玻璃筛柱快速回收DNA片段的方法
专利汇可以提供玻璃筛柱快速回收DNA片段的方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种利用玻璃筛柱快速回收DNA 片段 的方法，它将含有DNA片段的凝胶物切成碎 块 放入去掉 吸附 层后的玻璃筛板离心管内，利用冻融方法将含有DNA的凝胶高速离心，使DNA与凝胶分离，DNA从凝胶中流出经过玻璃筛柱的筛孔得到收集。本发明方法能快速回收DNA片段，操作简便，需耗 试剂 少，DNA回收率高，实验成本低，有利于分子 生物 学实验广泛开展和应用。，下面是玻璃筛柱快速回收DNA片段的方法专利的具体信息内容。
1.一种玻璃筛柱快速回收DNA片段的方法，其包括DNA凝胶玻 璃筛柱式离心管、Eppendrof离心管，通过玻璃筛柱和冻融原理 相结合在高速离心下使DNA片段顺从凝胶中流出达到与琼脂糖凝 胶产生分离而获得，其特征在于：
a.含有DNA的凝胶物必须切成3-4mm3大小的碎块置入玻璃筛 柱式离心管内放入冰箱内在-20℃的低温下冷冻30分钟。
b.冷冻后的玻璃筛柱式离心管需套合入1.5ml的Eppendrof式 离心管内，再将套合的离心管在室温下放入在转速10.000-12. 000rpm的离心机内进行10-15分钟离心。
2.根据权利要求1所述快速回收DNA片段的方法，其特征在于 玻璃筛柱式离心管是一种去掉吸附层后留下玻璃筛板而制成的离 心管。
3.根据权利要求1所述快速回收DNA片段的方法，是将 Eppendrof离心管内收集得到的DNA片段当检测含量较低时，可加 入至少2-4倍体积的无水酒精，再次置入-20℃的低温冰箱内冻冷 30分钟取出，再放入转速为10.000-12.000rpm的离心机内进行10 分钟离心，去除上清液，将沉淀在管内的DNA用少量TE液溶解，即可 获得所需的DNA片段。
本发明涉及分子生物学的一项基础实验技术，具体是指进行 分子生物学实验时，对凝胶DNA中片段进行回收的一种方法。
在含有各种不同大小片段的DNA混合物中，分离纯化特定分 子量的DNA片段是基因工程技术中的基础工作。近些年来，实验 室最常采用获取DNA片段的方法是凝胶电泳回收法，其主要是低 溶点琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶回收法，其次是DEAE纤维 素纸插片电泳法和蔗糖梯度超速离心分离DNA法，这些方法都可以 达到DNA片段的回收，但需投入使用的各种试剂较多，操作方法复 杂，实验成本高，而且获得DNA的回收率较低，给分子生物实验 带来诸多浪费，由于试剂多种，试剂的生产成本不断攀高，有碍 于分子生物实验的广泛开展和应用。
本发明的目的是提供一种新的DNA片段回收方法，对传统的 DNA片段回收方法进行更新，建立一种试剂使用少，操作简便，实验 成本低，DNA回收率高的快速回收方法。根据对几个主要发达国家 初步查新检索也未见到利用玻璃筛柱将凝胶冻融快速回收DNA片 段的方法。
实现本发明目的的技术方案是利用玻璃筛柱和冻融原理将含 有DNA的凝胶物速冻并经高速离心后，使DNA与琼脂糖凝胶分离， DNA从凝胶中流出后经过玻璃筛柱的筛孔得到收集，琼脂糖凝胶 却因受热融解成碎块滞留在柱式离心管内。
本发明的技术特点是操作方法简便，需耗的试剂品种和量均 较原技术方法减少90％，大幅度降低了试剂生产成本和使用价格， 与传统的实验技术回收法相比，可快速地回收到几百bp(200bp以 上)——几百kb(10万bp以下)大小不同的DNA片段，回收率在30％ -80％之间(根据凝胶的配制浓度)，能较好的获取DNA片段，是分子 生物学实验基础中一项有价值和值得推广的实验技术方法。
本发明的详细技术方案说明如下：
一种快速回收DNA片段的方法是将含有DNA片段的凝胶用刀片削切 成3-4mm3大小的碎块，置入玻璃筛柱式离心管内，在冰箱-20℃的低温 下冷冻30分钟，取出冷冻的玻璃筛柱式离心管套合入1.5ml的 Eppendrof式离心管内，套合后的离心管在室温下放置在转速为10. 000-12.000rpm的离心机内进行10-15分钟离心，DNA从凝胶中流出经过 玻璃筛柱的筛孔收集在1.5ml的Eppendrof离心管内。琼脂糖凝胶却因 受热融解成碎块滞留在柱式离心管内，从而达到与DNA分离的目的。 将Eppendrof离心管收集得到的DNA片段可用紫外比色法检测DNA浓度， 当DNA检测含量较低时，可加入至少2-4倍体积的无水酒精再次置入- 20℃的低温冰箱内冷冻30分钟取出，再次在转速为10.000-12.000rpm 的离心机内进行离心10分钟，去除上清液，沉淀在管内的DNA用少量TE 液溶解，即可得到所需的DNA。
本发明最佳实施方案是按照上述方法使用玻璃筛板柱式离心管， 应是去掉吸附层后留下玻璃筛板而制成的离心管。在操作此法确定 DNA回收率时，与DNA片段的大小和凝胶的浓度相关，尽量配制低浓度 (0.8％)凝胶为最佳，使用此方法不仅能一次分离数种DNA片段，而且 能将一定范围内的DNA片段一起回收，对分析利用DNA十分便利。回收 后的DNA片段可用作酶切、体外连结、探针标记、测序、PCR、质粒纯 化等分析使用。
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