用于增加肌肉量的食品组合物、肌肉量增加剂、运动障碍综合征治疗剂、少肌症治疗剂、运动功能维持剂、肌萎缩相关基因表达抑制剂、肌肉蛋白质分解抑制剂、肌萎缩预防剂、肌肉合成相关基因表达促进剂及肌肉合成促进剂
阅读：592发布：2020-05-12
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1.用于增加肌肉量的食品组合物，其特征在于含有来源于裸藻的物质作为活性成分。
2.根据权利要求1所述的用于增加肌肉量的食品组合物，其特征在于所述来源于裸藻的物质为裸藻。
3.根据权利要求1或2所述的用于增加肌肉量的食品组合物，其特征在于用于增加股四头肌的量。
4.肌肉量增加剂，其特征在于含有来源于裸藻的物质作为活性成分。
5.用于预防少肌症、用于改善少肌症、用于预防运动障碍综合征或用于改善运动障碍综合征的食品组合物，其含有来源于裸藻的物质作为活性成分。
6.运动障碍综合征预防剂，其特征在于含有来源于裸藻的物质作为活性成分。
7.运动障碍综合征治疗剂，其特征在于含有来源于裸藻的物质作为活性成分。
8.少肌症预防剂，其特征在于含有来源于裸藻的物质作为活性成分。
9.少肌症治疗剂，其特征在于含有来源于裸藻的物质作为活性成分。
10.运动功能维持剂，其特征在于含有来源于裸藻的物质作为活性成分。
11.运动功能改善剂，其特征在于含有来源于裸藻的物质作为活性成分。
12.用于抑制肌萎缩相关基因表达、用于抑制肌肉蛋白质分解、用于预防肌萎缩、用于促进肌肉合成相关基因表达或用于促进肌肉合成的食品组合物，其含有来源于裸藻的物质作为活性成分。
13.肌萎缩相关基因表达抑制剂，其特征在于含有来源于裸藻的物质作为活性成分，用于抑制肌萎缩相关基因的表达。
14.肌肉蛋白质分解抑制剂，其特征在于含有来源于裸藻的物质作为活性成分，用于抑制肌肉蛋白质的分解。
15.肌萎缩预防剂，其特征在于含有来源于裸藻的物质作为活性成分，用于预防肌肉的萎缩。
16.肌肉合成相关基因表达促进剂，其特征在于含有来源于裸藻的物质作为活性成分，用于促进肌肉合成相关基因的表达。
17.肌肉合成促进剂，其特征在于含有来源于裸藻的物质作为活性成分，用于促进肌肉合成。
用于增加肌肉量的食品组合物、肌肉量增加剂、运动障碍综合
成相关基因表达促进剂及肌肉合成促进剂
技术领域
[0001] 本发明涉及用于增加肌肉量的食品组合物、肌肉量增加剂、运动障碍综合征治疗剂、少肌症治疗剂及运动功能维持剂、肌萎缩相关基因表达抑制剂、肌肉蛋白质分解抑制剂、肌萎缩预防剂、肌肉合成相关基因表达促进剂及肌肉合成促进剂。
背景技术
[0002] 近年来，伴随年龄增长、运动不足产生的肌肉力量的降低、肌肉量减少相关而产生的症状的“少肌症”、“运动障碍综合征”大受瞩目。
[0003] 少肌症根据欧洲老年人少肌症工作组(European Working Group on Sarcopenia in Older People(EWGSOP))定义为除了肌肉量的降低以外，出现肌肉质的降低，即肌肉力量的降低或身体机能的降低(非专利文献1)。
[0005] 少肌症指由于年龄增长、疾病、运动不足、营养不良等而引起的肌肉量减少所伴随的肌肉力量降低，身体机能的降低，运动障碍综合征指由于年龄增长、运动不足等而引起在肌肉、骨骼等运动器官部位发生损害，对日常生活造成困难的状态。即，认为运动障碍综合征是包括运动器官全面症状的概念，与此相对，少肌症是对所述运动器官之中的尤其是肌肉量、肌肉力量、身体机能进行关注的症状。
[0006] 肌肉增强是预防、改善运动障碍综合征、少肌症的方法之一。用于增强肌肉的肌肉增强剂已知有类固醇激素，但其被报告产生循环系统疾病等副作用，已进行了源自天然物质的没有副作用的原料的探索。例如，报告称属于鳕形目的鱼的鱼肉蛋白质(专利文献1)，苹果汁压榨残渣及迷迭香提取物(专利文献2)具有使肌肉量增加的作用。
[0008] 裸藻作为多种营养素均衡摄入的补充剂而使用，其具有59种营养素，这59种营养素属于维生素、矿物质、氨基酸、不饱和脂肪酸等人类生存所需的大部分必需营养素，并且提出其可以用作不能摄取必需营养素的贫困地区的食品供给源。
[0009] 裸藻是食物链的初级生产者，由于它被捕食者捕食，以及光、温度条件、搅拌速度等培养条件高于其他微生物等原因，因此裸藻难以大规模的培养。近年来，本发明的发明人进行了深入的研究，由此已经建立了大规模培养的技术，并开辟了大规模供应裸藻及从裸藻中提出裸藻淀粉等大量供给来源于裸藻的物质的途径。
[0010] 裸藻是一种独特的生物，其具有进行鞭毛运动的动物特性，同时具有作为植物的叶绿体植物并进行光合作用，可以期待裸藻本身和来源于裸藻的物质具有许多功能。
[0011] 因此，期望开发一种可以大量供给的裸藻和来源裸藻的物质的利用方法。
[0012] 现有技术文献
[0013] 专利文献
[0014] 专利文献1：日本专利第6109909号公报
[0015] 专利文献2：日本专利第5884112号公报
[0016] 非专利文献
[0017] 非专利文献1：神崎恒一，“少肌症的定义和诊断方法”，日本医事新报，No.4677，pp.22-26(2013)
[0018] 非专利文献2：公益社团法人日本整形外科学会，“运动障碍综合征”，运动障碍综合征小册子2015年度版
发明内容
[0019] 发明要解决的问题
