用于治疗精神和行为障碍的对Vps10p-结构域受体家族的调节
阅读：1190发布：2020-05-25
专利汇可以提供用于治疗精神和行为障碍的对Vps10p-结构域受体家族的调节专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及用于在动物中调节选自选蛋白、SorLA、SorCS1、SorCS2和SorCS3的一种或多种Vps10p结构域受体的活性的方法和用于制备用于 治疗 精神和行为障碍的药物的方法。通过抑制或促进配体与Vps10p-结构域受体的结合来进行调节。还提供了用于筛选能够调节所述Vps10p-结构域受体活性的 试剂 的体外和体内方法。本发明还涉及体内改变所述受体的表达的方法。，下面是用于治疗精神和行为障碍的对Vps10p-结构域受体家族的调节专利的具体信息内容。
1.抗-SorCS2抗体在制备治疗神经症性、应激相关的和躯体形式障碍、焦虑相关的行为、(F06.4)器质性焦虑障碍、(F60.6)焦虑性[回避]人格障碍、(F60.7)焦虑性人格障碍、(F93.0)儿童期离别焦虑障碍、(F93.1)儿童期恐怖性焦虑障碍、过度焦虑症的药物中的用途，其中神经症性、应激相关的和躯体形式障碍选自(F40.)恐惧性焦虑障碍、(F41.)其他焦虑症和(F43.)对严重应激的反应和适应障碍，其中所述抗-SorCS2抗体能够调节SorCS2和选自p75NTR、TrkB、proBDNF的前肽和成熟BDNF的配体间的相互作用。
2.根据权利要求1所述的用途，其中：
-(F40.)恐惧性焦虑障碍选自(F40.0)广场恐怖症、(F40.1)社交恐惧症、(F40.2)特定(分离的)恐怖、(F40.8)其他恐惧性焦虑障碍和(F40.9)待分类的恐惧性焦虑障碍；和-(F41.)其他焦虑症选自(F41.0)惊恐障碍[发作性阵发焦虑]和(F41.1)广泛性焦虑症。
3.根据权利要求2所述的用途，其中(F40.1)社交恐惧症选自对人恐怖症和社交神经官能症。
4.根据权利要求2所述的用途，其中(F40.2)特定(分离的)恐怖选自恐高症、动物恐惧症、幽闭恐怖症和单纯恐怖症。
5.根据权利要求2所述的用途，其中(F40.9)待分类的恐惧性焦虑障碍选自恐怖症NOS和恐怖状态NOS。
6.根据权利要求1所述的用途，其中(F43.)对严重应激的反应和适应障碍选自(F43.0)急性应激反应、(F43.1)创伤后应激障碍和(F43.2)适应障碍。
7.根据权利要求1所述的用途，其中抗-SorCS2抗体是抗-SorCS2多克隆抗体或抗-SorCS2单克隆抗体之一。
8.根据权利要求1所述的用途，其中抗体是多克隆抗-SorCS2 IgG。
用于治疗精神和行为障碍的对Vps10p-结构域受体家族的
调节
[0002] 本发明涉及用于治疗精神和行为障碍的对Vps10p-结构域受体的调节。本发明还涉及鉴定能够用作经由Vps10p-结构域受体的信号传导的调节剂的配体。因此，取决于精神和行为障碍的具体类型，试剂选自拮抗剂/抑制剂和激动剂。本发明还涉及用于治疗精神和行为障碍的此类配体的制备和用途。本发明还涉及Vps10p-结构域受体转基因动物用作精神和行为障碍的动物模型的用途。
[0003] 发明背景
[0004] 精神和行为障碍是失能(disability)的最主要原因之一，占世界上15岁及以上的成年人中的伤残损失健康生命年(years of life lived with disability)(YLD)的超过37％，并且为可能代表未来的数年中日益严重的健康、社会和经济问题的疾病(Lopez和Murray 1998)。在世界卫生组织的ICD10，第V章，F00-F99组(精神和行为障碍)中定义了精神和行为障碍，其包括例如抑郁和严重的抑郁性障碍、强迫性神经失调、精神分裂症、幻视和幻听、进食障碍、焦虑症和双相情感障碍(躁狂抑郁症)。此类障碍是常见的、严重的、慢性的和通常威胁生命的疾病。自杀据估计为高至15％的具有障碍例如严重的抑郁性障碍和双相情感障碍的个体的死亡原因，并且许多其他有害的健康相关效应已得到公认(Michelson，Stratakis等人1996；Musselman，Evans等人1998；Ciechanowski，Katon等人2000；Schulz，Beach等人2000；Kupfer 2005)。逐渐得到公认的是此类障碍是对多个器官系统具有有害效应的全身性疾病。例如，严重的抑郁性障碍代表了心血管疾病的发展以及指数心肌梗塞(index myocardial infarction)后死亡的主要风险因素(Musselman，Evans等人1998)。最近的研究已提出由高度抑郁性症状赋予的增加的死亡率风险的量级与中风和充血性心力衰竭的相似(Schulz，Beach等人2000)。
[0005] 改变的神经元活性，特别是突触可塑性的损伤被认为是精神和行为障碍例如但不限于精神分裂症、抑郁症和双相情感障碍的病理生理学的基础(Manji，Drevets等人2001；Lu和Martinowich 2008)。哺乳动物中枢神经系统的独特神经元活性被认为是在动物和人中观察到的多种特定脑功能的基础。亚细胞机制可塑造个体神经元的活性，所述个体神经元可再次被整合入功能细胞装配体(functional cell assemblies)(Buzsaki和Draguhn 2004)。还可将此类细胞装配体的功能进一步整合入具有功能意义的机制，其表现为行为的各种形式。某些亚细胞机制对于塑造神经元活性(包括单个神经元的内在兴奋性(intrinsic excitability)以及基本突触性质和突触可塑性)是至关重要的。所有此类机制在整个神经元网络上可同时发生以产生对于哺乳动物脑功能来说是经典的大脑振荡(Buzsaki和Draguhn 2004)。在人中，如果此类精确控制的大脑振荡被破坏，那么其可导致今天难以治疗的严重精神和行为症状。在本说明书中，神经元活性涵盖通过单细胞成像或单通道游离膜片钳(excised-patch)或全细胞膜片钳记录、或通过体内或体外细胞内或细胞外记录测量的，亚细胞区室、单个神经元或其装配体中的电活动性，包括阈上或阈下突触反应和其可塑性，神经元组织的细胞中的膜兴奋性、细胞内离子浓度的变化或跨膜离子流以及其行为关系。
[0006] 突触可塑性的分子机制最初包括导致改变的突触功能的现有突触蛋白质的修饰。其也依赖于调节基因转录的第二信使神经递质和突触上关键蛋白质的水平的变化。该活性依赖性机制需要更长的时间且持续更长的时间，被认为是大脑中持久记忆储存和加工的基础机制。两个神经元之间的突触联系的功效的持久变化可包括突触接触的强化(表示长时程增强或LTP)或减弱(表示长时程抑制或LTD)。传统上，LTP一直被视为在海马中空间记忆储存的主要介导者(mediator)，而LTD被赋予调节信噪比和擦除记忆的作用。然而，不断积累的证据显示LTD还在学习和记忆中具有作用(Kemp和Manahan-Vaughan 2007)。重要地，LTD的诱导似乎与心境障碍的发展相关。例如，LTD在暴露于轻度自然应激的动物中和抑郁症的动物模型中得到促进(Xu，Anwyl等人1997；Holderbach，Clark等人2007)。
[0007] 神经营养因子是小分子可溶性蛋白，其通过与细胞表面受体酪氨酸激酶相互作用用作神经元活性(包括突触可塑性和神经元存活)的关键调节剂。例如，脑源性神经营养因子(BDNF)的活性依赖性分泌是长时程突触修饰(long-term synaptic modification)的诱导中的关键步骤(Poo 2001)。在海马中，已知BDNF通过其从突出前侧的受控释放和其随后与突触后侧上的受体酪氨酸激酶的相互作用在早期LTP的诱导中起重要作用(Nagappan和Lu 2005)。类似地，BDNF的前体形式(proBDNF)的释放和通过细胞外蛋白酶切割成成熟BDNF是诱导晚期LTP所必需的(Pang，Teng等人2004)。在另一方面，未被切割的proBDNFNTR与受体p75 的相互作用导致LTD的诱导(Woo，Teng等人2005)。顺着这些线索，BDNF+/-小鼠和具有缺陷BDNF分泌的敲入(knock-in)小鼠显示包括焦虑和认知功能障碍的明显行为表型(Chen，Jing等人2006；Einat和Manji 2006)。
[0008] BDNF还调节一般神经元活性，例如，GABA能神经元的活性。GABA(γ-氨基丁酸)是哺乳动物大脑中的主要抑制性神经递质。GABA在大脑皮层中从约20％的神经元释放(Somogyi，Tamas等人1998)，并且在突触接触时通过遍在表达的GABAA受体介导快速触抑制(Farrant和Nusser 2005)。通过快速开放与GABAA受体结合的Cl-通道，GABA使皮层网络的节律协调起来，这被认为是重要功能例如感觉加工、记忆形成和高级认知功能的基础。当大脑节律在障碍例如癫痫症、抑郁症和精神分裂症中被破坏时，有缺陷的GABA系统被认为在此类不能治愈的精神和行为障碍的发展和维持中起着根本作用(Lewis，Hashimoto等人2005)。GABAA受体介导的抑制可通过几个机制来调节，包括GABA能中间神经元的发放率(firing rate)的变化、量子释放的动力学、GABAA受体水平上的突触间隙形态学突触后修饰的改变(Ben-Ari和Cossart 2000)和永久性阴离子的电化学梯度的位移(Kaila 1994)。
成熟BDNF通过此类机制中的几个(如果不是全部的话)机制来调节GABA能突触传递。
BDNF在终点减少GABA释放概率(Frerking，Malenka等人1998；Olofsdotter，Lindvall等人2000)、减少GABAA受体表面表达(Henneberger，Juttner等人2002；Hewitt和Bains
2006)和通过抑制KCC2(K-Cl协同转运蛋白2)减弱Cl-电化学电势的驱动力(Rivera，Li等人2002)。在齿状回中也已显示BDNF对GABA能传递的调节效应。mIPSCs(Olofsdotter，Lindvall等人2000)和sIPSCs(Holm等人，提交的手稿)的频率被内源和外源BDNF降低。
最终，成熟BDNF减弱篮状细胞的兴奋性，这表明该机制通过TrkB受体参与sIPSC的降低(Holm等人，提交的手稿)。
成熟BDNF通过此类机制中的几个(如果不是全部的话)机制来调节GABA能突触传递。
BDNF在终点减少GABA释放概率(Frerking，Malenka等人1998；Olofsdotter，Lindvall等人2000)、减少GABAA受体表面表达(Henneberger，Juttner等人2002；Hewitt和Bains
2006)和通过抑制KCC2(K-Cl协同转运蛋白2)减弱Cl-电化学电势的驱动力(Rivera，Li等人2002)。在齿状回中也已显示BDNF对GABA能传递的调节效应。mIPSCs(Olofsdotter，Lindvall等人2000)和sIPSCs(Holm等人，提交的手稿)的频率被内源和外源BDNF降低。
最终，成熟BDNF减弱篮状细胞的兴奋性，这表明该机制通过TrkB受体参与sIPSC的降低(Holm等人，提交的手稿)。
[0009] 选蛋白(Sortilin)
[0010] 选蛋白，Vps10p-结构域受体家族的原型成员，偶尔也称为神经降压肽受体3(NTR3)、糖蛋白95(Gp95)或100kDa NT受体。人选蛋白被存取在Swiss Prot中的ID NO.Q99523下。选蛋白(SEQ ID NO.1)是在许多组织包括脑、脊髓、睾丸、肝脏和骨骼肌中表达的I型膜受体(Petersen，Nielsen等人1997；Hermans-Borgmeyer，Hermey等人1999)。
选蛋白属于包括选蛋白、SorLA(Jacobsen，Madsen等人1996)、SorCS1、SorCS2和SorCS3的受体家族。
选蛋白属于包括选蛋白、SorLA(Jacobsen，Madsen等人1996)、SorCS1、SorCS2和SorCS3的受体家族。
[0011] 该家族中的所有受体共有约600个氨基酸的N末端结构域的结构特征，其与两个结构域的每一个具有强烈相似性，其构成了酵母分选受体Vps10p的腔部分(Marcusson，Horazdovsky等人1994)。除其他配体以外结合神经营养因子和神经肽类的Vps10p-结构域(Vps10p-D)(Mazella，Zsurger等人1998；Munck Petersen，Nielsen等人1999；Nykjaer，Lee等人2004；Westergaard，Sorensen等人2004；Teng，Teng等人2005)构成了选蛋白的完整腔部分(sSortilin)并且经酶促前肽切割激活以进行配体结合(Mazella，Zsurger等人1998；Munck Petersen，Nielsen等人1999)。选蛋白是能够进行胞吞作用以及细胞内分选的多功能1型受体(Marcusson，Horazdovsky等人1994；Mazella，Zsurger等人1998；NTR
Munck Petersen，Nielsen等人1999)，并且如最近所显示的，其还通过触发p75 -介导的神经元凋亡的神经营养因子前体-诱导来进行信号传导(Nykjaer，Lee等人2004；Teng，Teng等人2005；Jansen，Giehl等人2007；Nakamura，Namekata等人2007)。选蛋白是作为前体蛋白合成的，其通过酶促切割除去短N末端前肽而被转变为成熟选蛋白。只有成熟受体才结合配体并且有趣地，所有其的已知配体例如神经降压肽(NT)、脂蛋白脂酶、神经生长因子-β(proNGF)和脑源性神经营养因子(proBDNF)的前体、受体结合蛋白(RAP)及其自身前肽竞争结合(Munck Petersen，Nielsen等人1999；Nielsen，Jacobsen等人
1999；Nykjaer，Lee等人2004；Teng，Teng等人2005)，这表明多种配体靶向共有的或部分共有的结合位点。NT是十三肽，其结合选蛋白、SorLA以及两个G蛋白偶联受体NTR1和NTR2(Tanaka，Masu等人1990；Chalon，Vita等人1996；Mazella，Zsurger等人1998；
Jacobsen，Madsen等人2001)。与选蛋白有关的NT的生理作用仍未完全阐明(Vincent，Mazella等人1999)，NT仍然是重要工具，因为其抑制所有其他配体对选蛋白Vps 10p-D的结合。已提出选蛋白可能通过proBDNF的细胞内分选参与细胞外BDNF可用性的调节(Chen，Ieraci等人2005)。事实上，已提出选蛋白具有减小的对之前与较差的记忆功能、焦虑相关行为和双相情感障碍相关的BDNF的Val66Met变体的亲和力(Neves-Pereira，Mundo等人
2002；Egan，Kojima等人2003；Chen，Jing等人2006)。
Munck Petersen，Nielsen等人1999)，并且如最近所显示的，其还通过触发p75 -介导的神经元凋亡的神经营养因子前体-诱导来进行信号传导(Nykjaer，Lee等人2004；Teng，Teng等人2005；Jansen，Giehl等人2007；Nakamura，Namekata等人2007)。选蛋白是作为前体蛋白合成的，其通过酶促切割除去短N末端前肽而被转变为成熟选蛋白。只有成熟受体才结合配体并且有趣地，所有其的已知配体例如神经降压肽(NT)、脂蛋白脂酶、神经生长因子-β(proNGF)和脑源性神经营养因子(proBDNF)的前体、受体结合蛋白(RAP)及其自身前肽竞争结合(Munck Petersen，Nielsen等人1999；Nielsen，Jacobsen等人
1999；Nykjaer，Lee等人2004；Teng，Teng等人2005)，这表明多种配体靶向共有的或部分共有的结合位点。NT是十三肽，其结合选蛋白、SorLA以及两个G蛋白偶联受体NTR1和NTR2(Tanaka，Masu等人1990；Chalon，Vita等人1996；Mazella，Zsurger等人1998；
Jacobsen，Madsen等人2001)。与选蛋白有关的NT的生理作用仍未完全阐明(Vincent，Mazella等人1999)，NT仍然是重要工具，因为其抑制所有其他配体对选蛋白Vps 10p-D的结合。已提出选蛋白可能通过proBDNF的细胞内分选参与细胞外BDNF可用性的调节(Chen，Ieraci等人2005)。事实上，已提出选蛋白具有减小的对之前与较差的记忆功能、焦虑相关行为和双相情感障碍相关的BDNF的Val66Met变体的亲和力(Neves-Pereira，Mundo等人
2002；Egan，Kojima等人2003；Chen，Jing等人2006)。
[0012] SorLA
[0013] 分选蛋白相关受体缩写为SorLA(Swiss prot ID号Q92673)，也称为LR11，是250-kDa的1型膜蛋白和在Vps10p-结构域受体家族中鉴定的第二成员。SorLA(与选蛋白类似，其腔结构域仅由Vps10p结构域组成)以受体前体的形式合成，其在晚期高尔基体区室(late Golgi compartment)中被弗林蛋白酶(furin)切割。已证明截断为Vps10p结构域用于神经肽与受体相关蛋白的前肽可抑制的结合的条件。已证明(Jacobsen，Madsen等人2001)未被前肽抑制的受体相关蛋白、载脂蛋白E和脂蛋白脂酶的avid结合发生在位于其他腔内域(lumenal domain)中的位点上。在转染的细胞中，约10％的全长SorLA在能够介导胞吞作用的细胞表面上表达。主受体库在晚期高尔基体区室中发现，并且已表明与新合成的配体的相互作用。在发育过程中以及在成年生物中，SorLA在整个神经系统的不同细胞类型中高度表达(Kanaki，Bujo等人1998；Motoi，Aizawa等人1999；Offe，Dodson等人2006)。有趣地，SorLA水平在阿尔茨海默病的散发形式(sporadic form)中降低(Scherzer，Offe等人2004；Dodson，Gearing等人2006；Sager，Wuu等人2007)并且SorLA基因中的遗传的突变与晚发阿尔茨海默病在遗传上关联(Rogaeva，Meng等人2007)。重要地，已显示SorLA介导淀粉样前体蛋白的高亲和力结合和分选，并且赋予抗Aβ产生的保护作用(Andersen，Reiche等人2005；Offe，Dodson等人2006；Spoelgen，von Arnim等人
2006；Rogaeva，Meng等人2007)。
2006；Rogaeva，Meng等人2007)。
[0014] SorCS1-3
[0015] SorCS1(Swiss prot ID 号 Q8WY21)、SorCS2(Swiss prot ID 号 Q96PQ0) 和SorCS3(Swiss prot ID号Q9UPU3)构成了相互高度相似的包含Vps10p-D和与跨膜结构域相邻的富含亮氨酸的结构域的蛋白质的亚组(Westergaard，Sorensen等人2004；Westergaard，Kirkegaard等人2005)。SorCS1-3在整个神经系统中全都显著表达(Hermey，Riedel等人1999；Hermey，Riedel等人2001；Hermey，Schaller等人2001；Rezgaoui，Hermey等人2001；Hermey，Keat等人2003)，但它们差异表达并且受突触可塑性调节(Hermey，Plath等人2004)。与SorLA和选蛋白类似，SorCS1结合其前肽但未观察到与RAP或NT的结合(Hermey，Keat等人2003)。SorCS1和SorCS3都结合血小板源性生长因子-BB，然而SorCS2配体从未被描述过(Hermey，Sjogaard等人2006)。SorCS3也结合proNGF的前结构域(prodomain)，但与选蛋白和SorLA不同，其不需要前肽切割以结合配体(Westergaard，Kirkegaard等人2005)。SorCS1可在神经系统外起着重要作用，因为该基因上的区域被鉴定为小鼠的2型糖尿病数量性状基因座(Clee，Yandell等人2006)，并且人SorCS1基因的变异与糖尿病相关性状关联(Granhall，Park等人2006；Goodarzi，Lehman等人2007)。有趣地，发现SorCS2基因中的单核苷酸多态性(SNP)与特别高的发生双相情感障碍的风险相关(Baum，Akula等人2008)。
现有技术
现有技术
[0016] 虽然许多药物已可获得用于治疗精神和行为障碍，但全都具有复杂的间接作用机制，并且目标在于减轻症状而不在于治疗疾病的根源。相反地，一般认为靶向调节突触可塑性的信号传导途径的药物应当被开发为用于精神和行为障碍的长期治疗(Manji，Drevets等人2001)。事实上，抗抑郁剂和锂的长期施用很可能通过增加神经营养因子特别是BDNF的表达来对此类信号传导途径产生主要效应(Manji，Drevets等人2001；Duman和Monteggia 2006；Martinowich，Manji等人2007)。大量的试验和临床数据显示BDNF在精神和行为障碍中的中心作用。例如，BDNF基因中的多态性与精神和行为障碍例如精神分裂症、抑郁症和双相情感障碍相关(Neves-Pereira，Mundo等人2002；Schumacher，Jamra等人2005)。此外，BDNF血清水平在患有双相情感障碍的患者的抑郁和躁狂发作中降低但在精神分裂症患者中升高(Gama，Andreazza等人2007)。同样地，BDNF水平在来自抑郁患者的死后脑组织中比正常人受试者的低但在死亡时服用抗抑郁剂的患者中更高(Chen，Dowlatshahi等人2001)。此外，BDNF的直接海马输注在啮齿类动物中产生抗抑郁作用(Siuciak，Lewis等人1997；Shirayama，Chen等人2002)。
[0017] 发明概述
[0018] 本发明人已研究了调节Vps10p-结构域受体的活性对突触可塑性的诱导和对转基因小鼠的行为的作用。该受体家族的成员是选蛋白、SorLA、SorCS1、SorCS2和SorCS3(图1)。
[0019] 简而言之，本发明人证明了Vps10p-结构域受体直接与BDNF系统的成分相互作用并且用作突触可塑性以及神经元活性(特别是除了GABA能活性外的NMDA-受体依赖性LTD和LTP)的重要调节剂。还显示了Vps10p-结构域受体的调节如何在记忆以及焦虑相关和抑郁行为的试验模型中在体内影响动物行为。关于Vps10p-结构域受体和其与BDNF系统的成分的相互作用的早期工作已聚焦于对细胞死亡的效应。
[0020] 更具体地，本发明人显示在海马中，选蛋白只定位在突触的突触前侧，然而SorCS2定位在突触后密集区(图2)。本发明人还显示NMDA受体依赖性LTD在来自Sortillin-/-、SorCS1-/-(图3)和SorCS2-/-小鼠(图4)的海马切片中受损。此外，NMDA受体依赖性晚期LTP也在来自选蛋白-/-和SorCS2-/-小鼠的切片中受损(图5)。同样地，早期LTP在SorCS2-/-小鼠中也部分受损(图5B)。这些结果强烈地暗示着Vps10p-结构域受体在突触可塑性中的关键作用。此外，来自选蛋白-/-小鼠而非来自SorCS2-/-小鼠的海马切片中的LTD可通过在外源proBDNF存在的情况下进行试验来挽救(图3B和图4B)。因此，NTR很显然选蛋白作用于突触前侧以调节proBDNF的可用度，而SorCS2通过调节p75 和TrkB的活性在介导对proBDNF和BDNF的突触后反应中起作用(图4D)。事实上，本发明人发现NTR
SorCS2在物理上与pro-BDNF和成熟BDNF(图7)以及与p75 (图6)相互作用。本发明人还发现TrkB的胞外结构域与选蛋白、SorCS1和SorCS2直接相互作用(图8)。特别重要的是，本发明人显示来自选蛋白-/-小鼠的海马切片的LTD可通过施用重组可溶性选蛋白来挽救(图3C)，而野生型小鼠的切片中的LTD通过施用重组选蛋白前肽被抑制(图21)。此外，野生型小鼠的海马切片中的LTD和LTP的诱导通过施用抗SorCS2多克隆抗体被抑制但不被非特异性对照抗体抑制(图4C和图22)，这暗示着SorCS2在突触可塑性中的作用是敏锐的(acute)并且依赖于细胞表面定位的SorCS2。总之，这些结果显示Vps10p-结构域受体活性的药理调节具有调节突触可塑性的潜能。
SorCS2在物理上与pro-BDNF和成熟BDNF(图7)以及与p75 (图6)相互作用。本发明人还发现TrkB的胞外结构域与选蛋白、SorCS1和SorCS2直接相互作用(图8)。特别重要的是，本发明人显示来自选蛋白-/-小鼠的海马切片的LTD可通过施用重组可溶性选蛋白来挽救(图3C)，而野生型小鼠的切片中的LTD通过施用重组选蛋白前肽被抑制(图21)。此外，野生型小鼠的海马切片中的LTD和LTP的诱导通过施用抗SorCS2多克隆抗体被抑制但不被非特异性对照抗体抑制(图4C和图22)，这暗示着SorCS2在突触可塑性中的作用是敏锐的(acute)并且依赖于细胞表面定位的SorCS2。总之，这些结果显示Vps10p-结构域受体活性的药理调节具有调节突触可塑性的潜能。
[0021] 本发明人发现选蛋白和SorCS2在海马的齿状回中高度表达(图1A和B)。在此处，已知从颗粒细胞释放的BDNF降低GABA能篮状细胞的兴奋性(图8A)。重要地，本发明人还发现选蛋白或SorCS2的基因破坏(genetic disruption)增加了齿状回中GABA能篮状细胞的兴奋性(图8B)。再次，对选蛋白-/-小鼠的海马切片施用外源BDNF使GABA能兴奋性正常化(图8B)，暗示着Vps10p-结构域受体也可能通过调节BDNF的可用度和活性来在该系统中调节突触功能。
[0022] 根据Vps10p-结构域受体在突触可塑性中的作用，选蛋白和SorCS2的基因破坏导致如由本发明人在被动回避试验中显示的改变的记忆功能(图13A和B)。还显示Vps10p-结构域受体的基因破坏如何在焦虑相关行为和抑郁/躁狂行为的两个试验模型(旷场试验和高架十字迷宫)中影响动物行为。在这些模型中，选蛋白、SorCS1或SorCS2的不存在具有与从使用抗抑郁药或抗焦虑剂的治疗预期的作用相似的作用(图9-12、图16、图17和图23)。根据之前的报导(Chen，Jing等人2006)，本发明人发现BDNF+/-小鼠在此类模型中显示增强的焦虑和抑郁行为。该行为被选蛋白的基因破坏完全逆转(图9-10)，这暗示着因BDNF的不存在引起的情绪障碍可通过调节Vps10p-结构域受体的活性来治疗。同样地，选蛋白、SorCS2或BDNF的不存在导致在试验过程中增加的从高架十字迷宫跌落(被认为与注意缺陷障碍和多动症相关的表型)(图18)。选蛋白和BDNF的不存在导致减少的迷宫跌落(图18)。此外，在进行高架十字迷宫试验之前，选蛋白、SorCS2或BDNF的不存在导致如通过高架平台暴露(elevated platform exposure)(图19)或足底电击(图20)显示的对应激的异常应对。
[0023] 与旷场试验和高架十字迷宫(图11和12)中SorCS2-/-小鼠的狂躁行为相反，SorCS2-/-小鼠在抑郁的强迫游泳试验模型中显示明确的抑郁行为(图14)。这是重要的，因为最近发现SorCS2基因中的单核苷酸多态性(SNP)与特别高的发生双相情感障碍的风险相关(Baum，Akula等人2008)。双相情感障碍的研究因缺乏适当的动物模型而受阻，现有模型仅重现抑郁或躁狂症的行为类似体(homologue)(Einat和Manji 2006；Coyle 2007；Roybal，Theobold等人2007)。根据本文中由本发明人提供的行为数据以及报导的SorCS2基因与双相情感障碍的遗传关联性，本发明提出SorCS2-/-小鼠是疾病的独特且有前景的模型。
[0024] 总之，本发明人假设Vps10p-结构域受体的调节可以是用于治疗精神和行为障碍的非常重要的靶。取决于疾病，这可通过增强或抑制一个或若干个Vps10p-结构域受体的活性来进行。例如通过增加或减少一个或若干个Vps10-结构域受体的表达，或通过增强或抑制Vps10p-结构域受体与特异性结合配偶体(partner)的相互作用。在SorCS2的情况NTR下，所述配偶体可能是p75 、TrkB、proBDNF前肽和/或成熟BDNF。
[0025] 因此，在一个主要方面，本发明涉及至少一种用于治疗精神和行为障碍的方法的试剂，该试剂能够通过调节经由Vps10p-结构域受体的信号传导来调节神经元活性。
[0026] 在另一个主要的方面，本发明涉及能够通过调节经由Vps10p-结构域受体的信号传导来调节神经元活性的试剂用于治疗精神和行为障碍的方法的用途。
[0027] 在另一个主要的方面，本发明涉及能够通过调节经由Vps10p-结构域受体的信号传导来调节神经元活性的试剂用于制备用于治疗精神和行为障碍的药物的用途。
[0028] 在另一个主要的方面，本发明涉及治疗精神和行为障碍的方法，所述方法包括通过调节经由Vps10p-结构域受体的信号传导来调节有此需要的患者的神经元活性。
[0029] 在另一方面，本发明涉及用于鉴定将受益于利用Vps10p-结构域受体激动剂或拮抗剂的治疗的精神和行为患者的方法，所述方法包括从所述患者获得样品并且通过酶联免疫吸附测定(ELISA)和/或通过遗传学试验就神经营养因子和/或Vps10p-结构域受体的改变的水平分析所述样品。
[0030] 在还另一个方面中，本发明涉及治疗有此需要的个体的焦虑和抑郁症的方法，所述方法包括给所述个体施用治疗有效量的选蛋白拮抗剂。
[0031] 在另一个方面中，本发明涉及恢复神经元过度活跃的方法，所述方法包括给有此需要的患者施用外源BDNF。
[0032] 在另一个方面中，本发明涉及特异性调节SorCS2与成熟BDNF的相互作用的方法，所述方法包括给所述个体施用治疗有效量的本发明的试剂。
[0033] 在另一个方面中，本发明涉及特异性抑制p75NTR与TrkB的相互作用的方法，所述方法包括给所述个体施用治疗有效量的本发明的试剂。
[0034] 在另一个主要方面中，本发明涉及转基因敲除小鼠，其中内源Vps10p-结构域受体SorCS2基因已被破坏以消除功能受体的表达，并且其中所述小鼠相对于非转基因对照小鼠展示改变的精神行为。
[0035] 在另一个主要方面中，本发明涉及转基因敲除小鼠，其中内源Vps10p-结构域受体SorCS1基因已被破坏以消除功能受体的表达，并且其中所述小鼠相对于非转基因对照小鼠展示改变的精神行为。
[0036] 在另一个主要方面中，本发明涉及用于测定试剂结合Vps10p-结构域受体和调节对于神经元活性重要的参数的功效的方法，所述方法包括以下步骤：
[0037] a.提供表达Vps10p-结构域受体的细胞培养物，和
[0038] b.提供Vps10p-结构域受体的激动剂，和
[0039] c.提供潜在试剂的文库，和
[0040] d.提供用于测定与Vps10p-结构域受体的结合、Vps10p-结构域受体的内化和经由Vps10p-结构域受体的信号传导的测定，所述测定包括
[0041] e.在b)的激动剂存在的情况下，将c)的待测的潜在试剂的文库加入a)的细胞培养物中，和
[0042] f.测定
[0043] i.结合至Vps10p-结构域受体的试剂的量，和/或
[0044] ii.通过Vps10p-结构域受体内化的试剂的量，和/或
[0045] iii.经由Vps10p-结构域受体进行的信号传导的程度，和
[0046] g.将步骤f)中测定的量与在待测的试剂不存在的情况下测量的量相比较，[0047] h.其中两个量的差异鉴定了这样的试剂，所述试剂
[0048] i.能够结合Vps10p-结构域受体，和/或
[0049] ii.能够抑制经由Vps10p-结构域受体的信号传导，和/或能
[0050] 够抑制所述Vps10p-结构域受体对激动剂的内化。
[0051] 在另一个主要的方面中，本发明涉及用于测定试剂结合Vps 10p-结构域受体和调节对于神经元活性非常重要的参数的功效的方法，所述方法包括以下步骤：
[0052] a.提供表达Vps10p-结构域受体的细胞培养物，和
[0053] b.提供不表达Vps10p-结构域受体的细胞培养物，和
[0054] c.任选地提供过表达Vps10p-结构域受体的细胞培养物，
