酵母和细菌益生菌的组合以及用于改善猪的生产的方法
阅读：288发布：2020-05-08
专利汇可以提供酵母和细菌益生菌的组合以及用于改善猪的生产的方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及组合物并公开了改善猪的生产的方法。在一个实施方式中，所述组合物可包含至少一种芽孢杆菌菌株 生物 纯培养物的组合。所述组合物可以包含酿酒 酵母 (Saccharomyces cerevisiae)制品。公开了对猪及其后代提供有益效应的方法，所述有益效应包括但不限于猪的性能改善。，下面是酵母和细菌益生菌的组合以及用于改善猪的生产的方法专利的具体信息内容。
1.一种组合物，其包含：
包含枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)1104和枯草芽孢杆菌2084中的至少一种的一种或多种芽孢杆菌菌株的生物纯培养物。
2.根据权利要求1所述的组合物，其还包含酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)制品。
3.根据权利要求2所述的组合物，其中所述酿酒酵母制品包含下列至少一种：酿酒酵母提取物、水解酿酒酵母、和酿酒酵母培养物。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的组合物，其还包含载体。
5.根据权利要求4所述的组合物，其中所述载体选自：乳清、麦芽糊精、蔗糖、葡萄糖、石灰石、稻壳和硅铝酸钠。
6.根据权利要求2所述的组合物，其中所述酿酒酵母制品还包含25重量％和80重量％之间的酿酒酵母提取物、5重量％和40重量％之间的水解酿酒酵母、以及5重量％和50重量％之间的酿酒酵母培养物。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的组合物，其中所述一种或多种芽孢杆菌菌株的生物纯培养物是直接饲喂的微生物产品。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的组合物，其中所述组合物还包含动物饲料。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的组合物，其中所述组合物的一种或多种芽孢杆菌菌株的生物纯培养物在所述组合物中的浓度为约1x 10e4和1x 10e9 CFU/克饲料之间。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的组合物，其中动物饲料中的所述组合物被构造成被动物消耗，并且导致被引入到所述动物中的所述一种或多种芽孢杆菌菌株的生物纯培养物的浓度在约1x 10e5和1x 10e11 CFU/动物/天之间的范围内。
11.根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物是直接饲喂的微生物组合物，所述直接饲喂的微生物组合物包含所述一种或多种芽孢杆菌菌株的生物纯培养物和分离的酿酒酵母制品，并且其中所述直接饲喂的微生物组合物抑制已摄取有效量的所述直接饲喂的微生物组合物的猪的胃肠道中的大肠杆菌(Escherichia coli)。
12.根据权利要求1-11中任一项所述的组合物，其用于增加猪的性能。
13.根据权利要求1-11中任一项所述的组合物，其用于改善猪的免疫系统功能。
14.根据权利要求1-11中任一项所述的组合物，其用于制备直接饲喂的微生物组合物，所述直接饲喂的微生物组合物用于抑制已摄取有效量的所述直接饲喂的微生物组合物的猪的胃肠道中的大肠杆菌。
15.一种增加猪的性能的方法，所述方法包括向所述猪施用有效量的根据权利要求1至
11中任一项所述的组合物。
16.根据权利要求15所述的增加猪的性能的方法，其还包括改善所述猪的免疫系统功能。
17.根据权利要求15所述的方法，其还包括增加所述猪的免疫球蛋白。
18.根据权利要求15所述的增加猪的性能的方法，其还包括减少所述猪的炎症。
19.根据权利要求15所述的增加猪的性能的方法，其还包括改善猪群的生存力。
20.根据权利要求15所述的增加猪的性能的方法，其还包括降低猪群的死亡率。
21.根据权利要求15所述的增加猪的性能的方法，其还包括增加所述猪的干扰素-γ。
22.根据权利要求15所述的增加猪的性能的方法，其还包括减少断奶后第三天的腹泻。
23.根据权利要求22所述的增加猪的性能的方法，其还提供所述猪从基于乳汁的饲粮到固体饲粮的改善的过渡。
24.根据权利要求15所述的增加猪的性能的方法，其还提供所述猪在断奶后的改善的生存力。
25.根据权利要求15所述的增加猪的性能的方法，其中所述猪是母猪，并且所述方法还包括在所述母猪所生的一窝幼崽中提供增加的断奶窝重。
26.根据权利要求15所述的增加猪的性能的方法，其中所述猪是母猪，并且所述方法还包括提供所述母猪所生的活产仔猪数增加。
27.根据权利要求15所述的增加猪的性能的方法，其还提供在所述猪的肠道中减少的病原菌计数。
28.根据权利要求15所述的增加猪的性能的方法，其中所述猪是母猪，并且其中增加猪的性能还包括在整个猪生产阶段中正面管理所述母猪和所述母猪的后代的肠道健康。
29.根据权利要求15所述的增加猪的性能的方法，其还包括改善所述猪所生的后代的免疫系统功能，其中所述猪是已施用有效量的所述组合物的母猪。
30.根据权利要求29所述的方法，其中所述猪所生的后代的免疫系统功能改善选自以下至少一种：增加所述后代的免疫球蛋白，增加所述后代的干扰素-γ，减少所述后代的炎症，减少所述后代的断奶后第三天的腹泻，改善所述后代从基于乳汁的饲粮向固体饲粮的过渡，增加所述后代的断奶窝重，改善所述后代群的生存力，改善所述后代群的断奶后的生存力，以及降低所述后代群的死亡率。
31.一种制备饲料的方法，所述饲料包含有效量的根据权利要求1至11中任一项所述的组合物。
酵母和细菌益生菌的组合以及用于改善猪的生产的方法
[0001] 相关申请的交叉引用
[0003] 文献目录
技术领域
[0005] 本公开涉及用于改善猪的生产的组合物和方法。更具体地，本公开涉及包含芽孢杆菌(Bacillus)菌株、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的组合物，以及配制和使用它们以改善生产猪的方法。
背景技术
[0006] 提高母猪生产力是改善生产成本和优化肉用仔猪的获利性的关键。本文提供的公开内容证明了酵母和益生菌的几种组合改善母猪生产力、以及断奶仔猪的免疫力和生存力。
[0007] 几种不同类型的微生物已被鉴定为改善宿主健康的有益益生菌，包括乳酸芽孢杆菌(Lactobacillus)、双歧芽孢杆菌(Bifidobacterium)、肠球菌(Enterococcus)、芽孢芽孢杆菌(Bacillus)和酵母。益生菌倾向于通过三种作用方式为宿主提供益处：1)宿主免疫系统的免疫调制；2)通过对其他微生物的直接和间接效应转变胃肠道微生物生态；3)影响细菌代谢产物，无论是病原性生物产生的毒素还是对有益生物或宿主提供营养优势的化合物(Soccol等人，2010)。芽孢杆菌和酵母是用于牲畜饲料中的益生菌补充物，因为与乳酸芽孢杆菌或双歧芽孢杆菌生物相比，它们在相对苛刻的饲料混合和储存条件下倾向于稳定并维持活力。因此，科学文献中有施用酵母或芽孢杆菌对猪群健康和生产的有益效应的实例。
[0008] 配方酵母已被证实改善出生体重、改善乳猪生存力(降低死亡率)并增加断奶仔猪的数量和重量(Bass等人，2012)。研究表明，将酵母的组分配制成特定水平的β-葡聚糖、甘露寡糖、核苷酸内容物和酵母代谢产物，可以在饲粮中包含酵母时增加动物性能反应以及该反应的可预测性(Lindemann等人，2010)。酵母的β-葡聚糖组分激活并增强免疫应答，改善仔猪对病原菌的防御(Vetvicka等人，2014)。此外，β-葡聚糖具有结合某些真菌毒素以及改善肝功能的能力。β-1,3和β-1,6葡聚糖已被证实改善免疫应答，而β-1,4葡聚糖未改善免疫应答(Galliano等人，2012；Jang等人，2013)。干酵母已被证实是一种免疫系统刺激剂，其促进有益细菌的生长，同时抑制致病细菌(Jurgens等人，1997)。
