生物样本血液中苯系物的测定方法
阅读：477发布：2020-05-12
专利汇可以提供生物样本血液中苯系物的测定方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 为一种 生物 样本血液中苯系物的测定方法，即通过吹扫捕集/气相色谱/质谱联用技术同时测定血液中6种苯系物含量的方法。本发明对吹扫捕集实验条件进行优化，使血液中的6种苯系物富集和解析，然后用气相色谱/质谱联用和以同位素内标法选择特征离子进行定性和定量分析。本发明方法操作简便、分析周期短、分离度好，准确度和精 密度 能满足分析测试的要求，适合用于生物样本血液中苯系物的同时检测分析。，下面是生物样本血液中苯系物的测定方法专利的具体信息内容。
1.一种生物样本血液中苯系物的测定方法，其特征在于：采用吹扫捕集/气相色谱/同位素内标质谱联用法测定血液中苯系物的含量，该测定方法具体包括如下步骤：
混标溶液的配制：称取苯系物的纯物质，用甲醇配制混标溶液；
同位素内标溶液的配制：称取苯系物的同位素物质，用甲醇配制同位素内标溶液；
标准系列溶液的配制：取混标溶液，用甲醇配成具有5级以上浓度梯度的标准系列溶液；分别取各级浓度的标准系列溶液加入到对应的进样瓶中，并在每个进样瓶中依次加入同位素内标溶液、空白血液和消泡剂，最后用纯水定容；
标准系列溶液的检测及标准曲线的绘制：将各级浓度的标准系列溶液通过吹扫捕集仪和气质联用仪进行测定，以浓度为横坐标、以标准系列溶液中苯系物和同位素内标溶液中苯系物的峰面积之比为纵坐标，绘制各物质的标准曲线，并计算得到标准曲线方程；
血样的测定：取血样加入进样瓶中，依次加入同位素内标溶液和消泡剂，最后用纯水定容，然后通过吹扫捕集仪和气质联用仪进行测定，得到血样中苯系物和同位素内标溶液中苯系物的峰面积之比，将峰面积之比分别代入对应的标准曲线方程中，得到血样中苯系物的含量。
2.根据权利要求1所述的生物样本血液中苯系物的测定方法，其特征在于：吹扫捕集仪的参数设定：以99. 999%的氦气为吹扫气，吹扫时间为11 min，吹扫流量为40mL/min；解析温度为250℃，解析流量为300 mL/min，解析时间为2 min；烘烤温度为280℃，烘烤流量为
200 mL/min，烘烤时间为2 min。
3.根据权利要求2所述的生物样本血液中苯系物的测定方法，其特征在于：气质联用仪的参数设定：色谱柱为DB-624毛细管色谱柱，色谱柱规格为30m×0.25mm×1.4μm；柱温为起始温度40℃保持3min，以10℃/min升到150℃，保持0.5 min，再以15℃/min升到210℃，保持
4min；分流进样，分流比为20：1；进样口温度为250℃；载气为99.999%的氦气；恒流模式，载气流量为1.2 mL/min；离子源种类为EI，离子源温度为250℃；传输线温度为280℃；电子轰击能量为70 eV。
4.根据权利要求3所述的生物样本血液中苯系物的测定方法，其特征在于：配制各单标浓度为100μg/mL的混标溶液。
5.根据权利要求4所述的生物样本血液中苯系物的测定方法，其特征在于：配制各单标浓度为200ng/mL的同位素内标溶液。
6.根据权利要求1-5中任意一项所述的生物样本血液中苯系物的测定方法，其特征在于：血样的准备过程包括通过静脉穿刺收集血液样本于采血管中，采样后将真空采血管中血样倒入样品瓶中，并于4℃冷藏保存。
生物样本血液中苯系物的测定方法
技术领域
[0001] 本发明涉及化学分析检测技术领域，具体是一种生物样本血液中苯系物的测定方法。
背景技术
[0002] 苯系物是化工、医药、农药、制革等行业的重要原料和溶剂。由于苯系物具有较强的挥发性，在环境中广泛存在，因其接触途径广，已成为一种重要的职业危害因素。由于苯系物对人体健康的危害极大，如对造血系统造成损伤及致畸致癌。因此如何对苯系物内暴露含量进行有效的测定是当前环境医学领域研究的热点和亟待解决的问题。
