疼痛知觉，或伤害感觉，是受一种称为″伤害感受器(nociceptor)″ 的特殊性感觉神经元的外围末端调节。有多种物理与化学刺激会诱发 哺乳动物的此等神经元活化，引起可能有害刺激的辨识。然而，当伤 害感受器的活化作用不当或过度时，可能造成耗弱的急性或慢性疼痛。
神经性疼痛涉及没有刺激时的疼痛讯号传递，典型地是由神经系 统受损所致。大多数情况下，此等疼痛是因外围系统受到初次伤害后(例 如：经由直接伤害或全身性疾病)造成外围与中枢神经系统敏化所致。 神经性疼痛典型为灼热、剧痛且其强度不温和，有时候可能使诱发该 疼痛的初次伤害或疾病更恶化。
目前对神经性疼痛的处理法大多无效。鸦片(如：吗啡)为强力的止 痛剂，但其适用性常受限于其不良副作用，如：生理性上瘾与戒断性 质，及呼吸困难、情绪变化与并发便秘的肠蠕动下降、恶心、呕吐、 及内分泌与自主神经系统改变。此外，神经性疼痛经常对一般类鸦片 止痛剂疗法没有反应或仅有部份反应。使用N-甲基-D-天冬胺酸拮抗剂 克他命(ketamine)或α(2)-肾上腺素激导性促效剂氯压定(clonidine)可减 轻急性或慢性疼痛，并可减少类鸦片剂的用量，但此等制剂经常因副 作用而无法耐受。
过去曾使用辣椒素局部治疗慢性与急性疼痛，包括神经性疼痛。 辣椒素为一种衍生自茄科(Solanaceae)植物(包括辣椒)的辛辣物质，似乎 可选择性作用在咸信可媒介疼痛的小直径的传入神经纤维(A-δ与C纤 维)。对辣椒素的反应特征为在外围组织中持续活化伤害感受器，最后 使得外围伤害感受器对一种或多种刺激没有敏感性。由动物研究可见， 辣椒素似乎藉由打开钙与钠的阳离子选择性信道而启动C纤维膜去极 化。
同样具有类香草醇(vanilloid)部份基团的辣椒素结构类似物亦会引 发类似反应。其中一种类似物为树脂毒素(resiniferatoxin)(RTX)，是大 戟科(Euphorbia)植物的天然产物。类香草醇受体(VR)是用于说明辣椒 素与此等相关刺激性化合物的神经元膜辨识位置。辣椒素反应受到另 一种辣椒素类似物(辣椒素氮呯(capsazepine))的竞争性抑制(进而拮抗)， 亦受非选择性阳离子信道阻断剂钌红抑制，此等拮抗剂与VR结合不 超过中等亲和性(典型Ki值不低于140μM)。
已有人自大鼠与人类的背根神经节细胞(dorsal root ganglion cells) 选殖出类香草醇受体。所判别出的第一种类香草醇受体称为第1型类 香草醇受体(VR1)，术语″VR1″与″辣椒素受体″在本文中可交换使用， 是指此型的大鼠及/或人类受体，及哺乳动物同源物。VR1于疼痛感受 中的角色已采用缺乏此受体的小鼠确认，此种小鼠不会被类香草醇诱 发疼痛行为，且对热与发炎的反应已受损。VR1为一种非选择性阳离 子信道，当与高温、低pH及辣椒素受体促效剂反应时，其开放阈值即 下降。例如：该信道通常在高于约45℃的温度下开放。此辣椒素受体 信道开放后，通常即自表达该受体的神经元与其它附近神经元中释出 发炎性肽，增加疼痛反应。受到辣椒素初次活化作用后，辣椒素受体 即经由依赖cAMP的蛋白质激酶的磷酸化反应，迅速脱除敏化反应。
由于其有能力在外围组织中脱除伤害感受器的敏化反应，因此 VR1促效剂类香草醇化合物即已用为局部麻醉剂。然而，投与促效剂 本身可能造成灼热疼痛，而限制其医疗用途。近来已有报告指出VR1 拮抗剂(包括某些非类香草醇化合物)亦适用于治疗疼痛(参见2002年1 月31日公告的PCT国际申请公告案案号WO02/08221，以及2003年 7月31日公告的WO03/062209)。
因此，需要一种会与VR1交互作用，但不会诱发VR1促效剂类香草 醇化合物的初期疼痛感受的化合物来治疗慢性与急性疼痛，包括神经 性疼痛。特别需要此受体的拮抗剂来治疗疼痛，以及如：曝露到催泪 气体与其它刺激物、搔痒、尿道病症(如：尿失禁与膀胱过动症)等症状。 本发明可符合此需求，并提供进一步的相关优点。

本发明提供一种式I的被芳基取代的嘌呤类似物：
式I
及此等化合物的医药上可接受的盐类。式I中：
Ar1为苯基、苯甲基、或5-或6-元杂芳基或(杂芳基)甲基基团，其各自 视需要被取代，且其较佳各自被0至5个独立地选自Rb的取代基 及共同形成稠合、视需要被取代(例如，被0至5个独立地选自Rb 的取代基取代)的5-或6-元碳环或杂环的基团取代；
Ar2为苯基、萘基、或5-至10-元杂芳基基团，其各自视需要被取代， 较佳为被0至5个独立地选自Rb的取代基取代；
W、X及Y各自独立地为N或CR1；
R1于每次出现时，独立地选自：氢、卤素、氰基、硝基、氨基、C1-C6 烷基、C1-C6卤烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤烷氧基、C1-C6烷氧 羰基、氨基羰基、氨基磺醯基、C1-C6烷基磺醯基、单-与二-(C1-C6 烷基)氨基磺醯基、单-与二-(C1-C6烷基)氨基羰基、及单-与二-(C1-C6 烷基)氨基C0-C4烷基；
R3为：
(i)氢、卤素、硝基或氰基；或
(ii)如通式-Rx-L-M-Ry的基团，其中：
Rx为C0-C3亚烷基；
L为单一共价键、O、C(＝O)(如： )、OC(＝O)(如： )、 C(＝O)O(如： )、S、SO2、(C＝O)pN(Rz)(如： 或 )、 N(Rz)(C＝O)p(如： 或 )、SO2N(Rz)(如： )或 N(Rz)SO2(如： )；其中，p为0或1；
M为单一共价键、C1-C8烷基、C1-C8烯基、C1-C8炔基，其中烷 基、烯基或炔基各自视需要被取代，较佳为被0至9个独立 地选自Rb的取代基取代；以及
Ry为：
(d)氢；
(e)C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C1-C8烷氧基、 (C1-C8烷基)氨基C0-C8烷基、C1-C8烷醯基、C3-C8烷酮、C2-C8烷基醚、 或3-至10-元碳环或杂环，其各自视需要被取代，较佳为被0至9个独 立地选自Rb的取代基取代；或
(f)与Rx或Rz共同形成4-至10-元碳环或杂环，其视需 要被取代，较佳为被0至9个独立选自Rb的取代基取代；
Rz为：
(d)氢；
(e)C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C1-C8烷醯基、 C3-C8烷酮、C2-C8烷基醚、或3-至10-元碳环或杂环，其各自视需要被 取代，较佳为被0至9个独立地选自Rb的取代基取代；或
(f)与Rx或Ry共同形成4-至10-元碳环或杂环，其视需 要被取代，较佳为被0至9个独立地选自Rb的取代基取代；
R4于每次出现时，独立地选自Rb，或两个相邻的R4基团共同形成4- 至10-元碳环或杂环，其视需要被取代，较佳为被0至4个独立选 自Rb的取代基取代；
R5于每次出现时，独立地选自Rb，或两个相邻的R5基团共同形成4- 至10-元碳环或杂环，其视需要被取代，较佳为被0至4个独立选 自Rb的取代基取代；以及
Rb于每次出现时，独立地选自：
(iii)氢、羟基、卤素、氨基、氨基羰基、氨基磺醯基、氰基、硝 基及-COOH；以及
(iv)C1-C8烷基、C1-C8烯基、C1-C8炔基、C3-C8环烷基、C1-C8 卤烷基、C1-C8烷氧基、C1-C8卤烷氧基、C1-C8烷醯基、C3-C8烷酮、 C1-C8烷醯氧基、C1-C8烷硫基、C2-C8烷基醚、C1-C6烷氧羰基、C1-C6 烷基磺醯基、单-与二-(C1-C6烷基)氨基磺醯基、单-与二-(C1-C6烷基) 氨基羰基、及单-或二-(C1-C6烷基)氨基C0-C4烷基；其各自被0至3个 独立地选自羟基、卤素、氨基、氰基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、羟 基C1-C4烷基、C1-C4卤烷基、及单-与二-(C1-C4烷基)氨基的取代基取 代。
某些态样中，式I化合物为VR1调节剂，且其于辣椒素受体结合 性分析法中的Ki不超过1微摩尔(micromolar)、100纳摩尔(nanomolar)、 50纳摩尔、10纳摩尔或1纳摩尔及/或在测定辣椒素受体促效剂或拮抗 剂活性时的分析法中具有EC50或IC50值不超过1微摩尔、100纳摩尔、 50纳摩尔、10纳摩尔或1纳摩尔。
某些具体实施例中，本文所述的VR1调节剂为VR1拮抗剂，且 于辣椒素受体活化作用活体外分析法中没有可检测到的促效剂活性。
某些态样中，本文所述的化合物是被标记可检测的标记物(例如： 放射性标记或与萤光素共轭)。
其它态样中，本发明进一步提供医药组合物，其包含至少一种本 文所述的化合物(亦即，本文所提供的化合物或其医药上可接受的盐) 与生理上可接受的载体或赋形剂组合。
其它态样中，提供一种降低细胞辣椒素受体的钙传导的方法，其 包括将表达辣椒素受体的细胞(例如：神经元)与本文所述的至少一种 VR1调节剂接触。此等接触可于活体内或于活体外进行。
进一步提供抑制类香草醇配体与辣椒素受体结合的方法。某些此 等态样中，抑制作用是于活体外进行。此等方法包括以辣椒素受体与 本文所述的至少一种VR1调节剂，于足以检测到抑制类香草醇配体与 辣椒素受体结合的条件与用量下接触。其它此等态样中，辣椒素受体 是在患者体内。此等方法包括使患者体内表达辣椒素受体的细胞与至 少一种本文所述的VR1调节剂，于足以检测到抑制类香草醇配体与活 体外表达选殖的辣椒素受体的细胞结合的用量下接触，藉以抑制类香 草醇配体与患者体内辣椒素受体结合。
本发明进一步提供一种治疗患者体内对辣椒素受体调节作用有反 应的病症的方法，其包括对患者投与治疗有效量的至少一种本文所述 的VR1调节剂。
其它态样中，提供一种为患者治疗疼痛的方法，其包括对罹患疼 痛的患者投与治疗有效量的至少一种本文所述的VR1调节剂。
尚提出一种治疗患者的搔痒、尿失禁、膀胱过动症、咳嗽及/或呃逆的 方法，其包括对罹患一种或多种上述病症的患者投与治疗有效量的至 少一种本文所述的VR1调节剂。
本发明尚提供一种促进肥胖患者减轻体重的方法，其包括对肥胖患者 投与治疗有效量的至少一种本文所述的VR1调节剂。
并提供一种判别可与辣椒素受体结合的制剂的方法，其包括：(a) 将辣椒素受体与本文所述被标记的VR1调节剂，于允许VR1调节剂与 辣椒素受体结合的条件下接触，藉以产生已结合的被标记的VR1调节 剂；(b)在没有试验制剂存在下检测与已结合的被标记VR1调节剂含量 相应的讯号；(c)将已结合的被标记VR1调节剂与试验制剂接触；(d) 在试验制剂的存在下检测与已结合的被标记VR1调节剂含量相应的讯 号；及(e)与步骤(b)所检测到的讯号比较，测定步骤(d)的讯号降低程度， 因此得以判别该制剂是否与辣椒素受体结合。
其它态样中，本发明提供一种测定样本中是否含有辣椒素受体的方法， 其包括：(a)将样本与本文所述VR1调节剂于允许VR1调节剂与辣椒素 受体结合的条件下接触；与(b)检测与辣椒素受体结合的VR1调节剂量。 本发明亦提供一种包装的医药制剂，其包含：(a)含于容器中的本文所述 医药组合物；及(b)使用该组合物治疗对辣椒素受体调节作用有反应的 一种或多种病症的说明书，该病症如：疼痛、搔痒、尿失禁、膀胱过 动症、咳嗽、呃逆及/或肥胖。
另一态样中，本发明提供一种制备本文所揭示化合物(包括中间物) 的方法。
本发明此等与其它态样将可参考下列详细说明而了解。

如上述，本发明提供被芳基取代的嘌呤类似物。此等化合物可用 于活体外或活体内，依多种方式调节辣椒素受体活性。
术语说明
本文中通常采用标准命名法说明化合物。咸了解，具有不对称中 心的化合物(除非另有说明，否则)包括所有光学异构物与其混合物。此 外，具有碳-碳双键的化合物可能出现Z-与E-型，除非另有说明，否则 化合物的所有异构型均包括在本发明中。若化合物呈多种互变异构型 时，所出示的化合物并不限于任一种特定互变异构物，而希望包括所 有互变异构型。本文所述某些化合物是以包括代号的通式说明(例如： R3、Ar1、X)。除非另有说明，否则此等化学式中各代号的定义分别与 其它代号独立，化学式中任何出现一次以上的代号每次出现时的定义 亦分别独立。
术语″被芳基取代的嘌呤类似物″用于本文中指所有式I化合物，及 本文所提供其它化学式的化合物。换言之，本文所述视需要被取代的 化合物，其中该核心：
或

