多取代萘衍生物在制备抗肿瘤血管生成药物中的应用及药物
组合物
技术领域
[0001] 本
发明属于化合物的生物活性应用技术领域，具体而言，涉及一种
多取代萘衍生物在制备抗肿瘤血管生成药物中的应用及药物组合物。
背景技术
[0002] 血管为正常组织器官的形态发生与功能维护所必需，它与人体发育失调和多种病因导致的种种
疾病密切相关。
恶性肿瘤是威胁人类健康的重大疾病，探索安全有效的抗肿瘤
治疗策略是当今生命科学研究领域极富挑战性的课题。研究表明，肿瘤血管生成(angiogenesis)与肿瘤的生长、侵袭、转移、复发及
预后密切相关，肿瘤组织中微血管
密度已被认为是预测肿瘤转移，复发和预后的重要指标。二十世纪七十年代，Folkman等提出了通过抑制血管生成治疗肿瘤的设想。在这一理论的指导下，2004年2月，世界上第一个抗血管生成药物Avastin(基因工程重组抗VEGF单克隆
抗体)获美国FDA批准上市，用于同
化疗药物联合治疗转移性
结直肠癌。随后，治疗肾癌的多靶点酪
氨酸激酶
抑制剂索拉非尼(Nexavar)和舒尼替尼(Sutent)分别于2005年12月和2006年1月获FDA批准上市。2006年5月，用于治疗
肺癌的重组人血管内皮抑素恩度(Endostar)或我国SFDA批准在国内上市。肿瘤抗血管生成治疗(antiangiogenic cancer therapy)被认为是治疗恶性肿瘤最具发展前途的策略之一。
[0003] 对大多数实体瘤而言，肿瘤血管靶向治疗在多方面优于直接针对肿瘤细胞的细胞毒药物的普通化疗，主要表现为：(1)治疗“靶”是增殖过程中的肿瘤血管内皮细胞，因此对不同类型实体肿瘤，包括原发性肿瘤、转移性肿瘤和多药耐药肿瘤的治疗均有效；(2)肿瘤新生血管内皮细胞遗传性状稳定，产生肿瘤耐药的机会较小；(3)肿瘤细胞的生长和新陈代谢的维持需要肿瘤血管提供养料和
氧气，某一根毛细血管塌陷，使血流中断，会产生抗血管作用放大的“旁观者(bystander)”效应，使依赖它支持的周围肿瘤细胞死亡。理论上推算，每杀死一个肿瘤血管内皮细胞，能够抑制50～100个肿瘤细胞的生长；(4)肿瘤血管本身是药物作用的靶部位，药物易于到达并在局部形成较高浓度。近年来，抑制肿瘤血管形成的药物得到了广泛的关注和高度重视，人们希望寻找到高效的治疗肿瘤药物，即在抑制肿瘤的同时阻断肿瘤血管的形成，从而切断肿瘤的来源，发挥最有效的
抗肿瘤效果。
[0004] 唑来膦酸是第三代双膦酸盐药物，主要用于治疗恶性高
钙血症及骨转移癌。目前的研究发现，除抑制骨吸收外唑来膦酸还具有直接和间接的抗肿瘤活性。其中抑制肿瘤血管形成是其间接抗肿瘤作用机制之一。其抗肿瘤血管生成作用可能机制如下：(1)抑制肿瘤细胞及肿瘤间质细胞分泌VEGF，调节VEGF-VEGFR自分泌环抑制血管生成；(2)抑制血管内皮细胞迁移、黏附作用；(3)诱导循环内皮细胞祖细胞凋亡，抑制肿瘤细胞及肿瘤浸润巨噬细胞分泌MMPs；(4)抑制肿瘤细胞血管生成拟态。但唑来膦酸抑制肿瘤血管形成方面的生物活性不够理想，很难开发成抗肿瘤的一线药物。
发明内容
[0005] 本发明首次发现多取代萘衍生物具有抑制肿瘤血管生成的活性，利用该发现制备抑制肿瘤及肿瘤血管生成的药物可用于治疗或
预防与肿瘤或肿瘤血管生成相关的疾病。
[0006] 基于上述实验研究结果，本发明的第一个目的在于提供一种多取代萘衍生物的制药用途，即：多取代萘衍生物在制备抗肿瘤血管生成药物中的应用；以及多取代萘衍生物在制备治疗肿瘤或/和抑制实体瘤转移的药物中的应用。所述的多取代萘衍生物的化学结构式为：
[0007]
[0008] 本发明所涉及的活性化合物多取代萘衍生物(NY-06D)，其氢谱、