[0055] d.提供Vps10p-结构域受体的激动剂，和
[0056] e.提供潜在试剂的文库，和
[0057] f提供包括a)的第一测定和包括b)的第二测定以及任选地包括c)的第三测定，和
[0058] g.将待测的潜在试剂的文库加入3个测定，和
[0059] h.测定
[0060] i.结合至Vps10p-结构域受体的试剂的量，和/或
[0061] ii.被Vps10p-结构域受体内化的试剂的量，和/或
[0062] iii.经由Vps10p-结构域受体进行的信号传导的程度，和
[0063] i.将使用a)在步骤g)中测定的试剂的量与使用b)在步骤g)中测定的量和使用c)在g)中测定的量相比较，
[0064] j.其中量的差异鉴定了这样的试剂，所述试剂能够：
[0065] i.结合Vps10p-结构域受体，和/或
[0066] ii.抑制经由Vps10p-结构域受体的信号传导，和/或
[0067] k.抑制所述Vps10p-结构域受体对激动剂的内化。
[0068] 在还另一个方面，本发明涉及用于测定试剂结合Vps10p-结构域受体和调节神经元活性的功效的方法，所述方法包括以下步骤：
[0069] a.提供表达Vps10p-结构域受体的哺乳动物，和
[0070] b.提供不表达Vps10p-结构域受体的哺乳动物，和
[0071] c.提供过表达Vps10p-结构域受体的哺乳动物，和
[0072] d.提供Vps10p-结构域受体的激动剂，和
[0073] e.提供潜在试剂的文库，和
[0074] f.分别给a)、b)和c)的所述哺乳动物施用所述试剂文库，和
[0075] g.使用一种或多种试验测定a)、b)和c)中定义的各个哺乳动物的异常精神行为的程度，所述试验选自旷场试验、高架十字迷宫试验、Y-迷宫试验、T-迷宫试验、放射迷宫试验、巴恩斯迷宫试验、社会认知试验、攻击试验、运动学习试验、空间学习试验、昼夜节律活动试验、Morris水迷宫、洞板试验、情境和线索依赖性恐惧条件化试验、被动回避试验、主动回避试验、惊跳反射试验、性行为和亲职行为试验、学得无助感试验、强迫游泳试验和明-暗探究试验，以及
[0076] h.将使用a)的在步骤g)中测定的异常精神行为的程度与使用b)的在g)中测定的程度，与使用c)的在g)中测定的程度相比较，其中抑制程度的差异鉴定了能够结合Vps10p-结构域受体、抑制经由Vps10p-结构域受体的信号传导的试剂。
[0077] 在另一方面中，本发明涉及用于测定试剂结合Vps10p-结构域受体和潜在调节神经元活性的功效的体外筛选方法，所述方法包括以下步骤：
[0078] a.提供Vps10p-结构域受体，和
[0079] b.提供激动剂，
[0080] c.提供潜在拮抗剂的文库，和
[0081] d.提供用于测量激动剂与Vps10p-结构域受体的结合的测定，和
[0082] e.将待测的潜在拮抗剂的文库加入测定中，和
[0083] f 测定结合Vps10p-结构域受体的激动剂的量，和
[0084] g.将步骤f)中测定的量与在待测的拮抗剂不存在的情况下测量的量相比较，[0085] h.其中两个量的差异鉴定了改变激动剂与Vps10p-结构域受体的结合的拮抗剂。
[0086] 在另一个方面中，本发明涉及筛选用于在治疗精神和行为障碍的方法中使用的试剂的体外方法，所述方法包括以下步骤：
[0087] i.提供Vps10p-结构域受体，和
[0088] j.提供激动剂，
[0089] k.提供潜在拮抗剂的文库，和
[0090] l.提供用于测量激动剂与Vps10p-结构域受体的结合的测定，和
[0091] m.将待测的潜在拮抗剂的文库加入测定中，和
[0092] n.测定结合至Vps10p-结构域受体的激动剂的量，和
[0093] o.将步骤f)中测定的量与在待测的拮抗剂不存在的情况下测量的量相比较，[0094] p.其中两个量的差异鉴定了改变激动剂与Vps10p-结构域受体的结合的拮抗剂。
[0096] 图1：受体概况。
[0097] 图2：海马中的表达和亚细胞定位。
[0098] 图3：选蛋白-/-和SorCS1-/-小鼠中的LTD。
[0099] 图4：SorCS2-/-小鼠中的LTD。
[0100] 图5：选蛋白和SorCS2-/-小鼠中的LTP。
[0101] 图6：SorCS2与p75NTR的物理相互作用。
[0102] 图7：SorCS2与BDNF的前肽和成熟BDNF-BIAcore的物理相互作用。
[0103] 图8：选蛋白和SorCS2对GABA能活性的调节。
[0104] 图9：选蛋白-/-、BDNF+/-和小鼠选蛋白-/-/BDNF+/--旷场试验-高架十字迷宫。
[0105] 图10：选蛋白-/-、BDNF+/-和小鼠选蛋白-/-/BDNF+/-小鼠-高架十字迷宫。
[0106] 图11：SorCS2-/-小鼠-旷场试验。
[0107] 图12：SorCS2-/-小鼠-高架十字迷宫。
[0108] 图13：被动回避。
[0109] 图14：强迫游泳试验。
[0110] 图15：TrkB的胞外结构域与固定的选蛋白、SorCS1和SorCS2的结合。
[0111] 图16：SorCS2-/-小鼠-旷场试验。
[0112] 图17：选蛋白-/-小鼠-高架十字迷宫-被动回避。
[0113] 图18：选蛋白-/-、BDNF+/-、选蛋白-/-/BDNF+/-、SorCS2-/-小鼠-高架十字迷宫的跌落。
[0114] 图19：SorCS2-/-小鼠-高架十字迷宫。
[0115] 图20：BDNF+/-、选蛋白-/-、SorCS2-/-小鼠-高架十字迷宫。
[0116] 图21：GST-选蛋白前肽阻断野生型小鼠中的LTD。
[0117] 图22：抗SorCS2 IgG阻断野生型小鼠中的LTP。
[0118] 图23：SorCS1-/-小鼠-高架十字迷宫。
[0119] 发明详述
[0120] 定义
[0121] 除非另有明确指出，否则本文中使用的全部技术和科学术语具有与本发明属于的领域内的技术人员通常理解的意义相同的意义。为了本发明的目的，定义下列术语。
[0123] 亲和力：可根据结合亲和力来表征大多数配体与它们的结合位点的相互作用。一般地，高亲和力配体结合因配体与其受体之间的较大的分子间力而产生，然而低亲和力配体结合涉及配体与其受体之间的较小的分子间力。通常，高亲和力结合涉及配体在其受体结合位点上具有比在低亲和力结合的情况下更长的驻留时间。当一些结合能可用于引起受体的构象变化，从而导致改变的相关离子通道或酶的行为时，配体对受体的高和力结合通常在生理上是重要的。
[0124] 可结合受体，改变受体的功能并且触发生理反应的配体称为该受体的激动剂。可根据生理反应可被触发的量和产生生理反应所需的激动剂浓度来表征结合受体的激动剂。高亲和力配体结合意味着相对低的配体浓度足以最大化地占据配体结合位点和触发生理反应。低亲和力结合意味着在最大化占据结合位点和获得对配体的最大生理反应之前需要相对高的配体浓度。通常根据一半受体结合位点被占据时配体的浓度(称为解离常数(kd))来表征配体结合。亲和力也是受体与其配体之间例如抗体与其抗原之间的结合的强度。
[0125] 醇：一类包含一个或多个羟基(OH)的有机化合物。在该上下文中，饱和或不饱和、分支或不分支的烃基在更大的分子上位于取代基。
[0126] 脂环基：术语“脂环基”意指与脂烃基具有相似性质的环烃基。
[0127] 脂烃基：在本发明的上下文中，术语“脂烃基”意指饱和或不饱和的线性或分支的烃基。该术语用于包括例如烷基、烯基和炔基。
[0128] 烷基：术语“烷基”意指饱和线性或分支烃基，包括例如甲基、乙基、异丙基、叔丁基、庚基、十二烷基、十八烷基、戊基、2-乙基己基等。
[0130] 炔基：术语“炔基”意指具有一个或多个碳-碳三键的不饱和线性或分支烃基。
[0131] 两亲性(Amphiphil)：包含极性的水溶性和非极性的不溶于水的基团的物质。
[0132] 激动剂：激动剂是能够增加或产生受体的活性的化合物。具体地，Vps10p-结构域受体的激动剂是这样的化合物，其能够结合Vps10p-结构域受体的一个或多个结合位点，从而诱导与给定的内源激动剂配体化合物诱导的相同的生理反应。
[0133] 拮抗剂：拮抗剂在该情况下与抑制剂同义。拮抗剂是能够减少效应物例如受体的活性的化合物。具体地，Vps10p-结构域受体拮抗剂是这样的化合物，其能够结合Vps10p-结构域受体的一个或多个结合位点，因而抑制另一个配体的结合，从而抑制生理反应。
[0134] 反义-RNA：能够通过特异性结合目的mRNA分子来引起基因沉默的RNA分子。
[0135] 反义-DNA：能够通过特异性结合目的mRNA分子来引起基因沉默的DNA分子。
[0136] 抗体：本文中提及的术语“抗体”包括完整抗体和其任何抗原结合片段(即，“抗原结合部分”)或单链。
[0137] 将本发明的选蛋白、SorCS1、SorCS2、TrkA、TrkB、TrkC和BDNF多肽或多肽片段用于产生neublastin-特异性抗体。如本文中所使用的，″SorCS2-特异性抗体”是这样的抗体，例如多克隆抗体或单克隆抗体，其具有对SorCS2多肽或多肽片段的免疫反应性，或其特异性结合SorCS2多肽的表位。
[0138] 多克隆和单克隆抗体的制备在本领域内是公知的。可以具体地如由例如Green等人在：“Production of Polyclonal Antisera”in Immunochemical Protocols(Manson，Ed.)；Humana Press，1992，第1-5页中；由Coligan等人在：“Production of Polyclonal Antisera in Rabbits，Rats，Mice and Hamsters”in Current Protocols in Immunology，1992，第2.4.1节中，以及由Ed Harlow和David Lane(Eds.)在“Antibodies；A laboratory manual”Cold Spring Harbor Lab.Press 1988中所述的获得多克隆抗体。可以具体地如由例如Kohler & Milstein，Nature，1975，256：495；Coligan等人在Current Protocols in Immunology，1992，第2.5.1-2.6.7节中；以及Harlow等人在Antibodies：A Laboratory Manual；Cold Spring Harbor，Pub.，1988，第726页中所述获得单克隆抗体。
[0139] 简而言之，可通过用包含抗原的组合物注射例如小鼠，通过取出血清样品验证抗体产物的存在，取出脾脏以获得B淋巴细胞，将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合以产生杂交瘤，克隆杂交瘤，选择产生针对抗原的抗体的阳性克隆，然后从杂交瘤培养物分离抗体来获得单克隆抗体。
[0140] 可通过许多良好建立的技术从杂交瘤培养物分离和纯化单克隆抗体，所述技术包括利用蛋白A琼脂糖凝胶的亲和层析、大小排阻层析和离子交换层析，参见例如Coligan等人Current Protocols in Immunology，1992，2.7.1-2.7.12节和2.9.1-2.9.3节；和Barnes等 人：“Purification of Immunoglobulin G(IgG)”in Methods in Molecular Biology；Humana Press，1992，第10卷，第79-104页。多克隆或单克隆抗体可任选地例如通过结合至多肽(所述抗体是针对该多肽产生的)，并从该多肽所结合的基质洗脱来进一步纯化。
[0141] 可使用完整多肽或包含小的目的肽的片段作为免疫抗原来制备结合本发明的SorCS2多肽的抗体。用于免疫动物的多肽可通过重组DNA技术或通过化学合成来获得，并且可任选地将其缀合至载体蛋白。被化学偶联至肽的通常使用的载体蛋白包括钥孔嘁血蓝蛋白(KLH)、甲状腺球蛋白、牛血清白蛋白(BSA)和破伤风类毒素。然后可将偶联的肽用于免疫动物，所述动物可以具体地是小鼠、大鼠、仓鼠或兔。
[0142] 可由本领域技术人员将产生SorCS2抗体的方法用于选蛋白、SorCS1、TrkA、TrkB、TrkC和BDNF。
[0143] 单克隆抗体：以其各种语法形式表示的短语单克隆抗体是指只包含一种能够与特定抗原免疫反应的抗体结合位点的抗体分子群体。因此单克隆抗体通常显示对于与其免疫反应的任意抗原的单一结合亲合力。单克隆抗体可包括具有多个抗原结合位点(每一个对不同的抗原具有免疫特异性)的抗体分子，例如双特异性单克隆抗体。
[0144] 多克隆抗体：多克隆抗体是识别特定给定的抗原的抗体分子的混合物，因此多克隆抗体可识别所述抗原内的不同表位。
[0145] 细胞凋亡：细胞凋亡是多细胞生物中细胞的自杀过程。其为程序化死亡(PCD)的主要类型之一，包括协调地结合在一起的(orchestrated)一系列导致特征性细胞形态学和死亡的生物化学事件。
[0146] 细胞凋亡抑制剂：能够减少细胞凋亡过程的任意化合物。
[0147] 芳香基：术语“芳香基”或“芳基”意指单环或多环芳香烃基。
[0148] 结合：术语“结合”或“与......结合”是指化学部分或化合物或其部分之间靠近的状态。结合可以是非共价的，其中并置(juxtaposition)对于氢键合或范德瓦尔斯或静电相互作用是在能量上有利的，或其可以是共价的。
[0149] 结合位点：如本文中所使用的术语“结合位点”或“结合口袋(binding pocket)”是指由于其形状而与另一个分子、分子复合物、化学实体或化合物有利地结合的分子或分子复合物的区域。如本文中所使用的，口袋包括至少深腔(deep cavity)和任选地浅腔(shallow cavity)。
[0150] 生物反应剂(Bioreactive agent)：如本文中所使用的术语“生物活性剂”是指可以与为治疗或诊断的应用结合，一起用于例如用于诊断患者的疾病存在或不存在的方法和/或用于治疗患者的疾病的方法的任何物质。“生物活性剂”是指能够在体外和/或体内发挥生物效应的物质。生物活性剂可以是中性的、带正电荷或带负电荷的。适当的生物活性剂包括例如前体药物、诊断剂、治疗剂、药学试剂、药物、氧输送剂、血液代用品、合成有机分子、多肽、肽、维生素、甾类、类固醇类似物和遗传定子(genetic determinant)，包括核苷、核苷酸和多核苷酸。
[0151] 阳离子基团：当将包含该化学基团的化合物溶解在溶剂中时，优选当溶解在水中时，能够用作质子供体的化学基团。
[0152] 复合物：如本文中所使用的，术语“复合物”是指分子或蛋白质、其保守类似物或截短物与化学实体结合的组合。
[0153] 环基(Cyclic group)：术语“环基”是指分类为脂环基、芳香基或杂环基的闭环烃基。
[0154] 环烯基：意指由1、2或3个环(每环3至8个碳)组成的单价不饱和碳环基，其可任选地用1或2个取代基进行取代，所述取代基选自羟基、氰基、低级烯基、低级烷氧基、低级卤代烷氧基、烯基硫基、卤素、卤代烯基、羟基烯基、硝基、烷氧基羰基、氨基、烯基氨基、烯基磺酰基、芳基磺酰基、烯基氨基磺酰基、芳氨基磺酰基、烷基磺酰基氨基、芳磺酰基氨基、烯基氨基羰基、芳氨基羰基、烯基羰基氨基和芳基羰基氨基。
[0155] 环烷基：意指由1、2或3个环(每环3至8个碳)组成的单价饱和碳环基，其可任选地用1或2个取代基进行取代，所述取代基选自羟基、氰基、低级烷基、低级烷氧基、低级卤代烷氧基、烷硫基、卤素、卤代烷基、羟烷基、硝基、烷氧基羰基、氨基、烷氨基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、烷氨基磺酰基、芳氨基磺酰基、烷基磺酰基氨基、芳基磺酰基氨基、烷氨基羰基、芳氨基羰基、烷羰基氨基和芳基羰基氨基。
[0156] 偶极-偶极相互作用：如本文中所使用的术语“偶极-偶极相互作用”是指可两个或更多个极性分子之间产生的引力。因此，“偶极-偶极相互作用”是指第一极性分子的不带电荷的部分正电末端与第二极性分子的不带电荷的部分负电末端的吸引。“偶极-偶极相互作用”也指分子间氢键合。
[0157] 静电相互作用：如本文中所使用的术语“静电相互作用”是指当相反电荷的成分彼此吸引时，由于吸引力而导致的带电荷的成分、分子或离子之间发生的任何相互作用。实例包括但不限于：离子相互作用、共价相互作用、离子与偶极子(离子与极性分子)之间的相互作用、两个偶极子(极性分子的部分电荷)之间的相互作用、氢键和伦敦分散键(London dispersion bond)(可极化分子的感生偶极子(induced dipoles of polarizable molecule))。因此，例如，“离子相互作用”或“静电相互作用”是指第一带正电荷的分子与第二带负电荷的分子之间的吸引力。离子或静电相互作用包括例如带负电荷的生物活性剂之间的吸引力。
[0158] 形成环：意指当形成环结构时，提及的原子通过键连接。
[0159] 片段：根据本发明的多肽片段(包括其任何功能等同物)可以在一个实施方案中包含少于500个氨基酸残基，例如少于450个氨基酸残基，例如少于400个氨基酸残基，例如少于350个氨基酸残基，例如少于300个氨基酸残基，例如少于250个氨基酸残基，例如少于240个氨基酸残基，例如少于225个氨基酸残基，例如少于200个氨基酸残基，例如少于180个氨基酸残基，例如少于160个氨基酸残基，例如少于150个氨基酸残基，例如少于140个氨基酸残基，例如少于130个氨基酸残基，例如少于120个氨基酸残基，例如少于110个氨基酸残基，例如少于100个氨基酸残基，例如少于90个氨基酸残基，例如少于85个氨基酸残基，例如少于80个氨基酸残基，例如少于75个氨基酸残基，例如少于70个氨基酸残基，例如少于65个氨基酸残基，例如少于60个氨基酸残基，例如少于55个氨基酸残基，例如少于50个氨基酸残基。神经降压肽的片段包括但不限于神经降压肽PYIL和YIL的C末端氨基酸。
[0160] 功能等同性：如本发明中所使用的术语“功能等同性”，根据一个优选实施方案，是通过参照序列的预定片段的相应功能性建立的。
[0161] 随着插入、缺失和置换(包括保守置换)的数目和范围增加，Vps10p-结构域受体调节剂的功能等同物或变体将被理解为展示与优选预定的神经营养因子前体活性调节剂序列渐进不同的氨基酸序列。该差异测量为优选预定序列与片段或功能等同物之间的同源性的减少。
[0162] 如果包含功能上相似的氨基酸侧链的残基被置换，通过置换获得的功能变体可良好地展示天然神经营养因子前体活性调节剂的活性的某种形式或程度，但具有较低同源性。在该方面中功能上相似是指侧链的主要特征例如疏水性、碱性、中性或酸性，或立体位阻效应(steric bulk)的存在或不存在。因此，在本发明的一个实施方案中，同一性的程度不是片段成为根据本发明的优选预定的片段的变体或功能等同物的首要量度标准。
[0163] 基因“沉默”：导致减少的内源基因表达的方法。基因沉默优选是基因表达的转录后减少的结果。
[0164] 基团：(部分/取代物)如在本技术领域内被充分理解的，大的取代程度不仅可被耐受，而且通常是可取的。取代预期存在于本发明的材料上。作为简化本申请通篇使用的某些技术的论述和引用的方式，术语“基团”和“部分”用于区别允许取代或可被取代的化学种类与不允许取代或不可以被这样取代的化学种类。因此，当术语“基团”用于描述化学取代基时，被描述的化学物质包括未被取代的基团和具有O、N或S原子(例如在链上)以及羰基或其他常规取代的该基团。当术语“部分”用于描述化合物或取代基时，意欲只包括未被取代的化学物质。例如，短语“烷基”意欲不仅包括纯开链饱和烃烷基取代基，例如甲基、乙基、丙基、叔丁基等，而且还包括具有本领域内已知的其他取代基例如羟基、烷氧基、烷基磺酰基、卤原子、氰基、硝基、氨基、羧基等的烷基取代基。因此，“烷基”包括醚基、卤代烷基、硝基烷基、羧基烷基、羟烷基、磺基烷基等。在另一个方面，短语“烷基部分”限定于只包括纯开链饱和烃烷基取代基，例如甲基、乙基、丙基、叔丁基等。相同的定义适用于“烯基”和“烯基部分”；适用于“炔基”和“炔基部分”；适用于“环基”和“环部分”；适用于“脂环基”和“脂环部分”；适用于“芳香基”或“芳基”和适用于“芳香部分”或“芳基部分”；以及适用于“杂环基”和“杂环部分”。
[0165] 杂环基团(heterocyclic group)：术语“杂环基团”意指其中环中的一个或多个原子是除了碳以外的元素(例如，氮、氧、硫等)的闭环烃。
[0166] 杂环基(heterocyclyl)意指单价饱和环基，其由1至2个环(每个环3至8个原子)组成，掺入了1或2个环杂原子(选自N、O或S(O)0-2)，并且其可任选地被1或2个取代基取代，所述取代基选自羟基、氧代、氰基、低级烷基、低级烷氧、低级卤代烷氧基、烷硫基、卤素、卤代烷基、羟烷基、硝基、烷氧基羰基、氨基、烷氨基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、烷氨基磺酰基、芳氨基磺酰基、烷基磺酰基氨基、芳基磺酰基氨基、烷氨基羰基、芳氨基羰基、烷基羰基氨基或芳基羰基氨基。
[0167] 杂芳基意指具有1至3个环(每一个环4至8个原子)的单价芳香环基，在环内掺入了1或2个杂原子(选自氮、氧或硫)，所述环可任选地被1或2个取代基取代，所述取代基选自羟基、氰基、低级烷基、低级烷氧基、低级卤代烷氧基、烷硫基、卤素、卤代烷基、羟烷基、硝基、烷氧基羰基、氨基、烷氨基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、烷氨基磺酰基、芳氨基磺酰基、烷基磺酰基氨基、芳基磺酰基氨基、烷氨基羰基、芳氨基羰基、烷基羰基氨基和芳基羰基氨基。
[0168] 同源性：氨基酸序列之间的同源性可使用公知的记分矩阵例如BLOSUM 30、BLOSUM 40、BLOSUM 45、BLOSUM 50、BLOSUM 55、BLOSUM 60、BLOSUM 62、BLOSUM 65、BLOSUM70、BLOSUM 75、BLOSUM 80、BLOSUM 85和BLOSUM 90中的任意一个来进行计算。
[0169] 分别与SEQ ID NO：1至10的片段共有同源性的片段，当它们分别与所述预定的片段序列优选至少约60％同源，例如至少65％同源，例如至少70％同源％同源，例如至少75％同源，例如至少80％同源，例如至少85％同源，例如至少90％同源，例如至少92％同源，例如至少94％同源，例如至少95％同源，例如至少96％同源，例如至少97％同源，例如至少98％同源，例如至少99％同源时，被认为落在本发明的范围内。根据本发明的一个实施方案，百分数同源性是指百分数同一性。
[0170] 用于测定肽片段的结构和功能关系的其他适当地适宜方法描述于US 6,013,478，将其在此引用作为参考。同样地，测定氨基酸序列与受体部分的结合的方法对于本领域技术人员来说是已知的。
[0171] 除了引入优选预定的神经营养因子前体活性调节剂或其片段的任意位置的保守置换外，还可期望在这样的神经营养因子前体活性调节剂的任意一个或多个位置上引入非保守置换。
[0172] 导致神经营养因子前体活性调节剂的功能上等同的片段形成的非保守置换可以例如i)在极性上显著不同，例如用具有非极性侧链的残基(Ala、Leu、Pro、Trp、Val、Ile、Leu、Phe或Met)置换具有极性侧链例的残基如Gly、Ser、Thr、Cys、Tyr、Asn或Gln或带电荷的氨基酸例如Asp、Glu、Arg或Lys，或用带电荷的残基或极性残基置换非极性残基；和/或ii)在其对多肽主链取向的影响上显著不同，例如另一种残基对Pro或Gly的置换；和/或iii)在电荷上显著不同，例如用带负电荷的残基例如Glu或Asp置换带正电荷的残基例如Lys、His或Arg(并且反之亦然)；和/或iv)在空间位阻效应(steric bulk)上显著不同，例如用大残基(bulky residue)例如His、Trp、Phe或Tyr置换具有较小的侧链的残基例如Ala、Gly或Ser(以及反之亦然)。
[0173] 可基于疏水性和亲水性值以及氨基酸侧链取代基的相对相似性(包括电荷、大小等)在一个优选实施方案中产生通过氨基酸置换获得的变体。考虑多个上述特征的示例性氨基酸置换对于本领域技术人员来说是公知的并且包括：精氨酸和赖氨酸；谷氨酸和天冬氨酸；丝氨酸和苏氨酸；谷氨酰胺和天冬酰胺；以及缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸。
[0174] 除了本文中所述的变体外，可配制在立体化学上相似的变体以模拟变体结构的关键部分并且也可以以与本发明的变体相同的方式使用此类化合物。这可通过对于本领域技术人员来说是已知的模型化和化学设计来实现。应理解所有此类在立体化学上相似的构建体落在本发明的范围内。
[0175] 在另外的实施方案中，本发明涉及包含被取代的氨基酸的功能变体，所述被取代的氨基酸具有在其已取代的氨基酸的亲水值的+/-4.9内，例如+/-4.7内、例如+/-4.5内、例如+/-4.3内、例如+/-4.1内、例如+/-3.9内、例如+/-3.7内、例如+/-3.5内、例如+/-3.3内、例如+/-3.1内、例如+/-2.9内、例如+/-2.7内、例如+/-2.5内、例如+/-2.3内、例如+/-2.1内、例如+/-2.0内、例如+/-1.8内、例如+/-1.6内、例如+/-1.5内、例如+/-1.4内、例如+/-1.3，例如在+/-1.2内、例如+/-1.1内、例如+/-1.0内、例如+/-0.9内、例如+/-0.8内、例如+/-0.7内、例如+/-0.6内、例如+/-0.5内、例如+/-0.4内、例如+/-0.3内、例如+/-0.25内、例如+/-0.2内的亲水值或亲水指数。
[0176] 亲水(hydrophilic)和亲水(hydropathic)氨基酸指数在赋予蛋白质相互作用的生物功能中的重要性在本领域内是公知的(Kyte & Doo-little，1982和Hopp，美国专利号4,554,101，各个在此引用作为参考)。
[0177] 本文中使用的氨基酸亲水指数值为：异亮氨酸(+4.5)；缬氨酸(+4.2)；亮氨酸(+3.8)；苯丙氨酸(+2.8)；半胱氨酸/胱氨酸(+2.5)；甲硫氨酸(+1.9)；丙氨酸(+1.8)；甘氨酸(-0.4)；苏氨酸(-0.7)；丝氨酸(-0.8)；色氨酸(-0.9)；酪氨酸(-1.3)；脯氨酸(-1.6)；组氨酸(-3.2)；谷氨酸(-3.5)；谷氨酰胺(-3.5)；天冬氨酸(-3.5)；天冬酰胺(-3.5)；赖氨酸(-3.9)；和精氨酸(-4.5)(Kyte & Doolittle，1982)。
[0178] 氨基酸亲水性值为：精氨酸(+3.0)；赖氨酸(+3.0)；天冬氨酸(+3.0.+-.1)；谷氨酸(+3.0.+-.1)；丝氨酸(+0.3)；天冬酰胺(+0.2)；谷氨酰胺(+0.2)；甘氨酸(0)；苏氨酸(-0.4)；脯氨酸(-0.5.+-.1)；丙氨酸(-0.5)；组氨酸(-0.5)；半胱氨酸(-1.0)；甲硫氨酸(-1.3)；缬氨酸(-1.5)；亮氨酸(-1.8)；异亮氨酸(-1.8)；酪氨酸(-2.3)；苯丙氨酸(-2.5)；色氨酸(-3.4)(U.S.4,554,101)。
[0179] 除了本文中描述的肽基化合物外，可配制立体化学上相似的化合物来模拟肽结构的关键部分并且还可以以与本发明的肽相同的方式使用这样的化合物。这可通过本领域技术人员已知的建模和化学药品设计的技术来实现。例如，可将酯化作用和其他烷基化作用用于修饰例如二-精氨酸肽骨架的氨基末端以模拟四肽结构。应理解所有此类立体化学上相似的构建体落在本发明的范围内。
[0180] 具有N-末端烷基化和C-末端酯化的肽也包括在本发明的范围内。功能等同物也包括与相同或其他神经营养因子前体活性调节剂片段和/或神经营养因子前体活性调节剂分子形成的糖基化和共价或聚集的缀合物，包括二聚体或不相关化学部分。此类功能等同物利用本领域内已知的方法通过将官能团与在片段中(包括在N-和C-末端的任一端或两端上)发现的基团连接来制备。
[0181] 因此功能等同物可包含缀合至羧基末端、烷基胺或包含羧基侧链的残基的脂肪族或酰基酯或酰胺的片段，例如在天冬氨酸残基上缀合至烷基胺的缀合物；包含羟基的残基的O-酰基衍生物和氨基端氨基酸或包含氨基的残基的N-酰基衍生物例如具有fMet-Leu-Phe或免疫球蛋白的缀合物。酰基的衍生物选自烷基部分(包括C3至C10正烷基)，从而形成链烷酰基(alkanoyl)种类，和碳环或杂环化合物，从而形成芳酰基种类。反应性基团优选是用于通过反应性侧基将蛋白质与不溶性基质交联的本身已知的双功能化合物。
[0182] 共价或聚集功能性等同物和其衍生物在免疫测定中用作试剂或用于亲和纯化法。例如，根据本发明的神经营养因子前体活性调节剂的片段可通过本身已知的方法共价键合至溴化氰活化的Sepharose或利用或不利用戊二醛交联吸附至聚烯烃表面而不溶解，以用于抗神经营养因子活性调节剂抗体或细胞表面受体的测定或纯化。还可用可检测的基团例如利用氯胺T方法放射性碘化片段，将该片段共价连接至稀土螯合物(rare earth chelate)或缀合至另一个荧光部分以用于例如诊断测定。
[0183] 可通过通常在约1至10个氨基酸残基，优选约1至5个氨基酸残基的量级上产生氨基酸插入，或约1至10个残基，例如约2至5个残基的缺失来进行神经营养因子前体活性调节剂的优选预定片段的诱变。
[0184] 在一个实施方案中，配体或结合位点1、2或3是通过自动化合成的合成的寡核苷酸。可使用任何商购可得的固相技术例如Merrifield固相合成法，其中将氨基酸连续地添加至正在生长的氨基酸链(参见Merrifield，J.Am.Chem.Soc.85：2149-2146，1963)。
[0185] 用于多肽的自动化合成的设备可从提供商例如Applied Biosystems，Inc.of Foster City，Calif.商购获得，并且通常可按照制造商的说明书进行操作。固相合成使得能够将期望的氨基酸置换掺入根据本发明的神经营养因子前体活性调节剂的任意片段。要理解，可组合置换、缺失、插入或其任意亚组合来获得功能等同物的最终序列。应理解插入包括例如与疏水性或免疫原性蛋白质或载体例如能够用作载体的任何蛋白质和支架结构的氨基端和/或羧基端融合。
[0186] 还提供了包括二聚体(包括本发明的关键抑制剂的片段的同二聚体和异二聚体)的寡聚体并且其落在本发明的范围内。可将神经营养因子前体活性调节剂功能等同物和变体与其他氨基酸序列或与天然关键抑制剂序列产生为同二聚体或异二聚体。异二聚体包括含有免疫反应性关键抑制性片段以及不需要具有或产生任何生物活性的关键抑制性片段的二聚体。
[0187] 可体外和体内合成Vps10p-结构域受体拮抗剂(包括但不限于选蛋白抑制性肽片段)。用于体外合成的方法是公知的，适合于或适当地适应关键抑制剂的体内合成的方法也描述于现有技术中。当体内合成时，用包含编码关键肽抑制剂或其片段的DNA的载体转化宿主细胞。载体被定义为可复制的核酸构建体。载体用于介导神经营养因子前体活性调节剂的表达。表达载体是这样的可复制的DNA构建体，其中将可在体内表达的编码预定的关键抑制性片段或其任意功能等同物的核酸序列有效地连接于适当的控制序列，所述控制序列能够在适当的宿主中影响片段或等同物的表达。此类控制序列在本领域内是公知的。原核和真核细胞都可用于合成配体。
[0188] 然而来源于多细胞生物的细胞的培养物代表了优选宿主细胞。原则，任何高等真核细胞都可以使用，无论其来自脊椎动物还是无脊椎动物培养物。有用的宿主细胞系的实例是VERO和HeLa细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系和WI38、BHK、COS-7、293和MDCK细胞系。优选宿主细胞是已知合成内源关键抑制剂的真核细胞。可分离此类宿主细胞的培养物，将其用作片段的来源或用于治疗的治疗性方法，包括目的在于促进或抑制生长状态的治疗方法，或在人或动物身体上进行的诊断方法。
[0189] 疏水键：如本文中所使用的术语“氢键”是指可在共价地键合至负电性原子(例如氧、硫或氮)的氢原子与另一个负电性原子之间发生的吸引力或桥接。氢键可在第一分子中的氢原子与第二分子中的电负性原子之间发生(分子间氢键合)。同样地，氢键也可在两者都包含在单个分子中的氢原子与电负性原子之间发生(分子内氢键合)。
