促进健康的组合物及制备方法
阅读：907发布：2020-06-01
专利汇可以提供促进健康的组合物及制备方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及健康促进组合物及它们的制备方法的领域。，下面是促进健康的组合物及制备方法专利的具体信息内容。
1.生产对变异链球菌具有特异性结合能力的非活性乳杆菌(Lactobacillus)组合物的方法，所述方法包括以下步骤:
i)将对变异链球菌具有特异性结合能力的乳杆菌或乳杆菌混合物的细胞的悬浮液以
0.5至2℃/分钟的温度变化，从低于40℃的起始温度加热至75至85℃的巴斯德消毒温度，其中特异性结合
a)耐受热处理和/或
b)耐受蛋白酶处理和/或
c)是钙-依赖性的和/或
d)发生在介于4.5及8.5间的pH范围，和/或
e)在唾液存在下发生，
ii)将温热的悬浮液维持于巴斯德消毒温度达20至40分钟的时间，
iii)将维持于步骤ii)的悬浮液以0.5至2℃/分钟的温度变化冷却至低于40℃的最终温度。
2.根据权利要求1的方法，其中乳杆菌细胞选自类干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)或这些的混合物的菌株细胞。
3.根据权利要求2的方法，其中所述乳杆菌细胞选自类干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌，优选具有DSMZ号DSMZ 16667、DSMZ 16668、DSMZ16669、DSMZ 16670、DSMZ 16671、DSMZ
16672及DSMZ 16673中的一种，或其突变体或衍生细胞系，所述突变体或衍生细胞系仍保留对变异链球菌的特异性结合能力。
4.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述乳杆菌细胞具有对变异链球菌血清型c(DSMZ 20523)和/或血清型e(NCTC 10923)和/或血清型F(NCTC 11060)的特异性结合能力。
5.根据前述权利要求中任一项的方法，其中步骤i)的巴斯德消毒温度是从78至
80℃。
6.根据前述权利要求中任一项的方法，其中步骤i)和/或iii)的温度变化是从0.8至1.2℃/分钟。
7.根据前述权利要求中任一项的方法，其中步骤i)的悬浮液的介质包含不超过
10mmol葡萄糖/升。
8.根据前述权利要求中任一项的方法，其进一步包括以下步骤:
(iv)用载体处理步骤iii)中所获得的悬浮液以制备喷雾干燥混合物，所述载体选自碱金属硫酸盐及碱土金属硫酸盐，所选择载体的量使得喷雾干燥悬浮液的干物质含量达到以重量计10至30%，
(v)喷雾干燥步骤iv)中所获得的喷雾干燥混合物。
9.根据权利要求8的方法，其中喷雾干燥是在从180至250℃的用于干燥的喷雾干燥气体的气体进口温度及从70至100℃，优选85℃的来自用于干燥的区域，通常喷雾塔的气体出口温度下，及反应区域中欲干燥的物质的喷雾干燥气体的平均滞留时间从10至60秒，优选从20至40秒下实现。
10.对变异链球菌具有特异性结合能力的乳杆菌组合物，其根据权利要求1-9中任一项的方法能够获得或已获得。
11.用于人体的产品，其中所述产品包含根据权利要求10的乳杆菌组合物。
12.根据权利要求11的产品，其选自食品，包括高档食品产品、饮料产品、半成品、口腔卫生产品、化妆产品及医药产品。
13.根据权利要求10的乳杆菌组合物在制备用于人体的抗生龋性产品中的用途。
14.用于龋预防和/或从人口腔移除变异链球菌的方法，所述方法包括将根据权利要求10的组合物和/或根据权利要求11至12的任一项的产品与人口腔接触的步骤。
促进健康的组合物及制备方法
