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缩合的嘧啶衍生物

阅读:141发布:2023-02-13

专利汇可以提供缩合的嘧啶衍生物专利检索,专利查询,专利分析的服务。并且一种具有极好的抗 肿瘤 活性,以通式(Ⅰ)表示的新的嘧啶衍 生物 或其药物上可接受的盐,式(I)中各取代基的定义详见 说明书 ,一种制备式(Ⅰ)化合物或其盐的方法,以及含有式(Ⅰ)化合物或其盐的抗肿瘤药。,下面是缩合的嘧啶衍生物专利的具体信息内容。

1、下列通式(Ⅰ)所示的嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐:

其中R1代表羟基或基;R2代表亚苯基、亚吡啶基、亚噻吩基、亚呋喃基或亚噻唑基,-CO2R5和-CO2R6可彼此相同或不同,各自代表羧基或羧酸酯, 代表 , 或 ,A代表原子、式 代表的基团(其中R3和R4可彼此相同或不同,各自代表氢或卤原子或可被取代的基,或R3和R4可结合形成可被取代的亚烷基)或式 代表的基团(其中R70代表氢原子或烃基),n为1-3的整数,条件是R1代表氧,并且氢与3-位上的氮连接的化合物被包括在上述定义中。
2、权利要求1所述的嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐,其中R1为氨基。
3、权利要求1所述的嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐,其中R1为羟基。
4、权利要求1所述的嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐,其中R2为亚苯基。
5、权利要求1所述的嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐,其中R2为亚吡啶基。
6、权利要求1所述的嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐,其中R2为亚噻吩基。
7、权利要求1所述的嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐,其中R2为亚呋喃基。
8、权利要求1所述的嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐,其中R2为亚噻唑基。
9、权利要求1所述的嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐,其中 为N-CH2-CH2-。
10、权利要求1所述的嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐,其中 代表
11、权利要求1所述的嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐,其中 代表 。
12、权利要求1所述的嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐,其中A为式 代表的基团(其中R3和R4可彼此相同或不同,各自代表氢或卤原子或低级烷基、低级链烯基或低级炔基,或R3和R4可结合形成可被取代的亚烷基)。
13、权利要求1所述的嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐,其中A为式 代表的基团(其中R70代表氢原子或烃基)。
14、权利要求1所述的嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐,其中R1为氨基且R2为亚苯基。
15、权利要求1所述的嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐,其中R1为氨基且R2为亚噻吩基。
16、权利要求1所述的嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐,其中R1为羟基且R2为亚苯基。
17、权利要求1所述的嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐,其中R1为羟基且R2为亚噻吩基。
18、权利要求1所述的嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐,其中R1为氨基,A为亚甲基且n为1。
19、权利要求1所述的嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐,其中R1为羟基,A为亚甲基且n为1。
20、权利要求9所述的嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐,其中R2为亚苯基。
21、权利要求10所述的嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐,其中R2为亚苯基。
22、权利要求10所述的嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐,其中R1为氨基且R2为亚苯基。
23、权利要求10所述的嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐,其中R2为亚苯基且A为
24、权利要求10所述的嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐,其中R2为亚苯基且A为-NH-。
25、权利要求10所述的嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐,其中R1为氨基,R2为亚苯基,R5和R6各自为氢原子,n为1,且A为
26、权利要求1所述的嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐,其中R2代表亚苯基、亚吡啶基、亚噻吩基或亚呋喃基,R5和R6各自为氢原子, ,且A为式 代表的基团(其中R3和R4可彼此相同或不同,各自代表氢或卤原子或烃基,或R3和R4可结合形成可被取代的亚烷基)。
27、权利要求26所述的嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐,其中R1为氨基。
28、权利要求26所述的嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐,其中R2为羟基。
29、权利要求26所述的嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐,其中R2为亚苯基。
30、权利要求26所述的嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐,其中R2为亚噻吩基。
31、权利要求26所述的嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐,其中R3和R4可彼此相同或不同,各自代表氢或卤原子或低级烷基、低级链烯基或低级炔基。
32、权利要求26所述的嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐,其中n为1。
33、权利要求26所述的嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐,其中n为2。
34、权利要求11所述的嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐,其中R1为氨基。
35、权利要求11所述的嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐,其中R1为氨基且R2为亚苯基。
36、权利要求11所述的嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐,其中R1为氨基且R2为亚噻吩基。
37、权利要求11所述的嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐,其中R2为亚苯基且A为-NH-。
38、权利要求11所述的嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐,其中R2为亚苯基且A为
39、权利要求11所述的嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐,其中R5和R6各自为氢原子且A为式 代表的基团(其中R3和R4可彼此相同或不同,各自代表氢或卤原子或可被取代的烃基)。
40、权利要求11所述的嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐,其中R1为氨基,R2为亚苯基,R5和R6各自为氢原子,A为亚甲基,且n为2。
41、权利要求11所述的嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐,其中R1为氨基,R2为亚噻吩基,R5和R6各自为氢原子,A为亚甲基,且n为2。
42、权利要求11所述的嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐,其中R1为氨基,R2为亚苯基,R5和R6各自为氢原子,n为2,且A为 。
43、权利要求11所述的嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐,其中R1为氨基,R2为亚苯基,R5和R6各自为氢原子,n为2,且A为 。
44、下列通式(1)所示的吡咯并〔3,2-d〕嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐:

其中R1代表羟基或氨基;R2代表亚苯基或式 所示的基团(其中X代表硫或氧原子),R3和R4可彼此相同或不同,各自代表氢原子或烃基,或它们可结合形成亚烷基,且n为1-3的整数。
45、权利要求44所述的吡咯并〔3,2-d〕嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐,其中R1为氨基。
46、权利要求44所述的吡咯并〔3,2-d〕嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐,其中R2为亚苯基。
47、权利要求44所述的吡咯并〔3,2-d〕嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐,其中R2为噻吩基。
48、权利要求44所述的吡咯并〔3,2-d〕嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐,其中R3和R4可彼此相同或不同,各自为氢原子或低级烷基、低级链烯基或低级炔基。
49、权利要求44所述的吡咯并〔3,2-d〕嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐,其中n为2。
50、下列通式101所示的6,7-二氢-5H-环戊二烯并〔d〕嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐:

其中R1代表羟基或氨基,R2代表亚苯基、亚噻吩基、亚呋喃基或亚噻唑基,R3和R4可彼此相同或不同,各自代表氢原子或可被取代的烃基,且n为1-3的整数。
51、下列通式(Ⅱ)所示的化合物及其盐:

其中R1代表羟基或氨基,R2代表亚苯基、亚吡啶基、亚噻吩基、亚呋喃基或亚噻唑基,-CO2R10代表羧基或羧酸酯, 代表 , ,A代表氧原子,式 所示的基团(其中R3和R4可彼此相同或不同,各自代表氢或卤原子或可被取代的烃基,或R3和R4可结合形成可被取代的亚烷基)或式 所示的基团(其中R70代表氢原子或烃基),且n为1-3的整数,条件是R1代表氧,且氢与3-位上的氮连接的化合物被包括在上述定义中。
52、权利要求51所述的化合物或其盐,其中 为 。
53、权利要求52所述的化合物或其盐,其中R2代表亚苯基、亚吡啶基、亚噻吩基或亚呋喃基,且A为式 代表的基团(其中R3和R4可彼此相同或不同,各自代表氢或卤原子或烃基,或R3和R4的可结合形成亚烷基)。
54、如权利要求51所述的化合物或其盐,其中 为 。
55、如权利要求54所述的化合物或其盐,其中A为式 代表的基团(其中R3和R4可彼此相同或不同,各自代表氢或卤原子或可被取代的烃基)。
56、下列通式(4)所示的化合物或其盐:

其中R1代表羟基或氨基,R2代表亚苯基或式 代表的基团(其中X代表硫或氧原子),R3和R4可彼此相同或不同,各自代表氢原子或烃基,或它们可结合形成亚烷基,n为1-3的整数,且-COOR10代表羧基或羧酸酯。
57、下列通式(105)所示的化合物或其盐:

其中R1代表羟基或氨基,R2代表亚苯基、亚噻吩基、亚呋喃基或亚噻唑基,R3和R4可彼此相同或不同,各自代表氢原子或可被取代的烃基,n为1-3的整数,且-COOR10代表羧基或羧酸酯。
58、一种制备权利要求1所述的嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐的方法,该方法包括使通式(Ⅲ)的化合物或其羧基被改性成反应性形式的反应性衍生物

其中R1代表羟基或氨基,R2代表亚苯基、亚吡啶基、亚噻吩基、亚呋喃基或亚噻唑基, , 或 ,A代表氧原子,或 代表的基团(其中R3和R4可彼此相同或不同,各自代表氢或卤原子或可被取代的烃基,或R3和R4可结合形成可被取代的亚烷基)或式 代表的基团(其中R70代表氢原子或烃基),且n为1-3的整数,条件是R1为氧,且氢与在3-位上的氮连接的化合物被包括在上述定义中,
与通式(Ⅳ)的化合物反应,

其中-CO2R5和-CO2R6可彼此相同或不同,各自代表羧基或羧酸酯。
59、权利要求58所述的方法,其中通式(Ⅲ)所示的化合物选自条件是 的通式(Ⅲ)所示的化合物。
60、权利要求58所述的方法,其中通式(Ⅲ)所示的化合物选自条件如下的通式(Ⅲ)所示的化合物:R2代表亚苯基、亚吡啶基、亚噻吩基或亚呋喃基, ,A为式 代表的基团(其中R3和R4可彼此相同或不同,各自代表氢或卤原子或烃基,或R3和R4可结合形成亚烷基)。
61、权利要求58所述的方法,其中通式(Ⅲ)所式的化合物选自条件是 的通式(Ⅲ)所示的化合物
62、一种制备嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐的方法,该方法包括使通式(Ⅴ)所示的化合物或其羧基被改性成反应性形式的反应性衍生物

其中R1代表羟基或氨基,R2代表亚苯基、亚吡啶基、亚噻吩基、亚呋喃基或亚噻唑基,R3和R4可彼此相同或不同,各自代表氢或卤原子或可被取代的炔基,且n为1-3的整数,条件是R1代表氧,且氢与3-位上的氮连接的化合物被包括在上述定义中,与通式(Ⅳ)所示的化合物反应,

其中-CO2R5和-CO2R6可彼此相同或不同,各自代表羧基或羧酸酯,条件是-CO2R5和-CO2R6之一或两者代表羧酸酯,
形成下列通式(Ⅵ)所示的羧酸酯,

其中R1代表羟基或氨基,R2代表亚苯基、亚吡啶基、亚噻吩基、亚呋喃基或亚噻唑基,R3和R4可彼此相同或不同,各自代表氢或卤原子或可被取代的烃基,-CO2R5和-CO2R6可彼此相同或不同,各自代表羧基或羧酸酯,条件是-CO2R5和-CO2R6之一或两者代表羧酸酯,且n为1-3的整数,条件是R1代表氧,且氢与3-位上的氮连接的化合物被包括在上述定义中,
和通过酸解或包括催化还原在内的氢解将酯转化成游离羧酸衍生物。
63、一种制备权利要求44所述的吡咯并〔3,2-d〕嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐的方法,该方法包括使下列通式(2)所示的化合物或其羧基被改性成反应性形式的反应性衍生物

其中R1代表羟基或氨基,R2代表亚苯基或式 所示的基团(其中X代表硫或氧原子),R3和R4可彼此相同或不同,各自代表氢原子或烃基,或它们可结合形成亚烷基,且n为1-3的整数,
与下列通式(3)所示的化合物反应:

其中R5和R6可彼此相同或不同,各自代表羧基保护基。
64、一种制备权利要求50所述的6,7-二氢-5H-环戊二烯并〔d〕嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐的方法,该方法包括使下列通式(102)所示的化合物或其羧基被改性成反应性形式的反应性衍生物

其中R1代表羟基或氨基,R2代表亚苯基、亚噻吩基、亚呋喃基或亚噻唑基,R3和R4可彼此相同或不同,各自代表氢原子或可被取代的烃基,且n为1-3的整数,
与通式(103)的化合物缩合,

其中R5和R6可彼此相同或不同,各自代表羧基保护基,形成下列通式(104)所示的羧酸酯:

其中R1、R2、R3、R4、R5、R6和n各自如在上面通式102和103中所定义的,
和通过酸或碱水解或包括催化还原在内的氢解将酯转化成相应的游离羧酸。
65、一种含有权利要求1所述的嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐作为有效成分的抗肿瘤药物。
66、一种含有权利要求10所述的嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐作为有效成分的抗肿瘤药物。
67、一种含有权利要求11所述的嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐作为有效成分的抗肿瘤药物。
68、一种含有权利要求44所述的吡咯并〔3,2-d〕嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐作为有效成分的抗肿瘤药物。
69、一种含有权利要求50所述的6,7-二氢-5H-环戊二烯并〔d〕嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐作为有效成分的抗肿瘤药物。
70、一种包括有效量的权利要求1所述的嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐和一种填充剂的药物组合物。
71、权利要求1所述的嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐在制备一种可有效地治疗服用抗肿瘤药后可见效的某种疾病的药物中的应用。
72、一种治疗患有服用抗肿瘤药后可见效的疾病的患者的方法,该方法包括给患者服用有效量的权利要求1所述的嘧啶衍生物或其药物上可接受的盐。

说明书全文

发明涉及与嘧啶环稠合的杂环化合物(下文简称为缩合的嘧啶衍生物),如吡咯并〔3,2-d〕嘧啶和6,7-二氢-5H-环戊二烯并〔d〕嘧啶,它们用做抗肿瘤药,本发明还涉及其制备方法。

甲喋呤(下文简称为“MTX”)是叶酸拮抗剂并已被开发为抗肿瘤药。自从其在50年代早期出现以来,其一直在临床上占有重要地位。MTX主要用于治疗绒膜癌,骨肉瘤和急性淋巴细胞白血病,另外,其治疗使用范围通过与其它抗肿瘤药合用或采用新的给药方法而正在拓宽。MTX对二氢叶酸还原酶(DHFR)显示出高抑制活性。但DHFR在肿瘤组织和正常组织中皆存在,因此MTX对二者都有影响。事实上,MTX会引起潜在的副作用,如骨髓抑制和肠上皮退化,这限制了其临床应用。另外,MTX在治疗范围和对实体肿瘤疗效上也很窄。

进一步讲,MTX的治疗作用随着重复用MTX治疗一段周期后发生的肿瘤细胞对其的耐药性而大大降低了。MTX的这些缺陷限制了其治疗使用范围并降低了其临床用途。

在近四十年,已合成了几百种叶酸类似物并进行了生化和药理试验。即,检测了这些化合物对赖叶酸酶和肿瘤细胞生长的抑制活性及对带肿瘤小鼠的治疗作用。由这些类似物累积得到的大量生化和药理 数据提供了有关结构-活性和结构-毒性关系的大量信息。这些大量结果已由许多论文和综述所提供,例如:Chemistry  and  Biology  of  Pteridines  1989,Ed.  by  H.  Ch.  Curtius,S.  Ghisla,N.  Blau.  Walter  de  Gruyter,Berlin,New  York  1990;Progress  in  Medicinal  Chemistry,vol.  26,pp.  1  to  252(1989),Elsevier  Science  Publishers.)

在考虑化学改性中,叶酸的分子结构可方便地分为四部分,即,杂环,桥键,苯甲酸和氨基酸部分。这些叶酸类似物的基本结构特征存在于杂环部分。事实上,目前具有杂环的大多数叶酸拮抗药是已知的,其包括互相稠合的两个6-员环,如喋啶环或有关的6-6稠合的杂环。

近年来,已报道了具有各种脱氮杂喋啶环的叶酸类似物,如5-脱氮杂喋啶,8-脱氮杂喋啶,10-脱氮杂喋啶,5,8-二脱氮杂喋啶,和它们的二氢和5,6,7,8-四氢脱氮杂喋啶。DHFR抑制剂,MTX和10-乙基-10-脱氮杂喋啶(10-EDAM)〔K.Y. Shum et al.,J.Clinical Oncology 6(3)446-450(1988)〕具有喋啶环;胸苷酸合成酶抑制剂,N10-2-丙炔基-5,8-二脱氮杂叶酸(CB3717)〔A.H.Calvert et al.,J.Clinical Oncology,4(8),1245-52(1986)〕和N-〔5-〔N-(3,4-二氢-2-甲基-4-代喹唑啉-6-基甲基)-N-甲基氨基〕-2-噻吩甲酰基〕-L-谷氨酸(D1694)〔A.L.Jackman et al.,Cancer Research,51,5579 -86(1991)〕具有5,8-二脱氮杂喋啶环,和甘氨酰胺核苷酸转甲酰酶抑制剂,5,10-二脱氮杂-5,6,7,8-四氢叶酸(DDATHF)〔E.C.  Taylor  et  al.,J.Med.Chem.,28,914-921(1985)〕具有5-脱氮杂-5,6,7,8-四氢喋啶环,其落在上述分类中(带有缩合的6-员杂环的类似物)。

另一方面,仅有少数具有杂环且包括互相稠合的6-和5-员环的类似物是现在已知的,例如2,4-二氨基嘌呤为基础的反叶酸,该叶酸类似物由嘌呤环代替了喋啶环,见L.T.Weinstock,Journal  of  Medicinal  Chemistry,13.995(1970),其对叶酸有关的酶和L1210白血病完全缺乏抑制活性。另一例是吡咯并〔2,3-d〕嘧啶为基础的反叶酸,其结构如下所示。该类化合物描述见Miwa  et  al.in  Journal  of  Medicinal  Chemistry,34,55  to  560(1991)。这些化合物显示了拮抗叶酸性质和对肿瘤细胞增殖的强大抑制作用。但其临床应用还未见报道,

其中R为氢原子或甲基;符号 代表单或双键。

欧洲专利申请№.0438261-A2(July  24,1991)披露了与谷氨酸衍生物键合的稠合杂环,其用做抗肿瘤剂

尽管本领域所做的最新科学进展已如上所示,但由于MTX已使用,反叶酸还没进入临床使用。另外,在调查中发现反叶酸很难达到令人满意的浓度并看来是要被限制,这是因为当用其治疗癌症患者时,其相对窄的抗肿瘤谱,耐药性的发展和它们的副反应。因此,在癌症化疗领域紧迫地期待创造并开发抗癌反叶酸,其疗效进一步提高并能通过对肿瘤组织的高选择毒性而发挥作用。

在这些情况下,本发明目的是提供新的嘧啶衍生物,其显示出良好的抗肿瘤活性。另外,本发明的目的也提供了制备该衍生物的方法和含该衍生物作为活性成份的药物组合物。

本发明者已通过广泛深入的研究解决了上述问题并已发现缩合的嘧啶衍生物是新的并可用作抗肿瘤药。本发明在上述发现的基础上已完成。

因此,本发明提供了由下面通式(Ⅰ)代表的嘧啶衍生物,即稠合了一个五员环的嘧啶或其药用盐:

其中R1为羟基或氨基;R2为亚苯基,亚吡啶基,亚噻吩基,亚呋喃基或亚噻唑基;-CO2R5和-CO2R6相互可相同或不同,分别为羧基或羧酸酯基; 代表 或 ;A为氧原子, (其中R3和R4相互可相同或不同,分别为氢或卤原子或可被取代的基,或R3和R4合起来形成可被取代的亚烷基)或 (其中R70为氢原子或烃基);n为1-3的整数,条件是R1为氧且氢连到3-位氮上的化合物被包括在基于-烯醇互变异构体如上所示的定义中。

本发明包括下面嘧啶衍生物和其药用盐:

(1)通式(Ⅰ)中R1为氨基。

(2)通式(Ⅰ)中R1为羟基。

(3)通式(Ⅰ)中R2为亚苯基。

(4)通式(Ⅰ)中R2为亚吡啶基。

(5)通式(Ⅰ)中R2为亚噻吩基。

(6)通式(Ⅰ)中R2为亚呋喃基。

(7)通式(Ⅰ)中R2为亚噻唑基。

(8)通式(Ⅰ)中 。

(9)通式(Ⅰ)中 。

(10)通式(Ⅰ)中 。

(11)通式(Ⅰ)中A为 (其中R3和R4相互可相同或不同,分别为氢或卤原子或低级烷基,低级链烯基或低级炔基,或R3和R4可合起来形成可被取代的亚烷基)。

(12)通式(Ⅰ)中A为 (其中R70为氢原子或烃基)。

(13)通式(Ⅰ)中R1为氨基,R2为亚苯基。

(14)通式(Ⅰ)中R1为氨基,R2为亚噻吩基。

(15)通式(Ⅰ)中R1为羟基,R2为亚苯基。

(16)通式(Ⅰ)中R1为羟基,R2为亚噻吩基。

(17)通式(Ⅰ)中R1为氨基,A为亚甲基,n为1。

(18)通式(Ⅰ)中R1为羟基,A为亚甲基,n为1。

(19)通式(Ⅰ)中 ,R2为亚苯基。

(20)通式(Ⅰ)中 ,R2为亚苯基。

(21)通式(Ⅰ)中, ,R1为氨基和R2为亚苯基。

(22)通式(Ⅰ)中, ,R2为亚苯基,A为 。

(23)通式(Ⅰ)中, ,R2为亚苯基,A为-NH-。

(24)通式(Ⅰ)中, ,R1为氨基,R2为亚苯基,R5和R6分别为氢原子,n为1且A为 。

(25)通式(Ⅰ)中,R2为亚苯基,亚吡啶基,亚噻吩基或亚呋喃基,R5和R6分别为氢原子, 为 ,A为 (其中R3和R4相互可相同或不同,每个为氢或卤原子或烃基,或R3和R4合起来为可被取代的亚烷基)。

(26)通式(Ⅰ)中,R2为亚苯基,亚吡啶基,亚噻吩基或亚呋喃基,R5和R6分别为氢原子, 为 ,A为 (其中R3和R4相互相同或不同,每个为氢或卤原子或烃基或R3和R4合起来形成可被取代的亚烷基),R1为氨基。

(27)通式(Ⅰ)中,R2为亚苯基,亚吡啶基,亚噻吩基或亚呋喃基,R5和R6分别为氢原子, ,A为 (其中R3和R4相互相同或不同,每个为氢或卤原子或烃基或R3和R4合起来形成可被 取代的亚烷基),R1为羟基。

(28)通式(Ⅰ)中,R2为亚苯基,R5和R6分别为氢原子, (其中R3和R4相互相同或不同,每个为氢或卤原子或烃基,或R3和R4合起来形成可被取代的亚烷基)。

(29)通式(Ⅰ)中,R2为亚噻吩基,R5和R6分别为氢原子, (其中R3和R4相互相同或不同,每个为氢或卤原子或烃基,或R3和R4合起来形成可被取代的亚烷基)。

(30)通式(Ⅰ)中,R2为亚苯基,亚吡啶基,亚噻吩基或亚呋喃基,R5和R6分别为氢原子, (其中R3和R4相互相同或不同,每个为氢或卤原子或低级烷基,低级链烯基或低级炔基)。

(31)通式(Ⅰ)中,R2为亚苯基,亚吡啶基,亚噻吩基或亚呋喃基,R5和R6分别为氢原子, (其中R3和R4相互相同或不同,每个为氢或卤原子或烃基,或R3和R4可合起来形成可被取代的亚烷基),n为1。

(32)通式(Ⅰ)中,R2为亚苯基,亚吡啶基,亚噻吩基或亚呋喃基,R5和R6分别为氢原子, ,A为 (其中R3和R4相互相同或不同,每个为氢或卤原子或烃基,或R3和R4可合起来形成可被取代的亚烷基),n为2。

(33)通式(Ⅰ)中, ,R1为氨基。

(34)通式(Ⅰ)中, ,R1为氨基,R2为亚苯基。

(35)通式(Ⅰ)中, ,R1为氨基,R2为亚噻吩基。

(36)通式(Ⅰ)中, ,R2为亚苯基,A为-NH-。

(37)通式(Ⅰ)中, ,R2为亚苯基,A为 。

(38)通式(Ⅰ)中, ,R5和R6分别为氢原子,A为 (其中R3和R4相互可相同或不同,每个代表氢或卤原子或可被取代的烃基)。

(39)通式(Ⅰ)中, ,R1为氨基,R2为亚苯基,R5和R6分别为氢原子,A为亚甲基,n为2。

(40)通式(Ⅰ)中, ,R1为氨基,R2为亚噻吩基,R5和R6分别为氢原子,A为亚甲基,n为2。

(41)通式(Ⅰ)中, ,R1为氨基,R2为亚苯基,R5和R6分别为氢原子,A为 ,n为2。

(42)通式(Ⅰ)中, ,R1为氨基,R2为亚苯基;R5和R6分别为氢原子,A为 ,n为2。

(43)由下面通式(1)代表的吡咯并〔3,2-d〕嘧啶衍生物或其药用盐:

其中R1为羟基或氨基,优选氨基;R2为亚苯基或下式代表的基团

(其中X代表硫或氧原子),优选亚苯基或亚噻吩基;R3和R4相互可相同或不同,每个代表氢原子或烃基团,或它们合起来形成亚烷基,每个优选为氢原子,低级烷基,低级链烯基或低级炔基;n为1-3的整数,优选1或2,更优选为2。

(44)由下面通式(101)代表的6,7-二氢-5H-环戊二烯并〔d〕嘧啶衍生物或其药用盐:

其中R1代表羟基或氨基,R2代表亚苯基,亚噻吩基,亚呋喃基或亚噻唑基,R3和R4相互可相同或不同,每个代表氢原子或可被取代的烃基,n为1-3的整数。

本发明还提供了由下面通式(Ⅱ)代表的化合物或其盐:

其中R1代表羟基或氨基,R2代表亚苯基,亚吡啶基,亚噻吩基,亚呋喃基或亚噻唑基,-CO2R10代表羧基或羧酸酯基, 代表 , 或 ,A代表氧原子,下式代表的基团: (其中R3和R4相互可相同或不同,每个代表氢或卤原子或可被取代的烃基,或R3和R4合起来形成可被取代的亚烷基)或下式代表的基团: (其中R70代表氢原子或烃基),n为1-3的整数,条件是R1代表氧,氢原子连到3-位氮上的化合物被包括在上述定义中。

本发明化合物包括下面的化合物和其盐:

(1)通式(Ⅱ)中,

(2)通式(Ⅱ)中, ,R2为亚苯基,亚吡啶基,亚噻吩基或亚呋喃基,A为 (其中R3和R4相互可相同或不同,每个代表氢或卤原子或烃基,或R3和R4合起来形成亚烷基)。

(3)通式(Ⅱ)中,

(4)通式(Ⅱ)中, ,A为 (其中R3和R4相互可相同或不同,每个代表氢或卤原子或可被取代的烃基)。

(5)由下面通式(4)代表的化合物或其盐:

其中R1为羟基或氨基,R2为亚苯基或由下式代表的基团: (其中X为硫或氧原子),R3和R4相互可相同或不同,且每个代表氢原子或烃基,或它们合起来形成亚烷基,n是1-3的整数,-COOR10代表羧基或羧酸酯基。

