核激素受体(NHR)构成一个大的配体依赖性和序列特异性转录因 子的超家族。该家族的成员或者通过与启动子靶基因特异性结合而直 接影响转录(Evans，Science 240：889-895(1988))，或者通过与其它转录 因子的蛋白-蛋白相互作用而间接影响转录(Jonat等， Cell 62：1189-1204 (1990)，Schuele等， Cell 62：1217-1226(1990)，和Yang-Yen等， Cell 62： 1205-1215(1990))。核激素受体超家族(在本领域中也称为“类固醇/甲 状腺激素受体超家族”)包括各种各样的疏水性配体包括皮质醇、醛固 酮、雌激素、孕酮、睾酮、维生素D3、甲状腺激素和视黄酸的受体(Evans， 1988，参见上文)。除这些常规核激素受体之外，该超家族有大量的配 体未知的蛋白质，称为孤独核激素受体(Mangelsdorf等， Cell 83：835- 839(1995)，O′Malley等， Mol.Endocrinol. 10：1293(1996)，Enmark等， Mol.Endocrinol. 10，1293-1307(1996)和Giguere， Endocrin.Rev. 20， 689-725(1999))。所述常规核激素受体在有配体时一般是反式激活蛋 白，而在无配体时可以或者是活性阻抑蛋白，或者在转录上为惰性的。 某些孤独受体的行为如同它们在无配体时在转录上是惰性的。然而， 其它孤独受体的行为或者是组成型激活蛋白或者是阻抑蛋白。这些孤 独核激素受体或者处于尚未被鉴定的遍在配体的控制之下，或者不需 要结合来发挥其活性。
与其它转录因子一样，核激素受体具有模块结构，所述模块结构 由三个不同的结构域构成：含有转录激活功能AF-1的大小可变的N 末端结构域、高度保守的DNA结合结构域和中等保守的配体结合结构 域。所述配体结合结构域不仅负责结合特异性配体，而且含有称为 AF-2的转录激活功能和二聚化结构域(Wurtz等， Nature Struc.Biol. 3， 87-94(1996)，Parker等， Nature Struc.Biol. 3，113-115(1996)和Kumar 等， Steroids  64，310-319(1999))。虽然这些受体的总体蛋白质序列可以 有相当大的变化，但所有的序列在所述配体结合结构域都享有表现出 从一个祖先原始型趋异的共同结构排列和基本同源性(尤其是序列同 一性)。
类固醇结合核激素受体(SB-NHR)构成一个核激素受体亚家族。这 些受体是相关的，因为与NHR超家族的其它成员相比，它们相互之间 享有较强的序列同源性，特别是在配体结合结构域(LBD)中(Evans， 1988，参见上文)，并且它们都利用基于类固醇的配体。NHR的该亚家 族的某些例子是雄激素受体(AR)、雌激素受体(ER)、孕酮受体(PR)、 糖皮质激素受体(GR)、盐皮质激素受体(MR)、醛固酮受体(ALDR)以及 类固醇异生素受体(SXR)(Evans等，WO99/35246)。根据LBD中的强 序列同源性，几种孤独受体也可能是SB-NHR亚家族的成员。
与每种SB-NHR在LBD中存在高序列同源性一致，每种SB-NHR 的天然配体来源于一种共同类固醇核心。SB-NHR成员所利用的某些 基于类固醇的配体的例子包括皮质醇、醛固酮、雌激素、孕酮、睾酮 和二氢睾酮。一种SB-NHR相对于另一种SB-NHR的特定基于类固醇 配体的特异性通过在所述类固醇核心周围的差别取代而获得。与对特 定SB-NHR的高水平特异性相关联的、与该特定SB-NHR结合的高亲 和性结合，可以通过在类固醇核心周围仅进行较小的结构变化而获得 (例如Waller等， Toxicol.Appl.Pharmacol. 137，219-227(1996)和 Mekenyan等， Environ.Sci.Technol. 31，3702-3711(1997)，与睾酮相 比，孕酮对雄激素受体有结合亲和性)。
关于SB-NHR家族成员，已经描述了数目众多的合成来源的类固 醇和非类固醇激动剂和拮抗剂。这些激动配体和拮抗配体中的许多在 临床中用于雄性中，以治疗各种各样的疾病。RU486是PR合成激动 剂的例子，用作避孕药(Vegeto等， Cell  69：703-713(1992))，而氟他胺 是AR拮抗剂的例子，用于治疗前列腺癌(Neri等， Endo. 91，427-437 (1972))。他莫昔芬是ER功能的组织特异性调节剂的例子，用于治疗 乳癌(Smigel， J.Natl.Cancer Inst. 90，647-648(1998))。他莫昔芬在乳房 组织中可以作为ER的拮抗剂起作用，而在骨中可以作为ER的激动剂 起作用(Grese等， Proc.Natl.Acad.Sci.USA 94，14105-14110(1997))。因 为观察到他莫昔芬的组织选择性效应，所以这种药物和与其类似的药 物被称为“部分激动剂”或“部分拮抗剂”。除合成来源的非内源性 配体之外，从食物来源可以获得NHR的非内源性配体(Regal等， Proc. Soc.Exp.Biol.Med.223，372-378(2000)和Hempstock等， J.Med.Food2， 267-269(1999))。黄酮类化合物植物雌激素是SB-NHR的非天然配体 的例子，它们可以从食物来源例如大豆容易地获得(Quella等， J.Clin. Oncol.18，1068-1074(2000)和Banz等， J.Med Food2，271-273 (1999))。通过加入小分子配体调节各种NHR的转录活性的能力，使得 它们成为开发用于各种各样病状的药物的理想的靶。
如上所述，可以对非天然配体进行合成工程改造，以用作NHR 功能的调节剂。就SB-NHR而言，非天然配体的工程改造可以包括鉴 定模拟天然类固醇核心系统的核心结构。这可以通过用可得到的各种 各样NHR配体结合结构域的晶体结构来针对几种SB-NHR进行随机 筛选或者通过多种定向途径来达到(Bourguet等， Nature 375，377-382 (1995)，Brzozowski等， Nature 389，753-758(1997)，Shiau等， Cell 95， 927-937(1998)和Tanenbaum等， Proc.Natl.Acad.Sci.USA 95，5998- 6003(1998))。在这样一种类固醇模拟核心周围的差别取代，可以提供 对一种受体的选择性优于对另一种受体的药物。另外，这类修饰可以 用来获得对特定SB-NHR具有激动剂活性或者拮抗剂活性的药物。在 所述类固醇模拟核心周围的差别取代，可能导致形成一系列对于例如 ER对PR对AR对GR对MR的特异性的高亲和性激动剂和拮抗剂。
这样一种差别取代的途径已经在例如以下文献中在类固醇NHR的基 于喹啉的调节剂方面有报道： J.Med.Chem.，41，623(1999)；WO 9749709；US 5696133；US 5696130；US 5696127；US 5693647；US 5693646；US 5688810；US 5688808和WO 9619458，所述文献都通过引 用结合到本文中。
本发明的化合物包含一个用作类固醇模拟物的核心，并且可用作 类固醇结合核激素受体功能以及下述的其它NHR功能的调节剂。
发明概述
本发明提供以下式I的稠环化合物及其盐，所述化合物尤其可用 作核激素受体功能的调节剂：

当用于式I和整个说明书中时，所述符号具有以下含义，除非另有说 明，并且每次出现时独立地选自：
G为芳基或杂环基(例如杂芳基)，其中所述基团为单环或多环，并且所 述基团可任选地在一个或多个位置、优选被以下基团取代：氢、 烷基或取代的烷基、链烯基或取代的链烯基、链炔基或取代的链 炔基、卤代、环烷基或取代的环烷基、环烯基或取代的环烯基、 芳基或取代的芳基、杂环基或取代的杂环基、芳烷基或取代的芳 烷基、杂环基烷基或取代的杂环基烷基、CN、R1OC＝O、R1C＝O、 R1C＝S、R1HNC＝O、R1R2NC＝O、HOCR3R3’、硝基、R1OCH2、 R1O、NH2、NR4R5、SR1、S＝OR1、SO2R1、SO2OR1、SO2NR1R1’、 (R1O)(R1’O)P＝O、氧代、(R1)(R1’)P＝O或(R1’)(NHR1)P＝O；
Z1为O、S、NH或NR6；
Z2为O、S、NH或NR6；
A1为CR7或N；
A2为CR7或N；
Y为J-J’-J”，其中J为(CR7R7’)n，而n＝0-3，J’为一个键或O、S、S＝O、 SO2、NH、NR7、C＝O、OC＝O、NR1C＝O、CR7R7’、C＝CR8R8’、 R2P＝O、R2P＝S、R2OP＝O、R2NHP＝O、OP＝OOR2、OP＝ONHR2、 OP＝OR2、OSO2、C＝NR7、NHNH、NHNR6、NR6NH、N＝N、环 烷基或取代的环烷基、环烯基或取代的环烯基、杂环基或取代的 杂环基、或者芳基或取代的芳基，且J”为(CR7R7’)n，而n＝0-3， 其中Y不是键；
W为CR7R7’-CR7R7’、CR8＝CR8’、CR7R7’-C＝O、NR9-CR7R7’、N＝CR8、 N＝N、NR9-NR9’、S-CR7R7’、SO-CR7R7’、SO2-CR7R7’、环烷基或 取代的环烷基、环烯基或取代的环烯基、杂环基或取代的杂环 基、或者芳基或取代的芳基，其中当W不是NR9-CR7R7’、N＝CR8、 N＝N、NR9-NR9’、S-CR7R7’、SO-CR7R7’、SO2-CR7R7’、或者杂环 基或取代的杂环基时，则J’必须是O、S、S＝O、SO2、NH、NR7、 OC＝O、NR1C＝O、OP＝OOR2、OP＝ONHR2、OSO2、NHNH、 NHNR6、NR6NH或N＝N；
Q1为H、烷基或取代的烷基、链烯基或取代链烯基、环烷基或取代的 环烷基、环烯基或取代的环烯基、杂环基烷基或取代的杂环基烷 基、芳烷基或取代的芳烷基、链炔基或取代链炔基、芳基或取代 的芳基、杂环基(例如杂芳基)或取代的杂环基(例如取代的杂芳 基)、卤代、CN、R1OC＝O、R4C＝O、R5R6NC＝O、HOCR7R7’、硝 基、R1OCH2、R1O、NH2、C＝OSR1、SO2R1或NR4R5；
Q2为H、烷基或取代的烷基、链烯基或取代链烯基、环烷基或取代的 环烷基、环烯基或取代的环烯基、杂环基烷基或取代的杂环基烷 基、芳烷基或取代的芳烷基、链炔基或取代链炔基、芳基或取代 的芳基、杂环基(例如杂芳基)或取代的杂环基(例如取代的杂芳 基)、卤代、CN、R1OC＝O、R4C＝O、R5R6NC＝O、HOCR7R7’、硝 基、R1OCH2、R1O、NH2、C＝OSR1、SO2R1或NR4R5；
L为一个键、(CR7R7’)n、NH、NR5、NH(CR7R7’)n或NR5(CR7R7’)n，
其中n＝0-3；
R1和R1’分别独立地为H、烷基或取代的烷基、环烷基或取代的环烷 基、环烯基或取代的环烯基、杂环基或取代的杂环基、环烷基烷 基或取代的环烷基烷基、环烯基烷基或取代的环烯基烷基、杂环 基烷基或取代的杂环基烷基、芳基或取代的芳基、芳烷基或取代 的芳烷基；
R2为烷基或取代的烷基、环烷基或取代的环烷基、环烯基或取代的环 烯基、杂环基或取代的杂环基、环烷基烷基或取代的环烷基烷 基、环烯基烷基或取代的环烯基烷基、杂环基烷基或取代的杂环 基烷基、芳基或取代的芳基、芳烷基或取代的芳烷基；
R3和R3’分别独立地为H、烷基或取代的烷基、环烷基或取代的环烷 基、环烯基或取代的环烯基、杂环基或取代的杂环基、环烷基烷 基或取代的环烷基烷基、环烯基烷基或取代的环烯基烷基、杂环 基烷基或取代的杂环基烷基、芳基或取代的芳基、芳烷基或取代 的芳烷基、卤代、CN、羟胺、羟基酰胺、烷氧基或取代的烷氧基、 氨基、NR1R2、硫氢基、烷硫基或取代的烷硫基；
R4为H、烷基或取代的烷基、环烷基或取代的环烷基、环烯基或取代 的环烯基、杂环基或取代的杂环基、环烷基烷基或取代的环烷基 烷基、环烯基烷基或取代的环烯基烷基、杂环基烷基或取代的杂 环基烷基、芳基或取代的芳基、芳烷基或取代的芳烷基、R1C＝O、 R1NHC＝O、SO2OR1或SO2NR1R1’；
R5为烷基或取代的烷基、环烷基或取代的环烷基、环烯基或取代的环 烯基、杂环基或取代的杂环基、环烷基烷基或取代的环烷基烷 基、环烯基烷基或取代的环烯基烷基、杂环基烷基或取代的杂环 基烷基、芳基或取代的芳基、芳烷基或取代的芳烷基、R1C＝O、 R1NHC＝O、SO2R1、SO2OR1或SO2NR1R1’；
R6为烷基或取代的烷基、环烷基或取代的环烷基、环烯基或取代的环 烯基、杂环基或取代的杂环基、环烷基烷基或取代的环烷基烷 基、环烯基烷基或取代的环烯基烷基、杂环基烷基或取代的杂环 基烷基、芳基或取代的芳基、芳烷基或取代的芳烷基、CN、OH、 OR1、R1C＝O、R1NHC＝O、SO2R1、SO2OR1或SO2NR1R1’；
R7和R7’分别独立地为H、烷基或取代的烷基、链烯基或取代链烯基、 环烷基或取代的环烷基、环烯基或取代的环烯基、杂环基或取代 的杂环基、环烷基烷基或取代的环烷基烷基、环烯基烷基或取代 的环烯基烷基、杂环基烷基或取代的杂环基烷基、芳基或取代的 芳基、芳烷基或取代的芳烷基、卤代、CN、OR1、硝基、羟胺、 羟基酰胺、氨基、NHR4、NR2R5、NOR1、硫氢基、烷硫基或取 代的烷硫基、R1C＝O、R1OC＝O、R1NHC＝O、SO2R1、SOR1、 PO3R1R1’、R1R1’NC＝O、C＝OSR1、SO2R1、SO2OR1或SO2NR1R1’， 或者其中A1或A2含有基团R7，而W含有基团R7，A1或A2的所 述R7基团与W一起形成一个杂环；
R8和R8’分别独立地为H、烷基或取代的烷基、链烯基或取代链烯基、 环烷基或取代的环烷基、环烯基或取代的环烯基、杂环基或取代 的杂环基、环烷基烷基或取代的环烷基烷基、环烯基烷基或取代 的环烯基烷基、杂环基烷基或取代的杂环基烷基、芳基或取代的 芳基、芳烷基或取代的芳烷基、硝基、卤代、CN、OR1、氨基、 NHR4、NR2R5、NOR1、烷硫基或取代的烷硫基、C＝OSR1、 R1OC＝O、R1C＝O、R1NHC＝O、R1R1’NC＝O、SO2OR1、S＝OR1、 SO2R1、PO3R1R1’或SO2NR1R1’；且
R9和R9’分别独立地为H、烷基或取代的烷基、链烯基或取代链烯基、 环烷基或取代的环烷基、环烯基或取代的环烯基、杂环基或取代 的杂环基、环烷基烷基或取代的环烷基烷基、环烯基烷基或取代 的环烯基烷基、杂环基烷基或取代的杂环基烷基、芳基或取代的 芳基、芳烷基或取代的芳烷基、CN、OH、OR1、R1C＝O、R1OC＝O、 R1NHC＝O、SO2R1、SO2OR1或SO2NR1R1’。
式I内的化合物是新的，其中一个优选的亚类是以下式Ia的化合 物：

其中G、L、Z1、Z2、A1、A2、Q1和Q2如上文所限定；
Y’为J-J’-J”，其中J为(CR7R7’)n，而n＝0-3，J’为一个键或O、S、S＝O、 SO2、NH、NR7、CR7R7’、R2P＝O、R2P＝S、R2OP＝O、R2NHP＝O、 OP＝OOR2、OP＝ONHR2、OSO2、NHNH、NHNR6、NR6NH、N＝N、 环烷基或取代的环烷基、环烯基或取代的环烯基、或者杂环基或 取代的杂环基，且J”为(CR7R7’)n，而n＝0-3，其中Y不是键；且 W’为CR7R7’-CR7R7’、CR7R7’-C＝O、NR9-CR7R7’、N＝CR8、N＝N、 NR9-NR9’、环烷基或取代的环烷基、环烯基或取代的环烯基、杂 环基或取代的杂环基、或者芳基或取代的芳基，其中当W’不是 NR9-CR7R7’、N＝CR8、N＝N、NR9-NR9’或者杂环基或取代的杂环 基时，则J’必须是O、S、S＝O、SO2、NH、NR7、OP＝OOR2、 OP＝ONHR2、OSO2、NHNH、NHNR6、NR6NH或N＝N；或者， Y’为NR7-CR7R7’，且W’为CR8＝CR8’；或者， Y’为CR7R7’-C＝O，且W’为NR9-CR7R7’；
其中R2、R6、R7、R7’、R8、R9和R9’如上文所限定，并且条件是：(1)
当Y’为-O-，Q1和Q2为氢，Z1和Z2为O，W’为-CH2-CH2-，并且 A1和A2为CH时，则G-L不是苯基、一取代的苯基或被两个或 更多个以下基团取代的苯基：甲氧基、卤代、NO2、甲基、CH3- S-、OH、CO2H、三氟甲基、-C(O)-C6H5、NH2、4-7-环氧、六氢 -1H-异吲哚-1，3(2H)二酮或-C(O)-CH3；
(2)当Y’为-O-，Q1和Q2为氢，Z1和Z2为O，W’为CH2-CH2，并 且A1和A2中一个为CH，而另一个为CR7时，则G-L不是未取 代的苯基；
(3)当Y’为-O-，Q1和Q2为氢，Z1和Z2为O，W’为CH2-CH2，并 且A1和A2中一个为CH，而另一个为C-CH3时，则G-L不是用 氯和/或甲基取代的苯基；
(4)当Y’为-O-或-S-，Q1和Q2为氢，Z1和Z2为O，W’为CH2-CH2， 并且A1和A2中一个为CH，而另一个为CH或C-烷基时，则G- L不是N-取代的哌嗪-烷基-或N-取代的咪唑烷-烷基-；
(5)当Y’为-O-；Q1和Q2为氢，Z1和Z2为O，W’为CH2-CH2，并 且A1和A2为CH时，则G-L不是_唑或三唑；
(6)当Y’为-O-；Q1和Q2为氢或甲基，Z1和Z2为O，W’为CH2- CH2，并且A1和A2为CH或C-CH3时，则G-L不是噻唑或取代 的噻唑(另外，任选地除去其中G-L为可任选取代的噻二唑或者部 分饱和的噻唑的这类化合物，条件是其中A1和A2都是CH)；
(7)当Y’含有一个选自以下的基团J’：S、S＝O、SO2、NH、NR7、 R2P＝O、R2P＝S、R2OP＝O、R2NHP＝O、OP＝OOR2、OP＝ONHR2、 OSO2、NHNH、NHR6、NR6NH或N＝N，W’为CR7R7’-CR7R7’， 并且Z1和Z2为O时，则G-L不是未取代的苯基；
(8)当Y’为NR7，W’为未取代或取代的苯基，并且Q1和Q2为氢 时，则Z1和Z2不是O；
(9)当Y’为-O-，Q1和Q2为氢，Z1和Z2为O，W’为带有一个任选 取代的苯基的二氢异_唑，并且A1和A2为CH时，则G-L不是 未取代的苯基或二氯苯基；
(10)当Y’为O，Q1和Q2为氢，Z1和Z2为O，W’为环氧乙烷，并 且A1和A2为CH时，则G-L不是甲基苯基或氯苯基；
(11)当Y’为NR7-CR7R7’，W’为CR8＝CR8’，Q1和Q2为氢，A1和 A2为CH、C-CH3、C-CH2-C6H5或C-CH2-CH3，并且Z1和Z2为O 时，则G-L不是未取代的苯基、一取代的苯基或甲基吡啶基；
(12)当Y’为CR7R7’-C＝O，W’为NR9-CR7R7’，Q1和Q2为氢，A1 和A2为CH，并且Z1和Z2为O时，则G-L不是未取代的苯基；
(13)当Y’为CHR7’-NR7，其中R7’为未取代的苯基、甲氧基或乙氧 基，且R7为未取代的苯基、甲基或-C(O)-C6H5，W’为二甲氧基亚 苯基或未取代的亚苯基，Z1和Z2为O，Q1和Q2为氢，并且A1 和A2为CH、C-CN、C-C(O)-C6H5或-C(O)-二甲氧基苯基时，则 G-L不是未取代的苯基；
(14)式Ia化合物不是6，10-环硫-4H-噻吩并[3’，4’：5，6]芳辛并 (cyclooct)[1，2-f]异吲哚-7，9(5H，8H)-二酮、8-(3，5-二氯苯基)- 6，6a，9a，10，11，12，-六氢-1，3，6，10-四甲基-2，2，13-三氧化物， (6R，6aR，9aS，10S)；
(15)当Y’为O，W’为-CH2-CH2-，Q1和Q2为甲基，Z1和Z2为O， 并且A1和A2为CH时，则G-L不是未取代的苯基、被甲氧基、 苯基-烷基-或吗啉-烷基取代的苯基，也不是通过为亚烷基的基团 L自身桥连形成双化合物的所述化合物；
(16)当Y’为-O-，Q1和Q2为氢，Z1和Z2为O，W’为CR7R7’-CR7R7’， 并且A1和A2为CH时，则G-L不是未取代的苯基；并且
(17)当Y’为-O-，Q1和Q2为氢，Z1和Z2为O，W’为环戊基、环 己基、3-苯基-2-异_唑啉或CR7R7’-CR7R7’，其中R7和R7’分别独 立地限定为Cl、Br、H和4-丁内酯，而R7和R7’不同时都是H， 并且A1和A2为CH时，则G-L不是未取代的萘环或一取代的苯 环，其中所述取代基为甲氧基、Br、Cl、NO2、甲基、乙基、CH2- 苯基、S-苯基或O-苯基。
最好是，所述式I化合物是单体的，并且不包括在其它寡聚体或 多聚体内。
另一个优选的新型亚类是以下式Ib的化合物：

其中G、Z1、Z2、Q1和Q2如上文所限定；
Y’为J-J’-J”，其中J为(CR7R7’)n，而n＝0-3，J’为一个键或O、S、S＝O、 SO2、NH、NR7、CR7R7’、R2P＝O、R2P＝S、R2OP＝O、R2NHP＝O、 OP＝OOR2、OP＝ONHR2、OSO2、NHNH、NHNR6、NR6NH、N＝N、 环烷基或取代的环烷基、环烯基或取代的环烯基、或者杂环基或 取代的杂环基，并且J”为(CR7R7’)n，而n＝0-3，其中Y不是键； 且
W’为CR7R7’-CR7R7’、CR7R7’-C＝O、NR9-CR7R7’、N＝CR8、N＝N、 NR9-NR9’、环烷基或取代的环烷基、环烯基或取代的环烯基、杂 环基或取代的杂环基、或者芳基或取代的芳基，其中 当W’不是NR9-CR7R7’、N＝CR8、N＝N、NR9-NR9’或者杂环基或取代 的杂环基时，则J’必须是O、S、S＝O、SO2、NH、NR7、OP＝OOR2、 OP＝ONHR2、OSO2、NHNH、NHNR6、NR6NH或N＝N；或者，
Y’为CR7R7’-C＝O，且W’为NR9-CR7R7’；
L为一个键；并且
A1和A2如以上所限定，尤其是其中A1和/或A2为烷基或任选取代的 烷基(优选这类任选的取代基是一个或多个以下限定的基团V1)，条件 是：当Y’＝O，且W’＝-CH2-CH2-时，则A1或A2中至少一个不是CH； 此外以上文的(2)、(3)、(6)、(7)和(8)为条件。
式I化合物或及其盐包括一个核心，所述核心可以充当类固醇模 拟物(并且不需要存在类固醇型(例如环戊并全氢菲类似物)结构)。
本发明的进一步描述
以下是用于本说明书中术语的定义。本文为一组术语提供的原始 定义适用于本说明书中单独的或者作为另一组术语一部分的该组术 语，除非另有说明。
术语“烷基(alkyl)”和“烷(alk)”是指含有1-12个碳原子、优选 1-6个碳原子的直链或支链烷(烃)基。示例性的这类基团包括但不限于 甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、戊基、己基、 异己基、庚基、4，4-二甲基戊基、辛基、2，2，4-三甲基戊基、壬基、癸 基、十一烷基、十二烷基等。“取代的烷基”是指在任何可用的连接 点被一个或多个取代基、优选1-4个取代基取代的烷基。示例性的取 代基包括但不限于一个或多个以下基团：卤代(例如一个卤代取代基或 多个卤代取代基，在后一种情况下形成诸如全氟烷基，或者带有Cl3 或CF3的烷基)、烷氧基、烷硫基、羟基、羧基(即-COOH)、烷氧羰基、 烷基羰基氧基、氨基(即-NH2)、氨甲酰基或取代的氨甲酰基、氨基甲 酸酯或者取代的氨基甲酸酯、脲或取代的脲、脒基(amidinyl)或取代的 脒基、硫氢基(即-SH)、芳基、杂环、环烷基、杂环基烷基、-S-芳基、 -S-杂环、-S＝O-芳基、-S＝O-杂环、芳烷基-O-、-S(O)2-芳基、-S(O)2- 杂环、-NHS(O)2-芳基、-NHS(O)2-杂环、-NHS(O)2NH-芳基、- NHS(O)2NH-杂环、-P(O)2-芳基、-P(O)2-杂环、-NHP(O)2-芳基、-NHP(O)2- 杂环、-NHP(O)2NH-芳基、-NHP(O)2NH-杂环、-O-芳基、-O-杂环、- NH-芳基、-NH-杂环、-NHC＝O-芳基、-NHC＝O-烷基、-NHC＝O-杂环、 -OC＝O-芳基、-OC＝O-杂环、-NHC＝ONH-芳基、-NHC＝ONH-杂环、- OC＝OO-芳基、-OC＝OO-杂环、-OC＝ONH-芳基、-OC＝ONH-杂环、- NHC＝OO-芳基、-NHC＝OO-杂环、-NHC＝OO-烷基、-C＝ONH-芳基、 -C＝ONH-杂环、-C＝OO-芳基、-C＝OO-杂环、-N(烷基)S(O)2-芳基、-N(烷 基)S(O)2-杂环、-N(烷基)S(O)2NH-芳基、-N(烷基)S(O)2NH-杂环、-N(烷 基)P(O)2-芳基、-N(烷基)P(O)2-杂环、-N(烷基)P(O)2NH-芳基、-N(烷 基)P(O)2NH-杂环、-N(烷基)-芳基、-N(烷基)杂环、-N(烷基)C＝O-芳基、 -N(烷基)C＝O-杂环、-N(烷基)C＝ONH-芳基、-N(烷基)C＝ONH-杂环、 -OC＝ON(烷基)-芳基、-OC＝ON(烷基)-杂环、-N(烷基)C＝OO-芳基、- N(烷基)C＝OO-杂环、-C＝ON(烷基)-芳基、-C＝ON(烷基)-杂环、- NHS(O)2N(烷基)-芳基、-NHS(O)2N(烷基)-杂环、-NHP(O)2N(烷基)-芳 基、NHP(O)2N(烷基)-杂环、-NHC＝ON(烷基)-芳基、-NHC＝ON(烷基)- 杂环、-N(烷基)S(O)2N(烷基)-芳基、-N(烷基)S(O)2N(烷基)-杂环、-N(烷 基)P(O)2N(烷基)-芳基、-N(烷基)P(O)2N(烷基)-杂环、-N(烷基)C＝ON(烷 基)-芳基和-N(烷基)C＝ON(烷基)-杂环。在上述示例性取代基中，在每 种情况下，基团例如“烷基”、“芳基”和“杂环”本身可以被任选 取代；例如，在上述基团“NCH＝OO-烷基”中的“烷基”可以被任选 取代，因此“NHC＝OO-烷基”和“NHC＝OO-取代的烷基”是示例性 取代基。示例性烷基取代基也包括例如“T”和“T-R12”(其定义如下) 的基团，尤其是A1或A2内的取代烷基。
术语“链烯基”是指含有2-12个碳原子和至少一个碳-碳双键的 直链或支链烃基。示例性的这类基团包括乙烯基或烯丙基。“取代的 链烯基”是指在任何可用的连接点被一个或多个取代基、优选1-4个 取代基取代的链烯基。示例性的取代基包括但不限于烷基或取代的烷 基、以及上述同示例性烷基取代基一样的那些基团。
术语“链炔基”是指含有2-12个碳原子和至少一个碳-碳叁键的 直链或支链烃基。示例性的这类基团包括乙炔基。“取代的链炔基” 是指在任何可用的连接点被一个或多个取代基、优选1-4个取代基取 代的链炔基。示例性的取代基包括但不限于烷基或取代的烷基、以及 上述同示例性烷基取代基一样的那些基团。
术语“环烷基”是指含有1-4个环并且每个环含有3-8个碳原子 的全饱和环烃基。示例性的这类基团包括环丙基、环丁基、环戊基、 环己基等。“取代的环烷基”是指在任何可用的连接点被一个或多个 取代基、优选1-4个取代基取代的环烷基。示例性取代基包括但不限 于硝基、氰基、烷基或取代的烷基、以及上述与示例性烷基取代基一 样的和先前所述的G定义中的优选芳基取代基一样的那些基团。示例 性取代基也包括螺接环取代基或稠环取代基，尤其是环烯基或取代 的环烯基。
术语“环烯基”是指含有1-4个环并且每个环含有3-8个碳原子 的部分不饱和环烃基。示例性的这类基团包括环丁烯基、环戊烯基、 环己烯基等。“取代的环烯基”是指在任何可用的连接点被一个或多 个取代基、优选1-4个取代基取代的环烯基。示例性取代基包括但不 限于硝基、氰基、烷基或取代的烷基、以及上述与示例性烷基取代基 一样的和先前所述的G定义中的优选芳基取代基一样的那些基团。示 例性取代基也包括螺接环取代基或稠环取代基，尤其是环烷基或取代 的环烷基。
术语“烷氧基”或“烷硫基”是指分别通过一个氧键(-O-)或硫键 (-S-)连接的上述烷基。术语“取代的烷氧基”或“取代的烷硫基”是 指分别通过一个氧键(-O-)或硫键(-S-)连接的上述取代的烷基。
术语“烷氧羰基”是指通过一个羰基连接的烷氧基。
术语“烷基羰基”是指通过一个羰基连接的烷基。术语“烷基羰 基氧基”是指通过一个氧键连接的烷基羰基。
术语“芳烷基”、“取代的芳烷基”、“环烷基烷基”、“取代 的环烷基烷基”、“环烯基烷基”、“取代的环烯基烷基”、“杂环 基烷基”和“取代的杂环基烷基”是指在指明为“取代”的芳基、环 烷基、环烯基或杂环基和/或烷基上取代的、通过一个烷基连接的芳 基、环烷基、环烯基和杂环基。
术语“芳基”是指具有1-5个芳环、尤其是单环基或二环基的环 状芳烃基，例如苯基、联苯基或萘基。当含有两个或更多个芳环(二环 等)时，所述芳基的芳环可以在一个点连接(例如联苯基)、或者是稠合 的(例如萘基、菲基)。“取代的芳基”是指在任何连接点被一个或多 个取代基、优选1、2、3、4或5个取代基取代的芳基。示例性的取代 基包括但不限于硝基、环烷基或取代的环烷基、环烯基或取代的环烯 基、氰基、烷基-S(O)m-(m＝0、1或2)、烷基或取代的烷基、以及上述 与示例性烷基取代基一样的和先前所述的G定义中的优选芳基取代基 一样的那些基团。示例性取代基也包括稠环取代基、例如杂环基或环 烯基、或者取代的杂环基或环烯基(例如从而形成芴基、四氢萘基或二 氢茚基)。
“氨甲酰基”是指基团-CONH-，其一端连接于所述分子的其余部 分，而另一端连接于氢或一个有机部分(例如烷基、取代的烷基、芳基、 取代的芳基、杂环、烷基羰基、羟基和取代的氮)。“氨基甲酸酯”是 指基团-O-CO-NH-，其一端连接于所述分子的其余部分，而另一端连 接于氢或一个有机部分(例如以上所列的)。“脲”是指基团-NH-CO- NH-，其一端连接到所述分子的其余部分，而另一端连接于氢或一个 有机部分(例如以上所列的)。“脒基”是指C(＝NH)(NH2)。“取代的氨 甲酰基”、“取代的氨基甲酸酯”、“取代的脲”和“取代的脒基” 是指其中一个或多个氢被有机部分(例如以上所列的)取代的上述氨甲 酰基、氨基甲酸酯、脲或脒基。
术语“杂环”、“杂环基(heterocyclic)”和“杂环基(heterocyclo)” 是指在至少一个含碳原子的环中具有至少一个杂原子的全饱和或部分 饱和不饱和或全不饱和的包括芳族的(即“杂芳基”)环基(例如3-7元 单环、7-11元二环或者10-16元三环的环系)。含杂原子的杂环基的每 个环可以有1、2、3或4个选自氮原子、氧原子和/或硫原子的杂原子， 其中所述氮杂原子和硫杂原子可以任选地被氧化，并且所述氮杂原子 可以任选被季铵化。(术语“杂芳_”是指带有季铵氮原子并因此带有 正电荷的杂芳基。)杂环基可以在所述环或环系的任何杂原子或碳原 子上连接于所述分子的其余部分。示例性的单环杂环基包括环氧乙 烷、氮杂环丁烷基、吡咯烷基、吡咯基、吡唑基、氧杂环丁烷基、吡 唑啉基、咪唑基、咪唑啉基、咪唑烷基、_唑基、_唑烷基、异_唑 啉基、异_唑基、噻唑基、噻二唑基、噻唑烷基、异噻唑基、异噻唑 烷基基、呋喃基、四氢呋喃基、噻吩基、_二唑基、哌啶基、哌嗪基、 2-氧代哌嗪基、2-氧代哌啶基、2-氧代吡咯烷基、2-氧代氮杂_基、氮 杂_基、六氢二氮杂_基、4-哌啶酮基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、 哒嗪基、三嗪基、三唑基、四唑基、四氢吡喃基、吗啉基、硫代吗啉 基、硫代吗啉基亚砜、硫代吗啉基砜、1，3-二氧戊环和四氢-1，1-二氧代 噻吩基等。示例性的二环杂环基包括吲哚基、异吲哚基、苯并噻唑基、 苯并间二氧杂环戊烯基、苯并_唑基、苯并_二唑基、苯并噻吩基、 奎宁环基、喹啉基、四氢异喹啉基、异喹啉基、苯并咪唑基、苯并吡 喃基、中氮茚基、苯并呋喃基、苯并呋咱基、色酮基、香豆素基、苯 并吡喃基、噌啉基、喹喔啉基、吲唑基、吡咯并吡啶基、呋喃并吡啶 基(例如呋喃并[2，3-c]吡啶基、呋喃并[3，2-b]吡啶基]或呋喃并[2，3-b]吡 啶基)、二氢苯并二氧杂环己烯基、二氢二氧化苯并噻吩基 (dihydrodioxidobenzothiophenyl)、二氢异吲哚基、二氢吲哚基、二氢喹 啉基、二氢喹唑啉基(例如3，4-二氢-4-氧代-喹唑啉基)、三嗪基氮杂_、 四氢异喹啉基等。示例性的三环杂环基包括咔唑基、benzidolyl，菲咯 啉基、氧芴基、吖啶基、菲啶基、呫吨基等。
“取代的杂环”和“取代的杂环基”(例如“取代的杂芳基”)是 指在任何可用连接点被一个或多个取代基、优选1-4个取代基取代的 杂环或杂环基。示例性的取代基包括但不限于环烷基或取代的环烷 基、环烯基或取代的环烯基、硝基、氧代(即＝O)、氰基、烷基-S(O)m- (m＝0、1或2)、烷基或取代的烷基、以及以上与示例性烷基取代基一 样的和与先前所述的G定义中的优选杂环基取代基一样的那些取代 基。
术语“季铵氮”是指四价带正电荷的氮原子，包括例如四烷基铵 基团(例如四甲基铵、N-甲基吡啶_)中带正电荷的氮、质子化铵种类(例 如三甲基氢化铵、N-氢化吡啶_)中带正电荷的氮、胺N-氧化物(例如 N-甲基-N-吗啉-N-氧化物、吡啶-N-氧化物)中带正电荷的氮、以及N- 氨基-铵基(例如N-氨基吡啶_)中带正电荷的氮。
术语“卤素”或“卤代”是指氯、溴、氟或碘。
术语“羟胺”和“羟基酰胺”分别是指基团OH-NH-和OH-NH- CO-。
当官能团被称为“被护的”时，这是指该基团为被修饰的形式， 以便减轻、尤其是消除所述被护位点不想要的副反应。用于本文所述 方法和化合物的合适保护基包括但不限于在标准教科书例如Greene，T. W.等， Protective Groups in Organic Synthesis，Wiley，N.Y.(1991)中描述 的那些保护基。
当使用诸如“(CRR)n”之类的术语时，是指在连接的两个片段之 间存在任选取代的烷基链，该链的长度由术语n所述的范围限定。 其实例为n＝0-3，是指在所述两个片段之间存在0-3个(CRR)单位，它 连接于第一个和最后一个(CRR)单位。在术语n设定为0(n＝0)的情况 下，则在连接于(CRR)的两个片段之间有一个键。
除非另有说明，具有不饱和化合价的任何杂原子都假定有足以满 足所述化合价的氢原子。
二价基团，例如W定义中的那些二价基团(例如NR9-CR7R7’)，可 以以任一方向连接于所述分子的其余部分(例如对于W定义中上述基 团而言为
或，
羧酸酯阴离子是指带负电荷基团-COO-。
式I化合物形成盐，所述盐也在本发明的范围内。在本文中提及 式I化合物时，应该理解是包括提及其盐，除非另有说明。本文所用 的术语“盐”是指与无机和/或有机酸和碱形成的酸式盐和/或碱式盐。 另外，当式I化合物含有碱性部分例如但不限于吡啶或咪唑和酸性部 分例如但不限于羧酸时，可以形成两性离子(“内盐”)，这些包括在 本文所用的术语“盐”的范围内。优选药学上可接受的(即无毒的生理 上可接受的)盐，虽然其它盐也是可用的，例如用于在制备期间可能使 用的分离或纯化步骤中。例如，通过使式I化合物与一定量的酸或碱(例 如等量的)在一种介质中反应，可以生成式I化合物的盐，所述介质例 如为所述盐在其中沉淀的介质，或者式I化合物与酸或碱在水性介质 中反应，然后冻干。
含有碱性部分(包括例如*但不限于胺或吡啶或咪唑环)的式I化合 物可以与各种各样的有机酸和无机酸形成盐。示例性的酸加成盐包括 乙酸盐(例如与乙酸或三卤代乙酸例如三氟乙酸生成的盐)、己二酸 盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸 氢盐、硼酸盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷 丙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、葡 糖庚酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴 酸盐、氢碘酸、羟基乙磺酸盐(例如2-羟基乙磺酸盐)、乳酸盐、马来 酸盐、甲磺酸盐、萘磺酸盐(例如2-萘磺酸盐)、烟酸盐、硝酸盐、草 酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、苯基丙酸盐(例如3-苯基丙酸盐)、磷酸 盐、苦味酸盐、新戊酸酯、丙酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐(例 如与硫酸形成的那些盐)、磺酸盐(例如本文提及的那些盐)、酒石酸盐、 硫氰酸盐、甲苯磺酸盐(toluenesulfonate)例如甲苯磺酸盐(tosylate)、十 一烷酸盐等。
含有酸性部分(包括例如但不限于羧酸)的式I化合物可以与各种 各样的有机碱和无机碱形成盐。示例性的碱式盐包括铵盐、碱金属盐 例如钠盐、锂盐和钾盐、碱土金属盐例如钙盐和镁盐、与有机碱(例如 有机胺)例如苯乍生、二环己胺、hydrabamines(与N，N-双(脱氢枞基) 乙二胺形成的)、N-甲基-D-葡糖胺、N-甲基-D-glycamides、叔丁胺形 成的盐和与氨基酸例如精氨酸、酪氨酸等形成的盐。碱性含氮基团可 以用诸如低级烷基卤(例如甲基、乙基、丙基和丁基氯、溴和碘)、二 烷基硫酸盐(例如硫酸二甲酯、二乙酯、二丁酯和二戊酯)、长链卤化 物(例如癸基、十二烷基、肉豆蔻基和硬脂基氯、溴和碘)、芳烷基卤(例 如苄基溴和苯乙基溴)和其它卤化物的试剂季铵化。
此中也考虑了本发明化合物的前体药物和溶剂合物。本文所用的 术语“前体药物”是指在给予受治疗者后通过代谢过程或化学过程经 历化学转化产生式I化合物、或其盐和/或溶剂合物的化合物。式I化 合物的溶剂合物包括例如水合物。
式I化合物或其盐可以以其互变异构体形式(例如作为酰胺或亚氨 酸酯)存在。所有这类互变异构体形式在此都考虑作为本发明的一部 分。
本发明化合物的所有立体异构体(例如由于各种取代基上不对称 碳而引起的可能存在的那些立体异构体)包括对映体形式和非对映体 形式，都考虑在本发明范围内。本发明化合物的各种立体异构体可能 例如基本上无其它异构体(例如作为纯或基本纯的具有规定活性的旋 光异构体)，或者可以混合例如作为外消旋体，或者与所有其它立体异 构体或其它选定的立体异构体混合。本发明的手性中心可以具有the IUPAC 1974 Recommendations定义的S构型或R构型。外消旋形式可 以通过物理方法例如非对映体衍生物的分级结晶、分离或结晶、或者 通过手性柱色谱分离来拆分。各种旋光异构体可以通过任何合适的方 法包括但不限于常规方法例如与旋光性酸形成盐然后结晶，从外消旋 体中获得。
考虑了或者混合物形式或者纯或基本纯形式的本发明化合物的 所有构型异构体。本发明化合物的定义包括顺式(Z)和反式(E)烯烃异构 体以及环烃或杂环的顺式和反式异构体。在某些情况下，例如对于式I 中与G-L连接的稠合环系而言，可能优选外型或内型。例如，对于其 中Y为O或NR7的雄激素受体拮抗剂(或选择性雄激素受体调节剂)而 言，可能优选外型构型，而对于Y的大多数其它定义而言，可能优选 内型构型。正如人们可以认识到的，所述优选的构型可能随特定化合 物及其优选活性而变。构型异构体的分离可以通过任何合适的方法例 如柱色谱来完成。
在整个说明书中，可以选择基团及其取代基来提供合适的部分和 化合物。
本文中所示的作为实例性或优选的实施方案是用来说明的，而非 限制性的。
制备方法
本发明的化合物可以通过诸如在以下流程I-XI中所示的那些方法 来制备。本领域技术人员可以容易地选择溶剂、温度、压力和其它反 应条件。原料是市售的，或者由本领域技术人员容易地来制备。在制 备化合物时，可以使用组合的技术，例如在中间体具有适合于这些技 术的基团的情况下。参见以下文献，所述文献描述可以用来制备本发 明化合物的其它方法：Li等， Eur.J.Org.Chem. 9，1841-1850(1998)；Li， Y-Q， Synlett. 5，461-464(1996)；Thiemann等， Bull.Chem.Soc.Jpn. 67， 1886-1893(1994)；Tsuge等， Heterocycles  14，423-428(1980)；Ward等， Can J.Chem. 75，681-693(1997)；Ward等， Can J.Chem. 69，1487-1497 (1991)；Ward等， Tetrahedron Lett. 31，845-848(1990)；Fleming等， J.Org. Chem. 44，2280-2282(1979)；Jankowski等， J.Organomet.Chem. 595， 109-113(2000)；Keglevich等， J.Organomet.Chem. 579，182-189(1999)； Keglevich等， J.Organomet.Chem. 570，49-539(1998)；Jankowski等， Hetroat.Chem. 7，369-374(1996)；Jankowski等， J.Am.Chem.Soc. 113， 7011-7017(1991)；Quin等， Tetrahedron Lett. 31，6473-6476(1990)；Quin 等， J.Org.Chem. 59，120-129(1994)；Quin等， J.Org.Chem. 58，6212- 6216(1993)；Quin等， Phosphorous，Sulfur Silicon Relat.Elem. 63，349- 362(1991)；Quin等， Hetroat.Chem. 2，359-367(1991)；Hussong等， Phosphorus Sulfur. 25，201-212(1985)；Quin等， J.Org.Chem. 51，3341- 3347(1986)；Myers等， J.Am.Chem.Soc. 114，5684-5692(1992)；Myers 等， J.Am.Chem.Soc. 113，6682-6683(1991)；Shen等，美国专利第 5817679号；Cordone等， J.Am.Chem.Soc. 111，5969-5970(1989)；Jung 等， J.Chem.Soc.Commun.630-632(1984)；Lay等， J.Am.Chem.Soc. 104，7658-7659(1982)；Gonzalez等， J.Am.Chem.Soc.117，3405-3421 (1995)；Kreher等， Chem Ber. 125，183-189(1992)；Simig等， Synlett 7， 425-426(1990)；Sha等， J.Org.Chem. 55，2446-2450(1990)；Drew等， J. Chem.Soc.，Perkin Trans. 17，1277-1284(1985)；Kreher等， Anorg Chem.， Org Chem.31B，599-604(1976)；Avalos等， Tetrahedron Lett.39，9301- 9304(1998)；Gousse等， Macromolecules  31，314-321(1998)； Mikhailyuchenko等， Khim.Geterotsikl.Soedin. 6，751-758(1993)； Lubowitz等，美国专利第4476184号；Padwa等， J.Org.Chem. 61， 3706-3714(1996)；Schlessinger等， J.Org.Chem. 59，3246-3247(1994)； Buchmeiser等，WO公布号9827423；Tanabe等，日本专利文件JP 07144477；Mochizucki等，日本专利文件 JP 63170383；Hosoda等，日本 专利文件 JP 62053963；Onaka等，日本专利文件 JP 62053964；Kato等， 日本专利文件 JP 53086035；Kato等，日本专利文件 JP 51088631； Tottori等，日本专利文件 JP 49124225；Augustin等，德国专利文件 DD101271；Title等，法国专利文件 FR 2031538；Gousse等， Polym.Int. 48，723-731(1999)；Padwa等， J.Org.Chem. 62，4088-4096(1997)； Theurillat-Moritz等， Tetrahedron：Asymmetry 7，3163-3168(1996)； Mathews等， J.Carbohydr.Chem. 14，287-97(1995)；Srivastava等， Natl. Acad Sci.Lett.(India) 15，41-44(1992)；Mayorga等， Rev.Cubana Quim. 4，1-6(1988)；Kondoli等， J. Chem.Res.，Synop. 3，76(1987)；Primelles等， Cent.Azucar 7-14(1985)；Solov’eva等， Khim.Geterotsikl.Soedin. 5， 613-15(1984)；Liu等， Yaoxue Xuebao 18，752-759(1983)；Joshi等， Indian J.Chem，Sect.B. 22B，131-135(1983)；Amos等，WO公布号 9829495；Odagiri等，美国专利第4670536号；Gallucci等，欧洲专利文 件 EP 355435；Redmore，D.美国专利第3821232号；Nakano等， Heterocycles 35，37-40(1993)；Tomisawa等， Chem.Pharm.Bull. 36， 1692-1697(1988)；Krow等， J.Heterocycl.Chem. 22，131-135(1985)； Krow等， J.Org.Chem. 47，1989-1993(1982)；Liu等， Yaoxue Xuebao 18， 752-759(1983)；Nishikawa等， Yaoxue Xuebao JP 01061457；和/或Rice 等， J.Med.Chem. 11，183-185(1968)。
在本说明书中、例如在“制备方法”中以及在本文的其它小节中 引用的所有文献，都通过引用全部结合到本文中。在本文中提及任何 文献，不能解释为承认这一文献是现有技术。
流程I