，均具体地包括在被芳基取代嘌呤类似物的定义范围内。
本文所述化合物的″医药上可接受的盐″为相关技艺中习知适用于 与人类或动物的组织接触，不会引起过度毒性、刺激性、过敏反应或 其它问题或并发症的酸或碱盐类。此等盐类包括如：胺的碱性残基的 无机酸与有机酸盐类，及如：羧酸的酸性残基的碱金属或有机盐类。 明确的医药用盐类包括(但不限于)酸如：盐酸、磷酸、氢溴酸、苹果酸、 乙醇酸、富马酸、硫酸、胺磺酸、磺胺酸、甲酸、甲苯磺酸、甲磺酸、 苯磺酸、乙二磺酸、2-羟基乙磺酸、硝酸、苯甲酸、2-乙醯氧基苯甲 酸、柠檬酸、酒石酸、乳酸、硬脂酸、水杨酸、麸胺酸、抗坏血酸、 双羟萘酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、丙酸、羟基马来酸、氢碘酸、 苯基乙酸、烷酸类如：乙酸、HOOC-(CH2)n-COOH，其中n为0至4， 等等的盐类。同样地，医药上可接受的阳离子包括(但不限于)钠、钾、 钙、铝、锂与铵。习此相关技艺的人士咸了解本文所提供化合物的其 它医药上可接受的盐类，包括彼等列于Remington′s Pharmaceutical Sciences，第17版，Mack Publishing Company，Easton.PA，第1418页 (1985)中的盐类。一般而言，医药上可接受的酸或碱盐可由包含碱性或 酸性部份基团的母化合物依任何习知的化学方法制得。简言之，此等 盐类的制法可将此等化合物的游离酸或碱的型式与化学计量的适当碱 或酸，于水或有机溶剂中，或于此二者的混合物中反应而制备；通常 使用非水性介质，如：醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈较佳。
成了解，各式I化合物可以(但不一定要)调配成水合物、溶剂合物 或非共价错化物。此外，多种不同结晶型及多态异构物(polymorph)均 在本发明范围内。本文亦提供式I化合物的前药。″前药″为一种不一定 完全符合本文所提供化合物结构式要求的化合物，但可在投与患者后， 于活体内修饰，产生式I或本文所提供其它化学式的化合物。例如：前 药可为本文所提供化合物的醯化衍生物。前药包括其中羟基、胺或氢 硫基键结在任何基团上的化合物，当投与哺乳动物个体后，会分别裂 解形成游离羟基、氨基或氢硫基。前药实例包括(但不限于)：本文所提 供化合物中醇与胺官能基的乙酸酯、甲酸酯与苯甲酸酯衍生物。本文 所提供化合物可藉由修饰化合物中的官能基，使其裂解形成母体化合 物而制备。
本文所采用术语″烷基″指直链或分支链的饱和脂族烃。烷基包括具 有1至8个碳原子(C1-C8烷基)、1至6个碳原子(C1-C6烷基)与1至4 个碳原子(C1-C4烷基)的基团，如：甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁 基、第二丁基、第三丁基、戊基、2-戊基、异戊基、新戊基、己基、2- 己基、3-己基与3-甲基戊基。″C0-C4烷基″指单一共价键(C0)或具有1、 2、3或4个碳原子的烷基；″C0-C6烷基″指单一共价键或C1-C6烷基； ″C0-C8烷基″指单一共价键或C1-C8烷基。本文有些例子中，烷基的取 代基有明确说明。例如：″氰基C1-C6烷基″指具有至少一个CN取代基 的C1-C6烷基。一种代表性的分支氰基烷基为-C(CH3)2CN。
″亚烷基″指如上述定义的二价烷基。C0-C4亚烷基为单一共价键或 具有1至4个碳原子的亚烷基；及C0-C3亚烷基为单一共价键或具有1 至3个碳原子的亚烷基(C1-C3亚烷基)。
″烯基″指直链或分支链烯基，其中含有至少一个不饱和碳-碳双键。 烯基包括C2-C8烯基、C2-C6烯基与C2-C4烯基，其分别含有2至8个、 2至6个或2至4个碳原子，如：乙烯基、烯丙基或异丙烯基。″炔基″ 指直链或分支链炔基，其包含一个或多个不饱和碳-碳键，其中至少一 个为参键。炔基包括C2-C8炔基、C2-C6炔基与C2-C4炔基，其分别含 有2至8个、2至6个或2至4个碳原子。
″环烷基″为包含一个或多个饱和及/或部份饱和环的基团，其中所 有环组元均为碳，如：环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、 环辛基、金刚烷基、十氢萘基、八氢茚基，及如上述任何部份饱和基 团变化型，如：环己烯基。某些环烷基为C3-C7环烷基，其中该环包含 3至7个环组元。
本文所采用″烷氧基″指如上述的烷基利用氧桥连基附接。烷氧基包 括C1-C6烷氧基与C1-C4烷氧基，其分别含有1至6个或1至4个碳原 子。明确烷氧基为甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、 第二丁氧基、第三丁氧基、正戊氧基、2-戊氧基、3-戊氧基、异戊氧基、 新戊氧基、己氧基、2-己氧基、3-己氧基与3-甲基戊氧基。同样地，″ 烷硫基″指如上述的烷基、烯基或炔基经由硫桥连基附接。
术语″烷氧羰基″指利用羰基连结的烷氧基(亦即具有通式结构为 -C(＝O)-O-烷基的基团)。烷氧羰基包括C1-C8、C1-C-6与C1-C4烷氧羰基， 其烷基部份分别具有1至8、6或4个碳原子。
本文所采用″烷醯氧基″指利用氧桥连基连结的烷醯基(亦即通式结 构为-O-C(＝O)-烷基的基团)。烷醯氧基包括C1-C8、C1-C-6与C1-C4烷醯 氧基，其烷基部份分别具有1至8、至6或至4个碳原子。
″烷基磺醯基″指式-(SO2)-烷基的基团，其中硫原子为附接点。烷基 磺醯基包括C1-C6烷基磺醯基与C1-C4烷基磺醯基，其分别具有1至6 个或1至4个碳原子。甲磺醯基为烷磺醯基的一个代表。同样地，″C1-C4 卤烷基磺醯基″指式-(SO2)-C1-C4卤烷基的基团，其中硫原子为附接点。 三氟甲基磺醯基为卤烷基磺醯基的一个代表。
″氨基磺醯基″指式-(SO2)-NH2的基团，其中硫原子为附接点。术语 ″单-或二-(C1-C6烷基)氨基磺醯基″指式-(SO2)-N(R)2的基团，其中硫原 子为附接点，且其中一个R为C1-C6烷基，另一个R为氢或独立地选 出的C1-C6烷基。
术语″烷醯基″指呈直链或分支排列的醯基(例如：-(C＝O)-烷基)。烷 醯基包括C2-C8烷醯基、C2-C6烷醯基与C2-C4烷醯基，其分别含有2 至8个、2至6个或2至4个碳原子。″C1烷醯基″指-(C＝O)-H，其(与 C2-C8烷醯基)均包括在术语″C1-C8烷醯基″的范围内。乙醯基为C2烷醯 基。
″烷酮″为其中碳原子呈直链或分支烷基排列的酮基。″C3-C8烷酮 ″、”C3-C6烷酮″与″C3-C4烷酮″分别指具有3至8、至6或至4个碳原 子的烷酮。例如，C3烷酮基的结构式为-CH2-(C＝O)-CH3。
同样地，″烷基醚″指直链或分支醚取代基。烷基醚基团包括C2-C8 烷基醚、C2-C-6烷基醚与C2-C4烷基醚，其分别具有2至8、至6或至 4个碳原子。例如，C2烷基醚的结构式为-CH2-O-CH3。
″烷基氨基″指通式结构为NH-烷基或-N(烷基)(烷基)的二级或三级 胺，其中各烷基可相同或相异。此等基团包括例如：单-与二-(C1-C8烷 基)氨基，其中各烷基可相同或相异，且可包含1至8个碳原子，及单- 与二-(C1-C6烷基)氨基，与单-与二-(C1-C4烷基)氨基。
″烷基氨基烷基″指利用亚烷基连结的烷基氨基(亦即具有通式结构 为-烷基-NH-烷基或-烷基-N(烷基)(烷基)的基团)，其中各烷基是分别独 立地选出。此等基团包括例如：单-与二-(C1-C8烷基)氨基C1-C8烷基、 单-与二-(C1-C6烷基)氨基C1-C6烷基与单-与二-(C1-C4烷基)氨基C1-C4 烷基，其中各烷基可相同或相异。″单-或二-(C1-C6烷基)氨基C0-C6烷 基″指利用单一共价键结或C1-C6亚烷基连结的单-或二-(C1-C6烷基)氨 基。下列为代表性烷基氨基烷基：

术语″氨基羰基″指醯氨基(亦即-(C＝O)NH2)。″单-或二-(C1-C6烷基) 氨基羰基″为氨基羰基中一个或两个氢原子被C1-C8烷基置换。若两个 氢原子均被置换时，C1-C6烷基可相同或相异。
术语″卤素″指氟、氯、溴或碘。
″卤烷基″为分支、直链或环状烷基被一个或多个卤原子取代(例如： ″C1-C8卤烷基″具有1至8个碳原子；″C1-C6卤烷基″具有1至6个碳原 子)。卤烷基的实例包括(但不限于)：单-、二-或三氟甲基；单-、二-或 三氯甲基；单-、二-、三-、四-或五-氟乙基；单-、二-、三-、四-或五 氯乙基；及1，2，2，2-四氟-1-三氟甲基一乙基。典型卤烷基为三氟甲基与二 氟甲基。术语″卤烷氧基″指利用氧桥连基附接的如上述定义的卤烷基。 ″C1-C8卤烷氧基″具有1至8个碳原子。
位于两个字母或代号间的短折线(″-″)是用于表示取代基的附接点。 例如：-CONH2是利用碳原子附接。
本文所采用″杂原子″为氧、硫或氮。
″碳环″或″碳环基″包括至少一个完全由碳-碳键形成的环(在本文中 称为碳环)且不含杂环。除非另有说明，否则碳环中的各碳环可为饱和、 部份饱和或芳香族。碳环通常具有1至3个稠合、侧接或螺环；某些 具体实施例中的碳环可具有一个环或两个稠合环。典型地，各环包含3 至8个环组元(亦即C3-C8)；C5-C7环则出现在某些具体实施例中。碳环 (包括稠合、侧接或螺环)典型地包含9至14个环组元。某些碳环为环 烷基为4-至10元(亦即包含4至10个环组元)。某些代表性碳环为上述 的环烷基。其它碳环为芳基(亦即包含至少一个芳香族碳环)。此等碳环 包括例如：苯基、萘基、芴基、氢茚基与1，2，3，4-四氢-萘基。
″杂环″或″杂环基″具有1至3个稠合、侧接或螺环；其中至少一个 为杂环(亦即一个或多个环原子为杂原子，其余环原子为碳原子)。典型 地，杂环包含1、2、3或4个杂原子；某些具体实施例中，各杂环中 每个环具有1或2个杂原子。各杂环通常包含3至8个环组元(某些具 体实施例中出示具有4或5至7个环组元的环)与典型含有9至14个环 组元的杂环(包含稠合、侧接或螺环)。某些杂环包含硫原子作为环组元； 某些具体实施例中，硫原子被氧化成SO或SO2。杂环可视需要被多种 指定的取代基取代。除非另有说明，否则杂环可为杂环烷基(亦即各环 为饱和或部份饱和)或杂芳基(亦即基团中至少一个环为芳香族)。杂环 基团通常可利用任一个环或取代基原子连结，但其限制条件为应形成 安定的化合物。
杂环基包括例如：吖 基(azepanyl)、吖 基(azocinyl)、苯并咪 唑基、苯并咪唑啉基、苯并异噻唑基、苯并异恶唑基、苯并呋喃基、 苯并硫基呋喃基、苯并恶唑基、苯并噻唑基、苯并四唑基、色满基、 色烯基、噌啉基、十氢喹啉基、二氢呋喃并[2，3-b]四氢呋喃基、二氢异 喹啉基、二氢四氢呋喃基、1，4-二氧杂-8-氮杂-螺[4.5]癸基、二噻嗪基、 呋喃基、呋咱基、咪唑啉基、咪唑啶基、咪唑基、吲唑基、吲哚烯基、 吲哚啉基、吲哚嗪基、吲哚基、异苯并呋喃基、异色满基、异吲唑基、 异吲哚啉基、异吲哚基、异噻唑基、异恶唑基、异喹啉基、吗啉基、 萘啶基、八氢异喹啉基、恶二唑基、恶唑啶基、恶唑基、酞嗪基、哌 嗪基、哌啶基、哌啶基、哌啶酮基、喋啶基、嘌呤基、吡喃基、吡嗪 基、吡唑啶基、吡唑啉基、吡唑基、嗒嗪基、吡啶并咪唑基、吡啶并 恶唑基、吡啶并噻唑基、吡啶基、嘧啶基、吡咯啶基、吡咯啶酮基、 吡咯啉基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、喹恶啉基、奎宁环基、四氢 异喹啉基、四氢喹啉基、四唑基、噻二嗪基、噻二唑基、噻唑基、噻 吩并噻唑基、噻吩并恶唑基、噻吩并咪唑基、噻吩基、噻吩基 (thiophenyl)、硫代吗啉基(与其中硫原子被氧化的变化基团)、三嗪基、 与如本文上述被1至4个取代基取代的上述任何基团。
″杂环C0-C8烷基″为利用单一共价键或C1-C8亚烷基连结的杂环基。 (4-至10-元杂环)C0-C6烷基为利用单一共价键或具有1至6个碳原子的 亚烷基连结的杂环基。(4至10元杂环烷基)C0-C4烷基为用利单一共价 键或C1-C4亚烷基连结的4至10元杂环烷基环。
本文所采用″取代基″指共价键结所需分子中原子的分子部份基 团。例如：”环取代基”可为如：卤素、烷基、卤烷基的部份基团，或 如本文所讨论与作为环组元的原子(较佳为碳或氮原子)共价键结的其 它基团。术语″取代″指使用如上述取代基置换分子结构中氢原子，但不 可超过所指定原子上的价数，并可由此取代法得到化学上安定的化合 物(亦即可以单离、判定其特性及测试其生物活性)。
″视需要被取代″的基团为未被取代或被氢以外的一个或多个合适 基团(其可相同或相异)取代在一个或多个可利用的位置，典型为1、2、 3、4或5个位置。视需要的取代法亦以″被0至X个取代基取代″的语 法表示，其中X为可使用的取代基最大数目。某些视需要被取代的基 团是被0至2、至3或至4个分别独立选出的取代基取代(亦即未被取 代或被至多达所出示的最大取代基数目取代)。
术语″VR1″与″辣椒素受体″在本文中交换使用，是指第1型类香草 醇受体。除非另有说明，否则此等术语包括大鼠与人类VR1受体(例如： GenBank登录号AF327067、AJ277028与NM_018727；某些人类VR1 cDNAs的序列示于美国专利案No.6,482,611的SEQ ID NOs：1至3，及 编码的氨基酸序列示于SEQ ID NOs：4与5)，及在其它物种中发现的其 同系物。
″VR1调节剂″在本文中亦称为″调节剂″，为一种调节VR1活化作 用及/或VR1-媒介的讯号转导作用的化合物。本文所明确提供的VR1 调节剂为式I化合物与式I化合物的医药上可接受的盐类。VR1调节剂 可为VR1促效剂或拮抗剂。若对VR1的Ki小于1微摩尔，较佳为小 于100摩尔纳摩尔、10摩尔纳摩尔或1摩尔纳摩尔时，则该调节剂的 结合性为″高亲和性″。测定对VR1的Ki的代表性分析法示于本文中实 施例5。
若可检测出调节剂抑制类香草醇配体与VR1及/或VR1-媒介的讯 号转导结合时(采用例如：实施例6所示的代表性分析法)，则视该调节 剂为″拮抗剂″；通常此等拮抗剂在实施例6所提供的分析法中抑制VR1 活化作用的IC50值小于1微摩尔，较佳为小于100摩尔纳摩尔，更佳 为小于10摩尔纳摩尔或1摩尔纳摩尔。VR1拮抗剂包括中性拮抗剂与 反促效剂。某些具体实施例中，本文所提供的辣椒素受体拮抗剂不为 类香草醇。
VR1的″反促效剂″为当不添加类香草醇配体时，使VR1的活性降 至其基础活性以下的化合物。VR1的反促效剂亦可抑制类香草醇配体 在VR1的活性，及/或亦可抑制类香草醇配体与VR1结合。化合物抑 制类香草醇配体与VR1结合的能力可采用结合性分析法测定，如：实 施例5所示的结合性分析法。VR1的基础活性及因VR1拮抗剂的存在 而降低的VR1活性可采用钙离子移动分析法测定，如：实施例6的分 析法。
VR1的″中性拮抗剂″为一种抑制类香草醇配体在VR1上的活性， 但不会显著改变受体基础活性的化合物(亦即在实施例6所述的钙移动 分析法中，没有类香草醇配体存在时，VR1活性降低程度不超过10％， 更佳为不超过5％，甚至更佳为不超过2％；最佳为没有检测出其活性 的下降)。VR1的中性拮抗剂可抑制类香草醇配体与VR1结合。
本文所采用″辣椒素受体促效剂″或″VR1促效剂″为一种提高受体 的活性超过受体的基础活性的化合物(亦即加强VR1活化作用及/或 VR1所媒介的讯号转导)。辣椒素受体促效剂活性可采用实施例6所提 供的代表性分析法判别。一般而言，此等促效剂在实施例6所提供的 分析法中，EC50值小于1微摩尔，较佳为小于100摩尔纳摩尔，更佳 为小于10摩尔纳摩尔。某些具体实施例中，本文所提供的辣椒素受体 促效剂不为类香草醇。
″类香草醇″为包含苯基环，利用两个氧原子与相邻环碳原子键结 (其中一个碳原子与苯环上所键结的第三个部份基团的附接点呈对位) 的辣椒素或任何辣椒素类似物。若类香草醇与VR1结合的Ki(依本文 所述方法测定)不超过10μM时，则该类香草醇为″类香草醇配体″。类 香草醇配体促效剂包括辣椒素、欧凡尼(olvanil)、N-花生四烯醯基-多巴 胺与树脂毒素(resiniferatoxin)(RTX)。类香草醇配体拮抗剂包括辣椒素 氮呯与碘代树脂毒素。
″治疗有效量″(或剂量)为当投予患者时，可以使患者产生显著有效 效果(例如：可检测出至少一种接受治疗的病症减轻)的用量。此等减轻 程度可采用任何适当标准检测，包括缓和一种或多种症状，如：疼痛。 治疗有效量或剂量通常可使体液(如：血液、血浆、血清、CSF、滑液、 淋巴液、细胞间质液、眼泪或尿液)中化合物浓度足以改变类香草醇配 体与VR1的活体外结合性(采用实施例5所提供的分析法)及/或VR1所 媒介的讯号转导(采用实施例6所提供的分析法)。
″患者″为接受本文所提供化合物治疗的任何个体。患者包括人类， 及其它动物如：宠物(例如：狗与猫)与家畜。患者可能罹换一种或多种 对辣椒素受体调节作用有反应的病症(例如：疼痛、暴露到类香草醇配 体、搔痒、尿失禁、膀胱过动症、呼吸病变、咳嗽及/或呃逆)，或可能 没有此等症状(亦即可对有发展出此等症状的风险的患者进行预防性处 理)。
被芳基取代的嘌呤类似物
如上述，本发明提供被芳基取代的嘌呤类似物，其可用于多方面， 包括用于治疗疼痛(例如：神经性或外围神经所媒介的疼痛)；暴露到辣 椒素；暴露到酸、热、光、催泪气体、空气污染物(如，例如：香烟)、 感染性制剂(包括病毒、细菌与酵母菌)、胡椒喷雾或相关制剂；呼吸病 症，如：哮喘或慢性阻塞性肺病；搔痒；尿失禁或膀胱过动症；咳嗽 或呃逆；及/或肥胖。此等化合物亦可用于活体外分析法(例如：分析受 体活性)，作为检测与定位VR1的探针，及作为配体结合性与VR1所 媒介讯号转导分析法的标准物。
本文所提供的某些化合物可检测出在摩尔纳摩尔(亦即低于微摩尔) 下调节辣椒素与VR1的结合作用，较佳为低于摩尔纳摩尔，更佳为低 于100微微摩尔(picomolar)、20微微摩尔、10微微摩尔或5微微摩尔。 此等调节剂最好不为类香草醇。某些较佳调节剂为VR1拮抗剂且于实 施例5所述的分析法中没有可检测出的促效剂活性。较佳VR1调节剂 并以高亲和性与VR1结合，且不会实质上抑制人类EGF受体酪胺酸激 酶的活性。
某些具体实施例中，Ar1为苯基、苯甲基、萘基、萘基甲基、或5- 或10-元杂芳基或(杂芳基)甲基基团，如上所述其各自视需要被Rb取代。 其它化合物进一步符合式Ia：

