【发明所属的技术领域】

本发明是一般有关于具有效医药性质的经杂烷基取代的联苯-4-羧 酸芳基醯胺类似物。本发明进一步关于使用此等化合物治疗与辣椒素 受体活化相关病症的用途，以此等化合物检测其它会与辣椒素受体结 合制剂的用途，及作为辣椒素受体的检测与定位的探针的用途。

【先前技术】

疼痛知觉，或伤害感觉(nociception)，是由一群特化感觉神经元的 周边末稍神经所调节，称为″伤害性受体(nociceptor)″。各种不同物 理及化学刺激会引起哺乳动物的此等神经元的活化，导致潜在伤害刺 激的认知。然而，不适当或过度活化伤害性受体，可造成急性或慢性 疼痛衰弱。

神经病变性疼痛(neuropathic pain)涉及无刺激存在时的疼痛讯号传 递，典型地是由神经系统受损所致。大部分例子中，此等疼痛是因周 边神经系统受到初次伤害(例如，经由直接伤害或全身性疾病)后造成 周边与中枢神经系统的敏化作用(sensitization)。神经病变性疼痛典型为 灼热、剧痛且其强度持续，有时候可使诱发该疼痛的初次伤害或疾病 更恶化。

目前对神经病变性疼痛的治疗大多无效。鸦片(例如吗啡)为强力止 痛剂，但由于有害的副作用使其使用受限，例如生理性上瘾与戒断性 质，及呼吸困难、情绪变化和降低肠蠕动，并伴随便秘、恶心、呕吐、 及内分泌与自主神经系统改变。另外，神经病变性疼痛经常是没有反 应或仅部分对己习知的类鸦片止痛剂疗法有反应。使用N-甲基-D-天冬 胺酸拮抗剂克他明(ketamine)或α(2)-肾上腺素促效剂氯压定(clonidine) 可减轻急性或慢性疼痛，并可减少类鸦片剂的用量，但此等制剂经常 因副作用而无法耐受。

过去曾使用辣椒素局部治疗慢性与急性疼痛，包括神经病变性疼 痛。辣椒素为一种衍生自茄科植物的刺激性物质(包括红辣椒)，且可选 择性作用于被视为传达疼痛的小直径传入神经纤维(A-δ及C纤维)。对 辣椒素的反应特征为持续活化在周边组织中的伤害性受体，最后使得 周边伤害性受体对一种或多种刺激不具敏感性。由动物研究中，辣椒 素似乎藉由打开钙与钠的阳离子选择性信道而激活C纤维膜去极化。

共有相同类香草醇(vanilloid)部分的辣椒素结构类似物亦可引起相 似的反应。其中一种类似物为树脂毒素(resiniferatoxin)(RTX)，是大戟 科(Euphorbia)植物的天然产物。类香草醇受体(VR)一词是创造来描述 辣椒素与此等相关刺激性化合物的神经元膜辨识位置。辣椒素反应受 到另一种辣椒素类似物(辣椒素受体阻断剂(apsazepine))的竞争性抑制 (而因此拮抗)，亦可被非选择性阳离子信道阻断剂钌红(ruthenium red) 所抑制，该等拮抗剂连结至VR只有中度的亲和力(典型Ki值不低于 140μM)。

大鼠和人类的类香草醇受体可从背根神经节细胞复制。第一类型 的类香草醇受体与已知的类香草醇受体第1型(VR1)是相同的，该术语 ″VR1″和″辣椒素受体″在本文可交换地使用，是指此型的大鼠及/ 或人类受体，及哺乳动物同源物。VR1在痛觉上的角色已使用缺乏该 受体的小鼠来证实，该小鼠无表现出类香草醇所引发的疼痛行为，且 对热和发炎反应已受损。VR1为具有阈值的非选择性阳离子信道，用 来降低对高温、低pH和辣椒素受体促效剂有反应的机会。例如，该信 道通常在大于约45℃的温度打开。该辣椒素受体信道开放后，一般即 自表现该受体的神经元与其它附近神经元中释出发炎胜肽，以增加疼 痛反应。在辣椒素初期活化后，辣椒素受体经由cAMP依赖型蛋白激 酶(cAMP-dependent protein kinase)的磷酸化而经过快速的脱敏化 (desensitization)作用。

VR1促效剂类香草醇化合物一直做为局部麻醉剂，是由于其对周 边组织的伤害性受体具有脱敏化的能力。然而，促效剂的应用可自我 导致灼热感疼痛，而限制其治疗上的使用。近来有研究指出VR1拮抗 剂，包括非类香草醇化合物，亦有助于疼痛的治疗(参见公开于2002 年1月31日的PCT国际专利申请案第WO 02/08221号，及公开于2003 年7月31日的申请案第WO 03/062209号)。

因此，与VR1发生反应的化合物，但不引起初期痛觉的VR1促效 剂类香草醇化合物，为想要用于慢性和急性疼痛(包括神经病变性疼痛) 的治疗方式。此受体的拮抗剂特别想要用于疼痛和下列情况的治疗， 例如暴露于催泪气体、发痒及例如尿失禁和膀胱过动症(overactive bladder)的尿道病症。本发明可符合此需求，并进一步提供相关的优点。

【发明内容】

本发明提供式I的经杂烷基取代的联苯-4-羧酸芳基醯胺类似物及 此等化合物的医药上可接受的盐类：

式I

式I中：

各独立地表示单键或双键；

其中：(a)A、B及E独立地为CR1、C(R1)2、NR1或N；或

(b)B与A或E邻接而形成稠合5-至8-元部分饱和环，该环经0 至3个独立选自R1的取代基取代，及其它的A或E为CR1、C(R1)2、 NR1

或N；

D及G独立地为CR1、C(R1)2、NR1或N；

W、X、Y及Z独立地为CR1或N；

P、Q、T及V独立地为CR1、C(R1)2、N或NH；或Q是与V或P连 结在一起形成稠合5-至7-元碳环或杂环，该环经0至4个独立选自Rb 的取代基所取代；

R1在每一次出现时独立地选择自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、硝基 或式L至M的基团；

L在每一次出现时独立地选择自单键共价键、O、C(＝O)、OC(＝O)、 C(＝O)O、OC(＝O)O、S(O)m、N(Rx)、C(＝O)N(Rx)、N(Rx)C(＝O)、 N(Rx)S(O)m、S(O)mN(Rx)或N[S(O)mRx]]]]]S(O)m；式中，m在每一次出现 时独立地选择自0、1或2；又Rx在每一次出现时独立地选择自氢或 C1-C8烷基；

在每一次出现时独立地选择自(a)氢；或(b)C1-C8烷基、C2-C8烯基、 C2-C8炔基、单-及二-(C1-C4烷基)胺C0-C4烷基、苯基C0-C4烷基、C3-C8 环烷基C0-C4烷基、(5元杂芳基)C0-C4烷基或(5至7元杂环烷基)C0-C4 烷基，其中每一个经0至5个独立选自Rb的取代基取代；

J1选择自O、NH或S；

U为C1-C3烷基、视需要经0至3个独立选自酮基及C1-C3烷基的取代 基取代、或两个取代基连结在一起形成3-至7-元环烷基或杂环烷基； 各一：(a)J2为O或S，

n为1，及

Rz为氢、C1-C6烷基、C1-C6卤烷基或C2-C6

烷基醚；或

(b)J2为N，

n为2，及

(i)Rz在每一次出现时独立地选择自氢或C1-C6烷 基，其可经0至3个选自Rb的取代基取代；或

(ii)两个RZ基团均与J2连结形成5-至8-元杂环烷 基，该杂环烷基经0至3个选自Rb的取代基取 代；及

Rb在每一次出现时独立地选自卤素、羟基、氰基、硝基、氨基、氧代 基、COOH、C1-C6烷基、C3-C8环烷基C0-C4烷基、C1-C6卤烷基、C1-C6 烷氧基、C1-C6卤烷氧基、C2-C6烷氧醚、氨基羰基、C1-C6羟基烷基、 C1-C6氨基烷基或者单-或二-(C1-C6烷基)氨基。

于某些态样中，式I的化合物为VR1调节剂且Ki在辣椒素受体结 合性分析法中呈现不超过1微摩尔浓度(micromolar)、100纳摩尔浓度 (nanomolar)、50纳摩尔浓度、10纳摩尔浓度或1纳摩尔浓度及/或在测 定辣椒素受体促效剂或拮抗剂活性的分析法中具有不超过1微摩尔浓 度、100纳摩尔浓度、50纳摩尔浓度、10纳摩尔浓度或1纳摩尔浓度 的EC50或IC50值。

于某些具体实施例中，本文所述的VR1调节剂为VR1拮抗剂，且 于辣椒素受体活化作用的活体外分析法中没有可检测的促效剂活性。

于某些态样中，本文所述的化合物经可检测的标记物(例如经放射 性标记或萤光素共轭物(fluorescein conjugated))予以标记。

于其它态样中，本发明进一步提供含有至少一种如本文所述的化 合物的医药组合物(例如，本文所述的化合物或其医药上可接受的盐)， 与生理上可接受的载剂或赋形剂组合。

于其它态样中，提供降低细胞辣椒素受体的钙离子传导性的方法， 包括将表现辣椒素受体的细胞(例如为神经元细胞)与至少一种如本文 所述的VR1调节剂的治疗有效量接触。该接触可发生在活体内或活体 外。

进一步提供抑制类香草醇配位体与辣椒素受体结合的方法。在一 些态样中，此抑制可发生在活体外。该等方法包括在足以测量到抑制 类香草醇配位体结合至辣椒素受体的条件及含量下，将辣椒素受体与 至少一种如本文所述的VR1调节剂接触。在其它态样中，该辣椒素受 体是在患者中出现。该方法包括在足以于活体外可检测到抑制类香草 醇配位体与表现选殖辣椒素受体的细胞结合的用量下，使表现辣椒素 受体的患者细胞与至少一种如本文所述的VR1调节剂接触，因而抑制 类香草醇配位体与患者的辣椒素受体结合。

本发明进一步提供患者对辣椒素受体调节易敏感的治疗方法，包 括投予患者治疗有效量的至少一种如本文所述的VR1调节剂。

其它态样中，提供一种治疗患有疼痛患者的方法，包括对患有疼 痛的患者投予治疗有效量的至少一种如本文所述的VR1调节剂。

另提供治疗患有搔痒、尿失禁、膀胱过动症、咳嗽及/或呃逆的方 法，包括对患有上述一种或多种病症的患者投予治疗有效量的至少一 种本文所述的VR1调节剂。

本发明进一步提供促使肥胖患者减重的方法，包括对肥胖患者投 予治疗有效量的至少一种如本文所述的VR1调节剂。

进一步提供鉴别可与辣椒素受体结合的制剂的方法，包括：(a)在 允许VR1调节剂结合至辣椒素受体的条件下，将辣椒素受体与本文所 述的经标记VR1调节剂接触，藉以产生经结合、标记的VR1调节剂；

(b)在没有测试制剂存在下，检测与经结合、标记的VR1调节剂含量相 应的讯号；(c)将经结合、标记的VR1调节剂与测试制剂接触；(d)在有 测试制剂存在下检测经结合、标记的VR1调节剂含量相应的讯号；(e) 与在步骤(b)所检测到的讯号比较，检测在步骤(d)所降低的讯号，而鉴 别出结合至辣椒素受体的制剂。

于其它态样中，本发明提供决定样本中是否有辣椒素受体存在的 方法，包括：(a)将样本与如本文所述的VR1调节剂于可使VR1调节 剂与辣椒素受体结合的条件下接触；及(b)检测VR1调节剂结合至辣椒 素受体的程度。

本发明亦提供经包装的医药制剂，包含：(a)包含在容器中的如本 文所述的医药组合物；及(b)使用该组合物治疗对于辣椒素受体调节作 用有反应的一种或多种病症的说明书，该病症例如疼痛、搔痒、尿失 禁、膀胱过动症、咳嗽、呃逆及/或肥胖。

再于另一态样中，本发明提供制备本文所揭示的化合物，包括中 间物的方法。

本发明此等与其它态样将可参考下列详细说明而变得更为明确。

【实施方式】

如上文所述，本发明提供经杂烷基取代的联苯-4-羧酸芳基醯胺类 似物。该等化合物可用于活体外或活体内，以调节(较佳为抑制)在各种 环境中辣椒素受体的活性。

术语

本文所述的化合物通常使用标准命名法描述。对于具有不对称中 心的化合物，应了解(除非特别指明)所有光学异构物及其混合物均涵盖 在内。此外，具有碳-碳双键的化合物可出现Z-与E-型，除非特别限定， 否则化合物的所有异构物型均涵盖于本发明中。当化合物以多种互变 异构物型(tautomeric form)存在时，所叙述的化合物并不限定于任何一 种特定互变异构物，更确切为意欲涵盖所有互变异构物型。本文某些 化合物是使用含有变量(例如J1、A、X)的通式说明。除非特别指明， 该通式中各变量独立地定义为任何其它的变量，又于通式中出现多于 一次的任何变量于每一次出现时是各独立地定义。

术语″经杂烷基取代的联苯-4-羧酸芳基醯胺类似物″用于本文中 是指所有包括式I的化合物，及本文所提供其它通式的化合物，以及该 化合物的医药上可接受的盐类。

本文所述化合物的″医药上可接受的盐类″是相关技艺习知可适 合用于与人类或动物组织接触而不会引起过度毒性、刺激性、过敏反 应、或其它问题或并发症的酸性或碱性盐类。该等盐类包括碱性残基(例 如胺类)的无机或有机酸盐，以及酸性残基(例如羧酸)的碱金属或有机 盐。特定医药上的盐包括，但不限于此，该酸性盐类如盐酸、磷酸、 氢溴酸、苹果酸、乙醇酸、反丁烯二酸、硫酸、磺胺醯酸、对胺苯磺 醯酸、甲酸、甲苯磺酸、甲烷磺酸、苯磺酸、乙烷二磺酸、2-羟基乙磺 酸、硝酸、苯甲酸、2-乙醯氧基苯甲酸、柠檬酸、酒石酸、乳酸、硬脂 酸、水杨酸、麸胺酸、抗坏血酸、双羟萘酸(pamoic)、琥珀酸、延胡索 酸、顺丁烯二酸、丙酸、羟基顺丁烯二酸、氢碘酸、苯基乙酸、烷基 酸(alkanoic acid)例如乙酸、HOOC-(CH2)n-COOH其中n为0至4等。 类似地，医药上可接受的阳离子包括，但不限于钠、钾、钙、铝、锂 及铵。熟习该项技术者将可进一步辨识本文所提供的化合物的医药上 可接受的盐类，包括列举于Remington′s Pharmaceutical Sciences第17 版，Mack Publishing Company，Easton，PA，第1418页(1985)。通常， 医药上可接受的酸性或碱性盐类可由含有酸性或碱性基团的母化合物 藉由习知化学方法合成。简言的，此等盐类可经由使游离酸或碱形式 的彼等化合物与化学剂量的适当碱或酸，于水或有机溶剂中或两者的 混合物中反应而制备；通常使用非水性介质，例如醚、乙酸乙酯、乙 醇、异丙醇或乙腈为较佳。

可了解，各式I的各化合物可，但非必须，配制成水合物、溶剂合 物或非共价错合物。此外，多种结晶形式及多形态异构物(polymorphous) 均为在本发明的范围中。本文亦提供式I化合物的前驱药物(prodrug)。 ″前驱药物″是一种化合物，其可能不完全符合本文提供的化合物的 结构要求，然而在活体内，即在投予患者的后，经修饰而产生式I或本 文所提供的其它通式化合物。例如，前驱药物可为如本文所提供物的 醯化(acylated)衍生物的化合物。前驱药物包括其中羟基、胺或硫氢基 与任何基团结合的化合物，当投予哺乳类对象后，会裂解而分别地形 成游离羟基、氨基或硫氢基。前驱药物的实例包括，但不限于，本文 所提供化合物的醇及胺官能基的乙酸酯、甲酸酯、磷酸酯与芐酸酯衍 生物。本文所提供的化合物的前驱药物可藉由修饰存在化合物中的官 能基予以制备，其中该修饰会裂解成为母化合物。