如流程I中所示，式II的二烯烃可以在本领域技术人员容易选择 的条件下((例如加上加热(“Δ”))与式III的亲双烯体反应，获得式IV化 合物，这是一种式I化合物。式II化合物的一种中间体二烯烃可以从 商业来源获得，或者可以由本领域技术人员例如按照以下文献以及其 中引用的参考文献容易地制备：Hofman等， J.Agric.Food Chem. 45， 898-906(1997)；Baciocchi等， J.Chem.Soc.，Perkin Trans. 28，821-824 (1975)；Wu等， J.Heterocycles 38，1507-1518(1994)；Yin等， Tetrahedron Lett 38，5953-5954(1997)；Mic′ovic′等， Tetrahedron 20，2279-2287 (1964)；Gorbunova等， J.Org.Chem.， 35，1557-1566(1999)；Rassu等， Chem.Soc.Rev. 29，109-118(2000)；Kaberdin等， Russ.Chem.Rev.. 68， 765-779(1999)；Barluenga等， Aldrichimica Acta 32，4-15(1999)； Bogdanowicz-Szwed等， Pol.Wiad.Chem. 52，821-842(1998)；Casiraghi 等， Adv.Asymmetric Synth. 3，113-189(1998)；和/或Baeckvall等， Chem. Rev. 98，2291-2312(1998)。一种式III的中间体亲双烯体可以从商业来 源获得，或者本领域技术人员例如按照以下文献以及其中引用的参考 文献容易地制得：Deshpande等， Heterocycles 51，2159-2162(1999)； Seijas等， J.Chem.Res.，Synop. 7，420-421(1999)；Langer等， Eur.J.Org. Chem. 7，1467-1470(1998)；Kita等，日本专利文件 JP 09194458；Lopez- Alvarado等， J.Org.Chem. 61，5865-5870(1996)；Condon等，美国专利 第5523277号；Sasakihara等，日本专利文件 JP 04290868；Igarashi等， 日本专利文件 JP 04149173；Aoyama等，日本专利文件 JP 04134063； Aoyama等，日本专利文件 JP 04134062；Pastor等， J.Org.Chem. 53， 5776-5779(1988)；和/或Takahashi等， Chem.Lett. 6，1229-1232 (1987)。
流程II

如流程 II所示，通过使式V的伯胺例如在溶剂例如乙酸中在加热 或不加热的情况下与式 VI的取代的酸酐样中间体反应，得到式 IV化 合物(它是一种式 I化合物)，可以获得式 I化合物。式 V的伯胺可以从 商业来源获得，或者可以由本领域技术人员容易地合成。式 VI的酸酐 样试剂可以从商业来源获得，或者可以由本领域技术人员容易地合 成。以下所列的文献描述了用于合成式 VI中间体的示例性途径以及可 能适用于合成式 IV化合物的合成途径(所有文献都通过引用全部结合 到本文中)：Kohler，E.P.；Tishler，M.；Potter，H.；Thompson，H.T .J.Am. Chem.Soc.1939，1057-1061；Yur′ev，Y.K.；Zefirov，N.S. J. Gen.Chem. U.S.R.R.(Engl.Transl.)1961，31，772-5；Norman G.Gaylord美国专利第 3,995,099号；Schueler，P.E.；Rhodes，Y.E. J.Org.Chem.1974，39， 2063-9；Ishitobi，H.；Tanida，H；Tsuji， T.Bull.Chem.Soc.Japan 1971，44， 2993-3000；Stájer，G.；Virág，M.；Szabó，A.E.；Bernáth，G.；Sohár，P.； Sillanp__，R.Acta.Chem.Scand.1996，50，922-30；Hart，H.；Ghosh，T. Tetrahedron Lett.1988，29，881-884；Kato，M.；Yamamoto，S.；Yoshihara， T.；Furuichi，K；Miwa，T. Chem.Lett.1987，1823-1826；Kottwitz，J.； Vorbrüggen，H.Synthesis 1995，636-637；Creary， X.J.Org.Chem.1975， 40，3326-3331；Alder，K.；Ache，H.-J.；Flock，F.H.Chem.Ber.1960，93， 1888-1895；Toder，B.H.；Branca，S.J.；Dieter，R.K.；Smith，A.B.III Synth.Commun.1975，5，435-439；Sprague，P.W.；Heikes，J.E.； Gougoutas，J.Z.；Malley，M.F.；Harris，D.N.；和/或Greenberg， R.J.Med Chem.1985，28，1580-1590。
上述途径可以以组合方式应用，例如通过用在以下文献中所述的 多孔反应板(multi-well reaction block)：Waldemar Ruediger，Wen-Jeng Li， John W.，Allen Jr.和Harold N.Weller III，美国专利第5,961,925号， Apparatus for Synthesis of Multiple Organic Compounds With Pinch Valve Block(通过引用全部结合到本文中)。通过利用上述的多孔反应板，人 们可以例如一次进行多个96个反应。然后可以从反应管中除去溶剂， 而无需从反应板中除去溶剂，可以用碱例如碳酸氢钠沉淀粗产物。可 以通过将反应板内容物过滤，收集沉淀，然后可以将所需产物直接转 移到96孔板中以供筛选。以这种方式，可以合成大量的一系列式I化 合物，并且可以根据需要通过自动化方法进行测试。
流程III

流程 III描述了一种制备式 VI的中间体化合物的方法，式 VI化 合物可以用来合成式 I化合物，如流程 II中所述。如流程 III中所述， 可以使式 II的二烯烃与式 VII的亲双烯体反应，得到式 VI的中间体。 用来获得达到这种转化的方法与流程 I中所述的方法类似。
流程IV

流程 IV描述了一种制备式 VI的中间体化合物的方法，式 VI化 合物可以用来合成式 I化合物，如流程 II中所述。如流程 IV中所述， 可以使式 II的二烯烃与式 VIII的亲双烯体反应，得到式 IX的中间体。 可以使式 IX的中间体脱水，成为式 VI的酸酐样中间体。式 IX的双 酸中间体的脱水可以通过各种各样的方法来完成，所述方法例如本领 域技术人员已知的方法以及在以下文献和其中引用的参考文献中描述 的方法：Sprague等， J.Med.Chem. 28，1580-1590(1985)；和/或Retemi 等， J.Org.Chem. 61，6296-6301(1996)。
流程 I-IV描述了用于合成式 I化合物及其中间体的通用方法，其 中在所述环系周围的取代直接在例如中间体二烯烃、亲双烯体、酸酐 样中间体和胺基团水平上加入。除这些途径之外，可以在已经制备的 式I化合物上通过各种各样的途径引入额外的取代，以制备其它的式 I 化合物。用于进一步取代的示例性方法描述于流程 V-XI中。
流程V

流程 V描述了一种这样的将额外的取代引入式I结构的方法。如 流程 V中所示，式 X化合物是一种式 I化合物，其中A1和A2为CR7， W为NH-CHR7，而Y为CHR7-CHR7，例如通过本领域技术人员已知 的方法，通过使式 X化合物与多种亲电子试剂例如酰基卤或烷基卤在 碱存在下反应，在基团W的游离胺上官能化。在流程 V中，X是离去 基团，而式 XI化合物是其中A1和A2为CR7、W为NR7-CHR7、而Y 为CHR7-CHR7的式 I化合物。
流程VI

流程 VI描述了一种用于在式 I化合物上进一步引入取代的途 径。如流程 VI所示，式 XII化合物是一种式 I化合物，其中A1和A2 为CR7，W为S-CHR7，而Y为CHR7-CHR7，可以用氧化剂例如mCPBA 或诸如本领域技术人员已知的其它试剂将式 XII化合物部分氧化，得 到式 XIII的亚砜类似物，式 XIII的亚砜类似物是其中A1和A2为CR7， W为SO-CHR7，而Y为CHR7-CHR7的式 I化合物。用氧化剂例如 mCPBA或者例如本领域技术人员已知的其它试剂进一步处理式 XIII 化合物，可以得到式 XIV的砜类似物，式 XIV的砜类似物是其中A1 和A2为CR7、W为SO2-CHR7、而Y为CHR7-CHR7的式 I化合物。
或者，通过用氧化剂例如mCPBA或用例如本领域技术人员已知的其 它试剂延长处理，可以将式 XII化合物直接转化为式 XIV化合物。
流程VII

流程 VII描述了用于在式I化合物上进一步引入取代的另一种途 径。如流程 VII所示，可以使式 IIa的二烯烃与式 III的亲双烯体如 流程 I中所述进行反应，得到式 IVa化合物，式 IVa化合物是一种式I 化合物，其中Y为O，A2为CR7，而A1为C-(CH2)q-T。可以使式IVa 化合物与式R12-T’的试剂反应，获得式IVb或IVc的化合物，式 IVb 或 IVc的化合物是其中Y为O、A2为CR7、而A1分别为C-(CH2)q-T’-R12 或C-(CH2)q-T-R12的式 I化合物。试剂R12-T’可以得自商业来源，或者 可以由本领域技术人员容易地制备。
在上述流程中，R12具有与先前限定的R7一样的定义，q为0或 者0-8的整数，而T定义为或者(1)能够经历与离去基团T’亲核取代反 应的亲核中心，例如但不限于含氮、氧或硫的基团，或者(2)能够经历 与亲核基团T’亲核取代反应的离去基团(例如但不限于含氮、氧或硫的 亲核基团)。T’的定义与T相同。在本发明的情况下，例如，当攻击试 剂(亲核试剂)给底物带来一个电子对时，用这对电子形成新键合，发 生亲核取代反应，然后离去基团(离核体)离开该电子对，留下阴离子 中间体。有关脂族亲核取代机制的详细论述和具体脂族亲核取代反应 的综述，参见Advanced Organic Chemistry，Reactions，Mechanisms，and Structure，4thAddition.Jerry March(编著)，John Wiley & Sons，New York (1992)293-500及其其中的参考文献。当然，式IVa、IVb或IVc化合 物可以用于本文所述的方法中(尤其是用于治疗核激素受体相关病 症)，而无需经历T或T’的进一步反应。
流程VIII

式 IVa、 IVb和 IVc化合物的一种替代途径描述于流程 VIII中。 关于这种途径，例如流程 II、 III和 IV中描述的技术可以用来制备式 VIa的中间体，其中T和q如流程 VII中所限定。可以使式 VIa的中 间体与式V的取代胺如流程 II中所述进行反应，得到式 IVa化合物， 式 IVa化合物是一种式I化合物，其中Y为O，A2为CR7，而A1为 C-(CH2)q-T。可以以流程 VII中所述的方式处理式 IVa化合物，获得 式 IVb或 IVc化合物，式 IVb或 IVc化合物是其中Y为O、A2为CR7、 而A1分别为C-(CH2)q-T’-R12或C-(CH2)q-T-R12的式 I化合物。
流程IX

流程 IX描述了在式 I化合物上进一步引入取代的另一种途径。如 流程IX所示(其中X是离去基团)，可以使式IIb的二烯烃与式III 的亲双烯体如流程I中所述进行反应，得到式IVe化合物，式IVe化 合物是一种式I化合物，其中Y为NH，A1和A2为CR7。例如通过用 本领域技术人员已知的方法以及在流程V中所述的方法，使式IVe化 合物与各种各样的亲电子试剂例如酰基氯或烷基卤在碱存在下反应， 可以在游离胺上官能化，得到式IVf化合物，式IVf化合物是一种其 中Y为NR7、A1和A2为CR7的式I化合物。
流程X

在流程X中描述式IVe和IVf化合物的一种替代途径。关于该途 径，流程II、III和IV中所述的技术可以应用于制备式VIb的中间体。 可以使式VIb的中间体与式V的取代胺如流程II中所述进行反应，得 到式IVe化合物，式IVe化合物是一种式I化合物，其中Y为NH， A1和A2为CR7。可以以流程V中所述的方式处理后一种中间体，获 得式IVf化合物，式IVf化合物是一种其中Y为NR7、A1和A2为CR7 的式I化合物。
流程XI

流程XI描述了在式I化合物上引入其它取代的另一种途径。如流 程XI中所示，可以使式IIc的二烯烃与式III的亲双烯体如流程I中 所述进行反应，得到式IVg化合物，式IVg化合物是一种式I化合物， 其中Y为SO，而A1和A2为CR7。可以用氧化剂例如mCPBA如流程 VI中所述处理式IVg化合物，得到式IVh化合物，式IVh化合物是 一种式I化合物，其中Y为SO2，而A1和A2为CR7。
流程XII

流程XII描述了在式I化合物上引入其它取代的另一种途径。如 流程XII中所示，可以将式XV化合物(该化合物可以按照上述流程制 备)在合适的酶或微生物存在下温育，导致形成式XVI的羟基化类似 物。这种方法可以用来导致由特定微生物或一系列不同的微生物在式 XV分子中区域特异性以及对映体特异性地引入羟基。这类微生物在 性质上可以例如是细菌、酵母或真菌，并且可以从分发单位(distributors) 例如ATCC获得，或者例如用本领域技术人员已知的方法经鉴定用于 该方法中。化合物XVI是一种式I化合物，其中Y如上所述，而A1 和A2优选为CR7。
流程XIII

流程III描述了在式I化合物上引入其它取代的另一种途径。如 流程XIII中所示，可以将式XVIII化合物(该化合物可以按照上述流 程制备)在合适的酶或微生物存在下温育，导致形成式XVIII的二醇类 似物。这种方法可以用来导致由特定微生物或一系列不同的微生物将 式XVII化合物区域特异性以及对映体特异性地转化为式XVIII的1- 2二醇。这类微生物在性质上可以例如是细菌、酵母或真菌，并且可 以从分发单位例如ATCC获得，或者例如用本领域技术人员已知的方 法经鉴定而用于该方法中。化合物XVIII是一种式I化合物，其中Y 如上所述，而A1和A2优选为CR7。
本发明也提供流程XII和XIII的方法。
因此，在一个实施方案中，本发明提供一种制备以下式XVI化合 物或其盐的方法：

其中所述符号如本文所定义，
所述方法包括使以下式XV的化合物或其盐：

其中所述符号如上所限定；
与能够催化所述化合物XV羟基化生成所述化合物XVI的酶或微生物 接触，并且实现所述羟基化的步骤。
在另一个优选实施方案中，本发明提供一种制备以下式XVIII的 化合物或其盐的方法：

其中所述符号如上所限定；
所述方法包括使以下式XVII的化合物或其盐：

其中所述符号如上所限定；
与能够催化化合物XVII的环氧环开环形成所述化合物XVIII的二醇的 酶或微生物接触，并且实现所述开环和形成二醇的步骤。
在本发明的所述方法中，考虑了或者单独的(即基本上无其它立体 异构体)或者与其它立体异构体形式混合的式XV、XVI、XVII和XVIII 化合物的未指定手性中心的所有立体构型。当接触异构体混合物时选 择性地使一种异构体转化(例如与内型异构体的羟基化相比，优先将外 型异构体羟基化)，是本发明的一个优选实施方案。选择性地转化为一 种异构体(例如与内面(exo face)“内型异构体”的羟基化相比，优先在 外面(exo face)“外型异构体”上羟基化，或者使环氧化物区域选择性 地开环，仅形成反式二醇的两种可能区域异构体中的一种)，是本发明 的一个优选实施方案。将非手性中间体羟基化而形成所述羟基化产物 的单一旋光异构体，也是本发明的一个优选实施方案。通过选择性羟 基化、或者环氧化物开环和二醇形成来拆分中间体的外消旋混合物， 从而产生两种可能的旋光异构体中的一种，也是本发明的一个优选实 施方案。本文所用的术语“拆分”是指部分拆分，优选完全拆分。
本文所用的术语“酶促过程”或“酶促方法”是指利用酶或微生 物的本发明的过程或方法。本文所用的术语“羟基化”是指将羟基如 上所述加入到亚甲基上。羟基化可以例如通过按照本发明的方法与分 子氧接触而完成。二醇形成可以例如按照本发明的方法通过与水接触 而完成。本发明方法中“酶或微生物”的应用包括应用两种或更多种 以及一种酶或微生物。
在本发明中所用的酶或微生物可以是能够催化本文所述酶促转 化的任何酶或微生物。所述酶或微生物材料无论其何种来源或纯度， 都可以以游离状态使用，或者例如通过物理吸附或捕获固定化于支持 体上。适用于本发明的微生物或酶可以根据以下步骤来选择：根据所 需活性进行筛选，例如通过使候选微生物或酶与起始化合物XV或 XVII或其盐接触，然后观察转化为相应的化合物XVI或XVIII或其 盐。所述酶可以例如为动物或植物酶或其混合物、微生物细胞、压碎 细胞、细胞提取物的形式，或者是合成来源的。
示例性微生物包括以下属内的微生物：链霉菌属( Streptomyces)或 拟无枝酸菌属( Amycolatopsis)。特别优选的微生物是以下种内的微生 物：灰色链霉菌( Streptomyces griseus)尤其是灰色链霉菌ATCC 10137 和东方拟无枝酸菌( Amycolatopsis orientalis)例如ATCC 14930、ATCC 21425、ATCC 35165、ATCC 39444、ATCC 43333、ATCC 43490、ATCC 53550、ATCC 53630，尤其是ATCC 43491。本文所用的术语“ATCC” 是指美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection，10801 University Blvd.，Manassas Virginia 20110-2209)所提及生物体的保藏 号。应该理解，本发明也考虑了这些生物体的突变体用于本文所述的 方法中，例如利用化学、物理(例如X射线)或生物方法(例如采用分子 生物学技术)修饰的那些突变体。
优选的酶包括来源于微生物、特别是上述那些微生物的酶。可以 例如通过提取和纯化方法例如用本领域技术人员已知的方法来分离 酶。酶可以例如以其游离状态或者以固定化形式使用。本发明的一个 实施方案是其中酶被吸附到合适的载体例如硅藻土(多孔Celite Hyflo Supercel)、微孔聚丙烯(Enka Accurel_聚丙烯粉末)或非离子聚合吸附剂 例如Amberlite_；得自Rohm and Haas Co.的XAD-2(聚苯乙烯)或 XAD-7(聚丙烯酸酯)。当用于使酶固定化时，载体可以控制酶的粒径 并防止在有机溶剂中使用时酶颗粒聚集。例如通过用冷丙酮在Celite Hyflo Supercel存在下沉淀所述酶的水溶液、然后真空干燥，或者在非 离子聚合吸附剂的情况下，将酶溶液与吸附剂在振摇器上温育，除去 过量的溶液，然后真空下干燥酶-吸附剂树脂，可以完成固定化。虽然 理想的是尽可能使用最少量的酶，但所需的酶量将根据所用酶的比活 而变。
如上所述的羟基化可以在体内发生。例如，肝脏酶可以相对于内 型异构体，选择性地将本发明化合物的外型异构体羟基化。在体外实 施本发明方法时，可以使用肝微粒体羟化酶作为催化的酶。
这些方法也可以采用含有有能力催化所述转化的酶的微生物细 胞来进行。当用微生物进行所述转化时，通过加入所述细胞和原料至 所需的反应介质中，常规性地实施这些程序。
当使用微生物时，所述细胞可以以完整的湿细胞或干燥细胞例如 冻干、喷雾干燥或热干燥的细胞形式、或者以经处理的细胞材料例如 已破碎细胞或细胞提取物的形式使用。也可以使用固定化于先前描述 的Celite_或Accurel_聚丙烯的细胞提取物。也考虑了应用遗传工程生 物体。宿主细胞可以是经修饰从而含有表达一种或多种如上所述能够 催化的酶的一个或多个基因的任何细胞，例如大肠杆菌( Escherichia coli)。
当使用一个或多个微生物时，本发明的酶法可以在微生物发酵之 后进行(两级发酵转化)，或者与发酵同时进行，也就是说，在后一种 情况下，通过原位发酵和转化进行(单级发酵转化)。
本领域技术人员可以利用合适的培养基达到使微生物生长。用于 使微生物生长的合适培养基包括那些为微生物细胞的生长提供必需营 养素的培养基。供生长用的典型培养基包括必需的碳源、氮源和元素 (例如微量的)。也可以加入诱导物。本文所用的术语“诱导物”包括 增强微生物细胞内所需酶活性生成的任何化合物。
碳源可以包括：糖，例如麦芽糖、乳糖、葡萄糖、果糖、甘油、 山梨醇、蔗糖、淀粉、甘露醇、丙二醇等；有机酸，例如乙酸钠、柠 檬酸钠等；和醇类，例如乙醇、丙醇等。
氮源可以包括N-Z胺A、玉米浆、大豆粉、牛肉膏、酵母膏、糖 蜜、面包酵母、胰蛋白胨、nutrisoy、蛋白胨、yeastamin、氨基酸例如 谷氨酸钠等、硝酸钠、硫酸铵等。
微量元素可以包括镁盐、锰盐、钙盐、钴盐、镍盐、铁盐、钠盐 和钾盐。磷酸盐也可以以微量加入，优选以大于微量的量加入。
采用的培养基可以包括不止一种碳源或氮源或其它营养素。
供生长用的优选培养基包括培养液。
当在微生物生长期间例如在摇瓶培养物或发酵罐中进行时，反应 混合物的搅动和通气影响转化过程中可用的氧量。
反应介质的温育最好在约4℃和约60℃之间的温度下进行。反应 时间可以根据所用的酶量以及酶的比活适当地改变。通过提高反应温 度和/或增加加入至反应溶液中的酶量，可以减少反应时间。
也优选使用水性液体作为反应介质，虽然也可以使用有机液体或 混溶性或不混溶性(两相)有机/水性液体混合物。选择酶或微生物相对 于原料的用量，以允许催化本发明的酶促转化。
两相溶剂体系的有机相溶剂可以是在水中不混溶的任何有机溶 剂，例如甲苯、环己烷、二甲苯、三氯三氟乙烷等。水相方便地为水， 优选去离子水，或者为合适的水性缓冲液，尤其是磷酸缓冲液。双向 溶剂体系优选包含约10-90％(体积)的有机相和约90-10％(体积)的水 相，最优选含有20％或约20％(体积)的有机相和80％或约80％(体积) 的水相。
这类方法的一个示例性实施方案以制备待用的酶或微生物水溶 液开始。例如，可以将优选的酶或微生物加入至适量的水性溶剂例如 磷酸缓冲液等中。最好将这种混合物调节并维持在所需的pH。
用本发明方法生产的化合物XVI和XVIII可以用例如萃取、蒸 馏、结晶和柱色谱的方法分离和纯化。
优选化合物
本发明化合物的一个优选亚类包括式I化合物或其盐，其中一个 或多个、最好是所有以下取代基如下定义：
G为芳基或杂环基(例如杂芳基)，其中所述基团为单环或多环，并且所 述基团可任选地在一个或多个位置、优选被以下基团取代：氢、 烷基或取代的烷基、链烯基或取代的链烯基、链炔基或取代的链 炔基、卤代、环烷基或取代的环烷基、环烯基或取代的环烯基、 芳基或取代的芳基、杂环基或取代的杂环基、芳烷基或取代的芳 烷基、杂环基烷基或取代的杂环基烷基、CN、R1OC＝O、R1C＝O、 R1HNC＝O、R1R2NC＝O、HOCR3R3’、硝基、R1OCH2、R1O、NH2、 NR4R5、S＝OR1、SO2R1、SO2NR1R1’、(R1)(R1’)P＝O或 (R1’)(NHR1)P＝O；
Z1为O、S、NH或NR6；
Z2为O、S、NH或NR6；
A1为CR7或N；
A2为CR7或N；
Y为J-J’-J”，其中J为(CR7R7’)n，而n＝0-3，J’为一个键或O、S、S＝O、 SO2、NH、OC＝O、C＝O、NR7、CR7R7’、R2P＝O、R2p＝S、R2OP＝O、 R2NHP＝O、OP＝OOR2、OP＝ONHR2、OP＝OR2、OSO2、NHNH、 NHNR6、NR6NH、N＝N、环烷基或取代的环烷基、环烯基或取代 的环烯基或者杂环基或取代的杂环基，且J”为(CR7R7’)n，而n＝ 0-3，其中Y不是键；
W为CR7R7’-CR7R7’、CR7R7’-C＝O、NR9-CR7R7’、N＝CR8、N＝N、 NR9-NR9’、环烷基或取代的环烷基、环烯基或取代的环烯基、杂 环基或取代的杂环基、或者芳基或取代的芳基，其中当W不是 NR9-CR7R7’、N＝CR8、N＝N、NR9-NR9’、或者杂环基或取代的杂 环基时，则J’必须是O、S、S＝O、SO2、NH、NR7、OP＝OOR2、 OP＝ONHR2、OSO2、NHNH、NHNR6、NR6NH或N＝N；
Q1为H、烷基或取代的烷基、链烯基或取代链烯基、环烷基或取代的 环烷基、环烯基或取代的环烯基、杂环基烷基或取代的杂环基烷 基、芳烷基或取代的芳烷基、链炔基或取代链炔基、芳基或取代 的芳基、杂环基(例如杂芳基)或取代的杂环基(例如取代的杂芳 基)、卤代、CN、R1OC＝O、R4C＝O、R5R6NC＝O、HOCR7R7’、硝 基、R1OCH2、R1O、NH2或NR4R5；
Q2为H、烷基或取代的烷基、链烯基或取代链烯基、环烷基或取代的 环烷基、环烯基或取代的环烯基、杂环基烷基或取代的杂环基烷 基、芳烷基或取代的芳烷基、链炔基或取代链炔基、芳基或取代 的芳基、杂环基(例如杂芳基)或取代的杂环基(例如取代的杂芳 基)、卤代、CN、R1OC＝O、R4C＝O、R5R6NC＝O、HOCR7R7’、硝 基、R1OCH2、R1O、NH2或NR4R5；
L为一个键、(CR7R7’)n、NH、NR5或NR5(CR7R7’)n，其中n＝0-3；
R1和R1’分别独立地为H、烷基或取代的烷基、环烷基或取代的环烷 基、环烯基或取代的环烯基、杂环基或取代的杂环基、环烷基烷 基或取代的环烷基烷基、环烯基烷基或取代的环烯基烷基、杂环 基烷基或取代的杂环基烷基、芳基或取代的芳基、芳烷基或取代 的芳烷基；
R2为烷基或取代的烷基、环烷基或取代的环烷基、环烯基或取代的环 烯基、杂环基或取代的杂环基、环烷基烷基或取代的环烷基烷 基、环烯基烷基或取代的环烯基烷基、杂环基烷基或取代的杂环 基烷基、芳基或取代的芳基、芳烷基或取代的芳烷基；
R3和R3’分别独立地为H、烷基或取代的烷基、环烷基或取代的环烷 基、环烯基或取代的环烯基、杂环基或取代的杂环基、环烷基烷 基或取代的环烷基烷基、环烯基烷基或取代的环烯基烷基、杂环 基烷基或取代的杂环基烷基、芳基或取代的芳基、芳烷基或取代 的芳烷基、卤代、CN、羟胺、羟基酰胺、烷氧基或取代的烷氧基、 氨基、NR1R2、硫氢基、烷硫基或取代的烷硫基；
R4为H、烷基或取代的烷基、环烷基或取代的环烷基、环烯基或取代 的环烯基、杂环基或取代的杂环基、环烷基烷基或取代的环烷基 烷基、环烯基烷基或取代的环烯基烷基、杂环基烷基或取代的杂 环基烷基、芳基或取代的芳基、芳烷基或取代的芳烷基、R1C＝O、 R1NHC＝O或SO2NR1R1’；
R5为烷基或取代的烷基、环烷基或取代的环烷基、环烯基或取代的环 烯基、杂环基或取代的杂环基、环烷基烷基或取代的环烷基烷 基、环烯基烷基或取代的环烯基烷基、杂环基烷基或取代的杂环 基烷基、芳基或取代的芳基、芳烷基或取代的芳烷基、R1C＝O、 R1NHC＝O、SO2R1或SO2NR1R1’；
R6为烷基或取代的烷基、环烷基或取代的环烷基、环烯基或取代的环 烯基、杂环基或取代的杂环基、环烷基烷基或取代的环烷基烷 基、环烯基烷基或取代的环烯基烷基、杂环基烷基或取代的杂环 基烷基、芳基或取代的芳基、芳烷基或取代的芳烷基、CN、OH、 OR1、R1C＝O、R1NHC＝O、SO2R1或SO2NR1R1’；
R7和R7’分别独立地为H、烷基或取代的烷基、链烯基或取代链烯基、 环烷基或取代的环烷基、环烯基或取代的环烯基、杂环基或取代 的杂环基、环烷基烷基或取代的环烷基烷基、环烯基烷基或取代 的环烯基烷基、杂环基烷基或取代的杂环基烷基、芳基或取代的 芳基、芳烷基或取代的芳烷基、卤代、CN、OR1、硝基、羟胺、 羟基酰胺、氨基、NHR4、NR2R5、NOR1、硫氢基、烷硫基或取 代的烷硫基、R1C＝O、R1OC＝O、R1NHC＝O、SOR1、PO3R1R1’、 R1R1’NC＝O、C＝OSR1、SO2R1或SO2NR1R1’；
R8和R8’分别独立地为H、烷基或取代的烷基、链烯基或取代链烯基、 环烷基或取代的环烷基、环烯基或取代的环烯基、杂环基或取代 的杂环基、环烷基烷基或取代的环烷基烷基、环烯基烷基或取代 的环烯基烷基、杂环基烷基或取代的杂环基烷基、芳基或取代的 芳基、芳烷基或取代的芳烷基、硝基、卤代、CN、OR1、氨基、 NHR4、NR2R5、NOR1、烷硫基或取代的烷硫基、C＝OSR1、 R1OC＝O、R1C＝O、R1NHC＝O、R1R1’NC＝O、S＝OR1、SO2R1、 PO3R1R1’或SO2NR1R1’；
R9和R9’分别独立地为H、烷基或取代的烷基、环烷基或取代的环烷 基、环烯基或取代的环烯基、杂环基或取代的杂环基、环烷基烷 基或取代的环烷基烷基、环烯基烷基或取代的环烯基烷基、杂环 基烷基或取代的杂环基烷基、芳基或取代的芳基、芳烷基或取代 的芳烷基、CN、OH、OR1、R1C＝O、R1OC＝O、R1NHC＝O或 SO2NR1R1’；
尤其是其中该优选亚类的基团W和Y也在式Ia的W’和Y’的定义内， 在适合于该亚类时以所述式Ia的(1)-(14)为条件，并且最优选其中 (i)当Y’为-O-，并且W’为CR7R7’-CR7R7’时，A1和A2不同时为 CH；并且(ii)当L为一个键时，G不是未取代的苯基。
本发明化合物的另一个更优选亚类包括式I化合物或其盐，其中 一个或多个、最好是所有以下取代基如下定义：
G为芳基或杂环基(例如杂芳基)，其中所述基团为单环或多环，并且所 述基团可任选地在一个或多个位置、优选被以下基团取代：氢、 烷基或取代的烷基、链烯基或取代的链烯基、链炔基或取代的链 炔基、卤代、环烷基或取代的环烷基、环烯基或取代的环烯基、 芳基或取代的芳基、杂环基或取代的杂环基、芳烷基或取代的芳 烷基、杂环基烷基或取代的杂环基烷基、CN、R1C＝O、R1HNC＝O、 R1R2NC＝O、HOCR3R3’、硝基、R1OCH2、R1O、NH2、NR4Ri5 SO2R1或SO2NR1R1’；
Z1为O；
Z2为O；
A1为CR7；
A2为CR7；
Y为J-J’-J”，其中J为(CR7R7’)n，而n＝0-3，J’为一个键或O、S、S＝O、 SO2、NH、NR7、CR7R7’、R2P＝O、R2P＝S、R2OP＝O、R2NHP＝O、 OP＝OOR2、OP＝ONHR2、OP＝OR2、OSO2、NHNH、NHNR6、 NR6NH、N＝N、环烷基或取代的环烷基、环烯基或取代的环烯基 或者杂环基或取代的杂环基，且J”为(CR7R7’)n，而n＝0-3，其中 Y不是键；
W为CR7R7’-CR7R7’、CR7R7’-C＝O、NR9-CR7R7’、N＝CR8、N＝N、 NR9-NR9’、环烷基或取代的环烷基、环烯基或取代的环烯基、杂 环基或取代的杂环基、或者芳基或取代的芳基，其中当W不是 NR9-CR7R7’、N＝CR8、N＝N、NR9-NR9’、或者杂环基或取代的杂 环基时，则J’必须是O、S、S＝O、SO2、NH、NR7、OP＝OOR2、 OP＝ONHR2、OSO2、NHNH、NHNR6、NR6NH或N＝N；
Q1为H、烷基或取代的烷基、链烯基或取代链烯基、环烷基或取代的 环烷基、环烯基或取代的环烯基、杂环基烷基或取代的杂环基烷 基、芳烷基或取代的芳烷基、链炔基或取代链炔基、芳基或取代 的芳基、杂环基(例如杂芳基)或取代的杂环基(例如取代的杂芳 基)、卤代、CN、R4C＝O、R5R6NC＝O、HOCR7R7’、硝基、R1OCH2、 R1O、NH2或NR4R5；
Q2为H、烷基或取代的烷基、链烯基或取代链烯基、环烷基或取代的 环烷基、环烯基或取代的环烯基、杂环基烷基或取代的杂环基烷 基、芳烷基或取代的芳烷基、链炔基或取代链炔基、芳基或取代 的芳基、杂环基(例如杂芳基)或取代的杂环基(例如取代的杂芳 基)、卤代、CN、R4C＝O、R5R6NC＝O、HOCR7R7’、硝基、R1OCH2、 R1O、NH2或NR4R5；
L为一个键；
R1和R1’分别独立地为H、烷基或取代的烷基、环烷基或取代的环烷 基、环烯基或取代的环烯基、杂环基或取代的杂环基、环烷基烷 基或取代的环烷基烷基、环烯基烷基或取代的环烯基烷基、杂环 基烷基或取代的杂环基烷基、芳基或取代的芳基、芳烷基或取代 的芳烷基；
R2为烷基或取代的烷基、环烷基或取代的环烷基、环烯基或取代的环 烯基、杂环基或取代的杂环基、环烷基烷基或取代的环烷基烷 基、环烯基烷基或取代的环烯基烷基、杂环基烷基或取代的杂环 基烷基、芳基或取代的芳基、芳烷基或取代的芳烷基；
R3和R3’分别独立地为H、烷基或取代的烷基、环烷基或取代的环烷 基、环烯基或取代的环烯基、杂环基或取代的杂环基、环烷基烷 基或取代的环烷基烷基、环烯基烷基或取代的环烯基烷基、杂环 基烷基或取代的杂环基烷基、芳基或取代的芳基、芳烷基或取代 的芳烷基、卤代、CN、烷氧基或取代的烷氧基、氨基、NR1R2、 烷硫基或取代的烷硫基；
R4为H、烷基或取代的烷基、环烷基或取代的环烷基、环烯基或取代 的环烯基、杂环基或取代的杂环基、环烷基烷基或取代的环烷基 烷基、环烯基烷基或取代的环烯基烷基、杂环基烷基或取代的杂 环基烷基、芳基或取代的芳基、芳烷基或取代的芳烷基、R1C＝O、 R1NHC＝O或SO2NR1R1’；
R5为烷基或取代的烷基、环烷基或取代的环烷基、环烯基或取代的环 烯基、杂环基或取代的杂环基、环烷基烷基或取代的环烷基烷 基、环烯基烷基或取代的环烯基烷基、杂环基烷基或取代的杂环 基烷基、芳基或取代的芳基、芳烷基或取代的芳烷基、R1C＝O、 R1NHC＝O、SO2R1或SO2NR1R1’；
R6为烷基或取代的烷基、环烷基或取代的环烷基、环烯基或取代的环 烯基、杂环基或取代的杂环基、环烷基烷基或取代的环烷基烷 基、环烯基烷基或取代的环烯基烷基、杂环基烷基或取代的杂环 基烷基、芳基或取代的芳基、芳烷基或取代的芳烷基、CN、OH、 OR1、R1C＝O、R1NHC＝O、SO2R1或SO2NR1R1’；
R7和R7’分别独立地为H、烷基或取代的烷基、链烯基或取代链烯基、 环烷基或取代的环烷基、环烯基或取代的环烯基、杂环基或取代 的杂环基、环烷基烷基或取代的环烷基烷基、环烯基烷基或取代 的环烯基烷基、杂环基烷基或取代的杂环基烷基、芳基或取代的 芳基、芳烷基或取代的芳烷基、卤代、CN、OR1、硝基、氨基、 NHR4、NR2R5、烷硫基或取代的烷硫基、R1C＝O、R1NHC＝O、 SO2R1、R1R1’NC＝O或SO2NR1R1’；
R8和R8’分别独立地为H、烷基或取代的烷基、环烷基或取代的环烷 基、环烯基或取代的环烯基、杂环基或取代的杂环基、环烷基烷 基或取代的环烷基烷基、环烯基烷基或取代的环烯基烷基、杂环 基烷基或取代的杂环基烷基、芳基或取代的芳基、芳烷基或取代 的芳烷基、硝基、卤代、CN、OR1、氨基、NHR4、NR2R5、烷硫 基或取代的烷硫基、R1C＝O、R1NHC＝O、R1R1’NC＝O、SO2R1或 SO2NR1R1’；且
R9和R9’分别独立地为H、烷基或取代的烷基、链烯基或取代链烯基、 环烷基或取代的环烷基、环烯基或取代的环烯基、杂环基或取代 的杂环基、环烷基烷基或取代的环烷基烷基、环烯基烷基或取代 的环烯基烷基、杂环基烷基或取代的杂环基烷基、芳基或取代的 芳基、芳烷基或取代的芳烷基、CN、OH、OR1、R1C＝O、R1NHC＝O 或SO2NR1R1’；
尤其是其中该优选亚类的基团W和Y也在式Ia的W’和Y’的定义内， 在适合于该亚类时以所述式Ia的(1)-(14)为条件，并且最优选其中 (i)当Y’为-O-，并且W’为CR7R7’-CR7R7’时，A1和A2不同时为 CH；并且(ii)当L为一个键时，G不是未取代的苯基。
本发明化合物的一个特别优选的亚类包括式I化合物或其盐，其 中一个或多个、最好是所有以下取代基如下定义：
G为芳基(尤其是苯基或萘基)或杂环基(尤其是本文实施例化合物的那 些杂环基G)，其中所述基团为单环或多环，并且所述基团可任选 地在一个或多个位置、优选被任一本文实施例化合物中例举的取 代基取代；
L为一个键、(CR7R7’)n(其中n为1，而R7和R7’分别独立地为H、烷 基或取代的烷基)或-CH2-NH-；
A1和A2分别独立地为CR7，其中R7(i)为氢、烷基或取代的烷基、芳 烷基或取代的芳烷基、链烯基或取代的链烯基(例如被芳基(尤其 是苯基或萘基)或取代的芳基取代的链烯基、或者被杂环基或取代 的杂环基取代的链烯基)、芳基或取代的芳基、杂环基或取代的杂 环基、杂环基烷基或取代的杂环基烷基，其中对于每种所述基团 而言，优选的取代基是一个或多个选自V1的基团(尤其是式CR7 的A1和A2基团，其中A1和/或A2中每个的R7独立选自C1-4烷基， 所述烷基被一个或多个基团V1取代)，或者(ii)与基团W(尤其是 当W为CR7R7’-CR7R7’时)的R7形成一个杂环；
V1为OH、CN、卤代、-O-芳基、-O-取代的芳基、-O-杂环基、-O-取 代的杂环基、-O-CO-烷基、-O-CO-取代的烷基、-O-(烷基甲硅烷 基)、-O-芳基烷基、-O-取代的芳基烷基、-O-CO-烷基、-O-CO- 取代的烷基、-O-CO-芳基烷基、-O-CO-取代的芳基烷基、-O-CO- 芳基、-O-CO-取代的芳基、-O-CO-杂环基、-O-CO-取代的杂环基、 -S-(任选取代的芳基)-NH-CO-(任选取代的烷基)、-SO-(任选取代 的芳基)-NH-CO-(任选取代的烷基)、-SO2-(任选取代的芳基)-NH- CO-(任选取代的烷基)、-NH-SO2-芳基、-NH-SO2-取代的芳基、- NH-CO-O-(任选取代的芳基烷基)、-NH-CO-O-烷基、-NH-CO-O- 取代的烷基、-NH-CO-烷基、-NH-CO-取代的烷基、-NH-CO-芳基、 -NH-CO-取代的芳基、-NH-CO-(任选取代的芳基烷基)、-NH- CO-(任选取代的烷基)-O-(任选取代的芳基)、-N(任选取代的烷 基)(任选取代的芳基)、-N(任选取代的烷基)(任选取代的芳基烷 基)、-COH、-COOH、-CO-O-烷基、-CO-O-取代的烷基、-CO-O- 任选取代的芳基烷基、-CO-芳基、-CO-取代的芳基、-O-CO-NH- 芳基、-O-CO-NH-取代的芳基、-CO-NH-芳基、-CO-NH-取代的芳 基、-CO-NH-芳基烷基、-CO-NH-取代的芳基烷基、-O-(任选取代 的芳基)-NH-CO-(任选取代的烷基)；
Y为-O-、-SO-、-N(V2)-、-CH2-N(V2)-、-CO-N(烷基)-、-CH2-S-、- CH2-SO2-；
V2为氢、烷基、芳基烷基、-CO-烷基、-CO-O-芳基、-CO-O-芳基烷基； W为CR7R7’-CR7R7’(其中R7和R7’分别独立选自：H、OH、烷基或取 代的烷基(例如羟基烷基)，或者其中W与A1或A2的R7一起形成 一个杂环)、CR8＝CR8’(其中R8和R8’分别独立选自：H、烷基或 取代的烷基(例如羟基烷基))、CR7R7’-C＝O(R7和R7’分别为氢，或 者其中R7与A1或A2的R7一起形成一个杂环)、N＝CR8(其中R8 为烷基)、环烷基或取代的环烷基、或者杂环基或取代的杂环基；
Z1和Z2为O；且
Q1和Q2为H。
优选的G-L基团是任选取代的萘基或任选取代的稠合二环杂环 基，例如任选取代的苯并稠合杂环基(例如通过所述苯部分连接于所述 分子的其余部分)，尤其是其中连接于苯的杂环有5元，实例为苯并_ 唑、苯并噻唑、苯并噻二唑、苯并_二唑或苯并噻吩，例如：


其中
X为卤代(尤其是F)、OH、CN、NO2或
(如，
U为O或S(其中S可以任选地被氧合，例如氧合为SO)；
U1为CH3或CF3；
每个U2独立地为N、CH或CF；
U3为N、O或S；
U4和U5与它们所连接的原子一起形成一个任选取代的5元杂环，所述 杂环可以部分不饱和或是芳环，并且含有1-3个环杂原子；
每个U6独立地为CH或N；和
表示由U3、U4和U5形成的环内的任选双键。
一个尤其优选的亚类包括具有以下结构的式I化合物或其盐：