[0009] 给母猪饲喂干酵母改善乳汁IgG，并且不影响哺乳性能，但是改善随后的断奶后性能。与对照饲喂的仔猪相比，断奶后饲喂甘露寡糖的仔猪的生长性能改善(Miquel等人，2004)。所述效应在健康状况较差的仔猪中更为明显。
[0010] 向幼猪提供酵母来源的核苷酸与增加采食量和改善从母乳向固体饲料的过渡有关(Plante等人，2011)。乳汁倾向于核苷酸含量高，而典型的饲料成分则较低。通过补充酵母核苷酸，在仔猪从母猪断奶造成的应激高峰期期间，增强了肠道的生长和成熟(Plante等人，2011)。酵母代谢物还含有支持采食的谷氨酸。幼猪的采食能力有限，因此，刺激采食是断奶仔猪的优先事项，以确保从乳食向固态饲料的积极过渡。
[0011] 酵母培养物已经给妊娠/哺乳母猪饲喂以试图改善断奶前死亡率和改善窝增重(Kim等人，2010；Veum等人，1995)。在这两项研究中，饲喂酵母培养物都没有改善哺乳期间仔猪的性能，也没有改善母猪饲料利用率。相比之下，饲喂干酵母已被证实改善断奶后的性能，但不影响断奶前的窝的性能(Jurgens等人，1997)。通过将酵母配制成特定组分并饲喂给妊娠和哺乳期间的母猪，与对照饲喂母猪相比，乳猪的出生体重和断奶体重增加(Lindemann等人，2010)。断奶后的性能也受到母猪在妊娠和哺乳期间饲喂配方酵母制品的影响。与对照饲喂母猪相比，产自酵母饲喂母猪的仔猪的断奶体重较重，导致平均日增重(ADG)和最终体重更高。当针对初始体重调节数据后，产自酵母饲喂母猪的仔猪的饲料转化率也有改善。
[0012] 据报道，芽孢杆菌益生菌当施用于仔猪时增加增重，并改善饲料利用效率(Chen等人，2006；Davis等人，2008；Hong等人，2005)。饲喂给仔猪的芽孢杆菌益生菌的生长促进效应归因于它产生抗微生物化合物和抑制肠道病原体生长的能力(Hentges等人，1992)。因此，通过产生抗微生物化合物和抑制某些肠道微生物种类，芽孢杆菌益生菌改变了胃肠道中的微生物种群，使肠道环境对病原微生物较不宜居并提高了有益的乳酸芽孢杆菌种群(Cui等人，2013；Baker等人，2013)。此外，当对母猪施用芽孢杆菌益生菌时，已在乳猪中观察到有益效应，包括断奶体重增加、腹泻病减少、以及胃肠道中大肠杆菌(E.coli)和梭菌属(Clostridium)水平降低。(Baker等人，2013；Maruta等人，1996)。来自芽孢杆菌益生菌的这些效应类似于施用促进生长的抗生素的益处，并且已报道芽孢杆菌与补充抗生素的饲料类似地改善仔猪的生长性能(Hu等人，2014)。
[0013] 文献中存在一些实例，报告了将基于酵母的制品与芽孢杆菌益生菌的组合饲喂给牲畜和家禽的效应。将酶水解酵母制品和枯草芽孢杆菌(Bacillus sublilis)益生菌单独地和组合地喂饲肉鸡，该研究得出结论，尽管这种组合的效应可以认为是累加的，但没有观察到响应这种特定的酵母-芽孢杆菌组合的协同关系(Gomez等人，2012)。一项评价活酵母和芽孢杆菌菌株组合饲喂给育肥仔猪的研究发现，酵母/芽孢杆菌组合并未比单独饲喂芽孢杆菌菌株有益处(Giang等人，2011)。活酵母、即酿酒酵母、真菌、即米曲霉、和细菌菌株(嗜酸乳芽孢杆菌(Lactobacillus acidophilus)和枯草芽孢杆菌)的组合饲喂给断奶仔猪，与饲喂未经处理的对照饲粮的仔猪相比改善了生长性能，但没有评价所述组合的单个组分的效应(Choi等人，2011)。另一项评价芽孢杆菌益生菌与活性干酵母制品组合的研究没有报告当饲喂给断奶仔猪时的生长性能比饲喂单个组分时观察到的生长性能有任何额外的改善(Barker等人，2003)。此外，活性酵母与枯草芽孢杆菌和地衣芽孢芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)组合益生菌联合，与单独的酵母或芽孢杆菌组合饲喂给断奶仔猪时相比，没有改善生长性能或养分消化率(Min等人，2003)。这些数据提示，一些酵母制品(无论是活菌株还是非活菌株)与基于芽孢杆菌的益生菌组合，当饲喂给仔猪时，与各自单独饲喂所观察到的益处相比，没有提供额外的益处。
[0014] 抗生素生长促进剂在猪的生产中被广泛用于控制健康挑战、提高加瘦肉组织增重、以及改善饲料利用效率。但是，随着2017年《兽医饲料指令》(Veterinary Feed Directive)的实施，抗生素技术的使用将很快变得不那么普遍，从而限制并积极规范了牲畜和家禽饲粮中使用抗生素的用途。养猪者想要有效的抗生素替代品，其对他们的生产效率提供的益处与使用亚治疗量抗生素相似。本论文概述的酵母和芽孢杆菌益生菌的效应提供了一些与促进生长的抗生素相同的益处，虽然往往程度较低且一致性较低。在不使用亚治疗量抗生素的情况下，养猪业需要替代技术以在所有的猪生长生产阶段中管理其畜群健康和生产效率。最好是，这种抗生素替代品将易于在农场上实施，并从出生到上市对畜群健康和猪肉生产提供多重益处。发明内容
[0015] 本发明旨在解决一个或多个上述问题。根据本发明的一个实施方式，本公开涉及一种组合物，其包含一种或多种选自枯草芽孢杆菌1104和枯草芽孢杆菌2084的芽孢杆菌菌株的生物纯培养物；和配方酵母制品。(登录号：ABS 1104NRRL B-67258和BS2084 NRRL B-50013)。用于此处时，所述配方酵母制品可包含占总配方酵母制品重量的约25％-80％的酿酒酵母提取物、占总配方酵母制品重量的约5％-40％的水解酵母、占总配方酵母制品重量的约5％-50％的酵母培养物。所述配方酵母也可以包含占总配方酵母制品重量的约5％-
50％的石灰石。
50％的石灰石。
[0016] 在一个实施方式中，本公开涉及一种组合物，其具有一种或多种选自枯草芽孢杆菌1104和枯草芽孢杆菌2084的芽孢杆菌菌株的生物纯培养物。
[0017] 在一个实施方式中，本公开涉及一种组合物，其具有一种或多种选自枯草芽孢杆菌1104和枯草芽孢杆菌2084的芽孢杆菌菌株的分离生物纯培养物。
[0018] 在一个实施方式中，本公开涉及一种酿酒酵母制品组合物，其具有酿酒酵母提取物、水解酿酒酵母和酿酒酵母培养物中的一种或多种。
[0019] 在一个实施方式中，本公开涉及一种组合物，其具有一种或多种选自枯草芽孢杆菌1104和枯草芽孢杆菌2084的芽孢杆菌菌株的生物纯培养物；酿酒酵母制品。
[0020] 在一个实施方式中，所述酿酒酵母制品可包括酿酒酵母提取物、水解酿酒酵母和酿酒酵母培养物中的一种或多种。
[0021] 在一个实施方式中，所述酿酒酵母制品可含有25重量％和80重量％之间的酿酒酵母提取物、5重量％和40重量％之间的水解酿酒酵母、以及5重量％和50重量％之间的酿酒酵母培养物。
[0022] 在一个实施方式中，该复合物可以至少部分包含直接饲喂的微生物。在一个实施方式中，所述组合物(compositing)也可包括选自乳清、麦芽糊精、蔗糖、葡萄糖、石灰石、稻壳和硅铝酸钠(sodium silica aluminate)中的至少一种的载体。
[0023] 在一个实施方式中，所述组合物也可以包括防腐剂。
[0024] 在一个实施方式中，所述组合物也可以包括动物饲料(feed)。
[0025] 在一个实施方式中，所述组合物也可以包括一定量的饲料(feedstuff)。
[0026] 在一个实施方式中，动物饲料中所述组合物具有的一种或多种芽孢杆菌菌株生物纯培养物在所述组合物中的浓度在约1x 10e4和1x 10e9 CFU/克饲料之间。
[0027] 在一个实施方式中，动物饲料中的所述组合物被动物消耗，并且所得到的被引入到所述动物中的一种或多种芽孢杆菌菌株的生物纯培养物的浓度在约1x 10e5和1x 10e11 CFU/动物/天之间的范围内。
