精氨酸酶抑制剂组合疗法
专利汇可以提供精氨酸酶抑制剂组合疗法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及通过向受试者联合施用本文公开的精 氨 酸酶 抑制剂 和包含本文公开的免疫细胞的组合物来 治疗 或 预防 受试者的 疾病 的方法。，下面是精氨酸酶抑制剂组合疗法专利的具体信息内容。
1.一种治疗或预防受试者疾病的方法，该方法包括对受试者联合施用精氨酸酶抑制剂和包含免疫细胞的组合物。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述免疫细胞包括细胞毒性T细胞(CTL)。
3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述免疫细胞包含表达嵌合抗原受体的T细胞。
4.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其特征在于，所述免疫细胞包含对疾病相关肽表达特异的受体的T细胞。
5.如前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述免疫细胞包含天然杀伤(NK)细胞。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述天然杀伤细胞是NK-92天然杀伤细胞。
7.如权利要求5或6所述的方法，其特征在于，所述天然杀伤细胞表达嵌合抗原受体。
8.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其特征在于，所述免疫细胞对受试者是自体的。
9.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其特征在于，所述免疫细胞对受试者是同种异体的。
10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述免疫细胞获自细胞库。
11.如权利要求1至4中任一项所述的方法，其特征在于，所述免疫细胞在抗原呈递细胞(APC)存在下扩增，所述抗原呈递细胞在施用于受试者之前呈递疾病特异性肽。
12.如权利要求11所述的方法，其特征在于，所述APC呈递多于一种疾病特异性肽。
13.如权利要求11或12所述的方法，其特征在于，所述APC是B细胞。
14.如权利要求11或12所述的方法，其特征在于，所述APC是树突细胞。
15.如权利要求11或12所述的方法，其特征在于，所述APC是抗原呈递T细胞。
16.如权利要求15所述的方法，其特征在于，所述人工抗原呈递细胞是aK562细胞。
17.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述免疫细胞包含T细胞，并且所述T细胞不富集。
18.如前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述免疫细胞和精氨酸酶抑制剂共同施用。
19.如前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述免疫细胞和精氨酸酶抑制剂依次施用。
20.如前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述包含免疫细胞的组合物还包含细胞因子。
21.如权利要求20所述的方法，其特征在于，所述细胞因子是IL-2。
22.如权利要求20所述的方法，其特征在于，所述细胞因子是IL-15。
23.如权利要求1至22中任一项所述的方法，其特征在于，向受试者施用至少1×106个细胞/kg细胞。
24.如权利要求1至23中任一项所述的方法，其特征在于，向受试者施用至少1×107个细胞/kg细胞。
25.如权利要求1至24中任一项所述的方法，其特征在于，向受试者施用至少1×108个细胞/kg细胞。
26.如权利要求1至25中任一项所述的方法，其特征在于，向受试者施用至少1×109个细胞/kg细胞。
27.如前述权利要求中任一项所述的方法，进一步包括向受试者联合施用抗体。
28.如权利要求27所述的方法，其特征在于，所述抗体靶向肿瘤抗原。
29.如权利要求27或28所述的方法，其特征在于，所述抗体是单克隆的。
30.如权利要求27或28所述的方法，其特征在于，所述抗体是多克隆的。
31.如权利要求27-29中任一项所述的方法，其特征在于，所述抗体是嵌合的。
32.如权利要求27-31中任一项所述的方法，其特征在于，所述包含免疫细胞的组合物包含NK细胞。
33.如权利要求27-32中任一项所述的方法，其特征在于，所述抗体、包含免疫细胞的组合物和精氨酸酶抑制剂共同施用。
34.如权利要求27-32中任一项所述的方法，其特征在于，所述抗体、包含免疫细胞的组合物和精氨酸酶抑制剂依次施用。
35.如前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述精氨酸酶抑制剂是具有式I结构的化合物，或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体或前药，
其中，
R1选自-OH、ORa和NRbRc；
a
R选自氢、取代或未取代的烷基、环烷基、芳基、(杂环烷基)烷基、(杂芳基)烷基和芳烷基；
Rb和Rc各自独立地选自H、-OH、取代或未取代的烷基、-SO2(烷基)、-SO2(芳基)、(杂环烷基)烷基和(杂芳基)烷基；
2
R选自H、取代或未取代的烷基、和(烷基)C(O)-；
W、X、Y和Z各自独立地选自键、-C(R')(R”')-、-C(R”')2-、-CR”'-、-NR”'-、-N-、-O-、-C(O)-和-S-，使得W、X、Y和Z中不超过三个同时代表键；并且没有两个相邻的W、X、Y和Z成员同时是-O-、-S-、-N-或-NR”'-；
l、m、n和p各自独立地为0、1或2，例如1或2；
任选代表一个或多个双键；
R3和R4各自独立地选自氢、取代或未取代的烷基，和C(O)-R'，或
R3和R4与它们所键合的硼原子一起形成完全饱和或部分饱和的5-或6-元环；
D选自取代或未取代的亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚芳基和亚环烷基，
其中D中的一个或多个-CH2-基团任选和独立地被选自O、NR'、S、SO、SO2和CR'R”的Q部分取代；或者
其中任意两个相邻的-CH2-基团任选被两个环亚烷基基团取代(从而形成稠合双环体系)；
条件是D不含有两个相邻的选自O、NR'、S、SO和SO2的Q部分；和
R'，R”和R'”各自独立地选自H，OH，S(O)Rd，S(O)2Rd，烷基，芳基，-NH2，-NH(烷基)，-N(烷基)2，-C(O)NRdRe，-C(O)(烷基)，-C(O)(芳基)，-C(O)O(烷基)，-C(O)O(芳基)，环烷基，杂环烷基，-C(O)(杂环烷基)，杂芳基，芳烷基，-C(O)(芳烷基)，-C(O)(芳基)，(环烷基)烷基，(杂芳基)烷基-和(杂环烷基)烷基；
d e
其中R 和R各自独立地选自H、取代或未取代的烷基、芳烷基、芳基、羟烷基、氨基烷基、环烷基、杂环烷基、杂芳基、NR'R”C(O)-和(芳基)亚环烷基-，
其中任意烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、环烷基或杂环烷基任选地被取代，
例如，被选自卤素、氧代、-COOH、-CN、-NO2、-OH、-NRdRe、-NRgS(O)2Rh、(C1-C6)烷基、(C1-C6)卤代烷基、(C1-C6)卤代烷氧基、(C1-C6)烷氧基、(C3-C14)芳基、(C3-C14)杂芳基、(C3-C14)杂环烷基、(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)亚烷基和(C3-C14)芳氧基的一个或多个成员取代。
36.如权利要求35所述的方法，其特征在于：
R1选自-OH、ORa和NRbRc；
a
R选自氢、直链或支链(C1-C6)烷基、(C3-C8)环烷基、(C3-C14)芳基、(C3-C14)杂环烷基-(C1-C6)亚烷基-、(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)亚烷基-和(C3-C14)芳基(C1-C6)亚烷基-；
Rb和Rc各自独立地选自H、-OH、直链或支链(C1-C6)烷基、-SO2-(C1-C6)烷基、(C3-C14)芳基-SO2、(C3-C14)杂环烷基-(C1-C6)亚烷基-和(C3-C14)杂芳基(C1-C6)亚烷基-；
R2选自H、直链或支链(C1-C6)烷基和(C1-C6)烷基-C(O)-；
W、X、Y和Z各自独立地选自键、-C(R')(R”')-、-C(R”')2-、-CR”'-、-NR”'-、-N-、-O-、-C(O)-和-S-，使得W、X、Y和Z中不超过三个同时代表键；并且没有两个相邻的W、X、Y和Z成员同时是-O-、-S-、-N-或-NR”'-；
l、m、n和p各自独立地为0、1或2，例如1或2；
任选代表一个或多个双键；
R3和R4各自独立地选自氢、直链或支链(C1-C6)烷基、和C(O)-R'，或
3 4
R和R与它们所键合的硼原子一起形成完全饱和或部分饱和的5-或6-元环；
D选自直链或支链(C3-C5)亚烷基、直链或支链(C2-C8)亚烯基、直链或支链(C2-C8)亚炔基、(C3-C14)亚芳基和(C3-C14)亚环烷基，
其中D中的一个或多个-CH2-基团任选和独立地被选自O、NR'、S、SO、SO2和CR'R”的Q部分取代；或者
其中任意两个相邻的-CH2-基团任选地被(C3-C14)-环亚烷基的两个成员取代；
条件是D不含有两个相邻的选自O、NR'、S、SO和SO2的Q部分；和
R'，R”和R'”各自独立地选自H，OH，S(O)Rd，S(O)2Rd，(C1-C8)烷基，(C3-C6)芳基，-NH2，-d e
NH(C1-C6)烷基，-N[(C1-C6)烷基]2，-C(O)NRR ，-C(O)(C1-C6)烷基，-C(O)(C3-C14)芳基，-C(O)O(C1-C6)烷基，-C(O)O(C3-C14)芳基，(C3-C6)环烷基，(C3-C14)杂环烷基，-C(O)(C3-C14)杂环烷基，(C3-C14)杂芳基，(C3-C14)芳基-(C1-C6)亚烷基-，-C(O)(C3-C14)芳基-(C1-C6)亚烷基-，-C(O)(C3-C14)芳基，(C3-C6)环烷基-(C1-C6)亚烷基-，(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)亚烷基-和(C3-C14)杂环-(C1-C6)亚烷基-；
其中任意烷基，亚烷基，芳基，杂芳基，环烷基或杂环烷基任选被选自卤素，氧代，-COOH，-CN，-NO2，-OH，-NRdRe，-NRgS(O)2Rh、(C1-C6)烷氧基，(C3-C14)芳基，(C1-C6)卤代烷基和(C3-C14)芳氧基的一个或多个成员取代；
其中Rd、Re、Rg和Rh各自独立地选自H、直链或支链(C1-C6)烷基、任选取代的(C3-C14)芳基(C1-C6)亚烷基-、任选取代的(C3-C14)芳基、(C1-C6)羟烷基、(C1-C6)氨基烷基、H2N(C1-C6)亚烷基-、任选取代的(C3-C6)环烷基、任选取代的(C3-C14)杂环烷基、任选取代的(C3-C14)杂芳基、任选取代的(C3-C14)芳基-(C1-C6)亚烷基-、NR'R”C(O)-和(C3-C6)芳基-(C3-C14)-亚环烷基-,
或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体或前药。
37.如权利要求35或36所述的方法，其特征在于：
R1选自-OH、ORa和NRbRc；
Ra选自氢、直链或支链(C1-C6)烷基、(C3-C8)环烷基、(C3-C14)芳基、(C3-C14)杂环烷基-(C1-C6)亚烷基-、(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)亚烷基-和(C3-C14)芳基(C1-C6)亚烷基-；
b c
R和R各自独立地选自H、-OH、直链或支链(C1-C6)烷基、-SO2-(C1-C6)烷基、(C3-C14)芳基S(O)2-、(C3-C14)杂环烷基-(C1-C6)亚烷基-和(C3-C14)杂芳基(C1-C6)亚烷基-；
R2选自H、直链或支链(C1-C6)烷基和(C1-C6)烷基-C(O)-；
W、X、Y和Z各自独立地选自键、-C(R”')2-、-CR”'-、-NR”'-、-N-、-O-、-C(O)-和-S-，使得W、X、Y和Z中不超过三个同时代表键；和
没有两个相邻的W、X、Y和Z成员同时是-O-、-S-、-N-或-NR”'-；
l、m、n和p各自独立地为0、1或2，例如1或2；
任选代表一个或多个双键；
R3和R4各自独立地选自氢、直链或支链(C1-C6)烷基、和C(O)-R'，或
R3和R4与它们所键合的硼原子一起形成完全饱和或部分饱和的5-或6-元环；
D选自直链或支链(C3-C5)亚烷基、直链或支链(C2-C8)亚烯基、直链或支链(C2-C8)亚炔基、(C3-C14)亚芳基和(C3-C14)亚环烷基，
其中D中的一个或多个-CH2-基团任选和独立地被选自O、NR'、S、SO、SO2和CR'R”的Q部分取代；或者
其中任意两个相邻的-CH2-基团任选地被(C3-C14)-环亚烷基的两个成员取代；
条件是D不含有两个相邻的选自O、NR'、S、SO和SO2的Q部分；和
R'，R”和R'”各自独立地选自H，OH，(C1-C8)烷基，(C3-C6)芳基，-NH2，-NH(C1-C6)烷基，-N[(C1-C6)烷基]2，-C(O)(C1-C6)烷基，-C(O)(C3-C14)芳基，-C(O)O(C1-C6)烷基，-C(O)O(C3-C14)芳基，(C3-C6)环烷基，(C3-C14)杂环烷基，(C3-C14)杂芳基，(C3-C14)芳基-(C1-C6)亚烷基-，(C3-C6)环烷基-(C1-C6)亚烷基-，(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)亚烷基-和(C3-C14)杂环-(C1-C6)亚烷基-；
其中任意烷基、亚烷基、芳基、杂芳基、环烷基或杂环烷基任选地被选自卤素、氧代、-COOH、-CN、-NO2、-OH、-NRdRe、-NRgS(O)2Rh、(C1)-C6)烷氧基和(C3-C14)芳氧基的一个或多个成员取代；
其中Rd、Re、Rg和Rh各自独立地选自H、直链或支链(C1-C6)烷基、任选取代的(C3-C14)芳基(C1-C6)亚烷基-、任选取代的(C3-C14)芳基、(C1-C6)羟烷基、(C1-C6)氨基烷基、H2N(C1-C6)亚烷基-、任选取代的(C3-C6)环烷基、任选取代的(C3-C14)杂环烷基、任选取代的(C3-C14)杂芳基、任选取代的(C3-C14)芳基-(C1-C6)亚烷基-、NR'R”C(O)-和(C3-C6)芳基-(C3-C14)-亚环烷基-,
或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体或前药。
38.如权利要求35至37中任一项所述的方法，其特征在于，D选自：
-L1-L2-CH2-CH2-,
-CH2-L1-L2-CH2-
1 2
-CH2-CH2-L-L、
-L1-CH2-CH2-L2-、
-L1-CH2-L2-CH2-、
-CH2-L1-CH2-L2-、
1
-L-CH2-CH2-、
-CH2-L1-CH2-、
-CH2-CH2-L1-,
-L2-CH2-CH2-、
-CH2-L2-CH2-,和
-CH2-CH2-L2-,
其中L1和L2独立地选自O、NR'、S、SO、SO2和CR'R”；和
当L1和L2彼此相邻时，则L1和L2不同时为O、NR'、S、SO或SO2。
39.如权利要求35至38中任一项所述的方法，其特征在于，D为直链或支链(C3-C5)亚烷基。
40.如权利要求35至39中任一项所述的方法，其特征在于，D为丙烯。
41.如权利要求35至40中任一项所述的方法，其特征在于，R1是-OH。
42.如权利要求35至41中任一项所述的方法，其特征在于，每个R2、R3和R4是氢。
43.如权利要求35至42中任一项所述的方法，其特征在于，每个W、X、Y和Z是-C(R”')2-。
44.如权利要求43所述的方法，其特征在于，R”'是H。
45.如权利要求35至43中任一项所述的方法，其特征在于，R”’的至少一次出现不是H。
46.如权利要求43至45中任一项所述的方法，其特征在于，1+m+n+p＝3。
47.如权利要求43至45中任一项所述的方法，其特征在于，1+m+n+p＝4。