式Ia
或其医药上可接受的盐类，式中：
W、X、Y及R3如通式I所述；
N为0或1(亦即包含B1、B2、B3、B4及B5的环经由单一共价键 或伸甲基连结至核心氮)；
A1、A2、A3及A4各自独立地为N或CR4，其中R4如通式I所述；
B1、B2、B3、B4及B5各自独立地为N或CR5，其中R5如通式I 所述；以及
R2为卤素、C1-C6烷基(如：异丙基或第三丁基)、C1-C6卤烷基(如： 三氟甲基)、C1-C6烷基磺醯基、C1-C6卤烷基磺醯基、羟基C1-C6烷基、 或氰基C1-C6烷基。
某些本文所提供化学式的具体实施例中，R3为如通式-Rx-L-M-Ry 的基团，其中Rx、L、M及Ry如通式I所述；于某些具体实施例中：
Rx为C1-C3亚烷基；
L为单一共价键、O、或N(Rz)；及/或
M为单一共价键或被0至4个取代基取代的C1-C8烷基；
Ry为：(a)氢；(b)C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C1-C8烷氧 基、(C1-C8烷基)氨基C0-C8烷基、C1-C8烷醯基、C3-C8烷酮、C2-C8烷 基醚、或3-至10-元碳环或杂环，其各自被0至4个独立地选自Rb的 取代基取代；或(c)与Rx或Rz共同形成4-至10-元碳环或杂环，其被0 至4个独立选自Rb的取代基取代；以及
Rz为：(a)氢；(b)C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C1-C8烷醯 基、C3-C8烷酮、C2-C8烷基醚、或3-至10-元碳环或杂环，其各自被0 至4个独立地选自Rb的取代基取代；或(c)与Rx或Ry共同形成4-至10- 元碳环或杂环，其被0至4个独立选自Rb的取代基取代。
明显地，于式-Rx-L-M-Ry的基团中，若两个相邻代号键结，则该 两个代号共同形成单键。例如，若-Rx、L及M各为单一共价键，则 R2为-Ry。
其它具体实施例中，某些式Ia的CR1调节剂进一步符合式II：
             式II
或其医药上可接受的盐类，式中，W、X、Y独立地为N或CR1； R1于每次出现时，独立地选自氢、卤素、羟基、氰基、硝基、氨基、 C1-C6烷基、C1-C6卤烷基、C1-C6卤烷氧基、C1-C6烷氧羰基、氨基磺 醯基、C1-C6烷基磺醯基、单-与二-(C1-C6烷基)氨基磺醯基、单-与二 -(C1-C6烷基)氨基羰基、及单-与二-(C1-C6烷基)氨基C0-C4烷基；以及 R3、A1、A2、A3、A4、B1、B2、B3、B4及B5皆如通式Ia所述；以及 R2为氰基、氰基C1-C6烷基、C1-C6卤烷基、C1-C6烷基磺醯基、C1-C6 卤烷基磺醯基、单-或二-(C1-C6烷基)氨基磺醯基、或单-或二-(C1-C6烷 基)氨基羰基。
某些式II的化合物中，Y为N。其它式II的化合物中，W为N且 X为CR1；X为N且W为CR1；或W及X两者皆为N。某些此等化 合物以亚式IIa、IIb或IIc为特征，其中n为0且其余代号如通式II所 述：

式IIa    式IIb    式IIc
如上述，式II、IIa、IIb及IIc中的A1、A2、A3及A4为独立地选 自N及CR4。某些此等化合物中，A1、A2、A3及A4中的至少两个或 三个为CR4；其它此等化合物中，A1、A2、A3及A4全部皆为CR4。各 R4独立地如上所述；某些化合物中，各R4独立地选自氢、卤素、氰基、 C1-C6烷基、C1-C6烯基、C1-C6卤烷基、C1-C6烷氧基、及C1-C6卤烷氧 基。一类式II、IIa、IIb及IIc的化合物中，A2及A3为CR4，且位在 A2及A3位置处的R4为选自甲基、卤素及氢(亦即A2及A3独立地为 C-CH3、C-卤素或CH)。某些此等化合物中，A2及A3各为CH。某些 式II、IIa、IIb及IIc的化合物中，A1及A4独立地为N或CH。
如上述，B1、B2、B3、B4及B5独立地选自N及CR5。某些此等化 合物中，B1、B2、B3、B4及B5中的至少两个或三个为CR5；其它此等 化合物中，B1、B2、B3、B4及B5中的至少四个为CR5。较佳地，至少 一个R5不为氢(亦即，包含B1、B2、B3、B4及B5的环具有至少一个取 代基，该取代基可位在附接点的邻位、间位或对位)。某些具体实施例 中，包含B1、B2、B3、B4及B5的环具有至少一个与附接点呈邻位的取 代基(亦即，B1或B5为被取代的碳)。各R5独立地如上所述；某些化合 物中，各R5独立地选自氢、卤素、氰基、-COOH、C1-C6烷基、C1-C6 烯基、C1-C6卤烷基、C1-C6烷氧基、及C1-C6卤烷氧基。
某些化合物中，式II、IIa、IIb及IIc中的各R1独立地为甲基、乙 基、氨基或氰基。其它此等化合物中，各R1为氢或甲基。
式II、IIa、IIb及IIc中的R2通常为如上所述；某些化合物中，R2 为三氟甲基、甲基磺醯基、三氟甲基磺醯基、或2-氰基-丙-2-基。
式II、IIa、IIb及IIc中的R3为如上所述；某些化合物中，R3为： (a)氢、卤素或氰基；或(b)C1-C6烷基、C1-C6烯基、C2-C6烷基醚、单- 或二-(C1-C6烷基)氨基C0-C4烷基、或(4-至10-元杂环基)C0-C6烷基，其 各自被0至4个独立地选自卤素、氰基、C1-C4烷基及C1-C4卤烷基的 取代基取代。一类式II、IIa、IIb及IIc的化合物中，R3为氢；于另一 类中，R3为C2-C6烷基醚、单-或二-(C1-C6烷基)氨基C0-C4烷基、或(4- 至10-元杂环基)C0-C6烷基，其各自被0至4个独立地选自卤素、氰基、 甲基及乙基的取代基取代。
某些具体实施例中，式I的CR1调节剂进一步符合式III：
               式III
或其医药上可接受的盐类，式中：
W、X及Y如通式II所述；
A1、A2、A3及A4如通式Ia所述；限制条件为如果R2为C1-C6烷 基时，则A2及A3不为C1-C6烷基；
B1、B2、B3、B4及B5独立地为N或CR5；
R2为卤素、氰基、氨基、C3-C6烷基、氰基C1-C6烷基、C1-C6卤烷 基、单-或二-(C1-C6烷基)氨基C0-C4烷基、C1-C6烷基磺醯基、或C1-C6 卤烷基磺醯基；
R3如通式I所述，限制条件为R3不为卤素或未被取代的烷基；以 及
R5于每次出现时，独立地选自氢、羟基、卤素、氨基、氨基羰基、 氰基、硝基、-COOH、C1-C6烷基、C1-C6烯基、C1-C6炔基、C1-C6卤 烷基、氨基C1-C6烷基、氰基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤烷氧 基、C1-C8烷醯基、C1-C8烷醯氧基、C1-C8烷硫基、C2-C8烷基醚、C1-C6 烷氧羰基、氨基磺醯基、C1-C6烷基磺醯基、单-与二-(C1-C6烷基)氨基 磺醯基、单-与二-(C1-C6烷基)氨基羰基、及单-与二-(C1-C6烷基)氨基 C0-C4烷基；或两个相邻的R5基团共同形成4-至10-元碳环或杂环，其 被0至4个独立地选自Rb的取代基取代。
某些式III的化合物中，Y为N。其它化合物中，W为N且X为 CR1；X为N且W为CR1；或W及X两者皆为N。某些此等化合物以 亚式IIIa、IIIb或IIIc为特征，其中n为0且其余代号如通式III所述：

式IIIa    式IIIb    式IIIc
某些式III、IIIa、IIIb及IIIc的化合物中，A2及A3各为CH。其它 式III、IIIa、IIIb及IIIc的化合物中，A1及A4独立地为N或CH。
如上述，B1、B2、B3、B4及B5独立地选自N及CR5。某些此等化 合物中，B1、B2、B3、B4及B5中的至少两个或三个为CR5；其它此等 化合物中，B1、B2、B3、B4及B5中的至少四个为CR5。较佳地，至少 一个R5不为氢(亦即，包含B1、B2、B3、B4及B5的环具有至少一个取 代基，该取代基可位在附接点的邻位、间位或对位)。某些具体实施例 中，包含B1、B2、B3、B4及B5的环具有至少一个与附接点呈邻位的取 代基(亦即，B1或B5为被取代的碳)。各R5独立地如上所述；某些化合 物中，各R5独立地选自氢、卤素、氰基、-COOH、C1-C6烷基、C1-C6 烯基、C1-C6卤烷基、C1-C6烷氧基、及C1-C6卤烷氧基。
式III、IIIa、IIIb及IIIc中的R2通常如上式III所述；某些化合物 中，R2为卤素、异丙基、第三丁基、三氟甲基、甲基磺醯基、三氟甲 基磺醯基、或2-氰基-丙-2-基。
式III、IIIa、IIIb及IIIc中的R3为如上所述；某些化合物中，R3 为：(a)氢、卤素或氰基；或(b)C2-C6烷基醚、单-或二-(C1-C6烷基)氨基 C0-C4烷基、或(4-至10-元杂环基)C0-C6烷基，其各自被0至4个独立 地选自卤素、氰基、C1-C4烷基及C1-C4卤烷基的取代基取代。一类式 III、IIIa、IIIb及IIIc的化合物中，R3为氢；于另一类中，R3为C2-C6 烷基醚、单-或二-(C1-C6烷基)氨基C0-C4烷基、或(4-至10-元杂环 基)C0-C6烷基，其各自被0至4个独立地选自卤素、氰基、甲基及乙基 的取代基取代。
某些具体实施例中，式I的CR1调节剂进一步符合式IV：
               式IV
或其医药上可接受的盐类，式中：
W、X及Y如通式II所述；
B1、B2、B3、B4及B5各自独立地为N或CR5；限制条件为B1、 B2、B3、B4及B5中至少一者为被取代的碳；
A1及A4独立地为CH或N；
R2、R5、A2及A3如通式III所述；以及
R3如通式I所述。
某些式IV的化合物中，Y为N。其它化合物中，W为N且X为 CR1；X为N且W为CR1；或W及X两者皆为N。某些此等化合物以 亚式IVa、IVb或IVc为特征，其中n为0且其余代号如通式IV所述：

