本发明涉及眼用阳离子水包油型乳剂，其具有长期保持为正的ζ电 势。

“眼用乳剂”指适合眼部应用的并且可能具有药物作用或美容作用 的乳剂。

本发明的乳剂具有长时间保持为正的ζ电势，就是说，所述乳剂是 长期稳定的。

根据产品在指明的期限内及其储存和使用期间(即，其货架时间)，其 保持与制造时相同的特性和特征的程度定义稳定性。稳定性测试的目的 是提供药物物质或药物产品的质量在受到诸如温度、湿度和光等多种环 境因素的影响下，是如何随时间变化的证据，并且使得推荐储存条件、 建立重复测试周期和货架时间成为可能。

尽管实时稳定性研究包括评价那些最终影响药物有效期的因素，但 是这些研究费时且费用高昂。通常，使用加速的稳定性研究来预测药物 产品的货架时间。这些加速研究将所述系统置于温度40℃下至少6个月。

为了通过建立降解途径并且鉴定可能的降解产物来了解所述系统的 内在稳定性机理，并且因此调整使用的分析过程，申请人开发了应力稳 定性测试，在该测试期间，乳剂在指定时长期间经受温度80℃的极端条 件。

然后使用数学外推，例如阿伦尼乌斯方程计算产品的预测货架时间。 阿伦尼乌斯方程在药物稳定性测试中的应用是简单明了的。在等温法中， 将被研究的系统储存在若干个高温下，其它条件固定。过度的热暴露加 速降解，并且因此使得能够在较短的时间内确定速率常数。

最近几年，水包油型乳剂，特别是具有亚微细粒大小的液滴的乳剂(上 下文中称为“亚微细粒乳剂”)的重要性不断增加，特别是作为输送疏水 药物的介质。

然而，稳定乳剂，包括亚微细粒乳剂，可能是本领域技术人员关心 的问题。稳定乳剂的一种已知方法是赋予液滴表面静电荷，其导致小滴 排斥和较少的小滴合并。由于它们的离子特性和偶极特性，分散在溶液 中的胶体颗粒带电。本领域中将此电荷称为“ζ电势”，此电荷可以是负 的或正的，负的导致阴离子乳剂，正的产生阳离子乳剂(Klang et al.，Pharm. Dev.Technology 2000，5，521-532)。ζ电势是颗粒间排斥或吸引的程度 (Washington，Adv.Drug Deliv.Reviews 1996，20：131-145)的衡量。

文献中报道的亚微细粒乳剂制剂通常基于卵磷脂、非离子或离子表 面活性剂和诸如蔬菜油等油的组合，所述卵磷脂是从天然来源获得的具 有不同组成的磷脂的混合物。卵磷脂通常包含主要组分磷脂酰胆碱、带 负电的磷脂和带正电的磷脂，磷脂酰胆碱在很宽的pH范围内是中性的， 带负电的磷脂例如磷脂酰丝氨酸和磷脂酸，带正电的磷脂例如磷脂酰乙 醇胺。作为它们的组成的结果，在大多数现有的基于磷脂的乳剂中，胶 体颗粒带负电。加入足量的阳离子剂可以反转此表面电荷并且产生正电 胶体，如它们的ζ电势所反映的，其中所述阳离子剂例如硬脂胺、油胺、 壳聚糖、{N-[i-(2，3-二油基氧基)丙基]-N，N，N-三甲基铵(DOTAP)或其它 (Rabinovich-Guilatt et al.，Chem Phys Lipids 2004，131：1-13；Liu et al.， Pharm.Res.1996，13：1856-1860，Klang et al.，Int.J.Pharm.1996， 132：33-44)。

在所有的含磷脂胶体中(例如脂质体或乳剂)，观察到长时间后ζ电势 显著下降，这是由于磷脂水解成为游离脂肪酸(Zuidam and Crommelin，J Pharm Sci 1995，84：1113-1119)，其可以成为给药后毒性副作用的来源 (Varveri et al.，J.Photochem.Photobiol.A 1995，91：121-124)。在阳离子磷脂 胶体中，ζ电势的下降证明该系统不是完全化学稳定的(Tamilvanan et al.， STP Pharma Sciences 2001，11：421-426))，并且在一些情况下可能导致制 剂的物理不稳定，该物理不稳定由液滴大小所反映。

例如，在蓖麻油：豆油相中含有0.25-1.5％壳聚糖、0-1.5％磷脂、0-2.5％ 泊洛沙姆(poloxamer)的壳聚糖阳离子制剂中，只有含有泊洛沙姆和壳聚 糖的制剂在高压灭菌中显示良好的稳定性，而壳聚糖和磷脂的共同存在 导致该乳剂在灭菌中的不稳定。根据作者，带正电的壳聚糖和带负电的 磷脂之间的相互作用导致由油滴的合并引起的围绕油滴的乳化膜受损 (Int.J Pharm.1999，183：175-84)。进一步评价这些乳剂的抗微生物活性， 以用于粘膜或肠胃外给药(Eur.J.Pharm.Biopharm.2002，53：115-23)。

特别感兴趣的是以下关于用于局部眼部给药的阳离子型乳剂的专 利：

美国专利第6,007,826号公开了水包油型乳剂，其包含具有带正电的 界面膜的胶体颗粒。该界面膜由阳离子型脂质(0.05-3％重量比)、磷脂 (0.5-3％)和非离子型表面活性剂(0.05-3％)组成，所述阳离子型脂质例如 C10-C14伯烷基胺(公开的是硬脂胺或油胺)、C10-C24伯链烷醇胺或三甲基 甘氨酸胆固醇酯(cholesterol betainate)，所述非离子型表面活性剂选自泊 洛沙姆、泰洛沙泊(tyloxapol)、聚山梨醇酯和聚氧乙烯脂肪酸酯。保持油 的浓度在3-20％的范围内。美国专利第6,007,826号的乳剂ζ电势对热应 力不稳定(参见Tamilvanan et al.，STP Pharma Sciences 2001，11：421-426和 下文给出的实施例12)。