48.如权利要求43至47中任一项所述的方法，其特征在于，每个W、X、Y和Z是-CR”'-，并且 表示一个或多个双键。
49.如权利要求35至42中任一项所述的方法，其特征在于，W、X、Y或Z中的至少一个选自-NR”'-、-N、-O-和-S-。
50.如权利要求49所述的方法，其特征在于，W，X，Y和Z中的任意一个是-NH-，其余三个中的每一个是-C(R”')2-。
51.如权利要求49或50所述的方法，其特征在于,R”'是H。
52.如权利要求49或50所述的方法，其特征在于，R”’的至少一次出现不是H。
53.如权利要求49至52中任一项所述的方法，其特征在于，X是-NH-。
54.如权利要求41所述的方法，其特征在于，W、X、Y和Z中的任意一个是-N-，并且其余三个中的每一个是-CR”'-，并且 表示一个或多个双键。
55.如权利要求54所述的方法，其特征在于，X是-N-。
56.如权利要求54或55所述的方法，其特征在于,R”'是H。
57.如权利要求54或55所述的方法，其特征在于，R”’的至少一次出现不是H。
58.如权利要求54或55所述的方法，其特征在于，l+m+n+p＝4。
59.如权利要求35至58中任一项所述的方法，其特征在于，所述式I化合物不是1-氨基-
2-(3-硼丙基)环己烷羧酸。
60.如权利要求35所述的方法，其特征在于，l、m、n和p的总和是3、4、5或6。
61.如权利要求1至34中任一项所述的方法，其特征在于，所述精氨酸酶抑制剂选自下表：
或其药学上可接受的盐、立体异构体或前药。
62.如权利要求1至34中任一项所述的方法，其特征在于，所述精氨酸酶抑制剂选自下表：
或其药学上可接受的盐、立体异构体或前药。
63.如权利要求1至34中任一项所述的方法，其特征在于，所述精氨酸酶抑制剂是具有式II结构的化合物，
其中：
R1选自-OH、ORa和NRbRc；
Ra选自氢、取代或未取代的烷基、芳基、(杂环烷基)-烷基、杂芳烷基和芳烷基；
Rb和Rc各自独立地选自H、-OH、取代或未取代的烷基、-S(O)2(烷基)、-S(O)2(芳基)、(杂环烷基)烷基和杂芳烷基；
(A)R2选自取代或未取代的烷基、烯基、炔基、芳基、环烷基、芳烷基、杂芳烷基、杂芳基、杂环烷基、(杂环烷基)烷基、(杂芳基)杂环亚烷基、(芳基)亚杂环烷基、(芳烷基)亚杂环烷基、(杂芳烷基)杂环亚烷基、((杂环烷基)烷基)杂环亚烷基，和-(CH2)m-(X)u-(CH2)n-(Y)v-Rf；
其中
u和v各自独立地为0或1，并且u+v＝1；
m和n各自独立地为0、1、2、3、4、5或6，其中m+n≥1；
X和Y独立地选自-NH、-O-和-S；
Rf选自H、羟基、取代或未取代的烷基和芳基；和
R5选自取代或未取代的烷基或烷基-C(O)；或
(B)R2是(杂环烷基)烷基；和
5
R选自H、取代或未取代的烷基，和烷基-C(O)；
R3和R4各自独立地选自氢、取代或未取代的烷基，和C(O)-R'，
或R3和R4与它们所键合的硼原子一起形成完全或部分饱和的5-或6-元环，并且任选地含有1-3个选自O、S和N的另外的杂原子环成员；
D选自取代或未取代的亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚芳基和亚环烷基，
其中D中的一个或多个-CH2基团任选和独立地被选自O、NR'、S、SO、SO2和CR'R”的Q部分取代；或者
其中任意两个相邻的-CH2-基团任选地被两个环亚烷基基团取代；
条件是D不含有两个相邻的选自O、NR'、S、SO和SO2的Q部分；和
R'和R”各自独立地选自H、取代或未取代的烷基和芳基；
其中任意烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、环烷基或杂环烷基任选地被取代，例如，被选自卤素、氧代、-COOH、-CN、-NO2、-OH、-NRdRe、-NRgS(O)2Rh、(C1-C6)烷基、(C1-C6)卤代烷基、(C1-C6)卤代烷氧基、(C1-C6)烷氧基、(C3-C14)芳基、(C3-C14)杂芳基、(C3-C14)杂环烷基、(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)亚烷基和(C3-C14)芳氧基的一个或多个成员取代；
或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体或前药。
64.如权利要求63所述的方法，其特征在于，所述精氨酸酶抑制剂是具有式II结构的化合物，或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体或前药，
其中
1 a b c
R选自-OH、OR和NRR；
Ra选自氢、直链或支链(C1-C6)烷基、(C3-C14)芳基、(C3-C14)杂环烷基-(C1-C6)亚烷基-、(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)亚烷基-和(C3-C14)芳基(C1-C6)亚烷基-；
Rb和Rc各自独立地选自H、-OH、直链或支链(C1-C6)烷基、-S(O)2-(C1-C6)烷基、(C3-C14)芳基-S(O)2、(C3-C14))杂环烷基-(C1-C6)亚烷基-和(C3-C14)杂芳基(C1-C6)亚烷基-；
(A)R2选自直链或支链(C1-C6)烷基、直链或支链(C2-C6)烯基、直链或支链(C2-C6)炔基、(C3-C14)芳基、(C3-C14)-环烷基、(C3-C14)芳基(C1-C6)亚烷基-、(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)亚烷基-、(C3-C14)杂芳基、(C3-C14)杂环烷基、(C3-C14)杂环烷基-(C1-C6)亚烷基-、(C3-C14)杂芳基-(C3-C6)亚杂环烷基-、(C3-C14)芳基-(C3-C14)亚杂环烷基-、(C3-C14)-芳基-(C1-C6))烷基-(C3-C14)亚杂环烷基-、(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)烷基-(C3-C14)亚杂环烷基-、(C3-C14)杂环烷基-(C1-C6)烷基-(C3-C14)亚杂环烷基-和-(CH2)m-(X)u-(CH2)n-(Y)v-Rf；
其中
u和v各自独立地为0或1，并且u+v＝1；
m和n各自独立地为0、1、2、3、4、5或6，其中m+n≥1；
X和Y独立地选自-NH、-O-和-S；
Rf选自H、羟基、直链或支链(C1-C6)烷基和(C3-C14)芳基；和
R5选自直链或支链(C1-C6)烷基或(C1-C6)烷基-C(O)；或者
2 5
(B)R 为(C3-C14)杂环烷基-(C1-C2)亚烷基-；和R选自H、直链或支链(C1-C6)烷基，和(C1-C6)烷基-C(O)；
R3和R4各自独立地选自氢、直链或支链(C1-C6)烷基，和C(O)-R'，或
R3和R4与它们所键合的硼原子一起形成完全或部分饱和的5-或6-元环，并且任选地含有1-3个选自O、S和N的另外的杂原子环成员；和
D选自直链或支链(C1-C6)亚烷基、直链或支链(C2-C8)亚烯基、直链或支链(C2-C8)亚炔基、(C3-C14)亚芳基和(C3-C14)亚环烷基，
其中D中的一个或多个-CH2-基团任选和独立地被选自O、NR'、S、SO、SO2和CR'R”的Q部分取代；或者
其中任意两个相邻的-CH2-基团任选地被(C3-C14)-环亚烷基的两个成员取代；
条件是D不含有两个相邻的选自O、NR'、S、SO和SO2的Q部分；
其中任意烷基、亚烷基、烯基、亚烯基、炔基或亚炔基任选地被选自卤素、氧代、-COOH、-CN、-NO2、-OH、-NRdRe、-NRgS(O)2Rh、(C1-C6)烷氧基和(C3-C14)芳氧基的一个或多个成员取代；
其中Rd、Re、Rg和Rh各自独立地选自H、直链或支链(C1-C6)烷基、任选取代的(C3-C14)芳基(C1-C6)亚烷基-、(C1-C6)烷氧基、任选取代的(C3-C14)芳基、(C1-C6)羟烷基、(C1-C6)氨基烷基、H2N(C1-C6)亚烷基-、任选取代的(C3-C6)环烷基、任选取代的(C3-C14)杂环烷基、任选取代的(C3-C14)杂芳基、任选取代的(C3-C14)芳基-(C1-C6)亚烷基-、NR'R”C(O)-和(C3-C6)芳基-(C3-C14)-亚环烷基-和
R'和R”各自独立地选自H、(C1-C8)烷基和(C3-C6)芳基；和
其中任意芳基、杂芳基、环烷基或杂环烷基任选地被选自卤素、-OH、氧代、-COOH、(C3-C14)芳基(C1-C6)亚烷基-、-CN、-NO2、-NH2、(C1-C6)烷基-S-、(C3-C14)环烷基、(C3-C14)杂环烷基、(C3-C14)芳基、(C3-C14)杂芳基、-C(O)NH-(C1-C6)烷基、-NHC(O)-(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基、(C2-C8)烯基、(C2-C8)炔基、(C1-C6)烷氧基、(C1-C6)卤代烷基，和(C1-C6))羟基烷基的一个或多个成员取代。
65.如权利要求63或64所述的方法，其特征在于，D选自：
-L1-L2-CH2-CH2-,
-CH2-L1-L2-CH2-
-CH2-CH2-L1-L2、
-L1-CH2-CH2-L2-,和
-L1-CH2-L2-CH2-、
其中L1和L2独立地选自O、NR'、S、SO、SO2和CR'R”。
66.如权利要求63至65中任一项所述的方法，其特征在于，D为直链或支链(C3-C5)亚烷基。
67.如权利要求63至66中任一项所述的方法，其特征在于，D为丁烯。
1
68.如权利要求63至67中任一项所述的方法，其特征在于，R是-OH。
69.如权利要求63至68中任一项所述的方法，其特征在于，
(A)R2选自直链或支链(C1-C6)烷基、直链或支链(C2-C6)烯基、直链或支链(C2-C6)炔基、(C3-C14)芳基、(C3-C14)-环烷基、(C3-C14)芳基(C1-C6)亚烷基-、(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)亚烷基-、(C3-C14)杂芳基、(C3-C14)杂环烷基、(C3-C14)杂环烷基-(C1-C6)亚烷基-、(C3-C14)杂芳基-(C3-C6)亚杂环烷基-、(C3-C14)芳基-(C3-C14)亚杂环烷基-、(C3-C14)-芳基-(C1-C6)烷基-(C3-C14)亚杂环烷基-、(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)烷基-(C3-C14)亚杂环烷基-、(C3-C14)杂环烷基-(C1-C6)烷基-(C3-C14)亚杂环烷基-和-(CH2)m-(X)u-(CH2)n-(Y)v-Rf；和
3 4
R和R各自为氢
或
(B)R2是(C3-C14)杂环烷基-(C1-C2)亚烷基-；和
R3，R4和R5各自为氢。
70.如权利要求63至69中任一项所述的方法，其特征在于，
R2选自(C1-C6)烷基、(C3-C14)芳基、(C3-C14)杂芳基、(C3-C14)杂环烷基、(C3-C14)杂环烷基-(C1-C6)亚烷基-、(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)亚烷基-、(C3-C14)芳基-(C1-C6)亚烷基-和-(CH2)n-(X)u-(CH2)m-(Y)v-Rf，和
R5选自直链或支链(C1-C6)烷基或(C1-C6)烷基-C(O)-。
71.如权利要求63至70中任一项所述的方法，其特征在于，R2是任选被羟基或-NRdRe取代的烷基。
72.如权利要求71所述的方法，其特征在于，每个Rd和Re独立地选自H、直链或支链(C1-C6)烷基、(C1-C6)氨基烷基、任选取代的(C3-C14)芳基-(C1-C6)亚烷基-、任选取代的(C3-C14)芳基和任选取代的(C3-C6)环烷基。
73.如权利要求72所述的方法，其特征在于，每个Rd和Re为(C1-C6)氨基烷基。
74.如权利要求63至70中任一项所述的方法，其特征在于，R2为-(CH2)n-(X)u-(CH2)m-(Y)v-Rf。
75.如权利要求74所述的方法，其特征在于，X和Y各自独立地为-NH-。
76.如权利要求74所述的方法，其特征在于，m为1且n为2。
77.如权利要求74所述的方法，其特征在于，每个u和v是1。
78.如权利要求63至70中任一项所述的方法，其特征在于，R2是任选地被选自-(C1-C6)烷氧基、-(C1-C6)烷基和-OH的一个或多个成员取代的(C3-C6)杂环烷基-(C1-C2)亚烷基。
79.如权利要求63至70中任一项所述的方法，其特征在于，R2为(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)亚烷基-。
80.如权利要求63至79中任一项所述的方法，其特征在于，式II化合物不是2-氨基-4-硼-2-甲基丁酸。
81.如权利要求1至34中任一项所述的方法，其特征在于，所述精氨酸酶抑制剂选自下表：
或其药学上可接受的盐、立体异构体或前药。
82.如权利要求1至34中任一项所述的方法，其特征在于，所述精氨酸酶抑制剂是具有式III结构的化合物,或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体或前药：
其中
R6选自ORa和NRbRc；
Ra选自氢、取代或未取代的烷基、环烷基、芳基、(杂环烷基)-烷基、杂芳烷基和芳烷基；
Rb和Rc各自独立地选自H、-OH、取代或未取代的烷基、-S(O)2(烷基)、-S(O)2(芳基)、(杂环烷基)烷基和杂芳烷基；
R7选自H、取代或未取代的烷基、芳烷基、杂芳烷基、(杂环烷基)烷基和(烷基)C(O)-；
X选自亚环烷基和亚杂环烷基，
Y选自H、烷基、-NR'R”、羟烷基、环烷基、(环烷基)烷基、芳基、芳烷基、杂环烷基、(杂环烷基)烷基、杂芳基、杂芳烷基、(杂芳基)杂环烷基、(芳基)杂环烷基、(芳烷基)杂环烷基、(杂芳烷基)杂环烷基和((杂环烷基)烷基)杂环烷基；
M选自键、亚烷基、-O-、-C(O)-、-C(S)-、-C(O)NH-、-C(S)NH-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-NR'-，和-C＝NR”-；
R8和R9独立地选自氢、取代或未取代的烷基、环烷基、芳基和C(O)-R'，
或R8和R9与它们所键合的硼原子一起形成完全饱和或部分饱和的5-或6-元环，并且任选地含有1-3个选自O、S和N的另外的杂原子环成员；
其中环任选与环烷基、杂环或芳环稠合；
D选自取代或未取代的亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚芳基和亚环烷基，
其中D中的一个或多个-CH2-基团任选和独立地被选自O、NR'、S、SO、SO2和CR'R”的Q部分取代；或者
其中任意两个相邻的-CH2-基团任选地被两个环亚烷基基团取代；和
条件是D不含有两个相邻的选自O、NR'、S、SO和SO2的Q部分；和
R'和R”独立地选自H、取代或未取代的烷基、-C(O)(烷基)、芳基、芳烷基、氨基烷基、环烷基、杂环烷基、杂芳基；
其中任意烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、环烷基或杂环烷基任选地被取代，例如，被选自卤素、氧代、-COOH、-CN、-NO2、-OH、-NRdRe、-NRgS(O)2Rh、(C1-C6)烷基、(C1-C6)卤代烷基、(C1-C6)卤代烷氧基、(C1-C6)烷氧基、(C3-C14)芳基、(C3-C14)杂芳基、(C3-C14)杂环烷基、(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)亚烷基和(C3-C14)芳氧基的一个或多个成员取代。
83.如权利要求82所述的方法，其特征在于，所述精氨酸酶抑制剂是具有式III结构的化合物，或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体或前药：
其中
6 a b c
R选自OR和NRR；
Ra选自氢、直链或支链(C1-C6)烷基、(C3-C8)环烷基、(C3-C14)芳基、(C3-C14)杂环烷基-(C1-C6)亚烷基-、(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)亚烷基-和(C3-C14)芳基(C1-C6)亚烷基；
Rb和Rc各自独立地选自H、-OH、直链或支链(C1-C6)烷基、-S(O)2-(C1-C6)烷基、(C3-C14)芳基S(O)2-、(C3-C14))杂环烷基-(C1-C6)亚烷基-和(C3-C14)杂芳基(C1-C6)亚烷基-；
