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在化学疗法期间对正常细胞的瞬时保护

阅读：421发布：2020-10-27

专利汇可以提供在化学疗法期间对正常细胞的瞬时保护专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及改善的化合物、组合物和方法，其瞬时保护健康细胞和尤其造血干细胞和祖细胞(HSPC)以及肾细胞免受与破坏DNA的 化学 治疗 剂有关的破坏。在一个方面，公开了使用所公开的化合物改善对健康细胞的保护，所公开的化合物在向进行破坏DNA的化学 治疗方案 以治疗增生性病症的受试者施用时充当高度选择性并短暂、瞬时起作用的细胞周期蛋白依赖性激酶4/6(CDK 4/6) 抑制剂 。，下面是在化学疗法期间对正常细胞的瞬时保护专利的具体信息内容。

1.一种降低针对细胞周期蛋白依赖性激酶4/6(CDK4/6)复制非依赖性癌症或异常细胞增殖进行治疗的受试者中化学疗法对健康细胞的作用的方法，其中所述健康细胞是造血干细胞、造血祖细胞或肾上皮细胞，所述方法包括向所述受试者施用有效量的选自式I、II、III、IV或V的化合物或其药学上可接受的盐：
其中：
Z为-(CH2)x-，其中x为1、2、3或4，或-O-(CH2)z-，其中z为2、3或4；
每一X独立地为CH或N；
每一X′独立地为CH或N；
X″独立地为CH2、S或NH，经配置使得所述部分为稳定5元环；
R、R8和R11独立地为H、C1-C3烷基或卤烷基、环烷基或含有一个或多个选自N、O或S的杂原子的环烷基；-(亚烷基)m-C3-C8环烷基、-(亚烷基)m-芳基、-(亚烷基)m-杂环基、-(亚烷基)m-杂芳基、-(亚烷基)m-NR3R4、-(亚烷基)m-C(0)-NR3R4；-(亚烷基)m-0-R5、-(亚烷基)m-S(0)n-R5或-(亚烷基)m-S(0)n-NR3R4，其中任一者在化合价容许的情况下可以任选地独立地经一个或多个R基团取代，且其中两个结合于相同或相邻原子的Rx基团可以任选地组合形成环；
每一R1独立地为芳基、烷基、环烷基或卤烷基，其中所述烷基、环烷基和卤烷基中的每一者任选地在链中包括代替碳的O或N杂原子且相邻环原子上或相同环原子上的两个R1连同其连接的环原子任选地形成3-8元环；
y为0、1、2、3或4；
R2为-(亚烷基)m-杂环基、-(亚烷基)m-杂芳基、-(亚烷基)m-NR3R4、-(亚烷基)m-C(O)-NR3R4；-(亚烷基)m-C(O)-O-烷基；-(亚烷基)m-O-R5、-(亚烷基)m-S(O)n-R5或-(亚烷基)m-S(O)n-NR3R4，其中任一者在化合价容许的情况下可以任选地独立地经一个或多个Rx基团取x
代，且其中两个结合于相同或相邻原子的R基团可以任选地组合形成环且其中m为0或1且n为0、1或2；
R3和R4每次出现时独立地为：
(i)氢或
(ii)烷基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、环烷基烷基、杂环烷基、芳基烷基或杂芳基烷基，其中任一者在化合价容许的情况下可以任选地独立地经一个或多个Rx基团取代，且其中两个结合于相同或相邻原子的Rx基团可以任选地组合形成环；或R3和R4连同其连接的氮原子可以组合形成在化合价容许的情况下任选地独立地经一个或多个Rx基团取代的杂环，且其中两个结合于相同或相邻原子的Rx基团可以任选地组合形成环；
R5和R5*每次出现时为
(i)氢或
(ii)烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、环烷基烷基、杂环烷基、芳基烷基或杂芳基烷基，其中任一者在化合价容许的情况下可以任选地独立地经一个或多个Rx基团取代；
Rx每次出现时独立地为卤基、氰基、硝基、氧代基、烷基、卤烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、杂环基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、环烷基烷基、杂环烷基、-(亚烷基)m-
5 5 5 3 4
OR、-(亚烷基)m-O-亚烷基-OR 、-(亚烷基)m-S(O)n-R 、-(亚烷基)m-NRR 、-(亚烷基)m-CN、-(亚烷基)m-C(O)-R5、-(亚烷基)m-C(S)-R5、-(亚烷基)m-C(O)-OR5、-(亚烷基)m-O-C(O)-R5、-(亚烷基)m-C(S)-OR5、-(亚烷基)m-C(O)-(亚烷基)m-NR3R4、-(亚烷基)m-C(S)-NR3R4、-(亚烷基)m-N(R3)-C(O)-NR3R4、-(亚烷基)m-N(R3)-C(S)-NR3R4、-(亚烷基)m-N(R3)-C(O)-R5、-(亚烷
3 5 3 4 3 4
基)m-N(R )-C(S)-R 、-(亚烷基)m-O-C(O)-NR R 、-(亚烷基)m-O-C(S)-NR R 、-(亚烷基)m-SO2-NR3R4、-(亚烷基)m-N(R3)-SO2-R5、-(亚烷基)m-N(R3)-SO2-NR3R4、-(亚烷基)m-N(R3)-C(O)-OR5)、-(亚烷基)m-N(R3)-C(S)-OR5或-(亚烷基)m-N(R3)-SO2-R5；其中：
所述烷基、卤烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、杂环基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、环烷基烷基和杂环烷基可以进一步独立地经一个或多个以下各基取代：
-(亚烷基)m-CN、-(亚烷基)m-OR5*、-(亚烷基)m-S(O)n-R5*、-(亚烷基)m-NR3*R4*、-(亚烷基)m-C(O)-R5*、-(亚烷基)m-C(＝S)R5*、-(亚烷基)m-C(＝O)OR5*、-(亚烷基)m-OC(＝O)R5*、-(亚烷基)m-C(S)-OR5*、-(亚烷基)m-C(O)-NR3*R4*、-(亚烷基)m-C(S)-NR3*R4*、-(亚烷基)m-N(R3*)-C(O)-NR3*R4*、-(亚烷基)m-N(R3*)-C(S)-NR3*R4*、-(亚烷基)m-N(R3*)-C(O)-R5*、-(亚烷基)m-N(R3*)-C(S)-R5*、-(亚烷基)m-O-C(O)-NR3*R4*、-(亚烷基)m-O-C(S)-NR3*R4*、-(亚烷基)m-SO2-NR3*R4*、-(亚烷基)m-N(R3*)-SO2-R5*、-(亚烷基)m-N(R3*)-SO2-NR3*R4*、-(亚烷基)m-N(R3*)-C(O)-OR5*、-(亚烷基)m-N(R3*)-C(S)-OR5*或-(亚烷基)m-N(R3*)-SO2-R5*，
n为0、1或2，且
m为0或1；
R3*和R4*每次出现时独立地为：
(i)氢或
(ii)烷基、烯基、炔基环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、环烷基烷基、杂环烷基、芳基烷基或杂芳基烷基，其中任一者在化合价容许的情况下可以任选地独立地经一个或多个Rx基团取代；或R3*和R4*连同其连接的氮原子可以组合形成在化合价容许的情况下任选地独立地经一个或多个Rx基团取代的杂环；且
6 3 4
R为H或低级烷基、-(亚烷基)m-杂环基、-(亚烷基)m-杂芳基、-(亚烷基)m-NRR 、-(亚烷基)m-C(0)-NR3R4；-(亚烷基)m-0-R5、-(亚烷基)m-S(0)n-R5或-(亚烷基)m-S(0)n-NR3R4，其中任一者在化合价容许的情况下可以任选地独立地经一个或多个Rx基团取代，且其中两个结合于相同或相邻原子的Rx基团可以任选地组合形成环；且
10 A A
R 为(i)NHR ，其中R 为未经取代或经取代的C1-C8烷基、环烷基烷基或-TT-RR、C1-C8环烷基或含有一个或多个选自N、O和S的杂原子的环烷基；TT为未经取代或经取代的C1-C8烷基或C3-C8环烷基连接基团；且RR为羟基、未经取代或经取代的C1-C6烷氧基、氨基、未经取代或经取代的C1-C6烷基氨基、未经取代或经取代的二C1-C6烷基氨基、未经取代或经取代的C6-C10芳基、包含一个或两个5或6元环和1-4个选自N、O和S的杂原子的未经取代或经取代的杂芳基、未经取代或经取代的C3-C10碳环或包含一个或两个5或6元环和1-4个选自N、O和S的杂原子的未经取代或经取代的杂环；或(ii)-C(O)-R12或-C(O)O-R13，其中R12为NHRA或RA且R13为RA。
2.如权利要求1所述的方法，其中R8为氢或C1-C3烷基。
3.如权利要求1所述的方法，其中所述化合物具有选自图27中所示结构的式。
4.如权利要求1所述的方法，其中所述化合物具有选自图28中所示结构的式。
5.如权利要求1所述的方法，其中所述化合物具有选自图29中所示结构的式。
6.如权利要求1所述的方法，其中所述化合物具有选自图30中所示结构的式。
7.如权利要求1所述的方法，其中所述化合物具有选自图31中所示结构的式。
8.如权利要求1所述的方法，其中所述化合物具有下式：
9.如权利要求1所述的方法，其中所述化合物具有下式：
10.如权利要求1所述的方法，其中所述化合物具有下式：
11.如权利要求1所述的方法，其中所述化合物具有下式：
12.如权利要求1所述的方法，其中所述化合物具有下式：
13.如权利要求1所述的方法，其中所述化合物具有下式：
14.如权利要求1所述的方法，其中所述化合物具有下式：
15.如权利要求1所述的方法，其中所述化合物具有下式：
16.如权利要求1所述的方法，其中所述化合物具有下式：
17.如权利要求1所述的方法，其中所述化合物具有下式：
18.如权利要求1所述的方法，其中所述化合物具有下式：
其中R为C(H)X、NX、C(H)Y或C(X)2；
其中X为氢、直链、支链或环状C1至C5烷基，包括甲基、乙基、丙基、环丙基、异丙基、丁基、仲丁基、叔丁基、异丁基、环丁基、戊基、异戊基、新戊基、叔戊基、仲戊基和环戊基；且Y为NR1R2，其中R1和R2独立地为X，或其中R1和R2为一起形成包括一个或两个杂原子(N、O或S)的桥的烷基；且
其中两个X基团可以一起形成包括一个或两个杂原子(N、S或O)以形成螺化合物的烷基桥或桥；或
其药学上可接受的盐。
19.如权利要求1所述的方法，其中所述化合物选自以下各式：
。
20.如权利要求19所述的方法，其中所述化合物为：
21.如权利要求19所述的方法，其中所述化合物为：
22.如权利要求19所述的方法，其中所述化合物为：
23.如权利要求19所述的方法，其中所述化合物为：
24.如权利要求1所述的方法，其中一个X为N且一个X为C。
25.如权利要求1至24中任一项所述的方法，其中所述受试者是人类。
26.如权利要求1至24中任一项所述的方法，其中所述化合物在暴露于所述细胞毒性化合物之前24小时或更少时间施用至所述受试者。
27.如权利要求1至26中任一项所述的方法，其中所述受试者患有癌症。
28.如权利要求1至26中任一项所述的方法，其中所述受试者具有异常细胞增殖。
29.如权利要求1至28中任一项所述的方法，其中所述癌症或异常细胞增殖特征为成视网膜细胞瘤肿瘤抑制蛋白(RB)的丧失或不存在。
30.如权利要求1至26中任一项所述的方法，其中所述癌症是小细胞肺癌、成视网膜细胞瘤、三重阴性乳癌、人类乳头状瘤病毒(HPV)阳性头颈癌或HPV阳性宫颈癌。
31.如权利要求1至30中任一项所述的方法，其中所述化学疗法选自烷基化剂、DNA插入剂、蛋白质合成抑制剂、DNA或RNA合成抑制剂、DNA碱基类似物、拓扑异构酶抑制剂、端粒酶抑制剂或端粒DNA结合化合物。
32.如权利要求1至30中任一项所述的方法，其中所述癌症是小细胞肺癌且化学疗法选自依托泊苷、顺铂和卡铂或其组合。
33.如权利要求1至32中任一项所述的方法，其中至少80％或更多的所述HSPC在离所述化合物上次施用不到36小时再进入细胞周期。
34.如权利要求1至33中任一项所述的方法，其中所述健康细胞是造血干细胞或造血祖细胞。
35.如权利要求1至33中任一项所述的方法，其中所述健康细胞是肾上皮细胞。
36.一种用组合疗法治疗受试者的Rb阴性癌症或异常细胞增殖的方法，其包括向所述受试者施用与另一化学治疗化合物组合的有效量的化学疗法与选自式I、II、III、IV或V或其药学上可接受的盐的细胞周期蛋白依赖性激酶4/6(CDK4/6)化合物的组合：
其中：
Z为-(CH2)x-，其中x为1、2、3或4，或-O-(CH2)z-，其中z为2、3或4；
每一X独立地为CH或N；
每一X′独立地为CH或N；
X″独立地为CH2、S或NH，经配置使得所述部分为稳定5元环；
8 11
R、R和R 独立地为H、C1-C3烷基或卤烷基、环烷基或含有一个或多个选自N、O或S的杂原子的环烷基；-(亚烷基)m-C3-C8环烷基、-(亚烷基)m-芳基、-(亚烷基)m-杂环基、-(亚烷基)m-杂芳基、-(亚烷基)m-NR3R4、-(亚烷基)m-C(0)-NR3R4；-(亚烷基)m-0-R5、-(亚烷基)m-S(0)n-R5或-(亚烷基)m-S(0)n-NR3R4，其中任一者在化合价容许的情况下可以任选地独立地经一个或多个R基团取代，且其中两个结合于相同或相邻原子的Rx基团可以任选地组合形成环；
每一R1独立地为芳基、烷基、环烷基或卤烷基，其中所述烷基、环烷基和卤烷基中的每一者任选地在链中包括代替碳的O或N杂原子且相邻环原子上或相同环原子上的两个R1连同其连接的环原子任选地形成3-8元环；
y为0、1、2、3或4；
R2为-(亚烷基)m-杂环基、-(亚烷基)m-杂芳基、-(亚烷基)m-NR3R4、-(亚烷基)m-C(O)-
3 4 5 5
NRR ；-(亚烷基)m-C(O)-O-烷基；-(亚烷基)m-O-R 、-(亚烷基)m-S(O)n-R或-(亚烷基)m-S(O)n-NR3R4，其中任一者在化合价容许的情况下可以任选地独立地经一个或多个Rx基团取代，且其中两个结合于相同或相邻原子的Rx基团可以任选地组合形成环且其中m为0或1且n为0、1或2；
3 4
R和R每次出现时独立地为：
(i)氢或
(ii)烷基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、环烷基烷基、杂环烷基、芳基烷基或杂芳基烷基，其中任一者在化合价容许的情况下可以任选地独立地经一个或多个Rx基团取代，且其x 3 4
中两个结合于相同或相邻原子的R基团可以任选地组合形成环；或R 和R连同其连接的氮原子可以组合形成在化合价容许的情况下任选地独立地经一个或多个Rx基团取代的杂环，且其中两个结合于相同或相邻原子的Rx基团可以任选地组合形成环；
R5和R5*每次出现时为
(i)氢或
(ii)烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、环烷基烷基、杂环烷基、芳基烷基或杂芳基烷基，其中任一者在化合价容许的情况下可以任选地独立地经一个或多个Rx基团取代；
Rx每次出现时独立地为卤基、氰基、硝基、氧代基、烷基、卤烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、杂环基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、环烷基烷基、杂环烷基、-(亚烷基)m-OR5、-(亚烷基)m-O-亚烷基-OR5、-(亚烷基)m-S(O)n-R5、-(亚烷基)m-NR3R4、-(亚烷基)m-CN、-(亚烷基)m-C(O)-R5、-(亚烷基)m-C(S)-R5、-(亚烷基)m-C(O)-OR5、-(亚烷基)m-O-C(O)-R5、-(亚烷基)m-C(S)-OR5、-(亚烷基)m-C(O)-(亚烷基)m-NR3R4、-(亚烷基)m-C(S)-NR3R4、-(亚烷基)m-N(R3)-C(O)-NR3R4、-(亚烷基)m-N(R3)-C(S)-NR3R4、-(亚烷基)m-N(R3)-C(O)-R5、-(亚烷基)m-N(R3)-C(S)-R5、-(亚烷基)m-O-C(O)-NR3R4、-(亚烷基)m-O-C(S)-NR3R4、-(亚烷基)m-SO2-NR3R4、-(亚烷基)m-N(R3)-SO2-R5、-(亚烷基)m-N(R3)-SO2-NR3R4、-(亚烷基)m-N(R3)-C(O)-OR5)-(亚烷基)m-N(R3)-C(S)-OR5或-(亚烷基)m-N(R3)-SO2-R5；其中：
所述烷基、卤烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、杂环基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、环烷基烷基和杂环烷基可以进一步独立地经一个或多个以下各基取代：
-(亚烷基)m-CN、-(亚烷基)m-OR5*、-(亚烷基)m-S(O)n-R5*、-(亚烷基)m-NR3*R4*、-(亚烷基)m-C(O)-R5*、-(亚烷基)m-C(＝S)R5*、-(亚烷基)m-C(＝O)OR5*、-(亚烷基)m-OC(＝O)R5*、-
5 3 4 3 4
(亚烷基)m-C(S)-OR*、-(亚烷基)m-C(O)-NR*R*、-(亚烷基)m-C(S)-NR*R*、-(亚烷基)m-N(R3*)-C(O)-NR3*R4*、-(亚烷基)m-N(R3*)-C(S)-NR3*R4*、-(亚烷基)m-N(R3*)-C(O)-R5*、-(亚烷基)m-N(R3*)-C(S)-R5*、-(亚烷基)m-O-C(O)-NR3*R4*、-(亚烷基)m-O-C(S)-NR3*R4*、-(亚烷基)m-SO2-NR3*R4*、-(亚烷基)m-N(R3*)-SO2-R5*、-(亚烷基)m-N(R3*)-SO2-NR3*R4*、-(亚烷基)m-N(R3*)-C(O)-OR5*、-(亚烷基)m-N(R3*)-C(S)-OR5*或-(亚烷基)m-N(R3*)-SO2-R5*，
n为0、1或2，且
m为0或1；
R3*和R4*每次出现时独立地为：
(i)氢或
(ii)烷基、烯基、炔基环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、环烷基烷基、杂环烷基、芳基烷基或杂芳基烷基，其中任一者在化合价容许的情况下可以任选地独立地经一个或多个Rx基团取代；或R3*和R4*连同其连接的氮原子可以组合形成在化合价容许的情况下任选地独立地经一个或多个Rx基团取代的杂环；且
6 3 4
R为H或低级烷基、-(亚烷基)m-杂环基、-(亚烷基)m-杂芳基、-(亚烷基)m-NRR 、-(亚烷基)m-C(0)-NR3R4；-(亚烷基)m-0-R5、-(亚烷基)m-S(0)n-R5或-(亚烷基)m-S(0)n-NR3R4，其中任一者在化合价容许的情况下可以任选地独立地经一个或多个Rx基团取代，且其中两个结合于相同或相邻原子的Rx基团可以任选地组合形成环；且
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R 为(i)NHR ，其中R 为未经取代或经取代的C1-C8烷基、环烷基烷基或-TT-RR、C1-C8环烷基或含有一个或多个选自N、O和S的杂原子的环烷基；TT为未经取代或经取代的C1-C8烷基或C3-C8环烷基连接基团；且RR为羟基、未经取代或经取代的C1-C6烷氧基、氨基、未经取代或经取代的C1-C6烷基氨基、未经取代或经取代的二C1-C6烷基氨基、未经取代或经取代的C6-C10芳基、包含一个或两个5或6元环和1-4个选自N、O和S的杂原子的未经取代或经取代的杂芳基、未经取代或经取代的C3-C10碳环或包含一个或两个5或6元环和1-4个选自N、O和S的杂原子的未经取代或经取代的杂环；或(ii)-C(O)-R12或-C(O)O-R13，其中R12为NHRA或RA且R13为RA。
37.如权利要求36所述的方法，其中所述CDK4/6抑制剂为：
其中R为C(H)X、NX、C(H)Y或C(X)2；
其中X为氢、直链、支链或环状C1至C5烷基，包括甲基、乙基、丙基、环丙基、异丙基、丁基、仲丁基、叔丁基、异丁基、环丁基、戊基、异戊基、新戊基、叔戊基、仲戊基和环戊基；且Y为NR1R2，其中R1和R2独立地为X，或其中R1和R2为一起形成包括一个或两个杂原子(N、O或S)的桥的烷基；且
其中两个X基团可以一起形成包括一个或两个杂原子(N、S或O)的烷基桥或桥以形成螺化合物；或
其药学上可接受的盐或前药。
38.如权利要求36所述的方法，其中所述化合物选自以下各式：
39.如权利要求36所述的方法，其中所述化合物为：
40.如权利要求36所述的方法，其中所述化合物为：
41.如权利要求36所述的方法，其中所述化合物为：
42.如权利要求36所述的方法，其中所述化合物为：
43.如权利要求36所述的方法，其中所述化学治疗化合物选自包括mTOR抑制剂、PI3激酶抑制剂、双重mTOR-PI3K抑制剂、MEK抑制剂、RAS抑制剂、ALK抑制剂、AKT抑制剂、HSP抑制剂、BCL-2抑制剂、细胞凋亡诱发化合物、PD-1抑制剂和FLT-3抑制剂或其组合的化合物。
44.一种化合物，其具有下式：
或其药学上可接受的盐。
45.一种药物组合物，其包含呈适合的剂型以实现在化学疗法期间健康细胞的化学保护的如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐。
46.任何本文中描述的化合物的用途，其用于降低化学疗法在针对细胞周期蛋白依赖性激酶4/6(CDK4/6)复制非依赖性癌症或异常细胞增殖进行治疗的受试者中的作用，其中所述健康细胞是造血干细胞、造血祖细胞或肾上皮细胞。
47.任何本文中描述的化合物的用途，其与化学治疗剂组合用于治疗受试者的Rb阴性癌症或异常细胞增殖。
48.如权利要求46所述的用途，其中所述化合物描述于权利要求19中。
49.如权利要求47所述的用途，其中所述化合物描述于权利要求19中。

说明书全文

在化学疗法期间对正常细胞的瞬时保护

[0001] 相关申请
[0002] 本申请要求2013年3月15日提交的美国临时申请No.61/798,772、2013年8月1日提交的美国临时申请No.61/861,374、2013年12月3日提交的美国临时申请No.61/911,354和2014年3月7日提出的美国临时申请No.61/949,786的权益。这些申请每一者整体以引用的方式并入本文中以达成所有目的。
[0003] 政府利益
[0004] 由于变态反应与传染病国家研究院(the National Institutes of Allergy and Infectious Disease)所颁予的资助号5R44AI084284的支持，故美国政府在本发明中具有权利。

技术领域

[0005] 本发明涉及改善的化合物、组合物和方法，其瞬时保护健康细胞和尤其造血干细胞和祖细胞(HSPC)以及肾细胞免受与破坏DNA的化学治疗剂有关的破坏。在一个方面，公开了使用所公开的化合物改善对健康细胞的保护，所公开的化合物在向进行破坏DNA的化学治疗方案以治疗增生性病症的受试者施用时充当高度选择性且短暂、瞬时起作用的细胞周期蛋白依赖性激酶4/6(CDK 4/6)抑制剂。
[0006] 发明背景
[0007] 化学疗法是指使用细胞毒性(典型地破坏DNA)药物治疗一系列增生性病症，尤其包括癌症、肿瘤、牛皮癣、关节炎、狼疮和多发性硬化。化学治疗化合物往往是非特异性的，且尤其在高剂量下，对正常的迅速分裂的细胞具有毒性。此常常在进行化学疗法的患者中引起多种副作用。
[0008] 骨髓抑制(骨髓中血细胞产生严重减少)是一种此类副作用。其特征为骨髓抑制(贫血、中性白细胞减少、粒性白细胞缺乏症和血小板减少症)与淋巴球减少症。中性白细胞减少特征为循环的嗜中性粒细胞的数目选择性下降和对细菌感染的敏感性增强。在美国，贫血(红血球或红血球的数目、血红蛋白的数量或浓集红血球体积(特征为血细胞比容的测定)减少)影响大概67％进行化学疗法的癌症患者。参见BioWorld Today,第4页,2002年7月23日。血小板减少症是血小板数目减少且对出血的敏感性增加。淋巴球减少症是化学疗法的一种常见副作用，特征为循环的淋巴细胞(又称T和B细胞)数目减少。淋巴球减少症患者易感染各种类型的感染。
[0009] 骨髓抑制继续代表癌症化学疗法的主要剂量限制性毒性，引起相当大的发病率，且潜在需要降低化学疗法剂量强度，此可能使疾病控制和存活率受损。来自预期和回顾性随机化临床试验的相当多的证据清楚地表明化学疗法诱发的骨髓抑制有损长期疾病控制和存活(Lyman,G.H.,Chemotherapy dose intensity and quality cancer care(Oncology(Williston Park),2006.20(14增刊9):第16-25页))。此外，在美国国家综合癌症网络(National Comprehensive Cancer Network guidelines)中推荐的例如肺、乳房和结肠直肠癌的治疗方案日益与显著的骨髓抑制有关，而日益推荐用于治疗早期疾病以及晚期或转移性疾病(Smith,R.E.,Trends in recommendations for myelosuppressive 
chemotherapy for the treatment of solid tumors.J Natl Compr Canc Netw,2006.4(7):第649-58页)。使癌症患者的治疗强度更大的此倾向需要改善的量度，以最小化骨髓抑制和并发症的风险，同时最佳化相对剂量强度。
[0010] 除骨髓抑制之外，化学治疗剂可能不利地影响其它健康的细胞，例如肾上皮细胞，可能导致因管状上皮死亡而出现急性肾损伤。急性肾损伤可能引起长期肾病、多器官衰竭、败血症和死亡。
[0011] 一种最小化骨髓抑制、肾毒性和其它化学治疗细胞毒性的机制为减少化学疗法的计划剂量强度。然而，剂量减少或周期延迟减少有效性并最终有损长期疾病控制和存活率。
[0012] 已使用小分子减少某些化学治疗化合物的一些副作用。举例来说，甲酰四氢叶酸(leukovorin)已用于减轻甲氨蝶呤(methotrexate)对骨髓细胞和胃肠粘膜细胞的作用。氨磷汀(amifostine)已经用于减少在接收烷基化或含铂化学治疗剂的患者中中性白细胞减少相关的发热和粘膜炎的发生率。此外，得拉唑沙(dexrazoxane)已经用于提供心脏保护，以免蒽环抗癌化合物的破坏。不幸地，注意到例如得拉唑沙和氨磷汀等许多化学保护剂可能降低附随给出的化学疗法的功效。
[0013] 其它的化学保护疗法，尤其化学疗法相关的贫血和中性白细胞减少，包括使用生长因子。造血生长因子可作为重组蛋白质购得。这些蛋白质包括用于治疗中性白细胞减少的粒细胞群落刺激因子(G-CSF)和粒细胞-巨噬细胞群落刺激因子(GM-CSF)和其衍生物，和用于治疗贫血的促红细胞生成素(EPO)和其衍生物。然而，这些重组蛋白质是昂贵的。此外，EPO在癌症患者中具有显著的毒性，在若干大型随机化试验中引起血栓形成、复发和死亡增加。G-CSF和GM-CSF可能增加例如白血病和脊髓发育不良等继发性骨髓病症的晚期(治疗后>2年)风险。因此，其使用受到限制且不再是所有需要的患者容易获得。此外，虽然生长因子可以加速一些血细胞谱系的恢复，但不存在治疗血小板、巨噬细胞、T细胞或B细胞抑制的疗法。
[0014] Roberts等人在2012年报导，在例如HSPC等健康细胞的CDK4/6依赖性子集中Pfizer化合物PD-0332991诱发瞬时的细胞周期停滞(参见Roberts等人Multiple Roles of Cyclin-Dependent Kinase 4/6Inhibitors in Cancer Therapy.JNCI 2012；104(6):476-
487)。此化合物目前正由Pfizer在临床试验中作为一种针对雌激素阳性、HER2阴性的乳癌的抗赘生性剂进行测试。
[0015] 造血干细胞产生祖细胞，祖细胞又产生血液的所有分化组分，如图1中所示(例如淋巴细胞、红血球、血小板、粒细胞、单核细胞)。HSPC需要CDK4/6的活性用于增殖(参见Roberts等人Multiple Roles of Cyclin-Dependent Kinase 4/6Inhibitors in Cancer Therapy.JNCI 2012；104(6):476-487)。在健康的肾中，肾上皮细胞偶尔进入细胞周期(约1％上皮细胞)。然而，在肾损害后，上皮增生稳固地增加(参见Humphreys,B.D.等人
Intrinsic epithelial cells repair the kidney after injury.Cell Stem Cell 2,
284-91(2008))。重要地，在肾损伤后，幸存的肾上皮细胞复制以修复对肾管状上皮的破坏(参见Humphreys,B.D.等人Repair of injured proximal tubule does not involve 
specialized progenitors.Proc Natl Acad Sci U S A 108,9226-31(2011))。亦参见Sharpless等人提交的WO 2010132725。
[0016] 已鉴别大量CDK 4/6抑制剂，包括特定吡啶并[2,3-d]嘧啶、2-苯胺基嘧啶、二芳基脲、苯甲酰基-2,4-二氨基噻唑、吲哚并[6,7-a]吡咯并[3,4-c]咔唑和羟吲哚(参见P.S.Sharma,R.Sharma,R.Tyagi,Curr.Cancer Drug Targets 8(2008)53-75)。WO 03/
062236鉴别一系列2-(吡啶-2-基氨基-吡啶并[2,3]嘧啶-7-酮用于治疗展示对CDK4/6的选择性的Rb阳性癌症，包括6-乙酰基-8-环戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-
8H-吡啶并-[2,3-d]-嘧啶-7-酮(PD0332991)。临床试验研究已经报导在使用PD0332991下的等级3/4中性白细胞减少和白血球减少症的速度，引起71％患者需要中断给药和35％需要减少剂量；以及引起10％中止的不良事件(参见Finn,Abstract S1-6,SABCS 2012)。
[0017] VanderWel等人描述了含碘的吡啶并[2,3-d]嘧啶-7-酮(CKIA)作为有效和选择性的CDK4抑制剂(参见VanderWel等人,J.Med.Chem.48(2005)2371-2387)。
[0018] Glaxo Group有限公司提交的WO 99/15500公开了蛋白激酶和丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂。
[0019] Novartis AG提交的WO 2010/020675描述了作为CDK抑制剂的吡咯并嘧啶化合物。Novartis还提出的WO 2011/101409描述了具有CDK 4/6抑制活性的吡咯并嘧啶。
[0020] Novartis提交的WO 2005/052147和Janssen Pharma提交的WO 2006/074985公开了额外CDK4抑制剂。
[0021] Barvian等人提交的US 2007/0179118传授了使用CDK4抑制剂治疗炎症。
[0022] Tavares提交并转让给G1Therapeutics的WO 2012/061156描述了CDK抑制剂。Tavares提交并转让给G1 Therapeutics的WO 2013/148748描述了内酰胺激酶抑制剂。
[0023] Sharpless等人的美国专利公布2011/0224227描述了在进行化学治疗的受试者中使用某些CDK4/6抑制剂，例如PD0332991和2BrIC(参见Zhu等人,J.Med.Chem.,46(11)2027-2030(2003)；PCT/US2009/059281)减少或预防细胞毒性化合物对HSPC的作用。又参见美国专利公布2012/0100100。
[0024] Stone等人,Cancer Research 56,3199-3202(1996年7月1日)描述了可逆的p16介导的细胞周期停滞，从而避免了化学疗法破坏。
[0025] 因此，本发明的一个目标为提供在化学疗法期间治疗患者的新化合物、组合物和方法。发明概要
[0026] 在一个实施方案中，提供改善的化合物、方法和组合物以最小化将暴露于、正暴露于或已暴露于化学治疗剂(典型地DNA破坏剂)的受试者(典型地人类)中化学治疗剂毒性对例如造血干细胞和造血祖细胞(一起称为HSPC)和/或肾上皮细胞等CDK4/6复制依赖性健康细胞的作用。
[0027] 确切地说，本发明包括施用有效量的如本文中描述的所选式I、II、III、IV或V化合物、其药学上可接受的组合物、盐、同位素类似物或前药，此提供了受试者中在受试者暴露于例如DNA破坏化学治疗剂等化学治疗剂期间或之后例如HSPC和/或肾上皮细胞等健康细胞的最佳瞬时G1停滞：
[0028]
[0029]
[0030] 在一个非限制性实例中，化合物可以选自下表1的化合物，或其药学上可接受的组合物、盐、同位素类似物或前药。在一个非限制性实例中，化合物可以选自下述化合物T、Q、GG、U或AAAA，或其药学上可接受的组合物、盐、同位素类似物或前药。
[0031] 所述化合物提供了在化学治疗剂治疗期间改善的对CDK复制依赖性健康细胞的保护，部分是因为其(i)显示短暂、瞬时的G1停滞作用，且(ii)在化学治疗破坏作用停止后显示细胞快速同步再进入细胞周期。这些CDK4/6特异性的短暂、瞬时G1停滞化合物作为化学保护剂的使用因复制延迟而允许例如细胞谱系加速恢复、细胞毒性风险减小和/或化学治疗剂诱发的细胞死亡最小化。
[0032] 尽管有报导使用例如2BrIC和PD0332991等已知的CDK4/6抑制剂证明化学保护，但已发现这些抑制剂可能不是用于药理学静止(PQ)策略的最理想化合物。举例来说，体内2BrIC的使用受其有限的生物利用率限制，且尽管PD0332991显示对CDK4/6的相对选择性，但化合物具有相对长效的细胞内作用(参见Roberts等人Multiple Roles of Cyclin-
Dependent Kinase 4/6Inhibitors in Cancer Therapy.JCNI 2012；104(6):476-487(图
2A))，延长G1停滞的瞬时性超过足够保护以防化学治疗剂治疗伤害可能所需的时间。此类长效作用延迟例如使受化学治疗剂不良影响或在自然寿命周期期间循环的血液细胞系复原所需的HSPC细胞谱系的增殖。在化学治疗剂治疗方案需要HSPC快速再进入细胞周期中，从而使受到化学治疗剂或急性HSPC G1停滞不良影响的红细胞、血小板和骨髓细胞(单核细胞和粒细胞)复原以限制骨髓抑制或血液毒性作用的受试者中，PD0332991提供的长效G1停滞可能限制其作为潜在化学保护剂的用途。此外，PD0332991作为以常规和重复时间间隔，依例如每隔几天重复的方案暴露于化学治疗剂的受试者中化学保护剂的用途受到限制，因为在需要使这些受试者的HSPC在受试者的下一化学治疗剂循环前再次停滞前其可能限制这些受试者的HSPC快速再进入细胞周期的能力。关于其它患病组织，例如肾细胞，由于肾毒性药剂，增殖的及时重新开始对于组织修复，例如肾管状上皮修复来说是关键的，因此，过度长期的PQ是不希望的。
[0033] 因此，在一个替代实施方案中，本发明包括向有需要的主体施用有效量的本文中描述的化合物，此类化合物显示提供改善的治疗作用的以下因素的一者或任何组合(单独或其任何组合，每一者视为特定和独立地描述)：i)其中相当大部分的CDK4/6复制依赖性健康细胞(例如至少80％或更大)在离人类中活性化合物的上次施用或例如使用以下实施例中描述的方案不到24小时、30小时或36小时内恢复至或接近治疗前基线细胞周期活性(即再进入细胞周期)；ii)其中相当大部分的健康细胞在离活性化合物上次施用不到24小时、30小时或36小时内同步再进入细胞周期；(iii)其中活性化合物的CDK4/6抑制作用的消散在离抑制剂的施用不到24小时、30小时或36小时内发生；(iv)其中活性化合物对CDK4和/或CDK6抑制的IC50比其对CDK2抑制的IC50浓度小超过1500倍；(v)其中相当大部分的健康细胞在离活性化合物的CDK4/6抑制作用的消散不到24小时、30小时或36小时内恢复至或接近治疗前基线细胞周期活性(即再进入细胞周期)；(vi)其中治疗前基线细胞周期活性(即再进入细胞周期)在离受试者血液中的CDK4/6抑制剂的浓度水平降到治疗有效浓度的时刻不到约24小时、约30小时或约36小时内；或(vii)其中相当大部分的健康细胞在离化学治疗剂的上次施用不到24小时、30小时或36小时内同步再进入细胞周期。
[0034] 本文中描述的化合物可以在用化学治疗剂治疗前，在用化学治疗剂治疗期间，在暴露于化学治疗剂后或其组合施用至受试者。本文中描述的化合物典型地以允许药物容易进入血流的方式，例如经由静脉内注射或舌下、大动脉内或其它有效的进入血流途径施用；然而，可以使用经口、局部、经皮、鼻内、肌肉内或通过吸入，例如通过溶液、悬浮液或乳液或其它所需的施用途径。在一个实施方案中，化合物在用化学治疗剂治疗前不到约24小时、20小时、16小时、12小时、8小时或4小时、2.5小时、2小时、1小时、1/2小时或更短时间施用至受试者。典型地，本文中描述的活性化合物在用化学治疗剂治疗前施用至受试者，使得化合物在用化学治疗剂治疗前或期间到达峰值血清水平。在一个实施方案中，活性化合物附随化学治疗剂暴露或紧跟其施用。必要时，活性化合物可以在化学治疗剂治疗期间多次施用以最大化抑制，尤其当化学治疗药物长时间施用或具有长的半衰期时。如果希望减轻与化学治疗剂暴露有关的健康细胞破坏，那么本文中描述的活性化合物可以在暴露于化学治疗剂后施用。在某些实施方案中，活性化合物在化学治疗剂暴露后长达约1/2小时、长达约1小时、长达约2小时、长达约4小时、长达约8小时、长达约10小时、长达约12小时、长达约14小时、长达约16小时或长达约20小时或更长时间施用。在一具体实施方案中，活性化合物在暴露于化学治疗剂后长达约12小时与20小时之间施用。
[0035] 与例如CDK2等其它CKD相比，本文中描述的CDK4/6抑制剂展示对抑制CDK4和/或CDK6的显著选择性。举例来说，本发明描述的CDK4/6抑制剂提供对受试者的例如HSPC或肾上皮细胞等CDK4/6复制依赖性健康细胞的剂量依赖性G1停滞作用，且本文中提供的方法足以在化学治疗剂暴露期间，例如在DNA破坏化学治疗剂能够在受试者中的CDk4/6复制依赖性健康细胞上进行DNA破坏作用的时间段期间提供对靶向的CDk4/6复制依赖性健康细胞的化学保护，同时与例如PD0332991相比，由于本文中描述的化合物提供的时间限制性CDK4/6抑制作用，而允许在化学治疗剂消散后不久使这些细胞同步和快速再进入细胞周期。同样地，适用于本发明的CDK4/6抑制剂提供对已暴露于毒性水平的化学治疗剂，例如偶然过度剂量的CDK4/6复制依赖性健康细胞剂量依赖性的减轻作用，允许修复与化学治疗剂暴露有关的DNA破坏和与例如PD0332991相比，在CDK4/6抑制作用消散后同步快速地再进入细胞周期。在一个实施方案中，本文中描述的CDK4/6抑制剂的使用对受试者的CDK4/6复制依赖性健康细胞引起G1停滞作用，在CDK4/6抑制剂施用后消散，使得受试者的健康细胞在施用不到约24小时、30小时、36小时或40小时内恢复至或接近其施用前基线细胞周期活性。在一个实施方案中，G1停滞作用消散，使得受试者的CDK4/6复制依赖性健康细胞在不到约24小时、30小时、36小时或40小时内恢复至其施用前基线细胞周期活性。
[0036] 在一个实施方案中，本文中描述的CDK4/6抑制剂的使用引起G1停滞作用消散，使得受试者的CDk4/6依赖性健康细胞在化学治疗剂作用不到约24小时、30小时、36小时或40小时内恢复至或接近其施用前基线细胞周期活性。在一个实施方案中，G1停滞作用消散使得受试者的CDk4/6复制依赖性细胞在化学治疗剂施用不到约24小时、30小时、36小时或40小时、或施用约48小时内恢复至其施用前基线细胞周期活性。在一个实施方案中，CDK4/6复制依赖性健康细胞是HSPC。在一个实施方案中，CDK4/6复制依赖性健康细胞是肾上皮细胞。
[0037] 在一个实施方案中，本文中描述的CDK4/6抑制剂的使用引起G1停滞作用消散，使得受试者的CDk4/6复制依赖性健康细胞在离受试者血液中的CDK4/6抑制剂的浓度水平降到治疗有效浓度的时刻不到约24小时、30小时、36小时、40小时内或不到约48小时内恢复至或接近其施用前基线细胞周期活性。
[0038] 在一个实施方案中，本文中描述的CDK4/6抑制剂用以在暴露于化学治疗剂，例如DNA破坏化学治疗剂期间保护肾上皮细胞，其中肾上皮细胞被瞬时阻止响应于化学治疗剂诱发的肾管状上皮破坏而进入S期，离受试者血液中的CDK4/6抑制剂的浓度水平降到治疗有效浓度的时刻、离化学治疗剂作用的停止或离CDK4/6施用的施用不超过约24小时、约30小时、约36小时、约40小时或约48小时。
[0039] 适用于所述方法的CDK4/6抑制剂的中止效应可以是同步的，那就是说，在G1停滞作用消散时，暴露于本文中描述的CDK4/6抑制剂的CDK4/6复制依赖性健康细胞以类似时间安排的方式再进入细胞周期。再进入细胞周期的CDK4/6复制依赖性健康细胞这样做，使得G1和S细胞的正常比例在离受试者血液中的CDK4/6抑制剂的浓度水平降到治疗有效浓度的时刻不到约24小时、30小时、36小时、40小时或约48小时快速有效地重建。
[0040] 此有利地使得与例如PD0332991等不同步CDK4/6抑制剂相比，较大数目的健康细胞在G1停滞消散时开始复制。
[0041] 另外，在使用本文中描述的CDK4/6抑制剂进行G1停滞后同步再进入细胞周期提供了定时造血生长因子的施用以帮助再造造血细胞系，从而最大化生长因子作用的能力。因而，在一个实施方案中，本文中描述的化合物或方法的使用与造血生长因子的使用组合，所述造血生长因子包括(但不限于)粒细胞群落刺激因子(G-CSF)、粒细胞巨噬细胞群落刺激因子(GM-CSF)、促血小板生成素、介白素(IL)-12、青灰因子和促红细胞生成素(EPO)或其衍生物。在一个实施方案中，CDK4/6抑制剂在施用造血生长因子前施用。在一个实施方案中，造血生长因子施用时间经安排，使得CDK4/6抑制剂对HSPC的作用已经消散。
[0042] 在一个方面，本文中描述的CDK4/6抑制剂的使用允许化学保护方案在许多抗癌治疗中常见的标准化学治疗剂给药时程或方案期间使用。举例来说，可以施用CDK4/6抑制剂，以便CDK4/6复制依赖性健康细胞在化学治疗剂暴露期间停滞在G1，其中由于化合物的G1停滞作用快速消散，所以很多健康细胞在化学治疗剂暴露后不久，例如在不到约24、30、40或48小时内再进入细胞周期且能够复制，并继续复制，直到在下一化学治疗剂治疗前施用CDK4/6抑制剂。在一个实施方案中，施用CDK4/6抑制剂以允许CDK4/6复制依赖性健康细胞在G1停滞与再进入细胞周期之间循环，从而适应重复给药的化学治疗剂治疗方案，例如包括(但不限于)其中如下施用化学治疗剂的治疗方案：每21天，在第1-3天；每28天，在第1-3天；每3周，在第1天；每28天，在第1天、第8天和第15天；每28天，在第1天和第8天；每21天，在第1天和第8天；每21天，在第1天-第5天；一周1天，历时6-8周；在第1天、第22天和第43天；每周，第1天和第2天；第1-4天和第22天-第25天；第1-4天；第22天-第25天；和第43-46天；和类似类型方案，其中CDK4/6复制依赖性细胞在化学治疗剂暴露期间停滞在G1且在化学治疗剂暴露之间显著部分的细胞再进入细胞周期。在一个实施方案中，可以施用CDK4/6抑制剂，使得受试者的CDK4/6复制依赖性细胞在每日化学治疗剂暴露，例如连续多日化学治疗方案期间停滞在G1，但显著部分的CDK4/6复制依赖性细胞在每日治疗之间再进入细胞周期和复制。在一个实施方案中，可以施用CDK4/6抑制剂，使得受试者的CDK4/6复制依赖性细胞在每日化学治疗剂暴露，例如连续多日方案期间停滞在G1，但显著部分的健康细胞在下一化学治疗剂暴露前在间歇期期间再进入细胞周期和复制。在一个实施方案中，施用CDK4/6抑制剂，使得在每日化学治疗剂治疗方案，例如连续多日治疗方案期间提供受试者的CDK4/6复制依赖性细胞的G1停滞，且在多日方案结束后不久停滞的细胞能够再进入细胞周期。在一个实施方案中，癌症是小细胞肺癌且CDK4/6抑制剂在21日治疗周期期间在第1天、第2天和第3天施用，其中施用的DNA破坏剂选自卡铂(carboplatin)、顺铂(cisplatin)和依托泊苷(etoposide)或其组合。
[0043] 根据本发明治疗的受试者可以进行用于治疗例如癌症等增生性病症或疾病的治疗性化学疗法。癌症特征可为以下之一或组合：细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)的活性增加；细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)的活性增加；成视网膜细胞瘤肿瘤抑制蛋白(Rb)丧失、不足或不存在(Rb空白)；高水平MYC表现；细胞周期蛋白E1、E2增加；和细胞周期蛋白A增加。癌症特征可为成视网膜细胞瘤肿瘤抑制蛋白或成视网膜细胞瘤家族成员蛋白(例如(但不限于)p107和p130)的表达减少。在一个实施方案中，受试者进行化学治疗剂治疗以治疗Rb空白的或Rb缺乏的癌症，包括(但不限于)小细胞肺癌、三重阴性乳癌、HPV阳性头颈癌、成视网膜细胞瘤、Rb阴性膀胱癌、Rb阴性前列腺癌、骨肉瘤或宫颈癌。在一个实施方案中，癌症是CDK4/6非依赖性癌症。抑制剂化合物的施用可以允许与在缺乏CDK4/6抑制剂化合物施用下将安全使用的标准剂量比更高的剂量的化学治疗剂用于治疗疾病。
[0044] 包括人类在内的主体或受试者可以进行非恶性增生性病症或其它异常细胞增殖(例如肿瘤、多发性硬化、狼疮或关节炎)的化学治疗剂治疗。
[0045] 经保护的HSPC包括造血干细胞，例如长期造血干细胞(LT-HSC)和短期造血干细胞(ST-HSC)：和造血祖细胞，包括多潜能祖细胞(MPP)、共同脊髓祖细胞(CMP)、共同淋巴祖细胞(CLP)、粒细胞-单核细胞祖细胞(GMP)和巨核细胞-红细胞祖细胞(MEP)。施用抑制剂化合物提供受试者中造血干细胞和/或造血祖细胞的短期瞬时的药理学静止。