[0001] 本发明涉及促进健康的产品及其制备方法的领域。
[0002] 变异链球菌(Streptococcus mutans)在龋齿发展中扮演关键作用。细菌将可发酵糖转化为有机酸，并因此产生酸性微环境。有机酸能够使牙釉质去矿物质，并因此造成或促进龋损伤。此外，变异链球菌生成非水溶性葡聚糖基质。此葡聚糖基质会支持蚀斑的发展及黏附以及支持变异链球菌黏附在牙齿表面上。另外，已显示在龋损伤中亦经常发现其它细菌，但总是与变异链球菌一起。因此，目前认为变异链球菌是龋损伤发展所必须。
[0003] 不断需要能够防止龋损伤发展的疗法。在本文中，本发明旨在表明可作用于变异链球菌以避免、停止或减缓龋损伤发展的疗法。本发明亦旨在表明用于此类疗法的制备方法。
[0004] 过去，曾就控制龋损伤测试整个系列疗法，特别地为了避免或至少延缓其出现。本领域技术人员特别地熟悉用于控制龋齿及与龋齿相关微生物的传统化学疗法，如它们用于牙膏和/或漱口剂和/或其它牙齿保健产品中。然而，另外亦尝试通过其它微生物或其产品控制与龋相关的微生物，特别地已尝试减少它们在牙齿上或在口腔中的量，或影响生龋性。此类方法描述于例如WO2006/027265 Al中。然而，缺点在于消费者通常不喜欢或立法者完全禁止口腔保健产品中使用活微生物。此外，活微生物可能因代谢物而影响含有其的产品的口感和/或外观;此影响可能不是用于控制龋损伤的每一种产品所期望的。此外，在设计用于控制龋损伤的产品中的活生物的用途限制所述产品的架存期。
[0005] 因此，多种技术领域中非常普遍尝试使用无代谢活性的微生物(特别地冻干微生物)而不是活微生物。然而，现在的问题是此类微生物在适合它们的条件下(例如当其进入合适的水性介质中时)，可能回复至代谢活性状态。因此，无代谢活性微生物的用途需要严格限制含有它们的产品的可能的组成。
[0006] 因此，已在完全不同技术领域中尝试用已破坏的微生物而不是活的或代谢活性微生物制备产品。因此，例如WO 01/95741 Al显示用于促进肠内平衡的食物，该食物产品包含无活力的乳杆菌(Lactobacillus)。通过热处理，例如通过巴斯德消毒法或杀菌法，能够使乳杆菌无活力。然而，所述文献亦提及由热处理造成的损失微生物的一些健康促进作用的风险，否则所述健康促进作用能够实现。虽然文献指出能够“选择性”去除这些健康促进作用，但实质上文献并未教导在热处理微生物期间如何能避免损失所需健康促进作用的任何内容。因此鉴于所述文献，本领域技术人员不能够以有意义方式预测或猜测何种健康促进作用会因微生物的热处理而损失及何种不会。特别地，不能够预测或估计抗生龋性作用是否因热处理而失去。
[0007] 因此，本发明目的是表明用于控制龋损伤的疗法，特别地用于避免或延缓龋损伤的发展的疗法。特别地，期望保证疗法带来所需效果。期望其制备简单并廉价，且如果可能，避免以上所述缺点或将其减至较低程度。
[0008] 因此，根据本发明，提出生产对变异链球菌具有特异性结合能力的非活性乳杆菌制剂的方法，所述方法包括以下步骤:
[0009] i)将对变异链球菌具有特异性结合能力的乳杆菌或乳杆菌混合物的细胞的悬浮液，以0.5至2℃/分钟的温度变化，从低于40℃的起始温度加热至75至85℃的巴斯德消毒温度，其中特异性结合
[0010] a)耐受热处理和/或
[0011] b)耐受蛋白酶处理和/或
[0012] c)是钙-依赖性的和/或
[0013] d)发生在介于4.5及8.5间的pH范围，和/或
[0014] e)在唾液存在下发生，
[0015] ii)将温热悬浮液在巴斯德消毒温度下保持20至40分钟的时间，[0016] iii)将步骤ii)中保持的悬浮液以0.5至2℃/分钟的温度变化冷却至低于40℃的最终温度。
