一种用于治疗冠心病心绞痛的中药组合物及其制备方法
阅读：93发布：2023-01-30
专利汇可以提供一种用于治疗冠心病心绞痛的中药组合物及其制备方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种用于 治疗 冠心病心绞痛的中药组合物，该中药组合物的有效成分是由如下重量配比的 原料药 制成的：丹参10-20份、黄连2-8份、人参3-9份、三七1-5份、葛根10-20份、赤芍7-17份、肉苁蓉5-15份、法半夏3-9份。本发明同时公开了该中药组合物三种不同且有效的制备方法。该中药组合物对冠心病心绞痛瘀热痰互结证具有显著效果。，下面是一种用于治疗冠心病心绞痛的中药组合物及其制备方法专利的具体信息内容。
1.一种用于治疗冠心病的中药组合物，其特征在于该中药组合物是由如下重量配比的原料药制成的：丹参10-20份、黄连2-8份、人参3-9份、三七1-5份、葛根10-20份、赤芍
7-17份、肉苁蓉5-15份、法半夏3-9份。
2.根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于各原料药的配比为：丹参12-18份、黄连3-7份、人参4-8份、三七2-4份、葛根12-18份、赤芍9-15份、肉苁蓉7-13份、法半夏
4-8份。
3.根据权利要求2所述的中药组合物，其特征在于各原料药的配比为：丹参15份、黄连5份、人参6份、三七3份、葛根15份、赤芍12份、肉苁蓉10份、法半夏6份。
4.根据权利要求1、2或3所述的中药组合物，其特征在于用等量的酒苁蓉代替肉苁蓉。
5.制备权利要求1至4中任一项所述中药组合物的方法，其特征在于该方法可以是以下三种工艺中的任一种：
工艺一：将全部原料药以水煎煮提取，提取液浓缩至相对密度1.1-1.2，加入乙醇至含醇量达60%-80%，静置后取上清液，回收乙醇，余液即得；
工艺二：将丹参、黄连一起用60%-80%乙醇提取，提取液回收乙醇，得余液，备用；将其余原料药一起以水煎煮提取，提取液浓缩至相对密度1.1-1.2，加入乙醇至含醇量达
50%-70%，静置后取上清液，回收乙醇，得余液；将两种余液合并即得；
工艺三：将丹参、黄连、人参和三七一起用60%-80%乙醇提取，提取液回收乙醇，得余液，备用；将其余原料药一起以水煎煮提取，提取液浓缩至相对密度1.1-1.2，加入乙醇至含醇量达50%-70%，静置后取上清液，回收乙醇，得余液；将两种余液合并即得。
6.制备权利要求1至4中任一项所述中药组合物的方法，其特征在于该方法可以是以下三种工艺中的任一种：
工艺一：将全部原料药煎煮提取3次，每次加水10倍量、煮沸0.5小时，提取液合并后浓缩至相对密度1.12，加入乙醇至含醇量达70%，放置24小时，取上清液，回收乙醇，余液即得；
工艺二：将丹参、黄连一起用70%乙醇提取3次，每次加10倍量乙醇溶液、提取0.5小时，合并提取液，回收乙醇，得余液，备用；将其余原料药一起煎煮提取3次，每次加水8倍量、煮沸1小时，提取液合并后浓缩至相对密度1.12，加入乙醇至含醇量达60%，放置24小时，取上清液，回收乙醇，得余液；将两种余液合并，即得；
工艺三：将丹参、黄连、人参和三七一起用70%乙醇提取3次，每次加10倍量乙醇溶液、提取1小时，合并提取液，回收乙醇，得余液，备用；将其余原料药一起煎煮提取3次，每次加水10倍量、煮沸1小时，提取液合并后浓缩至相对密度1.18，加入乙醇至含醇量达60%，放置24小时，取上清，回收乙醇，得余液；将两种余液合并，即得。
7.权利要求1至4中任一项所述中药组合物在制备用于治疗冠心病心绞痛的药物中的应用。
8.权利要求1至4中任一项所述中药组合物在制备用于治疗冠心病心绞痛瘀热痰互结证的药物中的应用。
9.权利要求1至4中任一项所述中药组合物在制备用于治疗瘀热痰互结所致胸痹心痛的药物中的应用。
一种用于治疗冠心病心绞痛的中药组合物及其制备方法
技术领域
[0001] 本发明涉及一种用于治疗冠心病心绞痛的中药组合物及其制备方法，属于中医药领域。
背景技术
[0002] 近年来我国冠心病发病率呈现加速上升的趋势，根据《中国心血管病报告2011》，我国心血管疾病现患病人数2.3亿，每10个成人中就有2个患有心血管疾病。中医药在冠心病的治疗上有一定优势，通过对冠心病的中医病因病机分析，从整体出发进行辨证论治，在冠心病系统治疗的整个过程中均能有较好的调节作用。
[0003] 冠心病心绞痛属于中医胸痹心痛范畴。中医对冠心病心绞痛的认识很早，最早追溯到马王堆汉墓出土的《五十二病方》，其中就有对“心痛”的描述。对于胸痹心痛病机的论述，最经典的是《金匮要略》，其中以“阳微阴弦”概括了其病机特点，“阳虚知在上焦，所以胸痹、心痛者，以其阴弦故也”，即心阳虚衰，阴邪占于阳位，而为胸痹心痛。基于此论，笔者认为胸痹病机分为“标”与“本”两个方而:“本”在于正气亏虚，胸中阳气不振，即“阳微”，“标”是实邪内阻，即瘀血与痰浊阻滞脉道，即“阴弦”。
