从纯中药制剂中提取具有改善性生活质量的 复方雄蛾强肾原料药的方法

(一)技术领域本发明涉及从纯中药制剂中提取具有改善性生活质量的复方雄蛾强肾原料药的方法，属于中药原料药的提取纯化技术。其商品名为“复方雄蛾强肾”。

(二)背景技术传统的中药提取方法采用浓度高的乙醇提取有效成分，对中药采用粉碎高温、高压、灭菌的常规制备工艺。其缺点是高温、高压、高浓缩乙醇混合提取各类中药破坏了药物中有效活性，药液的有效成分提取易受损失。

(三)发明内容技术方案包括处方新工艺、工艺流程图及各种毒理、药理综述。

技术解决方案是：本发明的目的公开一种利用大孔树脂吸附，用气相层析测定仪器进行指痕图谱成分定量测定，最终制成合格精粉，即原料药粉。

红参150g、淫羊藿100g、雄性柞蚕蛾1500g、延胡索100g、五味子50g、菟丝子50g、蛇床子25g、肉苁蓉25g、胡芦巴80g、韭菜子(盐)50g、牛膝100g、仙茅(酒)80g、小茴香25g、肉桂50g。选中了14种天然红参6.29％、淫羊藿4.19％、雄性柞蚕蛾62.89％、延胡索4.19％、五味子2.1％、菟丝子2.1％、蛇床子1.05％、肉苁蓉1.05％、胡芦巴3.35％、韭菜子(盐)2.1％、牛膝4％、仙茅(酒)3.35％、小茴香1.05％、肉桂2.1％的植物和昆虫，通过每100kg雄性蚕蛾原料，加入200kg 65％乙醇，在25℃条件下浸泡30天后，用粉碎机将其粉碎成匀浆，在25℃条件下浸泡60天，吸取乙醇浸出物的上清液在85℃条件下减压浓缩，待喷雾干燥。和将植物部分原料，每100kg原料加入300kg的65％乙醇、浸泡12小时后，在85℃条件下回流提取3小时，吸取回流提取滤液，再将剩余残渣分别加入200kg65％乙醇和100kg65％乙醇，分别在85℃条件下回流提取2小时和1小时，剩余残渣弃去。吸取回流提取的滤液并合并在一起，在85℃条件下浓缩，吸取乙醇提取液的上清液，通过大孔树脂柱中的大孔树脂吸附，用65％的乙醇将吸附在大孔树脂上的成分洗脱至乙醇中，将洗脱液在85℃条件下浓缩，浓缩后和待喷雾干燥的雄性柞蚕蛾浓缩液一并在85℃条件下喷雾干燥，制成精粉成品，用气相层析测定仪器进行指痕图谱成分定量测定、最终制成合格原料药。

复方制剂中提取具有改善性生活质量的复方雄蛾强肾原料药的方法采用大孔树脂吸附，用气相层析测定仪器进行指痕图谱成分定量测定，保证药品的稳定性和高质量。

本发明的创造性通过对药理、临床来实现，以下的综述资料是一部分资料提供。

(四)附图说明图1是本发明的工艺流程图。其工艺流程描述如下：(1)本发明处方：红参150g、淫羊藿100g、雄性柞蚕蛾1500g、延胡索100g、五味子50g、菟丝子50g、蛇床子25g、肉苁蓉25g、胡芦巴80g、韭菜子(盐)50g、牛膝100g、仙茅(酒)80g、小茴香25g、肉桂50g。

(2)溶剂：65％乙醇。

(3)提取液：棕红色液体。

(4)物理参数雄性柞蚕蛾浸泡、65％乙醇回流提取、树脂吸附、喷雾干燥均为常压，减压浓缩的压力为真空度0.02～0.04MPa；雄性柞蚕蛾浸泡的温度为常温25℃，65％乙醇回流提取的温度为85℃，减压浓缩的温度为75～85℃，树脂吸附的温度为常温，喷雾干燥的温度为80～85℃。