[0046] 如本文中描述的CDK4/6抑制剂的施用可以引起与在缺乏CDK4/6抑制剂施用下在用化学治疗剂治疗后典型预期、常见或与其有关的情况相比，贫血减少、淋巴球减少症减少、血小板减少症减少或中性白细胞减少。如本文中描述的CDK4/6抑制剂的使用使得在CDK4/6抑制剂使用停止后自与长期使用CDK4/6抑制剂有关的骨髓抑制，例如骨髓抑制、贫血、淋巴球减少症、血小板减少症或中性白细胞减少的恢复更快。在一些实施方案中，如本文中描述的CDK4/6抑制剂的使用使得与长期使用CDK4/6抑制剂有关的骨髓抑制，例如骨髓抑制、贫血、淋巴球减少症、血小板减少症或中性白细胞减少减少或有限。
[0047] 在一个替代方面，本文中描述的CDK4/6抑制剂可以与治疗Rb阴性癌症或其它Rb阴性异常增殖的化学治疗剂组合用于其抗癌、抗肿瘤或抗增生作用。在一个实施方案中，本文中描述的CDK4/6抑制剂提供与化学治疗剂的抗癌或抗增生活性的累加效应或协同效应。可以与本文中描述的CDK4/6抑制剂组合的化学治疗剂是有效或适用于治疗RB空白癌症或异常细胞增殖的任何化学治疗剂。在一个具体实施方案中，本文中描述的化合物的使用在治疗方案内与至少一种其它化学治疗剂组合，且可以是不依赖于增殖或进展通过细胞周期以达到抗增生活性的化合物。此类药剂可以包括(但不限于)他莫昔芬(tamoxifen)、咪达唑仑(midazolam)、来曲唑(letrozole)、硼替佐米(bortezomib)、阿那曲唑(anastrozole)、戈舍瑞林(goserelin)、mTOR抑制剂、PI3激酶抑制剂、双重mTOR-PI3K抑制剂、MEK抑制剂、RAS抑制剂、ALK抑制剂、HSP抑制剂(例如HSP70和HSP 90抑制剂或其组合)、BCL-2抑制剂、细胞凋亡诱发化合物、AKT抑制剂、PD-1抑制剂或FLT-3抑制剂或其组合。mTOR抑制剂的实例包括(但不限于)雷帕霉素(rapamycin)和其类似物、依维莫司(everolimus)(Afinitor)、坦西莫司(temsirolimus)、雷达莫司(ridaforolimus)、西罗莫司(sirolimus)和德佛莫司(deforolimus)。P13激酶抑制剂的实例包括(但不限于)渥曼青霉素(Wortmannin)、脱甲绿胶酶素(demethoxyviridin)、哌立福新(perifosine)、依德西伯(idelalisib)、PX-866、IPI-145(Infinity)、BAY80-6946、BEZ235、RP6503、TGR 1202(RP5264)、MLN1117(INK1117)、皮提西伯(Pictilisib)、布帕西伯(Buparlisib)、SAR245408(XL147)、SAR245409(XL765)、帕洛米德(Palomid)529、ZSTK474、PWT33597、RP6530、CUDC-907和AEZS-136。MEK抑制剂的实例包括(但不限于)曲美替尼(Tametinib)、司美替尼(Selumetinib)、MEK162、GDC-0973(XL518)和PD0325901。RAS抑制剂的实例包括(但不限于)瑞赖新(Reolysin)和siG12D 
LODER。ALK抑制剂的实例包括(但不限于)克唑替尼(Crizotinib)、AP26113和LDK378。HSP抑制剂包括(但不限于)格尔德霉素(Geldanamycin)或17-N-烯丙基氨基-17-脱氧基格尔德霉素(17AAG)和根赤壳菌素(Radicicol)。与化学治疗剂组合的CDK4/6抑制剂选自包含上述式I、式II、式III、式IV或式V的化合物或组合物，或其药学上可接受的组合物、盐、同位素类似物或前药。在一个实施方案中，化合物可以选自下表1中的化合物，或其药学上可接受的组合物、盐、同位素类似物或前药。在一个实施方案中，化合物选自化合物T、Q、GG、U或AAAA，或其药学上可接受的组合物、盐、同位素类似物或前药。
[0048] 在某些实施方案中，本文中描述的化合物在用另一化学治疗剂治疗前，在用另一化学治疗剂治疗期间，在施用另一化学治疗剂后或其组合施用受试者。在一个实施方案中，CDK4/6抑制剂选自表1中描述的化合物。在一个实施方案中，化合物选自化合物T、Q、GG、U或AAAA。
[0049] 在一些实施方案中，受试者或主体是哺乳动物，包括人类。
[0050] 总之，本发明包括以下特征：
[0051] A.如本文中描述的式I、II、III、IV和V的化合物，和其药学上可接受的组合物、盐、同位素类似物或前药，其用于在化学治疗剂暴露期间例如HSPC和/或肾上皮细胞等CDK4/6复制依赖性健康细胞的化学保护。在一个实施方案中，化合物选自表1中描述的化合物或其药学上可接受的组合物、盐、同位素类似物或前药。在一个实施方案中，化合物选自化合物T、Q、GG、U或AAAA，或其药学上可接受的组合物、盐、同位素类似物或前药；
[0052] B.如本文中描述的式I、II、III、IV和V的化合物，和其药学上可接受的组合物、盐、同位素类似物和前药，其用于在用于治疗增生性病症的化学治疗方案期间例如HSPC和/或肾上皮细胞等CDK4/6复制依赖性健康细胞的化学保护。在一个实施方案中，化合物选自表1中描述的化合物或其药学上可接受的组合物、盐、同位素类似物或前药。在一个实施方案中，化合物选自化合物T、Q、GG、U或AAAA，或其药学上可接受的组合物、盐、同位素类似物或前药；
[0053] C.如本文中描述的式I、II、III、IV和V的化合物，和其药学上可接受的组合物、盐、同位素类似物和前药，其用于在用于治疗癌症的化学治疗方案期间例如HSPC和/或肾上皮细胞等CDK4/6复制依赖性健康细胞的化学保护。在一个实施方案中，化合物选自表1中描述的化合物或其药学上可接受的组合物、盐、同位素类似物或前药。在一个实施方案中，化合物选自化合物T、Q、GG、U或AAAA，或其药学上可接受的组合物、盐、同位素类似物或前药；
[0054] D.如本文中描述的式I、II、III、IV和V的化合物，和其药学上可接受的组合物、盐、同位素类似物和前药，其与造血生长因子组合使用于将暴露于、正暴露于或已暴露于化学治疗剂的受试者中。在一个实施方案中，化合物选自表1中描述的化合物或其药学上可接受的组合物、盐、同位素类似物或前药。在一个实施方案中，化合物选自化合物T、Q、GG、U或AAAA，或其药学上可接受的组合物、盐、同位素类似物或前药；
[0055] E.如本文中描述的式I、II、III、IV和V的化合物，和其药学上可接受的组合物、盐、同位素类似物和前药的用途，其用于制造用于例如HSPC和/或肾上皮细胞等CDK4/6复制依赖性健康细胞的化学保护的药剂。在一个实施方案中，化合物选自表1中描述的化合物或其药学上可接受的组合物、盐、同位素类似物或前药。在一个实施方案中，化合物选自化合物T、Q、GG、U或AAAA，或其药学上可接受的组合物、盐、同位素类似物或前药；
[0056] F.如本文中描述的式I、II、III、IV和V的化合物，和其药学上可接受的组合物、盐、同位素类似物和前药的用途，其用于制造用于减轻例如HSPC和/或肾上皮细胞等已经暴露于化学治疗剂暴露的CDK4/6复制依赖性健康细胞的DNA破坏的药剂。在一个实施方案中，化合物选自表1中描述的化合物或其药学上可接受的组合物、盐、同位素类似物或前药。在一个实施方案中，化合物选自化合物T、Q、GG、U或AAAA，或其药学上可接受的组合物、盐、同位素类似物或前药；
[0057] G.一种药物制剂，其包含有效治疗受试者量的如本文中描述的式I、II、III、IV和V的化合物，或其药学上可接受的组合物、盐和前药，其用于健康细胞的化学保护。在一个实施方案中，化合物选自表1中描述的化合物或其药学上可接受的组合物、盐、同位素类似物或前药。在一个实施方案中，化合物选自化合物T、Q、GG、U或AAAA，或其药学上可接受的组合物、盐、同位素类似物或前药；
[0058] H.一种用于制备含有有效量的如本文中描述的式I、II、III、IV和V的化合物的治疗产品的方法。在一个实施方案中，化合物选自表1中描述的化合物或其药学上可接受的组合物、盐、同位素类似物或前药。在一个实施方案中，化合物选自化合物T、Q、GG、U或AAAA，或其药学上可接受的组合物、盐、同位素类似物或前药；
[0059] I.一种用于制造式I、II、III、IV和V的药剂的方法，所述药剂意图用于例如HSPC和/或肾上皮细胞等CDK4/6复制依赖性健康细胞的化学保护中的治疗用途中。在一个实施方案中，药剂选自表1中描述的化合物或其药学上可接受的组合物、盐、同位素类似物或前药。在一个实施方案中，药剂选自化合物T、Q、GG、U或AAAA，或其药学上可接受的组合物、盐、同位素类似物或前药；
[0060] J.一种用于制造式I、II、III、IV和V的药剂的方法，所述药剂意图用于减轻例如HSPC和/或肾上皮细胞等已经暴露于化学治疗剂的CDK4/6复制依赖性健康细胞的DNA破坏的治疗用途中。在一个实施方案中，药剂选自表1中描述的化合物或其药学上可接受的组合物、盐、同位素类似物或前药。在一个实施方案中，药剂选自化合物T、Q、GG、U或AAAA，或其药学上可接受的组合物、盐、同位素类似物或前药；
[0061] K.一种抑制Rb阴性癌症或增生性病状发展的方法，其通过施用式I、II、III、IV或V的化合物或其药学上可接受的组合物、盐、同位素类似物或前药；与化学治疗剂组合，提供与化学治疗剂的累加或协同效应。在一个实施方案中，化合物选自表1中描述的化合物或其药学上可接受的组合物、盐、同位素类似物或前药。在一个实施方案中，化合物选自化合物T、Q、GG、U或AAAA，或其药学上可接受的组合物、盐、同位素类似物或前药。在一个实施方案中，CDK4/6抑制剂与选自以下的化学治疗剂组合：MEK抑制剂、PI3激酶δ抑制剂、BCL-2抑制剂、AKT抑制剂、细胞凋亡诱发化合物、AKT抑制剂、PD-1抑制剂、FLT-3抑制剂、HSP90抑制剂或mTOR抑制剂或其组合。
[0062] 附图简述
[0063] 图1是展示健康造血干细胞(HSC)和健康造血祖细胞的分层增殖和在增殖后分化增加的造血作用的示意图。
[0064] 图2A是处于G2-M期(空心圆)、S期(三角形)、G0-G1期(正方形)、<2N(菱形)中的细胞的百分比对比化合物T在tHS68细胞中的可变浓度(nM)的图。将Cdk4/6依赖性细胞系(tHS68)用指示浓度的化合物T处理24小时。化合物T处理后，收获细胞并分析细胞周期分布。如实施例152中所描述，tHS68细胞展示彻底G1停滞，伴随有S期的细胞数目对应下降。图
2B是tHS68细胞(CDK4/6依赖性细胞系)数目对比细胞的DNA含量(如通过碘化丙锭测量)的图。将细胞用DMSO处理24小时，收获并分析细胞周期分布。图2C是WM2664细胞(CDK4/6依赖性细胞系)数目对比细胞的DNA含量(如通过碘化丙锭测量)的图。将细胞用DMSO处理24小时，收获并分析细胞周期分布。图2D是A2058细胞(CDK4/6非依赖性细胞系)数目对比细胞的DNA含量(如通过碘化丙锭测量)的图。将细胞用DMSO处理24小时，收获并分析细胞周期分布。图2E是在用化合物T处理后tHS68细胞(CDK4/6依赖性细胞系)数目对比细胞的DNA含量(如通过碘化丙锭测量)的图。将细胞用化合物T(300nM)处理24小时，收获并分析细胞周期分布。如实施例152中所描述，用化合物T处理tHS68细胞引起S期峰损失(通过箭头指示)。图
2F是在用化合物T处理后WM2664细胞(CDK4/6依赖性细胞系)数目对比细胞的DNA含量(如通过碘化丙锭测量)的图。将细胞用化合物T(300nM)处理24小时，收获并分析细胞周期分布。
如实施例152中所描述，用化合物T处理WM2664细胞引起S期峰损失(通过箭头指示)。图2G是在用化合物T处理后A2058细胞(CDK4/6非依赖性细胞系)数目对比细胞的DNA含量(如通过碘化丙锭测量)的图。将细胞用化合物T(300nM)处理24小时，收获并分析细胞周期分布。如实施例152中所描述，用化合物T处理A2058细胞未引起S期峰损失(通过箭头指示)。
[0065] 图3是展示用化合物T处理后在Ser807/811和Ser780Rb的磷酸化水平的蛋白质印迹。将Cdk4/6依赖性(tHS68或WM2664)和Cdk4/6非依赖性细胞系(A2058)用化合物T(300nM)处理所指示的时间(0、4、8、16和24小时)。MAPK水平作为蛋白水平的对照显示。处理后，收获细胞并通过蛋白质印迹分析来分析Rb磷酸化。如实施例153中所描述，化合物T处理引起Cdk4/6依赖性细胞系(tHS68和WM2664)中处理后Rb磷酸化减少，而Cdk4/6非依赖性细胞系(A2058)中则没有。
[0066] 图4A是Rb阳性细胞系(WM2664)中或Rb阴性小细胞肺癌细胞系(H345、H69、H209、SHP-77、NCI417或H82)中在用DMSO(深色条)或PD0332991(浅色条)处理后S期细胞的百分比的图。将细胞用PD0332991(300nM)或DMSO对照处理24小时。通过EdU掺入和流动式细胞测量术测量细胞增殖。数据表示每次细胞处理100,000个细胞事件。如实施例154中所描述，RB空白SCLC细胞系抵抗Cdk4/6抑制，因为在用PD0332991处理时未看到S期细胞百分比的变化。
[0067] 图4B是Rb阳性细胞系(tHS68)中或Rb阴性小细胞肺癌细胞系(H345、H69、SHP-77或H82)中在用DMSO(深色条)或化合物GG(较浅色条)处理后S期细胞的百分比的图。将细胞用化合物GG(300nM或1000nM)或DMSO对照处理24小时。通过EdU掺入和流动式细胞测量术测量细胞增殖。数据表示每次细胞处理100,000个细胞事件。如实施例154中所描述，RB空白SCLC细胞系抵抗Cdk4/6抑制，因为在用化合物GG处理时未看到S期细胞百分比的变化。
[0068] 图4C是Rb阳性细胞系(tHS68)中或Rb阴性小细胞肺癌细胞系(H345、H209或SHP-77)中在用DMSO(深色条)或化合物T(较浅色条)处理后S期细胞的百分比的图。将细胞用化合物T(300nM或1000nM)或DMSO对照处理24小时。通过EdU掺入和流动式细胞测量术测量细胞增殖。数据表示每次细胞处理100,000个细胞事件。如实施例154中所描述，RB空白SCLC细胞系抵抗Cdk4/6抑制，因为在用化合物T处理时未看到S期细胞百分比的变化。
[0069] 图5是EdU掺入对比PD0332991施用健康小鼠HSPC和健康脊髓祖细胞后的时间(小时)的图。通过口腔管饲法施用PD0332991(150mg/kg)以评估瞬时CDK4/6抑制对骨髓停滞的暂时作用，如Roberts等人Multiple Roles of Cyclin-Dependent Kinase 4/6 Inhibitors in Cancer Therapy.JCNI 2012；104(6):476-487(图2A)中报导。如实施例156中所描述，单一口服剂量的PD0332991引起HSPC EdU掺入(圆形；LKS+)和脊髓祖细胞EdU掺入(正方形；LKS-)持久减少超过36小时。
[0070] 图6A是在化合物T、Q或GG以150mg/kg进行口腔管饲法后，施用后12或者24小时EdU掺入HSPC(与未处理的对照小鼠相比)的比率的图。图6B是用化合物T处理的小鼠在12或者24小时的EdU阳性HSPC细胞的百分比的图。通过口腔管饲法，给予小鼠50mg/kg(三角形)、
100mg/kg(正方形)或150mg/kg(倒三角形)。图6C是用化合物T(150mg/kg，通过口腔管饲法)处理的小鼠在12、24、36和48小时的EdU阳性HSPC细胞百分比的图。如实施例157中所描述，化合物T和GG证明在12小时EdU掺入减少，并到24小时，开始恢复至细胞分裂的正常水平。
[0071] 图7是用PD0332991(三角形)或化合物T(倒三角形)处理的小鼠的EdU阳性HSPC细胞百分比对比化合物施用后时间(小时)的图。两种化合物都通过口腔管饲法施用150mg/kg并在12、24、36或48小时测量EdU阳性HSPC细胞的百分比。如实施例158中所描述，单一口服剂量的PD0332991引起HSPC增殖持久减少超过36小时。相比之下，单一口服剂量的化合物T引起12小时HSPC增殖的初始减少，但到化合物T给药后24小时，HSPC增殖重新开始。
[0072] 图8A是在人类成纤维细胞(Rb阳性)细胞中细胞周期的G0-G1期中的细胞百分比对比化合物洗脱后时间(小时)的图。图8B是在人类成纤维细胞(Rb阳性)细胞中细胞周期的S期中的细胞百分比对比化合物洗脱后时间(小时)的图。图8C是在人类肾近端小管上皮(Rb阳性)细胞中细胞周期的G0-G1期中的细胞百分比对比化合物洗脱后时间(小时)的图。图8D是在人类肾近端小管上皮(Rb阳性)细胞中细胞周期的S期中的细胞百分比对比化合物洗脱后时间(小时)的图。这些细胞洗脱实验证明本发明的抑制剂化合物在不同的细胞类型中具有短暂瞬时的G1停滞作用。在24、36、40和48小时确定洗脱化合物后对细胞周期的作用。如实施例159中所描述，结果展示与用化合物T(正方形)、化合物Q(三角形)、化合物GG(X)或化合物U(具有十字形的X)处理的细胞相比，用PD0332991(圆形)处理的细胞到达细胞分裂的基线水平花费显著更长时间(参见仅仅用DMSO(菱形)处理的细胞)。
[0073] 图9A是血浆药物浓度(ng/ml)对比化合物T施用后时间(小时)的图。图9B是血浆药物浓度(ng/ml)对比化合物Q施用后时间(小时)的图。图9C是血浆药物浓度(ng/ml)对比化合物GG施用后时间(小时)的图。图9D是血浆药物浓度(ng/ml)对比化合物U施用后时间(小时)的图。化合物通过口腔管饲法以30mg/kg(菱形)或通过静脉内注射以10mg/kg(正方形)给予小鼠。在给药后0、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0和8.0小时取血液样品并通过HPLC测定血浆浓度。
[0074] 图10提供人类和动物(猴、狗、大鼠和小鼠)肝微粒体中化合物T和PD0332991的半衰期(分钟)。如实施例158中所描述，在每一测试物种中PD0332991具有超过60分钟的半衰期。在每一试验物种中化合物T的半衰期比PD0332991短。
[0075] 图11A是用5uM依托泊苷处理的细胞对比用指示量的化合物T处理的细胞存活率的图。在处理后24小时测定存活细胞。如实施例162中所描述，展示化合物T保护tHS68细胞免于化学治疗剂诱发的细胞死亡。图11B是用100μM卡铂处理的细胞对比用指示量的化合物T处理的细胞存活率的图。在处理后24小时测定存活细胞。如实施例162中所描述，化合物T保护tHS68细胞免受化学治疗剂诱发的细胞死亡。
[0076] 图12A是用化合物T(100nM、300nM或1000nM)和化学疗法(依托泊苷、多柔比星(doxorubicin)、卡铂、紫杉醇(paclitaxel)或喜树碱(camptothecin))处理的HS68细胞中相对H2AX活性对比可变浓度的化合物T(nM)的图。将Cdk4/6依赖性HS68细胞用指示剂量的化合物T和化学疗法处理。测量H2AX焦点形成以评估化学疗法诱发的DNA破坏。如实施例162中所描述，用化合物T和各种化学治疗剂化合物处理的细胞免于化学疗法诱发的DNA破坏。
[0077] 图12B是用化合物T(100nM、300nM或1000nM)和化学疗法(依托泊苷、多柔比星、卡铂、紫杉醇或喜树碱)处理的HS68细胞中相对卡斯蛋白酶3/7活性对比可变浓度的化合物T(nM)的图。将Cdk4/6依赖性HS68细胞用指示剂量的化合物T和化学疗法处理。测量卡斯蛋白酶3/7活性以评估化学疗法诱发的细胞凋亡。如实施例162中所描述，用化合物T和各种化学治疗剂化合物处理的细胞免于化学疗法诱发的卡斯蛋白酶3/7活化。
[0078] 图13是展示增殖(如通过12小时后EdU掺入测量)对比细胞DNA含量(如通过DAPI染色测量)的一系列等高线图。代表性等高线图展示如通过不处理、仅仅EdU处理或EdU加化合物T处理12小时后的EdU掺入所测量，WBM(全骨髓；顶部)和HSPC(造血干细胞和祖细胞；LSK；底部)中的增殖。如实施例163中所描述，化合物T减少全骨髓和造血干细胞和/或祖细胞的增殖。
[0079] 图14A是用化合物T(空心条)处理或未经处理(实心条)的全骨髓(WBM)和各种造血干细胞和祖细胞(Lin-、LSK、HSC、MPP或CD28+LSK细胞谱系)中EdU阳性细胞的百分比的图。如实施例163中所描述，用化合物T处理抑制测试的WBM和所有HSPC谱系的增殖。*P<0.05，**P<0.01。
[0080] 图14B是用化合物T(空心条)处理或未经处理(实心条)的全骨髓(WBM)和各种谱系限制祖细胞(MP、GMP、MEP、CMP或CLP细胞谱系)中EdU阳性细胞的百分比的图。如实施例163中所描述，用化合物T处理抑制测试的WBM和所有谱系限制祖细胞的增殖。*P<0.05，**P<0.01。
[0081] 图15A是用化合物T(空心条)处理或未经处理(实心条)的T细胞群体(总、CD4+、CD8+、DP、DN、DN1、DN2、DN3或DN4)中EdU阳性细胞的百分比的图。如实施例164中所描述，用化合物T处理抑制CD4+、CD8+、DP、DN、DN1、DN2、DN3或DN4T细胞群体的增殖。*P<0.05，**P<0.01。
[0082] 图15B是用化合物T(空心条)处理或未经处理(实心条)的B细胞群体(B220+、B220+sIgM+、Pre-pro-B sIgM-、Pro-B、Pre-B)中EdU阳性细胞的百分比的图。如实施例164中所描述，用化合物T处理抑制各种B细胞群体(B220+、B220+sIgM+、Pre-pro-B sIgM-、Pro-B和Pre-B)的增殖。*P<0.05，**P<0.01。
[0083] 图15C是用化合物T(空心条)处理或未经处理(实心条)的骨髓细胞群体(Mac1+Gr1+、Ter119+或CD41+)中EdU阳性细胞的百分比的图。如实施例164中所描述，用化合物T处理抑制Mac1+Gr1+、Ter119+或CD41+骨髓细胞群体的增殖。*P<0.05，**P<0.01。
[0084] 图16展示骨髓中化合物GG的药效学评估。为评估骨髓中化合物GG的瞬时CDK4/6抑制对卡铂诱发的细胞毒性的作用，将FVB/n小鼠(每组n＝3)用媒介物对照、90mg/kg卡铂腹膜内注射或150mg/kg化合物GG口腔管饲法加90mg/kg卡铂腹膜内注射处理。处理后24小时，收获骨髓并通过如早先说明的EdU掺入测量循环骨髓祖细胞的百分比。
[0085] 图17A是施用5-氟尿嘧啶(5FU)(三角形)、5FU加化合物T(正方形)或未处理的对照(圆形)后全血细胞计数对比时间(天)的图。在通过腹膜内注射施用5-氟尿嘧啶(5FU)150mg/kg之前三十分钟，通过口腔管饲法将FVB野生型小鼠用化合物T(150mg/kg)或媒介物对照处理。在第六天开始，每两天测量完全血细胞计数。如实施例166中所描述，当用化合物T预处理时，全血细胞更迅速从化学疗法(5FU)恢复。图17B是施用5-氟尿嘧啶(5FU)(三角形)、5FU加化合物T(正方形)或未处理的对照(圆形)后嗜中性细胞计数对比时间(天)的图。
实验如图17A中所描述进行。如实施例166中所描述，当用化合物T预处理时，嗜中性细胞更迅速从化学疗法(5FU)恢复。图17C是施用5-氟尿嘧啶(5FU)(三角形)、5FU加化合物T(正方形)或未处理的对照(圆形)后淋巴细胞计数对比时间(天)的图。实验如图17A中所描述进行。如实施例166中所描述，当用化合物T预处理时，淋巴细胞更迅速从化学疗法(5FU)恢复。
图17D是施用5-氟尿嘧啶(5FU)(三角形)、5FU加化合物T(正方形)或未处理的对照(圆形)后血小板细胞计数对比时间(天)的图。实验如图17A中所描述进行。如实施例166中所描述，当用化合物T预处理时，血小板细胞更迅速从化学疗法(5FU)恢复。图17E是施用5-氟尿嘧啶(5FU)(三角形)、5FU加化合物T(正方形)或未处理的对照(圆形)后红血球细胞计数对比时间(天)的图。实验如图17A中所描述进行。如实施例166中所描述，当用化合物T预处理时，红血球细胞更迅速从化学疗法(5FU)恢复。图17F是施用5-氟尿嘧啶(5FU)(三角形)、5FU加化合物T(正方形)或未处理的对照(圆形)后血细胞比容(％)对比时间(天)的图。实验如图17A中所描述进行。如实施例166中所描述，当用化合物T预处理时，血细胞比容百分比更迅速从化学疗法(5FU)恢复。
[0086] 图18A是施用5-氟尿嘧啶(5FU)、5FU加化合物T或未处理的对照后14天全血细胞计数的图。在通过腹膜内注射施用5-氟尿嘧啶(5FU)150mg/kg之前三十分钟，通过口腔管饲法将FVB野生型小鼠用化合物T(150mg/kg)或媒介物对照处理。在第14天测量完全血细胞计数。方框表示5％-95％分布，触须线表示最小值和最大值，且中间条表示中位数。进行史都登氏t检验(Student’s t test)以计算双面P值。如实施例166中所描述，当用化合物T预处理时，全血细胞更迅速从化学疗法(5FU)恢复。图18B是施用5-氟尿嘧啶(5FU)、5FU加化合物T或未处理的对照后14天嗜中性细胞计数的图。实验如图18A中所描述进行。如实施例166中所描述，当用化合物T预处理时，嗜中性细胞更迅速从化学疗法(5FU)恢复。图18C是施用5-氟尿嘧啶(5FU)、5FU加化合物T或未处理的对照后14天淋巴细胞计数的图。实验如图18A中所描述进行。如实施例166中所描述，当用化合物T预处理时，淋巴细胞更迅速从化学疗法(5FU)恢复。图18D是施用5-氟尿嘧啶(5FU)、5FU加化合物T或未处理的对照后14天红血球细胞计数的图。实验如图18A中所描述进行。如实施例166中所描述，当用化合物T预处理时，红血球细胞更迅速从化学疗法(5FU)恢复。图18E是施用5-氟尿嘧啶(5FU)、5FU加化合物T或未处理的对照后14天血小板细胞计数的图。实验如图18A中所描述进行。如实施例166中所描述，当用化合物T预处理时，血小板细胞更迅速从化学疗法(5FU)恢复。
[0087] 图19A是在循环3第10天(第52天)未处理小鼠(圆形)、5-氟尿嘧啶(5FU)加化合物T处理的小鼠(正方形)或5-FU处理的小鼠(三角形)中全血细胞(1000个细胞/微升)的图。在通过腹膜内注射施用5-氟尿嘧啶(5FU)150mg/kg之前三十分钟，通过口腔管饲法将FVB野生型小鼠用化合物T(150mg/kg)或媒介物对照处理。在21天循环的第1天，小鼠接收3个循环的化合物T或媒介物对照+5FU。在第二次给药后第10天(第一次给药后第52天(循环3第10天))测量完全血细胞计数。如实施例167中所描述，当用若干循环的化合物T处理时，全血细胞展示从化学疗法(5FU)的恢复得到改善。图19B是在循环3第10天(第52天)未处理小鼠(圆形)、5-氟尿嘧啶(5FU)加化合物T处理的小鼠(正方形)或5-FU处理的小鼠(三角形)中嗜中性细胞(1000个细胞/微升)的图。实验如图19A中所描述进行。如实施例167中所描述，当用若干循环的化合物T处理时，嗜中性细胞展示从化学疗法(5FU)的恢复得到改善。图19C是在循环
3第10天(第52天)未处理小鼠(圆形)、5-氟尿嘧啶(5FU)加化合物T处理的小鼠(正方形)或
5-FU处理的小鼠(三角形)中淋巴细胞(1000个细胞/微升)的图。实验如图19A中所描述进行。如实施例167中所描述，当用若干循环的化合物T处理时，淋巴细胞展示从化学疗法(5FU)的恢复得到改善。图19D是在循环3第10天(第52天)未处理小鼠(圆形)、5-氟尿嘧啶(5FU)加化合物T处理的小鼠(正方形)或5-FU处理的小鼠(三角形)中红血细胞(1000个细胞/微升)的图。实验如图19A中所描述进行。如实施例167中所描述，当用若干循环的化合物T处理时，红血细胞展示从化学疗法(5FU)的恢复得到改善。图19E是在循环3第10天(第52天)未处理小鼠(圆形)、5-氟尿嘧啶(5FU)加化合物T处理的小鼠(正方形)或5-FU处理的小鼠(三角形)中血小板细胞(1000个细胞/微升)的图。实验如图19A中所描述进行。如实施例
167中所描述，当用若干循环的化合物T处理时，血小板细胞展示从化学疗法(5FU)的恢复得到改善。
[0088] 图20是处于G2-M期(×)、S期(三角形)、G0-G1期(正方形)或<2N(菱形)中的细胞的百分比对比化合物T在人类肾近端小管细胞中的可变浓度(nM)的图。将细胞用指示浓度的化合物T处理24小时。化合物T处理后，收获细胞并分析细胞周期分布。如实施例168中所描述，人类肾近端小管细胞展示彻底G1停滞，伴随有S期细胞数目对应下降。
[0089] 图21是处于G2-M期(×)、S期(三角形)、G0-G1期(正方形)或<2N(菱形)中的细胞的百分比对比化合物T在用DMSO、依托泊苷或顺铂处理的人类肾近端小管细胞中的可变浓度(nM)的图。将细胞用指示浓度的化合物T与DMSO、依托泊苷或顺铂组合处理24小时。化合物T处理后，收获细胞并分析细胞周期分布。如实施例169中所描述，用化合物T处理人类肾近端小管细胞保护这些细胞免受依托泊苷和顺铂的化学疗法诱发的破坏。
[0090] 图22是用化合物T和化学疗法(顺铂)处理的人类肾近端小管细胞中相对γ-H2AX活性对比化合物T的可变浓度(nM)的图。将细胞用指示剂量的化合物T(10nM、30nM、100nM、300nM或1000nM)和化学疗法(25uM顺铂)处理。测量γ-H2AX焦点形成以评估化学疗法诱发的DNA破坏。如实施例170中所描述，用化合物T处理的细胞免受化学疗法(顺铂)诱发的DNA破坏。
[0091] 图23是用指示浓度的化合物T和DMSO或顺铂(25uM、50uM或100uM)处理的肾小管上皮细胞中卡斯蛋白酶3/7活化(如通过相对光单位测量)的图。从美国典型菌种保藏中心(American Type Culture Collection，ATCC，Manassas，VA)获得正常肾近端小管上皮细胞。细胞在孵育箱中在37℃下在5％CO2潮湿气氛中37℃潮湿孵育箱中补充有肾上皮细胞生长试剂盒(ATCC)的肾上皮细胞基础培养基(ATCC)中生长。在25uM、50uM或100uM顺铂不存在或存在下将细胞用DMSO或30nM、100nM、300nM或1uM化合物T处理。24小时后，使用Caspase-Glo 3/7分析系统(Promega，Madison，WI)，根据制造商的说明书，测量卡斯蛋白酶3/7活化。如实施例170中所描述，化合物T证明在这些细胞中卡斯蛋白酶3/7活化的剂量依赖性降低。
[0092] 图24-26说明本发明化合物的R2的若干示例性实施方案。
[0093] 图27A-27C、28A-D、29A-29C、30A-30B和31A-31F说明本发明化合物的核心结构的若干示例性实施方案。
[0094] 发明详述
[0095] 提供改善的化合物、方法和组合物以最小化将暴露于、正暴露于或已暴露于化学治疗剂(典型地DNA破坏剂)的受试者，典型地人类中化学治疗剂毒性对例如造血干细胞和造血祖细胞(一起称为HSPC)和/或肾上皮细胞等CDK4/6复制依赖性健康细胞的作用。
[0096] 定义
[0097] 除非另有说明，否则用于本申请，包括说明书和权利要求书中的以下术语具有以下给出的定义。除非上下文另外清楚地规定，否则如本说明书和随附权利要求书中所用，单数“一(a/an)”和“所述”包括复数个指示物。标准化学术语的定义可见于参考资料中，包括Carey和Sundberg(2007)Advanced Organic Chemistry第5版A和B卷,Springer Science+Business Media LLC,New York。除非另外指明，否则本发明的实施将采用合成有机化学、质谱分析、色谱的制备和分析法、蛋白质化学、生物化学、重组DNA技术和药理学的常规方法。有机化学的常规方法包括以下中包括的方法：March’s Advanced Organic Chemistry:Reactions,Mechanisms,and Structure,第6版,M.B.Smith和J.March,John Wiley&Sons,Inc.,Hoboken,NJ,2007。
[0098] 单独或在例如“卤烷基”和“烷基氨基”等其它术语内的术语“烷基”涵盖具有一个至约十二个碳原子的直链或支链基团。“低级烷基”具有一个至约六个碳原子。此类基团的实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、己基等等。术语“亚烷基”涵盖桥连二价直链和支链烷基。实例包括亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚异丙基等等。
[0099] 术语“烯基”涵盖具有至少一个碳-碳双键和两个至约十二个碳原子的直链或支链基团。“低级烯基”具有两个至约六个碳原子。烯基的实例包括乙烯基、丙烯基、烯丙基、丙烯基、丁烯基和4-甲基丁烯基。术语“烯基”和“低级烯基”涵盖具有“顺式”和“反式”取向或者“E”和“Z”取向的基团。
[0100] 术语“炔基”表示具有至少一个碳-碳三键并具有两个至约十二个碳原子的直链或支链基团。“低级炔基”具有两个至约六个碳原子。此类基团的实例包括炔丙基、丁炔基等等。
[0101] 烷基、烯基和炔基可以任选地经一个或多个例如卤基、羟基、硝基、氨基、氰基、卤烷基、芳基、杂芳基、杂环基等官能团取代。
[0102] 术语“烷基氨基”涵盖“N-烷基氨基”和“N,N-二烷基氨基”，其中氨基对应地独立地经一个烷基和两个烷基取代。“低级烷基氨基”具有一个或两个具有一个至六个碳原子的烷基附接到氮原子。适合的烷基氨基可以是单烷基氨基或二烷基氨基，例如N-甲基氨基、N-乙基氨基、N,N-二甲基氨基、N,N-二乙基氨基等等。
[0103] 术语“卤基”意指卤素，例如氟、氯、溴或碘原子。
[0104] 术语“卤烷基”涵盖其中烷基碳原子的任一个或多个经如上定义的一个或多个卤基取代的基团。实例包括单卤烷基、二卤烷基和多卤烷基，包括全卤烷基。举个例子，单卤烷基可以在基团内具有碘基、溴基、氯基或氟基原子。二卤烷基和多卤烷基可以具有两个或超过两个相同卤基原子或不同的卤基的组合。“低级卤烷基”涵盖具有1-6个碳原子的基团。卤烷基的实例包括氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、氯甲基、二氯甲基、三氯甲基、五氟乙基、七氟丙基、二氟氯甲基、二氯氟甲基、二氟乙基、二氟丙基、二氯乙基和二氯丙基。“全氟烷基”意指所有氢原子经氟原子置换的烷基。实例包括三氟甲基和五氟乙基。
[0105] 单独或组合的术语“芳基”意指含有一个或两个环的碳环芳香族系统，其中此类环可以依稠合方式附接在一起。术语“芳基”涵盖芳族基，例如苯基、萘基、茚基、四氢萘基和茚满基。更优选的芳基是苯基。所述“芳基”可以具有1个或更多个取代基，例如低级烷基、羟基、卤基、卤烷基、硝基、氰基、烷氧基、低级烷基氨基等等。芳基可以任选地经例如卤基、羟基、硝基、氨基、氰基、卤烷基、芳基、杂芳基、杂环基等一个或多个官能团取代。
[0106] 术语“杂环基”(或“杂环”)涵盖饱和和部分饱和含杂原子环基，其中杂原子可以选自氮、硫和氧。杂环包含单环6-8元环以及5-16元双环系统(其可以包括桥连稠合和螺稠合双环系统)。其不包括含有-O-O-、-O-S-或-S-S-部分的环。所述“杂环基”可以具有1个至3个取代基，例如羟基、Boc、卤基、卤烷基、氰基、低级烷基、低级芳烷基、氧代基、低级烷氧基、氨基、低级烷基氨基等等。
[0107] 饱和杂环基的实例包括含有1至4个氮原子的饱和3至6元杂单环基[例如吡咯烷基、咪唑烷基、哌啶基、吡咯啉基、哌嗪基]；含有1至2个氧原子和1至3个氮原子的饱和3至6元杂单环基[例如吗啉基]；含有1至2个硫原子和1至3个氮原子的饱和3至6元杂单环基[例如噻唑烷基]。部分饱和杂环基的实例包括二氢噻吩基、二氢吡喃基、二氢呋喃基、二氢噻唑基等等。
[0108] 部分饱和和饱和杂环基的具体实例包括吡咯烷基、咪唑烷基、哌啶基、吡咯啉基、吡唑烷基、哌嗪基、吗啉基、四氢吡喃基、噻唑烷基、二氢噻吩基、2,3-二氢-苯并[1,4]二噁烷基、吲哚啉基、异吲哚啉基、二氢苯并噻吩基、二氢苯并呋喃基、异色满基、色满基、1,2-二氢喹啉基、1,2,3,4-四氢-异喹啉基、1,2,3,4-四氢-喹啉基、2,3,4,4a,9,9a-六氢-1H-3-氮杂-芴基、5,6,7-三氢-l,2,4-三唑并[3,4-a]异喹啉基、3,4-二氢-2H-苯并[1,4]噁嗪基、苯并[1,4]二噁烷基、2,3-二氢-1H-lλ'-苯并[d]异噻唑-6-基、二氢吡喃基、二氢呋喃基和二氢噻唑基等等。
[0109] 杂环基还包括杂环基与芳基稠合/缩合的基团：含有1至5个氮原子的缩合杂环基，例如吲哚基、异吲哚基、吲哚嗪基、苯并咪唑基、喹啉基、异喹啉基、吲唑基、苯并三唑基、四氢哒嗪基[例如四唑并[1,5-b]哒嗪基]；含有1至2个氧原子和1至3个氮原子的不饱和缩合杂环基[例如苯并噁唑基、苯并噁二唑基]；含有1至2个硫原子和1至3个氮原子的不饱和缩合杂环基[例如苯并噻唑基、苯并噻二唑基]；和含有1至2个氧或硫原子的饱和、部分不饱和和不饱和缩合杂环基[例如苯并呋喃基、苯并噻吩基、2,3-二氢苯并[1,4]二噁烷基和二氢苯并呋喃基]。
[0110] 术语“杂芳基”表示含有一个或多个选自O、N和S的群组的杂原子的芳基环系统，其中环氮和硫原子任选地氧化且氮原子任选地季铵化。实例包括含有1至4个氮原子的不饱和5至6元杂单环基，例如吡咯基、咪唑基、吡唑基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、三唑基[例如4H-1,2,4-三唑基、1H-1,2,3-三唑基、2H-1,2,3-三唑基]；含有氧原子的不饱和5至6元杂单环基，例如吡喃基、2-呋喃基、3-呋喃基等；含有硫原子的不饱和5至6元杂单环基，例如2-噻吩基、3-噻吩基等；含有1至2个氧原子和1至3个氮原子的不饱和5至6元杂单环基，例如噁唑基、异噁唑基、噁二唑基[例如1,2,4-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、1,2,5-噁二唑基]；含有1至2个硫原子和1至3个氮原子的不饱和5至6元杂单环基，例如噻唑基、噻二唑基[例如1,2,4-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、1,2,5-噻二唑基]。
[0111] 术语“杂芳基烷基”表示经杂芳基取代的烷基。实例包括吡啶基甲基和噻吩基乙基。
[0112] 术语“磺酰基”无论单独使用或与其它术语相联，例如烷基磺酰基，均对应表示二价基-SO2-。
[0113] 术语“羧基(carboxy或carboxyl)”无论单独使用或与其它术语一起使用，例如“羧基烷基”，均表示-C(O)-OH。
[0114] 术语“羰基”无论单独使用或与其它术语一起使用，例如“氨基羰基”，均表示-C(O)-。
[0115] 术语“氨基羰基”表示式-C(O)-NH2的酰胺基。
[0116] 术语“杂环烷基”涵盖经杂环基取代的烷基。实例包括哌啶基甲基和吗啉基乙基。
[0117] 术语“芳基烷基”涵盖经芳基取代的烷基。实例包括苯甲基、二苯甲基和苯乙基。所述芳基烷基中的芳基可以另外经卤基、烷基、烷氧基、卤烷基和卤烷氧基取代。
[0118] 术语“环烷基”包括具有3至10个碳的饱和碳环基团。低级环烷基包括C3-C6环。实例包括环戊基、环丙基和环己基。环烷基可以任选地经例如卤基、羟基、硝基、氨基、氰基、卤烷基、芳基、杂芳基、杂环基等一个或多个官能团取代。
[0119] 术语“环烷基烷基”涵盖经环烷基取代的烷基。“低级环烷基烷基”是附接到具有一个至六个碳原子的烷基的环烷基。实例包括环己基甲基。所述基团中的环烷基可以另外经卤基、烷基、烷氧基和羟基取代。
[0120] 术语“环烯基”包括具有一个或多个碳-碳双键的碳环基团，包括“环烷基二烯基”化合物。实例包括环戊烯基、环戊二烯基、环己烯基和环庚二烯基。
[0121] 术语“包含”意指开放性，包括所指示的组分但不排除其它要素。
[0122] 如本文所用，术语“氧代基”涵盖用双键附接的氧原子。
[0123] 如本文所用，术语“硝基”涵盖-NO2。
[0124] 如本文所用，术语“氰基”涵盖-CN。
[0125] 如本文所用，术语“前药”意指当体内施用至主体时转变为母体药物的化合物。如本文所用，术语“母体药物”意指适用于治疗主体，典型地人类中本文中描述的任何病症，或控制或改善与本文中描述的任何生理性或病理性病症有关的根本原因或症状的任何本发明所述的化合物。前药可以用于实现任何所期望的作用，包括增强母体药物的特性或改善母体药物的药物或药物动力学特性。存在前药策略，其提供了调节母体药物的体内产生的条件的选择，所有都视为包括在本文中。前药策略的非限制性实例包括以下的共价附接：可去除基团或基团的可去除部分，例如(但不限于)酰化、磷酸化、膦酰基化、氨基磷酸酯衍生物、酰胺化、还原、氧化、酯化、烷基化、其它羧基衍生物、硫氧基或砜衍生物、羰化或酸酐。
[0126] 说明书和权利要求书中，除非另作说明，否则所给出的化学式或名称应该涵盖所有光学和立体异构体以及存在此类异构体和混合物的外消旋混合物。
[0127] 在一些实施方案中，CDK4/6复制依赖性健康细胞是造血干细胞祖细胞。造血干细胞和祖细胞包括(但不限于)长期造血干细胞(LT-HSC)、短期造血干细胞(ST-HSC)、多潜能祖细胞(MPP)、共同脊髓祖细胞(CMP)、共同淋巴祖细胞(CLP)、粒细胞-单核细胞祖细胞(GMP)和巨核细胞-红细胞祖细胞(MEP)。在一些实施方案中，CDK4/6复制依赖性健康细胞可以是例如(但不限于)肝、肾、胰腺、脑、肺、肾上腺、肠、肠管、胃、皮肤、听觉系统、骨骼、膀胱、卵巢、子宫、睾丸、胆囊、甲状腺、心脏、胰岛、血管等等非造血组织中的细胞。在一些实施方案中，CDK4/6复制依赖性健康细胞是肾细胞，且尤其是肾上皮细胞，例如肾近端小管上皮细胞。在一些实施方案中，CDK4/6复制依赖性健康细胞是造血干细胞祖细胞。在一些实施方案中，CDK4/6复制依赖性健康细胞可以是例如(但不限于)肝、肾、胰腺、脑、肺、肾上腺、肠、肠管、胃、皮肤、听觉系统、骨骼、膀胱、卵巢、子宫、睾丸、胆囊、甲状腺、心脏、胰岛、血管等等非造血组织中的细胞。
[0128] 本文中描述的化合物的背景下使用的术语“选择性CDK4/6抑制剂”包括在标准磷酸化分析中以IC50摩尔浓度比抑制CDK2活性相同程度所需的IC50摩尔浓度小至少1/500或1/1000或1/1500或1/1800、1/2000、1/5000或1/10,000抑制CDK4活性、CDK6活性或CDK4与CDK6活性的化合物。
[0129] “诱发G1停滞”意指抑制剂化合物诱发细胞群体相当大部分处于细胞周期的G1期的静态。
[0130] “造血不足”意指血液细胞谱系计数减少或血细胞(即脊髓发育不良)和/或淋巴细胞(即淋巴球减少症、例如B细胞和T细胞等循环淋巴细胞数目减少)产生不足。可以观测到血液不足，例如贫血、血小板数减少(即血小板减少症)或白血球计数减少(即白血球减少症)或粒细胞减少(例如中性白细胞减少)形式的骨髓抑制。
[0131] “同步再进入细胞周期”意指由于CDK4/6抑制剂化合物的作用而处于G1停滞的CDK4/6复制依赖性健康细胞，例如HSPC在化合物作用消散后在相对相同的集中时间框内或以相对相同的速率再进入细胞周期。相对地，“非同步再进入细胞周期”意指由于CDK4/6抑制剂化合物的作用而处于G1停滞的CDK4/6复制依赖性健康细胞，例如HSPC在化合物例如PD0332991作用消散后在相对不同的集中时间框内或以相对不同的速率再进入细胞周期。
[0132] “停止循环”或“药物假期”意指受试者不施用或暴露于化学治疗剂的时间段。举例来说，在21天施用受试者化学治疗剂且7天不施用化学治疗剂且方案大量重复的治疗方案中，未施用的7天时期视为“停止循环”或“药物假期”。脱靶和药物假期也可以指治疗方案的中断，其中受试者由于有害的副作用，例如骨髓抑制而一段时间不施用化学治疗剂。
[0133] 所治疗的受试者典型地是人类受试者，不过应了解本文中描述的方法对于其它动物，例如哺乳动物和脊椎动物物种也是有效的。更具体地说，术语受试者可以包括用于分析中的动物，例如用于临床前测试中的动物，包括(但不限于)小鼠、大鼠、猴、犬、猪和兔；以及家养猪类(猪和肥猪)、反刍动物、马、家禽、猫科动物、牛科动物、鼠类、犬科动物等等。
[0134] “相当大部分”或“显著部分”意指至少80％。在替代实施方案中，部分可以是至少85％、90％或95％或更大。
[0135] 在一些实施方案中，术语“CDK4/6复制非依赖性癌症”是指不显著需要CDK4/6活性用于复制的癌症。此类类型的癌症常常但不总是特征为(例如细胞显示)CDK2活性水平增加或成视网膜细胞瘤肿瘤抑制蛋白或成视网膜细胞瘤家族成员蛋白(例如(但不限于)p107和p130)的表现减少。CDK2活性的水平增加或成视网膜细胞瘤肿瘤抑制蛋白或成视网膜细胞瘤家族成员蛋白的表现减少或缺乏例如与正常细胞相比可以增加或减少。在一些实施方案中，CDK2活性的水平增加可以与MYC原致癌基因扩增或过度表现有关(例如可以由其引起或与其一起观测到)。在一些实施方案中，CDK2活性的水平增加可以与细胞周期蛋白E1、细胞周期蛋白E2或细胞周期蛋白A的过度表现有关。
[0136] 如本文所用，术语“化学疗法”或“化学治疗剂”是指用细胞生长抑制剂或细胞毒性剂(即化合物)治疗以减少或消除例如癌细胞等不良细胞的生长或增殖。因此，如本文所用，“化学疗法”或“化学治疗剂”是指用于治疗例如癌症等增生病症的细胞毒性剂或细胞生长抑制剂。药剂的细胞毒性作用可以是但无需是核酸插入或结合、DNA或RNA烷基化、RNA或DNA合成抑制、另一核酸相关活性(例如蛋白质合成)或任何其它细胞毒性作用的抑制中一者或多者的结果。