Benita和Lambert的美国专利第6,656,460号描述了通过局部使用阳 性亚微细粒乳剂治疗干眼疾病状态的方法，所述乳剂含有0.1-0.5％的磷 脂、0.5-2％的诸如泊洛沙姆的乳化剂以及苯扎氯铵作为防腐剂。因为这 些制剂含有0.1至0.5％重量比的磷脂，所以预期它们的ζ电势在80℃时 下降(参见实施例12)。

尽管一些现有乳剂可能显示良好的液滴大小的物理稳定性，但是依 然需要物理稳定的阳离子型眼用乳剂，该乳剂不含有足量的任何怀疑影 响长时间ζ电势的物质，同时显示眼部给药的良好耐受性。

怀疑影响ζ电势的物质可能是磷脂，以及经过储存成为带负电的任 何物质。

影响长时间ζ电势的物质的含量必须是，在任何时间，乳剂中正电 荷的量在负电荷的量之上。

本发明中长时间(overtime)的意思是超过1年的持续时间，优选超过 2年，更优选超过3年。在本发明中，如果乳剂满足任何测试A至D的 要求，那么相信所述乳剂具有长时间不受影响的ζ电势。

本发明中的“良好耐受性”指治疗益处和眼部不舒适的比例是患者 所接受的，优选与安慰剂或0.9％NaCl溶液相似。

通常接受为了显示良好的眼部耐受性，制剂中的阳离子含量不应超 过0.1％，优选不超过0.05％，并且更优选不超过0.03％。显示0.1％或0.3％ w/v的诸如硬脂胺或油胺的伯胺对于眼部给药是安全的(Klang et al.，J. Pharm.Pharmacol.1994，46：986-993)。

健康监管机构允许将浓度高至约0.03％的诸如苯扎氯铵、苯度溴铵和 苄索氯铵的季胺用于眼部给药(Furrer et al.，Eur.J.Pharm.Biopharm.2002， 53：263-280)。尽管在乳剂中存在重要含量的阳离子剂可能通过消除出现 的负电实体来长时间成功保持稳定的正ζ电势(参见实施例13)，这些乳剂 与用于眼部组合物的通常推荐不相容。减少阳离子浓度的尝试可能导致 该乳剂的不稳定(参见实施例14)。

本发明的目的是提出亚微细粒眼用乳剂，其包括最小量的阳离子剂 并且依然长时间具有和保持稳定的正ζ电势。

本发明涉及眼用水包油型乳剂，其包含胶体颗粒，该胶体颗粒具有 被界面膜包围的油核，所述乳剂包含至少一种阳离子剂和至少一种非离 子表面活性剂，所述乳剂具有正的ζ电势并且满足ζ电势稳定性测试A、 B、C和/或D的要求。

本发明的乳剂是如上所定义的长时间物理稳定的，并且在如测试A、 B、C和/或D所述的特定测量条件下保持正的ζ电势。

依照本发明，乳剂不含有足量的怀疑影响长时间ζ电势的任何物质。 有利地，本发明的乳剂不含有磷脂。

ζ电势

ζ电势衡量混悬液中任何颗粒所展示的物理性质。可以使用ζ电势预 测混悬液在不同环境中的行为、优化混悬液的配方以及预测长时间稳定 性。

为了避免乳剂液滴之间合并并且形成逐步增加尺寸的聚集物，需要 赋予颗粒排斥力。赋予胶体系统排斥力的一种方法是通过静电或电荷稳 定。静电或电荷稳定具有通过简单改变系统中离子浓度来稳定系统的益 处。这是可逆的和便宜的过程。

根据颗粒的性质及其周围介质，所述表面电荷可以有许多来源，但 是最重要的机理是表面基团的电离或带电离子的吸收。

极性液体中颗粒间的相互作用不受颗粒表面电势的支配，但是受到 该颗粒及其相关离子的有效电势的支配。为了利用分散的静电控制，必 须测量颗粒的ζ电势而不是其表面电荷。带电颗粒吸引分散剂中相反电 荷的离子。靠近表面的离子被强烈结合；那些距离较远的形成更加分散 的区域。在此区域中有一想象的边界，称为滑动面，其中颗粒和离子作 为单一实体。滑动面处的电势被称为ζ电势。很久以来已经认识到ζ电势 是胶体颗粒间相互作用程度的非常好的指示，并且通常使用对ζ电势的 测量来评价胶体系统的稳定性。特定系统中测得的ζ电势依赖于该表面 的化学，并且还依赖于该表面与其周围环境相互作用的方式。因此，必 须总是在良好限定的环境中(具体来说pH和离子强度)研究ζ电势。

电泳淌度

颗粒表面存在电荷的重要后果是它们与施加的电场相互作用。这些 作用被总称为动电效应(electrokinetic effect)。如果诱导悬浮在液体中的颗 粒在施加电场的影响下迁移，那么其被更具体地称为电泳。当横跨电解 液施加电场时，悬浮在该电解液中的带电颗粒被吸引向相反电荷的电极。 作用在颗粒上的粘滞力倾向于对抗这种迁移。当在这两种相反的力间达 到平衡时，颗粒以等速度移动。该速度依赖于电场强度或电压梯度、介 质的介电常数、介质的粘度和ζ电势。单位电场中颗粒的速度被称为其 电泳淌度。ζ电势通过亨利方程与电泳淌度相关：

                    UE＝2εz f(Ka)