(5)操作过程

①雄性柞蚕蛾加2倍量65％乙醇浸泡30天，用粉碎机将雄性柞蚕蛾粉碎匀浆，再浸泡60天，取上清液，得浸泡液(1)。

②将浸泡液(1)进行减压浓缩，得浓缩液(2)。

③其余药材加3倍量65％乙醇浸泡12小时，然后进行回流提取3小时，滤过，得滤液(3)；药渣加2倍量65％乙醇回流提取2小时，滤过，得滤液(4)；药渣再加1倍量65％乙醇回流提取1小时，滤过，得滤液(5)。

④合并滤液(3)、(4)、(5)，静置，取上清液，得提取液(6)。

⑤将提取液(6)用大孔树脂进行吸附。

⑥用65％乙醇洗脱吸附在树脂上的化学成份至乙醇中，得洗脱液(7)。

⑦减压回收洗脱液(7)，得浓缩液(8)。

⑧合并浓缩液(2)和浓缩液(8)，得浓缩液(9)。

⑨将浓缩液(9)进行喷雾干燥，得药粉。

将红参6.29％、淫羊藿4.19％、雄性柞蚕蛾62.89％、延胡索4.19％、五味子2.1％、菟丝子2.1％、蛇床子1.05％、肉苁蓉1.05％、胡芦巴3.35％、韭菜子(盐)2.1％、牛膝4％、仙茅(酒)3.35％、小茴香1.05％、肉桂2.1％植物原料，通过每100kg雄性蚕蛾原料，加入200kg65％乙醇，在25℃条件下浸泡30天后，用粉碎机将其粉碎成匀浆，在25℃条件下浸泡60天，吸取乙醇浸出物的上清液在85℃条件下减压浓缩，待喷雾干燥。和将植物部分原料，每100kg原料加入300kg的65％乙醇、浸泡12小时后，在85℃条件下回流提取3小时，吸取回流提取滤液，再将剩余残渣分别加入200kg65％乙醇和100kg65％乙醇，分别在85℃条件下回流提取2小时和1小时，剩余残渣弃去。吸取回流提取的滤液并合并在一起，在85℃条件下浓缩，吸取乙醇提取液的上清液，通过大孔树脂柱中的大孔树脂吸附，用65％的乙醇将吸附在大孔树脂上的成分洗脱至乙醇中，将洗脱液在85℃条件下浓缩，浓缩后和待喷雾干燥的雄性柞蚕蛾浓缩液一并在85℃条件下喷雾干燥，制成精粉成品，用气相层析测定仪器进行指痕图谱成分定量测定、最终制成合格原料药。

(五)具体实施方式红参150g、淫羊藿100g、雄性柞蚕蛾1500g、延胡索100g、五味子50g、菟丝子50g、蛇床子25g、肉苁蓉25g、胡芦巴80g、韭菜子(盐)50g、牛膝100g、仙茅(酒)80g、小茴香25g、肉桂50g。

将红参、淫羊藿、雄性柞蚕蛾、延胡索、五味子、菟丝子、蛇床子、肉苁蓉、胡芦巴、韭菜子(盐)、牛膝、仙茅(酒)、小茴香、肉桂植物原料，通过每100kg雄性蚕蛾原料，加入200kg65％乙醇，在25℃条件下浸泡30天后，用粉碎机将其粉碎成匀浆，在25℃条件下浸泡60天，吸取乙醇浸出物的上清液在85℃条件下减压浓缩，待喷雾干燥。和将植物部分原料，每100kg原料加入300kg的65％乙醇、浸泡12小时后，在85℃条件下回流提取3小时，吸取回流提取滤液，再将剩余残渣分别加入200kg65％乙醇和100kg65％乙醇，分别在85℃条件下回流提取2小时和1小时，剩余残渣弃去。吸取回流提取的滤液并合并在一起，在85℃条件下浓缩，吸取乙醇提取液的上清液，通过大孔树脂柱中的大孔树脂吸附，用65％的乙醇将吸附在大孔树脂上的成分洗脱至乙醇中，将洗脱液在85℃条件下浓缩，浓缩后和待喷雾干燥的雄性柞蚕蛾浓缩液一并在85℃条件下喷雾干燥，制成精粉成品，用气相层析测定仪器进行指痕图谱成分定量测定、最终制成合格原料药。

