对5-羟色胺转运蛋白、5-羟色胺受体和去甲肾上腺素转运蛋白具有亲和性的化合物的治疗用途
阅读：702发布：2020-05-22
专利汇可以提供对5-羟色胺转运蛋白、5-羟色胺受体和去甲肾上腺素转运蛋白具有亲和性的化合物的治疗用途专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且提供了4-[2-(4-甲基苯基硫烷基)苯基]哌啶及其 治疗 上可接受的盐的 治疗用途 。，下面是对5-羟色胺转运蛋白、5-羟色胺受体和去甲肾上腺素转运蛋白具有亲和性的化合物的治疗用途专利的具体信息内容。
1.一种治疗选自以下的疾病的方法：精神运动迟缓；重症抑郁；心境恶劣障碍；环性气质；由于全身性医学状况造成的心境障碍；物质诱发的抑郁；复发性抑郁；单次发作抑郁症；儿童抑郁症；非典型抑郁症；中风后抑郁症；衰竭性抑郁；与胃肠疼痛、IBS、滥用、敌意、易激惹、疲劳、焦虑(焦虑性抑郁)、路易体病、亨廷顿病或多发性硬化有关的抑郁；与疼痛有关的广泛性焦虑障碍；季节性情感障碍(SAD)；高血压风险增高的患者中的抑郁或焦虑；
有睡眠问题的患者的抑郁或焦虑；应激相关障碍；急性应激；痴呆；轻度认知损伤(MCI)；
血管性痴呆；脑白质稀疏；小血管病；与情感障碍、抑郁、广泛性抑郁、重症抑郁障碍、焦虑障碍、广泛性焦虑障碍、惊恐症、强迫症、精神分裂、帕金森病、痴呆、艾滋病痴呆、ADHD、与年龄有关的记忆损伤、唐氏综合症、癫痫、创伤性脑损伤、Asperger综合症和色氨酸水解酶基因变异相关的认知损伤；经前、经期或经后焦虑障碍；病理性喊叫；自闭症；肥胖；厌食症；贪食症；狂食；冲动控制障碍；间歇性暴发性障碍；偷窃狂；纵火狂；病理性赌博；拨毛发癖；品行障碍；倦怠；紧张；慢性疲劳综合症；尽夜节律障碍；睡眠障碍；睡眠呼吸障碍；
呼吸不足综合症；行为障碍；老年行为障碍；与痴呆有关的行为障碍；与ADHD、Asperger综合症和自闭症有关的强迫和注意谱系障碍；痴呆和阿尔茨海默病中的攻击和躁动行为；与HPA轴活动过强有关的胰岛素抗性；鞭样损伤；害怕飞行、电梯和小房间；以及弱视；该方法包括向需要治疗的患者施用治疗有效量的4-[2-(4-甲基苯基硫烷基)苯基]哌啶及其治疗上可接受的盐(化合物I)。
2.权利要求1的方法，其中化合物I是晶态，条件是该化合物不是盐酸盐。
3.权利要求1的方法，其中化合物I是氢溴酸盐。
4.权利要求3的方法，其中化合物I是晶态，在大约6.08、14.81、19.26和25.30°2θ处有XRPD峰。
5.权利要求4的方法，其中化合物I有图1所描述的XRPD。
6.权利要求1-5中任一项的方法，其中化合物I以约1-60mg的单位剂量施用给患者。
7.权利要求6的方法，其中4-[2-(4-甲基苯基硫烷基)苯基]哌啶的氢溴酸盐以约
10-40mg向患者口服给药。
8.4-[2-(4-甲基苯基硫烷基)苯基]哌啶及其治疗上可接受的盐(化合物I)在制造用于治疗下述疾病的药物中的应用：精神运动迟缓；重症抑郁；心境恶劣障碍；环性气质；
由于全身性医学状况造成的心境障碍；物质诱发的抑郁；复发性抑郁；单次发作抑郁症；儿童抑郁症；非典型抑郁症；中风后抑郁症；衰竭性抑郁；与胃肠疼痛、IBS、滥用、敌意、易激惹、疲劳、焦虑(焦虑性抑郁)、路易体病、亨廷顿病或多发性硬化有关的抑郁；与疼痛有关的广泛性焦虑障碍；季节性情感障碍(SAD)；高血压风险增高的患者中的抑郁或焦虑；有睡眠问题的患者的抑郁或焦虑；应激相关障碍；急性应激；痴呆；轻度认知损伤(MCI)；血管性痴呆；脑白质稀疏；小血管病；与情感障碍、抑郁、广泛性抑郁、重症抑郁障碍、焦虑障碍、广泛性焦虑障碍、惊恐症、强迫症、精神分裂、帕金森病、痴呆、艾滋病痴呆、ADHD、与年龄有关的记忆损伤、唐氏综合症、癫痫、创伤性脑损伤、Asperger综合症和色氨酸水解酶基因变异相关的认知损伤；经前、经期或经后焦虑障碍；病理性喊叫；自闭症；肥胖；厌食症；贪食症；狂食；冲动控制障碍；间歇性暴发性障碍；偷窃狂；纵火狂；病理性赌博；拨毛发癖；品行障碍；倦怠；紧张；慢性疲劳综合症；尽夜节律障碍；睡眠障碍；睡眠呼吸障碍；呼吸不足综合症；行为障碍；老年行为障碍；与痴呆有关的行为障碍；与ADHD、Asperger综合症和自闭症有关的强迫和注意谱系障碍；痴呆和阿尔茨海默病中的攻击和躁动行为；与HPA轴活动过强有关的胰岛素抗性；鞭样损伤；害怕飞行、电梯和小房间；以及弱视。
9.权利要求8的应用，其中化合物I是晶态，条件是该化合物不是盐酸盐。
10.权利要求8的应用，其中化合物I是氢溴酸盐。
11.权利要求10的应用，其中化合物I是在大约6.08、14.81、19.26和25.30°2θ处有XRPD峰的晶体。
12.权利要求11的应用，其中化合物I具有图1描述的XRPD。
13.权利要求8-12中任一项的应用，其中所述的药物是约1-60mg化合物I的单位剂量。
14.权利要求13的应用，其中所述的药物是用于口服的约10-40mg单位剂量的
4-[2-(4-甲基苯基硫烷基)苯基]哌啶的氢溴酸盐。
15.4-[2-(4-甲基苯基硫烷基)苯基]哌啶及基治疗上可接受的盐用于治疗选自下述的一种疾病：精神运动迟缓；重症抑郁；心境恶劣障碍；环性气质；由于全身性医学状况造成的心境障碍；物质诱发的抑郁；复发性抑郁；单次发作抑郁症；儿童抑郁症；非典型抑郁症；中风后抑郁症；衰竭性抑郁；与胃肠疼痛、IBS、滥用、敌意、易激惹、疲劳、焦虑(焦虑性抑郁)、路易体病、亨廷顿病或多发性硬化有关的抑郁；与疼痛有关的广泛性焦虑障碍；季节性情感障碍(SAD)；高血压风险增高的患者中的抑郁或焦虑；有睡眠问题的患者的抑郁或焦虑；应激相关障碍；急性应激；痴呆；轻度认知损伤(MCI)；血管性痴呆；脑白质稀疏；
小血管病；与情感障碍、抑郁、广泛性抑郁、重症抑郁障碍、焦虑障碍、广泛性焦虑障碍、惊恐症、强迫症、精神分裂、帕金森病、痴呆、艾滋病痴呆、ADHD、与年龄有关的记忆损伤、唐氏综合症、癫痫、创伤性脑损伤、Asperger综合症和色氨酸水解酶基因变异相关的认知损伤；经前、经期或经后焦虑障碍；病理性喊叫；自闭症；肥胖；厌食症；贪食症；狂食；冲动控制障碍；间歇性暴发性障碍；偷窃狂；纵火狂；病理性赌博；拨毛发癖；品行障碍；倦怠；紧张；慢性疲劳综合症；尽夜节律障碍；睡眠障碍；睡眠呼吸障碍；呼吸不足综合症；行为障碍；老年行为障碍；与痴呆有关的行为障碍；与ADHD、Asperger综合症和自闭症有关的强迫和注意谱系障碍；痴呆和阿尔茨海默病中的攻击和躁动行为；与HPA轴活动过强有关的胰岛素抗性；鞭样损伤；害怕飞行、电梯和小房间；以及弱视。
16.权利要求15的化合物，它是晶体，条件是，该化合物不是盐酸盐。
17.权利要求15的化合物，该化合物是氢溴酸盐。
18.权利要求16的化合物，该化合物是在约6.08、14.81、19.26和25.30°2θ处有XRPD峰的晶体。
19.权利要求18的化合物，其具有图1中描述的XRPD。
20.权利要求15-19中任一项的化合物，它以约1-60mg的单位剂量施用给患者。
21.权利要求20的化合物，它是以约10-40mg向患者口服给药的4-[2-(4-甲基苯基硫烷基)苯基]哌啶的氢溴酸盐。
对5-羟色胺转运蛋白、5-羟色胺受体和去甲肾上腺素转运
技术领域
[0001] 本发明涉及具有5-羟色胺和去甲肾上腺素转运抑制活性并对5-羟色胺受体具有亲和性的化合物的治疗用途。
背景技术
[0002] 多年来医生们都喜欢用选择性5-羟色胺再摄取抑制剂(SSRI)治疗多种CNS疾病，例如抑郁和焦虑，因为它们有效和安全，这比上一代的CNS药物(即，所谓的三环类药物)有利。然而，SSRI的问题是，存在相当多的无应答者，即，对治疗不响应或不完全响应的患者。另外，通常SSRI要在治疗数周后才开始显现效果。最后，虽然SSRI的副作用一般较三环类药物小，但服用SSRI常常也产生不利作用，例如睡眠障碍。
[0003] 已知对5-羟色胺转运蛋白(SERT)的抑制与对一种或多种5-羟色胺受体的活性相结合会造成5-羟色胺水平的更快增高。业已报道，作为5-HT1A部分激动剂的吲哚洛尔与5-羟色胺再摄取抑制剂结合，会造成效应更快发生[Psych.Res.，125，81-86，2004]。类似地，已经发现5-羟色胺再摄取抑制剂与具有5-HT2C拮抗作用或逆激动作用的化合物(在5-HT2C受体具有负效力的化合物)相结合，如微渗析实验所测定的，造成终末区域中5-HT水平的显著增加[WO 01/41701]。因为SERT化合物的疗效据信是由于诱导的5-羟色胺水平增高产生的，所以这些活性的结合意味着临床疗效显现时间较短和5-羟色胺再摄取抑制剂的疗效扩大或增强。
[0004] 几种神经递质被设想参与了调节认知力的神经元活动。特别是，胆碱能系统在认知方面起着主要作用，因此，影响胆碱能系统的化合物有可能适用于治疗认知损伤。已经影响5-HT3受体的化合物会影响胆碱能系统，它们因此可能适用于治疗认知损伤。
[0005] 众所周知，5-HT2受体的拮抗剂，特别是5-HT2A和5-HT2C拮抗剂可用于治疗睡眠障碍[Neuropharmacol.，33，467-471，1994；Bioorg.Med.Chem.Lett.，15，3665-3669，2005]。
