用于核酸扩增试剂冷冻干燥的保护剂
阅读：12发布：2020-05-11
专利汇可以提供用于核酸扩增试剂冷冻干燥的保护剂专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种用于核酸扩增 试剂 冷冻干燥 的保护剂，按 质量 比为(50-100)：1的海藻糖和 牛 血清 白蛋白 组成。添加本发明的保护剂，使核酸扩增试剂冷冻干燥后能在常温条件下运输，历时3天，对检测效果没影响，节约运输成本；易于保存：冻干体系无需低温冷冻，可于4℃保存6个月，若于-20℃可保存1年；操作容易，检测效果好：将核酸扩增体系与保护剂一起冷冻干燥，使用时仅需加入缓冲剂复溶，再加入待检测的 模版 ，即可进行检测，且检测灵敏度无损失或损失很小；保护剂组分简单，成本低廉：成本较低；该组保护剂适用于多种核酸扩增体系的冷冻干燥。，下面是用于核酸扩增试剂冷冻干燥的保护剂专利的具体信息内容。
用于核酸扩增试剂冷冻干燥的保护剂
技术领域
[0001] 本发明涉及一种用于核酸扩增试剂冷冻干燥的保护剂，适用于多种核酸检测技术。
背景技术
[0003] (1)需要被复制的DNA模版；
[0004] (2)针对DNA模版设计的引物；
[0005] (3)用于DNA复制的DNA聚合酶；
[0006] (4)缓冲剂；
[0007] (5)Mg2+；
[0008] (6)dNTPs；
[0009] 但以上试剂均需要低温冷冻保存，尤其是DNA聚合酶，需保存于-20℃，且避免反复冻融。这就给运输及使用带来极大不便，不仅增加运输成本，且使用时操作复杂，对实验者技术要求较高，伴随有污染的可能。
发明内容
[0010] 本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种用于核酸扩增试剂冷冻干燥的保护剂。
[0011] 本发明的技术方案如下：
[0013] 本发明的优点：
[0014] (1)添加本发明的保护剂，使核酸扩增试剂冷冻干燥后能在常温条件下运输，历时3天，对检测效果没影响，节约运输成本；
[0015] (2)易于保存：冻干体系无需低温冷冻，可于4℃保存6个月，若于-20℃可保存1年；
[0016] (3)操作容易，检测效果好：将核酸扩增体系与保护剂一起冷冻干燥，使用时仅需加入缓冲剂复溶，再加入待检测的模版，即可进行检测，且检测灵敏度无损失或损失很小；
[0017] (4)保护剂组分简单，成本低廉：成本较低；
[0018] (5)该组保护剂适用于多种核酸扩增体系的冷冻干燥。
具体实施方式
[0019] 下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。以下实施例仅用于补充说明本发明而不用于限制本发明要求保护的范围。以下实施例中的实验条件和方法如无特殊说明，均为常规条件和方法，实施例中所用试剂、材料如无特殊说明均可通过商业途径获得。以下“％”均指质量/体积百分比，即g/100mL；“+”均指检测结果为阳性，“－”均指检测结果为阴性。
[0020] 实施例中所用细菌基因组提取试剂盒购买自天根生化科技有限公司。
[0021] 实施例1
[0022] 一种用于核酸扩增试剂冷冻干燥的保护剂，按质量比为50：1的海藻糖和牛血清白蛋白制成。
[0023] 制备方法为：
[0024] 将0.5g海藻糖以及10mg牛血清白蛋白加无菌去离子水至1mL，混匀，溶解。
[0025] 实施例2
[0026] 一种用于核酸扩增试剂冷冻干燥的保护剂，按质量比为100：1的海藻糖和牛血清白蛋白制成。
[0027] 制备方法为：
[0028] 将1g海藻糖以及10mg牛血清白蛋白加无菌去离子水至1mL，混匀，溶解。
[0029] 实施例3
[0030] 一种用于核酸扩增试剂冷冻干燥的保护剂，按质量比为60：1的海藻糖和牛血清白蛋白制成。
[0031] 制备方法为：
[0032] 将0.6g海藻糖以及10mg牛血清白蛋白加无菌去离子水至1mL，混匀，溶解。
[0033] 实施例4
[0034] 一种用于核酸扩增试剂冷冻干燥的保护剂的应用
[0035] 制备冻干试剂
[0036] (1)制备志贺氏菌的PCR扩增反应液，包含pfu DNA聚合酶1μL、100μM SEQ ID No.1所示的外引物上游引物0.1μL、100μM SEQ ID No.2所示的外引物下游引物0.1μL、10mM dNTPs3μL、25mM MgCl2 2μL和2×荧光染料1μL，并加入实施例1制备的用于核酸扩增试剂冷冻干燥的保护剂1μL，充分混匀。核苷酸序列见表1。