[0190] 疏水相互作用：如本文中所使用的术语“疏水相互作用”是指在极性环境(例如水)中位于彼此引力范围内的必需非极性(疏水性)成分之间发生的任何相互作用。如本文中所使用的，引力范围在0.1至2nm的尺度上。特定类型的疏水相互作用由“范德瓦尔斯力”即非极性分子之间的引力(通过量子力学解释的)产生。范德华力通常与瞬间偶极矩相关，所述瞬间偶极矩由相邻原子诱导并且涉及电子分布的变化。
[0191] 抑制：如本文中所使用的抑制意指阻止两个相互作用伴侣例如受体与配体，或两个或多个大分子之间的相互作用。
[0192] 体外/体内：术语以它们通常的意义使用。
[0193] 损伤：由破坏组织的任何过程引起。癌性肿瘤是损伤的实例，然而被肿瘤破坏的周围组织也是损伤。创伤，包括触电死(electrocution)和化学烧伤，也可引起损伤。某些疾病带来损伤，例如由水痘引起的皮肤变形。损伤也可由代谢过程如溃疡或自身免疫活性(如在患有许多形式的关节炎的情况中)引起。有时在神经外科过程中故意施以损伤，例如用于治疗癫痫和其他脑障碍的小心置入的脑损伤。
[0194] 配体：能够结合(第二)生物分子并且与其形成复合物以用于生物学目的的物质、化合物或生物分子例如蛋白质，包括受体。在狭义上，其为通过分子间力例如离子键、氢键和范德瓦尔斯力结合靶蛋白上的位点的信号靶向分子。对接(docking)(缔合)通常是可逆的(分离(dissociation))。配体与其靶分子之间的实际不可逆共价结合在生物系统中是罕见的。与金属有机和无机化学中的意义相反，其是无关的，无论配体实际上是否结合在金属位点上，正如血红蛋白的情况一样。结合受体的配体可改变化学构象，即受体蛋白的三维形状。受体蛋白的构象状态决定受体的功能状态。结合的趋向或强度称为亲和力。配体包括底物、抑制剂、激活物、非自身受体、共受体和神经递质。放射性配体是放射性同位素标记的化合物并且在PET研究中在体内用作示踪剂以及用于体外结合研究。
[0195] 精神和行为障碍：本发明涉及调节神经元活性以制备用于治疗和/或预防精神和行为障碍的药物的方法。根据在本申请的归档日期于http://www.who.int/classifications/apps/icd/icd10online/上概述的WHO标准定义精神和行为障碍。
[0196] 特定化合物的部分涵盖所述特定化合物的基团或部分。
[0197] 神经元活性：如本文中所使用的改变的神经元活性应当理解为体外或体内记录的亚细胞区室或单个神经元或神经胶质细胞或其装配体的改变的功能，包括阈上或阈下突触反应防止和其可塑性、神经组织的细胞中膜兴奋性、细胞内离子浓度、跨膜离子流或离子通道的变化，或分析其行为关联性。
[0198] 药物试剂：术语“药物试剂”或“药物”或“药物”是指可用于治疗(包括预防、诊断、减轻或治愈)患者的疾患(malady)、痛苦、状况、疾病或损伤的任意治疗或预防剂。治疗上有用的遗传定子、肽、多肽和多核苷酸可包括在术语药物或药品的意义内。如本文中所定义的，“治疗剂”、“药物试剂”或“药品”或“治剂”是一种生物活性剂。
[0199] 药物组合物：或药品、药物或试剂是指当适当地给患者施用时诱导期望的治疗效果的任意化学或生物物质、化合物或组合物。一些药品以无活性的形式销售，该形式在体内转化成具有药物活性的代谢产物。为了本发明的目的，术语“药物组合物”和“药物”包括无活性药品和活性代谢物。
[0200] 多肽：如本文中所使用的术语“多肽”是指包含至少2个氨基酸的分子。氨基酸可以是天然的或合成的。“寡肽”在本文中定义为长度不超过100个氨基酸的多肽。术语“多肽”也意欲包括蛋白质，即包含至少一个多肽的功能性生物分子；当包含至少2个多肽时，这些多肽可形成共价连接或可以是非共价连接的复合物。蛋白质中的多肽可被糖基化和/或脂化和/或包含辅基。
[0201] 多核苷酸：如本文中所使用的“多核苷酸”是指包含至少2个核酸的分子。核酸可以是天然存在的或是经修饰的，例如锁核酸(locked nucleic acid)(LNA)或肽核酸(PNA)。如本文中所使用的多核苷酸通常属于：
[0202] i)包含预定编码序列的多核苷酸，或
[0203] ii)编码预定氨基酸序列的多核苷酸，或
[0205] iv)其互补链在严格条件下与(i)、(ii)和(iii)的任一项中定义的多核苷酸杂交，并且编码具有至少一个如本文中指定的预定活性的多肽或其片段的多核苷酸；和[0206] v)包含与多核苷酸(iii)或(iv)的核苷酸序列简并的核苷酸序列的多核苷酸；
[0207] 或这样的多核苷酸的互补链。
[0208] 纯化的抗体：术语“纯化的抗体”是其至少60％的重量不含与其天然结合的多肽和天然存在的有机分子的抗体。优选，所述制剂以至少75％的重量，更优选至少90％的重量和最优选至少99％的重量的量包含抗体。
[0209] 均方根偏差：术语“均方根偏差”(rmsd)用作比较两个密切相关的结构的均值并且与在于比对中在结构上使两个结构的相关原子之间的距离最小化后所述距离的偏差相关。具有密切相关结构的相关蛋白质的特征在于相对低的RMSD值，然而更大的差异将导致RMSD值的增加。
[0210] 序列同一性：在一个实施方案中利用神经营养因子前体活性调节剂肽的片段测定序列同一性，所述片段包含至少25个连续氨基酸并且具有分别与SEQ ID NO：1，SEQ ID NO：2，SEQ ID NO：3，SEQ ID NO：4，SEQ ID NO：5，SEQ ID NO：6，SEQ ID NO：7，SEQ ID NO：8，SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10的任一个的氨基酸序列具有至少80％例如85％，例如90％，例如95％，例如99％的同一性的氨基酸序列，其中使用Wisconsin Genetics软件包中的算法GAP、BESTFIT或FASTA，利用缺省空位权重(default gap weights)测定百分数同一性。
[0211] 下列术语用于描述两个或更多个多核苷酸之间的序列关系：“预定序列”、“比较窗口”、“序列同一性”、“序列同一性的百分数”和“显著的同一性”。
[0212] 可利用Smith和Waterman(1981)Adv.Appl.Math.2：482的局部同源性算法，利用Needleman和Wunsch(1970)J.Mol.Biol.48：443的同源性比对算法，利用Pearson和Lipman(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)85：2444的相似性搜索方法，利用此类算法的计算机化实现(Wisconsin Genetics Software Package Release 7.0，Genetics Computer Group，575 Science Dr.，Madison，Wis.中的GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA)或通过观察进行用于对齐比较窗口的序列的最佳比对，选择由不同方法产生的最佳比对(即，导致比较窗口上的最高同源性百分数)。
[0213] 当用于多肽时，氨基酸序列的同一性程度是在由氨基酸序列共有的位置上相同氨基酸的数目的函数。氨基酸序列的同源性或相似性的程度是在由氨基酸序列共有的位置上氨基酸(即结构上相关的)的数目的函数。
[0214] “不相关的”或“非同源的”序列与本发明的神经营养因子前体活性调节剂多肽序列之一共有低于40％的同一性，虽然优选低于25％的同一性。术语“显著的同一性”意指两个肽序列，当例如使用缺省空位权重通过程序GAP或BESTFIT最佳比对时，共有至少80％的序列同一性，优选至少90％的序列同一性，更优选至少95％的序列同一性或更高的同一性(例如，99％的序列同一性)。优选，不相同的残基位置相异在于保守氨基酸置换。
[0215] 保守氨基酸置换是指具有相似侧链的残基的互换性。例如，具有脂肪族侧链的氨基酸的组是甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸；具有脂肪族-羟基侧链的氨基酸的组是丝氨酸和苏氨酸，具有含酰胺侧链的氨基酸的组是天冬酰胺和谷氨酰胺；具有芳香族侧链的氨基酸的组是苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸；具有碱性侧链的氨基酸的组是赖氨酸、精氨酸和组氨酸；以及具有含硫侧链的氨基酸的组是半胱氨酸和甲硫氨酸。优选保守氨基酸置换的组是：缬氨酸-亮氨酸-异亮氨酸、赖氨酸-精氨酸、丙氨酸-缬氨酸以及天冬酰胺-谷氨酰胺。
[0216] 此外，还可基于如下本文中定义的保守氨基酸的预定数目测定变体。如本文中所使用的保守氨基酸置换涉及一个氨基酸(在氨基酸的预定组内)对另一个氨基酸(在相同组内)的置换，其中所述氨基酸展示相似或大体上相似的特征。
[0217] 在如本文中所使用的术语“保守氨基酸置换”的意义内，一个氨基酸可置换下文中指示的氨基酸的组内的另一个氨基酸：
[0218] i)具有极性侧链的氨基酸(Asp、Glu、Lys、Arg、His、Asn、Gln、Ser、Thr、Tyr和Cys)
[0219] ii)具有非极性侧链的氨基酸(Gly、Ala、Val、Leu、Ile、Phe、Trp、Pro和Met)[0220] iii)具有脂肪族侧链的氨基酸(Gly、Ala Val、Leu、Ile)
[0221] iv)具有环状侧链的氨基酸(Phe、Tyr、Trp、His、Pro)
[0222] v)具有芳香族侧链的氨基酸(Phe、Tyr、Trp)
[0223] vi)具有酸性侧链的氨基酸(Asp、Glu)
[0224] vii)具有碱性侧链的氨基酸(Lys、Arg、His)
[0225] viii)具有酰胺侧链的氨基酸(Asn、Gln)
[0226] ix)具有羟基侧链的氨基酸(Ser、Thr)
[0227] x)具有含硫侧链的氨基酸(Cys、Met)
[0228] xi)中性弱疏水性氨基酸(Pro、Ala、Gly、Ser、Thr)
[0229] xii)亲水性酸性氨基酸(Gln、Asn、Glu、Asp)和
[0230] xiii)疏水性氨基酸(Leu、Ile、Val)。
[0231] 因此，根据本发明的变体或其片段可在序列的相同变体或其片段内或在所述序列的不同变体或其片段之间包含至少一个置换，例如彼此独立地引入的多个置换。
[0232] 根据上文中的概述很清楚：相同的变体或其片段可包含超过1个来自如上文中定义的保守氨基酸的超过1组的保守氨基酸置换。
[0233] 至少一个氨基酸的添加或缺失可以是优选2至250个氨基酸，例如10至20个氨基酸，例如20至30个氨基酸，例如40至50个氨基酸的添加或缺失。然而，超过50个氨基酸的添加或缺失，例如50至100个氨基酸的添加，100至150个氨基酸的添加，150至250个氨基酸的添加，也包括在本发明内。缺失和/或添加可以-彼此独立地-是序列内和/或在序列末端上的缺失和/或添加。
[0234] siRNA：“小干扰RNA”(siRNA)是能够在哺乳动物细胞中引起基因特异性沉默的短的(通常，但不限于，短于30个氨基酸的长度)双链RNA分子。
[0235] 取代的低级烷基意指具有选自羟基、烷氧基、氨基、酰胺基、羧基、酰基、卤素、氰基、硝基和硫氢基的1至3个取代基的低级烷基。
[0236] 突触可塑性：是两个神经元之间的联系或突触以改变强度的能力。存在若干协作以实现突触可塑性的基础机制，包括释放入突触的神经递质的量的变化和细胞对此类神经递质作出反应的有效程度的变化。因为假定记忆由脑内突触的巨大互联网络代表，因此突触可塑性是学习和记忆的重要神经化学物质基础之一。两个已知的突触可塑性的分子机制由试验室例如Eric Kandel的试验室的研究揭示。第一机制包括修饰现有突触蛋白(通常地蛋白质激酶)，从而导致改变的突触功能。第二机制依赖于调节基因转录的第二信使神经递质和突变上的关节蛋白质的水平的变化。该第二机制可通过蛋白质磷酸化触发但花费更长时间和持续更长时间，从而提供了持久记忆储存的机制。两个神经元之间的突变联系的效能的持久变化(长时程增强或LTP)可包括突触接触的产生和中断。
[0237] 突触的强度也依赖于其具有的通道的数目。几个事实暗示神经元改变它们的突触后膜上的受体的密度作为改变它们自已响应刺激的兴奋性的机制。在维持平衡的动态过程中，通过胞吐作用将NMDA和AMPA受体加入至膜以及通过胞吞作用将其除去。这些过程以及膜上受体的数目的扩增可被突触活性改变。试验已显示AMPA因反复的NMDAR激活而被递送至膜。
[0238] 如果突触的强度只通过刺激强化或通过其不存在来减弱，那么将产生正反馈回路，从而导致一些细胞永不兴奋(fire)并且一些细胞兴奋太多。但也存在称为收缩和再可塑性的两种可塑性的调控形式来提供负反馈。突触缩放用于维持彼此相关的突触的强度，从而降低响应持续兴奋的小的兴奋性突触后电位的振幅并且在长时间阻断或抑制后使其升高。该效应通过改变突触上NMDA受体的数目在数小时或数天内逐渐发生( 和Ehlers，2005)。再可塑性(负反馈的另一种形式)在一段时间内减小可塑性的效应。因此，如果细胞在过去已受到许多可塑性影响，那么再可塑性
2+
(metaplasticity)使将来的可塑性不太有效。由于LTP和LTD(长时程抑制)依赖于Ca通过NMDA通道流入，因此再可塑性可因NMDA受体的变化例如它们的亚基的变化(以允许
2+
细胞内Ca 的浓度更迅速地降低)而产生。
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(metaplasticity)使将来的可塑性不太有效。由于LTP和LTD(长时程抑制)依赖于Ca通过NMDA通道流入，因此再可塑性可因NMDA受体的变化例如它们的亚基的变化(以允许
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细胞内Ca 的浓度更迅速地降低)而产生。
[0239] 治疗：如本文中所使用的术语“治疗”是指包括个体(包括人或动物身体)的临床状况的疗法(包括手术)的方法。疗法可以是改善、治愈或预防性的，即减轻精神和行为症状。
[0240] 变体：如本文中所使用的术语“变体”是指氨基酸序列变体，所述变体优选与预定序列的任一个具有至少60％的序列同一性，例如至少63％的序列同一性，例如至少66％的序列同一性，例如至少70％的序列同一性，例如至少72％的序列同一性，例如至少75％的序列同一性，例如至少80％的序列同一性，例如至少85％的序列同一性，例如至少90％的序列同一性，例如至少91％的序列同一性，例如至少91％的序列同一性，例如至少92％的序列同一性，例如至少93％的序列同一性，例如至少94％的序列同一性，例如至少95％的序列同一性，例如至少96％的序列同一性，例如至少97％的序列同一性，例如至少98％的序列同一性，例如至少99％的序列同一性。
[0241] 表达的上调：导致增加的基因，优选内源基因的表达的过程。
[0242] 本发明的试剂
[0243] 在主要方面中，本发明涉及至少一种试剂，其能够通过调节经由Vps10p-结构域受体的信号传导来调节神经元活性，用于治疗精神和行为障碍的方法，其中神经元活性通过如下来测量：
[0244] a.长时程抑制，和/或
[0245] b.早期和晚期长时程增强，和/或
[0246] c.GABA能活性。
[0247] 在一个实施方案中，试剂是特异性SorCS2调节剂。
[0248] 在另一个实施方案中，试剂是特异性SorCS2拮抗剂。
[0249] 在另一个实施方案中，试剂是特异性SorCS2激动剂。
[0250] 在另一个实施方案中，试剂是特异性选蛋白调节剂。
[0251] 在另一个实施方案中，试剂是特异性选蛋白拮抗剂。
[0252] 在另一个实施方案中，试剂是特异性选蛋白激动剂。
[0253] 在一个实施方案中，试剂是特异性SorCS1调节剂。
[0254] 在另一个实施方案中，试剂是特异性SorCS1拮抗剂。
[0255] 在另一个实施方案中，试剂是特异性SorCS1激动剂。
[0256] 在其他实施方案中，所述试剂抑制选蛋白的胞外结构域与选自TrkA、TrkB和TrkC的酪氨酸激酶受体的胞外结构域之间的相互作用。
[0257] 在另一个实施方案中，所述试剂选自有机分子、抗体、蛋白质、肽、多肽、反义RNA、反义DNA和siRNA。
[0258] 在一个重要的实施方案中，所述试剂是具有选自如下的氨基酸序列的肽：
[0259] a.RIFRSSDFAKNFVQTD，
[0260] b.RIFRSSDF，
[0261] c.RIFRSSDFAKNF，
[0262] d.RSSDFAKNFVQTDLPF，
[0263] e.FAKNFVQTD，
[0264] f.RIFR，
[0265] g.FAKNF，和
[0266] h.RGGRIFRSSDFAKNF，
[0267] 或a至h的两个或更多个的组合。
[0268] 在其他实施方案中，如本文上文中定义的肽是环状的。
[0269] 在本发明的另一个实施方案中，所述试剂是多肽，例如选自脑源性神经营养因子(BDNF)、神经生长因子(NGF)、神经营养因子3(NT3)和神经营养因子4/5(NT4/5)的外源神经营养因子。
[0270] 在另一个实施方案中，如本文上文中定义的多肽是可溶性Vps10p-结构域受体或其片段，所述可溶性受体选自选蛋白、SorLA、SorCS1、SorCS2和SorCS3。
[0271] 在本发明的另一个实施方案中，如本文上文中定义的可溶性受体诱导神经元活性。
[0272] 在本发明的另一个实施方案中，如本文上文中定义的可溶性受体降低神经元活性。
[0273] 在其他实施方案中，所述本发明的至少一种试剂是两种试剂。
[0274] 在其他实施方案中，所述本发明的至少一种试剂是三种或更多种试剂。
[0275] 在一个实施方案中，本发明的试剂选自特异性SorCS2拮抗剂、特异性SorCS2激动剂、特异性SorCS1拮抗剂、特异性SorCS1激动剂、特异性选蛋白拮抗剂和特异性选蛋白激动剂。
[0276] 在一个重要的实施方案中，本发明的试剂能够调节SorCS2与选自p75NTR、TrkB、NTRTrkB、p75 ：TrkB二元复合物、proBDNF的前肽、成熟BDNF、GluR、AMPA-R和NMDA-受体的相互作用伴侣之间的相互作用。
[0277] 在另一个实施方案中，本发明的试剂能够调节SorCS2与选自p75NTR、TrkB、proBDNF的前肽和成熟BDNF的配体之间的相互作用。
[0278] 抗体
[0279] 在高度优选实施方案中，本发明的试剂是抗体。
[0280] 抗体紧密结合特定靶分子，从而直接使其失活或标记其以进行破坏。抗体以显著的特异性和强度(由许多化学力包括氢键、疏水力和范德华力以及离子相互作用的总和决定的)识别其靶(抗原)。通常，靶在化学上越复杂，其免疫原性越高。抗原决定簇可包括短的线性氨基酸区段或更复杂的三维蛋白质模块(module)。
[0281] 在概念上，抗靶受体的抗体可以以两种方式：竞争性或变构效应抑制配体结合。竞争性抑制包括抗体至受体上的配体结合位点的直接结合或邻近所述结合位点，从而将配体从其受体置换或在空间上抑制配体接近配体结合位点。变构性抑制包括抗体至受体多肽上的与配体结合表位不同的位点的结合。然而，对该位点的结合将诱导受体的总体结构的构象变化，使其难以或甚至不可能让配体结合其关联识别位点(cognate recognition site)。
[0282] 本发明的一个方面是提供特异性识别和结合Vps10p-结构域受体、TrkA、TrkB、NTRTrkC和p75 受体的表位的抗体或其功能等同物。
[0283] 抗体或其功能等同物可以是本领域内已知的任意抗体，例如来源于哺乳动物的多克隆或单克隆抗体或合成的抗体例如单链抗体或包含抗体片段的杂合体(hybrid)。此外，抗体可以是单克隆抗体或人造多克隆抗体的混合物。此外，抗体的功能等同物可以是抗体片段，特别是表位结合片段。此外，抗体或其功能等同物可以是模拟抗体的小分子。天然存在的抗体是由重链和轻链组成的免疫球蛋白分子。在本发明的优选实施方案中，抗体是单克隆抗体。
[0284] 单克隆抗体(Mab)是其中每一个抗体都相似，从而识别相同表位的抗体。单克隆抗体通常由杂交瘤细胞系产生。制备单克隆抗体和合成抗体的杂交瘤细胞的方法对于本领域技术人员来说是公知的。抗体产生性杂交瘤可以例如通过将抗体产生性B淋巴细胞与永生化B淋巴细胞系融合来制备。可以例如如Antibodies：A Laboratory Manual，By Ed Harlow和David Lane，Cold Spring Harbor Laboratory Press，1988中所述制备根据本发明的单克隆抗体。所述单克隆抗体可以来源于任何合适的哺乳动物物种，然而通常单克隆抗体是啮齿类动物抗体例如鼠类或大鼠单克隆抗体。优选根据本发明的抗体是单克隆抗体或衍生自单克隆抗体。
[0285] 多克隆抗体是识别特定给定的抗原的抗体分子的混合物，因此多克隆抗体可识别所述抗原内的不同表位。一般地，从之前已用抗原免疫过的哺乳动物的血清纯化多克隆抗体。多克隆抗体可以例如利用Antibodies：A Laboratory Manual，By Ed Harlow and David Lane，Cold Spring Harbor Laboratory Press，1988中描述的任何方法制备。多克隆抗体可来源于任何适当的哺乳动物物种，例如来自小鼠、大鼠、兔、驴、山羊、绵羊、牛或骆驼。抗体优选不来源于非哺乳动物物种，即抗体例如优选地不是鸡抗体。抗体还可以例如是人造多克隆抗体，如例如US 5,789,208或US 6,335,163中描述的抗体，将两个专利的说明书完整地在此引用作为参考。
[0286] 根据本发明的抗体还可以是重组抗体。重组抗体是使用重技术产生的抗体或其片段或其功能等同物。例如重组抗体可使用合成文库或利用噬菌体文库产生。重组抗体可按照任何常规方法例如“Recombinant Antibodies”，Frank Breitling，Stefan D übel，Jossey-Bass，September 1999中概述的方法产生。
[0287] 根据本发明的抗体还可以是双特异性抗体，即特异性识别两个不同表位的抗体。双特异性抗体通常可以例如通过融合两个杂交瘤整合以组合它们的特异性，通过化学交联或使用重组技术来从单克隆抗体或从重组抗体开始制备。根据本发明的抗体还可以是三特异性抗体。
[0288] 在一个优选实施方案中，抗体的功能等同物是抗体的片段，优选抗原结合片段或可变区。用于本发明的抗体片段的实例包括Fab、Fab′、F(ab′)2和Fv片段。抗体的木瓜蛋白酶降解产生两个完全相同的抗原结合片段(称为Fab片段，各自具有单个抗原结合位点)和残留的″Fc″片段，因其容易结晶而这样称呼的。胃蛋白酶处理产生具有两个能够交联抗原的抗原结合片段的F(ab′)2片段和残留的其他片段(其被称为pFc′)。其他片段可包括双抗体(diabody)、线性抗体、单链抗体分子和从抗体片段形成的多特异性抗体。如本文中所使用的，关于抗体的“功能片段”是指Fv、F(ab)和F(ab′)2片段。
[0289] 优选抗体片段保持抗体与其抗原或受体选择性结合的一些或基本上全部的能力。一些优选片段定义如下：
[0290] (1)Fab是包含抗体分子的单价抗原结合片段的片段。Fab片段可通过用木瓜蛋白酶降解完整抗体以产生完整轻链和一盘棋重链的部分来产生。
[0291] (2)Fab’是抗体分子的片段并且可通过用胃蛋白酶处理完整抗体，然后还原以产生完整轻链和重链的一部分来获得。每个抗体分子可获得两个Fab’片段。Fab′片段与Fab片段相异在于少数残基(包含来自抗体链区的一个或多个半胱氨酸)在重链CH1结构域的羧基末端的添加。
[0292] (3)(Fab’)2是可通过用胃蛋白酶处理完整抗体而不进行随后的还原获得的抗体的片段。F(ab’)2是通过两个二硫键保持在一起的两个Fab’片段的二聚体。
[0293] (4)Fv是包含完整抗原识别和结合位点的最小抗体片段。该区域由紧密的非共价缔合的一个重链和一个轻链可变结构域的二聚体(VH-VL二聚体)组成。其以这样的构型存在：每一个可变结构域的3个CDR相互作用以确定VH-VL二聚体的表面上的抗原结合位点。6个CDR整体地赋予抗体抗原结合特异性。然而，甚至单个可变结构域(或只包含特异于抗原的3个CDR的Fv的一半)具有识别和结合抗原的能力，虽然以比完整结合位点更低的亲和力。
[0294] 在本发明的一个实施方案中，抗体是单链抗体(“SCA”)，其被定义为基因工程改造的分子，包含轻链的可变区、重链的可变区，通过适当的多肽连接体连接为基因融合的单链分子。此类单链抗体也称为“单链Fv”或“scFv”抗体片段。一般地，Fv多肽还在VH与VL结构域之间包含多肽连接体，其使得scFv能够形成用于抗原结合的期望的结构。
[0295] 在本发明的另一个实施方案中，抗体的功能等同物是模拟抗体的小分子。此类分子可以是非免疫球蛋白结合成员。因此本发明结合的表位多肽可衍生自天然存在的蛋白质或多肽：所述蛋白质或多肽可以例如从新设计，或可选自文库。结合成员可以是单个部分，例如多肽或蛋白质结构域，或其可以包括2个或更多个部分，例如多肽对例如一对多TM肽。结合多肽可以例如但非唯一地，是脂质运载蛋白、单链MHC分子Anticalin (Pieris)、TM TM
Affibody 或Trinectin (Phylos)、Nanobodies(Ablynx)。可选择结合成员或其利用本领域技术人员已知的重组方法进行设计。
Affibody 或Trinectin (Phylos)、Nanobodies(Ablynx)。可选择结合成员或其利用本领域技术人员已知的重组方法进行设计。
[0296] 人抗体
[0297] 本发明的人单克隆抗体可通过许多技术，包括常规单克隆抗体方法，例如Kohler和Milstein，Nature 256：495(1975)的标准体细胞杂交技术来产生。虽然体细胞杂交法是优选的，但原则上可应用用于产生单克隆抗体的其他技术例如B淋巴细胞的病毒或致癌性转化或使用人抗体基因的文库的噬菌体展示技术。
[0298] 在一个实施方案中，人单克隆抗体针对包含SEQ ID NO.1的氨基酸残基R325、S316、Y351、I353、K260、I327、F314、F350至M363、S305、F306、T398至G400、I303-G309、Q349-A356、Y395和T402的表位。
[0299] 在另一个实施方案中，人单克隆抗体针对包含SEQ ID NO.1的氨基酸残基R325、S316、Y351、I353、K260、I327、F314、F350至M363、S305、F306以及T398至G400的表位。
[0300] 在另一个实施方案中，人单克隆抗体针对包含SEQ ID NO.1的氨基酸残基R325、S316、Y351、I353、K260、I327、F314以及F350至M363的表位。
[0301] 在另一个实施方案中，人单克隆抗体针对包含SEQ ID NO.1的氨基酸残基L572、L114、V112、R109至S111、S115至G118、T570、G571、W586、W597、T168-I174、L572、A573以及S584至F588的表位。
[0302] 在另一个实施方案中，人单克隆抗体针对包含SEQ ID NO.1的氨基酸残基L572、L114、V112、R109至S111、S115至G118、T570、G571、W586和W597的表位。
[0303] 在另一个实施方案中，人单克隆抗体针对包含SEQ ID NO.1的氨基酸残基L572、L114和V112的表位。
[0304] 在另一个实施方案中，人单克隆抗体针对包含SEQ ID NO.1的氨基酸残基D403、S420、D422、N423、S424、I425、E426、T451、Y466、E470、I498、S499和V500的表位。
[0305] 在另一个实施方案中，人单克隆抗体针对包含SEQ ID NO.1的氨基酸残基D403、N423、S424、I425、T451、Y466、I498和V500的表位。
[0306] 在另一个实施方案中，人单克隆抗体针对包含SEQ ID NO.1的氨基酸残基T451、Y466、I498和V500的表位。
[0307] 免疫
[0308] 为了产生针对本发明的目的表位的完全人单克隆抗体，可如例如由Lonberg等人(1994)，同上；Fishwild等人(1996)，同上和WO 98/24884描述的，用抗原和/或表达本发明的受体靶的表位的细胞的浓缩制剂(enriched preparation)免疫包含人免疫球蛋白基因的转基因或转染色体小鼠(例如，HCo12、HCo7或KM小鼠)。可选地，可用编码CaOU-1表位的DNA免疫小鼠。优选，小鼠在第一次输注时将为6至16周龄。
[0309] 对于不同抗原累积的经验已显示当一开始用完全弗氏佐剂中的抗原表达性细胞腹膜内(i.p.)或皮下(s.c.)免疫，然后每隔一周用PBS中的抗原表达性细胞腹膜内免疫(达到总共10次)时，HuMAb转基因小鼠反应最佳。可在免疫方案的整个过程中利用通过眶后采血(retroorbital bleed)获得的血浆样品监控免疫应答。可通过FACS分析筛查血浆，将具有充足滴度的抗抗原人免疫球蛋白的小鼠用于融合。可在例如处死并且取出脾脏之前4和3天，用抗原表达性细胞静脉内加强免疫小鼠。
[0311] 抗体主要通过位于6个重链和轻链互补决定区(CDR)中的氨基酸残基与靶抗原相互作用。为此，CDR中的氨基酸序列在个体抗体之间比CDR外的序列更多样。因为CDR序列负责大部分抗体-抗原相互途径，因此可能通过构建表达载体来表达模拟特定天然存在的抗体的性质的重组抗体，所述表达载体包含移植至构架序列(来自不同的具有不同性质的抗体)的来自特定天然存在的抗体的CDR序列(参见，例如，Riechmann，L.等人(1998)Nature332：323-327；Jones，P.等人(1986)Nature 321：522-525；和Queen，C.等人(1989)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86：10029-10033)。此类构架序列可获自包括种系抗体基因序列的公共DNA数据库。此类种系序列与成熟抗体基因序列不同，因为它们将不包括在B细胞成熟过程中通过V(D)J连接形成的完全装配的可变基因。种系基因序列还与高亲和力第二抗体库(secondary repertoire antibody)的序列不同，所述第二抗体库在整个可变基因中包含突变(但通常集簇在CDR中)。例如，体细胞突变在构架区1的氨基末端部分和构架区4的羧基末端部分中相对罕见。为此，不必获得特定抗体的完整DNA序列来重新产生具有与原始抗体的结合性质相似的结合性质的完整重组抗体(参见WO 99/45962)。覆盖CDR区的部分重链和轻链序列通常足以满足该目的。部分序列用于确定贡献重组抗体可变基因的种系可变基因和连接基因区段。然后将种系序列用于填补可变区的丢失部分。重链和轻链前导序列在蛋白质成熟过程中被切割，从而不贡献于终抗体的性质。为了添加丢失的序列，可通过连接或PCR扩增将克隆的cDNA序列与合成的寡核苷酸组合。可选地，可将整个可变区合成为一组短的、交叠的寡核苷酸并且通过PCR扩增组合以产生完整的合成的可变区克隆。该方法具有某些有利方面例如消除或包含特定限制性位点或优化特定密码子。
[0312] 将来自杂交瘤的重链和轻链转录物的核苷酸序列用于设计一组交叠的合成寡核苷酸，以产生具有与天然序列相同的氨基酸编码能力的合成的V序列。合成的重链和κ链序列可与天然序列相异于3个方式：中断重复核苷酸碱基串以促进寡核苷酸合成和PCR扩增；根据Kozak法则(Kozak，1991，J.Biol.Chem.266：19867-19870)掺入最适翻译起始位点；以及将HindIII位点设计在翻译起始位点上游。
[0313] 对于重链和轻链可变区，将优化的编码序列和相应的非编码链序列在相应非编码寡核苷酸的大致中点处分解成30-50个核苷酸的寡核苷酸。因此，对于每一条链，可将寡核苷酸装配入覆盖150-400个核苷酸的区段的交叠双链组。然后将所述库用作模板来产生150-400个核苷酸的PCR扩增产物。通常，将单个可变区寡核苷酸组分成分开扩增以产生两个交叠PCR产物的两个库。然后通过PCR扩增组合这些交叠产物以形成完整可变区。也可能期望在PCR扩增中包括重链或轻链恒定区的交叠片段(包括κ轻链的BbsI位点，或γ重链的AgeI位点)以产生可被容易地克隆进入表达载体构建体的片段。