[0003] 目前，对于空气中、水中苯系物的检测方法已有很多，而且各方法已被公众所熟知，与水、空气等相比，血液成分及理化性质非常复杂，用于检测水和空气中苯系物的方法并不适用于对血液的检测。目前未见有关于生物样本血液中苯系物的检测技术的报道。
发明内容
[0004] 本发明提供一种生物样本血液中苯系物的测定方法，至少达到分离度好，准确度和精密度能满足分析测试的要求。
[0005] 针对以上技术问题，本发明提供的生物样本血液中苯系物的测定方法，采用吹扫捕集/气相色谱/同位素内标质谱联用法测定血液中苯系物的含量，该测定方法具体包括如下步骤：混标溶液的配制：称取苯系物的纯物质，用甲醇配制混标溶液；
同位素内标溶液的配制：称取苯系物的同位素物质，用甲醇配制同位素内标溶液；
标准系列溶液的配制：取混标溶液，用甲醇配成具有5级以上浓度梯度的标准系列溶液；分别取各级浓度的标准系列溶液加入到对应的进样瓶中，并在每个进样瓶中依次加入同位素内标溶液、空白血液和消泡剂，最后用纯水定容；
标准系列溶液的检测及标准曲线的绘制：将各级浓度的标准系列溶液通过吹扫捕集仪和气质联用仪进行测定，以浓度为横坐标、以标准系列溶液中苯系物和同位素内标溶液中苯系物的峰面积之比为纵坐标，绘制各物质的标准曲线，并计算得到标准曲线方程；
血样的测定：取血样加入进样瓶中，依次加入同位素内标溶液和消泡剂，最后用纯水定容，然后通过吹扫捕集仪和气质联用仪进行测定，得到血样中苯系物和同位素内标溶液中苯系物的峰面积之比，将峰面积之比分别代入对应的标准曲线方程中，得到血样中苯系物的含量。
同位素内标溶液的配制：称取苯系物的同位素物质，用甲醇配制同位素内标溶液；
标准系列溶液的配制：取混标溶液，用甲醇配成具有5级以上浓度梯度的标准系列溶液；分别取各级浓度的标准系列溶液加入到对应的进样瓶中，并在每个进样瓶中依次加入同位素内标溶液、空白血液和消泡剂，最后用纯水定容；
标准系列溶液的检测及标准曲线的绘制：将各级浓度的标准系列溶液通过吹扫捕集仪和气质联用仪进行测定，以浓度为横坐标、以标准系列溶液中苯系物和同位素内标溶液中苯系物的峰面积之比为纵坐标，绘制各物质的标准曲线，并计算得到标准曲线方程；
血样的测定：取血样加入进样瓶中，依次加入同位素内标溶液和消泡剂，最后用纯水定容，然后通过吹扫捕集仪和气质联用仪进行测定，得到血样中苯系物和同位素内标溶液中苯系物的峰面积之比，将峰面积之比分别代入对应的标准曲线方程中，得到血样中苯系物的含量。
[0006] 本发明采用P&T/GC/MS联用技术同位素内标法，对生物样本血液中苯系物含量进行准确的定性定量分析，为人体苯系物内暴露检测方法提供科学依据，检测结果分离度好，准确度和精密度能满足分析测试的要求。本发明使用到了同位素内标法。现有技术中定量方法多用外标法或归一化法，但是归一化法需要知道各组分的校正因子，不适于微量杂质的含量测定；外标法要求对照品溶液的浓度与样品中组分的浓度相近，且该方法的准确性受进样重复性和实验条件稳定性的影响。内标法即选择样品中不含有的纯物质作为内标物加入待测样品溶液中，以待测组分和内标的峰面积做比值，测定待测组分含量的方法。内标法优点：在色谱柱不超载的范围内，定量结果与进样量重复性无关；只要被测物质和内标物出峰，且能完全分离就可定量，与其他组分无关；能避免实验各步处理操作中的待测组分丢失造成的定量不准确。内标法缺点：内标物不易得。内标物的要求：内标物是原样品中不含有的组分，否则会使峰重叠而无法准确测量内标物的峰面积；内标物与待测化合物有相同或相似的理化性质，它们的保留时间应相近，但彼此能完全分离(分离度≥1.5)；内标物要求与样本成分不干扰、不反应；内标物必须是纯度合乎要求的纯物质。本发明用同位素取代物作为内标，即用同位素取代待测化合物的C或H，使内标物质与待测化合物既有相似的理化性质又彼此能完全分离。同位素内标与待测化合物的保留时间和离子丰度等色谱行为类似。
