使用抗Aβ抗体减少脑淀粉样蛋白斑块的方法
阅读：422发布：2020-09-19
专利汇可以提供使用抗Aβ抗体减少脑淀粉样蛋白斑块的方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本公开涉及抗Aβ 抗体 或其 抗原 结合 片段 用于减少脑 淀粉 样蛋白斑 块 ，或使抗Aβ抗体或其抗原结合片段的长期 给药 期间微出血的发生减至最少的用途。举例来说，本公开涉及减少脑淀粉样蛋白斑块的方法，所述方法包括向受试者施用与BIIB037抗体结合于相同表位的抗Aβ抗体或其抗原结合片段，其中所述施用可减少脑中的淀粉样蛋白斑块而不影响血管淀粉样蛋白，并且其中BIIB037抗体结合于包含Aβ的 氨 基酸3‑6的表位。，下面是使用抗Aβ抗体减少脑淀粉样蛋白斑块的方法专利的具体信息内容。
1. 一种减少脑淀粉样蛋白斑块的方法，所述方法包括向受试者施用与BIIB037抗体结 合于相同表位的抗Αβ抗体或其抗原结合片段，其中所述施用可减少脑中的淀粉样蛋白斑块 而基本上不影响血管淀粉样蛋白，并且其中ΒΙΙΒ037抗体结合于包含Αβ的氨基酸3-6的表 位。
2. -种减少脑淀粉样蛋白斑块的方法，所述方法包括向受试者施用竞争性抑制 ΒΙΙΒ037抗体的抗Αβ抗体或其抗原结合片段，其中所述施用可减少脑中的淀粉样蛋白斑块 而基本上不影响血管淀粉样蛋白。
3. -种使抗Αβ抗体或其抗原结合片段的长期给药期间微出血的发生减至最少的方法， 所述方法包括向受试者施用与ΒΙΙΒ037抗体结合于相同表位的抗Αβ抗体，其中ΒΙΙΒ037抗体 结合于包含Α邱勺氨基酸3-6的表位。
4. 一种使抗Αβ抗体或其抗原结合片段的长期给药期间微出血的发生减至最少的方法， 所述方法包括向受试者施用竞争性抑制ΒΙΙΒ037抗体的抗Αβ抗体。
5. -种测量测试受试者中脑淀粉样蛋白斑块的量的方法，所述方法包括： (a) 在施用与ΒΙΙΒ037抗体结合于相同构象表位的抗Αβ抗体或其抗原结合片段后测量 在测试受试者的脑中产生的信号，其中所述抗体或其抗原结合片段用产生可测量信号的试 剂标记;和 (b) 比较在所述测试受试者中产生的信号与向一位或多位对照受试者施用所述标记的 抗体或其抗原结合片段后产生的信号;其中相对于所述对照受试者在所述测试受试者中产 生的信号的增加与脑淀粉样蛋白斑块的增加有关。
6. -种治疗需要治疗的患者中特征在于脑淀粉样蛋白斑块的神经退化性疾病的方法， 所述方法包括： (a) 向需要神经退化性疾病治疗的患者施用与BIIB037抗体结合于相同构象表位的抗A β抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段用产生可测量信号的试剂标记； (b) 回顾在所述患者中测量的信号与向一位或多位对照受试者施用所述标记的抗体或 其抗原结合片段后测量的信号的比较后，评估所述患者的疾病状态;其中相对于所述对照 受试者在所述患者中产生的信号的增加与脑淀粉样蛋白斑块的增加有关；以及 (c) 用适合于所述患者的疾病状态的疗法治疗所述患者。
7. -种测量测试受试者中脑淀粉样蛋白斑块的量的方法，所述方法包括： (a) 在施用竞争性抑制BIIB037抗体的抗Αβ抗体或其抗原结合片段后测量在测试受试 者的脑中产生的信号，其中所述抗体或其抗原结合片段用产生可测量信号的试剂标记;和 (b) 比较在所述测试受试者中产生的信号与向一位或多位对照受试者施用所述标记的 抗体或其抗原结合片段后产生的信号;其中相对于所述对照受试者在所述测试受试者中产 生的信号的增加与脑淀粉样蛋白斑块的增加有关。
8. -种治疗需要治疗的患者中特征在于脑淀粉样蛋白斑块的神经退化性疾病的方法， 所述方法包括： (a) 向需要神经退化性疾病治疗的患者施用竞争性抑制BIIB037抗体的抗Αβ抗体或其 抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段用产生可测量信号的试剂标记； (b) 回顾在所述患者中测量的信号与向一位或多位对照受试者施用所述标记的抗体或 其抗原结合片段后测量的信号的比较后，评估所述患者的疾病状态;其中相对于所述对照 受试者在所述患者中产生的信号的增加与脑淀粉样蛋白斑块的增加有关；以及 (C)用适合于所述患者的疾病状态的疗法治疗所述患者。
9. 如权利要求5到8中任一项所述的方法，其中所述对照受试者是正常健康个体、具有 不同的严重程度的神经退化性病症的个体或其组合。
10. -种评估针对特征在于脑淀粉样蛋白斑块的神经退化性疾病进行治疗的患者的疾 病进展的方法，所述方法包括： (a) 向所述需要神经退化性疾病治疗的患者施用与BIIB037抗体结合于相同构象表位 的抗Αβ抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段用产生可测量信号的试剂 标记，其中在所述施用后在所述患者中测量所述信号； (b) 在(a)的所述施用后以一个或多个时间间隔施用所述标记的抗Αβ抗体或其抗原结 合片段，其中在所述施用后在所述患者中测量所述信号； (c) 基于在(a)的施用后以所述一个或多个时间间隔在所述患者中测量的信号的变化， 评估所述患者的疾病进展;其中所述信号的增加指示所述患者中所述神经退化性疾病的进 展。
11. 一种评估针对特征在于脑淀粉样蛋白斑块的神经退化性疾病进行治疗的患者的疾 病进展的方法，所述方法包括： (a) 向所述需要神经退化性疾病治疗的患者施用竞争性抑制BIIB037抗体的抗Αβ抗体 或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段用产生可测量信号的试剂标记，其中 在所述施用后在所述患者中测量所述信号； (b) 在(a)的所述施用后以一个或多个时间间隔施用所述标记的抗Αβ抗体或其抗原结 合片段，其中在所述施用后在所述患者中测量所述信号； (c) 基于在(a)的施用后以所述一个或多个时间间隔在所述患者中测量的信号的变化， 评估所述患者的疾病进展;其中所述信号的增加指示所述患者中所述神经退化性疾病的进 展。
12. 如权利要求10或11所述的方法，其进一步包括基于疾病进展的程度调节所述患者 的治疗。
13. 如权利要求6、8、9到10或12中任一项所述的方法，其中所述适合于所述患者的疾病 状态的疗法包括向所述需要所述神经退化性疾病治疗的患者施用与BIIB037抗体结合于相 同构象表位的抗Αβ抗体或其抗原结合片段。
14. 如权利要求6、8、9或11到12中任一项所述的方法，其中所述适合于所述患者的疾病 状态的疗法包括向所述需要所述神经退化性疾病治疗的患者施用竞争性抑制ΒΙΙΒ037抗体 的抗Αβ抗体或其抗原结合片段。
15. 如权利要求6或8中任一项所述的方法，所述方法进一步包括： (d) 在(a)的所述施用后以一个或多个时间间隔施用所述标记的抗Αβ抗体或其抗原结 合片段，其中在所述施用后在所述患者中测量所述信号;和 (e) 基于在(a)的施用后以所述一个或多个时间间隔在所述患者中测量的信号的变化， 评估所述患者的疾病进展;其中所述信号的增加指示所述患者中所述神经退化性疾病的进 展。
16. 如权利要求5到15中任一项所述的方法，其中所述试剂包含一种或多种放射性配 体。
17. 如权利要求5到16中任一项所述的方法，其中所述配体是1251。
18. 如权利要求5到17中任一项所述的方法，其中由所述试剂产生的所述信号是通过单 光子发射计算机断层扫描来测量。
19. 如权利要求1到18中任一项所述的方法，其中所述抗Αβ抗体或其抗原结合片段包含 重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，并且其中所述VH包含互补决定区-1 (VHCDR1)氨基酸序 列SEQ ID Ν0:3。
20. 如权利要求1到19中任一项所述的方法，其中所述抗Αβ抗体或其抗原结合片段包含 VH和VL，并且其中所述VH包含互补决定区-2(VHCDR2)氨基酸序列SEQ ID Ν0:4。
21. 如权利要求1到20中任一项所述的方法，其中所述抗Αβ抗体或其抗原结合片段包含 VH和VL，并且其中所述VH包含互补决定区-3(VHCDR3)氨基酸序列SEQ ID ΝΟ:5。
22. 如权利要求1到21中任一项所述的方法，其中所述抗Αβ抗体或其抗原结合片段包含 VH和VL，并且其中所述VL包含互补决定区-l(VLCDRl)氨基酸序列SEQ ID ΝΟ:6。
23. 如权利要求1到22中任一项所述的方法，其中所述抗Αβ抗体或其抗原结合片段包含 VH和VL，并且其中所述VL包含互补决定区-2(VLCDR2)氨基酸序列SEQ ID ΝΟ:7。
24. 如权利要求1到23中任一项所述的方法，其中所述抗Αβ抗体或其抗原结合片段包含 VH和VL，并且其中所述VL包含互补决定区-3(VLCDR3)氨基酸序列SEQ ID ΝΟ:8。
25. 如权利要求1到24中任一项所述的方法，其中所述抗Αβ抗体或其抗原结合片段包含 VH和VL，并且其中所述VH包含VHCDRUVHCDR2以及VHCDR3氨基酸序列SEQ ID ΝΟ:3、4、5。
26. 如权利要求1到25中任一项所述的方法，其中所述抗Αβ抗体或其抗原结合片段包含 VH和VL，并且其中所述VL包含VLCDRUVLCDR2以及VLCDR3氨基酸序列SEQ ID ΝΟ:6、7、8。
27. 如权利要求1到26中任一项所述的方法，其中所述抗Αβ抗体或其抗原结合片段包含 VH和VL，并且其中所述VH包含VHCDR1、VHCDR2以及VHCDR3氨基酸序列SEQ ID ΝΟ:3、4、5,并 且所述VL包含VLCDR1、VLCDR2以及VLCDR3氨基酸序列SEQ ID ΝΟ:6、7、8。
28. 如权利要求1到27中任一项所述的方法，其中所述抗Αβ抗体或其抗原结合片段包含 VH和VL，并且其中所述VH包含SEQ ID ΝΟ:1并且所述VL包含SEQ ID ΝΟ:2。
29. 如权利要求28所述的方法，其中所述抗Αβ抗体或其抗原结合片段包含ΒΙΙΒ037抗体 的抗原结合区。
30. 如权利要求1到29中任一项所述的方法，其中所述抗Αβ抗体或其抗原结合片段选择 性结合于Αβ聚集体。
31. 如权利要求1到30中任一项所述的方法，其中所述抗Αβ抗体或其抗原结合片段可结 合于Αβ原纤维，但基本上不结合于Αβ单体。
32. 如权利要求1到31中任一项所述的方法，其中所述抗Αβ抗体或其抗原结合片段可以 减少脑淀粉样蛋白斑块的有效量通过血-脑屏障。
33. 如权利要求1到32中任一项所述的方法，其中所述抗Αβ抗体或其抗原结合片段以超 过结合于血管淀粉样蛋白的亲和力结合于实质淀粉样蛋白斑块。
34. 如权利要求1到33中任一项所述的方法，其中所述抗Αβ抗体或其抗原结合片段以低 于实质淀粉样蛋白斑块上的程度聚集于嗜刚果红淀粉样蛋白血管病病变中。
35. 如权利要求1到34中任一项所述的方法，其中脑中淀粉样蛋白斑块的减少包含Fc受 体参与。
36. 如权利要求1到35中任一项所述的方法，其中所述抗Αβ抗体的抗原结合片段是单链 Fv 片段(scFv)、F(ab'）片段、F(ab)片段或 F(ab'）2 片段。
37. 如权利要求1到36中任一项所述的方法，其中所述抗Αβ抗体或其抗原结合片段是人 类的。
38. 如权利要求1到37中任一项所述的方法，其中所述抗Αβ抗体或其抗原结合片段是嵌 合的。
39. 如权利要求1到5或7中任一项所述的方法，其中所述受试者患有神经退化性疾病。
40. 如权利要求6或8到39中任一项所述的方法，其中所述神经退化性疾病是选自阿尔 茨海默氏病、唐氏综合征、轻度认知障碍、脑淀粉样蛋白血管病、血管性痴呆、多发梗塞性痴 呆、帕金森氏病、路易体痴呆、亨廷顿氏病、克-雅氏病、囊肿性纤维化或高歇氏病。
41. 如权利要求1到26中任一项所述的方法，其用于治疗或预防阿尔茨海默氏病的进 展；用于与阿尔茨海默氏病相关的症状的改善；用于针对阿尔茨海默氏病的存在诊断或筛 选受试者或用于测定受试者发展阿尔茨海默氏病的风险。
42. 如权利要求1到41中任一项所述的方法，其中所述施用是通过外周施用。
43. 如权利要求1到42中任一项所述的方法，其中所述施用是通过肠胃外施用。
使用抗Αβ抗体减少脑淀粉样蛋白斑块的方法
[0001 ] 背景
[0002] 公开领域
[0003] 本公开涉及使用抗Αβ抗体减少脑淀粉样蛋白斑块的方法。具体来说，本公开涉及 减少脑淀粉样蛋白斑块而不影响血管淀粉样蛋白的方法，所述方法包括向受试者施用与 ΒΙΙΒ037抗体结合于相同表位或竞争性抑制ΒΙΙΒ037抗体的抗Αβ抗体或其抗原结合片段，其 中所述施用减少脑中的淀粉样蛋白斑块而不影响血管淀粉样蛋白，并且其中ΒΙΙΒ037抗体 结合于包含Αβ的氨基酸3-6的表位。此外，本公开涉及使抗Αβ抗体或其抗原结合片段的长期 给药期间微出血的发生减至最少的方法。
[0004] 公开背景
[0005] 份定粉样蛋白（Αβ)肽是受阿尔茨海默氏病(AD)影响的个体的脑实质中的淀粉样蛋 白斑块（即，实质淀粉样蛋白斑块）的主要组分。所述斑块的形成是归因于由淀粉样前体蛋 白（APP)加工过度产生Αβ，并且归因于Αβ在特定条件下从其可溶性形式转化为高度有序的 原纤维聚集体的能力。虽然在淀粉样蛋白斑块附近发生神经元退化，但一些研究已经表明， 如初原纤维或简单寡聚物的中间体也牵涉于AD发病机理中并且甚至显现为所述病理的发 作中的更具神经毒性物质。此外，已经研究不同大小的聚集体的毒性特性并且所获得的结 果支持以下假设，即不同聚集体大小可诱导不同退化途径（Di Carlo Μ. ,European Biophysics Journal 39(6):877-888(2010))〇
[0006] 阿尔茨海默氏病的特征不仅在于实质淀粉样蛋白斑块和细胞内缠结的存在，而且 在于血管中淀粉样蛋白沉积物的存在（即，血管淀粉样蛋白沉积物），这种病况被称作脑淀 粉样蛋白血管病(CAA)，也称作嗜刚果红淀粉样蛋白血管病。在阿尔茨海默氏病患者和一些 转基因小鼠模型中均观察到的CAA主要是由Αβ的较短形式Afo-40构成，而实质中的大部分淀 粉样蛋白沉积物是由Afo- 42构成。致密淀粉样蛋白沉积物也含有Icock等，Journal of Neuroinflammation I(24):1-11(2004))。
[0007] 作为阿尔茨海默氏病的潜在治疗的Αβ免疫疗法的概念在数十年前出现，证实用聚 集的Αβ主动免疫可能减少AD样病理的发展或延迟APP转基因小鼠中现有病理的进展，并且 还导致这些动物中改进的行为（Schenk等，Nature 400: 173-177(1999)，Janus等， Neurobiol Aging 21:541-549(2000) ,Morgan等，Nature 408:982-985(2000))。在一小组 患者中如脑膜脑炎的不利事件的发展阻碍了转化为人类治疗方法(Orgogozo等,Neurology 61:46-54(2003))。另外，已经考虑了不同的潜在原因，包括由佐剂导致的T细胞活化、A抑太 上T细胞表位的存在、与生理学APP衍生物的交叉反应性以及通过血管淀粉样蛋白的减少使 血管崩解（Schenk等，Nat Rev Neurosci 3:824-828)。
[0008] 需要发展一种使用被动免疫(例如，抗Αβ抗体)来治疗神经退化性病症(例如，阿尔 茨海默氏病)的安全方法。
[0009] 简要概述
[0010] -个实施方案涉及一种减少脑淀粉样蛋白斑块的方法，所述方法包括向受试者施 用与ΒΙΙΒ037抗体结合于相同表位的抗Αβ抗体或其抗原结合片段，其中所述施用可减少脑 中的淀粉样蛋白斑块而基本上不影响血管淀粉样蛋白，并且其中BIIB037抗体结合于包含A β的氨基酸3-6的表位。
[0011] 还公开一种减少脑淀粉样蛋白斑块的方法，所述方法包括向受试者施用竞争性抑 制ΒΙΙΒ037抗体的抗Αβ抗体或其抗原结合片段，其中所述施用可减少脑中的淀粉样蛋白斑 块而基本上不影响血管淀粉样蛋白。
[0012] 进一步公开一种使抗Αβ抗体或其抗原结合片段的长期给药期间微出血的发生减 至最少的方法，所述方法包括向受试者施用与BIIBO 37抗体结合于相同表位的抗Αβ抗体，其 中ΒΙΙΒ037抗体结合于包含Αβ的氨基酸3-6的表位。
[0013] 还公开一种使抗Αβ抗体或其抗原结合片段的长期给药期间微出血的发生减至最 少的方法，所述方法包括向受试者施用竞争性抑制ΒΙΙΒ037抗体的抗Αβ抗体。
[0014] 进一步公开一种测量测试受试者中脑淀粉样蛋白斑块的量的方法，所述方法包 括：（a)在施用与ΒΙΙΒ037抗体结合于相同构象表位的抗Αβ抗体或其抗原结合片段后测量在 测试受试者的脑中产生的信号，其中所述抗体或其抗原结合片段用产生可测量信号的试剂 标记;和(b)比较在所述测试受试者中产生的信号与向一位或多位对照受试者施用所述标 记的抗体或其抗原结合片段后产生的信号;其中相对于所述对照受试者在所述测试受试者 中产生的信号的增加与脑淀粉样蛋白斑块的增加有关。
[0015] 还公开治疗需要治疗的患者中特征在于脑淀粉样蛋白斑块的神经退化性疾病的 方法，所述方法包括：（a)向需要神经退化性疾病治疗的患者施用与BIIB037抗体结合于相 同构象表位的抗Αβ抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段用产生可测量 信号的试剂标记；（b)回顾在所述患者中测量的信号与向一位或多位对照受试者施用所述 标记的抗体或其抗原结合片段后测量的信号的比较后，评估所述患者的疾病状态;其中相 对于所述对照受试者在所述患者中产生的信号的增加与脑淀粉样蛋白斑块的增加有关；以 及(c)用适合于所述患者的疾病状态的疗法治疗所述患者。
[0016] -个实施方案涉及一种测量测试受试者中脑淀粉样蛋白斑块的量的方法，所述方 法包括：（a)在施用竞争性抑制BIIB037抗体的抗Αβ抗体或其抗原结合片段后测量在测试受 试者的脑中产生的信号，其中所述抗体或其抗原结合片段用产生可测量信号的试剂标记； 和(b)比较在所述测试受试者中产生的信号与向一位或多位对照受试者施用所述标记的抗 体或其抗原结合片段后产生的信号;其中相对于所述对照受试者在所述测试受试者中产生 的信号的增加与脑淀粉样蛋白斑块的增加有关。