[0006] 因此，作为SERT抑制剂和5-HT2A/C和5-HT3受体的抑制剂的那些化合物，预期在治疗还患有会从5-羟色胺水平增高受益的疾病的患者中的认知损伤方面会特别有用。这样的治疗性介入预期比使用SERT化合物常产生的对睡眠的不利作用要小。这些不利作用包括入睡和保持睡眠的问题，失眠问题，受抑的快速眼动(REM)睡眠，睡眠潜伏期增加，低效睡眠，夜间醒觉增多，和断裂性睡眠[Hum.Psychopharm.Clin.Exp.，20，533-559，2005；Int.Clin.Psychpharm.，21(Suppl.1)，S25-S29，2006]。
[0007] 国际专利申请WO 2003/029232公开了游离碱及其相应的HCl盐形式的化合物4-[2-(4-甲基苯基硫烷基)苯基]哌啶。据报道，该化合物是5-羟色胺转运蛋白和5-HT2C受体的抑制剂，并可用于治疗情感性障碍，例如抑郁和焦虑。
[0008] WO 2007/144006公开了4-[2-(4-甲基苯基硫烷基)苯基]哌啶的进一步的药学应用，还公开了该化合物除了是5-羟色胺转运蛋白抑制剂以外，还是去甲肾上腺素转运蛋白抑制剂，以及5-HT2A和5-HT3受体及α1肾上腺素能受体的拮抗剂。发明概要
[0009] 本发明人发现，除了已知的药理性质以外，4-[2-(4-甲基苯基硫烷基)苯基]哌啶还是去甲肾上腺素再摄取的有效抑制剂和5-羟色胺受体3(5-HT3)的拮抗剂。因此，本发明涉及治疗某些疾病的方法，包括向需要治疗的患者施用4-[2-(4-甲基苯基硫烷基)苯基]哌啶及其可药用的盐。
[0010] 在一项实施方案中，本发明涉及4-[2-(4-甲基苯基硫烷基)苯基]哌啶及其可药用的盐制造用于治疗某些疾病的药物的用途。
[0011] 在一项实施方案中，本发明涉及4-[2-(4-甲基苯基硫烷基)苯基]哌啶及其可药用的盐用于治疗某些疾病。
[0013] 图1：化合物I的HBr加成盐的X射线衍射图
[0014] 图2：化合物I的HBr加成盐的溶剂化物的X射线衍射图
[0015] 图3：化合物I的DL-乳酸加成盐的X射线衍射图
[0016] 图4：化合物I的L-天冬氨酸加成盐(1∶1)在与L-天冬氨酸的混合物中的X射线衍射图
[0017] 图5：化合物I的L-天冬氨酸加成盐(1∶1)的水合物在与L-天冬氨酸的混合物中的X射线衍射图
[0018] 图6：化合物I的谷氨酸加成盐(1∶1)在与谷氨酸一水合物的混合物中的X射线衍射图
[0019] 图7：化合物I的戊二酸加成盐(1∶1)的X射线衍射图
[0020] 图8：化合物I的丙二酸加成盐(1∶1)(α型)的X射线衍射图
[0021] 图9：化合物I的丙二酸加成盐(1∶1)(β型)的X射线衍射图
[0023] 图11：服用本发明化合物时前额叶皮质中的多巴胺水平
[0024] 发明详述
[0025] 本发明涉及化合物I，即，4-[2-(4-甲基苯基硫烷基)苯基]哌啶，及其可药用盐的用途。4-[2-(4-甲基苯基硫烷基)苯基]哌啶的结构是
[0026]
[0027] 在一项实施方案中，所述的可药用盐是无毒性酸的酸加成盐。该盐包括从有机酸制得的盐，例如马来酸、富马酸、苯甲酸、抗坏血酸、丁二酸、乙二酸、双亚甲基水杨酸、甲磺酸、乙二磺酸、乙酸、丙酸、酒石酸、水杨酸、柠檬酸、葡糖酸、乳酸、苹果酸、丙二酸、扁桃酸、肉桂酸、柠康酸、天冬氨酸、硬脂酸、棕榈酸、衣康酸、乙醇酸、对氨基苯甲酸、谷氨酸、苯磺酸、茶碱乙酸、以及8-卤代茶碱，例如8-溴茶碱的盐。该盐也可以由无机酸，例如由氢溴酸、盐酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸和硝酸制得。其它的可用盐列在实施例3的表中(表1)。
[0028] 在一项实施方案中，本发明提供了化合物I的应用，条件是，化合物I不是非晶形式的游离碱，或晶体形式的盐酸盐。
[0029] 口服剂型，特别是片剂和胶囊剂，由于易于服用和因此有较好的顺应性，常常受到患者和医师的青睐。对于片剂和胶囊剂，最好是活性成分是晶态。在一项实施方案中，化合物I是晶态，特别是在它不是盐酸盐的条件下。
[0030] 在本发明中使用的晶体可以以溶剂化物的形式存在，即，晶体中溶剂分子构成晶体结构的一部分。溶剂化物可以由水形成，在这种情形溶剂化物常被称作水合物。或者是，溶剂化物可以由其它溶剂，例如乙醇、丙酮或乙酸乙酯等形成。溶剂化物的准确数量常常与条件有关。例如，水合物通常在温度升高或者相对湿度减小时失水。条件(例如湿度)变化时不改变或只有很小变化的那些化合物，一般被认为更适合药物制剂。应当注意，HBr加成盐在从水中沉淀时不形成水合物，而诸如丁二酸盐、苹果酸盐和酒石酸盐等化合物则形成。
[0031] 一些化合物是吸湿的，即，当其暴露于湿汽中时会吸水。吸湿性通常被认为是药剂中要存在的化合物的不良性质，特别是在干的制剂中，例如片剂或胶囊剂。在一项实施方案中，本发明提供低吸湿性的晶体。
[0032] 对于使用晶态活性成分的口服剂型，如果该晶体是严格定义的会有好处。在本文中，术语“严格定义的”特别是指化学计量比被严格限定，即，形成该盐的离子之间的比例是小整数之间的比例，例如1∶1、1∶2、2∶1、1∶1∶1等。在一项实施方案中，本发明化合物是严格定义的晶体。
[0033] 活性成分的溶解度对于剂型的选择也是重要的，因为它可以直接影响生物利用度。对于口服剂型，一般认为活性成分的溶解度较高会有利，因为它增加生物利用度。一些患者，例如老年患者，吞咽药片可能有困难，口服滴剂可能是合适的替代物以避免需要吞咽药片。为了限制口服滴剂的体积，活性成分在溶液中必须有高浓度，这也需要化合物的高溶解度。如表3中所示，DL-乳酸、L-天冬氨酸、谷氨酸、戊二酸和丙二酸的加成盐具有极高的溶解度。
[0034] 晶形影响化合物的过滤和加工性能。针形结晶在生产环境中会更难处理，因为过滤变得更难和耗时。指定的盐的准确晶形与盐沉淀的条件有关。本发明中使用的HBr酸加成盐在从乙醇、乙酸和丙醇中沉淀时生成针形的溶剂化晶体，但当HBr加成盐从水中沉淀时则形成非针形的非水合形式的晶体，具有优越的过滤性质。
[0035] 表3还描述了最终pH，即，盐的饱和溶液中的pH。此性质很重要，因为在储存期间无法完全避免水汽，而水汽的积累会造成含有低最终pH的盐的药片内部或表面的pH减小，这可能缩短存放(shell)期限。另外，具有低的最终pH值的盐可能造成工艺设备的腐蚀，如果片剂是用湿法造粒制备的话。表3的数据表明HBr、HCl和己二酸加成盐在这方面性能优越。
[0036] 在一项实施方案中，本发明中使用的化合物，即，式I化合物，是HBr加成盐。
[0037] 在一项实施方案中，本发明中使用的化合物是DL-乳酸加成盐，特别是1∶1盐。
[0038] 在一项实施方案中，本发明中使用的化合物是L-天冬氨酸加成盐，特别是1∶1盐。
[0039] 在一项实施方案中，本发明中使用的化合物是谷氨酸加成盐，特别是1∶1盐。
[0040] 在一项实施方案中，本发明中使用的化合物是戊二酸加成盐，特别是1∶1盐。
[0041] 在一项实施方案中，本发明中使用的化合物是丙二酸加成盐，特别是1∶1盐，该盐被发现存在两种多晶形变体α和β，其中β型由于溶解度较小而被认为是最稳定的形式。
[0042] 在一项实施方案中，本发明中使用的化合物是纯化形式。术语“纯化形式”意在指示该化合物根据具体情况基本上不含其它化合物或其它晶形(即，该化合物的多晶形物)。
[0043] 在一项实施方案中，本发明中使用的化合物是晶体形式，特别是纯化形式的HBr加成盐。在另一实施方案中，该HBr盐的X射线粉末衍射图(XRPD)于大约6.08°、14.81°、19.26°和25.38°2θ角有峰，特别是，该HBr盐具有图1中描述的XRPD。
[0044] 在一项实施方案中，本发明中使用的化合物是晶体形式，特别是纯化形式的DL-乳酸加成盐(1∶1)。在另一实施方案中，该DL-乳酸加成盐的XRPD在约5.30°、8.81°、9.44°和17.24°2θ有峰，特别是，该DL乳酸加成盐具有图2所示的XRPD。
[0045] 在一项实施方案中，本发明中使用的化合物是晶体形式，特别是纯化形式的L-天冬氨酸加成盐(1∶1)。在另一实施方案中，该L-天冬氨酸加成盐是未溶剂化的，其XRPD在约11.05°、20.16°、20.60°和25.00°2θ有峰。在一项实施方案中，该L-天冬氨酸盐当与L-天冬氨酸混合时具有图3中所示的XRPD。在一项实施方案中，该L-天冬氨酸加成盐是水合物，特别是纯化的形式。在另一实施方案中，该L-天冬氨酸加成盐水合物的XRPD在约7.80°、13.80°、14.10°和19.63°2θ有峰。在一项实施方案中，该L-天冬氨酸加成盐水合物当与L-天冬氨酸混合时，具有图4中所示的XRPD。
[0046] 在一项实施方案中，本发明中使用的化合物是晶体形式，特别是纯化形式的谷氨酸加成盐(1∶1)。在另一实施方案中，该谷氨酸加成盐的XRPD在约7.71°、14.01°、19.26°和22.57°2θ有峰，特别是，该谷氨酸盐当与谷氨酸一水合物混合时，具有图5中所示的XRPD。