[0007] 进一步地，吹扫捕集仪的参数设定：以99. 999%的氦气为吹扫气，吹扫时间为11 min，吹扫流量为40mL/min；解析温度为250℃，解析流量为300 mL/min，解析时间为2 min；烘烤温度为280℃，烘烤流量为200 mL/min，烘烤时间为2 min。约35%-70%的血液检测结果差错出自血样检测前。为获得可靠的检测数据，提供给疾病预防控制中心和环保部门真实准确的实验数据，必须严格控制采血、血液保存及检测等一系列过程中的干扰。血液中的苯系物属于痕量有毒有害有机污染物，需要采用高富集效率和高灵敏度的分析测试技术进行检测。为此，本发明采用吹扫捕集技术（P&T）来高效富集生物样本血液中的挥发性苯系物（苯、甲苯、乙苯、间/对二甲苯和邻二甲苯），不仅可降低分析方法的检出限，而且不需有机溶剂和萃取基质，可有效避免有机试剂与血液样本中某些成分的相互作用等产生的二次污染。并且本发明针对血液的特性，对吹扫捕集的条件参数等进行了针对性的优化，例如通过分析吹扫温度和吹扫时间、解吸温度和解吸时间对吹扫捕集效率的影响，最终确定适合参数。
[0008] 进一步地，气质联用仪的参数设定：色谱柱为DB-624毛细管色谱柱，色谱柱规格为30m×0.25mm×1.4μm；柱温为起始温度40℃保持3 min，以10℃/min升到150℃，保持0.5 min，再以15℃/min升到210℃，保持4 min；分流进样，分流比为20：1；进样口温度为250℃；
载气为99. 999%的氦气；恒流模式，载气流量为1.2 mL/min；离子源种类为EI，离子源温度为250℃；传输线温度为280℃；电子轰击能量为70 eV。气相色谱-质谱法（GC/MS）可对痕量的未知化合物进行定性定量分析，方法灵敏度高、使用范围广，是目前最重要、应用最多的分析测试技术之一，已被广泛应用于分析水、空气中VOCs。同位素内标化合物与目标化合物的化学性质几乎完全一样，所以在测试过程中的富集效率、损失程度和基质影响等完全一致，可用来校正分析方法的测试偏差。
载气为99. 999%的氦气；恒流模式，载气流量为1.2 mL/min；离子源种类为EI，离子源温度为250℃；传输线温度为280℃；电子轰击能量为70 eV。气相色谱-质谱法（GC/MS）可对痕量的未知化合物进行定性定量分析，方法灵敏度高、使用范围广，是目前最重要、应用最多的分析测试技术之一，已被广泛应用于分析水、空气中VOCs。同位素内标化合物与目标化合物的化学性质几乎完全一样，所以在测试过程中的富集效率、损失程度和基质影响等完全一致，可用来校正分析方法的测试偏差。
[0009] 进一步地，步骤1），配制各单标浓度为100μg/mL的混标溶液。
[0010] 进一步地，步骤2），配制各单标浓度为200ng/mL的同位素内标溶液。
[0012] 综上所述，本发明所提供的一种用吹扫捕集/气相色谱/质谱联用技术同时测定生物样本血液中苯系物含量的方法，对吹扫捕集实验条件进行优化，使生物样本血液中的苯系物富集和解析，然后用气相色谱/质谱联用和以同位素内标法选择特征离子进行定性和定量分析。通过优化吹扫捕集参数，本发明方法实现了对生物样本血液中苯、甲苯、乙苯、间/对二甲苯、邻二甲苯6种苯系物的同时富集、解析和准确测定。本发明方法检出限为0.002 0.011μg/L，线性范围为0.043 10.99μg/L，低、高浓度的加标回收率范围分别为~ ~
72.78% 81.03%、82.27% 109.09%。对同一样品重复进行6次分析，RSD范围为3.47% 7.36%。
~ ~ ~
本方法操作简便、分析周期短、分离度好，准确度和精密度能满足分析测试的要求，适合用于生物样本血液中6种苯系物的同时检测分析。
附图说明
72.78% 81.03%、82.27% 109.09%。对同一样品重复进行6次分析，RSD范围为3.47% 7.36%。
~ ~ ~