                         3η

其中UE＝电泳淌度，z＝ζ电势，ε＝介电常数，η＝粘度并且f(Ka)＝亨 利函数。

ζ电势的电泳确定最经常在水性介质和中等电介质浓度中进行。此种 情况下f(Ka)是1.5，并且其被称为斯莫路柯维斯基近似值。因此从淌度 计算ζ电势对于附和斯莫路柯维斯基模型的系统是简单明了的，即分散 在含有多于10-3摩尔盐的电解液中的大于0.2微米的颗粒。对于低介电 常数介质(例如非水性介质)中的小颗粒，f(Ka)为1.0并且能够进行同样简 单的计算。这被称为休克尔近似值。

测试A、B、C和D

测试A在于测量热应力条件下乳剂ζ电势的稳定性。

在T＝0时，即乳剂一制备后就进行实验，测量乳剂的ζ电势，将所 得的值称为Z0。在80℃下储存含有5至10ml乳剂的10ml有效容量并 在氮气气氛下密封的(无气泡)玻璃小瓶(I型)。

然后在T＝15小时时，测量ζ电势Z15h。

然后计算值δA＝Z15h-Z0。

对于ζ电势的每一次测量，如下进行操作：

在配有合适软件并用所提供的标准校准的诸如Malvern Zetasizer 2000(Malvern Instruments，UK)的装置中通过电泳淌度确定乳剂液滴表面 的ζ电势。

如果需要，在双蒸馏水中稀释乳剂以便得到可以进行最佳颗粒检测 的散射强度。在零差检测中，样品计数率应为100至1000KCps(如果使 用外差检测，应该推导出参比束的贡献)。在25℃下，使用150mV的恒 压电池进行三次连续测量。通过斯莫路柯维斯基方程，使用水的介电常 数和粘度将电泳淌度转化为ζ电势值。测量值对应三次所得数值的平均 值。

如果δA低于测量的标准误，优选低于10mV，并且更优选低于5mV， 那么认为所述乳剂满足ζ电势稳定性测试A。

根据优选实施方案，本发明的眼用乳剂满足ζ电势稳定性测试B。

测试B与测试A相似，除了在80℃下储存乳剂48小时，48小时后 测量ζ电势Z2并且计算δB＝Z2-Z0。如果δB低于测量的标准误，优选 低于10mV，并且更优选低于5mV，那么认为所述乳剂满足ζ电势稳定 性测试B。

根据本发明的更优选实施方案，本发明的眼用乳剂满足ζ电势稳定 性测试C。

测试C与测试A相似，除了在80℃下储存乳剂7天，在第7天测量 ζ电势Z7并且计算δC＝Z7-Z0。如果δC低于测量的标准误，优选低于 10mV，并且更优选低于5mV，那么认为所述乳剂满足ζ电势稳定性测 试C。

根据本发明的更优选实施方案，本发明的眼用乳剂满足ζ电势稳定 性测试D。

测试D与测试A相似，除了在80℃下储存乳剂14天，在第14天 测量ζ电势Z14并且计算δD＝Z14-Z0。如果δD低于测量的标准误，优 选低于10mV，并且更优选低于5mV，那么认为所述乳剂满足ζ电势稳 定性测试D。

根据本发明的一实施方案，基于乳剂总重量，阳离子剂的浓度为 0.001％至0.1％重量比，优选0.002％至0.05％重量比，并且更优选0.003％ 至0.03％重量比(w/w)。

优选地，基于乳剂总重量，油的浓度不高于7％重量比，优选约0.5％ 至5％重量比，并且更优选约1％至3％重量比(w/w)。

在本发明的另一实施方案中，阳离子剂/油的重量比为0.0025至0.06， 优选0.005至0.04，优选从0.01至0.02。

在本发明的乳剂中，基于乳剂总重量，非离子剂的浓度低于1％重量 比，优选0.01％至0.6％(w/w)。

在本发明的眼用水包油型乳剂中，所述阳离子剂选自C10-C24伯烷基 胺、叔脂族胺、季铵化合物、阳离子型脂质、氨基醇、双胍盐、阳离子 聚合物以及它们中两个或多个的混合物。

所述伯胺优选自油胺和硬脂胺；所述叔脂族盐可以是十二烷基二甲 基胺(dimethyl lauramine)或二乙醇胺，所述氨基醇可以是三(羟甲基)氨基 甲烷。

在一优选实施方案中，所述阳离子剂是季铵化合物，其优选自苯扎 卤铵、劳拉卤铵(lauralkonium halide)、溴棕三甲铵、十六碳烷基三甲铵卤 化物、十四烷基三甲铵卤化物、十二烷基三甲铵卤化物、十六烷三甲基 卤化铵、苄索卤铵、behenalkonium卤化物(behenalkonium halide)、西他 卤铵、cetethyldimonium卤化物(cetethyldimonium halide)、西吡卤铵、苯 度卤铵、氯丙烯基乌洛托品卤化物(chlorallyl methenamine halide)、卤化十 四烷基二甲基苄基铵、卤化十八烷基二甲基苯基铵(stearalkonium halide) 或它们中两个或多个的混合物，卤化物优选为氯化物或溴化物。优选地， 所述阳离子剂选自苯扎氯铵、劳拉氯铵、苯度溴铵、benzethenium氯化物 (benzethenium chloride)、溴化十六碳烷基三甲铵、溴化十四碳烷基三甲铵、 溴化十二烷基三甲铵或它们中两个或多个的混合物。

所述阳离子聚合物可以是壳聚糖，所述阳离子型脂质可以是1，2-二油 基-3-三甲基铵-丙烷，1，2-二油基-sn-甘油基-磷脂酰乙醇胺、阳离子型糖 神经鞘脂或阳离子型胆固醇衍生物。

