IL-1β抗体及其结合片段的心血管相关用途
阅读：633发布：2021-07-08
专利汇可以提供IL-1β抗体及其结合片段的心血管相关用途专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了使用抗IL-1β结合分子(例如，IL-1β结合 抗体 及其 片段 )，降低、 预防 或 治疗 心血管事件和/或心 血管 疾病 的方法，所述心 血管疾病 包括急性心血管疾病或慢性心血管疾病。本公开还涉及预防或治疗心血管事件和/或心血管疾病的方法，包括通过降低心血管事件或疾病。，下面是IL-1β抗体及其结合片段的心血管相关用途专利的具体信息内容。
1.降低个体中的心血管事件的方法，包括向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段，其中所述个体是有在先的心血管事件历史或至少一种心血管疾病的风险因子历史的个体，且其中所述心血管事件是心肌梗塞、中风、心血管死亡、充血性心力衰竭、心脏停搏、急性冠脉综合征、绞痛或血管再生术。
2.权利要求1的方法，其中所述个体是有在先的心血管事件历史的个体，且其中所述心血管事件是心肌梗塞、中风、急性冠脉综合征、绞痛或血管再生术。
3.权利要求1或2的方法，其中所述血管再生术是冠脉、颈动脉或外周动脉血管再生术。
4.权利要求3的方法，其中所述冠脉、颈动脉或外周动脉血管再生术是经皮冠状动脉介入治疗(PCI)、植入支架、冠状动脉旁路移植血管(CABG)、颈动脉内膜切除术、外周血管病旁路手术或外周血管成形术。
5.权利要求2的方法，其中所述个体还具有至少一种心血管疾病的风险因子历史。
6.权利要求1或5的方法，其中所述风险因子是明显的冠心病、冠状动脉病、血栓形成、短暂性缺血发作、左心室肥大、动脉硬化、再狭窄、吸烟或外周血管病。
7.权利要求1或5的方法，其中所述风险因子是升高的甘油三酯、全身性炎症、高血磷水平、高甲状旁腺激素水平、微量蛋白尿或高同型半胱氨酸水平。
8.权利要求1或5的方法，其中所述风险因子是肥胖、高血糖、慢性肾衰竭、高血葡萄糖、慢性肾病或代谢综合征。
9.权利要求1或5的方法，其中所述风险因子是高血压、血脂异常、血脂过多、升高的总胆固醇、升高的LDL胆固醇或低HDL胆固醇或动脉粥样硬化。
10.权利要求1或2的方法，其中所述个体具有升高的C-反应蛋白(CRP)水平。
11.权利要求1或2的方法，其中所述个体大于55岁。
12.权利要求1或2的方法，其中所述个体是非高血压的。
13.权利要求1或2的方法，其中所述个体患糖尿病。
14.权利要求13的方法，其中所述糖尿病是2型糖尿病。
15.权利要求1或2的方法，其中所述个体具有两种或多种所述风险因子的历史。
16.权利要求15的方法，其中所述个体具有三种或多种所述风险因子的历史。
17.权利要求1或2的方法，其中施用所述治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段足以实现CRP水平的减少。
18.在心血管事件后，降低个体死亡率的方法，包括向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段。
19.权利要求18的方法，其中所述心血管事件是心肌梗塞。
20.权利要求18的方法，其中所述心血管事件是中风。
21.权利要求18的方法，其中所述心血管事件是充血性心力衰竭。
22.权利要求18的方法，其中所述心血管事件是急性冠脉综合征。
23.权利要求18的方法，其中所述心血管事件是绞痛。
24.权利要求18的方法，其中所述心血管事件是血管再生术。
25.权利要求24的方法，其中所述血管再生术是冠脉、颈动脉或外周动脉血管再生术。
26.权利要求25的方法，其中所述冠脉、颈动脉或外周动脉血管再生术是经皮冠状动脉介入治疗(PCI)、植入支架、冠状动脉旁路移植血管(CABG)、颈动脉内膜切除术、外周血管病旁路手术或外周血管成形术。
27.权利要求18的方法，其中所述个体未患2型糖尿病。
28.权利要求18的方法，其中所述个体是经在先的心肌梗塞或中风的心血管事件后存活的。
29.权利要求18的方法，其中所述心血管事件的发生是心肌梗塞或中风的心血管事件的复发。
30.权利要求18的方法，其中所述个体具有一种或多种的心血管疾病风险因子的历史。
31.权利要求30的方法，其中所述风险因子是明显的冠心病、冠状动脉病、血栓形成、短暂性缺血发作、左心室肥大、动脉硬化、再狭窄、吸烟或外周血管病。
32.权利要求30的方法，其中所述风险因子是升高的甘油三酯、全身性炎症、高血磷水平、高甲状旁腺激素水平、微量蛋白尿或高同型半胱氨酸水平。
33.权利要求30的方法，其中所述风险因子是肥胖、高血糖、慢性肾衰竭、高血葡萄糖、慢性肾病或代谢综合征。
34.权利要求30的方法，其中所述风险因子是高血压、血脂异常、血脂过多、升高的总胆固醇、升高的LDL胆固醇或低HDL胆固醇或动脉粥样硬化。
35.权利要求18的方法，其中所述个体是非高血压的。
36.权利要求30的方法，其中所述个体具有两种或多种所述风险因子的历史。
37.权利要求36的方法，其中所述个体具有三种或多种所述风险因子的历史。
38.权利要求18的方法，其中施用所述治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段足以实现CRP水平的减少。
39.在有至少一种心血管疾病风险因子历史的个体中降低心血管事件的方法，包括向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段，且其中所述风险因子不是2型糖尿病、肥胖、高血糖、血脂异常、血脂过多、慢性肾衰竭、高血葡萄糖、慢性肾病、高血压、动脉粥样硬化或代谢综合征。
40.权利要求39的方法，其中所述风险因子不是2型糖尿病。
41.权利要求39或40的方法，其中所述心血管事件是心肌梗塞。
42.权利要求39或40的方法，其中所述心血管事件是中风。
43.权利要求39或40的方法，其中所述心血管事件是心脏停搏。
44.权利要求39或40的方法，其中所述心血管事件是充血性心力衰竭。
45.权利要求39或40的方法，其中所述心血管事件是心血管死亡。
46.权利要求39或40的方法，其中所述心血管事件是急性冠脉综合征。
47.权利要求39或40的方法，其中所述心血管事件是绞痛。
48.权利要求39或40的方法，其中所述心血管事件是血管再生术。
49.权利要求48的方法，其中所述血管再生术是冠脉、颈动脉或外周动脉血管再生术。
50.权利要求49的方法，其中所述冠脉、颈动脉或外周动脉血管再生术是经皮冠状动脉介入治疗(PCI)、植入支架、冠状动脉旁路移植血管(CABG)、颈动脉内膜切除术、外周血管病旁路手术或外周血管成形术。
51.权利要求39的方法，其中所述风险因子是明显的冠心病、冠状动脉病、血栓形成、短暂性缺血发作、左心室肥大、动脉硬化、再狭窄、吸烟或外周血管病。
52.权利要求39的方法，其中所述风险因子是升高的甘油三酯、全身性炎症、高血磷水平、高甲状旁腺激素水平、微量蛋白尿或高同型半胱氨酸水平。
53.权利要求39的方法，其中所述个体具有升高的C-反应蛋白(CRP)水平。
54.权利要求39的方法，其中所述个体大于55岁。
55.权利要求39的方法，其中所述个体具有两种或多种所述风险因子的历史。
56.权利要求55的方法，其中所述个体具有三种或多种所述风险因子的历史。
57.权利要求39的方法，其中施用所述治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段足以实现CRP水平的减少。
58.治疗个体中的心血管事件的方法，其中所述心血管事件是心肌梗塞、中风、充血性心力衰竭、急性冠脉综合征或绞痛，包括向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段和至少一种包括IL-1β抗体或片段以外的活性剂的其他药物组合物。
59.权利要求58的方法，其中所述至少一种其他药物组合物的活性剂是胆固醇降低剂、抑制素、HMG-CoA还原酶抑制剂、钙通道阻断剂、β阻断剂、抗高血压剂、利尿剂、阿司匹林、烟酸、血管紧张肽转变酶(ACE)抑制剂、血管紧张素II受体阻断剂、血管舒张剂、抗凝剂、血小板聚集的抑制剂、溶栓剂或毛地黄。
60.治疗个体中的心血管事件的方法，其中所述心血管事件是心肌梗塞、中风、充血性心力衰竭、急性冠脉综合征或绞痛，包括向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段和血管再生术。
61.权利要求60的方法，其中所述血管再生术是冠脉、颈动脉或外周动脉血管再生术。
62.降低个体在血管再生术后再狭窄的方法，包括向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段。
63.权利要求62的方法，其中所述血管再生术是冠脉、颈动脉或外周动脉血管再生术。
64.权利要求58、60或62的任一项的方法，其中施用所述治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段足以实现CRP水平的减少。
65.治疗个体急性高血压的方法，包括向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段和一种或多种抗高血压剂。
66.权利要求65的方法，其中所述个体具有高于或等于180/110mm Hg的血压。
67.权利要求65的方法，其中所述抗高血压剂是静脉内施用的。
68.权利要求65的方法，其中所述抗高血压剂是拉贝洛尔、美托洛尔、肼苯哒嗪、硝酸甘油、尼卡地平、硝普钠或氯维地平。
69.权利要求1、2、18、39、60或62的任一项的方法，还包括施用至少一种包括抗IL-1β结合抗体或其结合片段以外的活性剂的其他药物组合物。
70.权利要求69的方法，其中所述至少一种其他药物组合物的活性剂是胆固醇降低剂。
71.权利要求69的方法，其中所述至少一种其他药物组合物的活性剂是抑制素或HMG-CoA还原酶抑制剂。
72.权利要求69的方法，其中所述至少一种其他药物组合物的活性剂是钙通道阻断剂。
73.权利要求69的方法，其中所述至少一种其他药物组合物的活性剂是抗高血压剂、利尿剂或阿司匹林。
74.权利要求69的方法，其中所述至少一种其他药物组合物的活性剂是血管紧张肽转变酶(ACE)抑制剂或血管紧张素II受体阻断剂。
75.权利要求69的方法，其中所述至少一种其他药物组合物的活性剂是血管舒张剂。
76.权利要求69的方法，其中所述至少一种其他药物组合物的活性剂是抗凝剂或血小板聚集的抑制剂。
77.权利要求69的方法，其中所述至少一种其他药物组合物的活性剂是溶栓剂。
78.权利要求69的方法，其中所述至少一种其他药物组合物的活性剂是毛地黄。
79.权利要求1-78的任一项的方法，其中所述抗IL-1β结合抗体或其结合片段以约
500pM或更低的解离常数结合人IL-1β。
80.权利要求79的方法，其中所述抗IL-1β结合抗体或其结合片段以约50pM或更低的解离常数结合人IL-1β。
81.权利要求80的方法，其中所述抗IL-1β结合抗体或其结合片段以约5pM或更低的解离常数结合人IL-1β。
82.权利要求1-78的任一项的方法，其中所述抗IL-1β结合抗体或其结合片段是中和抗体。
83.权利要求1-78的任一项的方法，其中所述抗IL-1β结合抗体或其结合片段结合IL-1β表位，使得所述结合的抗体或片段基本允许IL-1β与IL-1受体I(IL-1RI)的结合。
84.权利要求1-78的任一项的方法，其中所述抗IL-1β结合抗体或其结合片段不与IL-1α、IL-1R或IL-1Ra可检测的结合。
85.权利要求1-78的任一项的方法，其中所述抗IL-1β结合抗体或其结合片段与具有SEQ ID NO：1的轻链可变区和SEQ ID NO：2的重链可变区的抗体竞争结合。
86.权利要求1-78的任一项的方法，其中所述抗IL-1β结合抗体或其结合片段与IL-1β中包含Glu64的表位结合。
87.权利要求1-78的任一项的方法，其中所述抗IL-1β结合抗体或其结合片段与IL-1β的N末端的氨基酸1-34结合。
88.权利要求1-78的任一项的方法，其中所述抗IL-1β结合抗体或其结合片段是人源化的或人的。
89.权利要求1-78的任一项的方法，其中所述抗IL-1β结合抗体或其结合片段以一个或多个剂量的1mg/kg或更少的抗体或片段进行施用。
90.权利要求89的方法，其中所述抗IL-1β结合抗体或其结合片段以一个或多个剂量的0.3mg/kg或更少的抗体或片段进行施用。
91.权利要求90的方法，其中所述抗IL-1β结合抗体或其结合片段以一个或多个剂量的0.03mg/kg或更少的抗体或片段进行施用。
92.权利要求89-91的任一项的方法，其中所述一个或多个剂量是至少0.01mg/kg的抗体或片段。
93.权利要求1-78的任一项的方法，其中所述抗IL-1β结合抗体或其结合片段以一个或多个剂量的0.03mg/kg至1mg/kg进行施用。
94.权利要求1-78的任一项的方法，其中所述抗IL-1β结合抗体或其结合片段以固定剂量施用，不依赖于剂量与个体重量的比例。
95.权利要求94的方法，其中所述抗IL-1β结合抗体或其结合片段以一个或多个剂量的100mg或更少的抗体或片段进行施用。
96.权利要求95的方法，其中所述抗IL-1β结合抗体或其结合片段以一个或多个剂量的25mg或更少的抗体或片段进行施用。
97.权利要求96的方法，其中所述抗IL-1β结合抗体或其结合片段以一个或多个剂量的10mg或更少的抗体或片段进行施用。
98.权利要求94-97的任一项的方法，其中所述抗IL-1β结合抗体或其结合片段以一个或多个剂量的至少0.5mg的抗体或片段进行施用。
99.权利要求94的方法，其中所述抗IL-1β结合抗体或其结合片段以一个或多个剂量的1mg至100mg的抗体或片段进行施用。
100.权利要求94-99的任一项的方法，其中所述抗IL-1β结合抗体或其结合片段的固定剂量是使用预装填的注射器或递送装置施用的。
101.权利要求1-100的任一项的方法，其中所述抗IL-1β结合抗体或其结合片段是通过皮下、静脉内或肌肉内注射施用的。
102.权利要求1-101的任一项的方法，其中在施用初始剂量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段后，再施用一次或多次后续剂量。
103.权利要求102的方法，其中所述初始剂量和一次或多次后续剂量是以约每周1次至约每12个月1次的间隔施用的。
104.权利要求103的方法，其中所述初始剂量和一次或多次后续剂量是以约每两周1次至约每6个月1次的间隔施用的。
105.权利要求104的方法，其中所述初始剂量和一次或多次后续剂量是以约每月1次至约每6个月1次的间隔施用的。
106.权利要求105的方法，其中所述初始剂量和一次或多次后续剂量是以约每月1次至约每3个月1次的间隔施用的。
107.权利要求105的方法，其中所述初始剂量和一次或多次后续剂量是以约每3个月
1次至约每6个月1次的间隔施用的。
IL-1β抗体及其结合片段的心血管相关用途
[0001] 相关申请
[0002] 本申请要求于2010年3月11日提交的美国临时申请号61/313,001，于2009年10月16日提交的美国临时申请号61/252,571，和于2009年5月29日提交的美国临时申请号61/182,679的权益，所述专利的公开内容整体引入本文作为参考。
发明领域
发明领域
[0004] 发明背景
[0005] 在过去十年间，炎症已成为心血管疾病病理发生的中心课题，广泛的心脏病与炎症和细胞因子调控相关联(Mehra等人，2005，J.LeukocyteBiol.78：805-818)。心肌中的每一种有核的细胞类型(包括心肌细胞)都可以响应各种形式的应激/损伤，而分泌促炎细胞因子。它们在多种条件下升高，如炎性心肌炎、同种异体移植排斥、心缺血状态、充血性心力衰竭(CHF)和再灌注损伤。
[0006] IL-1β是由许多不同细胞类型，包括单核细胞和巨噬细胞，分泌的促炎细胞因子。当作为炎症反应的一部分释放时，IL-1β造成一系列生物效应，这主要通过诱导其他炎症介质来介导，所述其他炎症介质例如促肾上腺皮质激素、血小板因子-4、前列腺素E2(PGE2)、IL-6和IL-8。IL-1β通过激活IL-1受体(其存在于几乎所有细胞类型上)，诱导局部和全身的炎症效应。白介素-1(IL-1)细胞因子家族已被提示牵涉许多疾病状态。IL-1家族成员包括IL-1α、IL-1β和IL-1Ra。尽管通过其与IL-1受体(IL-1R1和IL-1R2)结合的能力而相关联，但这些细胞因子的每一个都是不同的，由不同基因表达且具有不同的一级氨基酸序列。此外，这些细胞因子的生理活性可以彼此区分。
[0007] 发明概述
[0008] 本公开一般涉及用于降低、预防或治疗心血管事件和/或心血管疾病的IL-1β结合分子，包括急性心血管疾病或慢性心血管疾病。本公开还涉及用于预防或治疗心血管事件和/或心血管疾病的方法，包括通过降低心血管事件或疾病。
[0009] 本公开提供了降低个体中的心血管事件的方法，包括向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段，其中所述个体是有在先的心血管事件历史或至少一种心血管疾病的风险因子历史的个体，且其中所述心血管事件是心肌梗塞、中风、心血管死亡、充血性心力衰竭、心脏停搏、急性冠脉综合征、绞痛或血管再生术。
[0010] 本公开提供了降低有至少一种心血管疾病的风险因子历史的个体中的心血管事件的方法(例如，延迟至事件的时间、降低事件的可能性或风险、预防事件、降低事件的严重程度、降低恢复的时间)，包括向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段，且其中所述心血管事件是心肌梗塞、中风、心血管死亡、充血性心力衰竭、心脏停搏、急性冠脉综合征、绞痛或血管再生术。
[0011] 本公开还提供了降低有在先的心血管事件历史的个体中的心血管事件的方法(例如，延迟至事件的时间、降低事件的可能性或风险、预防事件、降低事件的严重程度、降低恢复的时间)，包括向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段，且其中所述心血管事件是心肌梗塞、中风、心血管死亡、充血性心力衰竭、心脏停搏、急性冠脉综合征、绞痛或血管再生术。在一些实施方案中，在先的心血管事件是第一次心血管事件。在一些实施方案中，在先的或第一次心血管事件选自心肌梗塞、中风、充血性心力衰竭、急性冠脉综合征、绞痛和血管再生术。在一些实施方案中，在先的或第一次心血管事件是心肌梗塞或急性冠脉综合征。在一些实施方案中，心肌梗塞是有ST升高的心肌梗塞(例如，ST段升高型心肌梗塞，STEMI)。在一些实施方案中，心肌梗塞是没有ST升高的心肌梗塞(例如，无ST段升高型心肌梗塞，NSTEMI)。在一些实施方案中，通过心电图(例如，ECG、EKG)确定ST升高的存在或缺失。在一些实施方案中，降低心血管事件的方法是降低第二次或继发性心血管事件的方法。在一些实施方案中，所述心血管事件(例如，第二次或继发性心血管事件)选自心肌梗塞、中风、心血管死亡、充血性心力衰竭、心脏停搏、急性冠脉综合征、绞痛和血管再生术。在一些实施方案中，第一次心血管事件和第二次心血管事件是相同类型的心血管事件。在一些实施方案中，第一次心血管事件和第二次心血管事件是不同类型的心血管事件。
[0012] 在一些实施方案中，血管再生术是冠脉、颈动脉或外周动脉血管再生术。在一些实施方案中，所述冠脉、颈动脉或外周动脉血管再生术是经皮冠状动脉介入治疗(percutaneous coronary intervention，PCI)、植入支架(stent implant)、冠状动脉旁路移植血管(CABG)、颈动脉内膜切除术、外周血管病旁路手术(peripheral vascular disease bypass surgery)或外周血管成形术。
[0013] 在一些实施方案中，所述个体还具有至少一种心血管疾病的风险因子的历史。在一些实施方案中，所述风险因子是明显的冠心病、冠状动脉病、血栓形成、短暂性缺血发作(transient ischaemic attack)、左心室肥大、动脉硬化(arteriosclerosis)、再狭窄、吸烟或外周血管病。在一些实施方案中，所述风险因子是升高的甘油三酯、全身性炎症、高血磷水平、高甲状旁腺激素水平、微量蛋白尿或高同型半胱氨酸水平。在一些实施方案中，所述风险因子是肥胖、高血糖(hyperglycemia)、慢性肾衰竭、高血葡萄糖(high blood glucose)、慢性肾病或代谢综合征。在一些实施方案中，所述风险因子是末期肾病。在一些实施方案中，所述风险因子是高血压、血脂异常、血脂过多、升高的总胆固醇、升高的LDL胆固醇或低HDL胆固醇或动脉粥样硬化(atherosclerosis)。在一些实施方案中，高血压表现为血压大于或等于180/110mm Hg。在一些其它实施方案中，高血压是温和至中度的，伴随收缩压(SBP)为140至180mm Hg，和/或舒张压(DBP)为90至110mm Hg。
[0014] 在一些实施方案中，所述个体具有升高的C-反应蛋白(CRP)水平。
[0015] 在一些实施方案中，所述个体大于55岁。
[0016] 在一些实施方案中，所述个体大于65岁。
[0017] 在一些实施方案中，所述个体是非高血压的。
[0018] 在一些实施方案中，所述个体患难以控制的高血压。
[0019] 在一些实施方案中，所述个体有心律不齐。
[0020] 在一些实施方案中，所述个体有“A型”人格。
[0021] 在一些实施方案中，所述个体有久坐的生活方式。
[0022] 在一些实施方案中，所述个体患糖尿病。在一些实施方案中，所述糖尿病是2型糖尿病。
[0023] 在一些实施方案中，所述个体具有两种或多种所述风险因子的历史。
[0024] 在一些实施方案中，所述个体具有三种或多种所述风险因子的历史。
[0025] 在一些实施方案中，施用所述治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段足以实现CRP水平的减少。
[0026] 本公开还提供了在心血管事件后，降低个体死亡率的方法，包括向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段。
[0027] 在一些实施方案中，所述心血管事件是心肌梗塞、中风、充血性心力衰竭、急性冠脉综合征、绞痛或血管再生术。在一些实施方案中，所述心血管事件是心肌梗塞或急性冠脉综合征。在一些实施方案中，心肌梗塞是有ST升高的心肌梗塞(例如，ST段升高型心肌梗塞，STEMI)。在一些实施方案中，心肌梗塞是没有ST升高的心肌梗塞(例如，无ST段升高型心肌梗塞，NSTEMI)。在一些实施方案中，通过心电图(例如，ECG、EKG)确定ST升高的存在或缺失。在一些实施方案中，血管再生术是冠脉、颈动脉或外周动脉血管再生术。在一些实施方案中，所述冠脉、颈动脉或外周动脉血管再生术是经皮冠状动脉介入治疗(PCI)、植入支架、冠状动脉旁路移植血管(CABG)、颈动脉内膜切除术、外周血管病旁路手术或外周血管成形术。
[0028] 在一些实施方案中，所述个体没有2型糖尿病。
[0029] 在一些实施方案中，所述个体是经在先的心肌梗塞或中风的心血管事件后存活的。
[0030] 在一些实施方案中，所述心血管事件的发生是心肌梗塞或中风的心血管事件的复发。
[0031] 在一些实施方案中，所述个体具有一种或多种的心血管疾病风险因子的历史。在一些实施方案中，所述风险因子是明显的冠心病、冠状动脉病、血栓形成、短暂性缺血发作、左心室肥大、动脉硬化、再狭窄、吸烟或外周血管病。在一些实施方案中，所述风险因子是升高的甘油三酯、全身性炎症、高血磷水平、高甲状旁腺激素水平、微量蛋白尿或高同型半胱氨酸水平。在一些实施方案中，所述风险因子是肥胖、高血糖、慢性肾衰竭、高血葡萄糖、慢性肾病或代谢综合征。在一些实施方案中，所述风险因子是末期肾病。在一些实施方案中，所述风险因子是高血压、血脂异常、血脂过多、升高的总胆固醇、升高的LDL胆固醇或低HDL胆固醇或动脉粥样硬化。在一些实施方案中，高血压表现为血压大于或等于180/110mmHg。在一些其它实施方案中，高血压是温和至中度的，伴随收缩压(SBP)为140至180mm Hg，和/或舒张压(DBP)为90至110mm Hg。
[0032] 在一些实施方案中，所述个体是非高血压的。
[0033] 在一些实施方案中，所述个体患难以控制的高血压。
[0034] 在一些实施方案中，所述个体有心律不齐。
[0035] 在一些实施方案中，所述个体有“A型”人格。
[0036] 在一些实施方案中，所述个体有久坐的生活方式。
[0037] 在一些实施方案中，所述个体具有两种或多种所述风险因子的历史。
[0038] 在一些实施方案中，所述个体具有三种或多种所述风险因子的历史。
[0039] 在一些实施方案中，所述个体是有心血管疾病的患者，包括急性心血管疾病(例如，与充血性心力衰竭不相关的)或慢性心血管疾病(例如，与多种动脉粥样硬化型心血管疾病的风险因子相关的)。
[0040] 在一些实施方案中，施用所述治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段足以实现CRP水平的减少。
[0041] 本公开还提供了在有至少一种心血管疾病风险因子历史的个体中降低心血管事件的方法，包括向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段，且其中所述风险因子不是2型糖尿病、肥胖、高血糖、血脂异常、血脂过多、慢性肾衰竭、高血葡萄糖、慢性肾病、高血压、动脉粥样硬化或代谢综合征。
[0042] 在一些实施方案中，所述心血管事件是心肌梗塞、中风、心脏停搏、充血性心力衰竭、心血管死亡、急性冠脉综合征(例如，经诊断的)、绞痛或血管再生术。在一些实施方案中，所述血管再生术是冠脉、颈动脉或外周动脉血管再生术。在一些实施方案中，所述冠脉、颈动脉或外周动脉血管再生术是经皮冠状动脉介入治疗(PCI)、植入支架、冠状动脉旁路移植血管(CABG)、颈动脉内膜切除术、外周血管病旁路手术或外周血管成形术。
[0043] 在一些实施方案中，所述风险因子是明显的冠心病、冠状动脉病、血栓形成、短暂性缺血发作、左心室肥大、动脉硬化、再狭窄、吸烟或外周血管病。在一些实施方案中，所述风险因子是升高的甘油三酯、全身性炎症、高血磷水平、高甲状旁腺激素水平、微量蛋白尿或高同型半胱氨酸水平。
[0044] 在一些实施方案中，所述个体具有升高的C-反应蛋白(CRP)水平。
[0045] 在一些实施方案中，所述个体大于55岁。
[0046] 在一些实施方案中，所述个体大于65岁。
[0047] 在一些实施方案中，所述个体具有两种或多种所述风险因子的历史。
[0048] 在一些实施方案中，所述个体具有三种或多种所述风险因子的历史。
[0049] 在一些实施方案中，所述个体是患心血管疾病的患者，包括急性心血管疾病(例如，与充血性心力衰竭不相关的)或慢性心血管疾病(例如，与多种动脉粥样硬化型心血管疾病的风险因子相关的)。
[0050] 在一些实施方案中，施用所述治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段足以实现CRP水平的减少。
[0051] 本公开还提供了治疗个体中的心血管事件的方法，其中所述心血管事件是心肌梗塞、中风、充血性心力衰竭、急性冠脉综合征或绞痛，包括向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段和至少一种包括IL-1β抗体或片段以外的活性剂的其他药物组合物。
[0052] 在一些实施方案中，所述心血管事件是心肌梗塞或急性冠脉综合征。在一些实施方案中，心肌梗塞是有ST升高的心肌梗塞(例如，ST段升高型心肌梗塞，STEMI)。在一些实施方案中，心肌梗塞是没有ST升高的心肌梗塞(例如，无ST段升高型心肌梗塞，NSTEMI)。在一些实施方案中，通过心电图(例如，ECG、EKG)确定ST升高的存在或缺失。
[0053] 在一些实施方案中，所述至少一种其他药物组合物的活性剂是胆固醇降低剂、抑制素、HMG-CoA还原酶抑制剂、钙通道阻断剂、β阻断剂、抗高血压剂、利尿剂、阿司匹林、烟酸、血管紧张肽转变酶(ACE)抑制剂、血管紧张素II受体阻断剂、血管舒张剂、抗凝剂、血小板聚集的抑制剂、溶栓剂或毛地黄。
[0054] 本公开还提供了治疗个体中的心血管事件的方法，其中所述心血管事件是心肌梗塞、中风、充血性心力衰竭、急性冠脉综合征或绞痛，包括向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段和(例如，联合)血管再生术。
[0055] 在一些实施方案中，所述心血管事件是心肌梗塞或急性冠脉综合征。在一些实施方案中，心肌梗塞是有ST升高的心肌梗塞(例如，ST段升高型心肌梗塞，STEMI)。在一些实施方案中，心肌梗塞是没有ST升高的心肌梗塞(例如，无ST段升高型心肌梗塞，NSTEMI)。在一些实施方案中，通过心电图(例如，ECG、EKG)确定ST升高的存在或缺失。
[0056] 在一些实施方案中，所述血管再生术是冠脉、颈动脉或外周动脉血管再生术。
[0057] 本公开还提供了治疗个体的心血管疾病的方法，包括例如急性心血管疾病或慢性心血管疾病，包括向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段和(例如，联合)血管再生术。
[0058] 在一些实施方案中，施用所述治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段足以实现降低MACE(主要的消极心脏事件，例如心肌梗塞、中风、死亡，如CV死亡，和/或其混合)的相关风险(例如，更低的风险、频率、发生、严重程度)，包括例如在患心血管疾病例如急性心血管疾病或慢性心血管疾病的患者中，或者在有动脉粥样硬化型心血管疾病的多种风险因子(例如，年龄55、年龄65，加一种或多种的：CABG、NSTEMI、高血压、升高的胆固醇或抑制素、升高的CRP、不超过6个月的在先心肌梗塞/中风史、在先的ACS或TIA史、吸烟、PCI史、2型糖尿病)的患者中。
[0059] 在一些实施方案中，施用所述治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段足以及时对第一次MACE事件、血管再生术(例如，CABG)，总括性死亡率(all cause mortality)、外周血管病、首次记录的绞痛终点、充血性心力衰竭(CHF)入院，实现减少的入院次数、住院持续时间、因缺血事件(例如，绞痛和/或CHF)而再入院、梗塞面积、舒张期容积、射血分数或利尿剂的使用。
[0060] 在一些实施方案中，施用所述治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段足以实现斑块消退、斑块稳定和/或抑制斑块破裂。