[0017] 在WO 2006/027265 Al中公开了此类乳杆菌，为本发明的公开内容的目的，将所述文献全部内容以引用的方式并入本文中。
[0018] 令人惊奇的是，已显示在根据本发明方法的步骤中描述的温和条件下的通过巴斯德消毒的手段，通过根据本发明所选择的乳杆菌能够成功制备完全或基本没有活的、代谢活性的乳杆菌微生物，但仍对变异链球菌具有特异性结合能力的制剂。因此，根据本发明制备的制剂适合于发挥抗生龋性作用，并因此作为预防和/或处理龋的疗法是有用的。术语“龋”及“龋损伤”能够在本发明范围中互换使用且指特征在于在牙齿上或牙齿中发展的软化斑，并进行性地导致牙齿坏死的慢性感染病。通过已知方法能够诊断龋;本领域技术人员能够就此目的参照例如Angmar-Mansson与tenBosch的论文，Adv.Dent.Res.7(1993),70至79。
[0019] 就本发明目的而言，术语“控制龋”或“控制龋损伤”包括龋的预防。因此，口腔中应没有变异链球菌的人亦可因此而从根据本发明制备的其它组合物受益，只要这些组合物结合随机引入的变异链球菌细胞并以此方式促进后者的移除。
[0020] 就本发明的目的而言，术语“龋的治疗”亦包括向罹患龋的患者施用根据本发明制备的组合物，用于减少变异链球菌细胞的数量的目的，及如果是合适的，用于完全去除来自口中，特别地来自包括牙齿及牙齿间空隙的整个口腔的变异链球菌的目的。
[0021] 至于结合变异链球菌的能力，根据本发明所选择的微生物是高度热稳定的。这允许维持而不会失去WO 2006/027265 A1中所描述的活的乳杆菌细胞的结合变异链球菌的健康促进作用，甚至在根据本发明的巴斯德消毒后。此点特别不寻常，因为对于微生物原则上预期巴斯德消毒时，微生物的大量(例如)蛋白质将变性，及其它细胞成份会溶解或破坏，以致微生物的健康促进作用通常在巴斯德消毒后丧失。事实上，以上所提及的WO01/95741 Al仅显示尽管经过巴斯德消毒，对于某些乳杆菌仍可能维持对肠道菌群的健康促进作用。然而，就结构、含量及用途而言，口腔完全不同于肠道，因此本领域技术人员无法将最后提及文件的发现应用于本发明。
[0022] 因此，根据本发明的其它方面，指示对变异链球菌具有特异性结合能力的乳杆菌组合物，该组合物通过根据本发明的制备方法是可获得的或得到。此类组合物实现根据本发明的制备方法的以上所述优点，特别地其适用于制备供人身体使用的抗生龋性产品。
[0023] 乳杆菌细胞优选地选自类干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)菌株细胞或这些的混合物。因此用乳杆菌菌株，特别地类干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌的菌株的纯培养物悬浮液，但也用两种、三种、四种、五种、六种、七种或更多种菌株的混合物能够进行根据本发明的制备方法。对于根据本发明方法特别优选的是WO2006/027265 Al中说明的乳杆菌属种及菌株，特别地具有以下DSMZ编号之一的那些:DSMZ16667、DSMZ 16668、DSMZ 16669、DSMZ 16670、DSMZ 16671、DSMZ 16672及DSMZ16673，每一个于2004年8月26日保存于德意志微生物保藏中心(Deutsche Sammlung für Mikroorganismen und Zellkulturen，Mascheroder Weg 1b,Brunswick,德国)。至于在本发明范围中提及的乳杆菌细胞，此至少优选地理解为意指刚才所提及菌株及两种、三种、四种、五种、六种或七种上述菌株的混合物的细胞。本领域技术人员将理解，除以上所提及的菌株中的一种的细胞外，在根据本发明方法中亦能够采用突变体或衍生细胞系，该突变体或衍生细胞保留特异性结合变异链球菌的能力。