[0028] 在一个实施方式中，本公开涉及具有一种或多种选自枯草芽孢杆菌1104和枯草芽孢杆菌2084的芽孢杆菌菌株的生物纯培养物的组合物用于增加猪的性能。
[0029] 在一个实施方式中，本公开涉及具有一种或多种选自枯草芽孢杆菌1104和枯草芽孢杆菌2084的芽孢杆菌菌株的生物纯培养物的组合物用于增加猪的性能。
[0030] 在一个实施方式中，本公开涉及一种改善动物的免疫系统功能的方法，所述方法包括向所述动物施用有效量的本文所述的组合物。
[0031] 在一个实施方式中，所述改善免疫系统功能的方法是改善已施用有效量的本文所述组合物的猪的免疫系统功能的方法。
[0032] 在一个实施方式中，所述改善免疫系统功能的方法是改善已施用有效量的本文所述组合物的母猪的后代的免疫系统功能的方法。
[0033] 在一个实施方式中，本公开涉及一种改善动物的后代的免疫系统功能的方法，所述方法包括向所述动物施用有效量的本文所述的组合物。
[0034] 在一个实施方式中，本公开涉及减轻动物的炎症的方法，所述方法包括向动物施用有效量的本文所述的组合物。
[0035] 在一个实施方式中，本公开涉及减轻动物的后代的炎症的方法，所述方法包括向所述动物施用有效量的本文所述的组合物。
[0036] 在一个实施方式中，本公开涉及一种改善动物群的生存力的方法，所述方法包括向所述动物群施用有效量的本文所述的组合物。
[0037] 在一个实施方式中，本公开涉及一种改善动物群的后代群的生存力的方法，所述方法包括向所述动物群施用有效量的本文所述的组合物。
[0038] 在一个实施方式中，本公开涉及一种降低动物群的死亡率的方法，所述方法包括向所述动物群施用有效量的本文所述的组合物。
[0039] 在一个实施方式中，本公开涉及一种降低动物群的后代群的死亡率的方法，所述方法包括向所述动物群施用有效量的本文所述的组合物。
[0040] 在一个实施方式中，本公开涉及增加动物的干扰素-γ的方法，所述方法包括向动物施用有效量的本文所述的组合物。
[0041] 在一个实施方式中，本公开涉及增加动物的后代的干扰素-γ的方法，所述方法包括向所述动物施用有效量的本文所述的组合物。
[0042] 在一个实施方式中，本公开涉及增加母猪所生仔猪的体重的方法，所述方法包括向所述母猪施用有效量的本文所述的组合物。
[0043] 在一个实施方式中，本公开涉及一种提供动物肠道中减少的病原菌计数的方法，所述方法包括向所述动物施用有效量的本文所述的组合物。
[0045] 图1.显示粪便微生物生态数据的主要组分分析图，所述分析比较了饲喂下列各项的妊娠母猪：1)对照，基础饲粮；2)枯草芽孢杆菌双菌株直接饲喂微生物(DFM；枯草芽孢杆菌ABS1104 NRRL B-67258；枯草芽孢杆菌BS2084 NRRL B-50013)；3)含有酵母提取物、水解酵母和酵母培养物(酵母)的配方酵母；或4)芽孢杆菌组合+配方酵母(Y+DFM)。
[0046] 图2.显示粪便微生物生态数据的主要组分分析图，所述分析比较了饲喂下列各项的哺乳母猪：1)对照，基础饲粮；2)枯草芽孢杆菌双菌株组合(ABS1104 NRRL B-67258；BS2084 NRRL B-50013)；3)含有酵母提取物、水解酵母和酵母培养物(酵母)的配方酵母；或
4)芽孢杆菌组合+配方酵母(Y+DFM)。
4)芽孢杆菌组合+配方酵母(Y+DFM)。
[0047] 图3.显示粪便微生物生态数据的主要组分分析图，所述分析比较了产自饲喂下列各项的母猪的5日龄乳猪：1)对照，基础饲粮；2)枯草芽孢杆菌双菌株直接饲喂微生物(DFM；枯草芽孢杆菌ABS1104 NRRL B-67258；枯草芽孢杆菌BS2084 NRRL B-50013)；3)含有酵母提取物、水解酵母和酵母培养物(酵母)的配方酵母；或4)芽孢杆菌组合+配方酵母(Y+DFM)。
[0048] 图4.显示粪便微生物生态数据的主要组分分析图，所述分析比较了产自饲喂下列各项的母猪的18日龄乳猪：1)对照，基础饲粮；2)枯草芽孢杆菌双菌株直接饲喂微生物(DFM；枯草芽孢杆菌ABS1104 NRRL B-67258；枯草芽孢杆菌BS2084 NRRL B-50013)；3)含有酵母提取物、水解酵母和酵母培养物(酵母)的配方酵母；或4)芽孢杆菌组合+配方酵母(Y+DFM)。
[0049] 图5.显示粪便微生物生态数据的主要组分分析图，所述分析比较了饲喂下列各项的母猪所生的24日龄断奶幼猪：1)对照，基础饲粮；2)枯草芽孢杆菌双菌株直接饲喂微生物(DFM；枯草芽孢杆菌ABS1104 NRRL B-67258；枯草芽孢杆菌BS2084 NRRL B-50013)；3)含有酵母提取物、水解酵母和酵母培养物(酵母)的配方酵母；或4)芽孢杆菌组合+配方酵母(Y+DFM)。
[0050] 图6.显示粪便微生物生态数据的主要组分分析图，所述分析比较了饲喂下列各项的母猪所生的35日龄断奶幼猪：1)对照，基础饲粮；2)枯草芽孢杆菌双菌株直接饲喂微生物(DFM；枯草芽孢杆菌ABS1104 NRRL B-67258；枯草芽孢杆菌BS2084 NRRL B-50013)；3)含有酵母提取物、水解酵母和酵母培养物(酵母)的配方酵母；或4)芽孢杆菌组合+配方酵母(Y+DFM)。
[0051] 在详细解释本发明的实施方式之前，应当理解，本发明的应用不限于在以下描述中阐述或在附图中示出的结构细节和组分安排。本发明能够有其他实施方式或以各种方式实践和实行。还有，应理解在本文中使用的用语和术语是为了描述而不应该被认为是限制。
具体实施方式
[0052] 除非另有定义，本文中使用的所有技术和科学术语所具有的含义与本公开所属领域的普通技术人员通常理解的相同。Singleton等人，《微生物学和分子生物学词典》(DICTIONARY OF MICROBIOLOGY AND MOLECULAR BIOLOGY)，第20版，John Wiley and Sons，New York(1994)，和Hale&Marham，《哈珀·柯林斯生物学词典》(THE HARPER COLLINS DICTIONARY OF BIOLOGY)，Harper Perennial，N.Y.(1991)，为技术人员提供了本公开中使用的许多术语的通用词典。
[0053] 本公开不受本文中公开的示例性方法和材料限制，并且与本文所述的相似或等效的任何方法和材料均可用于实践或检验本公开的实施方式。数值范围包括限定该范围的数字在内。
[0055] 应注意，用于说明书和所附权利要求中时，没有数量指示的单数形式包括复数指示物，除非上下文另有明确规定。
[0056] 本公开中的数值范围是近似的，因此，除非另外指出，否则可以包括该范围之外的值。数值范围包括从上限到下限值的所有值并包括上下限值在内，以一个单位为增量，条件是任何较低值和任何较高值之间有至少两个单位的间隔。举例来说，如果一种组成、物理或其他性质，例如分子量、熔融指数、温度等，是从100到1,000，则意欲所有单个值，例如100、101、102等，以及子范围，例如100到144、155到170、197到200等，均被明确列出。对于含有小于1的值或含有大于1的分数(例如1.1、1.5等)的范围，酌情将一个单位视为0.0001、0.001、
0.01或0.1。对于含有小于十的单个位数数字的范围(例如1至5)，通常将一个单位视为0.1。
这些仅是具体意图的示例，并且所列举的最低值和最高值之间的数值的所有可能组合将被认为在本申请中明确陈述。在本公开内容中提供了混合物中组分的相对量等的数值范围，以及方法中列举的各种温度和其他参数范围。
0.01或0.1。对于含有小于十的单个位数数字的范围(例如1至5)，通常将一个单位视为0.1。
这些仅是具体意图的示例，并且所列举的最低值和最高值之间的数值的所有可能组合将被认为在本申请中明确陈述。在本公开内容中提供了混合物中组分的相对量等的数值范围，以及方法中列举的各种温度和其他参数范围。
[0057] 用于本文中时，“施用”是指将所述菌株、所述配方酵母、和/或其组合引入环境的动作。