本方法操作简便、分析周期短、分离度好，准确度和精密度能满足分析测试的要求，适合用于生物样本血液中6种苯系物的同时检测分析。
附图说明
[0013] 图1为不同吹扫流速下各色谱峰面积变化趋势。
[0014] 图2为不同吹扫温度下各色谱峰面积变化趋势。
[0015] 图3为不同解析温度时各色谱峰面积变化趋势。
[0016] 图4为不同解析时间下各色谱峰面积变化趋势。
[0017] 图5为浓度为1.563μg/L的混标溶液的选择离子谱图。
具体实施方式
[0018] 本发明采用吹扫捕集/气相色谱/同位素内标质谱联用法测定血液中苯系物的含量，在一种典型的实施方式中，该测定方法具体包括如下步骤：混标溶液的配制：称取苯系物的纯物质，用甲醇配制混标溶液；
同位素内标溶液的配制：称取苯系物的同位素物质，用甲醇配制同位素内标溶液；
标准系列溶液的配制：取混标溶液，用甲醇配成具有5级以上浓度梯度的标准系列溶液；分别取各级浓度的标准系列溶液加入到对应的进样瓶中，并在每个进样瓶中依次加入同位素内标溶液、空白血液和消泡剂，最后用纯水定容；
标准系列溶液的检测及标准曲线的绘制：将各级浓度的标准系列溶液通过吹扫捕集仪和气质联用仪进行测定，以浓度为横坐标、以标准系列溶液中苯系物和同位素内标溶液中苯系物的峰面积之比为纵坐标，绘制各物质的标准曲线，并计算得到标准曲线方程；
血样的测定：取血样加入进样瓶中，依次加入同位素内标溶液和消泡剂，最后用纯水定容，然后通过吹扫捕集仪和气质联用仪进行测定，得到血样中苯系物和同位素内标溶液中苯系物的峰面积之比，将峰面积之比分别代入对应的标准曲线方程中，得到血样中苯系物的含量。
同位素内标溶液的配制：称取苯系物的同位素物质，用甲醇配制同位素内标溶液；
标准系列溶液的配制：取混标溶液，用甲醇配成具有5级以上浓度梯度的标准系列溶液；分别取各级浓度的标准系列溶液加入到对应的进样瓶中，并在每个进样瓶中依次加入同位素内标溶液、空白血液和消泡剂，最后用纯水定容；
标准系列溶液的检测及标准曲线的绘制：将各级浓度的标准系列溶液通过吹扫捕集仪和气质联用仪进行测定，以浓度为横坐标、以标准系列溶液中苯系物和同位素内标溶液中苯系物的峰面积之比为纵坐标，绘制各物质的标准曲线，并计算得到标准曲线方程；
血样的测定：取血样加入进样瓶中，依次加入同位素内标溶液和消泡剂，最后用纯水定容，然后通过吹扫捕集仪和气质联用仪进行测定，得到血样中苯系物和同位素内标溶液中苯系物的峰面积之比，将峰面积之比分别代入对应的标准曲线方程中，得到血样中苯系物的含量。
[0019] 在一种相对具体的实施方式中，包括如下步骤：1）首先，打开高纯氮气罩，通气15 min，使操作环境充满氮气。
[0020] 2）混标溶液的配制：称取苯系物的纯物质，优选用甲醇配制得到各单标浓度为100μg/mL的混标溶液。
[0021] 具体为：a、准确称取苯0.0281g、甲苯0.0344g、乙苯0.0248g、间二甲苯0.0283g、对二甲苯0.0283 g、邻二甲苯0.0277 g于10.0mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度线，得到苯2.81mg/mL、甲苯3.44mg/mL、乙苯2.48mg/mL、间二甲苯2.83mg/mL、对二甲苯2.83mg/mL、邻二甲苯2.77mg/mL标准溶液；b、准确取上述配置的各标准溶液苯356μL、甲苯291μL、乙苯403μL、间二甲苯354μL、对二甲苯354 μL、邻二甲苯361μL于10.0mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度线，得到各单标浓度为100.0μg/mL的混标溶液；c、分装入1 mL棕色安瓿瓶中，封口后置于冰箱中，4℃冷藏保存。
[0022] 3）同位素内标溶液的配制：称取苯系物的同位素物质，优选用甲醇配制得到各单标浓度为200ng/mL的同位素内标溶液。
