一种同种脱细胞真皮基质制备方法
专利汇可以提供一种同种脱细胞真皮基质制备方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 属于医学 生物 材料 技术领域，具体涉及一种同种脱细胞真皮基质制备方法。本发明主要解决目前的脱细胞真皮基质制备方法存在制备过程繁琐、耗时长、细胞碎屑去除不彻底、化学物质残留多等不足。本发明一种同种脱细胞真皮基质制备方法包括以下步骤：1）取皮；2）脱表皮层：将 断层 皮片放入高渗盐 水 溶液中震荡，揭去表皮层得真皮基质；3）去细胞成分：将真皮基质放入十二烷基 硫酸 钠无菌生理盐水溶液中超声处理 破碎 细胞，得脱细胞真皮基质；4）清洗；5）修饰空间结构：将清洗后的脱细胞真皮基质放入胰蛋白酶无菌生理盐水溶液中超声清洗；6）二次清洗；7）灭菌。本发明具有方法简单、耗时短、细胞成分去除彻底、提高植入后血管化速度等优点。，下面是一种同种脱细胞真皮基质制备方法专利的具体信息内容。
1.一种同种脱细胞真皮基质制备方法，其特征是包括以下步骤：
1）取皮：选用人尸体皮为皮源，取带有表皮层和真皮层的断层皮片；
2）脱表皮层：将断层皮片放入高渗盐水溶液中，在35～40℃恒温摇床中震荡16～24小时，取出皮片，揭去表皮层，得真皮基质；
3）去细胞成分：将真皮基质放入十二烷基硫酸钠无菌生理盐水溶液中，在室温下超声处理0.5～1小时，破碎细胞，并去除真皮中的细胞成分，得脱细胞真皮基质；
4）清洗：将脱细胞真皮基质，用无菌生理盐水清洗2～5次；
5）修饰空间结构：将清洗后的脱细胞真皮基质，放入胰蛋白酶无菌生理盐水溶液中，超声清洗20～30分钟；
6）二次清洗：将步骤（5）所得的脱细胞真皮基质，用无菌磷酸盐缓冲溶液清洗；
7）灭菌：将二次清洗后的脱细胞真皮基质拉网、封装，钴-60 γ射线辐照灭菌，制得同种脱细胞真皮基质。
2.根据权利要求1所述的一种同种脱细胞真皮基质制备方法，其特征是所述的高渗盐水溶液为浓度为0.5～2mol/L的氯化钠溶液。
3.根据权利要求1所述的一种同种脱细胞真皮基质制备方法，其特征是所述的十二烷基硫酸钠溶液的浓度为2.5～7.5g/L。
4.根据权利要求1所述的一种同种脱细胞真皮基质制备方法，其特征是所述的胰蛋白酶溶液的浓度为1.0～2.5g/L。
5.根据权利要求1所述的一种同种脱细胞真皮基质制备方法，其特征是所述的钴-60 γ射线辐照灭菌剂量为15～20kGy。
一种同种脱细胞真皮基质制备方法
技术领域
背景技术
发明内容
2）脱表皮层：将断层皮片放入高渗盐水溶液中，在35～40℃恒温摇床中震荡16～24小时，取出皮片，揭去表皮层，得真皮基质；
3）去细胞成分：将真皮基质放入十二烷基硫酸钠无菌生理盐水溶液中，在室温下超声处理0.5～1小时，破碎细胞，并去除真皮中的细胞成分，得脱细胞真皮基质；
4）清洗：将脱细胞真皮基质，用无菌生理盐水清洗2～5次；
5）修饰空间结构：将清洗后的脱细胞真皮基质，放入胰蛋白酶无菌生理盐水溶液中，超声清洗20～30分钟；
6）二次清洗：将步骤（5）所得的脱细胞真皮基质，用无菌磷酸盐缓冲溶液清洗；
7）灭菌：将二次清洗后的脱细胞真皮基质拉网、封装，钴-60 γ射线辐照灭菌，制得同种脱细胞真皮基质。
2）本发明用胰蛋白酶溶液和一定的超声条件结合，修饰其空间结构，增加脱细胞真皮基质胶原纤维间隙，提高其植入后血管化速度；
3）本发明方法制备的脱细胞真皮基质中含有丰富的中性黏多糖，且其内部弹性纤维结构保存完好，PAS染色呈阳性反应，未破坏其基底膜结构，
4）本发明制备方法简单、耗时短。
附图说明
图3为人正常皮肤组织学结构光学纤维镜观察（HE×100）图；
图4为同种（人）脱细胞真皮基质组织学结构光学显微镜观察（HE×100）图；
图5人正常皮肤基底膜光学纤维镜观察（PAS×200）图；
图6为同种（人）脱细胞真皮基质基底膜光学纤维镜观察（PAS×200）图；