[0058] 用于本文中时，术语“动物”包括但不限于人类、哺乳动物、两栖动物、鸟类、爬行动物、猪、奶牛、牛、山羊、马、绵羊、家禽、以及在农场或牧场喂养或饲养的其他动物、绵羊、大角绵羊、水牛、羚羊、公牛、驴、骡子、鹿、麋鹿、北美驯鹿、水牛、骆驼、美洲驼、羊驼、兔、小鼠、大鼠、豚鼠、仓鼠、雪貂、狗、猫和其他宠物、灵长类动物、猴子、猿和大猩猩。在一些实施方式中，动物是猪，包括但不限于母猪、乳猪和育成猪。
[0059] “至少一个菌株”是指单个菌株，还有包含至少两个细菌菌株的菌株混合物。“至少两个菌株的混合物”是指两个、三个、四个、五个、六个或甚至更多个菌株的混合物。在菌株混合物的一些实施方式中，比例可以从1％至99％不等。在某些实施方式中，用于所述混合物中的菌株的比例为至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、或95％。菌株混合物的其他实施方式是从25％至
75％。菌株混合物的另外的实施方式是每个菌株为大约50％。当混合物包含多于两个菌株时，菌株可以在所述混合物中以基本上相等的比例或以不同的比例存在。
75％。菌株混合物的另外的实施方式是每个菌株为大约50％。当混合物包含多于两个菌株时，菌株可以在所述混合物中以基本上相等的比例或以不同的比例存在。
[0060] 用于本文中时，术语“饲料”是指商业饲料。饲料可以由各种原料和添加剂掺合而成。这些掺合物根据目标动物的具体要求配制。
[0061] 用于本文中时，“有效量”是指用于改善动物性能的菌株、配方酵母和/或其组合的量。性能的改善可以如本文所述或通过本领域已知的其他方法来测量。有效量可以通过提供自由取食含有所述菌株、所述配方酵母和/或其组合的饲料而施用于动物。所述菌株、所述配方酵母和/或其组合也可以分一剂或多剂施用。
[0062] 用于本文中时，术语“饲料(feed)”在本文中与“饲料(feedstuff)”同义。
[0063] 用于本文中时，术语“饲料组分”是指饲料的全部或一部分。饲料的一部分可以是指饲料的一种组成成分或饲料的多于一种、例如2或3或4种组成成分。术语“饲料组分”包括预混物或预混物组成成分。
[0064] 用于本文中时，“性能”是指通过一个或多个以下参数衡量的动物、例如猪或家禽的生产性：腹泻，死亡率，产仔猪数，活产，初生窝重，生存力，免疫系统功能，炎症。本文所使用的“性能改善”或“改善的性能”是指在性能定义下列出的至少一个参数的改善。
[0065] 用于本文中时，术语“蛋白质”包括蛋白质、多肽和肽。
[0066] 在一个实施方式中，本公开涉及一种或多种细菌菌株。在又一个实施方式中，本公开涉及包含一种或多种细菌菌株的组合物。所述细菌菌株可以选自枯草芽孢杆菌1104和枯草芽孢杆菌2084(根据布达佩斯条约(Budapest Treaty)进行保藏并分别指定登录号为ABS1104 NRRL B-67258和BS2084 NRRL B-50013)。在又一个实施方式中，本公开涉及包含配方酵母的组合物。所述配方酵母可包含占总配方酵母重量的约25％-80％的酿酒酵母提取物、占总配方酵母重量的约5％-40％的水解酵母、占总配方酵母重量的约5％-50％的酵母培养物的组合。所述配方酵母也可以包含占总配方酵母制品重量的约5％-50％的石灰石。所述组合物可以是液体、混合物、固体、粉末、溶液、分散体、冻干物、冷冻干燥物或其任何组合。
[0067] 在一个实施方式中，所述组合物是饲料添加剂。在一个实施方式中，可以如本文所述调节组合物的浓度以施用于所需的动物阶段。在一个实施方式中，所述动物是仔猪。
[0068] 在一个实施方式中，可以将一种或多种载体或其他成分添加到如本文公开的组合物中。所述组合物可以按各种物理形式例如追施物(top dress)、水溶性浓缩物、凝胶或明胶胶囊施用。添加剂可以包括但不限于生长底物、酶、糖、碳水化合物、提取物和生长促进成分。
[0069] 所述芽孢杆菌菌株可以通过在液体营养肉汤中生长来发酵所述细菌菌株而产生。在至少一个实施方式中，所述芽孢杆菌菌株生长到形成最高数量的孢子的水平。在非限制性示例中，可通过放大种子培养物的规模来开始发酵。这涉及将所述培养物反复和无菌地转移到越来越大的体积中以作为发酵的接种物，这是在大型不锈钢发酵罐内在含有最佳生长所需的蛋白质、碳水化合物和矿物质的培养基中进行的。非限制性的示例性介质是TSB。
将接种物添加到发酵容器后，控制温度和搅拌以允许最大生长。一旦培养物达到最大种群密度，就通过从发酵培养基中分离细胞来收获培养物。这通常通过离心来完成。
将接种物添加到发酵容器后，控制温度和搅拌以允许最大生长。一旦培养物达到最大种群密度，就通过从发酵培养基中分离细胞来收获培养物。这通常通过离心来完成。
[0070] 在一个实施方式中，为了制备芽孢杆菌菌株，将各芽孢杆菌菌株发酵到5x 103CFU/ml至约4x 1012CFU/ml水平。通过离心收获细菌，并除去上清液。在一些实施方式中，细菌是细菌沉淀团。在至少一些实施方式中，将细菌沉淀团冷冻干燥并与载体混合。菌株也可以在有或没有防腐剂下、并以浓缩、非浓缩或稀释的形式使用。
[0071] 然后可以确定培养物的计数。CFU或集落形成单位是从标准微生物铺板方法产生的样品的活细胞计数。
[0072] 该术语源自于以下事实：单个细胞在铺板在适当的培养基上时会生长，并在琼脂培养基中成为活集落。由于多个细胞可以产生一个可见的集落，因此术语集落形成单位是比细胞数更有用的单位量度。
[0073] 在另一个实施方式中，本公开涉及可以用作饲料或用于制备饲料的饲料添加剂组合物。取决于用途和/或应用方式和/或施用方式，所述饲料可以是溶液形式或作为固体。当用作饲料或用于制备饲料、例如功能性饲料时，所述饲料添加剂组合物可以结合以下一种或多种使用：营养上可接受的载体，营养上可接受的稀释剂，营养上可接受的赋形剂，营养上可接受的佐剂，营养活性成分。在一个实施方式中，本文公开的饲料添加剂组合物与饲料组分混合以形成饲料。在一个实施方式中，所述饲料可以是复合饲料，或其预混物。在一个实施方式中，本文公开的饲料添加剂组合物可以与复合饲料、复合饲料组分或复合饲料的预混物混合。
[0074] 复合饲料可以是提供所有日常需要的营养素的全价饲料、提供一部分日粮(蛋白质，能量)的浓缩物、或仅提供附加微量营养素例如矿物质和维生素的补充物。复合饲料中使用的主要成分是饲料谷物，其包括玉米、大豆、高粱、燕麦和大麦。本文中提到的预混物可以是由微量成分组成的组合物，所述微量成分例如维生素、矿物质、化学防腐剂、抗生素、发酵产品和其他必要成分。预混合物通常是适合掺入商业日粮的组合物。
[0075] 在一个实施方式中，本文所公开的饲料可包含一种或多种选自以下的饲料原料：谷物，例如小粒谷类作物(例如小麦、大麦、黑麦、燕麦及其组合)和/或大粒谷类作物例如玉米或高粱；谷物的副产物，例如玉米面筋粉、酒糟、麦麸、粗小麦粉、次小麦粉、米糠、稻壳、燕麦壳、棕榈仁和柑桔渣；从诸如大豆、向日葵、花生、羽扇豆、豌豆、蚕豆、棉花、低芥酸菜籽、鱼粉、干血浆蛋白质、肉和骨粉、马铃薯蛋白、乳清、干椰子肉、芝麻等来源获得的蛋白质；从植物和动物来源获得的油和脂肪；以及矿物质和维生素。
[0076] 在又一个实施方式，饲料可包含至少一种高纤维饲料原料和/或所述至少一种高纤维饲料原料的至少一种副产物，以提供高纤维饲料。高纤维饲料原料的实例包括：小麦，大麦，黑麦，燕麦，谷物副产物例如玉米面筋粉、酒糟、麦麸、粗小麦粉、次小麦粉、米糠、稻壳、燕麦壳、棕榈仁和柑桔渣。一些蛋白质来源也可被视为高纤维：从诸如向日葵、羽扇豆、蚕豆和棉花等来源获得的蛋白质。
[0077] 在又一个实施方式中，所述饲料可以是以下一种或多种：复合饲料和预混物，包括粒料、作物或作物残渣：玉米，大豆，高粱，燕麦，大麦，干椰子肉，禾秆，谷壳，甜菜废料；鱼粉；鲜切草和其他饲用植物；肉骨粉；糖蜜；油饼粕和压榨饼；寡糖；储存的饲用植物：干草和青贮饲料；海藻；种子和谷物，完整的或通过粉碎、碾碎等制备；发芽的谷物和豆类；酵母提取物。