双胍盐的实例可以选自氯己定及其盐、聚己缩胍、苯乙双胍、烷基 双胍或它们中两个或多个的混合物。

可以被包括在本发明乳剂中的非离子表面活性剂的实例是泰洛沙 泊，泊洛沙姆，例如Pluronic F68LFTM或Lutrol F68、Pluronic L-G2LFTM和 Pluronic L62DTM(BASF Wyandotte Corp.，Parsippany，N.J.，USA)，聚山梨 醇酯，例如吐温20和吐温80，聚氧乙烯蓖麻油衍生物，山梨糖醇酐酯， 硬脂酸聚烃氧基酯以及它们中两个或多个的混合物。

优选地，本发明的水包油型乳剂包含苯扎氯铵作为阳离子剂以及泰 洛沙泊作为非离子表面活性剂之一。

根据另一优选方式，所述乳剂包含苯扎氯铵作为阳离子剂以及泰洛 沙泊和泊洛沙姆作为非离子表面活性剂。

根据本发明，胶体颗粒具有等于或小于1μm的平均颗粒大小，优选 等于或小于300nm，更优选在100至250nm的范围内。

所述乳剂的油相可能包含选自以下的一种或多种成分：植物油(即豆 油、橄榄油、芝麻油、棉籽油、蓖麻油、甜杏仁油)、矿物油(即凡士林和 液态石蜡)、中链甘油三酯(MCT)(即甘油三酯油，其中碳氢链具有约8-12 个碳原子)、油状脂肪酸、豆蔻酸异丙酯、油状脂肪醇、山梨醇和脂肪酸 的酯、油状蔗糖酯以及一般来说任何生理耐受的油状物质。

油相的主要成分优选为植物油和/或MCT。在由乳剂运送的疏水物质 在油相中不充分可溶的情况下，可以包括脂肪酸和脂肪醇。

可以用于本发明乳剂的MCT油的实例是TCMTM(Societe des Oleagineux，France)、Miglyol 812TM(Dynamit Novel，Sweden)。

可以存在于本发明乳剂中的其它可选化合物例如是阴离子表面活性 剂和各种添加剂，例如渗透压调节剂，例如蔗糖、甘油或甘露糖醇；抗 氧化剂，例如α-生育酚、硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、无水硫代硫酸钠、柠 檬酸一水合物、棕榈酸抗坏血酸酯和抗坏血酸；或防腐剂，例如乙基汞 硫代水杨酸、氯丁醇、苄醇、苯氧基乙醇、苯乙醇、山梨酸、EDTA和甲 基-、乙基-或丁基对羟基苯甲酸酯；所述可选化合物可能只能以不损害ζ 电势稳定性的特定浓度加入。

阴离子表面活性剂的实例是意图用于药物的阴离子脂质，例如磷脂。 可以用于本发明乳剂的磷脂的实例是卵磷脂类；Epikuren 120TM(Lucas Meyer，Germany)，其为约70％的磷脂酰胆碱和12％的磷脂酰乙醇胺以及 约15％的其它磷脂的混合物；Ovothin 160TM或Ovethin 200TM(Lucas Meyer，磷脂酰胆碱，18％的磷脂酰乙醇胺和12％的其它磷脂；纯化的磷 脂混合物，例如从蛋黄中获得的那些；Lipoid E80TM(Lipoid AC， Ludwigshafen，Germany)，其为磷脂混合物，包含约80％的磷脂酰胆碱、 8％的磷脂酰乙醇胺、3.6％的非极性脂以及约2％的神经鞘髓磷脂。

本发明乳剂的水相中优选的pH是4.0-8.5，6.0-8.0是特别优选的。

本发明还涉及制备本发明的眼用水包油型乳剂的方法，所述乳剂包 含具有被界面膜包围的油核的胶体颗粒，所述乳剂包含至少一种阳离子 剂、至少一种非离子表面活性剂，所述数据具有正的ζ电势并且满足ζ 电势稳定性测试A的要求，所述方法包含剪切混合以及随后高压均匀化 通过混合水相和油相得到的粗乳剂的步骤。

本发明的眼用乳剂可以被组方成用于许多药物应用的、具有不同疏 水活性成分的药物组合物。也可以用这些乳剂进行亲水剂的给药。

依照本发明，所述乳剂可以被组方以用于所述活性成分的眼部给药。 在所述水包油型乳剂中，不溶于水的药物溶于内部油相中，由此保持优 选的分子状态。此外，由于油造成的视线模糊被外部相中的水减到最小。 另外，可以调节油相中的药物浓度以最大化热力学活性，因此增强药物 向更深层组织的渗透。

因此，本发明提供本发明的水包油型乳剂在制备用于预防或治疗眼 部疾病的药物中的用途。

本发明还涉及眼用制剂，其包含本发明的水包油型乳剂和药物可接 受载体，其选自滴眼剂组合物、眼软膏剂、眼用凝胶剂。

所述制剂还可以在药物可接受载体之中或之内包含药物有效量的活 性成分。

本发明还提供治疗眼部疾病状态的方法，其包括包含如上所定义的 水包油型乳剂的药物组合物。

本发明还涉及本发明的水包油型乳剂或如上所定义的眼用组合物在 制备治疗眼部疾病状态的药物中的用途。

使用本发明的阳离子乳剂可以预防或治疗多种眼部疾病状态，例如 青光眼、眼炎症状态，例如角膜炎、眼色素层炎、眼内炎症、过敏和干 眼综合征眼部感染、眼部过敏、眼部感染、癌生长、源自角膜的新血管 生长、视网膜水肿、黄斑点水肿、糖尿病性视网膜病变、早产儿视网膜 病变、视网膜退变疾病(黄斑变性、视网膜营养不良)、与神经胶质增生相 关的视网膜疾病。

