专利汇可以提供通过同时测量至少两种不同分子标记物来提高检测肿瘤及其前体阶段时的临床特异性的方法专利检索,专利查询,专利分析的服务。并且本 发明 涉及一种改进病变细胞的诊断的自动化方法,所述的标记物在与 疾病 相关的基因表达中显示出变化,该方法通过应用 抗体 和确认 信号 强度的联合同时使细胞或组织样本的组成区域中的至少两种不同分子标记物 染色 。,下面是通过同时测量至少两种不同分子标记物来提高检测肿瘤及其前体阶段时的临床特异性的方法专利的具体信息内容。
1.用于鉴定癌细胞及其前体的自动化体外方法的用途,其特征在 于同时检测细胞或组织样本中至少两种标记物,并且合并和汇总信号 强度,并且至少一个分子标记物选自:her2/neu、p16、p53、Ki67、 MN、mdm-2、bc1-2和EGF受体。
2.按照权利要求1的用途,其特征在于标记物的联合物是: her2/neu和Ki67、her2/neu和p53、her2/neu和bc1-2、her2/neu 和MN、her2/neu和mdm-2、her2/neu和EGF受体、bc1-2和Ki67、 bc1-2和MN、bc1-2和mdm-2、bc1-2和EGF受体、her2/neu和bc1-2、 p53和bc1-2、p53和MN、p53和mdm-2、p53和EGF受体、p16和p53、 p16和MN、p16和mdm-2、p16和EGF受体、p16和Ki67、p16和 her2/neu、p16和bc1-2、MN和mdm-2、MN和EGF受体、mdm-2和EGF 受体。
3.按照权利要求1的用途,其特征在于所述的自动化信息处理与 一个诊断专家系统连接,该系统将图像信息归纳为建议性诊断。
4.按照权利要求1至3中任何一项的用途,其特征在于通过分析 组织样本的组成区域内的显色反应或荧光信号定量检测出所述的分子 标记物,其中将二级色彩或各个色彩的空间接近在使用至少两种标记 物提供附加信息时与单一染色比较。
5.按照权利要求1-4中任何一项的用途,其特征在于检测乳腺、 肺、子宫颈、结肠、皮肤和前列腺的肿瘤。
6.按照权利要求1-5中任何一项的用途,其特征在于它包括反 射性试验。
7.用于鉴定癌细胞及其前体的自动化体外方法,其特征在于同时 检测细胞或组织样本中至少两种标记物,并且合并和汇总信号强度, 并且至少一个分子标记物选自:her2/neu、p16、p53、Ki67、MN、mdm-2、 bc1-2和EGF受体。
8.按照权利要求7的自动化体外方法,其特征在于标记物的联合 物是:her2/neu和Ki67、her2/neu和p53、her2/neu和bc1-2、 her2/neu和MN、her2/neu和mdm-2、her2/neu和EGF受体、bc1-2 和Ki67、bc1-2和MN、bc1-2和mdm-2、bc1-2和EGF受体、her2/neu 和bc1-2、p53和bc1-2、p53和MN、p53和mdm-2、p53和EGF受体、 p16和p53、p16和MN、p16和mdm-2、p16和EGF受体、p16和Ki67、 p16和her2/neu、p16和bc1-2、MN和mdm-2、MN和EGF受体、mdm-2 和EGF受体。
9.按照权利要求7的方法,其特征在于所述的自动化信息处理与 一个诊断专家系统连接,该系统将图像信息归纳为建议性诊断。
10.按照权利要求7至9中任何一项的方法,其特征在于通过分 析组织样本的组成区域内的显色反应或荧光信号定量检测出所述的分 子标记物,其中将二级色彩或各个色彩的空间接近在使用至少两种标 记物提供附加信息时与单一染色比较。
11.按照权利要求7-10中任何一项的方法,其特征在于检测乳 腺、肺、子宫颈、结肠、皮肤和前列腺的肿瘤。
12.按照权利要求7-11中任何一项的方法,其特征在于它包括 反射性试验。
13.用于实施权利要求7-12中任何一项的方法的试验试剂盒, 其中含有所有必要的试剂。