其中G为任选取代的萘基或苯并稠合二环杂环基，R7为CH3或被V’ 取代的C1-4烷基，而R7’为H或羟基。
相对于其中R7’为H的相应化合物而言，除具有良好的通透性和 高系统血液水平外，其中R7’为羟基的化合物还可以提供增强的水溶性 和代谢稳定性。这些含羟基的化合物可以通过R7’为羟基的相应化合物 的代谢以及通过本文所述的制备方法来获得。
应用和实用性
本发明的化合物调节核激素受体(NHR)的功能，本发明的化合物 包括例如作为雄激素受体(AR)、雌激素受体(ER)、孕酮受体(PR)、糖 皮质激素受体(GR)、盐皮质激素受体(MR)、类固醇异生素受体(SXR)、 其它类固醇结合NHR、孤独受体或其它NHR的激动剂、部分激动剂、 拮抗剂或部分拮抗剂的化合物。优选对一种这样的NHR相对于NHR 家族内其它NHR的选择性调节。“调节”包括例如活化(例如激动剂 活性，诸如选择性雄激素受体激动剂活性)或抑制(例如拮抗剂活性)。
因此，本发明的化合物可用于治疗NHR相关病症。“NHR相关 病症”在本文中使用时是指可以通过调节受治疗者体内NHR的功能可 以治疗的病症或疾病，其中治疗包括所述病症或疾病的预防(例如预防 性治疗)、部分缓解或治愈。调节可以在局部发生，例如在所述受治疗 者的某些组织内发生，或者在正治疗这种疾病病症的受治疗者体内更 为广泛地发生。
本发明的化合物可用于治疗各种各样的病症和疾病，包括但不限 于以下所述的病症和疾病：
式I化合物可以在涉及雌激素受体途径调节的各种各样的病症中 用作雌激素受体的激动剂、部分激动剂、拮抗剂或部分拮抗剂，优选 对该受体是选择性的。所述化合物的应用包括但不限于：骨质疏松，热 潮红、阴道干燥、前列腺癌、乳癌、子宫内膜癌、表达雌激素受体的 癌症例如上述癌症和其它癌症、避孕、终止妊娠、绝经、闭经和痛经。
式I化合物可以在涉及孕酮受体途径调节的各种各样的病症中用 作孕酮受体的激动剂、部分激动剂、拮抗剂或部分拮抗剂，优选对该 受体是选择性的。所述化合物的应用包括但不限于：乳癌、带有孕酮 受体的其它癌症、子宫内膜异位、恶病质、避孕、绝经、cyclesynchrony、 脑脊膜瘤、痛经、纤维瘤、终止妊娠、引产和骨质疏松。
式I化合物可以在涉及糖皮质激素受体途径调节的各种各样的病 症中用作糖皮质激素受体的激动剂、部分激动剂、拮抗剂或部分拮抗 剂，优选对该受体是选择性的。所述化合物的应用包括但不限于：炎 性疾病、自身免疫病、前列腺癌、乳癌、早老性痴呆、精神病、药瘾、 非胰岛素依赖性糖尿病以及作为多巴胺受体阻滞药或者作为用于治疗 多巴胺受体介导疾病的药物。
式I化合物可以在涉及盐皮质激素受体途径调节的各种各样的病 症中用作盐皮质激素受体的激动剂、部分激动剂、拮抗剂或部分拮抗 剂，优选对该受体是选择性的。所述化合物的应用包括但不限于：停 药综合征和炎性疾病。
式I化合物可以在涉及醛固酮受体途径调节的各种各样的病症中 用作醛固酮受体的激动剂、部分激动剂、拮抗剂或部分拮抗剂，优选 对该受体是选择性的。所述化合物的一个应用包括但不限于充血性心 力衰竭。
式I化合物可以在涉及雄激素受体途径调节的各种各样的病症中 用作雄激素受体的激动剂、部分激动剂、拮抗剂或部分拮抗剂，优选 对该受体是选择性的。所述化合物的应用包括但不限于：多毛症、痤 疮、皮脂溢、早老性痴呆、雄激素性脱发(androgenic alopecia)、性腺机 能减退、超多毛症(hyperpilosity)、良性前列腺肥大、前列腺腺瘤和肿 瘤(例如晚期转移性前列腺癌)、带有雄激素受体的良性或恶性肿瘤细 胞的治疗(例如乳房、脑、皮肤、卵巢、膀胱、淋巴、肝脏和肾脏癌症 的情况)、VCAM表达的胰腺癌调节和其中用于治疗心脏病、炎症和免 疫调节的应用、VEGF表达的调节以及其中用作抗血管生成药的应 用、骨质疏松、抑制精子发生、性欲、恶病质、子宫内膜异位、多囊 卵巢综合征、厌食、雄性中由于年龄相关的睾酮水平下降而补充雄激 素、雄性更年期(male menopause)、雄性激素替代、雄性和雌性性机能 障碍以及在能走动的患者中抑制肌肉萎缩。例如，考虑了泛AR(Pan AR) 调节，尤其优选前列腺选择性AR调节(“SARM”)，例如用于治疗早期 前列腺癌。
式I化合物可以用作例如在许多肿瘤系中发现的突变型雄激素受 体的(优选选择性的)拮抗剂。这类突变体的实例是在诸如以下的代表 性前列腺肿瘤细胞系中发现的那些突变体：LNCap(T877A突变， Biophys.Acta，187，1052(1990))、PCa2b(L701H和T877A突变，J.Urol.， 162，2192(1999))和CWR22(H874Y突变，Mol.Endo.，11，450(1997))。
所述化合物的应用包括但不限于前列腺腺瘤和肿瘤、乳癌和子宫内膜 癌。
式I化合物可以在涉及类固醇异生素受体途径调节的各种各样的 病症中用作类固醇异生素受体的激动剂、部分激动剂、拮抗剂或部分 拮抗剂，优选对该受体是选择性的。所述化合物的应用包括但不限于： 治疗胆固醇内稳态调节异常、通过共同给予调节SXR的P450调节剂 效应的药物(本发明化合物)减弱药物的代谢。
除上述NHR之外，还有许多可能未鉴定的活化配体或失活配体 的NHR。这些蛋白由于与其它NHR有强序列同源性，被分类为NHR， 并且被称为孤独受体。因为所述孤独受体表现出与其它NHR的强序列 同源性，所以式I化合物包括用作孤独NHR功能调节剂的那些化合 物。受NHR调节剂(例如式I范围内的化合物)调节的孤独受体例如但 不限于表1中所列的那些受体。所述孤独受体的调节剂的示例性治疗 应用也在表1中列出，但不限于其中的实例。
表1.  示例性的孤独核激素受体、形式(M＝单体，D＝异二聚体，H＝ 同二聚体)、组织表达和目标治疗应用。(CNS＝中枢神经系统)
受体            形式     组织表达               目标治疗应用
NURR1          M/D     多巴胺能神经元        帕金森病
RZRβ          M       脑(脑垂体)，肌肉      睡眠障碍
RORα          M       小脑，浦肯野细胞      关节炎，小脑性共济
                                             失调
NOR-1          M       脑，肌肉，心脏，肾    CNS疾病，癌症
                       上腺，胸腺
NGFI-Bβ       M/D     脑                    CNS疾病
COUP-Tfα      H       脑                    CNS疾病
COUP-TFβ      H       脑                    CNS疾病
COUP-TFγx     H       脑                    CNS疾病
Nur77          H       脑，胸腺，肾上腺      CNS疾病
Rev-ErbAα     H       肌肉，脑(遍在的)      肥胖
HNF4α         H       肝，肾，肠            糖尿病
SF-1           M       性腺，脑垂体          代谢性疾病
LXRα，β      D       肾(遍在的)            代谢性疾病
GCNF           M/H     睾丸，卵巢            不育症
ERRα，β      M       胎盘，骨              不育症，骨质疏松
FXR            D       肝，肾                代谢性疾病
CARα          H       肝，肾                代谢性疾病
PXR            H       肝，肠                代谢性疾病
因此，本发明提供用于治疗NHR相关病症的方法，所述方法包 括给予需要所述治疗的受治疗者有效量的至少一种式I化合物的步 骤。其它治疗药例如下述的那些治疗药可以与本发明化合物一起用于 本发明方法中(例如分开应用，或作为固定剂量配制在一起)。在本发 明的方法中，这类其它治疗药可以在给予本发明化合物之前、同时或 之后给予。
本发明也提供药用组合物，所述药用组合物包含有效量的至少一 种能够治疗NHR相关病症的式I化合物和药学上可接受的载体(载体 或稀释剂)。本发明的组合物可以含有下述的其它治疗药，并且可以例 如按照例如药用制剂领域熟知的技术，通过用常规固体或液体载体或 稀释剂以及适合于所需给药方式的类型的药用添加剂(例如赋形剂、粘 合剂、防腐剂、稳定剂、矫味剂等)来配制。
应该注意到，本发明化合物在其作用机制方面并无限制，可用于 治疗本文所列或所述的任何病症或疾病，例如炎性疾病或癌症或其它 增生性疾病，还可用于治疗这类病症或疾病的组合物中。这类病症和 疾病包括但不限于任何先前所述的以及诸如以下所述的病症或疾病： 维持肌肉强度和功能(例如在老年动物中)；逆转或预防老年动物虚弱 或年龄相关性机能减退(“ARFD”)(例如sarcopenia)；治疗糖皮质激素分 解代谢副作用；预防和/或治疗骨量、密度或生长减少(例如骨质疏松和 骨质稀少)；治疗慢性疲劳综合征(CFS)；慢性malagia；治疗急性疲劳 综合征和选择性手术后的肌肉损失(例如术后康复)；加速伤口愈合； 加速骨折修复(例如加速髋部骨折患者恢复)；加速复合性骨折例如内 脱位性骨生成的愈合；用于关节置换；预防术后粘连形成；加速牙齿 修复或生长；维持感觉功能(例如听觉、视觉、嗅觉和味觉)；治疗牙 周病；治疗骨折继发的消瘦和与慢性阻塞性肺病(COPD)、慢性肝病、 AIDS、失重、癌性恶病质、烧伤和外伤恢复、慢性分解代谢状态(例如 昏迷)、进食障碍(例如厌食)和化学治疗相关的消瘦；治疗心肌病；治 疗血小板减少；治疗与节段性回肠炎相关的生长迟缓；治疗短肠综合 征；治疗过敏性大肠综合征；治疗炎性肠病；治疗节段性回肠炎和溃 疡性结肠炎；治疗与移植相关的并发症；治疗生理性身材矮小包括生 长激素缺乏儿童和与慢性病相关的身材矮小；治疗肥胖和与肥胖相关 的身材矮小；治疗厌食(例如与恶病质或衰老相关的)；治疗皮质醇过 多症和Cushing综合征；Paget病；治疗骨关节炎；诱导脉冲式生长激 素释放；治疗骨软骨发育不良；治疗抑郁、神经过敏、易怒和紧张； 治疗精神动力减低和自卑(例如动机/过分自信)；改善认知功能(例如治 疗痴呆，包括早老性痴呆和短期记忆力丧失)；治疗与肺机能障碍和通 风机依赖有关的分解代谢；治疗心机能障碍(例如与心脏瓣膜疾病、心 肌梗塞、心脏肥大或充血性心力衰竭相关的)；降压；预防心室机能障 碍或预防再灌注事件；治疗长期透析的成年动物；逆转或减慢衰老的 分解代谢状态；减弱或逆转外伤后的蛋白质分解代谢反应(例如逆转与 手术、充血性心力衰竭、心肌病、烧伤、癌症、COPD等相关的分解 代谢状态)；减轻恶病质和由于诸如癌症或AIDS之类的慢性病所致的 蛋白质损失；治疗血胰岛素增多，包括胰岛细胞增殖症；治疗免疫抑 制患者；治疗与多发性硬化或其它神经变性性疾病相关的消瘦；促进 髓磷脂修复；维持皮肤厚度；治疗代谢内稳态和肾内稳态(例如在虚弱 的老年动物中)；刺激成骨细胞、骨重建和软骨生长；调节食物摄取量； 治疗哺乳动物(例如人类)的胰岛素抵抗，包括NIDDM；治疗心脏中的 胰岛素抵抗；改善睡眠质量和校正由于REM睡眠高度增加和REN潜 伏期减少所致的衰老的相对生长激素过少症；治疗低体温；治疗充血 性心力衰竭；治疗脂肪营养不良(例如在进行HIV或AIDS治疗例如蛋 白酶抑制剂的患者中)；治疗肌萎缩(例如由于身体不活动、卧床或承 重减轻的条件所致)；治疗肌骨骼损伤(例如在老年动物中)；改善总体 肺功能；治疗睡眠障碍；和治疗长时间危重疾病的分解代谢状态；治 疗多毛症、痤疮、皮脂溢、雄激素性脱发、贫血、超多毛症、良性前 列腺肥大、前列腺腺瘤和肿瘤(例如晚期转移性前列腺癌)和带有雄激 素受体的恶性肿瘤细胞，例如在乳房、脑部、皮肤、卵巢、膀胱、淋 巴、肝脏和肾脏癌症的情况下；皮肤癌、胰腺癌、子宫内膜癌、肺癌 和结肠癌；骨肉瘤；恶性肿瘤的高钙血；转移性骨病；治疗精子生成、 子宫内膜异位和多囊卵巢综合征；抵抗妊娠的先兆子痫、子痫和早产； 治疗经前综合征；治疗阴道干燥；雄性中年龄相关的睾酮水平降低、 雄性更年期、性腺机能减退、雄性激素替代、雄性和雌性性机能障碍(例 如勃起机能障碍、性冲动减少、性冷淡(sexual well-being)、性欲减低)、 雄性和雌性避孕、掉发、Reaven综合征以及增强骨和肌肉性能/强度； 以及统称为“综合征X(SyndromeX)”或在Johannsson J.Clin. Endocrinol.Metab.，82，727-34(1997)中详述的“代谢综合征”的病症、 疾病和病患。
本发明化合物在调节免疫细胞活化/增殖方面有治疗效用，例如作 为涉及CAM(细胞粘着分子)和白细胞整联蛋白(Leukointegrin)的胞间 配体/受体结合反应的竞争性抑制剂。例如，本发明的化合物调节 LFA-ICAM1，尤其可用作LFA-ICAM1拮抗剂，用于治疗与LFA-ICAM 1相关的所有病症，例如免疫性疾病。本发明化合物的优选应用包括 但不限于炎性疾病，例如由于哺乳动物体内非特异性免疫系统的应答 引起的那些病症(例如成人呼吸窘迫综合征、休克、氧中毒、败血病继 发的多器官损伤综合征、外伤继发的多器官损伤综合征、由于心肺旁 路引起的组织再灌注损伤、心肌梗塞或应用血栓溶解药、急性肾小球 性肾炎、脉管炎、反应性关节炎、带有急性炎性组分的皮肤病、中风、 热损伤、血液透析、白细胞提取、溃疡性结肠炎、坏死性小肠结肠炎 和粒细胞输注相关综合征)和由于哺乳动物体内特异性免疫系统应答 引起的病症(例如牛皮藓、器官/组织移植排斥、移植物抗宿主反应和自 身免疫病，包括Raynaud综合征、自身免疫性甲状腺炎、皮炎、多发 性硬化、类风湿性关节炎、胰岛素依赖性糖尿病、眼色素层炎、炎性 肠病包括节段性回肠炎和溃疡性结肠炎、和系统性红斑狼疮)。本发明 化合物可以用于治疗哮喘或作为辅助药以将癌症治疗中细胞因子治疗 的毒性降至最低。本发明化合物可以用来治疗目前通过类固醇疗法可 治疗的所有疾病。本发明化合物可以单独或者与其它免疫抑制药或消 炎药一起用于治疗这些疾病和其它疾病。按照本发明，式I化合物可 以在炎症开始之前给予(以便抑制提前出现的炎症)或在炎症开始之后 给予。当预防性给予时，所述免疫抑制化合物最好在任何炎症反应或 症状之前(例如在器官或组织移植之前、移植时或之后不久，但在任何 症状或器官排斥之前)给予。式I化合物的预防性给予，预防或减弱任 何的后续炎症反应(例如移植器官或组织的排斥等)。给予式I化合物， 减弱任何实际的炎症(例如移植器官或组织的排斥)。
式I化合物可以用任何合适的方式给予用于本文所述的任何用 途，诸如可经口给予，例如为片剂、胶囊、颗粒剂或散剂的形式；舌 下给予；口腔含化给予；胃肠外给予，例如皮下、静脉内、肌内或胸 骨内注射或输注技术(例如作为无菌注射用水性或非水溶液或混悬 剂)；经鼻给予，包括给予鼻粘膜，例如通过吸入喷雾；局部给予，例 如为乳油或软膏形式；或经直肠给予，例如为栓剂形式；为含有无毒 药学上可接受的溶媒或稀释剂的剂量单位制剂。本发明化合物可以例 如以适合于立即释放或延长释放的形式给予。立即释放或延长释放可 以通过以下方法达到：应用包含本发明化合物的合适的药用组合物， 或者特别是在延长释放的情况下，应用诸如皮下植入物或渗透泵的装 置。本发明化合物也可以通过脂质体给予。
用于口服给药的示例性组合物包括：混悬剂，所述混悬剂可以含 有例如用于增加体积的微晶纤维素、作为悬浮剂的藻酸或藻酸钠、作 为粘度增强剂的甲基纤维素以及甜味剂或矫味剂例如本领域已知的那 些；和立即释放片剂，所述片剂可以含有例如微晶纤维素、磷酸二钙、 淀粉、硬脂酸镁和/或乳糖和/或其它赋形剂、粘合剂、增容剂、崩解剂、 稀释剂和润滑剂，例如本领域已知的那些。式I化合物也可以通过舌 下和/或口腔含化给药而经口腔给予。模制片、压制片或冻干片是可以 使用的示例性形式。示例性组合物包括用快速溶解性稀释剂例如甘露 醇、乳糖、蔗糖和/或环糊精配制本发明化合物的那些组合物。在这类 制剂中也可以包括高分子量赋形剂，例如纤维素(avicel)或聚乙二醇 (PEG)。这类制剂也可以含有有助于粘膜粘附的赋形剂，例如羟丙基纤 维素(HPC)、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、羧甲基纤维素钠(SCMC)马来 酐共聚物(例如Gantrez)，以及控制释放的药剂，例如聚丙烯酸酯共聚 物(例如Carbopol934)。也可以加入润滑剂、助流剂、矫味剂、着色剂 和稳定剂，以便于制造和应用。
用于鼻用气雾剂或吸入给药的示例性组合物包括盐水中的溶 液，所述溶液可以含有例如苯甲醇或其它合适的防腐剂、用于增强生 物利用度的吸收促进剂和/或其它增溶剂或分散剂，例如本领域已知的 那些。
用于胃肠外给药的示例性组合物包括注射用溶液或混悬剂，所述 溶液或混悬剂可以含有例如合适的无毒胃肠外可接受的稀释剂或溶 剂，例如甘露醇、1，3-丁二醇、水、Ringer氏溶液、等渗氯化钠溶液或 其它合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂，包括合成甘油一酯或甘油二 酯、以及脂肪酸，包括油酸或Cremaphor。
用于直肠给药的示例性组合物包括栓剂，所述栓剂可以含有例如 合适的无刺激性赋形剂，例如可可脂、合成甘油酯或聚乙二醇，所述 栓剂在常温下为固体，但在直肠腔中液化和/或溶解以释放药物。
用于局部给药的示例性组合物包括局部载体，例如Plastibase(用 聚乙烯胶凝的矿物油)。
本发明化合物的有效量可以由本领域技术人员确定，包括用于成 人的约1-100(例如15)mg/kg体重/天的活性化合物的示例性剂量，所 述剂量可以以一次剂量或单个分次剂量形式给予，例如每日1-4次。 人们会理解，用于任何特定受治疗者的具体剂量水平和给药频率可以 改变，并且取决于各种各样的因素，包括所用具体化合物的活性、该 化合物的代谢稳定性和作用时间、受治疗者的物种、年龄、体重、一 般健康状况、性别和饮食、给药方式和给药时间、排泄速率、药物组 合和具体病症的严重程度。治疗的优选受治疗者包括经受NHR相关病 症的动物，最优选哺乳动物物种例如人类和驯养动物例如狗、猫等。
如上所述，本发明的化合物可以单独使用，或者可以相互联用和 /或与其它合适的可用于治疗NHR相关病症的治疗药联用，例如抗生 素或其它药用活性物质。
例如，本发明化合物可以与例如但不限于以下的生长促进药联 用：TRH、二乙基己烯雌酚、茶碱、脑啡肽、E系列前列腺素、美国 专利第3,239,345号中公开的化合物例如折仑诺和在美国专利第 4,036,979号公开的化合物例如例如舒贝诺司或在美国专利第 4,411,890号中公开的肽。
本发明化合物也可以与生长激素促分泌剂联用，所述促分泌剂例 如GHRP-6、GHRP-1(如在美国专利第4,411,890号和公开的WO 89/07110和WO89/07111中公开的)、GHRP-2(如在WO93/04081中 公开的)、NN703(Novo Nordisk)、LY444711(Lilly)、MK-677(Merck)、 CP424391(Pfizer)和B-HT920，或者与生长激素释放因子及其类似物或 生长激素及其类似物或生长调节素包括IGF-I和IGF-2联用，或者与α- 肾上腺素能激动剂例如可乐定、或5-羟色胺5-HTD激动剂例如舒马 普坦、或抑制促生长素抑制素或其释放的药物例如毒扁豆碱和吡斯的 明联用。本发明所公开化合物的再一用法是与甲状旁腺激素PTH(1-34) 或二膦酸酯例如MK-217(阿仑膦酸)联用。
本发明化合物的在一种用法是与以下药物联用：雌激素、睾酮、 选择性雌激素受体调节剂例如他莫昔芬或雷洛昔芬、或者其它雄激素 受体调节剂例如在Edwards，J.P.等，Bio.Med.Chem.Let.，9，1003-1008 (1999)和Hamann，L.G.等， J Med. Chem.，42，210-212(1999)中公开的药 物。
本发明化合物的再一用法是与孕酮受体激动剂(“PRA”)例如左炔 诺孕酮、醋酸甲羟孕酮(MPA)联用。
本发明的化合物可以单独使用或者相互联用，和/或与包括以下的 其它核激素受体调节剂或可用于治疗上述疾病的其它合适的治疗药联 用：抗糖尿病药；抗骨质疏松药；抗肥胖药；消炎药；抗焦虑药；抗 抑郁药；降压药；抗血小板药；抗血栓形成药和血栓溶解药；强心苷； 降胆固醇药/降脂药；盐皮质激素受体拮抗剂；磷酸二酯酶抑制剂；蛋 白质酪氨酸激酶抑制剂；甲状腺剂模拟物(thyroid mimetics)(包括甲状 腺受体激动剂)；同化激素类药；HIV或AIDS治疗；可用于治疗早老 性痴呆和其它认知障碍的疗法；可用于治疗睡眠障碍的疗法；抗增殖 药；和抗肿瘤药。
与本发明化合物联用的合适抗糖尿病药的实例包括双胍(例如二 甲双胍)、糖苷酶抑制剂(例如阿卡波糖)、胰岛素(包括胰岛素促分泌剂 或胰岛素致敏剂)、氯茴苯酸(例如瑞格列奈)、磺酰脲类(例如格列美脲、 格列本脲和格列吡嗪)、双胍/格列本脲组合(例如Glucovancc_)、噻唑 烷二酮(例如曲格列酮、rosiglitazone和吡格列酮)、PPAR-α激动剂、PPAR-γ 激动剂、PPARα/γ双激动剂、SGLT2抑制剂、糖原磷酸化酶抑制剂、 脂肪酸结合蛋白(aP2)的抑制剂例如在2000年3月6日申请的美国顺序 号09/519,079中公开的、胰高血糖素样肽-1(GLP-1)和二肽基肽酶IV (DP4)抑制剂。
与本发明化合物联用的合适抗骨质疏松药的实例包括阿仑膦 酸、利塞膦酸、PTH、PTH片段、雷洛昔芬、降钙素、类固醇或非类固 醇孕酮受体激动剂、RANK配体拮抗剂、钙传感受体拮抗剂、TRAP 抑制剂、选择性雌激素受体调节剂(SERM)、雌激素和AP-1抑制剂。
与本发明化合物联用的合适抗肥胖药的实例包括aP2抑制剂例如 在2000年3月6日申请的美国顺序号09/519,079中公开的抑制剂； PPARγ拮抗剂、PPAR8激动剂、β3肾上腺素能激动剂例如AJ9677 (Takeda/Dainippon)、L750355(Merck)或CP331648(Pfizer)或其它已知 的β3激动剂如在美国专利第5,541,204、5,770,615、5,491,134、5,776,983 和5,488,064号中公开的激动剂；脂酶抑制剂例如奥利司他或ATL-962 (Alizyme)、5-羟色胺(和多巴胺)再吸收抑制剂例如西布曲明、托吡酯 (Johnson&Johnson)或axokine(Regeneron)；甲状腺受体β药，例如WO 97/21993(U.Cal SF)、WO99/00353(KaroBio)和GB98/284425(KaroBio) 中公开的甲状腺受体配体；和/或食欲抑制药，例如右苯丙胺、芬特明、 苯丙醇胺或马吲哚。
与本发明化合物联用的合适消炎药的实例包括泼尼松、地塞米 松、Enbrel_、环加氧酶抑制剂(即COX-1和/或COX-2抑制剂，例如 NSAID、阿司匹林、吲哚美辛、布洛芬、吡罗昔康、Naproxen_、 Celebrex_、Vioxx_)、CTLA4-Ig激动剂/拮抗剂、CD40配体拮抗剂、 IMPDH抑制剂例如麦考酚酸(CellCept_)整联蛋白拮抗剂、α-4β-7整 联蛋白拮抗剂、细胞粘着抑制剂、干扰素γ拮抗剂、ICAM-1、肿瘤坏 死因子(TNF)拮抗剂(例如infliximab，OR1384)、前列腺素合成抑制剂、 布地奈德、氯法齐明、CNI-1493、CD4拮抗剂(例如 Priliximab)、p38促 细胞分裂剂活化蛋白激酶抑制剂、蛋白质酪氨酸激酶(PTK)抑制剂、 IKK抑制剂和用于治疗刺激性大肠综合征的疗法(例如 Zelmac_和 Maxi-K_openers，例如美国专利第6,184,231 B1号中公开的那些)。
与本发明化合物联用的合适抗焦虑药的实例包括地西泮、劳拉西 泮、丁螺环酮、奥沙西泮和双羟萘酸羟嗪。
与本发明化合物联用的合适抗抑郁药包括西酞普兰、氟西汀、奈法唑 酮、舍曲林和帕罗西汀。
与本发明化合物联用的合适降压药包括β肾上腺素能阻滞药、钙 通道阻滞药(L-型和T-型；例如地尔硫_、维拉帕米、硝苯地平、氨氯地 平和mybefradil)、利尿药(例如氯噻嗪、氢氯噻嗪、氟甲噻嗪、氢氟噻 嗪、苄氟噻嗪、甲氯噻嗪、三氯噻嗪、泊利噻嗪、苄噻嗪、依他尼酸 tricrynafen、氯噻酮、呋塞米、musolimine、布美他尼、氨苯蝶啶、阿米 洛利、螺内酯)、肾素抑制剂、ACE抑制剂(例如卡托普利、佐芬普利、 福辛普利、依那普利、西多普利、西拉普利、地拉普利、喷托普利、喹那普利、 雷米普利、赖诺普利)、AT-1受体拮抗剂(例如氯沙坦、irbesartan、缬沙坦)、 ET受体拮抗剂(例如sitaxsentan、atrsentan和在美国专利第5,612,359 和6,043,265号中公开的化合物)、双ET/AII拮抗剂(例如在WO 00/01389中公开的化合物)、中性内肽酶(NEP)抑制剂、vasopepsidase 抑制剂(双NEP-ACE抑制剂)(例如奥马曲拉和gemopatrilat)和硝酸盐。
与本发明化合物联用的合适抗血小板药的实例包括GPIIb/IIIa阻 滞药(例如阿昔单抗、依替巴肽、替罗非班)、P2Y12拮抗剂(例如氯吡 格雷、噻氯匹定、CS-747)、血栓烷受体拮抗剂(例如依非曲班)、阿司 匹林和PDE-III抑制剂(例如双嘧达莫)加上或不加阿司匹林。
与本发明化合物联用的合适强心苷的实例包括洋地黄和毒毛花 苷G。
与本发明化合物联用的合适降胆固醇药/降脂药的实例包括 HMG-CoA还原酶抑制剂(例如普伐他汀、洛伐他汀、阿托伐他汀、辛 伐他汀、NK-104(a.k.a.依伐他汀或nisvastatin或nisbastatin)和ZD-4522 (a.k.a.罗苏伐他汀或atavastatin或visastatin))、角鲨烯合成酶抑制剂、 fibrates、胆汁酸螯合剂、ACAT抑制剂、MTP抑制剂、脂加氧酶 (lipooxygenase)抑制剂、胆固醇吸收抑制剂和胆固醇酯转运蛋白抑制剂 (例如CP-529414)。
与本发明化合物联用的合适盐皮质激素受体拮抗剂的实例包括 螺内酯和依普利酮(eplerinone)。
与本发明化合物联用的合适磷酸二酯酶抑制剂的实例包括PDEIII 抑制剂例如西洛他唑和PDE V抑制剂例如sildenafil。
与本发明化合物联用的合适甲状腺模拟物的实例包括促甲状腺 素、polythyroid、KB-130015和决奈达隆。
与本发明化合物联用的合适同化激素类药包括睾酮、TRH己烯雌 酚、雌激素、β-激动剂、茶碱、促蛋白合成类固醇、脱氢表雄甾酮、 脑啡肽、E-系列前列腺素、视黄酸和美国专利第3,239,345号中公开的 化合物例如Zeranol_(折仑诺)、美国专利第4,036,979中公开的化合物 例如舒贝诺司或美国专利第4,411,890号中公开的肽。
与本发明化合物联用的合适HIV或AIDS治疗药包括硫酸茚地那 韦、沙奎那韦、甲磺酸沙奎那韦、利托那韦、拉米夫定、齐多夫定、 拉米夫定/齐多夫定组合、扎西他滨、去羟肌苷、司他夫定和醋酸甲地 孕酮。
与本发明化合物联用的治疗早老性痴呆和认知障碍的合适治疗 药包括多奈哌齐、他克林、revastigmine、5HT6、γ分泌酶抑制剂、β分 泌酶抑制剂、SK通道阻滞药、Maxi-K阻滞药和KCNQ阻滞药。
与本发明化合物联用的治疗睡眠障碍的合适治疗药包括褪黑激 素类似物、褪黑激素受体拮抗剂、ML1B激动剂和GABA/NMDA受体 拮抗剂。
与本发明化合物联用的合适抗增殖药的实例包括环孢菌素A、紫 杉醇、FK 506和柔红霉素。
与本发明化合物联用的合适抗肿瘤药的实例包括紫杉醇、柔红霉 素、epothilones、顺铂和卡铂。
本发明的化合物还可以与营养增补剂联用，所述营养增补剂例如 U.S.5,179,080中描述的，尤其是与乳清蛋白或酪蛋白、氨基酸(例如亮 氨酸、支链氨基酸和丁酸羟甲酯)、甘油三酯、维生素(例如A、B6、 B12、叶酸、C、D和E)、矿物质(例如硒、镁、锌、铬、钙和钾)、肉 毒硷、硫辛酸、肌酸和辅酶Q-10联用。
另外，本发明化合物可以与以下药物联合使用：用于治疗性功能 障碍的治疗药，包括但不限于PDE5抑制剂，例如西地那非或IC-351； 抗吸收药、激素替代治疗药、维生素D类似物、降钙素、元素钙和钙 增补剂、组织蛋白酶K抑制剂、MMP抑制剂、玻连蛋白受体拮抗剂、 Src SH2拮抗剂、vacular-H+-ATP酶抑制剂、孕酮受体激动剂、依普黄 酮、氟化物、RANK拮抗剂、PTH及其类似物和片段、替勃龙、HMG-CoA 还原酶抑制剂、SERM’s、p38抑制剂、prostanoids、17-β羟基类固醇 脱氢酶抑制剂和Src激酶抑制剂。
本发明化合物可以与以下药物联用：雄性避孕药例如壬苯醇醚9 或用于治疗掉发的治疗药例如米诺地尔和非那雄胺或化疗药例如 LHRH激动剂。
对于优选的抗癌应用或抗血管生成应用，本发明的化合物可以单 独给予，或者与其它抗癌药和细胞毒性药以及用于治疗癌症或其它增 生性疾病的治疗联合给予，例如当所述第二种药物的作用机制与本发 明式I化合物相同或不同时。可与本发明化合物联用的抗癌药和细胞 毒性药类的实例包括但不限于：烷化剂，例如氮芥、烷基磺酸酯类、 亚硝基脲类、乙烯亚胺类和三氮烯类；抗代谢药，例如叶酸拮抗剂、 嘌呤类似物和嘧啶类似物；抗生素，例如蒽环类抗生素、博来霉素、 丝裂霉素、放线菌素和普卡霉素；酶，例如L-天冬酰胺酶；法尼基- 蛋白质转移酶抑制剂；5α还原酶抑制剂；3型17β-羟基类固醇脱氢酶 抑制剂；激素类药，例如糖皮质激素、雌激素/抗雌激素、雄激素/抗雄 激素、孕激素和黄体素释放激素拮抗剂、乙酸奥曲肽；微管破坏药， 例如海鞘素或其类似物和衍生物；微管稳定药，例如taxanes，例如紫 杉醇(Taxolt_)、多西他赛(Taxotere_)以及它们的类似物、和 epothilones，例如epothilones A-F及其类似物；植物源制品，例如长 春花生物碱、表鬼臼毒素、taxanes；和拓扑异构酶抑制剂；异戊二烯 基-蛋白质转移酶抑制剂；和其它药物(miscellaneous agents)，例如羟基 脲、丙卡巴肼、米托坦、六甲蜜胺、铂配位络合物例如顺铂和卡铂； 和用作抗癌药和细胞毒性药的其它药物，例如生物反应改进剂、生长 因子；免疫调节药和单克隆抗体。本发明的化合物也可以与放射治疗 结合使用。
这些抗癌药和细胞毒性药类的代表性实例包括但不限于盐酸氮 芥、环磷酰胺、苯丁酸氮芥、美法仑、异环磷酰胺、白消安、卡莫司 汀、洛莫司汀、司莫司汀、链佐星、赛替派、达卡巴嗪、甲氨蝶呤、 硫鸟嘌呤、巯基嘌呤、氟达拉滨、pentastatin、克拉屈滨、阿糖胞苷、 氟尿嘧啶、盐酸多柔比星、柔红霉素、伊达比星、硫酸博来霉素、丝 裂霉素C、放线菌素D、safracins、saframycins、quinocarcins、 discodermolides、长春新碱、长春花碱、酒石酸长春瑞滨、依托泊苷、 磷酸依托泊苷、替尼泊苷、紫杉醇、他莫昔芬、雌莫司汀、磷酸雌莫 司汀钠盐、氟他胺、布舍瑞林、亮丙立德、蝶啶、diyneses、左旋咪唑、 aflacon、干扰素、白介素、阿地白介素、非格司亭、沙格司亭、利妥 昔单抗、BCG、维A酸、盐酸伊立替康、倍他米松、盐酸吉西他滨、 六甲蜜胺和托泊替康和它们的类似物或衍生物。
这些类别的优选成员包括但不限于：紫杉醇、顺铂、卡铂、多柔 比星、洋红霉素、柔红霉素、氨基蝶呤、甲氨蝶呤、甲基蝶呤、丝裂 霉素C、海鞘素743或泊非霉素、5-氟尿嘧啶、6-巯基嘌呤、吉西他滨、 阿糖胞苷、鬼臼毒素或鬼臼毒素衍生物例如依托泊苷、磷酸依托泊苷 或替尼泊苷、美法仑、长春花碱、长春新碱、异长春碱、长春地辛和 环氧长春碱。
抗癌药和其它细胞毒性药的实例包括以下：在德国专利第 4138042.8号；WO 97/19086、WO 98/22461、WO 98/25929、WO 98/38192、WO 99/01124、WO 99/02224、WO 99/02514、WO 99/03848、 WO 99/07692、WO 99/27890、WO 99/28324、WO 99/43653、WO 99/54330、WO 99/54318、WO 99/54319、WO 99/65913、WO 99/67252、 WO 99/67253和WO 00/00485中找到的epothilone衍生物；在WO 99/24416中(也可参见美国专利第6,040,321号)中发现的细胞周期蛋白 依赖性激酶抑制剂；在WO 97/30992和WO 98/54966中发现的异戊二 烯基-蛋白质转移酶抑制剂；和在美国专利第6,011,029号中以类别描 述和具体描述的那些药物(所述美国专利的化合物可以与任何NHR调 节剂(包括但不限于本发明的那些化合物)例如AR调节剂、ER调节剂 和LHRH调节剂、或者与手术去生殖腺(尤其是在治疗癌症时)一起使 用)。
也可以配制本发明的组合物，或者本发明的组合物与在给予与上 述病症相关的治疗时根据特定有用性选择的其它治疗药共同给予。例 如，本发明的化合物可以与预防恶心、过敏和胃刺激的药物例如止吐 剂以及H1和H2抗组胺药一起配制。
当涉及癌症治疗时，本发明的化合物最优选单独使用，或者与抗 癌疗法例如放射治疗和/或与细胞抑制药和/或细胞毒性药例如但不限 于以下的药物联合使用：DNA相互作用药，例如顺铂或多柔比星；法 尼基蛋白质转移酶抑制剂，例如美国专利第6,011,029号中描述的那 些；拓扑异构酶II抑制剂，例如依托泊苷；拓扑异构酶I抑制剂，例 如CPT-11或托泊替康；微管蛋白稳定药，例如紫杉醇、多西他赛、其 它taxanes或epothilones；激素类药，例如他莫昔芬；胸苷酸合酶抑制 剂，例如5-氟尿嘧啶；抗代谢药，例如甲氨蝶呤；抗血管生成药，例 如制管张素、ZD6474、ZD6126和comberstatin A2；激酶抑制剂，例 如her2特异性抗体、Iressa和CDK抑制剂；组蛋白脱乙酰酶抑制剂， 例如CI-994和MS-27-275。这类化合物也可以与抑制循环睾酮产生的 药物例如LHRH激动剂或拮抗剂或者与手术去生殖腺联合。
例如，晚期转移性前列腺癌的已知疗法包括“全雄激素切除疗法 (complete androgen ablation therapy)”，其中通过化学去生殖腺(去生殖 腺用来抑制循环睾酮(T)和二氢睾酮(DHT)的产生)，然后给予雄激素受 体(AR)拮抗剂(所述拮抗剂可以抑制来自前列腺组织将循环雄激素前 体转化为T/DHT的T/DHT功能)，而控制将雄激素供应给前列腺组织， 来抑制肿瘤生长。本发明的化合物在全切除疗法中作为AR拮抗剂单 独使用，或者与其它AR拮抗剂例如氟他胺、卡索地司(Casodex)、尼 鲁米特或醋酸环丙孕酮联用。
本发明的化合物可以作为手术的辅助治疗。
本发明化合物的另一应用是与抗体疗法例如但不限于抗PSCA的 抗体疗法联用。另外一种应用是与用于治疗癌症的疫苗/免疫调节剂协 调使用。
本发明的化合物可以按照Mark E.Salvati等的2001年4月18日 申请的题为“Selective Androgen Receptor Modulators and Methods for Their Identification，Design and Use”的美国临时专利申请顺序号 60/284,438(案卷号为LD0250(PSP))(所述临时专利申请通过引用全部 结合到本文中(包括但不限于引用本发明式I范围内的所有具体化合 物))和Mark E.Salvati等的2001年6月20日申请的题为“Selective Androgen Receptor Modulators and Methods for Their Identification， Design and Use”的美国专利申请顺序号_____(未给予申请号)(案卷号 为LD0250(NP))(所述专利申请通过引用全部结合到本文中(包括但不 限于引用本发明式I范围内的所有具体化合物))中描述的方法使用。
对于本发明化合物的外消旋物，一种对映体可以例如是全AR拮 抗剂，而另一种对映体可以是在肿瘤组织中为AR拮抗剂，而在带有 雄激素受体的非肿瘤组织中没有活性或有激动剂活性。
以上其它治疗药当与本发明化合物联用时，可以例如以 Physicians’Desk Reference(PDR)中指定的量或者如本领域技术人员在 其它情况下确定的量来使用。
以下测定可以用来确定化合物作为NHR调节剂的活性。优选在 这些测定中的任一测定中结合活性或反式激活活性高于20μM的那些 化合物。利用如下所述的反式激活测定和标准AR结合测定，确定了 本发明的各种化合物具有AR调节活性。
反式激活测定：
AR特异性测定：
在转染的报道构建体的反式激活测定中用宿主细胞的内源性雄 激素受体，测试本发明的化合物。反式激活测定提供一种鉴定模拟天 然激素(在这种情况下为二氢睾酮(DHT)效应的功能性激动剂和部分激 动剂或者抑制天然激素效应的拮抗剂的方法。这种测定可以用来在两 个系列数据有良好相关性时预测体内的活性。参见例如T.Berger等，J. Steroid Biochem.Molec.Biol.773(1992)，该文献的公开内容通过引用 结合到本文中。
关于反式激活测定，报道质粒通过转染(一种诱导细胞摄取外源基 因的方法)而被导入到相应的细胞中。这种报道质粒包含受含雄激素效 应元件(ARE)的前列腺特异性抗原(PSA)上游序列控制的报道蛋白例如 分泌型碱性磷酸酶(SEAP)的cDNA。这种报道质粒作为AR的转录调 节活性的报道分子起作用。因此，所述报道分子作为在AR及其天然 激素控制下的基因正常表达的产物(mRNA，然后是蛋白质)的替代物起 作用。为了检测拮抗剂，反式激活测定在恒定浓度的已知诱导特定报 道信号的天然AR激素(DHT)存在下进行。增加怀疑拮抗剂的浓度将降 低所述报道信号(例如SEAP产生)。另一方面，将转染细胞暴露于增加 浓度的怀疑的激动剂，将增加所述报道信号的产生。
关于这种测定，LNCaP和MDA 453细胞得自美国典型培养物保 藏中心(American Type Culture Collection(Rockville，MD))并且分别维 持在补充10％胎牛血清(FBS；Gibco)的RPMI 1640或DMEM培养基 中。按照Heiser，130 Methods Mol.Biol.，117(2000)所述的优化方法， 用pSEAP2/PSA540/增强子报道质粒通过电穿孔瞬时转染相应的细 胞。所述报道质粒如下构建：用市售的人胎盘基因组DNA通过聚合酶 循环反应(PCR)，产生含有BglII位点(位置5284)和于人前列腺特异性 抗原启动子((登记号U37672)，Schuur，等，J.Biol.Chem.，271(12)：7043- 51(1996))的Hind III位点(位置5831)的片段。将该片段亚克隆到预先 用BglII和HindIII消化的pSEAP2/basic(Clontech)中，产生 pSEAP2/PSA540构建体。然后，通过PCR，从人胎盘基因组DNA中 扩增一个带有人PSA中位置-5322至-3873之间的上游序列的片段的片 段。用引物引入XhoI位点和BglII位点。将所得的片段亚克隆到分别 用XhoI和BglII消化的pSEAP2/PSA540中，产生pSEAP2/PSA540/增 强子构建体。将LNCaP和MDA 453细胞收集到含有10％经活性炭吸 附的FBS的培养基中。将每种细胞悬浮液分配到两个Gene Pulser Cuvetts(Bio-Rad)中，然后接受8μg所述报道构建体，并且用Bio-Rad Gene Pulser以210伏和960微法拉第电穿孔。在转染后洗涤细胞，并 用含有活性炭吸附的胎牛血清的培养基在无(空白)或有(对照)1nM二 氢睾酮(DHT；Sigma Chemical)的情况下和在有或无10-10至10-5M (样品)浓度范围的标准抗雄激素比卡鲁胺或本发明化合物存在下孵 育。每种样品使用双份测定。化合物的稀释在Biomek 2000实验室工 作站上进行。48小时后，用Phospha-Light Chemiluminescent Reporter Gene Assay System(磷光化学发光报道基因分析系统)(Tropix，Inc)，分 析一部分上清液的SEAP活性。用CellTiter 96 Aqueous Non-Radioactive Cell Proliferation Assay(非放射性细胞增殖测定)(MTS Assay， Promega)，测定剩余细胞的活力。简而言之，将四唑_化合物(3-(4，5- 二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺基苯基)-2H-四唑_内 盐；MTS)和电子偶合试剂(吩嗪硫酸甲酯；PMS)的混合物加入到细胞 中。MTS(Owen试剂)被细胞生物还原为可溶于组织培养基中的甲_， 因此可以直接从96孔测定板直接测量490nm的吸光度，而无需其它 加工。根据490nm吸光度的量测量的甲_产物的量与培养物中的活细 胞数成正比。对于每个重复测定，根据得自MTS测定的吸光度490 值，将SEAP读出值标准化。对于拮抗剂模式，如下计算抑制百分比： ％抑制＝100×(1-[对照平均值-空白平均值/样品平均值-空白平均 值])
将数据作图，并且定量测定抑制50％标准化SEAP的化合物浓度 (IC50)。
对于激动剂模式，％对照是指与用天然激素(在这种情况下为DHT) 观测到的最大效应相比的试验化合物的效应，并且如下计算： ％对照＝100×样品平均值-空白平均值/对照平均值-空白平均值
将数据作图，并且定量测定激活至50％标准化SEAP水平的化合 物浓度(EC50)。
GR特异性测定：
所用的报道质粒由关于AR特异性反式激活测定所述的SEAP报 道蛋白的cDNA构成。SEAP报道蛋白的表达由小鼠乳腺瘤病毒长末 端重复(MMTVLTR)序列控制，所述序列含有三个可以用GR和PR调 节的激素效应元件(HRE)，参见例如G.Chalepakis等，Cell，53(3)，371 (1988)。将该质粒转染到表达内源GR的A549细胞中，获得GR特异 性反式激活测定。A549细胞得自美国典型培养物保藏中心(Rockville， MD)，并且维持在补充10％胎牛血清(FBS；Gibco)的RPMI 1640中。
本发明化合物的GR特异性拮抗剂活性的测定，与关于AR特异性反 式激活测定所述的测定相同，只是DHT被5nM地塞米松(Sigma Chemicals)取代，地塞米松是一种GR特异性的激动剂。本发明化合物 的GR特异性激动剂活性的测定按照关于AR反式激活测定中所述方 法进行，其中人们通过加入试验化合物，在无已知的GR特异性激动 剂配体的情况下测量所述GR特异性报道系统的激活。
PR特异性测定：
所用的报道质粒由关于AR特异性反式激活测定所述的SEAP报 道蛋白的cDNA构成。SEAP报道蛋白的表达由小鼠乳腺瘤病毒长末 端重复(MMTVLTR)序列控制，所述序列含有三个可以用GR和PR调 节的激素效应元件(HRE)。将该质粒转染到表达内源PR的T47D中， 获得PR特异性反式激活测定。T47D细胞得自美国典型培养物保藏中 心(Rockville，MD)，并且维持在补充10％胎牛血清(FBS；Gibco)的 DMEM培养基中。本发明化合物的PR特异性拮抗剂活性的测定，与 关于AR特异性反式激活测定所述的测定相同，只是DHT被1nM Promegastone(NEN)取代，Promegastone是一种PR特异性的激动剂。
本发明化合物的PR特异性激动剂活性的测定按照关于AR反式激活测 定中所述方法进行，其中人们通过加入试验化合物，在无已知的PR 特异性激动剂配体的情况下测量所述PR特异性报道系统的激活。
AR结合测定：
关于全细胞结合测定，将分别含有10％经活性炭吸附的CA-FBS (Cocaleco Biologicals)的RPMI 1640或DMEM的96孔微量滴定板中的 人LNCaP细胞(T877A突变型AR)或MDA 453(野生型AR)于37℃孵 育，以除去可能与细胞中所述受体复合的任何内源配体。48小时后， 或者进行饱和分析，以测定逐渐增加的二氢睾酮[3H]-DHT的Kd，或者 进行竞争性结合测定，以评价试验化合物与[3H]-DHT竞争的能力。关 于饱和分析，将含有[3H]DHT(浓度范围为0.1nM-16nM)、无(总结合) 或有(非特异性结合)500倍摩尔浓度过量的未标记DHT的培养基 (RPMI 1640或DMEM-0.2％CA-FBS)加入到细胞中。于37℃4小时后， 取出一等份的每种[3H]-DHT浓度的总结合培养基，以估计游离[3H]- DHT的量。取出剩余的培养基，用PBS洗涤细胞3次，将细胞收集到 UniFilter GF/B板(Packard)上，加入Microscint(Packard)，并且在Top- Counter(Packard)中对平板计数，以评估结合[3H]-DHT的量。
对于饱和分析，总结合和非特异性结合之差被定义为特异性结 合。特异性结合通过Scatchard分析评估，以测定[3H]-DHT的Kd。参 见例如D.Rodbard，Mathematics and statistics of ligand assays：an illustrated guide：载于：J.Langon和J.J.Clapp编著，Ligand Assay， Masson Publishing U.S.A.，Inc.，New York，第45-99页(1981)，所述文献 的公开内容通过引用结合到本文中。
对于竞争研究，将含有1nM[3H]-DHT和浓度范围为10-10-10-5M 的本发明化合物(“试验化合物”)的培养基加入到细胞中。每种样品 使用两个重复测定。于37℃4小时后，如上所述洗涤细胞、收获细胞 并对其计数。数据以在给定化合物的剂量反应曲线范围内剩余的[3H]- DHT的量(在无试验化合物时占对照的百分比)作图。在log-logit转换 后，定量测定抑制在无竞争配体时[3H]-DHT的结合量的50％的试验化 合物的浓度(IC50)。通过将Cheng Prusoff等式应用于IC50值，测定KI 值，其中：