[0061] 在一些实施方案中，施用所述治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段足以实现CRP水平、BNP水平、肌钙蛋白水平、C-肽水平、LDL水平、血压或血糖(HbA1C)的减少。
[0062] 在一些实施方案中，施用所述治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段足以实现SAE、恶化、低血糖、严重感染率、感染率、免疫原性或心力衰竭的减少或不再增加。
[0063] 本公开还提供了降低个体在血管再生术后再狭窄的方法，包括向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段。
[0064] 在一些实施方案中，所述血管再生术是冠脉、颈动脉或外周动脉血管再生术。
[0065] 在一些实施方案中，施用所述治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段足以实现CRP水平的减少。
[0066] 本公开还提供了治疗个体急性高血压的方法，包括向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段和一种或多种抗高血压剂。在一些实施方案中，所述个体具有高于或等于180/110mm Hg的血压。在一些其它实施方案中，个体具有温和至中度的高血压，伴随收缩压(SBP)为140至180mm Hg，和/或舒张压(DBP)为90至110mm Hg。在一些实施方案中，所述抗高血压剂是静脉内施用的。在一些实施方案中，所述抗高血压剂选自α/β肾上腺素能阻断剂、血管紧张肽转变酶抑制剂、血管紧张素II受体拮抗剂、抗肾上腺素能剂、β肾上腺素能阻断剂、钙通道阻断剂、利尿剂和血管舒张剂。在一些实施方案中，所述抗高血压剂是卡维地洛(carvedilol)、拉贝洛尔(labetalol，)、贝那普利(benazepril)、卡托普利(captopril)、依那普利(enalapril)、福辛普利(fosinopril)、赖诺普利(lisinopril)、莫昔普利(moexipril)、培哚普利(perindopril)、喹那普利(quinapril)、雷米普利(ramipril)、群多普利(trandolapril)、坎地沙坦(candesartan)、依普罗沙坦(eprosartan)、厄贝沙坦(irbesartan)、氯沙坦(losartan)、替米沙坦(telmisartan)、缬沙坦(valsartan)、可乐定(clonidine)、多沙唑嗪(doxazosin)、胍那苄(guanabenz)、胍那决尔(guanadrel)、胍乙啶(guanethidine)、胍法辛(guanfacine)、美卡拉明(mecamylamine)、甲基多巴(methyldopa)、呱唑嗪(prazosin)、利血平(reserpine)、特拉唑嗪(terazosin)、醋丁洛尔(acebutolol)、阿替洛尔(atenolol)、倍他洛尔(betaxolol)、比索洛尔(bisoprolol)、卡替洛尔(carteolol)、美托洛尔(metoprolol)、那多洛尔(nadolol)、喷布洛尔(penbutolol)、吲哚洛尔(pindolo)、普萘洛尔(propranolol)、噻吗洛尔(timolol)、氨氯地平(amlodipine)、地尔硫卓(diltiazem)、非洛地平(felodipine)、伊拉地平(isradipine)、尼卡地平(nicardipine)、硝苯地平(nifedipine)、尼索地平(nisoldipine)、维拉帕米(verapamil)、阿米洛利(amiloride)、苄噻嗪(benzthiazide)、氯噻嗪(chlorothiazide)、氯噻酮(chlorthalidone)、呋塞米(furosemide)、氢氯噻嗪(hydrochlorothiazide)、吲达帕胺(indapamide)、美托拉宗(metolazone)、泊利噻嗪(polythiazide)、螺内酯(spironolactone)、托拉塞米(torsemide)、三氯噻嗪(trichlormethiazide)、肼苯哒嗪(hydralazine)、硝酸甘油(nitroglycerin)、硝普钠(sodium nitroprusside)、氯维地平(clevidipine)或米诺地尔(minoxidil)。在一些实施方案中，所述抗高血压剂是拉贝洛尔(labetalol)、美托洛尔(metoprolol)、肼苯哒嗪(hydralazine)、硝酸甘油(nitroglycerin)、尼卡地平(nicardipine)、硝普钠(sodiumnitroprusside)或氯维地平(clevidipine)。
[0067] 本公开还提供了降低、预防或治疗个体中的心血管事件或疾病(例如，急性心血管疾病或慢性心血管疾病)的方法，包括向所述个体施用抗IL-1β结合抗体或其结合片段与医学或手术干预的(例如，在之前、过程中或之后的)组合(例如，联合)。此类抗体可以治疗有效量施用。此类干预可以是治疗有效的。在一些实施方案中，医学干预是活性剂，例如药物或生物活性剂，包括例如任何一种或多种本文所述的活性剂。在一些实施方案中，医学干预是门诊病人医学处理或方法。在一些实施方案中，医学干预是住院病人住院。在一些实施方案中，手术干预是血管再生术，包括例如任何一种或多种本文所述的血管再生术。在一些实施方案中，手术干预涉及心脏瓣膜修复或替换、冠状动脉搭桥手术、心脏移植或心脏泵。在一些实施方案中，手术干预涉及双心室心脏起搏器、心内除颤器(internalcardiac defibrillator，ICD)或肌切除术。在一些实施方案中，医学干预是戒烟药疗或戒烟咨询服务。
[0068] 本公开还提供了在有至少一种心血管疾病风险因子历史的个体中降低心血管事件的方法，包括(a)鉴别、诊断或选择有至少一种心血管疾病风险因子历史的个体，和(b)向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段，且其中所述心血管事件是心肌梗塞、中风、心血管死亡、充血性心力衰竭、心脏停搏、急性冠脉综合征、绞痛或血管再生术。
[0069] 本公开还提供了在有在先心血管事件历史的个体中降低心血管事件的方法，包括(a)鉴别、诊断或选择有在先心血管事件历史的个体，和(b)向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段，且其中所述心血管事件是心肌梗塞、中风、急性冠脉综合征、绞痛或血管再生术。在一些实施方案中，在先的心血管事件是第一次心血管事件。在一些实施方案中，在先的或第一次心血管事件选自心肌梗塞、中风、充血性心力衰竭、急性冠脉综合征、绞痛和血管再生术。在一些实施方案中，在先的或第一次心血管事件是心肌梗塞或急性冠脉综合征。在一些实施方案中，心肌梗塞是有ST升高的心肌梗塞(例如，ST段升高型心肌梗塞，STEMI)。在一些实施方案中，心肌梗塞是没有ST升高的心肌梗塞(例如，无ST段升高型心肌梗塞，NSTEMI)。在一些实施方案中，通过心电图(例如，ECG、EKG)确定ST升高的存在或缺失。在一些实施方案中，降低心血管事件的方法是降低第二次或继发性心血管事件的方法。在一些实施方案中，所述心血管事件(例如，第二次或继发性心血管事件)选自心肌梗塞、中风、心血管死亡、充血性心力衰竭、心脏停搏、急性冠脉综合征、绞痛或血管再生术。在一些实施方案中，第一次心血管事件和第二次心血管事件是相同类型的心血管事件。在一些实施方案中，第一次心血管事件和第二次心血管事件是不同类型的心血管事件。
[0070] 本公开还提供了在心血管事件后，降低个体死亡率的方法，包括(a)鉴别、诊断或选择有心血管事件的个体，和(b)向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段。在一些实施方案中，所述心血管事件选自心肌梗塞、中风、充血性心力衰竭、急性冠脉综合征、绞痛和血管再生术。在一些实施方案中，所述心血管事件是心肌梗塞或急性冠脉综合征。在一些实施方案中，心肌梗塞是有ST升高的心肌梗塞(例如，ST段升高型心肌梗塞，STEMI)。在一些实施方案中，心肌梗塞是没有ST升高的心肌梗塞(例如，无ST段升高型心肌梗塞，NSTEMI)。在一些实施方案中，通过心电图(例如，ECG、EKG)确定ST升高的存在或缺失。
[0071] 本公开还提供了在有至少一种心血管疾病的风险因子历史的个体中降低心血管事件的方法，包括(a)鉴别、诊断或选择有至少一种心血管疾病的风险因子历史的个体，和(b)向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段，且其中所述风险因子不是2型糖尿病、肥胖、高血糖、血脂异常、血脂过多、慢性肾衰竭、高血葡萄糖、慢性肾病、高血压、动脉粥样硬化、或代谢综合征。在一些实施方案中，所述心血管事件选自心肌梗塞、中风、心血管死亡、充血性心力衰竭、心脏停搏、急性冠脉综合征、绞痛和血管再生术。
[0072] 本公开还提供了治疗个体中的心血管事件的方法，其中所述心血管事件是心肌梗塞、中风、充血性心力衰竭、急性冠脉综合征或绞痛，包括(a)鉴别、诊断或选择有心血管事件的个体，和(b)向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段和至少一种包含IL-1β抗体或片段以外的活性剂的其他药物组合物。在一些实施方案中，在先的或第一次心血管事件是心肌梗塞或急性冠脉综合征。在一些实施方案中，心肌梗塞是有ST升高的心肌梗塞(例如，ST段升高型心肌梗塞，STEMI)。在一些实施方案中，心肌梗塞是没有ST升高的心肌梗塞(例如，无ST段升高型心肌梗塞，NSTEMI)。在一些实施方案中，通过心电图(例如，ECG、EKG)确定ST升高的存在或缺失。
[0073] 本公开还提供了治疗个体中的心血管事件的方法，其中所述心血管事件是心肌梗塞、中风、充血性心力衰竭、急性冠脉综合征或绞痛，包括(a)鉴别、诊断或选择有心血管事件的个体，和(b)向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段和(例如联合)血管再生术。在一些实施方案中，在先的或第一次心血管事件是心肌梗塞或急性冠脉综合征。在一些实施方案中，心肌梗塞是有ST升高的心肌梗塞(例如，ST段升高型心肌梗塞，STEMI)。在一些实施方案中，心肌梗塞是没有ST升高的心肌梗塞(例如，无ST段升高型心肌梗塞，NSTEMI)。在一些实施方案中，通过心电图(例如，ECG、EKG)确定ST升高的存在或缺失。
[0074] 本公开还提供了降低个体在血管再生术后再狭窄的方法，包括(a)鉴别、诊断或选择有血管再生术的个体，和(b)向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段。
[0075] 本公开还提供了治疗个体的急性高血压的方法，包括(a)鉴别、诊断或选择有急性高血压的个体，和(b)向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段和一种或多种抗高血压剂。在一些实施方案中，高血压表现为血压大于或等于180/110mm Hg。在一些其它实施方案中，高血压是温和至中度的，伴随收缩压(SBP)为140至180mm Hg，和/或舒张压(DBP)为90至110mm Hg。
[0076] 在任意的和/或所有的上述实施方案中，施用所述治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段足以实现CRP水平的减少。
[0077] 本公开还提供了用于任意的和/或所有的上述方法中的药物组合物，包括例如用于降低、预防或治疗心血管事件和/或心血管疾病，包括急性心血管疾病或慢性心血管疾病，这是通过施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段。
[0078] 本文提供了各种方法和药物组合物，包括例如如上所述的那些。本公开进一步提供了IL-1β结合抗体及其结合片段，以及可用于任意的和/或所有的上述方法和药物组合物中的合适剂量和给药方案，或可与任意的和/或所有的上述方法和药物组合物一起使用的合适剂量和给药方案。
[0079] 在任意的和/或所有的上述方法和药物组合物的一些实施方案中，与人IL-1β结合的抗体或片段具有约1nM或更低的解离常数。在一些实施方案中，与人IL-1β结合的抗体或片段具有约500pM或更低的解离常数。在一些实施方案中，与人IL-1β结合的抗IL-1β结合抗体或其结合片段具有约250pM或更低的解离常数。在一些实施方案中，与人IL-1β结合的抗IL-1β结合抗体或其结合片段具有约100pM或更低的解离常数。在任何上述方法的一些实施方案中，与人IL-1β结合的抗IL-1β结合抗体或其结合片段具有约50pM或更低的解离常数。在任何上述方法的一些实施方案中，与人IL-1β结合的抗IL-1β结合抗体或其结合片段具有约5pM或更低的解离常数。在一些实施方案中，与人IL-1β结合的抗IL-1β结合抗体或其结合片段具有约1pM或更低的解离常数。在一些实施方案中，与人IL-1β结合的抗IL-1β结合抗体或其结合片段具有约0.3pM或更低的解离常数。
[0080] 在任意的和/或所有的上述方法的一些实施方案中，抗IL-1β结合抗体或其结合片段是中和抗体。
[0081] 在任意的和/或所有的上述方法的一些实施方案中，抗IL-1β结合抗体或其结合片段结合IL-1β表位，使得所述结合抗体或片段基本允许IL-1β与IL-1受体I(IL-1RI)的结合。
[0082] 在任意的和/或所有的上述方法的一些实施方案中，抗IL-1β结合抗体或其结合片段不与IL-1α、IL-1R或IL-1Ra可检测的结合。
[0083] 在任意的和/或所有的上述方法的一些实施方案中，抗IL-1β结合抗体或其结合片段与具有SEQ ID NO：1的轻链可变区和SEQ ID NO：2的重链可变区的抗体竞争结合。在任意的和/或所有的上述方法的一些实施方案中，抗IL-1β结合抗体或其结合片段结合的表位与具有SEQ ID NO：1的轻链可变区和SEQ ID NO：2的重链可变区的抗体所结合的表位相同或基本相同。在任意的和/或所有的上述方法的一些实施方案中，抗IL-1β结合抗体或其结合片段包含SEQ ID NO：1的轻链可变区和SEQ ID NO：2的重链可变区。
[0084] 在任意的和/或所有的上述方法的一些实施方案中，抗IL-1β结合抗体或其结合片段与IL-1β中包含Glu64的表位结合。
[0085] 在任意的和/或所有的上述方法的一些实施方案中，抗IL-1β结合抗体或其结合片段与IL-1β的N末端的氨基酸1-34结合。
[0086] 在任意的和/或所有的上述方法和药物组合物的一些实施方案中，抗IL-1β结合抗体或其结合片段是人源化的或人的。
[0087] 在任意的和/或所有的上述方法的一些实施方案中，抗IL-1β结合抗体或其结合片段以一个或多个剂量的3mg/kg的抗体或片段进行施用。在一些实施方案中，抗IL-1β结合抗体或其结合片段以一个或多个剂量的1mg/kg或更少的抗体或片段进行施用。在一些实施方案中，抗IL-1β结合抗体或其结合片段以一个或多个剂量的0.3mg/kg或更少的抗体或片段进行施用。在一些实施方案中，抗IL-1β结合抗体或其结合片段以一个或多个的0.1mg/kg或更少的抗体或片段进行施用。在一些实施方案中，抗IL-1β结合抗体或其结合片段以一个或多个剂量的0.03mg/kg或更少的抗体或片段进行施用。在一些实施方案中，一个或多个剂量至少为0.01mg/kg的抗体或片段。在任意上述方法的一些实施方案中，抗IL-1β结合抗体或其结合片段以一个或多个剂量的0.03mg/kg至1mg/kg进行施用。
[0088] 在任意的和/或所有的上述方法的一些实施方案中，抗IL-1β结合抗体或其结合片段以固定剂量施用，不依赖于剂量与个体体重的比例。在一些实施方案中，抗IL-1β结合抗体或其结合片段以一个或多个的100mg或更少的抗体或片段剂量进行施用。在一些实施方案中，抗IL-1β结合抗体或其结合片段以一个或多个的25mg或更少的抗体或片段剂量进行施用。在一些实施方案中，抗IL-1β结合抗体或其结合片段以一个或多个的10mg或更少的抗体或片段剂量进行施用。在一些实施方案中，抗IL-1β结合抗体或其结合片段以一个或多个的至少0.5mg的抗体或片段剂量进行施用。在一些实施方案中，抗IL-1β结合抗体或其结合片段以一个或多个的1mg至100mg的抗体或片段剂量进行施用。在一些实施方案中，抗IL-1β结合抗体或其结合片段的所述固定剂量是使用预装填的注射器或递送装置施用的。
[0089] 在任意的和/或所有的上述方法的一些实施方案中，抗IL-1β结合抗体或其结合片段是通过皮下、静脉内或肌肉内注射施用的。
[0090] 在任意的和/或所有的上述方法的一些实施方案中，在施用初始剂量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段后，再施用一次或多次后续剂量。在一些实施方案中，所述初始剂量和一次或多次后续剂量是以约每周1次至约每12个月1次的间隔施用的。在一些实施方案中，所述初始剂量和一次或多次后续剂量是以约每两周1次至约每6个月1次的间隔施用的。在一些实施方案中，所述初始剂量和一次或多次后续剂量是以约每月1次至约每6个月1次的间隔施用的。在一些实施方案中，所述初始剂量和一次或多次后续剂量是以约每月1次至约每3个月1次的间隔施用的。在一些实施方案中，所述初始剂量和一次或多次后续剂量是以约每3个月1次至约每6个月1次的间隔施用的。
[0091] 在任意的和/或所有的上述方法的一些实施方案中提供了给药方案，其中所述给药方案包括以一次以上的给药间隔施用IL-1β结合抗体或其结合片段。在一些实施方案中，给药方案包括以至少两个(例如，2、3、4、5、6)不同的给药间隔施用IL-1β抗体或其片段。在一些实施方案中，给药方案包括以两个不同的给药间隔施用IL-1β抗体或其片段。在一些实施方案中，给药方案包括以两个不同的给药间隔施用IL-1β结合抗体或其结合片段，其中所述第一个给药间隔包括施用一次或多次IL-1β抗体或其片段剂量，而第二个给药间隔包括施用一次或多次IL-1β抗体或其片段剂量，并且其中第一个给药间隔时间上短于第二个给药间隔。例如，第一个给药间隔可以是天或周，而第二个给药间隔可以是月。在一些实施方案中，第一个给药间隔是约5天至约28天，约7天至约21天，约12天至约16天，或约14天。在一些实施方案中，第二个给药间隔是约1个月至约3个月，约1个月至约2个月，或约1个月。在一些实施方案中，第一个给药间隔是约7天，第二个给药间隔是约1个月。
[0092] 在一些实施方案中，在施用初始剂量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段后，再施用一次或多次后续剂量，并且其中在施用初始剂量和第二次剂量之间的给药间隔，和在第二次和第三次剂量之间的给药间隔是约7天至约21天，并且其中在施用后续剂量之间的给药间隔是约1个月至约3个月。在一些实施方案中，在施用初始剂量和第二次剂量之间的给药间隔，和在第二次和第三次剂量之间的给药间隔是约12天至约16天，而在施用后续剂量之间的给药间隔是约1个月至约2个月。在一些实施方案中，在施用初始剂量和第二次剂量之间的给药间隔，和在第二次和第三次剂量之间的给药间隔是约14天，而在施用后续剂量之间的给药间隔是约1个月。
[0093] 在任意的和/或所有的上述方法、剂量和/或给药方案的优选的实施方案中，IL-1β结合抗体或其结合片段(例如，治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段)是在心血管事件的1周内、在心血管事件的96小时内、在心血管事件的72小时内、在心血管事件的48小时内、在心血管事件的24小时内，或在心血管事件的12小时内第一次施用。
[0094] 在任意的和/或所有的上述方法的一些实施方案中，施用初始剂量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段后，再施用一次或多次后续剂量，并且其中所述一次或多次后续剂量的量与初始剂量几乎相同或较少。
[0095] 在任意的和/或所有的上述方法的一些实施方案中，施用初始剂量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段后，再施用一次或多次后续剂量，并且其中至少一次后续剂量的量比初始剂量多。
[0096] 在任意的和/或所有的上述方法的一些实施方案中，抗IL-1β结合抗体或其结合片段在测量IL-1β诱导的IL-8生产的人全血IL-1β抑制测定中，具有比IL-1β受体拮抗剂更低的IC50。在一些实施方案中，所述IL-1β受体拮抗剂是阿那白滞素(anakinra)。
[0097] 在一些实施方案中，任意的和/或所有的上述方法可进一步包括施用至少一种包括抗IL-1β结合抗体或其结合片段以外的活性剂的其他药物组合物。在一些实施方案中，所述至少一种其他药物组合物的活性剂是胆固醇降低剂。在一些实施方案中，所述至少一种其他药物组合物的活性剂是抑制素或HMG-CoA还原酶抑制剂(例如，洛伐他汀(lovastatin)、普伐他汀(pravastatin)、辛伐他汀(simvastatin)、氟伐他汀(fluvastatin)、阿托伐他汀(atorvastatin)、西立伐他汀(cerivastatin)、美伐他汀(mevastatin)、匹伐他汀(pitavastatin)、罗苏伐他汀(rosuvastatin)或其混合物，或其与依泽替米贝(Ezetimibe)、烟酸、苯磺酸氨氯地平(Amlodipine Besylate)的混合物)。在一些实施方案中，所述至少一种其他药物组合物的活性剂是钙通道阻断剂(例如，氨氯地平、地尔硫卓、硝苯地平、尼卡地平、维拉帕米)或β阻断剂(例如，艾司洛尔(esmolol)、美托洛尔(metoprolol)、纳多洛尔(nadolol)、喷布洛尔(penbutolol))。在一些实施方案中，所述至少一种其他药物组合物的活性剂是抗高血压剂(例如，拉贝洛尔、美托洛尔、肼苯哒嗪、硝酸甘油、尼卡地平、硝普钠、氯维地平)、利尿剂(例如，噻嗪类利尿剂、氯噻酮(chlorthalidone)、呋塞米、氢氯噻嗪、吲达帕胺、美托拉宗、盐酸阿米洛利、螺内酯(spironolactone)、氨苯蝶啶(triamterene))或阿司匹林。在一些实施方案中，所述至少一种其他药物组合物的活性剂是血管紧张肽转变酶(ACE)抑制剂(例如，雷米普利、雷米普利拉(ramiprilat)、卡托普利(captopril)、赖诺普利(lisinopril))或血管紧张素II受体阻断剂(例如，氯沙坦、奥美沙坦(olmesartan)、缬沙坦)。在一些实施方案中，所述至少一种其他药物组合物的活性剂是血管舒张剂。在一些实施方案中，所述至少一种其他药物组合物的活性剂是抗凝剂(例如，醋硝香豆素(acenocoumarol)、苯丙香豆素(phenprocoumon)、华法林(warfarin)、肝素(heparin)、低分子量肝素(low molecular weight heparin))或血小板聚集的抑制剂(例如，氯吡格雷(clopidogrel)、噻氯匹定(ticlopidine)、西洛他唑(cilostazol)、双嘧达莫(dipyridamole)、依替巴肽(eptifibatide)、阿司匹林(aspirin)、阿昔单抗(abciximab)、依替巴肽(eptifibatide)、替罗非班(tirofiban))。在一些实施方案中，所述至少一种其他药物组合物的活性剂是溶栓剂(例如，链激酶(streptokinase)、尿激酶(urokinase)、阿替普酶(alteplase)、瑞替普酶(reteplase)、替奈普酶(tenecteplase))。在一些实施方案中，所述至少一种其他药物组合物的活性剂是毛地黄。在一些实施方案中，所述至少一种其他药物组合物的活性剂是地高辛(digoxin)或奈西立肽(nesiritide)。在一些实施方案中，所述至少一种其他药物组合物的活性剂是氧。在一些实施方案中，所述至少一种其他药物组合物的活性剂是凝血酶抑制剂(例如，水蛭素(hirudin)、比伐卢定(bivalirudin))。在一些实施方案中，所述至少一种其他药物组合物的活性剂是硝酸盐(例如，三硝酸甘油酯(GTN)/硝酸甘油、二硝酸异山梨酯(isosorbide dinitrate)、单硝酸异山梨酯(isosorbide mononitrate))。在一些实施方案中，所述至少一种其他药物组合物的活性剂是止痛剂(例如，硫酸吗啡(morphine sulfate))。在一些实施方案中，所述至少一种其他药物组合物的活性剂是肾素抑制剂。在一些实施方案中，所述至少一种其他药物组合物的活性剂是内皮素A受体抑制剂。在一些实施方案中，所述至少一种其他药物组合物的活性剂是醛固酮抑制剂。
[0098] 本公开还提供了这样的抗IL-1β结合抗体或其结合片段用于生产组合物的用途，所述抗体或其结合片段在测量IL-1β诱导的IL-8生产的人全血IL-1β抑制测定中，具有比IL-1β受体拮抗剂更低的IC50，其中所述组合物用于降低、预防或治疗心脏事件或心血管疾病。
[0099] 本文提供的这些IL-1β结合抗体和其结合片段，以及合适的剂量和给药方案和/或包括抗IL-1β抗体或其片段以外的活性剂的其他药物组合物，可用于上述方法和/或药物组合物中，或与上述方法和/或药物组合物一起使用，包括例如：
[0100] 用于降低有至少一种心血管疾病的风险因子历史的个体中的心血管事件(例如，延迟至事件的时间、降低事件的可能性或风险、预防事件、降低事件的严重程度、降低恢复的时间)的方法和/或药物组合物，包括向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段，且其中所述心血管事件是心肌梗塞、中风、心血管死亡、充血性心力衰竭、心脏停搏、急性冠脉综合征、绞痛或血管再生术；
[0101] 用于降低有在先的心血管事件历史的个体中的心血管事件(例如，延迟至事件的时间、降低事件的可能性或风险、预防事件、降低事件的严重程度、降低恢复的时间)的方法和/或药物组合物，包括向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段，且其中所述心血管事件是心肌梗塞、中风、心血管死亡、充血性心力衰竭、心脏停搏、急性冠脉综合征、绞痛或血管再生术；
[0102] 用于降低个体在心血管事件后的死亡率的方法和/或药物组合物，包括向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段；
[0103] 用于降低有至少一种心血管疾病的风险因子历史的个体中的心血管事件的方法和/或药物组合物，包括向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段，且其中所述风险因子不是2型糖尿病、肥胖、高血糖、血脂异常、血脂过多、慢性肾衰竭、高血葡萄糖、慢性肾病、高血压、动脉粥样硬化或代谢综合征；
[0104] 用于治疗个体中的心血管事件的方法和/或药物组合物，其中所述心血管事件是心肌梗塞、中风、充血性心力衰竭、急性冠脉综合征或绞痛，包括向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段和至少一种包括IL-1β抗体或片段以外的活性剂的其他药物组合物；
[0105] 用于治疗个体中的心血管事件的方法和/或药物组合物，其中所述心血管事件是心肌梗塞、中风、充血性心力衰竭、急性冠脉综合征或绞痛，包括向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段和血管再生术；
[0106] 用于治疗个体中的心血管疾病的方法和/或药物组合物，包括例如急性心血管疾病或慢性心血管疾病，包括向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段和血管再生术；
[0107] 用于降低个体在血管再生术后再狭窄的方法和/或药物组合物，包括向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段；
[0108] 用于治疗个体的急性高血压的方法和/或药物组合物，包括向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段和一种或多种抗高血压剂；
[0109] 用于降低、预防或治疗个体中的心血管事件或疾病(例如急性心血管疾病或慢性心血管疾病)的方法和/或药物组合物，包括向所述个体施用抗IL-1β结合抗体或其结合片段与医学或手术干预的组合；
[0110] 用于抑制个体中的血小板活性的方法和/或药物组合物，包括向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段；
[0111] 用于降低有至少一种心血管疾病的风险因子历史的个体中的心血管事件的方法和/或药物组合物，包括(a)鉴别、诊断或选择有至少一种心血管疾病风险因子历史的个体，和(b)向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段，且其中所述心血管事件是心肌梗塞、中风、心血管死亡、充血性心力衰竭、心脏停搏、急性冠脉综合征、绞痛或血管再生术；
[0112] 用于降低有在先心血管事件历史的个体中的心血管事件的方法和/或药物组合物，包括(a)鉴别、诊断或选择有在先心血管事件历史的个体，和(b)向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段，且其中所述心血管事件是心肌梗塞、中风、急性冠脉综合征、绞痛或血管再生术；
[0113] 用于在心血管事件后，降低个体死亡率的方法和/或药物组合物，包括(a)鉴别、诊断或选择有心血管事件的个体，和(b)向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段；
[0114] 用于在有至少一种心血管疾病的风险因子历史的个体中降低心血管事件的方法和/或药物组合物，包括(a)鉴别、诊断或选择有至少一种心血管疾病的风险因子历史的个体，和(b)向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段，且其中所述风险因子不是2型糖尿病、肥胖、高血糖、血脂异常、血脂过多、慢性肾衰竭、高血葡萄糖、慢性肾病、高血压、动脉粥样硬化、或代谢综合征；
[0115] 用于治疗个体中的心血管事件的方法和/或药物组合物，其中所述心血管事件是心肌梗塞、中风、充血性心力衰竭、急性冠脉综合征或绞痛，包括(a)鉴别、诊断或选择有心血管事件的个体，和(b)向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段和至少一种包含IL-1β抗体或片段以外的活性剂的其他药物组合物；
