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一种茶叶中游离基酸的测定方法

阅读:501发布:2023-01-25

专利汇可以提供一种茶叶中游离基酸的测定方法专利检索,专利查询,专利分析的服务。并且本 发明 涉及茶叶分析检测技术领域,特别涉及一种茶叶中游离 氨 基酸的测定方法,包括样品制备、标准曲线的制备、液相色谱条件、质谱条件、测定法、计算方式、检测方法灵敏度、准确度和精 密度 。本发明提供的技术方案带来的有益效果是: 溶剂 使用量少,前处理简单,容易操作,准确度高,且可以极大避免其他检测方法中难以避免的“峰重叠”现象,在茶叶品质化学理论研究及茶叶滋味品质的调控方面均具有广阔的应用前景。,下面是一种茶叶中游离基酸的测定方法专利的具体信息内容。

1.一种茶叶中游离基酸的测定方法,其特征在于,具体步骤如下:
(1)、样品制备
茶叶样品依据GB/T 8303-2013要求制样,过40目筛,准确称取磨碎试样1.0g(准确至
0.01g)茶叶于15mL离心管中,加入1mL 50%的乙醇溶液(含0.1mol/L的HCl),均质后
12000r/min的调条下离心10min,上清液过0.22μm滤膜后供高效液相色谱-串联质谱法测定;
(2)、标准曲线的制备
精密量取步骤1过中0.22μm滤膜后的清液氨基酸混合标准工作液,制得0μmol/L、0.04μmol/L、0.20μmol/L、1.0μmol/L、5.0μmol/L、25.0μmol/L供高效液相色谱-串联质谱法测定;
(3)、测定
3.1液相色谱条件
(1)色谱柱:Intertsil OSD-4 C18 1.7μm;
(2)流动相:A:水,B:甲醇,C:0.5%甲酸
(3)流速:0.3L/min;
(4)柱温:25℃;
(5)进样量:5μL
3.2质谱条件
(1)离子源:电喷雾离子源,正离子模式;
(2)扫描方式:多反应监测;
(3)脱溶剂气、锥孔气、碰撞气均为高纯氮气,使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求;
(4)毛细管电压、锥孔电压、碰撞能量优化至最优灵敏度;
(5)监测离子:监测离子
3.3测定法
测定样品溶液,分别得到样品中各氨基酸色谱峰面积,代入校正曲线计算含量,以超纯水作为空白样品,在相同条件下进行测定,计算空白样品中各氨基酸本底值,即得各样品中氨基酸含量;样品溶液中各氨基酸的响应值均应在仪器测定的线性范围之内;
(4)、空白试验
除不加试样外,采用步骤3.3完全相同的测定步骤进行平行操作;
(5)、计算
样品中各游离氨基酸的含量计算如下:
X-样品中各氨基酸组分的含量,单位为克每千克(g/kg);
c-样品浓度,单位为μmol/L;
V-试样总体积,单位为毫升(mL);
M-氨基酸的摩尔质量,单位为克/摩尔(g/mol);
m-试样质量,单位为克(g);
(6)、检测方法灵敏度、准确度和精密度
(1)灵敏度;
(2)准确度;
(3)精密度。

说明书全文

一种茶叶中游离基酸的测定方法

技术领域

[0001] 本发明涉及茶叶分析检测技术领域,特别涉及一种茶叶中游离氨基酸的测定方法。

背景技术

[0002] 茶叶中游离氨基酸含量是用来描述茶叶鲜爽程度的一个重要品质指标,还是人体所必需的营养物质,同时对人体疾病的康复和预防起着极重要的保健作用。测定茶叶中游离氨基酸含量对茶叶的开发利用具有一定的指导意义。
[0003] 现有技术中,茶叶中游离氨基酸含量的测定不够准确,操作过程比较复杂,测定花费时间比较长。