[0314] 然后将重建的重链和轻链可变区与克隆的启动子序列、前导序列、翻译起始序列、恒定区序列、3’非翻译序列、多腺苷酸化序列和转录终止序列组合以形成表达载体构建体。可将重链和轻链表达构建体组合入单个载体，将其共转染、相继地转染或分开转染入宿主细胞，然后融合所述宿主细胞以形成表达两条链的宿主细胞。
[0315] 单价抗体
[0316] 单特异性结合多肽可以是单价的，即只具有一个结合结构域。
[0317] 对于单价抗体，免疫球蛋白恒定结构域氨基酸残基序列包含在本领域内称为CH1、CH2、CH3和CH4的抗体分子的结构部分。优选的是在本领域内称为CL的那些结合多肽。优选CL多肽选自Cκ和Cλ。
[0318] 此外，在恒定结构域可以是重链或轻链恒定结构域(分别地CH或CL)的范围内，许多种单价结合多肽组合物包括在本发明中。例如，轻链恒定结构域能够与另一个轻链恒定结构域或与重链恒定结构域形成二硫键。相反地，重链恒定结构域可形成两个独立的二硫键，从而允许可能桥连另一个重链和轻链，或形成重链的多聚体。
[0319] 因此，在另一个实施方案中，本发明涉及分离的单价结合多肽，其中恒定链结构域C具有能够形成至少一个二硫键的半胱氨酸残基，并且其中至少两个单价多肽通过所述二硫键共价连接。
[0320] 在优选实施方案中，恒定链结构域C可以是CL或CH。其中C是CL，CL多肽优选选自Cκ和Cλ。
[0321] 在另一个实施方案中，本发明包括结合多肽组合物，所述组合物包含上述单价多肽，除了其中C是具有能够形成二硫键的半胱氨酸残基(以便组合物包含两个通过所述二硫键共价连接的单价多肽)的CL外。
[0322] 多特异性，包括双特异性
[0323] 在优选实施方案中，本发明涉及多特异性结合多肽，其具有对于至少两个不同实体的亲和力并且能够结合所述实体。多特异性结合多肽可包括双特异性结合多肽。
[0324] 在一个实施方案中，多特异性分子是双特异性抗体(BsAb)，其具有至少两个不同的结合结构域，其中优选其至少一个是抗体来源的结构域。
[0325] 本发明的双特异性分子还可以是单链双特异性分子例如单链双特异性抗体、包含一个单链抗体和结合结构域的单链双特异性分子或包含两个结合结构域的单链双特异性分子。多特异性分子还可以是单链分子或可包含至少两个单链分子。
[0326] 可以以本领域技术人员已知的任何适当方式产生多特异性(包括双特异性)抗体。
[0327] 产生双特异性完整抗体的常规方法是融合两个各自产生具有期望的特异性的抗体的杂交瘤细胞系。由于免疫球蛋白重链与轻链的随机缔合，此类杂合杂交瘤产生达到10种不同的重链与轻链组合的混合物，其中只有一种是双特异性抗体。因此，此类双特异性抗体必须通过繁琐的方法进行纯化，这大大地减少了期望的产物的收率。
[0328] 可选择的方法包括通过化学交联铰链区中的半胱氨酸残基或如上所述通过遗传工程引入的C末端Cys来体外连接两个抗原特异性。通过使用Fab与促进异二聚体形成的肽的重组融合来实现此类体外装配的改进。然而，此类方法中双特异性产物的收率远低于100％。
[0329] 产生二价或双特异性抗体片段的更高率的方法(不包括体外化学装配步骤)由Holliger等人(1993)描述。该方法利用观察：从细菌分泌的scFv通常以单体和二聚体的形式存在。该观察表明不同链的VH和VL可配对，从而形成二聚体或更大的复合物。二聚体抗体片段，也由Hollinger等人称为“双抗体”，事实上是体内装配的小二价抗体片段。通过连接两个不同抗体1和2的VH和VL，以形成“交叉(cross-over)”链VH 1-VL 2和VH 2-VL1，显示二聚化方法重新装配两个抗原结合位点。两个结合位点的亲和力经显示等于初始scFv′s，或当除去共价连接VH和VL的多肽连接体，从而产生两个各自由直接且共价地连接至VL而不与VH配对的VH组成的蛋白质时，甚至增加9倍。该产生双特异性抗体片段的策略也描述于几个专利申请中。专利申请WO 94/09131(SCOTGEN LTD；优先权日期1992年10月15日)涉及其中结合结构域衍生自存在于两个链上的或连接在scFv中的VH和VL区的双特异性结合蛋白，然而其他融合的抗体结构域例如C末端恒定结构域被用于稳定二聚体结构。专利WO 94/13804(CAMBRIDGE ANTIBODY TECHNOLOGY/MEDICAL RESEARCH COUNCIL；
第一优先权日期1992年12月4日)涉及包含不能够彼此缔合的VH和VL的多肽，其中V结构域可以用或可以不用连接体连接。
第一优先权日期1992年12月4日)涉及包含不能够彼此缔合的VH和VL的多肽，其中V结构域可以用或可以不用连接体连接。
[0330] Mallender和Voss，1994(也描述于专利申请WO 94/13806；DOW CHEMICAL CO；优先权日期1992年12月11日)报导了在大肠杆菌中体内产生单链双特异性抗体片段。二价蛋白质的双特异性基于通过柔性多肽连接体在基因水平(genetic level)上连接在一起的两个之前产生的具有不同特异性的单价scFv分子。按惯例，无论何时提及单链抗体片段，都意指在多肽连接体存在或不存在的情况下由连接在一起的一条重链和一条(相应的)轻链组成的单个分子。当通过“双抗体”法(Holliger等人，(1993)和专利申请WO 94/09131)或通过“双scFv”法(Mallender和Voss，1994和专利申请WO 94/13806)制备双价或双特异性抗体片段时，再次将VH连接至(相应的)VL。
[0331] 上述多特异性分子可利用许多方法来制备。例如，可在相同的载体中编码所有特异性并且在相同的宿主细胞中表达。当多特异性分子是mAb X mAb、mAb X Fab、Fab X F(ab′)2或配体X Fab融合蛋白时，该方法特别有用。用于制备二价或多价抗体的各种其他方法描述于例如美国专利号5,260,203；5,455,030；4,881,175；5,132,405；5,091,513；5,476,786；5,013,653；5,258,498和5,482,858中。
[0332] 通过使用根据本发明的双特异性或多特异性结合多肽，本发明提供了与单特异性/单价结合多肽相比较的若干有利方面。
[0333] 可以优选地至少一个其他结合结构域能够结合免疫反应性细胞例如白细胞、巨噬细胞、淋巴细胞、嗜碱性细胞和/或嗜酸细胞，以增强治疗方法中结合多肽的效应。这可通过确立至少一个其他结合结构域能够特异性结合哺乳动物蛋白质例如人蛋白质，例如选自任意分化簇蛋白(cluster differentiation protein)(CD)的蛋白质，特别是CD64和/或CD89来实现。用于产生具有CD64特异性的双特异性抗体的方法描述于属于Medarex，Inc的US 6,071,517中。
[0334] 此类优选单克隆抗体的产生和表征由Fanger等人在WO 88/00052和US4,954,617中进行了描述。此类抗体在其与受体的Fcγ结合位点不同的位点上结合FcγRI、FcγRII或FcγRIII的表位，因此，它们的结合基本上不被生理水平的IgG阻断。
用于本发明的特异性抗FcγRI抗体为mAb 22、mAb 32、mAb 44、mAb 62和mAb 197。在其他实施方案中，抗Fcγ受体抗体是mAb 22的人源化形式(H22)。H22抗体的产生和表征描述于Graziano，R.F.等人(1995)J.Immunol.155(10)：4996-5002和WO 94/10332中。1992年11月4日将产生H22抗体的细胞系在名称HA022CL1下保藏在美国典型培养物保藏中心，其具有登录号CRL 11177。
用于本发明的特异性抗FcγRI抗体为mAb 22、mAb 32、mAb 44、mAb 62和mAb 197。在其他实施方案中，抗Fcγ受体抗体是mAb 22的人源化形式(H22)。H22抗体的产生和表征描述于Graziano，R.F.等人(1995)J.Immunol.155(10)：4996-5002和WO 94/10332中。1992年11月4日将产生H22抗体的细胞系在名称HA022CL1下保藏在美国典型培养物保藏中心，其具有登录号CRL 11177。
[0335] 在其他优选实施方案中，Fc受体的结合特异性由结合人IgA受体例如Fcα受体(FcαI(CD89))的抗体提供，其结合优选不被人免疫球蛋白A(IgA)阻断。术语“IgA受体”旨在包括位于染色体19上的一个α-基因(FcαRI)的基因产物。已知该基因编码若干55至110kDa的可变剪接的跨膜同种型。FcαRI(CD89)在单核细胞/巨噬细胞、嗜酸性粒细胞和中性粒细胞上但不在非效应细胞群体上组成型表达。FcαRI具有对于IgA1和IgA2的中等亲和力，当与细胞因子例如G-CSF或GM-CSF接触后所述亲和力增加(Morton，H.C.等人(1996)Critical Reviews in Immunology 16：423-440)。已描述了结合IgA配体结合结构域外部的FcαRI的鉴定为A3、A59、A62和A77的4个FcαRI特异性单克隆抗体(Monteiro，R.C.等人(1992)J.Immunol.148：1764)。
[0336] FcαRI、FcγRI、FcγRII和FcγRIII特别是FcγRII和FcγRIII是用于本发明的优选触发受体，因为它们(1)主要在免疫效应细胞例如单核细胞、PMN、巨噬细胞和树突细胞上表达；(2)以高水平(例如，每细胞5,000-100,000个)表达；(3)是细胞毒性(例如，ADCC、吞噬作用)的介导者(mediator)；和(4)介导增强的对靶向它们的抗原包括自身抗原的抗原递呈。
[0337] 虽然人单克隆抗体是优选的，但可用于本发明的双特异性或多特异性分子的其他抗体是鼠类单克隆抗体、嵌合单克隆抗体和人源化单克隆抗体。可通过本领域内已知的方法制备此类鼠类单克隆抗体、嵌合单克隆抗体和人源化单克隆抗体。
[0338] 可使用化学技术(参见例如，D.M.Kranz等人(1981)Proc.Natl.Acad.Sci.USA78：5807)、“polydoma”技术(参见US 4,474,893)或重组DNA技术来制造本发明的双特异性和多特异性分子。
[0339] 当结合特异性是抗体时，可通过两个重链的C端铰链区的硫氢基键合缀合它们。在特别优选实施方案中，在缀合前修饰铰链区以包含奇数个(优选一个)硫氢基残基。
[0340] 可选地，可在相同的载体中编码两个结合特异性以及在相同宿主细胞中装配两个结合特异性。当双特异性和多特异性分子是mAb x mAb、mAb x Fab、Fab x F(ab′)2或配体x Fab融合蛋白时，该方法特别有用。本发明的双特异性和多特异性分子例如双特异性分子可以是单链分子，例如单链双特异性抗体、包含一个单链抗体和结合决定簇的单链双特异性分子或包含两个结合决定簇的单链双特异性分子。双特异性和多特异性分子还可以是单链分子或可包含至少两个单链分子。用于制备双和多特异性分子的方法描述于例如US5,260,203；US 5,455,030；US 4,881,175；US 5,132,405；US 5,091,513；US 5,476,786；
US 5,013,653；US 5,258,498和US 5,482,858中。
US 5,013,653；US 5,258,498和US 5,482,858中。
[0341] 双特异性和多特异性分子与其特异性靶的结合可通过酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射免疫测定(RIA)、FACS分析、生物测定(例如，生长抑制)或蛋白质印迹测定来验证。此类测定的每一个测定通常通过使用特异于目的复合物的标记的试剂(例如，抗体)检测特定目的蛋白质-抗体复合物的存在。例如，可使用例如识别并且特异性结合抗体-FcR复合物的酶联抗体或抗体片段检测FcR-抗体复合物。可选地，可使用多种其他免疫测定的任一种测定检测复合物。例如，可放射性标记抗体，将其用于放射免疫测定(RIA)(参见，例如，Weintraub，B.，Principles of Radioimmunoassays，Seventh Training Course on Radioligand Assay Techniques，The Endocrine Society，March，1986)。可通过这样的方法如使用γ计数器或闪烁计数器或通过放射自显影术检测放射性同位素。
[0342] 人源化抗体的构架
[0343] 并非总是期望使用非人抗体来进行人治疗，因为非人“外源”表位可在待治疗的个体中引发免疫应答。为了消除或使与非人抗体相关的问题最小化，期望建造嵌合抗体衍生物，即组合非人Fab可变区结合决定簇与人恒定区(Fc)的“人源化”抗体分子。此类抗体特征在于与上述单克隆和多克隆抗体相当的抗原特异性和亲和力，并且当给人施用时免疫原性不太强，从而更可能被待治疗的个体耐受。
[0344] 因此，在一个实施方案中，结合多肽具有人源化抗体构架上携带的结合结构域，也称为人源化抗体。
[0345] 人源化抗体一般是包含源自人抗体的区域和源自非人抗体例如啮齿类动物抗体的区域的嵌合抗体。人源化(也称为改形(Reshaping)或CDR-移植)是用于减少来自异种来源(通常啮齿类动物)的单克隆抗体(mAb)的免疫原性，增加与人免疫球蛋白的同源性，和用于促进它们对人免疫系统的激活的良好建立的技术。因此，人源化抗体通常是这样的人抗体，其中一些CDR残基和可能地一些构架残基被来自啮齿类动物中的类似位点的残基取代。
[0346] 更重要的是人源化抗体保持对抗原的高亲和力和其他有利的生物性质。为了实现该目标，根据优选方法，通过使用亲本和人源化序列的三维模型分析亲本序列和各种概念上的人源化产物的方法来制备人源化抗体。三维免疫球蛋白模型通常是可获得的并且对于本领域技术人员来说是熟悉的。图解和显示选择的候选免疫球蛋白序列的可能的三维构象结构的计算机程序是可获得的。这些显示的观查允许分析某些残基在候选免疫球蛋白序列的功能发挥中的作用，即，分析影响候选免疫球蛋白结合其抗原的能力的残基。这样，可从接受和输出序列选择FR残基并且将其组合以便使期望的抗体特征例如增加的对靶抗原的亲和力最大化，虽然是CDR残基直接和最显著地影响抗原结合。
[0347] 用于人源化Mab的一个方法涉及产生嵌合抗体，在所述嵌合抗体中，包含一个抗体的完全可变结构域的抗原结合位点融合至源自第二抗体优选人抗体的恒定结构域。用于进行此类嵌合(chimerisation)步骤的方法例如描述于EP-A-0 120 694(Celltech Limited)、EP-A-0 125 023(Genentech Inc.)、EP-A-0 171 496(Res.Dev.Corp.Japan)、EP-A-0173494(Stanford University)和EP-A-0 194 276(Celltech Limited)中。抗体的人源化的更复杂形式包括可变结构域的重新设计以便构成非人抗体结合位点的氨基酸整合入人抗体可变区的构架(Jones等人，1986)。
[0348] 本发明的人源化抗体可通过能够用源自非人抗体的CDR替换人抗体的CDR的至少部分的任何方法来制备。Winter描述了可用于制备本发明的人源化抗体的方法(UK专利申请GB 2188638A，1987年3月26日提交)，其内容明确地在此引用作为参考。可使用下列实施例中描述的寡核苷酸定点诱变，用非人CDR替换人CDR。
[0349] 举例来说，可如下面简要解释中所描述的制备本发明的人源化抗体。本发明的人源化抗体可通过下列步骤产生：
[0350] (a)利用常规技术构建包含具有编码抗体重链的DNA序列的操纵子的表达载体，在所述抗体重链中，CDR和保持供体抗体结合特异性所需的可变结构域的构架区的此类最小部分来源于非人免疫球蛋白并且抗体链的其余部分来源人免疫球蛋白，从而产生本发明的载体；
[0351] (b)利用常规技术构建包含具有编码抗体轻链的DNA序列的操纵子的表达载体，在所述抗体轻链中，CDR和保持供体抗体结合特异性所需的可变结构域的构架区的此类最小部分来源于非人免疫球蛋白并且抗体链的其余部分来源于人免疫球蛋白，从而产生本发明的载体；
[0352] (c)利用常规技术将表达载体转移进入宿主细胞以产生本发明的经转染的宿主细胞；和
[0353] (d)利用常规技术培养所述经转染的细胞以产生本发明的人源化抗体。
[0354] 可用两个本发明的载体共转染宿主细胞，第一载体包含编码轻链衍生的多肽的操纵子并且第二载体包含编码重链衍生的多肽的操纵子。两个载体包含不同的选择标记，但在另一方面，除了抗体重链和轻链编码序列外，两个载体优选相同，以尽可能确保重链和轻链多肽的等量表达。可选地，可使用单个载体，所述载体包含编码轻链和重链多肽的序列。轻链和重链的编码序列可包含cDNA或基因组DNA或两者。
[0355] 用于表达本发明的改变的抗体的宿主细胞可以是细菌细胞例如大肠杆菌(E.coli)或真核细胞。具体地，为了该目的，可使用良好确定的哺乳动物细胞类型例如骨髓瘤细胞或中国仓鼠卵巢细胞。
[0356] 籍以构建本发明的载体的一般方法、产生本发明的宿主细胞所需的转染方法和从此类宿主细胞产生本发明的抗体所需的培养方法全都是常规技术。同样地，本发明的人源化抗体，一旦产生，可按照下文中所述的标准方法来进行纯化。
[0357] 人抗体构架
[0358] 在更优选实施方案中，本发明涉及结合多肽，其中结合结构域由人抗体构架携带，即其中所述抗体具有比人源化抗体更大程度的人肽序列。
[0359] 可使用携带完全人免疫系统而非小鼠系统的转基因小鼠产生抗人蛋白质的人mAb抗体。将来自用目的抗原免疫的这些转基因小鼠的脾细胞用于产生杂交瘤，所述杂交瘤分泌具有对于来自人蛋白质的表位的特异性亲和力的人mAb(参见，例如，Wood等人国际申请WO 91/00906，Kucherlapati等人PCT申请WO 91/10741；Lonberg等人国际申请WO 92/03918；Kay等人国际申请92/03917；Lonberg，N.等人1994Nature 368：856-859；Green，L.L.等人1994 Nature Genet.7：13-21；Morrison，S.L.等人1994 Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81：6851-6855；Bruggeman等人1993 Year Immunol 7：33-40；Tuaillon等人1993 PNAS 90：3720-3724；Bruggeman等人1991 Eur J Immunol 21：1323-1326)。
[0360] 此类转基因小鼠可 从Abgenix，Inc.，Fremont，Calif.和Medarex，Inc.，Annandale，N.J获得。已描述了嵌合和种系突变小鼠中抗体重链铰链区(IH)基因的纯合子缺失导致内源抗体产生的完全抑制。将人种系免疫球蛋白基因阵列转移至这样的种系突变小鼠将导致在抗原攻击后人抗体的产生。参见，例如，Jakobovits等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：2551(1993)；Jakobovits等人，Nature 362：255-258(1993)；Bruggermann等人，Year in Immunol.7：33(1993)；以及Duchosal等人Nature 355：258(1992)。人抗体还可来源于噬菌体展示文库(Hoogenboom等人，J.Mol.Biol.227：381(1991)；Marks等人，J.Mol.Biol.222：581-597(1991)；Vaughan，等人，Nature Biotech 14：309(1996))。
[0361] 本申请的发明人已产生抗Vps10p-结构域受体的几个部分的抗体。本发明涉及抗该受体家族的统一特性-Vps10p结构域的抗体。Vps10p-结构域的下列序列比对显示该受体家族内的保守。
[0362] 表1：抗Vps10p-结构域受体抗体
[0363]
[0364]
[0365]
[0366]
[0367] 抗体抑制配体结合的一般用途(Generic use)
[0368] 抗体紧密结合特定靶分子，从而直接使其失活或标记其以进行破坏。抗体以显著的特异性和强度(由许多化学力包括氢键、疏水力和范德瓦尔斯力以及离子相互作用的总和决定的)识别其靶(抗原)。通常，靶在化学上越复杂，其免疫原性越高。抗原决定簇可包括短的线性氨基酸区段或更复杂的三维蛋白质模块。
[0369] 用于制备抗体的方法
[0370] 可按照标准方法(参见例如Antibodies-A laboratory Manual by Ed Harlow和David Lane，Cold Spring Harbor Laboratory 1998，ISBN 0-87969-314-2)产生抗特定抗原或抗原的表位的多克隆和单克隆抗体。也已描述用于随后产生人源化抗体或其片段的方法(例如A.M.Scott等人，Cancer Research 60：3254-3261，2000；A.Nissim和Y.Chernajovsky，Handb.Exp.Pharmacol.181：3-18，2008；A.Mountain and J.R.Adair，Biotechnol.Genet.Eng.Rev.10：1-142，1992)。
[0371] 制备抗体的成功的一般预期
[0372] 使用包含期望的靶表位的短合成寡肽可能产生抗任何选择的肽基序的抗体。因此，保证可产生抗受体上的配体结合位点的抗体。单个抗体种类是否具有抑制配体结合的潜力仅取决于免疫球蛋白对于受体的亲和力超过配体的亲和力的事实。最后，要做的是筛选许多单个抗体的抑制潜能以发现具有期望的性质的抗体。
[0373] 用于抑制性抗体的筛选测定是普通知识并且通常包括竞争性酶联免疫吸附测定(ELISA)。详细地，将包含其配体结合基序的重组受体或片段固定在微量滴定板的重复孔中。接着，用含有配体的溶液温育孔。使用识别配体并且与彩色染料反应偶联的抗体确认配体与固定的受体的结合。在不同抗体存在的情况下试验配体与受体的结合以鉴定阻断配体与受体结合，从而阻止各微量滴定板孔中的颜色反应的那些免疫球蛋白种类。
[0374] 抗体的成功的临床用途
[0375] 许多治疗性抗体用于临床用途。实例包括Genentech的Rituxan，抗CD20受体的抗体(用于类风湿性关节炎)、Johnson & Johnson的类克，抗TNFα受体的抗体(用于银屑病)、Roche的阿瓦斯丁，用于治疗结肠直肠癌和肺癌的抗VEGF抗体以及赫赛汀，用于乳腺癌治疗的抗受体HRE2抗体。
[0376] 估计与受体的结合是生物技术领域内技术人员的常规工作。在这一点上，必须提及：神经营养因子前体以及Vps10p-结构域受体家族在本发明的现有技术水平上是已知的并且在例如Lee等人(2001)Science 294：1945-1948的论文中已提及涉及例如神经营养因子前体的结合测定。
[0377] 因此，在一个实施方案中，本发明的试剂是抗SorCS2多克隆或单克隆抗体。
[0378] 在另一个实施方案中，试剂是多克隆抗SorCS2IgG。
[0379] 在其他实施方案中，试剂是抗选蛋白多克隆抗体。
[0380] 在另一个实施方案中，试剂是抗选蛋白多克隆抗体。
[0381] 在另一个实施方案中，试剂是抗SorLA多克隆或单克隆抗体。
[0382] 在另一个实施方案中，试剂是抗SorCS1多克隆或单克隆抗体。
[0383] 在另一个实施方案中，试剂是抗SorCS3多克隆或单克隆抗体。
[0384] SorCS1敲除小鼠
[0385] 在重要的方面中，本发明涉及转基因敲除小鼠，其中内源Vps10p-结构域受体SorCS1基因已被破坏，从而消除功能受体的表达，并且其中所述小鼠就长时程抑制和长时程增强而言显示减小的反应。
[0386] 在其他实施方案中，如本文上文中定义的转基因小鼠的基因破坏包括编码小鼠SorCS1受体的起始密码子或来自胞外结构域、跨膜结构域或细胞质结构域的区域的SorCS1受体基因核苷酸序列的缺失。
[0387] 因此，在一个方面中，本发明涉及转基因敲除小鼠，其中内源Vps10p-结构域受体SorCS1基因已被破坏，从而消除功能受体的表达，并且其中所述小鼠展示相对于非转基因对照小鼠改变的精神行为。
[0388] SorCS2敲除小鼠
[0389] 在重要的方面中，本发明涉及转基因敲除小鼠，其中内源Vps10p-结构域受体SorCS2基因已被破坏，从而消除功能受体的表达，并且其中所述小鼠在长时程抑制和长时程增强方面显示减弱的反应。
[0390] 在其他实施方案中，如本文上文中定义的转基因小鼠的基因破坏包括编码小鼠SorCS2受体的起始密码子或来自胞外结构域、跨膜结构域或细胞质结构域的区域的SorCS1受体基因核苷酸序列的缺失。
[0391] 因此，在一个方面中，本发明涉及转基因敲除小鼠，其中内源Vps10p-结构域受体SorCS2基因已被破坏，从而消除功能受体的表达，并且其中所述小鼠展示相对于非转基因对照小鼠改变的精神行为。
[0392] 筛选本发明的试剂的方法
[0393] 本发明提供用于特定靶和方法，所述靶和方法用于筛选和评估能够通过调节经由Vps10p-结构域受体的信号传导调节神经元活性，用于治疗精神和行为障碍的方法的的候选试剂，其中通过下列方面测量神经元活性：
[0394] a.长时程抑制，和/或
[0395] b.早期和晚期长程增强效应，和/或
[0396] c.GABA能活性。
[0397] 虽然就某些生理活性筛选大量肽可以是繁重的工作，但待进行的本文中的测定的精确公开内容使得技术人员能够再现本发明无需过度的试验负担并且无需创技能。
[0398] 这也在T21/05中得到确证，其中第11段指出：“...就某些生理活性筛选大量肽可以是繁重的工作。然而，委员会确信待进行的测定的精确公开内容使得技术人员能够可能地以费时费力的方式(但在给的情况下，无需过度的试验负担并且无需创技能)再现本发明”。
[0399] 为此目的，候选试剂的筛选文库可容易地在市场上购买获得。无论文库是肽文库还是化学文库都不对本情况(situation)具有任何影响，因为化学文库的筛选也是常规工作。事实上，化学文库的筛选是由商业公司提供的服务，并且从他们的描述材料(参见例如http://www.analyticon.com/)清楚地看到他们并不认为筛选工作本身是有创造性的。
[0400] 在一个实施方案中，本发明涉及对于减轻或抑制权利转基因小鼠的精神行为的能力的筛选候选试剂的方法，所述方法包括以下步骤：
[0401] a.提供如本文上文中定义的第一和第二转基因小鼠；
[0402] b.给所述第一转基因小鼠施用候选试剂，和
[0403] c.将步骤(b)的所述第一转基因小鼠的精神行为与未施用所述候选试剂的步骤(a)的所述第二转基因小鼠的精神行为相比较；其中相对于未施用所述候选试剂的所述第二转基因小鼠施用了所述候选试剂的所述第一转基因小鼠的精神行为的减轻表示候选试剂减轻了精神行为。
[0404] 在其他实施方案中，本发明涉及就减轻如本文上文中定义的转基因小鼠的精神和行为病症的能力筛选候选试剂的方法，其包括：
[0405] a.提供如本文上文中定义的转基因小鼠；
[0406] b.提供不存在如本文上文中定义的基因破坏的野生型小鼠；和
[0407] c.提供不存在本文上文中定义的基因破坏的对照野生型小鼠；和
[0408] d.给所述第一野生型小鼠(b)施用候选试剂，和
[0409] e.将步骤(a)的所述转基因小鼠的精神行为与施用了所述候选试剂的步骤(b)的所述野生型小鼠的精神行为相比较，与未施用所述候选试剂的步骤(c)的所述对照野生型小鼠的精神行为相比较；其中相对于对照野生型小鼠(c)，施用了所述候选试剂的所述野生型小鼠(b)的精神行为降低至可与未施用所述候选试剂的所述第二转基因小鼠相比较的水平表示所述候选试剂减轻精神行为。
[0410] 药物组合物和施用形式
[0411] 治疗方法中药物递送的主要途径是静脉内、口服和局部途径。也包括其他药物施用方法例如皮下注射或通过吸入，所述施用方法对于将药物递送至靶位点或将药物引入血流是有效的。
[0412] 本发明的药物制剂所施用至的粘膜可以是将给其施用生物活性物质的哺乳动物的任意粘膜，例如鼻、阴道、眼、口中、产道、肺、胃肠道或直肠中的粘膜，优选鼻、口或阴道的粘膜。
[0413] 可通过胃肠外途径(即通过静脉内、肌内、皮下、鼻内、直肠内、阴道内或腹膜内施用)施用本发明的化合物。胃肠外施用的皮下和肌内形式通常是优选的。用于此类施用的适当剂型可通过常规技术来制备。化合物还可通过吸入来施用，其为通过鼻内和口服吸入施用。用于这样的施用的适当的剂型例如气溶胶制剂或计量吸入器(metered dose inhaler)可利用常规技术制备。
[0414] 可将根据本发明的化合物与至少一种其他化合物一起施用。可同时施用(作为分开的制剂或组合在单位剂型中)或相继施用化合物。
[0415] 在本发明的一个实施方案中，如本文上文中定义的药物组合物的活性成分的剂量为10μg至500mg/kg体重。
[0416] 制剂
[0417] 虽然可能以原始化学药品的形式施用本发明的化合物或盐，但优选以药物制剂的形式提供其。因此，本发明还提供了用于医疗应用的药物制剂，其包含本发明的化合物或如本文中所定义的其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体。
[0418] 可将本发明的化合物配制在许多种口服施用剂型中。药物组合物和剂型可包含本发明的化合物或其药学上可接受的盐或其晶形作为活性成分。药学上可接受的载体可以是固体或液体。固体形式制剂包括粉剂、片剂、丸剂、胶囊、扁囊剂、栓剂和可分散的粒剂。固体载体可以是也可用作稀释剂、调味剂、增溶剂、润滑剂、悬浮剂、粘合剂、防腐剂、湿润剂、片剂崩解剂或封装材料的一种或多种物质。
[0419] 优选地，组合物可以为按重量计算约0.5％至75％的本发明的化合物，其余部分由适当的药物赋形剂组成。为了口服施用，此类赋形剂包括药物级的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、滑石、纤维素、葡萄糖、明胶、蔗糖、碳酸镁等。
[0420] 在粉剂中，载体是与微细活性成分混合的微细固体。在片剂中，将活性成分以适当的比例与具有必需结合能力的载体混合，并且将其压制成期望的形状和大小。粉剂和片剂优选包含约1至70％的活性化合物。适当的载体是碳酸镁、硬脂酸镁、滑石、糖、乳糖、果胶、糊精、淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低熔点石蜡、可可脂等。术语“制剂”意欲包括利用封装材料作为载体从而提供胶囊的活性成分的制剂，在所述胶囊中，具有或不具有载体的活性成分被与其结合的载体包围。类似地，包括扁囊剂和锭剂。片剂、粉剂、胶囊、丸剂、扁囊剂和锭剂可以是适合于口服施用的固体形式。
[0421] 根据本发明的滴剂可包含无菌或有菌水性或油性溶液或悬浮液，并且可通过将活性成分溶解在适当的水溶液中来制备，其任选地包括杀菌剂和/或杀真菌剂和/或任何其他适当的防腐剂，以及任选地包含表面活性剂。然后可通过过滤澄清所获得的溶液，将其转移至适当的容器中，然后密封容器，通过高压灭菌或保持在98-100℃进行半小时来进行灭菌。可选地，可将溶液过滤灭菌，将其转移至无菌容器中。适合于包含在滴剂中的杀菌剂和杀真菌剂的实例是硝酸或醋酸苯汞(0.002％)、苯扎氯铵(0.01％)和醋酸氯己定(0.01％)。用于油性溶液的制剂的适当溶剂包括甘油、稀释的醇和丙二醇。
[0422] 还包括的是固体形式的制剂，其意欲在即将使用之前被转变成用于口服施用的液体形式制剂。此类液体形式包括溶液、悬浮液和乳剂。除了活性成分以外，此类制剂还可包含着色剂、香料、稳定剂、缓冲剂、人造和天然甜味剂、分散剂、稠化剂、增溶剂等。