图7人正常皮肤弹性纤维光学纤维镜观察（Verhoeff’s×200）图；
图8为同种（人）脱细胞真皮基质弹性纤维光学纤维镜观察（Verhoeff’s×200）图。
具体实施方式
1）取皮：取捐献的健康人新鲜尸体皮，用鼓式取皮机取厚度为0.6mm的断层皮片；
2）脱表皮层：将断层皮片裁剪为5cm×5cm～10cm×10cm大小，放入浓度为0.5mol/L的氯化钠溶液中，在35℃恒温摇床中震荡16小时，取出皮片，揭去表皮层，得真皮基质；
3）去细胞成分：将真皮基质放入浓度为2.5g/L的十二烷基硫酸钠无菌生理盐水溶液中，在室温下使用输出功率为250～500W，频率为20～26.5KHz的超声仪超声处理0.5小时，破碎细胞，并去除真皮中的细胞成分，得脱细胞真皮基质；
4）清洗：将脱细胞真皮基质，用无菌生理盐水清洗2次；
5）修饰空间结构：将清洗后的脱细胞真皮基质，放入浓度为1.0g/L的胰蛋白酶无菌生理盐水溶液中，使用输出功率为250～500W，频率为20～26.5KHz的超声仪超声清洗20分钟，进一步去除细胞碎片，增加脱细胞真皮基质胶原纤维间隙，修饰其空间结构；
6）二次清洗：将步骤（5）所得的脱细胞真皮基质，用无菌磷酸盐缓冲溶液清洗；
7）灭菌：将二次清洗后的脱细胞真皮基质拉网、封装，用钴-60 γ射线在15kGy辐照灭菌，制得同种脱细胞真皮基质产品。
1）取皮：取捐献的健康人新鲜尸体皮，用电动取皮刀取厚度为0.4mm的断层皮片；
2）脱表皮层：将断层皮片裁剪为5cm×5cm～10cm×10cm大小，放入浓度为1mol/L的氯化钠溶液中，在38℃恒温摇床中震荡20小时，取出皮片，揭去表皮层，得真皮基质；
3）去细胞成分：将真皮基质放入浓度为5.0g/L的十二烷基硫酸钠无菌生理盐水溶液中，在室温下使用输出功率为250～500W，频率为20～26.5KHz的超声仪超声处理0.8小时，破碎细胞，并去除真皮中的细胞成分，得脱细胞真皮基质；
4）清洗：将脱细胞真皮基质，用无菌生理盐水清洗3次；
5）修饰空间结构：将清洗后的脱细胞真皮基质，放入浓度为1.5g/L的胰蛋白酶无菌生理盐水溶液中，使用输出功率为250～500W，频率为20～26.5KHz的超声仪超声清洗25分钟，进一步去除细胞碎片，增加脱细胞真皮基质胶原纤维间隙，修饰其空间结构；
6）二次清洗：将步骤（5）所得的脱细胞真皮基质，用无菌磷酸盐缓冲溶液清洗；
7）灭菌：将二次清洗后的脱细胞真皮基质拉网、封装，用钴-60 γ射线在15kGy辐照灭菌，制得同种脱细胞真皮基质产品。
1）取皮：取捐献的健康人新鲜尸体皮，用鼓式取皮机取厚度为0.8mm的断层皮片；
2）脱表皮层：将断层皮片裁剪为5cm×5cm～10cm×10cm大小，放入浓度为0.5mol/L的氯化钠溶液中，在40℃恒温摇床中震荡24小时，取出皮片，揭去表皮层，得真皮基质；
3）去细胞成分：将真皮基质放入浓度为7.5g/L的十二烷基硫酸钠无菌生理盐水溶液中，在室温下使用输出功率为250～500W，频率为20～26.5KHz的超声仪超声处理0.5小时，破碎细胞，并去除真皮中的细胞成分，得脱细胞真皮基质；
4）清洗：将脱细胞真皮基质，用无菌生理盐水清洗5次；
5）修饰空间结构：将清洗后的脱细胞真皮基质，放入浓度为2.5g/L的胰蛋白酶无菌生理盐水溶液中，使用输出功率为250～500W，频率为20～26.5KHz的超声仪超声清洗30分钟，进一步去除细胞碎片，增加脱细胞真皮基质胶原纤维间隙，修饰其空间结构；
6）二次清洗：将步骤（5）所得的脱细胞真皮基质，用无菌磷酸盐缓冲溶液清洗；
7）灭菌：将二次清洗后的脱细胞真皮基质拉网、封装，用钴-60 γ射线在20kGy辐照灭菌，制得同种脱细胞真皮基质产品。
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