[0004] 血瘀和痰浊阻滞心脉是胸痹心痛的核心病机。心主血脉，血液的状态与心脏的功能相互影响，胸痹为心胸之痹证，《黄帝内经·素问》中指出了胸痹病因:“心痹者，脉不通”，“痹在于脉则血凝而不流”，提示了血瘀和心脉痹阻是胸痹的发病基础，血凝聚于脉道，使得心脉受阻，不通则痛。心与血脉的关系密切，故血瘀在冠心病心绞痛病因病机中处于一个根本的位置，无论如何辨证分型，血瘀证都作为其背景式证候。除此之外，《脉因证治》中认为:“胸痹，皆痰水宿饮，停留不散”；“胸痹为气实，气分挟痰饮”，现代人生活压力大、饮食营养不均衡，容易伤于脾胃，脾胃运化失常而导致痰湿内生，痰浊内阻于心脉，而为胸痹心痛。古代很多医家亦偏向于从痰浊的角度来辨治胸痹，《金匮要略·胸痹心痛短气病脉证治第九》中治疗“胸痹不得卧，心痛彻背者”，用瓜萎薤白半夏汤，即认识到痰浊对于胸痹的影响，从通阳化痰的角度治疗胸痹心痛。胸痹心痛是因于瘀血痰浊的阻滞，而瘀血与痰浊产生的根本原因是心阳亏虚：正气存内、邪不可干，而正气亏虚是“邪”产生的根本原因，瘀和痰这样的内生病理产物也是如此：心气亏虚，不足以推动血脉，血脉势缓而成瘀，形成瘀血；上焦气机失调，或中焦脾胃运化失常，使得痰浊内生，困阻于心脉。
[0005] 冠心病患者都伴有不同程度的血液流变学及微循环异常，表现为血液黏度增高，纤维蛋白原增加，血沉上升，微循环障碍等，这些变化与中医的血瘀证较为契合，即血液凝滞不行而瘀阻于脉道，多项现代研究直接表明血液流变学变化与血瘀证的形成具有一定关系。同时，冠心病痰浊证患者亦存在着血液流变学异常以及血脂代谢紊乱，根据现代研究结果，普遍认为痰浊和血脂在内涵上有高度联系性，亦有基于临床与基础研究的推断认为痰瘀是冠状脉脂质斑块的主要病理基础。
发明内容
[0006] 第一部分：处方组成
[0007] 本发明所述用于治疗冠心病心绞痛的中药组合物，其有效成分是由如下重量配比的原料药制成的：丹参10-20份、黄连2-8份、人参3-9份、三七1-5份、葛根10-20份、赤芍7-17份、肉苁蓉5-15份、法半夏3-9份。
[0008] 确切的，所述原料药的重量配比为：丹参12-18份、黄连3-7份、人参4-8份、三七2-4份、葛根12-18份、赤芍9-15份、肉苁蓉7-13份、法半夏4-8份。
[0009] 更准确的，所述原料药的重量配比为：丹参15份、黄连5份、人参6份、三七3份、葛根15份、赤芍12份、肉苁蓉10份、法半夏6份。
[0010] 上述所有原料药，均符合现行中国药典的相关标准，并且其中的肉苁蓉也可用等量酒苁蓉代替。
[0011] 本发明中药组合物具有活血化瘀，清热涤痰之功效，可用于治疗瘀热痰互结所致胸痹心痛，症见胸痛胸闷，或痛引肩背、心悸气短、心烦难眠、口干乏力、舌质紫暗、苔黄腻、大便干、小便黄，或冠心病心绞痛瘀热痰互结证，见上述症状者。该中药组合物具有活血祛痰、宣痹止痛、宁心安神的作用，对缺血性冠心病、心肌梗死及心绞痛具有显著的治疗作用。
[0012] 依据中医理论，本发明中药组合物的可做以下方解。丹参：味苦，微寒，归心、肝经，功擅活血祛瘀，凉血消痈，为君药；其色赤入心，能破宿血，补新血，一味而兼具活血、养血之功。黄连：味苦，寒；归心、肝、胃、大肠经，清热燥湿，泻火解毒，为臣药；其尤长于清湿火郁结。法半夏：辛温，入肺、脾、胃经，可燥湿化痰，消痞散结，为臣药，合黄连辛开苦降，通利泄浊，降逆散结。赤芍：味苦，微寒，归肝经，清热凉血，散瘀止痛，亦为臣药，可助丹参以活血，合黄连以凉血。君一臣三，相合无间，直达病所，化瘀清热，涤痰祛浊，使瘀热痰邪，豁然得解。三七：甘温、微苦，入肝、胃经，化瘀止血，活血定痛，既可助丹参通脉行瘀，又可防诸药化瘀太过，而致出血，故为佐药。葛根：辛甘性凉，入脾胃经，解肌退热，生津止渴，亦为佐药。人参：甘、微苦、温，归心、肺、脾经，大补元气、补脾益肺，生津安神，同为佐药，可补瘀热耗伤之气津，也可助黄连以除烦助眠。肉苁蓉：甘、咸、温，归肾、大肠经，可补肾阳、益精血、润肠通便，亦为佐药。诸药相伍，活血与清热涤痰并用，祛邪与扶正共举，活血而不致出血，祛邪而不致伤正，使瘀血得散，里热得清，痰湿得化，邪去而正复，为胸痹心痛之瘀热痰互结者标本兼治之剂。
[0013] 第二部分：制备方法
[0014] 在临床使用时，本发明中药组合物可以按传统工艺以水煎煮取汁服用，为方便携带、储存、服用等目的，也可按以下任一工艺进行提取精制。
[0016] 工艺二：将丹参、黄连一起用60％-80％乙醇提取，提取液回收乙醇，得余液，备用；将其余原料药一起以水煎煮提取，提取液浓缩至相对密度1.1-1.2(20℃测)，加入乙醇至含醇量达50％-70％，静置后取上清液，回收乙醇，得余液；将两种余液合并即得。
[0017] 工艺三：将丹参、黄连、人参和三七一起用60％-80％乙醇提取，提取液回收乙醇，得余液，备用；将其余原料药一起以水煎煮提取，提取液浓缩至相对密度1.1-1.2(20℃测)，加入乙醇至含醇量达50％-70％，静置后取上清液，回收乙醇，得余液；将两种余液合并即得。
[0018] 确切的，该中药组合物的制备工艺可以是以下任一种。
[0019] 工艺一：将全部原料药煎煮提取3次，每次加水10倍量、煮沸0.5小时，提取液合并后浓缩至相对密度1.12(20℃测)，加入乙醇至含醇量达70％，放置24小时，取上清液，回收乙醇，余液即得。
[0020] 工艺二：将丹参、黄连一起用70％乙醇提取3次，每次加10倍量乙醇溶液、提取0.5小时，合并提取液，回收乙醇，得余液，备用；将其余原料药一起煎煮提取3次，每次加水8倍量、煮沸1小时，提取液合并后浓缩至相对密度1.12(20℃测)，加入乙醇至含醇量达
60％，放置24小时，取上清液，回收乙醇，得余液；将两种余液合并，即得。
60％，放置24小时，取上清液，回收乙醇，得余液；将两种余液合并，即得。