[0024] 乳杆菌细胞优选地具有对血清型c(DSMZ 20523)和/或血清型e(NCTC10923)和/或血清型F(NCTC 11060)变异链球菌的特异性结合能力。
[0025] 突变体，特别地以上所提到的乳杆菌菌株中的一种的突变体，具有一或多种永久可遗传修饰，通常为其核酸的修饰。此类修饰通常亦涵盖诸如转换或颠换的点突变，但亦包括核酸的一个或多个碱基的缺失、插入及添加，由此修饰核酸并导致偏离正常情况的基因产物的基因表达和/或转录和/或翻译，或失活。突变能够自发地发生或另外由诸如，例如化学剂的活性剂或辐射的作用引发。选择及获得突变体及衍生细胞系的方 法 在 例 如Sambrook，“Molecularcloning,a laboratory manual”,Cold Spring Harbor Laboratory,NY,(2001) 中 及 Ausubel，“Current protocols in molecular biology”,Green Publishing Associates and Wiley Interscience NY,(1989)中所描述。技术人员能够在WO 2006/027265 Al中发现其它信息。
[0026] 就本发明的目的而言，“特异性结合”或“特异性结合能力”是针对变异链球菌而言，意指根据本发明所用的乳杆菌细胞，或根据本发明经过巴斯德消毒的细胞与变异链球菌结合，但并不会与通常大量出现在口腔中的大多数或全部的剩余的微生物结合。根据本发明所选择的微生物优选地不与唾液链球菌(Streptococcus salivarius)、唾液链球菌嗜热亚种(Streptococcus salivarius thermophilus)、口腔链球菌(Streptococcus oralis)、缓 症 链 球 菌(Streptococcus mitis) 和/或 血 链 球 菌 (Streptococcus sanguinis)结合。根据本发明所用的乳杆菌细胞优选地不与唾液链球菌嗜热亚种API50CH(Streptococcus salivarius ssp.thermophilus API 50CH，Biomerieux，法国)、口腔链球菌DSMZ 20066、口腔链球菌DSMZ 20395、口腔链球菌DSMZ 20627、缓症链球菌DSMZ
12643和/或血链球菌DSMZ 20567结合。当根据本发明所用的乳杆菌细胞不与链球菌属以外的属的细菌结合时（亦即例如不与葡萄球菌属的细胞结合时）其同样是优选的。特别优选地，它们不与表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)DSMZ 1798和/或表皮葡萄球菌DSMZ 20044结合。为测试结合能力，本领域技术人员可如WO2006/027265 Al中所述进行处理，通过将以上所提及细菌与根据本发明所选择的乳杆菌，或根据本发明经过巴斯德消毒的它们的剩余物，以3:1的体积比混合，并观察由乳杆菌造成的任何凝集。适宜方法述于以上所提及的WO说明书的实施例3中。
12643和/或血链球菌DSMZ 20567结合。当根据本发明所用的乳杆菌细胞不与链球菌属以外的属的细菌结合时（亦即例如不与葡萄球菌属的细胞结合时）其同样是优选的。特别优选地，它们不与表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)DSMZ 1798和/或表皮葡萄球菌DSMZ 20044结合。为测试结合能力，本领域技术人员可如WO2006/027265 Al中所述进行处理，通过将以上所提及细菌与根据本发明所选择的乳杆菌，或根据本发明经过巴斯德消毒的它们的剩余物，以3:1的体积比混合，并观察由乳杆菌造成的任何凝集。适宜方法述于以上所提及的WO说明书的实施例3中。