[0020] 本发明是鉴于上述问题进行的，本发明的目的在于提供可以日常持续摄取，有效使肌肉量增加，能够进行运动障碍综合征、少肌症的治疗、预防和改善的用于增加肌肉量的食品组合物、肌肉量增加剂、运动障碍综合征治疗剂、少肌症治疗剂、运动功能维持剂、肌萎缩相关基因表达抑制剂、肌肉蛋白质分解抑制剂、肌萎缩预防剂、肌肉合成相关基因表达促进剂及肌肉合成促进剂。
[0021] 解决问题的方法
[0022] 本发明人为了解决上述问题进行了深入研究，结果发现，裸藻具有使肌肉量增加的作用、抑制肌萎缩的作用、抑制肌肉蛋白质的分解的作用，促进肌肉合成的作用，从而完成了本发明。
[0023] 因此，根据本发明，利用特征在于含有来源于裸藻的物质作为活性成分的用于增加肌肉量的食品组合物，上述问题得以解决。
[0024] 此时，上述来源于裸藻的物质可以为裸藻。
[0025] 此时，其可以为用于使股四头肌的量增加的用于增加肌肉量的食品组合物。
[0026] 另外，根据本发明，利用特征在于含有来源于裸藻的物质作为活性成分的肌肉量增加剂，上述问题得以解决。
[0027] 另外，根据本发明，利用含有来源于裸藻的物质作为活性成分的用于预防少肌症、用于改善少肌症、用于预防运动障碍综合征或用于改善运动障碍综合征的食品组合物，上述问题得以解决。
[0028] 另外，根据本发明，利用特征在于含有来源于裸藻的物质作为活性成分的运动障碍综合征预防剂、运动障碍综合征治疗剂、少肌症预防剂、少肌症治疗剂、运动功能维持剂及运动功能改善剂，上述问题得以解决。
[0029] 另外，根据本发明，利用含有来源于裸藻的物质作为活性成分的用于抑制肌萎缩相关基因表达、用于抑制肌肉蛋白质分解、用于预防肌萎缩、用于促进肌肉合成相关基因表达或用于促进肌肉合成的食品组合物，上述问题得以解决。
[0030] 另外，根据本发明，利用特征在于含有来源于裸藻的物质作为活性成分的肌萎缩相关基因表达抑制剂、肌肉蛋白质分解抑制剂、肌萎缩预防剂、肌肉合成相关基因表达促进剂及肌肉合成促进剂，上述问题得以解决。
[0031] 发明的效果
[0032] 根据本发明，可以提供新型用于增加肌肉量的食品组合物、肌肉量增加剂、运动障碍综合征治疗剂、少肌症治疗剂、运动功能维持剂、肌萎缩相关基因表达抑制剂、肌肉蛋白质分解抑制剂、肌萎缩预防剂、肌肉合成相关基因表达促进剂及肌肉合成促进剂。
[0033] 本发明的用于增加肌肉量的食品组合物、肌肉量增加剂、运动障碍综合征治疗剂、少肌症治疗剂、运动功能维持剂、肌萎缩相关基因表达抑制剂、肌肉蛋白质分解抑制剂、肌萎缩预防剂、肌肉合成相关基因表达促进剂及肌肉合成促进剂，由于至今没有副作用报告，具备符合食品卫生法水平的安全性的裸藻作为活性成分，因此能够长期性持续施用及持续摄取。附图说明
[0034] [图1]示出在试验1中，连续4周摄取了各试验餐时的体重变化的图。
[0035] [图2]示出在试验1的试验餐的摄取量的图。
[0036] [图3]示出试验1结束时的肝脏重量的图。
[0037] [图4]示出试验1结束时的股四头肌重量的图(Tukey检验，*p＜0.05vs. 对照组)。
[0038] [图5]示出试验2试验结束时的体重及肝脏重量的图(数据为平均值±SE，n＝6，Tukey检验，**p＜0.01vs.通常饲养组(-))。
[0039] [图6]示出试验2结束后的各肌肉重量的图(数据为平均值±SE，n＝6， Tukey检验，**p＜0.01，***p＜0.001vs.通常饲养组(-))。
[0040] [图7]示出相对于试验2结束后的通常饲养组(-)的各肌肉重量的比例的图(数据为平均值±SE，n＝6，Dunnett多重检验，p＜0.05， p＜0.01 vs.尾部悬挂组(C))。
[0041] [图8]示出试验2结束后的各肌肉中肌萎缩相关基因的表达量的图(数据为平均值±SE，n＝6，Tukey检验，*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001vs.尾部悬挂组(C))。
[0042] [图9]示出肌肉蛋白质的分解(肌萎缩)的机理的说明图。
[0043] [图10]示出试验2结束后的各肌肉中的肌肉合成相关基因的表达量的图(数据为平均值±SE，n＝6，Tukey检验，#p＜0.05vs.TS(除了C以外的3组比较：Dunnett多重检验，p＜0.05， p＜0.01vs.TS))。
[0044] [图11]示出肌肉蛋白质的合成(肌肉合成)的机理说明图。
具体实施方式
[0045] 以下，参考图1至11对本发明的实施方式进行说明。
[0046] 本实施方式涉及含有来源于裸藻的物质作为活性成分的用于增加肌肉量的食品组合物、肌肉量增加剂、运动障碍综合征治疗剂、少肌症治疗剂、运动功能维持剂、肌萎缩相关基因表达抑制剂、肌肉蛋白质分解抑制剂、肌萎缩预防剂、肌肉合成相关基因表达促进剂及肌肉合成促进剂。
[0047] <运动障碍综合征>
[0048] 运动障碍综合征(locomotive syndrome)根据日本整形外科学会定义为骨骼、关节、软骨、椎间盘、肌肉等运动器官中的任一个或多个发生损害，“站立”、“行走”等功能降低的状态(非专利文献2)。
[0049] 运动障碍综合征，也被简写为运动障碍(locomo)或称为运动障碍症候群、运动器官症候群等。
[0050] 以下，对运动障碍综合征的诊断基准进行说明(吉村典子，“运动障碍综合征的临床诊断值和患病率”，日本老年医学会杂志52卷4号，350-353 页(2015))。
[0051] (运动障碍度测试)
[0052] 作为运动障碍综合征的诊断基准之一的运动障碍度测试包括：(1)起立测试，(2)2步测试，(3)运动障碍量表25。
