嗜酸氧化亚铁硫杆菌冷冻干燥保护剂
阅读：222发布：2020-05-12
专利汇可以提供嗜酸氧化亚铁硫杆菌冷冻干燥保护剂专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且浸矿 微 生物 嗜酸 氧 化亚 铁 硫杆菌(Acidithiobacillus ferrooxidans) 冷冻干燥 过程中保护剂。其重量组成为甘油3％－5％、海藻糖13％－16％、 蔗糖 18％－20％、 牛 血清蛋白8％－11％。采用本 发明 ，可以使冷冻干燥嗜酸氧化亚铁硫杆菌的存活率最高达到94％，相比未加保护剂直接冷冻干燥的对照的存活率(2％)高了47倍。，下面是嗜酸氧化亚铁硫杆菌冷冻干燥保护剂专利的具体信息内容。
嗜酸氧化亚铁硫杆菌冷冻干燥保护剂
技术领域
背景技术
：冷冻干燥是将高浓度的微生物细胞迅速冷冻至-20℃，再用真空泵减压升华冷冻悬浮液中的水分，对许多类别微生物的保藏是一种极佳的方法，保藏期可达10年以上。美国典型菌种保藏中心(ATCC)有95％以上的菌株用此法保存。为了提高微生物真空冷冻干燥后细胞的成活率及稳定性，常在冷冻时加入各种保护剂在冷冻干燥过程中保护活细胞。
保护剂可改变细胞冷冻干燥时的物理、化学环境，减轻或免除在冷冻初期因形成冰晶而造成的损害，提高存活率；不同保护剂配比对不同细菌冷冻干燥后的存活率影响不同。
作为低温保藏常用保护剂有甘油、蔗糖、牛血清等，David Cleland等人报道用蔗糖/牛血清蛋白作为冻干燥保护剂对嗜酸氧化亚铁硫杆菌冷冻干燥后的存活率达81％，另外，海藻糖也非常适合作为保护剂，并能达到理想的保护效果。
嗜酸氧化亚铁硫杆菌(Acidithiobacillus ferrooxidans，简称A.f菌，以前被称作氧化亚铁硫杆菌)嗜酸好氧，是一种化能自养的革兰氏阴性菌，以亚铁(Fe2+)、元素硫(S0)或金属硫化矿(S2-)作为能量来源，以空气中的CO2为碳源，并吸收氮、磷等无机营养物质合成菌体细胞。在多种金属硫化矿的生物冶金研究中，A.f菌被公认为是主要的浸矿菌种之一，国内外研究机构一直在开展对该菌的研究和选育工作。获得具有优良性状的菌株之后，进行对菌种资源的保藏工作是必不可少的。
嗜酸氧化亚铁硫杆菌极端嗜酸自养，其特殊的生理特性使得单一地使用以上任何一种冷冻干燥保护剂都无法达到较好的保护效果。多种保护剂混合使用能够取长补短，达到最好的保护效果，然而针对嗜酸氧化亚铁硫杆菌的冷冻干燥保护剂的研究工作开展较少。
保护剂可改变细胞冷冻干燥时的物理、化学环境，减轻或免除在冷冻初期因形成冰晶而造成的损害，提高存活率；不同保护剂配比对不同细菌冷冻干燥后的存活率影响不同。
作为低温保藏常用保护剂有甘油、蔗糖、牛血清等，David Cleland等人报道用蔗糖/牛血清蛋白作为冻干燥保护剂对嗜酸氧化亚铁硫杆菌冷冻干燥后的存活率达81％，另外，海藻糖也非常适合作为保护剂，并能达到理想的保护效果。
嗜酸氧化亚铁硫杆菌(Acidithiobacillus ferrooxidans，简称A.f菌，以前被称作氧化亚铁硫杆菌)嗜酸好氧，是一种化能自养的革兰氏阴性菌，以亚铁(Fe2+)、元素硫(S0)或金属硫化矿(S2-)作为能量来源，以空气中的CO2为碳源，并吸收氮、磷等无机营养物质合成菌体细胞。在多种金属硫化矿的生物冶金研究中，A.f菌被公认为是主要的浸矿菌种之一，国内外研究机构一直在开展对该菌的研究和选育工作。获得具有优良性状的菌株之后，进行对菌种资源的保藏工作是必不可少的。