[0027] 因此，优选的是根据本发明的方法，其中在第一步骤中，将一或多种优选的乳杆菌菌株，特别地如上所述的类干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌及优选的菌株DSMZ 16667、DSMZ16668、DSMZ 16669、DSMZ 16670、DSMZ16671、DSMZ 16672及DSMZ 16673中的一或多种及特别优选地至少DSM16671和/或一种突变体或衍生细胞系的细胞，在悬浮液中以从0.5至
2℃的温度变化，从低于40℃的起始温度加热至从75至85℃的巴斯德消毒温度;在第二步骤中，将其维持于巴斯德消毒温度下20至40分钟(巴斯德消毒时间)且其中在随后第三步骤中，使悬浮液以从0.5至2℃的温度变化冷却至低于40℃的最终温度。
2℃的温度变化，从低于40℃的起始温度加热至从75至85℃的巴斯德消毒温度;在第二步骤中，将其维持于巴斯德消毒温度下20至40分钟(巴斯德消毒时间)且其中在随后第三步骤中，使悬浮液以从0.5至2℃的温度变化冷却至低于40℃的最终温度。
[0028] 在步骤i)中的巴斯德温度优选78至80℃，特别优选80℃。以此巴斯德消毒温度，快速并因此节能而安全地实现破坏根据本发明选择的乳杆菌细胞，同时相较于活乳杆菌细胞的非巴斯德消毒培养物损失很少结合能力。
[0029] 巴斯德消毒时间优选25至35分钟且特别优选30分钟。已显示特别地相较于乳杆菌细胞的活培养物，用78至80℃(优选80℃)的巴斯德消毒温度，快速破坏根据本发明所选择的乳杆菌细胞与变异链球菌的结合能力的较小的损失的组合是可能的。
[0030] 当步骤i)或iii)中的温度变化是0.8至1.2℃每分钟，优选1℃/分钟时，其同样是优选的。以此方式，能够有利地保持在短时间内升温达到巴斯德消毒温度，以节省能量，从而没有破坏乳杆菌细胞或不得不接受变异链球菌结合能力的大量损失的风险。
[0031] 特别优选也是根据本发明的方法，其中在第一步骤中，将一或多种优选的乳杆菌菌株，特别地如上所述的类干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌及优选的菌株DSMZ 16667、DSMZ16668、DSMZ 16669、DSMZ 16670、DSMZ16671、DSMZ 16672及DSMZ 16673中的一或多种及特别优选地至少DSM16671和/或一种突变体或衍生细胞系的细胞在悬浮液中以0.8至
1.2℃，优选的1℃的温度变化，从40℃以下的起始温度加热至从78至80℃，优选80℃的巴斯德消毒温度;在第二步骤中，将其维持于巴斯德消毒温度下25至35分钟(巴斯德消毒时间)且其中在随后第三步骤中，将该悬浮液以从0.8至1.2℃，优选1℃的温度变化冷却至低于40℃的最终温度。
1.2℃，优选的1℃的温度变化，从40℃以下的起始温度加热至从78至80℃，优选80℃的巴斯德消毒温度;在第二步骤中，将其维持于巴斯德消毒温度下25至35分钟(巴斯德消毒时间)且其中在随后第三步骤中，将该悬浮液以从0.8至1.2℃，优选1℃的温度变化冷却至低于40℃的最终温度。
[0032] 根据本发明巴斯德消毒的细胞优选地是在后指数生长期。在根据本发明的制备方法的步骤i)中，特别优选使用来自起初允许指数生长，但其中葡萄糖浓度降至不大于1mM葡萄糖的数值的培养基的细胞。此处，优选使用其葡萄糖浓度已降至不大于1mM葡萄糖的数值不超过1h的细胞，否则根据本发明制备方法的产物（即步骤iii的结果），如合适，如下文所描述的洗涤步骤或喷雾干燥步骤的产物的特异性结合变异链球菌的能力将开始丧失。