[0423] 适合于口服施用的其他形式包括液体形式制剂，其包括乳剂、糖浆剂、酏剂、水溶液、水混悬液、牙膏、凝胶状牙膏(gel dentrifrice)、口香糖或固体形式制剂，其意欲在即将使用之间被转变成液体形式制剂。可将乳剂在含水丙二醇溶液配制于溶液中或，其可包含乳化剂例如卵磷脂、去水山梨糖醇单油酸酯或阿拉伯胶。可通过将活性成分溶解在水中，然后加入适当的着色剂、香料、稳定剂和增稠剂来制备水溶液。可通过将微细活性成分与不同材料例如天然或合树胶、树脂、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和其他公知的悬浮剂一起分散在水中来制备水混悬液。固体形式制剂包括溶液、悬浮液和乳剂，并且除了活性成分外可包含着色剂、香料、稳定剂、缓冲剂、人造和天然甜味剂、分散剂、稠化剂、增溶剂等。
[0424] 可将本发明的化合物配制用于胃肠外施用(例如，通过注射，例如单次注射(bolus injection)或连续输注)，并且其可在安瓿瓶、预装注射器(pre-filled syringe)、小容量注入物(small volume infusion)中以单剂量形式提供或在添加了防腐剂的多剂量容器中提供。组合物可采用这样的形式如油性或水性载体中的悬浮液、溶液或乳剂，例如水性聚乙二醇中的溶液。油性或非水性载体、稀释剂、溶剂或载体的实例包括丙二醇、聚乙二醇、植物油(例如橄榄油)和可注射有机酯(例如，油酸乙酯)并且可包含配方剂(formulatory agent)例如防腐剂、湿润剂、乳化剂或悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。可选地，活性成分可以以粉剂形式存在，所述粉剂可通过无菌分离无菌固体或通过从溶液冷冻干燥(以在使用前用适当的载体例如无菌无热原的水重建)来获得。
[0425] 用于胃肠外制剂的油包括石油、动物油、植物油或合成的油。用于此类制剂的油的具体实例包括花生油、大豆油、芝麻、棉籽油、玉米油、橄榄油、矿油和矿物油。用于胃肠外制剂的适当的脂肪酸包括油酸、硬脂酸和硬脂酸。油酸乙酯和异丙基豆蔻酸酯是适当的脂肪酸酯的实例。
[0426] 用于胃肠外制剂的适当肥皂包含脂肪碱金属(fatty alkali metal)、铵和三乙胺盐，适当的去垢剂包括(a)阳离子去垢剂例如二甲基二烷基卤化铵和烷基吡啶卤化物；(b)阴离子去垢剂例如，烷基、芳基和烯烃磺酸盐、烷基、烯烃、醚和硫酸甘油单酯和磺基丁二酸酯，(c)非离子化去垢剂例如脂肪胺氧化物、脂肪酸脂肪酸烷醇酰胺酯和聚氧乙烯聚丙烯共聚物，(d)两性去垢剂例如烷基-.β.-氨基丙酸酯和2-烷基-咪唑啉季铵盐和(e)其混合物。
[0427] 胃肠外制剂通常可在溶液中包含按重量计算约0.5至约25％的活性成分。可使用防腐剂和缓冲剂。为了在注射部分上使刺激降至最低或消除刺激，此类组合物可包含一种或多种具有约12至约17的亲水亲油平衡(HLB)的非离子型表面活性剂。此类制剂中的表面活性剂的量通常在按重量计算约5至约15％的范围内。适当的表面活性剂包括聚乙烯山梨聚糖脂肪酸酯例如去水山梨糖醇单油酸酯和通过环氧丙烷与丙二醇的缩合形成的环氧乙烷与疏水性碱的高分子量加成化合物。可以在单剂量或多剂量密封的容器例如安瓿和小瓶中提供胃肠外制剂，可将所述制剂在冷冻干燥(冻干的)的条件下贮存，在即将使用之前只需要加入无菌液体赋形剂例如水即可用于注射。可从之前描述的种类的无菌粉剂、粒剂和片剂制备临时注射液和悬浮液。
[0428] 还可局部递送本发明的化合物。局部施用的区域包括皮肤表面以及还有阴道、直肠、鼻、口和咽喉的粘膜组织。用于经由皮肤和粘膜局部施用的组合物不应当产生刺激的体征，例如肿胀或发红。
[0429] 局部组合物可包括适用于局部施用的药学上可接受的载体。因此，所述组合物可采用例如悬浮液、溶液、软膏剂、洗剂、性用润滑剂(sexual lubricant)、乳膏、泡沫、气溶胶、喷雾剂、栓剂、植入物、吸入剂、片剂、胶囊、无水粉剂(dry powder)、糖浆剂、香膏(balm)或锭剂的形式。用于制备此类组合物的方法在制剂工业中是公知的。
[0430] 可将本发明的化合物配制为软膏，乳膏剂或洗剂或配制为经皮肤贴剂来用于至表皮的局施用。可通过添加适当的增稠剂和/或胶凝剂来将例如软膏和乳膏剂与水性或油性基质配制在一起。洗剂可用水性或油性基质配制，并且通常还可包含一种或多种乳化剂、稳定剂、分散剂、悬浮剂、增稠剂或着色剂。适合用于口中局部施用的制剂包括将活性剂包含在调味基质通常蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶中的锭剂；将活性剂包含在惰性基质例如明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯胶中的软锭剂(pastille)；和将活性剂包含在适当的液体载体中的漱口药。
[0431] 根据本发明的乳膏、软膏或糊剂是用于外敷的活性成分的半固体制剂。可通过借助于适当的机器，将以微粒或粉末形式存在的活性成分单独地或在溶液中或者在水性或非性液体中的悬浮液中与油脂性或非油脂性基质混合来制备所述制剂。基质可包含烃类例如硬、软或液体石蜡、甘油、蜂蜡、金属皂；胶浆剂；油或天然来源例如杏仁、玉米、落花生(arachis)、蓖麻油或橄榄油；羊毛脂或其衍生物或脂肪酸例如硬酯酸或油酸和醇例如丙二醇或大粒凝胶。制剂可掺入任何适当的表面活性剂例如阴离子性、阳离子性或非离子性表面活性剂例如，脱水山梨糖醇酯或其聚氧乙烯混合物。也可包含悬浮剂例如天然性树胶、纤维素衍生物或无机材料例如silicaceous silicas和其他成分例如羊毛脂。
[0432] 根据本发明的洗剂包括适合用于皮肤或眼的洗剂。洗眼剂可包含任选地含有杀菌剂的无菌水溶液并且可利用与用于制备滴剂的方法相似的方法来制备。用于皮肤的洗剂或搽剂还可包含促进干燥和使皮肤凉快的试剂，例如酒精或丙酮，和/或保湿剂例如甘油或油例如蓖麻油或花生油。
[0433] 透皮递送
[0434] 本文中描述的药物试剂-化学改性剂复合物可透皮施用。透皮施用通常包括将用于递送药物试剂以使药物透皮进入患者的全身性循环。皮肤位置包括用于透皮递送药物的解剖部位，包括前臂、腹部、胸部、背部、臀部、乳突区等。
[0435] 透皮递送可通过将复合物的来源与患者的皮肤长时间接触来实现。皮肤贴剂具有额外的有利方面：给身体提供药物试剂-化学改性剂复合物的受控递送。参见Transdermal Drug Delivery：Developmental Issues and Research Initiatives，Hadgraft and Guy(eds.)，Marcel Dekker，Inc.，(1989)；Controlled Drug Delivery：Fundamentals and Applications，Robinson和Lee(eds.)，Marcel Dekker Inc.，(1987)；和 Transdermal Delivery of Drugs，第1-3卷，Kydonieus和Berner(eds.)，CRC Press，(1987)。此类剂型可通过将药物试剂-化学改性剂复合物溶解、分散或否则掺入适当的介质例如人造橡胶基质材料中来制备。还可将吸收促进剂用于增加化合物穿过皮肤的流动。这样的流动速度可通过提供速度控制膜(rate-controlling membrane)或将化合物分散入聚合物基质或凝胶中来控制。
[0436] 被动透皮药物递送
[0437] 许多种类的透皮贴剂可用于本文中描述的方法。例如，可从基底材料和丙烯酸酯胶粘剂制备简单的粘贴剂。可将药物试剂-化学改性剂复合物和任意增强剂配制入胶粘铸膜液(adhesive casting solution)并且让其充分混合。将溶液直接浇铸在基底材料上，在烘箱中蒸发浇铸剂，留下粘性膜。可粘附释放衬垫以完成系统。
[0438] 可选地，聚氨酯基质贴剂可用于递送药物试剂-化学改性剂复合物。该贴剂的层包括基底、聚氨酯药物/增强剂基质、膜、胶粘剂和释放衬垫。使用室温固化聚氨酯预聚物来制备聚氨酯基质。向预聚物中加入水、醇和复合物导致可直接浇铸在基底材料上的胶粘刚性弹性体(tacky firm elastomer)的形成。
[0439] 本发明的其他实施方案利用水凝胶基质贴剂。通常，水凝胶基质可包含醇、水、药物和几种亲水聚合物。可将该水凝胶基质在基底层与粘着之间整合入透皮贴剂。
[0440] 贮液器贴剂(liquid reservoir patch)可用于本文中描述的方法。该贴剂包含不可渗透的或半渗透性的热封基底层、热封膜、基于丙烯酸酯的压力敏感性皮肤胶粘剂和硅化处理的释放衬里。基底被热封至膜以形成贮液器，然后可用复合物、增强剂、胶凝剂和其他赋剂充满该贮液器。
[0441] 薄膜基质贴剂(Foam matrix patch)在设计和组成上与贮液器系统相似，除了将胶化的药物试剂-化学改性剂溶液(pharmaceutical agent-chemical modifier solution)限制在薄膜层(通常聚氨酯)中。该薄膜层位于基底与已被热封在贴剂的外围的膜之间。
[0442] 关于被动递送系统，释放速度通常通过贮液器与皮肤之间的膜，通过从整体装置扩散，或通过通过皮肤本身用途递送系统的速度控制屏障来控制。参见美国专利Nos.4,816,258；4,927,408；4,904,475；4,588,580，4,788,062等。药物递送的速度部分依赖于膜的性质。例如，穿过体内的膜的药物递送的速度通常比穿过表皮屏障的速度快。复合物从装置递送至膜的速度最有利地通过使用控制速度的膜来控制，将所述膜置于贮液器与皮肤之间。假定皮肤对复合物充分可渗透(即通过皮肤的吸收大于穿过膜的速度)，那么膜将用于控制由患者经历的给药速度。
[0443] 可基于期望的渗透性程度、复合物的性质和与构建装置相关的机械考虑来选择适当的透性膜材料。示例性透性膜材料包括包括广泛多样的天然和合成聚合物例如多二乙硅氧烷类(硅橡胶)、乙烯乙酸乙烯酯共聚物(EVA)、聚氨基甲酸酯类、聚醚聚氨酯共聚物、聚乙烯类、聚酰胺、聚氯乙烯(PVC)、聚丙烯类、聚碳酸酯、聚四氟乙烯(PTFE)、纤维质植物例如三乙酸纤维素和硝酸/乙酸纤维素和水凝胶类例如甲基丙烯酸2-羟基乙酯(HEMA)。
[0444] 取决于期望的装置特征，可在装置中包含其他项目，例如治疗产品的其他常规成分。例如，根据本发明的组合物还可包含一种或多种防腐剂或抑菌剂例如羟苯甲酯、羟苯丙酯、氯甲酚、苯扎氯铵等。此类药物组合物还可包含其他活性成分例如抗微生物剂，特别是抗生素、麻醉剂、镇痛药和止痒剂。
[0445] 可将本发明的化合物配制为栓剂来进行施用。首先熔化低熔点蜡例如脂肪酸甘油酯类或可可脂的混合物，通过例如搅拌将活性成分均匀地分散。然后将熔化的均匀混合物倾注入适宜大小的模具中，使其冷却和固化。
[0446] 可将活性化合物配制成栓剂，所述栓剂包含例如约0.5％至约50％置于聚乙二醇(PEG)载体(例如，PEG 1000[96％]和PEG 4000[4％])中的本发明的化合物。
[0447] 可将本发明的化合物配制用于阴道施用。子宫托、止血栓(tampons)、乳膏剂、凝胶、糊剂、泡沫(foam)或喷雾剂除了活性成分外还包含这样的载体如本领域内已知是适当的载体。
[0448] 还可将本发明的化合物配制用于经鼻施用。可通过常规方法例如利用滴管、吸量管(pipette)或喷雾器将溶液或悬浮液直接施用至鼻腔。可以以单剂或多剂量形式提供制剂。在滴管或吸量管的后一种情况下，这可通过患者施用适当的预定体积的溶液或悬浮液来实现。在喷雾的情况下，这可以例如通过计量雾化喷雾泵(metering atomizing spray pump)来实现。
[0449] 可将本发明的化合物配制用于气溶胶施用，特别地给呼吸道施用，包括鼻内施用。所述化合物通常具有例如5微米或更小的量级的小粒度。这样的粒度可通过本领域内已知的方法，例如通过微粉化来获得。在具有适当的喷射剂例如氟氯化碳(CFC)例如二氟二氯甲烷、三氯氟甲烷或二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他适当的气体在加压封装装置(pressurized pack)中提供活性剂。气溶胶还可方便地包含表面活性剂例如卵磷脂。药物的剂量可通过量阀(metered valve)来控制。可选地，可以干粉(例如适当粉末基质例如乳糖、淀粉、淀粉衍生物例如羟丙基甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷(PVP)中的化合物的粉末混合物)的形式提供活性成分。粉末载体可在鼻腔中形成凝胶。可以以单位剂量形式例如在例如可通过吸入器从其施用粉剂的凝胶或吸塑包装的胶囊或药筒中提供粉末组合物。
[0450] 当想要时，可用适合于活性成分持续或受控释放施用的肠溶衣制备制剂。
[0451] 药物制剂优选以单位剂型存在。在这样的形式中，制剂被细分成包含适当量的活性成分的单位剂量。单位剂型可以是已包装的制剂、包含不连续量的制剂的包装例如包装的片剂、胶囊和小瓶或安瓿中的粉剂。同样地，单位剂型本身可以是胶囊剂、片剂、扁囊剂或锭剂或其是以包装形式存在的适当数量的任何此类剂型。
[0452] 药学上可接受的盐
[0453] 本化合物的药学上可接受的盐，当它们可被制备时，也意欲包括在本发明中。此类盐可以是在它们用于制药用途的应用中可接受的盐。其意思是所述盐将保持母体化合物的生物活性并且所述盐在其治疗疾病的应用和使用中不具有不想要的或有害的作用。
[0454] 以标准方式制备药学上可接受的盐。如果母体化合物是碱，那么在适当的溶剂中以过量的有机或无机酸处理其。如果母体化合物是酸，那么在适当的溶剂中用无机或有机碱处理其。
[0455] 本发明的化合物可以以有效量以其碱金属或碱土金属盐的形式与药学上可接受的载体或稀释剂共同、同时或一起，特别地且优选地以其药物组合物的形式施用，无论是通过口服、直肠还是有胃肠外(包括皮下)途径施用。
[0456] 用于本发明的药物组合物的药学上可接受的酸加成盐的实例包括例如衍生自无机酸例如盐酸、氢溴酸、磷酸、偏磷酸、硝酸和硫酸类和有机酸例如酒石酸、乙酸、柠檬酸、苹果酸、乳酸、反丁烯二酸、苯甲酸、乙醇酸、葡糖酸、琥珀酸、对甲基苯磺酸和芳基磺酸的加成盐。
[0457] 因此，在一个方面中，本发明涉及包含如本文上文中定义的试剂的药物组合物。
[0458] 在一个实施方案中，如本文上文中定义的试剂选自小有机分子、寡肽、蛋白质和单克隆或多克隆抗体。
[0459] 在一个实施方案中，如本文上文中定义的药物组合物包含药学上可接受的载体。
[0460] 在一个实施方案中，如本文上文中定义的药物组合物的pH为pH 5至pH 9。
[0461] 在一个实施方案中，可将如本文上文中定义的药物组合物被配制为用于通过注射施用、栓剂、口服施用、舌下片剂或喷雾剂、皮肤施用、吸入或用于使用可植入的生物相容性胶囊的局部施用。
[0462] 在其他实施方案中，注射是静脉内、肌内、脊柱内、腹膜内、皮下注射，单次或连续施用。
[0463] 在一个实施方案中，根据本发明的药物组合物以30分钟至24小时的间隔施用。
[0464] 在一个实施方案中，根据本发明的药物组合物以1至6小时的间隔施用。
[0465] 在一个实施方案中，根据本发明的药物组合物以6至72小时的间隔施用。
[0466] 第二活性成分
[0467] 在一个实施方案中，如本文上文中定义的药物组合物包含第二活性成分。
[0469] 在其他实施方案中，抗精神病药物选自氯氮平、利培酮、阿立哌唑、喹硫平和奥氮平。
[0470] 在其他实施方案中，抗焦虑剂选自苯二氮卓类、丁螺环酮、乙酰丙嗪、乙酰丙嗪和羟嗪。
[0471] 在其他实施方案中，抗抑郁药选自选择性5-羟色胺再摄取抑制剂(SSRI)、三环抗抑郁剂和Amitryptilin。
[0472] 在其他实施方案中，阿片样物质选自吗啡、芬太尼和羟可酮。
[0473] 在其他实施方案中，NMDA拮抗剂选自氯胺酮、美金刚和金刚烷胺。
[0474] 在一个重要方面中，本发明涉及通过调节有此需要的患者的神经元活性来治疗如本文下文中定义的精神和行为障碍的方法，所述方法包括通过给所述患者施用如本文上文中定义的药物组合物来调节经由Vps10p-结构域受体的信号传导。
[0475] 分部分试剂盒
[0476] 在一个方面中，本发明涉及分部分试剂盒(kit in parts)，其包括：
[0477] -如本文上文中定义的药物组合物，
[0478] -用于施用药物的医疗器械或其他装置，
[0479] -关于如何使用分部分试剂盒的说明书，
[0480] -任选地如本文上文中定义的第二活性成分。
[0481] 适应症
[0482] 本发明的试剂用于治疗如由WHO在本申请的提交日期于下列URL：http://www.who.int/classifications/apps/icd/icd10online/上定义的精神和行为障碍。分类精神和行为障碍(F00-F99)因此如下概述：
[0484] (F00.)阿尔茨海默病痴呆
[0485] (F01.)血管性痴呆
[0486] (F01.1)多发梗塞痴呆
[0487] (F02.)在他处分类的其他疾病中的痴呆
[0488] (F02.0)匹克病痴呆
[0489] (F02.1)克罗伊茨费尔特-雅各布病痴呆
[0490] (F02.2)亨廷顿病痴呆
[0491] (F02.3)帕金森病痴呆
[0492] (F02.4)人免疫缺陷病毒(HIV)病痴呆
[0493] (F03.)待分类的痴呆
[0494] (F04.)非酒精或其他精神活性物质诱发的器质性遗忘综合征
[0495] (F05.)非酒精或其他精神活性物质诱发的谵妄
[0496] (F06.)脑损伤和机能障碍及物理性疾病所致其他精神障碍
[0497] (F06.0)器质性幻觉症
[0498] (F06.1)器质性紧张性障碍
[0499] (F06.2)器质性妄想性(精神分裂症样)障碍
[0500] (F06.3)器质性心境(情感)障碍
[0501] (F06.4)器质性焦虑障碍
[0502] (F06.5)器质性解离障碍
[0503] (F06.6)器质性情绪不稳定(衰弱)障碍
[0504] (F06.7)轻度认知功能障碍
[0505] (F06.8)脑损伤和功能障碍及物理性疾病所致的其他分类的精神障碍
[0506] (F06.9)脑损伤和功能障碍及物理性疾病所致的待分类的精神障碍
[0507] 器质性脑综合征NOS
[0508] (F07.)脑疾病、损伤和机能障碍所致人格和行为障碍
[0509] (F07.0)器质性人格障碍
[0510] (F07.1)脑炎后综合征
[0511] (F07.2)脑震荡后综合征
[0512] (F07.8)脑疾病、损伤和机能障碍所致其他器质性人格和行为障碍
[0513] (F07.9)脑疾病、损伤和机能障碍所致待分类的器质性人格和行为障碍
[0514] (F09.)待分类的器质性或症状性精神障碍
[0515] (F10-F19)精神活性物质使用所致精神和行为障碍
[0516] (F10.)酒精的使用所致精神和行为障碍
[0517] (F10.0)急性中毒
[0518] (F10.1)伤害性用药
[0519] (F10.2)依赖综合征
[0520] (F10.3)戒断状态
[0521] (F10.4)伴有谵妄的戒断状态
[0522] (F10.5)精神障碍
[0523] (F10.6)遗忘综合征
[0524] (F10.7)精神障碍
[0525] (F10.8)其他精神和行为障碍
[0526] (F10.9)待分类的精神和行为障碍
[0527] (F11.)阿片类物质的使用所致精神和行为障碍
[0528] (F11.0)急性中毒
[0529] (F11.1)伤害性用药
[0530] (F11.2)依赖综合征
[0531] (F11.3)戒断状态
[0532] (F11.4)伴有谵妄的戒断状态
[0533] (F11.5)精神障碍
[0534] (F11.6)遗忘综合征
[0535] (F11.7)精神障碍
[0536] (F11.8)其他精神和行为障碍
[0537] (F11.9)待分类的精神和行为障碍
[0538] (F12.)大麻类物质的使用所致精神和行为障碍
[0539] (F12.0)急性中毒
[0540] (F12.1)伤害性用药
[0541] (F12.2)依赖综合征
[0542] (F12.3)戒断状态
[0543] (F12.4)伴有谵妄的戒断状态
[0544] (F12.5)精神障碍
[0545] (F12.6)遗忘综合征
[0546] (F12.7)精神障碍
[0547] (F12.8)其他精神和行为障碍
[0548] (F12.9)待分类的精神和行为障碍
[0549] (F13.)镇静药或安眠药的使用所致精神和行为障碍
[0550] (F13.0)急性中毒
[0551] (F13.1)伤害性用药
[0552] (F13.2)依赖综合征
[0553] (F13.3)戒断状态
[0554] (F13.4)伴有谵妄的戒断状态
[0555] (F13.5)精神障碍
[0556] (F13.6)遗忘综合征
[0557] (F13.7)精神障碍
[0558] (F13.8)其他精神和行为障碍
[0559] (F13.9)待分类的精神和行为障碍
[0560] (F14.)可卡因的使用所致精神和行为障碍
[0561] (F14.0)急性中毒
[0562] (F14.1)伤害性用药
[0563] (F14.2)依赖综合征
[0564] (F14.3)戒断状态
[0565] (F14.4)伴有谵妄的戒断状态
[0566] (F14.5)精神障碍
[0567] (F14.6)遗忘综合征
[0568] (F14.7)精神障碍
[0569] (F14.8)其他精神和行为障碍
[0570] (F14.9)待分类的精神和行为障碍
[0571] (F15.)其他兴奋剂包括咖啡因的使用所致精神和行为障碍
[0572] (F15.0)急性中毒
[0573] (F15.1)伤害性用药
[0574] (F15.2)依赖综合征
[0575] (F15.3)戒断状态
[0576] (F15.4)伴有谵妄的戒断状态
[0577] (F15.5)精神障碍
[0578] (F15.6)遗忘综合征
[0579] (F15.7)精神障碍
[0580] (F15.8)其他精神和行为障碍
[0581] (F15.9)待分类的精神和行为障碍
[0582] (F16.)致幻剂的使用所致精神和行为障碍
[0583] (F16.0)急性中毒
[0584] (F16.1)伤害性用药
[0585] (F16.2)依赖综合征
[0586] (F16.3)戒断状态
[0587] (F16.4)伴有谵妄的戒断状态
[0588] (F16.5)精神障碍
[0589] (F16.6)遗忘综合征
[0590] (F16.7)精神障碍
[0591] (F16.8)其他精神和行为障碍
[0592] (F16.9)待分类的精神和行为障碍
[0593] (F17.)烟草使用所致精神和行为障碍
[0594] (F17.0)急性中毒
[0595] (F17.1)伤害性用药
[0596] (F17.2)依赖综合征
[0597] (F17.3)戒断状态
[0598] (F17.4)伴有谵妄的戒断状态
[0599] (F17.5)精神障碍
[0600] (F17.6)遗忘综合征
[0601] (F17.7)精神障碍
[0602] (F17.8)其他精神和行为障碍
[0603] (F17.9)待分类的精神和行为障碍
[0604] (F18.)挥发性溶剂的使用所致精神和行为障碍
[0605] (F18.0)急性中毒
[0606] (F18.1)伤害性用药
[0607] (F18.2)依赖综合征
[0608] (F18.3)戒断状态
[0609] (F18.4)伴有谵妄的戒断状态
[0610] (F18.5)精神障碍
[0611] (F18.6)遗忘综合征
[0612] (F18.7)精神障碍
[0613] (F18.8)其他精神和行为障碍
[0614] (F18.9)待分类的精神和行为障碍
[0615] (F19.)多种药物使用和其他精神活性物质的使用所致精神和行为障碍
[0616] (F19.0)急性中毒
[0617] (F19.1)伤害性用药
[0618] (F19.2)依赖综合征
[0619] (F19.3)戒断状态
[0620] (F19.4)伴有谵妄的戒断状态
[0621] (F19.5)精神障碍
[0622] (F19.6)遗忘综合征
[0623] (F19.7)精神障碍
[0624] (F19.8)其他精神和行为障碍
[0625] (F19.9)待分类的精神和行为障碍
[0626] (F20-F29)精神分裂症性、分裂型和妄想型障碍
[0627] (F20.)精神分裂症
[0629] (F20.1)青春型精神分裂症
[0630] (F20.2)紧张型精神分裂症
[0631] (F20.3)未分化型精神分裂症
[0632] (F20.4)精神分裂症后抑郁
[0633] (F20.5)残留型精神分裂症
[0634] (F20.6)单纯型精神分裂症
[0635] (F20.8)其他精神分裂症
[0636] 体感幻觉精神分裂症(Cenesthopathic schizophrenia)
[0637] 精神分裂症样精神障碍NOS
[0638] 精神分裂样精神病NOS
[0639] (F20.9)待分类的精神分裂症
[0640] (F21.)分裂型障碍
[0641] (F22.)持久的妄想性障碍
[0642] (F22.0)妄想症
[0643] (F22.8)其他持久的妄想性障碍
[0644] 妄想性畸形恐怖
[0645] 更年期偏执状态
[0646] 诉讼妄想狂
[0647] (F22.9)待分类的持久的妄想性障碍
[0648] (F23.)急性短暂精神病性障碍
[0649] (F23.0)不具有精神分裂症的症状的急性多形性精神病
[0650] (F23.1)具有精神分裂症的症状的急性多形性精神病
[0651] (F23.2)急性精神分裂症样精神病性障碍
[0652] (F23.3)其他急性妄想为主的精神病性障碍
[0653] (F23.8)其他急性短暂精神病性障碍
[0654] (F23.9)待分类的急性短暂精神病性障碍
[0655] (F24.)感应性妄想性障碍
[0656] 感应性精神病
[0657] 诱发的偏执性障碍
[0658] 诱发的精神病性障碍
[0659] (F25.)分裂情感性障碍
[0660] (F25.0)狂躁型情感性分裂症
[0661] (F25.1)抑郁型情感性分裂症
[0662] (F25.2)混合型情感性分裂症
[0663] (F25.8)其他分裂情感性障碍
[0664] (F25.9)待分类的情感性分裂症
[0665] (F28.)其他非器质性精神障碍
[0666] 慢性幻觉性精神障碍
[0667] (F29.)待分类的非器质性精神障碍
[0668] (F30-F39)心境(情感)障碍
[0669] (F30.)躁狂性发作
[0670] (F30.0)轻躁狂
[0671] (F30.1)无精神病性症状的躁狂症
[0672] (F30.2)有精神病性症状的躁狂症
[0673] (F30.8)其他躁狂性发作
[0674] (F30.9)待分类的躁狂性发作
[0675] (F31.)双相情感障碍
[0676] (F31.0)双相情感障碍，目前为轻躁狂
[0677] (F31.1)双相情感障碍，目前为无精神病性症状的躁狂
[0678] (F31.2)双相情感障碍，目前为有精神病性症状的躁狂
[0679] (F31.3)双相情感障碍，目前为轻度或中度抑郁
[0680] (F31.4)双相情感障碍，目前为无精神病性症状的重度抑郁
[0681] (F31.5)双相情感障碍，目前为有精神病性症状的重度抑郁
[0682] (F31.6)双相情感障碍，目前为混合性发作
[0683] (F31.7)双相情感障碍，目前为缓解
[0684] (F31.8)其他双相情感障碍
[0685] 双极情感Ⅱ障碍
[0686] 复发性躁狂性发作NOS
[0687] (F31.9)待分类的双相情感障碍
[0688] (F32.)抑郁发作
[0689] (F32.0)轻度抑郁症
[0690] (F32.1)中度抑郁发作
[0691] (F32.2)未伴有精神病性症状的重度抑郁发作
[0692] (F32.3)伴有精神病性症状的重度抑郁发作
[0693] (F32.8)其他抑郁发作
[0694] 非典型抑郁症
[0695] 单一次发作的“假性”抑郁症NOS
[0696] (F32.9)待分类的抑郁发作
[0697] (F33.)复发性抑郁障碍
[0698] (F33.0)复发性抑郁障碍，目前为轻抑郁
[0699] (F33.1)复发性抑郁障碍，目前为中度抑郁
[0700] (F33.2)复发性抑郁障碍，目前为不具有神经症性症状的重度抑郁
[0701] (F33.3)复发性抑郁障碍，目前为具有神经症性症状的重度抑郁
[0702] (F33.4)复发性抑郁障碍，目前为缓解的
[0703] (F33.8)其他复发性抑郁障碍
[0704] (F33.9)待分类的复发性抑郁障碍
[0705] (F34.)持续性心境(情感)障碍
[0706] (F34.0)环性心境
[0707] (F34.1)恶劣心境
[0708] (F34.8)其他持续性心境(情感)障碍
[0709] (F34.9)待分类的持续性心境(情感)障碍
[0710] (F38.)其他心境(情感)障碍
[0711] (F38.0)其他单一心境(情感)障碍
[0712] 混合情感发作
[0713] (F38.1)其他待分类的心境(情感)障碍
[0714] 复发性短暂抑郁发作
[0715] (F38.8)其他待分类的心境(情感)障碍
[0716] (F39.)待分类的心境(情感)障碍
[0717] (F40-F48)神经症性、应激相关的和躯体形式障碍
[0718] (F40.)恐惧性焦虑障碍
[0720] (F40.1)社交恐惧症
[0721] 对人恐怖症
[0722] 社交神经官能症
[0723] (F40.2)特定(分离的)恐怖
[0724] 恐高症
[0725] 动物恐惧症
[0726] 幽闭恐怖症
[0727] 单纯恐怖症
[0728] (F40.8)其他恐惧性焦虑障碍
[0729] (F40.9)待分类的恐惧性焦虑障碍
[0730] 恐怖症NOS
[0731] 恐怖状态NOS
[0732] (F41.)其他焦虑症
[0733] (F41.0)惊恐障碍(发作性阵发焦虑)
[0734] (F41.1)广泛性焦虑症
[0735] (F42.)强迫性神经失调
[0736] (F43.)对严重应激的反应和适应障碍
[0737] (F43.0)急性应激反应
[0739] (F43.2)适应障碍
[0740] (F44.)分离(转换)性障碍
[0741] (F44.0)分离性遗忘症
[0742] (F44.1)分离性神游症
[0743] (F44.2)分离性木僵状态
[0744] (F44.3)出神和附体障碍
[0745] (F44.4)分离性运动障碍
[0746] (F44.5)分离性抽搐
[0747] (F44.6)分离性感觉麻木或感觉丧失
[0748] (F44.7)混合性分离(转换)性障碍
[0749] (F44.8)其他分离(转换)性障碍
[0750] 刚塞综合征
[0751] 多重人格
[0752] (F44.9)待分类的分离(转换)性障碍
[0753] (F45.)躯体形式障碍
[0754] (F45.0)躯体化障碍
[0755] 布里凯综合征
[0756] 多种心身障碍
[0757] (F45.1)未分化躯体形式障碍
[0758] (F45.2)疑病障碍
[0759] 躯体变形障碍
[0760] 畸形恐怖(非妄想性)
[0761] 疑病性神经症
[0763] 疾病恐怖
[0764] (F45.3)躯体形式的自主神经功能失调
[0765] 心脏神经症
[0766] 德柯司他综合征
[0767] 胃神经官能症
[0768] 神经循环衰弱症
[0769] (F45.4)持续性躯体形式的疼痛障碍
[0770] 精神性疼痛
[0771] (F45.8)其他躯体形式障碍
[0772] (F45.9)待分类的躯体形式障碍
[0773] (F48.)其他神经症性障碍
[0774] (F48.0)神经衰弱
[0775] (F48.1)人格解体-现实解体综合征
[0776] (F48.8)其他特定的神经症性障碍
[0777] Dhat综合征
[0778] 职业性神经官能症，包括书写痉挛
[0779] 精神衰弱
[0780] 精神衰弱性神经症
[0781] 心因性晕厥