本文使用的术语″烷基″是指直链或分支链的饱和脂肪族烃。烷 基包括具有1至8个碳原子(C1-C8烷基)、1至6个碳原子(C1-C6烷基) 及1至4个碳原子(C1-C4烷基)的基团，例如甲基、乙基、正丙基、异 丙基、正丁基、第二丁基、叔丁基、戊基、2-戊基、异戊基、新戊基、 己基、2-己基、3-己基、3-甲基戊基、环丙基、环丙基甲基、环戊基、 环戊基甲基、环己基、环庚基及降莰基。″C0-C4烷基″是指单一共价 键(C0)或具有1、2、3或4个碳原子的烷基；″C0-C6烷基″是指单一 共价键或C1-C6烷基；″C0-C8烷基″是指单一共价键或C1-C8烷基。 在本文某些实例中，烷基的取代基会特别地指明。例如″C1-C6氨基烷 基″是指具有至少一个氨基取代基的C1-C6烷基。

″伸烷基″是如上述定义的二价烷基。C0-C8伸烷基为单一共价键 或具有1至8个碳原子的伸烷基；C0-C4伸烷基为单一共价键或具有1 至4个碳原子的伸烷基。″烯基″是指直链或分支链的烯基，其具有 至少一个不饱和碳-碳双键。烯基包括C2-C8烯基、C2-C6烯基及C2-C4 烯基，其分别含有2至8个、2至6个或2至4个碳原子，例如乙烯基、 烯丙基或异丙烯基。

″炔基″是指直链或分支链的炔基，其具有一个或多个不饱和碳- 碳键，其中至少一个为碳-碳参键。炔基包含C2-C8炔基、C2-C6炔基及 C2-C4炔基，其分别含有2至8个、2至6个或2至4个碳原子。

″环烷基″是指饱和或部分饱和环状的基团，其中所有环元均为 碳，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、降莰 基、金刚烷基、十氢萘基、八氢茚基，及前述各种的部分不饱和环的 变体，例如环己烯基。该等基团通常含有3至约10个环碳原子；在某 些实施例中，该基团具有3至7个环碳原子(即C3-C7环烷基)。如果经 取代，任何环碳原子可键结至任何所指的取代基。

本文所使用的″烷氧基″是指经由氧桥连接至如上述的烷基。烷 氧基包括C1-C6烷氧基及C1-C4烷氧基，其分别含有1至6个或1至4 个碳原子。甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、第二丁 氧基、叔丁氧基、正戊氧基、2-戊氧基、3-戊氧基、异戊氧基、新戊氧 基、己氧基、2-己氧基、3-己氧基及3-甲基戊氧基为代表性烷氧基。同 样地，″烷硫基″是指经由硫桥连接至如上述的烷基、烯基或炔基。

术语″氧代基″用于本文是指酮(keto)基(C＝O)。该氧代基为非 芳族碳原子的取代基，造成-CH2-转化成-C(＝O)-。

″烷基磺醯基″是指具通式-(SO2)-烷基的基团，式中硫原子为连 接点。烷基磺醯基包括C1-C6烷基磺醯基及C1-C4烷基磺醯基，其分别 包含有1至6个或1至4个碳原子。甲基磺醯基为一代表性烷基磺醯 基。

术语″单-或二-(C1-C6烷基)磺胺醯″是指具通式-(SO2)-N(R)2的基 团，式中硫原子为连接点，且其中一个R为C1-C6烷基及另一个R为 氢或独立地选自C1-C6烷基。

术语″烷醯基″是指呈线型或分支型排列的醯基(例-(C＝O)-烷基) 其中连接经由酮基的碳。烷醯基包括C2-C8烷醯基、C2-C6烷醯基及C2-C4 烷醯基，分别具有2至8个、2至6个及2至4个碳原子。″C1烷醯 基″是指-(C＝O)-H，其(与C2-C8烷醯基)均包含于术语″C1-C8烷醯基″ 的范围内。乙醯基为C2烷醯基。

″烷酮″为其中碳原子呈直链或分支链烷基排列的酮基。″C3-C8 烷酮″、″C3-C6烷酮″及″C3-C4烷酮″是指烷酮分别具有3至8个、 6或4个碳原子。举例而言，C3烷酮基具有-CH2-(C＝O)-CH3结构。

同样地，″烷基醚″是指直链或分支醚取代基。烷基醚包括C2-C8 烷基醚、C2-C6烷基醚及C2-C4烷基醚，其分别具有2至8个、6或4 个碳原子。举例而言，C2烷基醚具有-CH2-O-CH3结构。

″烷基氨基″是指具有-NH-烷基或-N(烷基)(烷基)的一般结构的 二级或三级胺，其中各烷基可为相同或不同。该等基团包括，例如单- 及二-(C1-C8烷基)氨基，其中各烷基可为相同或不同且包含1至8个碳 原子，以及单-及二-(C1-C6烷基)氨基以及单-及二-(C1-C4烷基)氨基。″ C5-C6环烷基″氨基是指氨基的氮原子经5-或6-元环烷基取代。

″烷基氨基烷基″是指经由伸烷基连接的烷基氨基(即具有通式为 -烷基-NH-烷基或-烷基-N(烷基)(烷基))，其中各烷基是独立选择。该基 团包括，例如，单-及二-(C1-C8烷基)氨基C1-C8烷基、单-及二-(C1-C6 烷基)氨基C1-C6烷基及单-及二-(C1-C4烷基)氨基C1-C4烷基，其中各烷 基可为相同或不同。″单-或二-(C1-C6烷基)氨基C0-C6烷基″是指经由 单一共价键或C1-C6伸烷基连接的单-或二-(C1-C6烷基)氨基。下列为代 表性的烷基氨基烷基：

术语″氨基羰基″是指醯氨基(即-(C＝O)NH2)。″单-或二-(C1-C8 烷基)氨基羰基″是指氨基羰基中的一个或两个氢原子以C1-C8烷基取 代。假使两个氢原子经如此取代，该C1-C8烷基可为相同或不同。

术语″卤素″是指氟、氯、溴及碘。

″卤烷基″为分支链或直链烷基，经1个或多个卤素原子取代(例 如″C1-C8卤烷基″具有1至8个碳原子；″C1-C4卤烷基″具有1至4 个碳原子)。卤烷基的实例包括，但不限于单-、二-或三-氟甲基；单-、 二-或三-氯甲基；单-、二-、三-、四-或五-氟乙基；单-、二-、三-、四- 或五-氯乙基；及1，2，2，2-四氟-1-三氟甲基-乙基。典型卤烷基为三氟甲 基及二氟甲基。术语″卤烷氧基″是指上述卤烷基经由氧桥键结。″ C1-C4卤烷氧基″具有1至4个碳原子。

不在两个字母或符号间的破折号(″-″)是用来指示取代基的连接 点。例如，-CONH2经由碳原子连接。

本文使用的″杂原子″是指氧、硫或氮。

″碳环″或″碳环基″包括至少一个完全经由碳-碳键形成的环 (在本文是指碳环)，且不包含杂环。除非特别指明，否则碳环中的各碳 环可为饱和、部分饱和或芳香系。碳环一般具有1至3个稠合、侧接 或螺旋环；在某些具体实施例中的碳环具有1个或2个稠合环。典型 地，每一环中含有3至8个环元(亦即C3-C8)；C5-C7环是详述于特定实 施例。碳环包括稠合、侧接或螺旋环，其环通常包含9至14个环元。 某些代表性碳环是如上述的环烷基。其它碳环为芳基(亦即包含至少一 个芳香系碳环)。该碳环包括，例如，苯基、萘基、茀基、氢茚基及1，2，3，4- 四氢-萘基。

某些碳环经由C0-C4伸烷基(即单一共价键或C1-C4伸烷基)键结。 该基团包括，例如，苯基C0-C4烷基。

″杂环″或″杂环基″具有1至3个稠合、侧接或螺旋环，其中 至少一环为杂环(即一个或多个环原子为杂原子，剩余环原子为碳)。通 常，杂环包括1、2、3或4个杂原子；在一些实施例中每一杂环的环 具有1或2个杂原子。每一杂环一般含有3至8个环元(具有4或5至 7个环元的环会详述于某些实施例中)，且包括稠合、侧接或螺旋环之 杂环，其环通常包含9至14个环元。某些杂环包括以硫原子作为环元； 在一些实施例中，该硫原子可经氧化成SO或SO2。杂环可视需要经不 同取代基所取代，如同所指示。除非特别指明，否则杂环可为杂环烷 基(即每一环为饱和或部分饱和)或杂芳基(即基团中至少有一环为芳香 系)。杂环基通常可经由任何环或取代基原子键结而获得稳定化合物。 N-键结的杂环基经由化合物氮原子键结。

杂环基包括，例如，全氢 呯基(azepanyl)、吖辛基、苯并咪唑基、 苯并咪唑啉基、苯并异噻唑基、苯并异恶唑基、苯并呋喃基、苯并硫 代呋喃基、苯并恶唑基、苯并噻唑基、苯并四唑基、色满基(chromanyl)、 色烯基(chromenyl)、噌啉基(cinnolinyl)、十氢喹啉基、二氢呋喃并[2，3-b] 四氢呋喃基、二氢异喹啉基、二氢四氢呋喃基、1，4-二恶-8- -螺[4.5] 癸基、二噻 基、呋喃基、呋呫基、咪唑啉基、咪唑啶基、咪唑基、 吲唑基、假吲哚基(indoenyl)、吲哚啉基(indolinyl)、吲哚 基 (indolizinyl)、吲哚基、异苯并呋喃基、异色满基、异吲唑基、异吲哚 啉基、异吲哚基、异噻唑基、异恶唑基、异喹啉基、吗啉基、萘啶基、 八氢异喹啉基、恶二唑基、恶唑啶基、恶唑基、酞 基、哌 基、哌 啶基、哌啶酮基、喋啶基、嘌呤基、吡喃基、吡 基、吡唑烷基 (pyrazolidinyl)、吡唑啉基、吡唑基、嗒 基、吡啶并咪唑基、吡啶并 恶唑基、吡啶并噻唑基、吡啶基、嘧啶基、吡咯啶基、吡咯酮基、二 氢吡咯基(pyrrolinyl)、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、喹恶啉基、 啶基 (quinuclidinyl)、四氢异喹啉基、四氢喹啉基、四唑基、噻二 基、噻 二唑基、噻唑基、噻吩并噻唑基、噻吩并恶唑基、噻吩并咪唑基、噻 吩基(thienyl)、噻吩基(thiophenyl)、苯硫基、硫吗啉基、及其硫原子经 氧化的变体、三 基、及可视需要经1至4个上述取代基所取代的前 述任何基团。

″杂环C0-C8烷基″是指杂环基经由直接键结或C1-C8伸烷基键 结。(5至7元杂环)C0-C4烷基为具有5至7个环元的杂环基，经由直 接键结或具有1至4个碳原子的伸烷基键结。该基团包括(5至7元杂 芳基)C0-C4烷基及(5至7元杂环烷基)C0-C4烷基。

本文所使用″取代基″是指与所关注分子内之原子共价键结的分 子基团。例如，″环取代基″可为例如卤素、烷基、卤烷基的基团或 如本文描述共价键结至环元的基团(较佳为碳或氮原子)。术语″取代″ 是指在分子结构中的氢原子经上述取代基置换，使得此指定原子的价 数不会超过，且为化学稳定的化合物(即可经分离、鉴定、及测试生物 活性的化合物)。

″视需要经取代″是指未经取代或(除了氢)在一个或多个可取代 位置(通常为1、2、3、4或5的位置)经氢以外或经适当基团(可为相同 或不同的基团)所取代的基团。视需要经取代亦可为″视需要经0至X 个取代基取代″，其中X为可能的取代基的最大数目。特定的视需要 经取代基是可视需要经0至2、3或4个独立选择的取代基(即不饱和或 饱和的取代基直到取代基指定的最大数目)所取代。

术语″VR1″及″辣椒素受体″于本文中是可交换使用，指第1 型类香草醇受体。除非特别指明，否则这些术语涵盖大鼠及人类的VR1 受体(例如，GenBank寄存编号AF327067、AJ277028及NM_018727； 特定人类VR1 cDNAs的序列，由美国专利第6,482,611号的SEQ ID NOs：1至3，与示于SEQ ID NOs：4及5的编码氨基酸序列所提供)， 以及在其它物种中发现的同源物。

″VR1调节剂″，在本文中亦称为″调节剂″是调节VR1活性及 /或经VR1-媒介讯号传递的化合物。在本文特别提供的VR1调节剂为 式I的化合物与式I化合物的医药上可接受的盐类。VR1调节剂可为 VR1促效剂或拮抗剂。调节剂是以″高亲和力″连结，若VR1中的 Ki小于1微摩尔浓度，较佳Ki少于100纳摩尔浓度、10纳摩尔浓度 或1纳摩尔浓度。本文实施例4提供用于测定VR1的Ki值的代表性 试验。

若检测到调节剂抑制类香草醇配位体连结至VR1及/或VR1媒介 讯号传递(使用例如实施例5提供的代表性试验)；一般而言，该拮抗剂 可以小于1微摩尔浓度，较佳小于100纳摩尔浓度，且更佳小于10纳 摩尔浓度或1纳摩尔浓度的IC50值来抑制VR1活性，在实施例5提供 的试验内。VR1拮抗剂包括中性拮抗剂及反促效剂。在一些实施例中， 本文提供的辣椒素受体拮抗剂不为类香草醇。

VR1的″反促效剂″为不添加类香草醇配位体时，使VR1的活性 降至其基础活性程度以下的化合物。VR1的反促效剂亦可抑制VR1对 类香草醇配位体的活性，及/或可抑制VR1对类香草醇配位体的结合。 化合物抑制VR1对类香草醇配位体的结合能力可藉由结合测试，例如 实施例4所提供的结合测试。VR1的基础活性，及因VR1拮抗剂存在 的VR1活性降低，可藉由钙移动性测试测定，例如实施例5的测试。

VR1的″中性拮抗剂″为一种抑制类香草醇配位体在VR1上的活 性，但不显著改变该受体的基础活性的化合物(如实施例5所述的钙移 动性测试中，没有类香草醇配位体存在时，VR1活性降低程度不超过 10％，更佳为不超过5％，甚至更佳为不超过2％，最佳为没有检测到 活性的降低)。VR1的中性拮抗剂可抑制类香草醇配位体对VR1的结 合。

本文使用的″辣椒素受体促效剂″或″VR1促效剂″为一种可提 高该受体活性至其基础活性程度以上的化合物(即增加VR1活性及/或 VR1媒介讯号传递)。辣椒素受体拮抗剂活性可藉由实施例5使用的代 表性试验而定义。一般而言，该拮抗剂在实施例5所提供的测试中， 具有小于1微摩尔浓度的EC50值，较佳为小于100纳摩尔浓度，又更 佳为小于10纳摩尔浓度。在一些实施例中，本文提供的辣椒素受体促 效剂不为类香草醇。

″类香草醇″为辣椒素或任何含有苯环的辣椒素类似物，该苯环 是以两个氧原子与邻接环碳原子键结(其中一个碳原子与苯环上所键结 的第三基团的连接点呈对位)。若该类香草醇以不超过10μM的Ki(如 本文所述的测定)与VR1键结，则该类香草醇为″类香草醇配位体″。 类香草醇配位体促效剂包括辣椒素、奥伐尼(olvanil)、N-花生四烯醯基 -多巴胺(N-arachidonoyl-dopamine)、及树胶脂毒素(RTX)。类香草醇配 位体拮抗剂包括辣椒呯及碘-树胶脂毒素。

″治疗有效量″(或剂量)为投予患者后造成可识别的患者利益(例 如提供从经治疗症状的可检测舒缓)的用量。该等舒缓可使用任何适当 准则检测，包括减轻一种或多种病状(例如疼痛)。治疗有效量或剂量一 般在体液(例如血液、血浆、血清、CSF、关节液、淋巴液、细胞间质 液、泪液或尿液)中造成足以改变活体外类香草醇配位体对VR1结合(由 实施例5中所使用的测定提供)及/或VR1媒介讯号传递(由实施例6中 所使用的测定提供)的化合物浓度。