[0053] (1)起立测试为准备10cm、20cm、30cm、40cm的4个高度的台子，通过是否能用单脚或双脚起立而测定脚力的测试。
[0054] (2)2步测试为以尽可能大的步幅行走2步，测定2步程度的步长，除以身高而计算出2步值。根据2步值对包括下肢肌肉力量、平衡能力、柔软性等的步行能力进行评价。
[0055] (3)对运动障碍量表25而言，利用对于过去1个月期间是否有身体的疼痛、日常生活的困难所进行的25个项目的调查问卷进行评价。
[0056] 基于运动障碍度测试的判断，包括运动障碍度1和运动障碍度2这二者。
[0057] 运动障碍度1的临床判断值如下所述。
[0058] 1)起立测试：用其中一只单脚从40cm的高度无法起立
[0059] 2)2步测试：2步值低于1.3
[0060] 3)运动障碍量表25：运动障碍量表25的结果为7分以上
[0061] 将即使在上述1)～3)中有任一项符合的情况判定为“运动障碍度1”，判断为移动功能的降低已开始的状态。
[0062] 运动障碍度2的临床判断值如下所述。
[0063] 1)起立测试：用双脚从20cm的高度无法起立
[0064] 2)2步测试：2步值低于1.1
[0065] 3)运动障碍量表25：运动障碍量表25的结果为16分以上
[0066] 将即使在上述1)～3)中有任一项符合的情况判定为“运动障碍度2”，判断为移动功能的降低进展的状态。
[0067] <少肌症>
[0068] 少肌症(sarcopenia)是指伴随年龄增长的骨骼肌萎缩，伴随骨骼肌肉量及骨骼肌力的降低或身体功能的降低为特征的综合征。
[0069] 少肌症根据国家、地区等不同而提倡了多种诊断基准，但以肌肉量的降低作为必要项目，在符合肌肉力量或身体能力的降低中的任一者的情况下诊断为少肌症(葛谷雅文，“少肌症的诊断，病态，治疗”日本老年医学会杂志52卷4号，343-349页(2015))。
[0070] 以下对少肌症的诊断基准进行说明(公益财团法人长寿科学振兴财团，健康长寿网，少肌症的诊断，URL： https：//www.tyojyu.or.jp/net/byouki/sarcopenia/shindan.html)。
[0071] (基于EWGSOP的诊断基准)
[0072] 根据EWGSOP，将除了存在四肢骨骼肌肉量的降低以外，有身体功能(步行速度)的降低或肌肉力量(握力)的降低的情况诊断为少肌症。
[0073] 具体而言，将以下情况诊断为少肌症：以四肢骨骼肌肉量(ALM)为四肢的肌肉量除以身高(m)的平方的双能量X线吸收测定法(DXA)的值(kg/m2)在男性中为7.23kg/m2以下、在女性中为5.67kg/m2以下的情况作为必要条件，并且当10m的步行速度低于0.8m/秒的情况，或握力在男性中低于30kg、在女性中低于20kg的情况。
[0074] 诊断的顺序为，首先测定步行速度，在为0.8m/秒以下的情况下测定四肢骨骼肌肉量，将作为诊断基准的在男性中7.23kg/m2以下，在女性中 5.67kg/m2以下的情况诊断为少肌症，为更高值时诊断为不是少肌症。
[0075] 在步行速度比0.8m/秒更快的情况下测定握力，将在男性中为比30kg、女性中为比20kg更高值的情况诊断为不是少肌症，在为高值的情况下测定四肢骨骼肌肉量，将为诊断基准值以下的情况诊断为少肌症，为诊断基准值以上的情况诊断为不是少肌症。
[0076] (亚洲人的诊断基准)
[0077] EWGSOP的诊断基准是由欧洲的工作组制订的基准，由于欧洲人和亚洲人在体格、身体功能上存在差异，因此由针对亚洲的少肌症的工作组，亚洲少肌症工作组(ASIAN working Group FOR SARCOPENIA(AWGS)) 制订了面向亚洲人的诊断基准。在基于AWGS的诊断基准中，与EWGSOP 的诊断基准在握力、肌肉量的基准上有所不同。
[0078] 诊断为少肌症的握力的基准在男性中设为低于26kg，女性中为低于 18kg，肌肉量的基准在男性中设为7kg/m2以下(DXA值，BIA值)，在女性中为5.4kg/m2以下(DXA值)，5.7kg/m2以下(BIA值)。
[0079] (日本人的诊断基准)
[0080] EWGSOP的诊断基准是以欧美人的老年人为基准的，由于日本人与欧美人即便是老年人中也有体格、生活习惯的差异，因此，由日本国立长寿医疗研究中心老龄化相关的长期纵向流行病学研究(NILS-LSA)制订了适合日本人的老年人的少肌症的简易基准方案。
[0081] 在基于NILS-LSA的诊断基准中，将以下情况诊断为少肌症：当65 岁以上的老年人的步行速度低于1m/秒，或者握力在男性中低于25kg、在女性中低于20kg的情况下，并且BMI值(体重指数，以体重相对于身高的平方的比表示体格的指数)低于18.5或者小腿围低于30cm的情况。
[0082] 当步行速度、握力为基准值以上时为正常。虽然步行速度、握力为基准值以下但BMI、小腿围为基准值以上时，则诊断为是脆弱老年人但不是少肌症。
[0083] <裸藻>
[0084] 在本实施方式中，“裸藻”包括在动物学、植物学的分类中被分类于裸藻属(Euglena)的微生物、其变种、其变异种的全部。
[0085] 这里，裸藻属(Euglena)的微生物是指在动物学中属于原生动物门 (Protozoa)的鞭毛纲(Mastigophorea)、植鞭亚纲(Phytomastigophorea) 的眼虫目(Euglenida)的眼虫亚目(Euglenoidina)的微生物。另一方面，裸藻属微生物在植物学中属于裸藻门(Euglenophyta)的裸藻纲 (Euglenophyceae)的裸藻目(Euglenales)。