[0047] 在一项实施方案中，本发明中使用的化合物是晶体形式，特别是纯化形式的丙二酸加成盐(1∶1)。在另一实施方案中，该丙二酸加成盐是α形式，并且其XRPD在约10.77°、16.70°、19.93°和24.01°2θ有峰，或者该丙二酸加成盐是β形式，并且其XRPD在约6.08°、10.11°、18.25°和20.26°2θ有峰，特别是，该丙二酸加成盐具有图7或8所示的XRPD。
[0048] 在一项实施方案中，本发明中使用的化合物是晶体形式，特别是纯化形式的戊二酸加成盐(1∶1)。在另一实施方案中，该戊二酸加成盐的XRPD在约9.39°、11.70°、14.05°和14.58°2θ有峰，特别是，该戊二酸加成盐具有图6中描述的XRPD。
[0049] 化合物I的药理作用包括5-羟色胺和去甲肾上腺素再摄取抑制作用和5-HT3拮抗作用。这些活性表明，化合物I在治疗疼痛(例如慢性疼痛)方面可能特别有用[Clin.Ther.26，951-979，2004；Exp.Opin.Ther.Targets，11，527-540，2007]。实际上，实施例6中提供的数据表明，式I化合物可用于治疗疼痛。化合物I可以用来治疗疼痛，或用于治疗与其它疾病(例如CNS疾病，特别是抑郁和焦虑)有关的疼痛。
[0050] 实施例4中列出的数据表明，化合物I引起前额叶皮质和海马中乙酰胆碱的胞外浓度增高。早就有临床证据表明，提高脑中乙酰胆碱的水平一般会有助于治疗阿尔茨海默病和认知损伤，参见乙酰胆碱酯酶抑制剂在治疗阿尔茨海默病中的应用。
[0051] 实施例5中列出的数据表明，化合物I引起前额叶皮质中多巴胺胞外浓度增高。根据帕金森病患者的执行和认知功能在用多巴胺受体激动剂或多巴治疗时会有改进的事实，已经提出多巴胺水平对认知功能也起重要作用。在老年抑郁症和焦虑症中，即，在老年群体的抑郁和焦虑症中，认知损伤很常见。对本发明中使用的化合物展示的数据表明，这些化合物可用于治疗老年群体的抑郁或焦虑症。
[0052] 认知缺陷或认知损伤包括认知功能或认知范围减退，例如，工作记忆、注意和警觉、词语学习和记忆、视觉学习和记忆、推理和求解(例如执行功能)、处理速度和/或社会认知功能减退。特别是，认知缺陷或认知损伤可指示注意力缺陷，思维混乱，思维缓慢，理解困难，专注性差，问题求解受损，记忆力差，表达思想困难和/或综合思想、感觉及行为有困难，或难以摆脱无关思想。术语“认知缺陷”和“认知损伤”是用来指示同一概念，可以互换使用。
[0053] 在一项实施方案中，化合物I还可用于治疗除了认知损伤外还确诊患有其它CNS障碍的患者，所述的其它CNS障碍包括情感性障碍，例如抑郁；广泛性抑郁；重症抑郁障碍；焦虑障碍，包括广泛性焦虑障碍和惊恐症；强迫症；神经分裂症；帕金森病；痴呆，艾滋病痴呆；注意缺陷多动障碍；与年龄有关的记忆损伤；唐氏综合症，色氨酸水解酶基因变异，或阿尔茨海默病。
[0054] 认知损伤是抑郁症，例如重症抑郁障碍的典型特点之一。抑郁状态的改善也会导致认知损伤的改善，在这个意义上，认知障碍在某种程度上可以是抑郁的继发结果。然而，也有清楚的证据表明，认知障碍确实与抑郁无关。例如，研究表明在从抑郁中恢复时产生永久性认知损伤[J.Nervous Mental Disease，185，748-754，197]。另外，抗抑郁药对抑郁和认知损伤的效果不同进一步支持了抑郁和认知损伤无关的观点，即使它们常常是复合病变状态。虽然5-羟色胺和去甲肾上腺素药物在抑郁症状的改善方面效果相近，但是几项研究表明，去甲肾上腺素能系统的调节对认知功能的改善不如5-羟色胺调节的改善效果[Brain Res.Bull.，58，345-350，2002；Hum Psychpharmacol.，8，41-47，1993]。
[0055] 化合物I的认知作用还使其可用于治疗精神运动迟缓。精神运动迟缓的特征是个体的认知损伤和身体活动减慢。精神运动迟缓常见于抑郁患者，是重症抑郁的征兆。患有精神运动迟缓的患者在处理日常活动，例如穿衣，自我梳理和烹调，以及需要移动的事件(例如购货)方面会有困难。
[0056] 化合物I已用在一项多剂量临床试验中，其中70名健康的志愿者以最高达30mg/天服用化合物I或安慰剂。49名受试者接受活性化合物，21名接受安慰剂。在试验期间测量生命体征，包括血压，只是在最高剂量时有血压升高的迹象。这似乎表明化合物I在预期的临床剂量下不会造成血压升高，因此化合物I可以用来治疗患者高血压或高血压风险高的患者。
[0057] 本发明中使用的化合物的宽的药理性质表明，它们还可用于治疗那些对用SSRI治疗没有应答或没有充分应答的患者的抑郁症。
[0058] 化合物I的独特的药理性质使得该化合物可用于治疗选自以下的各种疾病：抑郁症，例如重症抑郁，精神运动迟缓，心境恶劣障碍，环性气质，由全身性医学状况引起的心境障碍，物质诱发的抑郁，复发性抑郁，单次发作抑郁症，儿童抑郁症，非典型抑郁，中风后抑郁，衰竭性抑郁，与胃肠疼痛例如IBS(肠易激综合症)、滥用、敌意、易激惹、疲劳、焦虑(焦虑性抑郁)、路易体病、亨廷顿病或多发性硬化有关的抑郁症，与疼痛有关的广泛性焦虑障碍，季节性情感障碍(SAD)，高血压风险增大的患者中的抑郁或焦虑，有睡眠问题的患者的抑郁或焦虑，应激相关性障碍，急性应激障碍，痴呆，轻度认知损伤(MCI)，精神分裂或帕金森病中的认知损伤，与年龄有关的认知损伤，血管性痴呆，脑白质稀疏(leucariosis)，小血管病；与情感障碍(例如抑郁、广泛性抑郁、重症抑郁障碍)、焦虑性障碍(包括广泛焦虑障碍和惊恐症)、强迫症、精神分裂症、帕金森病、痴呆、艾滋病痴呆、注意缺陷多动障碍(ADHD)、与年龄有关的记忆损伤、唐氏综合症、色氨酸水解酶基因变异、癫痫、创伤性脑损伤或Asperger综合症有关的认知损伤；经前、经期或经后焦虑障碍，病理性喊叫，自闭症，肥胖，厌食症，贪食症和狂食症，冲动控制障碍，间歇暴发性障碍，偷窃狂，纵火狂，病理性赌博，拨毛发癖，品行障碍，倦怠，紧张，慢性疲劳综合症，尽夜节律障碍，睡眠障碍，睡眠呼吸障碍，呼吸不足综合症、行为障碍，老年行为障碍，与痴呆有关的行为障碍，与ADHD、Asperger综合症及自闭症有关的强迫和注意谱系障碍，痴呆及阿尔茨海默病中的攻击和躁动行为，与HPA(下丘脑-垂体-肾上腺)轴活动过强有关的胰岛素抗性，鞭样损伤，害怕飞行、电梯或小房间，以及弱视。
[0059] 在这方面，重症抑郁表示按MADRS抑郁量表患者分数高于30，例如高于32或35的抑郁症。
[0060] 因此，在一项实施方案中，本发明提供了用于治疗下述疾病的方法：精神运动迟缓；重症抑郁；心境恶劣障碍；环性气质；由于全身性医学状况造成的心境障碍；物质诱发的抑郁；复发性抑郁；单次发作抑郁症；儿童抑郁症；非典型抑郁症；中风后抑郁症；衰竭性抑郁；与胃肠疼痛、IBS、滥用、敌意、易激惹、疲劳、焦虑(焦虑性抑郁)、路易体病、亨廷顿病或多发性硬化有关的抑郁；与疼痛有关的广泛性焦虑障碍；季节性情感障碍(SAD)；高血压风险增高的患者中的抑郁或焦虑；有睡眠问题的患者的抑郁或焦虑；应激相关障碍；急性应激；痴呆；轻度认知损伤(MCI)；血管性痴呆；脑白质稀疏；小血管病；与情感障碍、抑郁、广泛性抑郁、重症抑郁障碍、焦虑障碍、广泛性焦虑障碍、惊恐症、强迫症、精神分裂、帕金森病、痴呆、艾滋病痴呆、ADHD、与年龄有关的记忆损伤、唐氏综合症、癫痫、创伤性脑损伤、Asperger综合症和色氨酸水解酶基因变异相关的认知损伤；经前、经期或经后焦虑障碍；病理性喊叫；自闭症；肥胖；厌食症；贪食症；狂食；冲动控制障碍；间歇性暴发性障碍；
偷窃狂；纵火狂；病理性赌博；拨毛发癖；品行障碍；倦怠；紧张；慢性疲劳综合症；尽夜节律障碍；睡眠障碍；睡眠呼吸障碍；呼吸不足综合症；行为障碍；老年行为障碍；与痴呆有关的行为障碍；与ADHD、Asperger综合症和自闭症有关的强迫和注意谱系障碍；痴呆和阿尔茨海默病中的攻击和躁动行为；与HPA轴活动过强有关的胰岛素抗性；鞭样损伤；害怕飞行、电梯和小房间；以及弱视；所述方法包括向需要治疗的患者施用治疗有效量的化合物I。
偷窃狂；纵火狂；病理性赌博；拨毛发癖；品行障碍；倦怠；紧张；慢性疲劳综合症；尽夜节律障碍；睡眠障碍；睡眠呼吸障碍；呼吸不足综合症；行为障碍；老年行为障碍；与痴呆有关的行为障碍；与ADHD、Asperger综合症和自闭症有关的强迫和注意谱系障碍；痴呆和阿尔茨海默病中的攻击和躁动行为；与HPA轴活动过强有关的胰岛素抗性；鞭样损伤；害怕飞行、电梯和小房间；以及弱视；所述方法包括向需要治疗的患者施用治疗有效量的化合物I。
[0061] 在一项实施方案中，要治疗的患者已被诊断患有该患者所治疗的疾病。
[0062] 在一项实施方案中，本发明化合物以每天每Kg体重约0.001-100mg的数量施用。
[0063] 典型的口服剂量是每天每Kg体重约0.001-100mg，优选每天每Kg体重约0.01-50mg，一次或多次，例如1至3次给药。准确的剂量取决于给药的频率和方式，治疗对象的性别、年龄、体重和一般状况，所治疗病症的本质和严重程度，以及要治疗的任何伴随疾病和对本领域技术人员很明显的其它因素。
[0064] 成年人的典型的口服剂量是1-100mg/天本发明化合物，例如1-30mg/天，或5-25mg/天。这通常通过每天1次或2次施用0.1-50mg，例如1-25mg，比如1、5、10、15、20、
25、30、40、50或60mg本发明化合物来完成。