″患者″是以本文所提供的化合物治疗的任何个体。患者包括人 类、及其它动物，例如伴陪动物(即狗及猫)以及家畜动物。患者可能患 有一种或多种对辣椒素受体调节作用有反应的病症(例如疼痛、暴露于 类香草醇配位体、搔痒、尿失禁、膀胱过动症、呼吸病变、咳嗽、及/ 或呃逆)，或可能无上述的病状(亦即预防性的治疗)。

经杂烷基取代的联苯-4-羧酸芳基醯胺类似物

如上述，本发明提供经杂烷基取代的联苯-4-羧酸芳基醯胺类似物， 其可用于各种情况，包括治疗疼痛(例如神经病变性或周边神经所调控 的疼痛)；暴露于辣椒素；暴露于酸、热、光、催泪气体、空气污染物(例 如香烟)、传染性制剂(包括病毒、细菌及酵母菌)、胡椒喷雾或相关制 剂；呼吸病症，例如气喘或慢性阻塞性肺病；搔痒；尿失禁或膀胱过 动症；咳嗽或呃逆；及/或肥胖。该化合物亦可用于活体外测试(即受体 活性测试)；作为VR1检测及定位用探针；以及作为配位体结合及VR1- 媒介讯号传递测试的标准。

本文提供的一些化合物可检测到调节辣椒素对VR1是在纳摩尔浓 (即次微摩尔浓度)结合，较佳为在次纳摩尔浓度，更佳为在100微微摩 尔浓度(picomolar)、20微微摩尔浓度、10微微摩尔浓度或5微微摩尔 浓度以下的浓度。该调节剂较佳为非类香草醇。一些较佳调节剂为VR1 拮抗剂且在实施例5所述测试中未检测到促效剂活性。较佳VR1调节 剂可进一步以高亲和力结合至VR1，且实质上不抑制人类EGF受体酪 胺酸激酶(tyrosine kinase)的活性。

在一些实施例中，式I的化合物或其医药上可接受的盐类可进一步 满足式II：

式II

式中：

B及E独立地为CR1、C(R1)2、NR1或N；或B及E邻接而形成稠合含 5至8元部分饱和环，该环经0至3个独立选自R1的取代基取代； Q、T及V独立地为CR1、C(R1)2、N或NH；或Q是与V或R3连结一 起形成稠合5至7元的碳环或杂环，该环经0至4个独立选自Rb的取 代基取代；

R2为卤素、羟基、氨基、氰基、硝基或式L至M的基团；

R3为氢、卤素、氰基、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8环 烷基C0-C4烷基、C1-C8卤烷基、C2-C8烷基醚、C1-C8烷基亚磺醯基、 C1-C8烷基亚磺醯氨基或与Q连结在一起形成视需要经取代的稠合5至 7元的碳环或杂环；

L在每一次出现时独立地选择自单一共价键、O、C(＝O)、OC(＝O)、 C(＝O)O、OC(＝O)O、S(O)m、N(Rx)、C(＝O)N(Rx)、N(Rx)C(＝O)、 N(Rx)S(O)m、S(O)mN(Rx)或N[S(O)mRx]S(O)m；式中，m在每一次出现时 独立地选择自0、1或2；又Rx在每一次出现时独立地选择自氢或C1-C8 烷基；

M在每一次出现时独立地选择自(a)氢或羟基；或(b)C1-C8烷基、C2-C8 烯基、C2-C8炔基、单-及二-(C1-C4烷基)氨基C0-C4烷基、苯基C0-C4 烷基、C3-C8环烷基C0-C4烷基或(5至7元杂环烷基)C0-C4烷基，其中 每一个经0至5个独立选自Rb的取代基取代；

以及剩余变量是如式I所描述。

在式I及式II的一些化合物中，各表示为双键。

在式I及式II的一些化合物中，所指示的基团

是可视需要经苯基或吡啶环取代，例如

在一些上述化合物中，W、Y及Z为CR1，其在W、Y及Z中的 各R1独立地选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、硝基、C1-C4烷基、 C1-C4卤烷基、C1-C4烷氧基、-N(H)SO2C1-C4烷基、-N(C1-C4烷基) SO2C1-C4烷基或-N(SO2C1-C4烷基)2。例如，在W、Y及Z中的各R1 可独立地选自氢、卤素、羟基或C1-C4烷基。在一些化合物中，X为N或CH。在其它化合物中，W及Z各为CH，X为N或CH，及Y为 CR1。在另一上述化合物中，W及Y(或W、Y及Z)各为CH，且X为 N或CH。

在其它上述化合物中，W为N且X、Y及Z为CR1，其在X、Y 及Z中各R1可独立地选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、硝基、C1-C4 烷基、C1-C4卤烷基、C1-C4烷氧基、C1-C8烷基、磺醯基、单-或二-(C1-C8 烷基)磺醯氨基、-N(H)SO2C1-C4烷基、-N(C1-C4烷基)SO2C1-C4烷基或 -N(SO2C1-C4烷基)2。例如，在X、Y及Z中的各R1可独立地选自氢、 卤素、羟基或C1-C4烷基。

如上所述，变量的L在每一次出现时独立地选择自：单一共价键、 O、C(＝O)(即 OC(＝O)(即 C(＝O)O(即 OC(＝O)O(即 -S(O)m-(即-S-， 或 N(Rx)(即 C(＝O)N(Rx)(即 N(Rx)C(＝O)(即 N(Rx)S(O)m(即 S(O)mN(Rx)(即 或 N[S(O)mRx]]]]]S(O)m(即 其中，m为0、1或2且Rx在每一次出现时 独立地选择自氢或C1-C8烷基。在一些化合物中，L在每一次出现时独 立地选择自单一共价键、O、C(＝O)、S(O)m、N(Rx)、C(＝O)N(Rx)、 N(Rx)C(＝O)、N(Rx)S(O)m、S(O)mN(Rx)或N[S(O)mRx]S(O)m。

为了明了本发明，下述取代基的结构是指示于下：

在一些实施例中，式I所指的基团 选自A为CR2的基团， 其中R2为卤素、羟基、氨基、氰基、硝基或如上所述的式L至M的 基团。在该化合物的基团 及式II的化合物中，较佳经苯基 或吡啶基取代，例如：

或视需要经吡啶基或嘧啶基所取代，其中G为N，例如：

在一些实施例中，B及D为CR1，B及D上的R1在每一次出现 时独立地选择自氢、卤素、氨基、氰基、硝基、C1-C4烷基、C1-C4卤 烷基或C1-C4烷氧基。在一些实施例中，E为N或CR1，其中E为上的 R1氢、C1-C4烷基或C1-C2烷氧基；较佳是E上的R1为氢。在一些实施 例中，B、E及D为CH；在另一实例中，B、E、D、Y及W为CH。

在一些化合物中，R2为氰基、硝基、NHOH、氨基、C1-C4烷基、 C1-C4卤烷基、C1-C4羟基烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4烷基硫基、C1-C4 烷醯基、C1-C4羟基烷基、C1-C4氨基烷基、单-或二-(C1-C4烷基)氨基 C0-C4烷基、(C5-C6环烷基)氨基、(5-或6-元杂环烷基)C0-C4烷基、-N(Rx )SO2C1-C4烷基或-N(SO2C1-C4烷基)2。在一些上述化合物中，R2为氰 基、CHO、氨基、硝基、C1-C4烷基、C1-C4卤烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4 卤烷氧基、C1-C4烷基硫基、C1-C4羟基烷基、C1-C4氨基烷基、单-及二 -(C1-C4烷基)氨基C0-C4烷基、恶二唑基、环戊基氨基、-N(H)SO2C1-C4 烷基、-N(CH3)SO2C1-C4烷基或-N(SO2C1-C2烷基)2。在另一上述实施例 中，R2为氰基、CHO、氨基、硝基、甲基、乙基、丙基、羟甲基、三 氟甲基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、甲基硫基、乙基硫基、C1-C4烷基 氨基、(C1-C4烷基)氨基甲基、环戊基氨基、-N(H)SO2C1-C4烷基、 -N(CH3)SO2CH3或-N(SO2CH3)2。代表性R2基团包括卤素、甲基、氰基 及三氟甲基。

在式I的一些化合物中，P为CR3，其中R3是如式II所定义。在 上述化合物中，及式II化合物中，所指示基团：

可为，例如，

在一些实施例中，T及V独立地为N或CH。在一些化合物中， R3较佳为卤素、C1-C4烷基、C2-C4烷基醚、C1-C4卤烷基、C1-C4羟基 烷基、-SO2CF3或与Q一起连接形成稠合5-或6-元碳环或杂环。在一 些实施例中，R3为卤素、叔丁基或三氟甲基。在一些实施例中，Q、V 及T独立地选自氢、卤素、氰基、C1-C4烷基或C1-C4卤烷基。

-J1-U-J2-(Rz)n所指示的基团可为任何各种的杂烷基，该杂烷基包括 在J1位置上有一个杂原子及经1至3个伸烷基分隔J1与第二个杂原子， 该伸烷基可视需要经上述所取代。J1一般为O、N或S；在一些实施例 中，J1为O。在一些实施例中，U为C2烷基，经0至2个独立选择自 氧代基或C1-C3烷基的取代基取代；该代表性U基团包括-CH2-CH2-及 -CH2-C(O)-。在一些实施例中，-J2-(Rz)n选择自：(i)-OH及-NH2，或(ii) C1-C4烷氧基、吡咯啶基、哌啶基、哌 基、吗啉基或者单-或二-(C1-C6 烷基)氨基，各经0至3个独立选自羟基、卤素、氨基、C1-C4烷基、 C1-C4卤烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4卤烷氧基或C1-C4烷基硫基。

代表性-J1-U-J2-(RZ)n基团包括，例如：

一些式I及式II的化合物进一步满足式III：

式III

其中：

G及T独立地为CH或N；

R2为氰基、CHO、氨基、硝基、甲基、乙基、丙基、三氟甲基、甲氧 基、乙氧基、丙氧基、甲基硫基、乙基硫基、-N(H)SO2C1-C4烷基、 -N(CH3)SO2C1-C4烷基或-N(SO2CH3)2；

R3为卤素、氰基、C1-C6烷基或C1-C4卤烷基；

X与Z独立地为N、CH、C-OH、C-NH2、C(C1-C3烷基)或C(C1-C6卤 烷基)；

J1为O或NH；及 -J2-(RZ)n选自：(i)-OH及-NH2，或(ii)C1-C4烷氧基、吡咯啶基、哌啶基、 哌 基、吗啉基或者单-或二-(C1-C6烷基)氨基，各经0至3个独立选自 羟基、卤素、氨基、C1-C4烷基、C1-C4卤烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4 卤烷氧基或C1-C4烷基硫基所取代。

在一些式III化合物中，J1为O。在另一上述化合物中，X及Z独 立地为N或CH；G为N；以及R2及R3独立地为卤素、C1-C4烷基或 C1-C4卤烷基。

本文提供一些代表性的经杂烷基取代的联苯-4-羧酸芳基醯胺类似物， 包括但不限于实例1及2中那些特定性描述。将了解本文所述的特定 化合物是具代表性，但并非限定本发明的范围。再者，如上述，本发 明的所有化合物皆可以不含碱或医药上可接受的盐的形式存在。

本发明某些态样所提供的经杂烷基取代的联苯-4-羧酸芳基醯胺类 似物可检测地改变(调节)VR1活性，如同使用活体外VR1功能性测试 测定，例如钙移动性测试、背根神经结测试或活体内疼痛舒缓测试。 当开始筛选该活性时，可使用VR1配位体结合测试。本文中有关″VR1 配位体结合测试″意欲参照如实例4所提供的标准活体外受体结合测 试，及″钙移动性测试″(在本文亦指″讯号传递测试″)可如实例5中 所述而进行。简言的，为评估对VR1的结合作用，将VR1制剂与能结 合至VR1(例如，如RTX的辣椒素受体促效剂)的经标记(例125I或3H) 化合物VR1及未标记的测试化合物一起培育以进行竞争测试。于本文 所提供的测试中，所使用的VR1较佳为哺乳动物VR1，更佳为使用人 类或大鼠VR1。受体可经重组表现或自然表现。该VR1制剂可为，例 如，来自重组表现人类VR1的HEK293或CHO细胞的膜制剂。将可 检测地调节能结合至VR1的类香草醇配位体的化合物一起培育，造成 与VR1制剂结合的标记量相对于没有化合物不存在的结合标记量降低 或增加。此降低或增加可用于决定如本文所述VR1的Ki值。一般而 言，在该测试中使与VR1制剂结合的标记量降低的化合物为较佳。

如上述，在某些具体实施例中，较佳为以VR1拮抗剂的化合物。 该等化合物的IC50值可使用如实施例5所提供的标准活体外VR1所调 节的钙移动性测试予以测定。简言的，使表现辣椒素受体的细胞与所 关注化合物及可指示细胞内钙浓度的指示剂(例如，膜可通透的钙敏感 性染料，例如，Fluo-3或Fura-2(两者皆得自，例如，Molecular Probes， Eugene，OR)，当与Ca++结合时，其各别会产生萤光讯号)相接触。该 接触较佳为藉由细胞于缓冲液或培养液中培育一次或多次下进行，该 缓冲液或培养液是包括化合物及或溶液中的指示剂。接触维持充足时 间以容许染料进入细胞中(例如，1至2小时)。将细胞洗涤或过滤以移 除过量染料，然后与类香草醇受体促效剂(例如，辣椒素、RTX或奥伐 尼)接触，典型地在相当于EC50浓度时接触，再量测萤光反应。当经促 效剂接触的细胞与VR1拮抗剂化合物接触时，相较于经促效剂接触的 细胞在测试化合物不存在下，其萤光反应一般会降低至少20％，较佳 为至少50％，且更佳为至少80％。本文所提供的VR1拮抗剂的IC50 较佳为小于1微摩尔浓度、小于100nM、小于10nM或小于1nM。

在其它具体实施例中，以作为辣椒素受体促效剂的化合物较佳。 辣椒素受体促效剂的活性一般可如实例5中所述而测定。当细胞与1 微摩尔浓度的VR1促效剂的化合物接触时，该萤光反应通常比与 100nM辣椒素接触的细胞所观察到的萤光反应增加至少30％。本文所 提供的VR1促效剂的EC50较佳为小于1微摩尔浓度、小于100nM或 小于10nM。

VR1调节活性亦可，或者，使用如实例8提供的经培养的背根神 经结测试及/或如实例9提供的活体内疼痛舒缓测试而予以评估。本文 所提供的化合物较佳为于本文提供的一种或多种功能性测试中，对于 VR1活性具有统计学上显著的特定影响。

于某些实施例中，本文所提供的VR1调节剂实质上不会调节配位 体结合至其它细胞表面受体，例如EGF受体酪胺酸激酶或烟碱性乙醯 胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptor)。换句话说，该调节剂不会实 质上抑制细胞表面的活性，例如人类表皮细胞生长因子(EGF)受体酪胺 酸激酶或烟碱性乙醯胆碱受体(例如，对该受体的IC50或IC40较佳为大 于1微摩尔浓度，且最佳为大于10微摩尔浓度)。较佳为该调节剂于 0.5微摩尔浓度、1微摩尔浓度或更佳为10微摩尔浓度下，无可检测地 抑制EGF受体活性或烟碱性乙醯胆碱受体活性。测定细胞表面受体活 性的测试剂为市售可得，且包含购自Panvera(Madison，WI)的酪胺酸 激酶测试套组。

本文所提供的VR1调节剂较佳为非镇静剂。换句话说，于测试疼 痛舒缓的动物模式(例如本文于实例9中提供的模型)中，足以提供止痛 的最小剂量的两倍的VR1调节剂剂量，在动物模式镇静测试中(藉由使 用Fitzgerald等(1988)Toxicology 49(2-3)：433-9所述的方法)，只引起 短暂(例如，持续时间不超过解除疼痛所维持时间的1/2)，或较佳为无 统计学上显著的镇静作用。较佳为，足以提供止痛的最小剂量的五倍 剂量不会产生统计学上显著的镇静作用。更佳为，本文提供的VR1调 节剂在静脉内剂量小于25mg/kg(较佳为小于10mg/kg)或在口服剂量小 于140mg/kg(较佳为小于50mg/kg，更佳为小于30mg/kg)不会产生镇静 作用。