根据非特异性结合进行校正后，测定IC50值。IC50定义为将特异性结 合降低50％所需的竞争配体的浓度。[3H]-DHT对于MDA 453和LNCaP 的Kd分别为0.7nM和0.2nM。
人前列腺细胞增殖测定：
在人前列腺癌细胞系增殖方面，测试本发明化合物(“试验化合 物”)。为此，将来源于未能去生殖腺的患者的转移瘤的细胞系MDA PCa2b细胞(Navone等，Clin.Cancer Res.，3，2493-500(1997))与试验化 合物或在无试验化合物的情况下孵育72小时，定量测定掺入到DNA 中的[3H]-胸苷的量，作为评价细胞数和因此评价增殖的方式。MDA PCa2b细胞系维持在补充10％FBS的BRFF-HPCl培养基(Biological Research Faculty&Facility Inc.，MD)中。对于该测定，将细胞接种到 Biocoated 96孔小平板中，于37℃在10％FBS(经活性炭吸附 的)/BRFF-BMZERO(无雄激素)中孵育。24小时后，细胞在无(空白)或 有1nM DHT(对照)或者加入浓度范围为10-10-10-5M的本发明试验化 合物(样品)的情况下处理。每种样品使用双份测定。化合物的稀释在 Biomek 2000实验室工作站上进行。72小时后，每孔加入0.44 uCi.[3H]- 胸苷(Amersham)，再孵育24小时，然后用胰蛋白酶处理，将细胞收获 到GF/B滤器上。加入Micro-scint PS至滤器上，然后在Beckman TopCount上计数。
抑制百分比如下计算：
％抑制＝100×(1-[平均值对照-平均值空白/平均值样品-平均值空白])。将数 据作图，定量测定抑制50％所述[3H]-胸苷掺入的化合物浓度(IC50)。
C2C12小鼠成肌细胞反式激活测定：
开发了两种功能性反式激活测定，以便用荧光素酶报道分子评价 雄激素激动剂在肌细胞背景中的功效。第一种测定(ARTA Stable1)使 用一种细胞系-Stable1(克隆#72)，所述细胞系稳定表达全长大鼠雄 激素受体，但需要增强子/报道分子的瞬时转染。这种细胞系来源于 C2C12小鼠成肌细胞。第二种测定(ARTA Stable2)使用一种细胞系- Stable2(克隆#133)，该细胞系来源于稳定表达rAR和增强子/荧光素酶 报道分子两者的Stable1。
在该系统中使用的增强子/报报道分子构建体是pGL3/2XDR-1/荧光 素酶。据报道2XDR-1是CV-1细胞中的AR特异性效应元件，Brown 等 The Journal of Biological Chemisty 272，8227-8235，(1997)。该构建体 通过将AR/GR共有增强子序列随机诱变而开发得到。
ARTA Stable1：
1.将Stable1细胞以6,000细胞/孔接种到96孔板内的含有10％ 经活性炭和葡聚糖处理的FBS(HyClone Cat.No.：SH30068.02)、50mM HEPES缓冲液(Gibco BRL，Cat.No.：15630-080)、1×MEM丙酮酸钠 (Gibco BRL，Cat.No.：11360-070)、0.5×抗生素-抗真菌药和800μg/ml 遗传霉素(Gibco BRL，Cat.No.：10131-035)的高葡萄糖无酚红DMEM (Gibco BRL，Cat.No.：21063-029)中。
2.48小时后，细胞用LipofectAMINE PlusTM试剂(Gibco BRL，Cat. No.：10964-013)，用pGL3/2XDR-1/荧光素酶转染。具体地说，5ng/孔 pGL3/2XDR-1/荧光素酶DNA和50ng/孔鲑精DNA(作为载体)用5μl/ 孔Opti-MEMem培养基(Gibco BRL，Cat.No.：31985-070)稀释。向其中 加入0.5μl/孔Plus试剂。该混合物于室温孵育15分钟。在一个单独的 容器中，0.385μl/孔LipofectAMINE试剂用5μl/孔Opti-MEM稀释。
然后，该DNA混合物与LipofectAMINE混合物混合，于室温再孵育 15分钟。在此期间，除去得自细胞的培养基，更换为60μl/孔的 Opti-MEM。向其中加入10μl/孔的DNA/LipofectAMINE转染混合物。 将细胞孵育4小时。
3.从细胞中除去转染混合物，用90μl以上#1中的培养基取代。
4.在每孔中加入10μl/孔的合适药物稀释液。
5.24小时后，用Steady-GloTM Luciferase Assay System(荧光素酶 测定系统)，按照生产商的说明(Promega，Cat.No.：E2520)测定活性。
ARTA stable2
1.将Stable2细胞以6,000细胞/孔接种到96孔板内的含有10％ 经活性炭和葡聚糖处理的FBS(HyClone Cat.No.：SH30068.02)、50 mM HEPES缓冲液(Gibco BRL，Cat.No.：15630-080)、1×MEM丙酮酸钠 (Gibco BRL，Cat.No.：11360-070)、0.5×抗生素-抗真菌药、800μg/ml 遗传霉素(Gibco BRL，Cat.No.：1013l-035)和800μg/ml潮霉素β(Gibco BRL，Cat.No.：10687-010)的高葡萄糖无酚红DMEM(Gibco BRL，Cat. No.：21063-029)中。
2.48小时后，除去所述细胞的培养基，更换为90μl新鲜培养基。 在每孔中加入10μl/孔的合适药物稀释液。
3.24小时后，用Steady-GloTM Luciferase Assay System(荧光素酶 测定系统)，按照生产商的说明(Promega，Cat.No.：E2520)测定活性。
参见Jacek Ostrowski等于2001年6月20日申请的题为“Cell Lines and Cell-Based Assays for Identification of Androgen Receptor Modulators”的美国专利顺序号______(尚未给予申请号)(档案号为 D0177)，该专利申请通过引用全部结合到本文中。
增殖测定
鼠类乳腺细胞增殖测定：
通过在增殖测定中，用来源于Shionogi肿瘤的雄激素反应性鼠类 乳腺细胞系(Hiraoka等，Cancer Res.，47，6560-6564(1987))，测试本发明 化合物，测定本发明化合物(“试验化合物”)调节AR功能的能力。通 过按照最初在Tetuo等，Cancer Research 25，1168-1175(1965)中描述的 通用方法，将肿瘤碎片传代，建立了亲代Shionogi系的稳定AR依赖 性克隆。通过上述程序，分离出一个稳定系-SC114，对其表征并用 于测试实施例化合物。将SC114细胞在有或无所述试验化合物的情况 下孵育72小时，然后如Suzuki等，J.Steroid Biochem.Mol.Biol.37， 559-567(1990)中所述，定量测定作为替代物终点的DNA中的[3H]-胸 苷掺入量，以评价细胞数，从而评价增殖率。SC114细胞系维持在含 有10-8M睾酮和2％DCC处理的FCS的MEM中。对于该测定，将细 胞接种于96孔小平板内的维持培养基中，并于37℃孵育。第二天， 将培养基更换为含有(拮抗剂模式)或不含(激动剂模式)10-8M睾酮 和含有浓度范围为10-10-10-5M的本发明试验化合物的无血清培养基 [含有0.1％BSA的Ham’s F-12：MEM(1∶1，v/v)]中。每种样品使用双份 测定。化合物的稀释在Biomek 2000实验室工作站上进行。72小时后， 每孔加入0.44 uCi[3H]-胸苷(Amersham)，再孵育2小时，然后用胰蛋 白酶处理，将细胞收获到GF/B滤器上。加入Micro-scint PS至滤器上， 然后在Beckman TopCount上计数。
对于拮抗剂模式，抑制百分比如下计算：
％抑制＝100×(1-[平均值样品-平均值空白/平均值对照-平均值空白]) 将数据作图，定量测定抑制50％所述[3H]-胸苷掺入的化合物浓度(IC 50)。
对于激动剂模式，％对照是指与用天然激素(在这种情况下为DHT) 观测到的最大效应相比的试验化合物的效应，并且如下计算：
％对照＝100×(平均值样品-平均值空白)/(平均值对照-平均值空白) 将数据作图，并且定量测定抑制50％所述[3H]-胸苷掺入的化合物 浓度(EC50)。
测量GR诱导的AP-1反式阻抑的体外测定：
所述AP-1测定是基于细胞的荧光素酶报道分子测定。含有内源 糖皮质激素受体的A549细胞用与荧光素酶基因连接的AP-1 DNA结 合部位稳定地转染。然后让细胞在RPMI+10％胎牛血清(活性炭处理 的)+青霉素/链霉素与0.5mg/ml遗传霉素中生长。在所述测定前一 天，以大约40000细胞/孔接种细胞。在测定当天，通过吸取，取出培 养基，每孔加入20μl测定缓冲液(无酚红RPMI+10％FCS(活性炭处 理的)+青霉素/链霉素)。此时，向每孔中加入20μl测定缓冲液(对照 实验)、本发明化合物(“试验化合物”)(溶于DMS中，并且以不同浓 度加入)或地塞米松(100nM，溶于DMSO中，阳性对照)。然后平板于 37℃预孵育15分钟，然后用10ng/ml PMA刺激细胞。然后，平板于 37℃孵育7小时，此后向每孔中加入40μl荧光素酶底物试剂。通过在 发光计中通过分析测定与用缓冲液或地塞米松处理的对照实验相比的 活性。活性以与用单独的10ng/ml PMA的缓冲液对照相比的报道系统 的抑制百分比表示。≤10μM浓度的地塞米松-对照，抑制活性通常 达65％。在试验化合物≤10μM浓度下表现出抑制PMA达50％或更高 的诱导的试验化合物被认为有活性。
前列腺湿重测定-AR拮抗剂测定：
在未成熟雄性大鼠模型-公认的给定化合物的标准抗雄激素活 性试验中，如L.G.Hershberger等，Proc.Soc.Expt.Biol.Med.，83，175 (1953)；P.C.Walsh和R.F.Gittes，“Inhibition of extratesticular stimuli to prostate growth in the castrated rat by antiandrogens”，Endocrinology，86， 624(1970)；和B.J.Furr等，“ICI 176，334：A novel non-steroid， peripherally selective antiandrogen”，J.Endocrinol.，113，R7-9(1987)(所 述文献的公开内容通过引用结合到本文中)中所述，研究了本发明化合 物作为AR拮抗剂的活性。
该测定的基础是这样一个事实：雄性副性器官例如前列腺和精 囊，在生殖功能方面起重要作用。由于持续存在血清睾酮(T)，这些腺 体被刺激生长并且维持其大小和分泌功能，睾酮是睾丸中莱迪希氏细 胞在垂体黄体生成素(LH)和促卵泡激素(FSH)控制下产生的主要血清 雄激素(＞95％)。睾酮在前列腺中被5α-还原酶转化为更具活性的形式 -二氢睾酮(DHT)。与肾上腺雄激素在65岁男性中贡献总DHT的40％ 相比，肾上腺雄激素在大鼠前列腺中也贡献总DHT的大约20％。F. Labrie等Clin.Invest.Med.，16，475-492(1993)。然而，这并不是主要的 途径，因为在动物和人类中，在不伴随肾上腺切除术的情况下，阉割 都导致前列腺和精囊几乎完全退化。因此，在正常条件下，肾上腺并 不支持前列腺组织的显著生长。M.C.Luke和D.S.Coffey，″The Physiology of Reproduction″.E.Knobil和J.D.Neill编著，1，1435-1487 (1994)。由于雄性性器官是对雄激素活性调节反应最强的组织，所以 用这一模型来测定未成熟阉割大鼠中副性器官的雄激素依赖性生长。
雄性未成熟大鼠(19-20日龄Sprague-Dawley，Harlan Sprague- Dawely)在metofane麻醉下阉割。手术后5天，对这些阉割大鼠(60-70 g，23-25日龄)给药3天。给动物皮下(s.c.)给予花生油溶媒中的1mg/kg 丙酸睾酮(TP)，通过管饲法(p.o.)以溶于80％PEG 400和20％Tween 80 (PEGTW)中的悬浮液口服给予抗雄激素试验化合物(本发明的化合 物)。给予(v/w)动物0.5ml溶媒/100g体重。实验组如下：
1.对照溶媒
2.丙酸睾酮(TP)(3mg/大鼠/天，皮下)
3.TP加Casodex(卡索地司)(p.o.给药，在PEGTW中，QD)，一 种公认的抗雄激素，作为参比化合物。
4.为了证明拮抗剂活性，以一系列剂量给予(p.o.，在PEGTW中， QD)本发明的化合物(“试验化合物”)与TP(s.c.，在第2组中 给予)。
5.为了证明激动剂活性，以一系列剂量给予(p.o.，在PEGTW中， QD)单独的本发明化合物(“试验化合物”)。
在3天治疗结束时，处死动物，将腹侧前列腺称重。为了比较得 自不同实验的数据，首先将性器官重量以mg/100g体重标准化，TP所 诱导的器官重量的增加被认为是最大增加值(100％)。用ANOVA然后 用单尾Student或Fischer正合检验(exact test)进行统计分析。
性器官的增重和减重反映出随血清雄激素浓度而变的细胞数 (DNA含量)和细胞质量(蛋白质含量)的变化。参见Y.Okuda等，J.Urol.， 145，188-191(1991)，该文献的公开内容通过引用结合到本文中。因 此，器官湿重的测量结果足以表明雄激素和雄激素拮抗剂的生物活 性。在未成熟阉割大鼠中，外源雄激素的替代以剂量依赖性方式增加 精囊(SV)和腹侧前列腺(VP)。
当给予3mg/大鼠/天的睾酮(T)或1mg/大鼠/天的丙酸睾酮(TP)达3 天时，器官重量的最大增加为4-5倍。T和TP的EC50分别约为1mg 和0.03mg。VP和SV的重量增加也与血清T和DHT浓度的增加相关。 虽然给予T显示出皮下注射后2小时的T和DHT的血清浓度5倍于 TP，但此后，这些高水平非常快地下降。相反，在TP治疗的动物中T 和DHT的血清浓度在24小时期间相当一致，因此，TP显示出约10- 30倍于游离T的效力。
在这一未成熟阉割大鼠模型中，也将已知的AR拮抗剂(卡索地司) 与0.1mg TP(ED80)同时给予，以剂量依赖性方式抑制睾酮介导的VP 和SV的重量增加。当口服给药或皮下给药时，拮抗剂效应相似。本 发明的化合物也通过抑制睾酮介导的VP和SV的重量增加而显示出 AR拮抗剂活性。
肛门提肌和前列腺湿重测定-AR激动剂测定：
在未成熟雄性大鼠模型中，研究了本发明化合物作为AR激动剂 的活性，这是给定化合物在肌肉中合成作用和在性器官中支持作用 (sustaining effect)的一种公认的试验，如L.G.Hershberger等，Proc.Soc. Expt.Biol.Med.，83，175(1953)；B.L.Beyler等，″Methods for evaluating anabolic and catabolic agents in laboratory animals″，J.Amer.Med. Women’s Ass.，23，708(1968)；H.Fukuda等，″Investigations ofthe levator ani muscle as an annabolic steroid assay"，Nago Dai.Yak.Ken.Nem.14，84 (1966)中所述，所述文献的公开内容通过引用结合到本文中。
该测定的基础在于已充分确定的雄激素类药对动物和男性中肌 肉组织和副性器官的维持和生长的作用。已经充分地表征了雄激素类 固醇例如睾酮(T)维持肌肉质量的能力。动物或人类在阉割后用外源性 T源治疗，导致肌萎缩的逆转。在大鼠肛门提肌中T对肌萎缩的作用 已被很好地表征。M.Masuoka等，″Constant Cell population in normal， testosterone deprived and testosterone stimulated levator ani muscles″Am. J.Anat.119，263(1966)；Z.Gori等，″Testosterone hypertrophy of levator ani muscle of castrated rats.I.Quantitative data″’Boll.-Soc.Ital.Biol.Sper. 42，1596(1966)；Z.Gori等，″Testosterone hypertrophy of levator ani muscle of castrated rats.II.Electron microscopic observations″Boll.-Soc. Ital.Biol.Sper.42，1600(1966)；A.Boris等，Steroids 15，61(1970)。如 上所述，雄激素对雄性副性器官例如前列腺和精囊维持的作用已有充 分的描述。阉割导致前列腺和精囊的快速退化和萎缩。这种效应可以 通过外源性加入雄激素而被逆转。由于肛门提肌和雄性性器官都是对 雄激素类药作用最具反应性的组织，所以用这一模型来测定未成熟阉 割大鼠中肛门提肌和副性器官中萎缩的雄激素依赖性逆转。从销售商 (Taconic)处获得阉割的性成熟大鼠(200-250g，6-8周龄，Sprague- Dawley，Harlan)。将大鼠分为多组，用以下药物之一每日治疗达7-14 天：
1.对照溶媒
2.丙酸睾酮(TP)(3mg/大鼠/天，皮下)
3.TP加卡索地司(P.o.给药，在PEGTW中，QD)，一种公认的抗 雄激素，作为参比化合物。
4.为了证明拮抗剂活性，以一系列剂量给予(p.o.，在PEGTW中， QD)本发明的化合物(“试验化合物”)与TP(s.c.，在第2组中 给予)。
5.为了证明激动剂活性，以一系列剂量给予(p.o.，在PEGTW中， QD)单独的本发明化合物(“试验化合物”)。
在所述7-14天的治疗结束时，用二氧化碳处死动物，将肛门提 肌、精囊和腹侧前列腺称重。为了比较得自不同实验的数据，首先将 肛门提肌和性器官重量以mg/100g体重标准化，TP所诱导的器官重量 的增加被认为是最大增加值(100％)。用Super-anova(单因素)进行统计 分析。
性器官的增重和减重反映出随血清雄激素浓度而变的细胞数 (DNA含量)和细胞质量(蛋白质含量)的变化。参见Y.Okuda等，J.Urol.， 145，188-191(1991)，该文献的公开内容通过引用结合到本文中。因 此，器官湿重的测量结果足以表明雄激素和雄激素拮抗剂的生物活 性。在未成熟阉割大鼠中，外源雄激素的替代以剂量依赖性方式增加 肛门提肌、精囊(SV)和前列腺。
当给予3mg/大鼠/天的睾酮(T)或1mg/大鼠/天的丙酸睾酮(TP)达3 天时，器官重量的最大增加为4-5倍。T和TP的EC50分别约为1mg 和0.03mg。VP和SV的重量增加也与血清T和DHT浓度的增加相关。 虽然给予T显示出皮下注射后2小时的T和DHT的血清浓度5倍于 TP，但此后，这些高水平非常快地下降。相反，在TP治疗的动物中T 和DHT的血清浓度在24小时期间相当一致，因此，TP显示出约10- 30倍于游离T的效力。
MDA PCa2b人前列腺Zenograft测定：
体内抗肿瘤试验：在Balb/c nu/nu裸鼠体内维持MDA-PCa-2b人 前列腺肿瘤。用从供体小鼠获得的肿瘤碎片，使肿瘤在成年雄性裸鼠 (4-6周龄)中作为皮下移植物繁殖。每5-6周进行肿瘤传代。
对于抗肿瘤功效试验，将需要测定有意义反应的所需数目的动物 在试验开始时混合，用13号套针给每只动物皮下植入肿瘤碎片(约50 mg)。让肿瘤生长至大约100-200mg(排除超出该范围的肿瘤)，将动物 平均分配到不同的治疗组和对照组中。每只动物的治疗基于个体的体 重。每日检查受治疗动物的治疗相关毒性/死亡率。每组动物在治疗开 始前称重(Wt1)，然后在最后一剂治疗之后再次称重(Wt2)。体重之差 (Wt2-Wt1)提供了对治疗相关毒性的度量。
通过用卡尺每周两次测量肿瘤，测量肿瘤反应，直至肿瘤达到0.5 gm的预定“目标”大小。根据公式：肿瘤重量＝(长度×宽度2)÷2， 估计肿瘤重量(mg)。肿瘤反应的终点以肿瘤生长抑制(％T/C)(定义为经 治疗肿瘤的平均肿瘤重量(T)与对照组平均肿瘤重量(C)之比)来表示。
为了评估肿瘤细胞的杀伤，首先用以下公式计算肿瘤体积加倍的 时间：
TVDT＝对照肿瘤达到目标大小的平均时间(天数)-对照肿瘤达 到一半目标大小的平均时间(天数)，
然后log细胞杀伤＝(T-C)÷(3.32×TVDT)
用Gehan广义Wilcoxon检验进行数据的统计学评估。
Dunning前列腺肿瘤：
Dunning R3327H前列腺肿瘤是前列腺的一种自发衍生的充分分 化的雄激素反应性腺癌(Smolev JK，Heston WD，Scott WW和Coffey DS， Cencer Treat Rep.61，273-287(1977))。根据其高度雄激素依赖性和在 在完整雄性大鼠中的可再现生长，选择R3327H亚系的生长物。因此， 这一模型和这种肿瘤的其它亚系被广泛用来评估抗雄激素例如氟他胺 和比卡鲁胺/卡索地司的体内抗肿瘤活性Maucher A.和von Angerer，J. Cancer Res.Clin.Oncol.，119，669-674(1993)，Furr B.J.A.Euro.URL. 18(suppl.3)，2-9(1990)，Shain S.A.和Huot Ri.J.Steriod Biochem.31， 711-718(1988))。
在研究开始时，将Dunning肿瘤片(约4×4mm)皮下移植至成熟 雄性Copenhagen大鼠(6-7周龄，Harlan-Sprague Dawley，Indianapolis， MD)的胁腹。移植后约6周，将带有可测量大小(约80-120mm2)肿瘤 的动物随机分为多个治疗组(8-10只大鼠/组)，并且开始治疗。一组大 鼠阉割，用作肿瘤生长的阴性对照。动物用本发明化合物、标准抗雄 激素例如比卡鲁胺或溶媒(对照)每日治疗达平均10-14周。将试验化合 物溶于含10％聚乙二醇和0.05％Tween 80的1％羧甲基纤维素- PEG/CMC(Sigma，St Louis，MO)溶媒(2.5ml/kg体重)中。典型的治疗性 实验将包括每种标准品或试验化合物(范围300-3mg/kg)的三个逐步上 升剂量的三个组。
溶媒(对照)组中的肿瘤达到1500-2500mm3，而阉割动物组在14 周的观测期间通常显示出肿瘤停滞。用20mmg/kg比卡鲁胺或氟他胺口 服治疗的动物预期在14周治疗后将显示出与对照相比肿瘤体积减小 40％。每周用游标卡尺(Froboz，Switzerlannd)，采用长度和宽度的垂直测 量法，测量肿瘤的大小。肿瘤体积用以下公式：长度×宽度×高度＝ 体积，以mm3测量。治疗组和对照组之间的统计学差异用多重ANOVA 分析，然后是单尾非参数Studentt检验评估。
成熟大鼠前列腺重量分析：
用一种成熟雄性大鼠模型研究本发明化合物的活性，该模型是上 文所述肛门提肌和前列腺湿重测定的一种变体。上述体内测定是公认 用于测定给定化合物在性器官中的对肌肉的合成作用和支持作用的测 定，如以下文献中所述：L.G.Hershberger等，83 Proc.Soc.Expt.Biol. Med.，175(1953)；B.L.Beyler等，″Methods for evaluating anabolic and catabolic agents in laboratory animals″，23 J.Amer.Med. Women’s Ass.， 708(1968)；H.Fukuda等，″Investigations of the levator ani muscle as an anabolic steroid assay″，14 Nago Dai.Yak.Ken.Nem.84(1966)，所述文 献的公开内容通过引用结合到本文中。该测定的基础在于已充分确定 的雄激素类药对动物和男性中肌肉组织和副性器官的维持和生长的作 用。
雄性副性器官例如前列腺和精囊，在生殖功能方面起重要作用。 由于持续存在血清睾酮(T)，这些腺体被刺激生长并且维持其大小和分 泌功能，睾酮是睾丸中莱迪希氏细胞在垂体黄体生成素(LH)和促卵泡 激素(FSH)控制下产生的主要血清雄激素(＞95％)。睾酮在前列腺中被 5α-还原酶转化为更具活性的形式-二氢睾酮(DHT)。与肾上腺雄激素 在65岁男性中贡献总DHT的40％相比，肾上腺雄激素在大鼠前列腺 中也贡献总DHT的大约20％。F.Labrie等16 Clin.Invest.Med.，475-492 (1993)。然而，这并不是主要的途径，因为在动物和人类中，在不伴 随肾上腺切除术的情况下，阉割都导致前列腺和精囊几乎完全退化。 因此，在正常条件下，肾上腺并不支持前列腺组织的显著生长。M.C. Luke和D.S.Coffey，″The Physiology of Reproduction″.E.Knobil和J.D. Neill编著，1，1435-1487(1994)。由于雄性性器官和肛门提肌是对雄激 素活性调节反应最强的组织，所以用这一模型来测定成熟大鼠中调节 雄激素受体途径的化合物的活性。
除其对组织例如前列腺、精囊和肌肉的促有丝分裂活性外，睾酮 也充当其自身生物合成的负调节剂。睾丸莱迪希氏细胞中睾酮的产生 受从垂体释放的循环LH水平的控制。LH水平本身受在下丘脑中产生 的LHRH水平的控制。血液中的睾酮水平用来抑制LHRH的分泌，并 因此降低LH水平，最终降低循环睾酮水平。通过测量受本发明化合 物(“试验化合物”)作用时的LH血液水平，有可能测定所述化合物在 这种内分泌循环的下丘脑轴的激动剂活性水平或拮抗剂活性水平。
Harlan Sprague Dawely大鼠(40-42日龄，180-220g)的配对组通过 管饲法(p.o.)以溶于80％PEG 400和20％Tween 80(PEGTW)中的悬浮 液口服给予所述试验化合物达14天。两个对照组，一个为完整对照 组，一个为阉割对照组，仅给这两个对照组口服给予所述PEGTW溶 媒。动物以0.5ml溶媒/100g体重给药(v/w)。实验组如下：
1.完整溶媒(p.o.PEGTW，QD)
2.对照溶媒(p.o.PEGTW，QD)
3.比卡鲁胺(Casodex(卡索地司)，一种公认的抗雄激素，作为参 比化合物)或一种本发明化合物，p.o.，在PEGTW中，QD，(按 一系列剂量)。
在14天的治疗结束时，处死动物，手术取出腹侧前列腺、精囊和 肛门提肌并称重。为了比较得自不同实验的数据，首先将器官重量以 mg/100g体重标准化，然后以完整组中相应器官的所述数值的百分比 来表示。
用Biotrak[125I]试剂盒(Amersham Pharmacia Biotek)，按照生产商 的指示，定量测定大鼠黄体生成素(rLH)。该测定基于血清中存在的LH 与Amerlex-M微珠/抗体悬浮液竞争结合[125I]rLH。在与所述血清保温 并且随后洗涤后剩余的放射性，在标准曲线中外推，得到一个读数 (ng/ml)。
性器官和肛门提肌的增重和减重反映出随血清雄激素浓度而变 的细胞数(DNA含量)和细胞质量(蛋白质含量)的变化。参见Y.Okuda 等，J.Urol.，145，188-191(1991)，该文献的公开内容通过引用结合到本 文中。因此，器官湿重的测量结果足以表明雄激素和雄激素拮抗剂的 生物活性。在成熟大鼠测定中，活性激动剂对一种或多种雄激素效应 器官(肛门提肌、前列腺、精囊)的重量没有作用，或者将增加一种或 多种雄激素效应器官(肛门提肌、前列腺、精囊)的重量，并且对LH分 泌没有作用或者有抑制作用。具有拮抗剂活性的化合物将增加一种或 多种雄激素效应器官(肛门提肌、前列腺、精囊)的重量，并且对LH分 泌没有作用或者有降低的抑制作用。
CWR22人前列腺Zenograft测定：
体内抗肿瘤试验：在Balb/c nu/nu裸鼠体内维持CWR22人前列腺 肿瘤。用从供体小鼠获得的肿瘤碎片，使肿瘤在成年雄性裸鼠(4-6周 龄)中作为皮下移植物繁殖。每5-6周进行肿瘤传代。
对于抗肿瘤功效试验，将需要测定有意义反应的所需数目的动物 在试验开始时混合，用13号套针给每只动物皮下植入肿瘤碎片(约50 mg)。让肿瘤生长至大约100-200mg(排除超出该范围的肿瘤)，并将动 物平均分配到不同的治疗组和对照组中。每只动物的治疗基于个体的 体重。每日检查受治疗动物的治疗相关毒性/死亡率。每组动物在治疗 开始前称重(Wt1)，然后在最后一剂治疗之后再次称重(Wt2)。体重之 差(Wt2-Wt1)提供了对治疗相关毒性的度量。
通过用卡尺每周两次测量肿瘤，测量肿瘤反应，直至肿瘤达到0.5 gm的预定“目标”大小。根据公式：肿瘤重量＝(长度×宽度2)÷2， 估计肿瘤重量(mg)。
肿瘤反应的终点以肿瘤生长抑制(％T/C)来表示(定义为经治疗肿 瘤的平均肿瘤重量(T)与对照组平均肿瘤重量(C)之比)。
为了评估肿瘤细胞的杀伤，首先用以下公式计算肿瘤体积加倍的 时间：
TVDT＝对照肿瘤达到目标大小的平均时间(天数)-对照肿瘤达 到一半目标大小的平均时间(天数)，
然后log细胞杀伤＝(T-C)÷(3.32×TVDT)
用Gehan广义Wilcoxon检验进行数据的统计学评估。
以下实施例描述了本发明的实施方案，但并不是限制本发明的范 围。
缩写
在本文中使用以下缩写：
DBU＝1，8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯
4-DMAP＝4-二甲氨基吡啶
ee＝对映体过量
DMF＝二甲基甲酰胺
EtOAc＝乙酸乙酯
LDA＝二异丙酰胺锂
Hünig碱＝N，N-二异丙基乙胺
Me＝甲基
RT＝保留时间
TFA＝三氟乙酸
THF＝四氢呋喃
TLC＝薄层色谱
TMS＝三甲基甲硅烷基
pTSA＝对甲苯磺酸
Δ＝加热
t-Bu＝叔丁基
PhCH3＝甲苯
Pd/C＝披钯碳
TsCI＝甲苯磺酰氯
TBSOTf＝三氟甲磺酸叔丁基二甲基甲硅烷基酯
TBS＝叔丁基二甲基甲硅烷
MeI＝甲基碘
(BOC)2O＝重碳酸二叔丁酯
TEA＝三乙胺
n-BuLi＝正丁基锂
rt＝室温
LC＝液相色谱
Ts＝甲苯磺酰基
Ph＝苯基
EtOH＝乙醇
DCE＝二氯乙烷
DMSO＝二甲基亚砜
Ra-Ni＝阮内镍
MS＝分子筛
MS(ES)＝电离喷雾质谱
mCPBA＝间氯过氧苯甲酸
sat＝饱和的
AcOH＝乙酸
MeOH＝甲醇
Et2O＝乙醚
Ac＝乙酰基
DEAD＝偶氮二甲酸二乙酯
h＝小时
Et＝乙基
WSDCC＝水溶性二羰基二酰亚胺，盐酸1-(3-二甲氨基丙基)-3- 乙基碳二亚胺
TBAF＝氟化四丁基铵
DBAD＝偶氮二甲酸二叔丁酯
DCC＝二环己基碳二亚胺
Wilkinson催化剂＝RhCl(PPh3)3
ADDP＝1，1-[偶氮二羰基]联哌啶
DMa＝二甲基乙酰胺
DME＝1，2-二甲氧基乙烷
BOP＝六氟合磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲氨基)-磷_
实施例1
(3aα，4α，7α，7aα)-2-(4-溴-3-甲基苯基)四氢-4，7-桥亚乙基硫代 (ethanothio)吡喃并[3，4-c]吡咯-1，3，8(2H，4H)-三酮(1C)

A.4-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-2H-噻喃(1A)

将2，3-二氢-4H-噻喃-4-酮(1.50 g，13.14mol，如Richards等，J.Org. Chem.46，4836-4842(1981)中所述方法合成)溶于CH2Cl2(130mL)中， 加入三乙胺(5.47 mL，39.41mmol)。然后加入三氟甲磺酸叔丁基二甲基 甲硅烷基酯(3.62mL，15.77mmol)。l0分钟后，通过旋转蒸发器于25 ℃除去挥发物。让所得的黄色油状物通过SiO2短柱，用3％TEA的己 烷溶液洗脱，得到1.82g作为橙色油状物的化合物1A。
B.1-[4-溴-3-甲基苯基]-1H-吡咯-2，5-二酮(1B)

将4-溴-3-甲基苯胺(1.55g，8.33mmol)和马来酐(O.898g，9.16 mmol)溶于乙酸(10mL)中，并于115℃加热12小时。然后将反应物冷 却至25℃，真空除去乙酸。将所得的残余物悬浮于5％K2CO3(100mL) 中，搅拌25分钟，然后过滤并用水冲洗。然后将所述物质真空干燥， 得到作为浅褐色固体的化合物1B(1.65g)。HPLC：100％，2.96min(保 留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含有O.1％TFA的10-90％甲 醇水溶液在4分钟内洗脱，4mL/min，于220nm监测)。
C.(3aα，4α，7α，7aα)-2-(4-溴-3-甲基苯基)四氢-4，7-桥亚乙基硫代吡喃 并[3，4-c]吡咯-1，3，8(2H，4H)-三酮(1C)
将化合物1A(0.313g，1.41mmol)和化合物1B(0.250g，0.94mmol) 溶于甲苯中，并加热至回流达5小时。然后将氩气流通入反应瓶而除 去甲苯。然后残余物通过SiO2快速色谱纯化，用20％己烷的氯仿溶液 洗脱。这得到0.168g作为黄色固体的烯醇醚中间体。将烯醇醚中间体 溶于二氯乙烷(2.0mL)中，加入TFA(0.25mL)。0.5小时后，反应用饱 和碳酸氢钠水溶液猝灭，并用CH2Cl2(2×30mL)萃取。将有机物经无 水硫酸钠干燥并蒸发，得到作为白色固体的0.079g的化合物1C。
HPLC：99％，3.010min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm， 用含有0.1％TFA的10-90％甲醇水溶液在4分钟内洗脱，4mL/min，于 220nm监测)，MS(ES)：m/z396.9[M+NH4]+。
实施例2
(3aα，4α，7α，7aα)-2-(4-溴-3-甲基苯基)四氢-4，7-桥亚乙基硫代吡喃并 [3，4-c]吡咯-1，3，8(2H，4H)-三酮5，5-二氧化物(2)

将化合物1C(0.040g，0.105mmol)溶于CH2Cl2(4.0mL)中，冷却 至0℃。加入m-CPBA(60％纯度，0.061g，0.210mmol)，然后将反应物 温热至25℃。1小时后，在剧烈搅拌下加入饱和碳酸氢钠和饱和亚硫 酸钠的1∶1混合物(20mL)。15分钟后，混合物用CH2Cl2(2×30mL)萃 取，有机物经无水硫酸钠干燥，得到作为白色固体的0.031g的化合物 2。不必进行纯化。HPLC：78％，2.290min(保留时间)(YMC S5 ODS 柱，4.6×50mm，用含有0.1％TFA的10-90％甲醇水溶液在4分钟内洗 脱，4mL/min，于220nm监测)，MS(ES)：m/z429.8[M+NH4]+。
实施例3
(3aα，4β，7β，7aα)-2-(3-氯苯基)六氢-4-甲基-4，7-环氧-1H-异吲哚- 1，3(2H)-二酮(3)

将3-氯苯胺(0.100g，0.787mmol)和3，6-桥氧-3-甲基六氢邻苯二甲 酸酐(0.172g，0.945mmmol)溶于AcOH(2.0mL)中，并且加热至110℃达 11小时。然后将反应物冷却至25℃，倾至冷饱和碳酸钾水溶液中，并 且剧烈搅拌10分钟。然后将溶液过滤并用水冲洗。所得的滤液真空干 燥，得到作为白色固体的0.118g的化合物3。不必进行进一步纯化。 HPLC：99％，2.510min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含 有0.1％TFA的10-90％甲醇水溶液在4分钟内洗脱，4mL/min，于220 nm监测)，MS(ES)：m/z292.32[M+H]+。
实施例4
(3aα，4α，7α，7a)-和(3aα，4β，7β，7aα)-4-[(乙酰氧基)甲基]-3a，4，7，7a-四 氢-2-[3-(三氟甲基)苯基]-4，7-环氧-1H-异吲哚-1，3(2H)-二酮 (分别为4i和4ii)

将2-乙酰氧基甲基呋喃(0.599mL，4.78mmol)和1-[3-(三氟甲基)- 苯基]-1H-吡咯-2，5-二酮(0.500g，2.39mmol)于25℃溶于二氯甲烷(3.0 mL)中。22小时后，真空除去挥发物，所得的残余物经SiO2快速色谱 纯化，用0-15％丙酮的二氯甲烷溶液洗脱，得到0.438g黄色油状物， 为未被分离的化合物4i和化合物4ii的2∶1混合物。HPLC：100％，3.093 min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含有0.1％TFA的 10-90％甲醇水溶液在4分钟内洗脱，4mL/min，于220nm监测)，MS (ES)：m/z398.9[M+NH4]+。
实施例5
(3aα，4α，7α，7aα)-和(3aα，4β，7β，7aα)-4-[(乙酰氧基)尹基]-六氢-2-[3-(三 氟甲基)苯基]-4，7-环氧-1H-异吲哚-1，3(2H)-酮(分别为5i和5ii)

将化合物4i和4ii的所述2∶1混合物(0.361g，得自实施例4)溶于 乙酸乙酯(25mL)中，加入Pd/C(10％Pd，0.2g)。通过气囊引入氢气， 将反应物于25℃搅拌4小时；然后通过硅藻土过滤并用乙酸乙酯冲 洗。真空浓缩，得到黄色油状物，测定所述油状物为未被分离的化合 物5i和化合物5ii的2∶1混合物。HPLC：100％，2.900min(保留时间) (YMC S5 ODS柱，4.6×50nm，用含有0.1％TFA的10-90％甲醇水溶液 在4分钟内洗脱，4mL/min，于220nm监测)，MS(ES)：m/z401.0 [M+NH4]+。
实施例6
(3aα，4α，7α，7a)-和(3aα，4β，7β，7aα)-3a，4，7，7a-四氢-5-(羟基甲基)-2-[3- (三氟甲基)苯基]-4，7-环氧-1H-异吲哚-1，3(2H)-二酮(分别为6i和6ii)

将1-[3-(三氟甲基)苯基]-1H-吡咯-2，5-二酮(0.500g，2.39mmol)和 3-呋喃甲醇(0.412mL，4.78mmol)溶于二氯甲烷(3.0mL)中，于25℃搅 拌20小时。然后真空除去挥发物，所得的物质通过SiO2快速色谱纯 化，用氯仿/丙酮洗脱，得到0.379g的化合物6i和0.220g的化合物6ii， 这两种化合物都为白色固体。化合物6i：PLC：100％，2.197min(保留 时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含有0.1％TFA的10-90％甲醇 水溶液在4分钟内洗脱，4mL/min，于220nm监测)，MS(ES)：m/z338.0 [M-H]-。化合物6ii：HpLC：100％，2.477min(保留时间)(YMC S5 ODS 柱，4.6×50mm，用含有0.1％TFA的10-90％甲醇水溶液在4分钟内洗 脱，4mL/min，于220nm监测)，MS(ES)：m/z338.0[M-H]-。
实施例7
(3aα，4α，7α，7aα)-3a，4，7，7a-四氢-5-(羟基甲基)-4-甲基-2-[3-(三氟甲基) 苯基]-4，7-环氧-1H-异吲哚-1，3(2H)-二酮(7)

将2-甲基-3-呋喃甲醇(0.537g，4.78mmol)和1-[3-(三氟甲基)-苯 基]-1H-吡咯-2，5-二酮(0.500g，2.39mmol)溶于二氯乙烷(2.0mL)中，于 25℃搅拌20小时。然后真空浓缩反应物，所得的物质通过SiO2快速 色谱纯化，用乙酸乙酯/二氯甲烷洗脱，得到0.317g的化合物7，为白 色固体。在色谱后没有分离到其它可能的异构体。HPLC：100％，2.197 min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含有0.1％TFA的10- 90％甲醇水溶液在4分钟内洗脱，4mL/min，于220nm监测)，MS(ES)： m/z351.9[M-H]-。
实施例8
(3aα，4β，7β，7aα)-2-[3，5-双(三氟甲基)苯基]六氢-4，7-环氧-1H-异吲哚- 1，3(2H)-二酮(8)

将3，5-双(三氟甲基)-苯胺(0.017g，0.0075mmol)溶于乙酸(0.300 mL)中，然后转移到带有隔帽(septa cap)的1.5mL锥形小瓶中。如上所 述制备另外95种胺的储液。向每个上述小瓶中加入0.4mL(0.12mmol) 外-7-氧杂二环[2.2.1]庚烷-2，3-二羧酸酐的乙酸储液。然后密封小瓶， 于110℃加热11小时。冷却至25℃时，从小瓶取下帽，真空除去乙酸。 向每个小瓶中加入1mL丙酮/二氯甲烷的2∶1混合物，然后将小瓶于 40℃加热1小时。一旦所有产物都在溶液中时，将其通过机器人转移 到带有用0.2mL水预先润湿的粗玻璃料的过滤管中。让氮气吹过每个 管，直至除去挥发性有机物。然后向各管中加入1.5mL10％碳酸钠水 溶液，然后于25℃剧烈振摇15分钟。将管抽空，再密封，向各管中 加入1.0mL水，然后振摇。再次将管抽空，并用水第二次洗涤。然后 将各管中的所得残余物真空干燥48小时。干燥后，向各管中加入1.0 mL20％TFA的二氯甲烷溶液，将架子振摇30分钟。然后将管排空到 有预先配衡的(pre-tared)定制微量管的96孔板中。分析各管中产物的 纯度(分析型LC)和身份(LC-MS)。将管中物真空浓缩，并称重以得到 产量。含有3，5-双三氟甲基苯胺和外-7-氧杂二环[2.2.1]庚烷-2，3-二羧酸 酐的反应物的管，得到0.022g的化合物8，为白色固体。HPLC：94％， 4.03min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含有0.1％TFA的 10-90％甲醇水溶液在4分钟内洗脱，4mL/min，于220nm监测)，MS (ES)：m/z434.2[M+Na+MeOH]+。在其余95种另外的反应物洗脱中， 得到纯度＞70％且产量＞5mg的总共80种最终的化合物。几种样品需 要进一步纯化，所述纯化通过SiO2短柱进行，用二氯甲烷/丙酮洗脱。
参见以下表2。
实施例9
(3aα，4α，7α，7aα)-2-(4-溴苯基)八氢-1，3-二氧代-4，7-桥亚乙烯基-5H-吡 咯并[3，4-c]吡啶-5-羧酸苯酯(9)

将1-[4-溴苯基]-1H-吡咯-2，5-二酮(0.250g，0.992mmol，如实施例 1B中所述方法合成)和1(2H)-吡啶羧酸苯基甲酯(0.299g，1.49mmol， 如Richard等，J.Org.Chem.46，4836-4842(1981)中所述方法合成)溶于 甲苯中，并于85℃加热1小时。冷却至25℃时后，真空除去甲苯。将 所得的残余物溶于最少量的氯仿中，通过加入己烷沉淀所述产物。于 25℃1小时后，将产物过滤，并用冷20％己烷的氯仿溶液冲洗，得到 化合物9，为白色固体(0.243g)，是单一的异构体。HPLC：100％，3.393 min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含有0.1％TFA的10- 90％甲醇水溶液在4分钟内洗脱，4mL/min，于220nm监测)，MS(ES)： m/z454.98[M+H]+。
实施例10
(3aα，4α，7α，7aα)-2-(4-溴苯基)八氢-1，3-二氧代-4，7-桥亚乙烯基-5H-吡 咯并[3，4-c]吡啶-5-羧酸苯基甲酯(10)

将1-[3-(三氟甲基)苯基]-1H-吡咯-2，5-二酮(3.78g，15.7mmol)和 1(2H)-吡啶羧酸苯基甲酯(4.0g，18.8mmol，如Richard等，J.Org.Chem. 46，4836-4842(1981)中所述方法合成)溶于甲苯中，并于80℃加热3小 时。冷却至25℃后，真空除去甲苯，所得的残余物通过SiO2快速色谱 纯化，用甲醇/二氯甲烷洗脱，得到3.2g的化合物10，为黄色油状物。 HPLC：95％，3.510min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含 有0.1％TFA的10-90％甲醇水溶液在4分钟内洗脱，4mL/min，于220 nm监测)，MS(ES)：m/z457.2[M+H]+。
实施例11
(3aα，4α，7α，7aα)-六氢-2-[3-(三氟甲基)苯基]-4，7-桥亚乙基-1H-吡咯并 [3，4-c]吡啶-1，3(2H)-二酮三氟乙酸盐(11)

将化合物10(3.2g)溶于100mlMeOH中，并加入10％Pd/C DeGussa催化剂(2g)。然后通过气囊引入氢气。1小时后，将反应物通 过硅藻土过滤，并用MeOH冲洗。真空除去挥发物，所得的粗制物质 通过反相制备型HPLC纯化，得到2.5g作为TFA盐(白色固体)的化合 物11。HPLC：99％，1.843min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm， 用含有0.1％TFA的10-90％甲醇水溶液在4分钟内洗脱，4mL/min，于 220nm监测)，MS(ES)：m/z325.12[M+H]+。
实施例12
(3aα，4α，7α，7aα)-5-乙酰基六氢-2-[3-(三氟甲基)苯基]-4，7-桥亚乙基- 1H-吡咯并[3，4-c]吡啶-1，3(2H)-二酮(12)

将化合物11(0.100g，0.23mmol)悬浮于THF(5.0mL)中，加入TEA (0.097mL，0.46mmol)，产生均相溶液。然后加入乙酰氯(0.033mL，0.46 mmol)。2小时后，反应物用饱和碳酸氢钠水溶液猝灭，并用二氯甲烷 (3×15mL)萃取。粗制物质通过制备型TLC纯化，用氯仿/丙酮洗脱， 得到0.099g的化合物12，为无色油状物。HPLC：99％，2.66min(保留 时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含有0.1％TFA的10-90％甲醇 水溶液在4分钟内洗脱，4 mL/min，于220nm监测)，MS(ES)：m/z367.0 [M+H]+。
实施例13
(3aα，4α，7α，7aα)-5-苯甲酰基六氢-2-[3-(三氟甲基)苯基]-4，7-桥亚乙基- 1H-吡咯并[3，4-c]吡啶-1，3(2H)-二酮(13)

将化合物11(0.100g，0.23mmol)悬浮于THE(5.0mL)中，加入TEA (0.097mL，0.46mmol)，产生均相溶液。然后加入苯甲酰氯(0.05433mL， 0.46mmol)。2小时后，反应物用饱和碳酸氢钠水溶液猝灭，并用二氯 甲烷(3×15mL)萃取。粗制物质经反相制备型HPLC纯化，得到0.020g 的化合物13，为白色泡沫状物。HPLC：99％，3.183min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含有0.1％TFA的10-90％甲醇水溶液在4分 钟内洗脱，4mL/min，于220nm监测)，MS(ES)：m/z429.1[M+H]+。
实施例14
(3aα，4α，7α，7aα)-六氢-5-甲基-2-[3-(三氟甲基)苯基]-4，7-桥亚乙基-1H- 吡咯并[3，4-c]吡啶-1，3(2H)-二酮(14)

将化合物11(0.100g，0.23mmol)悬浮于THF(5.0mL)，加入TEA (0.097mL，0.46mmol)中，产生均相溶液。加入硫酸二甲酯(0.043mL， 0.46mmol)，并将反应物于25℃搅拌。14小时后，将反应物真空浓缩， 粗制物质通过制备型TLC纯化，用10％MeOH的二氯甲烷溶液洗脱， 得到0.030g的化合物14，为白色固体。HPLC：100％，1.797min(保留 时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含有0.1％TFA的10-90％甲醇 水溶液在4分钟内洗脱，4mL/min，于220nm监测)，MS(ES)：m/z 339.21[M+H]+。
实施例15
(3aα，4α，7α，7aα)-六氢-5-(苯基甲基)-2-[3-(三氟甲基)苯基]-4，7-桥亚乙 基-1H-吡咯并[3，4-c]吡啶-1，3(2H)-二酮三氟乙酸盐(15)

将化合物11(0.100g，0.23mmol)溶于DMF(5.0mL)中，加入 K2CO3(0.063g，0.46mmol)。然后加入苄基溴(0.041mL，0.35mmol)。
将反应物于25℃搅拌1小时，然后过滤并浓缩。粗制物质通过反相制 备型HPLC纯化，得到0.055g的化合物15，为白色固体。HpLC：100％， 2.31min(保留时间)(YMC S5 QDS柱，4.6×50mm，用含有0.1％TFA的 10-90％甲醇水溶液在4分钟内洗脱，4mL/min，于220nm监测)，MS (ES)：m/z415.36[M+H]+。
实施例16
(3aα，4α，7α，7aα)-六氢-5-丙基-2-[3-(三氟甲基)苯基]-4，7-桥亚乙基-1H- 吡咯并[3，4-c]吡啶-1，3(2H)-二酮三氟乙酸盐(16)

将化合物11(0.100g，0.23mmol)溶于DMF(5.0mL)中，加入 K2CO3(0.079g，0.57mmol)，然后加入1-溴丙烷(0.031mL，0.34mmol)。
将反应物于25℃搅拌6小时，然后过滤并浓缩。粗制物质经反相制备 型HPLC纯化，得到0.070g的化合物16，为白色固体。HPLC：100％， 1.907min(保留时间)(YMCS5 ODS柱，4.6×50mm，用含有0.1％TFA 的10-90％甲醇水溶液在4分钟内洗脱，4mL/min，于220nm监测)，MS (ES)：m/z340.22[M+H]+。
实施例17
(3aα，4α，4aβ，5aβ，6α，6aα)-2-[4-氰基-3-(三氟甲基)苯基]十氢-1，3-二氧 代-4，6-(亚氨基亚甲基)环丙[f]异吲哚-7-羧酸苯基甲酯(17)

将1-甲基-3-硝基-1-亚硝基胍(2.5g，17mmol)于0℃分次加入到 40％KOH/H2O(15mL)和Et2O(25mL)的溶液中。当加入完成后，乙醚 层变为黄色。于0℃30分钟后，于0℃将乙醚层倾至(3aα，4α，7α，7aα)- 2-[4-氰基-3-(三氟甲基)苯基]十氢-1，3-二氧代-4，7-桥亚乙烯基-5H-吡咯 并[3，4-c]吡啶-5-羧酸苯基甲酯(0.50g，1.09mmol，如实施例10中所述 方法制备)和Pd(OAc)2(0.010g)的THF(10mL)溶液中。然后将反应物 缓慢温热至25℃，并搅拌24小时，然后通过硅藻土过滤，用THF冲 洗。然后粗制物质通过SiO2快速色谱纯化，用MeOH/CH2Cl2洗脱， 得到0.34g的化合物17，为白色固体，并且是单一的异构体。HPLC： 100％，3.61min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含有0.1％ TFA的10-90％甲醇水溶液在4分钟内洗脱，4mL/min，于220nm监测)， MS(ES)：m/z496.25[M+H]+。
实施例18
(3aα，4α，4aβ，5aβ，6α，6aα)-4-[十氢-1，3-二氧代-4，6-(亚氨基亚甲基)环丙 [f]异吲哚-2-基]-2-(三氟甲基)苄腈(18)

将化合物17(0.200g，0.404mmol)溶于MeOH(20mL)中，加入5％ Pd/C(0.200g)。然后通过气囊引入氢气。3小时后，将反应物通过硅 藻土过滤，用MeOH冲洗，并真空除去挥发物，得到化合物18(0.130 g)，为白色固体。HPLC：100％，1.80min(保留时间)(YMC S5 ODS柱， 4.6×50mm，用含有0.1％TFA的10-90％甲醇水溶液在4分钟内洗脱，4 mL/min，于220nm监测)，MS(ES)：m/z362.09[M+H]+。
实施例19
(3aα，4α，4aβ，5aβ，6α，6aα)-4-[十氢-7-甲基-1，3-二氧代-4，6-(亚氨基亚甲 基)环丙[f]异吲哚-2-基]-2-(三氟甲基)苄腈(19)

将化合物17(0.100g，0.277mmol)溶于CH3CN(2.0mL)中。然后 加入TEA(0.19mL，1.39mmol)和MeI(0.052mL，0.83mmol)，将反应物 于25℃搅拌14小时。将反应物浓缩，将粗制物质溶于二氯甲烷/水中， 并用CH2Cl2(3×15mL)萃取。合并的有机物经无水硫酸钠干燥。粗制 物质经快速色谱纯化，用3％MeOH/CH2Cl2洗脱，得到0.030g的化合 物19，为浅黄色固体。HPLC：100％，1.720min(保留时间)(YMC S5 ODS 柱，4.6×50mm，用含有0.1％TFA的10-90％甲醇水溶液在4分钟内洗 脱，4mL/min，于220nm监测)，MS(ES)：m/z376.11[M+H]+。
实施例20
(3aα，4β，7β，7aα)-4-(八氢-4，7-二甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧-2H-异吲哚- 2-基)-2-(三氟甲基)苄腈(20B)

A.(3aα，4β，7β，7aα)-六氢-4，7-环氧异苯并呋喃-1，3-二酮(20A)

将新蒸馏的二甲基呋喃(1.60mL，15.3mmol)溶于CH2Cl2(2.0mL) 中，并加入马来酐(1.0g，10.2mmol)中。反应物于25℃搅拌16小时， 然后真空浓缩，得到黄色固体。将该固体溶于乙酸乙酯(30mL)中，加 入Pd/C(10％Pd，0.200g)。通过气囊引入氢气，将反应物搅拌24小时。
通过硅藻土过滤除去Pd，用EtOAc冲洗，然后真空浓缩，得到化合物 20A(1.69g)，为白色固体。二维NOE实验证实所述结构指定为化合 物20A的结构。
B.(3aα，4β，7β，7aα)-4-(八氢-4，7-二甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧-2H-异吲 哚-2-基)-2-(三氟甲基)苄腈(20B)
将化合物20A(603mg，3.21mmol，1eq)、5-氨基-2-氰基苯基三氟 甲烷(benzotrifluoride)(640mg，3.44mmol，1.07eq)和TsOH(10mg，催 化量)的甲苯(5mL)溶液在密封管中加热2天。将反应混合物冷却至室 温，然后减压浓缩。经硅胶快速色谱纯化，用50％EtOAc/己烷洗脱， 得到400mg(1.10mmol，34％)的化合物20B，为白色固体。HPLC：99％， 3.04min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，在4分钟内含有 0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液，4mL/min，于220nm监测)，MS(ESI)： m/z382.2[M+NH4]+。
实施例21
(3aα，4β，7β，7aα)-N-[4-[[2-[2-[4-氰基-3-(三氟甲基)苯基]八氢-7-甲基- 1，3-二氧代-4，7-环氧-4H-异吲哚-4-基]乙基]硫代]苯基]乙酰胺(21E)

A.5-甲基-2-呋喃乙醇(21A)

将n-BuLi(83mL，133.0mmol，1.2eq，1.6M己烷)溶液于0℃在惰 性环境下加入至2-甲基呋喃(10mL，110.8mmol，1eq)的THF(85mL) 搅拌溶液中。将反应混合物于室温搅拌4小时，然后冷却至0℃。滴 加环氧乙烷(8.3 mL，166.3mmol，1.5eq)，然后让反应混合物温热至室 温过夜。用饱和氯化铵水溶液猝灭后，分离所得的各层，水层用乙醚 (2X)萃取。合并的有机层经硫酸钠干燥并减压浓缩。常压蒸馏(170-185 ℃)，得到10.13g(80.3mmol，72％)的化合物21A，为浅黄色油状物。
B.2-(2-溴乙基)-5-甲基呋喃(21B)