[0023] 具体为：a、准确称取苯（D5）0.0421g、甲苯（D5）0.0435g、乙苯（D10）0.0451g、间/对二甲苯（D10）0.0452g、邻二甲苯（D4）0.0357g于10.0mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度线，得到同位素单标储备液；b、准确取上述配制的苯（D5）2.375 mL、甲苯（D5）2.299mL、乙苯（D10）2.217 mL、间/对二甲苯（D10）2.212mL、邻二甲苯（D4）2.801mL于50.0mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度线，得到浓度为200μg/mL的同位素混标贮备液；c、分装入1 mL棕色安瓿瓶中，封口后置于冰箱中，4℃冷藏保存；d、取上述同位素混标贮备液1.0mL，用甲醇稀释至10.00mL，得到浓度为20.0μg/mL同位素混标中间液；e、取上述同位素混标中间液0.1mL，用甲醇稀释至
10.00mL，得到浓度为200.0ng/mL的同位素内标溶液；f、分装入10 mL棕色溶剂小瓶中，封口后置于冰箱中，4℃冷藏保存。
10.00mL，得到浓度为200.0ng/mL的同位素内标溶液；f、分装入10 mL棕色溶剂小瓶中，封口后置于冰箱中，4℃冷藏保存。
[0024] 4）测定仪器的参数设定：测定过程中使用到的仪器有美国Thermo Fisher Scientific公司的TQU03947气质联用仪；美国Tekmar公司的吹扫捕集仪、吹扫捕集仪自动进样器；美国Agilent公司的DB-624弹性石英毛细管色谱柱；25 mL砂芯式吹扫管；40 mL内衬有聚四氟乙烯膜的棕色进样瓶；7 mL的内含肝素钠和氟化钠的玻璃真空采血管；5 mL棕色玻璃样品瓶。
[0025] 吹扫捕集仪的参数设定：以99. 999%的氦气为吹扫气，吹扫时间为11 min，吹扫流量为40mL/min；解析温度为250℃，解析流量为300 mL/min，解析时间为2 min；烘烤温度为280℃，烘烤流量为200 mL/min，烘烤时间为2 min。
[0026] a、吹扫时间与吹扫流速的确定吹扫时间与吹扫流速是吹扫捕集技术的重要参数，吹扫时间与吹扫流速的乘积即吹扫气总体积。吹扫气总体积越大，则吹扫效率越高。但是吹扫气总体积过大，会将捕集在冷阱中的被分析组分吹落或吹散，降低吹扫效率和结果的重现性。针对血液特性，以及为了节约分析时间、提高工作效率，本发明选择11 min作为吹扫时间，对吹扫流速进行了优化。选取
34、36、38、40、42 mL/min为时间梯度，取同浓度的混合标准溶液进行分析，比较不同吹扫流速下各色谱峰面积的变化。
34、36、38、40、42 mL/min为时间梯度，取同浓度的混合标准溶液进行分析，比较不同吹扫流速下各色谱峰面积的变化。
[0027] 混合标准溶液中六种苯系物浓度均为200 ng/L，不同吹扫流速下各色谱峰面积变化趋势见图1。可见，在36 44mL/min范围内，随着吹扫流速的增大，色谱峰面积逐渐增大；当~吹扫流速为40mL/min时，色谱峰面积达到最大值；吹扫流速大于40mL/min后，色谱峰面积出现了下降。针对血液特性，本发明选择吹扫流速为40 mL/min。
[0028] b、吹扫温度的确定升高吹扫温度可提高吹扫效率，并且缩短吹扫时间。尤其在吹扫高水溶性化合物时，吹扫温度对吹扫效率的影响更大。但是吹扫温度如果过高，会导致吹扫出的水蒸气过多，不利于待测组分在冷阱中的吸附。而且高水分会导致中极性气相色谱柱的分离效率下降，并损害其使用寿命。对于水中VOC，一般选取20 50℃为常用温度；而血液中基质复杂，40℃以上~
温度会导致部分蛋白质发生变形，甚至堵塞管路。因此，本发明选取20、25、30、35、40℃为温度梯度，取同浓度的混合标准溶液进行分析，比较不同吹扫温度下各色谱峰面积的变化。