[0017] 进一步公开一种治疗需要治疗的患者中特征在于脑淀粉样蛋白斑块的神经退化 性疾病的方法，所述方法包括：（a)向需要神经退化性疾病治疗的患者施用竞争性抑制 BIIB037抗体的抗Αβ抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段用产生可测 量信号的试剂标记；（b)回顾在所述患者中测量的信号与向一位或多位对照受试者施用所 述标记的抗体或其抗原结合片段后测量的信号的比较后，评估所述患者的疾病状态;其中 相对于所述对照受试者在所述患者中产生的信号的增加与脑淀粉样蛋白斑块的增加有关； 以及(c)用适合于所述患者的疾病状态的疗法治疗所述患者。
[0018] 在某些实施方案中，所述对照受试者是正常健康个体、具有不同的严重程度的神 经退化性病症的个体或其组合。
[0019] 还公开一种评估针对特征在于脑淀粉样蛋白斑块的神经退化性疾病进行治疗的 患者的疾病进展的方法，所述方法包括：（a)向所述需要神经退化性疾病治疗的患者施用与 BIIB037抗体结合于相同构象表位的抗Αβ抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原 结合片段用产生可测量信号的试剂标记，其中在所述施用后在所述患者中测量所述信号； (b)在(a)的所述施用后以一个或多个时间间隔施用所述标记的抗Αβ抗体或其抗原结合片 段，其中在所述施用后在所述患者中测量所述信号；（c)基于在(a)的施用后以所述一个或 多个时间间隔在所述患者中测量的信号的变化，评估所述患者的疾病进展;其中所述信号 的增加指示所述患者中所述神经退化性疾病的进展。
[0020] 进一步公开一种评估针对特征在于脑淀粉样蛋白斑块的神经退化性疾病进行治 疗的患者的疾病进展的方法，所述方法包括：（a)向所述需要神经退化性疾病治疗的患者施 用竞争性抑制BIIB037抗体的抗Αβ抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片 段用产生可测量信号的试剂标记，其中在所述施用后在所述患者中测量所述信号；（b)在 (a)的所述施用后以一个或多个时间间隔施用所述标记的抗Αβ抗体或其抗原结合片段，其 中在所述施用后在所述患者中测量所述信号；（c)基于在(a)的施用后以所述一个或多个时 间间隔在所述患者中测量的信号的变化，评估所述患者的疾病进展;其中所述信号的增加 指示所述患者中所述神经退化性疾病的进展。
[0021] 某些实施方案包括如本文所述的方法，其进一步包括基于疾病进展的程度调节所 述患者的治疗。
[0022] 在一些实施方案中，所述适合于所述患者的疾病状态的疗法包括向所述需要所述 神经退化性疾病治疗的患者施用与BIIB037抗体结合于相同构象表位的抗Αβ抗体或其抗原 结合片段。
[0023] 某些实施方案包括如本文所述的方法，其中所述适合于所述患者的疾病状态的疗 法包括向所述需要所述神经退化性疾病治疗的患者施用竞争性抑制ΒΙΙΒ037抗体的抗 体或其抗原结合片段。
[0024] 如技术方案6或8中任一项所述的方法，其进一步包括：（d)在(a)的所述施用后以 一个或多个时间间隔施用所述标记的抗Αβ抗体或其抗原结合片段，其中在所述施用后在所 述患者中测量所述信号；和(e)基于在(a)的施用后以所述一个或多个时间间隔在所述患者 中测量的信号的变化，评估所述患者的疾病进展;其中所述信号的增加指示所述患者中所 述神经退化性疾病的进展。
[0025] 在某些实施方案中，所述试剂包含一种或多种放射性配体。
[0026]在某些实施方案中，所述配体是125I。
[0028]在某些实施方案中，所述抗Αβ抗体或其抗原结合片段包含重链可变区（VH)和轻链 可变区(VL)，并且其中所述VH包含互补决定区-I(VHCDRl)氨基酸序列SEQ ID Ν0:3。
[0029] 在某些实施方案中，所述抗Αβ抗体或其抗原结合片段包含VH和VL，并且其中所述 VH包含互补决定区-2(VHCDR2)氨基酸序列SEQ ID Ν0:4。
[0030] 在某些实施方案中，所述抗Αβ抗体或其抗原结合片段包含VH和VL，并且其中所述 VH包含互补决定区-3(VHCDR3)氨基酸序列SEQ ID Ν0:5。[0031 ]在某些实施方案中，所述抗Αβ抗体或其抗原结合片段包含VH和VL，并且其中所述 VL包含互补决定区-I(VLCDRl)氨基酸序列SEQ ID N0:6。
[0032] 在某些实施方案中，所述抗Αβ抗体或其抗原结合片段包含VH和VL，并且其中所述 VL包含互补决定区-2(VLCDR2)氨基酸序列SEQ ID Ν0:7。
[0033] 在某些实施方案中，所述抗Αβ抗体或其抗原结合片段包含VH和VL，其中所述VL包 含互补决定区_3(VLCDR3)氨基酸序列SEQ ID Ν0:8。
[0034] 在某些实施方案中，所述抗Αβ抗体或其抗原结合片段包含VH和VL，并且其中所述 VH包含VHCDRUVHCDR2以及VHCDR3氨基酸序列SEQ ID Ν0:3、4、5。
[0035] 在某些实施方案中，所述抗Αβ抗体或其抗原结合片段包含VH和VL，并且其中所述 VL包含VLCDRUVLCDR2以及VLCDR3氨基酸序列SEQ ID Ν0:6、7、8。
[0036] 在某些实施方案中，所述抗Αβ抗体或其抗原结合片段包含VH和VL，其中所述VH包 含VHCDRUVHCDR2以及VHCDR3氨基酸序列SEQ ID腸：3、4、5，并且所述¥1^包含¥〇：01?1、 VLCDR2以及VLCDR3氨基酸序列SEQ ID Ν0:6、7、8。
[0037] 在某些实施方案中，所述抗Αβ抗体或其抗原结合片段包含VH和VL，其中所述VH包 含SEQ ID NO: 1并且所述VL包含SEQ ID NO:2。
[0038]在某些实施方案中，所述抗Αβ抗体或其抗原结合片段包含BIIB037抗体的抗原结 合区。
[0039] 在某些实施方案中，所述抗Αβ抗体或其抗原结合片段选择性结合于Αβ聚集体。
[0040] 在某些实施方案中，所述抗Αβ抗体或其抗原结合片段可能结合于Αβ原纤维，但基 本上不结合于Αβ单体。
[0041] 在某些实施方案中，所述抗Αβ抗体或其抗原结合片段可以减少脑淀粉样蛋白斑块 的有效量通过血-脑屏障。
[0042] 在某些实施方案中，所述抗Αβ抗体或其抗原结合片段以超过结合于血管淀粉样蛋 白的亲和力结合于实质淀粉样蛋白斑块。
[0043] 在某些实施方案中，所述抗Αβ抗体或其抗原结合片段以低于实质淀粉样蛋白斑块 上的程度聚集于嗜刚果红淀粉样蛋白血管病病变中。
[0044] 在某些实施方案中，脑中淀粉样蛋白斑块的减少包含Fc受体参与。
[0045] 在某些实施方案中，所述抗Αβ抗体的抗原结合片段是单链Fv片段(scFv)、F(ab'） 片段、F(ab)片段或F(ab'） 2片段。在一个实施方案中，所述抗体是人类的。在另一实施方案 中，所述抗体是嵌合的。
[0046] 在某些实施方案中，所述受试者患有神经退化性病症。在某些实施方案中，所述神 经退化性疾病是选自阿尔茨海默氏病、唐氏综合征、轻度认知障碍、脑淀粉样蛋白血管病、 血管性痴呆、多发梗塞性痴呆、帕金森氏病、路易体痴呆、亨廷顿氏病、克-雅氏病、囊肿性纤 维化或高歇氏病。
[0047] 某些实施方案包括如本文所述的方法，其用于治疗或预防阿尔茨海默氏病的进 展；用于与阿尔茨海默氏病相关的症状的改善；用于针对阿尔茨海默氏病的存在诊断或筛 选受试者或用于测定受试者发展阿尔茨海默氏病的风险。
[0048] 在某些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段是通过肠胃外施用来施用。
[0049] 在某些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段是通过外周施用来施用。
[0052]图I(A-D):嵌合BIIB037( "chBIIB037"）选择性结合于Αβ聚集体。（A)chBIIB037或 3D6结合于Αβ(1-42)聚集体。（B)由间接地固定于ELISA板上的3D6而非由chBIIB037捕获可 溶性单体Αβ(1-40)。（C)使用BIIB037或3D6免疫沉淀聚集的（泳道2)或单体Αβ(1-42)(泳道 1)的制剂。（D)使用FITC缀合的chBIIB037对人类阿尔茨海默氏病脑组织进行免疫染色。 [0053]图2(A-D):BIIB037在Tg2576转基因小鼠中单次腹膜内施用后的脑渗透。（A)在单 次剂量(30mg/kg)后的3周内测量血浆(μg/ml)和脑(ng/g)中的BIIB037含量。（B)在BIIB037 或3D6抗体的单次剂量后测量血浆Αβ浓度(pmol/mDJC)在Tg2576小鼠中的单次剂量后 BIIB037与淀粉样蛋白沉积物的体内结合与(D)用广谱Αβ抗体对连续切片进行染色相比较。 [0054]图3(Α-Ε):在Tg2576转基因小鼠中短期给药后chBIIB037与实质淀粉样蛋白斑块 的结合。(A)Cy3标记的chBIIB037或(C)Cy3标记的3D6与脑中的淀粉样蛋白沉积物的结合是 在荧光显微镜下显示，并且(b，d，e)使用Visiopharm k软件定量。（E)与一个或另一淀 粉样蛋白区室相关的Cy3染色表述为占总的脑区染色的百分比，并且证实相对于血管淀粉 样蛋白，chBIIB037与实质淀粉样蛋白的优先结合。
[0055]图4(A-C):在Tg2576转基因小鼠中用chBIIB037进行6个月的长期给药后的暴露。 (八）在0.3、1、3、10以及3011^/1^(^8118037治疗组的最后剂量后24小时测量血浆中的 chBIIB037浓度(μg/mlhPBS组中超过检测极限的chBIIB037含量是归因于由所述测定测量 的内源性抗Αβ抗体。（B)同样在0.3、1、3、10以及30mg/kg chBIIB037治疗组的DEA(无洗涤 剂)脑部分中测量chBIIB037浓度。（C)血浆(空心圆）或脑(三角形）中的药物浓度与所施用 的剂量的相关性。各符号表示一种动物，并且点线表示所述测定的检测极限。
[0056]图5(A-D):在Tg2576转基因小鼠中用chBIIB037进行6个月的长期给药后淀粉样蛋 白负荷的减少。与PBS对照组相比，3、10以及30mg/kgchBIIB037治疗组的(A)可溶性DEA和 (C)不溶性胍脑部分中的AM2浓度均显著降低。（B)皮质和(D)海马中的总的脑淀粉样蛋白 负载通过6E10免疫组织化学显示并且使用VISIOPHARM®软件定量。（数据是表示为平 均值土SEM;点线表示与PBS治疗的对照组相比50%减少。治疗组与对照组之间的差异通过 邓恩氏事后测试(Dunn's post-hoc test)根据Kruskall-Wallis单因素方差分析基于秩来 测定。与媒介物的统计学显著差异是由星号(*)指示;P〈〇.05)。
[0057] 图6(A-D):在Tg2576转基因小鼠中用chBIIB037长期给药后chBIIB037与血管淀粉 样蛋白的结合。（A)致密淀粉样蛋白斑块和CAA的硫黄素 S(Thio-S)染色是在荧光显微镜下 显示，并且(B)使用\]^0卩11狀111'<软件来区分实质沉积物与血管沉积物，并且定量各实体 所占据的面积。（C)皮质和(D)海马中的血管淀粉样蛋白负载是针对chBIIB037的3、10以及 30mg/kg剂量通过硫黄素 S染色来评估。（E)在0、10、70和500mg/kg chBIIB037以及500mg/kg BIIB037的13周静脉内治疗后，Tg2576小鼠中微出血程度的差异，如通过Perls染色所确定。 (数据表示为平均值土 SEM; η =每组18-20只动物）。
[0058]图7(Α-Β):在Tg2576转基因小鼠中用chBIIB037进行6个月的长期给药后淀粉样蛋 白负荷的减少。（A)wt chBIIB037、无糖基化(Agly)chBIIB037或3D6以3mg/kg经由Tg2576小 鼠中每周腹膜内注射给药。在由脑匀浆制备的不溶性(胍)部分中测量的脑Αβ 42含量(pmol/ g)与PBS治疗的对照组相比较。（治疗组与对照组之间的差异通过邓恩氏事后测试测定，p〈 0.Ol，n =每组12-14只；平均值土SEMh(B)通过ThiO-S染色定量的皮质致密淀粉样蛋白斑 块负载(染色面积％ )在wt chBIIB037、Agly chBIIB037以及3D6治疗组中通过用Thio-S染 色的面积的定量来评估并且与PBS对照组相比较。（治疗组与对照组之间的差异通过邓恩氏 事后测试测定 ;P〈0.01，n = 每组12-14只；平均值±SEM)。AglychBIIB037和3D6对致密淀粉 样蛋白斑块负载无影响。
[0059]图8(A-C):在Tg2576转基因小鼠中用chBIIB037长期给药后的淀粉样蛋白负载减 少会影响所有大小的斑块。（A，B)用6E10染色的淀粉样蛋白斑块使用VlSIOPHARIVf软 件来定量。斑块的大小是通过面积来确定:斑块<125μπι 2(#4)，125-250μπι2(#3)，250-500μπι2 (#2)以及>50(^1112(#1)。（〇在所有大小范围内的斑块数目在chBIIB037治疗组中测定并且 与PBS治疗的对照相比较。（t测试，* = p〈. 0.005)。
[0060]图9(A-B):在Tg2576转基因小鼠中用chBIIB037长期给药后小胶质细胞介导的淀 粉样蛋白斑块清除。(A)来自PBS或chBIIB037治疗的小鼠的脑切片针对Αβ(6Ε10-浅灰)和小 胶质细胞标志物（Ibal-深灰)进行免疫染色。（B)计算多70%周长由巨噬细胞围绕的斑块并 且基于斑块大小分级。70%由小胶质细胞围绕的斑块的百分比在chBIIB037治疗组(透明 条)与PBS对照组(灰色条)之间针对>250μπι 2的斑块进行比较(t测试，* = p〈. 0.005)。[0061 ] 图10(Α-Β):ΒΙΙΒ037/Αβ复合物的结构。（A)具有Αβ2-9的人类8118037。邰 2-9肽呈棒 状表示，其中氧呈浅灰色，氮呈深灰色，并且碳呈白色。接触所述肽的CDR: VH⑶R1(H1 )、 VHCDR2 (Η2)、VHCDR3 (Η3)、VLCDRI (LI)、VLCDR2 (L2)以及VLCDR3 (L3)。仅示出接触所述肽的 CDRt3(B)AeUD肽骨架在ΒΙΙΒ037(白色)和W02(中灰色）的结构中的重叠。
[0062] 图11(4-8):8118037与小鼠如的结合。（六)人类和小鼠如（1-42)序列的比对。（8) BIIB037与人类和小鼠 Αβ(1-16)肽的结合
[0063]图 12(A-C):(A)Tg2576(Tg)和 WT 小鼠 CNS 中使用[125I]chBIIB037 的单光子发射计 算机断层扫描(SPECT)成像数据的概述;接着是在所述标记的抗体的静脉内施用后(B)7天 和(C)14天。
[0064] 图 13(A-C):(A)Tg2576(a)和WT(b)小鼠的CNS中[125I]chBIIB037的标准化摄取的 代表性矢形面实例。（B)Tg2576小鼠的CNS中[ 125I]chBIIB037的体内积聚的代表性48天图 像。（C)在(a) Tg和(b) WT小鼠脑中[1251 ] chBI IB037的平均标准化脑摄取。
[0065] 图H(A-C):相对于血库，在Tg和WT小鼠脑中[I25I]chBIIB037的体内摄取。图14A示 出在第48天(D48)在Tg2576(L)相对于WT(R)小鼠中的平均脑摄取并且接着在用I 3BS灌注后 (D48灌注)进行比较。图14B-C示出感兴趣区域(ROI)由第28天的数据产生的曲线。在血库与 组织之间测量放射性浓度(yCi/mm 3)。
[0066]图 15(A-G):Tg2576小鼠脑中SPECT成像数据的概述；以下是(A)lmg/kg[125I]Agly-chBIIB037(22月龄Tg2576)、（C) lmg/kg[125I]huBIIB037F(ab'）2(22月龄Tg2576)或（D)Img/ kg[125I]huBIIB037F(ab'）2(3月龄WT)的施用。（B)在老年Tg2576小鼠（22月龄）中体内[ 125I] Agly-chBIIB037结合的定量脑图谱分析。（E)在老年Tg2576和WT小鼠脑中体内[125I] huBIIB037F(ab'）2结合的定量感兴趣区域分析。（F)在Tg小鼠图像中选择的任意比例的矢 形面和冠状缝图像的比较以示出[ 125I]huBIIB037F(ab'）2的体内摄取和保留。（G)在老年 Tg2576和野生型小鼠脑中体内[125I]huBIIB037F(ab'）2结合的定量ROI分析的整体概述。数 据表示为在四个成像时间点内针对小脑中的％ ID/g标准化的皮质中的％ ID/g。
[0067]图16:代表性第48天图像，示出在Tg2576老年小鼠脑的CNS中[125I]Agly-chBIIB037(l和IOmpk)的体内积聚。还在年轻Tg2576小鼠脑中以及使用[ 125I]P1.17标记的 同型对照（I Ompk)测试CNS特异性体内积聚。
[0068]图17:在24h采集时针对Ab的5F3免疫染色和SPECT图像(左侧），表示低和高摄取动 物。在右侧的曲线示出针对所有成像的动物，皮质中的定量SPECT ROI相对于离体淀粉样蛋 白面积(每只动物2个切片）的相关性。
[0069]图18:用于组织学和放射自显影分析的小鼠脑的取样。
[0070] 图19:在Tg小鼠101和WT小鼠201的海马区域中的显微放射自显影(mARG)。
[0071]图20:在海马区域中的相邻切片中Tg小鼠101中的mArg和针对Αβ的免疫组织化学 (IHC)染色。
[0072]图21:在海马区域中的相邻切片中Tg小鼠101中的mARG和针对A邱勺硫黄素-S染色。 [0073]图22:在Tg和WT小鼠中的靶标和非靶标组织/器官中[125I]chBIIB037的生物分布。 数据表述为组织之间的％ ID/g。
[0074] 图23:在Tg2576和WT小鼠中体内[125I]huBIIB037F(ab'）2的全身SPECT图像。
[0075] 图24:在老年Tg2576和年轻WT小鼠的非靶标组织中[125I]huBIIB037F(ab'）2的体 内生物分布的定量全身分析。数据表述为在来自Tg2576(实心条)和WT(条纹条)小鼠的组织 之间的％ID/ g(3[H，心脏;K，肾;L，肝;Lu，肺;M，肌肉；S，胃；T，甲状腺;WB，全身]。
[0076] 详述
[0077] I.定义
[0078] 应注意，术语"一种(a)"或"一种(an)"实体是指一种或多种所述实体;例如，"一种 抗Αβ抗体"应理解为表示一种或多种特异性结合于Αβ的抗体。因而，术语"一种(a)"（或"一 种(an)"）、"一种或多种"以及"至少一种"可在本文中互换使用。