[0137] 因此，“细胞毒性剂”可以是亦描述为“抗赘生性”剂或“化学治疗剂”的任一化合物或化合物的任何组合。此类化合物包括(但不限于)DNA破坏化合物和可以杀死细胞的其它化学物质。“破坏DNA的化学治疗剂”包括(但不限于)烷基化剂、DNA插入剂、蛋白质合成抑制剂、DNA或RNA合成抑制剂、DNA碱基类似物、拓扑异构酶抑制剂和端粒酶抑制剂或端粒DNA结合化合物。举例来说，烷基化剂包括烷基磺酸盐，例如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)和哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶(aziridine)，例如苯佐替派
(benzodizepa)、卡波醌(carboquone)、米得派(meturedepa)和尿烷亚胺(uredepa)；乙烯亚胺和甲基三聚氰胺，例如六甲蜜胺(altretamine)、三乙撑蜜胺(triethylenemelamine)、三亚乙基磷酰胺(triethylenephosphoramide)、三乙撑硫代磷酰胺
(triethylenethiophosphoramide)和三羟甲蜜胺(trimethylolmelamine)；氮芥类，例如苯丁酸氮芥(chlorambucil)、萘氮芥(chlornaphazine)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、雌莫司汀(estramustine)、异环磷酰胺(iphosphamide)、二氯甲二乙胺(mechlorethamine)、二氯甲二乙胺氧化物盐酸盐(mechlorethamine oxide hydrochloride)、美法仑
(melphalan)、诺伐比辛(novembichine)、苯芥胆甾醇(phenesterine)、泼尼莫司汀
(prednimustine)、氯乙环磷酰胺(trofosfamide)和尿嘧啶氮芥(uracil mustard)；和亚硝基脲(nitroso urea)，例如卡莫司汀(carmustine)、氯尿霉素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)和雷莫司汀(ranimustine)。
[0138] 用于治疗癌症的抗生素包括放线菌素D(dactinomycin)、道诺霉素(daunorubicin)、多柔比星(doxorubicin)、艾达霉素(idarubicin)、硫酸博来霉素
(bleomycin sulfate)、丝裂霉素(mytomycin)、光神霉素(plicamycin)和链脲佐菌素
(streptozocin)。化学治疗抗代谢物包括巯基嘌呤(mercaptopurine)、硫鸟嘌呤
(thioguanine)、克拉屈滨(cladribine)、磷酸氟达拉滨(fludarabine phosphate)、氟尿嘧啶(fluorouracil，5-FU))、氟尿核苷(floxuridine)、阿糖胞苷(cytarabine)、喷司他汀(pentostatin)、甲氨蝶呤(methotrexate)和硫唑嘌呤(azathioprine)、无环鸟苷
(acyclovir)、腺嘌呤β-1-D-阿拉伯糖苷(adenineβ-1-D-arabinoside)、氨甲蝶呤
(amethopterin)、氨基蝶呤(aminopterin)、2-氨基嘌呤(2-aminopurine)、阿非迪霉素(aphidicolin)、8-氮杂鸟嘌呤(8-azaguanine)、氮丝氨酸(azaserine)、6-氮尿嘧啶(6-azauracil)、2′-叠氮基-2′-脱氧核苷、5-溴脱氧胞苷、胞嘧啶β-1-D-阿拉伯糖苷、重氮氧基正亮氨酸(diazooxynorleucine)、二脱氧核苷(dideoxynucleoside)、5-氟脱氧胞苷(5-fluorodeoxycytidine)、5-氟脱氧尿苷(5-fluorodeoxyuridine)和羟基脲(hydroxyurea)。
[0139] 化学治疗蛋白质合成抑制剂包括相思子毒素(abrin)、金精三羧酸(aurintricarboxylic acid)、氯胺苯醇(chloramphenicol)、大肠杆菌素E3(colicin E3)、放线菌酮(cycloheximide)、白喉毒素(diphtheria toxin)、伊短菌素A(edeine A)、吐根碱(emetine)、红霉素(erythromycin)、乙基硫氨酸(ethionine)、氟化物(fluoride)、5-氟色氨酸(5-fluorotryptophan)、梭链孢酸(fusidic acid)、鸟苷酰基亚甲基二磷酸盐
(guanylyl methylene diphosphonate)和鸟苷酰基亚氨二磷酸盐(guanylyl 
imidodiphosphate)、卡那霉素(kanamycin)、春日霉素(kasugamycin)、黄色霉素
(kirromycin)和O-甲基苏氨酸(O-methyl threonine)。其它的蛋白质合成抑制剂包括蒴莲根毒素(modeccin)、新霉素(neomycin)、正缬氨酸(norvaline)、密旋霉素(pactamycin)、巴龙霉素(paromomycine)、嘌呤霉素(puromycin)、篦麻毒素(ricin)、志贺毒素(shiga toxin)、焦土霉素(showdomycin)、稀疏霉素(sparsomycin)、放线壮观素(spectinomycin)、链霉素(streptomycin)、四环素(tetracycline)、硫链丝菌肽(thiostrepton)和三甲氧苄二氨嘧啶(trimethoprim)。DNA合成抑制剂包括烷基化剂，例如硫酸二甲酯、丝裂霉素C(mitomycin C)、氮芥和硫芥；插入剂，例如吖啶染料(acridine dye)、放线菌素
(actinomycins)、阿霉素(adriamycin)、蒽(anthracenes)、苯并芘(benzopyrene)、溴化乙锭(ethidium bromide)、缠结二碘化丙锭(propidium diiodide-intertwining)；和其它药剂，例如偏端霉素(distamycin)和纺锤菌素(netropsin)。拓扑异构酶抑制剂，例如香豆霉素(coumermycin)、萘啶酮酸(nalidixic acid)、新生霉素(novobiocin)和奥索利酸
(oxolinic acid)；细胞分裂抑制剂，包括秋水仙胺(colcemide)、秋水仙碱(colchicine)、长春花碱(vinblastine)和长春新碱(vincristine)；和RNA合成抑制剂，包括放线菌素D、α-鹅膏蕈碱和其它真菌毒伞肽、虫草素(cordycepin)(3′-脱氧腺苷)、二氯核糖呋喃酮酰基苯并咪唑、甲哌力复霉素(rifampicine)、曲张链菌素(streptovaricin)和利迪链菌素
(streptolydigin)也可以用作DNA破坏化合物。
[0140] 毒性作用可以通过本发明公开的选择性CDK4/6抑制剂减轻的当前化学治疗剂包括(但不限于)阿霉素(adrimycin)、5-氟尿嘧啶(5FU)、6-巯基嘌呤、吉西他滨(gemcitabine)、美法仑、苯丁酸氮芥、丝裂霉素、伊立替康(irinotecan)、米托蒽醌(mitoxantrone)、依托泊苷、喜树碱(camptothecin)、放线菌素-D(actinomycin-D)、丝裂霉素、顺铂、过氧化氢(hydrogen peroxide)、卡铂、丙卡巴肼(procarbazine)、二氯甲二乙胺、环磷酰胺、异环磷酰胺、美法仑、苯丁酸氮芥、白消安、亚硝基脲(nitrosurea)、放线菌素D(dactinomycin)、道诺霉素、多柔比星、博来霉素、普卡霉素(plicomycin)、他莫昔芬(tamoxifen)、紫杉酚(taxol)、反式铂(transplatinum)、长春花碱(vinblastine)、长春灭瘟碱(vinblastin)、卡莫司汀、阿糖胞苷、二氯甲二乙胺、苯丁酸氮芥、链脲佐菌素
(streptozocin)、洛莫司汀(lomustine)、替莫唑胺(temozolomide)、噻替派(thiotepa)、六甲蜜胺、奥沙利铂(oxaliplatin)、喜树碱(campothecin)和甲氨蝶呤等等和类似的作用类型药剂。在一个实施方案中，破坏DNA的化学治疗剂选自顺铂、卡铂、喜树碱、多柔比星和依托泊苷。
[0141] 在某些替代实施方案中，本文中描述的CDK4/6抑制剂与治疗CDK4/6复制非依赖性、例如Rb阴性癌症或增生病症的化学治疗剂组合用于抗癌或抗增生作用。本文中描述的CDK4/6抑制剂可以提供与化学治疗剂的累加或协同效应，抗癌作用比在使用单独化学治疗剂下所见的抗癌作用大。在一个实施方案中，本文中描述的CDK4/6抑制剂可以与上述一种或多种化学治疗化合物组合。在一个实施方案中，本文中描述的CDK4/6抑制剂可以与选自(但不限于)以下的化学治疗剂组合：他莫昔芬、咪达唑仑、来曲唑、硼替佐米、阿那曲唑、戈舍瑞林、mTOR抑制剂、PI3激酶抑制剂、双重mTOR-PI3K抑制剂、MEK抑制剂、RAS抑制剂、ALK抑制剂、HSP抑制剂(例如HSP70和HSP 90抑制剂或其组合)、BCL-2抑制剂、细胞凋亡诱发化合物、AKT抑制剂(包括(但不限于)MK-2206、GSK690693、哌立福新、KRX-0401、GDC-0068、曲西立滨(Triciribine)、AZD5363、和厚朴酚(Honokiol)、PF-04691502和米替福新(Miltefosine))、PD-1抑制剂(包括(但不限于)纳武单抗(Nivolumab)、CT-011、MK-3475、BMS936558和AMP-514)或FLT-3抑制剂(包括(但不限于)P406、多韦替尼(Dovitinib)、奎扎替尼(Quizartinib)(AC220)、阿木替尼(Amuvatinib)(MP-470)、唐杜替尼(Tandutinib)(MLN518)、ENMD-2076和KW-2449)或其组合。mTOR抑制剂的实例包括(但不限于)雷帕霉素和其类似物、依维莫司(Afinitor)、坦西莫司、雷达莫司、西罗莫司和德佛莫司。P13激酶抑制剂的实例包括(但不限于)渥曼青霉素、脱甲绿胶酶素、哌立福新、依德西伯、PX-866、IPI-
145(Infinity)、BAY 80-6946、BEZ235、RP6503、TGR 1202(RP5264)、MLN1117(INK1117)、皮提西伯、布帕西伯、SAR245408(XL147)、SAR245409(XL765)、帕洛米德529、ZSTK474、PWT33597、RP6530、CUDC-907和AEZS-136。MEK抑制剂的实例包括(但不限于)曲美替尼、司美替尼、MEK162、GDC-0973(XL518)和PD0325901。RAS抑制剂的实例包括(但不限于)瑞赖新和siG12D LODER。ALK抑制剂的实例包括(但不限于)克唑替尼、AP26113和LDK378。HSP抑制剂包括(但不限于)格尔德霉素或17-N-烯丙基氨基-17-脱氧基格尔德霉素(17AAG)和根赤壳菌素。在一个实施方案中，与化学治疗剂组合的CDK4/6抑制剂选自包含上述式I、式II、式III、式IV或式V的化合物或组合物或其药学上可接受的组合物、盐、同位素类似物或前药。
在一个实施方案中，化合物选自下表1中的化合物，或其药学上可接受的组合物、盐、同位素类似物或前药。在一个实施方案中，化合物选自化合物T、Q、GG、U或AAAA，或其药学上可接受的组合物、盐、同位素类似物或前药。
[0142] 在一个实施方案中，本文中描述的CDK4/6抑制剂可以与选自(但不限于)以下的化学治疗剂组合：甲磺酸伊马替尼(Imatinib mesylate) 、达沙替尼(Dasatinib)、尼洛替尼(Nilotinib) 、博舒替尼(Bosutinib) 、曲妥
珠单抗(Trastuzumab) 、帕妥珠单抗(Pertuzumab)(PerjetaTM)、拉帕替尼
(Lapatinib) 、吉非替尼(Gefitinib) 、厄罗替尼(Erlotinib)
、西妥昔单抗(Cetuximab) 、帕尼单抗(Panitumumab)
、凡德他尼(Vandetanib) 、威罗菲尼(Vemurafenib) 、伏立诺他
(Vorinostat) 、罗米地辛(Romidepsin) 、蓓萨罗丁(Bexarotene)
、阿利维A酸(Alitretinoin) 、维甲酸(Tretinoin) 、
卡非佐米(Carfilizomib)(KyprolisTM)、普拉曲沙(Pralatrexate) 、贝伐单抗
(Bevacizumab) 、(Ziv-aflibercept) 、索拉非尼(Sorafenib)
、舒尼替尼(Sunitinib) 、帕唑帕尼(Pazopanib) 、瑞格
菲尼(Regorafenib) 和卡博替尼(Cabozantinib)(CometriqTM)。
[0143] “长期血液毒性”意指在施用化学治疗剂后影响受试者持续超过一周或多周、一个或多个月或一年或多年的时间的血液毒性。长期血液毒性可以引起骨髓病症，骨髓病症可以引起血细胞(即脊髓发育不良)和/或淋巴细胞(即淋巴球减少症、例如B细胞和T细胞等循环淋巴细胞数目减少)产生效率低。可以观测到血液毒性，例如如贫血、血小板数减少(即血小板减少症)或白血球数减少(即中性白细胞减少)。在一些情况下，脊髓发育不良可以引起白血病的发展。与化学治疗剂相关的长期毒性还可以破坏受试者中除血液细胞外的其它自我更新细胞。因此，长期的毒性还可以引起面色苍白和虚弱。
[0144] 活性化合物
[0145] 在一个实施方案中，本发明是针对式I、II、III、IV或V的化合物或此类化合物或其药学上可接受的盐的用途：
[0146]
[0147]
[0148] 其中：
[0149] Z为-(CH2)x-，其中x为1、2、3或4，或-O-(CH2)z-，其中z为2、3或4；
[0150] 每一X独立地为CH或N；
[0151] 每一X′独立地为CH或N；
[0152] X″独立地为CH2、S或NH，经配置使得所述部分为稳定5元环；
[0153] R、R8和R11独立地为H、C1-C3烷基或卤烷基、环烷基或含有一个或多个选自N、O或S的杂原子的环烷基；-(亚烷基)m-C3-C8环烷基、-(亚烷基)m-芳基、-(亚烷基)m-杂环基、-(亚烷3 4 3 4 5
基)m-杂芳基、-(亚烷基)m-NRR 、-(亚烷基)m-C(O)-NRR ；-(亚烷基)m-O-R、-(亚烷基)m-S(O)n-R5或-(亚烷基)m-S(O)n-NR3R4，其中任一者在化合价容许的情况下可以任选地独立地经一个或多个R基团取代，且其中两个结合于相同或相邻原子的Rx基团可以任选地组合形成环；
[0154] 每一R1独立地为芳基、烷基、环烷基或卤烷基，其中所述烷基、环烷基和卤烷基中的每一者任选地在链中包括代替碳的O或N杂原子且相邻环原子上或相同环原子上的两个R1连同其连接的环原子任选地形成3-8元环；
[0155] y为0、1、2、3或4；
[0156] R2为-(亚烷基)m-杂环基、-(亚烷基)m-杂芳基、-(亚烷基)m-NR3R4、-(亚烷基)m-C(O)-NR3R4；-(亚烷基)m-C(O)-O-烷基；-(亚烷基)m-O-R5、-(亚烷基)m-S(O)n-R5或-(亚烷基)m-S(O)n-NR3R4，其中任一者在化合价容许的情况下可以任选地独立地经一个或多个Rx基团取代，且其中两个结合于相同或相邻原子的Rx基团可以任选地组合形成环且其中m为0或1且n为0、1或2；
[0157] R3和R4每次出现时独立地为：
[0158] (i)氢或
[0159] (ii)烷基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、环烷基烷基、杂环烷基、芳基烷基或杂芳基烷基，其中任一者在化合价容许的情况下可以任选地独立地经一个或多个Rx基团取代，且其中两个结合于相同或相邻原子的Rx基团可以任选地组合形成环；或R3和R4连同其连接的氮原子可以组合形成在化合价容许的情况下任选地独立地经一个或多个Rx基团取代的杂环，且其中两个结合于相同或相邻原子的Rx基团可以任选地组合形成环；
[0160] R5和R5*每次出现时为
[0161] (i)氢或
[0162] (ii)烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、环烷基烷基、杂环烷基、芳基烷基或杂芳基烷基，其中任一者在化合价容许的情况下可以任选地独立地经一个或多个Rx基团取代；
[0163] Rx每次出现时独立地为卤基、氰基、硝基、氧代基、烷基、卤烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、杂环基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、环烷基烷基、杂环烷基、-(亚烷基)m-OR5、-(亚烷基)m-O-亚烷基-OR5、-(亚烷基)m-S(O)n-R5、-(亚烷基)m-NR3R4、-(亚烷基)m-CN、-(亚烷基)m-C(O)-R5、-(亚烷基)m-C(S)-R5、-(亚烷基)m-C(O)-OR5、-(亚烷基)m-O-C(O)-5 5 3 4 3 4
R 、-(亚烷基)m-C(S)-OR 、-(亚烷基)m-C(O)-(亚烷基)m-NR R 、-(亚烷基)m-C(S)-NR R 、-(亚烷基)m-N(R3)-C(O)-NR3R4、-(亚烷基)m-N(R3)-C(S)-NR3R4、-(亚烷基)m-N(R3)-C(O)-R5、-(亚烷基)m-N(R3)-C(S)-R5、-(亚烷基)m-O-C(O)-NR3R4、-(亚烷基)m-O-C(S)-NR3R4、-(亚烷基)m-SO2-NR3R4、-(亚烷基)m-N(R3)-SO2-R5、-(亚烷基)m-N(R3)-SO2-NR3R4、-(亚烷基)m-N(R3)-C(O)-OR5)、-(亚烷基)m-N(R3)-C(S)-OR5或-(亚烷基)m-N(R3)-SO2-R5；其中：
[0164] 所述烷基、卤烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、杂环基、芳基、杂芳基、芳基烷基、杂芳基烷基、环烷基烷基和杂环烷基可以进一步独立地经一个或多个以下各基取代：
[0165] -(亚烷基)m-CN、-(亚烷基)m-OR5*、-(亚烷基)m-S(O)n-R5*、-(亚烷基)m-NR3*R4*、-(亚烷基)m-C(O)-R5*、-(亚烷基)m-C(＝S)R5*、-(亚烷基)m-C(＝O)O R5*、-(亚烷基)m-OC(＝O)R5*、-(亚烷基)m-C(S)-OR5*、-(亚烷基)m-C(O)-NR3*R4*、-(亚烷基)m-C(S)-NR3*R4*、-(亚3 3 4 3 3 4 3
烷基)m-N(R *)-C(O)-NR*R*、-(亚烷基)m-N(R *)-C(S)-NR *R *、-(亚烷基)m-N(R *)-C(O)-R5*、-(亚烷基)m-N(R3*)-C(S)-R5*、-(亚烷基)m-O-C(O)-NR3*R4*、-(亚烷基)m-O-C(S)-NR3*R4*、-(亚烷基)m-SO2-NR3*R4*、-(亚烷基)m-N(R3*)-SO2-R5*、-(亚烷基)m-N(R3*)-SO2-NR3*R4*、-(亚烷基)m-N(R3*)-C(O)-OR5*、-(亚烷基)m-N(R3*)-C(S)-OR5*或-(亚烷基)m-N
3 5
(R*)-SO2-R*，
[0166] n为0、1或2，且
[0167] m为0或1；
[0168] R3*和R4*每次出现时独立地为：
[0169] (i)氢或
[0170] (ii)烷基、烯基、炔基环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、环烷基烷基、杂环烷基、芳基烷基或杂芳基烷基，其中任一者在化合价容许的情况下可以任选地独立地经一个或多个Rx基团取代；或R3*和R4*连同其连接的氮原子可以组合形成在化合价容许的情况下任选地独立地经一个或多个Rx基团取代的杂环；且
[0171] R6为H或低级烷基、-(亚烷基)m-杂环基、-(亚烷基)m-杂芳基、-(亚烷基)m-NR3R4、-(亚烷基)m-C(0)-NR3R4；-(亚烷基)m-0-R5、-(亚烷基)m-S(0)n-R5或-(亚烷基)m-S(0)n-NR3R4，其中任一者在化合价容许的情况下可以任选地独立地经一个或多个Rx基团取代，且其中两个结合于相同或相邻原子的Rx基团可以任选地组合形成环；且
[0172] R10为(i)NHRA，其中RA为未经取代或经取代的C1-C8烷基、环烷基烷基或-TT-RR、C1-C8环烷基或含有一个或多个选自N、O和S的杂原子的环烷基；TT为未经取代或经取代的C1-C8烷基或C3-C8环烷基连接基团；且RR为羟基、未经取代或经取代的C1-C6烷氧基、氨基、未经取代或经取代的C1-C6烷基氨基、未经取代或经取代的二C1-C6烷基氨基、未经取代或经取代的C6-C10芳基、包含一个或两个5或6元环和1-4个选自N、O和S的杂原子的未经取代或经取代的杂芳基、未经取代或经取代的C3-C10碳环或包含一个或两个5或6元环和1-4个选自N、O和S的杂原子的未经取代或经取代的杂环；或(ii)-C(O)-R12或-C(O)O-R13，其中R12为NHRA或RA且R13为RA；
[0173] 或其药学上可接受的盐、前药或同位素变体，例如部分或完全氘化形式。
[0174] 在一些方面，化合物具有式I或式II且R6不存在。
[0175] 在一些方面，化合物具有式III：
[0176]
[0177] 且变数如针对式I和II的化合物和其药学上可接受的盐所定义。
[0178] 在一些方面，Rx未经进一步取代。
[0179] 在一些方面，R2为-(亚烷基)m-杂环基、-(亚烷基)m-杂芳基、-(亚烷基)m-NR3R4、-(亚烷基)m-C(O)-NR3R4；-(亚烷基)m-O-R5、-(亚烷基)m-S(O)n-R5或-(亚烷基)m-S(O)n-NR3R4，x其中任一者在化合价容许的情况下可以任选地独立地经一个或多个R 基团取代，且其中两个结合于相同或相邻原子的Rx基团可以任选地组合形成环且其中m为0或1且n为0、1或2。
[0180] 在一些方面，R8为氢或C1-C3烷基。
[0181] 在一些方面，R为氢或C1-C3烷基。
[0182] 在一些方面，R2为-(亚烷基)m-杂环基、-(亚烷基)m-NR3R4、-(亚烷基)m-C(O)-NR3R4、-(亚烷基)m-C(O)-O-烷基或-(亚烷基)m-OR5，其中任一者在化合价容许的情况下可以任选地独立地经一个或多个Rx基团取代，且其中两个结合于相同或相邻原子的Rx基团可以任选地组合形成环。
[0183] 在一些方面，R2为-(亚烷基)m-杂环基、-(亚烷基)m-NR3R4、-(亚烷基)m-C(O)-NR3R4、-(亚烷基)m-C(O)-O-烷基或-(亚烷基)m-OR5，未经进一步取代。
[0184] 在一些方面，R2中的m为1。在另一方面，R2中的亚烷基为亚甲基。
[0185] 在一些方面，R2为 其中：
[0186] R2*为键、亚烷基、-(亚烷基)m-O-(亚烷基)m-、-(亚烷基)m-C(O)-(亚烷基)m-、-(亚烷基)m-S(O)2-(亚烷基)m-和-(亚烷基)m-NH-(亚烷基)m-，其中每一m独立地为0或1；
[0187] P为4至8元单环或双环饱和杂环基；
[0188] 每一Rx1独立地为-(亚烷基)m-(C(O))m-(亚烷基)m-(N(RN))m-(烷基)m，其中每一m独立地为0或1，前提条件为至少一个m为1；-(C(O))-O-烷基；-(亚烷基)m-环烷基，其中m为0或1；-N(RN)-环烷基；-C(O)-环烷基；-(亚烷基)m-杂环基，其中m为0或1；或-N(RN)-杂环基；-C(O)-杂环基；-S(O)2-(亚烷基)m，其中m为1或2，其中：
[0189] RN为H、C1至C4烷基或C1至C6杂烷基，且
[0190] 其中两个Rx1可以连同P上其连接的可以为相同原子的原子形成环；且
[0191] t为0、1或2。
[0192] 在一些方面，每一Rx1仅仅任选地经未经取代的烷基、卤素或羟基取代。
[0193] 在一些方面，Rx1为氢或未经取代的C1-C4烷基。
[0194] 在一些方面，至少一个Rx1为-(亚烷基)m-杂环基，其中m为0或1。
[0195] 在一些方面，R2为 其中P*为4至8元单环或双环饱和杂环基。
[0196] 在一些方面，R2为
[0197] 在一些方面，R2为
[0198] 在一些方面，R2为 其中：
[0199] R2*为键、亚烷基、-(亚烷基)m-O-(亚烷基)m-、-(亚烷基)m-C(O)-(亚烷基)m-、-(亚烷基)m-S(O)2-(亚烷基)m-和-(亚烷基)m-NH-(亚烷基)m-，其中每一m独立地为0或1；
[0200] P为4至8元单环或双环饱和杂环基；
[0201] P1为4至6元单环饱和杂环基；
[0202] 每一Rx2独立地为氢或烷基；且
[0203] s为0、1或2。
[0204] 在一些方面，R2为
[0205] 在一些方面，P1包括至少一个氮。
[0206] 在一些方面，在任何先前方面的R2*中的任何亚烷基未经进一步取代。
[0207] 在一些方面，R2选自图24-26中描绘的结构。
[0208] 在一些方面，R2为
[0209]
[0210] 在一些方面，化合物具有通式I且更具体地说，图27-31中通用结构之一，其中变数如先前所定义。
[0211] 在一些方面，化合物具有通式Ia：
[0212]
[0213] 其中R1、R2、R和y如先前所定义。
[0214] 在一些实施方案中，所述化合物具有式Ia且R为烷基。
[0215] 在一些实施方案中，所述化合物具有式Ia且R为H。
[0216] 在一些实施方案中，所述化合物具有式Ia且R2为 其中P*为4至8元单环或双环饱和杂环基且R2*、Rx1和t如先前所定义。
[0217] 在一些实施方案中，所述化合物具有式Ia且R2为 其中P*为4至8元单环或双环饱和杂环基，Rx1为氢或未经取代的C1-C4烷基且R2*如先前所定义。
[0218] 在一些实施方案中，所述化合物具有式Ib：
[0219]
[0220] 其中R2和R如先前所定义。
[0221] 在一些实施方案中，所述化合物具有式Ib且R为烷基。
[0222] 在一些实施方案中，所述化合物具有式Ib且R为H。
[0223] 在一些实施方案中，所述化合物具有式Ib且R2为 其中P*为4至8元单环或双环饱和杂环基且R2*、Rx1和t如先前所定义。
[0224] 在一些实施方案中，所述化合物具有式Ib且R2为 其中P*为4至8元单环或双环饱和杂环基，Rx1为氢或C1-C4烷基且R2*如先前所定义。
[0225] 在一些实施方案中，所述化合物具有式Ic：
[0226]
[0227] 其中R2和R如先前所定义。
[0228] 在一些实施方案中，所述化合物具有式Ic且R为烷基。
[0229] 在一些实施方案中，所述化合物具有式Ic且R为H。
[0230] 在一些实施方案中，所述化合物具有式Ic且R2为 其中P*为4至8元单环或双环饱和杂环基且R2*、Rx1和t如先前所定义。
[0231] 在一些实施方案中，所述化合物具有式Ic且R2为 其中P*为4至8元单环或双环饱和杂环基，Rx1为氢或C1-C4烷基且R2*如先前所定义。
[0232] 在一些实施方案中，所述化合物具有式Id：
[0233]
[0234] 其中R2和R如先前所定义。
[0235] 在一些实施方案中，所述化合物具有式Id且R为烷基。
[0236] 在一些实施方案中，所述化合物具有式Id且R为H。
[0237] 在一些实施方案中，所述化合物具有式Id且R2为 其中P*为4至8元单环或双环饱和杂环基且R2*、Rx1和t如先前所定义。
[0238] 在一些实施方案中，所述化合物具有式Id且R2为 其x1 2*
中P*为4至8元单环或双环饱和杂环基，R 为氢或C1-C4烷基且R 如先前所定义。
[0239] 在一些实施方案中，所述化合物具有式Ie：
[0240]
[0241] 在一些实施方案中，所述化合物具有式Ie且R为烷基。
[0242] 在一些实施方案中，所述化合物具有式Ie且R为H。
[0243] 在一些实施方案中，所述化合物具有式Ie且R2为 其中P*为4至8元单环或双环饱和杂环基且R2*、Rx1和t如先前所定义。
[0244] 在一些实施方案中，所述化合物具有式Ie且R2为 其中P*为4至8元单环或双环饱和杂环基，Rx1为氢或C1-C4烷基且R2*如先前所定义。
[0245] 在一些实施方案中，所述化合物具有式If：
[0246]
[0247] 在一些实施方案中，所述化合物具有式If且R为烷基。
[0248] 在一些实施方案中，所述化合物具有式If且R为H。
[0249] 在一些实施方案中，所述化合物具有式If且R2为 其中P*为4至8元单环或双环饱和杂环基且R2*、Rx1和t如先前所定义。
[0250] 在一些实施方案中，所述化合物具有式If且R2为 其中P*为4至8元单环或双环饱和杂环基，Rx1为氢或C1-C4烷基且R2*如先前所定义。
[0251] 在一些实施方案中，所述化合物具有式Ig：
[0252]
[0253] 在一些实施方案中，所述化合物具有式Ig且R为烷基。
[0254] 在一些实施方案中，所述化合物具有式Ig且R为H。
[0255] 在一些实施方案中，所述化合物具有式Ig且R2为 其中P*为4至8元单环或双环饱和杂环基且R2*、Rx1和t如先前所定义。
[0256] 在一些实施方案中，所述化合物具有式Ig且R2为 其中P*为4至8元单环或双环饱和杂环基，Rx1为氢或C1-C4烷基且R2*如先前所定义。
[0257] 在一些实施方案中，所述化合物具有式Ih：
[0258]
[0259] 在一些实施方案中，所述化合物具有式Ih且R为烷基。
[0260] 在一些实施方案中，所述化合物具有式Ih且R为H。
[0261] 在一些实施方案中，所述化合物具有式Ih且R2为 其中P*为4至8元单环或双环饱和杂环基且R2*、Rx1和t如先前所定义。
[0262] 在一些实施方案中，所述化合物具有式Ih且R2为 其中P*为4至8元单环或双环饱和杂环基，Rx1为氢或C1-C4烷基且R2*如先前所定义。
[0263] 在一些实施方案中，所述化合物具有式Ii：
[0264]
[0265] 在一些实施方案中，所述化合物具有式Ii且R为烷基。
[0266] 在一些实施方案中，所述化合物具有式Ii且R为H。
[0267] 在一些实施方案中，所述化合物具有式Ii且R2为 其中P*为4至8元单环或双环饱和杂环基且R2*、Rx1和t如先前所定义。
[0268] 在一些实施方案中，所述化合物具有式Ii且R2为 其中P*为4至8元单环或双环饱和杂环基，Rx1为氢或C1-C4烷基且R2*如先前所定义。
[0269] 在一些实施方案中，所述化合物具有式Ij：
[0270]
[0271] 在一些实施方案中，所述化合物具有式Ij且R为烷基。
[0272] 在一些实施方案中，所述化合物具有式Ij且R为H。
[0273] 在一些实施方案中，所述化合物具有式Ij且R2为 其中P*为4至8元单环或双环饱和杂环基。
[0274] 在一些实施方案中，所述化合物具有式Ij且R2为 其中P*为4至8元单环或双环饱和杂环基，Rx1为氢或C1-C4烷基。
[0275] 在一些实施方案中，所述化合物具有式Ij且R为H，且两个X均为N。
[0276] 在一些实施方案中，所述化合物具有以下结构：
[0277]
[0278] 在一些实施方案中，所述化合物具有式Ik且R2为 其中P*为4至8元单环或双环饱和杂环基。
[0279] 在一些实施方案中，所述化合物具有式Ik且R2为 其中P*为4至8元单环或双环饱和杂环基，Rx1为氢或C1-C4烷基。
[0280] 在一些实施方案中，所述化合物具有式Il：
[0281]
[0282] 在一些实施方案中，所述化合物具有式Il且R2为 其中P*为4至8元单环或双环饱和杂环基。
[0283] 在一些实施方案中，所述化合物具有式Il且R2为 其中P*为4至8元单环或双环饱和杂环基，Rx1为氢或C1-C4烷基。
[0284] 在一些实施方案中，所述化合物具有式Im：
[0285]
[0286] 在一些实施方案中，所述化合物具有式Im且R2为 其中P*为4至8元单环或双环饱和杂环基。
[0287] 在一些实施方案中，所述化合物具有式Im且R2为 其中P*为4至8元单环或双环饱和杂环基，Rx1为氢或C1-C4烷基。
[0288] 在一些实施方案中，所述化合物具有式IIa：
[0289]
[0290] 在一些实施方案中，所述化合物具有式IIa且R2为其中P*为4至8元单环或双环饱和杂环基。
[0291] 在一些实施方案中，所述化合物具有式IIa且R2为其中P*为4至8元单环或双环饱和杂环基，Rx1为氢或C1-C4烷基。
[0292] 在一些实施方案中，所述化合物具有式IIb：
[0293]
[0294] 在一些实施方案中，所述化合物具有式Im且R2为 其中P*为4至8元单环或双环饱和杂环基。
[0295] 在一些实施方案中，所述化合物具有式Im且R2为 其x1
中P*为4至8元单环或双环饱和杂环基，R 为氢或C1-C4烷基。
[0296] 在一些方面，活性化合物为：
[0297]
[0298] 在某些实施方案中，所述化合物选自：
[0299]
[0300]
[0301] 其中R为C(H)X、NX、C(H)Y或C(X)2，
[0302] 其中X为直链、支链或环状C1至C5烷基，包括甲基、乙基、丙基、环丙基、异丙基、丁基、仲丁基、叔丁基、异丁基、环丁基、戊基、异戊基、新戊基、叔戊基、仲戊基和环戊基；且[0303] Y为NR1R2，其中R1和R2独立地为X，或其中R1和R2为一起形成包括一个或两个杂原子(N、O或S)的桥的烷基；
[0304] 且其中两个X基团可以一起形成包括一个或两个杂原子(N、S或O)的烷基桥或桥以形成螺化合物。
[0305] 式T的IUPAC名为2'-((5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)氨基)-7',8'-二氢-6'H-螺[环己烷-1,9'-吡嗪并[1',2':1,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶]-6'-酮；式Q为2'-((5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)氨基)-7',8'-二氢-6'H-螺[环己烷-1,9'-吡嗪并[1',2':1,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶]-6'-酮；式GG为2'-((5-(4-异丙基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)氨基)-7',8'-二氢-6'H-螺[环己烷-1,9'-吡嗪并[1',2':1,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶]-6'-酮；且式U为2'-((5-(4-吗啉并哌啶-1-基)吡啶-2-基)氨基)-7',8'-二氢-6'H-螺[环己烷-1,9'-吡嗪并[1',2':1,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶]-6'-酮。
[0306] 在本发明内且可以用于所公开的治疗方法和组合物中的其它特定化合物包括下表1中所列出的结构。
[0307] 表1：CDK4/6抑制剂的结构
[0308]
[0309]
[0310]
[0311]
[0312]
[0313]
[0314]
[0315]
[0316]
[0317]
[0318]
[0319]
[0320]
[0321] 同位素取代
[0322] 本发明包括化合物和具有量超过同位素天然丰度(即富集)的所需原子同位素取代的化合物的使用。同位素是具有相同的原子序数但不同的质量数，即质子数目相同但中子数目不同的原子。通过一般实例且不限于，可以在所述结构中任何地方使用氢的同位素，例如氘(2H)和氚(3H)。或者或另外，可以使用碳的同位素，例如13C和14C。一种优选同位素取代是在分子上一个或多个位置氘取代氢以改善药物的性能。氘可以在代谢期间键断裂的位置中结合(α-氘动力学同位素效应)或紧靠或接近键断裂位点结合(β-氘动力学同位素效应)。
[0323] 经例如氘的重同位素取代可以提供某些由代谢稳定性更大产生的治疗优点，例如体内半衰期延长或所需剂量减少。在代谢分解位点氘取代氢可以降低该键代谢的速率或消除。在氢原子可以存在的化合物的任何位置，氢原子可以是氢的任何同位素，包括氕(1H)、氘(2H)和氚(3H)。因此，除非上下文清楚地另外规定，否则本文中提及化合物涵盖所有潜在的同位素形式。
[0324] 术语“同位素标记”类似物是指作为“氘化类似物”、“13C-标记类似物”或“氘化/13C标记类似物”的类似物。术语“氘化类似物”意指本文中描述的化合物，其中H-同位素，即氢/氕(1H)经H同位素(即氘(2H))取代。氘取代可以是部分或完全的。部分氘取代意指至少一个氢经至少一个氘取代。在某些实施方案中，同位素在任何相关位置90％、95％或99％或更多富集同位素。在一些实施方案中，其是在预定位置90％、95％或99％富集的氘。
[0325] CDK复制依赖性细胞和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂
[0326] 组织特异性干细胞和其它固有增殖细胞子集能够自我更新，意指在成年哺乳动物寿命中其能够通过调控的复制置换本身。另外，干细胞不对称地分裂，产生“子代”或“祖”细胞，这些细胞又产生既定器官的各种组分。举例来说，在造血系统中，造血干细胞产生祖细胞，祖细胞又产生血液的所有分化组分(例如白血球、红血球和血小板)。参见图1。
[0327] 某些增殖细胞，例如HSPC，需要增生性激酶细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)和/或细胞周期蛋白依赖性激酶6(CDK6)的酶活性用于细胞复制。相比之下，成年哺乳动物中的大部分增殖细胞(例如骨髓中更加分化的血液形成细胞)不需要CDK4和/或CDK6(即CDK4/6)的活性。这些分化的细胞可以在缺乏CDK4/6活性下通过使用其它增生性激酶，例如细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)或细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)增殖。
[0328] 施用的CDK4/6抑制剂选自包含式I、式II、式III、式IV或式V之化合物或组合物或其组合。在一个实施方案中，化合物选自表1中描述的化合物。
[0329] 在某些实施方案中，CDK4/6抑制剂是式I、II、III、IV或V的CDK4/6抑制剂或其药学上可接受的组合物、盐、同位素类似物或前药，其中化合物提供的保护实际上是短暂和瞬时的，允许显著部分的细胞在化学治疗剂的作用停止后，例如在不到约24、30、36或40小时内快速地同步再进入细胞周期。在一个实施方案中，化合物选自表1中描述的化合物或其药学上可接受的组合物、盐、同位素类似物或前药。在一个实施方案中，化合物选自化合物T、Q、GG、U或AAAA，或其药学上可接受的组合物、盐、同位素类似物或前药。静止在细胞周期G1期内的细胞对化学治疗剂的破坏作用比增殖细胞更有抵抗力。用于所描述的方法的CDK4/6抑制化合物是高度选择性的有效CDK4/6抑制剂，具有最低的CDK2抑制活性。在一个实施方案中，用于本文中描述的方法中的CDK4/6化合物的CDK4/CycD1IC50抑制浓度值比其对CDK2/CycE抑制相应的IC50浓度值低>1500倍、>1800倍、>2000倍、>2200倍、>2500倍、>2700倍、>3000倍、>3200倍或更大。在一个实施方案中，用于本文中描述的方法的CDK4/6抑制剂对CDK4/CycD1抑制的IC50浓度值为约<1.50nM、<1.25nM、<1.0nM、<0.90nM、<0.85nM、<0.80nM、<
0.75nM、<0.70nM、<0.65nM、<0.60nM、<0.55nM或更小。在一个实施方案中，用于本文中描述的方法的CDK4/6抑制剂对CDK2/CycE抑制的IC50浓度值约>1.0μM、>1.25μM、>1.50μM、>1.75μM、>2.0μM、>2.25μM、>2.50μM、>2.75μM、>3.0μM、>3.25μM、>3.5μM或更大。在一个实施方案中，用于本文中描述的方法的CDK4/6抑制剂对CDK2/CycA IC50的IC50浓度值>0.80μM、>0.85μM、>0.90μM、>0.95μM、>.1.0μM、>1.25μM、>1.50μM、>1.75μM、>2.0μM、>2.25μM、>2.50μM、>
2.75uM、>3.0μM或更大。在一个实施方案中，用于本文中描述的方法的CDK4/6抑制剂选自由式I、式II、式III、式IV或式V或其药学上可接受的组合物、盐或前药组成的群组。在一个实施方案中，化合物选自表1中描述的化合物或其药学上可接受的组合物、盐、同位素类似物或前药。在一个实施方案中，化合物选自化合物T、Q、GG、U或AAAA，或其药学上可接受的组合物、盐、同位素类似物或前药。
[0330] 在一个实施方案中，本文中描述的CDK4/6抑制剂用于其中受试者暴露于常规重复的化学治疗剂治疗的CDK4/6复制依赖性健康细胞周期中，其中当暴露化学治疗剂时健康细胞停滞在G1且在受试者下一化学治疗剂治疗前再进入细胞周期。此类循环允许CDK4/6复制依赖性细胞在常规重复治疗之间再生破坏的血细胞谱系，例如与用于癌症的标准化学治疗剂治疗有关的破坏的血细胞谱系，且降低与长期CDK4/6抑制有关的风险。在G1停滞状态与复制状态之间的此循环在使用更长期起作用的CDK4/6抑制剂(例如PD0332991)的时间间隔有限的重复化学治疗剂暴露中是不可能的，因为化合物的延缓G1停滞作用禁止在下一化学治疗剂暴露前显著并有意义地再进入细胞周期或在治疗停止后延迟健康细胞进入细胞周期和复原破坏的组织或细胞。
[0331] 用化学疗法处理的增生性病症包括癌和非癌疾病。在一典型实施方案中，增生性病症是CDK4/6复制非依赖性病症。化合物在包括(但不限于)以下的大量肿瘤类型的化学治疗剂治疗期间有效地保护健康CDK4/6复制依赖性细胞，例如HSPC：乳房、前列腺、卵巢、皮肤、肺、结肠直肠、脑(即神经胶质瘤)和肾。优选地，选择性CDK4/6抑制剂不应损害化学治疗剂的功效或停滞G1，停滞癌细胞。许多癌症不依赖于CDK4/6的活性来增殖，因为其可以混杂地使用增生性激酶(例如可以使用CDK 1/2/4/或6)或缺乏通过CDK失活的成视网膜细胞瘤肿瘤抑制蛋白(Rb)的功能。某些肿瘤对CDK4/6抑制的潜在敏感性可以基于肿瘤类型和分子遗传学使用标准技术推断。典型地不受CDK4/6抑制影响的癌症是特征可以为包括(但不限于)以下的群组中的一或多者的癌症：CDK1或CDK2活性增加、成视网膜细胞瘤肿瘤抑制蛋白(Rb)丧失、不足或不存在、MYC表现水平高、细胞周期蛋白E(例如E1或E2)增加和细胞周期蛋白A增加或Rb失活蛋白(例如HPV编码的E7)表现。此类癌症可以包括(但不限于)小细胞肺癌、成视网膜细胞瘤、HPV阳性恶性疾病(如宫颈癌和某些头颈部癌)、MYC扩增肿瘤(例如伯基特氏淋巴瘤(Burkitts’Lymphoma))和三重阴性乳癌；某些类别肉瘤、某些类别非小细胞肺癌、某些类别黑色素瘤、某些类别胰腺癌、某些类别白血病、某些类别淋巴瘤、某些类别脑癌、某些类别结肠癌、某些类别前列腺癌、某些类别卵巢癌、某些类别子宫癌、某些类别甲状腺癌和其它内分泌组织癌、某些类别唾液癌、某些类别胸腺癌瘤、某些类别肾癌、某些类别膀胱癌和某些类别睾丸癌。
[0332] 成视网膜细胞瘤(Rb)肿瘤抑制蛋白(Rb空白)的丧失或不存在可以通过本领域技术人员已知的任何标准分析，包括(但不限于)蛋白质印迹法、ELISA(酶联免疫吸附分析)、IHC(免疫组织化学)和FACS(荧光活化细胞分选)确定。分析的选择将取决于利用的组织、细胞系或替代组织样品，例如蛋白质印迹法和ELISA可以用于任何或所有类型的组织、细胞系或替代组织，而IHC方法将更适用于本发明的方法中利用的组织是肿瘤活检的情况。FACs分析将大部分可应用于呈单细胞悬浮液的样品，例如细胞系和分离的外周血单核细胞。参见例如US 20070212736“Functional Immunohistochemical Cell Cycle Analysis as a Prognostic Indicator for Cancer”。
[0333] 或者，分子遗传测试可以用于测定成视网膜细胞瘤基因状态。用于成视网膜细胞瘤的分子遗传测试包括如以下中所描述的测试：Lohmann及Gallie“Retinoblastoma.Gene Reviews”(2010)http://www.ncbi.nlm.nih.gov/bookshelf/br.fcgi？book＝gene&part＝retinobl astoma或Parsam等人“A comprehensive,sensitive and economical approach for the detection of mutations in the RB1 gene in retinoblastoma”Journal of Genetics,88(4),517-527(2009)。
[0334] CDK1或CDK2的活性增加、MYC表现水平高、细胞周期蛋白E增加和细胞周期蛋白A增加可以通过本领域技术人员已知的任何标准分析，包括(但不限于)蛋白质印迹法、ELISA(酶联免疫吸附分析)、IHC(免疫组织化学)和FACS(荧光活化细胞分选)确定。分析的选择将取决于利用的组织、细胞系或替代组织样品，例如蛋白质印迹法和ELISA可以用于任何或所有类型的组织、细胞系或替代组织，而IHC方法将更适用于本发明的方法中利用的组织是肿瘤活检的情况。FACs分析将大部分可应用于呈单细胞悬浮液的样品，例如细胞系和分离的外周血单核细胞。