温度会导致部分蛋白质发生变形，甚至堵塞管路。因此，本发明选取20、25、30、35、40℃为温度梯度，取同浓度的混合标准溶液进行分析，比较不同吹扫温度下各色谱峰面积的变化。
[0029] 混合标准溶液中六种苯系物浓度均为200 ng/L，不同吹扫温度下各色谱峰面积变化趋势见图2。可见，色谱峰面积随着吹扫温度的升高而增大。但考虑到血液的特性，本发明选择吹扫温度为40℃。
[0030] c、解析温度的确定解析温度是吹扫捕集技术的另一关键参数。当完成吹扫以后，解析器迅速加热捕集管，使捕集阱表面吸附的化合物脱离出来，并随载气吹入气相系统。解析温度越高，捕集管加热时间约短，解析越完全，即吹扫效率越高，而且高解析温度有利于形成尖锐对称的色谱峰。
但解析温度过高会降低捕集阱和吸附剂的寿命。针对血液特性，本发明选取220、230、240、
250、260℃为温度梯度，取同浓度的混合标准溶液进行分析，比较不同解析温度时各色谱峰面积的变化。
但解析温度过高会降低捕集阱和吸附剂的寿命。针对血液特性，本发明选取220、230、240、
250、260℃为温度梯度，取同浓度的混合标准溶液进行分析，比较不同解析温度时各色谱峰面积的变化。
[0031] 混合标准溶液中六种苯系物浓度均为200 ng/L，不同解析温度时各色谱峰面积变化趋势见图3。可见，在210 250℃温度范围内，随着解析温度的增大，色谱峰面积逐渐增大；~
250℃以后色谱峰面积趋于平稳。针对血液特性以及为了保护捕集阱和吸附剂，本发明选择解析温度为250℃。
250℃以后色谱峰面积趋于平稳。针对血液特性以及为了保护捕集阱和吸附剂，本发明选择解析温度为250℃。
[0032] d、解析时间的确定解析时间越长，解析越完全，吹扫效率越高。但过长的解析时间会降低吸附剂使用寿命，并导致色谱峰拖尾。针对血液特性，我们选取1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 min为时间梯度，取同浓度的混合标准溶液进行分析，比较不同解析时间下各色谱峰面积的变化。
[0033] 混合标准溶液中六种苯系物浓度均为200 ng/L，不同解析时间下各色谱峰面积变化趋势见图4。可见，在1.0 2.0 min温度范围内，随着解析时间的增长，色谱峰面积逐渐增~大；2.0 min以后色谱峰面积趋于平稳。针对血液特性以及为了保护吸附剂，本发明选择解析时间为2.0 min。
[0034] e、清洗烘烤参数的确定一般水中清洗循环设置为1次。血液中成分复杂，含有大量血凝块、絮状蛋白质和血细胞等。为了最大程度地减少挥发性物质的损失，本发明的前处理步骤简单，所以血液中的各种物质极易堵塞吹扫捕集仪的传输管路和各电磁阀。试验中发现，设定清洗循环为3次后，仪器堵塞现象明显减少。
[0035] 若被测组分的浓度较高，会导致仪器本底值偏高。所以，应设定较高的烘烤温度和较长的烘烤时间，以减少残留在仪器内的挥发性物质。本发明选择烘烤温度为280 ℃，烘烤时间为2 min。
[0036] 气质联用仪的参数设定：色谱柱为DB-624毛细管色谱柱，色谱柱规格为30m×0.25mm×1.4μm；柱温为起始温度40℃保持3 min，以10℃/min升到150℃，保持0.5 min，再以15℃/min升到210℃，保持4 min；分流进样，分流比为20：1；进样口温度为250℃；载气为
99. 999%的氦气；恒流模式，载气流量为1.2 mL/min；离子源种类为EI，离子源温度为250℃；传输线温度为280℃；电子轰击能量为70 eV。每种化合物的保留时间由全扫描模式确定，质谱峰顶点值由SIM模式确定，选择离子见表1。
99. 999%的氦气；恒流模式，载气流量为1.2 mL/min；离子源种类为EI，离子源温度为250℃；传输线温度为280℃；电子轰击能量为70 eV。每种化合物的保留时间由全扫描模式确定，质谱峰顶点值由SIM模式确定，选择离子见表1。