适合向眼部输送的一些物质可以包括，例如，抗生素(例如四环素、 氯四环素、杆菌肽、新霉素、多粘菌素、短杆菌肽、头孢氨苄、土霉素、 氯霉素、卡那霉素、利福平、妥布霉素、庆大霉素、环丙沙星、氨基糖 苷类(aminosides)、红霉素和青霉素、喹诺酮、头孢他啶、万古霉素亚胺 培南)；抗真菌剂，例如两性霉素B和咪康唑；抗细菌药，例如磺胺类、 磺胺嘧啶、磺胺醋酰、磺胺甲二唑和磺胺异噁唑、呋喃西林和丙酸钠； 抗病毒剂，例如碘脱氧尿苷、三氟胸苷、阿昔洛韦、更昔洛韦、西多福 韦和干扰素；抗菌剂，例如呋喃西林和丙酸钠；非抗生素的、抗感染、抗 细菌或抗微生物药物，例如基于碘的制剂三氯生、氯己定；抗变应性剂， 例如色甘酸钠、安他唑啉、噻吡二胺、氯苯那敏、西替利嗪、新安替根 和非尼拉敏；抗增殖剂，例如沙利度胺；合成糖皮质激素和盐皮质激素， 以及更一般地源自胆固醇代谢的激素形式(孕酮，雌激素，诸如睾丸激素 的雄性激素、DHEA及其衍生物)；抗炎药，例如氢化可的松、醋酸氢化 可的松、地塞米松、地塞米松21-磷酸、fluorocinolene、甲羟松、醋酸泼 尼松龙、luoromethalone、曲安西龙和曲安奈德及它们的衍生物；非类固醇 类抗炎药，例如水杨酸盐或酯、吲哚美辛、布洛芬、双氯芬酸、氟比洛 芬和吡罗昔康，以及诸如罗非昔布的COX2抑制剂，双氯芬酸、尼美舒 利、奈帕芬胺；抗肿瘤药，例如卡莫司汀、顺铂、丝裂霉素和氟尿嘧啶； 免疫药物，例如疫苗和免疫刺激剂；胰岛素、降钙素、甲状旁腺激素和 肽和下丘脑释放因子；β肾上腺素受体阻滞药，例如马来酸噻吗洛尔、盐 酸左布诺洛尔和盐酸倍他洛尔、噻吗洛尔-碱、倍他洛尔、阿替洛尔、肾 上腺素、地匹福林(dipivalyl)、oxonolol、乙酰唑胺-碱和醋甲唑胺；细胞 因子、白介素和生长因子(生长因子，例如表皮生长因子、成纤维细胞生 长因子、血小板衍生的生长因子、转化生长因子β、睫状神经营养因子、 神经胶质衍生的神经营养因子、NGF、EPO、PlGF)；抗体或抗体片断、 寡核酸适配体(oligoaptamers)、核酸适配体(aptamers)和基因片断(寡核苷 酸、质粒、核酶、小干扰RNA、核酸片断、肽、反义序列)；免疫抑制剂 例如环孢菌素、西罗莫司和他克罗姆，免疫调节剂，例如环磷酰胺、他 莫昔芬；抗血栓形成和血管扩张剂，例如rtPA、尿激酶、纤维蛋白溶酶、 一氧化氮供体；抗氧化剂，例如叶黄素、维生素类和/或它们的衍生物；和 /或它们眼可接受的盐。

根据一优选实施方案，所述活性物质是至少一种免疫抑制剂，优选 选自环孢菌素，优选环孢菌素A、他克罗姆和西罗莫司。优选地，在这 些乳剂中，免疫抑制剂的含量为0.01％至0.4％，优选0.05％至0.2％(w/w)。 优选地，这些乳剂不含有磷脂。优选地，本发明的这些乳剂在包含MCT 或由MCT组成的介质中含有环孢菌素、西罗莫司和/或他克罗姆。虽未 被理论证实相关，但使用MCT，一种从全部中选出的植物油，可以提供 本发明眼用乳剂的稳定性和生物利用度，所述乳剂含有至少一种免疫抑 制剂，优选为环孢菌素A。已经发现MCT具有环孢菌素的良好溶解特性， 这可能在观察到的提高的本发明乳剂中的环孢菌素生物利用度中起作 用。优选地，MCT的含量为乳剂的0.5％至4％w/w。优选地，本发明的 乳剂含有免疫抑制剂以及MCT和泰洛沙泊，免疫抑制剂优选自环孢菌 素，优选环孢菌素A、他克罗姆和西罗莫司。优选地，泰洛沙泊的含量 从乳剂的0.05％至0.5％w/w。优选地，免疫抑制剂与油的重量比为0.0125 至0.1。在所述乳剂的一特定实施方案中，免疫抑制剂与油的重量比为 0.083至0.1。在所述乳剂的另一特定实施方案中，免疫抑制剂与油的重 量比为0.00125至0.05。含有至少一种免疫抑制剂的本发明乳剂对于治疗 干眼疾病状态是特别有用的，所述干眼疾病状态特别是角结膜干燥症 (KCS)、特应性角结膜炎(AKC)和春季角膜炎(VKC)。

本发明还涉及含有或不含有活性物质的水包油型乳剂在制备治疗眼 部疾病状态的眼用组合物中的用途。

还可以将本发明的乳剂包括在选自镜片、眼部贴片、植入物或插入 物的输送装置中。

药物或活性物质可以以乳剂重量的约0.0001％至5％的含量存在。

根据所述药物是亲水的或疏水的，其物理存在于油相中或水组分中。

以下实施例描述制备和使用本发明的最好方式。仅为指导如何制备 和使用本发明提供这些实施例，不意欲以任何方式限制本发明的范围。

实施例

在以下实施例中，使用以下缩写：

CTAB：溴化十六碳烷基三甲铵、溴化十四烷基三甲铵和溴化十二烷 基三甲铵的混合物

MCT：TCMTM(Societe des Oleagineux，France)