(6)由下面通式(105)代表的化合物或其盐:

其中R1为羟基或氨基,R2为亚苯基,亚噻吩基,亚呋喃基或亚噻唑基,R3和R4相互可相同或不同,每个代表氢原子或可被取代的烃基,n为1-3的整数,-COOR10为羧基或羧酸酯基。

本发明提供了制备上述通式(Ⅰ)的嘧啶衍生物或其药用盐的方法,其包括将下面通式(Ⅲ)代表的化合物或羧基被改性为活性形式的其反应活性衍生物,

其中R1为羟基或氨基,R2为亚苯基,亚吡啶基,亚噻吩基,亚呋喃基或亚噻唑基, 或 ,A代表氧原子,下式代表的基团: (其中R3和R4相互可相同或不同,每个代表氢或卤原子或可被取代的烃基,或R3和R4可合起来形成可被取代的亚烷基)或下式代表的基团: (其中R70代表氢原子或烃基),n为1-3的整数,条件是R1为氧,氢连到3-位氮上的化合物被包括在上述定义中,与下面通式(Ⅳ)代表的化合物反应

其中-CO2R5和-CO2R6相互可相同或不同,每个代表羧基或羧酸酯基。

本发明包括下面的方法:

(1)在上述方法中,通式(Ⅲ)代表的化合物是选自通式(Ⅲ)代表的化合物,条件是 。

(2)在上述方法中,通式(Ⅲ)代表的化合物选自通式(Ⅲ)化合物,条件为R2代表亚苯基,亚吡啶基,亚噻吩基或亚呋喃基, (其 中R3和R4相互可相同或不同,每个代表氢或卤原子或烃基,或R3和R4合起来形成亚烷基)。

(3)在上述方法中,通式(Ⅲ)代表的化合物选自通式(Ⅲ)化合物,条件是 。

(4)制备嘧啶衍生物或其药用盐的方法,其包括将下面通式(Ⅴ)代表的化合物或羧基被改性为活性形式的其反应活性衍生物

其中R1代表羟基或氨基,R2代表亚苯基,亚吡啶基,亚噻吩基,亚呋喃基或亚噻唑基,R3和R4相互可相同或不同,每个代表氢或卤原子或可被取代的烃基,n为1-3的整数,条件为R1是氧且氢连到3-位氮上的化合物被包括在上述定义中,与下式通式(Ⅳ)化合物反应

其中-CO2R5和-CO2R6相互可相同或不同,每个代表 羧基或羧酸酯基,条件为-CO2R5和-CO2R6中一个或二个代表酯化的羧基,形成下式通式(Ⅵ)代表的羧酸酯:

其中R1为羟基或氨基,R2代表亚苯基,亚吡啶基,亚噻吩基,亚呋喃基或亚噻唑基,R3和R4相互可相同或不同,每个代表氢或卤原子或可被取代的烃基,-CO2R5和-CO2R6相互可相同或不同,每个为羧基或羧酸酯基,条件是-CO2R5和-CO2R6中之一或二个为羧酸酯基,n为1-3的整数,条件为R1为氧且氢连到3-位氮上的化合物被包括在上述定义中,将所得酯通过酸解或包括催化还原的氢解转变为游离羧酸衍生物。

(5)制备通式(1)吡咯并〔3,2-d〕嘧啶衍生物或其药用盐的方法,其包括将通式(2)化合物或羧基被修饰成反应活性形式的其反应活性衍生物

其中R1为羟基或氨基,R2为亚苯基或下式基团: (其中X为硫或氧),R3和R4相互可相同或不同,每个代表氢原子或烃基,或它们合起来形成亚烷基,n为1-3的整数,与通式(3)化合物反应

其中R5和R6相互可相同或不同,每个代表羧基保护基。

(6)制备通式(101)的6,7-二氢-5H-环戊二烯并〔d〕嘧啶衍生物或其药用盐的方法,其包括将通式(102)化合物或羧基被改性成活性形式的其反应活性衍生物

其中R1为羟基或氨基,R2为亚苯基,亚噻吩基,亚呋喃基或亚噻唑基,R3和R4相互可相同或不同,每个为氢原子或可被取代的烃基,n为1-3,与通式(103)化合物缩合:

其中R5和R6相互可相同或不同,每个代表羧基保护基,形成通式(104)的羧酸酯

其中R1,R2,R3,R4,R5,R6和n分别如上述通式102和103所定义,然后通过酸或碱水解或包括催化还原的氢解将该酯转变为相应的游离羧酸。

进一步讲,本发明提供了含通式(Ⅰ)的嘧啶衍生物或其药用盐作为活性成份的抗肿瘤药,优选含上述通式(1)吡咯并〔3,2-d〕嘧啶衍生物或其药用盐作活性成份,或含上述通式(101)6,7-二氢-5H-环戊二烯并〔d〕嘧啶衍生物或其药用盐作活性成份的抗肿瘤药。

更具体讲,本发明提供了含有效量上述通式(Ⅰ)嘧啶衍生物或其药用盐和填充剂的药物组合物,上述通式(Ⅰ)嘧啶衍生物或其药 用盐用于药物的制备,该药物在需服用抗肿瘤药治疗的疾病中是有效的,及治疗患有需服用抗肿瘤疾病的患者的方法,该方法包括将有效量的上述通式(Ⅰ)嘧啶衍生物或其药用盐给药于患者。

R1为羟基的上述通式(1),(2),(4),(101),(102),(104)和(105)的化合物分别是以酮和烯醇互变异构体以平衡共存状态存在的。虽然这些化合物一般是以它们的烯醇互变异构体(即羟基化合物)表示,在本发明书中也是这样标示的,但本发明包括任何情况下的酮互变异构体(即氧代或酰氨化合物)及烯醇互变异构体。

进一步讲,虽然本发明通式(Ⅰ)代表的化合物除了L-谷氨酸部分的不对称原子外,可在杂环的5-位碳原子或在与R3和R4键合的碳原子上(在该情况中,A为 ,其中R3和R4相互可相同或不同且每个代表氢或卤原子或可被取代的烃基)可有不对称碳原子,且每个不对称中心可是S-或R-构型或它们的混合物,但条件是谷氨酸部分的不对称碳原子必是S-(L-)绝对构型。在这种情况中,通式(Ⅰ)化合物被制成非对映体或非对映体混合物,其可通过常规方法很易分离或纯化,如根据需要分级结晶或色谱。由此分离的非对映体都在本发明范围之内。

本发明通式(Ⅰ)化合物通常制成粉末,结晶固体或结晶。

本发明如下详细描述。

在上述定义中,由R2定义的亚苯基可为1,4-或1,3-亚苯基,由R2定义的亚噻吩基和亚呋喃基分别在2,5(或5,2) -或3,5(或5,3)位有游离价键。由R2定义的亚吡啶基可在2,5或5,2位有游离价键。用R2定义的亚噻唑基可在1,3-或1,4-位有游离价键。

在上述定义中,由R3,R4和R70定义的烃基包括低级烷基,低级链烯基和低级炔基。低级烷基可是含1-6个碳原子的直链或支链低级烷基,如甲基,乙基,正丙基,异丙基,正丁基,异丁基,仲丁基,叔丁基,正戊基,异戊基,1-甲基丁基,1,2-二甲基丙基,正己基,异己基,1-甲基戊基,3-甲基戊基,1,2-二甲基丁基,2,3-二甲基丁基,1-乙基丁基,1,1,2-三甲基丙基,1-乙基-1-甲基丙基和1-乙基-2-甲基丙基。在这些基团中,优选甲基,乙基,丙基和异丙基,最优选甲基和乙基。

低级链烯基可为含2-6个碳原子的直链或支链链烯基,如乙烯基,1-丙烯基,2-丙烯基,1-丁烯基,2-丁烯基,2-甲基丙烯基,3,3-二甲基-1-丁烯基和4-甲基-2-戊烯基,其中优选1-丙烯基和2-丙烯基。

另外,低级炔基包括乙炔基,1-丙炔基,2-丙炔基,丁炔基,己炔基和戊炔基,其中优选2-丙炔基。

在上面定义中,R3和R4定义的可被取代烃基包括卤代烃基,如卤代的低级烷基,链烯基和炔基。

由R3和R4合起来形成的亚烷基包括亚甲基,亚乙基和亚丙基。

由R3和R4定义的卤原子包括氯原子,溴原子,碘原子和氟原子。

由R5,R6和R10定义的羧基保护基包括含1-5个碳原子的 烷基,可被取代的苄基,可被取代的苯基和三取代的甲烷基。如烷基包括甲基,乙基,丙基,异丙基,丁基,异丁基,叔丁基和戊基;可被取代苄基包括苄基,硝基苄基和甲氧苄基;可被取代的苯基包括苯基,甲氧苯基和硝基苯基;三取代甲硅烷基包括叔丁基二甲基甲硅烷基和叔丁基二苯基甲硅烷基。

虽然上述目的化合物和在其制备中得到的中间体由于存在不对称碳原子和/或双键而分别以光学异构体或几何异构体存在,但这些异构体也在本发明范围之内。虽然在采用一些制备方法时,目的化合物或中间体分别是以异构体混合物制得的,但在使用前,该混合物可通过常规方法,如分级结晶和色谱法分离并纯化。

本发明化合物与有机酸无机酸可共同形成药理可接受的盐。酸的优选例子包括盐酸硫酸磷酸醋酸柠檬酸丙二酸、水杨酸、苹果酸、富酸、马来酸、琥珀酸抗坏血酸以及甲磺酸。通过按通常方法向以游离碱形式存在的本发明化合物中加入必要量的这样一种有机或无机酸,可制得药理可接受的盐。这样制得的盐可用一种碱处理而再次转化成游离碱。用于这个目的的优选碱包括氢氧化钠、碳酸氨水碳酸氢钠的水溶液。

此外,本发明化合物可用一种适宜的碱与该化合物上的游离羧基反应而转化成药理可接受的羧酸盐。这种碱的优选例子包括碱金属和碱土金属的氢氧化物和碳酸盐,例如氢氧化钠和氢氧化钾以及它们的相应碳酸盐,还有含氮碱如氨和以三乙胺为代表的烷基胺。

本发明通式(Ⅰ)化合物的制备将叙述如下。

通式(Ⅰ)化合物可如下面反应流程1制备,即,通过使式(Ⅲ)羧酸或其反应性衍生物与式(Ⅳ)谷氨酸衍生物缩合,形成式(Ⅰ′) 中间体,再由水解或氢解来对该中间体的羧基保护基团去保护。

反应流程1

其中,R1、R2、R5、R6、A、 和n如式(Ⅰ)、(Ⅲ)和(Ⅳ)所定义。

虽然这样一种从式(Ⅲ)化合物与式(Ⅳ)化合物的缩合开始、以多种官能团的去保护而结束的反应序列是熟知的,因而是本专业技术人员易于进行的,现仍给出式(Ⅰ)化合物制备方法的一个具体例子,虽然它仅是一个过程示例,本发明并不限于它。

现在叙述式(101)化合物,即6,7-二氢-5H-环戊二烯并〔d〕嘧啶衍生物的制备方法的一个具体例子。

式(101)化合物可按反应流程2来制备,即,使式(102)羧酸或它的反应性衍生物与式(103)谷氨酸衍生物缩合以生成式(104)中间体,并通过水解或氢解来游离该中间体的羧基保护基,

反应流程2:

其中,R1,R2,R3,R4,R5,R6和n分别如式(101)、(102)、(103)和(104)所定义。

任何肽合成的常规方法可用于上述缩合。例如,中间体(104)可通过使化合物(102)与一种羧酸活化试剂在有或没有碱存在下 反应,并使所得化合物与化合物(103)反应而制备,所说羧酸活化剂例如有氯代碳酸酯、有机酸酐、二苯基磷酰叠氮化物、二乙基偶磷氰化物羰基二咪唑(diethyl  phosphorocyanidate  carbonyldiimidazole)、氯代磷酸酯或碳化二亚胺。

以化合物(102)为基准,活化试剂的用量为1-25摩尔当量,最好为1-5摩尔当量。作为活化剂使用的氯代碳酸酯包括氯代碳酸甲酯和氯代碳酸乙酯;有机酸酐包括乙酸酐、氯代乙酸酐和混合酸酐;氯代磷酸酯包括氯代磷酸二苯酯和氯代磷酸二乙酯。从实用的度看,碳化二亚胺最好是二环己基碳化二亚胺,但可以适宜地选自二苯基碳化二亚胺、1,3-二对甲苯基碳化二亚胺、1-环己基-3-(2-吗啉代乙基)碳化二亚胺等。

上述反应最好在一种溶剂中进行,溶剂可选自水、醇类(如甲醇、乙醇和丙醇)、醚类(如二乙醚、四氢呋喃和二噁烷)、腈类(如乙腈)、芳烃(如苯和甲苯)、卤代烃(如二氯甲烷、氯仿和四氯化碳)、酮、吡啶、二甲基甲酰胺、二甲亚砜等。此外,选自上述两种或多种溶剂的混合物可用作溶剂。

该反应在有或没有碱的存在下进行。所用碱宜于选自无机碱如甲醇钠、乙醇钠、氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾和碳酸氢钠;还有有机碱如三乙胺、三甲胺、吡啶和三乙醇胺。

然后,上述缩合步骤制备的酯(104)经水解或氢解可转化成相应的游离羧酸,这样得到了化合物(101)。

水解可在水中进行或,若有必需,在亲水有机溶剂如甲醇、乙醇、四氢呋喃、二噁烷、二甲基甲酰胺或二甲亚砜中,通过使用一种含水无机酸如盐酸、硫酸、硝酸或磷酸,一种有机酸如三氟乙酸、三 氯乙酸、对甲苯磺酸、苯磺酸或甲磺酸,一种含有苛性碱如氢氧化钠或氢氧化钾,一种碱金属碳酸盐如碳酸钠或碳酸钾,一种金属醇盐如甲醇钠或乙醇钠或一种胺如三乙胺或吡啶而进行。反应温度可从在冷却下达到的温度至所用溶剂沸点之间变化,最好从10-70℃,反应时间从约一小时至约两天。当使用碱金属碱或有机碱时,产物中谷氨酸部分为酸式盐形式或其中性盐形式。

当R5和R6分别为可被取代的苄基或苯基时,氢解是一种适宜的方式。这样一种化合物的氢解如下进行,即,在一种适合溶剂中,在-20℃至溶剂沸点,最好在0-50℃的温度下,在一种还原催化剂存在下,用常压或加压,用氢催化还原化合物(104)。

反应所用溶剂包括水、甲醇、乙醇、丙醇、乙酸乙酯、二乙醚、四氢呋喃、二噁烷、苯、甲苯、二甲基甲酰胺、吡啶等,而钯、铂或铑用作催化剂,它们即可单独地、也可载于载体上使用,阮内镍也可用作催化剂。

下面叙述原料(102)的制备。

式中R1是一个氨基的式(102)化合物可通过例如下面反应路线(反应流程3)制备:

其中,R1为氨基;R2、R3、R4和n分别如式(102)和(105)中所定义;Y为一个卤原子如氯、溴或碘原子;R7为一羧基保护基;R8为一通常的烯醇保护基如甲基、乙基、苄基或四氢吡喃基。

下面叙述上面的反应步骤。

2-氰基-2-环戊烯-1-酮(107)可如下高产率地顺利制备:使环戊烯酮与一种三(低级烷基)和一种芳香硫醇如硫酚或一种大体位脂肪族硫醇如异丙基硫醇反应,然后与甲苯磺酰氰化物反应,并使由此制得的产物与一种路易斯酸如硅胶或三氟化-醚反应。此时,通过作为中间体的3-烷硫基-2-氰基环戊烷而生成2-氰基-2-环戊烯-1-酮(107)。

通过使具有ω-卤代烷基的环式羧酸酯(106)与2-氰基- 2-环戊烯-1-酮(107)反应,可制得化合物(108)。该反应是在一种氢化钖如氢化三烷基钖或氢化三苯基钖物、或氢化三烷基锗物和一种自由基引发剂如偶氮双异丁腈的存在下进行。

另外,化合物(108)也可通过使一种由碘代烷基化合物(106)制得的有机化合物与2-氰基-2-环戊烯-1-酮(107)反应而制得。该反应中所用有机铜化合物可通过将一种铜盐加到自碘代烷基化合物(106)衍生的一种有机锌化合物中而制得。

3-取代的烷基-2-氰基环戊-1-酮(108)向一种低级烷基烯醇醚(109)的转化可通过使化合物(108)与一种常规羟基保护剂如重氮甲烷或其类似物、2,2-二甲氧基丙烷/对甲苯磺酸或原甲酸酯反应而实现。

1-烷氧基-2-氰基-3-取代的烷基-1-环戊烯化合物(109)可转化成式(105)所示的2,4-二氨基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并〔d〕嘧啶化合物(其中R1为氨基),这是一个目的化合物,其方法是,使化合物(109)与胍或其一种盐常压下或在一封闭管中加热来反应。在该反应中,胍相对于烯醇醚(109)过量〔例如2-20倍、最好为5-10倍于醚(109)的摩尔量〕,而所用溶剂最好为非质子传递溶剂如甲醇、乙醇、甲氧基乙醇、丙醇或2-甲基-2-丙醇,反应温度为50-200℃,最好为120-185℃,反应时间最好为8-70小时。当该反应在高温下长时间进行时,式(102)所示羧酸有时直接生成。

一般而言,具有一个6,7-二氢-5H-环戊二烯并〔d〕嘧啶环(102)的羧酸可如下制备,即,使一种相应的式(105) 羧酸酯进行酸性或碱性水解或包括催化还原在内的氢解,其过程于化合物(104)转化为化合物(101)的过程相同。

式中R1为羟基的式(105)化合物可按反应流程4所示的反应路线制备:

反应流程4:

其中,R1为羟基;R2、R3、R4、R7、R8、n和y分别如反应流程3所定义;R9为一个具有1-4个碳原子的低级烷基。

用已知方法可制备2-羰基烷氧基-2-环戊烯-1-酮(101)。即,它可按M.A.Guaciaro  et  al在Tetrahedron,47,4661(1978)中公开的方法从2-环戊二烯-1-酮制备,或按H.J.Reich  et  al在J.Am.Chem.Soc.,97,5434(1975)中公开的方法从2-羰基乙氧基-环戊酮制备,同时,由这两方法之一制得的产物可用于获得本发明的目的化合物。

在氢化和偶氮双异丁腈的存在下,使具有一种ω-卤代烷基的环式羧酸酯(106)与2-羰基烷氧基-2-环戊烯-1-酮(110)反应,可制得酮化合物(111)。

此外,使从碘烷基化合物(106)制备的一种有机铜化合物与2-羰基烷氧基-2-环戊烯-1-酮(110)反应,也可制得该酮化合物(111)。该反应中所用的有机铜化合物可通过向一种自碘烷基化合物(106)衍生得到的有机锌化合物中加入一种铜盐而制得。

酮化合物,即含环戊酮环的羧酸酯(111)向烯醇醚(112)的转化可如下顺利实现:使酯(111)与一种常规羟基保护剂如重氮甲烷或其类似物、2、2-二甲氧丙烷/对甲苯磺酸或原甲酸酯反应。

3-取代的烷基-2-羰基烷氧基-1-环戊酮化合物(111) 或1-烷氧基-3-取代的烷基-2-羰基烷氧基-1-环戊烯化合物(112)可转化成式(105)的含2-氨基-4-羟基嘧啶环的链烷羧酸酯(其中R1为羟基),其方法是使化合物(111)或化合物(112)与胍或其一种盐在溶剂中反应。所用溶剂、反应温度和反应时间可几乎与上述R1为氨基时的情况相同。

在上述方法中用作中间体的具有卤代烷基的环式羧酸酯(106)将由反应流程5和6中叙及的方法制备。

制备环酯(106)的第一个方法如下:

反应流程5

第一个方法

其中,R2、R3、R4、R7、n和y已分别在反应流程3中定义。

式(114)所示α,β-不饱和羧酸酯(其中R4为氢原子或羟基、R2和R7分别如上定义)可如下制备:将一种膦酰基乙酸三烷基酯(如膦酰基乙酸三甲酯或膦酰基乙酸三乙酯)加到一种含有一种碱(如叔丁醇钾/四氢呋喃、氢化钠、氢化锂或1,5-二氮杂环〔4.3.0〕壬-5-烯(DBN))的有机溶剂(即一种非质子传递溶剂如二甲基甲酰胺、醚、四氢呋喃、烃如己烷或它们的二种或多种混合物)中,制得一个混合物,向该混合物中逐步加入一种具有被保护羧基的5-或6-员环〔由式(113)所示,其中R4为氢原子,R2和R7分别如上定义,它的例子包括:

叔丁氧基羰基-取代的苯甲醛

叔丁氧基羰基-取代的噻吩基醛,以及

叔丁氧基羰基-取代的呋喃基醛,

每一取代基可在2,3,4和5位的任一位置〕或一种具有被保护羧基的5-或6-员环酮〔如式(113)所示,其中R4为烃基如烷基、炔丙基或丙烯基,它的例子包括:

烷基  叔丁氧基羰基苯基酮,

烷基  叔丁氧基羰基噻吩基酮,

烷基  叔丁氧基羰基呋喃基酮,以及

炔丙基叔丁氧基羰基苯基酮〕

然后使得到的混合物在室温或加热下反应。由此制得的不饱和酯,(114)在常压或加压下催化还原为一种相应的饱和酯(115), 然后再进一步转化为一种具有一个羧基的5-或6-员环的化合物〔如式(116)所示,其中R4为氢原子或烃基,R2和R4分别如上定义,它的例子包括:

ω-(4-(叔丁氧羰基)苯基)丙酸,

ω-(5-(叔丁氧羰基)-2-噻吩基)丙酸,和

ω-(5-(叔丁氧羰基)-2-呋喃基)丙酸,

它可在其苄基位置被一个烷基取代〕。由此制得的化合物(116)可通过将羧基还原成羟基而转化成相应的醇(117)。在该还原中所用的还原剂包括甲硼烷和甲硼烷类似物(如甲硼烷-二甲硫,甲硼烷-四氢呋喃和9-硼烷环〔3.3.1〕壬烷),而所用溶剂包括四氢呋喃和醚。然后,在一种碱存在下,醇(117)用磺酸酯化(如甲磺酰化或甲苯磺酰化),所得酯在一种非质子传递溶剂中在加热下用一种碱金属卤化物进一步卤化,得到具有一个ω-卤代烷基的环式羧酸酯(106a)〔相应于式(106)化合物,其中R3为卤素原子;R4为氢原子或甲基或乙基;n为2;R2、R7和y分别如式(106)中所定义〕。例如,通过该方法可制得

ω-(4-(叔丁氧羰基)苯基)丙基卤化物

ω-(5-(叔丁氧羰基)-2-噻吩基)丙基卤化物,和

ω-(5-(叔丁氧羰基)-2-呋喃基)丙基卤化物。

式(106)所示环式羧酸酯(其中R3为氢原子,R4为氢原子或低级烷基,n为1,R2和R7分别如式(106)所定义)可由第二个方法制备,它叙述于反应流程6中。

反应流程6

第二个方法

式(113)化合物(其中R2和R7分别如式(106)所定义,R4为氢原子或低级烷基)中的羰基可通过Wittig反应转化成一个外式亚甲基,该外式亚甲基可通过氢硼化作用进一步转化为羟甲基。由此制得的羟甲基化合物可进一步转化为卤化物(106b)。更确切地说,通过在冷却下将化合物(113)加入到一种溶液中而可制得外式亚甲基化合物(118),所说溶液可通过在冷却下将丁基锂加入到溴化甲基三苯基鏻溶于四氢呋喃的溶液中而预先制备。化合物(118)用一种氢硼化物如9-硼烷双环〔3.3.1〕壬烷、甲硼烷、二环己基硼烷、disiamytborane或thexyl borane进行氢硼烷化,然后与过氧化氢的碱性溶液反应,得到一种伯醇(119),它又可转化为一种ω-卤代烷基化合物(106b)〔相对应于式(106)化合物,其中R3为氢原子,R4为氢原子或甲基或乙基,n为1,R2、R7和y分别如式(106)中所定义〕,其过程与上述从(117)至(106a)的转化相同。

由此制得的化合物(106)用于化合物(108)和(111)的制备中,后者是本发明中重要的中间体。

在上述方法中所用的化合物(113)中,式(113)所示的一种化合物(其中R2为亚噻吩基,R4为氢原子)可如下制备:首先,由市售的2-噻吩酰氯与一种醇盐在冷却下或在室温下反应,制得2-噻吩羧酸酯,然后,通过使2-噻吩羧酸酯与丁基锂在N,N,N′,N′-四甲基乙二胺存在和冷却下反应,并把无水二甲基甲酰胺加入所得反应混合物中以进行反应,可将该2-噻吩羧酸酯转化为2-甲酰-5-噻吩羧酸酯(113)。此外,式(113)化合物(其中R2为亚噻吩基,R4为甲基或乙基)也可按上述类似方法制备。亦即,相应的甲基噻吩基酮和乙基噻吩酮可按上述方法同样制备,不同之处在于,二甲基甲酰胺被二甲基乙酰胺或二甲基丙酰胺所替代。除此之外,式中R2为亚苯基和R4为氢原子的式(113)化合物可通过将对甲酰苯甲酸转化为相应的酰氯并使该酰氯酯化而制得,而式中R2为亚苯基和R4为甲基或乙基的式(113)化合物可按R.Joyeau et al的方法制备(见J.Chem.Soc.,Perkin Trans.I,1899-1907(1987))。

本发明式(101)化合物的一些具体例子包括:

N-{4-〔2-(2,4-二氨基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)乙基〕苯甲酰}-L-谷氨酸;

N-{5-〔3-(2,4-二氨基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)丙基〕-2-噻吩甲酰}-L-谷氨酸;

N-{4-〔3-(2,4-二氨基-6,7-二氢-5H-环戊二 烯并〔d〕嘧啶-5-基)丙基〕苯甲酰}-L-谷氨酸;

N-{5-〔2-(2,4-二氨基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)乙基〕-2-噻吩甲酰}-L-谷氨基;

N-{5-〔2-(2,4-二氨基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)乙基〕-2-呋喃甲酰}-L-谷氨酸;

N-{5-〔3-(2,4-二氨基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)丙基〕-2-呋喃甲酰}-L-谷氨酸;

N-{5-〔2-(2,4-二氨基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)-1-乙基乙基〕-2-噻吩甲酰}-L-谷氨酸;

N-{4-〔2-(2,4-二氨基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)-1-乙基乙基〕苯甲酰}-L-谷氨酸,

N-{5-〔2-(2,4-二氨基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)-1-甲基乙基〕-2-噻吩甲酰}-L-谷氨酸,

N-{4-〔2-(2,4-二氨基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)-1-甲基乙基〕苯甲酰}-L-谷氨酸,

N-{5-〔3-(2,4-二氨基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)-1-甲基丙基〕2-噻吩甲酰}-L-谷氨酸,