[0116] 用于治疗个体中的心血管事件的方法和/或药物组合物，其中所述心血管事件是心肌梗塞、中风、充血性心力衰竭、急性冠脉综合征或绞痛，包括(a)鉴别、诊断或选择有心血管事件的个体，和(b)向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段和(例如联合)血管再生术；
[0117] 用于降低个体在血管再生术后再狭窄的方法和/或药物组合物，包括(a)鉴别、诊断或选择有血管再生术的个体，和(b)向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段；
[0118] 用于治疗个体的急性高血压的方法和/或药物组合物，包括(a)鉴别、诊断或选择有急性高血压的个体，和(b)向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段和一种或多种抗高血压剂；
[0119] 应该理解当本说明书提供了使用具有某些性质(例如Kd值或IC50值)的IL-1β抗体或其结合片段的方法时，例如，用于降低、预防或治疗心血管事件和/或心血管疾病，包括急性心血管疾病或慢性心血管疾病时，这也意味着涉及此种抗体或其片段在制备用于这些方法的药物中的用途。此外，本公开还涵盖具有这些性质的IL-1β抗体或其结合片段，以及包含这些抗体或其片段的药物组合物，用于在本文提供的方法中，例如用于降低、预防或治疗心血管事件和/或心血管疾病，包括急性心血管疾病或慢性心血管疾病。
[0121] 图1的图显示在人个体中IV施用0.01、0.03、0.1、0.3或1.0mg/kg抗IL-1β抗体后的血清浓度。
[0122] 图2的图显示在人个体中SC施用0.03、0.1或0.3mg/kg抗IL-1β抗体后的血清浓度。
[0123] 图3的图显示在人个体中施用0.01、0.03、0.1、0.3或1.0mg/kg的抗IL-1β抗体后，第28天的CRP的中位百分数改变。
[0125] 图5的图显示在心肌梗塞动物模型中对无着丝粒区段(代表梗塞面积)、前壁(梗塞)厚度、MPI或Tei指数(联合性收缩和舒张功能障碍的标志物，和心力衰竭相关性死亡率的代表性标志物)和TAPSE(右心室功能的标志物和AMI相关性死亡率的代表性标志物)的测量。
[0126] 图6的图显示对内皮细胞释放巨噬细胞诱导的促炎细胞因子的抑制。
[0127] 图7的图显示对平滑肌细胞释放巨噬细胞诱导的细胞因子和降解酶的抑制。
[0128] 图8的图显示ApoE敲除小鼠的主动脉中的动脉粥样硬化损伤形成的降低。
[0129] 图9是en face分析的照片，显示在ApoE敲除小鼠的主动脉中的动脉粥样硬化损伤形成的降低。
[0130] 发明详述
[0131] 本公开涉及用于治疗和/或预防心血管疾病的方法和相关制备品(articles of manufacture)，包括例如急性心血管疾病或慢性心血管疾病。方法可用于降低、治疗或预防个体的心血管事件，例如心肌梗塞、中风、心血管死亡、充血性心力衰竭、心脏停搏、急性冠脉综合征、绞痛或血管再生术，包括在有心血管疾病的风险因子历史的个体中。方法还可用于降低个体在心血管事件后的死亡率。本文公开的抗IL-1β抗体或结合片段的使用提供了相对于在先可获得的选项的潜在优势，例如更大的安全性(例如，降低的副作用)、更大的疗效、靶向疾病的炎性组分，和/或减低频率的给药。
[0132] 细胞因子的白介素-1(IL-1)家族已被提示牵涉几种疾病状态，例如类风湿性关节炎(RA)、骨关节炎、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎(UC)、脓毒性休克、慢性梗阻性肺部疾病(COPD)、哮喘、移植物抗宿主病、动脉粥样硬化、成人T细胞白血病、多发性骨髓瘤、多发性硬化症、中风和阿尔茨海默氏病。IL-1家族成员包括IL-1α、IL-1β和IL-1Ra。尽管由其与IL-1受体(IL-1R1和IL-1R2)结合的能力而相关联，但这些细胞因子的每一种都是由不同基因表达且具有不同的一级氨基酸序列。此外，这些细胞因子的生理活性可以彼此区分。
[0133] 破坏IL-1受体信号传导的化合物已作为治疗IL-1介导的疾病例如某些上述疾病的治疗剂进行研究。这些化合物包括重组IL-1Ra(Amgen Inc.，Thousand Oaks，CA)、IL-1受体“陷阱”肽(Regeneron Inc.，Tarrytown，NY)、以及动物衍生的IL-1β抗体和重组IL-1β抗体及其片段。直接靶向IL-1β配体的化合物被认为提供了较好的策略，特别是当施用具有高亲和力的IL-1β抗体时。
[0134] 抗体、人源化抗体和人工程化抗体
[0135] IL-1(例如，IL-1β)结合抗体可以以下述形式提供：多克隆抗体、单克隆抗体(mAbs)、重组抗体、嵌合抗体、CDR移植抗体、全人抗体、单链抗体和/或双特异性抗体，以及通过已知技术提供的片段，包括其变体和衍生物，所述技术包括但不限于酶促切割、肽合成或重组技术。
[0136] 抗体一般包含2条重链多肽和2条轻链多肽，但也考虑具有1条重链和1条轻链的单结构域抗体、和缺乏轻链的重链抗体。基于重链恒定结构域的氨基酸序列，存在5种类型的重链，称为α、δ、ε、γ和μ。这些不同类型的重链分别产生5类抗体，IgA(包括IgA1和IgA2)、IgD、IgE、IgG和IgM，包括4个IgG亚类，即IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。基于恒定结构域的氨基酸序列，还存在2种类型的轻链，称为kappa(κ)或lambda(λ)。全长抗体包括恒定结构域和可变结构域。恒定结构域无需存在于抗体的抗原结合片段中。本文公开的抗体的抗原结合片段可以包括Fab、Fab′、F(ab′)2和F(v)抗体片段。如下文更详细地讨论的，IL-1β结合片段包括可以结合IL-1β的抗体片段和抗原结合多肽。
[0137] 抗体的重链和轻链序列，或其抗原结合片段，均包括具有3个互补决定区(CDRs)以及非CDR构架区(FRs)的可变区。除非另有说明，如本文所使用的，术语“重链”和“轻链”分别意指重链可变区和轻链可变区。重链CDRs在本文中称为CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3。轻链CDRs在本文中称为CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3。抗体序列中的可变区和CDRs可以通过下述进行鉴定：(i)根据本领域中已开发的一般法则，或(ii)将序列相对已知可变区的数据库进行比对。用于鉴定这些区域的方法在Kontermann和Dubel，编辑，Antibody Engineering，Springer，New York，NY，2001，和Dinarello等人，Current Protocols in Immunology，John Wileyand Sons Inc.，Hoboken，NJ，2000中得到描述。抗体序列数据库在下述中得到描述，并且可以通过下述获得：www.bioinf.org.uk/abs的″TheKabatman″数 据 库 (由 A.C.Martin在 the Department of Biochemistry &Molecular Biology University College London，London，England维护)，和www.vbase2.org的 VBASE2，如在Retter等 人，Nucl.Acids Res.，33(Database issue)：D671-D674(2005) 中描 述的。″Kabatman″数据库网站也包括用于鉴定CDRs的一般经验法则。除非另有说明，如本文所使用的，术语“CDR”如Kabat等人，Sequences of Immunological Interest，第5版，U.S.Department of Health and Human Services，1991中进行定义。
[0138] 多克隆抗体优选通过相关抗原和佐剂的多次皮下(sc)或腹膜内(ip)免疫注射而在动物中产生，使用本领域已知的标准技术。改善的抗体应答可以通过使用双官能剂或衍生剂使相关抗原与蛋白质缀合来获得，所述蛋白质在待免疫的物种中是免疫原性的，例如钥孔血蓝蛋白、血清白蛋白、牛甲状腺球蛋白、或大豆胰蛋白酶抑制剂，所述双官能剂或衍生剂为例如马来酰亚氨基苯甲酰磺基琥珀酰亚胺酯(通过半胱氨酸残基缀合)、N-羟基琥珀酰亚胺(通过赖氨酸残基)、戊二醛、琥珀酸酐或本领域已知的其他物质。
[0139] 单克隆抗体指得自基本上均质的一群抗体的抗体。单克隆抗体一般是高度特异性的，并且可以针对单个抗原位点，与一般包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的常规(多克隆)抗体制品不同。除了其特异性外，单克隆抗体还是有利的，因为它们由均质培养物合成，不被具有不同特异性和特征的其他免疫球蛋白污染。
[0140] 待依照本公开使用的单克隆抗体可以通过首先由Kohler等人，(Nature，256：495-7，1975)描述的杂交瘤方法进行制备，或可以通过重组DNA方法(参见例如，美国专利号4,816,567)进行制备。单克隆抗体还可以使用例如Clackson等人，(Nature 352：
624-628，1991)和Marks等人，(J.Mol Biol.222：581-597，1991)中描述的技术，从噬菌体抗体文库中分离。
624-628，1991)和Marks等人，(J.Mol Biol.222：581-597，1991)中描述的技术，从噬菌体抗体文库中分离。
[0141] 进一步考虑本公开的抗体可以以本领域众所周知和本文描述的抗体的较小抗原结合片段进行使用。本公开涵盖包括2条全长重链和2条全长轻链的IL-1(例如，IL-1β)结合抗体。可替代地，IL-β结合抗体可以是保留对于IL-1β的结合活性的构建体，例如单链抗体或“微型”抗体。此种构建体可以通过本领域已知的方法进行制备，例如PCR介导的单链抗体克隆和装配用于在大肠杆菌中表达(如Antibody Engineering，The practicalapproach series，J.McCafferty，H.R.Hoogenboom，and D.J.Chiswell，编辑，Oxford University Press，1996中描述的)。在这个类型的构建体中，抗体分子的重和轻链可变部分由cDNA进行PCR扩增。所得到的扩增子随后可以例如在第二个PCR步骤中通过接头DNA进行装配，所述接头DNA编码由氨基酸Gly和Ser组成的柔性蛋白质接头。这个接头允许可变重和轻链部分以这样的方式折叠，该方式使得抗体结合袋重新产生，并且以通常与亲本全长二聚免疫球蛋白分子相当的亲和力结合抗原。
[0142] IL-1(例如，IL-1β)结合抗体和片段包括本文公开的示例性抗体、片段和序列的变体。变体包括包含一个或多个氨基酸序列置换、缺失和/或添加的肽和多肽，其具有与本文公开的一种或多种示例性抗体、片段和序列相同或基本上相同的表位结合亲和力和特异性。因此，变体包括包含对本文公开的示例性抗体、片段和序列的一个或多个氨基酸序列置换、缺失和/或添加的肽和多肽，其中此种置换、缺失和/或添加不引起表位结合的亲和力和特异性的实质改变。例如，抗体或片段的变体可由对于抗体或片段的一个或多个改变而引起，其中该改变的抗体或片段具有与起始序列相同或基本上相同的表位结合亲和力和特异性。变体可以是天然存在的，例如等位基因变体或剪接变体，或可以是人工构建的。变体可以由编码所述变体的相应核酸分子进行制备。本发明抗体和IL-1β结合片段的变体可以在轻和/或重链氨基酸序列中具有变化，所述变化可以是天然发生的或可以通过使用重组DNA技术在体外改造天然序列而引入。天然存在的变体包括“体细胞”变体，其在抗外源抗原的抗体应答的产生过程中在体内在相应胚系(germ line)核苷酸序列中产生。
[0143] IL-1(例如，IL-1β)结合抗体和结合片段的变体也可以通过诱变技术进行制备。例如，氨基酸改变可以在整个抗体编码区随机地引入，并且所得到的变体可以就对于IL-1β的结合亲和力或其它性质进行筛选。可替代地，氨基酸改变可以在IL-1β抗体的所选择区域中引入，例如在轻和/或重链CDRs中，和/或在构架区中引入，并且所得到的抗体可以就与IL-1β的结合或某些其他活性进行筛选。氨基酸改变包括在CDR中的一个或多个氨基酸置换，从单氨基酸差异到在给定CDR例如CDR3内引入多个氨基酸变更。在另一种方法中，CDR内的每个残基对IL-1β结合的贡献可以通过用丙氨酸置换在该CDR内的至少一个残基进行评估。Lewis等人(1995)，Mol.Immunol.32：1065-72。对于与IL-1β的结合并非最佳的残基随后可以加以改变，以便确定更优化的序列。本发明也涵盖通过插入氨基酸以增加CDR例如CDR3的大小而产生的变体。例如，大多数轻链CDR3序列长9个氨基酸。抗体中短于9个残基的轻链序列可以通过插入合适的氨基酸以增加该CDR的长度，来优化与IL-1β的结合。
[0144] 变体还可以通过轻或重链的“链改组”进行制备。Marks等人(1992)，Biotechnology 10：779-83。单条轻(或重)链可以与具有重(或轻)链库(repertoire)的文库组合，并且所得到的群体就所需活性例如与IL-1β的结合进行筛选。与使用既包含重链库又包含轻链库的文库时的可能情况相比，这允许筛选与单条轻链(或重链)组合的更多不同重链(或轻链)样本。
[0145] 本公开的IL-1(例如，IL-1β)结合抗体和片段涵盖本文公开的示例性抗体、片段和序列的衍生物。衍生物包括已进行化学修饰的多肽或肽、或其变体、片段或衍生物。例子包括一个或多个聚合物，例如水溶性聚合物、N联或O联碳水化合物、糖、磷酸和/或其他此种分子的共价附着。在附着的分子的类型或位置方面，衍生物以不同于天然存在的或起始的肽或多肽的方式被修饰。衍生物还包括天然存在于肽或多肽上的一个或多个化学基团的缺失。
[0146] IL-1β结合抗体和片段可以是双特异性的。双特异性抗体或片段可以具有几种构型。例如，双特异性抗体可以类似单个抗体(或抗体片段)，但具有2个不同抗原结合位点(可变区)。双特异性抗体可以通过化学技术(Kranz等人(1981)，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，78：5807)、通过“多瘤”(polydoma)技术(美国专利号4,474,893)或通过重组DNA技术来产生。本公开的双特异性抗体可以具有对于至少2种不同表位的结合特异性，其中至少一种是IL-1β的表位。IL-1β结合抗体和片段也可以是杂抗体(heteroantibody)。杂抗体是连接在一起的2种或更多种抗体或抗体结合片段(Fab)，每种抗体或片段具有不同特异性。
[0147] 绕过单克隆抗体产生的、用于制备抗体分子的抗原结合区域的重组DNA形式的技术可以考虑用于本发明IL-1(例如，IL-1β)结合抗体和片段。将DNA克隆到细菌表达系统内。适合于实践本公开的此种技术的一个例子，使用具有前导序列的噬菌体λ载体系统，所述前导序列引起表达的Fab蛋白质移动到周质间隙(在细菌细胞膜和细胞壁之间)或分泌。可以快速产生大量功能性Fab片段，并就其与IL-1β的结合进行筛选。此种IL-1β结合剂(对于IL-1β多肽具有特异性的Fab片段)尤其包括在本公开的IL-1β结合抗体和片段内。
[0148] 本发明IL-1(例如，IL-1β)结合抗体和片段可以是人源化或人工程化抗体。如本文所使用的，人源化抗体或其抗原结合片段是重组多肽，其包含来自非人抗体的抗原结合位点的部分和人抗体的构架和/或恒定区的部分。人工程化抗体或抗体片段是已通过在特定位置处修改(例如，缺失、插入或置换)氨基酸而被改造的非人(例如，小鼠)抗体，其中所述氨基酸的修改导致减少或消除该修饰抗体在人中的任何可检测免疫原性。
[0149] 人源化抗体包括嵌合抗体和CDR移植抗体。嵌合抗体是包括与人恒定区连接的非人抗体可变区的抗体。因此，在嵌合抗体中，可变区大部分是非人的，并且恒定区是人的。嵌合抗体和用于制备其的方法在Morrison等人，Proc.Natl.Acad.Scl USA，81：6841-6855(1984)，Boulianne等 人，Nature，312：643-646(1984)，和PCT申请公 开WO
86/01533中得到描述。尽管，它们可以比小鼠单克隆抗体更少免疫原性，但嵌合抗体的施用已与针对抗体的非人部分的人抗小鼠抗体应答(HAMA)关联起来。嵌合抗体也可以通过将来自具有合适抗原结合特异性的小鼠抗体分子的基因与来自具有合适生物活性的人抗体分子的基因剪接在一起来产生，所述生物活性例如激活人补体和介导ADCC的能力。
Morrison等人(1984)，Proc.Natl.Acad.Scl，81：6851；Neuberger等人(1984)，Nature，
312：604。一个例子是将Fc区替换为不同同种型的Fc区。
86/01533中得到描述。尽管，它们可以比小鼠单克隆抗体更少免疫原性，但嵌合抗体的施用已与针对抗体的非人部分的人抗小鼠抗体应答(HAMA)关联起来。嵌合抗体也可以通过将来自具有合适抗原结合特异性的小鼠抗体分子的基因与来自具有合适生物活性的人抗体分子的基因剪接在一起来产生，所述生物活性例如激活人补体和介导ADCC的能力。
Morrison等人(1984)，Proc.Natl.Acad.Scl，81：6851；Neuberger等人(1984)，Nature，
312：604。一个例子是将Fc区替换为不同同种型的Fc区。
[0150] CDR移植抗体是包括与来自人“受体”抗体的构架区连接的来自非人“供体”抗体的CDRs的抗体。一般地，CDR移植抗体包括比嵌合抗体更多的人抗体序列，因为它们包括来自人抗体的恒定区序列和可变区(构架)序列。因此，例如，本公开的CDR移植人源化抗体可以包含重链，所述重链包含来自人抗体的构架区(例如，人抗体的FR-1、FR-2或FR-3)的连续氨基酸序列(例如，约5个或更多、10个或更多、或甚至15个或更多个连续氨基酸残基)，或任选地，人抗体的整个构架区的大多数或全部。CDR移植抗体和用于制备其的方法在Jones等人，Nature，321：522-525(1986)，Riechmann等人，Nature，332：323-327(1988)，和Verhoeyen等人，Science，239：1534-1536(1988))中得到描述。可以用于产生人源化抗体的方法也在美国专利号4,816,567、5,721,367、5,837,243和6,180,377中得到描述。CDR移植抗体被认为比嵌合抗体较不可能诱导针对非人抗体部分的免疫反应。然而，已报告来自供体抗体的构架序列是供体抗体的结合亲和力和/或特异性所需的，推测这是因为这些构架序列影响供体抗体的抗原结合部分的折叠。因此，当供体非人CDR序列被移植到无关人构建序列上时，在某些情况下，相对于最初非人供体抗体，所得到的CDR移植抗体可能显示结合亲合力的丧失。参见例如，Riechmann等人，Nature，332：323-327(1988)，和Verhoeyen等人，Science，239：1534-1536(1988)。
[0151] 人工程化抗体包括例如“镶嵌”抗体和使用HUMANENGINEERINGTM技术(美国专利TM5,869,619)制备的抗体。HUMANENGINEERING 技术是商购可得的，并且涉及改变非人抗体或抗体片段，例如小鼠或嵌合抗体或抗体片段，方式是对抗体的氨基酸序列进行特异改变，以便产生在人中具有减少的免疫原性、然而仍保留原始非人抗体的所需结合性质的修饰抗体。一般地，该技术涉及将非人(例如，小鼠)抗体的氨基酸残基分类为“低风险”、“中等风险”或“高风险”残基。分类使用总体风险/回报计算来进行，该计算评估相对于置换将影响所得抗体的折叠和/或抗原结合性质的风险，进行该具体置换的预期益处(例如，在人中的免疫原性)。因此，低风险位置是预期在该处的置换是有利的位置，因为预期这将减少免疫原性而不显著影响抗原结合性质。中等风险位置是预期在该处的置换可减少免疫原性但有较大可能影响蛋白质折叠和/或抗原结合的位置。高风险位置包含最可能参与正确折叠或抗原结合的残基。一般地，非人抗体中的低风险位置用人残基进行置换，高风险位置很少置换，和有时，但不是不受限制地，在中等风险位置处进行人源化置换。在非人抗体可变区序列中具有脯氨酸的位置通常分类为至少中等风险位置。
[0152] 在非人(例如，小鼠)抗体序列的给定低或中等风险位置处置换的特定人氨基酸残基可以通过下述进行选择：使来自非人抗体的可变区的氨基酸序列与特定或共有人抗体序列的相应区域比对。根据该比对，在非人抗体序列的低或中等风险位置处的氨基酸残基可以置换为人抗体序列中的相应残基。用于制备人工程化蛋白质的技术在Studnicka等人，ProteinEngineering，7：805-814(1994)，美国专利5,766,886、5,770,196、5,821,123和5,869,619、和PCT申请公开WO 93/11794中更详细地进行描述。
[0153] “镶嵌”抗体是非人或人源化(例如，嵌合或CDR移植抗体)抗体，其已经经过改造以替换某些暴露于溶剂的氨基酸残基，以便进一步减少其免疫原性或增强其功能。因为推测嵌合抗体的表面残基较不可能影响正确的抗体折叠但较可能引发免疫反应，所以嵌合抗体的镶嵌可以包括例如，鉴定嵌合抗体的非人构架区中暴露于溶剂的残基，和用来自人构架区的相应表面残基替换它们中的至少一个。镶嵌可以通过任何合适的工程技术来完成，TM包括上述HUMAN ENGINEERING 技术的使用。
[0154] 在一个不同方法中，可以通过使CDR移植抗体“去人源化”来恢复结合亲合力。去人源化可以包括使来自供体抗体的构架区的残基回到CDR移植抗体，从而恢复正确折叠。类似的“去人源化”可以通过下述来达到：(i)在“受体”抗体中包括“供体”构架区的部分，或(ii)将“供体”抗体构架区的部分(连同移植的供体CDRs)移植到受体抗体内。
[0155] 关于抗体、人源化抗体、人工程化抗体和用于其制备的方法的进一步讨论，参见Kontermann and Dubel，编辑，Antibody Engineering，Springer，New York，NY，2001。
[0156] 示例性人源化或人工程化抗体包括IgG、IgM、IgE、IgA和IgD抗体。本发明抗体可以是任何类型(IgG、IgA、IgM、IgE、IgD等)或同种型，并且可以包括κ或λ轻链。例如，人抗体可以包含IgG重链或确定的片段，例如至少一种同种型，IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。作为进一步例子，本发明抗体或片段可以包含IgG1重链和IgG1轻链。
[0157] 本发明抗体和片段可以是人抗体(例如结合IL-1β多肽且由如下核酸序列编码的抗体，所述核酸序列是人胚系免疫球蛋白核酸序列的天然体细胞变体)，及其片段、合成变体、衍生物和融合物。此种抗体可以通过本领域已知的任何方法来产生，例如通过使用转基因哺乳动物(例如，转基因小鼠)，其中在该哺乳动物染色体中天然的免疫球蛋白库已被人V基因替换。此种哺乳动物表现出以正常方式实现人胚系抗体基因的VDJ重组和体细胞高变，从而产生具有全人序列的高亲和力抗体。
[0158] 针对靶蛋白质的人抗体也可以使用转基因动物来产生，所述转基因动物不具有内源免疫球蛋白生产，且经改造而包含人免疫球蛋白基因座。例如，WO 98/24893公开了具有人Ig基因座的转基因动物，其中由于内源重和轻链基因座的失活，该动物不产生功能性内源免疫球蛋白。WO 91/00906还公开了能够产生针对免疫原的免疫应答的转基因非灵长类哺乳动物宿主，其中抗体具有灵长类恒定区和/或可变区，且其中内源免疫球蛋白编码基因座被置换或失活。WO 96/30498和美国专利号6,091,001公开了使用Cre/Lox系统修饰哺乳动物中的免疫球蛋白基因座，以便例如替换恒定或可变区的全部或部分，从而形成修饰的抗体分子。WO 94/02602公开了具有灭活的内源Ig基因座和功能性人Ig基因座的非人哺乳动物宿主。美国专利号5,939,598公开了制备转基因小鼠的方法，其中该小鼠缺乏内源重链，且表达包含一个或多个异种恒定区的外源免疫球蛋白基因座。还参见，美国专利号6,114,598、6,657,103和6,833,268。
[0159] 使用上文描述的转基因动物，可以产生针对所选择的抗原分子的免疫应答，可以从动物中取出抗体生产细胞，且用于产生分泌人单克隆抗体的杂交瘤。免疫接种方案、佐剂等是本领域已知的，并且可以在例如转基因小鼠的免疫接种中使用，如WO 96/33735中所述的。这个出版物公开了针对各种抗原分子的单克隆抗体，所述抗原分子包括IL-6、IL-8、TNFa、人CD4、L选择蛋白、gp39和破伤风毒素。单克隆抗体可以就抑制或中和相应蛋白质的生物活性或生理效应的能力进行测试。WO 96/33735公开了针对IL-8的单克隆抗体，其衍生自用IL-8免疫的转基因小鼠的免疫细胞、阻断IL-8诱导的嗜中性粒细胞功能。对用于免疫转基因动物的抗原具有特异性的人单克隆抗体也公开于WO 96/34096和美国专利申请号20030194404；以及美国专利申请号20030031667中。
[0160] 用 于制 备 单 克 隆 抗 体 的另 外 转 基 因 动 物 包括 在 美 国 专 利 号5,770,429 和 Fishwild 等 人 (Nat.Biotechnol.14：845-851，1996) 中 描 述 的MedarexHuMAb- 其包含来自未重排人抗体基因的编码人抗体的重和轻链的基
因序列。对HuMAb- 的免疫使得能够产生针对靶蛋白质的全人单克隆抗体。
因序列。对HuMAb- 的免疫使得能够产生针对靶蛋白质的全人单克隆抗体。
[0161] 此外，Ishida等人(Cloning Stem Cells.4：91-102，2002)描述了TransChromo TMMouse(TCMOUSE )，其包含兆碱基大小的人DNA区段，并且掺入完整的人免疫球蛋白(hIg)TM
基因座。TCMOUSE 具有hIg的全多样库，包括IgGs的所有亚类(IgG1-G4)。用各种人抗原TM
免疫接种TC MOUSE 产生包含人抗体的抗体应答。
基因座。TCMOUSE 具有hIg的全多样库，包括IgGs的所有亚类(IgG1-G4)。用各种人抗原TM
免疫接种TC MOUSE 产生包含人抗体的抗体应答。
[0162] 还参见Jakobovits等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，90：2551(1993)；Jakobovits等人，Nature，362：255-258(1993)；Bruggermann等人，Year in Immunol.，7：33(1993)；和美国专利号5,591,669、美国专利号5,589,369、美国专利号5,545,807；和美国专利公开号20020199213。美国专利公开号20030092125描述了用于使动物的免疫应答偏向所需表位的方法。人抗体也可以通过体外活化的B细胞来产生(参见美国专利号5,567,610和
5,229,275)。
5,229,275)。
[0163] 人抗体也可以通过抗体展示文库的体外筛选来产生。参见Hoogenboom等人(1991)，J.Mol.Biol.227：381；和Marks等人(1991)，J.Mol.Biol.222：581。各种包含抗体的噬菌体展示文库已得到描述，并且可以容易地制备。文库可以包含各种各样的人抗体序列，例如人Fab、Fv和scFv片段，可以针对合适靶筛选这些序列。噬菌体展示文库可以包含非抗体的肽或蛋白质，可以筛选该肽或蛋白质以鉴定IL-1β的选择性结合剂。
[0164] 用于制备重组人抗体基因库的技术的发展和用于将所编码抗体片段展示在丝状噬菌体表面上的技术的发展，已提供了直接制备人抗体的手段。通过噬菌体技术产生的抗体以抗原结合片段——通常为Fv或Fab片段——的形式在细菌中产生，且因此缺乏效应子功能。效应子功能可以通过2种策略之一而引入：这些片段可以被改造成完全抗体用于在哺乳动物细胞中表达，或改造成具有能够触发效应子功能的第二结合位点的双特异性抗体片段。
[0165] 本公开考虑用于产生靶特异性抗体或其抗原结合部分的方法，其包括下述步骤：在噬菌体上合成人抗体文库、用靶蛋白质或其部分筛选文库、分离结合靶的噬菌体、且由噬菌体获得抗体。例如，用于制备在噬菌体展示技术中使用的抗体文库的一种方法包括下述步骤：用靶抗原或其抗原性部分免疫包含人免疫球蛋白基因座的非人动物，以产生免疫应答，从免疫接种的动物中提取抗体生产细胞；从提取的细胞中分离RNA，将RNA逆转录以产生cDNA，使用引物扩增cDNA，且将cDNA插入噬菌体展示载体内，从而使得抗体在噬菌体上表达。本公开的重组靶特异性抗体可以以这种方式获得。
[0166] 噬菌体展示方法通过在丝状噬菌体表面上展示抗体库，且随后通过与所选抗原的结合来选择噬菌体，从而模拟免疫选择。一种此种技术在WO99/10494中描述，其描述了使用此种方法分离针对MPL和msk受体的高亲和力和功能性拮抗性抗体。本公开的抗体可以通过筛选重组组合抗体文库，优选地scFv噬菌体展示文库进行分离，其中所述文库可以使用由衍生自人淋巴细胞的mRNA制备的人VL和VH cDNA来制备。用于制备和筛选此种文库的方法是本领域已知的。参见例如，美国专利号5,969,108。存在用于产生噬菌体展示文库的商购可得试剂盒(例如，PharmaciaRecombinant Phage Antibody System，目录号27-9400-01；和StratageneSurfZAP.TM.phage display kit，目录号240612)。还存在其他方法和试剂可以用于产生且筛选抗体展示文库(参见例如，Ladner等人美国专利号5,223,409；Kang等人PCT公开号WO 92/18619；Dower等人PCT公开号WO 91/17271；Winter等人PCT公开号WO 92/20791；Markland等人PCT公开号WO 92/15679；Breitling等人PCT公开号WO 93/01288；McCafferty等人PCT公开号WO 92/01047；Garrard等人PCT公开号WO 92/09690；Fuchs等 人(1991)Bio/Technology 9：1370-1372；Hay等人(1992)Hum.Antibod.Hybridomas 3：81-85；Huse等人(1989)Science246：1275-1281；
McCafferty等人，Nature(1990)348：552-554；Griffiths等人(1993)EMBO J 12：725-734；
Hawkins 等 人 (1992)J.Mol.Biol.226：889-896；Clackson 等 人 (1991)Nature 352：
624-628；Gram等人(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89：3576-3580；Garrad等人(1991)Bio/Technology 9：1373-1377；Hoogenboom等人(1991)Nuc Acid Res 19：4133-4137；和Barbas等人(1991)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88：7978-7982。