[0782] (F48.9)待分类的神经症性障碍
[0783] 神经症NOS
[0784] (F50-F59)伴有生理紊乱和身体因素的行为综合征
[0785] (F50.)进食障碍
[0786] (F50.0)神经性厌食
[0787] (F50.1)非典型神经性厌食
[0788] (F50.2)神经性贪食
[0789] (F50.3)非典型神经性贪食
[0790] (F50.4)与其他心理干扰相关的进食过量
[0791] (F50.5)与其他心理干扰有关的呕吐
[0792] (F50.8)其他进食障碍
[0793] 成人中的异食癖
[0794] (F50.9)待分类的进食障碍
[0795] (F51.)非器质性睡眠障碍
[0796] (F51.0)非器质性失眠症
[0797] (F51.1)非器质性嗜睡症
[0798] (F51.2)非器质性睡眠—觉醒障碍
[0799] (F51.3)睡行症(梦游症)
[0800] (F51.4)睡眠恐怖(夜惊)
[0801] (F51.5)梦魇
[0802] (F52.)非器质性障碍或疾病所致性功能障碍
[0803] (F52.0)性欲减退或缺失
[0804] (F52.1)性厌恶和性乐缺乏
[0805] (F52.2)生殖器反应丧失
[0806] (F52.3)性高潮障碍
[0807] (F52.4)早泄
[0808] (F52.5)非器质性阴道痉挛
[0809] (F52.6)非器质性性交疼痛
[0810] (F52.7)性欲亢进
[0811] (F52.8)非器质性障碍或疾病所致其他性功能障碍
[0812] (F52.9)非器质性障碍或疾病所致待分类的性功能障碍
[0813] (F53.)他处未分类的与产褥期相关的精神和行为障碍
[0814] (F53.0)他处未分类的与产褥期相关的轻度精神和行为障碍
[0815] 产后抑郁症NOS
[0816] 产启抑郁症NOS
[0817] (F53.1)他处未分类的与产褥期相关的重度精神和行为障碍
[0818] 产褥期精神病NOS
[0819] (F54.)与他处未分类的障碍或疾病相关的精神和行为因素
[0820] (F55.)非致依赖性物质滥用
[0821] (F59.)与心理干扰和身体因素相关的待分类的行为综合征
[0822] (F60-F69)成人人格和行为障碍
[0823] (F60.)特定人格障碍
[0824] (F60.0)偏执型人格障碍
[0825] (F60.1)分裂样人格障碍
[0826] (F60.2)反社会型(dissocial)人格障碍
[0827] 反社会型(antisocial)人格障碍
[0828] (F60.3)情绪不稳定型人格障碍
[0829] 边缘性人格障碍
[0830] (F60.4)表演型人格障碍
[0831] (F60.5)强迫性人格障碍
[0832] 强迫型人格障碍
[0833] (F60.6)焦虑性(回避)人格障碍
[0834] (F60.7)焦虑性人格障碍
[0835] (F60.8)其他特定人格障碍
[0836] 特异性人格障碍
[0837] “Haltlose”型人格障碍
[0838] 不成熟型人格障碍
[0839] 自恋型人格障碍
[0840] 被动攻击型人格障碍
[0841] 心理神经症型人格障碍
[0842] (F60.9)待分类的人格障碍
[0843] (F61.)混合性和其他的人格障碍
[0844] (F62.)非脑损伤和疾病所致持久性人格改变
[0845] (F63.)习惯与冲动障碍
[0846] (F63.0)病理性赌博
[0847] (F63.1)病理性纵火(放火癖)
[0848] (F63.2)病理性偷窃(盗窃癖)
[0849] (F63.3)拔毛症
[0850] (F64.)性身份障碍
[0851] (F64.0)易性癖
[0852] (F64.1)双重角色易装癖
[0853] (F64.2)童年性身份障碍
[0854] (F65.)性偏好障碍
[0855] (F65.0)恋物癖
[0856] (F65.1)恋物性易装癖
[0857] (F65.2)露阴癖
[0858] (F65.3)窥阴癖
[0859] (F65.4)恋童癖
[0860] (F65.5)施虐受虐狂
[0861] (F65.6)性偏好多相障碍
[0862] (F65.8)其他性偏好障碍
[0863] 摩擦癖
[0864] 恋尸癖
[0865] (F66.)与性发育和取向相关的生理和行为障碍
[0866] (F66.0)性成熟障碍
[0867] (F66.1)自我矛盾性性定向
[0868] (F66.2)性关系障碍
[0869] (F66.8)其他性心理发育障碍
[0870] (F66.9)待分类的性心理发育障碍
[0871] (F68.)其他成人人格和行为障碍
[0872] (F68.0)出于心理理由渲染躯体症状
[0873] (F68.1)身体的或生理的症状或失能的有意制造或伪装(做作性障碍)
[0874] 孟乔森综合症
[0875] (F68.8)其他分类的成人人格和行为障碍
[0876] (F69.)待分类的成人人格和行为障碍
[0877] (F70-F79)精神发育迟滞
[0878] (F70.)轻度精神发育迟滞
[0879] (F71.)中度精神发育迟滞
[0880] (F72.)重度精神发育迟滞
[0881] (F73.)极重度精神发育迟滞
[0882] (F78.)其他精神发育迟滞
[0883] (F79.)待分类的精神发育迟滞
[0884] (F80-F89)心理发育障碍
[0885] (F80.)特定言语和语言发育障碍
[0886] (F80.0)特定言语构音障碍
[0887] (F80.1)表达性语言障碍
[0888] (F80.2)感受性语言障碍
[0889] 韦尼克失语症
[0890] (F80.3)伴发癫痫的获得性失语(Landau-Kleffner综合征)
[0891] (F80.8)其他的言语和语言发育障碍
[0892] 发音不正
[0893] (F80.9)待分类的言语和语言发育障碍
[0894] (F81.)特定学校技能发育障碍
[0895] (F81.0)特定性阅读障碍
[0896] 发育性阅读困难
[0897] (F81.1)特定拼写障碍
[0898] (F81.2)特定计算技能障碍
[0899] 发育性计算不能
[0900] 格斯特曼综合征
[0901] (F81.3)混合性学习技能障碍
[0902] (F81.8)其他学校技能发育障碍
[0903] (F81.9)待分类的学校技能发育障碍
[0904] (F82.)特定运动功能发育障碍
[0905] 发育性运用障碍
[0906] (F83.)混合性特定发育障碍
[0907] (F84.)广泛性发育障碍
[0908] (F84.0)儿童孤独症
[0909] (F84.2)雷特综合征
[0910] (F84.4)有智能不足与重复动作之多动障碍
[0911] (F84.5)阿斯伯格综合症
[0912] (F88.)其他心理发育障碍
[0913] (F89.)待分类的心理发育障碍
[0914] (F90-F98)通常发病于童年和少年期的行为和精神障碍
[0915] (F90.)多动性障碍
[0916] (F90.0)活动和注意力的干扰
[0917] 伴多动的注意力缺陷障碍
[0918] 注意力缺陷多动症
[0919] 注意缺陷伴多动障碍
[0920] (F90.1)多动性品行障碍
[0921] (F90.8)其他多动性障碍
[0922] (F90.9)待分类的多动性障碍
[0923] (F91.)品行障碍
[0924] (F91.0)局限于家庭内的品行障碍
[0925] (F91.1)未社会化的品行障碍
[0926] (F91.2)社会化的品行障碍
[0927] (F91.3)对立违抗障碍
[0928] (F91.8)其他品行障碍
[0929] (F91.9)待分类的品行障碍
[0930] (F92.)品行与情绪混合障碍
[0931] (F92.0)抑郁性品行障碍
[0932] (F92.8)其他品行与情绪混合障碍
[0933] (F92.9)待分类的品行与情绪混合障碍
[0934] (F93.)特发于童年的情绪障碍
[0935] (F93.0)儿童期离别焦虑障碍
[0936] (F93.1)儿童期恐怖性焦虑障碍
[0937] (F93.2)儿童社交恐惧症
[0938] (F93.3)同胞竞争障碍
[0939] (F93.8)其他童年情绪障碍
[0940] 身份障碍
[0941] 过度焦虑症
[0942] (F93.9)待分类的童年情绪障碍
[0943] (F94.)特发于童年和少年的社交功能障碍
[0944] (F94.0)选择性缄默症
[0945] (F94.1)儿童反应性依恋障碍
[0946] (F94.2)脱抑制性童年依恋障碍
[0947] (F94.8)其他儿童社交功能障碍
[0948] (F94.9)待分类的儿童社交功能障碍
[0949] (F95.)抽动障碍
[0950] (F95.0)短暂性抽动障碍
[0951] (F95.1)慢性运动或发声抽动障碍
[0952] (F95.2)发声或多种运动联合抽动障碍(de la Tourette)
[0953] (F95.8)其他抽动障碍
[0954] (F95.9)待分类的抽动障碍
[0955] (F98.)其他通常发病于童年和少年期的行为和精神障碍
[0956] (F98.0)非器质性遗尿症
[0957] (F98.1)非器质性遗粪症
[0958] (F98.2)婴幼儿和童年喂食障碍
[0959] (F98.3)婴幼儿和童年异食障碍
[0960] (F98.4)刻板性运动障碍
[0961] (F98.5)口吃(结巴)
[0962] (F98.6)言语急促
[0963] (F98.8)通常发病于童年和少年期的其他特定行为和精神障碍
[0964] 非多动的注意缺陷障碍
[0965] 过度手淫
[0966] 咬指甲癖
[0967] 挖鼻
[0968] 吮拇指
[0969] (F98.9)通常发病于童年和少年期的待分类的行为和精神障碍
[0970] (F99)待分类的精神障碍
[0971] (F99.)未另外分类的精神障碍
[0972] 因此，在重要的方面，本发明的试剂用于治疗或预防或者治疗和预防精神和行为障碍，所述障碍选自器质性精神障碍，包括症状性精神障碍；精神活性物质使用所致精神和行为障碍；精神分裂症性、分裂型和妄想型障碍；心境[情感]障碍；神经症性应激相关和躯体形式障碍；与心理干扰和身体因素相关的行为综合征；成人人格和行为的障碍；精神发育迟滞；心理发育障碍；通常发病于童年和少年的行为和精神障碍和待分类的多动障碍。
[0973] 在一个实施方案中，用本发明的选蛋白或sorcs2激动剂试剂或sorcs1激动剂试剂治疗躁狂症。
[0974] 在一个实施方案中，如本文中定义的器质性精神障碍(包括症状性精神障碍)选自阿尔茨海默病性痴呆，血管性痴呆，他处未分类的其他疾病性痴呆，待分类的痴呆，非酒精或其他精神活性物质诱发的器质性遗忘综合征，非酒精或其他精神活性物质诱发的谵妄，脑损伤和机能障碍及物理性疾病所致其他精神障碍，器质性妄想性[精神分裂症样]障碍，脑疾病、损伤和机能障碍所致人格和行为障碍以及待分类的器质性或症状性精神障碍。
[0975] 在另一个实施方案中，如本文上文中定义的精神活性物质使用所致精神和行为障碍选自酒精的使用所致精神和行为障碍、阿片类物质的使用所致精神和行为障碍、大麻酚类的使用所致精神和行为障碍、镇静药或安眠药的使用所致精神和行为障碍、可卡因的使用所致精神和行为障碍、其他刺激物包括咖啡因的使用所致精神和行为障碍、致幻药的使用所致精神和行为障碍、烟草的使用所致精神和行为障碍、挥发性溶剂的使用所致精神和行为障碍以及多药使用和其他精神活性物质的使用所致精神和行为障碍。
[0976] 在本发明的其他实施方案中，如本文上文中定义的精神分裂症性、分裂型和妄想型障碍选自精神分裂症、分裂型障碍、持久的妄想性障碍、急性短暂精神病性障碍、感应性妄想性障碍、分裂情感性障碍、其他非器质性精神病和待分类的非器质性精神病。
[0977] 在其他实施方案中，如本文上文中定义的心境[情感]障碍选自躁狂性发作、双相情感障碍、抑郁发作、复发性抑郁障碍、持续性心境[情感]障碍、其他心境[情感]障碍和未分类的心境[情感]障碍。
[0978] 在本发明的另一个实施方案中，如上文中定义的神经症性应激相关的和躯体形式障碍选自恐怖性焦虑障碍、其他焦虑症、强迫性神经失调、对严重应激的反应和适应障碍、分离[转换]性障碍、躯体形式障碍和其他神经症性障碍。
[0979] 在本发明的另一个实施方案中，如本文上文中定义的与心理干扰和身体因素相关的行为综合征选自进食障碍、非器质性睡眠障碍、非器质性障碍或疾病所致性功能障碍、他处未分类的与产褥期相关的精神和行为障碍、他处分类的障碍或疾病相关的心理和行为因素、非致依赖性物质滥用和与心理干扰和身体因素相关的待分类的行为综合征。
[0980] 在本发明的另一个实施方案中，如上文中定义的成人人格和行为障碍选自特定人格障碍、混合性和其他的人格障碍、非脑损伤和疾病所致持久性人格改变、习惯与冲动控制障碍、性别认同障碍、性偏好障碍、与性发育和取向相关的生理和行为障碍、其他成人人格和行为障碍和待分类的成人人格和行为障碍。
[0981] 在本发明的另一个实施方案中，如上文中定义的精神发育迟滞选自轻度精神发育迟滞、中度精神发育迟滞、重度精神发育迟滞、极重度精神发育迟滞、其他精神发育迟滞和待分类的精神发育迟滞。
[0982] 在本发明的另一个实施方案中，如上文中定义的心理发育障碍选自特定言语和语言发育障碍、特定学校技能发育障碍、特定运动功能性发育障碍、混合性特定发育障碍、广泛性发育障碍、其他心理发育障碍和未分类的心理发育障碍。
[0983] 在本发明的另一个实施方案中，如上文中定义的通常发病于童年和少年期的行为和精神障碍选自多动性障碍、品行障碍、品行与情绪混合障碍、特发于童年的情感障碍、特发于童年和少年的社交功能障碍、抽搐性运动障碍和其他通常发病于童年和少年期的行为和精神障碍。
[0984] 在本发明的另一个实施方案中，待分类的精神障碍是未另外分类的精神障碍。
[0985] 按照如由Willnow和Herz在1994年(Willnow和Herz，1994)描述的标准ES细胞靶向法通过使用pTK2载体产生本发明的转基因敲除小鼠。
[0986] 附图详述
[0987] 图1：Vps10p-结构域受体家族。标示了它们的结构组织。
[0988] 图2：选蛋白和SorCS2在海马中的表达和亚细胞定位。A，通过按照标准方案使用多克隆兔抗选蛋白抗体和过氧化物酶染色进行免疫组织化学来显现WT小鼠脑切片的齿状回中的选蛋白表达。将来自选蛋白-/-小鼠的脑切片的染色用作阴性对照。B，通过来自SorCS2-/-小鼠的脑切片的X-gal染色显现海马中表达SorCS2的细胞。按照标准方案进行该染色步骤，该染色步骤利用插入SorCS2基因的外显子15的LacZ基因来破坏SorCS2基因表达。LacZ基因编码β-半乳糖苷酶，然后SorCS2启动子驱动其表达。C，选蛋白和SorCS2在海马中的亚细胞定位。从颅内取出8只8至12周龄的WT小鼠的海马，并且立即将其转移至10ml含有新鲜加入的蛋白酶抑制剂(0.1mM苯甲基磺酰氟(PMSF)，1mM抑肽酶，10mM亮肽酶素，10mM胃酶抑素(全部来自Sigma))的冰冷HEPES(羟乙基哌嗪-N-2-乙磺酸，N-2)-缓冲的蔗糖(0.32M蔗糖，4mM HEPESph 7.4)中，使用电机驱动的glassteflon匀浆器(B.Braun)以900rpm进行匀浆。以1000x g离心匀浆物(H)10分钟，产生P1(含有细胞碎片和细胞核的沉淀)和S1(上清液)级分。以10000x g离心所得到的上清液(S1)15分钟，产生S2和P2，富含线粒体和突触体的粗制突触体沉淀。将P2沉淀溶解在15ml含有蛋白酶抑制剂的HEPES-缓冲液蔗糖中，以10000x g离心15分钟，产生S2′和P2′(经洗涤的粗制突触体沉淀)。通过在9倍体积的含有蛋白酶抑制剂的冰冷H2O中进行低渗冲击来裂解P2′级分，对该级分进行3次glass-teflon匀浆器冲击以帮助裂解。将匀浆物调整至4mM HEPES，在冷室中持续混合30分钟以确保完全裂解，然后以25000x g离心20分钟，产生S3(LS1)(粗制突触小泡级分)和P3(LP1)(裂解的突触体膜级分)。以165000x g离心所得的上清液(LS1)2小时(45000rpm于70.1Ti中)，产生富含突触前小泡的沉淀SVP(LP2)。将沉淀P3(LP1)重悬浮于3.5ml含有蛋白酶抑制剂的HEPES-缓冲的蔗糖中，在含有0.8至1.0至1.2M蔗糖(加有蛋白酶抑制剂)的不连续梯度的顶部分层。在浮桶式转头中(30000rpm于SW41Ti中)以150000x g离心梯度2小时。回收1.0至1.2M的蔗糖层之间含有突触质膜的级分，通过加入2.5倍体积的4mM HEPES pH 7.4将其稀释至0.32m蔗糖。以150000x g离心悬浮液30分钟(42000rpm于70.1Ti中)，然后将所得的沉淀重悬浮于1ml含有蛋白酶抑制剂的50mMHEPES pH 7.4，2mM EDTA中，产生突触质膜(SPM)悬浮液。向700ml SPM悬浮液中加入3ml加有蛋白酶抑制剂和0.5％Triton X-100的冰冷50mM HEPES，pH 7.4，2mM EDTA。在冷室中旋转悬浮液15分钟，以32000x g(22000rpm于70.1Ti中)离心20分钟以获得含有突触后密集区的PDSI沉淀。将PSDI沉淀重悬浮于2ml加有蛋白酶抑制剂的冰冷50mM HEPES，pH 7.4，2mM EDTA中。保存300ml PSDI悬浮液，向剩余悬浮液中加入0.5％Triton-X 100，然后于冷室中旋转15分钟。以200000x g(50000rpm于70.1Ti中)离心PSDI悬浮液20分钟以获得含有浓缩的突触后密集物的PSDII沉淀。
将PSDII沉淀重悬浮于100ml加有蛋白酶抑制剂的50mM HEPES，pH 7.4，2mM EDTA中。使用Bio-Rad蛋白质测定测量级分的蛋白质浓度，将各级分的7-10mg的等分溶解在SDS样品缓冲液(20mM Tris-HCl，5％SDS，17.4％甘油，57％Pyronin Y(Sigma)，20mM DTT)中。通过还原SDS-PAGE(4-16％Tris-甘氨酸凝胶)分离级分，使用选蛋白抗体或SorCS2抗体通过蛋白质印迹法分析所述级分。将选蛋白和SorCS2的定位与突触前标志物突触小泡蛋白(Synaptophysin)和突触后密集区标志物PSD-95的定位相比较。将用选蛋白或SorCS2编码质粒稳定转染的HEK293细胞的裂解物用作阳性对照。将各个级分的情况(identity)列于右边。
将PSDII沉淀重悬浮于100ml加有蛋白酶抑制剂的50mM HEPES，pH 7.4，2mM EDTA中。使用Bio-Rad蛋白质测定测量级分的蛋白质浓度，将各级分的7-10mg的等分溶解在SDS样品缓冲液(20mM Tris-HCl，5％SDS，17.4％甘油，57％Pyronin Y(Sigma)，20mM DTT)中。通过还原SDS-PAGE(4-16％Tris-甘氨酸凝胶)分离级分，使用选蛋白抗体或SorCS2抗体通过蛋白质印迹法分析所述级分。将选蛋白和SorCS2的定位与突触前标志物突触小泡蛋白(Synaptophysin)和突触后密集区标志物PSD-95的定位相比较。将用选蛋白或SorCS2编码质粒稳定转染的HEK293细胞的裂解物用作阳性对照。将各个级分的情况(identity)列于右边。
[0989] 图3：选蛋白-/-和SorCS1-/-小鼠中受损的NMDA受体依赖性LTD。A，通过对Schaffer侧支施用LFS(1Hz，15分钟)使选蛋白-/-海马CA1突触中不存在LTD。在wt海马CA1突触中LFS诱导突触阻抑(synaptic depression)。B，利用抗切割proBDNF挽救选蛋白-/-海马CA1突触中的NMDA受体依赖性LTD。将选蛋白-/-海马切片与4ng/ml纯化的抗切割proBDNF一起温育至少1小时，然后进行记录，并且如所指示的，所述抗切割proBDNF在试验过程中始终存在。对Schaffer侧支施用LFS(1Hz，15分钟)。在与对照载体一起温育的选蛋白-/-海马切片中，LTD仍然受损。C，相似试验显示利用40ng/ml纯化的可溶性选蛋白挽救选蛋白-/-海马CA1突触中的NMDA受体依赖性LTD。D，相似试验显示SorCS1-/-海马CA1突触中不存在LTD。用于全部试验的海马切片来自3周龄小鼠。误差棒表示均值的标准差(S.E.M.)。
[0990] 图4：SorCS2-/-小鼠中受损的NMDA受体依赖性LTD。A，通过对schaffer侧支施用LFS(1Hz，15分钟)，SorCS2-/-海马CA1突触中不存在由LFS诱导的LTD。在wt海马CA1突触中LFS诱导突触阻抑。B，SorCS2-/-海马CA1突触中的NMDA受体依赖性LTD未被抗切割的proBDNF挽救。将SorCS2-/-海马切片与4ng/ml纯化的抗切割的proBDNF一起温育至少1小时，然后记录，如所指示的，所述proBDNF在整个试验过程中始终存在。对Schaffer侧支施用LFS(1Hz，15分钟)。在与对照载体一起温育的SorCS2-/-海马切片中，LTD仍然受损。C，通过施用抗SorCS2IgG在野生型海马CA1突触中导致受损的NMDA受体依赖性LTD。在利用非特异性IgG的对照试验中，LFS在野生型海马CA1突触中诱导突触阻抑。对Schaffer侧支施用LFS(1Hz，15分钟)。将海马切片与IgG一起温育至少90分钟，然后记录，如所指示的，所述IgG在整个试验过程中始终存在。误差棒表示S.E.M。D，改进NTR自(Lu，Pang等人2005)的突触可塑性的诱导模型，其描述了proBDNF通过与p75 相互作用在长时程抑制(LTD)的诱导中的作用和成熟BDNF通过与TrkB相互作用在长时程增强(LTP)的诱导中的作用。
[0991] 图5：选蛋白-/-和SorCS2-/-海马CA1突触中的受损的长时程增强。A，将两串(trains)HFS(100Hz，1秒)施用于Schaeffer侧支，在3小时后测量晚期长时程增强。在野生型海马CA1突触中，突触传递的效率在3小时后已增强至基线的约150％。在选蛋白-/-海马CA1突触中，长时程增强的晚期已下降至基线水平并且未诱导晚期长时程增强。B，相似试验显示SorCS2-/-海马CA1突触中的部分早期和晚期长时程增强。将两串HFS(100Hz，1秒)施用于Schaeffer侧支，分别在30分钟和3小时后测量早期和晚期长时程增强。与野生型小鼠相比较，早期长时程增强在SorCS2-/-小鼠中略微减弱。与野生型海马切片的突触传递的效率在3小时后已增强至150％相比较，在SorCS2-/-海马CA1突触中突触传递的效率在3小时后已增强至基线的约125％。误差棒表示S.E.M。C，与B的试验相同的试验显示SorCS2-/-海马CA1突触中受损的早期和晚期长时程增强。
[0992] 图6：SorCS2与p75NTR之间的物理相互作用。A，用DSP(Pierce)交联用编码SorCS2NTR和p75 的载体稳定转染的HEK293细胞，然后裂解。将细胞裂解物与结合至Gammabind珠的抗SorCS2抗体(GE Healthcare)一起温育。用SDS加样缓冲液从经洗涤的珠上洗脱沉NTR NTR
淀的复合物。蛋白质印迹分析显示SorCS2：p75 复合物的存在。显示了p75 和IgG重链NTR
的存在。将只用编码p75 的质粒稳定转染的HEK293细胞用作阴性对照。B，表面等离子共NTR
振试验(BIAcore)显示p75 的可溶性全长胞外结构域(p75ECD)与固定的可溶性SorCS2的直接相互作用。使用的p75ECD浓度为1μM。Kd估计为约10nM。
淀的复合物。蛋白质印迹分析显示SorCS2：p75 复合物的存在。显示了p75 和IgG重链NTR
的存在。将只用编码p75 的质粒稳定转染的HEK293细胞用作阴性对照。B，表面等离子共NTR
振试验(BIAcore)显示p75 的可溶性全长胞外结构域(p75ECD)与固定的可溶性SorCS2的直接相互作用。使用的p75ECD浓度为1μM。Kd估计为约10nM。
[0993] 图7：BDNF前肽和成熟BDNF与SorCS2的结合。A，通过表面等离子共振术(BIAcore)分析的BDNF前肽与固定的可溶性SorCS2的结合。使用的BDNF前肽的浓度为
20nM和50nM。Kd估计为15nM。B，成熟BDNF与SorCS2的结合。所使用的成熟BDNF浓度为10nM和20nM。Kd估计为5nM。
20nM和50nM。Kd估计为15nM。B，成熟BDNF与SorCS2的结合。所使用的成熟BDNF浓度为10nM和20nM。Kd估计为5nM。
[0994] 图8：神经元GABA活性在选蛋白和SorCS2-/-小鼠中增加，并且可通过BDNF挽救。A，描述齿状回颗粒细胞如何在GABA能篮状细胞的强大抑制性控制之下的模型。篮状细胞的兴奋性反过来被从颗粒细胞释放的BDNF抑制(Holm等人提交，2008)。B，通过体外小鼠脑切片制备物(P16-P20)中的单个神经元的电生理学记录估计GABA能活性。在每一个试验条件下，以Hz为单位测量自发抑制性突触后电流(sIPSCs)的频率。在对照小鼠(野生型，WT)中，GABA能活性为2.96±0.53Hz(n＝33个细胞)。在选蛋白-/-(选蛋白KO)小鼠中，该活性增加至6.15±0.80Hz(n＝25个细胞)。在挽救试验中，外源BDNF(20ng/ml)将选蛋白KO小鼠的GABA能活性逆转回野生型(WT)水平，达到2.66±1.4Hz(n＝3个细胞)。用于比较，SorCS2-/-(SorCS2KO)小鼠中的GABA能活性为5.68±0.7Hz(n＝6)，突显了Vps10p蛋白在此类抑制性细胞功能中重要性。误差棒表示S.E.M。
[0995] 图9：3月龄选蛋白-/-(选蛋白KO)、BDNF+/+、BDNF+/-和选蛋白KO/BDNF+/-小鼠的旷场试验和高架十字迷宫试验。旷场试验通常用作抑郁症、躁狂症和焦虑相关行为的试验模型。利用抗抑郁药或抗焦虑剂处理小鼠通常增加行走的距离、交叉路线的数目和进入的次数以及在旷场中心中花费的时间。在由(40x 40x 35cm)透明有机玻璃场所(arena)组成的旷场中分析野生型(WT)小鼠(n＝9)、选蛋白KO小鼠(n＝12)、BDNF+/+(n＝9)和BDNF+/-(n＝5)同窝出生仔畜以及缺乏两个选蛋白基因和一个BDNF等位基因的小鼠、选蛋白KO/BDNF+/-，(n＝4)。将场所设置在视频摄像机监测下的灯光昏暗的房间中，该视频摄像机与Any-maze跟踪系统控制下的计算机连接。将小鼠置于场所的角落中，在20分钟的时期内记录它们的行为。将旷场分成中心区、中间区和周围区。使用Any-Maze跟踪软件分析在不同区中的进入次数和花费的时间。A，在试验过程中行走的距离。B，不同区域之间线路交叉的总数。C，进入中心区次数的百分数(进入中心区次数/进入周围区次数*100)。D，在中心区中花费的时间的百分数。误差棒表示S.E.M。E，3月龄选蛋白-/-(选蛋白KO)、BDNF+/+、BDNF+/-和选蛋白KO/BDNF+/-小鼠的旷场试验。旷场试验通常用作抑郁症、躁狂症和焦虑相关行为的试验模型。利用抗抑郁药或抗焦虑剂处理小鼠通常增加在旷场中心区中花费的时间。在由(40x 40x 35cm)透明有机玻璃场所组成的旷场中分析选蛋白KO小鼠(n＝10)、BDNF+/+(n＝9)、BDNF+/-(n＝11)以及缺乏两个选蛋白基因和一个BDNF等位基因的小鼠、选蛋白KO/BDNF+/-，(n＝9)(全部小鼠都是同窝出生仔畜并且为约3月龄)。
将场所设置在视频摄像机监测下的灯光昏暗的房间中，该视频摄像机与Any-maze跟踪系统控制下的计算机连接。将小鼠置于场所的角落中，在20分钟的时期内记录它们的行为。
将旷场分成中心区、中间区和周围区。使用Any-Maze跟踪软件分析在不同区中的进入次数和花费的时间。E，在试验过程中行走的距离。误差棒表示S.E.M。F，在高架十字迷宫(用于抑郁症、躁狂症和焦虑相关行为的更具挑战性的试验模型)中进一步试验小鼠。利用抗抑郁药或抗焦虑剂处理小鼠通常增加进入开臂的次数和在开臂中花费的时间。升高高架十字迷宫，高于地板40cm，其由两个相反的具有15cm高的不透明壁的闭臂和两个相反的具有相同大小(35x 5cm)的开臂组成。将高架十字迷宫设置在视频摄像机监测下的灯光昏暗的房间中，该视频摄像机与Any-maze跟踪系统控制下的计算机连接。对每一个小鼠进行10分钟的试验时期，并且测量进入开臂的次数和在开臂中花费的时间。F，进入开臂次数的百分数(进入开臂次数/进入闭臂次数*100)。
将场所设置在视频摄像机监测下的灯光昏暗的房间中，该视频摄像机与Any-maze跟踪系统控制下的计算机连接。将小鼠置于场所的角落中，在20分钟的时期内记录它们的行为。
将旷场分成中心区、中间区和周围区。使用Any-Maze跟踪软件分析在不同区中的进入次数和花费的时间。E，在试验过程中行走的距离。误差棒表示S.E.M。F，在高架十字迷宫(用于抑郁症、躁狂症和焦虑相关行为的更具挑战性的试验模型)中进一步试验小鼠。利用抗抑郁药或抗焦虑剂处理小鼠通常增加进入开臂的次数和在开臂中花费的时间。升高高架十字迷宫，高于地板40cm，其由两个相反的具有15cm高的不透明壁的闭臂和两个相反的具有相同大小(35x 5cm)的开臂组成。将高架十字迷宫设置在视频摄像机监测下的灯光昏暗的房间中，该视频摄像机与Any-maze跟踪系统控制下的计算机连接。对每一个小鼠进行10分钟的试验时期，并且测量进入开臂的次数和在开臂中花费的时间。F，进入开臂次数的百分数(进入开臂次数/进入闭臂次数*100)。
[0996] 图10：3月龄选蛋白-/-(选蛋白KO)、BDNF+/+、BDNF+/-和选蛋白KO/BDNF+/-小鼠在高架十字迷宫中的行为。高架十字迷宫被用作用于抑郁症、躁狂症和焦虑相关行为的更具挑战性的试验模型。利用抗抑郁药或抗焦虑剂处理小鼠通常增加行走的距离、交叉路线的数目和进入开臂的次数以及在开臂中花费的时间。在升高到高于地板40cm的高架十字迷宫中测试野生型(WT)小鼠(n＝9)、选蛋白KO小鼠(n＝12)、BDNF+/+(n＝9)和BDNF+/-(n＝5)同窝出生仔畜以及缺乏两个选蛋白等位基因和一个BDNF等位基因的小鼠、选蛋白KO/BDNF+/-(n＝4)的行为，该高架十字迷宫由两个相反的具有15cm高的不透明壁的闭臂和两个相反的具有相同大小(35x 5cm)的开臂组成。将高架十字迷宫设置在视频摄像机监测下的灯光昏暗的房间中，该视频摄像机与Any-maze跟踪系统控制下的计算机连接。对每只小鼠进行10分钟的试验时期，并且测量进入开臂的次数和在开臂中花费的时间。A，在试验过程中行走的距离。B，开臂与闭臂之间交叉的总数。C，进入开臂次数的百分数(进入开臂次数/进入闭臂次数*100)。D，开臂中花费的时间的百分数。误差棒表示S.E.M。E，开臂中花费的时间的百分数。误差棒表示S.E.M。
[0997] 图11：8月龄SorCS2-/-(SorCS2 KO)和WT小鼠的旷场试验。在如图9的图例中所描述的旷场试验中分析8月龄野生型(WT)小鼠(n＝6)和SorCS2 KO小鼠(n＝4)。A，在试验过程中行走的距离。B，不同区域之间线路交叉的总数。C，进入中心区次数的百分数(进入中心区次数/进入周围区次数*100)。D，在中心区中花费的时间的百分数。误差棒表示S.E.M。
[0998] 图12：SorCS2-/-(SorCS2 KO)和WT小鼠在高架十字迷宫中的行为。在如图10的图例中所描述的高架十字迷宫中分析8月龄野生型(WT)小鼠(n＝6)和SorCS2 KO小鼠(n＝4)。A，在试验过程中行走的距离。B，开臂与闭臂之间交叉的总数。C，进入开臂次数的百分数(进入开臂次数/进入闭臂次数*100)。D，在开臂中花费的时间的百分数。误差棒表示S.E.M。