25、30、40、50或60mg本发明化合物来完成。
[0065] 在本文中使用时，化合物的“治疗有效量”是指在包括施用所述化合物的治疗性介入中，足以治愈、减轻或部分阻停指定疾病及其并发症的临床表现的某个数量。足以完成这一任务的数量被定义为“治疗有效量”。此术语还包括在包括施用所述化合物的治疗中，足以治愈、减轻或部分阻停指定疾病的临床表现的各个数量。用于各种目的的有效量将取决于疾病或损伤的严重程度以及治疗对象的体重和一般状况。应当理解，利用常规的实验方法，构筑一个数值矩阵并试验该矩阵中的不同的点，可以确定适当的剂量，这都属于有经验的医师的常规技能。
[0066] 本文中使用的“治疗”一词是指处治和护理患者以便对抗病症，例如疾病或障碍。此术语打算包括对于患者所患指定病症的治疗的全部范围，例如施用活性化合物以便减轻症状或并发症，延缓疾病、障碍或病症的进展，减轻或缓解症状和并发症，和/或治愈或消除疾病、障碍或病症，以及预防病症，其中预防应理解为处治和护理患者以便对抗疾病、病症或障碍，包括施用活性化合物以防止症状或并发症的发生。然而，预防(防止)性和治疗(治愈)性治疗是本发明的两个不同的方面。所治疗的患者优选是哺乳动物，特别是人类。
[0067] 在一项实施方案中，本发明涉及化合物I在制造药物中的应用，该药物用于治疗下述疾病：精神运动迟缓；重症抑郁；心境恶劣障碍；环性气质；由于全身性医学状况造成的心境障碍；物质诱发的抑郁；复发性抑郁；单次发作抑郁症；儿童抑郁症；非典型抑郁症；中风后抑郁症；衰竭性抑郁；与胃肠疼痛、IBS、滥用、敌意、易激惹、疲劳、焦虑(焦虑性抑郁)、路易体病、亨廷顿病或多发性硬化有关的抑郁；与疼痛有关的广泛性焦虑障碍；季节性情感障碍(SAD)；高血压风险增高的患者中的抑郁或焦虑；有睡眠问题的患者的抑郁或焦虑；应激相关障碍；急性应激；痴呆；轻度认知损伤(MCI)；血管性痴呆；脑白质稀疏；小血管病；与情感障碍、抑郁、广泛性抑郁、重症抑郁障碍、焦虑障碍、广泛性焦虑障碍、惊恐症、强迫症、精神分裂、帕金森病、痴呆、艾滋病痴呆、ADHD、与年龄有关的记忆损伤、唐氏综合症、癫痫、创伤性脑损伤、Asperger综合症和色氨酸水解酶基因变异相关的认知损伤；经前、经期或经后焦虑障碍；病理性喊叫；自闭症；肥胖；厌食症；贪食症；狂食；冲动控制障碍；间歇性暴发性障碍；偷窃狂；纵火狂；病理性赌博；拨毛发癖；品行障碍；倦怠；紧张；慢性疲劳综合症；尽夜节律障碍；睡眠障碍；睡眠呼吸障碍；呼吸不足综合症；行为障碍；老年行为障碍；与痴呆有关的行为障碍；与ADHD、Asperger综合症和自闭症有关的强迫和注意谱系障碍；痴呆和阿尔茨海默病中的攻击和躁动行为；与HPA轴活动过强有关的胰岛素抗性；鞭样损伤；害怕飞行、电梯和小房间；以及弱视。
[0068] 在一项实施方案中，本发明涉及使用式I化合物治疗下述疾病：精神运动迟缓；重症抑郁；心境恶劣障碍；环性气质；由于全身性医学状况造成的心境障碍；物质诱发的抑郁；复发性抑郁；单次发作抑郁症；儿童抑郁症；非典型抑郁症；中风后抑郁症；衰竭性抑郁；与胃肠疼痛、IBS、滥用、敌意、易激惹、疲劳、焦虑(焦虑性抑郁)、路易体病、亨廷顿病或多发性硬化有关的抑郁；与疼痛有关的广泛性焦虑障碍；季节性情感障碍(SAD)；高血压风险增高的患者中的抑郁或焦虑；有睡眠问题的患者的抑郁或焦虑；应激相关障碍；急性应激；痴呆；轻度认知损伤(MCI)；血管性痴呆；脑白质稀疏；小血管病；与情感障碍、抑郁、广泛性抑郁、重症抑郁障碍、焦虑障碍、广泛性焦虑障碍、惊恐症、强迫症、精神分裂、帕金森病、痴呆、艾滋病痴呆、ADHD、与年龄有关的记忆损伤、唐氏综合症、癫痫、创伤性脑损伤、Asperger综合症和色氨酸水解酶基因变异相关的认知损伤；经前、经期或经后焦虑障碍；
病理性喊叫；自闭症；肥胖；厌食症；贪食症；狂食；冲动控制障碍；间歇性暴发性障碍；偷窃狂；纵火狂；病理性赌博；拨毛发癖；品行障碍；倦怠；紧张；慢性疲劳综合症；尽夜节律障碍；睡眠障碍；睡眠呼吸障碍；呼吸不足综合症；行为障碍；老年行为障碍；与痴呆有关的行为障碍；与ADHD、Asperger综合症和自闭症有关的强迫和注意谱系障碍；痴呆和阿尔茨海默病中的攻击和躁动行为；与HPA轴活动过强有关的胰岛素抗性；鞭样损伤；害怕飞行、电梯和小房间；以及弱视。
病理性喊叫；自闭症；肥胖；厌食症；贪食症；狂食；冲动控制障碍；间歇性暴发性障碍；偷窃狂；纵火狂；病理性赌博；拨毛发癖；品行障碍；倦怠；紧张；慢性疲劳综合症；尽夜节律障碍；睡眠障碍；睡眠呼吸障碍；呼吸不足综合症；行为障碍；老年行为障碍；与痴呆有关的行为障碍；与ADHD、Asperger综合症和自闭症有关的强迫和注意谱系障碍；痴呆和阿尔茨海默病中的攻击和躁动行为；与HPA轴活动过强有关的胰岛素抗性；鞭样损伤；害怕飞行、电梯和小房间；以及弱视。
[0069] 本发明化合物可以单独地以纯化合物形式，或与可药用的载体或赋形剂相结合的形式，按单剂量或多剂量施用。本发明的药物组合物可以用可药用的载体或稀释剂以及任何其它已知的辅剂和赋形剂，按照常规技术，例如在Remington：The Science and Practice of Pharmacy，19ed.，Gennaro，Ed.，Mack Publishing Co.，Easton，PA，1995中公开的技术配制。
[0070] 药物组合物可以专门配制成经由任何合适的途径给药，例如口服、直肠、经鼻、肺、局部(包括颊含和舌下)、透皮、脑池内、腹膜内、阴道和非肠道(包括皮下、肌内、鞘内、静脉内和皮内)途径，优选的是口服途径。应当理解，优选的途径取决于所治疗的对象的一般状况和年龄，所治疗的病症的本质，和所选择的活性成分。
[0071] 用于口服的药物组合物包括固体剂型，例如胶囊剂、片剂、糖衣丸、丸剂、锭剂、粉剂和颗粒剂。必要时它们可以制备成带有包衣。
[0072] 用于口服的液体剂型包括溶液剂、乳剂、混悬剂、糖浆剂和酏剂。
[0073] 用于非肠道给药的药物组合物包括无菌的含水和非水注射溶液、分散体、悬浮液或乳状液，以及要在使用前重组形成无菌注射溶液或分散体的无菌粉末。
[0075] 本发明化合物适宜以含有约0.1-60mg，例如1mg、5mg、10mg、15mg、20mg、25mg、30mg、40mg或50mg本发明化合物的单位剂型施用。
[0076] 对于非肠道途径，例如静脉内、鞘内、肌内，及类似的给药途径，其剂量通常为口服剂量的大约一半。
[0077] 对于非肠道给药，可以使用本发明化合物在无菌的水溶液、丙二醇水溶液、维生素E水溶液或者芝麻油或花生油中的溶液。如果必要，应将这些水溶液适当缓冲，并且先用足够的盐水或葡萄糖将液体稀释剂作等渗处理。水溶液特别适合静脉内、肌内、皮下和腹膜内给药。使用的无菌水介质容易用本领域技术人员已知的标准技术得到。
[0078] 合适的药物载体包括惰性固体稀释剂或填料，无菌水溶液和各种有机溶剂。固体载体的实例是乳糖、白土、蔗糖、环糊精、滑石、明胶、琼脂、果胶、阿拉伯胶、硬脂酸镁、硬脂酸和纤维素的低级烷基醚。液体载体的实例是糖浆，花生油，橄榄油，磷脂，脂肪酸，脂肪胺，聚氧乙烯和水。将本发明化合物与可药用的载体结合形成的药物组合物，随后容易以适合所公开的给药途径的各式各样的剂型给药。
[0079] 适合口服给药的本发明的制剂可以以分离单元(例如胶囊或药片)的形式提供，每个单元中含有预定数量的活性成分，并可包含合适的赋形剂。另外，口服剂型可以是粉剂或颗粒剂，在含水或非水液体中的溶液或混悬液，或是水包油型或油包水型液体乳剂。
[0080] 如果固体载体用于口服给药，则制剂可以是片剂，例如，以粉末或小粒形式置于硬明胶胶囊中，或是糖锭或锭剂形式。固体载体的数量可以变化，但通常是从约25mg至约1g。
[0081] 如果使用液体载体，则制剂可以是糖浆剂、乳剂、软明胶胶囊或无菌的注射液(例如含水或非水液体混悬剂或溶液剂)的形式。
[0082] 片剂可以制备如下：将活性成分与常用的辅剂和/或稀释剂混合，然后在常规的压片机中将混合物压制。辅剂或稀释剂的实例包括：玉米淀粉，马铃薯淀粉，滑石，硬脂酸镁，明胶，乳糖，树胶等。通常用于此目的的任何其它辅剂或添加剂，例如着色剂、增香剂、防腐剂等，均可使用，只要它们与活性成分相容。
[0083] 含本发明化合物的胶囊剂可以制备如下：将含所述化合物的粉末与微晶纤维素及硬脂酸镁混合，将该粉末装入硬明胶胶囊中。任选地，所述胶囊可以用合适的颜料着色。通常，胶囊剂中含0.25-20％本发明化合物，例如0.5-1.0％、3.0-4.0％或者14.0-16.0％本发明化合物。可以使用这些浓度方便地在单位剂型中释放出1、5、10、15、20、25、30、40、50或60mg本发明化合物。
[0084] 注射用的溶液剂可以制备如下：将活性成分和可能的添加剂溶在一部分注射用的溶剂中，优选用无菌水，将该溶液调节至预定体积，将溶液灭菌，装入合适的安瓿瓶或小瓶中。本领域中通常使用的任何合适的添加剂均可加入，例如渗透压调节剂、防腐剂、抗氧化剂等。
[0085] 化合物I可以用例如下面列出的赋形剂配制成不同含量的片剂(百分含量为w/w％)：
[0086] 化合物I(例如HBr盐) 1-7％
[0087] 磷酸氢钙，无水 35-45％
[0088] 玉米淀粉 18-23％