N-{4-〔3-(2.4-二氨基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并〔d〕嘧啶-5基-1-甲基丙基〕-2-苯甲酰-2-谷氨酸

N-{4-〔2-(2-氨基-4-羟基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)乙基〕苯甲酰}-L-谷氨酸,

N-{5-〔2-(2-氨基-4-羟基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)乙基〕-2-噻吩甲酰}-L-谷氨 酸,

N-{5-〔2-(2-氨基-4-羟基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)乙基〕-2-呋喃甲酰}-L-谷氨酸,

N-{4-〔3-(2-氨基-4-羟基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)丙基〕苯甲酰}-L-谷氨酸,

N-{5-〔3-(2-氨基-4-羟基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)丙基〕-2-噻吩甲酰}-L-谷氨酸,

N-{5-〔3-(2-氨基-4-羟基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)丙基〕-2-呋喃甲酰}-L-谷氨酸,

N-{5-〔2-(2-氨基-4-羟基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)-1-乙基乙基〕-2-噻吩甲酰}-L-谷氨酸,

N-{4-〔2-(2-氨基-4-羟基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)-1-乙基乙基〕苯甲酰}-L-谷氨酸,

N-{5-〔2-(2-氨基-4-羟基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)-1-甲基乙基〕-2-噻吩甲酰}-L-谷氨酸,

N-{4-〔2-(2-氨基-4-羟基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)-1-甲基乙基〕苯甲酰}-L-谷 氨酸。

现在将叙述通式(1)化合物,即吡咯并〔3,2-d〕嘧啶衍生物。

通式(1)吡咯并〔3,2-d〕嘧啶衍生物和其药理可接受盐(以下简称“化合物(1)”,它们是本发明的目的化合物)和其制备用的中间体可通过下叙反应流程所示方法制备。在这些反应流程中,Me为甲基,Et为乙基,Bu为丁基,Ac为乙酰基,Ph为苯基,dioxane为二噁烷,acetophenonc为乙酰苯,Ordinary  temperature为常温。

反应流程7

方法1

其中R1、R2、R3、R4和n分别如式(1)中所定义;R5、R6和R7可相同或不同,各自为一羧基保护基,而该羧基保护基包括叔丁基、叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基、烷基(C1-4)、苄基、取代的苄基和苯基。

本发明的化合物(1)或其盐可通过化合物(5)的水解或氢解而制备。水解可采用含水无机酸、有机酸如三氟乙酸、含水碱金属氢氧化物或碱金属碳酸盐或一种有机碱在含水溶液,或若有必要,在一种亲水性有机溶剂如甲醇、乙醇、四氢呋喃、二噁烷或二甲基甲酰胺存在下常温实现。当采用一种碱金属的或有机的碱时,产物中的谷氨酸部分为酸式盐的形式或其中性盐的形式。当R5和R6均为苄基、取代的苄基或苯基时,氢解是一种适宜的方法。化合物(5)的氢解可在一种适宜的催化剂如钯(既可单独使用,也可载于一种载体上)的存在下在常压或加压下进行。上述方法制得的化合物(1)为粉末、晶状固体或结晶。

用于制备化合物(1)的中间体酯化合物(5)可用常规肽合成方法制备,即,使具有一个吡咯并〔3,2-d〕嘧啶环的化合物(2)与一羧酸活化剂如氯代碳酸酯、有机酸酐、DPPA、CDI、氯代磷酸酯或DCC在有或没有碱存在下反应,将化合物(2)转化成一种活性衍生物如混合酸酐或活性酯,然后使该活性衍生物与其羧基被保护的谷氨酸衍生物(3)反应。

化合物(2)可由化合物(6)通过酸性或碱性水解或通过包括催化还原在内的氢解而制备。

方法1中所用化合物(6)可通过例如反应流程8中所示的方法 2制备:

反应流程8

方法2

其中,R1、R2、R3、R4、R7和n分别如反应流程7所定义;R8为羧基保护基;R9为烷基或苯基。

当目的化合物是式(6)中R1为氨基的化合物相应的2,4-二氨基嘧啶化合物时,它可如下制得:通过使化合物(7)与一个N-酰基硫代异氰酸酯(AcylNcs,其中相应于R9CO基的酰基是一个脂族或芳香酰基,如乙酰基或苯甲酰基)在一种非质子传递溶剂中反应,从而将化合物(7)顺利地转化为化合物(8),再用常规方法使化合物(8)进行S-低级烷基化(如甲基化),并使得到的S-烷基化物与NH,在常压下或在封闭管中加热进行反应。

当目的化合物是式(6)中R1为羟基的化合物相应的2-氨基-4-羟基嘧啶化合物时,它可如下制得:通过使化合物(9)与一个N-酰基硫代异氰酸酯(AcylNCS)在一种溶剂中和在室温或冷却下反应,从而将化合物(9)转化为化合物(10),再使化合物(10)进行S-低级烷基化,并在加热下使制得的烷基化物与NH3反应,通过环闭合将烷基化物转化为目的化合物。

方法(2)中所用的化合物(7)可通过反应流程9所示的方法3制备:

反应流程9

方法3

其中R2、R3、R4、R7和n分别如反应流程7所定义;y为卤素原子。

化合物(11)通过使3-二甲基氨基丙烯腈与氨基乙腈反应而制得。

在一种碱〔如碱金属卤化物或有机碱如DBU(1,8-二氮杂双环〔5.4.0〕十一-7-烯)、DBN(1,5-二氮杂双环〔4.3.0〕壬-5-烯)或DMAP(4-二甲基氨基吡啶)〕存在下、在室温或加热下使化合物(11)与化合物(12)反应,可将(11)转化为化合物(13)。在一种光敏剂(如甲基基酮或乙酰苯)存在下,在一种适宜的溶剂中,用紫外光辐射化合物(13),使它发生异构化而可转化为化合物(14)。在一种质子吸收剂如醇钠、LDA(二异丙酰胺锂)或己二硅氮烷锂存在下,化合物(14)可通过环闭合而容易地转化为化合物(7)。

在制备式(6)中R1为羟基的化合物中用作方法(2)的原料的化合物(9)可通过如下面反应流程10所示的方法4来制备:

反应流程10

方法4

其中,R2、R3、R4、R7、R8、n和y分别如反应流程7-9中所定义。

使3-二甲基氨基丙烯腈与氨基乙酸反应,可制得化合物(15)。按类似于方法3的方式可将化合物(15)经化合物(16)和(17)转化为化合物(9)。

在化合物(7)和(9)的制备中用作另一种原料的化合物(12)中,式(12)中R3为氢原子和n为2的化合物(12a)可通过示于反应流程11中的下列方法5制备:

反应流程11

方法5

其中,R2、R4、R7和y分别如反应流程7-9所定义。

化合物(19)可如下制备:将一种膦酰基乙酸三烷基酯(如膦酰基乙酸三甲酯或膦酰乙酸三乙酯)滴加到一种含有一种碱(如叔丁醇钾/四氢呋喃、氢化钠或DBN)的有机溶剂中(非质子传递溶剂如二甲基甲酰胺、醚、四氢呋喃、其它们的混合物),向所得混合物中加入一种具有被保护羧基的化合物(18)

〔包括叔丁氧羰基取代的苯甲醛,

叔丁氧羰基取代的噻吩基醛,和

叔丁氧羰基取代的呋喃基醛,和

它们相应于式(18)中R4为氢原子的化合物,且后两个化合物分 别可在2、3、4和5位的任意一处具有所说取代基;

还包括烷基叔丁氧羰基苯基酮,

烷基叔丁氧羰基噻吩基酮,

烷基叔丁氧羰基呋喃基酮,和

炔丙基叔丁氧羰基苯基酮,

它们相对应于式(18)中R4为烃基的化合物〕,使所得混合物在室温或加热下反应。由此制得的化合物(19)在常压或加压下催化还原成相应的饱和酯,它再通过碱性水解进一步转化为同时具有一个羧酸基和一个被保护的羧基(即一个酯醛)的化合物(20)

〔例如  ω-(4-叔丁氧羰基苯基)链烷酸,

ω-(5-(叔丁氧羰基噻吩-2-基)链烷酸,或

ω-(5-(叔丁氧羰基呋喃-2-基)链烷酸,

其中,链烷酸部分既可为直链的,也可为支链的〕。然后,通过羧基还原,化合物(20)被转化为相应的化合物(21)。还原中所用的还原剂包括甲硼烷和甲硼烷类似物(如甲硼烷-二甲硫、甲硼烷四氢呋喃和9-甲硼烷基环〔3,3,1〕壬烷),而其中所用溶剂包括四氢呋喃和醚。式(21)化合物在一种碱存在下进行磺化(如甲磺酰化,所得磺酸酯用碱金属卤化物进一步卤化(在非质子传递溶剂中,加热),得到式(12a)中y为氯,溴或碘的化合物〔例如

ω-(4-(叔丁氧羰基苯基)-丙基卤,

ω-(5-(叔丁氧羰基噻吩基)-丙基卤,或

ω-(5-(叔丁氧羰基呋喃基)-丙基卤〕。

此外,式(18)中R4为甲基的化合物,亦即化合物(18a) 可用如下方法转化为一种异丙烯卤化物12(b):用溴化甲基三乙基鏻使化合物18(a)进行Wittig反应,生成一种异丙烯基化合物(22),然后用NBS或NCS卤化化合物(22)。

此外,化合物(22)可用如下方法转化为一种ω-卤代烷基化合物(12c):使化合物(22)与一种氢硼化合物如9-硼烷基双环〔3,3,1〕壬烷、甲硼烷、二环己基甲硼烷、disiamyl  borane或Hexyeborane反应以进行氢硼化,用一种过氧化氢的碱性溶液处理产物,以形成一种伯醇,再按上述(21)转化为(12a)的类似方式处理该伯醇。

式(26)化合物按反应流程12中所示方法6制备。

反应流程12

方法6

其中,R2、R7和y分别如反应流程7-9中所定义。

式(18)中R4为氢原子的式(18)化合物、亦即化合物(18b)如叔丁氧羰基苯甲醛、叔丁氧羰基呋喃醛或叔丁氧羰基噻吩醛与一种乙烯基镁卤化物反应,得到一种烯丙醇(23),用例如甲硅烷基醚保护该醇(23),然后氢硼化,得到伯醇(25),它可按上述类似方式转化为一种卤化物(26)。

由化合物(11)与该卤化物(26)反应而制得的化合物相应于式(13)化合物(其中,一个仲羟基键合到相对于构成叔胺的氮原子而言的γ-碳原子上)。该羟基可用已知方法还原为氢原子,形成一个式(13)中R3和R4为氢原子且n为2的化合物。此外,通过使该羟基氧化成一个羰基并使该羰基进行Wittig反应,该羟基也可被转化为一个外式亚甲基。

式(32)化合物按反应流程13所示方法7制备。

反应流程13

方法7

其中R2、R7和y分别如反应流程7-9所定义。

伯醇(25)可用如下方法转化为酮(29):使醇(25)与2,3-二氢呋喃或3,4-二氢-2H-吡喃反应,借此用四氢呋喃-2-基或四氢吡喃-2-基保护该羟基,使得到的被保护的醇与溴化四丁基铵反应,以便解封仲醇基,并使该仲醇进行Swern氧化。该酮(29)可用如下方法进一步转化为化合物(32):使酮(29)进行Wittig反应(与Ph3P+MeBr-、Buli和THF),以将它转化为一种外式亚甲基化合物(30),再使化合物(30)的伯醇基去保护,再按上述类似方式处理得到的醇(31)。

用于制备式(13)中R3为氢原子且n为1的化合物(它被称为化合物(13a)的第二种方法将在示于反应流程14中的方法8中叙述:

反应流程14:

方法8

其中,R2、R4、R7和y分别如反应流程7-9中定义。

化合物(36)可如下制备:使具有卤代烷基、低级烷基和保护了的羧基的化合物(33)氰化(用DMSO中的KCN),把得到的腈(34)还原为一种伯胺(35)(用THF中的BH3),并使胺(35)用二甲基氨基丙烯腈进行置换(在有或没有AcONa存在下在醇溶剂中)。化合物(36)可通过氰甲基化转化为化合物(13a)。化合物(33)可通过相应烷基化物用NBS溴化或相应羟甲基取代的衍生物的卤化而制备。化合物(36)的氰甲基化可通过将它与一种碱金属氰化物和在乙酸中仲甲醛反应而实现。

制备式(13)中R3和R4共同形成一个外式亚甲基且n为1的化合物(以下称为化合物(13c))的第三种方法下述于反应流程15所示的方法9中:

反应流程15:

方法9

其中R2和R7分别如反应流程7-9所定义;R11为氢原子或低级烷基。

该方法的特征在于,采用一种环氧化物来代替烷基卤(12)。式(18b)化合物(其中R2和R7分别如上定义)中的羰基可通过Wittig反应转化为一个外式亚甲基;该外式亚甲基又可通过前述的氢硼化转化为一个羟基;所得化合物可进一步转化为卤化物(12d)。更具体地说,该外式亚甲基化合物(37)可通过Wittig反应制得,该反应中,先将丁基锂冷却下加入到溴化甲基三苯基鏻于四氢呋喃中形成的悬浮液中而制得一个溶液,再将化合物(18b)加到该溶液中。由此制得的外式亚甲基化合物(37)可按类似于上述的方式转化为一种ω-卤代烷基化合物(12d),亦即,用氢硼化合物如甲硼烷使化合物(37)氢硼化,再用过氧化氢的碱性溶液与所得产物反应,形成一种伯醇(41),再按上述将(21)转化为(12a)的类似方式处理该醇(41)。这样制得的二腈中间体(13b)具有一个仲羟基,它键合到相对于形成该叔胺的氮原子为ω-碳的碳原子上。该仲羟基可按已知方法转化为氢原子。此外,中间体(13b)可用如下方法转化为具有一个亚烷基侧链的化合物(13c):把化合物(13b)氧化为一种化合物(39),再使该化合物(39)进行Wittig反应。

本发明的式(1)化合物的具体例子包括:

N-〔4-(3-(2,4-二氨基吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)丙基〕苯甲酰〕-L-谷氨酸,

N-〔5-(3-(2,4-二氨基吡咯并〔3,2-d〕-嘧啶-5-基)丙基-2-噻吩甲酰〕-L-谷氨酸,

N-〔5-〔3-2,4-二氨基吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)丙基〕-2-呋喃甲酰〕-L-谷氨酸,

N-〔4-〔3-(2-氨基-4-氧代吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)丙基〕苯甲酰〕-L-谷氨酸,

N-〔5-〔3-(2-氨基-4-氧代吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)丙基〕-2-噻吩甲酰〕-L-谷氨酸,

N-〔5-〔3-(2-氨基-4-氧代吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)丙基〕-2-呋喃甲酰〕-L-谷氨酸,

N-〔4-〔3-(2,4-二氨基吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)-1-甲基丙基〕苯甲酰〕-L-谷氨酸,

N-〔5-〔3-(2,4-二氨基吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)-1-甲基丙基〕-2-噻吩甲酰〕-L-谷氨酸,

N-〔5-〔3-(2,4-二氨基吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)-1-甲基丙基〕-2-呋喃甲酰〕-L-谷氨酸,

N-〔4-〔3-(2-氨基-4-氧代吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)-1-甲基丙基〕苯甲酰〕-L-谷氨酸,

N-〔5-〔3-(2-氨基-4-氧代吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)-1-甲基丙基〕-2-噻吩甲酰〕-L-谷氨酸,

N-〔5-〔3-(2-氨基-4-氧代吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)-1-甲基丙基〕-2-呋喃甲酰〕-L-谷氨酸,

N-〔4-〔3-2,4-二氨基吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基-1-亚甲基丙基〕苯甲酰〕-L-谷氨酸,

N-〔5-〔3-2,4-二氨基吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)-1-亚甲基丙基〕-2-噻吩甲酰〕-L-谷氨酸,

N-〔5-〔3-2,4-二氨基吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)-1-亚甲基丙基〕-2-呋喃甲酰〕-L-谷氨酸,

N-〔4-〔3-(2-氨基-4-氧代吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)-1-亚甲基丙基〕苯甲酰〕-L-谷氨酸,

N-〔5-〔3-(2-氨基-4-氧代吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)-1-亚甲基丙基〕-2-噻吩甲酰〕-L-谷氨酸,

N-〔5-〔3-(2-氨基-4-氧代吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)-1-亚甲基丙基〕-2-呋喃甲酰〕-L-谷氨酸,

N-〔4-〔3-(2,4-二氨基吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)-1-乙基丙基〕苯甲酰〕-L-谷氨酸,

N-〔5-3-(2,4-二氨基吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)-1-乙基丙基〕噻吩甲酰〕-L-谷氨酸,

N-〔5-〔3-(2,4-二氨基吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)-1-乙基丙基〕-2-呋喃甲酰〕-L-谷氨酸,

N-〔4-〔3-(2-氨基-4-氧代吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)-1-乙基丙基〕苯甲酰〕-L-谷氨酸,

N-〔5-〔3-(2-氨基-4-氧代吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)-1-乙基丙基〕-2-噻吩甲酰〕-L-谷氨酸,

N-〔5-〔3-(2-氨基-4-氧代吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)-1-乙基丙基〕-2-呋喃甲酰〕-L-谷氨酸,

N-〔4-〔2-(2,4-二氨基吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)乙基〕苯甲酰〕-L-谷氨酸,

N-〔5-〔2-(2,4-二氨基吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)乙基〕-2-噻吩甲酰〕-L-谷氨酸,

N-〔5-〔2-(2,4-二氨基吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)乙基〕-2-呋喃甲酰〕-L-谷氨酸,

N-〔4-〔2-(2-氨基-4-氧代吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)乙基〕苯甲酰〕-L-谷氨酸,

N-〔5-〔2-(2-氨基-4-氧代吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)乙基〕-2-噻吩甲酰〕-L-谷氨酸,

N-〔5-〔2-(2-氨基-4-氧代吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)乙基〕-2-呋喃甲酰〕-L-谷氨酸,

N-〔4-〔2-(2,4-二氨基吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)-1-乙基乙基〕苯甲酰〕-L-谷氨酸,

N-〔5-〔2-(2,4-二氨基吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)-1-乙基乙基〕-2-噻吩甲酰〕-L-谷氨酸,

N-〔5-〔2-(2,4-二氨基吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)-1-乙基乙基〕-2-呋喃甲酰〕-L-谷氨酸,

N-〔4-〔2-(2-氨基-4-氧代吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)-1-乙基乙基〕苯甲酰〕-L-谷氨酸,

N-〔5-〔2-(2-氨基-4-氧代吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)-1-乙基乙基〕-2-噻吩甲酰〕-L-谷氨酸,

N-〔5-〔2-(2-氨基-4-氧代吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)-1-乙基乙基〕-2-呋喃甲酰〕-L-谷氨酸,

N-〔4-〔2-(2,4-二氨基吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)-1-甲基乙基〕苯甲酰〕-L-谷氨酸,

N-〔5-〔2-(2,4-二氨基吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)-1-甲基乙基〕-2-噻吩甲酰〕-L-谷氨酸,

N-〔5-〔2-(2,4-二氨基吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)-1-甲基乙基〕-2-呋喃甲酰〕-L-谷氨酸,

N-〔4-〔2-(2-氨基-4-氧代吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)-1-甲基乙基〕苯甲酰〕-L-谷氨酸,

N-〔5-〔2-(2-氨基-4-氧代吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)-1-甲基乙基〕-2-噻吩甲酰〕-L-谷氨酸,

N-〔5-〔2-(2-氨基-4-氧代吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)-1-甲基乙基〕-2-呋喃甲酰〕-L-谷氨酸,

N-〔4-〔2-(2,4-二氨基吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)-1-亚甲基乙基〕苯甲酰〕-L-谷氨酸,

N-〔5-〔2-(2,4-二氨基吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)-1-亚甲基乙基〕-2-噻吩甲酰〕-L-谷氨酸,

N-〔5-〔2-(2,4-二氨基吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)-1-亚甲基乙基〕-2-呋喃甲酰,

N-〔4-〔2-(2-氨基-4-氧代吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基-1-亚甲基乙基〕-苯甲酰〕-L-谷氨酸,

N-〔5-〔2-(2-氨基-4-氧代吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基-1-亚甲基乙基-噻吩甲酰〕-L-谷氨酸,以及

N-〔5-〔2-(2-氨基-4-氧代吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基-1-亚甲基乙基〕-2-呋喃甲酰〕-L-谷氨酸。

为了说明本发明的作用,现在将叙述药理试验例。

试验例1

对二氢叶酸还原酶(DHFR)的抑制活性。

基本上按D.K.Misra等人的方法进行测量〔见Nature  189,39至42(1961)〕。

按J.M.Whiteley等人的方法用小鼠白血病细胞P388 制备DHFR〔见ArCh.Biochem.Biophys.,150,15至22(1972)〕。

将提纯的DHFR的溶液加入含磷酸钾缓冲溶液(pH:7.5,75mM),巯基乙醇(7.5mM)和NA DPH(0.25mM)的溶液中,使总量达0.57ml。以0.015ml的用量将各个本发明化合物的系列稀释液加入到上面制备的混合物中,在37℃预先加热由此制得的混合物5分钟,接着加入0.015ml 25μm的二氢叶酸溶液,在37℃保持获得的混合物5分钟以进行反应。检测得到的混合物每分钟在339nm处吸收的降低。基于上述降低程度确定形成的四氢叶酸的量并与对照溶液(不含本发明的化合物)比较,以计算50%DHFR抑制浓度(IC50)。结果列于表1-A和1-B中。

表1-A

化合物 IC50×108M

实施例2  9.7

实施例4  9.0

实施例6  100

实施例9  3.0

表1-B

化合物 DHFR抑制活性IC50×109

实施例103  72

实施例105  4.0

实施例108  7.6

试验例2:

对瘤细胞增生的抑制作用

用小鼠白血病细胞P388、小鼠结肠癌细胞结肠38、人鼻咽癌细胞KB和人癌细胞A549作为瘤细胞。将用RPM1-1640介质(10%胎血清)制得的上述癌细胞的悬浮液以预定的量各吸入96孔的微板。将微板放置在含5%CO2的二氧化碳保温箱中并在37℃温育1天。用培养介质稀释本发明化合物的DMSO溶液以制备化合物的系列稀释液。以预定的量将这些稀释液加入上述孔中。在37℃培养得到的微板3天,用MTT法测定细胞的存活数目,以测得50%细胞增生抑制浓度(IC50),按M.C.Alley等人的方法测定细胞的存活数目〔见Cancer Research,48,589至601(1988)〕,结果列于表2-A和2-B中。按类似的方法对作为对照化合物的MTX进行测试。

表2-A

化合物  MTX  实施例2  实施例4  实施例6  实施例9

P388  1.6  1.2  1.6  1.2  1.7

A549  8  1.9  6.3  94  10

KB  2  0.98  3.1  3.0  3.2

细胞38  6  4.0  12.9  34  3.9

(IC50×108M)

表2-B

增生抑制活性

IC50×109M

化合物  MTX  实施例103  实施例105  实施例108

P388  22  7.7  1.8  2.7

A549  88  9.8  2.4  9.3

LX-1  -  -  0.67  -

KB  11  3.8  0.92  1.6

结肠38  28  8.9  0.87  4.1

试验例3:

对移植到小鼠上的试验瘤的活性作用的试验

小鼠P388白血病

将P388细胞(1×106)接种到7周龄的雌性CDF1小鼠的腹腔中。第二天起每天给予小鼠试验药物一次,共四天。

以溶于悬浮于在生理盐水中的NaHCO34%溶液中的形式腹腔内给予各个试验药物,而对于对照组仅给予在生理盐水中的NaHCO3的4%溶液。每个对照组有10只小鼠,而每个治疗组有6只小鼠。基于按下列方式计算的T/C值估测抗肿瘤活性:

T/C(%)=治疗小鼠的平均存活时间(天)/对照小鼠的平均存活时间(天)

按R.I.Geran等人的方法进行测量(见Cancer  Chemotherapy  Reports(Part  3),31(1972)。按类似方法对作为对照化合物的MTX进行试验。结果列于表3-A和3-B中。

从上述试验例的结果可看出,本发明的化合物对二氢叶酸还原酶(DHFR)显示出抑制活性,从而显著地抑制小鼠白血病细胞P388、小鼠结肠癌细胞结肠38、人的非小细胞性的肺癌细胞A549和人的表皮癌细胞KB的增生。

另外,还可看出,本发明的化合物对已移植白血病细胞或某些固体肿瘤细胞的小鼠的肿瘤组织的增生有抑制作用,从而延长生命或起治疗作用,因此,本发明的化合物有望有效地用于治疗或维持治疗人类肿瘤。具体地说,本发明的化合物可单独或与其它抗癌药一起治疗或维持治疗各种肿瘤,例如已用MTX进行治疗的绒膜癌、白血病、雌性乳腺癌、头或颈的表面癌、鳞状细胞或小细胞性肺癌或各种淋巴肉瘤。

本发明化合物的一个特征在于其毒性比MTX低,在抗肿瘤活性试验中作为药物显示出显著作用,且其有效剂量较宽。另外,本发明的化合物的毒性通常也比Miwa等人报道的上述吡咯并〔3,2-d〕嘧啶化合物低,本发明化合物对MTX感受的肿瘤的最小有效剂量与MTX的几乎处于相同级数。但是,本发明化合物应用于患肿瘤小鼠(CDF1)时最大有效剂量与最小有效剂量之比要比MTX应用时大。确切地说,实施例2和9的化合物的剂量之比均为数十倍(约60)。而MTX的剂量之比很小,低于10,

当本发明的化合物用作药物时,他们可就这样或以药用羧酸盐或酸加成盐的形式经口腔肠胃外给药。其剂量根据症状;病人的体重年龄、性别和敏感性;给药方式(途径)和间隔(时间表);活性组分的种类;制剂的种类和性质等而变化,没有特殊的限制,每个实验对象(60Kg,1.62平方米/人)的日剂量通常为1至2000 mg,较好的为10至1000mg或1至300mg,最好为10至150mg,可每天一次连续给药或每周1至3次间歇给药。

通过往活性组分中加入填充剂,若需要,再加入粘合剂、崩解剂、润滑剂着色剂和/或矫正剂并将获得的混合物配制成片剂、颊剂、锭剂、颗粒剂、粉剂、胶囊剂、悬浮液或糖浆的方式,将本发明的化合物制成口服制剂,各个给药单元内活性组分与填充白剂之比(%)在约0.5至50%(重量)范围内较为合适,当上述比处于该范围内时,可获得较好的剂量。

填充剂的例子有乳糖、玉米淀粉蔗糖葡萄糖、山梨醇、结晶纤维素和二氧化硅;粘合剂的例子有聚乙烯醇、聚乙烯醚、乙基纤维素、甲基纤维素、阿拉伯胶、黄蓍胶、明胶、片胶、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、柠檬酸、糊精和果胶;润滑剂的例子有硬脂酸镁、滑石、聚乙二醇、硅石和硬化植物油;着色剂的例子有认可用作药用添加剂的那些着色剂;矫正剂的例子有可可粉、薄荷草、芳香粉、薄荷油、冰片和粉状肉桂皮。若需要,片剂和颗粒剂当然宜用糖、乳糖等包覆。