BAK：苯扎氯铵

BEC：苄索氯铵

BCB：溴化苄基二甲基十二烷基铵

OA：油胺(Sigma(USA)

SA：硬脂胺(Sigma，USA)

CsA：环孢菌素A

Cremophor：Cremophor EL(BASF，France)

Lutrol：Lutrol F68(BASF，France)

Oxypol(Gattefosse，France)

Montane 20(SEPPIC，France)

Oxypol：Gattefosse(St Priest，France)

Montane 20(SEPPIC，France)

Lipoid E80(LIPOID GmbH，Germany)

实施例1：阳离子剂是CTAB的阳离子型乳剂的制备

方法：   组分   Z01EM042   Z01EM043   CTAB(阳离子剂)   0.05％   0.1％   MCT(油)   2％   2％   α-生育酚(抗氧化剂)   0.01％   0.01％   Lipoid E80TM(阴离子表面活性剂)   0.32％   0.32％   Lutrol F68TM(非离子表面活性剂)   0.5％   0.5％   甘油(张力剂)   2.25％   2.25％   水   94.87％   94.82％

在同一烧杯中连续称量油相组分，并且在微加热下(40℃)磁力搅拌直 至得到黄色、清澈且稍微粘稠的相。在同一烧杯中连续称量水相组分， 并且在微加热下(40℃)磁力直至得到搅拌透明、澄清且流动的相。将两个 相均加热至65℃。通过向油相中快速加入水相形成粗乳剂，并且随后将 其快速加热至75℃。用膜保护水相和粗乳剂烧杯以防止任何水分蒸发。 乳剂为白色并且稍微透明。然后通过使用POLYTRON PT 6100高剪切混 合5分钟减小乳剂液滴大小。该乳剂变成乳状(milky)。使用冰浴将该乳 剂的温度冷却至20℃。

在微射流机(microfluidizer)(C5，Avestin)中，使用10,000psi压力下连 续循环5分钟，通过均化得到最终的乳剂。该最终的乳剂为乳状，并且 非常流动且不粘附在玻璃上。将该乳剂的温度降至25℃。测量其pH，然 后使用0.1M HCl或0.1M NaOH溶液将pH调至8.0。在着色玻璃小瓶中 通过氮气鼓泡调节乳剂，并且在高压灭菌器中将该乳剂在121℃下灭菌 20分钟。

在水中稀释后，通过使用高性能粒度分析仪(High Performance Particle Sizer)(Malvern Instruments，UK)的准弹性光散射来确定乳剂液滴 的平均颗粒大小。在双蒸馏水中1∶200稀释后，如上所详述地在25℃、 在Malvern Zetasizer 2000(Malvern Instruments，UK)中测量电泳淌度。

结果：   Z01EM042   Z01EM043   液滴大小(nm)   126   128   ζ电势(mV)   36.4   49.5

实施例2：实施例1中描述的阳离子型乳剂的稳定性

方法：

监测灭菌的乳剂在80℃下的稳定性(液滴大小、ζ电势)14天。

结果：   Z01EM042   Z01EM043   T(天)   0   7   14   0   7   14   液滴大小(nm)   126   143   155   128   140   151   ζ电势(mV)   36.4   39.0   38.7   49.5   53.8   49.9

Z01EM042和Z01EM043满足ζ电势稳定性测试D的要求。

实施例3：制备阳离子是苯扎氯铵的阳离子型乳剂

方法：   组分   Z01EM042   BAK(阳离子剂)   0.02％   MCT(油)   1％   α-生育酚(抗氧化剂)   0.005％   泰洛沙泊(非离子表面活性剂)   0.16％   Lutrol F68(非离子表面活性剂)   0.5％   甘油(张力剂)   2.25％   水   96.07％

根据实施例1中的描述制备。

结果：   Z01EM093   ζ电势(mV)   20.4

实施例4：实施例3中描述的阳离子型乳剂的稳定性

方法：

监测灭菌的乳剂在80℃下的稳定性(ζ电势)15天。

结果：   Z01EM093   T(天)   0   2   5   7   9   12   14   ζ电势(mV)   20.4   23.2   21.5   21.6   22.7   21.0   21.3

本实施例乳剂的ζ电势比之前已知的制剂更加稳定(数据未显示)。 Z01EM093满足ζ电势稳定性测试D的要求。

实施例5：制备阳离子型乳剂，其中阳离子是油铵

方法：   ％w/w   Z01EM165   油胺   0.05   矿物油   1   Lutrol F68   0.1   泰洛沙泊   0.3   甘油(张力剂)   2.25   水   至100

根据实施例1中的描述制备。

结果：   T(天)   Z01EM165   液滴大小(nm)   ζ电势(mV)   0   186   51.3   3   184   47.2   8   194   52.1   13   163   48.2   15   175   47.9

Z01EM165满足ζ电势稳定性测试D的要求。

实施例6：

方法：   ％(w/w)   Z01EM092   CTAB   0.005   MCT   1   维生素E   0.005   泰洛沙泊   0.16   Lutrol   0.25   甘油(张力剂)   2.25   水   至100

根据实施例1中的描述制备。

结果：   乳剂   Z01EM092   T(天)   0   2   5   7   9   12   14   ζ电势(mV)   19.8   21.9   22.4   18.5   20.3   18.5   20.5

Z01EM092满足ζ电势稳定性测试D的要求。

实施例7：具有BAK的阳离子乳剂

方法：   乳剂   Z01EM105   Z01EM155   Z01EM162   Z01EM163   组分   ％(w/w)   BAK   0.02   0.02   0.02   0.02   MCT   2   1   1   1   蓖麻油   0   1   0   0   Cremophor   0   0.25   0.1   0   泰洛沙泊   0.32   0   0.3   0.3   Montane 20   0   0   0   0.1   Lutrol   0.5   0.1   0   0   Oxypol   0   0.25   0   0   维生素E   0.01   0   0   0   甘油   2.25   2.25   2.25   2.25   水   至100％   至100％   至100％   至100％