McCafferty等人，Nature(1990)348：552-554；Griffiths等人(1993)EMBO J 12：725-734；
Hawkins 等 人 (1992)J.Mol.Biol.226：889-896；Clackson 等 人 (1991)Nature 352：
624-628；Gram等人(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89：3576-3580；Garrad等人(1991)Bio/Technology 9：1373-1377；Hoogenboom等人(1991)Nuc Acid Res 19：4133-4137；和Barbas等人(1991)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88：7978-7982。
[0167] 在一个实施方案中，为了分离具有所需特征的靶抗原特异性人抗体，筛选人VH和VL文库，以选择具有所需特异性的抗体片段。在这种方法中使用的抗体文库优选是如本文和本领域所述制备且筛选的scFv文库(McCafferty等人，PCT公开号WO 92/01047，McCafferty等人，(Nature348：552-554，1990)；和Griffiths等人，(EMBO J 12：725-734，1993)。scFv抗体文库优选使用靶蛋白质作为抗原进行筛选。
[0168] 可替代地，抗体的Fd片段(VH-CH1)和轻链(VL-CL)通过PCR分别进行克隆，并且在组合噬菌体展示文库中随机重组，随后可以就与特定抗原的结合进行选择。这些Fab片段在噬菌体表面上表达，即与编码其的基因物理连接。因此，通过抗原结合来选择Fab可以导致对Fab编码序列的共选择，随后可以扩增该序列。通过数轮抗原结合和再扩增(称为淘选的程序)，可以富集且最终分离对于抗原特异的Fab。
[0169] 在1994年，描述了称为“引导选择”的用于抗体人源化的方法。引导选择将噬菌体展示技术的力量用于小鼠单克隆抗体的人源化(参见Jespers，L.S.等人，Bio/Technology12，899-903(1994))。为此，小鼠单克隆抗体的Fd片段可以与人轻链文库组合展示，并且所得到的杂交Fab文库随后可以用抗原进行选择。小鼠Fd片段从而提供了引导选择的模板。
随后，使所选择的人轻链与人Fd片段文库组合。对所得到的文库的选择产生全人Fab。
随后，使所选择的人轻链与人Fd片段文库组合。对所得到的文库的选择产生全人Fab。
[0170] 用于从噬菌体展示文库获得人抗体的多种方法已得到描述(参见例如，Hoogenboom 等 人，J.Mol.Biol.，227：381(1991)；Marks 等 人，J.Mol.Biol，222：581-597(1991)；美国专利号5,565,332和5,573,905；Clackson，T.，和Wells，J.A.，TIBTECH 12，173-184(1994))。特别地，对衍生自噬菌体展示文库的抗体的体外选择和进化已成为有力工具(参见Burton，D.R.，和Barbas III，C.F.，Adv.Immunol.57，
191-280(1994)；Winter，G.等人，Annu.Rev.Immunol.12，433-455(1994)；美国专利公开号
20020004215和WO 92/01047；美国专利公开号20030190317；以及美国专利号6,054,287和5,877,293。
191-280(1994)；Winter，G.等人，Annu.Rev.Immunol.12，433-455(1994)；美国专利公开号
20020004215和WO 92/01047；美国专利公开号20030190317；以及美国专利号6,054,287和5,877,293。
[0171] Watkins，″Screening of Phage-Expressed Antibody Libraries byCapture Lift， ″ Methods in Molecular Biology，Antibody Phage Display：Methods and Protocols 178：187-193(2002)，和2003年3月6日公开的美国专利公开号20030044772描述了通过Capture Lift用于筛选噬菌体表达的抗体文库或其他结合分子的方法，Capture Lift是一种涉及将候选结合分子固定在固相载体上的方法。
[0172] Fv片段通过如下方式展示在噬菌体表面上：使作为噬菌体蛋白质融合物(例如，具有M13基因III)表达的一条链与作为可溶片段表达的互补链结合。考虑噬菌体可以是丝状噬菌体，例如I类噬菌体之一：fd、M13、f1、If1、lke、ZJ/Z、Ff，和II类噬菌体之一：Xf、Pf1和Pf3。噬菌体可以是M13或fd或其衍生物。
[0173] 一旦选择了起始人VL和VH区段，可以执行“混合和匹配”实验，以选择优选的VL/VH对组合，其中就靶的结合来筛选起始选择的VL和VH区段的不同对。此外，为了进一步改善抗体的质量，可以在类似于在天然免疫应答过程中负责抗体的亲和力成熟的体内体细胞突变过程的程序中；随机突变优选的VL/VH对的VL和VH区段，优选在VH和/或VL的CDR1、CDR2或CDR3区之任何一个中突变，。这种体外亲和力成熟可以通过使用PCR引物扩增VL和VH区来完成，所述PCR引物分别与VH CDR1、CDR2和CDR3，或VLCDR1、CDR2和CDR3互补，所述引物已在某些位置处掺加了4种核苷酸碱基的随机混合物，从而使得所产生的PCR产物编码随机突变已引入VH和/或VL CDR3区内的VL和VH区段。这些随机突变的VL和VH区段可以就与靶抗原的结合进行再筛选。
[0174] 从重组免疫球蛋白展示文库中筛选和分离靶特异性抗体后，编码所选择抗体的核酸可以从展示包(display package)(例如，自噬菌体基因组)中回收，并且通过标准重组DNA技术亚克隆到其他表达载体内。需要时，核酸可以进一步处理，以产生本公开的其他抗体形式，如下文所述。为了表达通过筛选组合文库而分离的重组人抗体，将编码抗体的DNA克隆到重组表达载体内，且引入哺乳动物宿主细胞内，如本文所述。
[0175] 考虑噬菌体展示方法可以在细菌或宿主细胞的增变株中进行。增变株是具有遗传缺陷的宿主细胞，其造成在其内复制的DNA相对于亲本DNA发生突变。示例增变菌株是NR9046mutD5和NR9046mut T1。
[0176] 还考虑噬菌体展示方法可以使用辅助噬菌体来进行。这是用于感染包含缺陷噬菌体基因组的细胞且功能在于弥补该缺陷的噬菌体。缺陷噬菌体基因组可以是其中某些功能编码基因序列被去除的噬菌粒或噬菌体。辅助噬菌体的例子是M13K07、M13K07基因III编号3；和展示或编码与衣壳蛋白融合的结合分子的噬菌体。
[0177] 抗体也可以经由噬菌体展示筛选方法来产生，其中使用如WO92/01047中公开的分层双重组合方法(hierarchical dual combinatorialapproach)，其中包含H或L链克隆的单菌落用于感染一个完整的文库，所述文库由编码另一条链(L或H)的克隆组成，并且所得到的双链特异性结合成员依照噬菌体展示技术例如本文描述的那些进行选择。这种技术也公开于Marks等人，(Bio/Technology，10：779-783，1992)中。
[0178] 用于在酵母和微生物细胞表面上展示肽的方法也已用于鉴定抗原特异性抗体。参见例如，美国专利号6,699,658。抗体文库可以与酵母蛋白质例如凝集素附着，有效地模拟在免疫系统中抗体经由B细胞的细胞表面展示。
[0179] 除噬菌体展示方法外，抗体可以使用核糖体mRNA展示方法和微生物细胞展示方法进行分离。使用核糖体展示进行的多肽选择在Hanes等人，(Proc.Natl Acad Sci USA，94：4937-4942，1997)以及授予Kawasaki的美国专利号5,643,768和5,658,754中得到描述。核糖体展示也用于抗体的快速大规模突变分析。选择性诱变方法也提供了产生具有改善活性的抗体的方法，所述抗体可以使用核糖体展示技术进行选择。
[0180] IL-1(例如IL-1β)结合抗体和片段可以包含这样的一个或多个部分，其不结合IL-1β而是负责其他功能，例如循环半衰期、直接细胞毒性效应、可检测标记、或激活接受者的内源补体级联或内源细胞毒性。抗体或片段可以包含全部或部分恒定区，并且可以具有任何同种型，包括IgA(例如，IgA1或IgA2)、IgD、IgE、IgG(例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)、或IgM。除了或代替包含恒定区，本公开的抗原结合化合物可以包括附加表位、清道夫受体(salvage receptor)表位、用于诊断或纯化用途的标签部分、或细胞毒性部分例如放射性核素或毒素。
[0181] 本发明抗体和片段的恒定区(当存在时)可以是γ1、γ2、γ3、γ4、μ、β2或δ或ε类型，优选γ类型，更优选y类型，而人轻链的恒定部分可以是κ或λ类型(其包括λ1、λ2和λ3亚型)，但优选κ类型。
[0182] 变体还包括包含经修饰的Fc区的抗体或片段，其中经修饰的Fc区包含相对于野生型Fc区的至少一个氨基酸修饰。变体Fc区可以相对于包含野生型Fc区的可比较分子进行设计，以便以更多或更小的亲和力结合Fc受体。
[0183] 例如，本发明IL-1β结合抗体和片段可以包含经修饰的Fc区。Fc区指与如下IgG C末端结构域同源的、天然存在的或合成的多肽，所述结构域在IgG的木瓜蛋白酶消化后产生。IgG Fc具有约50kD的分子量。在本发明抗体和片段中，可以使用整个Fc区，或仅半衰期增强部分。此外，氨基酸序列中的许多修饰是可接受的，因为天然活性并非在所有情况下都是必需或期望的。
[0184] 需要时，Fc区可以进行突变，以抑制其固定补体和以高亲和力结合Fc受体的能力。对于鼠类IgG Fc，Ala残基置换Glu 318、Lys 320和Lys322使得蛋白质无法指导ADCC。Glu置换Leu 235抑制蛋白质以高亲和力结合Fc受体的能力。关于人IgG的各种突变是已知的(参见例如，Morrison等人，1994，The Immunologist 2：119124和Brekke等人，1994，The Immunologist 2：125)。
[0185] 在某些实施方案中，提供了具有经修饰的Fc区的本发明抗体或片段，其中天然存在的Fc区进行修饰以增加抗体或片段在生物环境中的半衰期，例如血清半衰期或通过体外试验测量的半衰期。用于改变IgG Fc区的最初形式的方法在美国专利号6,998,253中得到描述。
[0186] 在某些实施方案中，可能希望修饰抗体或片段以便增加其血清半衰期，例如给抗体片段添加分子例如PEG或其他水溶性聚合物，包括多糖聚合物，以增加半衰期。这也可以例如通过将清道夫受体结合表位掺入抗体片段内(例如，通过抗体片段中合适区域的突变，或通过将该表位掺入肽标签内(例如借助于DNA或肽合成)，随后将肽标签融合在抗体片段的任一末端或中间)来达到(参见国际公开号WO96/32478)。清道夫受体结合表位指负责增加IgG分子的体内血清半衰期的IgG分子(例如，IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)Fc区的表位。
[0187] 清道夫受体结合表位可以包括这样的区域，其中来自Fc结构域的1个或2个环的任何一个或多个氨基酸残基被转移至抗体片段的类似位置上。更加优选地，转移来自Fc结构域的1个或2个环的3个或更多个氨基酸残基。更加优选地，表位取自Fc区(例如，IgG的Fc区)的CH2结构域，且转移至抗体的CH1、CH3或VH区或超过一个此种区域上。可替代地，表位取自Fc区的CH2结构域，且转移至抗体片段的CL区或VL区或两者。还参见国际申请WO 97/34631和WO 96/32478，其描述了Fc变体及其与清道夫受体的相互作用。
[0188] 在Fc受体结合位点内的残基的突变可以导致改变的效应子功能，例如改变的ADCC或CDC活性，或改变的半衰期。潜在突变包括一个或多个残基的插入、缺失或置换，包括用丙氨酸置换、保守置换、非保守置换、或用来自不同IgG亚类的相同位置处的相应氨基酸残基替换(例如，IgG1残基用在那个位置处的相应IgG2残基替换)。例如，已报告与原始嵌合IgG4比较，使IgG4中的氨基酸位置241的丝氨酸突变成脯氨酸(在IgG1和IgG2中的该位置处发现的残基)导致同质抗体的产生，以及延长的血清半衰期和改善的组织分布(Angal等人，Mol Immunol.30：105-8，1993)。
[0189] 抗体片段是完整全长抗体的部分，例如完整抗体的抗原结合区或可变区。抗体片段的例子包括Fab、Fab′、F(ab′)2和Fv片段；双链抗体(diabody)；线性抗体；单链抗体分子(例如，scFv)；多特异性抗体片段例如双特异性、三特异性和多特异性抗体(例如，双链抗体、三链抗体(triabody)、四链抗体(tetrabody))；微型抗体(minibody)；螯合重组抗体(chelatingrecombinant antibody)；三体(tribody)或双体(bibody)；胞内抗体；纳米抗体；小模块免疫药物(small modular immunopharmaceuticals，SMIP)、adnectins、结合结构域免疫球蛋白融合蛋白；驼源化抗体(camelizedantibody)；含VHH的抗体；和由抗体片段形成的任何其他多肽。
[0190] 本公开包括包含任何前述重或轻链序列且结合IL-1β的IL-1β结合抗体片段。如本文所使用的，术语片段指抗体的任何3个或更多个连续氨基酸(例如，4个或更多、5个或更多、6个或更多、8个或更多、或甚至10个或更多个连续氨基酸)，并且涵盖Fab、Fab′、F(ab′)2和F(v)片段、或单个轻或重链可变区或其部分。IL-1β结合片段包括例如Fab、Fab′、F(ab′)2、Fv和scFv。这些片段缺乏完整抗体的Fc片段，从循环中更快速地被清除，并且可以具有比完整抗体更少的非特异性组织结合。参见Wahl等人(1983)，J.Nucl.Med.，24：316-25。这些片段可以使用众所周知的方法由完整抗体产生，例如通过用酶例如木瓜蛋白酶(以产生Fab片段)或胃蛋白酶(以产生F(ab′)2片段)的蛋白酶解切割。
[0191] 用于测定IL-1β与IL-1受体I型(IL-1R1)的结合的体外和基于细胞的测定试验是本领域充分描述的，包括在与IL-1β或IL-1R1结合的分子(例如抗体、拮抗剂或其他抑制剂)存在下进行测定的试验。(参见例如Evans等人，(1995)，J.Biol.Chem.270：11477-11483；Vigers等人，(2000)，J.Biol.Chem.275：36927-36933；Yanofsky等 人，(1996)，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 93：7381-7386；Fredericks 等 人，(2004)，Protein Eng.Des.SeI.17：95-106；Slack 等 人，(1993)，J.Biol.Chem.268：2513-2524；Smith等人，(2003)，Immunity 18：87-96；Vigers等人，(1997)，Nature 386：190-194；
Ruggiero等人，(1997)，J.Immunol.158：3881-3887；Guo等人，(1995)，J.Biol.Chem.270：
27562-27568；Svenson等人，(1995)，Eur.J.Immunol.25：2842-2850；Arend等人，(1994)，J.Immunol.153：4766-4774)。用于此种测定试验的重组IL-1受体I型(包括人IL-1受体I型)，可从各种商业来源容易地获得(参见例如R&D Systems，SIGMA)。IL-1受体I型也可以从使用本领域已知的标准分子生物学和转染技术引入合适宿主细胞内的表达构建体或载体表达。表达的IL-1受体I型随后可以分离且纯化用于在结合测定中使用，或可替代地直接以细胞结合形式使用。
Ruggiero等人，(1997)，J.Immunol.158：3881-3887；Guo等人，(1995)，J.Biol.Chem.270：
27562-27568；Svenson等人，(1995)，Eur.J.Immunol.25：2842-2850；Arend等人，(1994)，J.Immunol.153：4766-4774)。用于此种测定试验的重组IL-1受体I型(包括人IL-1受体I型)，可从各种商业来源容易地获得(参见例如R&D Systems，SIGMA)。IL-1受体I型也可以从使用本领域已知的标准分子生物学和转染技术引入合适宿主细胞内的表达构建体或载体表达。表达的IL-1受体I型随后可以分离且纯化用于在结合测定中使用，或可替代地直接以细胞结合形式使用。
[0192] 例如，IL-1β与IL-1受体I型的结合可以通过下述进行测定：固定IL-1β结合抗体、使IL-1β与固定抗体接触且测定IL-1β是否与抗体结合，使可溶形式的IL-1RI与结合的IL-1β/抗体复合物接触，并且测定可溶IL-1RI是否与复合物结合。该方案也可以包括在与IL-1β接触前使可溶IL-1RI与固定抗体接触，以证实可溶IL-1RI不与固定抗体结合。这个方案可以使用用于结合相互作用的动力学分析的 仪器来进行。此种方案也可以用于测定抗体或其他分子是否允许或阻断IL-1β与IL-1受体I型的结合。
[0193] 对于其他IL-1β/IL-1RI结合测定试验，对IL-1β与IL-1受体I型的结合的允许或阻断可以通过下述确定：比较在IL-1β抗体或其IL-1β结合片段存在或不存在下比较IL-1β与IL-1RI的结合。在该试验的读出中阻断被鉴定为：与包含相应缓冲剂或稀释剂但不包含IL-1β抗体或其IL-1β结合片段的对照样品比较，在抗IL-1β抗体或其IL-1β结合片段存在下IL-1β与IL-1受体I型结合的指定减少。该试验读出可以定性地呈现为指示阻断的存在或不存在，或可以定量地呈现为指示由于抗体或片段的存在所致的结合减少的百分比或倍数。
[0194] 可替代地或另外地，当IL-1β结合抗体或IL-1β结合片段基本上阻断IL-1β与IL-1RI结合时，与在不存在抗体或片段的情况下相同浓度的IL-1β和IL-1RI的结合比较，IL-1β与IL-1RI的结合减少至少10倍、可替代地至少约20倍、可替代地至少约50倍、可替代地至少约100倍、可替代地至少约1000倍、可替代地至少约10000倍或更多。作为另一个例子，当IL-1β结合抗体或IL-1β结合片段基本上允许IL-1β与IL-1RI结合时，IL-1β与IL-1RI的结合是在不存在抗体或片段的情况下相同浓度的IL-1β和IL-1RI的结合的至少约90％、可替代地至少约95％、可替代地至少约99％、可替代地至少约99.9％、可替代地至少约99.99％、可替代地至少约99.999％、可替代地至少约99.9999％、可替代地基本上相同。
[0195] 在某些实施方案中，本公开可以包括IL-1β结合抗体或IL-1β结合片段，其与本文公开的一种或多种示例性抗体结合相同的表位或基本上相同的表位。可替代地或另外地，该IL-1β结合抗体或IL-1β结合片段与具有美国申请号11/472813中描述的AB7可变区序列(序列在下文显示)的抗体竞争结合。可替代地或另外地，本公开包括IL-1β结合抗体和片段，其结合氨基酸序列中包含的表位ESVDPKNYPKKKMEKRFVFNKIE(SEQID NO：3)。如本文考虑的，可以使用本领域几种已知方法中的任何一种容易地测定IL-1β结合抗体或片段是否与一种或多种示例性抗体，例如命名为AB7的抗体结合相同的表位或基本上相同的表位。
[0196] 例如，由IL-1β结合抗体或片段结合的关键氨基酸残基(表位)可以使用肽阵列TM进行测定，例如PepSpot 肽阵列(JPT Peptide Technologies，Berlin，Germany)，其中在膜上直接合成跨越整个IL-1β氨基酸序列的一系列12个氨基酸的扫描肽，每种肽与前一种肽重叠11个氨基酸。携带肽的膜随后用抗体在室温下例如以2μg/ml的浓度探测2小时，以针对所述抗体获取表位结合信息。抗体与膜结合肽的结合可以使用二级HRP缀合的山羊抗人(或适当时，小鼠)抗体，随后使用增强型化学发光(ECL)进行检测。对应于成熟IL-1β蛋白质的特定氨基酸残基或序列并且对于抗体结合具有正评分的肽点，指示由该特定抗体结合的表位。
[0197] 可替代地或另外地，可以执行抗体竞争实验，并且此种测定试验是本领域众所周知的。例如，为了测定抗体或片段是否与如下肽序列中包含的表位结合，所述肽序列包含对应于成熟IL-1β蛋白质的残基83-105的氨基酸ESVDPKNYPKKKMEKRFVFNKIE(SEQ ID NO：3)，可以将未知特异性的抗体与本公开任何示例性抗体(例如，AB7)进行比较。结合竞争测定可以例如使用用于结合相互作用的动力学分析的 仪器或通过ELISA来进行。
在此种测定中，未知表位特异性的抗体就其与已知比较抗体(例如，AB7)竞争结合的能力进行评估。与特定表位的竞争结合通过已知抗体(例如，AB7)与该IL-1β表位的结合减少至少约50％，或至少约70％、或至少约80％、或至少约90％、或至少约95％、或至少约99％或约100％来确定，并且可以指示与基本上相同的表位结合。
在此种测定中，未知表位特异性的抗体就其与已知比较抗体(例如，AB7)竞争结合的能力进行评估。与特定表位的竞争结合通过已知抗体(例如，AB7)与该IL-1β表位的结合减少至少约50％，或至少约70％、或至少约80％、或至少约90％、或至少约95％、或至少约99％或约100％来确定，并且可以指示与基本上相同的表位结合。
[0198] 鉴于本公开中鉴定了示例性抗体的IL-1β结合区域和/或这些公开抗体所识别的表位，可以考虑产生具有相似结合特征和治疗或诊断用途的其它抗体，其是与本公开的实施方案平行的实施方案。
[0199] 抗体的抗原结合片段包括保留与抗原特异性结合的能力(一般通过保留抗体的抗原结合部分)的片段。已经充分确立了抗体的抗原结合功能可以通过全长抗体的片段来实现。抗原结合部分的例子包括(i)Fab片段，其为由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；(ii)F(ab′)2片段，其为包含在铰链区处由二硫桥连接的2个Fab片段的二价片段；(iii)Fd片段，其为VH和CH1结构域；(iv)Fv片段，其为抗体单臂的VL和VH结构域，(v)dAb片段(Ward等人，(1989)Nature 341：544-546)，其为VH结构域；和(vi)分离的互补决定区(CDR)。单链抗体也包含在术语抗体的抗原结合部分内。本公开的IL-1β结合抗体和片段也涵盖单价或多价、或者单体或多聚体(例如，四聚体)、含或不含支架(例如，蛋白质或碳水化合物支架)的CDR衍生的结合结构域。
[0200] 本发明的IL-1β结合抗体或片段可以是较大免疫粘附分子的部分，通过抗体或抗体部分与一个或多个其他蛋白质或肽的共价或非共价结合而形成。此种免疫粘附分子的例子包括使用链霉亲和素核心区以构成四聚体scFv分子(Kipriyanov，S.M.等人(1995)Human Antibodies andHybridomas 6：93-101)，和使用半胱氨酸残基、标记肽和C末端多组氨酸标签以构成二价和生物素化的scFv分子(Kipriyanov，S.M.等人(1994)Mol.Immunol.31：1047-1058)。包含抗体和片段的免疫粘附分子可以使用标准重组DNA技术来获得，如本文所述。优选的抗原结合部分是完整结构域或完整结构域对。
[0201] 本公开的IL-1β结合抗体和片段也涵盖由VH结构域组成的结构域抗体(dAb)片段(Ward等人，Nature 341：544-546，1989)。本公开的IL-1β结合抗体和片段也涵盖双链抗体，它是二价抗体，其中VH和VL结构域在单条多肽链上表达，但使用的接头太短而不允许相同链上的2个结构域之间发生配对，从而迫使这些结构域与另一条链的互补结构域配对，产生2个抗原结合位点(参见例如，EP 404,097；WO 93/11161；Holliger等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：6444-6448，1993，和Poljak等人，Structure 2：1121-1123，1994)。双链抗体可以是双特异性或单特异性的。
[0202] 本公开的IL-1β结合抗体和片段也涵盖与IL-1β结合的单链抗体片段(scFv)。scFv包含与抗体轻链可变区(VL)可操作地连接的抗体重链可变区(VH)，其中重链可变区和轻链可变区一起或各自地形成结合IL-1β的结合位点。scFv可以包含在氨基末端处的VH区和在羧基末端处的VL区。可替代地，scFv可以包含在氨基末端处的VL区和在羧基末端处的VH区。此外，尽管Fv片段的2个结构域VL和VH由分开的基因编码，但它们可以使用重组方法通过合成接头而连接，所述合成接头使得它们能够被制备成单条多肽链，其中VL和VH区配对以形成单价分子(称为单链Fv(scFv)；参见例如Bird等人(1988)Science 242：
423-426；和Huston等人(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85：5879-5883)。
423-426；和Huston等人(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85：5879-5883)。
[0203] scFv可以任选地进一步包含在重链可变区和轻链可变区之间的多肽接头。此种多肽接头一般包含1-50个氨基酸，可替代地3-12个氨基酸，可替代地2个氨基酸。用于连接scFv中的重和轻链的接头肽的例子包括5氨基酸序列Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(SEQ ID NO：6)。其他例子包括这个序列的一个或多个串联重复(例如，包含Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(SEQ ID NO：6)的2-4个重复的多肽)，以产生接头。
[0204] 本公开的IL-1β结合抗体和片段也涵盖重链抗体(HCAb)。在驼类动物(camelids)(骆驼(camel)、单峰驼(dromedary)和美洲驼(llama)；Hamers-Casterman等人，1993Nature 363：446；Nguyen等人，1998J.Mol.Biol.275：413)、毯状鲨(Nuttall等 人，Mol Immunol.38：313-26，2001)、 护 士 鲨 (Greenberg 等 人，Nature 374：
168-73，1995；Roux 等 人，1998Proc.Nat.Acad.Sci.USA 95：11804)和 科 氏 兔 银 鲛(Nguyen等 人， ″Heavy-chainantibodies in Camelidae；a case of evolutionary innovation，″2002Immunogenetics 54(1)：39-47)的某些免疫球蛋白同种型中发现常规抗体H2L2结构的例外。这些抗体看起来可以仅使用重链可变区形成抗原结合区域，因为这些功能抗体是仅重链的二聚体(称为“重链抗体”或“HCAbs”)。因此，本发明的IL-1β结合抗体和片段的某些实施方案可以是与IL-1β特异性结合的重链抗体。例如，IgG类的且缺乏轻链的重链抗体由驼科(camelidae)动物产生，所述驼科动物包括骆驼、单峰驼和美洲驼(Hamers-Casterman等人，Nature 363：446-448(1993))。HCAbs具有约95kDa而不是常规IgG抗体的约160kDa的分子量。它们的结合结构域仅由重链可变结构域组成，通常称为VHH以使其与常规VH区分。Muyldermans等人，J.Mol.Recognit.12：131-140(1999)。
重链抗体的可变结构域有的称为纳米抗体(Cortez-Retamozo等人，Cancer Research64：
2853-57，2004)。纳米抗体文库可以如Conrath等人，(AntimicrobAgents Chemother 45：
2807-12，2001)中所述由免疫接种的单峰驼产生或使用重组方法来产生。
168-73，1995；Roux 等 人，1998Proc.Nat.Acad.Sci.USA 95：11804)和 科 氏 兔 银 鲛(Nguyen等 人， ″Heavy-chainantibodies in Camelidae；a case of evolutionary innovation，″2002Immunogenetics 54(1)：39-47)的某些免疫球蛋白同种型中发现常规抗体H2L2结构的例外。这些抗体看起来可以仅使用重链可变区形成抗原结合区域，因为这些功能抗体是仅重链的二聚体(称为“重链抗体”或“HCAbs”)。因此，本发明的IL-1β结合抗体和片段的某些实施方案可以是与IL-1β特异性结合的重链抗体。例如，IgG类的且缺乏轻链的重链抗体由驼科(camelidae)动物产生，所述驼科动物包括骆驼、单峰驼和美洲驼(Hamers-Casterman等人，Nature 363：446-448(1993))。HCAbs具有约95kDa而不是常规IgG抗体的约160kDa的分子量。它们的结合结构域仅由重链可变结构域组成，通常称为VHH以使其与常规VH区分。Muyldermans等人，J.Mol.Recognit.12：131-140(1999)。
重链抗体的可变结构域有的称为纳米抗体(Cortez-Retamozo等人，Cancer Research64：
2853-57，2004)。纳米抗体文库可以如Conrath等人，(AntimicrobAgents Chemother 45：
2807-12，2001)中所述由免疫接种的单峰驼产生或使用重组方法来产生。
[0205] 因为不存在第一个恒定结构域(CH1)(由于缺失剪接共有信号故在mRNA加工过程中被剪接掉)，所以可变结构域(VHH)之后紧接为铰链区、CH2和CH3结构域(Nguyen等人，Mol.Immunol.36：515-524(1999)；Woolven等人，Immunogenetics 50：98-101(1999))。驼科VHH据报告与IgG2和IgG3恒定区重组，所述IgG2和IgG3恒定区包含铰链、CH2和CH3结构域且缺乏CH1结构域(Hamers-Casterman等人，同上引文)。例如，美洲驼IgG1是常规(H2L2)抗体同种型，其中VH与包含铰链、CH1、CH2和CH3结构域的恒定区重组，而美洲驼IgG2和IgG3是仅重链的同种型，其缺乏CH1结构域且不包含轻链。