如有需要，可对本文提供的VR1调节剂进行特定药理性质的评估 包括，但没有限定，口服生物利用性(bioavailability)(较佳化合物为具口 服生物利用性至容许化合物的治疗有效浓度达到小于140mg/kg，较佳 为小于50mg/kg，更佳为小于30mg/kg，又更佳为小于10mg/kg，甚至 更佳为小于1mg/kg及最佳为少于0.1mg/kg的口服剂量程度)、毒性(较 佳的VR1调节剂为当投予治疗有效量至对象时不具毒性)、副作用(较 佳VR1调节剂为当投予治疗有效量至对象时产生和安慰剂相当的副作 用)、血清蛋白结合性以及活体外与活体内半衰期(较佳的VR1调节剂 的活体内半衰期应允许进行Q.I.D投药法，较佳为T.I.D.剂量，更佳为 B.I.D.剂量，且最佳为每天一次剂量)。此外，血脑障壁的差异渗透性对 于用于治疗疼痛的VR1调节剂而言可能符合所需，藉由调节CNS VR1 活性使得如上述的口服总每日剂量提供该调节作用至治疗有效的范 围，同时低脑含量的VR1调节剂用于治疗周边神经调节的疼痛为较佳 (即该剂量并不会提供足以显著地调节VR1活性的化合物的脑部(例 CSF)含量)。可使用此项技术中习知的例行测试来评估彼等性质，及鉴 定特定用途的优质化合物。例如，用于预测生物利用性的测试包括传 输通过人类肠单层细胞，包含Caco-2单层细胞。渗透人类血脑障壁的 化合物可由给予在实验室动物的脑部化合物浓度(例如经静脉内)预测。 血清蛋白结合测试可由白蛋白结合测试预测。化合物半衰期是与化合 物剂量频率成反比。化合物的活体外半衰期可经如本文实例6中所述 的微粒体半衰期测试而预测。

如上述，本文所提供化合物较佳为无毒性。一般而言，本文所使 用的术语″无毒性″应了解为一种相对定义，意指任何经美国食品与 药物管理局(United States Food and Drug Administration)(″FDA″)核准 用于投予哺乳动物(较佳为人类)或符合所制定的标准的物质，可由FDA 核准投予哺乳动物(较佳为人类用所允许)。此外，高度无毒性的化合物 通常会符合下列一项或多项标准：(1)实质上不抑制细胞ATP产生；(2) 实质上不显著延长心脏QT间隔；(3)实质上不引起肝肿大；或(4)不引 起肝酵素实质上的释放。

本文所使用，实质上不抑制细胞ATP产生的化合物为符合于本文 实施例7所设准绳的化合物。换句话说，如实施例7中所述而以100 μM的该化合物处理的细胞具有ATP浓度至少为未处理细胞所检测到 的50％。于更高度较佳实施例中，该细胞具有ATP浓度至少为未处理 细胞可检测的80％。

实质上不显著延长心脏QT间隔的化合物为一种使天竺鼠、迷你猪 或狗在接受使血清中化合物浓度相等于EC50或IC50的剂量投予后，不 会造成统计学上显著的心脏QT间隔(以心电图测量)。于某些较佳实施 例中，经非肠道或经口投予0.01、0.05、0.1、0.5、1、5、10、40或50 mg/kg剂量不会造成统计学上显著的心脏QT间隔延长。″统计学上显 著″是指使用具统计意义的标准参数测试，例如student’s T测试的测 定时，控制在p＜0.1标准或较佳为p＜0.05标准的意义产生变化。

实质上不引起肝肿大的化合物，为若以产生血清浓度相等于化合 物EC50或IC50的剂量每日处理实验室啮齿动物(例如小鼠或大鼠)投予 经5至10天，造成肝对体重比例的增加，即与对照控制组相比不超过 100％。在较高度较佳实施例中，该剂量不会造成肝肿大超过对照控制 组的75％或50％。如使用非啮齿类动物(例如狗)，该剂量不应造成肝对 体重比例的增加，与对照控制组相比不会超过50％，较佳为不超过 25％，又更佳为不超过10％。该测试的较佳经非肠道或经口投予的剂 量包括0.01、0.05、0.1、0.5、1、5、10、40或50mg/kg。

同样地，不引起肝酵素实质上的释放的化合物，为如果投予产生 血清浓度相等于EC50或IC50的两倍最小剂量，不使实验室啮齿动物中 不会提高血清中ALT、LDT或AST浓度的提高与假处理控制组相比超 过100％。在较高度较佳实施例中，该剂量不会提高该血清浓度与对照 控制组相比超过75％或50％。此外，不引起肝酵素实质上的释放的化 合物在活体内肝细胞试验中，如果浓度(在培养液或其它在活体外与肝 细胞接触或培育的该等溶液)等于该化合物的EC50或IC50，则不引起任 何该肝酵素可检测地释放至该培养液到高于在假处理控制细胞的基准 浓度。在较高度较佳实施例中，当该化合物为浓度五倍时、较佳是该 化合物为EC50或IC50十倍时，并不会引起任何该肝酵素可检测地释放 至培养液到高于基准浓度。

在其它具体实施例中，某些较佳化合物在浓度相当于化合物EC50 或IC50时，不会抑制或引发微粒体细胞色素P450酵素活性，例如 CYP1A2活性、CYP2A6活性、CYP2C9活性、CYP2C19活性、CYP2D6 活性、CYP2E1活性或CYP3A4活性。

某些较佳化合物在浓度等于化合物的EC50或IC50时，不会造成染 色体断裂(clastogenic)(例如，使用小鼠红血球前驱细胞小核测试、Ames 小核测试、螺旋小核测试等予以测定)。其它具体实施例中，某些较佳 化合物在此等浓度下不会诱发同源染色单体(sister chromatid)交换(例 如：中国仓鼠卵巢细胞)。

为了检测目的，如下文更详细的讨论，本文所提供的VR1调节剂 可标记同位素或放射性。例如，化合物中可能有一个或多个原子经原 子量或质量数不同于通常天然存在的原子量或质量数的相同元素所置 换。本文所提供化合物中可出现的同位素实例包括氢、碳、氮、氧、 磷、氟与氯的同位素，例如，2H、3H、11C、13C、14C、15N、18O、17O、 31P、32P、35S、18F与36Cl。此外，经重同位素例如，氘(亦即2H)取代 时，由于代谢稳定性较大，例如，增加活体内半衰期或降低所需剂量， 可得到特定的治疗优点，因此，于某些情形下较有利。

化合物的制备

经杂烷基取代的联苯-4-羧酸芳基醯胺类似物通常采用标准合成法 制备。起始材料可自供货商例如Sigma-Aldrich Corp.(St.Louis，MO)购 得，或可使用已建立的实验流程由市售可得的前驱物合成。举例而言， 可使用类似下列反应图所示的合成途径，及合成有机化学相关技艺已 知的合成法制备。下列反应图式中各变量是参照与本文所提供化合物 的说明中一致的任何基团。

术语″催化剂″是指适当的过渡金属催化剂，例如，但不限定此， 肆(三苯基膦)钯(0)或乙酸钯(II)。另外，催化系统可包括配位体例如， 但不限定于，2-(二环己基膦基)联苯基及三-叔丁基膦，亦可包含碱性盐 类，例如K3PO4、Na2CO3或叔丁基氧化钠或钾。过渡金属经催化反应 可于环境温度或较高的温度下进行，使用各种惰性溶剂包括，但不限 定于，甲苯、二氧杂环己烷、DMF、N-甲基吡咯啶酮、乙二醇二甲基 醚、甘醇二甲基醚与乙腈。常用的试剂/催化剂对包括芳基硼酸/钯(0) (Suzuki反应；Miyaura与Suzuki(1995)Chemical Reviews 95：2457)以及 芳基三烷锡烷/钯(0)(Stille反应；T.N.Mitchell的(1992)Synthesis 9：803-815)，芳基锌/钯(0)及芳基格林纳试剂(Grignard)/镍(II)。

术语″活化″是指合成性的转换，其中羧酸基团可转变成适当的 反应性羰基，例如，酸性氯或经混合酸酐，其离去基以″L″标记。这 些反应性羰基官能性可与适当的芳基-胺亲核反应形成相当应的芳基醯 胺化合物。反应剂是用于活化及依序地偶合胺亲核反应成羧酸，其为 习知技术领域范畴中的有机合成，且包括但不限定于，POCl3、SOCl2、 草醯氯、BOP制剂、1，3-二环己碳二亚胺(DCC)及1-乙基-3-(3’-二甲基 胺丙基)碳二亚胺盐酸(EDCI)。

术语″水解″是指经由与水反应而将腈或醚的官能性转换至酸的 官能性。该与水的反应可藉由习知技术领域范畴中的有机合成的不同 的酸或碱来催化。

下列反应图与本文中其它各处所采用的缩写为：

BOP                六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基-

                   三(二甲基氨基)鳞

DIAD               二异丙基偶氮二羧酸

DMF                二甲基甲醯胺

Et3N              三乙基胺

EtOH              乙醇

MS                 质谱仪

(M+1)              质量+1

Ptsa               对甲苯磺酸

PPh3              三苯基膦

Pd(PPh3)4       肆(三苯基膦)钯(0)

TBSO(或OTBS)       叔丁基-二甲基-硅烷基氧基

THF                四氢 喃

           反应图标1

           反应图标2

                 反应图标3

                 反应图标4

                 反应图标5

                 反应图标6

于某些实施例中，本文所提供的化合物可包含一个或多个不对称 碳原子，因此该化合物可以不同的立体异构物形式存在。此等型式可 为，例如，消旋性或光学活性。如上述，所有立体异构物形式均包含 在本发明范围内。尽管如此，仍可能需要得到单一镜像异构物 (enantiomer)(即光学活性型式)。制备单一镜像异构物的标准方法包含不 对称合成法与消旋性解析法。消旋性解析法可经由习知方法达成，例 如，在解析剂存在下的结晶予以完成；或层析法为使用，例如，手性 HPLC管柱层析。

化合物可在其合成法中使用包含至少一个经放射线同位素原子的 前趋物进行放射性标记。各放射同位素较佳为碳(例如，14C)、氢(例如， 3H)、硫(例如，35S)、或碘(例如，125I)。经氚标记的化合物亦可于氚化 的乙酸中经由铂催化剂交换、于氚化的三氟乙酸中的酸催化剂交换、 或使用化合物作为基质以氚气进行不均相的催化剂交换而予以催化制 备。此外，某些前趋物可依需要使用氚气进行氚-卤素交换反应、使用 氚气还原不饱和键，或使用氚硼化钠还原。经辐射标记的化合物的制 备可方便地向精于合成放射性探针化合物的放射性同位素供货商订 购。

医药组合物

本发明亦提供包含一种或多种经杂烷基取代的联苯-4-羧酸芳基醯 胺类似物、及至少一种生理上可接受的载体或赋形剂的医药组合物。 医药组合物可包含，例如，一种或多种水、缓冲剂(例如，中性缓冲盐 液或磷酸盐缓冲盐液)、乙醇、矿物油、植物油、二甲亚砜、碳水化合 物(例如，葡萄糖、甘露糖、蔗糖或聚葡萄糖)、甘露糖醇、蛋白质、佐 剂、聚肽或氨基酸(例如甘胺酸)、抗氧化剂、钳合剂(例如EDTA或麸 胱甘肽)及/或防腐剂。此外，本文所提供的医药组合物可(但并非需要) 包含其它活性成分。

医药组合物可配制成任何适当的投予方式，包含，例如，局部、 口服、经鼻、经直肠内或非经肠道投予。本文所使用的术语非经肠道 包含经皮下、皮内、血管内(例如，静脉内)、肌肉内、脊髓、颅内、蜘 蛛膜下腔内及腹膜内注射，以及任何相似的注射或灌注技术。于某些 实施例中，较佳为适用于口服的组合物。该等组合物包括，例如，锭 剂、片剂、菱形锭剂、水性或油性悬浮液、分散性粉剂或粒剂、乳剂、 硬或软胶囊、或糖浆或酏剂。又于其它的实施例中，本发明的组合物 可配制为冷冻干燥物。对于某些病症(例如，治疗诸如烧烫伤或搔痒等 皮肤病症)以局部投药的配制为较佳。对于治疗尿失禁及膀胱过动症以 直接投药至膀胱(经膀胱内投药)的配制为较佳。

口服用的化合物可进一步包含一种或多种成分，例如甜味剂、调 味剂、着色剂及/或防腐剂，以提供制剂的诉求及美味。锭剂包含活性 成分与掺混适合于制造锭剂的生理上可接受的赋形剂。该等赋形剂包 含，例如，惰性稀释剂(例如，碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸 钠)、粒化剂及崩解剂(例如，玉米淀粉或海藻酸)、粘合剂(例如，淀粉、 明胶或阿拉伯胶)及润滑剂(例如，硬酯酸镁、硬酯酸或滑石)。锭剂可 不包覆，或经由习知技术包覆以延迟在胃肠道的崩解与吸收，并因而 提供长期的持续作用。举例而言，可使用时间延缓物质例如，单硬酯 酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。

口服用配方亦可以硬明胶胶囊存在，其中活性成分是与惰性固体 稀释剂(例如，碳酸钙、磷酸钙或高岭土)混合；或以软明胶胶囊存在， 其中活性成分是与水或油性介质(例如，花生油、液态石蜡或橄榄油) 混合。

水性悬浮液包含活性物质与掺混适合用于制造水性悬浮液的赋形 剂。该等赋形剂包含悬浮剂(例如，羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟 丙基甲基纤维素、海藻酸钠、聚乙烯吡咯啶酮、黄耆胶及阿拉伯胶)； 及分散剂或润湿剂(例如，天然存在的磷脂类例如卵磷脂、环氧烷与脂 肪酸的缩合产物例如聚氧伸乙基硬脂酸酯、环氧乙烷与长链脂肪族醇 的缩合产物例如十七伸乙氧基鲸蜡醇、环氧乙烷与衍生自脂肪酸及己 醣醇的部分酯类的缩合产物例如聚氧伸乙基山梨醇单油酸酯、或环氧 乙烷与衍生自脂肪酸及己醣醇酐的部分酯类的缩合产物例如聚伸乙基 山梨醇酐单油酸酯)。水性悬浮液亦可包含一种或多种防腐剂，例如对 羟苯甲酸乙酯或对羟苯甲酸正丙酯；一种或多种着色剂；一种或多种 调味剂；一种或多种甜味剂，例如蔗糖或糖精。

油性悬浮液可藉由使活性成分悬浮于植物油(例如，花生油、橄榄 油、芝麻油或椰子油)中或矿物油(例如液态石蜡)中予以配制。该油性 悬浮液可包含增稠剂例如蜂蜡、硬性石蜡或鲸蜡醇。可添加如上述的 甜味剂及/或调味剂以提供适口的口服制剂。该等悬浮液可藉由添加抗 氧化剂(例如抗坏血酸)予以防腐。

适合制备水性悬浮液的分散性粉剂及粒剂可藉由添加水提供掺混 分散剂或润湿剂、悬浮剂及一种或多种防腐剂的活性成分。适合的分 散剂或润湿剂及悬浮剂可藉由彼等上所述予以例示。亦可存在其它赋 形剂，例如甜味剂、调味剂及着色剂。

医药组合物亦可调配成水包油(oil-in-water)乳液。该油相可为植物 油(例如，橄榄油或花生油)、矿物油(例如，液态石蜡)或其混合物。适 合的乳化剂包括天然存在的凝胶(例如，阿拉伯胶或黄耆胶)、天然存在 的磷酯类(例如，黄豆卵磷脂、及衍生自脂肪酸及己醣醇的酯类或部分 酯类)、酸酐类(例如，山梨糖酐单油酸酯)、及衍生自脂肪酸及己醣醇 的部分酯类与环氧乙烷的缩合产物(例如，聚氧伸乙基山梨糖酐单油酸 酯)。乳液亦可包含一种或多种甜味剂及/或调味剂。