[0021] 工艺三：将丹参、黄连、人参和三七一起用70％乙醇提取3次，每次加10倍量乙醇溶液、提取1小时，合并提取液，回收乙醇，得余液，备用；将其余原料药一起煎煮提取3次，每次加水10倍量、煮沸1小时，提取液合并后浓缩至相对密度1.18(20℃测)，加入乙醇至含醇量达60％，放置24小时，取上清，回收乙醇，得余液；将两种余液合并，即得。
[0022] 使用时，患者可以直接服用上述方法制得的药液；为解决口感、便携、储存等问题，也可以将所得药液按常规制剂工艺进一步制成颗粒剂、片剂、胶囊剂等剂型。
[0023] 第三部分：工艺研究实例
[0024] 以下内容为发明人进行本发明中药组合物制备工艺筛选研究的技术内容，用以说明发明人的创造性贡献。
[0025] 一、对工艺1的研究
[0026] 1仪器与材料
[0027] 1.1仪器(略)
[0028] 1.2药材与试剂(略，均符合中国药典标准)
[0029] 2实验方法
[0030] 2.1水提取正交实验设计
[0031] 影响中药成分提取效率的因素有很多，包括溶剂的选择、浸泡时间、提取时间、提取次数、溶剂用量等等，考虑到医院制剂的提取溶剂不能作改变，因此在不改变全水的条件下设计制剂的提取工艺。选择加水量为药材的6倍、8倍和10倍，提取时间选择为0.5h、1.0h、1.5h，提取次数按常规方法选择提取1次、2次、3次。
[0032] 为了确定全方水提的最佳工艺条件，我们拟以正交试验表L9(34)进行正交试验，从而确定最优工艺，因素水平见下表1-1。
[0033] 表1-1全方水提的因素水平表
[0034]
[0035] 2.2水提取工艺验证
[0036] 为了进一步验证所选最优工艺，按照处方(72g)30倍药量进行水提取工艺，每批样品2160g，共3批样品，按照最优工艺进行提取，测定提取液中各成分的含量和出膏率。
[0037] 2.3醇沉工艺的优选
[0038] 为了提高本药的药物治疗效果、减少病人服用量，适用于大工业化生产，最大量除去大分子杂质而又使有效成分损失最小，选择水提后醇沉除杂的方法以除去大分子杂质。因素水平见表1-2
[0039] 表1-2醇沉因素水平表
[0040]
[0041] 取提取液浓缩，分别浓缩至密度为1.06、1.12和1.18，按照醇沉因素表进行正交试验，每个样品30mL，共9个样品。缓缓加入乙醇使含醇量分别达到50％，60％、70％，分别放置不同时间，过滤，定容，测定各指标成分及干膏量。
[0042] 2.4醇沉工艺的验证
[0043] 为了进一步验证所选醇沉最优工艺，分别取优选的相对密度的浓缩液，缓慢加入使达到一定醇沉浓度，放置一定时间，取上清液测定指标成分含量。
[0044] 2.5各活性成分或指标成分的色谱条件
[0045] 丹酚酸B含量测定：色谱柱：TC C18(4.6×250mm，5μm)，检测波长286nm，-1柱温30℃，进样量5μL，流速1.0mL·min ，流动相：甲醇∶乙腈∶(甲酸∶水)＝
2
37∶13∶50(1∶59)(标准曲线Y＝6170X+80.724，R＝0.9995)。
2
37∶13∶50(1∶59)(标准曲线Y＝6170X+80.724，R＝0.9995)。
[0046] 人参皂苷含量测定：色谱柱：安捷伦TC C18(4.6×250mm，5μm)色谱柱；检测波-1长：203nm；流速：1.0mL·min ；进样量：10μL，以乙腈为流动相B，以水为流动相D。三七皂
2
苷Rb1(标准曲线Y＝1440.8X+3.1665，R＝0.9993)。
2
苷Rb1(标准曲线Y＝1440.8X+3.1665，R＝0.9993)。
[0047] 黄连生物碱含量测定：色谱柱：安捷伦TC C18(4.6×250mm，5μm)色谱柱；以-1乙腈-0.025mol·L 磷酸二氢钾溶液(27∶73)为流动相；检测波长为345nm。流速：
-1
1.0mL·min ；进样量：10μL。包括盐酸小檗碱、巴马汀、黄连碱和表小檗碱四种生物碱(标
2
准曲线Y＝45834X+145.91，R＝0.9999)。
-1
1.0mL·min ；进样量：10μL。包括盐酸小檗碱、巴马汀、黄连碱和表小檗碱四种生物碱(标
2
准曲线Y＝45834X+145.91，R＝0.9999)。
[0048] 赤芍中芍药苷含量测定：色谱柱：安捷伦HC C18(4.6×250mm，5μm)色谱柱；流动-1 -1相：甲醇∶0.025mol·L 磷酸二氢钾＝46∶54；检测波长：230nm；流速：1.0mL·min ；进
2
样量：10μL(标准曲线Y＝12962X+49.026，R＝0.999)。
2
样量：10μL(标准曲线Y＝12962X+49.026，R＝0.999)。
[0049] 肉苁蓉中松果菊苷含量测定：色谱柱：安捷伦TC C18(4.6×250mm，5μm)色谱柱；以甲醇为流动相A，以0.1％甲酸溶液为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长：330nm；流速：
-1 2
mL·min ；进样量：5μL(标准曲线Y＝7111.3X+19.938，R ＝0.9997)。
-1 2
mL·min ；进样量：5μL(标准曲线Y＝7111.3X+19.938，R ＝0.9997)。
[0050] 葛根中葛根素含量测定：色谱柱：安捷伦TC C18(4.6×250mm，5μm)柱；流动相：-1
以甲醇-水(25∶75)为流动相；检测波长为250nm。；流速：1.0mL·min ；进样量：10μL(标