[0206] 尽管HCAbs缺乏轻链，但它们具有抗原结合库(repereoire)。HCAbs的遗传产生机制在Nguyen等人Adv.Immunol 79：261-296(2001)和Nguyen等人，Immunogenetics 54：39-47(2002)中得到综述。鲨鱼，包括护士鲨，显示相似的含抗原受体的单个单体V结构域。
Irving等人，J.Immunol.Methods 248：31-45(2001)；Roux等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA
95：11804(1998)。
Irving等人，J.Immunol.Methods 248：31-45(2001)；Roux等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA
95：11804(1998)。
[0207] VHH包含小的完整抗原结合片段(例如，约15kDa，118-136个残基的片段)。已发现驼科VHH结构域以高亲和力与抗原结合(Desmyter等人，J.Biol Chem.276：26285-90，2001)，其中VHH亲和力一般在纳摩尔范围内，并且可与Fab和scFv片段的亲和力相当。VHH是高度可溶的且比Fab和scFv片段的相应衍生物更稳定。VH片段相对难以以可溶形式产生，但当构架残基改变成更VHH样时，可以获得可溶性和特异性结合的改善。(参见例如，Reichman等人，J Immunol Methods 1999，231：25-38.)。VHH携带使得其更亲水且阻止与BiP(免疫球蛋白重链结合蛋白质)长期相互作用的氨基酸置换，正常在折叠和装配过程中Bip将在内质网(ER)中与H链结合，直至它被L链替换。因为VHH增加的亲水性，所以改善了从ER中的分泌。
[0208] 功能性VHH可以通过蛋白酶解切割所免疫的驼类动物的HCAb，通过从所免疫的驼类动物的B细胞(导致重组VHH)、或从天然的或合成的文库中直接克隆VHH基因，而获得。具有所需抗原特异性的VHH也可以通过噬菌体展示技术来获得。与Fabs或scFvs比较，在噬菌体展示中使用VHH更简单且更有效，因为仅需要克隆且表达1个结构域以获得功能抗原结合片段。Muyldermans，Biotechnol.74：277-302(2001)；Ghahroudi等人，FEBS Lett.414：521-526(1997)；和van der Linden等人，J.Biotechnol.80：261-270(2000)。用于产生具有驼科重链的抗体的方法也在美国专利申请号20050136049和20050037421中得到描述。
[0209] 核糖体展示方法可以用于鉴定且分离具有所需结合活性和亲和力的scFv和/或VHH分子。Irving等人，J.Immunol.Methods 248：31-45(2001)。核糖体展示和选择具有产14
生和展示大型文库(10 )的潜力。
生和展示大型文库(10 )的潜力。
[0210] 其他实施方案提供通过驼源化过程产生的VHH样分子，在该过程中修饰非驼科VH，例如人VHH，以改善其溶解性且阻止非特异性结合。这通过用VHH样残基替换VH的VL侧上的残基来达到，从而模拟更可溶的VHH片段。当在体内施用于患者时，驼源化VH片段，特别是基于人构架的那些，预期显示出大大减少的免疫应答，并且因此预期具有用于治疗应用的显著优点。Davies等人，FEBS Lett.339：285-290(1994)；Davies等人，Protein Eng.9：531-537(1996)；Tanha等人，J.Biol.Chem.276：24774-24780(2001)；和Riechmann等人，Immunol.Methods 231：25-38(1999)。
[0211] 广泛多样的表达系统可用于产生IL-1β片段，包括Fab片段、scFv和VHH。例如，原核和真核起源的表达系统可以用于大规模生产抗体片段和抗体融合蛋白。特别有利的是允许将大量抗体片段分泌到培养基中的表达系统。
[0212] 双特异性Fab-scFv(“双体”)和三特异性Fab-(scFv)(2)(“三体”)的产生在Schoonjans等人(J Immunol.165：7050-57，2000)和Willems等人(J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci.786：161-76，2003)中得到描述。对于双体或三体，使scFv分子与VL-CL(L)和VH-CH1(Fd)链中的一个或两个融合，例如为了产生三体，使2个scFvs与Fab的C末端融合，而在双体中，使1个scFv与Fab的C末端融合。由经由肽接头(无铰链)或经由IgG铰链与CH3融合scFv组成的“微型抗体”已在Olafsen等人，Protein Eng Des SeI.2004Apr；17(4)：315-23中得到描述。
[0213] 胞内抗体是显示细胞内表达且可以操作细胞内蛋白质功能的单链抗体(Biocca等 人，EMBO J.9：101-108，1990；Colby等 人，Proc Natl AcadSci USA.101：17616-21，2004)。包含如下细胞信号序列的胞内抗体可以如Mhashilkar等人(EMBO J 14：1542-51，
1995)和Wheeler等人(FASEBJ.17：1733-5.2003)中所述产生，所述细胞信号序列使抗体构建体保留在细胞内区域中。穿膜抗体(transbody)是可穿过细胞的抗体，其中蛋白质转导结构域(PTD)与单链可变片段(scFv)抗体融合。Heng等人，(MedHypotheses.64：
1105-8，2005)。
1995)和Wheeler等人(FASEBJ.17：1733-5.2003)中所述产生，所述细胞信号序列使抗体构建体保留在细胞内区域中。穿膜抗体(transbody)是可穿过细胞的抗体，其中蛋白质转导结构域(PTD)与单链可变片段(scFv)抗体融合。Heng等人，(MedHypotheses.64：
1105-8，2005)。
[0214] 本公开的IL-1β结合抗体和片段也涵盖这样的抗体，其为SMIPs或对于靶蛋白质特异的结合结构域免疫球蛋白融合蛋白。这些构建体是包含与免疫球蛋白结构域融合的抗原结合结构域的单链多肽，所述免疫球蛋白结构域是执行抗体效应子功能所需的。参见例如，WO03/041600、美国专利申请20030133939和美国专利申请20030118592。
[0215] 本公开的IL-1β结合抗体和片段也涵盖免疫粘附素。一个或多个CDRs可以共价或非共价地掺入分子内，以使其成为免疫粘附素。免疫粘附素可以掺入CDR(s)作为较大多肽链的部分，可以使CDR(s)与另一条多肽链共价连接，或可以非共价掺入CDR(s)。本文公开的CDRs允许免疫粘附素与IL-1β特异性结合。
[0216] 本公开的IL-1β结合抗体和片段也涵盖抗体模拟物，其包含在有机或分子支架(例如蛋白质或碳水化合物支架)上构建的一个或多个IL-1β结合部分。具有相对限定的三维结构、通常称为蛋白质支架的蛋白质，可以用作试剂用于设计抗体模拟物。这些支架一般包含一个或多个易接受特异的或随机的序列变异的区域，通常对此类序列随机化以产生蛋白质文库，由其中可以选择出期望的产物。例如，抗体模拟物可以包含具有免疫球蛋白样结构域的嵌合非免疫球蛋白结合多肽，所述多肽包含具有2个或更多个溶剂暴露环的支架，所述溶剂暴露环含有插入每个环内的来自亲本抗体的不同CDR，并对亲本抗体所结合的配体显示出选择性结合活性。已提出非免疫球蛋白的蛋白质支架用于获得具有新结合性质的蛋白质。(Tramontano等人，J.Mol.Recognit.7：9，1994；McConnell和Hoess，J.Mol.Biol.250：460，1995)。其他蛋白质已作为构架进行测试，并且已用于在α螺旋表面上(Nord等人，Nat.Biotechnol.15：772，1997；Nord等人，Protein Eng.8：601，1995)，在α螺旋束的α螺旋之间的环上(Ku和Schultz，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 92：
6552，1995)，和在由二硫桥约束的环上，例如小蛋白酶抑制剂的那些环上(Markland等人，Biochemistry 35：8045，1996；Markland等人，Biochemistry 35：8058，1996；Rottgen和Collins，Gene 164：243，1995；Wang等人，J.Biol.Chem.270：12250，1995)展示随机化的残基。关于将支架用于抗体模拟物的方法公开于美国专利5,770,380以及美国专利申请
2004/0171116、2004/0266993和2005/0038229中。
6552，1995)，和在由二硫桥约束的环上，例如小蛋白酶抑制剂的那些环上(Markland等人，Biochemistry 35：8045，1996；Markland等人，Biochemistry 35：8058，1996；Rottgen和Collins，Gene 164：243，1995；Wang等人，J.Biol.Chem.270：12250，1995)展示随机化的残基。关于将支架用于抗体模拟物的方法公开于美国专利5,770,380以及美国专利申请
2004/0171116、2004/0266993和2005/0038229中。
[0217] 用于本文方法的抗IL-1β结合抗体或其结合片段一般以高亲和力与IL-1β结合(例如，如用BIACORE测定的)。在优选的实施方案中，抗体或其片段结合IL-1β，具有平衡结合解离常数(KD)为约10nM或更少、约5nM或更少、约1nM或更少、约500pM或更少，约250pM或更少、约100pM或更少、约50pM或更少或，约25pM或更少。在特别优选的实施方案中，抗体或抗体片段结合人IL-1β，解离常数为约100pM或更少、约50pM或更少、约10pM或更少、约5pM或更少、约3pM或更少、约1pM或更少、约0.75pM或更少、约0.5pM或更少、约0.3pM或更少、约0.2pM或更少，或约0.1pM或更少。在特别优选的实施方案中，抗体或抗体片段结合人IL-1β，解离常数为约10pM或更少。
[0218] 如通过酶联免疫吸附测定(ELISA)测定的，本公开的抗体或片段可以例如以约10nM或更少，约5nM或更少、约2nM或更少、约1nM或更少、约0.75nM或更少、约0.5nM或更少、约0.4nM或更少、约0.3nM或更少、或甚至约0.2nM或更少的IC50与IL-1β结合。优选地，本公开的抗体或抗体片段不与除IL-1外的任何靶交叉反应。例如，本发明抗体和片段可以与IL-1β结合，但不与IL-1α可检测地结合，或相对于其与IL-1α的结合，其与IL-1β的结合具有高至少约100倍(例如，至少约150倍、至少约200倍、或甚至至少约250倍)的选择性。在某些实施方案中，与在未施用本公开的抗体或片段的IL-1β刺激的动物中的血清IL-6水平比较，根据本公开使用的抗体或片段可以使动物中IL-1β诱导的血清IL-6表达受到至少50％(例如，至少60％、至少70％、或甚至至少80％)的抑制。抗体可以结合IL-1β，但允许或基本上允许结合的IL-1β配体与IL-1受体I型(IL-RI)结合。
与阻断或基本上干扰IL-1β与IL-1RI结合的许多已知IL-1β结合抗体不同，命名为AB5和AB7(美国申请号11/472813)的抗体与IL-1β配体选择性结合，但允许结合的IL-1β配体与IL-1RI结合。例如，命名为AB7的抗体与IL-1β表位结合，但仍允许结合的IL-1β与IL-1RI结合。在某些实施方案中，抗体可以减少结合的IL-1β与IL-1RI的相互作用的亲和力。因此，在一个相关方面，本公开提供了具有至少一个上述特征的IL-1β结合抗体或IL-1β结合抗体片段的用途。如本文所述，本公开的任何前述抗体、抗体片段或多肽都可以是人源化的或人工程化的。
与阻断或基本上干扰IL-1β与IL-1RI结合的许多已知IL-1β结合抗体不同，命名为AB5和AB7(美国申请号11/472813)的抗体与IL-1β配体选择性结合，但允许结合的IL-1β配体与IL-1RI结合。例如，命名为AB7的抗体与IL-1β表位结合，但仍允许结合的IL-1β与IL-1RI结合。在某些实施方案中，抗体可以减少结合的IL-1β与IL-1RI的相互作用的亲和力。因此，在一个相关方面，本公开提供了具有至少一个上述特征的IL-1β结合抗体或IL-1β结合抗体片段的用途。如本文所述，本公开的任何前述抗体、抗体片段或多肽都可以是人源化的或人工程化的。
[0219] 本领域已知的各种IL-1(例如，IL-1β)抗体和片段可以根据本文提供的方法使用，包括例如下述专利和专利申请中描述的抗体或使用下述专利和专利申请中描述的方法获得的抗体：US 4,935,343；US 2003/0026806；US 2003/0124617(例如，抗体AAL160)；WO 2006/081139(例如，抗体9.5.2)；WO 03/034984；WO 95/01997(例如，抗体SK48-E26VTKY)；U.S.7,446,175(例如，抗体ACZ 885)；WO 03/010282(例如，抗体Hu007)；WO 03/073982(例如，抗体N55S)；U.S.7,541,033(例如，W17、U43、W13、W18、W20)；U.S.7,491,392；WO 2004/072116、WO 2004/067568、EP 0 267 611B1、EP 0 364 778B1和美国申请号11/472813。作为非限制性例子，抗体AB5和AB7(美国申请号11/472813、WO2007/002261)可以依照本公开来使用。AB5和AB7的可变区序列如下：
[0220] AB7
[0221] 轻链
[0222] DIQMTQSTSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLSWYQQKPGKAVKLLIYYTSKLHSGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQQEDFATYFCLQGKMLPWTFGQGTKLEIK(SEQ IDNO：1)
[0223] 有下划线的序列描述(从左到右)CDR1、2和3。
[0224] 重链
[0225] QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCSFSGFSLSTSGMGVGWIRQPSGKGLEWLAHIWWDGDESYNPSLKSRLTISKDTSKNQVSLKITSVTAADTAVYFCARNRYDPPWFVDWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：2)
[0226] 有下划线的序列描述(从左到右)CDR1、2和3。
[0227] AB5
[0228] 轻链
[0229] DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISNYLSWYQQKPDGTVKLLIYYTSKLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCLQGKMLPWTFGGGTKLEIK(SEQ IDNO：4)
[0230] 有下划线的序列描述(从左到右)CDR1、2和3。
[0231] 重链
[0232] QVTLKESGPGILKPSQTLSLTCSFSGFSLSTSGMGVGWIRQPSGKGLEWLAHIWWDGDESYNPSLKTQLTISKDTSRNQVFLKITSVDTVDTATYFCARNRYDPPWFVDWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：5)
[0233] 有下划线的序列描述(从左到右)CDR1、2和3。
[0234] 在一些实施方案中，用于任何和/或所有的本文公开方法中的IL-1β抗体或其片段可以约1nM或更少的解离常数与人IL-1β结合。在一些实施方案中，抗体或片段结合人IL-1β的解离常数为约500pM或更少。在一些实施方案中，抗IL-1β结合抗体或其结合片段结合人IL-1β的解离常数为约250pM或更少。在一些实施方案中，抗IL-1β结合抗体或其结合片段结合人IL-1β的解离常数为约100pM或更少。在一些实施方案中，抗体或片段结合人IL-1β的解离常数为约50pM或更少。在一些实施方案中，抗体或片段结合人IL-1β的解离常数为约10pM或更少。在一些实施方案中，抗体或片段结合人IL-1β的解离常数为约5pM或更少。在一些实施方案中，抗体或片段结合人IL-1β的解离常数为约1pM或更少。在一些实施方案中，抗体或片段结合人IL-1β的解离常数为约0.3pM或更少。
[0235] 在一些实施方案中，抗IL-1β结合抗体或其结合片段是中和抗体。
[0236] 在一些实施方案中，抗IL-1β结合抗体或其结合片段结合IL-1β表位，使得所述结合抗体或片段基本允许IL-1β与IL-1受体(IL-1RI)的结合。
[0237] 在一些实施方案中，抗IL-1β结合抗体或其结合片段不与IL-1α、IL-1R或IL-1Ra可检测的结合。
[0238] 在一些实施方案中，抗IL-1β结合抗体或其结合片段与具有SEQ IDNO：1的轻链可变区和SEQ ID NO：2的重链可变区的抗体竞争结合。在任何上述方法的一些实施方案中，抗IL-1β结合抗体或其结合片段结合的表位与具有SEQ ID NO：1的轻链可变区和SEQ ID NO：2的重链可变区的抗体结合的表位相同或基本相同。在任何上述方法的一些实施方案中，抗IL-1β结合抗体或其结合片段包括SEQ ID NO：1的轻链可变区和SEQ IDNO：2的重链可变区。
[0239] 在一些实施方案中，抗IL-1β结合抗体或其结合片段与IL-1β中包含Glu64的表位结合。
[0240] 在一些实施方案中，抗IL-1β结合抗体或其结合片段与IL-1β的N末端的氨基酸1-34结合。
[0241] 在一些实施方案中，抗IL-1β结合抗体或其结合片段是人源化的或人的。
[0242] 本公开还提供了抗IL-1β结合抗体或其结合片段的用途，所述结合抗体或结合片段在测量IL-1β诱导的IL-8生产的人全血IL-1β抑制测定中，具有比IL-1β受体拮抗剂更低的IC50，用于生产用于降低、预防或治疗心血管事件或心血管疾病的组合物。
[0243] 在另一个方面，方法包括施用治疗有效量的抗IL-1β抗体或其片段，其中所述抗体或其片段在测量IL-1β诱导的IL-8生产的人全血IL-1β抑制测定中具有比IL-1β受体拮抗剂更低的IC50。在一个实施方案中，在测量IL-1β诱导的IL-8生产的人全血IL-1β抑制测定中，抗体或片段具有的IC50低于IL-1β受体拮抗剂的IC50的约90％、80％、70％、60％、50％。在另一个实施方案中，在测量IL-1β诱导的IL-8生产的人全血IL-1β抑制测定中，抗体或片段具有的IC50低于IL-1β受体拮抗剂的IC50的约40％、30％、20％、10％。
在优选的实施方案中，在测量IL-1β诱导的IL-8生产的人全血IL-1β抑制测定中，抗体或片段具有的IC50低于IL-1β受体拮抗剂的IC50的约8％、5％、4％、3％、2％、1％。在一个实施方案中，IL-1β受体拮抗剂是阿那白滞素(即， )。
在优选的实施方案中，在测量IL-1β诱导的IL-8生产的人全血IL-1β抑制测定中，抗体或片段具有的IC50低于IL-1β受体拮抗剂的IC50的约8％、5％、4％、3％、2％、1％。在一个实施方案中，IL-1β受体拮抗剂是阿那白滞素(即， )。
[0244] 在另一个方面，本文提供的方法包括向个体施用治疗有效量的抗IL-1β抗体或其片段，其中相比对照抗体，所述抗体或其片段在小鼠中提供了IL-1β刺激的IL-6释放的体内抑制，使用Economides等人，Nature Med.，9：47-52(2003)描述的测定，其通过引用整合到本文中。在一个实施方案中，相比对照抗体，抗体或片段在小鼠中提供至少约10％、20％、30％、40％、50％的IL-1β刺激的IL-6释放的体内抑制。在另一实施方案中，相比对照抗体，抗体或片段在小鼠中提供至少约60％、70％、80％、90％、95％的IL-1β刺激的IL-6释放的体内抑制。在一个实施方案中，对照抗体是同种型对照抗体。
[0245] 在另一个方面，本公开提供了这样的方法，包括向人施用治疗有效量的抗IL-1β抗体或其片段，其中相比未使用抗体的对照，所述抗体或其片段在人全血中抑制表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)诱导的细胞因子生产。在一个实施方案中，相比对照，抗体或片段提供了在人全血中对表皮葡萄球菌诱导的细胞因子生产更高水平的抑制，高至少约10％、20％、30％、40％、50％。在另一实施方案中，相比对照抗体，抗体或片段提供了在人全血中对表皮葡萄球菌诱导的细胞因子生产更高水平的抑制，高至少约60％、70％、80％、90％、95％。在一个实施方案中，抑制的细胞因子是IL-1β、IL-1a、IL-6、IL-8、IL-1Ra、TNFα或IFNγ。
[0246] 本文描述的抗体和抗体片段可以通过任何合适的方法进行制备。用于制备此种抗体和抗体片段的合适方法是本领域已知的。用于制备抗体和抗体片段的其他方法如本文所描述的作为本公开的部分。如本文所描述的，本公开的抗体、抗体片段或多肽可以分离或纯化至任何程度。如本文所使用的，分离的化合物是已从其天然环境中取出的化合物。纯化的化合物是在纯度方面已增加的化合物，从而与其(i)在其天然环境中时或(ii)当在实验室条件下最初合成和/或扩增时比较，该化合物以更纯的形式存在，其中“纯度”是相对术语，不一定指“绝对纯度”。
[0247] 药物组合物
[0248] 根据本公开使用的IL-1(例如，IL-1β)结合抗体和抗体片段可以配制在组合物，特别是药物组合物中，用于在本文的方法中使用。此种组合物包含与合适载体混合的治疗或预防有效量的本公开的IL-1β结合抗体或抗体片段，所述载体例如药学上可接受的物质。一般地，为了给动物施用，在配制于药物组合物中之前，充分纯化本公开的IL-1β结合抗体和抗体片段。
[0249] 药学上可接受的物质包括载体、赋形剂、稀释剂、抗氧化剂、防腐剂、着色剂、调味剂和稀释剂、乳化剂、悬浮剂、溶剂、填充剂、增量剂(bulkingagent)、缓冲剂、递送媒介物、张力剂、共溶剂、湿润剂、络合剂、缓冲物质、抗微生物剂和表面活性剂。
[0250] 中性缓冲盐水或与白蛋白混合的盐水是示例性合适的载体。药物组合物可以包括抗氧化剂例如抗坏血酸；低分子量多肽；蛋白质，例如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水聚合物例如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸例如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂例如EDTA；糖醇例如甘露糖醇或山梨糖醇；成盐抗衡离子例如钠；和/或非离子型表面活性剂例如Tween、普流尼克(pluronics)或聚乙二醇(PEG)。此外，例如，合适的张力增强剂包括碱金属卤化物(优选氯化钠或钾)、甘露糖醇、山梨糖醇等。合适的防腐剂包括苯扎氯铵、硫柳汞、苯乙醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、氯己定、山梨酸等。过氧化氢也可以用作防腐剂。合适的共溶剂包括甘油、丙二醇和PEG。合适的络合剂包括咖啡因、聚乙烯吡咯烷酮、β-环糊精或羟丙基-β-环糊精。合适的表面活性剂或湿润剂包括脱水山梨糖醇酯、聚山梨醇酯例如聚山梨醇酯80、氨基丁三醇、卵磷脂、胆固醇、tyloxapal等。缓冲剂可以是常规缓冲剂例如乙酸盐、硼酸盐、柠檬酸盐、磷酸盐、碳酸氢盐或Tris-HCl。乙酸盐缓冲液可以是约pH 4-5.5，和Tris缓冲液可以是约pH 7-8.5。另外的药学物质在Remington′sPharmaceutical Sciences，第18版，A.R.Gennaro，编辑，Mack PublishingCompany，1990中阐述。
[0251] 组合物可以是液体形式或冻干或冷冻干燥形式，并且可以包括一种或多种冷冻防护剂、赋形剂、表面活性剂、高分子量结构添加剂和/或增量剂(参见例如美国专利6,685,940、6,566,329和6,372,716)。在一个实施方案中，包括冷冻防护剂，其为非还原糖例如蔗糖、乳糖或海藻糖。一般包括的冷冻防护剂的量使得在重构后所得到的制剂将是等渗的，尽管高渗或略微低渗的制剂也可以是合适的。此外，冷冻防护剂的量应足以阻止蛋白质在冻干后不可接受量的降解和/或聚集。在冻干前制剂中对于糖(例如，蔗糖、乳糖、海藻糖)而言示例性冷冻防护剂浓度是约10mM-约400mM。在另一个实施方案中，包括表面活性剂，例如非离子型表面活性剂和离子型表面活性剂，例如聚山梨醇酯(例如聚山梨醇酯
20、聚山梨醇酯80)；泊洛沙姆(例如泊洛沙姆188)；聚(乙二醇)苯基醚(例如Triton)；
十二烷基硫酸钠(SDS)；月桂基硫酸钠；辛基糖苷钠；月桂基-、肉豆蔻基-、亚油基-或硬脂基-磺基甜菜碱；月桂基-、肉豆蔻基-、亚油基-或硬脂基-肌氨酸；亚油基-、肉豆蔻基-或鲸蜡基-甜菜碱；月桂酰氨基丙基-、椰油酰氨基丙基-、亚油酰氨基丙基-、肉豆蔻酰氨基丙基-、棕榈酰氨基丙基-或异硬脂酰氨基丙基-甜菜碱(例如月桂酰氨基丙基)；肉豆蔻酰氨基丙基-、棕榈酰氨基丙基-或异硬脂酰氨基丙基-二甲胺；甲基椰油酰基牛磺酸钠或TM
甲基油基-牛磺酸二钠；和MONAQUAT 系列(Mona Industries，Inc.，Paterson，NJ.)、聚乙二醇、聚丙二醇、以及乙二醇和丙二醇的共聚物(例如普流尼克、PF68等)。可以存在于预冻干制剂中的表面活性剂的示例性量是约0.001-0.5％。高分子量结构添加剂(例如充填剂、粘合剂)可以包括例如阿拉伯树胶、白蛋白、海藻酸、磷酸钙(二代)、纤维素、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、微晶纤维素、葡聚糖、糊精、dextrates、蔗糖、tylose、预糊化淀粉、硫酸钙、直链淀粉、甘氨酸、膨润土、麦芽糖、山梨糖醇、乙基纤维素、磷酸氢二钠、磷酸二钠、焦亚硫酸二钠、聚乙烯醇、明胶、葡萄糖、瓜尔胶、液体葡萄糖、可压缩糖、硅酸镁铝、麦芽糖糊精、聚氧化乙烯、聚甲基丙烯酸酯、聚维酮、海藻酸钠、黄蓍胶微晶纤维素、淀粉和玉米醇溶蛋白。高分子量结构添加剂的示例性浓度为0.1重量％-10重量％。在其他实施方案中，可以包括增量剂(例如，甘露糖醇、甘氨酸)。
20、聚山梨醇酯80)；泊洛沙姆(例如泊洛沙姆188)；聚(乙二醇)苯基醚(例如Triton)；
十二烷基硫酸钠(SDS)；月桂基硫酸钠；辛基糖苷钠；月桂基-、肉豆蔻基-、亚油基-或硬脂基-磺基甜菜碱；月桂基-、肉豆蔻基-、亚油基-或硬脂基-肌氨酸；亚油基-、肉豆蔻基-或鲸蜡基-甜菜碱；月桂酰氨基丙基-、椰油酰氨基丙基-、亚油酰氨基丙基-、肉豆蔻酰氨基丙基-、棕榈酰氨基丙基-或异硬脂酰氨基丙基-甜菜碱(例如月桂酰氨基丙基)；肉豆蔻酰氨基丙基-、棕榈酰氨基丙基-或异硬脂酰氨基丙基-二甲胺；甲基椰油酰基牛磺酸钠或TM
甲基油基-牛磺酸二钠；和MONAQUAT 系列(Mona Industries，Inc.，Paterson，NJ.)、聚乙二醇、聚丙二醇、以及乙二醇和丙二醇的共聚物(例如普流尼克、PF68等)。可以存在于预冻干制剂中的表面活性剂的示例性量是约0.001-0.5％。高分子量结构添加剂(例如充填剂、粘合剂)可以包括例如阿拉伯树胶、白蛋白、海藻酸、磷酸钙(二代)、纤维素、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、微晶纤维素、葡聚糖、糊精、dextrates、蔗糖、tylose、预糊化淀粉、硫酸钙、直链淀粉、甘氨酸、膨润土、麦芽糖、山梨糖醇、乙基纤维素、磷酸氢二钠、磷酸二钠、焦亚硫酸二钠、聚乙烯醇、明胶、葡萄糖、瓜尔胶、液体葡萄糖、可压缩糖、硅酸镁铝、麦芽糖糊精、聚氧化乙烯、聚甲基丙烯酸酯、聚维酮、海藻酸钠、黄蓍胶微晶纤维素、淀粉和玉米醇溶蛋白。高分子量结构添加剂的示例性浓度为0.1重量％-10重量％。在其他实施方案中，可以包括增量剂(例如，甘露糖醇、甘氨酸)。
[0252] 组合物可以适合于肠胃外施用。示例性组合物适合于通过技术人员可用的任何途径注射或输注到动物体内，例如关节内、皮下、静脉内、肌内、腹膜内、脑内(脑实质内)、脑室内、肌内、眼内、动脉内、损伤内、直肠内、经皮、经口和吸入途径。肠胃外制剂一般将是无菌、无致热原、等渗的水溶液，任选包含药学上可接受的防腐剂。
[0253] 非水溶剂的例子包括丙二醇、聚乙二醇、植物油例如橄榄油、和可注射有机酯例如油酸乙酯。水性载体包括水、醇/水溶液、乳状液或悬浮液，包括盐水和缓冲介质。肠胃外媒介物包括氯化钠溶液、林格氏葡萄糖、葡萄糖和氯化钠、乳酸林格氏液或不挥发性油。静脉内媒介物包括液体和营养补充剂、电解质补充剂，例如基于林格氏葡萄糖的那些，等。也可以存在防腐剂和其他添加剂，例如，抗微生物剂、抗氧化剂、螯合剂、惰性气体等。一般参见，引入本文作为参考的Remington′s PharmaceuticalScience，第16版，Mack编辑，1980。
[0254] 本文描述的药物组合物可以配制用于以这样的方式控制或持续递送，所述方式在特定局部环境中提供局部浓度的产物(例如，快速浓注(bolus)、贮库(depot)效应)的持续释放和/或增加的稳定性或半衰期。本公开考虑，在某些实施方案中，此种组合物在初始贮存物中可以包括显著更大量的抗体或片段，而依照本公开内容实际上在任何时间点上释放且可用的抗体或片段的有效量是比初始贮存物低得多的量。组合物可以包括本公开的IL-1β结合抗体、抗体片段、核酸或载体与聚合化合物(例如聚乳酸、聚乙醇酸等)颗粒制品、以及物质例如生物可降解基质、可注射微球体、微囊颗粒、微囊、生物可蚀解颗粒珠、脂质体和可植入递送装置(提供活性剂的控制或持续释放)的制剂，随后该制剂可以以贮库型注射剂的形式递送。用于配制此种持续或控制递送手段的技术是已知的，并且各种聚合物已得到开发和用于药物的控制释放和递送。此种聚合物一般是生物可降解和生物相容的。聚合物水凝胶，包括由对映体聚合物或多肽区段的络合而形成的聚合物水凝胶，以及具有温度或pH敏感性质的水凝胶，由于在捕获生物活性蛋白质物质(例如抗体)时涉及的温和水性条件，而可能是用于提供药物贮库效应所期望的。参见例如，在PCT申请公开WO93/15722中用于递送药物组合物的控制释放多孔聚合物微粒的描述。