式IVa    式IVb    式IVc
某些式IV、IVa、IVb及IVc的化合物中，A2及A3各为CH。其它 式IV、IVa、IVb及IVc的化合物中，A1及A4独立地为N或CH。
如上述，B1、B2、B3、B4及B5独立地选自N及CR5，且至少一个 R5不为氢。某些此等化合物中，B1、B2、B3、B4及B5中的至少两个或 三个为CR5；其它此等化合物中，B1、B2、B3、B4及B5中的至少四个 为CR5。R5不为氢且可位在附接点的邻位、间位或对位；某些具体实 施例中，包含B1、B2、B3、B4及B5的环具有至少一个与附接点呈邻位 的取代基(亦即，B1或B5为被取代的碳)。各R5独立地如上所述；某些 化合物中，各R5独立地选自氢、卤素、氰基、-COOH、C1-C6烷基、 C1-C6烯基、C1-C6卤烷基、C1-C6烷氧基、及C1-C6卤烷氧基。
式IV、IVa、IVb及IVc中的R2通常如上所述；某些化合物中， R2为卤素、异丙基、第三丁基、三氟甲基、甲基磺醯基、三氟甲基磺 醯基、或2-氰基-丙-2-基。
式IV、IVa、IVb及IVc中的R3为如上所述；某些化合物中，R3 为：(a)氢、卤素或氰基；或(b)C2-C6烷基醚、单-或二-(C1-C6烷基)氨基 C0-C4烷基、或(4-至10-元杂环基)C0-C6烷基，其各自被0至4个独立 地选自卤素、氰基、C1-C4烷基及C1-C4卤烷基的取代基取代。一类式 IV、IVa、IVb及IVc的化合物中，R3为氢；于另一类中，R3为C2-C6 烷基醚、单-或二-(C1-C6烷基)氨基C0-C4烷基、或(4-至10-元杂环 基)C0-C6烷基，其各自被0至4个独立地选自卤素、氰基、甲基及乙基 的取代基取代。
某些具体实施例中，式I的CR1调节剂进一步符合式V：
            式V
或其医药上可接受的盐类，式中：
W及X独立地为N或CR1；限制条件为W及X中至少一者为N；
R1若存在时，则为氢或甲基；
A2及A3各自为CR4；
各R4独立地选自甲基、卤素及氢；
B5为N或CH；
B1、B2及B3为CR5；限制条件为至少一个R5不为氢；
R2为卤素、异丙基、第三丁基、C1-C6卤烷基、C1-C6烷基磺醯基、 C1-C6卤烷基磺醯基、羟基C1-C6烷基、或氰基C1-C6烷基；
R3为：(a)氢、卤素或氰基；或(b)C2-C6烷基醚、单-或二-(C1-C6 烷基)氨基C0-C4烷基、或(4-至10-元杂环基)C0-C6烷基，其各自被0至 4个独立地选自卤素、氰基、C1-C4烷基及C1-C4卤烷基的取代基取代；
各R5独立地选自氢、卤素、氰基、-COOH、C1-C6烷基、C1-C6烯 基、C1-C6卤烷基、C1-C6烷氧基、及C1-C6卤烷氧基。
本文所提供代表性化合物包括(但不限于)彼等明确说明于实施例1 至3中者。咸了解，本文中明确说明的化合物仅为代表性化合物，并 无意限制本发明的范围。此外，如上述，所有本发明化合物均可呈游 离碱或其医药上可接受的盐。
本发明某些态样所提供的被芳基取代的嘌呤类似物显著地改变(调 节)VR1活性，其是采用活体外VR1功能性分析法测定，如：钙离子移 动分析法、背根神经节分析法或活体内疼痛解除分析法。可采用VR1 配体结合性分析法初步筛选此等活性。本文所提及的″VR1配体结合性 分析法″是指标准活体外受体结合性分析法，如：实施例5所提供者， 及″钙离子移动分析法″(本文中亦称为″讯号转导分析法″)可依实施例6 所述进行。简言之，可采用竞争性分析法分析与VR1的结合性，其中 将VR1制剂与会结合VR1的被标记(例如：125I或3H)化合物(例如：辣 椒素受体促效剂如：RTX)及未被标记的试验化合物进行培养。本文所 提供的分析法中，所使用的VR1最好为哺乳动物VR1，更佳为人类或 大鼠VR1。受体可被重组表达或自然表达。VR1制剂可为例如：来自 重组表达人类VR1的HEK293或CHO细胞的膜制剂。相对于没有化 合物存在时的标记物结合量而言，与显著调节类香草醇配体与VR1结 合性的化合物培养时，与VR1制剂结合的标记物量会下降或提高。此 下降或提高可依本文所说明，用于决定对VR1的Ki。一般而言，可在 此等分析法中使与VR1制剂结合的标记物量降低的化合物较佳。
如上述，作为VR1拮抗剂的化合物较适用于某些具体实施例。此 等化合物的IC50值可采用标准活体外VR1-所媒介的钙离子移动分析法 (如实施例6所示)决定。简言之，由表达辣椒素受体的细胞与所需化合 物及可指示细胞内钙浓度的指示剂(例如：膜可通透的钙敏感性染料如： Fluo-3或Fura-2(二者均可得自例如：Molecular Probes，Eugene，OR)， 其与Ca++结合时，分别会产生萤光讯号)接触。此等接触最好在包含化 合物及指示剂中一者或两者的缓冲液或培养基的溶液中，与细胞培养 一次或多次下进行。接触应维持足以使染料进入细胞中(例如：1至2 小时)的时间量。细胞经洗涤或过滤排除过量染料后，与类香草醇受体 促效剂(例如：辣椒素、RTX或欧凡尼(olvanil))，典型于等于EC50浓 度下接触，测定萤光反应。当接触过促效剂的细胞与作为VR1拮抗剂 的化合物接触时，相较于在没有试验化合物下与促效剂接触的细胞， 该萤光反应会下降至少20％，较佳为至少50％，更佳为至少80％。本 文所提供VR1拮抗剂的IC50较佳为小于1微摩尔，小于100nM，小于 10nM或小于1nM。
其它具体实施例中，以作为辣椒素受体促效剂的化合物较佳。辣 椒素受体促效剂活性通常依实施例6所述测定。当细胞与1微摩尔作 为VR1促效剂的化合物接触时，该萤光反应讯号量通常比与100nM 辣椒素接触的细胞所观察到的萤光反应讯号量提高至少30％。本文所 提供VR1促效剂的EC50较佳为小于1微摩尔，小于100nM或小于10 nM。
VR1调节活性亦或者可采用培养的背根神经节分析法(如实施例9 所述)及/或活体内疼痛解除分析法(如实施例10所述)分析。本文所提供 VR1调节剂在本文所提供一种或多种功能性分析法中对VR1活性具有 统计上显著的明确效应较佳。
某些具体实施例中，本文所提供VR1调节剂实质上不会调节配体 与如EGF受体酪胺酸激酶或烟碱乙醯胆碱受体的其它细表胞表面受体 的结合。换言之，此等调节剂实质上不会抑制如人类上皮生长因子(EGF) 受体酪胺酸激酶或烟碱乙醯胆碱受体的细胞表面受体的活性(例如：对 此等受体的IC50或IC40较佳为大于1微摩尔，最佳为大于10微摩尔)。 较佳者，调节剂不会在0.5微摩尔、1微摩尔或更佳为10微摩尔下显 著抑制EGF受体活性或烟碱乙醯胆碱受体活性。测定细胞表面受体活 性的分析法可自商品取得，包括可得自Panvera(Madison，WI)药厂的酪 胺酸激酶分析套组。
某些具体实施例中，较佳的VR1调节剂不为镇定剂。换言之，在 测定疼痛解除的动物模式中(如：本文实施例10所提供的模式)，VR1 调节剂的用量达充分止痛的最低剂量的两倍剂量时，仅会暂时镇定(亦 即持续时间不超过解除疼痛所维持时间的1/2)或最好在镇定的动物模 式分析法中没有统计上显著的镇定作用(采用Fitzgerald等人说明于 (1988)Toxicology 49(2-3)：433-9的方法)。较佳者，其剂量达充分止痛的 最低剂量的5倍剂量时，不会产生统计上显著的镇定作用。更佳者， 本文所提供VR1调节剂在小于25mg/kg(较佳为小于10mg/kg)的静脉 内剂量下或小于140mg/kg(较佳为小于50mg/kg，更佳为小于30mg/kg) 的口服剂量下，不会产生镇定作用。
若需要时，可分析本文所提供化合物的某些医药性质，包括(但不 限于)口服生体可用率(较佳化合物的口服生体可用率程度应可使口服 剂量小于140mg/kg，较佳为小于50mg/kg，更佳为小于30mg/kg，甚 至更佳为小于10mg/kg，亦更佳为小于1mg/kg与最佳为小于0.1mg/kg 的化合物达治疗有效浓度)、毒性(较佳化合物当以治疗有效量给药给个 体时，应无毒性)、副作用(较佳化合物当以治疗有效量给药给个体时所 产生的副作用应相当于安慰剂)、血清蛋白质结合性及活体外与活体内 半衰期(较佳化合物的活体内半衰期应容许进行Q.I.D.给药法，较佳为 T.I.D.给药法，更佳为B.I.D.给药法及最佳为一天一次给药法)。此外， 用于经由调节CNS VR1活性而治疗疼痛的VR1调节剂可能需要对血 脑障壁有不同渗透性，因此当提供上述每日口服总剂量时，可使此等 调节作用达治疗有效程度，同时降低脑中用于治疗外围神经所媒介的 疼痛的VR1调节剂浓度为较佳的作法(亦即此等剂量在脑中(例如：CSF) 所产生的化合物浓度应不足以显著调节VR1活性)。可采用相关技艺习 知的例行分析法来分析此等性质及判别特别用途的优良化合物。例如： 用于预估生体可用率的分析法包括转运通过人类肠单层细胞，包括 Caco-2单层细胞。化合物在人体中渗透血脑障壁的性质可采用接受化 合物给药(例如：经静脉内)的实验室动物脑中化合物浓度来评估。血清 蛋白质结合性可由白蛋白结合性分析法预估。化合物半衰期是与化合 物剂量频率成反比。化合物的活体外半衰期可由本文中实施例7所述 的微粒体半衰期分析来预估。
如上述，本文所提供化合物较佳为无毒性。一般而言，本文所采 用术语″无毒性″咸了解，是一种相对定义，意指任何经美国食品与药物 检验局(″FDA″)核准用于投与哺乳动物(较佳为人类)或符合所制定的标 准，可被FDA核准投与哺乳动物(较佳为人类)的物质。此外，极佳的 无毒性化合物通常会符合下列一项或多项标准：(1)不会实质上抑制细 胞ATP产生；(2)不会显著延长心脏QT间隔；(3)不会造成显著的肝扩 大，或(4)不会造成肝酵素实质释出。
本文所采用不会实质上抑制细胞ATP产生的化合物为一种符合本 文中实施例8所示标准的化合物。换言之，经过100μM此等化合物 处理的细胞中ATP含量为未处理细胞中所检测到ATP含量的至少 50％。极为更佳具体实施例中，此等细胞中ATP含量为未处理细胞中 所检测到ATP含量的至少80％。
不会显著延长心脏QT间隔的化合物为一种使天竺鼠、迷你猪或狗 在接受使血清中化合物浓度等于EC50或IC50的剂量给药后，不会在统 计上显著延长心脏QT间隔的化合物(由心电图测定)。某些较佳具体实 施例中，非经肠式或口服投与0.01、0.05、0.1、0.5、1、5、10、40或 50mg/kg的剂量不会在统计上显著延长心脏QT间隔。″统计上显著″ 意指采用标准参数分析法(如：史都登氏(Student′s)T字检定)测定统计 显著性时，其结果与对照组结果的差异达p＜0.1或更佳为达p＜0.05显 著水准。
若实验室囓齿类动物(例如：小鼠或大鼠)每天接受使血清中化合物 浓度等于EC50或IC50的剂量给药5至10天后，所导致的肝对体重比 例的增加不超过配对对照组的100％时，该化合物即不会造成显著的肝 扩大。极为更佳的具体实施例中，此等剂量不会使肝扩大程度超过配 对对照组的75％或50％。若采用非囓齿类动物(例如：狗)时，此等剂量 不会增加肝对体重比例超过配对未处理对照组的50％，较佳不超过 25％，更佳为不超过10％。此等分析法中，较佳给药剂量包括非经肠 式或口服投与0.01、0.05、0.1、0.5、1、5、10、40或50mg/kg。
同样地，若实验室动物(例如囓齿类)在接受可使血清中化合物浓度 等于VR1对化合物的EC50或IC50的最低剂量两倍浓度后，不会使血清 中ALT、LDH或AST浓度提高程度超过配对伪处理对照组的100％时， 则该化合物不会促进肝酵素实质释出。极为更佳的具体实施例中，此 等剂量不会使此等血清浓度超过配对对照组的75％或50％。或者，若 活体外肝细胞分析法中，(于活体外与肝细胞接触及培养的培养基中或 其它此等溶液中)，在等于化合物的EC50或IC50的浓度下，不会使任何 此等肝酵素释出至培养基中的量高于配对的仿真处理的对照组细胞培 养基中所观察到的基底值达可检测的程度，则该化合物不会促进肝酵 素实质释出。极为更佳的具体实施例中，当化合物在化合物的EC50或 IC50的5倍浓度(较佳为10倍浓度)时，不会使任何此等肝酵素释出至 培养基中的量高于基底值达可检测的程度。
其它具体实施例中，某些较佳化合物不会在等于化合物对VR1的 EC50或IC50浓度时，抑制或诱发微粒体细胞色素P450酵素活性，如： CYP1A2活性、CYP2A6活性、CYP2C9活性、CYP2C19活性、CYP2D6 活性、CYP2E1活性或CYP3A4活性。
某些较佳化合物在等于化合物的EC50或IC50浓度时，不会使细胞 裂解(clastogenic)(例如：采用小鼠红血球前驱物细胞小核分析法、Ames 小核分析法、螺旋小核分析法等测定)。其它具体实施例中，某些较佳 化合物在此等浓度下不会诱发姐妹染色单体交换(例如：中国仓鼠卵巢 细胞)。
如下文所讨论，为了检测目的，本文所提供的VR1调节剂可标记 同位素或放射性。例如：化合物中可能有一个或多个原子被原子量或 质量数不同于通常天然存在的原子量或质量数的相同元素置换。本文 所提供化合物中可出现的同位素实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟与 氯的同位素，如：2H、3H、11C、13C、14C、15N、18O、17O、31p、32p、 35S、18F与36Cl。此外，被重同位素如：氘(亦即2H)取代时，可因代谢 安定性较高而产生某些医疗优势，例如：增加活体内半衰期或降低所 需剂量，因此有时候较有利。
被芳基取代的嘌呤类似物的制法
被芳基取代的嘌呤类似物通常采用标准合成法制备。起始物可自 如：Sigma-Aldrich Corp.(St.Louis，MO)供货商所提供的商品取得，或可 由自商品取得的前驱物，采用已建立的方法制备。例如：可采用类似 下列反应图所示的合成途径，及合成有机化学相关技艺已知的合成法 制备。下列反应图中各代号是配合本文所提供化合物的说明的任何基 团。
反应图1

本文中所述的咪唑并嘧啶(V)可经由下列反应图I中所概述的反应 序列而获得。中间物III是经由将中间物I与中间物II在极性溶剂(如乙醇 或乙氧基乙醇)中反应而获得。以原酸酯(ortho ester)处理中间物III而提 供环状中间物IV。以芳香族胺处理中间物IV而提供咪唑并嘧啶V。
反应图2

本文中所述的三唑并嘧啶(VII)是经由以溶于酸性介质水溶液(如 HCl、H2SO4、或乙酸)的亚硝酸钠处理中间物III，而得中间物IV而获 得。以芳香族胺处理中间物VI而提供由结构VII表示的三唑并嘧啶。
反应图3

吡唑并嘧啶(XIV)可如反应图3所示而获得。在碱(如溶于脂族醇的 三烷基胺)的存在下，以丙二腈(malanonitrile)衍生物IX处理芳基肼VIII 而提供中间物X。该腈可藉由以酸(如硫酸)处理而转换成其甲醯胺衍生 物XI。以结构XII表示的吡唑并嘧啶酮是藉由在溶于脂族醇介质中的 碱金属烷氧化物的存在下以酯处理而得。在溶剂的存在或不存在下， 以POCl3处理嘧啶酮XII以提供中间物XIII。以芳香族胺置换中间物 XIII的卤素以提供吡唑并嘧啶XIV。
反应图4及5类似地说明Y为CR1的化合物的合成。
反应图4