2
准曲线Y＝43027X+174.87，R＝0.9998)
以甲醇-水(25∶75)为流动相；检测波长为250nm。；流速：1.0mL·min ；进样量：10μL(标
2
准曲线Y＝43027X+174.87，R＝0.9998)
[0051] 2.6提取液中活性成分的含量测定
[0052] 精确量取各待测夜25mL，过滤后按照2.5中各指标成分色谱条件进行含量测定，每个样品重复测定2次。
[0053] 2.7干膏量的测定
[0054] 取100mL提取液，先在95℃水浴锅上蒸干，再置于60℃减压干燥厢中干燥至称重，计算干膏得率。
[0055] 3结果与分析
[0056] 3.1水提取正交实验结果
[0057] 由于正交试验以6种成分为指标和干膏率结果共7项考察指标，选择综合加权评分法对试验结果进行方差分析。设定满分为100分，按照本发明中药组合物君臣佐使组方原则，赋予各药材指标成分的比重分数为：丹参含量20、黄连含量15、赤芍15、人参和三七15、葛根15、法半夏10、肉苁蓉10，在此基础上进行总加权评分，利用综合评分值(Pi)对试验结果进行方差分析:以Mij表示第j个指标成分下第i个指标成分的测定值，以各指标的最大值作为参照对同一指标各数据进行标准化处理；Dij表示第j个指标成分下的第i个测定值的标准化数据。Dij＝Mij/(Mj)max，以Ni表示第i次试验中干膏率的测定值，以干膏率的最大值作为参照对干膏率数据进行标准化处理，Ei＝Ni/(Ni)max，其中i＝1，
2，……，9；j＝1，2，……，6。综合评分Pi＝Σ比重分数×Dij+Σ10×Ei，将总分结果带入正交试验结果中，即得。结果分析见表1-3-表1-5。
2，……，9；j＝1，2，……，6。综合评分Pi＝Σ比重分数×Dij+Σ10×Ei，将总分结果带入正交试验结果中，即得。结果分析见表1-3-表1-5。
[0058] 表1-3 L9(34)水煎煮正交实验设计表与结果分析(综合指标)
[0059]
[0060] 表1-4水煎煮提取工艺参数均值响应表
[0061]
[0062] 表1-5水煎煮提取工艺参数方差分析表
[0063]
[0064]
[0065] 由实验结果可以看出：以综合指标进行方差分所得的最佳条件均是：A3B1C3，从这个结果来看影响水煎的显著因素是提取次数(P﹤0.05)，其次是加水量、提取时间，因此确定最佳工艺为A3B1C3，即加水量为药材的10倍，煎煮时间为0.5h，煎煮次数为3次。
[0066] 3.2水提取正交实验工艺验证
[0067] 为了进一步验证所选最优工艺为A3B1C3，按照处方30倍药量进行水提取工艺，药材提取及处理方法同2.1正交实验方法，各指标成分测定方法、结果分析及赋予权重同2.5，多指标成分分析见表1-6。
[0068] 表1-6水煎煮提取验证结果分析(综合指标)
[0069]
[0070] 由表1-6可知，三批试验数据之间无明显差异，最后确定水煎煮提取的最佳工艺条件为A3B1C3，即加水量10倍，提取时间为0.5h，提取3次。
[0071] 3.3醇沉正交实验测定结果
[0072] 采用多指标成分进行测定及分析，方法同2.5，并根据配方原则赋予各指标成分一定权重，结果见表1-7-表1-9。4
[0073] 表1-7 L9(3)醇沉正交结果分析(综合指标)
[0074]
[0075] 表1-8醇沉工艺参数均值响应表
[0076]
[0077] 表1-9醇沉工艺参数方差分析表
[0078]
[0079] 由表中实验结果可以看出：以多指标综合得分进行分析，所以最佳条件为A3B3C3，以极差R值和离均差平方和SS值为指标进行分析，影响干膏量较大的因素是药液相对密度B，其次是醇沉浓度A、醇沉时间C。各因素影响并不显著，因此从节省能源、有利于工业化生产的角度，选择条件A3B2C2进行下一步的验证实验。
[0080] 3.4醇沉工艺验证结果
[0081] 各指标成分测定方法、结果分析及赋予权重同表1-3，多指标成分分析见下表。
[0082] 表1-10水煎煮提取醇沉验证结果分析(综合指标)
[0083]
[0084] 由表可知，三批试验数据之间无明显差异，最后确定水提醇沉的最佳工艺条件为A3B2C2，即水提取液浓缩至相对密度约为1.12(20℃测)时，加入乙醇使含醇量达到70％，放置24h，离心，取上清液，回收乙醇，干燥即可。
[0085] 二、对工艺2的研究
[0086] 1.丹参、黄连醇提的正交试验
[0087] 将丹参、黄连药材按照处方半量进行乙醇提取，影响提取效果的因素有醇浓度、加醇量、提取时间、提取次数。
[0088] 醇浓度的选择：根据单因素考察结果，选择60％、70％、80％。加醇量的选择：取一定量的药材，加入6倍醇即可浸没药材，故选择加醇量为药材的6倍、8倍和10倍。提取时间的选择：考虑到工厂化生产时提取时间太短，有效成分提取不完全，提取时间太长，成本高，而且有效成分会受到破坏，故时间选择为0.5h、1h、1.5h。提取次数的选择：按常规方法选择，提取1次、2次、3次。
[0089] 按为了确定醇提的最佳工艺条件，我们拟以正交试验表L9(3*4)进行正交试验，从而确定最优工艺，因素水平见下表2-1。
[0090] 表2-1工艺2醇提取因素水平表
[0091]
[0092] 分别称取丹参粉末7.5g黄连粉末2.5g，按正交实验设计分别加入6、8、10倍60％、70％、80％浓度的乙醇溶液回流提取1次、2次、3次。过滤合并提取液，加溶剂定容至