[0037] 5）标准系列溶液的配制：取混标溶液，用甲醇配成具有5级以上浓度梯度的标准系列溶液；分别取各级浓度的标准系列溶液加入到对应的进样瓶中，并在每个进样瓶中依次加入同位素内标溶液、空白血液和消泡剂，最后用纯水定容；测定水中VOC时，配制的标准系列溶液一般不加基质，而是直接用水配制；本发明配制的标准系列溶液加了空白血液，从而消除了基质效应。
[0038] 具体为：a、将混标溶液和同位素内标溶液恢复至室温；b、在15个进样小瓶中分别加入0.40mL甲醇，取0.40mL、100.0μg/mL 的混标溶液（A）到第一个小瓶，混匀，得到浓度为50.0μg/mL的混标溶液（B）；同理，取0.40mL混标溶液（B）到第二个小瓶得到浓度为25.0μg/mL的混标溶液（C）……，以此类推，依次逐级“倍比”稀释，先是得到浓度为2500、1250、625、
313、156、78.1、39.1、19.5、9.77、4.89、0ng/mL的标准系列溶液（注：增加一个空白），然后继续用甲醇依次逐级“倍比”稀释，最后得到浓度梯度为12.5、6.25、3.13、1.56、0.78、0.39、
0.20、0.10、0.05、0.025、0 ng/mL的标准系列溶液；c、取每级的200μL标准系列溶液加入
40mL进样瓶，加入5mL空白血液，然后依次加入200μL同位素内标溶液、一滴消泡剂（约
0.039g）和20 mL纯水，密封样品瓶（注：垫片的聚四氟乙烯面朝下），上下震荡20次，再将进样瓶中加满纯水，密封样品瓶。
313、156、78.1、39.1、19.5、9.77、4.89、0ng/mL的标准系列溶液（注：增加一个空白），然后继续用甲醇依次逐级“倍比”稀释，最后得到浓度梯度为12.5、6.25、3.13、1.56、0.78、0.39、
0.20、0.10、0.05、0.025、0 ng/mL的标准系列溶液；c、取每级的200μL标准系列溶液加入
40mL进样瓶，加入5mL空白血液，然后依次加入200μL同位素内标溶液、一滴消泡剂（约
0.039g）和20 mL纯水，密封样品瓶（注：垫片的聚四氟乙烯面朝下），上下震荡20次，再将进样瓶中加满纯水，密封样品瓶。
[0039] 6）标准系列溶液的检测及标准曲线的绘制：将各级浓度的标准系列溶液通过吹扫捕集仪和气质联用仪进行测定，以浓度为横坐标、以标准系列溶液中苯系物和同位素内标溶液中苯系物的峰面积之比为纵坐标，绘制各物质的标准曲线，并计算得到标准曲线方程；a、分离结果
浓度为1.563μg/L的混标溶液的选择离子谱图如图5所示，图中，1-苯；2-甲苯；3-乙苯；
4-间/对二甲苯；5-邻二甲苯，从图中可以看出5种苯系物均得到了良好分离（间/对二甲苯未分离开）。
浓度为1.563μg/L的混标溶液的选择离子谱图如图5所示，图中，1-苯；2-甲苯；3-乙苯；
4-间/对二甲苯；5-邻二甲苯，从图中可以看出5种苯系物均得到了良好分离（间/对二甲苯未分离开）。
[0040] b、线性范围和检出限按照步骤5）所述，配制6种浓度标准系列溶液，按照上述实验条件进行平行测定。以浓度C ( μg/L) 为横坐标，以峰面积比值 ( Y ) 为纵坐标，绘制各物质的标准曲线。以信噪比响应值测得各化合物的检出限。结果见表2。
[0041] c、回收率和精密度取空白血样分别作高浓度（1.563 μg/L）和低浓度（0.195 μg/L）两个浓度水平的空白加标回收率，每个浓度做六个平行样测定精密度。结果见表3。
[0042] RSD满足小于20％的要求；回收率满足在70% 130%的要求。对标准样品进行分析，~各化合物的测定范围均在允许范围之内，可见本方法能满足测定6种苯系物的监测分析要求。