[0255] 用于这个用途的合适材料包括聚乳酸(参见例如，美国专利3,773,919)、聚(a-羟基羧酸)聚合物，例如聚-D-(-)-3-羟丁酸(EP133,988A)、L-谷氨酸和γ乙基-L-谷氨酸酯的共聚物(Sidman等人，Biopolymers，22：547-556(1983))、聚(甲基丙烯酸2-羟基乙酯)(Langer等人，J.Biomed.Mater.Res.，15：167-277(1981)，和Langer，Chem.Tech.，12：98-105(1982))、乙烯乙酸乙烯酯、或聚-D(-)-3-羟丁酸。其他生物可降解聚合物包括聚(内酯)、聚(缩醛)、聚(原酸酯)和聚(原碳酸酯)。持续释放组合物还可以包括脂质体，其可以通过本领域已知的数种方法中的任何一种进行制备(参见例如，Eppstein等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，82：3688-92(1985))。载体自身或其降解产物在靶组织中应是无毒的，并且不应使病症进一步恶化。这可以通过在靶病症的动物模型中的常规筛选进行测定，或者如果此种模型不可得的话，在正常动物中测定。
[0256] 用于持续释放的重组蛋白质的微囊化已用人生长激素(rhGH)、干扰素-(rhIFN-)、白介素-2和MN rgp120成功地进行。Johnson等人，Nat.Med.，2：795-799(1996)；Yasuda，Biomed.Ther.，27：1221-1223(1993)；Hora 等 人，Bio/Technologv.8：755-758(1990)；Cleland， ″ Design andProduction of Single Immunization Vaccines Using PolylactidePolyglycolide Microsphere Systems，″in Vaccine Design：The Subunit andAdjuvant Approach，Powell and Newman，编辑，(Plenum Press：NewYork，1995)，第
439-462页；WO 97/03692，WO 96/40072，WO 96/07399；和美国专利号5,654,010。这些蛋白质的持续释放制剂使用聚丙交酯共乙交酯(PLGA)聚合物(由于其生物相容性和广泛范围的生物可降解性质)进行开发。PLGA的降解产物——乳酸和乙醇酸可以在人体内被快速清除。此外，这种聚合物的降解度可以取决于其分子量和组成。Lewis，″Controlled release of bioactive agents from lactide/glycolide polymer，″in：M.Chasin and R.Langer(编辑)，Biodegradable Polymers as DrugDelivery Systems(Marcel Dekker：
New York，1990)，第1-41页。持续释放组合物的另外例子包括例如EP 58,481A，美国专利号3,887,699，EP158,277A，加拿大专利号1176565，U.Sidman等人，Biopolymers 22，
547[1983]，R.Langer等 人，Chem.Tech.12，98[1982]，Sinha 等 人，J.Control.Release
90，261[2003]，Zhu等人，Nat.Biotechnol.18，24[2000]，和Dai等人，Colloids Surf B Biointerfaces 41，117[2005]。
439-462页；WO 97/03692，WO 96/40072，WO 96/07399；和美国专利号5,654,010。这些蛋白质的持续释放制剂使用聚丙交酯共乙交酯(PLGA)聚合物(由于其生物相容性和广泛范围的生物可降解性质)进行开发。PLGA的降解产物——乳酸和乙醇酸可以在人体内被快速清除。此外，这种聚合物的降解度可以取决于其分子量和组成。Lewis，″Controlled release of bioactive agents from lactide/glycolide polymer，″in：M.Chasin and R.Langer(编辑)，Biodegradable Polymers as DrugDelivery Systems(Marcel Dekker：
New York，1990)，第1-41页。持续释放组合物的另外例子包括例如EP 58,481A，美国专利号3,887,699，EP158,277A，加拿大专利号1176565，U.Sidman等人，Biopolymers 22，
547[1983]，R.Langer等 人，Chem.Tech.12，98[1982]，Sinha 等 人，J.Control.Release
90，261[2003]，Zhu等人，Nat.Biotechnol.18，24[2000]，和Dai等人，Colloids Surf B Biointerfaces 41，117[2005]。
[0257] 生物粘附聚合物也预期用于在本公开的组合物中使用或与本公开的组合物一起使用。生物粘附剂是能够与生物基底长时间粘附的合成和天然存在的材料。例如，卡波姆和聚卡波非是聚(丙烯酸)的合成交联衍生物。基于天然存在物质的生物粘附递送系统包括例如透明质酸，也称为乙酰透明质酸。透明质酸是由D-葡糖醛酸和N-乙酰-D-葡糖胺残基组成的天然存在的粘多糖。透明质酸存在于脊椎动物的细胞外组织基质中，包括在结缔组织中，以及在滑液以及眼的玻璃体液和房水中。透明质酸的酯化衍生物已用于产生微球体用于在递送中使用，所述微球体是生物相容和生物可降解的(参见例如，Cortivo等人，Biomaterials(1991)12：727-730；European公开号517,565；国际公开号WO 96/29998；Ilium等人，J.Controlled ReI.(1994)29：133-141)。本公开的示例性含透明质酸组合物以IL-1β结合抗体或片段与透明质酸聚合物之比为约0.1％比约40％(w/w)的量包含透明质酸酯聚合物。
[0258] 生物可降解和生物不可降解聚合基质可以用于依照本公开递送组合物，并且此种聚合基质可以包含天然或合成聚合物。生物可降解基质是优选的。释放发生的时间段取决于聚合物的选择。一般地，历经数小时到3-12个月的释放是最希望的。可以用于形成生物可降解递送系统的示例性合成聚合物包括：乳酸和乙醇酸的聚合物、聚酰胺、聚碳酸酯、聚烯烃、聚亚烷基二醇、聚环氧烷、聚对苯二甲酸烷撑酯、聚乙烯醇、聚乙烯醚、聚乙烯酯、聚乙烯卤化物、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙交酯、聚硅氧烷、聚酐、聚氨基甲酸酯及其共聚物、聚(丁酸)、聚(戊酸)、烷基纤维素、羟烷基纤维素、纤维素醚、纤维素酯、硝基纤维素、丙烯酸和甲基丙烯酸酯的聚合物、甲基纤维素、乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟丁基甲基纤维素、乙酸纤维素、丙酸纤维素、乙酸丁酸纤维素、乙酸邻苯二甲酸纤维素、羧乙基纤维素、三乙酸纤维素、硫酸纤维素钠盐、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(甲基丙烯酸乙酯)、聚(甲基丙烯酸丁酯)、聚(甲基丙烯酸异丁酯)、聚(甲基丙烯酸己酯)、聚(甲基丙烯酸异癸酯)、聚(甲基丙烯酸月桂酯)、聚(甲基丙烯酸苯酯)、聚(丙烯酸甲酯)、聚(丙烯酸异丙酯)、聚(丙烯酸异丁酯)、聚(丙烯酸十八酯)、聚乙烯、聚丙烯、聚(乙二醇)、聚(环氧乙烷)、聚(对苯二甲酸乙二酯)、聚(乙烯醇)、聚乙酸乙烯酯、聚氯乙烯、聚苯乙烯和聚乙烯吡咯烷酮。示例性天然聚合物包括海藻酸盐和其他多糖，包括葡聚糖和纤维素、胶原、其化学衍生物(化学基团的取代、添加，例如烷基、烯基、羟基化、氧化、和由本领域技术人员常规进行的其他修饰)、白蛋白和其他亲水蛋白质、玉米醇溶蛋白和其他醇溶谷蛋白和疏水蛋白质、共聚物及其混合物。一般而言，这些材料通过在体内的酶促水解或暴露于水，通过表面或骨架溶蚀(Bulk erosion)而降解。聚合物任选为水凝胶的形式(参见例如WO04/009664，WO 05/087201，Sawhney等人，Macromolecules，1993，26，581-587)，其可以吸收高达约90％其重量的水，并且进一步任选地与多价离子或其他聚合物交联。
[0259] 递送系统还包括如下非聚合物系统，其为脂质，包括固醇例如胆固醇、胆固醇酯和脂肪酸或中性脂肪例如甘油单、二和三酯；水凝胶释放系统；硅橡胶系统；基于肽的系统；蜡涂层；使用常规粘合剂和赋形剂的压缩片剂；部分融合的埋植剂；等。具体例子包括但不限于：(a)其中产品以在基质内的形式包含在内的溶蚀系统，例如美国专利号4,452,775、
4,675,189和5,736,152中描述的那些，和(b)其中产品以控制速率从聚合物中渗透出来的扩散系统，例如在美国专利号3,854,480、5,133,974和5,407,686中描述的。包含产品的脂质体可以通过已知方法进行制备，例如(DE3,218,121；Epstein等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，82：3688-3692(1985)；Hwang 等 人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，77：
4030-4034(1980)；EP 52,322；EP 36,676；EP 88,046；EP 143,949；EP 142,641；日本专利申请83-118008；美国专利号4,485,045和4,544,545；和EP 102,324)。
4,675,189和5,736,152中描述的那些，和(b)其中产品以控制速率从聚合物中渗透出来的扩散系统，例如在美国专利号3,854,480、5,133,974和5,407,686中描述的。包含产品的脂质体可以通过已知方法进行制备，例如(DE3,218,121；Epstein等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，82：3688-3692(1985)；Hwang 等 人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，77：
4030-4034(1980)；EP 52,322；EP 36,676；EP 88,046；EP 143,949；EP 142,641；日本专利申请83-118008；美国专利号4,485,045和4,544,545；和EP 102,324)。
[0260] 包含IL-1β结合抗体或片段的药物组合物可以配制用于吸入，例如，作为干粉。吸入溶液也可以在液化推进剂中进行配制用于气雾剂递送。在另外一个实施方案中，溶液可以进行喷雾化。用于肺施用的另外药物组合物包括例如在PCT专利申请WO 94/20069中描述的那些，所述专利文献公开了化学修饰蛋白质的肺递送。对于肺递送，粒子大小应适合于递送至远端肺。例如，粒子大小可以是1μm-5μm；然而，可以使用较大颗粒，例如如果每个颗粒是很多孔的。
[0261] 包含IL-1β结合抗体或括体片段的某些制剂可以进行口服施用。以这种方式施用的制剂可以用或不用如下载体进行配制，所述载体在固体剂型例如片剂和胶囊的配制中常用。例如，胶囊可以设计为在胃肠道中于可使生物利用度最大化且循环前降解最小化的点上释放制剂的活性部分。可以包括另外的物质，以促进选择性结合剂的吸收。还可以采用稀释剂、调味剂、低熔点蜡、植物油、润滑剂、悬浮剂、片剂崩解剂和粘合剂。
[0262] 另一种制剂可以涉及与非毒性赋形剂混合的有效量的IL-1β结合抗体或片段，所述赋形剂适合于制造片剂。通过使片剂溶解于无菌水或另一种合适的媒介物中，可以以单位剂型制备溶液剂。合适的赋形剂包括但不限于，惰性稀释剂例如碳酸钙、碳酸钠或碳酸氢钠、乳糖或磷酸钙；或结合剂例如淀粉、明胶或阿拉伯树胶；或润滑剂例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。
[0263] 合适的和/或优选的药物制剂可以基于本公开内容和制剂技术的一般知识进行确定，这依赖于预期施用途径、递送形式和所需剂量。与施用方式无关，有效剂量可以根据患者体重、体表面积或器官大小进行计算。对这些计算作进一步精细化以确定涉及本文所述的每种制剂的合适治疗剂量，在本领域中是常规的，并属于本领域常规实践的范畴。合适的剂量可以通过使用合适的剂量应答数据来确定。
[0264] 根据本公开内容，另外的制剂将是显而易见的，包括涉及与一种或多种其他治疗剂组合的IL-1β结合抗体和片段的制剂。例如，在某些制剂中，本公开的IL-1β结合抗体、抗体片段、核酸或载体与IL-1信号途径的第二抑制剂一起进行配制。代表性第二抑制剂包括但不限于，抗体、抗体片段、肽、多肽、化合物、核酸、载体和药物组合物，例如，US 6899878、US2003022869、US 20060094663、US 20050186615、US 20030166069、WO/04022718、WO/05084696、WO/05019259中描述的那些。例如，组合物可以包含与IL-1β结合抗体、片段或者编码此种抗体或片段的核酸或载体组合的本公开的IL-1β结合抗体、抗体片段、核酸或载体。
[0265] 使用方法
[0266] 治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段可以如所公开的通过本文的方法用于治疗和/或预防心血管疾病，包括例如急性心血管疾病或慢性心血管疾病。此种方法，以及用于此种方法中的药物组合物可以用于在个体中降低、治疗或预防心血管事件，例如心肌梗塞、中风、心血管死亡、充血性心力衰竭、心脏停搏、急性冠脉综合征、绞痛或血管再生术，包括在具有心血管疾病风险因子历史的个体中。方法和药物组合物还可用于降低个体在心血管事件后的死亡率。本公开还考虑了其他IL-1通路抑制剂的用途，作为抗IL-1β抗体或片段的备选或额外方案。
[0267] 如本文所使用的，术语“预防”、“阻遏”和“抑制”的各种形式在所描述的方法方面指以暂时地或永久地预防、阻遏或降低临床症状的发生或事件、疾病或病况的表现，例如，心血管事件或疾病(例如，急性或慢性心血管疾病)。此种预防、阻遏或降低不需要是绝对有用的。
[0268] 如本文所使用的，术语“降低”的各种形式在涉及本文所述方法时指延迟至事件或疾病的时间，减少事件或疾病的风险或可能性，减少事件或疾病的发生(例如，在治疗组中)，预防事件或疾病的出现(例如，预防心血管事件或疾病)，减少事件或疾病的强度或严重程度(除了所述事件是死亡的情况)，和/或减少从事件或疾病恢复的时间(除了所述事件是死亡的情况)，例如，治疗心血管事件或疾病(例如，急性或慢性心血管疾病)。
[0269] 如本文所使用的，术语“在心血管事件后的死亡率”指在心血管事件后发生的死亡率(即死亡)(例如，在发动心血管事件后)，其可以但不必需由心血管事件直接或间接的导致或受心血管事件的影响。之后还指在心血管事件和死亡之间的时间上的接近(例如，可测量的)，不论是否可以确定直接或间接的病因联系。在心血管事件和死亡之间的时间上的接近性可以改变，并包括几乎同时达到的时间量。
[0270] 所使用的术语“治疗”的各种形式在涉及本文所述方法时指暂时地或永久地消除、降低、阻遏或改善事件、疾病或病况的临床症状、表现或进程，例如心血管事件或疾病(例如，急性或慢性心血管疾病)。此种治疗不需要是绝对有用的。
[0271] 如本文所使用的，术语“需要治疗”指由护理师(caregiver)作出的患者需要治疗或将从治疗中获益的判断。这种判断基于多种因素来作出，这些因素在护理师的专业知识范围内，但包括有关患者由于可通过本公开的方法或化合物治疗的病况而生病或将要生病的知识。
[0272] 如本文所使用的，术语“需要预防”指由护理师作出的患者需要预防或将从预防中获益的判断。这种判断基于多种因素来作出，这些因素在护理师的专业知识范围内，但包括有关患者由于可通过本公开的方法或化合物预防的病症而将会生病或可能会生病的知识。
[0273] 如本文所使用的，术语“治疗有效量”指化合物(例如抗体)的这样的量，其中所述化合物单独或作为药物组合物的一部分，当施用于个体(例如，以一个或多个剂量)时，该量能够对疾病状态或病况的任何症状、方面或特征具有任何可检测的积极效应，包括例如降低心血管事件或疾病、或降低在心血管事件或疾病之后的死亡率(例如，急性或慢性心血管疾病)。所述效应不需要是绝对有益的。
[0274] 本公开提供了治疗患心血管疾病的个体的方法，包括例如，急性心血管疾病或慢性心血管疾病，包括向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段。
[0275] 本公开提供了降低个体中的心血管事件的方法，包括向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段，其中所述个体具有在先的心血管事件历史或至少一种心血管疾病风险因子的历史，且其中所述心血管事件是心肌梗塞、中风、心血管死亡、充血性心力衰竭、心脏停搏、急性冠脉综合征、绞痛或血管再生术。
[0276] 本公开还提供了降低具有至少一种心血管疾病风险因子的历史的个体中的心血管事件的方法(例如，延迟至事件的时间、降低事件的可能性或风险、预防事件、降低事件的严重程度、降低恢复的时间)，包括向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段，且其中所述心血管事件是心肌梗塞、中风、心血管死亡、充血性心力衰竭、心脏停搏、急性冠脉综合征、绞痛或血管再生术。
[0277] 本公开还提供了降低有在先的心血管事件历史的个体中的心血管事件的方法(例如，延迟至事件的时间、降低事件的可能性或风险、预防事件、降低事件的严重程度、降低恢复的时间)，包括向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段，且其中所述心血管事件是心肌梗塞、中风、心血管死亡、充血性心力衰竭、心脏停搏、急性冠脉综合征、绞痛或血管再生术。在一些实施方案中，在先的心血管事件是第一次心血管事件。在一些实施方案中，在先的或第一次心血管事件选自心肌梗塞、中风、充血性心力衰竭、急性冠脉综合征、绞痛或血管再生术。
[0278] 在一些实施方案中，在先的或第一次心血管事件是心肌梗塞或急性冠脉综合征。在一些实施方案中，心肌梗塞是有ST升高的心肌梗塞(例如，ST段升高型心肌梗塞，STEMI)。在一些实施方案中，心肌梗塞是没有ST升高的心肌梗塞(例如，无ST段升高型心肌梗塞，NSTEMI)。在一些实施方案中，通过心电图(例如，ECG、EKG)确定ST升高的存在或缺失。
[0279] 在一些实施方案中，降低心血管事件的方法是降低第二次或继发性心血管事件的方法。在一些实施方案中，所述心血管事件(例如，第二次或继发性心血管事件)选自心肌梗塞、中风、心血管死亡、充血性心力衰竭、心脏停搏、急性冠脉综合征、绞痛或血管再生术。在一些实施方案中，第一次心血管事件和第二次心血管事件是相同类型的心血管事件。在一些实施方案中，第一次心血管和第二次心血管事件是不同类型的心血管事件。
[0280] 在一些实施方案中，血管再生术是冠脉、颈动脉或外周动脉血管再生术。在一些实施方案中，所述冠脉、颈动脉或外周动脉血管再生术是经皮冠状动脉介入治疗(PCI)、植入支架、冠状动脉旁路移植血管(CABG)、颈动脉内膜切除术、外周血管病旁路手术或外周血管成形术。
[0281] 在一些优选的实施方案中，治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段是在心血管事件的1周内、在心血管事件的96小时内、在心血管事件的72小时内、在心血管事件的48小时内、在心血管事件的24小时内，或在心血管事件的12小时内第一次施用。在一些实施方案中，个体还具有至少一种心血管疾病风险因子的历史。在一些实施方案中，所述风险因子是明显的冠心病、冠状动脉病、血栓形成、短暂性缺血发作、左心室肥大、动脉硬化、再狭窄、吸烟或外周血管病。在一些实施方案中，外周血管病是临床上明显的(例如，Fontaine II级或更高级的外周动脉病)。在一些实施方案中，所述风险因子是升高的甘油三酯、全身性炎症、高血磷水平、高甲状旁腺激素水平、微量蛋白尿或高同型半胱氨酸水平。在一些实施方案中，所述风险因子是肥胖、高血糖、慢性肾衰竭、高血葡萄糖、慢性肾病或代谢综合征。在一些实施方案中，所述风险因子是末期肾病。在一些实施方案中，所述风险因子是高血压、血脂异常、血脂过多、升高的总胆固醇、升高的LDL胆固醇或低HDL胆固醇或动脉粥样硬化。在一些实施方案中，高血压表现为血压大于或等于180/110mm Hg。在一些其它实施方案中，高血压是温和至中度的，伴随收缩压(SBP)为140至180mm Hg，和/或舒张压(DBP)为90至110mm Hg。在一些实施方案中，所述个体具有升高的C-反应蛋白(CRP)水平。在一些实施方案中，所述个体大于55岁。在一些实施方案中，所述个体大于65岁。
在一些实施方案中，所述个体是非高血压的。在一些实施方案中，所述个体具有难以控制的高血压。在一些实施方案中，所述个体具有“A型“人格。在一些实施方案中，所述个体具有久坐的生活方式。在一些实施方案中，所述个体是患糖尿病。在一些实施方案中，所述糖尿病是2型糖尿病。在一些实施方案中，所述个体具有两种或多种所述风险因子的历史。在一些实施方案中，所述个体具有三种或多种所述风险因子的历史。
在一些实施方案中，所述个体是非高血压的。在一些实施方案中，所述个体具有难以控制的高血压。在一些实施方案中，所述个体具有“A型“人格。在一些实施方案中，所述个体具有久坐的生活方式。在一些实施方案中，所述个体是患糖尿病。在一些实施方案中，所述糖尿病是2型糖尿病。在一些实施方案中，所述个体具有两种或多种所述风险因子的历史。在一些实施方案中，所述个体具有三种或多种所述风险因子的历史。
[0282] 在一些实施方案中，施用所述治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段足以实现CRP水平的减少。
[0283] 本公开还提供了在心血管事件后，降低个体死亡率的方法，包括向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段。在一些实施方案中，所述心血管事件是心肌梗塞、中风、心脏停搏、充血性心力衰竭、心血管死亡、急性冠脉综合征(例如，已诊断的)、绞痛或血管再生术。在一些实施方案中，所述心血管事件是心肌梗塞或急性冠脉综合征。在一些实施方案中，心肌梗塞是有ST升高的心肌梗塞(例如，ST段升高型心肌梗塞，STEMI)。在一些实施方案中，心肌梗塞是没有ST升高的心肌梗塞(例如，无ST段升高型心肌梗塞，NSTEMI)。在一些实施方案中，通过心电图(例如，ECG、EKG)确定ST升高的存在或缺失。
[0284] 在一些实施方案中，死亡是由心血管原因导致的死亡。在其他实施方案中，死亡是由任何原因导致的死亡。在一些实施方案中，心血管事件是心肌梗塞、中风、充血性心力衰竭、急性冠脉综合征、绞痛或血管再生术。在一些实施方案中，血管再生术是冠脉、颈动脉或外周动脉血管再生术。在一些实施方案中，所述冠脉、颈动脉或外周动脉血管再生术是经皮冠状动脉介入治疗(PCI)、植入支架、冠状动脉旁路移植血管(CABG)、颈动脉内膜切除术、外周血管病旁路手术或外周血管成形术。
[0285] 在一些优选的实施方案中，在心血管事件的1周内、在心血管事件的96小时内、在心血管事件的72小时内、在心血管事件的48小时内、在心血管事件的24小时内，或在心血管事件的12小时内第一次施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段。在一些实施方案中，所述个体没有2型糖尿病。在一些实施方案中，所述个体是经在先的心肌梗塞或中风的心血管事件后存活的。在一些实施方案中，所述心血管事件的发生是心肌梗塞或中风的心血管事件的复发。
[0286] 在一些实施方案中，个体具有一种或多种心血管疾病风险因子的历史。在一些实施方案中，所述风险因子是明显的冠心病、冠状动脉病、血栓形成、短暂性缺血发作、左心室肥大、动脉硬化、再狭窄、吸烟或外周血管病。在一些实施方案中，外周血管病是临床上明显的(例如，Fontaine II级或更高级的外周动脉病)。在一些实施方案中，所述风险因子是升高的甘油三酯、全身性炎症、高血磷水平、高甲状旁腺激素水平、微量蛋白尿或高同型半胱氨酸水平。在一些实施方案中，所述风险因子是肥胖、高血糖、慢性肾衰竭、高血葡萄糖、慢性肾病或代谢综合征。在一些实施方案中，所述风险因子是高血压、血脂异常、血脂过多、升高的总胆固醇、升高的LDL胆固醇或低HDL胆固醇或动脉粥样硬化。在一些实施方案中，高血压表现为血压大于或等于180/110mm Hg。在一些其它实施方案中，高血压是温和至中度的，伴随收缩压(SBP)为140至180mm Hg，和/或舒张压(DBP)为90至110mm Hg。
[0287] 在一些实施方案中，所述个体是非高血压的。在一些实施方案中，所述个体具有难以控制的高血压。在一些实施方案中，所述个体具有“A型“人格。在一些实施方案中，所述个体具有久坐的生活方式。在一些实施方案中，所述个体具有两种或多种所述风险因子的历史。在一些实施方案中，所述个体具有三种或多种所述风险因子的历史。
[0288] 在一些实施方案中，施用所述治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段足以实现CRP水平的减少。
[0289] 本公开还提供了在有至少一种心血管疾病风险因子历史的个体中降低心血管事件的方法，包括向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段，且其中所述风险因子不是2型糖尿病、肥胖、高血糖、血脂异常、血脂过多、慢性肾衰竭、高血葡萄糖、慢性肾病、高血压、动脉粥样硬化或代谢综合征。
[0290] 在一些实施方案中，所述心血管事件是心肌梗塞、中风、心脏停搏、充血性心力衰竭、心血管死亡、急性冠脉综合征(例如，已诊断的)、绞痛或血管再生术。在一些实施方案中，血管再生术是冠脉、颈动脉或外周动脉血管再生术。在一些实施方案中，所述冠脉、颈动脉或外周动脉血管再生术是经皮冠状动脉介入治疗(PCI)、植入支架、冠状动脉旁路移植血管(CABG)、颈动脉内膜切除术、外周血管病旁路手术或外周血管成形术。
[0291] 在一些实施方案中，所述风险因子是明显的冠心病、冠状动脉病、血栓形成、短暂性缺血发作、左心室肥大、动脉硬化、再狭窄、吸烟或外周血管病。在一些实施方案中，所述风险因子是升高的甘油三酯、全身性炎症、高血磷水平、高甲状旁腺激素水平、微量蛋白尿或高同型半胱氨酸水平。
[0292] 在一些实施方案中，所述个体具有升高的C反应蛋白(CRP)水平。在一些实施方案中，所述个体大于55岁。在一些实施方案中，所述个体大于65岁。在一些实施方案中，所述个体具有两种或多种所述风险因子的历史。在一些实施方案中，所述个体具有三种或多种所述风险因子的历史。
[0293] 在一些实施方案中，施用所述治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段足以实现CRP水平的减少。
[0294] 本公开还提供了治疗个体的心血管事件的方法，其中所述心血管事件是心肌梗塞、中风、充血性心力衰竭、急性冠脉综合征或绞痛，包括向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段和至少一种包括IL-1β抗体或片段以外的活性剂的其他药物组合物。
[0295] 在一些实施方案中，所述至少一种其他药物组合物的活性剂是胆固醇降低剂、抑制素、HMG-CoA还原酶抑制剂、钙通道阻断剂、β阻断剂、抗高血压剂、利尿剂、阿司匹林、烟酸、血管紧张肽转变酶(ACE)抑制剂、血管紧张素II受体阻断剂、血管舒张剂、抗凝剂、血小板聚集的抑制剂、溶栓剂或毛地黄。
[0296] 本公开还提供了治疗个体的心血管事件的方法，其中所述心血管事件是心肌梗塞、中风、充血性心力衰竭、急性冠脉综合征或绞痛，包括向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段和血管再生术。在一些实施方案中，所述血管再生术是冠脉、颈动脉或外周动脉血管再生术。
[0297] 本公开还提供了降低个体在血管再生术后再狭窄的方法，包括向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段。在一些实施方案中，所述血管再生术是冠脉、颈动脉或外周动脉血管再生术。
[0298] 本公开还提供了治疗个体急性高血压的方法，包括向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段和一种或多种抗高血压剂。在一些实施方案中，所述个体具有高于或等于180/110mm Hg的血压。在一些其它实施方案中，个体具有温和至中度的高血压，伴随收缩压(SBP)为140至180mm Hg，和/或舒张压(DBP)为90至110mm Hg。在一些实施方案中，所述抗高血压剂是静脉内施用的。在一些实施方案中，所述抗高血压剂选自α/β肾上腺素能阻断剂、血管紧张肽转变酶抑制剂、血管紧张素II受体拮抗剂、抗肾上腺素能剂、β肾上腺素能阻断剂、钙通道阻断剂、利尿剂和血管舒张剂。在一些实施方案中，所述抗高血压剂是卡维地洛(carvedilol)、拉贝洛尔(labetalol，)、贝那普利(benazepril)、卡托普利(captopril)、依那普利(enalapril)、福辛普利(fosinopril)、赖诺普利(lisinopril)、莫昔普利(moexipril)、培哚普利(perindopril)、喹那普利(quinapril)、雷米普利(ramipril)、群多普利(trandolapril)、坎地沙坦(candesartan)、依普罗沙坦(eprosartan)、厄贝沙坦(irbesartan)、氯沙坦(losartan)、替米沙坦(telmisartan)、缬沙坦(valsartan)、可乐定(clonidine)、多沙唑嗪(doxazosin)、胍那苄(guanabenz)、胍那决尔(guanadrel)、胍乙啶(guanethidine)、胍法辛(guanfacine)、美卡拉明(mecamylamine)、甲基多巴(methyldopa)、呱唑嗪(prazosin)、利血平(reserpine)、特拉唑嗪(terazosin)、醋丁洛尔(acebutolol)、阿替洛尔(atenolol)、倍他洛尔(betaxolol)、比索洛尔(bisoprolol)、卡替洛尔(carteolol)、美托洛尔(metoprolol)、那多洛尔(nadolol)、喷布洛尔(penbutolol)、吲哚洛尔(pindolo)、普萘洛尔(propranolol)、噻吗洛尔(timolol)、氨氯地平(amlodipine)、地尔硫卓(diltiazem)、非洛地平(felodipine)、伊拉地平(isradipine)、尼卡地平(nicardipine)、硝苯地平(nifedipine)、尼索地平(nisoldipine)、维拉帕米(verapamil)、阿米洛利(amiloride)、苄噻嗪(benzthiazide)、氯噻嗪(chlorothiazide)、氯噻酮(chlorthalidone)、呋塞米(furosemide)、氢氯噻嗪(hydrochlorothiazide)、吲达帕胺(indapamide)、美托拉宗(metolazone)、泊利噻嗪(polythiazide)、螺内酯(spironolactone)、托拉塞米(torsemide)、三氯噻嗪(trichlormethiazide)、肼苯哒嗪(hydralazine)、硝酸甘油(nitroglycerin)、硝普钠(sodium nitroprusside)、氯维地平(clevidipine)或米诺地尔(minoxidil)。在一些实施方案中，所述抗高血压剂是拉贝洛尔(labetalol)、美托洛尔(metoprolol)、肼苯哒嗪(hydralazine)、硝酸甘油(nitroglycerin)、尼卡地平(nicardipine)、硝普钠(sodiumnitroprusside)或氯维地平(clevidipine)。