[0089] 羟丙基纤维素 1-4％
[0090] 微晶纤维素 25-30％
[0091] 羟乙酸淀粉钠 1-5％
[0092] 滑石 1-3％
[0093] 硬脂酸镁 0.5-2％
[0094] 含化合物I的片剂的具体实例是：
[0095]含量 1mg 5mg 20mg
核心质量 125mg 125mg 500mg
化合物I，HBr 1.03％ 5.14％ 5.14％
无水磷酸氢钙 41.21％ 39.50％ 39.5％
玉米淀粉 21.75％ 20.35％ 20.35％
羟丙基纤维素 2.01％ 2.01％ 2.01％
微晶纤维素 27.50％ 27.50％ 27.50％
羟乙酸淀粉钠 3.00％ 3.00％ 3.00％
滑石 1.50％ 1.50％ 1.50％
硬脂酸镁 1.00％ 1.00％ 1.00％
核心质量 125mg 125mg 500mg
化合物I，HBr 1.03％ 5.14％ 5.14％
无水磷酸氢钙 41.21％ 39.50％ 39.5％
玉米淀粉 21.75％ 20.35％ 20.35％
羟丙基纤维素 2.01％ 2.01％ 2.01％
微晶纤维素 27.50％ 27.50％ 27.50％
羟乙酸淀粉钠 3.00％ 3.00％ 3.00％
滑石 1.50％ 1.50％ 1.50％
硬脂酸镁 1.00％ 1.00％ 1.00％
[0096] 或者是，化合物I可以用以下所示的赋形剂配制成不同含量的片剂(百分含量为w/w％)：
[0097] 化合物I，例如HBr盐 1-10％
[0098] 甘露醇 35-50％
[0099] 玉米淀粉 18-25％
[0100] 羟丙基纤维素 1-4％
[0101] 微晶纤维素 20-25％
[0102] 羟乙酸淀粉钠 1-5％
[0103] 硬脂酸镁 1-5％
[0104] 含化合物I的片剂的具体实例是：
[0105]含量 1mg 5mg 20mg
核心质量 90mg 90mg 360mg
化合物I，HBr 1.43％ 7.14％ 7.14％
甘露醇 44.51％ 40.74％ 40.74％
玉米淀粉 22.93％ 20.99％ 20.99％
羟丙基纤维素 2.13％ 2.13％ 2.13％
微晶纤维素 23.00％ 23.00％ 23.00％
羟乙酸淀粉钠 3.00％ 3.00％ 3.00％
硬脂酸镁 3.00％ 3.00％ 3.00％
核心质量 90mg 90mg 360mg
化合物I，HBr 1.43％ 7.14％ 7.14％
甘露醇 44.51％ 40.74％ 40.74％
玉米淀粉 22.93％ 20.99％ 20.99％
羟丙基纤维素 2.13％ 2.13％ 2.13％
微晶纤维素 23.00％ 23.00％ 23.00％
羟乙酸淀粉钠 3.00％ 3.00％ 3.00％
硬脂酸镁 3.00％ 3.00％ 3.00％
[0106] 以上示例的片剂可以被包衣，以便例如具有特殊的颜色或使药片易于吞咽。
[0107] 化合物I可以单独施用，或与其它的治疗活性化合物联合施用，其中该两种化合物可以同时或顺序地施用。可以方便地与化合物I联合施用的治疗活性化合物的实例包括镇静药或催眠药，例如苯并二氮杂 类；抗惊厥药，例如拉莫三嗪，丙戊酸，托吡酯，加巴喷丁，卡马西平；情绪稳定药，例如锂；多巴胺能药物，例如多巴胺激动剂和L-多巴；治疗ADHD的药物，例如阿托西汀；精神振奋药，例如莫达非尼，氯胺酮，哌甲酯和苯丙胺；其它的抗抑郁药，例如米氮平，米安色林和安非他酮；激素，例如T3，雌激素，DHEA和睾丸酮；非典型抗精神病药，例如奥氮平和阿立哌唑；典型抗精神病药，例如氟哌啶醇；治疗阿尔茨海默病的药物，例如胆碱酯酶抑制剂和美金刚叶酸盐，S-腺苷甲硫氨酸；免疫调节剂，例如干扰素；鸦片剂，例如丁丙诺啡；血管紧张素II受体1拮抗剂(AT1拮抗剂)；ACE抑制剂；他汀类药物；以及α-肾上腺素能拮抗剂，例如哌唑嗪。
[0108] 化合物I可以如WO 2003/029232或WO 2007/144006中所述制备。化合物I的盐可通过与适当的酸加成后沉淀来制备。沉淀可通过例如冷却、除去溶剂、加入另一种溶剂或混合手段来产生。或者是，化合物I可以如实施例中所述制备。
[0109] 本文中引用的所有参考文献，包括出版物、专利申请和专利，均以参考引用的方式全部并入本文中，该引用的程度如同各文献被个别地专门地指出以参考引用的方式并入并陈述其全部内容一样(至法律许可的最大程度)，与本文中其它地方对特定文件提供的任何分别的并入无关。
[0110] 在描述本发明的上下文中使用的术语“一个”和“此”(the)及类似对象，除非文中指出或与上下文明显矛盾，应理解成包括单数和复数。例如，短语“本发明化合物”，除非另外指出，应理解为是指本发明的各种“化合物”或具体描述的一种情形。
[0111] 除非另外指出，本文中提供的所有的准确数值均是相应的近似值的代表(例如，关于特定的因素或测量所提供的所有准确的示例值在适当时均可被认为也提供了用“约”修饰的相应的近似测量值)。
[0112] 本文中在某个或多个要素方面使用例如“含有”、“有”、“包括”或“包含”等术语对本发明任何方面的描述，除非另外说明或者明显地与上下文矛盾，也将支持本发明中由该特定的一个或多个要素“构成”、“基本上构成”或“基本上含有”所述要素的本发明的类似方面(例如，本文中被描述成含特定要素的组合物应该被理解为也描述了由该要素构成的组合物，除非另外指出或者与上下文明显矛盾)。实施例
[0113] 分析方法
[0114] X射线粉末衍射图(XRPD)是在PANalytical X’Pert PRO X-射线衍射仪上用CuKα1辐射测定的。样品在5-40°的2θ范围用X’celerator检测器以反射模式测量。
[0115] 元素成分(CHN)在Elemetar公司的Elementar Vario EL仪器上测定。每次测量用大约4mg样品，结果以两次测量的平均值的形式列出。
[0116] 实施例1A 5-羟色胺(5-HT)和去甲肾上腺素(NE)再摄取的抑制
[0117] 将等分的试验化合物和大鼠皮层突触小体制剂在37℃预培养10分钟，然后加入3 3
[H]NE或[H]5-HT(最终浓度10nM)。在10μM他舒普伦或西酞普兰存在下测定非特异性摄取，在缓冲液存在下测定总摄取。将等分液在37℃培养15分钟。培养后，经过Unifilter GF/C(预先在0.1％PEI中浸泡30分钟)过滤，使用Tomtec细胞收取程序分离被突触小体
3 3
吸收的[H]NE或[H]5-HT。洗涤滤器并在Wallac MicroBeta计数器中计数。
[H]NE或[H]5-HT(最终浓度10nM)。在10μM他舒普伦或西酞普兰存在下测定非特异性摄取，在缓冲液存在下测定总摄取。将等分液在37℃培养15分钟。培养后，经过Unifilter GF/C(预先在0.1％PEI中浸泡30分钟)过滤，使用Tomtec细胞收取程序分离被突触小体
3 3
吸收的[H]NE或[H]5-HT。洗涤滤器并在Wallac MicroBeta计数器中计数。
[0118] 本发明化合物对NET(去甲肾上腺素转运蛋白)的IC50值为23nM，对SERT(5-羟色胺转运蛋白)的IC50值为8nM。
[0119] 实施例1B 5-HT3A受体拮抗作用
[0120] 在表达人同聚5-HT3A受体的卵母细胞中，5-HT激活电流，EC50为2600nM。此电流可用典型的5-HT3拮抗剂(如昂丹司琼)拮抗。昂丹司琼在此体系中显示低于1nM的Ki值。本发明化合物在低浓度(0.1nM-100nM)显示有效的拮抗作用(IC50～10nM/Kb～2nM)，在更高浓度(100nM-100000nM)显示激动剂性质(EC50～2600nM)，达到的最大电流约为5-HT本身引起的最大电流的70-80％。在表达大鼠同聚5-HT3A受体的卵母细胞中，5-HT激活电流，EC50为3.3μM。此实验进行如下：从在0.4％MS-222中麻醉10-15分钟的成熟的雌性非洲爪蟾(Xenepus Laevis)中手术切下卵母细胞。将该卵母细胞用0.5mg/ml胶原酶(1A型，Sigma-Aldrich)在OR2缓冲液(82.5mN NaCl，2.0nM KCl，1.0mM MgCl2和5.0mM HEPES，pH7.6)中消化2-3小时。选择去掉滤泡层的卵母细胞并在补充了2mM丙酮酸钠、0.1U/l青霉素和0.1μg/l链霉素的改良的Barth盐水缓冲液[88mM NaCl，1mM KCl，15mM HEPES，
2.4mM NaHCO3，0.41mM CaCl2，0.82mM MgSO4，0.3mM Ca(NO3)2]中培养24小时。找出IV-IV期的卵母细胞，注射含有14-50pg编码人5-HT3A受体的cRNA的无核酸酶水12-48nl，在18℃培养，直到用其进行电生理学记录(注射后1-7天)。将表达人5-HT3受体的卵母细胞放入1ml浴中，用Ringer缓冲液(115mM NaCl，2.5mM KCl，10mM HEPES，1.8mM CaCl2，0.1mM MgCl2，pH7.5)灌流。将细胞用含3M KCl的琼脂堵塞的0.5-1MΩ电极穿刺，用Gene Clamp