碳谱数据为：1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.75-7.11(m，13H)，4.32-4.25(m，4H)，4.05(s，2H)，3.98(s，2H)，
1.34-1.29(t，6H).13CNMR(125MHz，CDCl3)δ171.65，141.77，138.25，135.67，132.34，
131.54，130.97，130.45，130.08，129.61，128.04，128.27，128.15，127.24，126.98，126.61，
123.89，123.09，121.05，98.17，87.48，62.03，59.04，41.72，40.50，14.08ppm.[0009] 需要说明的是，本发明制备的抗癌症肿瘤血管生成药物，可适用的肿瘤类型为肺癌、
乳腺癌、胃癌、肝癌、头颈部肿瘤、胰腺癌、
宫颈癌或
前列腺癌。
[0010] 另外，本
发明人将多取代萘衍生物与双
磷酸类药物联用后，能够降低化疗的不良反应，并能够增强双磷酸类药物的抗肿瘤血管生成的敏感性，二者联用后在抗肿瘤生长方面具有协同作用。因此，本发明的第二个目的是提供一种抗肿瘤血管生成的药物组合物，该药物组合物由活性成分和药学上可用的辅料组成，所述的活性成分包括如下组分：(1)双磷酸类药物；(2)多取代萘衍生物，所述的多取代萘衍生物的化学结构式为：
[0011]
[0012] 优选地，如上所述抗肿瘤血管生成的药物组合物，其中的双磷酸类药物选自如下的一种或两种以上：唑来膦酸或其盐、伊班膦酸或其盐、奥帕膦酸或其盐、米诺膦酸或其盐、依替膦酸或其盐、帕米膦酸或其盐、阿仑膦酸或其盐。
[0013] 进一步优选地，如上所述抗肿瘤血管生成的药物组合物，其中的双磷酸类药物为唑来膦酸。
[0014] 进一步优选地，如上所述抗肿瘤血管生成的药物组合物，其中唑来膦酸与所述多取代萘衍生物的重量比为1∶(2-20)。
[0015] 进一步优选地，如上所述抗肿瘤血管生成的药物组合物，其特征在于，唑来膦酸与所述多取代萘衍生物的重量比为1∶(4-8)。
[0016] 进一步优选地，如上所述抗肿瘤血管生成的药物组合物，其特征在于，唑来膦酸与所述多取代萘衍生物的重量比为1∶5。
[0017] 进一步优选地，如上所述抗肿瘤血管生成的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物为注射制剂，所述的注射制剂包括注射液、注射用冻干粉针剂。
[0018] 与
现有技术相比，本发明首次发现多取代萘衍生物具有抑制肿瘤血管生成的活性，利用该发现制备抑制肿瘤及肿瘤血管生成的药物可用于治疗或预防与肿瘤或肿瘤血管生成相关的疾病。同时，多取代萘衍生物选择性靶向肿瘤新生血管，大幅度提高血管内皮细胞内抗肿瘤血管生成药物浓度，最大限度降低抗肿瘤血管生成药物在正常组织器官中的浓度，克服药物全身分布带来的
副作用；尤其与双磷酸类药物联用后，能够降低化疗的不良反应，并能够增强双磷酸类药物的抗肿瘤血管生成的敏感性，二者联用后在抗肿瘤生长方面具有协同作用，还可抑制肿瘤的转移和复发。
具体实施方式
[0019] 以下
实施例进一步描述本发明多取代萘衍生物(简称NY-06D)的体外和体内药效实施例，实施例仅用于例证的目的，不限制本发明的范围，同时本领域普通技术人员根据本发明所做的显而易见的改变也包含在本发明范围之内。
[0020] 实施例1：NY-06D对肿瘤细胞培养液诱导的内皮细胞迁移的影响试验
[0021] 采用创伤愈合法检测NY-06D对肿瘤细胞培养液诱导的血管内皮细胞迁移的影响：取对数生长期的人脐静脉内皮细胞株ECV304细胞正常条件培养24h，细胞长成