[0037] (2)将上述体系冷冻干燥。
[0038] 检测时，用20μL复溶剂复溶冻干体系。
[0039] 制备液体试剂
[0040] 用冻干试剂的步骤(1)制备。
[0041] 冻干试剂复溶后与液体试剂，分别加入5μL模版，同时进行PCR扩增反应。
[0042] 检测模版为使用细菌基因组提取试剂盒分别提取108CFU/mL、107CFU/mL、106CFU/mL、105CFU/mL、104CFU/mL、103CFU/mL志贺氏菌得到的提取液以及一份阴性对照。
[0043] 检测结果通过荧光检测仪实时监测，其结果见表2。
[0044] 各实施例中使用的复溶剂：每20μL复溶剂由2.5μL pfu DNA聚合酶缓冲液与17.5μL无菌去离子水组成。
[0045] 表1
[0046]
[0047] 表2
[0048]
[0049] 实施例5
[0050] 一种用于核酸扩增试剂冷冻干燥的保护剂的应用
[0051] 制备冻干试剂
[0052] (1)配制志贺氏菌的LAMP扩增反应液，包含：Bst DNA聚合酶1μL、100μM SEQ ID No.1所示的外引物上游引物0.05μL、100μM SEQ ID No.2所示的外引物下游引物0.05μL、100μM SEQ ID No.3所示的内引物上游引物0.4μL、100μM SEQ ID No.4所示的内引物下游引物0.4μL、100μM SEQ ID No.5所示的环引物上游引物0.2μL、100μM SEQ ID No.6所示的环引物下游引物0.2μL、10mM dNTPs 3μL、0.5M MgCl2 0.15μL、5M甜菜碱3μL以及2×荧光染料1μL等，并加入实施例2制备的用于核酸扩增试剂冷冻干燥的保护剂1.5μL，充分混匀。
[0053] 核苷酸序列见表1。
[0054] (2)将上述体系冷冻干燥。
[0055] 检测时，用20μL复溶剂复溶冻干体系。
[0056] 制备液体试剂
[0057] 为冻干试剂的步骤(1)制备。
[0058] 冻干试剂复溶后与液体试剂，分别加入5μL模版，同时进行LAMP扩增反应。
[0059] 检测模版为使用细菌基因组提取试剂盒分别提取105CFU/mL、104CFU/mL、103CFU/mL、102CFU/mL、101CFU/mL、100CFU/mL志贺氏菌的提取液以及一份阴性对照。
[0060] 检测结果通过荧光检测仪实时监测，其结果见表3。
[0061] 表3
[0062]
[0063] 实施例6
[0064] 一种用于核酸扩增试剂冷冻干燥的保护剂的应用
[0065] (1)制备志贺氏菌LAMP扩增反应液，包含：Bst DNA聚合酶1μL、100μM SEQ ID No.1所示的外引物上游引物0.05μL、100μM SEQ ID No.2所示的外引物下游引物0.05μL、100μM SEQ ID No.3所示的内引物上游引物0.4μL、100μM SEQ ID No.4所示的内引物下游引物0.4μL、100μM SEQ ID No.5所示的环引物上游引物0.2μL、100μM SEQ ID No.6所示的环引物下游引物0.2μL、10mM dNTPs 3μL、0.5M MgCl2 0.15μL、5M甜菜碱3μL以及2×荧光染料1μL等，并加入实施例2制备的用于核酸扩增试剂冷冻干燥的保护剂1.5μL，充分混匀。
[0066] 核苷酸序列见表1。
[0067] 以上体系为实验组1；
[0068] 将实验组1试剂冷冻干燥后，用20μL复溶剂复溶冻干体系复溶为实验组2；
[0069] 将实验组1试剂冷冻干燥后，在常温放置3天，再于4℃放置6个月，用20μL复溶剂复溶冻干体系复溶为实验组3；
[0070] 实验组1、2、3分别加入5μL模版后，进行LAMP扩增反应。
[0071] 检测模版为使用细菌基因组提取试剂盒分别提取105CFU/mL、104CFU/mL、103CFU/mL、102CFU/mL、101CFU/mL、100CFU/mL志贺氏菌的提取液以及一份阴性对照。
[0072] 检测结果通过荧光检测仪实时监测，其结果见表4。
[0073] 表4
[0074]
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