目的是提供一种以全价饲料、浓縮料或能量蛋白词料为原料，生 产富含活性益生菌、多肽饲料产品的方法。本发明的技术方案：以动物全价饲料、饲料浓缩料或能量蛋白饲料为原料，
粉碎至20-40目，添加乳酸菌和酶发酵剂，调节
含水量至50%〜80%， 35〜37°C 控温发酵32〜80小时得到液态或半固态发酵全价饲料；工艺为：(1) 添加乳酸菌：所采用的乳酸菌发酵剂为植物乳杆菌Lp6 (丄"Cto^"7/M p/朋torwm Lp6);初次发酵接种物为8°/。〜10%的
脱脂奶粉培养基18小时发酵液， 以后批次发酵接种为前一批发酵料或再培养纯化菌液；(2) 添加酶发酵剂：所采用的酶选自酸性蛋白酶、中性蛋白酶或
纤维素酶中 的一种或其组合；(3) 发酵条件：调节含水量至50%〜80%，搅拌均匀，35〜37。C密闭控温发 酵32〜80小时；(4) 成品处理：发酵产物直接作为饲喂动物的饲料，或低于5(TC低温鼓风烘 干得到饲料干粉、或密封后长期保存；所述添加酶的重量以原料饲料干重的重量计，分别为酸性蛋白酶0.1%〜2 %，中性蛋白酶0.05%〜0.5。％禾口/或
纤维素酶0.05%〜0.5%。所接菌液按菌种的培养基重量以全价饲料干基重量的百分比计，控制初次 植物乳杆菌的接种量为全价饲料干基重量的0.2%〜1%，以后批次发酵接种量为 新鲜发酵料的3%〜5%。所用原料为所有种类畜禽水产全价词料、浓縮料或能量蛋白饲料。本发明所得的发酵动物全价饲料经测定表明，
水溶性蛋白占词料
粗蛋白的 39%〜56%，乳酸含量在5%〜6%， pH在3.8〜4.5，乳酸菌活菌数在107以上。利用本发明所得到的发酵动物全价饲料、浓縮料或能量蛋白词料，可用于 各种
家畜日粮，鱼虾日粮或其它养殖动物日粮。本发明所述的所用畜禽、水产 全价饲料为仔猪开食全价饲料，猪肥育料，各种蛋鸡全价饲料，各种肉鸡全价 饲料，高产奶
牛补充料，各种水产全价饲料、浓縮料以及词料原料等。 样品水溶性粗蛋白测定方法：
主要
试剂：①茚三酮
显色剂（2g茚三酮溶解于50ml乙二醇甲醚后,加入 25mL pH5.5、 0.2M
醋酸盐缓冲液，25mL去离子水，O.08mmol/L SnCl2'2H20); ©50% (V/V)
乙醇溶液；◎甘氨酸。所有的试剂均为AR试剂。主要仪器：721分光光度计，pH计磁力搅拌器，半自动定氮仪等。 标准曲线的绘制：取0.1000 g干燥过的甘氨酸溶于蒸馏水后定容至100 mL， 取出2.00 mL定容到100 mL,得到20 mg/L的溶液。再取此溶液稀释成含量为2 一20昭/mL的溶液用于标准曲线的绘制。取0.5mL测定，用稀释液于试管中加 2.00mL显色剂，混匀后沸水浴中加热30min，然后冷水冷却，加入6.00 mL 50 %的乙醇溶液混匀，放置15 min，同时做空白试验。用lcm比色皿以空白管调 零于570nm处测定A值。样品提取液的制备：取发酵前、后样品lg，悬浮于按样品与水的比例为1:40 (以样品干重计算）加入水，60。C水浴作用2.5h， 5000rpm/min离心20min，得到样品提取液。样品提取液中一NH2含量的测定：取样品提取液0.2-0.5 mL定容至50 mL， 取0.4 mL稀释液于试管中并加入1.60 mL蒸馏水和1.00 mL显色剂混匀后置于 沸水浴中加热15 min，同时做空白试验，以后操作同标准曲线。利用标准曲线 计算样品提取液中一NH2的含量（mmol/g)。样品水溶性粗蛋白的计算N量X6. 25X稀释倍数水溶粗蛋白％=-X 100用茚三酮反应的提取液亳升数X样品重(g)本发明与
