核酸靶分子平行筛选及扩增方法
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1.一种核酸靶分子平行筛选及扩增方法，包括从核酸样品中把多个不 同的靶分子筛选出来，用一对引子对筛选出来的所有靶分子进行无选择性地 扩增和标记，其特征是在筛选之前将核酸样品中核酸分子片段化，并进行末 端修饰和扩增，然后用随机固定于固体表面的与靶分子互补的核酸分子即筛 选分子把靶分子筛选出来，最后用一对引子对选出的靶分子进行扩增和标 记。
2.如权利要求1所述的平行筛选及扩增方法，其特征是所述的固体表 面是平面，弧面或圆面，固体材料为塑料，纤维素，尼龙或玻璃，金属。
3.如权利要求1所述的方法，其特征是所述的筛选分子是经分子生物 学技术获得的基因克隆或其片段或是化学合成的核酸片段，其长度为10- 10,000碱基。
本发明涉及一种核酸靶分子的筛选及扩增方法。
对核酸包括脱氧核糖核酸(DNA)及核糖核酸(RNA)进行分子检测 时，需把核酸样品中的靶分子筛选出来并加以扩增(复制出多个同一分子)。 靶分子是须检测的核酸片段，其结构特征可以代表所属生物体的遗传特征。 靶分子可以是DNA，RNA或是在体外由RNA转录成的DNA。筛选扩增得 到高纯度的大量的靶分子后，用分子生物学技术可以测定靶分子的结构特 征，从而得知所提供的核酸样品的生物体(病人)的遗传特征。目前，对核 酸中的靶分子进行筛选和扩增采用聚合酶链反应(PCR)。对一个双链DNA 靶分子进行聚合酶链反应时，要有二个对靶分子具专一性的、方向相反的单 链核酸小分子，即引子。引子是由化学方法合成的单链的DNA分子，能与 靶分子在末端进行分子杂交，其长度为10-50碱基。一个引子与靶分子中的 一条分子链在3′末端进行杂交，并在聚合酶的作用下有选择性地复制靶分 子，反复此过程可得到大量的靶分子。现已经知道，造成一种遗传病的基因 位点变化可以是不止一个，也就是说，要检测一种或多种遗传病时，所需筛 选和扩增的靶分子种数可达数百以上。所述的基因位点是指核酸结构中特定 的碱基位置。基因是核酸功能性的划分或具一定功能的核酸片段，具一定的 结构特征。进行分子检测时如用常规的PCR方法，需要合成大量的引子， 并用大量的反应分别对靶分子进行筛选和扩增。这种做法所需要的人力和物 力、费用都很大。如把多个引子组合在一个PCR反应中时，这些引子之间 的相互作用会产生副产物，因而影响靶分子的筛选和扩增。
本发明的目的是提供一种对多个不同的核酸靶分子进行平行筛选及扩增 的方法，它能克服现有技术的上述不足。
一种核酸靶分子平行筛选及扩增方法，包括从核酸样品中把多个不同的 靶分子筛选出来，用一对引子对筛选出来的所有靶分子进行无选择性地扩增 和标记，其特征是在筛选之前将核酸样品中核酸分子片段化，并进行末端修 饰和扩增，然后用随机固定于固体表面的与靶分子互补的核酸分子即筛选分 子把靶分子筛选出来，最后用一对引子对选出的靶分子进行扩增和标记。
本发明的优点是能同时对大量不同的靶分子进行筛选，并只用一对引子 对所有的靶分子进行扩增。使用本发明方法可以在进行分子检测时的样品准 备过程中，提高对大量不同的靶分子的筛选和扩增的效率，节省大量人力物 力，也可防止多种引子间的相互作用，确保分子检测的准确性。
下面通过实施例说明本发明。
实施例 对一病人进行遗传病测定(诊断)，须诊断的与遗传有关的病 有糖尿病等。把与这些病相关的基因片段固定于微珠面上。抽取病人血 样，把其中的DNA纯化，用水解酶进行随机片段化，所谓片段化指把大 (长)的核酸分子降解为短小的单链核酸片断，其长度一般为20-2000 碱基(碱基是核酸的基本组份，可作长度单位)，本实施例中的片段平均 长度为100碱基。然后进行末端修饰，即将所有片段在3′末端加长20 个碱基。然后用聚合酶把单链的分子转化成双链分子。此后在5′末端用 连接酶接上一个短小的双链分子(长20碱基)。二末端修饰后的核酸片 段在与其互补的引子及聚合酶等的作用下被扩增4倍以上，产生大量的 新的复制分子。所谓互补是根据碱基配对原理(A配T，G配C)，在一个 分子链中有连续配对碱基序列结构，相互补的核酸能相互杂交。杂交是 二互补的单链核酸分子结合成双链分子的过程。扩增后的核酸片段与固 定于微珠上的核酸分子即筛选分子进行杂交，与病相关的靶分子跟其它 核酸分离，在同一对引子的作用下，靶分子被扩增，并同时被荧光物标 记。所得产物在能检测上述遗传病的基因芯片内进行分子杂交。经清洗 等过程以后，靶分子在基因芯片内留下的荧光信号由激光扫描器查到， 并用电脑作记录、分析。最后电脑根据所输入的有关程序对病人的基因 型作出结论。
本实施例中所用的固体表面是平面、弧面或圆面，固体材料为塑料、 纤维素、尼龙或玻璃、金属。本实施例中所述的筛选分子是经分子生物学 技术获得的基因克隆或其片段或是化学合成的核酸片段，其长度为 10-10,000碱基。本实施例中所述的固定是通过共价键或离子键实现的， 一个核酸分子至少由一个化学键进行固定。所固定的位置不需预先确定， 不同筛选分子可组合使用，并随机固定。本发明的方法可用于核酸分子检 测。
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