[0079] 如本文所用，术语"神经退化性疾病" 一般包括但不限于阿尔茨海默氏病、轻度认 知障碍、额颞叶痴呆、路易体病、帕金森氏病、皮克氏病、贝瓦克病；嗜刚果红淀粉样蛋白血 管病、脑淀粉样蛋白血管病、唐氏综合征、多发梗塞性痴呆、亨廷顿氏病、克-雅氏病、AIDS痴 呆综合征、抑郁症、焦虑性障碍、恐怖症、贝尔氏麻痹、癫痫症、脑炎、多发性硬化;神经肌肉 障碍、神经肿瘤障碍、脑肿瘤、包括中风的神经血管障碍、神经免疫障碍、神经耳科疾病、包 括脊髓损伤的神经外伤、包括神经性疼痛的疼痛、小儿科神经和神经精神障碍、睡眠障碍、 妥瑞氏综合征、轻度认知障碍、血管性痴呆、多发梗塞性痴呆、囊肿性纤维化、高歇氏病、中 枢神经系统(CNS)的其它运动障碍和疾病。除非另外说明，否则术语"神经退化性"、"神经" 或"神经精神"在本文中可互换使用。
[0080] 除非另外说明，否则术语"病症"、"疾病"和"病"在本文中可互换使用。
[0081] 除非另外说明，否则术语"Αβ"、"AiKAbeta)"和"β-淀粉样蛋白"在本文中可互换使 用。
[0082] 如本文所用，术语"结合分子"或"抗原结合分子"在其最广泛含义上是指特异性结 合抗原决定簇的分子。抗原结合分子的非限制性实例是抗体和其保持抗原特异性结合的片 段，以及结合于A邱勺其它非抗体分子，包括但不限于激素、受体、配体、主要组织相容性复合 体(MHC)分子、如热休克蛋白（HSP)的伴侣蛋白，以及细胞-细胞粘着分子，如钙粘着蛋白、整 合素、C型凝集素以及免疫球蛋白（Ig)超家族的成员。因此，仅为了清晰起见并且不限制本 公开的范围，大部分以下实施方案是关于抗体和抗体样分子针对治疗剂和诊断剂的开发来 论述，所述分子表示结合分子。在另一实施方案中，所公开的结合分子包含抗体分子的至少 一个重链或轻链CDR。在另一实施方案中，所公开的结合分子包含来自一种或多种抗体分子 的至少两个CDR。在另一实施方案中，所公开的结合分子包含来自一种或多种抗体分子的至 少三个CDR。在另一实施方案中，所公开的结合分子包含来自一种或多种抗体分子的至少四 个CDR。在另一实施方案中，所公开的结合分子包含来自一种或多种抗体分子的至少五个 CDR。在另一实施方案中，所公开的结合分子包含来自一种或多种抗体分子的至少六个CDR。
[0083]本文公开一种减少脑淀粉样蛋白斑块而不影响血管淀粉样蛋白的方法，所述方法 包括向受试者施用抗Αβ抗体或其抗原结合片段。除非特定地提及全长大小的抗体，如天然 存在的抗体，否则术语"抗Αβ抗体"包含全长大小的抗体以及所述抗体的抗原结合片段、变 体、类似物或衍生物，例如天然存在的抗体或免疫球蛋白分子或工程改造的抗体分子或以 类似于抗体分子的方式结合抗原的片段。
[0084]术语"抗体"和"免疫球蛋白"在本文中可互换使用。抗体或免疫球蛋白至少包含重 链的可变结构域，并且通常包含重链和轻链的至少可变结构域。脊椎动物系统中的基础免 疫球蛋白结构相对地得到充分了解。参见例如Harlow等（1988)Antibodies:A Laboratory Manual(第2版；Cold Spring Harbor Laboratory Press) 〇
[0085] 如本文所用，术语"免疫球蛋白"包含可以生物化学方式区分的多种广泛类别的多 肽。本领域技术人员应了解，重链是分类为γ、μ、α、δ或ε( γ ,μ,α,δ,ε)，其中存在一些子类 (例如γ 1 - γ 4)。这种链的性质决定抗体的"类别"分别为IgG、IgM、IgA、IgG或IgE。免疫球蛋 白子类（同型），例如1861、1862、1863、1864、18六1等得到充分表征并且已知赋予功能特化。 这些类别和同型中的每一者的修饰型式容易由熟练技术人员鉴于本公开来辨别并且相应 地在本公开的范围内。所有免疫球蛋白类别均清楚地在本公开的范围内。以下论述一般将 针对免疫球蛋白分子的IgG类别。关于IgG，标准免疫球蛋白分子包含分子量为约23,000道 尔顿的两种同一轻链多肽，和分子量为53,000-70，000的两种同一重链多肽。所述四条链典 型地由二硫键呈Ύ'配置接合，其中所述轻链托住所述重链，在Ύ'的口部开始并且继续通 过可变区。
[0086] 轻链是分类为κ或λ(κ, λ)。各重链类别可与κ或λ轻链结合。一般说来，所述轻链和 重链彼此共价键结，并且当免疫球蛋白是由杂交瘤、B细胞或遗传工程改造的宿主细胞产生 时，两条重链的"尾部"部分通过共价二硫键或非共价键彼此键结。在重链中，氨基酸序列从 在Y配置的叉状末端的N端发展到在各链的底部的C端。
[0087] 轻链和重链均分成结构和功能同源区域。术语"恒定"和"可变"在功能方面使用。 在这点上，应了解轻(VL或VK)链和重(VH)链部分的可变结构域决定抗原识别和特异性。相 反地，轻链(CL)和重链(CHl、CH2或CH3)的恒定结构域赋予重要的生物特性，如分泌、经胎盘 移动相、Fc受体结合、补体结合等。按照惯例，当恒定区结构域更加远离抗体的抗原结合位 点或氨基端时，其编号增加。N端部分是可变区并且C端部分是恒定区；CH3和CL结构域实际 上分别包含重链和轻链的羧基端。
[0088] 如上文所指示，可变区允许抗体选择性识别并且特异性结合抗原上的表位。即，抗 体的VL结构域和VH结构域或在这些可变结构域内的互补决定区（CDR)的子集组合形成确定 三维抗原结合位点的可变区。这种四级抗体结构形成存在于Y的各臂的末端的抗原结合位 点。更具体说来，所述抗原结合位点是由VH和VL链中每一者上的三个CDR确定。在一些情况 下，例如源于骆驼物种或基于骆驼免疫球蛋白工程改造的某些免疫球蛋白分子的情况下， 完全免疫球蛋白分子可仅由重链组成，而无轻链。参见例如Hamer s-Casterman等， Nature363:446-448(1993)〇
[0089]在天然存在的抗体中，存在于各抗原结合结构域中的六个"互补决定区"或"CDR" 是短的非连续氨基酸序列，其特异性地定位以在所述抗体在水性环境中呈现其三维配置时 形成抗原结合结构域。所述抗原结合结构域中的氨基酸的剩余部分被称为"构架"区，显示 较低分子间变化。所述构架区大部分采用折叠构象并且所述CDR形成连接所述β-折叠结 构的环，并且在一些情况下形成所述β-折叠结构的一部分。因此，构架区用于形成通过链间 非共价相互作用使CDR呈正确取向定位的骨架。由定位的CDR形成的抗原结合结构域确定与 免疫活性抗原上的表位互补的表面。这一互补表面促进抗体与其同源表位的非共价结合。 分别构成CDR和构架区的氨基酸可容易地由本领域技术人员针对任何给定的重链或轻链可 变结构域鉴定，因为其已经精确地确定(参见下文）。
[0090] 在本领域内所使用和/或接受的术语存在两种或更多种定义的情况下，除非明确 地相反陈述，否则如本文所用的所述术语的定义意图包括所有所述含义。特定实例是使用 术语"互补决定区"（"CDR"）来描述在重链和轻链多肽的可变区内均发现的非连续抗原结合 位点。这一特定区域已经由Kabat等（1983)U.S.Dept.of Health and Human Services, "Sequences of Proteins of Immunological Interest" 并且由 Chothia和Lesk， J.Mol.Biol. 196:901-917(1987)描述，所述文献以引用的方式并入本文，其中当氨基酸残 基彼此相比较时，所述定义包括氨基酸残基的重叠或子集。然而，应用任一定义来指代抗体 或其变体的CDR均意图在如本文所定义和使用的所述术语的范围内。涵盖如以上引用的参 考文献中的任一者所定义的CDR的适当氨基酸残基作为比较陈述于以下表1中。涵盖特定 CDR的精确残基数目将视所述CDR的序列和大小而变化。给出所述抗体的可变区氨基酸序 列，本领域技术人员可常规地确定何种残基包含特定CDR。
[0091] 表1. CDR 定义1
[0093]"表1中所有CDR定义的编号均是根据由Kabat等陈述的编号惯例 [0094](参见下文）。
[0095] Kabat等还定义了一种用于可变结构域序列的编号系统，所述系统可适用于任何 抗体。本领域技术人员可明确地将这种"Kabat编号"系统指派给任何可变结构域序列，而不 依赖于超出所述序列本身的任何实验数据。如本文所用，"Kabat编号"是指由Kabat等 (1983)U.S. Dept. of Health and Human Services，"Sequence of Proteins of Immunological Interest陈述的编号系统。除非另外规定，否则对本公开的抗Αβ抗体或 其抗原结合片段、变体或衍生物中的特定氨基酸残基位置的编号的提及是根据Kabat编号 系统。
[0096] 本公开的抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物包括但不限于多克隆、单克隆、多 特异性、人类、人源化、灵长类化或嵌合抗体、单链抗体、表位结合片段，例如Fab、Fab'以及F (&13'）2、？(1、？¥、单链?¥(80?¥)、二硫键键联的？¥(8(^)、包含¥1^或¥!1结构域的片段、由？ &13表 达库产生的片段以及抗独特型(抗-Id)抗体。ScFv分子为本领域中已知的并且描述于例如 美国专利N O.5,892,019中。本公开的免疫球蛋白或抗体分子可为任何类型（例如IgG、IgE、 181、18〇、18厶以及18¥)、类别（例如1861、1862、1863、1 864、18厶1以及18厶2等)或子类的免疫 球蛋白分子。
[0097] 如本文所用，术语"重链部分"包括源于免疫球蛋白重链的氨基酸序列。在某些实 施方案中，包含重链部分的多肽包含以下至少一者:VH结构域、CHl结构域、铰链(例如上部、 中间和/或下部铰链区）结构域、CH2结构域、CH3结构域或其变体或片段。例如，用于本公开 的结合多肽可包含包含CHl结构域的多肽链;包含CHl结构域、铰链结构域的至少一部分以 及CH2结构域的多肽链;包含CHl结构域和CH3结构域的多肽链;包含CHl结构域、铰链结构域 的至少一部分以及CH3结构域的多肽链，或包含CHl结构域、铰链结构域的至少一部分、CH2 结构域以及CH3结构域的多肽链。在另一实施方案中，本公开的多肽包含包含CH3结构域的 多肽链。此外，用于本公开的结合多肽可缺乏CH2结构域的至少一部分(例如，CH2结构域的 全部或一部分）。如上文所陈述，本领域技术人员应了解这些结构域(例如重链部分)可进行 修饰，使得其氨基酸序列不同于天然存在的免疫球蛋白分子。
[0098] 在本文所公开的抗Αβ抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物的某些实施方案中， 多聚体的一条多肽链的重链部分与所述多聚体的第二多肽链上的那些重链部分同一。或 者，本公开的含重链部分的单体不同一。例如，各单体可包含不同的靶标结合位点，从而形 成例如双特异性抗体。
[0099] 用于本文所公开的方法的结合分子的重链部分可源于不同的免疫球蛋白分子。例 如，多肽的重链部分可包含源于IgGl分子的Ch 1结构域和源于IgG3分子的铰链区。在另一实 例中，重链部分可包含部分地源于IgGl分子并且部分地源于IgG3分子的铰链区。在另一实 例中，重链部分可包含部分地源于IgGl分子并且部分地源于IgG4分子的嵌合铰链。
[0100] 如本文所用，术语"轻链部分"包括源于免疫球蛋白轻链，例如κ或λ轻链的氨基酸 序列。在某些实施方案中，轻链部分包含VL或CL结构域中的至少一者。
[0101] 如先前所指示，各种免疫球蛋白类别的恒定区的亚单位结构和三维配置为众所周 知的。如本文所用，术语"VH结构域"包括免疫球蛋白重链的氨基端可变结构域并且术语 "CH1结构域"包括免疫球蛋白重链的第一(最氨基端)恒定区结构域。CHl结构域邻近于VH结 构域并且是免疫球蛋白重链分子的铰链区的氨基端。
[0102] 如本文所用，术语"CH2结构域"包括重链分子中使用常规编号方案例如从抗体的 约残基244延伸至残基360的部分(残基244至360，Kabat编号系统；和残基231-340，EU编号 系统；参见Kabat EA等的上文引用的著作。CH2结构域是独特的，因为其不与另一结构域紧 密配对。更确切地，两条N键联的分支碳水化合物链插入完整天然IgG分子的两个CH2结构域 之间。另外充分证实，CH3结构域从IgG分子的CH2结构域延伸至C端并且包含约108个残基。
[0103] 如本文所用，术语"铰链区"包括重链分子中接合CHl结构域至CH2结构域的部分。 这一铰链区包含约25个残基并且是柔性的，因此允许两个N端抗原结合区独立地移动。铰链 区可再分成三个不同的结构域：上部、中间和下部铰链结构域(Roux等，J. Immunol. 161: 4083(1998))。
[0104] 如本文所用，术语"二硫键"包括在两个硫原子之间形成的共价键。氨基酸半胱氨 酸包含可与第二硫醇基形成二硫键或桥接的硫醇基。在大多数天然存在的IgG分子中，CHl 和CL区通过二硫键键联并且两条重链通过在使用Kabat编号系统对应于239和242的位置处 的两个二硫键键联(位置226或229，EU编号系统）。
[0105] 本文所公开的抗Αβ抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物可依据其识别或特异性 结合的抗原(例如本文所公开的靶标多肽(例如Αβ))的表位或部分来描述或指定。靶标多肽 中与抗体的抗原结合结构域特异性相互作用的部分是"表位"或"抗原决定簇"。靶标多肽可 包含单个表位，但典型地包含至少两个表位，并且可包括任何数目的表位，视抗原的大小、 构象以及类型而定。此外，应注意靶标多肽上的"表位"可为或可包括非多肽要素，例如，表 位可包括碳水化合物侧链。
[0106] 针对抗体的肽或多肽表位的最小大小被认为是约四个至五个氨基酸。肽或多肽表 位可含有例如至少七个、至少九个或在至少约15个至约30个之间的氨基酸。由于⑶R可识别 呈三级形式的抗原肽或多肽，构成表位的氨基酸无需为连续的，并且在一些情况下，可能甚 至不在同一肽链上。由本公开的抗Αβ抗体识别的肽或多肽表位可含有A邱勺至少4个、至少5 个、至少6个、至少7个、至少8个、至少9个、至少10个、至少15个、至少20个、至少25个或在约 15个至约30个之间的连续或非连续氨基酸。
[0107] "特异性结合"一般意味着抗体经由其抗原结合结构域结合于表位，并且所述结合 需要所述抗原结合结构域与所述表位之间的一定程度的互补性。根据这一定义，当抗体结 合于表位时，抗体被认为比其将结合于随机、无关表位更容易地经由其抗原结合结构域"特 异性结合"于所述表位。术语"特异性"在本文中用于限定特定抗体结合于特定表位的亲和 力。例如，抗体"Α"可被视为对给定表位的特异性高于抗体"Β"，或抗体"Α"可被认为以高于 其对相关表位"D"的特异性的特异性结合于表位Τ'。
[0108] "优先结合"意味着抗体比其将结合于相关、相似、同源或类似表位更容易地特异 性结合于表位。因此，"优先结合"于给定表位的抗体将比结合于相关表位更有可能结合于 所述表位，即使所述抗体可与所述相关表位交叉反应。
[0109] 作为非限制性实例，如果抗体以低于所述抗体对第二表位的解离常数(Kd )的Kd结 合第一表位，那么所述抗体可被视为优先结合所述第一表位。在另一非限制性实例中，如果 抗体以低于所述抗体对第二表位的Kd至少一个数量级的亲和力结合第一表位，那么所述抗 体可被视为优先结合所述第一抗原。在另一非限制性实例中，如果抗体以低于所述抗体对 第二表位的Kd至少两个数量级的亲和力结合第一表位，那么所述抗体可被视为优先结合所 述第一表位。
[0110] 在另一非限制性实例中，如果抗体以低于所述抗体对第二表位的解离速率(k(解 离））的k(解离)结合第一表位，那么所述抗体可被视为优先结合所述第一表位。在另一非限 制性实例中，如果抗体以低于所述抗体对第二表位的k(解离)至少一个数量级的亲和力结 合第一表位，那么所述抗体可被视为优先结合所述第一表位。在另一非限制性实例中，如果 抗体以低于所述抗体对第二表位的k(解离)至少两个数量级的亲和力结合第一表位，那么 所述抗体可被视为优先结合所述第一表位。
[0111] 本文所公开的抗体或抗原结合片段、变体或衍生物可被认为以小于或等于5X 10_ Sec'lO^ec'SX ΙΟΛθίΓ1或H^secT1的解离速率(k(解离））结合本文所公开的靶标多 肽(例如，Αβ)或其片段或衍生物。在某些实施方案中，本公开的抗体可被认为以小于或等于 5Χ 10-tec'lO-4Sec^SX 10-5SecT1 或 lO-^ec'SX 10-tec-1、！。-6Sec^SX 10-7SecT1 或 10 isecr1的解离速率(k(解离））结合本文所公开的靶标多肽(例如，人类Αβ)或其片段或变体。
[0112] 本文所公开的抗体或抗原结合片段、变体或衍生物可被认为以大于或等于103Μ_ 1Sec^ 1N 5Χ IO3IT1 sec-1、 IO4IT1 sec 一1 或 5X IO4M一1 secT1的缔合速率(k(缔合））结合本文所公开 的靶标多肽(例如，Αβ)或其片段或变体。在某些实施方案中，本公开的抗体可被认为以大于 或等于 105M-Sec'SX 105M-Sec'lO^fSec-1 或 5Χ 106M-Sec-1 或 107M-Sec-1 的缔合速率(k (缔合)）结合本文所公开的靶标多肽(例如，Αβ)或其片段或变体。
[0113]如果抗体优先结合于给定表位至其在一定程度上阻断参考抗体与所述表位的结 合的程度，那么所述抗体被认为竞争性抑制所述参考抗体与所述表位的结合。竞争性抑制 可由本领域中已知的任何方法，例如竞争ELI SA测定来测定。抗体可被认为竞争性抑制参考 抗体与给定表位的结合达至少90 %、至少80 %、至少70 %、至少60 %或至少50 %。如本文所 述，抗Αβ抗体或其抗原结合片段竞争性抑制ΒΙΙΒ037抗体。
[0114] 如本文所用，术语"亲和力"是指个别表位与免疫球蛋白分子的CDR的结合强度的 量度。参见例如Harlow等（1988)Antibodies: A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Laboratory Press,第2版)第27-28页。
[0115] 如本文所公开的抗Αβ抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物以超过结合于血管淀 粉样蛋白的亲和力结合于实质淀粉样蛋白斑块。