[0299] 本公开还提供了降低、预防或治疗个体中的心血管事件或疾病的方法，包括向所述个体施用抗IL-1β结合抗体或其结合片段与医学或手术干预的(例如，在之前、过程中或之后的)组合。此类抗体可以治疗有效量施用。此类干预可以是治疗有效的。在一些实施方案中，医学干预是活性剂，例如药物或生物活性剂，包括例如任何一种或多种本文所述的活性剂。在一些实施方案中，医学干预是门诊病人医学处理或方法。在一些实施方案中，医学干预是住院病人住院。在一些实施方案中，手术干预是血管再生术，包括例如任何一种或多种本文所述的血管再生术。在一些实施方案中，手术干预涉及心脏瓣膜修复或替换、冠状动脉搭桥手术、心脏移植或心脏泵。在一些实施方案中，手术干预涉及双心室心脏起搏器、心内除颤器(internalcardiac defibrillator，ICD)或肌切除术。在一些实施方案中，医学干预是戒烟药疗或戒烟咨询服务。
[0300] 本公开还提供了在有至少一种心血管疾病风险因子历史的个体中降低心血管事件的方法，包括(a)鉴别、诊断或选择有至少一种心血管疾病风险因子历史的个体，和(b)向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段，且其中所述心血管事件是心肌梗塞、中风、心血管死亡、充血性心力衰竭、心脏停搏、急性冠脉综合征、绞痛或血管再生术。
[0301] 本公开还提供了在有在先心血管事件历史的个体中降低心血管事件的方法，包括(a)鉴别、诊断或选择有在先心血管事件历史的个体，和(b)向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段，且其中所述心血管事件是心肌梗塞、中风、急性冠脉综合征、绞痛或血管再生术。
[0302] 本公开还提供了在心血管事件后降低个体死亡率的方法，包括(a)鉴别、诊断或选择有心血管事件的个体，和(b)向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段。
[0303] 本公开还提供了在有至少一种心血管疾病风险因子历史的个体中降低心血管事件的方法，包括(a)鉴别、诊断或选择有至少一种心血管疾病风险因子历史的个体，和(b)向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段，且其中所述风险因子不是2型糖尿病、肥胖、高血糖、血脂异常、血脂过多、慢性肾衰竭、高血葡萄糖、慢性肾病、高血压、动脉粥样硬化、或代谢综合征。
[0304] 本公开还提供了治疗个体中的心血管事件的方法，其中所述心血管事件是心肌梗塞、中风、充血性心力衰竭、急性冠脉综合征或绞痛，包括(a)鉴别、诊断或选择有心血管事件的个体，和(b)向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段和至少一种包含IL-1β抗体或片段以外的活性剂的其他药物组合物。
[0305] 本公开还提供了治疗个体中的心血管事件的方法，其中所述心血管事件是心肌梗塞、中风、充血性心力衰竭、急性冠脉综合征或绞痛，包括(a)鉴别、诊断或选择有心血管事件的个体，和(b)向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段和血管再生术。
[0306] 本公开还提供了降低个体在血管再生术后再狭窄的方法，包括(a)鉴别、诊断或选择有血管再生术的个体，和(b)向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段。
[0307] 本公开还提供了治疗个体急性高血压的方法，包括(a)鉴别、诊断或选择有急性高血压的个体，和(b)向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段和一种或多种抗高血压剂。在一些实施方案中，高血压表现为高于或等于180/110mm Hg的血压。在一些其他实施方案中，高血压是温和至中度的，伴随收缩压(SBP)为140至180mm Hg，和/或舒张压(DBP)为90至110mm Hg。
[0308] 本公开还提供了在有近期的心肌梗塞(MI)、近期中风或已建立的外周动脉病的历史的个体中降低新的缺血性中风(致死或不致死)、新MI(致死或不致死)和其他血管死亡的组合终点率的方法，包括向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段。在一些实施方案中，个体具有无ST区段升高的急性冠脉综合征(例如，不稳定的绞痛或无Q波型心肌梗塞)。在一些实施方案中，抗IL-1β结合抗体或其结合片段是在最近胸痛发作或与局部缺血一致的症状开始的12、24、48或72小时内初次施用的。在一些实施方案中，个体具有与新的局部缺血相符合的ECG改变(例如，无ST区段升高)或比正常上限升高至少2倍的心酶或肌钙蛋白I或T。
[0309] 本公开还提供了在有近期的心肌梗塞(MI)、近期中风或已建立的外周动脉病的历史的个体中降低动脉粥样化血栓形成事件的方法，包括向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段。在一些实施方案中，个体具有无ST区段升高的急性冠脉综合征(例如，不稳定的绞痛或无Q波型心肌梗塞)。在一些实施方案中，抗IL-1β结合抗体或其结合片段是在最近胸痛发作或与局部缺血一致的症状开始的72小时内，或优选48小时，或更优选24、12、6或3小时内初次施用的。在一些实施方案中，个体具有与新的局部缺血相符合的ECG改变(例如，无ST区段升高)或比正常上限升高至少2倍的心酶或肌钙蛋白I或T。
[0310] 本公开还提供了在有ST区段升高型急性心肌梗塞的个体中降低自任何原因的死亡率、以及死亡、再次梗塞或中风的组合终点率的方法，包括向所述个体施用治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段。在一些实施方案中，抗IL-1β结合抗体或其结合片段是在个体呈现出心肌梗塞症状的72小时内，或优选48小时，或更优选24、12、6或3小时内初次施用的。
[0311] 在任何上述方法的一些实施方案中，个体是有心血管疾病的患者，包括例如急性心血管疾病或慢性心血管疾病。
[0312] 在任何上述方法的一些实施方案中，施用所述治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段足以实现CRP水平的减少。
[0313] 本公开还提供了抗IL-1β结合抗体或其结合片段用于生产组合物的用途，所述抗体或其结合片段在测量IL-1β诱导的IL-8生产的人全血IL-1β抑制测定中，具有比IL-1β受体拮抗剂更低的IC50，其中所述组合物用于降低、预防或治疗心脏事件或心血管疾病。
[0314] 本公开还提供了可以在心血管事件和/或初次施用抗IL-1β结合抗体或其结合片段后2年或更多年、3年或更多年、4年或更多年、或5年或更多年的时期评估个体的心血管事件的降低(例如，延迟至事件的时间、降低事件的可能性或风险、预防事件、降低事件的严重程度、降低恢复的时间)。
[0315] 此外，本公开还提供了治疗有效量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段也可足以实现C反应蛋白(CRP)水平的减少。使用标准测定可方便的测量CRP水平的降低(例如，高灵敏CRP、超灵敏CRP)。如本文公开的方法所提供的，C反应蛋白水平的减少可以是例如从处理前水平减少≥0.2、≥0.4、≥0.6、≥0.8、≥1.0、≥1.4、≥1.8、≥2.2、≥2.6、≥3.0mg/L。可选的，C反应蛋白水平的减少可以是例如从处理前水平减少＞20％、＞30％、＞40％、＞50％、＞60％、＞70％、＞80％、＞90％、＞95％。
[0316] 可选的或额外的，如本文公开所治疗的个体可经历脂类组成的可测量的改善(例如，血清脂类减少、HDL和LDL比例的改变)。血清脂类和/或脂类组成的此类测量可包括例如胆固醇的减少、低密度脂蛋白胆固醇(LDL)的减少、非常低密度脂蛋白胆固醇(VLDL)的减少、甘油三酯的减少、游离脂肪酸的减少、脱脂载脂蛋白B(Apo B)的减少、高密度脂蛋白胆固醇(HDL)增加、相比处理前水平维持高密度脂蛋白胆固醇(HDL)的水平，和/或脱脂载脂蛋白A(Apo A)的增加。可以使用本领域已知的标准技术测量。例如，胆固醇(如，总胆固醇)水平的减少可以是从处理前水平至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％或更多的减少。低密度脂蛋白胆固醇水平的减少可以是从处理前水平至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％或更多的减少。个体血中的甘油三酯水平的减少可以是从处理前水平至少5％、10％、15％、20％、
25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％或更多的减少。游离脂肪酸水平的减少可以是从处理前水平至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、
55％、60％或更多的减少。高密度脂蛋白胆固醇水平的增加可以是从处理前水平至少1％、
2％、3％、4％、5％、6％、8％、10％、12％、14％、16％或更多的增加。
25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％或更多的减少。游离脂肪酸水平的减少可以是从处理前水平至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、
55％、60％或更多的减少。高密度脂蛋白胆固醇水平的增加可以是从处理前水平至少1％、
2％、3％、4％、5％、6％、8％、10％、12％、14％、16％或更多的增加。
[0317] 可是使用本领域已知的标准医学实践和/或任何本领域已知的各种标准测定，进行上述诊断和测量，例如Chernecky CC，Berger BJ编著，(2004).Laboratory Tests and Diagnostic Procedures，第4版，Philadelphia：Saunders；Fischbach FT，Dunning MB III编著，(2004).Manual ofLaboratory and Diagnostic Tests，第7版，Philadelphia：LippincottWilliams and Wilkins；Genest J 等 人，(2003).Recommendations for themanagement of dyslipidemia and the prevention of cardiovascular disease：
Summary of the 2003update.Canadian Medical Association Journal，169(9)：921-924中公开的测定。还可在线获得：http://www.cmaj.ca/cgi/content/full/169/9/921/DC1；
Handbook ofDiagnostic Tests(2003)， 第 3 版，Philadelphia：Lippincott Williams andWilkins； 和 Pagana KD，Pagana TJ(2002).Mosby’s Manual of Diagnosticand Laboratory Tests，第2版，St.Louis：Mosby。
Summary of the 2003update.Canadian Medical Association Journal，169(9)：921-924中公开的测定。还可在线获得：http://www.cmaj.ca/cgi/content/full/169/9/921/DC1；
Handbook ofDiagnostic Tests(2003)， 第 3 版，Philadelphia：Lippincott Williams andWilkins； 和 Pagana KD，Pagana TJ(2002).Mosby’s Manual of Diagnosticand Laboratory Tests，第2版，St.Louis：Mosby。
[0318] 给药
[0319] 可以以一个或多个剂量施用用于任何和/或所有的上述方法中的抗IL-1β结合抗体或其结合片段(例如，初始剂量和一个或多个后续剂量)。在一些实施方案中，以一个或多个10mg/kg或更少，5mg/kg或更少，3mg/kg或更少，或2mg/kg或更少的抗体或片段的剂量施用抗IL-1β结合抗体或其结合片段。在一些实施方案中，以一个或多个1mg/kg或更少，一个或多个0.5mg/kg或更少，一个或多个0.3mg/kg或更少，一个或多个0.1mg/kg或更少或者一个或多个0.03mg/kg或更少的抗体或片段的剂量施用抗IL-1β结合抗体或其结合片段。在一些上述实施方案中，一个或多个剂量是至少0.01mg/kg的抗IL-1β结合抗体或其结合片段。在一些实施方案中，抗IL-1β结合抗体或其结合片段以一个或多个约0.01mg/kg至1mg/kg，约0.03mg/kg至1mg/kg，约0.01mg/kg至0.3mg/kg，或约0.1mg/kg至
0.3mg/kg的剂量进行施用。在一些实施方案中，抗IL-1β结合抗体或其结合片段以一个或多个约0.001mg/kg至0.3mg/kg，约0.001mg/kg至0.1mg/kg，约0.001mg/kg至0.03mg/kg，或约0.001mg/kg至0.01mg/kg的剂量进行施用。
0.3mg/kg的剂量进行施用。在一些实施方案中，抗IL-1β结合抗体或其结合片段以一个或多个约0.001mg/kg至0.3mg/kg，约0.001mg/kg至0.1mg/kg，约0.001mg/kg至0.03mg/kg，或约0.001mg/kg至0.01mg/kg的剂量进行施用。
[0320] 在其他实施方案中，抗IL-1β结合抗体或其结合片段的初始剂量和一个或多个后续剂量都是从约0.01mg/kg至约10mg/kg的抗体，从约0.05mg/kg至约5mg/kg的抗体，从约0.05mg/kg至约3mg/kg的抗体，从约0.1mg/kg至约3mg/kg的抗体，从约0.1mg/kg至约1mg/kg的抗体，从约0.1mg/kg至约0.5mg/kg的抗体，从约0.3mg/kg至约5mg/kg的抗体，从约0.3mg/kg至约3mg/kg的抗体，从约0.3mg/kg至约1mg/kg的抗体，从约0.5mg/kg至约5mg/kg的抗体，从约0.5mg/kg至约3mg/kg的抗体，从约0.5mg/kg至约1mg/kg的抗体，从约1mg/kg至约5mg/kg的抗体，从约1mg/kg至约3mg/kg的抗体。在某些实施方案中，施用两个或多个、三个或多个、四个或多个、五个或多个、六个或多个、七个或多个、八个或多个、九个或多个、十个或多个，或者十一个或多个后续剂量的抗体。上述剂量指mg(抗体或片段)/kg(治疗个体的体重)。
[0321] 可以以固定的剂量施用用于任何和/或所有的上述方法的抗IL-1β结合抗体或其结合片段，不依赖于剂量与个体体重的比例。在一些实施方案中，抗IL-1β结合抗体或其结合片段以一个或多个1000mg或更少，500mg或更少，或250mg或更少的抗体或片段的固定剂量进行施用。在一些实施方案中，抗IL-1β结合抗体或其结合片段以一个或多个100mg或更少，25mg或更少，或10mg或更少的抗体或片段的固定剂量进行施用。在一些实施方案中，抗IL-1β结合抗体或其结合片段以一个或多个至少0.5mg的抗体或片段的剂量进行施用。在一些实施方案中，抗IL-1β结合抗体或其结合片段以一个或多个至少1mg的抗体或片段剂量进行施用。在一些实施方案中，抗IL-1β结合抗体或其结合片段以一个或多个至少10mg的抗体或片段剂量进行施用。在一些实施方案中，抗IL-1β结合抗体或其结合片段以一个或多个1mg至100mg的抗体或片段剂量进行施用。
[0322] 在某些实施方案中，固定剂量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段是从约1mg至约10mg、约1mg至约25mg、约10mg至约25mg、约10mg至约50mg、约10mg至约100mg、约25mg至约50mg、约25mg至约100mg、约50mg至约100mg、约50mg至约150mg、约100mg至约150mg、约100mg至约200mg、约150mg至约200mg、约150mg至约250mg、约200mg至约250mg、约
200mg至约300mg、约250mg至约300mg、约250mg至约500mg、约300mg至约400mg、约400mg至约500mg、约400mg至约600mg、约500mg至约750mg、约600mg至约750mg、约700mg至约
800mg、或约750mg至约1000mg。在其他实施方案中，固定剂量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段是从约1mg至约10mg、约1mg至约25mg、约10mg至约25mg、约10mg至约100mg、约
25mg至约50mg、约50mg至约100mg、约100mg至约150mg、约150mg至约200mg、或约200mg至约250mg。
200mg至约300mg、约250mg至约300mg、约250mg至约500mg、约300mg至约400mg、约400mg至约500mg、约400mg至约600mg、约500mg至约750mg、约600mg至约750mg、约700mg至约
800mg、或约750mg至约1000mg。在其他实施方案中，固定剂量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段是从约1mg至约10mg、约1mg至约25mg、约10mg至约25mg、约10mg至约100mg、约
25mg至约50mg、约50mg至约100mg、约100mg至约150mg、约150mg至约200mg、或约200mg至约250mg。
[0323] 在任何和/或所有的上述方法的一些实施方案中，固定剂量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段是使用预装填的注射器或递送装置施用的。
[0324] 在任何和/或所有的上述方法的一些实施方案中，抗IL-1β结合抗体或其结合片段是皮下、静脉内或肌肉内注射施用的。
[0325] 在任何和/或所有的上述方法的一些实施方案中，施用初始剂量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段，之后施用一个或多个后续剂量。在一些实施方案中，初始剂量和一个或多个后续剂量是以约每周1次至约每12个月1次的间隔施用的。在一些实施方案中，初始剂量和一个或多个后续剂量是以约每2周1次至约每6个月1次的间隔施用的。在一些实施方案中，初始剂量和一个或多个后续剂量是以约每月1次至约每6个月1次的间隔施用的。在一些实施方案中，初始剂量和一个或多个后续剂量是以约每月1次至约每3个月1次的间隔施用的。在一些实施方案中，初始剂量和一个或多个后续剂量是以约每3个月1次至约每6个月1次的间隔施用的。
[0326] 本公开还提供了用于任何和/或所有的上述方法中的给药方案，其中上述给药方案包括一个以上的用于施用抗IL-1β结合抗体或其结合片段的给药间隔。在一些实施方案中，给药方案包括以至少两个(例如，2、3、4、5、6)不同的给药间隔施用IL-1β抗体或其片段。在一些实施方案中，给药方案包括以两个不同的给药间隔施用IL-1β抗体或其片段。在一些实施方案中，给药方案包括以两个不同的给药间隔施用IL-1β结合抗体或其结合片段，其中所述第一个给药间隔包括施用一次或多次IL-1β抗体或其片段剂量，而第二个给药间隔包括施用一次或多次IL-1β抗体或其片段剂量，并且其中第一个给药间隔时间上短于第二个给药间隔。例如，第一个给药间隔可以是天或周，而第二个给药间隔可以是月。在一些实施方案中，第一个给药间隔是约5天至约28天，约7天至约21天，约12天至约16天，或约14天。在一些实施方案中，第二个给药间隔是约1个月至约3个月，约1个月至约2个月，或约1个月。在一些实施方案中，第一个给药间隔是约7天，第二个给药间隔是约1个月。
[0327] 在一些实施方案中，在施用初始剂量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段后，再施用一次或多次后续剂量，其中在施用初始剂量和第二次剂量之间的给药间隔，和在第二次和第三次剂量之间的给药间隔是约7天至约21天，其中在施用后续剂量之间的给药间隔是约1个月至约3个月。在一些实施方案中，在施用初始剂量和第二次剂量之间的给药间隔，和在第二次和第三次剂量之间的给药间隔是约12天至约16天，而在施用后续剂量之间的给药间隔是约1个月至约2个月。在一些实施方案中，在施用初始剂量和第二次剂量之间的给药间隔，和在第二次和第三次剂量之间的给药间隔是约14天，而在施用后续剂量之间的给药间隔是约1个月。在任意的和/或所有的上述方法的一些实施方案中，将抗IL-1β结合抗体或其结合片段施用给个体使得剂量之间的时间间隔足以维持所述抗体或抗体片段在个体中的血浆浓度在至少约0.1ug/mL的水平。在一些实施方案中，将抗IL-1β结合抗体或其结合片段施用给个体使得剂量之间的时间间隔足以维持所述抗体或抗体片段在个体中的血浆浓度在至少约0.3ug/mL的水平。在一些实施方案中，将抗IL-1β结合抗体或其结合片段施用给个体使得剂量之间的时间间隔足以维持所述抗体或抗体片段在个体中的血浆浓度在至少约1ug/mL的水平。在一些实施方案中，这些血浆浓度值指从用根据本文公开内容的抗体或片段治疗的个体获得的值。
[0328] 在任意的和/或所有的上述方法的一些实施方案中，施用初始剂量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段后，再施用一次或多次后续剂量，其中所述一次或多次后续剂量的量与初始剂量几乎相同或较少。
[0329] 在任意的和/或所有的上述方法的一些实施方案中，施用初始剂量的抗IL-1β结合抗体或其结合片段后，再施用一次或多次后续剂量，其中至少一次后续剂量的量比初始剂量多。
[0330] 在任意的和/或所有的上述方法的一些实施方案中，抗IL-1β结合抗体或其结合片段在测量IL-1β诱导的IL-8生产的人全血IL-1β抑制测定中，具有比IL-1β受体拮抗剂更低的IC50。在一些实施方案中，所述IL-1β受体拮抗剂是阿那白滞素。
[0331] 在任意的和/或所有的上述方法的一些实施方案中，施用抗IL-1β结合抗体或其结合片段，其中施用初始剂量的抗体或抗体片段后，再施用一次或多次后续剂量，且其中在治疗过程中，在施用所述初始剂量和一个或多个后续剂量之间，允许所述抗体或抗体片段在人中的血浆浓度减少至低于约0.1ug/mL的水平一段大于约1周和小于约6个月的时间。在一些实施方案中，在施用之间允许所述抗体或抗体片段的血浆浓度减少至低于约0.07ug/mL、约0.05ug/mL、约0.03ug/mL或约0.01ug/mL的水平一段大于约1周和小于约5个月、约4个月、约3个月、约2个月、约1个月、约3周或约2周的时间。在一些实施方案中，所述血浆浓度值指从用根据本文公开内容的抗体或片段治疗的个体获得的值。
[0332] 组合
[0333] 本公开还提供了药物组合物，其包括可以与IL-1β结合抗体或片段联合(例如，与之分离的)施用的一种或多种其他活性剂，此类施用可以在相同的时间点或不同的时间点实施，例如同一天或不同天。其他活性剂的施用可以根据本领域已知的标准医学实践(例如，现有护理标准)，或者当与IL-1β结合抗体或片段的施用联合使用时，可以修饰所述施用(例如，更长的间隔、更小的剂量、延迟的起始)，例如本文公开的。下文提出的活性剂是示例性的，并非意在限制。组合还可以包括一种以上的其他活性剂，例如两种或三种其他活性剂。
[0334] 如本文公开的，施用给个体的抗IL-1β抗体或其片段可以与至少一种其他的活性剂治疗一起组合施用，例如本文提供的任何活性剂。在一个实施方案中，维持用至少一种活性剂治疗。在另一个实施方案中，至少一种活性剂治疗是降低或不持续的(例如，当个体稳定时)，同时用抗IL-1β抗体或片段治疗则维持在恒定的给药方案。在另一个实施方案中，至少一种活性剂治疗是降低或不持续的(例如，当个体稳定时)，并且用抗IL-1β抗体或片段治疗是降低的(例如，更低的剂量、更低的给药频率、更短的治疗方案)。在另一个实施方案中，用至少一种活性剂治疗是降低或不持续的(例如，当个体稳定时)，并且用抗IL-1β抗体或片段治疗是增加的(例如，更高的剂量、更高的给药频率、更长的治疗方案)。在另一个实施方案中，维持用至少一种活性剂治疗，并降低或不持续的(例如，更低的剂量、更低的给药频率、更短的治疗方案)用抗IL-1β抗体或片段治疗。在另一个实施方案中，降低或不持续的(例如，更低的剂量、更低的给药频率、更短的治疗方案)用至少一种活性剂治疗和用抗IL-1β抗体或片段治疗。
[0335] 在一些实施方案中，任意的的上述方法可进一步包括施用至少一种包括抗IL-1β结合抗体或其结合片段以外的活性剂的其他药物组合物。在一些实施方案中，所述至少一种其他药物组合物的活性剂是胆固醇降低剂。在一些实施方案中，所述至少一种其他药物组合物的活性剂是抑制素或HMG-CoA还原酶抑制剂(例如，洛伐他汀(lovastatin)、普伐他汀(pravastatin)、辛伐他汀(simvastatin)、氟伐他汀(fluvastatin)、阿托伐他汀(atorvastatin)、西立伐他汀(cerivastatin)、美伐他汀(mevastatin)、匹伐他汀(pitavastatin)、罗苏伐他汀(rosuvastatin)或其混合物，或其与依泽替米贝(Ezetimibe)、烟酸、苯磺酸氨氯地平(Amlodipine Besylate)的混合物)。在一些实施方案中，所述至少一种其他药物组合物的活性剂是钙通道阻断剂(例如，氨氯地平、地尔硫卓、硝苯地平、尼卡地平、维拉帕米)或β阻断剂(例如，艾司洛尔(esmolol)、美托洛尔(metoprolol)、纳多洛尔(nadolol)、喷布洛尔(penbutolol))。在一些实施方案中，所述至少一种其他药物组合物的活性剂是抗高血压剂(例如，拉贝洛尔、美托洛尔、肼苯哒嗪、硝酸甘油、尼卡地平、硝普钠、氯维地平)、利尿剂(例如，噻嗪类利尿剂、氯噻酮(chlorthalidone)、呋塞米、氢氯噻嗪、吲达帕胺、美托拉宗、盐酸阿米洛利、螺内酯(spironolactone)、氨苯蝶啶(triamterene))或阿司匹林。在一些实施方案中，所述至少一种其他药物组合物的活性剂是血管紧张肽转变酶(ACE)抑制剂(例如，雷米普利、雷米普利拉(ramiprilat)、卡托普利(captopril)、赖诺普利(lisinopril))或血管紧张素II受体阻断剂(例如，氯沙坦、奥美沙坦(olmesartan)、缬沙坦)。在一些实施方案中，所述至少一种其他药物组合物的活性剂是血管舒张剂。在一些实施方案中，所述至少一种其他药物组合物的活性剂是抗凝剂(例如，醋硝香豆素(acenocoumarol)、苯丙香豆素(phenprocoumon)、华法林(warfarin)、肝素(heparin)、低分子量肝素(low molecular weight heparin))或血小板聚集的抑制剂(例如，氯吡格雷(clopidogrel)、噻氯匹定(ticlopidine)、西洛他唑(cilostazol)、双嘧达莫(dipyridamole)、依替巴肽(eptifibatide)、阿司匹林(aspirin)、阿昔单抗(abciximab)、依替巴肽(eptifibatide)、替罗非班(tirofiban))。在一些实施方案中，所述至少一种其他药物组合物的活性剂是溶栓剂(例如，链激酶(streptokinase)、尿激酶(urokinase)、阿替普酶(alteplase)、瑞替普酶(reteplase)、替奈普酶(tenecteplase))。在一些实施方案中，所述至少一种其他药物组合物的活性剂是毛地黄。在一些实施方案中，所述至少一种其他药物组合物的活性剂是地高辛(digoxin)或奈西立肽(nesiritide)。在一些实施方案中，所述至少一种其他药物组合物的活性剂是氧。在一些实施方案中，所述至少一种其他药物组合物的活性剂是凝血酶抑制剂(例如，水蛭素(hirudin)、比伐卢定(bivalirudin))。在一些实施方案中，所述至少一种其他药物组合物的活性剂是硝酸盐(例如，三硝酸甘油酯(GTN)/硝酸甘油、二硝酸异山梨酯(isosorbide dinitrate)、单硝酸异山梨酯(isosorbide mononitrate))。在一些实施方案中，所述至少一种其他药物组合物的活性剂是止痛剂(例如，硫酸吗啡(morphine sulfate))。在一些实施方案中，所述至少一种其他药物组合物的活性剂是肾素抑制剂。在一些实施方案中，所述至少一种其他药物组合物的活性剂是内皮素A受体抑制剂。在一些实施方案中，所述至少一种其他药物组合物的活性剂是醛固酮抑制剂。
[0336] 在另一个实施方案中，考虑IL-1β抗体或结合片段的用途，用于生产治疗或预防本文公开的疾病或病况的药物(例如，用于降低、预防或治疗心血管事件和/或心血管疾病)中。在任何所述用途中，药物可以与使用第二种活性剂的治疗协调。
[0337] 在本公开的另一个方面，提供了制备品，其包含容器、在容器内包含抗IL-1β抗体或其片段的组合物、和产品说明书，所述说明书包含有关根据本文公开给个体(例如，人)施用抗体或片段的说明(例如，用于降低、预防或治疗心血管事件和/或心血管疾病)。在一个实施方案中，容器进一步包含药学上合适的载体、赋形剂或稀释剂。在一个相关实施方案中，容器内的组合物进一步包含第二活性剂。
