技术领域
[0001] 本
发明涉及改进乳胶结合的
抗原或
抗体粒子稳定性的方法，适用于体外
诊断试剂盒的应用。
背景技术
[0002] 1956年singer和plotz开始使用直径为微米级的粒子，通过附着在乳胶粒子上的抗原或者抗体与血清中的抗体或抗原进行定性的玻片凝聚法检测一些存在于体液中的微量被测物，主要包括类
风湿，前
白蛋白，黄体
酮等。随着粒子合成技术的发展，粒子直径由微米级提高的
纳米级，同时粒子表面可以根据需要进行一些特殊的处理，产生活性基团，纳米级的粒子被应用于免疫比浊测定中，开发一系列定量测定的诊断试剂，包括类风湿，抗O，Lp(a)，尿微球蛋白，前白蛋白，C反应蛋白，黄体酮，B2微球蛋白，肌
钙蛋白，
糖化血红蛋白等。随着临床检测要求的提高，国内外已广泛采用乳胶增强试剂对微球蛋白进行定量测定。
[0003] 乳胶增强法式一种新的临床诊断方法，通过将抗原或者抗体与乳胶粒子进行共价交联后与对应的抗体或者抗原进行抗原抗体反应，大幅度增强了普通免疫法的灵敏度，比普通免疫比浊至少提高一个数量级，可以达到放射
免疫测定法(RIA)的
水平，但没有放射污染，操作简单，可以用普通生化分析仪进行测定，符合现在临床检验的要求，实现了一些低含量物质的定量测定，由于使用了乳胶颗粒，并在颗粒上结合了蛋白，形成的乳胶增强粒子体积通常为0.05～0.5um，但是，它们在溶液中是以悬浮状态存在，并不能在溶液中长期稳定，所以必须解决乳胶结合的抗原或抗体粒子的稳定性。
[0004] CN200610025351基于下列原理的发明，主要应用于使用乳胶增强法的临床诊断试剂的稳定，其实质就是通过调节试剂的
密度，并使用封闭蛋白保证粒子所带电荷一致均匀，使得乳胶离子能够稳定的长期悬浮，已知结合蛋白后的乳胶粒子并不是完全被蛋白封闭的，需要使用一定量对反应影响很小的
水溶性强，带电荷比较多的蛋白保证乳胶增强粒子充分的封闭和均一，这里使用的封闭蛋白包括白蛋白，凝胶蛋白等。
发明内容
[0005] 本发明的目的在于提供一种改进乳胶悬浊液稳定性的方法，以克服
现有技术存在的上述
缺陷，满足临床应用的需要。
[0006] 本发明的方法，包括在试剂溶液中加入非离子型
表面活性剂、能提高颗粒表面带电状况的物质或者调节试剂溶液的PH的步骤；
[0007] 优选的，所述非离子型表面活性剂包括但是不限于Tween 20等，优选的，所述非离子型表面活性剂的加入量为试剂溶液重量的0.05～0.2％；
[0008] 所述能提高颗粒表面带电状况的物质包括但是不限于水杨酸钠等，优选的，所述能提高颗粒表面带电状况的物质的加入量为试剂溶液重量的0.01～0.1；
[0009] 所述调节试剂溶液的PH指的是，采用PH调节剂调节试剂溶液的PH为7～9，PH值来能够改变颗粒表面带电状况，较好的增强乳胶颗粒悬浮效果。一般来讲，PH升高，带电量越大，也就越容易悬浮在溶液中；所述PH调节剂包括但是不限于氢
氧化钠溶液、
磷酸缓冲液或
碳酸钠-
碳酸氢钠缓冲液；
[0010] 所述试剂溶液包括但是不限于乳胶增强法C反应蛋白(CRP)试剂溶液、类风湿因子试剂(RF)试剂溶液、肌钙蛋白试剂溶液或糖化血红蛋白试剂溶液、尿微球蛋白试剂溶液或B2微球蛋白试剂溶液等；
[0011] 乳胶增强法C反应蛋白(CRP)试剂溶液可采用赵和平的《C-反应蛋白定量测定》报道的方法进行配制；
[0012] 所述类风湿因子试剂(RF)试剂溶液可参考唐晓燕的《样品预处理对HCV-cAg酶联
免疫吸附试验特异性的影响》样品预处理的方法进行配制。
[0013] 本发明的方法，是针对CN200610025351的不足所提出改进，提供了改进乳胶结合的抗原或抗体粒子稳定性的方法，它在对于
生物体液样本进行定量测定以及分析样本中的分析物浓度时处于稳定状态，可以使临床诊断试剂测量结果重复性更好，并且不会出现存放一定时期的试剂底部出现沉淀，空白升高，灵敏度下降等各类问题。
具体实施方式
[0014] 以下