对灭菌的乳剂在80℃下的稳定性(液滴大小、ζ电势)进行T＝0，7 和14天的监测。

结果：   T(天)   Z01EM105   Z01EM155   Z01EM162   Z01EM163   液滴大小   (nm)   0   nd   288   243   249   7   nd   290   261   262   14   nd   nd   264   234   ζ电势   (mV)   0   24.9   19.7   22.3   18.8   2   20.7   nd   nd   nd   7   21.3   14.2   14.7   16.5   10   23.2   nd   nd   nd   13   22.2   nd   nd   nd   14   nd   nd   17.4   15.7   15   23.2   nd   nd   nd

nd：未确定

Z01EM105、Z01EM162和Z01EM163满足ζ电势稳定性测试D的要 求。Z01EM115满足ζ电势稳定性测试C的要求。

实施例8：阳离子剂是BEC或BCB的阳离子型乳剂

方法：   乳剂   Z01EM170   Z01EM171   组分   ％(w/w)   BEC   0.02   0   BCB   0   0.02   MCT   2   2   泰洛沙泊   0.3   0.3   甘油   2.25   2.25   Lutrol   0.1   0.1   水   至100％   至100％

根据实施例1中的描述制备。

结果：   T(天)   Z01EM170   Z01EM171   液滴大小   (nm)   0   210   239   7   232   250   14   233   nd   ζ电势(mV)   0   23.2   9.1   7   22.4   6.4   14   24.1   7.2

Z01EM170和Z01EM171满足ζ电势稳定性测试D的要求。

实施例9：具有BAK和矿物油的阳离子型乳剂

方法：   乳剂   Z01EM151   Z01EM152   Z01EM153   Z01EM164   Z01EM173   组分   ％(w/w)   BAK   0.02   0.02   0.02   0.02   0.02   矿物油   1   1   1   1   1   泰洛沙泊   0.3   0.3   0.3   0.3   0.3   Lutrol   0.1   0.1   0.1   0.1   0.1   甘油   2.25   2.25   2.25   2.25   2.25   水   至100％   至100％   至100％   0   0   缓冲液   0   0   0   至100％   至100％

对灭菌的乳剂在80℃下的稳定性(液滴大小、ζ电势)进行14天的监 测。

结果：   T(天)   Z01EM151   Z01EM152   Z01EM153   Z01EM164   Z01EM173   液滴大   小(nm)   0   25.8   26.0   23.4   16.7   20.7   3   22.2   23.0   26.2   18.3   nd   5   23.5   23.8   24.2   nd   nd   7   nd   nd   nd   nd   19.7   8   nd   nd   nd   16.5   nd   10   34.1   20.4   17.7   nd   nd   12   23.3   21.7   23.9   nd   nd   13   nd   nd   nd   12.7   nd   14   23.9   23   20.3   nd   nd   15   nd   nd   nd   13.2   17.8   ζ电势   (mV)   0   174   220   185   209   200   3   178   215   184   200   nd   5   170   213   182   nd   nd   7   nd   nd   nd   213   200   8   nd   nd   nd   nd   nd   10   182   311   186   nd   nd   12   176   221   224   nd   nd   13   nd   nd   nd   218   nd   14   168   216   188   nd   nd   15   nd   nd   nd   203   216

所有的乳剂均满足ζ电势稳定性测试D的要求。

实施例10：油相中含有环孢菌素A(CsA)作为活性物质的阳离子型乳剂

方法和结果：

根据实施例1中描述的方法制备，向油相中加入所述环孢菌素。

对灭菌的乳剂在80℃下的稳定性(液滴大小、ζ电势)进行T＝0，7 和15天的监测。   乳剂   Z06EM044   Z06EM045   组成   0.02％BAK   1.5％MCT   0.24％泰洛沙泊   0.01％维生素E   0.375％Lutrol   2.25％甘油   水至100％   CsA 0.1％   0.02％BAK   2％MCT   0.32％泰洛沙泊   0.01％维生素E   0.5％Lutrol   2.25％甘油   水至100％   CsA 0.2％   ζ电势(mV)   T0：224   T7：220   T15：239   T0：216   T7：214   T15：211   液滴大小(nm)   T0：25.3   T7：22.9   T15：21.8   T0：24.8   T7：22.2   T15：20.8   乳剂   Z06EM046   Z06EM047   Z06EM048   Z06EM049   组成   0.02％BAK   1％MCT   0.16％泰洛沙泊   0.01％维生素E   2.25％甘油   水至100％   CsA 0.05％   0.02％BAK   0.75％MCT   0.12％泰洛沙泊   0.01％维生素E   0.1％Lutrol   2.25％甘油   水至100％   CsA 0.025％   0.02％BAK   2％MCT   0.3％泰洛沙泊   0.01％维生素E   0.1％Lutrol   2.25％甘油   水至100％   CsA 0.025％   0.02％BAK   1％MCT   0.16％泰洛沙泊   0.01％维生素E   0.1％   Lutrol2.25％甘油   水至100％   CsA 0.05％   ζ电势   (mV)   T0：22.7   T7：20.7   T15：20.7   T0：20.9   T7：18.9   T15：16.9   T0：19.6   T7：19.6   T15：19.4   T0：25.0   T7：24.7   T15：19.2   液滴大   小(nm)   T0：188   T7：186   T15：195   T0：165   T7：188   T15：194   T0：212   T7：193   T15：200   T0：159   T7：173   T15：177   乳剂   Z06EM050   Z06EM051   Z06EM052   Z06EM053   组成   0.02％BAK   2％MCT   0.3％泰洛沙泊   0.01％维生素E   0.1％Lutrol   2.25％甘油   水至100％   CsA 0.05％   0.02％BAK   2％MCT   0.3％泰洛沙泊   0.01％维生素E   0.1％Lutrol   2.25％甘油   水至100％   CsA0.2％   0.02％BAK   4％MCT   0.3％泰洛沙泊   0.01％维生素E   0.1％Lutrol   2.25％甘油   水至100％   CsA0.2％   0.02％BAK   2％MCT   0.3％泰洛沙泊   0.01％维生素E   0.1％Lutrol   2.25％甘油   水至100％   CsA0.1％   ζ电势   (mV)   T0：17.9   T7：20.3   T15：18.9   T0：20.1   T7：21.9   T15：19.0   T0：28.4   T7：24.5   T15：23.0   T0：23.5   T7：23.2   T15：20.3   液滴大小   (nm)   T0：224   T7：212   T15：221   T0：179   T7：195   T15：206   T0：176   T7：201   T15：195   T0：204   T7：211   T15：226