R7选自H、直链或支链(C1-C6)烷基、(C3-C14)芳基(C1-C6)亚烷基-、(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)亚烷基-、(C3-C14)杂环烷基-(C1-C6)亚烷基-和(C1-C6)烷基-C(O)；
X选自(C3-C14)-亚环烷基和(C3-C14)亚杂环烷基，
Y选自H、(C1-C14)烷基、-NR'R”、羟基(C1-C6)亚烷基、(C3-C14)-环烷基、(C3-C14)-环烷基-(C1-C6)亚烷基、(C3-C14)芳基、(C3-C14)芳基-(C1-C6)亚烷基、(C3-C14)杂环烷基、(C3-C14)杂环烷基-(C1-C6)亚烷基、(C3-C14)杂芳基、(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)亚烷基、(C3-C14)杂芳基-(C3-C6)亚杂环烷基-、(C3-C14)芳基-(C3-C14)亚杂环烷基-、(C3-C14)-芳基-(C1-C6)烷基-(C3-C14)亚杂环烷基-、(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)烷基-(C3-C14)亚杂环烷基-和(C3-C14)杂环烷基-(C1-C6)烷基-(C3-C14)亚杂环烷基-；
M选自键、-(C1-C6)亚烷基-、-O-、C(O)-、-C(S)-、-C(O)NH-、-C(S)NH-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-NR'-和-C＝NR"-；
R8和R9独立地选自氢、直链或支链(C1-C6)烷基、(C3-C8)环烷基、(C3-C14)芳基和C(O)-R'，
或R8和R9与它们所键合的硼原子一起形成完全饱和或部分饱和的5-或6-元环，并且任选地含有1-3个选自O、S和N的另外的杂原子环成员；
其中环任选与环烷基、杂环或芳环稠合；
D选自直链或支链(C3-C5)亚烷基、直链或支链(C2-C8)亚烯基、直链或支链(C2-C8)亚炔基、(C3-C14)亚芳基和(C3-C14)亚环烷基，
其中D中的一个或多个-CH2-基团任选和独立地被选自O、NR'、S、SO、SO2和CR'R”的Q部分取代；或者
其中任意两个相邻的-CH2-基团任选地被(C3-C14)-环亚烷基的两个成员取代；
条件是D不含有两个相邻的选自O、NR'、S、SO和SO2的Q部分；和
R'和R”独立地选自H、(C1-C8)烷基、-C(O)-(C1-C8)亚烷基、任选取代的(C3-C6)芳基、任选取代的(C3-C14)芳基(C1-C6)亚烷基-、任选取代的(C1-C6)氨基烷基、任选取代的(C3-C6)环烷基、任选取代的(C3-C14)杂环烷基、任选取代的(C3-C14)杂芳基；
其中任意烷基、亚烷基、芳基、杂芳基、环烷基或杂环烷基任选被选自卤素、氧代、-d e g h
COOH、-CN、-NO2、-OH、-NRR 、-NR S(O)2R 、(C1-C6)烷基、(C1-C6)卤代烷基、(C1-C6)卤代烷氧基、(C1-C6)烷氧基、(C3-C14)芳基、(C3-C14)杂芳基、(C3-C14)杂环烷基、(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)亚烷基和(C3-C14)芳氧基的一个或多个成员取代；
其中Rd、Re、Rg和Rh各自独立地选自H、直链或支链(C1-C6)烷基、任选取代的(C3-C14)芳基(C1-C6)亚烷基-、任选取代的(C3-C14)芳基、(C1-C6)羟烷基、(C1-C6)氨基烷基、H2N(C1-C6)亚烷基-、任选取代的(C3-C6)环烷基、任选取代的(C3-C14)杂环烷基、任选取代的(C3-C14)杂芳基、任选取代的(C3-C14)芳基-(C1-C6)亚烷基-和NR'R”C(O)-。
84.如权利要求82或83所述的方法，其特征在于，D选自：
1 2
-L-L-CH2-CH2-,
-CH2-L1-L2-CH2-
-CH2-CH2-L1-L2、
-L1-CH2-CH2-L2-,和
-L1-CH2-L2-CH2-、
其中L1和L2独立地选自O、NR'、S、SO、SO2和CR'R”。
85.如权利要求82至84中任一项所述的方法，其特征在于，D为直链或支链(C3-C5)亚烷基。
86.如权利要求82至85中任一项所述的方法，其特征在于，D为丁烯。
87.如权利要求82至86中任一项所述的方法，其特征在于，R1是-OH。
88.如权利要求82至86中任一项所述的方法，其特征在于，R7、R8和R9是氢。
89.如权利要求82至88中任一项所述的方法，其特征在于，
X是(C3-C14)-亚环烷基；
M选自键、-(C1-C6)亚烷基-、-O-、C(O)-、-C(S)-、-C(O)NH-、-C(S)NH-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-NR'-和-C＝NR”-；和
Y是-NR'R”。
90.如权利要求89所述的方法，其特征在于，M是键且Y是-NH2。
91.如权利要求82至88中任一项所述的方法，其特征在于，
X是(C3-C14)杂环亚烷基；
M选自键、-(C1-C6)亚烷基-、-O-、-C(O)-、-C(S)-、-C(O)NH-、-C(S)NH-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-NR'-和-C＝NR”-；和
Y选自(C3-C14)-环烷基、(C3-C14)芳基、(C3-C14)芳基-(C1-C6)亚烷基、(C3-C14)杂芳基和(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)亚烷基。
92.如权利要求1至34中任一项所述的方法，其特征在于，所述精氨酸酶抑制剂选自下表
或其药学上可接受的盐、立体异构体或前药。
93.如权利要求1至34中任一项所述的方法，其特征在于，所述精氨酸酶抑制剂是具有式(VI)结构的化合物：
或其药学上可接受的盐或前药；
其中：
Ra是H或选自任选取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、(环烷基)烷基、(杂环烷基)烷基、芳基、杂芳基、芳烷基和杂芳烷基；
Rb是H或选自任选取代的烷基、烯基、炔基、酰基、-C(O)O(烷基)和-C(O)O(芳基)；
每个Rc独立地选自H或烷基，或两次出现的Rc与介于其间的-O-B-O-原子一起形成任选取代的含硼环；
X是O或S；
R1和R2各自独立地选自H和任选取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、(环烷基)烷基、杂环烷基、(杂环烷基)烷基、芳基、杂芳基、芳烷基和杂芳烷基；
R1和R2与介于其间的原子一起形成任选取代的5-至7-元环；和
R3是H或任选取代的烷基；
或R1和R3与介于其间的原子一起形成任选取代的5-至7-元环。
94.如权利要求93所述的方法，其特征在于，所述化合物具有式(VIa)的结构：
95.如权利要求93所述的方法，其特征在于，所述化合物具有式(VIb)的结构：
96.如权利要求93所述的方法，其特征在于，所述化合物具有式(VIc)的结构：
97.如权利要求93所述的方法，其特征在于，所述化合物具有式(VId)的结构：
98.如权利要求93所述的方法，其特征在于，所述化合物具有式(VIe)的结构：
99.如权利要求93所述的方法，其特征在于，所述化合物具有式(VIf)的结构：
100.如权利要求93所述的方法，其特征在于，所述化合物具有式(VIg)的结构：
101.如权利要求93所述的方法，其特征在于，所述化合物具有式(VIh)的结构：
102.如权利要求93至95中任一项所述的方法，其特征在于，R2是H。
103.如权利要求93至102中任一项所述的方法，其特征在于，Ra是H或任选取代的烷基。
104.如权利要求103所述的方法，其特征在于，Ra是H。
105.如权利要求93至104中任一项所述的方法，其特征在于，Rb是H或任选取代的烷基或酰基。
b
106.如权利要求105的方法，其特征在于，R是H。
107.如权利要求93至106中任一项所述的方法，其特征在于，对于每次出现，Rc为H。
108.如权利要求93至106中任一项所述的方法，其特征在于，两次出现的Rc一起形成任选取代的二氧杂环戊硼烷、二氧杂环戊硼酮、二氧杂环戊硼二酮、二氧杂环己硼烷、二氧杂环己硼酮或二氧杂环己硼二酮。
109.如权利要求93至107中任一项所述的方法，其特征在于，X为O。
110.如权利要求93-109中任一项所述的方法，其特征在于，如果R1是H，则R3不是苄基。
111.如权利要求93至110中任一项所述的方法，其特征在于，R1为H。
1 3
112.如权利要求93至110中任一项所述的方法，其特征在于，如果R 为苄基，则R不是甲基。
113.如权利要求93至109和112中任一项所述的方法，其特征在于，R1是任选取代的芳烷基、杂芳烷基、(环烷基)烷基或(杂环烷基)烷基。
114.如权利要求93至109和112中任一项所述的方法，其特征在于，R1是任选取代的芳烷基或杂芳烷基。
115.如权利要求114所述的方法，其特征在于，R1是苄基。
116.如权利要求114所述的方法，其特征在于，R1不是被-CF3取代的苄基。
117.如权利要求114所述的方法，其特征在于，R1是杂芳烷基，例如-CH2-(1H-咪唑-4-基)。
118.如权利要求93至109中任一项所述的方法，其特征在于，R1是任选取代的烷基、烯基或炔基。
119.如权利要求118所述的方法，其特征在于，R1是烷基，任选地被一个或多个独立地选自羟基、卤素、卤代烷基、烷氧基、-SH、-S-(烷基)、-SeH、-Se-(烷基)、芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基、氨基、羧酸、酯、胍基和酰氨基的取代基取代。
120.如权利要求119所述的方法，其特征在于，R1是烷基，任选被一个或多个独立地选自羟基、卤素、卤代烷基、烷氧基、-SH、-S-(烷基)、-SeH、-Se-(烷基)、杂芳基、环烷基、杂环烷基、氨基、羧酸、酯、胍基和酰氨基的取代基取代。
1
121.如权利要求120所述的方法，其特征在于，R是烷基，任选地被一个或多个独立地选自羟基、烷氧基、卤代烷基和-S-(烷基)的取代基取代。
122.如权利要求93至109中任一项所述的方法，其特征在于，R1选自任选取代的环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基。
1
123.如权利要求93至109中任一项所述的方法，其特征在于，R是Arg、His、Lys、Asp、Glu、Ser、Thr、Asn、Gln、Cys、Sec、Gly、Ala、Val、Ile、Leu、Met、Phe、Tyr或Trp的氨基酸侧链。
124.如权利要求93至123中任一项所述的方法，其特征在于，R3为H。
125.如权利要求93至109中任一项所述的方法，其特征在于，R1和R3与介于其间的原子一起形成取代的5-元环。
126.如权利要求93至109中任一项所述的方法，其特征在于，R1和R3与介于其间的原子一起形成任选取代的6-或7-元环。
127.如权利要求126所述的方法，其特征在于，R1和R3与介于其间的原子不形成四氢异喹啉基环。
128.如权利要求93所述的方法，其特征在于，所述化合物具有选自以下的结构：
或其药学上可接受的盐或前药。
129.如权利要求1至128中任一项所述的方法，还包括向所述受试者施用免疫检查点抑制剂。
130.如权利要求129所述的方法，其特征在于，所述免疫检查点抑制剂选自CTLA-4、PD-
1、VISTA、B7-H2、B7-H3、PD-L1、B7-H4、B7-H6、ICOS、HVEM、PD-L2、CD160、gp49B、PIR-B、KIR家族受体、TIM-1、TIM-3、TIM-4、LAG-3、BTLA、SIR-α(CD47)、CD48,2B4(CD244)、B7.1、B7.2、ILT-2、ILT-4、TIGIT、HHLA2、嗜乳脂蛋白、A2aR及其组合。
131.如权利要求1至130中任一项所述的方法，还包括向所述受试者施用化学治疗剂至所述受试者。
132.如权利要求131所述的方法，其特征在于，所述一种或多种另外的化学治疗剂包括氨基苯乙哌啶酮、安吖啶、阿那曲唑、天冬酰胺酶、AZD5363、卡介苗、比卡鲁胺、博来霉素、硼替佐米、布舍瑞林、白消安、喜树碱、卡培他滨、卡铂、卡非佐米、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、氯喹、顺铂、克拉屈滨、氯膦酸盐、考比替尼、秋水仙碱、环磷酰胺、环丙孕酮、阿糖胞苷、达卡巴嗪、放线菌素、柔红霉素、去甲氧绿毛菌素、地塞米松、二氯乙酸、二烯雌酚、己烯雌酚、多西紫杉醇、多柔比星、表柔比星、厄洛替尼、雌二醇、雌莫司汀、依托泊苷、依维莫司、依西美坦、非格司亭、氟达拉滨、氟氢可的松、氟尿嘧啶、氟甲睾酮、氟他胺、吉西他滨、染料木黄酮、戈舍瑞林、羟基脲、伊达比星、异环磷酰胺、伊马替尼、干扰素、伊立替康、来那度胺、来曲唑、甲酰四氢叶酸、亮丙瑞林、左旋咪唑、洛莫司汀、氯尼达明、二氯甲基二乙胺、甲羟孕酮、甲地孕酮、美法仑、巯基嘌呤、美司钠、二甲双胍、甲氨蝶呤、米替福新、丝裂霉素、米托坦、米托蒽醌、MK-2206、尼鲁米特、诺考达唑、奥曲肽、奥拉帕尼、奥沙利铂、紫杉醇、氨羟二磷酸二钠、帕唑帕尼、喷司他丁、哌立福辛、普卡霉素、泊马度胺、卟菲尔钠、甲基苄肼、雷替曲塞、利妥昔单抗、卢卡帕尼、司美替尼、索拉非尼、链脲佐菌素、舒尼替尼、苏拉明、他唑巴肽、他莫昔芬、替莫唑胺、替西罗莫司、替尼泊苷、睾酮、沙利度胺、硫鸟嘌呤、硫噻吩、二氯化二茂、托泊替康、托美替尼、曲妥珠单抗、维甲酸、维拉帕尼、长春碱、长春新碱、长春地辛或长春瑞滨。
133.如权利要求131所述的方法，其特征在于，所述一种或多种另外的化学治疗剂包括阿巴伏单抗、阿德木单抗、阿托珠单抗、阿仑单抗、麻安莫单抗、阿泊珠单抗、阿特朱单抗、阿维鲁单抗、博纳吐单抗、BMS-936559、卡妥索单抗、德瓦鲁单抗、爱帕司他、依帕珠单抗、吲哚莫德、奥英妥珠单抗、英妥木单抗(intelumumab)、伊匹单抗、伊沙妥昔单抗、帕博利珠单抗、MED14736、MPDL3280A、纳武单抗、奥卡吐珠单抗(ocaratuzumab)、奥法木单抗、奥拉单抗、帕姆单抗、皮迪利珠单抗(pidilizumab)、利妥昔单抗、替西木单抗(ticilimumab)、奥马珠单抗(samalizumab)或曲美木单抗(tremelimumab)。
134.如权利要求131所述的方法，其特征在于，所述一种或多种另外的化学治疗剂包括阿巴伏单抗、阿德木单抗、阿托珠单抗、麻安莫单抗、阿泊珠单抗、博纳吐单抗、卡妥索单抗、德瓦鲁单抗、依帕珠单抗、奥英妥珠单抗、英妥木单抗(intelumumab)、伊匹单抗、伊沙妥昔单抗、帕博利珠单抗、纳武单抗、奥卡吐珠单抗(ocaRatuzumab)、奥拉单抗、帕姆单抗、皮迪利珠单抗(pidilizumab)、替西木单抗(ticilimumab)、奥马珠单抗(samalizumab)或曲美木单抗(tremelimumab)。
135.如权利要求1至134所述的方法，其特征在于，所述疾病是癌症。