反应图5

某些具体实施例中，本文所提供化合物可包含一个或多个不对称 碳原子，因此化合物可出现不同立体异构型。此等型式可为例如：消 旋物或光学活性型。如上述，所有立体异构型均包括在本发明范围内。 尽管如此，仍可能需要得到单一对映异构物(enantiomer)(亦即光学活性 型)。制备单一对映异构物的标准方法包括不对称合成法与消旋物解析 法。消旋物解析法可例如：依一般方法进行如：于解析剂的存在下结 晶或使用例如：对掌性HPLC管柱层析。
化合物可在其合成法中使用包含至少一个放射性同位素原子的前 驱物进行放射性标记。各放射性同位素较佳为碳(例如：14C)、氢(例如： 3H)、硫(例如：35S)或碘(例如：125I)。标记氚的化合物制法亦可于氚化 的乙酸中，使用铂催化的交换反应；于氚化的三氟乙酸中，使用酸催 化的交换反应；或使用化合物作为受质，与氚气体进行不均相的催化 交换反应。此外，某些前驱物可依需要使用氚气体进行氚-卤素交换反 应，使用氚气体还原不饱和键或使用氚硼化钠还原。标记放射性的化 合物制法宜由专为合成标记放射性的探针化合物的放射性同位素供货 商进行。
医药组合物
本发明亦提供一种医药组合物，其包含一种或多种本文所提供化 合物，及至少一种生理上可接受的载体或赋形剂。医药组合物可包含 例如：下列一项或多项：水、缓冲液(例如：中性的缓冲生理食盐水或 磷酸盐缓冲生理食盐水)、乙醇、矿物油、植物油、二甲亚砜、碳水化 合物(例如：葡萄糖、甘露糖、蔗糖或葡聚糖)、甘露糖醇、蛋白质、辅 剂、多肽或氨基酸(如：甘胺酸)、抗氧化剂、螯合剂如：EDTA或谷胱 甘肽(glutathione)及/或防腐剂。此外，本文所提供的医药组合物中亦可 (但不一定)包括其它活性成分。
医药组合物可调配供任何适当给药方式使用，包括例如：局部、 口服、经鼻、经直肠或非经肠式给药。本文所采用术语非经肠式包括 经皮下、皮内、血管内(例如：静脉内)、肌内、脊髓内、颅内、鞘内、 与腹膜内注射，及任何类似的注射或输液技术。某些具体实施例中， 以适合口服的组合物较佳。此等组合物包括例如：锭剂、糖衣锭、口 含锭、水性或油性悬浮液、可匀散的粉剂或粒剂、乳液、硬性或软性 胶囊或糖浆或酏剂。其它具体实施例中，本发明医药组合物可呈冷冻 干燥物调配。局部给药用调配物可能较适于某些病症(例如：用于治疗 皮肤病如：烧伤或搔痒)。直接给药至膀胱的调配物(膀胱内给药)可能 较适于治疗尿失禁与膀胱过动症。
口服用组合物尚可包含一种或多种成分，如：甜味剂、调味剂、 着色剂及/或防腐剂，以提供吸引人且适口的制剂。锭剂包含活性成分 与适合制造锭剂的生理上可接受的赋形剂混合。此等赋形剂包括例如： 惰性稀释剂(例如：碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠)、制粒剂 与崩解剂(例如：玉米淀粉或藻酸)、结合剂(例如：淀粉、明胶或阿拉 伯胶)及润滑剂(例如：硬脂酸镁、硬脂酸或滑石)。锭剂可以没有包衣 或可依已知技术包覆包衣，以延缓于胃肠道中崩解与吸收，藉以提供 较长期的持续作用。例如：可使用定时释放物质如：单硬脂酸甘油酯 或二硬脂酸甘油酯。
口服用调配物亦可呈硬明胶胶囊，其中由活性成分与惰性固体稀 释剂混合(例如：碳酸钙、磷酸钙或高岭土)，或呈软明胶胶囊，其中活 性成分与水或油介质(例如：花生油、液态石蜡或橄榄油)混合。
水性悬浮液包含活性成分(群)与合适赋形剂混合，如：悬浮剂(例 如：羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、藻酸钠、聚 乙烯吡咯啶酮、黄耆胶与阿拉伯胶)；与匀散剂或湿化剂(例如：天然磷 脂如：卵磷脂、亚烷基氧化物与脂肪酸的缩合产物如：聚氧伸乙基硬 脂酸酯、环氧乙烷与长链脂族醇的缩合产物如：十七碳伸乙基氧鲸蜡 醇、环氧乙烷与衍生自脂肪酸及己糖醇的部份酯的缩合产物如：聚氧 伸乙基山梨糖醇单油酸酯、或环氧乙烷与衍生自脂肪酸及己糖醇酐的 部份酯的缩合产物如：聚氧伸乙基山梨糖醇酐单油酸酯)。水性悬浮液 亦可包含一种或多种防腐剂例如：对羟基苯甲酸的乙酯或正丙酯、一 种或多种着色剂、一种或多种调味剂及/或一种或多种甜味剂，如：蔗 糖或糖精。
油性悬浮液的调配法可将活性成分(群)悬浮于植物油中(例如：花 生油、橄榄油、芝麻油或椰子油)或矿物油如：液态石蜡。油性悬浮液 可包含稠化剂如：蜂蜡、硬性石蜡或鲸蜡醇。可添加如上述的甜味剂 及/或调味剂，以提供适口的口服制剂。此等悬浮液可添加如抗坏血酸 的抗氧化剂进行防腐。
适合制备水性悬浮液的可匀散性粉剂与粒剂可加水，使活性成分 与匀散剂或湿化剂、悬浮剂与一种或多种防腐剂混合。合适的匀散剂 或湿化剂及悬浮剂实例已如上述。亦可包含其它赋形剂如：甜味剂、 调味剂与着色剂。
医药组合物亦可调配成水包油性(oil-in-water)乳液。油相可为植物 油(例如：橄榄油或花生油)、矿物油(例如：液态石蜡)或其混合物。合 适的乳化剂包括天然胶质(例如：阿拉伯胶或黄耆胶)、天然磷脂(例如： 大豆卵磷脂、与衍生自脂肪酸及己糖醇的酯或部份酯)、酸酐(例如：山 梨糖醇单油酸酯)及衍生自脂肪酸及己糖醇的部份酯与环氧乙烷的缩合 产物(例如：聚氧伸乙基山梨糖醇酐单油酸酯)。乳液亦可包含一种或多 种甜味剂及/或一种或多种调味剂。
糖浆与酏剂可使用甜味剂调配，如：甘油、丙二醇、山梨糖醇或 蔗糖。此等调配物亦可包含一种或多种缓和剂、防腐剂、调味剂及/或 着色剂。
局部给药用调配物典型地包含局部用媒剂与活性成分(群)组 合，可添加或不添加其它可视需要选用的成分。合适的局部用媒剂与 其它成分是相关技艺已知者，且咸了解，其可依特定的物理形式与传 送模式选择媒剂。局部用媒剂包括水；有机溶剂如：醇类(例如：乙醇 或异丙醇)或甘油；二醇类(例如：丁二醇、异戊间二烯二醇或丙二醇)； 脂族醇(例如：羊毛脂)；水与有机溶剂的混合物，及有机溶剂的混合物 如：醇与甘油混合物；以脂质为主的物质如：脂肪酸、醯基甘油(包括 油类如：矿物油，与天然或合成的脂肪)、磷酸甘油酯、神经鞘脂质与 蜡类；以蛋白质为主的物质如：胶原与明胶；以聚硅氧为主的物质(包 括非挥发性及挥发性)；与以烃为主的物质如：小海绵与聚合物母质。 组合物可另包括一种或多种适合改善所施用调配物的安定性或有效性 的成分，如：安定剂、悬浮剂、乳化剂、黏度调整剂、胶凝剂、防腐 剂、抗氧化剂、皮肤渗透加强剂、湿化剂与持续释放性材料。此等成 分实例说明于Martindale的The Extra Pharmacopoeia(pharmaceutical Press，London 1993)与Remington：The Science and Practice of Pharmacy， 第21版，Lippincott Williams&Wilkins，Philadelphia，PA(2005)。调配物 可包括微胶囊，如：羟甲基纤维素或明胶微胶囊、微脂粒、白蛋白微 小球、微乳液、奈米粒子或奈米胶囊。
局部用调配物可制成多种物理型式，包括例如：固体、糊剂、乳 霜、泡沫物、洗液、凝胶、粉剂、水性液体(例如：眼药水)与乳液。此 等型式的物理外观与黏度可使用调配物中所含乳化剂与黏度调整剂的 用量来控制。固体通常坚实，无法倾倒，经常调配成棒状或杆状或粒 状；固体可不透明或透明，其可视需要包含溶剂、乳化剂、湿化剂、 软化剂、香料、染料/着色剂、防腐剂与其它可提高或加强最终产物效 力的活性成分。乳霜与洗液通常类似，其差异主要在其黏度；洗液与 乳霜二者均可能不透明、半透明或澄清，经常包含乳化剂、溶剂与黏 度调整剂，及湿化剂、软化剂、香料、染料/着色剂、防腐剂与其它可 提高或加强最终产物效力的活性成分。凝胶可制成多种不同黏度，由 浓稠或高黏度至稀薄或低黏度。此等调配物如同洗液与乳霜，亦可包 含溶剂、乳化剂、湿化剂、软化剂、香料、染料/着色剂、防腐剂与其 它可提高或加强最终产物效力的活性成分。液体比乳霜、洗液或凝胶 稀薄，通常不包含乳化剂。液态局部产品经常包含溶剂、乳化剂、湿 化剂、软化剂、香料、染料/着色剂、防腐剂与其它可提高或加强最终 产物效力的活性成分。
适用于局部用调配物的乳化剂包括(但不限于)：离子性乳化剂、鲸 蜡醇、非离子性乳化剂如：聚氧伸乙基油基醚、PEG-40硬脂酸酯、鲸 蜡硬脂醇醚(ceteareth)-12、鲸蜡硬脂醇醚-20、鲸蜡硬脂醇醚-30、鲸蜡 硬脂醇(ceteareth alcohol)、PEG-100硬脂酸酯与硬脂酸甘油酯。合适的 黏度调整剂包括(但不限于)：保护性胶体或非离子性胶质如：羟乙基纤 维素、黄耆胶、硅酸镁铝、硅石、微晶蜡、蜂蜡、石蜡与棕榈酸鲸蜡 酯。凝胶组合物的形成法可添加胶凝剂如：甲壳素(chitosan)、甲基纤 维素、乙基纤维素、聚乙烯醇、聚四元盐、羟乙基纤维素、羟丙基纤 维素、羟丙基甲基纤维素、聚羧基制剂(carbomer)或胺化甘草酸盐。合 适的界面活性剂包括(但不限于)：非离子性、两性、离子性与阴离子性 界面活性剂。局部用调配物中可使用例如：下列一种或多种：二甲硅 酮共多元醇(dimethicone copolyol)、聚山梨酸酯20、聚山梨酸酯40、聚 山梨酸酯60、聚山梨酸酯80、月桂醯胺DEA、椰子醯胺DEA与椰子 醯胺MEA、油基甜菜碱、椰子醯胺丙基磷脂醯基PG-二铵化氯、与月 桂基醚硫酸铵。合适的防腐剂包括(但不限于)：抗微生物剂如：对氧苯 甲酸甲酯(methylparaben)、对氧苯甲酸丙酯、山梨酸、苯甲酸与甲醛， 及物理性安定剂与抗氧化剂如：维生素E、抗坏血酸钠/抗坏血酸与五 倍子酸丙酯。合适的湿化剂包括(但不限于)：乳酸与其它羟基酸与其盐 类、甘油、丙二醇与丁二醇。合适的软化剂包括羊毛脂醇、羊毛脂、 羊毛脂衍生物、胆固醇、凡士林、新戊酸异硬脂基酯与矿物油。合适 的香料与色素包括(但不限于)：FD&C红色40号与FD&C黄色5号。 局部用调配物中可包含的其它成分包括(但不限于)研磨剂、吸收剂、抗 结块剂、消泡剂、抗静电剂、收敛剂(例如：美洲金缕梅、酒精与药草 萃液如：甘菊萃液)、结合剂/赋形剂、缓冲剂、螯合剂、膜形成剂、调 理剂、推进剂、不透明剂、pH调整剂与保护剂。
调配凝胶的合适局部用媒剂实例为：羟丙基纤维素(2.1％)；70/30 异丙醇/水(90.9％)；丙二醇(5.1％)；与聚山梨酸酯80(1.9％)。调配泡沫 物的合适局部用媒剂实例为：鲸蜡醇(1.1％)；硬脂醇(0.5％；季铵盐 (Quatemium)52(1.0％)；丙二醇(2.0％)；乙醇95 PGF3(61.05％)；去离子 水(30.05％)；P75烃推进剂(4.30％)。所有百分比均以重量计。
传送局部用组合物的典型方式包括使用手指涂抹；使用物理性涂 抹器施用如：布、卫生纸、棉花、小棒或刷子；喷洒(包括雾化、气雾 或泡沫喷洒)；滴药法；倾注；浸泡；及润洗。亦可使用控制释放的媒 剂。
医药组合物亦可制成无菌的注射用水性或油性悬浮液。依所使用 的媒剂与浓度而定，本文所提供的化合物(群)可以悬浮或溶解于媒剂 中。此等组合物可依据相关技艺已知的方式，使用如上述的合适匀散 剂、湿化剂及/或悬浮剂调配。可接受的媒剂与溶剂中，可使用水、1，3- 丁二醇、林格氏溶液与等张性氯化钠溶液。此外，可使用无菌的固定 油类作为溶剂或悬浮介质。因此任何厂牌的固定油均可使用，包括合 成的单-或二酸甘油酯。此外，用于制备注射用组合物的如油酸的脂肪 酸如局部麻醉剂、防腐剂及/或缓冲剂的辅剂可溶于媒剂中。
调节剂亦可调配成栓剂(例如：经直肠给药用)。此等组合物的制法 可由药物与常温下呈固体但在直肠温度下却呈液体的无刺激性赋形剂 混合，因此可于直肠中融化释出药物。合适的赋形剂包括例如：可可 奶油与聚乙二醇。
医药组合物可调配成持续释放或控制释放调配物(亦即如胶囊的给 药后可缓慢释出活性成分的调配物)。此等调配物通常依相关技艺已知 的方式制备及经例如：口、直肠或皮下植入物给药，或植入所需目标 位置。此等调配物中使用的载体为生物可兼容性，亦可为生物可降解； 较佳调配物可释放相当恒定浓度的调节剂。持续释放调配物中的调节 剂含量依例如：植入位置、释放的速度与所期望持续时间与所治疗或 预防病症的性质而定。
外加或并用上述给药法外，调节剂亦可加至食物或饮水中(例如： 供给药给非人类动物，包括宠物(如：狗与猫)与家畜)。动物饲料与饮 水组合物的调配可使动物在进食时，同时摄取适量组合物。亦适合使 组合物形成可加至饲料或饮水中的预混合物。
化合物通常投与治疗有效量。较佳的全身剂量不超过每天每公斤 体重50毫克(例如：每天每公斤体重约0.001毫克至约50毫克)，口服 剂量通常高于静脉内给药剂量的约5至20倍(例如：每天每公斤体重 0.01至40毫克)。
可与载体材料组合使用形成单一剂量单位的活性成分用量将依例 如：所治疗患者、特定的给药模式及其它同时投与的药物加以变化。 剂量单位通常包含约10微克至约500毫克活性成分。最佳剂量可采用 相关技艺已知的例行试验与方法决定。
医药组合物可包装用于治疗对VR1调节作用有反应的病症(例如： 治疗曝露到类香草醇配体或其它刺激物、疼痛、搔痒、肥胖或尿失禁)。 包装的医药组合物可包括(i)容器，内装包含至少一种本文所说明的 VR1调节剂的医药组合物，及(ii)说明书(例如：卷标或包装插页)，指 示其中所包含的组合物是用于治疗患者对VR1调节作用有反应的病 症。
使用方法
本文所提供VR1调节剂可于活体外与活体内，用以改变多方面辣 椒素受体的活性及/或活化作用。某些态样中，VR1拮抗剂可用于活体 外或活体内抑制类香草醇配体促效剂(如：辣椒素及/或RTX)与辣椒素 受体结合。一般而言，此等方法包括的步骤为由辣椒素受体与本文所 提供一种或多种VR1调节剂，于类香草醇配体的存在下，于水溶液中 及其它适合配体与辣椒素受体结合的条件下接触。VR1调节剂的浓度 通常足以改变类香草醇配体与VR1于活体外的结合性(采用实施例5的 分析法测定)及/或VR1所媒介讯号转导作用(采用实施例6的分析法测 定)。辣椒素受体可呈溶液或悬浮液(例如：含于单离的膜或细胞制剂 中)，或含于培养或单离的细胞中。某些具体实施例中，辣椒素受体是 由患者的神经细胞表达，且该水溶液为体液。较佳者，可对动物投与 一种或多种VR1调节剂，其给药量应使动物体内至少一种体液所含 VR1调节剂的治疗有效浓度为1微摩尔或以下；较佳为500摩尔纳摩 尔或以下；更佳为100摩尔纳摩尔或以下，50摩尔纳摩尔或以下，20 摩尔纳摩尔或以下，或10摩尔纳摩尔或以下。例如：此等化合物的给 药剂量可小于20毫克/公斤体重，较佳为小于5毫克/公斤，有时候小 于1毫克/公斤。
本文亦提供一种调节(较佳为降低)细胞辣椒素受体的讯号转导活 性(亦即钙传导)的方法。此等调节法是由辣椒素受体(活体外或活体内) 与一种或多种本文所提供VR1调节剂，于适合调节剂(群)与受体结合 的条件下接触而达成。VR1调节剂(群)的浓度通常足以改变本文所说明 的类香草醇配体与VR1于活体外的结合性及/或VR1所媒介讯号转导 作用。受体可呈溶液或悬浮液，含于培养或单离的细胞制剂或在患者 的细胞内。例如：细胞可为于动物活体内接触的神经细胞。或者，细 胞可为于动物活体内接触的上皮细胞，如：尿道膀胱上皮细胞(urothelial cell)或呼吸道上皮细胞。讯号转导活性的调节作用可藉由检测其对钙离 子传导性的影响来分析(亦称为钙离子移动或流量)。讯号转导活性的调 节作用亦可藉由检测接受本文所提供一种或多种VR1调节剂治疗的患 者症状的改变来分析(例如：疼痛、烧伤感觉、支气管收缩、发炎、咳 嗽、呃逆、搔痒、尿失禁或膀胱过动症)。
本文所提供VR1调节剂(群)较佳为经口或局部投与患者(例如：人 类)，且当调节VR1讯号转导活性时，存在于动物的至少一种体液中。 用于此方法于活体外调节VR1讯号转导活性的较佳VR1调节剂浓度为 1摩尔纳摩尔或以下，较佳为100微微摩尔或以下，更佳为20微微摩 尔或以下，及于活体内体液如：血液中的浓度为1微摩尔或以下，500 摩尔纳摩尔或以下，或100摩尔纳摩尔或以下。
本发明并提供一种治疗对VR1调节作用有反应的病症的方法。本 发明中，术语″治疗″包括改造疾病的治疗法及症状处理，其可为预防性 (亦即在症状出现之前处理，以预防、延缓或降低症状的严重性)或医疗 性(亦即在症状出现后处理，以降低症状的严重性及/或持续时间)。不 论类香草醇配体的局部含量，若病症的特征为辣椒素受体活性不当， 及/或若辣椒素受体活性的调节作用造成病症或其症状减轻时，则称该 病症″对VR1调节作用有反应″。此等病症包括例如：因暴露到VR1活 化刺激所造成的症状、疼痛、呼吸病变如：咳嗽、哮喘，慢性阻塞性 肺病、慢性支气管炎、囊性纤维变性与鼻炎(包括过敏性鼻炎，如：季 节性与常年性鼻炎，及非过敏性鼻炎)、抑郁症、搔痒、尿失禁、膀胱 过动症、呃逆与肥胖，其更详细说明于下文中。此等病症可采用相关 技艺已知的标准诊断及追踪。患者可包括人类、家庭宠物与家畜，其 剂量如上述。
疗程可能随所使用的化合物与所治疗的特定病症而定。然而，治 疗大多数病变时，以每天给药4次或以下的频率较佳。通常，以每天 给药2次的剂量疗程更佳，以每天给药1次特别佳。治疗急性疼痛时， 需要可迅速达到有效浓度的单一剂量。然而咸了解，对任何特定患者 的明确剂量与疗程将依多项因素决定，包括所使用特定化合物的活性、 年龄、体重、一般健康情形、性别、饮食、给药时间、给药途径与排 泄速度、药物组合与治疗期间特定疾病的严重性。通常，以足以提供 有效疗法的最低剂量较佳。可采用适合所治疗或预防病症的医学或兽 医学标准追踪患者。
因曝露到辣椒素受体活化刺激而产生症状的患者包括因热、光、 催泪气体或酸而引起灼伤的个体及黏膜曝露到(例如：因食入、吸入或 眼睛接触)辣椒素(例如：辣椒或胡椒喷雾)或相关刺激物如：酸、催泪 气体、传染性制剂或空气污染的个体。所产生的症状(可使用本文所提 供VR1调节剂，尤指拮抗剂治疗的症状)可包括例如：疼痛、支气管收 缩与发炎。
可使用本文所提供VR1调节剂治疗的疼痛可为慢性或急性疼痛， 包括(但不限于)：外围神经所媒介的疼痛(尤指神经性疼痛)。本文所提 供化合物可用于治疗例如：乳房切除手术后疼痛综合症、残肢疼痛、 幻肢疼痛、口腔神经性疼痛、牙痛(牙齿疼痛)、全口齿疼痛、带状疱疹 后神经痛、糖尿病神经病变、化疗引发神经病变、交感反射性营养不 良、三叉神经痛、骨关节炎、类风湿关节炎、纤维肌痛、格-巴二氏 (Guillain-Barre)综合征、感觉异常性股痛、口腔灼热综合症及/或与神经 及根伤害有关的疼痛。其它神经性疼痛病症灼痛(反射性交感神经失养 症-RSD、外围神经损伤后续发)、神经炎(包括例如：坐骨神经炎、外 围神经炎、多发神经炎、视神经炎、发热后神经炎、游走性神经炎、 节段神经炎与贡博氏(Gombault′s)神经炎)、神经元炎、神经痛(例如： 如上述者、颈臂神经痛、颅神经痛、膝状神经痛、舌咽神经痛、偏头 痛神经痛、自发性神经痛、肋间神经痛、乳房神经痛、下颌关节神经 痛、莫顿氏(Morton′s)神经痛、鼻睫状神经痛、枕骨神经痛、红色神经 痛(red neuralgia)、斯卢德氏(Sluder′s)神经痛、脾颚神经痛、眶上神经痛 与翼管神经痛)、与手术相关的疼痛、肌肉骨骼疼痛、AIDS相关神经 病变、MS的相关神经病变及脊柱伤害的相关疼痛。头痛包括涉及外围 神经活性的疼痛，如：窦、簇集(亦即偏头痛神经痛)与一些紧张性头痛 与偏头痛，亦可依本文的说明治疗。例如：当患者出现偏头痛前的先 兆时，即可投与本文所提供的化合物预防偏头痛。其它可依本文所说 明治疗的疼痛病症包括″口腔灼热综合症″、分娩疼痛、沙尔科氏 (Charcot′s)疼痛、肠胀气疼痛、月经疼痛、急性与慢性背痛(例如：下背 疼痛)、痔疮疼痛、消化不良疼痛、心绞痛、神经根疼痛、等位疼痛与 异位疼痛-包括癌症的相关疼痛(例如：骨癌患者)、与曝露到毒液有关 的疼痛(与发炎)(例如：因蛇咬伤、蜘蛛咬伤、或昆虫叮咬)及创伤的相 关疼痛(例如：手术后疼痛、割伤疼痛、挫伤与断骨，与灼伤疼痛)。其 它可依本文所述治疗的疼痛病症包括与发炎性肠道疾病、刺激性肠道 综合症与/或发炎性肠道疾病相关的疼痛。