[0033] 此外，根据本发明的方法优选地包括洗涤步骤，其中使步骤(iii)获得的悬浮液离心，以浓缩巴斯德消毒的细胞，用水处理因此得到的浓缩细胞，并再次离心，以再次浓缩细胞。所得浓缩细胞是作为干物质含量为10至30%（以重量计），优选地从18至22%（以重量计）的物质存在。
[0034] 根据本发明特别优选的方法是此类方法，所述方法除了步骤i)及iii)以外(特别地应用于上文描述的乳杆菌菌株DSMZ 16667、DSMZ 16668、DSMZ 16669、DSMZ 16670、DSMZ 16671、DSMZ 16672及DSMZ 16673或突变体或细胞系或类干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌的菌株中的一种，或两种、三种、四种、五种、六种或七种的混合物)及如果合适洗涤以外，包括以下步骤:
[0035] iv)处理步骤iii)所获得的悬浮液，优选地以用于制备喷雾干燥混合物的载体洗涤，载体选自由碱金属硫酸盐及碱土金属硫酸盐，优选地硫酸钠、硫酸钾或硫酸钙及这些硫酸盐的两种或多种的混合物，选择的载体的量使得喷雾干燥混合物的干物质含量达10至30%（以重量计），及
[0036] v)步骤iv)所得到的喷雾干燥混合物的喷雾干燥。
[0037] 喷雾干燥法是使待干燥的物质暴露于极其严苛条件且特别地达例如70℃至200℃的温度。即使从根据本发明所选择的乳杆菌细胞中亦无法知道它们是否能承受喷雾干燥期间的严苛条件而不显著损失对变异链球菌的特异性结合能力。而且，根据本发明在步骤iv)中使用大量载体时，原本预期负责进一步结合变异链球菌的乳杆菌表面的结构将被变性或损坏。令人惊奇的是，现已显示在所选择的条件下步骤iii)中所得的悬浮液的喷雾干燥而基本不损失对变异链球菌的结合能力是可能的。
[0038] 根据本发明的喷雾干燥及根据本发明制备的喷雾干燥的组合物的一些优点因而特别值得注意:相较于简单的巴斯德消毒法，根据本发明的喷雾干燥允许获得非粘性或吸湿性的组合物。在本文内容中，吸湿性意指在20℃的温度及50%的相对湿度下露天储存12个月时间，组合物的重量增加不超过2%。因此，根据本发明制备的组合物因而特别适用于在干燥产品中加工;其将不会因吸收水或特别地黏性而不利地影响这些产品的性质。
[0039] 此外，根据本发明的制备方法使得能够制备自由流动的根据本发明的组合物。能够特别容易地贮存和加工颗粒状的、自由流动的组合物，且能够将它们掺入很多种产品中同时能够非常精确地量取剂量。因此，相较于步骤iii)后直接获得的悬浮液，通过根据本发明的喷雾干燥方法获得的根据本发明的组合物能够以经济重要的规模掺入更广泛的产品谱中。
[0040] 步骤iv)中的特别优选的载体是硫酸钠。载体(特别优选硫酸钠)的量优选为步骤iii)所采用悬浮液的干物质的倍数。用于步骤v)喷雾干燥的喷雾干燥混合物在此情况下将含有约20%（以重量计）的总干燥物质。
[0041] 优选在从180至250℃的用于干燥的喷雾干燥气体的气体进口温度及来自从70至100℃，优选85℃的用于干燥的区域(通常为喷雾塔)的气体出口温度下，在欲干燥的物质的喷雾干燥气体的反应区中的平均滞留时间为从10至60秒，优选20至40秒下进行步骤v)的喷雾干燥。此外，本领域技术人员能够进一步自提供于WO 01/25411 Al中的信息取得关于喷雾干燥的指导。此文献通常描述适用于制备喷雾干燥的酶产品的喷雾干燥方法。令人惊奇的是，现已显示即使在根据本发明优选的更高温度下进行喷雾干燥而基本不损失对变异链球菌的结合能力是可能的。这无法由WO01/25411 Al预期，特别地由于所述文献未描述巴斯德消毒后操作喷雾干燥步骤的单个实例且由于本领域技术人员认为文献关于喷雾干燥对于其所主张的极多种类别酶的适合性是推测性的。