[0335] 在一些实施方案中，癌症选自小细胞肺癌、成视网膜细胞瘤和三重阴性(ER/PR/Her2阴性)或“基底样”乳癌，其几乎一直使成视网膜细胞瘤肿瘤抑制蛋白(Rb)失活，因此不需要CDK4/6活性来增殖。三重阴性(基线样)乳癌也几乎一直在遗传或功能上是Rb空白。此外，某些病毒诱发的癌症(例如宫颈癌和头颈部癌子集)表达使Rb失活的病毒蛋白质(E7)，使得这些肿瘤在功能上是Rb空白。一些肺癌也被认为是由HPV引起。在一个具体实施方案中，癌症是小细胞肺癌，且患者用选自依托泊苷、卡铂和顺铂或其组合的DNA破坏剂治疗。
[0336] 本文中描述的所选CDK4/6抑制剂也可以用于在包括(但不限于)以下的非癌症增生性疾病中异常组织的化学治疗剂治疗期间保护健康的CDK4/6复制依赖性细胞：牛皮癣、狼疮、关节炎(特别是类风湿性关节炎)、婴儿中血管瘤病、多发性硬化、骨髓退化性疾病、神经纤维瘤、神经节瘤病、瘢痕瘤形成、骨骼的佩吉特氏病(Paget's Disease)、乳房的纤维囊肿性病、派若尼氏(Peyronie’s)和杜氏(Duputren's)纤维化、再狭窄和肝硬化。此外，如果发生事故辐射或过度剂量(例如甲氨蝶呤过度剂量)，那么选择性CDK4/6抑制剂可以用于改善化学治疗剂的作用。
[0337] 根据本发明，活性化合物可以依任何化学治疗剂治疗时程和以符合规定疗程的任何剂量施用受试者。在施用化学治疗剂之前、期间或之后施用选择性CDK4/6抑制剂化合物。在一个实施方案中，本文中描述的CDK4/6抑制剂可以在化学治疗剂治疗前24小时直到暴露后24小时范围内的时间段期间施用受试者。然而，此时间段可以延长至早于暴露于药剂前
24小时的时间(例如基于化学治疗剂用于实现适合血浆浓度所花费的时间和/或化合物的血浆半衰期)。此外，时间段可以延长至比暴露于化学治疗剂后24小时更长，只要后面的CDK4/6抑制剂施用产生至少一些保护作用即可。此类暴露后处理尤其可以适用于事故辐射或过度剂量的情况。
[0338] 在一些实施方案中，选择性CDK4/6抑制剂可以在施用化学治疗剂前的时间段施用受试者，使得选择性CDK4/6抑制剂的血浆水平在施用化学治疗剂的时候达到峰值。合宜时，选择性CDK4/6抑制剂可以与化学治疗剂同时施用，以简化治疗方案。在一些实施方案中，化学保护剂和化学治疗剂可以提供于单一制剂中。
[0339] 在一些实施方案中，选择性CDK4/6抑制剂可以施用至受试者，使得化学治疗剂可以在更高剂量下(增加化学治疗剂剂量强度)或更频繁(增加化学治疗剂剂量密度)施用。剂量密集化学疗法是一种化学疗法治疗计划，其中药物在治疗之间的给予时间少于标准化学疗法治疗计划。化学疗法剂量强度表示每单位时间施用的化学疗法的单位剂量。剂量强度可以通过改变施用的剂量、施用时间间隔或两者增加或减少。骨髓抑制继续代表癌症化学疗法的主要剂量限制性毒性，引起相当大的发病率和死亡率，以及频繁减少化学疗法剂量强度，此可能有损疾病控制和存活率。如本文中描述的化合物和其用途表示一种增加化学疗法剂量密度和/或剂量强度，同时减轻不良事件，例如(但不限于)骨髓抑制的方式。
[0340] 必要时，多剂的所选CDK4/6抑制剂化合物可以施用至受试者。或者，受试者可以给予单剂的所选CDK4/6抑制剂。举例来说，可以施用CDK4/6抑制剂，以便CDK4/6复制依赖性健康细胞在化学治疗剂暴露期间停滞在G1，其中由于化合物的G1停滞作用快速消散，所以很多健康细胞在化学治疗剂暴露后不久，例如在约24-48小时或更少时间内再进入细胞周期且能够复制，并继续复制，直到在下一化学治疗剂治疗前施用CDK4/6抑制剂。在一个实施方案中，施用CDK4/6抑制剂以允许CDK4/6复制依赖性健康细胞在G1停滞与再进入细胞周期之间循环，从而适应重复给药的化学治疗剂治疗方案，例如包括(但不限于)其中如下施用化学治疗剂的治疗方案：每21天，在第1-3天；每28天，在第1-3天；每3周，在第1天；每28天，在第1天、第8天和第15天；每28天，在第1天和第8天；每21天，在第1天和第8天；每21天，在第1天-第5天；一周1天，历时6-8周；在第1天、第22天和第43天；每周，第1天和第2天；第1-4天和第22天-第25天；第1-4天；第22天-第25天；和第43-46天；和类似类型方案，其中CDK4/6复制依赖性细胞在化学治疗剂暴露期间停滞在G1且在化学治疗剂暴露之间显著部分的细胞再进入细胞周期。
[0341] 在一个实施方案中，本文中描述的CDK4/6抑制剂用以在CDK4/6复制非依赖性小细胞肺癌治疗方案期间对受试者的CDK4/6复制依赖性健康细胞提供化学保护。在一个实施方案中，施用CDK4/6抑制剂以在例如(但不限于)以下的小细胞肺癌治疗方案中提供化学保护：每21天在第1天顺铂60mg/m2IV加在第1-3天依托泊苷120mg/m2IV，循环4次；每28天在第1天顺铂80mg/m2IV加在第1-3天依托泊苷100mg/m2IV，循环4次；每21-28天在第1天顺铂60-
80mg/m2IV加在第1-3天依托泊苷80-120mg/m2IV(最多循环4次)；每28天在第1天卡铂AUC 
5-6IV加在第1-3天依托泊苷80-100mg/m2IV(最多循环4次)；
[0342] 每21-28天在第1天顺铂60-80mg/m2IV加在第1-3天依托泊苷80-120mg/m2IV；每28天在第1天卡铂AUC 5-6IV加在第1-3天依托泊苷80-100mg/m2IV(最多循环6次)；每28天在第1天顺铂60mg/m2IV加在第1、8和15天伊立替康60mg/m2IV(最多循环6次)；每21天在第1和8天顺铂30mg/m2IV或在第1天80mg/m2IV加在第1和8天伊立替康65mg/m2IV(最多循环6次)；
每28天在第1天卡铂AUC 5IV加在第1、8和15天伊立替康50mg/m2IV(最多循环6次)；每21天在第1天卡铂AUC 4-5IV加在第1天伊立替康150-200mg/m2IV(最多循环6次)；每21-28天在第1天环磷酰胺800-1000mg/m2IV加在第1天多柔比星40-50mg/m2IV加在第1天长春新碱1-
1.4mg/m2IV(最多循环6次)；每4周每天依托泊苷50mg/m2PO，历时3周；每21天在第1-5天拓扑替康2.3mg/m2PO；每21天在第1-5天拓扑替康1.5mg/m2IV；每28天在第1天卡铂AUC 5IV加在第1、8和15天伊立替康50mg/m2IV；每21天在第1天卡铂AUC 4-5IV加在第1天伊立替康
150-200mg/m2IV；每28天在第1、8和15天顺铂30mg/m2IV加在第1、8和15天伊立替康60mg/m2IV；每28天在第1天顺铂60mg/m2IV加在第1、8和15天伊立替康60mg/m2IV；每21天在第1和
8天顺铂30mg/m2IV或在第1天80mg/m2IV加在第1和8天伊立替康65mg/m2IV；每8周每周紫杉醇80mg/m2IV，历时6周；每3周在第1天紫杉醇175mg/m2IV；每4周每天依托泊苷50mg/m2PO，历时3周；每21天在第1-5天拓扑替康2.3mg/m2PO；每21天在第1-5天拓扑替康1.5mg/m2IV；
每28天在第1天卡铂AUC 5IV加在第1、8和15天伊立替康50mg/m2IV；每21天在第1天卡铂AUC 
4-5IV加在第1天伊立替康150-200mg/m2IV；每28天在第1、8和15天顺铂30mg/m2IV加在第1、
8和15天伊立替康60mg/m2IV；每28天在第1天顺铂60mg/m2IV加在第1、8和15天伊立替康
60mg/m2IV；每21天在第1和8天顺铂30mg/m2IV或在第1天80mg/m2IV加在第1和8天伊立替康
65mg/m2IV；每8周每周紫杉醇80mg/m2IV，历时6周；和每3周在第1天紫杉醇175mg/m2IV。
[0343] 在一个实施方案中，本文中描述的CDK4/6抑制剂在其中DNA破坏剂选自以下的治疗方案的第1天、第2天和第3天施用患有小细胞肺癌的受试者：卡铂、依托泊苷和顺铂或其组合，每21天在第1天、第2天和第3天施用。
[0344] 在一个实施方案中，本文中描述的CDK4/6抑制剂用以在CDK4/6复制非依赖性头颈部癌治疗方案期间对受试者的CDK4/6复制依赖性健康细胞提供化学保护。在一个实施方案中，施用CDK4/6抑制剂以在例如(但不限于)以下的CDK4/6复制非依赖性头颈部癌治疗方案中提供化学保护：在第1、22和43天顺铂100mg/m2IV或每周40-50mg/m2IV，历时6-7周；开始放射疗法前西妥昔单抗400mg/m2IV负荷剂量1周，接着每周250mg/m2(地塞米松、苯海拉明和雷尼替丁术前用药)；每周在第2天顺铂20mg/m2IV达7周加每周在第1天紫杉醇30mg/m2IV达7周；在第1-4天和第22-25天顺铂20mg/m2/天IV加通过连续静脉内输注在第1-4天和第22-25天5-FU 1000mg/m2/天；在放射日给予，通过连续静脉内输注在第1-5天5-FU 800mg/m2加羟基脲1g PO q12h(每次循环11剂)；每隔一周给予化学疗法和放射，总共13周；在1-4天、第22-25天和第43-46天卡铂70mg/m2/天IV加通过连续静脉内输注在1-4天、第22-25天和第43-46天5-FU 600mg/m2/天；每周在第1天卡铂AUC 1.5IV加在每周第1天紫杉醇45mg/m2IV；在第1、22和43天顺铂100mg/m2IV或每周40-50mg/m2IV，历时6-7周；在放射疗法期间，每3周在第1天多烯紫杉醇75mg/m2IV加在第1天顺铂100mg/m2IV加通过连续静脉内输注在
1-4天5-FU 100mg/m2/天，循环3次，随后3-8周后，每周卡铂AUC 1.5IV达7周；每3周在第1天多烯紫杉醇75mg/m2IV加在第1天顺铂75mg/m2IV加通过连续静脉内输注在1-4天5-FU 
750mg/m2/天，循环4次；每3周在第1天顺铂100mg/m2IV，循环6次，加每3周通过连续静脉内输注在1-4天5-FU 1000mg/m2/天，循环6次，在第1天加西妥昔单抗400mg/m2IV负荷剂量，随后每周250mg/m2IV直到疾病进展(地塞米松、苯海拉明和雷尼替丁术前用药)；每3周在第1天卡铂AUC 5IV，循环6次，加每3周通过连续静脉内输注在1-4天5-FU 1000mg/m2/天，循环6次，加在第1天西妥昔单抗400mg/m2IV负荷剂量，随后每周250mg/m2IV直到疾病进展(地塞米松、苯海拉明和雷尼替丁术前用药)；每3周在第1天顺铂75mg/m2IV加在第1天多烯紫杉醇
75mg/m2IV；每3周在第1天顺铂75mg/m2IV加在第1天紫杉醇175mg/m2IV；每3周在第1天卡铂AUC 6IV加在第1天多烯紫杉醇65mg/m2IV；每3周在第1天卡铂AUC 6IV加在第1天紫杉醇
200mg/m2IV；每3-4周在第1天顺铂75-100mg/m2IV加在第1天西妥昔单抗400mg/m2IV负荷剂量，随后每周250mg/m2IV(地塞米松、苯海拉明和雷尼替丁术前用药)；每3周在第1天顺铂
100mg/m2IV加通过连续静脉内输注在1-4天5-FU 1000mg/m2/天；每周甲氨蝶呤40mg/m2IV(3周等于1次循环)；每3周紫杉醇200mg/m2IV；每3周多烯紫杉醇75mg/m2IV；在第1天西妥昔单抗400mg/m2IV负荷剂量，随后每周250mg/m2IV直到疾病进展(地塞米松、苯海拉明和雷尼替丁术前用药)；每3周在第1天顺铂100mg/m2IV，循环6次，加每3周通过连续静脉内输注在
1-4天5-FU 1000mg/m2/天，循环6次，加在第1天西妥昔单抗400mg/m2IV负荷剂量，随后每周
250mg/m2IV(地塞米松、苯海拉明和雷尼替丁术前用药)；每3周在第1天卡铂AUC 5IV，循环6次，加每3周通过连续静脉内输注在1-4天5-FU 1000mg/m2/天，循环6次，加在第1天西妥昔单抗400mg/m2IV负荷剂量，随后每周250mg/m2IV(地塞米松、苯海拉明和雷尼替丁术前用药)；每3周在第1天顺铂75mg/m2IV加在第1天多烯紫杉醇75mg/m2IV；每3周在第1天顺铂
75mg/m2IV加在第1天紫杉醇175mg/m2IV；每3周在第1天卡铂AUC 6IV加在第1天多烯紫杉醇
65mg/m2IV；每3周在第1天卡铂AUC 6IV加在第1天紫杉醇200mg/m2IV；每3-4周在第1天顺铂
75-100mg/m2IV加在第1天西妥昔单抗400mg/m2IV负荷剂量，随后每周250mg/m2IV(地塞米松、苯海拉明和雷尼替丁术前用药)；每3周在第1天顺铂100mg/m2IV加通过连续静脉内输注在1-4天5-FU 1000mg/m2/天；每周甲氨蝶呤40mg/m2IV(3周等于1次循环)；每3周紫杉醇
200mg/m2IV；每3周多烯紫杉醇75mg/m2IV；在第1天西妥昔单抗400mg/m2IV负荷剂量，随后每周250mg/m2IV直到疾病进展(地塞米松、苯海拉明和雷尼替丁术前用药)；在放射下在第
1、22和43天顺铂100mg/m2IV，随后每4周在第1天顺铂80mg/m2IV加通过连续静脉内输注在
1-4天5-FU 1000mg/m2/天，循环3次；每3周在第1天顺铂75mg/m2IV加在第1天多烯紫杉醇
75mg/m2IV；每3周在第1天顺铂75mg/m2IV加在第1天紫杉醇175mg/m2IV；每3周在第1天卡铂AUC 6IV加在第1天多烯紫杉醇65mg/m2IV；每3周在第1天卡铂AUC 6IV加在第1天紫杉醇
200mg/m2IV；每3周在第1天顺铂100mg/m2IV加通过连续静脉内输注在1-4天5-FU 1000mg/m2/天；每4周顺铂50-70mg/m2IV在第1天加在第1、8和15天吉西他滨1000mg/m2IV；每4周在第1、8和15天吉西他滨1000mg/m2IV或每3周在第1和8天吉西他滨1250mg/m2IV；每周甲氨蝶呤40mg/m2IV(3周等于1次循环)；每3周紫杉醇200mg/m2IV；每3周多烯紫杉醇75mg/m2IV；每
3周在第1天顺铂75mg/m2IV加在第1天多烯紫杉醇75mg/m2IV；每3周在第1天顺铂75mg/m2IV加在第1天紫杉醇175mg/m2IV；每3周在第1天卡铂AUC 6IV加在第1天多烯紫杉醇65mg/
m2IV；每3周在第1天卡铂AUC 6IV加在第1天紫杉醇200mg/m2IV；每3周在第1天顺铂100mg/m2IV加通过连续静脉内输注在1-4天5-FU 1000mg/m2/天；每4周顺铂50-70mg/m2IV在第1天加在第1、8和15天吉西他滨1000mg/m2IV；每4周在第1、8和15天吉西他滨1000mg/m2IV或每3周在第1和8天吉西他滨1250mg/m2IV；每周甲氨蝶呤40mg/m2IV(3周等于1次循环)；每3周紫杉醇200mg/m2IV；和每3周多烯紫杉醇75mg/m2IV。
[0345] 在一个实施方案中，本文中描述的CDK4/6抑制剂用以在CDK4/6复制非依赖性三重阴性乳癌治疗方案期间对受试者的CDK4/6复制依赖性健康细胞提供化学保护。在一个实施方案中，施用CDK4/6抑制剂以在例如(但不限于)以下的CDK4/6复制非依赖性三重阴性乳癌治疗方案中提供化学保护：每两周剂量密集多柔比星(阿霉素)和环磷酰胺(环磷酰胺)，循环四次，接着每两周剂量密集紫杉醇(紫杉酚)，循环四次；每三周阿霉素/紫杉醇/环磷酰胺，总共循环四次；每两周阿霉素/紫杉醇/环磷酰胺，总共循环四次；每三个周阿霉素/环磷酰胺，接着紫杉醇(紫杉酚)，各循环四次；和阿霉素/环磷酰胺，接着每两周紫杉醇(紫杉酚)，各循环四次。
[0346] 三重阴性乳癌(TNBC)定义为缺乏雌激素受体、孕激素受体和HER2/neu染色。TNBC对可用于乳癌治疗的大部分有效疗法中的一些不敏感，包括HER2定向疗法，例如曲妥珠单抗，和内分泌疗法，例如他莫昔芬或芳香酶抑制剂。以剂量密集或生理节奏时程施用的组合细胞毒性化学疗法仍然为早期TNBC的标准疗法。铂剂近来已经显露为用于治疗TNBC的相关药物，在新辅助背景下卡铂添加到紫杉醇和阿霉素加环磷酰胺化学疗法。聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)抑制剂显露为有望治疗TNBC的治疗剂。PARP是参与许多细胞过程，包括DNA修复的酶家族。
[0347] 作为非限制性说明，受试者暴露于化学治疗剂一周至少5次、一周至少4次、一周至少3次、一周至少2次、一周至少1次、一个月至少3次、一个月至少2次或一个月至少1次，其中受试者的CDK4/6复制依赖性健康细胞在治疗期间停滞在G1且允许在化学治疗剂暴露中间，例如在治疗中断期间循环。在一个实施方案中，受试者一周进行5次化学治疗剂治疗，其中受试者的CDK4/6复制依赖性健康细胞在化学治疗剂暴露期间停滞在G1且在2天中断期间，例如过周末，允许再进入细胞周期。
[0348] 在一个实施方案中，使用本文中描述的CDK4/6抑制剂，使受试者的CDK4/6复制依赖性健康细胞在化学治疗剂整个暴露时期期间停滞，例如在连续多天方案期间，细胞停滞超过完成连续多天过程所需的时间段，接着允许在连续多天过程结束时再循环。在一个实施方案中，使用本文中描述的CDK4/6抑制剂，使受试者的CDK4/6复制依赖性健康细胞在整个化学治疗剂方案期间，例如在历时三周的每日化学治疗剂暴露中停滞，并在治疗方案完成后迅速地再进入细胞周期。
[0349] 在一个实施方案中，受试者已经暴露于化学治疗剂，并使用本文中描述的CDK4/6抑制剂，使受试者的CDK4/6复制依赖性健康细胞在暴露后处于G1停滞以减轻例如DNA破坏。在一个实施方案中，CDK4/6抑制剂在化学治疗剂暴露后至少1/2小时、至少1小时、至少2小时、至少3小时、至少4小时、至少5小时、至少6小时、至少7小时、至少8小时、至少10小时、至少12小时、至少14小时、至少16小时、至少18小时、至少20小时或更长时间施用。
[0350] 在一些实施方案中，本发明提供了保护哺乳动物(尤其人类)免受化学治疗剂的急性和慢性毒性作用的方法，其通过用选自式I、式II、式III、式IV或式V的CDK4/6抑制剂或其药学上可接受的组合物、盐、同位素类似物或前药瞬时(例如在不到约40、36、30、24小时或更少时间内)治疗，迫使CDK4/6复制依赖性健康细胞，例如造血干细胞和祖细胞(HSPC)和/或肾上皮细胞进入静态。在一个实施方案中，化合物选自表1中描述的化合物或其药学上可接受的组合物、盐、同位素类似物或前药。在一个实施方案中，化合物选自化合物T、Q、GG、U或AAAA，或其药学上可接受的组合物、盐、同位素类似物或前药。CDK4/6复制依赖性细胞在抑制剂治疗停止，且其细胞内作用消散后通常从瞬时静止此时期恢复，接着起作用。在静止期间，CDK4/6复制依赖性细胞免受化学治疗剂的作用。
[0351] 在一些实施方案中，CDK4/6复制依赖性健康细胞可以通过多次分开施用本文中描述的CDK4/6抑制剂，停滞更长时期，例如经数小时、数天和/或数周。由于例如HSPC等CDK4/6复制依赖性健康细胞在CDK4/6抑制剂细胞内作用消散后快速并同步再进入细胞周期，所以细胞能够比例如PD0332991等具有更长G1停滞型态的CDK4/6抑制剂更快地复原细胞谱系。
[0352] 通过选择性CDK4/6抑制剂提供的化学毒性减少可以允许在医学相关化学疗法中剂量加强(例如可以在固定时间段内给予更多疗法)，其将转化为更佳的功效。因此，本发明公开的方法可以使化学治疗方案毒性更少且更有效。此外，与外源性生物生长因子的保护性治疗相比，本文中描述的选择性CDK4/6抑制剂是可口服的小分子，其可以配制用于经由大量不同的途径施用。适当时，小分子可以配制用于经口、局部、鼻内、吸入、静脉内或任何其它期望施用形式。
[0353] 适用于本文中描述的方法的CDK4/6抑制剂是一种选择性CDK4/6抑制剂化合物，其选择性地抑制CDK4和CDK6中的至少一个，或主要作用模式是通过CDK4和/或CDK6的抑制。在一个实施方案中，如CDK4/CycD1 IC50磷酸化分析中测量的选择性CDK4/6抑制剂对CDK4的IC50比如CDK2/CycE IC50磷酸化分析中测量的所述化合物对CDK2的IC50低至少1500、2000、5000乃至10,000倍。在一个实施方案中，CDK4/6抑制剂比PD0332991有效至少约10倍或倍数大得多(即在CDK4/CycD1磷酸化分析中IC50低至少10倍或更多)。
[0354] 如本文中描述的所选CDK4/6抑制剂的使用可以诱发CDK4/6依赖性细胞中选择性G1停滞(例如如基于细胞的体外分析中测量)。在一个实施方案中，CDK4/6抑制剂能够增加G1期CDK4/6依赖性细胞的百分比，同时降低G2/M期和S期CDK4/6依赖性细胞的百分比。在一个实施方案中，选择性CDK4/6抑制剂在CDK4/6依赖性细胞中诱发基本上纯(即“彻底”)G1细胞周期停滞(例如其中选择性CDK4/6抑制剂的治疗诱发细胞周期停滞，使得如标准方法(例如碘化丙锭(PI)染色或其它)所定义，大部分细胞停滞在G1，其中组合的G2/M和S期细胞的群体不到总细胞群体的约30％、约25％、约20％、约15％、约10％、约5％、约3％或更少。评估细胞群体的细胞分裂期的方法为本领域中已知(参见例如美国专利申请公布No.2002/0224522)并包括血细胞计数分析、微观分析、梯度离心、淘洗、荧光技术(包括免疫荧光)和其组合。血细胞计数技术包括将细胞暴露于标记试剂或染色剂，例如DNA结合染料，例如PI，并通过流动式细胞测量术分析细胞DNA含量。免疫荧光技术包括用荧光抗体检测特定细胞周期指示物，例如胸苷类似物(例如5-溴-2-脱氧尿苷(BrdU)或碘代脱氧尿嘧啶核苷)。
[0355] 在一些实施方案中，使用本文中描述的选择性CDK4/6抑制剂使得尤其与除CDK4和或CDK6以外的激酶(例如CDK2)抑制相关的脱靶效应降低或基本上没有，因为本文中描述的选择性CDK4/6抑制剂是CDK2的不良抑制剂(例如>1uM IC50)。此外，由于CDK4/6的高选择性，使用本文中描述的化合物不应诱发CDK4/6非依赖性细胞的细胞周期停滞。另外，由于G1停滞作用的短暂瞬时性质，故CDK4/6复制依赖性细胞比使用PD0332991相对更快速地再进入细胞周期，使得在一个实施方案中，在长期治疗方案期间由于HSPC能够在化学治疗剂治疗之间复制而降低血液毒性发展的风险。
[0356] 在一些实施方案中，使用本文中描述的选择性CDK4/6抑制剂降低不良脱靶效应的风险，包括(但不限于)长期毒性、抗氧化作用和雌激素作用。抗氧化作用可以通过本领域中已知的标准分析确定。举例来说，没有显著抗氧化作用的化合物是不显著地除去自由基，例如氧自由基的化合物。化合物的抗氧化作用可以与例如染料木素等具有已知的抗氧化活性的化合物相比。因此，没有显著抗氧化活性的化合物可以是相对于染料木素，具有小于约2、3、5、10、30或100倍抗氧化活性的化合物。雌激素活性也可以经由已知的分析确定。举例来说，非雌激素化合物是未显著结合且活化雌激素受体的化合物。因此，基本上没有雌激素作用的化合物可以是相对于例如染料木素等具有雌激素活性的化合物，具有小于约2、3、5、
10、20或100倍雌激素活性的化合物。
[0357] 合成所选CDK4/6抑制剂
[0358] 本发明的CDK4/6抑制剂可以通过本领域技术人员已知的任何方式，包括例如根据以下1至9的通用方案合成。特定合成可见于WO2012/061156(对应5-(4-异丙基哌嗪-1-基)吡啶-2-胺和5-(4-吗啉代-1-哌啶基)吡啶-2-胺)。式I和式II可以根据方案1，使用对应经取代的2-氨基嘧啶或如WO2012/061156中所描述合成。
[0359]
[0360] 方案1
[0361]
[0362] 方案2
[0363] 在方案2中，Ref-1为WO 2010/020675A1；Ref-2为White,J.D.等人J.Org.Chem.1995,60,3600；和Ref-3为Presser,A.和Hufner,A.Monatshefte für Chemie 
2004,135,1015。
[0364]
[0365] 方案3
[0366] 在方案3中，Ref-1为WO 2010/020675 A1；Ref-4为WO 2005/040166 A1；且Ref-5为Schoenauer,K和Zbiral,E.Tetrahedron Letters 1983,24,573。
[0367]
[0368] 方案4
[0369] 在方案4中，Ref-1为WO 2010/020675 A1。
[0370]
[0371] 方案5
[0372]
[0373] 方案6
[0374]
[0375] 方案7
[0376]
[0377] 方案8
[0378]
[0379] 方案9
[0380] 在方案9中，Ref-1为WO 2010/020675 A1；Ref-2为WO 2005/040166 A1；且Ref-3为Schoenauer,K和Zbiral,E.Tetrahedron Letters 1983,24,573。
[0381]
[0382] 方案10
[0383] 在一个实施方案中，在例如三乙胺等有机碱存在下在例如二氯甲烷等有机溶剂中内酰胺中间体用BOC酸酐处理。在镍催化剂存在下Boc保护的内酰胺用二氧化碳处理以产生羧酸。羧酸与亚硫酰氯在例如甲苯等有机溶剂存在下反应。所得酸氯化物用胺处理以产生可以用例如三氟乙酸等强酸脱保护的酰胺，以产生最终目标抑制剂化合物。
[0384] 或者，内酰胺可以通过羧酸与保护胺在强酸和脱水剂存在下反应产生，强酸和脱水剂可以一起在一个部分中作为强酸酸酐。强酸酸酐的实例包括(但不限于)三氟乙酸酐、三溴乙酸酐、三氯乙酸酐或混合酸酐。脱水剂可以是基于碳二亚胺的化合物，例如(但不限于)DCC(N,N-二环己基碳二亚胺)、EDC(1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺或DIC(N,N-二异丙基碳二亚胺)。可能需要额外的步骤来去掉N-保护基且方法为本领域的技术人员已知。
[0385] 或者，键结至嘧啶环的卤素部分可以经可以被伯胺置换的任何离去基团取代，例如产生最终产物的中间体，例如Br、I、F、SMe、SO2Me、SO烷基、SO2烷基。参见例如Tavares的PCT/US2013/037878。
[0386] 其它胺中间体和最终胺化合物可以通过本领域的技术人员合成。应了解在本发明的时候所述化学可以采用包含可以受保护和脱保护的反应官能团并为本领域的技术人员已知的试剂。参见例如Greene,T.W.和Wuts,P.G.M.,Greene’s Protective Groups in Organic Synthesis,第4版,John Wiley and Sons。
[0387] 以上制备的式T、Q、GG和U通过质谱分析和NMR表征，如下所示：
[0388] 式T
[0389] 7.25(s,1H)7.63(br.s.,2H)7.94(br.s.,1H)8.10(br.s.,1H)8.39(br.s.,1H)9.08(br.s.,1H)11.59(br.s.,1H)。LCMS ESI(M+H)447。
[0390] 式Q
[0391] 1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 0.82(d,J＝7.32Hz,2H)1.08-1.37(m,3H)1.38-1.64(m,2H)1.71(br.s.,1H)1.91(br.s.,1H)2.80(br.s.,1H)3.12(s,1H)3.41(br.s.,4H)
3.65(br.s.,4H)4.09(br.s.,1H)7.26(s,1H)7.52-7.74(m,2H)7.94(br.s.,1H)8.13
(br.s.,1H)8.40(br.s.,1H)9.09(br.s.,1H)9.62(br.s.,1H)11.71(br.s.,1H)。LCMS ESI(M+)433
[0392] 式GG
[0393] 1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 0.85(br.s.,1H)1.17-1.39(m,7H)1.42-1.58(m,2H)1.67-1.84(m,3H)1.88-2.02(m,1H)2.76-2.93(m,1H)3.07-3.22(m,1H)3.29-3.39(m,
1H)3.41-3.61(m,4H)3.62-3.76(m,4H)3.78-3.88(m,1H)4.12(br.s.,1H)7.28(s,1H)7.60-
7.76(m,2H)7.98(s,1H)8.13(br.s.,1H)8.41(s,1H)9.10(br.s.,1H)11.21(br.s.,1H)
11.54(s,1H)。LCMS ESI(M+H)475
[0394] 式U
[0395] 1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 0.84(t,J＝7.61Hz,2H)1.13-1.39(m,4H)1.46(d,J＝14.05Hz,2H)1.64-1.99(m,6H)2.21(br.s.,1H)2.66-2.89(m,2H)3.06(br.s.,1H)3.24-3.36(m,1H)3.37-3.50(m,2H)3.56-3.72(m,2H)3.77-4.00(m,4H)4.02-4.19(m,2H)7.25(s,
1H)7.50-7.75(m,2H)7.89(d,J＝2.93Hz,1H)8.14(d,J＝7.32Hz,1H)8.38(br.s.,1H)9.06(s,1H)11.53(br.s.,1H)。LCMS ESI(M+H)517
[0396] 活性化合物、盐和制剂
[0397] 如本文所用，术语“活性化合物”是指本文中描述的选择性CDK 4/6抑制剂化合物或其药学上可接受的盐或同位素类似物。活性化合物可以通过任何适合的方法施用至受试者。所施用的活性化合物的量和时间安排当然可以取决于治疗的受试者、预期受试者暴露于的化学疗法的剂量、化学治疗剂暴露的时程、施用方式、具体活性化合物的药物动力学特性和主治医师的判断。因此，由于受受试者变化性影响，以下给出的剂量是指导且医师可以调整化合物的剂量以实现医师认为适合于受试者的治疗。在考虑所需治疗程度时，医师可以平衡多种因素，例如受试者的年龄和重量、先前存在的疾病的存在以及其它疾病的存在。药物制剂可以被制备用于任何所需的施用途径，包括(但不限于)经口、静脉内或气溶胶施用，如以下更详细地论述。
[0398] 本文中描述的任何活性化合物的治疗有效剂量将由保健执业医师，依赖于患者的状况、体型和年龄以及递送途径确定。在一个非限制性实施方案中，约0.1至约200mg/kg的剂量具有治疗功效，其中所有重量都是基于活性化合物的重量计算，包括采用盐的情况。在一些实施方案中，剂量可以是提供至多约1与5、10、20、30或40μM之间的活性化合物的血清浓度所需的化合物量。在一些实施方案中，约10mg/kg至约50mg/kg的剂量可以用于经口施用。典型地，约0.5mg/kg至5mg/kg的剂量可以用于肌肉内注射。在一些实施方案中，剂量可以为约1μmol/kg至约50μmol/kg，或任选地，约22μmol/kg与约33μmol/kg之间的化合物，用于静脉内或经口施用。口服剂型可以包括任何适当量的活性物质，每个片剂或其它固体剂型包括5mg至50、100、200或500mg。
[0399] 根据本发明公开的方法，如本文中描述的药学活性化合物可以呈固体形式或呈液体形式经口施用，或可以呈溶液、混悬液或乳液形式肌肉内、静脉内或通过吸入施用。在一些实施方案中，化合物或盐也也可以通过呈脂质体混悬液形式吸入、静脉内或肌肉内施用。当通过吸入施用时，活性化合物或盐可以呈具有任何所需粒度，例如约0.01、0.1或0.5至约
5、10、20或更多微米且任选地约1至约2微米的多个固体颗粒或小滴形式。如本发明公开的化合物已经证明例如当通过经口或静脉内途径施用时优良的药物动力学和药效学特性。
[0400] 在本发明的一个实施方案中，这些改善的CDK4/6抑制剂可以在具有血液生长因子试剂的计划方案中施用。因而，在一个实施方案中，本文中描述的化合物和方法的使用与包括(但不限于)以下的造血生长因子的使用组合：粒细胞群落刺激因子(G-CSF，例如以Neupogen(非格司亭(filgrastin)、Neulasta(聚乙二醇化非格斯亭(peg-filgrastin)或来格司亭(lenograstin)出售)、粒细胞-巨噬细胞群落刺激因子(GM-CSF，例如以莫拉司亭(molgramostim)和沙莫司亭(sargramostim)(Leukine)出售)、M-CSF(巨噬细胞群落刺激因子)、促血小板生成素(巨核细胞生长发育因子(MGDF)，例如以罗米司亭(Romiplostim)和艾曲波帕(Eltrombopag)出售)、介白素(IL)-12、介白素-3、介白素-11(脂肪形成抑制因子或奥普瑞白介素(oprelvekin))、SCF(干细胞因子、青灰因子、试剂盒配体或KL)和促红细胞生成素(EPO)以及其衍生物(例如红细胞生成素-α以Darbopoetin、Epocept、Nanokine、Epofit、Epogin、Eprex和Procrit出售；红细胞生成素-β以例如NeoRecormon、Recormon和Micera出售)、红细胞生成素-δ(以例如Dynepo出售)、红细胞生成素-ω(以例如Epomax出售)、红细胞生成素-ζ(以例如Silapo和Reacrit出售)以及例如Epocept、EPOTrust、Erypro Safe、Repoeitin、Vintor、Epofit、Erykine、Wepox、Espogen、Relipoeitin、Shanpoietin、Zyrop和EPIAO)。
[0401] 药物制剂可以包含本文中描述的活性化合物或其药学上可接受的盐于任何药学上可接受的载体中。如果想要溶液，那么水可以是精选用于水溶性化合物或盐的载体。关于水溶性化合物或盐，例如甘油、丙二醇、聚乙二醇或其混合物等有机媒介物可以是适合的。在后一情况下，有机媒介物可以含有相当大量的水。接着任一情况下的溶液可以用本领域的技术人员已知的适合方式杀菌，且为了说明，通过0.22微孔过滤器过滤杀菌。在杀菌之后，溶液可以分配至适当容器，例如去除热原的玻璃小瓶。分配任选地通过无菌方法进行。
接着可以将杀菌盖板放于小瓶上且必要时可以冻干小瓶内容物。
[0402] 除活性化合物或其盐之外，药物制剂可以含有其它添加剂，例如pH值调整添加剂。具体地说，适用pH值调整试剂包括例如盐酸等酸、碱或缓冲剂，例如乳酸钠、乙酸钠、磷酸钠、柠檬酸钠、硼酸钠或葡糖酸钠。此外，制剂可以含有抗微生物防腐剂。适用抗微生物防腐剂包括对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯和苯甲醇。当制剂放于打算多剂量使用的小瓶时典型地采用抗微生物防腐剂。本文中描述的药物制剂可以使用本领域中众所周知的技术冻干。
[0403] 为经口施用，药物组合物可以采取溶液、混悬液、片剂、丸剂、胶囊、粉末等形式。可以采用含有例如柠檬酸钠、碳酸钙和磷酸钙等各种赋形剂以及例如淀粉(例如马铃薯或木薯淀粉)和某些复合硅酸盐等各种崩解剂以及例如聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖、明胶和阿拉伯胶等粘合剂的片剂。另外，例如硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠和滑石等润滑剂常常非常适用于达成压片目的。可以采用类似类型的固体组合物作为软和硬填充明胶胶囊中的填料。在这方面的物质还包括乳糖或乳糖以及高分子量聚乙二醇。当希望水性混悬液和/或酏剂经口施用时，本发明公开的主题的化合物可以与各种甜味剂、调味剂、着色剂、乳化剂和/或悬浮剂以及例如水、乙醇、丙二醇、甘油等稀释剂和其各种类似组合进行组合。
[0404] 在本文中描述的主题的又一个实施方案中，提供一种可注射的稳定无菌制剂，其包含如本文中描述的活性化合物或其盐，该制剂呈单位剂型于密封容器中。化合物或盐以冻干物形式提供，其能够用适合的药学上可接受的载体复原以形成适于其注射至受试者的液体制剂。当化合物或盐基本上不溶于水时，可以采用足以使化合物或盐在水性载体中乳化的量的足够量的在生理学上可接受的乳化剂。尤其适用的乳化剂包括磷脂酰胆碱和卵磷脂。
[0405] 本文中提供的其它实施方案包括本文公开的活性化合物的脂质体制剂。用于形成脂质体混悬液的技术为本领域中众所周知。当化合物是水溶性盐时使用常规的脂质体技术，可以将其并入脂质小泡中。在此类情况下，由于活性化合物的水溶性，活性化合物可以基本上夹在脂质体的亲水性中心或核心内。所用脂质层可以具有任何常规的组合物且可以含有胆固醇或者可以不含胆固醇。当相关活性化合物不溶于水时，再次采用常规的脂质体形成技术，盐可以基本上夹在形成脂质体结构的疏水性双层脂质内。在任一情况下，如通过使用标准超声处理和均化技术，可以减小产生的脂质体的尺寸。包含本文公开的活性化合物的脂质体制剂可以冻干以产生冻干物，其可以用例如水等药学上可接受的载体复原，再生脂质体悬浮液。
[0406] 还提供适合于呈气溶胶形式通过吸入施用的药物制剂。这些制剂包含本文中描述的希望化合物或其盐的溶液或悬浮液或化合物或盐的多个固体颗粒。所需制剂可以放于小的腔室中并雾化。雾化可以通过压缩空气或通过超声波能实现以形成包含化合物或盐的多个液滴或固体颗粒。液滴或固体颗粒可以例如具有在约0.5至约10微米且任选约0.5至约5微米范围内的粒度。固体颗粒可以通过用本领域中已知的任何适当方式，例如通过微粉化加工固体化合物或其盐获得。任选地，固体颗粒或小滴的尺寸可以为约1到约2微米。在这方面，商业喷雾器可以用来实现此目的。化合物可以经由可呼吸粒子的气溶胶悬浮液用美国专利No.5,628,984中阐述的方式施用，其公开内容以引用的方式整体并入本文中。
[0407] 当适于呈气溶胶形式施用的药物制剂呈液体形式时，制剂可以包含水溶性活性化合物于包含水的载体中。可以存在表面活性剂，其降低制剂的表面张力，当经受雾化时足以形成所需尺寸范围内的小滴。
[0408] 如本文所用，术语“药学上可接受的盐”是指在合理医学判断范围内，适用于与受试者(例如人类受试者)接触，无过度毒性、刺激、过敏反应等，与合理益处/风险比相称，且有效用于其预期用途的盐，以及可能时本发明公开的主题的化合物的两性离子形式。
[0409] 因此，术语“盐”是指本发明公开的主题的化合物的相对无毒的无机和有机酸加成盐。这些盐可以在化合物最终分离和纯化期间原位制备，或通过分开使呈游离碱形式的纯化化合物与适合的有机或无机酸反应且分离由此形成的盐来制备。药学上可接受的碱加成盐可以用金属或胺，例如碱金属和碱土金属氢氧化物或有机胺形成。用作阳离子的金属的实例包括(但不限于)钠、钾、镁、钙等等。适合胺的实例包括(但不限于)N,N'-二苯甲基乙二胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、N-甲基葡糖胺和普鲁卡因。
[0410] 盐可以由无机酸硫酸盐、焦硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、硝酸盐、磷酸盐、磷酸一氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、氯化物、溴化物、碘化物(例如盐酸、硝酸、磷酸、硫酸、氢溴酸、氢碘酸、磷酸等等)。代表性盐包括氢溴化物、盐酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、硝酸盐、乙酸盐、草酸盐、戊酸盐、油酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸酯、月桂酸盐、硼酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐、磷酸盐、甲苯磺酸盐、柠檬酸盐、顺丁烯二酸盐、反丁烯二酸盐、丁二酸盐、酒石酸盐、萘甲酸盐、甲磺酸盐、葡糖庚酸盐、乳糖酸盐、十二烷基硫酸盐和羟乙基磺酸盐等等。盐还可以从有机酸制备，例如脂肪族单羧酸和二羧酸、经苯基取代的链烷酸、羟基链烷酸、链烷二羧酸、芳香族酸、脂肪族和芳香族磺酸等等。代表性盐包括乙酸盐、丙酸盐、辛酸盐、异丁酸盐、草酸盐、丙二酸盐、丁二酸盐、辛二酸盐、癸二酸盐、反丁烯二酸盐、顺丁烯二酸盐、扁桃酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、邻苯二甲酸盐、苯磺酸盐、甲苯磺酸盐、苯乙酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、顺丁烯二酸盐、酒石酸盐、甲烷磺酸盐等等。药学上可接受的盐可以包括基于碱金属和碱土金属的阳离子，例如钠、锂、钙、镁等等，以及无毒铵、季铵和胺阳离子，包括(但不限于)铵、四甲铵、四乙铵、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、乙胺等等。还涵盖氨基酸的盐，例如精氨酸盐、葡糖酸盐、半乳糖醛酸酯等等。参见例如Berge等人,J.Pharm.Sci.,1977,66,1-19，以引用的方式并入本文中。实施例
[0411] 中间体B、E、K、L、1A、1F和1CA根据Tavares,F.X.和Strum,J.C.的标题为CDK Inhibitors的US 8,598,186合成。
[0412] Tavares,F.X.的标题为Lactam Kinase Inhibitors的专利WO 2013/148748、Tavares,F.X.的标题为Synthesis of Lactams的WO 2013/163239和Tavares,F.X.和
Strum,J.C.的标题为CDK Inhibitors的US 8,598,186以引用的方式整体并入本文中。
[0413] 实施例1
[0414] 合成N-[2-[(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基)氨基]乙基]氨基甲酸叔丁酯，化合物1
[0415]
[0416] 向5-溴-2,4-二氯嘧啶(3.2g，0.0135mol)于乙醇(80mL)中的溶液中添加亨尼格碱(Hunig’s base)(3.0mL)，接着添加N-(叔丁氧羰基)-1,2-二氨基乙烷(2.5g，0.0156摩尔)于乙醇(20mL)中的溶液。将内容物搅拌过夜，历时20小时。在真空下蒸发溶剂。添加乙酸乙酯(200mL)和水(100mL)且分离各层。有机层经硫酸镁干燥并接着真空浓缩。使用己烷/乙酸乙酯(0-60％)的硅胶柱色谱法得到N-[2-[(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基)氨基]乙基]氨基甲酸叔丁酯。1HNMR(d6-DMSO)δppm 8.21(s,1H),7.62(brs,1H),7.27(brs,1H),3.39(m,2H),3.12(m,2H),1.34(s,9H)。LCMS(ESI)351(M+H)。
[0417] 实施例2
[0418] 合成N-[2-[[2-氯-5-(3,3-二乙氧基丙-1-炔基)嘧啶-4-基]氨基]乙基]氨基甲酸叔丁酯，化合物2
[0419]
[0420] 向含N-[2-[(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基)氨基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(1.265g，3.6mmol)的THF(10mL)中添加缩醛(0.778mL，5.43mmol)、Pd(dppf)CH2Cl2(148mg)和三乙胺(0.757mL，5.43mmol)。将内容物脱气并接着用氮气净化。接着向其中添加CuI(29mg)。将反应混合物在回流下加热48小时。冷却后，内容物经CELITETM过滤并浓缩。使用己烷/乙酸乙酯(0-30％)，所得残余物进行柱色谱法，得到N-[2-[[2-氯-5-(3,3-二乙氧基丙-1-炔基)嘧啶-4-基]氨基]乙基]氨基甲酸叔丁酯。1HNMR(d6-DMSO)δppm 8.18(s,1H),7.63(brs,1H),
7.40(brs,1H),5.55(s,1H),3.70(m,2H),3.60(m,2H),3.42(m,2H),3.15(m,2H),1.19-1.16(m,15H)。LCMS(ESI)399(M+H)。
[0421] 实施例3
[0422] 合成N-[2-[2-氯-6-(二乙氧基甲基)吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基]乙基]氨基甲酸叔丁酯，化合物3
[0423]
[0424] 向偶合产物(2.1g，0.00526摩尔)于THF(30mL)中的溶液中添加TBAF固体(7.0g)。将内容物加热至并保持在65℃，历时2小时。浓缩，接着使用乙酸乙酯/己烷(0-50％)进行柱色谱法，得到呈浅棕色液体状的N-[2-[2-氯-6-(二乙氧基甲基)吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(1.1g)。1HNMR(d6-DMSO)δppm 8.88(s,1H),6.95(brs,1H),6.69(s,
1H),5.79(s,1H),4.29(m,2H),3.59(m,4H),3.34(m,1H),3.18(m,1H),1.19(m,9H),1.17(m,
6H)。LCMS(ESI)399(M+H)。
[0425] 实施例4
[0426] 合成N-[2-(2-氯-6-甲酰基-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)乙基]氨基甲酸叔丁酯，化合物4
[0427]
[0428] 向来自前一步骤的缩醛(900mg)中添加AcOH(8.0mL)和水(1.0mL)。将反应物在室温下搅拌16小时。浓缩并使用乙酸乙酯/己烷(0-60％)，进行硅胶柱色谱法，得到呈泡沫状的N-[2-(2-氯-6-甲酰基-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)乙基]氨基甲酸叔丁酯(0.510g)。1HNMR(d6-DMSO)δppm 9.98(s,1H),9.18(s,1H),7.66(s,1H),6.80(brs,1H),4.52(m,2H),