500B放大器电压钳位在-90mV。将卵母细胞用Ringer缓冲液连续灌流，药物施加在灌流液中。5-HT激动剂溶液施加10-30秒。通过测定对于10μM 5-HT刺激的浓度响应，检验
5-HT3受体拮抗剂的效力。
2.4mM NaHCO3，0.41mM CaCl2，0.82mM MgSO4，0.3mM Ca(NO3)2]中培养24小时。找出IV-IV期的卵母细胞，注射含有14-50pg编码人5-HT3A受体的cRNA的无核酸酶水12-48nl，在18℃培养，直到用其进行电生理学记录(注射后1-7天)。将表达人5-HT3受体的卵母细胞放入1ml浴中，用Ringer缓冲液(115mM NaCl，2.5mM KCl，10mM HEPES，1.8mM CaCl2，0.1mM MgCl2，pH7.5)灌流。将细胞用含3M KCl的琼脂堵塞的0.5-1MΩ电极穿刺，用Gene Clamp
500B放大器电压钳位在-90mV。将卵母细胞用Ringer缓冲液连续灌流，药物施加在灌流液中。5-HT激动剂溶液施加10-30秒。通过测定对于10μM 5-HT刺激的浓度响应，检验
5-HT3受体拮抗剂的效力。
[0121] 实施例2A化合物I，HBr盐
[0122] 2-(4-甲苯基硫烷基)苯基溴化物
[0123] 将N-甲基吡咯烷酮(NMP)(4.5L)在充满氮气的反应器中于搅拌下用氮吹洗20分钟。依次加入4-甲基苯硫醇(900g，7.25mol)和1，2-二溴苯(1709g，7.25mol)。最后加入作为最后反应物的叔丁醇钾(813g，7.25mol)。此反应放热，结果使反应混合物的温度升至70℃。然后将反应混合物在120℃加热2-3小时，冷却至室温。加入乙酸乙酯(4L)和氯化钠水溶液(15％，2.5L)，将混合物搅拌20分钟。分离水相，用另一份乙酸乙酯(2L)萃取。
分离水相，将有机相合并，用氯化钠溶液(15％，2.5L)洗。分离有机相，用硫酸钠干燥，减压蒸发成红色油状物，其中含20-30％NMP。用甲醇将该油稀释至2倍体积，将混合物回流。再加入甲醇，直到得到透明的红色溶液。将该溶液慢慢冷却至室温并加晶种。产物以米色晶体形式结晶，将其过滤分离，用甲醇洗后在真空烘箱中于40℃干燥直至恒重。
分离水相，将有机相合并，用氯化钠溶液(15％，2.5L)洗。分离有机相，用硫酸钠干燥，减压蒸发成红色油状物，其中含20-30％NMP。用甲醇将该油稀释至2倍体积，将混合物回流。再加入甲醇，直到得到透明的红色溶液。将该溶液慢慢冷却至室温并加晶种。产物以米色晶体形式结晶，将其过滤分离，用甲醇洗后在真空烘箱中于40℃干燥直至恒重。
[0124] 4-羟基-4-(2-(4-甲苯基硫烷基)苯基)哌啶-1-羧酸乙酯
[0125] 在氮气氛和搅拌下将2-(4-甲苯基硫烷基)苯基溴(600g，2.15mol)于反应器中悬浮在庚烷(4.5L)里。室温下于10分钟内加入10M的BuLi/己烷溶液(235mL，2.36mol)。只观察到少量放热。将该悬浮液在环境温度下搅拌1小时，然后冷却至-40℃。加入溶在THF(1.5L)内的1-乙氧羰基-4-哌啶酮(368g，2.15mol)，加入速度不要比反应温度能保持低于-40℃更快。当反应完成时，将其温热至0℃，加入1M HCl(1L)并保持温度低于10℃，分离酸性的水相，用乙酸乙酯(1L)萃取。将有机相合并，用氯化钠溶液(15％，1L)萃取。有机相用硫酸钠干燥，蒸发后得到半晶态物质。将其用乙醚(250ml)浆化并过滤，在40℃的真空烘箱中干燥，直至恒重。
[0126] 4-(2-(4-甲苯基硫烷基)苯基)哌啶-1-羧酸乙酯
[0127] 将三氟乙酸(2.8kg，24.9mol)和三乙基硅烷(362g，3.1mol)装入带有有效搅拌器的反应器中。经由粉末漏斗，分批加入4-羟基-4-(2-(4-甲苯基硫烷基)苯基)哌啶-1-羧酸乙酯(462g，1.24mol)。此反应轻微放热，温度升至50℃。加料结束后，将反应混合物在60℃温热18小时，然后冷却至室温。加入甲苯(750mL)和水(750mL)。分离出有机相，水相用另一份甲苯(750mL)萃取。将有机相合并，用氯化钠溶液(15％，500mL)洗，用硫酸钠干燥。滤除硫酸钠，将滤液减压蒸发成红色油状物，在下一步中进一步加工。
[0128] 4-(2-(4-甲苯基硫烷基)苯基)哌啶氢溴酸盐
[0129] 将上一步骤(example 3)中红色油状的粗产品4-(2-(4-甲苯基硫烷基)苯基)哌啶-1-羧酸乙酯在搅拌的反应器中于氢溴酸/乙酸溶液(40％，545mL，3.11mol)混合。将该混合物在80℃加热18小时，然后冷却至室温。在冷却期间产物结晶。室温下1小时后向反应混合物中加入乙醚(800mL)，再搅拌该混合物1小时。滤出产物，用乙醚洗，在真空烘箱中于50℃干燥至恒重。
[0130] 实施例2B化合物I，HBr盐
[0131] 在搅拌下向轻微加热(约45℃)的442g油状物4-(2-对甲苯基硫烷基苯基)哌啶-1-羧酸乙酯加入545mL 33wt％的HBr/AcOH溶液(5.7M，2.5当量)。此混合造成10℃的升温。加完后将反应混合物加热至80℃，保持18小时。抽取样品用HPLC分析，如果未反应完全，则必须再加入33wt％HBr/AcOH溶液。不然就将混合物冷却至25℃，使产物4-(2-对甲苯基硫烷基苯基)哌啶氢溴酸盐沉淀。在25℃1小时后，向此浓稠的悬浮液加入800mL乙醚。再继续搅拌1小时，然后过滤分离产物，用400mL乙醚洗，在40℃真空干燥过夜。分离出白色固体形式的化合物I的氢溴酸盐。
[0132] 实施例2C化合物I氢溴酸盐的重结晶
[0133] 将10.0g化合物I的HBr盐(例如以上制备的)在100mL水中加热回流。混合物在80-90℃变透明和完全溶解。向此透明溶液中加入1g活性炭，继续回流15分钟，然后过滤，并令其自发冷却至室温。在冷却期间产生白色固体沉淀，将该悬浮液在室温搅拌1小时。过滤并在40℃真空干燥过夜，得到6.9g(69％)化合物I的HBr酸加成盐。其XRPD见图1。元素分析：3.92％N，59.36％C，6.16％H(理论值：3.85％N，59.34％C，6.09％H)。
[0134] 实施例3化合物I，其它盐
[0135] 游离碱的储备溶液的制备
[0136] 向500ml乙酸乙酯和200ml水的混合物加入50g化合物I的HBr盐，得到两相浆体。向此浆体中加入约25ml浓NaOH溶液，形成透明的两相溶液(pH测定为13-14)。将该溶液激烈搅拌15分钟，分离有机相。用200ml水洗有机相，用Na2SO4干燥，过滤并在60℃下减压蒸发，得到38g(99％)游离碱，为几乎无色的油状物。
[0137] 将10g上述油状物用乙酸乙酯溶解并调节体积至150ml，得到在乙酸乙酯中的0.235M储备液，从中取1.5ml(100mg游离碱)液样使用。
[0138] 将10g上述油状物用96％(体积)的EtOH溶解并调节体积至100ml，得到在乙醇中的0.353M储备液，从中取1.0ml(100mg游离碱)使用。用游离碱的储备液形成盐[0139] 将给定的液样置于试管中，在搅拌下加入表1中所示的适量的酸。如果酸是液体，则加入纯净的酸，否则就将酸溶在指定的溶剂中然后加入。在混合与沉淀后继续搅拌过夜，过滤收集沉淀。在30℃下真空干燥之前，先取一小份参考样品在室温下不抽真空地干燥。包括这一步骤是为了试验溶剂化物。一些结果列在表1。选择的XRPD衍射图示于图1-9中，主峰位置列在表2。表3示出本发明中使用的化合物在水中的溶解度及最终形成的饱和溶液的pH。“沉淀”一栏中表明溶解度测定后分离的沉淀是否与所溶解的化合物相同，这是水合物形成的指示。
[0140] 表1
[0141]酸(碱∶酸) MW 酸量 溶剂 CHN(实验值) CHN(理论值)
(g/mol) (mg或μl)
棕榈酸，十六烷酸 256.42 90.5 EtOAc 75.369.772.46 75.649.92.6
1∶1
DL-乳酸，DL-2- 90.1 31.8 EtOAc 66.887.263.52 67.537.293.75
羟基丙酸1∶1
1，6-己二酸 146.14 51.6 EtOAc 66.087.232.98 67.17.273.26
1∶1
1，6-己二酸 146.14 25.8 EtOAc 70.667.323.82 70.757.353.93
2∶1
富马酸1∶1 116.01 40.9 EtOH 65.716.413.35 66.146.313.51
1，5-戊二酸 132.12 46.6 EtOAc 66.096.973.2 66.487.033.37
1∶1
丙二酸1∶1 104.1 36.7 EtOAc 65.046.533.54 65.096.53.62
乙二酸1∶1 90.1 31.8 EtOH 64.286.413.61 64.326.213.75
1，8-辛二酸 202.02 35.6 EtOAc 71.797.863.58 71.837.863.64
2∶1
琥珀酸，1，4-丁 118.1 20.8 EtOAc 65.656.863.4 65.806.783.49
二酸，2∶1 (1∶1盐形成)
L-苹果酸，L-2- 134.1 47.3 EtOAc 62.876.203.22 63.296.523.36
羟基丁二酸1∶1，α