将Ph3Br2(3.68g，8.72mmol，1.1eq)加入到化合物21A(1g，7.93 mmol，1eq)的DMF(8mL)溶液中，将反应混合物于室温搅拌1小时。
将反应混合物加入至水中，并用EtOAc(3X)萃取。合并的有机层用水 (2×)洗涤，经硫酸钠干燥并减压浓缩。经硅胶快速色谱纯化，用10％ EtOAc/己烷洗脱，得到0.507g(2.68mmol，34％)的化合物21B。
C.N-[4-[[2-(5-甲基-2-呋喃基)乙基]硫代]苯基]乙酰胺(21C)

于0℃、惰性环境下，向4-乙酰氨基苯硫酚(442mg，2.64mmol，1eq) 的THF(1mL)溶液中加入n-BuLi(2mL，3.17mmol，1.2eq，1.6M己烷 溶液)的THF(1mL)溶液。将反应溶液于室温搅拌10分钟，加入化合 物21B(0.5g，2.64mmol，1eq)的THF(3mL)溶液。在通过TLC测定所 有原料耗尽后，用水猝灭反应，混合物用EtOAc(2X)萃取，经硫酸钠 干燥并减压浓缩。经硅胶快速色谱纯化，用50％EtOAc/己烷洗脱，得 到0.644g(2.34mmol，88％)的化合物21C。MS(ESI)：m/z276.09 [M+H]+。
D.(3aα，4β，7β，7aα)-N-[4-[[2-[2-[4氰基-3-(三氟甲基)苯基]- 1，2，3，3a，7，7a-六氢-7-甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧-4H-异吲哚-4-基]乙基] 硫代]苯基]乙酰胺(21D)

将化合物21C(195mg，0.708mmol，1eq)和4-(2，5-二氢2，5-二氧代 -1H-吡咯-1-基)-2-三氟甲基苄腈(377mg，1.416mmol，2eq，如实施例 1B中所述方法制备)的CH2Cl2(1.5mL)溶液于室温搅拌2天。将反应 混合物减压浓缩，通过NMR分析测定得到化合物21D。化合物21D 不经纯化而直接用于下一步。
E.(3aα，4β，7β，7aα)-N-[4-[[2-[2-[4-氰基-3-(三氟甲基)苯基]八氢-7-甲基 -1，3-二氧代-4，7-环氧-4H-异吲哚-4-基]乙基]硫代]苯基]乙酰胺(21E)
将粗制化合物21D(0.708mmol)和10％Pd/C(200mg)的MeOH (20mL)溶液在氢气环境下搅拌过夜。经制备型色谱纯化[HPLC，34.4 min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，20×250mm.，在30分钟内含有0.1％ TFA的0-100％甲醇水溶液，10mL/min，于220nm监测)]，然后经硅胶 快速色谱纯化，用1％MeOH/CH2Cl2洗脱，得到29mg(0.053mmol， 7.5％)的化合物21E，为黄色粉末。HPLC：99％，3.44min(保留时 间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，在4分钟内含有0.2％磷酸的10-90％ 甲醇水溶液，4mL/min，于220nm监测)，MS(ESI)：m/z544.01 [M+H]+。
实施例22
(3aα，4β，7β，7aα)-N-[4-[[2-[2-[4-氰基-3-(三氟甲基)苯基]八氢-7-甲基- 1，3-二氧代-4，7-环氧-4H-异吲哚-4-基]乙基]亚硫酰基]苯基]乙酰胺(22)

将mCPBA(12mg，0.05mmol)分次加入至粗制化合物21E(65mg， 0.12mmol，1eq)的CH2Cl2(6mL)溶液中，直至原料耗尽。经制备型色 谱纯化[HPLC，30.5min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，30×250mm，在 30分钟内含有0.1％TFA的0-100％甲醇水溶液，25mL/min，于220nm 监测)]，得到27.5mg(0.049mmol，41％)的化合物22，为黄褐色固体(非 对映体的约1∶1混合物)。HPLC：96％，2.88min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，在4分钟在内用含有0.1％TFA的10-90％甲醇水 溶液洗脱，4mL/min，于220nm监测)，MS(ESI)：m/z559.97[M+H]+。
实施例23
(3aα，4β，7β，7aα)-N-[4-[[2-[2-[4-氰基-3-(三氟甲基)苯基]八氢-7-甲基- 1，3-二氧代-4，7-环氧-4H-异吲哚-4-基]乙基]磺酰基]苯基]乙酰胺(23)

将mCPBA(26mg，0.105mmol，3eq)加入至化合物21E(19mg， 0.035mmol，1eq)的CH2Cl2(6mL)溶液中，将反应物于室温搅拌，直至 通过TLC显示，原料和中间体亚砜(化合物22)耗尽。经制备型色谱纯 化[HPLC，53.3min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，30×250mm，45分钟在 内含有0.1％TFA的0-70％甲醇水溶液，25mL/min，于220nm监测)]， 得到27.5mg(0.049mmol，40％)的化合物23，为白色固体。HPLC：99％， 2.94min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，在4分钟内含有 0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液，4mL/min，于220nm监测)，MS(ESI)： m/z575.95[M+H]+。
实施例24
(3aα，4β，7β，7aα)-和(3aα，4α，7α，7aα)-N-[2-[2-[4-氰基-3-(三氟甲基)苯基] 八氢-7-甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧-4H-异吲哚-4-基]乙基]苯磺酰胺 (分别为24Ci和24Cii)

A.5-甲基-2-呋喃乙醇4-甲基苯磺酸酯(24A)

将4-甲基苯磺酰氯(907mg，4.76mmol)加入至化合物21A(500mg， 3.96mmol)的6ml无水吡啶溶液中。将反应物于室温搅拌4小时，然 后用冰猝灭。反应混合物用二氯甲烷萃取，合并的有机层用饱和碳酸 氢钠水溶液和水洗涤，并减压浓缩，得到900mg(81％)的化合物24A， 为黄色油状物。
B.N-[2-(5-甲基-2-呋喃基)乙基]苯磺酰胺(24B)

将苯磺酰胺(157mg，1mmol)加入至10％氢氧化钠水溶液(0.4ml，1 mmol)中。然后加入化合物24A(280mg，1mmol)的丙酮(1mL)溶液。
将反应混合物于90℃加热8小时，然后冷却至室温。加入冰，混合物 用二氯甲烷萃取。合并的有机层用水洗涤、干燥并减压浓缩。经硅胶 快速色谱纯化，用二氯甲烷洗脱，得到60mg(23％)的化合物24B，为 黄色油状物。
C.(3aα，4β，7β，7aα)-和(3aα，4α，7α，7aα)-N-[2-[2-[4-氰基-3-(三氟甲基)苯 基]八氢-7-甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧-4H-异吲哚-4-基]乙基]苯磺酰胺 (分别为24Ci和24Cii)
将4-(2，5-二氢-2，5-二氧代-1H-吡咯-1-基)-2-三氟甲基苄腈(129mg， 0.45mmol，如实施例1B中所述方法制备)加入至化合物24B(60mg， 0.23mmol)的CH2Cl2(2mL)溶液中。将反应混合物于室温搅拌2天， 减压浓缩并经硅胶快速色谱纯化，用70％EtOAc/己烷洗脱，得到20mg (16％)的不饱和Diels-Alder产物。立即将所述不饱和产物(20mg)溶于2 ml乙醇中，并加入10mg10％Pd/C。将溶液于室温、氢气环境下搅拌 过夜。过滤混合物，将滤液减压浓缩。经制备型反相HPLC纯化，得 到7mg的化合物24Ci和2mg的化合物24Cii。化合物24Ci：HPLC：96％， 3.17min(保留时间)(YMC ODSA S5 C18 4.6×50mm，4分钟内含有 0.1％TFA的10％-90％甲醇水溶液梯度，于220nm检测)，MS(ES)：m/z： 533.99[M+H]+。化合物24Cii：HPLC：99％，38.95min(保留时间)(YMC ODS S5 20×250mm，40分钟内含有0.1％TFA的10％-90％甲醇水溶液 梯度，于220nm检测)，MS(ES)：m/z533.99[M+H]+。
实施例25
(3aα，4β，7β，7aα)-4-[八氢-4-(2-羟乙基)-7-甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧-2H- 异吲哚-2-基]-2-(三氟甲基)苄腈(25B)

A.(3aα，4β，7β，7aα)-和(3aα，4α，7α，7aα)-4-[1，3，3a，4，7，7a-六氢-4-(2-羟乙 基)-7-甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基]-2-(三氟甲基)苄腈 (分别为25Ai和25Aii)

将化合物21A(252mg，2mmol，1eq)和4-(2，5-二氢-2，5-二氧代- 1H-吡咯-1-基)-2-三氟甲基苄腈(798mg，3mmol，1.5eq)的CH2Cl2(10 mL)溶液于室温搅拌2天。将反应混合物减压浓缩。经硅胶快速色谱纯 化，用65％EtOAc/己烷洗脱，得到217mg的纯化合物25Ai、73mg 的纯化合物25Aii以及310mg化合物25Ai和25Aii的混合物。所有三 个部分都作为白色固体分离，总分离产量为600mg(1.53mmol， 76.5％)。化合物25Ai：HPLC90％，2.56min(保留时间)(YMC S5 ODS 柱，4.6×50mm，在4分钟内含有0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液，4 mL/min，于220nm监测)。化合物25Aii：HPLC90％，2.56min(保留时 间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，在4分钟内含有0.2％磷酸的10-90％ 甲醇水溶液，4mL/min，于220nm监测)。
B.(3aα，4β，7β，7aα)-4-[八氢-4-(2-羟乙基)-7-甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧- 2H-异吲哚-2-基]-2-(三氟甲基)苄腈(25B)
将化合物25Ai(0.2g，0.51mmol，1eq)和10％Pd/C(43mg，催化量) 的EtOH(12mL)溶液在氢气环境下室温搅拌2小时。将反应混合物通 过硅藻土过滤并减压浓缩，得到0.2g(0.51mmol，100％)的化合物 25B，为白色固体。HPLC：95％，2.59min(保留时间)(YMC S5 ODS柱， 4.6×50mm，用含有0.1％TFA的10-90％甲醇水溶液在4分钟内洗脱，4 mL/min，于220nm监测)，MS(ESI)：m/z394.97[M+H]+。
实施例26
(3aα，4α，7α，7aα)-和(3aα，4β，7β，7aα)-N-[4-[2-[2-[4-氰基-3-(三氟甲基)苯 基]八氢-7-甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧-4H-异吲哚-4-基]乙氧基]苯基]乙 酰胺(分别为26Ci和26Cii)

A.2-[4-[2-(5-甲基-2-呋喃基)乙氧基]苯基]乙酰胺(26A)

将三苯膦(681mg，2.6mmol，1.3eq)加入至化合物21A(252mg，2 mmol，1eq)和4-乙酰氨基苯酚(302mg，2mmol，1eq)的CH2Cl2(4mL) 溶液中。加入THF(5mL)，使反应混合物成为均相，然后将混合物冷 却至0℃。滴加DEAD(0.41mL，2.6mmol，1.3eq)，将反应混合物于室 温搅拌过夜，然后减压浓缩。经硅胶快速色谱纯化，用60％EtOAc/ 己烷洗脱，然后经制备型反相HPLC纯化，得到270mg(52％，1.04mmol) 的化合物26A，为浅褐色固体。MS(ESI)：m/z260.09[M+H]+。
B.(3aα，4α，7α，7aα)-和(3aα，4β，7β，7aα)-N-[4-[2-[2-[4-氰基-3-(三氟甲基) 苯基]-1，2，3，3a，7，7a-六氢-7-甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧-4H-异吲哚-4-基] 乙氧基]苯基]乙酰胺(分别为26Bi和26Bii)

将化合物26A(40mg，0.154mmol，1eq)和4-(2，5-二氢-2，5-二氧代 -1H-吡咯-1-基)-2-三氟甲基苄腈(88mg，0.31mmol，2eq)的二氯甲烷(2 mL)溶液于室温搅拌2天。将反应混合物减压浓缩。经硅胶快速色谱纯 化，用5％EtOAc/己烷洗脱，得到55mg(0.105mmol，68％)化合物26Bi 和26Bii的5∶1混合物，为白色固体，所述混合物直接用于下一步。HPLC 90％，3.28min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，在4分钟内含 有0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液，4mL/min，于220nm监测)。
C.(3aα，4α，7α，7aα)-和(3aα，4β，7β，7aα)-N-[4-[2-[2-[4-氰基-3-(三氟甲基) 苯基]八氢-7-甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧-4H-异吲哚-4-基]乙氧基]苯基] 乙酰胺(分别为26Ci和26Cii)
将化合物26Bi和26Bii(55mg，0.105mmol，1eq)和10％Pd/C(12 mg，催化量)的EtOH(3mL)溶液在氢气环境下于室温搅拌过夜。反应 混合物通过硅藻土过滤，并减压浓缩，得到50mg粗产物。经硅胶快 速色谱纯化，用70％EtOAc/己烷洗脱，分别得到18mg(0.034mmol， 32％)的化合物26Ci[HPLC：96％，3.33min(保留时间)(YMC S5 ODS柱， 4.6×50mm，在4分钟内含有0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液，4mL/min， 于220nm监测)。MS(ES)：m/z528.01[M+H]+]；和2.3mg(0.004mmols， 4％，85∶15-内型∶外型)的化合物(通过1H NMR)26Cii和化合物26Ci的 85∶15的混合物[HPLC：90％，3.35min(保留时间)(YMC S5 ODS柱， 4.6×50mm，4分钟在内含有0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液，4mL/min， 于220nm监测)，MS(ESI)：m/z528.12[M+H]+]。
实施例27
(3aα，4α，7α，7aα)-六氢-2-(2-萘基)-4，7-环氧-1H-异吲哚-1，3(2H)-二酮 (27D)

A.(内，内)-7-氧杂二环[2.2.1]庚-5-烯-2，3-二羧酸(27A)

按照Sprague等，J.Med.Chem.28，1580-1590(1985)中所述的方 法，合成化合物27A、27B和27C。将呋喃(100mL，1.38mol，1eq)和 马来酸(159.6g，1.38mol，1eq)的水(340mL)混合物于室温搅拌5天。 将混合物置于分液漏斗中，将水层与含有未反应呋喃的层分开。水层 用活性炭处理，通过硅藻土过滤，然后置于冰箱中。将接晶种时从溶 液中结晶的所需产物过滤，用冷水洗涤并经五氧化二磷干燥，得到70 g(0.38mol，28％)的化合物27A，为白色固体。
B.(内，内)-7-氧杂二环[2.2.1]庚烷-2，3-二羧酸(27B)

向化合物27A(69g，0.375mol，1eq)的EtOH(700mL)溶液中加入 10％Pd/C(4.5g，催化量)，然后混合物于55psi下在氢气环境下振摇， 直至停止吸收气体。将混合物通过硅藻土过滤并真空浓缩，得到66g (0.355mol，95％)的化合物27B，为白色固体。
C.(3aα，4α，7α，7aα)-六氢-4，7-环氧异苯并呋喃-1，3-二酮(27C)

将化合物27B(66g，355mol)的乙酰氯(300mL)溶液回流1小时。
真空浓缩反应溶液，所得的残余物从苯中再结晶，得到49.2g(0.292 mol，82％)的化合物27C，为白色固体(＞99％内型，通过1HNMR分 析)。
D.(3aα，4α，7α，7aα)-六氢-2-(2-萘基)-4，7-环氧-1H-异吲哚-1，3(2H)-二酮 (27D)
将化合物27C(45mg，0.30mmol，1eq)与2-萘胺(47mg，0.33mmol， 1.1eq)在乙酸(1mL)中混合，然后于115℃加热过夜。在反应物冷却至 室温后，加入一滴水，滤出所得的沉淀。该物质用甲醇洗涤并干燥， 得到65.7mg(74.5％)的化合物27D，为白色结晶固体。HPLC：99％，2.68 min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，4分钟内含有0.2％磷酸的 10-90％甲醇水溶液，4mL/min，于220nm监测)，MS(ESI)：m/z294.0 [M+H]+。
实施例28
(1aα，2β，2aα，5aα，6β，6aα)-六氢-4-(2-萘基)-2，6-环氧-3H-环氧乙烯并[f] 异吲哚-3，5(4H)-二酮(28B)

A.(1aα，2β，2aα，5aα，6β，6aα)-四氢-2，6-环氧基环氧乙烯并[f]异苯并呋 喃-3，5(2aH，5aH)-二酮(28A)

如Yur’ev，等，J.Gen.Chem.U.S.S.R.(Engl.Transl.)31，772-775 (1961)中所述，于室温搅拌外-7-氧杂二环[2.2.1]庚烷-2，3-二羧酸酐(5g， 30.09mmol)、甲酸(10mL)和过氧化氢(6mL)的溶液。30分钟后，将反 应物置于冰浴中(它变为放热，同时逸出气体)，让其缓慢温热至室温。
搅拌过夜后，经过滤收集所得的沉淀，用冰乙酸洗涤并干燥，得到3.02 g白色粉末。粗制固体在乙酰氯(100ml)中煮沸达10小时，将混合物减 压浓缩至约20ml。滤出所得的沉淀，用二_烷洗涤并干燥，得到2.37 g的化合物28A，为白色粉末。
B.(1aα，2β，2aα，5aα，6β，6aα)-六氢-4-(2-萘基)-2，6-环氧-3H-环氧乙烯并 [f]异吲哚-3，5(4H)-二酮(28B)
将化合物28A(100mg，0.520mmol，1.2eq)与2-萘胺(0.434mmol，1 eq)在乙酸(2mL)中混合，并于115℃加热过夜。让反应物冷却至室温 后，加入水，并滤出所得的沉淀。所述物质用碳酸钾水溶液和水顺序 洗涤，然后在真空炉干燥，得到113.7mg(85.3％)的化合物28B，为灰 白色结晶固体。HPLC：99％，1.76min(保留时间)(YMC S5 ODS柱， 4.6×50mm，在4分钟内含有0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液，4mL/min， 于220nm监测)，MS(ESI)：m/z308.0[M+H]+。
实施例29
(3aα，4α，7α，7aα)-2-[4-溴-3-(三氟甲基)苯基]-3a，4，7，7a-四氢-4，7-甲基 -4，7-环硫-1H-异吲哚-1，3(2H)-二酮8-氧化物(29)

将2，5-二甲基噻吩(0.048mL，0.42mmol)和4-(2，5-二氢-2，5-二氧代 -1H-吡咯-1-基)-2-三氟甲基苄腈(0.290g，0.625mmol)溶于二氯甲烷(8.0 mL)中，并冷却至-20℃。缓慢加入BF3·Et2O(0.412mL，3.36mmol)， 然后加入mCPBA(～50％，0.290g，0.84mmol)。于-20℃2小时后，将反 应物倾至饱和碳酸氢钠水溶液中，用二氯甲烷(3×20mL)萃取，有机物 经无水硫酸钠干燥。粗产物通过SiO2快速色谱纯化，用5％-10％-20％ EtOAc的二氯甲烷溶液洗脱，得到0.119g的化合物29，为白色固体。 HPLC：91％，3.303min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，在4 分钟内含有0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液，4mL/min，于220nm监 测)。MS(ESI)：m/z480.2[M+H]+。
实施例30
(3aα，4α，7α，7aα)-2-[4-溴-3-(三氟甲基)苯基]-3a，4，7，7a-四氢-4，7-环硫- 1H-异吲哚-1，3(2H)-二酮8-氧化物(30)

将噻吩(0.375mL，4.69mmol)和4-(2，5-二氢-2，5-二氧代-1H-吡咯-1- 基)-2-三氟甲基苄腈(0.100g，0.313mmol)溶于二氯甲烷(50mL)中，加 入mCPBA(-50％，1.62g，4.69mmol)，然后于25℃搅拌3小时。然后 加入三苯膦(2.0g)。15分钟后，真空除去挥发物，将所得的残余物溶 于二氯甲烷(200mL)中，用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤(3×50mL)并经硫 酸钠干燥。然后粗制物质通过SiO2快速色谱纯化，用1％-3％-5％甲醇 的二氯甲烷溶液洗脱，得到作为白色粉末的化合物30(0.059g)。NMR 光谱学和LC分析表明为单一的非对映体。HPLC：100％，3.437min(保 留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，在4分钟内含有0.2％磷酸的 10-90％甲醇水溶液，4mL/min，于220nm监测)，MS(ESI)：m/z443.2 [M+H]+。
实施例31
(3aα，4α，7α，7aα)-六氢-2-[3-(三氟甲基)苯基]-4，7-亚氨基-1H-异吲哚- 1，3(2H)-二酮(31D)

A.7-氮杂二环[2.2.1]庚-2，5-二烯-2，3，7-三羧酸2，3-二甲基7-(1，1-二甲 基乙基)酯(31A)

将新蒸馏的乙炔二羧酸二甲酯(6.7mL，54.0mmol)和N-(叔丁氧羰 基)-1H-吡咯(9.0mL，54.0mmol)混合，并于120℃加热3小时。经SiO2 快速色谱纯化，用EtOAc/CH2Cl2洗脱，得到8.3g的化合物31A，为 黄色固体。
B.(外，内)-7-氮杂二环[2.2.1]庚-2，5-二烯-2，3，7-三羧酸7-(1，1-二甲基乙 基)酯(31B)

将化合物31A(1.0g，3.5mmol)溶于MeOH(2.0mL)中，并加入 KOH水溶液(1g，在5mL水中)。将反应物加热至50℃达1小时。然 后将反应物冷却至25℃，加入Pd/C(0.5g，10％Pd)，然后将混合物置 于Parr装置中于25℃达14小时。然后反应物通过硅藻土过滤，并用 水冲洗。通过加入1N HCl将水溶液酸化至pH＝2，然后用EtOAc (2×100mL)萃取。将有机物浓缩，得到化合物31B，为浅黄色固体。
C.(3aα，4α，7α，7aα)-六氢-1，3-二氧代-4，7-亚氨基异苯并呋喃-8-羧酸 1，1-二甲基乙酯(31C)

将粗制化合物31B在升华室中真空下加热至120℃，导致作为白 色固体的化合物31C(0.051g)的升华，直接收集化合物31C，且不经 进一步纯化用于下一步中。
D.(3aα，4α，7α，7aα)-六氢-2-[3-(三氟甲基)苯基]-4，7-亚氨基-1H-异吲哚 -1，3(2H)-二酮(31D)
将化合物31C(0.050g，0.187mmol)和1-氨基-3-(三氟甲基)苯 (0.030g，0.187mmol)溶于AcOH(2.5mL)中，并加热至115℃达4.5小 时。通过加入饱和碳酸氢钠水溶液猝灭反应，反应物用二氯甲烷(3×15 mL)萃取。粗制物质经制备型反相HPLC纯化，得到0.030g的化合物 31D，为白色固体。HPLC：99％，2.33min(保留时间)(YMC S5 ODS柱， 4.6×50mm，在4分钟内含有0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液，4mL/min， 于220nm监测)，MS(ESI)：m/z311.15[M+H]+。
实施例32
(3aα，4β，7β，7aα)-和(3aα，4α，7α，7aα)-3a，4，7，7a-四氢-4，7-二甲基-2-[3- (三氟甲基)苯基]-4，7-环氧-1H-异吲哚-1，3(2H)-二酮(分别为32i和32ii)

将新蒸馏的2，5-二甲基呋喃(0.32mL，2.6mmol)溶于二氯甲烷(2.0 mL)中，加入1-[3-(三氟甲基)苯基]-1H-吡咯-2，5-二酮(0.5g，2.5mmol)。 将反应物于25℃搅拌16小时，然后减压浓缩。经硅胶快速色谱纯化， 用0.5％MeOH/CH2Cl2洗脱，得到50mg的化合物32i和250mg的化 合物32ii，为白色固体。化合物32i：HPLC：92％，3.047min(保留时 间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，在4分钟内含有0.2％磷酸的10-90％ 甲醇水溶液，4mL/min，于220nm监测)，MS(ES)：m/z：338.15 [M+H]+；化合物32ii：HPLC：98％，3.08min(保留时间)(YMC S5 ODS 柱，4.6×50mm，在4分钟内含有0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液，4 mL/min，于220nm监测)，MS(ES)：m/z338.30[M+H]+。
实施例33
(3aα，4α，7α，7aα)-六氢-4，7-二甲基-2-[3-(三氟甲基)苯基]-4，7-环氧-1H- 异吲哚-1，3(2H)-二酮(33)

将化合物32ii(0.080g，0.237mmol)溶于EtOAc(2mL)中，加入 EtOH(1ml)和Pd/C(10％Pd，0.050g)。然后通过气囊引入氢气，并将 反应物搅拌24小时。混合物通过硅藻土过滤，用EtOAc冲洗并真空 浓缩，得到化合物33(0.075g)，为白色固体。无需进一步纯化。HPLC： 90％，3.233min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，在4分钟内含 有0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液，4mL/min，于220nm监测)，MS(ES)： m/z340.40[M+H]+。
实施例34
(3aα，4α，7α，7aα)-四氢-5-甲基-2-(4-硝基-1-萘基)-4，7-桥亚乙烯基-1H- 吡咯并[3，4-c]吡啶-1，3，6(2H，5H)-三酮(34B)

A.4，5，7，7a-四氢-5-甲基-4，7-桥亚乙烯基呋喃并[3，4-c]吡啶-1，3，6(3aH)- 三酮(34A)

采用Tomisawa等，Heterocycles6，1765-1766(1977)和Tetrahedron Lett.29，2465-2468(1969)中所述方法的改进方法，合成化合物34A。
将马来酐和1-甲基-2-吡啶酮悬浮于30ml无水甲苯中。反应容器配有 一个迪安-斯达克榻分水器，将反应物回流48小时。让深色溶液冷却 至室温，然后真空除去挥发物。将所得的褐色糊状物溶于10ml沸腾 的甲苯中，在氮气流下过滤热溶液，以除去颗粒。于25℃静置时，所 需产物从溶液中沉淀出来。经过滤分离固体，用冷却甲苯洗涤，得到 化合物34A，该化合物无需进一步纯化而使用。
B.(3aα，4α，7α，7aα)-四氢-5-甲基-2-(4-硝基-1-萘基)-4，7-桥亚乙烯基- 1H-吡咯并[3，4-c]吡啶-1，3，6(2H，5H)-三酮(34B)
将1-氨基-4-硝基萘(0.094g，0.5mmol)和化合物34A(0.130g，0.63 mmol)溶于AcOH(2.0mL)中，并加热至110℃达11小时。然后将反应 物冷却至25℃，并倾至冷饱和碳酸钾水溶液中，剧烈搅拌10分钟。
将溶液过滤并用水冲洗。所得的滤液真空干燥并经硅胶色谱纯化，使 用4∶6EtOAc/己烷溶剂体系，得到0.172g的化合物34B，为白色固体。 HPLC：92％，2.472 min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含 有0.1％TFA的10-90％甲醇水溶液在4分钟内洗脱，4mL/min，于220 nm监测)，MS(ES)：m/z378.29[M+H]+。
实施例35
(3aα，4β，7β，7aα)-4-[4-[2-(4-氟苯氧基)乙基]八氢-7-甲基-1，3-二氧代- 4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基]-2-(三氟甲基)苄腈(35)

于室温、惰性环境下，将DEAD(0.06mL，0.380mmol，1.5eq)加 入至三苯膦(100mg，0.380mmol，1.5eq)的THF(1.3mL)溶液中。搅拌 10分钟后，一次性加入4-氟苯酚(43mg，0.380mmol，1.5eq)。将反应 混合物搅拌5分钟，加入化合物25B(100mg，0.254mmol，1eq)，然后 继续搅拌3.5小时。经硅胶快速色谱纯化，用50％EtOAc/己烷洗脱， 然后经制备型色谱纯化[HPLC：11.93min(保留时间)(YMC S5 ODS柱， 20×100mm，10分钟内含有0.1％TFA的0-100％甲醇水溶液，20mL/min， 于220nm监测)]，得到72mg(58％)的化合物35，为固体。HPLC：99％， 3.74min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，在4分钟内含有 0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液，4mL/min，于220nm监测)，MS(ESI)： m/z487.1[M-H]-。
实施例36
(3aα，4β，7β，7aα)-4-[4-(2-溴乙基]八氢-7-甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧-2H- 异吲哚-2-基]-2-(三氟甲基)苄腈(36)

于0℃，将化合物25B(495mg，1.26mmol，1eq)和吡啶(0.1ml，1.26 mmol，1eq)的二氯甲烷(2ml)溶液加入至Ph3PBr2(636mg，1.51mmol，1.2 eq)的二氯甲烷(2ml)溶液中。将反应混合物于室温搅拌3小时，然后减 压除去溶剂。所得的残余物用10ml的EtOAc-己烷(6∶4)洗涤2次，合 并洗涤液经硅胶快速色谱纯化，用60％EtOAc/己烷洗脱，得到390mg (0.85mmol，67.7％)的化合物36，为白色固体。HPLC：99％，3.51min(保 留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，在4分钟内含有0.2％磷酸的 10-90％甲醇水溶液，4mL/min，于220nm监测)。MS(ESI)：m/z456.7 [M-H]-。
实施例37
(3aα，4β，7β，7aα)六氢-4，7-二甲基-2-(3-甲基-4-硝基苯基)-4，7-环氧-1H- 异吲哚-1，3(2H)，二酮(37)

将4，硝基-3-甲基苯胺(0.050g，0.33mmol)、化合物20A(0.083g， 0.43mmol)、TEA(0.2mL)、MgSO4(0.075g)和甲苯(0.8mL)的组合物 在密封管中混合，将混合物加热至120℃达14小时。冷却至25℃后， 将反应物过滤，用二氯甲烷冲洗并浓缩。粗产物经制备型SiO2TLC纯 化，用二氯甲烷洗脱，得到0.075g的化合物37，为浅黄色固体。HPLC： 100％，2.733min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm；10-90％ MeOH/H2O梯度，+0.1％TFA；4mL/min，于220nM检测)，MS(ES)：m/z 3482[M+NH4]+。
实施例38-121
采用与上述方法类似的方法，制备本发明的其它化合物。实施例 38-121的化合物具有以下结构(L为一个键)：

其中G、化合物名称、保留时间、分子量和所用的方法在表2中叙述。 用来测定表2化合物保留时间的色谱技术如下：LCMS＝YMC S5 ODS 柱，46×50mm，用含有0.1％TFA的10-90％MeOH/H2O在4分钟内 洗脱；4mL/min，于220nm监测。表2中所列化合物的分子量(如果提 供)通过MS(ES)以公式m/z测定。
表2










实施例122-164
本发明的其它化合物通过与上述方法类似的方法制备。表3提供 了化合物名称和结构、保留时间以及表3中关于实施例122-164化合 物制备所基于方法的实施例编号。用来测定表3化合物保留时间的色 谱技术如下：
LCMS＝YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含有0.1％TFA的10-90％ MeOH/H2O在4分钟内洗脱；4mL/min，于220nm监测。 LC＝YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含有0.2％磷酸的10-90％ MeOH/H2O在4分钟内洗脱，4mL/min，于220nm监测。
表3







实施例165-203
制备本发明的其它化合物，并在以下表4中进一步描述。表4叙 述了化合物名称和结构以及表4中关于实施例165-203化合物制备所 基于方法的实施例编号。
表4






实施例204
(3aα，4β，7β，7aα)-4-[八氢-4-(2-羟乙基)-7-甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧-2H- 异吲哚-2-基]-2-(三氟甲基)苄腈(204D/25B)

A.2-[2-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]氧基]乙基]-5-甲基呋喃 (204A)

向化合物21A(2.00g，15.9mmol)的DMF(50mL)溶液中加入咪唑 (1.62g，23.9mmol)，然后加入叔丁基二甲基甲硅烷基氯(2.63g，17.5 mmol)。于25℃2小时后，将反应物倾至乙醚(300mL)中，用水(1×100 mL)、1N HCl(1×100mL)、水(1×100mL)、盐水(1×50mL)洗涤并经无 水硫酸镁干燥。粗制化合物204A经LCMS和NMR分析，测定其纯 度足以直接进行下一个步骤。HPLC：100％，4.347min(保留时间)(YMC S5ODS柱，4.6×50mm，用含有0.1％TFA的10-90％甲醇水溶液在4分 钟内洗脱，4mL/min，于220nm监测)。
B.(3aα，4β，7β，7aα)-4-[2-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]-氧基]乙 基]六氢-7-甲基-4，7-环氧-1H-异苯并呋喃-1，3(2H)-二酮(204B)

将化合物204A(4.0g，18.9mmol)和马来酐(1.42g，14.51mmol)溶 于二氯乙烷(10mL)中，并于25℃搅拌60小时。然后真空除去挥发物， 将所得的橙色油状物溶于无水乙醇(50mL)中，并加入Pd/C(10％Pd， 1.00g)。然后通过气囊引入氢气。3小时后，反应物通过硅藻土过滤， 用EtOAc冲洗并真空浓缩。粗制酸酐经SiO2快速色谱纯化，用丙酮/ 氯仿(0-2-4％丙酮)洗脱，除得到3.00g起始化合物204A之外，还得 到1.30g的化合物204B，为透明油状物。经质子NMR光谱学表征， 表明仅有外型异构体。1HNMR，400MHz，CDCl3，3.83(2H，t，J＝6.0 Hz)，3.22(1H，d，J＝8.2Hz)，3.06(1H，d，J＝8.2Hz)，1.70-2.25(6H，m)， 1.55(3H，s)，0.82(9H，s)，0.00(6H，s)。
C.(3aα，4β，7β，7aα)-4-[4-[2-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]-氧基] 乙基]八氢-7-甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基]-2-(三氟甲基) 苄腈(204C)

将化合物204B(0.250g，0.8mmol)和4-氨基-2-三氟甲基-苄腈 (0.124g，0.668mmol)在密封管内悬浮于无水甲苯(2.0mL)中。然后加入 MgSO4(0.200和三乙胺(0.5mL)，将管密封并置于125℃油浴中。40 小时后，将反应物冷却至25℃，过滤并真空浓缩。粗制物质通过SiO2 快速色谱纯化，用CH2Cl2洗脱，得到0.111g的化合物204C，为黄色 固体。HPLC：92％，4.203min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm， 用含有0.1％TFA的10-90％甲醇水溶液在4分钟内洗脱，4mL/min，于 220nm监测)。MS(ESI)：m/z531.1[M+Na]+。
D.(3aα，4β，7β，7aα)-4-[八氢-4-(2-羟乙基)-7-甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧- 2H-异吲哚-2-基]-2-(三氟甲基)苄腈(204D)
将化合物204C(0.031g，0.061mmol)溶于THF(0.5mL)中，并转移 至聚丙烯容器中，然后冷却至0℃。然后加入HF·吡啶(～47％HF，0.1 mL)。15分钟后，经LC测定反应完成，将反应物倾至冷的饱和碳酸氢 钠水溶液中。混合物用CH2Cl2(3×10mL)萃取。合并的有机层用1NHCl (1×20mL)洗涤并经无水硫酸钠干燥。化合物204D以黄色油状物分离 出来，并且与在实施例25中制备的物质相当。无需纯化。
实施例205
(3aα，4β，7β，7aα)-和(3aα，4α，7α，7aα)-4-[八氢-4-甲基-1，3-二氧代-7-(苯 基甲基)-4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基]-2-(三氟甲基)苄腈
(分别为205Ci和205Cii)

A.2-甲基-5-(苯基甲基)-呋喃(205A)

将n-BuLi(1.8ml，4.51mmol，1.1eq，2.5M己烷溶液)于-25℃加入 至2-甲基-呋喃(0.37ml，4.10mmol，1eq)的无水THF(3mL)溶液中。将 所得溶液于室温搅拌3小时，然后冷却至-15℃。加入已通过了氢氧化 铝柱的苄基溴(0.59ml，4.92mmol，1.2eq)，将溶液温热至室温，并搅拌 过夜。加入饱和氯化铵溶液(5mL)，并搅拌混合物1小时。然后反应 混合物用乙醚(2X)萃取，将合并的有机萃取液干燥并减压浓缩。经硅 胶快速色谱纯化，用己烷洗脱，得到323mg(46％，1.88mmol)的化合 物205A，为无色油状物。HPLC：95％，3.72min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，在4分钟内含有0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液，4 mL/min，于220nm监测)和约400mg产物与苄基溴的混合物(～2∶1，通 过HPLC分析)。
B.(3aα，4β，7β，7aα)-和(3aα，4α，7α，7aα)-4-[八氢-4-甲基-1，3-二氧代-7- (苯基甲基)-4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基]-2-(三氟甲基)苄腈(分别为205Bi 和205Bii)

于室温下搅拌化合物205A(124mg，0.72mmol，1eq)和4-(2，5-二氢 -2，5-二氧代-1H-吡咯-1-基)-2-三氟甲基苄腈(290mg，1.09mmol，1.5eq) 的二氯甲烷(2mL)溶液。4天后，将反应混合物减压浓缩。经硅胶快速 色谱纯化，用CH2Cl2洗脱，得到62mg(0.14mmol，20％)化合物205Bi 与205Bii的混合物，为白色固体，该混合物直接用于下一步。HPLC： 93％，3.69min(保留时间)(YMC S5 QDS柱，4.6×50mm，在4分钟内含 有0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液，4mL/min，于220nm监测)。
C.(3aα，4β，7β，7aα)-和(3aα，4α，7α，7aα)-4-[八氢-4-甲基-1，3-二氧代-7- (苯基甲基)-4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基]-2-(三氟甲基)苄腈(分别为205Ci 和205Cii)
将化合物205Bi与205Bii(62mg，0.14mmol，1eq)的混合物和10％ Pd/C(12mg，催化量)在EtOH(3.5mL)中的溶液于室温在氢气环境下 搅拌2小时。反应混合物通过硅藻土过滤并减压浓缩。经硅胶快速色 谱纯化，用35％EtOAc/己烷洗脱，得到22mg(0.05mmol，35％)的化合 物205Ci和12mg(0.027mmols，19％)的化合物205Cii。化合物205Ci： HPLC：98％，3.75 min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，在4分 钟内含有0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液，4mL/min，于220nm监测)， MS(ESI)：m/z458.2[M+NH4]+。化合物205Cii：HPLC：97％，3.78min (YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，4分钟内含有0.2磷酸的10-90％甲醇水 溶液，4mL/min，于220nm监测)，MS(ESI)：m/z473.45[M+CH3OH]+。
实施例206
(3aα，4β，7β，7aα)-2-[4-氰基-3-(三氟甲基)苯基]八氢-7-甲基-1，3-二氧代- 4，7-环氧-4H-异吲哚-4-丙腈(206)

将化合物36(34mg，0.074mmol)和NaCN(24mg，0.49mmol)的 DMSO(1mL)溶液于100℃加热0.5小时。冷却后，将反应混合物倾至 水中，水层用EtOAc(2X)萃取。合并的有机层用水(2X)洗涤，经硫酸 钠干燥并减压浓缩。经SiO2快速色谱纯化，用50％EtOAc/己烷洗脱， 然后经制备型HPLC纯化，30.41min(保留时间)(YMC S5 ODS 30× 250mm，在30分钟内含有0.1％TFA的10-90％甲醇水溶液，25mL/min， 于220nm监测)，得到6.6mg(22％)的化合物206，为白色固体。HPLC： 99％，2.89min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含有0.2％磷 酸的10-90％甲醇水溶液在4分钟内洗脱，4mL/min，于220nm监测)， MS(ES)：m/z402.1[M-H]-。
实施例207
(3aα，4β，7β，7aα)-4-[八氢-4-甲基-7-[2-(4-吗啉基)乙基]-1，3-二氧代-4，7- 环氢-2H-异吲哚-2-基]-2-(三氟甲基)苄腈三氟乙酸盐(1∶1)(207)

将化合物36(15.6mg，0.034mmol)和吗啉(6μL，0.068mmol)的甲 苯(1mL)溶液于100℃加热过夜。冷却后，减压浓缩反应混合物。经 SiO2快速色谱纯化，用10％MeOH/二氯甲烷洗脱，然后经制备型HPLC 纯化，23.96min(保留时间)(YMC S5 ODS 30×250mm，在30分钟内 含有0.1％TFA的10-90％甲醇水溶液，25mL/min，于220nm监测)，得 到8.7mg(55％)的化合物207(TFA盐)，为白色固体。HPLC：99％，2.02 min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含有0.2％磷酸的10- 90％甲醇水溶液在4分钟内洗脱，4mL/min，于220nm监测)，MS(ES)： m/z464.3[M+H]+。
实施例208
(3aα，4β，7β，7aα)-2-(5-氟-1-萘基)六氢-4，7-二甲基-4，7-环氧-1H-异吲哚- 1，3(2H)-二酮(208C)

A.1-氟-5-硝基萘(208A)

如J.Chem.Soc.1187(1949)中所述，向6N HCl(12mL)溶液中加 入1.47g(7.83mmol)细粉状5-硝基-1-萘胺。将混合物冷却至0℃，缓 慢加入冷的NaNO2(547mg，7.93mmol)的2mL水溶液，使得温度保持 在0℃左右。加入完成后，将反应混合物搅拌30分钟并过滤。将滤液 冷却至0℃，并用冷4.5MNaBF4溶液(5ml)处理，使氟硼酸重氮盐完 全沉淀。将混合物保持0℃达30分钟，然后将其过滤，沉淀用冷4.5M NaBF4溶液(5mL)、冰冷的乙醇(10mL)和Et2O(20mL)洗涤。将所得的 固体风干，得到1.74g(77％)相应的重氮盐。
向1.70g(5.92mmol)上述氟硼酸重氮盐中加入5g沙子，将所述 组分充分混合。将反应混合物小心地在减压下加热，直至发生分解。
反应结束时，将烧瓶进一步加热30分钟至130℃，以确保完全转化。 冷却后，将反应混合物溶于丙酮中，使内容物预先吸附至硅胶上。经 快速色谱达到纯化(硅胶，EtOAc的己烷溶液，0-10％)，得到449mg (50％)的化合物208A，为白色固体。
B.1-氨基-5-氟萘(208B)

将化合物208A(62mg，0.32mmol)的含0.1mL 12N HCl的1mL EtOH溶液加热至回流。以多个小份加入铁粉(62mg，1.11mmol)，并继 续加热2小时。将混合物冷却，用1N NaOH溶液中和，水层用二氯甲 烷萃取。合并的有机相经硫酸镁干燥并浓缩，留下残余物，残余物经 快速色谱纯化(硅胶，EtOAc的己烷溶液，40-80％)，得到42mg(80％) 的化合物208B，为黄色固体。
C.(3aα，4β，7β，7aα)-2-(5-氟-1-萘基)六氢-4，7-二甲基-4，7-环氧-1H-异吲 哚-1，3(2H)-二酮(208C)
将化合物208B(42mg，0.26mmol)、化合物20A(54mg，0.27 mmol)、MgSO4(69mg，0.58mmol)和三乙胺(191μL，1.37mmol)溶于2 ml甲苯中，并置于密封管中。将密封管加热至135℃达14小时。冷却 的反应混合物通过硅藻土短柱过滤，用二氯甲烷洗脱，减压除去溶剂。 残余物经制备型反相HPLC纯化(YMC S5 ODS 20×100mm，用含有 0.1％TFA的30-100％甲醇水溶液在10分钟内洗脱，20mL/min)，得到 15mg(17％)的化合物208C，为浅黄色固体。HPLC：16％，2.96min和 77％，3.06min(保留时间，阻转异构体)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm， 用含有0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液在4分钟内洗脱，4mL/min，于 220nm监测)，MS(ES)：m/z340.2 [M+H]+。
实施例209
(3aα，4β，7β，7aα)-2-(5-氟-4-硝基-1-萘基)六氢-4，7-二甲基-4，7-环氧-1H- 异吲哚-1，3(2H)-二酮(209C)

A.N-(5-氟-1-萘基)乙酰胺(209A)

将141mg(0.74mmol)的化合物208A的2mL AcOH溶液加热至 回流，并用小份的铁粉(118mg，2.11mmol)处理。将混合物回流下保持 15分钟，然后加入73μL(0.78mmol)Ac2O。回流下再过15分钟后， 将混合物冷却并过滤，用二氯甲烷洗脱。然后将滤液浓缩，残余物经 快速色谱纯化(硅胶，EtOAc的己烷溶液，20-50％)，得到化合物209A (145mg，97％)，为白色固体。
B.1-氨基-5-氟-4-硝基萘(209B)

将化合物209A(133mg，0.66mmol)溶于1mL AcOH中，将所得 溶液冷却至10℃。在该温度下，加入80μl(2.00mmol)红色发烟硝酸， 继续搅拌15分钟，然后加入碎冰猝灭反应。水层用二氯甲烷萃取，合 并的有机相经硫酸镁干燥并浓缩。将所得的残余物溶于3mL EtOH 中，加热至回流，并用0.5mL 40％ NaOH水溶液处理。继续搅拌15 分钟，然后将反应物冷却并用水稀释。水层用二氯甲烷萃取，合并的 有机相经硫酸镁干燥并浓缩。所得的残余物经快速色谱纯化(硅胶， EtOAc的己烷溶液，，40-70％)，得到36mg(27％)的化合物209B，为黄 色固体。
C.(3aα，4β，7β，7aα)-2-(5-氟-4-硝基-1-萘基)六氢-4，7-二甲基-4，7-环氧- 1H-异吲哚-1，3(2H)-二酮(209C)
按照以上实施例208C中所述的方法，让化合物209B(36mg，0.18 mmol)在密封管中与化合物20A(38mg，0.19mmol)、MgSO4(46mg， 0.39mmol)和Et3N(128μL，0.92 mmol)在250μL甲苯溶液中反应，在 通过制备型反相HPLC纯化(YMC S5 ODS 20×100mm，用含有0.1％ TFA的30-100％甲醇水溶液在10分钟内洗脱，20mL/min)后，得到27 mg(40％)的化合物209C，为黄色固体。HPLC：8％，2.88min和84％，3.06 min(阻转异构体，保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含有0.2 磷酸的10-90％甲醇水溶液在4分钟内洗脱，4mL/min，于220nm监测)， MS(ES)：m/z402.0[M+H]+。
实施例210
(3aα，4β，7β，7aα)-2-(1，1-二氧化苯并[b]噻吩-3-基)六氢-4，7-二甲基-4，7- 环氧-1H-异吲哚-1，3(2H)-二酮(210)

于室温下，将mCPBA(160mg，0.641mmol，70％纯度)加入至化合 物134(70mg，0.214mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液中。在原料耗尽后， 反应物用饱和碳酸氢钠猝灭，并用二氯甲烷萃取。有机层用1NNaOH 洗涤，经硫酸钠干燥并减压浓缩，得到63.9mg(83％)的化合物210， 为白色固体。HPLC：99％，3.81min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50 mm，用含有0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液在4分钟内洗脱，4mL/min， 于220nm监测)，MS(ES)：m/z360.0[M+H]+。
实施例211
4-(1，3，3a，4，7，7a-六氢-4，6，7-三甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧-2H-吡咯并 [3，4-c]吡啶-2-基)-2-(三氟甲基)苄腈(211)

将2，4，5-三甲基_唑(0.48mL，4.14mmol)溶于甲苯(2.0mL)中，加 入4-(2，5-二氢-2，5-二氧代-1H-吡咯-1-基)-2-三氟甲基苄腈(1.0g 3.76 mmol)。将反应混合物在氮气下于75℃搅拌2.5小时。将溶液冷却至室 温，滤出所得的沉淀，用甲苯冲洗，得到0.51g(35％收率)的化合物 211，为浅灰色固体。NMR分析表明，化合物211为一种异构体(外型 /内型)，然而该异构体的身份不能通过NMR分析来确定。HPLC：100％， 2.85min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含有0.1％TFA的 10-90％甲醇水溶液在4分钟内洗脱，4mL/min，于220nm监测)，MS (ES)：m/z378.42[M+H]+。
实施例212
(3aα，4β，7β，7aα)-四氢-4，7-二甲基-2-[3-(三氟甲基)苯基]-4，7-环氧-1H- 异吲哚-1，3，5(2H，4H)-三酮和(3aα，4α，7α，7aα)-四氢-4，7-二甲基-2-[3- (三氟甲基)苯基]-4，7-环氧-1H-异吲哚-1，3，5(2H，4H)-三酮 (分别为212i和212ii)

将2，2-二甲基-3(H)-呋喃酮(0.500g，4.46mmol)和1-[3-(三氟甲基) 苯基]-1H-吡咯-2，5-二酮(1.07g，4.46mmol)在密封管内悬浮于甲苯(20 mL)中。将混合物于110℃加热4小时，然后冷却至25℃，随后真空浓 缩。所得的残余物通过SiO2快速色谱纯化，用二氯甲烷洗脱，得到0.411 g作为白色固体的化合物212i和0.193g作为白色固体的化合物212ii。
所述结构指定通过1-D NOE质子NMR实验得到证实。化合物212i： HPLC：100％，2.817min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含 有0.1％TFA的10-90％甲醇水溶液在4分钟内洗脱，4mL/min，于220 nm监测)，MS(ES)：m/z376.0[M+Na]+。化合物212ii：HPLC：100％， 3.013min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含有0.2％磷酸 的10-90％甲醇水溶液在4分钟内洗脱，4mL/min，于220nm监测)，MS (ES)：m/z354.02[M+H]+。
实施例213
(3aα，4β，7β，7aα)-2-(5-氯-1-萘基)六氢-4，7-二甲基-4，7-环氧-1H-异吲哚- 1，3(2H)-二酮(213B)