某些态样中，本文所提供VR1调节剂可用于治疗机械性疼痛。本 文所采用术语″机械性疼痛″指头痛以外的疼痛，其不为神经性或因暴露 到热、冷或外来化学刺激所致。机械性疼痛包括物理性创伤(不为热或 化学烧烫伤或其它曝露到有害化学物质的刺激及/或疼痛)如：手术后疼 痛及因割伤、挫伤与断骨引起的疼痛；牙痛、全口齿疼痛；神经根疼 痛；骨关节炎；类风湿关节炎；纤维肌痛；感觉异常性股痛；背痛； 癌症的相关疼痛；绞痛；腕管综合症；及因骨折、分娩、痔疮、肠部 胀气、消化不良及月经引起的疼痛。
可治疗的搔痒病症包括干癣性搔痒、因血液透析引起的搔痒、疟 疾造成的(aguagenic)搔痒，及与外阴前庭炎有关的搔痒、接触性皮肤、 昆虫叮咬与皮肤过敏。可依本文的说明治疗的尿道疾病包括尿失禁(包 括溢尿性失禁、急性尿失禁及压力性尿失禁)，与过动性或不稳定性膀 胱疾病(包括膀胱迫肌过度反射、因脊柱造成迫肌过度反射与膀胱过度 敏感)。某些此等治疗法中，VR1调节剂是经由导管或类似装置给药， 可直接注射VR1调节剂至膀胱中。本文所提供化合物亦可用为止咳剂 (预防、缓解或压抑咳嗽)及治疗呃逆，及促进肥胖患者减轻体重。
其它态样中，本文所提供VR1调节剂可用于组合疗法中，供治疗 涉及疼痛及/或发炎成分的病症。此等病症包括例如：自体免疫病变与 已知具有发炎成分的病理性自体免疫反应，包括(但不限于)：关节炎(尤 指类风湿关节炎)、干癣、克隆氏症(Crohn′s disease)、红斑性狼疮、应 激性肠部综合症、组织移植物排斥与移植器官的过急性排斥。其它此 等病症包括创伤(例如：头部或脊柱受伤)、心脏-与脑-血管疾病与某些 传染性疾病。
此等组合疗法中，VR1调节剂是与止痛药及/或消炎剂一起投与患 者。VR1调节剂与止痛药及/或消炎剂可含在同一医药组合物中，或可 分开依任一顺序给药。消炎剂包括例如：非类固醇消炎药(NSAIDs)、 非专一性与环氧化酶-2(COX-2)专一性环氧化酶酵素抑制剂、金化合 物、皮质类固醇、胺甲蝶呤、肿瘤坏死因子(TNF)受体拮抗剂、抗-TNF α抗体、抗-C5抗体与介白素-1(IL-1)受体拮抗剂。NSAID实例包括(但 不限于)布洛芬(ibuprofen)(例如：ADVILTM、MOTRINTM)、氟布洛芬 (flurbiprofen)(ANSAIDTM)、萘普生(naproxen)或萘普生钠(例如： NAPROSYN、ANAPROX、ALEVETM)、双氯芬酸(diclofenac)(例如： CATAFLAMTM、VOLTARENTM)、双氯芬酸钠与米索前列醇(misoprostol) 的组合(例如：ARTHROTECTM)、速灵达(sulindac)(CLINORILTM)、恶 丙嗪(oxaprozin)(DAYPROTM)、二氟尼柳(diflunisal)(DOLOBIDTM)、炎 痛喜康(piroxicam)(FELDENETM)、吲哚美辛 (indomethacin)(INDOCINTM)、乙哚乙酸盐(etodolac)(LODINETM)、非诺 洛芬钙(fenoprofen calcium)(NALFONTM)、酮洛芬(ketoprofen)(例如： ORUDISTM、ORUVAILTM)、萘丁美酮钠(sodium nabumetone) (RELAFENTM)、柳氮磺胺嘧啶(sulfasalazine)(AZULFIDINETM)、托美汀 钠(tolmetin sodium)(TOLECTINTM)、及羟氯喹(hydroxychloroquine) (PLAQUENILTM)。一种特别的NSAID包括抑制环氧化酶(COX)酵素的 化合物。NSAID尚包括水杨酸盐如：乙醯基水杨酸或阿司匹林、水杨 酸钠、胆碱与水杨酸镁(TRILISATETM)与水杨醯水杨酸(DISALCIDTM) 及皮质类固醇如：可体松(CORTONETM乙酸盐)、地塞美松 (dexamethasone)(例如：DECADRONTM)、甲基氢化泼尼松 (methylprednisolone)(MEDROLTM)、氢化泼尼松(PRELONETM)、氢化泼尼 松磷酸钠(PEDIAPREDTM)与泼尼松(例如：PREDNICEN-MTM、 DELTASONETM、STERAPREDTM)。
此等组合疗法中，VR1调节剂的合适剂量通常如上述。消炎剂的 剂量与给药方法可参见例如：制造商于”Physician′s Desk Reference”中 的说明。某些具体实施例中，VR1调节剂与消炎剂的组合给药结果可 降低消炎剂要产生医疗效果时所需剂量，亦即降低最低治疗有效量。 因此，本发明组合或组合给药法中，消炎剂的剂量最好低于不与VR1 拮抗剂组合给药时，制造商所建议的最高消炎剂剂量。此剂量低于不 与VR1拮抗剂组合给药时，制造商所建议的最高消炎剂剂量的3/4时 更佳，甚至更佳为低于1/2，极佳为低于1/4，最佳剂量为低于最高剂 量的10％。咸了解，组合中VR1拮抗剂成分要达到所需效果时所需剂 量同样会受组合中消炎剂成分剂量与效力影响。
某些较佳具体实施例中，VR1调节剂与消炎剂的组合给药法是将 一种或多种VR1调节剂与一种或多种消炎剂包装在同一包装中，在同 一包装中分装在不同容器中、或为含有一种或多种VR1拮抗剂与一种 或多种消炎剂的混合物装在同一容器中。较佳混合物是调配成口服给 药用(例如：呈丸剂、胶囊、锭剂，等等)。某些具体实施例中，包装中 包含卷标，指示该一种或多种VR1调节剂与一种或多种消炎剂是用于 共同治疗发炎疼痛病症。
其它态样中，本文所提供VR1调节剂可与一种或多种其它解除疼 痛的医药组合。某些此等医药亦为上列的消炎剂。其它此等医药为止 痛剂，包括典型作用在一种或多种类鸦片受体亚型(例如：μ、κ及/ 或δ)的麻醉剂，较佳为作为促效剂或部份促效剂。此等药剂包括鸦片 制剂、鸦片制剂衍生物与类鸦片剂，及其医药上可接受的盐与水合物。 较佳具体实施例中，麻醉-止痛剂的明确实例包括阿芬他泥(alfentanyl)、 安依痛(alphaprodine)、阿尼利定(anileridine)、贝齐醯胺(bezitramide)、 丁丙诺菲(buprenorphine)、可待因(codeine)、二乙醯基二氢吗啡、二乙 醯基吗啡、二氢可待因、地芬诺酯(diphenoxylate)、乙基吗啡、芬坦尼 (fentanyl)、海若英、氢可酮(hydrocodone)、氢化吗啡酮(hydromorphone)、 异美沙酮(isomethadone)、左旋甲吗凡(levomethorphan)、左旋凡 (levorphane)、左吗喃(levorphanol)、麦啶(meperidine)、美索辛 (metazocine)、美沙酮(methadone)、甲吗凡(methorphan)、甲基二氢吗啡 酮(metopon)、吗啡、鸦片萃出物、鸦片液体萃出物、鸦片粉末、鸦片 粒剂、生鸦片、鸦片酊剂、羟考酮(oxycodone)、羟氢吗啡酮 (oxymorphone)、帕格利(paregoric)、喷他左辛(pentazocine)、哌替啶 (pethidine)、安唑辛(phenazocine)、去痛定(piminodine)、丙氧吩 (propoxyphene)、消旋甲吗喃(racemethorphan)、消旋吗喃(racemorphan)、 蒂巴因(thebaine)与上述制剂的医药上可接受的盐类与水合物。
麻醉止痛剂的其它明确实例包括例如：乙醯吩(acetorphine)、乙醯 基二氢可待因、乙醯美沙醇(acetylmethadol)、烯丙基普洛定 (allylprodine)、α-乙醯美沙醇(alphracetylmethadol)、α-美普定 (alphameprodine)、α-美沙醇(alphamethadol)、苯塞定(benzethidine)、苯 甲基吗啡、β-乙醯美沙醇(betacetylmethadol)、β-美普定 (betameprodine)、β-美沙醇(betamethadol)、β-普洛定(betaprodine)、丁 啡喃(butorphanol)、克尼辛(clonitazene)、可待因甲基溴化物、可待因-N- 氧化物、希普吗啡(cyprenorphine)、二氢脱氧吗啡(desomorphine)、右旋 莫醯胺(dextromoramide)、二普醯胺(diampromide)、二乙基噻丁烯 (diethylthiambutene)、二氢吗啡(dihydromorphine)、二孟赛哚 (dimenoxadol)、二甲庚醇(dimepheptanol)、二甲基噻丁烯 (dimethylthiamubutene)、二恶菲定丁酸盐(dioxaphetyl butyrate)、地匹哌 酮(dipipanone)、羟蒂巴酚(drotebanol)、乙醇、乙基甲基噻丁烯 (ethylmethylthiambutene)、依托嗒辛(etonitazene)、依托芬(etorphine)、 依托利定(etoxeridine)、夫特定(furethidine)、氢化吗啡醇 (hydromorphinol)、羟基普地定(hydroxypethidine)、酮基贝米酮 (ketobemidone)、左旋莫醯胺(levomoramide)、左旋酚醯基吗喃 (levophenacylmorphan)、甲基脱氧吗啡(methyldesorphine)、甲基二氢吗 啡、吗啡啶(morpheridine)、吗啡、甲基普醯胺(methylpromide)、吗啡甲 基磺酸酯、吗啡-N-氧化物、吗咯吩(myrophin)、纳洛酮(naloxone)、纳 曲酮(naltyhexone)、烟可待因(nicocodeine)、烟吗啡(nicomorphine)、去 甲基醯基美沙醇(noracymethadol)、去甲基左吗喃(norlevorphanol)、去 甲基美沙酮(normethadone)、去甲基吗啡、去甲基比喃酮(norpipanone)、 苯他索咔因(pentazocaine)、吩哚散(phenadoxone)、酚安普醯胺 (phenampromide)、酚吗喃(phenomorphan)、酚普啶(phenoperidine)、吡 咯他醯胺(piritramide)、福尔可定(pholcodine)、普庚索辛(proheptazoine)、 备解素(properidine)、丙吡胺(propiran)、消旋莫醯胺(racemoramide)、蒂 巴康(thebacon)、三甲普定(trimeperidine)与其医药上可接受的盐类与水 合物。
其它明确的代表性止痛剂包括例如： Nx与DEMEROL (均来自温莎药厂(Sanofi Winthrop Pharmaceuticals；New York，NY))； ； (Reckitt&Coleman药厂； Richmond，VA)； (Purdue Pharma L.P药厂；Norwalk，CT)； (Knoll药厂；Mount Olive，NJ)； ； (Janssen药厂；Titusville，NJ)； 与 (均来自Endo药厂；Chadds Ford，PA)； IR、MS/S与MS/L(均来自Richwood药厂；Florence， KY)、 SR与 (均来自Roxanne Laboratories实验室；Columbus OH)及 (Bristol-Myers Squibb 药厂；New York，NY)。其它止痛剂包括CB2-受体促效剂，如：AM1241， 及与α2δ次单位结合的化合物，如：纽停(Neurontin)(Gabapentin)与普 加灵(pregabalin)。
其它态样中，本文所提供VR1调节剂可与一种或多种白三烯受体 拮抗剂(例如：抑制半胱胺醯基白三烯CysLT1受体的药剂)组合使用。 CysLT1拮抗剂包括蒙特利克(Montelukast)( ；Merck&Co.， Inc.)。此等组合可用于治疗肺部疾病，如：哮喘。
本发明亦提供治疗尿失禁的组合疗法。此态样中，本文所提供的 VR1调节剂可与其它设计用于治疗此等疾病的药物组合使用，如：特 洛定(Tolterodine)( ；Pharmacia Corporation药厂)与抗胆碱激 导性剂，如：欧比汀(oxybutynin)( ；Ortho-McNeil Pharmaceutical，Inc.，Raritan，NJ)。
此等组合疗法中合适的VR1调节剂剂量通常如上述。其它解除疼 痛的医药剂量与给药方法可参见例如：制造商于”Physician′s Desk Reference”中的说明。某些具体实施例中，VR1调节剂与一种或多种其 它解除疼痛医药的组合给药结果可降低要产生医疗效果时所需各医疗 剂的剂量(例如：其中一种或两种药剂的剂量可小于上述或制造商所建 议最高剂量的3/4、小于1/2、小于1/4、或小于10％)。某些较佳具体 实施例中，VR1调节剂与一种或多种其它解除疼痛医药的组合给药法 是如上述，将一种或多种VR1调节剂与一种或多种其它解除疼痛的医 药包装在同一包装中而达成。
作为VR1促效剂的化合物亦可用在例如：群体控制(替代催泪气体) 或个人保护(例如：呈喷雾调配物)或经由辣椒素受体去敏化作用，作为 治疗疼痛、搔痒、尿失禁或膀胱过动症的医疗剂。通常，用于群体控 制或个人保护的化合物是依据习知催泪气体或胡椒喷雾技术调配及使 用。
另一态样中，本发明提供多种本文所提供化合物的非医药活体外 与活体内用途。例如：此等化合物可加以标记，(于如：细胞制剂或组 织切片、制剂或其部份中)用为检测与定位辣椒素受体的探针。此外， 本文所提供包含合适反应基(如：芳基、羰基、硝基或叠氮基)的化合物 可用于受体结合位置的光亲和性标记试验。此外，本文所提供化合物 亦可用为受体活性分析法中的阳性对照组，作为决定候选试剂与辣椒 素受体结合的能力的标准物，或作为正子放射断层扫瞄摄影(PET)放射 追踪剂或单光子放射计算机断层扫瞄摄影(SPECT)的显影。此等方法可 用于判别活体中辣椒素受体。例如：VR1调节剂可采用多种习知技术 标记(例如：放射性标记如本文中说明的放射性核种如：氚)，与样本培 养一段合适的时间(例如：先分析一段结合时间决定)。培养后，排除未 结合的化合物(例如：经由洗涤)，采用任何适合所采用标记物的方法检 测已结合的化合物(例如：自动放射照相术或闪烁计数法，测定标记放 射性的化合物；可采用分光镜分析法检测冷光基团与萤光基团)。依相 同方式处理含有有标记的化合物与较高量(例如：超过10倍以上)无标 记的化合物的配对样本作为对照组。试验样本中残留可检测的标记物 含量高于对照组时，表示样本中含有辣椒素受体。检测分析法(包括培 养细胞或组织样本中辣椒素受体的受体自动放射照相术(受体图谱分 析))可依Kuhar述于”Current Protocols in Pharmacology(1998)John Wiley&Sons，New York”中第8.1.1至8.1.9.节中的方法进行。
本文所提供的化合物亦可用于多种习知的细胞分离法。例如：调 节剂可连结组织培养板或其它担体的内表面，用为固定亲和性配体， 藉以于活体外单离辣椒素受体(例如：单离表达受体的细胞)。一项较佳 具体实施例中，调节剂是连结萤光标记物，如：萤光素，与细胞接触 后，使用萤光活化的细胞筛选法(FACS)分析(或单离)。
本文所提供VR1调节剂可进一步用于判别其它结合辣椒素受体的 制剂的分析法。一般而言，此等分析法为标准竞争结合分析法，其中 已结合的有标记VR1调节剂经以试验化合物置换。简言之，进行此等 分析法的方式为：(a)由辣椒素受体与本文所说明有放射性标记的VR1 调节剂，于允许VR1调节剂与辣椒素受体结合的条件下接触，藉以产 生已结合的有标记VR1调节剂；(b)检测已结合的有标记VR1调节剂 于没有试验制剂存在下的讯号；(c)由已结合的有标记VR1调节剂与试 验制剂接触；(d)检测已结合的有标记VR1调节剂于试验制剂存在下的 讯号；及(e)与(b)步骤检测到的讯号比较，检测(d)步骤讯号的下降程度， 因此得以判别该制剂是否与辣椒素受体结合。
下列实施例是供说明用，并未加以限制。除非另有说明，否则所 有试剂与溶剂均为标准商品级，未再进一步纯化即使用。采用例行修 饰法可以变化起始物与其它所采用的步骤，以制成本文所提供的其它 化合物。
实施例
下列实施例中，质谱数据为电喷洒MS，是使用加装Waters600帮 浦，Waters996光二极管数组检测器，Gilson215自动取样机与Gilson 841微注射器的Micromass Time-of-Flight LCT，以15V或30V锥管电 压(cone voltage)，在阳离子模式下测得。采用MassLynx(Advanced Chemistry Development，Inc；Toronto，Canada)4.0版软件收集数据及分 析。取1微升样本体积注射至50×4.6毫米Chromolith SpeedROD C18 管柱中，采用两相线性梯度，依6毫升/分钟的流速冲提。采用220至 340nm UV范围内测得的总吸光度检测样本。冲提条件为：移动相A- 95/5/0.05水/甲醇/TFA；移动相B-5/95/0.025水/甲醇/TFA。
梯度：     时间(分钟)     ％B
          0             10
          0.5           100
          1.2           100
          1.21          10
每次注射之间的总计算机运作时间为2分钟。
于下列实施例及本文他处所使用的特定定义为：
AcOH    乙酸
DMSO    二甲亚砜
EtOH    乙醇
MS      质谱
(M+1)   质量+1
1H NMR  质子核磁共振
HPLC   高压液相层析法
Hz     赫兹
NaOEt  乙氧化钠
实施例1
代表性被芳基取代的嘌呤类似物的制法
A.[9-(2-氯-苯基)-9H-嘌呤-6-基]-(4-三氟甲基-苯基)-胺(化合物 1)
1.6-氯-N4-(2-氯-苯基)-嘧啶-4，5-二胺