L-苹果酸，L-2- 134.1 47.3 EtOH 62.996.663.13 63.296.523.36
羟基丁二酸1∶1，β
D-酒石酸，D-2，3 150.1 53.0 EtOH 60.676.43.07 60.956.283.23
-二羟基丁二酸
1∶1
L-天冬氨酸1∶1 133.1 47.0 EtOH 59.316.77.1 63.436.786.73
(含多余酸)
谷氨酸1∶1 165.15 58.3 EtOH 56.386.887.35 56.466.947.06
(含多余酸) (对于1∶1盐和
酸-水合物1∶1)
柠檬酸2∶1 192.13 33.9 EtOAc 65.936.723.44 66.466.643.69
HCl/Et2O 1∶1 2M 176.4 EtOH
磷酸1∶1 14.7M 24.0 EtOAc 55.796.473.43 56.686.343.67
(g/mol) (mg或μl)
棕榈酸，十六烷酸 256.42 90.5 EtOAc 75.369.772.46 75.649.92.6
1∶1
DL-乳酸，DL-2- 90.1 31.8 EtOAc 66.887.263.52 67.537.293.75
羟基丙酸1∶1
1，6-己二酸 146.14 51.6 EtOAc 66.087.232.98 67.17.273.26
1∶1
1，6-己二酸 146.14 25.8 EtOAc 70.667.323.82 70.757.353.93
2∶1
富马酸1∶1 116.01 40.9 EtOH 65.716.413.35 66.146.313.51
1，5-戊二酸 132.12 46.6 EtOAc 66.096.973.2 66.487.033.37
1∶1
丙二酸1∶1 104.1 36.7 EtOAc 65.046.533.54 65.096.53.62
乙二酸1∶1 90.1 31.8 EtOH 64.286.413.61 64.326.213.75
1，8-辛二酸 202.02 35.6 EtOAc 71.797.863.58 71.837.863.64
2∶1
琥珀酸，1，4-丁 118.1 20.8 EtOAc 65.656.863.4 65.806.783.49
二酸，2∶1 (1∶1盐形成)
L-苹果酸，L-2- 134.1 47.3 EtOAc 62.876.203.22 63.296.523.36
羟基丁二酸1∶1，α
L-苹果酸，L-2- 134.1 47.3 EtOH 62.996.663.13 63.296.523.36
羟基丁二酸1∶1，β
D-酒石酸，D-2，3 150.1 53.0 EtOH 60.676.43.07 60.956.283.23
-二羟基丁二酸
1∶1
L-天冬氨酸1∶1 133.1 47.0 EtOH 59.316.77.1 63.436.786.73
(含多余酸)
谷氨酸1∶1 165.15 58.3 EtOH 56.386.887.35 56.466.947.06
(含多余酸) (对于1∶1盐和
酸-水合物1∶1)
柠檬酸2∶1 192.13 33.9 EtOAc 65.936.723.44 66.466.643.69
HCl/Et2O 1∶1 2M 176.4 EtOH
磷酸1∶1 14.7M 24.0 EtOAc 55.796.473.43 56.686.343.67
[0142] 表2：选择的X射线峰位置(°2θ)，2∶1指碱与酸之比为2∶1。所有数值均+-0.1°
[0143]棕榈酸盐 7.00 16.34 22.73 28.21
硬脂酸盐 6.70 15.52 21.81 28.91
DL-乳酸盐 5.30 8.18 9.44 17.24
乳酸盐水合物 11.67 16.70 18.25 21.76
羟基异丁酸盐 5.09 16.60 20.38 27.37
辛二酸盐 7.18 12.53 21.11 24.19
己二酸盐2∶1 8.03 13.52 17.90 24.60
己二酸盐1∶1α 9.33 14.01 18.72 20.63
己二酸盐1∶1β 15.69 21.53 25.81 31.18
戊二酸盐1∶1 9.39 11.70 14.05 14.58
丁二酸盐1∶1 11.74 14.33 17.75 26.84
富马酸盐1∶1 8.90 11.47 19.25 22.33
富马酸盐2∶1 8.49 12.48 17.78 23.97
马来酸盐1∶1 12.11 15.51 17.48 22.53
马来酸盐1∶1水合物 12.81 18.76 20.53 27.31
丙二酸盐α 10.77 16.70 19.93 24.01
丙二酸盐β 6.08 10.11 18.25 20.26
L-天冬氨酸盐 11.05 20.16 20.60 25.00
L-天冬氨酸盐水合物 7.80 13.80 14.10 19.63
谷氨酸盐 7.71 14.01 19.26 22.57
乙二酸盐 14.68 17.45 19.50 23.90
苹果酸盐1∶1α 8.30 12.04 17.23 20.67
苹果酸盐1∶1β 10.91 12.87 14.14 26.16
苹果酸盐水合物 12.30 15.56 19.56 23.30
D-酒石酸盐(得自EtOH) 5.08 17.18 19.42 22.10
盐酸盐 12.44 16.72 19.45 25.02
氢溴酸盐 6.08 14.81 19.26 25.38
氢溴酸盐1-PrOH溶剂化物 6.57 13.12 19.07 24.77
硬脂酸盐 6.70 15.52 21.81 28.91
DL-乳酸盐 5.30 8.18 9.44 17.24
乳酸盐水合物 11.67 16.70 18.25 21.76
羟基异丁酸盐 5.09 16.60 20.38 27.37
辛二酸盐 7.18 12.53 21.11 24.19
己二酸盐2∶1 8.03 13.52 17.90 24.60
己二酸盐1∶1α 9.33 14.01 18.72 20.63
己二酸盐1∶1β 15.69 21.53 25.81 31.18
戊二酸盐1∶1 9.39 11.70 14.05 14.58
丁二酸盐1∶1 11.74 14.33 17.75 26.84
富马酸盐1∶1 8.90 11.47 19.25 22.33
富马酸盐2∶1 8.49 12.48 17.78 23.97
马来酸盐1∶1 12.11 15.51 17.48 22.53
马来酸盐1∶1水合物 12.81 18.76 20.53 27.31
丙二酸盐α 10.77 16.70 19.93 24.01
丙二酸盐β 6.08 10.11 18.25 20.26
L-天冬氨酸盐 11.05 20.16 20.60 25.00
L-天冬氨酸盐水合物 7.80 13.80 14.10 19.63
谷氨酸盐 7.71 14.01 19.26 22.57
乙二酸盐 14.68 17.45 19.50 23.90
苹果酸盐1∶1α 8.30 12.04 17.23 20.67
苹果酸盐1∶1β 10.91 12.87 14.14 26.16
苹果酸盐水合物 12.30 15.56 19.56 23.30
D-酒石酸盐(得自EtOH) 5.08 17.18 19.42 22.10
盐酸盐 12.44 16.72 19.45 25.02
氢溴酸盐 6.08 14.81 19.26 25.38
氢溴酸盐1-PrOH溶剂化物 6.57 13.12 19.07 24.77
[0144] 表3
[0145]酸(碱∶酸) 溶解度 最终的pH 沉淀
(mg/ml)
棕榈酸，十六烷酸 0.4 8.6 ＝起始物
1∶1
DL-乳酸，DL-2- ＞150 6.1 ＝起始物
羟基丙酸1∶1 (蒸发后)
1，6-己二酸 2.5 4.0 部分2∶1盐
1∶1
1，6-己二酸 1.0 7.8 ＝起始物
2∶1
富马酸1∶1 0.2 3.3 ＝起始物
1，5-戊二酸 13 4.6 ＝起始物
1∶1
丙二酸1∶1(α) 5.2 4.0 ＝新形式(β)
乙二酸1∶1 1.1 2.7 ＝起始物
1，8-辛二酸 0.7 5.5 ＝起始物
2∶1
琥珀酸，1，4-丁 2.0 4.0 水合物
二酸，2∶1
L-苹果酸，L-2- 2.8 4.0 水合物
羟基丁二酸1∶1，β
D-酒石酸，D-2，3- 1.8 3.5 水合物
二羟基丁二酸
1∶1
L-天冬氨酸1∶1 39 4.3 水合物
谷氨酸1∶1 ＞35 4.6 -
柠檬酸2∶1 0.5 4.7 ＝起始物
磷酸1∶1 6.0 2.0 ？
HCl 4.5 6.8 ＝起始物
HBr 2.4 7.0 ＝起始物
(mg/ml)
棕榈酸，十六烷酸 0.4 8.6 ＝起始物
1∶1
DL-乳酸，DL-2- ＞150 6.1 ＝起始物
羟基丙酸1∶1 (蒸发后)
1，6-己二酸 2.5 4.0 部分2∶1盐
1∶1
1，6-己二酸 1.0 7.8 ＝起始物
2∶1
富马酸1∶1 0.2 3.3 ＝起始物
1，5-戊二酸 13 4.6 ＝起始物
1∶1
丙二酸1∶1(α) 5.2 4.0 ＝新形式(β)
乙二酸1∶1 1.1 2.7 ＝起始物