[0043] 7）血样的准备：通过静脉穿刺收集血液样本于真空采血管中，必须保证采血管采满，采样后将真空采血管中血样倒入样品瓶中，并于4℃冷藏保存；具体为：通过静脉穿刺收集血液样本于7 mL真空采血管中，轻轻颠倒混匀20次，使采血管中晶体状的肝素钠/氟化钠充分溶解，从而最大限度地减少凝血。采样后将真空采血管中样品轻轻倾倒入5 mL棕色螺口样品瓶中，使样品瓶完全充满，用带有白色特氟龙垫片的瓶盖拧紧。样品于4℃冷藏保存，在采样10周内完成分析。
[0044] 8）血样的测定：取血样加入进样瓶中，依次加入同位素内标溶液和消泡剂，最后用纯水定容，然后通过吹扫捕集仪和气质联用仪进行测定，得到血样中苯系物和同位素内标溶液中苯系物的峰面积之比，将峰面积之比分别代入对应的标准曲线方程中，得到血样中苯系物的含量。
[0045] 具体为：取5 mL血样加入40 mL进样瓶，同时加入200 μL同位素内标溶液和一滴消泡剂，加20 mL纯水上下震荡20次，加满纯水，密封样品瓶。在超声波振荡器中震荡1min，上机测定。
[0046] 血液中苯系物的浓度公式为：Ci＝Cis×40/5，式中：Ci为实际样品中被测组分的浓度，μg/L；Cis为标准曲线算得的被测组分的浓度，μg/L。
[0047] 以下采用上述进一步说明的测定方法对具体的血样中的苯系物成份进行测定。
[0048] 采用此法，对某污染地区300人和某清洁对照地区200人的生物样本血液中的苯系物含量进行了测定。重点污染地区和清洁对照地区的被测血样中各苯系物的含量范围见表4。由表中可见，重点污染地区血样中的各苯系物浓度较清洁对照地区偏高。
[0049] 由于本方法灵敏度高，专属性好，操作简便，因此可用于大批量生物样本血样的分析（特别是对重点污染地区居民苯系物内暴露水平含量进行测定）。
[0050] 本方法的建立对环境污染引起的相关疾病的防控具有重要的指导意义。
[0051] 实施例1：取重点污染地区居民王某的血液5 mL，按上述方法加入40 mL样品瓶，依次加入200μL同位素内标溶液、一滴消泡剂和20mL纯水。密封样品瓶，上下震荡20次。再将进样瓶中加满纯水，密封样品瓶。在超声波振荡器中震荡1 min，上机测定。测定结果见表5。
[0052] 可见王某血液中六种苯系物均有检出，其中样中苯和甲苯浓度较高，乙苯、间/对二甲苯和邻二甲苯浓度较低。提示该居民应注意防止与苯系物长期直接或间接接触，同时应该采取系列防治措施保障其身心健康。
[0053] 实施例2：取重点污染地区居民司某的血液5 mL，按上述方法加入40 mL样品瓶，依次加入200 μL同位素内标溶液、一滴消泡剂和20 mL纯水。密封样品瓶，上下震荡20次。再将进样瓶中加满纯水，密封样品瓶。在超声波振荡器中震荡1 min，上机测定。测定结果见表6。
[0054] 注：
[0055] 实施例3：取重点污染地区居民姚某的血液5 mL，按上述方法加入40 mL样品瓶，依次加入200 μL同位素内标溶液、一滴消泡剂和20 mL纯水。密封样品瓶，上下震荡20次。再将进样瓶中加满纯水，密封样品瓶。在超声波振荡器中震荡1 min，上机测定。测定结果见表7。
[0056] 注：
[0057] 实施例4：取重点污染地区居民贾某的血液5 mL，按上述方法加入40 mL样品瓶，依次加入200 μL同位素内标溶液、一滴消泡剂和20 mL纯水。密封样品瓶，上下震荡20次。再将进样瓶中加满纯水，密封样品瓶。在超声波振荡器中震荡1 min，上机测定。测定结果见表8。
[0058] 注：
[0059] 实施例5：取重点污染地区居民赵某的血液5 mL，按上述方法加入40 mL样品瓶，依次加入200 μL同位素内标溶液、一滴消泡剂和20 mL纯水。密封样品瓶，上下震荡20次。再将进样瓶中加满纯水，密封样品瓶。在超声波振荡器中震荡1 min，上机测定。测定结果见表9。
[0060] 注：
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