A.1-氨基-5-氯萘(213A)

向1.74g(6.06mmol)氟硼酸重氮盐(如实施例208A中描述的)的丙 酮(7mL)溶液中以多个小份加入693mg(7.00mmol)CuCl。在停止氮气 放出后，减压除去丙酮，将残余物溶于二氯甲烷(30ml)中。有机相用 水(30mL)洗涤，经硫酸镁干燥、浓缩，最后经快速色谱纯化(硅胶， EtOAc的己烷溶液，，0-15％)，得到754mg(70％)1-氯-5-硝基萘。
将以上合成的1-氯-5-硝基萘(540mg，2.6mmol)溶于10mL AcOH 中，然后用415mg(7.43mmol)铁粉处理，随后按照实施例209A中所 述方法用Ac2O(0.26mL，2.73mmol)处理，得到543mg(95％)1-乙酰氨 基-5-氯萘。
将以上合成的1-乙酰氨基-5-氯萘(52mg，0.24mmol)的3mL EtOH 溶液加热至回流，并用0.5mL 40％NaOH水溶液处理。将混合物回流 直至不再能检测到原料，将其冷却并减压浓缩。将残余物溶于二氯甲 烷(50mL)中，并用水(25ml)洗涤。有机层经硫酸镁干燥并浓缩，留下 41mg(98％)的化合物213A，为白色固体。
B.(3aα，4β，7β，7aα)-2-(5-氯-1-萘基)六氢-4，7-二甲基-4，7-环氧-1H-异吲 哚-1，3(2H)-二酮(213B)
按照实施例208C中描述的方法，在密封管内，让化合物213A(24 mg，0.14mmol)与化合物20A(29mg，0.15mmol)、MgSO4(36mg，0.30 mmol)和Et3N(100μL，0.71mmol)在250μL甲苯中反应，在经制备型 反相HPLC纯化(YMC S5 ODS 20×100mm，用含有0.1％TFA的30- 100％甲醇水溶液在10分钟内洗脱，20mL/min)后，得到27mg(40％) 的化合物213B，为白色固体。HPLC：98％，1.82min(保留时间)(YMC S5 TurboPack Pro柱，4.6×33mm，用含有0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液 在2分钟内洗脱，4mL/min，于220nm监测)，MS(ES)：m/z356.4 [M+H]+。
实施例214
(3aα，4β，7β，7aα)-2-(5-氯-4-硝基-1-萘基)六氢-4，7-二甲基-4，7-环氧-1H- 异吲哚-1，3(2H)-二酮(214B)

A.1-氨基-5-氯-4-硝基萘(214A)

按照实施例209A中所述的方法，将1-乙酰氨基-5-氯萘(150mg， 0.68mmol，如实施例213A中所述方法制备)溶于1mL AcOH中，并用 82μl红色发烟硝酸处理，随后用1mL40％NaOH水溶液在3mL EtOH 中去酰化，得到49mg(32％)的化合物214A，为黄色固体。
B.(3aα，4β，7β，7aα)-2-(5-氯-4-硝基-1-萘基)六氢-4，7-二甲基-4，7-环氧- 1H-异吲哚-1，3(2H)-二酮(214B)
按照实施例208C中所述的方法，在密封管内让化合物214A(27 mg，0.12mmol)与化合物20A(26mg，0.13mmol)、MgSO4(32mg，0.27 mmol)和Et3N(88μl，0.63mmol)在250μl甲苯中反应，在经制备型反 相HPLC纯化(YMC S5 ODS 20×100mm，用含有0.1％TFA的30-100％ 甲醇水溶液在10分钟内洗脱，20mL/min)后，得到22mg(45％)的化合 物214B，为黄色固体。HPLC：24％，3.06min和76％，3.25min(阻转异 构体，保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含有0.2％磷酸的 10-90％甲醇水溶液在4分钟内洗脱，4mL/min，于220nm监测)，MS (ES)：m/z418.0[M+NH4]+。
实施例215
(3aα，4β，7β，7aα)-4-乙基六氢-7-甲基-2-(4-硝基-1-萘基)-4，7-环氧-1H-异 吲哚-1，3(2H)-二酮(215B)

A.(3aα，4β，7β，7aα)-4-乙基六氢-7-甲基-4，7-环氧异苯并呋喃-1，3-二酮 (215A)

将2-乙基-5-甲基呋喃(1.89mL，15.3mmol)溶于二氯甲烷(10mL) 中，加入马来酐(1.00g，10.2mmol)。将反应物于25℃搅拌l8小时， 然后真空浓缩。将所得的粗制二环溶于EtOAc(50mL)中，加入10％ Pd/C(0.40g)。通过气囊引入氢气。4小时后，通过硅藻土过滤反应物， 用EtAOc冲洗。真空浓缩，得到粗制化合物215A(1.93g)，为白色固 体。该物质不经纯化直接用于下一步反应。
B.(3aα，4β，7β，7aα)-4-乙基六氢-7-甲基-2-(4-硝基-1-萘基)-4，7-环氧-1H- 异吲哚-1，3(2H)-二酮(215B)
将化合物215A(0.168g，0.798mmol)和4-硝基-1-萘胺(0.10g，0.53 mmol)悬浮于甲苯(0.8mL)中，加入TEA(0.2mL)和硫酸镁(0.1g)。将混 合物在密封管中于135℃加热18小时。然后将反应物冷却至室温并过 滤，用氯仿冲洗。浓缩，得到粗产物，将其经制备型SiO2 TLC纯化， 用二氯甲烷洗脱。这得到化合物215B(0.077g)，为黄色固体。HPLC： 100％，3.260min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含有0.2％ 磷酸的10-90％甲醇水溶液在4分钟内洗脱，4mL/min，于220nm监测)， MS(ES)：m/z381.05[M+H]+。
实施例216
(3aα，4β，7β，7aα)-2-(4-氰基-1-萘基)-N-(4-氟苯基)八氢-7-甲基-1，3-二氧 代-4，7-环氧-4H-异吲哚-4-乙酰胺(216B)

A.N-(4-氟苯基)-5-甲基-2-呋喃乙酰胺(216A)

5-甲基-2-呋喃乙酸(1.00g，7.14mmol，按照WO 9507893，实施例 19中所述方法合成)溶于CH3CN/DMF(4∶1，25mL)中，然后加入1-[3- (二甲氨基)丙基]-3-乙基碳二亚胺(1.37g，7.14mmol)和1-羟基-7-氮杂苯 并三唑(0.972g，7.14mmol)，接着加入4-氟苯胺(0.676mL，7.14mmol)。 3小时后，反应物用EtOAc(150mL)稀释，用1NHCl(1×30mL)、饱 和碳酸氢钠水溶液(1×30mL)、盐水(1×40mL)洗涤并经硫酸钠干燥。真 空浓缩后，化合物216A(1.581g)作为黄色泡沫状物分离出来。无需进 一步纯化。HPLC：78％，2.647min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50 mm，用含有0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液在4分钟内洗脱，4mL/min， 于220nm监测)。
B.(3aα，4β，7β，7aα)-2-(4-氰基-1-萘基)-N-(4-氟苯基)八氢-7-甲基-1，3-二 氧代-4，7-环氧-4H-异吲哚-4-乙酰胺(216B)
将化合物216A(0.200g，0.858mmol)和4-(2，5-二氢-2，5-二氧代- 1H-吡咯-1-基)-2-三氟甲基苄腈(0.164g，0.66mmol)溶于苯中，于60℃ 加热14小时。然后将反应物冷却并真空浓缩。将所得的橙色油状物溶 于EtOAc(15mL)中，并加入10％Pd/C(0.050g)。通过气囊引入氢气。
3小时后，反应物通过硅藻土过滤，用EtOAc冲洗并真空浓缩。所得 的粗制物质经制备型二氧化硅TLC纯化，用5％丙酮的二氯甲烷溶液 洗脱，得到0.166g的化合物216B，为白色固体。NMR光谱学表明仅 有一种异构体，该异构体通过NOE实验测定为外型。HPLC：95％，3.200 min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含有0.2％磷酸的10- 90％甲醇水溶液在4分钟内洗脱，4mL/min，于220nm监测)，MS(ES)： m/z484.0[M+H]+。
实施例217
(3aα，4β，7β，7aα)-六氢-4-甲基-2-(2-萘基)-4，7-环氧-1H-异吲哚-1，3(2H)- 二酮(快洗脱对映体)和(3aα，4β，7β，7aα)-六氢-4-甲基-2-(2-萘基)-4，7-环 氧-1H-异吲哚-1，3(2H)-二酮(慢洗脱对映体)(分别为217i和217ii)

通过手性反相液相色谱，将外消旋化合物137分离为单个对映 体。用Chiralpak AD-R柱(4.6×250mm)，用70％乙腈/30％水以1mL/min 洗脱。使用220nm的UV检测。通过分析性手性反相色谱分析，发现 快洗脱异构体-化合物217i(保留时间＝15.66min)为99.9％ee，而慢 洗脱异构体-化合物217ii(保留时间＝15.66min)为99.6％ee。
实施例218
(3aα，4β，7β，7aα)-4-[4-[2-[[(4-氟苯基)甲基]甲基氨基]乙基]八氢-7-甲基- 1，3-二氧代-4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基]-2-(三氟甲基)苄腈(218B)

A.(4-氟苄基)甲胺和双(4-氟苄基)甲胺(218A和218A’)

按照Singer等，J.Med.Chem.29；40-44(1986)中所述的方法，制 备化合物218A和218A’。将4-氟苄基溴(189mg，1.00mmol)在乙醇(1.5 mL)和甲胺(5mL，2MMeOH溶液)中回流3小时。加入另外一份甲胺 (2mL)，将混合物再回流1小时。将溶液冷却并真空浓缩，残余物溶 于2N HCl(3mL)和乙醚(1.5mL)的混合物中。分离各层，水层用另外 一份乙醚萃取。将水溶液冷却至0℃，用NaOH滴定至pH11，并用二 氯甲烷萃取。萃取液经硫酸镁干燥并浓缩，分别得到120mg化合物 218A与化合物218A’的2.5∶1混合物。粗制混合物不经进一步纯化而 进行到下一步。
B.(3aα，4β，7β，7aα)-4-[4-[2-[[(4-氟苯基)甲基]甲基氨基]乙基]八氢-7-甲 基-1，3-二氧代-4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基]-2-(三氟甲基)苄腈(218B)
将化合物36(34.3mg，0.075mmol)和化合物218A与218A’(21mg， ～0.088mmol(218A))的甲苯(0.4mL)溶液于100℃加热过夜。将反应混 合物冷却至室温，然后减压浓缩。经硅胶快速色谱纯化，用25％丙酮 /75％二氯甲烷洗脱，得到30mg(0.058mmol，77.7％)的218B，为黄色 固体。HPLC：99％，2.46min(保留时间)(YMC S5 ODS 4.6×50mm，4分 钟内含有0.2磷酸的10-90％甲醇水溶液，于220nm监测)，MS(ES)：m/z 516.26[M+H]+。
实施例219
(3aα，4β，5β，6β，7β，7aα)-4-(八氢-4，5，6，7-四甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧- 2H-异吲哚-2-基)-2-(三氟甲基)苄腈(219D)

A.2，3，4，5-四甲基呋喃(219A)

按照Hancock等，J.Org.Chem.42，1850-1856(1977)和Amamath， 等，J.Org.Chem.，60，301-307(1995)中所述的方法，制备化合物 219A。将2-丙酮(100mL，1.1mol)在PbO2(26.7g，0.11mol)上回流28 小时。冷却至室温后，将反应混合物过滤，残余物用丙酮洗涤。将滤 液减压浓缩以除去丙酮，然后于20Torr蒸馏。收集在100-120℃之间 馏出的部分，得到6.75g(42.5％)3，4-二甲基己-2，5-二酮，为浅黄色油 状物。
将3，4-二甲基己-2，5-二酮(3.00g，21.1mmol)和对甲苯磺酸(401mg， 2.11mmol)的苯(30mL)溶液在迪安-斯达克榻分水器中加热至回流过 夜。常压下蒸馏反应混合物，以除去过量的苯。将残余的混合物转移 至较小的烧瓶中，于常压下蒸馏。收集在80-100℃之间馏出的部分， 得到509mg(19％)的化合物219A，为浅黄色油状物。
B.(3aα，4β，7β，7aα)-4-乙基-3a，4，7，7a-四氢-4，5，6，7-四甲基-4，7-环氧异苯 并呋喃-1，3-二酮(219B)

将化合物219A(400mg，3.22mmol)和马来酐(442mg，4.51mmol) 的Et2O(1.5mL)溶液于室温搅拌过夜。然后将反应混合物置于冰箱中 达5天，此后收集产生的晶体并干燥，得到0.26g(37％)的化合物 219B，为黄褐色晶体。粗制化合物219B不经进一步纯化进行到下一 步。
C.(3aα，4β，5α，6α，7β，7aα)-4-乙基六氢-4，5，6，7-四甲基-4，7-环氧异苯并 呋喃-1，3-二酮(219C)

将化合物219B(120mg，0.545mmol)和10％Pd/C(24mg，催化量) 的EtOAc(2mL)溶液于室温在氢气囊下搅拌过夜。反应混合物通过硅 藻土过滤并减压浓缩，得到100mg(0.446mmol，81.9％)的化合物 219C，为白色固体，所述化合物不经进一步纯化进行到下一步。
D.(3aα，4β，5β，6β，7β，7aα)-4-(八氢-4，5，6，7-四甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧- 2H-异吲哚-2-基)-2-(三氟甲基)苄腈(219D)
将化合物219C(44.4mg，0.2mmol)、5-氨基-2-氰基三氟甲苯(45mg， 0.24mmol)、TEA(0.04mL)和硫酸镁(20mg)的甲苯(0.2mL)溶液于l35 ℃加热过夜。将反应混合物冷却至室温，过滤，然后减压浓缩。经硅 胶快速色谱纯化，用40％EtOAc/己烷洗脱，然后用MeOH洗涤所得的 固体，得到17mg(0.043mmol，21.7％)的化合物219D，为白色固体。 HPLC：90％，3.11min(保留时间)(YMC S5 ODS 4.6×50mm，4分钟内含 有0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液，于220nm监测)，MS(ES)：m/z 391.2[M-H]-。
实施例220
(3aα，4β，7β，7aα)-4-[八氢-4-甲基-1，3-二氧代-7-[2-[4-(三氟甲基)苯氧基] 乙基]-4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基]-2-(三氟甲基)苄腈(快洗脱对映体)和 (3aα，4β，7β，7aα)-4-[八氢-4-甲基-1，3-二氧代-7-[2-[4-(三氟甲基)苯氧基] 乙基]-4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基]-2-(三氟甲基)苄腈(慢洗脱对映体)(分 别为220i和220ii)

用手性正相液相色谱，将外消旋化合物35分离为单个的对映体。 用Chiralpak AD柱(50×500mm)，用85％己烷/7.5％甲醇/7.5％乙醇以 50mL/min洗脱。使用220nm UV检测。通过分析性手性正相色谱分析， 发现快洗脱异构体-化合物220i(保留时间＝55.86min)具有95.8％ee ([α]D25＝-53.02°，C＝3.134mg/cc，在二氯甲烷中)，而慢洗脱异构体- 化合物220ii(保留时间＝62.86min)为86％ee([α]D25＝+48.74°，C＝ 2.242mg/cc，在二氯甲烷中)。
实施例221
(3aα，4β，5β，7β，7aα)-4-(八氢-5-羟基-4，7-二甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧- 2H-异吲哚-2-基)-2-(三氟甲基)苄腈(221B)

A.(3aα，4β，7β，7aα)-4-(六氢-4，7-二甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧-2H-异吲 哚-2-基)-2-(三氟甲基)苄腈(221Ai)和(3aα，4α，7α，7aα)-4-(六氢-4，7-二甲 基-1，3-二氧代-4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基)-2-(三氟甲基)苄腈(221Aii)

将2，5-二甲基呋喃(0.8mL，7.51mmol)和4-(2，5-二氢-2，5-二氧代- 1H-吡咯-1-基)-2-三氟甲基苄腈(按照实施例1B中所述方法合成)(1.00g， 3.75mmol)的苯(4mL)溶液于60℃加热过夜。将反应混合物减压浓缩， 并置于高真空泵上，直至油状物固化，得到化合物221Ai和221Aii(通 过LC和NMR测定)的3∶1混合物，为褐色固体，所述混合物不经进一 步纯化直接用于下一步。
B.(3aα，4β，5β，7β，7aα)-4-(八氢-5-羟基-4，7-二甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧 -2H-异吲哚-2-基)-2-(三氟甲基)苄腈(221B)
于0℃将BH3·THF(3.75 mL，3.75mmol，1M的THF溶液)加入粗 制化合物221Ai和221Aii(3.75mmol)的THF(12.5mL)溶液中。在原料 耗尽后，将反应混合物减压浓缩。然后将所得的残余物溶于甲苯(12.5 mL)中，加入Me3NO(845mg，11.25mmol)，将混合物加热至回流过夜。 然后将反应混合物冷却至室温，加入到水中，用EtOAc(3X)萃取。合 并的有机层经硫酸镁干燥并减压浓缩。经SiO2快速色谱纯化，用75％ EtOAc/己烷洗脱，得到0.354g(25％)的化合物221B，为黄褐色粉末。 HPLC：90％，2.45min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含有 0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液在4分钟内洗脱，4mL/min，于220nm 监测)，MS(ES)：m/z381.11[M+H]+。
实施例222
(3aα，4β，5α，7β，7aβ)-4-(八氢-5-羟基-4，7-二甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧- 2H-异吲哚-2-基)-2-(三氟甲基)苄腈(222D)

A.3-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]氧基]-2，5-二甲基呋喃(222A)

将2，5-二甲基-3(3H)-呋喃酮(2.00g，17.8mmol)溶于二氯甲烷(180 mL)中。于25℃加入TEA(7.43mL，53.5mmol)，然后加入TBSOTf(4.92 mL，21.4mmol)。1小时后，将反应物真空浓缩，所得的浆液经硅胶柱 分离，用3％TEA的己烷溶液平衡。产物用3％TEA/己烷洗脱，得到 3.6g的化合物222A，为橙色油状物，该化合物直接用于后续反应中。
B.(3aα，4β，7β，7aα)-4-[5-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]氧基]- 1，3，3a，4，7，7a-六氢-4，7-二甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基]- 2-(三氟甲基)苄腈(222B)

将4-(2，5-二氢-2，5-二氧代-1H-吡咯-1-基)-2-三氟甲基苄腈(1.00g， 3.85mmol)溶于苯(5.0mL)中，加入化合物222A(1.30g，5.77mmol)。
将反应混合物温热至60℃达2小时，然后冷却至25℃。然后真空浓缩 所述溶液，得到化合物222B，为黄色油状物，所述油状物不经纯化用 于下一个反应中。HPLC：60％，4.013min(保留时间)(YMC S5 ODS柱， 4.6×50mm，用含有0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液在4分钟内洗脱，4 mL/min，于220nm监测)。
C.(3aα，4β，5α，7β，7aβ)-4-[5-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]氧基] 八氢-4，7-二甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基]-2-(三氟甲基) 苄腈(222C)

将粗制化合物222B(3.85mmol)溶于乙酸乙酯(75mL)中，加入 10％Pd/C(1.20g)。然后通过气囊引入氢气。24小时后，反应物通过 硅藻土过滤，用乙酸乙酯冲洗，并真空浓缩，得到黄色油状物。粗产 物经硅胶快速色谱纯化，用二氯甲烷/丙酮(0％-1％-2％丙酮)洗脱，得到 作为黄色固体的化合物222C(0.710g)。HPLC：100％，4.160min(保留 时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含有0.2％磷酸的10-90％甲醇水 溶液在4分钟内洗脱，4mL/min，于220nm监测)，MS(ES)：m/z517.6 [M+Na]+。
D.(3aα，4β，5α，7β，7aβ)-4-(八氢-5-羟基-4，7-二甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧 -2H-异吲哚-2-基)-2-(三氟甲基)苄腈(222D)
将化合物222C(0.040g，0.081mmol)溶于THF(1.0mL)中，加入 HF-吡啶(0.5mL)。2小时后，小心地将反应物倾至冷的饱和碳酸氢钠 水溶液中。然后混合物用二氯甲烷(3×10mL)萃取。合并的有机物用1N HCl(1×10mL)洗涤，并经无水硫酸钠干燥。真空浓缩，得到作为黄色 固体的化合物222D(0.031g)。NOE实验证实为所指定的异构体。HPLC： 98％，2.777min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含有0.2％ 磷酸的10-90％甲醇水溶液在4分钟内洗脱，4mL/min，于220nm监测)， MS(ES)：m/z403.06[M+Na]+。
实施例223
(αR)-α-甲氧基苯乙酸2-[(3aα，4β，7β，7aα)-2-(4-氰基-1-萘基)八氢-7-甲 基-1，3-二氧代-4，7-环氧-4H-异吲哚-4-基]乙酯(223C)

A.(3aα，4β，7β，7aα)-4-[4-[2-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]氧基] 乙基]八氢-7-甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基]-1-萘甲腈 (223A)

将4-氨基-1-萘甲腈(19.2g，114mmol)和马来酐(14.0g，113mmol) 的AcOH(230mL)溶液于115℃加热12小时。冷却至室温后，将反应 混合物减压浓缩，然后用二氯甲烷(2.5L)稀释。有机层用水(3L)洗涤3 次，用饱和碳酸钠水溶液(1L)洗涤1次，用盐水(1L)洗涤1次，经硫 酸镁干燥，并且减压浓缩至约200ml。经阳离子交换树脂(60g， CUBX13M6，United Chemical Technologies)快速色谱纯化，用二氯甲烷 洗脱，得到25.0g(88％)4-(2，5-二氢-2，5-二氧代-1H-1-基)-1-萘甲腈，为 黄色固体。HPLC 96％，2.48min(Phenomenex-prime S5-C18柱，4.6×50 mm，在4分钟内含有0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液，4mL/min，于220 nm监测)，MS(ES)：m/z249.25[M+H]+。
在密封管内，将4-(2，5-二氢-2，5-二氧代-1H-1-基)-1-萘甲腈(1.00g， 4.03mmol)悬浮于苯(6.0mL)中，加入化合物204A(1.11g，5.24mmol)。
将反应物于60℃加热16小时，然后冷却至25℃。真空除去苯，得到 黄色固体。将固体溶于乙酸乙酯(40mL)中，加入Pd/C(10％Pd，0.300 g)。然后通过气囊引入氢气。4小时后，反应物通过硅藻土过滤，用乙 酸乙酯冲洗。真空浓缩，达到浅黄色固体，所述固体经硅胶快速色谱 纯化，用丙酮/氯仿(0％-1.5％-3％丙酮)洗脱，得到化合物223A(1.53g)， 为黄色泡沫状物。HPLC：86％，4.173min(保留时间)(YMC S5 ODS柱， 4.6×50mm，用含有0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液在4分钟内洗脱，4 mL/min，于220nm监测)。
B.(3aα，4β，7β，7aα)-4-[八氢-4-(2-羟乙基)-7-甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧- 2H-异吲哚-2-基]-1-萘甲腈(223B)

将化合物223A(1.37g，2.97mmol)溶于THF(8.0mL)中，并转移至 聚丙烯瓶中，并冷却至0℃。然后加入HF·吡啶(2.0mL)。20分钟后， 小心地将反应物倾至冷饱和碳酸氢钠水溶液中，并用二氯甲烷(3×30 mL)萃取。然后有机物用1NHCl洗涤，并经无水硫酸钠干燥。真空浓 缩，得到化合物223B(0.99g)，为黄色泡沫状物，该泡沫状物不经进 一步纯化。HPLC：96％，2.443和2.597(阻转异构体)min(保留时 间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含有0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶 液在4分钟内洗脱，4mL/min，于220nm监测)，MS(ES)：m/z399.02 [M+Na]+。
C.(αR)-α-甲氧基苯乙酸2-[(3aα，4β，7β，7aα)-2-(4-氰基-1-萘基)八氢-7- 甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧-4H-异吲哚-4-基]乙酯(223C)
将化合物223B(0.200g，0.575mmol)加入至WSDCC(0.138g， 0.719mmol)和(R)-杏仁酸(0.096g，0.575mmol)的二氯甲烷(6.0mL)溶液 中。然后加入4-DMAP(0.005g)，将反应物于25℃搅拌4小时。然后 混合物用二氯甲烷稀释，并用1N HCl(2×10mL)洗涤，用碳酸氢钠(10 mL)洗涤1次，并经无水硫酸钠干燥。真空浓缩，得到化合物223C(0.220 g)，为黄色固体，该固体不经进一步纯化。HPLC：100％，3.283min(保 留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含有0.2％磷酸的10-90％甲醇 水溶液在4分钟内洗脱，4mL/min，于220nmm监测)，MS(ES)：m/z 547.26[M+Na]+。
实施例224
(3aα，4β，7β，7aα)-2-(甲硫基)-4-(八氢-4，7-二甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧- 2H-异吲哚-2-基)苄腈(224)

按照实施例208C中所述的方法，在密封管内，使4-氨基-2-(甲硫 基)苄腈(100mg，0.61mmol，按照EP 40931 A1中所述方法合成)与化合 物20A(131mg，0.67mmol)、硫酸镁(161mg，1.34mmol)和Et3N(0.44 mL，3.17mmol)在0.50mL甲苯中反应，经制备型反相HPLC纯化(YMC S5 ODS 20×100mm，用含有0.1％TFA的30-100％甲醇水溶液在10分 钟内洗脱，20mL/min)后，得到137mg(0.40mmol，66％)的化合物224， 为白色固体。HPLC：100％，2.73min(保留时间)(YMC S5 ODS柱， 4.6×50mm，用含有0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液在4分钟内洗脱，4 mL/min，于220nm监测)，MS(ES)：m/z401.0[M-H+OAc]-。
实施例225
(3aα，4β，7β，7aα)-2-(甲基亚硫酰基)-4-(八氢-4，7-二甲基-1，3-二氧代-4，7- 环氧-2H-异吲哚-2-基)苄腈(225)

向冰冷的化合物224(30mg，0.09mmol)在2mL水/MeOH(1∶1)中 的悬浮液中，以一个固体份加入过硫酸氢钾制剂(80mg，0.26mmol)。
将所得混合物于0℃搅拌4小时，然后用水(10mL)稀释，并用二氯甲 烷(2×20mL)萃取。将合并的有机层干燥并浓缩，留下残余物，通过使 该物质通过硅胶短柱过滤，用二氯甲烷洗脱而纯化，得到32mg(0.09 mmol，100％)的化合物225，为无色油状物。HPLC：99％，2.01min(保留 时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含有0.2％磷酸的10-90％甲醇水 溶液在4分钟内洗脱，4mL/min，于220nm监测)，MS(ES)：m/z376.0 [M+NH4]+。
实施例226
(3aα，4β，7β，7aα)-2-(甲基磺酰基)-4-(八氢-4，7-二甲基-1，3-二氧代-4，7-环 氧-2H-异吲哚-2-基)苄腈(226)

向化合物225(48mg，0.14mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液中，以一 个固体份加入mCPBA(145mg，50％混合物，0.42mmol)。让所得的混合 物温热至室温，并搅拌60小时，此时通过HPLC不再检测到原料。通 过加入饱和碳酸氢钠溶液(5mL)猝灭反应，分离各层，水层用二氯甲 烷(20mL)萃取。合并的有机相经硫酸镁干燥并浓缩。残留的残余物经 制备型反相HPLC纯化(YMC S5 ODS 20×100mm，用含有0.1％TFA 的30-100％甲醇水溶液在10分钟内洗脱，20mL/min)，得到48mg(0.13 mmol，92％)的化合物226，为白色固体。HPLC：100％，2.07min(保留时 间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含有0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶 液在4分钟内洗脱，4mL/min，于220mm监测)，MS(ES)：m/z392.0 [M+NH4]+。
实施例227
(3aα，4β，5β，7β，7aα)-7-[2-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]氧基]乙 基]六氢-5-羟基-4-甲基-2-(4-硝基-1-萘基)-4，7-环氧-1H-异吲哚- 1，3(2H)-二酮(227B)

A.(3aα，4β，7β，7aα)-4-[2-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]氧基]乙 基]-3a，4，7，7a-四氢-7-甲基-2-(4-硝基-1-萘基)-4，7-环氧-1H-异吲哚- 1，3(2H)-二酮(227A)

将化合物204A(455mg，1.894mmol，2eq)和1-[4-硝基萘]-1H-吡咯 -2，5-二酮(254mg，0.947mmol，1eq)(按照实施例223A中关于4-(2，5-二 氢-2，5-二氧代-1H-1-基)-1-萘甲腈所述的方法制备)的苯(2mL)溶液于 60℃加热过夜。将反应混合物减压浓缩，得到粗制化合物227A，为褐 色固体，该固体不经进一步纯化直接用于下一步中。
B.(3aα，4β，5β，7β，7aα)-7-[2-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]氧基] 乙基]六氢-5-羟基-4-甲基-2-(4-硝基-1-萘基)-4，7-环氧-1H-异吲哚- 1，3(2H)-二酮(227B)
于0℃，将BH3·THF(0.95mL，0.95mmol，1M的THF溶液，1eq) 加入至粗制化合物227A(0.95mmol，1eq)的THF(2mL)溶液中。在通 过HPLC表明化合物227A耗尽后，减压浓缩反应混合物。然后将所 得的残余物溶于甲苯(2mL)中，加入Me3NO(71mg，2.84mmol，3eq)， 并将混合物加热至回流过夜。然后将反应混合物冷却至室温，加入至 水中，用EtOAc(3X)萃取。合并的有机层经硫酸镁干燥并减压浓缩。
经SiO2快速色谱纯化，用75％EtOAc/己烷的混合物洗脱，得到130.2mg (26％)的化合物227B，为褐色固体。HPLC：94％，3.92min(保留时 间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含有0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶 液在4分钟内洗脱，4mL/min，于220nm监测)，MS(ES)：m/z527.5 [M+H]+。
实施例228
(3aα，4β，5β，7β，7aα)-六氢-5-羟基-7-(2-羟乙基)-4-甲基-2-(4-硝基-1-萘 基)-4，7-环氧-1H-异吲哚-1，3(2H)-二酮(228)

于0℃，将TBAF(0.3mL，0.296mmol，1M的THF溶液)和HF(0.3 mL，50％水溶液)在CH3CN(6mL)中的混合物加入至227B(104mg， 0.197mmol)的THF(2mL)溶液中。将反应混合物于室温搅拌过夜。在 经TLC表明原料耗尽后，加入水和EtOAc，并分离各层。水层用EtOAc (1X)萃取，合并的有机层用水(1X)和盐水(1X)洗涤，经硫酸钠干燥并减 压浓缩。经SiO2快速色谱纯化，用5％MeOH/二氯甲烷洗脱，得到61.2 mg(75％)的化合物228，为黄色固体。HPLC：99％，2.47min(保留时 间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含有0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶 液在4分钟内洗脱，4mL/min，于220nm监测)，MS(ES)：m/z411.2 [M-H]-。
实施例229
(3aα，4β，5β，7β，7aα)-7-[2-(4-氟苯氧基)乙基]六氢-5-羟基-4-甲基-2-(4-硝 基-1-萘基)-4，7-环氧-1H-异吲哚-1，3(2H)-二酮(229)

加入DBAD(37.7mg，0.164mmol)至PPh3(43mg，0.164mmol)的 THF(1mL)溶液中。搅拌10分钟后，加入4-氟苯酚(18.3mg，0.164 mmol)，再搅拌反应混合物5分钟。加入化合物228(45mg，0.109mmol) 的THF(1mL)溶液，将混合物于室温搅拌过夜。HPLC显示，所述粗 制反应混合物含有大多数原料二醇(化合物228)，因此，于室温下加入 该混合物至先前预先形成的PPh3(86mg)、DBAD(75.4mg)和苯酚(36.6 mg)在THF(4mL)中的混合物中。继续搅拌，直至所有化合物228耗 尽。然后减压浓缩反应物。经制备型色谱纯化[HPLC，15.2min(保留时 间)(YMC S5 ODS A柱，20×100mm，在15分钟内含有0.1％TFA的 10-90％甲醇水溶液，20mL/min，于220nm监测)]，得到25.0mg(45％) 的化合物229，为浅黄色固体。HPLC：99％，3.53min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含有0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液在4分 钟内洗脱，4mL/min，于220nm监测)，MS(ES)：m/z505.2[M-H]-。
实施例230
(3aα，4β，5β，6β，7β，7aα)-4-(八氢-5，6-二基-4，7-二甲基-1，3-二氧代-4，7- 环氧-2H-异吲哚-2-基)-2-(三氟甲基)苄腈和(3aα，4β，5α，6α，7β，7aα)-4- (八氢-5，6-二羟基-4，7-二甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基)-2- (三氟甲基)苄腈(分别为230Bi和230Bii)

A.(3aα，4β，7β，7aα)-4-(1，3，3a，4，7，7a-六氢-4，7-二甲基-1，3-二氧代-4，7-环 氧-2H-异吲哚-2-基)-2-(三氟甲基)苄腈(230A)

将3，5-二甲基呋喃(1.23mL，11.54mmol)和4-(2，5-二氢-2，5-二氧代 -1H-吡咯-1-基)-2-三氟甲基苄腈(2.00g，7.69mmol)溶于苯(10mL)中， 并于60℃加热18小时。然后真空除去挥发性有机物。所得的粗制化 合物230A不经纯化而用于下一步。HPLC：71％，3.007min(保留时 间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含有0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶 液在4分钟内洗脱，4mL/min，于220nm监测)。
B.(3aα，4β，5β，6β，7β，7aα)-4-(八氢-5，6-二羟基-4，7-二甲基-1，3-二氧代- 4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基)-2-(三氟甲基)苄腈和(3aα，4β，5α，6α，7β，7aα)- 4-(八氢-5，6-二羟基-4，7-二甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基)- 2-(三氟甲基)苄腈(230Bi和230Bii)
将化合物230A(0.100g，0.281mmol)溶于丙酮中，加入N-甲基吗 啉-N-氧化物(50％水溶液，0.100mL，0.42mmol)。然后加入OsO4(4％水 溶液，0.014mmol)。于25℃3小时后，反应完成，在剧烈搅拌下加入亚 硫酸钠(0.250g)。15分钟后，加入盐水(10mL)，溶液用EtOAc(3×15mL) 萃取。有机物经无水硫酸钠干燥，然后真空浓缩。粗制二醇混合物经 制备型TLC纯化，用18％丙酮的氯仿溶液洗脱，得到0.038g的化合 物230Bi(β面型)和0.012g的化合物230Bii(α面型)，为浅黄色固体。 化合物230Bi：HPLC：100％，2.567min(保留时间)(YMC S5 ODS柱， 4.6×50mm，用含有0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液在4分钟内洗脱，4 mL/min，于220nm监测)，MS(ES)：m/z397.08[M+H]+。化合物230Bii： HPLC：100％，2.417min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含 有0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液在4分钟内洗脱，4mL/min，于220 nm监测)，MS(ES)：m/z397.08[M+H]+。
实施例231
(3aα，4β，5β，6β，7β，7aα)-4-[八氢-5，6-二羟基-4-(羟乙基)-7-甲基-1，3-二氧 代-4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基]-1-萘甲腈(231C)

A.(3aα，4β，7β，7aα)-4-[4-[2-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]氧基] 乙基]-1，3，3a，4，7，7a-六氢-7-甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧-2H-异吲哚-2- 基]-1-萘甲腈(231A)

将化合物204A(29.03g，120mmol)和4-(2，5-二氢-2，5-二氧代-1H- 1-基)-1-萘甲腈(20.0g，80.6mmol)悬浮于苯(80mL)中，并加热至60℃ 达14小时。然后于40℃真空浓缩混合物达40分钟。将所得的浆液冷 却至25℃，然后悬浮于MeOH(200mL)中，于室温搅拌30分钟。然 后将溶液冷却至0℃达30分钟，然后过滤，用冷MeOH冲洗。所得的 固体真空干燥，得到26.1g粗制化合物231A，为白色固体。将甲醇溶 液真空浓缩，再悬浮于MeOH(50mL)中，并冷却至-20℃达4小时。 然后过滤所述溶液，用冷MeOH冲洗。所得的固体真空干燥，得到3.8 g的化合物231A，为白色固体。HPLC：95％，4.227min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含有0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液在4分 钟内洗脱，4mL/min，于220nm监测)。
B.(3aα，4β，5β，6β，7β，7aα)-4-[4-[2-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基] 氧基]乙基]八氢-5，6-二羟基-7-甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧-2H-异吲哚-2- 基]-1-萘甲腈(231B)

将化合物231A(0.400g，0.851mmol)溶于丙酮(9.0mL)中，加入N- 甲基吗啉-N-氧化物(50％水溶液，0.0.150mL，1.28mmol)。然后加入 OsO4(4％水溶液，0.043mmol)。于25℃3小时后，反应完成，在剧烈 搅拌下加入亚硫酸钠(1.0g)。15分钟后，加入盐水(30mL)，溶液用 EtOAc(3×50mL)萃取。有机物经无水硫酸钠干燥，然后真空浓缩。粗 制二醇经二氧化硅快速色谱纯化，用5-25％丙酮的氯仿溶液洗脱，得 到0.355g的化合物231B，为黄色固体。HPLC：93％，3.903min(保留 时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含有0.2％磷酸的10-90％甲醇水 溶液在4分钟内洗脱，4mL/min，于220nm监测)，MS(ES)：m/z522.00 [M+H]+。
C.(3aα，4β，5β，6β，7β，7aα)-4-[八氢-5，6-二羟基-4-(羟乙基)-7-甲基-1，3-二 氧代-4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基]-1-萘甲腈(231C)
将化合物231B(0.400g，0.766mmol)溶于THF(5.0mL)中，将其 转移至聚丙烯瓶中，并冷却至0℃。然后加入HF·吡啶(1.0mL)。20分 钟后，小心地将反应物倾至冷饱和碳酸氢钠水溶液中，用二氯甲烷(3 ×30mL)萃取。然后，有机物用1NHCl洗涤1次，并经无水硫酸钠 干燥。真空浓缩，得到化合物231C(0.290g)，为黄色泡沫状物，该物 质不经进一步纯化。HPLC：92％，2.273和2.423(阻转异构体)min(保留 时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含有0.2％磷酸的10-90％甲醇水 溶液在4分钟内洗脱，4mL/min，于220nm监测)，MS(ES)：m/z409.10 [M+H]+。
实施例232
(3aα，4β，5β，6β，7β，7aα)-4-[八氢-5，6-二羟基-4-甲基-1，3-二氧代-7-[2-[4- (三氟甲基)苯氧基]乙基]-4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基]-2-(三氟甲基)苄腈 (232C)

A.2-甲基-5-[2-[4-(三氟甲基)苯氧基]乙基]呋喃(232A)

向三苯膦(1.56g，5.95mmol)的THF(40mL)溶液中加入DBAD (1.37g，5.95mmol)。10分钟后，加入4-三氟甲基苯酚(0.964g，5.95 mmol)。再过10分钟后，加入化合物21A(0.500g，3.97mmol)。于25 ℃14小时后，将反应物真空浓缩，并经二氧化硅快速色谱纯化，用氯 仿洗脱，得到0.713g的化合物232A，为透明油状物。
B.(3aα，4β，7β，7aα)-4-[1，3，3a，4，7，7a-六氢-4-甲基-1，3-二氧代-7-[2-[4-(三 氟甲基)苯氧基]乙基]-4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基]-2-(三氟甲基)苄腈 (232B)

将化合物232A(0.301g，1.15mmol)和4-(2，5-二氢-2，5-二氧代1H- 吡咯-1-基)-2-三氟甲基苄腈(0.220g，0.846mmol)悬浮于苯(1.5mL)中， 并加热至60℃达14小时。然后于40℃真空浓缩混合物达40分钟。粗 产物经二氧化硅快速色谱纯化，用10-0％己烷的二氯甲烷溶液洗脱， 得到0.199g的化合物232B，为黄色固体。通过NOE实验，表征化合 物232B为外型非对映体。HPLC：94％，3.993min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含有0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液在4分钟 内洗脱，4mL/min，于220nm监测)。
C.(3aα，4β，5β，6β，7β，7aα)-4-[八氢-5，6-二羟基-4-甲基-1，3-二氧代-7-[2- [4-(三氟甲基)苯氧基]乙基]-4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基]-2-(三氟甲基)苄 腈(232C)
将化合物232B(0.075g，0.140mmol)溶于丙酮(2.0mL)中，加入N- 甲基吗啉-N-氧化物(50％水溶液，0.025mL，0.21mmol)。然后加入OsO4 (4％水溶液，0.007mmol)。于25℃3小时后，反应完成，在剧烈搅拌下 加入亚硫酸钠(0.25g)。15分钟后，加入盐水(5mL)，溶液用EtOAc(3×10 mL)萃取。有机物经无水硫酸钠干燥，然后真空浓缩。粗制二醇经制 备型硅胶TLC纯化，用10％丙酮的氯仿溶液洗脱，得到0.038g的化 合物232C，为黄色固体。HPLC：98％，3.747min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含有0.2磷酸的10-90％甲醇水溶液在4分钟内 洗脱，4mL/min，于220nm监测)，MS(ES)：m/z593.08[M+Na]+。
实施例233
(3aα，4β，5β，5aβ，8aβ，8bα)-4-(十氢-5-羟基-4-甲基-1，3-二氧代-4，8a-环氧- 2H-呋喃并[3，2-e]异吲哚-2-基)-1-萘甲腈(233)

向三苯膦(0.072g，0.276mmol)的THF(3.0mL)溶液中加入DBAD (0.063g，0.276mmol)。10分钟后，加入4-氰基苯酚(0.033g，0.276 mmol)。再过10分钟后，加入化合物231C(0.075g，0.184mmol)。于 25℃3小时后，将反应物真空浓缩，并经制备型硅胶TLC纯化，用15％ 丙酮的氯仿溶液洗脱，得到0.068g的化合物233，为白色固体。HPLC： 95％，2.430和2.560min(阻转异构体)(保留时间)(YMC S5 ODS柱， 4.6×50mm，在4分钟内含有0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液，4mL/min， 于220nm监测)，MS(ES)：m/z391.09[M+H]+。
实施例234
(3aα，4β，7β，7aα)-2-(4-氰基-1-萘基)八氢-7-甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧- 4H-异吲哚-4-乙酸(234B)

A.(3aα，4β，7β，7aα)-2-(4-氰基-1-萘基)-1，2，3，3a，7，7a-六氢-7-甲基-1，3-二 氧代-4，7-环氧-4H-异吲哚-4-乙酸(234A)

将5-甲基-2-呋喃乙酸(0.500g，3.57mmol)和4-(2，5-二氢-2，5-二氧 代-1H-1-基)-1-萘甲腈(0.899g，3.57mmol)溶于苯(3.0mL)中，于60℃加 热2小时，然后冷却至25℃。12小时后，从溶液中沉淀白色固体，将 其滤出，并用乙醚冲洗，得到1.20g的化合物234A，为浅黄色固体。 NMR表明仅有一种非对映体。HPLC：86％，2.767min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，在4分钟内含有0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶 液，4mL/min，于220nm监测)，MS(ES)：m/z389.45[M+H]+。
B.(3aα，4β，7β，7aα)-2-(4-氰基-1-萘基)八氢-7-甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧 -4H-异吲哚-4-乙酸(234B)
将化合物234A(1.1g，2.82mmol)溶于EtOH/EtOAc(1∶1，50mL) 中，加入Pd/C(10％Pd，0.4g)，然后通过气囊加入氢气。于25℃5小 时后，反应物通过硅藻土过滤，用EtOAc冲洗，并真空浓缩，得到1.00 g的化合物234B，为黄色固体。HPLC：80％，2.84min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，在4分钟内含有0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶 液，4mL/min，于220nm监测)，MS(ES)：m/z391.1[M+H]+。
实施例235
(3aα，4β，7β，7aα)-2-(4-氰基-1-萘基)八氢-7-甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧- 4H-异吲哚-4-乙酸甲酯(235)

将化合物234B(0.050g，0.125mmol)溶于乙腈(2.0mL)中，然后加 入DCC(0.025g，0.125mmol)，接着加入HOAc(0.018g，0.125mmol)。 加入4-氟苄醇(0.014mL，0.125mmol)，将反应物搅拌3小时。然后真 空浓缩反应物，并经制备型反相HPLC纯化(YMC S5 ODS 20×100mm， 在15分钟内含有0.1％TFA的10-90％甲醇水溶液，20mL/min，于220 nm监测)。纯化得到0.040g作为白色固体的化合物235，而不是预期 的苄酯。通过NMR或LC-MS没有观测到预期的苄酯。HPLC：100％， 3.033min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，4分钟内含有0.2％ 磷酸的10-90％甲醇水溶液，4mL/min，于220nm监测)，MS(ES)：m/z 405.51[M+H]+。
实施例236
(3aα，4β，7β，7aα)-2-(4-氰基-1-萘基)-N-[(4-氟苯基)甲基]八氢-7-甲基- 1，3-二氧代-4，7-环氧-4H-异吲哚-4-乙酰胺(236)

将化合物234B(0.100g，0.256mmol)溶于乙腈(4.0mL)中。然后加 入HOAc(0.035g，0.256mmol)和DCC(0.049g，0.256mmol)，接着加入 4-氟苄胺(0.030mL，0.256mmol)。于25℃4小时后，将反应物真空浓 缩，并经制备型HPLC纯化(YMC S5 ODS 20×100mm，在15分钟内含 有0.1％TFA的10-90％甲醇水溶液，20mL/min，于220nm监测)，得 到0.085g的化合物236，为白色固体。HPLC：100％，3.277min(保留 时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，在4分钟内含有0.2％磷酸的10- 90％甲醇水溶液，4mL/min，于220nm监测)，MS(ES)：m/z498.43 [M+H]+。
实施例237
(3aα，4β，7β，7aα)-N-[2-[2-(4-氰基-1-萘基)八氢-7-甲基-1，3-二氧代-4，7- 环氧-4H-异吲哚-4-基]乙基]-4-氟苯甲酰胺(237B)

A.4-氟-N-[2-(5-甲基-2-呋喃基)乙基]苯甲酰胺(237A)

于室温下，将4-氟苯乙酰基氯(0.29mL，2.44mmol)滴加至β-(5-甲 基-2-呋喃基)乙胺(300mg，2.44mmol，按照Yur’ev，Yu.K.等J.Gen. Chem.USSR(Engl.Transl.) 33，3444-8(1963)的方法制备)的THF(2.5 mL)溶液中，然后滴加Et3N(0.34mL，2.44mmol)中。一旦通过HPLC 表明原料耗尽，则反应物用水猝灭，并用二氯甲烷萃取。合并的有机 层经硫酸镁干燥并减压浓缩。通过快速色谱纯化，用0％-50％EtOAc/ 己烷梯度洗脱，得到523mg(95％)的化合物237A，为白色固体。HPLC： 99％，2.84min(保留时间)(Phenomenex-prime S5-C18柱，4.6×50mm，用 含有0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液在4分钟内洗脱，4mL/min，于220 nm监测)，MS(ES)：m/z248.15[M+H]+。
B.(3aα，4β，7β，7aα)-N-[2-[2-(4-氰基-1-萘基)八氢-7-甲基-1，3-二氧代- 4，7-环氧-4H-异吲哚-4-基]乙基]-4-氟苯甲酰胺(237B)
将化合物237A(221.5mg，0.896mmol)和4-(2，5-二氢-2，5-二氧代- 1H-1-基)-1-萘甲腈(222.4mg，0.896mmol)的苯(4mL)溶液于60℃加热过 夜。将反应混合物减压浓缩，并溶于EtOAc(30mL)中。加入10％Pd/C (50mg)，在氢气囊下将混合物搅拌过夜。反应混合物通过硅藻土柱过 滤并减压浓缩。经快速色谱纯化，用25％-75％EtOAc/己烷梯度洗脱， 得到160.3mg(36％)的化合物237B，为灰白色固体。HPLC：97％，3.13 和3.23min(保留时间)(Phenomenex-prime S5-C18柱，4.6×50mm，用含 有0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液在4分钟内洗脱，4mL/min，于220 nm监测)，MS(ES)：m/z498.11[M+H]+。
实施例238
[3aR-(3aα，4β，7β，7aα)]-4-[八氢-4-(2-羟乙基)-7-甲基-1，3-二氧代-4，7-环 氧-2H-异吲哚-2-基]-1-萘甲腈和[3aS-(3aα，4β，7β，7aα)]-4-[八氢-4-(2-羟 乙基)-7-甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基]-1-萘甲腈(238i和 238ii)