实施例将对本发明作进一步阐述，但本发明绝不仅仅局限于实施例。
[0015] 实施例1
[0016] 按照表1配制乳胶增强法C反应蛋白试剂(CRP)试剂
[0017] 表1
[0018]物质 浓度
MES溶液 25mmol/L
交联CRP抗体的乳胶粒子的乳液 2.5g/L
EDTA.Na2 5mmol/L
BSA 10g/L
蔗糖 5g/L
PBS缓冲液PH＝8.0 100mmol/L
[0019] 将各个组分混合，获得乳胶增强法C反应蛋白试剂(CRP)试剂溶液；
[0020] 再按照表2向上述配好的C反应蛋白试剂(CRP)试剂中添加一些非离子型表面活性剂，如Tween20。
[0021] 表2
[0022]溶液编号 保护剂
1 不添加
2 0.05％Tween 20
3 0.10％Tween 20
4 0.15％Tween 20
5 0.20％Tween 20
[0023] 表2中，0.05％Tween 20指的是，Tween 20的加入重量为胶增强法C反应蛋白试剂(CRP)试剂溶液的0.05％，下同。
[0024] 将表2中编号为1～5的C反应蛋白试剂(CRP)溶液放置在4℃贮存1，3，6，12月后，测定同一份标准质控血清，加入Tween 20作为保护剂的其变异度＜5％，结果如表3。
[0025] 表3
[0026]
[0027]
[0028] 表3可以看出，和没有加入Tween20作为保护剂的相比，加入Tween20起到的保护作用非常明显，能起到显著的稳定作用。
[0029] 实施例2
[0030] 按照下述方法配制类风湿因子试剂(RF)试剂溶液。
[0031] 表4
[0032]物质 浓度
MES溶液 25mmol/L
交联人IgG的乳胶粒子的乳液 2.5g/L
EDTA.Na2 5mmol/L
BSA 10g/L
蔗糖 5g/L
PBS缓冲液PH＝8.0 100mmol/L
[0033] 将各个组分混合，获得类风湿因子试剂(RF)试剂溶液。
[0034] 再按照下表向上述配好的类风湿因子(RF)试剂中添加一些能提高颗粒表面带电状况的物质水杨酸钠。
[0035] 表5
[0036]编号 保护剂
1 不添加
2 5mmol/L水杨酸钠
3 10mmol/L水杨酸钠
4 100mmol/L水杨酸钠
5 200mmol/L水杨酸钠
[0037] 将表中编号为1～5的类风湿因子试剂(RF)溶液放置在4℃贮存1，3，6，12月后，测定同一份标准质控血清，加入水杨酸钠作为保护剂的其变异度＜5％，结果如表6[0038] 表6
[0039]
[0040]
[0041] 从表6可以明显看出，采用本发明的方法，可以使乳胶颗粒很好的悬浮并保持稳定。
[0042] 实施例3
[0043] 利用本发明配制的普通溶液条件下保存的乳胶试剂进行PH对比研究，本处使用的是实例1和实例2中制备的CRP普通乳胶试剂和RF普通乳胶试剂。
[0044] 表7
[0045] C反应蛋白试剂(CRP)试剂
[0046]物质 浓度
MES溶液 25mmol/L
交联CRP抗体的乳胶粒子的乳液 2.5g/L
EDTA.Na2 5mmol/L
BSA 10g/L
蔗糖 5g/L
PBS缓冲液PH＝8.0 100mmol/L
[0047] 类风湿试剂(RF)试剂
[0048]物质 浓度
MES溶液 25mmol/L
交联人IgG的乳胶粒子的乳液 2.5g/L
EDTA.Na2 5mmol/L
BSA 10g/L
蔗糖 5g/L
PBS缓冲液PH＝8.0 100mmol/L
[0049] 将上述按照表7所得的溶液分几份并调节几个PH值梯度。
[0050] PH值是采用重量浓度为10％的NaOH溶液进行调节的。
[0051] 表8
[0052]
[0053] 将这一系列试剂放置在4℃贮存1，3，6，12月后，测定同一份标准质控血清，适当的PH值，其变异度＜5％。
[0054] 结果如表9
[0055] 表9
[0056]
[0057]
[0058]