非肠胃给药的制剂包括注射剂、分散剂和乳剂。本发明注射剂的制备方法包括根据需要将pH调节剂、缓冲剂、悬浮剂、增溶剂、稳定剂、增强剂和/或防腐剂加到有效成分中,然后按常规方法将混合物配制成静脉内、皮下或肌内注射剂。

注射剂包括无菌水溶液和分散液以及注射制剂使用前的无菌粉末。载体可以是含水、乙醇、甘油、多醇、上述二种或多种载体的混合物或植物油,可通过将化合物分散在含甘油、液态聚乙二醇或其混合物的水性或油性介质中的方法制备分散剂。注射制剂使用前的无菌 粉末宜采用将含化合物的无菌滤液进行真空浓缩/干燥或冷冻干燥的方法制备。

悬浮剂的例子包括甲基纤维素、多乙氧基醚、羟乙基纤维素、金合欢、黄蓍胶粉末,羧甲基纤维素钠和聚氧乙烯山梨糖醇单月桂酸酯。

增溶剂的例子包括聚乙烯硬化蓖麻油,多乙氧基醚、烟酰胺、聚氧乙烯山梨糖醇单月桂酸酯、Macrogol和蓖麻油脂肪酸的乙酯。

稳定剂的例子包括亚硫酸钠、焦硫酸钠和醚;防腐剂的例子有对羟基苯甲酸甲酯,对羟基苯甲酸乙酯、山梨酸、酚、甲酚和氯甲酚。

现在将参照下列制备例和实施例对本发明作更详细的描述,但本发明不限于此。

在下列制备例和实施例的光谱数据中,isomer表示“异构体”;Olefinic  Proton表示“烯属质子”;Pyrrole表示“吡咯”;ethylidene表示“亚乙基”;Mass表示“质谱”;neat表示“净”。

制备例1

3-(N-氰甲基)氨基丙烯腈〔化合物(11)〕

将氨基丙烯腈氢氯化物(26.5g,0.28mol),乙酸钠(34.8g,0.42mol)和3-二甲基氨基丙烯腈(13.8g,0.1mol)加入含甲醇(300ml)和水(20ml)的混合物中。在室温下搅拌获得的混合物24小时,接着加入水。用乙酸乙酯萃取得到的混合物。蒸馏有机层以除去溶剂,用硅胶柱色谱法处理获得的残余物并用溶剂(乙酸乙酯/己烷=1∶1)洗脱,得到9.3

(1H×

isomer)

制备例2

4-(3-碘丙基)-苯甲酸叔丁酯

〔通式(12)表示的化合物,式中n为2,R2为亚苯基,R3为H,R4为H,R7为叔丁基,Y为I〕

将叔丁醇钾(8.4g,0.075mol)加入二乙基膦酰基乙酸乙酯(19ml,0.075ml)的THF(200ml)溶液中,在室温下搅拌获得的混合物30分钟,接着加入对甲酰基苯甲酸叔丁酯(10.3g   50mmol)的THF(20ml)溶液。在室温下搅拌获得的混合物30分钟并倒入氯化铵的饱和水溶液中。用乙醚萃取获得的混合物。蒸馏有机层以除去溶剂,用硅胶柱色谱法处理残余物,用溶剂(乙酸乙酯/己烷=1∶10)洗脱,得到4-(叔丁氧羧基)苯基丙烯酸乙酯。在甲醇(200ml)中用10%钯-碳(0.5g)催化还原该产物,然后加入到含1N氢氧化钠水溶液(100ml)和甲醇(100ml)的混合物中。在室温下搅拌获得的混合物2小时。反应完全后,用1N盐酸水溶液使反应混合 物呈弱酸性,用乙酸乙酯萃取。蒸馏有机层以除去溶剂,用短硅胶柱色谱法提纯残余物,得到4-(叔丁氧羰基)苯基丙酸。将该酸溶于THF(100ml)中,接着在冰冷却下滴加BH3于THF(100ml)中的1M溶液。在室温下搅拌获得的混合物1小时。反应完全后,将反应混合物倒入氯化铵的饱和水溶液中,用乙酸乙酯萃取获得的混合物。蒸馏有机层以除去溶剂,用硅胶柱色谱法处理残余物,用溶剂(乙酸乙酯/己烷=1∶1)洗脱,得到4-(叔丁氧羧基)苯基丙醇。将该产物溶于乙醚(300ml),接着在冰冷却下加入三乙胺(21ml)和甲磺酰氯(5.8ml)。搅拌获得的混合物30分钟。反应完全后,将反应混合物倒入氯化铵的饱和水溶液中,用乙醚萃取获得的混合物。蒸馏有机层以除去溶剂,得到甲磺酸4-(叔丁氧羰基)苯基丙酯,将该产物溶于丙酮(300ml)中,接着加入碘化钠(30g)。加热回流获得的混合物1小时。反应完全后,将反应混合物倒入氯化铵的饱和水溶液中,用乙醚萃取获得的混合物。蒸馏有机层以除去溶剂,用硅胶柱色谱法处理残余物,用溶剂(乙醚/己烷=1∶10)洗脱,得到14.5g无色油状的标题化合物(84%)

·NMR(CDCl3)δ(ppm):

2.06-2.15(2H,m,I-CH2-CH2-CH2-Ar),2.76(2H,t,J=7.2Hz,I-CH2-CH2-CH2-Ar),3.14(2H,t,J=7.2Hz,I-CH2-CH2-CH2-Ar),7.24(2H,d,J=8.4Hz,ArH),7.92(2H,d,J=8.4Hz,ArH)

制备例3

4-〔3-(3-氨基-2-氰吡咯-1-基)丙基〕苯甲酸叔丁酯

〔通式(7)表示的化合物,式中n为2,R2为亚苯基,R3为H,R4为H,R7为叔丁基〕

将制备例1制得的3-(N-氰甲基)氨基丙烯腈(1g,9.3mmol)溶于含THF(20ml)和DMF(4ml)的混合物中,接着在冰冷却下加入60%氢化钠(0.45g)。搅拌获得的混合物,接着滴加制备例2制得的4-(3-碘丙基)苯甲酸叔丁酯(3.2g)于THF(10ml)中的溶液。在室温下搅拌获得的混合物1小时以完全反应。将反应混合物倒入氯化铵的饱和水溶液中。用乙酸乙酯萃取获得的混合物。蒸馏有机层以除去溶剂。用硅胶柱色谱法处理残余物,用溶剂(乙酸乙酯/己烷=1∶2)洗脱,得到2.5g(E)-4-(3-(N-氰甲基-N-对-氰乙烯氨基)丙基〕苯甲酸-叔丁酯。

·NMR(CDCl3)δ(ppm)

1.56(9H,s,t-Bu),1.87-1.97(2H,m,N-CH2-CH2-CH2-Ar),2.64(2H,t,J=7.2Hz,N-CH2-CH2-CH2-Ar),3.17(2H,t,J=7.2Hz,N-CH2-CH2-CH2-Ar),3.94(2H,s,N-CH2-CN),4.0(1H,d,J=18Hz,NC-CH=CH-N),6.85(1H,d,J=18Hz,NC-CH=CH-N),7.21(2H,d,J=8Hz,ArH),7.92(2H,d,J=8Hz,ArH)

然后将E型异构体溶于乙醚。在乙酰苯存在下用光(来自高压汞灯)辐射获得的溶液4小时。蒸馏反应混合物以除去溶剂。用硅胶柱色谱法处理残余物,用溶剂(乙醚/己烷=2∶1)洗脱,从而分离(Z)-4-〔3-(N-氰甲基-N-对-氰乙烯氨基)丙基)苯甲酸叔丁基(1.0g)。

·NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.57(9H,s,t-Bu),1.97-2.05(2H,m,N-CH2-CH2-CH2-Ar),2.71(2H,t,J=7.2Hz,N-CH2CH2-CH2-Ar),3.39(2H,t,J=7.2Hz,N-CH2-CH2-CH2-Ar),3.93(1H,d,J=10Hz,NC-CH=CH-N),4.25(2H,s,N-CH2-CN),6.23(1H,d,J=10Hz,NC-CH=CH-N),7.24(2H,d,J=8Hz,ArH),7.91(2H,d,J=8Hz,ArH)

将该Z型异构体(1.0g)溶于THF(50ml)中,接着在-78℃滴加LDA(3.75mmol)的THF溶液。搅拌获得的混合物以完成反应。往反应混合物中加氯化铵的饱和水溶液。用乙醚萃取获得的混合物,蒸馏有机层以除去溶剂,用硅胶柱色谱法处理残余物,用溶剂(乙醚/己烷=1∶1)洗脱,得到标题化合物(1g,33%)。

NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.6(9H,s,t-Bu),2.08-2.17(2H,m,N-CH2-CH2-CH2-Ar),2.64(2H,t,J=7.2Hz,N-CH2CH2-CH2-Ar),3.86(2H,t,J=7.2Hz,N-CH2-CH2-CH2-Ar),5.64(1H,d,J=3Hz,pyrrole 4-H),6.51(1H,d,J=3Hz,pyrrole 5-H),7.21(2H,d,J=8Hz,ArH),7.91(2H,d,J=8Hz,ArH)

·MS:FAB-MS m/z:325(M+)

实施例1

4-〔3-(2,4-二氨基吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)丙基〕苯甲酸叔丁酯

〔通式(6)表示的化合物,式中n为2,R1为NH2,R2为亚苯基,R3为H,R4为H,R7为叔丁基〕

将制备例3制得的4-〔3-(3-氨基-2-氰基吡咯-1- 基)-丙基〕苯甲酸叔丁酯(2.35g,7.2mmol)溶于二氯甲烷(30ml)中,接着在冰冷却下滴加苯甲酰异硫氰酸酯(1.14ml,8.6mmol)。在冰冷却下搅拌获得的混合物1小时,并蒸馏以除去溶剂。用硅胶柱色谱法处理残余物,用溶剂(乙醚/己烷=1∶1)洗脱溶剂,得到硫脲。将该硫脲溶于二氯甲烷(70ml)中,接着加入DBN(1.07ml,8.6mmol)和甲基碘(1.34ml,21.6mmol)。在室温下搅拌获得的混合物1小时以完成反应,将反应混合物倒入水中,用二氯甲烷萃取获得的混合物。蒸馏有机层以除去溶剂,用硅胶柱色谱法处理残余物,用溶剂(乙醚/己烷=1∶1)洗脱,得到S-甲基硫脲化合物,将该化合物溶于50ml氨的甲醇溶液(在冰冷却下用氨饱和甲醇制得)中,在高压釜中于90℃下加热获得的溶液24小时。反应完全后,浓缩反应混合物,用硅胶柱色谱法处理残余物,用溶剂(乙酸乙酯/己烷=1∶1)洗脱,得到4-〔3-(4-氨基-2-甲基硫代吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)丙基〕苯甲酸叔丁酯。再用另一种溶剂(乙酸乙酯/甲醇/乙酸=8∶1∶1)洗脱,得到标题化合物(1.32g,50%)

·NMR(CD3OD+CDCl3)δ(ppm):

1.58(9H,s,t-Bu),2.07-2.17(2H,m,N-CH2-CH2-CH2-Ar),2.62(2H,t,J=7.2Hz,N-CH2CH2-CH2-Ar),4.25(2H,t,J=7.2Hz,N-CH2-CH2-CH2-Ar),6.08(1H,d,J=3Hz,7-H),7.18(1H,d,J=3Hz,6-H),7.23(2H,d,J=8Hz,ArH),7.88(2H,d,J=8Hz,ArH)

·MS:FAB-MS m/z:368(M+H+)

实施例2

N-〔4-〔3-(2,4-二氨基吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)丙基〕〕苯甲酰〕-L-谷氨酸

〔通式(1)表示的化合物,式中n为2,R1为NH2,R2为亚苯基,R3为H,R4为H〕

将实施例1制得的4-〔3-(2,4-二氨基吡咯并〔3,2-d〕-嘧啶-5-基〕丙基〕苯甲酸叔丁酯(1g,2.7mmol)加入含二噁烷(50ml)和1N盐酸水溶剂(50ml)的混合物中。在90℃搅拌获得的混合物1小时。反应完全后,浓缩反应混合物,用硅胶柱色谱法处理,用溶剂(乙酸乙酯/甲醇/乙酸=7∶1∶1)洗脱,得到0.81g4-〔3-(2,4-二氨基吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)丙基〕苯甲酸。将该酸、L-谷氨酸二乙酯盐酸盐(1.61g)和二苯基磷酰基叠氮化物(DPPA)(1.65ml)加入DMF(35ml)中,接着在冰冷却下滴加三乙胺(2.2ml)。在冰冷却下搅拌获得的混合物,然后在室温下再搅拌4小时。反应完全后,浓缩反应混合物,用硅胶柱色谱法处 理,用溶剂(乙酸乙酯/甲醇/乙酸=8∶1∶1)洗脱,得到酰胺化合物。将该酰胺化合物溶于甲醇(15ml),接着滴加1N氢氧化钠水溶液(30ml)。在室温下搅拌获得的混合物5小时,用1N盐酸水溶液中和。浓缩得到的反应混合物,用硅胶柱色谱法处理,用溶剂(乙酸乙酯/甲醇/乙酸=5∶1∶1)洗脱。用乙醇和少量甲醇洗涤获得的固体,得到浅黄色结晶产物(0.72g),对该产物进行重结晶,得到0.35g标题化合物(28%)。

·m.p.189-193℃

·分子式C21H24N6O5·5/4H2O

元素分析:

计算值(%)  实测值(%)

C  54.48  C  54.64

H  5.77  H  5.55

N  18.15  N  17.87

·MS:FAB-MS m/z:441(M+H+)

·NMR(DMSO-d6+CDCl3)δ(ppm):

1.9-2.07(4H,m,9-CH2,21-CH2),2.25(2H,t,J=7.2Hz,22-CH2),4.2-4.4(3H,m,8-CH2,19-CH),6.01(1H,d,J=3Hz,7-CH),7.20(2H,d,J=8Hz,12-CH,16-CH),7.32(1H,d,J=3Hz,6-H),7.78(2H,d,J=8Hz,13-CH,15-CH)

制备例4

4-(3-碘-1-甲基丙基)苯甲酸叔丁酯

〔通式(12)表示的化合物,式中n为2,R2为亚苯基,R3为H,R4为甲基,R7为叔丁基,Y为I〕

除了用对-乙酰基苯甲酸叔丁酯作原料外,重复与制备例2相同的步骤,获得8.5g标题化合物(49%)。

·NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.28(3H,d,J=7.2Hz,-Me),1.58(9H,s,t-Bu),2.06-2.13(2H,m,I-CH2-CH2-CH-Ar),2.87-2.98(2H,m,I-CH2-CH2-CH-Ar),3.05-3.12(1H,m,I-CH2-CH2-CH-Ar),7.25(2H,d,J=8Hz,ArH),7.93(2H,d,J=8Hz,ArH)

制备例5

(E)-4-〔4-(N-氰甲基)-N-β-氰乙烯基氨基〕丁-2-基〕苯甲酸叔丁酯

〔通式(13)表示的化合物,式中n为2,R2为亚苯基,R3为H,R4为甲基,R7为叔丁基〕

按类似制备例3的方法,使3-(N-氰甲基)氨基-丙烯腈(2.57g,24mmol)与制备例4制备的4-(3-碘-1-甲基丙基)苯甲酸叔丁酯进行N-烷基化反应,获得6.5g标题化合物(81%)。

NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.31(3H,d,J=7.2Hz,Me),1.60(9H,s t-Bu),1.87-2.04(2H,m,N-CH2-CH2-CH-Ar),2.73-2.82(1H,m,N-CH2-CH2-CH-Ar),3.01-3.14(2H,m,N-CH2-CH2-CH-Ar),3.87(2H,s,N-CH2-CN),3.95(1H,d,J=14Hz,N-CH=CH-CN),6.73(1H,d,J=14Hz,N-CH=CH-CN),7.22(2H,d,J=8Hz,ArH),7.97(2H,d,J=8Hz,ArH)

制备例6

4-〔3-(3-氨基-2-氰基吡咯-1-基)-1-甲基-丙基〕苯甲酸叔丁酯

〔通式(7)表示的化合物,式中n为2,R2为亚苯基,R3为H,R4为甲基,R7为叔丁基〕

按与制备例3相同的步骤,通过光化异构作用使制备例5制得的(E)-4-(4-N-氰甲基)-N-β-氰乙烯基氨基〕丁-2-基〕苯甲酸叔丁酯转化成(Z)-4-〔4-(N-氰甲基)-N-β-氰乙烯基氨基〕丁-2-基〕苯甲酸叔丁酯。

·NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.31(3H,d,J=7.2Hz,Me),1.58(9H,s,t-Bu),1.92-2.09(2H,m N-CH2-CH2-CH-Ar),2.81-3.37(3H,m,N-CH2-CH2-CH-Ar),3.94(1H,d,J=10Hz, N-CH=CH-CN),4.19(2H,q,N-CH2CN),6.07(1H,d,J=10Hz,N-CH=CH-CN),7.24(2H,d,J=8Hz,ArH),7.94(2H,d,J=8Hz,ArH)

按类似于制备例3的方法处理获得的Z型异构体,通过闭环作用得到1.5g标题化合物(33%)

·NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.26(3H,d,J=7.2Hz,Me),1.58(9H,s t-Bu),2.01-2.19(2H,m,N-CH2-CH2-CH-Ar),2.64-2.74(1H,m,N-CH2-CH2-CH-Ar),3.57-3.78(4H,m,N-CH2-CH2-CH-Ar,NH2),5.58(1H,d,J=3Hz,pyrrole 4-H),6.37(1H,d,J=3Hz,pyrrole 5-H),7.21(2H,d,J=8Hz,ArH),7.94(2H,d,J=8Hz,ArH)

实施例3

4-〔2-(2,4-二氨基吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)-1-甲基丙基〕苯甲酸叔丁酯

〔通式(6)表示的化合物,式中n为2,R1为NH2,R2为亚苯基,R3为H,R4为甲基,R7为叔丁基〕

按与实施例1相同的步骤,处理制备例6制得的4-〔3-(3-氨基-2-氰吡咯-1-基)-1-甲基丙基〕苯甲酸叔丁酯(1.5g,4.4mmol)。通过闭环作用获得标题化合物(52%)。

·NMR(CD3OD+CDCl3)δ(ppm):

1.33(3H,d,J=7.2Hz,Me),1.64(9H,s,t-Bu),2.13-2.27(2H,m,N-CH2-CH2-CH-Ar),2.73-2.82(1H,m,N-CH2-CH2-CH-Ar),4.21-4.32(2H,m,N-CH2-CH2-CH-Ar),6.17(1H,d,J=3Hz,7-H),7.25(1H,d,J=3Hz,6-H),7.32(2H,d,J=8Hz,ArH),7.93(2H,d,J=8Hz,ArH)

实施例4

N-〔4-〔3-(2,4-二氨基吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基-1-甲基丙基〕苯甲酰〕-L-谷氨酸

〔通式(1)表示的化合物,式中n为2,R1为NH2,R2为亚苯基,R3为H,R4为甲基〕

按与实施例2相同的步骤,即用酸水解酯,L-谷氨酸二乙酯盐酸盐缩合获得的游离酸以形成酰胺化合物,再水解酰胺化合物的乙酯部分,使实施例3制得的4-〔2-(2,4-二氨基吡咯并〔3,2-d〕-嘧啶-5-基〕-1-甲基丙基〕苯甲酸叔丁酯(0.85g,2.3mmol)转化成标题化合物。

·分子式;C22H26N6O5·5/2H2O

·NMR(CD3OD+CDCl3)δ(ppm):

·MS:FAB-MS m/z:455(M+H)+

制备例7

4-(3-碘-1-乙基丙基)苯甲酸叔丁酯

〔通式(12)表示的化合物,式中n为2,R2为亚苯基,R3为H,R4为乙基,R7为叔丁基,Y为I〕

将对甲酰苯甲酸叔丁酯(20g,97mmol)溶于乙醚(300ml)中,接着在冰冷却下滴加溴化乙基镁(3M乙醚溶液,33ml),搅拌获得的混合物,反应完全后,将反应混合物倒 入氯化铵的饱和水溶液中,用乙醚萃取获得的混合物,蒸馏有机层以除去乙醇。用硅胶柱色谱法处理残余物,用溶剂(乙酸乙酯/己烷=1∶4)洗脱,得到22.3g4-(1-羟丙基)苯甲酸叔丁酯。将该产物溶于石油醚(500ml),接着加入活性二氧化锰(165mg)。加热回流获得的混合物30小时。反应完全后,过滤反应混合物,浓缩滤液,得到21.1g苯基-乙基酮化合物(相应于通式(18)中R4为乙基和R7为叔丁基表示的化合物)。然后对该化合物进行Horner-Emmons反应,也就是将叔丁醇钾(19g)加入二乙基膦酰基乙酸乙酯(36ml)的THF(400ml)溶液中。在室温下搅拌获得的混合物30分钟,接着加入苯基乙基酮化合物(21.1g)的THF(40ml)溶液。在55至65℃搅拌获得的混合物1.5小时。反应完全后,将反应混合物倒入氯化铵的饱和水溶液中,得到22.7gα,β-不饱和酯化合物(相应于通式(19)中R4为乙基和R7为叔丁基的化合物)。用于甲醇(300ml)中的10%钯-碳(0.5g)催化还原该酯化合物,并加入到含1N氢氧化钠水溶液(150ml)和甲醇(150ml)的混合物中,在室温下搅拌获得的混合物2小时。反应完全后,用1N盐酸水溶液使反应混合物呈弱酸性,用乙酸乙酯萃取。蒸馏有机层以除去溶剂,用短硅胶柱色谱法提纯残余物,得到17.7g3-〔对-(叔丁氧羧基)苯基〕-3-乙基丙酸。将该酸溶于THF(200ml)中,接着在冰冷却下滴加BH3在THF(80ml)中的1M溶液。在室温下搅拌获得的混合物1小时。反应完全后,将反应混合物倒入氯化铵的饱和水溶液中,用乙酸乙酯萃取获得的混合物。蒸馏有机层以除去溶剂,用硅胶柱色谱法处理残余 物,用溶剂(乙酸乙酯/己烷=1∶1)洗脱,得到16.7g4-(3-羟基-1-乙基丙基)-苯甲酸叔丁酯。将该产物溶于乙醚(400ml),接着在冰冷却下加入三乙胺(44ml)和甲磺酰氯(9.8ml)。搅拌获得的混合物以完成反应。将反应混合物倒入氯化铵的饱和水溶液中,用乙醚萃取获得的混合物。蒸馏有机层以除去溶剂,获得甲磺酸酯化合物,将该甲磺酸酯溶于丙酮(400ml),接着加入碘化钠(40g),加热回流获得的混合物,反应完全后,将反应混合物倒入氯化铵的饱和水溶液中,用乙醚萃取获得的混合物。蒸馏有机层以除去溶剂,用硅胶柱色谱法处理残余物,用溶剂(乙醚/己烷=1∶15)洗脱,得到20g无色油状的标题化合物(55%)

·NMR(CDCl3)δ(ppm):

0.77(3H,t,J=7.2Hz,-CH2CH3),1.58(9H,s,t-Bu),1.57-1.76(2H,m,N-CH2CH3);2.01-2.24(2H,m,I-CH2-CH2-CH-Ar),2.63-3.09(3H,m,I-CH2-CH2-CH-Ar),7.22(2H,d,J=8.4Hz,ArH),7.94(2H,d,J=8.4Hz,ArH)

制备例8

(E)-4-〔5-〔N-氰甲基-N-β-氰乙烯基氨基〕-戊-3-基〕苯甲酸叔丁酯

〔通式(13)表示的化合物,式中n为2,R2为亚苯基,R3为H,R4为乙基,R7为叔丁基〕

按与制备例3相同的方法用制备例7制得的4-(3-碘-1- 乙基丙基)苯甲酸叔丁酯对3-(N-氰甲基)氨基丙烯腈(7.2g进行N-烷基化反应,得到17g标题化合物(74%)。

·NMR(CDCl3)δ(ppm):

0.78(3H,t,J=7.2Hz,-CH2CH3),1.52-1.77(2H,m,-CH2CH3),1.59(9H,s,t-Bu),1.82-2.09(2H,m,N-CH2-CH2-CH-Ar),2.42-2.54(1H,m,N-CH2-CH2-CH-Ar),2.91-3.08(2H,m,N-CH2-CH2-CH-Ar),3.83(2H,s,N-CH2-CN),3.93(1H,d,J=14Hz,N-CH=CH-CN),6.7(1H,d,J=14Hz,N-CH=CH-CN),7.18(2H,d,J=8.4Hz,ArH),7.97(2H,d,J=8.4Hz,ArH)

制备例9

4-〔3-(3-氨基-2-氰基吡咯-1-基)-1-乙基丙基〕苯甲酸叔丁酯

〔通式(7)表示的化合物,式中n为2,R2为亚苯基,R3为H,R4为乙基,R7为叔丁基〕

按与制备例3相同的方法,通过光致异构化作用使制备例8制得的(E)-4-〔5-〔N-氰甲基-N-β-氰乙烯基氨基〕戊-3-基〕苯甲酸叔丁酯(10g)转化成(Z)-4-〔5-〔N-氰甲基-N-β-氰乙烯基氨基〕-戊-5-基)苯甲酸叔丁酯。

·NMR(CDCl3)δ(ppm):

0.78(3H,t,J=7.2Hz,-CH2CH3),1.58(9H,s,t-Bu),1.51-1.68(2H,m,-CH2CH3),1.86-2.19(2H,m,N-CH2-CH2-CH-Ar),2.53-2.62(1H,m,N-CH2-CH2-CH-Ar),3.01-3.33(2H,m,N-CH2-CH2-CH-Ar),3.94(1H,d,J=10Hz,N-CH=CH-CN),4.19(2H,q,18Hz,N-CH2-CN),6.06(1H,d,J=10Hz,N-CH=CH-CN),7.21(2H,d,J=8.4Hz,ArH),7.94(2H,d,J=8.4Hz,ArH)

通过闭环作用将获得的Z型异构体转化成标题化合物(4.8g,48%)。

·NMR(CDCl3)δ(ppm):

0.74(3H,t,J=7.2Hz,-CH2CH3),1.59(9H,s,t-Bu),1.56-1.77(2H,m,-CH2CH3),1.98-2.47(3H,m,N-CH2-CH2-CH-Ar),3.56-3.74(4H,m,NH2,N-CH2-CH2-CH-Ar),5.58(1H,d,J=3Hz,pyrrole 4-H),6.34(1H,d,J=3Hz,pyrrole 5-H),7.19(2H,d,J=8.4Hz,ArH),7.95(2H,d,J=8.4Hz,ArH)

·MS:FAB-MS m/z:325(M+)