[0078] 在一个实施方式中，将本文公开的组合物与饲料混合。或者，所述组合物可以包含在饲料的乳液或原料成分中。
[0079] 在一个实施方式中，本公开涉及增加动物的性能指标的方法。在另一个实施方式中，本公开涉及如上所述的提高仔猪的性能指标的方法。
[0080] 在有或没有饲料的任何时候都可以施用本公开的组合物。但是，如本文所述，一种优选的施用是与饲料一起。
[0081] 因此，在至少一些实施方式中，有效量的本公开组合物通过补充旨在用于动物的饲料而在动物中施用。用于本文中时，“补充”是指将有效量的本文提供的组合物掺入动物饲料中。这样，动物将在饲喂期间摄取本文提供的组合物。
[0082] 实施例
[0083] 提供以下实施例仅用于说明目的。实施例包含在本文中仅为了帮助更全面地理解当前描述的发明。实施例不以任何方式限制本文描述或要求保护的本发明的范围。
[0084] 实施例1
[0085] 酵母和芽孢杆菌组合施用于母猪改善性能、减少病原体负荷、并调制母猪及其后代的免疫应答
[0086] 目的
[0087] 母猪在整个妊娠和哺乳阶段期间饲喂配方酵母和芽孢杆菌组合制品，以确定对生殖性能的影响。在其后代中测量后续性能，以确定在妊娠和哺乳期间的所述饲料处理是否对仔猪的性能和生存力有任何影响。
[0088] 动物和实验饲粮
[0089] 总共500只母猪在交配后3天被确定用于本研究。在实验的第一天，将每个亚组随机分配到四个处理组之一，并基于胎次分区组。处理包括1)对照，基础饲粮；2)枯草芽孢杆菌双菌株组合(ABS1104NRRL B-67258；BS2084 NRRL B-50013)；3)配制成含有酵母提取物、水解酵母和酵母培养物的酵母组合；或4)芽孢杆菌组合+配方酵母。处理2、3和4作为对照基础饲粮(表1)的追施物应用。断奶之后，饲喂对照、枯草芽孢杆菌双菌株组合组合、配方酵母、或芽孢杆菌组合+配方酵母饲粮的母猪所产的总共1,100只混合性别的断奶仔猪饲喂标准饲粮，以确定所述饲喂给母猪的处理对断奶后后代性能是否有影响。
[0090] 实验设计，程序，和数据收集(母猪)
[0091] 动物圈养
[0092] 母猪在整个妊娠期，基于它们各自的体况记分，每天通过饲料/水槽饲喂两次。随意饮水。在大约妊娠第112天，将母猪移至产仔猪舍，并随机放在产圈中。饲粮从妊娠饲粮改为哺乳饲粮，在整个哺乳期不加限制地饲喂。
[0093] 试验饲粮
[0094] 基础饲粮是标准的妊娠和哺乳饲粮(表2)。配方酵母和芽孢杆菌通过追施递送给母猪。在妊娠期间，每天早上通过将酵母、芽孢杆菌或两者按规定的比率滴入有日粮的饲料槽中进行追施。注意确保直到最后一只母猪吃完她的日粮后才提供水。
[0095] 产仔后和在整个哺乳期中，每天以对哺乳规定的比率进行酵母、芽孢杆菌或两者的追施，直至断奶。在断奶当天，监测母猪以确定断奶至再配种间隔。
[0096] 数据收集
[0097] 在(1)母猪转移到产仔猪舍的当天、和(2)断奶时测量个体母猪体重。所述数据用于使用下式计算哺乳期期间的体重减轻：母猪体重减轻＝Wean-(PRE-(LW+LW/5.5))，其中Wean＝断奶时的母猪体重；PRE＝母猪产仔前体重；LW＝窝重；LW/5.5＝估算胎盘重量(Fahmy和Bernard，1971)。记录哺乳天数和从断奶到发情的天数。每窝记录出生乳猪数(活的和死的)、个体出生体重(活的和死的)、个体断奶体重、和哺乳期期间死去的乳猪数量。出生后24小时内允许交叉寄养和去除不健壮的仔猪，并且只允许在处理内或非检验的窝中进行。
[0098] 从每种处理中选择了25只取样母猪，并在妊娠结束时(第112-114天)进入产仔猪舍之前和哺乳结束时(第17-19天)收集粪便样品用于进行大肠杆菌和梭菌属的测量和计数。
[0099] 在妊娠和哺乳结束时从相同的取样母猪收集母猪血样，用于分析血尿素氮(BUN)、非酯化脂肪酸(NEFA)和葡萄糖。从每只取样母猪的一窝仔猪中，收集3至7日龄和16至20日龄(断奶时)的粪便样品，用于乳猪中的相同微生物计数。从每窝2只仔猪(一只小母猪和一只小公猪)收集2至4日龄以及断奶时的乳猪血样，进行与母猪相同的分析。从每只母猪和乳猪获得的血样亚组收集血清进行免疫测量，包括α-1-酸性糖蛋白、干扰素-γ和肿瘤坏死因子-α。
[0100] 试验设计&程序(保育)
[0101] 动物圈养
[0102] 总共1,100只混合性别断奶仔猪，其占从母猪阶段断奶的乳猪总数的22.8％，被转移到保育研究中心，以评价断奶后的性能。在到达时，将具有相同颜色的耳标的仔猪分组并随机放置在44个圈中，每圈19-27只(d 0)。每个猪圈内的小公猪和小母猪的数量是平衡的。检验外的猪(后备和/或没有耳标的猪)被移至非检验室。
[0103] 饲粮处理
[0104] 在第0天，将仔猪按圈称重。圈按母猪的饲粮、初始体重和分配日期进行分级和分区组。所有圈在所有阶段均接受共同的饲粮以评价断奶后的生存力。这导致保育阶段一种基础饲粮以及从母猪阶段开始总共四种处理(表3)。
[0105] 实验程序
[0106] 断奶后立即以4阶段饲喂程序(表4)进行51天的保育阶段。饲料通过系统提供，该系统允许按圈收集采食量数据。表5显示了在保育阶段的每个阶段期间饲喂的基础饲粮的组成。
[0107] 数据收集
[0108] 在断奶后第3天和第14天在两个时间点从各圈收集粪便样品用于微生物计数。从各圈选出两个小公猪并加标签以供将来采样，并在第0天、第2阶段结束时和第4阶段结束时在每个时间点按个体体重收集血液用于免疫分析。
[0109] 统计分析
[0110] 通过SAS的MIXED程序，使用ANOVA来分析数据。对于母猪阶段，以母猪/所产仔为实验单元。统计模式包括饲粮处理的固定效应和胎次的协变量。对于保育阶段，圈作为实验单元。统计模式包括母猪处理的固定效应和区组的随机效应。最初的圈体重(“BW”)用作保育阶段参数分析的协变量。使用SAS的Tukey调整选项进行处理之间的多重比较。所有结果均报告为最小二乘平均值。选择的显著性水平为α＝0.05。如果P<0.05，则认为处理效应显著，而在0.05≤P≤0.10之间的值被视为统计趋势。
[0111] 结果：
[0112] 母猪所产仔性能(总出生数、总活产数、初生窝重等)不受施用于母猪的处理的影响(表6)。当单独饲喂所述配方酵母制品或所述芽孢杆菌处理时，乳猪断奶体重仅略有改变，但是当所述配方酵母制品和芽孢杆菌处理以组合饲喂给母猪时，观察到1％的增加。饲喂所述芽孢杆菌处理的母猪在产仔前和断奶时均观察到母猪粪便样品中大肠杆菌计数略有减少(分别为-1.3％和-1.9％)，而当给母猪饲喂所述配方酵母制品时，在相同的时间段期间，粪便大肠杆菌计数略有增加(分别为+1.5％和+1.2％；表7)。然而，当所述芽孢杆菌处理和配方酵母制品以组合施用于母猪时，在产仔前和断奶时均观察到母猪粪便大肠杆菌计数的降低高得多(分别为-6.4％和-7.2％；表7)。
[0113] 当所述芽孢杆菌处理或所述配方酵母制品单独饲喂给母猪时，断奶时母猪血清中的急性期蛋白α-1-酸性糖蛋白略有减少(DFM对比配方酵母制品分别为-13.1％对比-14.2％)，然而当将所述芽孢杆菌处理和配方酵母制品组合并施用于母猪时，所述急性期蛋白的减少则明显更多(-48.0％；表8)。当所述芽孢杆菌处理或所述配方酵母制品单独施用于母猪时，其乳猪在断奶时血清中的肿瘤坏死因子-α增加，但在用所述芽孢杆菌处理和配方酵母二者组合处理的母猪的断奶时后代中则减少(-6.8％)(表8)。在单独施用所述芽孢杆菌处理或所述配方酵母制品的母猪所产的乳猪中观察到略有减少(分别为-2.8％和-
9.5％)，然而当两种饲料添加剂以组合饲喂给母猪时，在乳猪中观察到明显更高的减少(-
16.3％)。断奶时，在单独施用所述芽孢杆菌处理或所述配方酵母制品的母猪所产的仔猪中，血清α-1-酸性糖蛋白浓度增加，但在两种饲料添加剂以组合饲喂的母猪所产的仔猪中减少(-6.8％)。这些数据合起来表明，与单独施用母猪相比，将所述芽孢杆菌处理与配方酵母制品组合饲喂母猪，与其任何一个单独施用于母猪相比，明显减少了母猪及其乳猪在幼年与生产相关的炎症。