本发明的创造性通过毒理、药理临床来体现，实审时补充提供现简介如下：从纯中药制剂中提取具有改善性生活质量的复方雄蛾强肾原料药的方法药理作用1.药理实验表明，雄性蚕蛾为主要组成制品中含有抑制PED5酶系的成分，PED5是cGMP的快速降解酶，它能使cGMP分解失活而无法达到改善微循环的目地。制品作用于PED5酶系、抑制cGMP的降解，使cGMP的水平增高并持久，达到扩张血管，增加生殖组织血流量，使海绵体勃起并持久的作用。

2.雄性蚕蛾为主要组成制品的药理实验证实，在给药1.5小时后，雄性大白鼠血浆中的cGMP含量明显高于对照组。但是，制品可促使海绵体组织的含量明显高于血浆组，提示制品有选择性针对生殖系统，实现扩张血管，改善微循环，增加血流量的营养促进作用。

3.雄性蚕蛾为主要组成制品能显著增加大白鼠海绵体中NO含量，正常大白鼠海绵体内NO含量为29.2nmol/L，服食制品后，阴茎海绵体NO含量增加至42.3nmol/L是正常组的1.4倍多。制品能显著升高大白鼠血清中NO含量。正常大白鼠血清中NO含量为4.45nmol/L，服食制品后，大白鼠血清中NO含量增加至29.01nmol/L，是正常组的6.5倍，说明制品有较强的改善周身血液微循环，改善组织和器官的营养环境作用。

4.雄性蚕蛾为主要组成制品，利用多普勒彩超显像仪测定男性阴茎海绵体中的血流速度的新方法，实验结果表明，正常男性服食“制品”1小时后，通过多普勒彩超(美国Acllson 128×P/10C)测定阴茎海绵体动脉最大血流速度，比未服食“制品”的正常人组增加73％。正常男性海绵体动脉最大血流速度(MAX)为9.39cm/s。服食“制品”1小时后MAX增加至16.24cm/s。健康正常男性服食“制品”1小时后，通过多普勒彩超显像仪测定阴茎海绵体动脉平均血流量(TAMX)，比未服食“制品”组增加51.5％。正常男性海绵体平均血流速度TAMX为2.57cm/s。服食“制品”1小时后，男性海绵体TAMX为3.89cm/s。进入血流增加且平衡使勃起持久，符合和验证了药理活性的实验结果。

根据实验目的，我室采用放射免役分析法检测了美国伟哥及复方制品二种药物，二个剂量对50只雄性健康大鼠血浆，海面体中环磷酸鸟苷(cGMP)的含量。整体地观察了美国伟哥及复方制品再给药1.5小时后的变化。

其结果为：1.血浆组：美国伟哥的中、高剂量组与对照组比较均具有非常显著性差异P＜0.001，复方制品的中剂量组具有显著性差异P＜0.01，而复方制品的高剂量组则P＞0.2。

2.海绵体组：美国伟哥中剂量组显著性差异P＜0.1，高剂量组则具有非常显著性差异P＜0.001，复方制品组的中剂量P＜0.01，具有显著差异P＜0.001。

该实验结果对阐明复方制品的药理作用提供了有意义的数拒。

材料与方法材料：(一)动物：Wistar大鼠，雄性，50只，体重235.50±12.50g。由天津市医学实验动物开发公司提供(合格证书99-013)(二)药品及药剂1.实验药物复方制品：由沈阳新千年高科技有限公司提供，含量200mg/粒。批号：9811052.阳性对照药理美国伟哥：美国进口，由Pfizer公司生产，NDC0069-4220-60，1998，含量100mg/粒。