1，8-辛二酸 0.7 5.5 ＝起始物
2∶1
琥珀酸，1，4-丁 2.0 4.0 水合物
二酸，2∶1
L-苹果酸，L-2- 2.8 4.0 水合物
羟基丁二酸1∶1，β
D-酒石酸，D-2，3- 1.8 3.5 水合物
二羟基丁二酸
1∶1
L-天冬氨酸1∶1 39 4.3 水合物
谷氨酸1∶1 ＞35 4.6 -
柠檬酸2∶1 0.5 4.7 ＝起始物
磷酸1∶1 6.0 2.0 ？
HCl 4.5 6.8 ＝起始物
HBr 2.4 7.0 ＝起始物
[0146] 实施例4对乙酰胆碱水平的影响
[0147] 设计此试验以便评价本发明化合物对自由活动的大鼠的前额叶皮质及腹侧海马中乙酰胆碱能胞外水平的影响。
[0148] 使用原始重量275-300g的雄性Sprague-Dawley大鼠。将动物在受控条件(标准的户内温度21±2℃和湿度55±5％，随意用食和自来水)和12小时的明/暗周期下饲养。
[0149] 手术和微渗析实验
[0150] 将大鼠用hypnorm/速眠安(2ml/kg)麻醉，并将脑内引导管(CMA/12)立体定向地植入海马中，目的在于将渗析探针的尖定位在腹侧海马中(坐标：前卤后5.6mm，侧面-5.0mm，硬脑膜腹侧7.0mm)，或前额叶皮质中(坐标：前卤前3.2mm，侧面0.8mm，硬脑膜腹侧4.0mm)。使用锚固螺丝和丙烯酸胶粘剂固定引导管。用直肠探头监测动物的体温并保持在37℃。令大鼠在术后恢复2天，在笼内单独饲养。在实验当天经由该引导管插入微渗析探头(CMA/12，0.5mm直径，3mm长)。
[0151] 该探头经由双通道旋转接头与微注射泵连接。在将探头插入脑中之前不久，开始用过滤的Ringer溶液(145mm NaCl，3mM KCl，1mMMgCl2，含0.5μM新斯的明的1.2mM CaCl2)对微渗析探头灌流，并在实验期间保持1μl/分的恒定流速。在180分钟稳定期后，开始实验。每20分钟收集渗析液。实验后将动物宰杀，取出大脑，冷冻并切片，用于探针位置的验证。
[0152] 渗析液乙酰胆碱的分析
[0153] 渗析液中的乙酰胆碱的浓度(ACh)用具有电化学检测的HPLC分析，使用由100mM磷酸氢二钠、2.0mM辛磺酸、0.5mM氯化四甲铵和0.005％MB(ESA)组成的流动相(pH8.0)。一个含有固定的胆碱氧化酶的栓前酶反应器(ESA)在分析柱(ESA ACH-250)分离ACh之前从注入的样品(10μl)中去掉胆碱；流速0.35ml/分，温度：35℃。在分析柱之后，样品流过一只装有固定的乙酰胆碱酯酶和胆碱氧化酶的柱后固相反应器(ESA)。后一反应器将ACh转化成胆碱，随后将胆碱转化成甜菜碱和H2O2。后者用铂电极以电化学方式检测(分析池：
ESA，型号5040)。
ESA，型号5040)。
[0154] 数据表示
[0155] 在单次注射实验中，在施用化合物之前的即刻进行的接连3次Ach样品的平均值被作为每次实验的基线水平，将实验数据转换成基线值的百分数(注射前数值的平均基线值被归一化至100％)。数据列在图10a和10b中。
[0156] 列在图10a和10b中的数据显示了脑中胞外乙酰胆碱水平的剂量依赖性增高。这一临床前发现预期会在适用于治疗认知损伤和以认知损伤为特征的疾病的临床应用中转化成认知的改善。
[0157] 实施例5对多巴胺水平的影响
[0158] 单次注射本发明化合物会剂量依赖性地增高大鼠前额叶皮质中的胞外多巴胺(DA)水平。本发明化合物在8.9mg/kg和18mg/kg s.c.时，如图11所示，将DA水平在基线水平以上分别提高约100％和150％。数量是按游离碱计算的。
[0159] 方法
[0160] 使用起始重量为275-300g的雄性Sprague-Dawley大鼠。将动物在受控条件(标准的户内温度21±2℃和湿度55±5％，随意接近食物和自来水)和12小时的明/暗周期下饲养。对于3天的治疗实验，使用微量渗透泵(Alzet，2ML1)。将泵在无菌条件下充满，在七氟烷麻醇下皮下植入。实验利用机载微量泵进行。在实验结束时收集血样，用以测量治疗3天后试验化合物的血浆含量。
[0161] 手术和微渗析实验
[0162] 将动物用hypnorm/速眠安(2ml/kg)麻醉，并将脑内引导管(CMA/12)立体定向地植入海马中，使渗析探针尖定位在腹侧海马中(坐标：前卤前5.6mm，侧面-5.0mm，硬脑膜腹侧7.0mm)或前额叶皮质中(坐标：前卤前3.2mm，侧面3.0mm，硬脑膜腹侧4.0mm)。使用锚固螺丝和丙烯酸胶粘剂以固定引导管。动物的体温用直肠探头监测并保持在37℃。令大鼠在术后恢复2天，在笼内单独饲养。在实验的当天经由导管插入微渗析探头(CMA/12，直径0.5mm，长度3mm)。探头经由一个双通道旋转接头与微注射泵连接。在将探头插入脑中之前不久，开始用过滤的Ringer溶液(145mM NaCl，3mM KCl，1mM MgCl2，1.2mM CaCl2)对微渗析探头实行灌流，并在实验期间保持1(1.3)μL/分的恒定流速。在180分钟的稳定期后，开始实验。每20(30)分钟收集渗析液。实验后断头宰杀大鼠，取出大脑，冷冻和切片以验证探针定位。
[0163] 渗析液的分析
[0164] 渗析液中的多巴胺浓度用带有电化学检测的HPLC方法分析。用反相液相色谱法(ODS 150×3mm，3μM)分离单胺。多巴胺：流动相含90mM NaH2PO4，50mM柠檬酸钠，367mg/L1-辛磺酸钠，50μM EDTA和8％乙腈(pH4.0)，流速0.5ml/分。电化学检测用电量检测仪(CoulochemII，ESA)进行，电势设定在250mV(保卫细胞在350mV)。
[0165] 实施例6对神经病性疼痛的影响
[0166] 为证实对抗神经病性疼痛的效力，本发明化合物在神经病性疼痛的福尔马林模型[Neuroharm.，48，252-263，2005；Pain，51，5-17，1992]中进行试验。在此模型中，将福尔马林(4.5％，20μl)注射到小鼠左后爪的足底表面中，然后把小鼠置于单独的玻璃烧杯(容量2升)中以便观察。福尔马林注射引起的刺激造成特征的双相行为响应，这用消耗在舌舔受伤的爪上的时间来定量化。第一阶段(约0-10分钟)代表直接化学刺激和伤害感受，而第二阶段(约20-30分钟)被认为代表神经源性疼痛。两个阶段之间是一个休眠期，此时行为恢复正常。测定在两个阶段中消耗在舌舔受伤爪上的时间长短，以评价试验化合物减小疼痛刺激的效力。
[0167] 每组试验8只C57/B6小鼠(约25g)。下面的表4列出了在两个阶段(即，注射福尔马林后0-5分和20-30分)中消耗在舌舔受伤爪上的时间。施用的化合物的数量按游离碱计算。
[0168] 表4
[0169]赋形剂 1.0mg/kg 2.5mg/kg 10mg/kg
0-5分 42 37 30 37
(sec)
20-30分 41 43 26 6
(sec)
0-5分 42 37 30 37
(sec)
20-30分 41 43 26 6
(sec)
[0170] 表4的数据表明，本发明化合物在代表直接化学刺激和伤害感受的第一阶段影响很小。更值得注意的是，数据还显示在第二阶段中消耗在舌舔受伤爪上的时间有显著的和剂量依赖性的减少，表明本发明化合物在治疗神经病性疼痛中的作用。
| 标题 | 发布/更新时间 | 阅读量 |
|---|---|---|
| 一种阿戈美拉汀硫酸复合物多晶型B及其制备方法和应用 | 2020-05-16 | 559 |
| 阿戈美拉汀的混晶(形式-Ⅷ)、其制备方法、应用和包含其的药物组合物 | 2020-05-16 | 396 |
| 1-(2-烷基-2,3-二氢-苯并呋喃-4-基)-吡咯烷-3-基胺酰基化合物 | 2020-05-18 | 252 |
| 萘化合物、其制备方法及其药物组合物 | 2020-05-20 | 771 |
| 丁丙诺啡和μ阿片受体拮抗剂的组合物 | 2020-05-25 | 972 |
| 阿戈美拉汀的混晶(形式-Ⅷ)、其制备方法、应用和包含其的药物组合物 | 2020-05-26 | 23 |
| 苯基吡咯烷化合物 | 2020-05-15 | 473 |
| 阿戈美拉汀的新晶形Ⅴ、它的制备方法和包含它的药物组合物 | 2020-05-17 | 33 |
| 阿戈美拉汀的新晶型Ⅵ及其制备方法和应用 | 2020-05-21 | 346 |
| 用于监测和处理季节性情感障碍的方法和装置 | 2020-05-11 | 658 |
高效检索全球专利专利汇是专利免费检索,专利查询,专利分析-国家发明专利查询检索分析平台，是提供专利分析，专利查询，专利检索等数据服务功能的知识产权数据服务商。
我们的产品包含105个国家的1.26亿组数据，免费查、免费专利分析。
分析报告
专利汇分析报告产品可以对行业情报数据进行梳理分析，涉及维度包括行业专利基本状况分析、地域分析、技术分析、发明人分析、申请人分析、专利权人分析、失效分析、核心专利分析、法律分析、研发重点分析、企业专利处境分析、技术处境分析、专利寿命分析、企业定位分析、引证分析等超过60个分析角度，系统通过AI智能系统对图表进行解读，只需1分钟，一键生成行业专利分析报告。
QQ群二维码
意见反馈
意见反馈