[0116]如本文所用，术语"亲合力"是指免疫球蛋白群体与抗原之间的复合物的总体稳定 性，即具有抗原的免疫球蛋白混合物的功能结合强度。参见例如Harlow第29-34页。亲合力 是与所述群体中的个别免疫球蛋白分子与特异性表位的亲和力以及所述免疫球蛋白和所 述抗原的价态有关。例如，二价单克隆抗体与具有高度重复表位结构（如聚合物）的抗原之 间的相互作用将为一种高亲合力。
[0117] 如本文所公开的抗Αβ抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物也可依据其交叉反应 性来描述或指定。如本文所用，术语"交叉反应性"是指对一种抗原具特异性的抗体与第二 抗原反应的能力；即两种不同抗原物质之间的相关性的量度。因此，如果抗体结合于除诱导 其形成的表位外的表位，那么所述抗体具交叉反应性。所述交叉反应性表位一般含有许多 与诱导表位相同的互补结构特征，并且在一些情况下，实际上可比原始表位更适合。
[0118] 例如，某些抗体具有一定程度的交叉反应性，因为其结合相关但非同一的表位，例 如具有与参考表位至少95 %、至少90 %、至少85 %、至少80 %、至少75 %、至少70 %、至少 65%、至少60%、至少55%以及至少50%同一性(如使用本领域中已知且描述于本文中的方 法计算）的表位。如果抗体不结合具有与参考表位少于95%、少于90%、少于85%、少于 80 %、少于75 %、少于70 %、少于65 %、少于60 %、少于55 %以及少于50 %同一性（如使用本 领域中已知且描述于本文中的方法计算）的表位，那么所述抗体可被认为具有较少或无交 叉反应性。如果抗体不结合某种表位的任何其它类似物、直系同源物或同系物，那么所述抗 体可被认为对所述表位具"高度特异性"。
[0119] 如本文所述的抗Αβ抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物也可依据其对本公开的 多肽(例如Αβ)的结合亲和力来描述或指定。结合亲和力可包括具有小于5χ 10-2Μ、10-2Μ、5χ 10-3Μ、10-3Μ、5χ 10-4Μ、10-4Μ、5χ 10-5Μ、10-5Μ、5χ 10-6Μ、10-6Μ、5χ 10-7Μ、10-7Μ、5χ 10-8Μ、10- 8Μ、5χ 10-9Μ、10-9Μ、5χ 10-10Μ、10-10Μ、5χ10-ηΜ、10-ηΜ、5χ 10-12Μ、10-12Μ、5χ 10-13Μ、10-13Μ、5χ 10-14Μ、10- 14Μ、5χ 10-15M 或 10-15M 的解离常数或 Kd 的那些。
[0120] 包括单链抗体的抗体片段可包含单独或与以下的整体或一部分组合的可变区：铰 链区、CHl、CH2以及CH3结构域。还包括包含可变区与铰链区、CHl、CH2以及CH3结构域的任何 组合的抗原结合片段。结合分子，例如本文所公开的抗体或其抗原结合片段可来自任何动 物起源，包括鸟类和哺乳动物。所述抗体可为人类、鼠类、驴、兔、山羊、豚鼠、骆驼、美洲驼、 马或鸡抗体。在另一实施方案中，所述可变区可为condricthoid起源(例如来自藍鱼）。 [0121]如本文所用，术语"嵌合抗体"将被认为意味其中免疫反应性区域或位点是获自或 源自第一物种并且恒定区（其可为完整的、部分的或根据本公开进行修饰的）是获自第二物 种的任何抗体。例如，靶标结合区或位点可来自非人类来源(例如小鼠或灵长类动物)并且 恒定区可为人类的。或者，全人类结合区可与非人类(例如小鼠）恒定区组合。
[0122] 如本文所用，术语"鼠化抗体"或"鼠化免疫球蛋白"是指一种抗体，其包含来自本 公开的人类抗体的一个或多个CDR;和含有基于小鼠抗体序列的氨基酸取代和/或缺失和/ 或插入的人类构架区。提供所述CDR的人类免疫球蛋白被称作"亲本"或"接受体"并且提供 构架改变的小鼠抗体被称作"供体"。恒定区无需存在，但如果恒定区存在，那么其通常基本 上与小鼠抗体恒定区同一，即至少约85-90 %或约95%或更高同一性。此处，在一些实施方 案中，全长鼠化人类重链或轻链免疫球蛋白含有小鼠恒定区、人类CDR以及具有多种"鼠化" 氨基酸取代的基本上人类构架。典型地，"鼠化抗体"是包含鼠化可变轻链和/或鼠化可变重 链的抗体。例如，鼠化抗体将不会涵盖典型嵌合抗体，例如因为嵌合抗体的完整可变区是非 小鼠的。已经通过"鼠化"方法"鼠化"的修饰抗体与提供所述CDR的亲本抗体结合于相同抗 原并且如与所述亲本抗体相比，通常在小鼠中的免疫原性较少。
[0123] 如本文所用，术语"工程改造的抗体"是指其中重链或轻链或两者中的可变结构域 通过来自具有已知特异性的抗体的一个或多个CDR的至少部分置换并且必要时通过部分构 架区置换和序列改变而改变的抗体。尽管所述CDR可源自与所述构架区所源自的抗体相同 类别或甚至子类的抗体，但设想所述CDR将源自不同类别的抗体，例如源自不同物种的抗 体。其中来自具有已知特异性的非人类抗体的一个或多个"供体" CDR是接枝至人类重链或 轻链构架区中的工程改造的抗体在本文中被称作"人源化抗体"。可能不必要用来自供体可 变结构域的完全CDR置换所有CDR来将一个可变结构域的抗原结合能力传递至另一可变结 构域。相反地，可仅有必要传递维持靶标结合位点的活性所必需的那些残基。
[0124] 如本文所用，"人类"或"全人类"抗体包括具有人类免疫球蛋白的氨基酸序列的抗 体，并且包括从人类免疫球蛋白库或从一种或多种人类免疫球蛋白的转基因动物分离且不 表达内源性免疫球蛋白的抗体，如下文中和例如KucherIapati等的美国专利No. 5，939，598 中所述。"人类"或"全人类"抗体还包括包含重链的至少可变结构域或包含重链和轻链的至 少可变结构域的抗体，其中所述可变结构域具有人类免疫球蛋白可变结构域的氨基酸序 列。
[0125] "人类"或"全人类"抗体还包括如本文所述包含本文所述的抗体分子(例如，VH区 和/或VL区）的变体(包括衍生物）、基本上由所述变体组成或由所述变体组成的"人类"或 "全人类"抗体，所述抗体或其片段免疫特异性地结合于Αβ多肽或其片段或变体。本领域技 术人员已知的标准技术可用于在编码人类抗Αβ抗体的核苷酸序列中引入突变，包括但不限 于定点诱变和PCR介导的诱变，所述突变引起氨基酸取代。在某些实施方案中，相对于参考 乂!1区、¥!«1«1、¥!^01?2、¥!10)1?3、¥1^区、¥1^0)1?1、¥1^0)1?2或¥1^0)1?3，所述变体(包括衍生物）编码 少于50个氨基酸取代、少于40个氨基酸取代、少于30个氨基酸取代、少于25个氨基酸取代、 少于20个氨基酸取代、少于15个氨基酸取代、少于10个氨基酸取代、少于5个氨基酸取代、少 于4个氨基酸取代、少于3个氨基酸取代或少于2个氨基酸取代。
[0126] -方面，本公开的抗体是源自人类B细胞的人类单克隆抗体。任选地，根据数据库 中的有关人类生殖系可变区序列比对且采用所述人类抗体的构架区；参见例如由MRC Centre for Protein Engineering(Cambridge，UK)提供的Vbase (http ://vbase .mrc-cpe.cam.ac.uk/)。例如，被认为潜在地脱离真实生殖系序列的氨基酸可能是归因于在克隆 过程期间并入的PCR引物序列。与从噬菌体展示的抗体库或异种小鼠人工产生的人类样抗 体，如单链抗体片段(scFv)相比，本公开的人类单克隆抗体的特征在于(i)是使用人类免疫 反应而非动物代替物的免疫反应获得的，即所述抗体已经在人体中响应呈其相关构象的天 然Αβ产生，（ii)已经保护所述单株或至少对于邰的存在是重要的，以及（iii)由于所述抗体 具有人类起源，针对自身抗原的交叉反应性的风险降至最低。因此，根据本公开，术语"人类 单克隆抗体"、"人类单克隆自身抗体"、"人类抗体"等是用于表示具有人类起源的Αί3结合分 子，即所述分子已经从如B细胞的人类细胞或其杂交瘤细胞分离，或其cDNA已经直接从人类 细胞(例如人类记忆B细胞）的mRNA克隆。即使在人类抗体中产生氨基酸取代以例如改进结 合特征，所述抗体仍为"人类"的。
[0127] 如下文中和例如Kucherlapati等的美国专利no 5,939,598中所述的源自人类免 疫球蛋白库或一种或多种人类免疫球蛋白的转基因动物并且不表达内源性免疫球蛋白的 抗体被指示为人类样抗体以便区分所述抗体与本公开的真实人类抗体。
[0128] 如本文所用，术语"治疗(treat)"或"治疗(treatment)"是指治疗性治疗和预防性 (prophylactic/preventative)措施，其中目标是预防或减缓(减轻)不需要的生理学改变、 感染或病症。有益或所需的临床结果包括但不限于症状减轻、疾病程度减弱、稳定化（即，未 恶化)疾病状态、受试者中传染物的清除或减少、疾病进展的延迟或减慢、疾病状态的改善 或缓和以及缓解(部分抑或全部），无论可检测抑或不可检测。"治疗(Treatment)"还可意味 着与假如未接受治疗的情况下的预期存活相比延长的存活。需要治疗的那些包括已经具有 感染、病况或病症的那些，以及倾向于具有所述病况或病症的那些或其中将预防所述病况 或病症的那些。
[0129] "受试者"或"个体"或"动物"或"患者"或"哺乳动物"意味着需要诊断、预后或疗法 的任何受试者，尤其哺乳动物受试者。哺乳动物受试者包括人类、家畜、农畜以及动物园、运 动或玩赏动物，如狗、猫、豚鼠、兔、大鼠、小鼠、马、牛、母牛、熊等。
[0130] II.抗 Αβ 抗体
[0131]如本文所公开，与ΒΙΙΒ037抗体结合于相同表位的抗Αβ抗体或其抗原结合片段，其 中ΒΙΙΒ037抗体结合于包含Αβ的氨基酸3-6的表位。人类ΒΙΙΒ037抗体在以引用的方式整体 并入本文的国际公布N〇.W02008/081008中描述为NI-101.12F6A。除非另外说明，否则术语 "12F6A"、"hul2F6A"以及1118037"在本文中可互换使用。如本文所公开的术语 "chBIIB037"是指BIIB037的鼠类嵌合型式。
[0132] 如本文所述的人类和嵌合抗Αβ抗体或其抗原结合片段特异性结合于Αβ和其表位 以及Αβ和其表位的各种构象。例如，本文中公开选择性结合于Αβ聚集体的抗体或其抗原结 合片段。如本文所用，对"选择性结合"、"特异性结合"或"优先结合"A邱勺抗体的提及是指不 结合其它无关蛋白质的抗体。"选择性结合"或"特异性结合" Αβ构象异构体的抗体是指不结 合Αβ的所有构象，即不结合至少一种其它Αβ构象异构体的抗体。例如，本文中公开可区分Αβ 的单体和聚集形式的抗体或其抗原结合片段，即结合于Αβ原纤维而非Αβ单体。
[0133] 在某些实施方案中，适用于本文所提供的方法的抗Αβ抗体或其抗原结合片段、变 体或衍生物具有与ΒΙΙΒ037抗体的氨基酸序列具有至少约80%、约85%、约88%、约89%、约 90%、约91%、约92%、约93%、约94%或约95%序列同一性的氨基酸序列。在另一实施方案 中，所述结合分子与ΒΙΙΒ037抗体共享至少约96%、约97%、约98%、约99%或100%序列同 一性。在某些实施方案中，抗Αβ抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物特异性地与ΒΙΙΒ037 抗体结合于相同Αβ表位。在一些实施方案中，抗Αβ抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物包 含免疫球蛋白重链可变区(VH)和免疫球蛋白轻链可变区（VL)，其中所述VH包含与如表2中 所示的SEQ ID NO: 1至少80%、85%、90%、95%或100%同一的氨基酸序列并且所述VL包含 与SEQ ID N0:2至少80%、85%、90%、95%或100%同一的氨基酸序列。
[0134] 在一些实施方案中，抗Αβ抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物包含VH和VL，其中 所述VH包含与如表2中所示的SEQ ID NO: 1同一或除了一个、两个、三个、四个、五个或更多 个氨基酸取代外同一的氨基酸序列，并且所述VL包含与SEQ ID N0:2同一或除了一个、两 个、三个、四个、五个或更多个氨基酸取代外同一的氨基酸序列。
[0135] -些实施方案包括适用于本文所提供的方法的抗Αβ抗体或其抗原结合片段、变体 或衍生物，其包含VH，其中所述VH的VHCDRl、VHCDR2或VHCDR3区中的一者或多者与如表3中 所示的SEQ ID N0:3、SEQ ID N0:4、SEQ ID Ν0:5的一者或多者的一个或多个参考重链 ¥此01?1、¥!«1)1?2和/或¥!«1)1?3氨基酸序列至少80%、85%、90%、95%或100%同一。
[0136] 进一步公开适用于本文所提供的方法的抗Αβ抗体或其抗原结合片段、变体或衍生 物，其包含VH，其中所述VH的VHCDRl、VHCDR2或VHCDR3区中的一者或多者与如表3中所示的 SEQ ID N0:3、SEQ ID N0:4、SEQ ID Ν0:5的一者或多者的一个或多个参考重链VHCDR1、 VHCDR2或VHCDR3氨基酸序列同一或除了四个、三个、两个或一个氨基酸取代外同一。
[0137] 还公开适用于本文所提供的方法的抗Αβ抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物， 其包含VL，其中所述VL的VLCDRl、VLCDR2或VLCDR3区中的一者或多者与如表3中所示的SEQ ID N0:6、SEQ ID N0:7、SEQ ID勵：8的一者或多者的一个或多个参考重链¥1^〇«1、¥1^：01?2 或VLCDR3氨基酸序列至少80 %、85%、90 %、95%或100 %同一。
[0138] 在一些实施方案中，适用于本文所提供的方法的抗Αβ抗体或其抗原结合片段、变 体或衍生物包含VL，其中所述VL的VIXDRUVIXDR2或VIXDR3区中的一者或多者与如表3中所 示的SEQ ID N0:6、SEQ ID N0:7、SEQ ID Ν0:8的一者或多者的一个或多个参考重链 VLCDR1、VIXDR2或VIXDR3氨基酸序列同一或除了四个、三个、两个或一个氨基酸取代外同 〇
[0139] 在其它实施方案中，适用于本文所提供的方法的抗Αβ抗体或其抗原结合片段、变 体或衍生物包含与如表2中所示的SEQ ID Ν0:1和SEQ ID Ν0:2至少80%、85%、90%、95% 或100%同一的VH和VL氨基酸序列，基本上由所述氨基酸序列组成，或由所述氨基酸序列组 成。
[0140] 在一些实施方案中，适用于本文所提供的方法的抗Αβ抗体或其抗原结合片段、变 体或衍生物包含ΒΙΙΒ037抗体。
[0141] 表2: ΒΙΙΒ037抗体VH和VL氨基酸序列
[0145] 还包括编码如本文所述的抗Αβ抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物的多肽、编 码所述多肽的聚核苷酸、包含所述聚核苷酸的载体以及包含所述载体或聚核苷酸的宿主细 胞用于本文所述的方法，其均用于制造用于本文所述的方法的抗Αβ抗体或其抗原结合片 段、变体或衍生物。
[0146] 如本文所述的抗Αβ抗体的合适生物学活性变体可用于本公开的方法。所述变体将 保留所述亲本抗Αβ抗体的所需结合特性。用于制造抗体变体的方法一般可在本领域中获 得。
[0147] 用于诱变和核苷酸序列改变的方法为本领域中众所周知的。参见例如WaIker和 Gaastra编（1983)Techniques in Molecular Biology(MacMillan Publishing Company, New York);Kunkel，Proc·Natl·Acad·Sci·USA 82:488-492(1985);Kunkel等，Methods Enzymol.154:367-382(1987);Sambrook等（1989)MoIecuIar Cloning:A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor，N. Y ·);美国专利No · 4，873，192;以及其中引用的参考文献； 以引用的方式并入本文。对于不影响所关注的多肽的生物活性的适当氨基酸取代的指导可 发现于以引用的方式整体并入本文的Atlas of Protein Sequence and Structure (Natl ·Biomed·Res .Found· ,Washington，D· C.)，第345-352页（1978)中Dayhoff等的模型 中。Dayhoff等的模型使用点接受突变(PAM)氨基酸相似性矩阵(PAM 250矩阵）来确定合适 的保守性氨基酸取代。可进行保守性取代，如一种氨基酸用具有相似特性的另一氨基酸交 换。如由DayhofT等的模型的PAM 250矩阵所教导的保守性氨基酸取代的实例包括但不限于 GlyeAla、Va]t->Ile+->Leu, AspeGlu .、Arg、. .AsneGIn 以及[UTYpeTyr。
[0148] 用于测量抗Αβ抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物的结合特异性的方法包括但 不限于标准竞争性结合测定、用于监测T细胞或B细胞的免疫球蛋白分泌的测定、T细胞增殖 测定、细胞凋亡测定、ELISA测定等。参见例如WO 93/14125; Shi等，Immunity 13:633-642 (2000);Kumanogoh等，J Immunol 169:1175-1181(2002);Watanabe等，J Immunol 167: 4321-4328(2001 );Wang等，Blood 97:3498-3504(2001);以及Giraudon等，J Immunol 172 (2) :1246-1255(2004)中所公开的所述测定，所述文献均以引用的方式并入本文。术语在两 个聚核苷酸或多肽序列之间的"百分比序列同一性"是指在比较窗内由所述序列共享的同 一性匹配位置的数目，其中考虑到针对这两个序列的最优比对必须引入的添加或缺失（即， 空位）。匹配位置是其中在靶标和参考序列中均提供同一性核苷酸或氨基酸的任何位置。在 靶标序列中所提供的空位未考虑在内，因为空位不是核苷酸或氨基酸。同样，在参考序列中 所提供的空位也未考虑在内，因为考虑的是靶标序列核苷酸或氨基酸，而非来自参考序列 的核苷酸或氨基酸。