9.5％)，然而当两种饲料添加剂以组合饲喂给母猪时，在乳猪中观察到明显更高的减少(-
16.3％)。断奶时，在单独施用所述芽孢杆菌处理或所述配方酵母制品的母猪所产的仔猪中，血清α-1-酸性糖蛋白浓度增加，但在两种饲料添加剂以组合饲喂的母猪所产的仔猪中减少(-6.8％)。这些数据合起来表明，与单独施用母猪相比，将所述芽孢杆菌处理与配方酵母制品组合饲喂母猪，与其任何一个单独施用于母猪相比，明显减少了母猪及其乳猪在幼年与生产相关的炎症。
[0114] 此外，与未接受补充的母猪所产的仔猪相比，饲喂所述酵母处理的母猪所产的仔猪在断奶后3天的粪便大肠杆菌浓度降低，而饲喂所述芽孢杆菌处理的母猪所产的仔猪的乳酸菌种群增加(表10)。
[0115] 将所述配方酵母和芽孢杆菌组合施用于妊娠和哺乳期间的母猪，对其后代在断奶后的保育期期间的免疫能力有最大的效应。相对于对照仔猪，饲喂酵母+芽孢杆菌组合的母猪所生的仔猪断奶时，干扰素-δ(IFN-8)增加了180.8％，相比之下，在饲喂芽孢杆菌或酵母处理的母猪所生的仔猪中分别增加了17.1％和50.3％(表11)。同样在断奶时，在饲喂酵母+芽孢杆菌组合所生的仔猪中，肿瘤坏死因子-α(TNF-α)相对于对照仔猪增加了98.5％，相比之下，在饲喂芽孢杆菌的母猪所生的仔猪中仅增加67.2％并且在饲喂酵母的母猪所产的仔猪中降低(-16.6％)。在第2阶段保育期结束时，在饲喂所述酵母+芽孢杆菌组合的母猪所生的仔猪中，TNF-α相对于对照仔猪增加了254.3％，相比之下，在饲喂芽孢杆菌或酵母处理的母猪所生的仔猪中分别增加了61.6％和56.0％。
[0116] 表1.施用于妊娠和哺乳阶段期间的母猪的饲粮处理
[0117]
[0118] 1剂量基于假定妊娠中的母猪的平均采食量为5.0磅/天计算
[0119] 2剂量基于假定哺乳中的母猪的平均采食量为12.0磅/天计算
[0120] 3酵母被配制成含有酵母提取物、水解酵母和酵母培养物
[0121] 4芽孢杆菌益生菌包含50％枯草芽孢杆菌菌株ABS 1104(NRRL B-67258)和50％枯草芽孢杆菌菌株BS2084(NRRL B-50013)，目标为总共3.75×105CFU/克饲料
[0122] 表2.妊娠和哺乳基础饲粮在原样饲喂的基础上的饲粮和养分组成
[0123]
[0124]
[0125] 表3.评价在保育中母猪处理的遗留效应的实验处理
[0126] 处理 母猪饲粮1 保育饲粮2 圈数 仔猪数A 对照 对照 11 270
B 酵母 对照 9 235
C 芽孢杆菌 对照 13 308
D 配方酵母/芽孢杆菌 对照 11 287
B 酵母 对照 9 235
C 芽孢杆菌 对照 13 308
D 配方酵母/芽孢杆菌 对照 11 287
[0127] 1妊娠和哺乳阶段期间施用的母猪饲粮处理在表2中详细描述。
[0128] 2各阶段的保育基础饲粮在表5中描述。
[0129] 表4.保育阶段的饲喂程序
[0130] 保育阶段 饲粮1 饲喂天数1阶段：9-15磅体重 基础 11
2阶段：15-25磅体重 基础 12
3阶段：25-40磅体重 基础 14
4阶段：40-55磅体重 基础 14
2阶段：15-25磅体重 基础 12
3阶段：25-40磅体重 基础 14
4阶段：40-55磅体重 基础 14
[0131] 表5.各保育阶段中饲喂给仔猪的基础饲粮的组成，在原样饲喂的基础上
[0132]
[0133]
[0134]
[0135]
[0136]
[0137]
[0138]
[0139]
[0140] 实施例2
[0141] 给母猪施用配方酵母和芽孢杆菌益生菌改变母猪及其后代的微生物生态
[0142] 将总共500只母猪随机分配到四个处理组之一，并胎次胎次分区组。本研究的详细方法之前在实施例1中描述。简而言之，给母猪施用的处理包括1)对照，基础饲粮；2)枯草芽孢杆菌双菌株直接饲喂微生物(DFM；枯草芽孢杆菌ABS1104 NRRL B-67258；枯草芽孢杆菌BS2084 NRRL B-50013)；3)含有酵母提取物、水解酵母和酵母培养物的配方酵母；或4)芽孢杆菌DFM+配方酵母。从在妊娠结束时和哺乳阶段期间的25只母猪/处理、从母猪所产仔猪的5日龄和18日龄仔猪、以及从断奶后保育阶段期间的24日龄和35日龄仔猪收集粪便样品。从粪便样品中分离微生物DNA，并通过末端限制性片段长度多态性(TRFLP)分析来评估细菌生态。
[0143] 使用MoBio Powersoil DNA分离试剂盒(Mo Bio Laboratories，Carlsbad，CA)，按照制造商的说明，从粪便样品提取DNA。提取的DNA使用Zymo PCR抑制剂清除试剂盒(Zymo Research，Irvine，CA)进一步纯化。对于每个样品，使用标记有6-羧基荧光素(FAM)的通用正向引物27F-YM、和通用反向引物785R，进行PCR扩增反应，以扩增总细菌16S rRNA基因。标记的聚合酶链反应扩增子使用Zymo DNA Clean&ConcentratorTM试剂盒纯化。纯化的细菌DNA扩增子使用限制酶Haelll和Mspl消化。
[0144] 片段检测是在伊利诺伊大学(University of Illinois)的Urbana-Champaign核心DNA测序机构(Urbana-Champaign Core DNA Sequencing Facility)进行的。片段分析使用Genemapper 5(Thermo Fisher Scientific，Waltham，MA)进行。将所生成的峰表格导入BioNumerics 7.1版(Applied Maths，Sint-Martens-Latem Belgium)进行比较分析。在可能的情况下，使用MiCA数据库(爱达荷大学(University of Idaho)，Moscow，ID)对TRFLP峰进行推定鉴别至可能的最低分类水平。使用Canoco 5(Microcomputer Power，Ithaca，NY)进行群落组成的比较并确定可归因于处理的方差的量。
[0145] 主成分分析显示，母猪在妊娠(图1)或哺乳(图2)期间的粪便微生物生态没有差异。表12和表13中，分别对妊娠和哺乳母猪鉴定了指示该群落的代表性微生物成员的末端限制性片段(TRF)。当通过PCA分析时，饲喂酵母+芽孢杆菌DFM处理的母猪所产的5日龄仔猪的微生物生态与饲喂其他三种处理的母猪所产的仔猪不同(P＝0.10)(图3)。5日龄仔猪中存在的几种无法鉴定的TRF(235；81)和被鉴定为肠杆菌(249)、芽孢杆菌(334)、枯草芽孢杆菌(225)和唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)(327)的TRF，它们在酵母+芽孢杆菌处理中的比例与任何其他处理相比差异很大(表14)。饲喂四种处理中任一种的母猪所产的18日龄乳猪均未观察到差异(图4；表15)。从饲喂酵母+芽孢杆菌DFM处理的母猪所生的24日龄断奶保育仔猪收集的粪便样品的微生物生态与饲喂其他三种处理的母猪所生的仔猪不同(P＝0.11)(图5)。在24日龄的断奶后保育仔猪中存在无法鉴定的TRF(276)和被鉴定为梭菌目(clostridiales)(265)和拟杆菌(Bacteroides)(255)的TRF，它们在酵母+芽孢杆菌处理中的比例与其他任何处理相比差异很大(表16)。饲喂酵母处理的母猪所生的35日龄断奶保育仔猪的粪便微生物生态与其他三种处理不同(P＝0.01)(图6)；然而，许多TRF在酵母+芽孢杆菌处理中存在的比例比其他任何处理低得多，例如几个无法鉴定的TRF(81，239，321)、卷曲乳杆菌(Lactobacillus crispatus)(272)和乳杆菌(Lactobacillus sp.)(288)。
[0146] 表12：妊娠母猪的粪便群落中末端限制片段(TRF)基于总峰高的比例，按百分比计，以及这些TRF的推定分类鉴定。
[0147]