136.如权利要求135所述的方法，其特征在于，所述癌症是急性淋巴细胞白血病(ALL)、急性髓性白血病(AML)、肾上腺皮质癌、肛门癌、阑尾癌、非典型畸形/横纹肌样瘤、基底细胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脑肿瘤、星形细胞瘤、脑和脊髓肿瘤、脑干胶质瘤、中枢神经系统非典型畸形/横纹肌样瘤、中枢神经系统胚胎性肿瘤、乳腺癌、支气管肿瘤、伯基特(Burkitt)淋巴瘤、类癌肿瘤、原发灶不明癌、中枢神经系统癌症、宫颈癌、儿童癌症、脊索瘤、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性粒细胞白血病(CML)、慢性骨髓增生性疾病、结肠癌、结肠直肠癌、颅咽管瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、原位导管癌(DCIS)、胚胎肿瘤、子宫内膜癌、室管膜母细胞瘤、室管膜瘤、食道癌、鼻腔神经胶质瘤、尤文肉瘤、颅外生殖细胞肿瘤、性腺外生殖细胞瘤、肝外胆管癌、眼癌、骨的纤维组织细胞瘤、胆囊癌、胃癌、胃肠道类癌肿瘤、胃肠道间质瘤(GIST)、生殖细胞瘤、颅外生殖细胞肿瘤、性腺外生殖细胞肿瘤、卵巢生殖细胞肿瘤、妊娠滋养细胞肿瘤、神经胶质瘤、多毛细胞白血病、头颈癌、心脏癌、肝细胞癌、组织细胞增多症、朗格汉斯细胞癌、霍奇金淋巴瘤、下咽癌、眼内黑色素瘤、胰岛细胞瘤、卡波西肉瘤、肾癌、朗格汉斯细胞组织细胞增生症、喉癌、白血病、唇和口腔癌、肝癌、小叶原位癌(LCIS)、肺癌、淋巴瘤、艾滋病相关淋巴瘤、巨球蛋白血症、男性乳腺癌、成神经管细胞瘤、髓母细胞瘤、黑色素瘤、梅克尔细胞癌、恶性间皮瘤、原发性隐匿性转移性鳞状颈癌、涉及NUT基因的中线癌、口腔癌、多发性内分泌肿瘤综合征、多发性骨髓瘤/血浆细胞肿瘤、蕈样真菌病、骨髓增生异常综合征、骨髓增生异常/骨髓增生性肿瘤、慢性粒细胞白血病(CML)、急性髓性白血病(AML)、骨髓瘤、多发性骨髓瘤、慢性骨髓增生性疾病、鼻腔癌、鼻窦癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、非霍奇金淋巴瘤、非小细胞肺癌、口腔癌、口腔癌、唇癌、口咽癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、乳头状瘤病、副神经节瘤、鼻窦癌、鼻腔癌、甲状旁腺癌、阴茎癌症、咽癌、嗜铬细胞瘤、中间分化的松果体实质肿瘤、松果体细胞瘤、垂体瘤、浆细胞肿瘤、胸膜肺瘤、乳腺癌、原发性中枢神经系统(CNS)淋巴瘤、前列腺癌、直肠癌、肾细胞癌、肾盂癌、输尿管癌、移行细胞癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、唾液腺癌、肉瘤、塞扎里氏(Sézary)综合征、皮肤癌、小细胞肺癌、小肠癌、软组织肉瘤、鳞状细胞癌、鳞状原发性颈部癌、胃癌、幕上原始神经外胚层肿瘤、T细胞淋巴瘤、睾丸癌、喉癌、胸腺瘤、胸腺癌、甲状腺癌、肾盂和输尿管移行细胞癌、妊娠滋养细胞肿瘤、未知原发灶、儿童异常癌症、尿道癌、子宫癌、子宫肉瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症或威尔姆斯肿瘤。
137.如权利要求1至136中任一项所述的方法，其特征在于，给药包括肠胃外给药。
138.如权利要求1至136中任一项所述的方法，其特征在于，给药包括口服给药。
139.如权利要求1至136中任一项所述的方法，其特征在于，给药包括局部给药到所述受试者中存在的肿瘤。
精氨酸酶抑制剂组合疗法
1.背景技术
累，过继免疫疗法在治疗癌症方面的应用有限。尚未确定MDSCs抑制过继免疫疗法功效的机制原理。虽然已知MDSC在肿瘤微环境中产生精氨酸酶，从而减少肿瘤微环境中精氨酸的量，但尚未确定精氨酸在过继免疫疗法中的作用。早期研究表明，精氨酸可能通过几种不同的
机制潜在地抑制过继性T细胞免疫疗法(参见，例如，Raber i.，Oncotarget，7,17565-
17578；Lorvik等，2016,Cancer Res.,76,6864-6876；Ellyard等.2010,J.Immunother.33,
443-452)。例如，Lorvik等和Ellyard等人假定精氨酸酶在确保特定巨噬细胞对癌细胞具有细胞毒性方面起重要作用，从而抑制其增殖。
所述，本申请公开了过继免疫疗法与精氨酸酶抑制协同作用，从而提供治疗癌症的有效方
法。
(例如，依次或同时给药)。例如，精氨酸酶抑制剂与过继性T细胞免疫疗法或过继性NK细胞免疫疗法联合施用，以增强过继性T细胞或NK细胞免疫疗法的功效。在一些实施方式中，过继性T细胞免疫疗法涉及将细胞毒性T细胞(CTL)例如CD8+T细胞转移至受试者。在一些实施
方式中，过继性T细胞免疫疗法涉及将CD4+T细胞转移至受试者。在一些实施方式中，过继性T细胞免疫疗法涉及将CD8+T细胞和CD4+T细胞转移至受试者。在一些实施方式中，过继免疫疗法涉及将T细胞和NK细胞两者都转移至受试者。
或IL-5)一起施用。
原呈递T细胞(aK562T细胞)。在一些实施方式中，所述免疫细胞不富集。在一些实施方式中，包含免疫细胞的组合物和精氨酸酶抑制剂联合施用(例如，依次或同时施用)。包含免疫细
胞的组合物可以进一步包含一种或多种细胞因子(例如，IL-2或IL-15)。在一些实施方式
中，向受试者施用约1×106个细胞/kg细胞至约1×109个细胞/kg细胞。
胞的组合物)和抗体(例如，靶向肿瘤细胞的抗体)。抗体可以是单克隆抗体、多克隆抗体或嵌合抗体。精氨酸酶抑制剂，包含免疫细胞的组合物和抗体可以一起或不同时间(例如，依次)施用。
症的受试者(例如，人类患者)，以增强过继免疫疗法的治疗活性。在一个这样的实施方式
中，标准护理化学治疗剂是吉西他滨。在另一个这样的实施方式中，化学治疗剂是环磷酰
胺。在另一个这样的实施方式中，化学治疗剂是氟达拉滨。化学治疗试剂可以在过继免疫疗法/精氨酸酶抑制剂之前、之后和/或同时施用。在所有这些实施方式中，过继免疫疗法和精氨酸酶抑制剂可以与一种或多种细胞因子(例如IL-2或IL-5)一起施用。
CTLA-4抑制剂一起施用，以增强过继免疫疗法的功效。在此类实施方式中，检查点抑制剂可以在过继免疫疗法/精氨酸酶抑制剂之前、之后和/或同时施用。在所有这些实施方式中，过继免疫疗法和精氨酸酶抑制剂可以与一种或多种细胞因子(例如IL-2或IL-5)一起施用。
中。例如，精氨酸酶抑制剂对可溶性精氨酸酶的亲和力可能高于细胞内精氨酸酶。这种精氨酸酶抑制剂可以提高过继免疫疗法的功效，而没有通常与细胞中精氨酸补充相关的毒理学
问题。在一些实施方式中，所述精氨酸酶抑制剂在肝细胞系(例如HepG2)或K562细胞系中的细胞内精氨酸酶的IC50值比细胞裂解物中的可溶性精氨酸酶高至少两个、三个或四个数量
级。
中分别用抗CD3/抗CD28或IL-2刺激CFSE-负载T细胞或NK细胞。72h后通过流式细胞术测量
增殖。(图2B)分离的人粒细胞从培养基中消耗L-精氨酸，48h后通过LC/MS测量。(图2C)通过与从相同健康供体分离的粒细胞共培养，抑制人外周血T细胞增殖。(图2D)左，精氨酸酶抑制剂以剂量依赖性方式抑制粒细胞从培养基中消耗精氨酸；右，精氨酸酶抑制剂以剂量依
赖性方式抑制粒细胞介导的T细胞增殖抑制。共培养物中粒细胞与T细胞的比例为0.25比1。
(图2E)精氨酸酶抑制剂逆转粒细胞MDSC赋予的T细胞抑制。从肺癌患者血液中纯化的粒细
胞-MDSC处理过的培养基抑制T细胞增殖并消耗L-精氨酸，并且这两种作用以精氨酸酶抑制
剂的剂量依赖性方式逆转。左，精氨酸在培养基中的含量；右，T细胞增殖。处理培养基的MDSC与T细胞的比例为1比1。(图2F)，分离自头颈癌患者血液的纯化粒细胞处理过的培养基抑制T细胞增殖并消耗L-精氨酸，并且这两种作用以精氨酸酶抑制剂的剂量依赖性方式逆
转。左，T细胞增殖；右，精氨酸在培养基中的数量。处理培养基的粒细胞与T细胞的比例为
0.5比1。(图2G)精氨酸酶抑制剂逆转癌症患者粒细胞赋予的干扰素-γ和颗粒酶-B分泌的
抑制。通过流式细胞小球微阵列术分析来自组的培养基(图2F)。
每天两次的剂量(图3B)，并在最后一剂2h后收集样品。通过LC/MS测量血浆和肿瘤裂解物中的精氨酸酶抑制剂(图3A和3B，顶行)和L-精氨酸(图3C和3B，底行)。(图3C)接种CT26细胞并每天两次给予溶媒或精氨酸酶抑制剂23天的小鼠的体重。(****P<0.0001；***P<0.001；**P<0.01；相对于溶媒)。
4B)在骨髓室中缺乏Arg1基因表达的小鼠(称为ARG1ΔM)比含有野生型Arg1(ARG1WT)的小鼠
ΔM
生长的肿瘤更小，用精氨酸酶抑制剂处理ARG1 小鼠不会进一步减少肿瘤生长，表明精氨
酸酶抑制剂的靶向活性(每组N＝16)。(T检验：****P<0.0001；*P<0.05)。
Prkdc(SCID)/SzJ小鼠植入LLC细胞，精氨酸酶抑制剂以100mg/kg给予每天口服两次。(图
5C-5E)精氨酸酶抑制剂在B16(图5C)、CT26(图5D)和LLC(图5E)模型中的肿瘤生长抑制由
CD8+和NK细胞介导。用消耗的抗体处理荷瘤小鼠，每日给予两次溶媒或100mg/kg精氨酸酶
抑制剂。在研究第13天(CD8+细胞消耗)或研究第14天(NK细胞消耗)分析来自LLC研究的肿
瘤。(****P<0.0001；***P<0.001；**P<0.01)。
中，精氨酸酶抑制剂处理导致在研究第9天观察到的CD25+CD8+T细胞增加(每组N＝10)。(图
6C)在LLC模型中，精氨酸酶抑制剂处理导致在研究第14天观察到的肿瘤浸润性CD8+T细胞
增加和CD68+骨髓细胞减少(每组N＝10)。(图6D)在4T1模型中，精氨酸酶抑制剂处理导致研究第10天观察到的T细胞和NK细胞的增加和骨髓细胞的减少(每组N＝10)。(图6E)精氨酸酶
抑制剂增加T细胞和NK细胞标志物和干扰素应答基因。用溶媒或100mg/kg BID精氨酸酶抑
制剂处理的小鼠的LLC肿瘤中的mRNA转录物通过Nanostring测定(每组N＝6)。(图6F)用溶
媒或200mg/kg BID精氨酸酶抑制剂处理的小鼠的LLC肿瘤中的细胞因子和趋化因子通过
Luminex测定(每组N＝5)(T检验：**P<0.01；*P<0.05)。
长曲线(左侧和中间)和存活曲线(右侧)。每组N＝10。(图7B)在CT26模型(左)或LLC模型
(右)中结合吉西他滨的精氨酸酶抑制剂抑制肿瘤生长。每组N＝10。(图7C)精氨酸酶抑制剂和过继性T细胞转移抑制B16-F10模型中的肿瘤生长。对所有组施用环磷酰胺加氟达拉滨
(C/F)的非清髓化疗方案，并将IL-2给予接受T细胞的组。在研究第9天，将Pmel-1T细胞转移至T细胞组(ACT)中的小鼠。每组N＝10。(图7D)精氨酸酶抑制剂和过继性NK细胞转移减少了CT26模型中的肺转移。N＝6，对照；N＝7，精氨酸酶抑制剂；N＝5，NK细胞；N＝5，精氨酸酶抑制剂+NK细胞(T检验：****P<0.0001；***P<0.001；**P<0.01；*P<0.05)。
润粒细胞。(图8B-8D)在正常人组织(N＝33，组织分析)和人肿瘤组织(N＝12，肿瘤组织学分析)的切片中对Arg1进行免疫组织化学染色。显示了代表性的图像。箭头指向表达精氨酸酶的骨髓细胞。(图8E)通过定量MultiOmyx免疫荧光测定的在肿瘤组织微阵列中共表达粒细
胞标记物、CD15或巨噬细胞标记物、CD68的精氨酸酶1-阳性细胞的百分比。(图8F)来自患有头颈癌的患者的肿瘤切片的免疫荧光染色(MultiOmyx)显示出大量精氨酸酶1-阳性粒细
胞。(图8G)通过ELISA测定的来自癌症患者(N＝76，来自13种不同的组织学)和健康志愿者
(N＝31)的血浆精氨酸酶1蛋白质。(图8H)通过LC/MS测定的来自癌症患者(N＝26，来自7种
不同的组织学)和健康志愿者(N＝20)的血浆L-精氨酸(****P<0.0001，相对健康供体)。
4.详细说明
物来治疗或预防受试者中的疾病(例如，癌症或病毒感染)的方法和组合物。免疫细胞可以
是同种异体的或自体的。在一些实施方式中，该方法还包括联合施用本文公开的抗体。
4.1.定义
具有4-8个原子的杂环。
具有4-8个原子的杂环。
的一个IgV组成，使得抗体是二价的(例如，结合2个物质但可以具有结合特异性之一的2个
拷贝)。可以通过在抗体的一侧串联两个IgV来改造这些抗体。此外，尽管Fv片段的两个结构域VL和VH由不同的基因编码，但它们可以使用重组方法通过合成接头连接，使得它们能够
作为单个蛋白质链制备，其中VL和VH区配对形成单价多肽(称为单链Fv(scFv)；参见例如
Bird等人，(1988)Science 242:423-426；和Huston等人.(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA
85:5879-5883；和Osbourn等人.1998,Nature Biotechnology 16:778)。此类单链抗体也旨在包括在抗体的术语“抗原结合部分”内。任何特异性scFv的VH和VL序列可以与人免疫球蛋白恒定区cDNA或基因组序列连接，以产生编码完整IgG多肽或其他同种型的表达载体。VH和VL也可以使用蛋白质化学或重组DNA技术用于产生Fab、Fv或免疫球蛋白的其他片段。还包
括其他形式的单链抗体，例如双抗体。双抗体是二价双特异性抗体，其中VH和VL结构域在单个多肽链上表达，但使用的接头太短而不允许在同一链上的两个结构域之间配对，从而迫
使结构域与另一条链上的互补结构域配对并产生两个抗原结合位点(参见，例如，
Holliger，P.，等人，(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:6444-6448；Poljak,R.J.,等人.(1994)Structure 2:1121-1123).
肽的实例包括使用链霉亲和素核心区来制备四聚体scFv多肽(Kipriyanov，S.M.，等人，
(1995)人抗体和杂交瘤(Human Antibodies and Hybridomas)6:93-101)和利用半胱氨酸
残基，标记肽和C末端多组氨酸标签制备二价和生物素化的scFv多肽(Kipriyanov,S.M.,等
人.(1994)Mol.Immunol.31:1047-1058)。抗体部分，例如Fab和F(ab')2片段，可以使用常规技术从完整抗体制备，例如分别用完全抗体的木瓜蛋白酶或胃蛋白酶消化。此外，可以使用如本文所述的标准重组DNA技术获得抗体、抗体部分和免疫粘附多肽。如本文进一步所述，术语“抗体”包括基因工程或其他修饰形式的免疫球蛋白，例如胞内抗体、肽体、嵌合抗体、完全人抗体、人源化抗体和异源偶联抗体(例如，双特异性抗体、双抗体、三抗体、四抗体、串联di-scFv，串联三scFv)。术语功能性抗体片段还包括抗体的抗原结合片段，包括但不限于片段抗原结合(Fab)片段、F(ab')2片段、Fab'片段、Fv片段、重组IgG(rIgG)片段、单链可变片段(scFv)和单结构域抗体(例如，sdAb、sdFv、纳米抗体等)片段。
环结构中具有4-8个原子的杂环。
中，芳环(例如苯基)可稠合至饱和或不饱和环，例如环己烷、环戊烷或环己烯。如果化合价允许，饱和、不饱和和芳族双环的任何组合，包括在碳环的定义中。示例性的“碳环”包括环戊烷、环己烷、双环[2.2.1]庚烷、1,5-环辛二烯、1,2,3,4-四氢化萘、双环[4.2.0]辛-3-烯、萘和金刚烷。示例性的稠合碳环包括十氢化萘、萘、1,2,3,4-四氢化萘、双环[4.2.0]辛烷、
4,5,6,7-四氢-1H-茚和双环[4.1.0]庚-3-烯。“碳环”可以在能够承载氢原子的任意一个或多个位置被取代。
对于合适的有机化合物，允许的取代基可以是一个或多个，相同或不同的。出于本公开的目的，杂原子例如氮可以具有氢取代基和/或本文所述的有机化合物的任何允许的取代基，其满足杂原子的化合价。取代基可包括本文所述的任何取代基，例如，卤素、羟基、羰基(如羧基、烷氧基羰基、甲酰基或酰基)、硫代羰基(如硫代酯、硫代乙酸酯、或硫代甲酸酯)、烷氧基、磷酰基、磷酸酯、膦酸酯、次膦酸酯、氨基、酰氨基、脒基、亚胺、氰基、硝基、叠氮基、巯基、烷硫基、硫酸酯、磺酸酯、氨磺酰基、磺酰氨基、磺酰基、杂环基、芳烷基或芳族或杂芳族部分。本领域技术人员将理解，如果合适，取代基本身可以被取代。除非特别说明为“未取代的”，否则本文对化学部分的引用应理解为包括取代的变体。例如，提及“芳基”基团或部分，隐含地包括取代和未取代的变体。
其中R9和R10独立地代表氢或烃基，例如烷基，或R9和R10与介于其间的原子一起完成在
环结构中具有4-8个原子的杂环。
成环结构中具有4-8个原子的杂环。
(Compendium of Synthetic Organic Methods)，卷1-8,1971-1996,John Wiley&Sons,NY
中找到。代表性的氮保护基团包括但不限于甲酰基、乙酰基、三氟乙酰基、苄基、苄氧基羰基(“CBZ”)、叔丁氧基羰基(“Boc”)、三甲基甲硅烷基(“TMS”)、2-三甲基甲硅烷基-乙磺酰基(“TES“)、三苯甲基和取代的三苯甲基、烯丙氧基羰基、9-芴基甲氧基羰基(“FMOC”)、硝基-藜芦氧基羰基(“NVOC”)等。代表性的羟基保护基团包括但不限于羟基被酰化(酯化)或烷基化的那些，例如苄基和三苯甲基醚，以及烷基醚、四氢吡喃基醚、三烷基甲硅烷基醚(例如，TMS或TIPS基团)、乙二醇醚，如乙二醇和丙二醇衍生物和烯丙基醚。
4.2.详细说明
过继细胞转移
在一些实施方式中，选择与受试者共享至少2个(例如，至少3个、至少4个、至少5个、至少6个、至少7个，或至少8个)HLA等位基因且通过共享的HLA等位基因受到限制的免疫细胞。
a.T细胞转移
感染(例如，EBV或CMV感染)的受试者。在一些实施方式中，免疫细胞包含在存在APC的情况下扩增的T细胞，所述APC呈递一种或多种病毒肽(例如，EBV或CMV肽)。APC可以从一种或多种不同的病毒中呈递一种或多种病毒肽。APC可以是B细胞，树突细胞或人工抗原呈递细胞
(例如，人工抗原呈递细胞，如aK562细胞)。
b.NK过继细胞转移