[0149]序列同一性的百分比是通过测定两个序列中均出现同一性氨基酸残基或核酸碱 基的位置的数目以生成匹配位置的数目，将所述匹配位置的数目除以比较窗中的总位置数 目并且将结果乘以100以生成序列同一性的百分比来计算。[0150 ]当本文中论述任何特定多肽(包括本文所公开的恒定区、CDR、VH结构域或VL结构 域)是否与另一多肽至少约65%、约70%、约75%、约80%、约85%、约90%、约91%、约92%、 约93 %、约94 %、约95 %、约96 %、约97 %、约98 %、约99 %或甚至约100 %同一时，两个序列 之间的序列比较和百分比序列同一性的测定可使用针对在线使用和下载均容易获得的软 件来实现。合适的软件程序可由各种来源获得，并且用于蛋白质和核苷酸序列的比对。一种 测定百分比序列同一 1性的合适程序是bl2seq，它是可由美国政府的National Center for Biotechnology Information BLAST网站（blast .ncbi · nlm.nih · gov)获得的BLAST程序套 件的一部分。B12seq使用BLASTN或BLASTP算法在两个序列之间进行比较。BLASTN是用于比 较核酸序列，而BLASTP是用于比较氨基酸序列。其它合适程序为例如Needle、Stretcher、 Water或Matcher，它们是EMBOSS生物信息学程序套件的一部分并且也可从European Bioinformatics Institute(EBI)的www. ebi .ac .uk/Tools/psa获得。
[0151] 在与聚核苷酸或多肽参考序列比对的单一聚核苷酸或多肽靶标序列内的不同区 域可各自具有其自身的百分比序列同一性。应注意，所述百分比序列同一性值是舍入到最 接近的十分位。例如，80.11、80.12、80.13以及80.14是舍入到80.1，而80.15、80.16、80.17、 80.18以及80.19是舍入到80.2。还应注意，长度值将始终是整数。
[0152] 本领域技术人员应了解，用于计算百分比序列同一性的序列比对的产生不限于仅 由原始序列数据驱动的双重序列-序列比较。序列比对可源自多重序列比对。一种产生多重 序列比对的合适程序是ClustalW2，可从www · clustal · org获得。另一种合适程序是MUSCLE， 可从www. dr ive5. com/muse le/获得。Clus talW2和MUSCLE替代地可例如从EBI获得。
[0153] 还应了解，序列比对可通过整合序列数据与来自异质来源的数据，如结构数据(例 如晶体学蛋白质结构）、功能数据(例如突变的位置)或系统发生数据而产生。整合异质数据 以产生多重序列比对的合适程序是T-Cof fee，可在www.tcoffee.org获得，并且替代地可例 如从EBI获得。还应了解，用于所计算的百分比序列同一性的最终比对可自动地或手动地管 理。
[0154] 变体可与参考抗Αβ抗体差异例如少至1至15个氨基酸残基，少至1至10个氨基酸残 基，如6-10个，少至5个，少至4个、3个、2个或甚至1个氨基酸残基。"保守性氨基酸取代"是其 中氨基酸残基用具有带有相似电荷的侧链的氨基酸残基置换的取代。具有带有相似电荷的 侧链的氨基酸残基的家族已经在本领域中加以定义。这些家族包括具有碱性侧链(例如赖 氨酸、精氨酸、组氨酸）、酸性侧链(例如天冬氨酸、谷氨酸）、不带电极性侧链(例如甘氨酸、 天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸）、非极性侧链(例如丙氨酸、缬氨 酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸）、β分支侧链(例如苏氨酸、缬氨 酸、异亮氨酸）以及芳香族侧链(例如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)的氨基酸。或者，突 变可随机地沿编码序列的全部或一部分引入，如通过饱和诱变，并且所得突变体可针对生 物活性进行筛选以鉴定保留活性(例如结合Αβ多肽的能力）的突变体。
[0155] 例如，有可能仅在抗体分子的构架区中或仅在CDR区中引入突变。所引入的突变可 为沉默突变或中性错义突变，即对抗体结合抗原的能力无影响或具有较少影响。这些类型 的突变可适用于优化密码子使用，或改进杂交瘤细胞的抗体产生。或者，非中性错义突变可 改变抗体结合抗原的能力。本领域技术人员将能够设计并且测试具有所需特性的突变型分 子，如无抗原结合活性的改变或结合活性的改变(例如，抗原结合活性的改进或抗体特异性 的改变）。在诱变后，编码的蛋白质可按常规表达，并且编码的蛋白质的功能和/或生物活性 (例如，免疫特异性地结合Αβ多肽的至少一种表位的能力)可使用本文中所述的技术或通过 按常规修改本领域中已知的技术来测定。
[0156] III.使用抗Αβ抗体的治疗方法
[0157] 本公开涉及一种用于减少脑淀粉样蛋白斑块或在抗Αβ或其抗原结合片段的长期 给药期间使微出血的发生减至最少的方法，所述方法包括向受试者施用抗Αβ抗体或其抗原 结合片段。
[0158] 如本文所用的术语"减至最少"意味着减少、预防、保持恒定、无增加等。
[0159] 在某些实施方案中，如本文所述的方法涉及减少脑淀粉样蛋白斑块，所述方法包 括向受试者施用与ΒΙΙΒ037抗体结合于相同表位的抗Αβ抗体或其抗原结合片段，其中所述 施用可减少脑中的淀粉样蛋白斑块而基本上不影响血管淀粉样蛋白，并且其中ΒΙΙΒ037抗 体结合于包含A邱勺氨基酸3-6的表位。
[0160] 在一些实施方案中，如本文所述的方法涉及减少脑淀粉样蛋白，所述方法包括向 受试者施用竞争性抑制ΒΙΙΒ037抗体的抗Αβ抗体或其抗原结合片段，其中所述施用可减少 脑中的淀粉样蛋白斑块而基本上不影响血管淀粉样蛋白。
[0161]如本文所用的术语"减少脑淀粉样蛋白斑块而基本上不影响血管淀粉样蛋白"意 味着血管淀粉样蛋白沉积的量与对照（即未治疗)组相比通过抗Αβ抗体或其抗原结合片段 治疗既未基本上减少，也未基本上增加。
[0162] 进一步提供一种用于减少脑淀粉样蛋白斑块的方法，其中减少脑中淀粉样蛋白斑 块包括Fc受体参与。一种或多种Fc受体在小胶质细胞、星形细胞、少突胶质细胞以及神经元 中表达。Fc受体因其牵涉于神经病症中而日益被认识。抗Αβ抗体/Αβ免疫复合物可通过小胶 质细胞的Fc依赖性活化，随后通过Αβ沉积物的吞噬作用(Wilcock等，J Neurosci.23(9): 3745-3751 (2003))或Fc独立机制（Das等 JNeurosci .23(24) :8532-8538(2005))清除。
[0163] 在一些实施方案中，如本文所述的方法涉及本文所述的抗Αβ抗体(包括其抗原结 合片段、变体以及衍生物)的用途。进一步提供一种使抗Αβ抗体或其抗原结合片段的长期给 药期间微出血的发生减至最少的方法，所述方法包括向受试者施用与ΒΙΙΒ037抗体结合于 相同表位的抗Αβ抗体，并且其中BIIB037抗体结合于包含Αβ的氨基酸3-6的表位。在某些实 施方案中，如本文所述的方法使抗Αβ抗体或其抗原结合片段的长期给药期间微出血的发生 减至最少，所述方法包括向受试者施用竞争性抑制ΒΙΙΒ037抗体的抗Αβ抗体。通过另一实施 方案，如本文所述的抗Αβ抗体(包括其抗原结合片段、变体以及衍生物)也可用于通过从测 试个体获得体液样品并且使所述体液样品与如本文所述的抗Αβ抗体在使得能够形成抗体-抗原复合物的条件下接触来诊断或筛选个体中的神经退化性病症的方法，所述体液样品可 为血样、淋巴样品或任何其它体液样品。所述复合物的含量接着通过本领域中已知的方法， 例如ELISA、免疫荧光法、荧光活化细胞分选仪(FACS)、磁性细胞分选仪来测定，显著高于对 照样品中所形成的含量的含量指示测试个体中的疾病。以相同方式，也可使用如本文所述 的抗Αβ抗体所结合的特异性抗原。因此，本公开涉及一种体外免疫测定，其包含抗Αί3结合分 子，例如本公开的抗体或其抗原结合片段。
[0164] 通过另一实施方案，如本文所述的抗Αβ抗体(包括其抗原结合片段、变体以及衍生 物)也可用于治疗或预防个体中神经退化性病症的进展或改善与神经退化性病症相关的症 状的方法。
[0165] 如本文所用，术语"治疗(treat)"或"治疗(treatment)"是指治疗性治疗和预防性 (prophylactic/preventative)措施，其中目标是预防或减缓(减轻)不需要的生理学改变、 感染或病症。有益或所需的临床结果包括但不限于症状减轻、疾病程度减弱、稳定化（即，未 恶化)疾病状态、受试者中传染物的清除或减少、疾病进展的延迟或减慢、疾病状态的改善 或缓和以及缓解(部分抑或全部），无论可检测抑或不可检测。"治疗(Treatment)"还可意味 着与假如未接受治疗的情况下的预期存活相比延长的存活。需要治疗的那些包括已经具有 感染、病况或病症的那些，以及倾向于具有所述病况或病症的那些或其中将预防所述病况 或病症的那些。如本文所用的术语"治疗方法"涵盖本文所述的抗Αβ抗体(包括其抗原结合 片段、变体以及衍生物）用于治疗或预防个体中神经退化性病症的进展或改善与神经退化 性病症相关的症状的用途。如本文所用的术语"治疗方法"还涵盖本文所述的抗Αβ抗体(包 括其抗原结合片段、变体以及衍生物）以治疗或预防个体中神经退化性病症的进展或改善 与神经退化性病症相关的症状。
[0166] 在特定实施方案中，如本文所述的方法涉及治疗或预防阿尔茨海默氏病的进展； 与阿尔茨海默氏病相关的症状的改善;针对阿尔茨海默氏病的存在诊断或筛选受试者或测 定受试者发展阿尔茨海默氏病的风险。
[0167] Αβ的含量可通过本领域中已知的任何合适方法评估，所述方法包括例如通过选自 蛋白质印迹(Western blot)、免疫沉淀、酶联免疫吸附测定（ELISA)、放射性免疫测定 (RIA)、荧光活化细胞分选(FACS)、两维凝胶电泳、质谱法(MS)、基质辅助激光解吸附/电离_ 飞行时间-MS(MALDI-TOF)、表面增强激光解吸附电离-飞行时间（SELDI-T0F)、高效液相色 谱法(HPLC)、快速蛋白质液相色谱法(FPLC)、多维液相色谱法(LC)接着串联质谱法(MS/MS) 以及激光密度测定法的一种或多种技术分析Αβ。在某些实施方案中，Αβ的体内成像包括正 电子发射断层扫描(PET)、单光子发射断层扫描(SPECT)、近红外(NIR)光学成像或磁共振成 像(MRI)。
[0168] 如医学领域中众所周知，用于任一患者的剂量均依赖于多种因素，包括患者的尺 寸、体表面积、年龄、将施用的特定化合物、性别、施用时间和途径、一般健康状况以及并行 地施用的其它药物。
[0169]在某些实施方案中，可使用基于抗体的阵列，其例如负载有本公开的特异性识别A β的抗Αβ抗体或等同抗原结合分子。微阵列免疫测定的设计是概述于Kusnezow等，Mol .Cell Proteomics 5:1681-1696(2006)中。因此，本公开还涉及负载有根据本公开鉴定的抗Αβ结 合分子的微阵列。
[0170] IV.使用抗Αβ抗体的诊断或跟踪方法
[0171] 本公开提供抗Αβ抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物的用途，其用于测量测试 受试者中脑淀粉样蛋白斑块的量、评估针对神经退化性疾病进行治疗的患者中的疾病进展 或治疗需要治疗的患者中特征在于脑淀粉样蛋白斑块的神经退化性疾病。
[0172] 在一些实施方案中，适用于本文所提供的方法的抗Αβ抗体或其抗原结合片段、变 体或衍生物可与治疗剂、前药、肽、蛋白质、酶、病毒、脂质、生物反应调节剂、医药剂或PEG缀 合。
[0173] 本领域中已经广泛描述作为包括常规抗体的免疫毒素的缀合物。所述毒素可通过 常规偶联技术偶联于所述抗体，或含有蛋白质毒素部分的免疫毒素可以融合蛋白形式产 生。
[0174] 可偶联于如本文所公开的抗Αβ抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物以用于免疫 疗法的治疗剂的实例是药物、放射性同位素、凝集素以及毒素。
[0175] 与适用于本文所提供的方法的抗Αβ抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物缀合放 射性同位素用于例如免疫疗法时，某些同位素可视如白血球分布以及稳定性和发射的多种 因素来选择。视自身免疫反应而定，可使用一些发射体。一般来说，α和β粒子发射同位素是 用于免疫疗法。在某些实施方案中，可使用短程、高能α发射体，如 212Bi。可结合于本公开的 抗Αβ抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物以达成治疗目的的放射性同位素的实例包括但 不限于 123K124I、125I、131I、 89Zr、90Y、67Cu、64Cu、mIn、 212Bi、212At、211Pb、47SC、 109Pc^^88Re。 可偶联于结合分子(例如本文所公开的抗Αβ抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物)的其它 治疗剂以及离体和体内治疗方案是本领域技术人员已知的，或可容易由本领域技术人员确 定。在适当的情况下，本领域技术人员可使用编码上述抗体、抗原或相应载体中任一者的本 发明聚核苷酸来代替所述蛋白质材料本身。
[0176] 本领域技术人员应了解，缀合物也可视将缀合的所选试剂而定使用多种技术来组 装。例如，具有生物素的缀合物是例如通过使结合多肽与生物素的活化酯(如生物素 N-羟基 丁二酰亚胺酯)反应来制备。同样，具有荧光标志物的缀合物可在偶合剂存在下，例如通过 与异硫氰酸酯(例如荧光素-异硫氰酸酯)反应来制备。本公开的抗Αβ抗体或其抗原结合片 段、变体或衍生物的缀合物是以类似方式制备。
[0177] 进一步提供一种测量测试受试者中脑淀粉样蛋白斑块的量的方法，所述方法包 括：（a)在施用与ΒΙΙΒ037抗体结合于相同构象表位或竞争性抑制ΒΙΙΒ037抗体的抗Αβ抗体 或其抗原结合片段后，测量在测试受试者的脑中产生的信号，其中所述抗体或其抗原结合 片段用如本文所述的产生可测量信号的试剂标记;和(b)比较在所述测试受试者中产生的 信号与向一位或多位对照受试者施用所述标记的抗体或其抗原结合片段后产生的信号;其 中相对于所述对照受试者在所述测试受试者中产生的信号的增加与脑淀粉样蛋白斑块的 增加有关。
[0179] 本文中公开缀合于诊断剂或治疗剂的抗Αβ抗体或其抗原结合片段、变体或衍生 物。可通过使所述抗Αβ抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物偶联于可检测物质（即，产生 可测量信号的试剂）来帮助检测。可检测物质的实例包括各种酶、辅基、荧光材料、发光材 料、生物发光材料、放射性材料、使用各种正电子发射断层扫描的正电子发射金属以及非放 射性顺磁金属离子。关于可缀合于用作根据本公开的诊断剂的抗体的金属离子，参见例如 美国专利No.4,741，900。合适酶的实例包括辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或 乙酰胆碱酯酶;合适辅基复合物的实例包括抗生蛋白链菌素/生物素和抗生物素蛋白/生物 素;合适荧光材料的实例包括伞形酮、荧光素、异硫氰酸荧光素、若丹明、二氯三嗪基胺荧光 素、丹磺酰氯或藻红蛋白；发光材料的实例包括鲁米诺；生物发光材料的实例包括荧光素 酶、虫荧光素以及水母发光蛋白；并且合适放射性材料的实例包括 125I、131I、mIn或"Tc。
[0180] "对照受试者"意味着任何正常的健康受试者(或受试者的库）、具有不同程度的疾 病的一名或多名受试者或甚至在疾病的早期阶段的实际测试受试者。
[0181] 进一步提供一种评估针对特征在于脑淀粉样蛋白斑块的神经退化性疾病进行治 疗的患者的疾病进展的方法，所述方法包括：（a)向所述需要神经退化性疾病治疗的患者施 用与BIIB037抗体结合于相同构象表位或竞争性抑制BIIB037抗体的抗Αβ抗体或其抗原结 合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段用如本文所述的产生可测量信号的试剂标记，其 中在所述施用后在所述患者中测量所述信号；（b)在(a)的所述施用后以一个或多个时间间 隔施用所述标记的抗Αβ抗体或其抗原结合片段，其中在所述施用后在所述患者中测量所述 信号；（c)基于在(a)的施用后以所述一个或多个时间间隔在所述患者中测量的信号的变 化，评估所述患者的疾病进展;其中所述信号的增加指示所述患者中所述神经退化性疾病 的进展。
[0182] 本文所公开的标记的抗Αβ抗体或其抗原结合片段可在诊断上用于例如作为临床 测试程序的一部分监测神经退化性疾病的发展或进展，从而例如测定给定的治疗和/或预 防方案的效力。患者的治疗可基于神经退化性疾病进展的程度来调节。
[0183] 进一步提供一种治疗需要治疗的患者中特征在于脑淀粉样蛋白斑块的神经退化 性疾病的方法，所述方法包括：（a)向需要神经退化性疾病治疗的患者施用与ΒΙΙΒ037抗体 结合于相同构象表位的抗Αβ抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段用产 生可测量信号的试剂标记；（b)回顾在所述患者中测量的信号与向一位或多位对照受试者 施用所述标记的抗体或其抗原结合片段后测量的信号的比较后，评估所述患者的疾病状 态;其中相对于所述对照受试者在所述患者中产生的信号的增加与脑淀粉样蛋白斑块的增 加有关；以及(c)用适合于所述患者的疾病状态的疗法治疗所述患者。
[0184] 适合于所述患者的状态的疗法包括向所述需要所述神经退化性疾病治疗的患者 施用与BIIB037抗体结合于相同构象表位或竞争性抑制BIIB037抗体的抗Αβ抗体或其抗原 结合片段。如本文所公开的治疗特征在于脑淀粉样蛋白斑块的神经退化性疾病的方法可进 一步包括(d)在(a)的所述施用后以一个或多个时间间隔施用所述标记的抗Αβ抗体或其抗 原结合片段，其中在所述施用后在所述患者中测量所述信号；和（e)基于在(a)的施用后以 所述一个或多个时间间隔在所述患者中测量的信号的变化，评估所述患者的疾病进展;其 中所述信号的增加指示所述患者中所述神经退化性疾病的进展。
[0185] V.组合物和施用方法