[0086] 作为裸藻属的微生物，具体而言可列举：Euglena acus、Euglena anabaena、尾裸藻(Euglena caudata)、Euglena chadefaudii、Euglena deses、 Euglena gracilis、Euglena granulata、中型裸藻(Euglena intermedia)、Euglena mutabilis、尖尾裸藻(Euglena oxyuris)、Euglena proxima、Euglena spirogyra 、Euglena viridis、Euglena vermiformis、中型裸藻(Euglena intermedia)， Euglena piride等。
[0087] 作为裸藻细胞，可使用E.gracilis，尤其是E.gracilis Z株、E.gracilis NIES-49株等，但除此以外，也可以为E.gracilis Z株的变异株SM-ZK株 (叶绿体缺陷株)、变种var.bacillaris，源自这些种类的叶绿体的变异株等基因变异株的β-1，3-葡聚糖酶，中型裸藻(Euglena intermedia)，Euglena piride，及其它裸藻类，例如Astaia longa。
[0089] 裸藻属中包括其全部的变异株。另外，在这些变异株中，也包括通过遗传方法，例如：重组、转导、转化等得到的那些。
[0090] 在裸藻细胞的培养中，可以使用例如，添加了氮源、磷源、矿物质等营养盐类的培养液作为培养液，例如，改变的Cramer-Myers培养基((NH4)2HPO4 1.0g/L，KH2PO4 1.0g/L，MgSO4·7H2O 0.2g/l，CaCl2·2H2O 0.02g/l，Fe2(SO2)3·7H2O 3mg/l，MnCl2·4H2O 1.8mg/l，CoSO4·7H2O 1.5mg/l， ZnSO4·7H2O 0.4mg/l，Na2MoO4·2H2O 0.2mg/l，CuSO4·5H2O 0.02g/l，盐酸硫胺素(维生素B1)0.1mg/l，氰钴胺素(维生素B12)，(pH 3.5))。需要说明的是，(NH4)2HPO4也可以换成(NH4)2SO4、NH3aq。另外，除此以外，也可以使用基于裸藻生理和生物化学(北冈正三郎编，(株)学会出版中心)的记载制备的公知Hutner培养基、Koren-Hutner培养基。
[0091] 培养液的pH优选为2以上，并且其上限优选为6以下，更优选为4.5 以下。通过将pH设定为酸性，光合微生物可以比其他微生物的生长更具有优势，从而可以抑制污染。
[0092] 裸藻细胞的培养可以通过直接利用太阳光的开放池塘方式进行；也可以利用集光方式进行，其通过光纤等对由光收集装置收集的太阳光进行输送，并照射培养槽进行光合作用。
[0094] 裸藻细胞的分离通过例如培养液的离心、过滤或单纯地沉降而进行。
[0095] (裸藻藻体)
[0096] 在本实施方式中，裸藻藻体可以直接使用通过离心、过滤或沉降等分离的裸藻活细胞。对裸藻活细胞而言，也可以以从培养槽收获之后原样的状态进行使用，但优选用水或生理盐水进行洗涤。另外，裸藻藻体也可以以分散于水等液体中的分散液的状态使用。在本实施方式中，优选将对裸藻活细胞进行冷冻干燥处理、喷雾干燥处理得到的裸藻的干燥藻体用作裸藻藻体。
[0097] 进一步，也可以将通过对裸藻活细胞进行超声照射处理、均质化等机械处理而得到的藻体的机械处理物用作裸藻藻体。另外，也可以将对机械处理物施以了干燥处理的机械处理物干燥物用作裸藻藻体。
[0098] <裸藻水性溶剂提取物>
[0099] 在本实施方式中，“裸藻水性溶剂提取物”是指，使用水性溶剂从裸藻提取出的提取物，优选特别是使用水作为水性溶剂，在5℃～600℃下，进行几秒～几十小时的提取而得到的裸藻水提取物或裸藻热水提取物。
[0100] 用于提取的水未必一定是蒸馏水、纯水或超纯水，可以是例如自来水或含有杂质的水，但优选不含有阻碍活性成分提取的成分。
[0101] 在本实施方式中，“水提取物”是指通过0～50℃(不包括0℃)的水得到的提取物。
[0102] 此处，“水”是指0～50℃(不包括0℃)的水。
[0103] 水的温度没有特别限制，只要不影响活性成分，且可以充分提取活性成分即可，但优选1～40℃，更优选5～35℃，特别优选是10～30℃。
[0104] 在本实施方式中，“热水提取物”是指通过水温高于50℃的水得到的提取物，也可以称为“温水提取物”。
[0106] 热水的温度没有特别限制，只要不影响活性成分，且可以充分提取活性成分即可，但优选高于50℃且为120℃以下，更优选高于50℃且为100℃以下。
[0107] 用于提取的水的pH没有特别限制，只要不影响活性成分，且可以充分提取活性成分即可，但优选为pH4～10，更优选为pH5～9，特别优选为 pH6～8。
[0108] 在本实施方式中，单独使用水作为水性溶剂，但是，在不影响活性成分，并可以充分提取活性成分的溶剂的情况下，可以选择使用一种或两种以上通常可以用于提取的溶剂。例如，可以列举：水、醇、二醇等，但不限于此。作为醇类，可列举：乙醇、甲醇、正丙醇和异丙醇等。作为二醇类可列举：丁二醇和丙二醇等。作为其他水性溶剂，可列举丙酮等。这些溶剂可以单独使用或作为水溶液使用，可以制成任意两种以上或三种以上的混合溶剂使用。
[0109] 用于提取的水性溶剂的温度为例如0℃以上，只要不影响活性成分即可，不受特别限制。可以使用沸腾状态或超临界状态的水性溶剂，但优选使用5℃～600℃的水性溶剂，并且更优选使用10℃～200℃的水性溶剂。