(Herberman等人，Bolhuis等人，Trinchieri等人，Reynolds等人)。本文提供了向受试者联合施用包含免疫细胞(例如NK细胞，如NK-92细胞)的组合物和本文公开的精氨酸酶抑制剂
的方法。过继转移到受试者的NK细胞可以是自体的或同种异体的。
IL-2或IL-8)存在下扩增或孵育。NK细胞扩增可以包括暴露于细胞因子的交替时间段，然后是“休息”时间段，其中NK细胞不与细胞因子一起孵育。在某些实施方式中，NK细胞可以在辐射的饲养细胞存在下扩增。在一些实施方式中，NK细胞粘附于选定的靶细胞类型，并且具有特异性裂解靶细胞的能力。在一些实施方式中，NK细胞具有裂解靶细胞类型(例如，肿瘤细胞类型或病毒感染细胞)的能力。可以通过本领域已知的任何方法制备NK细胞用于向受试
给药，包括但不限于获得天然杀伤细胞的制剂，使制剂与所选择的靶细胞类型接触，基于它们对所选择的靶细胞类型的粘附选择天然杀伤细胞，并通过促进NK细胞之间的增殖来培养
所选择的天然杀伤细胞。在一些实施方式中，抗体可以与NK过继细胞疗法联合施用。
抗体疗法
面涉及具有在结合其靶点时引发生物活性的抗体。该生物活性可包括例如ADCC、细胞裂解、细胞死亡和/或肿瘤大小的减少。ADCC可以在体外被评估(Kroesen等人,免疫方法
(J.Immunol.Methods)，156：47-54,1992,其全部通过引用并入)或在体内通过使用组织学
分析来量化免疫细胞向肿瘤的浸润。
组合物、靶向并结合癌细胞或肿瘤细胞(因此指导NK细胞识别并中和癌症或肿瘤细胞)的抗
体和本文公开的精氨酸酶抑制剂。在其他实施方式中，受试者用本文公开的精氨酸酶抑制
剂和抗体处理以诱导体内NK细胞攻击癌症或肿瘤细胞。
精氨酸酶抑制剂
该方法还包括向受试者联合施用抗体。
其中，
R1选自-OH、ORa和NRbRc；
Ra选自氢、取代或未取代的烷基、环烷基、芳基、(杂环烷基)烷基、(杂芳基)烷基和芳烷
基；
Rb和Rc各自独立地选自H、-OH、取代或未取代的烷基、-SO2(烷基)、-SO2(芳基)、(杂环烷基)烷基和(杂芳基)烷基；
R2选自H、取代或未取代的烷基、和(烷基)C(O)-；
W、X、Y和Z各自独立地选自键、-C(R')(R”')-、-C(R”')2-、-CR”'-、-NR”'-、-N-、-O-、-C(O)-和-S-，使得W、X、Y和Z中不超过三个同时代表键；并且没有两个相邻的W、X、Y和Z成员同时是-O-、-S-、-N-或-NR”'-；
l、m、n和p各自独立地为0、1或2，例如1或2；
任选代表一个或多个双键；
R3和R4各自独立地选自氢、取代或未取代的烷基、和C(O)-R'，或
R3和R4与它们所键合的硼原子一起形成完全饱和或部分饱和的5-或6-元环；
D选自取代或未取代的亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚芳基和亚环烷基，
其中D中的一个或多个-CH2-基团任选和独立地被选自O、NR'、S、SO、SO2和CR'R”的Q部
分取代；或者
其中任意两个相邻的-CH2-基团任选被两个环亚烷基基团取代(从而形成稠合双环体
系)；
条件是D不含有两个相邻的选自O，NR'，S，SO和SO2的Q部分；和
d d
R'、R”和R'”各自独立地选自S(O)R 、S(O)2R 、烷基、芳基、-NH(烷基)、烷基)2、-C(O)NRdRe、-C(O)(烷基)、-C(O)(芳基)、-C(O)O(烷基)、-C(O)O(芳基)、环烷基、杂环烷基、杂环烷基)、杂芳基、芳烷基、O(环烷基)烷基、(杂芳基)烷基-和(杂环烷基)烷基；
其中Rd和Re各自独立地选自H、取代或未取代的烷基、芳烷基、芳基、羟烷基、氨基烷基、环烷基、杂环烷基、杂芳基、NR'R”C(O)-和(芳基)亚环烷基-，
其中任意烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、环烷基或杂环烷基任选被取代，例如，具有选自卤素、氧代、-COOH、-CN、-NO2、-OH、-NRdRe、-NRgS(O)2Rh，(C1-C6)烷基，(C1-C6)卤代烷基，(C1-C6)卤代烷氧基，(C1-C6)烷氧基，(C3-C14)芳基，(C3-C14)杂芳基，(C3-C14)杂环烷基，(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)亚烷基和(C3-C14)芳氧基中的一个或多个成员；
或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体或前药。
a
R选自氢，直链或支链(C1-C6)烷基，(C3-C8)环烷基，(C3-C14)芳基，(C3-C14)杂环烷基-
(C1-C6)亚烷基-、(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)亚烷基-和(C3-C14)芳基(C1-C6)亚烷基-；
Rb和Rc各自独立地选自H、-OH、直链或支链(C1-C6)烷基、-SO2-(C1-C6)烷基、(C3-C14)芳基-SO2-、(C3-C14)杂环烷基-(C1-C6)亚烷基-和(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)亚烷基-；
2
R选自H、直链或支链(C1-C6)烷基，和(C1-C6)烷基-C(O)-；
W、X、Y和Z各自独立地选自键、-C(R')(R”')-、-C(R”')2-、-CR”'-、-NR”'-、-N-、-O-、-C(O)-和-S-，使得W、X、Y和Z中不超过三个同时代表键；并且没有两个相邻的W、X、Y和Z成员同时是-O-、-S-、-N-或-NR”'-；
l、m、n和p各自独立地为0、1或2，例如1或2；
任选代表一个或多个双键；
R3和R4各自独立地选自氢、直链或支链(C1-C6)烷基、和C(O)-R'，或
R3和R4与它们所键合的硼原子一起形成完全饱和或部分饱和的5-或6-元环；
D选自直链或支链(C3-C5)亚烷基、直链或支链(C2-C8)亚烯基、直链或支链(C2-C8)亚炔
基、(C3-C14)亚芳基和(C3-C14)亚环烷基，
其中D中的一个或多个-CH2-基团任选和独立地被选自O、NR'、S、SO、SO2和CR'R”的Q部
分取代；或者
其中任意两个相邻的-CH2-基团任选地被(C3-C14)-环亚烷基的两个成员取代；
条件是D不含有两个相邻的选自O，NR'，S，SO和SO2的Q部分；和
d d
R’、R”和R”’各自独立地选自S(O)R、S(O)2R、(C1-C8)烷基、(C3-C6)芳基、-NH(C1-C6)烷基、C6)烷基]2、-C(O)NRdRe、-C(O)(C1-C6)烷基、-C(O)(C3-C14)芳基、-C(O)O(C1-C6)烷基、-C(O)O(C3-C14)芳基、(C3-C6)环烷基、(C3-C14)杂环烷基、3C14)杂环烷基、(C3-C14)杂芳基、(C3-C14)芳基-(C1-C6)亚烷基-、C14)芳基-(C1-C6)亚烷基-、O34(C3-C6)环烷基-(C1-C6)亚烷基-、(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)亚烷基-和(C3-C14)杂环-(C1-C6)亚烷基-；
其中任意烷基、亚烷基、芳基、杂芳基，环烷基或杂环烷基任选被选自卤素、氧代、-
NO2、-NRgS(O)2Rh、(C1-C6)烷氧基、(C3-C14)芳基、(C1-C6)卤代烷基和(C3-C14)芳氧基的一个或多个成员取代；
其中Rd、Re、Rg和Rh各自独立地选自H、直链或支链(C1-C6)烷基、任选取代的(C3-C14)芳基(C1-C6)亚烷基-、任选取代的(C3-C14)芳基、(C1-C6)羟烷基、(C1-C6)氨基烷基、H2N(C1-C6)亚烷基-、任选取代的(C3-C6)环烷基、任选取代的(C3-C14)杂环烷基、任选取代的(C3-C14)杂芳基、任选取代的(C3-C14)芳基-(C1-C6)亚烷基-、NR'R”C(O)-和(C3-C6)芳基-(C3-C14)-亚环烷基-。
a
R选自氢、直链或支链(C1-C6)烷基、(C3-C8)环烷基、(C3-C14)芳基、(C3-C14)杂环烷基-
(C1-C6)亚烷基-、(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)亚烷基-和(C3-C14)芳基(C1-C6)亚烷基-；
Rb和Rc各自独立地选自H、-OH、直链或支链(C1-C6)烷基、-SO2-(C1-C6)烷基、(C3-C14)芳基-SO2-、(C3-C14)杂环烷基-(C1-C6)亚烷基-和(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)亚烷基-；
2
R选自H、直链或支链(C1-C6)烷基，和(C1-C6)烷基-C(O)-；
W、X、Y和Z各自独立地选自键、-C(R”')2-、-CR”'-、-NR”'-、-N-、-O-、-C(O)-和-S-，使得W、X、Y和Z中不超过三个同时代表键；和
没有两个相邻的W、X、Y和Z成员同时是-O-、-S-、-N-或-NR”'-；
l、m、n和p各自独立地为0、1或2，例如1或2；
任选代表一个或多个双键；
R3和R4各自独立地选自氢、直链或支链(C1-C6)烷基、和C(O)-R'，或
R3和R4与它们所键合的硼原子一起形成完全饱和或部分饱和的5-或6-元环；
D选自直链或支链(C3-C5)亚烷基、直链或支链(C2-C8)亚烯基、直链或支链(C2-C8)亚炔
基、(C3-C14)亚芳基和(C3-C14)亚环烷基，
其中D中的一个或多个-CH2-基团任选和独立地被选自O、NR'、S、SO、SO2和CR'R”的Q部
分取代；或者
其中任意两个相邻的-CH2-基团任选地被(C3-C14)-环亚烷基的两个成员取代；
条件是D不含有两个相邻的选自O，NR'，S，SO和SO2的Q部分；和
R'、R”和R”’各自独立地选自H、OH、(C1-C8)烷基、(C3-C6)芳基、-NH2、-NH(C1-C6)烷基、-N[(C1-C6)烷基]2、-C(O)(C1-C6)烷基、-C(O)(C3-C14)芳基、-C(O)O(C1-C6)烷基、-C(O)O(C3-C14)芳基、(C3-C6)环烷基、(C3-C14)杂环烷基、(C3-C14)杂芳基、(C3-C14)芳基-(C1-C6)亚烷基-、(C3-C6)环烷基-(C1-C6)亚烷基-、(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)亚烷基-和(C3-C14)杂环-(C1-C6)亚烷基-；
其中任意烷基、亚烷基、芳基、杂芳基、环烷基或杂环烷基任选被一个或多个选自卤素、
氧代、-COOH、-CN、-NO2、-OH、-NRdRe、-NRgS(O)2Rh、(C1-C6)烷氧基和(C3-C14)芳氧基的成员取代；
其中Rd、Re、Rg和Rh各自独立地选自H、直链或支链(C1-C6)烷基、任选取代的(C3-C14)芳基(C1-C6)亚烷基-、任选取代的(C3-C14)芳基、(C1-C6)羟烷基、(C1-C6)氨基烷基、H2N(C1-C6)亚烷基-、任选取代的(C3-C6)环烷基、任选取代的(C3-C14)杂环烷基、任选取代的(C3-C14)杂芳基、任选取代的(C3-C14)芳基-(C1-C6)亚烷基-、NR'R”C(O)-和(C3-C6)芳基-(C3-C14)-亚环烷基-。
-CH2-L1-L2-CH2-
-CH2-CH2-L1-L2、
-L1-CH2-CH2-L2-、
-L1-CH2-L2-CH2-、
-CH2-L1-CH2-L2-、
1
-L-CH2-CH2-、
-CH2-L1-CH2-、
-CH2-CH2-L1-、
-L2-CH2-CH2-、
2
-CH2-L-CH2-,和
-CH2-CH2-L2-、
其中L1和L2独立地选自O、NR'、S、SO、SO2和CR'R”；和
当L1和L2彼此相邻时，则L1和L2不同时为O、NR'、S、SO或SO2。
且 表示一个或多个双键。
其余三个中的每一个是-CR”'-，并且 表示一个或多个双键。
其中：
R1选自-OH、ORa和NRbRc；
Ra选自氢、取代或未取代的烷基、芳基、(杂环烷基)-烷基、杂芳烷基和芳烷基；
Rb和Rc各自独立地选自H、-OH、取代或未取代的烷基、-S(O)2(烷基)、-S(O)2(芳基)、(杂环烷基)烷基和杂芳烷基；
(A)R2选自取代或未取代的烷基、烯基、炔基、芳基、环烷基、芳烷基、杂芳烷基、杂芳基、杂环烷基、(杂环烷基)烷基、(杂芳基)杂环亚烷基、(芳基)杂环亚烷基、(芳烷基)杂环亚烷基、(杂芳烷基)杂环亚烷基、((杂环烷基)烷基)杂环亚烷基，和-(CH2)m-(X)u-(CH2)n-(Y)v-Rf；
其中
u和v各自独立地为0或1，并且u+v＝1；
m和n各自独立地为0、1、2、3、4、5或6，其中m+n≥1；
X和Y独立地选自-NH、-O-和-S；
Rf选自H、羟基、取代或未取代的烷基和芳基；和
R5选自取代或未取代的烷基或烷基-C(O)-；或
(B)R2是(杂环烷基)烷基；和
R5选自H、取代或未取代的烷基，和烷基-C(O)；
R3和R4各自独立地选自氢、取代或未取代的烷基，和C(O)-R'，
3 4
或R 和R 与它们所键合的硼原子一起形成完全或部分饱和的5-或6-元环，并且任选地
含有1-3个选自O、S和N的另外的杂原子环成员；
D选自取代或未取代的亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚芳基和亚环烷基，
其中D中的一个或多个-CH2-基团任选和独立地被选自O、NR'、S、SO、SO2和CR'R”的Q部
分取代；或者
其中任意两个相邻的-CH2-基团任选地被两个环亚烷基基团取代；
条件是D不含有两个相邻的选自O、NR'、S、SO和SO2的Q部分；和
R'和R”各自独立地选自H、取代或未取代的烷基，和芳基；
其中任意烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、环烷基或杂环烷基任选被取代，例如，被选自卤素、氧代、-COOH、-CN、-NO2、-OH、-NRdRe、-NRgS(O)2Rh、(C1-C6)烷基、(C1-C6)卤代烷基、(C1-C6)卤代烷氧基、(C1-C6)烷氧基、(C3-C14)芳基、(C3-C14)杂芳基、(C3-C14)杂环烷基、(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)亚烷基和(C3-C14)芳氧基的一个或多个成员取代。
Ra选自氢、直链或支链(C1-C6)烷基、(C3-C14)芳基、(C3-C14)杂环烷基-(C1-C6)亚烷基-、(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)亚烷基-和(C3-C14)芳基(C1-C6)亚烷基-；
Rb和Rc各自独立地选自H、-OH、直链或支链(C1-C6)烷基、-S(O)2-(C1-C6)烷基、(C3-C14)芳基-S(O)2-、(C3-C14)杂环烷基-(C1-C6)亚烷基-和(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)亚烷基-；
(A)R2选自直链或支链(C1-C6)烷基、直链或支链(C2-C6)烯基、直链或支链(C2-C6)炔基、
(C3-C14)芳基、(C3-C14)-环烷基、(C3-C14)芳基(C1-C6)亚烷基-、(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)亚烷基-、(C3-C14)杂芳基、(C3-C14)杂环烷基、(C3-C14)杂环烷基-(C1-C6)亚烷基-、(C3-C14)杂芳基-(C3-C6)杂环亚烷基-、(C3-C14)芳基-(C3-C14)杂环亚烷基-、(C3-C14)-芳基-(C1-C6)烷基-(C3-C14)杂环亚烷基-、(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)烷基-(C3-C14)杂环亚烷基-、(C3-C14)杂环烷基-(C1-C6)烷基-(C3-C14)杂环亚烷基-和-(CH2)m-(X)u-(CH2)n-(Y)v-Rf；
其中
u和v各自独立地为0或1，并且u+v＝1；
m和n各自独立地为0、1、2、3、4、5或6，其中m+n≥1；
X和Y独立地选自-NH、-O-和-S；
Rf选自H、羟基、直链或支链(C1-C6)烷基和(C3-C14)芳基；和
5
R选自直链或支链(C1-C6)烷基或(C1-C6)烷基-C(O)-；或者
(B)R2为(C3-C14)杂环烷基-(C1-C2)亚烷基-；和R5选自H、直链或支链(C1-C6)烷基，和
(C1-C6)烷基-C(O)-；
R3和R4各自独立地选自氢、直链或支链(C1-C6)烷基，和C(O)-R'，或