实施例5

4-〔2-(2,4-二氨基吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)-1-乙基丙基〕苯甲酸

〔通式(2)表示的化合物,式中n为2,R1为NH2,R2为亚苯基,R3为H,R4为乙基〕

按与实施例1相同的步骤,通过闭环作用使制备例9制得的4-〔3-(3-氨基-2-氰吡咯-1-基-1-乙基丙基〕苯甲酸叔丁酯(3.4g,9.6mmol)转化成4-〔2-(2,4-二氨吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基-1-乙基丙基〕苯甲酸叔丁酯。按类似实施例2的方法用酸水解该产物,得到1.53g标题化合物(47%)。

·NMR(CD3OD+CDCl3)δ(ppm):

0.76(3H,t,J=7.2Hz,-CH2CH3),1.58-1.77(2H,m,-CH2CH3),2.09-2.48(3H,m,N-CH2-CH2-CH-Ar),4.14(2H,d,J=7Hz,N-CH2-CH2-CH-Ar),6.09(1H,d,J=2Hz,7-H),7.04(1H,d,J=2Hz,6-H),7.21-7.28(2H,m,ArH),7.95-7.99(2H,m,ArH)

实施例6

N-〔4-〔3-(2,4-二氨基吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基-1-乙基丙基〕苯甲酰〕-L-谷氨酸

〔通式(1)表示的化合物,式中n为2,R1为NH2,R2为亚苯基,R3为H,R4为乙基〕

按类似于实施例2的方法用L-谷氨酸二乙酯盐酸盐缩合实施例5制得的4-〔2-(2,4-二氨基吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基乙基丙基〕苯甲酸(1.53g,4.5mmol),得到酰胺化合物。将酰胺化合物的乙酯部分水解,得到1.02g标题化合物(48%)。

·NMR(CD3OD+CDCl3)δ(ppm):

0.71(3H,t,J=7.2Hz,-CH2CH3),1.48-1.72(2H,m,-CH2CH3),2.08-2.52(7H,m,N-CH2-CH2-CH-Ar,-CH2-CH2-CO2H),4.11-4.28(2H,m,N-CH2-CH2-CH-Ar),4.51-4.56(1H,m,-CONH-CH-),6.01-6.03(1H,m,7-H),7.11-7.16(3H,m,6-H,12-CH,16-CH),7.68-7.73(2H,m,13-CH,15-CH)

·分子式;C23H27N6O5Na·H2O

·元素分析;

计算值(%)  实测值(%)

C  54.33  C  54.88

H  5.75  H  6.24

N  16.52  N  16.00

·MS:FAB-MS m/z:469(M+H)+

制备例10

4-〔1-亚甲基-3-碘丙基〕苯甲酸叔丁酯

〔通式(32所示的化合物,式中R2为亚苯基,R7为叔丁基,Y为I〕

将对-甲酰基苯甲酸叔丁酯(20g,97mmol)溶于乙醚(300ml)中,接着在冰冷却下滴加溴化乙烯基镁(1MTHF溶液,100ml)。搅拌获得的混合物以完成反应。将反应混合物倒入水中,用乙醚萃取获得的混合物。蒸馏有机层以除去溶剂,用硅胶柱色谱法处理残余物,用溶剂(乙酸乙酯/己烷=1∶4)洗脱,得到22.4g烯丙醇(相应于通式(23)中R2为亚苯基和R7为叔丁基所示的化合物〕。将该醇溶于DMF(150ml)中,得到一种溶液。将咪唑(16.3g)和叔丁基二甲基甲硅氯(18g)完全溶于溶液中,在室温下静置获得的溶液以完成反应。将反应混合物倒入水中,用乙醚萃取获得的混合物。蒸馏有机层以除去溶剂,用硅胶柱色谱法处理残余物,用溶剂(乙醚/己烷=1∶5)洗脱,得到32g0-甲硅烷基化物(相应于通式(24)中R2为亚 苯基和R7为叔丁基表示的化合物)。将该甲硅烷基化物溶于THF(150ml),接着在冰冷却下滴加BH3在THF中的1M溶液。往上面制得的混合物中滴加甲醇(100ml),同时在冰冷却下搅拌混合物。往获得的混合物中再加入1N氢氧化钠水溶液(100ml)和30%过氧化氢(150ml)。在室温下搅拌制得的混合物以进行反应。将反应混合物倒入氯化铵的饱和水溶液中,用乙酸乙酯萃取获得的混合物。蒸馏有机层以除去溶剂,用硅胶柱色谱法处理残余物,用溶剂(乙酸乙酯/己烷=1∶4)洗脱,得到25g4-〔1-(丁基二甲基甲硅氧基)-3-羟丙基苯甲酸叔丁酯。将该产物溶于3,4-二氢-2H-吡喃(150ml),接着加入催化量的对甲苯磺酸吡啶鎓。在室温下静置获得的混合物以完成反应。将反应混合物倒入水中,用乙醚萃取获得的混合物。蒸馏有机层以除去溶剂,用硅胶柱色谱法处理残余物,用溶剂(乙酸乙酯/己烷=1∶10)洗脱,得到30g受保护的二醇化合物(相应于通式(27)中R2为亚苯基和R7为叔丁基表示的化合物)。将该二醇溶于THF(150ml)中,接着加入氟化四丁基铵(1M THF溶液),在室温下搅拌获得的混合物以完成反应。将反应混合物倒入氯化铵的饱和水溶液中,用乙醚萃取获得的混合物。蒸馏有机层以除去溶剂,用硅胶柱色谱法处理残余物,用溶剂(乙酸乙酯/己烷=1∶5)洗脱,得到21g4-〔(1-羟基-3-四氢呋喃-2-基氧基)丙基〕苯甲酸叔丁酯。

然后对该产物进行Swern氧化反应,即在-78℃将DMSO(36ml)滴入草酰二氯(22ml)的二氯甲烷(400ml)溶液中,接着在-78℃滴加4-〔(1-羟基-3-四氢吡喃-2 -基氧基)丙基〕苯甲酸叔丁酯(21g)于二氯甲烷(40ml)中的溶液。搅拌获得的混合物30分钟,接着在-78℃滴加三乙胺(104ml)。在冰冷却下搅拌获得的混合物以完成反应。将反应混合物倒入水中,用二氯甲烷萃取获得的混合物。蒸馏有机层以除去溶剂,用硅胶柱色谱法处理残余物,用溶剂(乙酸乙酯/己烷=1∶5)洗脱,得到20g4-〔(1-氧代-3-四氢吡喃-2-基氧基)丙基〕苯甲酸叔丁酯。对该产物再进行Wittig反应,即在-78℃将正丁基锂(2.5M己烷溶液,96ml)滴入溴化甲基三苯基鏻(86g)于THF(500ml)中的悬浮液。在冰冷却下搅拌获得的混合物,接着滴加4-〔(1-氧代-3-四氢吡喃-2-基氧基)丙基〕苯甲酸叔丁酯(20g)于TFH(40ml)中的溶液,在室温下搅拌获得的混合物,将反应混合物倒入氯化铵的饱和水溶液中,用乙醚萃取获得的混合物。蒸馏有机层以除去溶剂,用硅胶柱色谱法处理残余物,用溶剂(乙酸乙酯/己烷=1∶5)洗脱,得到外亚甲基化合物(相应于通式(30)中R2为亚苯基和R7为叔丁基表示的化合物)。在甲醇(200ml)中用对甲苯磺酸(催化量)处理该化合物,以除去THP基。获得8.5g伯醇(相应于通式(31)中R2为亚苯基和R7为叔丁基表示的化合物)。将该醇溶于乙醚(200ml)中,接着在冰冷却下加入三乙胺(24ml)和甲磺酰氯(5.37ml)。搅拌获得的混合物以完成反应。将反应混合物倒入水中,用乙醚萃取获得的混合物。蒸馏有机层以除去溶剂。残余物就这样用于后续反应,即将获得的甲磺酸酯溶于丙酮(350ml),接着加入碘化钠(16.9g),加热回流获得的混合物以完成反应。将反应混合物倒入水中,用乙醚萃取 获得的混合物。蒸馏有机层以除去溶剂,用硅胶柱色谱法处理残余物,用溶剂(乙醚/己烷=1∶10)洗脱,得到11g无色油状的标题化合物(31%)。

·NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.58(9H,s,t-Bu),3.08(2H,t,J=7.2Hz,I-CH2CH2-),3.19(2H,t,J=7.2Hz,I-CH2-CH2-),5.22(1H,brs,olefinic proton),5.47(1H,brs,olefinic proton),7.41(2H,d,J=8.4Hz,ArH),7.96(2H,d,J=8.4Hz,ArH)

制备例11

4-〔4-〔N-氰甲基-N-β-氰乙烯基氨基〕-2-丁烯-3-基〕苯甲酸叔丁酯

〔通式(13)表示的化合物,式中n为1,R2为亚苯基,R3和R4形成亚乙基,R7为叔丁基〕

将N-氰甲基氨基丙烯腈(5g,47mmol)溶于含THF(150ml)和DMF(30ml)的混合物中,接着在冰冷却下加入60%氢化钠(1.9g,47mmol)。在冰冷却下将制备例10制得的4-〔1-亚甲基-3-碘丙基〕苯甲酸叔丁酯于THF(20ml)中的溶液滴入上面制得的混合物中。在室温下搅拌获得的混合物1小时,将获得的反应混合物倒入氯化铵的饱和水溶液中,用乙酸乙酯萃取获得的混合物。蒸馏有机层以除去溶剂,用硅胶柱色谱法处理残余物,用溶剂(乙酸乙酯/己烷=1∶3)洗脱,得到4g标题化合物,它包含二种异构体,即Z和E型异构体。 这两种异构体的光谱数据如下所示。

·NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.6(9H,s,t-Bu),1.67(3H,d,J=8Hz,ethylidene-Me),3.83(2H,s,-N-CH2-),4.01(1H,d,J=15Hz,-N-CH=CH-CN),4.06(2H,s,-N-CH2-),5.9(1H,q,J=8Hz,ethylidene-H),6.75(1H,d,J=15Hz,-N-CH=CH-CN),7.18(2H,d,J=8.4Hz,ArH),8.01(2H,d,J=8.4Hz,ArH)

1.59(9H,s,t-Bu),1.99(3H,d,J=9Hz,ethylidene-Me),3.75(2H,s,-N-CH2-),4.12(1H,d,J=15Hz,N-CH=CH-CN),4.28(2H,s,N-CH2-),6.29(1H,q,J=9Hz,ethylidene-H),6.86(1H,d,J=15Hz,-N-CH=CH-CN),7.28(2H,d,J=8.4Hz,ArH),7.96(2H,d,J=8.4Hz,ArH)

·MS:FAB-MS m/z:338(M+H)+

制备例12

4-〔2-(3-氨基-2-氰吡咯-1-基)-1-亚乙基乙基〕苯甲酸叔丁酯

〔通式(7)表示的化合物,其中n为1,R2为亚苯基,R3和R4形成亚乙基,R7是叔丁基〕

将制备例11制得的4-〔4-〔N-氰甲基-N-β-氰乙烯基-氨基〕-2-丁烯-3-基苯甲酸叔丁酯(4g)溶于500ml乙醚,得到的溶液室温下在2ml乙酰苯存在下用高压水灯照射,反应混合物经蒸馏除去溶剂。残留物用硅胶柱色谱处理,并用溶剂(乙醚/乙烷=2∶1)洗脱,分离出Z异构体,该异构体用与制备例3相同的方法经LDA处理,经闭环作用得到1.2g标题化合物(30%)。

·NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.58(9H,s,t-Bu),1.58(3H×2/3,d,J=9Hz,ethylidene-Me),1.99(3H×1/3,d,J=9Hz,ethylidene-Me),4.63(2H×2/3,s,>N-CH2-),4.91(2H×1/3,s,>N-CH2-),5.49(1H×1/3,d,J=3Hz,pyrrole 4-H),5.53(1H×2/3,d,J=3Hz,pyrrole 4-H),5.78(1H×2/3,q,J=9Hz,ethylidene-H),6.19(1H×1/3,q,J=9Hz,ethylidene-H),6.35(1H×2/3,d,J=3Hz,pyrrole 5-H),6.38(1H×1/3,d,J=3Hz,pyrrole 5-H),7.08(2H×2/3,d,J=8.4Hz,ArH),7.87(2H×1/3,d,J=8.4Hz,ArH),7.92(2H×2/3,d,J=8.4Hz,ArH)

实施例7

4-〔2-(2,4-二氨基吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)〕-1-亚乙基乙基〕苯甲酸叔丁酯

〔通式(6)表示的化合物,其中n为1,R1为NH2,R2是亚苯基,R3和R4形成亚乙基,R7为叔丁基〕

将制备例12中制得的1.2g,3.6mmol4-〔2-(3-氨基-2-氰吡咯-1-基)-1-亚乙基乙基〕苯甲酸叔丁酯,按照与实施例1中相同的步骤进行处理,经闭环作用得到0.71g标题化合物(52%)。

实施例8

4-〔2-(2,4-二氨基吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)-1-乙基〕-乙基〕苯甲酸

〔通式(2)表示的化合物,其中n为1,R1为NH2,R2为亚苯基,R3为氢,R4为乙基〕

将实施例7中制得的4-〔2-(2,4-二氨基吡咯并〔3,2-d〕-嘧啶-5-基)-1-亚乙基乙基〕苯甲酸叔丁酯,在含有15ml乙酸和150ml甲醇的混合物中用10%钯-碳(0.2)催化还原,将还原产物加入含有50ml1N盐酸和50ml1,4-二噁烷的混合物中。所得的混合物在90℃搅拌1小时以完成反应。反应混合物浓缩,用硅胶柱色谱处理,然后用溶剂(乙酸/甲醇/乙酸乙酯=1∶1∶5)洗脱,得到0.5g标题化合物(83%)。

·NMR(CD3OD+CDCl3)δ(ppm):

0.78(3H,t,J=7.2Hz,-CH2CH3),1.64-2.18(2H,m,-CH2-CH3),2.96-3.02(1H,m,-N-CH2CH-Ar),4.31-4.72(2H,m,-N-CH2-CH-Ar),5.98(1H,d,J=3Hz,7-H),6.96(1H,d,J=3Hz,6-H),7.02-7.18(2H,m,ArH),7.82-7.94(2H,m,ArH)

实施例9

N-〔4-〔2-(2,4-二氨基吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)-1-乙基乙基〕苯甲酰〕〕-L-谷氨酸酯

〔通式(1)表示的化合物,其中n为1,R1为NH2,R2为亚苯基,R3是H,R4是乙基〕

将实施例8制得的4-〔2-(2,4-二氨基吡咯并〔3,2 -d〕嘧啶-5-基)-1-乙基乙基〕苯甲酸0.5g,1.6mmol,采用与实施例2相同的方法,与L-谷氨酸二乙酯盐酸盐缩合。缩合产物的乙酯部分经水解得到目标产物。该产物用硅胶柱色谱法纯化,所得的固体用乙醇和少量甲醇洗涤,得到170mg淡黄粉末状纯产物(24%)。

分子式:C22H26N6O5·2H2O

·NMR(CD3OD+CDCl3)δ(ppm):

0.71(3H,t,J=7.2Hz,CH2CH3),1.62-2.22(6H,m,CH2-CH3,-CH2CH2CO2H),2.91-2.98(1H,m,N-CH2-CH-Ar),4.19-4.45(2H,m,N-CH2-CH-Ar),4.58-4.63(1H,m,-CONHCH-),5.91(1H,d,J=3Hz,7H),6.96(1H,d,J=3Hz,6H),7.23-7.27(2H,m,ArH),7.76-7.81(2H,m,ArH)

·MS:FAB-MS m/z:499(C22H24N6O5Na2+H)+

制备例13

5-甲基-2-噻吩羧酸叔丁酯

〔通式(18)表示的化合物,其中R2是亚噻吩基,R4为H,R7是叔丁基〕

将1.7M溶于戊烷(8.0ml,13.6mmol)的叔丁基锂在氮气氛下,滴入溶于无水四氢呋喃的2-噻吩羧酸叔丁酯(1.84g,10mmol)和N,N,N′,N′-四甲基亚乙基二胺溶液,用干冰-丙酮冷却并搅拌。所得的混合物搅拌约50分钟,然后将15ml无水二甲基甲酰胺逐渐滴加进该混合物进行反 应。所得的液态混合物升温至室温,搅拌40分钟,倾入300ml乙醚/0.3N盐酸(2∶1)混合物。搅拌该混合物,回收有机层,用磷酸盐缓冲液(PH:7)和食盐溶液清洗,脱水,蒸馏以去除溶剂。残留物用硅胶柱色谱提纯(采用正-戊烷/乙酸乙酯(8∶1)混合物作展开剂),得到1.7g标题化合物。

·NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.59(9H,s),7.70(1H,d,J=4.0Hz),7.75(1H,d,J=4.0Hz),9.95(1H,s)

·IR(neat)ν:

2981,1713,1682cm-1

制备例14

5-(2-乙氧羰基-E-乙烯基)-2-噻吩-羧酸叔丁酯

〔通式(19)表示的化合物,其中R2为亚噻吩基,R4为H,R7是叔丁基〕

氢化锂(最少60%石蜡分散液,1.88g,约47mmol)在氮流下用无水己烷洗涤,并分散在无水四氢呋喃中,得到的分散液用冰冷却并搅拌,随后逐滴加入溶于无水四氢呋喃中的二乙基磷酰基乙酸乙酯溶液(10.53g,47mmol),所得混合物在室温下搅拌15分钟。将溶于无水四氢呋喃的用制备例13制得的5-甲基-2-噻吩-羧酸叔丁酯溶液,逐滴加入该混合物,在室温搅拌30分钟,用乙醚稀释,用稀碱、稀盐酸和食盐水溶液洗涤、脱水、真空干燥。残留物用硅胶柱色谱法提纯(用正-己烷/乙酸乙酯(8∶1)混合物作发展剂),得到7.5g标题化合物。

·NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.33(3H,t,J=7.2Hz),1.57(9H,s),4.25(2H,q,J=7.2Hz),6.33(1H,d,J=15.6Hz),7.18(1H,d,J=4.0Hz),7.61(1H,d,J=4.0Hz),7.70(1H,d,J=15.6Hz)

·IR(neat)ν:

2980,1713,1706,1630,969cm-1

制备例15

5-(2-乙氧羰基乙基)-2-噻吩-羧酸叔丁酯

将制备例14中制得的5-(2-乙氧羰基-E-乙烯基)-2-噻吩羧酸叔丁酯(7.58g,26.8mmol),在室温下于乙醇中用10%钯-碳(1.05g)混合物催化还原。反应完成后,滤出催化剂,浓缩滤液,并真空干燥,得7.6g标题化合物。

·NMR(neat)δ(ppm):

1.26(3H,t,J=7.2Hz),1.56(9H,s),2.68(2H,t,J=7.6Hz),3.15(2H,t,d,J=7Hz,0.8Hz),4.15(2H,q,J=7.2Hz),6.79(1H,dt,J=3.6Hz,0.8Hz),7.54(1H,d,J=3.6Hz)

制备例16

5-(3-羟丙基)-2-噻吩羧酸叔丁酯。

〔通式(21)表示的化合物,其中R2为亚噻吩基,R4为H,R7是叔丁基〕

将制备例15中得到的5-(2-乙氧羰基乙基)-2-噻吩羧酸叔丁酯(7.6g,26.8mmol)室温下在乙醇/1N氢氧化钠混合物中部分水解,得6.1g3-(5-叔-丁氧羰基-噻吩-2-基)丙酸。将该酸溶于无水四氢呋喃,在冰冷却下在约30分钟内将所得溶液滴入溶于四氢呋喃的硼烷溶液中(硼烷由硼氢化钠(3.37g,89ml)和三氟硼烷-乙醚络合物(16.9g,119mmol)预先制得)。所得的混合物搅拌30分钟,然后逐滴加入甲醇。在不再产生氢气后,将混合物过滤、蒸发至滤液干燥。将甲醇加入残留物,由共沸蒸馏除去硼化合物。将残留物溶于乙醚,所得溶液用稀盐酸和食盐水溶液清洗,脱水,蒸馏去除溶剂。残留物在真空中蒸发至干,得6.0g标题化合物。

·NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.56(9H,s),1.94(2H,tt,J=7.6Hz,6.4Hz),2.93(2H,td,J=7.6Hz,0.8Hz),3.70(2H,t,J=6.4Hz),6.78(1H,dt,J=3.6Hz,0.8Hz),7.54(1H,d,J=3.6Hz)

·IR(neat)ν:

3200~3700,2978,2935,1703cm-1

制备例17

5-(3-溴丙基)-2-噻吩羧酸叔丁酯

〔通式(12a)表示的化合物,其中R2为亚噻吩基,R4为H,R7是叔丁基,Y为Br〕

将制备例16中制得的5-(3-羟丙基)-2-噻吩羧酸叔丁 酯(6.0g,23.9mmol),用与制备例2相同的方法处理,得到6.2g标题化合物。

·NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.56(9H,s),2.21(2H,tt,J=7.2Hz,6.4Hz),3.00(2H,td,J=7.2Hz,0.8Hz),3.42(2H,t,J=6.4Hz),6.81(1H,dt,J=3.6Hz,0.8Hz),7.55(1H,d,J=3.6Hz)

制备例18

5-〔3-(3-氨基-2-氰吡咯-1-基)丙基〕-2-噻吩羧酸叔丁酯

〔化合物(7):n=2,R2为亚噻吩基,R3=R4=H,R7=叔丁基〕

重复与制备例3相同的步骤,只是将3-N-氰甲基)-氨基丙烯腈(2.8g)和5-(3-溴丙基)-2-噻吩羧酸叔丁酯〔化合物(12):n=2,R2为亚噻吩基,R3=R4=H,R7=叔丁基〕作原料,得到6g(70%)的目的产物(E)-5-〔3-N-氰甲基-N-β-氰乙烯基氨基)-丙基〕-2-噻吩羧酸叔丁酯。

·NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.57(9H,s,t-Bu),1.98-2.07(2H,m,N-CH2-CH2-CH2-Ar),

2.88(2H,t,J=7.2Hz,N-CH2-CH2-CH2-Ar),

3.27(2H,t,J=7.2Hz,N-CH2-CH2-CH2-Ar),3.96(2H,s,N-CH2-CN),

4.06(1H,d,J=18Hz,N-CH=CH-CN),6.79(1H,d,J=3.6Hz,ArH),

6.83(1H,d,J=18Hz,N-CH=CH-CN),7.56(1H,d,J=3.6Hz,ArH)

上面制得的E型异构体,用类似制备例3的方式进行光辐射,得到2.8g(47%)Z-5-〔3-(N-氰甲基-N-β-氰乙烯基氨基)丙基〕-2-噻吩羧酸叔丁酯〔化合物(14)〕。

·NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.56(9H,s,t-Bu),2.04-2.13(2H,m,N-CH2-CH2-CH2-Ar),

2.92(2H,t,J=7.2Hz,N-CH2-CH2-CH2-Ar),

3.44(2H,t,J=7.2Hz,N-CH2-CH2-CH2-Ar),4.01(1H,d,J=10Hz,N-CH=CH-CN),

4.28(2H,s,N-CH2-CN),6.22(1H,d,J=10Hz,N-CH=CH-CN),

6.79(1H,d,J=3.6Hz,ArH),7.54(1H,d,J=3.6Hz,ArH)

Z型异构体(41)(2.8g)用LDA进行相同的闭环作用(与制备例3类似),得到2.4g(86%)目的标题产物5-〔3-(3-氨基-2-氰吡咯-1-基)丙基〕-2-噻吩羧酸叔丁酯〔化合物(7):n=2,R2为亚噻吩基,R3=R4=H,R7=叔丁基〕。

NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.56(9H,s,t-Bu),2.16(2H,m,N-CH2-CH2-CH2-Ar),

2.79(2H,t,J=7.2Hz,N-CH2-CH2-CH2-Ar),

3.9(2H,t,J=7.2Hz,N-CH2-CH2-CH2-Ar),5.64(1H,d,J=2.8Hz,ピロ-ル4-H),

6.52(1H,d,J=2.8Hz,ピロ-ル5-H),6.77(2H,d,J=3.6Hz,ArH),

7.55(1H,d,J=3.6Hz,ArH)

实施例10

5-〔3-(2,4-二氨基吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)丙基〕-2-噻吩羧酸叔丁酯

〔化合物(6):n=2,R1=NH2,R2=亚噻吩基,R3=R4=H,R7=叔丁基〕

将制备例18中制得的5-〔3-氨基-2-氰吡咯-1-基)丙基〕-2-噻吩羧酸叔丁酯(7)(2.4g),进行与实施例1相同的闭环作用,通过形成吡咯并嘧啶环,得到2.1g(78%)目的标题化合物。

NMR(CD3OD)δ(ppm):

1.54(9H,s,t-Bu),2.13-2.21(2H,m,N-CH2-CH2-CH2-Ar),

2.81(2H,t,J=7.2Hz,N-CH2-CH2-CH2-Ar),

4.37(2H,t,J=7.2Hz,N-CH2-CH2-CH2-Ar),6.18(1H,d,J=3Hz,7-H),

6.81(1H,d,J=3.8Hz,ArH),7.34(1H,d,J=3Hz,6-H),

7.5(1H,d,J=3.8Hz,ArH)

实施例11

N-〔5-〔3-(2,4-二氨基吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)-丙基〕噻吩甲酰〕-L-谷氨酸酯

〔化合物(7):n=2,R2=亚噻吩基,R3=R4=H〕

与实施例2类似,实施例10制得的5-〔3-(2,4-二氨基吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)丙基〕-2-噻吩羧酸叔丁酯〔化合物(6)〕经水解,采用DPPA与谷氨酸二乙酯缩合,并用碱液水解,得0.95g(38%)呈淡黄色晶体状的标题化合物。

·mol.form.:C19H22N6O5S

·MS:FAB-MS m/z:447(M+H+)

NMR(DMSO)δ(ppm):

1.84-2.03(4H,m,N-CH2-CH2-CH2-Ar,NHCH-CH2-CH2-CO2H),

2.24-2.28(2H,m,NHCH-CH2-CH2-CO2H),

2.68(2H,t,J=7.2Hz,N-CH2-CH2-CH2-Ar),

4.21-4.33(3H,m,-CONHCH-,N-CH2-CH2-CH2-Ar),5.98(1H,d,J=3.2Hz,7-H),

6.67-6.83(2H,brd,NH2),6.81(1H,d,J=3.8Hz,ArH),

7.07-7.15(2H,brd,NH2),7.32(1H,dd,J=3.2Hz,1,2Hz,6-H),

7.61(1H,d,J=3.8Hz,ArH),8.27(1H,d,J=8Hz,-CONH-)

制备例19

1-叔-丁氧羰基-3-氨基-2-氰基-△2-吡咯啉

将N-氰甲基-β-丙氨酸乙酯(36g,0.23mol)溶解在CH2Cl2(200ml)中,随后加入三乙胺(48ml)和碳酸氢二-叔丁酯(55g)。室温搅拌该混合物以完成反应。将该反应混合物倾入水中,然后用乙酸乙酯萃取。对有机层蒸馏以去除溶剂。残留物用硅胶柱色谱处理,并用溶剂(乙酸乙酯/乙烷=1∶3)洗脱,得到22.7gN-叔-丁氧羰基-N-氰甲基-β-丙氨酸乙酯。然后,该酯经闭环作用。将溶于甲苯(100ml)的N-叔-丁氧羰基-N-氰甲基-β-丙氨酸乙酯(22.7g)在冰浴下滴入叔丁醇钾(9.9g)/甲苯(400ml)混合物。在冰浴下搅拌以完成反应。将该反应混合物倾入PH7.1的磷酸盐缓冲液,调节所得的混合物呈弱酸性,然后用氯仿萃取。将有机层蒸馏以 去除溶剂。残留物供随后步骤使用。将残留物溶于乙醇(300ml),随后加入HCO2NH4(11.3g),所得混合物回流加热以完成反应。将反应混合物浓缩,随后加入饱和氯化铵水溶液。所得的混合物用乙酸乙酯萃取,将有机层蒸馏以去除溶剂。残留物经硅胶柱色谱处理,并用溶剂(乙酸乙酯/乙烷=1∶2)洗脱,得到4.5g(9.6%)目的标题化合物。

参考文献:Henry  Rapoport  et  al.,J.Am.Chem.Soc.,86,5293(1964)

·NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.51(9H,s,t-Bu),2.73(2H,t,J=7.4Hz,pyrroline 4-H),3.77(2H,t,J=7.4Hz,pyrroline 5-H),4.28(2H,brs,NH2).