癌性疾病仍然是全球最常见的致死原因之一。临床上存在对癌症 和癌前期的早期识别和特定检测方法的需求。此外,肿瘤的更详尽的 特征描述至关重要,以便得出有关治疗和预后的推论。这是有效的, 因为不同的癌症亚型对所施用的治疗措施产生相异的反应。因此,譬 如,当被怀疑为乳腺癌时,会更加频繁地求助于对分子标记物的免疫 组织化学染色,例如细胞角蛋白、雌激素受体、her2/neu、Ki67或 p53(例如Leek等,1994,Br.J.Cancer,69,135-139;Mokbel 等,1999,Am.J.Surgery,178,69-72;Reiner等,1990,Cancer, Res.,50,7057-7061)。而这些染色常常通过乳腺活组织检查进行, 通过针穿刺(FNA=细针吸活检)进行染色也日益增多。分子标记物也 用于有关判定肿瘤是否是原发性肿瘤或转移中。例如,对原发性感染 器官特异性的标记物的表达可以有助于这种鉴定。
近年来,业已鉴定了大量的基因,作为突变的结果,它们以变化 了的方式表达其蛋白,因而在癌的发生中起了作用。作为诊断标记 物,可以在血清和细胞水平检测到相应的蛋白质。这些蛋白质参与细 胞中多样性的生理调节过程,例如生长调控(增殖基因,例如Ki67和 mcm-5;致癌基因和肿瘤抑制基因,例如p16、EGF受体、her2/neu 和mdm-2)、细胞凋亡(自然细胞死亡,例如p53和bcl-2)、DNA修复 (msh-1)和细胞粘着(E-钙粘着蛋白、β-连环蛋白和APC)。譬如,试 验对抗上述蛋白质的特异性抗体的免疫组织化学和免疫细胞化学检 测方法适合这样的检测(van Noorden,1986,Immunocytochemistry, Modern Methods and Applications,2nd edition,Wright,Bristol, 26-53)。
已经多次证实单一标记物不足以获得有关识别病变细胞的特异 性,因为它存在于一些健康细胞中。这所基于的事实是,这些标记物 可以是参与健康细胞中的生理调节过程且只被过分高度表达的蛋白 质,所述的过分高度表达是病变细胞的一个指征。Williams等(1998, PNAS,95,14932-14937)描述了DNA复制标记物mcm-5,其检测出子 宫颈涂片的28种试验损伤/肿瘤(n=58),但在这28种正常涂片中也 提供2种错误的阳性染色。Sano等(Pathology Intl.,1998,48, 580-585)报导了标记物p16在15种正常宫颈活组织中的3种非特异 染色。虽然事实上可以在子宫颈的100%的全部损伤和肿瘤中检测到 HPV,但也可以在许多正常子宫颈上皮中检测到HPV;即,虽然检测 HPV的试验高度敏感,但它只具有低的特异性(例如Cuzick,2000, JAMA.283,108-109)。
在病理学中,人们对检测生物样本中多种标记物日益感兴趣。一 方面,这能够获得更多有关检测和定性病变细胞或组织区域的可利用 信息;另一方面,可以识别出各个标记物的非特异染色是什么并且由 此避免不正确结论。传统上,出于这种目的制备了可利用活组织的连 续切片或机体样本的多种标本(例如宫颈涂片在固定剂中),随后其分 别用特定标记物染色。这种方法存在若干缺点:患者样本材料的高度 耗费,而样本材料通常是有限的;染色试剂的高度消耗;需要大量的 时间且成本较高;而且也不可能在细胞或组织样本的特定区域中同时 清晰地探测出两种或多种标记物。虽然文献中业已报导了在生物样本 中两种或多种不同生物标记物的同时检测(DAKO,免疫酶双染色法实 践指南;Gomez等,Eur J.Histochem.,1997.41,255-259),但 该途径至今无法应用到常规诊断中,因为这些方案在任何程度上都无 法标准化。Terhavauta等人(Cytopathology,1994,5.282-293) 采用p53和Ki67在取自子宫颈损伤的活组织中的双重染色,并且在 一个细胞的某些情况中可以由HPV阳性和HPV阴性损伤衍生的基细胞 和副基细胞中检测到这两种标记物。然而,同时,作者没有利用由上 述双重染色所获得的信息,通过合并所得的结果,来描绘出有关这个 样本中肿瘤细胞存在的可靠结论。完全没有任何从自动检测肿瘤区域 的立场出发利用染色信息的尝试。而且,除了这种联合之外,没有提 及任何其它可能有利于肿瘤区域的鉴定和定性的标记物联合物。