将5-氨基-4，6-二氯嘧啶(3.28克，0.02莫耳)溶于2-氯苯胺(2.56克) 的1-丁醇(50毫升)溶液中。于氮氛围下加热并搅拌该混合物40小时。 真空浓缩该反应混合物，以1.0N NaOH水溶液(150毫升)稀释残质， 以乙酸乙酯(3×100毫升)萃取，以盐水(100毫升)洗涤合并的有机萃取 物，并以MgSO4脱水。将干燥的萃取物过滤并真空浓缩，而得粗产物。 藉由快速管柱层析法以5至10％AcOH/己烷纯化粗产物，而得淡粉色 固体。
2.6-氯-9-(2-氯-苯基)-9H-嘌呤

将6-氯-N4-(2-氯-苯基)-嘧啶-4，5-二胺(0.28克)溶于原甲酸三乙酯 (2.0毫升)及乙酸酐(2.0毫升)中。于氮氛围下将该混合物在120℃加热 7.0小时。真空浓缩反应混合物，并藉由快速管柱层析法以15至30％ AcOH/己烷纯化粗产物，而得呈白色固体的6-氯-9-(2-氯-苯基)-9H-嘌 呤。
3.[9-(2-氯-苯基)-9H-嘌呤-6-基]-(4-三氟甲基-苯基)-胺

将6-氯-9-(2-氯-苯基)-9H-嘌呤(26.4毫克，0.1毫莫耳)及4-三氟甲 基苯胺(16.1毫克，0.1毫莫耳)溶于乙腈(1.0毫升)中。于氮氛围下将该 混合物在80℃加热20.0小时。冷却反应混合物至室温，并藉由过滤筛 选呈盐酸盐的标题产物。1H NMR(400MHZ，DMSO-D6)δ8.6(s，1H)， 8.45(s，1H)，8.2-8.25(m，3H)，7.6-7.8(m，6H)。MS＝390.2(M+H)。
B.(4-第三丁基-苯基)-[1-(2-氯-苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4- 基]-胺(化合物2)
1.5-氨基-1-(2-氯-苯基)-1H-吡唑-4-甲腈

将(1-乙氧基亚乙基)丙二腈(8.95克，0.05莫耳)、2-氯苯基肼盐酸 盐(6.71克，0.055莫耳)及三乙胺(20.2克，0.2莫耳)溶于甲醇(100毫升) 中。于氮氛围下加热并搅拌该混合物20小时。真空浓缩该反应混合物， 以水(150毫升)稀释残质，以乙酸乙酯(3×100毫升)萃取，以盐水(100 毫升)洗涤合并的有机萃取物，并以MgSO4脱水。将干燥的萃取物过滤 并真空浓缩，而得粗产物。藉由快速管柱层析法以1∶1的AcOH/己 烷纯化粗产物，而得淡黄色固体。
2.5-氨基-1-(2-氯-苯基)-1H-吡唑-4-甲醯胺

于60分钟内分批添加5-氨基-1-(2-氯-苯基)-1H-吡唑-4-甲腈(4.5 克，0.02莫耳)至冰冷搅拌的浓H2SO4(15毫升)中。使反应混合物缓慢 冷却至室温并搅拌20小时。将反应混合物倒入碎冰(200克)中并利用 50％NaOH水溶液将pH值调整至9.0。将固体滤出，以水洗涤固体并 真空脱水，而得呈黄色固体的5-氨基-1-(2-氯-苯基)-1H-吡唑-4-甲醯胺。
3.1-(2-氯-苯基)-1，5-二氢-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮

将5-氨基-1-(2-氯-苯基)-1H-吡唑-4-甲醯胺(1.18克，0.005莫耳)、 甲酸乙酯(1.6毫升，0.02莫耳)及21％NaOEt/EtOH(8.1毫升，0.025莫 耳)溶于EtOH(20.0毫升)中。于氮氛围下回流并搅拌反应混合物20小 时。真空浓缩反应混合物，以水(100毫升)稀释残质，并利用AcOH调 整pH值至6至7。过滤并脱水，而得呈橘黄色固体的所需嘧啶酮。
4.4-氯-1-(2-氯-苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶

将1-(2-氯-苯基)-1，5-二氢-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮(850毫克， 0.00344莫耳)溶于POCl3(10毫升)中。于氮氛围下以120℃加热并搅拌 反应混合物20小时。真空浓缩反应混合物，以冰(100克)使残质骤冷， 以乙酸乙酯(3×50毫升)萃取，以盐水(100毫升)洗涤合并的有机萃取 物，并以MgSO4脱水。将干燥的萃取物过滤并真空浓缩，而得粗产物。 藉由快速管柱层析法以5％AcOH/己烷纯化粗产物，而得呈白色固体的 4-氯-1-(2-氯-苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶。
5.(4-第三丁基-苯基)-[1-(2-氯-苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4- 基]-胺

将4-氯-1-(2-氯-苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶(53毫克，0.2毫莫耳) 及4-第三丁基苯胺(0.2毫莫耳)溶于乙腈(2.0毫升)中。于氮氛围下以80 ℃加热混合物20.0小时。冷却反应混合物至室温而得呈白色固体的(4- 第三丁基-苯基)-[1-(2-氯-苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-基]-胺。过滤呈 盐酸盐者。1H NMR(300 MHZ，DMSO-D6)δ8.6-8.75(bs，1H)，8.4(s，1H)， 7.4-8.0(m，8H)，1.3(s，9H)。MS＝378.3(M+H)。
实施例2
其它代表性被芳基取代的嘌呤类似物的合成
此实施例说明代表性被芳基取代的嘌呤类似物[3-(2-氯-苯 基)-3H-[1，2，3]三唑[4，5-d]嘧啶-7-基]-(4-三氟甲磺醯基-苯基)-胺(化合物 3)的合成
1.7-氯-3-(2-氯-苯基)-3H-[1，2，3]三唑[4，5-d]嘧啶

将6-氯-N4-(2-氯-苯基)-嘧啶-4，5-二胺(510毫克，0.002莫耳)溶于 CH2Cl2(15毫升)及50％乙酸水溶液(5.0毫升)中。于室温下滴加NaNO2 (308毫克，0.0048莫耳)的溶液于水(5.0毫升)中。于室温下搅拌混合物 2小时。将有机层从反应混合物分离，以CH2Cl2(15毫升)萃取水溶液， 以水(3×10毫升)洗涤合并的有机萃取物，并以MgSO4脱水。过滤干燥 的萃取物并减压浓缩，而得呈白色固体的7-氯-3-(2-氯-苯基)-3H-[1，2，3] 三唑[4，5-d]嘧啶。
2.[3-(2-氯-苯基)-3H-[1，2，3]三唑[4，5-d]嘧啶-7-基]-(4-三氟甲磺醯 基-苯基)-胺

将7-氯-3-(2-氯-苯基)-3H-[1，2，3]三唑[4，5-d]嘧啶(53毫克，0.2毫莫 耳)及4-三氟甲磺醯基苯胺(37.8毫克，0.2毫莫耳)溶于乙腈(2.0毫升) 中。于氮氛围下以80℃加热混合物20.0小时。冷却反应混合物至室温 而得呈白色固体的[3-(2-氯-苯基)-3H-[1，2，3]三唑[4，5-d]嘧啶-7-基]-(4-三 氟甲磺醯基-苯基)-胺。过滤呈盐酸盐者。1H NMR(400MHZ，DMSO-D6) δ8.85(s，1H)，8.55-8.60(d，2H)，8.15-8.20(d，2H)，7.6-7.9(m，4H)。MS＝ 455.1(M+H)。
实施例3
其它代表性被芳基取代的嘌呤类似物
采用例行修饰法，可改变起始物及采用其它步骤，以产生本文提 供的其它化合物。表I所列化合物是采用此等方法制备。标示″IC50″一 栏中，*表示依实施例6所测定的IC50为1微摩尔或更低(亦即使曝露 到1IC50辣椒素的细胞所产生萤光反应下降至50％时，此等化合物所 需的浓度为1微摩尔或更低)。
表I
代表性被芳基取代的嘌呤类似物