制备例20

5-叔-丁氧羰基-2,4-二氨基-6,7'-二氢吡咯并〔3,2-d〕嘧啶

〔5-叔-丁氧羰基-2,4-二氨基-△2-吡咯啉并-〔3,2-d〕-嘧啶〕

然后,进行闭环作用,将制备例19中制得的1-叔-丁氧羰基-3-氨基-2-氰基-△2-吡咯啉(2g)溶于叔丁醇(30ml),随后加入碳酸胍(5.2g)。将所得的混合物置于不锈园筒内,在密封状态下加热至145℃24小时。反应产物浓缩,经硅胶柱色谱纯化,用溶剂(乙酸乙酯/甲醇/乙酸=20∶1∶1)洗脱,得到1.2g(50%)的晶体状目的标题化合物。

·NMR(CD3OD)δ(ppm):

1.53(9H,s,t-Bu),2.91(2H,t,J=8.4Hz,7-H),3.94(2H,t,J=8.4Hz,6-H)

实施例12

N-〔4-〔3-(2,4-二氨基-6,7-二氢吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)丙基〕苯甲酸叔丁酯

〔N-〔4-〔3-(2,4-二氨基-△2-吡咯啉并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)丙基〕苯甲酸叔丁酯〕

将制备例20中制得的5-叔-丁氧羰基-2,4-二氨基-6,7-二氢吡咯并〔3,2-d〕嘧啶(0.7g)用1N  HCl/AcOH(20ml)处理,所得混合物蒸馏去除溶剂。将残留物充分干燥,并溶于DMF(15ml),随后加入乙酸钠(0.69g)和制备例2中制得的4-(3-碘丙基)-苯甲酸叔丁酯(0.96g)。将该混合物在室温下搅拌24小时以完成反应。反应混合物蒸馏以去除溶剂。残留物经硅胶柱色谱纯化,用溶剂(乙酸乙酯/甲醇/乙酸=10∶1∶1)洗脱,得到0.83g(79%)目的标题化合物。

·NMR(DMSO)δ(ppm):

1.47(9H,s,t-Bu),1.81-1.93(2H,m,N-CH2-CH2-CH2-Ar),

2.62(2H,t,J=7.6Hz,N-CH2-CH2-CH2-Ar),2.67(2H,t,J=8.4Hz,7-H),

2.77(2H,t,J=7.6Hz,N-CH2-CH2-CH2-Ar),3.17(2H,t,J=8.4Hz,6-H),

7.27(2H,d,J=8Hz,ArH),7.76(1H,d,J=8Hz,ArH)

实施例13

N-〔4-〔3-(2,4-二氨基-6,7-二氢吡咯并〔3,2-d〕-嘧啶-5-基)丙基〕-L-谷氨酸酯

〔N-〔4-〔3-(2,4-二氨基-△2-吡咯啉并〔3,2-d〕-嘧啶-5-基)丙基〕-L-谷氨酸酯〕

用类似实施例2的方法,将实施例12中制得的N-〔4-〔3-(2,4-二氨基-6,7-二氢吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基〕苯甲酸叔丁酯水解,采用DPPA与L-谷氨酸二丁酯缩合, 然后在碱中水解,得到50mg(22%)的结晶状的标题化合物。

·mol.form.:C21H26N6O5

·MS:FAB-MS m/z:443(M+H+)

·NMR(D2O)δ(ppm):

1.74-1.88(2H,m),2.62-2.68(2H,m),2.78-2.93(4H,m),3.31-3.47(2H,m),4.24-4.29(1H,m),7.26(2H,d,J=8Hz),7.67(2H,d,J=8Hz)

制备例21

4-〔2-溴-1-亚甲基乙基〕苯甲酸叔丁酯

将1.6M的溶于己烷中的正丁基锂溶液在-78℃下加入在THF(400ml)中的溴化甲基三苯基鏻(78g)的悬浮液,所得的混合物在冰浴下搅拌,然后滴加了溶于THF(100ml)中的对-甲基苯甲酸叔丁酯溶液。所得混合物在冰浴下搅拌,并倾入饱和氯化铵水溶液。将该混合物用乙醚萃取,并对有机层蒸馏去除溶剂。残留物经硅胶柱色谱处理,用溶剂(乙醚/己烷=1∶15)洗脱,得到苯乙烯化合物(23g)。将该化合物溶于丙酮(300ml),然后在室温搅拌下加入溶于叔丁醇和4-甲基吗啉N-氧化物(50%水溶液,75ml)的OsO4溶液(5mg/ml,30 ml)。将该混合物在室温下搅拌以完成反应,将反应混合物倾入水,并用乙酸乙酯萃取。将有机层蒸馏以去除溶剂,残留物经硅胶柱色谱处理,并用溶剂(乙酸乙酯/己烷=1∶2)洗脱,得25g二醇化合物。将该二醇化合物溶于二氯甲烷(500ml),随后加入三苯甲基氯(88g),4-二甲氨基吡啶(12.8g)和三乙胺(44g)。室温搅拌所得混合物以完成反应。将反应混合物倾入饱和氯化铵溶液,并用乙醚对其萃取。将有机层蒸馏以去除溶剂。残留物经硅胶柱色谱处理,并用溶剂(乙酸乙酯/己烷=1∶10)洗脱,得35g目的化合物,其中仅伯醇基得到保护。对该化合物进行斯韦恩(Swern)氧化。在-78℃下在溶于二氯甲烷(500ml)的草酰氯(20ml)溶液中滴加入DMSO(40ml),然后在-78℃下滴入溶于二氯甲烷(50ml)的4-〔(1-羟基-2-三苯甲氧基)乙基〕苯甲酸叔丁酯(35g)。所得混合物搅拌30分钟,随后在-78℃下滴加入三乙胺(94ml)。将所得混合物在冰浴中搅拌以完成反应。往该混合物中加入水,并用二氯甲烷萃取。将有机层蒸馏以去除溶剂,残留物经硅胶柱色谱处理,并用溶剂(乙酸乙酯/己烷=1∶12)洗脱,得氧代化合物(34g)。该化合物经魏蒂格(Wittig)反应,在-78℃下将溶于己烷的2.5M正丁基锂的溶液(57ml)滴入于THF(300ml)中的溴化甲基三苯基鏻(51g)的悬浮液中。所得的混合物在冰浴下搅拌,随后滴加入溶于THF(100ml)的4-〔(1-氧代-2-三苯甲氧基)乙基〕苯甲酸叔丁酯(34g)的溶液。对该混合物于室温下搅拌,将反应产物倾入饱和氯化铵水溶液中。所得反应混合物用乙醚萃取,并对有机层蒸馏以去除溶剂。残留物经硅胶柱色 谱处理,并用溶剂(乙酸乙酯/己烷=1∶15)洗脱,得一种外-亚甲基化合物。该化合物在甲醇(120ml)/乙酸乙酯(80ml)混合物中用对-甲苯磺酸(催化量)处理,以脱去三苯甲基,并由此得4-〔(2-羟基-1-亚甲基)乙基〕苯甲酸酯(7.5g)。将该产物溶于乙醚(200ml),随后在冰浴下加入三乙胺(23ml)和甲磺酰氯(5.6ml)。搅拌得到的混合物以完成反应。将该混合物倾入水中,并用乙醚萃取。蒸馏有机层以去除溶剂,残留物在随后反应中如下应用。将得到的甲磺酸酯化合物溶于丙酮(300ml),随后加入LiBr(14g),对该混合物回流加热以完成反应。将产物倾入水中,并用乙醚萃取,蒸馏有机层以去除溶剂。残留物经硅胶柱色谱处理,用溶剂(乙醚/己烷=1∶10)洗脱,得8.8g(20%)淡黄油状目的标题化合物。

·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.59(9H,s,t-Bu),4.19(2H,s, ),5.57(1H,brs,olefinic proton),5.63(1H,brs,olefinic proton)

制备例22

4-〔2-(3-氨基-2-氰吡咯-1-基)-1-亚甲基-乙基〕苯甲酸叔丁基

〔化合物(7):n=1,R2=亚苯基,R3-R4=亚甲基,R7=叔丁基〕

重复与制备例3相同的步骤,只是将制备例21中制得的N-氰 甲氨基-丙烯腈(3.2g,30mmol)和4-〔2-溴-1-亚甲基乙基〕苯甲酸叔丁酯作原料外,得7.5g(77%)目的化合物,即,(E)-4-〔3-〔N-氰甲基〕-N-β-氰乙烯氨基〕-1-丙烯-2-基〕苯甲酸叔丁酯〔化合物(13):n=1,R2=亚苯基,R3-R4=亚甲基,R7=叔丁基〕。

·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.59(9H,s,t-Bu),3.99(2H,s,N-CH2-CN),4.15(1H,d,J=15Hz,-N-CH=CH-CN),4.24(2H,brs, ),5.41(1H,brs,olefinic proton),5.71(1H,brs,olefinic proton),6.92(1H,d,J=15Hz,-N-CH=CH-CN),7.38(2H,d,J=8Hz,ArH),7.99(2H,d,J=8Hz,ArH).

将上面制得的E异构体按照制备例3相似的方式用光辐射,得3g(40%)Z-4-〔3-〔N-氰甲基-N-β-氰乙烯氨基〕-1-丙烯-2-基〕-苯甲酸叔丁酯〔化合物(14)〕。

·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.59(9H,s,t-Bu),4.06(1H,d,J=10Hz,-N-CH=CH-CN),4.27(2H,s,N-CH2-CN),4.46(2H,brs, ),5.43(1H,brs,olefinic proton),5.7(1H,brs,olefinic proton),6.29(1H,d,J=10Hz,-N-CH=CH-CN),7.41(2H,d,J=8Hz,ArH),7.8(2H,d,J=8Hz,ArH).

将上面制得的Z异构体〔化合物(14)〕(3g)按照制备例3类似的方式用LDA进行闭环作用,得0.8g(27%)目的标题化合物。

·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.59(9H,s,t-Bu),3.63(2H,brs,NH2),4.83(2H,brs, ),5.11(1H,brs,olefinic proton),5.57(1H,brs,olefinic proton),5.61(1H,d,J=2.8Hz,pyrrole 4-H),6.52(1H,d,J=2.8Hz,pyrrole 5-H),7.38(2H,d,J=8.4Hz,ArH),7.96(2H,d,J=8.4Hz,ArH).

实施例14

2-(2,4-二氨基吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)-1-亚甲基乙基〕苯甲酸叔丁酯

〔化合物(6):n=1,R2=亚苯基,R3-R4=亚甲基,R7=叔丁基〕

将制备例22中制得的化合物(7)(0.8g)按实施例1类似的方式进行闭环作用,通过形成吡咯并嘧啶环,得0.8g(59%)目的标题化合物,

·1H-NMR(CD3OD)δ(ppm):

1.57(9H,s,t-Bu),5.42(2H,brs, ),5.47(1H,brs,olefinic proton),5.62(1H,brs,olefinic proton),6.18(1H,d,J=2.8Hz,7-H),7.39(1H,d,J=2.8Hz,6-H),7.53(2H,d,J=8.4Hz,ArH),7.91(2H,d,J=8.4Hz,ArH).

实施例15

N-〔4-〔2-(2,4-二氨基吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)-1-亚甲基乙基〕苯甲酰〕-L-谷氨酸酯

〔化合物(1):n=1,R2=亚苯基,R3-R4=亚甲基〕

和实施例2的方法类似,将实施例14中制得的化合物(6)(0.8g)水解,用DPPA和L-谷氨酸二乙酯缩合,并用碱液水解,得晶体状的0.23g(23%)标题化合物。

·mol.form.:C21H22N6O5

·MS:FAB-MS m/z:439(M+H+)

·1H-NMR(DMSO-D2O)δ(ppm):

1.86-2.23(4H,m,-CONHCHCH2CH2-CO2H),

4.17-4.22(1H,m,-CONHCH-),5.33(2H,brs, ),5.43-5.51(2H,m,olefinic proton),5.96(1H,d,J=2.8Hz,7-H),7.25(1H,d,J=2.8Hz,6-H),7.56(2H,d,J=8.4Hz,ArH),7.81(2H,d,J=8.4Hz,ArH).

制备例23

4-N-(2-溴乙基)甲氨基苯甲酸乙酯

将4-氨基苯甲酸乙酯(20g)溶于DMF(200ml),随后加入二异丙基乙胺(32ml)和溴代乙酸乙酯(16ml)。将所得产物在70℃下搅拌以完成反应。将反应混合物倾入饱和氯化铵水溶液。反应混合物用乙酸乙酯萃取,将有机相蒸馏以去除溶剂,所得产物经硅胶柱色谱处理,用溶剂(乙酸乙酯/己烷=1∶3)洗 脱,得25g酯。将该酯溶于THF(200ml)/DMF(40ml)混合物。在冰浴中伴随搅拌下往该溶液中加入60%氢化钠(4.56g),随后加入甲基碘(8.8ml),室温搅拌之以完成反应。将混合物倾入饱和氯化铵溶液,所得产物用乙酸乙酯萃取。蒸馏有机相去除溶剂。残留物经硅胶柱色谱提纯,并用溶剂(乙酸乙酯/己烷=1∶3)洗脱,得15gN-甲基化合物。将该化合物溶于THF(85ml),随后加入1N的氢氧化钠。所得混合物在室温搅拌2小时以完成反应。反应产物用1N盐酸中和并用乙酸乙酯萃取,得单羧酸。将该酸完全干燥并溶于THF(100ml)。在冰浴伴随搅拌下,将溶于THF的1M BH3溶液(85ml)加入所得的溶液。所得溶液在室温搅拌5小时以完成反应。将该反应混合物倾入饱和氯化铵,并用乙酸乙酯进行萃取。蒸馏有机相以去除溶剂,残留物经硅胶柱色谱提纯,并用溶剂(乙酸乙酯/己烷=1∶1)洗脱,得11g伯醇。用与制备例2类似的方式,将该醇转换成甲磺酰衍生物,产品进一步用LiBr处理,得9g标题化合物(28%)。

·NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.36(3H,t,-CO2-CH2-CH3),3.07(3H,s,-N-Me),

3.46(2H,t,J=7.6Hz,Br-CH2-CH2-N),3.79(2H,t,J=7.6Hz,Br-CH2-CH2-N),

4.32(2H,q,-CO2-CH2-CH3),6.65(2H,d,J=9.2Hz,ArH),

7.92(2H,d,J=9.2Hz,ArH)

制备例24

4-N-〔2-(3-氨基-2-氰吡咯-1-基)乙基〕-甲氨基苯甲酸乙酯

采用制备例3类似的方法由3-(N-氰甲基)氨基丙烯腈(0.8g)和由制备例23制得的4-N-(2-溴乙基)甲氨基苯甲酸乙酯(2g)制得下式所示的E-4-N-〔2-〔3-N-氰甲基-N-β-氰乙烯基-氨基)〕乙基〕甲氨基苯甲酸乙酯(1g)(46%),

·NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.37(3H,t,CO2-CH2-CH3),3.06(3H,s,N-Me),

3.47(2H,t,J=6Hz,N-CH2-CH2-N-Ar),3.66(2H,t,J=6Hz,N-CH2-CH2-N-Ar),

3.94(2H,s,N-CH2-CN),4.07(1H,d,J=13.8Hz,N-CH=CH-CN),

6.64(2H,d,J=9.2Hz,ArH),6.79(1H,d,J=13.8Hz,N-CH=CH-CN),

7.95(2H,d,J=9.2Hz,ArH)

采用与制备例3相似的方式,用光照射上面制得E异构体(3.5g),得0.7gZ-4-N-〔2-〔3-(N-氰甲基-N-β-氰乙烯基氨基)〕乙基〕-甲氨基苯甲酸乙酯(20%),如下式所示。

·NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.37(3H,t,CO2-CH2-CH3),3.09(3H,s,N-Me),

3.66(2H,t,J=6Hz,N-CH2-CH2-N-Ar),3.76(2H,t,J=6Hz,N-CH2-CH2-N-Ar),

4.02(1H,d,J=10Hz,N-CH=CH-CN),4.25(2H,s,N-CH2-CN),

4.32(2H,q,-CO2-CH2-CH3),6.16(1H,d,J=10Hz,N-CH=CH-CN),

6.67(2H,d,J=9.2Hz,ArH),7.93(2H,d,J=9.2Hz,ArH)

采用类似制备例3的方法通过闭环作用,应用LDA使上述制得的Z异构体转化成标题化合物(0.2g,29%)。

·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.36(3H,t,CO2CH2CH3),2.83(3H,s,N-Me),3.65(2H,br,NH2),3.71(2H,t,J=6Hz, ),4.04(2H,t,J=6Hz, ),4.31(2H,q,CO2CH2CH3),5.6(1H,d,J=3.2Hz,pyrrole 4-H),6.36(1H,d,J=3.2Hz,pyrrole 5-H),6.56(2H,d,J=9.2Hz,ArH),7.9(2H,d,J=9.2Hz,ArH).

实施例16

4-N-〔2-(2,4-二氨基吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)乙基〕甲氨基苯甲酸乙酯

采用类似实施例1的方法通过闭环作用,将3-氨基-2-氰吡咯部分转为吡咯并嘧啶环而将上述制备例24中制得的化合物转化为标题化合物(120mg,52%)

·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.33(3H,t,CO2CH2CH3),2.73(3H,s,N-Me),3.78(2H,t,J=4.8Hz, ),4.25(2H,q,CO2CH2CH3),4.53(2H,t,J=4.8Hz, ),6.08(1H,d,J=2.8Hz,7-H),6.48(2H,d,J=9.2Hz,ArH),7.1(1H,d,J=2.8Hz,6-H),7.71(2H,d,J=9.2Hz,ArH).

实施例17

4-N-〔2-(2,4-二氨基吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)-乙基〕甲氨基苯甲酸

将实施例16中制得的吡咯并嘧啶衍生物(120mg)溶于乙醇(10ml),随后加入1N氢氧化钠。将所得的混合物回流加热以完成反应。反应混合物用1N  HCl中和并蒸馏去除溶剂。所得的残留物用硅胶柱色谱处理,并用溶剂(8∶1∶1=乙酸乙酯/甲醇/乙酸)洗脱,得100mg(90%)标题化合物。

·1H-NMR(CD3OD)δ(ppm):

2.75(3H,s,N-Me),3.78(2H,t,J=4.8Hz, ),4.56(2H,t,J=4.8Hz, ),6.15(1H,d,J=2.8Hz,7-H),6.49(2H,d,J=9.2Hz,ArH),7.14(1H,d,J=2.8Hz,6-H),7.76(2H,d,J=9.2Hz,ArH).

实施例18

N-〔4-N-〔2-(2,4-二氨基吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)乙基〕甲氨基苯甲酰基〕-L-谷氨酸

采用与实施例2类似的方式使用DPPA,将实施例17中制得的羧酸衍生物(100mg),和L-谷氨酸二乙酯一起缩合,将缩合物用碱液水解,得31mg(21%)结晶状的标题化合物。

·mol.form.:C21H25N7O5(MW:455.47)

·1H-NMR(CD3OD)δ(ppm):

1.98-2.37(2H,m,NHCHCH2CH2CO2H),2.39-2.54(2H,m,NHCHCH2CH2CO2H),2.78(3H,s,N-Me),3.54-3.84(2H,m, ),4.46-4.61(3H,m, ,-NHCH-),6.48(2H,d,J=9.2Hz,ArH),7.16(1H,d,J=2.8Hz,6-H),7.61(2H,d,J=9.2Hz,ArH).

制备例25

3-(N-羰乙氧基甲基)氨基丙烯腈

将氨基乙酸乙酯盐酸盐(36g),乙酸钠(32g)和3-二甲氨基丙烯腈(12.5g)加入乙醇(300ml)和水(20ml)的混合物。所得的混合物室温搅拌以完成反应,然后加入水。对该混合物用乙酸乙酯萃取,蒸馏有机相去除有机溶剂。得到的残留物用硅胶柱色谱处理,并用溶剂(1∶3乙酸乙酯/己烷)洗脱,得27.8g(69%)目的化合物。

·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.29(3H,t,CO2CH2CH2),3.71(2H,d,J=3Hz,N-CH2-CO2Et),3.88(1H,d,J=16Hz,olefinic proton),4.29(2H,q,CO2CH2CH3),5.29(br,NH),7.07(1H,dd,J=8Hz,J=16Hz,olefinic proton).

制备例26

4-〔3-(3-氨基-2-羰乙氧酰吡咯-1-基)-丙基〕苯甲酸叔丁酯

采用与制备例3类似的方式,由3-(N-羰乙氧基甲基)氨基丙烯腈(4.5g)和由制备例2制得的4-(3-碘丙基)-苯甲酸叔丁酯(10.1g)制得如下所示的E-4-〔3-〔3-(N-羰乙氧基甲基)-N-β-氰乙烯氨基〕丙基〕苯甲酸叔丁酯(4.8g)(44%)。

·NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.28(3H,t,CO2-CH2-CH3),1.59(9H,s,t-Bu),

1.86-1.96(2H,m,N-CH2-CH2-CH2-Ar),

2.68(2H,t,J=7.6Hz,N-CH2-CH2-CH2-Ar),

3.18(2H,t,J=7.6Hz,-N-CH2-CH2-CH2-Ar),

3.76(1H,d,J=13.6Hz,-N-CH=CH-CN),3.77(2H,s,N-CH2-CO2Et),

4.21(2H,q,CO2-CH2-CH3),6.89(1H,d,J=13.6Hz,N-CH=CH-CN),

7.21(2H,d,J=8.4Hz,ArH),7.93(2H,d,J=8.4Hz,ArH)

采用与制备例3类似的方式,通过光照射上面制得的E异构体(4.8g)制得下式所示的Z-4-〔3-〔3-(N-羰乙氧基甲基)-N-β-氰乙烯基氨基〕丙基〕苯甲酸叔丁酯(1.48g)(31%)。

·NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.29(3H,t,CO2-CH2-CH3),1.59(9H,s,t-Bu),

1.89-1.97(2H,m,N-CH2-CH2-CH2-Ar),

2.72(2H,t,J=7.6Hz,N-CH2-CH2-CH2-Ar),

3.34(2H,t,J=7.6Hz,N-CH2-CH2-CH2-Ar),

3.75(1H,d,J=10Hz,N-CH=CH-CN),4.08(2H,s,N-CH2-CO2Et),

4.24(2H,q,CO2-CH2-CH3),6.24(1H,d,J=10Hz,N-CH=CH-CN),

7.22(2H,d,J=8.4Hz,ArH),7.9(2H,d,J=8.4Hz,ArH)

往溶于甲苯(5ml)中的上面制得的Z异构体(1.48g)中,在冰浴下加入叔丁醇钾(0.3g)/甲苯(20ml)混合物。 将得到的混合物在冰浴下搅拌以完成反应,将反应混合物倒入饱和氯化铵水溶液,然后用甲苯萃取,蒸馏有机相以去除溶剂,残留物采用硅胶柱色谱处理,并用溶剂(1∶3乙酸乙酯/己烷)洗脱,得到0.6g(67%)标题化合物。

·NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.35(3H,t,CO2-CH2-CH3),1.58(9H,s,t-Bu),

1.99-2.07(2H,m,N-CH2-CH2-CH2-Ar),

2.61(2H,t,J=7.2Hz,N-CH2-CH2-CH2-Ar),

4.13(2H,t,J=7.2Hz,N-CH2-CH2-CH2-Ar),

4.3(2H,q,CO2-CH2-CH3),5.6(1H,d,J=2.8Hz,吡咯-4H),

6.53(1H,d,J=2.8Hz,吡咯-5H),7.19(2H,d,J=8.4Hz,ArH),

7.89(2H,d,J=8.4Hz,ArH)-168-

实施例19

4-〔3-(2-氨基-4-羟基吡咯并〔3,2-d〕-嘧啶-5-基)丙基〕苯甲酸叔丁酯

用和实施例1中类似的方法,通过闭环作用将3-氨基-2-羰乙氧基吡咯部分转为吡咯并嘧啶环而使制备例26中制得的化合物转化成标题化合物,可得0.5g(85%)产物。

分子式:

C20H24N4O3(MW:368.43)

·MS:FAB-MS m/z:369(M+H)+

·NMR(CD3OD)δ(ppm):

1.57(9H,s,t-Bu),2.11-2.19(2H,m,N-CH2-CH2-CH2-Ar),

2.65(2H,t,J=7.2Hz,N-CH2-CH2-CH2-Ar),

4.33(2H,t,J=7.2Hz,N-CH2-CH2-CH2-Ar),

6.02(1H,d,J=2.8Hz,7H),7.17(1H,d,J=2.8Hz,6H),

7.24(2H,d,J=8.4Hz,ArH),7.83(2H,d,J=8.4Hz,ArH)

制备例20

N-〔4-〔3-(2-氨基-4-羟基吡咯并〔3,2-d〕嘧啶-5-基)丙基〕苯甲酰〕-L-谷氨酸

采用与实施例2类似的方法,使用DPPA将实施例19中制得的化合物和L-谷氨酸一起缩合,得标题化合物。

分子式:C21H23N5O6(MW:441.44)

制备例101

2-氰基-2-环戊烯-1-酮的制备

在冰浴下氮气流中搅拌溶于无水二氯甲烷的对-甲苯硫醇溶液(13.7g,0.11mol),然后加入溶于己烷中的三甲基铝(7.9g,0.11mol)溶液。制得的混合物搅拌约20分钟,并在干冰-丙酮浴中冷却,然后滴加入溶于二氯甲烷中的2-环戊烯酮(8.41g,0.10mol)溶液。制得的混合物进一步搅拌30分钟,并用无水四氢呋喃稀释,然后在-50℃或更低的温度下加入溶于四氢呋喃中的对-甲苯磺酰氰(22.9g,0.12mol)。该混合物搅拌约30分钟,并进而置于冰浴中约60分钟。将约40ml甲醇滴入该混合物,随后加入乙醚。所得到的混合物用盐酸,碳酸氢钠溶液和食盐溶液洗涤,脱水,浓缩。该浓缩液通过静置或者加入少量的正-己烷/乙酸乙酯混合液,将结晶粉状2-氰基-3-(4-甲苯基)硫代-1-环戊烷酮(产量:22g)。

1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.82~2.00(m,1H),2.37(s,3H),2.30~2.60(m,3H),3.04(d,J=9.6Hz,1H),3.68~3.78(m,1H),7.20(d,J=8.4Hz,2H),7.42(d,J=8.4Hz,2H).