其它在肺的肿瘤活组织上进行的双重染色在Kraeft等(Clin Cancer Res.2000,6,434-442)和Oshika等(Mod Pathol,1998,11, 1059-1063)中提及。这些参考文献中提及的抗体联合物完全不同于本 发明所基于的联合物。而且,上述两篇公开物另外要求评估活组织染 色的病理学家作出诊断。这种途径在概念上与方法的自动化毫不相 客,由此迄今无法加以考虑。
Rao等(1998,Cancer Epidemiology,Biomarkers and Evolution.7,1027-1033)描述了多种肿瘤相关性标记物(DNA含 量、G-肌动蛋白和p53)在取自乳腺组织的针穿刺材料(FNA,细针吸活 检)中的多重染色。他们解释了其结果与使用多种标记物获得比由单 独标记物的观察更加高的临床特异性的影响,并此在乳腺癌的早期识 别中发挥重要作用。作者所指出的多重染色仅限于由乳腺组织获得的 针穿刺材料,因为材料的不同特性,无法应用于其它生物材料(即活 组织和子宫颈涂片)。而且,所述的标记物联合物不同于本发明所提 及的联合物。他们不曾尝试从肿瘤区域的检测自动化的立场上利用这 些染色信息。
现有临床肿瘤诊断的进一步改进在于两个方面,一方面是样本制 备和染色的自动化,另一方面是自动图像分析,自动图像分析中包括 诊断的确立。除了节省时间且需要较少的人力以外,这条途径也可以 更加客观,并由此使诊断更加统一。用荧光或用显色染料对肿瘤细胞 或其前体中的生物标记物的染色能够做到使信号定量并由此以自动 方式读取它们。能够以自动方式实现染色方案的体系业已存在。然 而,图象分析没有被用于获得自动化诊断(LeNeel等,Clin Chim Acta, 1998,278,185-192)。最先进的体系包括利用形态学图象信息自动 化检测子宫颈涂片中的肿瘤细胞及其前体(Sawaya等,Clinical Obstetrics and Gynecology,1999,42,922-938:Stoler,2000, Mod.Pathol,13,275-284)。
除了利用PAPNET体系自动化形态检测子宫颈涂片中的异常细胞 以外,Boon等(1995,Diagn.Cytopathol,13,423-428)也使用Ki67 抗体对增殖细胞的免疫组织化学染色。然而,这种单一分子标记物的 使用无法进行任何明确地区分良性增殖细胞和致癌细胞。但是,这些 作者不曾采用至少两种分子标记物的同时检测来鉴定异常细胞。
作者为Boon等的专利(US-5544650)描述了采用免疫化学标记 物的染色如何有利于样本中增殖(致癌性和非致癌性)细胞的自动化 检测,并且如何在半自动过程中,监控病理学家/细胞学家进而可以 判断被染色细胞是否真的为致癌细胞。然而,其中没有提及任何能够 以自动化方式检测异常或肿瘤细胞的特异性抗体的联合物。
专利US-6005256(其作者为McGlynn和Akkapeddi)提供了同时 检测机体样本中多种荧光标记的标记物的装置和方法的详细描述,包 括出于鉴定癌细胞的目的装置和方法,但并没有涉及到癌症诊断的具 体应用中或提及适当的标记物联合物可以产生较高的特异性。
已知Ampersand Medical Systems Group(www.ampersandmedical.com) 正在开发一种新的用于宫颈涂片的筛选系统(InPath),除了公司内部 所拥有的样品标本以外,还包括使用荧光进行非特异生物标记物的检 测。
高效检索全球专利专利汇是专利免费检索,专利查询,专利分析-国家发明专利查询检索分析平台,是提供专利分析,专利查询,专利检索等数据服务功能的知识产权数据服务商。
我们的产品包含105个国家的1.26亿组数据,免费查、免费专利分析。
专利汇分析报告产品可以对行业情报数据进行梳理分析,涉及维度包括行业专利基本状况分析、地域分析、技术分析、发明人分析、申请人分析、专利权人分析、失效分析、核心专利分析、法律分析、研发重点分析、企业专利处境分析、技术处境分析、专利寿命分析、企业定位分析、引证分析等超过60个分析角度,系统通过AI智能系统对图表进行解读,只需1分钟,一键生成行业专利分析报告。