[0042] 因此，根据本发明的特别优选的方法是这样的一种方法，其中：
[0043] (i)在第一步骤中，将一或多种优选的乳杆菌菌株，特别地类干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌及优选如上所述的菌株DSMZ 16667、DSMZ 16668、DSMZ 16669、DSMZ 16670、DSMZ16671、DSMZ 16672及DSMZ 16673中的一种或多种且特别优选至少DSM 16671和/或在后指数生长期中的一种突变体或衍生细胞系的细胞，在悬浮液中以从0.8至1.2℃，优选1℃的温度变化，从低于40℃的起始温度加热至从78至80℃，优选80℃的巴斯德消毒温度，及随后，
[0044] (ii)在巴斯德温度下将悬浮液维持25至35分钟，且优选30分钟，及随后，[0045] (iii)将悬浮液以0.8至1.2℃，优选1℃的温度变化冷却至低于40℃的最终温度，随后如上所述以水洗涤并通过离心得到从10至30%（以重量计），优选从18至22%（以重量计）的干燥物质含量，及随后，
[0046] (iv)以用于制备喷雾干燥混合物的载体处理悬浮液，载体是选自硫酸钠、硫酸钾及硫酸钙及其中两种或多种的混合物，且特别优选硫酸钠，选择载体用量使得喷雾干燥混合物的干燥物质含量为从10至30%（以重量计），及随后，
[0047] (v)由步骤(iv)中得到的含有载体的悬浮液进行喷雾干燥，所述喷雾干燥是在从180至250℃的用于干燥的喷雾干燥气体的气体进口温度及从70至100℃，优选85℃的用于干燥的区域（通常喷雾塔）的气体出口温度下，在欲干燥的物质的喷雾干燥气体的反应区域中的平均滞留时间为从10至60秒，优选从20至40秒下进行。
[0048] 此方法实现本发明的以上所述优点。
[0049] 根据本发明的乳杆菌组合物具有对变异链球菌的特异性结合能力，通过步骤i)至iii)及任选地iv)至v)的方法能够获得或已得到的该组合物被优选地掺入用于人体中的产品。当用于人体，特别地通过引入口腔和/或与牙齿接触时，实际可能使用根据本发明的组合物实施龋预防。
[0050] 根据本发明的产品方便地包含根据本发明的组合物，其量足以与变异链球菌结合和/或获得抗生龋性作用。此量取决于所述产品性质及其药学型式。特别地，该量亦取决于与变异链球菌可能的结合或可能的抗生龋性作用的特定所需程度。取决于产品，本领域技术人员通过常规实验手段将轻易确定满足作用的所需程度、产品性质及药学型式的根据本发明组合物的量。特别地，本领域技术人员将考虑到能够用根据本发明组合物涂覆的或能够通过混合掺入此组合物的产品。
[0051] 根据本发明的产品优选地选自食品产品，包括高档食品产品、饮料产品、半成品、口腔卫生产品、化妆产品及医药产品。相关产品描述于WO2006/027265 Al中。
[0052] 特别优选的产品是口香糖、牙膏、漱口剂及锭剂。
[0054] 实施例1:一般制备方法
[0055] 在37℃下，于适宜水性营养培养基中培养具有对变异链球菌的特异性结合能力的乳杆菌细胞，其中特异性结合
[0056] a)耐受热处理和/或
[0057] b)耐受蛋白酶处理和/或
[0058] c)是钙依赖性的和/或
[0059] d)在介于4.5及8.5间的pH范围中发生，和/或
[0060] e)在唾液存在下发生，
[0061] 适宜营养培养基含有葡萄糖、酵母提取物、Tween80及盐类。以补料分批操作呈水性悬浮液培养。
[0062] 一旦营养培养基的葡葡糖含量降至1mM以下，或此时间点后至多l小时，则将悬浮液加热至从75至85℃，优选地从78至80℃的巴斯德消毒温度。在本文内容中，以从0.5至1.2℃/分钟，优选从0.8至1.2℃/分钟的温度变化加热该悬浮液。