500ml，测定，结果见表2-3。
500ml，测定，结果见表2-3。
[0093] 表2-2各试验中测试成分回归方程及线性范围
[0094]
[0095] 采取综合加权评分的方法对丹参黄连醇提工艺进行优选，丹参作为主药，丹酚酸B和丹参酮IIA的加权分分别为0.3，黄连4种生物碱总和与干膏得率的加权分分别为0.2，根据加权分等于每项含量除以最高含量乘以100，可以得出总的权重积分。
[0096] 表2-3工艺2正交实验设计表与结果分析
[0097]
[0098]
[0099] 表2-4方差分析结果
[0100]
[0101] 以丹酚酸B、丹参酮IIA、4种生物碱的提取率为考察指标，本实验通过极差和方差分析表明：因素B(加溶剂量)与因素D(提取次数)对提取效果影响非常显著，因素A(醇浓度)也有显著影响，因素C(提取时间)影响可忽略不计，故作为误差项。根据极差和方差分析结果，考虑较少的较低溶剂浓度和最短的提取时间，减少浓缩的麻烦，结合表2-4的结果，最终确定其最佳提取条件A2B3C1D3，即10倍量的70％乙醇提取3次，每次0.5h。
[0102] 2.丹参、黄连醇提正交最佳工艺验证试验
[0103] 称取处方中10倍量丹参、黄连，按最佳提取工艺10倍70％乙醇提取3次，每次0.5h，平行提取三份，供试液分别含量测定。
[0104] 表2-5醇提工艺验证试验
[0105]
[0106] 以最佳工艺进行提取，丹参和黄连中各主要成分的含量均较高。正交试验所得结论符合实际提取结果，且结果稳定可靠。
[0107] 3.赤芍、三七、葛根、法半夏、肉苁蓉、人参6味药水提
[0108] 3.1水提的正交试验
[0109] 将赤芍、三七、葛根、法半夏、肉苁蓉、人参按照处方半量进行水提取，影响提取效果的因素有加水量、提取时间、提取次数。
[0110] 同样，加水量的选择6倍、8倍和10倍，提取时间的选择0.5h、1h、1.5h，提取次数的选择1次、2次、3次。
[0111] 采用正交试验表L9(3*4)进行正交试验，从而确定最优工艺，因素水平见下表2-6。
[0112] 表2-6工艺2水提取因素水平表
[0113]
[0114] 分别称取赤芍粉末6g、三七粉末1.5g、葛根粉末7.5g、法半夏粉末3g、肉苁蓉粉末5g、人参粉末3g，按正交实验设计分别加入6、8、10倍水回流提取1次、2次、3次。过滤合并提取液，加溶剂定容至500ml，测定。结果见表2-8、2-9。
[0115] 表2-7各试验中测试成分回归方程及线性范围
[0116]
[0117] 采取综合加权评分的方法对水提工艺进行优选，芍药作为臣药，芍药苷和干膏得率的加权分分别为0.275，葛根、肉苁蓉、人参、三七4种药材作为佐药加权分为0.15，根据加权分等于每项含量除以最高含量乘以100，可以得出总的权重积分。
[0118] 表2-8工艺2正交水提实验设计表与结果分析
[0119]
[0120] 表2-9方差分析结果
[0121]
[0122] 以葛根素、毛瑞花糖苷和松果菊苷总量、4种皂苷总量、芍药苷的含量、干膏提取率为考察指标，按综合加权评分法判定，直观分析显示各因素作用可见C(提取次数)＞A(加水量)＞B(提取时间)，因素C有显著性差异，因素A和B的影响均无显著性差异，确定水提的最佳工艺为A2B2C3，即加8倍量水，提取3次，每次提1h。
[0123] 3.2水提的正交最佳工艺验证试验
[0124] 称取处方中30倍量赤芍、半夏、三七、葛根、肉苁蓉、人参，按最佳提取工艺即8倍量提取3次，每次1h，合并提取液，平行提取三份，供试液分别含量测定。
[0125] 表2-10正交水提工艺验证试验
[0126]
[0127] 以最佳工艺进行提取各主要成分的含量均较高。正交试验所得结论符合实际提取结果，且结果稳定可靠。
[0128] 3.3水提醇沉正交试验
[0129] 根据药物特性和结合生产实际，优选对醇沉影响较大的醇浓度、药液相对密度、醇沉时间，选用正交试验表L9(3*4)进行正交试验。
[0130] 表2-11工艺2醇沉因素水平表
[0131]
[0132] 按最佳提取工艺-8倍量提取3次，每次1h，合并提取液，提取液取1500ml分成3份(每份500ml)分别浓缩为相对密度1.06、1.12、1.18，分别取30ml加入不同体积的乙醇使醇沉浓度为50％、60％、70％，按正交试验表中的时间沉淀。
[0133] 采取综合加权评分的方法对水提工艺进行优选，芍药作为臣药，芍药苷的加权分为0.30，葛根、肉苁蓉、人参、三七4种药材作为佐药加权分为0.20，干膏得率的加权分为0.10，根据加权分等于每项含量除以最高含量乘以100，可以得出总的权重积分。
[0134] 表2-12工艺2醇沉实验设计表与结果分析
[0135]
[0136] 表2-13方差分析结果
[0137]
[0138] 以葛根素、毛瑞花糖苷和松果菊苷总量、4种皂苷总量、芍药苷的含量、干膏提取率为考察指标，按综合加权评分法判定，直观分析显示各因素作用可见B(相对密度)＞A(醇沉浓度)＞B(沉淀时间)，因素A、B、C的影响均无显著性差异，确定水提的最佳工艺为A2B2C2，即醇沉浓度60％，药液相对密度1.12，沉淀24h。
[0139] 3.4醇沉的正交最佳工艺验证试验
[0140] 量取300ml提取液，按最佳醇沉工艺即相对密度1.12醇沉浓度60％沉淀24h，平行三份，供试液分别含量测定。