[0110] 因此，用于提取的水性溶剂是指，包括沸腾状态或超临界状态的水性溶剂。用于提取的水性溶剂的量，优选是能够充分溶解裸藻中含有的水溶性活性成分的量。
[0111] 提取方法没有特别限制，例如，可以通过下述方法进行提取，但不限于此，可以自由选择使用常用的提取方法。例如，以指定的时间将裸藻的藻体干燥粉末浸入水性溶剂中，然后进行离心或过滤；或者将裸藻的藻体干燥粉末加入水性溶剂中进行振荡并使其均匀分散，然后进行离心或过滤的方法等。
[0112] 另外，可以对加入裸藻后的水性溶剂进行加热来促进提取。
[0113] 裸藻的水提取可以通过如下所示的常用方法进行，但不限于此。例如，将裸藻组织和水放入容器中，并在一边进行适当搅拌或振动，一边静置指定的时间，得到的提取液可以直接用作水提取物。此外，例如，通过对如上所述的提取液进行离心，获得的上清液可以用作水提取物。此外，可以对如上所述的提取液或上清液进行浓缩，干燥以除去水分用作水提取物。为了提高提取效率并缩短提取时间，水提取可以通过向水中添加少量例如 10质量％以下的醇，优选添加乙醇来进行。
[0114] 进行水提取时的提取时间只要是提取活性成分的时间即可，没有特别限定，可以根据提取温度在几秒钟～几十小时的范围适当设定。
[0115] 用热水进行的提取可以通过如下所示的常用方法进行，但不限于此。通过在将裸藻与水一起导入至常用的提取器中，然后加热来进行提取。在使用沸水或超临界状态的水进行提取的情况下，需要使用能够承受水蒸气压力的提取器。提取时的压力可以设定为1～5000气压，优选60～400气压。
[0116] 在高温高压下进行提取的情况下，如果提取时间过长，则活性成分可能分解或可能发生化学反应。因此，当在高温高压下进行提取时，提取时间优选较短，例如为3分钟以内，更优选1分钟以内，特别优选30秒以内。
[0117] 提取的裸藻提取物可以直接用作本实施方式的肌肉量增加剂的活性成分使用，但该提取物可以进一步通过适当的分离方法(例如，分配提取、凝胶过滤、硅胶层析、反相或正相高效液相层析等)从活性较高的级分中进一步分级而使用。
[0118] 此外，可以将裸藻提取物或其级分浓缩、干燥以除去水性溶剂，其可以用作水性溶剂提取物。
[0119] <肌肉量增加剂>
[0120] 本实施方式涉及的肌肉量增加剂为将来源于裸藻的物质作为活性成分的肌肉量增加剂(肌量增加剂)。
[0121] 在所述“来源于裸藻的物质”中包括：裸藻活细胞、裸藻的干燥藻体等裸藻藻体，除此以外，裸藻的水性溶剂提取物，裸藻藻体的加工品等。
[0122] “肌肉量增加剂”是指使肌肉量(肌量)增加的药剂，与“肌量增加剂”同义。肌肉量的增加可以通过例如利用肌量计等测定肌肉量而评价。
[0123] 对作为肌肉量增加的对象的肌肉没有特别限定，优选为骨骼肌。作为骨骼肌，可列举例如：胸锁乳突肌、胸大肌、胸小肌、前锯肌、锁骨下肌、腹直肌、腹外斜肌、腹内斜肌、腹横肌、腰方肌、斜方肌、背阔肌、竖脊肌、肩胛提肌、菱形肌、三角肌、小圆肌、棘上肌、棘下肌、肩胛下肌、大圆肌、喙肱肌、肱二头肌、上臂肌、肱桡肌、肱三头肌、肘肌、旋前圆肌、旋前方肌、旋后肌、尺侧腕屈肌、桡侧腕屈肌、掌长肌、指浅屈肌、指深屈肌、拇长屈肌、桡侧腕长伸肌、桡侧腕短伸肌、尺侧腕伸肌、手指伸肌、示指伸肌、小指伸肌、拇长伸肌、拇短伸肌、拇长展肌、蚓状肌(4 根肌)、骨间掌侧肌(3根肌)、骨间背侧肌(4根肌)、小指外展肌、小指短屈肌、小指对掌肌、掌短肌、拇内收肌、拇短屈肌、拇对掌肌、拇短展肌、股直肌、股外侧肌、股中间肌、股内侧肌、髂肌、腰大肌、腰小肌、缝匠肌、耻骨肌、阔筋膜张肌、臀大肌、股二头肌、股四头肌、半腱肌、半膜肌、臀中肌、臀小肌、股薄肌、长收肌、短收肌、大收肌、深层外旋六肌(梨状肌、闭孔外肌、闭孔内肌、股方肌、上孖肌、下孖肌)、腓肠肌、比目鱼肌、膝窝肌、胫骨后肌、趾长屈肌、踇长屈肌、跖肌、胫骨前肌、腓骨长肌、腓骨短肌、第三腓骨肌、踇长伸肌、趾长伸肌等。
[0124] 股四头肌参与膝关节的伸展、股关节的弯曲，具体而言为伸开膝盖而起立的动作、步行动作、跑动动作。因此，如果股四头肌的肌肉量增加，则起立、步行、跑动等动作发生提升，可以预防、改善运动障碍综合征、少肌症。
[0125] 来源于裸藻的物质由于具有使肌肉量增加的作用，因此可用作肌肉增强剂。“肌肉增强剂”是指，增强肌肉的药剂，肌肉的增强可以通过例如：肌肉量、肌肉力量进行评价。
[0126] “增强肌肉”是指肌肉量增加、肌肉力量提高。肌肉量的增加例如从肌肉量的测定进行判断，肌肉力量的提高例如从基于肌力计等的肌肉力量的测定而判断。
[0127] <运动障碍综合征预防剂、运动障碍综合征治疗剂、少肌症预防剂、少肌症治疗剂>[0128] 本实施方式涉及的肌肉量增加剂含有来源于裸藻的物质作为活性成分，也可用作用于预防或治疗运动障碍综合征、少肌症的运动障碍综合征预防剂、运动障碍综合征治疗剂、少肌症预防剂、少肌症治疗剂。
[0129] 所述“治疗运动障碍综合征”、“治疗少肌症”是指，与摄取作为本实施方式的肌肉量增加剂的活性成分的来源于裸藻的物质前的状态相比，运动障碍综合征、少肌症的症状减轻。
[0130] <运动功能维持剂、运动功能改善剂>
[0131] 本实施方式涉及的肌肉量增加剂含有来源于裸藻的物质作为活性成分，也可用作用于维持运动功能的运动功能维持剂、用于改善运动功能的运动功能改善剂。