4.36(m,2H),1.14(s,9H)。LCMS(ESI)325(M+H)。
[0429] 实施例5
[0430] 合成7-[2-(叔丁氧羰基氨基)乙基]-2-氯-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸，化合物5[0431]
[0432] 向含来自前一步骤的醛(0.940g)的DMF(4mL中)添加过硫酸氢钾(1.95g，1.1eq)。将内容物在室温下搅拌7小时。使用己烷/乙酸乙酯(0-100％)进行硅胶柱色谱法，得到7-[2-(叔丁氧羰基氨基)乙基]-2-氯-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸(0.545g)。1HNMR(d6-DMSO)δppm 9.11(s,1H),7.39(s,1H),4.38(m,2H),4.15(m,2H),1.48(m,9H)。LCMS(ESI)341(M+H)。
[0433] 实施例6
[0434] 合成7-[2-(叔丁氧羰基氨基)乙基]-2-氯-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯，化合物6
[0435]
[0436] 向来自前一步骤的2-氯-7-丙基-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸(0.545g，0.00156摩尔)于甲苯(3.5mL)和MeOH(1mL)中的溶液中添加TMS-重氮甲烷(1.2mL)。在室温下搅拌过夜后，将过量TMS-重氮甲烷用乙酸(3mL)淬灭且真空浓缩反应物。残余物通过硅胶柱色谱法，使用己烷/乙酸乙酯(0-70％)来纯化，得到呈灰白色固体状的7-[2-(叔丁氧羰基氨基)乙基]-2-氯-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯(0.52g)。1HNMR(d6-DMSO)δppm 9.10(s,1H),7.45(s,1H),6.81(brs,1H)4.60(m,2H),3.91(s,3H),3.29(m,2H),1.18(m,9H)LCMS(ESI)
355(M+H)。
[0437] 实施例7
[0438] 合成氯三环状酰胺，化合物7
[0439]
[0440] 向含来自前一步骤的7-[2-(叔丁氧羰基氨基)乙基]-2-氯-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸甲酯(0.50g，0.0014摩尔)的二氯甲烷(2.0mL)中添加TFA(0.830mL)。将内容物在室温下搅拌1小时。真空浓缩得到粗氨基酯，其悬浮于甲苯(5mL)和亨尼格碱(0.5mL)中。将内容物在回流下加热2小时。浓缩，接着使用己烷/乙酸乙酯(0-50％)进行硅胶柱色谱法，得到所需氯三环状酰胺(0.260g)。1HNMR(d6-DMSO)δppm 9.08(s,1H),8.48(brs,1H),7.21(s,
1H)4.33(m,2H),3.64(m,2H)。LCMS(ESI)223(M+H)。
[0441] 实施例8
[0442] 合成氯-N-甲基三环状酰胺，化合物8
[0443]
[0444] 向氯三环状内酰胺化合物7(185mg，0.00083摩尔)于DMF(2.0mL)中的溶液中添加氢化钠(55％于油中的悬浮液，52mg)。搅拌15分钟后，碘甲烷(62μL，1.2eq)。将内容物在室温下搅拌30分钟。添加甲醇(5mL)后，添加饱和NaHCO3，接着添加乙酸乙酯。分离有机层，接着经硫酸镁干燥并真空浓缩，得到N-甲基化酰胺，产率定量。1HNMR(d6-DMSO)δppm 9.05(s,1H),7.17(s,1H)4.38(m,2H),3.80(m,2H),3.05(s,3H)。LCMS(ESI)237(M+H)。
[0445] 实施例9
[0446] 合成1-甲基-4-(6-硝基-3-吡啶基)哌嗪，化合物9
[0447]
[0448] 向含5-溴-2-硝基吡啶(4.93g，24.3毫摩尔)的DMF(20mL)中添加N-甲基哌嗪(2.96g，1.1eq)，接着添加DIPEA(4.65mL，26.7毫摩尔)。将内容物在90℃下加热24小时。添加乙酸乙酯(200mL)后，添加水(100mL)且分离各层。干燥，接着浓缩得到粗产物，通过硅胶柱色谱法，使用(0-10％)DCM/甲醇来纯化。1HNMR(d6-DMSO)δppm 8.26(s,1H),8.15(1H,d,J＝9.3Hz),7.49(1H,d,J＝9.4Hz),3.50(m,4H),2.49(m,4H),2.22(s,3H)。
[0449] 实施例10
[0450] 合成5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-胺，化合物10
[0451]
[0452] 向含1-甲基-4-(6-硝基-3-吡啶基)哌嗪(3.4g)的乙酸乙酯(100mL)和乙醇(100mL)中添加10％Pd/C(400mg)并接着将反应物在氢气(10psi)下搅拌过夜。经CELITETM过滤后，蒸发溶剂且粗产物通过硅胶柱色谱法，使用DCM/7N氨的MeOH溶液(0-5％)来纯化，得到5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-胺(2.2g)。1HNMR(d6-DMSO)δppm 7.56(1H,d,J＝3Hz),
7.13(1H,m),6.36(1H,d,J＝8.8Hz),5.33(brs,2H),2.88(m,4H),2.47(m,4H),2.16(s,3H)。
[0453] 实施例11
[0454] 合成4-(6-氨基-3-吡啶基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯，化合物11
[0455]
[0456] 此化合物如WO 2010/020675 A1中所述来制备。
[0457] 实施例12
[0458] 合成N-[2-(苯甲氧基羰基氨基)-3-甲基-丁基]氨基甲酸叔丁酯，化合物12
[0459]
[0460] 向冷却至0℃的含N-[1-(羟基甲基)-2-甲基-丙基]氨基甲酸苯甲酯(11.0g，0.0464摩尔)的二噁烷(100mL)中添加叠氮磷酸二苯酯(10.99mL，1.1eq)，接着添加DBU(8.32mL，1.2eq)。使内容物升温至室温并搅拌16小时。添加乙酸乙酯(300mL)和水(100mL)后，将有机层分离并用饱和NaHCO3(100mL)洗涤。接着干燥有机层(硫酸镁)并真空浓缩。向含此中间体的DMSO(100mL)中添加叠氮化钠(7.54g)且接着将内容物加热至90℃，保持2小时。添加乙酸乙酯和水后分离各层。有机层经硫酸镁干燥，接着真空浓缩，得到油状物，通过硅胶柱色谱法，使用己烷/乙酸乙酯(0-70％)来纯化，得到6.9g呈无色油状的N-[1-(叠氮基甲基)-2-甲基-丙基]氨基甲酸苯甲酯。
[0461] 向含N-[1-(叠氮基甲基)-2-甲基-丙基]氨基甲酸苯甲酯(6.9g，0.0263摩尔)的THF(100mL)中添加三苯基膦(7.59g，1.1eq)。将内容物搅拌20小时。添加水(10mL)并再搅拌6小时后，添加乙酸乙酯且分离各层。经硫酸镁干燥并真空浓缩后，粗产物通过硅胶柱色谱法，使用DCM/MeOH(0-10％)来纯化，得到呈黄色油状的N-[1-(氨基甲基)-2-甲基-丙基]氨基甲酸苯甲酯。
[0462] 向含N-[1-(氨基甲基)-2-甲基-丙基]氨基甲酸苯甲酯(4.65g，0.019摩尔)的THF(70mL)中添加2N NaOH(20mL)，接着添加二碳酸二叔丁酯(5.15g，1.2eq)。搅拌16小时后，添加乙酸乙酯且分离各层。经硫酸镁干燥并真空浓缩后，粗产物使用己烷/乙酸乙酯(0-40％)，经硅胶柱来纯化，得到中间体A，N-[2-(苯甲氧基羰基氨基)-3-甲基-丁基]氨基甲酸叔丁酯(6.1g)。1HNMR(600MHz,氯仿-d)δppm 0.89(d,J＝6.73Hz,3H)0.92(d,J＝6.73Hz,
3H)1.38(s,9H)1.70-1.81(m,1H)3.18(d,J＝5.56Hz,2H)3.47-3.60(m,1H)4.76(s,1H)4.89(d,J＝7.90Hz,1H)5.07(s,2H)7.25-7.36(m,5H)。LCMS(ESI)337(M+H)。
[0463] 实施例13
[0464] 合成N-[2-(苯甲氧基羰基氨基)-4-甲基-戊基]氨基甲酸叔丁酯，化合物13
[0465]
[0466] 在0℃下向N-[1-(羟基甲基)-3-甲基-丁基]氨基甲酸苯甲酯(6.3g，0.025摩尔)于DCM(100mL)中的溶液中添加二异丙基乙胺(5.25mL，1.2eq)，接着添加甲烷磺酰氯(2.13mL，1.1eq)。搅拌3小时后，添加水(100mL)且分离有机层。经硫酸镁干燥并真空浓缩后，得到粗[2-(苯甲氧基羰基氨基)-4-甲基-戊基]甲烷磺酸酯，其直接用于下一步。
[0467] 向含来自以上反应的粗[2-(苯甲氧基羰基氨基)-4-甲基-戊基]甲烷磺酸酯的DMF(50mL)中添加2.43g叠氮化钠。接着将反应混合物加热至85℃，保持3小时。冷却后，添加乙酸乙酯(300mL)和水。将有机层分离，经硫酸镁干燥并接着真空浓缩，得到粗N-[1-(叠氮基甲基)-3-甲基-丁基]氨基甲酸苯甲酯。向此粗中间体中添加THF(100mL)，接着添加7.21g三苯基膦并在氮气下搅拌16小时。添加水(10mL)并再搅拌6小时后，添加乙酸乙酯且分离各层。经硫酸镁干燥并真空浓缩后，粗产物使用DCM/MeOH(0-10％)进行柱分离，得到N-[1-(氨基甲基)-3-甲基-丁基]氨基甲酸苯甲酯(4.5g)。
[0468] 向含N-[1-(氨基甲基)-3-甲基-丁基]氨基甲酸苯甲酯(4.5g，0.018摩尔)的THF(60mL)中添加2N NaOH(18mL)，接着添加二碳酸二叔丁酯(4.19g，1.07eq)。搅拌16小时后，添加乙酸乙酯且分离各层。经硫酸镁干燥并真空浓缩后，粗产物用于下一步。1HNMR(600MHz,氯仿-d)δppm 0.89(d,J＝6.73Hz,6H)1.25-1.34(m,1H)1.39(s,9H)1.57-1.71(m,
2H)3.04-3.26(m,2H)3.68-3.80(m,1H)4.72-4.89(m,2H)5.06(s,2H)7.25-7.38(m,5H)。
LCMS(ESI)351(M+H)。
[0469] 实施例14
[0470] 合成N-[(2R)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-3-甲基-丁基]氨基甲酸叔丁酯，化合物14[0471]
[0472] 化合物14由N-[(1R)-1-(羟基甲基)-2-甲基-丙基]氨基甲酸苯甲酯，使用与针对化合物13所述类似的合成步骤合成。分析数据(NMR和质谱)与化合物12一致。
[0473] 实施例15
[0474] 合成N-[(2S)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-3-甲基-丁基]氨基甲酸叔丁酯，化合物15[0475]
[0476] 化合物15由N-[(1S)-1-(羟基甲基)-2-甲基-丙基]氨基甲酸苯甲酯，使用与针对化合物13所述类似的合成步骤合成。分析数据(NMR和质谱)与化合物12一致。
[0477] 实施例16
[0478] 合成N-[(1S)-1-(氨基甲基)-2-甲基-丙基]氨基甲酸叔丁酯，化合物16
[0479]
[0480] 向N-[(1S)-1-(羟基甲基)-2-甲基-丙基]氨基甲酸酯氨基甲酸叔丁酯(6.3g，0.025摩尔)于THF(100mL)中的溶液中添加二异丙基乙胺(5.25mL，1.2eq)，接着在0℃下添加甲烷磺酰氯(2.13mL，1.1eq)。搅拌3小时后，添加水(100mL)且分离有机层。经硫酸镁干燥并真空浓缩后，粗[(2S)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-甲基-丁基]甲烷磺酸酯直接用于下一步。
[0481] 向含来自以上反应的粗[(2S)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-甲基-丁基]甲烷磺酸酯的DMSO(50mL)中添加叠氮化钠(2.43g)。接着将反应混合物加热至85℃，保持3小时。冷却后，添加乙酸乙酯(300mL)和水。将有机层分离，经硫酸镁干燥并接着真空浓缩，得到粗N-[1-(叠氮基甲基)-3-甲基-丁基]氨基甲酸苯甲酯。向此粗中间体中添加THF(100mL)，接着添加三苯基膦(7.21g)并将反应物在氮气下搅拌16小时。添加水(10mL)并再搅拌6小时后，添加乙酸乙酯且分离各层。经硫酸镁干燥并真空浓缩后，粗产物通过硅胶柱色谱法，使用DCM/MeOH(0-10％)来纯化，得到N-[1-(氨基甲基)-3-甲基-丁基]氨基甲酸苯甲酯(4.5g)。LCMS(ESI)203(M+H)。
[0482] 实施例17
[0483] 合成N-[(1R)-1-(氨基甲基)-2-甲基-丙基]氨基甲酸叔丁酯，化合物17
[0484]
[0485] 化合物17由N-[(1R)-1-(羟基甲基)-2-甲基-丙基]氨基甲酸叔丁酯，使用与针对化合物16所述类似的合成顺序合成。分析数据(NMR和质谱)与化合物16一致。
[0486] 实施例18
[0487] 合成N-[(2S)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-4-甲基-戊基]氨基甲酸叔丁酯，化合物18[0488]
[0489] 化合物18由N-[(1S)-1-(羟基甲基)-3-甲基-丁基]氨基甲酸苯甲酯，使用与针对化合物13所述类似的合成顺序合成。分析数据(NMR和质谱)与化合物13一致。
[0490] 实施例19
[0491] 合成N-[(2S)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-2-苯基-乙基]氨基甲酸叔丁酯，化合物19[0492]
[0493] 化合物19由N-[(1S)-2-羟基-1-苯基-乙基]氨基甲酸苯甲酯，使用与针对化合物13所述类似的合成顺序合成。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.20-1.33(m,9H)3.11(t,J＝
6.29Hz,2H)4.59-4.68(m,1H)4.88-5.01(m,2H)6.81(t,J＝5.42Hz,1H)7.14-7.35(m,10H)
7.69(d,J＝8.49Hz,1H)。LCMS(ESI)371(M+H)。
[0494] 实施例20
[0495] 合成N-[(2S)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-3-甲基-戊基]氨基甲酸叔丁酯，化合物20[0496]
[0497] 化合物20由N-[(1S)-1-(羟基甲基)-2-甲基-丁基]氨基甲酸苯甲酯，使用与针对化合物13所述类似的合成顺序合成。1HNMR(600MHz,氯仿-d)δppm 0.85-0.92(m,6H)1.05-1.15(m,1H)1.35-1.41(m,9H)1.45-1.56(m,2H)3.14-3.24(m,2H)3.54-3.64(m,1H)4.78(s,
1H)4.96(d,J＝7.91Hz,1H)5.06(s,2H)7.27-7.37(m,5H)。LCMS(ESI)351(M+H)。
[0498] 实施例21
[0499] 合成N-[(2S)-2-(苯甲氧基羰基氨基)-3,3-二甲基-丁基]氨基甲酸叔丁酯，化合物21
[0500]
[0501] 化合物21由N-[(1S)-1-(羟基甲基)-2,2-二甲基-丙基]氨基甲酸苯甲酯，使用与针对化合物13所述类似的合成顺序合成。LCMS(ESI)351。
[0502] 实施例22
[0503] 合成N-[[1-(苯甲氧基羰基氨基)环己基]甲基]氨基甲酸叔丁酯，化合物22
[0504]
[0505] 向N-[1-(氨基甲基)环己基]氨基甲酸苯甲酯(10.0g，0.0381摩尔)于THF(150mL)中的溶液中添加二碳酸二叔丁酯(9.15g，1.1eq)且将内容物在室温下搅拌16小时。接着添加乙酸乙酯和水。将有机层分离，经硫酸镁干燥并接着真空浓缩，得到N-[[1-(苯甲氧基羰1
基氨基)环己基]甲基]氨基甲酸叔丁酯(13.1g)。HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 0.92-1.54(m,17H)1.76-2.06(m,2H)3.09(d,J＝6.15Hz,2H)4.92(s,2H)6.63(d,J＝17.27Hz,1H)
7.16-7.49(m,6H)。LCMS(ESI)363(M+H)。
[0506] 实施例23
[0507] 合成N-[[1-(苯甲氧基羰基氨基)环戊基]甲基]氨基甲酸叔丁酯，化合物23
[0508]
[0509] N-[[1-(苯甲氧基羰基氨基)环戊基]甲基]氨基甲酸叔丁酯以与N-[[1-(苯甲氧基羰基氨基)环己基]甲基]氨基甲酸叔丁酯类似的方式合成。LCMS(ESI)349(M+H)。
[0510] 实施例24
[0511] 合成2-硝基-5-[4-(1-哌啶基)-1-哌啶基]吡啶，化合物24
[0512]
[0513] 向含5-溴-2-硝基吡啶(1.2g，5.9mmol)的DMSO(4mL)中添加1-(4-哌啶基)哌啶(1.0g，5.9毫摩尔)和三乙胺(0.99mL，7.1毫摩尔)。将内容物在CEM Discovery微波系统中加热至120℃，保持3小时。接着粗反应物通过硅胶柱色谱法，使用DCM/甲醇(0-20％)来纯化，得到呈油状的2-硝基-5-[4-(1-哌啶基)-1-哌啶基]吡啶(457mg)。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.26-1.36(m,2H)1.43(m,6H)1.76(m,2H)2.37(m,5H)2.94(t,J＝12.74Hz,2H)
4.06(d,J＝13.47Hz,2H)7.41(dd,J＝9.37,2.64Hz,1H)8.08(d,J＝9.37Hz,1H)8.20(d,J＝
2.64Hz,1H)。
[0514] 实施例25
[0515] 合成5-[4-(1-哌啶基)-1-哌啶基]吡啶-2-胺，化合物25
[0516]
[0517] 5-[4-(1-哌啶基)-1-哌啶基]吡啶-2-胺以与合成5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-胺中所用类似的方式制备。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.13-1.37(m,6H)1.40-1.63(m,6H)1.71(m,2H),2.24(m,1H)2.43(m,2H)3.33(d,J＝12.30Hz,2H)5.31(s,2H)6.33(d,J＝
8.78Hz,1H)7.10(dd,J＝8.78,2.93Hz,1H)7.55(d,J＝2.64Hz,1H)。LCMS(ESI)261(M+H)。
[0518] 实施例26
[0519] 合成4-[1-(6-硝基-3-吡啶基)-4-哌啶基]吗啉，化合物26
[0520]
[0521] 4-[1-(6-硝基-3-吡啶基)-4-哌啶基]吗啉以与合成2-硝基-5-[4-(1-哌啶基)-1-哌啶基]吡啶中所用类似的方式合成。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.41(m,2H)1.82(m,2H)2.42(m,5H)2.98(t,J＝12.44Hz,2H)3.52(s,4H)4.04(d,J＝12.88Hz,2H)7.42(d,J＝
9.37Hz,1H)8.08(d,J＝9.08Hz,1H)8.21(s,1H)。
[0522] 实施例27
[0523] 合成5-(4-吗啉代-1-哌啶基)吡啶-2-胺，化合物27
[0524]
[0525] 5-(4-吗啉代-1-哌啶基)吡啶-2-胺以与合成5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-胺中所用类似的方式制备。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.34-1.52(m,2H)1.78(m,2H)2.14(m,1H)2.43(m,4H)3.32(d,J＝12.30Hz,4H)3.47-3.59(m,4H)5.32(s,2H)6.34(d,J＝8.78Hz,
1H)7.11(dd,J＝8.93,2.78Hz,1H)7.47-7.62(m,1H)。LCMS(ESI)263(M+H)。
[0526] 实施例28
[0527] 合成4-[1-(6-硝基-3-吡啶基)-4-哌啶基]硫吗啉，化合物28
[0528]
[0529] 4-[1-(6-硝基-3-吡啶基)-4-哌啶基]硫吗啉以与合成2-硝基-5-[4-(1-哌啶基)-1
1-哌啶基]吡啶中所用类似的方式合成。HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.40-1.52(m,2H)
1.71(m,2H)2.49-2.55(m,4H)2.56-2.63(m,1H)2.68-2.75(m,4H)2.88-2.98(m,2H)4.09(d,J＝13.18Hz,2H)7.42(dd,J＝9.22,3.07Hz,1H)8.08(d,J＝9.37Hz,1H)8.20(d,J＝3.22Hz,
1H)。
[0530] 实施例29
[0531] 合成5-(4-硫吗啉基-1-哌啶基)吡啶-2-胺，化合物29
[0532]
[0533] 5-(4-硫吗啉基-1-哌啶基)吡啶-2-胺以与合成5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-胺中所用类似的方式制备。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.47-1.59(m,2H)1.65(m,2H)2.22-2.38(m,1H)2.50-2.59(m,6H)2.68-2.82(m,4H)3.33(d,J＝12.00Hz,2H)5.31(s,2H)6.33(d,J＝9.08Hz,1H)7.10(dd,J＝8.78,2.93Hz,1H)7.55(d,J＝2.64Hz,1H)。LCMS(ESI)279(M+H)。
[0534] 实施例30
[0535] 合成2-硝基-5-(1-哌啶基)吡啶，化合物30
[0536]
[0537] 2-硝基-5-(1-哌啶基)吡啶以与合成2-硝基-5-[4-(1-哌啶基)-1-哌啶基]吡啶中类似的方式合成。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.56(m,6H)3.49(d,J＝4.39Hz,4H)7.30-7.47(m,1H)8.02-8.12(m,1H)8.15-8.26(m,1H)。
[0538] 实施例31
[0539] 合成5-(1-哌啶基)吡啶-2-胺，化合物31
[0540]
[0541] 5-(1-哌啶基)吡啶-2-胺以与合成5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-胺中所用类似的方式制备。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.39-1.46(m,2H)1.51-1.62(m,4H)2.75-2.92(m,4H)5.30(s,2H)6.34(d,J＝8.78Hz,1H)7.09(dd,J＝8.78,2.93Hz,1H)7.54(d,J＝2.93Hz,
1H)。LCMS(ESI)178(M+H)。
[0542] 实施例32
[0543] 合成4-(6-硝基-3-吡啶基)硫吗啉，化合物32
[0544]
[0545] 4-(6-硝基-3-吡啶基)硫吗啉以与合成2-硝基-5-[4-(1-哌啶基)-1-哌啶基]吡啶中所用类似的方式合成。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 2.56-2.69(m,4H)3.79-3.92(m,4H)7.43(dd,J＝9.22,3.07Hz,1H)8.10(d,J＝9.37Hz,1H)8.20(d,J＝2.93Hz,1H)。
[0546] 实施例33
[0547] 合成5-硫吗啉基吡啶-2-胺，化合物33
[0548]
[0549] 5-硫吗啉基吡啶-2-胺以与合成5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-胺中所用类似的方式制备。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 2.59-2.73(m,4H)3.04-3.20(m,4H)5.41(s,2H)6.35(d,J＝8.78Hz,1H)7.10(dd,J＝8.78,2.93Hz,1H)7.57(d,J＝2.64Hz,1H)。LCMS(ESI)196(M+H)。
[0550] 实施例34
[0551] 合成(4R)-5-(6-硝基-3-吡啶基)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-甲酸叔丁酯，化合物34
[0552]
[0553] (4R)-5-(6-硝基-3-吡啶基)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-甲酸叔丁酯以与合成2-硝基-5-[4-(1-哌啶基)-1-哌啶基]吡啶中所用类似的方式合成。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.33(d,J＝32.21Hz,11H)1.91(m,2H)3.15(d,J＝10.25Hz,1H)3.58(m,1H)4.46(m,1H)4.83(s,1H)7.16(s,1H)7.94(s,1H)8.05-8.16(m,1H)。
[0554] 实施例35
[0555] 合成(4R)-5-(6-氨基-3-吡啶基)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-甲酸叔丁酯，化合物35
[0556]
[0557] (4R)-5-(6-氨基-3-吡啶基)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-甲酸叔丁酯以与合成5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-胺中所用类似的方式制备。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.31(d,J＝31.91Hz,11H)1.83(m,2H)2.71-2.82(m,1H)3.44(m,1H)4.30(d,2H)5.08(s,2H)
6.35(d,J＝8.78Hz,1H)6.77-6.91(m,1H)7.33(s,1H)。LCMS(ESI)291(M+H)。
[0558] 实施例36
[0559] 合成N,N-二甲基-1-(6-硝基-3-吡啶基)哌啶-4-胺，化合物36
[0560]
[0561] N,N-二甲基-1-(6-硝基-3-吡啶基)哌啶-4-胺以与合成2-硝基-5-[4-(1-哌啶基)-1-哌啶基]吡啶中所用类似的方式合成。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.30-1.45(m,
2H)1.79(m,2H)2.14(s,6H)2.33(m,1H)2.92-3.04(m,2H)4.03(d,J＝13.76Hz,2H)7.42(dd,J＝9.22,3.07Hz,1H)8.04-8.11(m,1H)8.21(d,J＝2.93Hz,1H)。
[0562] 实施例37
[0563] 合成5-[4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]吡啶-2-胺，化合物37
[0564]
[0565] 5-[4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]吡啶-2-胺以与合成5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-胺中所用类似的方式制备。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.35-1.50(m,2H)1.69-1.81(m,
2H)2.00-2.10(m,1H)2.11-2.22(s,6H)3.17-3.36(m,4H)5.19-5.38(s,2H)6.34(d,J＝
8.78Hz,1H)7.10(dd,J＝8.78,2.93Hz,1H)7.55(d,J＝2.63Hz,1H)。LCMS(ESI)221(M+H)。
[0566] 实施例38
[0567] 合成4-(6-硝基-3-吡啶基)吗啉，化合物38
[0568]
[0569] 4-(6-硝基-3-吡啶基)吗啉以与合成2-硝基-5-[4-(1-哌啶基)-1-哌啶基]吡啶中所用类似的方式合成。
[0570] 实施例39
[0571] 合成5-吗啉代吡啶-2-胺，化合物39
[0572]
[0573] 5-吗啉代吡啶-2-胺以与合成5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-胺中所用类似的方式制备。1HNMR(600MHz,氯仿-d)δppm 2.91-3.00(m,4H)3.76-3.84(m,4H)4.19(br.s.,2H)6.45(d,J＝8.78Hz,1H)7.12(dd,J＝8.78,2.93Hz,1H)7.72(d,J＝2.93Hz,1H)。
[0574] 实施例40
[0575] 合成5-(4-异丁基哌嗪-1-基)吡啶-2-胺，化合物40
[0576]
[0577] 1-异丁基-4-(6-硝基-3-吡啶基)哌嗪以与合成2-硝基-5-[4-(1-哌啶基)-1-哌啶基]吡啶中类似的方式合成，接着其以与合成5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-胺中所用类似的方式转化成5-(4-异丁基哌嗪-1-基)吡啶-2-胺。1HNMR(600MHz,氯仿-d)δppm 0.88(d,J＝6.73Hz,6H)1.71-1.84(m,1H)2.10(d,J＝7.32Hz,2H)2.46-2.58(m,4H)2.97-3.07(m,4H)4.12(s,2H)6.45(d,J＝8.78Hz,1H)7.14(dd,J＝8.78,2.93Hz,1H)7.75(d,J＝2.93Hz,1H)。
LCMS(ESI)235(M+H)。
[0578] 实施例41
[0579] 合成5-(4-异丙基哌嗪-1-基)吡啶-2-胺，化合物41
[0580]
[0581] 1-异丙基-4-(6-硝基-3-吡啶基)哌嗪以与合成2-硝基-5-[4-(1-哌啶基)-1-哌啶基]吡啶中类似的方式合成，接着其以与合成5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-胺中所用类似的方式转化成5-(4-异丙基哌嗪-1-基)吡啶-2-胺。1HNMR(600MHz,氯仿-d)δppm 1.06(d,J＝6.44Hz,6H)2.59-2.75(m,5H)2.97-3.10(m,4H)4.13(s,2H)6.45(d,J＝8.78Hz,1H)7.15(dd,J＝9.08,2.93Hz,1H)7.76(d,J＝2.93Hz,1H)。LCMS(ESI)221(M+H)。
[0582] 实施例42
[0583] 合成5-[(2R,6S)-2,6-二甲基吗啉-4-基]吡啶-2-胺，化合物42
[0584]
[0585] (2S,6R)-2,6-二甲基-4-(6-硝基-3-吡啶基)吗啉以与合成2-硝基-5-[4-(1-哌啶基)-1-哌啶基]吡啶中所用类似的方式合成，接着其以与合成5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-胺中所用类似的方式转化成5-[(2R,6S)-2,6-二甲基吗啉-4-基]吡啶-2-胺。1HNMR
(600MHz,氯仿-d)δppm 1.20(d,J＝6.44Hz,6H)2.27-2.39(m,2H)3.11-3.21(m,2H)3.70-
3.84(m,2H)4.15(s,2H)6.45(d,J＝8.78Hz,1H)7.12(dd,J＝8.78,2.93Hz,1H)7.72(d,J＝
2.63Hz,1H)。LCMS(ESI)208(M+H)。
[0586] 实施例43
[0587] 合成5-[(3R,5S)-3,5-二甲基哌嗪-1-基]吡啶-2-胺，化合物43
[0588]
[0589] (3S,5R)-3,5-二甲基-1-(6-硝基-3-吡啶基)哌嗪以与合成2-硝基-5-[4-(1-哌啶基)-1-哌啶基]吡啶中类似的方式合成，接着其以与合成5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-胺中所用类似的方式转化成5-[(3R,5S)-3,5-二甲基哌嗪-1-基]吡啶-2-胺。1HNMR(600MHz,氯仿-d)δppm 1.09(d,J＝6.44Hz,6H)2.20(t,J＝10.83Hz,2H)2.95-3.08(m,2H)3.23(dd,J＝11.71,2.05Hz,2H)4.13(s,2H)6.45(d,J＝8.78Hz,1H)7.14(dd,J＝8.78,2.93Hz,1H)7.73(d,J＝2.63Hz,1H)。LCMS(ESI)207(M+H)。
[0590] 实施例44
[0591] 合成化合物44
[0592]
[0593] N-[2-[(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基)氨基]-3-甲基-丁基]氨基甲酸叔丁酯
[0594]
[0595] 中间体A于乙醇(100mL)中的溶液在压力计中在30psi氢气下使用10％Pd/C(0.7g)氢化7小时。反应混合物经CELITETM过滤后，有机层真空浓缩，得到N-(2-氨基-3-甲基-丁基)氨基甲酸叔丁酯(3.8g)。
[0596] 向5-溴-2,4-二氯-嘧啶(7.11g，0.0312摩尔)于乙醇(100mL)中的溶液中添加二异丙基乙胺(5.45mL，1.0eq)和N-(2-氨基-3-甲基-丁基)氨基甲酸叔丁酯(6.31g，0.0312摩尔)。将反应混合物在室温下搅拌20小时。真空浓缩后，添加乙酸乙酯和水。将有机层分离，经硫酸镁干燥并接着真空浓缩。粗产物通过硅胶柱色谱法，使用己烷/乙酸乙酯(0-30％)来1
纯化，得到N-[2-[(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基)氨基]-3-甲基-丁基]氨基甲酸叔丁酯。HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 0.77-0.85(d,J＝6.5Hz,3H)0.87(d,J＝6.73Hz,3H)1.31-1.39(m,
9H)1.82-1.93(m,1H)2.94(d,J＝5.56Hz,1H)3.08-3.22(m,2H)3.98(d,J＝8.20Hz,1H)6.96(d,J＝8.78Hz,1H)8.21(s,1H)。LCMS(ESI)393(M+H)。
[0597] N-[2-[2-氯-6-(二乙氧基甲基)吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基]-3-甲基-丁基]氨基甲酸叔丁酯
[0598]
[0599] N-[2-[2-氯-6-(二乙氧基甲基)吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基]-3-甲基-丁基]氨基甲酸叔丁酯通过使N-[2-[(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基)氨基]-3-甲基-丁基]氨基甲酸叔丁酯经受如针对N-[2-[[2-氯-5-(3,3-二乙氧基丙-1-炔基)嘧啶-4-基]氨基]乙基]氨基甲酸叔丁酯所述的Sonogoshira条件，接着随后如合成N-[2-[2-氯-6-(二乙氧基甲基)吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基]乙基]氨基甲酸叔丁酯中所述用TBAF处理来合成。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.11(d,J＝6.44Hz,3H)1.18(t,J＝7.03Hz,6H)1.21-1.26(m,12H)2.88(br.s.,1H)3.43-
3.78(m,6H)3.97-4.08(m,1H)5.61(s,1H)6.65(s,1H)6.71-6.78(m,1H)8.87(s,1H)。LCMS(ESI)441(M+H)。
[0600] 7-[1-[(叔丁氧羰基氨基)甲基]-2-甲基-丙基]-2-氯-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸
[0601]
[0602] 向N-[2-[[2-氯-5-(3,3-二乙氧基丙-1-炔基)嘧啶-4-基]氨基]乙基]氨基甲酸叔丁酯于THF中的溶液中添加TBAF且将内容物在回流下加热3小时。接着添加乙酸乙酯和水且分离有机层，经硫酸镁干燥并接着真空浓缩。向此粗反应物中添加乙酸/水(9:1)且将内容物在室温下搅拌12小时。真空浓缩后，添加饱和NaHCO3和乙酸乙酯。将有机层分离，干燥并接着真空浓缩。由此获得的粗反应产物溶解于DMF中，接着添加过硫酸氢钾且将内容物搅拌3小时。添加乙酸乙酯后，反应混合物经CELITETM过滤并真空浓缩。粗产物使用己烷/乙酸乙酯(0-100％)进行硅胶柱色谱法，得到7-[1-[(叔丁氧羰基氨基)甲基]-2-甲基-丙基]-2-氯-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 0.85(d,J＝7.03Hz,3H)0.97(d,J＝6.73Hz,3H)1.52(s,9H)1.99-2.23(m,1H)3.98(dd,J＝14.05,3.51Hz,1H)4.47-4.71(m,2H)7.47(s,1H)9.17(s,1H)。LCMS(ESI)383(M+H)。
[0603] 化合物44
[0604] 向含7-[1-[(叔丁氧羰基氨基)甲基]-2-甲基-丙基]-2-氯-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸(0.050g，0.00013摩尔)的DCM(1.5mL)中添加DIC(32.7mg)和DMAP(10mg)。将内容物搅拌2小时。接着添加三氟乙酸(0.4mL)且再继续搅拌30分钟。添加饱和NaHCO3以中和过量酸后，添加乙酸乙酯且分离有机层，使用硫酸镁干燥并接着真空浓缩。粗产物通过硅胶柱色谱法，使用己烷/乙酸乙酯(0-100％)来纯化，得到产物。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 0.72(d,J＝6.73Hz,3H)0.97(d,J＝6.73Hz,3H)2.09-2.22(m,1H)3.57(dd,J＝13.18,4.98Hz,
1H)3.72(dd,J＝13.61,4.25Hz,1H)4.53(dd,J＝8.05,3.95Hz,1H)7.20(s,1H)8.34(d,J＝
4.98Hz,1H)9.08(s,1H)。LCMS(ESI)265(M+H)。
[0605] 实施例45
[0606] 合成化合物45
[0607]
[0608] 化合物14用10％Pd/C氢化，得到中间体N-[(2R)-2-氨基-3-甲基-丁基]氨基甲酸叔丁酯，其接着，使用与针对化合物44所述类似的反应条件用5-溴-2,4-二氯-嘧啶处理，得到化合物45。分析数据与针对外消旋体(中间体1A)所报导一致。
[0609] 实施例46
[0610] 合成化合物46
[0611]
[0612] 化合物15用10％Pd/C氢化，得到中间体N-[(2S)-2-氨基-3-甲基-丁基]氨基甲酸叔丁酯，接着其使用与针对化合物44所述类似的反应条件，用5-溴-2,4-二氯-嘧啶处理，得到化合物46。分析数据(NMR和LCMS)与针对外消旋体化合物44所报导一致。
[0613] 实施例47
[0614] 合成化合物47
[0615]
[0616] 向化合物44(80mg，0.00030摩尔)于DMF(3mL)中的溶液中添加氢化钠于油中的60％分散体(40mg)。搅拌15分钟后，添加碘甲烷(37μL，2eq)。将内容物在室温下搅拌30分钟。接着添加饱和NaHCO3，接着乙酸乙酯。有机层经硫酸镁干燥并接着真空浓缩，得到产物。
1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 0.74(d,J＝6.73Hz,3H)0.91(d,J＝6.73Hz,3H)2.04-2.20(m,
1H)3.04(s,3H)3.69(dd,J＝13.76,1.17Hz,1H)3.96(dd,J＝13.76,4.68Hz,1H)4.58(dd,J＝7.32,3.51Hz,1H)7.16(s,1H)9.05(s,1H)。LCMS(ESI)279(M+H)。
[0617] 实施例48
[0618] 合成化合物48
[0619]
[0620] N-[(2S)-2-[(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基)氨基]-4-甲基-戊基]氨基甲酸叔丁酯
[0621]
[0622] 化合物18在乙醇中在压力计中在50psi氢气罩下用10％Pd/C氢化，得到N-[(2S)-2-氨基-4-甲基-戊基]氨基甲酸叔丁酯，其接着使用与针对N-[2-[(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基)氨基]-3-甲基-丁基]氨基甲酸叔丁酯所述类似的反应条件与5-溴-2,4-二氯-嘧啶反应，得到N-[(2S)-2-[(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基)氨基]-4-甲基-戊基]氨基甲酸叔丁酯。1HNMR
(600MHz,氯仿-d)δppm 0.91(d,J＝6.44Hz,3H)0.94(d,J＝6.44Hz,3H)1.32-1.51(m,11H)
1.55-1.67(m,1H)3.28(t,J＝5.86Hz,2H)4.21-4.42(m,1H)4.84(s,1H)5.84(d,J＝7.32Hz,
1H)8.07(s,1H)。LCMS(ESI)407(M+H)。
[0623]
[0624] 在氮气下向N-[(2S)-2-[(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基)氨基]-4-甲基-戊基]氨基甲酸叔丁酯(5.0g，12.3毫摩尔)于甲苯(36mL)和三乙胺(7.2mL)中的溶液中添加3,3-二乙氧基丙-1-炔(2.8mL，19.7毫摩尔)、Pd2(dba)3(1.1g，1.23毫摩尔)和三苯基胂(3.8g，12.3毫摩TM尔)。将内容物加热至70℃，保持24小时。冷却到室温后，反应混合物经CELITE 过滤并接着真空浓缩。粗产物通过硅胶柱色谱法，使用己烷/乙酸乙酯(0-30％)来纯化，得到(2S)-N2-[2-氯-5-(3,3-二乙氧基丙-1-炔基)嘧啶-4-基]-4-甲基-戊-1,2-二胺。LCMS(ESI)455(M+H)。
[0625]
[0626] 7-[(1S)-1-[(叔丁氧羰基氨基)甲基]-3-甲基-丁基]-2-氯-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸使用与针对7-[1-[(叔丁氧羰基氨基)甲基]-2-甲基-丙基]-2-氯-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸所述类似的合成顺序合成。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 0.88(d,J＝6.44Hz,3H)
0.97(d,J＝6.44Hz,3H)1.47(s,9H)1.49-1.54(m,1H)1.56(t,J＝7.17Hz,2H)3.98(dd,J＝
13.91,3.07Hz,1H)3.76(dd,J＝13.31,4.13Hz,1H)4.38(d,J＝14.05Hz,1H)4.90(t,J＝
7.17Hz,1H)7.41(s,1H)9.11(s,1H)。LCMS(M+H)397。
[0627] 化合物48使用与针对化合物44所述类似的合成顺序合成。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 0.82(d,J＝6.73Hz,3H)0.97(d,J＝6.44Hz,3H)1.34-1.46(m,1H)1.48-1.65(m,2H)3.40(dd,J＝13.32,5.42Hz,1H)3.76(dd,J＝13.47,4.10Hz,1H)4.76-4.92(m,1H)7.17(s,
1H)8.34(d,J＝5.27Hz,1H)9.04(s,1H)。LCMS(ESI)279(M+H)。
[0628] 实施例49
[0629] 合成化合物49
[0630]
[0631] 化合物49以与针对化合物47所述类似的方式合成。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 0.82(d,J＝6.44Hz,3H)0.97(d,J＝6.44Hz,3H)1.37-1.68(m,3H)3.04(s,3H)3.56(d,J＝