[0186] 制备抗Αβ抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物并施用给有需要的受试者的方法 是本领域技术人员众所周知或容易确定的。抗Αβ抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物的 施用途径可为例如外周、口服、肠胃外、通过吸入或局部。
[0187] 如本文所论述，可配制抗Αβ抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物以便促进所述 活性剂的施用并促进稳定性。在某些实施方案中，根据本公开的药物组合物包含药学上可 接受的无毒、无菌载体，如生理盐水、无毒缓冲液、防腐剂等。出于本申请的目的，抗Αβ抗体 或其抗原结合片段、变体或衍生物的药学有效量应被认为意味足以实现有效结合于靶标并 且足以实现益处，例如减少脑淀粉样蛋白斑块而不影响血管淀粉样蛋白或在抗Αβ抗体或其 抗原结合片段的长期给药期间使微出血的发生减至最少的量。在一些实施方案中，抗 体或其抗原结合片段、变体或衍生物可以减少脑淀粉样蛋白斑块的有效量通过血-脑屏障。
[0188] 用于本公开的药物组合物包含药学上可接受的载体，包括例如离子交换剂、氧化 铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白（如人类血清白蛋白）、缓冲物质（如磷酸盐）、甘氨酸、山梨 酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、盐或电解质(如硫酸鱼精蛋白）、磷酸 氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、胶态氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、基于纤维素的物 质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物、聚乙二醇以 及羊毛脂。
[0189] 微生物的作用的预防可通过各种抗细菌剂和抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯、氯 丁醇、苯酚、抗坏血酸、硫柳汞等来实现。在多种情况下，组合物中可包括等渗剂，例如糖、多 元醇（如甘露醇、山梨醇）或氯化钠。可注射组合物的延长吸收可通过在组合物中包括延迟 吸收的试剂，例如单硬脂酸铝和明胶来实现。
[0190] 肠胃外制剂可为单次灌注剂量、输注或负荷灌注剂量，随后为维持剂量。这些组合 物可以特定的固定或可变时间间隔，例如一天一次，或在"需要"的基础上施用。
[0191]用于肠胃外施用的制剂包括无菌水性或非水性溶液、混悬液以及乳剂。非水性溶 剂的实例是丙二醇、聚乙二醇、植物油(如橄榄油）以及可注射有机酯(如油酸乙酯）。水性载 体包括水、醇/水溶液、乳剂或混悬液，包括生理盐水和缓冲的介质。肠胃外媒介物包括氯化 钠溶液、林格氏葡萄糖、葡萄糖和氯化钠、乳酸化林格氏或不挥发性油。静脉内媒介物包括 流体和营养补充剂、电解质补充剂(如基于林格氏葡萄糖的那些)等。防腐剂和其它添加剂 也可存在，如抗微生物剂、抗氧化剂、螯合剂以及惰性气体等。此外，本公开的药物组合物可 包含其它试剂，如多巴胺或精神药理学药物，视所述药物组合物的预期用途而定。此外，所 述药物组合物也可配制为疫苗，例如在本公开的药物组合物包含用于被动免疫的抗Αβ抗体 的情况下。
[0192] 如本文所公开的某些药物组合物可以可接受的剂型，包括例如胶囊、片剂、水性混 悬液或溶液口服施用。某些药物组合物也可通过鼻气雾剂或吸入施用。所述组合物可制备 为生理盐水中的溶液，采用苯甲醇或其它合适的防腐剂、吸收促进剂来增强生物可用性， 和/或其它常规增溶剂或分散剂。
[0193] 将与载体材料组合产生单一剂型的抗Αβ抗体或其片段、变体或衍生物的量将视所 治疗的宿主和特定施用模式而变化。所述组合物可以单次剂量、多次剂量或在确定的时期 内以输注形式施用。也可调节给药方案以提供最优的所需反应(例如，治疗性或预防性反 应)。
[0194] 如本文所用的术语"外周施用"包括例如静脉内、动脉内、腹膜内、肌肉内、皮下、直 肠或阴道施用。虽然所有这些施用形式均清楚地预期为在本公开的范围内，但施用形式的 一个实例将为用于注射，尤其用于静脉内或动脉内注射或滴注的溶液。用于注射的合适药 物组合物可包含缓冲液(例如乙酸盐、磷酸盐或柠檬酸盐缓冲液）、表面活性剂(例如聚山梨 酸酯）、任选地的稳定剂(例如人类白蛋白）等。用于外周施用的制剂包括无菌水性或非水性 溶液、混悬液以及乳剂。非水性溶剂的实例是丙二醇、聚乙二醇、植物油（如橄榄油）以及可 注射有机酯(如油酸乙酯）。水性载体包括例如水、醇/水溶液、乳剂或混悬液，包括生理盐水 和缓冲的介质。在本公开中，药学上可接受的载体包括但不限于0.01-0.1 M磷酸盐缓冲液或 0.8 %生理盐水。其它常见肠胃外媒介物包括磷酸钠溶液、林格氏葡萄糖、葡萄糖和氯化钠、 乳酸化林格氏或不挥发性油。静脉内媒介物包括流体和营养补充剂、电解质补充剂(如基于 林格氏葡萄糖的那些)等。防腐剂和其它添加剂也可存在，如抗微生物剂、抗氧化剂、螯合剂 以及惰性气体等。
[0195] 氺氺氺
[0196] 除非另外指示，否则本公开的实践将采用常规的细胞生物学、细胞培养、分子生物 学、转基因生物学、微生物学、重组DNA以及免疫学技术，所述技术在本领域的技能内。所述 技术在文献中充分解释参见例如Molecular Cloning A Laboratory Manual，第2版， Sambrook等编，Cold Spring Harbor Laboratory Press : (1989) ；Molecular Cloning: A Laboratory Manual ,Sambrook等编，Cold Springs Harbor Laboratory，New York( 1992)， DNA Cloning，D · N · Glover编，第I卷和第II卷（1985); 01 igonucleo tide Synthesis， M. J · Gait编，（1984) ;Mu 11 is 等美国专利No : 4，683，195 ; Nucleic Acid Hybridization， B·D·Hames和S·J·Higgins编（1984);Transcription And Translation，B·D·Hames和 S.J.Higgins^(I984)；Culture Of Animal Cells，R.I.Freshney，Alan R.Liss，Inc·， (1987)；Immobilized Cells And Enzymes ,IRL Press，（1986);B·Perbal，A Practical Guide To Molecular Cloning(1984)；the treatise,Methods In Enzymology,Academic Press ,Inc.,N.Y.；Gene Transfer Vectors For Mammalian CelIs，J·H·MiIIer和 M.P.Calos编，Cold Spring Harbor Laboratory(1987);Methods In Enzymology，第154卷 和第155卷（Wu等编）；Immunochemical Methods In Cell And Molecular Biology，Mayer 和Walker编，Academic Press，London(1987);Handbook Of Experimental Immunology，第 I-IV卷，D.M.Weir和C.C.Blackwell编，（1986);Manipulating the Mouse Embryo，Cold Spring Harbor Laboratory Press ,Cold Spring Harbor，N.Y.，（1986);以及Ausubel等， Current Protocols in Molecular BiologyjJohn Wiley and Sons,Baltimore,Maryland (1989)。
[0197] 陈述免疫学的一般原理的标准参考著作包括Current Protocols in ImmunologyjJohn ffiley&Sons,New York；Klein,J., Immunology:The Science of Self-Nonself DiscriminationjJohn ffiley&Sons,New York(1982)；Roitt, I.,Brostoff,J. 及Male D. ,Immunology，第6版London:Mosby(2001) ;Abbas A.，Abul，A.以及Lichtman，A.， Cellular and Molecular Immunology，第5片反，Elsevier Health Sciences Division (2005);以及Harlow和Lane ,Antibodies : A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Press(1988)〇
[0198] 现在已经详细地描述了本公开，本公开将通过参考以下实施例更清楚地得到理 解，所述实施例仅出于说明目的随同包括并且不意图限制本公开。本文所提及的所有专利 和公布均明确地以引用的方式整体并入。 实施例
[0199] 常规方法(如本文所用的那些)的详述可发现于所引用的文献中。除非下文另外指 示，否则Αβ特异性B细胞的鉴定和展示所关注的特异性的抗Αβ抗体的分子克隆以及其重组 表达和功能表征已经或可如作为W02008/081008公布的国际申请PCT/EP2008/000053和作 为W02010/069603公布的国际申请PCT/EP2009/009186的实施例和补充方法章节中所述般 进行，所述申请的公开内容以引用的方式整体并入本文。
[0200] 实施例 1:人类ΒΙΙΒ037( "ΒΙΙΒ037"）和嵌合BIIB037( "chBIIB037"）的概括和体外 表征
[0201] 本实施例描述BIIB037和chBIIB037抗体产生。此外，所述实施例描述BIIB037和 chBIIB037抗体对Αβ的结合亲和力和选择性，其是使用本文所述的生物化学方法的系列来 评估。
[0202]具有优良认知性能或轻度认知障碍(MCI)缓解或初期阿尔茨海默氏病(AD)的健康 老年受试者的群组针对Αβ反应性记忆B细胞进行筛选。阳性B细胞克隆经受cDNA克隆和重组 表达以如W02008/081008中先前所述针对Αβ产生人类单克隆抗体。候选抗体是使用组织斑 块免疫反应性(TAPIR)测定在AD和APP转基因小鼠脑切片中通过其识别体外聚集的Αβ和离 体淀粉样蛋白斑块的能力来选择(Hock等,Neuron 38:547-554(2003))。一种所述候选物， 即指定为BIIB037的人类IgGl/κ单克隆抗体是针对进一步表征，基于其在来自人类AD脑或 APP转基因小鼠的组织切片上识别体外聚集的Αβ和离体β-淀粉样蛋白斑块的能力选择的 (Hock等，Nature Medicine 8(11): 1270-1275(2002))。产生ΒΙΙΒ037的嵌合型式（即， chBIIB037)，其中重链和轻链的恒定区分别用鼠类IgG2a和鼠类κ链序列置换。这种嵌合分 子(chBIIB037)用于APP转基因小鼠中的长期给药研究。chBIIB037的mIgG2a骨架以高亲和 力结合于小鼠 Fc γ受体，使得这种抗体胜任在脑中募集免疫效应细胞(如小胶质细胞）。 [0203] ΒΙΙΒ037和chBIIB037对Αβ的结合亲和力和选择性是使用一系列生物化学方法来 评估。如W02008/081008中所述通过在37°C下孵育来制备Αβ(1-42)聚集体并且直接涂布于 ELI SA板上。当Αβ的预成型原纤维聚集体涂布于ELI SA板上时，chBIIB037以可与充分表征的 抗体3D6相当的O.lnM EC50结合（Bard等，Nature Medicine 6:916-919(2000))(图 1A)。当 chBIIB037固定并且用于捕获可溶性、新鲜制备的单体Αβ(1-40)时，未观察到信号，这与3D6 形成对比，3D6以InM EC50捕获可溶性Αβ(1-40)(图lBhBIIBOS?不能结合Αβ的可溶性单体 形式是通过免疫沉淀研究使用新鲜制备的单体Αβί-42的制剂或A邱勺预成型原纤维聚集体 来确认（图1C)。具体说来，聚集的或单体Αβ(1-42)的制剂与BIIB037或3D6-起孵育并且使 用蛋白A琼脂糖珠粒捕获。洗涤所述珠粒，再悬浮于含有二硫苏糖醇的SDS-PAGE样品缓冲液 中并且煮沸，并且将上清液负载于16%Tricine SDS-PAGE上。制备硝化纤维印迹并且通过 蛋白质印迹使用小鼠抗β淀粉样蛋白单克隆抗体6E10(Covance ,Princeton，NJ)在制造商的 推荐稀释度下针对总Αβ进行染色。合成Αβ1-42(Αβ42)肽(AnaSpec，Fremont，CA)在六氟异丙 醇中以lmg/mL的浓度重构，空气干燥以形成膜，并且以lmg/mL的浓度溶解于DMSO中。AM2淀 粉样蛋白原纤维是通过将DMSO重构的单体AM2以100yg/mL的浓度稀释于I 3BS中，并且在37 °C下孵育至少24h来制备。新鲜制备的单体或原纤维Αβ42的样品与BIIB037或3D6-起孵育 并且使用蛋白A琼脂糖珠粒捕获。洗涤所述珠粒，再悬浮于含有二硫苏糖醇的SDS-PAGE样品 缓冲液中并且煮沸，将上清液负载于16%Tricine SDS-PAGE凝胶上并且印迹于硝化纤维素 膜，并且使用小鼠单克隆抗体6E10 (Covance，Pr inceton，NJ)检测AM2 〇 [0204]与所述抗体对聚集体的高结合亲合力一致，chBIIB037免疫染色AD脑组织中的淀 粉样蛋白斑块（图1D)。组织进行福尔马林固定的石蜡包埋，以5μπι切片，脱蜡并且使用基于 EDTA-硼酸盐的热诱导表位恢复试剂(Ventana CC1)。随后，将FITC标记的chBIIB037应用于 组织（1.7μg/ml)，随后与1:50稀释度下的绵羊-抗FITC抗体一起孵育。组织接着用苏木精染 色。
[0205]实施例2: BIIB037在Tg2576转基因小鼠中单次腹膜内施用后的脑渗透 [0206] 本实施例描述BIIB037渗透至脑中并且结合于Αβ的能力。BIIB037渗透至脑中是在 22 月龄雌性 Tg2576 小鼠 （Kawarabayashi 等J Neurosci 21(2) :372-381(2001))中在短期 给药(即在腹膜内以30mg/kg施用的BIIB037的单次剂量)后评估。
[0207] BIIB037血浆和脑浓度在施用所述抗体的单次剂量后1天和3天以及1周、2周和3周 时通过ELISA测定（图2A)。具体说来，冷冻脑在10体积（10mL/g湿组织）的含有50mMNaCl、 0.2%二乙胺(DEA)的溶液中用蛋白酶抑制剂均质化，并且在冰上声波处理约15-20s。样品 接着在4°C下在100,000g下离心持续30min。上清液作为DEA提取的可溶性Aβ部分保留。剩余 团块再悬浮于10体积的5M胍-盐酸盐(Gu-HCl)中，声波处理，并且如上文进行离心。所得上 清液作为胍提取的不溶性Αβ部分保留，并且弃去剩余团块。关于血浆和脑BIIB037浓度，96 孔微板(Nunc Maxisorp ,Corning Cos tar)在4 °C下用冷涂布缓冲液中浓度为5ug/mL的Αβ (1-42)肽(ΑΜ2)涂布过夜。血浆或DEA提取（即，无清洁剂）的脑匀浆样品稀释至最终工作浓 度并且在室温下孵育2小时。使用辣根过氧化物酶（HRP)缀合的山羊抗人类多克隆抗体 (Jackson ImmunoResearch)，随后使用底物TMB测量HRP活性来测定结合。通过与使用纯化 的抗体产生的标准曲线相比较来测定浓度。血衆中的Cmax是测定为18lμg/ml，其中半衰期 为2.5天。脑中的Cmax是测定为1062ng/g组织，并且半衰期为13天。如图2B中所示，血衆Αβ浓 度在ΒΙΙΒ037的单次剂量后未改变。脑ΒΙΙΒ037含量的下降与血浆中的下降不平行，表明所 述药物在脑中聚集，同时它自血浆中清除。相比之下，3D6抗体触发血衆Αβ峰值。
[0208]使用生物素标记的抗人类二次抗体显示在Tg2576小鼠中的单次剂量后ΒΙΙΒ037与 Αβ沉积物的体内结合，并且与用连续切片上离体预成型的广谱Αβ抗体5F3进行染色比较。全 身性施用的ΒΙΙΒ037典型地以高亲和力结合于实质淀粉样蛋白斑块（图2C)。在注射后1天观 察到由ΒΙΙΒ037实质斑块染色，但所述染色在注射后3天是明确限定的并且接着类似于用广 谱Αβ抗体5F3进行染色（图2D)。组织进行福尔马林固定的石蜡包埋，以5μπι切片，脱蜡并且使 用基于EDTA-硼酸盐的热诱导表位恢复试剂(Ventana CC1)。随后，山羊抗人类二次抗体以 1:500稀释度应用于组织。组织接着用苏木精染色。
[0209]实施例3:在Tg2576转基因小鼠中短期给药后chBIIB037与实质淀粉样蛋白斑块的 结合
[0210] 本实施例进一步描述差异chBIIB037结合。在22月龄的Tg2576转基因小鼠中短期 给药后chBIIB037与实质淀粉样蛋白斑块的结合。单次剂量（30mg/kg)的Cy3标记的 chBIIB037或Cy3标记的3D6腹膜内施用于Tg2576转基因小鼠，并且在给药后18天收集脑。冷 冻脑切片针对平滑肌肌动蛋白（SMA)进行免疫染色以便界定血管，并且如上文实施例2中 所述获得。所述抗体与Αβ沉积物的结合是在荧光显微镜下显示，从而允许直接目测结合于 不同类型的淀粉样蛋白沉积物的Cy3-chBIIB037(图3Α)。0 73标记的306抗体是用作这项研 究的比较物（图3C)。由标记的抗体涂抹过的实质和血管淀粉样蛋白沉积物的总面积是通过 使用由 VISIOPHARM κ 软件（Visiopharm A/S,Hoersholm,Denmark)写出的算法定量图 像分析来测定。（图3B、D以及E)。与一个或另一淀粉样蛋白区室相关的Cy3染色是表述为占 总染色的百分比，并且证实相对于血管淀粉样蛋白，chBIIB037与实质淀粉样蛋白的优先结 合(A、B以及E)。通过比较，相对于实质淀粉样蛋白斑块，3D6优先结合于血管淀粉样蛋白沉 积物(C、D以及E)。在野生型小鼠的治疗后，chBIIB037或3D6的结合均未检测到(E)。