[0141] 表2-14工艺2醇沉工艺验证试验(30ml)
[0142]
[0143] 三、对工艺3的研究
[0144] 1.丹参、黄连、人参、三七醇提
[0145] 1.1醇提部分正交试验
[0146] 将丹参、黄连、人参、三七药材按照处方半量进行乙醇提取，影响提取效果的因素有醇浓度、加醇量、提取时间、提取次数。
[0147] 醇浓度的选择：根据单因素考察结果，选择60％、70％、80％。加醇量的选择：为药材的6倍、8倍和10倍。提取时间的选择：为0.5h、1h、1.5h。提取次数的选择：为1次、2(3*4)次、3次。以正交试验表L9 进行正交试验，从而确定最优工艺，因素水平见下表3-1。
[0148] 表3-1工艺3醇提取部分因素水平表
[0149]
[0150] 分别称取丹参粉末7.5g黄连粉末2.5g、人参3g、三七1.5g，按正交实验设计分别加入6、8、10倍60％、70％、80％浓度的乙醇溶液回流提取1次、2次、3次。过滤合并提取液，加溶剂定容至500ml，测定。结果见表3-2。
[0151] 采取综合加权评分的方法对丹参黄连醇提工艺进行优选，丹参作为主药，丹酚酸B、丹参4种脂溶性成分总量和干膏得率的加权分分别为0.2，黄连4种生物碱总量加权分为0.25、4种皂苷总量加权分为0.15，根据加权分等于每项含量除以最高含量乘以100，可以得出总的权重积分。
[0152] 表3-2工艺3醇提部分的正交实验设计表与结果分析
[0153]
[0154] 表3-3方差分析结果
[0155]
[0156] 以丹酚酸B、丹参酮IIA、4种生物碱的提取率为考察指标，本实验通过极差和方差分析表明：因素D(提取次数)对提取效果影响显著，因素A(醇浓度)因素B(加溶剂量)对提取效果影响不显著，因素C(提取时间)影响可忽略不计，故作为误差项。根据极差和方差分析结果，考虑较少的较低溶剂浓度和最短的提取时间，减少浓缩的麻烦，结合表4的结果，最终确定其最佳提取条件A2B3C2D3，即10倍量的70％乙醇提取3次，每次1h。
[0157] 1.2工艺3醇提部分正交最佳工艺验证试验
[0158] 称取处方中15倍量丹参、黄连、人参、三七，按最佳提取工艺10倍70％乙醇提取3次，每次1h，平行提取三份，供试液分别含量测定。
[0159] 表3-4工艺3醇提部分工艺验证试验
[0160]
[0161] 以最佳工艺进行提取，丹参和黄连中各主要成分的含量均较高。正交试验所得结论符合实际提取结果，且结果稳定可靠。
[0162] 2赤芍、葛根、酒苁蓉、法半夏水提醇沉工艺研究
[0163] 2.1水提取正交实验设计
[0164] 影响中药成分提取效率的因素有很多，包括溶剂的选择、浸泡时间、提取时间、提取次数、溶剂用量等等，考虑到医院制剂的提取溶剂不能作改变，因此在不改变全水的条件下设计制剂的提取工艺。选择加水量为药材的6倍、8倍和10倍，提取时间选择为0.5h、1.0h、1.5h，提取次数按常规方法选择提取1次、2次、3次。
[0165] 为了确定全方水提的最佳工艺条件，我们拟以正交试验表L9(34)进行正交试验，从而确定最优工艺，因素水平见下表3-5。
[0166] 表3-5全方水提的因素水平表
[0167]
[0168] 2.2水提取工艺验证
[0169] 为了进一步验证所选最优工艺，按照处方15倍药量进行水提取工艺，每批样品645g，共3批样品，按照最优工艺进行提取，测定提取液中各成分的含量和出膏率。
[0170] 2.3醇沉工艺的优选
[0171] 为了提高本药的药物治疗效果、减少病人服用量，适用于大工业化生产，最大量除去大分子杂质而又使有效成分损失最小，选择水提后醇沉除杂的方法以除去大分子杂质。因素水平见表3-6
[0172] 表3-6醇沉因素水平表
[0173]
[0174] 取提取液浓缩，分别浓缩至密度为1.06、1.12和1.18，按照醇沉因素表进行正交试验，每个样品30mL，共9个样品。缓缓加入乙醇使含醇量分别达到50％，60％、70％，分别放置不同时间，过滤，定容，测定各指标成分及干膏量。
[0175] 2.4醇沉工艺的验证
[0176] 为了进一步验证所选醇沉最优工艺，分别取优选的相对密度的浓缩液，缓慢加入使达到一定醇沉浓度，放置一定时间，取上清液测定指标成分含量。
[0177] 2.5各活性成分或指标成分的色谱条件
[0178] 赤芍中芍药苷含量测定：色谱柱：安捷伦HC C18(4.6×250mm，5μm)色谱柱；流动-1 -1相：甲醇∶0.025mol·L 磷酸二氢钾＝46∶54；检测波长：230nm；流速：1.0mL·min ；进
2
样量：10μL(标准曲线Y＝12962X+49.026，R＝0.999)。
2
样量：10μL(标准曲线Y＝12962X+49.026，R＝0.999)。
[0179] 肉苁蓉中松果菊苷含量测定：色谱柱：安捷伦TC C18(4.6×250mm，5μm)色谱柱；以甲醇为流动相A，以0.1％甲酸溶液为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长：330nm；流速：
-1 2
mL·min ；进样量：5μL(标准曲线Y＝7111.3X+19.938，R ＝0.9997)。
-1 2
mL·min ；进样量：5μL(标准曲线Y＝7111.3X+19.938，R ＝0.9997)。