单层后，用直径为0.5mm的细胞刮棒在24h孔板中间划痕，切断细胞单层，用PBS冲洗2遍去掉刮下的游离细胞。
[0022] 实验分为阴性对照组、诱导组和处理组。其中诱导组为在对照组中加入10％人乳腺癌细胞MCF-7培养液，作为阳性对照；处理组为加入10％人乳腺癌细胞MCF-7培养液100μL后，再分别加入NY-06D溶液(浓度0.2mg/mL，由1640完全培养基配制，0.22μm微孔滤
膜过滤)，使其终浓度分别为10和30μg/mL，每组均设5个重复。在5％CO2的37℃
培养箱中培养24h后，在100倍的倒置光学
显微镜下观察不同处理条件下，细胞向中间划痕部位迁移情况。
[0023] 观察结果显示，10％人乳腺癌细胞MCF-7培养液能够明显促进ECV304细胞的迁移，而浓度为10和30μg/mL的NY-06D均能抑制MCF-7培养液对ECV304细胞的迁移促进作用，浓度越高，对这种诱导作用抑制越明显。这说明NY-06D具有一定的抑制肿瘤血管生成作用。
[0024] 实施例2：NY-06D对肺癌肿瘤血管生成的影响试验
[0025] 将新西兰兔随机分为NY-06D组，ZOL组，NY-06D+ZOL组，空白对照组，共4组，每组2只。按表1的剂量，各组每天灌胃2次，间隔12h，连续
给药3天，于末次灌胃1h后颈动脉
放血，4℃过夜，2500r/min离心25min，分离血清，混匀除菌过滤及灭活，-70℃冻存备用。同等条件下，以等体积的生理盐
水灌胃，制备空白对照血清。
[0026] 表1各组给药剂量
[0027]
[0028] 人肺腺癌细胞株A549及人脐静脉内皮细胞株CRL-1730，用含10％胎
牛血清的DMEM培养基于37℃、5％CO2培养箱中培养，待细胞生长至对数生长期时，以0.25％的胰酶消化传代。当A549处于对数生长期时，收集培养液，2000r/min离心5min，取其上清液(即CM)，将CM与DMEM培养液按1∶1混合，用其培养人脐静脉内皮细胞株CRL-1730即为CM诱导的内皮细胞。
[0029] 取对数生长期A549细胞，分为四组，分别加入体积分数为10％的各组含药血清和空白对照血清，静置培养24h。取对数生长期CM诱导的内皮细胞，分为四组，分别加入体积分数为10％的各组含药血清和空白对照血清，静置培养24h。
[0030] 将200μL人工基底膜(Matrigel)、0.1μg
成纤维细胞生长因子(bFGF)、5单位肝素、含药血清100μL置
冰上混匀后注入小鼠腹股沟皮下。空白血清为空白对照组，每组3只小鼠。7天后断髓法处死小鼠取出Matrigel栓，甲
醛固定，梯度脱水，
石蜡包埋切片，HE
染色，显微镜下摄片，放大100倍，计算在1个
视野内迁移入Matrigel小包内皮细胞的数量。实验重复3次。
[0031] 通过表2的试验统计结果可以看出，各给药组较空白对照组能明显抑制Martigel种植体内的内皮细胞迁移数，与空白对照组比有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01)。NY-06D+ZOL组较两个单药组比较，内皮细胞数大幅度偏少，具有统计学差异(P＜0.01)。
[0032] 表2各组含药血清对体内血管形成的影响
[0033]
[0034] 与空白对照组比较，★P＜0.05，★★P＜0.01；
[0035] 与NY-06D比较，P＜0.05， P＜0.01；
[0036] 与ZOL组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。