3.环磷酸鸟苷放射免役分析试剂盒，由上海中医药大学同位素室提供。

4.实验中所有试剂均系国产分析纯(AR)。

方法：

(一)动物分组及剂量：健康大鼠50只，随机分组，每组10只，共粉五组。

1.实验药物复方制品组：200mg/Kg，400mg/Kg两个剂量组。

2.阳性对照美国伟哥组，6mg/Kg，12mg/Kg，两个药剂组。

3.空白对照组：生理盐水0.4ml/只。

药物的配制：将美国伟哥、复方制品以定量生理盐水溶解后使用。

给药途径：各组动物均为一次灌胃给药。

(二)血浆样品的提取方法采血试管中加入50ul EDTA抗凝剂，取毛细下班管于大鼠眼框后静脉丛取血约1ml，置冰浴中，2000rpm离心10分钟，取血浆0.1ml，加入无水乙醇2ml，置液体快速混合约1分钟，放置5分钟，3000rpm离心10分钟，上清液轩小烧杯中，沉淀以75％乙醇1ml重复操作一次，二次上清真液合并，于60℃以下烘箱中烘干备用。

(三)海绵体样品的提取方法取海绵体50mg，组织研磨匀浆器中，在冰浴中加入50mM PH7.4醋酸钠缓洗一次，与匀浆充分完全后将匀浆液置于10ml试管中，匀浆管再用2ml无水乙醇洗一次，与匀浆液合并静止5分钟，3500rpm离心15分钟，上清液置小烧杯中，沉淀用75％乙醇1ml洗二次，合并上清液，置60℃以下烧箱中烘干备用。

(四)血浆及海绵体样品的cGMP会含量测定。

我室采用上海中医药大学同位素室提供的125I-cGMP放射免疫分析试剂盒，应用二抗体法进行测定。其实验灵敏度为0.008pmol/ml，测定最大结合百分率为82.7％。非特异结合百分率5.0％。

实验结果1.复方制品的中剂量，高剂量组对大鼠血浆中的cGMP含量均高于对照组，与美国伟哥一致。结果见表一：表一  血浆样品cGMP的含量

*为非常显著性差异**为显著性差异

2.复方制品的中剂量组对大鼠海绵中的cGMP含量与对照组比较具有显著性差异(P＜0.01)；复方制品的大剂量组对大鼠海绵体中的cGMP含量与对照组比较具有非常显著性差异P＜0.001，其cGMP含量高于美国伟哥中剂量组。结果见表二。

表二  海绵体中的(cGMP)含量

*为非常显著性差异**为显著性差异小结1.经过上述结果得到在给予不同剂量复方制品后1.5小时，大鼠血浆中的cGMP含量明显高于对照组，具有显著性差异P＜0.01而高剂量组为P＜0.2。但cGMP水平均有升高。阳性药物美国伟哥组在中剂量和高剂量组均具有非常显著差异P＜0.001。

2.复方制品的中剂量及高剂量组在海绵体组织中的作用由明显好于血浆样品，其与对照组比较均具有显著性差异(P＜0.01)和非常显著性差异(P＜0.001)，同时高于阳性药美国伟哥的中剂量组。实验表明，复方制品与阳性药美国伟哥对大鼠血浆及海绵体中使cGMP含量确有升高作用，尤其是海绵体中复方制品升高cGMP的作用强于对血浆cGMP的影响，此结果与有关文献报导一致。

经严格条件下分离，提纯成为天然制品，其原料来源与机体的酶系有相近性，并且已证实其制品有影响人体各种酶系的作用。

阴茎是三条管道所组成，肉眼看见的前后径短、左右径宽的一根，叫做海绵体，由柔软的海绵样组织构成。其动脉，称海绵体动脉，他是阴茎勃起的能源，它布满在海绵体内。海绵体是由上百万个空洞样海绵体组织构成，平时这些空洞处于扁平状态，它受周围无数的平滑肌细胞调控，平滑肌限制血液流到阴茎，使其保持平静状态，若是平滑肌失去调控能力，阴茎就会随时、随地充血而勃起。包裹在海绵体外面有一层没有弹性的纤维白膜，这层白膜是血流涌进阴茎时，白膜上的静脉受压迫而变扁平，控制血流方向，只许血流涌进，不准血流流出，于是维持阴茎有足够的勃起时间。运用No学说，科学家们揭示了阴茎勃起的生理机理，即在性兴奋下，海绵体内合成和释放No分子，由No激活GC、GC酶催化AGP生成cGMP，cGMP使阴茎海绵体空洞组织平滑肌松驰，使血管扩张，流入海绵体的血流量增加，使海绵体勃起并持久。