[0180] 葛根中葛根素含量测定：色谱柱：安捷伦TC C18(4.6×250mm，5μm)柱；流动相：-1
以甲醇-水(25∶75)为流动相；检测波长为250nm。；流速：1.0mL·min ；进样量：10μL(标
2
准曲线Y＝43027X+174.87，R＝0.9998)
以甲醇-水(25∶75)为流动相；检测波长为250nm。；流速：1.0mL·min ；进样量：10μL(标
2
准曲线Y＝43027X+174.87，R＝0.9998)
[0181] 3结果与分析
[0182] 3.1水提取正交实验结果
[0183] 由于正交试验以3种成分为指标和干膏率结果共4项考察指标，选择综合加权评分法对试验结果进行方差分析。设定满分为100分，按照本发明中药组合物君臣佐使组方原则，赋予各药材指标成分的比重分数为：赤芍25、葛根25、法半夏25、肉苁蓉25，在此基础上进行总加权评分，利用综合评分值(Pi)对试验结果进行方差分析:以Mij表示第j个指标成分下第i个指标成分的测定值，以各指标的最大值作为参照对同一指标各数据进行标准化处理；Dij表示第j个指标成分下的第i个测定值的标准化数据。Dij＝Mij/(Mj)max，以Ni表示第i次试验中干膏率的测定值，以干膏率的最大值作为参照对干膏率数据进行标准化处理，Ei＝Ni/(Ni)max，其中i＝1，2，……，9；j＝1，2，……，6。综合评分Pi＝Σ比重分数×Dij+Σ10×Ei，将总分结果带入正交试验结果中，即得。结果分析见表7-表9。
[0184] 表3-7 L9(34)水煎煮正交实验设计表与结果分析(综合指标)
[0185]
[0186] 表3-8水煎煮提取工艺参数均值响应表
[0187]
[0188] 表3-9水煎煮提取工艺参数方差分析表
[0189]
[0190] 由实验结果可以看出：以综合指标进行方差分所得的最佳条件均是：A3B2C3，从这个结果来看影响水煎的显著因素是提取次数(P﹤0.01)，其次是加水量、提取时间，结合生产要求确定最佳工艺为A3B1C3，即加水量为药材的10倍，煎煮时间为1.0h，煎煮次数为3次。
[0191] 3.2水提取正交实验工艺验证
[0192] 为了进一步验证所选最优工艺为A3B2C3，按照处方15倍药量进行水提取工艺，药材提取及处理方法同1.1正交实验方法，各指标成分测定方法、结果分析及赋予权重同1.5，多指标成分分析见表3-10。
[0193] 表3-10水煎煮提取验证结果分析(综合指标)
[0194]
[0195] 由表6可知，三批试验数据之间无明显差异(RSD 1.71％)，最后确定水煎煮提取的最佳工艺条件为A3B2C3，即加水量10倍，提取时间为1.0h，提取3次。
[0196] 3.3醇沉正交实验测定结果
[0197] 采用多指标成分进行测定及分析，并根据配方原则赋予各指标成分一定权重，结果见表11-表13。
[0198] 表3-11 L9(34)醇沉正交结果分析(综合指标)
[0199]
[0200] 表3-12醇沉工艺参数均值响应表
[0201]
[0202] 表3-13醇沉工艺参数方差分析表
[0203]
[0204] 由表中实验结果可以看出：以多指标综合得分进行分析，所以最佳条件为A2B3C2，以极差R值和离均差平方和SS值为指标进行分析，影响干膏量较大的因素是药液相对密度B(P﹤0.01)，其次是醇沉浓度A、醇沉时间C。各因素影响并不显著，因此从节省能源、有利于工业化生产的角度，选择条件A2B3C2进行下一步的验证实验。
[0205] 3.4醇沉工艺验证结果
[0206] 各指标成分测定方法、结果分析及赋予权重同表3-8，多指标成分分析见下表。
[0207] 表3-14水煎煮提取醇沉验证结果分析(综合指标)
[0208]
[0209] 由表可知，三批试验数据之间无明显差异(RSD 1.18％)，最后确定水提醇沉的最佳工艺条件为A2B3C2，即水提取液浓缩至相对密度约为1.18(20℃测)时，加入乙醇使含醇量达到60％，放置24h，离心，取上清液，回收乙醇，干燥即可。
[0210] 第四部分：效果验证
[0211] 结扎大鼠冠脉前降支诱导的心肌梗死模型是筛选和评价心肌保护药物的常用动物模型，为了验证本发明中药组合物治疗冠心病的效果，发明人进行了如下实验研究。
[0212] 1.材料和方法
[0213] 1.1主要材料和仪器
[0215] 受试药物：分别按本发明三种工艺(即实施例1、2、3)制得的中药组合物。
[0216] 1.2实验动物和分组
[0217] Wistar大鼠150只，雄性，体质量200±20g，适应性饲养3天，随机分为假手术组、模型组、工艺1组(2.2g提取物/kg/d)、工艺2组(2.2g提取物/kg/d)、工艺3组(2.2g提取物/kg/d)。假手术10只，其余每组35只大鼠。假手术组和模型组灌胃0.5％CMCC-Na液10ml/kg/d，其它各受试物混悬于0.5CMCC-Na液中，给药剂量为70kg体重成人等效剂量(按体表面积折算)。按提取率折算成提取物重量，灌胃体积为10ml/kg/d，灌胃1h后进行冠脉结扎手术。术后继续灌胃给药，直至实验结束。
[0218] 1.3急性心肌梗死大鼠模型的制备
[0219] 2％戊巴比妥钠30～45mg/kg腹腔注射麻醉后，于第3～4肋间开胸，暴露心脏，在左心耳下缘距肺动脉弓根部2mm处结扎，结扎深度<1mm，宽度1.5mm，裸眼观察见结扎线下方心肌颜色变灰白搏动减弱为结扎成功。假手术组只穿线不结扎，其它操作同模型组。手术完毕后皮下注射青霉素溶液40万u/只，连续2天。