[0132] “维持运动功能”是指，与进行对比的状态，例如摄取作为本实施方式的肌肉量增加剂的活性成分的来源于裸藻的物质前的状态相比，“站立”、“行走”等运动功能得到维持。
[0133] “改善运动功能”是指，与进行对比的状态，例如摄取作为本实施方式的肌肉量增加剂的活性成分的来源于裸藻的物质前的状态相比，“站立”、“行走”等运动功能得到改善。
[0134] <肌萎缩相关基因表达抑制剂、肌萎缩预防剂及肌肉蛋白质分解抑制剂>[0135] 来源于裸藻的物质由于具有抑制肌萎缩相关基因的表达的作用，因此，可用作肌萎缩相关基因表达抑制剂、肌萎缩预防剂、肌肉蛋白质分解抑制剂。
[0136] 作为被来源于裸藻的物质抑制表达的肌萎缩相关基因的例子，可例示例如：泛素连接酶的基因(Cbl-b(SEQ ID NO：1)、Atrogin-1(SEQ ID NO： 2)、MuRF1(SEQ ID NO：3))。
[0137] <肌肉合成相关基因表达促进剂及肌肉合成促进剂>
[0138] 来源于裸藻的物质由于具有促进肌肉合成相关基因的表达的作用，因此，可用作肌肉合成相关基因表达促进剂、肌肉合成促进剂。
[0139] 作为被来源于裸藻的物质促进表达的肌肉合成相关基因的例子，可例示例如：促进肌肉蛋白质的合成的S6K的基因(SEQ ID NO：5)。
[0140] <用途>
[0141] 对实施方式涉及的含有来源于裸藻的物质作为活性成分的肌肉量增加剂而言，对肌肉量的减少、肌肉力量降低的患者、确定诊断为运动障碍综合征、少肌症的患者施用。
[0142] 另外，本实施方式的含有来源于裸藻的物质作为活性成分的肌肉量增加剂被构成为药物组合物，保健食品等食品组合物的形式，对自我感觉肌肉量减少、肌肉力量降低的人、罹患运动障碍综合征、少肌症可能性高的人等，对运动障碍综合征、少肌症的预备人群的人进行预防性地施用。
[0143] 裸藻藻体等来源于裸藻的物质由于也能够作为食品摄取而没有副作用，因此，即使在确定诊断为运动障碍综合征、少肌症前也能够施用。
[0144] 已知一般而言，肌肉量的减少、肌肉力量的降低，运动障碍综合征、少肌症是由生活习惯，年龄增长、饮食习惯、运动不足等各种原因引起的。
[0145] 因此，可以将作为活性成分含有本实施方式的来源于裸藻的物质的用于增加肌肉量的食品组合物、肌肉量增加剂，对由于生活习惯、年龄增长、饮食习惯、运动不足而发生肌肉量的减少、肌肉力量的降低的可能性高的人，处于罹患运动障碍综合征、少肌症的可能性高的环境的人，例如：生活习惯、饮食习惯的混乱的家庭的人长期持续施用。
[0146] 将本实施方式涉及的含有来源于裸藻的物质作为活性成分的用于增加肌肉量的食品组合物、肌肉量增加剂进行施用的对象，不限定于上述症状或状态的人、人以外的动物。
[0147] 另外，可以对40岁以后的年龄的人，特别是60岁或65岁以上的老年人施用含有来源于裸藻的物质作为活性成分的用于增加肌肉量的食品组合物、肌肉量增加剂。
[0148] 40岁以上的人，特别是60岁或65岁以上的老年人具有由于年龄增长而肌肉量减少、肌肉力量降低的倾向，但通过来源于裸藻的物质具备的肌肉量增加的作用，能够抑制肌肉量的减少、肌肉力量的降低。
[0149] 根据本实施方式的用于增加肌肉量的食品组合物及肌肉量增加剂可以使肌肉量增加，因此期待与肌肉量的减少、肌肉力量的降低相关的疾病的预防、治疗、防止卧床不起状态，防止由跌倒引起的受伤的应用。
[0150] 另外，本实施方式涉及的含有来源于裸藻的物质作为活性成分的肌肉量增加剂可以加入药理学允许的添加剂，以食品组合物，药物组合物等组合物等形式使用。
[0151] (食品组合物)
[0152] 另外，本实施方式的来源于裸藻的物质在食品中也能够使用。
[0153] 本实施方式的用于增加肌肉量的食品组合物、用于预防少肌症、用于改善少肌症、用于预防运动障碍综合征或用于改善运动障碍综合征的食品组合物、用于抑制肌萎缩相关基因表达、用于抑制肌肉蛋白质分解、用于预防肌萎缩、用于促进肌肉合成相关基因表达或用于促进肌肉合成的食品组合物，在食品的领域中，能够通过将可有效发挥期望作用的量的来源于裸藻的物质作为食品原料，配合于各种食品中，而提供具有该作用的食品组合物。
[0154] 即，本发明在食品的领域中，能够提供被注明为肌肉量增加用等食品的食品组合物。作为该食品组合物，除了一般的食品以外，可列举：特定保健用食品、营养功能食品、功能标识食品、医院患者用食品、补充剂等。另外，也可以用作食品添加剂。
[0155] 作为该食品组合物，可列举例如：调味料、畜肉加工品、农产加工品、饮料(清凉饮料、酒精饮料、碳酸饮料、乳饮料、果汁饮料、茶、咖啡、营养饮料等)、粉末饮料(果汁粉、汤粉等)、浓缩饮料、点心类(糖果(喉糖)、曲奇、饼干、口香糖、软糖、巧克力等)、面包、麦片等。另外，在为特定保健用食品、营养功能食品、功能标识食品等的情况下，也可以为胶囊、锭剂、糖浆、颗粒、粉末等形状。
[0156] 此处，特定保健食品是指，含有影响生理功能等的保健功能成分的食品，是得到日本消费者厅厅长的许可并可以对适合于特定的保健用途的目的进行标识的食品。在本发明中，为作为特定的保健用途而表明“对抑制支持自理的日常生活而言所必要的肌肉量及肌肉力量的降低有用”、“对步行能力的改善有用”、“肌肉量、肌肉力量的维持”、“支持肌肉量、肌肉力量的维持”，“在中高年龄者中由于年龄增长而衰退的步行能力的维持”、“支持对由于年龄增长而衰减的肌肉的维持而言有用肌肉的塑造力”等进行销售的食品。