[0211] 实施例4:在Tg2576转基因小鼠中用chBIIB037进行6个月的长期给药后的暴露
[0212] 在Tg2576转基因小鼠中进行6个月的长期给药后评估chBIIB037减少淀粉样蛋白 负荷的效力。经由腹膜内注射每周一次施用〇 . 3、1、3、10以及30mg/kg的剂量所述抗体或 PBS。为了使小鼠抗人类抗体反应的产生减至最少，对动物给药BIIB037的鼠类嵌合型式 chBIIB037。如上文实施例2中所述通过ELISA测量血浆和脑药物含量。在最后剂量后24h收 集血浆样品，并且chBIIB037含量测量显示与剂量线性相关的暴露（图4A3CKPBS组中超过 检测极限的chBIIB037含量是归因于由所述测定测量的内源性抗Αβ抗体。在二乙胺(DEA)提 取的部分中测量的平均脑药物浓度与所施用的剂量和相应血浆药物浓度成比率（图4Β、 4C)。所述平均脑药物浓度与脑浓度可能精确地定量的剂量组(3-30mg/kg)的平均血浆浓度 的比率是0.7-1.0%。
[0213] 实施例5:在Tg2576转基因小鼠中用chBIIB037进行6个月的长期给药后淀粉样蛋 白负荷的减少
[0214] 本实施例描述如上文实施例2中所述使用脑匀浆部分通过ELISA测量的脑Αβ负载 的剂量依赖性减少。个别Αβ物质(Αβ1-38(Αβ38)、Αβ1-40(Αβ40)以及Αβ1-42(Αβ42))的浓度 是在DEA部分中并且在Gu-HCl部分中使用多点人类（4G8)Ai3三重测定（Meso Scale Discovery ,MD)根据制造商的说明书测定的。与PBS对照相比，AM2浓度在3、10以及30mg/kg chBIIB037治疗组的可溶性DEA(图5A)和胍部分（图5C)中均显著降低，其中百分比减少是在 39%与50%之间范围内。在3mg/kg和更高剂量下观察到AMO的显著减少或朝向AMO的减少 的趋势。
[0215] 皮质和海马中的总的脑淀粉样蛋白负载是通过免疫组织化学显示。具体说来，切 开脑并且通过浸入10%中性缓冲的福尔马林中持续48h至72h来固定。固定的脑接着经受处 理并且以水平取向进行包埋。对每一块进行切片直至海马得到鉴定，此时获得300个连续5μ m切片(每个载玻片3个切片）。对于6Ε10和硫黄素-S染色，对每第14个载玻片进行染色(大致 每225μπι 1个切片）。确定脑淀粉样蛋白的免疫组织化学使用1:750稀释度下的作为一级抗 体的小鼠抗Αβ1_16单克隆抗体(Clone 6Ε10,Covance,Princeton，NJ)和Ultramap抗小鼠喊 性磷酸酶试剂盒（Ventana Medical Systems，Tucson，AZ)，并且使用如本文所述的 VISIOPHARNf软件进行定量。载玻片用88 %甲酸溶液预处理，接着放置于Ventana Discovery XT免疫染色机上。载玻片用Ventana苏木精（Ventana Medical Systems, Tucs〇n，AZ)复染色，封片并且空气干燥过夜。
[0216]在6E10免疫染色后，载玻片用Aperio XT(Aperio Technologies，Inc· ,Vista,CA) 整个载玻片成像系统在20x放大倍数下根据制造商的说明书进行扫描。接着回顾数字图像 并且鉴定每个载玻片上3个切片中的最佳切片。来自这个切片的海马和皮质手动地注解为 独立的掩模并且接着使用由VISIOPHARM κ软件写出的算法来分析。所述算法测定所注 解的海马或皮质的面积和在IOx有效放大倍数下在这些解剖区域中的实质和血管淀粉样蛋 白的面积。在一组50个载玻片上进行所述软件的训练。
[0217] 载玻片还如先前所述用硫黄素-S(Thio-S)染色（Bussiere等，Am J Pathol 165: 987-995(2004))，并且用具有DAPI的 VECTASHIELD®封固剂（Vector Laboratories Bur I ingame ,CA)封片。在硫黄素-S染色后，回顾载玻片并且用Aperio FL (Aperio Technologies，Inc.，'\^8〖3,04)焚光整个载玻片成像系统在2(^放大倍数下根据制造商的 说明书扫描每个载玻片上3个切片中的最佳图像。如同6E10,来自这个切片的海马或皮质手 动地注解为独立的掩模并且接着通过使用由Visiopharm k软件写出并且针对荧光调 适的算法来分析。所述算法测定所述海马和所述皮质的面积以及在IOx有效放大倍数下在 这些解剖区域中的实质和血管淀粉样蛋白的面积。在一组ίο个载玻片上进行所述软件的训 练。
[0218] 对于所述lOmg/kg和30mg/kg齐丨遣，与PBS对照相比，由染色的沉积物占据的总面积 显著减少，其中百分比减少是在49%与70%之间范围内。（图5B和OT)。通过Thio-S染色评估 的致密淀粉样蛋白斑块显示，在30mg/kg的最高剂量下致密斑块在海马中减少高达63 % (图 5B)，并且在皮质中减少高达53% (图OT)。
[0219]实施例6:在Tg2576转基因小鼠中长期给药chBIIB037对血管淀粉样蛋白的影响 [0220]本实施例检查在Tg2576转基因小鼠中长期给药chBIIB037后对血管淀粉样蛋白和 微出血的影响。致密淀粉样蛋白斑块和CAA的Thio-S染色是在荧光显微镜下显示（图6A)，并 且如上文实施例5中所述使用VISIOPHARM®软件来定量（图6B)。皮质（图6C)和海马（图 6D)中的血管淀粉样蛋白负载是针对如上文实施例5中所述的3、10以及30mg/kg剂量通过 Thio-S染色来评估。如图6A-D中所证明，在Tg2576转基因小鼠中长期给药chBIIB037对血管 淀粉样蛋白负载无影响。
[0221]在实质和血管中均具有广泛淀粉样蛋白病理的22月龄Tg2576转基因小鼠中评估 微出血。小鼠经由在0、10、70、100或500mg/kg下的chBIIB037(每组每种性别9至10只小鼠）、 500mg/kg BIIB037(每组每种性别10只小鼠）或PBS(对照组）的静脉内（i . V.)治疗长期治疗 持续13周。在尸检时，收集脑，用福尔马林固定，横向取向并且横跨所述脑修剪成5个不同的 块。将每块3个5μπι组织切片放置于载玻片上并且用具有核固红复染色剂的普鲁士蓝 (Perls)染色。微出血的评分是基于先前所述的修改（Racke等，J Neurosci 25:629-636 (2005))的改编，除了必须在将要评分的两个连续切片上鉴定出普鲁士蓝阳性轮廓。如图6Ε 中所示，在l〇mg/kg和70mg/kg的治疗组与对照组之间处于ρ〈0.05程度下的微出血程度并无 统计学显著差异。在剂量递增至500mg/kg chBIIB037或ΒΙΙΒ037后观察到朝向升高的含量 的非显著趋势。
[0222] 实施例7:在Tg2576转基因小鼠中用chBIIB037进行6个月的长期给药后淀粉样蛋 白负荷的减少
[0223] 本实施例描述在10月龄的Tg2576转基因小鼠中用chBIIB037进行6个月的长期给 药后淀粉样蛋白负荷的减少。具体说来，在Tg2576小鼠中野生型（wt)chBIIB037或 chBIIB037-Agly经由每周一次腹膜内注射以3mg/kg给药，并且如上文实施例2和5中所述测 量不同的生物化学或组织学终点。如Tao和Morison J Immunol. 143:2595-2601 (1989)中所 述产生chBIIB037的非糖基化变体(chBIIB037-Agly)，其并入单一点突变(N297Q，使用标准 Kabat EU编号），所述点突变消除Fc区的N-糖基化并且剧烈地减少Fc γ受体结合。一组动物 用相同剂量的比较物抗体，即3D6或PBS对照治疗。在由脑匀浆制备的不溶性(胍)部分中测 量的脑Αβ 42含量与I3BS治疗的对照相比显著减少高达55%，而非糖基化(Agly)chBIIB037和 3D6无影响（图7A)。通过如上文实施例5中所述用Thio-S染色的面积的定量所评估，通过 Thio-S染色定量的皮质致密淀粉样蛋白斑块负载在wt chBIIB037治疗组中显著减少。 chBIIB037-Agly和3D6对致密淀粉样蛋白斑块负载无影响（图7B)。
[0224] 实施例8:在9.5月龄的了82576转基因小鼠中用^^118037长期给药后的淀粉样蛋 白负载减少会影响所有大小的斑块
[0225] 总淀粉样蛋白负载(包括扩散和致密实质β-淀粉样蛋白斑块以及血管淀粉样蛋白 或CAA )是通过6Ε 10免疫组织化学显示（图8Α)，并且如上文实施例5中所述使用 VISIOPHARM®软件定量（图8Β)。对于所述10mg/kg和30mg/kg剂量，与媒介物对照相比， 由Αβ染色的沉积物占据的总面积显著减少，其中百分比减少是在49%与70%之间范围内。 在0.3mg/kg、lmg/kg以及3mg/kg的较低剂量下观察到朝向较低淀粉样蛋白负载的趋势。淀 粉样蛋白斑块是基于大小分类为4个类别:斑块<125μπι 2(4)，125-250μπι2(3)，250-500μπι2(2) 以及>500μπι 2(1)(图8Β)。如图8C中所示，与PBS治疗的对照相比，chBIIB037治疗与所有大小 范围内的斑块数目的显著减少有关。
[0226] 实施例9:在9.5月龄的了82576转基因小鼠中用^^118037长期给药后小胶质细胞 介导的淀粉样蛋白斑块清除
[0227] 来自PBS或BIIB037治疗的小鼠的脑切片针对Αβ(6Ε10_浅灰)和小胶质细胞标志物 (Ibal-深灰）进行免疫染色。用抗Αβ抗体6Ε10免疫染色显示如与PBS对照组相比在 chBIIB037治疗组中淀粉样蛋白斑块的不同形态。而在对照动物中，淀粉样蛋白斑块的轮廓 是不规则的，具有不清楚的"模糊"边缘，在6个月治疗后保留在脑中的大多数斑块是由具有 尖锐界定的边界的致密密实核心组成。（图9A)。用活化的小胶质细胞标志物Iba-I共同免疫 染色显示，小胶质细胞是与致密斑块紧密缔合并且通常完全地围绕所述斑块。这些细胞的 形态是似变形虫的，其中少量分支至神经纤维网中。相比之下，在PBS治疗的对照组中，小胶 质细胞很少围绕斑块并且通常以大量分支提供，所述分支延伸至神经纤维网中。使用 Visiopharmk软件的分析计算个别淀粉样蛋白斑块的面积，并且将ibai染色的小胶质 细胞分类成2个类别，即围绕斑块(在斑块的25μπι内）或不与斑块缔合(与斑块相距>25μπ0。 (B)计算多70%周长由巨噬细胞围绕的斑块并且基于斑块大小分级。针对>250μπι 2的斑块， 在chBIIB037治疗组中（透明条)70%由小胶质细胞围绕的斑块的百分比与I3BS治疗的对照 组(灰色条)相比显著较大(*=P〈.〇.〇〇5)(图9B)。
[0228] 实施例10 :Αβ识别的结构基础
[0229]为了理解抗原识别的分子基础，使与Αβ(1-11)肽复合的ΒΙΙΒ037的Fab片段结晶。 ΒΙΙΒ037的Fab片段是通过用木瓜蛋白酶消化全抗体而产生的。简单地说，40mg ΒΙΙΒ037抗 体在消化缓冲液(20mM磷酸钠 (pH 7.2)、IOmM EDTA以及20mM半胱氨酸-HCl)中在ImL固定的 木瓜蛋白酶珠粒(Thermo Scientif ic)存在下在37°C下孵育18h，同时旋转混合。所述珠粒 通过离心去除，并且消化的抗体溶液针对磷酸盐缓冲的生理盐水透析。所述溶液接着负载 于5mL蛋白A琼脂糖柱上以消耗消化的Fc片段并且产生纯化的BIIB037Fab片段。所述 8118037? &13通过纳米液滴蒸气扩散方法在2971(温度下通过混合20〇1^7.611^/11^ BIIB037Fab溶液（IOmM Tris pH 8、150mM NaCl)与200nL含有 19%PEG 3350、300mM硫酸锂 以及IOOmM乙酸钠的储存溶液(pH 4)来结晶。Apo BIIB037Fab晶体与戊二醛交联，传递至含 有 19%PEG 3350、100mM HEPES pH 7以及IOmM Am_ll(DAEFRHDSGYE;SEQ ID N0:9)的浸泡 溶液并且浸泡24h，接着收集并且在液氮中闪冻。在FR-E SuperBright铜旋转-阳极X射线发 生器（Rigaku Americas ,Houston ,Texas ,USA)上在 100K下使用Raxis_4++成像板面积检测 器(Rigaku Americas ,Houston,Texas ,USA)测量反射强度来收集在180°的振荡范围内的衍 射数据。整合数据，简化，并且使用HKL2000确定比例。BIIB037Fab: Αβί -11晶体在单斜晶系 C2中编入索引。所述BIIB037Fab: Αβί -11结构通过分子置换使用apo BIIB037Fab结构作为 搜索模型用程序MolRep测定为2,55 A分辨率。关于Αβί-ll的残基Ala2至Gly9观察到充分 确定的电子密度，其是用Coot手动地确立。在结合槽的外部未观察到电子密度，所述结合槽 可能针对Αβ的Aspl或TyrlO至Glull建模。使用REFMAC程序进行结构细化。最终模型在不对 称单元中包括1个Fab分子(链H和L)、Ai32-9肽(链Q)以及124个水分子。模型细化的进展是通 过交叉验证R自由监测，所述交叉验证R自由是由构成数据的5%的随机指派的测试组计算。最终 R因子为19.4%，其中R抽因子为23.8%。拉氏图分析显示所有残基均位于容许区域内。 [0230] 关于Αβ的Aspl或Tyr 10至Glul 1未观察到电子密度。所述结构显示，Αβ2-9采用从N 端至C端伸展20 Λ的主要延伸构象，所述构象在由Asp7和Ser8构成的短转角中终止（图 ΙΟΑ)。^上的原始接触残基包括Glu-3、Phe-4、Arg-5以及His-6,证实使用N端和C端截短的 肽产生的表位定位数据。由四个由⑶R L1、L3、H2以及H3组成的抗原结合环发现BIIB037Fab 与Αβ2-9的相互作用。具体说来，残基Phe4和His6在⑶R H2、H3以及L3内的充分确定的口袋 内结合。所述Αβ2-9肽具有丨157 A2的总表面积，其中46 % (33〇人2)是包埋于具有高尖锐 互补性(0.75 % )的抗体界面处。
[0231] 氨基酸4-10已经描述为Αβ上的免疫显性表位(McLaurin，Nature，8:1263(2002); Town，Τ·等,Neuroscience Lett. ,207(2): 101-4(2001))。因此，已经报道数种单克隆抗体 结合于Αβ序列的这一区域内的相似线性表位。这些抗体包括:a)在一些⑶R内具有显著程度 的序列相似性并且均结合于Αβ(3-7)区内具有相似三级结构的Αβ的一组抗体（12A1U10D5、 12Β4、PFAl、PFA2 以及TO2) (Bas i等 JBC，（ 2010))，和b)罗氏单抗(gantenerumab)，其结合于 具有不同于12A11家族的总体结构的Αβ的残基1-11 (Bohrmann等，J.Alz .Disease ,26:1-21 (2011))。尽管这些抗体识别相似线性表位，但其展示一系列构象选择性，包括在单体和聚 集的Αβ之间不加区分的一些抗体（例如12B4)和选择性结合于聚集的Αβ的一些抗体（例如 10D5、12B4以及罗氏单抗ΚΒΙΙΒ037的结构另外不同于12Α11家族和罗氏单抗，不仅在抗体-肽界面的三级结构方面，而且在结合的Αβ肽本身的构象方面(图10B)。
[0232] 实施例11:抗体BIIB037的表位定位
[0233] BIIB037的表位是通过ELISA使用A抑太的合成片段鉴定。对于N端截短的A抑太，使用 无标签的肽。关于ELISA，在4°C下使用在涂布缓冲液（15mMNa 2C03、35mMNaHC03，pH9.6)中 浓度为5yg/mL的肽涂布96孔微板过夜。洗涤板并且在25 °C下用含有2 % BSA的I3BS阻断非特 异性结合位点持续lh。添加稀释于测定缓冲液(含有2%BSA的PBS)中的抗体，并且所述板在 25 °C下孵育2h。通过与辣根过氧化物酶缀合的山羊抗人类多克隆抗体（Jackson ImmunoResearch)-起孵育，随后使用底物TMB测量HRP活性来测定结合。
[0234] 对于C端截短的A抑太，使用生物素缀合的肽。生物素通过并入非天然赖氨酸残基而 以合成方式连接于所述蛋白质的羧基端。关于ELISA，生物素缀合的肽在25°C下以在测定缓 冲液中5yg/mL的浓度用Neutravidin预涂布的板（Thermo Scientific Reacti-Bind板）孵 育lh。洗涤板，添加稀释于测定缓冲液中的抗体，并且板在25°C下孵育2h。通过与辣根过氧 化物酶缀合的山羊抗人类多克隆抗体(Jackson ImmunoResearch)-起孵育，随后使用底物 TMB测量HRP活性来测定结合。
[0235] 如表4中所示，超过Αβ的残基Glu-3的N端截短和超过残基His-6的C端截短导致亲 和力的显著损失。这些结果指示，BIIB037的原始结合位点包含人类A邱勺残基3-6。
[0236]表4:BIIB037结合于合成Αβ肽片段。
[0239] ΒΙΙΒ037的表位进一步通过测量与人类和小鼠 A抑太的相对结合来研究。人类和小 鼠 A抑太序列的差异在于在位置5、10以及13处的三个氨基酸（图11Α)。对应于Αβ(1-16)序列 的生物素标记的合成肽是用于如上文所述通过ELISA测量ΒΙΙΒ037的结合（图11Β)。这种肽 含有在人类和小鼠序列之间所有三种差异，但在ΒΙΙΒ037表位(Αβ残基3-6,通过使用肽片段 的结合研究确立）内，在位置5处存在单一氨基酸差异。人类和小鼠 Αβ的EC5q值分别为0.5ηΜ 和43nM。所述小鼠肽上结合EC5q的约90倍减少指示，BIIB037选择性结合于人类Αβ，并且残基 Arg-5是结合的关键决定簇。
[0240] 实施例 12:Tg2576 和 WT 小鼠 CNS 中使用[125I]chBIIB037、[125I]Agly-chBIIB037 以 及[1251]人类BIIB037F(ab'）2 '的SPECT成像数据的概述