现有技术相比，具有以下特点和有益效果：1. 本发明采用液态或半固态发酵酶解技术，具有生产工艺简单、可控性好、 节水、节能、节省劳力、设备投资少、易于工业化生产等优势。2. 本发明方法制得富含小肽和活性益生菌畜禽水产全价词料或原料，具有增 强蛋白和矿物元素及其他营养素吸收、提供肠道有益菌的功能。3. 采用乳酸菌与酶发酵剂联合发酵全价饲料、浓縮料或原料，不仅可使饲料 中高分子的蛋白降解为小肽，还可消除饲料中
豆粕等原料含有的蛋白酶抑制因 子和胀气因子等对畜禽健康不利的成分。4. 本发明采用微生物发酵，在发酵过程中产生多种有机酸、酯类等风味物质 和细菌素，有助于提高采食量和饲料保存，
预防病原菌感染。5. 发酵产生异黄酮和酚类等生理活性物质，以及多种活性肽可提高
血浆谷胱 甘肽含量，提高超
氧化物岐化酶和谷胱甘肽过氧化物酶等抗
氧化酶活性，以及 增强机体免疫力等生物活性功能。6. 提高动物生长速度、提高饲料转化效率。能增加日增重6。/。和提高词料转 化率5%〜9%。 具体实施方式1. 原料粉碎预处理：粉碎至20-40目，全价料、浓缩料为根据各种畜禽饲养标准配制的饲料，在生产中，要对不同批次的原料的营养成分进行抽查测定。 以便合理的选择水的添加量、接种量等工艺参数。2. 菌禾中先lj备：生产菌禾中为植物孚L杆菌Lp6 (丄actok?cz7/wsp/awtarwm Lp6)， 采用8%〜10%的脱脂奶粉培养基，37。C静止培养18h，得到发酵
种子。3. 添加酶和接种植物乳杆菌：所采用的酶选自酸性蛋白酶、中性蛋白酶或 纤维素酶中的一种或其组合。同时接种培养好的植物乳杆菌发酵剂。4. 控温发酵：调节含水量至50%〜80%， 37。C密闭控温发酵32〜80小时。5. 成品处理：发酵产物可密封保存，短期内直接使用，如要长期保存，可 在低于5(TC的低温鼓风烘干至含水量低于12%。本发明添加酶的种类和酶量，菌种和原料配比，发酵
温度、时间等参数的 选择参见下列
实施例。 实施例1:配制断奶仔猪肥育猪全价词料100Kg，添加酸性蛋白酶0.8%，接种乳酸菌 液0.5%，用4(TC
自来水调含水量至50X， 35〜37。C密闭
包装发酵36小时，最 终产品的pH在4.1，发酵后可溶性蛋白是发酵前的182%左右，包装保存或直接 使用。实施例2:取肥育猪全价饲料100Kg，添加酸性蛋白酶0.4%，接种乳酸菌 液0.2%，用4(TC自来水调含水量至50X， 35〜37。C密闭发酵36小时，最终产 品的pH在4.0，发酵后可溶性蛋白是发酵前的142%左右，包装保存或直接使用。实施例3:配制断奶仔猪浓縮料100Kg，添加酸性蛋白酶1.0%，接种乳酸 菌液0.5%，用4(TC自来水调含水量至50X， 35〜37。C密闭包装发酵60小时， 最终产品的pH在4.2，发酵后可溶性粗蛋白是发酵前的152%左右，保存或直接混合其他饲料使用。 .实施例4: 100Kg菜粕粉，添加酸性蛋白酶0.5%、纤维素酶0.05%及中性 蛋白酶0.05%，接种乳酸菌液0.4%，用40"自来水调含水量至80%， 35〜37°C 密闭包装发酵72小时，最终产品的pH在3.8，发酵后可溶性粗蛋白是发酵前的 152%左右，包装保存或直接使用。