[0157] 此外，营养功能食品是指，用于补充营养成分(维生素、矿物质)的食品，是标识营养成分的功能的食品。为了将其作为营养功能食品进行出售，每日摄入标准量中含有的营养成分的量必须在限定的上限值和下限值内，并且不仅要标识出营养功能而且还要提示注意事项等。
[0158] 此外，功能标识食品是指，在经营者的责任下标识了基于科学依据的功能性的食品。功能标识食品在销售前已经将相关的安全性和功能性等依据信息发送给日本消费者厅厅长。
[0159] 在本实施方式涉及的食品组合物中，除了来源于裸藻的物质以外，可以自由选择而配合一种或两种以上通常能够在食品组合物中使用的成分。例如，可以含有各种调味料、保存剂、乳化剂、稳定剂、香料、着色剂、防腐剂、pH调节剂等通常可以在食品领域中使用的所有添加剂。
[0160] 在本实施方式涉及的食品组合物中，除了来源于裸藻的物质以外，也可以添加已知有肌肉量增加的作用的3-羟基-3-甲基丁酸酯(HMB)，源自黑姜(black ginger)的5，7-二甲氧基黄酮，亮氨酸比例40％配合必需氨基酸、咪唑肽、CoQ10等物质中的一种以上。
[0161] (药物组合物)
[0162] 本实施方式涉及的含有来源于裸藻的物质作为活性成分的肌肉量增加剂、运动障碍综合征预防剂、运动障碍综合征治疗剂、少肌症预防剂、少肌症治疗剂、运动功能维持剂、运动功能改善剂、肌萎缩相关基因表达抑制剂及肌肉蛋白质分解抑制剂、用于预防肌萎缩、肌肉合成相关基因表达促进剂、肌肉合成促进剂可以用作药物组合物。
[0163] 本实施方式的肌肉量增加剂、运动障碍综合征预防剂、运动障碍综合征治疗剂、少肌症预防剂、少肌症治疗剂、运动功能维持剂、运动功能改善剂、肌萎缩相关基因表达抑制剂、肌肉蛋白质分解抑制剂、肌萎缩预防剂、肌肉合成相关基因表达促进剂、肌肉合成促进剂在药物的领域中，通过与可有效发挥期望作用的量的来源于裸藻的物质一起，配合药学上允许的载体、添加剂而提供具有该作用的药物组合物。该药物组合物可以为药品也可以为准药。
[0164] 该药物组合物可以适用于内用，也可以适用于外用。因此，该药物组合物可以以内服剂，静脉注射，皮下注射，皮内注射，肌肉注射和/或腹腔内注射等注射剂，经黏膜适用剂，经皮适用剂等制剂形式使用。
[0165] 作为该药物组合物的剂型，可以根据适用的形式而适当设定，可列举例如：片剂、颗粒剂、胶囊剂、粉末剂、散剂等固态制剂，液剂、悬浮剂等液态制剂，软膏剂或凝胶剂等半固态剂。
[0166] 在本实施方式涉及的药物组合物中，可以自由选择含有一种或两种以上的药学上允许的添加剂。
[0167] 例如，在将本实施方式涉及的药物组合物适用于口服制剂的情况下，可以含有例如：赋形剂、粘合剂、崩解剂、表面活性剂、保存剂、着色剂、矫味剂、香料、稳定剂、防腐剂、抗氧剂等在药物制剂领域中通常能够使用的全部添加剂。另外，也可以利用药物传递系统(DDS)而制成缓释性制剂等。
[0168] 在本实施方式涉及的药物组合物中，除了来源于裸藻的物质以外，也可以添加已知有肌肉量增加的作用的3-羟基-3-甲基丁酸酯(HMB)、源自黑姜的5，7-二甲氧基黄酮、亮氨酸比例40％配合必需氨基酸、咪唑肽、CoQ10等物质中的一种以上。
[0169] <用法、用量>
[0170] 作为本实施方式的肌肉量增加剂的用法，可以利用例如：粉末剂、胶囊剂、片剂、颗粒、液剂或糖浆等口服施用。
[0171] 本实施方式的肌肉量增加剂的施用量、施用形式可以根据对象、病态及其进展情况、其它条件适当选择。例如，作为来源于裸藻的物质选择裸藻，在以人(成人)作为对象而得到肌肉量增加效果为目的进行口服施用的情况下，一般可以将裸藻以干燥重量计每天1～5000mg、优选为 100～3000mg，进一步优选为500～2000mg左右的方式，以1天1～2次的程度(早和晚)，每周为5次以上的比例持续施用。
[0172] 实施例
[0173] 以下，根据具体的实施例详细说明本发明，但本发明并不限于这些。
[0174] 在以下实施例中，作为来源于裸藻的物质使用裸藻粉末而进行了裸藻粉末的持续摄取对肌肉量、肌肉相关基因产生的影响的研究。
[0175] <实施例1>
[0176] 作为肌肉量增加剂使用了作为来源于裸藻的物质的Euglena gracilis粉末(裸藻藻体，Euglena(股份公司)制造)。
[0177] <试验1裸藻粉末的持续摄取对肌肉量产生的影响的研究>
[0178] 在试验1中，目的在于阐明在不是疾病模型的小鼠中裸藻的摄取对肌肉量产生的影响。将摄取4周后的股四头肌及肝脏作为样品。
[0179] (试验方法)
[0180] ■饲料制备
[0181] 在CE-2粮(购买自日本CLEA)中以包含裸藻粉末2％的方式混合，制备了裸藻粮。将CE-2粮的营养成分示于表1至3。
[0182] [表1]
[0183]
[0184] [表2]
[0185]
[0186] [表3]
[0187]
[0188] ■摄取试验
[0189] 将12周龄的C57BL/6J雄性小鼠以使得平均体重相等的方式分组为3 组，分别作为对照组、裸藻组(n＝6)。对于对照组，使其摄取了CE-2(通常粮)，对于裸藻组为含有2％裸藻的CE-2(裸藻粮)(表4)。经过4周的摄取期之后，从小鼠收集股四头肌及肝脏，测定了脏器重量。
[0190] [表4]
[0191]
[0192] (试验1的结果)
[0193] 将结果示于图1至4。在试验摄取时的体重变化(图1)及摄取量(图 2)中，没有观察到显著性差异。另外，虽然在肝脏重量中在各组间没有观察到显著性差异(图3)，但在股四头肌重量中，相对于对照组，裸藻组的肌重量显著显示为更高值(图4)。