[0241] 单光子发射计算机断层扫描(SPECT)成像是用于追踪野生型(WT)和Tg2576(Tg)小 鼠的脑中BIIB037抗体的鼠类嵌合和人类变体的进入。使用Iodogen方法（1^^111 〇-Scientific/Pierce Biotechnology，Rockford，IL)的修改型式进行BI IB037、Agly-chBIIB037以及人类BIIB037F(ab'）2的碘化。简单地说，600yg chBIIB037或Agly-chBIIB037用由50yg Iodogen预涂布的4个Pierce鹏化管中的20mCi 125I-NaI(Pierce鹏化 试剂；每个管 150yg chBIIB037、Agly-chl2F6A或人类BIIB037F(ab'）2以及5mCi 125I-NaI) 和Tris碘化缓冲液(25mM Tis-HCl、0.4mM NaCl pH7.5并且产生200μ1的总孵育体积)处理。 在室温下轻微搅拌所述管持续9min之后，添加50μ1清除缓冲液（在Tris碘化缓冲液中的 lOmg/ml酪氨酸)并且所述混合物再轻微搅拌5min，随后向所述4个管中的每一者中添加 Iml 25mMTris-HCl、0.4mM NaCl pH7.5、5mM EDTA、0.5%叠氮化钠。随后，来自所述4个管的组合 产物添加至〇6111：1'；[0011301(超滤单元中并且在6000印1]1下离心持续5111；[11。所述柱接着用41 Iml生理盐水洗涤。10μ1样品稀释至0.5ml用于OD测量并且100μΙ样品用Iml稀释以用于HPLC 分析。剩余物可用于所述研究。在这些研究中，使用5mCi [ 125I ]以大致80 %标记效率来标记 0.15mg chBIIB037或Agly-chBIIB037，最终导致每种抗体大致1.8个碘。所述标记的抗体的 活性是通过在同一条件下平行地产生用非放射性碘标记的样品并且使用ELISA测量A邱勺结 合亲和力来确认。
[0242] 在如表5中突出显示的第0、7、14以及21天经由尾部静脉注射向22月龄的雌性 丁82576(了 8，11=14)和非转基因057/8176(耵，11=14)小鼠施用0.11111载体添加的1011^/1^ [125I ]chBIIB037(1.25-1.5mCi)。向小鼠给予含有碘化钾(0.2g/L)的饮用水以减少甲状腺 中游离碘的摄取。进行SPECT/计算机断层扫描(CT)成像，接着随即在如表5中突出显示的第 7和14天以及在第28、48以及49天进行放射性标记的抗体的后续注射。关于SPECT/CT成像， 小鼠用100%氧气中的2-3%异氟烷麻醉。使用配备有1.4mm直径孔径针孔准直器(x9)的小 型动物专用NanoSPECT/CT照相机(Bioscan/Mediso)进行扫描。通过inviCRO LLC(Boston， MA)进行SPECT数据的分批处理重构并且利用与SPECT重构的CT图像配准组合的专有小鼠脑 图谱分析方案进行分析。在所述碘标记的研究结束时也向动物103和Ill(Tg)以及动物205 和210(WT)施用[ mIn]ChBIIB037,作为使用临床上接受的放射性同位素来代替放射性碘的 初步比较(表5)。
[0243] 表5:概述用于成像研究和研究后离体评估的数据的关键
[0245] mARG-显微放射自显影;BioD-生物分布;PARTI-Patho AutoRadio断层扫描成像
[0246] 通过inviCRO LLC(Boston，MA)进行SPECT数据的分批处理重构并且利用与SPECT 重构的CT图像配准组合的专有小鼠脑图谱分析方案进行分析。
[0247] 在Tg2576和WT小鼠（11=14只动物/组）的脑中评估体内[1251](*8118037抗体摄取。 来自所述研究中的所有动物的平均数据的概述SPECT图像突出显示于图12A中并且显示 Tg2576而非野生型小鼠中[125I]chBIIB037的体内皮质摄取。在静脉内施用[125I]chBIIB037 抗体后7、21、28以及48天后获得的采集数据显示与WT对照相比，在Tg2576小鼠的CNS中放射 性的时间依赖性和累积剂量依赖性积聚（图12B-E)。所述数据以每克组织的注射剂量的百 分比（％ID/g)、浓度(yCi/mm 3)形式或以感兴趣区域中的浓度相对于小脑(无效组织）中的 浓度标准化的比率提供。在研究过程中脑中的放射性的量在所有区域中均在2nCi /mm3至 10nCi/mm3 范围内。
[0248] 图12B-C表示与所述研究的第14天（图12C)相比在第7天（图12B)并且在1.5mCi放 射性标记的两次静脉内注射后沿矢形面(b)、水平面(c)以及冠状面(d)显示的Tg2576小鼠 皮质中具有相似缩放比例的[ 125I]chBIIB037的累积体内并入。各图中的图像(a)表示用于 图像配准SPECT图像的CT图像和用于后续定量放射性的积聚的脑图谱（iηVi CRO LLC)。在 Tg2576(左侧)和WT(右侧)小鼠中具有[125I]chBIIB037的高摄取程度的代表性第7天和第14 天SPECT图像显示Tg2576而非WT小鼠脑的皮质区中的体内摄取。
[0249] Tg2576小鼠中[125I]chBIIB037的积聚可能分类(任意）为三组，即高摄取程度、中 等摄取程度以及低摄取程度（图13)。图13A-B显示在Tg2576小鼠的CNS区室中随时间[ 125I ] chBIIB037的体内摄取和积聚，所述体内摄取和积聚在WT小鼠中不存在，并且可分等为积聚 低浓度、中等浓度以及高浓度的放射性标记的小鼠。图13C表示在每隔7天重复施用放射性 标记持续4周后经48天在小鼠脑中[ 125I]chBIIB037的平均标准化摄取。在Tg和WT小鼠中在 第7天和在Tg小鼠中在第28天显示的箭头指示标记的游离碘摄取至甲状腺中。在Tg小鼠中 在第48天显示的箭头指示摄取至Tg2576(a)小鼠的CNS区室中，而未摄取至WT对照脑(b)中。
[0250] 图14显示相对于血库，在Tg和WT小鼠脑中[125I]chBIIB037的体内摄取。上图示出 在第48天(D48)在Tg2576(L)相对于WT(R)小鼠中的平均脑摄取并且接着在用PBS灌注后 (D48灌注）进行比较。下图示出感兴趣区域（ROI)由第28天的数据产生的曲线并且指示 Tg2576小鼠脑中的摄取并不是如同WT小鼠中归因于血库，在WT小鼠中在血库与组织之间放 射性的测量浓度(yCi/mm 3)并无显著差异。
[0251] 图 15-18 表示使用[125I]Agly-chBIIB037 和[125I]huBIIB037F(ab'）2的体内 SPECT 成像。具体说来，22月龄(11=15)的雌性了82576〇8)和3月龄(11 = 4)的雌性訂小鼠在第0天经 由尾部静脉注射施用〇.11111体积的载体添加的111^/1^[1251从817-(311131113037(1.3111(：;0(11 = 5)或lmg/kg[125I]huBIIB037F(ab'）2(n = 7只Tg和4只WT)(表6)。向小鼠给予含有碘化钾 (0.28/1)的饮用水以减少甲状腺中游离碘的摄取。针对如表6中突出显示的[ 1251从817-chBIIB037 在第 7、10、14以及21天进行SPECT/CT成像。对于[125I]huBIIB037F(ab'）2，在静脉 内施用放射性标记的材料后4、24、72以及168h进行SPECT/CT成像(表6)。在所有情况下，小 鼠均被麻醉并且如上文所述进行扫描。
[0252] 表6:概述用于图像采集的数据的关键
[0255] 对于第2组和第4组，进行聚焦脑SPECT扫描持续约30min，接着在以下时间点进行 CT扫描：注射后4、24、72以及168小时。对于第3组和第5组，进行全身SPECT扫描持续约 30min，接着进行聚焦脑SPECT扫描持续约30min，随后在以下时间点进行CT扫描:注射后4、 24、72以及168小时。在扫描后，使用剂量校准器计算全身活性。在第14天或第168小时成像 时期后，处死动物。在成像前，inviCRO对所述系统进行分辨率、校准以及定量研究作为质量 控制措施。选择13只小鼠用于成像。
[0256] 125I标记的Agly-chBIIB037和huBIIB037F(ab'）2的放射化学纯度提供于表7中。
[0257] 表7:标记的Agly_chBIIB037和huBIIB037F(ab'）2的放射化学纯度
[0259] 在22月龄的Tg2576小鼠 （n = 5)的脑中评估体内[125I]Agly-chBIIB037摄取。来自 第1组中的所有动物的平均数据的图像显示在CNS中的放射性标记lmg/kg[125I]Agly-chBIIB037的体内摄取和保留（图15A)。数据表示来自在所述研究的持续时间期间的聚集头 部扫描的矢形面图像，所述图像与CT扫描图像配准并且标准化为各图像的99%。动物1001-1003是分类为中等摄取动物并且动物1004是分类为具有放射性标记的生物材料的高摄取 和保留。动物1005是基于所观察到的信号来自第3心室中的放射性标记的可能性而分类为 低摄取。
[0260] 在各时间点处图15A中所表示的数据的感兴趣区域(ROI)分析显示对第21天时来 自5只动物的数据求平均值，与纹状体和丘脑的靶标/小脑比率大致为2.0相比，在胼胝体、 皮质、海马、心室、嗅球以及白质中的最大信噪比大致为2.5。所分析的其它区域具有小于1 的比率(图15B)。
[0261] 在第2组和第3组中[125I]huBIIB037F(ab'）2的体内摄取的聚焦脑扫描是在六只动 物中评估。图15C表示来自在研究的持续时间期间的聚集头部扫描的矢形面图像，所述图像 与CT扫描图像配准并且标准化为各图像的99%。数据显示在老年Tg2576小鼠脑中[ 125I] huBIIB037F(ab'）2的摄取和保留。动物1006-1010是分类为低/无摄取动物，除了 1008,它是 分类为低/中等摄取。动物1011是分类为具有放射性标记的生物材料的高摄取和保留。在这 种动物中，在所述放射性标记施用后长达168h观察到高保留。
[0262] 在年轻(3月龄)WT小鼠脑中测量[1251]11仙118037?(&13'）2的摄取和保留。图150表 示来自在研究的持续时间期间的聚集头部扫描的矢形面图像，所述图像与CT扫描图像配准 并且标准化为各图像的99%以更清楚地确定分类为低或高保留。年轻WT小鼠显示[ 125I] huBIIB037F(ab'）2的低/无摄取和保留。
[0263] 动物1008和1011的分类通过图15E中突出显示的ROI定量得到进一步证实。左侧图 显示在四个成像时间点内针对小脑中的平均数据标准化的皮质中的标准数据(表示为％ ID/g)并且显示与WT小鼠脑相比，在Tg2576小鼠脑的皮质中的较高保留。右侧图表示个别摄 取数据并且突出显示与WT(红线）和剩余四只Tg2576(黑线）小鼠的保留相比具有[ 125I] huBIIB037F(ab'）2的较高保留的两只Tg2576小鼠，即1008和1011。
[0264] 选择代表性图像以显示在Tg2576小鼠中[125I]huBIIB037F(ab'）2的体内摄取和保 留。图15F表示来自在研究的持续时间期间的聚集头部扫描的矢形面和冠状面图像，所述图 像与CT扫描图像配准并且针对各动物任意确定比例以减少背景信号，从而更清楚地目测放 射性的空间定位。动物1011显示从2小时至168小时脑中放射性的相对较高积聚和保留。动 物1008展示与动物1011相比在研究的持续时间期间相似但较低的可定量皮质:小脑比率并 且再次显示一些摄取和保留。相比之下，动物1007显示最小可定量信号并且在这种任意比 例下还显示无放射性标记的显著摄取或保留。
[0265] 图15G示出在老年Tg2576和野生型小鼠脑中体内[125I]huBIIB037F(ab'）2结合的 定量感兴趣区域分析的整体概述。在四个成像时间点内针对小脑中的数据标准化的皮质中 的数据(表示S%ID/g)显示与WT(下图）小鼠脑相比，在Tg2576(中间图）小鼠脑的皮质、海 马以及纹状体中[ 125I]huBIIB037F(ab'）2的较高保留。上图证实在相同区域中显示[125I] Agly-chBIIB037的体内积聚的前述数据。
[0266] 图16示出代表性第48天图像，所述图像示出在Tg2576老年小鼠脑的CNS中[125I] Agly-ChBIIB037(l和IOmpk)的体内积聚。在年轻Tg2576小鼠脑中使用[125I]P1.17标记的同 型对照（IOmpk)未观察到CNS特异性体内积聚。
[0267] 图17示出低斑块负荷成功地在3只动物中的3者中指示并且高斑块负荷在3只动物 中的2者中指示。一种高斑块负荷动物作为假阴性结果提供(高斑块负荷，低信号）。
[0268] 实施例13 :相对于小鼠脑切片显微放射自显影（mARG)在Tg2576和WT小鼠脑中 [125I ] chBIIB037的免疫组织化学和组织学染色
[0269] 本实施例公开在Tg2576和WT小鼠脑中[125I]chBIIB037的免疫组织化学和组织学 染色以及脑组织的放射自显影评估。
[0270] 用于组织取样的方案是由MPI Research Laboratories ,Mattawan ,MI提供。基本 上，脑是在切开后接收并且浸入10%中性缓冲福尔马林中。固定的脑接着经受处理并且包 埋于石蜡中。对于整体处理的脑，所述组织是针对冠状面切片取向。关于沿冠状面修剪的 脑，各块从所述脑的前面开始以数字方式标记(例如，块1 =前脑，块7 =后脑）。通过所述脑 从最少6个层面获得5和/或ΙΟμπι连续切片。在各层面获得最少1个用于IHC的切片和2个用于 ARG的切片。关于AWHC染色，一个载玻片是从脑的各层面染色(大致每250-500μπι)。切片的 特定厚度、数目以及各层面之间的距离是记录于研究数据中（图18)。
[0271] 确定脑淀粉样蛋白的免疫组织化学（IHC)使用最终浓度为2μg/ml的Covance小鼠 抗人类β淀粉样蛋白1-16单克隆抗体(Clone6E10，SIG-39320)作为一次抗体。Biocare MM-AP聚合物是作为二次抗体与作为色原的Vulcan Fast Red-起使用。简单地说，载玻片浸入 88 %甲酸溶液中持续3分钟，接着在蒸馏水中冲洗5分钟，传递至缓冲液并且手动地染色。并 行地操作同型（IgGl)阴性对照。载玻片用Richard Alien苏木精2复染色，封片并且空气干 燥过夜。
[0272] 根据MPI Research Laboratories方案，来自冷冻的小鼠尸体的头部包埋于2%羧 甲基纤维素 (CMC)基质中并且安装在维持于-20°C下的切片机平台上。四种质量控制标准物 放置于冷冻块中，接着进行切片（用于切片厚度质量控制）。切割40μπι厚度的皮质切片并且 捕获于胶带上。
[0273] 通过与]^1八1^丨〇?0)缔结的0?5(0613¥3代，]\«))针对由了82576小鼠101、102以及 106和WT小鼠201和206制备的载玻片评估脑切片mARG。收集各小鼠的脑并且在MPI Research设施(Mattawan ,MI)中冷冻。冷冻的脑在干冰上装运并且存储于-70 °C下直至进行 切片。从各脑的六个解剖区域获得冠状面横截面，只要可能获得涵盖伏隔核、腹内侧下丘 脑、背内侧下丘脑、中缝背核、孤束核以及极后区的切片。进行定位mARG切片中的脑仙的IHC 染色程序并且评估结果来看所述Αβ和放射性标记的测试物品是否可能共同定位。
[0274] 在第28天(η = 2只Tg，n=l只WT)或在第7天(η = 1只WT)处死两只Tg和两只WT小鼠 以离体确定放射性是否定位于相关脑区域中的靶标(淀粉样蛋白斑块)处。代表性数据显示 与从WT小鼠获取的相似区域中的非特异性活性相比，在Tg小鼠脑的海马层中放射性病灶的 存在(图19)。
[0275] 图20示出6Ε10推导的Αβ免疫染色和mARG推导的放射性在Tg2576脑的相邻切片中 的共同定位。此外，使用mARG切片针对海马区域中的相邻切片中的Αβ的硫黄素-S染色显示 不可靠的结果（图21)。
[0276] 实施例14:使用[125I]chBIIB037和[125I]人类BIIB037F(ab'）2'的生物分布研究
[0277] 在研究结束时使用2只WT和3只Tg小鼠（表5)以评估数种组织中[125I]chBIIB037的 生物分布。这些动物在最后一次静脉内施用放射性标记的抗体后7天在所述研究的第28天 处死。移出包括脾、全脑、心脏、肾、肌肉、肝、膀胱、肺、胃、肠以及血液在内的器官和组织。对 器官和组织的样品称重并且使用自动γ计数器测量放射性。使用稀标准溶液和衰减校正的 注射剂量计算注射剂量的百分比（％ ID)。放射性浓度因此是表述为每克湿组织的注射剂量 的百分比（％ ID/g)(表8和图22)。
[0278] 表8.Tg2576和WT小鼠组织中[125I]chBIIB037的生物分布
[0281] 表8和图22包括以组织之间的％ID/g表述的数据并且显示脑组织中最低但选择性 的积聚，如与WT小鼠脑相比在Tg中放射性的较高体内积聚所指示。
[0282] 在所述研究的时程中[125I]huBIIB037F(ab'）2在非靶标外周器官中的生物分布是 使用那些器官的ROI分析来测定。图23示出在Tg2576和WT小鼠中体内[ 125I]huBIIB037F (ab'）2的全身SPECT图像。将脑中显示最高[125I]huBIIB037F(ab'）2的动物1011(左侧）的全 身最大密度投影(MIP)与WT小鼠 A1014(右侧）的全身最大密度投影相比较。提供呈两组MIP 形式的图像，其中数据是标准化为第一图像(顶部）的最大体素的99%或标准化为各图像 (底部）的最大体素的99%。
[0283] 图24示出在老年Tg2576和年轻WT小鼠的非靶标组织中[125I]huBIIB037F(ab'）2的 体内生物分布的定量全身分析。在Tg2576小鼠的甲状腺组织中的积聚是由随时间与WT (η = 2)小鼠相比放射性的较高体内积聚(η = 3)指示。肾积聚随时间减少，反映放射性标记的材 料的肾清除。
[0284] 氺氺氺
[0285] 本公开的范围不受所述的特定实施方案限制，所述实施方案意图作为本公开的个 别方面的单个说明，并且功能上相等的任何组合物或方法均在本公开的范围内。实际上，除 本文所示和所描述的那些修饰外，本领域技术人员由前述描述和附图还将显而易知本公开 的各种修饰。所述修饰还意图在随附权利要求书的范围内。
[0286] 本说明书中所提及的所有公布和专利申请均以引用的方式并入本文，其并入程度 就如同各个别公布或专利申请特定地且个别地指示以引用的方式并入一般。
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