[0999] 图13：Vps10p-结构域受体转基因小鼠中改变的记忆功能。A，在被动回避试验(Gemini Avoidance System)中试验的3月龄野生型(WT)小鼠(n＝9)、选蛋白-/-(选蛋白KO)小鼠(n＝12)、BDNF+/+(n＝9)和BDNF+/-(n＝4)同窝出生仔畜和缺乏两个选蛋白等位基因及一个BDNF等位基因的小鼠选蛋白KO/BDNF+/-(n＝4)。试验设置利用小鼠对黑暗的天然偏爱性，其由通过闸门(guillotine door)隔开的灯光明亮的明室和暗室组成。在训练日，将小鼠置于明室。当进入暗室时，门关闭并且小鼠接受电激(0.8mA，持续1秒)。24小时后，让小鼠返回明室，并且进入暗室的延迟表示对电击的记忆。B，在被动回避试验中试验的8月龄野生型(WT)小鼠(n＝6)和SorCS2-/-(SorCS2 KO)小鼠(n＝4)。误差棒表示S.E.M。C，在被动回避试验(Gemini Avoidance System)中试验的3月龄选蛋白-/-(选蛋白KO)小鼠(n＝9)、BDNF+/+(n＝10)、BDNF+/-(n＝7)和缺乏两个选蛋白等位基因和一个BDNF基因的小鼠：选蛋白KO/BDNF+/-(n＝8)(全部小鼠都是同窝出生仔畜)。试验设置利用小鼠对黑暗的天然偏爱性，其由通过闸门隔开的灯光明亮的明室和暗室组成。在训练日，将小鼠置于明室。当进入暗室时，门关闭并且小鼠接受电激(0.8mA，持续
1秒)。24小时后，让小鼠返回明室，并且进入暗室的延迟表示对电击的记忆。
1秒)。24小时后，让小鼠返回明室，并且进入暗室的延迟表示对电击的记忆。
[1000] 图14：SorCS2-/-(SorCS2 KO)小鼠的抑郁症行为。最终在强迫游泳试验(用于啮齿类动物的抑郁症行为的详尽描述的试验)中试验之前在一套旷场试验、高架十字迷宫和被动回避试验的试验中试验的野生型(WT)小鼠(n＝6)和SorCS2 KO小鼠(n＝4)。使用的强迫游泳试验大体上与其他地方(Porsolt，Le Pichon等人1977)描述的强迫游泳试验相似。将小鼠单个地放入装有20cm水的玻璃筒(高度：30cm，直径：15cm)，维持在23-25℃，并且保持在其中进行6分钟，同时使用数码摄影机记录它们的活动。当小鼠以直立位漂浮并且只进行少量活动来保持其头高出水面时小鼠被判断为不动。在2分钟习惯后，在6分钟试验期的最后4分钟过程中记录不动的时间。误差棒表示S.E.M。
[1001] 图15：TrkB的胞外结构域与固定的选蛋白、SorCS1和SorCS2的结合。A，通过表面等离子共振术(BIAcore)分析的TrkB-Fc嵌合体(R&D Systems)与固定的可溶性选蛋白的结合。使用TrkB-Fc嵌合体浓度为500nM、100nM和50nM。Kd估计为29nM。B，相似的试验，其显示TrkB-Fc嵌合体结合固定的可溶性SorCS1。Kd估计为9nM。C，相似的试验，其显示TrkB-Fc嵌合体结合固定的可溶性SorCS2。Kd估计为17nM。未观察到单独的Fc片段与任何Vps10p结构域受体的结合(数据未显示)。
[1002] 图16：SorCS2-/-小鼠-旷场试验。A，3-12月龄野生型(n＝6)和SorCS1 KO在上述旷场试验过程中行走的距离。误差棒表示S.E.M。
[1003] 图17：选蛋白-/-小鼠-高架十字迷宫-被动回避。A，2-3月龄野生型(n＝14)和选蛋白KO(n＝19)的高架十字迷宫试验显示在开臂中花费的时间的百分数和B，进入开臂次数(％)。C，如上所述的2-3月龄野生型(n＝8)和选蛋白KO(n＝13)的被动回避试验。误差棒表示S.E.M。
[1004] 图18：选蛋白-/-、BDNF+/-、选蛋白-/-/BDNF+/-、SorCS2-/-小鼠-高架十字迷宫的跌落。高架十字迷宫的跌落可被解释为活动缺陷(activity-deficiency)和多动症的小鼠的行为模拟(behavioural analogue)。对指定的基因型的高架十字迷宫的跌落评分。
[1005] 图19：SorCS2-/-小鼠-高架十字迷宫。在灯光明亮的明室中在高架十字迷宫中测试野生型和SorCS2 KO小鼠的进入开臂次数，进行10分钟，在进行试验之前，将高架十字迷宫放置或不放置在透明有机玻璃中的升高的平台(1m)上进行30分钟。之前已显示该处理伴随海马中LTD的促进(Xu，L等人Nature(387)1997)。
[1006] 图20：BDNF+/-、选蛋白-/-、SorCS2-/-小鼠-高架十字迷宫。在之前24小时已接受足底电击(1秒，0.8mA)后指定的基因型在高架十字迷宫中的行为。A，行走的距离。B，进入开臂次数(％)。C，在开臂中花费的时间的百分数。
[1007] 图21：用GST-选蛋白前肽阻断野生型小鼠中的LTD。对Schaffer侧支施用LFS(1Hz，15分钟)。在恢复过程中将海马切片与GST-选蛋白前肽或对照GST温育，如所指示的，所述GST-选蛋白前肽或对照GST也始终存在于试验中。
[1008] 图22：用抗SorCS2 IgG阻断野生型小鼠中的LTP。将两串HFS(100Hz，1秒)施用于Schaeffer侧支。在恢复过程中将海马切片与抗SorCS2 IgG或对照血清温育，如所指出的所述，所述抗SorCS2 IgG或对照血清也始终存在于试验中。在基线至强直后180分钟，显示样品描迹(Sample trace)。
[1009] 图23：SorCS1-/-小鼠-高架十字迷宫。在高架十字迷宫中测试3月龄野生型(n＝6)和SorCS1 KO(n＝7)小鼠。使迷宫升高高于地面40cm，该高架十字迷宫由两个相反的具有15cm高的不透明壁的闭臂和两个相反的具有相同大小(35x 5cm)的开臂组成。将高架十字迷宫设置在视频摄像机监测下的灯光昏暗的房间中，该视频摄像机与Any-maze跟踪系统控制下的计算机连接。对每只小鼠进行10分钟的试验时期，并且测量(A)行走的距离，(B)开臂与闭臂之间线路交叉的数目，和(C)在开臂中花费的时间的百分数。误差棒显示S.E.M。实施例
[1010] 实施例1：SorCS2:p75NTR复合物的证实
[1011] 用DSP(Pierce)交联用编码HEK293 SorCS2和p75NTR的质粒稳定转染的HEK293细胞，然后裂解。将细胞裂解物与结合至Gammabind珠(GE Healthcare)的抗SorCS2抗体一起温育。用SDS加样缓冲液从已洗涤的珠中洗脱沉淀的复合物。蛋白质印迹分析显示NTRSorCS2:p75 复合物的存在(图6A)。还使用CaHBS作为标准电泳缓冲液(10mM HEPES，pH 7.4，140mM NaCl，2mM CaCl2，1mM EGTA，0.005％ Tween-20)，利用表面等离子共振术NTR
(Biacore，Sweden)显示SorCS2与p75 的胞外结构域的直接相互作用。如提供商所述使用NHS/EDC法活化Biacore的生物传感器芯片(CM5，目录号BR-1000-14)，然后用SorCS2包被(图6B)。
(Biacore，Sweden)显示SorCS2与p75 的胞外结构域的直接相互作用。如提供商所述使用NHS/EDC法活化Biacore的生物传感器芯片(CM5，目录号BR-1000-14)，然后用SorCS2包被(图6B)。
[1012] 实施例2：SorCS2:TrkB复合物的证实。
[1013] 使用CaHBS作为标准电泳缓冲液(10mM HEPES，pH 7.4，140mM NaCl，2mM CaCl2，1mM EGTA，0.005％Tween-20)，利用表面等离子共振术(Biacore，Sweden)显示SorCS2与TrkB的胞外结构域的直接相互作用。如提供商所述使用NHS/EDC法活化Biacore的生物传感器芯片(CM5，目录号BR-1000-14)，然后用SorCS2包被(图15C)。还可通过免疫共沉淀证实SorCS2:TrkB复合物。用DSP(Pierce)交联例如在分别用编码两种受体的质粒转染后表达SorCS2和TrkB的细胞，随后裂解。将细胞裂解物与结合至Gammabind珠的抗SorCS2抗体(GE Healthcare)一起温育。用SDS加样缓冲液从已洗涤的珠中洗脱沉淀的复合物。
蛋白质印迹分析显示SorCS2:TrkB复合物的存在。
蛋白质印迹分析显示SorCS2:TrkB复合物的存在。
[1014] 实施例3：SorCS2与BDNF前肽和与成熟BDNF的相互作用的证实
[1015] 使用CaHBS作为标准电泳缓冲液(10mM HEPES，pH 7.4，140mM NaCl，2mM CaCl2，1mM EGTA，0.005％Tween-20)，利用表面等离子共振术(Biacore，Sweden)证实SorCS2的胞外结构域与BDNF前肽和与成熟BDNF的直接相互作用。如提供商所述使用NHS/EDC法活化Biacore的生物传感器芯片(CM5，目录号BR-1000-14)，然后用SorCS2包被(图7)。
[1016] 实施例4：用于鉴定受体拮抗剂/激动剂的基于细胞的筛选方法，所述受体拮抗剂NTR/激动剂调节包含SorCS2与p75 或TrkB的复合物的信号传导
[1017] 可在细胞系统中进行Vps10p结构域受体家族成员的结合、内化或信号传导的测NTR定。将表达SorCS2、p75 和TrkB(在例如分别用编码所有3种受体的质粒转染后)的细胞与候选试剂(抑制剂/拮抗剂)化合物一起温育。所述试剂可以例如代表针对所述受体、SorCS2和TrKB结合配体例如proBDNF、BDNF或各受体的片段的任意一个的抗体。在温育后，洗涤细胞，用DSP(Pierce)交联蛋白质复合物，随后裂解。将细胞裂解物与共价地连接至琼脂糖珠粒的抗SorCS2抗体一起温育。从已洗涤的珠粒(酸性缓冲液，随后中和)洗脱沉淀的复合物(洗脱物1)，使用抗TrkB抗体将其经历另一轮免疫沉淀，用SDS加样缓冲液洗脱沉淀的蛋白质(洗脱物2)。洗脱物1由单独的沉淀的SorCS2和/或SorCS2:TrkB、NTR NTR
SorCS2:p75 和SorCS2:TrkB:p75 复合物组成，然而洗脱物2只包含SorCS2:TrkB和/NTR NTR
或SorCS2:TrkB:p75 复合物。洗脱物1中的TrkB和p75 的蛋白质印迹分析显示候选NTR NTR
化合物是否能够分别抑制SorCS2:TrkB和SorCS2:p75 复合物形成。洗脱物2中的p75NTR
的蛋白质印迹分析显示候选化合物是否能够抑制三元SorCS2:TrkB:p75 复合物的形成。
SorCS2:p75 和SorCS2:TrkB:p75 复合物组成，然而洗脱物2只包含SorCS2:TrkB和/NTR NTR
或SorCS2:TrkB:p75 复合物。洗脱物1中的TrkB和p75 的蛋白质印迹分析显示候选NTR NTR
化合物是否能够分别抑制SorCS2:TrkB和SorCS2:p75 复合物形成。洗脱物2中的p75NTR
的蛋白质印迹分析显示候选化合物是否能够抑制三元SorCS2:TrkB:p75 复合物的形成。
[1018] 实施例5：用于鉴定破坏p75NTR和/或TrkB与SorCS2的相互作用的试剂的体外测定
[1019] 可使用CaHBS作为标准电泳缓冲液(10mM HEPES，pH 7.4，140mM NaCl，2mM CaCl2，1mM EGTA和0.005％Tween-20)利用例如表面等离子共振分析(Biacore，Sweden)测定配NTR
体例如小有机分子、肽或可溶性受体(包括但不限于SorCS2、p75 和TrkB)与固定的蛋白质的直接结合。如提供商所描述的，使用NHS/EDC法激活来自Biacore的生物传感器(CM5，目录号BR-1000-14)，然后用选蛋白或SorCS2包被。可应用几种不同的方法：可通过比较对固定有受体之一的芯片的结合信号(反应单位)和比较对空流动池的该信号来鉴定候选试剂。在另一个方法中，可在假定的抑制剂不存在或存在的情况下监控已确定的配体的抑制。信号的差异描述了拮抗剂的抑制电位。通过使用Biaevaluation 3.1版的程序拟合亲和力估计和抑制电位的传感图来分析收集的数据。可容易地将表面等离子共振测定转化成其中Vps10p-结构域受体、配体或假定的抑制剂被固定在固相上的其他测定中。例如，可通过在4℃下于50mM NaHCO3，pH 9.6中温育16小时来将受体固定在例如来自Nunc(目录号439454)的Maxisorp微量滴定孔中。在使用5％牛血清白蛋白(Sigma，目录号A9647)在室温下封闭2小时后，用MB缓冲液(10mM HEPES，pH 7.4，140mM NaCl，220mM CaCl2和
1mM MgCl2)洗涤孔3次，然后在不同浓度的候选抑制剂不存在或存在的情况下与标记的配体(例如碘化的)一起温育。在温育(例如，4℃下过夜)和用MB缓冲液洗涤后，通过加入
10％SDS来释放结合放射性。测定示踪剂对只包被有牛血清白蛋白的孔的非特异性结合，然后将其从结合试验中测定的值中扣除。可使用来自GraphPad，第4版的Prism软件使结合数据点与结合方程拟合。同样地，可标记拮抗剂并且直接测量对固定的受体的结合。在另一个设置中，可将受体、配体或拮抗剂固定在闪烁珠(scintillation bead)上，并在其中已用放射性标记受体-结合分子的闪烁迫近分析法中测量结合。
体例如小有机分子、肽或可溶性受体(包括但不限于SorCS2、p75 和TrkB)与固定的蛋白质的直接结合。如提供商所描述的，使用NHS/EDC法激活来自Biacore的生物传感器(CM5，目录号BR-1000-14)，然后用选蛋白或SorCS2包被。可应用几种不同的方法：可通过比较对固定有受体之一的芯片的结合信号(反应单位)和比较对空流动池的该信号来鉴定候选试剂。在另一个方法中，可在假定的抑制剂不存在或存在的情况下监控已确定的配体的抑制。信号的差异描述了拮抗剂的抑制电位。通过使用Biaevaluation 3.1版的程序拟合亲和力估计和抑制电位的传感图来分析收集的数据。可容易地将表面等离子共振测定转化成其中Vps10p-结构域受体、配体或假定的抑制剂被固定在固相上的其他测定中。例如，可通过在4℃下于50mM NaHCO3，pH 9.6中温育16小时来将受体固定在例如来自Nunc(目录号439454)的Maxisorp微量滴定孔中。在使用5％牛血清白蛋白(Sigma，目录号A9647)在室温下封闭2小时后，用MB缓冲液(10mM HEPES，pH 7.4，140mM NaCl，220mM CaCl2和
1mM MgCl2)洗涤孔3次，然后在不同浓度的候选抑制剂不存在或存在的情况下与标记的配体(例如碘化的)一起温育。在温育(例如，4℃下过夜)和用MB缓冲液洗涤后，通过加入
10％SDS来释放结合放射性。测定示踪剂对只包被有牛血清白蛋白的孔的非特异性结合，然后将其从结合试验中测定的值中扣除。可使用来自GraphPad，第4版的Prism软件使结合数据点与结合方程拟合。同样地，可标记拮抗剂并且直接测量对固定的受体的结合。在另一个设置中，可将受体、配体或拮抗剂固定在闪烁珠(scintillation bead)上，并在其中已用放射性标记受体-结合分子的闪烁迫近分析法中测量结合。
[1020] 实施例6：用于鉴定破坏proBDNF与选蛋白或SorCS2的相互作用的试剂的体外测定
[1021] 可以使用CaHBS作为标准电泳缓冲液(10mM HEPES，pH 7.4，140mM NaCl，2mM CaCl2，1mM EGTA和0.005％Tween-20)，通过例如表面等离子共振分析(Biacore，Sweden)测定配体例如小有机分子、肽或可溶性蛋白质与固定的蛋白质的直接结合。使用如提供商所描述的NHS/EDC法激活来自Biacore的生物传感器(CM5，目录号BR-1000-14)，然后用选蛋白或SorCS2包被所述传感器。可应用几种不同的方法：可通过比较对固定有受体之一的芯片的结合信号(反应单位)和比较对空流动池的该信号来鉴定候选试剂。在另一个方法中，可在假定的抑制剂不存在或存在的情况下监控已确定的配体的抑制。信号的差异描述了拮抗剂的抑制电位。通过使用Biaevaluation 3.1版的程序拟合亲和力估计和抑制电位的传感图来分析收集的数据。可容易地将表面等离子共振测定转化成其中Vps10p-结构域受体、配体或假定的抑制剂被固定在固相上的其他测定中。例如，可通过在4℃下于50mM NaHCO3，pH 9.6中温育16小时来将受体固定在例如来自Nunc(目录号439454)的Maxisorp微量滴定孔中。在使用5％牛血清白蛋白(Sigma，目录号A9647)在室温下封闭2小时后，用MB缓冲液(10mM HEPES，pH 7.4，140mM NaCl，220mM CaCl2和1mM MgCl2)洗涤孔3次，然后在不同浓度的候选抑制剂不存在或存在的情况下与标记的配体(例如碘化的)一起温育。在温育(例如，4℃下过夜)和用MB缓冲液洗涤后，通过加入10％SDS来释放结合放射性。
测定示踪剂对只包被有牛血清白蛋白的孔的非特异性结合，然后将其从结合试验中测定的值中扣除。可使用来自GraphPad，第4版的Prism软件使结合数据点与结合方程拟合。同样地，可标记拮抗剂并且直接测量对固定的受体的结合。在另一个设置中，可将受体、配体或拮抗剂固定在闪烁珠上，并在其中已用放射性标记受体-结合分子的闪烁迫近分析法中测量结合。
测定示踪剂对只包被有牛血清白蛋白的孔的非特异性结合，然后将其从结合试验中测定的值中扣除。可使用来自GraphPad，第4版的Prism软件使结合数据点与结合方程拟合。同样地，可标记拮抗剂并且直接测量对固定的受体的结合。在另一个设置中，可将受体、配体或拮抗剂固定在闪烁珠上，并在其中已用放射性标记受体-结合分子的闪烁迫近分析法中测量结合。
[1022] 实施例7：用于鉴定破坏proBDNF和/或BDNF与SorCS2的相互作用的试剂的体外测定
[1023] 可以使用CaHBS作为标准电泳缓冲液(10mM HEPES，pH 7.4，140mM NaCl，2mM CaCl2，1mM EGTA和0.005％Tween-20)，通过例如表面等离子共振分析(Biacore，Sweden)测定配体例如小有机分子、肽或可溶性蛋白质与固定的蛋白质的直接结合。使用如提供商所描述的NHS/EDC法激活来自Biacore的生物传感器(CM5，目录号BR-1000-14)，然后用选蛋白或SorCS2包被所述传感器。可应用几种不同的方法：可通过比较对固定有受体之一的芯片的结合信号(反应单位)和比较对空流动池的该信号来鉴定候选试剂。在另一个方法中，可在假定的抑制剂不存在或存在的情况下监控已确定的配体的抑制。信号的差异描述了拮抗剂的抑制电位。通过使用Biaevaluation 3.1版的程序拟合亲和力估计和抑制电位的传感图来分析收集的数据。可容易地将表面等离子共振测定转化成其中Vps10p-结构域受体、配体或假定的抑制剂被固定在固相上的其他测定中。例如，可通过在4℃下于50mM NaHCO3，pH 9.6中温育16小时来将受体固定在例如来自Nunc(目录号439454)的Maxisorp微量滴定孔中。在使用5％牛血清白蛋白(Sigma，目录号A9647)在室温下封闭2小时后，用MB缓冲液(10mM HEPES，pH 7.4，140mM NaCl，220mM CaCl2和1mM MgCl2)洗涤孔3次，然后在不同浓度的候选抑制剂不存在或存在的情况下与标记的配体(例如碘化的)一起温育。在温育(例如，4℃下过夜)和用MB缓冲液洗涤后，通过加入10％SDS来释放结合放射性。
测定示踪剂对只包被有牛血清白蛋白的孔的非特异性结合，然后将其从结合试验中测定的值中扣除。可使用来自GraphPad，第4版的Prism软件使结合数据点与结合方程拟合。同样地，可标记拮抗剂并且直接测量对固定的受体的结合。在另一个设置中，可将受体、配体或拮抗剂固定在闪烁珠上，并在其中已用放射性标记受体-结合分子的闪烁迫近分析法中测量结合。此类方法可用于筛选抑制proBDNF但非成熟BDNF与SorCS2结合的配体。类似地，此类方法可用于筛选抑制成熟BDNF但非proBDNF与SorCS2结合的其他配体。
测定示踪剂对只包被有牛血清白蛋白的孔的非特异性结合，然后将其从结合试验中测定的值中扣除。可使用来自GraphPad，第4版的Prism软件使结合数据点与结合方程拟合。同样地，可标记拮抗剂并且直接测量对固定的受体的结合。在另一个设置中，可将受体、配体或拮抗剂固定在闪烁珠上，并在其中已用放射性标记受体-结合分子的闪烁迫近分析法中测量结合。此类方法可用于筛选抑制proBDNF但非成熟BDNF与SorCS2结合的配体。类似地，此类方法可用于筛选抑制成熟BDNF但非proBDNF与SorCS2结合的其他配体。
[1024] 实施例8：用于鉴定能够抑制Vps10p-结构域受体的试剂的基于细胞的筛选方法[1025] 针对Vps10p-结构域：p75NTR:TrkB受体复合物的实体的拮抗剂可用作整个复合物的抑制剂。因此，其与能够结合例如Vps10p-结构域受体实体的试剂的筛选相关。这样的方法描述于本实施例中。可在细胞系统中测定通过由Vps10p结构域受体家族的成员进行的结合、内化或信号传导。分别在候选抑制剂/拮抗剂化合物不存在或存在的情况下将内源地或在例如用包含受体的cDNA的质粒转染后表达受体之一的细胞与放射性标记的配体一起温育。温育后，洗涤细胞以除去非特异性结合，然后收获细胞。候选拮抗剂/抑制剂与受体的结合程度通过使用本领域技术人员公知的常规放射配体测定法来测定。参见例如，Bylund和Toews(1993)Am J Physiol.265(5 Pt 1)：L421-9称为“Radioligand binding methods：practical guide and tips”。同样地，可如 等人(1992)FEBS 300：13-以及Nielsen等人(2001)EMBO J.，20：2180-中所述测定内吞作用/内化作用。
[1026] 实施例9：使用SorCS2-缺陷型小鼠或多克隆抗-SorCS2 IgG进行的海马突触可塑性的电生理学表征
[1027] 将SorCS2-/-小鼠回交至C57BL/6背景进行超过10代，将野生型C57BL/6小鼠用作对照。我们从野生型和年龄匹配的转基因小鼠(在P 17至P22之间)制备横向海马切片(400μm)。我们将切片维持在用95％O2和5％CO2起泡(bubbled)的贮藏室中。在至少2小时的回收期后，将切片移至暴露于95％O2和5％CO2的潮湿环境的界面室(interface chamber)，我们使用Axoclamp-2B放大器(Axon Instruments)，其具有置于海马区CA1的辐射层的充满人造脑脊髓液(ACSF；以mM计：126NaCl，2.5KCl，1.25NaH2PO4，2.5CaCl2，
1.3MgCl2，10D-葡萄糖)的玻璃微电极(10-15MΩ)，记录场兴奋性突触后电位(f-EPSP)。
在试验过程中，使切片充满加热至33℃的ACSF。我们在建立稳定的基线后施用低频刺激(LFS)。调整刺激强度以诱发约40％的最大值的f-EPSP。我们通过以1Hz的频率低频刺激
15分钟来诱导NMDA受体依赖性LTD。在WT海马切片中，LFS的施用诱导CA 1突触阻抑至基线水平的约80％。在年龄匹配的转基因SorCS2-/-小鼠中，NMDA受体依赖性LTD的诱导受损并且在LFS后30分钟突触传递的效率处于与基线相同的水平。为了验证SorCS2-缺陷型CA1突触的完整性，我们将多克隆抗SorCS2 IgG用于野生型海马切片，该应用消除LTD(图
4C)。
1.3MgCl2，10D-葡萄糖)的玻璃微电极(10-15MΩ)，记录场兴奋性突触后电位(f-EPSP)。
在试验过程中，使切片充满加热至33℃的ACSF。我们在建立稳定的基线后施用低频刺激(LFS)。调整刺激强度以诱发约40％的最大值的f-EPSP。我们通过以1Hz的频率低频刺激
15分钟来诱导NMDA受体依赖性LTD。在WT海马切片中，LFS的施用诱导CA 1突触阻抑至基线水平的约80％。在年龄匹配的转基因SorCS2-/-小鼠中，NMDA受体依赖性LTD的诱导受损并且在LFS后30分钟突触传递的效率处于与基线相同的水平。为了验证SorCS2-缺陷型CA1突触的完整性，我们将多克隆抗SorCS2 IgG用于野生型海马切片，该应用消除LTD(图
4C)。
[1028] 实施例10a：通过注射SorCS2拮抗剂体内电生理学表征应激动物中的海马长时程抑制
[1029] 使用之前描述的技术(Doyle，Holscher等人1996)将地锚和参照电极植入雄性Wistar大鼠200-300g。使用电生理标准将记录和刺激电极置于背侧海马的CA1区的辐射层中，通过尸体解剖进行验证。在手术后，将大鼠单个地安置(在笼子中)，具有12小时光照/黑暗周期和调温环境。在两周的恢复期中让大鼠在它们的笼中安静下来。接着，使用诱导轻度自然应激的方案：将大鼠从其笼中转移并且置于明亮的不熟悉的记录箱中。将在用能够穿过血脑屏障的低分子量SorCS2拮抗剂处理的大鼠中诱导长时程抑制(LTD)的能力与对照动物相比较。在将未经处理过的首次用于记录的大鼠在明亮的不熟悉的记录箱中首次放置后对它们施用低频刺激(LFS)方案40分钟。在对照组中，引发可靠的稳定的同源性突触LTD，然而用SorCS2拮抗剂处理的大鼠不能诱导LTD。
[1030] 实施例10b：用SorCS2拮抗剂处理抑郁症的动物模型
[1031] 在旷场和高架十字迷宫中测试应激和焦虑相关行为。通过使用慢性温和应激(CMS)方案，我们测试应激和焦虑相关行为在试验性抑郁症动物中是否被改变以及SorCS2拮抗剂是否可预防该疾病。将24只两月龄wistar大鼠分成两组。在整个应激方案过程中，一组用SorCS2拮抗剂处理，对照组注射Tween 80，3％NaCl。如(Moreau等人1994)所述，将两个组经历3周的应激方案。在CMS方案结束后立即在应激和焦虑相关行为旷场和高架十字迷宫试验中测试动物。
[1032] 实施例11：利用外源BDNF恢复选蛋白缺陷型小鼠中的神经元过度活跃
[1033] 检查3-4周龄野生型和选蛋白缺陷型小鼠的焦虑/抑郁症样行为的神经生理学体外关系。在新鲜350μm厚的脑切片中，在活组织中定量至海马颗粒细胞的抑制性GABA能突触输入。从WT、选蛋白和Sorcs2敲除(KO)小鼠的急性脑切片(acute brain slices)进行电生理学膜片钳记录。在深度异氟醚麻醉后，处死雄性小鼠，小心地解剖出大脑并且进行冷冻。在Vibratome 3000 Plus上切取350um厚的脑切片，在试验前(Drasbek和Jensen2006)将组织在O2/CO2起泡的林格溶液中静置至少1小时。在33℃下从齿状回的已鉴定的颗粒细胞的胞体(soma)进行全细胞膜片钳记录(Jensen和Mody 2001)。在阻断的谷氨酸能兴奋的条件下，GABA能活性表现为可用GABAA受体拮抗剂SR95531(100μM)阻断的自发抑制性突触后电流(sIPSCs)。对于每一个细胞，分析sIPSC的频率并且在将每一个试验组中的频率混合。在挽救试验中，将BDNF(脑源性神经营养因子，20ng/ml)充满脑切片至少5分钟，然后估计GABA能活性。在全细胞膜片钳记录中，选蛋白缺陷型小鼠显示从3.3±1.0Hz至6.7±1.6Hz的突触输入的自发活性的上调(上调103％)。随后，通过将外源脑源性神经营养因子(BDNF 20ng/ml)施用至组织浸浴液中来恢复选蛋白缺陷型小鼠脑切片中的病理生理学神经元活性(图8B)。
[1034] 实施例12：SorCS2活性的小分子刺激
[1035] SorCS2缺陷型小鼠在强迫游泳试验和糖偏爱试验(sucrose-preference-test)(Maguire和Mody 2008)中显示海马中的突触GABA能活动过度和抑郁症样行为。将刺激SorCS2活性的小分子配体用于使突触的活性恢复至正常水平。皮下注射10mg/kg体重的配体。随后行为分析显示在该处理中小鼠已从抑郁症样症状恢复。在处理过程中脑组织的体外分析也显示突触GABA能活性已恢复。基于这些动物试验，SorCS2特异性配体可进入治疗显示焦虑症和抑郁症的人的I期临床试验。
[1036] 实施例13：Vps10p结构域受体缺陷型或过表达型原代神经元细胞培养物中BDNF分泌的改变
[1037] 从Vps10p缺陷型或过表达型小鼠的脑制备原代神经元培养物。在出生后0-2天(P0-P2)，解剖出脑，离解细胞并且将其铺板。在体外2周的培养物成熟后，从单个神经元进行全细胞膜片钳记录。在阻断动作电位的TTX存在的情况下，神经元去极化，从而引发如2+
(Magby，Bi等人2006)中所述的BDNF的Ca 依赖性释放。小EPSC(mEPSC)的频率显示来自Vps10p缺陷型或过表达型神经元的改变的BDNF分泌。
(Magby，Bi等人2006)中所述的BDNF的Ca 依赖性释放。小EPSC(mEPSC)的频率显示来自Vps10p缺陷型或过表达型神经元的改变的BDNF分泌。
[1038] 实施例14：Vps10p结构域受体的拮抗剂/激动剂对原代神经元细胞培养物的BDNF分泌的调节
[1039] 从WT小鼠的脑制备原代神经元培养物。在出生后第0至2天(P0-P2)，切开脑，解离细胞，在Vps10p结构域受体的拮抗剂或激动剂存在或不存在的情况下将其铺板。在体外2周的培养物成熟后，从单个神经元进行全细胞膜片钳记录。在阻断动作电位的TTX存2+
在的情况下，神经元去极化，从而引发如(Magby，Bi等人2006)中所述的BDNF的Ca 依赖性释放。小EPSC(mEPSC)的频率显示用Vps10p结构域受体的激动剂或拮抗剂处理后来自Vps10p缺陷型或过表达型神经元的改变的BDNF分泌。
在的情况下，神经元去极化，从而引发如(Magby，Bi等人2006)中所述的BDNF的Ca 依赖性释放。小EPSC(mEPSC)的频率显示用Vps10p结构域受体的激动剂或拮抗剂处理后来自Vps10p缺陷型或过表达型神经元的改变的BDNF分泌。
[1040] 实施例15：神经元EEG活性和其通过体内Vps10p结构域受体拮抗剂/激动剂产生的恢复
[1041] 通过在海马中植入颅内EEG电极(Poisbeau，Williams等人1997)在WT成年小鼠或Vps10p结构域受体缺陷型或过表达型成年小鼠中进行体内电理学。在至少1周的术后恢复后，每天以相同的小时和以相似的环境条件进行EEG记录。收集4-8分钟长的电图记录，并且储存在计算机上。进行波谱分析以检查Vps10p缺陷型或过表达型小鼠中神经元活性的改变，已经评估Vps10p结构域受体拮抗剂/激动剂对神经元活性的体内调节。
[1042] 实施例16：SorCS2作为双相情感障碍的动物模型的用途
[1043] 目前的双相情感障碍动物模型重现了躁狂症或抑郁症的行为类似体(behavioral homologue)但非两者。在升高到高于地面40cm的高架十字迷宫中测试SorCS2-/-小鼠，该高架十字迷宫由两个相反的具有15cm高的不透明壁的闭臂和两个相反的具有相同大小(35x 5cm)的开臂组成。将高架十字迷宫设置在视频摄像机监测下的灯光昏暗的房间中，该视频摄像机与Any-maze跟踪系统控制下的计算机连接。对每一只小鼠进行10分钟的试验阶段并且测量进入次数和在开臂中花费的时间。测量的参数是在试验过程中行走的距离、不同区域之间线路交叉的总数、进入开臂次数的百分数(进入开臂次数/进入闭臂次数*100)以及在开臂中花费的时间的百分数。与对照野生型小鼠相比较，SorCS2-/-小鼠的所有这些参数都增加。该行为表型暗示着SorCS2-/-小鼠处于躁狂症状态。
[1044] 还在强迫游泳试验(用于啮齿类动物的抑郁症行为的良好描述的试验)中测试SorCS2-/-小鼠。使用的强迫游泳试验大体上与其他地方(Porsolt，Le Pichon等人1977)描述的强迫游泳试验相似。使小鼠单个落入装有20cm水的玻璃筒(高度：30cm，直径：15cm)，维持在23-25℃，并且保持在其中进行6分钟，同时使用数码视频摄像机记录它们的运动。当小鼠以直立位漂浮并且只进行少量运动来保持其头高出水面时，小鼠被判断为不动。在2分钟习惯后，在6分钟试验期的最后4分钟过程中记录不动的时间。与对照野生型小鼠相比较，SorCS2-/-小鼠不动经历的总时间大大增加，表明在这些试验情况下，SorCS2-/-小鼠处于抑郁症状态。
[1045] 这些发现鼓励了兴趣在于开发用于治疗双相情感障碍的改良药物试剂的制药公司使用SorCS2-/-小鼠作为用于测试潜在药物候选物的双相情感障碍的动物模型。将药物候选物以例如600mg/升的浓度混合在饮用水中，并且给予例如10天。对照小鼠给予正常水。然后在高架十字迷宫和强迫游泳试验中测试小鼠的行为。
[1046] 实施例17：可溶性选蛋白对突触可塑性的调节