13.47Hz,1H)4.00(dd,J＝13.32,4.25Hz,1H)4.82-4.94(m,1H)7.16(s,1H)9.03(s,1H)。
LCMS(ESI)293(M+H)。
[0632] 实施例50
[0633] 合成化合物50
[0634]
[0635] N-[(2S)-2-[(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基)氨基]-3-甲基-戊基]氨基甲酸叔丁酯
[0636]
[0637] 化合物20在压力容器中在50psi氢气下使用10％Pd/C氢化，得到N-[(2S)-2-氨基-3-甲基-戊基]氨基甲酸叔丁酯，其使用与针对N-[2-[(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基)氨基]-3-甲基-丁基]氨基甲酸叔丁酯所述类似的反应条件与5-溴-2,4-二氯-嘧啶反应，得到N-[(2S)-
2-[(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基)氨基]-3-甲基-戊基]氨基甲酸叔丁酯。1HNMR(600MHz,氯仿-d)δppm 0.88-0.95(m,6H)1.11-1.20(m,1H)1.34(s,9H)1.44-1.54(m,1H)1.64-1.72(m,1H)
3.17-3.27(m,1H)3.33-3.43(m,1H)4.11-4.21(m,1H)4.81(s,1H)5.92(d,J＝8.20Hz,1H)
8.05(s,1H)。LCMS(ESI)407。
[0638] N-[(2S)-2-[[2-氯-5-(3,3-二乙氧基丙-1-炔基)嘧啶-4-基]氨基]-3-甲基-戊基]氨基甲酸叔丁酯
[0639]
[0640] N-[(2S)-2-[[2-氯-5-(3,3-二乙氧基丙-1-炔基)嘧啶-4-基]氨基]-3-甲基-戊基]氨基甲酸叔丁酯使用与合成(2S)-N2-[2-氯-5-(3,3-二乙氧基丙-1-炔基)嘧啶-4-基]-
4-甲基-戊-1,2-二胺中所用类似的实验条件合成。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 0.76-0.89(m,6H)1.03(q,J＝7.22Hz,3H)1.10-1.17(m,3H)1.25-1.42(m,11H)1.59-1.73(m,1H)3.35-
3.47(m,4H)3.51-3.73(m,2H)3.99-4.11(m,1H)5.52-5.56(m,1H)6.76-7.03(m,2H)8.12-
8.23(m,1H)。LCMS(ESI)455(M+H)。
[0641] 7-[(1S)-1-[(叔丁氧羰基氨基)甲基]-2-甲基-丁基]-2-氯-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸
[0642]
[0643] 7-[(1S)-1-[(叔丁氧羰基氨基)甲基]-2-甲基-丁基]-2-氯-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸使用与针对7-[1-[(叔丁氧羰基氨基)甲基]-2-甲基-丙基]-2-氯-吡咯并[2,3-d]嘧
1
啶-6-甲酸所述类似的合成顺序合成。HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 0.80(t,J＝7.47Hz,3H)
0.86(d,J＝7.03Hz,3H)1.06-1.30(m,2H)1.48(s,9H)1.79-1.96(m,1H)3.95(dd,J＝14.05,
3.22Hz,1H)4.52(d,J＝14.35Hz,1H)4.61-4.73(m,1H)7.43(s,1H)9.13(s,1H)。LCMS(ESI)
397(M+H)。
[0644] 化合物50使用与针对化合物44所述类似的合成顺序合成。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 0.74(t,J＝7.32Hz,3H)0.89(d,J＝6.73Hz,3H)1.00-1.12(m,2H)1.82-1.94(m,1H)3.55(dd,J＝13.91,4.83Hz,1H)3.70(dd,J＝13.61,4.25Hz,1H)4.57(dd,J＝7.91,4.10Hz,
1H)7.17(s,1H)8.31(d,J＝5.27Hz,1H)9.05(s,1H)。LCMS(ESI)279(M+H)。
[0645] 实施例51
[0646] 合成化合物51
[0647]
[0648] 化合物51以与化合物47类似的方式合成。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 0.77(t,J＝7.47Hz,3H)0.84(d,J＝6.73Hz,3H)1.07-1.16(m,2H)1.82-1.95(m,1H)3.03(s,3H)3.68(d,J＝13.76Hz,1H)3.96(dd,J＝13.76,4.39Hz,1H)4.59-4.70(m,1H)7.16(s,1H)9.04(s,1H)。LCMS(ESI)293(M+H)。
[0649] 实施例52
[0650] 合成化合物52
[0651]
[0652] N-[(2S)-2-[(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基)氨基]-3,3-二甲基-丁基]氨基甲酸叔丁酯[0653]
[0654] 化合物21在压力容器中在50psi氢气下使用10％Pd/C氢化，得到N-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基-丁基]氨基甲酸叔丁酯，其接着使用与针对N-[2-[(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基)氨基]-3-甲基-丁基]氨基甲酸叔丁酯所述类似的反应条件与5-溴-2,4-二氯-嘧啶反应，得到N-[(2S)-2-[(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基)氨基]-3,3-二甲基-丁基]氨基甲酸叔丁酯。LCMS
(ESI)407(M+H)。
[0655] N-[(2S)-2-[[2-氯-5-(3,3-二乙氧基丙-1-炔基)嘧啶-4-基]氨基]-3,3-二甲基-丁基]氨基甲酸叔丁酯
[0656]
[0657] N-[(2S)-2-[[2-氯-5-(3,3-二乙氧基丙-1-炔基)嘧啶-4-基]氨基]-3,3-二甲基-丁基]氨基甲酸叔丁酯使用与合成(2S)-N2-[2-氯-5-(3,3-二乙氧基丙-1-炔基)嘧啶-4-基]-4-甲基-戊-1,2-二胺中所用类似的实验条件合成。LCMS(ESI)455(M+H)。
[0658] 7-[(1S)-1-[(叔丁氧羰基氨基)甲基]-2,2-二甲基-丙基]-2-氯-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸
[0659]
[0660] 7-[(1S)-1-[(叔丁氧羰基氨基)甲基]-2,2-二甲基-丙基]-2-氯-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸使用与针对7-[1-[(叔丁氧羰基氨基)甲基]-2-甲基-丙基]-2-氯-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸所述类似的合成顺序合成。LCMS(ESI)397(M+H)。
[0661] 中间体1F使用与针对中间体1A所述类似的合成顺序合成。LCMS(ESI)279(M+H)。
[0662] 实施例53
[0663] 合成化合物53
[0664]
[0665] 化合物53以与针对中间体1CA所述类似的方式合成。LCMS(ESI)293(M+H)。
[0666] 实施例54
[0667] 合成化合物54
[0668]
[0669] N-[(2S)-2-[(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基)氨基]-2-苯基-乙基]氨基甲酸叔丁酯
[0670]
[0671] 化合物21在压力容器中在50psi氢气下使用10％Pd/C氢化，得到N-[(2S)-2-氨基-2-苯基-乙基]氨基甲酸叔丁酯，其接着使用与针对N-[2-[(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基)氨基]-
3-甲基-丁基]氨基甲酸叔丁酯所述类似的反应条件与5-溴-2,4-二氯-嘧啶反应，得到N-[(2S)-2-[(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基)氨基]-2-苯基-乙基]氨基甲酸叔丁酯。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.32(s,9H)3.29-3.50(m,2H)5.12-5.24(m,1H)7.10(t,J＝5.27Hz,1H)7.21(t,J＝6.88Hz,1H)7.26-7.34(m,4H)7.89(d,J＝7.32Hz,1H)8.24(s,1H)。LCMS(ESI)427(M+H)。
[0672] N-[(2S)-2-[[2-氯-5-(3,3-二乙氧基丙-1-炔基)嘧啶-4-基]氨基]-2-苯基-乙基]氨基甲酸叔丁酯
[0673]
[0674] N-[(2S)-2-[[2-氯-5-(3,3-二乙氧基丙-1-炔基)嘧啶-4-基]氨基]-2-苯基-乙基]氨基甲酸叔丁酯使用与合成(2S)-N2-[2-氯-5-(3,3-二乙氧基丙-1-炔基)嘧啶-4-基]-
1
4-甲基-戊-1,2-二胺中所用类似的实验条件合成。HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.14(t,J＝7.03Hz,6H)1.32(s,9H)3.39(s,2H)3.52-3.61(m,2H)3.64-3.73(m,2H)5.17-5.26(m,1H)
5.57(s,1H)7.07-7.14(m,1H)7.20-7.25(m,1H)7.26-7.33(m,4H)7.90(d,J＝7.61Hz,1H)
8.19(s,1H)。LCMS(ESI)475(M+H)。
[0675] 7-[(1S)-2-(叔丁氧羰基氨基)-1-苯基-乙基]-2-氯-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸[0676]
[0677] 7-[(1S)-2-(叔丁氧羰基氨基)-1-苯基-乙基]-2-氯-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸使用与针对7-[1-[(叔丁氧羰基氨基)甲基]-2-甲基-丙基]-2-氯-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸所述类似的合成顺序合成。LCMS(ESI)417(M+H)。
[0678] 化合物54
[0679] 化合物54使用与针对化合物44所述类似的合成顺序合成。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 3.58-3.69(m,1H)4.13(dd,J＝13.47,4.39Hz,1H)6.07(d,J＝3.81Hz,1H)6.85(d,J＝7.32Hz,2H)7.19-7.31(m,3H)7.34(s,1H)8.27(d,J＝5.27Hz,1H)9.13(s,1H)。LCMS(ESI)
299(M+H)。
[0680] 实施例55
[0681] 合成化合物55
[0682]
[0683] N-[(1S)-1-[[(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基)氨基]甲基]-2-甲基-丙基]氨基甲酸叔丁酯
[0684]
[0685] N-[(1S)-1-[[(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基)氨基]甲基]-2-甲基-丙基]氨基甲酸叔丁酯使用与针对N-[2-[(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基)氨基]-3-甲基-丁基]氨基甲酸叔丁酯所述类似的反应条件，使用5-溴-2,4-二氯-嘧啶和中间体E合成。1HNMR(600MHz,氯仿-d)δppm 0.95-1.02(m,6H)1.35-1.45(m,9H)1.75-1.90(m,1H)3.35-3.48(m,1H)3.52-3.61(m,1H)
3.64-3.76(m,1H)4.56(d,J＝8.49Hz,1H)6.47(s,1H)8.07(s,1H)。LCMS(ESI)393(M+H)。
[0686] N-[(1S)-1-[[[2-氯-5-(3,3-二乙氧基丙-1-炔基)嘧啶-4-基]氨基]甲基]-2-甲基-丙基]氨基甲酸叔丁酯
[0687]
[0688] N-[(1S)-1-[[[2-氯-5-(3,3-二乙氧基丙-1-炔基)嘧啶-4-基]氨基]甲基]-2-甲基-丙基]氨基甲酸叔丁酯使用与合成(2S)-N2-[2-氯-5-(3,3-二乙氧基丙-1-炔基)嘧啶-1
4-基]-4-甲基-戊-1,2-二胺中所用类似的实验条件合成。HNMR(600MHz,氯仿-d)δppm 
0.90-1.00(m,6H)1.18-1.25(m,6H)1.34-1.36(m,9H)1.69-1.90(m,1H)3.34-3.82(m,6H)
4.53-4.77(m,1H)5.45-5.55(m,1H)6.37(dd,J＝15.37,6.59Hz,1H)6.56(s,1H)8.05(s,
1H)。LCMS(ESI)441(M+H)。
[0689] 7-[(2S)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-甲基-丁基]-2-氯-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸[0690]
[0691] 7-[(2S)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-甲基-丁基]-2-氯-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸使用与针对7-[1-[(叔丁氧羰基氨基)甲基]-2-甲基-丙基]-2-氯-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸所述类似的合成顺序合成。1HNMR(600MHz,氯仿-d)δppm 0.90(d,J＝6.73Hz,3H)0.96(d,J＝7.03Hz,3H)1.55-1.66(m,10H)4.14(dd,J＝13.61,3.95Hz,1H)4.52-4.63(m,1H)4.84(dd,J＝13.61,1.32Hz,1H)7.37(s,1H)8.95(s,1H)。LCMS(ESI)383(M+H)。
[0692] 化合物55
[0693] 化合物55使用与针对化合物44所述类似的合成顺序合成。LCMS(ESI)265(M+H)。
[0694] 实施例56
[0695] 合成化合物56
[0696]
[0697] 化合物56使用5-溴-2,4-二氯-嘧啶和化合物17作为起始物质且根据与化合物55类似的合成步骤顺序合成。分析数据与针对其所述的对映体一致(化合物55)。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 0.88(d,J＝6.44Hz,6H)1.73-1.86(m,1H)3.67-3.76(m,2H)4.11-
4.21(m,1H)7.13-7.19(m,1H)8.56(s,1H)9.05(s,1H)。LCMS(ESI)265(M+H)。
[0698] 实施例57
[0699] 合成化合物57
[0700]
[0701] N-[2-[(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基)氨基]-2-甲基-丙基]氨基甲酸叔丁酯
[0702]
[0703] N-[2-[(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基)氨基]-2-甲基-丙基]氨基甲酸叔丁酯使用与针对N-[2-[(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基)氨基]-3-甲基-丁基]氨基甲酸叔丁酯所述类似的反应条件，使用5-溴-2,4-二氯-嘧啶和N-(2-氨基-2-甲基-丙基)氨基甲酸叔丁酯合成。LCMS(ESI)379(M+H)。
[0704] N-[2-[[2-氯-5-(3,3-二乙氧基丙-1-炔基)嘧啶-4-基]氨基]-2-甲基-丙基]氨基甲酸叔丁酯
[0705]
[0706] N-[2-[[2-氯-5-(3,3-二乙氧基丙-1-炔基)嘧啶-4-基]氨基]-2-甲基-丙基]氨基甲酸叔丁酯使用与合成(2S)-N2-[2-氯-5-(3,3-二乙氧基丙-1-炔基)嘧啶-4-基]-4-甲基-戊-1,2-二胺中所用类似的实验条件合成。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.11-1.22(m,6H)1.31-1.45(m,15H)3.10-3.24(m,2H)3.51-3.76(m,4H)5.60(s,1H)6.94(s,1H)7.33(t,J＝
6.44Hz,1H)8.18(s,1H)。LCMS(ESI)427(M+H)。
[0707] 7-[2-(叔丁氧羰基氨基)-1,1-二甲基-乙基]-2-氯-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸[0708]
[0709] 7-[2-(叔丁氧羰基氨基)-1,1-二甲基-乙基]-2-氯-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸使用与针对7-[1-[(叔丁氧羰基氨基)甲基]-2-甲基-丙基]-2-氯-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸所述类似的合成顺序合成。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.43(s,9H)1.73(s,6H)4.06(s,2H)7.46(s,1H)9.23(s,1H)。LCMS(ESI)369(M+H)。
[0710] 化合物57
[0711] 化合物57使用与针对化合物44所述类似的合成顺序合成。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.73(s,6H)3.50(d,J＝2.93Hz,2H)7.25(s,1H)8.46-8.55(m,1H)9.07(s,1H)。LCMS(ESI)251(M+H)。
[0712] 实施例58
[0713] 合成化合物58
[0714]
[0715] N-[[1-[(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基)氨基]环己基]甲基]氨基甲酸叔丁酯
[0716]
[0717] N-[[1-[(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基)氨基]环己基]甲基]氨基甲酸叔丁酯，使用与针对N-[2-[(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基)氨基]-3-甲基-丁基]氨基甲酸叔丁酯所述类似的反应条件，使用5-溴-2,4-二氯-嘧啶和中间体K合成。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.18-1.54(m,17H)2.23(d,J＝14.35Hz,2H)3.36(d,J＝6.44Hz,2H)5.82(s,1H)6.93(s,1H)8.22(s,1H)。
LCMS(ESI)419(M+H)。
[0718] N-[[1-[[2-氯-5-(3,3-二乙氧基丙-1-炔基)嘧啶-4-基]氨基]环己基]甲基]氨基甲酸叔丁酯
[0719]
[0720] N-[[1-[[2-氯-5-(3,3-二乙氧基丙-1-炔基)嘧啶-4-基]氨基]环己基]甲基]氨基甲酸叔丁酯使用与合成(2S)-N2-[2-氯-5-(3,3-二乙氧基丙-1-炔基)嘧啶-4-基]-4-甲基-戊-1,2-二胺中所用类似的实验条件合成。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.08-1.16(m,6H)1.17-1.54(m,17H)2.13(br.s.,2H)3.36(d,J＝6.73Hz,2H)3.50-3.69(m,4H)5.72(s,1H)
6.94(s,1H)5.72(br.s.,1H)8.17(s,1H)。LCMS(ESI)467(M+H)。
[0721] 7-[1-[(叔丁氧羰基氨基)甲基]环己基]-2-氯-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸
[0722]
[0723] 7-[1-[(叔丁氧羰基氨基)甲基]环己基]-2-氯-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸，使用与针对7-[1-[(叔丁氧羰基氨基)甲基]-2-甲基-丙基]-2-氯-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸所述类似的合成顺序合成。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.37-1.54(m,13H)1.75(br.s.,4H)2.74(br.s.,2H)3.78-3.84(m,2H)7.44-7.51(m,1H)8.23(s,1H)9.11(s,1H)。LCMS(ESI)
409(M+H)。
[0724] 化合物58
[0725] 化合物58使用与针对化合物44所述类似的合成顺序合成。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.28(br.s.,2H)1.42(br.s.,2H)1.70(br.s.,4H)1.85-1.95(m,2H)2.69(m,2H)7.16-7.25(m,1H)8.41(br.s.,1H)9.04(s,1H)。LCMS 291(M+H)。
[0726] 实施例59
[0727] 合成化合物59
[0728]
[0729] N-[[1-[(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基)氨基]环戊基]甲基]氨基甲酸叔丁酯
[0730]
[0731] N-[[1-[(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基)氨基]环戊基]甲基]氨基甲酸叔丁酯使用与针对N-[2-[(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基)氨基]-3-甲基-丁基]氨基甲酸叔丁酯所述类似的反应条件，使用5-溴-2,4-二氯-嘧啶和中间体L合成。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.34(s,9H)1.50-1.58(m,2H)1.63-1.78(m,4H)1.96-2.06(m,2H)3.25(d,J＝6.15Hz,2H)6.71(s,1H)
7.18(t,J＝6.29Hz,1H)8.20(s,1H)。LCMS(ESI)405(M+H)。
[0732] N-[[1-[[2-氯-5-(3,3-二乙氧基丙-1-炔基)嘧啶-4-基]氨基]环戊基]甲基]氨基甲酸叔丁酯
[0733]
[0734] N-[[1-[[2-氯-5-(3,3-二乙氧基丙-1-炔基)嘧啶-4-基]氨基]环戊基]甲基]氨基甲酸叔丁酯使用与合成(2S)-N2-[2-氯-5-(3,3-二乙氧基丙-1-炔基)嘧啶-4-基]-4-甲基-戊-1,2-二胺中所用类似的实验条件合成。LCMS(ESI)453(M+H)。
[0735] 7-[1-[(叔丁氧羰基氨基)甲基]环戊基]-2-氯-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸
[0736]
[0737] 7-[1-[(叔丁氧羰基氨基)甲基]环戊基]-2-氯-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸使用与针对所述7-[1-[(叔丁氧羰基氨基)甲基]-2-甲基-丙基]-2-氯-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸类似的合成顺序合成。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.47(s,9H)1.74(br.s.,2H)1.88(br.s.,2H)2.04(br.s.,2H)2.41-2.45(m,2H)4.06(s,2H)7.45(s,1H)9.11(s,1H)。LCMS(ESI)395(M+H)。
[0738] 化合物59
[0739] 化合物59使用与针对化合物44所述类似的合成顺序合成。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.72(br.s.,2H)1.86-1.93(m,2H)1.99(d,J＝3.81Hz,2H)2.40(br.s.,2H)3.48(d,J＝2.34Hz,2H)7.22(s,1H)8.53(br.s.,1H)9.05(s,1H)。LCMS(ESI)277(M+H)。
[0740] 实施例60
[0741] 合成化合物60
[0742]
[0743] N-[2-[(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基)氨基]-4-甲基-戊基]氨基甲酸叔丁酯
[0744]
[0745] N-[2-[(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基)氨基]-4-甲基-戊基]氨基甲酸叔丁酯使用与针对N-[2-[(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基)氨基]-3-甲基-丁基]氨基甲酸叔丁酯所述类似的反应条件，使用5-溴-2,4-二氯-嘧啶和中间体B合成。分析数据与针对L-对映异构体所述一致。
[0746] N-[2-[[2-氯-5-(3,3-二乙氧基丙-1-炔基)嘧啶-4-基]氨基]-4-甲基-戊基]氨基甲酸叔丁酯
[0747]
[0748] N-[2-[[2-氯-5-(3,3-二乙氧基丙-1-炔基)嘧啶-4-基]氨基]-4-甲基-戊基]氨基甲酸叔丁酯使用与合成N-[2-[[2-氯-5-(3,3-二乙氧基丙-1-炔基)嘧啶-4-基]氨基]乙基]1
氨基甲酸叔丁酯中所用类似的实验条件合成。HNMR(600MHz,氯仿-d)δppm 1.21-1.31(m,
12H)1.38-1.46(m,11H)1.70(m,1H)3.24(m,2H)3.65-3.82(m,4H)4.86(br s.,1H),5.65(s,
1H)5.85(br s.,1H)6.94(s,1H)8.21(s,1H)。LCMS(ESI)455(M+H)。
[0749] 7-[1-[(叔丁氧羰基氨基)甲基]-3-甲基-丁基]-2-氯-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸
[0750]
[0751] 7-[1-[(叔丁氧羰基氨基)甲基]-3-甲基-丁基]-2-氯-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸使用与针对7-[1-[(叔丁氧羰基氨基)甲基]-2-甲基-丙基]-2-氯-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸所述类似的合成顺序合成。分析数据与针对L-异构体所述一致。
[0752] 化合物60
[0753] 化合物60使用与针对化合物44所述类似的合成顺序合成。分析数据与针对L-异构体所述一致。
[0754] 实施例61
[0755] 合成化合物61
[0756]
[0757] 向化合物60(100mg，0.00024摩尔)于DMF(3.0mL)中的溶液中添加氢化钠(60％于油中的分散体)(27.6mg，3eq)。搅拌15分钟后，添加碘甲烷(30，2eq)。将内容物在室温下搅拌30分钟。添加饱和NaHCO3后，添加乙酸乙酯。分离有机层，接着经硫酸镁干燥并真空浓缩，得到产物。分析数据类似于所述化合物49。
[0758] 实施例62
[0759] 合成化合物62
[0760]
[0761] N-[(1S,2S)-2-[(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基)氨基]环戊基]氨基甲酸叔丁酯
[0762]
[0763] N-[(1S,2S)-2-[(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基)氨基]环戊基]氨基甲酸叔丁酯通过使用与针对N-[2-[(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基)氨基]-3-甲基-丁基]氨基甲酸叔丁酯所述类似的反应条件，用5-溴-2,4-二氯-嘧啶处理N-[(1S,2S)-2-氨基环戊基]氨基甲酸叔丁酯合成。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.27(s,9H)1.42-1.54(m,2H)1.56-1.65(m,2H)1.80-1.88(m,
1H)1.96-2.01(m,1H)3.88-3.96(m,1H)4.03-4.09(m,1H)6.91(d,J＝8.20Hz,1H)7.41(d,J＝7.32Hz,1H)8.18(s,1H)。LCMS(ESI)391(M+H)。
[0764] N-[(1S,2S)-2-[[2-氯-5-(3,3-二乙氧基丙-1-炔基)嘧啶-4-基]氨基]环戊基]氨基甲酸叔丁酯
[0765]
[0766] N-[(1S,2S)-2-[[2-氯-5-(3,3-二乙氧基丙-1-炔基)嘧啶-4-基]氨基]环戊基]氨基甲酸叔丁酯使用与合成(2S)-N2-[2-氯-5-(3,3-二乙氧基丙-1-炔基)嘧啶-4-基]-4-甲基-戊-1,2-二胺中所用类似的实验条件合成。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.13(t,6H)1.28(s,9H)1.42-1.52(m,2H)1.58-1.65(m,2H)1.81-1.90(m,1H)1.99-2.08(m,1H)3.49-
3.60(m,2H)3.63-3.71(m,2H)3.84-3.93(m,1H)3.96-4.04(m,1H)5.53(s,1H)6.96(d,J＝
7.90Hz,1H)7.34(d,J＝7.03Hz,1H)8.14(s,1H)。LCMS(ESI)439(M+H)。
[0767] 7-[(1S,2S)-2-(叔丁氧羰基氨基)环戊基]-2-氯-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸
[0768]
[0769] 7-[(1S,2S)-2-(叔丁氧羰基氨基)环戊基]-2-氯-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸使用与针对7-[1-[(叔丁氧羰基氨基)甲基]-2-甲基-丙基]-2-氯-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸所述类似的合成顺序合成。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.41-1.52(m,9H)1.55-1.68(m,1H)1.88-2.00(m,2H)2.05-2.15(m,1H)2.26-2.35(m,1H)2.71-2.89(m,1H)4.01-4.16(m,
1H)4.28-4.45(m,1H)7.41(s,1H)9.11(s,1H)。LCMS(ESI)381(M+H)。
[0770] 化合物62
[0771] 化合物62使用与针对化合物44所述类似的合成顺序合成。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.48-1.60(m,1H)1.88-1.98(m,3H)1.99-2.08(m,1H)2.66-2.75(m,1H)3.63-3.74(m,1H)3.99-4.12(m,1H)7.21(s,1H)8.89(s,1H)9.04(s,1H)。LCMS(ESI)263(M+H)。
[0772] 实施例63
[0773] 合成化合物63
[0774]
[0775] 在氮气下向含氯三环状内酰胺(0.050g，0.225毫摩尔)的二噁烷(2.0mL)添加5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-胺(0.052g，1.2eq，0.270毫摩尔)，接着添加Pd2(dba)3(18.5mg)、BINAP(25mg)和叔丁醇钠(31mg，0.324毫摩尔)。使烧瓶的内容物脱气10分钟并接着加热至100℃，保持12小时。将粗反应物负载在硅胶柱上并用DCM/MeOH(0-15％)洗脱，得到所需产物(26mg)。向溶解于DCM/MeOH(10％)中的此化合物中添加3N HCl的异丙醇溶液(2eq)并将反应物搅拌过夜。真空浓缩得到盐酸盐。1HNMR(d6-DMSO)δppm 11.13(brs,1H),
9.07(s,1H),8.42(s,1H),8.03(br m 1H),7.99(s,1H),7.67(brm,1H),7.18(s,1H),4.33(m,2H),3.79(m,2H),3.64(m,2H),3.50(m,2H),3.16(m,4H),2.79(s,3H)。LCMS(ESI)379(M+H)。
[0776] 实施例64
[0777] 合成化合物64
[0778]
[0779] 在氮气下向含氯三环状内酰胺(0.075g，0.338毫摩尔)的二噁烷(3.5mL)中添加4-(6-氨基-3-吡啶基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.098g，1.05eq)，接着添加Pd2(dba)3(27mg)、BINAP(36mg)和叔丁醇钠(45mg)。将内容物在回流下加热11小时。将粗反应物负载至硅胶柱上并用DCM/MeOH(0-10％)洗脱，得到所需产物(32mg)。1HNMR(d6-DMSO)δppm 9.48(s,1H),8.84(s,1H),8.29(s,1H),8.18(s,1H),7.99(s,1H),7.42(m,1H),6.98(s,1H),4.23(m,2H),
3.59(m,2H),3.45(m,4H),3.50(m,2H),3.05(m,4H)。LCMS(ESI)465(M+H)。
[0780] 实施例65
[0781] 合成化合物65
[0782]
[0783] 向化合物64(23mg)于10％DCM/MeOH中的溶液中添加10mL3M HCl的异丙醇溶液。将内容物搅拌16小时。浓缩反应混合物得到盐酸盐。1HNMR(d6-DMSO)δppm 9.01(s,1H),7.94(m,1H),7.86(m,1H),7.23(s,1H),4.30(m,2H),3.64(m,2H),3.36(m,4H),3.25(m,4H)。LCMS(ESI)465(M+H)。
[0784] 实施例66
[0785] 合成化合物66
[0786]
[0787] 在氮气下向含氯-N-甲基三环状酰胺(0.080g，0.338毫摩尔)的二噁烷(3.5mL)添加4-(6-氨基-3-吡啶基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.102g(1.1eq)，接着添加Pd2(dba)3(27mg)、BINAP(36mg)和叔丁醇钠(45mg)。将内容物在回流下加热11小时。粗产物使用硅胶柱色谱法，使用洗脱剂二氯甲烷/甲醇(0-5％)来纯化，得到所需产物(44mg)。1HNMR(d6-DMSO)δppm 9.49(s,1H),8.85(s,1H),8.32(m,1H),8.02(s,1H),7.44(m,1H),7.00(s,1H),4.33(m,2H),
3.80(m,2H),3.48(m,4H),3.07(m,4H),3.05(s,3H),1.42(s,9H)。LCMS(ESI)479(M+H)。
[0788] 实施例67
[0789] 合成化合物67
[0790]
[0791] 向化合物66(32mg)中添加3N HCL(10mL)的异丙醇溶液且将内容物搅拌在室温下过夜，历时16小时。浓缩得到盐酸盐。1HNMR(d6-DMSO)δppm 9.13(m,2H),8.11(m,1H),8.10(s,1H),7.62(m,1H),7.21(s,1H),4.43(m,2H),3.85(m,2H),3.41(m,4H),3.28(m,4H),3.08(s,3H)。LCMS(ESI)379(M+H)。
[0792] 实施例68
[0793] 合成化合物68
[0794]
[0795] 化合物68使用与针对化合物64所述类似的实验条件合成。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 0.79(d,J＝7.03Hz,3H)1.01(d,J＝6.73Hz,3H)1.35-1.48(m,9H)2.16(dd,J＝14.64,6.73Hz,1H)3.00-3.14(m,4H)3.40-3.51(m,4H)3.51-3.60(m,1H)3.63-3.74(m,1H)4.44
(dd,J＝7.90,3.81Hz,1H)6.99(s,1H)7.46(dd,J＝8.93,2.78Hz,1H)7.94-8.09(m,2H)8.31(dd,J＝9.08,1.46Hz,1H)8.85(s,1H)9.46(s,1H)。LCMS(ESI)507(M+H)。
[0796] 实施例69
[0797] 合成化合物69
[0798]
[0799] 化合物69使用与针对化合物63所述类似的实验条件合成并呈盐酸盐形式回收。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 0.77-0.86(m,3H)0.96(d,J＝7.03Hz,3H)2.10-2.24(m,1H)
3.07(s,3H)3.37-3.79(m,8H)4.00(dd,J＝13.61,4.54Hz,2H)4.63-4.73(m,1H)7.20(s,1H)
7.58-7.71(m,1H)7.99(d,J＝2.34Hz,1H)8.12(d,J＝9.37Hz,1H)9.11(s,1H)9.41(br.s.,
2H)11.76(br.s.,1H)。LCMS(ESI)421(M+H)。
[0800] 实施例70
[0801] 合成化合物70
[0802]
[0803] 化合物70使用与针对化合物64和65所述类似的实验条件合成并呈盐酸盐形式回收。表征数据(NMR和LCMS)与针对化合物71所报导一致。
[0804] 实施例71
[0805] 合成化合物71
[0806]
[0807] 化合物71使用与针对化合物64和65所述类似的实验条件合成并呈盐酸盐形式回收。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 0.79(d,J＝6.73Hz,3H)1.01(d,J＝6.73Hz,3H)2.18(dd,J＝14.49,7.17Hz,1H)3.18-3.84(m,10H)4.53-4.71(m,1H)7.24(s,1H)7.65(d,J＝9.37Hz,1H)8.01(d,J＝2.64Hz,1H)8.14(d,J＝1.46Hz,1H)8.35(d,J＝5.27Hz,1H)9.14(s,1H)9.46(s,2H)11.80(s,1H)LCMS(ESI)407(M+H)。
[0808] 实施例72
[0809] 合成化合物72(化合物UUU)
[0810]
[0811] 化合物72使用与针对化合物64和65所述类似的实验条件合成并呈盐酸盐形式回收。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 0.77(d,J＝7.03Hz,3H)0.99(d,J＝6.73Hz,3H)2.10-2.24(m,1H)3.18-3.81(m,10H)4.54-4.69(m,1H)7.22(s,1H)7.63(d,J＝9.08Hz,1H)7.99(d,J＝2.63Hz,1H)8.11(s,1H)8.33(d,J＝5.27Hz,1H)9.12(s,1H)9.43(s,2H)11.77(s,1H)。LCMS(ESI)407(M+H)。
[0812] 实施例73
[0813] 合成化合物73
[0814]
[0815] 化合物73使用与针对化合物64和65所述类似的实验条件合成并呈盐酸盐形式回收。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 0.84(d,J＝6.73Hz,3H)0.98(d,J＝6.73Hz,3H)2.12-2.26(m,1H)3.09(s,3H)3.22-3.81(m,8H)4.01(dd,J＝13.61,4.25Hz,2H)4.59-4.72(m,1H)7.19(s,1H)7.74(s,1H)7.96-8.10(m,2H)9.08(s,1H)9.22(s,2H)。LCMS(ESI)421(M+H)。
[0816] 实施例74
[0817] 合成化合物74
[0818]
[0819] 化合物74使用与针对化合物63所述类似的实验条件合成并呈盐酸盐形式回收。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 0.85(d,J＝4.98Hz,3H)0.95(d,J＝4.98Hz,3H)1.42-1.70(m,
3H)2.77(d,J＝2.93Hz,3H)3.07-4.14(m,10H)4.95(s,1H)7.20(s,1H)7.66(d,J＝9.66Hz,
1H)7.94(s,1H)8.08-8.16(m,1H)8.33(d,J＝4.68Hz,1H)9.09(s,1H)11.38(s,1H)11.71(s,
1H)。LCMS(ESI)435(M+H)。
[0820] 实施例75
[0821] 合成化合物75
[0822]
[0823] 化合物75使用与针对化合物64和65所述类似的实验条件合成并呈盐酸盐形式回收。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 0.87(d,J＝6.15Hz,3H)0.94(d,J＝6.15Hz,3H)1.57(d,J＝84.61Hz,3H)3.05(s,3H)3.13-3.55(m,8H)3.69(d,J＝78.17Hz,2H)4.90(s,1H)7.15(s,1H)7.63-7.85(m,1H)7.93(s,1H)8.26(s,1H)9.03(s,1H)9.20(s,2H)。LCMS(ESI)421(M+H)。
[0824] 实施例76
[0825] 合成化合物76
[0826]
[0827] 化合物76使用与针对化合物63所述类似的实验条件合成并呈盐酸盐形式回收。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 0.85(d,J＝6.44Hz,3H)0.95(d,J＝6.44Hz,3H)1.43-1.70(m,
3H)2.78(d,J＝2.93Hz,3H)3.05(s,3H)3.24-3.84(m,8H)4.01(d,J＝9.66Hz,2H)4.89-5.01(m,1H)7.15(s,1H)7.77(s,1H)7.91-8.05(m,2H)9.03(s,1H)10.96-11.55(m,2H)。LCMS
(ESI)449(M+H)。
[0828] 实施例77
[0829] 合成化合物77
[0830]
[0831] 化合物77使用与针对化合物64和65所述类似的实验条件合成并呈盐酸盐形式回收。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 0.83-0.88(d,J＝6.15Hz,3H)0.95(d,J＝6.15Hz,3H)1.40-1.71(m,3H)3.28-3.83(m,8H)4.00(d,J＝3.22Hz,2H)4.91-5.08(m,1H)7.17(s,1H)
7.68(d,J＝9.66Hz,1H)7.93(s,1H)8.07(s,1H)9.06(s,1H)9.40(s,2H)11.59(s,1H)。LCMS(ESI)435(M+H)。
[0832] 实施例78
[0833] 合成化合物78
[0834]