[0148] 表13：哺乳母猪的粪便群落中末端限制片段(TRF)基于总峰高的比例，按百分比计，以及这些TRF的推定分类鉴定。
[0149] TRF 鉴定 对照 DEM 酵母 酵母+DEM31 未鉴定 8.2 8.4 11.7 8.1
245 拟杆菌 2.7 1.9 1.2 3.2
272 卷曲乳杆菌 4.0 3.2 3.7 3.1
265 梭菌目 3.6 4.2 3.1 3.5
235 未鉴定 5.5 7.5 6.2 5.4
259 未鉴定 5.2 5.1 4.7 6.8
262 梭菌属 4.0 3.3 3.3 5.1
255 拟杆菌 6.2 4.8 7.6 5.6
317 韦荣氏球菌科 2.8 2.6 3.7 3.4
288 乳杆菌 12.7 7.9 8.3 9.4
61 未鉴定 1.5 1.3 1.5 1.4
276 未鉴定 1.5 1.5 2.3 2.8
221 梭菌属 3.3 3.8 4.7 4.4
81 未鉴定 1.3 3.5 1.3 3.3
249 肠杆菌科 2.1 1.5 1.3 0.5
239 未鉴定 2.0 1.3 1.1 1.7
299 未鉴定 3.6 2.7 3.1 3.4
321 未鉴定 2.9 3.0 3.9 2.7
293 未鉴定 1.7 4.4 4.1 4.3
303 未鉴定 1.1 4.2 2.1 1.8
281 未鉴定 2.1 2.7 1.7 1.7
158 未鉴定 1.1 1.2 0.4 1.3
307 未鉴定 2.0 1.5 1.4 1.3
334 芽孢杆菌 2.4 1.5 1.4 1.0
225 枯草芽孢杆菌 4.7 2.6 1.6 2.9
327 唾液乳杆菌 0.9 1.3 1.0 1.0
次峰 10.8 13.0 13.2 11.3
245 拟杆菌 2.7 1.9 1.2 3.2
272 卷曲乳杆菌 4.0 3.2 3.7 3.1
265 梭菌目 3.6 4.2 3.1 3.5
235 未鉴定 5.5 7.5 6.2 5.4
259 未鉴定 5.2 5.1 4.7 6.8
262 梭菌属 4.0 3.3 3.3 5.1
255 拟杆菌 6.2 4.8 7.6 5.6
317 韦荣氏球菌科 2.8 2.6 3.7 3.4
288 乳杆菌 12.7 7.9 8.3 9.4
61 未鉴定 1.5 1.3 1.5 1.4
276 未鉴定 1.5 1.5 2.3 2.8
221 梭菌属 3.3 3.8 4.7 4.4
81 未鉴定 1.3 3.5 1.3 3.3
249 肠杆菌科 2.1 1.5 1.3 0.5
239 未鉴定 2.0 1.3 1.1 1.7
299 未鉴定 3.6 2.7 3.1 3.4
321 未鉴定 2.9 3.0 3.9 2.7
293 未鉴定 1.7 4.4 4.1 4.3
303 未鉴定 1.1 4.2 2.1 1.8
281 未鉴定 2.1 2.7 1.7 1.7
158 未鉴定 1.1 1.2 0.4 1.3
307 未鉴定 2.0 1.5 1.4 1.3
334 芽孢杆菌 2.4 1.5 1.4 1.0
225 枯草芽孢杆菌 4.7 2.6 1.6 2.9
327 唾液乳杆菌 0.9 1.3 1.0 1.0
次峰 10.8 13.0 13.2 11.3
[0150] 表14：5日龄乳猪的粪便群落中末端限制片段(TRF)基于总峰高的比例，按百分比计，以及这些TRF的推定分类鉴定
[0151]TRF 鉴定 对照 DEM 酵母 酵母+DEM
31 未鉴定 13.8 8.3 19.6 8.6
245 拟杆菌 6.6 4.4 2.8 5.0
272 卷曲乳杆菌 11.0 7.5 11.8 8.7
265 梭菌目 8.5 7.9 3.5 4.6
235 未鉴定 0.2 1.2 0.6 3.8
259 未鉴定 1.0 7.1 1.6 1.6
262 梭菌属 2.2 5.2 6.7 6.5
255 拟杆菌 3.1 3.3 1.8 1.5
317 韦荣氏球菌科 1.5 3.1 2.1 3.2
288 乳杆菌 1.6 0.8 1.2 1.4
61 未鉴定 1.2 2.5 0.6 1.4
276 未鉴定 2.0 5.1 3.7 3.6
221 梭菌属 0.6 0.7 3.8 1.5
81 未鉴定 13.0 9.6 7.8 3.2
249 肠杆菌科 3.3 3.0 6.8 13.5
239 未鉴定 0.0 1.5 2.0 0.8
299 未鉴定 0.6 2.7 0.9 0.9
321 未鉴定 0.9 2.6 1.8 1.1
293 未鉴定 0.2 1.1 0.7 0.5
303 未鉴定 2.4 1.5 0.1 1.0
281 未鉴定 5.8 1.0 1.6 3.9
158 未鉴定 0.9 1.5 0.5 0.6
307 未鉴定 3.5 0.8 1.6 1.5
334 芽孢杆菌 0.4 0.5 0.8 1.9
225 枯草芽孢杆菌 0.1 0.1 0.1 0.4
327 唾液乳杆菌 0.2 0.2 0.7 2.3
次峰 15.4 16.9 14.5 17.0
31 未鉴定 13.8 8.3 19.6 8.6
245 拟杆菌 6.6 4.4 2.8 5.0
272 卷曲乳杆菌 11.0 7.5 11.8 8.7
265 梭菌目 8.5 7.9 3.5 4.6
235 未鉴定 0.2 1.2 0.6 3.8
259 未鉴定 1.0 7.1 1.6 1.6
262 梭菌属 2.2 5.2 6.7 6.5
255 拟杆菌 3.1 3.3 1.8 1.5
317 韦荣氏球菌科 1.5 3.1 2.1 3.2
288 乳杆菌 1.6 0.8 1.2 1.4
61 未鉴定 1.2 2.5 0.6 1.4
276 未鉴定 2.0 5.1 3.7 3.6
221 梭菌属 0.6 0.7 3.8 1.5
81 未鉴定 13.0 9.6 7.8 3.2
249 肠杆菌科 3.3 3.0 6.8 13.5
239 未鉴定 0.0 1.5 2.0 0.8
299 未鉴定 0.6 2.7 0.9 0.9
321 未鉴定 0.9 2.6 1.8 1.1
293 未鉴定 0.2 1.1 0.7 0.5
303 未鉴定 2.4 1.5 0.1 1.0
281 未鉴定 5.8 1.0 1.6 3.9
158 未鉴定 0.9 1.5 0.5 0.6
307 未鉴定 3.5 0.8 1.6 1.5
334 芽孢杆菌 0.4 0.5 0.8 1.9
225 枯草芽孢杆菌 0.1 0.1 0.1 0.4
327 唾液乳杆菌 0.2 0.2 0.7 2.3
次峰 15.4 16.9 14.5 17.0
[0152] 表15：18日龄乳猪的粪便群落中末端限制片段(TRF)基于总峰高的比例，按百分比计，以及这些TRF的推定分类鉴定
[0153]
[0154] 表16：24日龄保育仔猪的粪便群落中末端限制片段(TRF)基于总峰高的比例，按百分比计，以及这些TRF的推定分类鉴定
[0155] TRF 鉴定 对照 DEM 酵母 酵母+DEM31 未鉴定 21.3 17.8 26.7 13.7
245 拟杆菌 0.9 1.1 1.8 1.2
272 卷曲乳杆菌 5.9 7.9 6.7 7.5
265 梭菌目 5.5 5.7 5.1 6.2
235 未鉴定 5.1 8.3 9.2 8.4
259 未鉴定 4.8 6.1 5.5 6.0
262 梭菌属 3.4 2.1 4.4 3.1
255 拟杆菌 3.2 3.8 0.9 5.3
317 韦荣氏球菌科 6.1 11.0 2.8 4.9
288 乳杆菌 0.4 0.7 1.2 0.8
61 未鉴定 1.0 1.4 0.3 1.4
276 未鉴定 5.0 5.7 2.1 1.5
221 梭菌属 0.3 0.4 0.1 0.8
81 未鉴定 1.6 1.7 4.9 3.1
249 肠杆菌科 0.7 1.0 0.8 1.1
239 未鉴定 6.2 0.6 1.8 2.7
299 未鉴定 2.1 1.4 1.2 2.3
321 未鉴定 0.5 1.4 3.5 0.6