雄性蚕蛾为主要组成制品，含有抑制PED5酶系的成分，其作用机理与Viagra相同，此酶抑制cGMP的降解，使cGMP的水平增高并持久，达到扩张血管、增加血流量，使海绵体勃起并持久的作用。雄性蚕蛾为主要组成制品对雄性大白鼠海绵体中cGMP含量有显著性地增加作用。实验证实，制品与Viagra两种药品在等剂量的前提下，同时给药1.5小时后，雄性蚕蛾为主要组成制品组和Viagra组血浆中cGMP含量明显高于对照组，制品组在海绵体组织中的cGMP含量明显高于血浆样品，显示对海绵体血管扩张的专一性和一定选择性。同时制品中剂量组增加cGMP的含量高于Viagra标准对照组。雄性蚕蛾为主要组成制品，做为天然提纯分离物的总体，其药理活性实验的结果是另人震惊的，超出人们的想象，其制品在治疗疾病和预防疾病中的价值巨大。

从纯中药制剂中提取具有改善性生活质量的复方雄蛾强肾原料药的方法临床观察总结一、临床资料(一)病例选择1.病例来源：30例中住院4例，门诊26例。(见表1)表1自然情况表

2.诊断标准全部30例病例选择按1986年全国中医、中西医结合等第三次老年医学研究协作会议和《中医诊断学》第五版教材关于肾阳虚的诊断标准。中医辨证均为肾阳虚证。西医诊断为神经衰弱、前列腺肥大、脱发、阳痿等。

3.病例选择(1)凡具备主要症状二项，次要症状中任意二项，舌脉中一项或积分值≥3分均为纳入病例。

(2)排除标准①合并心血管、肝、肾、和造血系统等严重原发生疾病，精神病患者；②脑脊髓疾病或有神经损伤患者；③确诊的器质必阳痿、药物性阳痿患者；④服用作用于神经系统或治疗精神病药物的患者；⑤不符合诊断标准者；⑥观察过程中自然脱落者；⑦观察过程中又自行服用其它助肾阳药物。

(二)观察方1.分组：我院均为试验组。

2.给药方法：试验组口服复方制品4粒/次，一日二次，白开水送服；二周一个疗程。观察3个疗程。

3.疗效判定标准显效：肾阳虚证积分治疗后，较治疗前降低2/3(含2/3)以上；或有关理化检查指标均较前有明显改善者有效：肾阳虚证积分治疗后，较治疗前降低1/3——2/3(不含2/3)；或有关理化检查指标前有改善者无效：肾阳虚证积分治疗后，较治疗前无变化或降低＜1/3；或有关理化检查指标较前无改善者二、结果1.疗效总表(见表2、3、4、5、6、7、8、9)表2  疗效表

表3  病程与疗效的关系

表4  疗程与疗效的关系

表5  观察组年龄与疗效的关系

表6  观察组性别与疗效的关系

表7  观察组治疗前后免疫球蛋白改变情况表

表8  观察组治疗前后临床症状改善情况表

表9  观察组有关安全性的化验检查表

三、讨论1.复方制品是由沈阳新千年高科技有限公司研制的新型保健药品，具有大补元气、温肾助阳、强筋健骨、填精益髓、通和血脉、润泽肌肤、延年益寿作用。用于肾阳不足之阳痿不举、腰膝酸软、肢冷畏寒、下身冷痛、尿频不利、气短而喘、神疲健忘、头晕耳鸣等症。

2.通过对30例肾阳不足病例的临床观察，经统计学处理证实该药确有临床疗效，显效4例，有效23例，总有效90％。

3.复方制品临床应用疗效改善临床症状为主，以免疫指标无明显影响，对血、尿常规、肝功无影响。

4.复方制品无毒副作用和不良反应。