发明内容

[0004] 为了解决现有技术的问题,本发明提供了一种操作简单、含量测定准确的茶叶中游离氨基酸的测定方法。
[0005] 本发明所述技术方案如下:
[0006] 一种茶叶中游离氨基酸的测定方法,具体步骤如下:
[0007] 1、样品制备
[0008] 茶叶样品依据GB/T 8303-2013要求制样,过40目筛,准确称取磨碎试样1.0g(准确至0.01g)茶叶于15mL离心管中,加入1mL 50%的乙醇溶液(含0.1mol/L的HCl),均质后12000r/min的调条下离心10min,上清液过0.22μm滤膜后供高效液相色谱-串联质谱法测定;
[0009] 2、标准曲线的制备
[0010] 精密量取步骤1过中0.22μm滤膜后的清液氨基酸混合标准工作液,制得0μmol/L、0.04μmol/L、0.20μmol/L、1.0μmol/L、5.0μmol/L、25.0μmol/L供高效液相色谱-串联质谱法测定;
[0011] 3、测定
[0012] 3.1液相色谱条件
[0013] (1)色谱柱:Intertsil OSD-4 C18 1.7μm(3.0*250mm);
[0014] (2)流动相:A:水,B:甲醇,C:0.5%甲酸
[0015] (3)流速:0.3L/min;
[0016] (4)柱温:25℃;
[0017] (5)进样量:5μL
[0018] 3.2质谱条件
[0019] (1)离子源:电喷雾离子源,正离子模式;
[0020] (2)扫描方式:多反应监测(MRM);
[0021] (3)脱溶剂气、锥孔气、碰撞气均为高纯氮气或其他合适的高纯气体;使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求;
[0022] (4)毛细管电压、锥孔电压、碰撞能量等电压值优化至最优灵敏度;
[0023] (5)监测离子:监测离子
[0024] 3.3测定法
[0025] 测定样品溶液,分别得到样品中各氨基酸色谱峰面积,代入校正曲线计算含量,以超纯水作为空白样品,在相同条件下进行测定,计算空白样品中各氨基酸本底值,即得各样品中氨基酸含量;样品溶液中各氨基酸的响应值均应在仪器测定的线性范围之内;
[0026] 4、空白试验
[0027] 除不加试样外,采用步骤3.3完全相同的测定步骤进行平行操作;
[0028] 5、计算
[0029] 样品中各游离氨基酸的含量计算如下:
[0030]
[0031] 式中:
[0032] X-样品中各氨基酸组分的含量,单位为克每千克(g/kg);
[0033] c-样品浓度,单位为μmol/L;
[0034] V-试样总体积,单位为毫升(mL);
[0035] M-氨基酸的摩尔质量,单位为克/摩尔(g/mol);
[0036] m-试样质量,单位为克(g);
[0037] 注:计算结果需扣除空白值,测定结果用平行测定的算术平均值表示,保留三位有效数字;
[0038] 6检测方法灵敏度、准确度和精密度
[0039] (1)灵敏度
[0040] (2)准确度
[0041] (3)精密度
[0042] 本发明提供的技术方案带来的有益效果是:
[0043] 溶剂使用量少,前处理简单,容易操作,准确度高,且可以极大避免其他检测方法中难以避免的“峰重叠”现象,在茶叶品质化学理论研究及茶叶滋味品质的调控方面均具有广阔的应用前景。

具体实施方式

[0044] 为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚,下面将结合具体实施例对本发明实施方式作进一步地详细描述。
[0045] 一种茶叶中游离氨基酸的测定方法,具体步骤如下:
[0046] 1、样品制备
[0047] 茶叶样品依据GB/T 8303-2013要求制样,过40目筛,准确称取磨碎试样1.0g(准确至0.01g)茶叶于15mL离心管中,加入1mL 50%的乙醇水溶液(含0.1mol/L的HCl),均质后12000r/min的调条下离心10min,上清液过0.22μm滤膜后供高效液相色谱-串联质谱法测定;
[0048] 2、标准曲线的制备
[0049] 精密量取步骤1过中0.22μm滤膜后的清液氨基酸混合标准工作液,制得0μmol/L、0.04μmol/L、0.20μmol/L、1.0μmol/L、5.0μmol/L、25.0μmol/L供高效液相色谱-串联质谱法测定;
[0050] 3、测定
[0051] 3.1液相色谱条件
[0052] (1)色谱柱:Intertsil OSD-4 C18 1.7μm(3.0*250mm);
[0053] (2)流动相:A:水,B:甲醇,C:0.5%甲酸,梯度淋洗见表1;
[0054] 表1 梯度淋洗表
[0055]
[0056]
[0057] (3)流速:0.3L/min;
[0058] (4)柱温:25℃;
[0059] (5)进样量:5μL
[0060] 3.2质谱条件
[0061] (1)离子源:电喷雾离子源,正离子模式;
[0062] (2)扫描方式:多反应监测(MRM);
[0063] (3)脱溶剂气、锥孔气、碰撞气均为高纯氮气或其他合适的高纯气体;使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求;
[0064] (4)毛细管电压、锥孔电压、碰撞能量等电压值优化至最优灵敏度;
[0065] (5)监测离子:监测离子
[0066] 3.3测定法
[0067] 测定样品溶液,分别得到样品中各氨基酸色谱峰面积,代入校正曲线计算含量,以超纯水作为空白样品,在相同条件下进行测定,计算空白样品中各氨基酸本底值,即得各样品中氨基酸含量;样品溶液中各氨基酸的响应值均应在仪器测定的线性范围之内;
[0068] 4、空白试验
[0069] 除不加试样外,采用步骤3.3完全相同的测定步骤进行平行操作;
[0070] 5、计算
[0071] 样品中各游离氨基酸的含量计算如下:
[0072]
[0073] 式中:
[0074] X-样品中各氨基酸组分的含量,单位为克每千克(μ/kg);
[0075] c-样品浓度,单位为μmol/L;
[0076] V-试样总体积,单位为毫升(mL);
[0077] M-氨基酸的摩尔质量,单位为克/摩尔(g/mol);
[0078] m-试样质量,单位为克(g);
[0079] 注:计算结果需扣除空白值,测定结果用平行测定的算术平均值表示,保留三位有效数字;
[0080] 6检测方法灵敏度、准确度和精密度
[0081] (1)灵敏度
[0082] (2)准确度
[0083] (3)精密度
[0084] 以上所述仅为本发明的较佳实施例,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
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