将上述产物(10g,43mmol)溶于四氢呋喃,用硅胶柱 吸附,然后用正-己烷/乙酸乙酯混合液作展开剂进行色谱提纯。对含目的化合物的馏分浓缩,得无色至黄色油状的目的化合物。

产量:2.9g。

·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):

2.55~2.58(m,2H),2.90~2.94(m,2H),8.32(t,J=2.8Hz,1H),

·IR(neat)ν(cm-1):2238,1728,1607

制备例102

4-乙烯基苯甲酸叔丁酯的制备

在干冰/丙酮冷却下于氮气流中将溶于己烷中的1.6M正-丁基锂溶液(49.7mmol)加入溶于无水四氢呋喃的溴化甲基三苯基鏻(18.2g,50.9mmol)悬浮液中。制得的混合物搅拌一会儿,其后在冰浴中再搅拌约30分钟,随后加入溶于无水四氢呋喃的叔丁基对苯二醛(10g,48.5mmol)。搅拌所得的混合物约40分钟。反应混合物经过滤去除沉淀,将滤液浓缩至干。残留物经硅胶柱色谱法纯化(展开剂:正-己烷/乙酸乙酯=20∶1),得目的化合物,产量:8.47g。

·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.59(s,9H),5.36(d-d,J=0.8Hz,10.8Hz,1H),5.84(d-d,J=0.8Hz,17.6Hz,1H),6.74(d-d,J=10.8Hz,17.6Hz,1H),7.43(d,J=8.0Hz,2H),7.94(d,J=8.0Hz,2H)

·IR(neat)ν(cm-1):2978,1710,1292,1166,816.

制备例103

4-(2-羟乙基)苯甲酸叔丁酯的制备

在氮气流下将溶于无水四氢呋喃的9-硼联环〔3.3.1〕壬烷(9-BBN,5.65g,46.3mmol)溶液加入制备例102中制得的4-乙烯基苯甲酸叔丁酯(8.47g,42.1mmol)的无水四氢呋喃溶液。所得的混合物室温搅拌3小时,依次加入15ml水和17ml3N  NaOH溶液,随后在50℃或更低滴加30%过氧化氢。搅拌该混合物1小时,并倾入水中。然后用乙酸乙酯萃取。对有机相用食盐水溶液清洗,脱水,蒸馏以去除溶剂。残留物用硅胶柱色谱法纯化(展开剂:正己烷/乙酸乙酯=1∶1),得目的化合物,产量:8.71g。

·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.41(t,J=6.6Hz),1.59(s,9H),2.92(t,J=6.6Hz,2H),3.88(q,J=6.6Hz,2H),7.28(d,J=8.0Hz,2H),7.93(d,J=8.0Hz,2H)

·IR(neat)ν(cm-1):

3150~3700,2978,1713,1294,1167.

制备例104

4-(2-溴乙基)苯甲酸叔丁酯的制备

在干冰/丙酮冷却下将溶于二氯甲烷的甲磺酰氯溶液(5.8g,50.8mmol)滴加到制备例103制得的4-(2-羟乙基)苯甲酸叔丁酯(87g,39.1mmol)和三乙胺(5.9g,58.7mmol)溶于二氯甲烷的溶液中。在冰浴下搅拌该混合物 30分钟,然后加入0.5N的亚硫酸氢钠溶液。搅拌该混合物,回收有机相,用食盐水溶液洗涤,干燥,蒸馏去除溶剂,得11.7g甲磺酸酯。将该酯溶于2-丁烷酮,随后加入溴化锂(5.1g,58.4mmol)。所得混合物在65℃通氮下搅拌12小时,然后室温静置,滤去沉淀,对滤液浓缩干燥。残留物用硅胶柱色谱法纯化(展开剂:正己烷/乙酸乙酯=4∶1)得无色或浅棕色晶状目的化合物(9.8g)。

·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.59(s,9H),3.21(t,J=7.2Hz,2H),3.58(t,J=7.2Hz,2H),7.26(d,J=8.0Hz,2H),7.94(d,J=8.0Hz,2H)

制备例105

4-〔2-(2-氰基-1-环戊烷酮-3-基)乙基〕苯甲酸叔丁酯的制备

在回流加热情况下将制备例101制得的溶于无水苯的2-氰基-2-环戊烯-1-酮(2.41g,22.5mmol)的溶液,偶氮联异丁腈(AIBN)(0.05g,催化量)和氢化三-正丁基锡(3.62g,12.4mmol)的无水苯溶液,逐滴加入溶于无水苯的制备例104中制得的4-(2-溴乙基)苯甲酸叔丁酯溶液(3.21g,11.3mmol)中,所得混合物回流加热约20分钟,蒸馏除去溶剂,残留物经硅胶柱色谱法纯化,得0.43g目的化合物。

·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.59(s,9H),1.78~1.96(m,1H),2.02~2.22(m,1H),2.24~2.58(m,4H),2.76~2.94(m,3H),7.26(d,J=8.2Hz,2H),7.93(d,J=8.2Hz,2H)

·IR(neat)ν(cm-1):2977,2933,2246,1760,1713

·Mass(FAB)M+H+=314.

制备例106

4-〔2-(2-氰基-3-甲氧基-2-环戊烯基)乙基〕苯甲酸叔丁酯的制备

将制备例105中制得的4-〔2-(2-氰基-1-环戊烯酮-3-基)-乙基〕苯甲酸叔丁酯(0.43g,1.37mmol)和N,N-二异丙乙基胺(0.21g,1.64mmol)溶于甲醇/乙腈(1∶5)混合液,随后加入溶于己烷的3.2g10%(重量)三甲基甲硅烷基二偶氮甲烷。室温搅拌该混合液2小时,然后加入少量的醋酸,搅拌,蒸馏以除去溶剂。残留物溶于二乙酯,用稀盐酸、稀碱和食盐溶液清洗,脱水,浓缩至干。残留物用硅胶柱色谱法纯化,得0.23g目的化合物。

·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.52~1.72(m,2H),1.59(s,9H),2.02~2.18(m,2H),2.46~2.52(m,2H),2.62~2.82(m,2H),2.82~2.94(m,1H),4.05(s,3H),7.24(d,J=8.2Hz,2H),7.90(d,J=8.2Hz,2H)

·IR(neat)ν(cm-1):2977,2933,2203,1710,1632

·Mass(FAB)M+H+=328.

实施例101

4-〔2-(2,4-二氨基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)乙基〕苯甲酸叔丁酯的制备

将制备例106制得的化合物(0.23g,0.7mmol)和碳酸胍(0.63g,3.5mmol)与2-甲基-2-丙醇混合。将混合物置于压反应器内并在氮气氛和搅拌下在155±30℃加热8小时,随后加入另外一些碳酸胍(0.25g,1.4mmol),在185±30℃下搅拌17小时。反应混合物静置冷却并滤去沉淀,浓缩滤液。残留物用硅胶柱色谱纯化(展开剂:氯仿/甲醇=10∶1)得0.25g白色粉末状目的化合物。

·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.59(s,9H),1.64~1.78(m,1H),1.84~1.98(m,2H),2.16~2.28(m,1H),2.60~2.71(m,2H),2.71~2.80(m,1H),2.80~2.91(m,1H),2.95~3.05(m,1H),4.40~4.47(br,2H),4.63~4.70(br,2H),7.23(d,J=8.0Hz,2H),7.91(d,J=8.0Hz,2H)

·IR(neat)ν(cm-1):3330,3145,1708,1610,1584

·Mass(FAB)M+H+=355.

实施例102

4-〔2-(2,4-二氨基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)乙基〕苯甲酸的制备

将实施例101中制得的化合物(0.19g,0.54mmol)溶于二噁烷/水/浓盐酸(20∶5∶1)混合液。得到的溶液回流加热4小时并浓缩。然后向残余物加入水和1H氢氧化钠以调节PH值至10以上。过滤此混合液,去除沉淀,向滤液中逐渐加入1N盐酸中和并得白色沉淀。过滤然后回收沉淀,干燥得0.08g目的化合物。

·1H-NMR(CD3OD)δ(ppm):

1.66~1.78(m,1H),1.94~2.14(m,2H),2.28~2.42(m,1H),2.70~2.84(m,3H),2.92~3.04(m,1H),3.18~3.26(m,1H),7.31(d,J=8.4Hz,2H),7.92(d,J=8.4Hz,2H)

·Mass(FAB)M+H+=299.

实施例103

N-{4-〔2-(2,4-二氨基-6,7-二羟基-5H-环戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)乙基〕苯甲酰}-L-谷氨酸的制备

将实施例102中制得的化合物(0.08g,0.27mmol)和盐酸L-谷氨酸二乙酯(0.137g,0.57mmol)悬浮于无水二甲基甲酰胺中,通氮在冰浴下搅拌得到的悬浮液,随后加入三乙胺(0.13g,1.28mmol)和二苯基磷酰酯叠氮化物(0.16g,0.57mmol)。在冰浴中搅拌约2小时,然后在室温下搅拌1小时,并过滤去除不溶物。浓缩滤液,用硅胶柱色谱法纯化(展开剂∶氯仿/甲醇=10∶1)。得到的二乙酯化合物溶于10ml乙醇和17ml1N氢氧化钠混合液。所得的溶液室温搅拌12小时,再加入少量的水,过滤之,浓缩滤液,并加入1N盐酸。过滤回收形成的白色沉淀并用硅胶柱色谱法纯化(展开剂:氯仿/甲醇/乙酸=10∶1∶1)纯化后的产物溶于稀碱液中,并加稀盐酸以再沉淀而进一步纯化,得白色粉状的目的化合物。

·1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm):

1.45~1.57(m,1H),1.76~2.00(m,3H),2.00~2.12(m,2H),2.33(t,J=7.6Hz,2H),2.42~2.52(m,1H),2.60~2.77(m,3H),3.01~3.10(m,1H),4.33~4.41(m,1H),6.00~6.16(br,2H),6.36~6.50(br,2H),7.30(d,J=8.0Hz,2H),7.78(d,J=8.0Hz,2H),8.43(d,J=6.8Hz,1H)

·Mass(FAB)M+H+=428.

制备例107

5-(2-乙氧羰基-E-乙烯基)-2-噻吩羧酸叔丁酯的制备

在通氮干冰/丙酮冷却下搅拌溶于无水四氢呋喃的2-噻吩羧酸叔丁酯和N,N,N′,N′-四甲基乙二胺(1.74g,15mmol)溶液,随后滴加溶于戊烷的1.7M叔丁基锂(13.6mmol)溶液(8.0ml),然后搅拌约50分钟。逐渐滴加无水二甲基甲酰胺(15ml)到反应混合物中以进行反应。移去干冰/丙酮浴,升至室温。搅拌混合液,倾入300ml二乙酯/0.3N  HCl(3∶1)混合液。搅拌所得的混合液一会儿,回收有机层,用PH=7的磷酸盐缓冲液和食盐溶液洗涤,脱水,蒸馏去除溶剂,残留物经硅胶柱色谱纯化(展开剂:正己烷/乙酸乙酯=8∶1),得1.7g5-甲基-2-噻吩-羧酸叔丁酯。

·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.59(s,9H),7.70(d,J=4.0Hz,1H),7.75(d,J=4.0Hz,1H),9.95(s,1H)

·IR(neat)ν(cm-1):2981,1713,1682.

氢化钠(最小60%石蜡分散液,1.88g,约47mmol)在通氮下用无水己烷洗涤,悬浮于无水四氢呋喃中。在冰浴中搅拌之,然后逐渐滴加溶于无水四氢呋喃的二乙基膦酰基乙酸乙酯溶液(10.53g,47mmol)。在室温搅拌15分钟。在冰浴中将溶于无水四氢呋喃的上面制得的5-甲酰基-2-噻吩羧酸叔丁酯(6.65g,31.3mmol)溶液逐渐滴加入该混合液,室温搅拌所得混合物约30分钟,用乙醚稀释之,用稀碱、稀盐酸和食盐水溶液洗涤,脱水,真空蒸发至干。残留物用硅胶柱色谱纯化(展开剂:正己烷/乙酸乙酯=8∶1),得7.58g目的化合物。

·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.33(t,J=7.2Hz,3H),1.57(s,9H),4.25(q,J=7.2Hz,2H),6.33(d,J=15.6Hz,1H),7.18(d,J=4.0Hz,1H),7.61(d,J=4.0Hz,1H),7.70(d,J=15.6Hz,1H)

·IR(neat)ν(cm-1):2980,1713,1706,1630,969.

制备例108

5-(2-乙氧羰基乙基)-2-噻吩羧酸叔丁酯的制备

在室温下于乙醇中用10%钯-碳催化还原在制备例107中制得的α,β-不饱和酯(7.58g,26.8mmol),反应完成后,滤去催化剂,浓缩滤液,浓缩并真空干燥,得7.6g目的化合物。

·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.26(t,J=7.2Hz,3H),1.56(s,9H),2.68(t,J=7.6Hz,2H),3.15(t-d,J=7.6Hz,0.8Hz,2H),4.15(q,J=7.2Hz,2H),6.79(dt,J=3.6Hz,0.8Hz,1H),7.54(d,J=3.6Hz,1H)

制备例109

5-(3-羟丙基)-2-噻吩羧酸叔丁酯的制备

在室温下于乙醇/1N氢氧化钠混合液中部分水解制备例108中制得的二酯(7.6g,26.8mmol),得6.1g3-(5-叔-丁氧羰基)-噻吩-2-基)丙酸。将该酸溶于无水四氢呋喃并在冰浴中在约30分钟内向其中滴加硼烷-四氢呋喃溶液(该化合物由硼氢化钠(3.37g,89mmol)和三氟硼烷-乙醚络合物(16.9g,119mmol)得到)。搅拌上述混合物30分钟,然后滴加甲醇。当氢气不再产生后,过滤反应混合物,将滤液蒸发至干,往残余物加入甲醇,通过共沸蒸馏去除硼化合物。将残留物溶于乙醚,并用稀盐酸和食盐溶液洗涤,脱水,蒸馏去除溶剂,将残留物真空干燥,得6.0g目的化合物。

·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.56(s,9H),1.94(tt,J=7.6Hz,J=6.4Hz,2H),2.93(td,J=7.6Hz,0.8Hz,2H),3.70(t,J=6.4Hz,2H),6.78(dt,J=3.6Hz,0.8Hz,1H),7.54(d,J=3.6Hz,1H)

·IR(neat)ν(cm-1):3200~3700,2978,2935,1703.

制备例110

5-(3-溴丙基)-2-噻吩-羧酸叔丁酯的制备

按照与制备例104类似的步骤,将制备例109中制得的醇(6.0g,23.9mmol)转化成相应的溴盐。产量:6.2g。

·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.56(s,9H),2.21(tt,J=7.6Hz,6.4Hz,2H),3.00(td,J=7.2Hz,0.8Hz,2H),3.42(t,J=6.4Hz,2H),6.81(dt,J=3.6Hz,0.8Hz,1H),7.55(d,J=3.6Hz,1H).

制备例111

5-〔3-(2-氰基-1-环戊烷酮-3-基)丙基〕-2-噻吩羧酸叔丁酯的制备

按照制备例105相同的步骤,将在制备例110中制得的溴盐(4.25g,14mmol)转化成目的化合物,产量为0.83g。

·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.40~1.72(m,2H),1.56(s,9H),1.74~1.94(m,2H),2.24~2.56(m,4H),2.83(d,J=12Hz,1H),2.82~2.94(m,2H),6.77(dt,J=3.6Hz,0.8Hz,1H),7.55(d,J=3.6Hz,1H)

·IR(neat)ν(cm-1):2979,2935,2246,1760,1704

·Mass(FAB)M+H+=334.

制备例112

5-〔3-(2-氰基-3-甲氧基-2-环戊烯基)丙基〕-2-噻吩羧酸叔丁酯的制备

按照与制备例106相同的步骤,将制备例111中制得的化合物(0.83g,2.5mmol)转化成目的化合物,产量为0.82g。

·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.40~1.84(m,5H),1.56(s,9H),2.02~2.14(m,1H),2.44~2.50(m,2H),2.78~2.92(m,3H),4.04(s,3H),6.76(d,J=3.6Hz,1H),7.54(d,J=3.6Hz,1H)

·IR(neat)ν(cm-1):2978,2936,2204,1704,1632

·Mass(FAB)M+H+=348.

实施例104

5-〔3-(2,4-二氨基-6,7-二羟基-5H-环戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)丙基〕-2-噻吩羧酸的制备

将制备例112中制得的化合物(0.82g,2.35mmol)和碳酸胍(4.3g,23.6mmol)与2-甲基-2-丙醇混合,并将其置于在氮气氛中的压力反应器内,搅拌下在155±3℃加热24小时,然后在180±3℃加热40小时,静置冷却该混合液并过滤。真空蒸发滤液至干。残余物用硅胶柱色谱纯化(展开剂:氯仿/甲醇/乙酸=20∶2∶1至10∶2∶1)。将纯化后的产物溶于稀碱液,并加盐酸以产生再沉淀,得白色粉末状目的化合物,产率:0.33g。

·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.2~1.3(m,1H),1.5~1.7(m,4H),1.9~2.1(m,1H),2.35~2.5(m,1H),2.5~2.7(m,1H),2.7~2.8(m,2H),2.9~3.0(m,1H),5.9~6.0(br,2H),6.15~6.3(br,2H),6.84(d,J=3.6Hz,1H),7.45(d,J=3.6Hz,1H)

·Mass(FAB)M+H+=319.

实施例105

N-{5-〔3-(2,4-二氨基-6,7-二羟基-5H-环戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)丙基〕-2-噻吩甲酰}-L-谷氨酸 的制备

按照实施例103相同的方法,将实施例104中制得的羧酸(0.30g,0.94mmol)转化成相应的谷氨酸衍生物,产量:0.15g。

·1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm):

1.20~1.32(m,1H),1.54~1.72(m,4H),1.82~2.08(m,3H),2.24~2.46(m,3H),2.56~2.68(m,1H),2.74~2.82(m,2H),2.92~3.01(m,1H),4.24~4.36(m,1H),5.80~5.90(br,2H),6.10~6.30(br,2H),6.85(d,J=3.6Hz,1H),7.65(d,J=3.6Hz,1H),8.39(d,J=7.6Hz,1H)

·Mass(Fab)M+H+=448.

制备例113

4-(2-乙氧羰基-E-乙烯基)-苯甲酸叔丁酯的制备

按照与制备例107相同的步骤,将对苯二醛酸叔丁酯(30g,0.146mmol)转化成相应的α,β-不饱和酯,产量:38.5g。

·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.35(t,J=7.2Hz,3H),1.60(s,9H),4.28(q,J=7.2Hz,2H),6.51(d,J=16.0Hz,1H),7.56(d,J=8.8Hz,2H),7.70(d,J=16.0Hz,1H),7.99(d,J=8.8Hz,2H)。

制备例114

4-(2-乙氧羰乙基)-苯甲酸叔丁酯的制备

依制备例108相同的步骤,将制备例113中制得的α,β-不饱和酯(38.5g,0.139mol)转化成目的化合物,产量:38g。

·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.23(t,J=7.2Hz,3H),1.58(s,9H),2.63(t,J=8.0Hz,2H),2.99(t,J=8.0Hz,2H),4.12(q,J=7.2Hz,2H),7.24(d,J=8.4Hz,2H),7.91(d,J=8.4Hz,2H).

制备例115

4-(3-羟丙基)苯甲酸叔丁酯的制备

依制备例109相同的步骤,将制备例114中制得的二酯(38g,0.137mol)转化成相应的醇,产量:25g。

·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.59(s,9H),1.91(tt,J=8.0Hz,6.4Hz,2H),2.76(t,J=8.0Hz,2H),3.67(t,J=6.4Hz,2H),7.24(d,J=8.4Hz,2H),7.91(d,J=8.4Hz,2H)

制备例116

4-(3-溴丙基)苯甲酸叔丁酯的制备

依制备例104相同的步骤,将制备例115中制得的醇(25g,0.105mol)转化成相应的溴盐,产量:25g。

·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.59(s,9H),2.1~2.22(m,2H),2.83(t,J=7.2Hz,2H),3.38(t,J=6.4Hz,2H),7.24(d,J=8.0Hz,2H),7.92(d,J=8.0Hz,2H)

制备例117

4-〔3-(2-氰基-1-环戊烷酮-3-基)丙基〕苯甲酸叔丁酯的制备

依制备例105相同的步骤,将制备例116中制得的溴盐(1.5g,5mmol)转化成目的化合物,产量:0.43g。

·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.40~1.66(m,2H),1.59(s,9H),1.70~1.92(m,3H),2.20~2.56(m,4H),2.60~2.80(m,2H),2.81(d,J=11.6Hz,1H),7.22(d,J=8.0Hz,2H),7.91(d,J=8.0Hz,2H)

·IR(neat)ν(cm-1):2958,2932,2248,1760,1710

·Mass(EI)M+=327.

制备例118

4-〔3-(2-氰基-3-甲氧基-2-环戊烯基)丙基〕苯甲酸叔丁酯的制备

依照制备例106相同的步骤,将制备例117中制得的化合物(0.41g)转化为目的化合物,产量0.31g。

·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.30~1.41(m,1H),1.41~1.55(m,1H),1.59(s,9H),1.55~1.82(m,3H),2.02~2.12(m,1H),2.42~2.48(m,2H),2.61~2.76(m,2H),2.82~2.91(m,1H),4.03(s,3H),7.22(d,J=8.0Hz,2H),7.90(d,J=8.0Hz,2H)

·IR(neat)ν(cm-1):2978,2935,2203,1712,1632

·Mass(EI)M+=341.

实施例106

4-〔3-(2,4-二氨基-6,7-二羟基-5H-环戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)丙基〕苯甲酸叔丁酯的制备

依实施例101相同的步骤,将制备例118中制得的化合物(1.06g,3.1mmol)转化成目的化合物,产量:0.95g。

·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.34~1.47(m,1H),1.56~1.82(m,4H),1.59(s,9H),2.10~2.23(m,1H),2.56~2.86(m,4H),2.95~3.02(m,1H),4.40~4.50(br,2H),4.60~4.70(br,2H),7.21(d,J=8.4Hz,2H),7.90(d,J=8.4Hz,2H)

·Mass(FAB)M+H+=369.

实施例107

4-〔3-(2,4-二氨基-6,7-二羟基-5H-环戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)丙基〕苯甲酸的制备

依照实施例102相同的步骤,将实施例106中制得的化合物(0.73g,2.0mmol)转化成相应的羧酸,产量:0.5g。

·1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm):

1.16~1.32(m,1H),1.50~1.64(m,3H),1.64~1.74(m,1H),1.94~2.08(m,1H),2.40~2.52(m,1H),2.54~2.74(m,3H),2.92~3.02(m,1H),6.20~6.35(br,2H),6.60~6.76(br,2H),7.28(d,J=8.4Hz,2H),7.83(d,J=8.4Hz,2H)

·Mass(FAB)M+H+=313.

实施例108

N-{4-〔3-(2,4-二氨基-6,7-二羟基-5H-环戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)丙基〕苯甲酰-L-谷氨酸的制备

依实施例103类似的方法,将实施例107中制备的羧酸(0.1g,0.32mmol)转化成相应的谷氨酸衍生物,产量:0.08g。

·1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm):

1.20~1.30(br,1H),1.50~1.72(m,4H),1.88~2.12(m,3H),2.30~2.37(m,2H),2.37~2.50(m,2H),2.55~2.70(m,3H),2.94~3.02(m,1H),4.30~4.42(m,1H),5.70~5.85(br,2H),6.05~6.20(br,2H),7.27(d,J=8.0Hz,2H),7.78(d,J=8.0Hz,2H),8.36~8.42(br,1H)

·Mass(FAB)M+H+=442.