[0338] 本公开还考虑试剂盒。在一个实施方案中，试剂盒包含包装在容器例如小瓶或瓶中的治疗或预防有效量的抗IL-1β抗体或片段，并且进一步包含与容器附着或与容器包装在一起的标签，所述标签描述容器的内容物并且提供关于如本文公开的容器内容物用途的指示和/或说明(例如，用于降低、预防或治疗心血管事件和/或心血管疾病)。在一个实施方案中，容器进一步包含药学上合适的载体、赋形剂或稀释剂。在一个相关实施方案中，容器进一步包含第二活性剂。
[0339] 在一个实施方案中，制备品、试剂盒或药物用于治疗或预防个体(例如，人)的疾病或病况(例如，用于降低、预防或治疗心血管事件和/或心血管疾病)。在另一个实施方案中，制备品的产品说明书和试剂盒的标签上的说明包含根据任何上述剂量和/或给药方案来施用抗体或片段的说明。在另外一个实施方案中，试剂盒或制备品的容器是预装注射器。实施例
[0340] 下述实施例仅旨在用于进一步举例说明本公开的实践，但不应解释为以任何方式限制其范围。其中引用的所有专利和科学文献的公开内容特别在此整体引入作为参考。
[0341] 实施例1
[0342] 向人类个体施用IL-1β抗体
[0343] 可以向个体施用IL-1β结合抗体或其结合片段用于上述用途。具体而言，在一个实例中，向人类个体施用名为AB7的IL-1β抗体(如上所述)以评估安全性、药物动力学和体内的生物学活性。在有2型糖尿病的人类个体中实施双盲的、安慰剂对照的临床研究。在一段时间内，通过静脉内(IV)或皮下(SC)途径向个体组给予单个剂量或多个剂量的抗体。
[0344] 关于IV途径施用的单次剂量，下表显示了用于研究的治疗组和个体数。
[0345]
[0346] 相似的，关于SC途径施用的单次和多次(3次，每双周)剂量，下表显示了治疗组和个体数。
[0347]
[0348] 在研究第1天时，SC注射(例如，上腹部、手臂、股)或经由恒定速率IV输注施用抗体或安慰剂。使用本领域已知的标准医学实践进行安全性评估，包括不良事件的记录、身体检查、生命体征和临床实验室检测(例如，血液化学、血液学、尿分析)。在剂量施用前和在施用后多个时间段收集血样，以评估多种参数，包括C反应蛋白。
[0349] 可选的或额外的，还可以包括研究组以用于评估例如以相同或更长的时间间隔(例如，月间隔)、备选的剂量和/或增加的组大小的额外数量的后续剂量的施用。
[0350] 实施例2
[0351] IL-1β抗体在人类个体中的药物动力学
[0352] 在第0、1、2、3、4、7、9±1、11±1、14±1、21±2、28±2、42±3和56±3天时，获得样品用于药物动力学分析。在IV施用0.01、0.03、0.1、0.3或1.0mg/kg剂量水平的单次抗体剂量后的药物动力学数据中间分析显示血清浓度-时间曲线，其具有22天的终末半衰期、2.54mL/天/kg的清除率和41.3mL/kg的中央室(central compartment)分布体积，非常类似于血清体积(图1)。
[0353] 相似的，分析了单个剂量的SC施用组的样品。如图2所示，在0.03、0.1和0.3mg/kg剂量水平施用抗体产生了这样的曲线，其具有22.7天的终末半衰期、2.4mL/天/kg的清除率和40.7mL/kg的中央室分布体积。
[0354] 实施例3
[0355] 在人类个体中IL-1β抗体对CRP的影响
[0356] 也在与PK样品相同的时间点在血清中测量C-反应蛋白。将每个抗体治疗剂量组的单个剂量抗体降低的超敏C反应蛋白(usCRP)水平与安慰剂相比。如图3所示，相比安慰剂的4％，在单个IV剂量抗体后28天，0.01、0.03、0.1、0.3和1.0mg/kg剂量组的usCRP的中间百分比降低分别是33、46、47、36和26。
[0357] 实施例4
[0358] 在心血管事件模型(急性心肌梗塞)中评估IL-1β抗体
[0359] 为了确定IL-1β抗体或其结合片段的心保护效应(例如，抑制不良的心重塑)，使用急性心肌梗塞(MI)的啮齿类模型(参见例如Wang等人，2006，Tex.Heart Inst.J.33：290-293；Salloum等人，2009，Cardiovasc.Drugs Ther.23：129-135)。心功能在例如MI模型中的测量的改善与后续心血管事件(例如，充血性心力衰竭)的几率相关。啮齿类MI模型使用远系繁殖的小鼠(例如癌症研究中心(Institute of Cancer Research)小鼠)和/或大鼠(例如Wistar大鼠)。在手术前，通过经胸的超声波心动描记法(TTE)评估动物，例如使用Vevo770成像系统(VisualSonics，Toronto，Canada)或Acuson C256，来获得对下列参数的测量：
[0360] ●左心室心舒张末期直径(LVEDD)
[0361] ●左心室心收缩末期直径(LVESD)
[0362] ●前壁心舒张厚度(AWDT)
[0363] ●后壁心舒张厚度(PWDT)
[0364] ●前壁心收缩厚度(AWST)
[0365] ●后壁心收缩厚度(PWST)
[0366] 左心室缩短分数(FS)计算为：
[0367] (LVEDD-LVESD)/LVEDD X 100
[0368] 将麻醉的成年动物进行冠状动脉结扎。在胸廓切开暴露心脏后，使用绕血管放置的丝质绑缚物结扎最接近的左降冠状动脉，诱导MI。对照动物(假操作)进行相同的手术程序，但没有冠脉结扎(参见下表)。在手术过程中或术后阶段立即死亡的动物未包括在分析内。
[0369]
[0370]
[0371] 然后，动物在局部缺血的过程中和/或之后的一个或多个预定的时间，接受腹膜内或静脉内施用的治疗抗体或安慰剂(例如，对照抗体)。例如，在一组中，抗体在局部缺血的过程中(t＝0)施用，而在另一组中，抗体在局部缺血后24小时施用。
[0372] 观察动物和记录在研究过程中死亡的数量。在预定的治疗后天数(例如，24小时、第7天、第14天)，通过TTE再次评估剩余的动物。在有意识的清醒下测量收缩BP，例如使用非侵入性的计算机尾套(tail-cuff)系统(BP-2000，Visitech Systems)，发现其与BP的直接动脉内测量密切相关。处死动物，收集血液的血清，并且确定梗塞面积(大小)。在去除后，将心脏用伊文思蓝染料或0.5％氮蓝四唑(NBT)染色，用盐水润洗，并照相确定梗塞面积。然后，将组织固定在4％多聚甲醛中，石蜡包埋并切片，用苏木精和伊红染色，用于组织破坏的组织学评估。可选的或额外的，固定组织并切片，定量心肌细胞死亡的水平(例如，TUNEL来确定凋亡)。
[0373] 可 选 的，可 以 在 成 年 的 雄 性 远 系 繁 殖 ICR 小 鼠 ( 例 如，HarlanLaboratories(Indianapolis，IN))进行评估IL-1β抗体或片段对心脏功能和/或不良的心重塑的影响(例如，后续心血管事件的几率，如充血性心力衰竭)的研究。CD-1小鼠经历如前所述的实验性心肌梗塞(Abbate等人，2008，Circulation 117：2670-2683)。用戊巴比妥(70mg/kg，IP)麻醉小鼠，口腔气管插管，在正压呼吸器上呼吸。在第四肋间隙实施左胸廓切开术，剥离心包膜暴露心脏。然后用手术显微镜(Leica F40)鉴别左降冠状动脉，用7.0丝质绑缚物结扎。如前所述(缩写为ibid)对一组4只小鼠进行假操作。在手术后，随机分配小鼠进行治疗，术后立即用腹膜内施用(0.05mg/kg、0.5mg/kg、5mg/kg剂量)抗IL-1β抗体XMA052MG1K或用对照IgG(n＝6只/组)治疗，7天后再次处理。还测试了在术前48小时用额外剂量的抗体(0.5mg/kg)预处理的效果。
[0374] 所有小鼠在术前和冠状动脉结扎后7、14和28天都经历经胸超声心动描记法。用Vevo770成像系统(VisualSonics Inc，Toronto，Ontario，Canada)和30-MHz探针实施多普勒超声心动描记法。心脏首先在胸骨旁和顶面观以2维模式成像，并根据美国超声心动描记法协会推荐(Gardin等人，2002，J Am Soc Echocardiography 15：275-290)实施测量。在M模式测量左心室心舒张末期直径(LVEDD)、左心室心收缩末期直径(LVESD)、前壁心舒张厚度(AWDT)、前壁心收缩厚度(AWST)、后壁心舒张厚度(PWDT)和后壁心收缩厚度(PWST)。如下计算LV缩短分数(LVFS)：FS＝(LVEDD-LVESD)/LVEDD X 100。使用17-片段图确定无着丝粒区段数(与梗塞面积相关)。使用顶面观测量射血时间(ET)，在瞬时A波结束和之后的E波之间(AE)的时间间隔。然后计算心肌性能指数(MPI，或Tei指数)(MPI＝[AE-ET]/ET)。还测量三尖瓣环收缩期前移(tricuspidal annular plane systolic excursion)作为右心室功能的标志物。实施和读取超声心动描记图的研究人员对治疗分配是未知。使用SPSS 11.0(Chicago，IL)进行统计学分析，使用ANOVA与post-hoc T检验进行多重比较，探讨组之间的差异。为了比较多个组之间的间隔改变，使用重复测量的随机效应ANOVA，来确定时间、组别和时间-组别相互作用的主效应。如果P值＜0.05，则认为统计学差异是显著的。
[0375] 所有的组中的基线超声心动描记值是相似的。如预期，早至术后第7天，相比所有组中的基线，观察到了LV直径(LVEDD和LVESD)的显著增加和LVFS的显著减少(除假操作小鼠外)。相比对照，接受XMA052MG1K抗体的小鼠在LVEDD、LVESD具有较小的增加，而在LVFS具有较小的减少(图4)。
[0376] 在盐水治疗的小鼠中，梗塞面积的代表物——无着丝粒区段的数量是3.9±0.4，其不受治疗的影响(图5)。因此，在盐水治疗中，前壁(梗塞)厚度)是0.52±0.05mm，且不受治疗影响(图5)。MPI或Tei指数是组合型收缩和舒张功能障碍的标志物与心力衰竭相关致死的代表性标志物，在AMI后显著增加(反映差功能)，并在用XMA052MG1K抗体治疗的小鼠中得以保持(图5)。相似的，TAPSE是右心室功能的标志物和AMI相关致死的代表性标志物，在AMI后显著减少(反映差功能)，并在用XMA052MG1K抗体治疗的小鼠中得以部分保持(图5)。因而，使用抗体阻断IL-1β在小鼠中缓解了AMI后的心脏扩大和功能障碍，不依赖于梗塞面积。在该动物模型中，在术前48小时用额外剂量的XMA052MG1K抗体预处理没有提供相对于术后治疗的任何优势(数据未显示)。
[0377] 实施例5
[0378] 在心血管事件模型(中风)中评估IL-1β抗体
[0379] 使用啮齿类(例如，小鼠、大鼠)中风模型评估IL-1β抗体或其结合片段的效应。例如，在一个模型中，使用成年的雄性Fischer大鼠(参见例如，Morales等人，2008，Circulation 118：1450-1459)。在另一个模型中，使用C57BL/6小鼠(参见例如，Royl等人，2009，Brain Res.1265：148-157)。由对治疗组不知情的研究人员以随机模式实施实验。通过中脑动脉闭塞(MCAO)诱导永久性局部脑缺血，例如通过烧灼或单纤丝阻塞。MCA暴露但未闭塞的大鼠/小鼠作为假操作对照。
[0380] 然后，对照动物组和MCAO组在一个或多个预定的时间，按规程接受腹膜内或静脉内施用的治疗抗体或安慰剂(例如，对照抗体)。例如，在一个组中，按规程立即施用抗体，而在另一个组中，在24小时后施用抗体。
[0381]MCAO 抗体Txt 活着测试 MRI 组织学
组1 假操作 N/A 是 是 是
组2 是 安慰剂 是 是 是
组3 是 低剂量(t＝0) 是 是 是
组4 是 高剂量(t＝0) 是 是 是
组3 是 低剂量(24hr) 是 是 是
组4 是 高剂量(24hr) 是 是 是
组1 假操作 N/A 是 是 是
组2 是 安慰剂 是 是 是
组3 是 低剂量(t＝0) 是 是 是
组4 是 高剂量(t＝0) 是 是 是
组3 是 低剂量(24hr) 是 是 是
组4 是 高剂量(24hr) 是 是 是
[0382] 评估动物的存活和体重改变，以及功能恢复(例如，感觉运动的、行为测试、如杆测试(pole test)、悬线测试和/或神经性缺乏评分)，和在活着阶段使用MRI测量脑损伤大小(例如T2-加权的MRI)，之后是在处死后(例如，第4周)的组织学检验(例如，HE染色和GFAP染色的冠状脑恒冷箱切片)后。此外，基于T2-加权MRI和HE染色的冠状脑恒冷箱切片，可以实施计算机辅助的半球容量分析法。可以评估其他的测试组，通过用MRI(例如，FAIR MRI)测量半球脑血流，确定MCAO后对急性再灌注的影响。
[0383] 实施例6
[0384] 在外周血管病的模型中评估IL-1β抗体
[0385] 为了确定IL-1β抗体或其结合片段对外周血管病的影响，可以使用肢缺血的动物模型(参见例如，Park等人，Endocrinology 149：483-491，2008)。例如，通过在麻醉动物中结扎一条股动脉，在C57BL/6雄性小鼠诱导肢缺血。暴露了动脉但未结扎的小鼠作为假操作对照。
[0386] 然后，对照动物组和动脉结扎组在一个或多个预定的时间，按规程接受腹膜内或静脉内施用治疗抗体或安慰剂(例如，对照抗体)。例如，在一个组中，按规程立即施用抗体，而在另一个组中，在24小时后施用抗体。
[0387]结扎 抗体Txt LDPI 组织学
组1 假操作 N/A 是 是
组2 是 安慰剂 是 是
组3 是 低剂量(t＝0) 是 是
组4 是 高剂量(t＝0) 是 是
组3 是 低剂量(24hr) 是 是
组4 是 高剂量(24hr) 是 是
组1 假操作 N/A 是 是
组2 是 安慰剂 是 是
组3 是 低剂量(t＝0) 是 是
组4 是 高剂量(t＝0) 是 是
组3 是 低剂量(24hr) 是 是
组4 是 高剂量(24hr) 是 是
[0388] 用激光多普勒输注成像(LDPI)分析仪(Moor Instruments，Devon，UK)评估两侧后腿的血流，并通过缺血肢体与正常肢体血流的比例评估血流恢复。以有规律的间隔观察LDPI的梯度血流测量(例如，持续两周的每天)。无痛致死小鼠，并分离缺血后肢进行组织学分析。
[0389] 在用4％多聚甲醛固定后，将缺血的小腿包埋在OCT化合物中，冷冻进行恒冷箱切片。用大鼠抗小鼠血小板EC粘附分子-1(PECAM-1)(PharMingen)、小鼠抗α平滑肌肌动蛋白(SMA)(Sigma)和大鼠抗小鼠CD45(PharMingen)、兔抗cGKI(Calbiochem)染色组织切片。为了评估毛细血管密度和炎症，在每只小鼠的2个不同切片(各≈3mm)上拍摄4个随机视野，并进行计算机辅助分析，按用PECAM-1(内皮标志物)或αSMA(血管平滑肌标志物)染色的毛细血管的平均数计算毛细血管密度。计数浸润的CD45阳性白细胞的平均数作为炎症的评估。
[0390] 实施例7
[0391] 在动脉粥样硬化模型中评估IL-1β抗体
[0392] 在共培养系统中评估IL-1β抗体(XOMA 052)对巨噬细胞诱导内皮细胞和平滑肌细胞生产细胞因子的影响。如示意，在该模型中，用200nMPMA预激活THP-1细胞12小时至巨噬细胞样表型，洗涤一次，在存在或缺少XOMA 052的条件下，按比例(10∶1；106THP-1和105HUVEC或CASMC)添加至预铺板的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)或人冠状动脉平滑肌细胞(CASMC)。可选的，如示意，在存在或缺少XOMA 052的条件下，用rhIL-1β(R&D Systems)孵育细胞。在48小时后，去除上清液，通过ELISA(R&D Systems)评估细胞因子或酶含量。所有的测定都实施一式三份。数据证实XOMA 052抑制IL-1β诱导的促炎分子的释放，所述促炎分子例如内皮细胞的IL-6、IL-8、MCP-1和PAI-1(p＜0.05，图6，左栏)。此外，数据显示XOMA 052抑制平滑肌细胞释放IL-6和IL-8，以及IL-1β-驱动的MMP-3和MMP-9(p＜0.05，图7，左栏)。重要的是，还观察到XOMA 052强力的降低在巨噬细胞/EC或巨噬细胞/SMC共培养系统背景中这些因子的诱导(p＜0.05，图6&7，右栏)。
[0393] ApoE敲除小鼠是动脉粥样硬化的良好验证的模型，遵循与人类的动脉粥样硬化相似的进展模式。自第6周开始，用导致动脉粥样硬化的餐喂养C57BL/6背景的雄性ApoE-/-小鼠16周，并在研究的持续期用IL-1β抗体XMA052MG1K(i.p.，如所示每周2次)、对照小鼠IgG(i.p.，每周2次，1.0mg/kg；Jackson ImmunoResearch)或喹那普利(subQ，10mg/kg，每天)治疗。如前后文所述(Calkin等人，2007，Atherosclerosis 195：17-22)，使用苏丹IV染色进行En face分析。将主动脉分为弓主动脉、胸主动脉和腹主动脉，然后纵向切断。在固定En face在蜡上后，照相和分析主动脉。根据苏丹IV染色而可见红的区域百分比，定量总的和分区的斑块面积。之后，将主动脉包埋在石蜡中，并切片进行横切面分析。在测试的3个剂量下，XOMA 052MG1K抑制ApoE敲除小鼠中的22-37％的动脉粥样硬化损伤的形成(p＜0.05，图8、9)。
[0394] 可选的，使用非侵入性的高分辨率超声技术(参见例如，Gronros等人，Am J Physiol Heart Circ Physiol.295：H2046-53，2008)，评估斑块发展和体内冠状动脉功能。用高脂肪餐喂养8周龄的雄性ApoE小鼠约16周，用或不用抗体治疗。在治疗过程中，测量总胆固醇水平，以及头臂动脉中的损伤进展的滞后程度，如使用超声生物显微镜在体内可视化。还使用组织学分析确定头臂动脉粥样硬化的降低。还通过流量(volumetric flow)测量冠状动脉功能，例如同步记录在腺苷输注前和过程中的多普勒速度信号和左冠状动脉形态。
[0395]抗体Txt 胆固醇 超声 组织学
组1 安慰剂 是 是 是
组2 低剂量 是 是 是
组3 中剂量 是 是 是
组4 高剂量 是 是 是
组1 安慰剂 是 是 是
组2 低剂量 是 是 是
组3 中剂量 是 是 是
组4 高剂量 是 是 是
[0396] 为了进一步表征IL-1β抗体对ApoE敲除模型中动脉粥样硬化损伤形成的影响，将主动脉窦和/或头臂动脉切片，评估损伤横切面面积和含量(Zhou等人，2008，Eur.J.Pharmacol.590：297-302；Calkin 等 人，2007，Atherosclerosis 195：17-22；Kirii 等人，2003，Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.23：656-660)。将系列的3-μm石蜡切片脱蜡和再次水合。用3％过氧化氢孵育，抑制内源性过氧化物酶活性。用20％(v/v)磷酸缓冲盐溶液中的山羊血清封闭切片后，在4℃用抗α-平滑肌肌动蛋白、炎性标志物(例如IL-6、IL-8、MCP-1、ICAM-1和VCAM-1)、降解酶(例如MMP-3、MMP-9和组织蛋白酶S)或血栓形成因子(例如组织因子或PAI-1)的抗体孵育切片过夜。然后用合适的二抗孵育切片。计算阳性区域，表示为整个斑块区域的百分比。包括了阴性对照，其中用相同稀释度的小鼠或大鼠IgG替代了一抗。还通过用亲脂性染料油红O染色，评估切片的脂类含量，并通过用抗CD68的抗体染色免疫组织化学定量巨噬细胞浸润(Kirii等人，2003，Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.23：656-660)。用图像分析程序(Image Pro Plus，Media Cybernetics)实施阳性免疫染色切片的盲分析。
[0397] 可选的，通过定量的基因表达分析探讨炎症和基质降解的标志物(Calkin等人，2007，Atherosclerosis 195：17-22)。使用Trizol和DNA酶处理，通过均质化作用从整个主动脉中提取RNA。使用Taqman系统，在ABI Prism 7700序列检测仪上进行定量实时RT-PCR。将前述基因的基因表达根据18S RNA归一化，按相比未处理对照小鼠中的表达水平的比例报道。出于统计学目的，非参数数据处理为其log衍生物。使用Student T-检验(两组)或单边ANOVA(三组或多组)比较表达的差异。
[0398] 还通过ELISA或使用Mesoscale Discovery(MSD)平台评估IL-1β抗体对抗体治疗的ApoE敲除小鼠的血清中的炎症、降解和血栓形成的上述标志物的影响。如所述，分析在处死时通过心脏穿刺获得的血清的血清脂类(Warnick，1986，Methods Enzymol.129：101-23)。所有的脂类测定都按一式三份测定来实施。每个测定进行具有已知的被分析物浓度的外部对照样品以保证精确度。还确定游离的血浆甘油浓度，用于校正甘油三酯值。
[0399] 为了定量评估动脉粥样硬化损伤的稳定性，选择5μm厚度的切片并定量。从心底横切面直到出现升主动脉处，按每50μm将切片梯度切开。每只小鼠使用约6片系列5μm切片进行形态测定和免疫组化分析。用修饰的Movat pentachrome染色剂，将斑块中的胶原和泡沫细胞染色。检查染色切片的斑块中埋藏的纤维帽(fibrous cap)，也对其计数。用计算机成像分析程序(Image Pro Plus，Media Cybernetics)实施形态测定。按斑块面积的百分比确定斑块组成，包括细胞外脂类、泡沫细胞和胶原。直接测量斑块面积，并从内弹性膜包住的面积中减去，获得通过除以内弹性膜围绕的面积校正的开放管腔面积(patent lumen area)。通过计算易损指数((泡沫细胞+细胞外脂类)/(胶原+平滑肌细胞))和埋藏的纤维帽平均数，评估IL-1β抗体对斑块稳定性的影响。
[0400] 使用尾套系统测量收缩和舒张血压，并计算平均血压(Chamberlain等人，2009，PLoS ONE 4(4)：e5073)。为了确保小鼠的压力水平保持最低，在整个实验过程中使用单个处理者，在开始分析前，小鼠进行一周的训练(采集血压和脉搏读数，但数据被放弃)。在相同的时间进行测量，每天1次，避免血压的正常的每日波动。此外，每天在尾巴的相同部分采集血压。在分析过程中，每天进行10次测量，计算每个“数据日”和周的平均血压和标准偏差(总计50个读数/只小鼠/周，10/天)。在每一天，如果血压低于40或高于210mmHg，或者如果它落在均值的2侧标准偏差之外，则抛弃该单个数据点。如果有效读数少于4个，则抛弃当天的所有数据。如果没有测量至少3个有效天数，则抛弃该周的数据。在喂养Western或WHC餐之前，每只小鼠采集一周chow餐的基线读数。通过全局非线性回归分析数据。该统计测试分析了在数据集之间同时共享一个或多个参数的整个数据集家族。对于每个共享的参数，全局非线性回归发现了适用于所有数据集的一个最适值。在此情况下，在对照(chow喂养)和治疗(餐喂养)条件下，确定不同小鼠基因型的血压，而全局非线性回归确定了各血压曲线之间的差异是否是可信的。测试不比较单个时间点，相反全局处理数据以产生每个比较的单个p值。
[0401] 进一步延伸这些研究用于评估IL-1β抗体或其片段对ApoE缺陷鼠动脉粥样硬化模型的颈动脉动脉损伤中的斑块破裂的影响(参见例如Nakamura等人，Atherosclerosis，2009，Feb 21(印刷前的电子出版))。麻醉ApoE缺陷的8周龄小鼠(C57BL/6)，在左颈总动脉正好靠近其分叉处进行结扎。在结扎后4周，在正好靠近结扎位点处应用聚乙烯套。对照组包括在内，其中动脉是暴露但未结扎的，以及结扎但未应用聚乙烯套。
[0402] 然后，动物在一个或多个预定的时间，按程序接受腹膜内或静脉内施用的治疗抗体或安慰剂(例如，对照抗体)。例如，在一个组中，在放置套之前24或48小时，施用抗体。在另一组中，在放置套的时候施用抗体。
[0403]结扎 套 抗体Txt 组织学
组1 假操作 N/A N/A 是
组2 是 否 N/A 是
组3 是 否 安慰剂 第0天
组4 是 是 安慰剂 第4天
组5 是 否 低剂量(-24hr) 第0天
组6 是 否 高剂量(-24hr) 第0天
组7 是 是 低剂量(-24hr) 第4天
组1 假操作 N/A N/A 是
组2 是 否 N/A 是
组3 是 否 安慰剂 第0天
组4 是 是 安慰剂 第4天
组5 是 否 低剂量(-24hr) 第0天
组6 是 否 高剂量(-24hr) 第0天
组7 是 是 低剂量(-24hr) 第4天
[0404]组8 是 是 高剂量(-24hr) 第4天
组9 是 是 低剂量(第0天) 第4天
组10 是 是 高剂量(第0天) 第4天
组9 是 是 低剂量(第0天) 第4天
组10 是 是 高剂量(第0天) 第4天
[0405] 刚好在放置套之前(第0天)和放置套后第4天时，在生理压力下，对小鼠通过左心室输注等渗盐水和在0.01M磷酸盐缓冲液(pH 7.4)中的4％多聚甲醛。收集颈动脉，加工用于组织学分析。从每个颈动脉的套内区域制备横冷冻切片(cross-cryosection)(6μm)，并用苏木精和伊红(H&E)染色，以及用picrosirius红染色胶原。每个单独玻片上的相应切片用于用抗嗜中性粒细胞的抗体进行免疫组化染色。
[0406] 比较抗体组和对照组之间的斑块内出血和伴随壁内血栓的新内膜破裂的比例。通过将损伤分为三组，对颈动脉的套内区域的斑块破裂进行组织学分类，基于每个样品组织中以60-μm间隔进行的30个切片分析。当在套内区域没有裂缝或没有附壁血栓或闭塞性血栓时，分类为“无破裂”。当检测到斑块内出血，或斑块内有具有裂缝或侵蚀的附壁血栓或闭塞性血栓时，分别分类为“出血”或“破裂”。
[0407] 还确定新内膜中的嗜中性粒细胞浸润和胶原含量。通过picrosirius红染色的阳性区域评估胶原含量，所述阳性区域当用偏振光观察时表现为明亮的。通过嗜中性粒细胞阳性区域评估新内膜中的嗜中性粒细胞浸润，所述区域是用抗嗜中性粒细胞抗体染色的(1∶50；Serotec，MCA771GA)。
[0408] 实施例8
[0409] 在有至少一种心血管疾病风险因子历史的个体中的心血管事件降低
[0410] 为了确定IL-1β抗体或其结合片段对降低有至少一种心血管疾病风险因子历史的个体中的心血管事件的影响(例如，至第一次事件的时间)，实施临床研究。在一个研究中，在有风险的群体中评估IL-1β抗体，测量初级结果的降低(例如，预防)，所述结果包括由心血管原因、心肌梗塞或中风导致的复合型死亡，以及各自独立的结果。测量次级结果的降低(例如，预防)可包括由任何原因导致的死亡，对血管再生术的需求、心力衰竭、绞痛(例如，因绞痛入院、不稳定的绞痛)、充血性心力衰竭和急性冠脉综合征。
[0411] 对于双盲研究，个体被随机招募进两个IL-1β抗体治疗剂量组(例如，0.3mg/kg，0.1mg/kg)之一，或匹配的安慰剂组。抗体和安慰剂治疗与标准护理联合施用。如果男性和女性具有冠状动脉病(例如明显的冠状动脉病)、外周血管病、2型糖尿病、升高的总胆固醇、高血压、低HDL胆固醇水平、吸烟、动脉粥样硬化和/或微量蛋白尿的历史，则研究中包括了年龄至少55岁的所述男性和女性，。如果已知个体已经历过近期的(例如，在招募的
6个月内)心血管事件，则排除所述个体。组的大小包括了足量的个体，以检测心血管事件在研究期间的相对风险的降低。所有个体都提供书面通知的同意书。
6个月内)心血管事件，则排除所述个体。组的大小包括了足量的个体，以检测心血管事件在研究期间的相对风险的降低。所有个体都提供书面通知的同意书。
[0412] 以每月的间隔向个体施用IL-1β抗体或安慰剂，并监控整个研究期间的结果(例如，3年的研究期)。通过医学领域接受的标准临床诊断确定结果。提示IL-1β抗体的效应的结果包括心血管事件结果的相对风险的降低(例如，相对风险降低20％)。
[0413] 实施例9
[0414] 在有在先的心血管事件历史的个体中的心血管事件的降低
[0415] 为了确定IL-1β抗体或其结合片段对降低有在先的心血管事件历史的个体中的心血管事件的影响(例如，至第二次事件的时间)，实施临床研究。在一个研究中，在发生第一次记载的心肌梗塞或急性冠脉综合征的心血管事件后的时期，在个体中评估IL-1β抗体。研究测量初级心血管事件结果的降低(例如，预防)，所述结果包括由心血管原因、心肌梗塞或中风导致的复合型死亡，以及各自独立的结果。测量次级结果的降低(例如，预防)可包括由任何原因导致的死亡，对血管再生术的需求、心力衰竭、绞痛(例如，因绞痛入院、不稳定的绞痛)、充血性心力衰竭和急性冠脉综合征。
[0416] 对于双盲研究，个体被随机招募进两个IL-1β抗体剂量组(例如，0.3mg/kg，0.1mg/kg)之一，或匹配的安慰剂组。如上所述，研究招募了在近期发生第一次心血管事件(例如，在96小时内)后的男性和女性。组的大小包括了足量的个体，以检测后续心血管事件在研究期间的相对风险的降低。所有个体都提供书面通知的同意书。
[0417] 以每月的间隔向个体施用IL-1β抗体或安慰剂，并监控整个研究期间的结果(例如，3年的研究期)。通过医学领域接受的标准临床诊断确定结果。提示IL-1β抗体的效应的结果包括第二次心血管事件结果的相对风险的降低(例如，相对风险降低20％)。
[0418] 本文引用的所有参考文献，包括出版物、专利申请和专利在此引入作为参考，其程度与每个参考文献个别并特别指出引入作为参考且在本文中整体阐述相同。
[0419] 除非本文另有说明或与上下文明显矛盾，在描述本发明的上下文中(特别是在下述权利要求的上下文中)使用的术语单数形式(“a”和“an”和“the”)和相似指代应解释为涵盖单数和复数。除非另有说明，术语“包含”、“具有”、“包括”和“含有”应解释为开放术语(即，意指“包括但不限于”)。无论何时开放术语用于描述本发明的特征或元件时，都特别考虑可以使用封闭术语代替开放术语，而不背离本发明的精神和范围。除非本文另有说明，本文所述的数值范围仅旨在充当逐个地提及包含在该范围内的每个单独数值的速记方法，并且每个单独数值合并入说明书内，就如同其在本文中单独述及一样。除非本文另有说明或与上下文明显矛盾，本文描述的所有方法可以以任何合适的顺序来进行。除非另有说明，本文提供的任何和所有例子、或示例性语言(例如，“例如”)的使用，仅旨在更好的举例说明本发明并且不对本发明的范围造成限制。说明书中没有任何语言应解释为指示任何未要求保护的元件是本发明实践所必需的。
[0420] 本发明的优选实施方案在本文中得到描述，包括本发明人已知的用于执行本发明的最佳方式。阅读前述说明书后，这些优选实施方案的变化对于本领域技术人员可以是显而易见的。本发明人预期技术人员可以适当时采用此种变化，并且本发明人预期本发明可以以如本文具体描述外的方式进行实践。因此，如由适用的法律允许的，本发明包括后附权利要求中所述的主题的所有修饰和等价方案。此外，除非本文另有说明或与上下文明显矛盾，上述元件以其所有可能变化方式的任何组合都落入本发明中。
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