[0835] 向化合物500.060g(0.205毫摩尔)中添加5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-胺(35.42mg，0.9eq)，接着添加1,4-二噁烷(3mL)。用氮气脱气后，添加Pd2dba3(12mg)、BINAP(16mg)和叔丁醇钠(24mg)。接着将内容物在CEM Discovery微波中在90℃下加热3小时。接
1
着将反应物负载至硅胶柱并通过用DCM/MeOH(0-15％)洗脱来纯化。HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 0.75(t,J＝7.47Hz,3H)0.91(d,J＝6.73Hz,3H)1.04-1.20(m,2H)1.80-1.98(m,1H)
2.77(d,J＝3.81Hz,3H)2.94-3.90(m,10H)4.54-4.68(m,1H)7.06-7.23(m,2H)7.56-7.75(m,1H)7.90-8.12(m,2H)8.29(s,1H)9.07(s,1H)10.98-11.74(m,2H)。LCMS(ESI)435(M+H)。
[0836] 实施例79
[0837] 合成化合物79
[0838]
[0839] 化合物79以与针对化合物78所述类似的方式，接着针对化合物65所述的解封闭步骤合成并转化成盐酸盐。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 0.75(t,J＝7.32Hz,3H)0.90(d,J＝6.73Hz,3H)1.07-1.15(m,2H)1.85-1.94(m,1H)3.17-3.75(m,10H)4.58-4.67(m,1H)7.17(s,1H)7.71(s,1H)7.96(s,1H)7.98-8.05(m,1H)8.28(d,J＝4.10Hz,1H)9.06(s,1H)9.39(s,2H)。LCMS(ESI)421(M+H)。
[0840] 实施例80
[0841] 合成化合物80
[0842]
[0843] 化合物80以与针对化合物78所述类似的方式合成。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 0.78(t,J＝7.32Hz,3H)0.86(d,J＝6.73Hz,3H)1.13-1.21(m,2H)1.84-1.96(m,1H)2.77(d,J＝4.39Hz,3H)3.04(s,3H)3.11-3.84(m,8H)3.98(dd,J＝13.61,4.25Hz,2H)4.66-4.74(m,
1H)7.17(s,1H)7.64(s,1H)7.96(d,J＝2.34Hz,1H)8.03-8.13(m,1H)9.08(s,1H)11.26(s,
1H)11.66(s,1H)。LCMS(ESI)449(M+H)。
[0844] 实施例81
[0845] 合成化合物81
[0846]
[0847] 所述化合物以与针对化合物78所述类似的方式，接着针对化合物65所述的解封闭步骤合成并转化成盐酸盐。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 0.78(t,J＝7.32Hz,3H)0.85(d,J＝6.73Hz,3H)1.10-1.27(m,2H)1.82-1.99(m,1H)3.04(s,3H)3.28-3.77(m,8H)3.97(dd,J＝13.91,4.54Hz,2H)4.62-4.75(m,1H)7.07-7.24(m,1H)7.62-7.75(m,1H)7.94(d,J＝2.34Hz,1H)7.97-8.08(m,1H)9.05(s,1H)9.29(s,2H)。LCMS(ESI)435(M+H)。
[0848] 实施例82
[0849] 合成化合物82
[0850]
[0851] 所述化合物以与针对化合物78所述类似的方式，接着针对化合物65所述的解封闭步骤合成并转化成盐酸盐。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 0.96(s,9H)3.15-3.87(m,10H)4.42-4.53(m,1H)6.99(s,1H)7.24(s,1H)8.06(s,1H)8.11-8.21(m,1H)8.79-8.98(m,2H)
9.25(s,2H)9.88(s,1H)。LCMS(ESI)421(M+H)。
[0852] 实施例83
[0853] 合成化合物83
[0854]
[0855] 化合物83以与针对化合物78所述类似的方式，接着针对化合物65所述的解封闭步骤合成并转化成盐酸盐。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 0.95(s,9H)2.79(d,J＝4.10Hz,3H)3.06-3.86(m,10H)4.56-4.67(m,1H)7.17(s,1H)7.70(s,1H)7.96(d,J＝2.63Hz,1H)7.99-
8.08(m,1H)8.26(s,1H)9.06(s,1H)10.80(s,1H)。LCMS(ESI)435(M+H)。
[0856] 实施例84
[0857] 合成化合物84
[0858]
[0859] 化合物84以与针对化合物78所述类似的方式合成并转化成盐酸盐。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 2.75-2.81(m,3H)3.12-3.16(m,2H)3.46-3.54(m,4H)3.60-3.69(m,2H)3.72-3.79(m,1H)4.07-4.18(m,2H)6.06-6.09(m,1H)6.90(d,J＝7.61Hz,2H)7.20-
7.31(m,3H)7.33(s,1H)7.49-7.55(m,1H)7.62-7.70(m,1H)7.92(d,J＝2.93Hz,1H)8.22(s,
1H)9.14(s,1H)。LCMS(ESI)455(M+H)。
[0860] 实施例85
[0861] 合成化合物85
[0862]
[0863] 化合物85以与针对化合物78所述类似的方式，接着针对化合物65所述的解封闭步骤合成并转化成盐酸盐。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 3.21(s,4H)3.35-3.67(m,5H)4.07-4.20(m,2H)6.13(s,1H)6.90(d,J＝7.32Hz,2H)7.22-7.31(m,3H)7.36(s,1H)7.48(d,J＝
9.37Hz,1H)7.93(d,J＝2.34Hz,1H)8.04-8.11(m,1H)8.25(d,J＝4.98Hz,1H)9.17(s,1H)
11.77(br,s.,1H)。LCMS(ESI)441(M+H)。
[0864] 实施例86
[0865] 合成化合物86
[0866]
[0867] 化合物86以与针对化合物78所述类似的方式，接着针对化合物65所述的解封闭步骤合成并转化成盐酸盐。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 0.90(d,J＝6.15Hz,6H)1.72-1.89(m,1H)3.15-3.92(m,9H)4.10-4.46(m,2H)7.18(s,1H)7.59(d,J＝8.78Hz,1H)8.00(s,1H)8.13(d,J＝9.37Hz,1H)8.55(s,1H)9.09(s,1H)9.67(s,2H)11.91(s,1H)。LCMS(ESI)407(ESI)。
[0868] 实施例87
[0869] 合成化合物87
[0870]
[0871] 化合物87以与化合物86类似的方式合成并转化成盐酸盐。表征数据(NMR和LCMS)与针对对映体所获得类似化合物86。
[0872] 实施例88
[0873] 合成化合物88
[0874]
[0875] 化合物88以与针对化合物78所述类似的方式，接着针对化合物65所述的解封闭步骤合成并转化成盐酸盐。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.78(s,6H)3.40-3.53(m,6H)3.64-3.73(m,4H)7.27(s,1H)7.66(d,J＝9.37Hz,1H)7.98(d,J＝2.34Hz,1H)8.12(br.s.,1H)
8.47(br.s.,1H)9.11(s,1H)9.45(br.s.,2H)11.62(br.s.,1H)。LCMS(ESI)393(M+H)。
[0876] 实施例89
[0877] 合成化合物89(又称为化合物T)
[0878]
[0879] 化合物89以与针对化合物78所述类似的方式合成并转化成盐酸盐。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.47(br.s.,6H)1.72(br.s.,2H)1.92(br.s.,2H)2.77(br.s.,3H)
3.18(br.s.,2H)3.46(br.s.,2H)3.63(br.s.,2H)3.66(d,J＝6.15Hz,2H)3.80(br.s.,2H)
7.25(s,1H)7.63(br.s.,2H)7.94(br.s.,1H)8.10(br.s.,1H)8.39(br.s.,1H)9.08(br.s.,
1H)11.59(br.s.,1H)。LCMS(ESI)447(M+H)。
[0880] 实施例90
[0881] 合成化合物90(又称为化合物Q)
[0882]
[0883] 化合物90以与针对化合物78所述类似的方式，接着针对化合物65所述的解封闭步骤合成并转化成盐酸盐。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.27-1.64(m,6H)1.71(br.s.,2H)1.91(br.s.,2H)2.80(br.s.,1H)3.17-3.24(m,2H)3.41(br.s.,4H)3.65(br.s.,4H)7.26(br.s.,1H)7.63(br.s.,1H)7.94(br.s.,1H)8.13(br.s.,1H)8.40(br.s.,1H)9.09(br.s.,
1H)9.62(br.s.,1H)11.71(br.s.,1H)。LCMS(ESI)433(M+H)。
[0884] 实施例91
[0885] 合成化合物91(又称为化合物ZZ)
[0886]
[0887] 化合物91使用与针对化合物78所述条件类似的条件合成并转化成盐酸盐。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.64-1.75(m,2H)1.83-1.92(m,2H)1.96-2.06(m,2H)2.49-2.58(m,2H)2.79(d,J＝3.81Hz,3H)3.06-3.18(m,4H)3.59-3.69(m,2H)3.73-3.83(m,2H)4.04-4.12(m,2H)7.17(br.s.,1H)7.60-7.70(m,2H)7.70-7.92(m,2H)7.96(br.s.,1H)8.41
(br.s.,1H)8.98(br.s.,1H)10.77(br.s.,1H)。LCMS(ESI)433(M+H)。
[0888] 实施例92
[0889] 合成化合物92
[0890]
[0891] 化合物92以与针对化合物78所述类似的方式，接着针对化合物65所述的解封闭步骤合成并转化成盐酸盐。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.64-1.75(m,2H)1.84-1.92(m,2H)1.96-2.05(m,2H)2.48-2.56(m,2H)3.22(br.s.,4H)3.42-3.48(m,4H)3.60-3.69(m,2H)
4.05-4.13(m,1H)7.18(s,1H)7.65(d,J＝13.47Hz,1H)7.70-7.77(m,1H)7.94(d,J＝
1.76Hz,1H)8.42(br.s.,1H)9.00(s,1H)9.15(br.s.,2H)。LCMS(ESI)419(M+H)。
[0892] 实施例93
[0893] 合成化合物93
[0894]
[0895] 化合物93以与针对化合物78所述类似的方式，接着针对化合物65所述的解封闭步骤合成并转化成盐酸盐。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.76(br.s.,2H)1.89(br.s.,2H)2.03(br.s.,2H)2.47-2.58(m,2H)3.04(s,3H)3.22(br.s.,4H)3.39(br.s.,4H)3.66(s,2H)
7.21(s,1H)7.67(d,J＝9.37Hz,1H)7.93(br.s.,1H)7.98-8.09(m,1H)9.04(s,1H)9.34
(br.s.,2H)11.31(br.s.,1H)。LCMS(ESI)433(M+H)。
[0896] 实施例94
[0897] 合成化合物94
[0898]
[0899] 化合物94使用与针对化合物78所述类似的条件合成并转化成盐酸盐。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.66-1.77(m,2H)1.84-1.94(m,2H)1.96-2.08(m,2H)2.48-2.57(m,2H)3.36-3.52(m,4H)3.60-3.80(m,6H)7.21(s,1H)7.53-7.74(m,2H)7.86(s,1H)8.02(s,1H)8.45(s,1H)9.03(s,1H)11.19(br.s.,1H)。LCMS(ESI)420(M+H)。
[0900] 实施例95
[0901] 合成化合物95
[0902]
[0903] 化合物95使用与针对化合物78所述类似的条件合成并转化成盐酸盐。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.65-1.79(m,2H)1.85-1.95(m,2H)1.97-2.08(m,2H)2.47-2.54(m,2H)3.40-3.58(m,5H)3.65(dd,J＝21.67,5.56Hz,1H)3.69-3.78(m,4H)7.24(s,1H)
7.97-8.17(m,2H)8.48(s,1H)9.08(s,1H)11.81(s,1H)。LCMS(ESI)421(M+H)。
[0904] 实施例96
[0905] 合成化合物96
[0906]
[0907] 化合物96使用与针对化合物78所述类似的条件合成并转化成盐酸盐。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.55-1.74(m,2H)1.80-1.98(m,4H)2.48-2.60(m,2H)3.40-3.50(m,4H)3.57-3.72(m,2H)3.90-4.20(m,4H)7.08(s,1H)7.37-7.57(m,2H)7.70(m,2H)8.32(s,1H)8.88(s,1H)9.98(s,1H)。LCMS(ESI)419(M+H)。
[0908] 实施例97
[0909] 合成化合物97(又称为化合物III)
[0910]
[0911] 化合物97使用与针对化合物78所述类似的条件合成并转化成盐酸盐。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.30(d,J＝5.27Hz,6H)1.65-1.78(m,2H)1.83-1.95(m,2H)1.97-
2.10(m,2H)2.45-2.55(m,2H)3.25-3.36(m,1H)3.39-3.48(m,4H)3.60-3.70(m,4H)3.75-
4.15(m,2H)7.24(s,1H)7.54-7.75(m,2H)7.95(s,1H)8.10(s,1H)8.49(s,1H)9.07(s,1H)
11.25(s,1H)11.48(s,1H)。LCMS(ESI)461(M+H)。
[0912] 实施例98
[0913] 合成化合物98
[0914]
[0915] 化合物98使用与针对化合物78所述类似的条件合成并转化成盐酸盐。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 0.99(d,J＝6.15Hz,6H)1.65-1.78(m,2H)1.90(m,2H)1.97-2.08(m,2H)2.08-2.17(m,1H)2.45-2.55(m,2H)2.88-3.02(m,2H)3.33-3.48(m,4H)3.50-3.90(m,6H)7.24(s,1H)7.67(s,2H)7.94(s,1H)8.12(s,1H)8.49(s,1H)9.07(s,1H)10.77(s,1H)
11.51(s,1H)。LCMS(ESI)475(M+H)。
[0916] 实施例99
[0917] 合成化合物99
[0918]
[0919] 化合物99使用与针对化合物78所述条件类似的条件合成并转化成盐酸盐。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.13(d,J＝5.86Hz,6H)1.66-1.77(m,2H)1.84-1.94(m,2H)1.97-2.09(m,2H)2.40-2.53(m,2H)3.37-3.49(m,2H)3.50-3.59(m,2H)3.59-3.73(m,4H)7.23(s,
1H)7.64(m,3H)7.85(s,1H)8.11(s,1H)8.47(s,1H)9.05(s,1H).11.35(br s.,1H)。LCMS(ESI)448(M+H)。
[0920] 实施例100
[0921] 合成化合物100
[0922]
[0923] 化合物100使用与针对化合物78所述类似的条件合成并转化成盐酸盐。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.50-1.57(m,2H)1.62-1.68(m,3H)1.68-1.75(m,2H)1.84-1.92(m,2H)1.97-2.08(m,2H)2.48-2.53(m,2H)3.14-3.23(m,4H)3.43-3.47(m,2H)3.58-3.70(m,2H)7.22(s,1H)7.58-7.70(m,2H)7.85-8.00(m,1H)8.16(d,1H)8.46(s,1H)9.04(s,1H)
11.37(br s.,1H)。LCMS(ESI)418(M+H)。
[0924] 实施例101
[0925] 合成化合物101(又称为化合物WW)
[0926]
[0927] 化合物101使用与针对化合物78所述条件类似的条件合成并转化成盐酸盐。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.72(s,2H)1.90(s,4H)2.03(s,2H)2.21(s,2H)2.48-2.54(m,2H)2.73(s,2H)3.03(s,2H)3.25-3.35(m,1H)3.38-3.48(m,4H)3.65-3.99(m,5H)7.23(s,1H)
7.63(d,J＝9.66Hz,1H)7.90(s,1H)8.13(s,1H)8.47(s,1H)9.06(s,1H)10.50(br s.,1H)。
LCMS(ESI)503(M+H)。
[0928] 实施例102
[0929] 合成化合物102(又称为化合物HHH)
[0930]
[0931] 化合物102使用与针对化合物78所述条件类似的条件合成并转化成盐酸盐。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.63-1.85(m,6H)1.87-1.92(m,2H)1.99-2.06(m,2H)2.15-2.23(m,2H)2.47-2.53(m,1H)2.69-2.79(m,2H)2.81-2.91(m,2H)2.98-3.08(m,2H)3.32-3.48(m,4H)3.57-3.72(m,4H)3.77-3.85(m,2H)7.22(s,1H)7.60-7.68(m,2H)7.90(s,1H)8.07(s,1H)8.46(s,1H)9.04(s,1H).11.41(br s.,1H)。LCMS(ESI)501(M+H)。
[0932] 实施例103
[0933] 合成化合物103
[0934]
[0935] 化合物103使用与针对化合物78所述条件类似的条件合成并转化成盐酸盐。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.64-1.76(m,2H)1.87-1.93(m,2H)2.00-2.07(m,2H)2.48-2.53(m,2H)2.67-2.72(m,4H)3.44-3.47(m,2H)3.50-3.55(m,4H)7.24(s,1H)7.61(d,J＝9.37Hz,2H)7.86(d,J＝2.63Hz,1H)8.09(d,J＝12.88Hz,1H)8.48(s,1H)9.06(s,1H)11.41(br s.,1H)。LCMS(ESI)436(M+H)。
[0936] 实施例104
[0937] 合成化合物104
[0938]
[0939] 化合物104使用与针对化合物78所述条件类似的条件合成并转化成盐酸盐。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.29(d,J＝6.73Hz,6H)1.66-1.79(m,2H)1.84-1.95(m,2H)1.98-2.09(m,2H)2.46-2.55(m,2H)3.29-3.39(m,2H)3.58-3.70(m,4H)3.77-3.86(m,4H)7.24(s,
1H)7.66(d,J＝9.37Hz,1H)7.96(d,J＝2.93Hz,1H)8.08(s,1H)8.48(s,1H)9.06(s,1H)9.28(s,1H)9.67(s,1H)11.36(s,1H)。LCMS(ESI)447(M+H)。
[0940] 实施例105
[0941] 合成化合物105
[0942]
[0943] 化合物105使用与针对化合物78所述条件类似的条件合成并转化成盐酸盐。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.73(s,2H)1.76-1.85(m,2H)1.85-1.94(m,2H)1.98-2.07(m,2H)2.19-2.26(m,2H)2.48-2.52(m,1H)2.70-2.81(m,4H)3.13-3.20(m,1H)3.30-3.48(m,3H)
3.58-3.71(m,4H)3.78-3.84(m,4H)7.24(s,1H)7.62(d,J＝9.37Hz,2H)7.89(d,J＝1.17Hz,
1H)8.09-8.18(m,1H)8.48(s,1H)9.06(s,1H)11.46(br s.,1H)。LCMS(ESI)519(M+H)。
[0944] 实施例106
[0945] 合成化合物106
[0946]
[0947] 化合物106使用与针对化合物78所述条件类似的条件合成，接着针对化合物65所述的解封闭步骤并转化成盐酸盐。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.65-1.75(m,2H)1.85-1.93(m,2H)1.93-1.99(m,1H)2.00-2.06(m,2H)2.08-2.14(m,1H)2.47-2.55(m,2H)3.07-
3.25(m,2H)3.25-3.69(m,5H)4.46(s,1H)4.67(s,1H)7.22(s,1H)7.58-7.69(m,2H)8.46(s,
1H)9.02(s,1H)9.34(s,1H)9.65(s,1H)。LCMS(ESI)431(M+H)。
[0948] 实施例107
[0949] 合成化合物107(又称为化合物YY)
[0950]
[0951] 化合物107使用与针对化合物78所述条件类似的条件合成并转化成盐酸盐。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.65-1.82(m,3H)1.89(br.s.,2H)1.98-2.08(m,2H)2.13(br.s.,2H)2.47-2.55(m,2H)2.68(d,J＝4.98Hz,6H)2.71-2.80(m,2H)3.29-3.71(m,10H)7.16-
7.26(m,1H)7.67(d,J＝9.66Hz,2H)7.91(d,J＝2.05Hz,1H)8.14(br.s.,1H)8.48(br.s.,
1H)9.05(s,1H)11.14(br.s.,1H)11.43(br.s.,1H)。LCMS(ESI)461(M+H)。
[0952] 实施例108
[0953] 合成化合物108
[0954]
[0955] 化合物108以与针对化合物64和65所述类似的方式合成并呈盐酸盐形式回收。分析数据与针对对映体化合物75所述一致。
[0956] 实施例109
[0957] 合成化合物109
[0958]
[0959] 化合物109以与针对化合物64和65所述类似的方式合成并呈盐酸盐形式回收。分析数据与针对对映体化合物75所述一致。
[0960] 实施例110
[0961] 合成化合物110
[0962]
[0963] 化合物110以与针对化合物78所述类似的方式合成并接着转化成其盐酸盐。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.50-1.65(m,1H)1.92-2.02(m,3H)2.06-2.15(m,1H)2.78(d,J＝3.81Hz,4H)3.10-3.20(m,4H)3.47-3.51(m,2H)3.64-3.71(m,1H)3.76-3.83(m,2H)3.98-
4.14(m,1H)7.20(s,2H)7.77(s,1H)7.97(s,2H)8.81(s,1H)9.03(s,1H)10.97(br s.,1H)。
LCMS(ESI)419(M+H)。
[0964] 实施例111
[0965] 合成化合物111
[0966]
[0967] 化合物111以与针对化合物78所述类似的方式合成并接着转化成其盐酸盐。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.54-1.59(m,1H)1.92-2.01(m,3H)2.06-2.15(m,1H)2.76-2.84(m,1H)3.17-3.24(m,6H)3.64-3.71(m,2H)4.02-4.11(m,2H)7.22(s,2H)7.64(s,1H)7.97(s,2H)8.75(s,1H)8.97(s,1H)9.21(s,1H)。LCMS(ESI)405(M+H)。
[0968] 实施例112
[0969] 合成化合物112
[0970]
[0971] 化合物112使用与针对化合物64所述类似的实验条件合成。
[0972] 实施例113
[0973] 合成N-[2-[(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基)氨基]乙基]氨基甲酸叔丁酯，化合物113
[0974]
[0975] 向5-溴-2,4-二氯嘧啶(12.80g，0.054摩尔)于乙醇(250mL)中的溶液中添加亨尼格碱(12.0mL)，接着添加N-(叔丁氧羰基)-1,2-二氨基乙烷(10g，0.0624摩尔)于乙醇(80mL)中的溶液。将内容物搅拌过夜，历时20小时。在真空下蒸发溶剂。添加乙酸乙酯(800mL)和水(300mL)且分离各层。有机层经硫酸镁干燥并接着真空浓缩。使用己烷/乙酸乙酯(0-60％)的硅胶柱色谱法，得到N-[2-[(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基)氨基]乙基]氨基甲酸叔丁酯。LCMS(ESI)351(M+H)。
[0976] 实施例114
[0977] 合成N-[2-[[2-氯-5-(3,3-二乙氧基丙-1-炔基)嘧啶-4-基]氨基]乙基]氨基甲酸叔丁酯，化合物114
[0978]
[0979] 在氮气下向含N-[2-[(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基)氨基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(5g，14.23毫摩尔)的甲苯(42mL)和三乙胺(8.33mL)添加三苯基胂(4.39g)、3,3-二乙氧基丙-1-炔(3.24mL)和Pddba(1.27g)。将内容物在70℃下加热24小时。经 过滤后，粗反应
物使用己烷/乙酸乙酯(0-20％)进行柱分离，得到所需产物3.9g。所得残余物使用己烷/乙酸乙酯(0-30％)进行柱色谱法，得到N-[2-[[2-氯-5-(3,3-二乙氧基丙-1-炔基)嘧啶-4-基]氨基]乙基]氨基甲酸叔丁酯。LCMS(ESI)399(M+H)。
[0980] 实施例115
[0981] 合成N-[2-[2-氯-6-(二乙氧基甲基)吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基]乙基]氨基甲酸叔丁酯，化合物115
[0982]
[0983] 向化合物114(3.9g，0.00976摩尔)于THF(60mL)中的溶液中添加TBAF(68.3mL，7eq)。将内容物加热至45℃，保持2小时。浓缩，接着使用乙酸乙酯/己烷(0-50％)进行柱色谱法，得到呈浅棕色液体状的N-[2-[2-氯-6-(二乙氧基甲基)吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(1.1g)。1HNMR(d6-DMSO)δppm 8.88(s,1H),6.95(brs,1H),6.69(s,
1H),5.79(s,1H),4.29(m,2H),3.59(m,4H),3.34(m,1H),3.18(m,1H),1.19(m,9H),1.17(m,
6H)。LCMS(ESI)399(M+H)。
[0984] 实施例116
[0985] 合成N-[2-[2-氯-6-(二乙氧基甲基)-5-碘-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基]乙基]氨基甲酸叔丁酯，化合物116
[0986]
[0987] 向含N-[2-[2-氯-6-(二乙氧基甲基)吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(0.1g，0.00025mol)的乙腈(2mL)中添加1,3-二碘-5,5-二甲基乙内酰脲(95mg，1eq)和固体NaHCO3(63mg，3eq)。将反应物在室温下搅拌16小时。将反应物过滤并真空浓缩。产物通过硅胶柱色谱法，使用己烷/乙酸乙酯(0-50％)来纯化，得到呈浅黄色固体状的N-[2-[2-氯-6-(二乙氧基甲基)-5-碘-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(0.03g)。LCMS(ESI)525(M+H)。
[0988] 实施例117
[0989] 合成N-[2-[2-氯-6-(二乙氧基甲基)-5-(邻甲苯基)吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基]乙基]氨基甲酸叔丁酯，化合物117
[0990]
[0991] 向含N-[2-[2-氯-6-(二乙氧基甲基)-5-碘-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(0.1g,0.19毫摩尔)的二噁烷(3mL)中添加含2-甲基苯基硼酸(28mg)、四(三苯基膦)钯(25mg)和磷酸钾(250mg)的水(0.3mL)。将反应物在CEM Discovery微波中90℃下加热3小时。将粗反应物负载到硅胶上并使用己烷/乙酸乙酯(0-30％)进行柱分离，得到N-[2-[2-氯-6-(二乙氧基甲基)-5-(邻甲苯基)吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(0.06g)。LCMS(ESI)489(M+H)。
[0992] 实施例118
[0993] 合成7-[2-(叔丁氧羰基氨基)乙基]-2-氯-5-(邻甲苯基)吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸，化合物118
[0994]
[0995] 向含N-[2-[2-氯-6-(二乙氧基甲基)-5-(邻甲苯基)吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(0.85g，1.74毫摩尔)的AcOH(10mL)中添加水(1.5mL)。将反应物在室温下搅拌16小时。接着真空浓缩粗反应物。添加乙酸乙酯(50mL)后，有机层用饱和NaHCO3洗涤。有机层经硫酸镁干燥并接着真空浓缩，得到粗中间体，N-[2-[2-氯-6-甲酰基-5-(邻甲苯基)吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基]乙基]氨基甲酸叔丁酯。向含此粗中间体的DMF(5mL)中添加过硫酸氢钾(1.3g)。搅拌2.5小时后，添加水(20mL)和乙酸乙酯(100mL)。将有机层分离，干燥并接着真空浓缩，得到粗产物，其使用己烷/乙酸乙酯(0-50％)进行硅胶柱分离，得到7-[2-(叔丁氧羰基氨基)乙基]-2-氯-5-(邻甲苯基)吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸(0.112g)。
LCMS(ESI)431(M+H)。
[0996] 实施例119
[0997] 合成化合物119
[0998]
[0999] 向含7-[2-(叔丁氧羰基氨基)乙基]-2-氯-5-(邻甲苯基)吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸(0.1g，0.261mmol)的DCM(4.1mL)中添加DMAP(20mg)，接着添加N,N’-二异丙基碳二亚胺(0.081mL，2eq)。搅拌3小时后，添加TFA(0.723mL)。接着再继续搅拌30分钟。反应混合物用饱和NaHCO3中和。接着添加DCM(20mL)且分离有机层，经硫酸镁干燥并接着真空浓缩，得到粗产物，其使用己烷/乙酸乙酯(0-100％)进行柱分离，得到氯三环状酰胺化合物119(0.65g)。LCMS(ESI)313(M+H)。
[1000] 实施例120
[1001] 合成化合物120
[1002]
[1003] 在氮气下向含氯三环状酰胺(0.040g，0.128毫摩尔)(化合物119)的二噁烷(2.5mL)中添加Pd2(dba)3(12mg)、叔丁醇钠(16mg)、BINAP(16mg)和4-吗啉代苯胺(22.7mg，
1eq)。将反应混合物在CEM Discovery微波中在90℃下加热3.0小时。将粗反应物负载至硅胶柱上且内容物用DCM/MeOH(0-6％)洗脱，得到产物(10mg)。LCMS(ESI)455(M+H)。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 2.14(s,3H)3.23-3.50(m,2H)3.57-3.73(m,2H),3.81-3.92(m,
8H),7.11-7.31(m,4H)7.31-7.48(m,1H)7.58-7.73(m,1H)7.77-7.95(m,2H)8.05-8.21(m,
1H)8.44(s,1H)9.85-10.01(m,1H)。
[1004] 实施例121
[1005] 合成化合物121
[1006]
[1007] 向含氯三环状酰胺(0.024g)(化合物119)的N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)(1.5mL)添加反式-4-氨基环己醇(0.0768mmol，26.54mg，3eq)和亨尼格碱(0.4mL)。反应在CEM Discovery微波容器中在150℃下加热1.2小时。将粗反应物负载至硅胶柱上且内容物用DCM/MeOH(0-10％)洗脱，得到产物(21mg)。LCMS(ESI)392(M+H)。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.23(d,J＝8.78Hz,4H)1.84(br.s.,4H)2.11(s,3H)3.34-3.43(m,1H)3.55(br.s.,2H)
3.72(br.s.,1H)4.13(br.s.,2H)4.50(br.s.,1H)7.03(br.s.,1H)7.12-7.28(m,4H)7.96(br.s.,1H)8.18(br.s.,1H)。
[1008] 实施例122
[1009] 合成7-[2-(叔丁氧羰基氨基)乙基]-2-氯-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸，化合物122
[1010]
[1011] 7-[2-(叔丁氧羰基氨基)乙基]-2-氯-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸使用与针对合成7-[2-(叔丁氧羰基氨基)乙基]-2-氯-5-(邻甲苯基)吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸所述类似的实验程序合成。LCMS(ESI)341(M+H)。
[1012] 实施例123
[1013] 合成化合物123
[1014]
[1015] 氯三环状酰胺化合物123使用与针对合成氯三环状酰胺(化合物119)所述类似的实验程序合成。LCMS(ESI)223(M+H)。
[1016] 实施例124
[1017] 合成化合物124
[1018]
[1019] 向含氯三环状酰胺，化合物123(0.035g，0.00157摩尔)的NMP(1.5mL)中添加亨尼格碱(0.3mL)，接着添加反式-4-氨基环己醇(54.2mg)。将反应混合物在150℃下加热1.5小时。将粗反应物负载至硅胶柱上且柱用DCM/MeOH(0-10％)洗脱，得到产物(5mg)。LCMS(ESI)302(M+H)。
[1020] 实施例125
[1021] 合成N-[2-[(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基)氨基]-2-甲基-丙基]氨基甲酸叔丁酯，化合物125
[1022]
[1023] N-[2-[(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基)氨基]-2-甲基-丙基]氨基甲酸叔丁酯通过使用与针对合成N-[2-[(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基)氨基]乙基]氨基甲酸叔丁酯所述类似的实验条件，用N-(2-氨基-2-甲基-丙基)氨基甲酸叔丁酯处理5-溴-2,4-二氯嘧啶来合成。LCMS(ESI)(M+H)379。
[1024] 实施例126
[1025] 合成N-[2-[[2-氯-5-(3,3-二乙氧基丙-1-炔基)嘧啶-4-基]氨基]-2-甲基-丙基]氨基甲酸叔丁酯，化合物126
[1026]
[1027] N-[2-[[2-氯-5-(3,3-二乙氧基丙-1-炔基)嘧啶-4-基]氨基]-2-甲基-丙基]氨基甲酸叔丁酯使用与针对合成N-[2-[[2-氯-5-(3,3-二乙氧基丙-1-炔基)嘧啶-4-基]氨基]乙基]氨基甲酸叔丁酯所述类似的实验条件，通过在例如Pddba等催化剂存在下用3,3-二乙氧基丙-1-炔处理N-[2-[(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基)氨基]-2-甲基-丙基]氨基甲酸叔丁酯来合成。
[1028] LCMS(ESI)(M+H)427。
[1029] 实施例127
[1030] 合成N-[2-[2-氯-6-(二乙氧基甲基)吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基]-2-甲基-丙基]氨基甲酸叔丁酯，化合物127
[1031]
[1032] N-[2-[2-氯-6-(二乙氧基甲基)吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基]-2-甲基-丙基]氨基甲酸叔丁酯使用与针对合成N-[2-[2-氯-6-(二乙氧基甲基)吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基]乙基]氨基甲酸叔丁酯所述类似的实验条件，通过用TBAF处理N-[2-[[2-氯-5-(3,3-二乙氧基丙-1-炔基)嘧啶-4-基]氨基]-2-甲基-丙基]氨基甲酸叔丁酯来合成。LCMS(ESI)(M+H)427。
[1033] 实施例128
[1034] 合成7-[2-(叔丁氧羰基氨基)-1,1-二甲基-乙基]-2-氯-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸，化合物128
[1035]
[1036] 7-[2-(叔丁氧羰基氨基)-1,1-二甲基-乙基]-2-氯-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸使用与针对合成7-[2-(叔丁氧羰基氨基)乙基]-2-氯-5-(邻甲苯基)吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸所述类似的实验程序合成。LCMS(ESI)369(M+H)。
[1037] 实施例129
[1038] 合成化合物129
[1039]
[1040] 氯三环状酰胺化合物129使用与针对合成氯三环状酰胺化合物119所述类似的程序合成。LCMS(ESI)251(M+H)。
[1041] 实施例130
[1042] 合成化合物130
[1043]
[1044] 化合物130通过使用与化合物124类似的实验条件，用反式-4-氨基环己醇处理氯三环状胺化合物129来合成。LCMS(ESI)330(M+H)。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.07-1.34(m,4H)1.47-2.05(m,10H)3.09(m,1H)3.51(d,J＝2.91Hz,2H)3.57(m,1H)4.50(br.s.,1H)6.89(s,1H)6.94-7.05(m,1H)8.04(br.s.,1H)8.60(s,1H)9.00(br.s.,1H)。
[1045] 实施例131
[1046] 合成N-[1-[[(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基)氨基]甲基]丙基]氨基甲酸苯甲酯，化合物131
[1047]
[1048] N-[1-[[(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基)氨基]甲基]丙基]氨基甲酸苯甲酯通过使用与针对合成N-[2-[(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基)氨基]乙基]氨基甲酸叔丁酯所述类似的实验条件，用N-[1-(氨基甲基)丙基]氨基甲酸苯甲酯处理5-溴-2,4-二氯嘧啶基来合成。LCMS(ESI)(M+H)413。
[1049] 实施例132
[1050] 合成N-[1-[[[2-氯-5-(3,3-二乙氧基丙-1-炔基)嘧啶-4-基]氨基]甲基]丙基]氨基甲酸苯甲酯，化合物132
[1051]
[1052] N-[1-[[[2-氯-5-(3,3-二乙氧基丙-1-炔基)嘧啶-4-基]氨基]甲基]丙基]氨基甲酸苯甲酯通过使用与针对合成N-[2-[[2-氯-5-(3,3-二乙氧基丙-1-炔基)嘧啶-4-基]氨基]乙基]氨基甲酸叔丁酯所述类似的实验条件，在例如Pddba等催化剂存在下用3,3-二乙氧基丙-1-炔处理N-[1-[[(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基)氨基]甲基]丙基]-氨基甲酸苯甲酯来制备。LCMS(ESI)(M+H)461。
[1053] 实施例133
[1054] 合成N-[1-[[2-氯-6-(二乙氧基甲基)吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基]甲基]丙基]氨基甲酸苯甲酯，化合物133
[1055]
[1056] N-[1-[[2-氯-6-(二乙氧基甲基)吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基]甲基]丙基]氨基甲酸苯甲酯通过使用与针对合成N-[2-[2-氯-6-(二乙氧基甲基)吡咯并[2,3d]嘧啶-7-基]乙基]氨基甲酸叔丁酯所述类似的实验条件，用TBAF处理N-[1-[[[2-氯-5-(3,3-二乙氧基丙-1-炔基)嘧啶-4-基]氨基]甲基]丙基]氨基甲酸苯甲酯来合成。LCMS(ESI)(M+H)461。
[1057] 实施例134
[1058] 合成7-[2-(苯甲氧基羰基氨基)丁基]-2-氯-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸，化合物134
[1059]
[1060] 7-[2-(苯甲氧基羰基氨基)丁基]-2-氯-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸使用与针对合成7-[2-(叔丁氧羰基氨基)乙基]-2-氯-5-(邻甲苯基)吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸所述类似的实验程序合成。LCMS(ESI)403(M+H)。
[1061] 实施例135
[1062] 合成化合物135