嗜酸氧化亚铁硫杆菌极端嗜酸自养，其特殊的生理特性使得单一地使用以上任何一种冷冻干燥保护剂都无法达到较好的保护效果。多种保护剂混合使用能够取长补短，达到最好的保护效果，然而针对嗜酸氧化亚铁硫杆菌的冷冻干燥保护剂的研究工作开展较少。
发明内容
：为了提高嗜酸氧化亚铁硫杆菌保藏成活率，本发明提供一种嗜酸氧化亚铁硫杆菌保藏冷冻干燥保护剂。
嗜酸氧化亚铁硫杆菌冷冻干燥保护剂，由甘油、海藻糖、蔗糖和牛血清蛋白组成，其重量百分组成为甘油3％-5％，海藻糖13％-16％，蔗糖18％-20％，牛血清蛋白8％-11％。
使用本发明的保护剂，可使冷冻干燥嗜酸氧化亚铁硫杆菌的存活率最高达到94％，相比未加保护剂直接冷冻干燥的对照的存活率(2％)高了47倍。
嗜酸氧化亚铁硫杆菌冷冻干燥保护剂，由甘油、海藻糖、蔗糖和牛血清蛋白组成，其重量百分组成为甘油3％-5％，海藻糖13％-16％，蔗糖18％-20％，牛血清蛋白8％-11％。
使用本发明的保护剂，可使冷冻干燥嗜酸氧化亚铁硫杆菌的存活率最高达到94％，相比未加保护剂直接冷冻干燥的对照的存活率(2％)高了47倍。
具体实施方式
：实施例11.菌种的培养与收集将Acidithiobacillus.ferrooxidans菌CMS菌株培养至对数生长中期，过滤去除黄钾铁钒，10000r/min离心20min收集菌体，用稀硫酸(pH2.0)清洗菌体2次。10000r/min离心5min后弃上清，将沉淀菌泥用无菌水重悬，用血球计数板计数后每分装到1.5mL离心管(每支0.5mL)，10000r/min离心5min，弃上清，菌泥用0.5mL保护剂悬浮，转移至已灭菌的安瓿管。
2.预冻和冷冻干燥将装有菌液的安瓿管，先在4℃平衡30min，再放置于-20℃预冻2h。然后用真空冷冻干燥机冷冻干燥24小时。真空封口后置4℃保藏。
3.存活率的测定置4℃保藏48小时后，用1mL灭菌9K基本盐(pH2.0)将冻干菌重悬，30℃放置2h，用血球计数板计数，得存活率(％)。
4.优化结果的验证在保护剂配方的范围内，对不同配比的保护剂的保护效果的验证结果如下：冷冻干燥保护剂的效果验证
其中以甘油5％、海藻糖15％、蔗糖18％、牛血清蛋白10％为嗜酸氧化亚铁硫杆菌冷冻干燥保护剂，进行冷冻干燥保藏，其存活率可达94％。
2.预冻和冷冻干燥将装有菌液的安瓿管，先在4℃平衡30min，再放置于-20℃预冻2h。然后用真空冷冻干燥机冷冻干燥24小时。真空封口后置4℃保藏。
3.存活率的测定置4℃保藏48小时后，用1mL灭菌9K基本盐(pH2.0)将冻干菌重悬，30℃放置2h，用血球计数板计数，得存活率(％)。
4.优化结果的验证在保护剂配方的范围内，对不同配比的保护剂的保护效果的验证结果如下：冷冻干燥保护剂的效果验证
其中以甘油5％、海藻糖15％、蔗糖18％、牛血清蛋白10％为嗜酸氧化亚铁硫杆菌冷冻干燥保护剂，进行冷冻干燥保藏，其存活率可达94％。
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