R3和R4与它们所键合的硼原子一起形成完全或部分饱和的5-或6-元环，并且任选地含
有1-3个选自O、S和N的另外的杂原子环成员；和
D选自直链或支链(C1-C6)亚烷基、直链或支链(C2-C8)亚烯基、直链或支链(C2-C8)亚炔
基、(C3-C14)亚芳基和(C3-C14)亚环烷基，
其中D中的一个或多个-CH2-基团任选和独立地被选自O、NR'、S、SO、SO2和CR'R”的Q部
分取代；或者
其中任意两个相邻的-CH2-基团任选地被(C3-C14)-环亚烷基的两个成员取代；
条件是D不含有两个相邻的选自O、NR'、S、SO和SO2的Q部分；
其中任意烷基、亚烷基、烯基、亚烯基、炔基或亚炔基任选地被选自卤素、氧代、-COOH、-CN、-NO2、-OH、-NRdRe、-NRgS(O)2Rh、(C1-C6)烷氧基和(C3-C14)芳氧基的一个或多个成员取代；
其中Rd、Re、Rg和Rh各自独立地选自H、直链或支链(C1-C6)烷基、任选取代的(C3-C14)芳基(C1-C6)亚烷基-、(C1-C6)烷氧基、任选取代的(C3-C14)芳基、(C1-C6)羟烷基、(C1-C6)氨基烷基、H2N(C1-C6)亚烷基-、任选取代的(C3-C6)环烷基、任选取代的(C3-C14)杂环烷基、任选取代的(C3-C14)杂芳基、任选取代的(C3-C14)芳基-(C1-C6)亚烷基-、NR'R”C(O)-和(C3-C6)芳基-(C3-C14)-亚环烷基-；和
R'和R”各自独立地选自H、(C1-C8)烷基和(C3-C6)芳基；和
其中任意芳基、杂芳基、环烷基或杂环烷基任选地被选自卤素、-OH、氧代、-COOH、(C3-
C14)芳基(C1-C6)亚烷基-、-CN、-NO2、-NH2、(C1-C6)烷基-S-、(C3-C14)环烷基、(C3-C14)杂环烷基、(C3-C14)芳基、(C3-C14)杂芳基、-C(O)NH-(C1-C6)烷基、-NHC(O)-(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基、(C2-C8)烯基、(C2-C8)炔基、(C1-C6)烷氧基、(C1-C6)卤代烷基，和(C1-C6)羟基烷基的一个或多个成员取代。
D选自：
-L1-L2-CH2-CH2-,
-CH2-L1-L2-CH2-
-CH2-CH2-L1-L2,
-L1-CH2-CH2-L2-,和
-L1-CH2-L2-CH2-,
其中L1和L2独立地选自O、NR'、S、SO、SO2和CR'R”。
(C3-C14)芳基、(C3-C14)-环烷基、(C3-C14)芳基(C1-C6)亚烷基-、(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)亚烷基-、(C3-C14)杂芳基、(C3-C14)杂环烷基、(C3-C14)杂环烷基-(C1-C6)亚烷基-、(C3-C14)杂芳基-(C3-C6)杂环亚烷基-、(C3-C14)芳基-(C3-C14)杂环亚烷基-、(C3-C14)-芳基-(C1-C6)烷基-(C3-C14)杂环亚烷基-、(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)烷基-(C3-C14)杂环亚烷基-、(C3-C14)杂环烷基-(C1-C6)烷基-(C3-C14)杂环亚烷基-和-(CH2)m-(X)u-(CH2)n-(Y)v-Rf；和
R3和R4各自为氢；
或
B)R2是(C3-C14)杂环烷基-(C1-C2)亚烷基-；和
R3，R4和R5各自为氢。
C14)芳基-(C1-C6)亚烷基-和-(CH2)n-(X)u-(CH2)m-(Y)v-R ，且R选自直链或支链(C1-C6)烷基或(C1-C6)烷基-C(O)-。
其中，
R6选自ORa和NRbRc；
Ra选自氢、取代或未取代的烷基、环烷基、芳基、(杂环烷基)-烷基、杂芳烷基和芳烷基；
Rb和Rc各自独立地选自H、-OH、取代或未取代的烷基、-S(O)2(烷基)、S(O)2(芳基)、(杂
环烷基)烷基和杂芳烷基；
R7选自H、取代或未取代的烷基、芳烷基、杂芳烷基、(杂环烷基)烷基和(烷基)C(O)-；
X选自环亚烷基和杂环亚烷基，
Y选自H、烷基、-NR'R”、羟烷基、环烷基、(环烷基)烷基、芳基、芳烷基、杂环烷基、(杂环烷基)烷基、杂芳基、杂芳烷基、(杂芳基)杂环烷基、(芳基)杂环烷基、(芳烷基)杂环烷基、(杂芳烷基)杂环烷基和((杂环烷基)烷基)杂环烷基；
M选自键、亚烷基、-O-、C(O)-、-C(S)-、-C(O)NH-、-C(S)NH-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-NR'-，和-C＝NR”-；
8 9
R和R独立地选自氢、取代或未取代的烷基、环烷基、芳基和C(O)-R'，
或R8和R9与它们所键合的硼原子一起形成完全饱和或部分饱和的5-或6-元环，并且任
选地含有1-3个选自O、S和N的另外的杂原子环成员；
其中环任选与环烷基、杂环或芳环稠合；
D选自取代或未取代的亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚芳基和亚环烷基(或环亚烷基)，
其中D中的一个或多个-CH2-基团任选和独立地被选自O、NR'、S、SO、SO2和CR'R”的Q部
分取代；或者
其中任意两个相邻的-CH2-基团任选地被两个环亚烷基基团取代；和
条件是D不含有两个相邻的选自O、NR'、S、SO和SO2的Q部分；和
R'和R”独立地选自H、取代或未取代的烷基、-C(O)(烷基)、芳基、芳烷基、氨基烷基、环烷基、杂环烷基、杂芳基；
其中任意烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、环烷基或杂环烷基任选被取代，例如，被选自卤素、氧代、-COOH、-CN、-NO2、-OH、-NRdRe、-NRgS(O)2Rh、(C1-C6)烷基、(C1-C6)卤代烷基、(C1-C6)卤代烷氧基、(C1-C6)烷氧基、(C3-C14)芳基、(C3-C14)杂芳基、(C3-C14)杂环烷基、(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)亚烷基和(C3-C14)芳氧基的一个或多个成员取代。
Ra选自氢、直链或支链(C1-C6)烷基、(C3-C8)环烷基、(C3-C14)芳基、(C3-C14)杂环烷基-(C1-C6)亚烷基-、(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)亚烷基-和(C3-C14)芳基(C1-C6)亚烷基-；
Rb和Rc各自独立地选自H、-OH、直链或支链(C1-C6)烷基、-S(O)2-(C1-C6)烷基、(C3-C14)芳基-S(O)2-、(C3-C14)杂环烷基-(C1-C6)亚烷基-和(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)亚烷基-；
R7选自H、直链或支链(C1-C6)烷基、(C3-C14)芳基(C1-C6)亚烷基-、(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)亚烷基-、(C3-C14)杂环烷基-(C1-C6)亚烷基-和(C1-C6)烷基-C(O)-；
X选自(C3-C14)-环亚烷基和(C3-C14)杂环亚烷基，
Y选自H、(C1-C14)烷基、-NR'R”、羟基(C1-C6)亚烷基、(C3-C14)-环烷基、(C3-C14)-环烷基-(C1-C6)亚烷基、(C3-C14)芳基、(C3-C14)芳基-(C1-C6)亚烷基、(C3-C14)杂环烷基、(C3-C14)杂环烷基-(C1-C6)亚烷基、(C3-C14)杂芳基、(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)亚烷基、(C3-C14)杂芳基-(C3-C6)杂环亚烷基-、(C3-C14)芳基-(C3-C14)杂环亚烷基-、(C3-C14)-芳基-(C1-C6)烷基-(C3-C14)杂环亚烷基-、(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)烷基-(C3-C14)杂环亚烷基-和(C3-C14)杂环烷基-(C1-C6)烷基-(C3-C14)杂环亚烷基-；
M选自键、-(C1-C6)亚烷基-、-O-、C(O)-、-C(S)-、-C(O)NH-、-C(S)NH-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-NR'-和-C＝NR”-；
R8和R9独立地选自氢、直链或支链(C1-C6)烷基、(C3-C8)环烷基、(C3-C14)芳基和C(O)-
R'，或R8和R9与它们所键合的硼原子一起形成完全饱和或部分饱和的5-或6-元环，并且任选地含有1-3个选自O、S和N的另外的杂原子环成员；
其中环任选与环烷基、杂环或芳环稠合；
D选自直链或支链(C3-C5)亚烷基、直链或支链(C2-C8)亚烯基、直链或支链(C2-C8)亚炔
基、(C3-C14)亚芳基和(C3-C14)亚环烷基，
其中D中的一个或多个-CH2-基团任选和独立地被选自O、NR'、S、SO、SO2和CR'R”的Q部
分取代；或者
其中任意两个相邻的-CH2-基团任选地被(C3-C14)-环亚烷基的两个成员取代；
条件是D不含有两个相邻的选自O、NR'、S、SO和SO2的Q部分；和
R'和R”独立地选自H、(C1-C8)烷基、-C(O)-(C1-C8)亚烷基、任选取代的(C3-C6)芳基、
任选取代的(C3-C14)芳基(C1-C6)亚烷基-、任选取代的(C1-C6)氨基烷基、任选取代的(C3-C6)环烷基、任选取代的(C3-C14)杂环烷基、任选取代的(C3-C14)杂芳基；
其中任意烷基、亚烷基、芳基、杂芳基、环烷基或杂环烷基任选被取代，例如，被选自卤
素、氧代、-COOH、-CN、-NO2、-OH、-NRdRe、-NRgS(O)2Rh、(C1-C6)烷基、(C1-C6)卤代烷基、(C1-C6)卤代烷氧基、(C1-C6)烷氧基、(C3-C14)芳基、(C3-C14)杂芳基、(C3-C14)杂环烷基、(C3-C14)杂芳基-(C1-C6)亚烷基和(C3-C14)芳氧基的一个或多个成员取代；
其中Rd、Re、Rg和Rh各自独立地选自H、直链或支链(C1-C6)烷基、任选取代的(C3-C14)芳基(C1-C6)亚烷基-、任选取代的(C3-C14)芳基、(C1-C6)羟烷基、(C1-C6)氨基烷基、H2N(C1-C6)亚烷基-、任选取代的(C3-C6)环烷基、任选取代的(C3-C14)杂环烷基、任选取代的(C3-C14)杂芳基、任选取代的(C3-C14)芳基-(C1-C6)亚烷基-和NR'R”C(O)-。
-CH2-L1-L2-CH2-
-CH2-CH2-L1-L2、
-L1-CH2-CH2-L2-,和
-L1-CH2-L2-CH2-，
其中L1和L2独立地选自O、NR'、S、SO、SO2和CR'R”。
或其立体异构体，内酯前药或药学上可接受的盐，其中：
虚线表示可选的双键；
Z是
X1是-(CH2)-或，当X1和X2之间存在所述双键时，X1是-(CH)-；
2 2 1 2
X是-(CH2)-或-(NR)-，或者，当所述双键存在于X和X之间时或
在X2和X3之间时，X2是-(CH)-或N；
X3是-(CH2)-，杂原子部分选自-S-，-O-和-(NR2)-，或者当在X2和X3之间或X3和X4之间存
在所述双键时，X3是-(CH)-或N；
X4为-(CH2)-或，当在X3和X4之间存在所述双键时，X4为-(CH)-并且为反式构型；
条件是不超过一个X2和X3为所述-(NR2)-或所述杂原子部分；
条件是当Z是 时，X3是-(NR2)-；
条件是X1、X2、X3、X4之间的双键不超过两个和
没有两个双键共有一个共同的碳原子；
R1是H以外的1价部分，或者，R1和所述α-羧酸酯一起形成内酯；和
R2独立地为H、甲基或乙基。
其中：
n为0、1或2；
X是NR5、CR6R7、O、S、S(＝O)或S(O)2；
R7是H、OH、OR8、CN或NR8R9；和
5 6 8 9
R、R 、R和R 独立地为H、(C1-C6)烷基、芳基、杂芳基、芳基(C1-C6)烷基、杂芳基(C1-C6)烷基、-C(＝O)(C1-C6)烷基、-C(＝O)(芳基)、-C(＝O)(杂芳基)、-SO2(C1-C6)烷基、-SO2(芳基)、-SO2(杂芳基)、-CONH(C1-C6)烷基、-CONH(芳基)或-CONH(杂芳基)
其中：
Ra是H或选自任选取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、(环烷基)烷基、(杂环烷
基)烷基、芳基、杂芳基、芳烷基和杂芳烷基；
Rb是H或选自任选取代的烷基、烯基、炔基、酰基、-C(O)O(烷基)和-C(O)O(芳基)；
c c
每个R独立地选自H或烷基，或两次出现的R 与介于其间的-O-B-O-原子一起形成任选
取代的含硼环；
X是O或S；
R1和R2各自独立地选自H和任选取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、(环烷基)烷基、杂环
烷基、(杂环烷基)烷基、芳基、杂芳基、芳烷基和杂芳烷基；或者
R1和R2与介于其间的原子一起形成任选取代的5-至7-元环；和
R3是H或任选取代的烷基；
或R1和R3与介于其间的原子一起形成任选取代的5-至7-元环；
其中所述化合物不是：
(dioxaborolandione)、二氧杂环己硼烷(dioxaborinane)、二氧杂环己硼酮
(dioxaborinanone)或二氧杂环己硼二酮(dioxaborinandione)。
H。在一些这样的实施方式中，X是O，R是H和R，R和R是H。
在其它这样的实施方式中，X是O且R是H。在一些这样的实施方式中，X是O，R是H且R是H。在一些这样的实施方式中，X是O，R3是H和Rc，Ra和Rb是H。
70％de、80％de、90％de，或甚至95％或更大的de。在某些实施方式中，本公开的化合物在一个或多个立体中心处具有大体上一种异构构型，并且在剩余的立体异构中心具有多种异构
构型。
粗体非楔形键表示-CO2Ra基团和(CH2)3B(ORc)2基团被配置为彼此顺式，但粗体非楔形
键不代表化合物的绝对构型(即R或S)。
和(CH2)3B(ORc)2基团被配置为彼此顺式结构，但不表示那些立体中心的绝对构型。因此，式(VIc)化合物总共代表两种异构体：
60mol％的一种对映异构体，或更优选至少75、90、95或甚至99摩尔％。在某些实施方式中，富集一种对映异构体的精氨酸酶抑制剂化合物基本上不含其他对映异构体，其中基本上不
含意指所述物质与其他对映异构体的量相比占少于10％、或少于5％、或少于4％、或少于
3％、或少于2％、或少于1％，例如，在组合物或化合物混合物中。例如，如果精氨酸酶抑制剂组合物或化合物混合物含有98克第一对映体和2克第二对映体，则可以说它含有98摩尔％
的第一对映体和仅2％的第二对映体。
可包含，例如，至少60摩尔％的一种非对映异构体，或更优选至少75、90、95或甚至99摩
尔％。
适的放射性核素包括但不限于2H(也写为D表示氘)、3H(也写为T表示氚)、11C、13C、14C、13N、
15N、15O、17O、18O、18F、35S、36Cl、82Br、75Br、76Br、77Br、123I、124I、125I和131I。例如，本公开的化合物中的一个或多个氕(1H)原子可以被氘原子取代(例如，式(I)的C1-6烷基的一个或多个氢
原子可以富集氘原子，例如，-CD3代替更常见的-C(1H)3甲基)。
以富集氘(例如，C1-6烷基的一个或多个氕原子可以被氘原子取代，例如，-CD3代替更常见的-C(1H)3甲基)。在一些实施方式中，该化合物富集两个或更多个氘原子。在一些实施方式中，该化合物包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或
24个氘原子。在一些实施方式中，化合物中的所有氢原子可以富集氘原子而不是氕原子。
1971；Jens Atzrodt，Volker Derdau，Thorsten Fey和Jochen Zimmermann的H/D交换的复兴(The Renaissance of H/D Exchange)，Angew.Chem.Int.2007版,7744-7765；同位素标
记的有机化学(The Organic Chemistry of Isotopic Labelling),James R.Hanson,皇家
化学学会,2011)。同位素标记的化合物可用于各种研究，例如NMR光谱学，代谢实验和/或测定。
J.LabelCompd.Radiopharm.2015,58,308-312).