糖浆及酏剂可与甜味剂，例如甘油、丙二醇、山梨糖醇或蔗糖一 起调配。该配方亦可包含一种或多种缓和剂、防腐剂、调味剂及/或着 色剂。

局部投药的配方典型地包含与活性剂结合的局部载体，可含或不 含其它的视需要化合物。适合的局部载体及其它成分已于此等技术领 域所习知，且可了解的是载体的选择将取决于特定的物理形式及传递 模式。局部载体包括水；有机溶剂例如醇类(例如，乙醇或异丙醇)或甘 油；二醇类(例如，丁二醇、异戊二醇或丙二醇)；脂肪族醇类(例如， 羊毛脂)；水与有机溶剂的混合物及的有机溶剂(例如醇)与甘油的混合 物；以脂质为主的物质例如脂肪酸，醯基甘油类(包含油类，例如矿物 油，及天然或合成来源的脂肪)，磷酸甘油酯类，神经鞘脂质类及蜡类； 以蛋白质为主的物质例如胶原蛋白及明胶；以硅酮为主的物质(非挥发 性与挥发性二者)；以及以烃为主的物质例如微海棉及聚合物基质。组 合物可进一步包括一种或多种成分以适合于改善施予配方的稳定性或 效果，例如稳定剂、悬浮剂、乳化剂、粘度调整剂、胶凝剂、防腐剂、 抗氧化剂、皮肤渗透增强剂、湿化剂及持续释放物质。上述成分的实 例已述于Matindale的The Extra Pharmacopoeia(Pharmaceutical Press， London 1993)与Martin(ed.)，Remington’s Pharmaceutical Sciences。配方 可包括微胶囊，例如羟甲基纤维素或明胶微胶囊、微脂粒、白蛋白微 球体、微乳液、纳米粒子或纳米胶囊。

局部配方可制备为多种物理形式包括，例如，固体、糊剂、乳霜、 泡沫剂、洗剂、凝胶、粉剂、水性液体及乳液。该等形式的物理外观 及粘度可藉由配方中存在的乳化剂及粘度调整剂的存在与用量予以控 制。固体通常坚固及具非可浇注性，且通常配制为棒状或条状，或呈 粒状形式；固体可为不透明或透明，且视需要可包含溶剂、乳化剂、 湿化剂、软化剂、芳香剂、染剂/着色剂、防腐剂及增加或增强最终产 物效力的其它活性成分。乳霜及洗剂通常相似，主要不同在于其粘度； 洗剂及乳霜二者可为不透明、半透明或透明，及经常包含乳化剂、溶 剂及粘度调整剂、以及湿化剂、润滑剂、芳香剂、染剂/着色剂、防腐 剂及增加或增强最终产物效力的其它活性成分。凝胶可制备为具广泛 的粘性，从浓稠或高度粘度至稀薄或低度粘度。此等配方，像是洗剂 及乳霜，亦可包含溶剂、乳化剂、湿化剂、软化剂、芳香剂、染剂/着 色剂、防腐剂及增加或增强最终产物效力的其它活性成分。液体比乳 霜、洗剂或凝胶稀薄，且通常不包含乳化剂。液体局部的产品经常包 含溶剂、乳化剂、湿化剂、软化剂、芳香剂、染剂/着色剂、防腐剂及 增加或增强最终产物效力的其它活性成分。

用于局部配方的适合乳化剂包括，但不限定于，离子性乳化剂、 鲸蜡醇(cetearyl alcohol)、非离子性乳化剂例如聚氧伸乙基油基醚、 PEG-40硬脂酸酯、鲸蜡硬脂醇醚-12(ceteareth-12)、鲸蜡硬脂醇醚-20、 鲸蜡硬脂醇醚-30、鲸蜡硬脂醇(ceteareth alcohol)、PEG-100硬脂酸酯及 硬脂酸甘油酯。适合的粘度调整剂包括，但不限定于，保护性胶体或 非离子性胶类例如，羟乙基纤维素、黄原胶、硅酸镁铝、硅石、微晶 体蜡、蜂蜡、石蜡及棕榈酸鲸蜡酯。凝胶组合物可藉由添加胶凝剂而 形成例如，聚葡萄胺糖(chitosan)、甲基纤维素、乙基纤维素、聚乙烯 醇、聚季铵盐(polyquatemium)、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙 基甲基纤维素、卡波姆(carbomer)或胺化的甘草酸。适合的界面活性剂 包括，但不限定于，非离子性、两性、离子性及阴离子性界面活性剂。 举例而言，局部配方中可使用一种或多种硅灵共多元醇(dimethicone copolyol)、聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇 酯80、月桂醯胺DEA、椰油醯胺DEA、及椰油醯胺MEA、油基甜菜 碱、椰油醯胺丙基磷脂醯基PG-二铵化氯、及月桂醇硫酸铵。适合的防 腐剂包括，但不限定于，抗微生物剂例如对羟苯甲酸甲酯、对羟苯甲 酸丙酯、山梨酸、苯甲酸、及甲醛，以及具物理性安定剂及抗氧化剂 例如维生素E、抗坏血酸钠/抗坏血酸及五倍子酸丙酯。适合的湿化剂 包括，但不限定于，乳酸及其它羟基酸及其盐、甘油、丙二醇及丁二 醇。适合的软化剂包括羊毛脂醇、羊毛脂、羊毛脂衍生物、胆固醇、 石蜡脂、新戊酸异硬脂醯酯及矿物油。适合的芳香剂及着色剂包括， 但不限定于，FD&C红色40号、FD&C黄色5号。局部配方中可包括 于其它适合的附加成分包括，但不限定于，研磨剂、吸收剂、抗结块 剂、抗起泡剂、抗静电剂、收敛剂(例如，金缕梅、醇与草本萃取物例 如洋甘菊萃取物)、粘合剂/赋形剂、缓冲剂、螯合剂、薄膜形成剂、调 理剂、推进剂、遮光剂、pH调整剂及保护剂。

凝胶配方的适合的局部载体实例为：羟丙基纤维素(2.1％)；70/30 异丙醇/水(90.9％)；丙二醇(5.1％)；及聚山梨醇酯80(1.9％)。作为泡沫 剂配方的适合的局部载体实例为：鲸蜡醇(1.1％)；硬脂醇(0.5％)；季铵 盐52(1.0％)；丙二醇(2.0％)；乙醇95PGF3(61.05％)；去离子水(30.05 ％)；P75烃推进剂(4.30％)。所有百分比均为重量计。

局部组合物的典型传递模式包含使用手指的施用法；使用物理器 具例如布、面纸、纱布、棉棒或刷子的施用法；喷洒法(包含雾化、气 溶胶或泡沫喷雾)；点滴器施用法；洒水法；浸渍法；及清洗法。亦可 使用经控制的释放载体。

医药组合物可制备为无菌注射用水性或油质悬浮液。视所用载体 与浓度而定，可使调节剂悬浮或溶解于载体中。该组合物可使用例如 上述的适当分散剂、润湿剂及/或悬浮剂，根据已知技术予以调配。于 可接受的载体与溶剂中，可使用水、1，3-丁二醇、林格氏溶液(Ringer’s solution)及等张氯化钠溶液。此外，可使用无菌的固定油类作为溶剂或 悬浮介质。欲达此目的，可使用任何厂牌的固定油，包括合成的单-或 二甘油酯。另外，譬如油酸的脂肪酸可用于注射组合物的制备中，而 佐剂譬如局部麻醉剂、防腐剂及/或缓冲剂可溶于载体中。化合物亦可 配制成塞剂(例如，予以直肠投药)。该等组合物可藉由混合药物与适合 的无刺激性赋形剂而制备，即于常温时为固体但在直肠温度时为液体， 因此将于直肠溶解而释放出药物。适合的赋形剂包括，例如，可可脂 及聚乙二醇。

医药组合物可配制成持续释放配方(即于投药后可缓慢释放调节剂 效力的配方例如胶囊)。此等配方通常可使用习知技术予以制备并藉由， 例如，口服、直肠或皮下植入法、或藉由在所需标的位置植入法来投 药。此等配方中使用的载剂为生物可兼容性，且亦可为生物可降解性； 较佳为配方提供相当固定的调节剂释放量。持续释放型配方中所含调 节剂的量取决于，例如，植入位置、释放率与预期的释放时间及治疗 或预防的病症性质。

除了上述投药模式外或一起并用，可方便地将调节剂加入食物或 饮用水中(例如，投以至非人类动物包含伴陪动物(例如狗或猫)及家畜 动物)。动物的饲料及饮用水组合物可配制成以使动物能随其在饮食时 摄取组合物的适当量。亦可方便地使该组合物如预混合物以添加至饲 料或饮用水。

化合物通常可于治疗有效量投予，且较佳为治疗有效量。较佳地 全身性剂量每天每公斤体重不高于50毫克(例如，每天每公斤体重自约 0.001毫克至约50毫克的范围)，投以口服剂量通常比静脉内剂量高约 5至20倍(例如，每天每公斤体重自0.01至40毫克的范围)。

可将活性成分的量与载体物质结合以产生单一剂量单位，该单一 剂量单位取决于，例如，所治疗的患者及特定的投药模式而定同。剂 量单位通常包含约10微克至约500毫克间的活性成分。理想的剂量可 使用此项技术中已习知的例行测试及程序来建立。

医药组合物可包装成用以治疗对VR1调节有反应的病症(例如，治 疗暴露于类香草醇配位体或其它刺激物、疼痛、搔痒、肥胖或尿失禁)。 经包装的医药组合物可包括含有如本文所述的至少一种VR1调节剂的 治疗有效量的容器，及指示所含的组合物为用于治疗对VR1调节有反 应病症的患者的说明书(例如，卷标)。

使用方法

本文所提供的VR1调节剂可于活体外与活体内二者中，用于改变 多方面辣椒素受体的活性及/或活化作用。于某些态样中，VR1拮抗剂 可用于活体外或活体内抑制类香草醇配位体促效剂(例如辣椒素及/或 RTX)与辣椒素受体结合。一般而言，此等方法包括的步骤为使辣椒素 受体与一种或多种本文所提供的VR1调节剂于类香草醇配位体存在， 于水溶液中及其它适合配位体与辣椒素受体结合的条件下接触。该 VR1调节剂通常存在于足以改变类香草配位体与VR1在活体外结合的 浓度(使用提供于实例4的测定)及/或经VR1媒介的讯号传递(使用提供 于实例5的测定)。该辣椒素受体可存在于溶液或悬浮液中(例如，于分 离的膜或细胞制剂中)、或于培养或分离的细胞中。于某些实施例中， 该辣椒素受体可藉由存于患者中的神经元细胞表现，且该水性溶液为 体液。较佳地，投予动物的一种或多种VR1调节剂的量使得存在于动 物内至少一种体液的VR1调节剂在治疗有效浓度为1微摩尔浓度或更 少；较佳为500纳摩尔浓度或更少；更佳为100纳摩尔浓度或更少、 50纳摩尔浓度或更少、20纳摩尔浓度或更少、或10纳摩尔浓度或更 少。举例而言，此等化合物投予的剂量为小于20毫克/公斤体重，较佳 为小于5毫克/公斤，又于一些实例中为小于1毫克/公斤。

本文亦提供调节，较佳为降低，细胞辣椒素受体的讯号传递活性(即 钙离子传导)的方法。该调节可藉由辣椒素受体(于活体外或活体内中) 与一种或多种本文所提供的VR1调节剂于适合调节剂与受体结合的条 件下接触而达成。该VR1调节剂的浓度通常存在于足以改变如本文所 述的类香草醇配位体与VR1在活体外结合及/或VR1媒介的讯号传递。 该受体可存在于溶液或悬浮液中、于培养或分离的细胞制剂中或于患 者的细胞内。或者，举例而言，该细胞可为于动物活体内接触的神经 细胞、该细胞可为于动物活体内接触的上皮细胞，例如尿道膀胱上皮 细胞(泌尿上皮细胞)或为呼吸道上皮细胞。讯号传导活性的调节可藉由 检测对钙离子传导性的影响来分析(亦称为钙移动或流量)。讯号传导活 性的调节亦可藉由检测本文所提供一种或多种VR1调节剂治疗的患者 症状(例如，疼痛、灼烧感觉、支气管收缩、发炎、咳嗽、呃逆、搔痒、 尿失禁或膀胱过动症)的改变予以分析。

本文所提供VR1调节剂较佳为经口或局部投予患者(例如：人类)， 且当调节VR1讯号转导活性时，是存在于动物的至少一种体液中。使 用此方法于活体外调节VR1讯号传导活性的较佳VR1调节剂浓度为1 纳摩尔浓度或以下，较佳为100微微摩尔浓度或以下，更佳为20微微 摩尔浓度或以下，及于活体内体液(例如血液中)的浓度为1微摩尔浓度 或以下，500纳摩尔浓度或以下，或100纳摩尔浓度或以下。

本发明进一步提供一种治疗对VR1调节作用有反应的病症的方 法。本发明的上下文中，术语″治疗″包括改善疾病的治疗法及症状处理， 其可为预防性(即在症状出现的前处理，以预防、延缓或降低症状的严 重性)或治疗性(亦即在症状出现后处理，以降低症状的严重性与/或持 续性)。不论类香草醇配位体的局部含量，若病症的特征为辣椒素受体 活性不适当，及/或若辣椒素受体活性的调节作用造成病症或其症状减 轻时，则称该病症″对VR1调节作用有反应″。此等病症包括例如，因 暴露到VR1活化刺激所造成的症状，疼痛、呼吸病变例如气喘及慢性 阻塞性肺病、搔痒、尿失禁、膀胱过动症、咳嗽、呃逆与肥胖，其更 详细说明于下文中。此等病症可采用相关技艺已知的标准诊断及追踪。 患者可包括人类、驯养的伴陪动物与家畜，其剂量如上述。

疗程可能随所使用的化合物与所治疗的特定病症状况而定。然而， 治疗大多数病变时，以每天投药4次或以下的频率较佳。通常，以每 天投药2次的剂量疗程更佳，以每天投药1次特别佳。治疗急性疼痛 时，需要可迅速达到有效浓度的单一剂量。然而将了解，对任何特定 患者的明确剂量与疗程将依多项因素决定，包括所使用特定化合物的 活性、年龄、体重、一般健康情形、性别、饮食、投药时间、投药途 径与排泄速度、药物组合与治疗期间特定疾病的严重性。通常，以足 以提供有效疗法的最低剂量较佳。可采用适合所治疗或预防病症的医 学或兽医学标准追踪患者的治疗效果。

因曝露到辣椒素受体活化刺激而产生症状的患者症状包括因热、 光、催泪气体或酸而引起灼伤的个体及其粘膜曝露到(例如，经食入、 吸入或眼睛接触)辣椒素(例如，辣椒或胡椒喷雾)或相关刺激物，例如 酸、催泪气体、传染性制剂或空气污染的个体。所产生的症状(可使用 本文所提供VR1调节剂，尤指拮抗剂治疗的症状)可包括，例如疼痛、 支气管收缩与发炎。