用制备型手性HPLC(CHIRALPAK AD 5×50cm柱；用20％ MeOH/EtOH(1∶1)的庚烷溶液(等度)洗脱，以50mL/min，于220nm)， 将外消旋化合物223B分离为其对映体，得到快洗脱化合物238i(Chiral HPLC：13.54min；CHIRALPAK AD 4.6×250mm柱；用20％ MeOH/EtOH(1∶1)的庚烷溶液，以1mL/min洗脱)和陵洗脱化合物238ii (Chiral HPLC：14.99min；CHIRALPAK AD 4.6×250mm柱；用20％ MeOH/EtOH(1∶1)的庚烷溶液，以1mL/min洗脱)。未确定化合物238i 和238ii的绝对构象。为了使命名简化，在本文中将化合物238i指定 为具有“R”构型，而化合物238ii指定为具有“S”构型。在本文中 从化合物238i衍生的对映体纯产物被指定为具有“R”构型，而从化 合物238ii衍生的对映体纯产物被指定为具有“S”构型。
实施例239
[3aR-(3aα，4β，7β，7aα)]-4-[4-[2-(3-氟苯氧基)乙基]八氢-7-甲基-1，3-二氧 代-4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基]-1-萘甲腈和[3aS-(-(3aα，4β，7β，7aα)]-4-[4- [2-(3-氟苯氧基)乙基]八氢-7-甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧-2H-异吲哚-2- 基)-1-萘甲腈(239i和239ii)

向三苯膦(0.0524g，0.20mmol)的THF(2.0mL)溶液中加入DBAD (0.046g，0.2mmol)。10分钟后，加入3-氟苯酚(0.018mL，0.2mmol)。 再过10分钟后，加入对映体纯化合物238i(0.050g，0.133mmol)。于 25℃3小时后，将反应物真空浓缩，并经制备型HPLC纯化(YMC S5 ODS 20×100mm，在15分钟内含有0.2％TFA的10-90％甲醇水溶液， 20mL/min，于220nm监测)，得到0.031g的化合物239i，为白色固体。 用对映体纯化合物238ii重复该程序，得到化合物239ii。化合物239i： HPLC：100％，3.80min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，在4 分钟内含有0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液，4mL/min，于220nm监测)， MS(ES)：m/z471.65[M+H]+，[α]D25＝-47.371(c＝4.412mg/cc，二氯甲 烷)。化合物239ii：HPLC：100％，3.80min(保留时间)(YMC S5 ODS柱， 4.6×50mm，在4分钟内含有0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液，4mL/min， 于220nm监测)，MS(ES)：m/z471.65[M+H]+，[α]D25＝+24.3(c＝4.165 mg/cc，CH2Cl2)。
实施例240
(4-氟苯基)氨基甲酸2-[(3aα，4β，7β，7aα)-2-(4-氰基-1-萘基)八氢-7-甲基 -1，3-二氢代-4，7-环氧-4H-异吲哚-4-基]乙酯(240)

将化合物223B(0.100g，0.279mmol)溶于二氯乙烷(3.0mL)中，加 入异氰酸4-氟苯酯(0.048mL，0.419mmol)，然后于60℃加热。2小时 后，将反应物冷却至25℃，并用二氯甲烷稀释。混合物用饱和碳酸氢 钠水溶液(20mL)洗涤1次，然后有机物经无水硫酸钠干燥。粗制物质 经二氧化硅快速色谱纯化，用15％丙酮的氯仿溶液洗脱，得到0.098g 的化合物240，为黄色泡沫状物。HPLC：98％，3.320和3.457min(阻转 异构体)(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，在4分钟内含有0.2％ 磷酸的10-90％甲醇水溶液，4mL/min，于220nm监测)，MS(ES)：m/z 514.13[M+H]+。
实施例241
(3aα，4β，7β，7aα)-4-[八氢-4-(2-羟乙基)-1，3-二氧代-4，7-环氧-2H-异吲哚 -2-基]-1-萘甲腈(241D)

A.2-[2-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]氧基]乙基]呋喃(241A)

于25℃将2-(2-羟乙基)呋喃(1.00g，8.93mmol，实施例255A)溶于 DMF中，加入咪唑(0.790g，11.61mmol)。然后在5分钟内分多次加入 TBSCl(1.35g，8.93mmol)。2小时后，将反应物倾至乙醚(300mL)中， 顺序用水(1×100mL)、1NHCl(1×100mL)和盐水(1×100mL)洗涤。然 后合并的有机物经硫酸镁干燥并真空浓缩。化合物241A作为透明油 状物分离出来(1.77g)，该物质不经纯化而用于下一步中。HPLC：100％， 4.233min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，在4分钟内含有 0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液，4mL/min，于220nm监测)。
B.(3aα，4β，7β，7aα)-4-[4-[2-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]氧基] 乙基]-1，3，3a，4，7，7a-六氢-1，3-二氧代-4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基]-1-萘甲 腈(241B)

在密封管内，将4-(2，5-二氢-2，5-二氧代-1H-1-基)-1-萘甲腈(0.721g， 3.40mmol)悬浮于苯(5.0mL)中，并加入化合物241A(1.00g，4.42 mmol)。将反应物于60℃加热16小时，然后冷却至25℃。真空除去苯， 得到黄色固体。粗制物质经二氧化硅快速色谱纯化，用1-5％丙酮的氯 仿溶液洗脱，得到1.37g的化合物241B，为黄色固体。NMR实验证 实了外型异构体的指定。HPLC：100％，4.030和4.110(阻转异构体)min (保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，在4分钟内含有0.2％磷酸的 10-90％甲醇水溶液，4mL/min，于220nm监测)。
C.(3aα，4β，7β，7aα)-4-[4-[2-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]氧基] 乙基]八氢-1，3-二氧代-4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基]-1-萘甲腈(241C)

将化合物241B(0.500g，1.14mmol)溶于乙酸乙酯(40mL)中，并 加入Pd/C(10％Pd，0.200g)。然后通过气囊引入氢气。4小时后，反应 物通过硅藻土过滤，用乙酸乙酯冲洗，并真空浓缩，得到浅黄色固体， 该固体经硅胶快速色谱纯化，用丙酮/氯仿(0％-1.5％-3％丙酮)洗脱，得 到化合物241C(0.450g)，为黄色泡沫状物。
D.(3aα，4β，7β，7aα)-4-[八氢-4-(2-羟乙基)-1，3-二氧代-4，7-环氧-2H-异吲 哚-2-基]-1-萘甲腈(241D)
将化合物241C(0.283g，0.50mmol)溶于2％12N HCl的无水乙醇 (10mL)溶液中。1小时后，反应物用饱和碳酸氢钠水溶液猝灭，并用 二氯甲烷(4×20mL)萃取。合并的有机物经硫酸钠干燥并真空浓缩，得 到0.211g的化合物241D，为白色固体。HPLC：100％，2.14min(保留 时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，在4分钟内含有0.2％磷酸的10- 90％甲醇水溶液，4mL/min，于220nm监测)，MS(ES)：m/z363.45 [M+H]+。
实施例242
(3aα，4β，6β，7β，7aα)-4-[4-[2-(4-氰基苯氧基)乙基]八氢-6-羟基-1，3-二氧 代-4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基)-1-萘甲腈(242C)

A.(3aα，4β，6β，7β，7aα)-4-[4-[2-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]氧 基]乙基]八氢-6-羟基-1，3-二氧代-4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基]-1-萘甲腈 (242A)

将化合物241B(1.00g，2.28mmol)和Wilkinson催化剂(0.105g， 0.114mmol)在25℃、真空下快速搅拌1小时，然后用氮气吹扫。然后 加入THF(30mL)，接着在烯烃完全溶解后加入儿茶酚硼烷(0.487mL， 4.57mmol)。1小时后，将反应物冷却至0℃，加入PH7.2磷酸盐缓冲 液(33mL)，然后加入EtOH(13mL)和H2O2(30％水溶液，3.0g)。于0 ℃3小时后，通过LC分析，反应完成，混合物用二氯甲烷(3×50mL) 萃取。合并的有机物用10％亚硫酸钠/1N NaOH的1∶1混合物(50mL) 洗涤，然后用盐水(50mL)洗涤1次。合并所有的水相，用二氯甲烷(50 mL)萃取，将有机相与先前的萃取液混合。然后所有的有机物经无水 硫酸钠干燥并真空浓缩。粗制物质经二氧化硅快速色谱纯化，用10- 20％丙酮的氯仿溶液洗脱，得到0.634g的化合物242A，为白色泡沫 状物。HPLC：96％，3.797min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm， 在4分钟内含有0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液，4mL/min，于220nm 监测)，MS(ES)：m/z493.13[M+H]+。
B.(3aα，4β，6β，7β，7aα)-4-[八氢-6-羟基-4-(2-羟乙基)-1，3-二氧代-4，7-环 氧-2H-异吲哚-2-基]-1-萘甲腈(242B)

将化合物242A(0.400g，0.813mmol)溶于2％12N HCl的无水乙醇 (10mL)溶液中。1小时后，反应物用饱和碳酸氢钠水溶液猝灭，并用 EtOAc(4×20mL)萃取。合并的有机物经硫酸钠干燥并真空浓缩，得到 0.305g的化合物242B，为白色固体。HPLC：90％，2.043min(保留时 间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，在4分钟内含有0.2％磷酸的10-90％ 甲醇水溶液，4mL/min，于220nm监测)，MS(ES)：m/z379.09[M+H]+。
C.(3aα，4β，6β，7β，7aα)-4-[4-[2-(4-氰基苯氧基)乙基]八氢-6-羟基-1，3-二 氧代-4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基)-1-萘甲腈(242C)
向三苯膦(0.054g，0.207mmol)的THF(2.0mL)溶液中加入DBAD (0.048g，0.207mmol)。10分钟后，加入4-氰基苯酚(0.025g，0.207 mmol)。再过10分钟后，加入化合物242B(0.050g，0.138mmol)。于 25℃3小时后，将反应物真空浓缩，并经制备型二氧化硅TLC纯化， 用25％丙酮/氯仿洗脱，得到0.056g的化合物242C，为白色固体。HPLC： 90％，2.987min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，在4分钟内含 有0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液，4mL/min，于220nm监测)，MS(ES)： m/z480.10[M+H]+。
实施例243
[3aS-(3aα，4β，5β，7β，7aα)]-4-[八氢-5-羟基-7-(2-羟乙基)-4-甲基-1，3-二 氧代-4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基)-1-萘甲腈和[3aR-(3aα，4β，5β，7β，7aα)]- 4-[八氢-5-羟基-7-(2-羟乙基)-4-甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧-2H-异吲哚- 2-基)-1-萘甲腈(243Di和243Dii)

A.(3aα，4β，7β，7aα)-4-[4-[2-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]氧基] 乙基]-1，3，3a，4，7，7a-六氢-1，3-二氧代-4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基]-1-萘甲 腈(243A)

加入4-(2，5-二氢-2，5-氧代-1H-1-基)-1-萘甲腈(18.3g，68.7mmol) 至化合物204A(26.6g，110.6mmol)的苯(75mL)溶液中，并于60℃加热 过夜。冷却至室温后，减压浓缩反应混合物。残余物在0℃搅拌下用 MeOH(250mL)处理10分钟。滤出所得的固体，用冷MeOH(2×10mL) 洗涤并干燥，得到26.7g(79.5％)的化合物243A，为黄色固体。上述 固体的HPLC分析表明它为95％的纯度(HPLC条件：95％，2.48min (Phenomenex-prime S5-C18柱，4.6×50mm，含有0.2％磷酸的10％-90％ 甲醇水溶液的4分钟梯度，于220nm检测))。然后减压浓缩滤液，所 得的固体经色谱纯化，用3％丙酮/CHCl3纯化，得到另外4.36g的化合 物243A(13％)，达到最终92.5％的收率。
B.(3aα，4β，5β，7β，7aα)-4-[7-[2-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]氧 基]乙基]八氢-5-羟基-4-甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基]-1- 萘甲腈(243B)

将243A(10g，20.46mmol)和RhCl(PPh3)3(0.947mg，1.02mmol)的 混合物抽空，并充满氩气(3X)。加入THF(200mL)，并且一旦所有颗 粒溶解，则缓慢滴加儿茶酚硼烷(4.4mL，40.93mmol)。当通过HPLC 测定产物生成停止后，将反应混合物冷却至0℃，并用磷酸盐缓冲液 (330mL，pH7.2)猝灭，然后加入EtOH(130mL)和过氧化氢(300mL， 30％水溶液)。一旦硼酸盐耗尽，则混合物用二氯甲烷(3X)萃取，合并 的有机层用1N NaOH、10％亚硫酸氢钠水溶液(1∶1，1X)和盐水(1X)洗 涤。合并的洗涤液用二氯甲烷(1X)萃取，合并的有机层经硫酸钠干燥。 经硅胶快速色谱纯化，用10％-30％丙酮/氯仿梯度在25分钟内洗脱， 得到7.1g(68％)243B，为浅黄色固体。HPLC条件：98％，3.82min (Phenomenex-prime S5-C18柱，4.6×50mm，含有0.2％磷酸的10％-90％ 甲醇水溶液的4分钟梯度，于220nm检测)。
C.[3aR-(3aα，4β，5β，7β，7aα)]-4-[7-[2-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷 基]氧基]乙基]八氢-5-羟基-4-甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧-2H-异吲哚-2- 基]-1-萘甲腈和[3aS-(3aα，4β，5β，7β，7aα)]-4-[7-[2-[[(1，1-二甲基乙基)二 甲基甲硅烷基]氧基]乙基]八氢-5-羟基-4-甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧- 2H-异吲哚-2-基]-1-萘甲腈(243Ci和243Cii)

通过手性正相液相色谱，将外消旋化合物243B分离为各个对映 体。使用ChiralPak OD柱(50×500mm)，用13％EtOH/己烷在99分钟 内以50mL/min洗脱，于220nm检测。快洗脱异构体化合物243Ci的 保留时间＝45min，而慢洗脱异构体化合物243Cii的保留时间＝66 min。
D.[3aS-(3aα，4β，5β，7β，7aα)]-4-[八氢-5-羟基-7-(2-羟乙基)-4-甲基-1，3- 二氧代-4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基)-1-萘甲腈和[3aR- (3aα，4β，5β，7β，7aα)]-4-[八氢-5-羟基-7-(2-羟乙基)-4-甲基-1，3-二氧代- 4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基)-1-萘甲腈(243Di和243Dii)
将化合物243Ci(0.84g，2.14mmol)溶于2％12NHCl/EtOH(20mL) 中，搅拌5分钟，并减压浓缩。经硅胶快速色谱纯化，用5-10％MeOH/ 二氯甲烷洗脱，得到0.57g(88％)的243Di。通过分析性手性正相色谱， 发现从快洗脱异构体(243Ci)馏出的化合物243Di为99.7％ee。HPLC 条件：99.7％，2.17min(Chiralcel OJ 44.6×250mm，10micron，40℃，等 度80％庚烷/20％EtOH/MeOH(1∶1)，1.0mL/min.，于288nm检测)。
将化合物243Cii(0.86g，2.19mmol)溶于2％12N HCl/EtOH(20mL) 中，搅拌5分钟，并减压浓缩。经硅胶快速色谱纯化，用5-10％MeOH/ 二氯甲烷洗脱，得到0.60g(90％)的243Dii。通过分析性手性正相色 谱，发现从慢洗脱异构体(243Cii)馏出的化合物243Dii具有87.1％ee。 HPLC条件：87.1％，184min(Chiralcel OJ 44.6×250mm，10micron，40 ℃，等度80％庚烷/20％EtOH/MeOH(1∶1)，1.0mL/min.，于288nm检 测)。
未确定化合物243Di和243Dii的绝对构象。为了使命名简化，在 本文中将化合物化合物243Di指定为具有“S”构型，而化合物243Dii 指定为具有“R”构型。在本文中从化合物243Di衍生的对映体纯产物 被指定为具有“S”构型，而从化合物243Dii衍生的对映体纯产物被 指定为具有“R”构型。
实施例244
[3aS-(3aα，4β，5β，7β，7aα)]-4-[7-[2-(4-氰基苯氧基)乙基]八氢-5-羟基-4- 甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基]-1-萘甲腈和[3aR- (3aα，4β，5β，7β，7aα)]-4-[7-[2-(4-氰基苯氧基)乙基]八氢-5-羟基-4-甲基- 1，3-二氧代-4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基]-1-萘甲腈(244i和244ii)

加入DBAD(26 mg，0.115mmol)至PPh3(30mg，0.115mmol)的 THF(0.65mL)溶液中。搅拌10分钟后，加入4-氰基苯酚(13.6mg，0.115 mmol)，再将反应混合物搅拌5分钟。加入化合物243Di(30mg，0.076 mmol)，于室温搅拌混合物1小时。减压浓缩反应物。经硅胶快速色谱 纯化，用30％丙酮/70％CHCl3洗脱，得到23.1mg(0.047mmol，61.7％) 的化合物244i。HPLC条件：95％，3.06min(YMC S5 ODS 4.6×50mm， 含有0.2％磷酸的10％-90％甲醇水溶液的4分钟梯度，于220nm检 测)。MS(ES)：m/z494.09[M+H]+。[α]D＝53.30°，C＝4.5mg/cc的THF， 于589nm)。
加入DBAD(26mg，0.115mmol)至PPh3(30mg，0.115mmol)的THF (0.65mL)溶液中。搅拌10分钟后，加入4-氰基苯酚(13.6mg，0.115 mmol)，再将反应混合物搅拌5分钟。加入化合物243Dii(30mg，0.076 mmol)，于室温搅拌混合物1小时。减压浓缩反应物。经硅胶快速色谱 纯化，用30％丙酮/70％CHCl3洗脱，得到20.3mg(0.041mmol，54.2％) 的化合物244ii。HPLC条件：90％，3.07min(YMC S5 ODS 4.6×50mm， 含有0.2％磷酸的10％-90％甲醇水溶液的4分钟梯度，于220nm检 测)。MS(ES)：m/z494.09[M+H]+。[α]D＝-42.87°，C＝6.6mg/cc的THF， 于589nm)。
实施例245
(3aα，4β，7β，7aα)-4-[4-[2-(4-氰基苯氧基)乙基]-7-乙基八氢-1，3-二氧代- 4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基)-1-萘甲腈(245D)

A.2-乙基-5-(2-羟乙基)呋喃(245A)

于-25℃加入n-BuLi(2.5M己烷溶液，4.4mL，11mmol)至2-乙基呋 喃(1.05mL，10mmol)的THF(10mL)溶液中。将溶液温热至室温，有搅 拌3小时。于-78℃加入环氧乙烷(0.75mL)。于-15℃搅拌反应物达0.5 小时，然后于室温搅拌过夜。加入饱和氯化铵水溶液，混合物用乙醚 (3×)萃取。合并的萃取液用水(1×)和盐水(1×)洗涤并经硫酸钠干燥。 经硅胶快速色谱纯化，用30％EtOAc/70％己烷洗脱，得到1.12g(8.02 mmol，80.2％)的化合物245A为黄色油状物。
B.(3aα，4β，7β，7aα)-4-[4-乙基-1，3，3a，4，7，7a-六氢-7-(2-羟乙基)-1，3-二氧 代-4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基]-1-萘甲腈(245B)

将化合物245A(280mg，2.00mmol)和4-(2，5-二氢-2，5-二氧代-1H- 1-基)-1-萘甲腈(496mg，2.00mmol)的苯(2mL)溶液于60℃搅拌2小 时。减压浓缩反应混合物。黄色固体-化合物245B直接用于下一步。
C.(3aα，4β，7β，7aα)-4-[4-乙基八氢-7-(2-羟乙基)-1，3-二氧代-4，7-环氧- 2H-异吲哚-2-基]-1-萘甲腈(245C)

将化合物245B(764mg，1.97mmol)和10％Pd/C(115mg，催化量) 在EtOAc(36mL)中的混合物于室温、氢气环境下搅拌2小时。反应混 合物通过硅藻土过滤并减压浓缩，得到779mg粗制化合物245C。该 粗产物经硅胶快速色谱纯化，用70％EtOAc/30％己烷洗脱，得到235mg (0.6mmol，30.1％)的化合物245C。HPLC条件：99％，2.84min(YMC S5 ODS 4.6×50mm，含有0.2％磷酸的10％-90％甲醇水溶液的4分钟梯度， 于220nm检测)。MS(ES)：m/z391.12[M+H]+。
D.(3aα，4β，7β，7aα)-4-[4-[2-(4-氰基苯氧基)乙基]-7-乙基八氢-1，3-二氧 代-4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基)-1-萘甲腈(245D)
加入DBAD(44.2mg，0.192mmol)至PPh3(50.4mg，0.192mmol)的 THF(1mL)溶液中。搅拌10分钟后，加入4-氰基苯酚(23mg，0.192 mmol)，再搅拌反应混合物5分钟。加入化合物245C(50mg，0.128 mmol)，于室温下搅拌混合物2小时。减压浓缩反应物。经硅胶快速色 谱纯化，用40％EtOAc/60％己烷洗脱，得到43mg(0.087mmol，68.4％) 的化合物245D，为白色固体。HPLC条件：99％，3.65min(YMC S5 ODS 4.6×50mm，含有0.2％磷酸的10％-90％甲醇水溶液的4分钟梯度，于 220nm检测)。MS(ES)：m/z492.16[M+H]+。
实施例246
(3aα，4β，7β，7aα)-4-[2-(乙酰氧基)乙基]-2-(4-氰基-1-萘基)六氢-7-甲基- 4，7-环氧-1H-异吲哚-1，3(2H)-二酮(246)

于25℃下，将化合物223B(0.100g，0.279mmol)溶于二氯甲烷(3.0 mL)中，加入吡啶(0.071mL，0.837mmol)和4-DMAP(1.0mg)。然后加 入乙酸酐(0.053mL，0.559mmol)，将反应物于25℃搅拌20小时。20 小时后，加入饱和碳酸氢钠水溶液，将反应物搅拌30分钟。然后，混 合物用二氯甲烷(2×20mL)萃取。随后，有机物用1N HCl(10mL)洗涤 1次，然后经无水硫酸钠干燥。真空浓缩后，粗制物质经制备型二氧 化硅TLC纯化，用12％丙酮的氯仿溶液洗脱，得到0.073g的化合物 246，为黄色泡沫状物。HPLC：95％，2.837和3.027min(阻转异构体)(保 留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，在4分钟内含有0.2％磷酸的 10-90％甲醇水溶液，4mL/min，于220nm监测)，MS(ES)：m/z441.10 [M+Na]+。
实施例247
(3aα，4β，7β，7aα)-4-[八氢-4-甲基-1，3-二氧代-7-(2-氧代乙基)-4，7-环氧 2H-异吲哚-2-基]-1-萘甲腈(247)

加入草酰氯(2.0M溶液，1.73mL，3.5mmol)至干燥二氯甲烷(10 mL)中，并冷却至-78℃。然后滴加DMSO(0.283mL，3.99mmol)，放 出气体。15分钟后，加入化合物223B(1.00g，2.66mmol)的二氯甲烷 (10mL)溶液。15分钟后，加入TEA(1.10mL，7.98mmol)，并将反应 物缓慢温热至25℃。然后加入水(30mL)，混合物用二氯甲烷(100mL) 稀释。然后，有机物用1NHCl(30mL)洗涤1次，用水(30mL)洗涤1 次，用盐水(30mL)洗涤1次，然后经无水硫酸钠干燥。粗产物通过真 空浓缩分离，得到化合物247，为橙色泡沫状物。粗制化合物247直 接进行到下一个反应中。HPLC：100％，2.70min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，在4分钟内含有0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液，4 mL/min，于220nm监测)，MS(ES)：m/z483.65[M+H]+。
实施例248
[3aα，4β(E)，7β，7aα]-4-[4-[3-(4-氰基苯基)-2-丙烯基]八氢-7-甲基-1，3-二 氧代-4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基]-1-萘甲腈和[3aα，4β(Z)，7β，7aα]-4-[4- [3-(4-氰基苯基)-2-丙烯基]八氢-7-甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧-2H-异吲 哚-2-基]-1-萘甲腈(248i和248ii)

将氯化(4-氰基苄基)-三苯基膦_(0.072g，0.174mmol)悬浮于THF (2.0mL)中，并冷却至0℃。然后滴加n-BuLi(1.6M溶液，0.092mL， 0.147mmol)，产生均相溶液。将溶液温热至25℃达15分钟，然后冷 却至0℃。然后加入化合物247(0.050g，0.134mmol)的THF溶液。1 小时后，反应物用饱和氯化铵水溶液猝灭，然后用二氯甲烷(3×20mL) 萃取。合并的有机物经无水硫酸钠干燥，然后真空浓缩。粗制物质经 制备型TLC纯化，用5％丙酮的氯仿溶液洗脱，得到0.010g化合物 248i与248ii的混合物，为白色固体。通过NMR光谱学表征为E和Z 烯烃异构体的1∶1混合物。HPLC：100％，3.517min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，在4分钟内含有0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液，4 mL/min，于220nm监测)，MS(ES)：m/z474.2[M+H]+。
实施例249
(3aα，4β，7β，7aα]-4-[4-[3-(4-氰基苯基)丙基]八氢-7-甲基-1，3-二氧代- 4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基]-1-萘甲腈(249)

将所述化合物248i和248ii的混合物(0.008g，0.017mmol)溶于 EtOH(3.0mL)中，加入Pd/C(10％Pd，0.008g)。然后通过气囊引入氢 气。18小时后反应物通过硅藻土过滤，用EtOAc洗脱，然后真空浓缩。 化合物249作为白色固体被分离出来(0.007g)。HPLC：90％，3.520min (保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，在4分钟内含有0.2％磷酸的 10-90％甲醇水溶液，4mL/min，于220nm监测)，MS(ES)：m/z476.13 [M+H]+。
实施例250
(3aα，4β，7β，7aα)-4-[4-[2-[(6-氯-1，2-苯并异_唑-3-基)氧基]乙基]八氢- 7-甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基]-1-萘甲腈(250)

向PPh3(52mg，0.20mmol)的0.5mL THF溶液中以一个固体份加 入DBAD(46mg，0.20mmol)。将所得的混合物搅拌10分钟，然后加 入6-氯-3-羟基-1，2-苯并异_唑(34mg，0.20mmol)。继续搅拌10分钟， 然后通过插管导入化合物223B(50mg，0.13mmol)的0.5mL THF溶 液。将所得的混合物于环境温度下搅拌24小时，浓缩并经制备型反相 HPLC纯化(YMC S5 ODS 20×100mm柱；用含有0.1％TFA的30-100％ 甲醇水溶液在10分钟内以20mL/min洗脱)，得到白色固体。将所获得 的固体溶于二氯甲烷中，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，经硫酸钠干燥并 浓缩，得到50mg(71％)的化合物250，为无色油状物。HPLC：26％，3.89 min和74％，4.02min(阻转异构体的混合物，保留时间)(YMC S5 ODS 柱，4.6×50mm Ballistic，在4分钟内含有0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶 液，4mL/min，于220nm监测)，MS(ES)：m/z528.4[M+H]+。
实施例251
(3aα，4β，7β，7aα)-4-[八氢-4-甲基-7-[2-[(6-硝基-1H-吲唑-3-基)氧基]乙 基]-1，3-二氧代-4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基]-1-萘甲腈(251)

向化合物223B(50mg，0.13mmol)的甲苯(1mL)溶液中加入ADDP (50mg，0.20mmol)、6-硝基-3-吲唑酮(indazolinone)(36mg，0.20mmol) 和n-Bu3P(50μL，0.2mmol)。将所得的混合物加热至80℃达24小时， 浓缩并经制备型反相HPLC(YMC S5 ODS 20×100mm柱；用含有0.1％ TFA的30-100％甲醇水溶液在10分钟内以20mL/min洗脱)和快速色谱 (硅胶，25％丙酮的氯仿溶液)的组合纯化，得到17mg(25％)的化合物 251，为黄色固体。HPLC：24％，3.60min以及76％，3.74min(阻转异构 体的混合物，保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm Ballistic，在4分 钟在内含有0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液，4mL/min，于220nm监测)， MS(ES)：m/z537.6[M+H]+。
实施例252
[3aS-(3aα，4β，5β，7β，7aα)]-4-[7-[2-(1，2-苯并异_唑-3-基氧基)乙基]八氢 -5-羟基-4-甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基]-1-萘甲腈(252)

按照关于化合物250所给出的方法，使PPh3(47mg，0.18mmol)、 DBAD(41mg，0.18mmol)、3-羟基-1，2-苯并异_唑(24mg，0.18mmol) 和化合物243Di(35mg，0.09mmol)反应。通过反相HPLC(YMC S5 ODS 20×100mm柱；用含有0.1％TFA的30-100％甲醇水溶液在10分 钟内以20mL/min洗脱)完成纯化，得到白色固体。将所得的固体溶于 二氯甲烷中，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩，得到 29mg(64％)的化合物252，为无色油状物。HPLC：96％，3.29min(阻转 异构体的混合物，保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm Ballistic，在 4分钟内含有0.2％磷酸的0-100％甲醇水溶液，4mL/min，于220nm监 测)，MS(ES)：m/z510.2[M+H]+。
实施例253
[3aR-(3aα，4β，5β，7β，7aα)]-4-[7-[2-(1，2-苯并异_唑-3-基氧基)乙基]八 氢-5-羟基-4-甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基]-1-萘甲腈

按照关于化合物250所给出的方法，使PPh3(47mg，0.18mmol)， DBAD(41mg，0.18mmol)、3-羟基-1，2-苯并异_唑(24mg，0.18mmol) 和化合物243Dii(35mg，0.09mmol)反应。通过反相HPLC(YMC S5 ODS 20×100mm柱；用含有0.1％TFA的30-100％甲醇水溶液在10分 钟内以20mL/min洗脱)完成纯化，得到白色固体。将所得的固体溶于 二氯甲烷中，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩，得到 23mg(51％)的化合物253，为无色油状物。HPLC：95％，3.29min(阻转 异构体的混合物，保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm Ballistic，在 4分钟内含有0.2％磷酸的0-100％甲醇水溶液，4mL/min，于220nm监 测)，MS(ES)：m/z510.4[M+H]+。
实施例254
(3aα，4β，5β，7β，7aα)]-4-(八氢-5-羟基-4，7-二甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧- 2H-异吲哚-2-基)-2-(三氟甲基)苄腈和(3aα，4β，5β，7β，7aα)]-4-(八氢-5- 羟基-4，7-二甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基)-2-(三氟甲基) 苄腈(254i和254ii)

通过制备型手性HPLC(CHIRALPAK AD 5×50cm柱；用20％ MeOH/EtOH(1∶1)的庚烷溶液(等度)以50mL/min洗脱)，将外消旋化合 物221B分离为其对映体，得到快洗脱化合物254i(Chiral HPLC：10.02 min；CHIRALPAK AD 4.6×250mm柱；用20％MeOH/EtOH(1∶1)的庚 烷溶液以1mL/min洗脱)和陵洗脱化合物254ii(Chiral HPLC：14.74 min；CHIRALPAKAD 4.6×250mm柱；用20％MeOH/EtOH(1∶1)的庚 烷溶液以1mL/min洗脱)。
实施例255
(3aα，4β，7β，7aα)-2-(4-氰基-1-萘基)八氢-1，3-二氧代-7-[2-(苯基甲氧基) 乙基]-4，7-环氧-4H-异吲哚-4-丙腈和(3aα，4α，7α，7aα)-2-(4-氰基-1-萘基) 八氢-1，3-二氧代-7-[2-(苯基甲氧基)乙基]-4，7-环氧-4H-异吲哚-4-丙腈
(255Hi和255Hii)

A.2-(2-羟乙基)呋喃(255A)

按照以下参考文献制备2-(2-羟乙基)呋喃：Harmata，M，等J.Org. Chem.60，5077-5092(1995)。于-78℃加入n-BuLi(2.5M己烷溶液，44 mL，110mmol)至呋喃(8mL，110mmol)的100mL THF溶液中。将溶液 于0℃搅拌4小时，然后于-78℃加入环氧乙烷(7.5mL)。将反应混合物 于-15℃搅拌1小时，然后于室温搅拌过夜。反应物用饱和氯化铵猝灭， 用乙醚(3×)萃取。合并的萃取液用水(1×)和盐水(1×)洗涤。乙醚溶液 经硫酸钠干燥并减压浓缩。经硅胶快速色谱纯化，用40％EtOAc/60％ 己烷洗脱，得到5.4g(48.2mmol，43.8％)的化合物255A，为浅褐色油 状物。
B.2-[2-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]氧基]乙基]呋喃(255B)

加入咪唑(3.65g，53.6mmol)和TBSCl(6.47g，42.9mmol)至化合 物255A(4.00g，35.7mmol)的50mL DMF溶液中。将混合物于室温搅 拌2小时，然后将反应混合物倾至乙醚中。乙醚溶液用水(1X)、1NHCl (1X)、水(1X)和盐水(1X)洗涤。有机层经硫酸钠干燥并减压浓缩。经硅 胶快速色谱纯化，用30％CH2Cl2/70％己烷洗脱，得到7.4g(32.7mmol， 91.7％)的255B，为无色油状物。
C.2-[2-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]氧基]乙基]-5-(2-羟乙基)呋 喃(255C)

于-78℃滴加t-BuLi(1.2M戊烷溶液，10mL，16.99mmol)至255B (3.49g，15.44mmol)在13mL THF中的搅拌溶液中。将混合物于0℃再 搅拌4小时。于-78℃加入环氧乙烷(1.05mL)至反应溶液中。将混合物 温热至室温并搅拌过夜。加入饱和氯化铵水溶液，减压除去大多数 THF。混合物用乙醚(3×)萃取，合并的有机层用水(1×)和盐水(1×) 洗涤，并经硫酸钠干燥。经硅胶快速色谱纯化，用5％EtOAc/95％二 氯甲烷洗脱，得到2.8g(10.4mmol，67％)的化合物255C，为黄色油状 物。
D.2-[2-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]氧基]乙基]-5-[2-(苯基甲氧 基)乙基]呋喃(255D)

醇255C(1.00g，3.7mmol)的12mL THF溶液用60％NaH(177.8 mg，4.44mmol)、苄基溴(0.53mL，4.44mmol)和碘化四丁基铵(50mg，5％) 于室温处理3小时。加入水，混合物用EtOAc(3×)萃取。合并的萃取 液用水(1×)和盐水(1×)洗涤并经硫酸钠干燥。经硅胶快速色谱纯化， 用20％己烷/80％CH2Cl2洗脱，得到1.10g(3.05mmol，82.6％)的化合物 255D，为黄色油状物。
E.2-(2-羟乙基)-5-[2-(苯基甲氧基)乙基]呋喃(255E)

于0℃，加入氟化四丁基铵(1.0M的THF，3.06mL，3.06mmol)至 化合物255D(1.1g，3.06mmol)的10mL THF溶液中。将反应混合物于 室温搅拌10分钟，用饱和氯化铵猝灭并用乙醚(3×)萃取。合并的萃取 液经硫酸钠干燥。经硅胶快速色谱纯化，用10％EtOAc/90％CH2Cl2 洗脱，得到750mg(3.05mmol，99.6％)的化合物255E，为浅黄色油状 物。
F.5-[2-(苯基甲氧基)乙基]呋喃-2-丙腈(255F)

于0℃加入DEAD(1.285mL，8.17mmol)至Ph3P(2.14g，8.17mmol) 的12mL干燥THF搅拌溶液中。将溶液于室温搅拌30分钟，加入化 合物255E(670mg，2.72mmol)。将反应物搅拌15分钟，于-15℃加入 丙酮合氰化氢(0.745mL，8.17mmol)。将反应物于-15℃搅拌30分钟， 然后于室温搅拌过夜。然后减压浓缩混合物。经硅胶快速色谱纯化， 用100％CH2Cl2洗脱，得到180mg(0.705mmol，26％)的化合物255F， 为无色油状物。
G.(3aα，4β，7β，7aα)-2-(4-氰基-1-萘基)-1，2，3，3a，7，7a-六氢-1，3-二氧代-7- [2-(苯基甲氧基)乙基]-4，7-环氧-4H-异吲哚-4-丙腈(255G)

将化合物255F(180mg，0.706mmol)和4-(2，5-二氢-2，5-二氧代- 1H-1-基)-1-萘甲腈(263mg，1.06mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液于室温搅 拌3天。减压浓缩反应混合物。经硅胶快速色谱纯化，用5％EtOAc/ 二氯甲烷洗脱，得到318mg(0.63mmol，89.6％)的化合物255G，为浅 灰色固体，该固体直接用于下一步。
H.(3aα，4β，7β，7aα)-2-(4-氰基-1-萘基)八氢-1，3-二氧代-7-[2-(苯基甲氧 基)乙基]-4，7-环氧-4H-异吲哚-4-丙腈和(3aα，4α，7α，7aα)-2-(4-氰基-1- 萘基)八氢-1，3-二氧代-7-[2-(苯基甲氧基)乙基]-4，7-环氧-4H-异吲哚-4- 丙腈(255Hi和255Hii)
将化合物255G(318mg，0.63mmol)和10％Pd/C(64mg)在EtOH (10mL)和EtOAc(5mL)中的混合物于室温、氢气环境下搅拌过夜。反 应混合物通过硅藻土过滤，并减压浓缩，得到320mg粗制化合物255Hi 和255Hii。通过硅胶快速色谱纯化25mg这种粗产物，用55％EtOAc/ 己烷洗脱，得到6.5mg(0.013mmol，26％(基于25mg))的化合物255Hi 和8.1mg(0.016mmol，32.4％(基于25mg))的化合物255Hii。化合物 255Hi：HPLC条件：98％，3.57min(YMC S5 ODS 4.6×50mm，在4分钟 内含有0.2％磷酸的10％-90％甲醇水溶液，于220nm检测，MS(ES)： m/z506.15[M+H]+。化合物255Hii：HPLC条件：98％，3.51min(YMC S5 ODS 4.6×50mm，含有0.2％磷酸的10％-90％甲醇水溶液的4分钟梯度， 于220nm检测)，MS(ES)：m/z506.15[M+H]+。
实施例256
(3aα，4β，7β，7aα)-2-(4-氰基-1-萘基)八氢-7-(2-羟乙基)-1，3-二氧代-4，7- 环氧-4H-异吲哚-4-丙腈和(3aα，4α，7α，7aα)-2-(4-氰基-1-萘基)八氢-7- (2-羟乙基)-1，3-二氧代-4，7-环氧-4H-异吲哚-4-丙腈(256i和256ii)

将化合物255Hi与255Hii(200mg，0.396mmol)和PdCl2(8.4mg， 催化量)在EtOH(1mL)和EtOAc(3mL)中的混合物于室温、氢气环境 (30psi)下搅拌过夜。反应混合物通过硅藻土过滤，并减压浓缩，通过 硅胶快速色谱纯化，用5％MeOH/二氯甲烷洗脱，然后用第二根柱子 纯化，用100％EtOAc洗脱，得到28.9mg(0.0696mmol，17.6％)的化 合物256ii和26.5mg(0.0639mmol，16.1％)的化合物256i。化合物256ii： HPLC条件：90％，2.44min(YMC S5 ODS 4.6×50mm，含有0.2％磷酸的 10％-90％甲醇水溶液的4分钟梯度，于220nm检测.)，MS(ES)：m/z 416.11[M+H]+。化合物256i：HPLC条件：99％，2.47min(YMC S5 ODS 4.6×50mm，含有0.2％磷酸的10％-90％甲醇水溶液的4分钟梯度，于 220nm检测)，MS(ES)：m/z416.11[M+H]+。
实施例257
(3aα，4β，7β，7aα)-2-(4-氰基-1-萘基)-7-[2-(4-氟苯氧基)乙基]八氢-1，3-二 氧代-4，7-环氧-4H-异吲哚-4-丙腈(257)

加入DBAD(15mg，0.065mmol)至PPh3(17mg，0.065mmol)的 THF(0.3mL)溶液中。搅拌10分钟后，加入4-氟苯酚(7.33mg，0.065 mmol)，再搅拌反应混合物5分钟。加入化合物256i(18.1mg，0.044 mmol)，于室温搅拌混合物3小时。减压浓缩反应物。经硅胶快速色谱 纯化，用60％EtOAc/30％己烷洗脱，得到5.9mg(0.0116mmol，26.34％) 的化合物257。HPLC条件：98％，3.59min(YMC S5 ODS 4.6×50mm，含 有0.2％磷酸的10％-90％甲醇水溶液的4分钟梯度，于220nm检测)。 MS(ES)：m/z510.14[M+H]+。
实施例258
(3aα，4β，7β，7aα)-2-(7-氯-2，1，3-苯并_二唑-4-基)六氢-4，7-二甲基-4，7- 环氧-1H-异吲哚-1，3(2H)-二酮(258)

A.4-氨基-7-氯-2，1，3-苯并_二唑(258A)

将1.0g(5.02mmol)4-氯-7-硝基苯并呋喃在20mL AcOH、10mL EtOAc和2mL水中的溶液加热至50℃，用铁粉(1.4g，251mmol)处理。 将混合物于80℃加热30分钟，然后让其冷却至室温。混合物通过硅 藻土过滤，用EtOAc洗脱。滤液用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，经硫酸 镁干燥并浓缩，得到化合物258A(0.80g，94％)，为红色固体。
B.(3aα，4β，7β，7aα)-2-(7-氯-2，1，3-苯并_二唑-4-基)六氢-4，7-二甲基- 4，7-环氧-1H-异吲哚-1，3(2H)-二酮(258B)
按照以上实施例208C中所述的方法，使化合物258A(42mg，0.25 mmol)在密封管内与化合物20A(73.5mg，0.375mmol)，MgSO4(75mg， 0.625mmol)和Et3N(170μl，1.25mmol)在250μL甲苯中反应，在经制 备型反相HPLC纯化(YMC S5 ODS 20×100mm，用含有0.1％TFA的 30-100％甲醇水溶液在12min内洗脱，20mL/min)后，得到23mg(26％) 的化合物258B，为黄色固体。HPLC：97.6％，2.87min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含有0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液在4分 钟内洗脱，4mL/min，于220nm监测)，MS(DCI)：m/z347.9[M]+。
实施例259
(3aα，4β，7β，7aα)-2-(7-氯-2-甲基-4-苯并呋喃基)六氢-4，7-二甲基-4，7-环 氧-1H-异吲哚-1，3(2H)-二酮(259)

按照实施例208C中所述的方法，使7-氯-2-甲基-4-苯并呋喃胺(38 mg，0.25mmol，按照Enomoto和Takemura在EP 0476697 A1中所述的 方法制备)在密封管内与化合物20A(73.5mg，0.375mmol)、硫酸镁(75 mg，0.625mmol)和Et3N(170μL，1.25mmol)在250μL甲苯中反应，在 经制备型反相HPLC纯化(YMC S5 ODS 20×100mm，用含有0.1％TFA 的30-100甲醇水溶液在12min内洗脱，20mL/min)后，得到42mg(47％) 的化合物259，为白色固体。HPLC：98％，3.45min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含有0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液在4分钟 内洗脱，4mL/min，于220nm监测)，MS(DCI)：m/z359.9[M]+。
实施例260
(3aα，4β，7β，7aα)-2-(7-氯-2-甲基苯并[b]噻吩-4-基)六氢-4，7-二甲基-4，7- 环氧-1H-异吲哚-1，3(2H)-二酮(260)

A.1-氯-2-(2-氯-烯丙基硫烷基)-4-硝基-苯(260A)

2-氯-5-硝基-苯硫醇(1.0g，5.27mmol，按照Still等，Synth.Comm. 13，1181(1983)中所述方法制备)的15mL DMF溶液用2，3-二氯丙烯 (693，μl，7.52mmol)和K2CO3(433mg，3.13mmol)处理。将混合物于80 ℃加热2小时，然后让其冷却至室温。加入EtOAc(200mL)和水(100 mL)。有机相用水(2×250mL)、饱和氯化钠水溶液(100mL)洗涤，经硫 酸镁干燥并浓缩。粗制物质经硅胶快速柱色谱纯化，用20％EtOAc的 己烷溶液洗脱，得到化合物260A(1.09g，89％)，为橙色油状物。
B.4-氨基-7-氯-2-甲基苯并[b]噻吩(260B)

将1.09g(4.67mmol)的化合物260A在20mL AcOH和10mL EtOAc和2mL水中的溶液加热至80℃，并用铁粉(1.3g，23.4mmol)处 理。将混合物于80℃加热40分钟，然后让其冷却至室温。混合物通 过硅藻土过滤，用EtOAc洗脱。滤液用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，经 硫酸镁干燥并真空浓缩。加入N，N-二乙基苯胺(10mL)，将反应物于 215℃加热6小时。冷却至室温后，加入1N HCl水溶液(20mL)，将反 应物于室温搅拌2小时。混合物用EtOAc(3×30mL)萃取。有机相用饱 和碳酸氢钠水溶液洗涤，经硫酸镁干燥并浓缩。粗制物质经硅胶快速 柱色谱纯化，用25％EtOAc的己烷溶液洗脱，得到化合物260B(320mg， 35％)，为淡棕色固体。
C.(3aα，4β，7β，7aα)-2-(7-氯-2-甲基苯并[b]噻吩-4-基)六氢-4，7-二甲基- 4，7-环氧-1H-异吲哚-1，3(2H)-二酮(260C)
按照实施例208C中所述的方法，使化合物260B(49mg，0.25mmol) 在密封管内与化合物20A(73.5mg，0.38mmol)、硫酸镁(75mg，0.63 mmol)和Et3N(170μL，1.25mmol)在250μl甲苯中反应，在经制备型反 相HPLC纯化(YMC S5 ODS 20×100mm，用含有0.1％TFA的30-100％ 甲醇水溶液在12min内洗脱，20mL/min)后，得到28mg(30％)的化合 物260C，为浅黄色固体。HPLC：96％，3.18min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含有0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液在4分钟 内洗脱，4mL/min，于220nm监测)，MS(DCI)：m/z376.0[M]+。
实施例261
[3aα，4β(E)，7β，7aα]-4-[2-(4-氰基-1-萘基)八氢-7-甲基-1，3-二氧代-4，7- 环氧-4H-异吲哚-4-基]-2-丁烯酸苯基甲酯(261)

将化合物247(0.500g，0.134mmol)溶于THF(20mL)中，加入苄 基(三苯基亚正膦基)(0.55g，0.134mmol)。于67℃搅拌反应混合物2小 时，然后减压浓缩。经SiO2快速色谱纯化，用5％丙酮/95％氯仿洗脱， 得到0.65g的化合物261，为黄色固体。HPLC：99％，3.717min(保留 时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含有0.2％磷酸的10-90％甲醇水 溶液在4分钟内洗脱，4mL/min，于220nm监测)，MS(ES)：m/z507.1 [M+H]+。
实施例262
(3aα，4β，7β，7aα)-2-(4-氰基-1-萘基)八氢-7-甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧- 4H-异吲哚-4-丁酸(262)

将化合物261(0.60g，1.19mmol)溶于EtOH/EtOAc(5mL/5mL) 中，加入10％Pd/C(0.30g)。然后通过气囊导入氢气。8小时后，反应 物通过硅藻土过滤，然后减压浓缩，得到化合物262(0.47g)，为白色 固体。HPLC：98％，2.81min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm， 用含有0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液在4分钟内洗脱，4mL/min，于 220nm监测)，MS(ES)：m/z419.1[M+H]+。
实施例263
(3aα，4β，7β，7aα)-2-(4-氰基-1-萘基)-N-(4-氟苯基)八氢-7-甲基-1，3-二氧 代-4，7-环氧-4H-异吲哚-4-丁酰胺(263)

将化合物262(0.030g，0.072mmol)溶于CH3CN(1mL)中。然后加 入DCC(0.014g，0.072mmol)和HOAc(0.0098g，0.072mmol)，接着加 入4-氟苯胺(0.007mL，0.072mmol)。将反应混合物在氩气下搅拌14小 时，将粗制物质溶于MeOH中，经制备型HPLC纯化(YMC VP-ODS 柱，20×100mm，用20％B至100％B在15分钟内洗脱，并且于100％B 保持10分钟)。化合物263(0.020g)作为白色固体分离出来。HPLC： 100％，3.217min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含有0.2％ 磷酸的10-90％甲醇水溶液在4分钟内洗脱，4mL/min，于220nm监测)， MS(ES)：m/z512.1[M+H]+。
实施例264
[3aS-(3aα，4β，5β，7β，7aα)]-4-[7-[2-(乙酰氧基)乙基]八氢-5-羟基-4-甲基- 1，3-二氧代-4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基]-1-萘甲腈和[3aR- (3aα，4β，5β，7β，7aα)]-4-[八氢-5-羟基-7-(2-羟乙基)-4-甲基-1，3-二氧代- 4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基]-1-萘甲腈(264和243Dii)