11 18 125 123 124 131 75 76 77
的化合物。对于无线电成像应用，C、F、 I、 I、 I、 I、Br、Br或 Br可能是有用的。
术人员将容易地认识到适用于本公开化合物的方法。
治疗方法
中，向受试者施用约1×103个细胞/kg(体重)至约1×1020个细胞/kg(体重)。在一些实施方
式中，至少1×103个细胞/kg、至少1×104个细胞/kg、至少1×106个细胞/kg、至少1×107个
细胞/kg、至少1×108个细胞/kg、至少1×109个细胞/kg、至少50×1010个细胞/kg、至少1×
1011个细胞/kg、至少1×1012个细胞/kg、至少1×1013个细胞/kg、至少1×1014个细胞/kg、至少1×1015个细胞/kg、至少1×1016个细胞/kg、至少1×1017个细胞/kg、至少1×1018个细胞/
kg、至少1×1019个细胞/kg，或至少1×1020个细胞/kg施用于受试者。施用于受试者的免疫
细胞的数量可以根据多种因素而变化，包括但不限于受试者对免疫细胞疗法的反应、受试
者的病史、受试者的体重、性别和/或种族背景。
多个治疗靶点的药物组合来改进治疗反应，最小化抗性发展或最小化不良事件的新治疗方
法的原动力。在组合治疗提供显著治疗优势的环境中，人们越来越关注与新研究药物如精
氨酸酶抑制剂的组合的开发。
时施用。在某些实施方式中，另外的药剂与精氨酸酶抑制剂和/或免疫细胞依次施用。
唑、天冬酰胺酶、AZD5363、卡介苗、比卡鲁胺、博来霉素、硼替佐米、布舍瑞林、白消安、喜树碱、卡培他滨、卡铂、卡非佐米、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、氯喹、顺铂、克拉屈滨、氯膦酸盐、考比替尼、秋水仙碱、环磷酰胺、环丙孕酮、阿糖胞苷、达卡巴嗪、放线菌素、柔红霉素、去甲氧绿毛菌素、地塞米松、二氯乙酸、二烯雌酚、己烯雌酚、多西紫杉醇、多柔比星、表柔比星、厄洛替尼、雌二醇、雌莫司汀、依托泊苷、依维莫司、依西美坦、非格司亭、氟达拉滨、氟氢可的松、氟尿嘧啶、氟甲睾酮、氟他胺、吉西他滨、染料木黄酮、戈舍瑞林、羟基脲、伊达比星、异环磷酰胺、伊马替尼、干扰素、伊立替康、来那度胺、来曲唑、甲酰四氢叶酸、亮丙瑞林、左旋咪唑、洛莫司汀、氯尼达明、二氯甲基二乙胺、甲羟孕酮、甲地孕酮、美法仑、巯基嘌呤、美司钠、二甲双胍、甲氨蝶呤、米替福新、丝裂霉素、米托坦、米托蒽醌、MK-2206、尼鲁米特、诺考达唑、奥曲肽、奥拉帕尼、奥沙利铂、紫杉醇、氨羟二磷酸二钠、帕唑帕尼、喷司他丁、哌立福辛、普卡霉素、泊马度胺、卟菲尔钠、甲基苄肼、雷替曲塞、利妥昔单抗、卢卡帕尼、司美替尼、索拉非尼、链脲佐菌素、舒尼替尼、苏拉明、他唑巴肽、他莫昔芬、替莫唑胺、替西罗莫司、替尼泊苷、睾酮、沙利度胺、硫鸟嘌呤、硫噻吩、二氯化二茂、托泊替康、托美替尼、曲妥珠单抗、维甲酸、维拉帕尼、长春碱、长春新碱、长春地辛或长春瑞滨。
(intelumumab)、伊匹单抗、伊沙妥昔单抗、帕博利珠单抗、纳武单抗、奥卡吐珠单抗
(ocaratuzumab)、奥拉单抗、帕姆单抗、皮迪利珠单抗(pidilizumab)、替西木单抗
(ticilimumab)、奥马珠单抗(samalizumab)或曲美木单抗(tremelimumab)。在一些实施方
式中，免疫-肿瘤剂是吲哚莫德、伊匹单抗、纳武单抗、帕姆单抗、或皮迪利珠单抗。在某些实施方式中，免疫-肿瘤学试剂是伊匹单抗。
限于CTLA-4、PD-1、VISTA、B7-H2、B7-H3、PD-L1、B7-H4、B7-H6、ICOS、HVEM、PD-L2、CD160、gp49B、PIR-B、KIR家族受体、TIM-1、TIM-3、TIM-4、LAG-3、BTLA、SIR-α(CD47)、CD48,2B4(CD244)、B7.1、B7.2、ILT-2、ILT-4、TIGIT、HHLA2、嗜乳脂蛋白、A2aR及其组合。免疫检查点抑制剂可以是结合并抑制免疫检查点蛋白的抗体或其抗原结合片段。免疫检查点抑制剂的
实例包括但不限于纳武单抗、帕姆单抗、皮迪利珠单抗、AMP-224、AMP-514、STI-A1110、TSR-
042、RG-7446、BMS-936559、MEDI-4736、MSB-0020718C、AUR-012和STI-A1010。
射)、口腔、鼻内、直肠或透皮给药途径。精氨酸酶抑制剂，包含免疫细胞的组合物和本文所述的抗体可以共同施用或在不同时间施用。包含免疫细胞的组合物、精氨酸酶抑制剂和抗
体可以局部或全身给药。在一些实施方式中，将包含免疫细胞的组合物、精氨酸酶抑制剂和本文公开的抗体局部施用于肿瘤或肿瘤微环境中。
药物组合物
组合物，例如本文所述的任何一种化学式的化合物和一种或多种药学上可接受的赋形剂。
在一些实施方案中，制剂可以进一步包含本文公开的抗体。在某些实施方案中，药物制剂可用于治疗或预防如本文所述的病症或症状。在某些实施方案中，药物制剂具有足够低的热
原活性以适合用于人类患者。
学上可接受的载体是本领域熟知的，包括，例如，水溶液，例如水或生理缓冲盐水或其他溶剂或载体，例如二醇、甘油、油例如橄榄油，或可注射的有机酯。在一些实施方案中，当此类药物组合物用于人类给药时，特别是用于侵入性给药途径(即，通过上皮屏障的运输或扩散的途径，例如注射或植入)；所述水溶液不含热原，或基本上不含热原。可以选择赋形剂，例如，以实现药剂的延迟释放或选择性地靶向一种或多种细胞，组织或器官。药物组合物可以是剂量单位形式，例如片剂，胶囊(包括喷洒胶囊和明胶胶囊)，颗粒，用于重构的亲液胶体，粉末，溶液，糖浆，栓剂，注射剂等。所述组合物还可以存在于透皮递送系统中，例如皮肤贴剂。该组合物还可以存在于适于局部给药的溶液中，例如滴眼剂。
决于例如组合物的给药途径。制剂或药物组合物可以是自乳化药物递送系统或自微乳化药
物递送系统。药物组合物(制剂)也可以是脂质体或其他聚合物基质，例如，本公开的化合
物，可以并入其中。例如，包含磷脂或其他脂质的脂质体，是无毒、生理学上可接受的和可代谢的载体，其制备和施用相对简单。
(3)纤维素及其衍生物，例如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和醋酸纤维素；(4)西黄蓍胶粉；
(5)麦芽；(6)明胶；(7)滑石；(8)赋形剂，例如可可脂和栓剂蜡；(9)油，例如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；(10)二醇，例如丙二醇；(11)多元醇，例如甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇；(12)酯，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，例如氢氧化镁和氢氧化铝；(15)藻酸；(16)无热原水；(17)等渗盐水；(18)林格氏液；
(19)乙醇；(20)磷酸盐缓冲溶液；和(21)用于药物制剂的其它无毒的相容物质。
胶囊剂)、大丸剂、散剂、颗粒剂、舌用糊剂)；通过口腔黏膜吸收(例如舌下)；肛门、直肠或阴道(例如作为阴道栓、乳膏剂或泡沫剂)；胃肠外(包括肌内、静脉内、皮下或鞘内、作为例如无菌溶液剂或混悬剂)；经鼻；腹膜内；皮下；透皮(例如作为施用于皮肤的贴剂)；和局部(例如作为施用于皮肤的乳膏剂、软膏剂或喷雾剂，或作为滴眼剂)。还可以配制化合物用于吸入。在某些实施方案中，可将化合物简单溶解于或悬浮于无菌水中。合适的给药途径和适于所述给药途径的组合物的详细描述可参见例如美国专利号6,110,973、5,763,493、5,731,
000、5,541,231、5,427,798、5,358,970和4,172,896以及其中引用的专利。
化。可与载体材料混合以产生单一剂型的活性成分的量一般将是产生治疗作用的化合物的
量。一般而言，在100％中计，该量的范围可为约1％-约99％的活性成分，优选约5％-约
70％，最优选约10％-约30％。
细碎的固体载体或两者充分均匀地混合，然后如有需要，使产物成形，来制备制剂。
或化合物也可以以大丸剂，药糖剂或糊剂形式给药。
剂)，片剂和丸剂的情况下，药物组合物还可包含缓冲剂。使用诸如乳糖(lactose/
milksugar)等赋形剂以及高分子量聚乙二醇等，类似类型的固体组合物也可用作软充填和
硬充填的明胶胶囊剂中的填充剂。
众所周知的其它包衣材料)制备。它们还可使用例如不同比例的羟丙基甲基纤维素(以提供
所需释放特征)、其它聚合物基质、脂质体和/或微球体，进行配制以提供其中活性成分的慢释或控释。它们可通过例如截留细菌滤器过滤，或通过以临用前可溶于无菌水或一些其它
无菌注射用介质的无菌固体组合物的形式掺入杀菌剂来灭菌。这些组合物还可任选含有遮
光剂，并且可以具有只在或优先在胃肠道的某些部分，任选以延时方式释放活性成分的组
成。可以使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡。活性成分还可呈微囊化形式，在适当时，与上述赋形剂的一种或多种一起。
二醇、栓剂蜡或水杨酸酯)混合来制备，并且在室温下是固体，但在体温下是液体，因此在直肠或阴道腔中将融化并释放活性化合物。
肤的流动。可通过提供速率控制膜或将化合物分散在聚合物基质或凝胶中来控制这种流动
的速率。
封在与机体组织相容的脂质体或微乳剂中，来制备贮库注射制剂。
物(包括水凝胶)，包括生物可降解的和不可降解的聚合物两者，都可用于形成化合物在特
定靶标部位缓释的植入剂。
的剂量，逐渐增加剂量直到达到所需作用。所谓“治疗有效量”意指足以引发所需治疗作用的化合物的浓度。一般认为，有效量的化合物将随受试者的体重、性别、年龄和病史而变化。
影响有效量的其它因素可包括但不限于患者病况的严重性、待治疗的病症、化合物的稳定
性，以及如有需要，与本发明的化合物一起施用的另一种类型的治疗剂。可通过多次施用所述治疗剂，来递送较大的总剂量。确定功效和剂量的方法是本领域技术人员已知的
(Isselbacher等人(1996)Harrison’s Principles of Internal Medicine第13版，1814-
1882，通过引用并入本文)。
效，这可包括两种化合物的协同效应)。例如，不同的治疗化合物可以相同的制剂或以单独的制剂同时或依序施用。在某些实施方案中，不同的治疗化合物可彼此在1小时、12小时、24小时、36小时、48小时、72小时或1周内施用。因此，接受所述治疗的个体可获益于不同治疗化合物的联合作用。
提供累加效应，其中累加效应是指单独施用本公开化合物和一种或多种另外的治疗剂的每
种作用的总和。
盐酸分子。作为另一个实例，盐可以包含每分子碱少于一个无机或有机酸分子，例如每分子酒石酸两个分子式I、II或III的化合物。
5.实施例
实施例1：过继免疫疗法与精氨酸酶抑制剂的施用
胺250mg/kg和氟达拉滨50mg/kg)治疗小鼠。在第7天通过腹膜内注射给予环磷酰胺和氟达
拉滨(图1A，橙色箭头)。在第8天静脉内转移Pmel-1CD8T细胞(1×106)(图1A，蓝色箭头)。在第8、9、10天，在接受过继免疫疗法的小鼠中，通过腹膜内注射每天两次给予重组人IL-2
(200,000UI)。精氨酸酶抑制剂每天两次给予100mg/kg。图1B显示接受组合T细胞疗法和精
氨酸酶抑制剂治疗的小鼠相对于仅接受过继性T细胞疗法的小鼠的25天内的肿瘤体积。单
独接受组合治疗的小鼠的肿瘤体积随时间显示肿瘤进展较慢。存活曲线可以在图1C中看
到。P值为0.0137，通过Mantel-Cox试验计算。(每组N＝9-10)。
实施例2：在肿瘤微环境中抑制精氨酸酶阻断骨髓细胞介导的免疫抑制
疫和阻碍免疫疗法。旨在阻断骨髓细胞介导的免疫抑制的药剂目前处于临床前和临床开发
阶段，但是没有专门针对肿瘤相关骨髓细胞的批准疗法。
催化氨基酸L-精氨酸的水解以产生尿素和L-鸟氨酸，从而消耗细胞外L-精氨酸。T细胞对L-精氨酸是营养缺陷型的，需要氨基酸以进行快速和连续的增殖循环，这些增殖遵循效应细
胞的T细胞抗原受体(TCR)依赖性激活。在一些炎症环境中，骨髓介导的精氨酸消耗对于抑
制过度的T细胞增殖是必需的。因此，阻断癌症背景下的Arg1活性可以改变L-精氨酸代谢的平衡，从而有利于淋巴细胞增殖。Arg1的药理学抑制是治疗癌症的引人注目的治疗策略。
量Arg1。
方法
理博公司(Millipore)，比尔里卡，马萨诸塞州)中用于基于细胞的测定和体内研究。没有观察到精氨酸酶抑制剂制剂的内毒素污染。
(29A1.4)、CD11b-PE-Cy7(M1/70)、CD68-PE-Cy7(FA-11)；CD3-PE(17A2)；来自BioLegend(圣迭戈，加州)的CD68-BV421(FA-11)、CD206-AlexaFluor488(C068C2)、CD11b-PerCP-Cy5.5
(M1/70)、CD11b-BV605(M1/70)；来自Stemcell Technologies(加拿大温哥华)的CD11b-PE
(M1/70)；和来自R&D系统(明尼苏达州明尼阿波利斯)的Arg1-APC(多克隆)。以下抗人抗体
用于流式细胞术：来自BD Biosciences的CD66b-PE(G10F5)、CD4-PerCP-Cy5.5(SK3)、CD8-APC(RPA-T8)；来自eBioscience的CD15-eF450(HI98)。
州)。在反应缓冲液(137mM NaCl，2.7mM KCl，8mM Na2HPO 4,2mM KH2PO4,0.005％Triton X-
100,0.5mM DTT，0.5mM MgCl2,0.1mM CaCl2,和160μM L-精氨酸，pH 7.4)中进行使用2nM Arg1或4nM Arg2的活性测定，在37℃下，使用剂量调整的精氨酸酶抑制剂持续30分钟。使用QuantiChrom尿素测定试剂盒(BioAssay Systems，海沃德，加州)通过分光光度测定法或使用SCIEX API4000质谱仪(Applied Biosystems，福斯特城，加州)通过13C(6)-L-精氨酸定量
13
产生 C(5)-L-鸟氨酸来测定活性。使用GraphPad Prism软件(圣迭戈，加州)绘制产生的尿
素或13C(5)-L-鸟氨酸峰面积并拟合至四参数方程以确定IC50值。
胞。冷冻的人肝细胞购自XenoTech(堪萨斯城，堪萨斯州)。通过微尖端超声处理制备裂解
物，然后通过离心澄清。通过聚蔗糖离心从Conversant Biologics(亨茨维尔，亚拉巴马州)购买的全血获得来自肾细胞癌(RCC)患者的血浆样品。通过二辛可宁酸/BCA蛋白质测定确
定(赛默飞世尔)，在反应缓冲液中测定粒细胞裂解物为0.094mg/mL。在经验确定的浓度下，在37℃下30分钟内消耗10-15％的13C(6)-L-精氨酸，测定红细胞或肝细胞裂解物。通过在精氨酸酶抑制剂的剂量调整存在下定量13C(6)-L-精氨酸产生的13C(5)-L-鸟氨酸，在裂解物
和血浆中测定精氨酸酶活性。
HepG2细胞，并且在精氨酸酶抑制剂处理当天，在96孔板的一式两份孔中以每孔200,000个
细胞接种K-562细胞。在含有5％热灭活和透析的FBS、抗生素/抗真菌、10mM L-精氨酸、
0.27mM L赖氨酸和2mM L-谷氨酰胺的SILAC RPMI-1640培养基(美国生命技术公司/赛默飞
世尔)中用剂量调整的精氨酸酶抑制剂处理细胞。24h后收获培养基，用QuantiChrom尿素测定试剂盒测定产生的尿素。含有培养基不含细胞的的孔用作背景对照。为了评估精氨酸酶
抑制剂对原代肝细胞中Arg1的影响，将冷冻的人肝细胞(XenoTech)解冻，使其粘附在胶原
包被的孔上4h，然后在含有10mM L-鸟氨酸,没有L-精氨酸，以及精氨酸酶抑制剂的剂量调
整的SILAC-RPMI中孵育48h,此时分析培养基的尿素。
NOS亚型，重组鼠诱导型NOS、重组牛内皮NOS和天然大鼠小脑神经元NOS的活性。
尔，加州)上进行荧光定量。
胞或NK细胞负载羧基荧光素琥珀酰亚胺酯(CFSE，赛默飞世尔)，并在含有最少50M L-精氨
酸(NK细胞)或100μM L-精氨酸(T细胞)的完全生长培养基中刺激72-96h。对于T细胞刺激，使用10μg/mL抗CD3(人克隆UCHT1或OKT3；鼠克隆145-2C11)的溶液涂覆96孔板的孔，然后在
2μg/mL可溶性抗-CD28(人克隆CD28.2；鼠克隆37.51)存在下的固定化抗体-CD3上刺激T细
胞。用重组IL-2刺激NK细胞。通过流式细胞术(Guava流式细胞仪，密理博，比尔里卡，马萨诸塞州或Attune NxT流式细胞仪，赛默飞世尔)分析CFSE稀释度来定量增殖。
表达和散射特性自发激活。使用pan-T细胞分离试剂盒(Stemcell Technologies)从相同供
体分离的T细胞负载CFSE，并在老化的粒细胞存在下铺板固定的抗CD3和可溶性抗CD28。如
所示，将细胞以几种比例的粒细胞与T细胞共培养，或以4T细胞与1粒细胞的固定比例共培
养。将共培养物培养3-4天，此时通过质谱法分析培养基的L-精氨酸和L-鸟氨酸，并通过流式细胞术测定T细胞增殖。从购自Conversant Biologics的全血中分离出来自癌症患者的
粒细胞MDSC(G-MDSC)或粒细胞。通过对CD66b+细胞的阳性选择，从聚蔗糖梯度的PBMC层中