[0063] 将热悬浮液维持于巴斯德消毒温度20至40分钟，优选25至35分钟且特别优选30分钟。
[0064] 随后将悬浮液冷却至40℃以下。在本文内容中，温度变化为从0.5至2℃/分钟，优选从0.8至1.2℃/分钟。
[0065] 随后通过离心将冷悬浮液浓缩至从10至30%（以重量计）的干物质含量。将如此获得的浓缩物重悬浮于水中并通过离心再次浓缩至从10至30%（以重量计）的干物质含量。总共进行至多8次的重悬浮与浓缩。最后，获得干物质含量为从10至30%（以重量计）的经洗涤的生物量。
[0066] 如实施例开始所述，生物量仍保留对变异链球菌的特异性结合能力。生物量本身可被掺入食品中，包括高档食品、饮料、半成品、口腔卫生产品、化妆产品或医药产品中，为使产品能够控制龋或支持先前已经存在的控制龋的能力。
[0067] 实施例2:口腔保健组合物的制备
[0068] 如实施例1中所描述地培养、巴斯德消毒并且洗涤根据本发明已定义的对变异链球菌具有特异性结合能力的类干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌的培养物。巴斯德消毒温度是80℃。巴斯德消毒时间是30分钟。在每一情况下温度变化为从0.8至1.2℃/分钟。通过添加水重悬浮第一次离心后得到的浓缩的悬浮液，形成干物质含量为5%（以重量计）的重悬浮液。将如此获得的重悬浮液再次离心至干物质含量降至20%（以重量计）。
[0069] 用水性载体及调味剂处理如此获得的经洗涤及浓缩的生物量。此得到用于控制龋的漱口液。
[0070] 以相同方式，获得用DSMZ 16667、DSMZ 16668、DSMZ 16669、DSMZ16670、DSMZ16671、DSMZ 16672或DSMZ 16673制备的经洗涤及浓缩的生物量。在每一情况下同样地用水性载体及调味剂处理此生物量以在每一情况下得到用于控制龋的漱口液。
[0071] 通过将各种经洗涤及浓缩的生物量掺入口香糖基质、牙膏基质及锭剂基质中，并添加所需调味剂，生产用于控制龋的口香糖、牙膏及锭剂，而非漱口剂。
[0072] 实施例3:一般的喷雾干燥方法
[0073] 通过制备水性10至30%强度碱金属和/或碱土金属硫酸盐溶液制备基本喷雾干燥溶液。将如实施例1所述获得的经洗涤及浓缩的生物量重悬浮于四倍量的基本喷雾干燥溶液中，形成喷雾干燥混合物，以便从100单位体积生物量获得500单位体积的喷雾干燥混合物。
[0074] 通过将喷雾干燥混合物引入喷雾干燥塔中进行喷雾干燥。在该喷雾干燥塔中填装喷雾干燥气体，该喷雾干燥气体具有180至250℃的进入喷雾干燥塔的进口温度及从70至100℃的来自喷雾干燥塔的出口温度。喷雾干燥混合物在该喷雾干燥塔中的平均滞留时间不超过60秒。
[0075] 如实施例1开始所述，所获得的喷雾干燥的物质仍保留对变异链球菌的特异性结合能力。获得的喷雾干燥物质本身可被掺入食品中，包括高档食品的食品、饮料、半成品、口腔卫生产品、化妆产品或医药产品，为使产品能够控制龋或支持先前已经存在的控制龋的能力。
[0076] 实施例4:制备其它口腔保健组合物
[0077] 如实施例1中所描述地培养、巴斯德消毒并且洗涤根据本发明已定义的对变异链球菌具有特异性结合能力的类干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌的培养物。巴斯德消毒温度是80℃。巴斯德消毒时间是30分钟。在每一情况下温度变化为从0.8至1.2℃/分钟。通过
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