制备例119

4-(1-乙基-3-碘丙基)苯甲酸叔丁酯的制备

将对甲酰苯甲酸叔丁酯(20g,97mmol)溶于乙醚(300ml),随后在冰浴中滴加溴化乙基镁(3M醚状液,33ml),搅拌混合液以完成反应然后将其倾入饱和氯化铵溶液,并用乙醚萃取,蒸馏有机相去除溶剂,残留物经硅胶柱色谱法纯化,用溶剂(乙酸乙酯/己烷=1∶4)洗脱,得22.3g4-(1-羟丙基)苯甲酸叔丁酯。将产物溶于石油醚(500ml),加入活性二氧化镁(165g),回流加热该混合物30小时以完成反应。过滤反应混合物,浓缩滤液,得21.1g4-丙酰苯甲酸叔丁酯。

对制得的酮进行豪勒-埃蒙斯(Horner-Emmons)反应,即往溶于四氢呋喃(400ml)的二乙基膦酰基乙酸乙酯(36ml)中加入叔丁醇钾(19g),室温搅拌30分钟,随后加入于四氢呋喃(40ml)中的上述酮(21.1g)。所得的混合液在55~65℃搅拌1.5小时以完成反应,将其倾入饱和氯化铵溶 液,得22.7g4-(1-乙基-2-乙氧羰基-E-乙烯基)苯甲酸叔丁基。

于甲醇(300ml)中用10%钯-碳(0.5g)催化剂还原上面得到的α,β-不饱和酯,得4-(1-乙基-2-乙氧羰基乙基)苯甲酸叔丁酯。将该产物加入1N的氢氧化钠(150ml)和甲醇(150ml)溶液,室温搅拌2小时以完成反应,将反应混合物用1N盐酸调至弱酸性并用乙酸乙酯萃取,蒸馏有机相去除溶剂,用硅胶柱色谱法纯化残留物,得17.7g3-(4-叔-丁氧基羰苯基)戊酸。将该酸溶于四氢呋喃(200ml),然后在冰浴中滴加溶于四氢呋喃(80ml)的1M氢化硼溶液。在室温下搅拌该混合液1小时以完成反应。将反应混合液倾入饱和氯化铵溶液,并用乙酸乙酯萃取,蒸馏有机相去除溶剂,残留物用硅胶柱色谱法纯化,用溶剂(乙酸乙酯/己烷=1∶1)洗脱,得16.7g4-(3-羟乙基丙基)-苯甲酸叔丁酯。将该醇溶于乙醚(400ml),然后在冰浴下加入三乙胺(4.4ml)和甲磺酰氯(9.8ml)。搅拌得到的混合液以完成反应。将得到的混合物倒入饱和氯化铵溶液,用乙醚萃取,蒸馏所得有机相以去除溶剂,得到甲磺酸酯。将其溶于丙酮(400ml),然后加入碘化钠(40g),回流加热该混合液以完成反应。将得到的反应混合物倒入饱和氯化铵溶液,用乙醚萃取之,蒸馏有机相去除溶剂,残留物经硅胶柱色谱分析,用溶剂(乙醚/己烷=1∶15)洗脱,得20g无色油状目的化合物。

·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):

0.77(3H,t,J=7.2Hz,-CH2CH3),1.58(9H,s,t-Bu),1.57~1.76(2H,m,-CH2CH3),2.01~2.24(2H,m,I-CH2CH2CH-Ar),2.63~3.09(3H,m,I-CH2CH2CH-Ar),7.22(2H,d,J=8.4Hz,ArH),7.94(2H,d,J=8.4Hz,ArH)

制备例120

4-(3-碘-1-甲基丙基)苯甲酸叔丁酯的制备

将对甲酰苯甲酸叔丁酯(20g,97mmol)溶于无水乙醚(300ml),随后在冰浴和搅拌下滴加溴化甲基镁(3M醚状液,33ml),搅拌获得的混合物1小时,然后倾入饱和氯化铵溶液。用乙醚萃取,醚相用水洗涤,干燥,蒸馏去除溶剂。淡黄色粘性液态残留物经硅胶柱色谱纯化,用溶剂(乙酸乙酯/己烷=1∶4)洗脱,得21.8g4-(羟乙基)苯甲酸叔丁酯。

该制得的羟基化合物经与制备例119相同的反应,得8.5g目的碘代化合物(49%)。

·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.28(3H,d,J=7.2Hz,-Me),1.58(9H,s,t-Bu),2.06~2.13(2H,m,I-CH2CH2CH-Ar),2.87~2.98(2H,m,I-CH2CH2CH-Ar),3.05~3.12(1H,m,I-CH2CH2CH-Ar),7.25(2H,d,J=8Hz,ArH),7.93(2H,d,J=8Hz,ArH)

制备例121

4-(3-溴-1-甲丙基)苯甲酸叔丁酯

按类似于制备例120的方法制备4-(3-羟基-1-甲丙基)苯甲酸叔丁酯。按类似于制备例104的方法对该化合物(15.6g,66.6mmol)进行溴化,得到目的化合物。产量:20.5g。

·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.29(3H,d,J=6.8Hz),1.59(9H,s),2.12(2H,dt,J=6.8Hz,6.8Hz),

3.03(1H,ddq,J=6.8Hz,6.8Hz,6.8Hz),3.15(1H,dt,J=10.0Hz,6.8Hz),

3.31(1H,dt,J=10.0Hz,6.8Hz),7.25(2H,d,J=8.4Hz),7.93(2H,d,J=8.4Hz)

制备例122

4-〔3-(2-氰基-1-环戊酮-3-基)-1-甲基-丙基〕苯甲酸叔丁酯

按类似于制备例105的方法将在制备例121中制得的溴化物(7.9g,25mmol)转化成相应的目的化合物。产量:1.6g。

·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.20-1.85(5H,m),1.59(9H,s),2.16-2.53(4H,m),2.75(1H,d,J=12.0Hz),

2.71-2.84(1H,m),7.23(2H,d,J=8.4Hz),7.93(2H,d,J=8.4Hz)

·Mass(EI)M+=341

制备实例123

4-〔3-(2-氰基-3-甲氧基-2-环戊烯基)-1-甲基丙基〕苯甲酸叔丁酯

按类似于制备例106的方法将在制备例122中制得的化合物 (1.57g,4.6mmol)转化成相应的目的化合物。产量:1.6g。

·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.00-1.76(6H,m),1.25(1H×1/2,s),1.27(1H×1/2,s),1.58(9H,s),

1.97-2.09(1H,m),2.36-2.46(2H,m),2.68-2.85(2H,m),3.99(3H×1/2,s),

4.01(3H,1/2,s),7.22(2H×1/2,d,J=8.4Hz),7.22(2H×1/2,d,J=8.4Hz)

·Mass(EI)M+=355

实施例109

4-〔3-(2,4-二氨基-6,7-二氢环戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)-1-甲基丙基〕苯甲酸

按类似于实施例104的方法将在制备例123中制得的化合物(1.6g,4.5mmol)转化成目的化合物。产量:0.39g。

·1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm):

0.90-1.68(5H,m),1.18(3H×1/2,d,J=6.8Hz),1.20(3H×1/2,d,J=6.8Hz),

1.88-2.02(1H,m),2.30-2.78(3H,m),2.86-2.96(1H,m),5.66-5.78(2H,br),

5.92-6.06(2H,br),7.28(2H×1/2,d,J=8.4Hz),

7.30(2H×1/2,d,J=8.4Hz),7.84(2H×1/2,d,J=8.4Hz),

7.85(2H×1/2,d,J=8.4Hz)

·Mass(FAB)M+H+=327

实施例110

N-〔4-〔3-(2,4-二氨基-6,7-二氢环戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)-1-甲基〕丙基苯甲酰〕-L-谷氨酸

按类似于实施例103的方法将在实施例109中制得的羧酸(0.38g,1.2mmol)转化成相应的谷氨酸衍生物。产 量:0.21g。

·1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm):

0.90-1.70(5H,m),1.16(3H×1/2,d,J=7.2Hz),1.18(3H×1/2,d,J=7.2Hz),

1.80-2.10(3H,m),2.16-2.80(5H,m),2.80-2.96(1H,m),4.28-4.40(1H,m),

5.78-5.90(2H,br),6.08-6.18(2H,br),7.20-7.30(2H,m),

7.72-7.82(2H,m),8.32-8.42(1H,m)

·Mass(FAB)M+H+=456

制备例124

4-〔2-(2-甲氧羰基-1-环戊酮-3-基)乙基〕苯甲酸叔丁酯

按类似于制备例105的方法,由在制备例104中制得的溴化物(5.9g,21mmol)和可用已知方法制备的2-甲氧羰基-2-环戊-1-酮(6.4g,41mmol)制备目的化合物。

产量:0.41g。

·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.46-1.60(1H,m),1.59(9H,s),1.70-1.82(1H,m),1.86-1.98(1H,m),

2.22~2.52(3H,m),2.54-2.82(3H,m),2.90(1H,d,J=10.8Hz),3.76(3H,s),

7.22(2H,d,J=8.4Hz),7.91(2H,d,J=8.4Hz)

实施例111

4-〔2-(2-氨基-3,4,6,7-四氢-4-氧代-5H-环戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)乙基〕苯甲酸叔丁酯

按类似于实施例101的方法将在制备例124中制得的化合物(0.4g,1.2mmol)转化成目的化合物,产量:0.27g。

·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.58(9H,s),1.62-1.84(2H,m),2.12-2.28(2H,m),2.56-2.85(4H,m),

3.07-3.17(1H,m),5.38-5.60(2H,br),7.22(2H,d,J=8.4Hz),

7.87(2H,d,J=8.4Hz),11.70-12.10(1H,br)

·Mass(FAB)M+H+=356

分子式 C20H25N3O3

元素分析

计算值(%)  实测值(%)

C67.58  C67.48

H7.09  H7.12

N11.82  N11.81

实施例112

4-〔2-(2-氨基-3,4,6,7-四氢-4-氧代-5H-环戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)乙基〕苯甲酸

按类似于实施例102的方法将在实施例111中制得的化合物(0.25g,0.7mmol)转化成相应的羧酸。产量:0.16g。

·1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm):

1.45-1.67(2H,m),2.00-2.18(2H,m),2.38-2.50(1H,m),

2.52-2.72(3H,m),2.86-2.96(1H,m),6.24-6.42(2H,br),

7.30(2H,d,J=8.4Hz),7.82(2H,d,J=8.4Hz),10.40-10.60(1H,br)

·Mass(FAB)M+H+=300

分子式 C16H17N3O3·0.5H2O

元素分析:

计算值(%)  实测值(%)

C62.33  C62.28

H5.88  H5.82

N13.63  N13.63

实施例113

N-〔4-〔2-(2-氨基-3,4,6,7-四氢-4-氧代-5H-环戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)乙基苯甲酰〕-L-谷氨酸

按类似于实施例103的方法将在实施例112中制得的羧酸(0.15g,0.5mmol)转化成相应的谷氨酸衍生物。产量:0.09g。

·1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm):

1.44-1.70(2H,m),1.86-2.20(4H,m),2.28-2.35(2H,m),2.35-2.72(4H,m),

2.85-2.96(1H,m),4.30-4.42(1H,m),6.25-6.40(2H,br),

7.28(2H,d,J=8.4Hz),7.77(2H,d,J=8.4Hz),8.40-8.50(1H,m),

10.40-10.60(1H,br)

制备例125

4-(乙氧羰基甲氧基)苯甲酸乙酯

在氮气流中用无水己烷洗涤氢化钠(最低60%石蜡分散液,2.95g,约74mmol)并悬浮于无水二甲基甲酰胺中。在冰冷却条件下搅拌所得悬浮液,接着滴加4-羟基苯甲酸乙酯(11.2g,67mmol)在二甲基甲酰胺中形成的溶液。将所 得混合物在室温下搅拌30分钟并再次用冰冷却,接着滴加溴代乙酸乙酯(12.9g,77mmol)在无水二甲基甲酰胺中形成的溶液。在室温下搅拌所得混合物以完成反应。过滤除去反应混合物中的不溶物并减压浓缩滤液。将残余物溶于二乙醚中并用碳酸氢钠水溶液和食盐水溶液洗涤所得溶液,干燥并蒸馏除去溶剂。通过硅胶柱色谱纯化残余物。产量:16.8g。

·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.29(3H,t,J=7.2Hz),1.37(3H,t,J=7.2Hz),4.28(2H,q,J=7.2Hz),

4.34(2H,q,J=7.2Hz),4.67(2H,s),6.92(2H,d,J=8.8Hz),

8.00(2H,d,J=8.8Hz)

制备实例126

4-(2-羟基乙氧基)苯甲酸乙酯

按类似于制备例109的方法将在制备例125中制得的酯(16.8g,67mmol)转化成目的羟基化合物。产量:13.7g。

·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.38(3H,t,J=7.2Hz),1.74-1.88(1H,br),4.00(2H,t,J=4.4Hz),

4.14(2H,t,J=4.4Hz),4.35(2H,q,J=7.2Hz),6.94(2H,d,J=9.2Hz),

8.00(2H,d,J=9.2Hz)

制备例127

4-(2-溴乙氧基)苯甲酸乙酯

在制备例126中制得的羟基化合物(13.7g,65mmol)进行与制备例110相同的反应,得到目的溴代化合物的 无色固体。产量:15.8g。

·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.38(3H,t,J=6.8Hz),3.66(2H,t,J=6.4Hz),4.34(2H,t,J=6.4Hz),

4.35(2H,q,J=6.8Hz),6.92(2H,d,J=8.8Hz),8.00(2H,d,J=8.8Hz)

·Mass(FAB)M+H+=273,275

分子式 C11H13O3Br

元素分析:

计算值(%)  实测值(%)

C48.37  C48.15

H4.80  H4.71

制备例128

4-〔2-(2-氰基-1-环戊酮-3-基)乙氧基〕苯甲酸乙酯

按类似于制备例105的方法将在制备例127中制得的溴化物(7.7g,28mmol)转化成目的化合物。产量:1.1g。

·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.38(3H,t,J=7.2Hz),1.50-1.78(1H,m),2.00-2.80(7H,m),

3.00(1H,d,J=12.0Hz),4.20(2H,t,J=6.0Hz),4.35(2H,q,J=7.2Hz),

6.92(2H,d,J=9.2Hz),8.00(2H,d,J=9.2Hz)

制备例129

4-〔2-(2-氰基-3-甲氧基-2-环戊烯基)乙氧基〕苯甲酸叔丁酯

按类似于制备例106的方法将在制备例128中制得的化合物 (1.1g,3.7mmol)转化成目的化合物。产量:0.78g。

·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.38(3H,t,J=7.2Hz),1.60-1.74(1H,m),1.76-1.90(1H,m),

2.12-2.32(2H,m),2.46-2.54(2H,m),3.06-4.08(1H,m),

4.12(2H,t,J=6.0Hz),4.34(2H,q,J=7.2Hz),6.90(2H,d,J=8.8Hz),

7.99(2H,d,J=8.8Hz)

·Mass(FAB)M+H+=316

实施例114

4-〔2-(2,4-二氨基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)乙氧基〕苯甲酸

按类似于实施例104的方法将在制备例129中制得的化合物(0.78g,2.5mmol)转化成目的化合物。产量:0.37g。

·1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm):

1.64-1.85(2H,m),1.94-2.08(2H,m),2.32-2.45(1H,m),2.58-2.72(1H,m),

3.00-3.12(1H,m),4.04(2H,t,J=7.2Hz),5.60-5.67(2H,br),

5.97-6.05(2H,br),6.94(2H,d,J=8.8Hz),7.84(2H,d,J=8.8Hz)

·Mass(FAB)M+H+=315

实施例115

N-〔4-〔2-(2,4-二氨基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)乙氧基〕苯甲酰〕-L-谷氨酸

按类似于实施例103的方法将在制备例114中制得的羧酸(0.48g,1.5mmol)转化成目的化合物。

·1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm):

1.66-2.10(6H,m),2.27-2.35(2H,m),2.36-2.50(1H,m),2.62-2.74(1H,m),

3.02-3.13(1H,m),4.05(2H,t,J=6.8Hz),4.29-4.38(1H,m),

5.81-5.98(2H,br),6.18-6.30(2H,br),6.97(2H,d,J=8.8Hz),

7.82(2H,d,J=8.8Hz),8.34(1H,d,J=7.2Hz)

·Mass(FAB)M+H+=444

制备例130

4-(1-氟-3-丁烯基)苯甲酸叔丁酯

将溴化烯丙基镁在二乙醚中形成的1.0M溶液(200ml,200ml)滴到4-甲酰苯甲酸叔丁酯(30.9g,150mmol)在无水四氢呋喃中形成的溶液中,同时在氮气流中用冰冷却条件下进行搅拌。滴完之后,将所得混合物进一步搅拌30分钟,然后加入220ml用冰冷却的1N盐酸。强力搅拌所得混合物。用二乙醚进一步萃取含水层。合并有机层,用食盐水溶液洗涤,干燥并浓缩。通过硅胶柱色谱纯化残余物,得到4-(1-羟基-3-丁烯基)苯甲酸叔丁酯。产量:8.2g。

将上面制得的羟基化合物(12g,48.3mmol)溶于无水二氯甲烷中,将所得溶液滴到在氮气氛中保持在干冰-丙酮浴中的三氟化二乙氨基硫(9.0g,56mmol)在无水二氯甲烷中形成的溶液中。滴完之后,在室温下搅拌所得混合物,然后加入磷酸盐缓冲液(PH7),回收有机层,用食盐水溶液洗涤,干燥并蒸馏以除去溶剂。通过硅胶柱色谱纯化残余物,得到目的化合物。产量:8.5g。

·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.60(9H,s),2.50-2.78(2H,m),5.10-5.17(2H,m),

5.53(1H,ddd,J=5.2Hz,7.6Hz,JHF=47.6Hz),5.72-5.83(2H,m),

7.37(2H,d,J=8.0Hz),7.99(2H,d,J=8.0Hz)

·IR(neat)ν(cm-1):2980,1715,1291,1166,1118

制备例131

4-(1-氟-3-羟丙基)苯甲酸叔丁酯

将在制备例130中制得的氟代化合物(8.5g,34mmol),N-甲基吗啉N-氧化物(5.0g,44mmol)和四氧化锇(1g/100cc,叔丁醇,8.6ml,33.7×1/100mmol)溶于丙酮/水混合物中。在室温下搅拌所得溶液以完成反应。滤除反应混合物中的不溶物并蒸馏滤液以除去丙酮。将75ml1N盐酸加到残余物中并用乙酸乙酯提取所得混合物。合并有机层,用食盐水溶液洗涤,干燥并减压蒸发至干,得到4-(1-氟-3,4-二羟丁基)苯甲酸叔丁酯。

将上面制得的二醇溶于二乙醚中,接着在搅拌和冰冷却条件下逐渐加入高碘酸钠(71g,51mmol)水溶液。滴完之后,将所得混合物进一步搅拌2小时。回收有机层并用二乙醚进一步萃取含水层。合并有机层,用食盐水溶液洗涤,干燥并减压蒸发至干,得到4-(1-氟-3-氧丙基)苯甲酸叔丁酯。

将上面制备的醛溶于四氢呋喃中并将硼氢化钠(1.9g,51mmol)逐渐加到所得溶液中,同时在冰冷却条件下搅拌该溶液。在室温下搅拌所得混合物以完成反应,然后加入二乙醚和冰-水。回 收有机层并用二乙醚进一步萃取含水层。合并有机层,用食盐水溶液洗涤,干燥并蒸发以除去溶剂。通过硅胶柱色谱纯化残余物,得到目的化合物。产量:6.4g。

·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.49-1.55(1H,m),1.60(9H,s),1.96-2.28(2H,m),3.74-3.84(1H,m),

3.84-3.95(1H,m),5.74(1H,ddd,J=4,0Hz,8.8Hz,JHF=48.0Hz),

7.39(2H,d,J=8.0Hz),8.00(2H,d,J=8.0Hz)

制备例132

4-(3-溴-1-氟丙基)苯甲酸叔丁酯

在制备例131中制得的羟基化合物(6.4g,25mmol)进行与制备例110相同的反应,得到7.4g目的溴代化合物。

·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.60(9H,s),2.19-2.39(1H,m),2.41-2.57(1H,m),

3.40-3.47(1H,m),3.54-3.62(1H,m),

5.72(1H,ddd,J=4.0Hz,9.2Hz,JHF=48.0Hz),7.39(2H,d,J=8.4Hz),

8.01(2H,d,J=8.4Hz)

·IR(neat)ν(cm-1);2979,1715,1291,1166,1118

制备例133

4-〔3-(2-氰基-1-环戊酮-3-基)-1-氟丙基〕苯甲酸叔丁酯

按类似于制备例105的方法将在制备例132中制得的溴化物(5.2g,16mmol)转化成目的化合物。产量:0.8g。

制备例134

4-〔3-(2-氰基-3-甲氧基-2-环戊烯基)-1-氟丙基〕 苯甲酸叔丁酯

按类似于制备例106的方法将在制备例133中制得的化合物(0.8g,2.3mmol)转化成目的化合物。产量:0.57g。

·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.34-1.66(2H,m),1.60(9H,s),1.70-2.16(4H,m),2.42-2.52(2H,m),

2.80-2.98(1H,m),4.03(3H×1/2,s),4.04(3H×1/2,s),

5.51(1H,ddd,J=4.8Hz,7.6Hz,JHF=47.6Hz),7.36(2H×1/2,d,J=8.0Hz),

7.37(2H×1/2,d,J=8.0Hz),7.99(2H,d,J=8.0Hz)

·IR(neat)ν(cm-1);2978,2947,2203,1712,1629,1294,1166,1119

实施例116

4-〔3-(2,4-二氨基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)-1-氟丙基〕苯甲酸叔丁酯

按类似于实施例101的方法将在制备例134中制得的化合物(0.57g,1.6mmol)转化成目的化合物。产量:0.4g。

·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.38-1.66(1H,m),1.59(9H,s),1.68-2.04(4H,m),2.11-2.25(1H,m),

2.57-2.68(1H,m),2.73-2.85(1H,m),3.00-3.12(1H,m),

4.46-4.59(2H,br),4.59-4.72(2H,br),5.40-5.64(1H,m),

7.34(2H,d,J=8.4Hz),7.99(2H,d,J=8.4Hz)

实施例117

4-〔3-(2,4-二氨基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)-1-氟丙基〕苯甲酸

按类似于实施例102的方法将在实施例116中制得的化合物(0.35g,0.91mmol)转化成相应的羧酸。产量: 0.26g。

实施例118

N-〔4-〔3-(2,4-二氨基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并〔d〕-嘧啶-5-基)-1-氟丙基〕苯甲酰〕-L-谷氨酸

按类似于实施例103的方法将在实施例117中制得的羧酸(0.26g,0.78mmol)转化成相应的谷氨酸衍生物。产量:0.085g。

·1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm):

1.10-2.15(8H,m),2.20-2.70(2H,m),2.32(2H,t,J=7.6Hz),

2.90-3.05(1H,m),4.32-4.40(1H,m),5.45-5.68(1H,m),6.00-6.30(2H,br),

6.30-6.60(2H,br),7.41(2H,d,J=8.0Hz),7.87(2H,d,J=8.0Hz),

8.55(1H,d,J=7.2Hz)

·Mass(FAB)M+H+=460

分子式 C22H26N5O5F·1H2O

元素分析:

计算值(%)  实测值(%)

C55.34  C55.05

H5.91  H5.80

N14.67  N14.54

制备例135

苯甲酸2-(2-氰基-1-环戊酮-3-基)乙酯

按类似于实施例105的方法将苯甲酸2-溴乙酯(7.9g,34mmol)转化成相应的目的化合物。产量:2.6g。

制备例136

苯甲酸2-(2-氰基-3-甲氧基-2-环戊烯基)乙酯

按类似于制备例106的方法将在制备例135中制得的化合物(2.6g,10mmol)转化成相应的目的化合物。产量:1.4g。

·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.61~1.73(1H,m),1.73~1.86(1H,m),2.13~2.32(2H,m),2.46~2.56(2H,m),3.01~3.12(1H,m),4.05(3H,s),4.41(2H,t,J=6.4Hz),7.40~7.48(2H,m),7.53~7.60(1H,m),8.01~8.07(2H,m).

制备例137

1-氰基-5-(2-羟乙基)-2-甲氧基-1-环戊烯

将6ml1N氢氧化钠加到在制备例136中制得的化合物(1.4g,5mmol)在甲醇中形成的溶液中。在室温下搅拌所得混合物以完成反应。蒸馏反应混合物以除去甲醇并将残余物溶于乙酸乙酯中。用碳酸氢钠水溶液和食盐水溶液洗涤所得溶液,用硫酸镁干燥,并蒸馏以除去溶剂,从而得到目的化合物。产量:0.82g。

·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.50~1.70(3H,m),1.96~2.06(1H,m),2.10~2.20(1H,m),2.42~2.57(2H,m),2.98~3.07(1H,m),3.69~3.84(2H,m),4.05(3H,s).

制备例138

1-氰基-5-(2-碘乙基)-2-甲氧基-1-环戊烯

按与制备例104相同的方法,将在制备例137中制备的醇(0.82g,4.9mmol)转化成相应的碘代化合物,所不同的是用碘化钠代替溴化锂,产量:1.3g。

·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.44~1.60(1H,m),1.78~1.90(1H,m),2.08~2.20(1H,m),2.23~2.34(1H,m),2.45~2.53(2H,m),2.93~3.03(1H,m),3.12~3.20(1H,m),3.23~3.32(1H,m),4.05(3H,s).

制备例139

4-〔N-苯甲酰-N-〔2-(2-氰基-3-甲氧基-2-环戊烯基)乙基〕氨基〕苯甲酸乙酯

在氮气流下用无水己烷洗涤氢化钠(最低60%石蜡分散液,0.14g,3.5mmol)并悬浮于无水二甲基甲酰胺中,然后加入4-苯甲酰氨基苯甲酸乙酯。将所得混合物在室温下搅拌30分钟,然后加入在制备例138中制得的碘代化合物(0.72g,3.2mmol)在无水二甲基甲酰胺中形成的溶液。将所得混合物在60℃下搅拌1小时并蒸馏除去溶剂,将残余物溶于乙酸乙酯中,用食盐水溶液洗涤所得溶液,干燥并进行硅胶柱色谱,得到目的化合物。产量:0.62g。

·1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):

1.36(3H,t,J=7.2Hz),1.60-1.75(2H,m),2.00-2.11(1H,m),

2.14-2.25(1H,m),2.47-2.54(2H,m),2.85-2.96(1H,m),4.39-4.42(2H,m),

4.02(3H,s),4.33(2H,q,J=7.2Hz),7.08(2H,d,J=8.8Hz),7.28-7.60(5H,m),

7.90(2H,d,J=8.8Hz)

·IR(neat)ν(cm-1):2983,2946,2203,1716,1647,1604,1275,1104

实施例119

4-〔N-〔2-(2,4-二氨基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)乙基〕-N-苯甲酰氨基〕苯甲酸

按类似于实施例104的方法将在制备例139中制得的化合物(0.61g,1.45mmol)转化成相应的目的化合物。产量:0.11g。

·NMR(DMSO-d6)δ(ppm):

1.42-1.54(1H,m),1.63-1.85(2H,m),1.91-2.04(1H,m),2.32-2.67(2H,m),

2.90-3.00(1H,m),3.80-3.96(2H,m),5.77-5.87(2H,br),

6.07-6.15(2H,br),7.15-7.28(7H,m),7.75(2H,d,J=8.4Hz)

实施例120

4-〔N-〔2-(2,4-二氨基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)乙基〕〕氨基苯甲酸

将在实施例119中制得的羧酸(0.11g,0.26mmol)和氢氧化锂-水合物(0.11g,2.6mmol)溶于蒸馏水中并在80℃加热条件下搅拌所得溶液以完成反应。加入1N盐酸酸化反应混合物,然后加入氯仿。强力搅拌所得混合物并过滤回收沉淀物。用氯仿洗涤沉淀物并用1N氢氧化钠和1N盐酸进行重沉淀,得到目的化合物。产量:70mg。

·NMR(DMSO-d6)δ(ppm):

1.39-1.51(1H,m),1.71-1.92(2H,m),1.94-2.07(1H,m),2.40-2.50(1H,m),

2.63-2.74(1H,m),2.98-3.15(3H,m),5.88-6.03(2H,br),

6.37(1H,t,J=4.8Hz),6.34-6.50(2H,br),6.54(2H,d,J=8.4Hz),

7.64(2H,d,J=8.4Hz)

实施例121

N-〔4-〔N′-〔2-(2,4-二氨基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并〔d〕嘧啶-5-基)乙基〕〕氨基〕苯甲酰-L-谷氨酸

按类似于实施例103的方法将在实施例120中制得的羧酸(65mg,0.21mmol)转化成相应的目的化合物。产量:10mg。

·NMR(DMSO-d6)δ(ppm):

1.36-1.51(1H,m),1.69-2.07(5H,m),2.21-2.52(3H,m),2.59-2.72(1H,m),

3.00-3.16(3H,m),4.26-4.35(1H,m),5.75-5.90(2H,br),

6.15(1H,t,J=4.8Hz),6.15-6.35(2H,br),6.34(2H,d,J=8.4Hz),

7.64(2H,d,J=8.4Hz),8.02(1H,d,J=7.2Hz)

·Mass(FAB)M+H+=443

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