纯化G-MDSC。使用Hetasep(Stemcell Technologies)从聚蔗糖梯度的RBC层纯化粒细胞。将G-MDSC或粒细胞在含有100μM的L-精氨酸的共培养基中温育48h，此时除去细胞并将G-
MDSC-或粒细胞处理过的培养基培养在固定化抗CD3/可溶性抗CD28上的来自健康供体的
CFSE-负载T细胞3-4天。根据制造商的说明书(BD Biosciences)，使用细胞计数珠阵列
(Cytometric Bead Array)试剂盒在来自T细胞共培养测定的培养基中定量细胞因子。
(巴尔港，缅因州)。根据动物关怀及使用委员会指南饲养和处理所有小鼠。对于4T1肿瘤模型，将1×105个细胞原位注射到乳腺脂肪垫中；对于所有其他肿瘤模型，在右侧皮下注射
6
(s.c.)1×10 个细胞。对于所有研究，从研究第1天(肿瘤植入后1天)开始，每天两次以
100mg/kg口服管饲法施用精氨酸酶抑制剂。对照组每天通过管饲法接受溶媒(水)两次。每
周三次记录通过数字卡尺(长×宽×宽/2)和体重测量的肿瘤体积。当肿瘤坏死或体积达到
2000mm3时，使动物安乐死。对于CT26模型，在第5、7、9、11、13和15天腹膜内(i.p.)注射抗PD-L1抗体(5mg/kg，克隆10F.9G2，BioXCell，西黎巴嫩，新罕布什尔州)。在第10天和第16天，对CT26模型吉西他滨(Selleckchem，休斯顿，得克萨斯州)腹膜内给药50mg/kg，或在第6天和第10天对LLC模型腹膜内给药60mg/kg。在第-1天，第0天，第5天和第10天，小鼠腹膜内注射抗CD8抗体(25mg/kg，克隆2.43，BioXCell)，用于CD8+细胞的消耗。按照与抗-CD8相同的时间表，在LLC和B16模型小鼠腹膜内注射抗-NK1.1抗体(25mg/kg，克隆PK136，BioXCell)或在CT26模型中使用抗Asialo GM1血清(20μL，Wako Chemicals，里士满，弗吉尼亚)，用于NK细胞的消耗。
Tie2-Cre-雌性，Cre阴性同窝仔作为野生型对照。根据St.Jude儿童研究医院的动物关怀及使用委员会批准的方案收养小鼠并使用。将LLC细胞(每只小鼠1×106个)皮下注射在侧翼
区域。每12h口服强饲100mg/kg精氨酸酶抑制剂或等体积的溶媒对照(水)，持续14天。对小鼠实施安乐死，切除肿瘤并记录重量。通过对所有动物的IL-4刺激的骨髓来源的巨噬细胞
的蛋白质印迹证实了Arg1的骨髓缺失。
从肿瘤植入后1天开始，通过口服管饲法每天两次以100mg/kg施用精氨酸酶抑制剂。在第7
天，通过腹膜内施用250mg/kg环磷酰胺和50mg/kg氟达拉滨的非清髓化疗方案诱导淋巴细
胞减少。对所有组施用化疗方案。在第9天，给小鼠静脉内(i.v.)施用1×106个Pmel-1T细
胞。接受Pmel-1T细胞的小鼠也接受腹膜内给药的重组人IL-2(200,000IU/剂量)，从T细胞
转移当天开始每天两次，持续3天。
18h)。通过流式细胞术将注射的NK细胞分析为CD25+和80-90％纯度，且T细胞小于0.4％。用溶媒或精氨酸酶抑制剂处理小鼠14天，然后将肺收获到Fekete溶液中并目测计数肿瘤结
节。
的肿瘤置于冰上含有5％FBS的RPMI-1640中，用剃刀刀片切碎，并在GentleMACS
OctoDissociator With Heat(Miltenyi Biotec)上根据制造商的说明在辅有小鼠肿瘤解
离酶(Miltenyi Biotec，贝尔吉施格拉德巴赫，德国)的RPMI-1640中解离。将解离的肿瘤通过70μm尼龙网过滤，用含有2％FBS的冷PBS洗涤，用抗CD16/CD32(Fc阻断抗体，
eBioscience)阻断，并染色细胞表面抗原。对于B16和4T1肿瘤，将洗涤的解离的肿瘤细胞与去除死细胞的微珠(Miltenyi Biotec)一起温育，并在染色前施加到磁柱上。对于细胞内染色，分别使用购自R&D系统或eBioscience的缓冲液固定细胞并透化细胞质或核抗原。所有
肿瘤流动实验均在Attune NxT流式细胞仪上获得，并使用FlowJo软件版本10(亚什兰集团
公司，俄勒冈州)进行分析，使用荧光减1对照进行门控和单染OneComp eBeads
(eBioscience)以设置补偿矩阵。
Core Diagnostics(海沃德，加州)用于石蜡包埋。提取RNA用于基因表达分析，并通过
NanoString技术(西雅图，华盛顿州)定量转录物。
中的细胞因子。
由Indivumed(汉堡，德国)进行自动化IHC。来自Abcam/Epitomics(伯林盖姆，加州)的兔抗人Arg1单克隆抗体克隆EPR6672(B)使用8种不同的肝细胞癌(HCC)病例和1份正常肝组织样
品作为阳性对照组织进行验证；将正常扁桃体组织和同种型对照抗体用作阴性对照。IHC在
11种不同的肿瘤组织学上进行：非小细胞肺癌(NSCLC、鳞状和腺癌)、乳腺癌(三阴性和非三阴性)、胃腺癌、结肠直肠癌(CRC)、前列腺腺癌、胰腺癌、卵巢癌、膀胱癌和RCC。每mm2的Arg1+细胞通过数字组织病理学(Oracle BIO)定量。
结果
另一种也代谢L-精氨酸并与炎症有关的酶类是NOS，它产生L-瓜氨酸和生物介质NO。测试精氨酸酶抑制剂抑制三种NOS亚型，内皮NOS、神经元NOS和诱导型NOS的能力。在50μM精氨酸酶抑制剂存在下未观察到对NOS酶的抑制(表1)。这些结果表明精氨酸酶抑制剂是精氨酸酶的
有效抑制剂，对NOS没有活性。接着测试精氨酸酶抑制剂抑制人粒细胞，外周血红细胞和原代肝细胞裂解物中天然Arg1酶的能力。发现精氨酸酶抑制剂抑制裂解物中的天然精氨酸
酶，其效力与重组精氨酸酶的效力相似(表1)。此外，据报道，与健康供体相比，RCC患者的血浆中Arg1蛋白和活性升高，并且在从RCC患者分离的血浆中观察到精氨酸酶抑制剂对精氨
酸酶活性的抑制(表1)。
测定(N＝2)。使用人粒细胞裂解物(N＝3)、人红细胞裂解物(N＝1)、人肝细胞裂解物(N＝4)和癌症患者血浆(N＝5)在具有160μM L-精氨酸的一式两份孔中进行精氨酸酶活性测定。在
50μM精氨酸酶抑制剂存在的情况下测定纯化的NOS酶活性，其显示对三种NOS同种型没有抑制活性。N/A＝不适用。
胞中的细胞内精氨酸酶表现出低效力(表2)。精氨酸酶抑制剂对完整细胞中精氨酸酶的低
效力可能是由于精氨酸酶抑制剂穿过细胞膜的效率低。这些结果表明，精氨酸酶抑制剂是
细胞外精氨酸酶的有效和特异性抑制剂。
两份的孔中。对于原代人肝细胞(N＝1)，在含有10mM L-鸟氨酸和缺乏L-精氨酸的培养基存在下，在一式两份孔中测量精氨酸酶活性。根据24h后培养基中尿素的产生测量精氨酸酶活性。
或不存在L-精氨酸的情况下，分别用抗CD3/抗CD28或IL-2刺激纯化的T细胞或NK细胞。如所预期的，人和鼠T细胞(图2A，左)和NK细胞(图2A，右)的增殖仅发生在含有L-精氨酸的培养基中。
人粒细胞从培养基中消耗L-精氨酸(图2B)。当活化的粒细胞与自体T细胞共培养时，T细胞
增殖受到抑制(图2C)。添加精氨酸酶抑制剂阻断了培养基中L-精氨酸的消耗(图2D，左)，并且将T细胞增殖恢复至没有粒细胞的T细胞观察到的增殖的90％(图2D，右)。这些结果表明，Arg1对L-精氨酸的消耗是粒细胞介导的体外T细胞增殖抑制所必需的，并且精氨酸酶抑制
剂逆转了这种免疫抑制。
48h，然后将处理过的培养基用于T细胞增殖测定。由于来自个体患者的样品量有限，使用来自健康供体的T细胞代替癌症患者供体的T细胞。癌症患者来源的G-MDSC或粒细胞减少了培
养基中L-精氨酸的量，精氨酸的消耗被精氨酸酶抑制剂阻断(图2E，左图和图2E，左图)。在G-MDSC或粒细胞处理过的培养基中T细胞增殖被抑制，并且通过添加精氨酸酶抑制剂，增殖分别恢复到对照水平的99％或79％(图2E，右和图2E，右))。精氨酸酶抑制剂还恢复T细胞炎性细胞因子干扰素-γ和颗粒酶-B的分泌到培养基中(图2G)。这些数据一起表明，精氨酸酶抑制剂对精氨酸酶的抑制阻断了骨髓细胞介导的免疫抑制，挽救了T细胞增殖和细胞因子
的分泌。
BID给药5天后，在肿瘤和血浆中观察到精氨酸酶抑制剂的剂量依赖性暴露(图3A和图3B，顶行)。在荷瘤小鼠中口服给药精氨酸酶抑制剂也增加了肿瘤和血浆中L-精氨酸的量，表明精氨酸酶抑制剂的靶向药效学作用(图3A和图3B，底行)。重要的是，精氨酸酶抑制剂在100mg/kg的剂量下耐受良好，每天两次，持续23天，没有显著的临床观察或对体重的影响(图3C)。
酸酶抑制剂在体内靶向Arg1，用在骨髓谱系中含有条件的破坏的Arg1的转基因小鼠品系进
flox/flox + ΔM
行评估。LLC细胞注入Arg ；Tie2-Cre 小鼠(图4B，表示为ARG1 )生长有较小的肿瘤，
其大小与精氨酸酶抑制剂处理的Argflox/flox相似；Tie2-Cre-小鼠(图4B，表示为ARG1WT)，用精氨酸酶抑制剂处理的Argflox/flox；Tie2-Cre+动物不会进一步降低肿瘤生长，这与精氨酸酶抑制剂对Arg1的特异性靶向抑制一致(图4B)。总之，这些结果提供了Arg1活性促进肿瘤
生长，并且通过精氨酸酶抑制剂消除骨髓细胞Arg1表达或精氨酸酶的药理学阻断限制了体
内肿瘤生长的证据。
生长抑制(图5A)。为了测试精氨酸酶抑制剂的体内功效机制是否是免疫细胞介导的，将精
氨酸酶抑制剂施用于LLC荷瘤的SCID小鼠。精氨酸酶抑制剂的功效在SCID背景中被消除(图
5B)，表明精氨酸酶抑制剂需要完整的免疫系统来抑制肿瘤生长。为了进一步研究参与介导精氨酸酶抑制剂作用的免疫区室，在缺乏特异性免疫细胞亚群的小鼠中评估肿瘤生长。B16(图5C)和CT26(图5D)肿瘤模型中CD8+细胞或NK细胞的消耗阻断了精氨酸酶抑制剂的功效，
表明这些模型中CD8+细胞和NK细胞都是精氨酸酶抑制剂的完全抗肿瘤作用所必需。在LLC
肿瘤模型中，NK细胞的消耗导致功效丧失，而CD8+细胞的消耗具有较小的作用(图5E)。总
之，这些结果表明精氨酸酶抑制剂的抗肿瘤作用是由免疫系统介导的，并且需要细胞毒性
淋巴细胞。
被精氨酸酶抑制剂抑制的每个模型中，TME中炎症增加表明在免疫细胞群中观察到统计学
上显著的变化(图6A)。在CT26(图6A)和B16(图6B)模型中，与溶媒处理的对照相比，精氨酸酶抑制剂处理导致肿瘤浸润激活的CD25+CD8+细胞毒性T细胞的增加。在LLC模型中，与溶媒处理的对照相比，精氨酸酶抑制剂处理引起肿瘤中CD8+T细胞的增加以及CD68+巨噬细胞的
减少(图6C)。在精氨酸酶抑制剂对肿瘤生长有轻微影响的4T1模型中，在免疫细胞群中观察到与肿瘤炎症增加一致的变化：与溶媒处理的对照相比，精氨酸酶抑制剂处理的动物的肿
瘤中CD3+T细胞增加，NK细胞增加，和骨髓细胞减少(图6D)。与溶媒对照相比，精氨酸酶抑制剂处理的动物的肿瘤中的炎症增加一致，精氨酸酶抑制剂与干扰素应答基因的转录物的增
加(图6E)和炎性细胞因子的增加相关(图6F)。总之，该数据表明，精氨酸酶抑制剂抑制肿瘤生长的分子机制是免疫细胞介导的，并且是由肿瘤微环境中炎症的增加引起，其包括细胞
毒性淋巴细胞的增加和抑制性骨髓细胞的减少。
进一步减少肿瘤生长，并且使用四种不同组合测试该想法。首先，用精氨酸酶抑制剂组合检查点阻断疗法抗PD-L1处理CT26荷瘤小鼠。虽然用精氨酸酶抑制剂或抗PD-L1作为单一疗法
肿瘤生长被降低，但通过组合两种药剂可增强肿瘤生长抑制(图7A，左)。单独用抗PD-L1治疗的10只小鼠中有3只完全肿瘤消退，而组合疗法产生6种完全反应(图7A，中心)，组合组在研究第46天存活率为90％，抗PD-L1单一药剂组的存活率为30％(图7A，右)。已经观察到一些标准护理化学治疗剂调节免疫浸润。虽然认为核苷类似物吉西他滨的主要作用机制是
DNA合成的抑制，但也观察到抑制MDSC。因此，有理由认为吉西他滨可以增加精氨酸酶抑制剂的活性。实际上，与吉西他滨组合的精氨酸酶抑制剂治疗导致CT26(图7B，左)和LLC(图
7B，右)肿瘤模型中肿瘤生长抑制显著增加。最后，两种不同的细胞疗法与精氨酸酶抑制剂组合使用。与用单一药剂处理的小鼠相比，用精氨酸酶抑制剂与对PMEL肿瘤抗原特异的T细胞组合处理的B16荷瘤小鼠表现出肿瘤生长显著降低(图7C)。值得注意的是，用精氨酸酶抑制剂加T细胞的组合处理的小鼠中显著的肿瘤生长抑制与在髓样ARG1缺失的小鼠中观察到
的T细胞疗法的显著存活益处一致。NK细胞疗法用于肺转移模型。与对照组相比，用精氨酸酶抑制剂与NK细胞组合处理的CT26荷瘤小鼠具有显著地更少的肺转移(图7D)。总之，这些
结果表明精氨酸酶抑制剂可能是与多种类型抗癌疗法的有吸引力的组合剂。
8D)，在肺、胃肠道和膀胱的肿瘤中具有特别高的数量。除HCC外，肿瘤细胞对Arg1染色在很大程度上为阴性(图8C)。通过Arg1和其他免疫细胞标记物的多参数免疫荧光染色肿瘤组织
微阵列，发现Arg1与粒细胞标记物CD15相比巨噬细胞标记物CD68更频繁地相关联(图8E)，
并且在一些情况下，观察到Arg1和CD15之间引人注目的共定位(图8F)。这些数据证实了多
种肿瘤类型中的Arg1表达。
中测量了Arg1蛋白。与健康志愿者相比，癌症患者的Arg1显著更高(图8G)。据报道，RCC患者的外周血L-精氨酸水平较低。跨越7种不同组织学，测量了20名健康志愿者和26名癌症患者的血浆L-精氨酸。与健康个体相比，癌症患者的L-精氨酸显著降低(图8H)。这些结果表明，与健康个体相比，癌症患者可能经历与更高循环Arg1和更低量L-精氨酸相关的免疫抑制，
并且抑制循环Arg1和用精氨酸酶抑制剂升高血浆L-精氨酸可以在癌症的背景下赋予免疫
益处。
共培养中的T细胞活性，重要的是，通过用精氨酸补充培养基或通过添加精氨酸酶抑制剂可以恢复T细胞增殖，显示精氨酸酶活性对于观察到的免疫抑制是必需的(图2A)。其次，骨髓腔室中Arg1的基因消除被认为可以减少炎症或肿瘤生长，这表明Arg1在体内具有促肿瘤发
生和免疫抑制的作用。第三，用nor-NOHA或精氨酸酶抑制剂在药理学上阻断精氨酸酶活性
可减少肿瘤生长。本研究还表明，精氨酸酶抑制剂对Arg1的抑制会增加肿瘤和血浆精氨酸，并增加TME的炎症。这些数据共同证明精氨酸酶活性具有免疫抑制作用，并为精氨酸酶作为癌症免疫治疗药物靶点提供验证。第二种精氨酸酶亚型，Arg2是组成型表达的线粒体基质
蛋白，在许多组织中以低水平存在，在肾和肠中以高水平存在。由于Arg2活性也影响血浆L-精氨酸水平，Arg2可能是免疫功能的调节子。为了支持这一观点，据报道Arg2可以促进母胎免疫耐受。
究。观察到每天两次口服给药精氨酸酶抑制剂在小鼠中耐受良好至少40天。缺乏明显的肝
毒性可通过一些观察结果解释。首先，精氨酸酶抑制剂不容易进入细胞，表现出HepG2和
K562细胞系中细胞内精氨酸酶的IC50值比细胞裂解物中的可溶性精氨酸酶高两个数量级
(表1和2)。其次，尿素循环Arg1的亚细胞定位和调节可以保护其免受药理学抑制。在肝细胞中，尿素循环Arg1与多酶复合物中的线粒体紧密相关，并且使用半透化细胞和放射性标记
的底物的研究已经证明产物和底物的紧密通道发生在尿素循环的连续酶中：精氨琥珀酸合
成酶，精氨琥珀酸裂解酶和精氨酸酶。因此，与血浆、肿瘤和发炎组织中的细胞质或细胞外精氨酸酶相比，精氨酸酶抑制剂可能更不易接近肝Arg1。测试精氨酸酶抑制剂抑制完整原
代肝细胞中精氨酸酶的能力(表2)，使用含有鸟氨酸但不含精氨酸的培养基，并且在这些条件下产生的尿素应该需要完整的尿素循环。因此，该测定可以是仅与尿素循环相关的Arg1
活性的量度。
织检查的组织病理学分析显示，手术前补充精氨酸导致CD16+和CD56+NK细胞浸润肿瘤增
加。在另一项对96名乳腺癌患者的研究中，与安慰剂相比，观察到接受精氨酸的小肿瘤患者的病理反应显著增加。这些数据表明补充精氨酸可能在癌症患者中具有免疫刺激和抗肿瘤
作用，并且表明通过药理学精氨酸酶抑制来提高全身性精氨酸将同样是有益的。然而，治疗性口服精氨酸补充剂的主要限制包括严重的胃肠不适和肠粘膜对精氨酸的广泛代谢。精氨
酸酶抑制剂治疗有可能增加和维持患者的精氨酸水平，从而避免饮食精氨酸补充所固有的
胃肠不适和精氨酸波动。
抗肿瘤免疫力是必要的。抵抗检查点封锁的细胞和分子基础是一个深入研究的领域。检测
反应性和耐药性患者的生物标志物研究指出抑制性TME是解释耐药性的一种可能性。与非
反应性肿瘤(冷肿瘤)相比，具有更高基线水平的T细胞浸润肿瘤(T细胞炎症肿瘤)的患者更
可能对抗CTLA-4或抗PD-1疗法有反应，且与反应的患者相比，抗PD-1疗法耐受的患者具有
更高的肿瘤浸润性MDSCs基线水平。此外，临床前研究表明，TME中必需的细胞外代谢物的消耗，例如葡萄糖和氨基酸，可以阻断T细胞效应子功能。总之，这些结果表明免疫抑制性骨髓细胞和必需代谢物的消耗可能导致对检查点封锁具有抗性的冷肿瘤，因此靶向这些骨髓细
胞和代谢调节途径，与检查点抗体结合，可以恢复炎症并增加患者反应率。为支持这一假
设，爱帕司他，抑制酶IDO-1并防止TME中必需氨基酸色氨酸的消耗，在黑色素瘤、肺癌、RCC、或头颈癌患者中组合抗PD-1疗法显示出惊人的效果，认为通过TME靶向T细胞检查点和免疫
抑制是一种有效的组合。
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