可使用本文所提供VR1调节剂治疗的疼痛可为慢性或急性疼痛， 包括，但不限于，周边神经所媒介的疼痛(尤指神经病变性疼痛)。本文 所提供化合物可用于治疗，例如乳房切除手术后疼痛综合症、残肢疼 痛、幻想肢体疼痛、口腔神经病变性疼痛、牙痛(牙龈疼痛)、全口齿疼 痛、化疗后引发神经病变、糖尿病神经病变、反射交感神经营养障碍、 三叉神经痛、骨关节炎、类风湿关节炎、纤维肌痛、归-伯二氏 (Guillain-Barre)综合症、感觉异常性股痛、口腔灼热综合症及/或两侧周 边神经病变。其它神经病变性疼痛病症包括灼痛(反射交感神经营养障 碍-RSD、仅次于周边神经损伤)、神经炎(包括例如，坐骨神经炎、周 边神经炎、多发神经炎、视神经炎、发热后神经炎、游走性神经炎、 节段神经炎及贡博氏(Gombault′s)神经炎)、神经元炎、神经痛(例如， 如上述、颈臂神经痛、颅侧神经痛、膝状神经痛、舌咽神经痛、偏头 痛神经痛、自发性神经痛、肋间神经痛、乳房神经痛、下颌关节神经 痛、莫顿氏(Morton′s)神经痛、鼻睫状神经痛、枕骨神经痛、红斑性神 经痛、斯卢德氏(Sluder′s)神经痛、蝶颚神经痛、眶上神经痛与翼管神经 痛)、与手术相关的疼痛、肌肉骨胳疼痛、AIDS相关神经病变、MS相 关神经病变及脊椎伤害相关疼痛。头痛，包括涉及周边神经活性的疼 痛，例如窦性、簇集性(亦即偏头痛神经痛)与紧张性头痛及偏头痛，亦 可依本文的说明治疗。例如，当患者出现偏头痛前的预兆时，即可投 予本文所提供的化合物预防偏头痛。其它可依本文所说明治疗的疼痛 病症包括″口腔灼热综合症″、分娩疼痛、沙尔科氏(Charcot′s)疼痛、 肠胀气疼痛、月经疼痛、急性与慢性背痛(例如，下背疼痛)、痔疮疼痛、 消化不良疼痛、心绞痛、神经根疼痛、同位性疼痛与异位性疼痛-包括 癌症的相关疼痛(例如，骨癌患者)、与曝露到毒液有关的疼痛(与发 炎)(例如，因蛇咬伤、蜘蛛咬伤、或昆虫叮咬)及创伤的相关疼痛(例如， 手术后疼痛、因创伤、挫伤与骨折及烧烫伤引起的疼痛)。其它可依本 文所述治疗的疼痛病症包括与发炎性肠部疾病、刺激性肠部综合症及/ 或发炎性肠部疾病相关的疼痛。

于某些态样中，本文所提供VR1调节剂可用于治疗机械性疼痛。 本文所使用术语“机械性疼痛”指头痛以外的疼痛，其不为神经病变 性或因暴露到热、冷或外来化学刺激所致。机械性疼痛包括物理性创 伤(不为热或化学烧烫伤或其它曝露到有害化学物质的刺激及/或疼痛) 例如手术后疼痛及因创伤、挫伤与骨折引起的疼痛；牙痛；全口齿疼 痛；神经根疼痛；骨关节炎；类风湿性关节炎；肌纤维痛；感觉异常 性股痛；背痛；癌症相关疼痛；心绞痛；腕管综合症；及因骨折、分 娩、痔疮、肠部胀气、消化不良及月经引起的疼痛。

可治疗的搔痒病症包括干癣性搔痒、因血液透析引起的搔痒、疟 疾造成的搔痒及与外阴前庭炎有关的搔痒、接触性皮肤、昆虫叮咬与 皮肤过敏。可依本文说明治疗尿道疾病包括尿失禁(包括满溢性尿失禁、 急迫性尿失禁及压力性尿失禁)，与过动性或不稳定性膀胱疾病(包括因 脊柱造成迫肌过度反射与膀胱过度敏感)。于某些此等治疗法中，VR1 调节剂经由导管或类似装置投药，而可直接注射VR1调节剂至膀胱中。 本文所提供化合物亦可用为止咳剂(预防、缓解或压抑咳嗽)及治疗呃 逆，及促进肥胖患者减轻体重。

于其它态样中，本文所提供VR1调节剂可用于组合疗法中，提供 治疗涉及发炎成分的病症。此等病症包括，例如自体免疫病变与已知 具有发炎成分的病理性自体免疫反应，包括，但不限于，关节炎(尤指 类风湿性关节炎)、干癣、克隆氏症(Crohn′s disease)、红斑性狼疮、刺 激性肠部综合症、组织移植物排斥与移植器官的过急性排斥。其它此 等病症包括创伤(例如，头部或脊柱受伤)、心脏-及脑-血管疾病与某些 传染性疾病。

于此等组合疗法中，VR1调节剂是与消炎剂一起投予患者。VR1 调节剂与消炎剂可含在同一医药组合物中，或可分开依任一顺序投药。 消炎剂包括例如，非类固醇消炎药(NSAIDs)、非专一性与环氧化酶 -2(COX-2)专一性环氧化酵素抑制剂、金化合物、皮质类固醇、胺甲蝶 呤、肿瘤坏死因子(TNF)受体拮抗剂、抗TNFα抗体、抗C5抗体与介 白素-1(IL-1)受体拮抗剂。NSAID的实例包括，但不限于，布洛芬 (ibuprofen)(例如，ADVILTM、MOTRINTM)、氟布洛芬 (flurbiprofen)(ANSAIDTM)、拿普生(naproxen)或拿普生钠(例如， NAPROSYN、ANAPROX、ALEVETM)、双氯芬酸(diclofenac)(例如， CATAFLAMTM、VOLTARENTM)、双氯芬酸钠与米索前列醇(misoprostol) 的组合(例如，ARTHROTECTM)、速灵达(sulindac)(CLINORILTM)、奥沙 普泰(oxaprozin)(DAYPROTM)、二氟尼柳(diflunisal)(DOLOBIDTM)、炎 痛喜康(piroxicam)(FELDENETM)、美洒辛(indomethacin)(INDOCINTM)、 伊托多雷(etodolac)(LODINETM)、非诺洛芬钙(fenoprofen calcium) (NALFONTM)、酮洛芬(ketoprofen)(例如，ORUDISTM、ORUVAILTM)、 那丁美酮钠(sodium nabumetone)(RELAFENTM)、硫氮磺胺嘧啶 (sulfasalazine)(AZULFIDINETM)、托美汀钠(tolmetin sodium) (TOLECTINTM)、及羟氯喹(hydroxychloroquine)(PLAQUENILTM)。一种 特别的NSAID包括抑制环氧化酶(COX)酵素的化合物。NSAID进一步 包括水杨酸盐例如乙醯基水杨酸或阿司匹林、水杨酸钠、胆碱与水杨 酸镁(TRILISATETM)，与水杨醯水杨酸(DISALCIDTM)，及皮质类固醇例 如可体松(CORTONETM乙酸盐)、地塞美松(dexamethasone)(例如， DECADRONTM)、甲基氢化泼尼松(methylprednisolone)(MEDROLTM)、氢 化泼尼松(prednisolone)(PRELONETM)、氢化泼尼松磷酸钠(PEDIAPREDTM) 与泼尼松(例如，PREDNICEN-MTM、DELTASONETM、STERAPREDTM)。

于此等组合疗法中，VR1调节剂的合适剂量通常如上述。消炎剂 的剂量与投药方法可参见例如，制造商于Physician′s Desk Reference中 的说明。于某些具体实施例中，VR1调节剂与消炎剂的组合投药结果 可降低消炎剂要产生医疗效果时所需剂量(即降低最低医疗有效量)。 因此，本发明组合或组合疗法中，消炎剂的剂量最好低于制造商所建 议不与VR1拮抗剂组合投药时的最高消炎剂剂量。此剂量低于制造商 所建议不与VR1拮抗剂组合投药时的最高消炎剂剂量的3/4时更佳， 甚至更佳为低于1/2，极佳为低于1/4，最佳剂量为低于最高剂量的10％。 将了解，组合中VR1拮抗剂成分要达到所需效果时所需剂量同样会受 组合中消炎剂成分剂量与效力影响。

于某些较佳具体实施例中，VR1调节剂与消炎剂的组合投药法是 将一种或多种VR1调节剂与一种或多种消炎剂包装在同一包装中，在 同一包装中分装在不同容器中、或为含有一种或多种VR1拮抗剂与一 种或多种消炎剂的混合物装在同一容器中。较佳混合物是调配成口服 投药用(例如，呈丸剂、胶囊、锭剂等)。于某些具体实施例中，包装中 包含卷标，指示该一种或多种VR1调节剂与一种或多种消炎剂是用于 共同治疗发炎疼痛病症。

于其它态样中，本文所提供VR1调节剂可与一种或多种其它解除 疼痛的医药组合。某些此等医药亦为上列的消炎剂。其它此等医药为 麻醉止痛剂，包括典型作用在一种或多种类鸦片受体亚型(例如，μ、 κ及/或δ)的麻醉剂，较佳为作为促效剂或部份促效剂。此等药剂包括 鸦片制剂、鸦片制剂衍生物与类鸦片剂，以及其医药上可接受的盐与 水合物。于较佳具体实施例中，麻醉止痛剂的明确实例包括阿芬他泥 (alfentanyl)、安依痛(alphaprodine)、阿尼利定(anileridine)、贝齐醯胺 (bezitramide)、丁丙诺菲(buprenorphine)、丁啡喃(butorphanol)、可待因 (codeine)、二乙醯基二氢吗啡、二乙醯基吗啡、二氢可待因、地芬诺酯 (diphenoxylate)、乙基吗啡、芬坦尼(fentanyl)、海若英、氢可酮 (hydrocodone)、氢化吗啡酮(hydromorphone)、异美沙酮(isomethadone)、 左旋甲吗凡(levomethorphan)、左旋凡(levorphane)、左吗喃(levorphanol)、 麦啶(meperidine)、美索辛(metazocine)、美沙酮(methadone)、甲吗凡 (methorphan)、甲基二氢吗啡酮(metopon)、吗啡、鸦片萃出物、鸦片液 体萃出物、鸦片粉末、鸦片粒剂、生鸦片、鸦片酊剂、羟考酮(oxycodone)、 羟氢吗啡酮(oxymorphone)、帕格利(paregoric)、喷他左辛(pentazocine)、 配西啶(pethidine)、安唑辛(phenazocine)、去痛啶(piminodine)、丙氧吩 (propoxyphene)、消旋甲吗喃(racemethorphan)、消旋吗喃(racemorphan)、 蒂巴因(thebaine)及前述制剂的医药上可接受的盐类与水合物。

麻醉止痛剂的其它实例包括例如，乙醯吩(acetorphine)、乙醯基二 氢可待因、乙醯美沙醇(acetylmethadol)、烯丙基普洛定(allylprodine)、 α-乙醯美沙醇(alphracetylmethadol)、α-美普定(alphameprodine)、α- 美沙醇(alphamethadol)、苯塞啶(benzethidine)、苯甲基吗啡、β-乙醯美 沙醇(betacetylmethadol)、β-美普定(betameprodine)、β-美沙醇 (betamethadol)、β-普洛定(betaprodine)、克尼辛(clonitazene)、可待因 甲基溴化物、可待因-N-氧化物、希普吗啡(cyprenorphine)、二氢脱氧吗 啡(desomorphine)、右旋莫醯胺(dextromoramide)、二普醯胺 (diampromide)、二乙基塞吩丁烯(diethylthiambutene)、吗福啉二苯丁酸 乙酯(dioxaphetyl butyrate)、狄匹潘浓(dipipanone)、羟蒂巴酚 (drotebanol)、乙醇、乙基甲基塞吩丁烯(ethylmethylthiambutene)、依托 嗒辛(etonitazene)、依托芬(etorphine)、依托利定(etoxeridine)、夫特定 (furethidine)、氢化吗啡醇(hydromorphinol)、羟基普地啶 (hydroxypethidine)、酮基贝米酮(ketobemidone)、左旋莫醯胺 (levomoramide)、左旋酚醯基吗喃(levophenacylmorphan)、甲基脱氧吗 啡(methyldesorphine)、甲基二氢吗啡、吗啡啶(morpheridine)、吗啡、 甲基普醯胺(methylpromide)、吗啡甲基磺酸酯、吗啡-N-氧化物、吗咯 吩(myrophin)、纳洛酮(naloxone)、纳曲酮(naltyhexone)、烟可待因 (nicocodeine)、烟吗啡(nicomorphine)、去甲基醯基美沙醇 (noracymethadol)、去甲基左吗喃(norlevorphanol)、去甲基美沙酮 (normethadone)、去甲基吗啡、去甲基比喃酮(norpipanone)、苯他索唑 因(pentazocaine)、苯吗庚酮(phenadoxone)、酚安普醯胺 (phenampromide)、酚吗喃(phenomorphan)、酚普啶(phenoperidine)、匹 立屈密特(piritramide)、尔可啶(pholcodine)、普庚索辛(proheptazoine)、 备解素(properidine)、丙匹胺(propiran)、消旋莫醯胺(racemoramide)、蒂 巴康(thebacon)、三甲普啶(trimeperidine)及其医药上可接受的盐类与水 合物。

进一步明确的代表性止痛剂包括例如， 与 (均来自温莎药厂(Sanofi Winthrop Pharmaceuticals；New York，NY))； (Reckitt&Coleman 药厂；Richmond，VA)； (Purdue Pharma L.P.药厂；Norwalk，CT)； (Knoll药厂；Mount Olive，NJ)； (Janssen药厂；Titusville，NJ)； 与 (均来自Endo药厂；Chadds Ford，PA)； MS/S与MS/L(均来自Richwood药厂；Florence，KY)、 与 (均来自Roxanne Laboratories 实验室；Columbus OH)及 (Bristol-Myers Squibb药厂；New York，NY)。其它止痛剂包括CB2-受体促效剂，例如AM1241，及与α 2δ亚单位结合的化合物，例如尼克定(Neurontin)(Gabapentin)与普加灵 (pregabalin)。

于其它态样中，本文所提供VR1调节剂可与一种或多种白三烯受 体拮抗剂(例如，抑制半胱胺醯基白三烯CysLT1受体的药剂)组合使用。 CysLT1拮抗剂包括蒙特利克(Montelukast) Merck&Co.， Inc.)。此等组合可用于治疗肺部疾病，例如气喘。

本发明进一步提供治疗尿失禁的组合疗法。于此方面中，本文所 提供的VR1调节剂可与其它用于治疗此等疾病的药物组合使用，例如 蕈毒碱受体拮抗剂，如特洛定 Pharmacia Corporation药厂)或抗胆碱激导性剂，例如欧比汀 (oxybutynin) Ortho-McNeil Pharmaceutical，Inc.，Raritan， NJ)。

此等组合疗法中合适的VR1调节剂剂量通常如上述。其它解除疼 痛的医药剂量与投药方法可参见例如制造商于Physician′s Desk Reference中的说明。于某些具体实施例中，VR1调节剂与一种或多种 其它解除疼痛的医药的组合投药结果可降低要产生医疗效果时所需各 医疗剂的剂量(例如，其中一种或两种药剂的剂量可小于上述或制造商 所建议的最高剂量的3/4、小于1/2、小于1/4、或小于10％)。于某些 具体实施例中，VR1调节剂与一种或多种其它解除疼痛的医药的组合 投药法，如上述，藉由将一种或多种VR1调节剂与一种或多种其它解 除疼痛的医药包装在同一包装中而达成。

作为VR1促效剂的化合物进一步可用在例如，群体控制(替代催泪 气体)或个人保护(亦即呈喷雾调配物)或经由辣椒素受体去敏化作用， 作为治疗疼痛、搔痒、尿失禁或膀胱过动症的医疗剂。通常，用于群 体控制或个人保护的化合物是依据习知催泪气体或胡椒喷雾技术调配 及使用。

于另一态样中，本发明提供多种本文所提供化合物的非医药活体 外与活体内用途。例如，此等化合物可加以标记，(于如细胞制剂或组 织切片、制剂或其部份中)用为检测与定位辣椒素受体的探针。此外， 本文所提供包含合适反应基(例如芳基、羰基、硝基或叠氮基)的化合物 可用于受体结合位置的光亲和性标记试验。此外，本文所提供化合物 亦可用为受体活性分析法中的阳性对照组，作为决定候选试剂与辣椒 素受体结合的能力的标准物，或作为正子放射断层扫瞄摄影(PET)放射 追踪剂或单光子放射计算机断层扫瞄摄影(SPECT)用的放射性追踪剂。 此等方法可用于判别活体中辣椒素受体。例如，VR1调节剂可使用多 种习知技术标记(例如，放射性标记如本文中说明的放射性核种，例如 氚)，与样本培育一段合适的时间(例如，先分析一段结合时间决定). 培育后，排除未结合的化合物(例如，经由洗涤)，采用任何适合所采用 标记物的方法检测已结合的化合物(例如，自动放射照相术或闪烁计数 法，测定标记放射性的化合物；可采用分光镜分析法检测冷光基团与 萤光基团)。依相同方式处理含有标记的化合物与较高量(例如，超过 10倍以上)无标记的化合物的配对样本作为对照组。试验样本中残留可 检测的标记物含量高于对照组时，表示样本中含有辣椒素受体。检测 分析法，包括培养细胞或组织样本中辣椒素受体的受体自动放射照相 术(受体图谱分析)可依Kuhar述于Current Protocols in Pharmacology (1998)John Wiley & Sons，New York”中第8.1.1至8.1.9.节中的方法进 行。