[1063]
[1064] 向7-[2-(苯甲氧基羰基氨基)丁基]-2-氯-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸于二氯甲烷中的溶液中添加HBr，将反应物在45℃下搅拌3小时。浓缩后，添加2N NaOH以碱化(pH＝8.0)反应物，接着添加THF(20mL)。接着添加Boc2O(1.2eq)并将反应物搅拌16小时。接着向粗反应混合物中添加乙酸乙酯(100mL)和水(50mL)并分离有机相，干燥(硫酸镁)并接着真空浓缩。向粗产物中添加二氯甲烷(30mL)，接着添加DIC和DMAP。搅拌2小时后，添加TFA且将内容物搅拌一小时。将溶剂真空蒸发并用饱和NaHCO3碱化残余物。接着添加乙酸乙酯且分离有机层，干燥(硫酸镁)并接着真空浓缩。用己烷/乙酸乙酯(0-100％)进行柱色谱法，得到所需氯三环状核心，化合物135。LCMS(ESI)251(M+H)。
[1065] 实施例136
[1066] 合成化合物136
[1067]
[1068] 化合物136通过使用与化合物124类似的实验条件，用反式-4-氨基环己醇处理氯三环状胺化合物135合成。LCMS(ESI)330(M+H)。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 0.80-0.95(m,3H)1.35-1.92(m,10H)3.66(br.m.,3H)4.17(br.s.,2H)4.47(br.s.,1H)6.85(s,1H)6.96(br.s.,1H)8.15(br.s.,1H)8.62(br.s.,1H)。
[1069] 实施例137
[1070] 合成N-[1-[[(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基)氨基]甲基]环戊基]氨基甲酸叔丁酯，化合物137
[1071]
[1072] N-[1-[[(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基)氨基]甲基]环戊基]氨基甲酸叔丁酯通过使用与针对合成N-[2-[(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基)氨基]乙基]氨基甲酸叔丁酯所述类似的实验条件，用N-[1-(氨基甲基)环戊基]氨基甲酸叔丁酯处理5-溴-2,4-二氯嘧啶来合成。LCMS(ESI)405(M+H)。
[1073] 实施例138
[1074] 合成N-[1-[[[2-氯-5-(3,3-二乙氧基丙-1-炔基)嘧啶-4-基]氨基]甲基]环戊基]氨基甲酸叔丁酯，化合物138
[1075]
[1076] N-[1-[[[2-氯-5-(3,3-二乙氧基丙-1-炔基)嘧啶-4-基]氨基]甲基]环戊基]氨基甲酸叔丁酯通过使用与针对合成N-[2-[[2-氯-5-(3,3-二乙氧基丙-1-炔基)嘧啶-4-基]氨基]乙基]氨基甲酸叔丁酯所述类似的实验条件，在例如Pddba等催化剂存在下，用3,3-二乙氧基丙-1-炔处理N-[1-[[(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基)氨基]甲基]环戊基]氨基甲酸叔丁酯来合成。LCMS(ESI)453(M+H)。
[1077] 实施例139
[1078] 合成N-[1-[[2-氯-6-(二乙氧基甲基)吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基]甲基]环戊基]氨基甲酸叔丁酯，化合物139
[1079]
[1080] N-[1-[[2-氯-6-(二乙氧基甲基)吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基]甲基]环戊基]氨基甲酸叔丁酯通过使用与针对合成N-[2-[2-氯-6-(二乙氧基甲基)吡咯并[2,3d]嘧啶-7-基]乙基]氨基甲酸叔丁酯所述类似的实验条件，用TBAF处理N-[2-[[2-氯-5-(3,3-二乙氧基丙-1-炔基)嘧啶-4-基]氨基]-2-甲基-丙基]氨基甲酸叔丁酯来合成。LCMS(ESI)453(M+H)。
[1081] 实施例140
[1082] 合成7-[[1-(叔丁氧羰基氨基)环戊基]甲基]-2-氯-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸，化合物140
[1083]
[1084] 7-[[1-(叔丁氧羰基氨基)环戊基]甲基]-2-氯-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸使用与针对合成7-[2-(叔丁氧羰基氨基)乙基]-2-氯-5-(邻甲苯基)吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸所述类似的实验程序合成。LCMS(ESI)395(M+H)。
[1085] 实施例141
[1086] 合成化合物141
[1087]
[1088] 氯三环状核心化合物141使用与针对合成氯三环状酰胺化合物119所述类似的实验程序合成。LCMS(ESI)277(M+H)。
[1089] 实施例142
[1090] 合成化合物142
[1091]
[1092] 化合物142通过使用与化合物124类似的实验条件，用反式-4-氨基环己醇处理氯三环状胺化合物141合成。LCMS(ESI)356(M+H)。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.08-1.32(m,8H)1.60-2.09(m,8H)3.03-3.17(m,1H)3.35(s,2H)3.54-3.62(m,1H)4.51(d,J＝4.39Hz,
1H)6.88(s,1H)6.96(br.s.,1H)8.07(br.s.,1H)8.58(s,1H)。
[1093] 实施例143
[1094] 合成N-[[1-[(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基)氨基]环戊基]甲基]氨基甲酸叔丁酯，化合物143
[1095]
[1096] N-[[1-[(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基)氨基]环戊基]甲基]氨基甲酸叔丁酯通过使用与针对合成N-[2-[(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基)氨基]乙基]氨基甲酸叔丁酯所述类似的实验条件，用N-[(1-氨基环戊基)甲基]氨基甲酸叔丁酯处理5-溴-2,4-二氯嘧啶来合成。LCMS(ESI)405(M+H)。
[1097] 实施例144
[1098] 合成N-[2-[[2-氯-5-(3,3-二乙氧基丙-1-炔基)嘧啶-4-基]氨基]-2-甲基-丙基]氨基甲酸叔丁酯，化合物144
[1099]
[1100] N-[[1-[[2-氯-5-(3,3-二乙氧基丙-1-炔基)嘧啶-4-基]氨基]环戊基]甲基]氨基甲酸叔丁酯通过使用与针对合成N-[2-[[2-氯-5-(3,3-二乙氧基丙-1-炔基)嘧啶-4-基]氨基]乙基]氨基甲酸叔丁酯所述类似的实验条件，在例如Pddba等催化剂存在下用3,3-二乙氧基丙-1-炔处理N-[2-[(5-溴-2-氯-嘧啶-4-基)氨基]-2-甲基-丙基]氨基甲酸叔丁酯来合成。
[1101] LCMS(ESI)453(M+H)。
[1102] 实施例145
[1103] 合成N-[[1-[2-氯-6-(二乙氧基甲基)吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基]环戊基]甲基]氨基甲酸叔丁酯，化合物145
[1104]
[1105] N-[[1-[2-氯-6-(二乙氧基甲基)吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基]环戊基]甲基]氨基甲酸叔丁酯通过使用与针对合成N-[2-[2-氯-6-(二乙氧基甲基)吡咯并[2,3d]嘧啶-7-基]乙基]氨基甲酸叔丁酯所述类似的实验条件，用TBAF处理N-[2-[[2-氯-5-(3,3-二乙氧基丙-1-炔基)嘧啶-4-基]氨基]-2-甲基-丙基]氨基甲酸叔丁酯来合成。LCMS(ESI)4534(M+H)。
[1106] 实施例146
[1107] 合成7-[2-(叔丁氧羰基氨基)-1,1-二甲基-乙基]-2-氯-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6甲酸，化合物146
[1108]
[1109] 7-[2-(叔丁氧基羰基氨基)-1,1-二甲基-乙基]-2-氯-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸使用与针对合成7-[2-(叔丁氧羰基氨基)乙基]-2-氯-5-(邻甲苯基)吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酸所述类似的实验程序合成。LCMS(ESI)395(M+H)。
[1110] 实施例147
[1111] 合成化合物147
[1112]
[1113] 氯三环状酰胺化合物147使用与针对氯三环状酰胺化合物119所述类似的实验程序合成。LCMS(ESI)277(M+H)。
[1114] 实施例148
[1115] 合成化合物148
[1116]
[1117] 化合物148通过使用与化合物124类似的实验条件，用反式-4-氨基环己醇处理氯三环状胺化合物147来合成。LCMS(ESI)356(M+H)。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.06-1.35(m,8H)1.45-1.95(m,8H)3.10(m,1H)3.58(br.s.,2H)3.95(br.s.,1H)4.49(br.s.,1H)6.84(s,1H)6.85-6.93(m,1H)8.29(s,1H)8.61(br.s.,1H)。
[1118] 实施例149
[1119] 合成化合物149
[1120]
[1121] 步骤1：根据A.Sarkar等人(JOC,2011,76,7132-7140)的方法，将化合物59进行Boc保护。
[1122] 步骤2：经Boc保护的化合物59用5mol％NiCl2(Ph3)2、0.1eq三苯基膦、3eq Mn、0.1eq碘化四乙基铵在DMI中在CO2(1atm)下在25℃下处理20小时，以将芳基卤化物衍生物转化成甲酸。
[1123] 步骤3：使用标准条件将来自步骤2的甲酸转化成相应酸氯化物。
[1124] 步骤4：来自步骤3的酸氯化物与N-甲基哌嗪反应，产生相应酰胺。
[1125] 步骤5：使用含三氟乙酸的亚甲基氯将来自步骤4的酰胺脱保护，产生目标化合物。化合物149通过硅胶柱色谱法，用二氯甲烷-甲醇梯度洗脱来纯化，得到化合物149。
[1126] 化合物119至149每一者和具有各种R8、R1和Z定义的相应化合物可以与氢化钠和烷基卤化物或其它卤化物反应，以在与胺反应前插入所需R取代，例如以上针对合成化合物120所述，产生所需的式I、II、III、IV或V的产物。
[1127] 实施例150
[1128] CDK4/6抑制体外分析
[1129] 通过Nanosyn(Santa Clara,CA)，在CDK4/细胞周期蛋白D1、CDK6/CycD3CDK2/CycA和CDK2/细胞周期蛋白E激酶分析中测试本文公开的所选化合物以确定其对这些CDK的抑制作用。使用微流体激酶检测技术(Caliper Assay Platform)进行分析。以12点剂量-反应格式，在Km下，针对ATP单一测试化合物。对于所有分析，使用的磷酸化受体底物肽浓度都是1μM，且对于所有分析，星孢菌素用作参考化合物。每一分析的细节如下所述：
[1130] CDK2/细胞周期蛋白A：酶浓度：0.2nM；ATP浓度：50μM；孵育时间：3小时。
[1131] CDK2/细胞周期蛋白E：酶浓度：0.28nM；ATP浓度：100μM；孵育时间：1小时。
[1132] CDK4/细胞周期蛋白D1：酶浓度：1nM；ATP浓度：200μM；孵育时间：10小时。
[1133] CDK6/细胞周期蛋白D3：酶浓度：1nM；ATP浓度：300μM；孵育时间：3小时。
[1134] 表1中化合物对CDK4/CycD1、CDK2/CycE、CDK2/CycA的抑制IC50值以及选择性倍数呈现于表2。
[1135] 表2：CDK4的选择性抑制
[1136]
[1137]
[1138]
[1139] 为进一步表征其激酶活性，使用DiscoveRx’s KINOMEscanTM谱图分析服务，针对456种(395种非突变)激酶筛选化合物T。使用1000nM的单一浓度(是对Cdk4的IC50的>1000倍)筛选化合物。来自此筛选的结果证实针对Cdk4的高效力和相对于Cdk2的高选择性。另外，激酶组谱图分析展示与其它测试的激酶相比，化合物T对Cdk4和Cdk6具有相对选择性。
确切地说，当使用65％、90％或99％的抑制阈值时，化合物T对应地抑制395种非突变激酶中的92种(23.3％)、31种(7.8％)或6种(1.5％)。
[1140] 除CDK4激酶活性之外，还针对CDK6激酶活性测试若干化合物。针对PD0332991(参考)和化合物T、Q、GG和U，CDK6/CycD3激酶分析以及CDK4/细胞周期蛋白D1、CDK2/CycA和CDK2/细胞周期蛋白E激酶分析的结果展示在表3中。对CDK4/细胞周期蛋白D110nM和对CDK12/CyclinE 10uM的IC50与先前针对PD0332991的公布报导非常一致(Fry等人Molecular Cancer Therapeutics(2004)3(11)1427-1437；Toogood等人Journal of Medicinal 
Chemistry(2005)48,2388-2406)。相对于参考化合物(PD0332991)，化合物T、Q、GG和U更有效(IC50更低)，并证明相对于参考化合物选择性倍数更高(CDK2/CycE IC50除以CDK4/CycD1 IC50)。
[1141] 表3：化合物T、Q、GG和U对CDK激酶的抑制
[1142]
[1143]
[1144] 实施例151
[1145] G1停滞(细胞G1和S期)分析
[1146] 为测定在各种处理后处于细胞周期的各种阶段的细胞分率，将HS68细胞(人类皮肤成纤维细胞系(Rb阳性))用碘化丙锭染色液染色并在Dako Cyan流动式细胞测量仪上操作。使用FlowJo 7.2.2分析测定G0-G1 DNA细胞周期中细胞的分率对比S期DNA细胞周期中的分率。
[1147] 测试表1中列出的化合物使HS68细胞停滞在细胞周期的G1期的能力。从细胞G1停滞分析的结果，HS68细胞的G1停滞所需的抑制EC50值的范围为22nM至1500nM(参见表4中标题为“细胞G1停滞EC50”的列)。
[1148] 实施例152
[1149] Cdk4/6依赖性细胞中化合物T使细胞周期停滞
[1150] 为测试CDK4/6抑制剂诱发彻底G1停滞的能力，使用基于细胞的筛选法，其由两种Cdk4/6依赖性细胞系(tHS68和WM2664；Rb阳性)和一种Cdk4/6非依赖性(A2058；Rb阴性)细胞系组成。涂铺后二十四小时，将每一细胞系用化合物T以剂量依赖性方式处理24小时。在实验结束时，收获细胞，固定并用碘化丙锭(DNA插入剂)染色，当通过488nm光激发时发出强烈红色荧光(发射最大值637nm)。样品在Dako Cyan流动式细胞测量仪上操作并针对每一样品，收集>10,000个事件。使用TreeStar,Inc.研发的FlowJo 2.2软件分析数据。
[1151] 图2B是tHS68细胞(CDK4/6依赖性细胞系)的数目对比细胞的DNA含量(如通过碘化丙锭测量)的图。将细胞用DMSO处理24小时，收获并分析细胞周期分布。图2C是WM2664细胞(CDK4/6依赖性细胞系)的数目对比细胞的DNA含量(如通过碘化丙锭测量)的图。将细胞用DMSO处理24小时，收获并分析细胞周期分布。图2D是A2058细胞(CDK4/6非依赖性细胞系)的数目对比细胞的DNA含量(如通过碘化丙锭测量)的图。将细胞用DMSO处理24小时，收获并分析细胞周期分布。图2E是在用化合物T处理后tHS68细胞(CDK4/6依赖性细胞系)的数目对比细胞的DNA含量(如通过碘化丙锭测量)的图。将细胞用化合物T(300nM)处理24小时，收获并分析细胞周期分布。如实施例152中所描述，用化合物T处理tHS68细胞引起S期峰损失(由箭头指示)。图2F是在用化合物T处理后WM2664细胞(CDK4/6依赖性细胞系)的数目对比细胞的DNA含量(如通过碘化丙锭测量)的图。将细胞用化合物T(300nM)处理24小时，收获并分析细胞周期分布。如实施例152中所描述，用化合物T处理WM2664细胞引起S期峰损失(由箭头指示)。图2G是在用化合物T处理后A2058细胞(CDK4/6非依赖性细胞系)的数目对比细胞的DNA含量(如通过碘化丙锭测量)的图。将细胞用化合物T(300nM)处理24小时，收获并分析细胞周期分布。如实施例152中所描述，用化合物T处理A2058细胞不引起S期峰损失(由箭头指示)。
[1152] 实施例153
[1153] 化合物T抑制RB的磷酸化
[1154] Cdk4/6-细胞周期蛋白D复合物对DNA细胞周期从G1进展至S期来说是必不可少的。此复合物使成视网膜细胞瘤肿瘤抑制蛋白质(Rb)磷酸化。为证明Cdk4/6抑制对Rb磷酸化(pRb)的影响，化合物T暴露于三个细胞系，两个Cdk4/6依赖性(tHS68、WM2664；Rb阳性)和一个Cdk4/6非依赖性(A2058；Rb阴性)。接种后二十四小时，将细胞用300nM最终浓度的化合物T处理4、8、16和24小时。将样品溶解并通过蛋白质印迹分析进行分析。使用物种特异性的抗体，在Cdk4/6细胞周期蛋白D复合物靶向的两个位点Ser780和Ser807/811，测量Rb磷酸化。
结果证明至暴露后16小时，化合物T在Rb依赖性细胞系中阻断Rb磷酸化，同时对Rb非依赖性细胞没有影响(图3)。
[1155] 实施例154
[1156] 小细胞肺癌(SCLC)细胞对CDK4/6抑制剂有抗性
[1157] 成视网膜细胞瘤(RB)肿瘤抑制因子是在大概11％的所有人类癌症中失活的主要阴性细胞周期调节因子。RB的功能性损失是小细胞肺癌(SCLC)发展的专性事件。在RB型肿瘤中，活化的Cdk2/4/6通过使RB(和相关家族成员)磷酸化和失活来促进G1行进至S期。相反地，RB缺失或失活的癌症的细胞周期进展不需要Cdk4/6活性。因为RB失活是SCLC发展的专性事件，所以此肿瘤类型对CDK4/6抑制剂具有高度抗性，且CDK4/6抑制剂与例如用于SCLC中的化学治疗剂等DNA破坏化学治疗剂共同施用不应该拮抗此类药剂的功效。
[1158] 测试若干化合物(PD0332991、化合物GG和化合物T)阻断一组具有已知RB遗传损失的SCLC细胞系中细胞增殖的能力。将SCLC细胞用DMSO或指示的CDK4/6抑制剂处理24小时。Cdk4/6抑制对增殖的作用通过EdU掺入测量。分析各种CDK4/6抑制剂对RB完整的Cdk4/6依赖性细胞系(WM2664或tHS68)和一组RB阴性的SCLC细胞系(H69、H82、H209、H345、NCI417或SHP-77)的生长抑制。
[1159] 如图4中所示，Rb阴性的SCLC细胞对Cdk4/6抑制具有抗性。图4A中，PD0332991抑制Rb阳性细胞系(WM2664)，但不影响Rb阴性小细胞肺癌细胞系(H345、H69、H209、SHP-77、NCI417和H82)的生长。图4B中，化合物GG抑制Rb阳性细胞系(tHS68)，但不影响Rb阴性细胞系(H345、H69、SHP-77和H82)的生长。图4C中，化合物T抑制Rb阳性细胞系(tHS68)，但不影响Rb阴性细胞系(H69、SHP-77和H209)的生长。此分析证明RB空白的SCLC细胞系对Cdk4/6抑制具有抗性，因为在用任何测试的CDK4/6抑制剂，包括化合物T和化合物GG处理后，看到S期细胞的百分比无变化，而每一实验中RB充足的细胞系对Cdk4/6抑制具有高敏感性，处理24小时后几乎没有细胞保持在S期中。
[1160] 实施例155
[1161] Rb阴性癌细胞对CDK4/6抑制剂具有抗性
[1162] 使用以下Rb阴性癌细胞系进行细胞增殖分析：H69(人类小细胞肺癌-Rb阴性)细胞或A2058(人类转移性黑色素瘤细胞-Rb阴性)。这些细胞在Costar(Tewksbury，Massachusetts)309396孔经组织培养物处理的白壁/透明底盘中接种。将细胞用表1的化合物，以10uM到1nM的九点剂量反应连续稀释液处理。将细胞暴露于化合物，并接着在四天(H69)或六天(A2058)后，如所指示，使用 场致发光细胞存活力分析(CTG；
Promega,Madison,Wisconsin,United States of America)，按照制造商建议，测定细胞存活力。在BioTek(Winooski，Vermont)Syngergy2多模盘式读数器上读取盘。将相对光单位(RLU)作为可变摩尔浓度的结果绘图，且使用Graphpad(LaJolla,Californaia)Prism 5统计软件分析数据以确定每一化合物的EC50。
[1163] 针对小细胞肺癌细胞系(H69)和人类转移性黑色素瘤细胞系(A2058)(两种Rb缺乏的(Rb阴性)细胞系)评估本文公开的所选化合物。这些细胞抑制分析的结果展示于表4中。抑制H69小细胞肺癌细胞所需的抑制EC50值的范围是2040nM至>3000nM。抑制A2058恶性黑色素瘤细胞增殖所需的抑制EC50值的范围是1313nM至>3000nM。与在Rb阳性细胞系上看到的显著抑制相比，发现测试的化合物不显著有效地抑制小细胞肺癌或黑色素瘤细胞的增殖。
[1164] 表4：Rb阴性癌细胞对CDK4/6抑制剂的抗性
[1165]
[1166]
[1167]
[1168] 实施例156
[1169] HSPC生长抑制研究
[1170] 先前已经证明PD0332991对HSPC的作用。图5展示在通过口腔管饲法的单一剂量150mg/kg PD0332991后小鼠HSPC和脊髓祖细胞的EdU掺入以评估瞬时CDK4/6抑制对骨髓停滞的暂时作用，如Roberts等人Multiple Roles of Cyclin-Dependent Kinase 4/
6Inhibitors in Cancer Therapy.JCNI 2012；104(6):476-487中报导。如图5中可见，单一口服剂量的PD0332991引起HSPC(LKS+)和脊髓祖细胞(LKS-)持久减少，超过36小时。直到口服后48小时，HSPC和脊髓祖细胞才恢复基线细胞分裂。
[1171] 实施例157
[1172] 如使用EdU掺入和流动式细胞测量术分析评估的骨髓增殖
[1173] 对于HSPC增殖实验，将幼年成年雌性FVB/N小鼠用如指示的单一剂量的化合物T、化合物Q、化合物GG或PD0332991通过口腔管饲法处理。接着在指示的时间(化合物施用后0、12、24、36或48小时)处死小鼠，并如先前描述收获骨髓(每个时间点n＝3只小鼠)(Johnson等人J.Clin.Invest.(2010)120(7),2528-2536)。在收获骨髓前四个小时，将小鼠用100μg EdU通过腹膜内注射(Invitrogen)处理。使用先前描述的方法，收获骨髓单核细胞并进行免疫表型分析，且接着确定EdU阳性细胞百分比(Johnson等人J.Clin.Invest.(2010)120(7),
2528-2536)。简单地说，通过谱系标记物(Lin-)、Sca1(S+)和c-Kit(K+)的表现鉴别HSPC。
[1174] 小鼠中的分析确定化合物T、化合物Q和化合物GG证明骨髓干细胞(HSPC)的剂量依赖性、瞬时且可逆的G1停滞(图6)。通过口腔管饲法，以150mg/kg化合物T、化合物Q、化合物GG或仅仅媒介物，对每组六只小鼠进行给药。在处死动物并收获骨髓前四小时，将小鼠用100μg EdU通过腹膜内注射处理。每组三只小鼠在12小时处死且在24小时处死每组剩余三只动物。结果展示于图6A中，呈与对照相比，在12或24小时时间点，处理动物的EdU阳性细胞的比率。化合物T和GG证明在12小时EdU掺入减少，其在24小时开始恢复正常。化合物Q也证明在12小时少许减少，且在24小时开始恢复基线，不过化合物Q的口服生物利用率低。
[1175] 将其它实验用检验剂量反应的化合物T完成且化合物处理时期更长。通过口腔管饲法，给予50、100或150mg/kg化合物T，并如上所述，在12和24小时，测定骨髓中的EdU掺入。或者通过口腔管饲法，给予150mg/kg化合物T，并在12、24、36和48小时，测定骨髓中的EdU掺入。如图6B和5C中可见并类似于细胞洗脱实验，如通过EdU掺入确定，在口腔管饲多剂后24小时中骨髓细胞和尤其HSPC恢复至正常细胞分裂。图6C中150mg/kg口服剂量的化合物T可以直接与图5中展示的相同剂量的PD0332991的结果比较，其中在24和36小时细胞仍然未分裂(如通过低EdU掺入确定)，仅仅在48小时恢复至正常值。
[1176] 实施例158
[1177] 比较化合物T和PD0332991的HSPC生长抑制研究
[1178] 图7是用PD0332991(三角形)或化合物T(倒三角形)处理的小鼠的EdU阳性HSPC细胞百分比对比施用化合物后的时间(小时)的图。通过口腔管饲法，施用150mg/kg的两种化合物。在收获骨髓之前一小时，EdU经腹膜内注射以标记循环细胞。在化合物处理后12、24、36和48小时收获骨髓，且在每个时间点，测定EdU阳性HSPC细胞的百分比。
[1179] 如图7中所见，单一口服剂量的PD0332991引起HSPC持久减少，超过36小时。相比之下，单一口服剂量的化合物T引起HSPC增殖在12小时初期减少，但到给予化合物T 24小时，HSPC增殖重新开始。
[1180] 实施例159
[1181] 细胞洗脱实验
[1182] 在第1天将HS68细胞以40,000个细胞/孔在60mm皿中在含有10％胎牛血清、100U/ml青霉素(penicillin)/链霉素(streptomycin)和1x Glutamax(Invitrogen)的DMEM中结晶析出，如所述(Brookes等人EMBO J,21(12)2936-2945(2002)和Ruas等人Mol Cell Biol,27(12)4273-4282(2007))。接种24小时后，将细胞用化合物T、化合物Q、化合物GG、化合物U、PD0332991或单独DMSO媒介物在300nM最终浓度的测试化合物下处理。在第3天，一式三份地收获一组处理的细胞样品(0小时样品)。剩余细胞在PBS-CMF中洗涤两次，并回到缺乏测试化合物的培养基。在24、40和48小时一式三份地收获成各组样品。
[1183] 或者，使用从美国典型菌种保藏中心(ATCC,Manassas,VA)中获得的正常肾近端小管上皮细胞(Rb阳性)进行相同的实验。将细胞在孵育箱中在37℃下在5％CO2潮湿气氛中37℃潮湿孵育箱中补充有肾上皮细胞生长试剂盒(ATCC)的肾上皮细胞基础培养基(ATCC)中生长。
[1184] 收获细胞后，将样品用碘化丙锭染色液染色且样品在Dako Cyan流动式细胞测量仪上操作。使用FlowJo 7.2.2分析测定G0-G1 DNA细胞周期中细胞的分率对比S期DNA细胞周期中的分率。
[1185] 图8展示细胞洗脱实验，其证明本发明的抑制剂化合物在不同的细胞类型中具有短暂、瞬时的G1停滞作用。在人类成纤维细胞(Rb阳性)(图8A和8B)或者人类肾近端小管上皮细胞(Rb阳性)(图8C和8D)中化合物T、Q、GG和U与PD0332991相比，且在24、36、40和48小时测定化合物洗脱后对细胞周期的作用。
[1186] 如图8中所示且类似于如图5中所示的体内结果，PD0332991需要细胞在洗脱后超过48小时恢复至正常基线细胞分裂。此在图8A和图8B中可见，因为获得的值对应地等于细胞分裂的G0-G1分率或者S期的DMSO对照的值。相比之下，在少至24小时或40小时内，用本发明的化合物处理的HS68细胞恢复至正常基线细胞分裂，在这些相同时间点不同于PD0332991。使用人类肾近端小管上皮细胞的结果(图8C和8D)也展示与用化合物T、Q、GG或U处理的细胞相比，经PD0332991处理的细胞花费显著更长的时间来恢复至基线水平。
[1187] 实施例160
[1188] CDK4/6抑制剂的药物动力学和药效学特性
[1189] 本发明的化合物证明优良的药物动力学和药效学特性。化合物T、Q、GG和U以30mg/kg通过口腔管饲法或10mg/kg通过静脉内注射给药。在给药后0、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0和8.0小时取血液样品并通过HPLC测定化合物T、Q、GG或U的血浆浓度。如表5中所示，化合物T、GG和U证明具有极好的口腔药物动力学和药效学特性。此包括52％至80％的极高口腔生物利用率(F(％))和经口施用后3至5小时的血浆半衰期。当通过静脉内施用递送时，化合物T、Q、GG和U证明具有极好的口腔药物动力学和药效学特性。所有四种化合物的代表性IV和口腔PK曲线展示于图9中。
[1190] 表5：CDK4/6抑制剂的药物动力学和药效学特性
[1191]小鼠PK 化合物T 化合物Q 化合物GG 化合物U
CL(mL/min/kg) 35 44 82 52
Vss(L/kg) 2.7 5.2 7.5 3.4
t1/2(h)p.o. 5 0.8 3.5 3
AUC0-inf(uM*h)i.v. 1.3 0.95 1.1 0.76
AUC(uM*h)p.o. 2.9 0.15 1.9 3.3
Cmax(uM)p.o. 2.5 0.16 1.9 4.2
Tmax(h)p.o. 1 0.5 1 0.5
F(％) 80 2 52 67
[1192] 实施例161
[1193] 代谢稳定性
[1194] 与PD0332991相比，化合物T的代谢稳定性在人类、犬、大鼠、猴和小鼠肝微粒体中测定。人类、小鼠和犬肝微粒体从Xenotech购买，且通过Absorption Systems制备史泊格-多利大鼠(Sprague-Dawley rat)肝微粒体。制备包含0.5mg/mL肝微粒体、100mM磷酸钾pH 7.4、5mM氯化镁和1uM测试化合物的反应混合物。将测试化合物以1uM最终浓度添加至反应混合物中。将反应混合物(没有辅因子)的等分试样在振摇水浴中在37℃下孵育3分钟。对照化合物睾固酮与测试化合物同时在分开的反应中操作。通过添加辅因子(NADPH)引发反应，且接着在振摇水浴中在37℃下孵育混合物。对于测试化合物，在0、10、20、30和60分钟取等分试样(100μL)，且对于睾固酮，在0、10、30和60分钟取等分试样(100μL)。测试化合物样品立刻与100μL含有内标的冰冷乙腈组合以终止反应。睾固酮样品立刻与800μL含有0.1％甲酸和内标的冰冷50/50乙腈/dH2O组合以终止反应。使用有效的LC-MS/MS方法分析样品。使用Orbitrap高分辨率质谱仪分析测试化合物样品以定量母体测试化合物的消失并检测代谢物的出现。与内标的峰面积响应比(PARR)与0时PARR相比，以确定保持在时间点的测试化合物或阳性对照的百分比。使用与单相指数式衰减方程式拟合的GraphPad软件计算半衰期。
[1195] 基于t1/2＝0.693k计算半衰期，其中k是基于剩余自然对数百分比对比孵育时间的曲线斜率的消除速度常数。当计算的半衰期比实验的持续时间长时，半衰期表达为>最长孵育时间。计算的半衰期也在括号中列出。如果计算的半衰期>实验的持续时间2x时，那么不报导半衰期。细胞增殖的及时重新开始为组织修复所必需，因此在例如HSPC等健康细胞中过度长期的停滞是不希望有的。决定其停滞持续时间的CDK4/6抑制剂的特征是其药物动力学(PK)和酶半衰期。一旦引发，体内G1停滞将维持，只要循环化合物保持在抑制水平下且只要化合物占用酶。PD032991例如具有整体长久的PK半衰期和相当缓慢的酶解离速率。人类中，PD0332991显示27小时的PK半衰期(参见Schwartz,GK等人(2011)BJC,104:1862-1868)。人类中，PD0332991的单一施用产生HSPC持续大概一周的细胞周期停滞。此反映了6天清除化合物(5个半衰期×27小时半衰期)以及酶CDK4/6功能的另外1.5至2天的抑制。此计算表明正常骨髓功能恢复花费总共7+天，在此期间新血液的产生减少。这些观测可以说明在临床中在PD0332991下见到的严重粒性白细胞减少症。
[1196] 其它实验用化合物T和PD0332991完成以比较人类、犬、大鼠、猴和小鼠肝微粒体中的代谢稳定性(半衰期)。如图10中所示，当分析化合物在肝微粒体中跨越物种的稳定性时，在每一物种中化合物T的可测定半衰期比针对PD0332991所报导的半衰期短。此外，如先前和图8所述，似乎PD0332991也具有延长的酶半衰期，如人类细胞中持续超过四十小时的显著细胞周期停滞产生所证明，甚至在化合物从细胞培养基(即在体外洗脱实验中)去除后。如图8中进一步展示，本文中描述的化合物从培养基的去除使得增殖迅速重新开始，与快速的酶解离速率一致。酶解离速率的这些差异转变成药效学(PD)作用的显著区别，如图5、6C和7中所示。如所示，单一口服剂量的PD0332991使得鼠类骨髓中造血干细胞和祖细胞
(HSPC)36+小时生长停滞，此超过PD0332991在小鼠中6小时PK半衰期所说明。相比之下，化合物T的作用短得多，允许快速再进入细胞周期，提供了HSPC增殖良好的体内控制。
[1197] 实施例162
[1198] 化合物T预防化学疗法诱发的细胞死亡、DNA破坏和卡斯蛋白酶活化
[1199] 为证明由化合物T处理诱发的药理学静止提供了对具有不同作用机制的化学治疗剂的抗性，使用端粒化人类二倍体成纤维细胞(tHDF；用人类端粒酶表现永生化的人类包皮成纤维细胞系)研发体外模型。这些细胞的增殖是高度Cdk4/6依赖性的，如在用CDK4/6抑制剂处理后其完全G1停滞所证明(参见Roberts PJ等人,Multiple Roles of Cyclin-Dependent Kinase 4/6Inhibitors in Cancer Therapy.J Natl Cancer Inst 2012；3月
21日；104(6):476-87)。通过Cell TiterGlo分析，按照制造商建议，测定细胞存活率。对于γ-H2AX与卡斯蛋白酶3/7分析来说，将细胞涂铺并使其附着24小时。接着将细胞用化合物T(指示浓度)或媒介物对照处理16小时，此时将所指示的化学疗法添加到预处理的细胞。对于γ-H2AX，在化学疗法暴露后8小时，收获细胞用于分析。对于γ-H2AX分析来说，将细胞固定、透化并根据γ-H2AX流动试剂盒(Millipore)用抗-γH2AX染色且通过流动式细胞测量术定量。使用TreeStar,Inc.研发的FlowJo 2.2软件分析数据。对于体外卡斯蛋白酶3/7分析来说，在化学疗法处理后24小时收获细胞。使用 3/7分析系统(Promega)，
按照制造商建议，测量卡斯蛋白酶3/7活化。
[1200] 如图11中所示，化合物T提供了避免卡铂和依托泊苷诱发的细胞死亡的选择性保护。在依托泊苷(5μM；图11A)或卡铂(100μM；图11B)存在下用增加浓度的化合物T处理tHS68人类成纤维细胞选择性地诱发剂量依赖性细胞存活，如Cell TiterGlo所测定。
[1201] 在用若干DNA破坏剂(例如卡铂、多柔比星、依托泊苷、喜树碱)或抗有丝分裂剂(紫杉醇)处理之前用化合物T处理减弱的DNA破坏，如通过γ-H2AX形成所测量(图12A)。另外，在卡铂、多柔比星、依托泊苷、喜树碱和紫杉醇暴露之前用化合物T处理tHDF细胞以剂量依赖性方式引起卡斯蛋白酶3/7活化的稳固下降(图12B)。这些数据展示由Cdk4/6抑制诱发的瞬时G1细胞周期停滞降低了与Cdk4/6敏感细胞的骨髓抑制有关的多种常用的细胞毒性化学治疗剂的毒性。
[1202] 实施例163
[1203] 化合物T抑制造血干细胞和/或祖细胞(HSPC)的增殖
[1204] 为表征化合物T处理对不同的小鼠造血细胞增殖的作用，通过口腔管饲法给予8周龄雌性C57Bl/6小鼠单一剂量的单独媒介物(20％Solutol)或化合物T(150mg/kg)。十小时后，给予所有小鼠100mcg EdU(5-乙炔基-2'-脱氧尿苷)单一腹膜内注射以标记在细胞周期S期的细胞。在EdU注射后2小时，处死所有处理小鼠，收获骨髓细胞并加工用于EdU掺入的流动式血细胞计数分析(图13)。
[1205] 在图13中，代表性等值线图展示WBM(全骨髓；顶部)和HSPC(造血干细胞和祖细胞；LSK；底部)中的增殖，如通过没有处理、仅仅EdU处理或EdU加化合物T处理的细胞的EdU掺入所测量。发现化合物T降低全骨髓和造血干细胞和祖细胞的增殖。
[1206] 与媒介物处理的小鼠相比，在所有分析的造血谱系中化合物T处理的小鼠展示显著更少的EdU阳性(EdU+)细胞。EdU+细胞频率的减少很可能是由于S期进入的减少，此与化合物T有效抑制Cdk4/6活性的事实一致。总的说来，化合物T处理在未分级分离的全骨髓细胞中引起EdU+细胞频率减少约70％(参见图13和图14)。在造血干细胞和祖细胞(HSPC)中，化合物T处理引起造血干细胞(HSC，74％抑制，整个造血谱系阶层中的最原始细胞)以及多潜能祖细胞(MPP，90％抑制，HSC的紧接下游子代)有效的细胞周期停滞(图14A)。
[1207] 如图14B中所示，在谱系分化阶层的下游，谱系限制的脊髓细胞(CMP、GMP和MEP)和淋巴祖细胞(CLP)的增殖也被化合物T显著抑制，展示EdU+细胞频率减少76-92％。
[1208] 实施例164
[1209] 化合物T抑制分化造血细胞的增殖
[1210] 使用与以上实施例X中论述和图13和14中所示相同的实验方案，研究化合物T对分化造血细胞的增殖的作用。化合物T在分化造血细胞中所得到的作用比HSPC中所见更可变。虽然T和B细胞祖细胞对化合物T具有高敏感性(分别EdU+细胞频率减少>99％和>80％)，但分化的骨髓红细胞的增殖对化合物T更有抗性，其中Mac1+G1+骨髓细胞展示EdU+细胞频率减少46％，且Ter119+红细胞样细胞展示EdU+细胞频率减少58％(图15)。总之，这些数据表明虽然所有造血细胞都对化合物T诱发的细胞周期停滞敏感，但在不同的细胞谱系中抑制程度变化，其中骨髓细胞展示化合物T对细胞增殖的作用小于在其它细胞谱系中所见。
[1211] 实施例165
[1212] 化合物GG保护骨髓祖细胞
[1213] 为评估骨髓中化合物GG的瞬时CDK4/6抑制对卡铂诱发的细胞毒性的作用，将FVB/n小鼠(每组n＝3)用媒介物对照、90mg/kg卡铂腹膜内注射或150mg/kg化合物GG口腔管饲法加90mg/kg卡铂腹膜内注射处理。处理后24小时，收获骨髓并通过如早先说明的EdU掺入测量循环骨髓祖细胞的百分比。如图16中所示，与卡铂施用同时施用化合物GG引起骨髓祖细胞的显著保护。对照动物中的EdU掺入标准化为100％并与来自卡铂处理的动物或卡铂和化合物GG处理的动物的骨髓的EdU掺入相比。
[1214] 实施例166
[1215] 化合物T降低5FU诱发的骨髓抑制
[1216] 为确定化合物T调节化学疗法诱发的骨髓抑制的能力，利用已知在小鼠中高度骨髓抑制的良好表征的单一剂量5-氟尿嘧啶(5FU)方案。给予FVB/n雌性小鼠150mg/kg单一口服剂量的媒介物或化合物T，30分钟后150mg/kg单一腹膜内剂量的5FU。在第六天开始，每两天测量完全血细胞计数。
[1217] 化合物T的共同施用正面影响所有造血谱系从5-FU诱发的骨髓抑制的恢复。图17证明在5FU施用之前用化合物T或媒介物对照处理的不同的血细胞类型的恢复时程。确定在每一测试的造血细胞谱系(全血细胞、嗜中性粒细胞、淋巴细胞、血小板和红血球)中，化合物T提供了比仅仅用5FU处理的细胞更快速的恢复。这些数据展示化合物T处理可能降低HSPC中5FU诱发的DNA破坏，引起化学疗法后加速的血细胞计数恢复。
[1218] 图18展示来自上述和图17中所示的骨髓抑制研究的第14天的数据。在第14天分析全血细胞计数。图18展示白血球(图18A)、嗜中性粒细胞(图18B)、淋巴细胞(图18C)、红血球(图18D)和血小板(图18E)的结果。在所有情况下，与单独5FU处理的骨髓抑制作用相比，当与5FU一起施用时化合物T在第14天引起每一细胞类型的显著保护。
[1219] 实施例167
[1220] 化合物T降低通过重复循环的5FU处理的5FU诱发的骨髓抑制
[1221] 为确定化合物T调节化学疗法诱发的骨髓抑制的能力，利用已知在小鼠中高度骨髓抑制的良好表征的5-氟尿嘧啶(5FU)方案。给予8周龄雌性C57Bl/6小鼠150mg/kg单一口服剂量的媒介物(20％Solutol)或化合物T，30分钟后150mg/kg腹膜内剂量的5FU。每21天重复这方案，循环3次。在循环1-3的第10天，取血液样品用于血液学分析。
[1222] 化合物T的共同施用减少在第三次循环的第10天(图19)以及其它循环(数据未展示)的骨髓抑制。根据上述单一剂量研究，这些数据展示化合物T处理可能降低HSPC中5FU诱发的DNA破坏，使得造血血细胞计数提高。
[1223] 实施例168
[1224] 人类肾近端小管细胞中DNA细胞周期分析
[1225] 为测试非造血细胞中CDK4/6抑制剂诱发彻底G1停滞的能力，在人类肾近端小管细胞中检查G1停滞。将细胞用化合物T以剂量依赖性方式处理24小时。在实验结束时，收获细胞，固定并用碘化丙锭(DNA插入剂)染色，当通过488nm光激发时发出强烈红色荧光(发射最大值637nm)。样品在Dako Cyan流动式细胞测量仪上操作。使用TreeStar,Inc.研发的FlowJo 2.2软件分析数据。分析一式三份进行，且误差线不可检测。如图20中所见，结果展示化合物T在人类肾近端小管细胞中诱发稳健的G1细胞周期停滞，因为在用增加量的化合物T处理后发现几乎所有的细胞都在G0-G1期。
[1226] 实施例169
[1227] 化合物T保护肾近端小管上皮细胞免受化学疗法诱发的DNA破坏
[1228] 使用依托泊苷和顺铂分析CDK4/6抑制剂保护人类肾近端小管细胞免受化学疗法诱发的DNA破坏的能力。将细胞用化合物T以剂量依赖性方式(10nM、30nM、100nM、300nM或1000nM)处理。在实验结束时，收获细胞，固定并用碘化丙锭(DNA插入剂)染色，当通过488nm光激发时发出强烈红色荧光(发射最大值637nm)。样品在Dako Cyan流动式细胞测量仪上操作。使用TreeStar,Inc.研发的FlowJo 2.2软件分析数据。如图21中所见，结果展示化合物T保护肾近端小管上皮细胞免受化学疗法诱发的DNA破坏，因为增加剂量的化合物T与依托泊苷或顺铂组合引起S期细胞的百分比下降，对应地，G0-G1期的细胞百分比升高。
[1229] 实施例170
[1230] 化合物T预防人类肾近端小管细胞中化学疗法诱发的细胞死亡、DNA破坏和卡斯蛋白酶活化
[1231] 为证明CDK4/6抑制剂处理诱发的药理学静止在非造血细胞中提供对化学治疗剂的抗性，分析化合物T对人类肾近端小管细胞的保护作用。从美国典型菌种保藏中心(American Type Culture Collection，ATCC，Manassas，VA)获得正常肾近端小管上皮细胞。细胞在孵育箱中在37℃下在5％CO2潮湿气氛中37℃潮湿孵育箱中补充有肾上皮细胞生长试剂盒(ATCC)的肾上皮细胞基础培养基(ATCC)中生长。将细胞用DMSO或10nM、30nM、
100nM、300nM或1uM化合物T在25uM顺铂不存在或者存在下处理。对于γ-H2AX分析来说，将细胞固定、透化并根据γ-H2AX流动试剂盒(Millipore)用抗-γH2AX染色且通过流动式细胞测量术定量。使用TreeStar,Inc.研发的FlowJo 2.2软件分析数据。使用Caspase-Glo 3/
7分析系统(Promega,Madison,WI)，通过按照制造商说明书，测量卡斯蛋白酶3/7活化。
[1232] 如通过γ-H2AX形成所测量，化合物T与顺铂组合处理肾近端小管细胞减弱DNA破坏(图22)。如图22中所见，由顺铂所引起的DNA破坏在化合物T处理后以依赖性方式下降。
[1233] 还研究了化合物T保护肾近端小管上皮细胞免于顺铂诱发的细胞凋亡(卡斯蛋白酶3/7活化)的能力。如图23中所示，化合物T证明这些细胞中卡斯蛋白酶3/7活化的剂量依赖性减少。在测试的所有三个水平的顺铂(25uM、50uM或100uM)下都见到卡斯蛋白酶3/7活性的此减少。这些数据展示由Cdk4/6抑制诱发的瞬时G1细胞周期停滞可以保护肾近端小管细胞免受化学疗法诱发的DNA破坏。
[1234] 实施例171
[1235] 药物产品的制备
[1236] 可以使用以下程序制备本发明的活性化合物供静脉内施用。可以在搅拌下将赋形剂羟丙基-β-环糊精和右旋糖添加到90％批料体积的USP灭菌注射水或灌洗水；搅拌直到溶解。添加盐酸盐形式的活性化合物并搅拌直到其溶解。将pH值用1N NaOH调至pH 4.3+0.1，且必要时1N HCl可以用于回滴定。USP灭菌注射水或灌洗水可以用于使溶液达到最终批料重量。接着再检查pH值以确保pH值是pH 4.3+0.1。如果pH值超过所述范围之外，那么视情况添加1N HCl或1N NaOH以使pH值至4.3+0.1。接着将溶液无菌过滤以填充50或100mL燧石玻璃小瓶，盖塞并卷边。
[1237] 已经参考本发明的实施方案描述本说明书。已经参考以随附实施例说明的分类实施方案描述本发明。然而，本发明可以用不同的形式具体化，且不应该被视作局限于本文中阐述的实施方案。在本文中的传授内容下，本领域技术人员将能够修改本发明以达到想要的目的且此类改变视为在本发明的范围内。
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