实施例4
VR1-转染的细胞与膜制剂
此实施例说明用于结合性分析法(实施例5)的VR1-转染的细胞与 含VR1的膜制剂的制法。
取编码全长人类辣椒素受体的cDNA(美国专利案No.6,482,611的 SEQ ID NO：1、2或3)次选殖至质体pBK-CMV(Stratagene，La Jolla， CA)，供于哺乳动物细胞中重组表达。
采用标准方法，将人类胚胎肾脏(HEK293)细胞以编码全长人类辣 椒素受体的pBK-CMV表达构筑体转染。在含G418(400μg/ml)的培养 基中筛选转染的细胞两周，以得到一群安定转染的细胞。经由限制稀 释法，自此群细胞中单离出独立纯系，以得到纯系的安定细胞株，供 下一个试验使用。
进行放射性配体结合性试验时，先将细胞接种至T175细胞培养烧 瓶内不含抗生素的培养基中，生长至约90％融合度(confluency)。烧瓶 随后经PBS洗涤，并于含5mM EDTA的PBS中收集细胞。细胞经温 和离心集结成块，保存在-80℃下，至分析为止。
取先前冷冻的细胞，利用组织均质器的助匀散于冰冷HEPES均质 缓冲液中(5mM KCl5、5.8mM NaCl、0.75mM CaCl2、2mM MgCl2、 320mM蔗糖与10mM HEPES pH7.4)。组织均质液先于1000xg(4℃) 下离心10分钟，藉以排除核部份及细胞碎片，然后取第一次离心的上 清液再于35,000xg(4℃)下离心30分钟，得到部份纯化的膜部份。将 膜再悬浮于HEPES均质缓冲液中，之后才进行分析。取一份膜均质液， 利用Bradford方法(BIO-RAD蛋白质分析套组，#500-0001，BIO-RAD， Hercules，CA)测定蛋白质浓度。
实施例5
辣椒素受体结合性分析法
本实施例说明辣椒素受体结合性的代表性分析法，其可用于测定 化合物对辣椒素(VR1)受体的结合亲和性。
与[3H]树脂毒素(resiniferatoxin)(RTX)的结合性试验基本上是依 Szallasi与Blumberg(1992)J.Pharmacol.Exp.Ter.262：883-888中说明的 方法进行。此方法中，当结合反应结束后，非专一性的RTX结合会因 添加牛α1酸醣蛋白(每支试管100微克)而下降。
[3H]RTX(37Ci/毫莫耳)是由国家癌症研究所-费得利克癌症研究与 发展中心的化学合成与分析实验室(the Chemical Synthesis and Analysis Laboratory，National Cancer Institute-Frederick Cancer Research and Development Center，Frederick，MD)合成得到。[3H]RTX亦可得自商品 (例如：药厂Amersham Pharmacia Biotech，Inc.；Piscataway，NJ)。
取实施例4的膜均质液依上述离心并再悬浮于均质缓冲液中，达 蛋白质浓度333μg/ml。于冰上制备结合性分析法混合物，其中包含 [3H]RTX(比活性2200mCi/ml)、2μl非放射活性试验化合物、0.25mg/ml 牛血清白蛋白(Cohn部份V)、与5×104-1×105VR1-转染细胞。使用上 述冰-冷HEPES均质缓冲液(pH7.4)调整最终体积至500μl(用于竞争结 合性分析法)或1,000μl(用于饱和结合性分析法)。非专一性结合的定义 为在1μM非放射活性RTX(Alexis Corp.；San Diego，CA)的存在下的 结合性。分析饱和结合性时，[3H]RTX的添加浓度范围为7-1,000pM， 稀释1至2次。典型作法为每条饱和结合性曲线收集11个浓度点。
竞争结合性分析法是于60pM[3H]RTX及不同浓度的试验化合物 存在下进行。将分析混合物移至37℃水浴中，开始进行结合反应，培 养60分钟后，使试管于冰上冷却，中止反应。于WALLAC玻璃纤维 滤纸(PERKIN-ELMER，Gaithersburg，MD)(使用前2小时先浸泡1.0％ PEI(聚乙烯亚胺))上过滤分离与膜结合的RTX及游离的RTX，及任何 与α1酸醣蛋白结合的RTX。使滤纸干燥一夜后，添加WALLAC BETA SCINT闪烁计数液，于WALLAC 1205 BETA PLATE计数器上计数。
平衡结合性参数的决定是藉由代入变构性希尔公式(the allosteric Hill equation)，以计算机程序FIT P(Biosoft，Ferguson，MO)辅助计算数 据(说明于Szallasi等人的(1993)J.Pharmacol.Exp.Ther.266：678-683)。 本文所提供化合物于此分析法中对辣椒素受体的Ki值小于1μM、100 nM、50nM、25nM、10nM或1nM。
实施例6
钙离子移动分析法
本实施例说明用于评估试验化合物的促效剂与拮抗剂活性的代表 性钙离子移动分析法。
将被表达质体转染(依实施例4所述)藉以表达人类辣椒素受体的 细胞接种至FALCON黑边、透明底板的96孔板中(#3904， BECTON-DICKINSON，Franklin Lakes，NJ)，生长至融合度70至90％。 排空96孔板中的培养基，在各孔中添加FLUO-3AM钙敏感性染料 (Molecular Probes，Eugene，OR)(染料溶液：1毫克FLUO-3AM、440μL DMSO与440μl 20％普罗尼克酸(pluronic acid)的DMSO溶液，于克氏 -林格氏(Krebs-Ringer)HEPES(KRH)缓冲液(25mM HEPES、5mM KCl、0.96mM NaH2PO4、1mM MgSO4、2mM CaCl2、5mM葡萄糖、 1mM羧苯磺胺(probenecid)，pH7.4)中稀释1∶250，每孔50μl稀释溶 液)。以铝箔覆盖分析板，于37℃的含5％CO2环境下培养1至2小时。 培养后，排空分析板中的染料，以KRH缓冲液洗涤细胞一次，再悬浮 于KRH缓冲液中。
(辣椒素EC50之测定法)
为了测定试验化合物于表达辣椒素受体的细胞中对辣椒素或其它 类香草醇促效剂促效或拮抗钙固定化反应的能力，因此先测定促效剂 辣椒素的EC50。在各孔细胞中添加依上述制备的20μl KRH缓冲与1 μl DMSO。采用FLIPR仪器，自动取出100μl含辣椒素的KRH缓冲 液加至各孔中。采用萤光扫瞄器(FLUOROSKAN ASCENT) (Labsystems；Franklin，MA)或FLIPR(萤光测定仪显影板读数系统； Molecular Devices，Sunnyvale，CA)仪器追踪辣椒素诱发的钙固定化作 用。以施用促效剂后30至60秒之间的数据制成8个点之浓度效应曲 线，最终辣椒素浓度为1nM至3μM。采用KALEIDAGRAPH软件 (Synergy Software，Reading，PA)将数据代入公式：
y＝a*(1/(1+(b/x)c))
以测定反应的50％激发浓度(excitatory concentration；EC50)。此公 式中，y为最高萤光讯号，x为促效剂或拮抗剂(此时指辣椒素)浓度，a 为Emax；b相当于EC50值，且c为希尔系数(Hill coefficient)。
(促效剂活性测定法)
取试验化合物溶于DMSO中，于KRH缓冲液中稀释，立即加至 依上述制备的细胞中。亦添加100nM辣椒素(约EC90浓度)至相同96 孔分析板中作为阳性对照组。分析孔中试验化合物的最终浓度为0.1 nM至5μM之间。
试验化合物作为辣椒素受体的促效剂的能力是测定表达辣椒素受 体的细胞被化合物诱发的萤光反应随化合物浓度的变化来决定。依上 述代入此数据，得到EC50，结果通常小于1微摩尔，较佳为小于100nM， 更佳为小于10nM。亦由指定试验化合物浓度(典型为1μM)诱发的反 应相对于由100nM辣椒素诱发的反应计算各试验化合物的效力程度。 此数值称为讯号百分比(POS)，由下列公式计算：
POS＝100*试验化合物反应/100nM辣椒素反应
此分析法提供一种同时分析试验化合物作为人类辣椒素受体促效 剂的强度与效力的定量法。人类辣椒素受体的促效剂通常在小于100 μM浓度，或较佳为小于1μM的浓度，或最佳为小于10nM的浓度 下诱发可检测的反应。其在1μM浓度时，对人类辣椒素受体的效力 程度较佳为大于30POS，更佳为大于80POS。某些促效剂在下文说明 的分析法中，于低于4nM的化合物浓度，更佳为低于10μM的浓度， 及最佳为低于或等于100μM的浓度下没有可检测的拮抗剂活性，即 证实其基本上没有拮抗剂活性。
(拮抗剂活性测定法)
取试验化合物溶于DMSO中，以20μl KRH缓冲液稀释，使分析 孔中最终试验化合物浓度为1μM至5μM之间，加至如上述制备的细 胞中。取含已制备的细胞与试验化合物的96孔板于黑暗中与室温下培 养0.5至6小时。应注意，培养时间不可持续超过6小时。即将测定 萤光反应之前，方利用FLIPR仪器自动添加100μl含辣椒素的KRH 缓冲液至96孔板各孔中，其浓度为如上述测得的EC50的两倍浓度，最 终样本体积为200μl，最终辣椒素浓度等于EC50。分析孔中试验化合 物的最终浓度为1μM至5μM之间。辣椒素受体的拮抗剂在10微摩 尔或更低浓度，较佳为1微摩尔或更低浓度，使此反应相对于配对对 照组(亦即在没有试验化合物的存在下，使用两倍EC50浓度的辣椒素处 理的细胞)降低至少约20％，较佳为至少约50％，最佳为至少80％。取 相对于在辣椒素的存在下及没有拮抗剂下所观察到的反应降低50％时 所需拮抗剂浓度，为拮抗剂的IC50，较佳为低于1微摩尔、100摩尔纳 摩尔、10摩尔纳摩尔或1摩尔纳摩尔。
某些较佳VR1调节剂为于上述分析法中，于低于4nM的化合物 浓度，更佳为低于10μM的浓度，及最佳为低于或等于100μM的浓 度下没有可检测的促效剂活性时，即证实其基本上没有促效剂活性。
实施例7
微粒体活体外半衰期
此实施例说明采用代表性肝微粒体半衰期分析法评估化合物半衰 期值(t1/2值)的方法。
集合的人类肝微粒体是得自XenoTech LLC(Kansas City，KS)。此 等肝微粒体亦可得自活体外技术(In Vitro Technologies)(Baltimore，MD) 或组织转形技术(Tissue Transformation Technologies)(Edison，NJ)。制备 6个试验反应，分别含25μl微粒体、5μl的100μM试验化合物溶液 与399μl的0.1M磷酸盐缓冲液(19mL 0.1M NaH2PO4、81mL 0.1M Na2HPO4，使用H3PO4调至pH7.4)。制备第7个反应作为阳性对照组， 其中包含25μl微粒体、399μl 0.1M磷酸盐缓冲液与5μl 100μM已 知其代谢性质的化合物溶液(例如：DIAZEPAM或CLOZAPINE)。将反 应于39℃下预培养10分钟。
辅因子混合物的制法为取16.2毫克NADP与45.4毫克葡萄糖-6- 磷酸盐于4mL 100mM MgCl2中稀释。葡萄糖-6-磷酸盐脱氢酶溶液的 制法为取214.3μl葡萄糖-6-磷酸盐脱氢酶悬浮液(Roche Molecular Biochemicals；Indianapolis，IN)于1285.7μl蒸馏水中稀释。添加71μl 起始反应混合物(3mL辅因子混合物；1.2mL葡萄糖-6-磷酸盐脱氢酶 溶液)至6个试验反应中的5个以及阳性对照组中。添加71μl 100mM MgCl2至第6个试验反应中，作为阴性对照组。在各指定时间点(0、1、 3、5、与10分钟时)，取75μl的各别反应混合物滴加至96孔含有75 μl冰冷乙腈的深孔分析板的孔中。将样本涡转混合，于3500rpm下 离心10分钟(Sorval T 6000D离心机，H1000B转子)。自各反应中取出 75μl上清液移至96孔分析板中，其中各孔含有150μl的0.5μM已 知其LCMS图形的化合物(内标准物)。进行各样本的LCMS分析，未 代谢的试验化合物含量以AUC测定，画出化合物浓度对时间的曲线， 外插得到试验化合物的t1/2值。
本发明所提供较佳化合物于人类肝微粒体中的活体外t1/2值 最好大于10分钟及小于4小时，较佳为30分钟至1小时之间。
实施例8
MDCK毒性分析法
此实施例说明采用Madin Darby犬肾脏(MDCK)细胞的细胞毒性分 析法评估化合物的毒性。
在透明底板的96孔分析板(PACKARD，Meriden，CT)的各孔中添加 1μl试验化合物，使分析法中化合物终浓度为10微摩尔、100微摩尔 或200微摩尔。对照组孔中则添加没有试验化合物的溶剂。
取MDCK细胞，ATCC no.CCL-34(美国菌种培养收集中心 (American Type Culture Collection，Manassas，VA))，依ATCC生产资料页 的指示，维持在无菌条件下。取融合的MDCK细胞经胰蛋白酶处理， 收集后，使用温热(37℃)培养基(VITACELL伊格氏最低必需培养基 (Minimum Essential Medium Eagle)、ATCC目录#30-2003)稀释至浓度 0.1×106个细胞/毫升。添加100μL稀释的细胞至各孔中，但其中5 个标准曲线对照组分析孔中改含100μl没有细胞的温热培养基。分析 板随后于37℃下，于95％O2、5％CO2中，恒定振荡培养2小时。培养 后，于每孔中添加50μL哺乳动物细胞溶胞液，孔上覆盖PACKARD TOPSEAL贴纸，再将分析板于合适振荡器上，在约700rpm下振荡2分 钟。
相对于未处理的细胞，会引起毒性的化合物将会降低ATP生产。 ATP-LITE-M冷光ATP检测套组通常是依据制造商的指示使用，以测 定已处理及未处理的MDCK细胞中的ATP产量。使PACKARD ATP LITE-M试剂平衡至室温。一旦平衡后，即取冷冻干燥的受质溶液于 5.5mL受质缓冲液(来自套组)中再组成。冷冻干燥的ATP标准溶液于去 离子水中再组成，形成10mM母液。对于5个对照组孔，则分别添加 10μL经一系列稀释的PACKARD标准物至各标准曲线对照组孔中， 使各连续孔的最终浓度为200nM、100nM、50nM、25nM与12.5nM。 于所有孔均添加PACKARD受质溶液(50μL)，然后加盖，将分析板于 合适的振荡器上，于约700rpm下振荡2分钟。将白色PACKARD贴 纸黏在各分析板底部，使用金属箔包裹分析板，将样本保持在黑暗中 10分钟。然后于22℃下使用冷光计数器(例如：PACKARD TOPCOUNT 微分析板闪烁与冷光计数器或TECAN SPECTRAFLUOR PLUS)测定 冷光度，并由标准曲线计算ATP含量。比较经试验化合物处理的细胞 中的ATP含量与未处理细胞中所测得ATP含量。经10μM较佳试验 化合物处理的细胞中的ATP含量为未处理细胞的至少80％，较佳为至 少90％。当试验化合物使用100μM浓度时，经较佳试验化合物处理 的细胞中检测的ATP含量为未处理细胞的至少50％，较佳为至少80％。
实施例9
背根神经节细胞分析法
此实施例说明用于评估化合物的VR1拮抗剂或促效剂活性的代 表性背根神经节细胞分析法。
依标准方法，自新生老鼠中切下DRG，予以分离及培养(Aguayo 与White(1992)Brain Research 570：61-67)。培养48小时后，洗涤细胞 一次，与钙敏感性染料Fluo-4AM(2.5至10μg/ml；TefLabs，Austin，TX) 培养30至60分钟。采用萤光计测定Fluo 4萤光的变化，追踪细胞内 钙浓度因添加辣椒素至细胞中而随VR1增加的变化。收集60至180 秒的数据，测定最高萤光讯号。
拮抗剂分析法中，将不同浓度的化合物添加至细胞。然后以化合 物浓度为函数画出萤光讯号曲线，以判别达到抑制50％辣椒素活化反 应时所需的浓度，或IC50。辣椒素受体的拮抗剂的较佳IC50低于1微 摩尔、100摩尔纳摩尔、10摩尔纳摩尔或1摩尔纳摩尔。促效剂分析 法中，将不同浓度的化合物添加至没有添加辣椒素的细胞中。作为辣 椒素受体促效剂的化合物会造成VR1依赖性的细胞内钙浓度增加，该 增加借着利用萤光计由Fluo-4萤光的变化予以追踪。EC50(或达到辣椒 素活化反应最高讯号的50％时所需浓度)较佳为低于1微摩尔、低于100 摩尔纳摩尔或低于10摩尔纳摩尔。
实施例10
测定疼痛解除的动物模式
此实施例说明分析化合物所提供的解除疼痛程度的代表性方法。
A.疼痛解除试验
下列方法是用于分析疼痛解除程度。
(机械性异常疼痛)
基本上是依Chaplan等人的(1994)J.Neurosci.Methods 53：55-63及 Tal与Eliav的(1998)Pain 64(3)：511至518中说明的方法分析机械性异 常疼痛(对无害刺激产生的异常反应)。取一系列不同刚度的凡弗瑞(von Frey)丝线(典型为一系列8至14种丝线)施加在后脚足底表面上，其力 量恰足使丝线弯曲。丝线保持此位置不超过3秒钟或直到大鼠出现阳 性异常疼痛反应为止。阳性异常疼痛反应包括举起处理的后脚，立即 舔拭或摇动脚部。采用狄克森上下分析法(Dixon up-down method)决定 各丝线的施加顺序与频率。使用此系列中的中等丝线开始试验，随后 依向上或向下顺序连续施用，分别依开始时所使用丝线是否出现阴性 或阳性反应而定。
若接受此等化合物处理的大鼠相较于未处理对照组或媒剂处理组 大鼠需要使用较高刚度的凡弗瑞(von Frey)丝线方可引起阳性异常疼痛 反应时，表示该化合物可有效逆转或预防类似机械性异常疼痛的症状。 或者，或此外，可在投与化合物之前及之后测试动物的慢性疼痛。此 等分析法中，相较于处理前诱发反应时所需丝线或未经处理或经媒剂 处理且亦具慢性疼痛的动物所需丝线，有效化合物可使处理后诱发反 应所需丝线刚度提高。试验化合物是于疼痛发作之前或之后给药。当 试验化合物在疼痛发作之后给药时，则在给药后10分钟至3小时进行 试验。
(机械性痛觉过敏)
基本上是依Koch等人的(1996)Analgesia 2(3)：157至164说明的方 法测定机械性痛觉过敏(对疼痛刺激的反应过度)。取大鼠置于有温热多 孔金属地板的个别笼内。在任一只后脚足底表面上温和针刺后，测定 后脚抽回的时间期(亦即动物将其后脚放回地板上之前保持的时间)。
若化合物使后脚抽回的时间期缩短达统计显著性时，则该化合物 可降低机械性痛觉过敏。试验化合物可于疼痛发作之前或之后给药。 当试验化合物在疼痛发作之后给药时，则在给药后10分钟至3小时进 行试验。
(热痛觉过敏)
基本上是依Hargreaves等人说明于(1988)Pain.32(1)：77至88中的 方法测定热痛觉过敏(对有害热刺激的反应过度)。简言之，在动物任一 只后脚的足底表面施加恒定的辐射热源。抽回后脚的时间(亦即动物移 动后脚之前的加热时间)，或称为热阀值或潜伏期，即可决定动物后脚 对热的敏感性。
若化合物使后脚抽回的时间期增加达统计显著性时(亦即出现反应 的热阀值或潜伏期加长)，则该化合物可降低热痛觉过敏。试验化合物 是于疼痛发作之前或之后给药。当试验化合物在疼痛发作之后给药时， 则在给药后10分钟至3小时进行试验。
B.疼痛模式
可采用下列任一种方法诱发疼痛，以测定化合物的止痛效力。一 般而言，采用雄性SD大鼠及下列至少一种模式时，本文所提供化合 物可在上述至少一种试验法中使疼痛于统计上显著降低。
(急性发炎疼痛模式)
急性发炎疼痛基本上是依Field等人说明于(1997)Br.J.Pharmacol. 121(8)：1513-1522中的角叉菜胶(carrageenan)模式所诱发。取100至200 μl的1至2％角叉菜胶溶液注射大鼠后脚中。注射后3至4小时，依 上述方法测定动物对热及机械性刺激的敏感性。在试验前或注射角叉 菜胶之前，对动物投与试验化合物(0.01至50mg/kg)。化合物可经口或 任何非经肠式、或局部给药至脚部。在此模式中解除疼痛的化合物可 使机械性异常疼痛与/或热痛觉过敏在统计上显著降低。
(慢性发炎疼痛模式)
采用下列一种方法诱发慢性发炎疼痛：
1.基本上是依Bertorelli等人说明于(1999)Br.J.Pharmacol. 128(6)：1252-1258的方法及Stein等人说明于(1998)Pharmacol.Biochem. Behav.31(2)：455-51的方法，取200μl完全弗洛伊德氏辅剂(Complete Freund′s Adjuvant)(0.1毫克热杀死并干燥的结核菌(M. Tuberculosis))注 射至大鼠后脚中：100μl注入足背，100μl注入足底表面。
2.基本上是依Abbadie等人说明于(1994)J Neurosci. 14(10)：5865-5871的方法，在大鼠的胫骨-跗骨关节上注射150μl CFA(1.5mg)。
其任一方法中，在注射CFA之前，先取得各试验动物后脚对机械 及热刺激的个别敏感度底线。
注射CFA后，依上述测试大鼠的热痛觉过敏、机械性异常疼痛与 机械性痛觉过敏。为了确认其发展出症状，在注射CFA后5、6与7 天时才开始进行大鼠试验。第7天时，以试验化合物、吗啡或媒剂处 理动物。以口服剂量为1至5mg/kg的吗啡作为合适的阳性对照组。典 型采用的试验化合物剂量为0.01至50mg/kg。化合物可在试验前呈单 一剂量给药，或在试验前每天给药1、2或3次，进行数天。药物可经 口或任何非经肠式途径、或局部给药给动物。
其结果以最高可能效力百分比(MPE)表示。0％MPE的定义为媒剂 的止痛效力，100％MPE的定义为动物恢复注射CFA前的底线敏感度。 在此模式中解除疼痛的化合物所得到的MPE为至少30％。
(慢性神经性疼痛模式)
慢性神经性疼痛基本上是依Bennett与Xie说明于(1988)Pain 33：87-107中的方法，采用慢性收缩伤害(CCI)处理大鼠坐骨神经而诱 发。麻醉大鼠(例如：经腹膜内使用剂量50至65mg/kg的戊巴比妥及 依需要增加其它剂量)。将各后脚侧面刮干净及消毒。采用无菌技术， 切开后脚侧面中股。将股二头肌切成钝端，曝露出坐骨神经。在每只 动物的其中一只后脚上，依约1至2毫米的间隔，将四条结扎线松弛 地结扎于坐骨神经周围。另一只脚的坐骨神经则没有结扎且不处理。 随后盖上肌肉，使用伤口夹或缝合线缝合皮肤。如上述分析大鼠的机 械性异常疼痛、机械性痛觉过敏与热痛觉过敏。
当化合物在此模式中，在即将试验前呈单一剂量给药，或在试验 前每天给药1、2或3次，进行数天(0.01至50mg/kg，经口、非经肠 式或局部给药)时，该化合物可在统计上显著降低机械性异常疼痛、机 械性痛觉过敏与/或热痛觉过敏。