本文所提供的化合物亦可用于多种习知的细胞分离法。例如，调 节剂可连结组织培养板或其它撑体的内表面，用为固定亲和性配位体， 藉以于活体外单离辣椒素受体(例如，单离表现受体的细胞)。于一较佳 具体实施例中，调节剂是连结萤光标记物，例如萤光素，与细胞接触 后，使用萤光活化的细胞筛选法(FACS)分析(或单离)。

本文所提供VR1调节剂可进一步用于判别其它结合辣椒素受体的 制剂的分析法。通常，此等分析法为标准竞争结合分析法，其中已结 合的有标记VR1调节剂经试验化合物置换。简言的，进行此等分析法 的方式为：(a)由辣椒素受体与本文所说明有标记放射性的化合物，于 可使化合物与辣椒素受体结合的条件下接触，藉以产生已结合的有标 记的化合物；(b)在没有试验制剂存在下检测与已结合的有标记化合物 含量相应的讯号；(c)由已结合的有标记化合物与试验制剂接触；(d)在 试验制剂的存在下检测与已结合的有标记化合物含量相应的讯号；及(e) 与步骤(b)所检测到的讯号比较，测定步骤(d)的讯号降低程度。

下列实例是供说明用，并未加以限制。除非另有说明，否则所有 试剂与溶剂均为标准商品级，未再进一步纯化即使用。采用例行修饰 法可以变化起始物与其它所采用的步骤，以制成本文所提供的其它化 合物。

实施例

                        实施例1

代表性经杂烷基取代的联苯-4-羧酸芳基醯胺类似物的制备

此实施例是说明合成N-{4-叔丁基-3-[2-(2，6-二甲基吗啉-4-基)-乙 氧基]-苯基}-4-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-苯甲醯胺(顺式)。

1.叔丁基-[2-(2-叔丁基-5-硝基-苯氧基)-乙氧基]-二甲基-硅烷

于0℃，于二异丙基偶氮二羧酸酯(2.02克，10毫摩尔)及三苯膦 (2.63克，10毫摩尔)于THF(100毫升)溶液中加入2-叔丁基-5-硝基酚 (1.95克，10毫摩尔)，然后再加入第三-(丁基二甲基硅烷基氧基)乙醇 (1.76克，10毫摩尔)。使反应混合物回温至室温并搅拌整夜。于乙酸 乙酯及1M氢氧化钠间使残余物分开，并进一步以乙酸乙酯萃取。干 燥结合的萃取物(MgSO4)并于减压下浓缩。残余物于硅胶经急骤层析法 纯化(95％己烷/5％醚)，产生标题化合物。

2.4-叔丁基-3-[2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-乙氧基]-苯甲醯胺

于叔丁基-[2-(2-叔丁基-5-硝基-苯氧基)-乙氧基]二甲基-硅烷(353 毫克，1.0毫摩尔)及氯化钙(131毫克，11毫摩尔)于乙醇(5毫升)与水 溶液中加入铁粉(660毫克，11毫摩尔)。回流溶液2小时，冷却及经硅 藻土过滤。于减压下浓缩混合物，以乙酸乙酯预溶再以食盐水洗涤。 于减压下浓缩溶液，产生标题化合物。

3.4-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-苯甲酸

于氮气气氛下于90℃加热2-氯-3-三氟甲基吡啶(4.5克，25毫摩 尔)、4-羧基苯并苯甲酸(5.4克，33.0毫摩尔)、四(三苯膦)钯(0)(1.4克， 1.1毫摩尔)及2M碳酸钾(30毫升)于乙腈(200毫升)的混合物12小时。 冷却反应混合物及经蒸发移除降低容积。以二氯甲烷分开及以浓盐酸 酸化水层。过滤收集沉淀物，产生标题化合物。

4.N-{4-叔丁基-3-[2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-乙氧基]-苯基}-4-(3- 三氟甲基-吡啶-2-基)-苯甲醯胺

于室温搅拌4-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-苯甲酸(540毫克，2毫摩 尔)、4-叔丁基-3-[2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-乙氧基]-苯甲醯胺(640 毫克，2毫摩尔)、三乙基胺(303毫克，3.0毫摩尔)、六氟磷酸苯并三 唑-1-基-氧基-三(二甲基氨基)鏻(1.32克，3.0毫摩尔)于二氯甲烷(50毫 升)的溶液2小时。于乙酸乙酯及水间分开残余物，并进一步以乙酸乙 酯萃取。以水、饱和水性碳酸氢钠与食盐水洗涤结合的有机萃取物。 经层析法纯化残余物，以(95％氯仿/5％甲醇)洗提，产生标题化合物。

5.N-[4-叔丁基-3-(2-羟基-乙氧基)-苯基]-4-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-苯 甲醯胺

于60℃加热N-{4-叔丁基-3-[2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-乙氧 基]-苯基}-4-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-苯甲醯胺(572毫克，1.0毫摩尔) 及对苯磺酸(75毫克)于THF(40毫升)及水(10毫升)18小时的混合物。 蒸发至干及分开乙酸乙酯与饱和水性碳酸氢钠。进一步以乙酸乙酯萃 取水溶液及以食盐水洗涤结合的有机萃取物。经层析法纯化残余物， 以(75％乙酸乙酯/25％己烷)洗提，产生标题化合物。(p40第8-10行)

6.N-{4-叔丁基-3-[2-(2.6-二甲基-吗啉基-4-基)-乙氧基]-苯基}-4-(3-三 氟甲基-吡啶-2-基)-苯甲醯胺(顺式)

搅拌N-[4-叔丁基-3-(2-羟基-乙氧基)-苯基]-4-(3-三氟甲基-吡啶-2- 基)-苯甲醯胺(46毫克，0.1毫摩尔)、三乙基胺(10毫克，0.1毫摩尔)、 甲磺醯氯(12毫克，0.1毫摩尔)于二氯甲烷(12毫升)中1小时。蒸发至 干及将残余物再容于乙腈(4毫升)中。添加碳酸钾(69毫克，0.3毫摩尔) 及反式-二甲基吗啉(33毫克，0.3毫摩尔)。于80℃加热混合物12小时。 蒸发至干及分开乙酸乙酯与饱和水性碳酸钠。进一步以乙酸乙酯萃取 及以食盐水洗涤结合的有机萃取物。经层析法纯化残余物，以(95％氯 仿/5％甲醇)洗提，产生标题化合物。

MS 556 (M+1).300MHz 1H NMR(CDCl3)：1.15(d，6H)，1.39(s，9H)，1.88(t，2H)，2.82(m，4H)，3.64(m， 2H)，4.14(t，2H)，6.91(d，1H)，7.21(d，1H)，7.45(dd，1H)7.58-7.62(m，3H)，7.92(d，2H)，8.06(s， 1H)，8.14(d，lH)，8.84(d，1H).

                          实施例2

其它代表性经杂烷基取代的联苯-4-羧酸芳基醯胺类似物

使用例行修饰法，改变该起始物质，及采用其它步骤，可产生本 文提供的其它化合物。表I所示化合物是采用此等方法制备。″IC50″栏 中的″*″代表其是依实施例5的方法测定，且小于1微摩尔浓度或以下 (亦即使曝露到1 IC50辣椒素的细胞所产生萤光反应下降至50％时，所 需此等化合物的浓度为1微摩尔浓度或以下)。质谱数据为电喷洒MS， 是使用加装Waters 600帮浦，Waters 996光二极管数组检测器，Gilson 215自动取样机与Gilson 841微注射器的Micromass Time-of-Flight LCT，以15V或30V锥管电压(cone voltage)，在阳离子模式下测得。 采用MassLynx(Advanced Chemistry Development，Inc；Toronto，Canada) 4.0版软件收集数据及分析。取1微升样本体积注射至50×4.6毫米 Chromolith SpeedROD C18管柱中，采用两相线性梯度，依6毫升/分钟 的流速冲提。使用220至340nm UV范围内测得的总吸光度检测样本。 冲提条件为：移动相A-95/5/0.05水/甲醇/TFA；移动相B-5/95/0.025水 /甲醇/TFA。

梯度：          时间(分钟)                ％B

                0                         10

                0.5                       100

                1.2                       100

                1.21                      10

每次注射的间的总运作时间为2分钟。

                     表1

代表性经杂烷基取代的联苯-4-羧酸芳基醯胺类似物

                    实施例3

VR1-转感染的细胞与膜制剂

此实施例说明用于辣椒素结合性分析法(实施例4)及功能性分析法 (实施例5)的VR1-转感染的细胞与膜制剂的制法。

取编码全长度人类椒素受体的cDNA(美国专利案第6,482,611号的 SEQ ID NO：1、2或3)次选殖至质体pBK-CMV(Stratagene，La Jolla，CA)， 供于哺乳动物细胞中重组表现。

使用标准方法，使人类胚胎肾脏(HEK293)细胞经编码全长度人类 辣椒素受体的pBK-CMV表现构筑体进行转感染。在含G418(400μg/ml) 的培养基中选取转感染的细胞两周，得到一群安定转感染的细胞。经 由限制稀释法，自此群细胞中单离出独立纯系，得到纯系的安定细胞 株，供下一个试验使用。

进行放射性结合性试验时，接种细胞至T175细胞培养烧瓶内不含 抗生素的培养基中，生长至约90％融合度。烧瓶随后经PBS洗涤，于 含5mM EDTA的PBS中收集细胞。细胞经温和离心集结成块，保存在 -80℃下，至分析为止。

取先前冷冻的细胞利用组织均质器的助匀散于冰冷HEPES均质缓 冲液中(5mM KCl、5.8mM NaCl、0.75mM CaCl2、2mM MgCl2、320mM 蔗糖与10mM HEPES pH 7.4)。组织均质液先于1000xg(4℃)下离心 10分钟，然后排除核部份及细胞碎片，然后取第一次离心的上澄液再 于35,000xg(4℃)下离心30分钟，得到部份纯化的膜部份。膜先再悬 浮于HEPES均质缓冲中后才进行分析。取一份膜均质液，利用Bradford 方法(BIO-RAD蛋白质分析套组，#500-0001，BIO-RAD，Hercules，CA) 测定蛋白质浓度。

                       实例4

              辣椒素受体结合性分析法

本实施例说明辣椒素受体结合性的代表性分析法，其可用于测定 化合物对辣椒素(VR1)受体的结合亲和性。

与[3H]树脂毒素(resiniferatoxin)(RTX)的结合性试验基本上是依 Szallasi与Blumberg(1992)J.Pharmacol.Exp.Ter.262：883-888中说明的 方法进行。此方法中，当结合反应结束后，非专一性RTX结合性会因 添加牛α1酸醣蛋白(每支试管100微克)而下降。

[3H]RTX(37Ci/毫摩尔)是由国家癌症研究所-费得利克癌症研究与 发展中心的化学合成与分析实验室(the Chemical Synthesis and Analysis Laboratory，National Cancer Institute-Frederick Cancer Research and Development Center，Frederick，MD)合成得到。[3H]RTX亦可得自商品 (例如：药厂Amersham Pharmacia Biotech，Inc.；Piscataway，NJ)。

取实施例3的膜均质液依上述离心及再悬浮于均质缓冲液中，达 蛋白质浓度333μg/ml。于冰上制备结合性分析法混合物，其中包含 [3H]RTX(比活性2200mCi/ml)、2μl非放射活性试验化合物、0.25mg/ml 牛血清白蛋白(Cohn部份V)、与5x104至1x105VR1-转感染细胞。使用 上述冰-冷HEPES均质缓冲液(pH 7.4)调整最终体积至500μl(用于竞 争结合性分析法)或1,000μl(用于饱和结合性分析法)。非专一结合性的 定义为在1μM非放射活性RTX(Alexis Corp.；San Diego，CA)的存在 下的结合性。分析饱和结合性时，[3H]RTX的添加浓度范围为7至1,000 pM，稀释1至2次。典型作法为每条饱和结合性曲线收集11个浓度点。

竞争结合性分析法是于60pM[3H]RTX及不同浓度的试验化合物 的存在下进行。将分析混合物移至37℃水浴中，开始进行结合性反应， 培养60分钟后，试管于冰上冷却，中止反应。于WALLA玻璃纤维滤 纸(PERKIN-ELMER，Gaithersburg，MD)(使用前先浸泡1.0％PEI(聚乙 烯亚胺)2小时)上过滤分离与膜结合的RTX及游离的RTX，及任何与 α1酸醣蛋白结合的RTX。使滤纸干燥一夜后，添加WALLAC BETA SCINT闪烁计数液，于WALLAC 1205BETA PLATE计数器上计数。

平衡结合性参数的决定法是代入变构性希尔公式(the allosteric Hill equation)，藉由计算机程序FIT P(Biosoft，Ferguson，MO)的助(说明于 Szallasi等人的(1993)J. Pharmacol.Exp.Ther.266：678-683)计算数据。 本文所提供化合物于此分析法中对辣椒素受体的Ki值小于1μM、100 nM、50nM、25nM、10nM或1nM。

                        实施例5

                     钙移动性分析法

本实施例说明用于分析试验化合物的促效剂与拮抗剂活性的代表 性钙移动性分析法。

经表现质体转感染(依实施例3所述)藉以表现人类辣椒素受体的 细胞接神至FALCON黑边，透明底板的96孔板中(#3904， BECTON-DICKINSON，Franklin Lakes，NJ)，生长至融合度70至90％。 排空96孔板中的培养基，在各孔中添加FLUO-3AM钙敏感性染料 (Molecular Probes，Eugene，OR)(染料溶液：1毫克FLUO-3AM、440μL DMSO与440μl 20％普罗尼克酸(pluronic acid)的DMSO溶液，于克氏 -林格氏(Krebs-Ringer)HEPES(KRH)缓冲液(25mM HEPES、5mM KCl、0.96mM NaH2PO4、1mM MgSO4、2mM CaCl2、5mM葡萄糖、 1mM羧苯磺胺(probenecid)，pH 7.4)中稀释1∶250，每孔50μl稀释溶 液)。以铝箔盖上分析板，于37℃的含5％CO2环境下棓养1至2小时。 培养后，排空分析板中的染料，以KRH缓冲液洗涤细胞一次，再悬浮 于KRH缓冲液中。

辣椒素EC50的测定法

为了测定试验化合物于表现辣椒素受体的细胞中对辣椒素或其它 类香草醇促效剂促效或撷抗钙移动性反应的能力，因此先测定促效剂 辣椒素的EC50。在各孔细胞中添加依上述制备的20μl KRH缓冲与1 μl DMSO。采用FLIPR仪器，自动取出100μl含辣椒素的KRH缓 冲液加至各孔中。采用萤光扫瞄器(FLUOROSKAN ASCENT) (Labsystems；Franklin，MA)或FLIPR(萤光测定仪显影板读数系统； Molecular Devices，Sunnyvale，CA)仪器追踪辣椒素诱发的钙移动性作 用。以施用促效剂后30至60秒的间的数据制成8个点的浓度效应曲 线，最终辣椒素浓度为1nM至3μM。采用KALEIDAGRAPH软件 (Synergy Software，Reading，PA)将数据代入公式：

            y＝a*(l/(l+(b/x)c)) 以测定反应的50％激发浓度(excitatory concentration；EC50)。此公式中， y为最高萤光讯号，x为促效剂或拮抗剂(此时指辣椒素)浓度，a为Emax； b相当于EC50值，且c为希尔是数(Hill coefficient)。

促效剂活性测定法

取试验化合物溶于DMSO中，于KRH缓冲液中稀释，立即加至 依上述制备的细胞中。亦添加100nM辣椒素(约EC90浓度)至相同96 孔分析板中作为阳性对照组。分析孔中试验化合物的最终浓度为0.1nM 至5μM的间。