在2L烧瓶中，将化合物243Di和243Dii的外消旋混合物(1.90克) 溶于100mL无水THF中。在搅拌下将无水叔丁基·甲基醚(900mL)和 乙酸乙烯酯(40mL)转移至烧瓶中，加入脂酶(20g，II型，粗品，得自猪 胰；Sigma，Cat#L3126)。于室温搅拌反应混合物21小时，此时加入另 外5克所述脂酶和20mL乙酸乙烯酯。再于室温搅拌反应物19小时， 将其贮存于4℃且不搅拌达36小时，然后于室温下再搅拌22小时(直 至通过手性HPLC分析显示所需％ee)。为了监测所述反应，取出200μl 所述混合物并将其离心。上清液(100μl)在氮气下干燥，将所得的残余 物溶于100μlEtOH中，并进行HPLC分析：
1)反相HPLC：柱子，YMC-ODS AQ 150×4.6；流速，1.2mL/min；
样品大小，10μl
溶剂A，：1mMHCl水溶液；溶剂B，MeCN；于300nm监测
梯度：
时间(min)  0 8 8.5 9.5 10 12
B％        30 60 85 85 30 30
2)Chiral-HPLC：柱子，CHIRALCEL OJ 4.6×250mm
流动相，己烷/MeOH/EtOH(8∶1∶1)
流速，1mL/min；样品大小，20μl
于220nm和300nm监测
于25℃和40℃进行。
(用于测定反应混合物的ee％)
经过滤除去酶，真空浓缩滤液。将反应混合物溶于氯仿中，并吸 附至硅胶(63-200微米)上。将这些固体上样至有5cm柱床高度硅胶 (25-40微米)的VLC漏斗(3cmI.D.，VLC是一种真空液相色谱，使用在 底部有24/40接合点的玻璃漏斗)，并进行分步梯度洗脱。所述梯度为 前3个流分的100％氯仿、接着为CHCl3-1％MeOH(3个流分)、 CHCl3-2％MeOH(3个流分)、CHCl3-3％MeOH(3个流分)、CHCl3-4％ MeOH(3个流分)、最后为CHCl3-5％MeOH(3个流分)。所述流分的 体积为100mL，直至达到CHCl3-3％MeOH，此后流分的体积为200 mL。化合物264在100％CHCl3的最后2个流分中洗脱，直至CHCl3- 2％MeOH的第一个流分。化合物243Dii从CHCl3-2％MeOH的第二个 流分开始洗脱，持续至CHCl3-5％MeOH的第一个流分。粗制化合物 243Dii含有少量有色杂质，通过Sephadex柱[LH-20，在CHCl3-MeOH (2∶1)中溶胀，柱(2.5cm I.D.和90cm长)除去所述杂质，得到632mg的 化合物243Dii。化合物264：HPLC条件：98％，7.2min(方法1)，手性 HPLC条件：29.0min，于25℃(方法2)。化合物243Dii：HPLC条件：98％， 4.6min(方法1)，手性HPLC条件：96％ee，于25.7min(于25℃)和19.8 min(于40℃)(方法2)。
实施例265
(3aα，4β，7β，7aα(E)]-4-[八氢-4-甲基-1，3-二氧代-7-(4-氧代-4-苯基-2-丁 烯基)-4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基]-1-萘甲腈(265)

将化合物247(0.050g，0.134mmol)溶于THF(1.5mL)中，加入(苯 甲酰亚甲基)三苯基正膦(0.051g，0.134mmol)。将反应混合物于67℃搅 拌24小时，然后冷却至23℃并真空浓缩。然后粗制物质经制备型HPLC 纯化(YMC VP-ODS柱，20×100mm，用20％B至100％B在15分钟内 洗脱，然后于100％B保持10分钟)，得到化合物265(0.040g)，为白 色固体。HPLC：100％，3.503min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50 mm，用含有0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液在4分钟内洗脱，4mL/min， 于220nm监测)，MS(ES)：m/z477.1[M+H]+。
实施例266
(3aα，4β，7β，7aα(E)]-4-[八氢-4-甲基-1，3-二氧代-7-(4-氧代-4-苯基-2-丁 烷基)-4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基]-1-萘甲腈(266)

将化合物265(0.010g，0.021mmol)溶于EtOH(2.0mL)中，加入 Pd/C(10％Pd，0.005g)。然后通过气囊导入氢气，并将反应物于25℃ 搅拌3小时。然后反应物通过硅藻土过滤，用EtOAc冲洗并真空浓缩， 得到作为黄褐色固体的化合物266(0.009g)。无需进行纯化。HPLC： 100％，3.38min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含有0.2％ 磷酸的10-90％甲醇水溶液在4分钟内洗脱，4mL/min，于220nm监测)， MS(ES)：m/z503.2[M+Na]+。
实施例267-378
采用与上述方法类似的方法，制备本发明另外的化合物。实施例 267-378的化合物具有以下结构(L为一个键)：

其中G、R7、化合物名称、保留时间、分子量和所用的方法在表5中 叙述。以下化合物的绝对构型未确定。为了使命名简化，化合物238i 在本文中被指定为具有“R”构型，而化合物238ii被指定为具有“S” 构型。在本文中从化合物238i衍生的对映体纯产物被指定为具有“R” 构型，而从化合物238ii衍生的对映体纯产物被指定为具有“S”构型。
用来测定表5化合物保留时间的色谱技术如下：LCMS＝YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含有0.1％TFA的10-90％MeOH/H2O在4 分钟内洗脱；4mL/min，于220nm监测。LCMS*＝YMC S5 ODS柱， 4.6×50mm，用含有0.1％TFA的10-90％MeOH/H2O在2分钟内洗脱； 4mL/min，于220nm监测。LC＝YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用 含有0.2％磷酸的10-90％MeOH/H2O在4分钟内洗脱，4mL/min，于 220nm监测。表5中所列化合物的分子量通过MS(ES)按公式m/z测 定。
表5




















实施例379-381
采用与上述方法类似的方法，制备本发明另外的化合物。实施例 379-381的化合物具有以下结构(L为一个键)：

其中G、R7、化合物名称、保留时间、分子量和所用的方法在表6中 叙述。用来测定表6化合物保留时间的色谱技术如下：LCMS＝YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含有0.1％TFA的10-90％MeOH/H2O在4 分钟内洗脱；4mL/min，于220nm监测。LCMS*＝YMC S5 ODS柱， 4.6×50mm，用含有0.1％TFA的10-90％MeOH/H2O在2分钟内洗脱； 4mL/mm，于220nm监测。LC＝YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用 含有0.2％磷酸的10-90％MeOH/H2O在4分钟内洗脱，4mL/min，于 220nm监测。
表6中所列化合物的分子量通过MS(ES)按公式m/z测定。
表6

实施例382-383
采用与上述方法类似的方法，制备本发明另外的化合物。实施例 382-383的化合物具有以下表7中所示的结构、化合物名称、保留时 间、分子量，并且用表7中所用的方法制备。用来测定表7化合物保 留时间的色谱技术如下：LCMS＝YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用 含有0.1％TFA的10-90％MeOH/H2O在4分钟内洗脱；4mL/min，于 220nm监测。LCMS*＝YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含有0.1％ TFA的10-90％MeOH/H2O在2分钟内洗脱；4mL/min，于220nm监 测。LC＝YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含有0.2％磷酸的10-90％ MeOH/H2O在4分钟内洗脱，4mL/min，于220nm监测。表7中所列 化合物的分子量通过MS(ES)按公式m/z测定。
表7

实施例384-418
采用与上述方法类似的方法，制备本发明另外的化合物。实施例 384-418的化合物具有以下结构(L为一个键)：

其中G、R7、化合物名称、保留时间、分子量和所用的方法在表8中 叙述。以下化合物的绝对构型并未确定。为了使命名简化，化合物243Di 在本文中被指定为具有“S”构型，而化合物243Dii在本文中被指定 为具有“R”构型。由化合物243Di衍生的对映体纯产物在本文中被 指定为具有“S”构型，由化合物243Dii衍生的对映体纯产物在本文 中被指定为具有“R”构型。
用来测定表8化合物保留时间的色谱技术如下：LCMS＝YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含有0.1％TFA的10-90％MeOH/H2O在4 分钟内洗脱；4mL/min，于220nm监测。LCMS*＝YMC S5 ODS柱， 4.6×50mm，用含有0.1％TFA的10-90％MeOH/H2O在2分钟内洗脱； 4mL/min，于220nm监测。LC＝YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用 含有0.2％磷酸的10-90％MeOH/H2O在4分钟内洗脱，4mL/min，于 220nm监测。表8中所列化合物的分子量通过MS(ES)按公式m/z测 定。
表8










实施例422
(3aα，4β，7β，7aα)-2-(7-溴-2，1，3-苯并_二唑-4-基)六氢-4，7-二甲基-4，7- 环氧-1H-异吲哚-1，3(2H)-二酮(422C)

A.4-溴-7-硝基苯并呋咱(422A)

向2，6-二溴苯胺(1.0g，4.0mmol)的CHCl3(8mL)溶液中加入 mCPBA(70％，HPLC，1.4g，8.0mmol)在CHCl3(8mL)中的悬浮液，于 室温下搅拌所得混合物24小时。反应混合物用氯仿稀释，顺序用2％ Na2S2O3溶液、5％Na2CO3溶液和盐水洗涤。有机层经硫酸钠干燥并减 压浓缩，留下一种固体，将该固体悬浮于DMSO(15mL)中。于室温向 该悬浮液中加入NaN3(272mg，4.19mmol)的DMSO(15mL)溶液。于 室温下搅拌所得混合物，直至大部分氮气被放出，然后快速加热至120 ℃达3分钟。将反应混合物冷却并倾至碎冰(100g)中。静置1小时后， 滤出沉淀，真空干燥，将其再溶解于浓硫酸(5mL)中。向该溶液中加 入含NaNO3(400mg，4.7mmol)的50％H2SO4(1.6mL)溶液，但温度维 持在60℃。在加入完成后，将混合物加热至85℃达30分钟，冷却至 室温，并倾至碎冰(40g)中。加入EtOAc，分离各层，水层用EtOAc 萃取。合并的有机层经硫酸钠干燥并浓缩，留下固体，固体经快速色 谱纯化(硅胶，EtOAc的(20％)己烷溶液)，得到化合物422A(785mg， 81％)，为黄褐色固体。
B.4-溴-7-氨基苯并呋咱(422B)

将化合物422A(563mg，2.31mmol)的AcOH(5mL)溶液加热至70 ℃，一次性加入铁粉(258mg，4.62mmol)。将所得的深色反应混合物搅 拌15分钟，冷却至室温并减压浓缩。将残余物溶于EtOAc中，所得 溶液用饱和碳酸钠溶液洗涤。有机层经硫酸钠干燥、浓缩并经快速色 谱纯化(硅胶，EtOAc的己烷溶液，10-60％)，得到化合物422B(470mg， 95％)，为红色固体。
C.(3aα，4β，7β，7aα)-2-(7-溴-2，1，3-苯并_二唑-4-基)六氢-4，7-二甲基- 4，7-环氧-1H-异吲哚-1，3(2H)-二酮(422C)
将化合物422B(43mg，0.20mmol)、化合物20A(45mg，0.23 mmol)、硫酸镁(60mg，0.50mmol)、Et3N(139μL，1.0mmol)和1，2-二甲 氧基乙烷(300μL)的混合物置于密封管中，并加热至135℃达14小时。 冷却至室温后，混合物通过硅藻土过滤，用MeOH洗脱，得到深色固 体，所述固体经快速色谱纯化(硅胶，EtOAc的己烷溶液，，5-40％)，得 到化合物422C(42mg，54％)，为黄色固体。HPLC：99％，2.96min(保留 时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm Ballistic，在4分钟内含有0.2％磷酸 的10-90％甲醇水溶液，4mL/min，于220nm监测)。1HNMR(丙酮-d6， 400MHz)：δ＝8.00(d，J＝7.5Hz，1H)，7.45(d，J＝7.5Hz，1H)，3.31(s， 2H)，1.98-1.93(m，2H)，1.74-1.69(m，2H)，1.57(s，6H)。
实施例423
(3aα，4β，7β，7aα)-7-[八氢-4，7-二甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧-2H-异吲哚- 2-基]-2，1，3-苯并_二唑-4-甲腈(423)

向化合物422C(42mg，0.11mmol)的DMA(1mL)溶液中加入 CuCN(20mg，0.22mmol)，将所得混合物加热至150℃达5小时。让混 合物冷却至室温，在EtOAc和NaCN水溶液(5g/50mL)之间分配。分 离各层，水层用EtOAc萃取一次。合并的有机相经硫酸钠干燥，浓缩 并经快速色谱纯化(硅胶，EtOAc的己烷溶液，20-70％)，得到化合物423 (13mg，35％)，为黄色油状物。HPLC：99％，2.66min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm Ballistic，在4分钟内含有0.2％磷酸的10-90％甲醇 水溶液，4mL/min，于220nm监测)，MS(ES)：m/z396.9[M-H+OAc]-。
实施例424
(3aα，4β，7β，7aα)-7-[八氢-4，7-二甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧-2H-异吲哚- 2-基]-2，1，3-苯并噻二唑-4-甲腈(424B)

A.4-氰基-7-氨基-苯并噻二唑(424A)

将2-氰基-5-硝基苯二胺(78mg，0.44mmol，按照WO 0076501中 所述方法制备)的SOCl2(2mL)溶液加热至回流达3小时。让所得的混 合物冷却至室温，然后倾至冰/水中。加入二氯甲烷，分离各层，水层 用二氯甲烷萃取2次。合并的有机相经硫酸镁干燥、浓缩并经快速色 谱纯化(硅胶，EtOAc的己烷溶液，50％)，得到4-氰基-7-硝基苯并噻二 唑。将该物质溶于含有EtOAc(1mL)和水(0.2mL)的AcOH(2mL)中， 加热至70℃。在该温度下以一个固体份加入铁粉(78mg，1.41mmol)， 将深色混合物搅拌20分钟，然后冷却至室温。反应混合物通过硅藻土 过滤，用EtOAc洗脱，用饱和碳酸钠溶液洗涤，经硫酸镁干燥并浓缩。 通过快速色谱完成纯化(硅胶，EtOAc的己烷溶液，20-70％)，得到化合 物424A(47mg，61％)，为褐色固体。
B.(3aα，4β，7β，7aα)-7-[八氢-4，7-二甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧-2H-异吲 哚-2-基]-2，1，3-苯并噻二唑-4-甲腈(424B)
将化合物424A(35mg，0.20mmol)、化合物20A(45mg，0.23 mmol)、硫酸镁(60mg，0.50mmol)、Et3N(139μL，1.0mmol)和DME(200 μL)的混合物置于密封管中，加热至135℃达l4小时。冷却至室温后， 混合物通过硅藻土过滤，用MeOH洗脱，得到深色固体，所述固体通 过快速色谱(硅胶，EtOAc的己烷溶液，10-50％)和反相制备型HPLC (YMC S5 ODS 20×100mm，用含有0.1％TFA的27-100％甲醇水溶液在 10分钟内洗脱，20mL/min)的组合纯化，得到化合物424B(36mg， 51％)，为黄色固体。HPLC：98％，2.45min(保留时间)(YMC S5 ODS柱， 4.6×50mm Ballistic，在4分钟内含有0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液，4 mL/min，于220nm监测)，MS(DCI)：m/z355.0[M+H]+。
实施例425
(3aα，4β，7β，7aα)-N-[2-[2-(4-氰基-1-萘基)八氢-7-甲基-1，3-二氧代4，7- 环氧-4H-异吲哚-4-基]乙基]-4-氟-N-甲基苯甲酰胺(425B)

A.4-氟-N-甲基-N-[2-(5-甲基-呋喃-2-基)-乙基]-苯甲酰胺(425A)

将NaH(60％油中的分散体，65mg，1.63mmol)分次加入至4-氟- N-[2-(5-甲基-2-呋喃基)乙基]苯甲酰胺(269mg，1.09mmol，237A)的 THF(5mL)溶液中。在气体放出停止后，滴加碘甲烷(0.14mL，2.18 mmol)。一旦HPLC分析表明反应完成50％后，则减压浓缩混合物，再 经受上述条件。在所有原料耗尽后，加入水，所得混合物用EtOAc(2 ×5mL)萃取。合并的有机层经硫酸钠干燥并减压浓缩。经快速色谱纯 化，用20％丙酮/氯仿洗脱，得到238mg(84％)的化合物425A。HPLC： 98％，2.94min(保留时间)(Phenomenex-prime S5-C18柱，4.6×50mm，用 含有0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液在4分钟内洗脱，4mL/min，于220 nm监测)，MS(ES)：m/z[M+H]＝262.38。
B.(3aα，4β，7β，7aα)-N-[2-[2-(4-氰基-1-萘基)八氢-7-甲基-1，3-二氧代- 4，7-环氧-4H-异吲哚-4-基]乙基]-4-氟-N-甲基苯甲酰胺(425B)
将化合物425A(183mg，0.75mmol)和4-(2，5-二氢-2，5-二氧代-1H- 1-基)-1-萘甲腈(174mg，0.75mmol)的苯(1mL)溶液于60℃加热15小 时。减压浓缩反应混合物，得到357mg粗制中间体。将粗制中间体(156 mg)溶于EtOAc(6mL)中，加入10％Pd/C(16mg)，并在氢气囊下将混 合物搅拌过夜。反应混合物通过硅藻土垫过滤并减压浓缩。经反相制 备型色谱纯化(YMC S5 ODS 20×100mm，在15分钟内含有0.1％TFA 的20-100％甲醇水溶液，20mL/min，于220nm监测)，得到160.3mg (72％)的化合物425B，为灰白色固体。HPLC：99％，3.23min(保留时 间)(Phenomenex-prime S5-C18柱，4.6×50mm，在4分钟内用含有0.2％ 磷酸的10-90％甲醇水溶液洗脱，4mL/min，于220nm监测)，MS(ES)： m/z[M+H]＝512.19。
实施例426
(3aα，4β，7β，7aα)-六氢-4，7-二甲基-2-[4-(2，2，2-三氟-1-羟乙基)苯基]-4，7- 环氧-1H-异吲哚-1，3(2H)-二酮(426B)

A.1-(4-氨基-苯基)-2，2，2-三氟-乙醇(426A)

按照Stewart，R.等，Can.J.Chem.58，2491-2496(1980)中所述方 法，制备化合物426A。于室温下，加入NaBH4(47mg，1.235mmol)至 对氨基三氟苯乙酮(155.7mg，0.823mmol，按照Klabunde，K.J.等，J. Org.Chem.35，1711-1712(1970)中所述方法合成)的异丙醇(3mL)溶液 中。30分钟后，反应物用磷酸盐缓冲液(pH7.2)猝灭，用水稀释并用 EtOAc(2×10mL)萃取。合并的有机层经硫酸钠干燥并减压浓缩，得 到154mg(98％)的化合物426A，为黄褐色固体。该物质不经纯化而直 接用于下一步中。HPLC：99％，0.42min(保留时间)(YMC S5 ODS柱， 4.6×50mm，用含有0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液在4分钟内洗脱，4 mL/min，于220nm监测)，MS(ES)：m/z[M+H]＝192.13。
B.(3aα，4β，7β，7aα)-六氢-4，7-二甲基-2-[4-(2，2，2-三氟-1-羟乙基)苯基]- 4，7-环氧-1H-异吲哚-1，3(2H)-二酮(426B)
将化合物426A(75.3mg，0.394)、化合物20A(51.5mg，0.262 mmol)、三乙胺(0.15mL)和硫酸镁(50mg)的甲苯(1mL)的混合物在密封 管中加热至135℃达15小时。将混合物过滤并减压浓缩。经反相制备 型色谱纯化(YMC S5 ODS 20×100mm，在15分钟内含有0.1％TFA 的20-100％甲醇水溶液，20mL/min，于220nm监测)，得到63.1mg(65％) 的化合物426B，为白色固体。HPLC：98％，2.49min(保留时 间)(Phenomenex-prime S5-C18柱，4.6×50mm，用含有0.2％磷酸的10- 90％甲醇水溶液在4分钟内洗脱，4mL/min，于220nm监测)，MS(ES)： m/z[M+H]＝370.16.
实施例427
(3aα，4β，7β，7aα)-4-[4-[2-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]氧基]乙 基]-1，3，3a，4，7，7a-六氢-7-甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基)-2- (三氟甲基)苄腈和(3aα，4α，7α，7aα)-4-[4-[2-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基 甲硅烷基]氧基]乙基]-1，3，3a，4，7，7a-六氢-7-甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧- 2H-异吲哚-2-基)-2-(三氟甲基)苄腈(427i和427ii)

将化合物204A(2.00g，8.50mmol)和4-(2，5-二氢-2，5-二氧代-1H- 吡咯-1-基)-2-三氟甲基苄腈(1.50g，5.60mmol)在苯(5.0mL)中混合，并 于60℃加热14小时，然后冷却至25℃。于40℃真空下达1小时除去 溶剂，得到粗制物质，该粗制物质经二氧化硅快速色谱纯化，用0.5％ EtOAc/CH2Cl2洗脱，得到2.0g的化合物427i和1.3g的化合物427ii， 均为浅褐色固体。化合物427i：HPLC：95％，4.200min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含有0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液在4分 钟内洗脱，4mL/min，于220nm监测)，MS(ES)：m/z507.1[M+H]+。化 合物427ii：HPLC：95％，4.20min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50 mm，用含有0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液在4分钟内洗脱，4mL/min， 于220nm监测)，MS(ES)：m/z507.1[M+H]+。
实施例428
[3aR-(3aα，4β，5β，7β，7aα)]-4-7-[2-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基] 氧基]乙基]八氢-5-羟基-4-甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基]- 2-(三氟甲基)苄腈和[3aS-(3aα，4β，5β，7β，7aα)]-4-7-[2-[[(1，1-二甲基乙基) 二甲基甲硅烷基]氧基]乙基]八氢-5-羟基-4-甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧- 2H-异吲哚-2-基]-2-(三氟甲基)苄腈(428i和428ii)

将化合物427i(1.40g，2.77mmol)和RhCl(PPh3)3(0.128g，0.14 mmol)在烧瓶中混合。然后将烧瓶抽空，充入3次氩气，然后用注射器 加入THF(3.0mL)。一旦所有颗粒溶解，则滴加儿茶酚硼烷(0.59mL， 5.54mmol)。在氩气下于25℃搅拌反应混合物30分钟，然后冷却至0 ℃。加入磷酸盐缓冲液(pH＝7，20mL)，接着加入EtOH(10mL)、30％ H2O2/H2O(2mL)。于0℃搅拌反应混合物3小时，然后用二氯甲烷(3×25 mL)萃取。合并的有机层用1N NaOH(25mL)、10％Na2SO3(25mL) 和盐水(25mL)洗涤。然后，粗制物质经浓缩和经二氧化硅快速色谱纯 化，用2％EtOAc/二氯甲烷至10％EtOAc/二氯甲烷洗脱，得到0.63g 化合物428i和428ii的外消旋混合物，为浅黄色固体。HPLC：99％，3.867 min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含有0.2％磷酸的10- 90％甲醇水溶液在4分钟内洗脱，4mL/min，于220nm监测)，MS(ES)： m/z525.1[M+H]
通过正相制备型手性HPLC，用Chiracel OD柱(5cm×50cm)，使 用含13％溶剂B(EtOH)的溶剂A(己烷)溶液洗脱，流速为50mL/min， 分离化合物428i和428ii的外消旋混合物。化合物428i在34min至38 min洗脱出来，而化合物428ii在44min至49min洗脱出来。通过手 性HPLC测定对映体过量。化合物428i：＞99％ee(12.576min(保留时 间)(Chiralcel OJ柱，4.6×250mm，用等度85％庚烷/15％MeOH/乙醇(1∶1) 洗脱，1mL/min，于220nm监测，40℃)。化合物428ii：99％ee(18.133 min(保留时间)(Chiralcel OJ柱，4.6×250mm，用等度85％庚烷/15％ MeOH/乙醇(1∶1)洗脱，1mL/min，于220nm监测，40℃)。
化合物428i和428ii的绝对构型未确定。为了使命名简化，在本 文中将化合物428i指定为具有“R”构型，而化合物428ii指定为具有 “S”构型。在本文中从化合物428i衍生的对映体纯产物被指定为具 有“R”构型，而从化合物428ii衍生的对映体纯产物被指定为具有“S” 构型。
实施例429
[3aR-(3aα，4β，5β，7β，7aα)]-4-[八氢-5-羟基-7-(2-羟乙基)-4-甲基-1，3-二 氧代-4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基]-2-(三氟尹基)苄腈和[3aS- (3aα，4β，5β，7β，7aα)]-4-[八氢-5-羟基-7-(2-羟乙基)-4-甲基-1，3-二氧代- 4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基]-2-(三氟甲基)苄腈(429i和429ii)

将化合物428i(180mg，0.34mmol)溶于2％HCl/EtOH(5.0mL) 中。30分钟后，加入饱和碳酸氢钠，水层用二氯甲烷(20mL×3)萃取， 用盐水洗涤，并经硫酸钠干燥，得到135mg的化合物429i，为白色固 体。HPLC：99％，2.257min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用 含有0.2％磷酸的10-90％甲醇水溶液在4分钟内洗脱，4mL/min，于220 nm监测)，MS(ES)：m/z411.1[M+H]+。
用化合物428ii重复上述程序，以相似的收率得到所需二醇化合 物429ii。
实施例430
[3aR-(3aα，4β，5β，7β，7aα)]-4-[7-[2-[(5-氯-2-吡啶基)氧基]乙基]八氢-5- 羟基-4-甲基-1，3-氧代-4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基]-2-(三氟甲基)苄腈 (430)

将三苯膦(0.026g，0.098mmol)和DBAD(0.023g，0.098mmol)在 THF(0.5mL)中混合。让先前的混合物反应15分钟后，加入2-羟基-6- 氯吡啶(0.016g，0.100mmol)，将混合物搅拌10分钟，加入化合物429i (0.020g，0.049mmol)。于25℃搅拌反应混合物2小时，然后粗制物质 经制备型TLC纯化，用10％丙酮/氯仿洗脱，得到0.014g的化合物 430，为浅褐色固体。HPLC：100％，3.370min(保留时间)(YMC S5 ODS 柱，4.6×50mm，用含有0.1％TFA的10-90％甲醇水溶液在4分钟内洗 脱，4mL/min，于220nm监测)，MS(ES)：m/z522.08[M+H]+。
实施例431
[3aS-(3aα，4β，5β，7β，7aα)]-4-[7-[2-[(5-氯-2-吡啶基)氧基]乙基]八氢-5-羟 基-4-甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基]-2-(三氟甲基)苄腈 (431)

将三苯膦(0.026g，0.098mmol)和DBAD(0.023g，0.098mmol)在 THF(0.5mL)中混合。让先前的混合物反应15分钟后，加入2-羟基-6- 氯吡啶(0.016g，0.100mmol)，将混合物搅拌10分钟，加入化合物429ii (0.020g，0.049mmol)。于25℃搅拌反应混合物2小时，然后粗制物质 经制备型TLC纯化，用10％丙酮/氯仿洗脱，得到0.015g的化合物 431，为浅褐色固体。HPLC：100％，3.370min(保留时间)(YMC S5 ODS 柱，4.6×50mm，用含有0.1％TFA的10-90％甲醇水溶液在4分钟内洗 脱，4mL/min，于220nm监测)，MS(ES)：m/z522.08[M+H]+。
实施例432
(3aα，4β，7β，7aα)-2-(4-氰基-1-萘基)八氢-N-(2-羟基苯基)-7-甲基-1，3-二 氧代-4，7-环氧-4H-异吲哚-4-丁酰胺(432)

将化合物262(0.100g，0.239mmol)溶于DMF(无水，1.5mL)中， 加入BOP(0.211g，0.478mmol)，然后加入2-氨基苯酚(0.052g，0.478 mmol)和N-甲基吗啉(0.052mL，0.478mmol)。在氩气下于25℃搅拌反 应混合物3小时，然后粗制物质经反相制备型HPLC纯化(YMC S5 ODS20×100mm，在15分钟内含有0.1％TFA的20-100％甲醇水溶液， 20mL/min，于220nm监测)，得到0.060g的化合物432，为浅褐色固 体。HPLC：100％，3.037min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm， 用含有0.1％TFA的10-90％甲醇水溶液在4分钟内洗脱，4mL/min，于 220nm监测)，MS(ES)：m/z510.34[M+H]+。
实施例433
(3aα，4β，7β，7aα]-4-[4-[3-(2-苯并_唑基)丙基]八氢-7-甲基-1，3-二氧代- 4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基]-1-萘甲腈(433)

将三苯膦(0.031g，0.118mmol)和DBAD(0.027g，0.118mmol)在 THF(0.5mL)中混合。让上述混合物反应15分钟后，加入化合物432 (0.030g，0.059mmol)。于25℃搅拌反应混合物2小时，然后粗制物质 经反相制备型HPLC纯化(YMC S5-ODS 20×100mm，在15分钟内含 有0.1％TFA的20-100％甲醇水溶液，20mL/min，于220nm监测)，得 到0.018g的化合物433，为浅褐色固体。HPLC：100％，3.357min(保 留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含有0.1％TFA的10-90％甲 醇水溶液在4分钟内洗脱，4mL/min，于220nm监测)，MS(ES)：m/z 492.37[M+H]+。
实施例434
(3aα，4β，5β，7β，7aα)-4-[4-乙基八氢-5-羟基-7-(2-羟乙基)-1，3-二氧代- 4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基]-1-萘甲腈(434C)

A.叔丁基-[2-(5-乙基-呋喃-2-基)-乙氧基]-二甲基-硅烷(434A)

加入咪唑(255mg，3.75mmol)和TBSCl(414mg，2.75mmol)至 245A(350mg，2.5mmol)的DMF(4mL)溶液中。于室温搅拌混合物15 小时，然后加入另外100mg(0.66mmol)TBSCl，以使反应完成。再搅 拌1小时后，反应混合物用乙醚(100mL)稀释，并用水(20mL)、1N HCl (20mL)、水(20mL)和盐水(20mL)洗涤。有机层经硫酸钠干燥并将减 压浓缩，得到509mg的化合物434A(80.3％)，为黄色油状物。
B.(3aα，4β，7β，7aα)-4-[4-[2-[[(1，1-二甲基乙基)-二甲基甲硅烷基]氧基] 乙基]-4-乙基-1，3，3a，4，7，7a-六氢-1，3-二氧代-4，7-环氧-2H-异吲哚-2- 基]-1-萘甲腈(434B)

将化合物434A(509mg，2.00mmol)和4-(2，5-二氢2，5-二氧代-1H- 1-基)-1-萘甲腈(498mg，2.00mmol)的苯(2mL)溶液于60℃加热18小 时。减压浓缩反应混合物，得到992mg(99％)粗制化合物434B，该化 合物不经进一步纯化而直接用于下一步中。
C.(3aα，4β，5β，7β，7aα)-4-[4-乙基八氢-5-羟基-7-(2-羟乙基)-1，3-二氧代- 4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基]-1-萘甲腈(434C)
将化合物434B(992mg，1.98mmol)和RhCl2(PPh3)3(183mg，0.198 mmol)的混合物抽空，充入氩气(3×)。加入THF(20mL)，一旦所有颗 粒溶解，则缓慢滴加儿茶酚硼烷(0.42mL，3.96mmol)。当通过HPLC 测定产物生成停止后，将反应混合物冷却至0℃，用磷酸盐缓冲液(34 mL，pH7.2)猝灭，然后加入EtOH(19mL)和过氧化氢(2.9mL，30％水溶 液)。2小时后，再加入磷酸盐缓冲液(6.8mL，pH7.2)、EtOH(3.8mL) 和过氧化氢(0.6mL)。于室温下搅拌反应混合物3小时。一旦硼酸盐中 间体耗尽后，混合物用二氯甲烷(300mL)萃取，合并的有机层用1N NaOH、10％亚硫酸氢钠水溶液和盐水洗涤。合并的有机层经硫酸钠干 燥。经硅胶快速色谱纯化，用10％MeOH/二氯甲烷洗脱，得到75mg (9.3％)的化合物434C，为灰色固体。HPLC条件：97％，2.43min (Phenomenex-prime S5-C18柱，4.6×50mm，含有0.2％磷酸的10％-90％ 甲醇水溶液的4分钟梯度，于220nm检测)。MS(ES)：m/z407.18 [M+H]+。
实施例435
(3aα，4β，5β，7β，7aα)]-4-[7-[2-(4-氰基苯氧基)乙基]-4-乙基八氢-5-羟基- 1，3-二氢代-4，7-环氢-2H-异吲哚-2-基]-1-萘甲腈(435)

加入DBAD(39.6mg，0.172mmol)至PPh3(45.1mg，0.172mmol)的 THF(0.8mL)溶液中。搅拌10分钟后，加入4-氰基苯酚(20.5mg，0.172 mmol)，再将反应混合物搅拌5分钟。加入化合物434C(25.0mg，0.062 mmol)，于室温下搅拌混合物2小时。减压浓缩反应物。经制备型TLC 纯化，用10％丙酮/氯仿洗脱，得到18.1mg(0.036mmol，57.6％)的化合 物435。HPLC条件：96％，3.15min(YMC S5 ODS 4.6×50mm，含有 0.2％磷酸的10％-90％甲醇水溶液的4分钟梯度，于220nm检测)。MS (ES)：m/z508.14[M+H]+。
实施例436
(3aα，4β，7β，7aα)-2-(4-氰基-1-萘基)八氢-N-(2-羟基苯基)-7-甲基-1，3-二 氧代-4，7-环氧-4H-异吲哚-4-乙酰胺(436)

将化合物234B(0.100g，0.256mmol)溶于DMF(无水，1.5mL)中， 加入BOP(0.225g，0.51mmol)，然后加入2-氨基苯酚(0.056g，0.51 mmol)和N-甲基吗啉(0.056mL，0.51mmol)。在氩气下于25℃搅拌反应 混合物3小时，然后粗制物质经反相制备型HPLC纯化(YMC S5 ODS 20×100mm，在15分钟内含有0.1％TFA的20-100％甲醇水溶液，20 mL/min，于220nm监测)，得到0.078g的化合物436，为浅褐色固体。 HPLC：100％，3.037min(保留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含 有0.1％TFA的10-90％甲醇水溶液在4分钟内洗脱，4mL/min，于220 nm监测)，MS(ES)：m/z482.34[M+H]+。
实施例437
(3aα，4β，7β，7aα)-4-[4-(2-苯并_唑基甲基)八氢-7-甲基-1，3-二氧代-4，7- 环氧-2H-异吲哚-2-基]-1-萘甲腈(437)

将三苯膦(0.082g，0.312mmol)和DBAD(0.072g，0.312mmol)在 THF(0.5mL)中混合。让上述混合物反应15分钟后，加入化合物436 (0.075g，0.156mmol)。于25℃搅拌反应混合物2小时，然后粗制物质 经反相制备型HPLC纯化(YMC S5 ODS 20×100mm，在15分钟内含 有0.1％TFA的20-100％甲醇水溶液，20mL/min，于220nm监测)，得 到0.052g的化合物437，为浅褐色固体。HPLC：100％，3.443min(保 留时间)(YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含有0.1％TFA的10-90％甲 醇水溶液在4分钟内洗脱，4mL/min，于220nm监测)，MS(ES)：m/z 464.18[M+H]+。
实施例438
(3aα，4β，7β，7aα)-六氢-4，7-二甲基-2-[4-[2，2，2-三氟-1-羟基-1-(三氟甲基) 乙基]苯基]-4，7-环氧-1H-异吲哚-1，3(2H)-二酮(438)

将2-(4’-氨基苯基)-1，1，1，3，3，3-六氟-2-丙醇(95.7mg，0.369)、化合 物20A(48.3mg，0.246mmol)、三乙胺(0.15mL)和硫酸镁(50mg)在甲 苯(1mL)中的混合物在密封管内加热至135℃过夜。将混合物过滤并减 压浓缩。经反相制备型色谱纯化(YMC S5 ODS 20×100mm，在15分 钟内含有0.1％TFA的20-100％甲醇水溶液，20mL/min，于220nm监 测)，得到44.0mg(41％)的化合物438，为白色固体。HPLC：99％，3.10 min(保留时间)(Phenomenex-prime S5-C18柱，4.6×50mm，用含有0.2％ 磷酸的10-90％甲醇水溶液在4分钟内洗脱，4mL/min，于220nm监测)， MS(ES)：m/z[M+H]＝438.14。
实施例439-454
采用与上述方法类似的方法，制备本发明另外的化合物。实施例 439-454的化合物具有以下结构(L为一个键)：

其中G、R7、化合物名称、保留时间、分子量和所用的方法在表9中 叙述。以下化合物的绝对构型并未确定。为了使命名简化，化合物243Di 在本文中被指定为具有“S”构型，而化合物243Dii在本文中被指定 为具有“R”构型。由化合物243Di衍生的对映体纯产物在本文中被 指定为具有“S”构型，由化合物243Dii衍生的对映体纯产物在本文 中被指定为具有“R”构型。同样，化合物428i在本文中被指定为具 有“S”构型，而化合物428ii在本文中被指定为具有“R”构型。由 化合物428i衍生的对映体纯产物在本文中被指定为具有“S”构型， 由化合物428ii衍生的对映体纯产物在本文中被指定为具有“R”构型。
用来测定表9化合物保留时间的色谱技术如下：LCMS＝YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含有0.1％TFA的10-90％MeOH/H2O在4 分钟内洗脱；4mL/min，于220nm监测。LCMS*＝YMC S5 ODS柱， 4.6×50mm，用含有0.1％TFA的10-90％MeOH/H2O在2分钟内洗脱； 4mL/min，于220nm监测。LC＝YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用 含有0.2％磷酸的10-90％MeOH/H2O在4分钟内洗脱，4mL/min，于 220nm监测。表9中所列化合物的分子量通过MS(ES)按公式m/z测 定。
表9





实施例455-457
采用与上述方法类似的方法，制备本发明另外的化合物。实施例 455-457的化合物具有以下结构(L为一个键)：

其中G、R7、化合物名称、保留时间、分子量和所用的方法在表10中 叙述。以下化合物的绝对构型并未确定。为了使命名简化，化合物238i 在本文中被指定为具有“R”构型，而化合物238ii在本文中被指定为 具有“S”构型。由化合物238i衍生的对映体纯产物在本文中被指定 为具有“R”构型，由化合物238ii衍生的对映体纯产物在本文中被指 定为具有“S”构型。
用来测定表10化合物保留时间的色谱技术如下：LCMS＝YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用含有0.1％TFA的10-90％MeOH/H2O在4 分钟内洗脱；4mL/min，于220nm监测。LCMS*＝YMC S5 ODS柱， 4.6×50mm，用含有0.1％TFA的10-90％MeOH/H2O在2分钟内洗脱； 4mL/min，于220nm监测。LC＝YMC S5 ODS柱，4.6×50mm，用 含有0.2％磷酸的10-90％MeOH/H2O在4分钟内洗脱，4mL/min，于 220nm监测。表10中所列化合物的分子量通过MS(ES)按公式m/z测 定。
表10

实施例458
(3aα，4β，5β，7β，7aα)-4-(八氢-5-羟基-4，7-二甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧- 2H-异吲哚-2-基)-2-(三氟甲基)苄腈和(3aα，4β，5α，7β，7aβ)-4-(八氢-5-羟 基-4，7-二甲基-1，3-二氧代-4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基)-2-(三氟甲基)苄 腈(221B和222D)

通过生物转化，将化合物20B转化为化合物221B和222D(也作 为化合物221B和222D合成)。
用东方拟无枝酸菌(Amycolatopsis orientalis)(ATCC 43491)将化合 物20B羟基化。用来自冷冻小瓶的1ml培养物接种500mL锥形瓶中 的100ml培养基，将烧瓶于28℃、200rpm培养3天。用10mL一份 的这种培养物接种500mL锥形瓶中的100ml培养基，将烧瓶于28℃、 200rpm培养1天。将10mL的所述1天培养物分配到3个50ml烧瓶 的每个烧瓶中。向每种培养物中加入化合物20B(3mg，0.1mL甲醇溶 液)，继续培养3天。每个烧瓶中的培养肉汤用20mL乙酸乙酯萃取， 将合并的乙酸乙酯萃取液于40℃氮气流下蒸发至干。将残余物溶于1.2 mL甲醇中，通过HPLC、LC/MS和LC/NMR分析。该溶液含有2.5mg 剩余的化合物20B、1.6mg的化合物221B和1.3mg的化合物222D。 MS和NMR分析结果与以上所示结构一致。
培养基：0.5％ toasted nutrisoy，2％葡萄糖，0.5％酵母膏，0.5％ K2HPO4，0.5％NaCl，用HCl调至pH7(R.V.Smith和J.P.Rosazza， Arch.Biochem.Biophys.，161，551-558(1974)
HPLC分析
柱子：Phenomenex Luna C18，150×2mm，5μ
流动相：溶剂A：95％20mM乙酸铵pH5.1，5％乙腈
溶剂B：95％乙腈，5％20mM乙酸铵pH5.1
线性梯度为25分钟内从100％溶剂A至5％溶剂A，然后以100％溶 剂A平衡8分钟。
温度：40℃
检测：250nm
注射体积：1μl
保留时间：化合物20B，20.8min；化合物221B，16.5min；化合物222D， 17.8min
HPLC条件
用手性HPLC条件来分离对映体，而用非手性HPLC条件来分离 化合物20B的羟基化类似物的非对映体(即化合物221B和222D以及 化合物254i和254ii)。
在手性HPLC条件下使用两种方法，用反相(RP)进行生物样品中 生物转化产物的手性分析，而用正相(NP)进行非生物样品的分析。 手性RP-HPLC条件
柱子：         CHIRALPAK AD-R
               4.6×250mm，10μ
温度：         40℃
注射体积：     5μL或20
流动相：       A：MeCN
               B：H2O
               等度，30％A，18min
流速：         1mL/min
UV检测：       242nm
手性NP-HPLC条件
柱子：            CHIRALPAK AD
                  4.6×250mm，10μ
温度：            25℃
注射体积：        5μL或20μL
流动相：          A：庚烷
                  B：MeOH/乙醇(1∶1)
                  等度，80％A，20min
流速：            1mL/min
UV检测：          242nm
在这些条件下，化合物254i和254ii的保留时间分别为8.5分钟和9.85 分钟。
用反相HPLC来分离非对映体化合物221B和222D：
流动相：
溶剂A：95％20mM乙酸铵pH5.1，5％乙腈
溶剂B：95％乙腈，5％20mM乙酸铵pH5.1
梯度：
线性梯度在25分钟内从100％溶剂A至5％溶剂A，然后以100％ 溶剂A平衡8分钟。总洗脱时间为36分钟。
流速：
0.2ml/min
柱子：
Phenomenex Luna5微米C18150×2.0mmid
检测：
于242nm下进行UV检测
在这些条件下，化合物221B和222D的保留时间分别为18.983min 和20.362min。
实施例459
(3aα，4β，5β，7β，7aα)-4-[八氢-5-羟基-7-[2-(羟乙基)-4-甲基-1，3-二氧代- 4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基]-1-萘甲腈(459)

通过生物转化，将化合物223A和331转化为化合物459。
化合物223A的微生物羟基化
1.反应
向含有100ml转化培养基的500mL烧瓶中，加入一个冷冻小瓶 (约2m1)的灰色链霉菌(Streptomyces griseus)ATCC 10137。转化培养基 如下制备：向2L塑料烧杯中加入20g葡萄糖、5.0g酵母膏、5.0g 大豆粉、5.0g氯化钠、5.0g磷酸氢二钾和1L去离子水，将混合物于 室温搅拌3-30分钟。然后用1N HCl或1N NaOH将混合物的pH调 至7.0。将所得的混合物分装到500ml烧瓶(每个烧瓶100ml)。用 Bio/Wrap覆盖烧瓶，于121℃高压灭菌15分钟，在使用之前冷却至室 温。
培养物于28℃、250rpm温育24小时。将10mL所得培养物转移 至50mL烧瓶中，向其中加入含1mg化合物223A的0.2ml乙醇。将 烧瓶于28℃、250rpm温育24小时，用EtOAc(10ml)萃取反应培养物。 EtOAc萃取液在氮气下干燥，将残余物溶于1ml MeOH(反应萃取 液)。
2.产物分析
HPLC：
将10μL反应萃取液中注射到HPLC柱(YMC ODS-AQ C-18柱， 150×6.0mm i.d.)中。该柱用1mM HCl的水/CH3CN溶液以1.2mL/min 的流速洗脱：8分钟内30-60％CH3CN，0.5分钟内60-85％CH3CN，85％ CH3CN1分钟，0.5分钟内85-30％CH3CN。于300nm监测流出液。观 测到面积比为约1∶1的两个主峰，它们分别具有与化合物459和331 相同的UV谱，保留时间分别为4.55min和7.23min，与化合物459(4.53 min)和化合物331(7.2min)的真正样品的保留时间匹配。
LC/MS
反应萃取液：两个UV主峰。
峰1，Tr4.68min：391[M+H]+，343，319，303，289
峰2，Tr5.35min：375[M+H]+，345
真正样品
化合物459，Tr4.82min：391[M+H]+，343，319，289
化合物331，Tr5.48min：375[M+H]+，345
化合物331的微生物羟基化
向含有100ml转化培养基的500mL烧瓶中，加入一个冷冻小瓶 (约2ml)的灰色链霉菌(Streptomyces griseus)ATCC 10137。转化培养基 如下制备：向2L塑料烧杯中加入20g葡萄糖、5.0g酵母膏、5.0g 大豆粉、5.0g氯化钠、5.0g磷酸氢二钾和1L去离子水，将混合物于 室温搅拌3-30分钟。然后用1N HCl或1N NaOH将混合物的pH调 至7.0。将所得的混合物分装到500ml烧瓶(每个烧瓶100ml)。用 Bio/Wrap覆盖烧瓶，于121℃高压灭菌15分钟，在使用之前冷却至室 温。
培养物于28℃、250rpm培养3天。将1mL所得培养物加入至含 有100ml转化培养基的500mL烧瓶中，将烧瓶于28℃、250 rpm温育 24小时。将10mL所得培养物转移至50mL烧瓶中，向其中加入含1mg 化合物331的0.2ml乙醇。将烧瓶于28℃、250rpm温育23小时。HPLC 分析表明，反应培养物中化合物459与化合物331的峰面积比约为 1.1/1。
实施例460
(1aα，2β，2aα，5aα，6βb，6aα)-4-[2-[2-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基] 氧基]乙基]八氢-6-甲基-3，5-二氧代-2，6-环氧-4H-环氧乙烯并[f]异吲哚 -4-基]-1-萘甲腈(460)

将化合物231A(2.00g，4.10mmol)溶于二氯甲烷(40ml)中，并冷 却至0℃。加入mCPBA(2.36g，8.20mmol)。然后将反应混合物温热至 室温，在氩气下搅拌18小时，然后加入10％Na2SO3(25ml)和饱和碳 酸氢钠(25ml)。搅拌20分钟后，分离有机层，水层用二氯甲烷(3×50ml) 萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩，得到2.0g化 合物460，为浅黄色固体。HPLC：99％，4.00min(保留时 间)(Phenomenex-prime S5-C18柱，4.6×50mm，用含有0.2％磷酸的10- 90％甲醇水溶液在4分钟内洗脱，4mL/min，于220nm监测)，MS (ES)：m/z[M+H]＝505.19
实施例461
[3aR-(3aα，4β，7β，7aα)]-4-[4-乙基八氢-7-(2-羟乙基)-1，3-二氧代-4，7-环 氧-2H-异吲哚-2-基]-1-萘甲腈和[3aS-(3aα，4β，7β，7aα)]-4-[4-乙基八氢- 7-(2-羟乙基)-1，3-二氧代-4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基]-1-萘甲腈(461i和 461ii)

通过正相制备型手性HPLC，用Chiracel AD柱(5cm×50cm)，用 含20％溶剂B(50％MeOH/EtOH)的溶剂A(庚烷)，以50mL/min的流 速，分离化合物245C的外消旋混合物。化合物461i在80min至100min 洗脱，而化合物461ii在125min至150min洗脱。
化合物461i和461ii的绝对构型未确定。为了使命名简化，在本 文中将化合物461i指定为具有“R”构型，而化合物461ii指定为具有 “S”构型。在本文中从化合物461i衍生的对映体纯产物被指定为具 有“R”构型，而从化合物461ii衍生的对映体纯产物被指定为具有“S” 构型。
实施例462
[3aR-(3aα，4β，7β，7aα)]-4-[4-[2-(4-氰基苯氧基)乙基]-7-乙基八氢-1，3-二 氧代-4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基]-1-萘甲腈(462)

加入DBAD(29.5mg，0.128mmol)至PPh3(33.6mg，0.128mmol)的 THF(0.5mL)溶液中。搅拌10分钟后，加入4-氰基苯酚(15.2mg，0.128 mmol)，将反应混合物再搅拌5分钟。加入化合物461i(18.3mg，0.047 mmol)，将混合物于室温搅拌2小时。减压浓缩反应物。经硅胶快速色 谱纯化，用40％EtOAc/己烷洗脱，得到16.9mg(0.034mmol，73.2％) 的化合物462。HPLC条件：98％，3.64min(YMC S5 ODS 4.6×50mm， 含有0.2％磷酸的10％-90％甲醇水溶液的4分钟梯度，于220nm检 测)。MS(ES)：m/z492.23[M+H]+。
实施例463
[3aS-(3aα，4β，7β，7aα)]-4-[4-[2-(4-氰基苯氧基)乙基]-7-乙基八氢-1，3-二 氧代-4，7-环氧-2H-异吲哚-2-基]-1-萘甲腈(463)

加入DBAD(29.5mg，0.128mmol)至PPh3(33.6mg，0.128mmol)的 THF(0.5mL)溶液中。搅拌10分钟后，加入4-氰基苯酚(15.2mg，0.128 mmol)，将反应混合物再搅拌5分钟。加入化合物461ii(18.3mg，0.047 mmol)，将混合物于室温搅拌2小时。减压浓缩反应物。经硅胶快速色 谱纯化，用40％EtOAc/己烷洗脱，得到18.1mg(0.037mmol，78.4％) 的化合物463。HPLC条件：97％，3.63min(YMC S5 ODS 4.6×50mm， 含有0.2％磷酸的10％-90％甲醇水溶液的4分钟梯度，于220nm检 测)。MS(ES)：m/z492.17[M+H]+。