293 未鉴定 0.5 0.2 1.8 0.4
303 未鉴定 3.3 3.1 2.8 2.3
281 未鉴定 1.5 1.0 0.2 0.7
158 未鉴定 0.0 0.2 0.1 0.0
307 未鉴定 0.7 0.9 0.8 0.7
334 芽孢杆菌 0.5 0.3 0.1 0.2
225 枯草芽孢杆菌 0.0 0.2 0.0 0.1
327 唾液乳杆菌 0.9 0.2 0.1 0.6
次峰 18.6 15.6 15.1 24.2
245 拟杆菌 0.9 1.1 1.8 1.2
272 卷曲乳杆菌 5.9 7.9 6.7 7.5
265 梭菌目 5.5 5.7 5.1 6.2
235 未鉴定 5.1 8.3 9.2 8.4
259 未鉴定 4.8 6.1 5.5 6.0
262 梭菌属 3.4 2.1 4.4 3.1
255 拟杆菌 3.2 3.8 0.9 5.3
317 韦荣氏球菌科 6.1 11.0 2.8 4.9
288 乳杆菌 0.4 0.7 1.2 0.8
61 未鉴定 1.0 1.4 0.3 1.4
276 未鉴定 5.0 5.7 2.1 1.5
221 梭菌属 0.3 0.4 0.1 0.8
81 未鉴定 1.6 1.7 4.9 3.1
249 肠杆菌科 0.7 1.0 0.8 1.1
239 未鉴定 6.2 0.6 1.8 2.7
299 未鉴定 2.1 1.4 1.2 2.3
321 未鉴定 0.5 1.4 3.5 0.6
293 未鉴定 0.5 0.2 1.8 0.4
303 未鉴定 3.3 3.1 2.8 2.3
281 未鉴定 1.5 1.0 0.2 0.7
158 未鉴定 0.0 0.2 0.1 0.0
307 未鉴定 0.7 0.9 0.8 0.7
334 芽孢杆菌 0.5 0.3 0.1 0.2
225 枯草芽孢杆菌 0.0 0.2 0.0 0.1
327 唾液乳杆菌 0.9 0.2 0.1 0.6
次峰 18.6 15.6 15.1 24.2
[0156] 表17：35日龄保育仔猪的粪便群落中末端限制片段(TRF)基于总峰高的比例，按百分比计，以及这些TRF的推定分类鉴定
[0157] TRF 鉴定 对照 DEM 酵母 酵母+DEM31 未鉴定 1.0 1.7 1.1 1.8
245 拟杆菌 22.4 16.3 33.7 20.6
272 卷曲乳杆菌 6.1 3.3 4.2 2.8
265 梭菌目 7.1 10.7 6.9 9.7
235 未鉴定 3.0 1.5 2.6 1.3
259 未鉴定 2.2 4.3 2.1 2.5
262 梭菌属 2.6 3.8 1.8 3.4
255 拟杆菌 0.9 1.4 0.7 1.4
317 韦荣氏球菌科 2.5 2.1 1.8 1.9
288 乳杆菌 1.2 1.3 1.1 0.9
61 未鉴定 12.5 13.9 13.0 12.5
276 未鉴定 5.9 4.7 5.7 6.5
221 梭菌属 1.0 3.0 1.9 2.1
81 未鉴定 2.0 1.5 0.8 0.3
249 肠杆菌科 1.8 5.6 0.0 5.7
239 未鉴定 1.9 2.8 1.2 0.6
299 未鉴定 0.9 1.4 1.3 1.2
321 未鉴定 3.7 2.1 2.2 1.7
293 未鉴定 1.3 0.6 0.5 0.4
303 未鉴定 1.3 0.6 0.7 1.3
281 未鉴定 0.3 0.0 0.1 0.0
158 未鉴定 0.6 1.4 0.6 1.0
307 未鉴定 2.0 1.6 2.2 1.5
334 芽孢杆菌 2.1 1.9 2.9 3.1
225 枯草芽孢杆菌 0.3 0.2 1.0 0.8
327 唾液乳杆菌 1.9 2.2 2.9 2.1
次峰 11.6 10.2 6.8 12.8
245 拟杆菌 22.4 16.3 33.7 20.6
272 卷曲乳杆菌 6.1 3.3 4.2 2.8
265 梭菌目 7.1 10.7 6.9 9.7
235 未鉴定 3.0 1.5 2.6 1.3
259 未鉴定 2.2 4.3 2.1 2.5
262 梭菌属 2.6 3.8 1.8 3.4
255 拟杆菌 0.9 1.4 0.7 1.4
317 韦荣氏球菌科 2.5 2.1 1.8 1.9
288 乳杆菌 1.2 1.3 1.1 0.9
61 未鉴定 12.5 13.9 13.0 12.5
276 未鉴定 5.9 4.7 5.7 6.5
221 梭菌属 1.0 3.0 1.9 2.1
81 未鉴定 2.0 1.5 0.8 0.3
249 肠杆菌科 1.8 5.6 0.0 5.7
239 未鉴定 1.9 2.8 1.2 0.6
299 未鉴定 0.9 1.4 1.3 1.2
321 未鉴定 3.7 2.1 2.2 1.7
293 未鉴定 1.3 0.6 0.5 0.4
303 未鉴定 1.3 0.6 0.7 1.3
281 未鉴定 0.3 0.0 0.1 0.0
158 未鉴定 0.6 1.4 0.6 1.0
307 未鉴定 2.0 1.6 2.2 1.5
334 芽孢杆菌 2.1 1.9 2.9 3.1
225 枯草芽孢杆菌 0.3 0.2 1.0 0.8
327 唾液乳杆菌 1.9 2.2 2.9 2.1
次峰 11.6 10.2 6.8 12.8
[0159] 各种增添、修改和重新安排被认为在所附权利要求的范围内，权利要求具体指出并清楚要求保护被认为是本发明的主题，并且旨在所附权利要求覆盖所有这样的增添、修改和重新安排。
[0160] 文献目录
[0161] Baker，A.A.，E.Davis，J.D.Spencer，R.Moser，和T.Rehberger.2013.母猪补充基于芽孢杆菌的直接饲喂微生物对其新生乳猪的胃肠道菌群的效应(The effect of a Bacillus-based direct-fed microbial supplemented to sows on the gastrointestinal microbiota of their neonatal piglets).J.Anim.Sci.91：3390-
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[0162] Barker，M.R.，S.S.Dritz，J.C.Nietfeld，和J.E.Minton.2003.BioPlus 2B和Levucell SB对响应鼠伤寒沙门氏菌血清型口服攻击后断奶仔猪生长性能和稀便的效应(Effects of BioPlus 2B and Levucell SB on weanling pig growth performance and fecal shedding in response to oral challenge with Salmonella serovar Typhimuruim).堪萨斯州立大学猪日论文集(Proceedings of the Kansas State
University Swine Day)2003.136-140页.
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[0183] Veum，T.L.，J.Reyes和M.Ellersieck.1995.母猪妊娠和哺乳饲粮补充酵母培养物对一个生育周期中表观养分消化率和生殖性能的效应(Effect of supplemental yeast culture sow gestation and lactation diets on apparent nutrient digestibilities and reproductive performance through one reproductive cycle).J.Anim.Sci.73：1741-1745.
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