[1047] 观察到通过对Schaffer侧支施用LFS(1Hz，15分钟)，导致选蛋白-/-海马CA1突触中不存在NMDA受体依赖性LTD。在wt海马CA1突触中，LFS诱导突触阻抑。通过在记录前与40ng/ml纯化的可溶性选蛋白一起温育至少1小时来挽救选蛋白-/-海马CA1突触中的NMDA受体依赖性LTD，如所指示的，所述可溶性选蛋白在整个试验过程中始终存在。将LFS(1Hz，15分钟)施用于Schaffer侧支。在与对照载体一起温育的选蛋白-/-海马切片中，LTD仍然受损(图3C)。
[1048] 实施例18：可溶性选蛋白用于治疗精神和行为障碍的应用
[1049] 在哺乳动物细胞培养物中大规模重组表达人选蛋白的可溶性结构域，随后利用例如免疫亲和层析进行纯化。将含有纯化的可溶性选蛋白的用于被动递送的设备通过手术植入患有精神和行为障碍的患者的大脑中。获得良好的效果并且患者开始终生治疗。
[1050] 实施例19：选蛋白与proBDNF的预形成的复合物用于治疗精神和行为障碍的应用[1051] 在哺乳动物细胞培养物中大规模重组表达人选蛋白的可溶性结构域，随后利用例如免疫亲和层析进行纯化。类似地，大规模表达和纯化proBDNF。将可溶性选蛋白和proBDNF一起温育以形成预形成的选蛋白：proBDNF复合物。将含有纯化的预形成的选蛋白：proBDNF的用于被动递送的装置通过手术转入患有精神和行为障碍的患者的大脑中。获得良好的效果并且患者开始终生治疗。
[1052] 实施例20：治疗方法
[1053] 得到的所开发的肽/多肽性质的活性剂(可能基于抗体的)被冷冻干燥以在使用前将其溶解或作为即可使用的溶液存在，以便其可被提供用于胃肠外施用途径(例如静脉内(I.V.)、肌内(I.M.)或皮下(S.C.))。固体剂型的粘膜应用也代表了在该情况下的可能性。
[1054] 如果得到的所开发的活性剂是化学性质的活性剂，那么制备例如用于口服施用以及潜在途径的制剂用于例如皮下或肌内用途。
[1055] 开发的药物可用于预防性目的或被长期提供用以长期治疗。在该情况下，活性剂干扰从而阻止导致精神和行为障碍的症状的分子事件过程发生。
[1056] 如果当时遗传试验经开发用以诊断易于发生精神和行为障碍的个体，可能应当将药物与这样的诊断结合使用。
[1057] 在发生精神和行为障碍后，利用药物的长期治疗代表了另一种可能性。原理通常是能够抑制导致疾病的症状的分子事件。
[1058] 最后可能将药物与精神和行为障碍的常规疗法(例如使用抗抑郁药和锂)一起共施用。
[1059] 实施例21：将受益于利用Vps10p-结构域受体激动剂/拮抗剂的治疗的精神病患者的鉴定
[1060] 通过酶联免疫吸附测定(ELISA)和/或通过遗传试验，就改变的神经营养因子和/或Vps10p-结构域受体水平分析通过分析遭受精神和行为障碍的患者的血液样品来鉴定患者。基于血液样品的分析，然后为患者开具Vps10p-结构域受体激动剂或拮抗剂的处方。
[1061] 实施例22：患有双相情感障碍的患者的治疗
[1062] 将患有严重双相情感障碍的27岁男性送入精神病医院住院。患者试图自杀并且受药物滥用的折磨。使用兔多克隆SorCS2抗体用于捕获以及小鼠单克隆抗体然后使用缀合有辣根过氧化物酶的猪抗小鼠第二抗体(DAKO，P0260)用于检测，通过ELISA来分析患者的血液样品。分析显示患者具有降低的SorCS2水平。然后为患者开具将要口服施用的SorCS2激动剂的处方。
[1063] 实施例23：患有焦虑症和抑郁症的患者的治疗
[1064] 35岁的男性患有焦虑症和抑郁症，并且利用ELISA对组织样品的分析显示低水平的BDNF。然后给患者施用将要口服施用的选蛋白拮抗剂。
[1065] 实施例24：使用活细胞电生理学或成像筛选细胞系中表达的Vps10p受体的调节[1066] 从Vps10p缺陷型或过表达型小鼠的脑制备原代培养物。在出生后0-2天(P0-P2)，解剖出脑，分离细胞并且将其铺板。在体外2周的培养物成熟后，从单个神经元进行全细胞2+
膜片钳记录。在阻断动作电位的TTX存在的情况下，神经元去极化，从而引发BDNF的Ca依赖性释放(Plummer等人2006)。小EPSC(mEPSC)的频率显示来自Vps10p缺陷型或过表达型神经元的改变的BDNF分泌。
膜片钳记录。在阻断动作电位的TTX存在的情况下，神经元去极化，从而引发BDNF的Ca依赖性释放(Plummer等人2006)。小EPSC(mEPSC)的频率显示来自Vps10p缺陷型或过表达型神经元的改变的BDNF分泌。
[1067] 实施例25：原代细胞培养物的神经元。来自其中就Vps10p受体的调节筛选配体的野生型小鼠的单个神经元的电生理记录。来自Vps10p受体缺陷型或过表达的小鼠的原代培养物中的单个神经元的电生理记录，以检查神经元兴奋性、突触功能和突触可塑性(Plummer等人2006)。
[1068] 通过将颅内EEG电极植入海马来在Vps10p缺陷型或过表达型成年小鼠中进行体内电生理学(Poisbeau等人(1997)J.Neurosci.17(10)：3467-75)。在至少1周的术后恢复后，在相同的小时和在相似的环境条件中每日进行EEG记录。收集4至8分钟长的电图记录(electrographic recording)并且将其存储在计算机上。进行波谱分析以检查Vps10p缺陷型或过表达型小鼠中神经元活性的改变和体内评估Vps10p受体配体对神经元活性的调节。
[1069] 用于鉴定本发明的试剂的其他电生理筛选方法是：
[1070] 脑片-用以检查神经元兴奋性、突触功能和突触可塑性的来自Vps10p受体缺陷型或过表达型小鼠的脑的切片中神经元的细胞内电生理记录。用以检查神经元兴奋性、突触功能和突触可塑性的来自Vps10p受体缺陷或过表达小鼠的脑的细胞外电生理记录。
[1071] 体内电生理学-使用颅内植入的电极记录Vps10p受体的药理调节和检查Vps10p受体缺陷型或过表达型小鼠的神经元活性的EEG记录(Poisbeau等人(1997)
J.Neurosci.17(10)：3467-75)。
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[1159] 序列表
[1160] SEQ ID NO 1：智人选蛋白
[1161] Swiss Prot主登录号：Q99523
[1162] 次级登录号：Q8IZ49
[1163] MERPWGAADGLSRWPHGLGLLLLLQLLPPSTLSQDRLDAPPPPAAPLPRWSGPIGV
[1164] SWGLRAAAAGGAFPRGGRWRRSAPGEDEECGRVRDFVAKLANNTHQHVFDDLRG
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[1169] TWSMAQLPSVGQEQFYSILAANDDMVFMHVDEPGDTGFGTIFTSDDRGIVYSKSL
[1170] DRHLYTTTGGETDFTNVTSLRGVYITSVLSEDNSIQTMITFDQGGRWTHLRKPENSE
[1171] CDATAKNKNECSLHIHASYSISQKLNVPMAPLSEPNAVGIVIAHGSVGDAISVMVPD
[1172] VYISDDGGYSWTKMLEGPHYYTILDSGGIIVAIEHSSRPINVIKFSTDEGQCWQTYTF
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[1177] HRYSVLQQHAEANGVDGVDALDTASHTNKSGYHDDSDEDLLE
[1178] SEQ ID NO 2：智人SorLA多肽
[1179] Swiss Prot主登录号：Q92673
[1180] 次级登录号：Q92856
[1181] MATRSSRRESRLPFLFTLVALLPPGALCEVWTQRLHGGSAPLPQDRGFLVVQGDPR
[1182] ELRLWARGDARGASRADEKPLRRKRSAALQPEPIKVYGQVSLNDSHNQMVVHWA
[1183] GEKSNVIVALARDSLALARPKSSDVYVSYDYGKSFKKISDKLNFGLGNRSEAVIAQF
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[1185] SHPNKQLWKSDDFGQTWIMIQEHVKSFSWGIDPYDKPNTIYIERHEPSGYSTVFRST
[1186] DFFQSRENQEVILEEVRDFQLRDKYMFATKVVHLLGSEQQSSVQLWVSFGRKPMR
[1187] AAQFVTRHPINEYYIADASEDQVFVCVSHSNNRTNLYISEAEGLKFSLSLENVLYYS
[1188] PGGAGSDTLVRYFANEPFADFHRVEGLQGVYIATLINGSMNEENMRSVITFDKGGT
[1189] WEFLQAPAFTGYGEKINCELSQGCSLHLAQRLSQLLNLQLRRMPILSKESAPGLIIAT
[1190] GSVGKNLASKTNVYISSSAGARWREALPGPHYYTWGDHGGIITAIAQGMETNELK
[1191] YSTNEGETWKTFIFSEKPVFVYGLLTEPGEKSTVFTIFGSNKENVHSWLILQVNATD
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[1200] QGYQLKNNTCVKEENTCLRNQYRCSNGNCINSIWWCDFDNDCGDMSDERNCPTTI
[1201] CDLDTQFRCQESGTCIPLSYKCDLEDDCGDNSDESHCEMHQCRSDEYNCS SGMCIR
[1202] SSWVCDGDNDCRDWSDEANCTAIYHTCEASNFQCRNGHCIPQRWACDGDTDCQD
[1203] GSDEDPVNCEKKCNGFRCPNGTCIPSSKHCDGLRDCSDGSDEQHCEPLCTHFMDFV
[1204] CKNRQQCLFHSMVCDGIIQCRDGSDEDAAFAGCSQDPEFHKVCDEFGFQCQNGVC
[1205] ISLIWKCDGMDDCGDYSDEANCENPTEAPNCSRYFQFRCENGH
[1206] CIPNRWKCDRENDCGDWSDEKDCGDSHILPFSTPGPSTCLPNYYRCSSGTCVMDT
[1207] WVCDGYRDCADGSDEEACPLLANVTAASTPTQLGRCDRFEFECHQPKTCIPNWKR
[1208] CDGHQDCQDGRDEANCPTHSTLTCMSREFQCEDGEACIVLSERCDGFLDCSDESDE
[1209] KACSDELTVYKVQNLQWTADFSGDVTLTWMRPKKMPSASCVYNVYYRVVGESIW
[1210] KTLETHSNKTNTVLKVLKPDTTYQVKVQVQCLSKAHNTNDFVTLRTPEGLPDAPR
[1211] NLQLSLPREAEGVIVGHWAPPIHTHGLIREYIVEYSRSGSKMWASQRAASNFTEIKN
[1212] LLVNTLYTVRVAAVTSRGIGNWSDSKSITTIKGKVIPPPDIHIDSYGENYLSFTLTMES
[1213] DIKVNGYVVNLFWAFDTHKQERRTLNFRGSILSHKVGNLTAHTSYEISAWAKTDLG
[1214] DSPLAFEHVMTRGVRPPAPSLKAKAINQTAVECTWTGPRNVVYGIFYATSFLDLYRN
[1215] PKSLTTSLHNKTVIVSKDEQYLFLVRVVVPYQGPSSDYVVVKMIPDSRLPPRHLHV
[1216] VHTGKTSVVIKWESPYDSPDQDLLYAIAVKDLIRKTDRSYKVKSRNSTVEYTLNKL
[1217] EPGGKYHIIVQLGNMSKDSSIKITTVSLSAPDALKIITENDHVLLFWKSLALKEKHF
[1218] NESRGYEIHMFDSAMNITAYLGNTTDNFFKISNLKMGHNYTFTVQARCLFGNQICG
[1219] EPAILLYDELGSGADASATQAARSTDVAAVVVPILFLILLSLGVGFAILYTKHRRLQS
[1220] SFTAFANSHYSSRLGSAIFSSGDDLGEDDEDAPMITGFSDDVPMVIA
[1221] SEQ ID NO 3：智人SorCS1
[1222] Swiss Prot主级登录号：Q8WY21
[1223] 次级登录号：Q59GG7 Q5JVT7 Q5JVT8 Q5VY14 Q86WQ1 Q86WQ2 Q9H1Y1 Q9H1Y2[1224] MGKVGAGGGSQARLSALLAGAGLLILCAPGVCGGGSCCPSPHPSSAPRSASTPRGF
[1225] SHQGRPGRAPATPLPLVVRPLFSVAPGDRALSLERARGTGASMAVAARSGRRRRSG
[1226] ADQEKAERGEGASRSPRGVLRDGGQQEPGTRERDPDKATRFRMEELRLTSTTFALT
[1227] GDSAHNQAMVHWSGHNSSVILILTKLYDYNLGSITESSLWRSTDYGTTYEKLNDKV
[1228] GLKTILSYLYVCPTNKRKIMLLTDPEIESSLLISSDEGATYQKYRLNFYIQSLLFHPKQ
[1229] EDWILAYSQDQKLYSSAEFGRRWQLIQEGVVPNRFYWSVMGSNKEPDLVHLEART
[1230] VDGHSHYLTCRMQNCTEANRNQPFPGYIDPDSLIVQDHYVFVQLTSGGRPHYYVS
[1231] YRRNAFAQMKLPKYALPKDMHVISTDENQVFAAVQEWNQNDTYNLYISDTRGVYF
[1232] TLALENVQSSRGPEGNIMIDLYEVAGIKGMFLANKKIDNQVKTFITYNKGRDWRLL
[1233] QAPDTDLRGDPVHCLLPYCSLHLHLKVSENPYTSGIIASKDTAPSIIVASGNIGSELSD
[1234] TDISMFVSSDAGNTWRQIFEEEHSVLYLDQGGVLVAMKHTSLPIRHLWLSFDEGRS
[1235] WSKYSFTSIPLFVDGVLGEPGEETLIMTVFGHFSHRSEWQLVKVDYKSIFDRRCAEE
[1236] DYRPWQLHSQGEACIMGAKRIYKKRKSERKCMQGKYAGAMESEPCVCTEADFDC
[1237] DYGYERHSNGQCLPAFWFNPSSLSKDCSLGQSYLNSTGYRKVVSNNCTDGVREQY
[1238] TAKPQKCPGKAPRGLRIVTADGKLTAEQGHNVTLMVQLEEGDVQRTLIQVDFGDGI
[1239] AVSYVNLSSMEDGIKHVYQNVGIFRVTVQVDNSLGSDSAVLYLHVTCPLEHVHLSL
[1240] PFVTTKNKEVNATAVLWPSQVGTLTYVWWYGNNTEPLITLEGSISFRFTSEGMNTIT
[1241] VQVSAGNAILQDTKTIAVYEEFRSLRLSFSPNLDDYNPDIPEWRRDIGRVIKKSLVEA
[1242] TGVPGQHILVAVLPGLPTTAELFVLPYQDPAGENKRSTDDLEQISELLIHTLNQNSVH
[1243] FELKPGVRVLVHAAHLTAAPLVDLTPTHSGSAMLMLLSVVFVGLAVFVIYKFKRRV
[1244] ALPSPPSPSTQPGDSSLRLQRARHATPPSTPKRGSAGAQYAI
[1245] SEQ ID NO 4：智人SorCS2
[1246] Swiss Prot主登录号：Q96PQ0
[1247] 次级登录号：Q9P2L7
[1248] MAHRGPSRASKGPGPTARAPSPGAPPPPRSPRSRPLLLLLLLLGACGAAGRSPEPGR
[1249] LGPHAQLTRVPRSPPAGRAEPGGGEDRQARGTEPGAPGPSPGPAPGPGEDGAPAAG
[1250] YRRWERAAPLAGVASRAQVSLISTSFVLKGDATHNQAMVHWTGENSSVILILTKYY
[1251] HADMGKVLESSLWRSSDFGTSYTKLTLQPGVTTVIDNFYICPTNKRKVILVSSSLSD
[1252] RDQSLFLSADEGATFQKQPIPFFVETLIFHPKEEDKVLAYTKESKLYVSSDLGKKWT
[1253] LLQERVTKDHVFWSVSGVDADPDLVHVEAQDLGGDFRYVTCAIHNCSEKMLTAPF
[1254] AGPIDHGSLTVQDDYIFFKATSANQTKYYVSYRRNEFVLMKLPKYALPKDLQIISTD
[1255] ESQVFVAVQEWYQMDTYNLYQSDPRGVRYALVLQDVRSSRQAEESVLIDILEVRGV
[1256] KGVFLANQKIDGKVMTLITYNKGRDWDYLRPP SMDMNGKPTNCKPPDCHLHLHL
[1257] RWADNPYVSGTVHTKDTAPGLIMGAGNLGSQLVEYKEEMYITSDCGHTWRQVFEE
[1258] EHHILYLDHGGVIVAIKDTSIPLKILKFSVDEGLTWSTHNFTSTSVFVDGLLSEPGDE
[1259] TLVMTVFGHISFRSDWELVKVDFRPSFSRQCGEEDYSSWELSNLQGDRCIMGQQRS
[1260] FRKRKSTSWCIKGRSFTSALTSRVCECRDSDFLCDYGFERSPSSESSTNKCSANFWF
[1261] NPLSPPDDCALGQTYTSSLGYRKVVSNVCEGGVDMQQSQVQLQCPLTPPRGLQVSI
[1262] QGEAVAVRPGEDVLFVVRQEQGDVLTTKYQVDLGDGFKAMYVNLTLTGEPIRHRY
[1263] ESPGIYRVSVRAENTAGHDEAVLFVQVNSPLQALYLEVVPVIGLNQEVNLAVLLPL
[1264] NPNLTVFYWWIGHSLQPLLSLDNSVTTRFSDTGDVRVTVQAACGNSVLQDSRVLR
[1265] VLDQFQVMPLQFSKELDAYNPNTPEWREDVGLVVTRLLSKETSVPQELLVTVVKP
[1266] GLPTLADLYVLLPPPRPTRKRSLSSDKRLAAIQQVLNAQKISFLLRGGVRVLVALRD
[1267] TGTGAEQLGGGGGYWAVVVLFVIGLFAAGAFILYKFKRKRPGRTVYAQMHNEKEQ
[1268] EMTSPVSHSEDVQGAVQGNHSGVVLSINSREMHSYLVS
[1269] SEQ ID NO 5：智人SorCS3
[1270] Swiss Prot主登录号：Q9UPU3
[1271] 次级登录号：Q5VXF9Q9NQJ2
[1272] MEAARTERPAGRPGAPLVRTGLLLLSTWVLAGAEITWDATGGPGRPAAPASRPPAL
[1273] SPLSPRAVASQWPEELASARRAAVLGRRAGPELLPQQGGGRGGEMQVEAGGTSPA
[1274] GERRGRGIPAPAKLGGARRSRRAQPPITQERGDAWATAPADGSRGSRPLAKGSREEV
[1275] KAPRAGGSAAEDLRLPSTSFALTGDSAHNQAMVHWSGHNSSVILILTKLYDFNLGS
[1276] VTESSLWRSTDYGTTYEKLNDKVGLKTVLSYLYVNPTNKRKIMLLSDPEMESSILIS
[1277] SDEGATYQKYRLTFYIQSLLFHPKQEDWVLAYSLDQKLYSSMDFGRRWQLMHERIT
[1278] PNRFYWSVAGLDKEADLVHMEVRTTDGYAHYLTCRIQECAETTRSGPFARSIDIS SL
[1279] VVQDEYIFIQVTTSGRASYYVSYRREAFAQIKLPKYSLPKDMHIISTDENQVFAAVQ
[1280] EWNQNDTYNLYISDTRGIYFTLAMENIKSSRGLMGNIIIELYEVAGIKGIFLANKKVD
[1281] DQVKTYITYNKGRDWRLLQAPDVDLRGSPVHCLLPFCSLHLHLQLSENPYS SGRIS
[1282] SKETAPGLVVATGNIGPELSYTDIGVFIS SDGGNTWRQIFDEEYNVWFLDWGGALVA
[1283] MKHTPLPVRHLWVSFDEGHSWDKYGFTSVPLFVDGALVEAGMETHIMTVFGHFSL
[1284] RSEWQLVKVDYKSIFSRHCTKEDYQTWHLLNQGEPCVMGERKI
[1285] FKKRKPGAQCALGRDHSGSVVSEPCVCANWDFECDYGYERHGESQCVPAFWYNP
[1286] ASPSKD
[1287] CSLGQSYLNSTGYRRIVSNNCTDGLREKYTAKAQMCPGKAPRGLHVVTTDGRLVA
[1288] EQGHN
[1289] ATFIILMEEGDLQRTNIQLDFGDGIAVSYANFSPIEDGIKHVYKSAGIFQVTAYAENNL
[1290] G
[1291] SDTAVLFLHVVCPVEHVHLRVPFVAIRNKEVNISAVVWPSQLGTLTYFWWFGNSTK
[1292] PLIT
[1293] LDSSISFTFLAEGTDTITVQVAAGNALIQDTKEIAVHEYFQSQLLSFSPNLDYHNPDIP
[1294] E
[1295] WRKDIGNVIKRALVKVTSVPEDQILIAVFPGLPTSAELFILPPKNLTERRKGNEGDLE
[1296] QI
[1297] VETLFNALNQNLVQFELKPGVQVIVYVTQLTLAPLVDSSAGHSSSAMLMLLSVVFV
[1298] GLAV
[1299] FLIYKFKRKIPWINIYAQVQHDKEQEMIGSVSQSENAPKITLSDFTEPEELLDKELDT
[1300] RV
[1301] IGGIATIANSESTKEIPNCTSV
[1302] SEQ ID NO 6：智人前BDNF原多肽(pre-pro-BDNF polypeptide)
[1303] Swiss-Prot主登录号：P23560
[1304] MTILFLTMVISYFGCMKAAPMKEANIRGQGGLAYPGVRTHGTLESVNGPKAGSRGL
[1305] TSLADTFEHVIEELLDEDQKVRPNEENNKDADLYTSRVMLSSQVPLEPPLLFLLEEY
[1306] KNYLDAANMSMRVRRHSDPARRGELSVCDSISEWVTAADKKTAVDMSGGTVTVL
[1307] EKVPVSKGQLKQYFYETKCNPMGYTKEGCRGIDKRHWNSQCRTTQSYVRALTMD
[1308] SKKRIGWRFIRIDTSCVCTLTIKRGR
[1309] SEQ ID NO 7：智人TrkA
[1310] Swiss Prot主登录号P04629
[1311] 次级登录号P08119 Q15655 Q15656 Q5D056 Q5VZS2 Q7Z5C3 Q9UIU7
[1312] MLRGGRRGQLGWHSWAAGPGSLLAWLILASAGAAPCPDACCPHGSSGLRCTRDG
[1313] ALD SLHHLPGAENLTELYIENQQHLQHLELRDLRGLGELRNLTIVKSGLRFVAPDAF
[1314] HFTPRLSRLNLSFNALESLSWKTVQGLSLQELVLSGNPLHCSCALRWLQRWEEEGL
[1315] GGVPEQKLQCHGQGPLAHMPNASCGVPTLKVQVPNASVDVGDDVLLRCQVEGRG
[1316] LEQAGWILTELEQSATVMKSGGLPSLGLTLANVTSDLNRKNVTCWAENDVGRAEV
[1317] SVQVNVSFPASVQLHTAVEMHHWCIPFSVDGQPAPSLRWLFNGSVLNETSFIFTEFL
[1318] EPAANETVRHGCLRLNQPTHVNNGNYTLLAANPFGQASASIMAAFMDNPFEFNPE
[1319] DPIPVSFSPVDTNSTSGDPVEKKDETPFGVSVAVGLAVFACLFLSTLLLVLNKCGRRN
[1320] KFGINRPAVLAPEDGLAMSLHFMTLGGSSLSPTEGKGSGLQGHIIENPQYFSDACVH
[1321] HIKRRDIVLKWELGEGAFGKVFLAECHNLLPEQDKMLVAVKALKEASES ARQDFQ
[1322] REAELLTMLQHQHIVRFFGVCTEGRPLLMVFEYMRHGDLNRF
[1323] LRSHGPDAKLLAGGEDVAPGPLGLGQLLAVASQVAAGMVYLAGLHFVHRDLATRN
[1324] CLVGQGLVVKIGDFGMSRDIYSTDYYRVGGRTMLPIRWMPPESILYRKFTTESDVW
[1325] SFGVVLWEIFTYGKQPWYQLSNTEAIDCITQGRELERPRACPPEVYAIMRGCWQRE
[1326] PQQRHSIKDVHARLQALAQAPPVYLDVLG
[1327] SEQ ID NO 8：智人TrkB
[1328] Swiss Prot主登录号Q16620
[1329] 次级登录号Q16675 Q8WXJ6
[1330] MSSWIRWHGPAMARLWGFCWLVVGFWRAAFACPTSCKCSASRIWCSDPSPGIVAF
[1331] PRLEPNSVDPENITEIFIANQKRLEIINEDDVEAYVGLRNLTIVDSGLKFVAHKAFLK
[1332] NSNLQHINFTRNKLTSLSRKHFRHLDLSELILVGNPFTCSCDIMWIKTLQEAKSSPDT
[1333] QDLYCLNESSKNIPLANLQIPNCGLPSANLAAPNLTVEEGKSITLSCSVAGDPVPNM
[1334] YWDVGNLVSKHMNETSHTQGSLRITNISSDDSGKQISCVAENLVGEDQDSVNLTVH
[1335] FAPTITFLESPTSDHHWCIPFTVKGNPKPALQWFYNGAILNESKYICTKIHVTNHTEY
[1336] HGCLQLDNPTHMNNGDYTLIAKNEYGKDEKQISAHFMGWPGIDDGANPNYPDVIY
[1337] EDYGTAANDIGDTTNRSNEIPSTDVTDKTGREHLSVYAVVVIASVVGFCLLVMLFLL
[1338] KLARHSKFGMKGPASVISNDDDSASPLHHISNGSNTPSSSEGGPDAVIIGMTKIPVIE
[1339] NPQYFGITNSQLKPDTFVQHIKRHNIVLKRELGEGAFGKVFLAECYNLCPEQDKILV
[1340] AVKTLKDASDNARKDFHREAELLTNLQHEHIVKFYGVCVEGDPLIMVFEYMKHGD
[1341] LNKFLRAHGPDAVLMAEGNPPTELTQSQMLHIAQQIAAGMVYLASQHFVHRDLAT
[1342] RNCLVGENLLVKIGDFGMSRDVYSTDYYRVGGHTMLPIRWMPPESIMYRKFTTESD
[1343] VWSLGVVLWEIFTYGKQPWYQLSNNEVIECITQGRVLQRPRTCPQEVYELMLGCW
[1344] QREPHMRKNIKGIHTLLQNLAKASPVYLDILG
[1345] SEQ ID NO 9：智人TrkC
[1346] Swiss Prot主登录号Q16288
[1347] 次级登录号O75682 Q12827 Q16289
[1348] MDVSLCPAKCSFWRIFLLGSVWLDYVGSVLACPANCVCSKTEINCRRPDDGNLFPL
[1349] LEGQDSGNSNGNASINITDISRNITSIHIENWRSLHTLNAVDMELYTGLQKLTIKNSG
[1350] LRSIQPRAFAKNPHLRYINLSSNRLTTLSWQLFQTLSLRELQLEQNFFNCSCDIRWM
[1351] QLWQEQGEAKLNSQNLYCINADGSQLPLFRMNISQCDLPEISVSHVNLTVREGDNA
[1352] VITCNGSGSPLPDVDWIVTGLQSINTHQTNLNWTNVHAINLTLVNVTSEDNGFTLTC
[1353] IAENVVGMSNASVALTVYYPPRVVSLEEPELRLEHCIEFVVRGNPPPTLHWLHNGQ
[1354] PLRESKIIHVEYYQEGEISEGCLLFNKPTHYNNGNYTLIAKNPLGTANQTINGHFLKE
[1355] PFPESTDNFILFDEVSPTPPITVTHKPEEDTFGVSIAVGLAAFACVLLVVLFVMINKY
[1356] GRRSKFGMKGPVAVISGEEDSASPLHHINHGITTPSSLDAGPDTVVIGMTRIPVIENP
[1357] QYFRQGHNCHKPDTYVQHIKRRDIVLKRELGEGAFGKVFLAECYNLSPTKDKMLV
[1358] AVKALKDPTLAARKDFQREAELLTNLQHEHIVKFYGVCGDGDPLIMVFEYMKHGD
[1359] LNKFLRAHGPDAMILVDGQPRQAKGELGLSQMLHIASQIASGMVYLASQHFVHRD
[1360] LATRNCLVGANLLVKIGDFGMSRDVYSTDYYRLFNPSGNDFCIWCEVGGHTMLPIR
[1361] WMPPESIMYRKFTTESDVWSFGVILWEIFTYGKQPWFQLSNTEVIECITQGRVLERP
[1362] RVCPKEVYDVMLGCWQREPQQRLNIKEIYKILHALGKATPIYLDILG
[1363] SEQ ID NO 10：智人p75NTR
[1364] Swiss Prot P08138
[1365] MGAGATGRAMDGPRLLLLLLLGVSLGGAKEACPTGLYTHSGECCKACNLGEGVA
[1366] QPCGANQTVCEPCLDSVTFSDVVSATEPCKPCTECVGLQSMSAPCVEADDAVCRCA
[1367] YGYYQDETTGRCEACRVCEAGSGLVFSCQDKQNTVCEECPDGTYSDEANHVDPCL
[1368] PCTVCEDTERQLRECTRWADAECEEIPGRWITRSTPPEGSDSTAPSTQEPEAPPEQDL
[1369] IASTVAGVVTTVMGSSQPVVTRGTTDNLIPVYCSILAAVVVGLVAYIAFKRWNSCKQ
[1370] NKQGANSRPVNQTPPPEGEKLHSDSGISVDSQSLHDQQPHTQTASGQALKGDGGLY
[1371] SSLPPAKREEVEKLLNGSAGDTWRHLAGELGYQPEHIDSFTHEACPVRALLASWAT
[1372] QDSATLDALLAALRRIQRADLVESLCSESTATSPV
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