试验化合物作为辣椒素受体的促效剂的能力是测定表现辣椒素受 体的细胞被化合物诱发的萤光反应随化合物浓度的变化来决定。依上 述代入此数据，得到EC50，结果通常小于1微摩尔浓度，较佳为小于 100nM，更佳为小于10nM。亦由指定试验化合物浓度(典型为1μM) 诱发的反应相对于由100nM辣椒素诱发的反应计算各试验化合物的效 力程度。此数值称为讯号百分比(POS)，由下列公式计算：

          POS＝100*试验化合物反应/100nM辣椒素反应

此分析法提供一种同时分析试验化合物作为人类辣椒素受体促效 剂的强度与效力的定量法。人类辣椒素受体的促效剂通常在小于100 μM浓度下诱发可检测的反应，或较佳为小于1μM的浓度，或最佳 为小于10nM的浓度。其在1μM浓度时，对人类辣椒素受体的效力 程度较佳为大于30POS，更佳为大于80POS。某些促效剂在下文说明 的分析法中，于低于4nM的化合物浓度下没有可检测的拮抗剂活性， 即证实其基本上没有拮抗剂活性，更佳为低于10μM的浓度，及最佳 为低于或等于100μM的浓度。

拮抗剂活性测定法

取试验化合物溶于DMSO中，以20μl KRH缓冲液稀释，使分析 孔中最终试验化合物浓度为1μM至5μM的间，加至如上述制备的细 胞中。取含已制备的细胞与试验化合物的96孔板于黑暗中与室温下培 养0.5至6小时。应注意，培养时间不可持续超过6小时。即将测定 萤光反应的前，才利用FLIPR仪器自动添加100μl含辣椒素的KRH 缓冲液至96孔板各孔中，其浓度为如上述测得的EC50的两倍浓度，最 终样本体积为200μl，最终辣椒素浓度等于EC50。分析孔中试验化合 物的最终浓度为1μM至5μM的间。辣椒素受体的拮抗剂在10微摩 尔浓度或以下浓度，较佳为1微摩尔浓度或以下浓度，使此反应相对 于配对对照组(亦即在没有试验化合物的存在下，使用两倍EC50浓度的 辣椒素处理的细胞)降低至少约20％，较佳为至少约50％，最佳为至少 80％。取相对于在辣椒素的存在下及没有拮抗剂下所观察到的反应降低 50％时所需拮抗剂浓度，为拮抗剂的IC50，较佳为低于1微摩尔浓度、 100纳摩尔浓度、10纳摩尔浓度或1纳摩尔浓度。

某些较佳VR1调节剂为于上述分析法中，于低于4nM的化合物浓 度下没有可检测的促效剂活性时，即证实其基本上没有促效剂活性， 更佳为低于10μM的浓度，及最佳为低于或等于100μM的浓度。

                     实施例6

               微粒体活体外半衰期

此实施例说明采用代表性肝微粒体半衰期分析法分析化合物半衰 期值(t1/2值)的方法。

集合的人类肝微粒体是得自XenoTech LLC(Kansas City，KS)。此等 肝微粒体亦可得自活体外技术(Baltimore，MD)或组织转形技术(Edison， NJ)。制备6个试验反应，分别含25μl微粒体、5μl的100μM试验 化合物溶液与399μl 0.1M磷酸盐缓冲液(19mL 0.1M NaH2PO4、81 mL 0.1M Na2HPO4，使用H3PO4调至pH7.4)。制备第7个反应作为正 对照组，其中包含25μl微粒体、399μl 0.1M磷酸盐缓冲液与5μl 100 μM已知其代谢性质的化合物溶液(例如，DIAZEPAM或 CLOZAPINE)。反应是于39℃下预培养10分钟。

辅因子混合物的制法为取16.2毫克NADP与45.4毫克葡萄糖-6- 磷酸盐于4mL 100mM MgCl2中稀释。葡萄糖-6-磷酸盐脱氢酶溶液的 制法为取214.3μl葡萄糖-6-磷酸盐脱氢酶悬浮液(洛氏药厂(Roche Molecular Biochemicals，Indianapolis，IN)供应)于1285.7μl蒸馏水中稀 释。添加71μl起始反应混合物(3mL辅因子混合物；1.2mL葡萄糖-6- 磷酸盐脱氢酶溶液)至6个试验反应中的5个以及正对照组中。添加71 μl 100mM MgCl2至第6个试验反应中，作为负对照组。在各指定 时间点(0、1、3、5、与10分钟时)，取75μl的各别反应混合物滴加 至96孔含有75μl冰冷乙 的深孔分析板的孔中。将样本涡转混合， 于3500rpm下离心10分钟(Sorval T 6000D离心机，H1000B转子)。自 各反应中取出75μl上澄液移至96孔分析板中，其中各孔含有150μl 0.5μM已知其LCMS图形(内标准)的化合物。进行各样本的LCMS分 析法，由AUC测定未代谢的试验化合物含量，画出化合物浓度对时间 的曲线，外插得到试验化合物的t1/2值。

本发明所提供较佳化合物于人类肝微粒体中的活体外t1/2值最好 大于10分钟及小于4小时，较佳为30分钟至1小时的间。

                         实施例7

                     MDCK毒性分析法

此实施例说明采用Madin Darby犬肾脏(MDCK)细胞的细胞毒性分 析法分析化合物的毒性。

在透明底板的96孔分析板(PACKARD，Meriden，CT)的各孔中添加 1μl试验化合物，使分析法中化合物终浓度为10微摩尔浓度、100微 摩尔浓度或200微摩尔浓度。对照组孔中则添加没有试验化合物的溶 剂。

取MDCK细胞，ATCC no.CCL-34(美国菌种培养收集处(American Type Culture Collection，Manassas，VA))，依ATCC生产资料页的指示， 维持在无菌条件下。取融合的MDCK细胞经胰蛋白酶处理，收集后， 使用温热(37℃)培养基(VITACELL伊格氏最低必需培养基(Minimum Essential Medium Eagle)、ATCC目录#30-2003)稀释至浓度0.1×106 个细胞/毫升。添加100μL稀释的细胞至各孔中，但其中5个标准曲 线对照组分析孔中改含100μl没有细胞的温热培养基。分析板随后于 37℃下，于95％O2、5％CO2中，恒定振荡培养2小时。培育后，于每 孔中添加50μL哺乳动物细胞溶胞液(PACKARD(Meriden，CT) ATP-LITE-M冷光ATP检测套组)，孔上加盖PACKARD TOPSEAL贴 纸，再将分析板于合适振荡器上，在约700rpm下振荡2分钟。

相对于未处理的细胞，会引起毒性的化合物将会降低ATP生产。 ATP-LITE-M冷光ATP检测套组通常是依据制造商的指示使用，以测 定已处理及未处理的MDCK细胞中的ATP产量。使PACKARD ATP LITE-M试剂平衡至室温。一旦平衡后，即取冷冻干燥的受质溶液于 5.5mL受质缓冲液(来自套组)中再组成。冷冻干燥的ATP标准溶液于去 离子水中再组成，形成10mM母液(stock)。于5个对照组孔，分别添 加10μL经一系列稀释的PACKARD标准物至各标准曲线对照组孔中， 使各连续孔的最终浓度为200nM、100nM、50nM、25nM与12.5nM。 于所有孔均添加PACKARD受质溶液(50μL)，然后加盖，将分析板于 合适的振荡器上，于约700rpm下振荡2分钟。将白色PACKARD贴 纸粘在各分析板底部，使用金属箔包裹分析板，将样本保持在黑暗中 10分钟。然后于22℃下使用冷光计数器(例如，PACKARD TOPCOUNT 微分析板闪烁与冷光计数器或TECAN SPECTRAFLUOR PLUS)测定 冷光度，并由标准曲线计算ATP含量。比较经试验化合物处理的细胞 中的ATP含量与未处理细胞中所测得ATP含量。经10μM较佳试验 化合物处理的细胞中的ATP含量为未处理细胞的至少80％，较佳为至 少90％。当试验化合物使用100μM浓度时，经较佳试验化合物处理 的细胞中检测的ATP含量为未处理细胞的至少50％，较佳为至少80％。

                      实施例8

                背根神经节细胞分析法

此实施例说明用于分析化合物的VR1拮抗剂或促效剂活性的代表 性背根神经节细胞分析法。

依标准方法，自新生大鼠中切下DRG，解离及培养(Aguayo与 White(1992)Brain Research 570：61-61)。培养48小时后，洗涤细胞一 次，与钙敏感性染料Fluo 4AM(2.5至10μg/ml；TefLabs，Austin，TX) 培养30至60分钟。然后再洗涤细胞一次。采用萤光计测定Fluo-4萤 光的变化，追踪细胞内钙浓度因添加辣椒素至细胞中而随VR1增加的 变化。收集60至180秒的数据，测定最高萤光讯号。

于拮抗剂分析法中，添加不同浓度的化合物至细胞。然后以化合 物浓度为函数画出萤光讯号曲线，以判别达到抑制50％辣椒素活化反 应时所需的浓度，或IC50。辣椒素受体的拮抗剂的较佳IC50低于1微 摩尔浓度、100纳摩尔浓度、10纳摩尔浓度或1纳摩尔浓度。于促效 剂分析法中，添加不同浓度的化合物至没有添加辣椒素的细胞中。作 为辣椒素受体促效剂的化合物采用萤光计追踪Fluo-4萤光变化时，细 胞内钙浓度会随VR1增加。达到辣椒素活化反应最高讯号的50％时所 需浓度为EC50，其较佳为低于1微摩尔浓度、低于100纳摩尔浓度或 低于10纳摩尔浓度。

                      实施例8

               测定疼痛解除的动物模式

此实例说明分析化合物解除疼痛程度的代表性方法。

A.疼痛解除试验

下列方法是用于分析疼痛解除程度。

机械性异常疼痛

基本上依Chaplan等人的(1994)J. Neurosci.Methods 53：55-63及Tal 与Eliav的(1998)Pain 64(3)：511-518中说明的方法分析机械性异常疼痛 (对无害刺激产生的异常反应)。取一系列不同刚度的凡弗瑞(von Frey) 丝线(典型为一系列8至14种丝线)施加在后脚足底表面上，其力量恰 足使丝线弯曲。丝线保持此位置不超过3秒钟或直到大鼠出现阳性异 常疼痛反应为止。阳性异常疼痛反应包括举起处理的后脚，立即舔或 摇动脚部。采用狄克森上下分析法(Dixon up-down method)决定各丝线 的施加顺序与频率。使用此系列中的中等丝线开始试验，随后依向上 或向下顺序连续施用，分别依开始时所使用丝线是否出现阴性或阳性 反应而定。

若接受此等化合物处理的大鼠相较于未处理对照组或媒剂处理组 大鼠需要使用较高刚度的凡弗瑞(von Frey)丝线方可引起阳性异常疼痛 反应时，表示该化合物可有效逆转或预防类似机械性异常疼痛的症状。 或者，或此外，可在投予化合物的前及的后测试动物的慢性疼痛。此 等分析法中，相较于处理前诱发反应时所需丝线或未经处理或经媒剂 处理且亦具慢性疼痛的动物所需丝线，有效化合物可使处理后诱发反 应所需丝线刚度提高。试验化合物是于疼痛发作的前或的后投药。当 试验化合物在疼痛发作的后投药时，在投药后进行试验10分钟至3小 时。

机械性痛觉过敏

基本上依Koch等人的(1996)Analgesia 2(3)：157-164说明的方法测 定机械性痛觉过敏(对疼痛刺激的反应过度)。取大鼠置于有温热多孔金 属地板的个别笼内。在任一只后脚足底表面上温和针刺后，测定后脚 抽回的时间期(亦即动物将其后脚放回地板上的前保持的时间)。

若化合物使后脚抽回的时间期缩短达统计显著性时，则该化合物 可降低机械性痛觉过敏。试验化合物是于疼痛发作的前或的后投药。 当试验化合物在疼痛发作的后投药时，在投药后进行试验10分钟至3 小时。

热痛觉过敏

基本上依Hargreaves等人说明于(1988)Pain.32(1)：77-88中方法测 定热痛觉过敏(对有害热刺激的反应过度)。简言的，在动物任一只后脚 的足底表面施加恒定的辐射热源。抽回后脚的时间(亦即动物移动后脚 的前的加热时间期)，或称为热阈值或潜伏期，即可决定动物后脚对热 的敏感性。

若化合物使后脚抽回的时间期加长达统计显著性时(亦即出现反应 的热阈值或潜伏期加长)，则该化合物可降低热痛觉过敏。试验化合物 是于疼痛发作的前或的后投药。当试验化合物在疼痛发作的后投药时， 在投药后进行试验10分钟至3小时。

B.疼痛模式

可采用下列任一种方法诱发疼痛，以测定化合物的止痛效力。一 般而言，采用雄性SD大鼠及下列至少一种模式时，本文所提供化合物 可在上述至少一种试验法中使疼痛在统计上显著降低。

急性发炎疼痛模式

急性发炎疼痛是基本上依Field等人说明于(1997)Br.J.Pharmacol. 121(8)：1513-1522中的角叉菜胶(carrageenan)模式中诱发急性疼痛。取 100至200μl的1至2％角叉菜胶溶液注射大老鼠后脚中。注射后3至 4小时，依上述方法测定动物对热及与机械性刺激的敏感性。在试验前 或注射角叉菜胶的前，对动物投予试验化合物(0.01至50mg/kg)。化合 物可经口或任何非经肠式、或局部投药至脚部。在此模式中解除疼痛 的化合物可使机械性异常疼痛及/或热痛觉过敏在统计上显著降低。

慢性发炎疼痛模式

采用下列一种方法诱发慢性发炎疼痛：

1.基本上依Bertorelli等人说明于(1999)Br.J. Pharmacol. 128(6)：1252-1258的方法及Stein等人说明于(1998)Pharmacol. Biochem.Behav.31(2)：455-51的方法，取200μl完全弗洛伊德氏辅剂 (Complete Freund′s Adjuvant)(0.1毫克的热杀死与干燥的结核菌(M Tuberculosis))注射至大鼠后脚中：100μl注入足背，100μl注入足底 表面。

2.基本上依Abbadie等人说明于(1994).JNeurosci.14(10)：5865-5871的 方法，在大鼠的胫骨跗骨关节上注射150μlCFA(1.5mg)。

其任一方法中，在注射CFA的前，先取得各试验动物后脚对机械 及热刺激的个别敏感度底线。

注射CFA后，依上述测试大鼠的热痛觉过敏、机械性异常疼痛与 机械性痛觉过敏。为了确使其发展出症状，在注射CFA后第5、6与7 天时才开始进行大鼠试验。第7天时，以试验化合物、吗啡或媒剂处 理动物。以口服剂量为1至5mg/kg的吗啡作为合适的阳性对照组。典 型采用的试验化合物剂量为0.01至50mg/kg。化合物可在试验前呈单 一大丸剂投药或在试验前，每天投药1、2或3次，进行数天。药物可 经口或任何非经肠式途径、或局部投药给动物。

其结果以最高可能效力百分比(MPE)表示。0％MPE的定义为媒剂 的止痛效力，100％MPE的定义为动物恢复注射CFA前的底线敏感度。 在此模式中解除疼痛的化合物所得到的MPE为至少30％。

慢性神经病变性疼痛模式

慢性神经病变性疼痛是基本上依Bennett与Xie说明于(1988)Pain 33：87-107中的方法，采用慢性收缩伤害(CCI)处理大鼠坐骨神经而诱 发。麻醉大鼠(例如，经腹膜内使用剂量50至65mg/kg的戊巴比妥及 依需要再增加剂量)。将后脚侧面刮干净及消毒。采用无菌技术，切开 后脚侧面中股。将股二头肌切成钝端，曝露出坐骨神经。在每只动物 的其中一只后脚上，依约1至2毫米的间隔，将四条结扎线松弛结扎 坐骨神经。另一只脚的坐骨神经则没有结扎且不处理。随后盖上肌肉， 使用伤口夹或缝合线缝合皮肤。依上述分析大老鼠的机械性异常疼痛、 机械性痛觉过敏与热痛觉过敏。

当化合物在此模式中，在即将试验前呈单一大丸剂投药或在试验 前，每天投药1、2或3次，进行数天(0.01至50mg/kg，经口、非经 肠式或局部投药)时，该化合物可在统计上显著降低机械性异常疼痛、 机械性痛觉过敏及/或热痛觉过敏。