含有CsA作为活性物质的乳剂满足ζ电势稳定性测试D的要求。

实施例11：ζ电势不长时间稳定的阳离子型乳剂

方法和结果：

根据实施例1中描述的方法制备。   乳剂   Z01EM102   Z01EM172   组成   0.05％SA   1％MCT   0.16％Lipoid   0.005％维生素E   0.25％Lutrol   2.25％甘油   水至100％   0.12％SA   0.01％BAK   2.5％MCT   0.5％Lipoid   0.01％维生素E   0.42％Lutrol   2.25％甘油   水至100％   ζ电势(mV)   T0：60.6   T2：39.1   T7：10.0   T0：55.8   T7：27.8   T15：4.3   液滴大小(nm)   T0：161   T2：158   T7：ND   T0：166   T7：164   T15：176

对灭菌的乳剂在80℃下的稳定性(液滴大小、ζ电势)进行T＝0，7 和15天的监测。

Z01EM102和Z01EM172不满足ζ电势稳定性测试C的要求。

实施例12：含有非常高阳离子含量的阳离子型乳剂，其ζ电势长时间稳 定，而其不适合于眼部使用。

方法和结果：

根据实施例1中描述的方法制备。   乳剂   Z01EM186   组成   1％BAK   10％豆油   1.2％Lipoid   2.25％甘油   水至100％   ζ电势(mV)   T0：57.5   T7：55.1   T15：53.9   液滴大小(nm)   T0：182   T7：198   T15：212

对灭菌的乳剂在80℃下的稳定性(液滴大小、ζ电势)进行T＝0，7 和15天的监测。

尽管Z01EM186满足ζ电势稳定性测试D的要求，其阳离子剂浓度 (BAK)是局部眼部给药通常使用浓度的50倍。所述乳剂不适合作为眼用 乳剂。

实施例13：含有叶黄素作为活性成分的阳离子型乳剂

方法：如之前所述。   Z42EM001   Z42EM002   叶黄素   0.4   0.4   红花油   1.6   1.6   泰洛沙泊   0.3   0.3   Montane 20   -   0.1   BAK   0.02   0.02   泊洛沙姆   0.1   0.1   甘油   2.25   2.25   去离子水   qsp 100   qsp 100

根据实施例1中描述的方法制备。   Z42EM001   Z42EM002   液滴大小(nm)   T0   347   255   T7   290   236   T14   285   321   ζ电势(mV)   T0   15.8   16.0   T7   8.8   8.4   T14   7.1   8.9

含有叶黄素作为活性物质的乳剂满足ζ电势稳定性测试D的要求。

实施例14：含有低阳离子含量的乳剂，其ζ电势和/或液滴大小长时间不 稳定。

方法和结果：

根据实施例1中描述的方法制备。

对灭菌的乳剂在80℃下的稳定性(液滴大小、ζ电势)进行T＝0，7 和15天的监测。   乳剂   Z01EM086   Z01EM089   组成   0.01％CTAB   2％MCT   0.32％Lipoid   0.01％维生素E   0.5％Lutrol   2.25％甘油   水至100％   0.02％BAK   2％MCT   0.32％Lipoid   0.01％维生素E   0.5％Lutrol   2.25％甘油   水至100％   ζ电势(mV)   T0：41.6   T2：39.8   T7：-15.6   T0：33.7   T7：20.4   T15：-5.1   液滴大小(nm)   T0：155   T15：167   T0：141   T15：172

Z01EM086和Z01EM089不满足ζ电势稳定性测试C的要求。

实施例14：长期局部给药后的眼耐受性试验

此项研究的目的是确定连续28天每日多次向白化兔的右眼内眼局部 给药后，阳离子型乳剂(Z01EM134、Z06EM048、Z06EM050和Z06EM053； 参见之前实施例中的组成)的眼耐受性。

方法：

此项研究涉及每组10只新西兰White白化兔(5只雄性和5只雌性)。 进行连续28天，每天4次的治疗(50μl眼部局部给药)。研究了全身耐受 性(体重、食物和水的消耗、一般方面、临床体征、血液学和血液生物化 学)、眼部耐受性(使用眼底镜观察、裂隙灯检查和眼睛组织学)以及尸体 剖检(肉眼检查、主要器官重量)。还进行了关于体重和器官重量、食物和 水的消耗数据以及血液学和生物化学参数的统计分析(MANOVA LSD检 验)。

结果：

一般行为、食物消耗和水消耗、体重、器官重量未受治疗的影响。 尸体剖检方面没有观察到由治疗引起的显著异常。眼及附件的眼科学观 察和显微镜检查没有显示不良反应。眼的反应限于轻微的结膜发红，在 该研究中的全部动物中均观察到该轻微的结膜发红并且在眼用产品的多 次滴注后，在兔中也普遍观察到了此反应。