[0194] 因此可知，作为来源于裸藻的物质的裸藻存在使肌肉量增加的作用，能够用作肌肉量增加剂、用于增加肌肉量的食品组合物。
[0195] 另外，股四头肌参与膝关节的伸展、股关节的弯曲，具体而言为伸开膝盖而起立的动作、步行动作、跑动动作。
[0196] 可知作为来源于裸藻的物质的裸藻具有使股四头肌的肌肉量增加的作用，能够使起立、步行、跑动等动作发生提升，因此能够用于预防和/ 或改善运动障碍综合征、少肌症。
[0197] <试验2关于基于裸藻摄取的肌萎缩抑制作用的研究>
[0198] 在试验2中，目的在于阐明通过摄取裸藻对肌萎缩产生的影响。
[0199] (试验方法)
[0200] 将C57BL/6小鼠(雄性、12周龄，32只)以使得平均体重相等的方式分组，分别作为通常饲养组(-)、尾部悬挂组(C)、尾部悬挂+裸藻低浓度组(EL)、尾部悬挂+裸藻高浓度组(EH)。
[0201] 利用灌胃针1天1次口服施用，对通常饲养组及尾部悬挂组施用水，对尾部悬挂+裸藻低浓度组(EL)及尾部悬挂+裸藻高浓度组(EH)分别以40mg/每只小鼠或80mg/每只小鼠的方式施用裸藻。
[0202] 从施用开始7天之后，开始尾部悬挂试验，从尾部悬挂试验开始10 天之后，在异氟烷麻醉下处死。通过腹主动脉采血收集血液，摘出肝脏、比目鱼肌、跖肌、腓肠肌、股四头肌的各肌肉，测定了重量。
[0203] 利用Tri试剂从跖肌及股四头肌提取RNA后合成cDNA，通过实时 PCR测定了各基因(Cbl-b(SEQ ID NO：1)、Atrogin-1(SEQ ID NO：2)、MuRF1(SEQ ID NO：3)、4E-BP1(SEQ ID NO：4)、RPS6KB1(SEQ ID NO： 5))的表达量。使用了β-肌动蛋白作为内参。
[0204] (分组)
[0205] 分组如下所述(各组n＝8)。
[0206] ■通常饲养组(-)：无尾部悬挂，施用dH2O
[0207] ■尾部悬挂组(C)：有尾部悬挂，施用dH2O
[0208] ■尾部悬挂+裸藻低浓度组(EL)：有尾部悬挂，施用裸藻40mg/每只小鼠/天(相当于摄取的1％)
[0209] ■尾部悬挂+裸藻高浓度组(EH)：有尾部悬挂，施用裸藻80mg/每只小鼠/天(相当于摄取的2％)
[0210] (试验2的结果)
[0211] (A.体重及肝脏重量测定)
[0212] 将体重及肝脏重量测定的结果示于图5。
[0213] 将试验结束时的体重与通常饲养组(-)比较时，在尾部悬挂组(C) 及尾部悬挂+裸藻低浓度组(EL)中观察到显著性减少。另外，在肝脏重量中也显示了与体重相同的行为。
[0214] (B.肌重量测定)
[0215] 将肌重量测定的结果示于图6及7。
[0216] 如图6所示，根据与通常饲养组相比在尾部悬挂中观察到肌重量的降低，确认诱导了由尾部悬挂引起的废用性肌萎缩。
[0217] 如图7所示，在跖肌及股四头肌中，通过裸藻的摄取抑制了肌重量的降低。认为在裸藻中包含有许多成分，具有有助于阻碍肌肉蛋白质的分解或者促进合成的可能性。
[0218] 根据肌重量测定的结果，可知能够将裸藻用于抑制跖肌、股四头肌的肌重量的降低。由于跖肌、股四头肌的肌肉量降低与运动障碍综合征、少肌症的发病相关连，因此，能够将裸藻用作运动障碍综合征、少肌症的治疗剂、预防剂。
[0219] 另外，由于跖肌、股四头肌为与运动功能密切相关的肌肉，因此，能够将裸藻用作运动功能维持剂、运动功能改善剂。
[0220] (C.肌萎缩相关基因表达量测定)
[0221] 将肌萎缩相关基因表达量测定的结果示于图8。
[0222] 如图8所示，在跖肌中观察到通过裸藻的摄取而抑制了参与肌肉蛋白质的分解的泛素连接酶的基因(Cbl-b(SEQ ID NO：1)、Atrogin-1(SEQ ID NO：2)、MuRF1(SEQ ID NO：3)，图9)的表达的倾向。
[0223] 另一方面，在股四头肌中没有观察到通过裸藻的摄取而抑制了Cbl-b (SEQ ID NO：1)及Atrogin-1(SEQ ID NO：2)的基因表达的倾向。根据以上结果，显示出根据肌肉的部位不同，在由裸藻带来的效能上显示出差异的可能性。
[0224] 根据肌萎缩相关基因表达量测定的结果可知，能够将裸藻用作用于抑制表达参与肌肉蛋白质的分解的泛素连接酶的基因(Cbl-b(SEQ ID NO：1)、 Atrogin-1(SEQ ID NO：2)、MuRF1(SEQ ID NO：3))的肌萎缩相关基因表达抑制剂。
[0225] 另外，可知能够将裸藻用作抑制肌肉蛋白质的分解的肌肉蛋白质分解抑制剂、预防肌萎缩的肌萎缩预防剂。
[0226] (D.肌肉合成相关基因表达量测定)
[0227] 将肌肉合成相关基因表达量测定的结果示于图10。
[0228] 如图10所示，在跖肌和股四头肌中观察到通过裸藻的摄取而抑制作为肌肉蛋白质的合成阻碍因子的4E-BP1(SEQ ID NO：4)(图11)的表达，促进了促进肌肉蛋白质的合成的S6K(RPS6KB1，SEQ ID NO：5)的基因 (图11)的表达的倾向。启示了裸藻抑制肌肉蛋白质的分解并且促进肌肉合成，由此发挥肌萎缩改善作用。另外，认为在裸藻中包含数目众多的成分，因此其作用点有多种，存在通过进行组合而发挥效果的可能性。
[0229] 根据肌肉合成相关基因表达量测定的结果可知，能够将裸藻用作促进肌肉合成相关基因的表达的肌肉合成相关基因表达促进剂。
[0230] 另外，可知能够将裸藻用作促进肌肉合成的肌肉合成促进剂。
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