[0220] 1.4检测指标
[0221] 术后7天、28天B超检测心功能。术后29天，10％水合氯醛腹腔注射麻醉，取血，取心脏，用4％甲醛固定，将结扎线下的心脏均匀分成3部分，切成4μm厚片，HE及MASSON染色，观察心脏组织结构改变及纤维化程度。计算坏死心肌占左心室面积的百分比，计算心肌纤维化的面积占左心室面积的百分比。取全血分离血清-20℃保存全自动生化分析仪检测肌酐(Cr)和尿素氮(Bun)含量
[0222] 1.5统计方法
[0223] 采用SPSS17.0统计软件，方差齐性用单因素方差分析(one-way anova)方差不齐时采用非参数检验
[0224] 2.结果
[0225] 表4-1本发明不同工艺不同剂量提取物对心梗后不同时间大鼠心功能参数EF值的影响
[0226]
[0227] 注：▲▲P<0.01与正常组比较；***p<0.001与模型组比较，**p<0.01与模型组比较
[0228] (续表)
[0229]
[0230]
[0231] 注：**p<0.01与模型组比较；*p<0.05与模型组比较
[0232] 3.结论
[0233] 本发明3种工艺制备的中药组合物对心肌梗死缓解期心脏均有确切的保护作用，其中工艺1的效果最好。
具体实施方式
[0234] 以下各实施例所制得的中药组合物，均可不同程度地实现本发明所声称的效果。
[0235] 实施例1：
[0236] 处方：丹参1500g、黄连500g、人参600g、三七300g、葛根1500g、赤芍1200g、酒苁蓉1000g、法半夏600g。
[0237] 制法：将全部原料药煎煮提取3次，每次加水10倍量、煮沸0.5小时，提取液合并后浓缩至相对密度1.12(20℃测)，加入乙醇至含醇量达70％，放置24小时，过滤，滤液回收乙醇，余液继续浓缩成稠膏，即得。
[0238] 实施例2：
[0239] 处方：同实施例1。
[0240] 制法：取原料药，将丹参、黄连一起用70％乙醇提取3次，每次加10倍量乙醇溶液、提取0.5小时，合并提取液，回收乙醇，得余液，备用；将其余原料药一起煎煮提取3次，每次加水8倍量、煮沸1小时，提取液合并后浓缩至相对密度1.12(20℃测)，加入乙醇至含醇量达60％，放置24小时，过滤，滤液回收乙醇，得余液；将上述两种余液合并，继续浓缩成稠膏，即得。
[0241] 实施例3：
[0242] 处方：同实施例1。
[0243] 制法：取原料药，将丹参、黄连、人参和三七一起用70％乙醇提取3次，每次加10倍量乙醇溶液、提取1小时，合并提取液，回收乙醇，得余液，备用；将其余原料药一起煎煮提取3次，每次加水10倍量、煮沸1小时，提取液合并后浓缩至相对密度1.18(20℃测)，加入乙醇至含醇量达60％，放置24小时，过滤，滤液回收乙醇，得余液；将两种余液合并，继续浓缩成稠膏，即得。
[0244] 实施例4：
[0245] 处方：丹参1000g、黄连200g、人参300g、三七100g、葛根1000g、赤芍700g、肉苁蓉500g、法半夏300g。
[0246] 制法：将全部原料药煎煮提取3次，每次加水10倍量、煮沸0.5小时，提取液合并后浓缩至相对密度1.10(20℃测)，加入乙醇至含醇量达60％，放置24小时，过滤，滤液回收乙醇，余液继续浓缩成稠膏，干燥、粉碎，加入适宜的辅料，制成颗粒剂。
[0247] 实施例5：
[0248] 处方：丹参2000g、黄连800g、人参900g、三七500g、葛根2000g、赤芍1700g、肉苁蓉1500g、法半夏900g。
[0249] 制法：将全部原料药煎煮提取3次，每次加水10倍量、煮沸0.5小时，提取液合并后浓缩至相对密度1.20(20℃测)，加入乙醇至含醇量达80％，放置24小时，过滤，滤液回收乙醇，余液继续浓缩成稠膏，干燥、粉碎，加入适宜的辅料，制成颗粒剂。
[0250] 实施例6：
[0251] 处方：丹参1200g、黄连300g、人参400g、三七200g、葛根1200g、赤芍900g、肉苁蓉700g、法半夏400g。
[0252] 制法：取原料药，将丹参、黄连一起用60％乙醇提取2次，每次加10倍量乙醇溶液、提取0.5小时，合并提取液，回收乙醇，得余液，备用；将其余原料药一起煎煮提取2次，每次加水8倍量、煮沸1小时，提取液合并后浓缩至相对密度1.10(20℃测)，加入乙醇至含醇量达50％，放置24小时，过滤，滤液回收乙醇，得余液；将上述两种余液合并，继续浓缩成稠膏，干燥、粉碎，加入适宜的辅料，制成片剂。
[0253] 实施例7：
[0254] 处方：丹参1800g、黄连700g、人参800g、三七400g、葛根1800g、赤芍1500g、肉苁蓉1300g、法半夏800g。
[0255] 制法：取原料药，将丹参、黄连一起用80％乙醇提取3次，每次加8倍量乙醇溶液、提取0.5小时，合并提取液，回收乙醇，得余液，备用；将其余原料药一起煎煮提取3次，每次加水10倍量、煮沸1小时，提取液合并后浓缩至相对密度1.20(20℃测)，加入乙醇至含醇量达70％，放置24小时，过滤，滤液回收乙醇，得余液；将上述两种余液合并，继续浓缩成稠膏，干燥、粉碎，加入适宜的辅料，制成片剂。
[0256] 实施例8：
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